PT770622E

PT770622E - Inibidores da adesao ciclicos

Info

Publication number: PT770622E
Application number: PT96113972T
Authority: PT
Inventors: Alfred Jonczyk; Kessler Prof Dr Horst; Beate Diefenbach; Simon Goodman; Arne Sutter; Gunter Holzmann; Michael Dechantsreiter
Original assignee: Merck Patent Gmbh
Priority date: 1995-09-15
Filing date: 1996-08-31
Publication date: 2000-07-31
Also published as: TR199600716A3; KR970015598A; TW517064B; HUP9602507A3; RU2157379C2; CA2185489A1; HU224614B1; PL185125B1; AU717574B2; ES2144179T3; DE59604363D1; AU6558096A; SI0770622T1; US6001961A; NO316946B1; DE19534177A1; BR9603751A; HU9602507D0; CZ264396A3; PL316071A1

Description

DESCRIÇÃO / .(

X “INIBIDORES DA ADESÃO CÍCLICOS ”

A invenção refere-se a novos ciclopéptidos da fórmula I ciclo-(n-Arg-nGli-nAsp-nD-nE) I, em que D e E significam cada um respectivamente de maneira independente Gli, Ala. b-Ala, Asn, Asp, Asp(OR), Arg, Cha, Cis, Gin, His, Ile, Leu, Lis, Lis(Ac), Lis(AcNH2), Lis(AcSH), Met, Nal, Nle.Om, Fen, 4-Hal-Fen, homoFen, Fgl, Pro, Pia, Ser, Tre', Tia, Tic, Trp, Tir ou Vai, em que os referidos radicais de aminoácidos também podem ser derivatizados, R alquilo com 1-18 átomos de C,

Hal F, Cl, Br, I,

Ac alcanoilo com 1-10 átomos de C, aroilo com 7-11 átomos de C ou aralcanoilo com 8-12 átomos de C, n um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo R, benzilo ou um radical aralquilo com 7-18 átomos de C na função alfa-amino do radical aminoácido correspondente com a condição de que, pelo menos, um radical de aminoácido é disponibilizado por meio de um substituinte n, em que n significa R e em que é exceptuado o composto <ArgGliAspNMeFenGli> e em que, desde que se trate de radicais de aminoácidos e derivados de aminoácidos opticamente activos, tanto as formas D como as formas L são incluídas assim como os respectivos sais fisiologicamente aceitáveis.

Compostos semelhantes, que no entanto não apresentam qualquer N-alquilaçào, são conhecidos, por exemplo, a partir da PE 0 406 428 e FEBS Lett. 291, 50-54 (1991).

Outros péptidos ciclícos contendo RGD são, por exemplo, conhecidos a partir d Thrombosis Research, 72(3), 231-245 (1993). A invenção tem como objectivo descobrir novos compostos com propriedades valiosas, especialmente que podem ser utilizados para a produção de produtos farmacêuticos.

Descobriu-se surpreendentemente que os compostos da fórmula I e os seus sais possuem propriedades bastante valiosas. Actuam, sobretudo, como inibidores de integrina, em que especialmente bloqueiam as acções de permuta dos receptores de integrina β3 ou β5 com ligandos. Os compostos, no caso dos receptores de integrina a^3 aJ35 e a,$3 demonstram uma especial eficácia, e também em relação a aJ3„ a^6 e a^8. Estas acções podem, por exemplo, ser comprovadas segundo o método, que é descrito por J. W. Smith et al. em J. Biol. Chem. 265, 12267-12271 (1990). Adicionalmente, possuem efeitos anti-inflamatórios. A dependência do aparecimento de angiogénese da acção de permuta entre integrinas vasculares e proteínas de matriz extra-celulares é descrita em P. C. Brooks, R. A. Clark e D. A. Cheresh in Science 264, 569-71 (1994). A possibilidade de inibição desta acção de permuta e, por conseguinte, de início de apotose (morte programada de células) de células vasculares angiogénicas por meio de um péptido cíclico é descrita por P. C. Brooks, A. M. Montgomery, M. Rosenfeld, R. A. Reisfeld, T.-Hu, G. Klier e D. A. Cheresh em Cell 79, 1157-64 (1994).

Os compostos da fórmula I, que bloqueiam a acção de permuta de receptores e ligandos de integrina como, por exemplo, de fibrinogénio no receptor de fibrinogénio (glicoproteína Ilb/IIIa), impedem a difusão de células de tumores enquanto por meio de metástase antagonistas de GPIIb/IIIa. Isto é provado por meio das seguintes observações:

Os compostos podem bloquear a ligação de proteinases metálicas a integrinas, e impedi desta forma que as células possam utilizar a actividade enzimática das proteinases. Um exemplo pode ser encontrado na capacidade de bloqueio da ligação de MMP--2(proteínase metálica de matriz-2) ao receptor de vitronectina ανβ3 através de um ciclo--RGD-péptido, tal como descrito por P. C. Brooks et al. Cell 85. 683-693 (1996). A disseminação de células de tumores a partir de um tumor local no sistema vascular verifica-se através da formação de microagregados (microtrombos) por acção de permuta das células de tumores com plaquetas sanguíneas. As células de tumores são blindadas pela protecção no microagregado e não são reconhecidas pelas células do sistema imunitário.

Os microagregados podem fixar-se nas paredes dos vasos sanguíneos, através do que é facilitada uma adicional introdução de células de tumores no tecido. Uma vez que a formação dos microtrombos por ligação de fibrinogénio nos receptores de fíbrinogénio pode ser impedida por plaquetas sanguíneas activadas, os antagonistas de GPIIa/IIIb são considerados como bloqueadores eficazes das metástases.

Os compostos da fórmula I podem eventualmente ser ainda utilizados em operações como substâncias activas antimicrobianas, em que são utilizados biomateriais, implantes, catéteres ou “pacemakers". Assim, actuam como antissépticos. A eficácia da actividade antimicrobiana pode ser comprovada pelo processo descrito por P. Valentin--Weigund et al., em Infection and Immunity, 2851-2855 (1988).

Uma vez que os compostos da fórmula I representam inibidores da ligação do fibrinogénio e, por conseguinte, ligandos dos receptores de fibrinogénio em plaquetas sanguíneas, podem ser utilizados in vivo como diagnósticos para a detecção e localização de trombos em sistemas vasculares, desde que possam· ser substituídos por meio de um radical marcado isotopicamente ou detectável por UV. No processo de formação de imagens podem também ser detectados e localizados com eles tumores (radiografia de tumores; PET). 4 4

Os compostos da fórmula I podem ser utilizados como inibidores da ligação fibrinogénio e também como agentes auxiliares eficazes para o estudo do metabolismo de plaquetas sanguíneas em diferentes estádios de activação ou de mecanismos de sinal intracelulares do receptor de fibrinogénio. A unidade detectável de um rótulo (“label”) a produzir como, por exemplo, biotinilo permite, após ligação ao receptor, examinar os referidos mecanismos.

Os compostos possuem também a propriedade de inibir a ligação de ligandos naturais ou artificais a integrinas, especialmente integrinas a^ av35 e %β3 mas também em relação a avp„ a^, e avp8.

Possuem ainda a vantagem, em relação ao estado da técnica, de por meio de N--alquilação de um ou mais compostos de péptidos se alcançar uma estabilização metabólica e uma elevada lipossolubilidade. Através da redução das possíveis pontes de hidrogénio, pois o N-alquilo não pode ser um dador de H para C=0, a capacidade de penetração através das membranas melhora, de forma que pode ser alcançada uma aumentada capacidade de ressorção oral podendo, por conseguinte, ocorrer uma elevada ligação de proteína de plasma. A N-alquilação da ligação peptídica aumenta a potência inibitória dos compostos e aumenta a selectividade da inibição relativamente a determinadas integrinas. A selectividade pode ser especialmente influenciada por meio da posição e quantidade dos grupos N-alquilo.

Os compostos podem ser utilizados como substâncias de produtos farmacêuticos na medicina humana e veterinária, especialmente para a profilaxia e para o tratamento de doenças de circulação, trombose, infarte cardíaco, arterioesclerose, inflamações, apoplexias, angina pectoris, doenças de tumores, doenças osteolíticas, especialmente, osteoporose, angiogénese e doenças provocadas por angiogénese como, por exemplo, a retinopatia diabética dos olhos, degeneração macular, miopia, histoplasmose ocular, artrite reumática, osteoartrite, glaucoma rubeótico, mas também colite ulcerosa, doença de Crohn, esclerose múltipla, psoríase, assim como restenose após angioplastia. Eventualmente, os compostos podem ser utilizados para melhoramento e apoio de processos de cicatrização em infecções microbianas e em paragens graves de rins.

Estas acções podem ser comprovadas, por exemplo, com o auxílio de métodos conhecidos da literatura, como são descritos por P. C. Brooks et al. em Cell. 79, 1157--1164 (1994) ou Science 264, 569-571 (1994).

As abreviaturas de radicais de aminoácidos anterior e posteriormente representam os radicais dos seguintes aminoácidos:

Abu ácido 4-aminobutírico Aha ácido 6-amino-hexanóico Ala alanina Asn asparagina Asp ácido aspártico Asp(OR) ácido aspártico (éster-β) Arg arginina Cha 3-ciclo-hexilalanina Cit citrulina Cis cisteína Dab ácido 2,4-diaminobutírico Dap ácido 2,3-diaminopropiónico Gin glutamina Glu ácido glutâmico Gli glicina His histidina Ile isoleucina x Leu leucina Lis lisina Lis(Ac) Nj-alcanoillisina

Lis(AcNH2) NE-aminoalcanoillisína Lis(AcSH) NE-mercaptoalcanoillisina Met metionina Nal 3-(2-naftil)-alanina Nle norleucina Orn ornitina Fen fenilalanina 4-Hal-Fen 4-halogeno-fenilalanina Fgl fenilglicina Pro prolina Pia 3-(2-piridil)-alanina Sar sarcosina (N-metilglicina) Ser serina Tia 3-(2-tienil)-alanina Tic ácido 3-tetra-hidro-isoquinolinocarboxílico Tre treonina Trp triptofano Tir tirosina Vai valina. As seguintes abreviaturas significam: BOC t-butoxicarbonil Bzl benzilo DCCI diciclo-hexilcarbodi-imida DMF dimetilformamida EDCI hidrocloreto de N-etil-N-(3-dimetilaminopropil)-carbodi-imida Et etilo Fmoc 9-fluorenilmetoxicarbonilo HOBt 1-hidroxibenzotriazol Me metilo

Mtr 4-metoxi-2,3,6-trimetiifenil-sulfonil NMe grupo-a amino N-metilado OBut éster-t butílico OMe éster metílico OEt éster etílico POA fenoxiacetilo i-Pr isopropilo n-Pr n-propilo TB TU tetrafluorborato de 2-( 1 H-benzotriazol-1 -il)-1,1,3,3 -tetrametilurónio TF A ácido trifluoroacético.

Caso os aminoácidos referidos anteriormente possam possuir múltiplas formas enantioméricas, então são incluídas por exemplo como componentes dos compostos da fórmula I, todas estas formas anterior e posteriormente referidas e também as suas misturas (por exemplo, as formas DL). Além disso, os aminoácidos podem, por exemplo, como componentes dos compostos da fórmula I, podem ser dotados com correspondentes grupos de protecção em si conhecidos.

Ainda são compreendidos pela invenção, péptidos do tipo cujos radicais aminoácido são parcial ou totalmente derivatizados. Por “derivatizados” entende-se que também os assim denominados “pró-fármacos” “prodrugs” como, por exemplo, derivados de N--guanidino-acilo de Arg, ésteres-β de Asp, derivados de Ne-alcanoilo, aminoalcanoilo, mercaptoalcanoilo da lisina, apenas para referir alguns. Adicionalmente, os radicais de aminoácidos podem ser parcialmente C-alfa-alquilados ou, por exemplo, para fins de diagnósticos, ser marcados isotopicamente. Estão ainda compreendidos compostos da fórmula I que são adicionalmente derivatizados na cadeia lateral dos grupos D e E, por meio de grupos amino, carboxi ou mercapto, uma vez que os derivados desta natureza são importantes compostos de partida para a preparação de conjugados de elevado peso molecular, por exemplo, para fins de imunização e produção de anticorpos. E ainda possível utilizar grupos funcionais na cadeia lateral de determinados radicais de aminoácidos ou radicais de aminoácidos derivatizados para imobilização dos péptidos sobrer materiais de polímero para a produção de colunas de cromatografia de afinidade

ou os grupos funcionais para a derivatização com reagentes auxiliares do diagnóstico como utilizar substituintes fluorescentes. O objectivo da invenção é ainda um processo para a produção de um composto da fórmula I segundo a reivindicação 1 ou um dos seus sais, caracterizado pelo facto de ser libertado a partir de um seu derivado funcional por meio de tratamento com um agente solvolisante ou hidrogenolisante

ou se tratar de um péptido da fórmula II

H-Z-OH em que Z significa -nArg-nGli-nAsp-nD-nE- -nGli-nAsp-nD-nE-nArg--nAsp-nD-nE-nArg-nGli--nD-nE-nArg-nGli-nAsp- ou nE-nArg-nGli-nAsp-nD-, ou se tratar um derivado reactivo de um péptido desta natureza com um agente ciclizante, ou se derivatizar um ciclopéptido, o qual corresponde à fórmula I, e disponibiliza no entanto através de um ou mais grupos amina, grupos acídicos e/ou α-átomos de C activados mediante de alquilação, acilação ou esterificação, e/ou se converter um composto básico ou acídico da fórmula I num dos seus sais por tratamento com um ácido ou base.

Anterior e postériormente, os radicais D, E e n possuem nas fórmulas I e II os referidos significados, caso não seja expressamente fornecido qualquer outro. As letras utilizadas para os respectivos radicais não estão relacionadas com o código de letras para os aminoácidos.

Nas fórmulas anteriores alquilo representa, de preferência, metilo, etilo, isopropilo, n--butilo, s-butilo ou t-butilo. O grupo D é preferencialmente Fen, sendo também preferido D-Fen, mas também 4--Hal-Fen, especialmente 4-1-Fen assim como Trp, Tir, homo-Fen, Nal ou Fgl, em que as formas D são igualmente preferidas. E é, de preferência, um radical de aminoácido hidrófobo, especialmente Gli, Ala, Vai, Leu, Nle ou Ile. A variável n representa preferencialmente grupos amino α em péptidos substituídos por N-metilo, N-etilo, N-propilo, N-benzilo ou N-isopropilo, em que vários radicais de aminoácidos podem ser N-substituídos com radicais alquilo iguais ou diferentes.

Correspondentemente, são objecto da invenção especialmente os compostos da fórmula I, nos quais pelo menos um dos referidos radicais possui um dos significados preferidos mencionados anteriormente.

Um grupo de compostos preferido pode ser expresso por intermédio da fórmula parcial Ia, que aliás corresponde à fórmula I, em que no entanto D significa D-Fen, Fen, D-TRp, Trp, D-Tir, Tir, D-homoFen, homoFen, D-Nal, Nal, D-Fgl, Fgl ou 4-Hal-Fen (forma D ou L) e E Vai, Gli, Ala, Leu, Ile ou Nle.

Um outro grupo de compostos preferido pode ser expresso por intermédio da fórmula parcial Ib, que corresponde à fórmula I, em que no entanto

D significa D-Fen e E significa Gli, Ala, Vai, Leu, Ile ou Níe, e um dos radicais de aminoácidos Arg, Gli ou Asp possui um substituinte alquilo no grupo a-amino.

Um outro grupo preferido de compostos pode ser expresso por intermédio da fórmula parcial Ic, que corresponde às fórmulas parciais Ia e Ib assim como à fórmula I, em que no entanto um dos radicais de aminoácidos D ou E é alquilado no grupo a-amino.

Ainda são especialmente preferidos, todos os sais fisiologicamente aceitáveis dos compostos ao abrigo das fórmulas parciais Ia, Ib e Ic.

Os compostos da fórmula I e também as substâncias de partida para sua preparação, estes são em geral produzidos de acordo com métodos conhecidos, tal como são descritos na literatura (por exemplo, nas obras de base como Wouben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart), e, na realidade, em condições reaccionais que são conhecidas e adequadas para as reacções referidas. Assim, podem também ser utilizadas no presente caso variantes conhecidas, mas que não são referidas, mais pormenorizadamente na presente memória.

As substâncias de partida podem, caso desejado, ser formadas in situ de modo que não sejam isoladas a partir da mistura reaccional, mas sim feitas reagir para obter os compostos da fórmula I.

Os compostos da fórmula I podem ser obtidos, libertando-os a partir dos seus derivados funcionais por solvólise, especialmente hidrólise ou por hidrogenóíise.

Substâncias de partida preferidas para a solvólise ou hidrogenóíise são aquelas que, em vez de conter um ou mais grupos amino e/ou hidroxi livres contêm correspondentes grupos amino e/ou hidroxi protegidos, preferencialmente aquelas que em vez de átomo de H ligado a um átomo de N, possuem um grupo de protecção de amino, por exemplo, aquelas que correspondem à fórmula I, mas que em vez de um grupo NH2 contêm um grupo NHR’ (em que R! significa um grupo de protecção de amino, por exemplo, BOC ou CBZ).

Ainda são preferidas substâncias de partida que, em vez do átomo H de um grupo hidroxi, possuem um grupo de protecção de hidroxi, por exemplo, as que correspondem à fórmula I, mas em vez de um grupo hidroxifenilo, contêm um grupo R”0-fenil (em que R” significa um grupo de protecção de hidroxi).

Podem também existir vários previstos muitos grupos amino e/ou hidroxi protegidos -iguais ou diferentes' - na molécula da substância de partida. No caso de os grupos de protecção previstos serem distintos entre si, podem em muitos casos ser separados selectivamente. A expressão “grupo de protecção de amino" é geralmente conhecida e refere-se a grupos adequados para protegerem (bloquearem) um grupo amino de reacções químicas, mas que são facilmente removíveis após efectuada a desejada reacção química em outros locais da molécula. São grupos especialmente típicos desta natureza grupos acilo, arilo, aralcoximetil ou aralquilo não substituídos ou substituídos. Visto que os grupos de protecção de amino podem ser removidos após a reacção desejada (ou a sequência de reacção), o seu tipo e tamanho não são geralmente críticos; no entanto, são preferidos os com 1-20, especialmente, 1-8 átomos de C. A expressão “grupo acilo” é adoptada no seu sentido mais amplo em relação com o presente processo. Este abrange grupos acilo que derivam de ácidos carboxílicos ou ácidos sulfónicos alifáticos, aralifáticos, aromáticos ou heterocíclicos, assim como em especial, grupos alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo e sobretudo aralcoxicarbonilo. Exemplos de grupos acilo deste tipo são alcanoilo como acetilo, propionilo, butirilo; aralcanoilo como fenilacetilo; aroilo como benzoilo ou toloilo; ariloxialcanoilo como POA; alcoxicarbonilo como metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo, BOC, 2-iodo-etoxicarbonilo; arai- quiloxicarbonilo como CBZ (“carbobenzoxi”), 4-metoxibenziloxicarbonilo, FMOC arilssulfonilo como Mtr. Grupos de protecção de amino preferidos são BOC e Mtr, ainda CBZ, Fmoc, benzilo e acetilo. A expressão “grupo de protecção de hidroxi” é de um modo geral igualmente conhecida e refere-se a grupos adequados para proteger um grupo hidroxi de reacções químicas, que são facilmente removíveis, após realizar a reacção química desejada em outros locais da molécula. Grupos típicos desta natureza são os grupos arilo, aralquilo ou acilo, além disso também grupos alquilo não substituídos ou substituídos, acima referidos. A natureza e o tamanho dos grupos de protecção de hidroxi não são críticos, uma vez que são novamente removidas após a desejada reacção química ou sequência das reacções; são preferidos os grupos com 1-20, especialmente 1-10 átomos de C. Exemplos de grupos de protecção hidroxi são, entre outros, benzilo, p-nitrobenzoilo, p-toluenos-sulfonilo, t-butilo e acetilo, em que benzilo e t-butilo são especialmente preferidos. Os grupos COOH em ácido aspártico e glutâmico são protegidos sob a forma do seu éster t--butílico (por exemplo, Asp(OBut)).

Os derivados funcionais utilizados como substância de partida dos compostos da fórmula I podem ser preparados segundo métodos comuns das sínteses de aminoácidos e de péptidos como são descritos, por exemplo, nas obras de base e nos pedidos de patente acima referidos, por exemplo, também segundo o método de fases sólidas segundo Merrifield (B. F Gysi u. R. B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 94, 3102 e seguintes (1972)). A libertação dos compostos da fórmula I a partir dos seus derivados funcionais realiza--se segundo o grupo de protecção utilizado - por exemplo com ácidos fortes, convenientemente com TFA ou ácido perclórico, mas também com outros ácidos inorgânicos fortes como ácido clorídrico ou ácido sulfúrico, ácidos carboxílicos inorgânicos fortes como ácido tricloracético ou ácidos sulfónicos como ácido benzenossulfónico ou p-toluenossulfónico. A presença de um dissolvente adicional inerte é possível, mas nem sempre necessário. Como dissolventes inertes adequam-se,

preferencialmente, ácidos orgânicos, por exemplo ácidos carboxílicos como ácido acético, éteres como tetra-hidrofurano ou dioxano, amidas como DMF, hidrocarbonetos halogenados como diclorometano, eventualmente também álcoois como metanol, etanol ou isopropanol assim como água. Ainda interessam também misturas dos dissolventes previamente referidos. De preferência é utilizado TFA em excesso sem adição de um dissolvente suplementar, ácido perclórico sob a forma de uma mistura de ácido acético e 70% de ácido perclórico na proporção de 9:1. As temperaturas da reacção para a separação situam-se, convenientemente, entre cerca de 0 e cerca de 50°, preferencialmente trabalha-se entre 15 e 30° (temperatura ambiente).

Os grupos BOC, OBut e Mtr podem ser separados, por exemplo, com TFA em diclorometano ou com HC1 cerca de 3 a 5 n em dioxano a 15-30°, o grupo FMOC com uma solução a cerca de 5-50% de dimetilamina, dietilamina ou piperidina em DMF a 15-30°.

Os grupos de protecção separáveis hidrogenoliticamente (por exemplo, CBZ ou benzilo) podem, por exemplo ser separados através por tratamento com hidrogénio em presença de um catalisador (por exemplo, um catalisador de metal nobre como paládio, convenientemente em um portador como carvão). Como dissolvente adequam-se, então, os álcoois acima mencionados mais especialmente, por exemplo, álcoois como metanol ou etanol ou amidas como DMF. A hidrogenólise é efectuada geralmente a temperaturas entre cerca de 0 e 100° e pressões entre cerca de 1 e 200 bar, de preferência, a 20-30° e 1-10 bar. Uma hidrogenólise do grupo CBZ é conseguida razoavelmente bem, por exemplo, com Pd-C 5 a 10% em metanol ou com formiato de amónio (em vez de H,) em Pd-C em metanol/DMF a 20-30°.

Compostos da fórmula I podem também ser obtidos por ciclização de compostos da fórmula II sob as condições de uma síntese de péptidos. Assim, trabalha-se convenientemente segundo os métodos correntes da síntese de péptido, como são descritos por exemplo em Houben-Weyl, l.c., Volume 15/11, páginas 1 a 806 (1974). 14 14 rs*.

A reacção efectua-se, preferencialmente, na presença de um agente desidratàhte,. por exemplo, uma carbodi-imida como DCC1 ou EDC1, ainda anidrido de ácido propanofosfórico (comparar Angew. Chem. 92 129 (1980)), difenilfosforilazida ou 2--etoxi-N-etoxicarbonil-l,2-di-hidroquinolina num dissolvente inerte, por exemplo, um hidrocarboneto halogenado como diclorometano, um éter como tetra-hidrofurano ou dioxano, uma amida como DMF ou dimetilacetamida, um nitrilo como acetonitrilo ou em misturas destes dissolventes, a temperaturas entre cerca de -10 e 40, preferencialmente, entre 0 e 30°. Para fomentar a ciclização intramolecular antes da ligação peptídica intermolecular, é conveniente trabalhar em soluções diluídas (princípio de diluição).

Em vez dos derivados II, podem ser utilizados na reacção derivados reactivos destas substâncias capazes de reacção, adequados, como por exemplo os do tipo em que os grupos reactivos intermediários são bloqueados por meio de grupos de protecção.

Os derivados de aminoácidos II podem, por exemplo, ser utilizados sob a forma dos seus ésteres activados, que são formados in situ convenientemente, por exemplo, por adição de HOBt ou N-hidroxisuccinimida.

As substâncias de partida da fórmula II são, como regra geral, novas. Estas podem ser preparadas segundo métodos conhecidos, por exemplo, os métodos mencionados atrás para a síntese dos péptidos e a separação dos grupos de protecção.

Normalmente, são sintetizados em primeiro lugar ésteres de pentapéptidos protegidos da fórmula R’-Z-OR’\ por exemplo, BOC-Z-O Me ou BOC-Z-OEt, que são primeiramente saponificados em ácidos da fórmula R’-Z-OH, por exemplo, BOC-Z-OH; a partir destes ácidos, é separado o grupo de protecção R’ por meio do que se obtêm os péptidos livres da fórmula H-Z-OH (II). A derivatização de um ciclopéptido, o qual corresponde a um composto da fórmula I, realiza-se da mesma forma por métodos em si conhecidos, como a alquilação de aminas,

a esterificação de ácidos carboxílicos ou a substituição nucleofílica de átomos de Cf alifáticos e descritos em cada Manual da Química Orgânica, por exemplo, J. March, Adv. Org. Chem., John Wilev & Sons N. Y. (1985).

Uma base da fórmula I pode ser transformada no respectivo sal de adição de ácido com um ácido. Para esta reacção interessam especialmente ácidos que originam sais fisiologicamente aceitáveis. Assim, podem ser utilizados ácidos inorgânicos, por exemplo, ácido sulfúrico, ácido nítrico, halogenetos de hidrogénio como ácido clorídrico ou ácido bromídrico, ácido fosfórico como ácido ortofosfórico, ácido sulfâmico, e ainda ácidos orgânicos, especialmente ácidos carboxílicos, sulfónicos ou \ sulfuricos alifáticos, alicíclicos, aralifáticos, aromáticos ou heterocíclicos monofuncionais ou polifuncionais, por exemplo, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido piválico, ácido dietilacético, ácido malónico, ácido succínico, ácido pimélico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido málico, ácido benzóico, ácido salicílico, ácido 2- ou 3-fenilpropiónico, ácido cítrico, ácido glucónico, ácido ascórbico, ácido nicotínico, ácido isonicotínico, ácido metanossulfónico ou etanossulfónico, ácido etanodissulfónico, ácido 2-hidroxie-tanossulfónico, ácido benzenossulfónico, ácido p-toluenossulfónico, ácidos naftaleno--monossulfónicos- e dissulfónicos, ácido laurilsulfurico. Os sais com sais fisiológicos não aceitáveis, por exemplo, picratos, podem ser utilizados para o isolamento e/ou a purificação dos compostos da fórmula I.

Por outro lado, um ácido da fórmula I por reacção com uma base pode ser convertido num dos seus sais metálicos ou amoniacais fisiologicamente aceitáveis. Como sais interessam especialmente os sais de sódio, potássio, magnésio, cálcio e amónio e ainda sais de amónio substituídos, por exemplo, os sais de dimetilamónio, dietilamónio ou di--isopropilamónio, sais de monoetanolamónio, dietanolamónio ou trietanolamónio, sais de ciclo-hexilamónio de diciclo-hexilamónio, sais de dibenziletilenodiamónio e, adicionalmente por exemplo sais com N-metil-D-glucamina ou com arginina ou lisina. 16

Os novos compostos da fórmula I e os seus sais fisiologicamente aceitáveis podem ser utilizados para a preparação de composições farmacêuticas, em quem são colocados juntamente com, pelo menos, uma substância veicular ou auxiliar e, caso desejado, juntamente com uma ou mais substância(s) activa(s) adicional/adicionais numa forma de dosagem apropriada. As composições assim obtidas, podem ser utilizadas como medicamento nas medicinas humana e veterinária. Como substâncias veiculares interessam as substâncias orgânicas ou inorgânicas, que são apropriadas para a aplicação entérica (por exemplo, oral ou rectal), parentérica (por exemplo, injecção intravenosa) ou local (por exemplo, tópica, dérmica, oftálmica ou nasal) ou para uma aplicação sob a forma de um spray de inalação e não reagem com os novos compostos, por exemplo, água ou solução aquosa isotónica de sal de cozinha , álcoois inferiores, óleos vegetais, álcoois benzílicos, polietilenoglicóis, triacetato de glicerina e outros glicéridos de ácidos gordos, gelatinas, lecitina de soja, hidratos de carbono como lactose ou amido, estearato de magnésio, talco, celulose, vaselina. Para a utilização oral servem especialmente comprimidos, drageias, cápsulas, xaropes, sumos ou gotas; de interesse são especialmente os comprimidos de lactato e cápsulas com revestimentos ou invólucros resistentes ao suco gástrico. Para a aplicação rectal servem supositórios, para aplicação parentérica servem soluções, de preferência, soluções oleosas ou aquosas, e ainda suspensões, emulsões ou implantes. Para a utilização tópica adequam-se, por exemplo, soluções que podem ser utilizadas sob a forma de gotas para os olhos, e ainda por exemplo, suspensões, emulsões, cremes, pomadas ou comprimatos. Para a aplicação como spray de inalação podem ser utilizados sprays que contêm a substância activa dissolvida ou suspensa num gás propulsor ou numa mistura de gases propulsores (por exemplo, C02 ou aditivos de hidrocarbonetos fluorclorados). Convenientemente, utiliza--se a substância sob a forma micronizada em que podem ser adicionados um ou mais dissolventes fisiologicamente compatíveis, por exemplo, etanol. As soluções de inalação podem administrar-se com o auxílio de inaladores comuns. Os novos compostos podem também ser liofilizados e os liofilizados obtidos, por exemplo, ser usados para a produção de preparados para injecção. As injecções podem, então, ser administradas como Bolus ou como infusão contínua (por exemplo, intravenosa, intramuscular, subcutânea ou intratecal). Os preparados administrados podem ser esterilizados e/ou 17s.,

''V ''ν. "V. conter substâncias auxiliares como agentes conservantes, estabilizantes e/ou molhántes, emulsificadores, sais para controlo da pressão osmótica, substâncias tampão, substâncias corantes e/ou aromatizantes. Podem, caso desejado, conter também uma ou mais outras substâncias activas, por exemplo, também uma ou mais vitaminas. —\ · ί ^.vW ,

As substâncias de acordo com a invenção podem, geralmente, ser administradas de forma análoga a outros péptidos conhecidos disponíveis comércialmente,. mas podem ser especialmente administrados de forma análoga aos compostos descritos na patente americana US-A-4 472 305, de preferência, em dosagens entre cerca de 0,05 e 500, especialmente entre 0,5 e 100 mg por unidade de dosagem. A dosagem diária situa-se, preferivelmente, entre cerca de 0,01 e 2 mg/kg de peso corporal. A dose especial para cada paciente determinado depende, contudo, dos mais diversos factores por exemplo da actividade do composto específico utilizado, da idade, peso corporal, estado geral de saúde, sexo, alimentação, momento e via de administração, velocidade de separação, combinação da substância farmacêutica e gravidade da respectiva doença, para a qual a terapia é válida. A aplicação parentérica é preferida. /

Um composto da presente invenção, em que Arg ou DArg é substituída por Orh ou DOm, pode ser utilizado como percursor para a síntese do péptido de acordo com a invenção, uma vez que Om pode ser transformado em Arg por meio de guanidinação. Este método é especialmente adequado para a preparação de péptidos contendo Arg marcados com 11C ou l4C.

Os novos compostos da fórmula I podem ainda ser utilizados como ligandos de integrina para a produção de colunas para a cromatografia por afinidade para a preparação de integrinas puras. O ligando, isto é, um derivado de péptido da fórmula I é acoplado covalentemente a um / portador polimérico através de funções de ancoragem. ........-18

/

Como materiais portadores poliméricos, são adequadas as fases poliméricas sólidas conhecidas na química dos péptidos com preferencialmente propriedades hidrófilas, por exemplo, poliaçúcar reticulado transversalmente como celulose, Sepharose ou Sephadex®, acrilamidas, polímero à base de polietilenoglicol ou Tentakelpolymere®.

Como funções de ancoragem, que estão acopladas com os portadores poliméricos, são adequadas de preferência as cadeias de alquileno lineares com 2-12 átomos de C, ligadas com uma extremidade directamente ao polímero e que apresentam na outra extremidade um grupo funcional como, por exemplo, hidroxi, amino, mercapto, maleinimida ou COOH e são, assim, adequados a serem associados com C- ou N--terminal do respectivo péptido.

Por conseguinte, é possível que o péptido seja ligado directamente ou através de uma segunda função de ancoragem com a ancoragem do polímero. Eventualmente, é possível que os péptidos, que contêm radicais de aminoácidòs com cadeias laterais funcionais, sejam ligados através destas à função de ancoragem do polímero.

Além disso, determinados radicais de aminoácidos que são componentes do péptido da fórmula I, podem ser modificados nas suas cadeias laterais, de modo que sejam disponibilizados para ancoragem através de, por exemplo, grupos SH, OH, NH2 ou COOH com a âncora do polímero.

No presente caso, são possíveis aminoácidos invulgares como por exemplo derivados de fenilalanina que possuem na posição 4 do anel de fenilo uma cadeia mercapto, hidroxi, amino ou carboxialquilo, em que o grupo funcional se encontra no fim da cadeia.

Exemplos de radicais de aminoácidos, cujas cadeias laterais servem directamente como função de ancoragem são, por exemplo, Lis, Om, Arg, Dab, Asp, Asn, Glu, Gin, Ser, Tre, Cis, Cit ou Tir.

Exemplos de ancoragens N-terminais são radicais como, por exemplo, -ΟΟ-Ο,Η^ΝΗ,Τ-''- -CO-C„H2n-OH, -CO-C„H2n-SH ou - CO-CnH2n-COOH com n = 2-12, em que o comprimento da cadeia de alquileno não é crítico e esta pode eventualmente ser substituída, por exemplo, por radicais arilo ou alquilarilo correspondentes.

As ancoragens C-terminais podem, por exemplo, ser -0-CnH2n-SH-, -0-CnH2n-0H, -0-CnH2n-NH2, -0-CnH2n-C00H, -NH-CnH2n-SH, -NH-CnH2n-OH, -NH-C„H2n-NH2 ou -NH-CnH2ll-COO, em que para n, assim como para a cadeia de alquileno, é utilizado o corte indicado anteriormente. A preparação dos materiais para a cromatografia de afinidade para a purificação de integrina, efectua-se sob condições idênticas às de condensação de aminoácidos comuns que são em si conhecidas e já foram descritas no capítulo para a preparação dos compostos da fórmula I.

Juntamente com a utilização de ciclopéptidos para a imobilização sobre materiais poliméricos para a produção de colunas de cromatografia por afinidade, é possível utilizar os compostos com as respectivas cadeias laterais funcionais para a sua posterior derivatização com reagentes auxiliares de diagnóstico como, por exemplo, substituintes fluorescentes. É ainda possível introduzir adicionalmente nas cadeias laterais dos radicais D e E, grupos funcionais como grupos amino, mercapto ou carboxi, por meio dos quais podem ser produzidos conjugados com proteínas ou outras substâncias de elevados pesos moleculares como, por exemplo, para fins de imunização e/ou produção de anticorpos.

Todas as temperaturas mencionadas anterior e posteriormente são expressas em °C. Nos exemplos que se seguem “processamento comum” significa: adicionar-se água, caso seja necessário, neutralizar-se, extrair-se com éter ou dicloroetano, separar-se, secar-se a fase orgânica sobre sulfato de sódio, filtrar-se, evaporar-se e purificar-se por cromatografia em gel de sílica e/ou cristalização. RZ = tempo de retenção (minutos). O 20 ensaio analítico realiza-se por meio de HPLC em Lichrosorb® select B ( 7 pm)- coluna''' 250 x 4 mm; eluente A: 0,3% de TFA em água; eluente B: 0,3% de TFA em Í--propanol/água (8:2) gradiente 1-99% de B em 50 min a 1 ml/min. Passagem e detecção a 215 nm. M’ = pico molecular no espectro de massa, é obtido de acordo com o método de Bombardeamento Rápido de Átomos (“Fast Atom Bombardment”) (FAB).

Exemplo 1

Uma solução de 0,6 g de H-NMe-Arg(Mtr)-Gli-Asp(OBut)-D-Fen-Val-ONa [por exemplo, obtenível a partir de Fmoc-NMe-Arg(Mtr)-Gli-Asp(OBut)-D-Fen-Val-0--Wang, em que O-Wang significa o radical utilizado nas técnicas de Merrifield modificadas, de uma resina 4-oximetil-fenoximetil-poliestireno, por eliminação do grupo Fmoc com piperidina/DMF e separação da resina com TFA/CH2C12 (1:1)] em 15 ml de DMF, é diluída com 85 ml de diclorometano e misturada com 50 mg de NaHC03. Após arrefecimento numa mistura de gelo seco/acetona são adicionados 40 μΐ de difenilfosforilazida. Após 16 horas de repouso à temperatura ambiente, concentra-se a solução. O concentrado é filtrado com gel (coluna Sephadex GlO-coluna em isopropanol/água 8:2) e depois purificado, de forma corrente, por meio de HPLC. Obtém-se após tratamento com TFA/H20 (98:2) ciclo-(NMe-Arg-Gli-Asp-D-FEn-Val); RZ = 18,1; FAB-MS (Μ + H): 589.

De forma semelhante obtêm-se por ciclização dos péptidos correspondentes lineares e a separação dos grupos de protecção: ciclo-(Arg-NMeGli-Asp-DFen-Val); RZ = 17,9; FAB-MS (Μ + H): 589; ciclo-(Arg-Gli-NMeAsp-DFen-Val); RZ = 18,3; FAB-MS (Μ + H): 589; ciclo-(Arg-Gli-NMeAsp-DFen-Val) x TFA; RZ = 15,4; FAB-MS (Μ + H): 589: ciclo-(Arg-Gli-Asp-NMeDFen-Val); RZ = 18,9; FAB-MS (Μ + H): 589; ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NMeVal); RZ = 19,5; FAB-MS (Μ + H): 589; cicIo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NMeLis); RZ = 11,1; FAB-MS (Μ + H): 618; ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NMeLis(benziloxicarbonil) x TFA; RZ = 23,4; FAB-MS + H): 752; ciclo-(NEArg-Gli-Asp-DFen-Val); FAB-MS (Μ + H): 603; ciclo-(Arg-NEtGli-Asp-DFen-Val); FAB-MS (Μ + H): 603; ciclo-(Arg-Gli-NEtAsp-DFen-Val); FAB-MS (Μ + H): 603; ciclo-(Arg-Gli-Asp-NEtDFen-Val); FAB-MS (Μ + H): 603; ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NEtVal); FAB-MS (Μ + H): 603; ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen(4-l)-NMeVal); RZ= 23,5; FAB-MS (Μ + H): 715; ciclo-(NPrArg-Gli-Asp-DFen-Val); FAB-MS (Μ -ί- H): 617; ciclo-(Arg-NPrGli-Asp-DFen-Val); FAB-MS (Μ + H): 617; ciclo-(Arg-Gli-NPrAsp-DFen-Val); FAB-MS (M + FI): 617; ciclo-(Arg-Gli-Asp-NPrDFen-Val); FAB-MS (Μ + H): 617; ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NPrVal); FAB-MS (Μ + H): 617; ciclo-(NBzlArg-Gli-Asp-DFen-Val); FAB-MS (Μ + H): 665; ciclo-(Arg-NBzlGli-Asp-DFen-Val); FAB-MS (Μ + H): 665; ciclo-(Arg-Gli-NBzlAsp-DFen-Val); FAB-MS (Μ + H): 665; ciclo-(Arg-Gli-Asp-NBzlDFen-Val); FAB-MS (Μ + H): 665; ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NBzlVal); FAB-MS (Μ + H): 665; ciclo-(Arg-Gli-Asp-Fen-DNMeVal) x TFA; RZ = 18,2; FAB-MS (Μ + H): 589; ciclo-(NMeArg-Gli-Asp-DFen-Leu); FAB-MS (Μ + H): 603; ciclo-(Arg-NMeGli-Asp-DFen-Leu); FAB-MS (Μ + H): 603; ciclo-(Arg-Gli-NMeAsp-DFen-Leu); FAB-MS (Μ + H): 603; ciclo-(Arg-Gli-Asp-NMeDFen-Leu); FAB-MS (Μ + H): 603; ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NMeLeu); FAB-MS (Μ + H): 603; ciclo-(NEtArg-Gli-Asp-DFen-Leu); FAB-MS (Μ + H): 617; ciclo-(Arg-NEtGli-Asp-DFen-Leu); FAB-MS (Μ + H): 617; ciclo-(Arg-Gli-NEtAsp-DFen-Leu); FAB-MS (Μ + H): 617; cicio-(Arg-Gli-Asp-NEtDFen-Leu); FAB-MS (Μ + H): 617; ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NEtLeu); FAB-MS (Μ + H): 617; ciclo-(NPrArg-Gli-Asp-DFen-Leu); FAB-MS (M + H): 631; ciclo-(Arg-NPrGli-Asp-DFen-Leu); FAB-MS (Μ + H): 631; ciclo-(Arg-Gli-NPrAsp-DFen-Leu); FAB-MS (Μ + H): 631; ciclo-(Arg-Gli-Asp-NPrDFen-Leu); FAB-MS (Μ + H): 631; ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NPrLeu); FAB-MS (Μ + H): 631; ciclo-(NBzlArg-Gli-Asp-DFen-Leu); FAB-MS (Μ + H): 679; ciclo-(Arg-NBzlGli-Asp-DFen-Leu); FAB-MS (Μ + H): 679; ciclo-(Arg-Gli-NBzlAsp-DFen-Leu); FAB-MS (Μ + H): 679; ciclo-(Arg-Gli-Asp-NBzlDFen-Leu); FAB-MS (Μ + H): 679; ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NBzlLeu); FAB-MS (Μ + H): 679; ciclo-(NMeArg-Gli-Asp-DFen-Ala); ciclo-(Arg-NMeGli-Asp-DFen-Ala); ciclo-(Arg-Gli-NMeAsp-DFen-Ala); ciclo-(Arg-Gli-Asp-NMeDFen-Ala); ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NMeAla); RZ = 16,2; FAB-MS (Μ + H): 561 ciclo-(NEtArg-Gli-Asp-DFen-Ala); ciclo-( Arg-NEtGli-Asp-DFen-Ala); ciclo-(Arg-Gli-NEtAsp-DFen-Ala); ciclo-(Arg-Gli-Asp-NEtDFen-Ala); ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NEtAla); ciclo-(NPrArg-Gli-Asp-DFen-Ala); ciclo-(Arg-NPrGli-Asp-DFen-Ala); ciclo-(Arg-Gli-NPr Asp-DFen-Ala); ciclo-(Arg-Gli-Asp-NPrDFen-Ala); 2 j ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NPrAla);

ciclo-(NBzlArg-Gli-Asp-DFen-Ala); ciclo-(Arg-NBzlGli-Asp-DFen-Ala); ciclo-( Arg-Gli-NB zl Asp-DF en- Ala); ' ciclo-(Arg-Gli-Asp-NBzlDFen-Ala); ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NBzlAla); ciclo-(NMeArg-Gli-Asp-DFen-Gli); ciclo-(Arg-NMeGli-Asp-DFen-Gli); ciclo-(Arg-Gli-NMeAsp-DFen-Gli); ciclo-(Arg-Gli-Asp-NMeDFen-Gli); ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NMeGli); RZ = 14,3; FAB-MS (Μ + H): 547; ciclo-(D Arg-Gli-Asp-DFen-NMeV al) x TF A; RZ = 18,7; FAB-MS (Μ + H): 589; ciclo-(NEtArg-Gli-Asp-DFen-Gli); ciclo-( Arg-NEtGli-Asp-DF en-Gli); cicl o-( Arg-Gli-NEtAsp-DFen-Gli); ciclo-(Arg-Gli-Asp-NEtDFen-Gli); ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NEtGli); ciclo-(NPrArg-Gli-Asp-DFen-Gli); ciclo-(Arg-NPrGli-Asp-DFen-Gli); ciclo-( Arg-Gli-NPr Asp-DF en-Gli); ciclo-(Arg-Gli-Asp-NPrDFen-Gli); ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NPrGli); ciclo-(NBzlArg-Gli-Asp-DFen-Gli); ciclo-(Arg-NBzlGli-Asp-DFen-Gli); ciclo-(Arg-Gli-NBzlAsp-DFen-Gli); ciclo-(Arg-Gli-Asp-NBzlDFen-Gli);

ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NBzlGli); ciclo-(NMeArg-Gli-Asp-Fgl-Val); ciclo-(Arg-NMeGli-Asp-Fgl-Val); ciclo-(Arg-Gli-NMeAsp-Fgl-Val); ciclo-(Arg-Gli-Asp-NMeFgl-Val); ciclo-(Arg-Gli-Asp-F gl-NMeV al); ciclo-(NEtArg-Gli-Asp-Fgl-Val); ciclo-(Arg-NEtGli-Asp-Fgl-Val); ciclo-(Arg-Gli-NEtAsp-Fgl-Vai); ciclo-( Arg-Gli-Asp-NEtF gl-Vai); ciclo-(Arg-Gli-Asp-Fgl-NEtVal); ciclo-(NPrArg-Gli-Asp-Fgl-Val); ciclo-(Arg-NPrGli-Asp-Fgl-Val); ciclo-(Arg-Gli-NPrAsp-Fgl-Val); ciclo-( Arg-Gli-Asp-NPrF gl-V al); ciclo-(Arg-Gli-Asp-Fgl-NPrVal): ciclo-(NBzl Arg-Gli-Asp-F gl-V al); ciclo-( Arg-NBzlGli-Asp-F gl-V al); ciclo-(Arg-Gli-NBzlAsp-Fgl-Val); ciclo-( Arg-Gli-Asp-NBzlFgl-Val); ciclo-(Arg-Gli-Asp-F gl-NBzlVal); ciclo-(NMe Arg-Gli-Asp-T rp-V al); ciclo-(Arg-NMeGli-Asp-Trp-Val); ciclo-( Arg-Gli-NMeAsp-T rp-V al); ciclo-(Arg-Gli-Asp-NMeTrp-Val); ciclo-(Arg-Gli-Asp-Trp-NMeVal); li 25 í

ciclo-(NEtArg-Gli-Asp-Trp-Val); ciclo-(Arg-NEtGli-Asp-Trp-Val); ciclo-(Arg-Gli-NEtAsp-Trp-Val); ciclo-(Arg-Gli-Asp-NEtTrp-Val); ciclo-(Arg-Gli-Asp-Trp-NEtV al); ciclo-(NPr Arg-Gli-Asp-T rp-Vai); ciclo-(Arg-NPrGli-Asp-Trp-Val); ciclo-(Arg-Gli-NPrAsp-Trp-Val); ciclo-(Arg-Gli-Asp-NPrTrp-Val); ciclo-(Arg-Gli-Asp-Trp-NPrVal); ciclo-(NBzlArg-Gli-Asp-Trp-V al); ciclo-( Arg-NBzIGli-Asp-Trp-V al); ciclo-( Arg-Gli-NBzl Asp-T rp-V al); ciclo-( Arg-Gli-Asp-NBzlT rp-V al); ciclo-(Arg-Gli-Asp-Trp-NBzlVal);

Exemplo 2

Uma solução de 0,28 g de ciclo-(Arg(Mtr)-Gli-Asp-NMeFen-DVal) [obtenível por ciclização de acordo com o Exemplo 1] em 8,4 ml de TF A, 1,7 ml de diclorometano e 0,9 ml de tiofenol deixa-se repousar 4 horas à temperatura ambiente, concentra-se subsequentemente e é liofilizado após diluição com água. A filtração do gel em Sephadex G 10 (ácido acético/água 1:1) e subsequente purificação mediante HPLC preparativa sob as condições indicadas rende ciclo-(Arg-Gli-Asp-NMeFen-DVal); FAB--MS (Μ + H): 589.

De forma semelhante obtém-se: a partir de ciclo-(Arg(Mtr)-Gli-NMeAsp-DFen-Ile): ciclo-(Arg-Gli-NMeAsp-DFen-Ile); FAB-MS (Μ + H): 603; a partir de ciclo-(D-Arg(Mtr)-NMeGli-Asp(OBut)-DF en-Nle): ciclo-(D-Arg-NMeGli-Asp-DFen-Nle); a partir de ciclo-(NMeArg(Mtr)-Gli-D-Asp(OEt)-DFen-Ile): ciclo-(NMeArg-Gli-D-Asp-DFen-Ile); a partir de ciclo-(NMeArg(Mtr)-Gli-Asp-Fen-Dlle): c iclo-(NMe Arg-Gli-Asp-F en-D lie); a partir de ciclo-(Arg(Mtr)-Gli-NMeAsp-Fen-DLeu): ciclo-(Arg-Gli-NMeAsp-Fen-DLeu); a partir de ciclo-(Arg(Mtr)-NMeGli-Asp-Fen-DSer): ciclo-(Arg-NMeGli-Asp-Fen-DSer); a partir de ciclo-(Arg(Mtr)-NMeGli-Asp-DNal-Leu): ciclo-(Arg-NMeGli-Asp-DNal-Leu); a partir de ciclo-(NMeArg(Mtr)-Gli-Asp-Nal-DLeu): ciclo-(NMeArg(Mtr)-Gli-Asp-Nal-DLeu); a partir de ciclo-( Arg(Mtr)-Gli - Asp-NMeF gl-D Vai): ciclo-(Arg(Mtr)-Gli-Asp-NMeFgl-DV al; a partir de ciclo-( Arg(Mtr)-Gli -NMeAsp-T rp-D V al): ciclo-(Arg(Mtr)-Gli -NMe Asp-Trp-D V al). Exemplo 3 São dissolvidos 80 mg de ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NMeVal) cinco a seis vezes em HC1 0.01 me após cada processo de dissolução liofiliza-se. A purificação subsequente rende por meio de HPLC proporciona ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NMeVal) x HC1; FAB-MS(M+ H) 589.

De forma análoga obtém-se a partir de ciclo-(NMeArg)-Gli-Asp-DF en-V al): ciclo-(NMeArg)-Gli-Asp-DFen-Val) x HC1; a partir de ciclo-(Arg-NMeGli-Asp-DFen-V al): ciclo-(Arg-NMeGli-Asp-DFen-Val) x HC1; FAB-MS (Μ + H): 589; a partir de ciclo-(Arg-Gli-NMeAsp-DFen-Val): ciclo-(Arg-Gli-NMeAsp-DFen-Val) xHCl; a partir de , ciclo-(Arg-Gli-Asp-NMeDFen-Val): ciclo-(Arg-Gli-Asp-NMeDFen-Val) x HC1. a partir de ciclo-( Arg-Gli- Asp-F en-DNMe-V al): ciclo-(Arg-Gli-Asp-Fen-DNMe-Val) x HC1; RZ = 18,2; FAB-MS (M + H): 589.

De forma análoga obtém-se por tratamento com ácido acético (AcOH): a partir de ciclo-(Arg-Gli-NMeAsp-DFen-Val): ciclo-(Arg-Gli-NMeAsp-DFen-Val) x AcOH; RZ = 15,4; FAB-MS (M + H): 589.

De forma análoga obtém-se por tratamento com ácido metanossulfónico (MeS03H): a partir de cíclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NMeVal): 28 ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NMeVal) x MeS03H; RZ = 17,8; FAB-MS (M + H): 589.

Exemplo 4

Para a preparação de fases de afinidade suspende-se 0,9 g de polímero N-maleinimido-(CH2)5-CO-NH-(CH2)3-polímero [obtenível através de condensação de polímero N--maleinimido-(CH2)5-COOH com H2N-(CH2)3]-polímero em 10 ml de tampão fosfato de sódio 0,1 M a pH 7 e adiciona-se a 4o um equivalente de ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen--NMeLis(CO(CH2)2SH). Agita-se 4 horas com aquecimento simultâneo da mistura reaccional até à temperatura ambiente, filtra-se o resíduo sólido e lava-se duas vezes de cada vez com 10 ml de solução de tampão (pH 7) e subsequentemente três vezes cada vez com 10 ml de água. Obtém-se ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NMeLis(CO(CH2)2S-3-(N--maleinimido-(CH2)3-CONH-(CH2)3-polímero)).

Exemplo 5

De forma análoga ao Exemplo 4 obtém-se através de condensação de Polímero 0-(CH2)3-NH2 [obtenível comercialmente] e Ciclo-(Arg-Gli-Asp-NMe-DFen--Lis(CO(CH2)4COOH) [obtenível por condensação de ácido adípico com ciclo-(Arg--Gli-Asp-NMe-DFen-Lis) sob as condições referidas] a seguinte fase polimérica: ciclo--(Arg-Gli-Asp-NMe-DFen-Lis-(CO-(CH2)4-CO-NH-(CH2)3-0-Polímero).

De forma análoga, obtém-se por condensação de ciclo-(NMe-Arg-Gli-Asp-DFen-Li s-(CO-(CH2)5-NH2) com HOOC-CH2-0-polímero: ciclo-(NMe-Arg-Gli-Asp-DFen-Lis-(C0-(CH2)5-NH-CO-CH2-O-polímero)).

Os seguintes exemplos referem-se a preparados farmacêuticos.

Exemplo A: Frascos para injecção

Uma solução de 100 g de um ciclopéptido da fórmula I e 5 g de hidrogenofosfato de dissódio em 3 1 de água bidestilada, é ajustada em 2 n de ácido salino a pH de 6,5, filtrados esterilmente. enchidos num frasco de injecção liofílizado sob condições estéreis e fechado de forma estéril. Cada frasco para injecção contém 5 mg de substância activa.

Exemplo B: Supositórios

Funde-se uma mistura de 20 g de substância activa da fórmula I com 100 g de lecitina de soja e 1400 g de manteiga de cacau, vaza-se em moldes e deixa-se arrefecer. Cada supositório contém 20 mg de substância activa.

Exemplo C: Solução

Prepara-se uma solução de 1 g de substância activa da fórmula I, 9,38 g de NaH2PO, x 2 H20, 28,48 g de Na2HP04 x 12 H20 e 0,1 g de cloreto de benzalcónio em 940 ml de água bidestilada. Ajusta-se a pH 6,8, completa-se o volume de 1 I e esteriliza-se por irradiação. Esta solução pode ser utilizada sob a forma de gotas para os olhos.

Exemplo D: Pomada

Misturam-se 500 g de substância activa da fórmula I com 99,5 g de vaselina sob condições assépticas.

Exemplo E: Comprimidos

Comprime-se uma mistura de 100 g de um ciclopéptido da fórmula I, 1 kg de lactose, 600 g de celulose mirocristalina, 600 g de amido de milho, 100 g de polivinilpirrolidona, 80 g de talco e 10 g de estearato de magnésio de modo a obter 30 --VjU^ comprimidos, de forma corrente, de forma que cada comprimido contenha 10 mg de ! substância activa.

Exemplo F: Drageias

Formam-se comprimidos como se indica no Exemplo E e revestem-se subsequentemente, de forma corrente, com um revestimento de sacarose, amido de milho, talco, tragacanto e corante.

Exemplo G: Cápsulas

De forma corrente, enchem-se cápsulas de gelatina dura com uma substância activa da fórmula I de maneira que cada cápsula contenha 5 mg de substância activa.

Exemplo H: Spray de inalação

Dissolvem-se 14 g de substância activa da fórmula I em 10 1 de solução de NaCl isotónica e embala-se a solução num recipiente de pulverização com mecanismo de bomba. A solução pode ser pulverizada na boca ou nariz. Um jacto de pulverização (cerca de 0,1 ml) corresponde a uma dose de cerca de 0,14 mg.

Lisboa, 2 8 ÂBR. 2000

Maria Silvina Ferreira

ANA SILVA CARVALHO AC;_ ...

Claims

5¾¾ 1 REIVINDICAÇÕES 1. Ciclopéptidos da fórmula I ciclo-(n-Arg-nGli-nAsp-nD-nE) I, em que D e E significam cada um respectivamente de maneira independente, Gli, Ala, b-Ala, Asn, Asp, Asp(OR), Arg, Cha, Cis, Gin, His, Ile, Leu, Lis, Lis(Ac), Lis(AcNH2), Lis(AcSH), Met, Nal, Nle, Om, Fen, 4-Hal-Fen, homoFen, Fgl, Pro, Pia, Ser, Tre, Tia, Tic, Trp, Tir ou Vai, em que os referidos radicais de aminoácidos também podem estar derivatizados, R alquilo com 1-18 átomos de C, Hal F, Cl, Br, I, Ac alcanoilo com 1-10 átomos de C, aroilo com 7-11 átomos de C ou aralcanoilo com 8-12 átomos de C, n um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo R, benzilo ou um radical aralquilo com 7-18 átomos de C na função alfa-amino do radical aminoácido correspondente com a condição de, pelo menos, um radical de aminoácido ser disponibilizado por intermédio de um substituinte n, em que n significa R e em que o composto <ArgGliaspNMeFenGli> é exceptuado, e em que, desde que se trate de radicais de aminoácidos opticamente activos e derivados de aminoácidos, tanto as formas D como as formas L estão incluídas, assim como os respectivos sais fisiologicamente aceitáveis.
2. Um enantiómero ou um diastereómero de um composto da fórmula I de acordo com a reivindicação 1. 2 3. (a) ciclo-(NMeArg-Gli-Asp-D-Fen-Val); (b) ciclo-(Arg-Gli-Asp-DFen-NMeVal); (c) cido-(Arg-NMeGli - Asp-DF en-V ai); (d) c icl o-(Arg-Gli-NMe Asp-DFen-V al); (e) ciclo-(Arg-Gli-Asp-NMeDFen-Val); de acordo com a reivindicação 1, assim como os respectivos sais fisiologicamente aceitáveis.
4. Processo para a preparação de um composto da fórmula I de acordo com a reivindicação 1 ou um seu sal, caracterizado pelo facto de se libertar o composto a partir de um seu derivado funcional por tratamento com um agente solvolisante ou hidrogenolisante ou se tratar um péptido da fórmula II, H-Z-OH II, em que Z significa -nArg-nGli-nAsp-nD-nE-nGli-nAsp-nD-nE-nArg-nAsp-nD-nE-nArg-nGli-nD-nE-nArg-nGli-nAsp- ou nE-nArg-nGli-nAsp-nD-, ou um derivado reactivo de um péptido desta natureza com um agente ciclizante, ou se derivatizar por alquilação, acilação ou esterificação um ciclopéptido disponibilizado, o qual corresponde à fórmula I, por um ou mais grupos amina, grupos acídicos e/ou α-átomos de C activados

ácido ou base num dos seus sais.
5. Processo para a preparação de composições farmacêuticas, caracterizado pelo facto de se colocar numa forma de dosagem apropriada um composto da fórmula I segundo a reivindicação 1 e/ou um dos seus sais fisiologicamente aceitáve'1 juntamente com, pelo menos, um material veicular ou auxiliar sólido, líquido ou semi-líquido.
6. Uma preparação farmacêutica, caracterizada por um teor de, pelo menos, um composto da fórmula geral I segundo a reivindicação 1 e/ou um dos seus sais fisiologicamente aceitáveis.
7. Utilização de compostos da fórmula I, de acordo com a reivindicação 1 ou dos respectivos sais fisiologicamente aceitáveis para a produção de um medicamento para o combate a doenças.
8. Utilização de compostos da fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, para a produção de ligandos imobilizados para cromatografia em colunas de afinidade.
9. Utilização de compostos da fórmula I, de acordo com a reivindicação 1, para a purificação de integrinas por cromatografia de afinidade. Lisboa, 2 8 ÂBR, 2000

ANA SILVA CARVALHO

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