PT727433E

PT727433E - Processo para a preparacao de 1-(2'-desoxi-2',2'-difluoro-d-ribo-pentofuranosil)-citosina a partir de 2-desoxi-2,2-difluoro-beta-d-ribo-pentopiranose

Info

Publication number: PT727433E
Application number: PT96300419T
Authority: PT
Inventors: David D Wirth
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1995-02-03
Filing date: 1996-01-22
Publication date: 2001-06-29
Also published as: CA2168080A1; ATE199724T1; ES2154788T3; US5559222A; CA2168080C; EP0727433A1; DK0727433T3; DE69612024T2; US5608043A; EP0727433B1; DE69612024D1; GR3035931T3; JPH08245685A

Description

h^rh C—4.( *-i -1 -

DESCRIÇÃO "PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE l-(2'-DESOXI-2',2'-DIFLUORO-D-RIBO-PENTOFURANOSIL)-CITOSINA A PARTIR DE 2-DESOXI-2,2-DIFLUORO-BETA-D-RIBO-PENTOPIRANOSE" A presente invenção refere-se à preparação de l-(2'-desoxi-2'-desoxi-2',2'-difluoro-D-rièo-pentofuranosil)-citosina (VI) a partir de 2-desoxi-2,2-difluoro-P-D-rz'òo-pentopiranose (I) como composto de partida. Em particular, a presente invenção refere-se a um processo onde 2-desoxi-2,2-difluoro-5-O-trifenilmetil-D-ríòo-pentofuranose α e β (II) são preparadas a partir de pento-piranose (I) por alquilação com cloreto de trifenilmetilo (tritilação). A l-(2'-desoxi-2',2'-difluoro-D-n00-pentofuranosil)-citosina (VI) é um agente antiviral e anti-cancerígeno.

As reacções de tritilação são descritas por Helferich em "Adv. Carbohvdrate Chemistrv. 3, 79-111 (1948). A reacção de um grupo hidroxi sobre um composto orgânico com cloreto de trifenilmetilo produz um éter trifenilmetílico. A reacção é vulgarmente efectuada em piridina que actua como um solvente e um aceitador de ácido. As reacções de tritilação são geralmente usadas com hidratos de carbono. A preparação de l-(2,-desoxi-2',2'-difluoro-D-r/6o-pentofuranosil)-citosina VI é descrita por Hertel et al., "J. Org. Cbem ". 53. 2406-2409 (1988) e / -2-

Chou et al., "Svnthesis". 565-570 (Junho de 1992). Usaram-se vias sintéticas diferentes para preparar o composto (VI). A preparação de 2-desoxi-2,2-difluoro-3-D-ríòo-pentopiranose (I) tem sido descrita na literatura. Assim, Hertel et al.,11J. Org. Chem.", 53. 2406-2409 (1988) e a Patente U.S. No. 4.954.623 de Nagarajan descrevem a reparação de pentopiranose (I). É, portanto, um objecto da presente invenção fornecer um processo para a preparação de l-(2'-desoxi-2,,2'-difluoro-D-n6<?-pentofuranosil)-citosina (VI) por meio de uma reacção intermediária usando uma reacção de tritilação que produza um produto de fiiranose (anel de 5 membros) a partir de um hidrato de carbono que, de outro modo, existe principalmente como uma piranose (anel de 6 membros). Mais ainda, é um objecto da presente invenção fornecer um processo que produza l-(2'-desoxi-2',2'-difluoro-D-nòo-pentofuranosil)-citosma (VI) com elevado rendimento. Estes e outros objectos tomar-se-ão cada vez mais evidentes em referência à descrição que se segue. A presente invenção refere-se a um processo para a preparação de 2-desoxi-2,2-difluoro-5-0-trifenilmetil-D-nbo-pentofuranose (II) que compreende: reagir, numa mistura de reacção, 2-desoxi-2,2-difluoro-P-D-nfo>-pentopiranose (I) com cloreto de trifenilmetilo e com uma base amina que também pode ser um solvente para a mistura de reacção a uma temperatura entre cerca de 20°C e 100°C para produzir (II); e separar (II) da mistura de reacção.

Em particular, a presente invenção refere-se a um processo de -3- —-i ( produzir l-(2'-desoxi-2',2,-diíluoro-D-n6o-pentofuranosil)-citosina (VI) e um isómero (VIA) alfa (a) a partir de 2,2-difluoro-D-riòo-pentopiranose (II) que compreende reagir, numa primeira mistura de reacção, 2-desoxi-2,2-difluoro-D-riòo-pentopiranose (I) com cloreto de trifenilmetilo e uma base amina que é também um solvente para a mistura de reacção, a uma temperatura entre 20°C e 100°C, para produzir 2-desoxi-2,2-difluoro-5-0-trifenilmetil-D-rzèofuranose (II) e separar (II) da primeira mistura de reacção; reagir, numa segunda mistura de reacção (II), com cloreto de metanossulfonilo, na presença de uma base amina num solvente orgânico, para formar 2-desoxi-2,2-difluoro-3-0-metilsulfonil-5-0-trifenilmetil-D-nòo-pentofiiranose-1 -metanossulfonato (III) e separar (ΠΙ) da segunda mistura de reacção; reagir, numa terceira mistura de reacção (III), com uma citosina protegida num solvente inerte, para formar l-(2'-desoxi-2',2'-difluoro-3'-0-metilsulfonil-5-0-trifenilmetil-D-ri6o-furanosil)-citosina (TV) que é separada da terceira mistura de reacção; reagir (IV), numa quarta mistura de reacção com um ácido, na presença de um solvente orgânico, para produzir l-(2'-desoxi-2,,2'-difluoro-3'-0-metilsulfonil-D-/'/òo-pentofuranosil)-citosina (V) e separar (V) da quarta mistura de reacção; e reagir (V) numa quinta mistura de reacção com um alcóxido de metal alcalino num solvente para formar l-(2'-desoxi-2,,2,-difluoro-D-rz6opentofuranosil)-citosina (VI e VIA) na mistura de reacção e separar (VI e VIA) da quinta mistura de reacção. A reacção, ou reacções, destinadas a produzir o intermediário (II) e l-(2,-desoxi-2'2'-difluoro-D-rz6o-pentofuranosil)-citosina (VI e VIA) são as seguintes: -4-

1 -(2 '-deoxi-2 '2 '-difluoro-D-ribo-pentofuranosil)-citosina (VI) e (X isómero(VIA)

Na preparação de 2-desoxi-2,2-difluoro-5-0-trifenilmetil-D-nòo-pentofuranose (II) a partir de 2,2-difluoro-D-rzôo-piranose (I), a reacção é conduzida na presença de uma base amina que também pode actuar como solvente para a reacção a uma temperatura entre 20° e 100°C. Esses solventes são aminas aromáticas heterocíclicas como piridina e 2-picolina. Solventes adicionais como os éteres (por exemplo, glima), hidrocarbonetos (por exemplo, hexono), hidrocarbonetos aromáticos (tolueno, clorobenzeno) e ésteres (por exemplo, acetato de etilo) podem ser usados para facilitar a mistura ou incorporação da reacção. Também podem ser usadas alquilaminas como a trietilamina mas não são preferidas. Na reacção, a base serve como um aceitador de ácido para o cloreto de hidrogénio gerado na reacção que produziu um sal -5-hidrocloreto de amina. Durante a reacção de tritilação, o anel de piranose de seis membros toma-se num anel de furanose de cinco membros com um grupo protector de trifenilmetilo na posição 5. Crê-se que esta transformação é regida por dois factores-chave, nomeadamente o equilíbrio das formas de piranose e de furanose do açúcar (que favorecem grandemente a indesejada forma furanose) e o facto de a tritilação dos alcoóis primários ser consideravelmente mais rápida do que a tritilação dos alcoóis secundários. Assim, visto que só a forma furanose contém um grupo álcool primário, é preferencialmente tritilada e esta reacção força o equilíbrio até uma posição que, de outro modo, seria menos estável. O isómero α (VIA) produzido com o l-(2'-desoxi-2',2'-difluoro-D-rióo-pentofuranosil)-citosina pode ser reciclado. O processo é descrito na Patente U.S. No. 4.954.623 de Nagaraian. O produto intermediário produzido pelo processo Nagaraian é 2-desoxi-2,2-difluoro-r/óo-piranose (I).

Registaram-se os espectros gerais de RMN num espectrómetro Bruker AC 300 (*H RMN a 300 MHz, 19F RMN a 282 MHz, 13C a 75 MHz). Os desvios químicos de *H RMN são referidos em δ ppm relativamente ao solvente (acetona-dtf, 2,04 ppm; CDC13, 7,24 ppm; DMSO- d6, 2,49 ppm). Os desvios químicos de 19F RMN são referidos em δ ppm relativamente a C6F6 (-162,9 ppm). Os desvios químicos de 13C RMN são referidos em δ ppm relativamente ao solvente (acetona- d6, 29,8 ppm; CDCI3, 77,0 ppm; DMSO- dt, 39,5 ppm). As multiplicidades são referidas como s (singuleto), brs (singuleto largo), d (dupleto), brd (dupleto largo), t (tripleto), dd (dupleto de dupletos), e dq (dupleto de quartetos). A cromatografia "flash" foi efectuada sobre silica gel 60 de EM Science, malha 230-400, e a TLC foi efectuada sobre placas de silica gel 60 reforçadas com vidro, de 0,25 mm de espessura, com um indicador fluorescente de 254 nm. A cromatografia de gás foi efectuada sobre um HP5890 com uma coluna capilar ID DB1 de 30 m x 0,1 mm com fluxo de hélio, uma injecção -6- h*. traccionada ("split"), e detecção de ionização por chama. A temperatura da coluna era de 50°C durante 3 minutos, 15°C/minuto até 250°C, e foi aí mantida durante 5 minutos. A HPLC foi efectuada usando um sistema SP8800 da Spectra-Physics com uma coluna de 25 cm Zorbax RX-C9 e uma velocidade de fluxo de 1,0 mL/minuto. Para compostos intermediários (II), (III), e (IV), o eluente era tampão a 60% (50 mM NaP^PCVI^O, pH 5,0) / acetonitrilo a 40%, e o detector foi marcado para 254 nm. Para os compostos (V), (VI) e (VIA), o eluente era tampão a 90% (50 mM Naf^PCVI^O, pH 5,0) / acetonitrilo a 10%, e o detector foi marcado para 270 nm. Os pontos de fusão foram determinados usando um dispositivo Meltemp e não estão corrigidos.

Passo 1

D-3,3-difluoro-4,5,6-tri-hidroxi-5,6-0-(l-etilpropilideno)hexeno

Um balão de fundo redondo de 250 mL, seco, equipado com um agitador mecânico, um condensador de refluxo e uma purga de azoto, foi carregado com 4,6 g de pó de zinco (70 mmol, 1,2 eq.), 9,3 g de D-gliceraldeído pentanido recentemente destilado (59 mmol), e 100 mL de THF anidro. Adicionou-se 3-bromo-3,3-difluoropropeno (6,6 mL, 65 mmol, 1,1 eq.) e a lama foi agitada sob azoto a temperatura ambiente durante três dias. Adicionaram-se 100 mL de éter ao balão, 40 mL de uma solução aquosa de bicarbonato de sódio a 5% e 2 g de um auxiliar de filtração. A lama foi filtrada, o bolo lavado com éter e água, e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída com 10 mL de éter e as camadas combinadas de éter foram lavadas com 20 mL de água. A -7- c-λ solução foi seca sobre sulfato de sódio anidro e foi concentrada em vácuo para produzir 13,8 g de um óleo amarelo. O produto foi purificado por meio de um corte central a partir de uma destilação em vácuo, pe 76-81°C, 0,7 mm Hg. O rendimento de alcoóis homo-alílicos purificados era de 5,7 g. A pureza global era de 95% por CG e a proporção eritro.treo era de 1,7:1 enquanto que, antes da destilação, era de 3,3:1. Os tempos de retenção na CG foram de 12,96 minutos para treo e de 13,16 minutos para eritro.

Eritro: !H RMN (CDC13) δ 6,15 (m, 1H), 5,85 (d, J=16 Hz, 1H), 5,62 (d, J=ll Hz, 1H), 4,4 (m, 1H), 4,2 (m, 1H), 4,1 (m, 1H), 1,75 (m, 4H), 1,05 (m, 6H). 19F RMN (DMSO- dõ) δ -108,6 (d,t J = 250 Hz, J = 15 Hz), -111,5 (t,d J = 250 Hz, J = 12 Hz). 13C RMN (CDC13) δ 130,2 (t, J = 25 Hz), 129,9 (t, J = 25 Hz), 121,0 (t, J = 10 Hz), 120,7 (q, J = 240 Hz), 112,7, 74,3, 73,1 (t, J = 30 Hz), 65,4,29,4, 28,9, 8,1, 8,0. ms (EI) 207 (M-Et), 129, 57. Treo: 'H RMN (CDC13) δ 6,2 (m, 1H), 5,85 (d, J = 16 Hz, 1H), 5,68 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,4 (m, 1H), 4,2 (m, 1H), 3,9 (m, 1H), 1,75 (m, 4H), 1,05 (m, 6H). ,9F RMN (DMSO- d6) δ -106,1 (d,t J = 250 Hz, J = 15 Hz), -111,3 (t,d J = 250 Hz, J = 12 Hz). I3C RMN (CDC13) δ 130,0 (t, J = 25 Hz), 130,0 (t, J = 25 Hz), 121,1 (t, J = 10 Hz), 120,7 (q, J = 240 Hz), 112,7, 74,2, 73,0 (t, J=30 Hz), 66,8,29,5, 29,0, 8,1, 8,0. ms (EI) 207 (M-Et), 129, 57.

Passo 2

2-Desoxi-2,2-difluoro-P-D-r/6o-pentopiranose (I) - 8-

fa*. ¥ Ή «-A A mistura de 2,7:1 de alcoóis homo-alílicos eritro e treo (0,53 g, 2,2 mmol) do Passo 1 foi dissolvida em 50 mL de cloreto de metileno e a solução foi colocada num balão de três tubuladuras e fundo redondo equipado com um tubo de aspersão e um agitador magnético. A solução foi agitada num banho de gelo e uma corrente de ozono a 2% em ar foi introduzida na solução até a cor azul persistir. Depois de purgar o ozono em excesso, adicionaram-se 7 mL de uma solução aquosa de tiossulfato de sódio a 7%. 5 minutos depois, as fases foram separadas, a camada inferior foi lavada com 10 mL de água e seca sobre sulfato de sódio anidro. A remoção do solvente em vácuo a temperatura ambiente produziu 0,31 g de um óleo incolor. Os espectros RMN deste aldeído (representado entre parêntesis) na reacção complicaram-se pela formação de hidrato mas a análise gc/ms como atrás referida (em que o hidrato se fenderia na válvula de injecção) indicava a presença dos dois aldeídos diastereoméricos (ms, EI, 209, perda de Et). O acetonitrilo (15 mL) e 1 mL de água foram adicionados ao óleo e a solução agitada a 53°C durante a noite. A solução foi evaporada sob vácuo elevado para produzir 0,21 g de um óleo incolor. A cromatografia de camada fina indicou duas pentopiranoses principais, RF 0,2 e 0,3 quando a sílica foi eluída com tolueno: álcool isopropílico, 5:1. Autêntico 2-desoxi-2,2-difluoro-β-D-nóopentopiranose (I) eluíu com um RF de 0,2. Os produtos foram separados por cromatografia "flash" sobre sílica usando o mesmo sistema solvente para produzir 40 mg do açúcar com RF 0,3 como um óleo incolor e 100 mg do conhecido açúcar intermediário pentopiranose (I), RF 0,2 que era cromatografica e espectroscopicamente idêntico ao material autêntico. 2,2-difluoro desoxixilose: RF 0,3; 1H RMN (acetona-d^, D2O) δ 5,05 (d, J = 6,4 Hz), 3,9 (d,q J = 22, 4,8 Hz, 1H), 3,85 (m, 2H), 3,72 (m, J = 1,5 Hz, 1H). 13C RMN (acetona-dí) 117,6 (q), 91,5 (q), 71,5 (t), 69,2 (t), 61,7 (s). 19F RMN (acetona-dtf) δ -118,9 (d,d J = 250, 4,9 Hz), -123,1 (d,d,d J = 250, 22, 6,0 Hz). -9- í (I) Rf 0,2; pf 137-139°C; ‘H RMN (acetona-^,) δ 3,64 (1 H), 3,91 (1 H), 3,94 (1 H), 4,05 (1 H), 5,02 (1 H); 19F RMN (acetona-d6) β -123,1 (brd, Jff=253 Hz), -119,2 (dq, J® = 3,7, 13,6 Hz, Jff = 250 Hz); 13C RMN (acetona-^) δ 63,56,68,55,68,55,91,89,117,30.

Análise para C5H804F2:

Calculado: C, 35,30; H,4,74; F, 22,34;

Encontrado: C, 35,59; H, 4,74; F, 22,52.

Passo 3

2-Desoxi-2,2-difluoro-5-(9-trifenilmetil-a- e -β-D-nèo-pentofuranose (II) A uma solução de 8,5 g de I (50 mmol) e 50 mL de piridina que foi agitada a 50°C durante 2 horas adicionaram-se 15,3 g de cloreto de trifenilmetilo (55 mmol, 1,1 eq.). A mistura de reacção foi mantida a 50°C sob uma atmosfera de azoto durante 20 horas. Depois da solução ter arrefecido a temperatura ambiente, foi vertida sobre 50 mL de gelo e agitada até atingir a temperatura ambiente. A camada aquosa foi extraída com éter (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com tampão de fosfato (2 x 100 mL 0,05 M NaH2PC>4, pH 4), bicarbonato aquoso (4 x 100 mL de NaHCC>3, saturado) e água (3 x 100 mL). Foram secas com MgS04, e concentradas em vácuo para produzir 23,1 g de II (47% de rendimento) como um óleo laranja que formou um sólido -10- h*· branco quando em repouso a temperatura ambiente. A RMN mostrou que o sólido era, principalmente, o anómero a. Purificação por cromatografia "flash" (35% de acetato de etilo/heptano) deu 3,9 g de II puro (83% de rendimento) que tinha as características físicas e espectrais que se seguem: RF 0,25 (35% de acetato de etilo/heptano); pf 122-123°C; *H RMN (anómero a, acetona-</<f) δ 3,24 (dd, 1 H, J = 5,0, 5,3 Hz), 3,35 (dd, 1H, J = 3,0, 7,3 Hz), 4,18 (m, 1 H), 4,27 (m, 1 H), 5,02 (d, 1 H, J = 6,2 Hz), 5,38 (t, 1 H, J = 6,8 Hz), 6,12 (d, 1 H, 6,4 Hz), 7,38 (m, 15 H); 19F RMN (anómero a, acetona-*/,?) δ -126,2 (dd, Jpp = 240 Hz, Jhf= 3,8 Hz), -110,5 (dq, JFF= 241 Hz, Jhp= 5,8, 9,2 Hz); 13C RMN (anómero a, acetona-*/*) δ 63,9, 72,5 (dd, J = 20, 11 Hz), 82,0 (d, J = 6,5 Hz), 87,2, 96,8 (q, J = 21 Hz), 123,4 (t, J = 248 Hz), 127,8,128,6,129,4,144,8; *H RMN (anómero β, acetona-*/*) δ 3,3 (m, 2H), 3,98 (m, 1H), 4,4 (m, 1H), 5,02 (d, 1H), 5,21 (t, 1H, J = 7,1 Hz), 6,39 (d, 1 H, 6,3 Hz), 7,38 (m, 15 H); 19F RMN (anómero β, acetona-*/*) δ -127,4 (dq, JFF = 234 Hz, Jhp= 5,7, 7,6 Hz), -125,7 (dd, JFF= 233 Hz, Jhf = 3,4 Hz); MS m/z (mistura α/β, intensidade relativa FD) 412 (100), 243 (15).

Análise para C24H22O4F2:

Calculado: C, 69,89; H, 5,38; F, 9,21;

Encontrado: C, 69,60; H, 5,48; F, 9,07;

Passo 4

PhjCO O PhsCO q ΝλγΟΗ W N^OSOíMe

T .MsCL^ ^ \ T

J-r—F Et3N, -f—F HON l CH2Cl2 MeSOaN » (m) (Π) 2-desoxi-2,2-difluoro-3-0-metilsulfonil-5-0-trifenilmetil-a- e β-D-nòo-pentofuranose-1 -metanossulfonato (ΠΙ)

Um balão de três tubuladuras de 250 mL, equipado com um - 11 - *.( *Ί agitador a nível superior, termómetro e funil de adição foi carregado com 3,0 g de pentofuranose (II) (7,3 mmol) e 120 mL de CH2CI2. A mistura foi agitada a temperatura ambiente até todos os sólidos estarem dissolvidos e, então, foi arrefecida até 0°C. A esta solução adicionaram-se, gota a gota, 2,5 g de cloreto de metanossulfonilo (21,9 mmol, 3,0 eq) em 5 mL de CH2CI2, enquanto a temperatura foi mantida entre 0o e 5°C. O funil de adição foi enxaguado com 5 mL de CH2CI2, e adicionaram-se 2,2 g de trietilamina (21,9 mmol, 3,0 eq.) gota a gota, mantendo a temperatura abaixo de 5°C, seguindo-se um enxaguamento adicional de 5 mL de CH2CI2. A mistura foi aquecida até temperatura ambiente e agitada durante 1,5 horas. A solução foi lavada (5 x 150 mL de NaHCC>3 saturado), seca com MgS04 e concentrada em vácuo, produzindo 4,0 g de pentofuranose-1-metanossulfonato, (III) (rendimento de 88%) como um sólido branco. A purificação por cromatografia "flash" (5% de éter/tolueno) produziu 0,3 g de anómero β de pentofuranose-1-metanossulfonato (III), que se decompôs quando em repouso, e 1,0 g de anómero α de pentofuranose- 1-metanossulfonato (III) (rendimento de 50%), que tinha as características espectrais que se seguem: Rf 0,3 (5% de éter/tolueno); *H RMN (CDC13), δ 3,02 (s, 1 H), 3,07 (s, 1 H), 3,44 (dd, 2 H, J = 3,9, 7,1 Hz), 4,48 (q, 1 H, J = 4,1 Hz), 5,20 (dd, 1 H, J = 4,5, 11,2 Hz), 6,09 (d, 1 H, J = 6,0 Hz), 7,38 (m, 15 H); 19F RMN (CDC13), δ -121,5 (d, Jpp = 255 Hz), -108,7 (JFF = 256 Hz, Jhf = 5,8, 9,9 Hz); ,3C RMN (CDC13) δ 38,7,40,2, 60,8, 74,6 (q, J = 19 Hz), 83,2, 87,3, 99,0 (q, J = 23 Hz), 143,0; FAB MS m/z (intensidade relativa) 568 (1,2), 491 (2,6), 395 (0,6), 243 (100), 155 (19), 119(34).

Análise para C26H26O8S2F2:

Calculado: C, 54,92; H, 4,61; S, 11,28; F, 6,68; Encontrado: C, 55,17; H, 4,86; S, 10,98; F, 6,64. - 12- íjA. £------- ( «-i

Passo 5

l-[2'-desoxi-2,,2'-difluoro-3,-0-metilsulfonil-5'-0-trifenilmetil-a- e β-D-riòo- pentofuranosil]-citosina (IV)

Um balão de quatro tubuladuras equipado com termómetro, manto de aquecimento, condensador e agitador a nível superior foi carregado com 2,6 g de citosina (23,2 mmol, 22 eq.), 15,2 mL de hexametildisilazano (72 mmol, 68,2 eq.) e 2,6 mg de (NH^SC^ (0,02 mmol, 0,015 eq.). A mistura foi aquecida até 120°C e agitada até a solução ficar transparente (1,5 horas). A solução foi então aquecida até 145°C e o excesso de HMDS foi removido por destilação. Quando a destilação atmosférica parou, a temperatura foi reduzida para Í20°C, e o HMDS foi destilado em vácuo até não haver líquido visível no vaso de reacção. A citosina sililada sólida adicionaram-se 2,1 mL de anisole e a lama foi agitada a 110°C até todos os sólidos estarem dissolvidos. Adicionou-se uma solução de 0,6 g de intermediário de pentofuranose-l-metanossulfonato (III) (1,06 mmol) em 0,8 mL de anisole e a mistura foi agitada a 110°C durante 4,5 horas. A mistura de reacção foi diluída com 8 mL de anisole; a solução foi reaquecida até 110°C e vertida vagarosamente para dentro de 30 mL de água a 0°C. Adicionaram-se mais 35 mL de água e a mistura foi agitada a 90°C até todos os sólidos se dissolverem. As camadas quentes foram separadas e a solução orgânica foi concentrada em vácuo, produzindo 0,43 g de intermediário de citosina em bruto (IV) (rendimento de 40%) como um óleo laranja-amarelo. A cromatografia "flash" (20% de 2-propanol/clorofórmio) forneceu 100 mg do anómero β, 40 mg do anómero a, e 240 mg de uma mistura α/β pura de citosina (IV). -13-

Observaram-se as seguintes características físicas e espectrais para 0 anómero a: RF 0,32 (20% de 2-propanol/clorofórmio); 'H RMN (DMSO-dá), δ 3,25 (s, 1 H), 3,4 (m, 2 H), 4,76 (m, 1 H) 5,55 (q, 1 H, J = 7,5 Hz), 5,83 (d, 1 H, J = 7,5 Hz), 6,50 (dd, 1 H, J = 7,2,2,4 Hz), 7,4 (m, 15 H), 7,5, (s, 2 H), 7,6 (d, 1 H); 19F RMN (DMSO-rf*), δ -121,4 (brd, Jff = 235 Hz), -112,8 (brd, JFF = 198 Hz); 13C RMN (DMSO-</6), δ 37,9, 62,2, 75,4, (q, J = 15 Hz), 79,6, 83,5, (q, J = 19 Hz), 86,6, 94,9, 121,1 (t, J = 261 Hz), 127,2, 128,0, 128,2, 140,9, 143,9, 154,6,165,8.

Observaram-se as seguintes características físicas e espectrais para o anómero β: RF 0,41 (20% de 2-propanol/clorofórmio); *H RMN (DMSO-</6), ò 3,21 (s, 1 H), 3,43 (m, 2 H), 4,32 (m, 1 H) 5,46 (q, 1 H, J = 9,0 Hz), 5,75 (d, 1 H, J = 7,5), 6,26 (t, 1 H, J = 8,5), 7,3 (m, 15 H), 7,50, (s, 2 H), 7,59 (d, 1 H, J = 7,5); 19F RMN (DMSO-40, δ -114,2 (brs, 2 F); ,3C RMN (DMSO-</6), δ 38,0,61,6, 74,5, (t, J = 24 Hz), 76,3, 86,7, 95,0, 121,0 (t, J = 261 Hz), 127,2, 128,0, 128,2, 143,1, 154,3, 165,8; FAB MS m/z (intensidade relativa) 584 (17), 342 (5), 243 (100), 155 (12), 133 (46). HRMS Calculado para C29H28N306SF2: 584,1667. Encontrado: 584,1692.

Passo 6

l-[2'-desoxi-2’,2'-difluoro-3'-0-metilsulfonil-a- e β-D-r/óopentofuranosil]-citosina (V) -14-

Um balão dc 10 mL de uma só tubuladura equipado com condensador, agitador magnético, sonda de temperatura e válvula para azoto foi carregado com 0,33 de intermediário de citosina (IV) (0,6 mmol) e 2 mL de acetonitrilo. O pH foi ajustado até 1,0 com HC1 (5% aq.). A solução foi aquecida até refluxo e agitada durante 3 horas. A solução arrefeceu até temperatura ambiente e adicionaram-se 4 mL de água para precipitar trifenilmetanol. A solução foi filtrada depois de agitação a temperatura ambiente durante 15 minutos. O precipitado foi lavado com água (2x2 mL), e os filtrados combinados foram concentrados em vácuo, produzindo 150 mg de intermediário de citosina (V) (rendimento de 45%).

Características físicas e espectrais (anómero α): 'H RMN (DMSO-d6), δ 3,4 (s, 1 H), 3,72 (m, 2 H), 4,64 (m, 1 H) 5,49 (q, 1 H, J = 8,0 Hz), 6,24 (d, 1 H), 6,36 (t, 1 H, J = 6,7 Hz), 7,99 (d, 1H,J = 7,8 Hz), 8,86, (s, 1 H), 9,97 (s, 1 H); 19F RMN (DMSO-</5), δ -120,4 (d, JFF = 240 Hz), -113,5 (d, Jff = 241 Hz);

Características físicas e espectrais (anómero β): *H RMN (DMSO-d6), δ 3,4 (s, 1 H), 3,72-3,82 (m, 2 H), 4,28 (m, 1 H) 5,30 (q, 1 H, J = 9,1 Hz), 6,24 (d, t, 2H), 8,06 (d, 1 H, J = 7,8 Hz), 8,86 (s, 1 H), 9,94, (s, 1 H); 19F RMN (DMSO-£/tf), δ -114,1 (brs, 2 F); 13C RMN (DMSO-d*), δ 38,2, 59,8, 74,1, (t, J = 24 Hz), 79,4, 84,1, (t, J = 31 Hz), 95,4,121,0, (t, 262 Hz), 144,2 147,0, 160,0.

Passo 7

(VI) l-(2'-desoxi-2',2'-difluoro-a- e P-D-nèopentofuranosil)-citosina(VI) - 15-

Um balão de 10 mL de uma só tubuladura, equipado com condensador e entrada para azoto, foi carregado com 0,28 g de intermediário V e 4,2 mL de CH3OH. O pH foi ajustado a 11 com NaOCH3 (soluto saturado de CH3OH), e a solução foi aquecida até refluxo e agitada durante 24 horas. Depois de arrefecer até temperatura ambiente, adicionaram-se 4 mL de 2-propanol e a solução turva foi agitada até 0°C durante 45 minutos. A lama foi filtrada através de um auxiliador de filtração. Adicionou-se HC1 concentrado ao filtrado para dar um pH de 1. Depois de agitar a lama resultante a 0°C durante 2 horas, o produto sólido foi filtrado e lavado com 0,4 mL de 2-propanol. A produção foi de 33 mg de produto de citosina (VI) (10% de rendimento), contendo 98% de anómero β e -2% de anómero a, e tendo as características espectrais que se seguem: *H RMN (DMSO-rf5), δ 3,63 (dd, 1 H, J = 3,2,9,5 Hz), 3,77 (d, 1 H,J = 12,3 Hz), 3,89 (d, 1 H, 8,2 Hz), 4,19 (m, 1 H), 6,05 (t, 1 H, J = 7,1 Hz), 6,31 (d, 1H,J = 7,9 Hz), 8,18, (d, 1 H, J = 7,9 Hz), 9,06 (s, 1 H), 10,28 (s, 1H). O seu tempo de retenção sobre HPLC foi idêntico ao de uma amostra autêntica do produto citosina (VI). A descrição que precede é meramente ilustrativa da presente invenção e a presente invenção é apenas limitada pelas reivindicações que apensas em anexo.

Lisboa, 30 de Março de 2001

ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA

Claims

-1 - REIVINDICAÇÕES 1. Um processo para a preparação de l-(2'-desoxi-2'2' difluoro-D-ribo-pentofuranosil)-citosina (VI) e um isómero α (VIA)

que compreende: reacção de l-[2'-desoxi-2,,2'-difluoro-3'-0-metilsulfonil-a- e β-D-nbopentofuranosil]-citosina (V)

numa mistura de reacção com um alcóxido de metal alcalino num solvente para formar l-(2'-dcsoxi-2',2,-difluoro-D-/-iiopentofuranosil)-citosina (VI e VIA).
2. O processo de Reivindicação 1, em que se adiciona ácido clorídrico concentrado para conferir um pH de 1.
3. Um processo para a preparação dc 2-dcsoxi-2,2-difluoro-5-O-trifemlmetil-D-ríòo-pentofuranose (Π).

(Π) que compreende: (a) reacção, numa mistura de reacção, de 2-desoxi-2,2-difluoro-D-r/óopentopiranose (I)

(I) com cloreto de trifenilmetilo e uma base amina a uma temperatura entre 20°C e 100°C para produzir (II); e (b) separação de (II) da mistura de reacção.
4. O processo de Reivindicação 3 onde, no passo (b), a mistura de reacção do passo (a) é vertida sobre gelo e (II) é extraído da mistura de reacção usando um solvente orgânico.
5. O processo de Reivindicação 4 onde o solvente é éter dietílico.
6. O processo de Reivindicação 3 onde, no passo (b), (II) é uma mistura de anómeros α e β que são separados um do outro cromatograficamente. -3- íry-?h 4-(
7. Um processo para a preparação de l-(2'-desoxi-2,,2'-difluoro-D-ribo-pentofuranosil)-citosina (VI) e um isómero α (VIA)

que compreende: (a) reacção, numa primeira mistura de reacção, de 2-desoxi-2,2-difluoro-D-r/òo-pentopiranose (I) com cloreto de trifenilmetilo e com uma base amina a uma temperatura entre 20°C e 100°C para produzir 2-desoxi-2,2-difluoro-5-O-trifenilmetil-D-r/bofixranose (II) e separação de (II) da primeira mistura de reacção; (b) reacção, numa segunda mistura de reacção (Π), com cloreto de metanossulfonilo na presença de uma base amina num solvente orgânico para formar 2-desoxi-2,2-difluoro-3-0-metilsulfonil-5-0-trifenilmetil-D-n'òo-pentofu-ra-nose-l-metanossulfonato (III) Ph3CO. o MeSO3* J. , OSOíMe f cm) e separação de (III) da segunda mistura de reacção; -4- /^. hs~'/fo (c) reacção, numa terceira mistura de reacção (III), com uma citosina protegida num solvente inerte para formar l-^-desoxi^^-difluoro-S'-0-metilsulfonil-5-0-trifenilmetil-D-n'òo-furanosil)~citosina (IV)

que é separado da terceira mistura de reacção; (d) reacção de (IV) numa quarta mistura de reacção com um ácido na presença de um solvente orgânico para produzir l-(2'-desoxi-2',2'-difluoro-3 '-0-metilsulfonil-D-riòo-pentofuranosil)-citosina (V)

e separação de (V) da quarta mistura de recção; e (e) reacção de (V) numa quinta mistura de reacção com um alcóxido de metal alcalino num solvente para formar l-(2'-desoxi-2',2,-difluoro-D-í-ièopcntofuranosil) - citosina (VI e VIA) e separação de (VI e VIA) da quinta mistura de reacção. -5-
8. O processo de Reivindicação 7 onde, no passo (a), a base amina é piridina e (II) é separado da mistura de reacção fomecendo-se água à mistura de reacção e extraindo-se (II) com um solvente orgânico imiscível em água; no passo (b) o solvente é diclorometano; e a base amina é trimetilamina;

no passo (c) a citosina protegida é bis-(trimetilsilil) citosina; no passo (d) o ácido é ácido clorídrico e o solvente é acetonitrilo; e no passo (e) o alcóxido é metóxido de sódio e o solvente é metanol.
9. 2-Desoxi-2,2-difluoro-5-0-trifenilmetil-D-rióopentofurano- se (II).
10. 2-desoxi-2,2-difluoro-3-0-metilsulfonil-5-0-trifenilmetil-D-r/èopentofuranose-1 -metanossulfonato (III).
11. 1 -[2l-desoxi-2,,2'-difluoro-3,-0-metilsulfonil-5'-0-trifenil- metil-α- e P-D-r/óopentofuranosil]-citosina (IV).
12. l-[2'-desoxi-2',2'-difluoro-3'-0-metilsulfonil-a- e β-D-riòo-pentofuranosil]-citosina (V). Lisboa, 30 de Março de 2001 c-^ J ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 <οΛη i ιςριηΔ