ES2306783T3 - Procedimiento para preparar nucleosidos purinicos. - Google Patents
Procedimiento para preparar nucleosidos purinicos. Download PDFInfo
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- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
Abstract
Un procedimiento para la preparación de un Beta nucleósido de la fórmula: (Ver fórmula) en la que - R1 es hidrógeno, halógeno o -OR 6 , - R6 es un grupo protector de hidroxi, - R2 y R3 son, de forma independiente, grupos protectores de hidroxi, y - R5 es un halógeno o -NH2, en la que el procedimiento comprende la etapa de hacer reaccionar un derivado de alfa-arabinofuranosilo de la fórmula: (Ver fórmula) en la que R1 , R2 y R3 son como se ha definido antes y R4 es un grupo saliente seleccionado de halógeno, alquilsulfoniloxi y arilsulfoniloxi, con un derivado de adenina de la fórmula: (Ver fórmula) En la que R5 es como se ha definido en lo que antecede y el grupo amino exocíclico C-6 de dicho derivado de adenina no está protegido, en presencia de un disolvente y una base, en la que dicha base tiene una pKa en agua de alrededor de 15 o mayor, y en la que no hay una producción sustancial o significativa de aductos formados mediante la adición de dicho derivado de alfa-arabinofuranosilo con dicho grupo amino exocíclico C-6 de dicho derivado de adenina.
Description
Procedimiento para preparar nucleósidos
purínicos.
La presente invención se refiere, en general a
la preparación química de nucleósidos purínicos. Más
específicamente, la invención se refiere al acoplamiento de un
derivado de adenina con un arabinofuranosilo bloqueado para formar
un nucleósido de \beta-D-adenina.
Tales nucleósidos son compuestos valiosos en el campo del
tratamiento del cáncer y como agentes antivirales.
\vskip1.000000\baselineskip
Una serie de nucleósidos
\beta-D-purínicos derivados de
adenina son útiles como agentes antitumorales y antivirales. Una
etapa importante en la síntesis de dichos agentes es la formación
del enlace N-glucosídico entre la base nucleotídica
adenina y un derivado de arabinofuranosilo. Las reacciones de
acoplamiento usadas para formar en enlace
N-glucosídico de los
2'-desoxinucleósidos normalmente han tenido como
resultado la formación de una mezcla de \alpha y
\beta-anómeros.
Se han sintetizado nucleósidos mediante
glucosilación de fusión, en la que la reacción se lleva a cabo en
ausencia de disolventes a una temperatura suficiente para convertir
los reactantes en una fase de fusión. Por ejemplo, la
2,6-dicloropurina se ha acoplado en condiciones de
fusión con
5-O-bencil-2-desoxi-1,3-di-O-acetil-2-fluoroarabinosa
para formar un 2'-fluoroarabinonucleósido con un
rendimiento del 27% (Wright y col., J. Org. 34: 2632, 1969). Otro
procedimiento sintético utiliza derivados sililados de bases
nucleotídicas, por ejemplo una base nucleotídica sigilada se ha
acoplado a azúcar desoxi paracetilada en presencia de un disolvente
y un catalizador de Friedel Crafts (Vorbruggen y col., J. Org.
Chem. 41: 2084, 1976). Este procedimiento se ha modificado
incorporando un grupo saliente de sulfonato en el azúcar desoxi en
la síntesis de
2'-desoxi-2'-difluoronucleósidos
(patente de EE.UU. Nº 4.526.988; patente de EE.UU. 4.965.374).
Se han obtenido rendimientos elevados de
nucleósidos
2'-desoxi-2'-fluoro-pirimidina
mediante el reflujo de pirimidinas con bromuro de
2-desoxi-2-fluoro-3,5-di-O-benzoil-\alpha-O-arabinofuranosilo.
(Howell y col., J. Org. Chem. 53: 85-88, 1988). Se
ha descubierto que el uso de los disolventes con constantes
dieléctricas menores tienen mayores cocientes de anómeros
\beta:\alpha. Se ha postulado que tales disolventes favorecían
una reacción S_{N}2, mientras que disolventes con constantes
dieléctricas mayores favorecían la producción de
\alpha-anómeros a través de una vía iónica
de
S_{N}1.
S_{N}1.
También se han usado procedimientos de
glucosilación aniónica para preparar nucleósidos de
2'-desoxi-2'-fluoropurina.
El documento EP 428109 describe el acoplamiento de la sal de sodio
de 6-cloropurina, formada por hidruro de sodio, con
bromuro de
3,5-dibencil-\alpha-D-arabinofuranosilo
usando condiciones que favorecen el desplazamiento S_{N}2. El uso
de acetonitrilo/cloruro de metileno 1:1 tuvo como resultado un
producto nucleosídico con una proporción entre los anómeros
\alpha:\beta de 10:1, frente a la proporción de 3,4:1 observada
al usar un reactante purínicos sililado. Con respecto al uso de
sales de adenina, el sustituyente de amino en la posición
C-6 se protegió como un derivado de benzoílo durante
la reacción de acoplamiento. La protección del grupo amino
exocíclico impide la formación de aductos de arabinofuranosilo que,
en caso contrario cabría esperar que se produjeran (p. ej., Ubukata
y col., Tetrahedron Lett., 27 3907-3908, 1986;
Ubukata y col., Agric. Biol. Chem. 52: 1117-1122,
1988; Searle y col., J. Org. Chem., 60:4296-4298,
1995; Baraldi y col., J. Med. Chem., 41: 3174-3185,
1998). La preparación de los anómeros \alpha y \beta de los
nucleósidos
2'-desoxi-2'-fluoropurina
y 2'-difluoropurina mediante glucosilación aniónica
se describe en la patente de EE.UU. nº 5.744.597 y la patente de
EE.UU. nº 5.821.357 con nucleósidos enriquecidos con el anómero
\beta preparado en una proporción de anómeros \alpha:\beta
entre superior a 1:1 a alrededor de 10:1 y de mayor a 1:1 a
alrededor de 7:1, respectivamente. Con respecto a las purinas
sustituidas con grupos amino exocíclicos, de nuevo ambas patentes
describen la protección de dichos grupos durante el acoplamiento a
un resto de azúcar adecuado (véase también el documento EP 577304).
La patente de EE.UU. nº 5.281.357 también describe el efecto de los
disolventes sobre la proporción de anómeros \alpha:\beta de
9-[1-(2'-desoxi-2',2'-difluoro-3',5'-di-O-benzoil-D-ribofuranosilo)]-2,6-dipivalamidopurina
preparada mediante acoplamiento de la sal de potasio de
2,6-dipivalanudipurina con una preparación de
2-desoxi-2,2-difluoro-D-ribofuranosil-3,5-dibenzoil-1-trifluorometanosulfonato
enriquecida con anómero \alpha. No hubo correlación entre la
constante dieléctrica de los seis disolventes usados y la
proporción entre los anómeros \alpha:\beta, por ejemplo tanto el
acetato de etilo como el acetonitrilo dieron la misma proporción de
1,6:1. El alcohol t-butílico dio la proporción más
elevada de anómeros \alpha:\beta de 3,5:1.
A pesar de los procedimientos preparativos para
los nucleósidos purínicos conocidos en la técnica, todavía existe
la necesidad de un procedimiento eficaz, eficiente y económicamente
preferible para la preparación de estos compuestos. El objeto de la
presente invención es proporcionar tal procedimiento. Otros objetos
son minimizar el número de etapas de reacción del procedimiento y
proporcionar un procedimiento que sea fácilmente escalable para la
producción de cantidades a escala comercial. Otros objetos y
ventajas se harán evidentes para personas expertas en la técnica y
familiarizadas con las referencias básicas a partir de una lectura
detenida de esta memoria
descriptiva.
descriptiva.
En sus términos más generales, un aspecto de la
presente invención proporciona la preparación de nucleósidos de
\beta-adenina mediante el acoplamiento de un
derivado de adenina que contiene en la posición C-6
un grupo amino exocíclico no protegido y un derivado de
arabinofuranosilo bloqueado. En formas de realización preferidas,
esta reacción se puede representar como:
\vskip1.000000\baselineskip
R^{1} es hidrógeno, halógeno o -OR^{6}, en
el que R^{6} es un grupo protector de hidroxi. En una forma de
realización preferida, R^{1} es flúor. R^{2} y R^{3} son
grupos protectores de hidroxi. En formas de realización preferidas,
R^{2}, R^{3} y R^{6} son, de forma independiente, benzoílo o
acetilo. R^{4} es un grupo saliente. Entre los grupos salientes
adecuados se incluyen halo, fluorosulfonilo, alquilsulfoniloxi,
trifluoroalquilsulfoniloxi y arilsulfoniloxi. En una forma de
realización preferida, R^{4} es bromo. R^{5} es hidrógeno,
halógeno o -NH_{2}. En formas de realización preferidas, R^{5}
es cloro o flúor.
Sorprendentemente, esta reacción procede sin una
producción sustancial de aductos resultantes de la adición de
arabinofuranosilo bloqueado (1) con el grupo amino exocíclico en la
posición C-6 del compuesto (2) (en lo sucesivo
denominado "grupo amino exocíclico C-6"), que
permanece sin proteger durante la reacción y/o el nitrógeno en la
posición N-7 del anillo de adenina. Un ejemplo de un
aducto subproducto del grupo amino exocíclico no deseado está
representado por la fórmula siguiente:
Para los propósitos de la presente invención y a
la luz del objetivo de proporcionar un procedimiento eficaz,
eficiente y económicamente preferible, "formación sustancial"
significa conversión de alrededor del 40% del derivado de adenina
de fórmula (2) en un aducto o aductos subproductos resultantes de la
adición del arabinofuranosilo bloqueado de fórmula (1) al grupo
amino no exocíclico C-6 no protegido y/o la posición
N-7 del compuesto (2). En formas de realización en
las que R^{5} es -NH_{2} (en lo sucesivo denominado "grupo
-NH_{2} R^{5}"), "formación sustancial" significa
conversión de alrededor del 40% del derivado de adenina de fórmula
(2) en aducto(s) subproducto(s) resultantes de la
adición del arabinofuranosilo bloqueado de fórmula (1) al grupo
amino exocíclico C-6 no protegido y/o posición
N-7 y/o el grupo -NH_{2} R^{5} del compuesto
(2).
Incuso más sorprendente es que la reacción puede
proceder sin incluso una producción significativa de aductos
resultantes de la adición del arabinofuranosilo bloqueado (1) al
grupo amino exocíclico C-6 no protegido y/o
posición N-7 del compuesto (2). Para los propósitos
de la presente invención, "producción significativa" significa
conversión de alrededor del 5% del derivado de adenina de fórmula
(2) en un aducto o aductos subproductos resultantes de la adición
del arabinofuranosilo bloqueado (1) al grupo amino exocíclico
C-6 no protegido y/o posición N-7
del compuesto (2). En formas de realización en las que R^{5} es
-NH_{2}, "producción significativa" significa conversión de
alrededor del 5% del derivado de adenina de fórmula (2) en un
aducto(s) subproducto(s) resultante de la adición del
arabinofuranosilo bloqueado de fórmula (1) al grupo amino exocíclico
C-6 no protegido y/o posición N-7
y/o el grupo -NH_{2}-R^{5} del compuesto
(2).
En general, bases útiles son aquéllas con una
pKa en agua de 15 o superior. En formas de realización preferidas,
la base es una base de metal alcalino, más preferentemente una base
de potasio. En formas de realización preferidas, la base es una
base esteáricamente impedida, por ejemplo t-butóxido de
potasio o t-amilato de potasio. Los disolventes inertes
adecuados incluyen, entre otros, alcohol t-butílico,
acetonitrilo, diclorometano, dicloroetano, alcohol
t-amílico, tetrahidrofurano o mezclas de los mismos. En
formas de realización preferidas, el disolvente o mezcla de
disolventes tiene un punto de ebullición de alrededor de 80ºC o
mayor.
El procedimiento de la presente invención
también comprende además la desprotección del resto de hidrato de
carbono bloqueado para formar un \beta-nucleósido
de la fórmula:
en la que R^{1} y R^{5} son
como se ha definido
antes.
En algunas formas de realización, el derivado de
adenina es 2-cloroadenina y el derivado de
arabinofuranosilo bloqueado es un derivado de
2-desoxi-2-fluoro-arabinofuranosilo,
con lo cual el \beta-nucleósido resultante es un
derivado de
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosilo)adenina.
La reacción se puede representar como:
en la que R^{2}, R^{3} y
R^{4} son como se ha definido antes. Asimismo, el procedimiento
también comprende desproteger el resto hidrato de carbono para
formar
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosilo)adenina,
también conocida como
clofarabina.
Otro aspecto de la invención es el
descubrimiento de la sorprendente estereoselectividad que se puede
alcanzar en la producción de nucleósidos de
2'-desoxi-2'-halo-\beta-D-adenina,
en el que dichos nucleósidos también se producen con un rendimiento
elevado. Esta reacción se puede representar como:
R^{7} y R^{8} son, de forma independiente,
halógeno, M^{+} es potasio, y R^{2}, R^{3} y R^{5} son como
se ha definido antes. Halógeno incluye bromo, flúor, cloro y yodo.
En una forma de realización preferida, R^{8} es flúor. En varias
formas de realización, R^{7} es cloro o, preferentemente, bromo.
El algunas formas de realización, el procedimiento además comprende
la adición de hidruro de calcio. Entre los disolventes inertes
adecuados se incluyen alcohol t-butílico, acetonitrilo,
diclorometano, dicloroetano, alcohol t-amílico,
tetrahidrofurano o mezclas de los mismos. En formas de realización
preferidas, el disolvente es una mezcla de alcohol
t-butílico y acetonitrilo, o una mezcla de alcohol
t-butílico y dicloroetano, o una mezcla de dicloroetano y
acetonitrilo, o una mezcla de alcohol t-amílico y
dicloroetano, o una mezcla de alcohol t-amílico y
acetonitrilo, o una mezcla de alcohol t-amílico, acetonitrilo
y diclorometano, o una mezcla de alcohol t-amílico,
acetonitrilo y dicloroetano. En formas de realización preferidas, el
disolvente o la mezcla de disolventes tiene un punto de ebullición
de alrededor de 80ºC o superior.
En algunas formas de realización, la sal
derivada de adenina (10) se forma in situ mediante la
reacción de una base de potasio con el correspondiente derivado de
adenina (2). En formas de realización preferidas, la base es
t-butóxido de potasio o t-amilato de potasio.
En varias formas de realización de la invención,
la reacción de acoplamiento produce una preparación, en la que la
proporción del anómero \beta de fórmula (11) con el anómero
\alpha de fórmula (12) es de al menos alrededor de 10:1, o,
preferentemente, es de al menos alrededor de 15:1 o, más preferible,
es de al menos alrededor de 20:1. Por tanto, la proporción de
anómeros puede ser de 10:1 o superior, 15:1 o superior o de 20:1 o
superior. En formas de realización preferidas, el anómero \beta de
fórmula (11) se prepara en un rendimiento de alrededor del 40% o
superior. En formas de realización más preferidas, el anómero
\beta de fórmula (11) se prepara en rendimientos de alrededor del
50% o superior o de alrededor del 80% o superior.
El procedimiento de la presente invención puede
también comprender el aislamiento del anómero \beta (11)
sometiendo la mezcla de anómeros \beta y \alpha a
recristalización o mediante un procedimiento de
re-suspensión. En una forma de realización
preferida, la posterior purificación comprende la resuspensión en
metanol o la cristalización de una mezcla de acetato de butilo y
heptano. En varias formas de realización, la preparación purificada
comprende una mezcla de nucleósidos en las que la proporción entre
el anómero \beta de fórmula (11) y el anómero \alpha de fórmula
(12) es de al menos alrededor de 20:1, o de al menos alrededor de
40:1 o de al menos alrededor de 60:1.
El procedimiento también comprende la
desprotección del resto hidrato de carbono bloqueado del anómero
\beta protegido para formar un nucleósido \beta de la
fórmula:
en la que R^{5} y R^{6} son
como se ha definido antes. Cuando R^{5} es cloro y R^{8} es
flúor, el nucleósido \beta de fórmula (13) es
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina.
Otro aspecto de la presente invención es un
procedimiento de múltiples etapas para la preparación de una
composición que comprende
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina.
Esto comprende la integración de los otros aspectos de la presente
invención en una síntesis eficaz, eficiente y económicamente
preferible y aislamiento de
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina.
Este procedimiento minimiza el número de etapas, en parte no
requiriendo la protección del grupo amino exocíclico
C-6. Además, la sorprendente preferencia
estereoselectiva por el anómero \beta permite, en parte, la
preparación de una composición con una proporción entre los
anómeros \beta:\alpha de al menos 99:1 o, en formas de
realización preferidas, es de alrededor de 400:1 o mayor, de
alrededor de 500:1 o superior o de alrededor de 1000:1 o superior,
sin utilizar una etapa de cromatografía preparativa para la
purificación del anómero \beta. La ausencia de una etapa
cromatográficas es una ventaja principal en relación con el
procedimiento económicamente preferible a escala comercial.
El procedimiento comprende la reacción de
bromuro de
3,5-O-dibenzoil-2-desoxi-2-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosilo
con una sal de potasio de 2-cloroadenina de la
fórmula:
En presencia de un disolvente para formar
2-cloro-9-(3',5'-O-dibenzoil-2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina.
El grupo amino exocíclico C-6 de la sal de potasio
2-cloroadenina no está protegido durante el
procedimiento. A continuación, la
2-cloro-9-(3',5'-O-dibenzoil-2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina
se desprotege para formar
2-cloro-9-(2'desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina,
que después se aísla para proporcionar una composición que
comprende
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina.
En algunas formas de realización, en las que la composición
producida mediante el procedimiento de múltiples etapas como se ha
descrito anteriormente, también comprende
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosil)adenina,
la
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina
es sustancialmente pura. Para los fines de la presente invención,
la
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina
sustancialmente pura significa que la proporción entre el
\beta-anómero y el
\alpha-anómero, medida mediante cromatografía
líquida de alta presión y análisis espectrofotométrico, es de al
menos 99:1.
El procedimiento puede además comprender aislar
la
2-cloro-9-(3',5'-O-dibenzoil-2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina
antes de la etapa de desprotección. En algunas formas de
realización, este aislamiento puede comprender resuspensión y/o
recristalización, que pueden efectuarse mediante el uso de metanol o
mediante el uso de una mezcla de acetato de butilo y heptano. En
otras formas de realización, el aislamiento de
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-(3-D-arabinofuranosil)adenina
también comprende recristalización. En algunas formas de
realización, la recristalización se hace en metanol.
En algunas formas de realización, la sal de
potasio de 2-cloroadenina se prepara in situ
mediante la reacción de una base de potasio con
2-cloroadenina en un disolvente inerte adecuado. En
formas de realización preferidas, la base es t-butóxido de
potasio o t-amilato de potasio. Entre los disolventes inertes
adecuados se incluyen alcohol t-butílico, acetonitrilo,
diclorometano, dicloroetano, alcohol t-amílico,
tetrahidrofurano o mezclas de los mismos. En formas de realización
preferidas, el disolvente es una mezcla de alcohol t-butílico
y acetonitrilo, o una mezcla de alcohol t-butílico y
dicloroetano, o una mezcla de dicloroetano y acetonitrilo, o una
mezcla de alcohol t-amílico y dicloroetano, o una mezcla de
alcohol t-amílico y acetonitrilo, o una mezcla de alcohol
t-amílico y acetonitrilo y diclorometano, o una mezcla de
alcohol t-amílico, acetonitrilo y dicloroetano.
Las figuras siguientes forman parte de la
presente memoria descriptiva y se incluyen para demostrar más
ciertos aspectos de la presente invención. La invención puede
entenderse mejor por referencia a una o más de estas figuras en
combinación con la descripción detallada de formas de realización
específicas presentadas en la presente memoria descriptiva.
Fig. 1. Esquema que representa la potencial
justificación del efecto del potasio en la producción
estereoselectiva de nucleósidos de
2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-adenina.
R^{2}, R^{3} y R^{5} son como se ha definido
anteriormente.
Fig. 2. Esquema de las conformaciones previstas
de los protones relevantes y átomos de flúor para la
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-halo-\beta-D-arabinofuranosil)adenina
(clofarabina) (21) y
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosil)adenina
(epiclofarabina) (22).
Fig. 3. RNM 1H parcial de
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina
(clofarabina) (21).
Fig. 4. RNM 1H parcial de
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosil)adenina
(epiclofarabina) (22).
Un aspecto de la presente invención proporciona
la preparación de nucleósidos de \beta-adenina
mediante el acoplamiento de un derivado de adenina con un grupo
amino exocíclico C-6 no protegido y un derivado de
arabinofuranosilo bloqueado, en presencia de una base y de
disolvente. El derivado de arabinofuranosilo bloqueado puede estar
representado por la estructura:
R^{1} es hidrógeno, halógeno o -OR^{6}, en
el que R^{6} es un grupo protector de hidroxi. Los halógenos
incluyen bromo, cloro, flúor y yodo. R^{2} y R^{3} son grupos
protectores de hidroxi. Los grupos protectores de hidroxi se
conocen en la técnica como grupos químicos funcionales a los que se
puede unir selectivamente y que se pueden eliminar de una
funcionalidad hidroxi presente en un compuesto químico, para
convertir tal funcionalidad inerte en las condiciones de la
reacción química a la que el compuesto es expuesto. Los grupos
protectores de hidroxi se describen en Green y Wuts, Protective
Groups in Organic Synthesis, 2ª edición, John Wiley & Sons,
Nueva York, 1991, e incluyen formilo, acetilo, propionilo, arilacilo
(p. ej., benzoílo y benzoílo sustituido), tritilo o
monometoxitritilo, bencilo o bencilo sustituido, derivados de
carbonato (p. ej., fenoxicarbonilo, etoxicarbonilo y
t-butoxicarbonilo) y sililo trisustituido, incluido
trialquilsililo (p. ej.,
dimetil-t-butilsililo) o
difenilmetilsililo. En formas de realización preferidas, los grupos
protectores son, de forma independiente, benzoílo o acetilo.
R^{4} es un grupo saliente, ejemplos adecuados
del cual incluyen halógeno, alquilsulfoniloxi y arilsulfoniloxi.
Entre los halógenos se incluyen cloro, flúor, yodo y, en una forma
de realización preferida, bromo. Los haluros de
\alpha-arabinofuranosilo bloqueados se pueden
preparar mediante varios procedimientos conocidos en la técnica
empleando procedimientos estándar de uso habitual por un experto en
la técnica, por ejemplo bromuro de
3,5-O-dibenzoil-2-desoxi-2-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosilo
(que se muestra como ejemplo en el Ejemplo 1; Tann y col., J. Org.
Chem., 50: 3644, 1985, que se incorpora en la presente memoria
descriptiva por referencia); el bromuro de
3-O-acetil-5-O-bencil-2-desoxi-2-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosilo
(Fox y col., Carbohydrate Res., 42-233, 1975, que
se incorpora en la presente memoria descriptiva por referencia);
cloruro de
2,3,5-O-tribencil-\alpha-D-arabinofuranosilo
(patente de EE.UU. nº 5.110.919, que se incorpora en la presente
memoria descriptiva por referencia); y cloruro de
3,5-di-p-toluil-2-desoxi-\alpha-arabinofuranosilo
(Bhattacharya y col., J. Org. Chem., 28: 428, 1963; Nuhn y col.,
Pharmazie, 24: 237, 1969, ambas incorporados en la presente memoria
descriptiva por referencia). La preparación de derivados de
\alpha-arabinofuranosilo bloqueados sustituidos en
la posición C-1 con alquilsulfonatos y
arilsulfonatos se describe en la patente de EE.UU. nº
5.401-861 y la patente de EE.UU. Nº 5.744.579. ambas
incorporadas en la presente memoria descriptiva por referencia.
Entre los alquilsulfonatos se incluyen metanosulfonato,
etilsulfonato y butilsulfonato, y entre los alquilsulfonatos
sustituidos se incluyen compuestos tales como sulfonato de
trifluorometano y 1,1,1-trifluorometanosulfonato.
Entre los arilsulfonatos se incluyen arilsulfonatos sustituidos
tales como p-nitrobencenosulfonato,
p-bromobencenosulfonato, p-metilbencenosulfonato y
similares.
Generalmente, las bases útiles tienen una pKa en
agua de 15 o mayor, y son adecuados para la formación de una sal
del derivado de adenina (2), como se representa con la fórmula:
R^{5} es como se ha definido anteriormente y
R^{+} es un catión monovalente. La base puede ser una base de
metal alcalino y, en formas de realización preferidas, la base de
metal alcalino es una base de potasio. En formas de realización
preferidas, la base es una base esteáricamente impedida, por ejemplo
t-butóxido de potasio o t-amilato de potasio.
Los disolventes útiles en la presente invención
son aquéllos que son inertes con respecto a la reacción. Entre los
disolventes inertes adecuados se incluyen, entre otros, alcohol
t-butílico, acetonitrilo, diclorometano, dicloroetano,
alcohol t-amílico, tetrahidrofurano o mezclas de los
mismos.
En una forma de realización preferida, la
reacción se lleva a cabo a temperatura ambiente. No obstante, en
otras formas de realización, la reacción se lleva a cabo a
temperaturas elevadas o menores. Por ejemplo, la reacción se
puede llevar a cabo a alrededor de 40ºC, o a alrededor de 50ºC, o a
alrededor de 60ºC o en condiciones de reflujo. Como alternativa, la
reacción se puede llevar a cabo de alrededor de -25ºC a alrededor
de 25ºC, a alrededor de -20ºC o a alrededor de -10ºC, o a alrededor
de 0ºC o a alrededor de 10ºC.
Siempre que un grupo amino se describe como
"no protegido", ello significa que el grupo amino no se ha
bloqueado con un grupo protector de amino. El uso y los tipos de
funcionalidades protectoras de amino son bien conocidos en la
técnica. Ejemplos se describen en Green y Wuts Protective Groups in
Organic Synthesis, 2ª edición, John Wiley & Sons, Nueva York,
1991.
La proporción molar de los reactantes no se
considera crítica y, en formas de realización preferidas, se usan
equivalentes molares aproximadamente iguales de derivado de
arabinofuranosilo bloqueado (1), derivado de adenina (2) y la base.
En algunas formas de realización se usa un ligero exceso molar (p.
ej., 1,05 a 1,1,5 equivalentes) de derivado de adenina (2) y/o de
base. El orden y la forma de adición preferidos para cualquier forma
de realización específica se pueden determinar mediante
experimentación rutinaria con una visión hacia el rendimiento de la
reacción y hacia la ingeniería química y las consideraciones de las
producciones.
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Otro aspecto de la invención es la preparación
estereoselectiva de nucleósidos de
2-desoxi-\beta-D-adenina.
En este procedimiento, un haluro de
2-desoxi-\alpha-D-arabinofuranosilo
bloqueado se acopla a la sal de un derivado de adenina representado
por la fórmula:
R^{5} y M^{+} son como se ha descrito
previamente. Sorprendentemente, la identidad del catión tiene un
profundo efecto sobre la estereoselectividad de la reacción de
acoplamiento. Las sales de potasio produjeron proporciones de los
anómeros \beta:\alpha mayores que las sales de litio o de sodio.
La sal representada por la fórmula (10) se puede producir in
situ mediante el uso de bases de potasio y derivados de adenina
de fórmula (2). Generalmente las bases adecuadas tienen una pKa en
agua de 15 o mayor, e incluyen bases de t-alcóxido de
potasio, hidróxido potásico, y las bases impedidas incluyen
diisopropilamida de potasio, bis(trimetilsilil)amida
de potasio, hexametildisililazida de potasio, hidruro de potasio y
similares. En formas de realización preferidas, la base es una base
estéricamente impedida, por ejemplo t-butóxido de potasio o
t-amilato de potasio.
No queriendo estar limitado por ninguna teoría,
la estereoselectividad preferencial observada con potasio puede
deberse, por ejemplo, cuando R^{8} es flúor y R^{7} es bromo, a
una atracción electrostática entre el átomo de flúor
electronegativo y el catión de potasio duro, lo que condice a un
ataque preferencial en el lado \beta, como se representa en la
Fig. 1. La ausencia de selectividad del litio y sodio puede deberse
a una asociación más covalente del catión con la base púrica. La
presente invención también abarca otros cationes, tales como cesio,
que pueden reemplazar al potasio como catión duro.
El disolvente empleado también posee un efecto
marcado sobre la proporción de los anómeros \beta:\alpha.
Generalmente, los disolventes con una constante dieléctrica menor
favorecen la producción del anómero \beta. Pero la elección del
disolvente no viene dictada simplemente por la constante
dieléctrica, en cuanto a que existe una tendencia por una relación
inversa entre incrementar la proporción de anómeros \beta:\alpha
y el rendimiento de los anómeros \beta y \alpha.
Presumiblemente, este efecto se relaciona con la solubilidad de los
reactantes y/o los productos intermedios. Ente los disolventes
adecuados se incluyen alcohol t-butílico, acetonitrilo,
diclorometano, dicloroetano, alcohol t-amílico, alcohol
isoamílico, tetrahidrofurano o mezclas de los mismos. En formas de
realización preferidas, el disolvente es una mezcla de alcohol
t-butílico y acetonitrilo, o una mezcla de alcohol
t-butílico y dicloroetano, o una mezcla de dicloroetano y
acetonitrilo, o una mezcla de alcohol t-amílico y
dicloroetano, o una mezcla de alcohol t-amílico y
acetonitrilo, o una mezcla de alcohol t-amílico,
acetonitrilo u diclorometano, o una mezcla de alcohol
t-amílico, acetonitrilo u dicloroetano. En las mezclas de
dos componentes, los dos disolventes se pueden combinar en el
intervalo de alrededor de 1:4 a alrededor de 1:1 v/v. En mezclas de
tres componentes, los tres disolventes pueden estar combinados en
proporciones de alrededor de 2:3:1 o de alrededor de 2:1:1 o de
alrededor de 1:1:1.
En una forma de realización preferida, la
reacción se lleva a cabo a temperatura ambiente. En otras formas de
realización se usan temperaturas elevadas o menores. La disminución
de la temperatura de la reacción, como en el intervalo de la
temperatura ambiente a alrededor de -25ºC, puede conducir a un
incremento de la proporción de anómeros \beta:\alpha. Las
temperaturas elevadas se pueden usar en el intervalo de la
temperatura ambiente a las condiciones de reflujo.
En algunas formas de realización se añade
hidruro de calcio. La adición de hidruro de calcio generalmente
aumenta la proporción de anómeros \beta:\alpha. Este efecto
puede deberse, en parte, a la eliminación de restos de agua del
disolvente.
La proporción molar de los reactantes no se
considera crítica y, en formas de realización preferidas en las que
la sal derivada de adenina (10) se produce in situ, se usan
equivalentes molares aproximadamente iguales de derivado de
arabinofuranosilo bloqueado (9), derivado de adenina (2) y la base,
y, cuando se añade, hidruro de calcio. En algunas formas de
realización se usa un ligero exceso molar (p. ej., 1,05 a 1,1,5
equivalentes) de derivado de adenina (2) y/o de base. El orden y la
forma de adición preferidos para cualquier forma de realización
específica se pueden determinar mediante experimentación rutinaria
con una visión hacia el rendimiento de la reacción y hacia la
ingeniería química y las consideraciones de las producciones.
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Sin más elaboración, se cree que un experto en
la técnica puede, usando la descripción precedente, utilizar la
presente invención en toda su extensión. Con los siguientes ejemplos
específicos se pretende meramente ilustrar la invención y no
limitar de ninguna manera el alcance de las descripción o el alcance
de las reivindicaciones.
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Ejemplo
1
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Un matraz de fondo redondo de una boca (100 ml)
se equipó con una barra de agitación y un adaptador de entrada de
nitrógeno. El matraz se cargó con diclorometano (10,4 ml) y
1,3,5-O-tribenzoil-2-desoxi-2-fluoro-\beta-D-arabinofuranosilo
(16) (2,6 g, Sigma, St. Louis, MO) a temperatura ambiente. La
solución se introdujo en atmósfera de nitrógeno. Se cargó una
solución al 33% de bromuro de hidrógeno en ácido acético (0,96 g) y
la mezcla resultante se agitó durante 18 h. El disolvente se
eliminó mediante evaporación rotatoria para dar un residuo naranja.
Esto se disolvió en diclorometano (30 ml) u se inactivó con
salmuera de bicarbonato sódico (30 ml), con lo que el pH fue de
7-8. La fase orgánica se repartió y lavó con
salmuera de bicarbonato sódico (30 ml). La fase orgánica se secó
sobre MgSO_{4} y se filtró. La eliminación del disolvente mediante
evaporación rotatoria y alto vacío dio bromuro de
3,5-dibenzoil-2-desoxi-2-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosilo
(17) en forma de una goma viscosa amarilla.
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Ejemplo
2
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Se preparó
2-cloro-9-(3,5-O-dibenzoil-2-desoxi-2-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina
(19) (Borregaard) utilizando diferentes bases y numerosos sistemas
disolventes y la adición opcional de hidruro de calcio. En los
ejemplos siguientes se describen tres preparaciones con detalle y
otras preparaciones se resumen en la Tabla 1.
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Un matraz de fondo redondo de tres bocas se
equipó con un controlador de la temperatura, entrada de nitrógeno y
tubos de salida, tabiques y una barra de agitación magnética. Se
cargó cloroadenina (18) (0,45 g) en forma de sólido y bajo
atmósfera de nitrógeno, seguido por t-butóxido de potasio
(0,34 g), acetonitrilo (2,3 ml) y alcohol t-butílico (6,9
ml). Después de agitar durante 1 hora a 24ºC-26ºC,
se añadió bromuro de
3,5-O-dibenzoil-2-desoxi-2-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosilo
(17) (1,21 g). La suspensión naranja resultante se agitó a
24ºC-26ºC durante 16 horas. El análisis HPLC de una
muestra control durante el procedimiento mostró una conversión del
96,6% y una proporción de anómero \beta (19) y anómero \alpha
(20) de 10,7:1. El análisis HPLC usó un sistema de fase inversa con
una columna Zorbax-SB-C18 y una fase
móvil de 80:20 de acetonitrilo/agua con 15% v/v de ácido
trifluoroacético a un caudal de 1 ml/min a 30ºC. La detección se
realizó mediante análisis espectrofotométrico a 263 nm. La
conversión se expresa en forma de valores del área bajo la curva
(a.u.c) de (19) + (20)/(18) + (19) + (20) x 100. El disolvente se
evaporó para dar 1,79 g de un residuo naranja. A esto se añadió
acetato de etilo (34 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente
durante 1,25 h y, después, se filtró a través de papel de filtro y
el papel se enjuagó dos veces con 5 ml de acetato de etilo. La
evaporación de la solución filtrada dio 1,28 h de cristales de
color naranja claro (86,8% mediante HPLC, área de los anómeros
combinados). Este material todavía contenía un cantidad pequeña de
2-cloroadenina (13) mediante HPLC. La proporción
anomérica fue de 11,8:1. Los cristales se disolvieron con 33 ml de
acetato de etilo a temperatura ambiente, para dar una solución
ligeramente opaca. Esto se filtró a través de una hoja de celite y
el filtrado se evaporó para dar 1,16 g de cristales. Este material
todavía contenía un cantidad pequeña de (13). El problema se remedió
mediante una filtración más eficiente. Los cristales se disolvieron
en 25 ml de acetato de etilo durante la noche a temperatura
ambiente, para dar una solución ligeramente turbia, Esto se filtró a
través de un filtro de jeringa Whatman de nylon de 0,45 mM y se
evaporó para dar 1,13 g. este material no contenía (18), mediante
análisis HPLC, y tenía una proporción anomérica de 11,9:1 y un
rendimiento de 83% con una pureza del 98,1% (a.u.c.). Considerando
la producción de los anómeros (19) y (20), no se produjo una
formación sustancial de un aducto subproducto formado por la
reacción de bromuro de
3,5-O-dibenzoil-2-desoxi-2-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosilo
(17) con el grupo amino exocíclico no protegido de la
2-cloroadenina (18). Además, el análisis HPLC reveló
la ausencia de formación considerable de subproductos.
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Un matraz de fondo redondo de tres bocas se
equipó con una barra de agitación magnética, un controlador de la
temperatura y una entrada de nitrógeno y se cargó con
2-cloroadenina (18) (0,29 g), seguido por
acetonitrilo (1,6 ml), alcohol t-amílico (3,3 ml),
terc-butóxido de potasio (0,2 g) e hidruro de calcio
(0,069 g). Esta mezcla se agitó a 25ºC durante 30 minutos antes de
cargar bromuro de
3,5-O-dibenzoil-2-desoxi-2-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosilo
(17) (0,68 g) disuelto en diclorometano (3,25 ml). La solución
naranja se agitó durante dos días, tras lo cual el análisis IIPLC
mostró una proporción anomérica \beta:\alpha de 18,8:1 y una
conversión de aproximadamente el 67%. El calentamiento a 401C
durante aproximadamente 4,5 h tuvo como resultado una proporción
anomérica \beta:\alpha de 18,7:1 y una disminución de la
conversión aparente a 63%. La mezcla de reacción se filtró al vacío
y la torta de filtrado se lavó con diclorometano (2x12 ml). El
filtrado se pasó a través de un filtro de jeringa de nylon y
después se concentró mediante evaporación rotatoria y bomba de alto
vacío para dar 0,72 g de material con una proporción anomérica
\beta:\alpha de 19:1, y una pureza de 88% mediante HPLC
(a.u.c.), dando un rendimiento de los anómeros (19) y (20) del 77%.
En cuanto que hubo una conversión de aproximadamente un 77% de la
cloroadenina, no hubo una formación sustancial ni significativa de
un aducto subproducto formado mediante la reacción de bromuro de
3,5-O-dibenzoil-2-desoxi-2-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosilo
(17) con el grupo amino exocíclico no protegido de
2-cloroadenina (18). Además, el análisis HPLC reveló
ausencia de formación sustancial o significativa de
subproductos.
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Un matraz de fondo redondo de tres bocas se
equipó con una barra de agitación magnética, un controlador de la
temperatura y una línea de entrada de nitrógeno y se cargó con
alcohol t-amílico:acetonitrilo (9 ml) a una proporción de
2:1, seguido por 2-cloroadenina (18) (0,63 g),
t-amilato de potasio (0,47 g) e hidruro de calcio (0,15 g).
Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos antes
de la adición de bromuro de
3,5-O-dibenzoil-2-desoxi-2-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosilo
(17) (1,5 g) disuelto en alcohol t-amílico:acetonitrilo (97
ml) en una proporción de 2:1. La solución se agitó durante 17 horas,
tras lo cual el análisis mediante HPLC mostró una conversión de
alrededor del 79% y una proporción anomérica de \beta:\alpha de
14,5:1. La mezcla de reacción se filtró al vacío y el residuo se
lavó con 2 x 5 ml de acetonitrilo. El filtrado se volvió a filtrar
a través de un filtro de nylon de 0,45 \mu y después se concentró.
El residuo concentrado se disolvió en acetato de butilo (5 ml). Se
añadió heptano (35 ml) y los cristales resultantes se recogieron
mediante filtración al vacío y se sometieron a alto vacío. El
análisis HPLC de los cristales indicó una proporción anomérica de
\beta:\alpha de 19,4:1 y un rendimiento del 63% de material con
una pureza del 90% (a.u.c.). En cuanto a que se produjo una
conversión de alrededor del 79% de la cloroadenina, no se produjo
una formación sustancial de un aducto subproducto formado por la
reacción de bromuro de
3,5-O-dibenzoil-2-desoxi-2-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosilo
(17) con el grupo amino exocíclico no protegido de la
2-cloroadenina (18). Además, el análisis HPLC no
reveló una formación sustancial de subproductos.
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Los resultados de los ejemplos preparativos
además de los ejemplos anteriores indicados en las preparaciones I,
II y III, se resumen en la Tabla 1. Normalmente, los procedimientos
preparativos usaron equivalentes molares aproximadamente iguales de
(17) y (18) e hidruro de calcio y un ligero exceso molar de
base.
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Ejemplo
3
Para purificar el compuesto (19) se usó una
etapa de re-suspensión utilizando reflujo con
metanol. Si es necesario, el pH deberá ajustarse a 6,0 antes de
esta etapa, para prevenir la desprotección durante la etapa de
re-suspensión. Dado que la resuspensión debe
implicar un equilibrio entre las fases de sólido y de solución se
requiere un periodo de tiempo para que este equilibrio se
establezca bajo un grupo dado de condiciones experimentales. Por
tanto, se investigaron los tiempos requeridos para el equilibrio
mediante monitorización de la composición anomérica de pastas a
diferentes proporciones de disolventes y temperaturas. Tres
características salientes se pusieron de manifiesto: (1) una
resuspensión caliente tuvo como resultado cantidades mayores de (19)
en la solución en equilibrio; (2) la cantidad de (19) en la fase de
solución aumenta con el tiempo a medida que se acerca al equilibrio
para la resuspensión en caliente y disminuye con el tiempo para una
resuspensión a temperatura ambiente; y (3) el equilibrio se alcanza
esencialmente a las 5 horas en condiciones de resuspensión en
caliente o a temperatura ambiente, aunque se observa un ligero
cambio en condiciones de temperatura ambiente en agitación durante
la noche. La resuspensión a temperatura ambiente produjo un mayor
incremento anomérico. Se concluyó que una resuspensión a
temperatura ambiente durante al menos 5 horas, seguida por 1 hora de
enfriamiento y filtración tiene como resultado la mejor
recuperación y proporción anomérica. Los resultados de este
procedimiento se muestran en la Tabla 2 para ciclos de 20 g
realizados en un reactor
de 1 l.
de 1 l.
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Ejemplo
4
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Dado que el benzoato de metilo es un líquido y
fácilmente soluble en muchos disolventes orgánicos, se prefirió la
escisión de los grupos bencilo con metóxido de sodio. Un matraz de
250 ml con varias bocas y equipado con un termopar, un agitador
magnético, un purgador de nitrógeno y condensador de reflujo, se
cargó con (19) (8,42 g, 16,45 mmol) y 15 ml de metanol a
temperatura ambiente. Se inició la agitación y la mezcla se calentó
hasta 38ºC. La reacción se cargó con metóxido sódico (62 \mul,
0,329 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 38ºC durante 7 horas,
después se detuvo el calentamiento y la mezcla se enfrió hasta la
temperatura ambiente y se agitó durante la noche. El pH se ajustó
hasta 5,0 con ácido acético. El matraz de reacción se enfrió en un
baño de hielo durante 2 horas y la mezcla de reacción se filtró y el
matraz y la torta de filtrado se lavaron con 9,5 ml de metanol. Un
matraz de 250 ml y múltiples bocas, equipado con un termopar, un
agitador magnético, un purgador de nitrógeno y un condensador de
flujo se cargó el sólido húmedo y 105 ml de metanol, se agitó y se
calentó hasta reflujo. La solución caliente se filtró y el filtrado
se transfirió al matraz de reacción original, en la que la mezcla
se enfrió hasta la temperatura ambiente. La mezcla se enfrió en un
baño de hielo/agua durante 0,5 h y la mezcla se filtró y el matraz y
la torta de filtro se enjuagó con 9,8 ml de metanol. El sólido
húmero se secó en una estufa de vacío para producir (21) a un
rendimiento de 69,4% con una pureza de 99,14 (a.u.c.). No se
detectó ningún anómero \alpha mediante HPLC.
Otros Ejemplos del procedimiento de
desprotección con condiciones variables se muestran en la Tabla
3.
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Ejemplo
5
Preparaciones agrupadas de mezclas anoméricas de
(19) y (20) se agruparon y desprotegieron a través de la
eliminación de los grupos benzoílo mediante tratamiento con metóxido
de sodio y metanol. Las clofarabina y epiclofarabina resultantes se
aislaron mediante HPLC preparativa. En un ciclo típico, 60 mg de
muestra bruta se disolvieron en 1,4 ml de fase móvil, es decir
acetonitrilo/agua en una proporción de 1:9 /v/v), para su inyección
en una columna Phenomenex Progidy C18, 10 \mu ODS, 250 x 21,2 mm y
un caudal de 12 ml/min. Las fracciones agrupadas se sometieron a
evaporación rotatoria para eliminar el acetonitrilo y se
liofilizaron. Las muestras purificadas se sometieron a análisis
RMN.
La Fig. 2 muestra las conformaciones previstas
de los protones relevantes y de los átomos fluoruro para
2-cloro-9-(2'-desoxi-2-fluoro-\beta-D-arabinofuranosilo)adenina
(clofarabina) (21) y
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosilo)adenina
(epiclofarabina):
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Según estas suposiciones conformacionales y la
relación de Karpus, las constantes de acoplamiento previstas del
anómero \beta (21) y del anómero \alpha (22) deberán cumplir la
relación siguiente:
- a)
- JH_{2}F será grande para ambos anómeros, \alpha o \beta
- b)
- (JH_{1}F)_{\beta} < (JH_{1}F)_{\alpha}
- c)
- (JH_{1}H_{2})_{\beta} > (JH_{1}H_{2})_{\alpha}
- d)
- JH_{2}H_{3} será pequeño ara ambos anómeros, \alpha o \beta
Estas predicciones están avaladas por el
análisis RMN de los anómeros purificados, como se muestra en la
Tabla 2, Fig. 3 y Fig. 4. Es notable el hecho de que los protones
N_{6} exocíclicos se producen en un desplazamiento químico
predecible (7,8-8,0 ppm) para clofarabina (21) y
epiclofarabina (22). Se han comunicado desplazamientos químicos
N_{6} para otros derivados de adenina (Reid y col., Helv. Chim.
Acta, 72: 1597-1606, 1989).
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La presente invención se ha mostrado tanto
mediante descripción como mediante ejemplos. Los ejemplos son
únicamente ejemplos y no pueden interpretarse como que limitan el
alcance de la invención. Un experto en la técnica preverá
equivalentes del procedimiento de la invención descrito mediante las
reivindicaciones siguientes que entran dentro del alcance de la
invención reivindicada.
Claims (27)
1. Un procedimiento para la preparación de un
\beta nucleósido de la fórmula:
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en la
que
- R^{1} es hidrógeno, halógeno o
-OR^{6},
- R^{6} es un grupo protector de hidroxi,
- R^{2} y R^{3} son, de forma independiente,
grupos protectores de hidroxi, y
- R^{5} es un halógeno o -NH_{2},
en la que el procedimiento
comprende la etapa de hacer reaccionar un derivado de
\alpha-arabinofuranosilo de la
fórmula:
en la que R^{1}, R^{2} y
R^{3} son como se ha definido antes y R^{4} es un grupo saliente
seleccionado de halógeno, alquilsulfoniloxi y
arilsulfoniloxi,
con un derivado de adenina de la fórmula:
En la que R^{5} es como se ha definido en lo
que antecede y el grupo amino exocíclico C-6 de
dicho derivado de adenina no está protegido, en presencia de un
disolvente y una base, en la que dicha base tiene una pKa en agua
de alrededor de 15 o mayor, y en la que no hay una producción
sustancial o significativa de aductos formados mediante la adición
de dicho derivado de \alpha-arabinofuranosilo con
dicho grupo amino exocíclico C-6 de dicho derivado
de adenina.
2. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que R^{5} es -NH_{2} (no protegido) y no hay una producción
sustancial de aductos formados mediante la adición de dicho derivado
de \alpha-arabinofuranosilo con dicho grupo
-NH_{2}.
3. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que R^{1} es flúor o en el que R^{5} es cloro.
4. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que R^{1} es flúor y R^{5} es cloro.
5. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que R^{1} y R^{3} son, de forma independiente, bencilo o
acetilo.
6. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que R^{4} es bromo.
7. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que dicha base es t-butóxido de potasio o t-amilato
de potasio.
8. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que dicho disolvente es mezcla de dos o más de alcohol
t-butílico, acetonitrilo, dicloroetano, diclorometano,
tetrahidrofurano y alcohol t-amílico.
9. El procedimiento de la reivindicación 1 ó 4,
en el que el procedimiento además comprende la etapa de desproteger
dicho \beta-nucleósido para formar un
\beta-nucleósido de la fórmula:
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en la que R^{1} y R^{5} son
como se ha definido en lo que
antecede.
10. El procedimiento de la reivindicación 4, en
el que dicha base es t-butóxido de potasio y dicho disolvente
es una mezcla de alcohol t-butílico y acetonitrilo.
11. Un procedimiento para la preparación
estereoselectiva de un
2'-desoxi-\beta-nucleósido
de la fórmula:
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\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{2} y R^{3} son, de
forma independiente, grupos protectores de hidroxi, y R^{5} es un
halógeno o -NH_{2}, en el que el procedimiento comprende la etapa
de hacer reaccionar un derivado
2'-desoxi-\alpha-arabinofuranosilo
de la
fórmula:
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en la que R^{7} es un halógeno y
R^{2} y R^{3} son como se ha definido en lo que
antecede,
con una sal del derivado de adenina de la
fórmula:
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en la que R^{5} es como se ha
definido en lo que antecede y el grupo amino exocíclico
C-6 de dicha sal del derivado de adenina no está
protegido, en presencia de un disolvente, en la que dicho
2'-desoxi-\beta-nucleósido
se produce en una proporción molar de al menos 10:1 respecto al
anómero
2'-desoxi-\alpha-nucleósido
representado por la
fórmula:
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12. El procedimiento de la reivindicación 11, en
el que R^{5} es cloro y/o en el que R^{7} es bromo o cromo.
13. El procedimiento de la reivindicación 12, en
el que R^{5} es cloro y R^{7} es bromo.
14. El procedimiento de la reivindicación 11 ó
13, en el que dicha proporción molar entre dicho
2'-desoxi-\beta-nucleósido
y dicho
2'-desoxi-\alpha-nucleósido
es de al menos 15:1, preferentemente al menos 20:1.
15. El procedimiento de la reivindicación 11 ó
13, en el que R^{2} y R^{3} son, de forma independiente, bencilo
o acetilo.
16. El procedimiento de la reivindicación 11 ó
13, en el que dicha sal del derivado de adenina se forma in
situ en dicho disolvente mediante la reacción de una base de
potasio con un derivado de adenina de la fórmula:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
17. El procedimiento de la reivindicación 16, en
el que dicha base de potasio es t-butóxido de potasio o
t-amilato de potasio.
18. El procedimiento de la reivindicación 11 ó
13, en el que dicho disolvente se selecciona de alcohol
t-butílico, una mezcla de alcohol t-butílico y
acetonitrilo, una mezcla de alcohol t-butílico y
dicloroetano, una mezcla de dicloroetano y acetonitrilo, una mezcla
de alcohol t-amílico y dicloroetano, una mezcla de alcohol
t-amílico y acetonitrilo, una mezcla de alcohol
t-amílico, acetonitrilo y diclorometano y una mezcla de
t-amílico, acetonitrilo y dicloroetano.
19. El procedimiento de la reivindicación 11 ó
13, en el que no hay una producción sustancial o significativa de
aductos formados mediante la adición de dicho derivado de
2'-desoxi-\alpha-arabinofuranosilo
con dicho grupo amino exocíclico C-6 de dicha sal
de derivado de adenina.
20. El procedimiento de la reivindicación 11 ó
13, que además comprende la etapa de purificar dicho
\beta-nucleósido mediante recristalización o
preparación de una suspensión en un disolvente inerte.
21. El procedimiento de la reivindicación 20, en
el que dicha purificación de dicho
\beta-nucleósido comprende la resuspensión en
metanol o la recristalización de la mezcla de acetato de butilo y
heptano.
22. El procedimiento de la reivindicación 11 ó
13, que además comprende la etapa de desprotección de dicho
2'-desoxi-\beta-nucleósido
para formar un
2'-desoxi-\beta-nucleósido
de la fórmula:
en la que R^{5} es como se ha
definido en lo que
antecede.
23. Un procedimiento para la preparación de una
composición que comprende
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-flúor-\beta-D-arabinofuranosil)adenina,
en el que el procedimiento comprende las etapas de:
- (1)
- hacer reaccionar bromuro de 3',5'-O-dibenzoil-2'-desoxi-2'-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosilo con una sal de potasio de 2-cloroadenina de la fórmula:
en la que el grupo amino exocíclico
de dicha sal de potasio de 2-cloroadenina no está
protegido, en presencia de un disolvente para formar
2-cloro-9-(3',5'-O-dibenzoil-2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina;
- (2)
- desproteger dicha 2-cloro-9-(3',5'-O-dibenzoil-2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina para formar 2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina; y
- (3)
- aislar dicho 2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-flúor-\beta-D-arabinofuranosil)adenina para formar una composición que comprende 2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-flúor-\beta-D-arabinofuranosil)adenina.
24. El procedimiento de la reivindicación 23, en
el que dicha composición comprende
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-flúor-\beta-D-arabinofuranosil)adenina
sustancialmente pura, es decir, la proporción de dicho
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-flúor-\beta-D-arabinofuranosil)adenina
con su anómero \alpha medido mediante cromatografía de líquido de
alta presión y análisis espectrofotométrico es al menos 99:1.
25. El procedimiento de la reivindicación 23, en
el que el procedimiento comprende además la etapa de
- (4)
- aislar dicha 2-cloro-9-(3',5'-O-dibenzoil-2'-desoxi-2'-flúor-\beta-D-arabinofuranosil)adenina antes de desproteger dicha 2-cloro-9-(3',5'-O-dibenzoil-2'-desoxi-2'-flúor-\beta-D-arabinofuranosil)adenina, en particular en la que dicha etapa de aislamiento (4) comprende un procedimiento de resuspensión.
26. El procedimiento de la reivindicación 23, en
el que dicha etapa de aislamiento (3) comprende la recristalización
de dicha
2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-flúor-\beta-D-arabinofuranosil)adenina.
27. El procedimiento de la reivindicación 23, en
el que dicha sal de potasio de 2-cloroadenina se
forma in situ en dicho disolvente mediante la reacción de
una base de potasio con 2-cloroadenina.
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