PT630651E

PT630651E - Agente farmaceutico semi-solido e processo para a sua preparacao

Info

Publication number: PT630651E
Application number: PT94304657T
Authority: PT
Inventors: Masao Ikeda; Tomoki Tatefuji; Hiroshi Yamauchi
Original assignee: Hayashibara Seib Kagaku Kenkyu
Priority date: 1993-06-28
Filing date: 1994-06-27
Publication date: 2001-06-29
Also published as: ATE199646T1; KR950000168A; FI943103A; TW496744B; DE69426844D1; US5489577A; EP0630651A2; AU6601994A; AU685111B2; JPH0776527A; EP0630651B1; EP0630651A3; KR100314820B1; DK0630651T3; FI943103A0; NZ260867A; CA2126932A1; DE69426844T2

Description

DESCRIÇÃO

"AGENTE FARMACÊUTICO SEMI-SÓLIDO E PROCESSO PARA A SUA PREPARAÇÃO" A presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica semi-sólida e a um processo para produzir a mesma, em particular a uma composição farmacêutica semi-sólida estabilizada que contém substâncias proteicas bioactivas e a um processo para produzir a mesma.

Composições farmacêuticas semi-sólidas que contêm compostos químicos

Composições farmacêuticas semi-sólidas que contêm compostos químicos como ingredientes activos tais como composições farmacêuticas sob a forma de pomadas ou supositórios têm sido até hoje produzidas por simples amas sarnento dos ingredientes activos e bases. No caso em que os ingredientes activos são substâncias proteicas bioactivas tais como citoquinas e hormonas, que são relativamente lábeis, ao contrário dos compostos químicos, se se amassam estas substâncias para obter um produto semi-sólido, então verificar-se-á que aquelas estão já inactivadas ou que estão ainda susceptíveis à inactivação e isto torna um tal semi--sólido impossível de utilizar na prática.

Devido a esta circunstância, as substâncias proteicas bioactivas têm sido preparadas em formas líquidas em que as suas actividades são retidas de forma estável e em seguida são administradas por injecção através da via subcutânea ou intramuscular a fim de tratar de doenças susceptíveis, por exemplo imunopatias, doenças virais, anormalidades na secreção hormonal e tumores malignos. 1

Uma vez que se verificou mais tarde que as substâncias proteicas bioactivas são muiLu eficazes no tratamento de traumas na pele e nas membranas mucosas bem como de doenças susceptiveis referidas, por conseguinte outros métodos de administração tal como injecções por via percutânea ou permucosal, que se consideram usualmente mais seguras e menos penosas, têm sido preferidos. Deste modo, o desenvolvimento de agentes farmacêuticos semi-sólidos utilizando substâncias proteicas bioactivas em forma estabilizada têm sido objecto de grande procura. A Patente EP-0.533.938 descreve um preparado rectal para supositórios que contém calcitonina. Este preparado contém igualmente manitol e Pharmasol B-105. A Patente FR-2-620.331 descreve um preparado rectal para supositórios. 0 preparado contém manitol, calcitonina e um excipiente. A Patente EP-0.504.483 descreve um preparado rectal para supositórios que contém manitol e calcitonina. A composição contém igualmente massa de supositório e óleo de vaselina. A Patente EP-0-080.879 dá a conhecer uma composição de pasta dentifrica. A composição contém interferão, um açúcar--álcool e Tween 80 (um agente de actividade superficial). A Patente WO-91/13601 dá a conhecer um preparado rectal para supositórios que contém manitol e calcitonina. Para além destes compostos, a composição contém Suppocire A1X. A presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica semi-sólida e a um processo para a preparação da mesma, em particular a uma composição farmacêutica semi-sólida estabilizada que contém substâncias bioactivas proteicas e a um processo para a preparação da mesma.

O

O 2 A presente invenção refere-se a um agente farmacêutico semi-sólido e a um processo para a preparação do mesmo, em particular a um agente farmacêutico semi-sólido estabilizado que contém substâncias bioactivas proteicas e a um processo para a preparação do mesmo. A fim de resolver o objecto anteriormente mencionado, os inventores da presente invenção estudaram activamente composições farmacêuticas semi-sólidas em que eram utilizados sacáridos. Como resultado, constatou-se em primeiro lugar que, propondo misturas de soluções aquosas que contêm substâncias proteicas bioactivas com vários sacáridos e comparando os sólidos resultantes no que se refere à actividade residual, a utilização de oligossacáridos, em particular dos oligos-sacáridos muito higroscópicos a uma humidade relativa de 75 %, se obtém como resultado sólidos que apresentavam uma proporção de actividade residual mais elevada em comparação com o caso da utilização de monossacáridos, bem como propondo a mistura subsequente dos sólidos resultantes com vários materiais de base e investigando o resultado no que se refere à estabilidade das actividades, se obtiveram composições farmacêuticas semi-sólidas com actividade estabilizada apenas quando se utilizaram bases oleosas ou gordurosas. A presente invenção baseia-se nesta nova constatação.

Posteriormente, os inventores da presente invenção investigaram mais em pormenor as proporções de combinação para estas substâncias e materiais, tendo chegado à conclusão de que os semi-sólidos que continham para uma parte em peso de um oligossacárido cerca de 0,02 ou menos partes em peso de substâncias proteicas bioactivas e cerca de 2 ou mais partes em peso de uma base oleosa ou gordurosa eram adequados como agentes farmacêuticos semi-sólidos porque conservavam de modo estável as actividades das substâncias proteicas bioactivas e apresentavam capacidades apropriadas de extensão e de retenção de forma. Deste modo os inventores da presente invenção completaram a invenção. 3 "7

A presente invenção será em seguida descrita mais em pormenor, apenas a titulo exemplificativo.

Os oligossacáridos que podem ser utilizados na presente invenção são um ou vários desde dissacáridos a decassacáridos que retêm bem as actividades de substâncias proteicas bioactivas de tal modo que se podem preparar composições farmacêuticas semi-sólidas estabilizadas: Por exemplo, dissacáridos como maltose, trealose, lactose, sucrose e paratinose; álcoois oligossacáridos tais como maltitol, lactitol e maltotriitol; malto-oligossacáridos tais como maltotriose, panose, maltotetraose e maltopentaose; oligossacáridos que possuem a estrutura da sucrose no interior das suas moléculas tais como elurose, rafinose, meletitose, lactosilfrutósido e maltosilfrutósido; e são arbitrariamente utilizadas outras misturas de oligossacáridos tais como "COUPLING SUGAR®", uma glicosilsucrose comercializada por Hayashibara Co., Ltd., Okayama; Japão, isomalto-oligos-sacáridos, galacto-oligosacáridos, fruto-oligosacáridos. • · São em particular oligossacáridos que estabilizam de modo notável as substâncias proteicas bioactivas os oligossacáridos anidros que são higroscópicos a 5 % ou em grau superior após 6 dias a uma humidade relativa de 7 5 %. Um oligossacárido como estes pode ser preparado com os que se apresentam sob forma substancialmente anidra com o teor de humidade o mais baixo possível, de preferência de 3 % p/p ou inferior e um oligossacárido típico deste tipo é um produto de maltose cristalina,

'FINETOSE ®// comercializado por Hayashibara Co., Ltd.,

Okayama; Japão. 0 teor de humidade tal como referido na presente invenção é o determinado pelo método de Karl Fischer. A expressão "composição farmacêutica semi-sólida" tal como referida na presente invenção significa uma composição farmacêutica sob a forma de uma pomada, um creme, uma pastilha, um supositório e formas semelhantes com a excepção das composições farmacêuticas sob a forma de pó c sólida. 4

.LCLAêfc- , A expressão "substância proteica bioactiva" tal como referida na presente invenção significa uma 3ub3tância que inclui proteínas simples ou complexas, mais em particular citoquinas, por exemplo, interferões α, β e γ, factores de necrose de tumores α e β (TNF-α, TNF-β), factor de crescimento de células epiteliais (EGF), factor de transferência, factor de crescimento de células T (TCGF) e factor de estimulação de colónias (CSF), e hormonas proteicas, por exemplo tais como insulina, hormona do crescimento, prolactina, hormona gonadotrópica coriónica, eritropoietina, hormona de estimulação dos folículos, hormona luteinizante, hormona adrenocorticotrópica, lactogénio placental, hormona de estimulação da tiróide e hormona de estimulação da paratiróide que apresentam pesos moleculares de até 5.000 a 200.000. • ·

Qualquer substância proteica bioactiva pode ser utilizada na presente invenção independentemente dos métodos de preparação. As substâncias proteicas bioactivas que são derivadas de fluidos corporais, de tecidos e órgãos quando aquelas estão presentes de modo inerente, as resultantes de culturas in vitro ou in vivo daqueles e as resultantes de culturas de células humanas, células animais e microorganismos em que a capacidade de produção daquelas substâncias foi introduzida por fusão celular convencional e por métodos de recombinação genética podem ser todas utilizadas na presente invenção.

Na presente invenção, em geral, são utilizadas substâncias proteicas bioactivas sob a forma de solução aquosa a uma concentração desde cerca de 5 % p/v ou inferior, de preferência de lxlO"5 a 3 % p/v.

Em geral, podem-se preparar sólidos tais como pós, grânulos e blocos em que as actividades de substâncias proteicas bioactivas estão estabilizadas por mistura de uma parte em peso de um oligossacárido sólido e de cerca de 0,4 ou menos partes em peso, de preferência de 0,001 a 0,3 partes em 5 r—Ά LC,? peso de uma solução aquosa da substância proteica bioactiva até se obter uma mistura tão homogénea quanto po33Ívcl. Se necessário, antes de completar a fase de obtenção dos produtos finais, proporciona-se de modo arbitrário uma fase de secagem utilizando secagem por ventilação, secagem por vácuo e liofilização e/ou uma fase de peneiração. • · A fim de preparar composições farmacêuticas semi-sólidas objectivas com sólidos obtidos como mencionado, misturam-se cerca de duas ou mais partes em peso para uma parte em peso do oligossacárido, de preferência cerca de 3 a 50 partes em peso de uma base oleosa ou gordurosa, por exemplo, vaselina branca, lanolina purificada, óleo de cacau ou "PHARMASOL®", comercializado por Nippon Oil and Fats Co., Ltd.. Deste modo é possivel obter composições farmacêuticas semi-sólidas estabilizadas de acordo com a presente invenção que contêm uma parte em peso de um oligossacárido, cerca de 0,02 ou menos partes em peso de uma substância proteica bioactiva e cerca de 2 ou mais partes em peso de uma base oleosa ou gordurosa. Se necessário, no decurso da preparação de uma composição farmacêutica semi-sólida como descrita, podem ser utilizados suplementos convencionais, por exemplo estabilizadores, agentes promotores de absorção, bactericidas, cargas, agentes que proporcionam sabores, corantes e aromatizantes em combinação de modo a melhorar a eficácia e o valor comercial.

As composições farmacêuticas semi-sólidas assim obtidas podem ser preparadas de modo favorável, após arrefecimento e moldagem, sob a forma de agentes orais e sob a forma de supositórios bem como sob a forma de pomadas em creme uma vez que a utilização de "PHARMASOL®" ou de óleo de cacau as estabiliza a 30 °C ou a uma temperatura inferior, mas causa a sua fusão a uma temperatura de cerca de 40 °C. Estes semi--sólidos são adequados para composições farmacêuticas que são administradas por via percutânea ou permucosal. A quantidade de substância proteica bioactiva contida nestas composições farmacêuticas semi-sólidas pode ser escolhida arbitrariamente; 6 por exemplo, no caso de IFN-α, o presente agente contém 102 a 108 Ul/g (a expressão "UI" significa unidades internacionais), no caso de IFN-γ, 10 a 107 Ul/g e no caso de TNF-a, até 10 a 107 Ul/g. A presente composição farmacêutica semi-sólida é administrada sob a forma de uma pomada, uma pastilha ou um supositório, por via percutânea ou permucosal, normalmente 1 a 5 vezes ao dia numa dose de até 0,01 a 10 g/adulto, a fim de tratar as doenças susceptiveis. Esta via de administração e esta dose podem ser alteradas arbitrariamente em função do tipo e do teor das substâncias proteicas bioactivas, bem como do tipo de doenças e dos sintomas do doente. A presente invenção será explicada em pormenor em seguida em conjunção com várias EXPERIÊNCIAS: EXPERIÊNCIA 1

Influência de sacáridos sobre a solidificação de uma substância proteica bioactiva

Examinaram-se as estabilidades de substâncias proteicas bioactivas em composições sólidas, obtidas por mistura até homogeneidade de soluções aquosas que continham substâncias proteicas bioactivas com sacáridos sólidos. De acordo com o método convencional, as substâncias proteicas bioactivas utilizadas na experiência foram preparadas por aplicação de um preparado de interferâo α (IFN-α), um preparado de interferão γ (IFN-γ) ou um preparado de factor de necrose de tumor α (TNF-α), todos estes produzidos por Hayashibara Biochemical Laboratories, Inc., Okayama, Japão, e comercializados por Cosmo Bio Co., Ltd., Tóquio, Japão, a uma coluna de anticorpo fixado com cada anticorpo monoclonal e após remoção das fracções não adsorvidas, as fracções adsorvidas foram eluidas da coluna e concentradas por um filtro de membrana para obter uma solução aquosa a cerca de 0,01 % p/v. 7 17

Os sacáridos utilizados na experiência eram monos-sacáridos (exemplos comparativos) Lais como glucose cristalina hidratada, glucose cristalina anidra, frutose cristalina anidra e galactose cristalina anidra; e oligossacáridos (exemplos) tais como maltose cristalina hidratada, maltose cristalina anidra, maltitol cristalino anidro, trealose cristalina hidratada, trealose cristalina anidra, neotrealose cristalina anidra, lactose cristalina hidratada, lactose cristalina anidra, sucrose cristalina anidra, panose cristalina anidra, lactosilglucósido cristalino anidro, lactosilfrutósido (aliás lactossucrose) anidro amorfo, maltotetraose anidra amorfa e glicosilsucrose amorfa anidra (COUPLING SUGAR®) . A 50 partes em peso de cada oligossacárido adicionou-se uma parte em peso de uma solução aquosa que continha uma das substâncias proteicas bioactivas preparadas pelo método anterior e misturou-se até homogeneidade quanto possível ao mesmo tempo que se pulverizava a solução sobre o oligossacárido. A mistura resultante foi deixada em repouso a 30 °C durante 18 horas e foi pulverizada a fim de obter um pó que continha uma substância proteica bioactiva. Após um mês de repouso do pó resultante sob condições de secagem a 40 °C, determinou-se a actividade residual da substância proteica bioactiva. A percentagem da actividade residual em relação à actividade inicial na solução aquosa de partida foi considerada como a percentagem da actividade residual (%), isto é, o índice da estabilidade da substância proteica bioactiva no pó. Entretanto, para cada sacárido utilizado como material determinou-se o nível da respectiva higroscopicidade deixando-o em repouso a uma humidade relativa de 75 % e a 30 "C durante 6 dias θ determinando o peso final. A diferença entre o peso final e o peso inicial foi determinada e foi considerada como o aumento de peso por absorção de humidade e a percentagem do aumento de peso em relação ao peso inicial foi considerada como a proporção de absorção de humidade (%) , isto é, o índice do nível de higroscopicidade. 03 resultados 8

foram os que se apresentam no Quadro 1 Quadro 1 • ·

Sacárido Percentagem de higroscopicidade (%) IFN-a IFN-β TNF-a Apreciação (A)Glucose cristalina hidratada Menos de 1,U 15,1 0 0 Inaceitável (A)Glucose cristalina anidra Menos de 1,0 25,7 0 0 Inaceitável (A)Frutose cristalina anidra Menos de 1,0 13, 6 0 0 Inaceitável (A)Galactose cristalina hidratada Menos de 1,0 12,4 0 0 Inaceitável (B)Maltose cristalina hidratada Menos de 1,0 47,2 22,5 9,2 Aceitável (B)Maltose cristalina anidra 5,9 98,7 56, 4 61,1 Excelente (B)Maltitol cristalino anidro Menos de 1,0 49,2 24,8 10, 6 Aceitável (B)Trealose cristalina hidratada Menos de 1,0 44,9 31, 8 8,0 Aceitável (B)Trealose cristalina anidra 9,8 86,1 52, 6 57, 4 Excelente (B)Neotrealose cristalina anidra Menos de 1,0 35, 4 14,0 7,3 Aceitável (B)Lactose cristalina hidratada Menos de 1,0 33, 1 2, 6 5,4 Aceitável (B)Lactose cristalina anidra Menos de 1,0 45, 4 9,3 9,1 Aceitável (B)Sucrose cristalina anidra Menos de 1,0 33, 5 20, 8 8,0 Aceitável (B)Panose cristalina anidra Menos de 1,0 36,2 14,4 36, 5 Aceitável (B)Lactosilglucósido cristalino anidro Menos de 1,0 32, 3 28,6 29, 4 Aceitável (B)Lactosilfrutósido amorfo anidro 21, 4 98,8 75, 6 70, 1 Excelente (B)Maltotetraose amorfa anidra 20,3 66, 2 47,1 50, 3 Excelente (B)Glucosilsucrose amorfa anidra 22, 6 80, 1 65, 9 55, 2 Excelente Nota: (A) significa monossacárido e (B) significa oligossacárido. (exemplo) (exemplo comparativo) 9

Estes dados confirmam que a solidificação de uma substância proteica bioactiva na presença da coexistência de um oligossacárido é adequada para a estabilização da substância proteica bioactiva. Verifica-se que os oligos-sacáridos que exercem uma higroscopicidade elevada de 5 % ou superior a uma humidade relativa de 75 % e a 30 °C durante 6 dias são utilizados de modo satisfatório, mais em particular os oligossacáridos tais como a maltose cristalina anidra, a trealose cristalina anidra, o lactosilfrutósido amorfo anidro e a glicosilsucrose amorfa anidra são utilizados de modo adequado. EXPERIÊNCIA 2

Influência das bases sobre a semi-solidificação de substâncias proteicas bioactivas solidificadas por oligossacáridos

Um IFN-α em pó estabilizado com maltose cristalina anidra, um IFN-γ em pó estabilizado com lactosilfrutósido amorfo anidro ou um TNF-α em pó estabilizado com lactosilfrutósido amorfo anidro, preparado pelo método da EXPERIÊNCIA 1, foi amassado com uma base de semi-solidificação do modo habitual e comparou-se a estabilidade e a actividade das substâncias proteicas bioactivas nas bases semi-sólidas resultantes.

Amassou-se uma parte em peso de uma substância proteica bioactiva em pó com 9 partes em peso de uma base solúvel em água, uma base de emulsão ou uma base oleosa ou gordurosa e deixou-se em repouso sob uma humidade relativa de 75 % e a 30 °C. Após deixar em repouso durante um mês, determinou-se a actividade residual da substância proteica bioactiva e em seguida calculou-se a percentagem da actividade residual em comparação com a actividade inicial, isto é, a percentagem da actividade residual (%) ou o índice da estabilização de uma substância proteica bioactiva no preparado farmacêutico semi--sólido. Para além disso, aqueceram-se os preparados com bases 10

oleosas ou gordurosas em tampão de fosfato a 40 °C durante 30 minutos a fim de dissolver e isolar as ba3CO oleosas ou gordurosas. Determinou-se a actividade da substância proteica bioactiva na solução resultante do modo habitual. Os resultados são apresentados no Quadro 2. Quadro 2 Base sólida coexistência de IFN-α e maltose cristalina anidra coexistência de IFN-γ e lactosil-frutósido amorfo anidro coexistência de TNF-α e lactosil-frutósido amorfo anidro Apreciação (A)Pomada Macrogol 0 0 0 Inaceitável (A)GEL HIVIS WAKO 0 0 0 Inaceitável (B)Creme de dia 0 0 0 Inaceitável (B)Creme frio 0 0 0 Inaceitável (C)Vaselina branca 100 100 100 Aceitável (C)PHARMASOL® 100 100 100 Aceitável

Nota: Os valores no Quadro 2 significam a percentagem (%) residual da actividade residual. (A) significa uma base solúvel em água, (B) significa uma base de emulsão e (C) significa uma base oleosa ou gordurosa

Como é óbvio a partir do Quadro 2, verificou-se que os pós que contêm substâncias proteicas bioactivas que foram solidificadas por oligossacáridos podem ser transformados em produtos farmacêuticos semi-sólidos que contêm substâncias proteicas bioactivas estabilizadas apenas no caso de se misturarem as substâncias proteicas com bases oleosas ou gordurosas. 11 EXPERIÊNCIA 3

Influência da proporção de mistura de substâncias proteicas bioactivas em pó e da base oleosa ou gordurosa sobre a formação do produto farmacêutico semi-sólido

Amassou-se uma parte em peso de um IFN-α em pó estabilizado com maltose cristalina anidra, obtido pelo método da EXPERIÊNCIA 1, com 0,1, 0,5, 1, 2, 5, 10 ou 20 partes em peso de vaselina branca ou "PHARMASOL®" e deixou-se a mistura resultante em repouso a cerca de 25 °C durante uma hora e em seguida observou-se a forma do produto resultante. Após 6 meses de repouso do produto sob uma humidade relativa de 75 % e a 30 °C, a actividade residual do IFN-α foi determinada e calculou-se a percentagem da actividade residual em relação à actividade inicial, como percentagem da actividade residual (%), isto é, o índice da estabilização das substâncias proteicas bioactivas nos produtos. A fim de permitir a comparação, deixaram-se em repouso substâncias proteicas bioactivas em pó sob as mesmas condições durante 6 meses e em seguida calculou-se a percentagem (%) da actividade residual. Os resultados são apresentados no Quadro 3. 12

Quadro 3

Partes oleosa a uma ] sólido em peso de uma base e gordurosa em relação parte em peso de um Forma Actividade residual (%) Apreni ação 0 pó 0 Controlo (A) 0,1 quase pó 0 Inaceitável (A) 0,5 gel 15, 8 Inaceitável (A) 1,0 pastoso 64,6 Aceitável (A) 2,0 pastoso 100 Excelente (A) 5,0 pastoso 100 Excelente (A) 10,0 pastoso 100 Excelente (A) 20,0 pastoso 100 Excelente (B) 0,1 quase pó 0 Inaceitável (B) 0,5 gel 20, 4 Inaceitável (B) 1,0 sólido 73, 6 Aceitável (B) 2,0 sólido 100 Excelente (B) 5,0 sólido 100 Excelente (A) 10,0 sólido 100 Excelente (A) 20,0 sólido 100 Excelente

Nota: (A) significa vaselina branca e (B) significa PHARMASOL®.

Como é óbvio a partir do Quadro 3, verificou-se que a proporção adequada de mistura de uma base oleosa ou gordurosa em relação a uma parte em peso de um sólido que contém uma substância proteica bioactiva é de cerca de 2 partes em peso, o que mantém o produto resultante numa forma desejável e numa actividade residual elevada. EXPERIÊNCIA 4

Influência das condições de produção sobre o produto farmacêutico semi-sólido

Examinou-se a influência dos materiais a misturar e do procedimento de mistura sobre a estabilização das substâncias proteicas bioactivas nos produtos farmacêuticos semi-sólidos 13

resultantes . A amostra A era um produto que foi produzido pelo processo de preparação representativo da presente invenção, tendo sido preparada pelo método da EXPERIÊNCIA 1 por mistura sucessiva homogénea de uma parte em peso de uma solução aquosa que continha 0,01 % p/v de lFN-α com 50 partes em peso de maltose cristalina anidra num sólido que foi em seguida amassado com vaselina branca pelo método da EXPERIÊNCIA 2. Cada uma das amostras seguintes, que servem de controlo, foi preparada utilizando a mesma proporção de mistura (partes em peso) da amostra A. Obteve-se um produto farmacêutico semi--sólido, amostra B, amassando sucessivamente maltose cristalina anidra com vaselina branca e amassando a mistura resultante com uma solução aquosa que continha IFN-α tão homogeneamente quanto possível.

Obteve-se um produto farmacêutico semi-sólido, amostra C, amassando sucessivamente maltose cristalina anidra com vaselina branca e amassando tão homogeneamente quanto possível a substância resultante com um produto liofilizado preparado a partir de uma solução aquosa que continha IFN-a.

Obteve-se um produto farmacêutico semi-sólido, amostra D, amassando sucessivamente vaselina branca com uma solução aquosa que continha IFN-α tão homogeneamente quanto possível.

Obteve-se um produto farmacêutico semi-sólido, amostra E, amassando sucessivamente vaselina branca com um produto liofilizado preparado a partir de uma solução aquosa que continha IFN-a.

Estas amostras foram deixadas em repouso sob uma humidade relativa de 75 % e a 40 °C. Após um mês de repouso, determinou-se a actividade residual do IFN-α em cada amostra e determinou-se a percentagem (%) da actividade residual em relação à actividade do material na solução aquosa como a 14

percentagem (%) da actividade residual, isto é, o índice da estabilização da substância proteica bioactiva no produto farmacêutico semi-sólido. Os resultados são apresentados no Quadro 4.

Quadro 4

Amostra Condições de produção

Actividade Apreciação residual (%) (A) (maltose cristalina + solução aquosa de + vaselina branca anidra IFN-a 100 Presente invenção (B) (maltose cristalina + vaselina branca + solução aquosa de anidra IFN-a 4,7 Controlo (C) (maltose cristalina + vaselina branca + IFN-α seco anidra 25,1 Controlo (D) Vaselina branca + solução aquosa de IFN-a 2,7 Controlo (E) Vaselina branca + IFN-α seco 38,4 Controlo Conforme é óbvio a partir do Quadro 4, verificou-se que os produtos farmacêuticos semi-sólidos que contêm substâncias proteicas bioactivas estabilizadas são obtidos por mistura sucessiva de soluções aquosas que contêm substâncias proteicas bioactivas com oligossacáridos e amassando as misturas resultantes com bases oleosas ou gordurosas. Verificou-se também que é impossível alcançar o objecto da presente invenção quando não se utilizam oligossacáridos nos materiais para os presentes produtos farmacêuticos semi-sólidos ou quando a rcspectiva ordem de mistura é alterada.

Descrevem-se em seguida vários exemplos da presente invenção, sem que devam ser tomados como reduzindo o seu âmbito. 15 EXEMPLO 1

Pomada contendo IFN-a

Injectaram-se cricetos recém-nascidos com um anti-soro preparado do modo habitual a fim de enfraquecer a respectiva reacção imune, implantaram-se por via subcutânea células BALL-1 e alimentaram-se os cricetos do modo habitual durante 3 semanas. As massas dos tumores, formadas subcutaneamente no corpo dos cricetos, foram extraídas, esmagadas e desagregadas em solução salina. As células deste modo obtidas foram lavadas com meio RPMI 1640 isento de soro (pH 7,2), suspensas numa preparação fresca do mesmo meio a fim de se obter uma densidade celular de cerca de 2*106 células/ml, conservada a 35 °C. Misturou-se a suspensão das células com 200 u/ml de um IFN-α parcialmente purificado, conservou-se a esta temperatura durante 2 horas, misturou-se com cerca de 300 de título de hemaglutinação ml de vírus Sendai a esta temperatura e incubou-se durante duas horas a fim de induzir o IFN-α. A cultura resultante foi centrifugada a fim de remover as substâncias insolúveis a cerca de l.OOOxg e a cerca de 4 °C, o sobrenadante foi concentrado com um filtro de membrana, o concentrado foi aplicado a uma coluna de anticorpo anti-IFN-a imobilizado do modo convencional e em seguida removeu-se uma fracção não adsorvida. Em seguida, eluiu-se uma fracção adsorvida a partir da coluna e concentrou-se com um filtro de membrana a fim de obter um preparado líquido a cerca de 0,5 % p/v que continha IFN-α humano com uma actividade específica de cerca de 2*108 Ul/mg de proteína.

Misturou-se uma parte em peso de um preparado líquido obtido pelo método do EXEMPLO 1 tão homogeneamente quanto possível com 49 partes em peso de maltose cristalina anidra a fim de obter um preparado sólido que continha IFN-α, o qual foi em seguida amassado com 3 vezes em volume de vaselina branca a fim de obter uma pomada contendo IFN-α. 0 produto tinha cerca de 5*106 Ul/g de IFN-α. O produto, uma pomada 16

contendo um IFN-α estabilizado, pode ser com vantagem utilizado para o tratamento Ue doenças susccptíveis ao IFN-a tais como uma doença infecciosa de vírus de herpes, um cancro cutâneo, uma rinite e uma conjuntivite por aplicação na pele ou nas membranas mucosas. EXEMPLO 2

Supositório contendo IFN-a

Misturou-se um preparado sólido que continha IFN-a humano, obtido pelo método do EXEMPLO 1, com 9 vezes em volume de "PHARMASOL®" que tinha sido dissolvido por aquecimento a 40 °C, verteu-se a mistura num molde e arrefeceu-se a fim de obter um supositório que continha IFN-α. O produto, um supositório contendo um IFN-a estabilizado, pode ser com vantagem utilizado para o tratamento de doenças susceptiveis ao IFN-α tais como uma doença infecciosa de vírus de herpes, uma hepatite e um tumor maligno por administração do mesmo no recto e na vagina. EXEMPLO 3

Creme contendo IFN-γ

De acordo com o método da EXPERIÊNCIA 1, aplicou-se um preparado de IFN-γ humano disponível no comércio a uma coluna de anticorpo anti-IFN-γ dum modo convencional. Após se ter removido a fracção não adsorvida, eluiu-se uma fracção adsorvida e concentrou-se com um filtro de membrana, tendo-se obtido uma quantidade de uma solução a 0,5 % p/v que continha IFN γ humano com um antividade específica de cerca de 2*107 Ul/mg de proteína.

Misturaram-se uma parte em peso da solução e 29 partes em peso de trealose cristalina anidra tão homogeneamente quanto possível num produto sólido que continha IFN-γ, o qual foi 17 amassado com 4 vezes em volume de lanolina purificada a fim de obter uma pomada que continha IFN-γ. 0 produto tinha cerca de 3χ105 Ul/g de IFN-γ. 0 produto, uma pomada que continha um IFN-γ estabilizado, pode ser com vantagem utilizado para o tratamento de doenças susceptiveis ao IFN-γ, tais como uma doença infecciosa por vírus, uma hepatite, um reumatismo articular, uma rinite e uma conjuntivite por aplicação daquela na pele e nas membranas mucosas de modo semelhante ao produto do EXEMPLO 1. EXEMPLO 4

Supositório contendo TNF-a

Eluiu-se uma fracção não adsorvida de anticorpo anti--IFN-α preparada pelo método do EXEMPLO 1 e concentrou-se com um filtro de membrana, tendo-se obtido uma quantidade de 0,5 % p/v de solução concentrada que continha TNF-α que tinha uma actividade especifica de cerca de 2*107 Ul/mg de proteína.

Misturaram-se uma parte em peso da solução e 49 partes em peso de lactosilfrutósido amorfo anidro tão homogeneamente quanto possível num produto sólido que continha TNF-α, o qual foi amassado com 3 vezes em volume de "PHARMASOL®" a fim de obter um supositório que continha TNF-a. 0 produto tinha cerca de 3xl05 Ul/g de TNF-α. 0 produto, um supositório que continha TNF-α estabilizado, pode ser com vantagem utilizado para o tratamento de doenças susceptiveis ao TNF-α, tais como um tumor maligno, uma doença infecciosa por vírus e uma imunopatia, por administração daquele no recto e na vagina. 18 EXEMPLO 5

Pastilha contendo citoquinas

Misturaram-se 0,5 partes em peso de uma solução que continha IFN-α humano preparada pelo método do EXEMPLO 1, 0,25 partes em peso de uma solução que continha lb'N-y humano preparada pelo método do EXEMPLO 3, 0,25 partes em peso de uma solução que continha TNF-α preparada pelo método do EXEMPLO 4 e 9 partes em peso de uma solução aquosa que continha cerca de 0,5 % p/v de albumina de soro de bovino, e misturaram-se tão homogeneamente quanto possível a mistura e 490 partes em peso de maltose cristalina anidra num produto sólido que continha citoquinas. O sólido foi misturado com 4 vezes em volume de manteiga de cacau anteriormente dissolvida por aquecimento, quantidades adequadas de um corante e um agente aromatizante, verteu-se a mistura num molde e arrefeceu-se, tendo-se obtido uma pastilha que continha citoquinas. O produto, que tem cerca de 1*105 Ul/g de IFN-α, cerca de 3X103 Ul/g de IFN-γ e cerca de 3χ103 Ul/g de TNF-α, é uma pastilha que contém 3 tipos de citoquinas estabilizadas. Uma vez que a eficácia do IFN-α, do IFN-γ e do TNF-α se exerce de modo sinergístico, é muito mais eficaz para o tratamento de doenças susceptíveis a IFN-α, a IFN-γ e a TNF-α tais como imunopatia, uma doença infecciosa por vírus e um tumor maligno por administração daquela por via oral. EXEMPLO 6

Supositório contendo citoquinas

Misturou-se tão homogeneamente quanto possível uma mistura que continha citoquinas, a qual foi preparada pelo método do EXEMPLO 5, e 490 partes em peso de trealose cristalina anidra, tendo-se obtido um sólido que continha citoquinas, o qual foi em seguida vertido num molde e 19

arrefecido a fim de obter um supositório que continha citoquinas. 0 produto, que tem cerca de 4*104 Ul/g de IFN-α, cerca de lxlO3 Ul/g de IFN-γ e cerca de 1*103 Ul/g de TNF-α, é um supositório que contém 3 tipos de citoquinas estabilizadas. Uma vez que a eficácia do IFN-α, do IFN-γ e do TNF-a se exerce de modo sinergistico, é muito mais eficaz para o tratamento de doenças susceptíveis a IFN-α, a IFN-γ e a TNF-α tais como imunopatia, uma doença infecciosa por vírus e um tumor maligno por administração daquele por via rectal e vaginal. EXEMPLO 7

Pomada contendo EGF

Dissolveu-se 0,0001 parte em peso de um EGF humano recombinante disponível no comércio numa parte em peso de solução salina tamponizada com fosfato (pH 7,2) e misturou-se a solução resultante com 49 partes em peso de maltose cristalina anidra tão homogeneamente quanto possível, tendo-se obtido um sólido. O sólido resultante foi amassado com 9 vezes em volume de vaselina branca a fim de obter uma pomada que continha EGF. O produto tinha cerca de 0,2 μg/g de EGF activo. O produto, uma pomada que contém EGF estabilizado, pode ser utilizado com vantagem para tratar doenças susceptíveis a EGF, tais como um trauma, uma incisão, uma abrasão e uma queimadura por aplicação daquela à pele ou às membranas mucosas a fim de tratar eficazmente essas afecções. EXEMPLO 8

Agente oral contendo insulina

Dissolveu-se 0,1 parte em peso de uma insulina humana 20

recombinante disponível no comércio, com uma actividade específica de cerca de 24 Ul/mg de proteína, numa parte em peso de salina tamponizada com fosfato (pH 7,0) e misturou-se a solução resultante com 49 partes em peso de maltose cristalina anidra tão homogeneamente quanto possível, tendo-se obtido um sólido. 0 sólido resultante foi amassado com 19 vezes em volume de manteiga de cacau, a qual tinha sido previamente dissolvida por aquecimento, e uma quantidade adequada de aromatizante e a mistura foi vertida num molde e arrefecida, tendo-se obtido um agente oral que continha insulina. O produto tinha cerca de 21 Ul/g de insulina. O produto, um agente oral que continha uma insulina estabilizada, pode ser utilizado com vantagem para manter o nível de açúcar no sangue de diabéticos entre os limites normais por administração do mesmo a cerca de 2 a 6 Ul/dia de insulina. EXEMPLO 9

Supositório contendo eritropoietina • ·

Dissolveu-se 0,01 parte em peso de uma eritropoietina humana derivada de urina disponível no comércio com uma actividade específica de cerca de ΙχΙΟ5 Ul/mg de proteína numa parte em peso de solução salina tamponizada com fosfato (pH 7,2) e misturou-se a solução resultante com 49 partes em peso de trealose cristalina anidra tão homogeneamente quanto possível, tendo-se obtido um sólido. O sólido resultante foi amassado com 39 vezes em volume de "PHARMASOL®", o qual tinha sido previamente dissolvido por aquecimento, e a mistura foi vertida num molde e arrefecida, tendo-se obtido um supositório que continha eritropoietina. 0 produto tinha cerca de 500 Ul/g de eritropoietina. O produto, um supositório que continha uma eritropoietina estabilizada, pode ser de modo vantajoso utilizado para manter 21 o número de eritrócitos em doentes anémicos por administração do mesmo a cerca de 1.000 a 6.000 Ul/dia dc eritropoietina.

[Efeito da invenção]

Conforme descrito anteriormente, a presente invenção estabeleceu produtos farmacêuticos semi-sólidos contendo substâncias proteicas bioactivas estabilizadas sob a forma de uma pomada e de um supositório. As preparações compreendem misturar soluções que contêm substâncias proteicas bioactivas com oligossacáridos a fim de obter produtos sólidos e amassar os produtos sólidos resultantes com bases oleosas ou gordurosas.

As substâncias proteicas bioactivas contidas nos produtos farmacêuticos semi-sólidos são eficazes para o tratamento de doenças susceptiveis e as bases oleosas ou gordurosas protegem a pele e as membranas mucosas. Os oligossacáridos nos produtos farmacêuticos semi-sólidos atingem uma eficácia terapêutica mais satisfatória a fim de fornecer um suplemento de energia às células e aos tecidos celulares. O presente produto farmacêutico semi-sólido é de fácil manuseamento porque é facilmente administrado ao corpo por vias percutânea ou permucosal, as quais são vias de administração mais seguras e menos dolorosas do que as administrações convencionais.

Lisboa, 28 de Março de 2001

O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL

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Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Composição farmacêutica semi-sólida de uma substância proteica bioactiva estabilizada, caracterizada por conter, para uma parte em peso de um ou mais oligossacáridos anidros seleccionados do grupo constituído por desde dissacáridos até decassacáridos, 0,02 ou menos partes em peso de uma substância proteica bioactiva e 2 ou mais partes em peso de uma base oleosa ou gordurosa, estando a referida substância proteica bioactiva estabilizada pelo referido oligossacárido anidro e pela referida base oleosa ou gordurosa.
2. Composição farmacêutica semi-sólida de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a referida substância proteica bioactiva ser um membro seleccionado do grupo constituído por uma citoquina, uma hormona e misturas destes compostos.
3. Composição farmacêutica semi-sólida de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o referido oligossacárido apresentar uma higroscopicidade de 5 % ou superior após ser submetido durante 6 dias a uma humidade relativa de 75 % a uma temperatura de 30 °C.
4. Composição farmacêutica semi-sólida de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a referida base oleosa ou gordurosa ser um membro seleccionado do grupo constituído por vaselina branca, lanolina, glicéridos e misturas destes componentes.
5. Composição farmacêutica semi-sólida de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por se apresentar sob a forma de uma pomada, uma pastilha ou um supositório. 1
6. Processo para a prepara· semí-solida, caracterix; oligossacárido anidro ; proteica bioactiva e ar-base oleosa ou gordurc menos partes em peso c-mais partes em peso da numa parte em peso dt sendo o referido oligos; seleccionados do grupo até decassacáridos.
7. Processo de acordo coa por a referida solução ;
8. Processo de acordo coa por a referida substânc' seleccionado do grupo o hormona e misturas dest-
9. Processo de acordo cor por a referida solução da referida substância :
10. Processo de acordo cor por o referido higroscopicidade de 5 durante 6 dias a uma temperatura de 30 °C.
11. Processo de acordo co- por a referida base seleccionado do grupo lanolina, glicéridos e
12. Processo de acordo co por a referida compc. apresentar sob a forma de uma pomada, uma pastilha ou um supositório. Lisboa, 28 de Março de 2001 O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL

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