JPH0296535A - 骨髄機能障害性貧血治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明はヒトエリスロポエチンを有効成分として含有す
る骨髄機能障害性貧血治療剤に関する。

［従来の技術］ 貧血とは血液の中の血色束の恐が正常の人より減少した
状態であって、様々な原因によって起こることか知られ
ている。骨髄での造血能が何らかの障害を受けて起こる
貧血もその１つであるが、該障害の原因としては遺伝的
なもの、制ガン剤等の薬剤或いは放射線などがあげられ
ている（高久史麿編、血液病学（第２版）、医学書院、
第１４項〜第２４項〕。

この骨髄機能障害性貧血の治療法としては従来、メスタ
ノロン、ナンドロロンシピオネート、ナンドロロンフリ
ルプロピオネート等の蛋白同化ホルモンやエナン１〜酸
テストステロン等の男性ホルモンを投与する方法がとら
れてきた。そしてこれらホルモン剤の投与によってもな
お症状が改善されない場合に、最後の手段として骨髄移
植が行われるというのが現状であった。

［発明が解決しようとする課題］ しかし、上記した蛋白同化ホルモン剤には肝機能障害、
月経異常、その仙多くの副作用があり、且つ禁忌症もあ
るという問題点があり、又、男性ホルモン剤にも肝臓へ
の副作用がある他、女性及び男性に対し夫々ホルモン剤
特有の副作用がある〔大阪府病院薬剤師会編、医薬品要
覧（第４版）。

薬業時報社版、　１９７７、　Ｐ６６２〜Ｐ６９９参照
〕さらに、骨髄移植に於ても、間質性肺炎等の合併症、
移植後の免疫不全等の問題があり、又高度な療法のため
簡単にどこででも行なえるものではないという難点があ
った（臨床免疫、１５（９）　　：　　６８７〜６９９
゜１９８３参照）。

本発明はかかる事情に鑑み、骨ｆｆ、ｔｉ　ＩＮ能能障
害貧血患者に対し、より安全で優れた治療剤を提供する
ことを目的としてなされたものである。

し課題を解決するための手段］ 本発明者は上述の目的を達成するため鋭意研究を重ねた
結果、本出願人が以前より研究してきたエリスロボエヂ
ン（以下ＥＰＯと略記する）が骨髄機能障害性貧血に対
し改善効果を有することを見出し本発明を完成した。

すなわち、本発明はヒトエリスロポエチンを有効成分と
して含有する骨髄機能障害性貧血治療剤を提供するもの
である。又、本発明の製剤は制ガン剤による骨髄機能障
害という副作用を軽減する薬理効果をも同時に有するも
のするから、これに基づきヒトエリスロポエチンを有効
成分として含有する制ガン剤の副作用軽減剤を提供する
ものでもある。

以下本発明の詳細な説明する。

本発明治療剤が対象とする貧血は骨髄機能障害性貧血で
あるが、なかでも遺伝的な骨髄機能障害による貧血、放
射線療法等の副作用で起こる骨髄機能障害による貧血、
及び制ガン剤の副作用で起こる骨髄機能障害による貧血
に対し特に有効である。

なお、上記した骨髄機能障害の原因となる制ガン剤とし
ては、例えばシスプラチン、５−フルオロウラシル、メ
ルフアラン、シクロホスファミド、ブスルフ７ン、メソ
１へレキセード、テガフール、シタラビン、メルカプト
プリン、ドキソルビシン、アクラルビシン、ブレオマイ
シン、ペプロマイシン、マイトマイシンＣ１アクチノマ
イシンＤ１ビンクリスチン、エトポザイド等があげられ
る。

又、前述の通り本発明製剤はこれらの制ガン剤の副作用
軽減剤でもある。

ＥＰＯはヒトに限らず、種々の動物において、骨髄に存
在する赤芽球系幹細胞に動いて、赤血球系細胞への分化
成熟、増殖を促進する作用を示す微量生理活性物質をい
うが、本発明で用いるヒトＥＰＯは、その１つでありヒ
ト固有のアミノ酸配列を有するポリペブタイドであって
、適宜糖鎖を有するかまたは有さないものである。具体
的には、ヒト尿由来のもの、ヒトＥＰＯのアミノ酸配列
を］−ドする遺伝子を宿主細胞内で形質発現させること
により得られるもの（以下［ヒトｒ　Ｅ　ＰＯＪという
）、ヒト腎癌細胞の組織培養物から１ｑられるもの、あ
るいはヒトＥＰＯ産生能を有するヒト由来の細胞株を細
胞融合して（ｑたハイブリドーマを培養して得られるも
の等である。

本発明に用いられるヒトＥＰＯは種々の手段によって得
ることができる。

例えば、ヒト尿ＥＰＯは正常人尿や再生不良性貧血患者
の尿又は血漿く血清を含む）から抽出することにより（
ｑることができる（Ｔ、　ＨＩＹＡＫＥ等。

ジャーナル　オブ　バイオロジカル　ケミストリー（Ｊ
、　Ｂ、　Ｃ，）、　　２５２巻５５５８頁（１９７７
年）：Ｊ。

Ｐ、Ｌｅｗｉｎ等、ジャーナル　オブ　ラボラトリ−ア
ンド　クリニカル　メデイシン（Ｊ、　Ｌａｂ、　ＣＩ
ａｎ。

Ｈｅｄ、　）　、　６６巻９８７頁（１９６５年）〕。

またヒトｒＥＰｏは例えばヒトＥＰＯのアミノ酸配列に
対応するメツセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を採取し、
そのｍＲＮＡを利用して組換ＤＮＡ体を作成し、次いで
適当な宿主細胞（例えば、大腸菌の如き細菌類、酵母類
、植物又は動物の細胞株等）で生産させるような、所謂
、遺伝子工学的方法によって得られる。〔例えば、５Ｙ
ＬＶＩＡ　Ｌ、　Ｈ，等：プローシーデイングス　オブ
　ザ　ナショナルアカデミ−オブ　リイエンシーズ　オ
ブ　ザユーエス　ニー　　（Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ、
　Ａｃａｄ、　Ｓｃ＋。

ＵＳＡ）　８１巻２７０８頁（１９８４年）を参照〕。

前記の動物細胞株は種々の細胞株を用いることができる
が好ましくはヒト又は曲孔動物由来の培養細胞株であり
、例えば、ＣＯ８細胞、チャイーズハムスター卵巣（Ｃ
ＨＯ）細胞、マウスＣ−１２７細胞等を挙げることがで
きる。この他、ヒト腎癌細胞の組織培養物から製造する
方法〔特開昭５４−５５７９０号〕、ヒトＥＰＯ産生能
を有するヒト由来のリンパ芽球様細胞から製造する方法
（特開昭５７−４０４１１号）、ヒト細胞株を細胞融合
して得られるハイブリドーマを培養して１ｑる方法等に
よっても製造することができる。

これらの方法によって得られたヒトＥＰＯは骨髄機能障
害性貧血の治療に有効であるような十分な酸素運Ｖ１１
機能を有する成熟赤血球細胞を増殖させる限り、全て本
発明に使用され得る。

上記の方法に於て、尿または培養上清中に含まれている
ヒトＥＰＯは、所望により通常の単離・￥８製法によっ
てさらに濃縮・精製することができる。例えば、安息香
酸、エタノール、アセトン、タンニン酸等の有機溶媒に
よる沈殿法、硫安等による塩析法、濃縮真空透析等の透
析法、ゲルろ過クロマトグラフィー、イオン交換クロマ
トグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等の
各種クロマトグラフィー法、等電点電気泳動、グル電気
泳動管の電気泳動法等が挙げられ、これらの方法は単独
でまたは適宜組合せて用いてもよい。

１ｑられたヒトＥＰＯは凍結保存とするかまたは凍結乾
燥、真空乾燥等の手段により水分を除去して保存するこ
とができる。ざらにはヒ＋−ＥＰＯ含有水溶液に水溶性
塩類もしくは親水性有機溶媒を添加して有効成分を析出
させ、１■られた沈殿物を乾燥して保存することもでき
る。また所望により、ヒｌ−Ｅ　Ｐ　Ｏを適当な緩衝液
に溶解した後、ミリポアフィルタ−等で無菌ろ過して注
射剤とすることができる。

本発明の骨ｆｈｆｉ機能障害性貧血治療剤は場合により
その他の貧血治療剤、例えば鉄剤、ビタミン３１２製剤
、男性ホルモン剤等を処方的に配合するかまたは使用時
に混合することができ、前記鉄剤の例としては乾燥硫酸
第一鉄、フマール酸鉄、デキストラン鉄、グルコン酸鉄
、グルクロンｒ！ｉ鉄、オロチン酸鉄等を挙げることが
できる。

本発明の骨髄機能障害性貧血治療剤に含まれるヒトＥＰ
Ｏの投与量、投与回数は対象の疾患患者の病状を配慮し
て決めることができるがヒ１〜ＥＰＯとして成人１人当
たり５００〜１０００００Ｕ　／日を連日もしくは少な
くとも２週間に１回投与される。

又、投与方法としては通常静脈注射又は皮下投与がとら
れる。

本発明の骨髄機能障害性貧血治療剤は安定化物質を含ん
でいてもよく、該安定化物質として、例えば、ポリエチ
レングリコール、タンパク質、糖類、アミノ酸、無機塩
、有機塩および含硫還元剤が挙げられ、これらの１つ又
は２つ以上を含有してもよい。

これらの安定化物質の添加量は、ヒトＥＰＯの１重量部
に対して０．１１〜１００００重量部の割合で配合する
ことが好ましい。なお、２つ以上の安定化物質を混合し
て使用する場合においてもそれらの総量が上記範囲以内
であればよい。

これらの安定化物質は相応する積を適当な濃度と９１１
の水溶液に調整して使用する。この水溶液の浸透圧比は
０．１〜３．０の範囲とし、より好ましくは０．８〜１
．２である。水溶液のｐＨは５．０〜９．０に調整し、
特にｐＨ６〜８に調整するのが好ましい。

また本発明の製剤を調整するにあたっては、吸着防止剤
を添加してもよい。

［実　施　例］ 以下参考例（ヒトＥＰＯの製造例）、実験例（薬理効果
）実施例（製剤例）をあげて本発明を具体的に説明する
。

）ＩＩ’）’ＡＫＥ、　Ｔ、等の方法（ジャーナル　オ
ブ　バイオロジカル　ケミストリー（Ｊ、　Ｂ、　Ｃ，
）５２巻５５５８頁（１９７７年）〕に従って再生不良
性貧血患者尿から１）　５ｅＤｈａｄｅＸ　Ｇ５０によ
る脱塩２）ＤＥＡＥセルロースによるバッチ吸着３）エ
タノール沈殿４）ＤＥＡＥアガロースカラムクロマトグ
ラフィーを用いて部分精製されたヒト尿ＥＰＯを１ｑた
。

ｓｔｅ　　２）　　相りロマトグラフィー得られた部分
精製ヒト尿ＥＰＯを２４％プロパツール（和光紬薬社製
）を含む０．１％トリフルオロ酢酸（Ａｌｄｒｉｃｈ社
製）溶液に溶解せしめたのらＨＰ　Ｌ　Ｃによる精製を
行った。ＨＰＬＣ装置は日立６３８−５０型を用い２Ｂ
Ｏｒ１ｍと２２０ｎｍの紫外部吸収により検出を行った
。

２４％ｎ−プロパツールを含んだ０．１％トリフルオロ
酢酸溶液で予め平衡化したＹＭＣ−ＣＢカラム（６ｒｒ
ｖｎ　Ｘ　３０ｃｍ山村化学社製）に上記で得られた試
料を注入し、前記平衡化溶液で溶出させた。未吸着画分
が溶出後、ｎ−プロパツールの濃度を２６％に高めて溶
出させた。ＥＰＯの活性画分を集めた後、Ｃｅｎｔｒｉ
ｃｏｎ−１００（ＡｍｉＣＯｎ社商品名）社用品名限外
ろ過払により、０．１〜０．２ｄに濃縮した。

５ｔｅｌ）　　３）高速分子篩クロマトグラフィー上記
濃縮試料を２６％ｎ−プロパツールを含む０．１％ＴＦ
Ａ溶液で予め平衡化したＴＳＫ−Ｇ３００ＳＷカラム（
７，８ｍｍ　Ｘ　８０ｃｍ東洋曽達社製）に注入し、前
記平衡液で溶出さゼた。分子間２５０００〜３００００
の位置にＥＰＯ活性を有するピークが得られたので、こ
の部分を集めて凍結乾燥した。比活性は約９Ｘ１０’Ｕ
／ｆｆ１ｆｆでｃＴ）　ツ７Ｌ。

各ステップｆ於ける比活性を表■に示す。

表　　　■ ｔｅｐ 比活性ｘ（Ｌｌ／ｍｇ） ２）逆相クロマトグラフィー　　　　　　１００００３
）高速分子篩クロマトグラフィー　　９００００＊アツ
セイ法　１ｓｃｏｖｅ　Ｎ、　Ｎ等（ジャーナル　オブ
　セルラー　フィジオロジ− （Ｊ、　Ｃｅ１１．　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　＞　８３巻３
０９頁（１９７４年）〕の方法に従った。

参考例　２　０ＨＯ細胞由来ヒトｒＥＰＯの超漬 １２月２７日に出願された発明の名称「真核細胞の形質
転換のための補助ＤＮＡを含むベクター」（特願昭５９
−２８１８６２号）に開示された方法に従って、ヒ１−
ＥＰＯのアミノ酸配列をコードする遺伝子を組込んだプ
ラスミドをチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細
胞）で形質発現させることによってヒトｒＥＰｏを得た
。要約すると以下の如くである。

ヒト胎児肝細胞から１７られたヒトＥＰＯのアミノ酸配
列をコードする遺伝子を組込んだラムダトＩＥＯＰＥＬ
１３クローンからのＤＮＡをＥＣ０Ｒ１で消化させ、ヒ
トＥＰＯのアミノ酸配列をコードする遺伝子を含む小さ
なＲ１フラグメン１〜を取り出しプラスミドＲＫＩ−４
のＥＣｏＲｌ部位へ挿入した。このヒトＥＰＯの遺伝子
を組込んだプラスミドＲＫＩ−４をＤＨＦＲ＝欠損ＣＨ
Ｏ細胞に組入れて形質転換させた。ＣＨＯ細胞を核酸を
欠如したアルファ培地中で培養することによって少なく
とあ１つのＤトＩＦＲ遺伝子を有する細胞を選択した後
、段階的にメト上レキ１ノートの濃度を高めてゆくこと
によってヒトｒＥＰｏを産生させた。

最終的な培養上清中のヒトｒＥＰｏの活性は２０Ｕ／ｄ
であった。

Ｃｌ−１０細胞を無血清培養液で３日間培養した俊、ヒ
ト尿ＥＰＯで用いた精製方法に準じてヒトｒＥＰｏを精
製した。得られたヒトｒＥＰｏはＫｒｙｓｔａ　Ｉ等の
方法（ジャーナル　オブ　ラボラトリ−アンド　クリニ
カル　メデイスン（Ｊ。

Ｌａｂ、ＣＩ　ｉｎ、　Ｒｅｄ、　）　９７巻１４４頁
（１９８１年）〕により６６００ＬＪ／ｌｌ１ｌの活性
を有していた。またこのヒトｒＥＰＯはＳＤＳポリアク
リルアミドゲル電気泳動の結果、単一のバンドであるこ
とが確認された。

得られたヒトｒＥＰｏにｏ、ｉ％ＢＳＡを加え、生理食
塩水にて透析した後、実験に供した。

実験例　１ １、実験動物： 遺伝的な骨け；ｈ造血機能障害性貧血を示すことが知ら
れているＷ系マウスを用いた。又このマウスの貧血症は
ヒト再生不良性貧血に酷似していることが知られている
。具体的には（ＷＢＸｖ Ｃ５７ＢＬ／６）Ｆｌ−Ｗ／Ｗ　　系、へＷ　／十系及
び対照として一＋／十系のマウス（９週令、体重２１〜
３４ｇ）を約１週間馴化して用いた。

２、ＥＰＯ： ＣＨＯ−Ｃｅｌｌ由来のヒトｒＥＰｏを用いた。投与溶
液は５％マンニトール、０．０５％ヒト血清アルブミン
を含む水溶液に投与量に応じてＥＰＯを溶解して調製し
た。

３、実験方法： ヒトｒＥＰＯの投与はマウス尾部より静脈内投与により
７日間連日実施した。投与前にマウスを各群の体重が均
等になる様に分け、ヒトｒＥＰ。

の投与量０．１７．８６．８６００Ｕ／Ａ’ｆｆとし比
較のために各系統に対照群を設け、検体の投与体積を５
ｄ／に’ｊとして投すした。測定は最終投与の翌日に行
なった。測定リンプルの採取は、エーテル麻酔下で解剖
し下行大静脈より速やかに採血することにより行なった
。

４、結　果： 結果を表２に示す。表２にみる通り、血中ヘモグロビン
ｆｆｉ　（ｇ／旧）はＷｖ／十系マウスに於てはヒトｒ
　Ｅ　ＰＯ８６Ｕ／Ｎｇ投与により増加を示しＷＺＷｖ
系マウスに於てはヒトｒ　Ｅ　ＰＯ８，６００Ｕ／Ｋｇ
投与により顕著な増加を示し、貧血改善効果がみられる
。

表 平均士標し￥偏差　＊　　：ｐ＜０．０５　　＊＊：ｐ
＜０．０１イｕし対照群（ヒトｒＥＰｏ　　Ｏυ／に３
）に対して実験例　２ １、実験マウス： マウスは、Ｃ５７Ｂ　Ｉ／６ＮＣｒｊ、♂８Ｗを使用し
た。　このマウスに８５０ｒａｄのＸ線を全身照射した
。　その後、同系マウスの骨髄有核細胞５Ｘ×１０５を
尾静脈から移植し、Ｘ線照射、骨髄移植マウスとした。

２、投与試料の調製： ヒ１〜ｒＥＰｏは、Ｌｏｔ　Ｒ６ＥＯ２を使用した。こ
のヒトｒＥＰｏを０．（）５％ヒト血清アルブミン、５
％マンニｉ〜−ル溶液で９６Ｕ／ｄに希釈し、ヒトｒＥ
Ｐｏ試利とした。このヒトｒＥＰｏ試利は分注後、凍結
保存し、投与口に融解して用いた。

コン］・ロール試料は、ヒトｒＥＰｏを含まない０．０
５％ヒト血清アルブミン、５％マンニ１〜−ル溶液を凍
結保存しておき、用いた。

３、実験方法： 凍結保存しておいたヒトｒＥＰｏ試料、コントロール試
料を投与口に融解した。これら投与試料をＸ線照射、骨
髄移植した日から、１日１回、連日１４日間、Ｏ，１ｍ
ｌ皮下投与した。

投与開始日（無処理マウス、ｎ＝４）、１，４゜７、１
４．２１１回転、ヒトｒＥＰｏ投与群、コントロール投
与群、無処理群から、ぞれぞれ４匹のマウスを取り出し
、末梢血液中のヘモグロビン値を測定した。

採血は、眼窩静脈からヘマトクリット管で行い、ヘモグ
ロビン値はＨＩＣＲＯＣＥＬＬＣＯυＮＴＥＲＣＣｌ３
０Ａ（ＳＹＳ）ＩＥＸ社）で測定した。

４、結　果： Ｘ線照射、骨髄移植マウスにヒトｒＥＰＯを連日１４日
間投与した時のヘモグロビン値の推移を図１に示した。

図１にみるとおり、ヘモグロビン値は、造血の停止に伴
い減少したが、赤血球産生の回復により増加する傾向を
示している。特に、２１日目には、ヒ１〜ｒＥＰｏ投与
群で′＃息の増加を示しており、ヒトｒＥＰｏによる赤
血球産生の促進が認められ、貧血の改善に有効であるこ
とが示唆されている。

１、実験動物： 体重１４０〜１６０　ｇの雄性ＳＤプラット静岡実験動
物）を用いた。−群４〜５匹とし、水、餌を自由に摂取
できる環境下で飼育した。

２、薬　剤： シスプラチン（ＣＤＤＰ）（＾１ｄｒｉｃｈより購入）
は生理食塩液に溶解させ、ラット体重ｔｏｏｇ当たり１
ｄを尾静脈より静注した。なお、ＣＤＤＰの構造は以下
の通りである。

ＣＨＯ−細胞由来のヒトｒＥＰＯを希釈液（５％マーン
ニトール０．０５％ヒト血清アルブミン）で希釈後、ラ
ット体重１００ｇ当たり、０．５ｍｌ１を尾静脈より投
与した。

３、実験方法： ラットにＣＤＤＰ８１ｒｌＦｌ／Ｋｌを単回投与し、１
３日目に下記の方法で血液検査を行い、ヘモグロビンが
均一になるように群分けした。　ヒトｒＥＰＯの投与を
１３日目より開始し、隔日１回、１ｌｌＯ回投与を行っ
た。　ヒトｒＥＰｏ非投与群には溶媒（Ｖｅｈｉｃｌｅ
）の処置を行わなかった。正常ラット（ＣＤＤＰ非投与
群）にヒトｒＥＰｏを投与する場合も同様に行った。

（血液検査） ＣＤＤＰ投与後、経時的に、背中足静脈より血液２０μ
ｇをゾーリーピペットで採取し、自動血球計数装置（Ｓ
ｙｓｍｅｘ　ＣＣ−１８ＯＡ＞でヘモグロビンを測定し
た。

４、結　果 結果を図２に示す。図にみるとおり、ヒトｒＥＰｏを２
２Ｕ／に！ｊから１７０ｔＪ／に９に変えて投与した結
果から、ＣＤＤＰ誘発貧血に対し用量依存的に貧血改善
がなされることがわかる。

火蓋四重 １、実験動物： 体重１５０〜１６０９の雄性ＳＤラッ１〜（静岡実験動
物）を用いた。−群６匹とし、水、餌を自由に摂取でき
る環境下で飼育した。

２、薬　剤： ’５−ＦＵを１５０ｍ５／に９使用した他は実験例３と
同じ。

３、実験方法： ５−ＦＵを１５０ｍ１／Ｋｌラツトに重性する。−５該
５−ＦｔＪ投与８日前からヘモグロビンが最低になる１
２日後までヒトｒＥＰｏを計１１回静注するスケジュー
ルを用いて、ヒトｒＥＰｏの用早を１７０゜８６０　、
１７３０．３４６０Ｕ／Ｋｇにかえて投与した。採血は
経時的に背中足静脈より行い、ヘモグロビン値を測定し
た。

４、結　果 結果を図３に示す。図から明らかなとおり、５−ＦＵ１
５０η／に９を静脈投与すると、投与後１週間目ぐらい
から貧血症状が出現するが、１２日１以降はすみやかに
回復する（５−ＦＵ投与群）。

一方５−ＦＵとヒトｒＥＰｏ併用群では、ヒトｒＥＰｏ
の前投与により、貧血発症前（４日前）に、ヘモグロビ
ンが正常レベル以上に増加した。

貧血が発症する８日以降では、ヒトｒＥＰｏ併用群でも
ヘモグロビンの減少がみられるものの、用量依存的に明
らかな貧血改善効果が認められた。

ヒｌ〜ｒ　Ｅ　ＰＯ１７３０Ｕ／に！？以上の投与では
ヘモグロビンはほぼ正常レベルを維持した。

実施例　１ ＣＨＯ細胞由来じトｒＥＰｏ　　　　１重量部ヒト血清
アルブミン　　　　　１００重量部注射用蒸留水にて全
量　　　　１０００００重量部上記組成比で無菌的に溶
液を調整し、バイアルに分注し、凍結乾燥し密封した。

実施例　２ 実施例１におけるヒト血清アルブミンに代えてデキスト
ラン４０を１００重量部用い、同様にて凍結乾燥製剤を
作製した。

実施例　３ １００ｍｉ中にマンニトール５９、ヒト尿ＥＰ０１ｍｇ
、ヒト血清アルブミン１００ｍｙ、アセチルトリプトフ
ァンナトリウム２．１５ｈ＋ｙ、カプリル酸ナトリウム
１．３３ｆｆ１ｇを含む水溶液を無菌的に調整し、ｌｄ
ずつバイアルに分注し凍結乾燥し密封する。

実施例　４ ｐｌ＋７．０の０．０５　Ｍリン酸緩衝液１００ｍ１中
にヒト尿Ｅ　Ｐ　Ｏ１ｍｇ、ポリエチレングリコール４
０００５００ｍｇ、エヂレンオキυイドプロビレＡンＡ
キリイド共重合体３０ｍｇ、塩化ナトリウム８００ｍ！
ｉＦを含む水溶液を無菌的に調整し、１ｍｌずつアンプ
ルに分注溶閉する。

実施例　５ ｐＨ７，０の０．０５　Ｍリン酸緩衝液５０ｍ１中にＣ
ＨＯ細胞由来ヒトｒＥＰＯ０，５ｍｇ、グリシン”ＮＪ
、ソルビトール１ｇを含む水溶液を無菌的に調整し、０
．５７ずつバイアルに分注し、凍結乾燥し密封する。別
に０．１％メチルセルロース水溶液を無菌的に調整し、
１ｒｄｌずつアンプルに分注し、溶解用溶溶液とする。

実施例　６ １００ｄ中にヒト尿Ｅ　Ｐ　Ｏ１ｍｇ、ヒト血清アルブ
ミン５００ｍｇ、マンニトール５００ｍｇを含む水溶液
を無菌的に調整し、１ｍｌずつバイアルに分注し凍結乾
燥し密封づ−る。

別に３００ｍｌ中にグリコン酸第二鉄３ｇ、ＮａＣｊ２
．７９を含む水溶液を無菌的に調整し、３ｄずつアンプ
ルに分注し、溶封する。　上記１バイアルを１アンプル
に溶解し徐々に（２〜３分で）静注する。

【図面の簡単な説明】

図１はＸ線照射、骨髄移植マウスに対するヒトｒＥＰｏ
投与効果を示す図であり、図２はＣＤＤＰ誘発貧血マウ
スに対するヒ１〜ｒＥＰＯ投与効果を示す図であり、図
３は５−ＦｔＪ誘発貧血マウスに対するヒＩ−ｒ　Ｅ　
ｌ）　Ｏ投与効果を示す図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ヒトエリスロポエチンを有効成分として含有する骨
   髄機能障害性貧血治療剤。 ２、ヒトエリスロポエチンがヒトエリスロポエチンのア
   ミノ酸配列をコードする遺伝子を宿主細胞内で形質発現
   させて得たものであることを特徴とする請求項１記載の
   骨髄機能障害性貧血治療剤。 ３、ヒトエリスロポエチンが人尿由来のものであること
   を特徴とする請求項１記載の骨髄機能障害性貧血治療剤
   。 ４、骨髄機能障害が遺伝性又は放射線被曝性、又は制ガ
   ン剤誘発性の骨髄機能障害である請求項１から３のいづ
   れかに記載された骨髄機能障害性貧血治療剤。 ５、骨髄機能障害を誘発する制ガン剤がシスプラチン、
   ５−フルオロウラシル、メルファラン、シクロホスファ
   ミド、ブスルファン、メソトレキセート、テガフール、
   シタラビン、メルカプトプリン、ドキソルビシン、アク
   ラルビシン、ブレオマイシン、ペプロマイシン、マイト
   マイシンＣ、アクチノマイシンＤ、ビンクリスチン、エ
   トポサイドから選ばれた１又は２以上の制ガン剤である
   請求項４記載の骨髄機能障害性貧血治療剤。 ６、ヒトエリスロポエチンを有効成分として含有する制
   ガン剤の副作用軽減剤。 ７、制ガン剤が請求項５記載の制ガン剤である請求項６
   記載の制ガン剤副作用軽減剤。