PT2740795T - Composição de fármaco para o tratamento e/ou a prevenção de cancro - Google Patents

Composição de fármaco para o tratamento e/ou a prevenção de cancro Download PDF

Info

Publication number
PT2740795T
PT2740795T PT128202256T PT12820225T PT2740795T PT 2740795 T PT2740795 T PT 2740795T PT 128202256 T PT128202256 T PT 128202256T PT 12820225 T PT12820225 T PT 12820225T PT 2740795 T PT2740795 T PT 2740795T
Authority
PT
Portugal
Prior art keywords
cancer
antibody
cells
human
caprin
Prior art date
Application number
PT128202256T
Other languages
English (en)
Inventor
Saito Takanori
Kobayashi Shinichi
Okano Fumiyoshi
Original Assignee
Toray Industries
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Toray Industries filed Critical Toray Industries
Publication of PT2740795T publication Critical patent/PT2740795T/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6857—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from lung cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6861—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from kidney or bladder cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6865—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from skin, nerves or brain cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6869—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

DESCRIÇÃO
COMPOSIÇÃO DE FÁRMACO PARA O TRATAMENTO E/OU A PREVENÇÃO DE
CANCRO
Campo técnico A presente invenção refere-se à nova utilização de um anticorpo contra CAPRIN-1 ou um fragmento do mesmo num fármaco tal como um agente terapêutico e/ou preventivo para o cancro. Técnica Anterior 0 cancro é a principal causa de morte. Esta doença atualmente é tratada principalmente por terapêutica cirúrgica em combinação com quimioterapia e/ou terapêutica de radiação. Apesar do desenvolvimento recente de novas técnicas cirúrgicas ou a descoberta de novos agentes anticancro, o tratamento de cancro existente tem um resultado melhorado insuficientemente, exceto para alguns tipos de cancro. Com os avanços recentes de biologia molecular ou imunologia do cancro, anticorpos que reagem especif icamente com cancro, antigénios de cancro que são reconhecidos por células T citotóxicas, genes que codificam tais antigénios de cancro, e semelhantes têm sido identificados, elevando as expectativas de terapêutica específica de cancro direcionadas a antigénios de cancro (Literatura não patente 1).
Para reduzir o efeito secundário de terapêutica do cancro, é desejável que péptidos, polipéptidos, ou proteínas reconhecidas como antigénios do cancro raramente existam em células normais e especif icamente existam em células de cancro. Em 1991, Boon et al. (Ludwig Institute for Cancer Research, Bélgica) isolou um antigénio de melanoma humano MAGE 1 reconhecido por células T CD8 positivas por um método de clonagem de expressão ADNc utilizando linhas celulares de cancro autólogas e as células T reativas a cancro (Literatura não patente 2) . Posteriormente, um método SEREX (identificação sorológica de antigénios através de clonagem de expressão recombinante) tinha sido relatado, que adota uma abordagem de clonagem de expressão de gene para identificar antigénios de tumor reconhecidos pelos anticorpos produzidos em resposta a cancro autólogo in vivo num paciente de cancro (Literatura não patente 3 e Literatura de patente 1) . De acordo com este método, alguns antigénios de cancro que raramente são expressos em células normais e são expressos especificamente em cancro têm sido isolados por este método (Literaturas não patente 4 a 9) . Além disso, terapêuticas celulares utilizando imunócitos que reagem especificamente com os antigénios de cancro utilizando vacinas ou semelhantes que compreendem antigénios de cancro está em ensaio clínico direcionado a alguns antigénios de cancro isolados.
Em anos recentes, vários fármacos de anticorpo para o tratamento do cancro direcionados a proteínas antigénicas em células de cancro têm surgido no mundo. Estes fármacos receberam atenção devido a sua certa eficácia como agentes terapêuticos específicos de cancro. A grande maioria de proteínas antigénicas direcionadas pelos fármacos, contudo, também são expressas em células normais. Como um resultado da administração de anticorpos, células normais que expressam os antigénio bem como células de cancro são danificadas, resultando desvantajosamente em efeito secundário. Consequentemente, se antigénios de cancro especificamente expressos na superfície de células de cancro podem ser identificados e anticorpos direcionados aos antigénios podem ser utilizados como fármacos, pode ser esperado que estes fármacos de anticorpo consigam um tratamento com menos efeito secundário. A proteína 1 citoplasmática ativa e associada à proliferação (CAPRIN-1) tem sido conhecida como uma proteína celular que é expressa após ativação ou divisão celular de células normais em repouso e e forma grânulos de estresse citoplasmãtico com ARNs intracelulares para participar na regulação de transporte e tradução de ARN. Encontrou-se que esta proteína é especificamente expressa na superfície de células de cancro e, portanto, está a ser estudada como um alvo de fármacos de anticorpo para o tratamento de cancro (literatura de patente 2).
Lista de citações Literatura de Patente
Literatura de patente 1: Patente U.S. N° 5698396 Literatura de patente 2: W02010/016526 Literatura não Patente
Literatura não Patente 1: Tsuyoshi Akiyoshi, "Japanese Journal of Cancer and Chemotherapy", 1997, Vol. 24, p. 511-519 (Japanese Journal of Cancer and Chemotherapy Publishers Inc., Japão)
Literatura não Patente 2: Bruggen P. et al., Science, 254: 1643-1647 (1991)
Literatura não Patente 3: Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 92: 11810-11813 (1995)
Literatura não Patente 4: Int. J. Cancer, 72: 965-971 (1997) Literatura não Patente 5: Cancer Res., 58: 1034-1041 (1998) Literatura não Patente 6: Int. J. Cancer, 29: 652-658 (1998) Literatura não Patente 7: Int. J. Oncol., 14: 703-708 (1999) Literatura não Patente 8: Cancer Res., 56: 4766-4772 (1996) Literatura não Patente 9: Hum. Mol. Gene 6: 33-39, 1997 Sumário da Invenção Problema técnico
Um objeto da presente invenção é proporcionar é produzir um anticorpo que tem como alvo CAPRIN-1 especificamente expressa na superfície de células de cancro e tem melhor atividade antitumoral que os anticorpos convencionais, e proporcionar o anticorpo para utilização como um agente terapêutico e/ou preventivo para o cancro.
Solução ao problema A presente invenção possui os seguintes aspetos: A presente invenção proporciona um anticorpo ou um fragmento do mesmo que tem reatividade imunológica com uma proteína CAPRIN-1, 0 anticorpo ou fragmento do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOs: 5, 6, e 7 e uma região variável de cadeia leve compreendendo as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOs: 9, 10, e 11.
Noutra forma de realização, o anticorpo é um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo quimérico, Um anticorpo de cadeia simples, ou um anticorpo bi-específico. A presente invenção também proporciona uma composição farmacêutica que compreende o anticorpo ou o fragmento do mesmo como um ingrediente ativo, e uma combinação farmacêutica conforme definida nas reivindicações. A invenção também proporciona a dita composição farmacêutica e a dita combinação farmacêutica, cada uma para utilização num método para o tratamento e/ou a prevenção de cancro.
Numa forma de realização da presente invenção, o cancro é cancro da mama, cancro renal, cancro pancreático, cancro do intestino grosso, cancro pulmonar, tumor cerebral, cancro gástrico, cancro do colo uterino, cancro ovárico, cancro da próstata, cancro da bexiga, cancro esofágico, leucemia, linfoma, fibrossarcoma, mastocitoma, ou melanoma.
Efeitos Vantajosos da Invenção 0 anticorpo contra CAPRIN-1 utilizado na presente invenção danifica células de cancro. Consequentemente, o anticorpo contra CAPRIN-1 é úteis no tratamento e/ou na prevenção de cancro.
Descrição de formas de realização 0 anticorpo contra um polipéptido de CAPRIN-1 utilizado na presente invenção pode ser examinado para sua atividade antitumoral, conforme descrito posteriormente, examinando in vivo a inibição de proliferação tumoral num animal portador de cancro ou examinando ex vivo a presença ou ausência de atividade citotóxica mediada por complemento ou imunócito exibida pelo anticorpo contra células tumorais que expressam o polipéptido. 0 anticorpo contra CAPRIN-1 utilizado na presente invenção é um anticorpo monoclonal que se liga especif icamente à proteína de CAPRIN-1. Tal anticorpo monoclonal pode ser qualquer tipo de anticorpo que pode exercer atividade antitumoral e inclui, por exemplo, anticorpos de animais não humanos (por exemplo, anticorpos monoclonais de ratinho, rato, coelho, e galinha), anticorpos recombinantes (por exemplo, anticorpos sintéticos, anticorpos multiespecíficos, anticorpos humanizados, anticorpos quiméricos, e anticorpos de cadeia simples (scFv)), anticorpos humanos, e seus fragmentos de anticorpo (por exemplo, Fab, F(ab')2, e Fv) . Estes anticorpos e fragmentos dos mesmos podem ser preparados por meio de métodos geralmente conhecidos dos peritos na especialidade. No caso de um indivíduo de teste humano, um anticorpo humano ou um anticorpo humanizado é desejável para a evitar ou suprimir a rejeição. 0 anticorpo é qualquer classe de molécula de imunoglobulina, por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgA, IgD, ou IgY, ou qualquer subclasse, por exemplo, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl ou IgA2. 0 anticorpo pode ainda ser modificado por acetilação, formilação, amidação fosforilação, PEGuilação, ou semelhantes, adicionalmente à glicolisação.
Neste contexto, a frase "ligar-se especificamente a uma proteína de CAPRIN-1" significa que o anticorpo se liga especif icamente a uma proteína de CAPRIN-1 e não se liga substancialmente a outras proteínas. 0 indivíduo a receber o tratamento e/ou prevenção de cancro de acordo com a presente invenção é um mamífero tal como um ser humano, um animal de estimação, animais de pecuária, ou um animal de desporto, preferentemente um ser humano. A seguir no presente documento, a preparação de antigénio, preparação de anticorpo, e uma composição farmacêutica de acordo com a presente invenção serão descritos. <Preparação de antigénio para a preparação de anticorpos>
As proteínas ou fragmentos das mesmas utilizadas como antigénios de sensibilização para a obtenção do anticorpo contra CAPRIN-1 utilizado na presente invenção não são limitados pelos tipos de animais que servem como suas origens, incluindo seres humanos, cães, gado, cavalos, ratinhos, ratos, e galinhas. As proteínas ou fragmentos das mesmas, contudo, são preferentemente selecionadas em vista da compatibilidade com as células parentais para utilização em fusão celular. No geral, são preferidas proteínas derivadas de mamíferos. Particularmente, são preferidas proteínas derivadas de ser humano. Por exemplo, quando a CAPRIN-1 é CAPRIN-1 humana, proteínas de CAPRIN-1 humana, péptidos parciais das mesmas, ou células que expressam CAPRIN-1 humana podem ser utilizadas como os antigénios de sensibilização.
As sequências nucleotídicas e as sequências de aminoácidos de CAPRIN-1 humana e homólogos das mesmas podem ser obtidas, por exemplo, fazendo um acesso ao GenBank (NCBI, EUA) e utilizando o algoritmo BLAST ou FASTA (Karlin and Altschul, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 90: 5873-5877, 1993; e Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, 1997).
Na presente invenção, com referência à sequência nucleotídica (SEQ ID NO: 1 ou 3) ou sequência de aminoácidos (SEQ ID NO: 2 ou 4) de CAPRIN-1 humana, as alvos são ácidos nucleicos ou proteínas que consiste em sequências que têm de 70 a 100 %, preferentemente de 80 % a 100 %, mais preferentemente de 90 % a 100 %, ainda preferentemente de 95 % a 100 %, por exemplo, de 97 % a 100 %, de 98 % a 100 %, de 99 % a 100 %, ou de 99,5 % a 100 % de identidade de sequência com a sequência nucleotídica ou a sequência de aminoácidos da ORF ou a porção madura da referência. Neste contexto, o termo " % de identidade de sequência" significa a percentagem (%) do número de aminoácidos idênticos (ou bases) em relação ao número total de aminoácidos (ou bases) quando duas sequências estão alinhadas de tal modo que o grau máximo de semelhança ou identidade é pode ser conseguido com ou sem introdução de intervalos.
Os fragmentos de cada proteína de CAPRIN-1 têm comprimentos que variam desde o comprimento do aminoácido de um epítopo (ou um determinante antigénico) , que é a unidade mais curta reconhecida pelo anticorpo, até menos do que o comprimento completo da proteína. 0 epítopo refere-se a um fragmento de polipéptido que tem antigenicidade ou imunogenicidade em mamíferos, preferentemente seres humanos. Sua menor unidade consiste em aproximadamente 7 a 12 aminoácidos, por exemplo, 8 a 11 aminoãcidos.
Polipéptidos que compreendem as proteínas CAPRIN-1 humanas acima e péptidos parciais das mesmas sintetizadas de acordo com métodos de síntese química, por exemplo, os métodos Fmoc (fluorenilmetiloxicarbonilo) and tBoc (t-butiloxicarbonilo) (Seikagaku Jikken Koza (Biochemical Experimentation Course in English) 1, the Japanese Biochemical Society ed., Protein Chemistry IV, Chemical Modification and Peptide Synthesis, Tokyo Kagaku Dojin Co., Ltd. (Japão) , 1981) . Igualmente, estes polipéptidos podem ser sintetizados por meio de métodos de rotina utilizando vários sintetizadores de péptido disponíveis comercialmente. Alternativamente, polinucleótidos que codificam os polipéptidos podem ser preparados utilizando abordagens de engenharia genética conhecidas na técnica (Sambrook et al. , Molecular Cloning, a 2a edição, Current Protocols in Molecular Biology (1989), Cold Spring Harbor Laboratory Press; Ausubel et al. , Short Protocols in Molecular Biology, a 3a edição, A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology (1995) , John Wiley &amp; Sons; etc.) em incorporados em vetores de expressão, que então são introduzidos em células hospedeiras de modo que as células hospedeiras produzem os polipéptidos. Desta maneira, os polipéptidos de interesse podem ser obtidos.
Os polinucleótidos que codificam os polipéptidos podem ser prontamente preparados por meio de abordagens de engenharia genética conhecidas na técnica ou métodos de rotina utilizando sintetizadores de ácidos nucleicos disponíveis comercialmente. Por exemplo, 0 ADN que compreende a seuquência nucleotídica do gene de CAPRIN-1 humano pode ser preparado por meio de PCR utilizando uma biblioteca de ADNc ou ADN cromossómico humano como um molde e um par de iniciadores concebidos de forma a ser capazes de amplificar a sequência nucleotídica descrita na SEQ ID NO: 1. As condições de reação por este PCR podem ser determinadas de forma apropriada. Exemplos das condições podem incluir, mas não são limitadas a, 30 ciclos cada envolvendo as etapas de reação que consistem em 94 °C durante 30 segundos (desnaturação) , 55 °C durante 30 segundos a 1 minuto (anelamento), e 72 °C durante 2 minutos (alongamento) utilizando termotolerância de ADN polimerase (por exemplo, Taq polimerase, Pfu polimerase) e um tampão de PCr contendo Mg2+, seguida pela reação a 72 °C durante 7 minutos. A abordagem de PCR, condições, etc. são descritos em, por exemplo, Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology, a 3a edição, A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology (1995), John Wiley &amp; Sons (particularmente, Capítulo 15) .
Igualmente, as sondas ou iniciadores apropriados podem ser preparados com base nas informações sobre as sequências nucleotídicas do gene de CAPRIN-1 e as sequências de aminoácidos das proteínas de CAPRIN-1, e utilizadas no rastreio de, por exemplo, uma biblioteca de ADNc humana, para isolar o ADN desej ado. Preferentemente, tal biblioteca de ADNc é produzida a partir de células, órgãos, ou tecidos que expressam proteínas de CAPRIN-1. Exemplos de tais células ou tecidos incluem células ou tecidos derivados de testículos ou de cancros ou tumores tais como leucemia, cancro da mama, linfoma, tumor cerebral, cancro pulmonar, cancro pancreático, e cancro do intestino grosso. Estas operações, incluindo a preparação de sondas ou iniciadores, a construção de uma biblioteca de ADNc, o rastreio construção da biblioteca de ADNc, e a clonagem do gene de interesse, são conhecidos pelos peritos na especialidade e podem ser realizados de acordo com métodos descritos em, por exemplo, Sambrook et al., Molecular Cloning, a 2a edição, Current Protocols in Molecular Biology (1989), e Ausubel et al. (ibid.) . Os ADNs que codificam as proteínas de CAPRIN-1 humana e os péptidos parciais das mesmas podem ser obtidos a partir do ADN assim obtido.
As células hospedeiras podem ser qualquer célula capaz de expressar os polipéptidos acima. Exemplos de células procarióticas incluem, mas não são limitadas a, E. coli Exemplos de células eucarióticas incluem, mas não são limitados a: células de mamíferos tais como células de rim de macaco COSI e células de ovário de hamster chinês CHO; uma linha celular de células embriónicas humanas (HEK293), linha de células de pele embriónicas de ratinho (NIH3T3) , células de leveduras tais como células de brotamento de leveduras e leveduras fissiparidade; células de bicho-da-seda; e óvulos de Xenopus.
No caso de utilizar células procarióticas como as células hospedeiras, os vetores de expressão utilizados têm uma origem que permite a replicação nas células procarióticas, um promotor, um local de ligação ao ribossoma, um local de multiclonagem, um terminador, um gene de resistência a fármacos, um gene complementar auxotrófico, etc. Exemplos de vetores de expressão para E. coli podem incluir a série pUC, pBluescript II, sistemas de expressão pET, e sistemas de expressão pGEX. Os ADN que codificam o polipéptido acima podem ser incorporados em tal vetores de expressão, com os quais as células hospedeiras procarióticas são depois transformados, seguido pela cultura dos transformantes obtidos de modo que os polipéptidos codificados pelos ADNs são expressos nas células hospedeiras procarióticas. A este respeito, os polipéptidos podem ser expressos como proteínas de fusão com outras proteínas.
No caso de utilizar células eucarióticas como as células hospedeiras, vetores de expressão para células eucarióticas tendo um promotor, uma região de splicing, um local de adição de poli(A), etc. são utilizados como os vetores de expressão. Exemplos de tais vetores de expressão podem incluir os vetores pKAl, pCDM8, pSVK3, pMSG, pSVL, pBK-CMV, pBK-RSV, EBV, pRS, pcDNA3, e pYES2. Da mesma forma conforme acima, os ADN que codificam o polipéptido acima podem ser incorporados em tal vetores de expressão, com os quais as células hospedeiras eucarióticas são depois transformadas, seguido pela cultura dos transformantes obtidos de modo que os polipéptidos codificados pelos ADNs são expressos nas células hospedeiras eucarióticas. No caso de utilizar vetores de expressão tais como pIND/V5-His, pFLAG-CMV-2, pEGFP-Nl, ou pEGFP-Cl, OS polipéptidos podem ser expressos como várias proteínas de fusão com marcador His (por exemplo, (His) 6 (His) i0) , etiqueta FLAG, etiqueta myc, etiqueta HA, GFP, ou semelhantes.
Os vetores de expressão podem ser introduzidos nas células hospedeiras utilizando métodos bem conhecidos tais como eletroporação, um método de fosfato de cálcio, um método de lipossomas, um método de DEAE dextrano, microinjeção, infeção virai, lipofeção e ligação com péptidos de penetração em células. 0 polipéptido de interesse pode ser isolado e purificado a partir de células hospedeiras por uma combinação de operações de separação conhecidos na técnica. Exemplos das mesmas incluem, mas não são limitadas a, tratamento com um desnaturante (por exemplo, ureia) ou um detergente, ultrassonicação, digestão enzimática, salificação, fracionamento e precipitação de solvente, diálise, centrifugação ultrafiltração, filtração em gel, SDS-PAGE, eletroforese de focagem isoelétrica, cromatografia de permuta iónica, cromatografia hidrofóbica, cromatografia de afinidade, e cromatografia de fase reversa. <Estrutura do anticorpo
Os anticorpos são é geralmente glicoproteínas heteromultiméricas compreendendo, pelo menos, duas cadeias pesadas e duas cadeias leves. As imunoglobulinas para além de
IgM são glicoproteínas heterotetraméricas de aproximadamente 150 kDa cada compostas por duas cadeias leves (L) idênticas e duas cadeias pesadas (H) idênticas. Tipicamente, cada cadeia leve está conetada a uma cadeia pesada através de uma ligação covalente dissulfureto simples, embora o número de ligações dissulfureto entre as cadeias pesadas varie consoante os diferentes isotipos de imunoglobulinas. Cada uma das cadeias pesadas e leves também tem uma ligação de dissulfureto intracadeia. Cada cadeia pesada tem um domínio variável (região VH) em uma das extremidades, seguido de uma série de regiões constantes. Cada cadeia leve tem um domínio variável (região VL) numa extremidade e tem uma região constante simples na outra extremidade. A região constante de cadeia leve está alinhada com a primeira região constante de cadeia pesada, enquanto o domínio variável de cadeia leve está alinhado com o domínio variável de cadeia pesada. Regiões particulares denominadas regiões determinantes de complementaridade (CDRs) nos domínios variáveis do anticorpo exibem variabilidade específica e conferem especificidade de ligação ao anticorpo. Porções relativamente conservadas nas regiões variáveis são denominadas regiões estruturais (FRs). Os domínios variáveis das cadeias pesadas e cadeias leves completas compreendem cada um quatro FRs ligadas através de três CDRs. Estas três CDR são denominadas CDRH1, CDRH2, e CDRH3 nesta ordem desde a terminação N da cadeia pesada. Igualmente, CDR são denominadas CDRL1, CDRL2, e CDRL3 na cadeia leve. A CDRH3 é mais importante para a especificidade de ligação do anticorpo para o seu antigénio. Além disso, CDRs em cada cadeia são mantidas próximas entre si pelas regiões FR e contribuem para a formação de uma local de ligação de antigénio no anticorpo, juntamente com as CDRs na outra cadeia. As regiões constantes não contribuem diretamente para a ligação de anticorpo-antigénio, mas exibem várias funções efetoras, por exemplo, envolvimento na citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC), fagocitose mediada pela ligação a um recetor Fcy, taxa de semivida/eliminação mediada por um recetor Fc neonatal (FcRn) , e citotoxicidade dependente de complemento (CDC) mediada por um componente Clq na cascata do complemento. <Preparação do anticorpo 0 anticorpo anti-CAPRIN-1 de acordo com a presente invenção significa um anticorpo tendo reatividade itnunológica com uma proteína de CAPRIN-1 de comprimento completo ou um fragmento da mesma.
Neste contexto, a "reatividade imunológica" significa a propriedade do anticorpo ligar-se ao antigénio de CAPRIN-1 in vivo. Através de tal ligação, o anticorpo exerce a função de danificar (por exemplo, matar, suprimir, ou regredir) tumor. Especificamente, o anticorpo utilizado na presente invenção não é limitado por seu tipo desde que o anticorpo possa danificar tumores tais como cancro de mama, cancro renal, cancro pancreático, cancro do intestino grosso, cancro pulmonar, tumor cerebral, cancro gástrico, cancro do colo uterino, cancro ovárico, cancro da próstata, cancro da bexiga, cancro esofágico, leucemia, linfoma, fibrossarcoma, mastocitoma, ou melanoma como um resultado da ligação à proteína de CAPRIN-1. A seguir no presente documento, exemplos de preparação de vários anticorpos monoclonais serão mostrados.
Por exemplo, linhas celulares de cancro da mama SK-BR-3 expressando CAPRIN-1 são administradas a cada ratinho para imunização. 0 baço é extraído deste ratinho. Após a separação das células de baço, as células são fundidas com as células de mieloma de ratinho. Os clones que produzem anticorpos tendo efeito antiproliferativo numa célula de cancro são selecionados dentre as células de fusão obtidas (hibridomas). Os hibridomas que produzem anticorpos monoclonais tendo efeito antiproliferativo da célula de cancro são isolados e cultivados. 0 anticorpo pode ser preparado por meio de purificação do sobrenadante da cultura de acordo com um método de purificação por afinidade geral.
Os hibridomas que produzem anticorpo monoclonal podem ser preparados, por exemplo, como se segue: em primeiro lugar, os animais são imunizados com antigénios de sensibilização de acordo com um método conhecido na técnica. Este método de imunização geralmente envolve injetar intraperitonealmente ou subcutaneamente os antigénios de sensibilização aos mamíferos. Especificamente, os antigénios de sensibilização são diluídos com ou suspensos em PBS (solução salina tamponada com fosfato) , solução salina fisiológica, ou semelhante numa quantidade apropriada e depois misturados, se for desejado, com uma quantidade apropriada de um adjuvante convencional, por exemplo, um adjuvante completo de Freund. Após emulsificação, a emulsão resultante é administrada a cada mamífero várias vezes a cada 4 a 21 dias. Alternativamente, um veículo apropriado pode ser usado para a imunização com os antigénios de sensibilização.
Após a confirmação de uma elevação no nível do anticorpo desejado no soro do mamífero assim imunizado, os imunócitos são recolhidos do mamífero e submetidos a fusão celular. Exemplos preferidos dos imunócitos incluem particularmente células de baço.
Utilizam-se células de mieiorna de mamíferos como células parentais parceiras a ser fusionadas com os imunócitos. Para as células de mieloma, várias linhas celulares conhecidas na técnica, por exemplo, P3U1 (P3-X63Ag8Ul), P3 (P3x63Ag8.653) (J. Immunol. (1979) 123, 1548-1550), P3x63Ag8U.l (Current Topics in Microbiology and Immunology (1978) 81, 1-7), NS-1 (Kohler. G. and Milstein, C. Eur. J. Immunol. (1976) 6, 511-519) , MPC-11 (Margulies. D.H. et al. , Cell (1976) 8, 405-415), SP2/0 (Shulman, M. et. al. , Nature (1978) 276, 269-270), FO (deSt. Groth, S.F. et al., J. Immunol. Methods (1980) 35, 1-21), S194 (Trowbridge, I.S. J. Exp. Med. (1978) 148, 313-323), e R210 (Galfre, G. et al., Nature (1979) 277, 131-133), são preferentemente utilizadas. A fusão celular entre os imunócitos e as células de mieloma pode ser basicamente efetuada de acordo com um método conhecido na técnica, por exemplo, o método de Kohler e Mil stein (Kohler, G. and Milstein, C. Methods Enzymol. (1981) 73, 3-46) .
Mais especificamente, a fusão celular é levada a cabo, por exemplo, na presença de um promotor de fusão celular num meio nutriente convencional. Por exemplo, polietileno glicol (PEG) ou hemaglutinante do Japão (HVJ)) é utilizado como o promotor de fusão. Se for desejado, um auxiliar tal como o sulfóxido de dimetilo pode ser ainda adicionado com a finalidade de potenciar a eficiência da fusão. A razão entre os imunócitos e as células de mieloma utilizadas pode ser arbitrariamente definida. Por exemplo, a quantidade dos imunócitos é preferentemente ajustado de 1 a 10 vezes a quantidade das células de mieloma. Exemplos do meio que pode ser utilizado na fusão celular incluem os meios RPMI1640 e MEM adequados para o crescimento das linhas celulares de mieloma bem como meios convencionais para utilização neste tipo de cultura celular. Além disso, um suplemento de soro tal como soro fetal de vitelo (FCS) pode ser utilizado em combinação com estas células.
Para a fusão celular, os imunócitos e as células de mieloma são bem misturadas numa quantidade predeterminada do meio. Uma solução de PEG (massa molecular média: por exemplo, aproximadamente de 1000 a 6000) preaquecida até aproximadamente 37 °C é normalmente adicionada à mistura a uma concentração de 30 a 60 % (p/v) e misturada aí para formar os hibridomas de interesse. Subsequentemente, procedimentos de adicionar sequencialmente um meio apropriado e remover o sobrenadante por meio de centrifugação são repetidos para remover agentes de fusão celular ou semelhantes desfavoráveis para o crescimento de hibridomas.
Os hibridomas assim obtidos são cultivados num meio seletivo convencional, por exemplo, um meio de cultura HAT (meio contendo hipoxantina, aminopterina, e timidina) para seleção. A cultura no meio HAT é continuada durante um período (normalmente, de vários dias a várias semanas) suficiente para a morte das células que não são do hibridoma de interesse (células não fusionadas). Subsequentemente, os hibridomas que produzem o anticorpo de interesse são rastreados e clonados como clones individuais por meio de um método de diluição limitativo convencional.
Para além da obtenção dos hibridomas pela imunização de animais não humanos com antigénios, os hibridomas que produzem anticorpos humanos tendo a atividade desejada (por exemplo, atividade antiproliferativa celular) podem ser obtidos pela sensibilização de linfócitos humanos, por exemplo, linfócitos humanos infetados pelo vírus EB, com proteínas, células que expressam proteínas, ou lisados dos mesmos in vitro e fusão dos linfócitos sensibilizados com células de mieloma derivados de humano capazes de se dividir permanentemente, por exemplo, U266 (n° de acesso TIB 196).
Os hibridomas que produzem anticorpo monoclonal assim preparados podem ser subcultivados num meio convencional e também podem ser armazenados durante um longo período em azoto líquido.
Especificamente, os antigénios desejado ou células que expressam os antigénios desejados são utilizados como antigénios de sensibilização na imunização de acordo com um método de imunização convencional. Os imunócitos obtidos são fusionados com células parentais conhecidas na técnica de acordo com um método de fusão celular convencional. As células produtoras de anticorpos monoclonais (hibridomas) podem ser rastreadas por um método de rastreio convencional para preparar o anticorpo.
Neste contexto, por exemplo, ratinhos KM (Kirin Pharma Co., Ltd./Medarex) e ratinhos Xeno (Amgen Inc.) são conhecidos como os ratinhos produtores de anticorpo humano (por exemplo, Publicações Internacionais n° WO02/43478 e W002/092812). Anticorpos policlonais humanos completos podem ser obtidos a partir do sangue de tais ratinhos imunizados com as proteínas de CAPRIN-1 ou fragmentos das mesmas. Alternativamente, as células de baço podem ser isoladas dos ratinhos imunizados deste modo e fusionadas com células de mieloma. Desta maneira, hibridomas monoclonais humanos podem ser obtidos.
Os antigénios podem ser preparados de acordo com, por exemplo, um método utilizando células animais (Publicação de Patente JP (Kohyo) N° 2007-530068) ou um método utilizando baculovírus (por exemplo, Publicação Internacional N.° 2008/46777) . Os antigénios tendo baixa imunogenicidade podem ser ligados a macromoléculas tais como albumina para imunização.
Alternativamente, os anticorpos recombinantes podem ser utilizados, que são produzidos utilizando uma técnica de recombinação génica que envolve: a clonagem de genes de anticorpos de hibridomas; incorporar os genes de anticorpos nos vetores adequados; e introduzir os vetores em hospedeiros (veja-se, por exemplo, Carl, A.K. Borrebaeck, James, W. Larrick, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Publicado no Reino Unido por MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990) . Especificamente, os ADNc da região variável (região V) do anticorpo são sintetizados a partir dos ARNm de hibridomas utilizando transcriptase reversa. Após a obtenção dos ADNs que codificam as regiões V dos anticorpo de interesse, os ADNs são ligados com ADNS que codificam as regiões constantes do anticorpo desejado (regiões C) . Os produtos de ligação resultantes depois são incorporados nos vetores de expressão. Alternativamente, os ADNs que codificam a região V do anticorpo podem ser incorporados nos vetores de expressão contendo os ADNs da região C do anticorpo. Estes ADNs podem ser incorporados no vetores de expressão de modo que sejam expressos sob o controlo de regiões de controlo de expressão, por exemplo, um potenciador e um promotor. A seguir, as células hospedeiras podem ser transformadas com os vetores de expressão resultantes e permitidas que expressem anticorpos.
Conforme descrito anteriormente, o anticorpo anti-CAPRIN-1 da presente invenção é qualquer dos vários anticorpos monoclonais incluindo anticorpos monoclonais de animais não humanos, anticorpos monoclonais humanos, e anticorpos recombinantes.
Estes anticorpos monoclonais de animais não humanos ou anticorpos monoclonais humanos podem ser preparados pela cultura de hibridonaas obtidos pela fusão entre células de baço de animais não humanos (por exemplo, ratinhos, ratinhos produtores de anticorpos humanos, galinha, ou coelhos) imunizados com proteínas de CAPRIN-l e células de mieloma. 0 anticorpo recombinante inclui, conforme descrito anteriormente, anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anticorpos de cadeia simples, anticorpos multiespecíficos, e semelhantes. 0 anticorpo quimérico pode ser preparado por: ligar ADNs que codificam regiões variáveis de cadeia leve ou pesada de um anticorpo derivado de um animal não humano (por exemplo, ratinho, rato, coelho, ou galinha) com ADN que codifica regiões constantes de cadeia leve ou pesada derivado de um anticorpo humano; incorporar os genes de fusão resultantes em vetores de expressão, e introduzir os vetores em hospedeiros de modo que os anticorpos são produzidos.
Especificamente, o anticorpo quimérico é, por exemplo, um anticorpo composto de regiões variáveis de cadeias pesada e leve de anticorpo de ratinho e região constante de cadeia pesada e leve de anticorpos humanos. 0 anticorpo quimérico pode ser preparado utilizando um método conhecido na técnica que envolve, por exemplo: ligar os ADNs que codificam as regiões V de anticorpo de ratinho com ADNs que codificam as regiões C de anticorpo humano; incorporar os produtos de ligação resultantes nos vetores de expressão; e introduzir os vetores em hospedeiros de modo que os anticorpos são produzidos. Nos Exemplos descritos posteriormente, os anticorpos quiméricos humanos-ratinhos foram preparados e confirmados para ter um efeito antitumoral. Estes anticorpos monoclonais compreendem uma região variável de cadeia pesada (VH) tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve (VL) tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12, em que a região VH compreende CDR1 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, CDR2 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6, e CDR3 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7, e a região VL compreende CDR1 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ IDN.°: 9, CDR2 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10, e CDR3 representada pela sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11. O anticorpo humanizado, também denominado anticorpo humano remodelado, e um anticorpo modificado por engenharia genética. 0 anticorpo humanizado é construído por enxerto de CDRs de anticorpo humano com CDRs que correspondem ao anticorpo derivado de um animal imunizado. Especificamente, ADNs em que as sequências que codificam CDR em ADNs que codificam uma região variável de cadeia pesada ou leve de anticorpo humano são substituídos pelas sequências que codificam a CDR correspondente de um anticorpo derivado de animal não humano (por exemplo, ratinho, rato, coelho, ou galinha) são preparados e ligados com os ADNs que codificam as regiões constantes de cadeia pesada ou leve derivada de anticorpo humano. Os genes de fusão resultantes podem ser incorporados em vetores de expressão, que depois são introduzidos em hospedeiros para a produção de anticorpos para preparar o anticorpo humanizado de interesse.
Especificamente, por exemplo, as sequências de ADN concebidas para ligar CDRs de anticorpos de ratinho e galinha e regiões estruturais de anticorpo humano (FRs) são sintetizadas por meio de PCR utilizando oligonucleótidos preparados tendo porções terminais sobrepostas entre si. Os ADNs obtidos são ligados com ADNS que codificam as regiões constantes do anticorpo. Subsequentemente, os produtos de ligação resultantes são incorporados nos vetores de expressão, que depois são introduzidos em hospedeiros para a produção de anticorpos para obter o anticorpo de interesse (veja-se a Publicação de Pedido de Patente Europeia n° EP2394Q0 e a Pedido Internacional n° WO96/02576). As FRs do anticorpo humano ligadas através das CDR são selecionadas de tal modo que as CDRs formam um local de ligação ao antigénio favorável. Se for necessário, os aminoácidos nas regiões estruturais das regiões variáveis do anticorpo podem ser substituídos de tal modo que as CDRs do anticorpo humano remodelado resultante formam um local de ligação ao antigénio apropriado (Sato K. et al., Cancer Research 1993, 53: 851-856). Além disso, estas regiões estruturais podem ser substituídas com regiões estruturais derivadas de vários anticorpos humanos (veja-se a Publicação Internacional N 0 W099/51743) .
As regiões estruturais do anticorpo humano ligadas através das CDR são selecionadas de tal modo que as CDRs formam um local de ligação ao antigénio favorável. Se for necessário, os aminoácidos nas regiões estruturais das regiões variáveis do anticorpo podem ser substituídos de tal modo que as CDRs do anticorpo humano remodelado resultante formam um local de ligação ao antigénio apropriado (Sato K. et al., Cancer Research 1993, 53: 851-856). 0 anticorpo de cadeia simples refere-se a um anticorpo ou fragmento do mesmo que compreende regiões variáveis de cadeias leves e pesadas ligadas entre si através de um ligante. Um ADN que codifica o anticorpo de cadeia simples pode ser preparado ligando um ADN que codifica a região variável da cadeia pesada, um ADN que codifica o ligante, e um ADN que codifica variável de cadeia leve. Neste contexto, as regiões variáveis de cadeias leves e pesadas são ambas derivadas de um anticorpo humano ou derivado de um anticorpo humano tendo CDRs sozinhos substituídos por CDRs de um anticorpo derivado de animal não humano (por exemplo, ratinho, rato, coelho, ou galinha). 0 ligante consiste em 12 a 19 aminoácidos, Exemplos do mesmo incluem (G4S) 3 que consistem em 15 aminoácidos (G.B. Kimet al.,
Protein Engineering Design and Selection 2007, 20 (S) : 425-432). O anticorpo multiespecífico refere-se a um anticorpo capaz de se ligar especificamente a uma pluralidade de diferentes epítopos. Por exemplo, o anticorpo biespecífico (diacorpo) é capaz de se ligar especif icamente a dois epítopos diferentes. Um ADN que codifica o anticorpo biespecífico pode ser preparado ligando, por exemplo, um ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada A, um ADN que codifica uma região variável de cadeia leve B, um ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada B, e um ADN que codifica um região variável de cadeia leve A nesta ordem (desde que o ADN que codifica uma região variável de cadeia leve B e o ADN que codifica um região variável de cadeia pesada B e ligado via um ADN que codifica um ligante conforme descrito acima). Neste contexto, as regiões variáveis de cadeias leves e pesadas são todas derivadas de um anticorpo humano ou derivado de um anticorpo humano tendo CDRs sozinhos substituídos por CDRs de um anticorpo derivado de animal não humano (por exemplo, ratinho, rato, coelho, ou galinha).
Os aminoácidos em regiões variáveis (por exemplo, FRs) ou regiões constantes da anticorpo quimérico ou o anticorpo humanizado assim preparado pode ser substituído por outros aminoácidos. A substituição de aminoácidos é a substituição de, por exemplo, menos de 15, menos de 10, 8 ou menos, 7 ou menos, 6 ou menos, 5 ou menos, 4 ou menos, 3 ou menos, ou 2 ou menos aminoácidos, preferentemente de 1 a 5 aminoácidos, mais preferentemente 1 ou 2 aminoácidos. 0 anticorpo substituído deveria ser funcionalmente equivalente a um anticorpo não substituído. A substituição é de forma desejável uma substituição de aminoácido conservative, que é a substituição entre aminoácido semelhantes em propriedades tais como carga, cadeias laterais, polaridade, e aromaticidade. Os aminoácidos podem ser classificados em termos de propriedades semelhantes em, por exemplo: aminoãcidos básicos (arginina, lisina, e histidina); aminoãcidos ácidos (ácido aspártico e ácido glutâmico); aminoácidos polares sem carga (glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, cisteína, e tirosina), aminoácidos não polares (leucina, isoleucina, alanina, valina, prolina, fenilalanina, triptofano, e metionina); aminoácidos ramificados (leucina, valina, e isoleucina); e aminoãcidos aromáticos (fenilalanina, tirosina, triptofano, e histidina).
Exemplos de anticorpos modificados incluem anticorpos ligados a várias moléculas tais como o polietilenoglicol (PEG) . No anticorpo modificado da presente invenção acima mencionado, a substância a ser ligada não é limitada. Com a finalidade de obter tal anticorpo modificado, o anticorpo obtido pode ser quimicamente modificado. Já foi estabelecido um método para tal na técnica.
Neste contexto, a frase "funcionalmente equivalente" significa que um anticorpo objeto tenha atividade biológica ou bioquímica semelhante à do anticorpo da presente invenção, especificamente, o anticorpo em questão tem a função de danificar tumor e essencialmente não causa rejeição quando é aplicado a seres humanos, por exemplo. Exemplos de tal atividade podem incluir atividade antiproliferativa e atividade de ligação.
Um método para a preparação de um polipéptido funcionalmente equivalente a um certo polipétido, que envolve introduzir uma mutação num polipéptido, é bem conhecido para os peritos na especialidade. Por exemplo, os peritos na especialidade podem introduzir de forma apropriada uma mutação no anticorpo da presente invenção utilizando mutagénese dirigida ao local (Hashimoto-Gotoh, T. et al. (1995) Gene 152: 271-275; Zoller, MJ., e Smith, M. (1983) Methods Enzymol. , 100: 468-500; Kramer, W. et al. , (1984) Nucleic Acids Res., 12: 9441-9456; Kramer, W. and Fritz, HJ. , (1987) Methods Enzymol., 154 : 3 50-367; Kunkel, TA. , (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , 82: 488-4S2; e Kunkel (1988) Methods Enzymol., 85: 2763-2766) ou semelhante, deste modo preparando um anticorpo funcionalmente equivalente ao anticorpo da presente invenção.
Um anticorpo que reconhece um epítopo de uma proteína de CAPRIN-1 reconhecida pelo anticorpo anti-CAPRIN-1 descrito acima pode ser obtido através de um método conhecido pelos peritos na especialidade. Por exemplo, o anticorpo pode ser obtido através de um método que envolve determinar o epítopo da proteína de CAPRIN-1 reconhecida pelo anticorpo anti-CAPRIN-1 por um método convencional (por exemplo, mapeamento de epítopos) e preparar um anticorpo utilizando um polipéptido tendo uma sequência de aminoácidos contida no epítopo como um imunógeno, ou um método que envolve determinar um epítopo para um anticorpo preparado através d eum método convencional e selecionar um anticorpo que reconhece o mesmo epítopo como aquele para o anticorpo anti-CAPRIN-1. 0 anticorpo da presente invenção tem uma constante de afinidade Ka (k0n/k0ff) de preferentemente pelo menos 107 M'1, pelo menos 108 M"~, pelo menos 5 x 108 M'1, pelo menos 109 M”1, pelo menos 5 x 109 M'1, pelo menos IO10 M"1, pelo menos 5 x IO10 M”1, pelo menos 1011 M_i, pelo menos 5 x IO11 M"1, pelo menos 1012 M”1, ou pelo menos 1013 M"1. 0 anticorpo da presente invenção pode ser conjugado com um agente antitumoral. A conjugação do anticorpo com o agente antitumoral pode ser realizada através de um espaçador tendo um grupo (por exemplo, um grupo succinimidilo, um grupo formilo, um grupo 2-piridilditio um grupo maleimidilo um grupo alcoxicarbonilo, ou um grupo hidroxi) reativo com um grupo amino, um grupo carboxilo, um grupo hidroxi, um grupo tiol, ou semelhantes.
Exemplos do agente antitumoral incluem os seguintes agentes antitumorais publicamente conhecidos na literatura, etc.: paclitaxel, doxorrubicina, daunorrubicina, ciclofosfamida, metotrexato, 5 -fluorouracilo, tiotepa, bussulfano, improsulfano, pipossulfan, benzodopa, carboquona, meturedopa, uredopa, altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida, trimetilolomelamina, bulatacina, bulatacinona, canfotecina, briostatina, calistatina, criptoficina 1, criptoficina 8, dolastatina, duocarmicina, eleuterobina, pancratistatina, sarcodictina, espongistatina, clorambucil, clornafazina, colofosmfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracilo, carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina ranimustina, caliqueamicina, dinemicina, clodronato, esperamicina, aclacinomicina, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicina, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicina, dactinomicina, detorbicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, Adriamicina; epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicina, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina, denopterina, pteropterina, trimetrexato, fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina, ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxi fluridina, enocitabina, floxuridina, androgénios (por exemplo, calusterona, propionato de dromosta1onona, epitiostanol, mepitiostano, e testolactona), aminoglutetimida, mitotano, trilostano, ácido frolinico, aceglatona, glicosídeo de aldofosfamida, ácido aminolevulinico, eniluracilo, amsacrina, bestrabucilo, bisantreno, edatraxato, defofamina, demecolcina, diaziquona, elfornitina, acetato de eliptínio, epotilona, etoglúcido, lentinano, lonidamina, maitansina, ansamitocina, mitoguazona, mitoxantrona, mopidanmol, nitraerina, pentostatina, fenamet, pirarrubicina, losoxantrona, ácido podofilinico, 2-etilidrazida, procarbaz ina, razoxano, rizoxina, esquizofilano, espirogermânio, ácido tenuazónico, triaziquona, roridina A, anguidina, uretano, vindesina, dacarbazina manomustina, mitobronitol, mitolactol, pipobromano, gacitosina, docetaxel, clorambucilo, gencitabina, 6 -1 ioguanina, mercaptopurina, cisplatina, oxaliplatina, carboplatina, vinblastina etopósido, ifosfamida, mi toxant rona, vincristina, vinorelbina, novantrona, tenipósido, edatrexato, daunomicina, aminopterina, XeIoda, ibandronato, irinotecano, inibidores da topoisomerase, difluorometilornitina (DMFO), ácido retinõico, capecitabina, e sais e derivados farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
Alternativamente, o anticorpo da presente invenção pode ser administrado em combinação com um agente antitumoral para produzir um efeito terapêutico maior. Esta abordagem é adaptável a um paciente com cancro que expressa CAPRIN-1 antes ou após operação cirúrgica. Esta abordagem pode ser aplicada, particularmente após cirurgia, a cancro que expressa CAPRIN-1, que tenham sido tratados com um agente antitumoral individualmente, para produzir maior prevenção de recorrência de cancro ou prolongação do tempo de sobrevivência.
Exemplos do agente antitumoral utilizado na administração combinada com o anticorpo da presente invenção incluem os seguintes agentes antitumorais conhecidos publicamente nas literaturas, etc.: paclitaxel, doxorrubicina, daunorrubicina, ciclofosfamida, metotrexato, 5-fluorourac ilo, tiotepa, bussulfano, improsulfano, pipossulfan, benzodopa, carboquona, meturedopa, uredopa, altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida, trimetilolomelamina, bulatacina, bulatacinona, canfotecina, briostatina, calistatina, criptoficina 1, criptoficina 8, dolastatina, duocarmicina, eleuterobina, pancratistatina, sarcodictina, espongistatina, clorambucil, clornafazina, colofosmfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracilo, carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina ranimustina, caliqueamicina, dinemicina, clodronato, esperamicina, aclacinomicina, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicina, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicina, dactinomicina, detorbicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, Adriamicina; epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicina, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina, denopterina, pteropterina, trimetrexato, fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina, ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina, calusterona, propionato de dromostalonona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona, aminoglutetimida, mitotano, trilostano, ácido frolinico, aceglatona, glicosideo de aldofosfamida, ácido aminolevulinico, eniluracilo, amsacrina, bestrabucilo, bisantreno, edatraxato, defofamina, demecolcina, diaziquona, elfornitina, acetato de eliptinio, epotilona, etoglúcido, lentinano, lonidamina, maitansina, ansamitocina, mitoguazona, mitoxantrona, mopidanmol, nitraerina, pentostatina, fenamet, pirarrubicina, losoxantrona, ácido podofilinico, 2-etilidrazida, procarbazina, razoxano, rizoxina, esquizofilano, espirogermânio, ácido tenuazónico, triaziquona, roridina A, anguidina, uretano, vindesina, dacarbazina manomustina, mitobronitol, mitolactol, pipobromano, gacitosina, docetaxel, clorambucilo, gencitabina, 6-tioguanina, mercaptopurina, cisplatina, oxaliplatina, carboplatina, vinblastina etopósido, ifosfamida, mitoxantrona, vincristina, vinorelbina, novantrona, tenipósido, edatrexato, daunomicina, aminopterina, Xeloda, ibandronato, irinotecano, inibidores da topoisomerase, difluorometilornitina (DMFO), ácido retinóico, capecitabina, e solvatos e hidratos f armaceut i camente aceitáveis (conhecidos na técnica) e derivados (conhecidos na técnica) dos mesmos. Destes agentes antitumorais, ciclofosfamida, paclitaxel, docetaxel, ou vinorelbina é particularmente utilizado.
Alternativamente, o anticorpo da presente invenção pode ser ligado a um radioisótopo publicamente conhecido nas literaturas, etc., tal como 211At, 131I 125I 90Y, 186Re, 188Re, 153Sm, 212Bi, 32P, 1/5Lu, ou 176Lu. De forma desejável, um radioisótopo eficaz para o tratamento ou diagnóstico do tumor é utilizado. 0 anticorpo da presente invenção é um anticorpo tendo reatividade imunológica com a CAPRIN-1, um anticorpo que reconhece especif icamente CAPRIN-1, ou um anticorpo que se liga especificamente a CAPRIN-1 e exibe atividade citotóxica ou efeito antiproliferativo em cancro. 0 anticorpo deve ter uma estrutura que cause pouca ou nenhuma rejeição nos animais recetores. Exemplos de tais anticorpos incluem anticorpos humanos, anticorpos humanizados, anticorpos quiméricos (por exemplo, anticorpos quiméricos ratinho-humano) , anticorpos de cadeia simples, e anticorpos biespecíficos quando os animais recetores são seres humanos. Estes anticorpos (1) têm regiões variáveis de cadeias leves e pesadas derivadas de um anticorpo humano, (2) têm regiões variáveis com CDRs (CDR1, CDR2, e CDR3) de cadeias leves e pesadas derivadas de um anticorpo de um animal não humano e regiões estruturais derivadas de um anticorpo humano, ou (3) estes anticorpos são anticorpos recombinantes tendo regiões variáveis de cadeias leve e pesada derivadas de um anticorpo de animal não humanos e regiões constantes de cadeia leve e pesada derivadas de um anticorpo humano. 0 anticorpo da presente invenção é preferentemente o anticorpo (1) ou (2).
Tais anticorpos recombinantes podem ser preparados como se segue: ADNs que codificam anticorpos monoclonais (por exemplo, anticorpos monoclonais de ser humano, ratinho, rato, coelho, e galinha) contra CAPRIN-1 humana são clonados a partir de células que produzem anticorpos tais como hibridomas e utilizados como moldes em RT-PCR ou semelhantes para preparar ADNs que codificam as regiões variáveis das cadeias leves e pesadas nos anticorpos. As respetivas sequências das regiões variáveis das cadeias leves e pesadas e as respetivas sequências de CDR1, CDR2 , e CDR3 em cada região são determinadas com base no sistema de numeração de Rabat EU (Rabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)).
Tal ADN que codifica cada região variável ou ADN que codifica cada CDR é preparado utilizando técnicas de recombinação genética (Sambrook et al., Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)) ou um sintetizador de ADN. Neste contexto, os hibridomas produtores de anticorpos monoclonals humanos podem ser preparados imunizando animais produtores de anticorpos humanos (por exemplo, ratinhos) com CAPRIN-1 humana e fusionando posteriormente células de baço excisadas do animal imunizado com células de mieloma. Além disto, são preparados ADNs que codificam as regiões constantes e variáveis de cadeia leve ou pesada derivadas de anticorpo humano, se for necessário, utilizando uma técnica de recombinação génica ou um sintetizador de ADN.
Os ADNs recombinantes preparados podem ser incorporados em um ou mais vetores adequados, que depois são introduzidos em células hospedeiras (por exemplo, células de mamíferos células de leveduras, e células de insetos) de modo que os ADNs são (co) expressos para produzem anticorpos recombinantes (P.J. Delves., ANTIBODY PRODUCTION ESSENTIAL TECHNIQUES., 1997 WILEY, P. Shepherd and C. Dean., Monoclonal Antibodies: 2000 OXFORD UNIVERSITY PRESS; e J.W. Goding., Monoclonal Antibodies: principles and practice., 1993 ACADEMIC PRESS).
Exemplos do anticorpo da presente invenção preparados por qualquer dos métodos descritos acima incluem o seguinte anticorpo (a) obtido nos Exemplos descritos posteriormente: (a) um anticorpo ou fragmento do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOs: 5, 6, ele uma região variável de cadeia leve compreendendo as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOs: 9, 10, e 11 (por exemplo, um anticorpo composto de uma região variável de cadeia pesada que consiste numa sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve que consiste numa sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 12).
Neste contexto, as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 5, 6, e 7 correspondem a CDR1, CDR2 , e CDR3, respetivamente, de uma região variável da cadeia pesada de um anticorpo de ratinho. As sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 9, 10, e 11 correspondem a CDR1, CDR2, e CDR3, respetivamente, de uma região variável da cadeia leve de um anticorpo de ratinho.
Exemplos do anticorpo humanizado, o anticorpo quimérico, o anticorpo de cadeia simples, ou o anticorpo multiespecífico da presente invenção incluem os seguintes anticorpos (i) , (ii) e (iii) : (i) um anticorpo ou fragmento do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOs: 5, 6, e 7 e as sequências de aminoácidos das regiões estruturais derivadas de anticorpo humano e uma região variável de cadeia leve que compreende as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOs: 9, 10, e 11 e as sequências de aminoácidos das regiões estruturais derivadas de anticorpo humano; (ii) um anticorpo ou fragmento do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOs: 5, 6, e 7 e as sequências de aminoácidos das regiões estruturais derivadas de anticorpo humano, uma região constante de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos derivada de um anticorpo humano, uma região variável de cadeia leve que compreende as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 9, 10, e 11 e as sequências de aminoácidos das regiões estruturais derivadas de anticorpo humano, e uma região constante de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos derivada de anticorpo humano; e (iii) um anticorpo ou fragmento do mesmo que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 8, uma região constante de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos derivada de um anticorpo humano, uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 12, e uma região constante de cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos derivada de anticorpo humano.
As sequências das regiões constantes e variáveis de cadeias pesadas e leves de anticorpos humanos estão disponíveis de, por exemplo, NCBI (USA; GenBank, UniGene, etc.). Por exemplo, as seguintes sequências podem ser consultadas em: Número de acesso J00228 para uma região constante de uma cadeia pesada de IgGl humana; Número de acesso J00230 para uma região constante de uma cadeia pesada de IgG2 humana; Número de acesso X03604 para uma região constante de uma cadeia pesada de IgG3 humana,· Número de acesso K01316 para uma região constante de uma cadeia pesada de IgG4 humana; Números de Acesso V00557, X64135, e X64133 para uma região constante de uma cadeia leve humana k; e Números de Acesso X64132 e X64134 para uma região constante de uma cadeia leve humana X.
Preferentemente, estes anticorpos têm atividade citotóxica e podem deste modo exercer um efeito antitumoral.
As sequências particulares acima das regiões variáveis e CDRs de cadeias leves e pesadas em cada anticorpo são proporcionadas meramente para fins ilustrativos. É óbvio que o anticorpo da presente invenção não está limitado pelas sequências particulares. Os hibridomas capazes de produzir os anticorpos de animal não humano ou anticorpos humanos anti-CAPRIN-1 (por exemplo, anticorpos de ratinho) diferentes daqueles descritos acima são preparados, e anticorpos monoclonais produzidos pelos hibridomas são recuperados e avaliados como sendo (ou não sendo) os anticorpos de interesse com atividade de ligação imunológica contra CAPRIN-1 humana e atividade citotóxica como índices. Os hibridomas que produzem anticorpo monoclonal de interesse são identificados desse modo. Posteriormente, os ADNs que codificam as regiões variáveis de cadeias leves e pesadas dos anticorpos de interesses são produzidos a partir dos hibridomas e sequenciados, conforme descrito acima. Os ADNs são utilizados para a preparação dos diferentes anticorpos. 0 anticorpo descrito acima pode ser o anticorpo (a) tendo a substituição, eliminação, ou adição de um ou vários aminoácidos, particularmente numa sequência de uma região estrutural e/ou uma região constante, desde que o anticorpo tenha tal especificidade que pode especificamente reconhece CAPRIN-1. Neste contexto, o termo "vários" significa preferentemente de 2 a 5, mais preferentemente 2 ou 3. A presente invenção proporciona adicionalmente um ADN que codifica o anticorpo da presente invenção, um ADN que codifica a cadeia leve ou pesada do anticorpo, ou um ADN que codifica a região variável de cadeia pesada ou leve no anticorpo. Tal ADN inclui, por exemplo, um ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada que compreende as sequências nucleotídicas que codificam as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 5, 6, e 7, e um ADN que codifica uma região variável de cadeia leve que compreende as sequências nucleotídicas que codificam as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 9, 10, e 11, no caso do anticorpo (a).
As CDRs codificadas pelo ADN tendo estas sequências servem como regiões que determinam a especificidade do anticorpo. As sequências que codificam as outras regiões (isto é, regiões constantes e regiões estruturais) do anticorpo, portanto, podem ser sequências derivadas de outros anticorpos. Neste contexto, "outros anticorpos" também incluem anticorpos derivados de organismos não humanos e são preferentemente aqueles derivados de seres humanos desde o ponto de vista de redução dos efeitos secundários. Especificamente, o ADN da presente invenção preferentemente compreende sequências nucleotídicas que codificam as sequências de aminoácidos derivadas de anticorpo humano correspondente de regiões que codificam cada região estrutural e cada região constante nas cadeias leves e pesadas.
Exemplos adicionais do ADN que codifica o anticorpo da presente invenção incluem ADN que codifica uma região variável de cadeia pesada que compreende a sequência nucleotídica que codifica a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 8, e um ADN que codifica uma região variável de cadeia leve que compreende uma sequência nucleotídica que codifica a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 12 . Neste contexto, a sequência nucleotídica que codifica a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 8 é, por exemplo, a sequência nucleotídica representada pela SEQ ID NO: 13. A sequência nucleotídica que codifica a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 12 é, por exemplo, a sequência nucleotídica representada pela SEQ ID NO: 14. Em tal ADN, a região que codifica cada região constante nas cadeias pesadas e leves compreendem uma sequência nucleotídica que codifica uma sequência de aminoácidos correspondente a partir de um anticorpo humano.
Estes ADNs de anticorpo podem ser obtidos, por exemplo, pelos métodos descritos acima ou o seguinte método: em primeiro lugar, os ARNs totais são preparados a partir de hibridomas relacionados com o anticorpo da presente invenção utilizando um kit de extração de ARN disponível comercialmente, e os ADNcs são sintetizados utilizando transcriptase reversa e iniciadores aleatórios ou semelhantes. Subsequentemente, os ADNc que codificam anticorpo são amplificados por meio de PCR utilizando iniciadores de oligonucleótidos para sequências conservadas de cada região variável em genes conhecidos de cadeia leve e pesada de anticorpo de ratinho. As sequências que codificam regiões constantes podem ser obtidas através de amplificação por PCR de sequências conhecidas. A sequência nucleotídica do ADN pode ser incorporada num plasmídeo ou um fago para sequenciamento, por exemplo, e determinada de acordo com um método de rotina. 0 efeito antitumoral do anticorpo anti-CAPRIN-1 utilizado na presente invenção em células de cancro que expressam CAPRIN-1 pode ser provocado por citotoxicidade celular dependente de anticorpo mediada por células (ADCC) e citotoxicidade dependente do complemento (CDC) contra as células que expressam CAPRIN-1. 0 efeito antitumoral com base no mecanismo é conhecido por se correlacionar com o número de moléculas alvo que se ligam ao anticorpo expressas na superfície de células de cancro (Niwa R. , Clinical Cancer Research 2005 Mar 15; 11 (6) : 2327-2336) . 0 número de moléculas alvo expressas na superfície de células de cancro pode ser examinado utilizando um kit de ensaio existente capaz de medir o número de moléculas na superfície celular. Especificamente, o número de moléculas alvo que se ligam a anticorpo pode ser determinado: fazendo reagir células de cancro com, por exemplo, anticorpos contra as moléculas alvo como anticorpos primários; fazendo reagir com os mesmos anticorpos marcados com fluorescência com os anticorpos primários, juntamente com a curva de calibração com o número de moléculas conhecido preliminarmente; medindo a intensidade de fluorescência média das amostras,· e determinando o número de moléculas alvo com base na curva de calibração obtida.
Consequentemente, o anticorpo anti-CAPRIN-1 utilizado na presente invenção pode ser avaliado para sua atividade pela determinação ex vivo da atividade de ADCC ou a atividade de CDC contra células de cancro expressando CAPRIN-1 ou examinando o número de moléculas de CAPRIN-1 expressas na superfície de células de cancro no caso de utilizar o anticorpo anti-CAPRIN-1 de acordo com a presente invenção como um anticorpo primário conforme especificamente mostrado abaixo nos Exemplos. 0 anticorpo anti-CAPRIN-1 utilizado na presente invenção liga-se a proteínas de CAPRIN-1 em células de cancro e exibe um efeito antitumoral devido através da atividade. Consequentemente, 0 anticorpo anti-CAPRIN-1 da presente invenção é presumivelmente útil no tratamento ou prevenção do cancro. Especificamente, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de cancro, que compreende um anticorpo anti-CAPRIN-1 como um ingrediente ativo. 0 anticorpo anti-CAPRIN-1 utilizado para o propósito de administração aos organismos humanos (terapêutica de anticorpo) é preferentemente um anticorpo humano ou um anticorpo humanizado para reduzir a imunogenicidade. 0 anticorpo anti-CAPRIN-1 com maior afinidade de ligação para uma proteína CAPRIN-1 na superfície de célulasde cancro exerce atividade antitumoral mais forte. Consequentemente, um efeito antitumoral mais forte pode ser esperado se o anticorpo anti-CAPRIN-1 tendo alta afinidade de ligação para a proteína de CAPRIN-1 puder ser obtido. Tal anticorpo é adaptável a uma composição farmacêutica destinada ao tratamento e/ou a prevenção de cancro. De forma desejável, tal alta afinidade de ligação é preferentemente pelo menos 107 M_1, pelo menos 10® M'1, pelo menos 5 x 10® M“l, pelo menos 109 M_1, pelo menos 5 x 109 MT1, pelo menos IO10 M”1, pelo menos 5 x IO10 M”1, pelo menos 1011 M"1, pelo menos 5 x 1011 M”1, pelo menos 1012 M”1, ou pelo menos 1013 M”1, em termos de uma constante de associação (constante de afinidade) Ka (k0n/k0ff) , conforme descrito acima. A ligação de anticorpos anti-CAPRIN-1 a um maior número de moléculas de CAPRIN-1 na superfície de células de cancro produz atividade antitumoral mais forte. De forma desejável, o número de moléculas de CAPRIN-1 às quais os anticorpos se ligam para o efeito antitumoral esperado é de !04 ou mais, preferentemente 105 ou mais moléculas de CAPRIN-1 por célula de cancro medida utilizando o anticorpo anti-CAPRIN-1 da presente invenção. cLigação a células que expressam o antigénio> A capacidade do anticorpo de se ligar à CAPRIN-1 pode ser determinada pela utilização de ensaio de ligação utilizando, por exemplo, ELISA, Western blot, imunofluorescência, e análise de citometria de fluxo, conforme descrito nos Exemplos. cColoração imunohistoquímica> 0 anticorpo que reconhece CAPRIN-1 pode ser testado para sua reatividade com CAPRIN-1 através de um método de imunohistoquímica conhecido pelos peritos na especialidade utilizando seções congeladas fixadas em paraformaldeído ou em acetona ou seções teciduais fixadas em paraformaldeído e envolvidas em parafina de um tecido obtido de um paciente durante a operação cirúgica ou a partir de um animal que porta um tecido de xenoenxerto inoculado com uma linha celular que expressa CARIN-1 espontaneamente ou após transfeção.
Para a coloração imunohistoquímica, o anticorpo reativo com CAPRIN-1 pode ser tingido através de vários métodos. Por exemplo, o anticorpo pode ser visualizado através de reação com anticorpo anti-ratinho de cabra conjugado com peroxidase de rábano, anticorpo anti-coelho de cabra ou anticorpo anti-galinha de cabra. <Composição farmacêutica>
Um alvo da composição farmacêutica para o tratamento e/ou prevenção de cancro da presente invenção não é particularmente limitado desde que o alvo seja cancro (células) que expressam o gene de CAPRIN-1.
Os termos "tumor" e "cancro" utilizados no presente documento significam neoplasmas malignos e são utilizados indistintamente entre si. 0 cancro alvo na presente invenção é cancro que expressa um gene que codifica proteína CAPRIN-1 e é preferentemente cancro de mama, cancro renal, cancro pancreático, cancro do intestino grosso, cancro pulmonar, tumor cerebral, cancro gástrico, cancro do colo uterino, cancro ovárico, cancro da próstata, cancro da bexiga, cancro esofágico, leucemia, linfoma, fibrossarcoma, mastocitoma, ou melanoma.
Exemplos específicos destes cancros incluem, mas não são limitados a, adenocarcinoma da mama, adenocarcinoma da mama de tipo complexo, tumor da glândula mamária misto maligno, adenocarcinoma papilar intraductal, adenocarcinoma pulmonar, cancro de células escamosas, cancro de células pequenas, cancro de células grandes, glioma que é um tumor de tecido neuroepitelial, ependimoma, tumor neuronal, tumor neuroectodérmico embrionário, neurilenoma, neurofibroma, meningioma, leucemia linfocítica crónica, linfoma, linfoma gastrointestinal, linfoma alimentar, linfoma de células de tipo peuqenas a médias, cancro cecal, cancro do cólon ascendente, cancro do cólon descendente, cancro do cólon transversal, cancro do cólon sigmoide, cancro retal, cancro ovárico epithelial, tumor de células germinais, tumor de células do estroma, carcinoma ductal pancreático, carcinoma ductal pancreático invasivo, adenocarcinoma pancreático, carcinoma das células acinares, carcinoma adenosquamouso, tumor de células gigantes, neoplasma mucino papilar intraductal, neoplasmas cístico mucino, pancreatoblastoma, cistadenocarcinoma seroso, tumor pseudopapilar sólido, gastrinoma, glucagonoma, insulinoma, neoplasia endócrinas múltipla de tipo 1 (síndrome de Wermer), tumor de células de ilhotas não funcionais, somatostatinoma, e VIPoma. 0 indivíduo como o recipiente são preferentemente mamíferos, por exemplo, mamíferos incluindo primatas, animais de estimação, animais de pecuária, e animais de desporto e são particularmente preferentemente seres humanos, cães, e gatos.
No caso de utilizar o anticorpo da presente invenção como a composição farmacêutica, a composição farmacêutica pode ser formulada por meio de um método geralmente conhecido pelos peritos na especialidade. Por exemplo, a composição farmacêutica pode ser utilizada na forma de uma injeção parentérica de uma suspensão ou solução asséptica com água ou qualquer outro líquido farmaceuticamente aceitável. Por exemplo, a composição farmacêutica pode ser formulada com o anticorpo misturado numa farmacêutica unitária necessária para a prática farmacêutica geralmente aceite, em combinação apropriada com meios ou veículos aceitáveis farmacologicamente, especificamente, água esterilizada, solução salina fisiológica, óleo vegetal, um emulsificante, um agente de suspensão, um detergente, um estabilizante, um agente aromatizante, um excipiente, um veículo, um conservante, um aglutinante, etc. A quantidade do ingrediente ativo em tal preparação é determinada de modo que se possa conseguir uma dosagem adequada dentro do intervalo prescrito.
Uma composição asséptica para injeção pode ser formulada de acordo com a prática farmacêutica convencional utilizando um veículo tal como água destilada para a injeção.
Exemplos de soluções aquosas para injeção incluem solução salina fisiológica, soluções isotónicas contendo glicose e outros adjuvantes, por exemplo, D-sorbitol, D-manose, D-manitol, e cloreto de sódio. Estas soluções podem ser utilizadas em combinação com um solubilizante adequado, por exemplo, um álcool (especificamente, etanol) ou um poliálcool (por exemplo, propilenoglicol e polietilenoglicol), ou um detergente não iónico, por exemplo, polissorbato 80 (TM) ou HCO-60.
Exemplos de soluções oleosas incluem óleo de sésamo e óleo de soja. Estas soluções podem ser utilizadas em combinação com um solubilizante tal como benzoato de benzilo ou álcool benzilico. As soluções podem ainda ser misturadas com um tampão (por exemplo, uma solução de tampão de fosfato e uma solução de tampão de acetato de sódio) , um agente calmante (por exemplo, cloridrato de procaína), um estabilizante (por exemplo, álcool benzilico e fenol), e um antioxidante. As soluções de injeção assim preparadas são normalmente carregadas em ampolas apropriadas. A composição farmacêutica da presente invenção é administrada por via oral ou parentérica, preferentemente por via parentérica. Exemplos específicos destas formas farmacêuticas incluem injeções, agentes de administração intranasal, agentes de administração transpulmonar, e agentes de administração percutânea. Exemplos das injeções incluem injeção intravenosa, injeção intramuscular, injeção intraperitoneal, e injeção subcutânea, através da qual a composição farmacêutica pode ser administrada sistemicamente ou localmente.
Igualmente, o método de administração pode ser selecionado apropriadamente dependendo da idade, peso, sexo, sintomas, etc. de um paciente. A dose de uma composição farmacêutica contendo o anticorpo ou um polinucleótido que codifica o anticorpo pode ser selecionada dentro de um intervalo de, por exemplo, 0,0001 a 1000 mg/kg de peso corporal por dose. Alternativamente, a dose pode ser selecionada dentro de um intervalo de, por exemplo, 0,001 a 100000 mg/corpo de um paciente, embora a dose não necessariamente esteja limitada a estes valores numéricos. Embora a dose e o método de administração variem dependendo do peso, idade, sexo, sintomas, etc. de um paciente, os peritos na especialidade podem apropriadamente selecionar a dose e o método. A composição farmacêutica incluindo o anticorpo ou fragmentos do mesmo da presente invenção pode ser administrada a um indivíduo para tratar e/ou prevenir cancro, preferentemente cancro de mama, cancro renal, cancro pancreático, cancro do intestino grosso, cancro pulmonar, tumor cerebral, cancro gástrico, cancro do colo uterino, cancro ovárico, cancro da próstata, cancro da bexiga, cancro esofágico, leucemia, linfoma, fibrossarcoma, mastocitoma, ou melanoma. A presente invenção abrange ainda um método para o tratamento e/ou a prevenção de cancro, pela administração da composição farmacêutica da presente invenção em combinação com o agente antitumoral conforme exemplificado acima ou uma composição farmacêutica que compreende o agente antitumoral a um indivíduo. 0 anticorpo ou o fragmento do mesmo da presente invenção pode ser administrado simultaneamente com ou separadamente do agente antitumoral ao indivíduo. No caso de administração separadamente destas composições farmacêuticas, um pode ser administrado antes ou depois. Seus intervalos de dosagem, doses, vias de administração, e o número de doses podem ser adequadamente selecionados por um especialista. As formas farmacêuticas de fármacos separados a ser administrados simultaneamente também incluem, por exemplo, composições farmacêuticas cada uma formulada misturando o anticorpo ou o fragmento do mesmo da presente invenção e o agente antitumoral num veículo farmacologicamente aceitável (ou meio). As descrições acima sobre a prescrição, formulação, vias de administração, doses, cancro, etc. como para as composições farmacêuticas e formas farmacêuticas contendo o anticorpo da presente invenção também são aplicáveis a quaiquer das composições farmacêuticas e formas farmacêuticas contendo o agente antitumoral.
Consequentemente, a presente invenção proporciona também uma combinação farmacêutica conforme definida nas reivindicações, que compreende a composição farmacêutica da presente invenção e uma composição farmacêutica que compreende o agente antitumoral conforme exemplificado acima. Apresente invenção também proporciona uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de cancro, que compreende o anticorpo ou o fragmento do mesmo da presente invenção e o agente antitumoral juntamente com um veículo farmacologicamente aceitável. <Polipéptido e ADN> A presente invenção proporciona ainda os seguintes polipéptidos e ADNs com relação ao anticorpo (a): (i) um polipéptido compreendendo as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 8 e 12, e um ADN que codifica o polipéptido, por exemplo, um ADN que compreende as sequências nucleotídicas representadas pelas SEQ ID NOS: 13 e 14; (ii) um polipéptido de CDR de cadeia pesada selecionado a partir do grupo que consiste nas sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 5, 6, e 7, e um ADN que codifica o polipéptido; e (iii) um polipéptido de CDR de cadeia leve selecionado a partir do grupo que consiste nas sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOS: 9, 10, e 11, e um ADN que codifica o polipéptido.
Estes polipéptidos e ADNs podem ser preparados utilizando técnicas de recombinação genética conforme descritas acima. Exemplos A seguir no presente documento, a presente invenção será descrita especificamente em referência aos Exemplos. Contudo, o âmbito da presente invenção não pretende ser limitado por estes exemplos específicos. <Exemplo 1: Análise de expressão génica de CAPRIN-1 em cada tecido> A expressão génica de CAPRIN-1 em tecidos normais humanos e caninos e várias linhas celulares foi examinada por meio de RT-PCR de acordo com o Exemplo 1(4) descrito no documento W02010/015526. Como um resultado, observou-se forte expressão em testículos entre os tecidos saudáveis de cão, ao passo que se observou expressão em tecidos de cancro da mama e de adenocarcinoma de cão. Como um resultado de também confirmar a expressão em tecidos humanos, a expressão foi confirmada apenas nos testículos entre os tecidos normais, como com o gene de CAPRIN-1 canino. Em contraste, detetou-se a expressão em vários tipos de linhas celulares de cancro, incluindo 8 linhas de células de cancro da mama humano (ZR75-1, MCF7, T47D, SK-BR-3, MDA-MB-157, BT-20, MDA-MB-231V, e MRK-nu-1) e 4 linhas celulares de cancro pancreático (Capan-2, MIAPaCa-2, Panc-1, e BxPc-3), entre as células de cancro. Estes resultados demonstraram que a CAPRIN-la é expressa em várias células de cancro, embora sua expressão não seja vista em tecidos normais diferentes de testículos. <Exemplo 2: Preparação de anticorpo monoclonal de ratinho contra CAPRIN-1> 100 pg de proteínas de CAPRIN-i humanas tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2, que foram preparadasno Exemplo 3 descrito no documento W02010/016526, foram misturadas em quantidade igual de adjuvante MPL+TDM (Sigma-Aldrich Corp.). Esta mistura foi utilizada como uma solução de antigénio por ratinho. A solução de antigénio foi administrada intraperitonealmente a cada ratinho Balb/c de 6 semanas de idade (Japan SLC, Inc.). Posteriormente, foram realizados 7 reforços a cada semana para completar a imunização. Três dias após a dose final, o baço de cada ratinho foi excisado e triturado entre duas lâminas de vidro esterilizadas. Os procedimentos de lavagem com PBS (-) (Nissui Pharmaceutical Co. , Ltd.) e remoção do sobrenadante por meio de centrifugação a 1500 rpm durante 10 minutos foram repetidos três vezes para obter as células de baço. As células de baço obtidas foram misturadas com células de miei orna de ratinho SP2/0 (adquiridas de ATCC) a uma razão de 10:1.200 μΐ de um meio RPMI164 0 contendo 10 % de FBS foram aquecidas até 37°C e misturadas com 800 μΐ de PEG1500 (Boehringer Ingelheim GmbH), e a solução de PEG preparada deste modo foi adicionadas à mistura de células, que depois deixou-se repousar durante 5 minutos para fusão celular. Após a remoção do sobrenadante por meio de centrifugação a 1700 rpm durante 5 minutos, as células foram suspensas em 150 ml de um meio RPM11640 contendo 15 % de FBS suplementado com 2 % equivalente de uma solução de HAT (Life Technologies, Inc. /Gibco) (meio seletivo HAT) . Esta suspensão foi inoculada a quinze placa de 96 poços (Thermo Fisher Scientific Inc . /Nunc) a uma concentração de 100 μΙ/poço. As células de baço e a células de mieloma foram fusionadas por cultura a 37°C durante 7 dias sob condições de 5 % de C02 para obter hibridomas.
Os hibridomas preparados foram rastreados com a afinidade de ligação de anticorpos produzidos pelos hibridomas contra proteínas CAPRIN-1 como um índice. Um pg/ml de solução das proteínas de CAPRIN-1 preparadas no Exemplo 3 descrito no W02010/016526 foi adicionado a uma placa de 96 poços a uma concentração de 100 μΐ/poço e deixou-se a repousar a 4°C durante 18 horas. Cada poço foi lavado três vezes com PBS-T. Depois, uma solução a 0,5 % de albumina sérica bovina (BSA) (Sigma-Aldrich Corp.) foi adicionada aí a uma concentração de 400 μΐ/poço e deixou-se a repousas à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução em cada poço foi descartada, e cada poço foi lavado três vezes com 4 00 μΐ de PBS-T. Depois, o sobrenadantes de cultura de cada hibridoma obtido acima foi adicionada aí a uma concentração de 100 μΐ/poço e deixou-se a repousas à temperatura ambiente durante 2 horas. Cada poço foi lavado três vezes com PBS-T. Depois, anticorpos anti-IgG de ratinho marcados comHRP (H+L) (Invitrogen Corp.) diluídos 5000 vezes com PBS foram adicionados a uma concentração de 100 μΐ/poço e deixou-se a repousar à temperatura ambiente durante 1 hora. Cada poço foi lavado três vezes com PBS-T. Depois, uma solução de substrato TMB (Thermo Fisher Scientific Inc.) foi adicionada aí a uma concentração de 100 μΐ/poço e deixou-se a repousar durante 15 a 30 minutos para provocar a reação de cor. Após o desenvolvimento da cor, a reação foi terminada pela adição de ácido sulfúrico a 1 N a uma concentração de 100 μΐ/poço. A absorvância foi medida a 450 nm e 595 nm utilizando um espetrómetro de absorção. Como um resultado, vários hibridomas produzindo anticorpos tendo absorvância elevada foram selecionados.
Os hibridomas selecionados foram adicionados a uma placa de 96 poços a uma densidade de 0,5 células/poço e foram cultivados na placa. Uma semana mais tarde, os hibridomas que formam colónias únicas nos poços foram observados. As células nestes poços foram adicionalmente cultivadas, e os hibridomas clonados foram rastreados com a afinidade de ligação de anticorpos produzidos pelos hibridomas contra proteínas CAPRIN-1 como um índice. Um pg/ml de solução das proteínas de CAPRIN-1 preparadas no Exemplo 3 descrito no W02Q10/016526 foi adicionado a uma placa de 96 poços a uma concentração de 100 μΐ/poço e deixou-se a repousar a 4°C durante 18 horas. Cada poço foi lavado três vezes com PBS-T. Depois, uma solução a 0,5 % de BSA (Sigma-Aldrich Corp.) foi adicionada aí a uma concentração de 400 μΐ/poço e deixou-se a repousas à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução em cada poço foi descartada, e cada poço foi lavado três vezes com 400 μΐ de PBS-T. Depois, o sobrenadantes de cultura de cada hibridoma obtido acima foi adicionada aí a uma concentração de 100 μ 1/poço e deixou-se a repousas à temperatura ambiente durante 2 horas. Cada poço foi lavado três vezes com PBS-T. Depois, anticorpos anti-IgG de ratinho marcados com HRP (H+L) (Invitrogen Corp.) diluídos 5000 vezes com PBS foram adicionados a uma concentração de 100 μΐ/poço e deixou-se a repousar à temperatura ambiente durante 1 hora. Cada poço foi lavado três vezes com PBS-T. Depois, uma solução de substrato TMB (Thermo Fisher Scientific Inc.) foi adicionada aí a uma concentração de 100 μΐ/poço e deixou-se a repousar durante 15 a 30 minutos para provocar a reação de cor. Após o desenvolvimento da cor, a reação foi terminada pela adição de ácido sulfúrico a 1 N a uma concentração de 100 μΐ/poço. A absorvância foi medida a 4 50 nm e 595 nm utilizando um espetrómetro de absorção. Como um resultado, obtiveram-se 112 linhas de hibridomas produzindo anticorpos monoclonais reativos com proteínas de CAPRIN-1. A seguir, os anticorpos monoclonais foram rastreados para os anticorpos reativos com a superfície de células de cancro de mama que expressam CAPRIN-1. Especificamente, 106 células de uma linha celular de cancro da mama humano MDA-MB -231V foram centrifugadas num tubo de microcentrífuga de 1,5 ml. 100 pL do sobrenadantes de cultura de cada hibridoma obtido acima foi adicionado aí e deixado a repousas durante 1 hora em gelo. Após lavagem com PBS, anticorpos anti-IgG de ratinho de cabra marcados com FITC (Invitrogen Corp.) diluídos 500 vezes com PBS contendo 0,1 % de FBS foram adicionados e deixados a repousar durante 1 hora em gelo. Após lavagem com PBS, mediu-se a intensidade de fluorescência utilizando um FACS Calibur (Becton, Dickinson and Company). Por outro lado, a mesma operação como acima foi realizada utilizando o soro de cada ratinho Balb/c de 6 semanas de idade não tratado diluído 500 vezes com um meio para cultura de hibridoma, em vez dos anticorpos, para preparar o controlo. Como um resultado, um anticorpo monoclonal (n° 1) tendo intensidade de fluorescência mais forte do que o controlo; isto é, reativo com a superfície de células de cancro de mama, foi selecionado. <Exemplo 3: Caracterização do anticorpo monoclonal selecionado
Os anticorpos monoclonais obtidos no Exemplo 2 foram analisados de acordo com um método descrito no Exemplo 5 do documento W02010/016526 para suas sequências nucleotídicas e os aminoácidos codificados por estas. Como o resultado, o anticorpo monoclonal n. 0 1 foi composto de uma região variável de cadeia pesada que consiste numa sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 8 e uma região variável de cadeia leve que consiste numa sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 12. A sequência nucleotídica resultante que codifica a região variável de cadeia pesada do anticorpo monoclonal n.° 1 é mostrada na SEQ ID NO: 13, e a sequência de aminoácidos é mostrada na SEQ ID NO: 8 . A sequência nucleotídica que codifica a região variável de cadeia leve do mesmo é mostrada na SEQ ID NO: 14, e a sequência de aminoácidos é mostrada na SEQ ID NO: 12.
Especificamente, o anticorpo monoclonal n.° 1 foi confirmado que consiste na região variável de cadeia pesada que consiste numa sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 8 e a região variável de cadeia leve que consiste numa sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 12, em que a região variável de cadeia pesada tinha CDR1, CDR2 , e CDRL3 que consiste nas sequências de aminoácidos da SEQ ID NOs: 5, 6, e 7, respetivamente, e a região variável de cadeia leve tinha CDR1, CDR2, e CDRL3 que consiste nas sequências de aminoácidos da SEQ ID NOs: 9, 10, e 11, respetivamente. <Exemplo 4: Preparação de anticorpo monoclonal quimérico humano-ratinho>
Ambas as extremidades do fragmento de amplificação do gene que compreende o nucleótido que codifica a região variável de cadeia pesada do anticorpo monoclonal de ratinho n° 1 obtido no Exemplo 3, que consiste numa sequência de nucleótidos representada pela SEQ ID NO: 13, foram tratadas com enzimas de restrição, depois purificadas, e inseridas de acordo com um método de rotina num vetor pcDNA4/myc-His (Invitrogen Corp.) já tendo insertos de gene de uma sequência líder derivada de anticorpo de ratinho e uma região constante de cadeia H de igGi H humana que compreende a SEQ ID NO: 37. Igualmente, o fragmento de amplificação do gene que compreende o gene da região variável de cadeia leve do anticorpo monoclonal de ratinho n.° 1 que consiste numa sequência nucleotídica representada pela SEQ ID NO: 14) foi tratado em ambas as extremidades com enzimas de restrição, depois purificado, e inserido de acordo com um método de rotina num vetor pcDNA3.1/myc-His (Invitrogen Corp.) já tendo insertos de gene de uma sequência líder derivada de anticorpo de ratinho e uma região constante de cadeia L de IgGi H humana que compreende a SEQ ID NO: 38. A seguir, o vetor recombinante tendo o inserto da região variável de cadeia pesada (SEQ ID NO: 13) do anticorpo monoclonal de ratinho n°. 1 e o vetor recombinante tendo o inserto da região variável de cadeia leve (SEQ ID NO: 14) do anticorpo monoclonal de ratinho n°. 1 foram introduzidos em células CH0-K1 (obtidas do RIKEN Cell Bank). Especificamente, 2 x 105 células CHO-K1 foram cultivadas em meio F12 de Ham (Invitrogen) contendo 1 ml de FBS a 10 % por poço de uma placa de cultura de 12 poços, e foram lavadas com PBS(-). Posteriormente, um meio F12 de Ham fresco contendo 1 ml de FBS a 10 % por poço foi adicionado aí. 250 ng de cada um do vetores lisados em 30 pL de OptiMEM (Invitrogen Corp.) foi misturado com 30 pL de reagente de transfeçâo Polyfect (Qiagen N.V.), e esta mistura foi adicionada a cada poço. As células CH0-K1 cotransfetadas com os vetores recombinantes foram cultivadas num meio F12 de Ham contendo FBS a 10 % suplementado com 200 pg/mL de Zeocina (Invitrogen Corp.) e 200 pg/mL de Geneticina (Roche Diagnostics K.K.) e depois inoculadas a uma placa de 96 poços a uma densidade de 0,5 células/poço para preparar uma linha celular que produz de forma estável um anticorpo monoclonal quimérico humano-ratinho n.° 1 (n.° 1) tendo as regiões variáveis de anticorpo monoclonal de ratinho n.° 1.
Cada linha celular preparada foi cultivada durante 5 dias num balão de 150 cm2 a uma densidade de 5 x 105 células/mL utilizando 30 mL de um meio OptiCHO isento de soro (Invitrogen Corp.) para obter os sobrenadantes de cultura contendo anticorpo monoclonal quimérico de humano-ratinho n.° 1.
Igualmente, as linhas celulares que produzem de forma estável os anticorpos monoclonais comparativos quiméricos humano-ratinho 1 a 11 foram preparadas da mesma maneira como acima utilizando os seguintes anticorpos monoclonais derivados de ratinho anti-CAPRIN-1 descritos no documento W02010/016526 como anticorpos comparativos 1 que consiste na região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 15 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 16; um anticorpo comparativo 2 que consiste na região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 17 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 18; um anticorpo comparativo 3 que consiste na região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 19 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 20; um anticorpo comparativo 4 que consiste na região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 21 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 22; um anticorpo comparativo 5 que consiste na região variável de cadeia pesada da SEQ ID MO: 23 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 24; um anticorpo comparativo 6 que consiste na região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 25 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 26; um anticorpo comparativo 7 que consiste na região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 2 7 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 28; um anticorpo comparativo 8 que consiste na região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 29 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 30; um anticorpo comparativo 9 que consiste na região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 31 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 32; um anticorpo comparativo 10 que consiste na região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 33 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 34; e um anticorpo comparativo 11 que consiste na região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 35 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 36. Cada linha celular preparada foi cultivada durante 5 dias num balão de 150 cm2 a uma densidade de 5 x 105 células/mL utilizando 30 mL de um meio OptiCHO isento de soro (Invitrogen Corp.) para obter os sobrenadantes de cultura contendo quaiquer dos anticorpos monoclonais quiméricos de humano-ratinho 1 a 11. <Exemplo 5: Expressão de CAPRIN-1 na superfície de várias células de cancro utilizando o anticorpo anti-CAPRIN-1 n.° 1> A seguir, as linhas celulares de cancro da mama humano (ZR75-1, MCF7, T47D, SK-BR-3, MDA-MB-157, BT-20, MDA-MB23IV, e MRK-nu-1) , linhas de células de cancro renal (Caki-1, Caki-2, A498, e ACHN), a linha de células de cancro da bexiga (T24), a linha de células de cancro de ovário (SK0V3), a linhas de células de cancro pulmonar (QG56 e A549), as linhas celulares de cancro pancreático (Capan-2 e MIAPaCa-2), a linha celular de cancro de próstata (PC3) , a linha celular de cancro do colo uterino (SW756) , a linha celular de fibrossarcoma (HT1080) , as linhas celulares de tumor cerebral (T98G, U87MG, U251, SNB19, e U373) , as linhas celulares de cancro gástrico (MNK28 e MNK45) , as linhas celulares de cancro de intestino grosso (HT29, Lovo,
CaCo2, SW480, e HCT116), a linha celular de leucemia (AML5), e a linha celular de linfoma (Ramos) confirmadas que têm expressão do gene CAPRIN-1 foram examinadas para sua expressão de proteínas de CAPRIN-1 na superfície celular utilizando os sobrenadantes de cultura contendo n.0 1 obtidos no Exemplo 4. 5xl05 células de cada linha celular foram centrifugadas cada uma num tubo de microcentrífuga de 1,5 ml. Cada sobrenadante de cultura (100 pL) contendo o anticorpo n.° 1 foi adicionado ao tubo e deixado a repousar durante 1 hora em gelo. Após lavagem com PBS, anticorpos anti-IgG de ratinho (H+L) de cabra marcado com FITC (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.) diluídos com PBS contendo FBS a 0,1 % adicionado aí e deixado a repousar a 4 °C durante 30 minutos. Após lavagem com PBS, mediu-se a intensidade de fluorescência utilizando um FACS Calibur (Becton, Dickinson and Company) . 0 controlo negativo utilizado foi células que reagiam apenas com anticorpos secundários. Como um resultado, as células suplementadas com o anticorpo n.0 1 tinham intensidade de fluorescência pelo menos 35 % mais forte que o controlo negativo. Isto demonstrou que as proteínas de CAPRIN-1 são expressas na superfície de membrana celular das linhas celulares de cancro humano. A taxa acima de acentuação na intensidade de fluorescência foi indicada pela taxa de aumento da intensidade de fluorescência média (MFI) em cada linha celular e calculada de acordo com a seguinte expressão: Taxa de aumento da intensidade de fluorescência média (taxa de acentuação da intensidade de fluorescência) ( %) = ( (MFI de células que reagiram com os anticorpos anti-CAPRIN-1) (Controlo de MFI)) / (Controlo de MFI) x 100. <Exemplo 6 : efeito antitumoral (atividade de ADCC) do anticorpo anti-CAPRIN-1 contra células de cancro> 0 anticorpo monoclonal quimérico humano-ratinho anti-CAPRIN-1 obtido no Exemplo 4 foi estudado para sua capacidade de danificar células de cancro que expressam CAPRIN-1 por meio de ensaio de atividade de ADCC. O sobrenadante de cultura das células que produzem n.0 1 foi purificado
utilizando Hitrap Protein A Sepharose FF (GE Healthcare Bio-Sciences Ltd.) . Após substituição com PBS (-) , a solução foi filtrada através de um filtro de 0,22 pm (Millipore Corp.) . O anticorpo resultante foi u para ensaio de atividade. 10° células cada da linha celular de cancro da mama humano MCF7, a linha celular de cancro de intestino grosso HCT116, a linha de células de cancro pancreático humano MIAPaCa-2, a linha de células de cancro renal humano Caki-2, e a linha celular de cancro pulmonar humano QG56 que confirmaram ter expressão de CAPRIN-1 foram recolhidas num tubo de centrífuga de 50 ml, ao qual 100 pCi de crómio 51 foi depois adicionado, seguido por incubação a 37 °C durante 2 horas. Posteriormente, as células foram lavadas três vezes com um meio RPMI 1640 contendo FBS a 10 % e adicionadas a uma densidade de 2 x 10J células/poço a cada placa de 96 poços d efundo em V para preparar as células alvo. 0 anticorpo purificado n.° 1 e os anticorpos quiméricos humano-ratinho quiméricos 1 a 11 obtidos no Exemplo 4 foram cada um adicionado aí a uma concentração de 1 pg/poço. Uma população de células contendo células NK humanas separadas utilizando um método de rotina de linfócitos separadas de sangue periférico humano foi adicionada à placa a uma densidade de 2 x 105 células/poço e cultivada a 37°C durante 4 horas sob condições de 5 % de C02. Após a cultura, a quantidade de crómio 51 libertada de células de tumor danificadas foi medida no sobrenadante da cultura para calcular a atividade citotóxica de cada anticorpo anti-CAPRIN-1 contra as células de cancro. 0 controlo negativo utilizado foi células que suplementadas com anticorpos de controlo de isotipo. A população de células contendo células NK que foi utilizada nesta avaliação foi preparada como se segue: células mononucleares de sangue periférico humano separadas de sangue periférico humano de acordo com um método de rotina utilizando solução de separação de gravidade específica Histopaque para separação de célula mononuclear de sangue periférico humano (Sigma-Aldrich Corp.) foram feitas reagir com vários anticorpos marcados com FITC (anticorpo anti-CD3 humano, anticorpo anti-CD20 humano, anticorpo anti-CD 19 humano, anticorpo anti-CDllc humano, e anticorpo anti-HLA-DR (Becton, and Dickinson and Company)), e uma população de células não corada com os anticorpos foi separada utilizando um classificador de células (FACS Vantage SE (Becton, and Dickinson and Company)) ou um kit de separação de células NK humanas (Miltenyi Biotec K.K.) . Como um resultado da avaliação da atividade citotóxica contra as células de cancro, os anticorpos de controlo de isotipo utilizados e os anticopos comparativos 1 a 11 utilizados tinham atividade citotóxica inferior a 5 % contra todas as linhas celulares. Em contraste, o anticorpo n° 1 exibiu atividade citotóxica de 20 %, 17 %, 27 %, 21 %, e 10 % contra a linha celular de cancro da mama humano MCF7, a linha celular de cancro de intestino grosso HCT-116, a linha de células de cancro pancreático humano MIAPaCa-2, a linha de células de cancro renal humano Caki-2, e a linha de células de cancro pulmonar humano QG56, respetivamente. Igualmente, os anticorpos de controlo de isotipo utilizados e os anticopos comparativos 1 a 11 utilizados tinham atividade citotóxica inferior a 4 % contra todas as outras células de cancro, as linhas celulares de cancro da mama ZR75-1, T47D, Hs578T, BT-20, SK-BR-3, MDA-MB-231V, e MRK-nu-1, linhas celulares de glioma T98G e U373, uma linha de células de cancro pulmonar A549, linhas celulares de cancro renal Caki-1 e ACHN, uma linha celular de cancro do colo uterino SW756, uma linha de células de cancro da bexiga T24, linhas de células de cancro gástrico MKN28 e MKN45, uma linha celular de cancro de intestino grosso SW480, uma linha de células de leucemia AML5, e uma linha de células de linforna Ramos. Em contraste, 0 anticorpo n.° 1 foi confirmado ter 10 % ou mais de atividade citotóxica contra estas linhas celulares. Estes resultados mostraram que o anticorpo monoclonal n.° 1 obtido contra CAPRIN-1 danifica células de cancro que expressam CAPRIN-1 atraés de sua atividade de ADCC, e demonstraram que o anticorpo n. ° 1 exibe atividade citotóxica mais forte contra células de cancro humanas que aquela dos anticorpos comparativos 1 a 11.
Estes resultados sobre a atividade citotõxica foram obtidos misturando o anticorpo contra CAPRIN-1 utilizado na presente invenção, células de linfócitos (população contendo células NK), e 2xl03 células de cada linha celular de cancro com crómio 51 incorporado, conforme descrito anteriormente, seguido da cultura das células durante 4 horas, após a cultura, medindo a quantidade de crómio 51 libertado no meio, e calculando a atividade citotóxica contra cada linha celular de cancro de acordo com a seguinte expressão.
Expressão: Atividade citotõxica (%) = Quantidade de crómio 51 libertado das células alvo suplementadas com o anticorpo contra CAPRIN-1 e células de linfócitos (população contendo células NK) / Quantidade de crómio 51 libertado das células alvo suplementadas com ácido clorídrico a 1 N x 100. A seguir, o anticorpo monoclonal quimérico humano-ratinho n.° 1 obtido no Exemplo 4 foi avaliado para seu efeito antitumoral em ratinhos portadores de cancro in vivo. O anticorpo utilizado foi purificado em coluna a partir do sobrenadante de cultura de cada linha celular que produz o anticorpo n. 0 1. De forma semelhante, os anticorpos monoclonais quiméricos de humano-ratinho comparativos de anticorpo anti-CAPRIN-1 1 a 11 preparados no Exemplo 4 também foram avaliados para seus efeitos antitumorais em ratinhos portadores de cancro in vivo. 0 anticorpo n. 0 0 foi estudado para seu efeito antitumoral utilizando ratinhos portadores de cancro em que foi transplantada uma linha celular de cancro derivada de humano que expressam CAPRIN-1. 2 x 106 células da linha celular de cancro pancreático humano Capan-2 (adquirida de ATCG) por ratinho foram transplantadas subcutaneamente nas costas de ratinhos nus 65 Balb/c (Japan SLC, Inc.) e deixadas a crescer até que o tamanho do tumor era de aproximadamente 5 mm de diâmetro. 0 anticorpo n.° 1 e os anticorpos quiméricos comparativos humano-ratinho 1 a 11 foram cada um administrados intraperitonealmente a uma dose de 200 pg (200 μΐ) / ratinho a 5 (por anticorpo) destes ratinhos portadores de cancro. Posteriormente, cada anticorpo foi administrado por via intraperitoneal aos ratinhos portadores de cancro na mesma dose que acima um total de três vezes durante 2 dias. 0 tamanho do tumor foi medida todos os dias, e o efeito antitumoral foi observado. Por outro lado, administrou-se PBS (-) em vez dos anticorpos aos restantes 5 ratinhos portadores de tumor, que, por sua vez, foram utilizados como um grupo de controlo. 0 tamanho do tumor foi calculado em termos de volume de acordo com a expressão 0,5 x (eixo principal x eixo menor x eixo menor) .
Como um resultado da observação do efeito antitumoral, o tamanho tumoral foi reduzido até aproximadamente 85 % nos ratinhos que receberam os anticorpos quiméricos comparativos humano-ratinho 1 a 11, enquanto que o anticorpo n.° exibiu um efeito antitumoral de reduzir o tamanho do tumor até 80 % no grupo de teste que recebeu o anticorpo n.° 1 contra CAPRIN-1, ni dia 2 9 após a administração do anticorpo (com o tamanho do tumor no grupo de controlo na mesma data definido como 100 %) . Estes resultados demonstraram que o anticorpo n.° 1 exerce um efeito antitumoral in vivo mais forte que os dos anticorpos comparativos 1 a 11. <Exemplo 7: 0 número de moléculas de CAPRIN-1 na superfície de várias células de cancro reconhecidas pelo anticorpo anti-CAPRIN-1 n.° 1>
As linhas celulares de cancro da mama (ZR75-1, MCF7, T4 7D, SK-BR-3, MDA-MB-157, BT-20, MDA-MB-231V, e MRK-nu-1), linhas celular de cancro renal (Caki-1, Caki-2, A498, e ACHN), uma linha celular de cancro da bexiga (T24), uma linha celular de cancro de ovário (SK0V3), a linhas celular de cancro pulmonar (QG56 e A54 9) , linhas celulares de cancro pancreático (Capan-2 e MIAPaCa-2), uma linha celular de cancro de próstata (PC3), uma linha celular de cancro do colo uterino (SW756) , uma linha celular de fibrossarcoma (HT1080), linhas celulares de tumor cerebral (T98G, U87MG, U251, SNB19, e U373), linhas celulares de cancro gástrico (MNK28 e MNK45), linhas celulares de cancro de intestino grosso (HT29, Lovo, CaCo2, SW480, e HCT116), uma linha de células de leucemia (AML5), e uma linha celular de linfoma (Ramos) foram examinadas utilizando um kit de ensaio QIFIKIT para o número de moléculas (Dako Japan Inc.) para o número de moléculas de CAPRIN-1 na sua superfície celular reconhecida pelo anticorpo anti-CAPRIN-1 n.° 1. De forma semelhante, o número de moléculas de CAPRIN-1 na superfície destas várias células de cancro também foi examinado utilizando os anticorpos comparativos 1 a 11, que são os anticorpos monoclonais anti-CAPRIN-1 preparados no Exemplo 4.
De acordo com o protocolo anexo ao kit, o anticorpo n.° 1 e os anticorpos comparativos 1 a 11 foram diluídos em 5 pg/mL (em termos de concentração final ) com PBS, e esta diluição foi adicionada a cada linha celular e feita reagir durante 30 minutos. Após lavagem com PBS, os anticorpos anti-IgG de ratinho marcados com fluorescência anexos ao kit foram adicionados como anticorpos secundários, juntamente com esferas de calibração anexas ao kit, a cada linha celular e deixada a repousar durante 45 minutos em gelo. Cada linha celular e as esferas de calibração foram lavadas com PBS. Posteriormente, mediu-se a intensidade de fluorescência utilizando um FACS Calibur (Becton, Dickinson and Company) para obter o valor de intensidade de fluorescência média (média). Além disso, anticorpos comparativos foram medidos de forma semelhante como acima para obter uma média. 0 controlo negativo utilizado foi células feitas reagir com anticorpos de controlo de isotipo. e uma média também foi obtida. Cada valor de intensidade de fluorescência média (média) foi utilizado para calcular o número de moléculas de acordo com o protocolo anexo ao kit. Como um resultado, o número de moléculas de CAPRIN-1 na superfície de várias células de cancro reconhecidas pelo anticorpo n.° 1 foi de 10b ou mais por célula para todas as linhas celulares humanas examinadas. Por outro lado, o número de moléculas reconhecidas pelos anticorpos monoclonais comparativos 1 a 11 foi inferior a 10b por célula. Aplicabilidade Industrial 0 anticorpo da presente invenção é útil no tratamento e/ou prevenção do cancro.
LISTA DE SEQUÊNCIAS
DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO
Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.
Documentos de patente referidos na descrição
Documentos de não patente citados na descrição • BOON et al. Ludwig Institute for Cancer Research, Belgium, 1991 [0003] • TSUYOSHI AKIYOSHI. Japanese Journal of Cancer and Chemotherapy. Japanese Journal of Cancer and Chemotherapy Publishers Inc, 1997, vol. 24, 511-519 [0007] • BRUGGEN P. et al. Science, 1991, vol. 254, 1643-1647 [0007] • Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, vol. 92, 11810-11813 [0007] • Int. J. Cancer, 1997, vol. 72, 965-971 [0007] • Cancer Res., 1998, vol. 58, 1034-1041 [0007] • Int. J. Cancer, 1998, vol. 29, 652-658 [0007] • Int. J. Oncol., 1999, vol. 14, 703-708 [0007] • Cancer Res., 1996, vol. 56, 4766-4772 [0007] • Hum. Mol. Gene, 1997, vol. 6, 33-39 [0007] • KARLIN ; ALTSCHUL. Proc. Natl. Acad. Sci . USA, 1993, vol. 90, 5873-5877 [0023] • ALTSCHUL et al. Nucleic Acids Res. , 1997, vol. 25, 3389-3402 [0023] • Biochemical Experimentation Course in English. SEIKAGAKU JIKKEN KOZA. Protein Chemistry IV, Chemical Modification and Peptide Synthesis. Tokyo Kagaku Dojin Co., Ltd, 1981 [0026] • Current Protocols in Molecular Biology. SAMBROOK et al. Molecular Cloning. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 [0026] • A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology. AUSUBEL et al. Short Protocols in Molecular Biology. John Wiley &amp; Sons, 1995 [0026] • A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology. AUSUBEL et al. Short Protocols in Molecular Biology. John Wiley &amp; Sons, 1995 [0027] • Current Protocols in Molecular Biology. SAMBROOK et al. Molecular Cloning. 1989 [0028] • AUSUBEL et al. MOLECULAR CLONING [0028] • J. Immunol., 1979, vol. 123, 1548-1550 [0041] • Current Topics in Microbiology and Immunology, 1978, vol. 81, 1-7 [0041] • KOHLER. G. ; MILSTEIN, C. Bur. J. Immunol., 1976, vol. 6, 511-519 [0041] • MARGULIES. D.H. et al. Cell, 1976, vol. 8, 405-415 [0041] • SHULMAN, M. et al. Nature, 1978, vol. 276, 269-270 [0041] • DEST. GROTH, S.F. et al. J. Immunol. Methods, 1980, vol. 35, 1-21 [0041] • TROWBRIDGE, I.S. J. Exp. Med. , 1978, vol. 148, 313-323 [0041] • GALFRE, G. et al. Nature, 1979, vol. 277, 131-133 [0041] • KOHLER, G. ; MILSTEIN, C. Methods Enzymol., 1981, vol. 73, 3-46 [0042]
• CARL, A.K. BORREBAECK ; JAMES, W. LARRICK. THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES. MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990 [0052] • SATO K. etal. Cancer Research, 1993, vol. 53, 851-856 [0059] [0060] • G.B. KIM et al. Protein Engineering Design and Selection, 2007, vol. 20 (9), 425-432 [0061] • HASHIMOTO-GOTOH, T. et al. Gene, 1995, vol. 152, 271-275 [0067] • ZOLLER, MJ.; SMITH, M. Methods Enzymol., 1983, vol. 100, 468-500 [0067] • KRAMER, W. et al. Nucleic Acids Res. , 1984 , vol. 12 , 9441-9456 [0067] • KRAMER, W. ; FRITZ, HJ. Methods Enzymol., 1987, vol . 154, 350-367 [0067] • KUNKEL, TA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , 1985, vol. 82, 488-492 [0067] • KUNKEL. Methods Enzymol. , 1988, vol. 85, 2763-2766 [0067] • KABAT et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest. Public Health Service, National Institute of Health, 1991 [0076] • SAMBROOK et al. Molecular Cloning A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 [0077] • P.J. DELVES. ANTIBODY PRODUCTION ESSENTIAL TECHNIQUES. WILEY, 1997 [0078] • P. SHEPHERD ; C. DEAN. Monoclonal Antibodies. OXFORD UNIVERSITY PRESS, 2000 [0078] • J.W, GODING. Monoclonal Antibodies: principles and practice . ACADEMIC PRESS, 1993 [0078] • NIWA R. Clinical Cancer Research, 15 March 2005, vol. 11 (6), 2327-2336 [0091]

Claims (10)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Um anticorpo ou um fragmento do mesmo que tem reatividade imunológica com uma proteína CAPRIN-1, o anticorpo ou fragmento do mesmo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo regiões de determinação de complementaridade das SEQ ID NOs: 5, 6, e 7 e uma região variável de cadeia leve que compreende regiões de determinação de complementaridade das SEQ ID NOS: 9, 10, e 11.
  2. 2. O anticorpo ou o fragmento do mesmo de acordo com a reivindicação 1, em que o anticorpo é um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo quimérico, um anticorpo de cadeia simples, ou um anticorpo multiespecífico.
  3. 3. O anticorpo ou o fragmento do mesmo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o anticorpo ou o fragmento do mesmo é conjugado com um agente antitumoral. 4 . 0 anticorpo ou o fragmento do mesmo de acordo com qualquer reivindicação anterior, para utilização num método para o tratamento e/ou a prevenção de cancro. 5. 0 anticorpo ou o fragmento do mesmo para utilização de acordo com a reivindicação 4, em que o cancro é cancro da mama, cancro renal, cancro pancreãtico, cancro do intestino grosso, cancro pulmonar, tumor cerebral, cancro gástrico, cancro do colo uterino, cancro ovárico, cancro da próstata, cancro da bexiga, cancro esofágico, leucemia, linfoma, fibrossarcoma, mastocitoma ou melanoma.
  4. 6. Uma composição farmacêutica, que compreende um anticorpo ou um fragmento do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 como um ingrediente ativo.
  5. 7. A composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 6, para utilização num método para o tratamento e/ou a prevenção de cancro.
  6. 8. A composição farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 7, em que o cancro é cancro da mama, cancro renal, cancro pancreático, cancro do intestino grosso, cancro pulmonar, tumor cerebral, cancro gástrico, cancro do colo uterino, cancro ovãrico, cancro da próstata, cancro da bexiga, cancro esofágico, leucemia, linfoma, fibrossarcoma, mastocitoma ou melanoma.
  7. 9. Uma composição farmacêutica, que compreende uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 6 e uma composição farmacêutica que compreende um agente antitumoral.
  8. 10. A combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 9, para utilização num método para o tratamento e/ou a prevenção de cancro.
  9. 11. A combinação farmacêutica para utilização de acordo com a reivindicação 10, em que o cancro é cancro da mama, cancro renal, cancro pancreático, cancro do intestino grosso, cancro pulmonar, tumor cerebral, cancro gástrico, cancro do colo uterino, cancro ovárico, cancro da próstata, cancro da bexiga, cancro esofágico, leucemia, linfoma, fibrossarcoma, mastocitoma, ou melanoma.
  10. 12 . Um ADN que codifica um anticorpo ou um fragmento do mesmo de acordo com a reivindicação 1 ou 2.
PT128202256T 2011-08-04 2012-08-03 Composição de fármaco para o tratamento e/ou a prevenção de cancro PT2740795T (pt)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2011171379 2011-08-04

Publications (1)

Publication Number Publication Date
PT2740795T true PT2740795T (pt) 2017-01-09

Family

ID=47629403

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PT128202256T PT2740795T (pt) 2011-08-04 2012-08-03 Composição de fármaco para o tratamento e/ou a prevenção de cancro

Country Status (16)

Country Link
US (1) US9181348B2 (pt)
EP (1) EP2740795B1 (pt)
JP (1) JP6065591B2 (pt)
KR (1) KR101980554B1 (pt)
CN (1) CN103764825B (pt)
AU (1) AU2012290952B2 (pt)
BR (1) BR112014002618B1 (pt)
CA (1) CA2844034C (pt)
DK (1) DK2740795T3 (pt)
ES (1) ES2609859T3 (pt)
HU (1) HUE030137T2 (pt)
MX (1) MX348577B (pt)
PL (1) PL2740795T3 (pt)
PT (1) PT2740795T (pt)
RU (1) RU2611197C2 (pt)
WO (1) WO2013018889A1 (pt)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102171570B (zh) 2008-08-05 2014-10-15 东丽株式会社 用于检测癌的方法
KR101638490B1 (ko) 2008-08-05 2016-07-11 도레이 카부시키가이샤 암의 치료 및 예방용 의약 조성물
JP5906739B2 (ja) * 2010-02-04 2016-04-20 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
DK2741085T3 (en) * 2011-08-04 2017-06-19 Toray Industries Method for detecting pancreatic cancer
CA2844037C (en) * 2011-08-04 2020-07-14 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of pancreatic cancer
US9573993B2 (en) 2012-02-21 2017-02-21 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment of cancer comprising an anti-CAPRIN-1 peptide antibody
CA2869120C (en) * 2012-03-30 2023-05-23 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of liver cancer
KR102052400B1 (ko) 2012-03-30 2019-12-06 도레이 카부시키가이샤 담낭암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물
TR201902972T4 (tr) 2012-07-19 2019-03-21 Toray Industries Kanseri tespit etmek için yöntem.
DK2876447T3 (da) 2012-07-19 2020-02-24 Toray Industries Fremgangsmåde til detektering af cancer
PL3031826T3 (pl) 2013-08-09 2019-03-29 Toray Industries, Inc. Kompozycja farmaceutyczna do leczenia i/lub zapobiegania nowotworowi
WO2018009916A1 (en) 2016-07-07 2018-01-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Antibody adjuvant conjugates
WO2018079740A1 (ja) 2016-10-28 2018-05-03 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
AU2019242520A1 (en) 2018-03-30 2020-10-29 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer
CN112638933A (zh) * 2018-07-11 2021-04-09 海德格霍格有限公司 Smo蛋白的特异性表位、识别该表位的抗体以及包含该抗体的组合物
WO2020013644A1 (ko) 2018-07-11 2020-01-16 고려대학교 산학협력단 Smo 단백질의 특이적 에피토프, 이를 인지하는 항체 및 이를 포함하는 조성물
AU2020241686A1 (en) 2019-03-15 2021-11-04 Bolt Biotherapeutics, Inc. Immunoconjugates targeting HER2
AU2020291014A1 (en) 2019-06-13 2022-01-27 Bolt Biotherapeutics, Inc. Aminobenzazepine compounds, immunoconjugates, and uses thereof
US20220347310A1 (en) 2019-09-30 2022-11-03 Bolt Biotherapeutics, Inc. Amide-linked, aminobenzazepine immunoconjugates, and uses thereof
CA3155077A1 (en) 2019-10-25 2021-04-29 Romas Kudirka Thienoazepine immunoconjugates, and uses thereof
KR20220152309A (ko) 2020-03-12 2022-11-15 도레이 카부시키가이샤 암의 치료 및/또는 예방을 위한 의약품
US20230159635A1 (en) 2020-03-12 2023-05-25 Toray Industries, Inc. Medicament for treatment and/or prevention of cancer
US20230140155A1 (en) 2020-03-12 2023-05-04 Toray Industries, Inc. Medicament for treatment and/or prevention of cancer
JPWO2021182570A1 (pt) 2020-03-12 2021-09-16
US20230129035A1 (en) 2020-03-12 2023-04-27 Toray Industries, Inc. Medicament for treatment and/or prevention of cancer
JP2023524271A (ja) 2020-05-08 2023-06-09 ボルト バイオセラピューティクス、インコーポレーテッド エラスターゼ－基質ペプチドリンカーイムノコンジュゲート、及びそれらの使用
CN111979278B (zh) * 2020-07-27 2022-04-22 河北圣雪大成制药有限责任公司 一种通过发酵降低大观霉素杂质e的方法
CN116234586A (zh) 2020-08-13 2023-06-06 博尔特生物治疗药物有限公司 吡唑并氮呯免疫缀合物及其用途
AU2022296193A1 (en) 2021-06-23 2024-01-18 Toray Industries, Inc. Medicament for treatment and/or prevention of cancer
JPWO2022270524A1 (pt) 2021-06-23 2022-12-29
EP4378476A1 (en) 2021-07-27 2024-06-05 Toray Industries, Inc. Medicament for treatment and/or prevention of cancer
AU2022320304A1 (en) 2021-07-27 2024-02-29 Toray Industries, Inc. Medicament for treatment and/or prevention of cancer
EP4378477A1 (en) 2021-07-27 2024-06-05 Toray Industries, Inc. Medicament for treatment and/or prevention of cancer
KR20240051956A (ko) 2021-09-03 2024-04-22 도레이 카부시키가이샤 암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물
WO2023076599A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Bolt Biotherapeutics, Inc. Tlr agonist immunoconjugates with cysteine-mutant antibodies, and uses thereof
WO2024173387A1 (en) 2023-02-14 2024-08-22 Bolt Biotherapeutics, Inc. Aza-benzazepine immunoconjugates, and uses thereof
WO2024186626A1 (en) 2023-03-03 2024-09-12 Bolt Biotherapeutics, Inc. Aza-bicyclic sting agonist immunoconjugates, and uses thereof

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5994524A (en) 1994-07-13 1999-11-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Polynucleotides which encode reshaped IL-8-specific antibodies and methods to produce the same
US5698396A (en) 1995-06-07 1997-12-16 Ludwig Institute For Cancer Research Method for identifying auto-immunoreactive substances from a subject
FR2761994B1 (fr) 1997-04-11 1999-06-18 Centre Nat Rech Scient Preparation de recepteurs membranaires a partir de baculovirus extracellulaires
ES2364266T3 (es) 1998-04-03 2011-08-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anticuerpo humanizado hacia el factor tisular humano (tf) y procedimiento para construir el anticuerpo humanizado.
US20030118599A1 (en) 1999-04-02 2003-06-26 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of lung cancer
TR200100916T2 (pt) 1998-07-14 2002-06-21 Corixa@@Corporation
RU2234942C2 (ru) 1998-07-14 2004-08-27 Корикса Корпорейшн Выделенный опухолевый полипептид предстательной железы и кодирующий его полинуклеотид
US6969518B2 (en) 1998-12-28 2005-11-29 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of breast cancer
WO2000052204A2 (en) 1999-02-22 2000-09-08 Orntoft Torben F Gene expression in bladder tumors
US6444425B1 (en) 1999-04-02 2002-09-03 Corixa Corporation Compounds for therapy and diagnosis of lung cancer and methods for their use
JP2002540790A (ja) 1999-04-02 2002-12-03 コリクサ コーポレイション 肺癌の治療および診断のための化合物ならびにその使用のための方法
US6949245B1 (en) 1999-06-25 2005-09-27 Genentech, Inc. Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies
JP2003528587A (ja) 1999-10-29 2003-09-30 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド ２７個のヒト分泌タンパク質
US20020006404A1 (en) 1999-11-08 2002-01-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
JP2004526401A (ja) 2000-03-29 2004-09-02 コリクサ コーポレイション 肺癌の治療および診断のための組成物および方法
WO2002043478A2 (en) 2000-11-30 2002-06-06 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
US7919467B2 (en) 2000-12-04 2011-04-05 Immunotope, Inc. Cytotoxic T-lymphocyte-inducing immunogens for prevention, treatment, and diagnosis of cancer
US20040029114A1 (en) 2001-01-24 2004-02-12 Eos Technology, Inc. Methods of diagnosis of breast cancer, compositions and methods of screening for modulators of breast cancer
RU2306952C2 (ru) 2001-01-31 2007-09-27 Байоджен Айдек Инк. Лечение в-клеточных злокачественных опухолей с использованием комбинации применений, связанных с антителами, уменьшающими количество b-клеток, и с иммуномодулирующими антителами
AU2002311787A1 (en) 2001-03-28 2002-10-15 Zycos Inc. Translational profiling
WO2002083070A2 (en) 2001-04-10 2002-10-24 Corixa Corporation Compounds for immunotherapy and diagnosis of colon cancer and methods for their use
CN1789416B (zh) 2001-05-11 2011-11-16 协和发酵麒麟株式会社 含人抗体λ轻链基因的人类人工染色体
WO2002092001A2 (en) 2001-05-11 2002-11-21 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of lung cancer
US20030190640A1 (en) 2001-05-31 2003-10-09 Mary Faris Genes expressed in prostate cancer
US20040142325A1 (en) 2001-09-14 2004-07-22 Liat Mintz Methods and systems for annotating biomolecular sequences
WO2003072035A2 (en) 2002-02-22 2003-09-04 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US20050003390A1 (en) 2002-05-17 2005-01-06 Axenovich Sergey A. Targets for controlling cellular growth and for diagnostic methods
US20040126379A1 (en) 2002-08-21 2004-07-01 Boehringer Ingelheim International Gmbh Compositions and methods for treating cancer using cytotoxic CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents
WO2004047728A2 (en) 2002-11-26 2004-06-10 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
WO2004076682A2 (en) 2003-02-26 2004-09-10 Surromed, Inc. Targets for controlling cellular growth and for diagnostic methods
EP1629119A2 (en) 2003-04-29 2006-03-01 Wyeth Methods for diagnosing aml and mds by differential gene expression
KR20060031809A (ko) 2003-06-09 2006-04-13 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 미시간 암 치료 및 진단용 조성물 및 방법
WO2005007830A2 (en) 2003-07-14 2005-01-27 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and compositions for diagnosis, staging and prognosis of prostate cancer
US20050032113A1 (en) 2003-07-17 2005-02-10 Mitsubishi Pharma Corporation Membrane protein library for proteome analysis and method for preparing same
WO2005116076A2 (en) 2004-01-26 2005-12-08 Debiovision Inc. Neoplasm-specific polypeptides and their uses
PT1735348E (pt) 2004-03-19 2012-07-24 Imclone Llc Anticorpo anti-receptor do factor de crescimento humano
KR100942849B1 (ko) 2004-03-30 2010-02-17 글락소 그룹 리미티드 면역글로불린
WO2005100998A2 (en) 2004-04-16 2005-10-27 Europroteome Ag Membrane markers for use in cancer diagnosis and therapy
WO2006002378A2 (en) 2004-06-23 2006-01-05 Avalon Pharmaceuticals Determining cancer-linked genes and therapeutic targets using molecular cytogenetic methods
UA94899C2 (ru) 2005-01-21 2011-06-25 Дженентек, Инк. Фиксированное дозирование антител к her
JP4134179B2 (ja) 2005-02-04 2008-08-13 株式会社ソニー・コンピュータエンタテインメント ソフトウエアによる動的予測方法および装置
JP5006802B2 (ja) 2005-02-18 2012-08-22 チルドレンズ メディカル センター コーポレイション 上皮由来の癌診断および予後診断のためのバイオマーカーとしてのＣｙｒ６１
CA2602088C (en) 2005-03-11 2021-07-27 Ciphergen Biosystems, Inc. Biomarkers for ovarian cancer and endometrial cancer
JP2006316040A (ja) 2005-05-13 2006-11-24 Genentech Inc Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）補助療法
US8014957B2 (en) 2005-12-15 2011-09-06 Fred Hutchinson Cancer Research Center Genes associated with progression and response in chronic myeloid leukemia and uses thereof
WO2007095186A2 (en) 2006-02-14 2007-08-23 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of cancer
US20100015724A1 (en) 2006-08-17 2010-01-21 Peter Hornbeck Lysine acetylation sites
US20080107668A1 (en) 2006-08-30 2008-05-08 Immunotope, Inc. Cytotoxic t-lymphocyte-inducing immunogens for prevention, treatment, and diagnosis of cancer
WO2008031041A2 (en) 2006-09-07 2008-03-13 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Melanoma gene signature
WO2008059252A2 (en) 2006-11-15 2008-05-22 Oxford Biomedica (Uk) Limited Methods and composition fro t cell receptors which recognize 5t4 antigen
JP5663834B2 (ja) 2008-03-14 2015-02-04 東ソー株式会社 遺伝子組換え抗体の製造方法
ES2539603T3 (es) 2008-08-05 2015-07-02 Toray Industries, Inc. Agente inductor de inmunidad
CN102171570B (zh) * 2008-08-05 2014-10-15 东丽株式会社 用于检测癌的方法
KR101638490B1 (ko) * 2008-08-05 2016-07-11 도레이 카부시키가이샤 암의 치료 및 예방용 의약 조성물
US8420348B2 (en) 2009-08-19 2013-04-16 Merck Patent Gesellschaft Mit Beschrankter Haftung Antibodies for the detection of integrin complexes in FFPE material
KR101545914B1 (ko) 2009-09-22 2015-08-20 프로바이오겐 아게 특수화된 글리칸 구조를 함유하는 분자의 생산 방법
RU2418587C1 (ru) * 2010-01-21 2011-05-20 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная медицинская академия Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО "НижГМА Росздрава") Способ лечения злокачественных опухолей головного мозга
JP5906739B2 (ja) 2010-02-04 2016-04-20 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
SI2531206T1 (sl) 2010-02-04 2017-12-29 Morphotek, Inc. Polipeptidi klorotoksina in konjugati ter njihove uporabe
CA2788545C (en) 2010-02-04 2019-03-26 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treating and/or preventing cancer
MX340014B (es) 2010-02-04 2016-06-22 Toray Industries Composicion farmaceutica para el tratamiento y/o prevencion del cancer.
WO2011096519A1 (ja) 2010-02-04 2011-08-11 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
CN109925511B (zh) 2010-02-04 2024-03-19 东丽株式会社 用于癌的治疗和/或预防的药物
JP5742713B2 (ja) 2010-02-04 2015-07-01 東レ株式会社 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
JP5312368B2 (ja) 2010-02-16 2013-10-09 富士フイルム株式会社 金属複合基板およびその製造方法
DK2741085T3 (en) 2011-08-04 2017-06-19 Toray Industries Method for detecting pancreatic cancer
AU2012290957B2 (en) 2011-08-04 2017-04-20 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
CA2844037C (en) 2011-08-04 2020-07-14 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of pancreatic cancer
KR102052400B1 (ko) 2012-03-30 2019-12-06 도레이 카부시키가이샤 담낭암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물
CA2869120C (en) 2012-03-30 2023-05-23 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of liver cancer

Also Published As

Publication number Publication date
PL2740795T3 (pl) 2017-04-28
RU2014108045A (ru) 2015-09-10
CN103764825A (zh) 2014-04-30
RU2611197C2 (ru) 2017-02-21
CN103764825B (zh) 2015-09-02
ES2609859T3 (es) 2017-04-24
MX2014001370A (es) 2014-03-21
KR101980554B1 (ko) 2019-05-21
CA2844034C (en) 2019-07-16
AU2012290952A1 (en) 2014-03-20
AU2012290952B2 (en) 2016-05-05
EP2740795B1 (en) 2016-10-05
MX348577B (es) 2017-06-20
EP2740795A1 (en) 2014-06-11
DK2740795T3 (en) 2017-01-16
JP6065591B2 (ja) 2017-01-25
BR112014002618A2 (pt) 2018-01-23
US9181348B2 (en) 2015-11-10
EP2740795A4 (en) 2015-04-15
JPWO2013018889A1 (ja) 2015-03-05
CA2844034A1 (en) 2013-02-07
KR20140054181A (ko) 2014-05-08
US20140178373A1 (en) 2014-06-26
HUE030137T2 (en) 2017-04-28
BR112014002618B1 (pt) 2022-09-20
WO2013018889A1 (ja) 2013-02-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2012290952B2 (en) Cancer treatment and/or prevention drug composition
AU2012290946B2 (en) Cancer treatment and/or prevention drug composition
ES2763122T3 (es) Composición farmacéutica, que comprende anticuerpos contra caprin 1 para el tratamiento y/o para la prevención del cáncer
AU2012290954B2 (en) Pharmaceutical composition for treatment and/or prophylaxis of cancer
AU2013223161B2 (en) Medicinal composition for treating and/or preventing cancer
AU2013223147B2 (en) Pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of cancer
BR112014002621B1 (pt) Anticorpo, ou seu fragmento, composição farmacêutica, uso de um anticorpo e uso de uma composição farmacêutica