PT2697198T - Compostos de benzeno substituído - Google Patents

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James Nelson Wigle Timothy
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Description

DESCRIÇÃO "COMPOSTOS DE BENZENO SUBSTITUÍDO"
PEDIDOS RELACIONADOS
Este pedido reivindica prioridade a, e o beneficio de, o Pedido provisório U.S. N.° 61/474,825, apresentado em 13 de abril de 2011 e 61/505, 676 apresentado em 08 de julho de 2011.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
Nas células eucarióticas, o ADN é empacotado com histonas para formar a cromatina. Alterações na estrutura ordenada da cromatina podem levar a alterações na transcrição de genes associados. O controlo de alterações na estrutura da cromatina (e, desse modo, da transcrição) é mediado por modificações covalentes nas histonas, muito especialmente nas suas caudas N-terminais. Estas modificações são frequentemente referidas como epigenéticas porque podem levar a alterações transmitidas por via hereditária na expressão de genes, mas não afetam a sequência do próprio ADN. As modificações covalentes (por exemplo, metilação, acetilação, fosforilação e ubiquitinação) das cadeias laterais de aminoácidos são mediadas enzimaticamente. A adição seletiva de grupos metilo a sitios de aminoácidos específicos nas histonas é controlado pela ação de uma familia única de enzimas conhecida como histona-metiltransferases (HMTs). O conjunto orquestrado dos sistemas bioquímicos por detrás da regulação da transcrição tem de ser rigorosamente controlado para que o crescimento e diferenciação de células progridam de forma ótima. Surgem estados patológicos quando estes controlos são interrompidos pela expressão e/ou atividade aberrante das enzimas responsáveis pela modificação do ADN e das histonas. Nos cancros humanos, por exemplo, há um corpo de evidência crescente que sugere que a atividade enzimática epigenética desregulada contribui para a proliferação descontrolada das células associadas ao cancro, bem como para outros fenótipos relevantes para o cancro tais como um aumento da migração e invasão celulares. Além do cancro, há evidência crescente para um papel das enzimas epigenéticas num número de outras doenças humanas, incluindo doenças metabólicas (tais como a diabetes), doenças inflamatórias (tais como a doença de Crohn), doenças neurodegenerativas (tais como a doença de Alzheimer) e doenças cardiovasculares. Por conseguinte, a modulação seletiva da ação aberrante de enzimas epigenéticas pode ser promissor para o tratamento de uma gama de doenças. A WO2007136592 divulga compostos à base de quinolona e a sua utilização para o tratamento de cancro. A EP1357111 divulga derivados de piridona que têm uma atividade de ligação ao recetor canabinoide tipo 2. A US2010035912 divulga compostos químicos que interrompem a montagem retroviral e a maturação de partículas de vírus e métodos de utilização de tais compostos para tratar a infeção por HIV-1. A W02008113006 divulga compostos de quinolinona para o tratamento e/ou prevenção de doenças ou condições mediadas pelo canal de sódio.
Sabe-se que as proteínas do grupo policomb (PcG) e grupo tritorax (trxG) fazem parte do sistema de memória celular. Ver, por exemplo, Francis et al. (2001) Nat Rev Mol Cell
Biol 2:409-21 e Simon et al. (2002) Curr Opin Genet Dev 12:210-8. Em geral, as proteínas PcG são repressores da transcrição que mantêm o "estado desativado," e as proteínas trxG são ativadores da transcrição que mantêm o "estado ativado." Uma vez que os membros das proteínas PcG e trxG contêm atividade histona-metiltransferase (HMTase) intrínseca, as proteínas PcG e trxG podem participar na memória celular através da metilação de histonas nucleares. Ver, por exemplo, Beisel et al. (2002) Nature 419:857-62; Cao et al. (2002) Science 298:1039-43; Czermin et al. (2002) Cell 111:185-96; Kuzmichev et al. (2002) Genes Dev 16:2893-905; Milne et al. (2002) Mol Cell 10:1107-17; Muller et al. (2002) Cell 111:197-208; e Nakamura et al. (2002) Mol Cell 10:1119-28.
Estudos bioquímicos e genéticos proporcionaram evidência que a função das proteínas PcG em Drosophlla em, pelo menos, dois complexos proteicos distintos, o complexo repressivo de Policomb 1 (PRC1) e o complexo ESC-E(Z) (também conhecido como complexo repressivo de Policomb 2 (PRC2)). Otte et al. (2003) Curr Opin Genet Dev 13:448-54. Estudos em Drosophlla demonstraram que os complexos ESC-E (Z)/EED-EZH2 (isto é, PRC2) têm atividade histona-metiltransf erase intrínseca. Apesar das composições dos complexos isolados em diferentes grupos serem ligeiramente diferentes, eles contêm geralmente EED, EZH2, SUZ12 e RbAp48 ou os seus homólogos de Drosophlla. No entanto, um complexo reconstituído que compreende apenas EED, EZH2 e SUZ12 retém a atividade histona-metiltransferase para a lisina 27 da histona H3. Patente US 7,563,589.
Das várias proteínas que constituem os complexos de PRC2, a EZH2 (Homólogo Potenciador de Zeste 2) é a subunidade catalítica. 0 sítio catalítico da EZH2, por sua vez, está presente dentro de um domínio SET, um motivo de sequência altamente conservada (denominado depois Su(var)3-9, Potenciador de Zeste, Tritorax) que se encontra em várias proteínas associadas à cromatina, incluindo membros tanto do grupo Tritorax como do grupo Policomb. 0 domínio SET é característico de todas as histona lisina-metiltransferases conhecidas exceto da H3-K79-metiltransferase D0T1.
Além do silenciamento do gene Hox, foi demonstrado que a metilação de K27 da histona H3 mediada por PRC2 participa na inativação de X. Plath et ai. (2003) Science 300:131-5; Silva et ai. (2003) Dev Cell 4:481-95. O recrutamento do complexo de PRC2 para a Xi e a trimetilação subsequente na histona H3-K27 ocorre durante a etapa de iniciação da inativação de X e é dependente do ARN de Xist. Além disso, constatou-se que a EZH2 e a sua atividade de histona H3-K27-metiltransferase associada marcam de forma diferenciada as células de epiblasto pluripotenciais e a trofectoderme diferenciada, e é coerente com um papel da EZH2 na manutenção dos padrões de modificação epigenética de células de epiblasto pluripotenciais, e a supressão de EZH2 mediada por Cre resulta na perda de metilação da histona H3-K27 nas células. Erhardt et ai. (2003) Development 130:4235-48) . Além disso, estudos em linhas de células e tecidos de cancro da próstata e mama revelaram uma forte correlação entre os níveis de EZH2 e SUZ12 e a capacidade de invasão destes cancros, indicando que a disfunção do complexo de PRC2 pode contribuir para o cancro. Bracken et al. (2 0 03) EMBO J 22:5323-35/ Kirmizis et al. (2003) Mol Câncer Ther 2:113-21; Kleer et al. (2003) Proc Natl Acad
Sei USA 100:11606-11; Varambally et al. (2002) Nature 419:624-9.
Recentemente foi referido que as mutações somáticas da tirosina 641 (Y641C, Y641F, Y641N, Y641S e Y641H; por vezes também referidas como Y646C, Y646F, Y646N, Y646S e Y646H, respetivamente) da EZH2 estavam associadas ao linfoma folicular (FL) e ao subtipo semelhante a células B de centro germinativo (GCB) do linfoma de células B grandes difusas (DLBCL). Morin et al. (2010) Nat Genet 42:181-5. Em todos os casos, verificou-se que a ocorrência do gene de EZH2 mutante é heterozigótica e detetou-se a expressão de alelos de tipo selvagem e mutantes nas amostras de mutantes caracterizadas por sequenciação com transcriptoma. Foi também demonstrado que todas as formas mutantes de EZH2 poderiam ser incorporadas no complexo multiproteico de PRC2, mas que os complexos resultantes não tinham a capacidade de catalisar a metilação do resíduo equivalente a H3-K27 de um substrato peptidico. Assim, concluiu-se que as alterações associadas a patologias na Tyr641 da EZH2 resultavam na perda de função em relação à metilação da H3-K27 catalisada pela EZH2.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Num aspeto, a presente invenção refere-se a um composto de benzeno substituído de Fórmula (Ie) abaixo ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
em que Z é NR7R8 ou S(0)aR7, em que a é 0;
Ri é H ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados de hidroxilo, alcoxilo C7-Ce, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino e arilo C6-Ci0; cada um de R2 e R4 é, independentemente, -Q1-T1, em que Qi é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 opcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados de halo e hidroxilo, e T7 é H, halo ou azido; R3 é H ou halo; R5 é H ou alquilo Ci-Cê; R6 é H, halo, ciano, azido, ORa, -NRaRb, -C(0)NRaRb, -S(0)bRa, em que b é 0, 1 ou 2 ou RS2; em que RS2 é alquilo
Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, ou heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, e em que cada um de Ra e Rb é, independentemente, H, alquilo C1-C6, ou heterocicloalquilo de 4 a 12 membros; ou Ra e Rb, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional; e cada um de Ra, Rs2 e o anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros formado por Ra e Rb, está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2; em que Q2 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3, e T2 é H, halo, -ORc, -NRcRd, -C(0)0Rc, alquilo Ci-C6 ou Rs4, em que cada um de Rc e Rd é, independentemente, H ou alquilo C1-C6, Rs4 é cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros e Rs4 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3, em que Q3 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 cada opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo C1-C6, e T3 é selecionado do grupo que consiste em halo, ciano, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, 0Re, COORe, -S(0)2Re/ -NReRf, e -C(0)NReRf, em que cada um de Re e Rf é, independentemente, H ou alquilo C1-C6 ou Rc e Rd, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional e opcionalmente substituído com alquilo Ci-Cê; R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C4 e T4 é H, alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, C (0)-alquilo C1-6, C (0) -cicloalquilo C3-6, ou heterocicloalquilo de 4 a 14 membros, cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5, em que Q5 é uma ligação, C (0) , C(0)NRk, NRkC (0) , S (0) 2, ou unidade de ligação alquilo C1-C3, em que Rk é H ou alquilo Ci-C6, e T5 é H, halo, alquilo C1-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-Cg-amino, cicloalquilo C3~C8, arilo Cg-Cio, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, ou S(0)qRq em que q é 0, 1 ou 2 e Rq é alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e T5 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, alquilo Ci-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-Cg-amino, cicloalquilo C8-C8, arilo C6_ C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros exceto quando T5 é H, halo, hidroxilo ou ciano; ou -Q5-T5 é oxo;
Rg é H, alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com halo, hidroxilo ou alcoxilo C1-C6, alcenilo C2-C6, cicloalquilo C3 —Cg, ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros; ou R7 e Rg, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 a 2 heteroátomos adicionais, e o anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros formado por R7 e Rg está opcionalmente substituído com um ou mais -Qg-Tg, em que Qg é uma ligação, C (0) , C (0) NRm, NRmC (0) , S (0) 2, ou unidade de ligação alquilo C1-C3, em que Rm é H ou alquilo C1-C6, e T6 é H, halo, alquilo C1-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Cg-Cg-amino, di-alquil Cg-Cg-amino, cicloalquilo C3 —Cg, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, ou S(0)pRp em que p é 0, 1 ou 2 e Rp é alquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3~Cg, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e T6 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, alquilo C1-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo Cg-Cg, amino, mono-alquil Cg-Cg-amino, di-alquil Cg-Cg-amino, cicloalquilo C3~Cg, arilo Cg-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros exceto quando Tg é H, halo, hidroxilo, ou ciano; ou -Q6-T6 é oxo; e
Ri2 é halo, alcoxilo Cg-Cg, alcenilo C2-Cg, ou alquilo Cg-Cg opcionalmente substituído com halo.
Noutro aspeto, a presente invenção refere-se a um composto de benzeno substituído de Fórmula (Ie) acima ou um sal farmaceuticamente aceitável, em que
Ri é H ou alquilo Cg-Cg opcionalmente substituído uma ou mais vezes com um substituinte selecionado de hidroxilo, alcoxilo Cg-Cg e arilo Cg-Cgo; R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação ou uma unidade de ligação alquilo C1-C4, e T4 é alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, C (0) -alquilo C1-C6, C (0) -cicloalquilo C3-Ce, di-hidropiranilo, tetra-hidropiranilo, tetra- hidrotiopiranilo, piperidinilo, pirrolidinilo, azetidinilo e oxetanilo, cada opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados de oxo e -Q5- t5; R8 é H ou alquilo Ci-C6, haloalquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6 ou cicloalquilo C3-C8; e R12 é halo, alquilo Ci-C6, haloalquilo Ci-C6 ou alcoxilo Ci~ C 6 .
Opcionalmente, Z é NR7Rg ou SR7;
Rg é H, halo, ciano, 0Ra, -C(0)NRaRb, -S(0)2Ra ou Rs2; em que Rs2 é alquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, ou heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, e em que cada um de Ra e Rb é, independentemente, H ou alquilo Ci-C6; ou Ra e Rb, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional; e cada um de Rs2 e o anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros formado por Ra e Rb, está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2; em que Q2 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3, e T2 é H, halo, -0RC, -NRcRd, -C (0) Oalquilo Ci-C6, ou alquilo C1-C6, em que cada um de Rc e Rd é, independentemente, H ou alquilo Ci-C6 ou Rc e Rd, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional e 0 ou 1 substituintes alquilo Ci-C6; R7 é alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, di-hidropiranilo, tetra-hidropiranilo, tetra-hidrotiopiranilo, piperidinilo, pirrolidinilo, azetidinilo e oxetanilo, cada opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados de oxo e -Q5-T5; e R12 é halo ou alquilo C1-C6.
Opcionalmente, R2, R4 e R12 são, cada, independentemente alquilo Ci-C6 e R5 é H.
Um subconjunto dos compostos de Fórmula (Ie) inclui aqueles em que R7 é ciclo-hexilo, di-hidropiranilo, tetra-hidropiranilo, tetra-hidrotiopiranilo, piperidinilo, pirrolidinilo, azetidinilo oxetanilo, 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ilo, 1-oxaespiro[4.5]decan-8-ilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-l,l'-isobenzofuran]-4-ilo, 7'H-espiro[ciclo-hexano-l,5'- furo[3,4-b]piridin]-4-ilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'- furo[3,4-c]piridin]-4-ilo ou 1-azaespiro[4.5]decan-8-ilo, cada substituído com um ou mais -Q5-T5.
Opcionalmente, Z é selecionado do grupo que consiste em piperidinilo, morfolinilo, piperazinilo, azetidinilo, pirrolidinilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-ilo, e 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decan-8-ilo, cada opcionalmente substituído com um -Q6-T6.
Opcionalmente, Rg é halo e Z é SR7, em que R7 é alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros e R7 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Opcionalmente, R6 é -S(0)bRa ou azido, em que b é 0, 1 ou 2 e Ra é alquilo Ci-C6 ou cicloalquilo C3-C8; e Z é NR7R8, em que R7 é cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 14 membros, cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5; e R8 é H ou alquilo Ci-C6.
Outro subconjunto dos compostos de Fórmula (Ie) inclui aqueles de Fórmula (II):
em que n é 0, 1 ou 2; U é O, S, N-Q5-T5 ou CH-Q5-T5; e R12 é
Cl, Br, ou metilo, e preferencialmente U é CH-Q5-T5 e n é 0 .
Opcionalmente, o composto é de Fórmula (IIA):
em que n é 0, 1 ou 2; U é O, S, N-Q5-T5 ou CH-Q5-T5; e R12 é
Cl, Br, ou metilo, e preferencialmente U é CH-Q5-T5 e n é 0 .
Opcionalmente, (i) Q5 é uma ligação e T5 é H, alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, ou di-alquil Ci-Cg-amino, em que T5 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, alcoxilo C1-C6, ou cicloalquilo C3-C8; (ii) Qs é CO, S(0)2, ou NHC (O) ; e T5 é alquilo Ci-C6, alcoxilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, ou heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, (111) Q5 é unidade de ligação alquilo C1-C3 e T5 é H ou arilo C6-Ci0, (iv) Q5 é unidade de ligação alquilo C1-C3 e T5 é cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, ou S(0)qRq, (v) Q5 é NHC (0) e T5 é alquilo Ci-C6 ou alcoxilo C1-C6, ou (vi) um ou mais -Q5-T5 são oxo.
Opcionalmente, um ou mais -Οε-Τβ são oxo, ou quando Q6 é uma ligação ou C (0), T6 é alquilo Ci-C6 ou alcoxilo Ci-C6.
Ainda outro subconjunto dos compostos de Fórmula (Ie) inclui um composto de acordo com a reivindicação 13. A presente invenção também proporciona composições farmacêuticas que compreendem um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis e um ou mais compostos selecionados daqueles de qualquer uma das Fórmulas (Ie) aqui descritas, e N-(5-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)furan-2-carboxamida, N,N'-(5-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-1,3- fenileno)diacetamida, N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-pivalamidobenzamida, 3-(3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]dioxepina-7-sulfonamido)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida, N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3,5-dimetoxibenzamida, N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3,4,5-trimetoxibenzamida, 3-alil-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4,5-dimetoxibenzamida, 4-(2-amino-2-oxoetoxi)-3-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-metoxibenzamida, 3-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-4-hidroxi-5-metoxibenzamida e 3- bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-metoxi-4-propoxibenzamida.
Outro aspeto desta invenção é um composto de acordo com a presente invenção para utilização num método de tratamento ou prevenção de cancro. 0 método inclui administrar a um indivíduo que necessita dos mesmos uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos selecionados daqueles de qualquer uma das Fórmulas (Ie) aqui descritas, e N-(5-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)furan-2-carboxamida, N,N'-(5-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-1,3- fenileno)diacetamida, N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-pivalamidobenzamida, 3-(3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]dioxepina-7-sulfonamido)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida, N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3,5-dimetoxibenzamida, N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3,4,5-trimetoxibenzamida, 3-alil-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4,5-dimetoxibenzamida, 4- (2-amino-2-oxoetoxi)-3-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-metoxibenzamida, 3-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-4-hidroxi-5-metoxibenzamida e 3-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-metoxi-4-propoxibenzamida.
Salvo indicação em contrário, qualquer descrição de utilizações inclui utilizações dos compostos para proporcionar esse tratamento ou profilaxia como se descreve na descrição, bem como utilizações dos compostos para preparar um medicamento para tratar ou prevenir essa condição. 0 tratamento inclui o tratamento de animais humanos ou não humanos incluindo roedores e outros modelos de doença.
Por exemplo, a utilização de compostos num método de tratamento compreende o passo de administração, a um indivíduo que tem um cancro com metilação aberrante de H3-K27, uma quantidade eficaz de um ou mais compostos das Fórmulas aqui descritas, em que o(s) composto(s) inibe(m) a atividade histona-metiltransferase de EZH2, tratando, desse modo, o cancro. Os exemplos de metilação aberrante de H3-K27 podem incluir um aumento global e/ou distribuição alterada da di- ou trimetilação de H3-K27 dentro da cromatina da célula cancerosa.
Por exemplo, o cancro é selecionado do grupo que consiste em cancros que sobreexpressam EZH2 ou outras subunidades de PRC2, contêm mutações de perda de função nas H3-K27-desmetilases tais como UTX, ou sobreexpressam proteínas auxiliares tais como PHF19/PCL3 capazes de aumentar e ou localizar de forma errada a atividade de EZH2 (ver referências em Sneeringer et ai. Proc Natl Acad Sei USA 107 (49) :20980-5, 2010) .
Por exemplo, a utilização de compostos num método de tratamento compreende o passo de administração, a um indivíduo que tem um cancro que sobreexpressa EZH2, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos das Fórmulas aqui descritas, em que o(s) composto(s) inibe(m) a atividade histona-metiltransferase de EZH2, tratando, desse modo, o cancro.
Por exemplo, a utilização de compostos num método de tratamento compreende o passo de administração, a um indivíduo que tem um cancro com uma mutação de perda de função na H3-K27-desmetilase UTX, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos das Fórmulas aqui descritas, em que o(s) composto(s) inibe(m) a atividade histona-metiltransferase de EZH2, tratando, desse modo, o cancro
Por exemplo, a utilização de compostos num método de tratamento compreende o passo de administração, a um indivíduo que tem um cancro que sobreexpressa componente(s) auxiliar (es) do PRC2, tais como PHF19/PCL3, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos das Fórmulas aqui descritas, em que o(s) composto(s) inibe(m) a atividade histona-metiltransferase de EZH2, tratando, desse modo, o cancro
Esta divulgação refere-se a um método de modulação da atividade da EZH2 de tipo selvagem, a subunidade catalítica do complexo de PRC2 que catalisa a mono- até à tri-metilação da lisina 27 na histona H3 (H3-K27) . Por exemplo, a presente invenção refere-se a um método de inibição da atividade de EZH2 numa célula. Este método pode ser realizado quer in vitro quer in vivo.
Esta divulgação refere-se a um método de inibição num indivíduo da conversão de H3-K27 em H3-K27 trimetilada. 0 método compreende a administração, a um indivíduo, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais dos compostos das Fórmulas aqui descritas para inibir a atividade histona-metiltransferase de EZH2, inibindo, desse modo, a conversão de H3-K27 em H3-K27 trimetilada no indivíduo.
Por exemplo, o método compreende o passo de administração, a um indivíduo que tem um cancro que expressa um mutante Y641 de EZH2, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos das Fórmulas aqui descritas, em que o(s) composto (s) inibe (m) a atividade histona-metiltransferase de EZH2, tratando, desse modo, o cancro.
Por exemplo, o cancro é selecionado do grupo que consiste em linfoma folicular e linfoma de células B grandes difusas (DLBCL) de subtipo semelhante a células B de centro germinativo (GCB). Por exemplo, o cancro é linfoma, leucemia ou melanoma. Preferencialmente, o linfoma é linfoma não Hodgkin, linfoma folicular ou linfoma de células B grandes difusas. Alternativamente, a leucemia é leucemia mielógena crónica (CML), leucemia mieloide aguda, leucemia linfocitica aguda ou leucemia de linhagem mista. A condição pré-cancerosa é sindrome mielodisplásica (MDS, antigamente conhecida como pré-leucemia).
Por exemplo, o cancro é um cancro hematológico.
Por exemplo, o método compreende o passo de administração, a um indivíduo que tem um cancro que expressa um mutante Y641 de EZH2, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais compostos das Fórmulas aqui descritas, em que o(s) composto(s) inibe(m) seletivamente a atividade histona-metiltransferase do mutante Y641 de EZH2, tratando, desse modo, o cancro.
Por exemplo, o método compreende ainda os passos de realização de um ensaio para detetar um mutante Y641 de EZH2 numa amostra compreendendo células cancerosas de um indivíduo que tem um cancro.
Esta divulgação refere-se a um método de modulação da atividade da histona-metiltransferase EZH2 de tipo selvagem e mutante, a subunidade catalítica do complexo de PRC2 que catalisa a mono- até à tri-metilação da lisina 27 na histona H3 (H3-K27). Por exemplo, a presente invenção refere-se a um método de inibição da atividade de certas formas mutantes de EZH2 numa célula. As formas mutantes de EZH2 incluem uma substituição da tirosina 641 por outro resíduo de aminoácido (Y641, também Tyr641) da EZH2 de tipo selvagem. 0 método inclui pôr em contacto a célula com uma quantidade eficaz de um ou mais dos compostos de qualquer Fórmula aqui descrita. Este método pode ser realizado quer in vitro quer in vivo.
Esta divulgação refere-se a um método de inibição, num indivíduo, da conversão de H3-K27 em H3-K27 trimetilada. 0 método compreende a administração, a um indivíduo que expressa um mutante Y641 de EZH2, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais dos compostos de qualquer Fórmula aqui descrita para inibir a atividade histona-metiltransferase de EZH2, inibindo, desse modo, a conversão de H3-K27 em H3-K27 trimetilada no indivíduo. Por exemplo, a atividade histona-metiltransferase inibida é aquela do mutante Y641 de EZH2. Por exemplo, o composto desta invenção inibe seletivamente a atividade histona-metiltransferase do mutante Y641 de EZH2. Por exemplo, o mutante Y641 de EZH2 é selecionado do grupo que consiste em Y641C, Y641F, Y641H, Y641N e Y641S. 0 método de inibição, num indivíduo, da conversão de H3-K27 em H3-K27 trimetilada pode compreender também a realização de um ensaio para detetar um mutante Y641 de EZH2 numa amostra de um indivíduo, antes de administrar ao indivíduo que expressa um mutante Y641 de EZH2, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais dos compostos de qualquer Fórmula aqui descrita. Por exemplo, a realização do ensaio para detetar o mutante de Y641 de EZH2 inclui a ressequenciação de todo o genoma ou a ressequenciação da região alvo que deteta um ácido nucleico que codifica o mutante Y641 de EZH2. Por exemplo, a realização do ensaio para detetar o mutante Y641 de EZH2 inclui pôr em contacto a amostra com um anticorpo que se liga especificamente a um polipéptido ou seu fragmento característico do mutante Y641 de EZH2. Por exemplo, a realização do ensaio para detetar o mutante Y641 de EZH2 inclui pôr em contacto a amostra sob condições extremamente restringentes com uma sonda de ácido nucleico que hibridiza com um ácido nucleico que codifica um polipéptido ou fragmento do mesmo característico do mutante Y641 de EZH2.
Além disso, a divulgação refere-se também a um método de identificação de um inibidor de um mutante Y641 de EZH2. 0 método compreende os passos de combinar um mutante Y641 de EZH2 isolado com um substrato de histona, um doador de grupos metilo e um composto de ensaio, em que o substrato de histona compreende uma forma de H3-K27 selecionado do grupo que consiste em H3-K27 não metilada, H3-K27 monometilada, H3-K27 dimetilada, e qualquer combinação das mesmas; e a realização de um ensaio para detetar a metilação de H3-K27 (por exemplo, formação de H3-K27 trimetilada) no substrato de histona, identificando, desse modo, o composto de ensaio como um inibidor do mutante Y641 de EZH2 quando a metilação de H3-K27 (por exemplo, formação de H3-K27 trimetilada) na presença do composto de ensaio é menor do que metilação de H3-K27 (por exemplo, formação de H3-K27 trimetilada) na ausência do composto de ensaio. A realização do ensaio para detetar a metilação de H3-K27 no substrato de histona compreende medir a incorporação de grupos metilo marcados.
Os grupos metilo marcados podem ser grupos metilo marcados isotopicamente. A realização do ensaio para detetar a metilação de H3-K27 no substrato de histona pode compreender pôr em contacto o substrato de histona com um anticorpo que se liga especificamente à H3-K27 trimetilada.
Encontra-se também no âmbito da divulgação, um método de identificação de um inibidor seletivo de um mutante Y641 de EZH2. 0 método compreende os passos de combinar um mutante Y641 de EZH2 isolado com um substrato de histona, um doador de grupos metilo e um composto de ensaio, em que o substrato de histona compreende uma forma de H3-K27 selecionada do grupo que consiste em H3-K27 monometilada, H3-K27 dimetilada e uma combinação de H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada, formando, desse modo, uma mistura de ensaio; combinar uma EZH2 de tipo selvagem isolada com um substrato de histona, um doador de grupos metilo e um composto de ensaio, em que o substrato de histona compreende uma forma de H3-K27 selecionada do grupo que consiste em H3-K27 monometilada, H3-K27 dimetilada e uma combinação de H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada, formando, desse modo, uma mistura de controlo; realizar um ensaio para detetar a trimetilação do substrato de histona em cada uma da mistura de ensaio e da mistura de controlo; calcular a razão de (a) trimetilação com o mutante Y641 de EZH2 e o composto de ensaio (M+) relativamente à (b) trimetilação com o mutante Y641 de EZH2 sem o composto de ensaio (M-); calcular a razão de (c) trimetilação com EZH2 de tipo selvagem e o composto de ensaio (WT+) relativamente à (d) trimetilação com EZH2 de tipo selvagem sem o composto de ensaio (WT-); comparar a razão (a)/ (b) com a razão (c)/(d); e identificar o composto de ensaio como um inibidor seletivo do mutante Y641 de EZH2 quando a razão (a)/(b) é inferior à razão (c)/(d). A presente divulgação proporciona ainda um método de identificação de um indivíduo como um candidato para tratamento com um ou mais compostos da invenção. 0 método compreende os passos de realizar um ensaio para detetar um mutante Y641 de EZH2 numa amostra de um indivíduo; e identificar um indivíduo que expressa um mutante Y641 de EZH2 como um candidato para tratamento com um ou mais compostos da invenção, em que o(s) composto(s) inibe(m) a atividade histona-metiltransferase de EZH2.
Ainda outro aspeto da divulgação é um método de inibição da conversão de H3-K27 em H3-K27 trimetilada. 0 método compreende o passo de pôr em contacto um mutante Y641 de EZH2 com um substrato de histona compreendendo H3-K27 e uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção, em que o composto inibe a atividade histona-metiltransferase de EZH2, inibindo, desse modo, a conversão de H3-K27 em H3-K27 trimetilada.
Além disso, os compostos ou métodos aqui descritos pode ser utilizado para investigação (por exemplo, estudo de enzimas epigenéticas) e outros fins não terapêuticos.
Salvo definido em contrário, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados têm o mesmo significado que o comummente entendido por um especialista com conhecimentos médios na matéria à qual pertence esta invenção. Na descrição, as formas singulares incluem também o plural a menos que o contexto determine claramente o contrário. Embora possam ser utilizados métodos e materiais semelhantes ou equivalentes àqueles aqui descritos na prática ou avaliação da presente invenção, os métodos e materiais adequados são descritos abaixo. Não se reconhece que as referências aqui citadas sejam técnica anterior à invenção reivindicada. No caso de conflito, a presente descrição, incluindo as definições, controlarão. Além disso, os materiais, métodos e exemplos são apenas ilustrativos e não pretendem ser limitativos.
Outras caracteristicas e vantagens da invenção serão evidentes a partir da seguinte descrição detalhada e reivindicações.
BREVE DESCRIÇÕES DAS FIGURAS A Figura 1(A) é um gráfico idealizado da contagem de células (isto é, número de células) como uma função do tempo que mostra a proliferação exponencial durante a fase logarítmica do crescimento de células. A Figura 1 (B) é um gráfico idealizado do ln(contagem de células) como uma função do tempo para os dados do painel (A) · A Figura 2 é um gráfico que mostra as curvas de crescimento celular bifásicas na presença de um composto antiprolif erativo para o qual há um atraso antes de se sentir o impacto do composto sobre o crescimento celular. 0 composto começa a afetar o crescimento celular no ponto de tempo marcado "inicio do impacto." Os circulos sólidos representam dados idealizados para a amostra de controlo de veiculo (ou solvente) que não é tratada com composto. Os outros simbolos representam curvas de crescimento bifásicas para células tratadas com diferentes concentrações de composto (isto é, fármaco). A Figura 3 é uma nova representação gráfica de kp como uma função da concentração de composto para (A) um citostático e (B) um composto citotóxico, que ilustra a determinação gráfica da LCC para um agente citotóxico. Assinale-se que para um composto citostático (painel A) , o valor de kp nunca pode cair abaixo de zero. A Figura 4 é um diagrama que mostra o crescimento de tumores em ratos portadores de xenoenxerto de WSU-DLCL2 tratados com o Composto 222 ao longo de 27 dias. A Figura 5 é um diagrama que mostra a metilação de H3K27me3 global em tumores WSU-DLCL2 de ratos tratados com o Composto 222 ou veiculo durante 27 dias.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A presente invenção proporciona novos compostos de benzeno substituído, métodos de sintese para a preparação dos compostos, composições farmacêuticas contendo-os e várias utilizações dos compostos. 1. Compostos de Benzeno Substituído A presente divulgação proporciona os compostos de Fórmula (I) :
Nesta fórmula:
Xi é Ν ou CRu; X2 é N ou CRi3; X3 é N ou C, e quando X3 é N, R6 está ausente; Z é NR7R8, OR7, S(0)aR7 ou CR7R8R14, em que a é 0, 1 ou 2 ; cada um de Ri, R5, R9 e Rio é, independentemente, H ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, COOH, C(O)O-alquilo C1-C6, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros; cada um de R2, R3 e R4 é, independentemente, -Q1-T1, em que Qi é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo C1-C6, e Ti é H, halo, hidroxilo, COOH, ciano, azido ou RSi, em que RSi é alquilo C1-C3, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, alcoxilo Ci-C6, C (O) O-alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, amino, mono-alquil C1-C6-amino, di-alquil Ci-Cg-amino, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e Rsi está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, oxo, COOH, C(O)O-alquilo C1-C6, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-Cg-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo Cg-Cio, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros; R6 é H, halo, ciano, azido, ORa, -NRaRb, -C(0)Ra, -C(0)0Ra, -C(0)NRaRb, -NRbC (O) Ra, -S(0)bRa, -S(0)bNRaRb ou Rs2, em que Rs2 é alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 12 membros; b é 0, 1 ou 2, cada um de Ra e Rb é, independentemente, H ou Rs3, e Rs3 é alquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros; ou Ra e Rb, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional; e cada um de Rs2, Rs3 e o anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros formado por Ra e Rb, está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2_T2, em que Q2 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 cada opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo Ci-C6, e T2 é H, halo, ciano, -0RC, -NRcRd, -C(0)Rc, -C(0)0Rc, -C(0)NRcRd, -NRdC(0)Rc, -NRdC(0)0Rc, -S (0) 2Rc, -S(0)2NRcRd ou RS4, em que cada um de Rc e Rd é, independentemente, H ou RSs, cada um de RS4 e RSs é, independentemente, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6_Cio, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, ou Rc e Rd, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional, e cada um de Rd4, Rss e o anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros formado por Rc e Rd, está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3, em que Q3 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 cada opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo C1-C6, e T3 é selecionado do grupo que consiste em halo, ciano, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, 0Re, C00Re, -S(0)2Re, -NReRf, e -C(0)NReRf, em que cada um de Re e Rf é independentemente H ou alquilo Ci-Cg, ou -Q3-T3 é oxo; ou -Q2-T2 é oxo; R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação, unidade de ligação alquilo C1-C4 ou unidade de ligação alcenilo C2-C4, cada unidade de ligação opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo C1-C6, e T4 é H, halo, ciano, NRgRh, -0Rg, C (0) Rg, -C(0)0Rg, -C(0)NRgRh, -C(0)NRg0Rh, -NRgC(0)Rh, — S (0) 2Rg ou Rs6, em que cada um de Rg e Rh é, independentemente, H ou RS7, cada um de RS6 e Rs7 é, independentemente, alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e cada um de RS6 e Rs7 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q5_T5, em que Qs é uma ligação, C (0) , C(0)NRk, NRkC (0) , S (0) 2, ou unidade de ligação alquilo C1-C3, em que Rk é H ou alquilo Ci-C6, e T5 é H, halo, alquilo Ci-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil C1-C6-amino, di-alquil Ci-Cg-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo Cg-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, ou S(0)qRq em que qéO, lou2eRqé alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e T5 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, alquilo C1-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros exceto quando T5 é H, halo, hidroxilo ou ciano; ou -Q5-T5 é oxo; cada um de Rs, Rn, R12 e R13 é, independentemente, H, halo, hidroxilo, COOH, ciano, RSs, 0RSs ou COORss, em que RSs é alquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, ou di-alquil Ci-Cg-amino e Rss está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, COOH, C(0)0-alquilo C1-C6, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, e di-alquil Ci-C6-amino; ou R7 e R8, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 a 2 heteroátomos adicionais, ou R7 e Rs, em conjunto com o átomo de C ao qual estão ligados, formam cicloalquilo C3-C8 ou um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 1 a 3 heteroátomos, e cada um dos anéis heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou cicloalquilo C3-C8 formados por R7 e Rs estão opcionalmente substituídos com um ou mais -ζρ-Τβ, em que Q6 é uma ligação, C (0) , C(0)NRm, NRmC (0) , S(0)2 ou unidade de ligação alquilo C1-C3, em que Rm é H ou alquilo C1-C6, e T6 é H, halo, alquilo C1-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, ou S(0)pRp em que p é 0, 1 ou 2 e Rp é alquilo C3- C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6_Cio, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e T6 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, alquilo Cq-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo Cq-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros exceto quando Τβ é H, halo, hidroxilo ou ciano; ou -Q6-T6 é oxo; e R14 está ausente, ou é H ou alquilo Cq-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, COOH, C(0)0-alquilo C1-C6, ciano, alcoxilo Cq-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros; na condição de que o composto não seja N-(5-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)furan-2-carboxamida, N,N'-(5-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-1,3-fenileno)diacetamida, N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-pivalamidobenzamida, 3-(3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]dioxepina-7-sulfonamido)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida, N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3,5-dimetoxibenzamida, N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 3,4,5-trimetoxibenzamida, 3- alil-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4,5-dimetoxibenzamida, 4- (2-amino-2-oxoetoxi)-3-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-metoxibenzamida, 3-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-hidroxi-5-metoxibenzamida, ou 3-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-metoxi-4-propoxibenzamida.
Por exemplo, Xi é CRn e X2 é CRi3.
Por exemplo, Xi é CRn e X2 é N.
Por exemplo, Xi é N e X2 é CR13.
Por exemplo, Xi é N e X2 é N.
Por exemplo, X3 é C.
Por exemplo, X3 é N e R6 está ausente.
Por exemplo, Z é NR7R8.
Por exemplo, Z é CR7R8R14.
Por exemplo, Z é OR7.
Por exemplo, Z é S(0)aR7, em que a é 0, 1 ou 2.
Por exemplo, Z é SR7.
Por exemplo, R6 é H.
Por exemplo, R6 é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo, e iodo).
Por exemplo, Rg é alquilo C1-C3 opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, Rg é CF3.
Por exemplo, Rg é alcenilo C2~Cg, alcinilo C2~Cg ou cicloalquilo C3-Cg cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, Rg é etenilo.
Por exemplo, Rg é etinilo.
Por exemplo, Rg é etinilo substituído com um ou mais -Q2-T2, em que Q2 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo Ci~C3 e T2 é alquilo CR-Cg, cicloalquilo C3-C6, ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
Por exemplo, R6 é azido.
Por exemplo, R6 é ciano.
Por exemplo, R6 é C(0)H.
Por exemplo, R6 é 0Ra ou -C(0)Ra.
Por exemplo, Ra é alquilo Ci-C6 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes), o qual está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, R6 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, R6 é piperidinilo, 2,2,6,6-tetrametil-piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, 2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, morfolinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo ou pirrolidinilo, cada um dos quais está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, R6 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2, e -Q2-T2 é oxo ou Q2 é uma ligação e T2 é -0RC, -NRcRd, -C(0)Rc, -C(0)0Rc, -S(0)2Rc, alquilo Ci-C6, ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros, cada um dos quais está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3 quando Rc ou Rd não é H.
Por exemplo, R6 é -NRaRb, -C(0)Ra, -C(0)0Ra, -C(0)NRaRb, -NRbC (0) Ra, -SRa, -S (0) 2Ra ou -S(0)2NRaRb.
Por exemplo, cada um de Ra e Rb é, independentemente, H, alquilo Ci-C6 ou cicloalquilo C3-C8 opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, um de Ra e Rb é H.
Por exemplo, Ra e Rb, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 7 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomos adicionais ao átomo de N (por exemplo, azetidinilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) e o anel está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, ~Q2~^2 não é H.
Por exemplo, -Q2-T2 é oxo.
Por exemplo, Q2 é uma ligação.
Por exemplo, Q2 é uma unidade de ligação alquilo C1-C3 não substituída.
Por exemplo, T2 é alquilo C1-C6 ou arilo C6-C10, cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
Por exemplo, T2 é um alquilo C1-C6 de cadeia linear ou C3-C6 ramificado não substituído ou substituído, incluindo, mas não se limitando a metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, s-butilo, t-butilo, n-pentilo, s-pentilo e n-hexilo.
Por exemplo, T2 é fenilo.
Por exemplo, T2 é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo).
Por exemplo, T2 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
Por exemplo, T2 é -0RC, -NRcRd, -C(0)Rc, -C(0)0Rc ou -S(0)2Rc.
Por exemplo, Rc é alquilo C1-C6 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes), o qual está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
Por exemplo, cada um de Rc e Rd é, independentemente, H ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais -Q3- T3.
Por exemplo, Rc é H.
Por exemplo, Rd é H.
Por exemplo, Rc e Rd, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 7 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomos adicionais ao átomo de N (por exemplo, azetidinilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) e o anel está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
Por exemplo, Q2 é uma ligação e T2 é -0RC, -NRcRd, -C(0)Rc, -C(0)0Rc, -S(0)2Rc, alquilo Ci-C6 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros, cada um dos quais está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3 quando Rc ou Rd não é H.
Por exemplo,-Q3-T3 é oxo.
Por exemplo, T2 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros ou cicloalquilo C3-C8, e um ou mais -Q3-T3 são oxo.
Por exemplo, Q3 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 não substituída ou substituída.
Por exemplo, T3 é H, halo, heterocicloalquilo de 4 a 7 membros, alquilo C1-C3, 0Re, COORe, -S(0)2Re, -NReRf ou -C (0) NReRf.
Por exemplo, um de Rd e Re é H.
Por exemplo, Q3 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 e T3 é selecionado do grupo que consiste em alquilo Ci_C3, halo, 0Re, _S(0)2Re, _NReRf e _C(0)NReRf.
Por exemplo, Q3 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 e T3 é selecionado do grupo que consiste em alquilo C1-C3, 0Re, -S(0)2Re ou -NReRf.
Por exemplo, Re é H.
Por exemplo, Rf é H.
Por exemplo, R7 não é H.
Por exemplo, R7 é -C(0)Rg.
Por exemplo, R7 é -C(0)Rg, em que Rg é cicloalquilo C3-C8, ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros, cicloalquilo C3-C8.
Por exemplo, R7 é arilo C6-C10 substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é fenilo opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é cicloalquilo C3-C8 opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é heterocicloalquilo de 8 a 14 membros tal como 1,4-dioxaespiro[4.5]decanilo (por exemplo, 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ilo), l,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decanilo (por exemplo, l,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decan-8-ilo), 1-oxaespiro[4.5]decanilo (por exemplo, 1-oxaespiro[4.5]decan-8-ilo ou 1- oxaespiro[4.5]decan-2-ona-8-ilo), l-azaespiro[4.5]decanilo (por exemplo, 1-azaespiro[4.5]decan-8-ilo ou 1-azaespiro[4.5]decan-2-ona-8-ilo), 3'H-espiro[ciclo-hexano- 1,1 '-isobenzofuran]-ilo (por exemplo, 3'H-espiro[ciclo- hexano-1,1'-isobenzofuran]-4-ilo ou 3 Ή-espiro[ciclo- hexano-1,1'-isobenzofuran]-3'-ona-4-ilo), 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4-b]piridin]-ilo (por exemplo, 7 ' H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4 —b]piridin]-4-ilo ou 7' H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4-b]piridin]-7'-ona-4-ilo), ou 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4-c]piridin]-ilo (por exemplo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4- c]piridin]-4-ilo ou 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4-c]piridin]-3'-ona-4-ilo), cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é heterocicloalquilo de 5 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é isopropilo.
Por exemplo, R7 é pirrolidinilo, piperidinilo, tetra- hidropirano, ciclopentilo ou ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, cada opcionalmente substituído com um -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é ciclopentilo ou ciclo-hexilo, cada opcionalmente substituído com um - Q5-T5.
Por exemplo, Q5 é NHC (0) e T5 é alquilo C1-C6 ou alcoxilo Ci-C6.
Por exemplo, -Q5-T5 é oxo.
Por exemplo, T4 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros ou cicloalquilo C3-C8 ou arilo C6-Ci0, e um ou mais -Q5-T5 são oxo.
Por exemplo, R7 é l-óxido-tetra-hidro-2H-tiopiranilo ou l,l-dióxido-tetra-hidro-2H-tiopiranilo.
Por exemplo, R7 é ciclo-hexanonilo, por exemplo, ciclo-hexanon-4-ilo.
Por exemplo, T5 é H, halo, alquilo Ci-C6, alcoxilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, Q5 é uma ligação e T5 é alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, Q5 é uma ligação e T5 é heteroarilo de 5 ou 6 membros, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil C1-C6-amino, em que T5 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, alcoxilo C1-C6 ou cicloalquilo C3-C8.
Por exemplo, Q5 é CO, S(0)2 ou NHC (0) ; e T5 é alquilo Ci-C6, alcoxilo Ci-Cg, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, T5 é alquilo Ci-C6 ou alcoxilo Ci-C6, cada opcionalmente substituído com halo, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-C6-amino ou cicloalquilo C3-C8.
Por exemplo, Q5 é unidade de ligação alquilo C1-C3 e T5 é H ou arilo C6-Ci0.
Por exemplo, Qs é unidade de ligação alquilo C1-C3 e T5 é cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo de 4 a 7 membros ou S ( 0 ) qRq .
Por exemplo, R6 é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo) e Z é S (0) aRv, em que a é 0, 1 ou 2, e R7 é alquilo
Ci-C6 (por exemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, butilo, ou t-butilo), cicloalquilo C3-C8 (por exemplo, ciclopentilo, ciclo-hexilo ou ciclo-heptilo) ou heterocicloalquilo de 4 a 14 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, morfolinilo, 1,4- dioxaespiro[4.5]decanilo, 1,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decanilo, 1-oxaespiro[4.5]decanilo, 1- azaespiro[4.5]decanilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1, 1'- isobenzofuran]-ilo, 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4- b] piridin]-ilo, ou 3 Ή-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4- c] piridin]-ilo, e semelhantes) e R7 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R6 é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo) e Z é OR7 em que R7 é heterocicloalquilo de 4 a 14 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3, 6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, morfolinilo, 1,4- dioxaespiro[4.5]decanilo, 1,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decanilo, 1-oxaespiro[4.5]decanilo, 1- azaespiro[4.5]decanilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'- isobenzofuran]-ilo, 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4- b] piridin]-ilo, ou 3 Ή-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4- c] piridin]-ilo, e semelhantes) e R7 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, Rn é H.
Por exemplo, cada um de R2 e R4 é, independentemente, H ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com amino, azido, halo, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino ou arilo C6-Ci0.
Por exemplo, cada um de R2 e R4 é, independentemente, alquilo C1-C3 opcionalmente substituído com alcoxilo C1-C6.
Por exemplo, cada um de R2 e R4 é metilo.
Por exemplo, Ri é H.
Por exemplo, Ri é alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com azido, halo, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-C6-amino ou arilo C6-Ci0.
Por exemplo, Ri2 é H, metilo, etilo, etenilo ou halo.
Por exemplo, R12 é metilo.
Por exemplo, R12 é etilo ou propenilo.
Por exemplo, R12 é metoxilo.
Por exemplo, R12 é etenilo.
Por exemplo, R8 é H, metilo, etilo ou etenilo.
Por exemplo, R8 é metilo.
Por exemplo, R8 é etilo.
Por exemplo, R8 é propilo.
Por exemplo, R8 é etenilo ou propenilo.
Por exemplo, R8 é alquilo C1-C6 substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo (por exemplo, F, Cl ou Br), hidroxilo ou alcoxilo C1-C6.
Por exemplo, R8 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros opcionalmente substituído (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H- tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes).
Por exemplo, R8 é piperidinilo.
Por exemplo, R8 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros opcionalmente substituído e R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C4, e T4 é H, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, Z é NR7R8 ou CR7R8R14 em que R7 e Rs, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 11 membros possuindo 1 a 3 heteroátomos (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H- piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo, morfolinilo, 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decanilo, e semelhantes) ou cicloalquilo C3-C8, cada opcionalmente substituído com um ou mais -Οε-Τβ.
Por exemplo, o anel formado por R7 e Rs é selecionado do grupo que consiste em azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, morfolinilo, piperazinilo, l,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decanilo e ciclo-hexenilo, cada opcionalmente substituído com um -Q6-T6.
Por exemplo, Z é 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decan-8-ilo, pirrolidina-2,5-diona-l-ilo ou piperidina-2,6-diona-l-ilo.
Por exemplo, um ou mais -ζρ-Τβ são oxo.
Por exemplo, T6 é H, halo, alquilo Ci-C6, alcoxilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, CP é uma ligação e T6 é alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, Gb é CO, S (0) 2 ou NHC (0) ; e T6 é alquilo C1-C6, alcoxilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, T6 é alquilo C1-C6 ou alcoxilo C1-C6, cada opcionalmente substituído com halo, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino ou cicloalquilo C3-C8.
Por exemplo, Gb é unidade de ligação alquilo Ci-C3, e T6 é H ou arilo C6-C10.
Por exemplo, Q6 é unidade de ligação alquilo Ci-C3, e T6 é cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo de 4 a 7 membros ou S(0)pRp.
Por exemplo, cada um de Rp e Rq é, independentemente, alquilo CR-Cb.
Por exemplo, R6 é -S(0)bRa ou azido, em que b é 0, 1 ou 2, e Ra é alquilo Ci-C6 ou cicloalquilo C3-C8; e Z é NR7R8, em que R7 é cicloalquilo C3-C8 (por exemplo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, ou ciclo-heptilo) ou heterocicloalquilo de 4 a 14 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, morfolinilo, 1,4- dioxaespiro[4.5]decanilo, 1,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decanilo, 1-oxaespiro[4.5]decanilo, 1- azaespiro[4.5]decanilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'- isobenzofuran]-ilo, 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4- b] piridin]-ilo, ou 3 Ή-espiro[ciclo-hexano-1, 1'-furo[3,4- c] piridin]-ilo, e semelhantes), cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5; e R8 é H ou alquilo C1-C6 (por exemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, butilo, ou t-butilo).
Por exemplo, R6 é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo) , e Z é NR7Rg ou CR7R8Ri4 em que R7 e R8, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 11 membros possuindo 1 a 3 heteroátomos (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H- piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, morfolinilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo, 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decanilo, l,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decan-8-ilo, pirrolidina-2,5-diona-l-ilo, piperidina-2,6-diona-l-ilo, e semelhantes) ou cicloalquilo C3-C8, cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q6-T6.
Por exemplo, R13 é H ou metilo.
Por exemplo, R13 é H.
Por exemplo, R3 é H.
Por exemplo, cada um de R5, R9 e Rio é H.
Noutro aspeto, a presente divulgação refere-se a um composto de benzeno substituído de Fórmula (I) acima ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que
Xi é N ou CRu; X2 é N ou CRi3; X3 é N ou C, e quando X3 é N, R6 está ausente; Z é NR7R8, OR7, S(0)aR7 ou CR7R8R14, em que a é 0, 1 ou 2 ; cada um de R3, R5, R9 e Ri0 é, independentemente, H ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, COOH, C(O)O-alquilo C1-C6, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-Cg-amino, cicloalquilo C3-Cs, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros; cada um de R2, R3 e R4 é, independentemente, -Q1-T1, em que Qi é uma ligação ou unidade de ligação alquilo Ci~C3 opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo C1-C6, e T2 é H, halo, hidroxilo, COOH, ciano, azido ou RSi, em que RSi é alquilo Ci-C3, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, alcoxilo C1-C6, C (O) O-alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e RSi está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, oxo, COOH, C(O)O-alquilo C1-C6, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-Cs, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros; R6 é H, halo, ciano, azido, ORa, -NRaRb, -C(0)Ra, -C(0)0Ra,
-C(0)NRaRb, -NRbC (O) Ra, -S(0)bRa, -S(0)bNRaRb ou Rs2, em que Rs2 é alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-Cs ou heterocicloalquilo de 4 a 12 membros; b é 0, 1 ou 2, cada um de Ra e Rb é, independentemente, H ou RS3, e RS3 é alquilo Ci-Cô, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros; ou Ra e Rb, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional; e cada um de RS2, Rs3 e o anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros formado por Ra e Rb, está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2_T2, em que Q2 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 cada opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo Ci-C6, e T2 é H, halo, ciano, -0RC, -NRcRd, -C(0)Rc, -C(0)0Rc, -C(0)NRcRd, -NRdC(0)Rc, -NRdC(0)0Rc, -S(0)2Rc, _S(0)2NRcRd ou Rs4, em que cada um de Rc e Rd é, independentemente, H ou RSs, cada um de RS4 e Rss é, independentemente, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6_Cio, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, ou Rc e Rd, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional, e cada um de Rs4, Rss e o anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros formado por Rc e Rd, está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3, em que Q3 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 cada opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo C1-C6, e T3 é selecionado do grupo que consiste em halo, ciano, alquilo Ci-Cg, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, 0Re, COORe, -S (0) 2Re, -NReRf e -C(0)NReRf, em que cada um de Re e Rf é, independentemente, H ou alquilo C1-C6, ou -Q3-T3 é oxo; ou -Q2-T2 é oxo; R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação, unidade de ligação alquilo C1-C4 ou unidade de ligação alcenilo C2-C4, cada unidade de ligação opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo C1-C6, e T4 é H, halo, ciano, NRgRh, -ORg, "C(0)Rg, -C(0)0Rg, “C (0) NRgRh, “C (0) NRgORh, -NRgC(0)Rh, -S(0)2Rg ou Rs 6 , em que cada um de Rg e Rh é, independentemente, H ou RS7, cada um de RS6 e Rs7 é, independentemente, alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e cada um de RS6 e Rs7 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5, em que Q5 é uma ligação, C (0) , C(0)NRk, NRkC (0) , S (0)2, ou unidade de ligação alquilo C1-C3, em que Rk é H ou alquilo Ci-C6, e T5 é H, halo, alquilo Ci-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil C1-C6-amino, di-alquil Ci-Cg-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo Cg-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, ou S(0)qRq em que qéO, 1 ou 2, eRqé alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e T5 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, alquilo C1-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros exceto quando T5 é H, halo, hidroxilo, ou ciano; ou -Q5-T5 é oxo; na condição de que (i) R7 não seja C(0)Rg ou -S(0)2Rg quando Z é NR7R8; (ii) R7 não seja alquilo Ci-C6 quando Z é OR7, e (iii) R7 não seja H; cada um de Rs, Rn, R12 e R13 é, independentemente, H, halo, hidroxilo, COOH, ciano, RSs, 0RSs ou COORss, em que RSs é alquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, ou di-alquil Ci-Cg-amino e RSs está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, COOH, C (0)0-alquilo C1-C6, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino e di-alquil Ci-Cg-amino; ou R7 e Rs, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 a 2 heteroátomos adicionais, ou R7 e R8, em conjunto com o átomo de C ao qual estão ligados, formam cicloalquilo C3-C8 ou um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 1 a 3 heteroátomos, e cada um dos anéis heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou cicloalquilo C3-C8 formados por R7 e Rs estão opcionalmente substituídos com um ou mais -Q6-T6, em que Q6 é uma ligação, C (0) , C(0)NRm, NRmC (0) , S(0)2, ou unidade de ligação alquilo C1-C3, em que Rm é H ou alquilo C1-C6, e T6 é H, halo, alquilo C1-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, ou S(0)pRp em que p é 0, 1 ou 2 e Rp é alquilo C2- C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6_Cio, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e T6 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, alquilo C1-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros exceto quando T6 é H, halo, hidroxilo ou ciano; ou -ζρ-Τβ é oxo; e R14 está ausente, ou é H ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, COOH, C (0)0-alquilo C1-C6, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros.
Por exemplo, X2 é CRn e X2 é CR13.
Por exemplo, X2 é CRn e X2 é N.
Por exemplo, Xi é N e X2 é CR13.
Por exemplo, Xi é N e X2 é N.
Por exemplo, X3 é C.
Por exemplo, X3 é N e Rg está ausente.
Por exemplo, Z é NR7R8.
Por exemplo, Z é CR7R8R14.
Por exemplo, Z é OR7.
Por exemplo, Z é S(0)aR7, em que a é 0, 1 ou 2.
Por exemplo, Z é SR7.
Por exemplo, Rg é H.
Por exemplo, Rg é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo).
Por exemplo, Rg é alquilo C1-C3 opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, Rg é CF3.
Por exemplo, Rg é alcenilo C2~Cg, alcinilo C2~Cg ou cicloalquilo C3-Cg cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, Rg é etenilo.
Por exemplo, Rg é etinilo.
Por exemplo, R6 é etinilo substituído com um ou mais -Q2-I2, em que Q2 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 e T2 é alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C6 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
Por exemplo, R6 é azido.
Por exemplo, R6 é ciano.
Por exemplo, R6 é C(0)H.
Por exemplo, Rg é -C(0)Ra.
Por exemplo, Ra é alquilo Cg-Cg ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes), o qual está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, R6 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, R6 é piperidinilo, 2,2,6,6-tetrametil-piperidinilo, 1,2,3,β-tetra-hidropiridinilo, 2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, morfolinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, ou pirrolidinilo, cada um dos quais está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, R6 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2, e -Q2-T2 é oxo ou Q2 é uma ligação e T2 é -0RC, -NRcRd, -C(0)Rc, -C(0)0Rc, -S(0)2RC/ alquilo Ci-C6 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros, cada um dos quais está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3 quando Rc ou Rd não é H.
Por exemplo, R6 é -NRaRb, -C(0)Ra, -C(0)0Ra, -C(0)NRaRb, -NRbC (0) Ra, -SRa, -S(0)2Ra ou -S(0)2NRaRb.
Por exemplo, cada um de Ra e Rb é, independentemente, H, alquilo Ci-C6 ou cicloalquilo C3-C8 opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, um de Ra e Rb é H.
Por exemplo, Ra e Rb, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 7 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomos adicionais ao átomo de N (por exemplo, azetidinilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) e o anel está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, -Q2“T2 não é H.
Por exemplo, -Q2~T2 é oxo.
Por exemplo, Q2 é uma ligação.
Por exemplo, Q2 é uma unidade de ligação alquilo C1-C3 não substituída.
Por exemplo, T2 é alquilo C1-C6 ou arilo C6-C10, cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
Por exemplo, T2 é um alquilo C1-C6 de cadeia linear ou C3-C6 ramificado não substituído ou substituído, incluindo, mas não se limitando a metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, s-butilo, t-butilo, n-pentilo, s-pentilo e n-hexilo.
Por exemplo, T2 é fenilo.
Por exemplo, T2 é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo).
Por exemplo, T2 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
Por exemplo, T2 é -0RC, -NRcRd, -C(0)Rc, -C(0)0Rc ou -S(0)2Rc.
Por exemplo, Rc é alquilo C1-C6 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes), o qual está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
Por exemplo, cada um de Rc e Rd é, independentemente, H ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3
Por exemplo, Rc é H.
Por exemplo, Rd é H.
Por exemplo, Rc e Rd, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 7 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomos adicionais ao átomo de N (por exemplo, azetidinilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) e o anel está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
Por exemplo, Q2 é uma ligação e T2 é -0RC, -NRcRd, -C(0)Rc, -C(0)0Rc, -S (0) 2RC, alquilo Ci-C6, ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros, cada um dos quais está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3 quando Rc ou Rd não é H.
Por exemplo, -Q3-T3 é oxo.
Por exemplo, T2 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros ou cicloalquilo C3-C8, e um ou mais -Q3-T3 são oxo.
Por exemplo, Q3 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 não substituída ou substituída.
Por exemplo, T3 é H, halo, heterocicloalquilo de 4 a 7 membros, alquilo C1-C3, 0Re, C00Re, -S(0)2Re, -NReRf ou -C (0) NReRf.
Por exemplo, um de Rd e Re é H.
Por exemplo, Q3 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3, e T3 é selecionado do grupo que consiste em alquilo C1-C3, halo, 0Re, -S(0)2Re, -NReRf e -C(0)NReRf.
Por exemplo, Q3 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3, e T3 é selecionado do grupo que consiste em alquilo C1-C3, 0Re, -S(0)2Re ou -NReRf.
Por exemplo, Re é H.
Por exemplo, Rf é H.
Por exemplo, R7 não é H.
Por exemplo, R7 é -C(0)Rg.
Por exemplo, R7 é -C(0)Rg, em que Rg é cicloalquilo C3-C8, ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros, cicloalquilo C3-C8.
Por exemplo, R7 é arilo C6-C10 substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é fenilo opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é alquilo CR-C6 opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é cicloalquilo C3-C8 opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é heterocicloalquilo de 8 a 14 membros tal como 1,4-dioxaespiro[4.5]decanilo (por exemplo, 1,4- dioxaespiro[4.5]decan-8-ilo), l,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decanilo (por exemplo, l,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decan-8-ilo), 1-oxaespiro[4.5]decanilo (por exemplo, 1-oxaespiro[4.5]decan-8-ilo ou 1- oxaespiro[4.5]decan-2-ona-8-ilo), l-azaespiro[4.5]decanilo (por exemplo, 1-azaespiro[4.5]decan-8-ilo ou 1-azaespiro[4.5]decan-2-ona-8-ilo), 3'H-espiro[ciclo-hexano- 1,1 '-isobenzofuran]-ilo (por exemplo, 3'H-espiro[ciclo- hexano-1,1'-isobenzofuran]-4-ilo ou 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-isobenzofuran]-3'-ona-4-ilo), 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4-b]piridin]-ilo (por exemplo, 7 ' H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4-b]piridin]-4-ilo ou 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4-b]piridin]-7'-ona-4-ilo), ou 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4-c]piridin]-ilo (por exemplo, 3 Ή-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo [3,4- c]piridin]-4-ilo ou 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4-c]piridin]-3'-ona-4-ilo), cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é heterocicloalquilo de 5 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é isopropilo.
Por exemplo, R7 é pirrolidinilo, piperidinilo, tetra-hidropirano, ciclopentilo, ou ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, cada opcionalmente substituído com um -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é ciclopentilo ou ciclo-hexilo, cada opcionalmente substituído com um-Q5-T5.
Por exemplo, Q5 é NHC (0) , e T5 é alquilo C1-C6 ou alcoxilo Ci-C6.
Por exemplo, -Q5-T5 é oxo.
Por exemplo, T4 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros ou cicloalquilo C3-C8 ou arilo C6-C10, e um ou mais -Q5-T5 são oxo.
Por exemplo, R7 é l-óxido-tetra-hidro-2H-tiopiranilo ou l,l-dióxido-tetra-hidro-2H-tiopiranilo.
Por exemplo, R7 é ciclo-hexanonilo, por exemplo, ciclo-hexanon-4-ilo.
Por exemplo, T5 é H, halo, alquilo Ci-C6, alcoxilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, Q5 é uma ligação, e T5 é alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, Q5 é uma ligação, e T5 é heteroarilo de 5 ou 6 membros, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil C1-C6-amino, em que T5 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, alcoxilo C1-C6 ou cicloalquilo C3-C8.
Por exemplo, Q5 é CO, S(0)2 ou NHC (0) ; e T5 é alquilo Ci-C6, alcoxilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, T5 é alquilo C1-C6 ou alcoxilo C1-C6, cada opcionalmente substituído com halo, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-C6-amino ou cicloalquilo C3-C8.
Por exemplo, Q5 é unidade de ligação alquilo C1-C3, e T5 é H ou arilo C6-Ci0.
Por exemplo, Q5 é unidade de ligação alquilo C1-C3, e T5 é cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo de 4 a 7 membros ou S ( 0 ) qRq .
Por exemplo, R6 é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo) e Z é S(0)aR7, em que a é 0, 1 ou 2, e R7 é alquilo Ci-C6 (por exemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, butilo ou t-butilo), cicloalquilo C3-C8 (por exemplo, ciclopentilo, ciclo-hexilo ou ciclo-heptilo) ou heterocicloalquilo de 4 a 14 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, morfolinilo, 1,4- dioxaespiro[4.5]decanilo, 1,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decanilo, 1-oxaespiro[4.5]decanilo, 1- azaespiro[4.5]decanilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'- isobenzofuran]-ilo, 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4- b] piridin]-ilo, ou 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4- c] piridin]-ilo, e semelhantes) e R7 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, Rg é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo) e Z é OR7 em que R7 é heterocicloalquilo de 4 a 14 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3, 6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, morfolinilo, 1,4- dioxaespiro[4.5]decanilo, 1,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decanilo, 1-oxaespiro[4.5]decanilo, 1- azaespiro[4.5]decanilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'- isobenzofuran]-ilo, 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4- b] piridin]-ilo, ou 3 Ή-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4- c] piridin]-ilo, e semelhantes) e R7 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, Rn é H.
Por exemplo, cada um de R2 e R4 é, independentemente, H ou alquilo Ci-Cg opcionalmente substituído com amino, azido, halo, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-Cg-amino ou arilo Cg-Cio.
Por exemplo, cada um de R2 e R4 é, independentemente, alquilo C1-C3 opcionalmente substituído com alcoxilo Cg-Cg.
Por exemplo, cada um de R2 e R4 é metilo.
Por exemplo, Rg é H.
Por exemplo, Rg é alquilo Cg-Cg opcionalmente substituído com azido, halo, amino, mono-alquil Cg-Cg-amino, di-alquil Cg-Cg-amino ou arilo Cg-Cgo.
Por exemplo, R12 é H, metilo, etilo, etenilo ou halo.
Por exemplo, R12 é metilo.
Por exemplo, R12 é etilo ou propenilo.
Por exemplo, R12 é metoxilo.
Por exemplo, Ri2 é etenilo.
Por exemplo, R8 é H, metilo, etilo ou etenilo.
Por exemplo, R8 é metilo.
Por exemplo, R8 é etilo.
Por exemplo, R8 é propilo.
Por exemplo, R8 é etenilo ou propenilo.
Por exemplo, Rs é alquilo C1-C6 substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo (por exemplo, F, Cl ou Br) , hidroxilo ou alcoxilo C1-C6.
Por exemplo, Rs é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros opcionalmente substituído (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H- piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H- tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2, 6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes).
Por exemplo, R8 é piperidinilo.
Por exemplo, R8 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros opcionalmente substituído, e R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C4 e T4 é H, alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, Z é NR7R8 ou CR7R8R14 em que R7 e R8, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 11 membros possuindo 1 a 3 heteroátomos (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H- piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo, morfolinilo, 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decanilo, e semelhantes) ou cicloalquilo C3-C8, cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q6-T6.
Por exemplo, o anel formado por R7 e R8 é selecionado do grupo que consiste em azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, morfolinilo, piperazinilo, l,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decanilo e ciclo-hexenilo, cada opcionalmente substituído com um -Q6-T6.
Por exemplo, Z é 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decan-8-ilo, pirrolidina-2,5-diona-l-ilo ou piperidina-2,6-diona-l-ilo.
Por exemplo, um ou mais -ζρ-Τβ são oxo.
Por exemplo, T6 é H, halo, alquilo C1-C6, alcoxilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, Q6 é uma ligação e T6 é alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, Qe é CO, S(0)2, ou NHC (0) ; e T6 é alquilo C7-C6, alcoxilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, T6 é alquilo C1-C6 ou alcoxilo C1-C6, cada opcionalmente substituído com halo, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino ou cicloalquilo C3-C8.
Por exemplo, Q6 é unidade de ligação alquilo C1-C3 e T6 é H ou arilo C6-C10.
Por exemplo, Q6 é unidade de ligação alquilo C1-C3 e T6 é cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo de 4 a 7 membros ou S(0)pRp.
Por exemplo, cada um de Rp e Rq é, independentemente, alquilo C1-C6.
Por exemplo, R6 é -S(0)bRa ou azido, em que b é 0, 1 ou 2 e Ra é alquilo Ci-C6 ou cicloalquilo C3-C8; e Z é NR7R8, em que R7 é cicloalquilo C3-C8 (por exemplo, ciclopentilo, ciclo-hexilo ou ciclo-heptilo) ou heterocicloalquilo de 4 a 14 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra- hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H- piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, morfolinilo, 1,4- dioxaespiro[4.5]decanilo, 1,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decanilo, 1-oxaespiro[4.5]decanilo, 1- azaespiro[4.5]decanilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'- isobenzofuran]-ilo, 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4- b] piridin]-ilo, ou 3 Ή-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4- c] piridin]-ilo, e semelhantes), cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5; e Rs é H ou alquilo C1-C6 (por exemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, butilo ou t-butilo).
Por exemplo, R6 é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo) e Z é NR7R8 ou CR7R8R14 em que R7 e Rg, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 11 membros possuindo 1 a 3 heteroátomos (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H- piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, morfolinilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo, 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decanilo, l,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decan-8-ilo, pirrolidina-2,5-diona-l-ilo, piperidina-2,6-diona-l-ilo, e semelhantes) ou cicloalquilo C3-C8, cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q6-T6.
Por exemplo, R13 é H ou metilo.
Por exemplo, R13 é H.
Por exemplo, R3 é H.
Por exemplo, cada um de R5, R9 e Rio é H. A presente divulgação proporciona os compostos de Fórmula (Ia)
ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
Xi é N ou CRu; X2 é N ou CR13; X3 é N ou C, e quando X3 é N, R6 está ausente; Z é NR7R8, OR7, S(0)aR7 ou CR7R8Ri4, em que a é 0, 1 ou 2 ; cada um de Ri e R5 é, independentemente, H ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, COOH, C(O)O-alquilo Ci-C6, ciano, alcoxilo Ci-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros; cada um de R2, R3 e R4 é, independentemente, -Q1-T1, em que Qi é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo C1-C6, e Ti é H, halo, hidroxilo, COOH, ciano, azido ou RSi, em que RSi é alquilo C1-C3, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, alcoxilo C1-C6, C (0) O-alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, amino, mono-alquil C1-C6-amino, di-alquil Ci-Cg-amino, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros e RSi está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, oxo, COOH, C(0)O-alquilo Ci-C6, ciano, alcoxilo Ci-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros; R6 é H, halo, ciano, azido, 0Ra, -NRaRb, -C(0)Ra, -C(0)0Ra,
-C(0)NRaRb, -NRbC (0) Ra, -S(0)bRa, -S(0)bNRaRb ou Rs2, em que Rs2 é alquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, b é 0, 1 ou 2, cada um de Ra e Rb é, independentemente, H ou RS3, e RS3 é alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros; ou Ra e Rb, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional; e cada um de Rs2, Rs3 e o anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros formado por Ra e Rb, está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2, em que Q2 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 cada opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo Ci-C6, e T2 é H, halo, ciano, -0RC, -NRcRd, -C(0)Rc, -C(0)0Rc, -C(0)NRcRd, -NRdC(0)Rc, -NRdC(0)0Rc, -S(0)2Rc, -S(0)2NRcRd ou Rs4, em que cada um de Rc e Rd é, independentemente, H ou RSs, cada um de RS4 e RSs é, independentemente, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros ou Rc e Rd, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional, e cada um de Rs4, Rs5 e o anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros formado por Rc e Rd, está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3, em que Q3 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 cada opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo C1-C6, e T3 é selecionado do grupo que consiste em halo, ciano, alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, 0Re, COORe, — S (0) 2 Rer -NReRf e -C(0)NReRf, em que cada um de Re e Rf é independentemente H ou alquilo C1-C6, ou -Q3-T3 é oxo; ou -Q2-T2 é oxo; ou R6 é H, halo, ciano, azido, -NRaRb, -C(0)Ra, -C(0)0Ra,
-C(0)NRaRb, -NRbC (0) Ra, -S(0)bRa, -S(0)bNRaRb ou RS2, em que Rs2 é alquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, b é 0, 1 ou 2, cada um de Ra e Rb é, independentemente, H ou RS3, e RS3 é alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros; ou Ra e Rb, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional; e cada um de RS2, Rs3 e o anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros formado por Ra e Rb, está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2_T2, em que Q2 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 cada opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo Ci-C6, e T2 é H, halo, ciano, -0RC, -NRcRd, -C(0)Rc, -C(0)0Rc, -C(0)NRcRd, -NRdC(0)Rc, -NRdC(0)0Rc, -S(0)2RC/ -S(0)2NRcRd ou Rs4, em que cada um de Rc e Rd é, independentemente, H ou RSs, cada um de RS4 e RSs é, independentemente, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6_Cio, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros ou Rc e Rd, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional, e cada um de Rs4, Rs5 e o anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros formado por Rc e Rd, está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3, em que Q3 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 cada opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo C1-C6, e T3 é selecionado do grupo que consiste em halo, ciano, alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, 0Re, COORe, — S (0) 2 Rer -NReRf e -C(0)NReRf, em que cada um de Re e Rf é independentemente H ou alquilo C1-C6, ou -Q3-T3 é oxo; ou -Q2-T2 é oxo; R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação, unidade de ligação alquilo C1-C4 ou unidade de ligação alcenilo C2-C4, cada unidade de ligação opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo C1-C6, e T4 é H, halo, ciano, NRgRh, _ORg, -C(0)Rg, -C(0)0Rg, -C(0)NRgRh, -C(0)NRg0Rh, -NRgC(0)Rh, — S (0) 2Rg ou Rs6, em que cada um de Rg e Rh é, independentemente, H ou RS7, cada um de Rs6 e Rs7 é, independentemente, alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 14 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e cada um de Rs6 e Rs7 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5, em que Q5 é uma ligação, C (0) , C(0)NRk, NRkC(0), S (0) 2 ou unidade de ligação alquilo C1-C3, em que Rk é H ou alquilo Ci-C6, e T5 é H, halo, alquilo Ci-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil C1-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, ou S(0)qRq em que qéO, lou2eRqé alquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e T5 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, alquilo C1-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros exceto quando T5 é H, halo, hidroxilo ou ciano; ou -Q5-T5 é oxo; ou R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação, unidade de ligação alquilo C1-C4 ou unidade de ligação alcenilo C2-C4, cada unidade de ligação opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo Ci-C6, e T4 é H, halo, ciano, NRgRh, -0Rg, C (0) Rg, -C(0)0Rg, -C(0)NRgRh, -C(0)NRg0Rh, -NRgC(0)Rh, — S (0) 2Rg ou Rs6, em que cada um de Rg e Rh é, independentemente, H ou RS7, cada um de RS6 e Rs7 é, independentemente, alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e cada um de Rg 5 e Rg7 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5, em que Q5 é uma ligação, C (0) , C(0)NRk, NRkC (0) , S(0)2 ou unidade de ligação alquilo C1-C3, em que
Rk é H ou alquilo Ci-C6, e T5 é H, halo, alquilo Ci-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil C1-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6_ C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, ou S(0)qRq em que qéO, 1 ou 2, eRqé alquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo Cg-Cio, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e T5 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, alquilo Ci-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros exceto quando T5 é H, halo, hidroxilo ou ciano; ou -Q5-T5 é oxo; na condição de que (i) R7 não seja C(0)Rg ou -S(0)2Rg quando Z é NR7R8; (ii) R7 não seja alquilo Ci-C6 quando Z é OR7, e (iii) R7 não seja H; cada um de R8, Rn, R12 e R13 é, independentemente, H, halo, hidroxilo, COOH, ciano, Rs8, 0RS8 ou COORs8, em que Rs8 é alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3~C8, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, ou di-alquil Ci-Cg-amino e Rs8 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, COOH, C (0)O-alquilo C1-C6, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino e di-alquil Ci-C6-amino; ou R7 e R8, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 a 2 heteroátomos adicionais, ou R7 e R8, em conjunto com o átomo de C ao qual estão ligados, formam cicloalquilo C3~C8 ou um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 1 a 3 heteroátomos, e cada um dos anéis heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou cicloalquilo C3~C8 formado por R7 e R8 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q6-T6, em que QQ é uma ligação, C (0) , C(0)NRm, NRmC (0) , S (0) 2 ou unidade de ligação alquilo C1-C3, em que Rm é H ou alquilo C1-C6, e T6 é H, halo, alquilo C1-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros ou S(0)pRp em que p é 0, 1 ou 2, e Rp é alquilo Ci~
Cg, alcenilo C2-Cg, alcinilo C2-Cg, cicloalquilo C3-C8, arilo Cg-Cio, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e Tg está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, alquilo Ci-Cg, hidroxilo, ciano, alcoxilo Ci-Cg, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-Cg-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo Cg-Cio, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros exceto quando T6 é H, halo, hidroxilo ou ciano; ou -Qg-Tg é oxo; e R14 está ausente, ou é H ou alquilo Ci-Cg opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, COOH, C(0)O-alquilo Ci-C6, ciano, alcoxilo Ci-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros; na condição de que o composto não seja N-(5-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)furan-2-carboxamida, N,N'-(5-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-1,3-fenileno)diacetamida, N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-pivalamidobenzamida, 3-(3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]dioxepina-7-sulfonamido)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida, N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3,5-dimetoxibenzamida, N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 3,4,5-trimetoxibenzamida, 3- alil-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4,5-dimetoxibenzamida, 4- (2-amino-2-oxoetoxi)-3-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-metoxibenzamida, 3-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-hidroxi-5-metoxibenzamida, ou 3-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-metoxi-4-propoxibenzamida.
Por exemplo, Xi é CRu e X2 é CR13.
Por exemplo, Xi é CRu e X2 é N.
Por exemplo, Xi é N e X2 é CR13.
Por exemplo, Xi é N e X2 é N.
Por exemplo, X3 é C.
Por exemplo, X3 é N e Rg está ausente.
Por exemplo, Z é NR7R8.
Por exemplo, Z é CR7R8Ri4.
Por exemplo, Z é 0R7.
Por exemplo, Z é S(0)aR7, em que a é 0, 1 ou 2.
Por exemplo, Z é SR7.
Por exemplo, Rg é H.
Por exemplo, Rg é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo).
Por exemplo, Rg é alquilo C1-C3 opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, Rg é CF3.
Por exemplo, Rg é alcenilo C2~Cg, alcinilo C2~Cg ou cicloalquilo C3-C6 cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, Rg é etenilo.
Por exemplo, Rg é etinilo.
Por exemplo, R6 é etinilo substituído com um ou mais -Q2-I2, em que Q2 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 e T2 é alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C6 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
Por exemplo, R6 é azido.
Por exemplo, R6 é ciano.
Por exemplo, R6 é C(0)H.
Por exemplo, Rg é 0Ra ou -C(0)Ra.
Por exemplo, Ra é alquilo Cg-Cg ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes), o qual está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, R6 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, R6 é piperidinilo, 2,2,6,6-tetrametil-piperidinilo, 1,2,3,β-tetra-hidropiridinilo, 2,2,6,6-tetrametil-1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, morfolinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo ou pirrolidinilo, cada um dos quais está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, R6 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2, e -Q2-T2 é oxo, ou Q2 é uma ligação e T2 é -0RC, -NRcRd, -C(0)Rc, -C(0)0Rc, -S(0)2RC/ alquilo Ci-C6 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros, cada um dos quais está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3 quando Rc ou Rd não é H.
Por exemplo, R6 é -NRaRb, -C(0)Ra, -C(0)0Ra, -C(0)NRaRb, -NRbC (0) Ra, -SRa, -S(0)2Ra ou -S(0)2NRaRb.
Por exemplo, cada um de Ra e Rb é, independentemente, H, alquilo Ci-C6 ou cicloalquilo C3-C8 opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, um de Ra e Rb é H.
Por exemplo, Ra e Rb, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 7 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomos adicionais ao átomo de N (por exemplo, azetidinilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) e o anel está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2.
Por exemplo, -Q2“T2 não é H.
Por exemplo, -Q2~T2 é oxo.
Por exemplo, Q2 é uma ligação.
Por exemplo, Q2 é uma unidade de ligação alquilo C1-C3 não substituída.
Por exemplo, T2 é alquilo C1-C6 ou arilo C6-C10, cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
Por exemplo, T2 é um alquilo C1-C6 de cadeia linear ou C3-C6 ramificado não substituído ou substituído, incluindo, mas não se limitando a metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, s-butilo, t-butilo, n-pentilo, s-pentilo e n-hexilo.
Por exemplo, T2 é fenilo.
Por exemplo, T2 é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo).
Por exemplo, T2 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
Por exemplo, T2 é -0RC, -NRcRd, -C(0)Rc, -C(0)0Rc ou -S(0)2Rc.
Por exemplo, Rc é alquilo C1-C6 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes), o qual está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
Por exemplo, cada um de Rc e Rd é, independentemente, H ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais -Q3- T3.
Por exemplo, Rc é H.
Por exemplo, Rd é H.
Por exemplo, Rc e Rd, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 7 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomos adicionais ao átomo de N (por exemplo, azetidinilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) e o anel está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3.
Por exemplo, Q2 é uma ligação e T2 é -0RC, -NRcRd, -C(0)Rc, -C(0)0Rc, -S(0)2Rc, alquilo Ci-C6 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros, cada um dos quais está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3 quando Rc ou Rd não é H.
Por exemplo, -Q3-T3 é oxo.
Por exemplo, T2 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros ou cicloalquilo C3-C8 e um ou mais -Q3-T3 são oxo.
Por exemplo, Q3 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 não substituída ou substituída.
Por exemplo, T3 é H, halo, heterocicloalquilo de 4 a 7 membros, alquilo C1-C3, 0Re, COORe, -S(0)2Re, -NReRf ou -C (0) NReRf.
Por exemplo, um de Rd e Re é H.
Por exemplo, Q3 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 e T3 é selecionado do grupo que consiste em alquilo Ci_C3, halo, 0Re, _S(0)2Re/ _NReRf e _C(0)NReRf.
Por exemplo, Q3 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 e T3 é selecionado do grupo que consiste em alquilo C1-C3, 0Re, -S (0) 2Re ou -NReRf.
Por exemplo, Re é H.
Por exemplo, Rf é H.
Por exemplo, R7 não é H.
Por exemplo, R7 é -C(0)Rg.
Por exemplo, R7 é -C(0)Rg, em que Rg é cicloalquilo C3-C8, ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros, cicloalquilo C3-C8.
Por exemplo, R7 é arilo C6-C10 substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é fenilo opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é cicloalquilo C3-C8 opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes) opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é heterocicloalquilo de 8 a 14 membros tal como 1,4-dioxaespiro[4.5]decanilo (por exemplo, 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ilo), l,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decanilo (por exemplo, l,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decan-8-ilo), 1-oxaespiro[4.5]decanilo (por exemplo, 1-oxaespiro[4.5]decan-8-ilo ou 1- oxaespiro[4.5]decan-2-ona-8-ilo), l-azaespiro[4.5]decanilo (por exemplo, 1-azaespiro[4.5]decan-8-ilo ou 1-azaespiro[4.5]decan-2-ona-8-ilo), 3'H-espiro[ciclo-hexano- 1,1 '-isobenzofuran]-ilo (por exemplo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-isobenzofuran]-4-ilo ou 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-isobenzofuran]-3'-ona-4-ilo), 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5 '-furo [3,4 —b] piridin]-ilo (por exemplo, 7Ή-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4-b]piridin]-4-ilo ou 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4-b]piridin]-7'-ona-4-ilo), ou 3 Ή-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4-c]piridin]-ilo (por exemplo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4- c]piridin]-4-ilo ou 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4-c]piridin]-3'-ona-4-ilo), cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é heterocicloalquilo de 5 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é isopropilo.
Por exemplo, R7 é pirrolidinilo, piperidinilo, tetra- hidropirano, ciclopentilo, ou ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, cada opcionalmente substituído com um -Q5-T5.
Por exemplo, R7 é ciclopentilo ou ciclo-hexilo, cada opcionalmente substituído com um -Q5-T5.
Por exemplo, Q5 é NHC (0) e T5 é alquilo C1-C6 ou alcoxilo Ci-C6.
Por exemplo, -Q5-T5 é oxo.
Por exemplo, T4 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros ou cicloalquilo C3-C8 ou arilo C6-C10, e um ou mais -Q5-T5 são oxo.
Por exemplo, R7 é l-óxido-tetra-hidro-2H-tiopiranilo ou l,l-dióxido-tetra-hidro-2H-tiopiranilo.
Por exemplo, R7 é ciclo-hexanonilo, por exemplo, ciclo-hexanon-4-ilo.
Por exemplo, T5 é H, halo, alquilo C1-C6, alcoxilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, Q5 é uma ligação e T5 é alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, Q5 é uma ligação e T5 é heteroarilo de 5 ou 6 membros, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil C1-C6-amino, em que T5 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, alcoxilo C1-C6 ou cicloalquilo C3-C8.
Por exemplo, Qs é CO, S(O)2 ou NHC(O); e T5 é alquilo C1-C6, alcoxilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, T5 é alquilo Ci-C6 ou alcoxilo Ci-C6, cada opcionalmente substituído com halo, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-C6-amino ou cicloalquilo C3-C8.
Por exemplo, Q5 é unidade de ligação alquilo C1-C3 e T5 é H ou arilo C6-Ci0.
Por exemplo, Q5 é unidade de ligação alquilo C1-C3 e T5 é cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo de 4 a 7 membros ou 5 ( 0 ) qRq .
Por exemplo, R6 é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo) e Z é S(0)aR7, em que a é 0, 1 ou 2, e R7 é alquilo Ci-C6 (por exemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, butilo ou t-butilo), cicloalquilo C3-C8 (por exemplo, ciclopentilo, ciclo-hexilo ou ciclo-heptilo) ou heterocicloalquilo de 4 a 14 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, morfolinilo, 1,4- dioxaespiro[4.5]decanilo, 1,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decanilo, 1-oxaespiro[4.5]decanilo, 1- azaespiro[4.5]decanilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'- isobenzofuran]-ilo, 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4-b]piridin]-ilo ou 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4- c]piridin]-ilo, e semelhantes) e R7 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R6 é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo) e Z é OR7 em que R7 é heterocicloalquilo de 4 a 14 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3, 6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, morfolinilo, 1,4- dioxaespiro[4.5]decanilo, 1,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decanilo, 1-oxaespiro[4.5]decanilo, 1- azaespiro[4.5]decanilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'- isobenzofuran]-ilo, 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4- b] piridin]-ilo, ou 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4- c] piridin]-ilo, e semelhantes) e R7 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, Rn é H.
Por exemplo, cada um de R2 e R4 é, independentemente, H ou alquilo Ci-Cg opcionalmente substituído com amino, azido, halo, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-Cg-amino ou arilo C6-C10.
Por exemplo, cada um de R2 e R4 é, independentemente, alquilo C1-C3 opcionalmente substituído com alcoxilo Ci-Cg.
Por exemplo, cada um de R2 e R4 é metilo.
Por exemplo, Ri é H.
Por exemplo, Ri é alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com azido, halo, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-Cg-amino ou arilo C6-C10.
Por exemplo, R12 é H, metilo, etilo, etenilo ou halo.
Por exemplo, R12 é metilo.
Por exemplo, Ri2 é etilo ou propenilo.
Por exemplo, R12 é metoxilo.
Por exemplo, R12 é etenilo.
Por exemplo, R8 é H, metilo, etilo ou etenilo.
Por exemplo, R8 é metilo.
Por exemplo, R8 é etilo.
Por exemplo, Rs é propilo.
Por exemplo, Rs é etenilo ou propenilo.
Por exemplo, Rs é alquilo Ci-Cg substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo (por exemplo, F, Cl ou Br), hidroxilo ou alcoxilo C1-C6.
Por exemplo, Rs é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros opcionalmente substituído (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H- piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H- tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo e morfolinilo, e semelhantes).
Por exemplo, R8 é piperidinilo.
Por exemplo, R8 é heterocicloalquilo de 4 a 7 membros opcionalmente substituído e R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C4 e T4 é H, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, Z é NR7R8 ou CRvR8Ri4 em que R7 e R8, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 11 membros possuindo 1 a 3 heteroátomos (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo, morfolinilo, 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decanilo, e semelhantes) ou cicloalquilo C3-C8, cada opcionalmente substituído com um ou mais -Οε-Τβ.
Por exemplo, o anel formado por R7 e R8 é selecionado do grupo que consiste em azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, morfolinilo, piperazinilo, l,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decanilo e ciclo-hexenilo, cada opcionalmente substituído com um -Q6-T6.
Por exemplo, Z é 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decan-8-ilo, pirrolidina-2,5-diona-l-ilo ou piperidina-2,6-diona-l-ilo.
Por exemplo, um ou mais -Qg-Tg são oxo.
Por exemplo, T6 é H, halo, alquilo Ci-C6, alcoxilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, Qg é uma ligação e T6 é alquilo Ci-Cô, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, Q6 é CO, S(0)2 ou NHC (0); e T6 é alquilo Ci-C6, alcoxilo Ci — Cg, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros.
Por exemplo, T6 é alquilo Ci-C6 ou alcoxilo Ci-C6, cada opcionalmente substituído com halo, hidroxilo, ciano, alcoxilo Ci-C6, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di-alquil Ci-Cg-amino ou cicloalquilo C3-C8.
Por exemplo, Qg é unidade de ligação alquilo Ci~C3 e T6 é H ou arilo Cg-Cio.
Por exemplo, Qg é unidade de ligação alquilo C7-C3 e T6 é cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo de 4 a 7 membros ou S(0)pRp.
Por exemplo, cada um de Rp e Rq é, independentemente, alquilo Ci-C6.
Por exemplo, Rg é -S(0)bRa ou azido, em que b é 0, 1 ou 2 e Ra é alquilo Cg-Cg ou cicloalquilo C3-C8; e Z é NR7R8, em que R7 é cicloalquilo C3-C8 (por exemplo, ciclopentilo, ciclo-hexilo ou ciclo-heptilo) ou heterocicloalquilo de 4 a 14 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3, 6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, morfolinilo, 1,4-dioxaespiro[4.5]decanilo, 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decanilo, 1-oxaespiro[4.5]decanilo, 1-azaespiro[4.5]decanilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1, 1'-isobenzofuran]-ilo, 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4- b] piridin]-ilo ou 3 Ή-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4- c] piridin]-ilo, e semelhantes), cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5; e Rs é H ou alquilo C1-C6 (por exemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, butilo ou t-butilo).
Por exemplo, R6 é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo) e Z é NR7R8 ou CR7R8R14 em que R7 e Rs, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 11 membros possuindo 1 a 3 heteroátomos (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, morfolinilo, 2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo, 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decanilo, l,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decan-8-ilo, pirrolidina-2,5-diona-l-ilo, piperidina-2,6-diona-l-ilo, e semelhantes) ou cicloalquilo C3-C8, cada opcionalmente substituído com um ou mais -Οε-Τβ.
Por exemplo, R13 é H ou metilo.
Por exemplo, R13 é H.
Por exemplo, R3 é H.
Por exemplo, cada um de R5, R9 e Rio é H.
Outro subconjunto dos compostos de Fórmula (I) inclui aqueles de Fórmula (Ib), (Ic) ou (Id):
ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Z, X2, X3, Ri, R2, R3, R4, R5, Rô, Rh e R12 são como aqui definidos para a Fórmula (I).
Ainda outro subconjunto dos compostos de Fórmula (I) é aqueles de Fórmula (Ie) como descritos acima.
Além das características descritas acima dos compostos desta divulgação, onde aplicáveis, os compostos de Fórmula (Ie) podem incluir uma ou mais das seguintes características:
Por exemplo, Ri é H ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído uma ou mais vezes com um substituinte selecionado de hidroxilo, alcoxilo C1-C6 e arilo C6-C10; R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação ou uma unidade de ligação alquilo C1-C4, e T4 é alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo Cg-Cio, C (0) - alquilo CR-Cg, C (0) - cicloalquilo C3-C6, di-hidropiranilo, tetra-hidropiranilo, tetra- hidrotiopiranilo, piperidinilo, pirrolidinilo, azetidinilo e oxetanilo, cada opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados de oxo e -Q5-T5; R8 é H ou alquilo Ci-C6, haloalquilo Ci-C6, alcenilo C2-C 6 ou cicloalquilo C3-C8; e R12 é halo, alquilo C1-C6, haloalquilo Ci-C6 ou alcoxilo Ci-C6.
Por exemplo, Z é NR7R8 ou SR7; R6 é H, halo, ciano, 0Ra, -C(0)NRaRb, -S(0)2Ra ou Rs2; em que Rs2 é alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6 ou heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, e em que cada um de Ra e Rb é, independentemente, H ou alquilo Cp-Cg; ou Ra e Rb, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional; e cada um de Rs2 e o anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros formado por Ra e Rb, está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2; em que Q2 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3, e T2 é H, halo, -0RC, -NRcRd, - C(0)0alquilo Ci-C6 ou alquilo Ci-Cg, em que cada um de Rc e Rb é, independentemente, H ou alquilo Cp-Cg, ou Rc e Rd, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional e 0 ou 1 substituintes alquilo Ci-Cg; R7 é alquilo CR-Cg, cicloalquilo C3-C8, di-hidropiranilo, tetra-hidropiranilo, tetra-hidrotiopiranilo, piperidinilo, pirrolidinilo, azetidinilo e oxetanilo, cada opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados de oxo e -Q5-T5; e Ri2 é halo ou alquilo Ci-C6.
Por exemplo, R2, R4 e R12 são, cada, independentemente alquilo Ci-C6 e R5 é H.
Por exemplo, R7 é ciclo-hexilo, di-hidropiranilo, tetra-hidropiranilo, tetra-hidrotiopiranilo, piperidinilo, pirrolidinilo, azetidinilo oxetanilo, 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ilo, 1-oxaespiro[4.5]decan-8-ilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-isobenzofuran]-4-ilo, 7 ' H-espiro[ciclo-hexano-l,5'-furo[3,4-b]piridin]-4-ilo, 3Ή-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4-c]piridin]-4-ilo ou 1-azaespiro[4.5]decan-8-ilo, cada substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, Z é selecionado do grupo que consiste em piperidinilo, morfolinilo, piperazinilo, azetidinilo, pirrolidinilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-ilo, 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decan-8-ilo e ciclo-hexenilo, cada opcionalmente substituído com um -ζρ-Τβ.
Por exemplo, R6 é halo ('por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo) e Z é S(0)aR7, em que a é 0 e R7 é alquilo C1-C6 (por exemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, butilo ou t-butilo), cicloalquilo C3-C8 (por exemplo, ciclopentilo, ciclo-hexilo ou ciclo-heptilo) ou heterocicloalquilo de 4 a 14 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, morfolinilo, 1,4-dioxaespiro[4.5]decanilo, 1,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decanilo, 1-oxaespiro[4.5]decanilo, 1-azaespiro[4.5]decanilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-l,l'- isobenzofuran]-ilo, 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4- b] piridin]-ilo, ou 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4- c] piridin]-ilo, e semelhantes) e R7 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
Por exemplo, R6 é -S(0)bRa ou azido, em que b é 0, 1 ou 2 e Ra é alquilo Ci-C6 ou cicloalquilo C3-C8; e Z é NR7R8, em que R7 é cicloalquilo C3-C8 (por exemplo, ciclopentilo, ciclo-hexilo ou ciclo-heptilo) ou heterocicloalquilo de 4 a 14 membros (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3, 6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3, 6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, morfolinilo, 1,4- dioxaespiro[4.5]decanilo, 1,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decanilo, 1-oxaespiro[4.5]decanilo, 1- azaespiro[4.5]decanilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'- isobenzofuran]-ilo, 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4- b] piridin]-ilo, ou 3 Ή-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4- c] piridin]-ilo, e semelhantes), cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5; e R8 é H ou alquilo C1-C6 (por exemplo, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, butilo, ou t-butilo).
Por exemplo, R6 é halo (por exemplo, flúor, cloro, bromo e iodo) e Z é NR7R8 ou CR7R8Ri4 em que R7 e R8, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 11 membros possuindo 1 a 3 heteroátomos (por exemplo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, piperidinilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, piperazinilo, tetra-hidro-2H-piranilo, 3,6-di-hidro-2H-piranilo, tetra-hidro-2H-tiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, morfolinilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo, l,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decanilo, l,4-dioxa-8- azaespiro[4.5]decan-8-ilo, pirrolidina-2,5-diona-l-ilo, piperidina-2,6-diona-l-ilo, e semelhantes) ou cicloalquilo C3-C8, cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q6-T6.
Outro subconjunto dos compostos de Fórmula (I) inclui aqueles de Fórmula (II):
ou os sais ou ésteres farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que R6, R7, R8 e R12 são aqui definidos.
Ainda outro subconjunto dos compostos de Fórmula (I) inclui aqueles de Fórmula (IIA):
ou os sais ou ésteres farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que n é 0, 1 ou 2; U é O, S, N-Q5-T5 ou CH-Q5-T5; R12 é Cl, Br ou metilo; e R6, R7, Rs, Qs e T5 são aqui definidos.
Além das caracteristicas descritas acima dos compostos desta divulgação, onde aplicáveis, os compostos de Fórmula (II) ou (IIA) podem incluir uma ou mais das seguintes caracteristicas:
Por exemplo, Q5 é uma ligação e T5 é H, alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino ou di-alquil Ci-C6-amino, em que T5 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, alcoxilo C1-C6 ou cicloalquilo C3-C8.
Por exemplo, Q5 é CO, S(0)2 ou NHC (O) ; e T5 é alquilo Ci-C6, alcoxilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 12 membros.
Por exemplo, Q5 é unidade de ligação alquilo C1-C3 e T5 é H ou arilo C6-Ci0.
Por exemplo, Q5 é unidade de ligação alquilo C1-C3 e T5 é cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou 5 ( O ) qRq .
Por exemplo, Q5 é NHC (O) e T5 é alquilo Ci-C6 ou alcoxilo Cl“C6·
Por exemplo, um ou mais -Q5-T5 são oxo.
Por exemplo, U é CH-Q5-T5 e n é 0
Por exemplo, um ou mais -ζΑ-ΙΑ são oxo.
Por exemplo, Q6 é uma ligação ou C (0) e T6 é alquilo C1-C6 ou alcoxilo C1-C6.
Ainda outro subconjunto dos compostos de Fórmula (I) inclui aqueles de Fórmula (III) :
ou os sais ou ésteres farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que R7 é um heterocicloalquilo de 4 ou 6 membros possuindo um átomo de azoto no anel e está substituído com um ou dois grupos metilo ou um grupo i-propilo; R3 é H ou F; R4 é metilo, etilo, n-propilo, isopropilo ou CF3, e R6 é CF3, Cl ou F, na condição de que quando R4 é metilo, (1) R6 seja CF3, ou (2) R3 seja F, ou (3) R6 seja CF3 e R3 seja F, ou (4) R6 seja F ou Cl e R7 seja um heterocicloalquilo de 6 membros possuindo apenas um azoto e que está substituído com dois grupos metilo.
Além das caracteristicas descritas acima dos compostos desta divulgação, onde aplicáveis, os compostos de Fórmula (III) podem incluir uma ou mais das seguintes caracteristicas:
Por exemplo, R7 é um heterocicloalquilo de 4 ou 6 membros possuindo um e apenas um heteroátomo no anel e o heteroátomo é azoto.
Por exemplo, R7 não está adicionalmente substituído, além do um ou dois grupos metilo ou do um grupo i-propilo.
Por exemplo, R7 é
Por exemplo, R7 é
Por exemplo, R7 é
Os compostos representativos da presente divulgação incluem os compostos listados na Tabela 1. Na tabela abaixo, cada ocorrência de
deve ser interpretada como
Tabela 1
*As atribuições da estereoquimica cis/trans dos Compostos 58/59, 60/61, 107/108 e 416/417 são arbitrariamente atribuídas, t MS- Espetrometria de massa da amostra. Esta pode ser registada nos modos de iões positivos ou negativos e os iões potenciais incluem M, M+l, M+23 (M+Na) e M-l.
Como aqui utilizado, "alquilo", "alquilo Ci, C2, C3, C4, C5 ou C6" ou "alquilo Ci-C6" destina-se a incluir grupos hidrocarboneto alifáticos saturados de cadeia linear (lineares) Ci, C2, C3, C4, C5 ou C6 e grupos hidrocarboneto alifáticos saturados ramificados C3, C4, C5 ou C6. Por exemplo, alquilo C1-C6 destina-se a incluir grupos alquilo Ci, C2, C3, C4, C5 e C6. Os exemplos de alquilo incluem unidades que têm desde um a seis átomos de carbono, tais como, mas não se limitando a, metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, s-butilo, t-butilo, n-pentilo, s-pentilo ou n-hexilo.
Em certas formas de realização, um alquilo de cadeia linear ou ramificado tem seis ou menos átomos de carbono (por exemplo, Ci-C6 para a cadeia linear, C3-C6 para a cadeia ramificada) e noutra forma de realização, um alquilo de cadeia linear ou ramificado tem quatro ou menos átomos de carbono.
Como aqui utilizado, o termo "cicloalquilo" refere-se a um sistema mono- ou multiciclico (por exemplo, anéis fundidos, em ponte ou espiro) de hidrocarboneto não aromático saturado ou insaturado possuindo 3 a 30 átomos de carbono (por exemplo, C3-Cio) · Os exemplos de cicloalquilo incluem, mas não se limitam a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, ciclooctilo, ciclopentenilo, ciclo-hexenilo, ciclo-heptenilo e adamantilo. O termo "heterocicloalquilo" refere-se a um sistema de anel monociclico de 3-8 membros, biciclico de 7-12 membros (anéis fundidos, em ponte ou espiro) ou triciclico de 11-14 membros (anéis fundidos, em ponte ou espiro) não aromático saturado ou insaturado, possuindo um ou mais heteroátomos (tais como O, N, S ou Se) , salvo indicação em contrário. Os exemplos de grupos heterocicloalquilo incluem, mas não se limitam a, piperidinilo, piperazinilo, pirrolidinilo, dioxanilo, tetra-hidrofuranilo, isoindolinilo, indolinilo, imidazolidinilo, pirazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, triazolidinilo, tetra-hidrofuranilo, oxiranilo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, 1,2,3,6-tetra-hidropiridinilo, tetra-hidropiranilo, di- hidropiranilo, piranilo, morfolinilo, tetra- hidrotiopiranilo, 1,4-diazepanilo, 1,4-oxazepanilo, 2-oxa- 5-azabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanilo, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptanilo, 2,6-diazaespiro[3.3]heptanilo, l,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decanilo, 1,4- dioxaespiro[4.5]decanilo, 1-oxaespiro[4.5]decanilo, 1- azaespiro[4.5]decanilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-l,l'- isobenzofuran]-ilo, 7'H-espiro[ciclo-hexano-1,5'-furo[3,4- b] piridin]-ilo, 3'H-espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4- c] piridin]-ilo e semelhantes. 0 termo "alquilo opcionalmente substituído" refere-se a alquilo não substituído ou alquilo que tem substituintes designados a substituir um ou mais átomos de hidrogénio em um ou mais carbonos da cadeia principal do hidrocarboneto. Tais substituintes podem incluir, por exemplo, alquilo, alcenilo, alcinilo, halogéneo, hidroxilo, alquilcarboniloxilo, arilcarboniloxilo, alcoxicarboniloxilo, ariloxicarboniloxilo, carboxilato, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, alquiltiocarbonilo, alcoxilo, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoilo e ureido), amidino, imino, sulfidrilo, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinilo, sulfonato, sulfamoilo, sulfonamido, nitro, trifluorometilo, ciano, azido, heterociclilo, alquilarilo ou uma unidade aromática ou heteroaromática.
Uma unidade "arilalquilo" ou "aralquilo" é um alquilo substituído com um arilo (por exemplo, fenilmetilo (benzilo)) . Uma unidade "alquilarilo" é um arilo substituído com um alquilo (por exemplo, metilfenilo) .
Como aqui utilizado, "unidade de ligação alquilo" destina-se a incluir grupos hidrocarboneto alifáticos saturados bivalentes de cadeia linear (lineares) Ci, C2, C3, C4, C5 ou C6 e grupos hidrocarboneto alifáticos saturados ramificados C3, C4, C5 ou C6. Por exemplo, unidade de ligação alquilo C4-C6 destina-se a incluir grupos de ligação alquilo C4, C2, C3, C4, C5 e C6. Os exemplos de unidades de ligação alquilo incluem, unidades que têm desde um a seis átomos de carbono, tais como, mas não se limitando a, metilo (-CH2-), etilo (-CH2CH2-) , n-propilo (-CH2CH2CH2-) , i-propilo (-CHCH3CH2-) , n-butilo (-CH2CH2CH2CH2-) , s-butilo (-CHCH3CH2CH2-) , i-butilo (-C (CH3) 2CH2-) , n-pentilo (-CH2CH2CH2CH2CH2-) , s-pentilo (-CHCH3CH2CH2CH2-) ou n-hexilo (-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-) . "Alcenilo" inclui grupos alifáticos insaturados análogos em comprimento e substituição possivel aos alquilos descritos acima, mas que contêm pelo menos uma ligação dupla. Por exemplo, o termo "alcenilo" inclui grupos alcenilo de cadeia linear (por exemplo, etenilo, propenilo, butenilo, pentenilo, hexenilo, heptenilo, octenilo, nonenilo, decenilo) e grupos alcenilo ramificados. Em certas formas de realização, um grupo alcenilo de cadeia linear ou ramificado tem seis ou menos átomos de carbono na sua cadeia principal (por exemplo, C2-C6 para a cadeia linear, C3-C6 para a cadeia ramificada) . 0 termo "C2-C6" inclui grupos alcenilo que contêm dois a seis átomos de carbono. 0 termo "C3-C6" inclui grupos alcenilo que contêm três a seis átomos de carbono. 0 termo "alcenilo opcionalmente substituído" refere-se a alcenilo não substituído ou alcenilo que tem substituintes designados a substituir um ou mais átomos de hidrogénio em um ou mais átomos de carbono da cadeia principal do hidrocarboneto. Tais substituintes podem incluir, por exemplo, alquilo, alcenilo, alcinilo, halogéneo, hidroxilo, alquilcarboniloxilo, arilcarboniloxilo, alcoxicarboniloxilo, ariloxicarboniloxilo, carboxilato, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, alquiltiocarbonilo, alcoxilo, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoilo e ureido), amidino, imino, sulfidrilo, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinilo, sulfonato, sulfamoilo, sulfonamido, nitro, trifluorometilo, ciano, heterociclilo, alquilarilo ou uma unidade aromática ou heteroaromática. "Alcinilo" inclui grupos alifáticos insaturados análogos em comprimento e substituição possivel aos alquilos descritos acima, mas que contêm pelo menos uma ligação tripla. Por exemplo, "alcinilo" inclui grupos alcinilo de cadeia linear (por exemplo, etinilo, propinilo, butinilo, pentinilo, hexinilo, heptinilo, octinilo, noninilo, decinilo) e grupos alcinilo ramificados. Em certas formas de realização, um grupo alcinilo de cadeia linear ou ramificado tem seis ou menos átomos de carbono na sua cadeia principal (por exemplo, C2-C6 para a cadeia linear, C3-C6 para a cadeia ramificada). 0 termo "C2-C6" inclui grupos alcinilo que contêm dois a seis átomos de carbono. 0 termo "C3-C6" inclui grupos alcinilo que contêm três a seis átomos de carbono. 0 termo "alcinilo opcionalmente substituído" refere-se a alcinilo não substituído ou alcinilo que tem substituintes designados a substituir um ou mais átomos de hidrogénio em um ou mais átomos de carbono da cadeia principal do hidrocarboneto. Tais substituintes podem incluir, por exemplo, alquilo, alcenilo, alcinilo, halogéneo, hidroxilo, alquilcarboniloxilo, arilcarboniloxilo, alcoxicarboniloxilo, ariloxicarboniloxilo, carboxilato, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, alquiltiocarbonilo, alcoxilo, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoilo e ureido), amidino, imino, sulfidrilo, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinilo, sulfonato, sulfamoilo, sulfonamido, nitro, trifluorometilo, ciano, azido, heterociclilo, alquilarilo ou uma unidade aromática ou heteroaromática.
Outras unidades opcionalmente substituídas (tais como cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo ou heteroarilo opcionalmente substituído) incluem tanto as unidades não substituídas como as unidades que têm um ou mais dos substituintes designados. Por exemplo, heterocicloalquilo substituído inclui aquele substituído com um ou mais grupos alquilo, tais como 2,2,6,6-tetrametil-piperidinilo e 2,2,6,6-tetrametil-l,2,3,6-tetra-hidropiridinilo. "Arilo" inclui grupos com aromaticidade, incluindo sistemas "conjugados" ou multiciclicos com pelo menos um anel aromático e não contêm qualquer heteroátomo na estrutura em anel. Os exemplos incluem fenilo, benzilo, 1,2,3,4-tetra-hidronaftalenilo, etc.
Os grupos "heteroarilo" são grupos arilo, como definidos acima, exceto que têm desde um a quatro heteroátomos na estrutura em anel e podem ser também referidos como "heterociclos de arilo" ou "heteroaromáticos." Como aqui utilizado, o termo "heteroarilo" destina-se a incluir um anel heterocíclico aromático monocíclico de 5, 6 ou 7 membros ou bicíclico de 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 membros estável, que consiste em átomos de carbono e um ou mais heteroátomos, por exemplo, 1 ou 1-2 ou 1-3 ou 1-4 ou 1-5 ou 1-6 heteroátomos ou por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 heteroátomos, independentemente selecionados do grupo que consiste em azoto, oxigénio e enxofre. O átomo de azoto pode estar substituído ou não substituído (isto é, N ou NR em que R é H ou outros substituintes, como definidos). Os heteroátomos de azoto e enxofre podem estar opcionalmente oxidados (isto é, N^O e S(0)p, em que p = 1 ou 2) . É de assinalar que número total de átomos de S e O no heterociclo aromático não é mais do que 1.
Os exemplos de grupos heteroarilo incluem pirrole, furano, tiofeno, tiazole, isotiazole, imidazole, triazole, tetrazole, pirazole, oxazole, isoxazole, piridina, pirazina, piridazina, pirimidina e semelhantes.
Além disso, os termos "arilo" e "heteroarilo" incluem grupos arilo e heteroarilo multicíclicos, por exemplo, tricíclicos, bicíclicos, por exemplo, naftaleno, benzoxazole, benzodioxazole, benzotiazole, benzoimidazole, benzotiofeno, metilenodioxifenilo, quinolina, isoquinolina, naftiridina, indole, benzofurano, purina, benzofurano, desazapurina, indolizina.
No caso de anéis aromáticos multicíclicos, apenas um dos anéis tem de ser aromático (por exemplo, 2,3-di-hidroindole), embora todos os anéis possam ser aromáticos (por exemplo, quinolina). 0 segundo anel pode ser também fundido ou em ponte. 0 anel cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo ou heteroarilo pode estar substituído em uma ou mais posições endociclicas (por exemplo, o carbono ou heteroátomo endociclico, tal como N) com tais substituintes como descritos acima, por exemplo, alquilo, alcenilo, alcinilo, halogéneo, hidroxilo, alcoxilo, alquilcarboniloxilo, arilcarboniloxilo, alcoxicarboniloxilo, ariloxicarboniloxilo, carboxilato, alquilcarbonilo, alquilaminocarbonilo, aralquilaminocarbonilo, alcenilaminocarbonilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, aralquilcarbonilo, alcenilcarbonilo, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, alquiltiocarbonilo, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoilo e ureido), amidino, imino, sulfidrilo, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinilo, sulfonato, sulfamoilo, sulfonamido, nitro, trifluorometilo, ciano, azido, heterociclilo, alquilarilo ou uma unidade aromática ou heteroaromática. Os grupos arilo e heteroarilo podem ser também fundidos ou em ponte com anéis aliciclicos ou heterociclicos, os quais não são aromáticos, de forma a formar um sistema multiciclico (por exemplo, tetralina, metilenodioxifenilo).
Como aqui utilizado, "carbociclo" ou "anel carbociclico" destina-se a incluir qualquer anel monociclico, biciclico ou triciclico estável possuindo o número especificado de carbonos, qualquer dos quais pode ser saturado, insaturado ou aromático. Carbociclo inclui cicloalquilo e arilo. Por exemplo, um carbociclo C3-C14 destina-se a incluir um anel monociclico, biciclico ou triciclico possuindo 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 átomos de carbono. Os exemplos de carbociclos incluem, mas não se limitam a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclobutenilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclo-hexilo, ciclo-heptenilo, ciclo-heptilo, ciclo-heptenilo, adamantilo, ciclooctilo, ciclooctenilo, ciclooctadienilo, fluorenilo, fenilo, naftilo, indanilo, adamantilo e tetra-hidronaftilo. Os anéis em ponte também estão incluidos na definição de carbociclo, incluindo, por exemplo, [3.3.0]biciclooctano, [4.3.0]biciclononano, [4.4.0]biciclodecano e [2.2.2]biciclooctano . Um anel em ponte ocorre quando um ou mais átomos de carbono ligam dois átomos de carbono não adjacentes. Numa forma de realização, os anéis em ponte são um ou dois átomos de carbono. Assinale-se que uma ponte converte sempre um anel monociclico num anel triciclico. Quando um anel tem uma ponte, os substituintes especificados para o anel também podem estar presentes na ponte. Os anéis fundidos (por exemplo, naftilo, tetra-hidronaf tilo) e espiro estão também incluidos.
Como aqui utilizado, "heterociclo" ou "grupo heterociclico" inclui qualquer estrutura em anel (saturado, insaturado ou aromático) que contém pelo menos um heteroátomo endociclico (por exemplo, N, O ou S) . Heterociclo inclui heterocicloalquilo e heteroarilo. Os exemplos de heterociclos incluem, mas não se limitam a, morfolina, pirrolidina, tetra-hidrotiofeno, piperidina, piperazina, oxetano, pirano, tetra-hidropirano, azetidina e tetra-hidrofurano.
Os exemplos de grupos heterocíclicos incluem, mas não se limitam a, acridinilo, azocinilo, benzimidazolilo, benzofuranilo, benzotiofuranilo, benzotiofenilo, benzoxazolilo, benzoxazolinilo, benzotiazolilo, benzotriazolilo, benzotetrazolilo, benzisoxazolilo, benzisotiazolilo, benzimidazolinilo, carbazolilo, 4aH-carbazolilo, carbolinilo, cromanilo, cromenilo, cinolinilo, deca-hidroquinolinilo, 2H,6H-1,5,2-ditiazinilo, di- hidrofuro[2,3-b]tetra-hidrofurano, furanilo, furazanilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, imidazolilo, lH-indazolilo, indolenilo, indolinilo, indolizinilo, indolilo, 3H-indolilo, isatinoílo, isobenzofuranilo, isocromanilo, isoindazolilo, isoindolinilo, isoindolilo, isoquinolinilo, isotiazolilo, isoxazolilo, metilenodioxifenilo, morfolinilo, naftiridinilo, octa-hidroisoquinolinilo, oxadiazolilo, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, 1,2,4- oxadiazol5(4H)-ona, oxazolidinilo, oxazolilo, oxindolilo, pirimidinilo, fenantridinilo, fenantrolinilo, fenazinilo, fenotiazinilo, fenoxatinilo, fenoxazinilo, ftalazinilo, piperazinilo, piperidinilo, piperidonilo, 4-piperidonilo, piperonilo, pteridinilo, purinilo, piranilo, pirazinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridooxazole, piridoimidazole, piridotiazole, piridinilo, piridilo, pirimidinilo, pirrolidinilo, pirrolinilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolinilo, 4 H-quinolizinilo, quinoxalinilo, quinuclidinilo, tetra- hidrofuranilo, tetra-hidroisoquinolinilo, tetra- hidroquinolinilo, tetrazolilo, 6H-1,2,5-tiadiazinilo, 1.2.3- tiadiazolilo, 1,2,4-tiadiazolilo, 1,2,5-tiadiazolilo, 1.3.4- tiadiazolilo, tiantrenilo, tiazolilo, tienilo, tienotiazolilo, tienooxazolilo, tienoimidazolilo, tiofenilo, triazinilo, 1,2,3-triazolilo, 1,2,4-triazolilo, 1.2.5- triazolilo, 1,3,4-triazolilo e xantenilo. 0 termo "substituído," como aqui utilizado, significa que qualquer um ou mais átomos de hidrogénio no átomo designado está substituído com uma seleção dos grupos indicados, na condição de que a valência normal do átomo designado não seja excedida e que a substituição resulte num composto estável. Quando um substituinte é oxo ou ceto (isto é, =0), então são substituídos 2 átomos de hidrogénio no átomo. Os substituintes ceto não estão presentes em unidades aromáticas. Ligações duplas endocíclicas, como aqui utilizadas, são ligações duplas que se formam entre dois átomos endocíclicos adjacentes (por exemplo, C=C, C=N ou N=N) . "Composto estável" e "estrutura estável" destinam-se a indicar um composto que é suficientemente robusto para sobreviver ao isolamento até um grau de pureza útil a partir de uma mistura reacional, e formulação num agente terapêutico eficaz.
Quando uma ligação para um substituinte é indicada como a cruzar uma ligação que liga dois átomos num anel, então esse substituinte pode estar ligado a qualquer átomo no anel. Quando um substituinte é listado sem indicar o átomo através do qual esse substituinte está ligado ao resto do composto de uma dada fórmula, então esse substituinte pode estar ligado através de qualquer átomo nessa fórmula. São admissíveis combinações de substituintes e/ou variáveis, mas apenas de tais combinações resultarem em compostos estáveis.
Quando qualquer variável (por exemplo, Ri) ocorre mais do que uma vez em qualquer constituinte ou fórmula para um composto, a sua definição em cada ocorrência é independente da sua definição em cada uma das outras ocorrências. Assim, por exemplo, se um grupo é mostrado como estando substituído com 0-2 unidades Ri, então o grupo pode estar opcionalmente substituído com até duas unidades Ri e Ri em cada ocorrência é independentemente selecionado da definição de Ri. De igual modo, são admissíveis combinações de substituintes e/ou variáveis, mas apenas se tais combinações resultarem em compostos estáveis. 0 termo "hidroxi" ou "hidroxilo" inclui grupos com um -OH ou -0-.
Como aqui utilizado, "halo" ou "halogéneo" refere-se a flúor, cloro, bromo e iodo. 0 termo "per-halogenado" geralmente refere-se a uma unidade em que todos os átomos de hidrogénio estão substituídos por átomos de halogéneo. 0 termo "haloalquilo" ou "haloalcoxilo" refere-se a um alquilo ou alcoxilo substituído com um ou mais átomos de halogéneo. 0 termo "carbonilo" inclui compostos e unidades que contêm um carbono conectado com uma ligação dupla a um átomo de oxigénio. Os exemplos de unidades que contêm um carbonilo incluem, mas não se limitam a, aldeídos, cetonas, ácidos carboxílicos, amidas, ésteres, anidridos, etc. 0 termo "carboxilo" refere-se a -C00H ou seu éster de alquilo Ci-Cg. "Acilo" inclui unidades que contêm o radical acilo (R-C(0)-) ou um grupo carbonilo. "Acilo substituído" inclui grupos acilo em que um ou mais dos átomos de hidrogénio estão substituídos, por exemplo, por grupos alquilo, grupos alcinilo, halogéneo, hidroxilo, alquilcarboniloxilo, arilcarboniloxilo, alcoxicarboniloxilo, ariloxicarboniloxilo, carboxilato, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, alquiltiocarbonilo, alcoxilo, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino) , acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoilo e ureido), amidino, imino, sulfidrilo, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinilo, sulfonato, sulfamoilo, sulfonamido, nitro, trifluorometilo, ciano, azido, heterociclilo, alquilarilo ou uma unidade aromática ou heteroaromática. "Aroilo" inclui unidades com um arilo ou unidade heteroaromática ligada a um grupo carbonilo. Os exemplos de grupos aroilo incluem fenilcarboxilo, naftilo carboxilo, etc. "Alcoxialquilo," "alquilaminoalquilo" e "tioalcoxialquilo" incluem grupos alquilo, como descritos acima, em que átomos de oxigénio, azoto ou enxofre substituem um ou mais átomos de carbono da cadeia principal do hidrocarboneto. 0 termo "alcoxi" ou "alcoxilo" inclui grupos alquilo, alcenilo e alcinilo substituídos e não substituídos ligados covalentemente a um átomo de oxigénio. Os exemplos de grupos alcoxilo ou radicais alcoxilo incluem, mas não se limitam a, os grupos metoxilo, etoxilo, isopropiloxilo, propoxilo, butoxilo e pentoxilo. Os exemplos de grupos alcoxilo substituídos incluem grupos alcoxilo halogenados. Os grupos alcoxilo podem estar substituídos com grupos tais como alcenilo, alcinilo, halogéneo, hidroxilo, alquilcarboniloxilo, arilcarboniloxilo, alcoxicarboniloxilo, ariloxicarboniloxilo, carboxilato, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, alquiltiocarbonilo, alcoxilo, fosfato, fosfonato, fosfinato, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoilo e ureido), amidino, imino, sulfidrilo, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinilo, sulfonato, sulfamoilo, sulfonamido, nitro, trifluorometilo, ciano, azido, heterociclilo, alquilarilo ou um unidades aromáticas ou heteroaromáticas. Os exemplos de grupos alcoxilo substituídos com halogéneo incluem, mas não se limitam a, fluorometoxilo, difluorometoxilo, trifluorometoxilo, clorometoxilo, diclorometoxilo e triclorometoxilo. 0 termo "éter" ou "alcoxi" inclui compostos ou unidades que contêm um oxigénio ligado a dois átomos de carbono ou heteroátomos. Por exemplo, o termo inclui "alcoxialquilo," o qual refere-se a um grupo alquilo, alcenilo ou alcinilo ligado covalentemente a um átomo de oxigénio que está ligado covalentemente a um grupo alquilo. 0 termo "éster" inclui compostos ou unidades que contêm um carbono ou um heteroátomo ligado a um átomo de oxigénio que está ligado ao carbono de um grupo carbonilo. 0 termo "éster" inclui grupos alcoxicarboxilo tais como metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, propoxicarbonilo, butoxicarbonilo, pentoxicarbonilo, etc. 0 termo "tioalquilo" inclui compostos ou unidades que contêm um grupo alquilo conectado a um átomo de enxofre. Os grupos tioalquilo podem estar substituídos com grupos tais como alquilo, alcenilo, alcinilo, halogéneo, hidroxilo, alquilcarboniloxilo, arilcarboniloxilo, alcoxicarboniloxilo, ariloxicarboniloxilo, carboxilato, ácido carboxilico, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilaminocarbonilo, dialquilaminocarbonilo, alquiltiocarbonilo, alcoxilo, amino (incluindo alquilamino, dialquilamino, arilamino, diarilamino e alquilarilamino), acilamino (incluindo alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoilo e ureido), amidino, imino, sulfidrilo, alquiltio, ariltio, tiocarboxilato, sulfatos, alquilsulfinilo, sulfonato, sulfamoilo, sulfonamido, nitro, trifluorometilo, ciano, azido, heterociclilo, alquilarilo ou unidades aromáticas ou heteroaromáticas. 0 termo "tiocarbonilo" ou "tiocarboxilo" inclui compostos e unidades que contêm um carbono conectado por uma ligação dupla a um átomo de enxofre. 0 termo "tioéter" inclui unidades que contêm um átomo de enxofre ligado a dois átomos de carbono ou heteroátomos. Os exemplos de tioéteres incluem, mas não se limitam a alctioalquilos, alctioalcenilos e alctioalcinilos. 0 termo "alctioalquilos" inclui unidades com um grupo alquilo, alcenilo ou alcinilo ligado a um átomo de enxofre que está ligado a um grupo alquilo. De forma semelhante, o termo "alctioalcenilos" refere-se a unidades em que um grupo alquilo, alcenilo ou alcinilo está ligado a um átomo de enxofre que está ligado covalentemente a um grupo alcenilo; e alctioalcinilos" refere-se a unidades em que um grupo alquilo, alcenilo ou alcinilo está ligado a um átomo de enxofre que está ligado covalentemente a um grupo alcinilo.
Como aqui utilizado, "amina" ou "amino" refere-se a -NH2 não substituído ou substituído. "Alquilamino" inclui grupos de compostos em que o azoto do -NH2 está ligado a pelo menos um grupo alquilo. Os exemplos de grupos alquilamino incluem benzilamino, metilamino, etilamino, fenetilamino, etc. "Dialquilamino" inclui grupos em que o azoto do -NH2 está ligado a pelo menos dois grupos alquilo adicionais. Os exemplos de grupos dialquilamino incluem, mas não se limitam a, dimetilamino e dietilamino. "Arilamino" e "diarilamino" incluem grupos em que o azoto está ligado a pelo menos um ou dois grupos arilo, respetivamente. "Aminoarilo" e "aminoariloxilo" referem-se a arilo e ariloxilo substituído com amino. "Alquilarilamino," "alquilaminoarilo" ou "arilaminoalquilo" refere-se a um grupo amino que está ligado a pelo menos um grupo alquilo e pelo menos um grupo arilo. "Alcaminoalquilo" refere-se a um grupo alquilo, alcenilo ou alcinilo ligado a um átomo de azoto que está também ligado a um grupo alquilo. "Acilamino" inclui grupos em que o azoto está ligado a um grupo acilo. Os exemplos de acilamino incluem, mas não se limitam a, grupos alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, carbamoílo e ureido. 0 termo "amida" ou "aminocarboxilo" inclui compostos ou unidades que contêm um átomo de azoto que está ligado ao carbono de um grupo carbonilo ou um tiocarbonilo. 0 termo inclui grupos "alcaminocarboxilo" que incluem grupos alquilo, alcenilo ou alcinilo ligados a um grupo amino que está ligado ao carbono de um grupo carbonilo ou tiocarbonilo. Inclui também grupos "arilaminocarboxilo" que incluem unidades arilo ou heteroarilo ligadas a um grupo amino que está ligado ao carbono de um grupo carbonilo ou tiocarbonilo. Os termos "alquilaminocarboxilo", "alcenilaminocarboxilo", "alcinilaminocarboxilo" e "arilaminocarboxilo" incluem unidades em que unidades alquilo, alcenilo, alcinilo e arilo, respetivamente, estão ligadas a um átomo de azoto que está, por sua vez, ligado ao carbono de um grupo carbonilo. As amidas podem estar substituídas com substituintes tais como alquilo de cadeia linear, alquilo ramificado, cicloalquilo, arilo, heteroarilo ou heterociclo. Os substituintes nos grupos amida podem estar ainda substituídos.
Os compostos da presente invenção que contêm azotos podem ser convertidos em N-óxidos por tratamento com um agente oxidante (por exemplo, ácido 3-cloroperoxibenzoico (mCPBA) e/ou peróxidos de hidrogénio) para proporcionar outros compostos da presente invenção. Assim, considera-se que, quando permitido pela valência e estrutura, todos os compostos contendo azoto apresentados e reivindicados incluem tanto o composto como se mostra como o seu derivado N-óxido (que pode ser designado como N^O ou N+-0~) . Além disso, noutros casos, os azotos nos compostos da presente invenção podem ser convertidos nos compostos de N-hidroxilo ou N-alcoxilo. Por exemplo, os compostos de N-hidroxilo podem ser preparados por oxidação da amina parental por um agente oxidante tal como m-CPBA. Considera-se também que, quando permitido pela valência e estrutura, todos os compostos contendo azoto mostrados e reivindicados abrangem tanto o composto como se mostra como os seus derivados N-hidróxi (isto é, N-OH) e N-alcóxi (isto é, N-OR, em que R é alquilo Ci-C6, alcenilo Ci-C6, alcinilo Ci-C6, carbociclo de 3-14 membros ou heterociclo de 3-14 membros substituído ou não substituído).
Na presente descrição, nalguns casos, a fórmula estrutural do composto representa um certo isómero por conveniência, mas a presente invenção inclui todos os isómeros, tais como isómeros geométricos, isómeros óticos com base num carbono assimétrico, estereoisómeros, tautómeros e semelhantes, entendendo-se que nem todos os isómeros possam ter o mesmo nivel de atividade. Além disso, pode estar presente um polimorfismo cristalino para os compostos representados pela fórmula. Assinale-se que qualquer forma cristalina, mistura de formas cristalinas, ou anidrido ou hidrato da mesma está incluido no âmbito da presente invenção. Além disso, o chamado metabolito que é produzido por degradação do presente composto in vivo está incluído no âmbito da presente divulgação. "Isomerismo" significa compostos que têm fórmulas moleculares idênticas mas diferem na sequência de ligação dos seus átomos ou no arranjo dos seus átomos no espaço. Os isómeros que diferem no arranjo dos seus átomos no espaço são denominados "estereoisómeros." Os estereoisómeros que não são imagens no espelho um do outro são denominados "diastereoisómeros," e os estereoisómeros que são imagens não sobreponíveis no espelho um do outro são denominados "enantiómeros" ou por vezes isómeros óticos. Uma mistura que contém quantidades iguais de formas enantioméricas individuais de quiralidade oposta é denominada uma "mistura racémica."
Um átomo de carbono ligado a quatro substituintes não idênticos é denominado um "centro quiral." "Isómero quiral" significa um composto com pelo menos um centro quiral. Os compostos com mais do que um centro quiral podem existir como um diastereómero individual ou como uma mistura de diastereómeros, denominada "mistura diastereomérica." Quando está presente um centro quiral, um estereoisómero pode ser caracterizado pela configuração absoluta (R ou S) desse centro quiral. A configuração absoluta refere-se ao arranjo no espaço dos substituintes ligados ao centro quiral. Os substituintes ligados ao centro quiral em questão são ordenados de acordo com as Regras de Sequência de Cahn, Ingold e Prelog. (Cahn et ai., Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385; errata 511; Cahn et ai., Angew. Chem. 1966, 78, 413; Cahn e Ingold, J. Chem. Soc. 1951 (London), 612; Cahn et ai., Experientia 1956, 12, 81; Cahn, J. Chem. Educ. 1964, 41, 116). "Isómero geométrico" significa os diastereómeros que devem a sua existência à rotação impedida em torno de ligações duplas ou uma unidade de ligação cicloalquilo (por exemplo, 1,3-cilcobutilo). Estas configurações são diferenciadas nos seus nomes pelos prefixos cis e trans ou Z e E, os quais indicam que os grupos estão do mesmo lado ou em lados opostos da ligação dupla na molécula de acordo com as regras de Cahn-Ingold-Prelog. É para ser entendido que os compostos da presente invenção podem ser representados como isómeros quirais ou isómeros geométricos diferentes. Deve ser também entendido que quando os compostos têm formas isoméricas quirais ou formas isoméricas geométricas, todas as formas isoméricas destinam-se a estar incluídas no âmbito da presente invenção e o nome dos compostos não exclui quaisquer formas isoméricas, entendendo-se que nem todos os isómeros possam ter o mesmo nivel de atividade.
Além disso, as estruturas e outros compostos discutidos nesta invenção incluem todos os isómeros atrópicos dos mesmos, entendendo-se que nem todos os isómeros atrópicos possam ter o mesmo nivel de atividade. Os "isómeros atrópicos" são um tipo de estereoisómero em que os átomos dos dois isómeros estão organizados de forma diferente no espaço. Os isómeros atrópicos devem a sua existência a uma rotação restringida provocada por impedimento da rotação de grupos grandes em torno de uma ligação central. Tais isómeros atrópicos existem tipicamente como uma mistura, contudo como consequência de avanços recentes nas técnicas de cromatografia, é possivel separar misturas de dois isómeros atrópicos em casos selecionados. "Tautómero" é um de dois ou mais isómeros estruturais que existem em equilibrio e é facilmente convertido de uma forma isomérica noutra. Esta conversão resulta na migração formal de um átomo de hidrogénio acompanhada por uma troca de ligações duplas conjugadas adjacentes. Os tautómeros existem como uma mistura de um conjunto tautomérico em solução. Nas soluções onde seja possivel tautomerização, será atingido um equilibrio quimico dos tautómeros. A proporção exata dos tautómeros depende de vários fatores, incluindo temperatura, solvente e pH. 0 conceito de tautómeros que são interconvertiveis por tautomerizações é chamado tautomerismo.
Dos vários tipos de tautomerismo que são possíveis, dois são comummente observados. No tautomerismo ceto-enol ocorre um deslocamento simultâneo de eletrões e um átomo de hidrogénio. 0 tautomerismo anel-cadeia resulta como consequência do grupo aldeido (-CHO) numa molécula de cadeia de açúcar que reage com um dos grupos hidroxilo (-0H) na mesma molécula para dar uma forma ciclica (forma de anel) como exibida pela glicose.
Os pares tautoméricos comuns são: cetona-enol, amida-nitrilo, lactama-lactima, tautomerismo amida-ácido imidico em anéis heterociclicos (por exemplo, em bases de azoto tais como guanina, timina e citosina), imina-enamina e enamina-enamina. Um exemplo de equilibrio ceto-enol é entre as piridin-2(1H)-onas e os correspondentes piridin-2-óis, como se mostra a seguir.
É para ser entendido que os compostos da presente invenção podem ser representados como diferentes tautómeros. Deve ser também entendido que quando os compostos têm formas tautoméricas, todas as formas tautoméricas destinam-se a estar incluidas no âmbito da presente invenção e o nome dos compostos não exclui qualquer forma tautomérica. Entender-se-á que certos tautómeros podem ter um nivel mais alto de atividade do que outros. 0 termo "polimorfos cristalinos", "polimorfos" ou "formas cristalinas" significa estruturas cristalinas em que um composto (ou um seu sal ou solvato) pode cristalizar em diferentes arranjos de empacotamento cristalino, os quais têm todos a mesma composição elementar. As diferentes formas cristalinas têm geralmente diferentes padrões de difração de raios X, espetros de infravermelho, pontos de fusão, dureza, forma de cristal, propriedades óticas e elétricas, estabilidade e solubilidade. 0 solvente de recristalização, a velocidade de cristalização, a temperatura de armazenamento e outros fatores podem originar a predominância de uma forma cristalina. Os polimorfos cristalinos dos compostos podem ser preparados por cristalização em diferentes condições.
Os compostos de qualquer Fórmula aqui descrita incluem os próprios compostos, bem como os seus sais, seus solvatos e seus pró-fármacos, se aplicável. Por exemplo, pode formar-se um sal entre um anião e um grupo carregado positivamente (por exemplo, amino) num composto de benzeno substituído. Os aniões adequados incluem cloreto, brometo, iodeto, sulfato, bissulfato, sulfamato, nitrato, fosfato, citrato, metanossulfonato, trifluoroacetato, glutamato, glucuronato, glutarato, malato, maleato, succinato, fumarato, tartrato, tosilato, salicilato, lactato, naftalenossulfonato e acetato (por exemplo, trifluoroacetato) . 0 termo "anião farmaceuticamente aceitável" refere-se a um anião adequado para formar um sal farmaceuticamente aceitável. Do mesmo modo, pode também formar-se um sal entre um catião e um grupo carregado negativamente (por exemplo, carboxilato) num composto de benzeno substituído. Os catiões adequados incluem o ião de sódio, ião de potássio, ião de magnésio, ião de cálcio e um catião de amónio tal como o ião tetrametilamónio. Os compostos de benzeno substituídos com arilo ou heteroarilo incluem também os sais que contêm átomos de azoto quaternários.
Os exemplos de pró-fármacos incluem ésteres e outros derivados farmaceuticamente aceitáveis, os quais, após administração a um indivíduo, são capazes de proporcionar compostos de benzeno substituído ativos.
Adicionalmente, os compostos da presente invenção, por exemplo, os sais dos compostos, podem existir na sua forma hidratado ou não hidratada (a anidra) ou como solvatos com outras moléculas de solvente. Os exemplos não limitativos de hidratos incluem mono-hidratos, di-hidratos, etc. Os exemplos não limitativos de solvatos incluem solvatos de etanol, solvatos de acetona, etc. "Solvato" significa formas de adição de solvente que contêm quantidades estequiométricas ou não estequiométricas de solvente. Alguns compostos têm uma tendência para reter uma proporção molar fixa de moléculas de solvente no estado sólido cristalino, formando, desse modo, um solvato. Se o solvente é água o solvato que se forma é um hidrato; e se o solvente é álcool, o solvato que se forma é um alcoolato. Os hidratos formam-se pela combinação de uma ou mais moléculas de água com uma molécula da substância, em que a água retém o seu estado molecular como H20.
Como aqui utilizado, o termo "análogo" refere-se a um composto quimico que é estruturalmente semelhante a outro, mas difere ligeiramente na composição (como na substituição de um átomo por um átomo de um elemento diferente ou na presença de um grupo funcional particular, ou a substituição de um grupo funcional por outro grupo funcional) . Assim, um análogo é um composto que é semelhante ou comparável em função e aspeto, mas não em estrutura ou origem com o composto de referência.
Como aqui definido, o termo "derivado" refere-se a compostos que têm uma estrutura central comum e estão substituídos com vários grupos como aqui descritos. Por exemplo, todos os compostos representados pela Fórmula (I) são compostos de benzeno substituído e têm a Fórmula (I) como um núcleo comum. 0 termo "bioisóstero" refere-se a um composto que resulta da troca de um átomo ou de um grupo de átomos por outro átomo ou grupo de átomos grosseiramente semelhante. 0 objetivo de uma substituição bioisostérica é gerar um novo composto com propriedades biológicas semelhantes ao composto parental. A substituição bioisostérica pode ser de base fisico-quimica ou topológica. Os exemplos de bioisósteros de ácido carboxilico incluem, mas não se limitam a, acilsulfonimidas, tetrazoles, sulfonatos e fosfonatos. Ver, por exemplo, Patani e LaVoie, Chem. Rev. 96, 3147-3176, 1996. A presente invenção destina-se a incluir todos os isótopos dos átomos que ocorrem nos presentes compostos. Os isótopos incluem aqueles átomos que têm o mesmo número atómico mas diferentes números de massa. A titulo de exemplo geral, e sem limitação, os isótopos de hidrogénio incluem tritio e deutério, e os isótopos de carbono incluem C-13 e C-14. 2. Síntese de Compostos de Benzeno Substituído A presente divulgação proporciona métodos para a síntese dos compostos de qualquer uma das Fórmulas aqui descritas. A presente divulgação também proporciona métodos detalhados para a síntese de vários compostos divulgados de acordo com os seguintes esquemas como se mostra nos exemplos.
Por toda a descrição, quando as composições são descritas como tendo, incluindo ou compreendendo componentes específicos, considera-se que as composições também consistem essencialmente, ou consistem, nos componentes especificados. De forma semelhante, quando os métodos ou processos são descritos como tendo, incluindo ou compreendendo passos de processo específicos, os processos também consistem essencialmente, ou consistem, nos passos de processamento especificados. Além disso, deve ser entendido que a ordem dos passos ou a ordem para realizar certas ações é irrelevante desde que a invenção permaneça realizável. Além do mais, dois ou mais passos ou ações podem ser realizados simultaneamente.
Os processos sintéticos da divulgação podem tolerar uma grande variedade de grupos funcionais, por isso podem ser utilizados vários materiais de partida substituídos. Os processos proporcionam geralmente o composto final desejado no fim ou próximo do fim do processo global, embora possa ser desejável, em certos casos, converter adicionalmente o composto num sal, éster ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do mesmo.
Os compostos da presente divulgação podem ser preparados de uma variedade de maneiras utilizando materiais de partida comercialmente disponíveis, compostos conhecido na literatura ou a partir de intermediários facilmente preparados, utilizando métodos de sintese correntes e procedimentos conhecidos dos especialistas na técnica ou que serão evidentes para o especialista à luz dos ensinamentos aqui. Os métodos e procedimentos de sintese padrão para a preparação de moléculas orgânicas e para as transformações e manipulações de grupos funcionais podem ser obtidos a partir da literatura cientifica relevante ou de texto de referência no campo. Embora não se esteja limitado a qualquer uma ou a várias fontes, os textos clássicos tais como Smith, Μ. B., March, J., March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5th edition, John Wiley & Sons: New York, 2001; Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons: New York, 1999; R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); L. Fieser e M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); e L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995), aqio incorporados por referência, são textos de referência úteis e reconhecidos de sintese orgânica, conhecidos dos especialistas na técnica. As seguintes descrições de métodos de sintese são projetadas para ilustrar, mas não para limitar, os procedimentos gerais para a preparação de compostos da presente invenção.
Os compostos da presente invenção podem ser convenientemente preparados por uma variedade de métodos familiares para os especialistas na técnica. Os compostos com qualquer uma das Fórmulas aqui descritas podem ser preparados de acordo com os procedimentos ilustrados nos
Esquemas 1-10 abaixo, a partir de materiais de partida comercialmente disponíveis ou materiais de partida que podem ser preparados utilizando procedimentos da literatura. Os grupos Z e R (tais como Ri, R2, R3, R4, R6, R7, R8 e R12) nos Esquemas 1-10 são como definidos em qualquer Fórmula aqui descrita, salvo indicação em contrário.
Um especialista com conhecimentos médios na matéria reconhecerá que, durante as sequências reacionais e esquemas de sintese aqui descritos, a ordem de certos passos pode ser alterada, tal como a introdução e remoção de grupos de proteção.
Um especialista com conhecimentos médios na matéria reconhecerá que certos grupos podem exigir proteção das condições reacionais através da utilização de grupos de proteção. Os grupos de proteção podem ser também utilizados para diferenciar grupos funcionais semelhantes nas moléculas. Uma lista de grupos de proteção e de como introduzir e remover estes grupos pode ser encontrada em Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons: New York, 1999.
Os grupos de proteção preferidos incluem, mas não se limitam a:
Para uma unidade hidroxilo: TBS, benzilo, THP, Ac Para ácidos carboxilicos: éster benzilico, éster metilico, éster etilico, éster alilico Para aminas: Cbz, BOC, DMB
Para dióis: Ac (x2) TBS (x2) ou quando tomados em conjunto acetonidos
Para tióis: Ac
Para benzimidazoles: SEM, benzilo, PMB, DMB
Para aldeídos: dialquilacetais tais como dimetoxiacetal ou dietilacetilo.
Nos esquemas reacionais aqui descritos podem ser produzidos múltiplos estereoisómeros. Quando não é indicado um estereoisómero particular, entende-se que representa todos os estereoisómeros possíveis que poderiam ser produzidos a partir da reação. Um especialista com conhecimentos médios na matéria reconhecerá que as reações podem ser otimizadas para dar preferencialmente um isómero, ou podem ser idealizados novos esquemas para produzir um único isómero. Se são produzidas misturas, pode utilizar-se técnicas tais como cromatoqrafia em camada fina preparativa, HPLC preparativa, HPLC quiral preparativa ou SFC preparativa para separar os isómeros.
As seguintes abreviaturas são utilizadas por toda a descrição e são definidas abaixo: AA acetato de amónio ACN acetonitrilo
Ac acetilo ACHO ácido acético atm atmosfera aq. Aquosa BID ou b.i.d. bis in die (duas vezes por dia) tBuOK t-butóxido de potássio
Bn benzilo BOC terc-butoxicarbonilo BOP hexafluorofosfato de (benzotriazol-1- iloxi)tris(dimetilamino)-fosfónio Cbz benziloxicarbonilo CDCI3 clorofórmio deuterado CH2CI2 diclorometano COMU Hexafluorofosfato de (l-ciano-2-etoxi-2- oxoetilidenaminooxi)dimetil-amino-morfolino-carbénio d dias DBU l,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno DCE 1,2-dicloroetano DCM diclorometano DEAD Azodicarboxilato de dietilo DIAD Azodicarboxilato de diisopropilo
DiBAL-H hidreto de diisobutil-alumínio DIPEA N,N-diisopropiletilamina (base de Hunig) DMA Dimetilacetamida DMAP N,N-dimetil-4-aminopiridina DMB 2,4-dimetoxibenzilo DMF N,N-Dimetilformamida DMSO Dimetilsulfóxido DPPA Azida difenilfosfónica EA ou AcOEt Acetato de etilo EDC ou EDCI N-(3-Dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida
Et2<D éter dietilico ELS Dispersão de Luz Evaporativa ESI- Eletropulverização no modo negativo ESI+ Eletropulverização no modo positivo
EtsN ou TEA trietilamina
EtOH etanol FA ácido fórmico FC ou FCC Cromatografia flash h horas H20 água HATU Hexafluorofosfato de 0- (7-azabenzotriazol-l- il)-Ν,Ν,Ν',N'-tetrametilurónio HOAT l-Hidroxi-7-azabenzotriazole HOBt 1-Hidroxibenzotriazole HO-Su N-Hidroxissuccinimida HC1 cloreto de hidrogénio ou ácido clorídrico HPLC Cromatografia líquida de alta eficiência K2C03 carbonato de potássio KHMDs Hexametildissilazida de potássio LC/MS ou LC-MS Cromatografia líquida-espetro de massa LDA Diisopropilamida de lítio
LiHMDs Hexametildissilazida de lítio LG grupo de saída M Molar m/z razão massa/carga m-CPBA ácido meta-cloroperbenzoico
MeCN Acetonitrilo
MeOD d4-metanol
Mel Iodeto de metilo MS3Â peneiros moleculares de 3Â
MgSCg Sulfato de magnésio min minutos
Ms Mesilo
MsCl Cloreto de mesilo
MsO Mesilato MS Espetro de massa MWI irradiação de micro-ondas
Na2C03 carbonato de sódio
Na2S04 sulfato de sódio
NaHC03 bicarbonato de sódio
NaHMDs Hexametildissilazida de sódio
NaOH hidróxido de sódio
NaHC03 bicarbonato de sódio
Na2S04 sulfato de sódio NIS N-iodossuccinimida RMN Ressonância Magnética Nuclear o/n ou 0/N de um dia para o outro
Pd/C Paládio sobre carvão
Pd(dppf)Cl2. DCM[1,1'-Bis(difenilfosfino)ferroceno] dicloropaládio(II), complexo com diclorometano PPAA Anidrido cíclico do ácido 1-propanofosfónico
Pd(OH)2 Di-hidróxido de paládio PE Éter de petróleo PG grupo de proteção PMB para-metoxibenzilo ppm partes por milhão p.o. per os (administração oral) HPLC prep Cromatografia Líquida de Alta Eficiência preparativa TLC prep cromatografia em camada fina preparativa p-TsOH ácido para-toluenossulfónico
PyBOP Hexafluorofosfato de (benzotriazol-1- iloxi)tripirrolidinofosfónio QD ou q.d. quaque die (uma vez por dia) RBF balão de fundo redondo RP-HPLC Cromatografia Líquida de Alta Eficiência de
Fase Inversa
Ta ou TA Temperatura ambiente SEM (Trimetilsilil)etoximetilo SEMC1 (Cloreto de (trimetilsilil)etoximetilo SFC Cromatografia supercrítica SGC cromatografia sobre sílica gel STAB Triacetoxiboro-hidreto de sódio TBAF fluoreto de tetra-n-butilamónio TBME Éter terc-butílico e metílico TEA Trietilamina TFA ácido trifluoroacético
TfO triflato THF tetra-hidrofurano THP tetra-hidropirano TID ou t.i.d ter in die (três vezes por dia) TLC cromatografia em camada fina TMSC1 Cloreto de trimetilsililo
Ts tosilo
TsOH ácido tosíco UV ultravioleta
Esquema 1
0 Esquema 1 mostra a síntese de análogos de benzeno em que Z = -N(R7) (R8) seguindo uma via geral que utiliza química bem estabelecida. Os ácidos nitrobenzoicos substituídos, muitos dos quais estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparados por nitrações dos ácidos benzoicos substituídos apropriados ou outra química conhecida para um especialista na técnica, podem ser convertidos nos seus ésteres metílicos por tratamento com iodeto de metilo num solvente polar tal como DMF na presença de uma base apropriada tal como carbonato de sódio a uma temperatura apropriada tal como 60 °C (Passo 1). O grupo nitro pode ser reduzido a uma amina utilizando um agente de redução apropriado tal como ferro na presença de um ácido tal como cloreto de amónio num solvente prótico tal como etanol a uma temperatura apropriada tal como 80 °C (Passo 2) . A introdução do R7 pode ser feita utilizando uma aminação redutiva com uma R7-cetona ou R7-aldeído apropriado na presença de um agente de redução apropriado tal como cianoboro-hidreto de sódio e ácido catalítico tal como ácido acético num solvente apropriado tal como metanol. Uma variedade de grupos R8 pode ser introduzida por alquilação utilizando R8-LG, em que LG é um grupo de sarda tal como iodo, na presença de uma base suave tal como carbonato de césio num solvente polar apropriado tal como acetonitrilo a uma temperatura apropriada tal como 80 °C (Passo 4). Alternativamente, os grupos R8 podem ser introduzidos por aminação redutiva com R8-cetona ou R8-aldeido na presença de um agente de redução apropriado tal como cianoboro-hidreto de sódio e ácido catalítico tal como ácido acético num solvente apropriado tal como metanol. A unidade éster pode ser convertida numa amida utilizando um protocolo de dois passos padrão. O éster pode ser hidrolisado ao ácido correspondente utilizando uma base adequada tal como hidróxido de sódio num solvente polar tal como etanol (Passo 5) . O ácido seria depois submetido a uma reação de acoplamento de amida padrão, após o que a amina apropriada seria adicionada juntamente com um reagente de acoplamento de amidas adequado tal como PYBOP num solvente adequado tal como DMSO para dar a amida desejada (Passo 6).
Esquema 2
Dependendo da natureza do substituinte R6, poderia ser utilizada modificação quimica adicional para converter o substituinte R6 num substituinte R6 alternativo. Uma amostragem representativa de tais modificações poderia incluir hidrogenação, remoção de grupo de proteção seguida de reações de acoplamento de amida adicionais, reações de acoplamento catalisadas por paládio, reações de aminação redutiva ou reações de alguilação. Por exemplo, se R6 é um brometo, os substituintes R6 alternativos poderiam ser em seguida introduzidos utilizando protocolos padrão à base de metal de transição que se baseiam num grupo de saída tal como um brometo como um ponto de conexão.
Num tal protocolo como representado no Esquema 2 substituintes R6 não aromáticos ligados através de uma ligação carbono-carbono podem ser introduzidos pela reação de Suzuki de um composto em que R6 = Br com um derivado de éster borónico não aromático insaturado apropriado (por exemplo um derivado de éster borónico olefínico tal como vinil 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-l,3,2-dioxaborolano) na presença de uma base suave e um catalisador de paládio num solvente polar tal como dioxano/água, a temperatura elevada para dar o novo substituinte R6 desejado. Dependendo da natureza do substituinte R6, poderia utilizar-se modificação química adicional para converter o substituinte Rg insaturado num substituinte Rg alternativo. Uma amostragem representativa de tais modificações poderia incluir a hidrogenação, remoção de grupo de proteção seguida de reações de acoplamento de amida adicionais, reações de acoplamento catalisadas por paládio, reações de aminação redutiva ou reações de alquilação. Por exemplo, nos casos em que é introduzido um grupo Rg não aromático insaturado, a modificação adicional por hidrogenação pode dar o grupo Rg saturado correspondente (por exemplo conversão de um grupo vinilo num grupo etilo). Nos casos em que os grupos Rg introduzidos têm a funcionalidade amina protegida, as modificações adicionais incluem a desproteção para dar aminas que podem em passos subsequentes ser adicionalmente modificadas, por exemplo, por reações de formação de amida ou aminação redutiva.
Noutro protocolo como representado no Esquema 3, substituintes R6 não aromáticos ligados via uma ligação carbono-carbono podem ser introduzido pela reação de Sonogashira de um composto em que R6 = Br, opcionalmente seguida de modificação adicional do grupo alcinilo introduzido. Na reação de Sonogashira, um composto em que Rg— Br é acoplado com um derivado de alcino terminal na presença de um base suave, um catalisador de cobre e um catalisador de paládio num solvente orgânico tal como tolueno a temperatura elevada. Isto resulta na substituição do grupo Br por um grupo alcinilo. 0 composto resultante em que o substituinte Rg é um grupo alcinilo pode ser submetido a modificações subsequentes adequadas para dar um substituinte Rg alternativo. Uma amostragem representativa de tais modificações poderia incluir a hidrogenação, remoção de grupo de proteção seguida de reações de acoplamento de amida adicionais, reações de aminação redutiva ou reações de alquilação.
Esquema 3
Noutro protocolo substituintes Rg não aromáticos ligados através de uma ligação carbono-carbono podem ser preparados por outras reações de substituição de compostos de átomo de bromo em que Rg = Br, opcionalmente seguidas de modificação adicional do grupo R6 introduzido. Os exemplos de tais reações de substituição incluem reações de acoplamento com reagentes de zinco tais como reações de cianação e Negishi. No caso da reação de cianação, os compostos em que R6 = Br podem ser feitos reagir com cianeto de zinco sob condições padrão de reações mediadas por catalisador de paládio para dar compostos em que R6= CN. 0 grupo ciano em tais compostos pode ser submetido a modificação adicional para dar outros grupos R6. Tais modificações de ciano incluem i. redução a uma amina que pode ser subsequentemente convertida numa amida por acilação ou alquilação, ii. redução a um aldeido que pode ser submetido a reação de aminação redutiva para dar os derivados correspondentes. Nas reações de Negishi, reagentes de alquilzinco que podem ser preparados a partir de iodetos de alquilo (por exemplo N-Boc-3-iodoazetidina) são acoplados a compostos em que R6 = Br utilizando catalisadores de paládio ou níquel. Nos produtos resultantes, o grupo Rg introduzido pode ser convertido num grupo alternativo por modificações adicionais do grupo Rg nos passos subsequentes tais como desproteção, formação de amida ou alquilação.
Os compostos com substituintes Rg que são aminas ligadas através de uma ligação azoto-carbono podem ser introduzidos pela reação de acoplamento de Buchwald de compostos em que Rg = Br, seguida de modificação opcional do grupo Rg como se representa no Esquema 4. Na reação de Buchwald, os compostos em que Rg= Br são tratados com uma amina primária ou secundária (por exemplo piperazina-l-carboxilato de terc-butilo) na presença de um catalisador de paládio (por exemplo Pd(dba)2/BINAP) e uma base (por exemplo carbonato de césio) num solvente orgânico (por exemplo tolueno) a temperatura elevada. 0 produto do acoplamento de Buchwald pode ser submetido a modificações adequadas subsequentes para dar um substituinte Rg alternativo. Tais modificações são exemplificadas pela remoção de grupo de proteção, reações de acoplamento de amida, reações de aminação redutiva ou reações de alquilação.
Esquema 4
Os compostos com substituintes Rg que são grupos alquiltio ligados através de uma ligação enxofre-carbono podem ser preparados pela reação de acoplamento de compostos em que Rg = Br com tióis na presença de um catalisador de paládio e uma base fraca (por exemplo, DIPEA) num solvente orgânico a temperatura elevada. Os sulfuretos do produto de acoplamento podem ser submetidos a modificações adequadas subsequentes para dar um substituinte Rg alternativo. Tais modificações incluem reações de oxidação de enxofre para dar sulfóxidos e sulfonas, remoção de grupo de proteção, reações de acoplamento de amida, reações de aminação redutiva ou reações de alquilação.
Numa modificação da sintese geral no Esquema 1, dependendo da natureza do substituinte R7, poderia utilizar-se modificação quimica adicional subsequente ao Passo 6 do Esquema 1 para converter o substituinte R7 num substituinte R7 alternativo. Por exemplo um grupo amino protegido contido em R7 pode ser submetido a reação de desproteção (por exemplo, dissociação de grupo Boc) para dar grupos amino livres. Tais grupos amino livres podem ser submetidos a reações de aminação redutiva ou reações de alquilação para dar aminas substituídas. 0 Esquema 5 mostra a sintese geral de compostos de picolinamida. Partindo de 3-bromo-6-cloropicolinato de metilo, a oxidação ao N-óxido, seguida de cloração com oxicloreto de fósforo dá 3-bromo-4,6-dicloropicolinato de metilo. 0 grupo 4-cloro pode ser seletivamente substituído por várias mono- e dialquilaminas que podem conter também grupos funcionais ou funcionais protegidos que podem ser desprotegidos numa etapa posterior. 0 grupo 3-bromo pode ser mantido ou pode ser opcionalmente convertido num grupo R12 alternativo por reação de substituição adequada e modificações adicionais de grupo funcional. Tais reações incluem reações de acoplamento mediadas com catalisadores de paládio. Por exemplo o grupo 3-bromo pode ser convertido num grupo R12 = metilo por reação de Stille com tetrametilestanho. A hidrólise de éster seguida de acoplamento de amida com 3-(aminometil)-piridin-2-onas apropriadas produz compostos de picolinamida em que R6 é um grupo cloro. 0 grupo cloro pode ser opcionalmente convertido em grupos Rg alternativos por reações de substituição adequadas quer num passo final ou, alternativamente, antes do Passo 6 de hidrólise de éster. Os exemplos de tais reações de substituição incluem reações de cianação e aminação quer diretamente ou mediadas com catalisadores de paládio. Os compostos análogos em que R12 é cloro podem ser preparados de maneira análoga a partir de 3,4,6-tricloropiridina-2-carboxilato de metilo.
Esquema 5
As sínteses gerais das 3-(aminometil)-piridin-2(1H)-onas intermediárias para a reação de acoplamento de amida do Esquema 1 são representadas no Esquema 6. Num método, uma dicetona pode ser condensada com 2-cianoacetamida na presença de um reagente apropriado tal como acetato de piperidina num solvente polar tal como etanol para proporcionar uma cianopiridona (Passo 9) . Noutro método, quando R3 é H, uma cetona com alcinilo apropriadamente substituído pode ser condensada com 2-cianoacetamida na presença de um reagente apropriado tal como acetato de piperidina num solvente polar tal como etanol para proporcionar uma cianopiridona (Passo 11) . 0 grupo ciano pode ser reduzido sob condições apropriadas tais como hidrogenação na presença de níquel de Raney catalítico num solvente polar tal como amónio em metanol para proporcionar a amina (Passo 10).
Esquema 6
Adicionalmente, dependendo da natureza do grupo R2, R3 ou R4, pode utilizar-se modificação química adicional para converter cada um daqueles independentemente num substituinte alternativo. Uma amostragem representativa de tais modificações pode incluir hidrogenação, remoção de grupo de proteção seguida de reações de acoplamento de amida adicionais, reações de acoplamento catalisadas por paládio, reações de aminação redutiva e reações de alquilação. 0 Esquema 7 representa uma variante da via de síntese geral do Esquema 1 com base em materiais de partida de 3-amino-5-bromo-benzoato de metilo substituídos na posição 2 (substituinte é um grupo R12). Por sua vez, estes materiais de partida podem ser preparados a partir de ácidos 3-nitro-benzoico substituídos na posição 2 que estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparados por nitração de ácidos benzoicos substituídos na posição 2. Assim, a bromação de ácidos 3-nitro-benzoico substituídos na posição 2 com um reagente adequado tal como 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4- imidazolidinadiona produz os ácidos 3-nitro-5-bromobenzoicos substituídos na posição 2 apropriados. Uma variedade de métodos de esterificação e, em seguida, redução do grupo nitro pode ser então implementada sequencialmente para preparar os materiais de partida de 3-amino-5-bromo-benzoato de metilo substituído na posição 2 a partir de ácidos 3-nitro-5-bromo-benzoicos substituídos na posição 2.
Esquema 7
Como se representa no Esquema 7, o grupo R7 pode ser introduzido a partir de 3-amino-5-bromo-benzoatos de metilo substituídos na posição 2 no Passo 1 utilizando uma aminação redutiva com uma R7-cetona ou R7-aldeído apropriado na presença de um agente de redução apropriado tal como cianoboro-hidreto de sódio e ácido catalítico tal como ácido acético num solvente apropriado tal como metanol. De forma semelhante, os grupos Rs podem ser introduzidos no Passo 2 por aminação redutiva com Rg-cetona ou Rs-aldeído na presença de um agente de redução apropriado tal como cianoboro-hidreto de sódio e ácido catalítico tal como ácido acético num solvente apropriado tal como metanol. Alternativamente, uma variedade de grupos R8 pode ser introduzida por alquilação utilizando R8-LG, em que LG é um grupo de saída tal como iodo, na presença de uma base suave tal como carbonato de césio num solvente polar apropriado tal como acetonitrilo a uma temperatura apropriada tal como 80 °C. No passo 3, os grupos R6 diferentes de bromo podem ser introduzidos através de reações de acoplamento catalisadas por paládio. Exemplos de tais grupos R6 e métodos foram descritos acima. Por exemplo, as aminas podem ser introduzidas por reações de Buchwald e os grupos insaturados podem ser introduzidos por reações de Suzuki ou Sonogashiri. O substituinte R6 pode ser submetido a modificações adequadas subsequentes para dar um substituinte R6 alternativo. Uma amostragem representativa de tais modificações poderia incluir hidrogenação (por exemplo, para saturar grupos insaturados), remoção de grupo de proteção seguida de reações de acoplamento de amida adicionais, reações de aminação redutiva ou reações de alquilação. No passo 4 a unidade éster pode ser hidrolisada ao ácido correspondente utilizando uma base adequada, tal como hidróxido de sódio num solvente polar tal como etanol. No passo 5, o ácido pode ser submetido a uma reação de acoplamento de amida padrão, após o que a 3-(aminometil)-piridin-2-ona apropriada seria adicionada juntamente com um reagente de acoplamento de amidas adequado tal como PYBOP num solvente adequado tal como DMSO para dar a amida desejada. Dependendo da natureza do substituinte R7, poderia utilizar-se modificação química adicional subsequente ao Passo 5 do Esquema 4 para converter o substituinte R7 num substituinte R7 alternativo. Por exemplo um grupo amino protegido contido em R7 pode ser submetido a reação de desproteção (por exemplo, dissociação de grupo Boc) para dar grupos amino livres. Tais grupos amino livres podem ser submetidos a reações de aminação redutiva ou reações de alquilação para dar aminas substituídas. 0 Esquema 8 abaixo representa a síntese geral de 2-monoalquilamino e 2-dialquilmino-3,6-dissubstituído-isonicotinamidas em que o substituinte na posição 3 corresponde a R12 e o substituinte na posição 6 corresponde a R-6. No passo 1, o substituinte na posição 3 pode ser introduzido pelo método descrito por Epsztain J. et ai. Tetrahedron, 1991, v. 47, 1697-16708, por metalação de 2- cloro-isonicotinanilida com n-butil-lítio, seguida de captação com um iodeto de alquilo tal como iodeto de metilo ou aldeído ou outro grupo eletrófilo.
Esquema 8
Nos casos em que o reagente de captação produz um substituinte com um grupo funcional, este grupo pode ser protegido ou convertido noutro grupo funcional compatível com os passos quimicos subsequentes. No passo 2, pode realizar-se a hidrólise da amida de anilida sob condições ácidas padrão, seguida de sintese do éster metilico sob condições padrão, por exemplo como se mostra com iodeto de metilo e base, para dar os 2-cloro-3-substituido-isonicotinatos de metilo correspondentes. No passo 4, um grupo alquilamino pode ser introduzido por reação de acoplamento de Buchwald de uma monoalquilamina R7NH2 com os 2- cloro-3-substituido-isonicotinatos de metilo. Esta reação é bem precedida para diversos sistemas de 2-cloropiridina na literatura quimica. Num Passo 5 opcional para os compostos dialquilamino, os grupos R8 podem ser introduzidos por aminação redutiva com R8-cetona ou R8-aldeido na presença de um agente de redução apropriado tal como cianoboro-hidreto de sódio e ácido catalítico tal como ácido acético, num solvente apropriado tal como metanol. Alternativamente, uma variedade de grupos R8 pode ser introduzida por alquilação utilizando R8-LG, em que LG é um grupo de saida tal como iodo, na presença de um base suave tal como carbonato de césio num solvente polar apropriado tal como acetonitrilo a uma temperatura apropriada tal como 80 °C. No passo 6, a oxidação ao N-óxido, seguida de cloração com oxicloreto de fósforo dá 6-cloro-2-mono ou dialquilamino-3-substituido-isonicotinatos de metilo. No passo 7, a unidade éster pode ser hidrolisada ao ácido correspondente utilizando uma base adequada tal como hidróxido de sódio num solvente polar tal como etanol. No passo 8, o ácido pode ser submetido a uma reação de acoplamento de amida padrão, após o que seria adicionada a
3- (aminometil)-piridin-2-ona substituída apropriada, juntamente com um reagente de acoplamento de amidas adequado tal como PYBOP num solvente adequado tal como DMSO para dar a amida desejada. No passo 9, o grupo cloro pode ser opcionalmente convertido em grupos R6 alternativos por reações de substituição adequadas quer num passo final ou, alternativamente, antes do Passo 6 de hidrólise de éster. Os exemplos de tais reações de substituição incluem reações de cianação e aminação quer diretamente ou mediadas com catalisadores de paládio. 0 substituinte R6 pode ser submetido a modificações adequadas subsequentes para dar uma substituinte R6 alternativo. Uma amostragem representativa de tais modificações poderia incluir hidrogenação (por exemplo, para saturar grupos insaturados), remoção de grupo de proteção seguida de reações de acoplamento de amida adicionais, reações de aminação redutiva ou reações de alquilação. Dependendo da natureza do substituinte R7, pode utilizar-se passos de modificação química adicional para converter o substituinte R7 num substituinte R7 alternativo. Por exemplo um grupo amino protegido contido em R7 pode ser submetido a reação de desproteção (por exemplo, dissociação de grupo Boc) para dar grupos amino livres. Tais grupos amino livres podem ser submetidos a reações de aminação redutiva ou reações de alquilação para dar aminas substituídas.
Esquema 9
0 Esquema 9 representa uma síntese de análogos de benzeno em que Z é um grupo sulfureto, sulfóxido ou sulfona, seguindo uma via geral que utiliza química bem estabelecida. Começando com um ácido benzoico substituído tal como ácido 5-cloro-2-metilbenzoico, a nitração utilizando condições padrão tais como tratamento com H2SO4 conc. e HNO3 conc. pode proporcionar o análogo nitrado. A esterificação do ácido pode ser conseguida utilizando um agente alquilante tal como iodeto de metilo na presença de uma base tal como carbonato de sódio num solvente polar tal como DMF. 0 grupo nitro pode ser reduzido utilizando condições tais como ferro e cloreto de amónio num solvente prótico tal como etanol com aquecimento até uma temperatura tal como 80 °C. A anilina resultante pode ser convertida num brometo utilizando uma reação Sandmeyer tal como tratamento com CuBr2 e nitrito de t-butilo num solvente tal como acetonitrilo. Um acoplamento catalisado por paládio de um tiol com o brometo pode ser conseguido utilizando uma fonte de paládio tal como Pd(OAc)2 com um ligando tal como Xantfos na presença de uma base tal como N,N-diisopropiletilamina num solvente tal como 1,4-dioxano, aquecendo opcionalmente até uma temperatura tal como 100 °C. O éster pode ser hidrolisado com uma base aquosa tal como NaOH em água. O ácido resultante pode ser acoplado com a 3-(aminometil)-piridin-2-ona substituída apropriada (por exemplo 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona como representada no Esquema 9) utilizando condições de acoplamento de aminoácido padrão tais como PyBOP em DMSO. O tioéter resultante pode ser oxidado ao sulfóxido ou sulfona correspondente utilizando os equivalentes apropriados de um oxidante tal como m-CPBA num solvente tal como DCM. O grupo cloro Rg pode ser substituído por uma grupo R6 alternativo num Passo 10 adicional ou após o Passo 5 ou antes do acoplamento de amidas. Os exemplos de grupos R6 alternativos incluem substituintes que podem ser incorporados utilizando acoplamentos com paládio tal como uma reação de Buchwald para dar grupos amina (por exemplo morfolino). O substituinte R6 pode ser submetido a modificações adequadas subsequentes para dar um substituinte R6 alternativa. Uma amostragem representativa de tais modificações inclui remoção de grupo de proteção seguida de reações de acoplamento de amida adicionais, reações de aminação redutiva ou reações de alquilação.
Esquema 10
0 Esquema 10 representa uma sintese de análogos de benzeno modificados em que Z é um grupo éter, seguindo uma via geral que utiliza quimica bem estabelecida. Começando com uma anilina substituída tal como 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo, a anilina pode ser convertida num fenol utilizando uma reação de Sandmeyer, tal como tratamento com solução aquosa de NaNCç num ácido aquoso tal como H2SO4 a 50%. O fenol pode ser alquilado utilizando um agente alquilante tal como 4-metilbenzenossulfonato de tetra-hidro-2H-piran-4-ilo na presença de uma base apropriada tal como carbonato de césio num solvente polar tal como DMF, aquecendo opcionalmente até uma temperatura tal como 80 °C. O éster pode ser hidrolisado com uma base aquosa tal como NaOH em água. O ácido resultante pode ser acoplado com a 3-(aminometil)-piridin-2-ona substituída apropriada utilizando condições de acoplamento de aminoácido padrão tais como PyBOP em DMSO. 0 grupo cloro R6 pode ser substituído por um grupo R6 alternativo num adicional após o Passo 5 ou antes do acoplamento de amidas. Os exemplos de grupos R6 alternativos incluem substituintes que podem ser incorporados utilizando acoplamentos com paládio tais como uma reação de Buchwald para dar grupos amina (por exemplo morfolino) . 0 substituinte R6 pode ser submetido a modificações adequadas subsequentes para dar um substituinte R6 alternativo. Uma amostragem representativa de tais modificações inclui remoção de grupo de proteção seguida de reações de acoplamento de amida adicionais, reações de aminação redutiva ou alquilação.
Um especialista com conhecimentos médios na matéria reconhecerá que nos esquemas anteriores a ordem de muitos dos passos é intermutável. 3. Métodos de Tratamento
Os compostos da presente invenção inibem a atividade histona-metiltransferase de EZH2 ou um mutante da mesma e, por conseguinte, a presente invenção também proporciona compostos para utilização em métodos de tratamento de condições e doenças cujo curso pode ser influenciado através da modulação do estado de metilação de histonas ou outras proteínas, em que o referido estado de metilação é mediado, pelo menos em parte, pela atividade de EZH2. Certos compostos aqui divulgados são candidatos para tratar ou prevenir certas condições e doenças. Por sua vez, a modulação do estado de metilação das histonas pode influenciar o nível de expressão de genes alvo ativados por metilação, e/ou genes alvo suprimidos por metilação. 0 método inclui administrar a um indivíduo que necessita de tal tratamento, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo, solvato ou estereoisómero farmaceuticamente aceitável do mesmo. 0 distúrbio no qual a metilação proteica mediada por EZH2 desempenha um papel pode ser cancro ou uma condição pré-cancerosa. A presente invenção proporciona ainda um composto da presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para utilização num método de tratamento de cancro ou pré-cancro cujo curso pode ser influenciado através da modulação da metilação proteica mediada por EZH2, ou, para a preparação de um medicamento útil para o tratamento de tal cancro ou pré-cancro. Os cancros ilustrativos que podem ser tratados incluem linfomas, incluindo linfoma não Hodgkin, linfoma folicular (FL) e linfoma de células B grandes difusas (DLBCL); melanoma; e leucemia, incluindo CML. A condição pré-cancerosa ilustrativa inclui síndrome mielodisplásica (MDS; antigamente conhecida como pré-leucemia). A presente divulgação também proporciona métodos de proteção contra um distúrbio no qual a metilação proteica mediada por EZH2 desempenha um papel, num indivíduo que necessita da mesma, administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da presente divulgação ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, a um indivíduo que necessita desse tratamento. 0 distúrbio pode ser cancro, por exemplo, cancro no qual a metilação proteica mediada por EZH2 desempenha um papel. A presente divulgação também proporciona a utilização de composto da presente divulgação ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo, solvato ou estereoisómero farmaceuticamente aceitável do mesmo, para a preparação de um medicamento útil para a prevenção de um distúrbio proliferativo celular associado, pelo menos em parte, com a metilação proteica mediada por EZH2.
Os compostos desta invenção podem ser utilizados para modular a metilação de proteínas (por exemplo, histona), por exemplo, para modular a atividade enzimática histona-metiltransferase ou histona-desmetilase. Pelo menos alguns dos compostos da invenção podem ser utilizados in vivo ou in vitro para modular a metilação de proteínas. A metilação de histonas foi referida como estando envolvida na expressão aberrante de certos genes em cancros e no silenciamento de genes neuronais em células não neuronais. Pelo menos alguns compostos aqui descritos são candidatos adequados para tratar estas doenças, isto é, para diminuir a metilação ou restabelecer a metilação até aproximadamente ao seu nivel em células normais homólogas.
Os compostos que são moduladores da metilação podem ser utilizados para modular a proliferação de células. Por exemplo, nalguns casos, a proliferação excessiva pode ser reduzida com agentes que diminuem a metilação, enquanto a proliferação insuficiente pode ser estimulada com agentes que aumentam a metilação. Por conseguinte, as doenças que podem ser tratadas pelos compostos da divulgação poderiam incluir doenças hiperproliferativas, tais como o crescimento de células benignas e crescimento de células malignas.
Como aqui utilizado, um "indivíduo que necessita do mesmo" é um indivíduo que tem um distúrbio no qual a metilação proteica mediada por EZH2 desempenha um papel ou um indivíduo que tem um maior risco de desenvolver esse distúrbio relativamente à população em geral. Um indivíduo que necessita do mesmo pode ter uma condição pré-cancerosa. Preferencialmente, um indivíduo que necessita do mesmo tem cancro. Um "indivíduo" inclui um mamífero. 0 mamífero pode ser, por exemplo, um humano ou mamífero não humano apropriado, tal como primata, rato, ratazana, cão, gato, vaca, cavalo, cabra, camelo, ovelhas ou um porco. 0 indivíduo pode ser também uma ave ou ave de capoeira. Numa forma de realização, o mamífero é um humano.
Como aqui utilizado, o termo "distúrbio proliferativo celular" refere-se a condições em que o crescimento não regulado ou anormal, ou ambos, de células pode levar ao desenvolvimento de uma condição ou doença indesejada, a qual pode ser, ou pode não ser, cancerosa. Os distúrbios proliferativos celulares ilustrativos que podem ser tratados com os compostos da invenção abrangem uma variedade de condições em que a divisão celular está desregulada. Os distúrbios proliferativos celulares ilustrativos incluem, mas não se limitam a, neoplasmas, tumores benignos, tumores malignos, condições pré-cancerosas, tumores in situ, tumores encapsulados, tumores metastáticos, tumores líquidos, tumores sólidos, tumores imunológicos, tumores hematológicos, cancros, carcinomas, leucemias, linfomas, sarcomas e células em divisão rápida. 0 termo "célula em divisão rápida," como aqui utilizado, é definido como qualquer célula que se divide a uma velocidade que excede ou é superior àquela que é esperada ou observada entre células vizinhas ou justapostas dentro do mesmo tecido. Um distúrbio proliferativo celular inclui um pré-cancro ou uma condição pré-cancerosa. Um distúrbio proliferativo celular inclui cancro. Os métodos e utilizações aqui proporcionados podem ser utilizados para tratar ou aliviar um sintoma de cancro ou para identificar candidatos adequados para tais fins. 0 termo "cancro" inclui tumores sólidos, bem como, tumores hematológicos e/ou malignidades. Uma "célula de pré-cancro" ou "célula pré-cancerosa" é uma célula que manisfeta um distúrbio proliferativo celular que é um pré-cancro ou uma condição pré-cancerosa. Uma "célula de cancro" ou "célula cancerosa" é uma célula que manifesta um distúrbio proliferativo celular que é um cancro. Qualquer meio reprodutível de medição pode ser utilizado para identificar células cancerosas ou células pré-cancerosas. As células cancerosas ou células pré-cancerosas podem ser identificadas por tipagem ou classificação histológica de uma amostra de tecido (por exemplo, uma amostra de biopsia). As células cancerosas ou células pré-cancerosas podem ser identificadas através da utilização de marcadores moleculares apropriados.
As condições ou distúrbios não cancerosos ilustrativos que podem ser tratados utilizando um ou mais compostos da presente divulgação incluem, mas não se limitam a, artrite reumatoide; inflamação; doença autoimune; condições linfoproliferativas; acromegalia; espondilite reumatoide; osteoartrite; gota, outras condições artríticas; septicemia; choque sético; choque endotóxico; septicemia gram-negativa; síndrome de choque tóxico; asma; síndrome de insuficiência respiratória do adulto; doença pulmonar obstrutiva crónica; inflamação pulmonar crónica; doença inflamatória do intestino; doença de Crohn; psoríase; eczema; colite ulcerosa; fibrose pancreática; fibrose hepática; doença renal aguda e crónica; síndrome do intestino irritável; piresis; reestenose; malária cerebral; acidente vascular cerebral e lesão isquémica; traumatismo nervoso; doença de Alzheimer; doença de Huntington; doença de Parkinson; dor aguda e crónica; rinite alérgica; conjuntivite alérgica; insuficiência cardíaca crónica; síndrome coronária aguda; caquexia; malária; lepra; leishmaniose; doença de Lyme; síndrome de Reiter; sinovite aguda; degenerescência muscular, bursite; tendinite; tenossinovite; síndrome de discos intervetebrais com hérnias, ruturas ou prolapso; osteopetrose; trombose; reestenose; silicose; sarcoidose pulmonar; doenças de reabsorção óssea, tais como osteoporose; reação do enxerto contra o hospedeiro; Esclerose Múltipla; lúpus; fibromialgia; SIDA e outras doenças virais tais como Herpes Zóster, Herpes Simplex I ou II, virus influenza e citomegalovirus; e diabetes mellitus.
Os cancros ilustrativos que podem ser tratados utilizando um ou mais compostos da presente invenção incluem, mas não se limitam a, carcinoma adrenocortical, cancros relacionados com SIDA, linfoma relacionado com SIDA, cancro anal, cancro anorrectal, cancro do canal anal, cancro do apêndice, astrocitoma cerebeloso da infância, astrocitoma cerebral da infância, carcinoma basocelular, cancro da pele (não melanoma), cancro biliar, cancro das vias biliares extra-hepáticas, cancro das vias biliares intra-hepáticas, cancro da bexiga, cancro da bexiga urinária, cancro do osso e articulação, osteossarcoma e histiocitoma fibroso maligno, cancro do cérebro, tumor cerebral, glioma do tronco cerebral, astrocitoma cerebeloso, astrocitoma/glioma maligno cerebral, ependimoma, meduloblastoma, tumores neuroectodérmicos primitivos supratentoriais, glioma do canal visual e hipotalâmico, cancro da mama, adenomas brônquicos/carcinoides, tumor carcinoide, gastrointestinal, cancro do sistema nervoso, linfoma do sistema nervoso, cancro do sistema nervoso central, linfoma do sistema nervoso central, cancro cervical, cancros da infância, leucemia linfocitica crónica, leucemia mielógena crónica, distúrbios mieloproliferativos crónicos, cancro do cólon, cancro colorretal, linfoma de células T cutâneo, neoplasma linfoide, micose fungoide, Sindrome de Seziary, cancro do endométrio, cancro esofágico, tumor das células germinativas extracranianas, tumor das células germinativas extragonadais, cancro das vias biliares extra-hepáticas, cancro do olho, melanoma intraocular, retinoblastoma, cancro da vesícula biliar, cancro gástrico (estômago), tumor carcinoide gastrointestinal, tumor do estroma gastrointestinal (GIST), tumor de células germinativas, tumor de células germinativas ovarianas, glioma de tumor trofoblástico gestacional, cancro da cabeça e do pescoço, cancro hepatocelular (fígado), linfoma de Hodgkin, cancro hipofaríngeo, melanoma intraocular, cancro ocular, tumores de células de ilhéus (pâncreas endócrino), sarcoma de Kaposi, cancro do rim, cancro renal, cancro do rim, cancro laríngeo, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloide aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena crónica, leucemia de tricoleucitos, cancro dos lábios e cavidade oral, cancro do fígado, cancro do pulmão, cancro das células não pequenas do pulmão, cancro das células pequenas do pulmão, linfoma relacionado com SIDA, linfoma não Hodgkin, linfoma do sistema nervoso central primário, Waldenstram macroglobulinemia, meduloblastoma, melanoma, melanoma intraocular (olho), carcinoma de células de merkel, mesotelioma maligno, mesotelioma, cancro escamoso metastático do pescoço, cancro da boca, cancro da língua, síndrome de neoplasia endócrina múltipla, micose fungoide, síndromes mielodisplásicas, doenças mielodisplásicas/ mieloproliferativas, leucemia mielógena crónica, leucemia mieloide aguda, mieloma múltiplo, distúrbios mieloproliferativos crónicos, cancro nasofaríngeo, neuroblastoma, cancro oral, cancro da cavidade oral, cancro orofaríngeo, cancro do ovário, cancro epitelial ovariano, tumor ovariano de baixo potencial maligno, cancro pancreático, cancro pancreático das células de ilhéus, cancro do seio paranasal e cavidade nasal, cancro da paratireoide, cancro peniano, cancro faríngeo, feocromocitoma, pineoblastoma e tumores neuroectodérmicos primitivos supratentoriais, tumor da pituitária, neoplasma/mieloma múltiplo das células plasmáticas, blastoma pleuropulmonar, cancro da próstata, cancro retal, cancro das células de transição da pélvis renal e uréter, retinoblastoma, rabdomiossarcoma, cancro da glândula salivar, família ewing de tumores de sarcoma, sarcoma de Kaposi, sarcoma de tecidos moles, cancro do útero, sarcoma uterino, cancro da pele (não melanoma), cancro da pele (melanoma), carcinoma cutâneo das células de merkel, cancro do intestino delgado, sarcoma de tecidos moles, carcinoma de células escamosas, cancro do estômago (gástrico), tumores neuroectodérmicos primitivos supratentoriais, cancro testicular, cancro da garganta, timoma, timoma e carcinoma tímico, cancro da tireoide, cancro das células de transição da pélvis renal e uréter e outros órgãos urinários, tumor trofoblástico gestacional, cancro uretral, cancro uterino endométrico, sarcoma uterino, cancro do corpo uterino, cancro vaginal, cancro vulvar e tumor de Wilm.
Um "distúrbio proliferativo celular do sistema hematológico" é um distúrbio proliferativo celular que envolve células do sistema hematológico. Um distúrbio proliferativo celular do sistema hematológico pode incluir linfoma, leucemia, neoplasmas mieloides, neoplasmas de mastócitos, mielodisplasia, gamapatia monoclonal benigna, granulomatose linfomatoide, papulose linfomatoide, policitemia vera, leucemia mielocítica crónica, metaplasia mieloide agnogénica e trombocitemia essencial. Um distúrbio proliferativo celular do sistema hematológico pode incluir hiperplasia, displasia e metaplasia de células do sistema hematológico. Num aspeto, as composições da presente invenção podem ser utilizadas para tratar um cancro selecionado do grupo que consiste em um cancro hematológico da presente invenção ou um distúrbio proliferativo das células hematológicas da presente invenção ou utilizadas para identificar candidatos adequados para tais fins. Um cancro hematológico da presente invenção pode incluir mieloma múltiplo, linfoma (incluindo linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, linfomas da infância e linfomas de origem linfocitica e cutânea), leucemia (incluindo leucemia da infância, leucemia de tricoleucitos, leucemia linfocitica aguda, leucemia mielocitica aguda, leucemia linfocitica crónica, leucemia mielocitica crónica, leucemia mielógena crónica e leucemia de mastócitos), neoplasmas mieloides e neoplasmas de mastócitos.
Um "distúrbio proliferativo celular do pulmão" é um distúrbio proliferativo celular que envolve células do pulmão. Os distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir todas as formas de distúrbios proliferativos celulares que afetam as células do pulmão. Os distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir cancro do pulmão, um pré-cancro ou condição pré-cancerosa do pulmão, crescimentos ou lesões benignas do pulmão, e crescimentos ou lesões malignas do pulmão, e lesões metastáticas em tecidos e órgãos do corpo diferentes do pulmão. Num aspeto, as composições da presente invenção podem ser utilizadas para tratar cancro do pulmão ou distúrbios proliferativos celulares do pulmão, ou utilizadas para identificar candidatos adequados para tais fins. 0 cancro do pulmão pode incluir todas as formas de cancro do pulmão. 0 cancro do pulmão pode incluir neoplasmas malignos do pulmão, carcinoma in situ, tumores carcinoides tipicos e tumores carcinoides atípicos. 0 cancro do pulmão pode incluir cancro das células pequenas do pulmão ("SCLC"), cancro das células não pequenas do pulmão ("NSCLC"), carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, carcinoma de células pequenas, carcinoma de células grandes, carcinoma de células adenoescamosas e mesotelioma. 0 cancro do pulmão pode incluir "carcinoma da cicatriz," carcinoma broncoalveolar, carcinoma de células gigantes, carcinoma de células fusiformes e carcinoma neuroendócrino de células grandes. 0 cancro do pulmão pode incluir neoplasmas do pulmão com heterogeneidade histológica e ultraestrutural (por exemplo, tipos de células mistas).
Os distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir todas as formas de distúrbios proliferativos celulares que afetam as células do pulmão. Os distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir cancro do pulmão, condições pré-cancerosas do pulmão. Os distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir hiperplasia, metaplasia e displasia do pulmão. Os distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir hiperplasia induzida por asbestos, metaplasia escamosa e metaplasia mesotelial reativa benigna. Os distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir a substituição do epitélio colunar por epitélio escamoso estratificado e displasia da mucosa. Os indivíduos expostos a agentes ambientais nocivos inalados tais como fumo de cigarro e asbestos podem ter um maior risco para desenvolver distúrbios proliferativos celulares do pulmão. As doenças pulmonares prévias que podem predispor um indivíduo ao desenvolvimento de distúrbios proliferativos celulares do pulmão podem incluir doença pulmonar intersticial crónica, doença pulmonar necrosante, esclerodermia, doença reumatoide, sarcoidose, pneumonite intersticial, tuberculose, pneumonias repetidas, fibrose pulmonar idiopática, granulomas, asbestose, alveolite fibrosante e doença de Hodgkin.
Um "distúrbio proliferativo celular do cólon" é um distúrbio proliferativo celular que envolve células do cólon. Preferencialmente, um distúrbio proliferativo celular do cólon é cancro do cólon. Num aspeto, as composições da presente invenção podem ser utilizadas para tratar cancro do cólon ou distúrbios proliferativos celulares do cólon, ou utilizadas para identificar candidatos adequados para tais fins. 0 cancro do cólon pode incluir todas as formas de cancro do cólon. 0 cancro do cólon pode incluir cancros do cólon esporádico e hereditário. 0 cancro do cólon pode incluir neoplasmas malignos do cólon, carcinoma in situ, tumores carcinoides típicos e tumores carcinoides atípicos. 0 cancro do cólon pode incluir adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas e carcinoma de células adenoescamosas. 0 cancro do cólon pode ser associado a uma síndrome hereditária selecionada do grupo que consiste em cancro colorretal não polipose hereditário, polipose adenomatosa familiar, síndrome de Gardner, síndrome de Peutz-Jeghers, síndrome de Turcot e polipose juvenil. 0 cancro do cólon pode ser provocado por uma síndrome hereditária selecionada do grupo que consiste em cancro colorretal não polipose hereditário, polipose adenomatosa familiar, síndrome de Gardner, síndrome de Peutz-Jeghers, síndrome de Turcot e polipose juvenil.
Os distúrbios proliferativos celulares do cólon podem incluir todas as formas de distúrbios proliferativos celulares que afetam as células do cólon. Os distúrbios proliferativos celulares do cólon podem incluir cancro do cólon, condições pré-cancerosas do cólon, pólipos adenomatosos do cólon e lesões metacrónicas do cólon. Um distúrbio proliferativo celular do cólon pode incluir um adenoma. Os distúrbios proliferativos celulares do cólon podem ser caracterizados por hiperplasia, metaplasia e displasia do cólon. As doenças prévias do cólon que podem predispor um indivíduo ao desenvolvimento de distúrbios proliferativos celulares do cólon podem incluir cancro do cólon anterior. A doença atual que pode predispor um indivíduo ao desenvolvimento de distúrbios proliferativos celulares do cólon pode incluir doença de Crohn e colite ulcerosa. Um distúrbio proliferativo celular do cólon pode estar associado a uma mutação num gene selecionado do grupo que consiste em p53, ras, FAP e DCC. Um indivíduo pode ter um risco elevado para desenvolver um distúrbio proliferativo celular do cólon devido à presença de uma mutação num gene selecionado do grupo que consiste em p53, ras, FAP e DCC.
Um "distúrbio proliferativo celular do pâncreas" é um distúrbio proliferativo celular que envolve células do pâncreas. Os distúrbios proliferativos celulares do pâncreas podem incluir todas as formas de distúrbios proliferativos celulares que afetam as células pancreáticas. Os distúrbios proliferativos celulares do pâncreas podem incluir cancro pancreático, um pré-cancro ou condição pré-cancerosa do pâncreas, hiperplasia do pâncreas e displasia do pâncreas, crescimentos ou lesões benignas do pâncreas, e crescimentos ou lesões malignas do pâncreas, e lesões metastáticas em tecidos e órgãos do corpo diferentes do pâncreas. 0 cancro pancreático inclui todas as formas de cancro do pâncreas. 0 cancro pancreático pode incluir adenocarcinoma ductal, carcinoma adenoescamoso, carcinoma de células gigantes pleomórficas, adenocarcinoma mucinoso, carcinoma de células a gigantes análogas a osteoclastos, cistadenocarcinoma mucinoso, carcinoma acinoso, carcinoma de células grandes não classificadas, carcinoma de células pequenas, pancreatoblastoma, neoplasma papilar, cistadenoma mucinoso, neoplasma quistico papilar e cistadenoma seroso. 0 cancro pancreático pode incluir também neoplasmas pancreáticos possuindo heterogeneidade histológica e ultraestrutural (por exemplo, tipos de células mistas).
Um "distúrbio proliferativo celular da próstata" é um distúrbio proliferativo celular que envolve células da próstata. Os distúrbios proliferativos celulares da próstata podem incluir todas as formas de distúrbios proliferativos celulares que afetam as células da próstata. Os distúrbios proliferativos celulares da próstata podem incluir cancro da próstata, um pré-cancro ou condição pré-cancerosa da próstata, crescimentos ou lesões benignas da próstata, e crescimentos ou lesões malignas da próstata, e lesões metastáticas em tecidos e órgãos do corpo diferentes da próstata. Os distúrbios proliferativos celulares da próstata podem incluir hiperplasia, metaplasia e displasia da próstata.
Um "distúrbio proliferativo celular da pele" é um distúrbio proliferativo celular que envolve células da pele. Os distúrbios proliferativos celulares da pele podem incluir todas as formas de distúrbios proliferativos celulares que afetam as células da pele. Os distúrbios proliferativos celulares da pele podem incluir um pré-cancro ou condição pré-cancerosa da pele, crescimentos ou lesões benignas da pele, melanoma, melanoma maligno e outros crescimentos ou lesões malignas da pele, e lesões metastáticas em tecidos e órgãos do corpo diferentes da pele. Os distúrbios proliferativos celulares da pele podem incluir hiperplasia, metaplasia e displasia da pele.
Um "distúrbio proliferativo celular do ovário" é um distúrbio proliferativo celular que envolve células do ovário. Os distúrbios proliferativos celulares do ovário podem incluir todas as formas de distúrbios proliferativos celulares que afetam as células do ovário. Os distúrbios proliferativos celulares do ovário podem incluir um pré-cancro ou condição pré-cancerosa do ovário, crescimentos ou lesões benignas do ovário, cancro do ovário, crescimentos ou lesões malignas do ovário, e lesões metastáticas em tecidos e órgãos do corpo diferentes do ovário. Os distúrbios proliferativos celulares da pele podem incluir hiperplasia, metaplasia e displasia de células do ovário.
Um "distúrbio proliferativo celular da mama" é um distúrbio proliferativo celular que envolve células da mama. Os distúrbios proliferativos celulares da mama podem incluir todas as formas de distúrbios proliferativos celulares que afetam as células da mama. Os distúrbios proliferativos celulares da mama podem incluir cancro da mama, um pré-cancro ou condição pré-cancerosa da mama, crescimentos ou lesões benignas da mama, e crescimentos ou lesões malignas da mama e lesões metastáticas em tecidos e órgãos do corpo diferentes da mama. Os distúrbios proliferativos celulares da mama podem incluir hiperplasia, metaplasia e displasia da mama.
Um distúrbio prolif erativo celular da mama pode ser uma condição pré-cancerosa da mama. As composições da presente invenção podem ser utilizadas para tratar uma condição pré-cancerosa da mama. Uma condição pré-cancerosa da mama pode incluir hiperplasia atipica da mama, carcinoma ductal in situ (DCIS), carcinoma intraductal, carcinoma lobular in situ (LCIS), neoplasia lobular e crescimento ou lesão da mama de etapa 0 ou grau 0 (por exemplo, cancro ou carcinoma da mama de etapa 0 ou grau 0 in situ) . Uma condição pré-cancerosa da mama pode ser faseada de acordo com o esquema de classificação TNM como aceite pelo American Joint Committee on Câncer (AJCC), onde ao tumor primário (T) foi atribuida uma etapa de TO ou Tis; e onde foi atribuido aos gânglios linfáticos regionais (N) uma etapa de NO; e onde foi atribuido a metástases distantes (M) uma etapa de MO. 0 distúrbio proliferativo celular da mama pode ser cancro da mama. Num aspeto, as composições da presente invenção podem ser utilizadas para tratar cancro da mama ou utilizadas para identificar candidatos adequados para tais fins. 0 cancro da mama pode incluir todas as formas de cancro da mama. 0 cancro da mama inclui todas as formas de cancro da mama. 0 cancro da mama pode incluir cancros epiteliais primários da mama. 0 cancro da mama pode incluir cancros nos quais a mama é envolvida por outros tumores tais como linfoma, sarcoma ou melanoma. 0 cancro da mama pode incluir carcinoma da mama, carcinoma ductal da mama, carcinoma lobular da mama, carcinoma indiferenciado da mama, doença de Brodie da mama, angiossarcoma da mama e linfoma primário da mama. 0 cancro da mama pode incluir o cancro da mama de Etapa I, II, IIIA, IIIB, IIIC e IV. 0 carcinoma ductal da mama pode incluir carcinoma invasivo, carcinoma invasivo in situ com componente intraductal predominante, cancro inflamatório da mama e um carcinoma ductal da mama com um tipo histológico selecionado do grupo que consiste em comedão, mucinoso (coloide), medular, medular com infiltrado linfocitico, papilar, cirroso e tubular. 0 carcinoma lobular da mama pode incluir carcinoma lobular invasivo com componente in situ predominante, carcinoma lobular invasivo e carcinoma lobular infiltrante. 0 cancro da mama pode incluir doença de Paget, doença de Paget com carcinoma intraductal e doença de Paget com carcinoma ductal invasivo. 0 cancro da mama pode incluir neoplasmas da mama possuindo heterogeneidade histológica e ultraestrutural (por exemplo, tipos de células mistas).
Um composto da presente invenção ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser utilizado para tratar cancro da mama ou utilizado para identificar candidatos adequados para tais fins. Um cancro da mama que é para ser tratado pode incluir cancro da mama familiar. Um cancro da mama que é para ser tratado pode incluir cancro da mama esporádico. Um cancro da mama que é para ser tratado pode surgir num indivíduo masculino. Um cancro da mama que é para ser tratado pode surgir num indivíduo feminino. Um cancro da mama que é para ser tratado pode surgir num indivíduo feminino pré-menopáusico ou um indivíduo feminino pós-menopáusico. Um cancro da mama que é para ser tratado pode surgir num indivíduo com uma idade superior ou igual a 30 anos ou um indivíduo com menos de 30 anos de idade. Um cancro da mama que é para ser tratado surgiu num indivíduo com uma idade superior ou igual a 50 anos ou um indivíduo com menos de 50 anos de idade. Um cancro da mama que é para ser tratado pode surgir num indivíduo com uma idade superior ou igual a 70 anos ou um indivíduo com menos de 70 anos de idade.
Um cancro da mama que é para ser tratado pode ser tipificado para identificar uma mutação familiar ou espontânea em BRCA1, BRCA2 ou p53. Um cancro da mama que é para ser tratado pode ser tipificado como tendo uma amplificação do gene HER2/neu, como sobreexpressão do HER2/neu ou como tendo um nível de expressão baixo, intermediário ou alto de HER2/neu. Um cancro da mama que é para ser tratado pode ser tipificado para um marcador selecionado do grupo que consiste em recetor de estrogénio (ER) , recetor de progesterona (PR), recetor do fator de crescimento epidérmico humano-2, Ki-67, CA15-3, CA 27-29 e c-Met. Um cancro da mama que é para ser tratado pode ser tipificado como desconhecido em termos de ER, rico em ER ou pobre em ER. Um cancro da mama que é para ser tratado pode ser tipificado como negativo para ER ou positivo para ER. A tipagem do ER de um cancro da mama pode ser realizada por qualquer meio reprodutível. A tipagem do ER de um cancro da mama pode ser realizada como estabelecido em Onkologie 27: 175-179 (2004) . Um cancro da mama que é para ser tratado pode ser tipificado como desconhecido em termos de PR, rico em PR ou pobre em PR. Um cancro da mama que é para ser tratado pode ser tipificado como negativo para PR ou positivo para PR. Um cancro da mama que é para ser tratado pode ser tipificado como positivo para o recetor ou negativo para o recetor. Um cancro da mama que é para ser tratado pode ser tipificado como estando associado a niveis elevados de CA 15-3 ou CA 27-29, ou ambos, no sangue.
Um cancro da mama que é para ser tratado pode incluir um tumor localizado da mama. Um cancro da mama que é para ser tratado pode incluir um tumor da mama que está associado a uma biopsia de gânglios linfáticos sentinela (SLN) negativa. Um cancro da mama que é para ser tratado pode incluir um tumor da mama que está associado a uma biopsia de gânglios linfáticos sentinela (SLN) positiva. Um cancro da mama que é para ser tratado pode incluir um tumor da mama que está associado a um ou mais gânglios linfáticos axilares positivos, em que os gânglios linfáticos axilares foram faseados por qualquer método aplicável. Um cancro da mama que é para ser tratado pode incluir um tumor da mama que foi tipificado como tendo um estado nodal negativo (por exemplo, gânglios negativos) ou estado nodal positivo (por exemplo, gânglios positivos). Um cancro da mama que é para ser tratado pode incluir um tumor da mama que sofreu metástase para outras localizações no corpo. Um cancro da mama que é para ser tratado pode ser classificado como tendo sofrido metástase para uma localização selecionada do grupo que consiste em osso, pulmão, figado ou cérebro. Um cancro da mama que é para ser tratado pode ser classificado de acordo com uma caracteristica selecionada do grupo que consiste em metastático, localizado, regional, local-regional, localmente avançado, distante, multicêntrico, bilateral, ipsilateral, contralateral, recentemente diagnosticado, recorrente e inoperável.
Um composto da presente divulgação ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser utilizado para tratar ou prevenir um distúrbio proliferativo celular da mama ou para tratar ou prevenir cancro da mama, num indivíduo que tem um maior risco de desenvolver cancro da mama relativamente à população em geral, ou utilizado para identificar candidatos adequados para tais fins. Um indivíduo com um maior risco de desenvolver cancro da mama relativamente à população em geral é um indivíduo feminino com antecedentes familiares ou história pessoal de cancro da mama. Um indivíduo com um maior risco de desenvolver cancro da mama relativamente à população em geral é um indivíduo feminino que tem uma mutação da linha germinal ou espontânea em BRCA1 ou BRCA2, ou ambos. Um indivíduo com um maior risco de desenvolver cancro da mama relativamente à população em geral é um indivíduo feminino com antecedentes familiares de cancro da mama e uma mutação da linha germinal ou espontânea em BRCA1 ou BRCA2, ou ambos. Um indivíduo com um maior risco de desenvolver cancro da mama relativamente à população em geral é um indivíduo feminino que tem mais de 30 anos de idade, mais de 40 anos de idade, mais de 50 anos de idade, mais de 60 anos de idade, mais de 70 anos de idade, mais de 80 anos de idade ou mais de 90 anos de idade. Um indivíduo com um maior risco de desenvolver cancro da mama relativamente à população em geral é um indivíduo com hiperplasia atipica da mama, carcinoma ductal in situ (DCIS), carcinoma intraductal, carcinoma lobular in situ (LCIS), neoplasia lobular ou um crescimento de etapa 0 ou lesão da mama (por exemplo, cancro ou carcinoma da mama de etapa 0 ou grau 0 in situ).
Um cancro da mama que é para ser tratado pode ser classificado histologicamente de acordo com o sistema de Scarff-Bloom-Richardson, em que foi atribuído ao tumor da mama uma pontuação de contagem de mitose de 1, 2 ou 3; uma pontuação de pleomorfismo nuclear de 1, 2 ou 3; uma pontuação de formação de túbulos de 1, 2 ou 3; e uma pontuação de Scarff-Bloom-Richardson total entre 3 e 9. Um cancro da mama que é para ser tratado pode ser classificado com um grau de tumor de acordo com o International Consensus Panei on the Treatment of Breast Câncer selecionado do grupo que consiste em grau 1, grau 1-2, grau 2, grau 2-3 ou grau 3.
Um cancro que é para ser tratado pode ser faseado de acordo com o sistema de classificação TNM do American Joint Committee on Câncer (AJCC), onde foi atribuída ao tumor (T) uma etapa de TX, Tl, Tlmic, Tla, Tlb, Tlc, T2, T3, T4, T4a, T4b, T4c ou T4d; e onde foi atribuído aos gânglios linfáticos regionais (N) uma etapa de NX, NO, Nl, N2, N2a, N2b, N3, N3a, N3b ou N3c; e onde pode ser atribuída a metástases distantes (M) uma etapa de MX, MO ou Ml. Um cancro que é para ser tratado pode ser faseado de acordo com uma classificação do American Joint Committee on Câncer (AJCC) como Etapa I, Etapa IIA, Etapa IIB, Etapa IIIA, Etapa IIIB, Etapa IIIC ou Etapa IV. Um cancro que é para ser tratado pode ser classificado com um grau de acordo com uma classificação AJCC como Grau GX (por exemplo, o grau não pode ser avaliado), Grau 1, Grau 2, Grau 3 ou Grau 4. Um cancro que é para ser tratado pode ser faseado de acordo com uma classificação patológica AJCC (pN) de pNX, pNO, PNO (I-), PNO (I+), PNO (mol-), PNO (mol+), PN1, PNl(mi), PNla, PNlb, PNlc, pN2, pN2a, pN2b, pN3, pN3a, pN3b ou pN3c.
Um cancro que é para ser tratado pode incluir um tumor que foi determinado como sendo inferior ou igual a cerca de 2 centímetros de diâmetro. Um cancro que é para ser tratado pode incluir um tumor que foi determinado como tendo desde cerca de 2 a cerca de 5 centímetros de diâmetro. Um cancro que é para ser tratado pode incluir um tumor que foi determinado como sendo superior ou igual a cerca de 3 centímetros de diâmetro. Um cancro que é para ser tratado pode incluir um tumor que foi determinado como sendo superior a 5 centímetros de diâmetro. Um cancro que é para ser tratado pode ser classificado pelo aspeto microscópico como bem diferenciado, moderadamente diferenciado, mal diferenciado ou indiferenciado. Um cancro que é para ser tratado pode ser classificado pelo aspeto microscópico em relação à contagem da mitose (por exemplo, quantidade de divisão celular) ou pleomorfismo nuclear (por exemplo, alteração nas células) . Um cancro que é para ser tratado pode ser classificado pelo aspeto microscópico como estando associado a áreas de necrose (por exemplo, áreas de células em processo de morte ou degeneração). Um cancro que é para ser tratado pode ser classificado como tendo um cariótipo anormal, tendo um número anormal de cromossomas ou tendo um ou mais cromossomas que são anormais em aspeto. Um cancro que é para ser tratado pode ser classificado como sendo aneuploide, triploide, tetraploide ou como tendo uma ploidia alterada. Um cancro que é para ser tratado pode ser classificado como tendo uma translocação cromossómica ou uma supressão ou duplicação de um cromossoma completo ou uma região de supressão, duplicação ou amplificação de uma porção de um cromossoma.
Um cancro que é para ser tratado pode ser avaliado por citometria e ADN, citometria de fluxo ou citometria de imagem. Um cancro que é para ser tratado pode ser tipificado como tendo 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ou 90% de células na etapa de sintese da divisão celular (por exemplo, na fase S da divisão celular) . Um cancro que é para ser tratado pode ser tipificado como tendo uma fração baixa na fase S ou uma fração alta na fase S.
Como aqui utilizada, uma "célula normal" é uma célula que não pode ser classificada como parte de um "distúrbio proliferativo celular". Uma célula normal carece de crescimento não regulado ou anormal, ou ambos, que pode levar ao desenvolvimento de uma condição ou doença indesejada. Preferencialmente, uma célula normal possui mecanismos de ponto de controlo do ciclo celular que funcionam normalmente.
Como aqui utilizado, "pôr em contacto uma célula" refere-se a uma condição em que um composto ou outra composição de matéria está em contacto direto com uma célula ou está suficientemente próximo para induzir um efeito biológico desejado numa célula.
Como aqui utilizado, "composto candidato" refere-se a um composto da presente divulgação ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, que foi ou será testado em um ou mais ensaios biológicos in vitro ou in vivo, para determinar se esse composto tem probabilidade de desencadear uma resposta biológica ou médica desejada numa célula, tecido, sistema, animal ou humano que está a ser procurada por um investigador ou clinico. Um composto candidato é um composto da presente divulgação ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo. A resposta biológica ou médica pode ser o tratamento de cancro. A resposta biológica ou médica pode ser o tratamento ou prevenção de um distúrbio proliferativo celular. A resposta ou efeito biológico pode incluir também uma alteração na proliferação ou crescimento celular que ocorre in vitro ou num modelo animal, bem como outras alterações biológicas que são observáveis in vitro. Os ensaios biológicos in vitro ou in vivo podem incluir, mas não se limitam a, ensaios de atividade enzimática, ensaios de alteração da mobilidade eletroforética, ensaios de gene repórter, ensaios de viabilidade celular in vitro e os ensaios aqui descritos.
Como aqui utilizado, "monoterapia" refere-se à administração de um único composto ativo ou terapêutico a um indivíduo que necessita do mesmo. Preferencialmente, a monoterapia envolverá a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ativo. Por exemplo, a monoterapia de cancro com um dos compostos da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, análogo ou derivado farmaceuticamente aceitável dos mesmos, a um indivíduo que necessita de tratamento de cancro. A monoterapia pode ser posta em contraste com a terapia de associação, em que é administrada uma associação de múltiplos compostos ativos, preferencialmente com cada componente da associação presente numa quantidade terapeuticamente eficaz. A monoterapia com um composto da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser mais eficaz do que a terapia de associação na indução de um efeito biológico desejado.
Como aqui utilizado, "tratamento" ou "tratar" descreve a gestão e tratamento de um doente para combater uma doença, condição ou distúrbio, e inclui a administração de um composto da presente divulgação, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, para aliviar os sintomas ou complicações de uma doença, condição ou distúrbio ou para eliminar a doença, condição ou distúrbio. 0 termo "tratar" pode incluir também tratamento de uma célula in vitro ou um modelo animal.
Um composto da presente divulgação, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser também utilizado para prevenir uma doença, condição ou distúrbio relevante, ou utilizado para identificar candidatos adequados para tais fins. Como aqui utilizado, "prevenção" ou "prevenir" descreve a redução ou eliminação do aparecimento dos sintomas ou complicações de tal doença, condição ou distúrbio.
Como aqui utilizado, o termo "aliviar" destina-se a descrever um processo através do qual a gravidade de um sinal ou sintoma de um distúrbio é diminuído. É importante referir que, um sinal ou sintoma pode ser aliviado sem ser eliminado. A administração de composições farmacêuticas da divulgação pode levar à eliminação de um sinal ou sintoma, contudo, a eliminação não é necessária. É esperado que as dosagens eficazes diminuam a gravidade de um sinal ou sintoma. Por exemplo, um sinal ou sintoma de um distúrbio tal como cancro, que pode ocorrer em localizações múltiplas, é aliviado se a gravidade do cancro diminuir em pelo menos uma das múltiplas localizações.
Como aqui utilizado, o termo "gravidade" destina-se a descrever o potencial do cancro para se transformar de um estado pré-canceroso, ou benigno, para um estado maligno. Alternativamente, ou além disso, gravidade destina-se a descrever uma etapa do cancro, por exemplo, de acordo com o sistema TNM (aceite pelo International Union Against Câncer (UICC) e o American Joint Committee on Câncer (AJCC)) ou por outros métodos reconhecidos na técnica. A etapa do cancro refere-se à extensão ou gravidade do cancro, com base em fatores tais como a localização do tumor primário, tamanho do tumor, número de tumores e envolvimento dos gânglios linfáticos (disseminação do cancro para os gânglios linfáticos). Alternativamente, ou além disso, gravidade destina-se a descrever o grau do tumor por métodos reconhecidos na técnica (ver, National Câncer Institute, www.cancer.gov). 0 grau do tumor é um sistema utilizado para classificar células cancerosas em termos de quanto anormais elas aparecem sob um microscópio e quão rapidamente o tumor tem probabilidade de crescer e disseminar-se. Muitos fatores são considerados quando se determina o grau do tumor, incluindo a estrutura e padrão de crescimento das células. Os fatores específicos utilizados para determinar o grau do tumor variam com cada tipo de cancro. A gravidade também descreve um grau histológico, também chamado de diferenciação, o qual refere-se ao quanto as células tumorais se assemelham às células normais do mesmo tipo de tecido (ver, National Câncer Institute, www.cancer.gov). Além disso, a gravidade descreve um grau nuclear, o qual refere-se ao tamanho e forma do núcleo em células tumorais e a percentagem de células tumorais que estão em divisão (ver, National Câncer Institute, www.cancer.gov). A gravidade pode descrever também o grau em que um tumor tem fatores de crescimento segregados, degradou a matriz extracelular, tornou-se vascularizado, perdeu a adesão aos tecidos justapostos ou metastáticos. Além do mais, a gravidade pode descrever o número de localizações para as quais um tumor primário sofreu metástase. Finalmente, a gravidade pode incluir a dificuldade de tratamento de tumores de vários tipos e localizações. Por exemplo, tumores inoperáveis, aqueles cancros que têm maior acesso a múltiplos sistemas do corpo (tumores hematológicos e imunológicos) e aqueles que são os mais resistentes aos tratamentos tradicionais são considerados muito graves. Nestas situações, o prolongamento da esperança de vida do indivíduo e/ou redução da dor, diminuição da proporção de células cancerosas ou restrição das células a um sistema, e a melhoria da etapa do cancro/grau do tumor/grau histológico/grau nuclear são considerados alívio de um sinal ou sintoma do cancro.
Como aqui utilizado o termo "sintoma" é definido como uma indicação de doença, enfermidade, lesão ou de que algo não está bem no corpo. Os sintomas são sentidos ou observados pelo indivíduo que experiencia o sintoma, mas pode não ser facilmente observado por outros. Os outros são definidos como os profissionais não relacionados com a saúde.
Como aqui utilizado o termo "sinal" é também definido como uma indicação de que algo não está bem no corpo. Mas os sinais são definidos como coisas que podem ser observadas por um médico, enfermeira ou outro profissional da saúde. 0 cancro é um grupo de doenças que pode originar quase todos os sinais ou sintomas. Os sinais e sintomas dependerão de onde o cancro está, do tamanho do cancro e de quanto afeta os órgãos ou estruturas próximos. Se um cancro se dissemina (metastiza), então os sintomas podem surgir em diferentes partes do corpo. À medida que um cancro cresce, ele começa a empurrar os órgãos, vasos sanguíneos e nervos próximos. Esta pressão cria alguns dos sinais e sintomas de cancro. Se o cancro está numa área crítica, tal como certas partes do cérebro, até mesmo o tumor mais pequeno pode originar sintomas cedo.
Mas, por vezes, os cancros começam em locais onde não causam quaisquer sintomas até o cancro se ter tornado bastante grande. Os cancros pancreáticos, por exemplo, geralmente não crescem até serem suficientemente grandes para serem sentidos do exterior do corpo. Alguns cancros pancreáticos não causam sintomas até começarem a crescer em torno dos tecidos nervosos próximos (isto provoca uma dor nas costas) . Outros crescem em torno das vias biliares, o que bloqueia o caudal de bilis e leva a um amarelecimento da pele conhecido como icterícia. Na altura em que um cancro pancreático origina estes sinais ou sintomas, ele geralmente atingiu uma fase avançada.
Um cancro pode originar também sintomas tais como febre, fadiga ou perda de peso. Isto pode ser porque as células cancerosas utilizam muito do fornecimento de energia do corpo ou libertam substâncias que alteram o metabolismo do corpo. Ou o cancro pode fazer com que o sistema imunitário reaja de maneiras que produzem estes sintomas.
Por vezes, as células cancerosas libertam substâncias para a corrente sanguínea que causam sintomas que geralmente se pensa que não resultam de cancros. Por exemplo, alguns cancros do pâncreas podem libertar substâncias que provocam o desenvolvimento de coágulos de sangue nas veias das pernas. Alguns cancros do pulmão produzem substâncias semelhantes a hormonas que afetam os niveis de cálcio no sangue, afetando os nervos e músculos e originando fraqueza e tonturas. 0 cancro apresenta vários sinais ou sintomas gerais que ocorrem quando está presente uma variedade de subtipos de células cancerosas. A maioria das pessoas com cancro perderá peso em alguma altura da sua doença. Uma perda de peso inexplicada (não intencional) de 10 libras ou mais pode ser o primeiro sinal de cancro, em particular de cancros do pâncreas, estômago, esófago ou pulmão. A febre é muito comum com cancro, mas é mais frequentemente observada em doença avançado. A maioria dos doentes com cancro terá febre em alguma altura, especialmente se o cancro ou o seu tratamento afetar o sistema imunitário e tornar mais dificil ao corpo combater a infeção. Menos frequentemente, a febre pode ser um sinal precoce de cancro, tal como com leucemia ou linfoma. A fadiga pode ser um sintoma importante à medida que o cancro progride. Embora possa ocorrer cedo em cancros tais como com leucemia ou se o cancro originar uma perda continua de sangue, como em alguns cancros do cólon ou estômago. A dor pode ser um sintoma precoce com alguns cancros tais como cancros do osso ou cancro testicular. Mas muito frequentemente a dor é um sintoma de doença avançada.
Juntamente com os cancros da pele (ver próxima secção), alguns cancros internos podem originar sinais na pele que podem ser vistos. Estas alterações incluem uma pele que parece mais escura (hiperpigmentação) , amarela (icterícia) ou vermelha (eritema); prurido; ou crescimento excessivo de pêlo.
Alternativamente, ou além disso, subtipos de cancros apresentam sinais ou sintomas específicos. Alterações nos hábitos do intestino ou função da bexiga poderiam indicar cancro. A obstipação intestinal prolongada, diarreia ou uma alteração no tamanho das fezes pode ser um sinal de cancro do cólon. Dor com micção, sangue na urina ou uma alteração na função da bexiga (tal como, micção mais frequente ou menos frequente) poderia estar relacionado com cancro da bexiga ou próstata.
Alterações na condição ou aspeto da pele de uma nova condição da pele poderiam indicar cancro. Os cancros da pele podem sangrar e ter o aspeto de feridas que não curam.
Uma ferida prolongada na boca poderia ser um cancro oral, especialmente em doentes que fumam, mascam tabaco ou bebem frequentemente álcool. As feridas no pénis ou vagina podem ser sinais de infeção ou um cancro inicial.
Sangramento ou descarga invulgar poderia indicar cancro. 0 sangramento invulgar pode ocorrer no cancro inicial ou avançado. Sangue na expetoração (flegma) pode ser um sinal de cancro do pulmão. Sangue nas fezes (ou umas fezes escuras ou pretas) poderia ser um sinal de cancro do cólon ou retal. 0 cancro do colo do útero ou do endométrio (revestimento do útero) pode originar sangramento vaginal. Sangue na urina pode ser um sinal de cancro da bexiga ou do rim. Uma descarga ensanguentada do mamilo pode ser um sinal de cancro da mama.
Um espessamento ou aparecimento de grumo na mama ou noutras partes do corpo poderia indicar a presença de um cancro. Muitos cancros podem ser sentidos através da pele, principalmente na mama, testículo, gânglios linfáticos (glândulas) e nos tecidos moles do corpo. Um aparecimento de grumo ou espessamento pode ser um sinal precoce ou tardio de cancro. Qualquer grumo ou espessamento poderia ser indicativo de cancro, especialmente se a formação é nova ou cresceu de tamanho.
Indigestão ou dificuldade de deglutição poderia indicar cancro. Enquanto estes sintomas têm comummente outras causas, a indigestão ou problemas de deglutição podem ser um sinal de cancro do esófago, estômago ou faringe (garganta).
Alterações recentes numa verruga ou sinal poderiam ser indicativas de cancro. Qualquer verruga, sinal ou sarda que altere em cor, tamanho ou forma, ou perca os seus limites definidos indica o potencial desenvolvimento de cancro. Por exemplo, a lesão da pele pode ser um melanoma.
Uma tosse ou rouquidão persistente poderia ser indicativa de cancro. Uma tosse que não desapareça pode ser um sinal de cancro do pulmão. A rouquidão pode ser um sinal de cancro da laringe (caixa de voz) ou tireoide.
Enquanto os sinais e sintomas listados acima são os mais comuns observados com o cancro, existem muitos outros que são menos comuns e não são aqui listados. 0 tratamento do cancro pode resultar numa redução no tamanho de um tumor. Uma redução no tamanho de um tumor pode ser também referida como "regressão do tumor". Preferencialmente, após tratamento, o tamanho do tumor seria reduzido em 5% ou mais relativamente ao seu tamanho antes do tratamento; mais preferencialmente, o tamanho do tumor é reduzido em 10% ou mais; mais preferencialmente, reduzido em 20% ou mais; mais preferencialmente, reduzido em 30% ou mais; mais preferencialmente, reduzido em 40% ou mais; ainda mais preferencialmente, reduzido em 50% ou mais; e muito preferencialmente, reduzido em mais do que 75% ou mais. O tamanho de um tumor pode ser medido por qualquer meio reprodutível de medição. O tamanho de um tumor pode ser medido como um diâmetro do tumor. O tratamento de cancro pode resultar numa redução no volume tumoral. Preferencialmente, após tratamento, o volume tumoral seria reduzido em 5% ou mais relativamente ao seu tamanho antes do tratamento; mais preferencialmente, o volume tumoral é reduzido em 10% ou mais; mais preferencialmente, reduzido em 20% ou mais; mais preferencialmente, reduzido em 30% ou mais; mais preferencialmente, reduzido em 40% ou mais; ainda mais preferencialmente, reduzido em 50% ou mais; e muito preferencialmente, reduzido em mais do que 75% ou mais. O volume tumoral pode ser medido por qualquer meio reprodutível de medição. O tratamento de cancro pode resultar numa diminuição no número de tumores. Preferencialmente, após tratamento, o número de tumores seria reduzido em 5% ou mais relativamente ao número antes do tratamento; mais preferencialmente, o número de tumores é reduzido em 10% ou mais; mais preferencialmente, reduzido em 20% ou mais; mais preferencialmente, reduzido em 30% ou mais; mais preferencialmente, reduzido em 40% ou mais; ainda mais preferencialmente, reduzido em 50% ou mais; e muito preferencialmente, reduzido em mais do que 75%. O número de tumores pode ser medido por qualquer meio reprodutível de medição. O número de tumores pode ser medido por contagem de tumores visiveis ao olho nu ou a uma ampliação especificada. Preferencialmente, a ampliação especificada é 2x, 3x, 4x, 5x, lOx ou 50x. O tratamento de cancro pode resultar numa diminuição no número de lesões metastáticas noutros tecidos ou órgãos distantes do sitio do tumor primário. Preferencialmente, após tratamento, o número de lesões metastáticas seria reduzido em 5% ou mais relativamente ao número antes do tratamento; mais preferencialmente, o número de lesões metastáticas é reduzido em 10% ou mais; mais preferencialmente, reduzido em 20% ou mais; mais preferencialmente, reduzido em 30% ou mais; mais preferencialmente, reduzido em 40% ou mais; ainda mais preferencialmente, reduzido em 50% ou mais; e muito preferencialmente, reduzido em mais do que 75%. O número de lesões metastáticas pode ser medido por qualquer meio reprodutível de medição. O número de lesões metastáticas pode ser medido por contagem das lesões metastáticas visíveis ao olho nu ou a uma ampliação especificada. Preferencialmente, a ampliação especificada é 2x, 3x, 4x, 5x, lOx ou 50x. 0 tratamento de cancro pode resultar num aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população de indivíduos tratados em comparação com uma população que recebeu veículo sozinho. Preferencialmente, o tempo de sobrevivência médio seria aumentado em mais do que 30 dias; mais preferencialmente, em mais do que 60 dias; mais preferencialmente, em mais do que 90 dias; e muito preferencialmente, em mais do que 120 dias. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido por qualquer meio reprodutível. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido, por exemplo, calculando para uma população a duração média de sobrevivência após início do tratamento com um composto ativo. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser também medido, por exemplo, calculando para uma população a duração média de sobrevivência após finalização de um primeiro ciclo de tratamento com um composto ativo. O tratamento de cancro pode resultar num aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população de indivíduos tratados em comparação com uma população de indivíduos não tratados. Preferencialmente, o tempo de sobrevivência médio seria aumentado em mais do que 30 dias; mais preferencialmente, em mais do que 60 dias; mais preferencialmente, em mais do que 90 dias; e muito preferencialmente, em mais do que 120 dias. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido por qualquer meio reprodutível. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido, por exemplo, calculando para uma população a duração média de sobrevivência após início do tratamento com um composto ativo. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser também medido, por exemplo, calculando para uma população a duração média de sobrevivência após finalização de um primeiro ciclo de tratamento com um composto ativo. 0 tratamento de cancro pode resultar num aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população de indivíduos tratados em comparação com uma população que recebeu monoterapia com um fármaco que não é um composto da presente invenção ou um sal, pró-fármaco, metabolito, análogo ou derivado farmaceuticamente aceitável do mesmo. Preferencialmente, o tempo de sobrevivência médio seria aumentado em mais do que 30 dias; mais preferencialmente, em mais do que 60 dias; mais preferencialmente, em mais do que 90 dias; e muito preferencialmente, em mais do que 120 dias. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido por qualquer meio reprodutível. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser medido, por exemplo, calculando para uma população a duração média de sobrevivência após início do tratamento com um composto ativo. Um aumento no tempo de sobrevivência médio de uma população pode ser também medido, por exemplo, calculando para uma população a duração média de sobrevivência após finalização de um primeiro ciclo de tratamento com um composto ativo. O tratamento de cancro pode resultar numa diminuição na taxa de mortalidade de uma população de indivíduos tratados em comparação com uma população que recebeu o veículo sozinho. O tratamento de cancro pode resultar numa diminuição na taxa de mortalidade de uma população de indivíduos tratados em comparação com uma população não tratada. 0 tratamento de cancro pode resultar numa diminuição na taxa de mortalidade de uma população de indivíduos tratados em comparação com uma população que recebeu monoterapia com um fármaco que não é um composto da presente invenção ou um sal, pró-fármaco, metabolito, análogo ou derivado farmaceuticamente aceitável do mesmo. Preferencialmente, a taxa de mortalidade seria diminuída em mais do que 2%; mais preferencialmente, em mais do que 5%; mais preferencialmente, em mais do que 10%; e muito preferencialmente, em mais do que 25%. Uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população de indivíduos tratados pode ser medida por qualquer meio reprodutível. Uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população pode ser medida, por exemplo, calculando para uma população o número médio de mortes relacionadas com a doença por unidade tempo após início do tratamento com um composto ativo. Uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população pode ser também medida, por exemplo, calculando para uma população o médio número de mortes relacionadas com a doença por unidade tempo após finalização de um primeiro ciclo de tratamento com um composto ativo. O tratamento de cancro pode resultar numa diminuição na taxa de crescimento de tumores. Preferencialmente, após tratamento, a taxa de crescimento de tumores seria reduzida em pelo menos 5% relativamente ao número antes do tratamento; mais preferencialmente, a taxa de crescimento de tumores seria reduzida em pelo menos 10%; mais preferencialmente, reduzida em pelo menos 20%; mais preferencialmente, reduzida em pelo menos 30%; mais preferencialmente, reduzida em pelo menos 40%; mais preferencialmente, reduzida em pelo menos 50%; ainda mais preferencialmente, reduzida em pelo menos 50%; e muito preferencialmente, reduzida em pelo menos 75%. A taxa de crescimento de tumores pode ser medida por qualquer meio reprodutível de medição. A taxa de crescimento de tumores pode ser medida de acordo com uma alteração no diâmetro do tumor por unidade tempo. 0 tratamento de cancro pode resultar numa diminuição no novo crescimento de tumores. Preferencialmente após tratamento, o novo crescimento de tumores seria menos do que 5%; mais preferencialmente, o novo crescimento de tumores seria menos do que 10%; mais preferencialmente, menos do que 20%; mais preferencialmente, menos do que 30%; mais preferencialmente, menos do que 40%; mais preferencialmente, menos do que 50%; ainda mais preferencialmente, menos do que 50%; e muito preferencialmente, menos do que 75%. O novo crescimento de tumores pode ser medido por qualquer meio reprodutível de medição. O novo crescimento de tumores é medido, por exemplo, medindo um aumento no diâmetro de um tumor após uma diminuição anterior do tumor que se seguiu ao tratamento. Uma diminuição no novo crescimento de tumores é indicada pelo insucesso dos tumores em ocorrer novamente depois do tratamento ter sido parado. O tratamento ou prevenção de um distúrbio proliferativo celular pode resultar numa redução na taxa de proliferação celular. Preferencialmente, após tratamento, a taxa de proliferação celular seria reduzida em pelo menos 5%; mais preferencialmente, em pelo menos 10%; mais preferencialmente, em pelo menos 20%; mais preferencialmente, em pelo menos 30%; mais preferencialmente, em pelo menos 40%; mais preferencialmente, em pelo menos 50%; ainda mais preferencialmente, em pelo menos 50%; e muito preferencialmente, em pelo menos 75%. A taxa de proliferação celular pode ser medida por qualquer meio reprodutível de medição. A taxa de proliferação celular é medida, por exemplo, medindo o número de células em divisão numa amostra de tecido por unidade tempo. 0 tratamento ou prevenção de um distúrbio proliferativo celular pode resultar numa redução na proporção de células proliferantes. Preferencialmente, após tratamento, a proporção de células proliferantes seria reduzida em pelo menos 5%; mais preferencialmente, em pelo menos 10%; mais preferencialmente, em pelo menos 20%; mais preferencialmente, em pelo menos 30%; mais preferencialmente, em pelo menos 40%; mais preferencialmente, em pelo menos 50%; ainda mais preferencialmente, em pelo menos 50%; e muito preferencialmente, em pelo menos 75%. A proporção de células proliferantes pode ser medida por qualquer meio reprodutível de medição. Preferencialmente, a proporção de células proliferantes é medida, por exemplo, quantificando o número de células em divisão relativamente ao número de células que não estão em divisão numa amostra de tecido. A proporção de células proliferantes pode ser equivalente ao Índice mitótico. O tratamento ou prevenção de um distúrbio proliferativo celular pode resultar numa diminuição no tamanho de uma área ou zona de proliferação celular. Preferencialmente, após tratamento, o tamanho de uma área ou zona de proliferação celular seria reduzido em pelo menos 5% relativamente ao seu tamanho antes do tratamento; mais preferencialmente, reduzido em pelo menos 10%; mais preferencialmente, reduzido em pelo menos 20%; mais preferencialmente, reduzido em pelo menos 30%; mais preferencialmente, reduzido em pelo menos 40%; mais preferencialmente, reduzido em pelo menos 50%; ainda mais preferencialmente, reduzido em pelo menos 50%; e muito preferencialmente, reduzido em pelo menos 75%. O tamanho de uma área ou zona de proliferação celular pode ser medido por qualquer meio reprodutível de medição. 0 tamanho de uma área ou zona de proliferação celular pode ser medido como um diâmetro ou largura de uma área ou zona de proliferação celular. 0 tratamento ou prevenção de um distúrbio proliferativo celular pode resultar numa diminuição no número ou proporção de células que têm um aspeto ou morfologia anormal. Preferencialmente, após tratamento, o número de células que têm uma morfologia anormal seria reduzido em pelo menos 5% relativamente ao seu tamanho antes do tratamento; mais preferencialmente, reduzido em pelo menos 10%; mais preferencialmente, reduzido em pelo menos 20%; mais preferencialmente, reduzido em pelo menos 30%; mais preferencialmente, reduzido em pelo menos 40%; mais preferencialmente, reduzido em pelo menos 50%; ainda mais preferencialmente, reduzido em pelo menos 50%; e muito preferencialmente, reduzido em pelo menos 75%. Um aspeto ou morfologia celular anormal pode ser medido por qualquer meio reprodutível de medição. Uma morfologia celular anormal pode ser medida por microscopia, por exemplo, utilizando um microscópio invertido para cultura de tecidos. Uma morfologia celular anormal pode tomar a forma de pleomorfismo nuclear.
Como aqui utilizado, o termo "seletivamente" significa com tendência para ocorrer a uma frequência maior numa população do que noutra população. As populações comparadas podem ser populações de células. Um composto da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode atuar seletivamente numa célula cancerosa ou pré-cancerosa, mas não numa célula normal. Um composto da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode atuar seletivamente para modular um alvo molecular (por exemplo, uma proteina-metiltransferase alvo), mas não modula significativamente outro alvo molecular (por exemplo, uma proteina-metiltransferase não alvo). A invenção também proporciona um método para inibir seletivamente a atividade de uma enzima, tal como uma proteina-metiltransferase. Preferencialmente, um evento ocorre seletivamente na população A relativamente à população B, se ocorrer mais de duas vezes mais frequentemente na população A em comparação com a população B. Um evento ocorre seletivamente, se ocorre mais de cinco vezes mais frequentemente na população A. Um evento ocorre seletivamente, se ocorre mais de dez vezes mais frequentemente na população A; mais preferencialmente, mais de cinquenta vezes; ainda mais preferencialmente, mais de 100 vezes; e muito preferencialmente, mais de 1000 vezes mais frequentemente na população A em comparação com a população B. Por exemplo, dir-se-ia que a morte celular ocorre seletivamente em células cancerosas se ela ocorrer com uma frequência superior a duas vezes em células cancerosas em comparação com células normais.
Um composto da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode modular a atividade de um alvo molecular (por exemplo, uma proteina-metiltransferase alvo). Modulação refere-se à estimulação ou inibição de uma atividade de um alvo molecular. Preferencialmente, um composto da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, modula a atividade de um alvo molecular, se estimula ou inibe a atividade do alvo molecular em pelo menos 2 vezes relativamente à atividade do alvo molecular nas mesmas condições, mas que carecem apenas da presença do referido composto. Mais preferencialmente, um composto da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, modula a atividade de um alvo molecular, se estimula ou inibe a atividade do alvo molecular em pelo menos 5 vezes, pelo menos 10 vezes, pelo menos 20 vezes, pelo menos 50 vezes, pelo menos 100 vezes relativamente à atividade do alvo molecular nas mesmas condições, mas que carecem apenas da presença do referido composto. A atividade de um alvo molecular pode ser medida por qualquer meio reprodutível. A atividade de um alvo molecular pode ser medida in vitro ou in vivo. Por exemplo, a atividade de um alvo molecular pode ser medida in vitro por um ensaio de atividade enzimática ou um ensaio de ligação de ADN ou a atividade de um alvo molecular pode ser medida in vivo analisando a expressão de um gene repórter.
Um composto da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, não modula significativamente a atividade de um alvo molecular se a adição do composto não estimular ou inibir a atividade do alvo molecular em mais do que 10% relativamente à atividade do alvo molecular nas mesmas condições, mas que carecem apenas da presença do referido composto.
Como aqui utilizado, o termo "seletiva para a isoenzima" significa a inibição ou estimulação preferencial de uma primeira isoforma de uma enzima em comparação com uma segunda isoforma de uma enzima (por exemplo, inibição ou estimulação preferencial de uma isoenzima alfa da proteina-metiltransferase em comparação com uma isoenzima beta da proteina-metiltransferase). Preferencialmente, um composto da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, demonstra um mínimo de um diferencial de quatro vezes, preferencialmente um diferencial de dez vezes, mais preferencialmente um diferencial de cinquenta vezes, na dosagem necessária para conseguir um efeito biológico. Preferencialmente, um composto da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, demonstra este diferencial ao longo da gama de inibição e o diferencial é exemplificado à IC50, isto é, uma inibição de 50%, para um alvo molecular de interesse. A administração de um composto da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, a uma célula ou um indivíduo que necessita do mesmo pode resultar na modulação (isto é, estimulação ou inibição) de uma atividade de uma proteína-metiltransferase de interesse. A presente divulgação proporciona métodos de avaliação da atividade biológica de um composto da presente divulgação, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou métodos de identificação de um composto de ensaio como um inibidor de um mutante Y641 de EZH2. Numa forma de realização, o método inclui combinar um mutante Y641 de EZH2 isolado com um substrato de histona, um doador de grupos metilo (tal como S-adenosilmetionina (SAM)) e um composto de ensaio, em que o substrato de histona compreende uma forma de H3-K27 selecionada do grupo que consiste em H3-K27 não metilada, H3-K27 monometilada, H3-K27 dimetilada e qualquer combinação das mesmas; e realização de um ensaio para detetar a metilação da H3-K27 no substrato de histona, identificando, desse modo, o composto de ensaio como um inibidor do mutante Y641 de EZH2 quando a metilação de H3-K27 na presença do composto de ensaio é menor do que a metilação de H3-K27 na ausência do composto de ensaio. 0 ensaio para detetar a metilação de H3-K27 pode ser selecionado para medir a velocidade de metilação, a extensão de metilação, ou ambas, a velocidade e extensão da metilação. 0 mutante Y641 de EZH2 é isolado como um complexo de PRC2 ou equivalente funcional do mesmo. Como aqui utilizado, o termo "isolado" significa substancialmente separado de outros componentes com os quais o complexo pode estar presente quando ocorre na natureza. Um composto pode ser isolado sem estar necessariamente purificado. Numa forma de realização, o mutante de EZH2 é isolado como um complexo de um mutante Y641 de EZH2 em conjunto com EED e SUZ12. Noutra forma de realização, o mutante de EZH2 é isolado como um complexo de um mutante Y641 de EZH2 em conjunto com EED, SUZ12 e RbAp48. Nas condições apropriadas, um complexo de PRC2, ou equivalente funcional do mesmo, exibe atividade histona-metiltransferase para a H3-K27. Numa forma de realização, o complexo é constituído por polipéptidos componentes expressos de forma recombinante, por exemplo, EZH2, EED, SUZ12, com ou sem RbAp48. 0 mutante Y641 de EZH2 isolado é combinado com um substrato de histona. Um substrato de histona inclui qualquer fonte adequada de polipéptidos de histona ou seus fragmentos que pode servir como substrato para EZH2. Numa forma de realização, o substrato de histona inclui histonas isoladas a partir de um indivíduo. As histonas podem ser isoladas a partir de células de um indivíduo utilizando qualquer método adequado; tais métodos são bem conhecidos do especialista na técnica e não precisam de ser aqui especificados em mais detalhe. Ver, por exemplo, Fang et al. (2004) Methods Enzymol 377:213-26. De acordo com os exemplos abaixo, o substrato de histona é proporcionado como nucleossomas. De acordo com os exemplos abaixo, numa forma de realização o substrato de histona é proporcionado como nucleossomas de eritrócitos de aves (galinha). 0 substrato de histona assim proporcionado pode incluir uma mistura de estados de modificação de histonas, incluindo vários estados de metilação de H3-K27, como avaliado por transferência de Western com anticorpos específicos para o estado de metilação de H3-K27. Numa forma de realização, o substrato de histona pode ser proporcionado como histona H3 de comprimento total purificada. Tal histona H3 de comprimento total purificada pode ser proporcionada como uma preparação homogénea em relação aos estados de metilação de H3-K27 ou como uma mistura de vários estados de metilação de H3-K27. As preparações homogéneas de histona H3 isolada em relação aos estados de metilação de H3-K27 podem ser preparadas, em parte, por passagem sobre uma coluna de imunoafinidade carregada com anticorpos específicos para o estado de metilação de H3-K27 adequados ou por imunoprecipitação utilizando esférulas magnéticas revestidas com anticorpos específicos para o estado de metilação de H3-K27 adequados. Alternativamente, ou além disso, o estado de metilação de H3-K27 pode ser caracterizado como parte da realização do ensaio. Por exemplo, o substrato de histona material de partida pode ser caracterizado como contendo 50 por cento de H3-K27 não metilada, 40 por cento de H3-K27 monometilada, 10 por cento de H3-K27 dimetilada e 0 por cento de H3-K27 trimetilada.
Numa forma de realização, o substrato de histona inclui uma biblioteca de péptidos ou um péptido adequado que compreende uma ou mais sequências de aminoácidos relacionadas com a histona H3, incluindo, em particular, uma sequência que abrange a H3-K27. Por exemplo, numa forma de realização, o substrato de histona é um fragmento de péptido que corresponde aos resíduos de aminoácidos 21-44 da histona H3. A biblioteca de péptidos ou o péptido pode ser preparado através de síntese de péptidos de acordo com técnicas bem conhecidas na matéria e opcionalmente modificado de forma a incorporar qualquer grau de metilação desejado da lisina correspondente à H3-K27. Como se descreve nos exemplos abaixo, tais péptidos podem ser também modificados para incorporar um marcador, tal como biotina, útil na realização de ensaios a jusante. Numa forma de realização, o marcador é anexado à extremidade amino (N) do(s) péptido(s). Numa forma de realização, o marcador é anexado à extremidade carboxilo (C) do(s) péptido(s). A deteção da metilação de H3-K27 pode ser realizada utilizando qualquer método adequado. Numa forma de realização, a fonte de grupos metilo doadores inclui grupos metilo que são marcados com um marcador detetável. Numa forma de realização, o marcador detetável é um marcador isotópico, por exemplo, trítio. Outros tipos de marcadores podem incluir, por exemplo, marcadores fluorescentes. A deteção da formação de H3-K27 trimetilada pode ser realizada utilizando qualquer método adequado. Por exemplo, a deteção da formação de H3-K27 trimetilada pode ser realizada utilizando um ensaio para detetar a incorporação de grupos metilo marcados, tal como descrito acima, opcionalmente combinado com um método cromatográfico ou outro para separar os produtos marcados por tamanho, por exemplo, eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE), eletroforese capilar (CE) ou cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) . Alternativamente, ou além disso, a deteção da formação de H3-K27 trimetilada pode ser realizada utilizando anticorpos que são específicas para a H3-K27 trimetilada. A deteção da conversão de H3-K27 monometilada em H3-K27 dimetilada pode ser realizada utilizando qualquer método adequado. Numa forma de realização, a conversão é medida utilizando anticorpos específicos para a H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada. Por exemplo, as quantidades ou concentrações iniciais de H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada podem ser determinadas utilizando anticorpos específicos apropriados para H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada. Após a combinação de enzima, substrato, doador de grupos metilo e composto de ensaio, as quantidades ou concentrações resultantes de H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada. Após a combinação de enzima, substrato, doador de grupos metilo e composto de ensaio, as quantidades ou concentrações resultante de H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada podem ser em seguida determinadas utilizando anticorpos específicos apropriados para a H3-K27 monometilada e a H3-K27 dimetilada. As quantidades ou concentrações iniciais e resultantes de H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada podem ser então comparadas. Alternativamente, ou além disso, as quantidades ou concentrações iniciais e resultantes de H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada podem ser então comparadas com as quantidades ou concentrações correspondentes de um controlo negativo. Uma reação de controlo negativo, em que não é incluído o agente de ensaio no teste, pode ser realizada em paralelo ou como um controlo histórico. Os resultados dessa reação de controlo podem ser opcionalmente subtraídos dos resultados correspondentes da reação experimental antes ou simultaneamente com a realização da comparação mencionada acima.
Uma vez que a forma dimetilada de H3-K27 pode ser adicionalmente metilada no mesmo ensaio, uma redução na quantidade ou concentração de H3-K27 monometilada pode não parecer corresponder diretamente a um aumento na H3-K27 dimetilada. Neste caso, pode-se presumir, contudo, que uma redução na quantidade ou concentração de H3-K27 monometilada é, ela mesmo, um reflexo da conversão de H3-K27 monometilada em H3-K27 dimetilada. A deteção da conversão de H3-K27 dimetilada em H3-K27 trimetilada pode ser realizada utilizando qualquer método adequado. Numa forma de realização, a conversão é medida utilizando anticorpos específicos para a H3-K27 dimetilada e H3-K27 trimetilada. Por exemplo, as quantidades ou concentrações iniciais de H3-K27 dimetilada e H3-K27 trimetilada podem ser determinadas utilizando anticorpos específicos apropriados para a H3-K27 dimetilada e a H3-K27 trimetilada. Após a combinação de enzima, substrato e composto de ensaio, as quantidades ou concentrações resultantes de H3-K27 dimetilada e H3-K27 trimetilada podem ser então determinadas utilizando anticorpos específicos apropriados para a H3-K27 dimetilada e a H3-K27 trimetilada. As quantidades ou concentrações iniciais e resultantes de H3-K27 dimetilada e H3-K27 trimetilada podem ser então comparadas. Alternativamente, ou além disso, as quantidades ou concentrações iniciais e resultantes de H3-K27 dimetilada e H3-K27 trimetilada podem ser então comparadas com as quantidades ou concentrações correspondentes de um controlo negativo. Uma reação de controlo negativo, em que não é incluido agente de ensaio no teste, pode ser realizada em paralelo ou como um controlo histórico. Os resultados dessa reação de controlo podem ser opcionalmente subtraídos dos resultados correspondentes da reação experimental antes ou simultaneamente com a realização da comparação mencionada acima.
Um agente de ensaio é identificado como um inibidor do mutante Y641 de EZH2 quando a metilação de H3-K27 com o composto de ensaio é menor do que a metilação de H3-K27 sem o composto de ensaio. Numa forma de realização, um agente de ensaio é identificado como um inibidor do mutante Y641 de EZH2 quando a formação de H3-K27 trimetilada na presença do composto de ensaio é menor do que a formação de H3-K27 trimetilada na ausência do composto de ensaio. A presente divulgação também proporciona um método de identificação de um inibidor seletivo de um mutante Y641 de EZH2. Numa forma de realização, o método inclui combinar um mutante Y641 de EZH2 isolado com um substrato de histona, um doador de grupos metilo (por exemplo, SAM) e um composto de ensaio, em que o substrato de histona compreende uma forma de H3-K27 selecionada do grupo que consiste em H3-K27 monometilada, H3-K27 dimetilada e uma combinação de H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada, formando, desse modo, uma mistura de ensaio; combinar uma EZH2 de tipo selvagem isolada com um substrato de histona, um doador de grupos metilo (por exemplo, SAM) e um composto de ensaio, em que o substrato de histona compreende uma forma de H3-K27 selecionada do grupo que consiste em H3-K27 monometilada, H3-K27 dimetilada e uma combinação de H3-K27 monometilada e H3-K27 dimetilada, formando, desse modo, uma mistura de controlo; realizar um ensaio para detetar a trimetilação do substrato de histona em cada uma da mistura de ensaio e da mistura de controlo; calcular a razão de (a) trimetilação com o mutante Y641 de EZH2 e o composto de ensaio (M+) relativamente à (b) trimetilação com o mutante Y641 de EZH2 sem o composto de ensaio (M-); calcular a razão de (c) trimetilação com EZH2 de tipo selvagem e o composto de ensaio (WT+) relativamente à (d) trimetilação com EZH2 de tipo selvagem sem o composto de ensaio (WT-); comparar a razão (a)/ (b) com a razão (c)/(d); e identificar o composto de ensaio como um inibidor seletivo do mutante Y641 de EZH2 quando a razão (a)/ (b) é inferior à razão (c)/(d) . Numa forma de realização, o método inclui ainda ter em consideração um controlo negativo sem composto de ensaio para qualquer uma, ou ambas, a mistura de ensaio e a mistura de controlo.
Em alguns ensaios, são utilizados reagentes imunológicos, por exemplo, anticorpos e antigénios. Pode utilizar-se fluorescência na medição da atividade enzimática em alguns ensaios. Como aqui utilizada, "fluorescência" refere-se a um processo através do qual uma molécula emite um fotão como consequência de absorção de um fotão que entra de energia mais alta pela mesma molécula. Os métodos específicos de avaliação da atividade biológica dos compostos divulgados são descritos nos exemplos. A administração de um composto da presente divulgação, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, a uma célula ou um indivíduo que necessita do mesmo pode resultar na modulação (isto é, estimulação ou inibição) de uma atividade de um alvo intracelular (por exemplo, substrato). Vários alvos intracelulares podem ser modulados com os compostos da presente divulgação, incluindo, mas não se limitando à proteina-metiltrasferase.
Ativação refere-se a colocar uma composição de matéria (por exemplo, proteina ou ácido nucleico) num estado adequado para realizar uma função biológica desejada. Uma composição de matéria capaz de ser ativada tem também um estado não ativado. Uma composição ativada de matéria pode ter uma função biológica inibidora ou estimuladora, ou ambas.
Elevação refere-se a um aumento numa atividade biológica desejada de uma composição de matéria (por exemplo, uma proteína ou um ácido nucleico). A elevação pode ocorrer através de um aumento na concentração de uma composição de matéria.
Como aqui utilizado, "uma via de ponto de controlo do ciclo celular" refere-se a uma via bioquímica que está envolvida na modulação de um ponto de controlo do ciclo celular. Uma via de ponto de controlo do ciclo celular pode ter efeitos estimuladores ou inibidores, ou ambos, em uma ou mais funções que compreendem um ponto de controlo do ciclo celular. Uma via de ponto de controlo do ciclo celular é constituída por, pelo menos, duas composições de matéria, preferencialmente proteínas, as quais contribuem ambas para a modulação de um ponto de controlo do ciclo celular. Uma via de ponto de controlo do ciclo celular pode ser ativada através de uma ativação de um ou mais membros da via do ponto de controlo do ciclo celular. Preferencialmente, uma via de ponto de controlo do ciclo celular é uma via de sinalização bioquímica.
Como aqui utilizado, "regulador de pontos de controlo do ciclo celular" refere-se a uma composição de matéria que pode atuar, pelo menos em parte, na modulação de um ponto de controlo do ciclo celular. Um regulador de pontos de controlo do ciclo celular pode ter efeitos estimuladores ou inibidores, ou ambos, em uma ou mais funções que compreendem um ponto de controlo do ciclo celular. Um regulador de pontos de controlo do ciclo celular pode ser uma proteína ou uma não proteína. 0 tratamento de cancro ou de um distúrbio proliferativo celular pode resultar em morte celular e, preferencialmente, a morte celular resultaria numa diminuição de pelo menos 10% no número de células numa população. Mais preferencialmente, morte celular significa uma diminuição de pelo menos 20%; mais preferencialmente, uma diminuição de pelo menos 30%; mais preferencialmente, uma diminuição de pelo menos 40%; mais preferencialmente, uma diminuição de pelo menos 50%; muito preferencialmente, uma diminuição de pelo menos 75%. O número de células numa população pode ser medido por qualquer meio reprodutível. Um número de células numa população pode ser medido por triagem celular ativada por fluorescência (FACS), microscopia de imunofluorescência e microscopia ótica. Os métodos de medição da morte celular são como se mostra em Li et al., Proc Natl Acad Sei USA. 100(5): 2674-8, 2003. Num aspeto, a morte celular ocorre por apoptose.
Preferencialmente, uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, não seria siqnificativamente citotóxico para as células normais. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto não é significativamente citotóxica para as células normais se a administração do composto numa quantidade terapeuticamente eficaz não induz morte celular em mais do que 10% das células normais. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto não afeta significativamente a viabilidade das células normais, se a administração do composto numa quantidade terapeuticamente eficaz não induz morte celular em mais do que 10% das células normais. Num aspeto, a morte celular ocorre por apoptose. A colocação em contacto de uma célula com um composto da presente divulgação, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode induzir ou ativar a morte celular seletivamente em células cancerosas. A administração, a um indivíduo que necessita do mesmo, de um composto da presente divulgação, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode induzir ou ativar a morte celular seletivamente em células cancerosas. A colocação em contacto de uma célula com um composto da presente divulgação, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode induzir a morte celular seletivamente em uma ou mais células afetadas por um distúrbio proliferativo celular. Preferencialmente, a administração, a um indivíduo que necessita do mesmo, de um composto da presente divulgação, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, induziria a morte celular seletivamente em uma ou mais células afetadas por um distúrbio proliferativo celular.
Um aspeto da presente invenção refere-se a um método de tratamento ou prevenção de cancro (por exemplo, cujo curso pode ser influenciado através da modulação da metilação proteica mediada por EZH2) administrando um composto da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, a um indivíduo que necessita do mesmo, em que a administração do composto da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, resulta em uma ou mais das seguintes: prevenção da proliferação de células cancerosas por acumulação de células em uma ou mais fases do ciclo celular (por exemplo Gl, Gl/S, G2/M) ou indução da senescência celular ou promoção da diferenciação de células tumorais; promoção da morte celular em células cancerosas via citotoxicidade, necrose ou apoptose, sem uma quantidade significativa de morte celular em células normais, atividade antitumoral em animais com um índice terapêutico de pelo menos 2. Como aqui utilizado, "índice terapêutico" é a dose tolerada máxima dividida pela dose eficaz. A presente invenção refere-se também a um método utilizado para identificar candidatos adequados para tratar ou prevenir cancro.
Um especialista na técnica pode reportar-se a textos de referência gerais para descrições detalhadas das técnicas conhecidas aqui discutidas ou técnicas equivalentes. Estes textos incluem Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Inc. (2005); Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (3rd edition), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2000); Coligan et al., Current Protocols in Immunology, John Wiley &amp; Sons, N.Y.; Enna et al., Current Protocols in Pharmacology, John Wiley &amp; Sons, N.Y.; Fingi et al., The Pharmacological Basis of Therapeutics (1975), Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18th edition (1990). Evidentemente, pode também reportar-se as estes textos ao preparar ou utilizar um aspeto da invenção.
Como aqui utilizado, "terapia de associação" ou "co-terapia" inclui a administração de um composto da presente invenção, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, e pelo menos um segundo agente como parte de um regímen de tratamento específico destinado a proporcionar o efeito benéfico da co-ação destes agentes terapêuticos. O efeito benéfico da combinação pode incluir, mas não se limita à co-ação farmacocinética ou farmacodinâmica resultante da associação de agentes terapêuticos. A administração destes agentes terapêuticos em associação é tipicamente realizada ao longo de um intervalo de tempo definido (geralmente minutos, horas, dias ou semanas dependendo da associação selecionada). "Terapia de associação" pode, mas geralmente não se destina a, abranger a administração de dois ou mais destes agentes terapêuticos como parte de regímenes de monoterapia separados que incidental e arbitrariamente resultam nas combinações da presente invenção. "Terapia de associação" destina-se a abranger a administração destes agentes terapêuticos de uma maneira sequencial, em que cada agente terapêutico é administrado num tempo diferente, bem como a administração destes agentes terapêuticos, ou pelo menos dois dos agentes terapêuticos, de uma maneira substancialmente simultânea. A administração substancialmente simultânea pode ser realizada, por exemplo, administrando ao indivíduo uma única cápsula possuindo uma proporção fixa de cada agente terapêutico ou em múltiplas cápsulas únicas para cada um dos agentes terapêuticos. A administração sequencial ou substancialmente simultânea de cada agente terapêutico pode ser efetuada por qualquer via apropriada incluindo, mas não se limitando às vias orais, vias intravenosas, vias intramusculares e absorção direta através dos tecidos da membrana mucosa. Os agentes terapêuticos podem ser administrados pela mesma via ou por vias diferentes. Por exemplo, um primeiro agente terapêutico da associação selecionada pode ser administrado por injeção intravenosa, enquanto os outros agentes terapêuticos da associação podem ser administrados por via oral. Alternativamente, por exemplo, todos os agentes terapêuticos podem ser administrados por via oral ou todos os agentes terapêuticos podem ser administrados por injeção intravenosa. A sequência pela qual os agentes terapêuticos são administrados não é rigorosamente critica. "Terapia de associação" abrange também a administração dos agentes terapêuticos como descritos acima em associação adicional com outros ingredientes biologicamente ativos e terapias não farmacológicas (por exemplo, cirurgia ou tratamento por radiação) . Nos casos em que a terapia de associação compreende ainda um tratamento não farmacológico, o tratamento não farmacológico pode ser realizado em qualquer tempo adequado desde que seja conseguido um efeito benéfico da co-ação da associação dos agentes terapêuticos e tratamento não farmacológico. Por exemplo, em casos apropriados, o efeito benéfico é ainda conseguido quando o tratamento não farmacológico é temporalmente removido da administração dos agentes terapêuticos, eventualmente durante dias ou até mesmo semanas.
Um composto da presente divulgação, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, análogo ou derivado farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser administrado em associação com um segundo agente quimioterapêutico. 0 segundo agente quimioterapêutico (também referido como um agente antineoplásico ou agente antiproliferativo) pode ser um agente alquilante; um antibiótico; um antimetabolito; um agente desintoxicante; um interferão; um anticorpo policlonal ou monoclonal; um inibidor de EGFR; um inibidor de HER2; um inibidor de histona-desacetilase; uma hormona; um inibidor mitótico; um inibidor de mTOR; um inibidor de multi-cinases; um inibidor de serina/treonina-cinase; um inibidor de tirosina-cinase; um inibidor de VEGF/VEGFR; um taxano ou derivado de taxano, um inibidor de aromatase, uma antraciclina, um fármaco que visa microtúbulos, um fármaco de veneno de topoisomerase, um inibidor de um alvo molecular ou enzima (por exemplo, uma cinase ou uma proteina-metiltransferase), um fármaco análogo a citidina ou qualquer agente quimioterapêutico, antineoplásico ou antiproliferativo listado em www.câncer.org/docroot/cdg/cdb_0.asp .
Os agentes alguilantes ilustrativos incluem, mas não se limitam a, ciclofosfamida (Cytoxan; Neosar); clorambucil (Leukeran); melfalano (Alkeran); carmustina (BiCNU); bussulfano (Busulfex); lomustina (CeeNU); dacarbazina (DTIC-Dome); oxaliplatina (Eloxatin); carmustina (Gliadel); ifosfamida (Ifex); mecloretamina (Mustargen); bussulfano (Myleran); carboplatina (Paraplatin); cisplatina (CDDP; Platinol); temozolomida (Temodar); tiotepa (Thioplex); bendamustina (Treanda); ou estreptozocina (Zanosar).
Os antibióticos ilustrativo incluem, mas não se limitam a, doxorrubicina (Adriamicina); doxorrubicina lipossómica (Doxil); mitoxantrona (Novantrone); bleomicina (Blenoxane); daunorrubicina (Cerubidine); daunorrubicina lipossómica (DaunoXome); dactinomicina (Cosmegen); epirrubicina (Ellence); idarrubicina (Idamicina); plicamicina (Mithracin); mitomicina (Mutamicina); pentostatina (Nipent); ou valrubicina (Valstar).
Os antimetabolitos ilustrativos incluem, mas não se limitam a, fluorouracilo (Adrucil) ; capecitabina (Xeloda); hidroxiureia (Hydrea); mercaptopurina (Purinethol); pemetrexedo (Alimta); fludarabina (Fludara); nelarabina (Arranon); cladribina (Cladribina Novaplus); clofarabina (Clolar); citarabina (Cytosar-U); decitabina (Dacogen); citarabina lipossómica (DepoCyt) ; hidroxiureia (Droxia); pralatrexato (Folotyn); floxuridina (FUDR); gencitabina (Gemzar); cladribina (Leustatin); fludarabina (Oforta); metotrexato (MTX; Rheumatrex); metotrexato (Trexall); tioguanina (Tabloid); TS-1 ou citarabina (Tarabine PFS).
Os agentes desintoxicantes ilustrativos incluem, mas não se limitam a, amifostina (Ethyol) ou mesna (Mesnex).
Os interferões ilustrativos incluem, mas não se limitam a, interferão alfa-2b (Intron A) ou interferão alfa-2a (Roferon-A).
Os anticorpos policlonais ou monoclonais ilustrativos incluem, mas não se limitam a, trastuzumab (Herceptin); ofatumumab (Arzerra); bevacizumab (Avastin); rituximab (Rituxan); cetuximab (Erbitux); panitumumab (Vectibix); tositumomab/iodol31 tositumomab (Bexxar); alemtuzumab (Campath); ibritumomab (Zevalin; In-111; Y-90 Zevalin); gemtuzumab (Milotarg); eculizumab (Soliris) ordenosumab.
Os inibidores de EGFR ilustrativo incluem, mas não se limitam a, gefitinib (Iressa); lapatinib (Tykerb); cetuximab (Erbitux); erlotinib (Tarceva); panitumumab (Vectibix); PKI-166; canertinib (CI-1033); matuzumab (Emd7200) ou EKB-569.
Os inibidores de HER2 ilustrativos incluem, mas não se limitam a, trastuzumab (Herceptin); lapatinib (Tykerb) ou AC-4 8 0.
Os inibidores da histona-desacetilase incluem, mas não se limitam a, vorinostat (Zolinza).
As hormonas ilustrativas incluem, mas não se limitam a, tamoxifeno (Soltamox; Nolvadex); raloxifeno (Evista); megestrol (Megace); leuprolida (Lupron; Lupron Depot; Eligard; Viadur); fulvestrante (Faslodex); letrozole (Femara); triptorrelina (Trelstar LA; Trelstar Depot); exemestano (Aromasin); goserrelina (Zoladex); bicalutamida (Casodex); anastrozole (Arimidex); fluoximesterona (Androxy; Halotestin); medroxiprogesterona (Proverá; Depo-Provera); estramustina (Emcyt); flutamida (Eulexin); toremifeno (Fareston); degarelix (Firmagon); nilutamida (Nilandron); abarelix (Plenaxis); ou testolactona (Teslac).
Os inibidores mitóticos ilustrativos incluem, mas não se limitam a, paclitaxel (Taxol; Onxol; Abraxane); docetaxel (Taxotere); vincristina (Oncovin; Vincasar PFS) ; vinblastina (Velban); etoposido (Toposar; Etopophos; VePesid); teniposido (Vumon); ixabepilona (Ixempra); nocodazole; epotilona; vinorelbina (Navelbine); camptotecina (CPT); irinotecano (Camptosar); topotecano (Hycamtin); amsacrina ou lamelarina D (LAM-D).
Os inibidores de mTOR ilustrativos incluem, mas não se limitam a, everolimus (Afinitor) ou temsirolimus (Torisel); rapamune, ridaforolimus; ou AP23573.
Os inibidores de multi-cinases ilustrativos incluem, mas não se limitam a, sorafenib (Nexavar); sunitinib (Sutent); BIBW 2992; E7080; Zd6474; PKC-412; motesanib; ou AP24534.
Os inibidores de serina/treonina-cinase ilustrativos incluem, mas não se limitam a, ruboxistaurina; eril/cloridrato de easudil; flavopiridol; seliciclib (CYC202; Roscovitrine); SNS-032 (BMS-387032); Pkc412; briostatina; KAI-9803; SF1126; VX-680; Azdll52; Arry-142886 (AZD-6244); SCIO-469; GW681323; CC-401; CEP-1347 ou PD 332991.
Os inibidores de tirosina-cinase ilustrativos incluem, mas não se limitam a, erlotinib (Tarceva); gefitinib (Iressa); imatinib (Gleevec); sorafenib (Nexavar); sunitinib (Sutent); trastuzumab (Herceptin); bevacizumab (Avastin); rituximab (Rituxan); lapatinib (Tykerb); cetuximab (Erbitux); panitumumab (Vectibix); everolímus (Afinitor); alemtuzumab (Campath); gemtuzumab (Mylotarg); temsirolímus (Torisel); pazopanib (Votrient); dasatinib (Sprycel); nilotinib (Tasigna); vatalanib (Ptk787; ZK222584); CEP-701; SU5614; MLN518; XL999; VX-322; Azd0530; BMS-354825; SKI-606 CP-690; AG-490; WHI-P154; WHI-P131; AC-220; ou AMG888.
Os inibidores de VEGF/VEGFR ilustrativos incluem, mas não se limitam a, bevacizumab (Avastin); sorafenib (Nexavar); sunitinib (Sutent); ranibizumab; pegaptanib; ou vandetinib.
Os fármacos que visam microtúbulos ilustrativos incluem, mas não se limitam a, paclitaxel, docetaxel, vincristina, vinblastina, nocodazole, epotilonas e navelbina.
Os fármaco de veneno de topoisomerases ilustrativos incluem, mas não se limitam a, teniposido, etoposido, adriamicina, camptotecina, daunorrubicina, dactinomicina, mitoxantrona, amsacrina, epirrubicina e idarrubicina.
Os taxanos ou derivados de taxano ilustrativos incluem, mas não se limitam a, paclitaxel e docetaxol.
Os agentes quimioterapêuticos, antineoplásicos, antiproliferativos gerais ilustrativos incluem, mas não se limitam a, altretamina (Hexalen); isotretinoina (Accutane; Amnesteem; Claravis; Sotret); tretinoina (Vesanoid); azacitidina (Vidaza); bortezomib (Velcade) asparaginase (Elspar); levamisol (Ergamisol); mitotano (Lysodren); procarbazina (Matulane); pegaspargase (Oncaspar); denileucina diftitox (Ontak); porfimero (Photofrin); aldesleucina (Proleukin); lenalidomida (Revlimid); bexaroteno (Targretin); talidomida (Thalomid); temsirolimus (Torisel); trióxido arsénico (Trisenox); verteporfina (Visudyne); mimosina (Leucenol); (tegafur 1M - 5-cloro-2,4- di-hidroxipirimidina 0,4 Μ - oxonato de potássio 1 M) ou lovastatina.
Noutro aspeto, o segundo agente quimioterapêutico pode ser uma citocina tal como o G-CSF (fator de estimulação de colónias de granulócitos). Noutro aspeto, um composto da presente divulgação, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, análogo ou derivado farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser administrado em associação com terapia de radiação. A terapia de radiação pode ser também administrada em associação com um composto da presente divulgação e outro agente quimioterapêutico aqui descrito como parte de uma terapia de múltiplos agentes. Ainda noutro aspeto, um composto da presente divulgação, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, análogo ou derivado farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser administrado em associação com associações de quimioterapia padrão tais como, mas não se restringindo a, CMF (ciclofosfamida, metotrexato e 5-fluorouracilo), CAF (ciclofosfamida, adriamicina e 5-fluorouracilo), AC (adriamicina e ciclofosfamida), FEC (5-fluorouracilo, epirrubicina e ciclofosfamida), ACT ou ATC (adriamicina, ciclofosfamida e paclitaxel), rituximab, Xeloda (capecitabina), Cisplatina (CDDP), Carboplatina, TS-1 (tegafur, gimestat e otastat potássio numa proporção molar de 1:0,4:1), Camptotecina-11 (CPT-11, Irinotecano ou Camptosar™), CHOP (ciclofosfamida, hidroxidaunorrubicina, oncovina e prednisona ou prednisolona), R-CHOP (rituximab, ciclofosfamida, hidroxidaunorrubicina, oncovina, prednisona ou prednisolona) ou CMFP (ciclofosfamida, metotrexato, 5-fluorouracilo e prednisona).
Em exemplos preferidos, um composto da presente divulgação, ou um sal, pró-fármaco, metabolito, polimorfo ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode ser administrado com um inibidor de uma enzima, tal como uma cinase recetora ou não recetora. As cinases recetoras e não recetoras são, por exemplo, tirosina-cinases ou serina/treonina-cinases. Os inibidores de cinase aqui descritos são moléculas pequenas, ácidos polinucleicos, polipéptidos ou anticorpos.
Os inibidores de cinase ilustrativos incluem, mas não se limitam a, Bevacizumab (visa o VEGF), BIBW 2992 (visa os EGFR e Erb2), Cetuximab/Erbitux (visa o Erbl), Imatinib/Gleevic (visa o Bcr-Abl), Trastuzumab (visa o Erb2), Gefitinib/Iressa (visa o EGFR), Ranibizumab (visa o VEGF), Pegaptanib (visa o VEGF), Erlotinib/Tarceva (visa o Erbl), Nilotinib (visa o Bcr-Abl), Lapatinib (visa o Erbl e o Erb2/Her2), GW-572016/ditosilato de lapatinib (visa o HER2/Erb2), Panitumumab/Vectibix (visa o EGFR), Vandetinib (visa o RET/VEGFR), E7080 (múltiplos alvos incluindo RET e VEGFR), Herceptin (visa o HER2/Erb2), PKI-166 (visa o EGFR), Canertinib/CI-1033 (visa o EGFR), Sunitinib/SU-11464/Sutent (visa o EGFR e FLT3), Matuzumab/Emd7200 (visa o EGFR), EKB-569 (visa o EGFR), Zd6474 (visa o EGFR e VEGFR), PKC-412 (visa o VEGR e o FLT3),
Vatalanib/Ptk787/ZK222584 (visa o VEGR), CEP-701 (visa o FLT3), SU5614 (visa o FLT3), MLN518 (visa o FLT3), XL999 (visa o FLT3), VX-322 (visa o FLT3), Azd0530 (visa o SRC), BMS-354825 (visa o SRC), SKI-606 (visa o SRC), CP-690 (visa a JAK), AG-490 (visa a JAK), WHI-P154 (visa a JAK), WHI- P131 (visa a JAK), sorafenib/Nexavar (visa os RAF cinase, VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-β, KIT, FLT-3 e RET), Dasatinib/Sprycel (BCR/ABL e Src), AC-220 (visa o Flt3), AC-480 (visa todas as proteínas HER, "panHER"), difosfato de motesanib (visa os VEGF1-3, PDGFR e c-kit), Denosumab (visa o RANKL, inibe o SRC), AMG888 (visa o HER3) e AP24534 (múltiplos alvos incluindo Flt3).
Os inibidores de serina/treonina-cinase ilustrativos incluem, mas não se limitam a, Rapamune (visa o mTOR/FRAPl), Deforolimus (visa o mTOR), Certican/Everolimus (visa o mTOR/FRAPl), AP23573 (visa o mTOR/FRAPl), Eril/Cloridrato de fasudil (visa o RHO), Flavopiridol (visa a CDK), Seliciclib/CYC202/Roscovitrina (visa a CDK) , SNS-032/BMS-387032 (visa a CDK), Ruboxistaurina (visa a PKC) , Pkc412 (visa a PKC), Briostatina (visa a PKC), KAI-9803 (visa a PKC), SF1126 (visa a PI3K), VX-680 (visa a Aurora-cinase), Azdll52 (visa a Aurora-cinase), Arry-142886/AZD-6244 (visa a MAP/MEK), SCIO-469 (visa a MAP/MEK), GW681323 (visa a MAP/MEK), CC-401 (visa a JNK), CEP-1347 (visa a JNK) e PD 332991 (visa a CDK). O distúrbio no qual a metilação proteica mediada por EZH2 desempenha um papel pode ser uma doença neurológica. Desse modo, os compostos desta divulgação podem ser também utilizados para tratar ou estudar doenças neurológicas tais como epilepsia, esquizofrenia, distúrbio bipolar ou outros distúrbios psicológicos e/ou psiquiátricos, neuropatias, atrofia muscular esquelética e doenças neurodegenerativas, por exemplo, uma doença neurodegenerativa. As doenças neurodegenerativas ilustrativas incluem: Alzheimer, Esclerose Lateral Amiotrófica (ALS) e doença de Parkinson. Outra classe de doenças neurodegenerativas inclui as doenças provocadas, pelo menos em parte, por agregação de poliglutamina. As doenças desta classe incluem: doença de Huntingtons, Atrofia Muscular Bulboespinhal (SBMA ou Doença de Kennedy), Atrofia Dentato-rubro-palido-luisiana (DRPLA), Ataxia Espinhocerebelosa 1 (SCA1), Ataxia Espinhocerebelosa 2 (SCA2), Doença de Machado-Joseph (MJD; SCA3), Ataxia Espinhocerebelosa 6 (SCA6), Ataxia Espinhocerebelosa 7 (SCA7) e Ataxia Espinhocerebelosa 12 (SCA12).
Qualquer outra doença em que a metilação epigenética, a qual é mediada por EZH2, desempenha um papel pode ser tratada ou prevenida utilizando compostos e métodos aqui descritos, ou tais doenças e os tratamentos potenciais das mesmas podem ser estudados com os compostos aqui descritos. 4 . Composições Farmacêuticas A presente divulgação também proporciona composições farmacêuticas que compreendem um composto de qualquer uma das Fórmulas aqui descritas em combinação com pelo menos um excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
Uma "composição farmacêutica" é uma formulação que contém os compostos da presente divulgação numa forma adequada para administração a um indivíduo. Numa forma de realização, a composição farmacêutica está a granel ou numa forma de dosagem unitária. A forma de dosagem unitária é qualquer de uma variedade de formas, incluindo, por exemplo, uma cápsula, um saco IV, um comprimido, uma única bomba num inalador de aerossol ou um frasco. A quantidade de ingrediente ativo (por exemplo, uma formulação do composto divulgado, ou sal, hidrato, solvato ou isómero do mesmo) numa dose unitária de composição é uma quantidade eficaz e varia de acordo com o tratamento particular envolvido. Um especialista na técnica aperceber-se-á que é por vezes necessário preparar variações de rotina à dosagem dependendo da idade e condição do doente. A dosagem dependerá também da via de administração. É considerada uma variedade de vias, incluindo oral, pulmonar, retal, parentérica, transdérmica, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, inalação, bucal, sublingual, intrapleural, intratecal, intranasal e semelhantes. As formas de dosagem para a administração tópica ou transdérmica de um composto desta invenção incluem pós, formulações para pulverização, pomadas, pastas, cremes, loções, geles, soluções, adesivos e inalantes. Numa forma de realização, o composto ativo é misturado sob condições estéreis com um veiculo farmaceuticamente aceitável e com quaisquer conservantes, tampões ou propulsores que sejam necessários.
Como aqui utilizada, a frase "farmaceuticamente aceitável" refere-se àqueles compostos, aniões, catiões, materiais, composições, veiculos e/ou formas de dosagem que são, no âmbito de avaliação médica sólida, adequados para utilização em contacto com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação excessivo, comensurável com uma relação beneficio/risco razoável. "Excipiente farmaceuticamente aceitável" significa um excipiente que é útil na preparação de uma composição farmacêutica que é geralmente segura, não tóxica e que não é biologicamente nem, de outro modo, indesejável e inclui um excipiente que é aceitável para uso veterinário, bem como utilização farmacêutica humana. Um "excipiente farmaceuticamente aceitável" como utilizado na descrição e reivindicações inclui um e mais do que um desses excipientes.
Uma composição farmacêutica da invenção é formulada para ser compatível com a sua via de administração pretendida. Os exemplos de vias de administração incluem a administração parentérica, por exemplo, intravenosa, intradérmica, subcutânea, oral ('por exemplo, inalação), transdérmica (tópica) e transmucosa. As soluções ou suspensões utilizadas para aplicação parentérica, intradérmica ou subcutânea podem incluir os seguintes componentes: um diluente estéril tal como água para preparação injetável, soro fisiológico, óleos fixos, polietileno glicóis, glicerina, propileno glicol ou outros solventes sintéticos; agentes antibacterianos tais como álcool benzilico ou metilparabenos; antioxidantes tais como ácido ascórbico ou bissulfito de sódio; agentes quelantes tais como ácido etilenodiaminotetra-acético; tampões tais como acetatos, citratos ou fosfatos e agentes para o ajuste da tonicidade tais como cloreto de sódio ou dextrose. 0 pH pode ser ajustado com ácidos ou bases, tais como ácido clorídrico ou hidróxido de sódio. A preparação parentérica pode ser fechada em ampolas, seringas descartáveis ou frascos de doses múltiplas feitos de vidro ou plástico.
Um composto ou composição farmacêutica da invenção pode ser administrado a um indivíduo por muitos dos métodos bem conhecidos, atualmente utilizados para tratamento quimioterapêutico. Por exemplo, para o tratamento de cancros, um composto da invenção pode ser injetado diretamente nos tumores, injetados na corrente sanguínea ou cavidades corporais ou tomados por via oral ou aplicados através da pele com adesivos. A dose escolhida deve ser suficiente para constituir tratamento eficaz, mas não tão alta como para originar efeitos secundários inaceitáveis. Preferencialmente, o estado da condição patológica (por exemplo, cancro, pré-cancro e semelhantes) e a saúde do doente devem ser monitorizados muito de perto durante e por um periodo razoável após tratamento. 0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz", como aqui utilizado, refere-se a uma quantidade de um agente farmacêutico para tratar, melhorar ou prevenir uma doença ou condição identificada, ou para exibir um efeito terapêutico ou inibidor detetável. 0 efeito pode ser detetado por qualquer método de ensaio conhecido na técnica. A quantidade eficaz exata para um indivíduo dependerá do peso corporal, tamanho e saúde do indivíduo; da natureza e extensão da condição; e o agente terapêutico ou associação de agentes terapêuticos selecionado para administração. As quantidades terapeuticamente eficazes para uma dada situação podem ser determinadas por experiências de rotina que estão dentro da perícia e avaliação do clínico. Num aspeto preferido, a doença ou condição a ser tratada é cancro. Noutro aspeto, a doença ou condição a ser tratada é um distúrbio proliferativo celular.
Para qualquer composto, a quantidade terapeuticamente eficaz pode ser inicialmente estimada em ensaios de culturas de células, por exemplo, de células neoplásicas, ou em modelos animais, geralmente ratazanas, ratos, coelhos, cães ou porcos. 0 modelo animal pode ser também utilizado para determinar a gama de concentrações apropriada e a via de administração. Tal informação pode ser em seguida utilizada para determinar as doses e vias úteis para administração em humanos. A eficácia terapêutica/profilática e a toxicidade podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos correntes em culturas de células ou animais experimentais, por exemplo, ED50 (a dose terapeuticamente eficaz em 50% da população) e LD50 (a dose letal para 50% da população) . A relação de doses entre os efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice terapêutico e pode ser expresso como a razão, LD50/ED50. São preferidas as composições farmacêuticas que exibem índices terapêuticos grandes. A dosagem pode variar dentro desta gama dependendo da forma de dosagem utilizada, sensibilidade do doente e via de administração. A dose e administração são ajustadas para proporcionar níveis suficientes do(s) agente(s) ativo(s) ou para manter o efeito desejado. Os fatores que podem ser tidos em consideração incluem a gravidade do estado patológico, saúde geral do indivíduo, idade, peso e género do indivíduo, dieta, tempo e frequência de administração, associação (ões) de fármaco(s), sensibilidades à reação e tolerância/resposta à terapia. As composições farmacêuticas de ação prolongada podem ser administradas a cada 3 a 4 dias, a cada semana ou uma vez a cada duas semanas dependendo da semivida e taxa de depuração da formulação particular.
As composições farmacêuticas que contêm compostos ativos da presente invenção podem ser fabricadas de uma maneira que é geralmente conhecida, por exemplo, por meio de processos de mistura, dissolução, granulação, preparação de drageias, levigação, emulsificação, encapsulação, inclusão ou liofilização convencionais. As composições farmacêuticas podem ser formuladas de uma maneira convencional utilizando um ou mais veiculos farmaceuticamente aceitáveis compreendendo excipientes e/ou auxiliares que facilitam o processamento dos compostos ativos em preparações que podem ser utilizadas farmaceuticamente. Evidentemente, a formulação apropriada depende da via de administração escolhida.
As composições farmacêuticas adequadas para utilização injetável incluem soluções aquosas estéreis (quando solúveis em água) ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis estéreis. Para administração intravenosa, os veiculos adequados incluem soro fisiológico, água bacteriostática, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.) ou soro fisiológico tamponado com fosfato (PBS). Em todos os casos, a composição tem de ser estéril e deve ser fluida ao ponto de existir seringabilidade fácil. Tem de ser estável sob as condições de fabrico e conservação e tem de ser conservada contra a ação contaminante de microrganismos tais como bactérias e fungos. 0 veiculo pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol e polietileno glicol liquido e semelhantes) e misturas adequadas dos mesmos. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, pela utilização de um revestimento tal como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula necessário no caso de dispersões e pela utilização de tensioativos. A prevenção da ação de microrganismos pode ser conseguida por vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal e semelhantes. Em muitos casos, será preferível incluir agentes isotónicos, por exemplo, açúcares, poliálcoois tais como manitol e sorbitol, e cloreto de sódio na composição. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser provocada incluindo na composição um agente que retarda absorção, por exemplo, monoestearato de aluminio e gelatina.
As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas incorporando o composto ativo na quantidade necessária num solvente apropriado com um ou uma combinação de ingredientes enumerados acima, consoante necessário, seguido de esterilização por filtração. Em geral, as dispersões são preparadas incorporando o composto ativo num veiculo estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários daqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação são secagem em vácuo e secagem por congelação que produz um pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente adicional desejado a partir de uma solução do mesmo, previamente esterilizada por filtração.
As composições orais incluem geralmente um diluente inerte ou um veiculo comestível farmaceuticamente aceitável. Elas podem ser fechadas em cápsulas de gelatina ou prensadas em comprimidos. Para efeitos de administração terapêutica oral, o composto ativo pode ser incorporado com excipientes e utilizado na forma de comprimidos, trociscos ou cápsulas. As composições orais podem ser também preparadas utilizando um veiculo liquido para utilização como um colutório, em que o composto no veiculo liquido é aplicado por via oral e bochechado e expetorado ou engolido. Podem ser incluídos aglutinantes e/ou materiais adjuvantes farmaceuticamente compatíveis, como parte da composição. Os comprimidos, pilulas, cápsulas, trociscos e semelhantes podem conter qualquer um dos seguintes ingredientes ou compostos de uma natureza semelhante: um aglutinante tal como celulose microcristalina, goma tragacanta ou gelatina; um excipiente tal como amido ou lactose, um desintegrante tal como ácido alginico, Primogel ou amido de milho; um lubrificante tal como estearato de magnésio ou Sterotes; um deslizante tal como dióxido de silicio coloidal; um edulcorante tal como sacarose ou sacarina; ou um aromatizante tal como hortelã-pimenta, salicilato de metilo ou aromatizante de laranja.
Para administração por inalação, os compostos são administrados na forma de uma formulação para pulverização de aerossol a partir de um recipiente ou distribuidor pressurizado, o qual contém um propulsor adequado, por exemplo, um gás tal como dióxido de carbono ou um nebulizador. A administração sistémica pode ser também por via transmucosa ou meio transdérmico. Para administração por via transmucosa ou transdérmica, são utilizados na formulação penetrantes apropriados para a barreira a ser permeada. Tais penetrantes são geralmente conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, para administração por via transmucosa, detergentes, sais biliares e derivados de ácido fusidico. A administração por via transmucosa pode ser realizada através da utilização de formulações para pulverização nasal ou supositórios. Para administração transdérmica, os compostos ativos são formulados em pomadas, unguentos, geles ou cremes, como geralmente conhecido na técnica.
Os compostos ativos podem ser preparados com veiculos farmaceuticamente aceitáveis que protegerão o composto contra a eliminação rápida a partir do corpo, tal como uma formulação de libertação controlada, incluindo implantes e sistemas de administração microencapsulados. Podem ser utilizados polímeros biocompativeis, biodegradáveis, tais como etileno acetato de vinilo, polianidridos, poli(ácido glicólico), colagénio, poliortoésteres e poli(ácido láctico). Os métodos para preparação de tais formulações serão evidentes para os especialistas na técnica. Os materiais podem ser também obtidos comercialmente de Alza Corporation e Nova Pharmaceuticals, Inc. As suspensões lipossómicas (incluindo lipossomas dirigidos para células infetadas com anticorpos monoclonais contra antigénios virais) podem ser também utilizadas como veiculos farmaceuticamente aceitáveis. Estas podem ser preparadas de acordo com métodos conhecidos para os especialistas na técnica, por exemplo, como descrito na Pat. U.S. N.° 4,522,811. É especialmente vantajoso formular as composições orais ou parentéricas na forma unitária de dosagem para facilidade de administração e uniformidade de dosagem. A forma unitária de dosagem, como aqui utilizada, refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para o indivíduo a ser tratado; em que cada unidade contém uma quantidade predeterminada de composto ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o veiculo farmacêutico necessário. A especificação para as formas unitárias de dosagem da invenção são determinadas e diretamente dependentes das caracteristicas únicas do composto ativo e do efeito terapêutico particular a ser conseguido.
Nas aplicações terapêuticas, as dosagens das composições farmacêuticas utilizadas de acordo com a invenção variam dependendo do agente, da idade, peso e condição clinica do doente recetor, e da experiência e avaliação do clinico ou médico que administra a terapia, entre outros fatores que afetam a dosagem selecionada. Em geral, a dose deve ser suficiente para resultar num abrandamento e, preferencialmente, inversão do crescimento dos tumores e, preferencialmente, que origine também uma regressão completa do cancro. As dosagens podem variar desde cerca de 0,01 mg/kg por dia a cerca de 5000 mg/kg por dia. Em aspetos preferidos, as dosagens podem variar desde cerca de 1 mg/kg por dia a cerca de 1000 mg/kg por dia. Num aspeto, a dose situar-se-á na gama de cerca de 0,1 mg/dia a cerca de 50 g/dia; cerca de 0,1 mg/dia a cerca de 25 g/dia; cerca de 0,1 mg/dia a cerca de 10 g/dia; cerca de 0,1 mg a cerca de 3 g/dia; ou cerca de 0,1 mg a cerca de 1 g/dia, em doses únicas, divididas ou continuas (dose essa que pode ser ajustada para o peso do doente em kg, área de superfície corporal em m2 e idade em anos) . Uma quantidade eficaz de um agente farmacêutico é aquela que proporciona uma melhoria objetivamente identificável, como observada pelo clinico ou outro observador qualificado. Por exemplo, a regressão de um tumor num doente pode ser medida por referência ao diâmetro de um tumor. A diminuição do diâmetro de um tumor indica regressão. A regressão é também indicada pelo insucesso da recorrência dos tumores depois de o tratamento ter sido interrompido. Como aqui utilizado, o termo "maneira de dosagem eficaz" refere-se à quantidade de um composto ativo para produzir o efeito biológico desejado num indivíduo ou célula.
As composições farmacêuticas podem ser incluídas num recipiente, embalagem ou distribuidor em conjunto com instruções para administração.
Os compostos da presente invenção são ainda capazes de formar sais. Todas estas formas são também consideradas no âmbito da invenção reivindicada.
Como aqui utilizado, "sais farmaceuticamente aceitáveis" refere-se a derivados dos compostos da presente invenção em que o composto parental é modificado preparando os sais de ácido ou base do mesmo. Os exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não se limitam a, sais de ácidos minerais ou orgânicos de residuos básicos tais como aminas, sais alcali ou orgânicos de residuos ácidos tais como ácidos carboxilicos e semelhantes. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais não tóxicos convencionais ou os sais de amónio quaternário do composto parental preparados, por exemplo, a partir de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos. Por exemplo, tais sais não tóxicos convencionais incluem, mas não se limitam àqueles derivados de ácidos inorgânicos e orgânicos selecionados de 2-acetoxibenzoico, 2-hidroxietanossulfónico, acético, ascórbico, benzenossulfónico, benzoico, bicarbónico, carbónico, citrico, edético, etanodissulfónico, 1,2-etanossulfónico, fumárico, gluco-heptónico, glucónico, glutâmico, glicólico, glicolilarsanilico, hexilresorcinico, hidrabâmico, bromidrico, clorídrico, iodidrico, hidroximaleico, hidroxinaftoico, isetiónico, láctico, lactobiónico, laurilsulfónico, maleico, málico, mandélico, metanossulfónico, napsílico, nítrico, oxálico, pamoico, pantoténico, fenilacético, fosfórico, poligalacturónico, propiónico, salicíclico, esteárico, subacético, succínico, sulfâmico, sulfanílico, sulfúrico, tânico, tartárico, toluenossulfónico e os aminoácidos que ocorrem comummente, por exemplo, glicina, alanina, fenilalanina, arginina, etc.
Outros exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem ácido hexanoico, ácido ciclopentanopropiónico, ácido pirúvico, ácido malónico, ácido 3- (4-hidroxibenzoil)benzoico, ácido cinâmico, ácido 4-clorobenzenossulfónico, ácido 2-naftalenossulfónico, ácido 4-toluenossulfónico, ácido canforsulfónico, ácido 4-metilbiciclo-[2.2.2]-oct-2-eno-l-carboxílico, ácido 3-fenilpropiónico, ácido trimetilacético, ácido butil terciário-acético, ácido mucónico e semelhantes. A presente invenção também abrange sais preparados quando um protão ácido presente no composto parental é substituído por um ião metálico, por exemplo, um ião de metal alcalino, um ião alcalinoterroso ou um ião alumínio; ou coordena com uma base orgânica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina e semelhantes. Na forma de sal, entende-se que a proporção do composto para o catião ou anião do sal pode ser 1:1 ou qualquer proporção diferente de 1:1, por exemplo, 3:1, 2:1, 1:2 ou 1:3.
Deve ser entendido que todas as referências aos sais farmaceuticamente aceitáveis incluem as formas de adição de solvente (solvatos) ou formas cristalinas (polimorfos) como aqui definidas, do mesmo sal.
Os compostos da presente invenção podem ser também preparados como ésteres, por exemplo, ésteres farmaceuticamente aceitáveis. Por exemplo, um grupo funcional ácido carboxilico num composto pode ser convertido no seu éster correspondente, por exemplo, um éster de metilo, etilo ou outro. De igual modo, um grupo álcool num composto pode ser convertido no seu éster correspondente, por exemplo, acetato, propionato ou outro éster.
Os compostos da presente divulgação podem ser também preparados como pró-fármacos, por exemplo, pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis. Os termos "pró-fármaco" e "profármaco" são aqui utilizados indistintamente e referem-se a qualquer composto que liberta um fármaco parental ativo in vivo. Uma vez que se sabe que os pró-fármacos melhoram muitas qualidades desejáveis dos produtos farmacêuticos (por exemplo, solubilidade, biodisponibilidade, fabrico, etc.), os compostos da presente divulgação podem ser administrados na forma de pró-fármaco. Assim, a presente invenção destina-se a abranger pró-fármacos dos compostos presentemente reivindicados, métodos de administração dos mesmos, e composições que contêm os mesmos. "Pró-fármacos" destina-se a incluir quaisquer veiculos ligados covalentemente que libertam um fármaco parental ativo da presente divulgação in vivo quando esse pró-fármaco é administrado a um indivíduo. Os pró-fármacos da presente divulgação são preparados modificando grupos funcionais presentes no composto de tal forma que as modificações são dissociadas, quer na manipulação de rotina ou in vivo, no composto parental. Os pró-fármacos incluem compostos da presente divulgação em que um grupo hidroxilo, amino, sulfidrilo, carboxilo ou carbonilo está ligado a qualquer grupo que pode ser dissociado in vivo para formar um grupo hidroxilo livre, amino livre, sulfidrilo livre, carboxilo livre ou carbonilo livre, respetivamente.
Os exemplos de pró-fármacos incluem, mas não se limitam a, ésteres (por exemplo, derivados de acetato, dialquilaminoacetatos, formatos, fosfatos, sulfatos e benzoato) e carbamatos (por exemplo, N,N-dimetilaminocarbonilo) de grupos funcionais hidroxilo, ésteres (por exemplo, ésteres etílicos, ésteres de morfolinoetanol) de grupos funcionais carboxilo, derivados N-acilados (por exemplo, N-acetilo), bases de N-Mannich, bases de Schiff e enaminonas de grupos funcionais amino, oximas, acetais, cetais e ésteres de enol de grupos funcionais cetona e aldeído em compostos da invenção e semelhantes, Ver Bundegaard, H., Design of Prodrugs, pl-92, Elesevier, New York-Oxford (1985).
Os compostos, ou sais, ésteres ou pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são administrados por via oral, nasal, transdérmica, pulmonar, por inalação, por via bucal, sublingual, intraperitoneal, subcutânea, intramuscular, intravenosa, retal, intrapleural, intratecal e parentérica. Numa forma de realização, o composto é administrado por via oral. Um especialista na técnica reconhecerá as vantagens de certas vias de administração. 0 regime posológico ao utilizar os compostos é selecionado de acordo com uma variedade de fatores incluindo tipo, espécie, idade, peso, género e condição médica do doente; a gravidade da condição a ser tratada; a via de administração; a função renal e hepática do doente; e o composto particular ou seu sal utilizado. Um especialista médico ou veterinário com conhecimentos médios na técnica pode determinar facilmente e prescrever a quantidade eficaz do fármaco necessária para prevenir, contrariar ou parar o progresso da condição.
As técnicas para formulação e administração dos compostos divulgados da invenção podem ser encontradas em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, Mack Publishing Co. , Easton, PA (1995) . Os compostos aqui descritos e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, são utilizados em preparações farmacêuticas em combinação com um veiculo ou diluente farmaceuticamente aceitável. Os veiculos farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem enchimentos ou diluentes sólidos inertes e soluções aquosas ou orgânicas estéreis. Os compostos estarão presentes em tais composições farmacêuticas em quantidades suficientes para proporcionar a quantidade de dosagem desejada na gama aqui descrita.
Todas as percentagens e proporções aqui utilizadas, salvo indicação em contrário, são em peso. Outras caracteristicas e vantagens da presente invenção são evidentes a partir dos diferentes exemplos. Os exemplos proporcionados ilustram diferentes componentes e metodologias úteis na prática da presente invenção. Os exemplos não limitam a invenção reivindicada. Com base na presente divulgação o especialista pode identificar e utilizar outros componentes e metodologias úteis para praticar a presente invenção.
Nos esquemas de sintese aqui descritos, os compostos podem ser desenhados com uma configuração particular por razões de simplicidade. Tais configurações particulares não são para ser interpretadas como limitando a invenção a um ou outro isómero, tautómero, regioisómero ou estereoisómero, nem excluem as misturas de isómeros, tautómeros, regioisómeros ou estereoisómeros; contudo, entender-se-á que um dado isómero, tautómero, regioisómero ou estereoisómero pode ter um nível mais alto de atividade do que outro isómero, tautómero, regioisómero ou estereoisómero.
Os compostos concebidos, selecionados e/ou otimizados pelos métodos descritos acima, uma vez produzidos, podem ser caracterizados utilizando uma variedade de ensaios conhecidos dos especialistas na técnica para determinar se os compostos têm atividade biológica. Por exemplo, as moléculas podem ser caracterizadas por ensaios convencionais, incluindo, mas não se limitando àqueles ensaios descrito abaixo, para determinar se têm uma atividade prevista, atividade de ligação e/ou especificidade de ligação.
Além disso, pode-se utilizar triagens de alto rendimento para acelerar a análise utilizando tais ensaios. Como consequência, pode ser possível triar rapidamente as moléculas aqui descritas quanto à atividade, utilizando técnicas conhecidas na matéria. As metodologias gerais para realizar a triagem de alto rendimento são descritas, por exemplo, em Devlin (1998) High Throughput Screening, Mareei Dekker; e Patente U.S. N.° 5,763,263. Os ensaios de alto rendimento podem utilizar uma ou mais técnicas de ensaio diferentes, incluindo, mas não se limitando àquelas descritas abaixo.
Todas as publicações e documentos de patentes aqui citados são aqui incorporados por referência como se cada uma dessas publicações ou documentos fosse específica e individualmente indicado para ser aqui incorporado por referência. A citação de publicações e documentos de patentes não é um reconhecimento de que qualquer um seja técnica anterior pertinente, nem constitui qualquer reconhecimento relativamente ao conteúdo ou data dos mesmos. Tendo agora a divulgação sido descrita por meio de descrição escrita, os especialistas na técnica reconhecerão que a divulgação pode ser praticada numa variedade de formas de realização e que a descrição anterior e os exemplos abaixo são para fins de ilustração das reivindicações que se seguem. 5. Exemplos
Parte Experimental Geral RMN
Os espetros de RMN de XH foram adquiridos utilizando CDCI3, salvo indicação em contrário, e foram registados a 400 ou 500 MHz utilizando instrumentos Varian ou Oxford, instrumentos de magnete (500 MHz) . As multiplicidades indicadas são s = singleto, d = dupleto, t = tripleto, q = quarteto, quint = quintet, sxt = sexteto, m = multipleto, dd =dupleto de dupletos, dt = dupleto de tripletos; 1 indica um sinal largo.
LCMS e HPLC
Shimadzu LC-Q, Shimadzu LCMS-2010EV ou Waters Acquity Ultra Performance LC. HPLC: Os produtos foram analisados pelo Shimadzu SPD-20A com uma coluna 150 x 4,5mm YMC ODS-M80 ou coluna 150 x 4,6mm YMC-Pack Pro C18 a 1,0 mL/min. A fase móvel foi MeCN:H20=3:2 (contendo 0,3% de SDS e 0,05% de H3PO4) , 0,05% de TFA em água, 0,05% de TFA em acetonitrilo (gradiente inicial 20 %, em seguida 0,05% de TFA/MeCN até conc. até 95 % em 3 min. Mantém durante 0,5 min. a 3,51 até 4,50 min, em seguida 0,05% de TFA/MeCN conc. 20 %).
Alternativamente a LCMS, foram utilizados 2 métodos diferentes; o que nós mais utilizámos é o pH alto (METCR1600) e o outro para compostos mais correntes (METCR1416).
0,1 % de Ácido fórmico em água - Fase móvel "A" 0,1 % de Ácido fórmico em acetonitrilo - Fase móvel "B" utilizando uma coluna Waters Atlantis dC18, 2,1 mm x 100 mm, 3pm, com um caudal =0,6 mL/min Temperatura da coluna = 40 °C; Tempo (min) %B 0,00 min 5% B. 5,0 min 100% B, 5,4 min 100% B e 0,42 min 5% B O método de 3,5 minutos refere-se a uma coluna Atlantis dC18, 2,1 mm x 50 mm, 3pm, caudal de 1 mL/min a 40C. Fase móvel A Ácido fórmico (aq.) 0,1% fase móvel B ácido fórmico (MeCN) 0,1%, injeção 3 pL, gradiente 0 min (5% orgânico), 2,5 min (100 % orgânico), 2,7 min (100 % orgânico), 2,71 min (5% orgânico), 3,5 min (5% orgânico) O método de 7,0 minutos refere-se a uma coluna Atlantis dC18, 2,1 mm x 100 mm, 3pm, caudal de 0,6 mL/min a 40C.
Fase móvel A Ácido fórmico (aq.) 0,1% fase móvel B ácido fórmico (MeCN) 0,1%, injeção 3 pL, gradiente 0 min (5% orgânico), 5 min (100 % orgânico), 5,4 min (100 % orgânico), 5,42 min (5% orgânico), 7 min (5% orgânico)
Ambos os métodos de 3,5 e 7 minutos foram realizados num sistema MS18 Shimadzu LCMS-2010EV ou um MS19 Shimadzu LCMS-2010EV utilizando bombas LC-20AB e detetores PDA SPD-M20A.
Os produtos foram purificados por HPLC/MS utilizando-o Sistema Waters AutoPurification com Detetor de Massa 3100.
As análises por HPLC podem ser também realizadas num Shimdazu LC-2010 CHT utilizando uma coluna YMC ODS-A, C18, (150 x 4,6 x 5 pm) à temperatura ambiente com um caudal de 1,4 mL/min. É utilizado um volume de injeção de 10 pL e a deteção ocorre via UV/PDA. A Fase móvel A é 0,05% de TFA em água e a Fase móvel B é 0,05 % de TFA em acetonitrilo com um programa de gradiente de 5 % B inicial até 95 % B em 8 min, mantém durante 1,5 min, aos 9,51 até 12 min conc. B. 0,5 %. O diluente é a fase móvel
Outros A cromatografia em coluna flash automatizada foi realizada numa Biotage Isolera versão 4. Cartucho SNAP de 10 g a correr a 12 mL/min ou um cartucho SNAP de 25 g a correr a 25 mL/min e deteção a 254 nm e 280 nm.
As reduções com Nitrilo Select podem ser realizadas num ThalesNano Η-Cube® de acordo com as condições descritas no procedimento experimental.
Procedimento geral para a síntese do piridona aminas
R= e.g. -CH2Ph, -CH2CH2OH, CH2CH2OMe A uma solução do composto ciano (1 eq.) em MeOH, foram adicionados uma quantidade catalitica de Niquel de Raney e solução de amónia. A mistura foi agitada à TA sob hidrogénio (pressão de balão) durante 1 h. Depois de concluida a reação, a mistura foi filtrada através de um leito de celite, lavando com MeOH. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para proporcionar a amina desejada. Este procedimento é aplicável a um grande variedade de grupos R descritos nos exemplos. Em geral, as cianopiridinas estão disponíveis de fornecedores comerciais ou podem ser sintetizadas através de métodos conhecidos dos especialistas com conhecimentos médios na matéria. Sínteses de materiais de partida ou intermediários 3-(Aminometil)-6-metil-4-propil-l,2-di-hidropiridin-2-ona, sal de HC1
A uma solução, mantida sob agitação, de t-BuOK (20,0 g, 179 mmol) e cianoacetamida (16,5 g, 196 mmol) em DMSO (300 mL) foi adicionada (3E)-3-hepten-2-ona (20,0 g, 178 mmol). A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 30 minutos e, em seguida, foi adicionado mais t-BuOK (60,0 g, 712 mmol) à mistura reacional. A mistura reacional foi colocada sob atmosfera de oxigénio e agitada durante 16 h. A mistura reacional foi em seguida purgada com árgon e foi arrefecida até 0 °C. A mistura foi diluida com HC1 aq. e o precipitado resultante foi recolhido. O sólido foi lavado com água e seco para dar 6-metil-2-oxo-4-propil-l,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo (15,0 g, 47% de rendimento). A uma solução, mantida sob agitação, de 6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo (15,0 g, 85,1 mmol) em metanol (600 mL) e HC1 concentrado (15 mL) foi adicionado Pd(OH)2 (15,0 g) . A mistura foi agitada durante 48 horas sob atmosfera de H2. A mistura reacional foi filtrada e o filtrado foi concentrado in vacuo. Foi adicionada etanol ao resíduo, o precipitado resultante foi recolhido e seco para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (13,0 g, 60% de rendimento) . RMN de (400 MHz, CDCI3) õppm; 11,86 (s. 1., 1H) , 6,00 (s, 1H) , 3,78 (q, J = 5,5 Hz, 2H) , 3,61 (s. 1., 2H) , 2,46 (m, 2H) , 2,17 (s, 3H), 1,50 (sxt, J= 7,4 Hz, 2H), 0,91 (t, J=7,4 Hz, 3H) . 6-Metil-2-oxo-4-(propan-2-il)-1,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo
A uma solução de 2-cianoacetamida (35,1 g, 417 mmol) e t-BuOK (42,5 g, 379 mmol) em DMSO (631 mL) foi adicionada 5-metil-3-hexen-2-ona (50,0 mL, 379 mmol) sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada a 23 °C durante 30 min e, em seguida, foi adicionado mais t-BuOK (127 g, 1137 mmol) . O N2 gasoso foi substituído por 02 gasoso e a mistura foi agitada durante 45 h a 23 °C sob oxigénio. A mistura foi arrefecida até 0 °C, diluída com H20 (200 mL) e HC1 (5N, 227 mL, adicionado lentamente). A mistura foi agitada durante 15 min a 0 °C e o sólido foi filtrado com funil de Buchner. O sólido foi lavado com H20 (1500 mL) e seco com ar quente (55 °C, 16 h) para dar 6-metil-2-oxo-4-(propan-2-il)-1,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo (26,6 g, 40% de rendimento) . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDCI3) : δ 6,14 ppm (s, 1H) , 3,25-3,29 (m, 1H) , 2,45 (s, 3H) , 1,26 (d, J = 6,8Hz, 6H); LC-MS: m/z 177,1 [M+l], 198,9 [M+23]. 3-(Aminometil)-6-metil-4-(propan-2-il)-1,2-di-hidropiridin- 2-ona, sal de HC1
A uma solução de 6-metil-2-oxo-4-(propan-2-il)-1,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo (5,00 g, 28,4 mmol) em MeOH (400 mL) e HC1 (8,8 mL, 12 M) foi adicionado Pd(OH)2 a 10% (5,17 g, 3,68 mmol) sob atmosfera de N2. O N2 gasoso foi substituído por H2 gasoso e a mistura foi agitada durante 24 h a 23 °C sob hidrogénio. O H2 gasoso foi substituído por N2 gasoso e a mistura foi filtrada através de celite, lavada com MeOH e concentrada. O resíduo foi triturado com EtOH-TBME, o sólido foi recolhido com funil de Buchner e seco in vacuo para dar o composto em epígrafe (6,15 g, 100%). RMN de XH (400 MHz, DMSO-d6) : δ ppm 11,9 (s 1, 1H) , 8,03 (s 1, 2H) , 6,12 (s, 1H) , 3, 82-3, 84 (m, 2H) , 3,08-3,12 (m, 1H) , 2,19 (s, 3H) , 1,12 (d, J= 6,8Hz, 6H) . 6-Metil-2-oxo-4-(trifluorometil)-1,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo
A uma solução de 2-cianoacetamida (14,0 g, 166 mmol) e trifluoroacetilacetona (20,0 mL, 166 mmol) em H20 (332 mL) foi adicionada K2CC>3 (6,60 g, 47,9 mmol) . A mistura foi agitada a 23 °C durante 15 h. O sólido precipitado foi filtrada com funil de Buchner, lavada com gelo fria H20, e seca com quente ar (60 °C, 16 h) para dar o composto em epígrafe (17,6 g, 52%) . RMN de (400 MHz, DMSO-dg) : δ ppm 2,38 (s, 3H), 6,66 (s, 1H).
Cloridrato de 3-(aminometil)-6-metil-4-(trifluorometil)- 1,2-di-hidropiridin-2-ona, sal de HC1
A uma solução de 6-metil-2-oxo-4-(trifluorometil)-1,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo (400 mg, 1,98 mmol) em MeOH (19,8 mL) e HC1 (436 uL, 12M) foi adicionado Pd(0H)2 a 10% (361 mg, 0,257 mmol) sob atmosfera de N2. O N2 gasoso foi substituído por H2 gasoso e a mistura foi agitada durante 18 h a 23 °C sob hidrogénio. O H2 gasoso foi substituído por N2 gasoso. A mistura foi filtrada através de Celite, lavada com MeOH e concentrada. O residuo foi triturado com Me0H-Et20, recolhido com funil de Buchner e seco in vacuo para dar o composto em epigrafe (433 mg, 100%) . RMN de (400 MHz, DMSO-de) : δ ppm 2,31 (s, 3H) , 3,88 (s, 2H) , 6,43 (s, 1H). 5-Fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-l,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 6-metil-2-oxo-4-(propan-2-il)-1,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo (225 mg, 1,277 mmol) em MeCN (6 mL) foi adicionado Selectfluor (620 mg, 1,75 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 3 h. Depois de arrefecer até 23 °C, a mistura reacional foi concentrada in vacuo. O residuo foi purificado por cromatograf ia em coluna (50% a 100% de
AcOEt-heptano para obter o composto em epígrafe (90 mg, 36%). RMN de ^ (400 MHz, CDC13) δ ppm 3,39 (m, 1 H) , 2,44
(d, J= 3,1 Hz, 3 H), 1,41 (dd, J= 7,0, 3,1 Hz, 6 H); LCMS E-S (M+H) = 195,2. 5-Fluoro-6-metil-2-oxo-4-propil-l,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo
O composto em epígrafe foi preparado da mesma maneira que a descrita para o 5-Fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo (20% de rendimento). RMN de XH (400 MHz, CDC13) δ ppm 2,80 (dt, J = 7,9, 1,9 Hz 2 H) , 2,31 (d, J= 2,1 Hz, 3 H) , 1,73 (tq, J= 7,4, 7,4 Hz, 2 H) , 1,06 (t, J= 7,3 Hz, 3 H); LCMS E-S (M+H) = 195,2. 5-Fluoro-4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo
O composto em epígrafe foi preparado da mesma maneira que a descrita para o 5-Fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo (15% de rendimento). RMN de XH (400 MHz, CDCI3) δ ppm 2,46 (d, J = 3,1 Hz, 3 H) , 2,44 (d, J= 7,4, 3,1 Hz, 3 H); LCMS E-S (M+H) = 167,2. 3-(Aminometil)-5-fluoro-4-isopropil-6-metilpiridin-2(1H)-ona
5-Fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo (100 mg, 0,515 mmol) num balão de 100 mL foi dissolvido numa mistura de MeOH (6 mL) e 2 mL de NH3aq (2 mL, 25%) . A redução foi realizada utilizando Η-Cube com Ni de Raney como um catalisador à temperatura ambiente durante 3-4 h. Depois de concluída a reação (monitorizada por TLC), a reação foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido cinzento (90 mg, 90 %) . RMN de XH (400 MHz, CD3OD) δ ppm 4,04 (s, 2 H) , 3,22 (m, 1 H) , 2,24 (d, J = 3,4 Hz, 3 H) , 1,32 (dd, J= 7,0, 1,8 Hz, 6 H); LCMS E-S (M+H) = 199,2. 3-(Aminometil)-5-fluoro-6-metil-4-propilpiridin-2(1H)-ona
O composto em epígrafe foi preparado da mesma maneira que a descrita para a 3-(aminometil)-5-fluoro-4-isopropil-6-metilpiridin-2(1H)-ona (92% de rendimento). RMN de XH (400 MHz, CDC13) δ ppm 3,76 (s, 2 H) , 2,61 (dt, J = 7,2, 1,8 Hz 2 H) , 2,31 (d, J= 2,8 Hz, 3 H) , 1,57 (tq, J= 7,6, 7,6 Hz, 2 H), 1,00 (t, J= 7,3 Hz, 3 H); LCMS E-S (M+H) = 199,2. 3-(Aminometil)-5-fluoro-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona
0 composto em epígrafe foi preparado da mesma maneira que a descrita para a 3-(Aminometil)-5-fluoro-4-isopropil-6-metilpiridin-2(1H)-ona (92% de rendimento). RMN de (400 MHz, CDC13) δ ppm 3,79 (s, 2 H) , 2,29 (d, J= 3,3 Hz, 3 H) , 2,24 (d, J= 2,1 Hz, 3 H); LCMS E-S (M+H) = 171,2. Ácido 2-metil-3-nitro-5-(trifluorometil)benzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-metil-5-(trifluorometil)benzoico (2,00 g, 9,80 mmol) em H2SO4 (20 mL, 12 N) foi adicionado HNO3 (2 mL, 12N) a 0 °C.
Depois de agitar durante 3 horas, foi adicionada água e o precipitado resultante foi recolhido. O sólido foi lavado com água e seco para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (1,90 g, 76% de rendimento) . RMN de XH (400 MHz, CDCI3) õppm; 8,43 (s, 1H) , 8,15 (s, 1H), 2,77 (s, 3H) ; MS (ES) [M-H] 247,8. 2-Metil-3-nitro-5-(trifluorometil)benzoato de metilo
A uma solução de ácido 2-metil-3-nitro-5-(trifluorometil)benzoico (21,0 g, 84,3 mmol) em DMF
(200 mL) foi adicionado carbonato de potássio (35,0 g, 253 mmol) e iodeto de metilo (24,0 g, 169 mmol). A mistura foi agitada a 60 °C e depois de agitar durante 6 h a mistura reacional foi arrefecida até 23 °C e foi filtrada. O filtrado foi concentrado in vacuo e o resíduo foi dissolvido em AcOEt e água. A fase aquosa foi extraída com
AcOEt (2 x 250 mL e as camadas orgânicas combinadas foram concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (SiCç heptano-AcOEt =4 /1) para dar o composto em epígrafe (20,0 g, 90% de rendimento). RMN de (400 MHz, CDC13) δ (ppm) ; 8,27 (s, 1H) , 8,11 (s, 1H) , 3,99 (s, 3H), 2,71 (s, 3H); MS (ES) [M-H] 261,9. 3-Amino-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 2-metil-3-nitro-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (20,0 g, 76,0 mmol) em
MeOH (400 mL) foi adicionado Pd(OH)2 (2,00 g) . A mistura reacional foi agitada durante 3 horas sob atmosfera de hidrogénio. Depois de purgar com azoto, a mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado in vacuo para dar o composto em epígrafe como um sólido laranja (10,2 g, 58% de rendimento) . RMN de 1H (400 MHz, CDCI3) õppm; 7,47 (s 1, 1H) , 7,01 (d, J= 2,0 Hz, 1H) , 3,92 (m, 2H) , 3,91 (s, 3H) , 2,39 (s, 3H). 4-{[3-(Metoxicarbonil)-2-metil-5- (trifluorometil)fenil]amino}piperidina-l-carboxilato de fcerc-Butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (6,00 g, 25,7 mmol) em CH2CI2 (120 mL) e AcOH (6 mL) foi adicionada N-Boc piperidinona (6,70 g, 33,4 mmol) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (13,6 g, 64,3 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 20 horas. Em seguida, foi adicionado NaHCCg saturado e a mistura foi separada. A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 x 50 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (SÍO2 heptano/AcOEt = 4/1) para dar o composto em epígrafe (10,6 g, 98% de rendimento) . RMN de 1H (400 MHz, CDCI3) õppm; 7,37 (s, 1H) , 6,88 (s, 1H) , 4,05 (m, 2H) , 3,90 (s, 3H) , 3,01 (m, 3H) , 2,32 (s, 3H) , 1,71 (m, 2H) , 1,48-1,61 (m, 2H), 1,45 (s, 9H); MS (ES) [M-H] 415,1. 4-{Etil[3-(metoxicarbonil)-2-metil-5- (trifluorometil)fenil]amino}piperidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 4-{ [3- (metoxicarbonil)-2-metil-5- (trifluorometil)fenil]amino}piperidina-l-carboxilato de
terc-butilo (10,6 g, 25,4 mmol) em CH2CI2 (200 mL) e AcOH (10 mL) foi adicionado acetaldeído (2,80 g, 63,5 mmol) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (13,4 g, 63,5 mmol). A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 24 horas. Em seguida, foi adicionado NaHCCb saturado e a mistura foi separada. A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 x 50 mL) e a camada orgânica combinada foi concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (SÍO2 Heptano/AcOEt = 5/1) para dar o composto em epígrafe como óleo (4,50 g, 40% de rendimento). RMN de XH (400 MHz, CDC13) õppm; 7,82 (s.l., 1H) , 7,45 (d, J= 1,6 Hz, 1H) , 3,96-4,18 (m, 2H) , 3,92 (s, 3H) , 3,08 (q, J= 7,0 Hz, 2H) , 2,89 (tt, J= 11,0, 3,7 Hz, 1H) , 2,69 (m, 2H) , 2,55 (s, 3H) , 1,73 (m, 2H) , 1,49-1,56 (m, 2H) , 1,45 (s, 9H), 0,86 (t, J= 7,0 Hz, 3H); MS (ES) [M+Na] 467,0.
3-[Etil(piperidin-4-il)amino]-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo, sal de TFA
A uma solução, mantida sob agitação, de 4-{etil[3-(metoxicarbonil)-2-metil-5-(trifluorometil)fenil]amino}-piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (4,50 g, 10,1 mmol) em CH2CI2 (50 mL) foi adicionado TFA (5 mL) . A mistura reacional foi agitada à ta durante 18 horas. Em seguida, mistura reacional foi concentrada in vacuo para dar o composto em epígrafe como um produto em bruto (7,70 g) . 3- [Etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-[etil(piperidin- 4- il)amino]-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo, sal de TFA (material em bruto, 5,30 g, 12,0 mmol) em CH2CI2 (150 mL) e AcOH (10 mL) foi adicionado formaldeído (15 mL, solução aquosa a 44%) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (6,40 g, 30,0 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 2,5 dias. Em seguida, foi adicionado NaHCCp saturado e a mistura foi separada. A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 x 50 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-Si02 heptano/AcOEt=2/l) para dar o composto em epígrafe como óleo (l,20cg, 28% de rendimento). RMN de XH (400cMHz, CDCI3) õppm; 7,81 (s.l., 1H) , 7,45 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 3,92 (s, 3H) , 3,10 (q, J= 7,0 Hz, 2H) , 2,83 (m, 2H) , 2,66-2,77 (m, 1H) , 2,54 (s, 3H) , 2,24 (s, 3H) , 1, 84-1, 94 (m, 2Η) , 1, 63-1,78 (m, 4H) , 0,86 (t, J= 7,0 Hz, 3H) ; MS (ES) [M+H] 359,1. 3- {Etil[1-(propan-2-il)piperidin-4-il]amino}-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3- [etil(piperidin- 4- il)amino]-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo, sal de TFA (material em bruto, 1,30 g, 3,36 mmol) em CH2CI2 (20 mL) e AcOH (5 mL) foi adicionada acetona (590 mg, 10,1 mmol) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,80 g, 8,40 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 6 dias e, em seguida, foi adicionado NaHCCb saturado e a mistura foi separada. A camada aquosa foi extraida com CH2CI2 (3 x 30 mL) e a camada orgânica combinada foi concentrada in vacuo. O residuo foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel (NH-SiCg heptano/acetato de etilo=5/l) para dar o composto em epigrafe como óleo (220 mg, 17% de rendimento) . RMN de (400 MHz, CDCI3) õppm; 7,79 (s.l., 1H) , 7,44 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 3,91 (s, 3H) , 3,10 (q, J= 7,0 Hz, 2H) , 2,86 (m, 2H), 2,61-2,75 (m, 2H) , 2,53 (s, 3H), 2,06 (m, 2H), 1,70- 1,80 (m, 2H) , 1,58-1, 69 (m, 2H) , 1,00 (s x 2, 6H) , 0,84 (t, J= 7,0 Hz, 3H); MS (ES) [M+H] 387,2. Ácido 3-[etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-5- (trifluorometil)benzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-[etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-5- (trifluorometil)benzoato de metilo (700 mg, 1,95 mmol) em metanol (15 mL) foi adicionado NaOH aq. (5M, 590 uL, 2,93 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 3 horas. Depois de arrefecer até 23 °C, foi adicionado HC1 (2 M) à mistura. A mistura foi acidificada até pH = 5 e foi concentrada in vacuo para dar o composto em epígrafe como produtos em bruto (1,26 g) .
Seguindo o mesmo método de preparação que para o ácido 3-[etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-5-(trifluorometil)benzoico, os seguintes compostos em epígrafe foram preparados a partir de 3-amino-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo e 3-oxoazetidina-l-carboxilato de terc-butilo. 3-((3-(Metoxicarbonil)-2-metil-5- (trifluorometil)fenil)amino)azetidina-l-carboxilato de t-butilo
RMN de XH (400 MHz, CDC13) δ ppm 7,49 (s, 1H) , 6,60 (s, 1H) , 4,39 (dd, J= 7,2 Hz, 8,8 Hz, 2H) , 4,26 (m, 1H) , 4,19 (1, d, J = 5,6 Hz, 1H) , 3,93 (s, 3H) , 3,78 (m, 2H) , 2,41 (s, 3H), 1,47 (s, 9H). 3-(Etil(3-(metoxicarbonil)-2-metil-5- (trifluorometil)fenil)amino)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo
RMN de (400 MHz, CDC13) δ ppm 7,86 (s, 1H) , 7,20 (s, 1H) , 4,15 (m, 1H) , 3,99 (dd, J = 8,4 Hz, J = 8,4 Hz, 2H) , 3,94 (s, 3H) , 3,65 (1, 2H) , 3,00 (q, J= 7,2 Hz, 2H) , 2,60 (s, 3H) , 1,43 (s, 9H) , 0,90 (t, J = 6,8 Hz, 3H) ; MS (ES) (M+l) 417,41. 3-(Azetidin-3-il(etil)amino)-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo
RMN de XH (400 MHz, CDC13) δ ppm 7,89 (s, 1H) , 7,20 (s, 1H) , 4,39 (m, 1H) , 3,94 (s, 3H) , 3,87 (m, 2H) , 3,68 (1, 2H) , 2,99 (q, J = 6,8 Hz, 2H) , 2,64 (s, 3H) , 0,92 (t, J = 6,8 Hz, 3H); MS (ES) (M+l) 317,32. 3-(Etil(l-metilazetidin-3-il)amino)-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo
RMN de (400 MHz, CDC13) δ ppm 7,83 (s, 1H) , 7,24 (s, 1H) , 4,03 (m, 1H) , 3,94 (s, 3H) , 3,60 (1, dd, J= 7,2, 7,2
Hz, 2H) , 2,94 (q, J= 7,6 Hz, 2H) , 2,72 (1, t, J = 6,8 Hz, 2H) , 2,59 (s, 3H) , 2,33 (s, 3H), 0,90 (t, J= 7,2 Hz, 3H); MS (ES) (M+l) 331,09. Ácido 3-(etil(l-metilazetidin-3-il)amino)-2-metil-5- (trifluorometil)benzoico
RMN de XH (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,83 (s, 1H) , 7,37 (s, 1H), 4,44 (1, 1H), 3,86 (1, 2H), 3,33 (s, 2H) , 3,04 (q, J = 6,8 Hz, 2H) , 3,03 (s, 3H) , 2,64 (s, 3H) , 0,90 (t, J = 7,2 Hz, 3H); MS (ES) (M+l) 317,32. 3-((5-Cloro-3-(metoxicarbonil)-2- metilfenil)amino)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo
RMN de XH (500 MHz, CD3OD) δ ppm 7,05 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 6,48 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 4,31 (dd, J = 7,2, 7,8 Hz, 2H) , 4,26-4,21 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,82 (dd, J= 4,4, 8,3 Hz, 2 H), 2,29 (s, 3H), 1,45 (s, 9H). 3-((5-Cloro-3-(metoxicarbonil)-2- metilfenil)(etil)amino)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo
RMN de (500 MHz, CD3OD) δ ppm 7,57 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,18 (d, J= 2,0 Hz, 1H) , 4,19-4,14 (m, 1H) , 3,98 (dd, J = 8,0, 7,5 Hz, 2H) , 3,89(s, 3H) , 3, 62-3,56 (1, 2H) , 2,98 (q, J = 6,7 Hz, 2H) , 2,49 (s, 3H) , l,42(s, 9 H) , 0,88 (t, J = 7,2 Hz, 3H). 5-Cloro-3-(etil(l-metilazetidin-3-il)amino)-2-metilbenzoato de metilo
RMN de XH (500 MHz, CD3OD) δ ppm 7,53 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,17 (d, J= 2,0 Hz, 1H) , 4,01 (m, 1H) , 3,89 (s, 3H) , 3,57 (dd, J = 6,5, 8,0 Hz, 2H) , 2,93 (q, J = 7,5 Hz, 2H) , 2,83 (tl, J= 7,0 Hz, 2H) , 2,49 (s, 3H) , 2,33 (s, 3H) , 0,90 (t, J= 7,0 Hz, 3H); LCMS (M+H)=297,30. Ácido 3-{etil[1-(propan-2-il)piperidin-4-il]amino}-2-meti1- 5-(trifluorometil)benzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-{etil[1-(propan- 2- il)piperidin-4-il]amino}-2-metil-5-(trifluorometil) -benzoato de metilo (220 mg, 0,569 mmol) em metanol (4 mL) foi adicionado NaOH aq. (5M, 170 uL, 0,854 mmol). A mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 2 horas. Depois de arrefecer até 23 °C foi adicionado HC1 (2 M) à mistura. A mistura foi acidificada até pH = 5 e foi concentrada in vacuo para dar o composto em epígrafe como produtos em bruto (510 mg). 3- {[(2R*,6R*)-l-Benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il]amino}-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (400 mg, 1,72 mmol) em THF (15 mL) e TFA (491 uL) foi adicionada (2R, 6S)-1- benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-ona (410 mg, 1,89 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada a 60 °C durante 1 hora sob atmosfera de azoto. Em seguida, a mistura foi arrefecida até 0 °C num banho de gelo, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (765 mg, 3,43 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 2 horas. Em seguida, foi adicionado NaHCCq aq. a 0 °C até pH8-9, e o conteúdo foi extraído com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca sobre MgSCg e filtrada. 0 filtrado foi concentrado in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-SiCg; heptano/acetato de etilo=3/l) para dar o composto em epígrafe como um óleo incolor. (278 mg, 37% de rendimento) . RMN de (400M Hz, CDCI3) õppm; 7,21-7,40 (m, 6H), 6,90 (s, 1H), 3,95 (d, J= 14,0 Hz, 1H) , 3,90 (s, 3H) , 3, 60-3,73 (m, 2H) , 3,46 (d, J= 14,0 Hz, 1H) , 3,08-3,12 (m, 1H) , 2, 98-3, 03 (m, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,02- 2,08 (m, 1H) , 1,83-1, 88 (m, 1H) , 1,52-1, 60 (m, 1H) , 1, ΙΟΙ,26 (m, 1H) , 1,11 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 1,13 (d, J = 6,4
Hz, 3H). 3-{[(2R*,6S*)-l-Benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il]amino}-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (mistura diastereomérica)
A uma mistura, mantida sob agitação, de MS3A (1,0 g) , 3- amino-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (350 mg, 1,50 mmol) e (2R, 6S)-l-benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-ona (359 mg, 1,65 mmol) em clorofórmio (10 mL) foi adicionado ácido acético (500 uL) a 0 °C e agitada à t.a. durante 7 horas. À mistura reacional foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (670 mg, 3,00 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 1,5 horas. Em seguida, a mistura reacional foi desativada com NaHCCb aq. até pH8-9. O MS 3Â foi removido por filtração através de Celite e o conteúdo foi extraído com acetato de etilo, seco sobre MgSCh, filtrado e o filtrado foi concentrado in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (heptano/acetato de etilo=5/l a 3/1). As frações alvo foram recolhidas e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-SiCç; heptano/acetato de etilo=5/l) para dar o composto em epígrafe como um óleo amarelo-claro (223 mg, 62% de rendimento.) . Para o isómero principal; RMN de (400 MHz, CDCI3) õppm 7,40-7,21 (m, 6H) , 6,85 (s, 1H) , 4, 00-3, 95 (m, 1H) , 3,91(s, 3H) , 3,88 (d, 2H) , 3, 84-3, 76 (m, 1H) , 2,83-2,73 (m, 2H) , 2,25 (s, 3H) , 1,83-1, 69 (m, 4H) , 1,13 (d, J = 6,4Hz, 6H). 3-{[(2R*,6R*)-l-Benzil-2,6-dimetilpiperidin-4- il](etil)amino}-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3—{ [ (2R, 6R)-1- benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il]amino}-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (278 mg, 0,640 mmol) em CH2CI2 (5 mL) e AcOH (500 uL) foi adicionado acetaldeído (359 mg, 6,40 mmol) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (428 mg, 1,92 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 7 horas. Em seguida, a mistura reacional foi desativada com NaHCCb aq. até pH8-9. O conteúdo foi extraído com acetato de etilo, seco sobre MgSCg e filtrado. O filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-SÍO2 heptano/acetato de etilo=5/l) para dar o composto em epígrafe como um óleo amarelo-claro (236 mg, 80% de rendimento.) . RMN de (400 MHz, CDCI3) õppm; 7,7 9 (s, 1H) , 7,43 (s, 1H) , 7,21-7,36 (m, 5H) , 3,92 (s, 3H) , 3,87 (d, J= 14,0 Hz, 1H) , 3,38 (d, J= 14,0 Hz, 1H) , 3,04-3,15 (m, 4H) , 2,73-2,80 (m, 1H) , 2,53 (s, 3H) , 1,76-1, 82 (m, 1H) , 1,51-1,63 (m, 2H) , 1,34-1,42 (m, 1H) , 1,06 (d, J= 6,0
Hz, 3H) , 0,93 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 0,86 (t, J = 6,8 Hz, 3H) . 3-{[(2R*,6S*)-l-Benzil-2,6-dimetilpiperidin-4- il](etil)amino}-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (mistura diastereomérica)
A uma solução, mantida sob agitação, de 3—{ [ (2R, 6S)-1- benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il]amino}-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (223 mg, 0,513 mmol) em clorofórmio (4 mL) e ácido acético (500 uL) foi adicionado acetaldeido (1, 0 mL) e agitada durante 30 min a 0 °C. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (343 mg, 1,54 mmol) à mistura reacional a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 4 horas. Em seguida, a mistura reacional foi desativada com NaHCCg aq. até pH8-9. O conteúdo foi extraido com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre MgSCg e filtrada. O filtrado foi concentrado in vacuo. O residuo foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel (heptano/acetato de etilo=4/l a 1/2) para dar o composto em epigrafe como um óleo incolor. (105,5 mg, 44% de rendimento). MS (ES) [M+H] 463,3. 3-{[(2R*,4S*,6R*)-l-Benzil-2,6-dimetilpiperidin-4- il](etil)amino}-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin- 3-il)metil]-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3—{ [ (2R, 6R)-1- benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il](etil)amino}-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (236 mg, 0,510 mmol) em etanol (5 mL) foi adicionado NaOH aq. (5 M, 269 uL, 1,02 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 80 °C durante 2 horas. Depois de arrefecer até à ta, a mistura reacional foi concentrada in vacuo e seca sob pressão reduzida para dar o sal de sódio de ácido carboxílico em bruto. A uma solução, mantida sob agitação, de sal de sódio de ácido carboxílico em bruto e 3-(aminometil)-4,6-dimetil- 1,2-di-hidropiridin-2-ona, HC1 sal (125 mg, 0,664 mmol) em DMSO (5 mL) foi adicionado PyBOP (398 mg, 0,766 mmol) e base de Hunig (445 uL, 2,55 mmol). A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 19 horas. A mistura reacional foi desativada com água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água (duas vezes) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre MgSCg e filtrada. A camada orgânica combinada foi concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-SiCq; acetato de etilo/MeOH=50/l-8/l) para dar o composto em epígrafe como um branco amorfo (267 mg, 90% de rendimento) . RMN de (400 MHz, CDC13) õppm 7,14-7,36 (m, 8H) , 5,94 (s, 1H) , 4,53-4,56 (m, 2H), 3,85 (d, J= 14,0 Hz, 1H) , 3,58 (d, J = 14,0 Hz, 1H) , 3,02-3,14 (m, 4H) , 2,72-2,80 (m, 1H) , 2,40 (s, 3H) , 2,32 (s, 3H) , 2,21 (s, 3H) , 1,32-1,82 (m, 4H) , 1,05 (d, J = 6,4 Hz, 3H) , 0,92 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 0,84 (t, J = 6,8 Hz, 3H) . 3-{[(2R*,4R*,6S*)-l-Benzil-2,6-dimetilpiperidin-4- il](etil)amino}-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin- 3-il)metil]-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3—{[(2R, 6S)-1- benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il](etil)amino}-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (106 mg, 0,228 mmol) em etanol (2,0 mL) foi adicionado NaOH aq. (5 M, 91,2 uL, 0,456 mmol). A mistura reacional foi agitada a 80 °C durante 1,5 horas. Depois de arrefecer até à ta, o solvente foi removido in vacuo e seco sob pressão reduzida. A uma solução, mantida sob agitação, deste residuo e 3- (aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona, sal de HC1 (55,9 mg, 0,297 mmol) em DMSO (2 mL) foi adicionada base de Hunig (199 uL, 1,14 mmol) e PyBOP (178 mg, 0,342 mmol) . A mistura reacional foi agitada à ta durante 4 horas. A mistura reacional foi desativada com água. O conteúdo foi extraido com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada duas vezes com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre MgSCg e filtrada. O filtrado foi concentrado in vacuo. O residuo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH S1O2 acetato de etilo/MeOH=50/l a 40/1) para dar o composto em epígrafe como um óleo incolor (35, 6 mg, 27% de rendimento) . RMN de (400 MHz, CDCI3) õppm; 7,34-7, 08 (m, 7H) , 5,96 (s, 1H) , 4,54 (d, J = 6,0Hz, 2H) , 3,81 (s, 2H) , 3,53 (m, 1H) , 2,99-2,91 (m, 2H) , 2,81 (m, 2H) , 2,41 (s, 3H) , 2,24 (s, 3H) , 2,20 (s, 3H) , 1,82-1,47 (m, 4H) , 1,00 (d, J = 6,4Hz, 6H) , 0,81 (t, J = 6,8Hz, 3H); MS(ES) [M+H] 583,0. 4-{[5-Cloro-3-(metoxicarbonil)-2- metilfenil]amino}piperidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (1,40 g, 7,04 mmol) em CH2CI2 (30 mL) e AcOH (2,50 g, 42,2 mmol) foi adicionada N-Boc piperidinona (1,96 g, 9,85 mmol) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,40 g, 21,1 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 18 horas e, em seguida, foi adicionado NaHCCR saturado e a mistura foi separada. A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 x 20 mL) e as camadas orgânicas combinadas foram concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (Si02 heptano/acetato de etilo=10/l a 1/1) para dar o composto em epígrafe como óleo (2,40 g, 89% de rendimento). RMN de (400 MHz, CDCI3) õppm; 7,09 (s, 1H), 6,69 (s, 1H) , 4,05 (m, 2H) , 3,88 (s, 3H) , 3,63 (m, 1H) , 3,42 (m, 1H) , 2,97 (m, 2H) , 2,23 (s, 3H) , 2,05 (m, 2H) , 1,45 (s, 9H), 1,27 (m, 2H). 4- {[5-Cloro-3-(metoxicarbonil)-2- metilfenil](etil)amino}piperidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 4-{ [5-cloro-3-(metoxicarbonil)-2-metilfenil]amino}piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (2,40 g, 6,28 mmol) em diclorometano (50 mL) e ácido acético (1,8 mL) foi adicionado acetaldeído (830 uL, 12,6 mmol) e
triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,00 g, 18,8 mmol). A mistura reacional foi agitada à ta durante 18 horas. Em seguida, foi adicionado NaHCCç ag. e a mistura foi
separada. A camada aguosa foi extraída com diclorometano. A camada orgânica combinada foi concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (Si02 heptano/acetato de etilo=10/l) para dar o composto em epígrafe como óleo (2,40 g, 89% de rendimento). RMN de XH (400 MHz, CDC13) õppm; 7,56 (s, 1H), 7,21 (d, J= 1,6 Hz, 1H) , 4,04 (m, 2H) , 3,89 (s, 3H) , 3,02 (g, J= 7,0 Hz, 2H) , 2,88 (m, 1H) , 2,68 (m, 2H) , 2,44 (s, 3H) , 1,71 (m, 2H), 1,48-1,61 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 0,83-0,89 (t, J= 7,0 Hz, 3H); MS(ES) [M+Na] 433,0. 5- Cloro-3-[etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 4-{etil[3-(metoxicarbonil)-2-metil-5-clorofenil]amino}piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (2,20 g, 5,35 mmol) em diclorometano (20 mL) foi adicionado TFA (4 mL) . A mistura reacional foi agitada à ta durante 2 horas. Em seguida, a mistura reacional foi concentrada in vacuo para dar o sal de TFA como um produto em bruto. A uma solução, mantida sob agitação, de sal de TFA em THF (20 mL) e ácido acético (305 uL) foi adicionado formaldeído (3 mL, solução aquosa a 44%) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (3,40 g, 16,1 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 19 horas e, em seguida, foi adicionado NaHCCb saturado e a mistura foi separada. A camada aquosa foi extraída com AcOEt (50 mL) e a camada orgânica combinada foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre Na2S04 e filtrada e o filtrado concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-SÍO2 heptano/acetato de etilo=l/l) para dar composto em epígrafe como óleo (1,54 g, 89% de rendimento). RMN de XH (400 MHz, CDCI3) óppm; 7,54 (d, J= 2,4 Hz, 1H) , 7,21 (d, J=2,4 Hz, 1H) , 3,89 (s, 3H) , 3,07 (q, J= 6,8 Hz, 2H) , 2,81-2,85 (m, 2H) , 2, 66-2,70 (m, 1H) , 2,44 (s, 3H) , 2,24 (s, 3H) , 1,86- 1,93 (m, 2H) , 1, 65-1,75 (m, 4H) , 0,86 (t, J= 6,8 Hz, 3H) . Ácido 5-cloro-3-[etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2- metilbenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-[etil(1-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metilbenzoato de metilo (1,06 g, 3,26 mmol) em metanol (10 mL) foi adicionado NaOH aq. (5 M, 780 uL, 3,92 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 18 horas. Depois de arrefecer até 23 °C, foi adicionado HC1 (2 M, 2 mL) ) à mistura e a mistura foi acidificada até pH = 5 e foi concentrada in vacuo para dar o composto em epígrafe como produtos em bruto (1,80 g). 3-{[(2R,6R)-l-Benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il]amino}-5-fluoro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-fluoro-2-metilbenzoato de metilo (520 mg, 2,84 mmol) em THF (20 mL) e TFA (813 uL) foi adicionada (2R,6S)-l-benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-ona (679 mg, 3,12 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada a 60 °C durante 1 hora sob atmosfera de azoto. Em seguida, a mistura foi arrefecida até 0 °C num banho de gelo, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,27 g, 5,68 mmol). A mistura reacional foi agitada à ta durante 2 horas. Em seguida, foi adicionado NaHCCp aq. a 0 °C até pH8-9 e o conteúdo foi extraído com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca sobre MgSCg e filtrada. O filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-SiCh; heptano/acetato de etilo=5/l) para dar composto em epígrafe como um óleo incolor (331 mg, 30% de rendimento.) . RMN de 1H (400 MHz, CDC13) õppm; 7,35-7,39 (m, 2H) , 7,27-7,30 (m, 2H) , 7,21-7,26 (m, 1H) , 6,76 (dd, J=2,4, 9,2 Hz, 1H) , 6,45 (dd, J=2,4, 11,2 Hz, 1H), 3,94 (d, J=14,4 Hz, 1H) , 3,87 (s, 3Η) , 3,58-3, 65 (m, 2H) , 3,46 (d, J=14,4 Hz, 1H) , 3,06-3,12 (m, 1H) , 2,94-3,01 (m, 1H) , 2,21 (s, 3H) , 2,02-2, 07 (m, 1H) , 1,82-1,89 (m, 1H) , 1,15-1,22 (m, 1H) , 1,12 (d, J=6, 0 Hz, 3H), 1,09 (d, J=7,2 Hz, 3H). 3-{[(2R,4R,6S)-l-Benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il]amino}-5-fluoro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-fluoro-2-metilbenzoato de metilo (171 mg, 0,931 mmol) em clorofórmio (6 mL) e AcOH (266 uL) foi adicionada (2R, 6S)-1-benzil- 2,6-dimetilpiperidin-4-ona (212 mg, 0,980 mmol) e MS3A (500 mg) a 0 °C. A mistura foi agitada à ta durante 2 horas sob atmosfera de azoto. Em seguida, a mistura foi arrefecida até 0 °C num banho de gelo e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (415 mg, 1,86 mmol). A mistura reacional foi agitada à ta durante 5 horas. Em seguida, foi adicionado NaHCCb aq. a 0 °C até pH8-9, e o conteúdo foi extraido com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca sobre MgSCR e filtrada. O filtrado foi concentrado in vacuo. O residuo foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel (1. SiCR; heptano/acetato de etilo=5/l a 3/1, 2. NH-SiCR; heptano/acetato de etilo=5/l, 3. NH-Si02; heptano/acetato de etilo=10/l a 6/1) para dar o composto em epigrafe como um óleo incolor (85,0 mg, 24% de rendimento.) . RMN de XH (400 MHz, CDC13) õppm; 7,38-7,20 (m, 5H) , 6,77 (dd, J = 2,4, 9,2 Hz, 1H) , 6,40 (dd, J= 2,4, 11,6 Hz, 1H) , 3,95-3,90 (m, 1H) , 3,88 (s, 3H) , 3,87 (s, 2H) , 2,84-2,74 (m, 2H) , 2,16 (s, 3H) , 1,81-1,66 (m, 4H) , 1,11 (d, J=6, 0 Hz, 6H) . 3-{[(2R,6R)-l-Benzil-2,6-dimetilpiperidin-4- il](etil)amino}-5-fluoro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-{[(2R,6R)-1-benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il]amino}-5-fluoro-2-metilbenzoato de metilo (269 mg, 0,701 mmol) em diclorometano (5 mL) e ácido acético (500 uL) foi adicionado acetaldeido (124 mg, 2,80 mmol) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (469 mg, 2,10 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada à ta durante 12 horas. Em seguida, a mistura reacional foi desativada com NaHCCR aq. até pH8-9. O conteúdo foi extraido com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca sobre MgSCg e filtrada. O filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-SiCq; heptano/acetato de etilo=5/l) para dar o composto em epígrafe como um óleo amarelo-claro (277 mg, 96% de rendimento). RMN de (400 MHz, CDCI3) õppm; 7,19-7,36 (m, 6H) , 6,97 (dd, J = 2,4, 10,4 Hz, 1H) , 3,89 (s, 3H) , 3,86 (d, J= 10,4 Hz, 1H) , 3,39 (d, J= 10,4 Hz, 1H) , 3,02-3,10 (m, 4H) , 2,74-2,80 (m, 1H) , 2,43 (s, 3H) , 1,74-1, 82 (m, 1H) , 1,51-1,63 (m, 2H) , 1,32-1,40 (m, 1H) , 1,05 (d, J= 6,4
Hz, 3H) , 0,93 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 0,86 (t, J = 6,8 Hz, 3H); MS (ES) [M+H] 413,0. 3-{[(2R,4R,6S)-l-Benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il](etil)amino}-5-fluoro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-{[(2R,4R,6S)-1-benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il]amino}-5-fluoro-2-metilbenzoato de metilo (84,9 mg, 0,221 mmol) e acetaldeído (124 mg, 2,21 mmol) em clorofórmio (2 mL) , foi adicionado ácido acético (200 uL) a 0 °C e agitada a 23 °C durante 1 hora. À mistura reacional foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (148 mg, 0, 662 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada à TA durante 3,5 horas. À mistura reacional foram adicionados MS 3Â (200 mg) e acetaldeído (500 uL) a 0 °C e agitada à t.a. durante 25 minutos. À mistura reacional foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (148 mg, 0,662 mmol) a 0 °C e agitada à ta durante 12 horas. Em seguida, a mistura reacional foi então desativada com NaHCCh saturado até pH = 8-9. O conteúdo foi extraído com AcOEt. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre MgSCh e filtrada. O filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-SÍ02; heptano/acetato de etilo=5/l) para dar o composto em epígrafe como um óleo incolor (48,5 mg, 53% de rendimento) . RMN de (400 MHz, CDCI3) õppm; 7,36-7,19 (m, 6H) , 6,96 (dd, J= 2,8, 9, 6Hz, 1H) , 3,90 (s, 3H) , 3,82 (s, 2H) , 3,44 (m, 1H) , 2,98-2,91 (m, 2H) , 2,88-2,87 (m, 2H) , 2,31 (s, 3H), 1,82-1,70 (m, 2H), 1,57- 1,4 7 (m, 2H) , 0,99 (d, J= 6,4Hz, 6H) , 0,83 (t, J= 6,8Hz, 3H) . 3-{[(2R,6R)-l-Benzil-2,6-dimetilpiperidin-4- il](etil)amino}-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin- 3-il)metil]-5-fluoro-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-{[(2R,6R)-l-benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il](etil)amino}-5-fluoro-2-metilbenzoato de metilo (277 mg, 0,672 mmol) em etanol (5 mL) foi adicionado NaOH aq. (5 M, 269 uL, 1,35 mmol). A mistura reacional foi agitada a 80 °C durante 2 horas. Depois de arrefecer até à ta, a mistura reacional foi concentrada in vacuo e seca sob pressão reduzida para dar sal de sódio de ácido carboxílico em bruto. A uma solução, mantida sob agitação, de sal de sódio de ácido carboxílico em bruto e 3-(aminometil)-4,6-dimetil- 1,2-di-hidropiridin-2-ona, sal de HC1 (165 mg, 0, 874 mmol) em DMSO (5 mL) foi adicionado PyBOP (525 mg, 1,01 mmol) e base de Hunig (586 uL, 3,36 mmol). A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 5 horas. A mistura reacional foi desativada com água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água (2 x 10 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (1 x 10 mL) . A camada orgânica foi seca sobre MgSCg e filtrada e o filtrado concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-SiCh; acetato de etilo apenas até acetato de etilo/MeOH=50/l-8/l) para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (378 mg, rendimento quantitativo). RMN de (400 MHz, CDCI3) õppm; 7,20-7,38 (m, 5H) , 7,02-7,10 (m, 1H) , 6, 80-6, 84 (m, 1H) , 6, 73-6, 78 (m, 1H) , 5,93 (s, 1H) , 4,51 (d, J= 6,0 Hz, 2H) , 3,85 (d, J= 10,0 Hz, 1H), 3,38 (d, J= 10,0 Hz, 1H) , 3,01- 3.05 (m, 4H) , 2,67-2,81 (m, 1H) , 2,40 (s, 3H) , 2,23 (s, 3H) , 2,23 (s, 3H) , 1,52-1,83 (m, 3H) , 1,32-1,39 (m, 1H) , 1.05 (d, J = 6,4 Hz, 3H) , 0,93 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 0,84 (t, J = 6,8 Hz, 3H) . 3-{[(2R,4R,6S)-l-Benzil-2,6-dimetilpiperidin-4- il](etil)amino}-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin- 3-il)metil]-5-fluoro-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-{[(2R,4R,6S)-1-benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il](etil)amino}-5-fluoro-2-metilbenzoato de metilo (48,5 mg, 0,118 mmol) em etanol (1,5 mL) foi adicionado NaOH aq. (5 M, 47,0 uL, 0,235 mmol). A mistura reacional foi agitada a 80 °C durante 1,5 horas. Depois de arrefecer até à ta, o solvente foi removido in vacuo e seco sob pressão reduzida. A uma solução, mantida sob agitação, deste residuo e 3- (aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona, sal de HC1 (28,8 mg, 0,153 mmol) em DMSO (1 mL) foi adicionado PyBOP (91,8 mg, 0,176 mmol) e base de Hunig (102 uL, 0,588 mmol). A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 13,5 horas. A mistura reacional foi desativada com água, e a mistura foi extraida com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água (2 x 10 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (1 x 10 mL). A camada orgânica foi seca sobre MgSCg, filtrada e o filtrado foi concentrado in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH SiC>2, acetato de etilo/MeOH=50/l a 8/1) para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (50,1 mg, 79% de rendimento). MS(ES) [M+H] 533,3.
Exemplo 1: Síntese de Composto 1: 5-bromo-3- (ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metilo (0,5 g, 1,75 mmol) em acetonitrilo (10 mL), foram-lhe adicionados CS2CO3 (1,02 g, 2,63 mmol) e iodeto de metilo (1,45 g, 3,5 mmol). A mistura reacional resultante foi agitada a 80 °C durante 4 h. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo dissolvido em água e extraído com acetato de etilo. 0 material em bruto obtido foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel proporcionando o produto de composto desejado sem mais purificação (0,39 g) .
Passo 2: Sintese de 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1 equiv.) em etanol (5 mL), foi adicionada solução aquosa de NaOH (1 equiv.) e a reação agitada a 60 °C durante 4 h. Após conclusão, o etanol foi removido sob pressão reduzida e o residuo acidificado com HC1 IN até pH 6. A fase aquosa foi extraida com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e o solvente removido sob pressão reduzida proporcionando o ácido puro (rendimento 50-60%). A uma solução deste ácido (1 equiv.) em DMSO (1,5 mL) , foi adicionado PyBOP (1,5 equiv.) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 15 min. Em seguida, foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-ona (2 equiv.) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, foi adicionada água e o sólido precipitado resultante filtrado e lavado com água. Em seguida, este sólido foi agitado com acetonitrilo durante 10 min e novamente filtrado para se obter a molécula alvo pura (rendimento 50-60%) . LCMS: 446, 15 (M + 1)+; HPLC: 94,48% (a 254 nm) (Tr; 5,257); RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H) , 8,20 (t, 1H, J=4,8 Hz), 7,25 (s, 1H) , 7,04 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=4,8 Hz), 3,37-3,45 (m, 1H), 2,49 (3H misturados no pico do solvente), 2,17 (s, 3H) , 2,13 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,53-1, 67 (m, 4H) , 1,38- 1,50 (m, 4H) .
Exemplo 2: Síntese de Composto 2: 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(piperidina-4-il)amino)benzamida
Passo 1: ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (50 g, 276,2 mmol) em H2SO4 conc. (200 mL) , foi adicionada 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4- imidazolidinadiona (43,4 g, 151,8 mmol) em porções à temperatura ambiente e a massa reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h. Após conclusão, a massa reacional foi vertida sobre água gelada, o sólido precipitado foi filtrado, o residuo resultante foi lavado com água e seco sob vácuo dando o composto desejado (71,7 g, 99,9%) que foi utilizado para reação subsequente.
Passo 2: 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (287 g, 1103 mmol) em DMF (150 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (468 g, 4415 mmol) e iodeto de metilo (626,63 g, 4415 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Após conclusão, o sólido precipitado foi filtrado, o resíduo lavado com éter dietílico (5 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desejado (302 g, 99%) que foi utilizado para reação subsequente.
Passo 3: 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de metilo (150 g, 544 mmol) em etanol (750 mL) , foram adicionados, sob agitação, cloreto de amónio (150 g, 2777 mmol) dissolvido em água (750 mL) e ferro em pó (93,3 g, 1636 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Após conclusão, a massa reacional foi filtrada através de celite dando lavagem de água e acetato de etilo, o filtrado foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desejado.
Passo 4: 4-((5-bromo-3-(metoxicarbonil)amino)piperidina-1- carboxilato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo em bruto anterior (5 g, 20,57 mmol) e 4-oxopiperidina-l-carboxilato de terc-butilo (8,2 g, 41,15 mmol) em metanol (50 mL), foi adicionado ácido acético (1,2 g, 20,57 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (1,55 g, 24,6 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto 5 (5 g, 57%).
Passo 5: 4-((5-bromo-3-(metoxicarbonil)-2-metilfenilo (metil)amino)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 4-((5-bromo-3-(metoxicarbonil)amino)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (3 g, 7,06 mmol) em acetonitrilo (25 mL) , foram adicionados carbonato de césio (4,57 g, 14,11 mmol) e iodeto de metilo (5 g, 35,2 mmol); a massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Após conclusão, a massa reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, o residuo foi lavado com acetato de etilo e o filtrado foi concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (2,5 g, 81%).
Passo 6: 4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2- metilfenil)(metil)amino)piperidin-l-carboxilato de terc-butilo
Foi adicionado NaOH aquoso (0,37 g, 9,38 mmol) a uma solução de 4-((5-bromo-3-(metoxicarbonil)-2-metilfenilo (metil)amino)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (2 g, 4,69 mmol) em MeOH (20 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (1,7 g, 90%) . O ácido (1,7 g, 4,22 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (10 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (1,42 g, 9,38 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (3,66 g, 7,04 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão, a massa reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação com cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (1,3 g, 50%).
Passo 7: 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(piperidina-4-il)amino)benzamida
Uma solução, mantida sob agitação, de 4-( (5-bromo-3-(((4, 6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidin-l-carboxilato de terc-butilo (1,3 g, 2,39 mmol) em DCM (10 mL) foi arrefecida até 0 °C e foi-lhe adicionado TFA (2 mL). A massa reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após conclusão, a reação foi concentrada até à secura. 0 residuo foi basificado com bicarbonato de sódio aquoso até pH 8 e a camada aquosa extraida com 20% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas para proporcionar o composto desejado (0,9 g, 85%). LCMS: 461,15 (M + 1)+; HPLC: 98,52% (a 254 nm) (Tr;4,673; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,22 (t, 1H) , 7,19 (s, 1H) , 7,01 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=4 Hz), 2,91 (d, 2H, J=ll,6 Hz), 2,78 (si, 1H) , 2,55 (s, 3H) , 2,32-2,35 (m, 2H) , 2,18 (s, 3H) , 2,10 (s, 6H), 1,44-1,50 (m, 4H).
Exemplo 3: Síntese de Composto 3: 5-cloro-3-(ciclo- hexil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico
Ácido 5-cloro-2-metilbenzoico (4 g, 23,39 mmol) foi adicionado a H2SO4 conc. arrefecido (27 mL) a -10 °C em porções. Após 10 minutos, foi adicionada, gota a gota a -10 °C, mistura de nitração {preparada misturando HN03 Conc. (3,3 g, 52, 68 mmol) com H2SO4 conc. (4,4 mL) } . A massa reacional resultante foi agitada a -10 °C durante 30 minutos. Após conclusão, a mistura reacional foi vertida sobre água gelada, o sólido precipitado foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo dando o composto desejado (4, 95 g, 99%) .
Passo 2: 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico (6,75 g, 31,25 mmol) em DMF (33 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (13,23 g, 125,18 mmol) e iodeto de metilo (17,77 g, 125,2 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 60 °C durante 4 h. Após conclusão, foi adicionada água à massa reacional e a extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por cromatografia em coluna sobre sílica (tamanho de malha 60-120) dando o composto desejado (6 g, 83%) .
Passo 3: 3-amino-5-cloro-2-metilo benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (6 g, 26,13 mmol) em etanol (60 mL), foram adicionados, sob agitação, cloreto de amónio (6 g, 112,1 mmol) dissolvido em água (60 mL) e ferro em pó (11,88 g, 208,4 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 1 h. Após conclusão, foi adicionada água à massa reacional e a mistura reacional foi filtrada através de celite, o filtrado foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desejado.
Passo 4: 5-cloro-3-(ciclo-hexilamino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo (1 g, 5,025 mmol) e ciclo-hexanona (0,739 g, 7,75 mmol) em metanol (10 mL) , foi adicionado ácido acético (0,301 g, 5,02 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (390 mg, 0,00621 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (1,4 g, contaminado com ciclo-hexanona).
Passo 5: 5-cloro-3-(ciclo-hexil(metil)amino)-2- metilbenzoato de metilo (6):
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-(ciclo-hexilamino)-2-metilbenzoato de metilo (1,4 g, 0,0049 mole) em acetonitrilo (10 mL) , foram adicionados carbonato de césio (3,2 g, 0, 0099 mole) e iodeto de metilo (3,5 g, 0,0024 mole); a massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 13 h. Após conclusão, a massa reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, o resíduo foi lavado com acetato de etilo e o filtrado foi concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (800 mg, 55%).
Passo 6: 5-cloro-3-(ciclo-hexil(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,16 g, 4,06 mmol) a uma solução de composto 6 (0,8 g, 2,71 mmol) em EtOH (5 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,7 g, 91%). 0 ácido (0,7 g, 2,49 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (2 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,752 g, 4,98 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (1,9 g, 3,73 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (0,250 g, 25 %). LCMS: 416,35 (M + 1)+; HPLC: 99,01% (a 254 nm) (Tr; 5,408; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,20 (t, 1H, J=4,8 Hz), 7,05 (d, 1H, J=2 Hz), 6,88 (d, 1H, J=2 Hz), 5,85 (s, 1H), 4,24 (d, 2H, J=4,8 Hz), 2,70 (m, 1H) , 2,56 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,12 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H), 1,75-1,35 (m, 7H), 1,25-1,05 (m, 3H).
Exemplo 4: Sintese de Composto 4: 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(1-pivaloilpiperidin-4-il)amino)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(piperidina-4-il)amino)benzamida (0,05 g, 0,112 mmol) em DMF (2 mL) , foram adicionados EDCI.HC1 (0, 064 g, 0,336 mmol), HOBt (0,03 g, 0,22 mmol), trietilamina (0,03 g, 0,336 mmol) e ácido piválico (0,023 g, 0,224 mmol) à temperatura ambiente e agitada à mesma temperatura durante 18 h. Após conclusão, foi adicionada água e extraida com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas dando material em bruto; o qual foi em seguida purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,03 g, 56%). LCMS: 545,20 (Μ + 1)+ ; HPLC: 98, 60% (a 254 nm) (Tr; 6, 355; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% Β em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H) , 8,20 (t, 1H, J=4,4 Hz), 7,25 (d, 1H, J=2,8 Hz), 7,05 (d, 1H, J=1,2 Hz), 5,85 (s, 1H) , 4,23-4,25 (m, 4H) , 3,00 (m, 1H) , 2,76 (t, 2H, J=12,4 Hz), 2,54 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1, 62-1, 65 (m, 2H) , 1,42-1,48 (m, 2H), 1,18 (s, 9H) .
Exemplo 5: Síntese de Composto 5: 5-bromo-3- (ciclopentil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
A uma mistura de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (15 g, 82,80 mmol) em H2SO4 conc. (60 mL) , foi adicionado 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidinadiona (13,07 g, 45,71 mmol) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h. Em seguida, a mistura reacional foi lentamente vertida para 400 mL de água gelada. O sólido que precipitou foi filtrado, lavado e seco sob vácuo o composto desejado (21 g, 98,22%) .
Passo 2: 3-bromo-5-nitrobenzoato de metilo (3):
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (16 g, 61,54 mmol) em DMF (160 mL) , foram adicionados iodometano (35,72 g, 248 mmol) e carbonato de sódio (26,28 g, 248 mmol). A massa reacional resultante foi agitada a 60 °C durante 8 h. Após conclusão, a massa reacional foi filtrada e o resíduo sólido inorgânico lavado com acetato de etilo. Os filtrados combinados foram concentrados sob vácuo até à secura. O resíduo foi redissolvido em acetato de etilo e lavado com solução de bicarbonato de sódio a 5% (700 mL) , seguida de solução de HC1 5M (300 mL). A camada orgânica foi finalmente lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio e concentrada para proporcionar o composto desejado (16 g, 95%).
Passo 3: 3-amino-5-bromobenzoato de etilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-bromo-5-nitrobenzoato de metilo (17 g, 62,04 mmol) em etanol (85 mL) , foi adicionada solução de NH4C1 (17 g em 85 mL água, 317,8 mmol), seguida de Fe em pó (27,82 g, 498,12 mmol) . A massa reacional resultante foi agitada a 90 °C durante 1 h. Após conclusão, a massa reacional foi filtrada e o filtrado concentrado até à secura para se obter um sólido que foi dissolvido em solução sat. de bicarbonato de sódio. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (3X50 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas para proporcionar o composto desejado (15 g, 99,14%).
Passo 4: 3-bromo-5-(ciclopentilamino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5- bromobenzoato de etilo (2 g, 8,73 mmol) e ciclopentanona (2,2 g, 26,1 mmol) em metanol (20 mL), foi adicionado ácido acético (1,04 g, 17,4 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (1,37 g, 21,83 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (1,6 g, 61%).
Passo 5: 5-bromo-3-(ciclopentil(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-bromo-5- (ciclopentilamino)benzoato de metilo (0,3 g, 0,96 mmol) em DMF (5 mL), foram adicionados carbonato de césio (0,628 g, 1,92 mmol) e iodeto de etilo (0,748 g, 4,8 mmol) ; a massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 24 h. Após conclusão, a massa reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, o residuo foi lavado com acetato de etilo, e o filtrado foi concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,150 g, 46 %) .
Passo 6: 5-bromo-3-(ciclopentil(etil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,03 g, 0,75 mmol) a uma solução de 5-bromo-3-(ciclopentil(etil)amino)-2- metilbenzoato de metilo (0,170 g, 0,75 mmol) em EtOH (10 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,15 g, 92,59 %). O ácido (0,15 g, 0,461 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (5 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,14 g, 0,923 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,35 g, 0,692 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação por HPLC para proporcionar o composto em epígrafe (0,050 g, 24%) como o sal de TFA.: LCMS: 460,10 (M + 1)+; HPLC: 99,22% (a 2 54 nm) (Tr;5,115; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,09 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,24 (d, 2H, J=4,8 Hz), 3,47-3, 48 (m, 1H) , 2,96 (m, 2H) , 2,18 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H), 1,33-1,63 (m, 8H), 0,78 (t, 3H, J=6,4 Hz).
Exemplo 6: Síntese de Composto 7: 5-cloro-3- (ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico
Foi adicionado ácido 5-cloro-2-metilbenzoico (4 g, 23,4 mmol) a H2SO4 conc. arrefecido (27 mL) a -10 °C em pequenas porções e agitado durante 10 minutos. Foi adicionada, gota a gota a -10 °C, mistura de nitração {preparada misturando ΗΝ03 Cone. (3,3 g, 52,68 mmol) com H2SO4 cone. (4,4 mL)}. A mistura resultante foi agitada a -10 °C durante 30 minutos. Após conclusão, a mistura reacional foi vertida para água gelada, o sólido foi recolhido por filtração, lavado com água e seco sob vácuo para dar ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico (4,95 g, 99%).
Passo 2: Sintese de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico, preparado de forma análoga a acima, (6,75 g, 31,3 mmol) em DMF (33 mL) foi adicionado carbonato de sódio (13,2 g, 125 mmol) e iodeto de metilo (17,8 g, 125 mmol) . A mistura resultante foi aquecida a 60 °C durante 4 h. Após conclusão, foi adicionada água à mistura e a extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por cromatografia em coluna sobre silica para dar 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (6 g, 83,6%).
Passo 3: Sintese de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (6 g, 26,1 mmol) em etanol (60 mL), foi adicionado cloreto de amónio (6 g, 112 mmol) dissolvido em água (60 mL) e ferro em pó (11,9 g, 208 mmol). A mistura resultante foi aquecida a 80 °C durante 1 h. Após conclusão, foi adicionada água à mistura e a mistura reacional foi filtrada através de celite, e o filtrado foi extraido com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida para dar 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo.
Passo 4: Sintese de 5-cloro-3-(ciclopentilamino)-2- metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo (1 g, 5,0 mmol) e ciclopentanona (2,1 g, 25,0 mmol) em metanol (10 mL) foi adicionado ácido acético (0,6 g, 5,0 mmol), e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,78 g, 12,5 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por coluna cromatografia sobre silica para proporcionar 5-cloro-3-(ciclopentilamino)-2- metilbenzoato de metilo (1,2 g, 89%).
Passo 5: Sintese de 5-cloro-3-(ciclopentil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metilo (0,5 g, 1,86 mmol) em acetonitrilo (5 mL) foi adicionado carbonato de césio (1,22 g, 3,7 mmol) e iodeto de metilo (1,32 g, 9,33 mmol) . A mistura resultante foi aquecida a 80 °C durante 12 h. Após conclusão, a mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, o resíduo foi lavado com acetato de etilo, e o filtrado foi concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 5-cloro-3-(ciclopentil(metil)amino)-2- metilbenzoato de metilo (0,5 g, 95%).
Passo 6: Síntese de 5-cloro-3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,106 g, 2,66 mmol) a uma solução de 5-cloro-3-(ciclopentil(metil)amino)-2- metilbenzoato de metilo (0,5 g, 1,77 mmol) em MeOH (5 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o metanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,4 g, 84%). O ácido (0,1 g, 0,37 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (0,5 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,114 g, 0,74 mmol). A mistura
reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,29 g, 0,56 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação em coluna para proporcionar 5-cloro-3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (100 mg, 66%). LCMS: 402,15 (M + 1)+; HPLC: 96,46% (a 254 nm) (Tr;5,289; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-dfj, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 8,19 (t, 1H, J=4,8 Hz), 7,13 (d, 1H, J=2 Hz), 6,91 (d, 1H, J=2 Hz), 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=5,2 Hz), 3,41-3,45 (m, 1H), 2,50 (3H misturados no pico do solvente), 2,18 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,38-1,67 (m, 8H).
Exemplo 7: Sintese de Composto 8: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(piperidin-4-il)amino)benzamida
Passo 1: ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico
Foi adicionado ácido 5-cloro-2-metilbenzoico (4 g, 23,39 mmol) a H2SO4 conc. arrefecido (27 mL) a -10 °C em porções. Após 10 minutos foi adicionada, gota a gota a -10 °C, mistura de nitração {preparada misturando HN03 Conc. (3,3 g, 52, 68 mmol) com H2SO4 conc. (4,4 mL) } . A massa reacional resultante foi agitada a -10 °C durante 30 minutos. Após conclusão, a mistura reacional foi vertida sobre água gelada, o sólido precipitado foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo dando o composto desejado (4, 95 g, 99%) .
Passo 2: 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico (6,75 g, 31,25 mmol) em DMF (33 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (13,23 g, 125,18 mmol) e iodeto de metilo (17,77 g, 125,2 mmol). A massa reacional resultante foi aguecida a 60 °C durante 4 h. Após conclusão, foi adicionada água à massa reacional e a extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por cromatografia em coluna sobre silica (tamanho de malha 60-120) dando o composto desejado (6 g, 84%) .
Passo 3: 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (6 g, 26,13 mmol) em etanol (60 mL) , foram adicionados sob agitação cloreto de amónio (6 g, 112,1 mmol) dissolvido em água (60 mL) e ferro em pó (11,88 g, 208,4 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 1 h. Após conclusão, foi adicionada água à massa reacional e a mistura reacional foi filtrada através de celite, o filtrado foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desejado.
Passo 4: 4-((5-cloro-3-(metoxicarbonil)-2-metilfenil)amino) piperidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo (6 g, 30,15 mmol) e 4-oxopiperidina-l-carboxilato de terc-butilo (29 g, 150 mmol) em metanol (10 mL) , foi adicionado ácido acético (1,8 g, 30,1 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (4,7 g, 75,3 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (4 g, 30%).
Passo 5: 4-( (5-cloro-3-(metoxicarbonil)-2-metilfenilo) (metil)amino)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 4-((5-cloro-3-(metoxicarbonil)-2-metilfenil)amino)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (4 g, 9,09 mmol) em acetonitrilo (50 mL), foram adicionados carbonato de césio (5,9 g, 18,09 mmol) e iodeto de metilo (6,95 g, 48, 94 mmol); a massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 12 h. Após conclusão, a massa reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, o resíduo foi lavado com acetato de etilo, e o filtrado foi concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (2,2 g,53%).
Passo 6: 4-( (5-cloro-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2- metilfenil)(metil)amino)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo
Foi adicionado NaOH aquoso (0,75 g, 1,86 mmol) a uma solução de 4-( (5-cloro-3-(metoxicarbonil)-2-
metilfenil)(metil)amino)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (0,5 g, 1,26 mmol) em MeOH (5 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,4 g, 84%). O ácido (0,4 g, 1,04 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (1 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4, 6- dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,316 g, 2,09 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,816 g, 1,56 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação em coluna para proporcionar o composto desejado (0,225 g, 41 %).
Passo 7: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(piperidin-4-il)amino)benzamida
Uma solução, mantida sob agitação, de 4-( (5-cloro-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (0,2 g, 0,632 mmol) em DCM (5 mL) foi arrefecida até 0 °C e foi-lhe adicionado TFA (0,15 mL). A massa reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após conclusão, a reação foi concentrada até à secura. O resíduo foi purificado por lavagens com solvente para proporcionar o composto desejado (0,14 g, 53 %) como o seu sal de TFA. LCMS: 417,25 (M + 1)+; HPLC: 96,16% (a 254 nm) (Tr; 4, 677; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H) , 8,49 (sl, 1H) , 8,20 (t, 1H) , 8,18 (sl, 1H) , 7,19 (s, 1H) , 6,96 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,25 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,25 (d, 2H, J=12 Hz), 3,08 (m, 1H) , 2,88 (sl, 2H) , 2,56 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,17 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,76 (sl, 4H).
Exemplo 8: Sintese de Composto 10: 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida:
Passo 1: Sintese de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (50 g, 276 mmol) em H2SO4 conc. (200 mL), foi adicionada 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidinadiona (43,4 g, 152 mmol) em porções à temperatura ambiente, e a agitação foi prosseguida à temperatura ambiente durante 5 h. Após conclusão, a mistura foi vertida para água gelada, o sólido resultante foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para dar ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (71,7 g, 99,9%).
Passo 2: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de me tilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico, preparado de forma análoga a acima, (287 g, 1103 mmol) em DMF (150 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (468 g, 4415 mmol) e iodeto de metilo (626,6 g, 4415 mmol). A mistura resultante foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Após conclusão, o sólido foi removido por filtração e o resíduo lavado com éter dietílico (5 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida para dar 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de metilo (302 g, 99%).
Passo 3: Síntese de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno (150 g, 544 mmol) em etanol (750 mL) foi adicionada uma solução de cloreto de amónio (150 g, 2777 mmol) em água (750 mL) e ferro em pó (93,3 g, 1636 mmol). A mistura resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Após conclusão, a mistura foi filtrada através de celite; a celite foi lavada com água e acetato de etilo e o filtrado foi extraido com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida para dar 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo.
Passo 4: Sintese de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo (2 g, 8,23 mmol) e di-hidro-2H-pirano-4(3)-ona (1,06 g, 10,6 mmol) em metanol (20 mL), foi adicionado ácido acético (0,5 g, 8,23 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,622 g, 9,87 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metilo (1,6 g, 61%).
Passo 5: Sintese de 5-bromo-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-( (tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metilo (0,4 g, 1,26 mmol) em acetonitrilo (15 mL) , foram adicionados carbonato de césio (0,79 g, 2,44 mmol) e iodeto de metilo (0,86 g, 6,11 mmol); a mistura resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Após conclusão, a mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, o resíduo foi lavado com acetato de etilo, e o filtrado foi concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia em coluna para proporcionar a Síntese de 5-bromo-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metilo (0,33 g, 80%).
Passo 6: Síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,19 g, 4,89 mmol) a uma solução de composto 6 (0,8 g, 2,4 mmol) em MeOH (20 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,70 g, 92%). O ácido (0,7 g, 2,24 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (3 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,74 g, 4,89 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (1,9 g, 3,6 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão, a mistura foi vertida para gelo para se obter um sólido. 0 sólido foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação com cromatografia em coluna para proporcionar 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida (0,53 g, 54%). LCMS: 462,23 (Μ + 1)+ ; HPLC: 98,57% (a 254 nm) (Tr; 5,276; Método:
Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H) , 8,20 (t, 1H, J=4,8 Hz), 7,24 (d, 1H, J=2 Hz), 7,04 (d, 1H, J=2 Hz), 5,85 (s, 1H), 4,24 (d, 2H, J=4,8 Hz), 3,84 (d, 2H, J=10,8 Hz), 3,22-3,28 (m, 2H), 2,96 (m, 1H), 2,56 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,13 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,52-1,61 (m, 4H) .
Exemplo 9: Sintese de Composto 13: 2, 5-dicloro-3- (ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida
Passo 1: Sintese de ácido 2,5-dicloro-3-nitrobenzoico:
Foi adicionado ácido 2,5-diclorobenzoico (5 g, 26,2 mmol) a H2SO4 conc. arrefecido (50 mL) a -10 °C, em pequenas porções. Após 10 minutos foi adicionada, gota a gota a -10 °C, a mistura de nitração {preparada misturando HN03 Conc. (2,5 mL) com H2SO4 conc. (10 mL) } . A mistura reacional resultante foi agitada a -10 °C durante 2 h. Após conclusão, a mistura reacional foi vertida para água gelada e precipitou um sólido. O sólido foi recolhido por filtração, lavado com água e seco sob vácuo para dar ácido 2.5- dicloro-3-nitrobenzoico (3,4 g, 65%).
Passo 2: Sintese de 2,5-dicloro-3-nitrobenzoato de metilo:
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2,5-dicloro-3-nitrobenzoico (3,2 g, 13,67 mmol) em DMF (30 mL) foi adicionado carbonato de sódio (4,3 g, 40,56 mmol) e iodeto de metilo (9,7 g, 68,30 mmol) . A mistura reacional foi aquecida a 60 °C durante 18 h. Após conclusão, foi adicionada água à mistura reacional e o produto foi extraido utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida para dar 2.5- dicloro-3-nitrobenzoato de metilo (3 g, 90%).
Passo 3: Sintese de 3-amino-2,5-diclorobenzoato de metilo:
A uma solução, mantida sob agitação, de 2,5-dicloro-3-nitrobenzoato de metilo (3,3 g, 13,1 mmol) em etanol (20 mL) foi adicionado cloreto de amónio (3,5 g, 64,81 mmol) dissolvido em água (20 mL) e ferro em pó (7 g, 82,35 mmol) . A mistura reacional foi aquecida a 80 °C durante 3 h. Após conclusão, foi adicionada água à mistura reacional e os sólidos removido por filtração através de celite. O filtrado foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida para dar 3-amino-2,5-diclorobenzoato de metilo (2,5 g, 66 %).
Passo 4: Síntese de 2, 5-dicloro-3- (ciclopentilamino)benzoato de metilo:
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-2,5-diclorobenzoato de metilo (2,5 g, 11,5 mmol) e ciclopentanona (4,8 g, 57,1 mmol) em metanol (5 mL) foi adicionado ácido acético (0,6 g, 11,3 mmol) e a agitação foi prosseguida à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (1,4 g, 22,2 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 2,5-dicloro-3-(ciclopentilamino)benzoato de metilo (0,275 g, 8%).
Passo 5: Síntese de 2,5-dicloro-3- (ciclopentil(metil)amino)benzoato de metilo:
A uma solução, mantida sob agitação, de 2,5-dicloro-3-(ciclopentilamino)benzoato de metilo (0,275 g, 0,958 mmol) em acetonitrilo (5 mL) foi adicionado carbonato de césio (0, 622 g, 1,9 mmol) e iodeto de metilo (0, 689 g, 4,78 mmol) . A mistura reacional foi aquecida a 80 °C durante 18 h. Após conclusão, a reação foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada. O resíduo foi lavado com acetato de etilo e o filtrado foi concentrado para proporcionar 2,5-dicloro-3-(ciclopentil(metil)amino)- benzoato de metilo (0,27 g, 93%).
Passo 6: Síntese de 2,5-dicloro-3- (ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,50 g, 1,24 mmol) a uma solução de 2,5-dicloro-3-(ciclopentil(metil)amino)benzoato de metilo (0,25 g, 0,83 mmol) em MeOH (5 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o metanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e até pH 4 utilizando ácido cítrico. O produto foi extraído utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para dar o ácido desejado (0,21 g, 88%). 0 ácido (0,21 g, 0,755 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (3 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,3 g, 1,97 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,757 g, 1,45 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido. O sólido foi filtrado e lavado com acetonitrilo. O composto foi adicionalmente purificado por HPLC prep. para proporcionar 2,5-dicloro-3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida (0,1 g, 36 %) como o sal de TFA. LCMS: 422,10 (M + 1)+; HPLC: 97,58% (a 254 nm) (Tr;6,973; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-dg, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H) , 8,35 (t, 1H) , 7,23 (s, 1H) , 6,98 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,24 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,66 (m, 1H) , 2,59 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,70 (si, 2H) , 1,61 (si, 2H), 1,48 (si, 4H).
Exemplo 10: Sintese de Composto 14: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida
Passo 1: ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico
Foi adicionado ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (4 g, 23,39 mmol) a H2SO4 conc. arrefecido (27 mL) a -10 °C, em
porções. Após 10 minutos foi adicionada, gota a gota a -10 °C, mistura de nitração {preparada misturando HN03 Conc. (3,3 g, 52, 68 mmol) com H2SO4 conc. (4,4 mL) } . A massa reacional resultante foi agitada a -10 °C durante 30 minutos. Após conclusão, a mistura reacional foi vertida sobre água gelada, o sólido precipitado foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo dando o composto desejado (4, 95 g, 99%) .
Passo 2: 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-cloro-2- metil-3-nitrobenzoico (6,75 g, 31,25 mmol) em DMF (33 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (13,23 g, 125,18 mmol) e iodeto de metilo (17,77 g, 125,2 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 60 °C durante 4 h. Após conclusão, foi adicionada água à massa reacional e a extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por cromatografia em coluna sobre silica (tamanho de malha 60-120) dando o composto desejado (6 g, 84%) .
Passo 3: 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (6 g, 26,13 mmol) em etanol (60 mL) , foram adicionados sob agitação cloreto de amónio (6 g, 112,1 mmol) dissolvido em água (60 mL) e ferro em pó (11,88 g, 208,4 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 1 h. Após conclusão, foi adicionada água à massa reacional e a mistura reacional foi filtrada através de celite, o filtrado foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desejado que foi utilizado tal e qual.
Passo 4: 5-cloro-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo (1 g, 5,025 mmol) e di-hidro-2H-pirano-4(3H)-ona (753 mg, 7,537 mmol) em metanol (10 mL) , foi adicionado ácido acético (301 mg, 5,025 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (373 mg, 6,03 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (700 mg, 49%) .
Passo 5: 5-cloro-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metilo (700 mg, 2,473 mmol) em acetonitrilo (10 mL), foram adicionados carbonato de césio (1,61 g, 4,946 mmol) e iodeto de metilo (1,82 g, 0,8 mL, 12,36 mmol); a massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 13 h. Após conclusão, a massa reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, o residuo foi lavado com acetato de etilo, e o filtrado foi concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (480 mg, 65%).
Passo 6: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (96 mg, 2,424 mmol) a uma solução de 5-cloro-2-metil-3-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metilo (0,48 g, 1,616 mmol) em EtOH (2 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,4 g, 87%). O ácido (0,4 g, 1,41 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (1 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6- dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,429 g, 2,82 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (1,10 g, 2,12 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação em coluna para proporcionar o composto em epigrafe (0,17 g, 29 %) : LCMS: 418,25 (M + 1)+; HPLC: 97,72% (a 254 nm) (Tr; 5, 022; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,48 (s, 1H) , 8,21 (t, 1H, J=4,4 Hz), 7,13 (s, 1H) , 6,92 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,24 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,84 (d, 2H, J=10,8
Hz), 3,25 (t, 2H, J=11,2 Hz), 2,96 (m, 1H) , 2,56 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1, 65-1,52 (m, 4H) .
Exemplo 11: Sintese de Composto 15: (4-((5-bromo-3-(((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2- metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo
Passo 1: Síntese de 5-bromo-3-((4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de me tilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo (5 g, 20,6 mmol) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (5,6 g, 26,7 mmol) em metanol (50 mL) foi adicionado ácido acético (1,2 g, 20,6 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (1,6 g, 26,7 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto 5-bromo-3-((4-( (terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (3 g, 33,3%).
Passo 2: Síntese de 5-bromo-3-((4-((terc- butoxicarbonil ) amino)ciclo-hexil)(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-3-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1,5 g, 4,6 mmol) em acetonitrilo (15 mL) foi adicionado carbonato de césio (2,63 g, 8,1 mmol) e iodeto de metilo (2,86 g, 20,32 mmol) . A mistura foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Após conclusão, a reação foi arrefecida até à temperatura ambiente, filtrada e o resíduo foi lavado com acetato de etilo. O filtrado foi concentrado para proporcionar 5-bromo-3-((4-((terc-butoxicarbonil) amino)ciclo-hexil)(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1,5 g).
Passo 3: Síntese de (4-( (5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo- l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionado NaOH aquoso (0,26 g, 6,62 mmol) a uma solução de 5-bromo-3-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil) (metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1,5 g, 3,3 mmol) em MeOH (20 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o metanol foi removido sob pressão reduzida e a mistura foi acidificada utilizando HC1 diluído até pH 6 e até pH 4 utilizando ácido cítrico. O produto foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para dar o ácido desejado (1,33 g, 92%). 0 ácido (1,3 g, 2,96 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (10 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,34 g, 2,2 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,88 g, 1,7 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura foi vertida sobre gelo para se obter sólido. O sólido foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação com cromatografia em coluna para proporcionar (4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo. (0,5 g, 26%). LCMS: 575,80 (M + 1)+; HPLC: 99,99% (a 254 nm) (Tr; 6, 094,7, 065 [mistura de diastereómeros]; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9.51- 12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 8,20 (d, 1H, J=3, 6 Hz), 7,21 (s, 1H) , 7,18 (s, 1H) , 7,01 (s, 1H) , 6,66 (d, 1H, J=7,2 Hz), 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=3,2 Hz), 3,44 (sl, 1H), 3,15 (sl, 1H), 2,55-2,66 (m, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,10 (s, 6H) , 1,76-1,79 (m, 2H) , 1.51- 1,63 (m, 3H), 1,36-1,38 (m, 11H), 1,07-1,16 (m, 1H).
Exemplo 12: Síntese de Composto 16: 3- (ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-l,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)benzamida
Passo 1: ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-metil-3- nitrobenzoico (50 g, 276,2 mmol) em H2SO4 conc. (200 mL) , foi adicionada 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4- imidazolidinadiona (43,4 g, 151,8 mmol) em porções à temperatura ambiente e a massa reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h. Após conclusão, a massa reacional foi vertida sobre água gelada, o sólido precipitado foi filtrado, o residuo resultante foi lavado com água e seco sob vácuo para dar o composto desejado (71,7 g, 100%)
Passo 2: 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-bromo-2- metil-3-nitrobenzoico (287 g, 1103 mmol) em DMF (150 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (468 g, 4415 mmol) e iodeto de metilo (626,63 g, 4415 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Após conclusão, o sólido precipitado foi filtrado, o resíduo lavado com éter dietílico (5 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desejado em bruto (302 g, 99%) que foi utilizado sem mais purificação.
Passo 3: 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de metilo (150 g, 544 mmol) em etanol (750 mL) , foram adicionados sob agitação cloreto de amónio (150 g, 2777 mmol) dissolvido em água (750 mL) e ferro em pó (93,3 g, 1636 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Após conclusão, a massa reacional foi filtrada através de celite dando lavagem de água e acetato de etilo, o filtrado foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desejado que foi adicionalmente utilizado tal e qual.
Passo 4: 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo (0,3 g, 1,33 mmol) e ciclopentanona (0,56 g, 6,6 mmol) em metanol (3 mL), foi adicionado ácido acético (0,159 g, 2,6 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,208 g, 3,3 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi utilizado tal e qual no passo seguinte.
Passo 5: Síntese de 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
Uma solução de 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metilo (1 g, 3,22 mmol), Cs2C03 (2,10 g, 6,45 mmol) e iodeto de metilo (2,3 g, 16,12 mmol) em acetonitrilo (15 mL) foi aquecida a 80 °C durante 14 h. Após consumo total do material de partida, a mistura reacional foi filtrada. O filtrado foi concentrado e o resíduo obtido foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,9 g, 86%).
Passo 6: 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2- oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,166 g, 4,15 mmol) a uma solução de 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-2- metilbenzoato de metilo (0,9 g, 2,76 mmol) em EtOH (9 mL) e água (2,2 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,85 g, 98%). O ácido (0,85 g, 2,73 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (10 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,83 g, 5,46 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (2,13 g, 4,09 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de éter para proporcionar o composto desejado (0,450 g, 37%).
Passo 7: 4-(3-(ciclopentil(metil)amino)-5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4-metilfenil)-5,6-di-hidropiridina-l(2H)-carboxilato de terc-butilo
A uma solução desgaseifiçada de 5-bromo-3- (ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1,0 g, 2,24 mmol) e ácido borónico (0,833 g, 2,69 mmol) em dioxano (20 mL) foi adicionado Pd(PPh3) 4 (0,260 g, 0,224 mmol, 0,1 eq) e a solução foi novamente purgada com árgon durante 20 min. À mistura reacional foi adicionada solução aquosa de Na2C03 (0,857, 8, 08 mmol) em 1 mL de água e a mistura reacional foi novamente purgada com árgon durante 20 min. A reação foi aquecida a 100 °C durante 90 min. A mistura reacional foi em seguida arrefecida até à temperatura ambiente e vertida para água fria e extraida com diclorometano. O composto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,900 g, 64%).
Passo 8: 3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 4- (3- (ciclopentil(metil)amino)-5-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4-metilfenil)-5, 6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato de terc-butilo (0,800 g, 1,45 mmol) em DCM foi adicionado TFA (3 mL) e a mistura reacional foi agitada à TA durante 2 h. Após conclusão, a reação foi concentrada até à secura. O residuo foi basificado com bicarbonato de sódio aquoso até pH 8 e a camada aquosa extraida com 20% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas para proporcionar material em bruto que foi purificado por HPLC preparativa para proporcionar o composto desejado (0,620 g, 95%).
Passo 9: 3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-l, 2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)benzamida
3-(Ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)benzamida (0,100 g, 0,223 mmol) foi dissolvida em metanol (5 mL) e arrefecida até 0 °C, foi adicionada formalina (0,067 g, 0,19 mL, 2,23 mmol). A massa reacional resultante foi agitada à mesma temperatura durante 30 minutos. Foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,041 g, 0,66 mmol) à massa reacional anterior e agitada à temperatura ambiente durante 4 h. Após conclusão, os solventes foram removidos sob pressão reduzida e foi adicionada água ao residuo, a extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,065 g, 63%) : LCMS: 463,40 (M + 1)+; HPLC: 98,79% (a 254 nm) (Tr;3,911; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,43 (s, 1H), 8,04 (t, 1H, J=4,8 Hz), 7,17 (s, 1H), 6,95 (s, 1H) , 6,07 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,25 (d, 2H, J=4,8 Hz), 3,45 (m, 1H), 2,98 (sl, 2H), 2,53 (m, 2H) , 2,42 (sl, 2H) , 2,26 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,17 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,67 (m, 2H) , 1,59 (m, 2H) , 1,49 (m, 2H) , 1,40 (m, 2H) .
Exemplo 13: Síntese de Composto 17: 3-( (1-acetilpiperidin- 4-il) (metil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
À 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-2-metil-3-(metil(piperidina-4-il)amino)benzamida (0,2 g, 0,447 mmol) dissolvida em DMSO (2 mL) e foi-lhe adicionado ácido acético (0,054 g, 0,896 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,342 g, 0,672 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão, a massa reacional foi vertida para gelo, e extraída utilizando 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas para proporcionar material em bruto, o qual foi em seguida purificado com cromatografia em coluna utilizando sílica (tamanho de malha 100-200) para proporcionar o composto desejado (0,15 g, 17%). LCMS: 503,20 (M + 1)+; HPLC: 96, 06% (a 254 nm) (Tr;5,143; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-dg, 400 MHz) δ 11,48 (s, 1H), 8,21 (t, 1H, J=4,8 Hz), 7,23 (d, 1H, J=1, 6 Hz), 7,04 (d, 1H, J=l,6 Hz), 5,85 (s, 1H), 4,32 (d, 1H, J=12,4 Hz), 4,23 (d, 2H, J=4,8 Hz), 3,77 (d, 1H, J=13,2
Hz), 2,98 (t, 2H, J=11,2 Hz), 2,54 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,13 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,97 (s, 3H) , 1,53-1, 60 (m, 4H), 1,38-1,41 (m, 1H).
Exemplo 14: Síntese de Composto 18: 3- (ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(l-metilpiperidin-4-il)benzamida
A uma solução de 3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(1-metil-1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)benzamida (0,045 g, 0,097 mmol) em etanol foi adicionado Pd a 10%/C e a reação foi agitada sob H2 a pressão de câmara-de-ar. Após consumo total do material de partida, a mistura reacional foi filtrada através de celite. O filtrado foi concentrado e triturado em acetonitrilo e filtrado para proporcionar o composto desejado (0,030 g, 66%): LCMS: 465,40 (M + 1)+;
HPLC: 95,39% (a 254 nm) (Tr; 3, 884; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,44 (s, 1H) , 7,98 (t, 1H) , 7,00 (s, 1H) , 6,77 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,25 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,42 (m, 1H) , 2,84 (d, 2H, J=ll,2 Hz), 2,47 (s, 3H) , 2,37 (m, 1H) , 2,18 (s, 6H) , 2,15 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,93 (t, 2H, J=10, 8 Hz), 1,70-1,55 (m, 8H) , 1,48 (m, 2H) , 1,38 (m, 2H) .
Exemplo 15: Síntese de Composto 20: 3- (ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
Passo 1: Síntese de ácido 2-metil-3-nitro-5- (trifluorometil)benzoico
Foi adicionado ácido 2-metil-5-(trifluorometil)benzoico (4 g, 19,6 mmol) a H2SO4 conc. arrefecido (27 mL) a -10 °C, em pequenas porções. Após 10 minutos foi adicionada, gota a gota a -10 °C, mistura de nitração {preparada misturando HNO3 conc. (2,77 g, 44,44 mmol) com H2SO4 conc. (3,6 mL)}. A solução resultante foi agitada a -10 °C durante 30 minutos. Após conclusão, a mistura reacional foi vertida para água gelada. O sólido foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para dar ácido 2-metil-3-nitro-5- (trifluorometil)benzoico (4,95 g, 99%).
Passo 2: Síntese de 2-metil-3-nitro-5- (trifluorometil)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-metil-3-nitro-5-(trifluorometil)benzoico (1 g, 4,01 mmol) em DMF (3 mL) foi adicionado carbonato de sódio (0,63 g, 6,02 mmol) e iodeto de metilo (1,14 g, 8,03 mmol) . A mistura resultante foi aquecida a 60 °C durante 4 h. Após conclusão, foi adicionada água à reação e o produto extraído utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por cromatografia em coluna sobre sílica para dar 2-metil-3-nitro-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (1 g, 95,2%) .
Passo 3: Síntese de 3-amino-2-metil-5- (trifluorometil)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 2-metil-3-nitro-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (5,6 g, 20,97 mmol) em etanol (40 mL) foi adicionado cloreto de amónio (5, 6 g, 104,6 mmol) dissolvido em água (30 mL) e ferro em pó (4,67 g, 85,16 mmol). A mistura resultante foi aquecida a 80 °C durante 1 h. Após conclusão, foi adicionada água à reação, em seguida a mistura foi filtrada através de celite. O filtrado foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas, em seguida concentradas sob pressão reduzida para dar 3-amino-2-metil- 5-(trifluorometil)benzoato de metilo.
Passo 4: Síntese de 3-(ciclopentilamino)-2-metil-5- (trifluorometil)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (2,5 g, 10,7 mmol) e ciclopentanona (4,5 g, 53,49 mmol) em metanol (25 mL) foi adicionado ácido acético (1,98 g, 21,44 mmol). Após 3 h, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (1,68 g, 24,3 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 3- (ciclopentilamino)-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (1,8 g, 55,9%).
Passo 5: Síntese de 3-(ciclopentil(metil)amino)-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3- (ciclopentilamino)-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (1,6 g, 5,38 mmol) em acetonitrilo (25 mL) foi adicionado carbonato de césio (3,5 g, 10,7 mmol) e iodeto de metilo (3,8 g, 26,8 mmol) . A mistura foi aquecida a 80 °C durante 8 h. Após conclusão, a reação foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada. O residuo foi lavado com acetato de etilo e o filtrado foi concentrado para dar 3-(ciclopentil(metil)amino)-2-metil-5-(trifluorometil)-benzoato de metilo.
Passo 6: Sintese de 3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,7 62 g, 15,4 mmol) a uma solução de 3-(ciclopentil(metil)amino)-2-metil-5- (trifluorometil)benzoato de metilo (2 g, 6,34 mmol) em MeOH (20 mL) e a mistura foi agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o metanol foi removido sob pressão reduzida e o residuo acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e até pH 4 utilizando ácido citrico. 0 produto foi extraido utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para dar o ácido desejado (1,5 g, 78%). 0 ácido (0,5 g, 1,69 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (3 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,505 g, 3,32 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter sido adicionado PYBOP (1,29 g, 2,49 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura foi vertida sobre gelo para se obter um sólido. 0 sólido foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de éter para proporcionar o composto 3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5- (trifluorometil)benzamida (100 mg, 14%). Dados Analíticos: LCMS: 436, 20 (M + 1)+; HPLC: 89,22% (a 254 nm) (Tr; 6, 094; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H) , 8,30 (t, 1H) , 7,37 (s, 1H) , 7,18 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,26 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,51 (m, 1H) , 2,53 (s, 3H) , 2,25 (s, 3H) , 2,19 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,41-1,69 (m, 8H) .
Exemplo 16: Síntese de Composto 21: 3- (ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 3-amino-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 3-amino-2-metilbenzoico de metilo (5 g, 33,1 mmol) em metanol (50 mL) , foi adicionado H2SO4 conc. (5 mL) a 0 °C e a mistura foi aquecida a 70 °C durante 22 h. Após conclusão, o metanol foi removido sob pressão reduzida e, em seguida, foi adicionada solução sat. de bicarbonato de sódio e o produto extraído com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas para produzir 3-amino-2-metilbenzoato de metilo (5 g, 91%) .
Passo 2: Sintese de 3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-2-metilbenzoato de metilo (2 g, 12,1 mmol) e ciclopentanona (5 g, 60,6 mmol) em metanol (20 mL) foi adicionado ácido acético (0,72 g, 12,12 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (1,13 g, 18,2 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metilo (2,2 g, 78%).
Passo 3: Sintese de 3-(ciclopentil(metil)amino)-2- metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metilo (2,2 g, 9,44 mmol) em acetonitrilo (20 mL) foi adicionado carbonato de césio (6,13 g, 18,8 mmol) e iodeto de metilo (6,7 g, 47,2 mmol) . A mistura resultante foi aquecida a 80 °C durante 12 h. Após conclusão, a mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, lavando com acetato de etilo. O filtrado foi concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 3-(ciclopentil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (2 g, 85%) .
Passo 4: Síntese de 3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,48 g, 12,14 mmol) a uma solução de 3-(ciclopentil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (2 g, 8,09 mmol) em MeOH (20 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o metanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para dar o ácido desejado (1,3 g, 69%). 0 ácido (0,3 g, 1,28 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (5 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,39 g, 2,5 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,99 g, 1,92 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação em coluna para proporcionar 3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,020 g, 4%) .
Dados Analíticos: LCMS: 368,15 (M + 1)+; HPLC: 99, 4 9% (a 2 54 nm) (Tr;4,18 6; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,43 (s, 1H) , 8,00 (t, 1H, J=4 Hz), 7,09-7,16 (m, 2H) , 6,90 (d, 1H, J=6,8 Hz), 5,84 (s, 1H) , 4,25 (d, 2H, J=5,2 Hz), 3,41 (t, 1H, J=6,8 Hz), 2,47 (s, 3H) , 2,18 (d, 6H, J=4,4 Hz), 2,10 (s, 3H), l,58-l,67(m, 4H),1,37-1,52 (m, 4H) .
Exemplo 17: Sintese de Composto 23: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(l-metilpiperidin-4-il)amino)benzamida
5-Cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(piperidin-4-il)amino)benzamida (0,08 g, 0,192 mmol) foi dissolvida em metanol (5 mL) e arrefecida até 0 °C, foi adicionada formalina (0,028 g, 0,965 mmol). A massa reacional resultante foi agitada à mesma temperatura durante 30 minutos. Foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,023 g, 0,38 mmol) à massa reacional anterior e agitada à temperatura ambiente durante 4 h. Após conclusão, os solventes foram removidos sob pressão reduzida e foi adicionada água ao residuo, a extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna dando o composto desejado (0,02 g, 24 %) : LCMS: 431,25 (M + 1)+; HPLC: 98, 80% (a 254 nm) (Tr;4,757; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1.4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-dfj, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,20 (t, 1H), 7,15 (d, 1H, J=l,2 Hz), 6,94 (d, 1H, J=2 Hz), 5,85 (s, 1H), 4,25 (d, 2H, J=4,8 Hz), 3.05 (sl, 2H) , 2,88 (sl, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,44 (sl, 2H) , 2,18 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,68 (sl, 4H) .
Exemplo 18: Sintese de Composto 25: 3- (ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(2,2,6,6-tetrametil- l,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)benzamida
Passo 1: ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (50 g, 276,2 mmol) em H2SO4 conc. (200 mL) , foi adicionada 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4- imidazolidinadiona (43,4 g, 151,8 mmol) em porções à temperatura ambiente e a massa reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h. Após conclusão, a massa reacional foi vertida sobre água gelada, o sólido precipitado foi filtrado, o residuo resultante foi lavado com água e seco sob vácuo para dar o composto desejado (71,7 g, 100%) .
Sintese de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (287 g, 1103 mmol) em DMF (150 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (468 g, 4415 mmol) e iodeto de metilo (626,63 g, 4415 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Após conclusão, o sólido precipitado foi filtrado, o resíduo lavado com éter dietílico (5 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desejado em bruto (302 g, 99%).
Passo 2: 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de metilo (150 g, 544 mmol) em etanol (750 mL) , foram adicionados sob agitação cloreto de amónio (150 g, 2777 mmol) dissolvido em água (750 mL) e ferro em pó (93,3 g, 1636 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Após conclusão, a massa reacional foi filtrada através de celite dando lavagem de água e acetato de etilo, o filtrado foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desej ado.
Passo 3: 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo (0,3 g, 1,33 mmol) e ciclopentanona (0,56 g, 6,6 mmol) em metanol (3 mL), foi adicionado ácido acético (0,159 g, 2,6 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,208 g, 3,3 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida para dar o composto desejado.
Passo 4: 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metilo em bruto (0,7 g, 2,25 mmol) em acetonitrilo (15 mL) , foram adicionados carbonato de césio (1,47 g, 4,50 mmol) e iodeto de metilo (1,6 g, 11,26 mmol); a massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Após conclusão, a massa reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, o resíduo foi lavado com acetato de etilo, e o filtrado foi concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,6 g, 82%).
Passo 5: 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,11 g, 2,75 mmol) a uma solução de 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-2- metilbenzoato de metilo (0,6 g, 1,8 mmol) em MeOH (1,5 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para dar o respetivo ácido (0,5 g, 87%). 0 ácido (0,5 g, 1,60 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (3 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,49 g, 3,22 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (1,25 g, 2,41 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de éter para proporcionar o composto desejado (0,315 g, 44%).
Passo 6: 3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(2,2, 6, 6-tetrametil-1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)benzamida
Uma solução de 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-N-( (4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (1 equiv.), ácido (2,2,6,6-tetrametil- 1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)borónico (1,2 equiv.) e Pd (PPh3)4 (0,1 equiv.) em 1,4-dioxano (4 mL) foi purgada com árgon durante 10 min. Em seguida, foi-lhe adicionada uma solução de Na2C03 2 M s (3,6 equiv.) e foi novamente purgado árgon durante 10 min. A mistura reacional foi agitada a 100 °C durante 2 h. Após conclusão da reação, foi-lhe adicionada água e a extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre anidro Na2S04, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar material em bruto que foi purificado HPLC preparativa para dar o composto desejado como o seu sal de TFA (0,045, 23%) . LCMS: 505,39 (M + 1)+; HPLC: 99, 95% (a 254 nm) (Tr; 4,0 91; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (MeOD, 400 MHz) δ 7,70 (s, 1H) , 7,46 (s, 1H) , 6,21 (s, 1H) , 6,13 (s, 1H) , 4,48 (s, 2H) , 4,23 (sl, 1H) , 3,14 (s, 3H) , 2,69 (s, 2H) , 2,42 (s, 3Η) , 2,39 (s, 3H) , 2,24 (s, 3H) , 1,92 (, 2H) , 1,81 (m, 2H) , 1,67 (m, 4H) , 1,60 (s, 6H) , 1,53 (s, 6H) .
Exemplo 19: Síntese de Composto 26: (4-((5-bromo-3-(((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo
Passo 1: ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
A uma mistura de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (15 g, 82,80 mmol) em H2SO4 conc. (60 mL) , foi adicionada 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidinadiona (13,07 g, 45,71 mmol) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h. Depois de concluída a reação, a mistura reacional foi lentamente vertida sobre água gelada (400 mL) . 0 precipitado foi recolhido por filtração para dar o composto desejado (21 g, 98,22%).
Passo 2: 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (16 g, 61,54 mmol) em DMF (160 mL) , foram adicionados iodometano (35,72 g, 248 mmol) e carbonato de sódio (26,28 g, 248 mmol). A massa reacional resultante foi agitada a 60 °C durante 8 h. Após conclusão, a massa reacional foi filtrada e o resíduo sólido inorgânico lavado com acetato de etilo. O filtrado combinado foi concentrado sob vácuo até à secura. O resíduo foi redissolvido em acetato de etilo e lavado com solução de bicarbonato de sódio a 5% (700 mL) , seguida de solução de HC1 5M (300 mL). A camada orgânica foi finalmente lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada para proporcionar o composto desejado (16 g, 94,50%).
Passo 3: 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (17 g, 62,04 mmol) em etanol (85 mL) , foi adicionada solução de NH4C1 (17 g em 85 mL de água, 317,8 mmol), seguida de Fe em pó (27,82 g, 498,11 mmol) . A massa reacional resultante foi agitada a 90 °C durante 1 h. Após conclusão, a massa reacional foi filtrada e o filtrado foi concentrado até à secura para se obter um sólido que foi dissolvido em solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas para proporcionar o composto desejado 4 (15 g, 99%).
Passo 4: 5-bromo-3-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo (5 g, 20,57 mmol) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (5,67 g, 26,74 mmol) em metanol (50 mL), foi adicionado ácido acético (1,2 g, 20,57 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 4 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (1,68 g, 26,74 mmol) e a reação agitada 18 h. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida; foi adicionada água e extraída com DCM. O orgânico combinado foi seco, concentrado e purificado por cromatografia em coluna utilizando sílica (tamanho de malha 100-200) para proporcionar o composto desejado (3 g, 33%).
Passo 5: (4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di- hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2- metilfenil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionado NaOH aquoso (0,247 g, 6,83 mmol) a uma solução de 5-bromo-3-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil) amino)-2-metilbenzoato de metilo (1,5 g, 3,41 mmol) em MeOH (20 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (1,28 g, 89%). 0 ácido (1,28 g, 3,01 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (10 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (1,03 g, 6,83 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (2,6 g, 5,12 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo e extraída com 5% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para se obter um sólido em bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,75 g, 45%). LCMS: 561,15 (M + 1)+; HPLC: 99,99% (a 254 nm) (Tr; 6, 8 76, 7, 080 [mistura de diastereómeros]; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,44 (s, 1H) , 8,07 (t, 1H, J=4, 8 Hz), 6,77 (d, 1H, J=7,6 Hz), 6,66 (s, 1H) , 6,51-6,54 (m, 1H) , 5,84 (s, 1H) , 4,71 (d, 1H, J=7,6 Hz), 4,21-4,22 (m, 2H), 3,44 (sl, 1H) , 3,19 (sl, 1H) , 2,16 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1, 93-2,03 (m, 5H) , 1,78 (s, 1H), 1,56-1,72 (m, 3H), 1,37 (s, 9H), 1,26-1,31 (m, 2H).
Exemplo 20: Síntese de Composto 28: 5-bromo-3-(ciclo-hexilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (50 g, 276,2 mmol) em H2SO4 conc. (200 mL) , foi adicionada 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4- imidazolidinadiona (43,4 g, 151,8 mmol) em porções à temperatura ambiente e a massa reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h. Após conclusão, a massa reacional foi vertida sobre água gelada, o sólido precipitado foi filtrado, o residuo resultante foi lavado com água e seco sob vácuo dando o composto desejado (71,7 g, 100%) .
Passo 2: 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (287 g, 1103 mmol) em DMF (150 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (468 g, 4415 mmol) e iodeto de metilo (626,63 g, 4415 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Após conclusão, o sólido precipitado foi filtrado, o resíduo lavado com éter dietílico (5 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desejado (302 g, 99%) .
Passo 3: 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de metilo (150 g, 544 mmol) em etanol (750 mL) , foram adicionados sob agitação cloreto de amónio (150 g, 2777 mmol) dissolvido em água (750 mL) e ferro em pó (93,3 g, 1636 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Após conclusão, a massa reacional foi filtrada através de celite dando lavagem de água e acetato de etilo, o filtrado foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida para dar o composto desejado que foi utilizado diretamente no passo seguinte.
Passo 4: 5-bromo-3-(ciclo-hexilamino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo (0,3 g, 1,33 mmol) e ciclo-hexanona (0,64 g, 6,6 mmol) em metanol (3 mL), foi adicionado ácido acético (0,159 g, 2,6 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,208 g, 3,3 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e foi utilizado diretamente no passo seguinte.
Passo 5: 5-bromo-3-(ciclo-hexilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0, 049 g, 1,23 mmol) a uma solução de 5-bromo-3-(ciclo-hexilamino)-2-metilbenzoato de metilo (0,2 g, 0,61 mmol) em MeOH (5 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,17 g, 89%). O ácido (0,17 g, 0,54 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (3 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,099 g, 0,65 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,42 g, 0,817 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi purificado por HPLC preparativa para proporcionar o composto desejado como o seu sal de TFA (0,042 g, 15%). LCMS: 446, 16 (M + 1)+; HPLC: 99,85% (a 254 nm) (Tr;6,918; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,45 (s,lH), 8,08 (s, 1H) , 6,66 (s, 1H) , 6,51 (d, 1H, J=0, 8 Hz), 5,84 (s, 1H) , 4,70(s, 1H) , 4,21 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,24 (s, 1H) , 2,16 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H), 1,94 (s, 3H), 1,88 (d, 2H, J=10 Hz), 1,69-1,72 (m, 3H), 1,22-1,36 (m, 5H).
Exemplo 21: Síntese de Composto 30: 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(l-metilpiperidin-4-il)amino)benzamida
Passo 1: ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (50 g, 276,2 mmol) em H2SO4 conc. (200 mL) , foi adicionada 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4- imidazolidinadiona (43,4 g, 151,8 mmol) em porções à temperatura ambiente e a massa reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h. Após conclusão, a massa reacional foi vertida sobre água gelada, o sólido precipitado foi filtrado, o residuo resultante foi lavado com água e seco sob vácuo dando o composto desejado (71,7 g, 99,9%) que foi utilizado para reação subsequente.
Passo 2: 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (287 g, 1103 mmol) em DMF (150 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (468 g, 4415 mmol) e iodeto de metilo (626,63 g, 4415 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Após conclusão, o sólido precipitado foi filtrado, o residuo lavado com éter dietilico (5 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desejado (302 g, 99).
Passo 3: 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de metilo (150 g, 544 mmol) em etanol (750 mL) , foram adicionados sob agitação cloreto de amónio (150 g, 2777 mmol) dissolvido em água (750 mL) e ferro em pó (93,3 g, 1636 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Após conclusão, a massa reacional foi filtrada através de celite dando lavagem de água e acetato de etilo, o filtrado foi extraido com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desej ado.
Passo 4: 5-bromo-2-metil-3-((l-metilpiperidin-4- il)amino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo (2 g, 8,23 mmol) e 1-metilpiperidin-4-ona (1,86 g, 16,46 mmol) em metanol (20 mL) , foi adicionado ácido acético (0,5 g, 8,23 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0, 622 g, 9,87 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,9 g, 33%).
Passo 5: 5-bromo-2-metil-3-(metil(l-metilpiperidin-4- il)amino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-( (l-metilpiperidin-4-il)amino)benzoato de metilo (0,6 g, 1,76 mmol) em acetonitrilo (15 mL) , foram adicionados carbonato de césio (1,14 g, 3,52 mmol) e iodeto de metilo (1,2 g, 8,8 mmol); a massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Após conclusão, a massa reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, o resíduo foi lavado com acetato de etilo, e o filtrado foi concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,5 g, 80%).
Passo 6: 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil(l-metilpiperidin-4-il)amino)benzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,11 g, 2,75 mmol) a uma solução de 5-bromo-2-metil-3-(metil(l-metilpiperidin-4-il) amino) benzoato de metilo (0,5 g, 1,4 mmol) em MeOH (20 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,42 g, 90%). O ácido (0,5 g, 0,974 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (3 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6- dimetilpiridin-2(1Η)-ona (0,45 g, 2,8 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (1,1 g, 2,1 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação com cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,2 g, 30%). LCMS: 475,02 (M + 1)+; HPLC: 94,25% (a 254 nm) (Tr; 4,570; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de XH (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 8,13 (t, 1H, J=4,8 Hz), 6,78 (d, 1H, J=0, 8 Hz), 6,60 (d, 1H, J=l,6 Hz), 5,85 (s, 1H) , 4,94 (d, 1H, J=8, 8 Hz), 4,22 (d, 2H, J=4,8 Hz), 3,62-3,64 (m, 1H) , 3,37-3,46 (m, 3H) , 3,11 (s, 3H) , 3,09 (s, 3H) , 2,17 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1, 99-2,09 (m, 2H) , 1,98 (s, 3H), 1,86-1,93 (m, 2H).
Exemplo 22: Sintese de Composto 31: 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(isopropil(metil)amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-bromo-3-(isopropilamino)-2- metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo (1 equiv.) em metanol (5 mL), foram adicionados acetona (5 equiv.) e ácido acético (2 equiv.) e mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, foi adicionado NaBH3CN (3 equiv.) a 0 °C. A mistura reacional resultante foi adicionalmente agitada durante 16 h à temperatura ambiente. Após conclusão, o solvente foi evaporado e adicionada água ao resíduo, e extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas para proporcionar produto em bruto que foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação (rendimento 80-90%).
Passo 2: Síntese de 5-bromo-3-(isopropil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-3-(isopropilamino)-2-metilbenzoato de metilo (0,5 g, 1,75 mmol) em acetonitrilo (10 mL), foram-lhe adicionados CS2CO3 (1,02 g, 2,63 mmol) e iodeto de metilo (1,45 g, 3,5 mmol). A mistura reacional resultante foi agitada a 80 °C durante 4 h. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e residuo dissolvido em água e extraido com acetato de etilo. O material em bruto obtido foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel proporcionando o produto de composto desejado sem mais purificação (0,39 g)
Passo 3: 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(isopropil(metil)amino)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-3-(isopropil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1 equiv.) em etanol (5 mL), foi adicionada solução aquosa de NaOH (1 equiv.) e a reação agitada a 60 °C durante 4 h. Após conclusão, o etanol foi removido sob pressão reduzida e residuo acidificado com HC1 IN até pH 6. A fase aquosa foi extraida com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e o solvente removido sob pressão reduzida proporcionando ácido puro (rendimento 50-60%). A uma solução deste ácido (1 equiv.) em DMSO (1,5 mL) , foi adicionado PyBOP (1,5 equiv.) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 15 min. Em seguida, foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-ona (2 equiv.) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, foi adicionada água e o sólido precipitado resultante filtrado e lavado com água. Em seguida, este sólido foi agitado com acetonitrilo durante 10 min e novamente filtrado para se obter a molécula alvo pura (rendimento 50-60%). LCMS: 420,15 (M + 1)+; HPLC: 93, 04% (a 254 nm) (Tr;4,791); RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H) , 8,19 (t, 1H, J=4, 8 Hz), 7,14 (d, 1H, J=l,6 Hz), 7,00 (d, 1H, J=l,2 Hz), 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,16-3,20 (m, 1H) , 2,52 (s, 3H) , 2,17 (s, 3H) , 2,10 (s, 6H) , 1,01 (d, 6H, J=6,4 Hz).
Exemplo 23: Sintese de Composto 32: 5-bromo-N-((4,6-di-hidro-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-( (tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato
Passo 1: ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico A uma mistura de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (15 g, 82,80 mmol) em H2SO4 conc. (60 mL) , foi adicionada 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidinadiona (13,07 g, 45,71 mmol) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h. Depois de concluida a reação, a mistura reacional foi lentamente vertida sobre água gelada (400 mL) . O sólido que precipitou foi filtrado e seco sob vácuo para se obter o composto desejado (21 g, 98%).
Passo 2: 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (16 g, 61,54 mmol) em DMF (160 mL) , foram adicionados iodometano (35,72 g, 248 mmol) e carbonato de sódio (26,28 g, 248 mmol). A massa reacional resultante foi agitada a 60 °C durante 8 h. Após conclusão, a massa reacional foi filtrada e o resíduo sólido inorgânico lavado com acetato de etilo. O filtrado combinado foi concentrado sob vácuo até à secura. O resíduo foi redissolvido em acetato de etilo e lavado com solução de bicarbonato de sódio a 5% (700 mL) , seguida de solução de HC1 5M (300 mL). A camada orgânica foi finalmente lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio e concentrada para proporcionar o composto desejado (16 g, 95%).
Passo 3: 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (17 g, 62,04 mmol) em etanol (85 mL) , foi adicionada solução de NH4C1 (17 g em 85 mL de água, 317,8 mmol), seguida de Fe em pó (27,82 g, 498,11 mmol) . A massa reacional resultante foi agitada a 90 °C durante 1 h. Após conclusão, a massa reacional foi filtrada e o filtrado foi concentrado até à secura para se obter um sólido que foi dissolvido em solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas para proporcionar o composto desejado (15 g, 99%).
Passo 4: 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo (2 g, 8,23 mmol) e tetra-hidropiran-4-ona (1,06 g, 10,66 mmol) em metanol (20 mL) , foi adicionado ácido acético (0,5 g, 8,23 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 18 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,62 g, 9,83 mmol) e a reação agitada 3 h. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida; foi adicionada água e extraida com DCM. O orgânico combinado foi seco, concentrado e purificado por cromatografia em coluna utilizando silica (tamanho de malha 100-200) para proporcionar o composto desejado (1,6 g, 62%).
Passo 5: 5-bromo-N-((4,6-di-hidro-2-oxo-l, 2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran- 4-il)amino)benzoato
Foi adicionado NaOH aquoso (0,146 g, 3,66 mmol) a uma solução de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4-il) amino) benzoato de metilo (0,6 g, 1,88 mmol) em MeOH (8 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,515 g, 90%) . O ácido (0,515 g, 1,67 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (3 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,50 g, 3,3 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (1 g, 1,98 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo e extraida com 5% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para se obter sólido em bruto, este foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,30 g, 37%). LCMS: 447,84 (M + 1)+; HPLC: 99,78% (a 254 nm) (Tr; 5,753; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de 1H (DMSO- d6r 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 8,09 (t, 1H, J=4,8 Hz), 6,76 (s, 1H), 6,53 (d, 1H, J=l,6 Hz), 5,84 (s, 1H), 4,82 (d, 1H, J=8 Hz), 4,42 (d, 2H, J=4,8 Hz), 3,85 (d, 2H, J=ll,2 Hz), 3,37-3,53 (m, 3H) , 2,16 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,95 (s, 3H), 1,81 (d, 2H, J=12,8 Hz), 1,44-1,54 (m, 2H).
Exemplo 24: Síntese de Composto 33: 5-bromo-3- (ciclopentilamino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2- metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo (1 equiv.) em metanol (5 mL), foram adicionados ciclopentanona (5 equiv.) e ácido acético (2 equiv.) e mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, foi adicionado NaBH3CN (3 equiv.) a 0 °C. A mistura reacional resultante foi adicionalmente agitada durante 16 h à temperatura ambiente. Após conclusão, o solvente foi evaporado e adicionada água ao resíduo e extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas para proporcionar o produto em bruto que foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação (rendimento 80-90%).
Passo 2: Síntese de 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-N-( (4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metilo (1 equiv.) em etanol (5 mL) , foi adicionada solução aquosa de NaOH (1 equiv.) e a reação agitada a 60 °C durante 4 h. Após conclusão, o etanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo acidificado com HC1 IN até pH 6. A fase aquosa foi extraída com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e o solvente removido sob pressão reduzida proporcionando ácido puro (rendimento 50-60%). A uma solução deste ácido (1 equiv.) em DMSO (1,5 mL) , foi adicionado PyBOP (1,5 equiv.) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 15 min. Em seguida, foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-ona (2 equiv.) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, foi adicionada água e o sólido precipitado filtrado e lavado com água. Este sólido foi em seguida agitado com acetonitrilo durante 10 min e novamente filtrado para se obter a molécula alvo pura (50-60% de rendimento). LCMS: 432,10 (M + 1)+; HPLC: 97,15% (a 254 nm) (Tr; 6, 834) ; RMN de XH (DMS0-de, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 8,09 (t, 1H, J=4,4 &amp; 5,2 Hz), 6,65 (d, 1H, J=l,6 Hz), 6,54 (d, 1H, J=l,6
Hz), 5,84 (s, 1H), 4,85 (d, 1H, J=6 Hz), 4,22 (d, 2H, J=5,2 Hz), 3,73 (m, 1H) , 2,16 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,95 (s, 3H) , 1,91 (m 2H) , 1,70-1, 62 (m, 2H) , 1, 60-1,45 (m, 4H) .
Exemplo 25: Síntese de Composto 36: 5-bromo-3- (ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2,4-dimetilbenzamida
1: ácido 5-bromo-2,4-dimetilbenzoico
À solução, mantida sob agitação, de NaOH (60 g) em água (1152 mL) foi adicionado bromo (36 mL) gota a gota a 0 °C e a mistura reacional agitada durante 45 min. à mesma temperatura. Foi adicionado ácido 2,4-dimetilbenzoico (12 g, 79,9 mmol) à mistura reacional anterior a 0 °C em porções e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Depois de concluída a reação de reação (TLC), a mistura reacional foi acidificada utilizando HC1 conc., o sólido foi filtrado através de funil de Buchner, e lavado com água e seco para proporcionar o composto desejado (12 g, 65 %) que foi utilizado sem mais purificação.
Passo 2: ácido 5-bromo-2,4-dimetil-3-nitrobenzoico
Foi adicionado ácido 5-bromo-2,4-dimetilbenzoico (12 g, 52,17 mmol) a H2SO4 conc. arrefecido (48 mL) a -10 °C em porções. Após 10 minutos foi adicionada, gota a gota a -10 °C, mistura de nitração {preparada misturando HN03 Conc. (6 mL, ) com H2SO4 conc. (24 mL) } . A massa reacional resultante foi agitada a -10 °C durante 30 minutos. Após conclusão, a mistura reacional foi vertida sobre água gelada, o sólido precipitado foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo dando o composto desejado (13 g, 91%).
Passo 3: 3-bromo-5-nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-bromo-2,4-dimetil-3-nitrobenzoico (13 g, 47,44 mmol) em DMF (120 mL), foram adicionados carbonato de sódio (15 g, 142,2 mmol) e iodeto de metilo (4,4 mL, 71,16 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Após conclusão, foi adicionada água à massa reacional e a extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução sat. de bicarbonato e HC1 5 N, secas sobre sulfato de sódio, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desejado (12,9 g, 86 %) .
Passo 4: 3-amino-5-bromo-2,4-dimetilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-bromo-5-nitrobenzoato de metilo (12,9 g, 44,79 mmol) em etanol (65 mL) , foram adicionados sob agitação cloreto de amónio (13 g, 223,95 mmol) dissolvido em água (65 mL) e ferro em pó (20 g, 358,33 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 1 h. Após conclusão, a mistura reacional foi filtrada através de um leito de celite, o leito de celite foi lavada com etanol, o filtrado foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desejado (11,0 g, 95%).
Passo 5: 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2,4-dimetilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo- 2,4-dimetilbenzoato de metilo (1,4 g, 5,42 mmol) e ciclopentanona (2,4 mL, 27,13 mmol) em metanol (20 mL), foi adicionado ácido acético (0,650 g, 10,84 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,85 g, 13,56 mmol) e reação foi agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido, foi adicionada água e o composto foi extraído com acetato de etilo. A camada orgânica combinada foi recolhida, seca sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (1,2 g, 68 %) .
Passo 6: 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-2,4- dimetilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2,4-dimetilbenzoato de metilo (0,3 g, 1,07 mmol) em DMF (5 mL), foram adicionados carbonato de césio (0,697 g, 2,14 mmol) e iodeto de etilo (0,3 mL, 5,38 mmol); a massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 12 h. Após conclusão, a massa reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, o residuo foi lavado com acetato de etilo, e o filtrado foi concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,3 g, 82%).
Passo 7: 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2,4-dimetilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,022 g, 0,553 mmol) a uma solução de 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-2,4- dimetilbenzoato de metilo (0,125 g, 0,368 mmol) em EtOH (10 mL) e H2O (1 mL) , e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4, concentradas sob pressão reduzida para dar o respetivo ácido (0,1 g, 84,03%). O ácido (0,1 g, 0,308 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (3 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,07 g, 0,462 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,320 g, 0,616 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação por HPLC para proporcionar o composto em epigrafe (0,018 g, 12,7 %) como o seu sal de TFA : LCMS: 460,10 (M + 1)+; HPLC: 98,10% (a 254 nm) (Tr;8,291; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H) , 8,18 (t, 1H, J=4,4 Hz), 7,20 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,26 (d, 2 H, J=4,8 Hz), 3,51-3,52 (m, 1H), 2,64 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,48-1,59 (m, 6H), 1,31-1,32 (m, 2H).
Exemplo 26: Sintese de Composto 48: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(N-metilciclopentanocarboxamido)benzamida
Passo 1: Síntese de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico
A H2SO4 conc. (136 mL) gelado (-10 a -15 °C) , mentido sob agitação, foi adicionado ácido 5-cloro-2-metilbenzoico (20 g, 0,117 mmol), em porções. Foi adicionada mistura de nitração [H2SO4 Conc. (22 mL) e HNO3 (11,05 mL)] gota a gota a -10 a -15 °C e a mistura resultante foi deixada agitar durante 30 min. O precipitado obtido foi filtrado e seco. O sólido foi o dissolvido em acetato de etilo, e seco (Na2SC>4) e concentrado para proporcionar o produto desejado (23,6 g, 93%) como um sólido branco.
Passo 2: Síntese de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de me tilo
A uma solução de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico (23,5 g, 0,109 mmol) em DMF (120 mL) foi adicionado carbonato de sódio (46,21, 0,436 mmol) e iodeto de metilo (27,2 mL, 0,43 mmol) à temperatura ambiente. A mistura reacional foi aquecida a 60 °C durante 3 h. Após consumo total do material de partida, a mistura reacional foi filtrada e o residuo lavado com acetato de etilo. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e o produto em bruto purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (16 g, 64%) como óleo espesso que solidificou em repouso.
Passo 3: Sintese de 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (16 g, 69 mmol) em etanol (160 mL), foram adicionados sob agitação cloreto de amónio (16 g, 53,4 mmol) dissolvido em água (160 mL) e ferro em pó (31,2 g, 55,85 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 1 h. Após conclusão, foi adicionada água e a mistura reacional filtrada através de celite. O filtrado foi extraido com acetato de etilo e as camadas orgânicas combinadas lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida dando o composto desejado (12,10 g, 86%) sem mais purificação.
Passo 4: Sintese de 5-cloro-3-(ciclopentanocarboxamido)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (0,4 g, 2,0 mmol) em piridina (2 mL) , foi adicionado cloreto de ciclopentilo (0,39 mL, 3.00 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Após consumo total do material de partida a reação foi desativada com água gelada. O precipitado resultante foi filtrada para proporcionar o produto desejado (0,5 g, 84%).
Passo 5: Síntese de 5-cloro-2-metil-3-(N- metilciclopentanocarboxamido)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-(ciclopentanocarboxamido)-2-metilbenzoato de metilo (0,3 g, 1.01 mmol) em DMF, foi adicionado hidreto de sódio (0, 060 g, 0,0015 mmol) a 0 °C e a mistura reacional foi deixada agitar durante 15 min. Foi adicionado iodeto de metilo (0,32 mL, 0,50 mmol) à mistura reacional e foi agitada à temperatura ambiente. Após consumo total do material de partida, a reação foi desativada com adição de água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica combinada foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca (Na2SC>4) e concentrada. O composto em bruto foi utilizado no passo seguinte.
Passo 6: Síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(N-metilciclopentanocarboxamido)benzamida
Foi adicionado NaOH aq. (0,077 g, 1,94 mmol) a uma solução de 5-cloro-2-metil-3-(N-metilciclopentanocarboxamido)- benzoato de metilo (0,4 g, 1,2 mmol) em EtOH: Água 4:1 (15 mL) e agitada a 65 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado com HC1 IN. A mistura reacional foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas e concentradas para proporcionar o respetivo ácido (0,35 g, 91%) . O ácido (0,3 g, 0,10 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (3 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,309 g, 0,20 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,826 g, 0,155 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão a mistura reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido que foi filtrado e lavado com acetonitrilo. Foi realizada uma purificação final utilizando purificação por HPLC prep. ao produto desejado como o sal de TFA (0,120 g, 27 %) . LCMS: 430,20 (Μ + 1)+; HPLC: 99, 79% (a 254 nm) (Tr; 6, 086); RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,55 (sl, 1H) , 8,43 (t, 1H) , 7,46 (s, 1H) , 7,29 (s, 1H) , 5,87 (s, 1H) , 4,25 (s, 2H) , 3,01 (s, 3H) , 2,35 (m, 1H) , 2,19 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 1,70-1,45 (m, 6H), 1,35 (m, 2H).
Exemplo 27: Síntese de Composto 49: 3-((2- aminoetil)(metil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Uma solução, mantida sob agitação, de (2- ( (5-cloro-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)etil)carbamato de terc-butilo (0,2 g, 4,2 mmol) em DCM (5 mL) foi arrefecida até 0 °C e foi-lhe adicionado TFA (1 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após conclusão, a reação foi concentrada até à secura.
Metade do material foi purificado por lavagens com solvente dando 3-((2-aminoetil)(metil)amino)-5-cloro-N-( (4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida pura como o sal de TFA (0,060 g, 76 %). LCMS: 377,15 (M + 1)+; HPLC: 97,57% (a 254 nm) (Tr;4,611); RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H) , 8,21 (t, 1H) , 7,69 (sl, 3H) , 7,16 (s, 1H) , 6,97 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,25 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,07 (t, 2H) , 2,96 (m, 2H) , 2,59 (s, 3H), 2,18 (s, 6H), 2,10 (s, 3H). O restante material foi basificado com bicarbonato de sódio aquoso até pH 8 e camada aquosa extraida com 20% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas para proporcionar o composto desejado como base livre que foi utilizado para reação subsequente (0,075 g).
Exemplo 28: Sintese de Composto 50: (2-( (5-cloro-3-(((4,6- dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)etil)carbamato de terc-butilo
Passo 1: Sintese de 3-( (2-( (terc- butoxicarbonil)amino)etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (1 g, 4,6 mmol) e (2-oxoetil)carbamato de terc-butilo (1,4 g, 8,8 mmol) em metanol (10 mL) , foi adicionado ácido acético (0,027 g, 4,6 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,352 g, 4,68 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o produto desejado (0,62 g, 38 %).
Passo 2: Sintese de 3-( (2-( (terc- butoxicarbonil)amino)etil)(metil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (0,5 g, 1,46 mmol) em acetonitrilo (10 mL) , foram adicionados carbonato de césio (0,95 g, 2,92 mmol) e iodeto de metilo (1 g, 7,3 mmol) e a mistura reacional resultante aquecida a 80 °C durante 12 h. Após conclusão, a mistura reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, o residuo lavado com acetato de etilo e o filtrado concentrado antes de purificação por cromatografia em coluna para proporcionar o produto desejado (0,325 g, 62%) .
Passo 3: Sintese de (2-( (5-cloro-3-(((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)etil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionado NaOH aquoso (0,071 g, 1,79 mmol) a uma solução de 3-( (2-( (terc-butoxicarbonil)amino)etil) (metil)-amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (0,425 g, 1,19 mmol) em MeOH (5 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo, e as camadas orgânicas combinadas secas e concentradas dando o respetivo ácido (0,34 g, 84%). O ácido (0,34 g, 0,99 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (1,5 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,300 g, 1,98 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,77 g, 1,48 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação em coluna para proporcionar (2-( (5-cloro-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2- metilfenil)(metil)amino)etil)carbamato de terc-butilo (0,27 g, 58%). LCMS: 477,25 (M + 1)+; HPLC: 97, 92% (a 254 nm) (Tr; 6, 229) ; RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H) , 8,17 (t, 1H) , 7,07 (s, 1H) , 6,88 (s, 1H) , 6,78 (sl, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,24 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,07 (t, 2H) , 2,84 (t, 2H) , 2,62 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,10 (s, 3H) , 1,35 (s, 9H) .
Exemplo 29: Síntese de Composto 51: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-((2-(dimetilamino)etil)(metil)amino)-2-metilbenzamida
3-((2-Aminoetil)(metil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,075 g, 0,199 mmol) foi dissolvida em metanol (5 mL) e arrefecida até 0 °C, foi adicionado formaldeído (0,056 g, 1,86 mmol). A mistura reacional resultante foi agitada à mesma temperatura durante 30 minutos, em seguida foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,023 g, 0,366 mmol) à mistura reacional anterior e agitada à temperatura ambiente durante 4 h. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e foi adicionada água, antes da extração com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna para proporcionar 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-((2- (dimetilamino)etil)(metil)amino)-2-metilbenzamida (0,040 g, 50%). LCMS: 405,25 (M + 1)+; HPLC: 89, 93% (a 254 nm) (Tr; 4, 634) ; RMN de ΧΗ (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H) , 8,21 (s, 1H) , 7,08 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,24 (sl, 2H) , 2,91 (t, 2H) , 2,63 (s, 3H) , 2,33-2,35 (m, 2H) , 2,11-2,18 (m, 15H).
Exemplo 30: Síntese de Composto 52: 3- (alil(ciclopentil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 3-(alil (ciclopentil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo
5-Cloro-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metilo (1,2 g, 4,46 mmol) foi dissolvido em DMF (12 mL) e arrefecido até 0 °C. Foi adicionado NaH (0,21 g, 8,92 mmol) após 10 minutos e foi adicionado brometo de alilo (1,07 g, 8,9 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h e, em seguida, aquecida a 80 0 °C durante 18 h. A reação foi desativada com água gelada e extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas dando 3- (alil(ciclopentil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo em bruto (0,4 g, 29,4 %) .
Passo 2: Síntese de 3-(alil (ciclopentil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0, 078 g, 1,95 mmol) a uma solução de 3-(alil(ciclopentil)amino)-5-cloro-2- metilbenzoato de metilo (0,4 g, 1,30 mmol) em MeOH (5 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo e as camadas orgânicas combinadas concentradas dando o respetivo ácido (0,37 g, 97,6%) . O ácido (0,25 g, 0,85 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (3 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,259 g, 1,74 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,66 g, 1,27 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, que foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação em coluna para proporcionar a 3-(alil(ciclopentil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida desejado (0,175 g, 48%). LCMS: 428,30 (M + 1)+; HPLC: 96, 37% (a 254 nm) (Tr; 6, 357); RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H) , 8,21 (t, 1H) , 7,16 (s, 1H) , 6,92 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 5, 63-5, 69 (m, 1H), 4,98 (m, 2H), 4,23 (d, 2H, J=4 Hz), 3,54 (d, 2H, J=5,6
Hz), 3,46-3,50 (m, 1H) , 2,18 (s, 3H) , 2,16 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,67 (m, 2H) , 1,59 (m, 2H) , 1,47 (m, 2H) , 1,36 (m, 2H) .
Exemplo 31: Síntese de Composto 53: 3- (ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(piperazin-1-il)benzamida
Passo 1: Síntese de 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2- metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo (3 g, 13,3 mmol) e ciclopentanona (5, 6 g, 66 mmol) em metanol (30 mL), foi adicionado ácido acético (1,59 g, 26,6 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (2,08 g, 29,4 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi utilizado sem mais purificação.
Passo 2: Síntese de 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metilo (1,6 g, 5,38 mmol) em acetonitrilo (20 mL) , foram adicionados carbonato de césio (3,5 g, 10,73 mmol) e iodeto de metilo (3,87 g, 27,25 mmol) e a mistura reacional resultante aquecida a 80 °C durante 12 h. Após conclusão, a mistura reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada. O resíduo foi lavado com acetato de etilo e o filtrado concentrado e purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (1,6 g, 95 %).
Passo 3: Síntese de 4-(3-(ciclopentil(metil)amino)-5-(metoxicarbonil)-4-metilfenil)piperazina-l-carboxilato de terc-butilo
Uma solução de 5-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1 g, 3,07 mmol), piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (0,85 g, 4,61 mmol) e Cs2C03 (0,5 g, 1,53 mmol) em tolueno (25 mL) foi purgada com árgon durante 10 min. Em seguida, foram-lhes adicionados Pd2(dba)3 (0,31 g, 0,307 mmol) e BINAP (0,038 g, 0,061 mmol) e novamente purgada com árgon durante 10 min. A mistura reacional foi agitada a 100 °C durante 8 h. Após conclusão, foi-lhe adicionada água e extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre anidro Na2SC>4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (0,44 g, 33,3 %).
Passo 4: Síntese de 4-(3-(ciclopentil(metil)amino)-5- (((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4-metilfenil)piperazina-l-carboxilato de terc-butilo
Foi adicionado NaOH aquoso (0,061 g, 1,53 mmol) a uma solução de 4-(3-(ciclopentil(metil)amino)-5- (metoxicarbonil)-4-metilfenil)piperazina-l-carboxilato de terc-butilo (0,44 g, 1,02 mmol) em MeOH (10 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,3 g, 70%). O ácido (0,3 g, 0,71 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (3 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,215 g, 1,43 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,56 g, 1,07 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, que foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de éter para proporcionar 4-(3-(ciclopentil(metil)amino)-5-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4- metilfenil)piperazina-l-carboxilato de terc-butilo (0,30 g, 75,7%).
Passo 5: Sintese de 3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(piperazin-l-il)benzamida
Uma solução, mantida sob agitação, de 4-(3-(ciclopentil(metil)amino)-5-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4-metilfenil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (0,30, 0,54 mmol) em DCM (10 mL) foi arrefecida até 0 °C e foi-lhe adicionado TFA (3 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após conclusão, a mistura foi concentrada até à secura. Metade do produto em bruto foi purificado por lavagem com solvente, dando o composto em epígrafe como o sal de TFA (0,01 g, 8,33 %). LCMS: 452,39 (M + 1)+; HPLC: 83, 92% (a 254 nm) (Tr; 3, 825); RMN de ΧΗ (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 8,71 (s, 2H) , 7,98 (s, 1H) , 6,79 (s, 1H) , 6,55 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,24 (d, 2H, J=3,2 Hz), 3,46 (1H no pico do solvente), 3,22-3,26 (m, 8H), 2,50 (3H no pico do solvente), 2,18 (s, 3H), 2,10 (s, 6H), 1,41-1,67 (m, 8H).
Metade do produto em bruto foi basificado com bicarbonato de sódio aquoso até pH 8 e a camada aquosa extraída com 20% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas para proporcionar o composto em epígrafe como base livre.
Exemplo 32: Síntese de Composto 54: 3- (ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(4-metilpiperazin-l-il)benzamida
3-(Ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(piperazin-1-il)benzamida (base livre) (0,100 g, 0,223 mmol) foi dissolvida em metanol (5 mL) e arrefecida até 0 °C, antes de ter sido adicionada formalina (0,033 g, 1,1 mL, 2,23 mmol) . A mistura reacional resultante foi agitada à mesma temperatura durante 30 minutos. Foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,013 g, 0,22 mmol) à mistura reacional anterior e agitada à temperatura ambiente durante 4 h. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e adicionada água ao resíduo, com extração realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna para proporcionar a 3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(4-metilpiperazin-l-il)benzamida desejada (0,037 g, 36%) . LCMS: 466, 40 (M + 1)+; HPLC: 99,18% (a 254 nm) (Tr;3,871); RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 7,94 (t, 1H) , 6,71 (s, 1H) , 6,48 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,24 (d, 2H, J=3,2 Hz), 3,39-3,43 (m, 1H), 3,07 (sl, 4H), 2,46 (s, 3H), 2,31 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 2,08 (s, 3H) , 1,66 (m, 2H) , 1,59 (m, 2H) , 1,39-1,48 (m, 4H) .
Exemplo 33: Síntese de Composto 55: 5-cloro-3-(ciclo-hexil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-3-(ciclo-hexilamino)-2- metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (1 g, 5,02 mmol) e ciclo-hexanona (2,45 g, 25 mmol) em metanol (10 mL), foi adicionado ácido acético (0,3 g, 5,02 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,63 g, 10,05 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 5-cloro-3-(ciclo-hexilamino)-2-metilbenzoato de metilo (1,2 g, 89, 92 %) .
Passo 2: Síntese de 5-cloro-3-(ciclo-hexilo (etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-(ciclo-hexilamino)-2-metilbenzoato de metilo (1,2 g, 4,3 mmol) em DMF seca (15 mL) , foram adicionados carbonato de césio (2,78 g, 8,5 mmol) e iodeto de etilo (3,35 g, 21,47 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 18 h. Após conclusão, a mistura reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, e o resíduo lavado com acetato de etilo. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 5-cloro-3-(ciclo-hexilo (etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (0,25 g, 22,7 %).
Passo 3: Síntese de 5-cloro-3-(ciclo-hexilo (etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,065 g, 1,61 mmol) a uma solução de 5-cloro-3-(ciclo-hexil(etil)amino)-2- metilbenzoato de metilo (0,25 g, 0,809 mmol) em EtOH (5 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,22 g, 92 %) . O ácido (0,22 g, 0,745 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (2 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,246 g, 1,49 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,58 g, 1,11 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura foi vertida para gelo para se obter um sólido que foi filtrado e lavado com acetonitrilo. A purificação final por purificação em coluna deu 5-cloro-3- (ciclo-hexil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,200 g, 46,6%). LCMS: 430,20 (M + 1)+; HPLC: 92,49% (a 254 nm) (Tr; 5,264); RMN de XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 8,21 (t, 1H) , 7,12 (s, 1H) , 6,91 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,01-3,03 (m, 2H), 2,64-2,66 (m, 1H) , 2,18 (s, 3H) , 2,13 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,68 (m, 4H) , 1,51-1,53 (m, 1H) , 1, 07-1,34 (m, 5H) , 0,78 (t, 3H, J=6,8 Hz).
Exemplo 34: Sintese de Composto 56: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metilo A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (1 g, 5,02 mmol) e tetra-hidropirano-4-ona (2,5 g, 25 mmol) em metanol (10 mL), foi adicionado ácido acético (0,3 g, 5,02 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,63 g, 10,05 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 5-cloro-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metilo (0,5 g, 35,5 %) .
Passo 2: Síntese de 5-cloro-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-( (tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metilo (0,5 g, 1,76 mmol) em CAN seco (15 mL), foram adicionados carbonato de césio (1,2 g, 3,68 mmol) e iodeto de etilo (2,7 g, 17,3 mmol) e a mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 18 h. Após conclusão, a mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, sendo o resíduo lavado com acetato de etilo. O filtrado foi concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o 5-cloro-3-(etil(tetra-hidro-2H- piran-4-il)amino)-2-metilbenzoato de metilo desejado (0,180 g, 34 %).
Passo 3: Síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,05 g, 1,22 mmol) a uma solução de 5-cloro-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-2-metilbenzoato de metilo (0,18 g, 0,608 mmol) em EtOH (5 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo e as camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas dando o respetivo ácido (0,15 g, 87 %). O ácido (0,15 g, 0,530 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (1 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,160 g, 1,06 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,413 g, 0,79 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura reacional foi vertida para gelo e a extração foi realizada utilizando 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas e purificadas por coluna de sílica gel para proporcionar 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0,100 g, 43,88%). LCMS: 432,25 (M+ 1)+; HPLC: 90,46% (a 254 nm) (Tr; 4,833); RMN de (DMSO-dfj, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H) , 8,22 (t, 1H) , 7,19 (s, 1H), 6,96 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,23 (d, 2H, J=4 Hz), 3,81 (d, 2H, J=10 Hz), 3,20-3,21 (m, 2H) , 2, 94-3, 02 (m, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,48-1,61 (m, 4H), 0,78 (t, 3H, J=6,4 Hz).
Exemplo 35: Síntese de Composto 57: 5-cloro-3-(ciclo-heptil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-3-(ciclo-heptilamino)-2- metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (1 g, 5,02 mmol) e ciclo-heptanona (2,81 g, 25 mmol) em metanol (10 mL), foi adicionado ácido acético (0,3 g, 5,02 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,65 g, 10,05 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 5-cloro-3-(ciclo-heptilamino)-2-metilbenzoato (0,8 g, 56,2 %) ·
Passo 2: Sintese de 5-cloro-3-(ciclo-heptil(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-(ciclo-heptilamino) -2-metilbenzoato (0,8 g, 2,70 mmol) em DMF seca (10 mL), foram adicionados carbonato de césio (1,76 g, 5,4 mmol) e iodeto de etilo (2,11 g, 13,5 mmol) e a mistura reacional resultante aquecida a 80 °C durante 18 h. Após conclusão, a mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, o residuo lavado com acetato de etilo e o filtrado concentrado, antes da purificação por cromatografia em coluna para proporcionar o 5-cloro-3-(ciclo-heptil(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo desejado (0,220 g, 25 %).
Passo 3: Sintese de 5-cloro-3-(ciclo-heptil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,04 g, 1,02 mmol) a uma solução de 5-cloro-3-(ciclo-heptil(etil)amino)-2- metilbenzoato de metilo (0,22 g, 0,68 mmol) em EtOH (5 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas dando o respetivo ácido (0,18 g, 85 %). O ácido (0,18 g, 0,585 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (1,5 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,177 g, 1,16 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,45 g, 0,87 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, que foi filtrado e lavado com acetonitrilo, antes da purificação em coluna para 5-cloro-3- (ciclo-heptil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,100 g, 38,7%). LCMS: 444,25 (M + 1)+; HPLC: 89,74% (a 254 nm) (Tr; 5, 933); RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H) , 8,21 (t, 1H) , 7,07 (s, 1H) , 6,88 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=4 Hz), 3, 02-3, 03 (m, 2H) , 2,77 (si, 1H) , 2,18 (s, 3H) , 2,13 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,76 (m, 2Η) , 1,59-1, 62 (m, 4H) , 1,46 (m, 4H) , 1,28 (m, 2H) , 0,78 (t, 3H, J=6 Hz).
Exemplo 36: Síntese de Composto 58: Cis-3-((4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (50 g, 276,2 mmol) em H2SO4 conc. (200 mL) , foi adicionada 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4- imidazolidinadiona (43,4 g, 151,8 mmol) em porções à temperatura ambiente e a massa reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h. Após conclusão, a mistura reacional foi vertida sobre água gelada, o sólido precipitado foi filtrado, o resíduo resultante foi lavado com água e seco sob vácuo dando o composto desejado (71,7 g, 100%) que foi utilizado tal e qual nos passos subsequentes.
Passo 2: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de me tilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (287 g, 1103 mmol) em DMF (150 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (468 g, 4415 mmol) e iodeto de metilo (626,63 g, 4415 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Após conclusão, o sólido precipitado foi filtrado, o resíduo lavado com éter dietílico (5 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desejado (302 g, 99%) que foi utilizado tal e qual nos passos subsequentes.
Passo 3: Síntese de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de metilo (150 g, 544 mmol) em etanol (750 mL) , foram adicionados sob agitação cloreto de amónio (150 g, 2777 mmol) dissolvido em água (750 mL) e ferro em pó (93,3 g, 1636 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Após conclusão, a massa reacional foi filtrada através de celite; dando lavagens de água e acetato de etilo para o resíduo, o filtrado foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto desejado que foi utilizado em passos subsequentes sem mais purificação.
Passo 4: Síntese de cis e trans 5-bromo-3-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo (5 g, 20,57 mmol) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (5,6 g, 26,7 mmol) em metanol (50 mL), foi adicionado ácido acético (1,2 g, 20,57 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 8 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (1,6 g, 26, 74 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado duas vezes por cromatografia em coluna, eluindo com acetato de etilo: hexano para proporcionar (4 g, 44%) de isómero cis menos polar e (3 g, 33%) do isómero trans mais polar puro.
Passo 5: Síntese de Cis-5-bromo-3-((4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, da mistura de isómero cis de 5-bromo-3-( (4-( (terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil) amino)-2-metilbenzoato de metilo (4 g, 9,09 mmol) em acetonitrilo (50 mL) foi adicionado carbonato de césio (5,9 g, 18,18 mmol) e iodeto de metilo (6,45 g, 45,45 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Após conclusão, a mistura reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, o residuo foi lavado com acetato de etilo e o filtrado foi concentrado para proporcionar o composto desejado em bruto o qual foi em seguida purificado por cromatografia em coluna dando o composto desejado (1,4 g, 34%).
Passo 6: Sintese de Cis-(4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionado NaOH aquoso (0,23 g, 5,72 mmol) a uma solução de cis-5-bromo-3-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)-ciclo-hexil)(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1,3 g, 2,86 mmol) em MeOH (20 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (1,13 g, 90,1%). 0 ácido (1,13 g, 2,57 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (10 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6- dimetilpiridin-2(1Η)-ona (0,87 g, 5,72 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (2,23 g, 4,28 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação com cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,8 g, 49%).
Passo 7: Sintese de Cis-3-((4-aminociclo- hexil)(metil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Uma solução, mantida sob agitação, de cis-(4-((5-bromo-3- (((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil) carbamato de terc-butilo (0,8 g, 1,39 mmol) em DCM (25 mL) foi arrefecida até 0 °C e foi-lhe adicionado TFA (5 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após conclusão, a reação foi concentrada até à secura. O residuo foi basificado com bicarbonato de sódio aquoso até pH 8 e camada aquosa extraida com 20% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas para proporcionar o composto desejado (600 mg, 91% de rendimento). LCMS: 475, 15 (M + 1)+; HPLC% 95, 88 (a 2 54 nm) (Tr; 4,8 32; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1.4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,22 (t, 1H) , 7,20 (s, 1H) , 7,01 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=3,6 Hz), 2,82-2,86 (m, 2H) , 2,53 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,13 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,82-1,84 (m, 2H), 1,34-1,44 (m, 6H). 100 mg de cis-3-((4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (base livre) foi em seguida dissolvida em HC1 metanólica (5 mL) e agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Depois de concluída a formação de sal, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o sólido resultante foi purificado, lavando com éter dietílico para proporcionar o sal de HC1 correspondente. Dados Analíticos do sal de HC1: LCMS: 475,20(M + 1)+; HPLC% 96,09 (a 254 nm) (Tr; 4, 818; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1.4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-dg, 400 MHz) δ 11,51 (s, 1H), 8,28 (t, 1H), 8,08 (s, 3H), 7,31 (s, 1H) , 7,08 (s, 1H) , 5,90 (s, 1H) , 4,24 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,05-3,13 (m, 2H) , 2,54 (s, 3H) , 2,19 (s, 6H) , 2,12 (s, 3H) , 1,83 (m, 2H) , 1,66 (m, 2H) , 1,59-1, 60 (m, 2H) , 1,46 (m, 2H).
Exemplo 37: Síntese de Composto 59: Trans-3-((4-aminociclo-hexil) (metil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de Trans-5-bromo-3-((4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de trans-5-bromo-3-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (3 g, 6,81 mmol) em acetonitrilo (40 mL), foram adicionados carbonato de césio (4,4 g, 13,62 mmol) e iodeto de metilo (4,83 g, 34,05 mmol); a mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Após conclusão, a mistura reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, o resíduo foi lavado com acetato de etilo e o filtrado foi concentrado para proporcionar o composto desejado em bruto o qual foi em seguida purificado por cromatografia em coluna dando o composto desejado (1,3 g, 43%).
Passo 2: Síntese de Trans-(4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionado NaOH aquoso (0,23 g, 5,72 mmol) a uma solução de trans-5-bromo-3-((4-((terc-butoxicarbonil)-amino)ciclo-hexil)(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1,3 g, 2,86 mmol) em MeOH (20 mL) e foi agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e o residuo foi acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e até pH 4 utilizando ácido citrico. A mistura foi extraida com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas, filtradas e concentradas para dar o respetivo ácido (1 g, 83%). O ácido (1 g, 2,27 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (5 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,65 g, 4,54 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (1,7 g, 3,4 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação com cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,7 g, 54%).
Passo 3: Sintese de Trans-3-((4-aminociclo- hexil)(metil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Uma solução, mantida sob agitação, de trans-(4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(metil)amino)ciclo-hexil) carbamato de terc-butilo (0,7 g, 1,21 mmol) em DCM (8 mL) foi arrefecida até 0 °C e foi-lhe adicionado TFA (2,5 mL) . A massa reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após conclusão, a reação foi concentrada até à secura. O resíduo foi basificado com bicarbonato de sódio aguoso até pH 8 e a camada aguosa extraída com 20% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas para proporcionar material em bruto gue foi em seguida purificado por lavagens com solvente dando o composto desejado (0,5 g, 86 %) . LCMS: 475,20 (M + 1)+; HPLC% 92,35(a 254 nm) (Tr;4,416; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-dfj, 400 MHz) δ 8,21 (t, 1H) , 7,18 (s, 1H) , 7,01 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H) , 2, 63-2, 66 (m, 2H) , 2,55 (s, 3H) , 2,17 (s, 3H) , 2,10 (s, 6H) , 1,79-1,82 (m, 2H) , 1,60 (m, 2H) , 1,46-1,49 (m, 2H) , 1, 06-1, 09 (m, 2H) . 100 mg de trans-3-((4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (base livre) foi em seguida dissolvida em HC1 metanólica (5 mL) e agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Depois de concluída a formação de sal, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o sólido resultante foi purificado lavando com éter dietílico para proporcionar o correspondente sal de HC1. Dados analíticos do sal de HC1: LCMS: 475,20(M + 1)+; HPLC% 91,40 (a 254 nm) (Tr; 4,408; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C;
Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de XH (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,51 (s, 1H) , 8,28 (t, 1H) , 8,06 (s, 3H) , 7,31 (s, 1H) , 7,08 (s, 1H) , 5,89 (s, 1H) , 4,24 (d, 2H, J=4,4 Hz), 2,92 (sl, 1H) , 2,62-2,91 (m, 4H) , 2,19 (s, 3H) , 2,13 (s, 3H) , 2,11 (s, 3H) , 1,97 (d, 2H, J=10,8 Hz), 1,70 (m, 2H) , 1,53-1,56 (m, 2H) , 1,31-1,34 (m, 2H) .
Exemplo 38: Síntese de Composto 60: Cis-3-((4- acetamidociclo-hexil)(metil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de composto cis-3-((4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (base livre) (0,225, 0,474 mmol) em DMF (3 mL), foram adicionados EDCI.HC1 (0,138 g, 0,718 mmol), HOBt (0,064 g, 0,47 mmol), trietilamina (0,1 g, 0,99 mmol) e ácido acético (0,057 g, 0,949 mmol) à temperatura ambiente e agitada à mesma temperatura durante 18 h. Após conclusão, foi adicionada água e extraida com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas dando material em bruto; o qual foi em seguida purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,17 g, 72%). LCMS: 517,25(M + 1)+; HPLC% 95,83(a 254 nm) (Tr;4,894; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,22 (t, 1H), 7,76 (d, 1H, J=7,2 Hz), 7,23 (s, 1H) , 7,03 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=3,6 Hz), 3,71 (sl, 1H), 2,89 (m, 1H), 2,53 (s, 3H), 2,18 (s, 3H) , 2,16 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,81 (s, 3H) , 1,74-1,76 (m, 2H) , 1,53 (m, 2H) , 1,39 (m, 4H) .
Exemplo 39: Sintese de Compostos 61: Trans-3-((4- acetamidociclo-hexil)(metil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de trans-3-((4-aminociclo-hexil)(metil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,225, 0,474 mmol em DMF (3 mL), foram adicionados EDCI.HC1 (0,138 g, 0,718 mmol), HOBt (0,064 g, 0,47 mmol), trietilamina (0,1 g, 0,99 mmol) e ácido acético (0,057 g, 0,949 mmol) à temperatura ambiente, e agitada à mesma temperatura durante 18 h. Após conclusão, foi adicionada água e extraida com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas, dando o material em bruto; o qual foi em seguida purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto desejado (0,13 g, 53%) . LCMS: 517,20 (M + 1)+; HPLC% 93, 92 (a 254 nm) (Tr;4,713; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 8,20 (t, 1H) , 7,65 (d, 1H, J=7,6 Hz), 7,18 (s, 1H) , 7,01 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=3, 6 Hz), 3,42- 3,44 (m, 1H) , 2,68-2,71 (m, 1H) , 2,56 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,10 (s, 6H) , 1,77-1, 80 (m, 2H) , 1,74 (s, 3H) , 1,62- 1,65 (m, 2H) , 1,46-1,54 (m, 2H) , 1, 07-1,23 (m, 2H) .
Exemplo 40: Síntese de Composto 62: 2-bromo-3- (ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida
Passo 1: 2-bromo-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 2-bromo-3- nitrobenzoato (3 g, 12,19 mmol) em DMF (33 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (5,16 g, 48,67 mmol) e iodeto de metilo (6,92 g, 48,67 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 60 °C durante 4 h. Após conclusão, foi adicionada água à mistura e a extração realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida para se obter 2-bromo-3-nitrobenzoato de metilo em bruto (4 g, em bruto).
Passo 2: Síntese de 3-amino-2-bromobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 2-bromo-3- nitrobenzoato de metilo (4 g, 15,38 mmol) em etanol (20 mL) , foram adicionados sob agitação cloreto de amónio (4 g, 74,07 mmol) dissolvido em água (20 mL) e ferro em pó (6,88 g, 123 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 1 h. Após conclusão, foi adicionada água à mistura e filtrada através de celite. O filtrado foi extraído com acetato de etilo e as camadas orgânicas combinadas lavadas com água e solução de bicarbonato de sódio, secas e concentradas sob pressão reduzida dando o 3-amino-2-bromobenzoato de metilo desejado (3 g, 85 %) que foi utilizado sem mais purificação.
Passo 3: Síntese de 2-bromo-3-(ciclopentilamino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-2- bromobenzoato de metilo (3 g, 13,0 mmol) e ciclopentanona (5,4 g, 64,28 mmol) em metanol (20 mL) , foi adicionado ácido acético (1,56 g, 26 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (2 g, 31,7 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 2-bromo-3-(ciclopentilamino)benzoato de metilo (1,4 g, 36 %) .
Passo 4: Síntese de 2-bromo-3- (ciclopentil(metil)amino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 2-bromo-3- (ciclopentilamino)benzoato de metilo (1,4 g, 4,69 mmol) em acetonitrilo (10 mL) , foram adicionados carbonato de césio (3 g, 9,2 mmol) e iodeto de metilo (3,38 g, 23,3 mmol) e a mistura reacional resultante aquecida a 80 °C durante 12 h.
Após conclusão, a mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada e o resíduo foi lavado com acetato de etilo. 0 filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 2-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)benzoato de metilo (1,1 g, 75 %).
Passo 5: Síntese de 2-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0, 064 g, 1,6 mmol) a uma solução de 2-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)benzoato de metilo (0,25 g, 0,801 mmol) em MeOH (5 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,2 g, 84%). O ácido (0,2 g, 0,67 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (1,5 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,204 g, 1,34 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,516 g, 1,00 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura foi vertida para gelo para se obter um sólido, que foi filtrado e lavado com acetonitrilo. A purificação final por HPLC preparativa proporcionou 2-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida como o sal de TFA (0,02 g, 6,89%). LCMS: 432,10 (M + 1)+; HPLC% 96, 05 (a 254 nm) (Tr; 4, 90 8) ; RMN de (DMS0-de, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H) , 8,21 (t, 1H) , 7,26-7,29 (m, 2H) , 6,94 (d, 1H, J=8 Hz), 5,86 (s, 1H), 4,25 (d, 2H), 3,59 (m, 1H), 2,56 (s, 3H) , 2,19 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,61-1,67 (m, 4H) , 1,46 (sl, 4H).
Exemplo 41: Síntese de Composto 63: 3- (ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-vinilbenzamida
Passo 1: Síntese de 2-bromo-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-bromo-3-nitrobenzoico (3 g, 12,19 mmol) em DMF (30 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (5,16 g, 48,6 mmol) e iodeto de metilo (6,92 g, 48,7 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Após conclusão, o sólido precipitado foi filtrado, o resíduo lavado com acetato de etilo (5 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida, dando o 2-bromo-3-nitrobenzoato em bruto desejado (4 g, 99%) que foi utilizado sem mais purificação.
Passo 2: Síntese de 3-amino-2-bromobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 2-bromo-3-nitrobenzoato em bruto anterior (4 g, 15,38 mmol) em etanol (20 mL) , foram adicionados sob agitação cloreto de amónio (4 g, 74,0 mmol) dissolvido em água (20 mL) e ferro em pó (6,87 g, 123 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 7 h. Após conclusão, a mistura reacional foi filtrada através de celite, lavando com água e acetato de etilo, e o filtrado extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida dando o produto em bruto desejado (3 g).
Passo 3: Síntese de 2 -bromo-3-(ciclopentilamino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-2-bromobenzoato de metilo (3 g, 13,01 mmol) e ciclopentanona (5, 6 g, 66 mmol) em metanol (30 mL), foi adicionado ácido acético (1,59 g, 26,6 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (2,08 g, 29,4 mmol) e a mistura agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 2-bromo-3-(ciclopentilamino)benzoato de metilo (1,4 g, 36%) .
Passo 4: Síntese de 2-bromo-3- (ciclopentil(metil)amino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 2-bromo-3-(ciclopentilamino)benzoato de metilo (1,4 g, 4,69 mmol) em acetonitrilo (20 mL) , foram adicionados carbonato de césio (3,0 g, 9,2 mmol) e iodeto de metilo (3,38 g, 23,4 mmol) e a mistura reacional resultante aquecida a 80 °C durante 12 h. Após conclusão, a mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada, e o resíduo lavado com acetato de etilo. O filtrado foi concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o 2-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)benzoato de metilo desejado (1,1 g, 75 %).
Passo 5: Síntese de 3-(ciclopentil(metil)amino)-2- vinilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 2-bromo-3-(ciclopentil(metil)amino)benzoato de metilo (1 equiv.) e 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-l,3,2-dioxaborolano (1,2 equiv.) numa mistura de dioxano/água (5 mL+1 mL) , foi adicionado Na2CC>3 (3,6 equiv.) e a solução purgada com árgon durante 15 min. Em seguida, foi adicionado Pd(PPh3)4 (0,1 equiv.) e purgado árgon durante 10 min. e a mistura reacional aquecida a 100 °C durante 2 h. Após conclusão, a mistura reacional foi diluída com água e extraída com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4 e o solvente removido sob pressão reduzida para proporcionar material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para proporcionar o 3-(ciclopentil(metil)amino)-2-vinilbenzoato de metilo desej ado.
Passo 6: Síntese de 3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-vinilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3- (ciclopentil(metil)amino)-2-vinilbenzoato de metilo (1 equiv.) em etanol (10 mL), foi adicionada solução aquosa de NaOH (1,5 equiv. in 10 mL água) e a reação agitada a 60 °C durante 4 h. Após conclusão, o etanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo acidificado com HC1 IN até pH 6. O precipitado foi filtrado, lavado com água e seco para se obter o ácido correspondente puro. A uma solução deste respetivo ácido (1 equiv.) em DMSO (10 mL) , foi adicionado PyBOP (1,5 equiv.) e a reação agitada à ta durante 15 min. Em seguida, foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (2 equiv.) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, foi adicionada água e o sólido resultante filtrado e lavado com água. Este sólido foi agitado com acetonitrilo durante 10 min e novamente filtrado para se obter 3- (ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-vinilbenzamida que foi purificada por HPLC preparativa produzindo o sal de TFA (0,045 g, 10,39 %) . LCMS: 380,25 (M + 1)+; HPLC% 98,00(a 254 nm) (Tr; 4,323); RMN de (DMSO-cfe, 400 MHz) δ 11,51 (s, 1H) , 8,01 (s, 1H) , 7,25 (sl, 2H) , 6,81-6,88 (m, 2H) , 5,85 (s, 1H) , 5,49 (d, 1H, J=18 Hz), 5,40 (sl, 1H) , 4,34 (3H misturados no pico do solvente), 4,19 (d, 3H, J=4,8 Hz), 2,17 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,61 (m, 4H), 1,47 (sl, 4H).
Exemplo 42: Síntese de Composto 64: 5-cloro-3- (ciclopentil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico
Foi adicionado ácido 5-cloro-2-metilbenzoico (4 g, 23,39 mmol) a H2SO4 conc. arrefecido (27 mL) a -10 °C, em
porções. Após 10 minutos foi adicionada, gota a gota a -10 °C, mistura de nitração [Preparada misturando HN03 Conc. (3,3 g, 52, 68 mmol) com H2SO4 conc. (4,4 mL) ] . A mistura reacional resultante foi agitada a -10 °C durante 30 minutos. Após conclusão, a mistura foi vertida sobre água gelada e o sólido precipitado resultante foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo dando o ácido cloro-2- metil-3-nitrobenzoico desejado (4,95 g, 99%).
Passo 2: Síntese de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo
I
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido cloro-2- metil-3-nitrobenzoico (6,75 g, 31,25 mmol) em DMF (33 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (13,23 g, 125,18 mmol) e iodeto de metilo (17,77 g, 125,2 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 60 °C durante 4 h. Após conclusão, foi adicionada água e extraida utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por cromatografia em coluna sobre silica (tamanho de malha 60-120) dando 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (6 g, 83, 65%) .
Passo 3: Sintese de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (6 g, 26,13 mmol) em etanol (60 mL) , foram adicionados sob agitação cloreto de amónio (6 g, 112,1 mmol) dissolvido em água (60 mL) e ferro em pó (11,88 g, 208,4 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 1 h. Após conclusão, foi adicionada água à reação e a mistura foi filtrada através de celite. O filtrado foi extraido com acetato de etilo e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida dando 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo que foi utilizado sem mais purificação.
Passo 4: Sintese de 5-cloro-3-(ciclopentilamino)-2- metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo (1 g, 5,02 mmol) e ciclopentanona (2,1 g, 25 mmol) em metanol (10 mL) , foi adicionado ácido acético (0,3 g, 5,02 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,37 g, 5,90 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 5-cloro-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metilo (0, 62 g, 46,2 %) .
Passo 5: Síntese de 5-cloro-3-(ciclopentil(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-(ciclopentilamino)-2-metilbenzoato de metilo (0,62 g, 2,32 mmol) em DMF seca (10 mL) , foram adicionados carbonato de césio (3,78 g, 11,6 mmol) e iodeto de etilo (5,43 g, 34,8 mmol) e a massa reacional resultante foi aguecida a 80 °C durante 18 h. Após conclusão, a mistura reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada. O resíduo foi lavado com acetato de etilo e o filtrado concentrado e purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o 5-cloro-3-(ciclopentil(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo desejado (0,101 g, 15 %) .
Passo 6: Síntese de 5-cloro-3-(ciclopentil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,1 g, 2,5 mmol) a uma solução de 5-cloro-3-(ciclopentil(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (0,5 g, 1,69 mmol) em EtOH (10 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo e as camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,41 g, 86 %). O ácido (0,10 g, 0,355 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (1,5 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,104 g, 0,77 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,277 g, 0,533 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura foi vertida para gelo e o sólido resultante filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de lavagens adicionais com solvente para produzir 5-cloro-3-(ciclopentil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,107 g, 72%). LCMS: 416,25 (Μ + 1)+; HPLC% 91,83(a 254 nm) (Tr; 5,021); RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 8,21 (t, 1H) , 7,19 (s, 1H) , 6,95 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=4 Hz), 3,45 (t, 1H), 2,94-2,96 (m, 2H), 2,18 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,58-1, 64 (m, 4H) , 1,47 (m, 2H), 1,32 (m, 2H), 0,77 (t, 3H, J=6,8 Hz).
Exemplo 43: Síntese de Composto 19: 5-bromo-2-cloro-3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida
Passo 1: Síntese de ácido 5-bromo-2-cloro-3-nitrobenzoico:
Foi adicionado ácido 5-bromo-2-clorobenzoico (5 g, 27,3 mmol) a H2SO4 conc. arrefecido (20 mL) a -10 °C, em pequenas porções. Após 10 minutos foi adicionada, gota a gota a -10 °C, mistura de nitração {preparada misturando HNO3 conc. (2,5 mL) com H2SO4 conc. (10 mL) } . A mistura reacional foi agitada a -10 °C durante 30 minutos. Após conclusão, a mistura reacional foi vertida para água gelada e o sólido recolhido por filtração. O sólido foi lavado com água e seco sob vácuo para dar ácido 5-bromo-2-cloro-3-nitrobenzoico (3,6 g, 60,5 %).
Passo 2: Síntese de 5-bromo-2-cloro-3-nitrobenzoato de metilo:
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido -bromo-2-cloro-3-nitrobenzoico (3,6 g, 12,9 mmol) em DMF (40 mL) foi adicionado carbonato de sódio (4,1 g, 38,6 mmol) e iodeto de metilo (4 mL, 64,3 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Após conclusão, foi adicionada água à mistura reacional e o produto foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução sat. de bicarbonato e HC1 5 N. Os orgânicos foram secos e concentrados sob pressão reduzida para proporcionar 5-bromo-2-cloro-3-nitrobenzoato de metilo (3,4 g, 89,9 %).
Passo 3: Síntese de 3-amino-5-bromo-2-clorobenzoato de metilo:
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-cloro-3-nitrobenzoaton de metilo (3,4 g, 11,6 mmol) em etanol (19 mL) foi adicionado cloreto de amónio (3,4 g, 57,8 mmol) dissolvido em água (30 mL) e ferro em pó (5,16 g, 92,5 mmol) . A mistura reacional foi aquecida a 80 °C durante 1 h. Após conclusão, a mistura reacional foi filtrada através de celite, lavando com etanol e acetato de etilo. O filtrado foi extraído com acetato de etilo e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida para dar 3-amino-5-bromo-2-clorobenzoato de metilo (2,8 g, 92,1 %).
Passo 4: Sintese de 5-bromo-2-cloro-3- (ciclopentilamino)benzoato de metilo:
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-clorobenzoato de metilo (2,8 g, 10,6 mmol) e ciclopentanona (4,47 g, 53,2 mmol) em metanol (20 mL) foi adicionado ácido acético (1,3 mL, 21,2 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (1,7 g, 26,6 mmol) e a reação agitada de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 5-bromo-2-cloro-3-(ciclopentilamino)benzoato de metilo (0,5 g, 14,2 %) .
Passo 5: Sintese de 5-bromo-2-cloro-3- (ciclopentil(metil)amino)benzoato de metilo:
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-cloro-3-(ciclopentilamino)benzoato de metilo (0,550 g, 1,65 mmol) em acetonitrilo (20 mL) foi adicionado carbonato de césio (1,08 g, 3,31 mmol) e iodeto de metilo (1,17 g, 8,25 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 80 °C durante 12 h. Após conclusão, a mistura reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada. O residuo foi lavado com acetato de etilo e o filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna para proporcionar 5-bromo-2-cloro-3-(ciclopentil(metil)amino)benzoato de metilo (0,350 g, 61%).
Passo 6: Sintese de 5-bromo-2-cloro-3- (ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,06 g, 1,52 mmol) a uma solução de 5-bromo-2-cloro-3-(ciclopentil(metil)amino)-benzoato de metilo (0,350 g, 1,01 mmol) em EtOH (4 mL) e água (1 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e até pH 4 com ácido citrico. O produto foi extraido com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para dar o ácido desejado (0,266 g, 79,4 %) . O ácido (0,265 g, 0,80 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (3 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,243 g, 1,60 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter sido adicionado PYBOP (0, 624 g, 1,20 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido. 0 sólido foi filtrado e lavado com acetonitrilo, seguido de purificação por cromatografia em coluna e HPLC prep. para dar 5-bromo-2-cloro-3-(ciclopentil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida (0,012 g, 3,22%).
Dados Analíticos: LCMS: 466,05 (M + 1)+; HPLC: 99,28% (a 2 54 nm) (Tr;6,917; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de (CD30D, 400 MHz) δ 7,42 (d, 1H, J=2 Hz), 7,24 (d, 1H, J=l,6 Hz), 6,16 (s, 1H), 4,66 (s, 2H), 3,71 (m, 1H), 2,70 (s, 3H) , 2,37 (s, 3H) , 2,25 (s, 3H) , 1,79 (m, 2H) , 1,70 (m, 2H) , 1,56 (m, 4H) .
Exemplo 44: Sínteses dos Compostos 91, 92, 97, 98, 102, 104, 105, 117-123, 126, 127, 137, 144, 157, 191, 192, 205- 209, 212, 213, 222, 243-245, 268, 269, 273, 276-279, 282- 287, 290, 301, 302, 306, 308-311, 313, 315, 319-322, 328, 332-336, 339, 340, 344, 347-349, 356, 386, 387, 389, 390 e 392-417
Os compostos 91, 92, 97, 98, 102, 104, 105, 117-123, 126, 127, 137, 144, 157, 191, 192, 205-209, 212, 213, 222, 243- 245, 268, 269, 273, 276-279, 282-287, 290, 301, 302, 306, 308-311, 313, 315, 319-322, 328, 332-336, 339, 340, 344, 347-349, 356, 386, 387, 389, 390, e 392-417 foram sintetizados como se descreve a seguir.
Composto 91: 3-(alil(piperidin-4-il)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil) -2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico
Foi adicionado ácido 5-cloro-2-metilbenzoico (4,0 g, 23 mmol) em porções a H2SO4 conc. arrefecido (27 mL) a -10 °C. Após 10 minutos foi adicionada, gota a gota a -10 °C, a mistura de nitração {consistindo em HN03 concentrado (3,3 g, 52 mmol) e H2SO4 concentrado (4,4 mL) } . A mistura foi agitada a -10 °C durante 30 minutos e vertida sobre água gelada. O sólido precipitado foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para dar o composto em epígrafe (4, 95 g, 99%) .
Passo 2: Síntese de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico (6,75 g, 31,3 mmol) em DMF (33 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (13,23 g, 125 mmol) e iodeto de metilo (17,77 g, 125 mmol). A mistura foi aquecida a 60 °C durante 4 h. Após conclusão, foi adicionada água à massa reacional e a extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por cromatografia em coluna sobre silica gel (para proporcionar o composto em epigrafe (6,0 g, 83%).
Passo 3: Sintese de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de me tilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (6,0 g, 26 mmol) em etanol (60 mL) foram adicionados cloreto de amónio (6,0 g, 110 mmol) dissolvido em água (60 mL) e ferro em pó (11,9 g, 208 mmol) sob agitação. A mistura foi aguecida a 80 °C durante 1 h. Após conclusão, foi adicionada água e a mistura reacional foi filtrada através de celite. O filtrado foi extraido com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o composto em epigrafe que foi utilizado sem mais purificação.
Passo 4: Sintese de 4-( (5-cloro-3-(metoxicarbonil)-2- metilfenil)amino)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo (5,0 g, 25 mmol) e 4-oxopiperidina-l-carboxilato de terc-butilo (25,3 g, 127 mmol) em metanol (50 mL), foi adicionado ácido acético (1,5 g, 25 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 8 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (1,89 g, 30,1 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (5,0 g, 52 %).
Passo 5: Síntese de 4-(alil (5-cloro-3-(metoxicarbonil)-2-metilfenil)amino)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 4-((5-cloro-3-(metoxicarbonil)-2-metilfenil)amino)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (0,70 g, 1,82 mmol) em DMF (7 mL) , foi adicionado NaH (0, 052 g, 2,19 mmol) a 0 °C. Depois de agitar durante 20 minutos, foi adicionado 3-bromoprop-l-eno (0,44 g, 3,64 mmol) e a mistura foi aquecida a 80 °C durante 15 h. Após conclusão, a massa reacional foi desativada com água gelada e a extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (0,3 g, 39 %).
Passo 6: Síntese de 4-(alil (5-cloro-3-(((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)amino)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo
Foi adicionado NaOH aquoso (0,113 g, 2,83 mmol) a uma solução de 4-(alil (5-cloro-3-(metoxicarbonil)-2- metilfenil)amino)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (0,60 g, 1,41 mmol) em etanol (15 mL). Depois de agitar a 60 °C durante 1 h, o etanol foi removido sob pressão reduzida e a mistura acidificada utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustada a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas, dando o respetivo ácido (0,5 g, 86%). O ácido anterior (0,5 g, 1,22 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (5 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,37 g, 2,44 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,95 g, 1,83 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. A mistura foi vertida para gelo e extraída com 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas e purificadas por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (0,2 g, 30%).
Passo 7: Síntese de 3-(alil (piperidin-4-il)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Uma solução, mantida sob agitação, de composto 4-(alil (5-cloro-3-(((4, 6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)amino)piperidina-1-carboxilato de terc-butilo (0,2 g, 0,36 mmol) em DCM (5 mL) foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado TFA (0,5 mL) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. e concentrada até à secura. O resíduo foi lavado com éter dietílico e, em seguida, purificado por HPLC preparativa para proporcionar o composto em epígrafe como o sal de TFA (0,06 g, 37%). LCMS: 443,25 (M+ 1)+; HPLC: 97,14% (a 254 nm) (Tr;5,074; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de (DMSO-cb, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H), 8,38 (si, 1H), 8,21 (t, 1H) , 8,05 (d, 1H) , 7,21 (d, 1H, J=4,4 Hz), 6,97 (d, 1H, J=l,6 Hz), 5,86 (s, 1H), 5,56-5, 64 (m, 1H), 4, 97-5, 09 (m, 2H) , 4,24 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,62 (d, 2H, J=5,2 Hz), 3,23 (m, 2H), 3,10-3,16 (m, 1H) , 2,85-2,88 (m, 2H) , 2,19 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,83-1, 86 (m, 2H) , 1, 68-1,73 (m, 2H) .
Composto 97: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(piperidin-4-11(propil)amino)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-(alil(piperidin- 4-il)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,04 g, 0,09 mmol) em MeOH (3 mL) foi adicionado Pd a 10%/C (0,01 g) e a reação agitada à temperatura ambiente sob hidrogénio (pressão de balão) durante 2 h. A mistura foi filtrada através de celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para se obter um sólido em bruto que foi purificado por HPLC preparativa para proporcionar o composto em epígrafe como o sal de TFA (0,012 g, 40%) . LCMS: 445,25 (M + 1)+; HPLC: 95,52% (a 254 nm) (Tr;5,102; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj. : 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H) , 8,39 (sl, 1H) , 8,22 (t, 1H) , 8,03 (sl, 1H) , 7,25 (s, 1H) , 6,98 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,24 (d, 2H, J=4,8 Hz), 3,24-3,27 (m, 2H) , 3,00 (m, 1H) , 2,92 (m, 2H) , 2,83-2,86 (m, 2H) , 2,18 (s, 3H) , 2,17 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,79- 1,82 (m, 2H) , 1,67-1,71 (m, 2H) , 1,18-1,23 (m, 2H) , 0,75 (t, 3H, J=8 Hz).
Composto 144: 3,6-dicloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-4-[metil(piperidin-4-il)amino]piridina-2-carboxamida
Passo 1: Síntese de 3,4,6-tricloropiridina-2-carboxilato de me tilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3,6-dicloropiridina-2-carboxilato de metilo (0,96 g, 4,66 mmol) em TFA (5 mL) foi adicionado peróxido de hidrogénio (solução aquosa a 30% p/p, 435 yL, 2,5 mmol) e a mistura reacional foi aquecida a 60 °C durante 20 h. A mistura reacional foi em seguida arrefecida e lentamente vertida sobre solução saturada de K2C03 (100 mL) , seguida de extração da camada aquosa com AcOEt (2x200 mL), lavagem das fases orgânicas combinadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2x50 mL) , secagem (Na2S04) e evaporação. O 3, 6-dicloro-2-(metoxicarbonil)piridín-l-io-l-olato desejado foi utilizado em bruto na etapa seguinte da síntese sem qualquer purificação adicional. Ao 3,6-dicloro-2-(metoxicarbonil)piridín-l-io-l-olato em bruto (-70% pureza, 2,40 g, 7,7 mmol) foi adicionado POCI3 (3,5 mL, 38 mmol) e a solução foi aquecida até 100 °C durante 4 h. Depois de arrefecer, o POCI3 foi removido in vacuo para dar um sólido branco que foi submetido a cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0% a 10% de AcOEt em heptano para proporcionar o composto em epígrafe como agulhas incolores (340 mg, 30% nos dois passos). LC-MS 100%, 2,20 min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z= 239,8/241,7, RMN de (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,51 (1H, s), 3,92 (3H, s) .
Passo 2: Síntese de 4-({1-[(terc-butoxi)carbonil]piperidin- 4—11}(metil)amino)-3,6-dicloropiridina-2-carboxilato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3,4,6- tricloropiridina-2-carboxilato de metilo (310 mg, 1,29 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionada TEA (359 yL, 2,58 mmol) seguida de 4-(metilamino)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (276 mg, 1,29 mmol) e a mistura reacional foi aquecida a 100 °C durante 4 h. A mistura reacional foi em seguida arrefecida até à temperatura ambiente e vertida sobre água (50 mL) , seguida de extração do produto para TBME (3x50 mL), lavagem dos orgânicos combinados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secagem com Na2SC>4 e evaporação. O produto em bruto foi em seguida purificado sobre uma coluna Isolute com 10 g de silica, eluindo com um gradiente de 0% a 50% de AcOEt em heptano para proporcionar o composto em epigrafe como um sólido branco (95 mg, 18%) . LC-MS 95%, 2,29min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z= 418,1/419,8, RMN de (500 MHz, Clorof órmio-d) δ 6,87 (s, 1 H) 4,12 - 4,34 (m, 2 H) 3,99 (s, 3 H) 3, 69 - 3, 80 (m, 1 H) 2,79 (s, 3 H) 2,64 - 2,77 (m, 2 H) 1,75 (s. 1., 4 H) 1,48 (s, 9 H).
Passo 3: Síntese de ácido 4-({1-[ (terc- butoxi)carbonil]piperidin-4-il}(metil)amino)-3,6-dicloropiridina-2-carboxílico
A uma solução, mantida sob agitação, de 4-({1-[ (terc-butoxi)carbonil]piperidin-4-il}(metil)amino)-3,6-dicloropiridina-2-carboxilato de metilo (95 mg, 0,23 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado NaOH aquoso 2M (2,3 mL, 4,54 mmol) e a mistura reacional foi deixada agitar à temperatura ambiente durante 16 h, tempo após o qual o THF foi evaporado in vacuo. A fase aquosa foi em seguida tratada com uma solução aquosa de ácido cítrico a 10% até pH 5-6 e, em seguida, extraída com AcOEt (3x50 mL) , as fases orgânicas combinadas foram em seguida secas com Na2SC>4 e evaporadas para dar o composto em epígrafe como um pó branco (77 mg, 84%). LC-MS 100%, 2,02 min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z= 403,9/405,6, RMN de (500 MHz, Metanol-d4) δ 7,09 (s, 1 H) 4,14-4,22 (m, 2 H) 3,80 - 3,89 (m, 1 H) 2,84 (s, 5 H) 1,74 - 1,81 (m, 4 H) 1,46 (s, 9 H) .
Passo 4: Síntese de 4-[(3,6-dicloro-2-{[(4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil]carbamoil}piridin-4- il)(metil)amino]piperidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 4-({1-[ (terc-butoxi)carbonil]piperidin-4-il}(metil)amino)-3,6-dicloropiridina-2-carboxílico (75 mg, 0,19 mmol) em DMF (2 mL) arrefecida até 0 °C h, foi adicionada DIPEA (48 yL, 0,28 mmol), seguida de PyBOP (116 mg, 0,22 mmol) e 3- (aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona (89% de pureza, 35 mg, 0,2 mmol). A mistura reacional foi em seguida agitada à temperatura ambiente durante 16 h, após o gue a reação foi vertida sobre água (30 mL) e extraida com AcOEt (3x50 mL) , após o que os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) e secos (Na2S04) e evaporados. O produto em bruto foi purificado utilizando uma coluna Isolute com 5 g de sílica, eluindo com um gradiente de 0% a 100% de AcOEt em heptano para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco que continha -45% p/p de óxido de tripirrolidinofosfeno por RMN - este composto foi utilizado na etapa seguinte da síntese sem qualquer purificação adicional. LC-MS 93%, 1,97 min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z= 538,0/539, 45/542,05, RMN de (500 MHz,
Clorofórmio-d) δ 10,03 (s.l., 1H) , 8,13 - 7,97 (m, 1H) , 6,79 (s, 1H) , 5,87 (s, 1H) , 4,50 (d, J = 6,1 Hz, 2H) , 4,16 (1. m, 2H) , 3,78 - 3, 62 (m, 1H) , 2,72 (s, 3H) , 2,65 (1. m, 2H) , 2,35 (s, 3H) , 2,22 (s, 3H) , 1,73 - 1, 63 (m, 4H) , 1,44(s,9H).
Passo 5: Síntese de cloridrato de 3,6-dicloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-4-[metil(piperidin-4-il)amino]piridina-2-carboxamida
4-[ (3,6-Dicloro-2-{ [ (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]carbamoil}piridin-4-il)(metil)amino]piperidina- 1- carboxilato de terc-butilo (310 mg, 1,29 mmol) foi dissolvido em HC1 4M em solução em dioxano (3 mL) e agitado à temperatura ambiente durante 16 h, após o que o solvente foi evaporado e o composto purificado por HPLC preparativa para proporcionar o composto em epígrafe como um pó bege (13 mg, 14%) . LC-MS 100%, 2,41min (método de LC-MS de 7 minutos), m/z= 438,1/439,8, RMN de (500 MHz, Metanol-d4) δ 7,12 (s, 1H) , 6,11 (s, 1H) , 4,46 (s, 2H) , 4,01 - 3,81 (m, 1H) , 3,45 (d, J = 12,9 Hz, 2H) , 3,12 - 2,97 (m, 2H) , 2,82 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 2,13 -1,93 (m, 4H).
Composto 386: 3,6-dicloro-n-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-4-[metil(oxan-4-il)amino]piridina- 2- carboxamida
Passo 1: Síntese de 3,6-dicloro-4-[metil(oxan-4- il)amino]piridina-2-carboxilato de metilo A uma solução, mantida sob agitação, de 3,4,6- tricloropiridina-2-carboxilato de metilo (600 mg, 2,50 mmol) em DMF (12 mL) foi adicionada TEA (696 pL, 4,99 mmol) , seguida de I\/-metiloxan-4-amina (287 mg, 2,50 mmol) e a mistura reacional foi aquecida a 100 °C durante 20 h. A mistura reacional foi em seguida arrefecida até à temperatura ambiente e vertida sobre água (100 mL), seguida de extração do produto para AcOEt (3x100 mL) , lavagem dos orgânicos combinados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secagem com Na2S04 e evaporação. O produto em bruto foi em seguida purificado sobre uma coluna Isolute com 10 g de sílica, eluindo com um gradiente de 0% a 60% de AcOEt em heptano para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco (114 mg, 14%) . LC-MS 100%, 1,91 min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 319,3/320,9, RMN de 1R (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 6,87 (s, 1H) , 4,15 - 4,00 (m, 2H) , 3,98 (s, 3H) , 3,93 - 3,71 (m, 1H) , 3,54 - 3,24 (m, 2H) , 2,82 (s, 3H) , 1,94 (dd, J = 12,1, 4,7 Hz, 2H) , 1,70 (d, J = 10,2 Hz, 2H) . (s. 1., 4 H) 1,48 (s, 9 H)
Passo 2: Síntese de ácido 3,6-dicloro-4-[metil(oxan-4-il)amino]piridina-2-carboxílico
A uma solução, mantida sob agitação, de 3, 6-dicloro-4-[metil(oxan-4-il)amino]piridina-2-carboxilato de metilo (114 mg, 0,36 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado NaOH aquoso 2M (0,89 mL, 1,79 mmol) e a mistura reacional foi deixada agitar à temperatura ambiente durante 20 h, tempo após o qual o THF foi evaporado in vacuo. A fase aquosa foi em seguida tratada com uma solução aquosa de ácido cítrico a 10% até pH 5-6 e, em seguida, extraída com AcOEt (3x50 mL) , seguida de uma solução de IPA/CHCI3 1:1 (2 x 50 mL), as fases orgânicas combinadas foram em seguida lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) secas com Na2S04 e evaporadas para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (85 mg, 78%). LC-MS 100%, 1.47 min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 305,5/306, 9, RMN de (500 MHz, Metanol-d4) δ 7,10 (s, 1H), 4,03 (dd, J = 11,5, 4,4 Hz, 2H), 3, 99 - 3, 86 (m, 1H) , 3.47 (t, J = 11,0 Hz, 2H) , 2,90 (s, 3H) , 2,05 - 1, 90 (m, 2H), 1,74 (d, J = 12,4 Hz, 2H).
Passo 3: Síntese de 3,6-dicloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil]-4-[metil(oxan-4-il)amino]piridina-2-carboxamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 3,6-dicloro- 4-[metil(oxan-4-il)amino]piridina-2-carboxílico (85 mg, 0,28 mmol) em DMF (2 mL) foi adicionada DIPEA (73 yL, 0,42 mmol) e HATU (127 mg, 0,33 mmol) . A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 min, tempo após o qual foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 52 mg, 0,31 mmol) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura reacional foi em seguida vertida sobre 50 mL de água e a fase aquosa foi extraida com AcOEt (3x50 mL) , lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , seca (Na2S04) e evaporada para dar um óleo. O produto foi em seguida purificado utilizando uma coluna Isolute com 5 g de silica, eluindo com 0% a 5% de MeOH em DCM e evaporado para dar um sólido vitreo que foi triturado com éter dietilico e filtrado para proporcionar o composto em epigrafe como um pó branco (50 mg, 41%) . LC-MS 95%, m/z = 439, 0/440, 8, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 11,33 (s.l., 1H), 8,20 (s.l.,
1H) , 6,79 (s, 1H) , 5,93 (s, 1H) , 4,51 (s, 2H) , 4,02 (dd, J = 11,4, 3,8 Hz, 2H) , 3, 92 - 3,72 (m, 1H) , 3,39 (t, J = 11,3
Hz, 2H) , 2,78 (s, 3H) , 2,38 (s, 3H) , 2,27 (s, 3H) , 1,89 (tt, J = 12,0, 6,2 Hz, 2H) , 1,83 - 1,52 (m, 2H) .
Composto 387: 3-bromo-6-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-4-[metil(oxan-4-il)amino]piridina- 2-carboxamida
Passo 1: Sintese de 3-bromo-6-cloropiridina-2-carboxilato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 3-bromo-6-cloropiridina-2-carboxílico (2,00 g, 8,46 mmol) em MeOH (40 mL) foi adicionado H2SO4 (189 yL, 3,55 mmol) e a solução foi aquecida a refluxo durante 16 h. A reação foi arrefecida e o MeOH removido sob pressão reduzida, o sólido resultante foi dissolvido em AcOEt (100 mL) e lavado com solução saturada de NaHC03 (2x50 mL) , seguida de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , seca (Na2S04) e evaporada sob pressão reduzida para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido esbranquiçado (1,97 g, 93%) que foi utilizado sem qualquer purificação adicional. LC-MS 98%, m/z=249,8/251,7/253,7
Passo 2: Síntese de 3-bromo-4,6-dicloropiridina-2- carboxilato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-bromo-6- cloropiridina-2-carboxilato de metilo (1,92 g, 7,67 mmol) em TFA (18 mL) foi adicionado peróxido de hidrogénio (solução aquosa a 30% p/p, 5,22 mL, 53,7 mmol) e a mistura reacional foi aquecida a 60 °C durante 21 h. A mistura reacional foi em seguida arrefecida e lentamente vertida sobre solução saturada de K2C03 (100 mL) , seguida de extração da camada aquosa com AcOEt (3x100 mL), lavagem das fases orgânicas combinadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2x50 mL) , secagem (Na2S04) e evaporação. O 3-bromo-6-cloro-2-(metoxicarbonil)piridín-l-io-l-olato desejado (2,61 g, -75% pureza) foi utilizado em bruto na etapa seguinte da síntese sem qualquer purificação adicional. Ao 3-bromo-6-cloro-2-(metoxicarbonil)piridín-1- io-l-olato em bruto (-75% pureza, 2,61 g, 7,35 mmol) foi adicionado POCI3 (3,42 mL, 36,7 mmol) e a solução foi aquecida a 100 °C durante 4 h. Depois de arrefecer o POCI3 foi removido in vacuo para dar um sólido branco que foi submetido a cromatografia em coluna sobre silica, eluindo com 0% a 10% de AcOEt em heptano para proporcionar o composto em epigrafe como um pó amarelo-pálido (1,07 g, 49% nos dois passos) . LC-MS 99%, 2,02 min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z= 283,7/285,7/287,7, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,56 (s, 1 H) 4,00 (s, 3 H).
Passo 3: Sintese de 3-bromo-6-cloro-4-[metil(oxan-4- il)amino]piridina-2-carboxilato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-bromo-4,6-dicloropiridina-2-carboxilato de metilo (600 mg, 2,1 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionada TEA (587 yL, 4,21 mmol), seguida de I\/-metiloxan-4-amina (240 mg, 2,1 mmol) e a mistura reacional foi aquecida a 80 °C durante 20 h. A mistura reacional foi em seguida arrefecida até à temperatura ambiente e vertida sobre água (100 mL), seguida de extração do produto para AcOEt (3x100 mL) , lavagem dos orgânicos combinados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secagem com Na2S04 e evaporação. O produto em bruto foi em seguida purificado sobre uma coluna Isolute com 10 g de silica, eluindo com um gradiente de 0% a 100% de AcOEt em heptano para proporcionar o composto em epigrafe como um sólido branco (110 mg, 14%) . LC-MS 100%, 1,94 min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 362,8/365,2/346,8, RMN de XH (250 MHz, Clorofórmio-d) δ 6,87 (s, 1H) , 4,17 - 3,99 (m, 2H) , 3,98 (s, 3H) , 3,93 -3,70 (m, 1H), 3,41 (t, J = 10,9 Hz, 2H), 2,81 (s, 3H) , 1,93 (dd, J = 11,9, 4,6 Hz, 2H) , 1,71 (d, J = 10,3Hz, 2H) .
Passo 4: Síntese de ácido 3-bromo-6-cloro-4-[metil(oxan-4-il)amino]piridina-2-carboxílico
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-bromo-6-cloro-4-[metil(oxan-4-il)amino]piridina-2-carboxilato de metilo (102 mg, 0,28 mmol) em THF (2 mL) foi adicionado NaOH aquoso 2M (0,70 mL, 1,40 mmol) e a mistura reacional foi deixada agitar à temperatura ambiente durante 18 h, tempo após o qual o THF foi evaporado in vacuo. A fase aquosa foi em seguida tratada com uma solução aquosa de ácido cítrico a 10% até pH 5-6 e, em seguida, extraída com AcOEt (3x50 mL) , seguida de uma solução de IPA/CHCI3 1:1 (2x50 mL) , as fases orgânicas combinadas foram em seguida lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secas com Na2SC>4 e evaporadas para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (72 mg, 73%). LC-MS 100%, 1,49 min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 349, 0/351,0/352, 9, RMN de XH (500 MHz, Metanol-d4) δ 7,07 (s, 1H) , 4,02 (dd, J = 11,3, 4,3 Hz, 2H) , 3, 96 - 3, 87 (m, 1H) , 3,46 (t, J = 11,0 Hz, 2H) , 2,85 (s, 3H) , 1,96 (dd, J = 12,3, 4,3 Hz, 2H) , l,77(s,2H).
Passo 5: Síntese de 3-bromo-6-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-4-[metil(oxan-4-il)amino]piridina-2-carboxamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 3-bromo-6-cloro-4-[metil(oxan-4-il)amino]piridina-2-carboxílico (73 mg, 0,21 mmol) em DMF (2 mL) foram adicionados DIPEA (56 yL, 0,31 mmol) e HATU (95 mg, 0,2 5 mmol) a 0 °C. A reação foi agitada a 0 °C durante 5 min, tempo após o qual foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di- hidropiridin-2-ona (89%, 52 mg, 0,31 mmol) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura reacional foi em seguida vertida sobre 50 mL de água, a fase aquosa foi extraída com AcOEt (3x50 mL) , lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , seca (Na2S04) e evaporada para dar um óleo. O produto foi em seguida purificado utilizando uma coluna Isolute com 5 g de sílica, eluindo com 0% a 4% de MeOH em DCM e evaporado para dar um sólido vítreo que foi triturado com éter dietílico, e filtrado e seco numa estufa de vácuo a 40 °C durante 24 h para proporcionar o composto em epígrafe como um pó branco (50 mg, 41%). LC-MS 99%, m/z = 483, 1/485, 0/486, 9, RMN de ΧΗ (500 MHz, CDC13) δ 10,94 (s.l., 1H) , 8,14 - 7,98 (m, 1H) , 6,83 (s, 1H) , 5,92 (s, 1H) , 4,55 (d, J = 6,1 Hz, 2H) , 4,15 - 3,94 (m, 2H) , 3, 93 - 3,70 (m, 1H) , 3,40 (t, J = 11,0 Hz, 2H), 2,78 (s, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 1,99 - 1,82 (m, 2H), 1,79 - 1,64 (m, 2H).
Composto 213: 5-(azetidin-3-il)-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2- di-hidropiridin-3-il)metil]-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-[(oxan-4- il)amino]benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-2-metil-5-bromobenzoato de metilo (4,06 g, 16,6 mmol) em DCE (60 mL) sob uma atmosfera de azoto foi adicionada oxan-4-ona (3,07 mL, 33,3 mmol), seguida de ácido acético (5,71 mL, 99.8 mmol) e a reação foi deixada agitar durante 5 min, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (10,6 g, 49.9 mmol). A reação foi agitada durante 3 h à temperatura ambiente após o que foi adicionada água destilada (50 mL) e a solução foi neutralizada com NaHC03 sólido. As fases foram separadas e, em seguida, a fase aquosa foi lavada com AcOEt (2x100 mL), os orgânicos combinados foram em seguida secos utilizando Na2S04, filtrados e evaporados. O resíduo foi purificado por FCC utilizando sílica e eluindo com um gradiente de 10% a 40% de AcOEt em heptano para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido esbranquiçado (3,88 g, 71%). LC-MS 100%, 2,10min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z=327,9/329,8, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,23 (d, J = 1,9 Hz, 1H) , 6,84 (d, J = 1,7 Hz, 1H) , 4,02 (dt, J = 11,7, 3,5 Hz, 2H) , 3,87 (s, 3H) , 3,65 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 3,59 - 3,45 (m, 3H) , 2,23 (s, 3H), 2,05 (d, J = 13,8 Hz, 2H), 1,51 (ddd, J = 24,1, 10,8, 4,2 Hz, 2H).
Passo 2: Síntese de 5-bromo-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-[ (oxan-4-il)amino]benzoato de metilo (2,0 g, 6,1 mmol) em DCE (10 mL) sob uma atmosfera de azoto foi adicionado acetaldeido (1,0 mL, 18 mmol), seguido de ácido acético (2,1 mL, 37 mmol) e a reação foi deixada agitar durante 5 min, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (6,6 g, 31 mmol) . A reação foi agitada durante 16 h à temperatura ambiente, tempo após o qual foram adicionados mais acetaldeido (1,0 mL, 22 mmol) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (3,0 g, 14 mmol) e a reação foi agitada durante mais 6 h, após o que foi adicionada água destilada (100 mL) e as fases foram separadas. A fase aquosa foi lavada com AcOEt (3x100 mL) , os orgânicos combinados foram em seguida secos utilizando Na2SC>4, filtrados e evaporados para proporcionar o composto em epigrafe como um óleo incolor (2,10 g, 93%) que foi adequado para utilização sem qualquer purificação adicional. LC-MS 96%, 2,38min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z=356,1/357,9, RMN de XH (500 MHz,
Clorofórmio-d) δ 7,70 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 2,0
Hz, 1H) , 3,95 (d, J = 11,3 Hz, 2H) , 3,88 (d, J = 9,1 Hz, 3H) , 3,32 (td, J = 11,5, 2,5 Hz, 2H) , 3,04 (q, J = 7,1 Hz, 2H) , 2, 98 - 2,87 (m, 1H) , 2,44 (s, 3H) , 1,77 - 1,55 (m, 4H), 0,86 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
Passo 3: Síntese de 3-{3-[etil(oxan-4-il)amino]-5- (metoxicarbonil)-4-metilfenil}azetidina-l-carboxilato de terc-butilo
A um balão seco foi adicionado zinco em pó (40 mg, 0,61 mmol) , seguida de DMA anidra (2 mL) e o vaso foi purgado com azoto enquanto se agitava vigorosamente e aquecia até 65 °C. Foram adicionados TMS-C1 (9 pL, 0,07 mmol) e 1,2- dibromoetano (6 pL, 0,07 mmol) e a reação foi agitada a 65 °C durante 30 min, seguida de adição gota a gota de N-Boc-3-iodoazetidina (133 mg, 0,47 mmol) como uma solução em DMA anidra (1 mL). A reação foi em seguida arrefecida até à temperatura ambiente e foi adicionado 5-bromo-3-[etil(oxan- 4-il)amino]-2-metilbenzoato de metilo (100 mg, 0,28 mmol) como uma solução em DMA anidra (2 mL). A solução resultante foi desgaseif içada com azoto durante 5 min, após o que foram adicionados Pd(dppf)CI2·DCM (7 mg, 0,01 mmol) e iodeto de cobre (I) (3 mg, 0,02 mmol) como sólidos. A reação foi aquecida a 80 °C durante 16 h e, em seguida, arrefecida até à temperatura ambiente seguida da adição de solução saturada de NH4C1 (50 mL) . A fase aquosa foi extraída com AcOEt (3x100 mL), e, em seguida, as fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2x50 mL) , secas com Na2SC>4, filtradas e evaporadas. O resíduo foi purificado sobre uma coluna Isolute de 5 g utilizando 10-30% de AcOEt em heptano como o eluente para proporcionar o composto em epigrafe como um óleo incolor (77 mg, 62%) . LC-MS 98%, 2,19min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 433,2, RMN de XH (500 MHz, CDC13) δ 7,49 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 7,16 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,31 (t, J = 8,7 Hz, 2H), 3,94 (dd, J = 14,4, 5,5 Hz, 4H) , 3,89 (s, 3H) , 3,77 - 3, 64 (m, 1H) , 3,31 (td, J =11,4, 2.7 Hz, 2H) , 3,06 (q, J = 7,0 Hz, 2H) , 2, 99 - 2,87 (m, 1H) , 2,46 (s, 3H) , 1,65 (ddd, J = 11,1, 8,6, 6,0 Hz, 4H) , 1,46 (s, 9H) , 0,85 (dd, J = 13,1, 6,1 Hz, 3H) .
Passo 4: Síntese de ácido 5-{l-[(terc- butoxi)carbonil]azetidin-3-il}-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metilbenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-{3-[etil(oxan-4-il)amino]-5-(metoxicarbonil)-4-metilfenil}azetidina-l-carboxilato de terc-butilo (78 mg, 0,18 mmol) em THF (2 mL) e MeOH (0,1 mL) foi adicionada solução de NaOH 2M (0,9 mL, 1.8 mmol) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h, seguido de aquecimento a 50 °C durante 22 h. A reação foi arrefecida até à temperatura ambiente e o solvente removido in vacuo após o que a solução aquosa foi ajustada a pH5 utilizando HC1 1M. O produto foi extraído para DCM (2x50 mL) , seco com Na2SC>4 e filtrado para proporcionar o composto em epigrafe como um óleo incolor (54 mg, 72%). LC-MS 100%, l,70min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 419,2, RMN de XH (500 MHz, MeOD) δ 7,77 (s, 1H) , 7,55 (s, 1H) , 4,36 (t, J = 8,2 Hz, 2H) , 3,90 (d, J = 27,0 Hz, 5H) , 3,71 (t, J = 6,5 Hz, 1H) , 3,36 (t, J = 11,3
Hz, 3H) , 2,55 (s, 3H) , 1,92 - 1,81 (m, 1H) , 1,64 (d, J = 55,8 Hz, 3H), 1,49 - 1,42 (m, 10H), 0,93 (s, 3H).
Passo 5: Síntese de 5-(azetidin-3-il)-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-{l-[(terc-butoxi)carbonil]azetidin-3-il}-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metilbenzoico (54 mg, 0,13 mmol) em DMF (2 mL) e a reação foi arrefecida utilizando um banho de gelo, seguido da adição de DIPEA (45 yL, 0,26 mmol) e HATU (59 mg, 0,15 mmol) ) . A reação foi agitada a 0 °C durante 5 min, tempo após o qual foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 24 mg, 0,14 mmol) e a reação foi aquecida à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura reacional foi em seguida vertida sobre 50 mL de água e a fase aquosa foi extraída com AcOEt (3x50 mL) , lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , seca (Na2S04) , filtrada e evaporada para dar um óleo. O produto foi em seguida purificado utilizando uma coluna Isolute com 5 g de sílica, eluindo com 0% a 2,5% de MeOH em DCM e evaporado para proporcionar 3-(3-{ [ (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]carbamoil}-5-[etil(oxan-4- il)amino]-4-metilfenil)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo como um óleo incolor (29 mg). LC-MS 90%, m/z=553,3.
Este material foi dissolvido em HC1 4M em solução em dioxano (3 mL) e agitado à temperatura ambiente durante 90 min, após o que o solvente foi evaporado até à secura e o composto purificado por HPLC preparativa para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco (11 mg, 8% nos 2 passos). LC-MS 97%, 2,17min (método de LC-MS de 7 minutos), m/z= 453,2, RMN de 1H (500 MHz, MeOD) δ 7,26 (s, 1H) , 7,18 (s, 1H) , 6,14 (s, 1H) , 4,48 (s, 2H) , 4,39 (s, 2H), 4,22 (s, 3H), 3,93 (d, J = 10,5 Hz, 2H) , 3,40 - 3,33 (m, 2H) , 3,29 - 2, 90 (m, 3H) , 2,40 (s, 3H) , 2,31 (s, 3H) , 2,26 (s, 3H) , 1,68 (d, J = 26,3 Hz, 4H) , 0,87 (s, 3H) .
Composto 245: 5-(azetidin-3-il)-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2- di-hidropiridin-3-il)metil]-2-metil-3-[metil(oxan-4-il)amino]benzam!da
Passo 1: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-[metil(oxan-4- il)amino]benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-[(oxan-4-il)amino]benzoato de metilo (1,20 g, 3,66 mmol) em DCE (10 mL) sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado paraformaldeido (659 mg, 21,9 mmol), seguido de ácido acético (1,26 mL, 21,9 mmol) e a reação foi deixada agitar durante 5 min, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,65 g, 21,9 mmol). A reação foi agitada durante 16 h à temperatura ambiente, tempo após o qual foram adicionados mais paraformaldeido (325 mg, 10,8 mmol) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,40 g, 11,3 mmol) e a reação foi agitada durante mais 18 h, após o que foi adicionada água destilada (30 mL) e foi adicionado NaHCCb sólido até a fase aquosa ter um pH 7 e as fases foram separadas, a fase aquosa foi lavada com AcOEt (3x50 mL), os orgânicos combinados foram em seguida lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secos utilizando Na2SC>4, filtrados e evaporados. O residuo em bruto foi purificado utilizando FCC sobre silica, eluindo com 0-10% de AcOEt em heptano para proporcionar o composto em epigrafe como um óleo incolor (728 mg, 52%). LC-MS 87%, m/z= 341,9/343,9, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,60 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 11,1 Hz, 2H) , 3,82 (s, 3H) , 3,27 (td, J = 11,5, 2,0 Hz, 2H) , 2, 94 - 2,79 (m, 1H) , 2,57 (s, 3H) , 2,36 (s, 3H) , 1,74 - 1,52 (m, 4H) .
Passo 2: Sintese de ácido 5-{l-[(terc- butoxi)carbonil]azetidin-3-il}-2-metil-3-[metil(oxan-4-il)amino]benzoico
A um balão seco foi adicionado zinco em pó (436 mg, 6, 67 mmol) e o balão foi aquecido utilizando uma pistola de calor durante alguns minutos. Em seguida, foi adicionada DMA anidra (20 mL) sob azoto, enquanto se agitava vigorosamente e aquecia até 65 °C. Foram adicionados TMS-C1 (102 pL, 0,8 mmol) e 1,2-dibromoetano (70 pL, 0,8 mmol) e a reação foi agitada a 65 °C durante 30 min, seguida de adição gota a gota de N-Boc-3-iodoazetidina (1,46 g, 5,16 mmol) como uma solução em DMA anidra (15 mL) . A reação foi em seguida arrefecida até à temperatura ambiente e foi adicionado 5-bromo-2-metil-3-[metil(oxan-4- il)amino]benzoato de metilo (1,06 g, 3,09 mmol) como uma solução em DMA anidra (15 mL) . A solução resultante foi desgaseifiçada com azoto durante 10 min após o que foram adicionados Pd(dppf)CI2.DCM (76 mg, 0,09 mmol) e iodeto de cobre (I) (35 mg, 0,19 mmol) como sólidos. A reação foi aquecida a 80 °C durante 90 min e, em seguida, arrefecida até à temperatura ambiente seguida da adição de água destilada (100 mL) e solução saturada de NH4C1 (10 mL) . A fase aquosa foi extraída com TBME (3x50 mL) e, em seguida, as fases orgânicas combinadas foram secas com Na2SC>4, filtradas e evaporadas. O resíduo foi purificado sobre uma coluna Isolute de 25 g utilizando 0%-40% de AcOEt em heptano como o eluente para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo castanho-pálido (507 mg). LC-MS 97%, m/z = 420,0. A uma solução, mantida sob agitação, de 3 — [ 3 — (metoxicarbonil)-4-metil-5-[metil(oxan-4- il)amino]fenil]azetidina-l-carboxilato de terc-butilo (85 mg, 0,2 mmol) em THF (2 mL) e MeOH (0,1 mL) foi adicionada solução de NaOH 2M (1,02 mL, 2,03 mmol) e a reação foi agitada a 50 °C durante 16 h, tempo após o qual foi adicionada solução de NaOH 4M (0,5 mL, 2,0 mmol) e a reação foi aquecida durante mais 24 h. A reação foi arrefecida até à temperatura ambiente e o solvente removido in vacuo após o que a solução aquosa foi ajustada a pH3
utilizando HC1 1M. 0 produto foi extraido para DCM
(2x50 mL), lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , seco com Na2S04 e filtrado para proporcionar o composto em epigrafe como um sólido esbranquiçado (47 mg, 21% nos dois passos) . LC-MS 95%, m/z = 405,l, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,66 (t, J = 7,0 Hz, 1H) , 7,19 (d, J = 1,3 Hz, 1H) , 4,34 (t, J = 8,7 Hz, 2H) , 3,98 (dd, J = 16,6, 10,2 Hz, 4H) , 3,79 - 3, 69 (m, 2H) , 3,35 (dd, J = 11,5, 10,0 Hz, 2H) , 2,97 (td, J = 10,8, 5,3 Hz, 1H) , 2,67 (s, 3H) , 2,55 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,74 (ddd, J = 15,5, 12,1, 4,3 Hz, 2H) , 1,66 (d, J = 11,1 Hz, 2H) , 1,48 (s, 9H) .
Passo 3: Síntese de 3-(3-{ [ (4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di- hidropiridin-3-il)metil]carbamoil}-4-metil-5-[metil(oxan-4-il)amino]fenil)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-{l-[(terc-butoxi)carbonil]azetidin-3-il}-2-metil-3-[metil(oxan-4-il) amino] benzoico (47 mg, 0,12 mmol) em DMF (2 mL) foram adicionados DIPEA (40 yL, 0,23 mmol) e HATU (53 mg, 0,14 mmol) a 0 °C. A reação foi agitada a 0 °C durante 5 min, tempo após o qual foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 22 mg, 0,13 mmol) e a reação foi aquecida à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura reacional foi em seguida vertida sobre água destilada (50 mL) e a fase aquosa foi extraída com DCM (3x50 mL), lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , seca (Na2SC>4) , filtrada e evaporada para dar um óleo. O produto foi em seguida purificado utilizando uma coluna Isolute com 5 g de sílica, eluindo com 0% a 5% de MeOH em DCM e evaporado para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo incolor (44 mg, 67%) . LC-MS 96%, m/z = 539, 4, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 11,68 (s, 1H) , 6,95 (t, J = 5,8 Hz, 1H) , 6,92 (d, J = 4,2 Hz, 2H) , 5,88 (s, 1H) , 4,47 (d, J = 5,8 Hz, 2H) , 4,20 (t, J = 8,7
Hz, 2H) , 3,90 (d, J = 11,2 Hz, 2H) , 3, 86 - 3,73 (m, 2H) ,
3, 62 -3,50 (m, 1H), 3,26 (t, J = 10,8 Hz, 2H) , 2,89 (ddd, J = 14,6, 10,8, 3,7 Hz, 1H) , 2,55 (s, 3H) , 2,33 (s, 3H) , 2,20 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H) , 1,75 - 1,47 (m, 4H) , 1,39 (d, J = 5,7 Hz, 9H).
Passo 4: Síntese de 5-(azetidin-3-il)-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-metil-3-[metil(oxan- 4-il)amino]benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3— (3—{ [ (4,6 — dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil]carbamoil}-4-metil-5-[metil(oxan-4-il)amino]fenil)azetidina-1-carboxilato de terc-butilo (29 mg, 1,29 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (1 mL) e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 90 min após o que o solvente foi evaporado e foi adicionado NaHCCq aquosa saturado até pH7-8. A fase aquosa foi extraída com uma mistura 1:1 de IPA:CHCl3 (2x50 mL) , e as fases orgânicas combinadas lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL) , secas com Na2SC>4, filtradas e evaporadas. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco (15 mg, 42%). LC-MS 100%, m/z= 439,3, RMN de (500 MHz, MeOD) δ 7,19 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 1,5 Hz, 1H) , 6.12 (s, 1H) , 4,46 (s, 2H) , 4,41 - 4,27 (m, 2H) , 4,26 - 4.13 (m, 3H), 3,93 (d, J = 11,4 Hz, 2H) , 3,36 (td, J =11,3, 3,3 Hz, 2H) , 3,06 (dq, J = 14,6, 5,0 Hz, 1H) , 2,65 (s, 3H) , 2,39 (s, 3H) , 2,26 (s, 3H) , 2,24 (s, 3H) , 1,75 - 1, 60 (m, 4H) .
Composto 269: N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-metil-3-[metil(oxan-4-il)amino]-5-(1-metilazetidin-3-il)benzamida
Passo 1: Síntese de 5-(azetidin-3-il)-2-metil-3- [metil(oxan-4-il)amino]benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3 —[3 — (metoxicarbonil)-4-metil-5-[metil(oxan-4- il)amino]fenil]azetidina-l-carboxilato de terc-butilo (400 mg, 0,96 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (1 mL) e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 45 min após o que o solvente foi evaporado até à secura e foi adicionado NaHCCq aquoso saturado até pH7-8. A fase aquosa foi extraída com DCM (3x30 mL) , lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL) , seca com MgS04, filtrada e evaporada para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo laranja (370 mg, 95%) . LC-MS 96%, m/z= 319,1, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,49 (d, J = 1,4 Hz, 1H) , 7,20 (d, J = 1,3 Hz, 1H) , 4,32 - 4,10 (m, 5H) , 3,98 (d, J = 11,0 Hz, 2H) , 3,90 (d, J = 8,4 Hz, 3H) , 3,34 (t, J = 10,8 Hz, 2H) , 2,99 (ddd, J = 14,7, 10,9, 3,8 Hz, 1H) , 2,65 (d, J = 8,3 Hz, 3H) , 2,51 - 2,41 (m, 3H) , 1,73 (ddd, J = 15,7, 12,1, 4,3 Hz, 2H), 1,64 (d, J = 11,2
Hz, 2H).
Passo 2: Síntese de 2-metil-3-[metil(oxan-4-il)amino]-5-(1-metilazetidin-3-il)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-(azetidin-3-il)-2-metil-3-[metil(oxan-4-il)amino]benzoato de metilo (320 mg, 1,01 mmol) em DCE (10 mL) sob uma atmosfera de azoto foi adicionado paraformaldeído (151 mg, 5,03 mmol), seguido de ácido acético (0,115 mL, 2,01 mmol) e a reação foi deixada agitar durante 5 min, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (852 mg, 4,02 mmol). A reação foi agitada durante 16 h à temperatura ambiente, tempo após o qual foram adicionados mais paraformaldeído (21 mg) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (98 mg), e a reação foi agitada durante mais 4 h, após o que foi adicionada água destilada (20 mL) e foi adicionado NaHCCb sólido até a fase aquosa ter um pH 7. As fases foram separadas, a fase aquosa foi lavada com DCM (3x20 mL) , as fases orgânicas combinadas foram em seguida lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secas utilizando MgSCq, filtradas e evaporadas para proporcionar o composto em epigrafe como um óleo (296 mg, 89%) . LC-MS 100%, m/z= 333,1, RMN de (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,42 (d, J = 1,4 Hz, 1H) , 7,09 (s, 1H) , 3,96 (d, J = 11,2 Hz, 2H) , 3, 92 - 3,82 (m, 5H) , 3,74 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 3,30 (dt, J = 22,2, 15,0 Hz, 4H) , 3, 00 - 2,89(m, 1H) , 2,62 (s, 3H) , 2,49 - 2,39 (m, 6H) , 1,75 - 1,59 (m, 4H) .
Passo 3: Síntese de N-[ (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-2-metil-3-[metil(oxan-4-il)amino]- 5-(l-metilazetidin-3-il)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 2-metil-3-[metil(oxan-4-il)amino]-5-(l-metilazetidin-3-il)benzoato de metilo (296 mg, 0,89 mmol) em THF (10 mL) e MeOH (1 mL) foi adicionada solução de NaOH 2M (4,5 mL, 8,9 mmol) e a reação foi agitada a 50 °C durante 16 h, tempo após o qual foi adicionada solução de NaOH 4M (1 mL, 4,5 mmol) e a reação foi aquecida durante mais 24 h. A reação foi arrefecida até à temperatura ambiente e o produto foi neutralizada com HC1 1M e evaporado até à secura, seguido de formação de azeótropo com tolueno para remover água residual. O ácido em bruto foi transferido para a etapa seguinte sem qualquer purificação. O residuo em bruto de ácido 2-metil-3-[metil(oxan-4-il)amino]-5-(l-metilazetidin-3-il)benzoico foi suspenso em DMF (10 mL) e a solução foi arrefecida
utilizando um banho de gelo, seguido da adição de DIPEA (433 yL, 2,49 mmol) e HATU (567 mg, 1,49 mmol) . A reação foi agitada a 0 °C durante 5 min, tempo após o qual foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 221 mg, 1,29 mmol) e a reação foi aquecida à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura reacional foi em seguida vertida sobre água destilada (50 mL) e a fase aquosa foi extraida com DCM (3x50 mL) , lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , seca (Na2S04) , filtrada e evaporada para dar um óleo. O produto foi em seguida purificado utilizando um método de HPLC preparativa (e evaporado até à secura, seguida de trituração com éter e filtração para proporcionar o composto em epigrafe como um sólido esbranquiçado (51 mg, 10%). LC-MS 91%, m/z=453,2, RMN de XH (500 MHz, MeOD) δ 7,14 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,09
(d, J = 1,7 Hz, 1H), 6,12 (s, 1H), 4,46 (s, 2H) , 4,41 (t, J = 9,2 Hz, 2H) , 4,22 (t, J = 9,3 Hz, 2H) , 4,14 (dd, J = 17,4, 8,5 Hz, 1H) , 3, 98 - 3, 89 (m, 2H) , 3,36 (td, J = 11,3, 3,4 Hz, 2H) , 3,06 (ddd, J = 14,6, 9,8, 4,9 Hz, 1H) , 2,97 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,73- 1,62 (m, 4H).
Composto 389: N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-5-[etil(oxan-4-il)amino]-4-metilpiridina-3-carboxamida
Passo 1: Síntese de 5-amino-4-metilpiridina-3-carboxilato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-amino-4-metilpiridina-3-carboxílico (0,94 g, 6,18 mmol) em MeOH (20 mL) a 0 °C, foi adicionado cloreto de tionilo gota a gota. A solução foi em seguida aquecida a 50 °C durante 3,5 h, foram adicionados mais 10 mL de MeOH e a reação aquecida a 50 °C durante 5 h, seguido de agitação à temperatura ambiente durante 64 h. O solvente foi em seguida evaporado sob pressão reduzida e foi adicionada solução saturada de NaHC03 até pH7-8. O produto foi extraído para AcOEt (2x50 mL) e os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secos utilizando Na2SC>4, filtrados e evaporados para proporcionar o composto em epígrafe como um pó esbranquiçado (824 mg, 80%) que foi adequado para ser utilizado na etapa seguinte sem qualquer purificação. LC-MS m/z=167,0, RMN de (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,52 (d, J = 34,2 Hz, 1H) , 8,16 (s, 1H) , 3,95 (d, J = 4,8 Hz, 3H) , 3,78 (s, 2H), 2,42 (s, 3H).
Passo 2: Síntese de 4-metil-5-[(oxan-4-il)amino]piridina-3-carboxilato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-amino-4-metilpiridina-3-carboxilato de metilo (805 mg, 4,84 mmol) em DCE (20 mL) sob uma atmosfera de azoto foi adicionada oxan-4-ona (537 yL, 5,80 mmol), seguida de ácido trifluoroacético (742 yL, 9,69 mmol) e a reação foi deixada agitar durante 5 min, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,54 g, 7,27 mmol). A reação foi agitada durante 16 h à temperatura ambiente, tempo após o qual foram adicionados mais oxan-4-ona (100 yL) e
triacetoxiboro-hidreto de sódio (300 mg) e a reação agitada durante mais 6 h. Foi adicionada água destilada (20 mL) e foi adicionado NaHCCy sólido até pH8. As fases foram separadas e, em seguida, a fase aquosa foi lavada com AcOEt (2x50 mL), os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), secos utilizando Na2SC>4, filtrados e evaporados para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido amarelo-pálido (1,11 g, 88%) que foi utilizado na etapa seguinte sem qualquer purificação adicional. LC-MS 96%, m/z=251,0, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,40 (s, 1H) , 8,10 (s, 1H) , 4,03 (dt, J = 11,9, 3,5 Hz, 2H) , 3,92 (s, 3H) , 3,68 - 3,58 (m, 1H), 3,54 (tt, J = 8,1, 4,1 Hz, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,12 - 2,05 (m, 2H), 1,53 (ddd, J = 23,8, 11,0,4,3 Hz, 2H) .
Passo 3: Síntese de 5-[etil (oxan-4-il)amino]-4- metilpiridina-3-carboxilato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 4-metil-5-[(oxan-4-il)amino]piridina-3-carboxilato de metilo (600 mg, 2,40 mmol) em DCE (20 mL) sob uma atmosfera de azoto foi adicionado acetaldeído (1,07 mL, 19,2 mmol), seguida de ácido trifluoroacético (367 yL, 4,79 mmol) e a reação foi deixada agitar durante 5 min, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (3,05 g, 14,4 mmol). A reação foi agitada durante 16 h à temperatura ambiente, tempo após o qual foram adicionados mais acetaldeído (500 pL) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,0 g) e a reação agitada durante mais 16 h. Foi adicionada água destilada (20 mL) e foi adicionado NaHCCp sólido até pH8. As fases foram separadas e, em seguida, a fase aquosa foi lavada com DCM (2x50 mL) , os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secos utilizando Na2SC>4, filtrados e evaporados. O resíduo foi purificado utilizando uma coluna Isolute de 25 g de sílica utilizando um gradiente de 0% a 50% de AcOEt em heptano para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo amarelo-pálido (418 mg, 60%). LC-MS 96%, m/z=279,l, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,76 (s, 1H), 8,44 (s, 1H) , 3,97 (d, J = 11,0 Hz, 2H) , 3,93 (s, 3H) , 3,33 (td, J = 11,6, 2,1 Hz, 2H) , 3,13 (q, J = 7,1 Hz, 2H) , 3,04 (tt, J = 10,9, 4,0 Hz, 1H) , 2,54 (s, 3H) , 1,76 - 1,59 (m, 4H) , 0,89 (t, J = 7,1 Hz, 3H) .
Passo 4: Síntese de ácido 5-[etil(oxan-4-il)amino]-4-metilpiridina-3-carboxílico
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-[etil(oxan-4-il)amino]-4-metilpiridina-3-carboxilato de metilo (415 mg, 1,49 mmol) em THF (7 mL) e MeOH (3 mL) foi adicionada solução de NaOH 4M (932 yL, 3,73 mmol) . A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 4,5 h, após o que a solução foi neutralizada via a adição de HC1 1M e o solvente foi removido sob pressão reduzida, seguido da adição de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) . A fase aquosa foi extraída com IPA:CHC13 1:1 (3X50
mL) , os orgânicos combinados lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL) , secos utilizando Na2SC>4, filtrados e evaporados para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido esbranquiçado (305 mg, 77%) que foi adequado para ser utilizado na etapa seguinte sem qualquer purificação adicional. LC-MS 99%, m/z=265,l, RMN de (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,57 (s, 1H), 8,46 (s, 1H) , 3,82 (d, J = 11,6 Hz, 2H) , 3,25 (t, J = 10,9 Hz, 2H) , 3,16 - 2,99 (m, 3H), 2,45 (s, 3H), 1,64 (d, J = 11,0 Hz, 2H), 1,48 (dt, J =11,9, 5,7 Hz, 2H) , 0,81 (t, J = 7,0 Hz, 3H) .
Passo 5: Síntese de N-[ (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-5-[etil(oxan-4-il)amino]-4-metilpiridina-3-carboxamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-[etil (oxan- 4-il)amino]-4-metilpiridina-3-carboxílico (300 mg, 1,13 mmol) em DMF (10 mL) foi adicionada DIPEA (395 yL, 2,27 mmol) e HATU (518 mg, 1,36 mmol) . A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 min, tempo após o qual foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l, 2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 214 mg, 1,25 mmol) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura reacional foi em seguida vertida sobre 500 mL de água e o produto foi extraído para AcOEt (3x200 mL) , a fase orgânica combinada foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2x100 mL) , seca (Na2SC>4) e evaporada. O produto em bruto foi em seguida purificado utilizando HPLC preparativa e o sólido resultante foi triturado com éter dietílico e isolado por filtração para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido esbranquiçado (115 mg, 25%). LC-MS 100%, m/z=399,2, RMN de XH (500 MHz, Acetona) δ 10,97 (s, 1H) , 8,32 (s, 1H) , 8,22 (s, 1H) , 7,73 (s, 1H) , 5,92 (s, 1H), 4,41 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 3,85 (dd, J = 11,3, 3,0 Hz, 2H) , 3,28 (td, J = 11,7, 1,9 Hz, 2H) , 3,15 (q, J = 7,1 Hz, 2H) , 3, 09 (ddd, J = 11,1, 7,2, 3,9 Hz, 1H) , 2,32 (d, J = 1,5 Hz, 6H) , 2,23 (s, 3H) , 1,69 (dd, J = 12,6, 1,7 Hz, 2H) , 1,55 (ddd, J = 24,3, 12,2, 4,4 Hz, 2H) , 0,85 (t, J = 7,1
Hz, 3H).
Composto 322: N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metil-5-(1-metilazetidin-3-il)benzamida
Passo 1: Síntese de 5-bromo-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metilbenzoato de metilo (622 mg, 1,90 mmol) em DCE (10 mL) sob uma atmosfera de azoto foi adicionado acetaldeído (318 yL, 5,69 mmol), seguido de ácido acético (650 pL, 11,4 mmol) e a reação foi deixada agitar durante 5 min, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,00 g, 9,48 mmol). A reação foi agitada durante 16 h à temperatura ambiente, tempo após o qual foram adicionados mais acetaldeído (300 pL) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,2 g) . A reação foi agitada durante mais 6 h, após o que foi adicionada água destilada (100 mL) e foi adicionado NaHCCq sólido até a fase aquosa ter um pH 7. As fases foram separadas, a fase aquosa foi lavada com DCM (2x50 mL) , as fases orgânicas combinadas foram em seguida lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , secas utilizando Na2SC>4, filtradas e evaporadas. O resíduo em bruto foi purificado utilizando FCC sobre sílica, eluindo com 0-5% de
AcOEt em heptano para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo amarelo-pálido (47 0 mg, 70%) . LC-MS 100m/z = 356,0/357,9. RMN de (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,64 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,29 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 3,89 (d, J = 11,3 Hz, 2H) , 3,83 (s, 3H) , 3,26 (td, J = 11,5, 2,6 Hz, 2H) , 2,98 (q, J = 7,1 Hz, 2H) , 2,86 (dd, J = 9,7, 5,2 Hz, 1H) , 2,38 (s, 3H) , 1, 67 - 1,52 (m, 4H) , 0,80 (t, J = 7,1
Hz, 3H).
Passo 2: Síntese de 5-(azetidin-3-il)-3-[etil(oxan-4- il)amino]-2-metilbenzoato de metilo
A um balão seco foi adicionado zinco em pó (186 mg, 2,85 mmol) e o balão foi aquecido utilizando uma pistola de calor durante alguns minutos. Em seguida, foi adicionada DMA anidra (15 mL) sob azoto, enquanto se agitava vigorosamente e aquecia até 65 °C. Foram adicionados TMSC1 (44 pL, 0,34 mmol) e 1,2-dibromoetano (30 pL, 0,34 mmol) e a reação foi agitada a 65 °C durante 30 min, seguido de adição gota a gota de N-Boc-3-iodoazetidina (624 mg, 2,20 mmol) como uma solução em DMA anidra (5 mL) . A reação foi em seguida arrefecida até à temperatura ambiente, foi adicionado 5-bromo-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metilbenzoato de metilo (470 mg, 1,32 mmol) como uma solução em DMA anidra (10 mL). A solução resultante foi desgaseifiçada com azoto durante 10 min, após o que foram adicionados Pd(dppf)CI2·DCM (32 mg, 0,04 mmol) e iodeto de cobre (I) (15 mg, 0,08 mmol) como sólidos. A reação foi aquecida até 80 °C durante 60 min e, em seguida, arrefecida até à temperatura ambiente, seguida da adição de água destilada (50 mL) e solução saturada de NH4CI (10 mL). A fase aquosa foi extraida com AcOEt (3x50 mL) e, em seguida, os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , secos com Na2S04, filtrados e evaporados até à secura, seguido de formação de azeótropo com heptano para remover qualquer DMA residual. O residuo foi purificado sobre uma coluna Isolute de 10 g utilizando 0%-25% de AcOEt em heptano como o eluente para proporcionar o composto em epigrafe como um óleo castanho-pálido (565 mg) . LC-MS 100%, 2,12min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 433,2. A este óleo foi adicionado DCM (4 mL) , seguido de TFA (1 mL) e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h, após o que o solvente foi evaporado e foi adicionado NaHCCb aquoso saturado até pH7-8. A fase aquosa foi extraida com DCM (3 x 30 mL) , lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL), seca com MgS04, filtrada e evaporada para proporcionar o composto em epigrafe como um óleo amarelo (440 mg) . LC-MS 100%, m/z= 333,1.
Passo 3: Sintese de N-[ (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metil- 5-(l-metilazetidin-3-il)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-(azetidin-3-il)- 3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metilbenzoato de metilo (440 mg, 1,32 mmol) em DCE (10 mL) sob uma atmosfera de azoto foi adicionado paraformaldeido (278 mg, 9,27 mmol) , seguido de ácido acético (0,15 mL, 2,65 mmol) e a reação foi deixada agitar durante 5 min, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,40 g, 6,62 mmol). A reação foi agitada durante 16 h à temperatura ambiente, tempo após o qual foi adicionada água destilada (20 mL) e foi adicionado NaHCCu sólido até a fase aquosa ter um pH 8 e as fases foram separadas, a fase aquosa foi lavada com DCM (3x30 mL) , os orgânicos combinados foram em seguida lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secos utilizando Na2SC>4, filtrados e evaporados. O residuo foi purificado por cromatografia sobre uma Isolute de 10 g (eluição com 0% a 5% de MeOH em DCM) e evaporado, seguido de purificação sobre alumina (eluição com 0% a 1 % de MeOH em DCM) para proporcionar o composto em epigrafe como um óleo amarelo que foi utilizado diretamente na etapa seguinte da sintese. LC-MS 77%, lm/z= 347,1. 3-[Etil(oxan-4-il)amino]-2-metil-5-(l-metilazetidin-3-il)benzoato de metilo (103 mg, 0,30 mmol) foi dissolvido em THF (20 mL) e foram adicionados MeOH (5 mL) e NaOH 2M (1,49 mL, 2,97 mmol). A reação foi agitada a 50 °C durante 16 h, arrefecida, acidificada até pH4 utilizando HC1 6M e o solvente evaporado sob pressão reduzida, e o residuo seco numa estufa de vácuo a 40 °C durante 5 h para proporcionar o ácido em bruto. Ao ácido em DMF (1 0 mL) foram adicionados HATU (170 mg, 0,45 mmol) e DIPEA (130 yL, 0,74 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 5 min e, em seguida, foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 66 mg, 0,39 mmol). A reação foi agitada durante 16 h, após o que mais HATU (80 mg) e 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona (30 mg) e a mistura agitada durante mais 5 h. A mistura reacional foi vertida sobre água destilada (50 mL) , extraida com AcOEt (3x50 mL) , lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2x20 mL) , seca com Na2SC>4, filtrada e evaporada. O resíduo em bruto foi purificado utilizando HPLC preparativa e evaporado para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido esbranquiçado (28 mg, 5% nos três passos). LC-MS 95%, m/z=467,3, RMN de XH (500 MHz, Acetona-d6) δ 10,73 (s, 1H) , 7,61 (s, 1H) , 7,30 (s, 1H) , 7,26 (s, 1H) , 5,97 (s, 1H) , 4,74 (t, J = 9,9 Hz, 2H) , 4,60 (t, J = 9,6 Hz, 2H) , 4,38 (q, J = 6,2 Hz, 3H) , 3,83 (d, J = 11,6 Hz, 2H) , 3,27 (s, 3H),3,23 (t, J = 11,6 Hz, 2H) , 3,10 (dd, J = 14,1, 7,0 Hz, 2H) , 3, 04 - 2, 97 (m, 1H) , 2,34 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 1,67 (d, J = 11,1
Hz, 2H) , 1,56 (td, J = 11,8, 4,1 Hz, 2H) , 0,83 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
Composto 332: 3-[benzil(metil)amino]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo- l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-(trifluorometil)benzamida
Passo 1: Síntese de N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-3-fluoro-2-(trifluorometil)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 3-fluoro-2-(trifluorometil)benzoico (1,00 g, 4,81 mmol) em DMF (25 mL) arrefecida num banho de gelo foi adicionado HATU (2,19 g, 5,77 mmol) e DIPEA (1,67 mL, 9,61 mmol). A reação foi agitada a 0 °C durante 5 min, tempo após o qual foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin- 2- ona (89%, 904 mg, 5,29 mmol) e a reação foi aquecida à temperatura ambiente durante 4 h. A mistura reacional foi em seguida vertida sobre água destilada (300 mL) e agitada durante 1 h, tempo após o qual o precipitado foi recolhido através de filtração a vácuo utilizando papel de microfibra. O sólido resultante foi triturado utilizando éter dietílico e filtrado para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido castanho-pálido (1,19 g, 72%). LC-MS 100%, m/z = 343, 0, RMN de XH (500 MHz, DMSO) δ 11,48 (s, 1H), 8,54 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 7,71 (dd, J = 13,3, 8,0 Hz, 1H) , 7,56 - 7,45 (m, 1H) , 7,20 (d, J = 7,6 Hz, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,25 (d, J = 4,9 Hz, 2H) , 2,18 (s, 3H) , 2,11 (s, 3H) .
Passo 2: Síntese de 3-(benzilamino)-N-[(4,6-dimetil-2-oxo- l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2- (trifluorometil)benzamida
Uma suspensão de N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin- 3- il) metil]-3-fluoro-2-(trifluorometil)benzamida (0,80 g, 2,34 mmol) em benzilamina (2,6 mL, 23,4 mmol) foi aquecida num reator de micro-ondas a 210 °C durante 4 h. Depois de arrefecer foi adicionada água destilada (20 mL) à suspensão espessa e foi adicionado HC1 2M até a suspensão estar a pH5, e a mistura foi extraída utilizando AcOEt (3x50 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com solução de HC1 pH5 (2x50 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL) , secos utilizando Na2S04 filtrados e evaporados. O óleo resultante foi purificado utilizando uma coluna Isolute de sílica de 50 g, eluindo com um gradiente de 0% a 5% de MeOH em DCM para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido esbranquiçado (313 mg, 29%) . LC-MS 94%, m/z = 430,2, RMN de 1H (500 MHz, Acetona-d6) δ 7,41 - 7,16 (m, 8H) , 6,69 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6,50 (d, J = 7,4 Hz, 1H) , 5,87 (s, 1H) , 5,84 (s, 1H), 4,53 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 4,35 (d, J = 5,6 Hz, 2H) , 2,28, (d, J = 4,0 Hz, 3H) , 2,21 (s, 3H).
Passo 3: Síntese de 3-[benzil(metil)amino]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-(trifluorometil)benzamida
A uma solução de 3-(benzilamino)-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-(trifluorometil)benzamida (100 mg, 0,23 mmol) em DCE (5 mL) foi adicionado ácido acético (27 pL, 0,47 mmol), seguido de paraformaldeído (7 mg, 0,23 mmol), após o que a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 min. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (74 mg, 0,35 mmol) numa porção e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. Foi realizado tratamento adicional com acetaldeído (35 mg), triacetoxiboro-hidreto de sódio (250 mg) e AcOH (100 mL). Após mais 24 h, foram adicionados acetaldeído (445 mg) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (250 mg) e a reação foi agitada durante mais 3 h. Foi em seguida adicionada água (20 mL) à mistura reacional e a fase aquosa foi neutralizada pela adição de NaHCCp em porções. A fase aquosa foi extraida com DCM (2x50 mL) , em seguida as fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas (Na2S04) e evaporadas. O produto foi purificado utilizando FCC sobre uma Isolute de 5 g, eluindo com 0-5% de MeOH em DCM para proporcionar o composto em epigrafe como um pó esbranquiçado (24 mg, 22%) . LC-MS 95%, 4,12min (método de LC-MS de 7 minutos), m/z = 444,2, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 11,10 (s.l., 1H) , 7,44 (t, J = 7,8 Hz, 1H) , 7,38 - 7,29 (m, 5H) , 7,27 - 7,23 (m, 1H) , 7,12 (d, J = 7,4 Hz, 1H) , 7,04 (t, J = 5,6 Hz, 1H) , 5,92 (s, 1H) , 4,52 (d, J = 5,9 Hz, 2H) , 4,09 (s, 2H) , 2,60 (s, 3H) , 2,38 (s, 3H), 2,19 (s, 3H).
Composto 333: 3-[benzil(etil)amino]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-(trifluorometil)benzamida
A uma solução de 3-(benzilamino)-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-(trifluorometil)benzamida (198 mg, 0,46 mmol) em DCE (5 mL) foi adicionado ácido acético (80 pL, 1,38 mmol), seguido de acetaldeido (129 pL, 2,31 mmol), após o que a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 min. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (490 mg, 2,31 mmol) numa porção e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. Foram realizados tratamentos adicionais de 4xl30uL com acetaldeido e 4x0,5 g de triacetoxiboro-hidreto de sódio ao longo de 3 dias para completar a reação. Foi em seguida adicionada água (100 mL) à mistura reacional e a fase aquosa foi neutralizada pela adição de NaHCCp em porções. A fase aquosa foi extraida com DCM (2 x 50 mL), em seguida as fases orgânicas combinadas lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas (Na2SC>4) e evaporadas. O produto foi purificado utilizando FCC sobre uma Isolute de 5 g, eluindo com 0-5% de MeOH em DCM, seguido de purificação através de RP-HPLC para dar o composto em epigrafe como um pó esbranquiçado (76 mg, 34%). LC-MS 100%, m/z=458,3, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 11,70 (s, 1H) , 7,42 (t, J = 7,8 Hz, 1H) , 7,36 - 7,27 (m, 5H) , 7,24 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 5,4 Hz, 1H) , 5,90 (s, 1H) , 4,50 (d, J = 5,7 Hz, 2H) , 4,05 (s, 2H) , 2,96 (q, J = 7,1 Hz, 2H) , 2,36 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 0,89 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
Composto 334: 3-[benzil(etil)amino]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-metilbenzamida
Passo 1: Sintese de 3-(benzilamino)-2-metilbenzoato de etilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-2-metilbenzoato de etilo (1,00 g, 5,58 mmol) em DCE (20 mL) foi adicionado benzaldeído (569 yL, 5,58 mmol), seguido de ácido acético (0,64 mL, 11,2 mmol). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante lhe, em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,77 g, 8,37 mmol) e a reação agitada durante 2 h. Foi adicionada água destilada (20 mL) e foi adicionado NaHCCb sólido até a fase aquosa ter um pH 7 e as fases foram separadas. A fase aquosa foi lavada com DCM (2 x5 0 mL) , os orgânicos combinados foram em seguida lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), secos utilizando Na2SC>4, filtrados e evaporados para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo amarelo (1,52 g, 96%) que foi utilizado na etapa seguinte sem qualquer purificação adicional. LC-MS 95%, m/z=270,0, RMN de (500 MHz,
Clorofórmio-d) δ 7,42 - 7,32 (m, 4H), 7,32 - 7,28 (m, 1H), 7,17 - 7,06 (m, 2H) , 6,73 (dd, J = 7,8, 1,1 Hz, 1H) , 4,40 (s, 2H) , 4,36 (q, J = 14,3, 5,3 Hz, 2H) , 4,08 (s.l., 1H) , 2,35, (s, 3H), 1,39 (t, 3H).
Passo 2: Síntese de 3-[benzil(etil)amino]-2-metilbenzoato de etilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-(benzilamino)-2-metilbenzoato de etilo (396 mg, 1,47 mmol) em DCE (10 mL) foi adicionado acetaldeído (164 yL, 2,94 mmol), seguido de ácido acético (0,17 mL, 2,94 mmol). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 min, e, em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,62 g, 2,94 mmol) e a reação agitada durante 16 h. Foi adicionada água destilada (30 mL) e foi em seguida adicionado NaHCCg sólido até a fase aquosa ter um pH 7, as fases foram separadas, a fase aquosa foi lavada com DCM (2x50 mL) , os orgânicos combinados foram em seguida lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), secos utilizando Na2SC>4, filtrados e evaporados. O resíduo resultante foi em seguida purificado utilizando uma coluna Isolute com 25 g de sílica, eluindo utilizando um gradiente de 0% a 5% de AcOEt em heptano para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo incolor (372 mg, 81%). LC-MS 94%, m/z= 298,1, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,48 (dd, J = 7,5, 1,3 Hz, 1H) , 7,29 - 7, 08 (m, 8H) , 4,32 (q, J = 7,1 Hz, 2H) , 4,05 (s, 2H) , 2,92 (q, J = 7,1 Hz, 2H) , 2,56 (s, 3H) , 1,35 (t, J = 7,1 Hz, 3H) , 0,92 (t, J = 7,1 Hz, 3H) .
Passo 3: Síntese de ácido 3-[benzil(etil)amino]-2- metilbenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-[benzil(etil)amino]-2-metilbenzoato de etilo (370 mg, 1,24 mmol) em THF (20 mL) e MeOH (5 mL) foi adicionado NaOH 2M (3,11 mL, 6,22 mmol) e a reação foi agitada a 50 °C durante 16 h. A reação foi arrefecida até à temperatura ambiente e o solvente removido in vácuo, após o que a solução aquosa foi ajustada a pHl utilizando HC1 1M. 0 produto foi extraido para DCM (3 x 50 mL) , lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , seco com Na2S04, concentrado e filtrado para proporcionar o composto em epigrafe como um óleo laranja (296 mg, 80%) que foi utilizado na etapa seguinte sem qualquer purificação adicional. LC-MS 91%, m/z=270,0, RMN de ΧΗ (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,73 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,34 - 7,30 (m, 4H) , 7,23 (dt, J = 15,4, 6,9 Hz, 3H) , 4,12 (d, J = 13,5 Hz, 2H) , 3, 04 - 2, 94 (m, 2H) , 2,69 (s, 3H) , 0,99 (t, J =7,0 Hz, 3H) .
Passo 4: Sintese de 3-[benzil(etil)amino]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido (3-[benzil(etil)amino]-2-metilbenzoico (91% pureza, 296 mg, 1,0 mmol) em DMF (10 mL) foi adicionada DIPEA (440 pL, 2,5 mmol) e HATU (570 mg, 1,5 mmol) . A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 min, tempo após o qual foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l, 2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 222 mg, 1,3 mmol) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura reacional foi em seguida vertida sobre 150 mL de água e agitada durante 20 min. O produto foi filtrado, seco ao ar sob vácuo e, em seguida, purificado utilizando RP-HPLC. O sólido resultante foi triturado com éter dietilico e isolado por filtração para proporcionar o composto em epigrafe como um sólido esbranquiçado (86 mg, 21 %) . LC-MS 99%, m/z = 404,3, RMN de (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 12,04 (s, 1H) , 7,33 - 7,23 (m, 4H) , 7,21 (t, J = 6,8 Hz, 1H) , 7,14 - 7,05 (m, 3H) , 7,05 - 6, 99 (m, 1H) , 5,92 (s, 1H) , 4,53 (d, J = 5,9 Hz, 2H) , 4,06 (s,2H), 2,92 (q, J= 6,9 Hz, 2H) , 2,41 (s, 3H) , 2,39 (s, 3H) , 2,16 (s, 3H) , 0,92 (t, J= 7,0 Hz, 3H) .
Composto 191: 2-bromo-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida
Passo 1: Sintese de 2-bromo-5-cloro-3-nitrobenzoato de me tilo
Uma solução de 2-bromo-5-clorobenzoato de metilo (10 g, 40 mmol) em H2SO4 concentrado 48 mL, 910 mmol) foi arrefecida até -5 °C num banho de acetona/gelo em ar. Foi adicionada uma mistura de ácido nitrico concentrado (3,35 mL, 52 mmol) e H2SO4 concentrado (3,4 mL, 64 mmol) gota a gota à mistura reacional, a 0 °C ao longo de 30 minutos. A mistura reacional amarela foi agitada a 0 °C durante 1,5 horas, antes de ser vertida sobre gelo. Foi adicionado AcOEt (150 mL) e as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada com água desionizada (3 x 50 mL), seguida de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL). A fase orgânica foi seca sobre MgS04, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para dar 12,0 g (60%) de material do composto em epigrafe como um óleo amarelo-pálido que solidificou em repouso. Este material continha 40% do isómero 6-nitro. Este material foi utilizado sem mais purificação. LC-MS 91%, m/z= sem ionização, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,86 (1 H, d, J=2,52 Hz), 7,77 (1 H, d, J=2,52 Hz), 3,99 (3 H, s) .
Passo 2: Sintese de 3-amino-2-bromo-5-clorobenzoato de me tilo
A uma solução de 2-bromo-5-cloro-3-nitrobenzoato de metilo (4,0 g, 14 mmol) em metanol (130 mL) à temperatura ambiente foi adicionado cloreto de amónio (7,13 g, 136 mmol), seguida de água desionizada (65 mL). A mistura foi aquecida até 70 °C ao ar, antes da adição de ferro (4,55 g, 81,5 mmol) . A reação foi agitada a 70 °C durante 3 horas, deixada arrefecer até à temperatura ambiente e filtrada através de Kieselgel. A almofada de filtração foi lavada com MeOH (65 mL) e o filtrado concentrado sob pressão reduzida. O residuo foi dissolvido em NaHCCb saturado (50 mL) e AcOEt (100 mL). As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com NaHCC>3(aq) saturado (3 x 50 mL) , antes de ser seca sobre MgSCg, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O residuo foi purificado por FCC (50 g de silica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes;
Heptano: AcOEt 95:5 até Heptano: AcOEt 7:3) para dar 1,92 g (48%) do composto em epígrafe como um óleo incolor. LC-MS 92%, m/z=268,8/265,8/267,6, RMN de (500 MHz,
Clorof órmio-d) δ 7,08 (1 H, d, J= 2,36 Hz), 6,86 (1 H, d, J= 2,36 Hz), 4,34 - 4,49 (2 H, m) , 3,93 (3 H, s).
Passo 3: Síntese de 2-bromo-5-cloro-3-(oxan-4- ilamino)benzoato de metilo
A uma solução de 3-amino-2-bromo-5-clorobenzoato de metilo (1,0 g, 3,8 mmol) em 1,2-dicloroetano (15 mL) à temperatura ambiente sob azoto foi adicionada oxan-4-ona (0,7 mL, 7,6 mmol), seguida de ácido acético (1,3 mL, 23 mmol). Esta solução foi agitada durante 5 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,4 g, 11 mmol) à temperatura ambiente. Após 21 h, foi adicionada mais oxan- 4-ona (0,7 mL, 7,6 mmol) à mistura reacional, sob agitação durante 10 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,4 g, 11 mmol). Depois de agitar durante 20 h, foi adicionada água desionizada (30 mL) e a mistura foi neutralizada com NaHCCL sólido. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 30 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (25 g de sílica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:AcOEt 9:1 até Heptano: AcOEt 8:2) para dar 903 mg (68%) do composto em epígrafe como um sólido branco. LC-MS 92%, 2,11 min (método de LC-MS de 3 minutos), m/z=348,2/350,2/351,9, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 6,94 - 7,07 (1 H, m), 6,70 (1 H, d, J= 2,36 Hz), 4,72 (1 H, d, J= 7,57 Hz), 3,96 - 4,15 (2 H, m) , 3, 87 - 3, 96 (3 H, m) , 3,40 - 3, 67 (3 H, m) , 2,05 (2 H, d, J= 13, 0 8 Hz), 1,49 - 1, 69 (2 H, m) .
Passo 4: Síntese de 2-bromo-5-cloro-3-[etil(oxan-4- il)amino]benzoato de metilo
A uma solução de 2-bromo-5-cloro-3-(oxan-4-ilamino)benzoato de metilo (300 mg, 0,86 mmol) em 1,2-dicloroetano (3 mL) à temperatura ambiente sob azoto foi adicionado acetaldeído (96 pL, 1,7 mmol), seguido de ácido acético (0,3 mL, 5,16 mmol). Esta solução foi agitada durante 5 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,55 g, 2,6 mmol) à temperatura ambiente, com monitorização da reação por LCMS. Após 22 h, foi adicionado mais acetaldeído (96 pL, 1,7 mmol) à mistura reacional e esta foi agitada durante 10 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,55 g, 2,6 mmol). Após 3 dias, a mistura reacional foi diluída com 1,2-dicloroetano (5 mL) . Foi adicionado acetaldeído (962 pL, 17,2 mmol) à mistura reacional e esta foi agitada durante 10 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,82 g, 8,6 mmol) . Após 15 h, foi adicionado mais acetaldeído (960 pL, 17,2 mmol) à mistura reacional e esta foi agitada durante 10 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,82 g, 8,6 mmol). A mistura reacional foi em seguida agitada à temperatura ambiente durante mais 22 horas, antes de ter sido adicionada água desionizada (25 mL) e a mistura foi neutralizada com NaHCCp sólido. Foi
adicionado AcOEt (25 mL) e as fases foram separadas. A camada aquosa foi então extraída com AcOEt (2 x 25 mL) e os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgSCq, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo
foi purificado por FCC (10 g de sílica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:AcOEt 99:1 até Heptano:AcOEt 8:2) para dar 122 mg (38%) do composto em epígrafe como um óleo incolor. LC-MS 85%, m/z=376,3/378,2/379,9, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,31 (d, J= 2,5 Hz, 1H) , 7,18 (d, J= 2,4 Hz, 1H) , 3,98 (dd, J= 8,7, 5,5 Hz, 2H) , 3,94 (s, 3H) , 3,35 (td, J = 11,6, 5,5 Hz, 2H) , 3,19 (t, J= 7,1 Hz, 1H) , 3,12 (q, J= 7,1 Hz, 2H) , 1,75 (td, J= 10,1, 8,8, 3,9
Hz, 4H) , 0,92 (t, J= 7,1 Hz, 3H) .
Passo 5: Síntese de ácido 2-bromo-5-cloro-3-[etil(oxan-4-il)amino]benzoico
A uma solução de 2-bromo-5-cloro-3-[etil(oxan-4-il)amino]benzoato de metilo (122 mg, 0,32 mmol) em tetra-hidrofurano (3 mL) foi adicionado NaOH 4M (3,2 mL) . A mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 20 horas. A mistura reacional foi acidificada até pH 2-3 com HC1 6M e extraída com DCM (3 x 100 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e
concentrados sob pressão reduzida para dar 109 mg (93%, 83% de rendimentos corrigidos) de ácido 2-bromo-5-cloro-3-[etil(oxan-4-il)amino]benzoico como uma espuma amarelo-pálida. LC-MS 89%, m/z = 361, 9/364,2/365, 8, RMN de 1E (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,50 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 2,4 Hz, 1H) , 4,00 (d, J = 11,5 Hz, 2H) , 3,49 - 3,27 (m, 2Η) , 3,21 (t, J = 7,4 Hz, 1H) , 3,14 (q, J = 7,0 Hz, 2H) , 1,78 (dd, J= 7,4, 3,4 Hz, 4H) , 0,93 (t, J= 7,0 Hz, 3H) .
Passo 6: Síntese de 2-bromo-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo- I, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida
A uma solução de ácido 2-bromo-5-cloro-3-[etil(oxan-4-il) amino] benzoico (109 mg, 0,3 mmol) em DMF (3 mL) à temperatura ambiente sob azoto foi adicionado PyBOP (187 mg, 0,36 mmol), seguido de N-etil-N-(propan-2- il)propan-2-amina (78 yL, 0,45 mmol) e 3-(aminometil)-4,6-dimetil-1,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 56 mg, 0,33 mmol).
Depois de agitar durante 1 hora à temperatura ambiente, foi adicionado AcOEt (30 mL) à mistura reacional e esta foi em seguida lavada com água desionizada (2 x 10 mL), seguida de NaHCCgíaq) saturado (2 x 10 mL) . A fase orgânica foi seca sobre MgSCg, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado duas vezes por FCC (5 g de sílica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; 100% DCM até DCM:MeOH 98:2) . A amostra foi seca numa estufa de vácuo durante 18 horas para dar 103 mg (65%) do composto em epígrafe como um sólido amarelo-pálido. LC-MS 94%, m/z=496,0/498,0/500,0, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ II, 00 (s, 1H) , 7,20 - 7,10 (m, 1H) , 7,10 - 7,05 (m, 2H) , 5,94 (s, 1H) , 4,54 (d, J= 5,9 Hz, 2H) , 3,96 (d, J = 11,4
Hz, 2H) , 3,42 - 3,26 (m, 2H) , 3,28 - 3,12 (m, 1H) , 3,09 (q, J = 7,0 Hz, 2H) , 2,39 (s, 3H) , 2,23 (s, 3H) , 1,72 (td, J = 8,5, 3,8 Hz, 4H), 0,90 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
Composto 102: 5-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-3-[etil(piperidin-4-il)amino]-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico
Uma solução de ácido 5-cloro-2-metilbenzoico (9,9 g, 58 mmol) em H2SO4 concentrado (70 mL, 1310 mmol) foi arrefecida até -5 °C num banho de acetona/gelo. Foi adicionada, gota a gota, uma mistura de ácido nítrico concentrado (4,9 mL, 75 mmol) e H2SO4 concentrado (5,0 mL, 94 mmol) à mistura reacional a -5 °C ao longo de 30 minutos. A mistura reacional foi agitada a -5 °C durante 2 horas, antes de ser vertida sobre gelo (150 g) e o precipitado recolhido por filtração. O precipitado foi dissolvido em AcOEt (100 mL) e lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , antes de ser seco sobre MgSCg, filtrado e concentrado sob pressão reduzida para dar 11,9 g do composto em epígrafe como um sólido esbranquiçado. Este material foi utilizado sem mais purificação. LC-MS 57%, m/z=214,0/216,0, RMN de (500 MHz, Clorof órmio-d) δ 10,37 (1 H, s. 1.), 8,19 (1 H, d, J=2,21 Hz), 7,91 (1 H, d, J=2,21 Hz), 2,67 (2 H, s).
Passo 2: Síntese de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de me tilo
A uma solução de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico (1,17 g, 5,43 mmol) em DMF (11 mL) à temperatura ambiente e azoto foi adicionado Na2CC>3 (862 mg, 8,14 mmol), seguido de iodometano (0,51 mL, 8,14 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 19 horas, antes de ser diluída com água desionizada (30 mL) e extraída com AcOEt (3 x 30 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com NaHCC>3(aq) saturado (30 mL) , secas sobre MgS04, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (10 g de sílica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:AcOEt 99:1 até Heptano:AcOEt 95:5) para dar 900 do composto em epígrafe como um óleo amarelo-pálido. LC-MS 89%, m/z=sem ionização, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,00 (1 H, d, J=2,21 Hz), 7,86 (1 H, d, J=2,21 Hz), 3,96 (3 H, s) , 2,60 (3 H, s) .
Passo 3: Síntese de 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (9,19 g, 40 mmol) em metanol (200 mL) à temperatura ambiente foi adicionado cloreto de amónio (21 g, 400 mmol), seguido de água desionizada (100 mL). A mistura foi aquecida até 70 °C, antes da adição de ferro (13,4 g, 240 mmol) . A reação ficou com uma cor escura ao longo das 2,5 horas que foi agitada a 70 °C. Esta mistura foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente e foi filtrada através de Kieselgel. A almofada de filtração foi lavada com MeOH (100 mL) e o filtrado concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em água desionizada (100 mL) e AcOEt (100 mL) . As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 100 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), secos sobre MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar 7,6 g do composto em epígrafe como um óleo viscoso laranja que solidificou em repouso. Este material foi utilizado sem mais purificação. LC-MS 63%, m/z=200,3/202,0, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,20 (1 H, d, J=2,21 Hz), 6,80 (1 H, d, J=2, 0 5 Hz), 3,89 (3 H, s), 3,74 - 3, 87 (2 H, m) , 2,30 (3 H, s) .
Passo 4: Síntese de 4-{[5-cloro-3-(metoxicarbonil)-2- metilfenil]amino}piperidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução de 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (100 mg, 0,50 mmol) em 1,2-dicloroetano (2,5 mL) à temperatura ambiente e sob azoto foi adicionado 4-oxopiperidina-l-carboxilato de terc-butilo (200 mg, 1,0 mmol), seguido de ácido acético (0,17 mL, 3,0 mmol). Esta solução foi agitada durante 5 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,32 g, 1,5 mmol) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada durante 20 horas sob azoto. Foi adicionado água desionizada (5 mL) e a mistura foi neutralizada com NaHCCb sólido. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (2x5 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgSCp, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 residuo foi purificado por FCC (10 g de silica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:AcOEt 99:1 até Heptano:AcOEt 7:3) para dar 131 mg (68%) do composto em epigrafe como um sólido branco. LC-MS 98%, m/z=405,4/406,9 (M+Na), RMN de (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,10 (1 H, d, J=2,0 5 Hz), 6,70 (1 H, d, J=l,89 Hz), 3,98 - 4,16 (2 H, m) , 3,88 (3 H, s) , 3,58 - 3,72 (1 H, m) , 3,37 - 3,52 (1 H, m) , 2,97 (2 Η, 1. t, J=ll, 50, 11,50 Hz), 2,24 (3 H, s) , 2,06 (2 Η, 1. d, J= 10, 60 Hz), 1,44 - 1,51 (9 H, m) , 1,32 -1,44 (2 H, m).
Passo 5: Síntese de 4-{[5-cloro-3-(metoxicarbonil)-2- metilfenil](etil)amino}piperidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução de 4-{ [5-cloro-3-(metoxicarbonil)-2-metilfenil]amino}piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (125 mg, 0,33 mmol) em 1,2-dicloroetano (1,6 mL) à temperatura ambiente sob azoto foi adicionado acetaldeido (37 pL, 0,65 mmol), seguido de ácido acético (0,11 mL, 1,96 mmol). Esta solução foi agitada durante 5 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,21 g, 0,98 mmol) à temperatura ambiente. A reação foi monitorizada por LCMS e após 4,5 h foram adicionados mais acetaldeido (73 pL, 1,31 mmol) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,28 g, 1,31 mmol) à mistura reacional. A mistura foi agitada durante mais 18 horas após o que foi adicionada água desionizada (10 mL) e a mistura foi neutralizada com NaHCCp sólido. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 10 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (10 g de sílica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:AcOEt 99:1 até Heptano:AcOEt 8:2) para dar 131 mg (98%) do composto em epígrafe como um óleo espesso incolor. LC-MS 98%, m/z=433,5/435,1 (M+Na), RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,57 (1 H, d, J=2,21 Hz), 7,22 (1 H, d, J=2,05 Hz), 3,97 - 4,14 (2 H, m) , 3,90 (3 H, s), 3,04 (2 H, q, J= 6,99 Hz), 2,81 - 2,91 (1 H, m) , 2,70 (2 Η, 1. t, J= 11,5 0, 11,50 Hz), 2,45 (3 H, s), 1, 69 - 1, 80 (2 H, m) , 1,47 - 1,56 (2 H, m) , 1,46 (9 H, s), 0,87 (3 H, t, J=7,09 Hz).
Passo 6: Síntese de ácido 3-({1-[ (terc- butoxi)carbonil]piperidin-4-il}(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoico
A uma solução de 4-{ [5-cloro-3-(metoxicarbonil)-2-metilfenil](etil)amino}piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (131 mg, 0,32 mmol) em tetra-hidrofurano (2 mL) foi adicionado LiOH (8,4 mg, 0,35 mmol) em água desionizada (2 mL). A mistura reacional foi agitada ao ar à temperatura ambiente durante 24 horas. Foi adicionado NaOH 1M (3,19 mL) à mistura reacional e esta foi agitada durante mais 24 horas. A mistura reacional foi em seguida aquecida até 40 °C durante 25 h. A mistura reacional foi acidificada até pH 2-3 com HC1 1M e extraída com AcOEt (3 x 20 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar 122 mg do composto em epígrafe como um óleo espesso laranja. LC-MS 76%, m/z = 397,5/399, 4, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,74 (1 H, s) , 7,20 - 7,35 (2 H, m) , 3,92 - 4,11 (2 H, m) , 2,97 - 3,13 (2 H, m) , 2,81 - 2,95 (1 H, m) , 2, 62 - 2,79 (2 H, m) , 2,53 (3 H, s), 1,75 (2 H, s. I. ), 1,48 - 1,61 (2 H, m) , 1,46 (9 H, s) , 0,89 (3 H, t, J=6,86 Hz).
Passo 7: Síntese de 4-[ (5-cloro-3-{ [(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]carbamoil}-2- metilfenil)(etil)amino]piperidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução de ácido 3-({1-[ (terc- butoxi)carbonil]piperidin-4-il}(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoico (60 mg, 0,15 mmol) em DMF (2 mL) à temperatura ambiente sob azoto foi adicionado PyBOP (94 mg, 0,18 mmol), seguido de N-etil-N-(propan-2-il)propan-2-amina (40 pL, 0,23 mmol) e 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 28 mg, 0,17 mmol). Depois de agitar durante 1 hora à temperatura ambiente, foi adicionado AcOEt (30 mL) à mistura reacional e esta foi em seguida lavada com água desionizada (5 mL) , seguida de NaHCC>3(aq) saturado (3x5 mL) . A fase orgânica foi seca sobre MgS04, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (2 g de sílica, cartucho
Isolute, gradiente de eluentes; 100% de AcOEt até
AcOEt:MeOH 96:4) para dar 71 mg (88%) do composto em epígrafe como um sólido amarelo-pálido. LC-MS 97%, m/z = 531,1/533, 1, RMN de (250 MHz, Clorof órmio-d) δ ppm 11,17 (1 H, s. 1.), 7,11 - 7,18 (1 Η, m) , 7,06 (2 Η, dd, J= 7 ,4 6, 2,28 Hz), 5,96 (1 Η, s), 4,53 (2 Η, d, J=5,94 Hz), 3,93 - 4,14 (2 H, m) , 2, 97 - 3, 08 (2 H, m) , 2,78 - 2,88 (1 H, m) , 2,68 (2 H, t, J=ll,57 Hz), 2,39 (3 H, s), 2,26 (3 H, s), 2,24 (3 H, s), 1,71 (2 H, d, J=ll,27 Hz), 1,52 (2 H, s. I. ), 1,45 (9 H, s), 0,86 (3 H, t, J= 6,93 Hz).
Passo 8: Síntese de 5-cloro-N-[ (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-3-[etil(piperidin-4-il)amino]-2-metilbenzamida
A uma solução de 4-[ (5-cloro-3-{ [(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]carbamoil}-2- metilfenil)(etil)amino]piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (140 mg, 0,26 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL) à temperatura ambiente foi adicionado HC1 (4M em dioxano) (1,32 mL) . Formou-se uma goma depois de agitar durante um curto tempo que se dissolveu em seguida após adição de água desionizada (2 mL) . A reação foi agitada durante 21 h, antes de ser concentrada sob pressão reduzida para dar um óleo espesso. Foi adicionado DCM (3 mL) e formou-se um sólido. Esta mistura foi concentrada para dar 105 mg de um sólido amarelo que foi agitado em DCM (10 mL) durante 1 hora, antes de ser filtrado e seco sob alto vácuo numa estufa de vácuo durante 24 horas. A amostra foi em seguida dissolvida em água desionizada (0,2 mL) e liofilizada para dar 86 mg (70%) do composto em epígrafe como um sólido bege. LC-MS 100%, m/z = 431,2/433,2, RMN de (500 MHz,
Clorofórmio-d) δ ppm 7,44 (sl, 1H) , 7,26 (sl, 1H) , 6,69 (sl, 1H) , 4,55 (s, 2H) , 3,53 - 3,34 (m, 3H) , 3,28-3, 08 (m, 2Η) , 3,01 (t, J= 11,8 Hz, 2H), 2,51 (s, 3H), 2,43 (s, 3H), 2,33 (s, 3H) , 2,16 - 1,96 (m, 2H) , 1,91 - 1,76 (m, 2H) , 0, 92 (t, J = 6, 9 Hz, 3H) .
Composto 192: 5-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metoxibenzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-2-metoxi-3-nitrobenzoato de metilo
A H2SO4 concentrado (90 mL) foi adicionado, em porções, ácido 5-cloro-2-metilbenzoico (13,2 g, 77,6 mmol) a 0 °C. Em seguida, foi adicionada, gota a gota a 0 °C ao longo de um periodo de cerca de 1,5 h, uma mistura de HNO3 conc. (10,5 g, 1740 mmol) em H2SO4 conc. (15 mL) . Após adição, a mistura foi agitada a esta temperatura durante 2 h. A mistura foi vertida para água gelada sob agitação vigorosa e o precipitado foi recolhido por filtração. 0 precipitado foi dissolvido em AcOEt, lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seco sobre anidro Na2SC>4 e concentrado para dar um composto em epigrafe em bruto (13,2 g), que foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. LC-MS 95%, m/z=245, 9/247, 9, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 8,01 (1 H, d, J= 2,68 Hz), 7,91 (1 H, d, J= 2,68 Hz), 4,01 (3 H, s), 3, 97 - 3, 99 (3 H, s) .
Passo 2: Síntese de 3-amino-5-cloro-2-metoxibenzoato de me tilo
A uma solução de 5-cloro-2-metoxi-3-nitrobenzoato de metilo (1,21 g, 4,93 mmol) em metanol (50 mL) à temperatura ambiente foi adicionado cloreto de amónio (2,59 g, 49,2 mmol) , seguido de água desionizada (25 mL) . A mistura foi aquecida até 70 °C, antes da adição de ferro (1,65 g, 29,6 mmol) . A reação ficou com uma cor escura ao longo das 2 horas em que foi agitada a 70 °C. Esta mistura foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente e foi filtrada através de Kieselgel. A almofada de filtração foi lavada com MeOH (50 mL) e o filtrado concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em água desionizada (25 mL) e AcOEt (25 mL) . As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 25 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL) , secos sobre MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar 892 mg (67%) do composto em epígrafe como um viscoso óleo castanho. Este material foi utilizado sem mais purificação. LC-MS 89%, l,75min (método de LC-MS de 3 minutos), m/z=216,3/218,0, RMN de XH (500 MHz, Clorof órmio-d) δ ppm 7,16 (1 H, d, J=2,52 Hz), 6,87 (1 H, d, J=2,52 Hz), 4,03 (2 H, s. 1.), 3, 89 - 3, 94 (3 H, m) , 3,84 (3 H, s) .
Passo 3: Síntese de 5-cloro-2-metoxi-3-[(oxan-4- il)amino]benzoato de metilo
A uma solução de 3-amino-5-cloro-2-metoxibenzoato de metilo (440 mg, 2 mmol) em 1,2-dicloroetano (8 mL) à temperatura ambiente sob azoto foi adicionada oxan-4-ona (0,38 mL, 4,0 mmol), seguida de ácido acético (0,7 mL, 12 mmol). Esta solução foi agitada durante 5 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,3 g, 6,1 mmol) à temperatura ambiente. Depois de agitar durante 23 horas foi adicionada água desionizada (16 mL) e a mistura foi neutralizada com NaHCCL sólido. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 16 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (10 g de sílica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:AcOEt 9:1 até Heptano:AcOEt 7:3) para dar 439 mg (72%) do composto em epígrafe como um sólido branco. LC-MS 97%, m/z=300,3/302,0, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,06 (1 H, d, J=2,52 Hz), 6,73 (1 H, d, J=2,52 Hz), 4,38 - 4,45 (1 H, m) , 4,02 (2 H, dt, J= 11,7 8, 3,49 Hz), 3,91 (3 H, s) , 3,81 (3 H, s) , 3,54 (2 H, td, J=11,4 7, 2,13 Hz), 3,40 - 3,50 (1 H, m) , 2,03 (2 Η, 1. d, J= 13,7 0 Hz), 1,48 - 1,55 (2 H, m) .
Passo 4: Síntese de 5-cloro-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metoxibenzoato de metilo
A uma solução de 5-cloro-2-metoxi-3-[(oxan-4-il) amino] benzoato de metilo (220 mg, 0,73 mmol) em 1,2-dicloroetano (2 mL) à temperatura ambiente sob azoto foi adicionado acetaldeído (82 pL, 1,47 mmol), seguido de ácido acético (0,25 mL, 4,4 mmol). Esta solução foi agitada durante 5 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,47 g, 2,2 mmol) à temperatura ambiente. Depois de agitar durante 16 horas, foi adicionado acetaldeído (82 pL, 1,47 mmol) à mistura reacional e agitada durante 5 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,47 g, 2,2 mmol). Depois de agitar durante 24 horas, foi adicionado mais acetaldeído (82 pL, 1,47 mmol) à mistura reacional e agitada durante 5 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,47 g, 2,2 mmol). A reação foi agitada durante 24 h, após o que foi adicionada água desionizada (10 mL) e a mistura foi neutralizada com NaHCCb sólido. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 10 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (10 g de sílica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:AcOEt 95:5 até Heptano: AcOEt 7:3) para dar 127 mg (53%) do composto em epígrafe como um óleo amarelo. LC-MS 93%, m/z=328,4/330,0, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,35 (d, J= 2,6
Hz, 1H) , 7,09 (d, J= 2,6 Hz, 1H) , 3,98 (dd, J= 11,3, 4,2
Hz, 2H) , 3,91 (s, 3H) , 3,85 (s, 3H) , 3,48 (tt, J = 11,6, 4.0 Hz, 1H), 3,36 (td, J= 11,8, 1,9 Hz, 2H) , 3,15 (q, J = 7.0 Hz, 2H) , 1,78 (qd, J = 12,2, 4,6 Hz, 2H), 1,72 - 1,59 (m, 2H) , 0,99 (t, J= 7,0 Hz, 3H) .
Passo 5: Síntese de ácido 5-cloro-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metoxibenzoico
A uma solução de 5-cloro-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metoxibenzoato de metilo (127 mg, 0,39 mmol) em THF (4 mL) foi adicionado NaOH 4M (3,87 mL) . A mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 24 horas. A mistura reacional foi acidificada até pH 2-3 com HC1 6M e extraída com DCM (5 x 15 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar 111 mg (91 %) do composto em epígrafe como um óleo amarelo. LC-MS 80%, l,25min (método de LC-MS de 3 minutos), m/z = 314,4/315, 9, RMN de (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 10,02 - 9, 55 (m, 1H) , 8,01 - 7,47 (m, 1H) , 7,36 - 6, 96 (m, 1H) , 4,15 - 3,86 (m, 5H) , 3,76 (t, J= 6,6 Hz, 2H) , 3,55 -3,12 (m, 3H) , 1, 95 - 1,59 (m, 4H) , 1,15 - 0,88 (m, 3H) .
Passo 6: Síntese de 5-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metoxibenzamida
A uma solução de 5-cloro-3-[etil(oxan-4-il)amino]-2-metoxibenzoico ácido (111 mg, 0,35 mmol) em DMF (3 mL) à temperatura ambiente sob azoto foi adicionado PyBOP (220 mg, 0,42 mmol), seguido de N-etil-N-(propan-2-il)propan-2-amina (92 yL, 0,53 mmol) e 3-(aminometil)-4,6- dimetil-1,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 66 mg, 0,39 mmol).
Depois de agitar durante 1,5 horas à temperatura ambiente não foi observado material de partida por LCMS. Foi adicionada água desionizada (20 mL) à mistura reacional e o precipitado resultante foi recolhido por filtração. O sólido foi lavado com água desionizada (3x5 mL), antes de ser seco ao ar. O sólido foi adicionalmente purificado por FCC (5 g de silica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; 100% DCM até DCM:MeOH 97:3) . A amostra foi seca numa estufa de vácuo durante 18 horas para dar 105 mg (64%) do composto em epigrafe como um sólido esbranquiçado. LC-MS 98%, m/z = 449, 5/452,1, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 11,47 (s, 1H) , 8,79 (t, J = 5,8 Hz, 1H) , 7,73 (d, J = 2,6 Hz, 1H) , 7,05 (d, J = 2,6 Hz, 1H) , 5,92 (s, 1H) , 4,55 (d, J= 6,0 Hz, 2H) , 3,98 (dd, J= 11,3, 3,8 Hz, 2H) , 3,78 (s, 3H) , 3,35 (t, J= 11,6 Hz, 3H) , 3,12 (q, J = 7,0 Hz, 2H) , 2,42 (s, 3H) , 2,28 (s, 3H) , 1,92 - 1,61 (m, 4H) , 0,94 (t, J= 7,0 Hz, 3H).
Composto 212: 5-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-2-metoxi-3-[metil(oxan-4-il)amino]benzamida
Passo 1: Sintese de 5-cloro-2-metoxi-3-[metil(oxan-4- il)amino]benzoato de metilo
A uma solução de 5-cloro-2-metoxi-3-[(oxan-4-il) amino] benzoato de metilo (500 mg, 1,67 mmol) em 1,2-dicloroetano (16 mL) à temperatura ambiente sob azoto foi adicionado paraformaldeído (300 mg, 10 mmol) , seguido de ácido acético (0,57 mL, 10 mmol). Esta mistura foi agitada durante 5 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,12 g, 10 mmol). Depois de agitar durante 64 horas, foi adicionada água desionizada (30 mL) e a mistura foi neutralizada com NaHC03 sólido e as fases foram separadas. A camada aquosa foi extraída com AcOEt (3 x 15 mL) e os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgSCg, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (10 g de sílica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:AcOEt 9:1 até Heptano: AcOEt 7:3) para dar 431 mg (82%) do composto em epígrafe como um óleo incolor. LC-MS 98%, m/z=314,0/316,0, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,30 (d, J = 2,5
Hz, 1H) , 7,04 (d, J= 2,5 Hz, 1H) , 4,00 (dd, J= 11,3, 4,3
Hz, 2H) , 3,90 (s, 3H) , 3,82 (s, 3H) , 3,70 (ddt, J= 11,7, 7,7, 3,8 Hz, 1H) , 3,39 (t, J= 11,1 Hz, 2H), 2,71 (s, 3H) , 1,84 (qd, J= 12,3,4,6 Hz, 2H) , 1, 66 - 1,55 (m, 2H) .
Passo 2: Síntese de ácido 5-cloro-2-metoxi-3-[metil(oxan-4-il)amino]benzoico
A uma solução de 5-cloro-2-metoxi-3-[metil(oxan-4-il) amino] benzoato de metilo (413 mg, 1,32 mmol) em THF (13 mL) e MeOH (2 mL) foi adicionado NaOH 4M (13,16 mL) . A mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 16 horas. A mistura reacional foi acidificada até pH 2-3 com HC1 6M e extraída com DCM (5 x 10 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar 385 mg (98%) do composto em epígrafe como um óleo espesso amarelo. LC-MS 94%, m/z = 300,0/302,0, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,74 (d, J= 2,0 Hz, 1H), 7,30-7,12 (m, 1H) , 4,11 - 4,02 (m, 2H) , 4,01 (s, 3H) , 3,54 (t, J= 11,6 Hz, 1H) , 3,40 (t, J = 11,3 Hz, 2H) , 2,76 (s, 3H) , 1, 97 - 1,78 (m, 2H) , 1,63 (d, J = 11,8 Hz, 2H) .
Passo 3: Síntese de 5-cloro-N-[ (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-metoxi-3-[metil(oxan-4-il)amino]benzamida
A uma solução de ácido 5-cloro-2-metoxi-3-[metil(oxan-4-il) amino] benzoico (200 mg, 0,67 mmol) em DMF (2 mL) à temperatura ambiente sob azoto foi adicionado HBTU (304 mg, 0,80 mmol), seguido de N-etil-N-(propan-2-il)propan-2-amina (174 yL, 1,0 mmol) e 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 125 mg, 0,73 mmol). Depois de agitar durante 2 horas à temperatura ambiente, foi adicionado AcOEt (30 mL) à mistura reacional e esta foi em seguida lavada com água desionizada (5 mL) , seguida de NaHCCpíaq) saturado (3x5 mL) . A fase orgânica foi seca sobre MgSCg, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (10 g de sílica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; 100% DCM até DCM:MeOH 96:4) para dar 182 mg (63%) do composto em epígrafe como um sólido esbranquiçado. LC-MS 98%, m/z=434,1/436,1, RMN de ΧΗ (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 12,52 (s 1, 1H) , 8,76 (t, J= 5,8 Hz, 1H) , 7,69 (d, J= 2,6 Hz, 1H) , 7,01 (d, J= 2,6 Hz, 1H) , 5,94 (s, 1H) , 4,56 (d, J = 6,0 Hz, 2H) , 3,99 (dd, J = 11,2, 3,9 Hz, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,49 (tt, J= 11,5, 3,7 Hz, 1H), 3,36 (t, J= 11,2 Hz, 2H), 2,67 (s, 3H), 2,42 (s, 3H) , 2,31 (s, 3H) , 1, 93 - 1,73 (m, 2H) , 1, 64 - 1,52 (m, 2H) .
Composto 205: 5-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-[metil(oxan-4-il)amino]benzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-2-[2- (trimetilsilil)etinil]benzoato de metilo
A uma solução de 2-bromo-5-clorobenzoato de metilo (14,8 g, 59 mmol) em TEA (124 mL, 890 mmol) foi adicionado iodeto de cobre (I) (338 mg, 1,78 mmol) e trifenilfosfina (778 mg, 2,97 mmol) à temperatura ambiente sob azoto. Esta mistura teve azoto a borbulhar através da mesma durante 10 minutos, antes da adição de etinil(trimetil)silano (12,45 mL, 89 mmol) e Pd(OAc) 2 (266 mg, 1,19 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 20 horas, antes de ser concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em água desionizada (50 mL) e AcOEt (50 mL) e filtrada através de celite. 0 bolo de filtração foi lavado com AcOEt (50 mL) , antes das fases terem sido separadas e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 50 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (10 g de sílica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:AcOEt 99:1 até Heptano:AcOEt 85:15) para dar 16,2 g (102,4%) do composto em epígrafe como um óleo laranja que solidificou em repouso e continha heptano residual. LC-MS 91%, m/z=267,4/268, 9, RMN de XH (500 MHz,
Clorofórmio-d) δ ppm 7,89 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 7,51 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,41 (dd, J= 8,3, 2,3 Hz, 1H) , 3,92 (s, 3H) , 0,27 (s, 9H).
Passo 2: Síntese de 5-cloro-2-etinilbenzoato de metilo
A uma solução de 5-cloro-2-[2- (trimetilsilil)etinil]benzoato de metilo (10 g, 37,5 mmol) em MeOH (150 mL) foi adicionado K2CO3 (10,4 g, 75 mmol) à temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada durante 1 hora, antes de ser concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em água desionizada (50 mL) e AcOEt (50 mL) . As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 50 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (50 g de sílica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:AcOEt 95:5 até Heptano:AcOEt 9:1) para dar 5,75 g (55%) do composto em epígrafe como um óleo laranja que solidificou em repouso. Este material continha 30% de éster etílico e foi adequado para utilização sem qualquer purificação adicional. LC-MS 38%, m/z = 195, 0/196, 9, RMN de (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,93 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 7,55 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,45 (dd, J= 8,3, 2,3 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,43 (s, 1H).
Passo 3: Síntese de 5-cloro-2-etilbenzoato de metilo
A uma solução de 5-cloro-2-etinilbenzoato de metilo (5,34 g, 27 mmol) em acetato de etilo (135 mL) foi adicionado Pd/C (10%) (50% de água, 2,92 g, 1,37 mmol). A mistura reacional foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura foi filtrada através de Celite. O bolo de filtração lavado com AcOEt (50 mL) e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para dar 5,12 g (94%) do composto em epígrafe como um óleo castanho que foi adequado para utilização sem qualquer purificação adicional. LC-MS 56%, m/z = 198, 9/200, 9, RMN de ΧΗ (500 MHz, Clorof órmio-d) δ ppm 7,84 (d, J = 2,3 Hz, 1H) , 7,39 (dd, J= 8,3, 2,3 Hz, 1H) , 7,21 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 3,90 (s, 3H) , 2,94 (q, J = 7,5
Hz, 2H), 1,21 (t, J= 7,5 Hz, 3H).
Passo 4: Síntese de 5-cloro-2-etil-3-nitrobenzoato de metilo
Uma solução de 5-cloro-2-etilbenzoato de metilo (5,12 g, 25,8 mmol) em H2SO4 concentrado (31 mL, 587 mmol) foi arrefecida até -5 °C num banho de acetona/gelo. Foi adicionada, gota a gota à mistura reacional a -5 °C ao longo de 15 minutos, uma mistura de ácido nítrico concentrado (2,15 mL, 33,5 mmol) e H2SO4 concentrado (2,0 mL, 37,5 mmol). A mistura reacional amarelo-pálida foi agitada a -5 °C durante 1 hora antes de ser vertida sobre gelo (500 mL) e esta foi extraída com AcOEt (3 x 100 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água desionizada (100 mL) e, em seguida, solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) . A fase orgânica foi seca sobre MgSCg, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. LCMS e RMN mostraram -30% de hidrólise do éster. O material em bruto foi dissolvido em metanol (30 mL) e arrefecida até 0 °C sob azoto, quando foi adicionado lentamente SOCI2 (2,25 mL, 30,93 mmol). A mistura reacional foi em seguida aquecida a refluxo durante 6 horas, antes de ser concentrada sob pressão reduzida para dar 6,18 g (98%) do composto em epígrafe contendo o material como um óleo laranja que era uma mistura 1:1 dos isómeros 3-nitro:6-nitro juntamente com algum éster etílico. O material foi adequado para utilização no passo seguinte sem qualquer purificação adicional.
Passo 5: Síntese de 3-amino-5-cloro-2-etilbenzoato de metilo
A uma solução de 5-cloro-2-etil-3-nitrobenzoato de metilo (6,18 g, 25,4 mmol) em metanol (250 mL) à temperatura ambiente foi adicionado cloreto de amónio (13,3 g, 253 mmol), seguido de água desionizada (125 mL). A mistura foi aquecida até 70 °C, antes da adição de ferro (8,50 g, 152 mmol) . A reação ficou com uma cor escura ao longo das 2,5 horas em que foi agitada a 70 °C. Esta mistura foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente e foi filtrada através de Kieselgel. A almofada de filtração foi lavada com MeOH (250 mL) e o filtrado concentrado sob pressão reduzida. O residuo foi dissolvido em NaHC03(aq) saturado (50 mL) e AcOEt (150 mL) . As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com NaHC03(aq) saturado (2 x 50 mL) , antes de ser seca sobre MgSCq, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O residuo foi purificado por FCC (50 g de silica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:AcOEt 95:5 até Heptano: AcOEt 75:25) para dar 2,42 g do 3-amino-5-cloro-2-etilbenzoato de metilo em bruto como um óleo amarelo. O material foi transferido para o passo seguinte sem mais purificação. LC-MS 31%, m/z=295,0, RMN de (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,17 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 6,79 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,86 - 3,81 (m, 2H), 2,74 (q, J = 7,5 Hz, 2H) , 1,2 0 (t, J = 7,5 Hz, 3H) .
Passo 6: Sintese de 5-cloro-2-etil-3-[(oxan-4-il)amino]benzoato de metilo
A uma solução de 3-amino-5-cloro-2-etilbenzoato de metilo (1,5 g, 7,02 mmol) em 1,2-dicloroetano (28 mL) à temperatura ambiente sob azoto, foi adicionada oxan-4-ona (1,3 mL, 14. mmol), seguida de ácido acético (2,41 mL, 42 mmol). Esta solução foi agitada durante 5 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,46 g, 21 mmol) à temperatura ambiente. Depois de agitar durante 20 horas, foi adicionada água desionizada (28 mL) e a mistura foi neutralizada com NaHCCb sólido. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraida com AcOEt (2 x 28 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O residuo foi purificado por FCC (50 g de silica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:AcOEt 95:5 até Heptano:AcOEt 8:2) para dar 1,76 g de 5-cloro-2-etil-3-[(oxan-4-il)amino]benzoato de metilo em bruto como um sólido branco. O material foi transferido para o passo seguinte sem mais purificação. LC-MS 60%, m/z=298,0/300,0, RMN de (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,07 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 6,71 (d, J = 1,9 Hz, 1H) , 4,01 (dt, J= 11,8, 3,4 Hz, 2H) , 3,87 (s, 3H) , 3, 82 - 3,76 (m, 1H) , 3, 64 - 3,47 (m, 3H) , 2,79 - 2,63 (m, 2H) , 2,06 (d, J = 13,2 Hz, 2H) , 1,55 - 1, 46 (m, 2H) , 1,18 (t, J = 7,5 Hz, 3H) .
Passo 7: Sintese de 5-cloro-2-etil-3-[metil(oxan-4- il)amino]benzoato de metilo
A uma solução de 5-cloro-2-etil-3-[ (oxan-4- il) amino] benzoato de metilo (350 mg, 1,18 mmol) em 1,2-dicloroetano (10 mL) à temperatura ambiente sob azoto foi adicionado paraformaldeido (212 mg, 7,05 mmol), seguido de ácido acético (0,4 mL, 7,05 mmol). Esta mistura foi agitada durante 5 minutos, antes da adição de triacetoxiboro- hidreto de sódio (1,49 g, 7,05 mmol) . Depois de agitar durante 23 horas, foi adicionado mais paraformaldeido (212 mg, 7,05 mmol) à mistura reacional e esta foi agitada durante 10 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,49 g, 7,05 mmol). Depois de agitar durante 3 horas, foi adicionada água desionizada (15 mL) e a mistura foi neutralizada com NaHCCb sólido e as fases foram separadas. A camada aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 15 mL) e os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgSCg, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por FCC (10 g de sílica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:AcOEt 99:1 até Heptano:AcOEt 85:15) para dar 334 mg do composto em epígrafe como um óleo incolor. O produto contém -22% de éster etílico. O material foi transferido para o passo seguinte sem mais purificação. LC-MS 56%, m/z = 312,0/314,0, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,52 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 7,24 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 4,01 - 3,93 (m, 2H) , 3,89 (s, 3H) , 3,34 (td, J= 11,7, 2,3 Hz, 2H) , 3,06 - 2,96 (m, 2H) , 2, 94 - 2,85 (m, 1H) , 2,61 (s, 3H) , 1,76 - 1,59 (m, 4H), 1,10 (t, J = 7,4 Hz, 3H).
Passo 8: Síntese de ácido 5-cloro-2-etil-3-[metil(oxan-4-il)amino]benzoico
A uma solução de 5-cloro-2-etil-3-[metil(oxan-4-il) amino] benzoato de metilo (334 mg, 1,07 mmol) em THF (11 mL) foi adicionado NaOH 4M (10,7 mL). A mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 27 horas. Foi adicionado MeOH (5 mL) à mistura reacional e esta foi agitada durante mais 21 horas a 50 °C. A mistura reacional foi acidificada até pH 2-3 com HC1 6M e extraída com DCM (5 χ 10 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar 311 mg do composto em epigrafe como um óleo laranja que solidificou em repouso. O material foi transferido para o passo seguinte sem mais purificação. LC-MS 79%, 2,01min (método de LC-MS de 3 minutos), m/z=298,0/300, 0, RMN de (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm
7,72 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 7,37 - 7,27 (m, 1H), 4,00 (d 1, J
= 11,1 Hz, 2H) , 3,36 (td, J= 11,6, 2,0 Hz, 2H) , 3,11 (q, J = 7,4 Hz, 2H) , 2,94 (t, J = 10,6 Hz, 1H) , 2,64 (s, 3H) , 1,78 - 1,56 (m, 4H), 1,15 (t, J= 7,4 Hz, 3H) .
Passo 9: Sintese de 5-cloro-N-[ (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-[metil(oxan-4-il)amino]benzamida
A uma solução de ácido 5-cloro-2-etil-3-[metil(oxan-4-il) amino] benzoico (100 mg, 0,34 mmol) em DMF (2 mL) à temperatura ambiente sob azoto foi adicionado HBTU (153 mg, 0,4 mmol), seguido de N-etil-N-(propan-2-il)propan-2-amina (88 yL, 0,5 mmol) e 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 63 mg, 0,37 mmol). Depois de agitar durante 3 horas à temperatura ambiente, foi adicionado AcOEt (30 mL) à mistura reacional e esta foi em seguida lavada com água desionizada (5 mL) , seguida de NaHCC>3(aq) saturado (3x5 mL) . A fase orgânica foi seca sobre MgS04, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O residuo foi purificado por FCC (5 g de silica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; 100% DCM até DCM:MeOH 96:4) para dar 94 mg (65%) do composto em epigrafe como um sólido esbranquiçado. LC-MS 95%, m/z=432,1/434,1, RMN de ΧΗ (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 11,34 (s, 1H) , 7,14 - 7,08 (m, 2H) , 7,03 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 5,95 (s, 1H) , 4,52 (d, J = 5,8 Hz, 2H) , 3,96 (d, J= 11,2 Hz, 2H) , 3,33 (td, J= 11,4, 2,3 Hz, 2H) , 2, 96 - 2,85 (m, 1H) , 2,79 (q, J= 7,4 Hz, 2H) , 2,58 (s, 3H) , 2,39 (s, 3H) , 2,23 (s, 3H) , 1,73 - 1, 62 (m, 4H), 1,05 (t, J = 7,4 Hz, 3H).
Composto 206: 5-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-[etil(oxan-4-il)amino]benzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-2-etil-3-[etil(oxan-4- il)amino]benzoato de metilo
A uma solução de 5-cloro-2-etil-3-[ (oxan-4- il) amino] benzoato de metilo (350 mg, 1,18 mmol) em 1,2-dicloroetano (10 mL) à temperatura ambiente sob azoto foi adicionado acetaldeído (0,66 mL, 11,8 mmol), seguido de ácido acético (0,4 mL, 7,05 mmol). Esta solução foi agitada durante 5 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,49 g, 11,8 mmol) à temperatura ambiente. Depois de agitar durante 23 horas, foi adicionado acetaldeído (0,66 mL, 11,8 mmol) à mistura reacional escura e esta foi agitada durante 10 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,49 g, 11,8 mmol). Depois de agitar durante 3 horas, foi adicionada água desionizada (15 mL) e a mistura foi neutralizada com NaHCCg sólido. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraida com AcOEt (2 x 15 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 residuo foi purificado por FCC (10 g de silica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; Heptano:AcOEt 99:1 até Heptano: AcOEt 85:15) para dar 317 mg do composto em epígrafe como um óleo incolor. O produto contém -25% de éter éster. O material foi transferido para o passo seguinte sem mais purificação. LC-MS 55%, 2m/z=326,0/328,0, RMN de (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,52 (d, J = 2,2
Hz, 1H) , 7,23 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 3,97 (d, J = 11,1 Hz, 2H) , 3,90 (s, 3H) , 3,32 (td, J = 11,6, 2,5 Hz, 2H) , 3,04 (q, J = 7,1 Hz, 4H) , 2,93 (ddd, J = 15,1, 10,8, 4,3 Hz, 1H) , 1,76 - 1, 62 (m, 4H) , 1,08 (t, J = 7,4 Hz, 3H) , 0,88 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
Passo 2: Síntese de 5-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-[etil(oxan-4-il)amino]benzamida
A uma solução de 5-cloro-2-etil-3-[etil(oxan-4-il) amino] benzoato de metilo (317 mg, 0,97 mmol) em THF (10 mL) foi adicionado NaOH 4M (9,73 mL). A mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 27 horas. Foi adicionado MeOH (5 mL) à mistura reacional e esta foi agitada durante mais 21 horas a 50 °C. A mistura reacional foi acidificada até pH 2-3 com HC1 6M e extraída com DCM (5 x 10 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgSCb, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar 289 mg do composto em epigrafe como um óleo laranja que solidificou em repouso. 0 material foi transferido para o passo seguinte sem mais purificação. LC-MS 79%, m/z=311,95/313,95, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,73 (d, J = 1,7 Hz, 1H) , 7,29 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 3,99 (d, J= 11,0 Hz, 2H) , 3,38 - 3,29 (m, 2H) , 3,20 - 3,03 (m, 4H) 3,02 - 2,91 (m, 1H) , 1,78 - 1,61 (m, 4H) , 1,13 (t, J= 7,4 Hz, 3H) , 0,91 (t, J= 7,0 Hz, 3H) .
Passo 3: Sintese de 5-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-[etil(oxan-4-il)amino]benzamida
A uma solução de ácido 5-cloro-2-etil-3-[etil(oxan-4-il) amino] benzoico (100 mg, 0,32 mmol) em DMF (2 mL) à temperatura ambiente sob azoto foi adicionado HBTU (146 mg, 0,38 mmol), seguido de N-etil-N-(propan-2-il)propan-2-amina (84 yL, 0,48 mmol) e 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l, 2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 60,3 mg, 0,35 mmol). Depois de agitar durante 3 horas à temperatura ambiente, foi
adicionado AcOEt (30 mL) à mistura reacional e esta foi em seguida lavada com água desionizada (5 mL) , seguida de NaHCC>3(aq) saturado (3x5 mL) . A fase orgânica foi seca sobre MgSCg, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O residuo foi purificado por FCC (5 g de silica, cartucho Isolute, gradiente de eluentes; 100% de AcOEt até 97:3 AcOEt:MeOH) para dar 90 mg (63%) do composto em epigrafe como um sólido branco. LC-MS 97%, m/z=446,1/448,2, RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 11,93 (s, 1H), 7,14 (t, J = 5,7 Hz, 1H) , 7,10 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 5,95 (s, 1H) , 4,52 (d, J= 5,8 Hz, 2H) , 3,95 (d, J = 11,2 Hz, 2H) , 3,30 (td, J= 11,3, 3,6 Hz, 2H) , 3,01 (q, J = 7,0 Hz, 2H) , 2,93 (ddd, J= 15,3, 10,0, 5,3 Hz, 1H) , 2,83 (q, J = 7,4 Hz, 2H) , 2,38 (s, 3H) , 2,22 (s, 3H) , 1,71 -1,63 (m, 4H) , 1,02 (t, J = 7,5 Hz, 3H) , 0,86 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
Composto 243: 5-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-2-metil-3-[(oxan-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino]benzamida
Passo 1: Síntese de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
Uma solução de ácido 5-bromo-2-metilbenzoico (5,0 g, 23 mmol) em H2SO4 concentrado (27 mL, 512 mmol) foi arrefecida até 5 °C num banho de acetona/gelo. Foi adicionada, gota a gota, uma mistura de ácido nítrico concentrado (1,9 mL, 30 mmol) e H2SO4 concentrado (2,8 mL, 52 mmol) à mistura reacional a -5 a 0 °C ao longo de 15 minutos. A mistura reacional amarela foi agitada a -5 °C durante 2 horas, no decurso das quais se formou um precipitado amarelo. A mistura reacional foi vertida sobre gelo (150 g) e o precipitado foi em seguida recolhido por filtração. O precipitado foi seco ao ar para dar o composto em epígrafe (5,5 g, 52%) como um sólido amarelo-pálido. RMN de XH (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,29 (s, 1 H) 8,13 (d, J=l,58 Hz, 1 H) 2,43 (s, 3 H).
Passo 2: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (5,5 g, 21 mmol) em DMF (42 mL) sob azoto, foi adicionado Na2CC>3 (3,4 g, 32 mmol), seguido de iodometano (2,0 mL, 32 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura foi diluída com água desionizada (150 mL) e extraída com AcOEt (4 x 50 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com NaHCCb (aq) saturado (2 x 50 mL), secas sobre MgSCg, filtradas e concentradas in vacuo para dar o composto em epígrafe (6,3 g, 61%) como um óleo amarelo. RMN de (500 MHz,
Clorof órmio-d) δ ppm 7,38 (d, J=2,05 Hz, 1 H) 7,23 (d, J=2,0 5 Hz, 1 H) 3,20 (s, 3H) l,82(s, 3H) .
Passo 3: Síntese de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (6,3 g, 21 mmol) em metanol (150 mL) foi adicionado cloreto de amónio (11,0 g, 210 mmol), seguido de água desionizada (75 mL) . A mistura foi aquecida até 70 °C, antes da adição de ferro (7,0 g, 125 mmol). A mistura reacional foi agitada a 70 °C durante 2 horas, antes de ter sido deixada arrefecer até à temperatura ambiente e filtrada através de Kieselgel. O almofada de filtração foi lavada com MeOH (150 mL) e o filtrado concentrado in vacuo. O residuo foi dissolvido em NaHCCb (aq) saturado (50 mL) e AcOEt (150 mL) . As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com NaHCCb (aq) saturado (3 x 50 mL) , seca sobre MgSCg, filtrada e concentrada in vacuo. O residuo foi purificado por cromatografia em coluna flash (cartucho Isolute com 50 g de silica, 5-20% de AcOEt: Heptanos) para dar o composto em epigrafe (3,0 g, 51%) como um óleo espesso amarelo-pálido. LC-MS 87%, m/z = 243,9, 244,9, 245,9, 246,9; RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,34 (d, J=1,89 Hz, 1 H) 6,95 (d, J=l,89 Hz, 1 H) 3,88 (s, 3 H) 3,80 (s. 1., 2 H) 2,29 (s, 3 H).
Passo 4: Sintese de 5-bromo-2-metil-3-[(oxan-4- il)amino]benzoato de metilo
A uma solução de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo (3,0 g, 12 mmol) em 1,2-dicloroetano (48 mL) sob azoto, foi adicionada oxan-4-ona (2,3 mL, 25 mmol), seguida de ácido acético (4,2 mL, 74 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 5 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (7,8 g, 37 mmol). Depois de agitar durante 64 horas, foi adicionada água desionizada (100 mL) e a mistura foi neutralizada com NaHCCb sólido. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (4 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (50 g de sílica, cartucho Isolute, 10-30% de AcOEt:Heptanos) para dar o composto em epígrafe (3,5 g 85%) como um sólido branco. LC-MS 99,8m/z= 327,9, 328,9, 329,9, 330,9; RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,24 (d, J=l,73 Hz, 1 H) 6,85 (d, J=1,58 Hz, 1 H) 4,03 (dt, J=ll,82, 3,31 Hz, 2 H) 3,88 (s, 3 H) 3,66 (s.l., 1 H) 3,56 (td, J=ll, 55, 1, 97 Hz, 2 H) 3,47 - 3,55 (m, 1 H) 2,24 (s, 3 H) 2,06 (d, J=13,56
Hz, 2 H) 1,47 - 1, 60 (m, 2 H) .
Passo 5: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-[ (oxan-4-il) (2,2,2-trifluoroetil)amino]benzoato de metilo
A uma solução de 5-bromo-2-metil-3-[(oxan-4- il)amino]benzoato de metilo (500 mg, 1,5 mmol) e TFA (15 mL) , foi adicionado NaBH4 (1,0 g, 26 mmol) em porções ao longo de 5 minutos. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e, em seguida, aquecida até 50 °C durante 3 horas e tratada com mais uma alíquota de NaBH4 (300 mg) ao longo de 25 minutos. A mistura reacional foi em seguida aquecida até 60 °C durante 2 horas e deixada agitar à temperatura ambiente durante 17 horas. A mistura reacional foi tratada com TFA (5 mL) e NaBH4 (200 mg) e aquecida de novo até 60 °C durante 3,5 horas. Foi adicionada mais uma alíquota de NaBH4 (200 mg) ao longo de 15 minutos, juntamente com TFA (5 mL) e o aquecimento prosseguido durante mais 3 horas, antes de se deixar em repouso à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi vertida sobre gelo (75 mL) e agitada até o gelo ter fundido. A mistura reacional foi em seguida basificada pela adição de NaOH (aq) 6M (40 mL) e reajustada a pH 7 utilizando HC1 1M (aq) (40 mL). A suspensão branca resultante foi recolhida por filtração, o sólido lavado com água (20 mL) e seco in vacuo a 40 °C durante 3 horas para dar o composto em epigrafe (577 mg, 91%) como um sólido branco. LC-MS 98%,), m/z = 409,90, 410,9, 411,90, 412,9; RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,80 (d, J=l,73 Hz, 1 H) 7,41 (d, J=l,73 Hz, 1 H) 4,01 (dd, J=ll, 51, 4,10 Hz, 2 H) 3,91 (s, 3 H) 3,64 (d,J=5,20
Hz, 2 H) 3,32 (t, J=11,82 Hz, 2 H) 2,99 (tt, J=ll,43, 3,63
Hz, 1 H) 2,48 (s, 3 H) 1,80 (dd, J=12,53, 1,50 Hz, 2 H) 1,54 - 1, 62 (m, 2 H) .
Passo 6: Síntese de ácido 5-bromo-2-metil-3-[(oxan-4-il)(2,2,2-trifluoroetil)amino]benzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-[ (oxan-4-il) (2,2,2-trifluoroetil)amino]benzoato de metilo (572 mg, 1,4 mmol) numa mistura de THF (14 mL) e MeOH (2,1 mL), foi adicionado NaOH (aq) 4M (13,9 mL). A mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 5,5 horas e, em seguida, agitada à temperatura ambiente durante 17 horas. O THF foi removido por concentração in vacuo e o residuo aquoso foi acidificado até pH 4 com HC1 6M (9,5 mL) . A suspensão resultante foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante 20 minutos, antes de se recolher o sólido por filtração. O bolo sólido foi lavado com água (20 mL) e seco sob alto vácuo durante 2 horas para dar o composto em epígrafe (507 mg, 90%) como um sólido branco. LC-MS 98%, m/z = 395, 9, 396, 9, 397, 9, 398, 9; RMN de (500 MHz,
Clorof órmio-d) δ ppm 7,97 (d, J=l,73 Hz, 1 H) 7,48 (d, J=1,73 Hz, 1 H) 4,02 (dd, J=ll, 35, 3, 94 Hz, 2 H) 3,65 (s. 1. , 2 H) 3,33 (t, J= 11,5 9 Hz, 2 H) 3,00 (tt, J=ll,49, 3,80 Hz, 1 H) 2,55 (s, 3 H) 1,82 (d, J=ll,98 Hz, 2 H) 1,55 - 1,69 (m, 2 H). OH não visível.
Passo 7: Síntese de 5-bromo-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-metil-3-[ (oxan-4-il) (2,2,2-trifluoroetil)amino]benzamida
Uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-[ (oxan-4-il) (2,2,2-trifluoroetil)amino]benzoato de metilo (250 mg, 0,63 mmol) em DMF seca (3,0 mL) a 0 °C sob azoto, foi tratada com HATU (288 mg, 0,76 mmol) e DIPEA (220 yL, 1,3 mmol) gota a gota. A solução resultante foi agitada durante 5 minutos e, em seguida, tratada com 3- (aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 119 mg, 0,69 mmol). A suspensão resultante foi agitada a 0 °C durante 20 minutos e, em seguida, agitada à temperatura ambiente durante 16,5 horas. A mistura reacional foi tratada com 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona (30 mg) . A agitação foi prosseguida durante 23 horas e a mistura reacional foi em seguida partilhada entre água (30 mL) e CH2C12 (20 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com CH2C12 (3 x 20 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com uma solução saturada de NaHCCq (50 mL) , água (60 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 40 mL) , secos sobre MgSCg, filtrados e concentrados in vacuo. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash (cartucho SNAP de 10 g, Isolera, 0-10% de MeOH/CH2Cl2) e triturado de éter (10 mL) com aplicação de ultrassons. O precipitado resultante foi recolhido por filtração e seco in vacuo para dar o composto em epígrafe (249 mg, 74%) como um sólido branco. LC-MS 100%, m/z = 530,0, 531,0, 532,0, 533, 0; RMN de XH (500 MHz, Acetona) δ 10,67 (s, 1H) , 7,55 (d, J = 1,8 Hz, 2H) , 7,27 (d, J =1,9 Hz, 1H) , 5,90 (s, 1H) , 4,40 (d, J = 5,5 Hz, 2H) , 3,90 (dd, J = 11,2, 4,6 Hz, 4H) , 3.28 (t, J =11,6 Hz, 2H) , 3, 07 - 2, 97 (m, 1H) , 2,32 (s, 3H) , 2.29 (s, 3H) , 2,24 (s, 3H) , 1,76 (dd, J = 12,3, 1,6 Hz, 2H) , 1,61 (qd, J = 12,0, 4,5 Hz, 2H) .
Composto 244: 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil)(oxan-4- il)amino]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil)(oxan-4-il)amino]-2-metilbenzoato de metilo
Uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-[ (oxan-4-il)amino]benzoato de metilo (500 mg, 1,5 mmol) em ácido difluoroacético (15 mL) , foi tratada com tetra-hidroborato de sódio (1000 mg, 26 mmol) em porções ao longo de 12 minutos. A mistura reacional foi aquecida até 50 °C e agitada durante 4 horas. A mistura reacional foi deixada atingir a temperatura ambiente e, em seguida, vertida sobre gelo (130 mL) e deixada durante 5 minutos. A mistura foi basificada pela adição de NaOH (aq) 6M (35 mL) e o pH ajustado a 7 utilizando HC1 1M (aq) (20 mL) . A suspensão resultante foi deixada em repouso até a solução ficar transparente e o sólido resultante recolhido por filtração e seco in vacuo a 40 °C para dar o composto em epígrafe (572 mg, 96%) como um sólido branco. LC-MS 100%, m/z = 391, 9, 392, 9, 393, 9, 394, 9; RMN de XH (500 MHz,
Clorof órmio-d) δ ppm 7,79 (d, J=l,89 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=1, 8 9 Hz, 1 H) 5,44 - 5,71 (m, 1 H) 4,00 (dd, J=ll,51, 4,10 Hz, 2 H) 3,91 (s, 3 H) 3,41 (td, J=13,99, 4,18 Hz, 2 H) 3,32 (t, J=11,27 Hz, 2 H) 2,97 (tt, J=ll, 37, 3, 84 Hz, 1 H) 2,47 (s, 3 H) 1,72 - 1,81 (m, 2 H) 1,59 - 1, 67 (m, 2 H) .
Passo 2: Síntese de ácido 5-bromo-3-[(2,2- difluoroetil)(oxan-4-il)amino]-2-metilbenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-3-[(2,2- difluoroetil) (oxan-4-il)amino]-2-metilbenzoato de metilo (571 mg, 1,5 mmol) numa mistura de THF (14,6 mL) e MeOH (2,2 mL) , foi adicionado NaOH 4M (14,6 mL) . A mistura
reacional foi agitada a 50 °C durante 7 horas. O aquecimento foi desligado e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 16,5 horas. 0 THF foi removido in vacuo e o residuo aquoso foi acidificado até pH 4 pela adição de HC1 6M (aq) (10 mL) com arrefecimento com gelo. O sólido resultante foi recolhido por filtração, lavado com água (20 mL) , e seco in vacuo para dar o composto em epigrafe (526 mg, 96%) como um sólido bege- claro. LC-MS 100%, m/z = 377,9, 378,9, 379,9, 380,9; RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,91 (d, J=l,58 Hz, 1 H) 7,49 (d, J=1,58 Hz, 1 H) 5,43 - 5,75 (m, 1 H) 4,01 (dd, J=11,43, 3,55 Hz, 2 H) 3,42 (td, J=13, 95, 3,78 Hz, 2 H) 3,32 (t, J=11,35 Hz, 2 H) 2,98 (tt, J=ll,37, 3,53 Hz, 1 H) 2,52 (s, 3 H) 1,77 (d, J=10,88 Hz, 2 H) 1,56 - 1, 69 (m, 2 H). OH não visível.
Passo 3: Síntese de 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil) (oxan-4-il)amino]-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-metilbenzamida
Uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-bromo-3-[(2,2-difluoroetil) (oxan-4-il)amino]-2-metilbenzoico (250 mg, 0,66 mmol) em DMF seca (3,0 mL) a 0 °C sob azoto, foi tratada com HATU (327 mg, 0,86 mmol) e DIPEA (230 yL, 1,3 mmol) gota a gota. A solução resultante foi agitada durante 5 minutos e, em seguida, tratada com 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 136 mg, 0,79 mmol). A suspensão resultante foi agitada a 0 °C durante 20 minutos e, em seguida, agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Após 18 horas, foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l, 2-di- hidropiridin-2-ona (25 mg) e a agitação prosseguido durante mais 25 horas. A mistura reacional foi diluida com água (30 mL) e CH2CI2 (30 mL) . As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 x 15 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução saturada de NaHC03 (aq) (45 mL) , água (2 x 50 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 50 mL) , secas (MgS04) , filtradas e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (cartucho SNAP de 10 g, Isolera, 0-3% de MeOH:CH2Cl2) e, em seguida, triturado com éter. O sólido resultante foi recolhido por filtração e seco in vacuo a 40 °C para dar o composto em epígrafe (259 mg, 77%) como um sólido esbranquiçado. LC-MS 100%, m/z = 512,0, 513,0, 514,0, 515,0; RMN de XH (500 MHz, Acetona) δ 10,71 (s, 1H) , 7,57 - 7,49 (m, 2H) , 7,25 (d, J = 1,9 Hz, 1H) , 5,91 (s, 1H) , 5,76 (tt, J = 56,2, 4,3 Hz, 1H) , 4,40 (d, J = 5,5 Hz, 2H) , 3,88 (dd, J = 11,3, 4,2 Hz, 2H) , 3,52 (td, J = 14,6, 4,2 Hz, 2H) , 3,33 - 3,23 (m, 2H) , 3,02 (tt, J = 11,6, 3,9 Hz, 1H) , 2,32 (s, 3H) , 2,28 (s, 3H) , 2,24 (s, 3H) , 1,73 (dd, J = 12,4, 1,9 Hz, 2H) , 1,59 (qd, J = 12,2, 4,5 Hz, 2H) .
Composto 328: N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-[etil(oxan-4-il)amino]-3-metilpiridina-4-carboxamida
Passo 1: Síntese de 2-cloro-N-fenilpiridina-4-carboxamida
A uma suspensão, mantida sob agitação, de ácido 2-cloroisonicotínico (5,0 g, 0,03 mol) em tolueno seco (100 mL) e 4 gotas de DMF, foi adicionado gota a gota cloreto de tionilo (7,4 mL, 0,10 mol) sob azoto. A mistura reacional foi agitada a 60 °C durante 2,5 horas e a temperatura foi aumentada gradualmente até 100 °C ao longo de 1,5 horas e mantida a esta temperatura durante 2 horas. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 65 horas, antes de ter sido tratada com outro equivalente de cloreto de tionilo (2,3 mL) e aquecida até 95 °C durante 40 minutos. A reação foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente e foi em seguida concentrada até à secura in vacuo e submetida a evaporação azeotrópica com tolueno seco (2 x 10 mL) para dar um óleo móvel amarelo que foi utilizado diretamente no passo seguinte sem mais purificação. A uma solução, mantida sob agitação, de anilina (2,9 mL, 0,03 mol) e N-etil-N-(propan-2-il)propan-2-amina (13,6 mL, 83 mmol) em THF seco (50 mL) foi adicionado o cloreto de ácido preparado acima, gota a gota. A mistura reacional foi agitada sob azoto durante 19 horas. A mistura reacional foi em seguida desativada pela adição de uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (aq) (100 mL) e agitada durante 35 minutos. As camadas foram separadas e a fase aquosa extraida com acetato de etilo (3 x 55 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (3 x 66 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (80 mL) , secos (MgS04) , filtrados e concentrados in vacuo. O residuo foi suspenso em éter dietilico (100 mL), brevemente submetido a ultrassons e o produto recolhido por filtração. Foi seco sob alto vácuo durante 3 horas à temperatura ambiente, em seguida deixado sob vácuo de um dia para o outro para dar o composto em epigrafe (6,1 g, 83%) como um sólido branco. LC-MS 100%, m/z = 233,0, 234,9; RMN de (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 8,58 (d, J=5,04
Hz, 1 H) 7,81 (s. 1., 1 H) 7,77 (s, 1 H) 7,63 (d, J=7,41 Hz, 3 H) 7,42 (t, J=7,96 Hz, 2 H) 7,19 - 7,26 (m, 1 H).
Passo 2: Sintese de 2-cloro-N,3-dimetil-N-fenilpiridina-4-carboxamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 2-cloro-N-fenilpiridina-4-carboxamida (2,0 g, 8,6 mmol) em THF seco (40 mL) a -78 °C sob azoto, foi adicionado gota a gota butil-litio 1,6M em n-hexanos (11,8 mL, 18,9 mmol) ao longo de 24 minutos. A mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 50 minutos e, em seguida, tratada com iodometano (1,8 mL, 28 mmol) gota a gota ao longo de 8 minutos. A mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 1 hora e em seguida deixada atingir lentamente a temperatura ambiente e agitada durante 20 horas. A mistura reacional foi desativada com água (20 mL) e as camadas foram separadas. A fase aquosa foi extraida com CH2CI2 (3 x 20 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (60 mL) , secas (MgS04) , filtradas, concentradas in vacuo para dar o composto em epigrafe (2,2 g, 93%) como um óleo espesso castanho. LC-MS 95%, m/z = 261,0, 263,0; RMN de 2Η (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 8,03 (d, J=4,89 Hz, 1 H) 7,23 (d, J=7,88 Hz, 2 H) 7,16 - 7,21 (m, 1 Η) 7,02 (d, J=7,25 Hz, 2 H) 6,89 (d, J=4,89 Hz, 1 H) 3,51 (s, 3 H) 2,34 (s, 3 H).
Passo 3: Sintese de ácido 2-cloro-3-metilpiridina-4- carboxílico
2-cloro-N,3-dimetil-N-fenilpiridina-4-carboxamida (2,2 g, 8,5 mmol) foi tratada com uma mistura de H2SC>4 concentrado (23,2 mL) e água (16,8 mL) e, em seguida, aquecida a 130 °C durante 46 horas. Após este tempo, a mistura reacional foi deixada atingir a temperatura ambiente e vertida sobre gelo (200 mL) e agitada até o gelo ter fundido. A mistura foi tornada alcalina (pH 8) pela adição de Na2CC>3 sólido (50,3 g) em porções. A suspensão foi filtrada e o filtrado acidificado até pH 3 pela adição de HC1 6M (aq) (—1,5 mL). O sólido resultante foi recolhido por filtração, lavado com água (20 mL) e seco in vacuo a 40 °C durante 10 horas para dar o composto em epigrafe (779 mg, 54%) como um sólido cor-de-rosa. LC-MS 100%, m/z = 171,9, 173,9; RMN de 1H (500 MHz, MeOD) δ ppm 8,30 (d, J=4,89 Hz, 1 H) 7,64 (d, J=5,04
Hz, 1H) 2,58 (s, 3H).
Passo 4: Sintese de 2-cloro-3-metilpiridina-4-carboxilato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-cloro-3-metilpiridina-4-carboxilico (780 mg, 4,5 mmol) em DMF anidra (5,0 mL), foi adicionado carbonato de potássio (1,25 g, 9,1 mmol) , seguido de iodeto de metilo (0,42 mL, 6,8 mmol) gota a gota. Foram adicionados mais 4 mL de DMF e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente sob azoto durante 18,5 horas. O solvente foi removido in vacuo e o residuo foi em seguida partilhado entre CH2CI2 (20 mL) e água (20 mL) . As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraida com CH2CI2 (3 x 15 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (2 x 30 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (40 mL) , secas (MgSCg) , filtradas e concentradas in vacuo. O residuo foi purificado por cromatografia em coluna (cartucho SNAP de 10 g, Isolera, 0-6% de acetato de etilo:heptanos) para dar o composto em epigrafe (591 mg, 59%) como um óleo incolor. LC-MS 84%, m/z = 185, 9, 187, 9; RMN de XH (500 MHz,
Clorof órmio-d) δ ppm 8,33 (d, J=5,04 Hz, 1 H) 7,54 (d, J=5,04 Hz, 1 H) 3,95 (s, 3 H) 2,60 (s, 3 H).
Passo 5: Sintese de 3-metil-2-[(oxan-4-il)amino]piridina-4-carboxilato de metilo
Uma suspensão purgada com azoto de Pd(OAc)2 (77 mg, 0,34 mmol) e 1,1'-binaftaleno-2,2'-diilbis(difenilfosfano) (430 mg, 0,69 mmol) em 1,4-dioxano (11 mL) foi aquecida a 40 °C durante 1 hora. Foram em seguida adicionados oxan-4-amina (237 pL, 2,3 mmol), uma solução de 2-cloro-3- metilpiridina-4-carboxilato de metilo (213 mg, 1,2 mmol) em dioxano desgaseifiçado (2 mL) e CS2CO3 (562 mg, 1,7 mmol) e a suspensão vermelha foi aquecida a 100 °C durante 6 horas. Depois de arrefecer até à temperatura ambiente, a mistura foi diluida com CH2CI2 (30 mL) e água (20 mL) . As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com CH2CI2 (3 x 15 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL) , secas (MgSCp) , filtradas e concentradas in vacuo. 0 resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna (cartucho SNAP de 25 g, Isolera, 0-28% acetato de etilo:heptanos), seguida de HPLC prep. (MeCN/Água) para dar o composto em epígrafe (112 mg, 39%) como um sólido cristalino branco. LC-MS 100%, m/z = 251,0; RMN de (500 MHz, MeOD) δ ppm 7,91 (d, J=5,20 Hz, 1 H) 6,77 (d, J=5,36 Hz, 1 H) 4,07 - 4,17 (m, 1 H) 3,98 (dd, J=12,06, 1,81 Hz, 2 H) 3,88 (s, 3 H) 3,55 (td, J=11,7 8, 1, 66 Hz, 2 H) 2,22 (s, 3 H) 1,97 (dd, J=12,69, 1,97 Hz, 2 H) 1,62 (qd, J=12,03, 4,41 Hz, 2 Η). NH não observado.
Passo 6: Síntese de ácido 2-[etil (oxan-4-il)amino]-3-metilpiridina-4-carboxílico
Uma solução de 3-metil-2-[(oxan-4-il)amino]piridina-4-carboxilato de metilo (67 mg, 0,27 mmol) em DMF seca (1,0 mL), foi adicionada a uma suspensão, mantida sob agitação, de hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral, 16 mg, 0,4 mmol) em DMF (0,3 mL) a 0 °C sob azoto. A mistura reacional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 30 minutos. A reação foi em seguida tratada com iodoetano (16 pL, 0,20 mmol) e agitada durante 30 minutos, e, em seguida, tratada novamente com iodoetano (16 pL, 0,20 mmol) e agitada durante mais 30 minutos. A mistura reacional foi adicionada a uma suspensão de hidreto de sódio (16 mg, 0,4 mmol) em DMF (0,3 mL) a 0 °C. Uma vez concluída a adição, a mistura reacional foi deixada atingir a temperatura ambiente e agitada durante 1 hora, antes de ser tratada com iodoetano (2 x 16 yL, 0,40 mmol) . A mistura reacional foi agitada durante mais 30 minutos. Foi adicionado hidreto de sódio (16 mg, 0,4 mmol) à mistura reacional e a mistura agitada durante 45 minutos, antes de ser tratada com iodoetano (2 x 16 yL, 0,40 mmol) e agitada durante 15 minutos, antes da adição sob azoto a uma solução de HC1 4M / dioxano (5,0 mL) com arrefecimento. A mistura reacional foi em seguida concentrada in vacuo a 40 °C, foi tratada com NaOH 1M (aq) (5 mL) e basificada pela adição de 10 pastilhas de NaOH até pH 12 com arrefecimento. O pH foi ajustado de novo até pH 10 pela adição de HC1 6M. A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura reacional foi em seguida acidificada até pH 5 pela adição de HC1 1M (80 gotas) . A solução resultante foi extraida com CHCI3 / IPA (1:1) (6 x 10 mL). Os extratos combinados foram concentrados in vacuo para dar o composto em epigrafe em bruto (207 mg) como um óleo amarelo. LC-MS 100%, m/z = 265,1. Este material foi utilizado diretamente na reação de acoplamento como se descreve a seguir.
Passo 7: Sintese de N-[ (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-2-[etil(oxan-4-il)amino]-3-metilpiridina-4-carboxamida
Uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-[etil (oxan-4-il)amino]-3-metilpiridina-4-carboxílico (20 mg, 0,08 mmol) em DMF seca (1,0 mL) a 0 °C sob azoto, foi tratada com HATU (37 mg, 0,1 mmol) e DIPEA (26 yL, 0,15 mmol), gota a gota. A solução resultante foi agitada durante 10 minutos e, em seguida, tratada com 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 15 mg, 0,09 mmol). A suspensão resultante foi agitada a 0 °C durante 20 minutos e, em seguida, agitada à temperatura ambiente durante 18,5 horas. A mistura reacional foi arrefecida até 0 °C e novamente tratada com HATU (120 mg, 0,31 mmol) e DIPEA (84 pL, 0,48 mmol). Depois de agitar durante 10 minutos, foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 49 mg, 0,29 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 1 hora a 0 °C e foi em seguida levantada do banho de gelo e agitada à temperatura ambiente durante 48 horas. A mistura reacional foi diluida com água (20 mL) e CH2CI2 (20 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraida com CH2CI2 (3 x 15 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (2 x 25 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 25 mL) , secas (MgSCg) , filtradas e concentradas in vacuo. O residuo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna (cartucho SNAP de 10 g, Isolera, 0-40% de MeOH:CH2Cl2 e 0-25% de MeOH (contendo 10% NH4OH) :CH2CÍ2) para dar 6,7 mg (22% de rendimento) do composto em epigrafe como um sólido esbranquiçado. LC-MS 100%, m/z = 399, 1; RMN de XH (250 MHz, DMSO) δ 11,49 (s, 1H) , 8,32 (t, J = 4,9 Hz, 1H) , 8,14 (d, J = 4,9 Hz, 1H) , 6,84 (d, J = 4,9 Hz, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,26 (d, J = 4,7
Hz, 2H) , 3,84 (dd, J = 10,3, 3,5 Hz,2H), 3,21 (dt, J = 13,6, 4,6 Hz, 5H) , 2,19 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H) , 2,11 (s, 3H) , 1,62 (dt, J = 21,1, 6,6 Hz, 4H) , 0,80 (t, J = 6,9 Hz, 3H) .
Composto 356: 5-cloro-3-{etil[(lr,4r)-4- (dimetilamino)ciclo-hexil]amino}-N-[(5-fluoro-4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-fluoro-4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 2-cianoacetamida (689 mg, 8,2 mmol) em EtOH anidro (7,0 mL) a 75 °C, foi adicionada 3-fluoropentano-2,4-diona (880 mg, 7,5 mmol), seguida de piperidina (96 pL, 0,97 mmol). A mistura reacional foi agitada a esta temperatura durante 3 horas e a mistura reacional deixada atingir a temperatura ambiente, antes de ser armazenada no frigorífico durante 4 dias. O sólido bege foi recolhido por filtração e lavado com EtOH frio (4 x 0,4 mL) até o filtrado correr transparente. O sólido bege resultante foi seco in vacuo a 40 °C durante 5 horas para dar o composto em epígrafe (733 mg, 58%) como um sólido bege. LC-MS 97%, m/z = 166,9, RMN de (500 MHz,
Clorofórmio-d) δ ppm 13,67 (s. 1., 1 H) 2,46 (d, J=2,05 Hz, 3 H) 2,45 (d, J=2,84 Hz, 3 H) .
Passo 2: Síntese de 3-(aminometil)-5-fluoro-4, 6-dimetil- 1,2-di-hidropiridin-2-ona
Uma solução de 5-fluoro-4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo 0,05M (731 mg, 4,4 mmol) em NH3 l,75M/MeOH (87 mL) foi feita passar através do hidrogenador de fluxo Η-Cube a 80 °C e 50 bar a um caudal de 1 mL/min. A solução resultante foi concentrada in vacuo. 0 sólido resultante foi dividido em 2 lotes e 350 mg do produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna (cartucho SNAP de 25 g, Isolera, 0-25% de MeOH (contendo 10% NH4OH):CH2C12) para dar o composto em epígrafe (307 mg, 20%) como um sólido esbranquiçado e uma mistura 1:1 de produto:material de partida. LC-MS (ELS) 100%, m/z = 170,9, RMN de 1H (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 3,79 (s, 2 H) 2,31 (d, J=2,84 Hz, 3 H) 2,25 (d, J=2,05 Hz, 3 H) .
Passo 3: Síntese de ácido 5-cloro-3-{etil[(lr,4r)-4- (dimetilamino)ciclo-hexil]amino}-2-metilbenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-{etil [ (lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil]amino}-2-metilbenzoato de metilo (1,0 g, 2,8 mmol) em THF (21 mL) , foi adicionada uma solução de NaOH (aq) 4M (21,3 mL, 85,0 mmol), seguida de MeOH (8,0 mL) . A solução resultante foi agitada a 50 °C durante 16,5 horas e arrefecida até à temperatura ambiente. Os solventes orgânicos foram removidos in vacuo e a fase aquosa remanescente foi tratada com uma solução de HC1 6M (aq) (14 mL) para ajustar o pH a 7 e, em seguida, HC1 0,1 M (aq) (24 mL) para ajustar o pH a 4. A mistura foi extraída com acetato de etilo (3 x 35 mL). O extrato aquoso foi ainda extraído com uma mistura de
CHC13:1 PA (1:1) (3 x 30 mL) . Os extratos de CHC13:IPA combinados foram secos (MgS04) , filtrados e concentrados in vacuo e, em seguida, exaustivamente secos na linha de alto vácuo. O sólido resultante foi submetido a evaporação azeotrópica com tolueno (3 x 20 mL). Foi em seguida
adicionado CH2CI2 (10 mL) à amostra, concentrada in vacuo e adicionalmente seca na linha de alto vácuo durante várias horas. Isto deu o composto em epigrafe (831 mg, 88%) como um sólido branco. LC-MS 92m/z = 339,0, 341,0; RMN de 1H (500 MHz, Clorof órmio-d) δ ppm 12,21 (s, 1 H) 7,69 (d, J=2,05 Hz, 1 H) 7,22 - 7,26 (m, 1 H) 2,99 - 3,11 (m, 3H) 2,69 - 2,79 (m, 7 H) 2,47 (s, 3 H) 2,28 (d, J=ll,98 Hz, 2 H) 2,05 (d, J=13,0 8 Hz, 2 H) 1,35 - 1, 65 (m, 4 H) 0,88 (t, J=7,01 Hz, 3 H).
Passo 4: Sintese de 5-cloro-3-{etil[(lr,4r)-4- (dimetilamino)ciclo-hexil]amino}-N-[(5-fluoro-4,6-dimetil- 2- oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-cloro-3-{etil [ (lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil]amino}-2-metilbenzoico (100 mg, 0,27 mmol) em DMF anidra (2,0 mL) a 0 °C sob azoto, foi tratada com HATU (121 mg, 0,32 mmol) e DIPEA (93 yL, 0,53 mmol), gota a gota. A solução resultante foi agitada durante 10 minutos e, em seguida, tratada com 3- (aminometil)-5-fluoro-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2- ona (50%, 99 mg, 0,29 mmol) . A suspensão resultante foi agitada a 0 °C durante 1 hora e, em seguida, agitada
durante 17 horas à temperatura ambiente. A mistura reacional foi partilhada entre água (15 mL) e CH2CI2 (20 mL) . As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraida com CH2CI2 (2 x 15 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com uma solução saturada de NaHC03 (aq) (30 mL) , água (2 x 25 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), secos (MgS04) , filtrados e concentrados in vacuo. O residuo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash (cartucho SNAP de 10 g, Isolera, 0-29% de MeOH:CH2Cl2) para dar o composto em epigrafe (68 mg, 52%) como um sólido bege. LC-MS 99%, m/z = 491, 1, 493, 1; RMN de ΧΗ (500 MHz, Metanol-d4) δ 7,17 (d, J = 1,9 Hz, 1H) , 7,02 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 4,59 (s, 1H) , 4,44 (s, 2H) , 3,06 (q, J = 7,0 Hz, 2H) , 2,69 (tt, J = 12,1, 3,2
Hz, 1H) , 2,41 - 2,29 (m, 10H) , 2,24(d, J = 2,8 Hz, 3H) ,
2,20 (s, 3H), 1,91 (dd, J = 27,7, 12,2 Hz, 4H), 1,44 (q, J = 12,3, 11,1 Hz, 2H) , 1,30 - 1,20 (m, 2H) , 0,83 (t, J = 7,0 Hz, 3H). Presume-se que um protão é coincidente com um pico do solvente.
Composto 347: 5-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-{etil[(lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil]amino}benzamida e Composto 348: 5-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-{etil[(ls,4s)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil] amino}benzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-2-[2- (trimetilsilil)etinil]benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 2-bromo-5-clorobenzoato de metilo (14,8 g, 59 mmol) em trietilamina (124 mL, 890 mmol) foi adicionado iodeto de cobre (339 mg, 1,8 mmol) e trif enilf osf ina (778 mg, 3,0 mmol) à temperatura ambiente, sob azoto. Esta mistura foi purgada com azoto, antes da adição de etinil(trimetil)silano (12,5 mL, 89 mmol) e Pd(OAc)2 (266 mg, 1,2 mmol). A mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 20 horas e concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido em água desionizada (50 mL) e AcOEt (50 mL) , e filtrado através de
Celite. O bolo de filtração foi lavado com AcOEt (50 mL) , antes das fases terem sido separadas e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 50 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (cartucho Isolute com 10 g de Sílica, 1 - 15% de AcOEt: Heptanos) para dar o composto em epígrafe (16,2 g, 93%) como um sólido laranja. LC-MS 91%, m/z = 267,4, 268, 9; RMN de XH (500 MHz, Clorof órmio-d) δ ppm 7,90 (d, J=2,21 Hz, 1 H) 7,52 (d, J=8,35 Hz, 1 H) 7,42 (dd, J=8,28, 2,29 Hz, 1 H) 3,93 (s, 3 H) 0,28 (s, 9H) .
Passo 2: Síntese de 5-cloro-2-etinilbenzoato de metilo
Uma suspensão de carbonato de potássio (5,0 g, 36 mmol) em metanol (20 mL) foi agitada sob azoto, enquanto se adicionava uma solução de 5-cloro-2-[2- (trimetilsilil)etinil]benzoato de metilo (4,8 g, 18,0 mmol) em metanol (50 mL) . A mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 2 horas. A mistura reacional foi filtrada e o sólido lavado com metanol. O filtrado foi concentrado in vacuo e, em seguida, redissolvido em metanol (50 mL) , e cuidadosamente tratado com cloreto de acetilo (4,0 mL) . A mistura reacional foi agitada de um dia para o outro e concentrada in vacuo. Foi adicionado TBME (50 mL) ao residuo e a suspensão resultante filtrada. O filtrado foi lavado com uma solução saturada de NaHCb (40 mL) . As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraida com TBME (3 x 40 mL). Os orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados in vacuo. O residuo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash (cartucho Isolute de 50 g, 0-10% TBME:Heptanos) para dar o composto em epigrafe (1,2 g, 33%) como um sólido branco. LC-MS 93%, m/z = 194, 9, 196, 9; RMN de (500 MHz,
Clorofórmio-d) δ ppm 7,94 (s, 1 H) , 7,56 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 7,46 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 3,95 (s, 3 H) , 3,44 (s, 1 H) .
Passo 3: Sintese de 5-cloro-2-etilbenzoato de metilo
A uma solução de 5-cloro-2-etinilbenzoato de metilo (1,13 g, 5,8 mmol) em TBME (50 mL) foi adicionado Pd/C (10%) (50% de água, 0,61 g, 0,29 mmol). A mistura reacional foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 130 minutos. A mistura foi filtrada através de Celite e o bolo de filtração foi lavado com TBME. 0 filtrado foi concentrado in vacuo para dar o composto em epigrafe (1,08 g, 74%) como um óleo castanho-pálido. LC-MS 79%, m/z = 198,9 / 200,9; RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) δ ppm 7,85 (s, 1 H) 7,40 (d, J=8,20 Hz, 1 H) 7,22 (d, J=8,20 Hz, 1 H) 3,91 (s, 3 H) 2,95 (q, J=7,46 Hz, 2 H) 1,22 (t, J=7,49 Hz, 3 H).
Passo 4: Síntese de 5-cloro-2-etil-3-nitrobenzoato de me tilo
Uma solução de 5-cloro-2-etilbenzoato de metilo (1,08 g, 5,4 mmol) em ácido sulfúrico concentrado (7,0 mL) foi arrefecida até -5 °C num banho de acetona/gelo. Foi adicionada, gota a gota, uma mistura de ácido nitrico a 70% (0,45 mL, 7,1 mmol) e ácido sulfúrico concentrado (0,5 mL) à mistura reacional a -5 °C ao longo de 15 minutos. A mistura reacional amarela-pálida resultante foi agitada a -5 °C durante 1 hora, antes de ser vertida sobre gelo (100 mL) e extraida com CH2CI2 (3 x 20 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água desionizada (20 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , secas sobre Na2SC>4, filtradas e concentradas in vacuo. O óleo resultante foi adicionado a uma solução contendo metanol (25 mL) e cloreto de tionilo (0,75 mL) a 0 °C. Após adição, a mistura foi aquecida sob refluxo suave durante 6 horas, antes de se arrefecer até à temperatura ambiente e concentrar in vacuo para dar o composto em epigrafe (1,2 g) como um óleo laranja que foi utilizado sem mais purificação no passo seguinte.
Passo 5: Síntese de 3-amino-5-cloro-2-etilbenzoato de metilo
A uma solução de 5-cloro-2-etil-3-nitrobenzoato de metilo (1,2 g, 5,0 mmol) em metanol (50 mL) e água desionizada (25 mL), foi adicionado cloreto de amónio (2,6 g, 50 mmol).
A mistura foi aquecida até 70 °C, antes da adição de ferro (1,7 g, 30 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 70 °C durante 3,5 horas, filtrada a quente através de Celite e a almofada de filtração foi lavada com MeOH (20 mL). O filtrado foi concentrado in vacuo e o resíduo aquoso foi dissolvido numa solução saturada de NaHCC>3(aq) (50 mL) e AcOEt (100 mL) . As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com NaHCCqíaq) saturado (2 x 65 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL) , seca sobre MgSCg, filtrada e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (cartucho SNAP de 25 g, Isolera, 0-11% acetato de etilo/heptanos) para dar o composto em epígrafe (372 mg, 33%) como um óleo amarelo. LC-MS 94%, m/z = 213,9, 215,9; RMN de (500 MHz,
Clorof órmio-d) d ppm 7,18 (d, J=2,21 Hz, 1 H) 6,80 (d, J=2,05 Hz, 1 H) 3,88 (s, 3 H) 3,85 (d, J=2,52 Hz, 2 H) 2,75 (q, J=7,57Hz, 2 H) 1,21 (t, J=7,49 Hz, 3 H).
Passo 6: Síntese de 3-[ (4-{ [ (terc- butoxi)carbonil]amino}ciclo-hexil)amino]-5-cloro-2-etilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-etilbenzoato de metilo (365 mg, 1,7 mmol) em 1,2-dicloroetano (20 mL) sob azoto, foi adicionado (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (364 mg, 1,7 mmol), seguido de ácido acético (587 pL, 10,3 mmol). A solução foi agitada durante 10 minutos, antes da adição em porções de triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,09 g, 5,1 mmol) ao longo de 1 hora. A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 17 horas,, antes de ser tratada com (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (364 mg, 1,7 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 30 minutos e, em seguida, tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,09 g, 5,1 mmol) ao longo de 2,5 horas. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante mais 26 horas, antes da adição de água desionizada (40 mL) . A mistura foi neutralizada com NaHCCp sólido (2,95 g) e foi extraída com acetato de etilo (3 x 50 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (35 mL) , secos (MgS04) , filtrados e concentrados in vacuo. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna (cartucho SNAP de 25 g, Isolera, 0-18% de AcOEt / Heptanos) para dar o composto em epígrafe como um óleo (623 mg, 85%), como uma mistura de isómeros cis/trans. LC-MS 46,1%, 2,61 min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 411,1, 413,1 e 50,2%, 2,66 min
(método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 411,1, 413,1; RMN de XH (500 MHz, Clorofórmio-d) d ppm 7,05 (dd, J=7,09, 2,05 Hz, 1 H) 6,68 (t, J=2,3 6 Hz, 1 H) 4,36 - 4, 63 (m, 1 H) 3,88 (d, J=3,31 Hz, 3 H) 3,62 - 3,78 (m, 1 H) 3,49 (s. 1., 1 H) 3,23 (s. 1., 1 Η) 2, 63 - 2,76 (m, 2 Η) 2,07 - 2,18 (m, 2 Η) 1,77 - 1,89 (m, 2 Η) 1,69 (s. 1., 1 Η) 1,46 (s, 9 Η) 1,27 (m, 3 Η) 1,13-1,24 (m, 3 Η).
Passo 7: Síntese de 3-[(4-{[(terc- butoxi) carbonil]amino}ciclo-hexil) (etil)amino]-5-cloro-2-etilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-[ (4-{ [ (terc-butoxi)carbonil]amino}ciclo-hexil)amino]-5-cloro-2-etilbenzoato de metilo (200 mg, 0,49 mmol) em 1,2- dicloroetano seco (5,0 mL), foi adicionado acetaldeído (54 yL, 1,0 mmol), seguido de ácido acético (167 yL, 2,9 mmol) . A mistura reacional foi agitada durante 50 minutos, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (309 mg, 1,5 mmol) ao longo de 2 horas e a reação foi agitada durante 20 horas. A mistura reacional foi tratada com acetaldeído (54 yL, 1,0 mmol) agitada durante 1 hora e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (309 mg, 1,5 mmol) em porções ao longo de 2 horas. A mistura reacional foi agitada durante mais 22 horas e, em seguida, tratada com acetaldeído (136 yL, 2,4 mmol) e agitada durante 1 hora, seguida de triacetoxiboro-hidreto de sódio (516 mg, 2,4 mmol) ao longo de 1,5 horas e agitada durante 22 horas. A mistura reacional foi tratada com acetaldeído (109 yL, 2,0 mmol) e agitada durante 1,5 horas, antes de ter sido adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (413 mg, 2,0 mmol) ao longo de 2 horas, juntamente com dicloroetano (5,0 mL) para ajudar à agitação. A mistura reacional foi agitada durante 19 horas, antes da adição de acetaldeido (82 yL, 1,5 mmol), agitada durante 1,5 horas, seguida de triacetoxiboro-hidreto de sódio (309 mg, 1,5 mmol) ao longo de 45 minutos. A mistura reacional foi agitada durante mais 70 horas, antes de ser diluida com água (20 mL) e o pH foi ajustado a 8 pela adição gradual de NaHCCb sólido (2,53 g) . As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraida com CH2CI2 (3 x 20 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (60 mL) , secas (MgSCg) , filtradas e concentradas in vacuo. O residuo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash (cartucho SNAP de 10 g, Isolera, 0-30% de AcOEt/Heptanos) para dar o composto em epigrafe (163 mg, 73%) como um óleo amarelo e uma mistura de isómeros cis/trans. LC-MS 100%, 5,83 min (método de LC-MS de 7 minutos), m/z = 439,2, 441,2; RMN de XH (500 MHz,
Clorofórmio-d) δ ppm 7,45 - 7,55 (m, 1 H) 7,22 (dd, J=4,33, 2,13 Hz, 1 H) 4,25 - 4, 67 (m, 1 H) 3,90 (d, J=2,21 Hz, 3 H) 3,29 -3,76 (m, 1 H) 2,95 - 3,11 (m, 4 H) 2,58 - 2, 96 (m, 1 H) 1, 62 - 2,03 (m, 4 H) 1,38 - 1,53 (m, 11 H) 1,01 - 1,14 (m, 4 H) 0,81 - 0, 94 (m, 4 H) .
Passo 8: Sintese de ácido 3-[ (4-{ [ (terc- butoxi) carbonil]amino}ciclo-hexil) (etil)amino]-5-cloro-2-etilbenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-[ (4-{ [ (terc-butoxi)carbonil]amino}ciclo-hexil)(etil)amino]-5-cloro-2-etilbenzoato de metilo (156 mg, 0,36 mmol) em THF (4,0 mL) e MeOH (0,29 mL) , foi adicionada uma solução de NaOH (aq) 4Μ (2,7 mL, 10,7 mmol). A solução resultante foi agitada a 50 °C durante 17 horas. A mistura reacional foi tratada com NaOH (aq) 4M (0,5 mL, 2,0 mmol) e a agitação foi prosseguida a 50 °C durante 32 horas. O aquecimento foi retirado e a mistura reacional foi deixada agitar à temperatura ambiente durante 65 horas. A mistura reacional foi tratada com NaOH (aq) 4M (1,0 mL, 4,0 mmol) e aquecida de novo até 50 °C durante 24 horas. Os solventes orgânicos foram removidos in vacuo e a fase aquosa foi tratada com uma solução de ácido citrico 0,5M (20 mL) para ajustar o pH a 4/5. O produto foi extraido com acetato de etilo (3 x 25 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL) , secas (MSO4) , filtradas e concentradas in vacuo e, em seguida, adicionalmente secas sobre a linha de alto vácuo durante 4 horas para dar o composto em epigrafe (142 mg, 92%) como um sólido branco e uma mistura de isómeros cis/trans. LC-MS 98%, 5,49 min (método de LC-MS de 7 minutos), m/z = 425,1, 427,1. RMN de mostra uma mistura de isómeros cis/trans.
Passo 9: Sintese de N-{4-[(5-cloro-3-{[(4,6-dimetil-2-oxo- l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]carbamoil}-2- etilfenil)(etil)amino]ciclo-hexil}carbamato de terc-butilo
Uma solução, mantida sob agitação, de ácido 3-[ (4-{ [ (terc-butoxi)carbonil]amino}ciclo-hexil)(etil)amino]-5-cloro-2-etilbenzoico (139 mg, 0,33 mmol) em DMF anidra (2,0 mL) a 0 °C sob azoto, foi tratada com HATU (149 mg, 0,39 mmol) e DIPEA (114 yL, 0,65 mmol). A solução resultante foi agitada durante 10 minutos e, em seguida, tratada com 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 61 mg, 0,36 mmol). A suspensão resultante foi agitada a 0 °C durante 1 hora e, em seguida, agitada à temperatura ambiente durante 98,5 horas. A mistura reacional foi tratada com HATU (37 mg, 0,1 mmol), agitada durante 1 hora e, em seguida, 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l, 2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 11 mg, 0,07 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante mais 23 horas e, em seguida, partilhada entre água (20 mL) e CH2CI2 (20 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraida com CH2CI2 (3x10 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com uma solução saturada de NaHC03 (aq) (40 mL) , água (20 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 20 mL) , seca (MgS04) , filtrada e concentrada in vacuo. O residuo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash (cartucho SNAP de 10 g, Isolera, 0-13% de MeOH/CH2Cl2) e triturado de éter /heptano (2,0 mL) com aplicação de ultrassons e as águas-mães decantadas. O sólido remanescente foi seco sob alto vácuo para dar o composto em epigrafe (101 mg, 52%) como um sólido bege. LC-MS 93%, 4,54 min (método de LC-MS de 7 minutos), m/z = 559,2, 561,2. RMN de mostra uma mistura de isómeros cis/trans.
Passo 10: Sintese de 3-[(4-aminociclo-hexil)(etil)amino]-5-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-etilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de N-{4-[ (5-cloro-3-{[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]carbamoil}-2-etilfenil)(etil)amino]ciclo-hexil}carbamato de terc-butilo (100 mg, 0,18 mmol) em CH2CÍ2 (4,0 mL) a 0 °C, foi adicionado ácido trifluoroacético (1,0 mL) . A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 40 minutos e, em seguida, agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. A mistura reacional foi concentrada in vacuo e o resíduo foi basificado com uma solução saturada de NaHCCb (aq) (10 mL) até o pH ser 8. O resíduo aquoso foi extraído com 20% de MeOH/CH2Cl2 (4 x 15 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram secas (MSO4) , filtradas e concentradas in vacuo para dar o composto em epígrafe (108 mg, 113%) como um sólido amarelo. LC-MS 48%, 2,88 min (método de LC-MS de 7 minutos), m/z = 459,1 e 39%, 2,96 min (método de LC-MS de 7 minutos), m/z = 459,1. RMN de mostra uma mistura de isómeros cis/trans.
Passo 11: Síntese de 5-cloro-N-[ (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-{etil[(lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil]aminojbenzamida e 5-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-{etil[ (ls,4s)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil]amino jbenzamida.
Uma solução, mantida sob agitação, de 3-[ (4-aminociclo-hexil) (etil)amino]-5-cloro-N-[ (4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-etilbenzamida (80 mg, 0,18 mmol) em 1,2-dicloroetano (3,0 mL), foi tratada com ácido acético (60 yL, 1,0 mmol) e paraformaldeido (31 mg, 1,0 mmol) . A mistura reacional foi agitada durante 35 minutos sob azoto, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (222 mg, 1,0 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 16,5 horas, antes da adição de paraformaldeido (16 mg, 0,52 mmol) e a agitação foi prosseguida durante 1 hora, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (111 mg, 0,52 mmol). A mistura reacional foi agitada durante mais 6 horas e, em seguida, tratada com paraf ormaldeido (10 mg, 0,35 mmol), agitada durante 10 minutos, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (74 mg, 0,35 mmol) e 1,2-dicloroetano (1,0 mL) e agitada durante mais 89 horas. A mistura reacional foi diluida com água (20 mL) e basificada até pH 8 pela adição de NaHCCq sólido (1,45 g) . Foi adicionado CH2CI2 (20 mL) e as camadas foram separadas. A fase aquosa foi extraida com CH2CI2 (3x10 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL) , secas (MgS04) , filtradas e concentradas in vacuo. O residuo em bruto foi purificado por HPLC preparativa (MeCN / água + 0,2% hidróxido de amónio) para dar o composto isomérico trans puro em epigrafe 347: 5-cloro-N-[ (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-{etil[(lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil]aminojbenzamida (22 mg, 26%) como um sólido branco e o composto isomérico cis puro em epigrafe 348: 5-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-{etil[(ls,4s)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil]aminojbenzamida (18 mg, 21%) como um sólido branco. 5-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-{etil[(lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexiljamino jbenzamida LC-MS 100%, 3,07 min (método de LC-MS de 7 minutos), m/z = 487,2, 489, 2; RMN de XH (500 MHz, Clorof órmio-d) δ 11,09 (s, 1H) , 7,11 - 7,04 (m, 2H) , 7,00 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 5,94 (s, 1H) , 4,51 (d, J = 5,9 Hz, 2H) , 3,00 (q, J = 7,0
Hz, 2H) , 2,79 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,65 (t, J = 11,5 Hz, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,24 (s, 6H), 2,22 (s, 3H), 2,14 (t, J = 11,4 Hz, 1H) , 1,87 (d, J = 10,3 Hz, 4H), 1,37 (q, J = 12,1
Hz, 2H), 1,17 (q, J = 11,5 Hz, 2H), 1,02 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 0,85 (t, J = 7,0 Hz, 3H). 5-cloro-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-etil-3-{etil[(ls,4s)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil]aminojbenzamida LC-MS 100%, 3,13 min (método de LC-MS de 7 minutos), m/z = 487,2, 489,2; RMN de XH (50 0 MHz, clorofórmio-d) δ 10,72 (s, 1H) , 7,09 (d, J = 2,0 Hz, 2H) , 7,01 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 5,93 (s, 1H) , 4,51 (d, J = 5,9 Hz, 2H) , 3,01 (q, J = 6,7 Hz, 3H) , 2,89 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,39 (s, 3H), 2,23 (s, 9H), 2,06 (s, 1H), 1,87 - 1,72 (m, 4H) , 1,43 (td, J = 8,3, 3,8 Hz, 2H) , 1,33 (dd, J = 12,6, 9,2 Hz, 2H) , 1,01 (t, J = 7,5 Hz, 3H) , 0,84 (t, J = 7,0 Hz, 3H) .
Composto 92 : 3-(alil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5- cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Sintese de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico
Foi adicionado ácido 5-cloro-2-metilbenzoico (4,0 g, 23 mmol) em porções a H2SO4 conc. arrefecido (27 mL) a -10 °C. Após 10 minutos, foi adicionada, gota a gota a -10 °C, uma mistura de nitração {preparada misturando HNO3 conc. (3,3 g, 52, 68 mmol) com H2SO4 conc. (4,4 mL) } . A massa reacional resultante foi agitada a -10 °C durante 30 minutos. Após conclusão, a mistura reacional foi vertida sobre água gelada, o sólido precipitado foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo dando o composto em epigrafe (4,95 g, 99%).
Passo 2: Sintese de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico (6,75 g, 31,3 mmol) em DMF (33 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (13,2 g, 125 mmol) e iodeto de metilo (17,8 g, 125 mmol). A mistura foi aquecida a 60 °C durante 4 h. Após conclusão, foi adicionada água à massa reacional e a extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por cromatografia em coluna sobre silica gel dando o composto em epigrafe (6,0 g, 83%) .
Passo 3: Síntese de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (6,0 g, 26 mmol) em etanol (60 mL), foram adicionados sob agitação cloreto de amónio (6,0 g, 110 mmol) dissolvido em água (60 mL) e ferro em pó (11,9 g, 208 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 1 h. Após conclusão, foi adicionada água à massa reacional e a mistura reacional foi filtrada através de celite, o filtrado foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida dando o composto em epígrafe que foi utilizado tal e qual.
Passo 4: Síntese de 5-cloro-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo (5,0 g, 19 mmol) e di-hidro-2H-pirano-4(3H)-ona (2,86 g, 28,6 mmol) em metanol (50 mL) , foi adicionado ácido acético (2,3 g, 38 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 8 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (3,0 g, 48 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epigrafe (3,0 g, 42 %) .
Passo 5: Sintese de 3-(alil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-( (tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metilo (1,0 g, 3,3 mmol) em DMF (10 mL) , foi adicionado NaH (0,25 g, 10 mmol) a 0 °C e a mistura agitada durante 20 minutos. Foi adicionado 3-bromoprop-l-eno (1,7 g, 14,13 mmol) e a mistura foi aquecida a 80 °C durante 15 h. Após conclusão, a reação foi desativada com água gelada e a extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas e o produto em bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna dando o composto em epigrafe (0,50 g, 44 %).
Passo 6: Sintese de 3-(alil(tetra-hidro-2H-piran-4- il)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,092 g, 2,32 mmol) a uma solução de 3-(alil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (0,50 g, 1,54 mmol) em etanol (15 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas dando o respetivo ácido (0,47 g, 98%). O ácido anterior (0,47 g, 1,52 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (5 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)-
4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,462 g, 3,04 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (1,18 g, 2,28 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido que foi filtrado e seco para proporcionar o composto em epigrafe (0,40 g, 59%). LCMS: 444,25 (M + 1)+; HPLC: 96, 85% (a 254 nm) (Tr;6,310; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de XH (DMSO-ch, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H) , 8,22 (t, 1H) , 7,16 (s, 1H) , 6,93 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 5,56-5, 62 (m, 1H) , 5, 02-5, 07 (m, 1H) , 4, 94-4, 96 (m, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=3,6 Hz), 3,83 (d, 2H, J=9, 6 Hz), 3,64 (d, 2H, J=4 Hz), 3,23 (t, 2H, J=10 Hz), 2,97 (m, 1H) , 2,18 (s, 3H) , 2,17 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,54-1,60 (m, 4H).
Composto 98: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(propil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3- (alil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil-2-metilbenzamida (0,10 g) em MeOH (10 mL) foi adicionado Pd a 10%/C (0,03 g) e a reação agitada à temperatura ambiente sob hidrogénio (pressão de balão) durante 2 h. Após conclusão, a mistura reacional foi filtrada através de celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para se obter sólido em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (0,02 g, 20%). LCMS: 445,25 (M + 1)+; HPLC: 90,40% (a 254 nm) (Tr; 5, 609; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-dfj, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H) , 8,23 (t, 1H) , 7,19 (s, 1H) , 6,93 (d, 1H, J=l,6 Hz), 5,88 (s, 1H) , 4,24 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,83 (d, 2H, J=10,4 Hz), 3,22-3,25 (m, 2H), 2,94 (t, 2H, J=7,2 Hz), 2,88-2, 90 (m, 1H) , 2,18 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,56 (m, 4H) , 1,14-1,23 (m, 2H) , 0,75 (t, 3H, J=8 Hz).
Composto 104: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(isobutil(metil)amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-3-(isobutilamino)-2- metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo (5,0 g, 25 mmol) e isobutiraldeído (4,5 g, 62 mmol) em metanol (50 mL) , foi adicionado ácido acético (3,0 g, 50 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (3, 94 g, 62 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (6,0 g, 94 %) .
Passo 2: Síntese de 5-cloro-3-(isobutil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-(isobutilamino)-2-metilbenzoato de metilo (1,0 g, 3,9 mmol) em acetonitrilo seco (10 mL), foram adicionados carbonato de césio (2,55 g, 7,8 mmol) e iodeto de metilo (5,55 g, 39 mmol) . A mistura foi aquecida a 80 °C durante 12 h. Após conclusão, a mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada. O resíduo foi lavado com acetato de etilo e o filtrado foi concentrado ao composto em epígrafe (1,0 g, 95 %) .
Passo 3: Síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(isobutil(metil)amino)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,22 g, 5,5 mmol) a uma solução de 5-cloro-3-(isobutil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1,0 g, 3,7 mmol) em EtOH (5 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas dando o respetivo ácido (0, 900 g, 95 %) . O ácido (0,30 g, 1,17 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (1,5 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,357 g, 2,34 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (0,915 g, 1,76 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (0,245 g, 53%). LCMS: 390,25 (M + 1)+; HPLC: 97,59% (a 254 nm) (Tr; 6, 063; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H) , 8,20 (t, 1H) , 7,07 (s, 1H) , 6,90 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=4,4 Hz), 2,63 (d, 2H, J=7,2 Hz), 2,54 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,16 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,75-1,78 (m, 1H), 0,85 (d, 6H, J=6 Hz).
Composto 105: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(isobutil)amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-3-(etil(isobutil)amino)-2- metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-(isobutilamino)-2-metilbenzoato de metilo (1,0 g, 3,9 mmol) em DMF seca (10 mL) , foram adicionados carbonato de césio (2,55 g, 7,82 mmol) e iodeto de etilo (6,09 g, 39,1 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 12 h. Após conclusão, a massa reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada. O resíduo foi lavado com acetato de etilo e o filtrado foi concentrado para dar material em bruto que foi em seguida utilizado tal e qual no passo seguinte (1,0 g, 91 %).
Passo 2: Síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(isobutil)amino)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,212 g, 5,28 mmol) a uma solução de composto 7 (1,0 g, 3,50 mmol) em EtOH (5 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,900 g). 0 ácido (0,90 g, 3,33 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (4,5 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (1,01 g, 6,67 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (2,60 g, 4,9 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. A mistura foi vertida para gelo para dar um sólido, este foi filtrado e purificado por lavagens com acetonitrilo e éter dietilico para proporcionar o composto em epígrafe (1,0 g, 75%). LCMS: 404,25 (M + 1)+; HPLC: 90,28% (a 254 nm) (Tr;6,063; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de XH (DMSO-ch, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 8,19 (t, 1H) , 7,10 (s, 1H) , 6,90 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,24 (d, 2H, J=4,8 Hz), 2,86 (q, 2H, J=7,2 Hz), 2,73 (d, 2H, J=7,6 Hz), 2,18 (s, 3H), 2,16 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,57-1,61 (m, 1H) , 0,91 (t, 3H, J=6, 8
Hz) , 0, 82 (d, 6H, J=6,4 Hz) .
Composto 117: 5-cloro-3-((ciclopentilmetil) (metil) amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-3-((ciclopentilmetil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo (3,0 g, 15 mmol) e ciclopentanocarbaldeído (2,2 g, 22 mmol) em metanol (30 mL), foi adicionado ácido acético (1,8 g, 30 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 8 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (2,4 g, 37 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (4,2 g, 99%) .
Passo 2: Síntese de 5-cloro-3-((ciclopentilmetil)(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-((ciclopentilmetil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1,0 g, 3,5 mmol) em acetonitrilo (10 mL), foram adicionados carbonato de césio (2,3 g, 7,1 mmol) e iodeto de metilo (5,0 g, 35 mmol) . A mistura foi aquecida a 80 °C durante 12 h. arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada. O resíduo foi lavado com acetato de etilo, e o filtrado foi concentrado e, em seguida, purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (1,0 g, 95%) .
Passo 3: Síntese de 5-cloro-3- ((ciclopentilmetil)(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,206 g, 15,1 mmol) a uma solução de 5-cloro-3-((ciclopentilmetil)(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1,0 g, 3,38 mmol) em etanol (10 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 h. O etanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas dando o respetivo ácido (0,9 g). O ácido anterior (0,3 g, 1,06 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (1,5 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)-4,6- dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,324 g, 2,12 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter sido adicionado PYBOP (0,831 g, 1,57 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. A mistura foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo para proporcionar o composto em epígrafe (0,25 g, 56%) . LCMS: 416,15 (Μ + 1)+ ; HPLC: 92,58% (a 254 nm) (Tr;6,169; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-d<j, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 8,19 (t, 1H) , 7,08 (s, 1H) , 6,89 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=4,4 Hz), 2,77 (d, 2H, J=7,2 Hz), 2,57 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 2,04-2,06 (m, 1H) , 1, 63-1, 65 (m, 2H) , 1,49-1,52 (m, 2H) , 1,45-1,46 (m, 2H), 1, 15-1, 18 (m, 2H) .
Composto 118: 5-cloro-3-((ciclopentilmetil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-3- ((ciclopentilmetil)(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-((ciclopentilmetil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1,0 g, 3,54 mmol) em DMF (10 mL) , foram adicionados carbonato de césio (2,31 g, 7,09 mmol) e iodeto de etilo (5,53 g, 35,4 mmol) . A massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 12 h. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada. O resíduo foi lavado com acetato de etilo e o filtrado foi concentrado até um resíduo que foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (1,0 g, 91 %) .
Passo 2: Síntese de 5-cloro-3- ((ciclopentilmetil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,193 g, 15,1 mmol) a uma solução de 5-cloro-3-((ciclopentilmetil)(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1,0 g, 3,22 mmol) em etanol (10 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,9 g). O ácido anterior (0,3 g, 1,01 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (1,5 mL) e foi adicionada 3- (aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,308 g, 2,12 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter sido adicionado PYBOP (0,791 g, 1,52 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo para se obter um sólido, este foi filtrado e lavado com acetonitrilo para proporcionar o composto em epígrafe (0,25 g, 57%). LCMS: 430,2 (M + 1)+; HPLC: 91,54% (@ 210 nm) (Tr;9,378; Método: Coluna: YMC ODS- A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-dg, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H) , 8,20 (t, 1H) , 7,12 (s, 1H) , 6,91 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=3, 6 Hz), 2,83-2,89 (m, 4H) , 2,18 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,85-1,89 (m, 1H) , 1,51-1,58 (m, 4H) , 1,41-1,46 (m, 2H), 1,14-1,15 (m 2H), 0,91 (t, 3H, J=8 Hz).
Composto 123: 5-cloro-3-(ciclobutil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-3-(ciclobutilamino)-2- metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (2,0 g, 10 mmol) e ciclobutanona (1,4 g, 20 mmol) em dicloroetano (20 mL) , foi adicionado ácido acético (3,6 g, 60 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (6,3 g, 30 mmol) a 0 °C e a reação agitada durante 3 h à temperatura ambiente. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epigrafe (1,4 g, 56 %).
Passo 2: Sintese de 5-cloro-3-(ciclobutil(metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-(ciclobutilamino)-2-metilbenzoato de metilo (0,7 g, 2,8 mmol) em acetonitrilo (10 mL), foram adicionados carbonato de césio (2,2 g, 6,8 mmol) e iodeto de metilo (3,9 g, 28 mmol) . A massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 8 h. Após conclusão, a massa reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada. O residuo foi lavado com acetato de etilo e o filtrado foi concentrado para dar o composto em epigrafe (0,62 g, 84%).
Passo 3: Sintese de 5-cloro-3-(ciclobutil(metil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,134 g, 3,34 mmol) a uma solução de 5-cloro-3-(ciclobutil(metil)amino)-2- metilbenzoato de metilo (0,60 g, 2,23 mmol) em etanol (10 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,5 g). O ácido anterior (0,25 g, 0,98 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (5 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)- 4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,22 g, 1,41 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter sido adicionado PYBOP (0,767 g, 1,47 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo e a extração foi realizada utilizando 10 % de
MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para se obter material em bruto que foi em seguida purificado por cromatografia em coluna dando o composto em epígrafe (0,36 g, 95 %). LCMS:388,09 (M + 1)+; HPLC: 96,62% (a 254 nm) (Tr;5,461; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,44 (s, 1H), 8,18 (t, 1H), 6,90 (d, 2H, J=7,2 Hz), 5,85 (s, 1H) , 4,24 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,65 (m, 1H) , 2,45 (s, 3H), 2,18 (s,3H), 2,15 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,03 (sl, 2H) , 1,76-1,81 (m, 2H) , 1,61-1,62 (m, 2H) .
Composto 137: 5-cloro-3-(ciclobutil(etil)amino)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-3-(ciclobutil(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-(ciclobutilamino)-2-metilbenzoato de metilo (0,70 g, 2,73 mmol) e acetaldeído (0,36 g, 8,20 mmol) em dicloroetano (15 mL), foi adicionado ácido acético (0,98 g, 16,4 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,7 g, 8,2 mmol) a 0 °C e a reação agitada durante 3 h à temperatura ambiente. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (0,71 g, 91 %) .
Passo 2: Síntese de 5-cloro-3-(ciclobutil(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,149 g, 3,7 mmol) a uma solução de 5-cloro-3-(ciclobutil(etil)amino)-2- metilbenzoato de metilo (0,70 g, 2,48 mmol) em etanol (10 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e o residuo acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas dando o respetivo ácido (0,6 g, ) . O ácido anterior (0,6 g, 2,2 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (5 mL) e foi adicionada 3-(aminometil) - 4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,67 g, 4,44 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter sido adicionado PYBOP (1,7 g, 3,33 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a massa reacional foi vertida para gelo; a extração foi realizada utilizando 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para se obter material em bruto que foi em seguida purificado por lavagens com solvente dando o composto em epigrafe (0,45 g, 50%). LCMS:402,20 (M + 1)+; HPLC: 98,73% (a 254 nm) (Tr; 4, 096; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-dg, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H), 8,22 (t, 1H, J=4,4 Hz), 6,97 (s, 1H), 6,92 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,75- 3,79 (m, 1H) , 2,87-2, 93 (m, 2H) , 2,18 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,99 (m, 2H) , 1,58-1, 69 (m, 4H) , 0,77 (t, 3H, J=6,8 Hz).
Composto 126: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil((tetra-hidro-2H-piran-4-il)metil)amino)benzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-2-metil-3-(((tetra-hidro-2H-piran-4-il)metil)amino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo (2,0 g, 10 mmol) e tetra-hidro-2H-pirano-4-carbaldeído (1,71 g, 15 mmol) em metanol (20 mL) , foi adicionado ácido acético (1,2 g, 20 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 8 h. Em seguida, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (2,11 g, 25 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (1,8 g, 60 %) .
Passo 2: Síntese de 5-cloro-2-metil-3-(metil((tetra-hidro-2H-piran-4-il)metil)amino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-(((tetra-hidro-2H-piran-4-il)metil)amino)benzoato de metilo (0,80 g, 2,71 mmol) em acetonitrilo (20 mL) , foram adicionados carbonato de césio (1,75 g, 5,42 mmol) e iodeto de metilo (1,93 g, 13,6 mmol). A massa reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 8 h. Após conclusão, a mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada. O resíduo foi lavado com acetato de etilo e o filtrado foi concentrado para dar material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para dar o composto em epígrafe (0,70 g, 84 %) .
Passo 3: Síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-(metil((tetra-hidro-2H-piran-4-il)metil)amino)benzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,18 g, 4,5 mmol) a uma solução de 5-cloro-2-metil-3-(metil((tetra-hidro-2H-piran-4- il)metil)amino)benzoato de metilo (0,70 g, 2,25 mmol) em etanol (10 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 h. O etanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas dando o respetivo ácido (0,2 g). O ácido anterior (0,2 g, 0,68 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (0,5 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,206 g, 1,35 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter sido adicionado PYBOP (0,528 g, 1,01 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. A mistura foi vertida para gelo e a extração foi realizada utilizando 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para se obter material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna dando o composto em epigrafe (0,2 g, 69 %) . LCMS: 432,25 (M +
1)+ ; HPLC: 99, 95% (a 254 nm) (Tr; 5,750; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp.
Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 8,19 (t, 1H) , 7,10 (d, 1H, J=1,6 Hz), 6,90 (d, 1H, J=2 Hz), 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=4, 8 Hz), 3,80 (d, 2H, J=8,4 Hz), 3,21-3,27 (m, 2H) , 2,73 (d, 2H, J=7,2 Hz), 2,55 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,74-1,75 (m, 1H) , 1,58-1,61 (m, 2H), 1,07-1,16 (m, 2H).
Composto 127: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil((tetra-hidro-2H-piran-4-il)metil)amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-3-(etil((tetra-hidro-2H-piran- 4-il)metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-(((tetra-hidro-2H-piran-4-il)metil)amino)benzoato de metilo (0,40 g, 1,35 mmol) e acetaldeído (0,120 g, 2,71 mmol) em dicloroetano (5 mL) , foi adicionado ácido acético (0,48 g, 8,1 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0, 663 g, 4,05 mmol) a 0 °C e a reação agitada durante 3 h à temperatura ambiente. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto purificado por cromatografia em coluna ao composto em epígrafe (0,38 g, 86%) .
Passo 2: Síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil((tetra-hidro-2H-piran-4-il)metil)amino)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0, 099 g, 2,46 mmol) a uma solução de 5-cloro-3-(etil((tetra-hidro-2H-piran-4- il)metil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (0,38 g, 1,2 mmol) em etanol (20 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e o residuo acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido (0,2 g). O ácido anterior (0,2 g, 0,64 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (2 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)- 4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,196 g, 1,29 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter sido adicionado PYBOP (0,504 g, 0,97 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. A mistura foi vertida para gelo e a extração foi realizada utilizando 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para se obter material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epigrafe (0,15 g, 52 %) . LCMS: 446, 20 (Μ + 1)+ ; HPLC: 99, 89% (a 254 nm) (Tr;5,381; Método:
Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H) , 8,21 (t, 1H) , 7,14 (s, 1H) , 6,91 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,23 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,78 (d, 2H, J=8,8 Hz, 3,18 (t, 2H, J=11,6 Hz), 2,82-2,89 (m, 4H), 2,18 (s, 3H), 2,13 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,54-1,57 (m, 3H) , 1,09-1,15 (m, 2H) , 0,91 (t, 3H, J=6,8 Hz).
Composto 157: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2,5-dimetilbenzamida
Passo 1: Síntese de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (50 g, 276 mmol) em H2SO4 conc. (200 mL), foi adicionada 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidinadiona (43,4 g, 152 mmol) em porções à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h e vertida sobre água gelada. O precipitado foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo dando o composto em epígrafe (71 g, 99%).
Passo 2: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (287 g, 1100 mmol) em DMF (150 mL), foram adicionados carbonato de sódio (468 g, 4415 mmol) e iodeto de metilo (627 g, 4415 mmol). A mistura foi aquecida a 60 °C durante 8 h. O precipitado foi filtrado e lavado com éter dietilico (5 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida dando o composto em epigrafe (302 g, 99%) que foi utilizado diretamente sem mais purificação.
Passo 3: Sintese de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzeno de metilo (150 g, 544 mmol) em etanol (750 mL) , foram adicionados sob agitação cloreto de amónio (150 g, 2777 mmol) dissolvido em água (750 mL) e ferro em pó (93,3 g, 1636 mmol) . A mistura foi aquecida a 80 °C durante 7 h e filtrada através de celite. ; Os sólidos foram lavados com água e acetato de etilo e os filtrados combinados foram extraídos com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epigrafe (175 g) que foi utilizado sem mais purificação.
Passo 4: Sintese de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo (15 g, 61 mmol) e di-hidro-2H- pirano-4(3Η)-ona (9,2 g, 92 mmol) em dicloroetano (300 mL), foi adicionado ácido acético (22 g, 368,4 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (39 g, 184 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (14 g, 69%).
Passo 5: Síntese de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-((tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)benzoato de metilo (14 g, 43 mmol) e acetaldeído (3,75 g, 85 mmol) em dicloroetano (150 mL), foi adicionado ácido acético (15,4 g, 256 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (27,0 g, 128 mmol) a 0 °C e a reação agitada à temperatura ambiente durante 2 h. O solvente foi removido sob pressão reduzida e adicionada água ao resíduo. A extração foi realizada utilizando DCM e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para dar material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (14 g, 93%).
Passo 6: Síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (2,36 g, 59 mmol) a uma solução de 5-bromo-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2- metilbenzoato de metilo (14 g, 39 mmol) em etanol (100 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 h. O etanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas dando o respetivo ácido (13,9 g). O ácido anterior (10 g, 29 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (25 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (8,8 g, 58 mmol) e trietilamina (5,6 g, 58 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter sido adicionado PYBOP (22 g, 43,8 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. A mistura foi vertida para gelo e extraída com 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para se obter material em bruto que foi purificado por lavagens com solvente para proporcionar o composto em epígrafe (14 g, 74%) .
Passo 7: Síntese de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2,5-dimetilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)-2-metilbenzamida (0,30 g, 0,63 mmol) em DMF (2 mL), foi adicionado diclorobis(trifenilfosfina)paládio (II) (0,028 g, 0,034 mmol), seguido de tetrametilestanho (0,124 g, 0,69 mmol). A mistura foi aquecida a 160 °C durante 30 minutos num reator de micro-ondas. A massa reacional foi desativada com água e a extração foi realizada utilizando 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas dando material em bruto. A purificação por cromatografia em coluna e, em seguida, por HPLC preparativa deu o composto em epígrafe como o correspondente sal de TFA (0,15 g, 57,7 %). LCMS: 412,15 (M + 1)+; HPLC: 94,29% (a 254 nm) (Tr;4,245; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de (CD30D, 400 MHz) δ 7,54 (s, 1H) , 7,33 (s, 1H) , 6,13 (s, 1H) , 4,47 (s, 2H) , 3, 95-3, 98 (m, 4H) , 3,74 (sl, 2H) , 3,37 (m, 1H) , 2,42 (s, 3H) , 2,38 (s, 3H) , 2,37 (s, 3H) , 2,24 (s, 3H) , 1,61-1,91 (sl, 4H), 1,01 (t, 3H, J=3,2 Hz).
Composto 222: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((ls,4s)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo (5,0 g, 25 mmol) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (6,95 g, 32,6 mmol) em 25 mL de dicloroetano, foi adicionado ácido acético (9,0 mL, 450,75 mmol) à temperatura ambiente. A mistura reacional foi arrefecida e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (22,8 g, 108 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi neutralizada com NaHCCp sat. e extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4, concentradas sob pressão reduzida e os isómeros produzidos separados por cromatografia em coluna sobre sílica gel (100-200) para dar o menos polar como isómero cis, 3-( ( (ls,4s)-4-( (terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (5,2 g, 52%) e o composto em epígrafe mais polar isómero trans, 3-( ( (lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (3,5 g, 35%).
Passo 2: Síntese de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (3,0 g, 7,6 mmol) e acetaldeído (0,66 g, 15 mmol) em 15 mL de dicloroetano, foi adicionado ácido acético (2,72 mL, 45,45 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura reacional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,81 g, 22,72 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi neutralizada com NaHCCb sat., extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4, concentradas sob pressão reduzida e o material em bruto purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (100-200) para produzir o composto em epígrafe (3,5 g, 96%).
Passo 3: Síntese de ( (lr,rs)-4-((5-cloro-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo
Uma mistura de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (3,5 g, 8,2 mmol) e NaOH (0,49 g, 12 mmol) em 20 mL de etanol:água (4:1) foi aquecida a 70 °C durante 2 h. Δ mistura reacional foi arrefecida até 0 °C e acidificada até pH 6 utilizando HC1 IN. A mistura foi concentrada e o residuo partilhado entre água e acetato de etilo. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar 3,2 g de ácido em bruto. Uma mistura do ácido em bruto (3,2 g, 7,8 mmol), 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (2,36 mg, 15,5 mmol) e PyBOP (6,07 mg, 11,7 mmol) foi agitada em 15 mL de DMSO à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluida com água e extraida com 10% de MeOH em DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4, concentrada sob pressão reduzida e o residuo purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel (100-200) para dar o composto em epigrafe (3,0 g, 71%).
Passo 4: Sintese de 3-( ( (lr,4r)-4-aminociclo- hexil)(etil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
A uma solução arrefecida de ((lr,4r)-4-((5-cloro-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil) carbamoil) -2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo (400 mg, 0,73 mmol) em 5 mL de DCM, foram adicionados 2 mL de TFA durante 2 h. A mistura reacional foi concentrada até à secura sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi dissolvido em 10% de MeOH em DCM e lavado com NaHCCp sat, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi seca sobre Na2S04, concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto em epígrafe (320 mg, 98%) .
Passo 5: Síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil) (etil)amino)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-( ( (lr,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (300 mg, 0,67 mmol) e formaldeído (0,5 mL de solução a 38%, 6,75 mmol) em 3 mL de metanol, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (83,0 mg, 1,35 mmol) a 0 °C e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 3 h. A mistura reacional foi concentrada até à secura e partilhada entre água e 10% de MeOH em DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, concentrada sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado sobre alumina básica para produzir o composto em epígrafe (120 mg, 32%).
Composto 268: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida
A uma solução de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (80 mg, 0,16 mmol) em 5 mL de metanol, foi adicionada uma quantidade catalítica de paládio a 10% sobre carvão. A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogénio à pressão de balão durante 13 h. A mistura reacional foi filtrada através de um leito de celite, concentrada sob pressão reduzida até um óleo viscoso que na lavagem com éter proporcionou o composto em epígrafe (40 mg, 54%) como um sólido esbranquiçado. LCMS: 439, 25 (M + 1)+; HPLC: 88,61% (a 254 nm) (Tr 4, 084; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj. : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,46 (sl, 1H) , 8,03 (t, 1H) , 7,15-7,13 m, 2H) , 6,94 (d, 1H) , 4,26 (d, 2H, J=4,4 Hz ), 3,02(d, 2H, J= 6,8 Hz), 2,61 (s, 6H) , 2,18 (s 6H) , 2,10 (s, 3H) , 1, 97-1,83 (m, 4H),1,39 (m, 4H) , 0,8 (t, 3H, J=6,8 Hz), (3H misturados no pico do solvente).
Composto 273: 5-cloro-3-(((ls,4s)-4-(dietilamino)ciclo- hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-(((lr,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (150 mg, 0,33 mmol) e acetaldeído (0,15 mL, 2,70 mmol) em 5 mL de dicloroetano, foi adicionado ácido acético (0,14 mL, 2,36 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura reacional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (286 mg, 1,35 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi neutralizada com NaHCCg sat. e extraída com DCM, seca sobre Na2S04 e concentrada sob pressão reduzida até um resíduo. A purificação por HPLC prep. deu o composto em epígrafe (100 mg, 59%) . LCMS: 501,50 (M + 1)+; HPLC: 93,90% (a 210-370 nm) (Tr;4,543; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,45 (sl, 1H) , 8,21 (t, 1H) , 7,13 (s, 1H) , 6,92 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,25 (d, 2H, J = 3,6 Hz), 3,03-3,01 (m, 2H) , 2,67-2,61 (m, 2H) , 2,42-2,33 (m, 4H) , 2,19 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H) , 2,11 (s, 3H) , 1,73 (m, 4H) , 1,39-1,19 (m, 4H) , 0,92 (m, 6H) , 0,78 (t, 3H) .
Composto 277: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-etinil-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo.
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo 6,0 g, 13,0 mmol) e acetaldeído (1,5 mL, 27,0 mmol) em dicloroetano (60 mL), foi adicionado ácido acético (5,4 mL, 82 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (8,6 g, 41 mmol) a 0 °C e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura reacional foi neutralizada com NaHCCh sat. e foi extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (100-200) para proporcionar o composto em epígrafe (5,0 g, 79%).
Passos 2 e 3: Síntese de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-etinil-2-metilbenzoato de metilo.
Uma solução de 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1,5 g, 3,20 mmol), trimetilsililacetileno (0,52 mL, 3,84 mmol), iodeto de cobre (12 mg, 0,06 mmol) e N, N-diisopropilamina (1,0 mL, 8,38 mmol) em 20 mL de tolueno foi purgada com árgon. Foi adicionado dicloro-bis(trifenilfosfina)paládio (II) (44 mg, 0,06 mmol), a mistura reacional aquecida a 80 °C durante 16 h. A mistura reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente, diluída com acetato de etilo e lavada com água. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida para se obter 1,8 g de composto protegido com sililo em bruto. Este foi dissolvido em 15 mL de THF e foi adicionado fluoreto de tetra-butilamónio (7,5 mL de solução 1M em THF, 7,40 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 2 h, diluída com acetato de etilo e lavada com água. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4, concentrada sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (100-200) para dar o composto em epígrafe (800 mg, 52%) .
Passos 4 e 5: Síntese de ( (lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-etinil-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo.
Uma mistura de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-etinil-2-metilbenzoato de metilo (800 mg, 1,92 mmol) e NaOH (115 mg, 2,89 mmol) em 12 mL de etanol: água (3:1) foi aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura reacional foi concentrada até à secura e o residuo foi partilhado entre água e DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04 e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar 700 mg do ácido em bruto. O ácido em bruto (700 mg, 1,75 mmol), 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (532 mg, 3,5 mmol) e PyBOP (1,36 g, 2,62 mmol) foram agitados em 7 mL de DMSO à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluida com água, e o produto precipitado foi filtrado e purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel para dar o composto em epígrafe (750 mg, 80%).
Passo 6: Síntese de 3-( ( (lr,4r)-4-aminociclo- hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-etinil-2-metilbenzamida.
A uma solução arrefecida de ((lr, 4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-etinil-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo (750 mg, 1,40 mmol) em 10 mL de DCM, foram adicionados 3 mL de TFA. A mistura foi agitada à ta durante 2 h e foi concentrada até à secura sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em 10% de MeOH em DCM e lavado com NaHCCg sat, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi seca sobre Na2S04 e concentrada sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe em bruto (600 mg, 98%) .
Passo 7: Síntese de N-((4, 6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil) (etil)amino)-5-etinil-2-metilbenzamida.
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-(((lr,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-etinil-2-metilbenzamida em bruto (600 mg, 1,38 mmol) e formaldeído (0,4 mL de solução a 38%, 6,75 mmol) em 10 mL de dicloroetano, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (731 mg, 3,45 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h e partilhada entre água e 10% de MeOH em DCM. A camada orgânica foi separada, seca sobre Na2S04 e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado sobre alumina básica para dar o composto em epígrafe (450 mg, 70%).
Dados Analíticos para N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino) ciclo-hexil)(etil)amino)-5-etinil-2-metilbenzamida-sal de TFA: LCMS: 463, 65 (M + 1)+; HPLC: 92, 65% (a 254 nm) (Tr; 4,748; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,46 (sl, 1H) , 9, 43 (sl, 1H) , 8,23 (t, 1H) , 7,36 (s, 1H) , 7,12 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,26 (d, 2H, J=4,0Hz), 3,17-3,03(m, 4H),2,69-2,68 (m, 6H), 2,50 (1H misturado no pico do solvente), 2,21 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,96- 1,84 (m, 4H) , 1,43 (m, 4H) , 0,79 (t, 3H) .
Composto 278: 5-ciano-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 3-( ( (ls,4s)-4-( (terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-ciano-2-metilbenzoato de metilo.
Uma solução de composto 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1,0 g, 2,13 mmol) e Zn(CN)2 (370 mg, 3,19 mmol) em 6 mL de DMF foi desgaseifiçada com árgon durante 20 min, seguido de adição de Pd(PPh3)4 (240 mg, 0,21 mmol). A mistura foi aquecida a 100 °C de um dia para o outro, diluída com água e extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04, concentradas e o resíduo purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para dar o composto em epígrafe (280 mg, 82%).
Passos 2 e 3: Síntese de ( (lr,4r)-4-((5-ciano-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo.
Uma mistura de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-ciano-2-metilbenzoato de metilo (735 mg, 1,78 mmol) e NaOH (85 mg, 2,13 mmol) em 12 mL de etanol: água (3:1) foi aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura foi concentrada até à secura e o produto em bruto foi partilhado entre água e DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar 380 mg de ácido em bruto. Uma mistura do ácido em bruto (380 mg, 0,94 mmol) , 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (287 mg, 1,89 mmol) e PyBOP (7 37 mg, 1,41 mmol) em 4 mL de DMSO foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluida com água e foi extraida com 10% de MeOH em DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04, concentradas sob pressão reduzida e o residuo purificado por cromatografia em coluna sobre silica para proporcionar o composto em epigrafe (350 mg, 75%).
Passo 4: Sintese de 3-( ( (lr,4r)-4-aminociclo- hexil) (etil)amino)-5-ciano-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida.
A uma solução arrefecida de composto ( (lr,4r)-4-((5-ciano-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo (350 mg, 0,80 mmol) em 5 mL de DCM, foi adicionado 1 mL de TFA. A mistura foi agitada à ta durante 2 h e concentrada até à secura sob pressão reduzida. O residuo foi dissolvido em 10% de MeOH em DCM e lavado com NaHC03 sat, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi seca sobre Na2S04, e concentrada sob pressão reduzida para se obter 284 mg do composto em epigrafe em bruto.
Passo 5: Síntese de 5-ciano-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida.
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-( ( (lr,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-5-ciano-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida em
bruto (325 mg, 0,74 mmol) e formaldeído (0,3 mL de solução a 38%, 3,72 mmol) em 10 mL de metanol, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (100 mg, 1,49 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h e partilhada entre água e 10% de MeOH em DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4, concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por purificação em coluna de alumina básica para dar o composto em epígrafe (75 mg, 22%).
Dados Analíticos de 5-ciano-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((ls,4s)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil) (etil)amino)-2-metilbenzamida: LCMS: 464,30 (M + 1)+; HPLC: 87,24% (a 254 nm) (Tr; 4,54 0; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,47 (sl, 1H) , 8,31 (t, 1H) , 7,61 (s, 1H) , 7,35 (s, 1H) , 5,87 (s, 1H) , 4,26 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3, 07-3, 05(m, 3H) , 2,73-2, 63 (m, 7H) , 2,25 (s, 3H) , 2,20 (s, 3Η) , 2,11 (s, 3H) , 1, 96-1,82 (m, 4H) , 1,41-1,37 (m, 4H) , 0,78 (t, 3H).
Composto 279: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil((lr,4r)-4-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil((lr,4r)-4-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida.
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-( ( (lr,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (300 mg, 0,67 mmol) e di-hidro-2H-pirano-4 (3H)-ona (99 mg, 1,01 mmol) em 5 mL de dicloroetano, foi adicionado ácido acético (0,24 mL, 4,05 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (429 mg, 2,02 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi neutralizada com NaHCCb sat. e extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4, concentradas sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para dar o composto em epígrafe (175 mg, 57%).
Passo 2: Síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil((lr,4r)-4-(metil(tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida.
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-N-((4, 6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil ( (lr,4r)-4- ( (tetra-hidro-2H-piran-4-il)amino)ciclo-hexil) amino)-2-metilbenzamida (175 mg, 0,33 mmol) e formalina (99 mg, 3,31 mmol) em 2 mL de metanol foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (41 mg, 0,66 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, neutralizada com NaHCCb sat. e extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04, concentradas sob pressão reduzida e o resíduo purificado por HPLC preparativa para proporcionar o composto em epígrafe (70 mg, 39%). LCMS: 543, 65 (M + 1)+; HPLC: 98,19% (a 210-370 nm) (Tr;4,515; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ;
Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-dg, 400 MHz) δ 11,45 (sl, 1H) , 8,21 (t, 1H) , 7,13 (s, 1H) , 6,92 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,25 (d, 2H, J = 4 Hz), 3,84-3, 82 (m, 2H) , 3,26-3,23 (m, 3H) , 3,03-3,01 (m, 2H) , 2, 67-2,53 (m, 2H) , 2,19 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H) , 2,11 (s, 6H) , 1,75-1,57 (m, 6H), 1,41-1,24 (m, 6H), 0,78 (t, 3H).
Composto 276: Síntese de composto 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de composto ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (50,0 g, 276 mmol) em H2SO4 conc. (200 mL), foi adicionada 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4-imidazolidinadiona (43,4 g, 152 mmol) em porções à temperatura ambiente e a agitação foi prosseguida durante 5 h. Após conclusão, a massa reacional foi vertida sobre água gelada, o sólido precipitado foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo dando o composto em epígrafe em bruto (71,7 g, 99,9%) que foi utilizado sem mais purificação.
Passo 2: Síntese de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo.
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico em bruto (287 g, 1103 mmol) em DMF (150 mL), foram adicionados carbonato de sódio (468 g, 4415 mmol) e iodeto de metilo (626 g, 4415 mmol) . A mistura foi aquecida a 60 °C durante 8 h, arrefecida até à temperatura ambiente. O sólido precipitado foi filtrado e lavado com éter dietílico (5 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (302 g, 99%) que foi utilizado diretamente.
Passo 3: Síntese de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo.
A uma solução, mantida sob agitação, do composto em bruto anterior 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (150 g, 0,54 mol) em etanol (750 mL) , foi adicionado cloreto de amónio (150 g, 2,78 mol) dissolvido em 750 mL de água, seguido de ferro em pó (93,3 g, 1,64 mol) sob agitação vigorosa. A mistura foi aquecida a 80 °C durante 7 h e filtrada através de celite. A almofada de filtração foi lavada com água e acetato de etilo e os filtrados foram extraídos com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4 e concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epigrafe (175 g em bruto).
Passo 4: Sintese de 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo.
A uma solução, mantida sob agitação, de composto 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo em bruto (15 g, 62 mmol) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (17 g, 8 mmol) em dicloroetano (200 mL) , foi adicionado ácido acético (23 mL, 368 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 10 min. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (40 g, 185 mmol) a 0 °C e a mistura agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi neutralizada com NaHCCg sat. e extraida com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4 e concentradas sob pressão reduzida. A separação por cromatografia em coluna da mistura isomérica em bruto deu o composto em epigrafe desejado (6,0 g, 22%).
Passo 5: Sintese de 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo.
A uma solução, mantida sob agitação, de composto 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (6,0 g, 13,0 mmol) e acetaldeído (1,5 mL, 27,0 mmol) em dicloroetano (60 mL)foi adicionado ácido acético (5,4 mL, 82 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (8,6 g, 40,9 mmol) a 0 °C e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura reacional foi neutralizada com NaHCCb sat. e extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4 e concentradas sob pressão reduzida. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para proporcionar o composto em epígrafe (5,0 g, 79%).
Passos 6 e 7: Síntese de ((lr,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo.
Uma mistura de 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil ) amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2- metilbenzoato de metilo (1,00 g, 2,13 mmol) e NaOH (102 mg, 2,56 mmol) em 6 mL de etanol: água (2:1) foi aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura reacional foi concentrada até à secura e o resíduo foi partilhado entre água e DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar 1,0 g de ácido em bruto. O ácido em bruto (1,0 g, 2,20 mmol), 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (669 mg, 4,40 mmol), PyBOP (1,71 g, 3,30 mmol) e 1 mL de trietilamina foram agitados em 2 mL de DMSO à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com água e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4, concentradas sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para dar o composto em epígrafe (1,0 g, 83%) .
Passo 8: Síntese de 3-( ( (lr,4r)-4-aminociclo- hexil)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida.
A uma solução arrefecida de composto ((lr, 4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo (1,0 g, 1,60 mmol) em 10 mL de DCM, foram adicionados 2 mL de TFA. A mistura reacional foi agitada à ta durante 2 h e concentrada até à secura sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em 10% de MeOH em DCM e lavado com NaHCCp sat, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe em bruto (650 mg, 81%).
Passo 9: Síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida.
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-( ( (lr,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida em bruto (650 mg, 1,32 mmol) e formaldeído (0,5 mL de solução a 38%, 13,3 mmol) em 10 mL de metanol, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (82 mg, 1,32 mmol a 0 °C e a mistura agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi partilhada entre água e 10% de MeOH em DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por purificação em coluna de alumina básica para dar o composto em epígrafe (450 mg, 65%) . Dados analíticos de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida: LCMS: 519,30 (M+l)+;
HPLC: 98,35% (Θ 254nm) (Tr; 4,392); Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (sl, 1H) , 9,39 (sl, 1H) , 8,23 (t, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 5,86 (s, 1H) , 4,25 (d, 2H, J=4, 0 Hz) , 3, 03-3, 01 (m, 3H) , 2, 69-2, 69 (m, 6H) , 2,50 (1H misturados no pico do solvente), 2,18 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H) , 2,11 (s, 3H) , 1, 94-1, 84 (m, 4H) , 1,42 (m, 4H) , 0,79 (t, 3H, J=6,8 Hz).
Composto 282: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-etil-2-metilbenzamida
Passo 1: Sintese de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-vinilbenzamida.
Uma mistura de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (200 mg, 0,38 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-vinil-l,3,2-dioxaborolano (71 mg, 0,46 mmol) e carbonato de sódio (147 mg, 1,39 mmol) em 10 mL de dioxano foi desgaseifiçada com árgon durante 20 min, foi adicionado Pd(PPh3)4 (44 mg, 0,04 mmol) e a mistura aquecida a 100 °C de um dia para o outro. A reação foi arrefecida até à temperatura ambiente e diluida com água. A mistura foi extraída com 10% de MeOH em DCM, as fases orgânicas combinadas, secas sobre Na2SC>4 e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel para se obter o composto em epígrafe (150 mg, 83%).
Passo 2: Síntese de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino) ciclo-hexil)(etil)amino)-5-etil-2-metilbenzamida.
A uma solução de composto N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-vinilbenzamida (150 mg, 0,32 mmol) em 5 mL de metanol, foi adicionada uma quantidade catalítica de paládio a 10% sobre carvão. A mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogénio a pressão de balão durante 12 h, filtrada através de celite e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por HPLC prep. para dar o composto em epígrafe como um sal de TFA (65 mg, 43%) . LCMS: 467,35 (M+l)+; HPLC: 93,41% (a 254 nm) (Tr; 10, 946; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; formato de amónio 10 mM em água + 0,1% NH3, B; Acetonitrilo + 5% solvente A + 0,1% NH3; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,0 mL/min.; Gradiente: 15% B até 95% B em 6,0 min, manter até aos 8,0 min, 15% B aos 8,5 min, manter até aos 15 min) ; RMN de (DMSO-dg, 400 MHz) δ 11,47 (sl, 1H) , 9,45 (s, 1H) , 8,38 (s, 1H) , 8,03 (s, 2H) , 7,26-6, 84 (m, 2H) , 5,87 (s, 1H) , 4,26 (d, J = 4,0 Hz, 2H) , 3,17-2,89 (m, 3H) , 2,70, 2, 68 (2s, 6H) , 2,19, 2,11 (3s, 9H), 1, 96-1,87 (m, 4H), 1,42 (m, 4H) , 1,15 (t, J= 7,2 Hz, 3H), 0,80 (s, 3H).
Composto 283: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(3-(4-metilpiperazin-l-il)prop-l-in-l-il)benzamida
Passo 1 Síntese de 3-( ( (lr,4r)-4-( (terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(3-(4-metilpiperazin-l-il)prop-l-in-l-il)benzoato de metilo.
Uma solução de 5-(3-bromoprop-l-in-l-il)-3-(((lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (500 mg, 1,0 mmol) e 1-metilpiperazina (0,49 mL, 4,9 mmol) em 5 mL de DMF foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com água e extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4 e concentradas sob vácuo para dar o composto em epígrafe (550 mg).
Passos 2 e 3: Síntese de ( (lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(3-(4-metilpiperazin-l-il)prop-l-in-1- il)fenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo.
Uma mistura de composto 3-(((lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil) amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(3-(4-metilpiperazin-l-il)prop-l-in-l-il)benzoato de metilo (550 mg, 1,0 mmol) e NaOH (83 mg, 2,1 mmol) em 8 mL de etanol:água (3:1) foi aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura reacional foi concentrada até à secura e o resíduo foi partilhado entre água e DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, concentrada sob pressão reduzida para proporcionar 470 mg de ácido. O ácido em bruto (470 mg, 0,92 mmol), 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (279 mg, 1,83 mmol), PyBOP (716 mg, 1,37 mmol) e trietilamina (0,38 mL, 2,75 mmol) foram agitados em 5 mL de DMSO à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com água e o composto foi extraído para 10% de MeOH em DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4, concentrada sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para dar o composto em epígrafe (350 mg, 50%).
Passo 4: Síntese de 3-( ( (lr,4r)-4-aminociclo- hexil) (etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(3-(4-metilpiperazin-l-il)prop-l-in-l-il)benzamida.
A uma solução arrefecida de ( (lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil) -2-metil-5-(3-(4-metilpiperazin-l-il)prop-l-in-1- il)fenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo (350 mg, 0,54 mmol) em 5 mL de DCM, foram adicionados 2 mL de TFA . A mistura reacional foi agitada à ta durante 2 h, concentrada até à secura sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em 10% de MeOH em DCM e lavado com NaHC03 sat, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi seca sobre Na2S04 e concentrada sob pressão reduzida para se obter o composto em epígrafe em bruto (250 mg, 84%) .
Passo 5: Síntese de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(3-(4-metilpiperazin-l-il)prop-l-in-l-il)benzamida.
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-( ( (lr,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(3-(4-metilpiperazin-l-il)prop-l-in-l-il)benzamida em bruto (250 mg, 0,45 mmol) e formaldeído (0,35 mL de solução a 38%, 4,56 mmol) em 3 mL de metanol foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (85 mg, 1,37 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h e partilhada entre água e 10% de MeOH em DCM. A camada orgânica foi separada, seca sobre Na2SC>4, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por HPLC prep. para proporcionar o composto em epígrafe como um sal de TFA (40 mg, 15%). LCMS: 575,45 (M+l)+; HPLC: 99, 30% (a 254 nm) (Tr; 3, 849; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (D20, 400 MHz) δ 7,75 (s, 1H) , 7,60 (s, 1H) , 6,28 (s, 1H) , 4,45 (d, J= 4,0Hz, 2H), 3,80- 3,63 (m, 5H) , 3,40-3,21 (m, 9H) , 2,92 (s, 3H) , 2,79 (2s, 6Η) , 2,35 (m, 3H) , 2,32 (s, 3H) , 2,26 (s, 3H) , 2,19-2,05 (m, 4H) , 1, 65-1,57 (m, 4H) , 0,97 (t, J= 7,2 Hz, 3H) .
Composto 284: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil((lr,4r)-4-(metilamino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo.
A uma solução, mantida sob agitação, de composto 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (5,0 g, 25 mmol) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (6,95 g, 32,7 mmol) em 25 mL de dicloroetano foi adicionado ácido acético (9,0 mL, 450 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 10 min. A mistura foi arrefecida e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (22,8 g, 108 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi neutralizada com NaHCCb sat. e foi extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4, concentradas sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para dar (3,5 g, 35%) do composto em epígrafe isómero trans mais polar 3-(( (lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato, juntamente com (5,2 g, 52%) do isómero cis menos polar 3—( ( (ls,4s)—4 — ((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato.
Passo 2: Síntese de 3-(((lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil ) amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo.
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (3,0 g, 7,6 mmol) e acetaldeído (0,66 g, 15 mmol) em 15 mL de dicloroetano, foi adicionado ácido acético (2,7 mL, 45 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura foi arrefecida até 0 °C, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,8 g, 22 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi neutralizada com NaCHCg sat. e foi extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4, concentradas sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para dar o composto em epígrafe (3,5 g, 96%) .
Passo 3: Síntese de 3-(((lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil) (metil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo.
A uma solução arrefecida de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (1,1 g, 3,3 mmol) em 12 mL de THF, foi adicionado hidreto de sódio (410 mg, 10 mmol), seguido de iodeto de metilo (2,1 mL, 34 mmol) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, desativada por adição lenta de água gelada e acidificada com solução de ácido cítrico. A extração com 10% de MeOH em DCM, seguida de secagem e concentração das fases orgânicas combinadas sob pressão reduzida deram o composto em epígrafe (1,0 g, 88%).
Passos 4 e 5: Síntese de ( (lr,4r)-4-((5-cloro-3-(((4, 6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)(metil)carbamato de terc-butilo.
Uma mistura de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)(metil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (1,0 g, 2,4 mmol) e NaOH (140 mg, 3,5 mmol) em 10 mL de etanol:água (4:1) foi aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura reacional foi concentrada até à secura e o resíduo foi partilhado entre água e DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar 1,0 g de ácido em bruto. Uma mistura do ácido em bruto (1,0 g, 2,4 mmol), 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (716 mg, 4,71 mmol), PyBOP (1,83 g, 3,53 mmol) e 2 mL de trietilamina foi agitada em 5 mL de DMSO à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi diluida com água e extraida com 10% de MeOH em DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04, concentradas sob pressão reduzida e o residuo purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel para dar o composto em epigrafe (700 mg, 53%).
Passo 6: Sintese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil((lr,4r)-4-(metilamino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida.
A uma solução arrefecida de ((ls,4s)-4-((5-cloro-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)(metil)carbamato de terc-butilo (700 mg, 1,25 mmol) em 20 mL de DCM, foram adicionados 3 mL de TFA . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h e concentrada até à secura sob pressão reduzida. 0 residuo foi dissolvido em 10% de MeOH em DCM e lavado com NaHC03 sat, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi seca sobre Na2S04, concentrada sob pressão reduzida e o residuo purificado por HPLC preparativa para se obter o composto em epigrafe como o seu sal de TFA (500 mg, 87%). LCMS: 459, 35 (M+l)+; HPLC: 97, 63% (a 254 nm) (Tr; 4,565; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de ΧΗ (DMS0-D6, 400 MHz) δ 11,46 (sl, 1H) , 8,32 (s, 2H) , 8,22 (m, 1H) , 7,20 (s, 1H) , 7,00 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,25 (d, J= 4,0 Hz, 2H) , 3,74 (m, 3H) , 3,03-3,01 (m, 3H) , 2,67 (m, 1H) , 2,19 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H) , 2,11 (s, 3H) , 1,33 (m, 2H) , 1,82-1, 80 (m, 2H) , 1,42-1,23 (m, 2H+2H), 0,78 (t, J= 7,2 Hz, 3H).
Composto 285: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil((lr,4r)-4- (etil(metil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil((lr, 4r) - 4-(etil(metil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida.
A uma solução, mantida sob agitação, de composto 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3- (etil((lr,4r)-4-(metilamino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida (200 mg, 0,43 mmol) e acetaldeído (0,03 mL, 0,43 mmol) em 5 mL de dicloroetano, foi adicionado ácido acético (0,15 mL, 2,62 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,28 g, 1,31 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi neutralizada com NaHC03 sat. e foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4, concentradas sob pressão reduzida e o resíduo purificado por HPLC prep. para dar o composto em epígrafe como um sal de TFA (80 mg, 37%). LCMS: 487,35 (M+l)+; HPLC: 99,87% (a 254 nm) (Tr;4,711; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-D6, 400 MHz) δ 11,47 (sl, 1H), 9,15 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 5,86 (s, 1H) , 4,24 (d, J = 4,0 Hz, 2H) , 3,16-3,01 (m, 5H) , 2, 64-2, 63 (m, 4H) , 2,19 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,91-1,83 (m, 4H) , 1,47 (m, 4H) , 1,19 (m, 3H) , 0,79 (t, J= 7,2 Hz, 3H) .
Composto 286: 5-cloro-3-(((lr,4r)-4- ((ciclopropilmetil)(metil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 5-cloro-3-( ( (lr,r)-4- ((ciclopropilmetil)(metil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida.
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil((lr,4r)-4-(metilamino)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida (200 mg, 0,43 mmol) e ciclopropanocarbaldeído (0,03 g, 0,43 mmol) em 5 mL de dicloroetano, foi adicionado ácido acético (0,15 mL, 2,62 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,277 g, 1,31 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi neutralizada com NaHCCb sat. e foi extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4, concentradas sob pressão reduzida e o resíduo purificado por HPLC prep. para dar o composto em epígrafe como um sal de TFA (100 mg, 44%) . LCMS: 513,40 (M+l)+; HPLC: 94,81% (a 254 nm) (Tr;4,924; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMS0-D6, 400 MHz) δ 11,47 (sl, 1H) , 9,09 (s, 1H) , 8,21 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 6,97 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,25 (d, J = 4,0 Hz, 2H) , 3,24 (m, 1H) , 3,03-3,01 (m, 3H) , 2,89-2, 87 (m, 1Η) , 2,71-2,70 (m, 4H) , 2,18 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1, 93-1,83 (m, 4H) , 1,46-1,44 (m, 4H) , 1,05 (m, 1H) , 0,79 (t, J= 7,2 Hz, 3H) , 0,63 (m, 2H) , 0,38-0,31 (m, 2H) .
Composto 287: Síntese de composto 5-cloro-3-(((lr,4r)-4-(ciclobutil(metil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6— dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passos 1 e 2: Síntese de ( (lr,4r)-4-((5-cloro-3-(((4, 6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo.
Uma mistura de composto 3-( ( (lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (3,5 g, 8,2 mmol) e NaOH (0,5 g, 12 mmol) em 20 mL de etanol:água (4:1) foi aquecida a 70 °C durante 2 h. Δ mistura reacional foi arrefecida até 0 °C e acidificada até pH 6 utilizando HC1 IN e concentrada. O resíduo foi partilhado entre água e acetato de etilo, a camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar 3,2 g de ácido em bruto. 0 ácido em bruto (3,2 g, 7,8 mmol), 3-(aminometil)-4,6- dimetilpiridin-2(1H)-ona (2,36 mg, 15,6 mmol) e PyBOP (6,1 mg, 11 mmol) foram agitados em 15 mL de DMSO à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com água e extraída com 10% de MeOH em DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4, concentradas sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para dar o composto em epígrafe (3,0 g, 71%) .
Passo 3: Síntese de 3-(((lr,4r)-4-aminociclo- hexil)(etil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida.
A uma solução arrefecida de ((ls,4s)-4-((5-cloro-3-( ( (4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo (400 mg, 0,73 mmol) em 5 mL de DCM, foram adicionados 2 mL de TFA. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h e concentrada até à secura sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em 10% de MeOH em DCM e lavado com NaHC03 sat, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi seca sobre Na2S04 e concentrada sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (320 mg, 98%).
Passo 4: Síntese de 5-cloro-3-(((lr,4r)-4- (ciclobutilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida.
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-( ( (lr,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (300 mg, 0,67 mmol) e ciclobutanona (141 mg, 2,02 mmol) em 20 mL de metanol, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (127 mg, 2,02 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada à ta de um dia para o outro, neutralizada com NaHCCg sat. e extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4 e concentradas sob pressão reduzida para se obter composto em epígrafe em bruto (260 mg, 77%).
Passo 5: Síntese de 5-cloro-3-( ( (lr,4r)-4- (ciclobutil(metil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida.
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-( ( (lr,4r)-4-(ciclobutilamino)ciclo-hexil) (etil)amino)-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (230 mg, 0,46 mmol) e formalina (138 mg, 4,61 mmol) em 10 mL de metanol, foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (43 mg, 0,69 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada à ta de um dia para o outro, neutralizada com NaHCCp sat. e extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4, concentradas sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para dar o composto em epígrafe (150 mg, 63%).
Dados Analíticos de 5-cloro-3-(((lr,4r)-4- (ciclobutil(metil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida-sal de TFA: LCMS: 513,25 (M+l)+; HPLC: 96,89% (a 254 nm) (Tr;4,886; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-D6, 400 MHz) δ 11,45 (sl, 1H), 9,40 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 6,97 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,25 (d, J = 4,0 Hz, 2H) , 3,77-3,75 (m, 1H) , 3,12-3,02 (m, 3H) , 2,69 (m, 1H) , 2,50 (4H misturados no pico do solvente), 2,18, 2,15, 2,11 (3s, 6H+3H+3H), 1,83-1,44 (m, 10H), 0,78 (t, 3H) .
Composto 290: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil) (etil)amino)-5-(3-(dimetilamino)prop-l-in-l-il)-2-metilbenzamida
Passos 1 e 2: Síntese de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(3-hidroxiprop-l-in-l-il)-2-metilbenzoato de metilo:
Uma solução de 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1,5 g, 3,2 mmol) , terc- butildimetil(prop-2-in-l-iloxi)silano (1,6 g, 9,6 mmol), iodeto de cobre (183 mg, 0,96 mmol) e trietilamina (1,30 mL, 9,60 mmol) em 10 mL de DMF foi purgada com árgon gasoso durante 20 min. Foi adicionado tetraquis- (trifenilfosfina)paládio (369 mg, 0,32 mmol) à mistura reacional e a mistura aquecida a 100 °C durante 5 h e arrefecida até à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com acetato de etilo, lavada com água e a camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida para se obter 1,9 g do produto intermediário protegido com sililo em bruto. O produto foi dissolvido em 15 mL de THF e foi adicionado fluoreto de tetra-butilamónio (6,81 mL de solução 1M em THF, 6,81 mmol) à temperatura ambiente e a mistura agitada durante 2 h. A mistura reacional foi diluída com acetato de etilo e lavada com água. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4, concentrada sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para dar o composto em epígrafe (950 mg, 630%).
Passo 3: Síntese de 5-(3-bromoprop-l-in-l-il)-3-(((lr,4r)- 4- ( (terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil) (etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo.
A uma solução de 3-(((lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil) amino)ciclo-hexil) (etil)amino)-5-(3-hidroxiprop-l-in-l-il)-2-metilbenzoato de metilo (950 mg, 2,14 mmol) em 13 mL de DCM, foram adicionados trifenilfosfina (840 mg, 3,21 mmol) e tetrabrometo de carbono (1,06 g, 3,21 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 3 h, diluída com DCM e lavada com água. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4, concentrada sob pressão reduzida e o resíduo purificado em coluna sobre sílica gel para dar o composto em epígrafe (900 mg, 82%).
Passo 4: Síntese de 3-(((lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil) amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(3-(dimetilamino)prop-l-in-l-il)-2-metilbenzoato de metilo.
Uma solução de 5-(3-bromoprop-l-in-l-il)-3-(((lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (500 mg, 0,98 mmol) e uma solução de N, Af-dimetilamina 2M em THF (2,5 mL, 4,9 mmol) em 5 mL de DMF foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, diluída com água e extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4 e concentradas sob vácuo para proporcionar o composto em epígrafe (450 mg, 96%) .
Passos 5 e 6: Síntese de ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(3-(dimetilamino)prop-l-in-l-il)-2- metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc- butilo.
Uma mistura de 3-(((lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil) amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(3-(dimetilamino)prop-l-in-l-il)-2-metilbenzoato de metilo (450 mg, 0,95 mmol) e NaOH (57 mg, 1,40 mmol) em 10 mL de etanol:água (4:1) foi aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura reacional foi concentrada até à secura e o residuo partilhado entre água e DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar 430 mg de ácido. O ácido em bruto (430 mg, 0,94 mmol), 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (280 mg, 1,88 mmol), PyBOP (733 mg, 1,40 mmol) e trietilamina (0,1 mL, 0,94 mmol) foram agitados em 7 mL de DMSO à ta de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluida com água, o composto precipitado foi filtrado e seco sob vácuo para se obter o composto em epigrafe em bruto (450 mg, 81%).
Passo 7: Sintese de 3-( ( (lr,4r)-4-aminociclo- hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(3-(dimetilamino)prop-l-in-1-il)-2-metilbenzamida.
A uma solução arrefecida de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(3-(dimetilamino)prop-l-in-l-il)-2-metilbenzoato de metilo (450 mg, 0,76 mmol) em 6 mL de DCM, foi adicionado 1 mL de TFA. A mistura reacional foi agitada à ta durante 2 h, e concentrada até à secura sob pressão reduzida. O residuo foi dissolvido em 10% de MeOH em DCM e lavado com NaHC03 sat, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi seca sobre Na2S04, concentrada sob pressão reduzida para se obter o composto em epígrafe em bruto (350 mg, 93%) .
Passo 8: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(3-(dimetilamino)prop-l-in-l-il)-2-metilbenzamida.
A uma solução, mantida sob agitação, de composto 3-(((lr,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(3-(dimetilamino)prop-l-in-l-il)-2-metilbenzamida em bruto (350 mg, 0,71 mmol) e formaldeído (0,56 mL de solução a 38%, 7,10 mmol) em 8 mL de metanol, foi adicionado
cianoboro-hidreto de sódio (132 mg, 2,10 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h, e partilhada entre água e 10% de MeOH em DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre alumina básica para proporcionar o composto em epígrafe (120 mg, 32%). LCMS: 520, 6 (M + 1)+; HPLC: 92,27% (@ 254nm) (Tr; 3, 886; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,45 (sl, 1H) , 8,18 (t, 1H) , 7,15 (s, 1H) , 6,96 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H), 4,25 (d, 2H), 3,02-3,00 (m, 2H), 2,50 (13 protões misturados no pico do solvente), 2,33 (s, 3H) , 2,23 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,11 (s, 3H) , 1,82 (m, 4H) , 1,39-1,28 (m, 4H), 0,77 (t, 3H).
Composto 301: N-((l-benzil-4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-5-cloro-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida
Ácido 5-cloro-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo- hexil) (etil)amino)-2-metilbenzoico (1 eq) foi dissolvido em DMSO e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-1-(2-hidroxietil)- 4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (2 eq) e trietilamina (1 eq) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, foi adicionado PYBOP (1,5 eq) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. A mistura reacional foi vertida para gelo e extraida com 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para se obter produto em bruto que foi purificado por HPLC prep. para proporcionar o composto em epigrafe (0,011 g, 16%) como o sal de TFA. LCMS: 563,40 (M + 1)+; HPLC: 90,27% (@ 210 nm-370 nm) (Tr;6,122; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (MeOD, 400 MHz) δ , 7,31-7,2 6 (m, 2H) , 7,24-7, 04 (m, 5H) , 6,23 (s, 1H) , 5,40 (d, 2H) , 4,50(s, 2H) , 3,34 (1 Protão misturado no pico do solvente), 3,11-3,08 (m, 2H+1H), 2,81 (s, 3H+3H) , 2,42 (s, 3H) , 2,29 (s, 3H) , 2,21 (s, 3H) , 2,08-1, 99 (m, 2H+2H) , 1,52-1,49 (m, 4H) , 0,86 (t, 3H J=7,2Hz).
Composto 302: 5-cloro-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo- hexil)(etil)amino)-N-((1-(2-hidroxietil)-4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Sintese de 5-cloro-3-( ( (lr,4r)-4- (dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de etilo (3,4 g, 8,0 mmol) em DCM (35 mL) foi adicionado TFA (10 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora, o solvente foi removido sob pressão reduzida e foi adicionada solução saturada de NaHCCb. A extração foi realizada utilizando 10% de MeOH/DCM e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secas sobre anidro Na2SC>4. A evaporação do solvente sob pressão reduzida deu 3-( ( (lr,4r)-4-aminociclo- hexil)(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (2,5 g, 96%) . 0 composto anterior (2,4 g, 7,4 mmol) foi dissolvido em metanol (25 mL) e a mistura arrefecida até 0 °C. Foi adicionada formalina (2,21 g, 73,95 mmol) e a mistura reacional resultante foi agitada à mesma temperatura durante 20 minutos. Foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,92 g, 14,8 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. O solvente foi removido sob pressão reduzida, adicionada água ao resíduo e a extração foi realizada utilizando 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida dando o composto em epígrafe (2,3 g, 88) que foi utilizado sem mais purificação adicional.
Passo 2: Síntese de ácido 5-cloro-3-(((lr,4r)-4- (dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzoico
Foi adicionado NaOH aquoso (0,73 g, 18,35 mmol) a uma solução de 5-cloro-3-(( (lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil) (etil)amino)-2-metilbenzoato de etilo (2,3 g, 9,1 mmol) em etanol (25 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 hora. O etanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e ajustado a pH 4 utilizando ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas dando o composto em epígrafe (2,0 g, 92%).
Passo 3: Síntese de 5-cloro-3-(((lr,4r)-4- (dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-N-((1-(2-hidroxietil)-4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Ácido 5-cloro-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo- hexil) (etil)amino)-2-metilbenzoico (1 eq) foi dissolvido em DMSO e foram adicionadas 3-(aminometil)-1-(2-hidroxietil)- 4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (2 eq) e trietilamina (1 eq) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, foi adicionado PYBOP (1,5 eq) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão, a mistura reacional foi vertida para gelo e extraída com 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para se obter um produto em bruto que foi purificado por HPLC prep. para proporcionar o composto em epígrafe (0,07 g, 20%) como o sal de TFA. LCMS: 517,35 (M + 1)+ ; HPLC: 91,15% (a 254 nm) (Tr;5,134; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de (DMSO-Troca com D20, 400 MHz) δ 7,17 (s, 1H) , 6,94 (s, 1H) , 6,01 (s, 1H) , 4,26 (m, 2H) , 3,99 (s, 2H) , 3,01-2,99 (m, 3H), 2,67(s, 3H+3H), 2,35 (1 Protão misturado no pico do solvente), 2,33 (m, 2H+2H), 2,19 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 1,94-1,81 (m, 5H) 1,40 (m, 4H), 0,77 (t, 3H) .
Composto 306: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo- hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
Passo 1: Síntese de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo
adicionado ácido acético (3,28 g, 54,8 mmol) a uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-2-metil-5- (trifluorometil)benzoato de metilo (2,0 g, 9,1 mmol) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (2,52 g, 11,87 mmol) em dicloroetano (20 mL) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (5,80 g, 27,4 mmol) a 0 °C e a mistura reacional foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso. A fase orgânica foi separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida. 0 material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epigrafe (2,8 g, 82%).
Passo 2: Sintese de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)-ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo
Foi adicionado ácido acético (0,85 g, 14,2 mmol) a uma solução, mantida sob agitação, de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (0,9 g, 2,40 mmol) e acetaldeido (0,21 g, 4,80 mmol) em dicloroetano (10 mL), e a mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,53 g, 7,21 mmol) a 0 °C e a mistura reacional agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. A reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraida com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida, e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epigrafe (0,8 g, 83%) .
Passo 3: Sintese de ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo- l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(trifluorometil)fenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionado hidróxido de sódio aquoso (0,12 g, 2,97 mmol) a uma solução de composto 3-( ( (lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(trifluorometil)benzoato de metilo (0,80 g, 1,98 mmol) em etanol (8 mL) e a mistura foi agitada a 60 °C durante 1 hora. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e o residuo acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e então ajustada a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas dando o respetivo ácido (0,7 g, ) . O ácido (0,7 g, 1,8 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (10 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2 (1H)-ona (0,54 g, 3,59 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, foi adicionado PYBOP (1,40 g, 2,69 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura reacional foi vertida para gelo e extraida com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas para se obter o produto em bruto que foi em seguida purificado lavando com acetonitrilo para proporcionar o composto em epigrafe (0,7 g, 74 %).
Passo 4: Sintese de 3-( ( (lr,4r)-4-aminociclo- hexil) (etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
A uma solução de ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metil-5-(trifluorometil)fenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo (0,7 g, 1,3 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (3 mL) e a mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Depois de concluída a reação, o solvente foi removido sob pressão reduzida e foi adicionada solução saturada de NaHCCb. A extração foi realizada utilizando 10% de MeOH/DCM; as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio; secas sobre anidro Na2SC>4; filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (0,56 g, 98%) que foi utilizado diretamente no passo seguinte.
Passo 5: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil) (etil)amino)-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
A uma solução de 3-( ( (lr,4r)-4-aminociclo- hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5- (trifluorometil)benzamida (0,5 g, 1,2 mmol) em DCM (5 mL) a 0 °C foi adicionada formalina (0,124 g, 4,13 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 20 minutos. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,63 g, 2,95 mmol) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após conclusão, foi adicionada água e a extração foi realizada utilizando 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida. O sólido em bruto obtido foi lavado com acetonitrilo e éter para proporcionar o composto em epigrafe (0,4 g, 67%). LCMS: 507,45 (M + 1)+; HPLC: 96,81% (a 210-370 nm) (Tr;4,857; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (si, 1H) , 8,34 (s, 1H) , 7,38 (s, 1H) , 7,20 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,27 (d, 2H) , 3,08 (m, 2H) , 2,67 (m, 1H) , 2,40 (s, 6H) , 2,24 (s, 3H) , 2,19 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,85 (m, 2H) , 1,80 (m, 2H) , 1,42 (m, 2H) , 1,25 (m, 2H), 0,78 (t, 3H).
Composto 390: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4-metilnicotinamida
Passo 1:Síntese de 5-amino-4-metilnicotinato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-amino-4-metilnicotínico (5,0 g, 32 mmol) em metanol (75 mL) , foi adicionado H2SO4 conc. (5 mL) lentamente à temperatura ambiente. A mistura foi agitada a 70 °C durante 12 h. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi neutralizado com solução saturada de NaCHCq. A extração foi realizada utilizando AcOEt; as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secas sobre Na2SC>4 anidro e concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (4,1 g, 75 %) que foi utilizado sem mais purificação.
Passo 2: Síntese de 5-( ( (lr,4r)-4-( (terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-4-metilnicotinato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-amino-4- metilnicotinato de metilo (1,20 g, 7,22 mmol) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (2,30 g, 10,8 mmol) em dicloroetano (20 mL) , foi adicionado ácido acético (2,59 g, 43 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,59 g, 21,56 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraida com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida. 0 composto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel para proporcionar o composto em epígrafe (0,65 g, 25%) .
Passo 3: Síntese de 5-(( (lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo-hexil)-(etil)-amino)-4-metilnicotinato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-( ( (lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-4-metilnicotinato de metilo (0,65 g, 1,79 mmol) e acetaldeído (0,39 g, 8,95 mmol) em dicloroetano (20 mL) foi adicionado ácido acético (0,64 g, 10,7 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,13 g, 5,33 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o composto em epígrafe (0,55 g, 79%).
Passo 4: Síntese de ((lr,4r)-4-((5-(((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4-metilpiridin-3-il) (etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionado NaOH aquoso (0,11 g, 2,81 mmol) a uma solução de 5-( ( (lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo-hexil)-(etil)-amino)-4-metilnicotinato de metilo (0,55 g, 1,40 mmol) em etanol (7 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e a mistura acidificada utilizando HC1 diluido até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura, dando o respetivo ácido (0,5 g). O ácido anterior (0,5 g, 1,3 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (5 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,48 g, 2,65 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, foi adicionado PYBOP (1,02 g, 1,58 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura foi vertida para gelo e extraida com 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas até um residuo que foi purificado por cromatografia sobre silica gel para proporcionar o composto em epigrafe (0,5 g, 74 %).
Passo 5: Sintese de 5-( ( (lr,r)-4-aminociclo- hexil) (etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metilnicotinamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ((lr,4r)—4 — ( (5 — (((4, 6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4-metilpiridin-3-il)(etil)amino)ciclo-hexil) carbamato de terc-butilo (0,5 g, 0,97 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (2 mL) . A mistura foi agitada à ta durante 1, o solvente foi removido sob pressão reduzida. Foi adicionada solução saturada de NaHCCg ao resíduo e a extração foi realizada utilizando 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio; secas sobre anidro Na2SC>4; filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (0,35 g, 88%).
Passo 6: Síntese de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-5-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-4-metilnicotinamida
5-(((lr,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-metilnicotinamida (0,35 g, 0,85 mmol) foi dissolvida em DCM (5 mL) e) foi adicionada formalina (0, 089 g, 2,96 mmol a 0 °C. A mistura foi agitada durante 20 minutos, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,45 g, 2,12 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após conclusão, a mistura foi diluida com água e a extração foi realizada utilizando 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida. O sólido obtido foi adicionalmente purificado por lavagens com acetonitrilo e éter para proporcionar o composto em epigrafe (0,3 g, 80%) . LCMS: 440,45 (Μ + 1)+; HPLC: 73,44% &amp; 21,34% (a 210-370 nm) (Tr;3,769 &amp; 3,965); Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de (DMSO-dd, 400 MHz) δ 11,45 (si, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,07 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,27 (d, 2H) , 3,18 (m, 1H) , 3,01 (m, 2H) , 2,22 (s, 3H) , 2,19 (s, 3H) , 2,12 (s, 6H) , 2,10 (s, 3H) , 1,74 (m, 2H) , 1,64 (m, 2H) , 1,40-1,20 (m, 4H) , 0,81 (t, 3H).
Composto 308: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-metoxi-2-metilbenzamida
Passo 1: Sintese de 5-metoxi-2-metil-3-nitrobenzoato de me tilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-hidroxi-2-metil-3-nitrobenzoico (1,50 g, 7,61 mmol) em DMF (15 mL) foi adicionado carbonato de sódio (3,23 g, 30,5 mmol) e iodeto de metilo (1,88 mL, 30,5 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Após conclusão, a mistura reacional foi diluída com água e a extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe em bruto (1,7 g) que foi utilizado diretamente no passo seguinte.
Passo 2: Síntese de 3-amino-5-metoxi-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-metoxi-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (1,7 g, 7,6 mmol) em etanol (20 mL) foi adicionado cloreto de amónio (1,7 g, 32 mmol) dissolvido em água (20 mL) e ferro em pó (3,38 g, 60,44 mmol). A mistura foi aquecida a 80 °C durante 3 h, filtrada e o resíduo bem lavado com etanol quente. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi basificado com bicarbonato de sódio aquoso. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe em bruto (1,2 g) que foi utilizado diretamente no passo seguinte.
Passo 3: Síntese 3-( ( (lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-metoxi-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-metoxi-2-metilbenzoato de metilo (1,2 g, 6,15 mmol) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (1,70 g, 7,99 mmol) em dicloroetano (20 mL) foi adicionado ácido acético (2,21 g, 36,8 mmol). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (3,91 g, 18,4 mmol) a 0 °C e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Após conclusão, a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida. O material em bruto obtido foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (0,35 g, 14%).
Passo 4: Síntese de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)-(etil)amino)-5-metoxi-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-(((lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-metoxi-2-metilbenzoato (0,35 g, 0,89 mmol) e acetaldeído (0,2 g, 4,46 mmol) em dicloroetano (5 mL) foi adicionado ácido acético (0,32 g, 5,35 mmol) e a mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,57 g, 2,67 mmol) a 0 °C e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Após conclusão, a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (0,3 g, 80%).
Passo 5: Síntese de ( (lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-metoxi-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionado NaOH aquoso (0,06 g, 1,42 mmol) a uma solução de 3-(( (lr,4r)-4-( (terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil) - (etil) amino)-5-metoxi-2-metilbenzoato de metilo (0,3 g, 0,71 mmol) em etanol (4 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura para dar o ácido em bruto (0,25 g). O ácido (0,25 g, 0,62 mmol) foi dissolvido em DMSO (3 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,19 g, 1,23 mmol) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, foi adicionado PYBOP (0,48 g, 0,92 mmol) e a mistura foi agitada de um dia para o outro. A reação foi desativada vertendo para gelo, e a mistura foi extraida com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre Na2SC>4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para dar o composto em epigrafe (0,2 g, 60 %).
Passo 6: Sintese de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-metoxi-2-metilbenzamida
A uma solução de ((lr,4r)-4-((3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-metoxi-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo (0,2 g, 0,37 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (2 mL) e a mistura reacional foi agitada à ta durante 1 h. Depois de concluída a reação o solvente foi removido sob pressão reduzida e foi adicionada solução saturada de NaHCCp. A extração foi realizada utilizando 10% de MeOH/DCM; as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio; secas sobre anidro Na2SC>4; filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar o composto desprotegido de Boc (0,15 g,). O composto desprotegido de Boc (0,15 g, 0,34 mmol) foi dissolvido em DCM (2 mL) e foi-lhe adicionada formalina (0,035 g, 1,19 mmol) a 0 °C. A mistura reacional resultante foi agitada a 0 °C durante 10 minutos. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,18 g, 0,85 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após conclusão da reação, foi adicionada água e a extração foi realizada utilizando 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar material em bruto que foi purificado por HPLC prep. para dar o composto em epigrafe como um sal de TFA (0,02 g, 12%). LCMS: 469,80 (M + 1)+; HPLC: 96, 80% (a 210-370 nm) (Tr;3,802); Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de XH (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H) , 9,42 (s, 1H) , 8,06 (s, 1H) , 6,75 (s, 1H) , 6,58 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,26 (d, 2H, J=4
Hz), 3,72 (s, 3H) , 3,09 (m, 3H) , 2,69 (s, 3H) , 2,68 (s, 3H) , 2,19 (s, 3H) , 2,10 (s, 6H) , 1,95 (m, 2H) , 1,87 (m, 2H), 1,41 (m, 4H), 0,801 (t, 3H).
Composto 309: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-((4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(2-hidroxietoxi)-2-metilbenzamida
Passo 1: síntese de 5-hidroxi-2-metil-3-nitrobenzoato de me tilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-hidroxi-2-metil-3-nitrobenzoico (3,50 g, 17,8 mmol) em metanol (40 mL) foi adicionado cloreto de tionilo (3,9 mL, 53 mmol) a 0 °C. A mistura reacional foi aquecida a refluxo durante 3 h. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida. Foi adicionado bicarbonato de sódio aquoso, seguido de extração com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (3,0 g, 80%).
Passo 2: síntese de 5-(2-hidroxietoxi)-2-metil-3- nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-hidroxi-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (1,5 g, 7,1 mmol) em ACN (15 mL) , foram adicionados carbonato de césio (4,6 g, 14 mmol) e 2-bromoetanol (2,5 mL, 35 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C de um dia para o outro. Após conclusão, a mistura reacional foi diluída com água e a extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para proporcionar o composto em epígrafe (1,35 g, 74%).
Passo 3: síntese de 3-amino-5-(2-hidroxietoxi)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-(2-hidroxietoxi) -2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (1,5 g, 5,88 mmol) em etanol (20 mL), foram adicionados cloreto de amónio (1,5 g, 28 mmol) dissolvido em água (20 mL) e ferro em pó (1,3 g, 23 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 3 h. Após conclusão, a mistura reacional foi filtrada e o resíduo bem lavado com etanol quente. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi basificado com bicarbonato de sódio aquoso. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida dando o composto em epígrafe em bruto (1,3 g) que foi utilizado diretamente.
Passo 4: síntese de 3-((4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-(2-hidroxietoxi)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-(2-hidroxietoxi)-2-metilbenzoato de metilo (1,3 g, 5,77 mmol) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (1,6 g, 7,5 mmol) em dicloroetano (20 mL) foi adicionado ácido acético (2,07 g, 34,66 mmol) e a mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (3,7 g, 17 mmol) a 0 °C e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Após conclusão, a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para proporcionar o composto em epígrafe (2,0 g, 82%) como uma mistura de isómeros cis/trans que foi transferida como uma mistura até ao composto final 309 que foi também isolado como uma mistura de isómeros cis/trans.
Passo 5: síntese de 3-((4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)-(etil)amino)-5-(2-hidroxietoxi)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-(2-hidroxietoxi)-2-metilbenzoato de metilo (2,0 g, 4,7 mmol) e acetaldeído (0,63 g, 14,2 mmol) em dicloroetano (20 mL) foi adicionado ácido acético (1,7 g, 28 mmol) e a mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (3,0 g, 14,2 mmol) a 0 °C e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Após conclusão, a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica foi separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida; O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (1,9 g, 89%) .
Passo 6: síntese de (4-( (3-( ((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(2-hidroxietoxi) -2-metilfenil)-(etil)-amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionado NaOH aquoso (0,25 g, 6,33 mmol) a uma solução de 3-( (4-( (terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)-(etil)amino)-5-(2-hidroxietoxi)-2-metilbenzoato de metilo (1,9 g, 4,2 mmol) em etanol (20 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas dando o ácido em bruto correspondente (1,8 g). O ácido (1,8 g, 4,1 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (15 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-ona (1,25 g, 8,25 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, foi adicionado PYBOP (3,22 g, 6,19 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura reacional foi vertida para gelo e extraida com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre Na2SC>4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para dar o composto em epigrafe (1,4 g, 59%) .
Passo 7: sintese de 3-((4-aminociclo-hexil)-(etil)-amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(2-hidroxietoxi)-2-metilbenzamida
A uma solução de (4-( (3-( ((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(2-hidroxietoxi)-2-metilfenil)-(etil)-amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo (0,80 g, 1,40 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado TFA (2 mL) e a mistura reacional foi agitada à ta durante 1 h. Depois de concluída a reação, o solvente foi removido sob pressão reduzida e foi adicionada solução saturada de NaHCCg. A extração foi realizada utilizando 10% de MeOH/DCM; as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e solução aguosa saturada de cloreto de sódio; secas sobre Na2SC>4 anidro; filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (0,5 g, 76%).
Passo 8: síntese de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-((4-(dimetilamino)ciclo-hexil) (etil)amino)-5-(2-hidroxietoxi)-2-metilbenzamida
A uma solução de 3-((4-aminociclo-hexil)-(etil)-amino)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(2-hidroxietoxi)-2-metilbenzamida (0,30 g, 0,63 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionada formalina (0,07 g, 2,23 mmol) a 0 °C. A mistura reacional resultante foi agitada a 0 °C durante 20 minutos. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,34 g, 1,59 mmol) e a mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e foi adicionada água ao resíduo e a extração foi realizada utilizando 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida. 0 sólido obtido foi adicionalmente purificado por lavagens com acetonitrilo e éter para proporcionar o composto em epigrafe N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-((4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(2-hidroxietoxi)-2-metilbenzamida como uma mistura de isómeros cis/trans (0,25 g, 78%). LCMS: 499,55 (M + 1)+; HPLC: 51,61 &amp; 47,78% (a 210-370 nm) (Tr;3,539 &amp; 3,751); Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-dd, 400 MHz) δ 11,45 (sl, 1H) , 8,04 (s, 1H) , 6,68 (s, 1H) , 6,51 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,25 (d, 2H) , 3,92 (t, 2H) , 3,67 (t, 2H) , 2,97 (m, 2H) , 2,18 (s, 3H) , 2,16 (s, 3H) , 2,12 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 2,08 (s, 3H) , 1,89 (s, 3H) , 1,76 (m, 3H) , 1,65 (sl, 1H) , 1,33 (m, 3H) , 1,10 (m, 1H), 0,788 (sl, 3H).
Composto 310: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-((4-(dimetilamino)ciclo-hexil)-(etil)-amino)-5-(2-metoxietoxi)-2-metilbenzamida
Passo 1: sintese de 5-(2-metoxietoxi)-2-metil-3- nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-hidroxi-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (1,50 g, 7,61 mmol) em ACN (15 mL) foi adicionado carbonato de césio (4,96 g, 15,2 mmol) e l-bromo-2-metoxietano (1,57 g, 11,4 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C de um dia para o outro. Após conclusão, a mistura reacional foi diluída com água e a extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (1,3 g, 68).
Passo 2: síntese de 3-amino-5-(2-metoxietoxi)-2- metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-(2-metoxietoxi)-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (1,35 g, 4,83 mmol) em etanol (20 mL) foram adicionados cloreto de amónio (1,35 g, 25,0 mmol) dissolvido em água (20 mL) e ferro em pó (1,07 g, 19,3 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 3 h. Após conclusão, a mistura reacional foi filtrada e o resíduo bem lavado com etanol quente. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi basificado com bicarbonato de sódio aquoso. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe em bruto (1,23 g) gue foi utilizado diretamente no passo seguinte.
Passo 3: síntese de 3-((4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-(2-metoxietoxi)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-(2-metoxietoxi)-2-metilbenzoato de metilo (1,23 g, 5,14 mmol) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (1,42 g, 6,69 mmol) em dicloroetano (15 mL) foi adicionado ácido acético (1,8 g, 31 mmol) e a mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (3,2 g, 15 mmol) a 0 °C e a reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Após conclusão, a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar metilo o composto em epígrafe (1,6 g, 72%) como uma mistura de isómeros cis/trans que foi transferido até ao composto final como uma mistura de isómeros cis/trans.
Passo 4: síntese de 3-( (4-( (terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)-(etil)-amino)-5-(2-metoxietoxi)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-(2-metoxietoxi)-2-metilbenzoato de metilo (1,60 g, 3,67 mmol) e acetaldeído (0,48 g, 10,9 mmol) em dicloroetano (20 mL) foi adicionado ácido acético (1,3 g, 22 mmol) e a mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,33 g, 11,0 mmol) a 0 °C e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida, o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (1,6 g, 94%) .
Passo 5: síntese de (4-( (3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-5-(2-metoxietoxi) -2-metilfenil)-(etil)-amino)-ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionado NaOH aquoso (0,2 g, 5,3 mmol) a uma solução de 3- ( (4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)-(etil)-amino)-5-(2-metoxietoxi)-2-metilbenzoato de metilo (1,6 g, 3,5 mmol) em etanol (20 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e foi ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas para dar o ácido em bruto correspondente (1,4 g) . O ácido (1,4 g, 3,1 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (15 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-ona (0,95 g, 6,2 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, foi adicionado PYBOP (2,4 g, 4,6 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. A mistura reacional foi vertida para gelo e extraida com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre Na2SC>4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epigrafe (1,9 g, 95 %) .
Passo 5: sintese de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-((4-(dimetilamino)ciclo-hexil)-(etil)-amino)-5-(2-metoxietoxi)-2-metilbenzamida
A uma solução de 3-( (4-( (terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)-(etil)-amino)-5-(2-metoxietoxi)-2-metilbenzoato de metilo (1,2 g, 2,67 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (2 mL) e a mistura reacional agitada à ta durante 1 h. Depois de concluída a reação, o solvente foi removido sob pressão reduzida e foi adicionada solução saturada de NaHCCp ao resíduo. A extração foi realizada utilizando 10% de MeOH/DCM; as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio; secas sobre anidro Na2SC>4; filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar o composto desprotegido de Boc (0,78 g, ). O composto desprotegido de Boc (0,30 g, 0,62 mmol) foi dissolvido em DCM (3 mL) e foi adicionada formalina (0,07 g, 2,33 mmol) a 0 °C. A mistura reacional resultante foi agitada a 0 °C durante 20 minutos. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,33 g, 1,56 mmol) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e foi adicionada água ao resíduo, a extração foi realizada utilizando 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar material em bruto que foi purificado por HPLC prep. para dar o composto em epígrafe N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-((4-(dimetilamino)ciclo-hexil)-(etil)-amino)-5-(2-metoxietoxi)-2-metilbenzamida como uma mistura de isómeros cis/trans (0,02 g, 6,3 %). LCMS: 513,60 (M + 1)+; HPLC: 44,48% &amp; 50,77% (a 210-370 nm) (Tr;3,879 &amp; 4,316); Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de XH (DMSO-dá, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 8,04 (s, 1H) , 6,68 (s, 1H) , 6,52 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,25 (d, 2H, J=4,4 Hz), 4,03 (sl, 2H), 3,61 (sl, 2H), 3,28 (s, 3H) , 3,10 (m, 1H) , 2,95 (m, 2H) , 2,18 (s, 6H) , 2,12 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 2,08 (s, 3H) , 1,77 (m, 2H) , 1,65 (sl, 2H), 1,33 (m, 3H), 1,15 (m, 1H), 0,78 (t, 3H, J=4 Hz) .
Composto 311: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)-(etil)-amino)-5-(etiltio)-2-metilbenzamida
Passo 1: síntese de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (50,0 g, 276 mmol) em H2SO4 conc. (200 mL) foi adicionada 1,3-dibromo-5,5-dimetil-2,4- imidazolidinadiona (43,4 g, 151,8 mmol) em porções à temperatura ambiente e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h. Após conclusão, a mistura reacional foi vertida sobre água gelada, o precipitado resultante foi filtrado, lavado com água, e seco sob vácuo, dando o composto em epígrafe em bruto desejado (71,7 g, 99,9%) que foi utilizado diretamente no passo seguinte.
Passo 2: síntese de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoico (285 g, 1104 mmol) em DMF (2,8 L) foi adicionado carbonato de sódio (468 g, 4415 mmol), seguido de adição de iodeto de metilo (626 g, 4415 mmol) à temperatura ambiente. A mistura reacional resultante foi aquecida a 60 °C durante 8 h. Após conclusão, a mistura reacional foi filtrada e lavada com acetato de etilo. Os filtrados combinados foram lavados com água e a fase aquosa foi retro-extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido esbranquiçado (290 g, 97% de rendimento). O composto isolado foi transferido diretamente para o passo seguinte.
Passo 3: síntese de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (290 g, 1060 mmol) em etanol (1,5 L) foi adicionado cloreto de amónio aquoso (283 g, 5290 mmol dissolvidas em 1,5 L de água). A mistura resultante foi agitada e aquecida a 80 °C, seguido de adição de ferro em pó (472 g, 8450 mmol) em porções a
80 °C. A mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 12 h. Após conclusão, a mistura reacional foi filtrada a quente sobre celite e o leito de celite foi lavado com metanol (5 L) , seguido de lavagem com 30% de MeOH em DCM (5 L). O filtrado combinado foi concentrado in vacuo, o residuo obtido foi diluido com bicarbonato aquoso e extraido com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido castanho (220 g, 89% de rendimento).
Passo 4: síntese de 5-bromo-3-( ( (IR, 411)-4-( (terc- butoxicarbonil)-amino)-ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-bromo-2-metilbenzoato de metilo (15,0 g, 617 mmol) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (17,1 g, 80,2 mmol) em dicloroetano (150 mL) foi adicionado ácido acético (22,2 g, 370 mmol) e a mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (39,3 g, 185 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)-amino)-ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (10,5 g, 39%).
Passo 5: síntese de 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)-amino)-ciclo-hexil)-(etil)-amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-3-( ( (lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo-hexil) amino)-2-metilbenzoato (10,0 g, 22,7 mmol) e acetaldeído (2,99 g, 68 mmol) em dicloroetano (100 mL) foi adicionado ácido acético (8,18 g, 136 mmol) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (14,5 g, 68,1 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida, o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (9,0 g, 84%) .
Passo 6: síntese de ((lr, 4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)-(etil)-amino)-ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionado NaOH aquoso (1,15 g, 28,8 mmol) a uma solução de 5-bromo-3-(((lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)-amino)-ciclo-hexil)-(etil)-amino)-2-metilbenzoato de metilo (9,0 g, 19 mmol) em etanol (100 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e o residuo foi acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e ajustado a pH 4 com ácido citrico. A extração foi realizada utilizando 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para dar o ácido em bruto (8,6 g,). O ácido (8,6 g, 19 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (10 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-ona (5,74 g, 37,8 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, foi adicionado PYBOP (14,7 g, 2845 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. A mistura reacional foi vertida para gelo e extraida com 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas para se obter material em bruto que foi purificado lavando com acetonitrilo para proporcionar o composto em epigrafe (10,2 g, 92 %) .
Passo 7: sintese de 3-(((lr,4r)-4-aminociclo-hexil)-(etil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
A uma solução de ((lr,4r)-4-((5-bromo-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)-(etil)-amino)-ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo (3,0 g, 5,10 mmol) em DCM (20 mL) foi adicionado TFA (5 mL) e a mistura reacional foi agitada à ta durante 1 h. Depois de concluída a reação, o solvente foi removido sob pressão reduzida e foi adicionada solução saturada de NaHCCg ao resíduo. A extração foi realizada utilizando 10% de MeOH/DCM; as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio; secas sobre anidro Na2SC>4; filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (2,2 g, 88%) que foi utilizado diretamente no passo seguinte.
Passo 8: síntese de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil) -(etil)-amino)-2-metilbenzamida
A uma solução de 3-( ((lr,4r)-4-aminociclo-hexil)-(etil)-amino)-5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (2,20 g, 4,50 mmol) em DCM (25 mL) foi adicionada formalina (0,49 g, 16,3 mmol) a 0 °C. A mistura reacional resultante foi agitada a 0 °C durante 20 minutos. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,39 g, 11,2 mmol) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após conclusão, foi adicionada água e a extração foi realizada utilizando 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epigrafe (2,3 g, 98%) que foi utilizado diretamente no passo seguinte.
Passo 9: sintese de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)-(etil)-amino)-5-(etiltio)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)-(etil)-amino)-2-metilbenzamida (0,40 g, 0,77 mmol) em dioxano foi adicionado etanotiol (0,048 g, 0,77 mmol) e Dl PE A (2,70 mL, 1,55 mmol) e a mistura reacional foi em seguida purgada com árgon durante 10 min. Em seguida, foram adicionados Pd(OAc)2 (0,009 g, 0,038 mmol) e Xantfos (0,045 g, 0,077 mmol) e a mistura reacional foi agitada a 100 °C de um dia para o outro. Após conclusão da reação, foi adicionada água e foi realizada extração utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre anidro Na2SC>4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para dar o composto em epigrafe (0,17 g, 44%). LCMS: 499,55 (M + 1)+; HPLC: 99,30% (a 210- 370 nm) (Tr;4,264); Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de XH (DMSO-dd, 400 MHz) δ 11,46 (sl, 1H) , 9,37 (s, 1H) , 8,14 (s, 1H) , 7,08 (s, 1H) , 6,89 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,25 (d, 2H, J=4 Hz), 3,15-2,90 (m, 6H) , 2,69 (s, 3H) , 2,68 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,94 (m, 2H) , 1,85 (m, 2H) , 1,41 (m, 4H) , 1,20 (t, 3H, J=7,2), 0,78 (t, 3H, J=6
Hz) .
Composto 313: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(4-hidroxiciclo-hexil)-amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: síntese de 3-(1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8- ilamino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (5,0 g, 25 mmol) e 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ona (5,86 g, 37,8 mmol) em dicloroetano (50 mL) foi adicionado ácido acético (9,0 g, 150 mmol) e a mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (15,9 g, 752 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraida com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel para proporcionar o composto em epigrafe (6,6 g, 76%) .
Passo 2: sintese de 5-cloro-3-(etil(1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-il)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-(1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ilamino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (6,6 g, 19 mmol) e acetaldeido (2,56 g, 58,4 mmol) em dicloroetano (70 mL) foi adicionado ácido acético (7,0 g, 120 mmol) e a mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (12 g, 57 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraida com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida. O residuo foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel para proporcionar o composto em epigrafe (4,0 g, 56%).
Passo 3: síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-il)amino)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (1,5 g, 38 mmol) a uma solução de 5-cloro-3-(etil(l,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-il)amino)-2-metilbenzoato de metilo (6,9 g, 19 mmol) em etanol (70 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e ajustado a pH 4 com ácido cítrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura para dar o ácido em bruto (6,5 g) . O ácido em bruto (6,5 g, 18 mmol) foi dissolvido em DMSO (50 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(lH)-ona (5,6 g, 37 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, foi adicionado PYBOP (14,3 g, 27,5 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. A mistura reacional foi vertida para gelo e extraída com 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (5, 9 g 66%) que foi utilizado diretamente no passo seguinte.
Passo 4: síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(4-oxociclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-il)amino)-2-metilbenzamida (2,0 g, 4,1 mmol) em acetona: água (14 mL + 6 mL) foi adicionado PTSA (3,1 g, 16 mmol) . A mistura reacional resultante foi agitada a 70 °C de um dia para o outro. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi basifiçado com bicarbonato de sódio aquoso. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (1,5 g, 83%) que foi utilizado diretamente no passo seguinte.
Passo 5: síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(4-hidroxiciclo-hexil)-amino)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(4-oxociclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida (0,30 g, 0,68 mmol) em MeOH foi adicionado NaBPU (0,038 g, 1,01 mmol) lentamente a 0 °C. A mistura reacional resultante foi agitada a 0 °C durante 2 h. Após conclusão, a reação foi desativada com água e extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida e o material em bruto obtido foi purificado por lavagens com acetonitrilo e éter para proporcionar o composto em epígrafe como uma mistura de isómeros (175 mg, 58%). LCMS: 446, 35 (M+ 1)+; HPLC: 74,32% &amp; 24,18% (a 210-370 nm) (Tr;5,157 &amp; 5,276); Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-dd, 400 MHz) δ 11,49 (s, 1H) , 8.25 (s, 1H) , 7,17 (s, 1H) , 6,96 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4.25 (d, 2H, J=4 Hz), 3,33 (m, 1H), 3,04 (m, 2H), 2,19 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,78 (m, 2H) , 1,66 (m, 2H), 1,38 (m, 3H), 1,10 (m, 2H), 0,78 (t, 3H).
Composto 315: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)benzamida
Passo 1: Síntese de 5-(3,6-di-hidro-2H-piran-4-il)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-N-((4, 6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr, 4r) -4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (0,30 g, 0,58 mmol) e 2-(3,6-di-hidro-2H-piran-4-il)- 4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolano (0,18 g, 0,88 mmol) numa mistura de dioxano-água foi adicionado Na2C03 (0,22 g, 2,07 mmol). A solução foi purgada com árgon durante 15 min, foi adicionado Pd(PPh3) 4 (0, 067 g, 0,05 mmol) e a solução foi novamente purgada com árgon durante 10 min. A mistura reacional foi aquecida a 100 °C durante 3 horas. Após conclusão, a mistura reacional foi diluída com água e extraída com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4 e o solvente removido sob pressão reduzida para proporcionar o composto em epígrafe (0,30 g, 98 %).
Passo 2: Síntese de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil) (etil)amino)-2-metil-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-(3,6-di-hidro-2H-piran-4-il)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (0,3 g, 0,576 mmol) em metanol, foi adicionada uma quantidade catalítica de Pd a 10%/C. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente sob pressão de balão de hidrogénio durante 1 hora. Após conclusão, a mistura reacional foi filtrada através de um leito de celite, a celite lavada com metanol e o filtrado concentrado sob pressão reduzida, para produzir um composto em bruto que foi purificado por HPLC prep. para proporcionar o composto alvo N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((ls,4s)-4-(dimetilamino) ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)benzamida como o sal de TFA (0,08 g, 26%). LCMS: 523,60 (M + 1)+; HPLC: 48,41+51,05% (@ 210nm-370 nm) (Tr; 3,93&amp; 3,99); Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de (DMSO-ch" 400 MHz) δ 11,47 (si, 1H), 8,39 (t, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,07(s,lH), 6,86 (s, 1H) , 5,87 (s, 1H) , 4,26 (d, 2H, J=2,8Hz) , 3, 94-3, 92 (m, 2H) , 3,41 (m, 2H) , 3, 09-2, 89 (m, 3H) , 2,69 (s, 3H+3H) , 2,19 (s, 3H+3H), 2,11 (s,3H), 1,99- 1,86 (m, 5H) , 1,64 (m, 4H) , l,42(m,3H), l,25(m,2H), 0,79 (t, 3H) .
Composto 319: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo- hexil)(etil)amino)-5-(etilsulfonil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(etiltio)-2-metilbenzamida A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (0,4 g, 0,77 mmol.) em dioxano foi adicionado etanotiol (0,048 g, 0,77 mmol) e DIPEA (2,7 mL, 1,55 mmol). A solução foi purgada com árgon durante 10 min, foram-lhe adicionados Pd(0Ac)2 (0,009 g, 0,038 mmol) e Xantfos (0,045 g, 0,077 mmol) e foi novamente purgado árgon durante 10 min. A mistura reacional foi agitada a 100 °C de um dia para o outro, foi água e a extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre anidro Na2SC>4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (0,17 g, 44%).LCMS: 499,55 (M + 1)+; HPLC: 99,30% (a 210-370 nm) (Tr; 4,264); Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de 1H (DMSO-dh, 400 MHz) δ 11,46 (sl, 1H) , 9,37 (s, 1H) , 8,14 (s, 1H) , 7,08 (s, 1H) , 6,89 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,25 (d, 2H, J=4 Hz), 3,15-2,90 (m, 6H) , 2,69 (s, 3H) , 2,68 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,94 (m, 2H) , 1,85 (m, 2Η) , 1,41 (m, 4H) , 1,20 (t, 3H, J=7,2), 0,78 (t, 3H, J=6
Hz) .
Passo 2: Síntese de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(etilsulfonil)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(etiltio)-2-metilbenzamida (0,085 g, 0,17 mmol.) em metanol foi adicionada oxona (0,105 g, 0,34 mmol) à temperatura ambiente. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h, foi adicionada água e a extração foi realizada utilizando 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre Na2SC>4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar material em bruto que foi purificado por HPLC prep. para proporcionar o composto em epígrafe como o sal de TFA (0,07 g, 77%). LCMS: 531, 60 (M + 1)+; HPLC: 89, 24% (Θ 210nm-370 nm) (Tr;4,082; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de ΧΗ (DMSO-de" 400 MHz) δ 11,47 (s, 1H) , 9,36 (s, 1H) , 8,36 (s, 1H) , 7,53 (s, 1H) , 7,38 (s, 1H) , 7,22 (m, 1H) , 7,09 (s, 1H) , 6,96 (s, 1H) , 5,87 (s, 1H) , 4,29-4,28 (d, 2H, J= 4,8Hz), 3,0-3,20 (m, 4H), 2,60-2,80 (m, 8H), 2,27 (s, 9H), 2,20 (s, 3H) , 2,11 (s, 3H) , 1,90-2,0 (m, 2H) , 1, 80-1, 90 (m, 2H) , 1,40-1,50(m, 4H) , 1,05-1,15 (t, 3H, J=7,6Hz), 0,75- 0,85 (t, 3H, J=6,8Hz).
Composto 320: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-isopropil-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-((((lr,4r)-4- (dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(prop-1-en-2-il)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-bromo-N-((4, 6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metilbenzamida (0,30 g, 0,58 mmol) e 4,4,5,5-tetrametil-2-(prop-l-en-2-il)-1,3,2-dioxaborolano (0,147 g, 0,875 mmol) em mistura de dioxano/água foi adicionado Na2C03 (0,22 g, 2,07 mmol) e a solução purgada com árgon durante 15 min. Em seguida, foi adicionado Pd(PPh3)4 (0,067 g, 0,058 mmol) e foi novamente purgado árgon durante 10 min. A mistura reacional foi aquecida a 100 °C durante 2 horas, diluída com água e extraída com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4 e o solvente removido sob pressão reduzida para proporcionar material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para proporcionar o composto em epígrafe (0,20 g, 71%) .
Passo 2: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3- il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-isopropil-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-(prop-1-en-2-il)benzamida (0,20 g, 0,41 mmol) em metanol foi adicionada uma quantidade catalítica de Pd a 10%/C. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente sob pressão de hidrogénio (pressão de balão) durante 2 h. A mistura foi filtrada através de um leito de celite, lavada com metanol e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. 0 composto em bruto resultante foi purificado por HPLC prep. para proporcionar o composto em epígrafe como o sal de TFA (0,07 g, 35%). LCMS: 481,40 (M + 1)+; HPLC: 97,01% (a 210 nm-370 nm) (Tr;3,996; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 pL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (sl, 1H) , 9,37 (sl, 1H) , 8,00 (s, 1H) , 7,01 (s, 1H) , 6,83 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 4,26- 4,25 (d, 2H, J= 4,OHz), 3,0-3,25 (m, 3H), 2,70-2,8 (m, 1H), 2, 60-2,75 (m, 6H) , 2,19 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H), 1,90-2,0 (m, 2H), 1,80-1,90 (m, 2H), 1,35-1,50(m, 4H), 1,16-1,20 (d, 6H, J= 6,8Hz), 0,75-0,85 (t, 3H).
Composto 321: 5-cloro-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)ciclo- hexil)-(etil)-amino)-N-((4-etil-6-metil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: síntese de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico (126 g, 0,59 mol) em DMF (1,0 L) foi adicionado carbonato de sódio (249 g, 2,34 mol) e iodeto de metilo (145 mL, 2,34 mol). A mistura reacional foi aquecida a 60 °C durante 4 h. Após conclusão, a mistura reacional foi filtrada e o resíduo lavado com DCM. A fase aquosa foi separada e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por cromatografia em coluna sobre sílica, eluindo com acetato de etilo: hexano para proporcionar o composto em epígrafe (85 g, 63%), RMN de ΧΗ (DMSO-de, 400 ΜΗζ) : δ 8,25 (d, 1Η) , 8,05 (s, 1Η) , 3,9 (s, 1H) , 2,4 (s, 1H) .
Passo 2: síntese de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de me tilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (85 g, 0,37 mol) em etanol (425 mL) foram adicionados cloreto de amónio (85 g, 112 mmol) dissolvido em água (425 mL) e ferro em pó (169 g, 2,96 mol) sob agitação. A mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 16 h, filtrada e o resíduo bem lavado com etanol quente. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi basifiçado com bicarbonato de sódio aquoso. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe em bruto (70 g) que foi utilizado diretamente. RMN de (DMSO-de, 400 ΜΗζ) : δ 6,8 (s, 2H) , 5,45 (s, 2H) , 3,75 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H)
Passo 3: síntese de 3-(((lr, 4r)-4-((terc-butoxi- carbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo (12 g, 60 mmol) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (15,4 g, 72 mmol) em dicloroetano (120 mL) foi adicionado ácido acético (21 g, 360 mmol) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (38,2 g, 180 mmol) e a reação agitada durante 2 h à temperatura ambiente. Após conclusão, foi adicionada água à mistura reacional e a extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de bicarbonato, secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para dar material em bruto que foi em seguida purificado em coluna para dar o composto em epígrafe isómero trans 3-( ( (lr,4rs)-4-( (terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (8,0 g, 33 %) ·
Passo 4: síntese de 3-(((lr,4r)-4-( (terc- butoxicarbonil) amino)-ciclo-hexil)-(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3— ( ( (lr, 4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (11,4 g, 28,8 mmol) e acetaldeído (2,5 g, 56 mmol) em dicloroetano (120 mL) foi adicionado ácido acético (10,7 g, 169 mmol) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (17,95 g, 84,6 mmol) e a reação agitada durante 2 h à temperatura ambiente. Após conclusão, foi adicionada água à mistura reacional e a extração foi realizada utilizando DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de bicarbonato, secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para dar material em bruto que foi em seguida purificado em coluna para dar o composto em epigrafe (9,8 g, 80 %).
Passo 5: sintese de 5-cloro-3-(((lr,4r)-4-(dimetilamino)-ciclo-hexil)-(etil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-( ( (lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (9,8 g, 23 mmol) em DCM (50 mL) a 0 °C foi adicionado TFA (10 mL) e a mistura reacional foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente. Após conclusão, a reação foi concentrada até à secura. O residuo foi em seguida basifiçado com solução aquosa sat. de bicarbonato (100 mL) até pH 8 e a camada aquosa extraida com 20% metanol em DCM (100 mL x 4) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04 e o solvente removido sob pressão reduzida para proporcionar a amina em bruto (7,4 g) que foi utilizada tal e qual na reação seguinte. A uma solução, mantida sob agitação, da amina (7,4 g, 23 mmol) em DCM (70 mL) a 0 °C, foi adicionada solução aq. de formalina a 37-41 % (2,4 g, 81 mmol) e a mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 10 min. Foi em seguida adicionado NaBH(0Ac)3 (12,1 g, 57 mmol) e a reação agitada durante 2 h. Após conclusão, a mistura reacional foi desativada com água. Foi adicionado MeOH (8 mL) e as camadas foram separadas. A extração foi realizada com 10% de MeOH em DCM e as fases orgânicas combinadas foram secas e concentradas. O residuo foi purificado em coluna sobre alumina básica para proporcionar o composto em epigrafe (8,0 g, 99%) .
Passo 6: sintese de ácido 5-cloro-3-(((lr,4r)-4- (dimetilamino)ciclo-hexil)-(etil)-amino)-2-metil-benzoico
Foi adicionado NaOH aquoso (1,8 g, 45 mmol em 7 mL de H2O) a uma solução de composto 3-( ( (lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-ciclo-hexil)-(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (8,0 g, 23 mmol) em etanol (70 mL) e agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e o residuo acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e ajustado a pH 4 com ácido citrico. A extração foi realizada utilizando 10% de MeOH em DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04 e concentradas para proporcionar o composto em epigrafe (7,6 g, 99%).
Passo 7: sintese de 3-(aminometil)-4-etil-6-metilpiridin-2 (1H)-ona
A uma solução de 4-etil-6-metil-2-oxo-l,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo (1 eq) em metanol e solução aq. de amoníaco (9:1) foi adicionada uma quantidade catalítica de Níquel de Raney. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente sob pressão de hidrogénio (pressão de balão) durante 2-5 h. Depois de concluída a reação, esta foi filtrada através de um leito de celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em epígrafe.
Passo 8: síntese de 5-cloro-3-(((lr,4r)-4- (dimetilamino)ciclo-hexil)-(etil)-amino)-N-((4-etil-6-metil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
0 ácido anterior, ácido 5-cloro-3-(((trans)-4-(dimetilamino)ciclo-hexil)-(etil)-amino)-2-metil-benzoico,
(1 eq) foi dissolvido em DMSO e foi adicionada 3-(aminometil)-4-etil-6-metilpiridin-2(1H)-ona (2 eq.). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, foram adicionados PYBOP (1,5 eq.) e trietilamina (1 eq.). A mistura reacional foi agitada de um dia para o outro. A mistura reacional foi em seguida vertida para gelo e extraída com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para se obter que foi purificado por cromatograf ia em coluna seguida de HPLC prep. para proporcionar o composto em epígrafe como um sal de TFA (0,1 g, 70%). LCMS: 487,45 (Μ + 1)+ ; HPLC: 96,17% (a 254 nm) (Tr; 6, 026; Método:
Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMS0-de, 400 MHz) δ 11,46 (sl, 1H) , 9,33 (s, 1H) , 8,22 (s, 1H) , 7,19 (s, 1H) , 6,97 (s, 1H) , 5,88 (s, 1H), 4,20-4,25 (d, 2H), 3,0-3,15 (m, 1H+2H), 2,60-2,75 (m, 1H+3H+3H) , 2,35-2,45 (m, 2H), 2,20 (s, 3H), 2,15 (s, 3H) , 1,90-2,0 (m, 2H) , 1, 80-1, 90 (m, 2H) , 1,35-1,50 (m, 4H), 1,10-1,20 (t, 3H, J=7,2 Hz), 0,75-0,85 (t, 3H).
Composto 335: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-((4-(dimetilamino)ciclo-hexil)tio)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 3-bromo-5-cloro-2-metilbenzoato de me tilo
A uma solução, mantida sob agitação, de CuBr2 (12,3 g, 55,3 mmol) em acetonitrilo (150 mL) , foi adicionado nitrito de terc-butilo (7,77 g, 75,4 mmol) a 0 °C e, em seguida, foi-lhe adicionado 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (10,0 g, 50,3 mmol) dissolvido em acetonitrilo. A mistura reacional resultante foi agitada a 0 °C durante 2 horas e, em seguida, à temperatura ambiente durante 18 h. Após conclusão, a mistura reacional foi diluida com água e extraida com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas sob pressão reduzida e purificadas por cromatografia em coluna sobre silica gel dando o composto em epígrafe (6,6 g, 50%).
Passo 2: Síntese de 3-bromo-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo- 1,2-di-hidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,45 g, 11,4 mmol) a uma solução de 3-bromo-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (2,0 g, 7,6 mmol) em EtOH (20 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 hora. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo acidificado utilizando HC1 diluído até pH 8 e, em seguida, com ácido cítrico até pH 6. A fase aquosa foi extraída com 10% metanol em DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para dar o respetivo intermediário ácido em bruto (1,5 g). O ácido (1,5 g, 6,2 mmol) foi dissolvido em DMSO (15 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (1,67 g, 12,43 mmol) e trietilamina (0,61 g, 6,01 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, foi adicionado PyBop (4,81 g, 9,26 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, a mistura reacional foi vertida para água gelada. O sólido suspenso foi recolhido por filtração, bem lavado com água e seco. 0 sólido obtido foi adicionalmente purificado por lavagens com acetonitrilo para proporcionar o composto em epígrafe (2,18 g, 92 %) .
Passo 3: Síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-((4-oxociclo-hexil)tio)benzamida
Uma solução de 3-bromo-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)-metil)-2-metilbenzamida (0,35 g, 0,91 mmol.), 4-mercaptociclo-hexanona (0,142 g, 1,09 mmol) e DIPEA (0,235 g, 1,82 mmol) em dioxano foi purgada com árgon durante 10 min. Em seguida, foram adicionados Pd(OAc)2 (0,01 g, 0,044 mmol) e Xantfos (0,052 g, 0,089 mmol) e foi novamente purgado árgon durante 10 min. A mistura reacional foi agitada a 100 °C de um dia para o outro. Após conclusão da reação, foi adicionada água e foi realizada extração utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre anidro Na2SC>4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (0,50 g, 88%).
Passo 4: Síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-((4-(dimetilamino)ciclo-hexil)tio)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-3-( (4-oxociclo-hexil)tio)benzamida (0,45 g, 1,03 mmol) e dimetilamina (0,14 g, 3,11 mmol) em dicloroetano (5 mL) foi adicionado ácido acético (0,37 g, 6,16 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,66 g, 3,11 mmol) a 0 °C e a mistura agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Depois de concluída a reação, o solvente foi removido sob pressão reduzida. Foi adicionada água ao resíduo e a extração foi realizada utilizando 5% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para proporcionar material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (0,016 g, 3,3 %). Dados Analíticos: LCMS: 462,35 (M + 1)+; HPLC: 89,00% (a 210-370 nm) (Tr;4,949; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-d^, 400 MHz) δ 7,44 (s, 1H) , 7,16 (s, 1H) , 6,10 (s, 1H) , 4,44 (s, 2H) , 3,63 (m, 1H) , 3,13 (m, 1H) , 2,38 (s, 3H) , 2,36 (s, 3H) , 2,35 (s, 3H) , 2,31 (s, 3H) , 2,24 (s, 3H) , 1,75-2,08 (m, 8H).
Composto 336: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-((4-hidroxiciclo-hexil)tio)-2-metilbenzamida
Este composto foi também isolado como um produto adicional a partir da purificação do composto 335 (0,235 g, 50%)
Dados Analíticos de: LCMS: 435,30 (M + 1)+; HPLC: 99,37% (a 210-370 nm) (Tr;5,900; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de XH (DMSO-d6, 400 MHz) δ 11,46 (sl, 1H) , 8,31 (t, 1H) , 7,72-7, 68 (m, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 5,85 (s, 1H) , 4,58 (d, 1H, J=4 Hz), 4,24 (d, 2H, J=4 Hz), 4,13 (m, 1H), 3,43 (m, 1H), 2,20 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1, 95-1, 80 (m, 1H), 1,75-1,55 (m, 1H), 1,40-1,20 (m, 4H), 0,87 (m, 2H).
Composto 339: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(4-hidroxi-4-metilciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: síntese de 2-metil-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução de ácido 2-metil-3-nitrobenzoico (10,0 g, 55,0 mmol) em 120 mL de metanol, foi adicionado H2SC>4 conc. (15 mL) à temperatura ambiente e a mistura agitada a 60 °C de um dia para o outro. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, o material em bruto foi neutralizado com NaHCCb sat. e extraido com acetato de etilo. A fase orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto em epígrafe (10 g).
Passo 2: síntese de 3-amino-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (10,0 g, 56,4 mmol) em 60 mL de etanol foram adicionados cloreto de amónio (18,0 g, 338 mmol) dissolvido em 60 mL de água e ferro em pó (18,8 g, 338,2 mmol). A mistura reacional resultante foi aquecida a 80 °C durante 3 h. Foi adicionada água à mistura reacional e, em seguida, foi filtrada através de celite. O filtrado foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre Na2SC>4, concentradas sob pressão reduzida para dar o composto em epígrafe (7,0 g, 83%).
Passo 3: síntese de 3-( (4-hidroxi-4-metilciclo- hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-2-metilbenzoato de metilo (1,5 g, 9,1 mmol) e 4-hidroxi-4-metilciclo-hexanona (1,51 mL, 11,8 mmol) em 10 mL de dicloroetano foi adicionado ácido acético (3,2 mL, 55 mmol) e a mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura reacional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (5,78 g, 27,3 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi neutralizada com NaHCCp sat., extraída com DCM, seca sobre Na2SC>4, concentrada sob pressão reduzida e purificada por cromatografia em coluna sobre sílica gel para proporcionar o composto em epígrafe que foi transferido como uma mistura de isómeros cis e trans (1,4 g, 56%) .
Passo 4: síntese de 3-(etil (4-hidroxi-4-metilciclo- hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-((4-hidroxi-4-metilciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (1,4 g, 5,05 mmol) e acetaldeído (0,7 mL, 13 mmol) em 20 mL de dicloroetano, foi adicionado ácido acético (1,7 mL, 30 mmol) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura reacional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (3,2 g, 15 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi neutralizada com NaHCCp sat. e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre
Na2SC>4, concentradas sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para proporcionar o composto em epígrafe (1,42 g, 94%).
Passo 5: síntese de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(4-hidroxi-4-metilciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida
Uma mistura de 3-(etil(4-hidroxi-4-metilciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (300 mg, 0,98 mmol) e NaOH (58 mg, 1,47 mmol) em 5 mL de etanol e água (3:2) foi aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura reacional foi concentrada até à secura e o resíduo foi partilhado entre água e acetato de etilo. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar 270 mg do ácido em bruto. O ácido em bruto (270 g, 0,92 mmol), 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (282 mg, 1,85 mmol), PyBOP (717 mg, 1,38 mmol) e trietilamina (0,12 mL, 0,92 mmol) foram agitados em 3 mL de DMSO à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com água e extraída com 10% de MeOH em DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04, concentradas e o resíduo purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para dar o composto em epígrafe N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(4-hidroxi-4-metilciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida como uma mistura de isómeros (120 mg, 30%). LCMS: 426,45 (M + 1)+; HPLC: 62,09 &amp; 33,24% (a 210-370 nm) (Tr;3,982 &amp; 4,164; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-d6 , 400 MHz) δ 11,44 (s, 1H), 8,04 (m, 1H), 7,12 (s, 2H), 6,91 (m, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,25 (d, 2H, J=4 Hz), 4,15 (m, 1H) , 3,00 (m, 2H) , 2,84 (m, 1H) , 2,18 (s, 6H) , 2,10 (s, 3H) , 1,75-1, 60 (m, 2H) , 1,55-1,35 (m, 4H) , 1,35-1,15 (m, 4H) , 1,08 &amp; 1,03 (s, 3H) , 0,87 &amp; 0,77 (t, 3H) .
Composto 340: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(4-metoxi-4-metilciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: síntese de 3-(etil(4-metoxi-4-metilciclo- hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução arrefecida de 3-(etil(4-hidroxi-4-metilciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (300 mg, 0,98 mmol) em THF (5 mL) , foi adicionado hidreto de sódio (235 mg, 5,89 mmol) em porções, seguido de iodeto de metilo (0,61 mL, 9,8 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h, arrefecida até 0 °C, desativada com água gelada e extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4 e concentradas sob pressão reduzida para dar 300 mg do composto em epígrafe em bruto.
Passo 2: Síntese de N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(4-metoxi-4-metilciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida
Uma mistura de 3-(etil(4-metoxi-4-metilciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato (300 mg, 0,94 mmol) e NaOH (56 mg, 1,41 mmol) em 5 mL de etanol e água (4:1) foi aquecida a 70 °C durante 2 h. A mistura reacional foi concentrada até à secura e o material em bruto foi partilhado entre água e acetato de etilo. A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4, e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar 280 mg do ácido em bruto. Uma mistura do ácido em bruto (280 mg, 0,91 mmol), 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (279 mg, 1,83 mmol), PyBOP (716 mg, 1,37 mmol) e trietilamina (0,12 mL, 0,91 mmol) em DMSO (3 mL) foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluída com água, extraída com 10% de MeOH em DCM, seca sobre Na2S04 e concentrada até um resíduo que foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para proporcionar o composto em epígrafe N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(4-metoxi-4-metilciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida como uma mistura de isómeros (70 mg, 17%) . LCMS: 440,45 (M + 1)+; HPLC: 45,77 &amp; 48,47% (a 210-370 nm) (Tr; 4,297 &amp; 4,430; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.;
Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de ΧΗ (DMSO-dg- , 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 8,03 (sl, 1H) , 7,15 (sl, 2H) , 6,91 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,25 (d, 2H, J=2,8 Hz), 3,10-2,90 (m, 7H) , 2,19 (s, 6H) , 2,10 (s, 3H) , 1,72-1,10 (m, 8H) , 1,08 &amp; 0,99 (s, 3H), 0,77 (t, 3H).
Composto 344: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil((ls,4s)-4-metoxiciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: Sintese de 5-cloro-3-(((ls,4s)-4-metoxiciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (1,0 g, 5,0 mmol) e 4-metoxiciclo-hexanona (1,28 g, 10,0 mmol) em dicloroetano (10 mL) foi adicionado ácido acético (1,8 g, 30 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (3,2 g, 15 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraida com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida. 0 material em bruto obtido foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel e o isómero cis do composto em epígrafe foi isolado como o produto isomérico menos polar (0,60 g, 38%). O isómero trans pode ser também transferido para produzir o correspondente produto final trans, composto 343.
Passo 2: Síntese de 5-cloro-3-(etil((ls,4s)-4-metoxiciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-(((ls,4s)-4-metoxiciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (0,60 g, 1,92 mmol) e acetaldeído (0,25 g, 5,78 mmol) em dicloroetano (10 mL), foi adicionado ácido acético (0,69 g, 11,6 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,22 g, 5,78 mmol) a 0 °C e a reação agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após conclusão, a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida e o produto em bruto purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel para proporcionar o composto em epigrafe (0,60 g, 92%) .
Passo 3: Sintese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil((ls,4s)-4-metoxiciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,07 g, 1,76 mmol) a uma solução de 5-cloro-3-(etil((lr,4r)-4-metoxiciclo- hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (0,4 g, 1,17 mmol) em etanol (5 mL) e a mistura foi agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluido até pH 6 e ajustado a pH 4 utilizando ácido citrico. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo e as camadas orgânicas combinadas foram concentradas até à secura dando o respetivo ácido em bruto (0,35 g). O ácido em bruto anterior (0,35 g, 1,1 mmol) foi dissolvido em DMSO (4 mL) e foi adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,33 g, 2,14 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, foi adicionado PYBOP (0,84 g, 1,61 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a mistura foi vertida para gelo e extraida com 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para produzir um produto em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel para proporcionar o composto em epígrafe (0,55 g, 79%) . LCMS: 460,30 (M + 1)+; HPLC: 97,37% (a 210-370 nm) (Tr;5,026; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,44 (sl, 1H) , 8,21 (t, 1H) , 7,13 (s, 1H) , 6,93 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,25 (d, 2H, J=3,2 Hz), 3,27 (m, 1H) , 3,18 (s, 3H) , 2,99 (q, 2H) , 2,79 (m, 1H) , 2,18 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,77 (m, 2H) , 1,60 (m, 2H) , 1,45 (m, 2H), 1,33 (m, 2H), 0,78 (t, 3H, J=6 Hz).
Composto 349: N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-((4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-((l-metilazetidin-3-il)oxi)benzamida
Passo 1: Síntese de 5-hidroxi-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-hidroxi-2-metil-3-nitrobenzoico (3,50 g, 17,8 mmol) em metanol (40 mL) , foi adicionado cloreto de tionilo (3, 9 mL, 53 mmol) a 0 °C. A mistura foi aquecida a refluxo durante 3 horas e concentrada sob pressão reduzida. Foi adicionado bicarbonato de sódio aquoso ao residuo que foi extraido com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida. 0 material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epigrafe (3,0 g, 80%).
Passo 2: Sintese de 3-(3-(metoxicarbonil)-4-metil-5- nitrofenoxi)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-hidroxi-2-metil-3-nitrobenzoato (1,5 g, 7,1 mmol) em ACN (15 mL) foram adicionados carbonato de césio (4,64 g, 14,2 mmol) e 3-iodoazetidina-l-carboxilato de terc-butilo (3,0 g, 11 mmol). A mistura resultante foi aquecida a 80 °C de um dia para o outro. Após conclusão, a mistura reacional foi diluida com água e a extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas sob pressão reduzida. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epigrafe (1,2 g, 46%).
Passo 3: Sintese de 3-(3-amino-5-(metoxicarbonil)-4- metilfenoxi)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-(3-(metoxicarbonil)-4-metil-5-nitrofenoxi)azetidina-1-carboxilato de terc-butilo (1,0 g, 2,7 mmol) em metanol (10 mL) foi adicionada uma quantidade catalítica de Pd a 10%/C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente sob uma atmosfera de hidrogénio (pressão de balão) durante 3 horas. Após conclusão, a mistura reacional foi filtrada através de um leito de celite que foi adicionalmente lavado com metanol. Os filtrados combinados foram concentrados sob pressão reduzida para proporcionar o composto em epígrafe (0,90 g, 98%).
Passo 4: Síntese de 3-(3-((4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-(metoxicarbonil)-4-metilfenoxi)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-(3-amino-5-(metoxicarbonil)-4-metilfenoxi)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo (0,90 g, 2,67 mmol) e (4-oxociclo- hexil)carbamato de terc-butilo (0,741 g, 3,47 mmol) em dicloroetano (10 mL) foi adicionado ácido acético (0,96 g, 16,1 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,7 g, 8,0 mmol) a 0 °C e a reação agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Após conclusão, a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida e o material em bruto purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epígrafe (0,9 g, 63%) como uma mistura de isómeros cis/trans.
Passo 5: Síntese de 3-(3-((4-( (terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(metoxicarbonil)-4-metilfenoxi)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3- (3-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-(metoxicarbonil)-4-metilfenoxi)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo (0,90 g, 1,69 mmol) e acetaldeído (0,22 g, 5,06 mmol) em dicloroetano (10 mL), foi adicionado ácido acético (0,61 g, 10 mmol) e a reação agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,07 g, 5,05 mmol) a 0 °C e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Após conclusão, a reação foi desativada com bicarbonato de sódio aquoso, a fase orgânica separada e a fase aquosa extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas, concentradas sob pressão reduzida, dando o composto em epígrafe que foi utilizado sem mais purificação (0,85 g).
Passo 6: Síntese de 3-(3-((4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4-metilfenoxi)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo
Foi adicionado NaOH aquoso (0,12 g, 3,03 mmol) a uma solução de 3-(3-( (4-( (terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil) (etil)amino)-5-(metoxicarbonil) -4- metilfenoxi)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo (0,85 g, 1,52 mmol) em etanol (10 mL) e a mistura agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e acidificado utilizando HC1 diluído até pH 6 e ajustado utilizando ácido cítrico até pH 4. A extração foi realizada utilizando acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas dando o respetivo ácido (0,75 g). O ácido anterior (0,75 g, 1,37 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (7 mL) e foi-lhe adicionada 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,42 g, 2,74 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, foi-lhe adicionado PYBOP (1,06 g, 2,05 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão, a mistura reacional foi vertida para gelo, extraída com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre anidro Na2SC>4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o composto em epígrafe (0,80 g, 85 %).
Passo 7: Síntese de N-( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-((4-(dimetilamino)ciclo-hexil)(etil)amino)-2-metil-5-((l-metilazetidin-3-il)oxi)benzamida
A um arrefecida solução, mantida sob agitação, de 3- (3- ( (4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-4-metilfenoxi)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo (0,80 g, 1,17 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado TFA (2 mL) . A mistura foi agitada à ta durante 1 h, concentrada sob pressão reduzida e foi adicionada solução saturada de NaHCCg ao resíduo. A extração foi realizada utilizando 10% de MeOH/DCM e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secas sobre Na2SC>4 anidro. O solvente foi removido sob pressão reduzida para dar o composto intermediário desprotegido de Boc (0,5 g). O intermediário anterior (0,5 g, 1,0 mmol) foi dissolvido em MeOH (3 mL) e foi adicionada formalina (0,16 g, 5,33 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada à mesma temperatura durante 20 minutos. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,55 g, 2,59 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após conclusão, o solvente foi removido sob pressão reduzida e adicionada água ao resíduo. A extração foi realizada utilizando 10 % de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto em epigrafe (0,03 g, 5,5 %) . LCMS: 524,55 (M + 1)+; HPLC: 37, 93 + 61,46% (a 210-370 nm) (Tr; 3,4 62 e 3,810; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-dg, 400 MHz) δ 11,45 (sl, 1H) , 8,05 (sl, 1H) , 6,56 (s, 1H) , 6,36 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,69 (sl, 1H) , 4,24 (sl, 2H) , 3,67 (m, 2H) , 3, 08-2, 92 (m, 4H) , 2,33-2,11 (m, 20H) , 1,73-1,65 (m, 4H), 1,35-1,29 (m, 4H), 0,77 (t, 3H).
Composto 119: 3-(((ls,4s)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)- 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: síntese de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-cloro-2-metilbenzoico (4,0 g, 24 mmol) em H2SO4 concentrado (27 mL) a -10 °C foi adicionada uma solução de nitração constituída por HN03 concentrado (3,3 g, 53 mmol) dissolvido em H2SO4 concentrado (4,4 mL) . A mistura resultante foi agitada a -10 °C durante 3 h e vertida sobre água gelada. O precipitado resultante foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo para dar o composto em epigrafe (4,95 g, 99%). Passo 2: sintese de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoico (6,75 g, 31,3 mmol) em DMF (33 mL) , foram adicionados carbonato de sódio (13,2 g, 125 mmol) e iodeto de metilo (17,8 g, 125 mmol). A mistura foi aquecida a 60 °C durante 4 h. Foi adicionada água à mistura reacional, seguida de extração com diclorometano. Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel para proporcionar o composto em epigrafe (6,0 g, 84%) .
Passo 3: sintese de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (6,0 g, 26 mmol) em etanol (60 mL), foram adicionados uma solução de cloreto de amónio (6,0 g, 112 mmol) em água (60 mL) e ferro em pó (11,9 g, 208 mmol). A mistura foi aquecida a 80 °C durante 1 h. Foi adicionada água e a mistura resultante foi filtrada através de celite, seguida de extração com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o composto em epigrafe em bruto (5,0 g).
Passo 4: sintese de 3-(((ls,4s)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-amino-5-cloro-2-metil-benzoato (5,0 g, 25 mmol) e (4-oxociclo-hexil)carbamato de terc-butilo (6,95 g, 32,7 mmol) em dicloroetano (25 mL) , foi adicionado ácido acético (9,0 g, 150 mmol) à temperatura ambiente. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (15,97 g, 75,4 mmol) e a reação agitada 1 h à temperatura ambiente. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel para proporcionar 5,2 g (52%) do composto em epigrafe que elui em primeiro lugar, o produto isómero cis 3-(((ls,4s)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo e 3,5 g (35%) do isómero mais polar, o produto isómero trans 3-(((lr,4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo.
Passo 5: síntese de 3-(((ls,4s)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-( ( (ls, 4s)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato (5,20 g, 13,1 mmol) e acetaldeído (1,15 g, 26,3 mmol) em dicloroetano (15 mL) , foi adicionado ácido acético (4,72 g, 78,8 mmol) à temperatura ambiente. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (8,35 g, 39,4 mmol) e a mistura foi agitada durante 1 h. Foi adicionada água a mistura foi extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para proporcionar o composto em epígrafe (5,3 g, 99 %).
Passo 6: síntese de ( (ls, 4s)-4-((5-cloro-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-( ( (ls, 4s)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-ciclo-hexil)(etil)amino)-5- cloro-2-metilbenzoato (5,20 g, 12,2 mmol) em etanol (15 mL) foi adicionada uma solução aquosa de NaOH (0,73 g, 18,4 mmol). A mistura foi agitada a 60 °C durante 1 h, concentrada sob pressão reduzida e, em seguida, acidificada até pH 4 por adição de HC1 diluido, seguido de ácido citrico. A mistura resultante foi extraida com acetato de etilo e os extratos combinados foram secos e concentrados sob pressão reduzida para proporcionar o ácido em bruto correspondente (4,4 g) . A uma solução, mantida sob agitação, do ácido (4,4 g, 10,7 mmol), 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (3,25 g, 21,4 mmol) e trietilamina (1,08 g, 10,70 mmol) em DMSO (15 mL) foi adicionado PyBOP (8,34 g, 16,05 mmol) a 0 °C. Depois de agitar de um dia para o outro à temperatura ambiente, a mistura foi vertida sobre gelo e extraida com 10 % de MeOH/CH2Cl2· As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para se obter material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel para proporcionar o composto em epígrafe (4,20 g, 72 %). LCMS: 548,40 (M + 1)+; HPLC: 98,62% (a 254 nm) (Tr;5,736; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,45 (s, 1H) , 8,20 (t, 1H) , 7,13 (s, 1H) , 6,91 (m, 2H) , 5,85 (s, 1H) , 4,22 (d, 2H) , 3,47 (sl, 1H) , 3,00-3,02 (m, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,71 (m, 2H), 1,53 (m, 2H), 1,39 (m, 4H), 1,37 (s, 9H), 0,78 (t, 3H, J=6,8 Hz).
Passo 7: síntese de 3-(((ls,4s)-4-aminociclo- hexil)(etil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ((ls,4s)—4 — ( (5 — cloro-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo (0,60 g, 1,10 mmol) em CH2CI2 (10 mL) foi adicionado ácido trifluoroacético (2 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h e concentrada até à secura. O resíduo foi dissolvido em bicarbonato de sódio aquoso, seguido de extração com 20% de MeOH/CH2CÍ2· As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar um resíduo que foi triturado para proporcionar o composto em epígrafe (0,5 g, 100 %). LCMS:445,30 (M + 1)+; HPLC: 99,3 % (a 254 nm) (Tr; 4,524; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C;
Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de XH (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8,21 (t, 1H) , 7,13 (s, 1H) , 6,91 (d, 1H, J=1,6 Hz), 5,85 (s, 1H), 4,24 (d, 2H, J=4,8 Hz), 2,99-3,04 (m, 2H) , 2,82-2,85 (m, 2H) , 2,18 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,75-1,77 (m, 2H) , 1,36-1,39 (m, 6H) , 0,79 (t, 3H, J=6,8 Hz).
Composto 121: 3-(((ls,4s)-4-acetamidociclo- hexil)(etil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-(((ls,4s)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,30 g, 0,68 mmol) e EDCI.HC1 (0,194 g, 1,01 mmol) em DMF (5 mL) foram adicionados HOBt (0,091 g, 0,675 mmol) e ácido acético (0,081 g, 1,35 mmol) à temperatura ambiente. Depois de agitar durante 18 h foi adicionada água e a mistura foi extraída com 10% de MeOH/CH2Cl2· As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas até um resíduo que foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para proporcionar o composto em epígrafe (0,10 g, 30 %) . LCMS:487,30 (M + 1)+ ; HPLC: 91,72% (a 254 nm) (Tr; 4,585; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 8,22 (t, 1H) , 7,75 (d, 1H, J=7,2 Hz), 7,15 (s, 1H), 6,93 (s, 1H), 5,85 (s, 1H) , 4,24 (d, 2H, J=4,4 Hz), 3,69 (sl, 1H) , 3,01-3,03 (m, 2H) , 2,94 (m, 1H) , 2,18 (s, 6H) , 2,10 (s, 3H) , 1,80 (s, 3H) , 1,69-1,71 (m, 2H), 1,37-1,51 (m, 6H), 0,79 (t, 3H, J=6,8. Hz).
Composto 120: 3-(((lr,4r)-4-aminociclo-hexil)(etil)amino)- 5-cloro-N- ((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: síntese de 3-(((lr,4r)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-( ( (lr, 4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (3,5 g, 8,8 mmol) preparado como descrito acima e acetaldeído (0,77 g, 17,7 mmol) em dicloroetano (15 mL), foi adicionado ácido acético (3,17 g, 53 mmol) à temperatura ambiente. Depois de agitar durante 10 minutos, foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (5,61 g, 26,5 mmol) e a reação foi agitada durante 1 h à temperatura ambiente. Foi adicionada água e a mistura foi extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para dar material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para proporcionar o composto em epígrafe (3,5 g, 93 %).
Passo 2: síntese de ((lr, 4r)-4-((5-cloro-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-(((lr, 4r)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)ciclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-2-metilbenzoato (3,50 g, 8,23 mmol) em etanol (15 mL) foi adicionada uma solução aquosa de NaOH (0,49 g, 12,4 mmol). A mistura foi agitada a 60 °C durante 1 h, concentrada sob pressão reduzida e acidificada até pH 4 por adição de HC1 diluído, seguido de solução de ácido cítrico. A mistura resultante foi extraída com acetato de etilo, e as camadas orgânicas combinadas foram secas sob pressão reduzida para dar o ácido em bruto correspondente (3,2 g) . A uma solução, mantida sob agitação, do ácido (3,2 g, 7,8 mmol), 3-(aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (2,36 g, 15,6 mmol) e trietilamina (0,79 g, 7,8 mmol) em DMSO (15 mL) foi adicionado PyBOP (6,07 g, 11,7 mmol) a 0 °C.
Depois de agitar de um dia para o outro à temperatura ambiente, a mistura foi vertida sobre gelo e extraída com 10 % de MeOH/ CH2CÍ2· As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para se obter material em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para proporcionar o composto em epígrafe (3,0 g, 70 %) . Dados
Analíticos: LCMS: 545,25 (M + 1)+; HPLC: 99,92% (a 254 nm) (Tr;5,677; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-de, 400 MHz) δ 11,46 (s, 1H) , 8,23 (t, 1H) , 7,14 (s, 1H) , 6,92 (s, 1Η), 6,65 (d, 1H, J=7,2 Hz), 5,85 (s, 1H), 4,23 (d, 2H, J=4
Hz), 3,14 (sl, 1H) , 3,00-3, 02 (m, 2H) , 2,18 (s, 3H) , 2,11 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1, 67-1,76 (m, 4H) , 1,40 (m, 2H) , 1,35 (m, 9H), 1,04-1,13 (m, 2H), 0,77 (t, 3H, J=6 Hz).
Passo 3: síntese de 3-(((lr,4r)-4-aminociclo- hexil) (etil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l, 2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ((lr, 4r)-4-((5-
cloro-3-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)(etil)amino)ciclo-hexil)carbamato de terc-butilo (0,6 g, 1,10 mmol) em diclorometano (2 mL) foi adicionado TFA (2 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h e concentrada até à secura. O resíduo foi dissolvido em bicarbonato de sódio aquoso e extraído com 20% de MeOH/ CH2CI2. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o produto em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica para proporcionar o composto em epígrafe (0,40 g, 81 %). LCMS:445,18 (M + 1)+; HPLC: 98,13% (a 254 nm) (Tr; 4, 096; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de XH (DMSO-d6r 400 MHz) δ 8,22 (t, 1H) , 7,13 (s, 1H) , 6,92 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 4,23 (d, 2H, J=4 Hz), 3,00-3,01 (m, 2H) , 2,59 (m, 1Η), 2,18 (s, 3H) , 2,12 (s, 3H) , 2,10 (s, 3H) , 1,73-1,76 (m, 2H) , 1, 65-1, 68 (m, 2H) , 1,36-1,39 (m, 2H) , 0, 97-1, 00 (m, 2H) , 0,77 (t, 3H, J=6 Hz). [1H misturado no pico do solvente].
Composto 122: 3-(((1 r, 4r)-4-acetamidociclo- hexil)(etil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-(((lr,4r)-4- aminociclo-hexil)(etil)amino)-5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,30 g, 0,68 mmol) e EDCI.HC1 (0,19 g, 1,0 mmol) em DMF (5 mL) foram adicionados HOBt (0,09 g, 0,68 mmol) e ácido acético (0,081 g, 1,35 mmol) à temperatura ambiente. Depois de agitar durante 18 h, foi adicionada água e a mistura foi extraída com 10% de MeOH/DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas, dando material em bruto que foi em seguida purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel para proporcionar o composto em epígrafe (0,10 g, 30 %). LCMS:487,25 (M + 1)+; HPLC: 92,95% (a 254 nm) (Tr; 4,445; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj . : 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B); RMN de (DMSO-d6, 400 MHz) 511,45 (s, 1H) , 8,21 (t, 1H) , 7,64 (d, 1H, J=7, 6 Hz), 7,14 (s, 1H) , 6,92 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,24 (d, 2H, J=4, 8 Hz), 3,41-3,43 (m, 1H) , 3,01-3,03 (m, 2H) , 2,61 (m,1H), 2,18 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 1,74 (t, 7H, J=18 Hz), 1,40-1,43 (m, 2H) , 1,07-1,12 (m, 2H) , 0,77 (t, 3H, J=6,8 Hz).
Composto 207: 5-cloro-3-(ciclo-hexiltio)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Passo 1: Síntese de 3-bromo-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo A uma solução, mantida sob agitação, de CuBr2 (12,3 g, 55,3 mmol) em acetonitrilo (100 mL) , foi adicionado nitrito de t-butilo (7,79 g, 75,4 mmol) a 0 °C. A esta solução, foi adicionado 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (10 g, 50,3 mmol) em acetonitrilo (50 mL) e agitada a 0 °C durante 2 h e à ta de um dia para o outro. Após conclusão, foi adicionada água e o produto extraído com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com solução aq. de NH4C1 e seca sobre sulfato de sódio, em seguida concentrada sob pressão reduzida. A purificação em coluna de sílica gel proporcionou o composto em epígrafe (6,6 g, 50%).
Passo 2: Síntese de 5-cloro-3-(ciclo-hexiltio)-2- metilbenzoato de metilo A uma solução, mantida sob agitação, de 3-bromo-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (1,0 g, 3,79 mmol) em 1,4-dioxano foi adicionada N, N-diisopropiletilamina (0,98 g, 7,59 mmol). A mistura reacional foi purgada com árgon durante 20 min. Em seguida, foram adicionados sequencialmente Pd(OAc)2 (0,042 g, 0,189 mmol), Xantfos (0,22 g, 0,38 mmol) e ciclo-hexiltiol (0,44 g, 3,79 mmol) e novamente purgada com árgon durante 10 min. A mistura reacional foi em seguida submetida a refluxo durante 16 h. Após conclusão, foi adicionada água e o produto extraido com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e o produto foi purificado por coluna de silica gel para proporcionar o composto em epigrafe (1,0 g, 83%)
Passo 3: Sintese de 5-cloro-3-(ciclo-hexiltio)-N-( (4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Foi adicionado NaOH aquoso (0,2 g em 2,5 mL de H2O, 5,02 mmol) a uma solução de 5-cloro-3-(ciclo-hexiltio)-2-metilbenzoato de metilo (1,0 g, 3,35 mmol) em etanol (10 mL) e a solução agitada a 60 °C durante 1 h. Após conclusão da reação, o etanol foi removido sob pressão reduzida e a camada aquosa foi acidificada utilizando HC1 diluido até pH 6 e, em seguida, ácido citrico até pH 4. 0 produto foi extraido utilizando 10% de metanol em DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas e concentradas para dar o respetivo ácido (0,91 g, 95%). O ácido anterior (0,91 g, 3,2 mmol) foi em seguida dissolvido em DMSO (2 mL) e foram adicionadas 3- (aminometil)-4,6-dimetilpiridin-2(1H)-ona (0,974 g, 6,41 mmol) e trietilamina (0,65 g, 3,2 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, antes de ter-lhe sido adicionado PYBOP (2,5 g, 4,8 mmol) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Após conclusão da reação, a solução foi vertida para gelo e o produto foi extraido com 10% de MeOH em DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas, concentradas para se obter produto em bruto. A purificação por lavagens com solvente proporcionou o composto em epigrafe (1,3 g, 93 %).
Dados Analíticos: LCMS: 419,2 (M + 1)+; HPLC: 98,38% (a 254 nm) (Tr; 7, 989; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (DMSO-dg, 400 MHz) δ 11,47 (sl, 1H), 8,32 (t, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,07 (s, 1H) , 5,85 (s, 1H) , 4,24-4,25 (d, 1H, J = 4Hz) , 2,21 (s, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,11 (s, 3H) , 1,88-1,91 (m, 2H) , 1,56- 1,69 (m, 3H) , 1,25-1,38 (m, 5H) , 2 protões misturados no pico do solvente.
Composto 208: 5-cloro-3-(ciclo-hexilsulfinil)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-l,2-di-hidro-piridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-(ciclo-hexiltio)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,2 g, 0,48 mmol) em DCM (7 mL) a 0 °C, foi adicionado m-CPBA (0, 098 g, 0,57 mmol) e agitada a 0 °C durante 2 h. A reação foi monitorizada por TLC. Após conclusão, a mistura reacional foi diluida com DCM e lavada com NaHCCp aq. . O produto foi purificado por lavagens com solvente para proporcionar o composto em epigrafe (0,17 g, 82,3%).
Dados Analíticos: LCMS: 435,1 (M + 1)+; HPLC: 92,68% (Θ 220 nm) (Tr;5,996; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de 1H (CDC13, 400 MHz) δ 11,44 (sl, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,45 (t, 1H) , 7,39 (s, 1H) , 5,97 (s, 1H) , 4,52 (sl, 2H), 2,53-2,59 (m, 1H) , 2,38 (s, 3H) , 2,34 (s, 3H) , 2,23 (s, 3H) , 1,85-1, 93 (m, 3H) , 1,65 (m, 2H) , 1,20-1,29 (m, 3H) .
Composto 209: 5-cloro-3-(ciclo-hexilsulfonil)-N-((4,6- dimetil-2-oxo-l,2-di-hidro-piridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-(ciclo-hexiltio)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida (0,1 g, 0,238 mmol) em DCM (4 mL) a 0 °C, foi adicionado m-CPBA (0,082 g, 0,48 mmol) e agitada à ta durante 2 h. A reação foi monitorizada por TLC. Após conclusão, a mistura reacional foi diluída com DCM e lavada com NaHCCc aq. . 0 produto foi purificado por HPLC prep. para proporcionar o composto em epígrafe (0,075 g, 23%).
Dados Analíticos: LCMS: 451,1 (M + 1)+; HPLC: 83,44% (a 254 nm) (Tr;6,547; Método: Coluna: YMC ODS-A 150 mm x 4,6 mm x 5 μ; Fase móvel: A; 0,05% TFA em água/ B; 0,05% TFA em acetonitrilo; Vol. Inj.: 10 yL, Temp. Col.: 30 °C; Caudal: 1,4 mL/min.; Gradiente: 5% B até 95% B em 8 min, manter durante 1,5 min, 9,51-12 min 5% B) ; RMN de (CDC13, 400 MHz) δ 11,44 (si, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,45 (t, 1H) , 5,97 (s, 1H) , 4,51 (d, 2H, J = 4Hz), 2, 94-3, 00 (m, 1H) , 2,62 (s, 3H) , 2,38 (s, 3 H) , 2,21 (s, 3H) , 1,88-1,95 (m, 4H) , 1,70 (m, 1H) , 1,52-1,55 (m, 2H) , 1,21 (m, 3H) .
Composto 416: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil((ls,4s)-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida
Passo 1: Sintese de 4-metanossulfonilciclo-hexan-l-ona
Uma solução contendo (buta-1,3-dien-2- iloxi)(trimetil)silano (12,5 mL, 70,7 mmol) em tolueno (50 mL), foi tratada com (metilsulfonil)eteno (4,1 mL, 47,1 mmol) e aquecida sob refluxo durante 7 6 horas. Após este tempo, a mistura reacional foi arrefecida até à temperatura ambiente e concentrada in vacuo para dar um óleo amarelo. O óleo foi dissolvido em CH2CI2 (120 mL) e filtrado através de Celite®. O filtrado foi concentrado in vacuo e o residuo resultante foi em seguida dissolvido em MeOH (8 mL) com arrefecimento (gelo/água). Foi em seguida tratado com TFA (2,0 mL) . A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante mais 10 minutos e, em seguida, à temperatura ambiente durante 25 horas. A mistura reacional foi concentrada in vacuo e o resíduo foi purificado por cromatograf ia em coluna flash (0-10% de MeOH/CH2Cl2) cartucho com 100 g de SNAP em Biotage Isolera para dar o composto em epígrafe 1,2 g (14%) como um óleo espesso amarelo. LC-MS 94%, 0,39 min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 177,0 (apenas visível por ELS). RMN de (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 3,24 - 3,32 (m, 1 H) 2,94 (s, 3 H) 2, 62 - 2,70 (m, 2 H) 2,50 - 2,56 (m, 2 H) 2,38 - 2,45 (m, 2 H) 2,07 - 2,18 (m, 2 H) .
Passo 2: Síntese de 5-cloro-2-metil-3-(((ls,4s)-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)amino)benzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 4- metanossulfonilciclo-hexan-l-ona (94%, 0,56 g, 3,0 mmol) em 1,2-dicloroetano (10 mL) sob um balão de azoto, foi adicionado 3-amino-5-cloro-2-metilbenzoato de metilo (0,60 g, 3,0 mmol), seguido de ácido acético (1,0 mL, 18,0 mmol) . A solução foi agitada durante 50 minutos, antes da adição em porções de triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,9 g, 9,0 mmol) ao longo de 4 horas. A suspensão resultante foi agitada de um dia para o outro, antes da adição de 4-metanossulfonilciclo-hexan-l-ona (0,28 g, 1,5 mmol) em 1,2- dicloroetano (1,5 mL) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,96 g, 4,5 mmol) ao longo de 2,5 horas. A mistura reacional foi agitada durante mais 67 horas, antes da adição de água desionizada (40 mL) à mistura reacional e neutralização (pH 8) pela adição gradual de NaHCCb sólido (4,8 g) . A mistura foi extraída com CH2CI2 (3 x 25 mL) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (40 mL) , secos sobre MgS04, filtrados e concentrados in vacuo. O resíduo foi pré-absorvido sobre sílica e purificado por cromatografia em coluna flash (0-55% de acetato de etilo / heptanos) cartucho com 100 g de SNAP em Biotage Isolera para dar o composto em epígrafe (131 mg, 12%) . LC-MS 96%, 2,09 min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 359,85, 360,85, 361, 90, 362,85; RMN de (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 7,12 (s. 1., 1 H) 6,68 (s. 1., 1 H) 3,89 (s, 3 H) 3,82 (s. 1., 1 H) 3,71 (s. 1., 1 H) 2, 93 - 3, 02 (m, 1 H) 2,89 (s, 3 H) 2,29 (s, 3 H) 2,03 - 2,18 (m, 4 H) 1,91 - 2,02 (m, 2 H) 1,71 - 1,83 (m, 2 H). O outro isómero metilo 5-cloro-2-metil-3-(((lr,4r)-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)amino)benzoato foi também isolado
(92 mg, 8%), LC-MS 96%, 2,06 min (método de LC-MS de 3,5 minutos), m/z = 359,85, 360,90, 361,90, 362,85; RMN de (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 7,11 (s.l., 1 H) 6,68 (s. 1., 1 H) 3,89 (s, 3 H) 3,62 (s. 1., 1 H) 3,27 - 3,36 (m, 1 Η) 2,84 - 2,95 (m, 4 Η) 2,32 - 2,42 (m, 4 Η) 2,24 (s. 1., 3 Η) 1,72 - 1,85 (m, 2 Η) 1,27 - 1,35 (m, 2 Η). Não foi possível fazer a atribuição de cis e trans a partir de experiências adicionais de RMN e a atribuição é arbitrária.
Passo 3: Síntese de 5-cloro-3-(etil((ls,4s)-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-2-metil-3-(((ls,4s)-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)amino)benzoato de metilo (246 mg, 0,68 mmol) em 1,2-dicloroetano seco (6,0 mL) , foi adicionado acetaldeído (115 pL, 2,1 mmol), seguido de ácido acético (235 pL, 4,1 mmol) . A reação foi agitada durante 35 minutos, antes de ter sido adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (435 mg, 2,1 mmol) em porções ao longo de 50 minutos, e a reação foi agitada de um dia para o outro e, em seguida, tratada com acetaldeído (115 pL, 2,1 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 1 hora, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (435 mg, 2,1 mmol) em porções ao longo de 1 hora e a mistura reacional agitada de um dia para o outro. Foi adicionado acetaldeído (229 pL, 4,1 mmol) e a reação agitada durante 2,5 horas, seguida da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (869 mg, 4,1 mmol) em porções ao longo de 1,5 horas e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Foi adicionado acetaldeído (229 pL, 4,1 mmol) juntamente com 1,2-dicloroetano (4,0 mL) para ajudar à dissolução e a reação agitada durante 4 horas. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (869 mg, 4,1 mmol) em porções ao longo de 2 horas e a agitação foi prosseguida ao longo do fim de semana. Foi adicionado acetaldeido (229 pL, 4,1 mmol) e a reação agitada durante 1.5 horas, seguida da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (869 mg, 4,1 mmol) em porções iguais ao longo de 1 hora, juntamente com 1,2-dicloroetano (5,0 mL) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. Foi adicionado acetaldeido (382 pL, 6,8 mmol) e a reação agitada durante 2.5 horas, seguido da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,4 g, 6,8 mmol) em porções iguais ao longo de 4 horas, juntamente com 1,2-dicloroetano (10 mL) e a agitação foi prosseguida de um dia para o outro. A mistura reacional foi diluida com água (40 mL) e neutralizada (até pH 8) pela adição gradual de NaHCCq sólido (5,79 g). As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraida com CH2CI2 (3 x 25 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), secas (MgSCp) , filtradas e concentradas in vacuo. O residuo em bruto foi pré-absorvido sobre silica e purificado por cromatografia em coluna (0-50% de AcOEt/Heptanos) cartucho SNAP de 10 g em Biotage Isolera para dar o composto em epigrafe (140 mg, 51%) como um sólido vitreo incolor. LC-MS 97%, 2,29 min (método de LC-MS de 3 minutos), m/z = 387,95, 388,95, 389,90, 390,95. RMN de XH (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 7,59 (d, J=l,89 Hz, 1 H) 7,21 (d, J=l,89 Hz, 1 H) 3,91 (s, 3 H) 3,45 (s. 1., 1 H) 3,01 (m, 2 H) 2,86 - 2,95 (m, 1 H) 2,82 (s, 3 H) 2,52 (s, 3 H) 2,08 (s. 1., 2 H) 1,94 (s. 1., 2 H) 1,86 (s. 1., 2 H) 1,46 - 1,54 (m, 2 H) 0,89 (t, J=7,01 Hz, 3 H).
Passo 4: Sintese de ácido 5-cloro-3-(etil((ls,4s)-4- (metilsulfonil)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoico
A uma solução, mantida sob agitação, de 5-cloro-3-(etil((ls,4s)-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoato de metilo (140 mg, 0,36 mmol) em THF (5,0 mL) e MeOH (0,3 mL) , foi adicionada uma solução de NaOH 4M (2,7 mL) . A solução resultante foi agitada a 50 °C durante 21 horas e, em seguida, tratada com NaOH 4M (0,9 mL, 3,6 mmol) e o aquecimento foi prosseguido durante mais 4 horas. Após este tempo, a mistura reacional foi deixada atingir a temperatura ambiente e, em seguida, concentrada in vacuo. O resíduo aquoso resultante foi extraído com CH2CI2 (20 mL) e éter (20 mL). O pH da fase aquosa foi então ajustado a 3-4 pela adição de HC1 1M (aq) (13 mL) e extraída com acetato de etilo (3 x 25 mL) . Os extratos de acetato de etilo combinados foram secos sobre MgS04, filtrados e concentrados in vacuo para dar o composto em epígrafe (122 mg, 80% de rendimento) como um sólido amarelo-claro. LC-MS 89%, 4,03 min (método de LC-MS de 7 minutos), m/z = 373, 95, 374, 90, 375, 95, 377,00. RMN de (500 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 7,77 (d, J=l,89 Hz, 1 H) 3,47 (s. 1., 1 H) 3,03 (s. 1., 2 H) 2,88 - 2, 97 (m, 1 H) 2,84 (s, 3 H) 2,60 (s, 3H) 2,12 (s.l., 2 H) 1,96 (s.l., 2 H) 1,88 (s. 1., 2 H) 1,55 (s. 1., 2 H) 0,91 (t, J=7,01 Hz, 3 H) . Supõe-se que 1 x ArH está sob o pico do CDCI3 e o pico do CO2H também não visível.
Passo 5: Síntese de 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil((ls, 4s) - 4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida
Uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-cloro-3-(etil((ls,4s)-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzoico (90%, 122 mg, 0,29 mmol) em DMF anidra (2,0 mL) a 0 °C sob um balão de N2, foi tratada com HATU (134 mg, 0,35 mmol) e DIPEA (102 yL, 0,59 mmol), gota a gota. A solução resultante foi agitada durante 10 minutos e, em seguida, tratada com 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona (89%, 60 mg, 0,35 mmol). A suspensão resultante foi agitada a 0 °C durante 15 minutos e, em seguida, agitada à temperatura ambiente ao longo do fim de semana. A mistura reacional foi partilhada entre água (10 mL) e CH2C12 (10 mL) . As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com CH2C12 (3 x 15 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com uma solução saturada de NaHC03 (aq) (10 mL), água (40 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 25 mL) , secos (MgS04) , filtrados e concentrados in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (0-9% de MeOH/CH2Cl2) cartucho SNAP de 10 g em Biotage Isolera para dar o composto em epígrafe (120 mg, 76% de rendimento) como um sólido esbranquiçado. LC-MS: 95%, 3,71 min (método de LC-MS de 7 minutos), m/z = 508,10, 509,10, 510,10, 511,10. RMN de (500 MHz, Clorofórmio-d) δ 10,84 (s, 1H), 7,07 (s, 2H) , 7,00 (m, 1H) , 6,10 (s, 1H) , 4,53 (d, J = 5,8 Hz, 2H) , 3,45 (s, 1H) , 3, 07 - 2, 95 (m, 2H) , 2, 93 - 2,85 (m, 1H) , 2,81 (s, 3H), 2,45 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 2,29 (s, 3H) , 2,14 - 2,01 (m, 2H) , 1, 97-1, 89 (m, 2H) , 1,87-1, 80 (m, 2H) , 1,50 (s 1, 2H) , 0,88 (t, J = 5,9 Hz, 3H) .
Composto 417: 5-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil((lr,4r)-4-(metilsulfonil)ciclo-hexil)amino)-2-metilbenzamida
Este composto foi preparado de uma maneira análoga à do composto 416 utilizando o outro isómero obtido no passo 2
Composto 392: N- [(4,6-Dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-3-[etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 3-[etil (1-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-5- (trifluorometil)benzoico (material em bruto, 580 mg, 1,68 mmol) e 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona, sal de HC1 (477 mg, 2,53 mmol) em DMSO (6 mL) foi adicionado PyBOP (1,57 g, 3,02 mmol) e base de Hunig (650 mg, 5,04 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 20 horas. A mistura reacional foi desativada com água e o precipitado resultante foi recolhido. O sólido foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel (NH-S1O2 acetato de etilo/MeOH=25/l) para dar o composto em epigrafe como um branco amorfo (386 mg, 48% de rendimento). RMN de XH (400 MHz, CDC13) õppm; 7,31 (s, 1H) , 7,27 (s, 1H) , 7,18 (t, J = 5,7 Hz, 1H) , 5,95 (s, 1H) , 4,55 (d, J = 5,9 Hz, 2H) , 3,17 (dq, J = 6,4, 3,3 Hz, 2H) , 3,08 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 2,81 (m, 2H), 2,70 (m, 1H), 2,40 (s, 3H) , 2,33 (s, 3H) , 2,23 (s, 3H) , 2,21 (s, 3H) , 1,78-1, 93 (m, 2H) , 1,70 (m, 2H) , 0,84 (t, J= 7,0 Hz, 3H) ; MS(ES) [M+H] 479, 2, [M+Na] 501,3; HPLC 96,8% de pureza.
Composto 393: 3-[Etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-N-[(6-metil-2-oxo-4-propil-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]- 5-(trifluorometil)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 3-[etil (1-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-5- (trifluorometil)benzoico (material em bruto, 680 mg, 1,97 mmol) e 3-(aminometil)-6-metil-4-propil-l,2-di- hidropiridin-2-ona, sal de HC1 (642 mg, 2,96 mmol) em DMSO (7 mL) foi adicionado PyBOP (1,85 g, 3,55 mmol) e base de Hunig (764 mg, 5,91 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 20 horas. A mistura reacional foi desativada com água e o precipitado resultante foi recolhido. 0 sólido foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-SÍO2 acetato de etilo/MeOH=20/l) para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (224 mg, 22% de rendimento) . RMN de XH (400 MHz, CDCI3) õppm; 7,31 (s, 1H) , 7,26 (s, 1H) , 7,16 (m, 1H) , 5,94 (s, 1H) , 4,55 (d, J = 5,9 Hz, 2H) , 3,08 (q, J = 7,0 Hz, 2H) , 2,82 (m, 2H) , 2, 66-2,73 (m, 3H) , 2,33 (s, 3H) , 2,24 (s x 2, 6H) , 1,79-1, 98 (m, 2H) , 1, 67-1,75 (m, 4H) , 1,59-1, 66 (m, 2H) , 1,02 (t, J = 7,2 Hz, 3H) , 0,84 (t, J = 7,0 Hz, 3H); MS (ES) [M-H] 505,2; HPLC 98,1% de pureza.
Composto 394: 3-[Etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-N-{[6-metil-2-oxo-4-(propan-2-il)-1,2-di-hidropiridin-3-il]metil}-5-(trifluorometil)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 3-[etil (1-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-5- (trifluorometil)benzoico (material em bruto, -0,313 mmol) e 3-(aminometil)-6-metil-4-(propan-2-il)-1,2-di-hidropiridin-2-ona, sal de HCl (88,0 mg, 0,407 mmol) em DMSO (2,4 mL) foi adicionado PyBOP (244 mg, 0,470 mmol) e base de Hunig (164 uL, 0,939 mmol). A mistura reacional foi agitada à ta durante 16 horas. A mistura reacional foi desativada com água e diluída com acetato de etilo. A camada aquosa foi extraída com diclorometano. A camada orgânica combinada foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-SÍO2 acetato de etilo/MeOH=20/l+5% trietilamina). 0 composto em bruto foi dissolvido com DMSO, diluido com água. 0 sólido precipitado foi recolhido e triturado com acetato de etilo/TBME/hexano para dar o composto em epigrafe como um sólido branco (80,0 mg, 51% de rendimento). RMN de (400 MHz, CDCI3) õppm; 7,31 (s, 1H), 7,26 (s, 1H) , 7,03-7,10 (m, 1H) , 6,04 (s, 1H) , 4,59 (d, J= 6,0 Hz, 2H) , 3,49-3,55 (m, 1H) , 3,09 (q, J= 6,8 Hz, 2H) , 2,81-2,84 (m, 2H) , 2,70-2,78 (m, 1H) , 2,32 (s, 3H) , 2,26 (s, 3H) , 2,24 (s, 3H) , 1, 86-1, 89 (m, 2H) , 1,68-1,71 (m, 4H) , 1,22 (d, J= 6,4 Hz, 6H) , 0,84 (t, J= 6,8 Hz, 3H) ; MS (ES) [M+H] 507,2, [M+Na] 529,2 ; HPLC 97,7% de pureza.
Composto 395: 3-[Etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-N-{[6-metil-2-oxo-4-(trifluorometil)-1,2-di-hidropiridin-3-il]metil}-5-(trifluorometil)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 3-[etil (1-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-5- (trifluorometil)benzoico (material em bruto, -0,313 mmol) e cloridrato de 3-(aminometil)-6-metil-4-(trifluorometil)- 1,2-di-hidropiridin-2-ona, sal de HC1 (100 mg, 0,91 mmol) em DMSO (2,4 mL) foi adicionado PyBOP (248 mg, 1,05 mmol) e base de Hunig (166 uL, 2,10 mmol). A mistura reacional foi agitada à ta durante 16 horas. A mistura reacional foi desativada com água e o precipitado resultante foi recolhido. O sólido foi triturado a partir de acetato de etilo/hexano. O sólido resultante foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-SiCç acetato de etilo/MeOH=10/l+10% trietilamina). 0 composto em bruto foi triturado a partir de acetato de etilo/hexano, e seco para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (75,0 mg, 44% de rendimento) . RMN de (400 MHz, CDCI3) õppm; 7,32 (s, 1H) , 7,26 (s, 1H) , 6, 86-6, 89 (m, 1H) , 6,34 (s, 1H) , 4,73 (d, J = 6,4 Hz, 2H) , 3,08 (q, J = 7,2 Hz, 2H) , 2,80-2,85 (m, 2H) , 2,70-2,78 (m, 1H) , 2,37 (s, 3H) , 2,35 (s, 3H) , 2,24 (s, 3H) , 1,85-1, 89 (m, 2H) , 1,69-1,72 (m, 4H) , 0,84 (t, J = 7,2 Hz, 3H) ; MS (ES) [M+H] 533, 1, [M+Na] 555,2 ; HPLC 95,8% de pureza.
Composto 395: diformato de 3-(etil(l-metilpiperidin-4-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-oxo-4-(trifluorometil)-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(trifluorometil)benzamida
RMN de ΧΗ (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,39 (s, 2H) , 7,48 (s, 1H) , 7,36 (s, 1H) , 6,36 (s, 1H) , 4,52 (s, 2H) , 3,38 (1, 2H) , 3,18 (1, m, 1H) , 3,11 (q, J= 7,2 Hz, 2H) , 2,96 (1, m, 2H) , 2,77 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 1,97 (1, d, J = 12,0 Hz, 2H) , 1,83 (1, m, 2H) , 0,84 (t, J = 7,2 Hz, 3H); MS (ES) (M+H)=533,53.
Seguindo o mesmo método de preparação acima de 3-[Etil(1-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-N-{[6-metil-2-oxo-4-(trifluorometil)-l,2-di-hidropiridin-3-il]metil}-5-(trifluorometil)benzamida, os seguintes análogos foram preparados utilizando o ácido carboxílico e amina correspondentes, e purificados por HPLC de fase inversa (ACN-H20 contendo 0,1 % de ácido fórmico).
Composto 396: formato de 3-(etil(l-metilpiperidin-4- il)amino)-N-((5-fluoro-6-metil-2-oxo-4-propil-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
RMN de (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,31 (s, 1H) , 7,49 (s, 1H) , 7,34 (s, 1H) , 4,45 (s, 2H) , 3,39 (1, 2H) , 3,17 (1, 1H) , 3,10 (q, J = 7,2 Hz, 2H) , 2,97 (1, m, 2H) , 2,77 (s, 3H) , 2,74 (1, m, 2H) , 2,33 (s, 3H) , 2,22 (d, J = 2,8 Hz, 3H) , 1,97 (1, m, 2H) , 1,85 (1, m, 2H) , 1,60 (m, 2H) , 1,02 (t, J = 7,2Hz, 3H) , 0,84 (t, J = 6,8 Hz, 3H) ; MS (ES) (M+H)=525,58 .
Composto 397: formato de 3-(etil(l-metilpiperidin-4- il)amino)-N-((5-fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
LCMS ES+ (M+l) =525,58 . RMN de (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,31 (s, 1H) , 7,50 (s, 1H) , 7,34 (s, 1H) , 4,49 (s, 2H) , 3,48 (m, 1H), 3,39 (1, 2H), 3,18 (1, m, 1H), 3,09 (q, J=6, 8
Hz, 2H) , 2,97 (1, m, 2H), 2,78 (s, 3H), 2,34 (s, 3H) , 2,21 (d, J= 3,2 Hz, 3H) , 1,96 (1, d, J = 12,0 Hz, 2H) , 1,86 (1, m, 2H), 1,32 (dd, J= 1,6 Hz, J= 7,2 Hz, 6H) , 0,84 (t, J = 6.8 Hz, 3H); MS (ES) (M+H)=525,58.
Composto 398: formato de 3-(etil(l-metilpiperidin-4- il)amino)-N-((5-fluoro-4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
RMN de XH (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,29 (s, 1H), 7,49 (s, 1H) , 7,35 (s, 1H) , 4,45 (s, 2H) , 3,39 (1, 2H) , 3,19 (1, 1H) , 3,09 (q, J = 7,2 Hz, 2H) , 2,97 (1, m, 2H) , 2,77 (s, 3H) , 2,34 (d, J = 2,4 Hz, 3H) , 2,33 (s, 3H) , 2,22 (d, J = 3,2 Hz, 3H) , 1,97 (1, m, 2H) , 1,86 (1, m, 2H) , 0,84 (t, J = 6.8 Hz, 3H); MS (ES) (M+H)=497,51.
Composto 399: diformato de 3-(etil(l-metilpiperidin-4-il)amino)-N-((5-fluoro-6-metil-2-oxo-4-(trifluorometil)- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
RMN de (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,32 (s, 2H) , 7,50 (s, 1H) , 7,34 (s, 1H), 4,59 (s, 2H), 3,40 (1, 2H), 3,18 (1, m, 2H) , 3,09 (q, J= 6,8, 2H) , 2,96 (1, m, 2H) , 2,78 (s, 3H) , 2,35 (s, 3H) , 2,29 (d, J = 3,2 Hz, 3H) , 1,98 (1, d, J = 13,2 Hz, 2H) , 1,86 (m, 1H) , 1,80 (1, m, 2H) , 0,84 (t, J = 6,8 Hz, 3H); MS (ES) (M+H)=551,53.
Composto 399: diformato de 3-(etil(l-metilpiperidin-4-il)amino)-N-((5-fluoro-6-metil-2-oxo-4-(trifluorometil)- 1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
6-Metil-2-oxo-4-(trifluorometil)-1,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo foi fluorado como se descreve para o 5-fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-l,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo. O produto foi isolado como uma mistura 3:1 de 6-metil-2-oxo-4-(trifluorometil)-1,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo (material de partida) e 5-fluoro-6-metil-2-oxo-4-(trifluorometil)-l,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo.
Para o 5-fluoro-6-metil-2-oxo-4-(trifluorometil)-1,2-di-hidropiridina-3-carbonitrilo, LCMS E-S (M+H) = 221,2. Esta mistura de nitrilos foi submetida às condições de redução como descritas acima para a 3-(Aminometil)-5-fluoro-4- isopropil-6-metilpiridin-2(1H)-ona. Para o composto fluorado a LCMS (ES) (M+H) mostrou 225,2 e para o análogo não fluorado a LCMS (ES) (M+H) mostrou 207,2. A reação de acoplamento subsequente foi realizada com a mistura de aminas em bruto sem mais purificações. Para o diformato de 3- (etil(l-metilpiperidin-4-il)amino)-N-((5-fluoro-6-metil-2-oxo-4-(trifluorometil)-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida; RMN de ΧΗ (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,32 (s, 2H) , 7,50 (s, 1H) , 7,34 (s, 1H) , 4,59 (s, 2H) , 3,40 (1, 2H) , 3,18 (1, m, 1H) , 3,09 (q, J = 6,8, 2H) , 2,96 (1, m, 2H) , 2,78 (s, 3H) , 2,35 (s, 3H) , 2,29 (d, J= 3,2 Hz, 3H) , 1,98 (1, d, J = 13,2 Hz, 2H) , 1,80 (1, m, 2H) , 0,84 (t, J= 6,8 Hz, 3H) ; MS (ES) (M+H) 551,5.
Composto 400: N- [(4,6-Eimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-3-{etil[1-(propan-2-il)piperidin-4-il]amino}-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 3-{etil[l-(propan-2-il)piperidin-4-il]amino}-2-metil-5-(trifluorometil)benzoico (material em bruto, 510 mg, 0,569 mmol) e 3-(aminometil)-4,6-dimetil-l,2-di-hidropiridin-2-ona, sal de HC1 (161 mg, 0,854 mmol) em DMSO (2 mL) foi adicionado PyBOP (534 mg, 1,02 mmol) e base de Hunig (220 mg, 1,71 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 20 horas. A mistura reacional foi desativada com água e o precipitado resultante foi recolhido. O sólido foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel (NH-SÍO2 acetato de etilo/MeOH=20/l) para dar o composto em epigrafe como um sólido branco (129 mg, 44% de rendimento). RMN de XH (400 MHz, CDC13) õppm; 7,30 (s, 1H) , 7,26 (s, 1H) , 7,22 (t, J= 5,9 Hz, 1H) , 5,95 (s, 1H) , 4,54 (d, J = 5,9 Hz, 2H) , 3,16 (m, 2H) , 3,08 (q, J= 7,0 Hz, 2H) , 2,85 (m, 2H) , 2, 62-2,74 (m, 1H) , 2,38 (s, 3H) , 2,33 (s, 3H) , 2,19 (s, 3H) , 2,00-2,09 (m, 1H) , 1,81 (m, 2H) , 1,58-1,76 (m, 2H) , 0,99 (s x 2, 6H) , 0,83 (t, J = 7,0 Hz, 3H) ; MS (ES) [M+H] 507,2, [M+Na] 529,3; HPLC 97,2% de pureza.
Composto 401: N- [(4,6-Dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3- il)metil]-3-{[(2R*,6R*)-2,6-dimetilpiperidin-4- il](etil)amino}-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3—{ [ (2R, 6R)-1- benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il](etil)amino}-N-[(4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida (267 mg, 0,459 mmol) em MeOH (5 mL) foi adicionado Pd/C (250 mg) . A mistura reacional foi agitada à ta durante 2 hora sob atmosfera de hidrogénio. A mistura reacional foi filtrada e o filtrado foi concentrado in vacuo. 0 residuo foi purificado por cromatografia em coluna sobre silica gel (1. NAM-300H silica gel produzida por Nagara Science Co., Ltd., acetato de etilo/MeOH=4/1 a acetato de etilo/MeOH/trietilamina= 1/1/0,01, 2. NH-Si02, heptano/acetato de etilo=30/l a 8/1) para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (127 mg, 56% de rendimento) . RMN de XH (400 MHz, CDCI3) õppm; 7,30 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,14 (t, J = 6,1 Hz, 1H), 5,94 (s, 1H) , 4,54 (dd, J= 5,9, 1,6 Hz, 2H) , 3,41-3,49 (m, 1H) , 3,01-3,13 (m, 3H) , 2,85-2, 92 (m, 1H) , 2,40 (s, 3H) , 2,32 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 1,63-1, 80 (m, 4H) , 1,13 (d, J = 7,0 Hz, 3H) , 1,02 (d, J = 6,2 Hz, 3H) , 0,83 (t, J = 7,0 Hz, 3H);LC-MS: m/z [M+H] 493,1, [M+Na] 515,3; HPLC; 97,2% de pureza.
Composto 402: N- [(4,6-Dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-3-{[(2R*,4R*,6S*)-2,6-dimetilpiperidin-4-il](etil)amino}-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3—{[(2R, 4R, 6S)-1- benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il] (etil)amino}—N—[(4,6 — dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida (35,6 mg, 0,0611 mmol) em MeOH (3,0 mL) foi adicionado Pd/C (120 mg) . A mistura reacional foi agitada durante 30 minutos sob atmosfera de hidrogénio. Depois de purgar com azoto, a mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado in vacuo. 0 resíduo foi purificado duas vezes por TLC preparativa (TLC sílica gel 60F254, MERCK, MeOH/ Et3N=100/l) para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (4,4 mg, 15% de rendimento) . RMN de XH (400 MHz, CDCI3) δ ppm; 7,33(s, 1H) , 7,30 (s, 1H) , 7,18 (m, 1H) , 5,96 (s, 1H) , 4,54 (d, J = 6,0Hz, 2H) , 3,73 (m, 1H) , 3,26-2, 69 (m, 4H) , 2,40 (s, 3H) , 2,38 (s, 3H) , 2,23 (s, 3H), 1,90-1,10 (m, 4H), 1,10-0,86 (m, 6H) , 0,83 (t, J = 7,2Hz, 3H) . (-2H) ; LC-MS: m/z [M+H] 493,2, [M+Na] 515,3; HPLC; 88,8% de pureza.
Composto 403: formato de 3-(etil(l-metilazetidin-3- il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-oxo-4-propil-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-(trifluorometil)benzamida
RMN de (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,33 (s, 1H) , 7,37 (s, 1H) , 7,26 (s, 1H) , 6,11 (s, 1H), 4,46 (s, 2H), 4,42 (1, m, 1H) , 4,21 (1, 2H) , 3,82 (1, 2H) , 3,00 (q, J= 6,8 Hz, 2H), 2,88 (s, 3H) , 2,65 (m, 2H) , 2,40 (s, 3H) , 2,22 (s, 3H) , 1,61 (m, 2H) , 0,99 (t, J= 7,2 Hz, 3H) , 0,86 (t, J = 6,8 Hz, 3H); MS (ES) (M+l) 480,53.
Composto 404: formato de 3-(etil(l-metilazetidin-3- il)amino)-N-((4-isopropil-6-metil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
RMN de (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,31 (s, 1H) , 7,37 (s, 1H) , 7,27 (s, 1H) , 6,21 (s, 1H) , 4,50 (s, 2H) , 4,41 (1, 1H0, 4,21 (1, 2H), 3,81 (1, 2H) , 3,38 (m, 1H) , 3,00 (q, J = 6,8 Hz, 2H), 2,87 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,24 (s, 3H), 1,20 (d, J = 6,4 Hz, 6H) , 0,86 (t, J = 6,8 Hz, 3H) ; MS (ES) (M+l) 479,54.
Composto 405: formato de N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di- hidropiridin-3-il)metil)-3-(etil(l-metilazetidin-3-il)amino)-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida
RMN de ΧΗ (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,32 (s, 1H) , 7,39 (s, 1H) , 7,26 (s, 1H), 6,08 (s, 1H), 4,44 (s, 2H), 4,41 (1, m, IH) , 4,21 (1, 2H), 3,82 (1, 2H), 3,00 (q, J= 6,8 Hz, 2H), 2,88 δ (s, 3H) , 2,39 (s, 3H) , 2,34 (d, J = 1,2 Hz, 3H) , 2,21 (s, 3H) , 0,86 (t, J = 6,8 Hz, 3H) ; MS (ES) (M+l) 451,49.
Composto 406: 5-Cloro-3-[etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-N-[(6-metil-2-oxo-4-propil-l,2-di-hidropiridin-3- II) metil]benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-cloro-3-[etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metilbenzoico (material em bruto, 1,80 g, 3,26 mmol) e 3-(aminometil)-6-metil-4-propil-l,2-di-hidropiridin-2-ona, sal de HC1 (916 mg, 4,24 mmol) em DMSO (10 mL) foi adicionado PyBOP (3,10 g, 5,87 mmol) e base de Hunig (1,20 g, 9,78 mmol). A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 16 horas. A mistura reacional foi desativada com água e o precipitado resultante foi recolhido. O sólido foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-SiCç Acetato de etilo/MeOH=l0/1) para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (264 mg, 17% de rendimento) . RMN de 1H (400 MHz, CDC13) õppm; 7,20 (t, J = 5,9 Hz, 1H) , 7,06 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,02 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 5,96 (s, 1H) , 4,54 (d, J = 5,9 Hz, 2H) , 3,02 (q, J = 7,0 Hz, 2H) , 2,81 (m, 2H), 2,64-2,71 (m, 3H) , 2,21-2,27 (s x 3, 9H) , 1,84-1,94 (m, 2H) , 1,55-1, 65 (m, 6H) , 1,00 (t, J= 7,4 Hz, 3H) , 0,84 (t, J=7,0 Hz, 3H); MS (ES) [M+H] 473,1, [M+Na] 495,3; HPLC 94,7% de pureza.
Composto 407: 5-Cloro-3-[etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-N-{[6-metil-2-oxo-4-(propan-2-il)-1,2-di-hidropiridin-3-il]metiljbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-cloro-3-[etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metilbenzoico (material em bruto, ~0,7 mmol) e cloridrato de 3-(aminometil)-6-metil-4-(propan-2-il)-1,2-di-hidropiridin-2- ona, sal de HC1 (200 mg, 0,91 mmol) em DMSO (5,3 mL) foi adicionado PyBOP (550 mg, 1,05 mmol) e base de Hunig (366 uL, 2,10 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 7 horas. A mistura reacional foi desativada com água e o precipitado resultante foi recolhido. O sólido foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-SÍO2 Acetato de etilo/MeOH=10/l+10% trietilamina). O composto em bruto foi triturado a partir de acetato de etilo/hexano, e seco para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (166 mg, 50% de rendimento) . RMN de XH (400 MHz, CDCI3) õppm; 7,06 (d, J = 2,4 Hz, 1H) , 7,01-7,05
(m, 1H), 7,00 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 6,04 (s, 1H), 4,57 (d, J = 6,0 Hz, 2H) , 3,49-3,57 (m, 1H) , 3,02 (q, J= 6,8 Hz, 2H) , 2,80-2,84 (m, 2H) , 2,61-2,69 (m, 1H) , 2,29 (s, 3H) , 2,23 (s, 3H) , 2,23 (s, 3H) , 1, 86-1, 90 (m, 2H) , 1, 66-1,70 (m, 4H) , 1,21 (d, J= 6,8 Hz, 6H) , 0,84 (t, J= 6,8 Hz, 3H) ; MS (ES) [M+Na] 495,2 ; HPLC 95,7% de pureza.
Composto 408: 5-Cloro-3-[etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-N-{[6-metil-2-oxo-4-(trifluorometil)-1,2-di-hidropiridin-3-il]metil}benzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-cloro-3-[etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metilbenzoico (material em bruto, ~0,7 mmol) e cloridrato de 3-(aminometil)-6-metil-4-(trifluorometil)-1,2-di-hidropiridin-2-ona, sal de HC1 (200 mg, 0,91 mmol) em DMSO (5,3 mL) foi adicionado PyBOP (550 mg, 1,05 mmol) e base de
Hunig (366 uL, 2,10 mmol). A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 7 horas. A mistura reacional foi desativada com água e diluída com acetato de etilo. A camada aquosa foi extraída com diclorometano. A camada orgânica combinada foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (SiC>2 Acetato de etilo/MeOH=10/l + 5% trietilamina) . O composto em bruto foi triturado com acetato de
etilo/hexano, e seco para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (145 mg, 42% de rendimento) . RMN de XH
(400 MHz, CDC13) óppm; 7,08 (d, J = 2,4Hz, 1H) , 7,03 (d, J = 2,4Hz, 1H) , 6,81-6,85 (m, 1H) , 6,35 (s, 1H) , 4,71 (d, J = 5,2 Hz, 2H) , 3,03 (q, J = 6,8 Hz, 2H) , 2,81-2,85 (m, 2H), 2, 68-2,72 (m, 1H) , 2,39 (s, 3H) , 2,27 (s, 3H) , 2,24 (s, 3H) , 1, 88-1, 94 (m, 2H) , 1, 67-1,72 (m, 4H) , 0,85 (t, J=6, 8
Hz, 3H); MS (ES) [M+H] 499,1, [M+Na] 521,1 ; HPLC 96,0% de pureza.
Seguindo o mesmo método de preparação descrito acima para a 5-cloro-3-[etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-N-{[6— metil-2-oxo-4-(trifluorometil)-1,2-di-hidropiridin-3-il]metiljbenzamida, os seguintes análogos foram preparados utilizando os fragmentos de piridona correspondentes descritos antes, e purificados por HPLC inversa/MS (ACN- H20, contendo 0,1% de ácido fórmico).
Composto 409: formato de 5-cloro-3-(etil(1-metilpiperidin-4-il)amino)-N-((5-fluoro-4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
RMN de (500 MHz, CD3OD) δ ppm 8,45-8,25 (1, 1H) , 7,30 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,13 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 4,47 (s, 2H), 3,50-3,38 (1, 2H), 3,25-3,15 (1, 1H) , 3,08 (q, J= 7,0
Hz, 2H) , 3, 06-2, 98 (1, 2H) , 2,83 (s, 3H) , 2,38 (d, J= 2,0
Hz, 3H) , 2,27 (s, 3H) , 2,26 (d, J= 2,0 Hz, 3H) , 2,03 (dl, J= 14,75 Hz, 2H), 1, 90-1,77 (1, 2H) , 0,89 (t, J= 7,0 Hz, 3H); MS (ES) (M+H) 463,50.
Composto 410: formato de 5-cloro-3-(etil(1-metilpiperidin-4-il)amino)-N-((5-fluoro-6-metil-2-oxo-4-propil-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
RMN de XH (500 MHz, CD3OD) δ ppm 8,43-8,26 (1, 1H) , 7,30 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,12 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 4,47 (s, 2H), 3,47-3,39 (1, 2H), 3,23-3,15 (1, 1H) , 3,08 (q, J= 7,0
Hz, 2H), 3, 05-2, 96 (1, 2H), 2,82 (s, 3H) , 2,79 (dl, J= 8,2
Hz, 2H) , 2,28-2,26 (1, 6H) , 2,06-1, 99 (1, 2H) , 1,93-1,82 (1, 2H) , 1, 68-1,59 (m, 2H) , 1,06 (t, J= 7,5 Hz, 3H) , 0,89 (t, J= 7,0 Hz, 3H); MS (ES) (M+H) 491,52.
Composto 411: formato de 5-cloro-3-(etil(1-metilpiperidin- 4- il)amino)-N-((5-fluoro-4-isopropil-6-metil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
RMN de (500 MHz, CD3OD) δ ppm 8,48-8,34 (1, 1H) , 7,35 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,16 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 4,57 (s, 2H) , 3,61-3,53 (m, 1H) , 3,52-3,44 (1, 2H) , 3,30-3,20 (1, 1H) , 3,13 (q, J= 7,0 Hz, 2H) , 3,10-3,01 (1, 2H) , 2,87 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,31 (d, J= 2,8 Hz, 3H), 2,10-2,04 (1, 2H) , 1, 98-1,87 (1, 2H) , 1,41 (d, J= 6,5 Hz, 6H) , 0,93 (t, J= 7,0 Hz, 3H); MS (ES) (M+H) 491,51.
Composto 412: formato de 5-cloro-3-(etil(l-metilazetidin-3-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-oxo-4-propil-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida
5- Cloro-3-(etil (l-metilazetidin-3-il)amino)-2-metilbenzoato de metilo foi hidrolisado ao ácido 5-cloro-3-(etil (1-metilazetidin-3-il)amino)-2-metilbenzoico seguindo o mesmo método de preparação que para o ácido 3-{Etil[1-(propan-2- il)piperidin-4-il]amino}-2-metil-5-(trifluorometil)benzoico a partir do seu carboxilato correspondente. 0 ácido 5-cloro-3-(etil(l-metilazetidin-3-il)amino)-2-metilbenzoico em bruto foi em seguida acoplado com 3-(Aminometil)-6-metil-4-propil-l,2-di-hidropiridin-2-ona, sal de HC1 preparado antes, seguindo o método de preparação descrito para a N- [ (4,6-Dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3- il)metil]-3-[etil(l-metilpiperidin-4-il)amino]-2-metil-5-(trifluorometil)benzamida. Após purificação por HPLC de fase inversa/MS (CAN-H2O contendo 0,1 % de ácido fórmico), foi obtido o composto em epigrafe. RMN de XH (500 MHz, CD3OD) δ ppm 8,58-8,24 (1, 1H) , 7,15 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,08 (d, J= 2,0 Hz, 1H), 6,14 (s, 1H), 4,48 (s, 2H), 4,41- 4,34 (m, 1H) , 4,25 (1, 2H) , 3,85 (1, 2H) , 3,00 (q, J= 7,0
Hz, 2H) , 2,92 (s, 3H) , 2,72-2, 66 (m, 2H) , 2,34 (s, 3H) , 2,26 (s, 3H), 1,70-1,61 (m, 2H) , 1,04 (t, J= 7,2 Hz, 3H) , 0,91 (t, J= 7,0 Hz, 3H); MS (ES) (M+H) 445,48.
Composto 413: formato de 5-cloro-3-(etil(l-metilazetidin-3-il)amino)-N-((4-isopropil-6-metil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-2-metilbenzamida
Da mesma maneira que foi preparado o composto anterior, formato de 5-cloro-3-(etil(l-metilazetidin-3-il)amino)-2-metil-N-((6-metil-2-oxo-4-propil-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida, o composto em epigrafe foi preparado utilizando ácido 5-cloro-3-(etil(l-metilazetidin-3- il)amino)-2-metilbenzoico e 3-(Aminometil)-6-metil-4- (propan-2-il)-1,2-di-hidropiridin-2-ona, sal de HC1. Após purificação por HPLC de fase inversa/MS (CAN-H20 contendo 0,1 % de ácido fórmico), foi obtido o composto em epigrafe. RMN de (500 MHz, CD3OD) δ ppm 8,43-8,25(1, 1H) , 7,15 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,08 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 6,25 (s, 1H) , 4,52 (s, 2H) , 4,40-4,34 (m, 1H) , 4,29-4,21 (1, 2H), 3,90- 3,79 (1, 2H), 3,48-3,40 (m, 1H) , 3,00 (q, J= 7,0 Hz, 2H), 2,92 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 1,24 (d, J= 7,0
Hz, 6H), 0,90 (t, J= 7,0 Hz, 3H). MS (ES) (M+H) 445,47.
Composto 414: N- [(4,6-Dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-3-{[(2R,6R)-2,6-dimetilpiperidin-4-il](etil)amino}-5-fluoro-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-{[(2R,6R)-l-benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il] (etil)amino}—N—[(4,6 — dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-5-fluoro-2-metilbenzamida (378 mg, 0,709 mmol) em MeOH (7 mL) foi adicionado Pd/C (150 mg). A mistura reacional foi agitada a 23 °C durante 1 hora sob atmosfera de hidrogénio. A mistura reacional foi filtrada e o filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (1. NAM-300H sílica gel produzida por Nagara Science Co., Ltd., acetato de etilo/MeOH=4/1 a acetato de etilo/MeOH/trietilamina=l/l/0,01, 2. NH-SiCç, heptano/acetato de etilo=30/l a 8/1) para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (235 mg, 75% de rendimento). RMN de XH (400 MHz, CDC13) õppm; 7,08 (t, J=6,2 Hz, 1H) , 6,82 (dd, J=10,7, 2,5 Hz, 1H) , 6,75 (dd, J= 8,2, 2,7 Hz, 1H) , 5,93 (s, 1H) , 4,51 (d, J=6,2 Hz, 2H) , 3,40-3, 48 (m, 1H) , 2, 95-3, 09 (m, 3H) , 2,83-2, 92 (m, 1H) , 2,39 (s, 3H) , 2,22 (s x 2, 6H) , 1, 63-1,78 (m, 4H) , 1,13 (d, J = 7,0 Hz,
3H), 1,02 (d, J= 6,2 Hz, 3H), 0,84 (t, J= 7,0 Hz, 3H); MS (ES) [M+H] 443,1, [M+Na] 465,2; HPLC; 99,3% de pureza.
Composto 415: N-[(4,6-Dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-3-{[(2R,4R,6S)-2,6-dimetilpiperidin-4-il](etil)amino}-5-fluoro-2-metilbenzamida
A uma solução, mantida sob agitação, de 3-{[(2R,4R,6S)-1-benzil-2,6-dimetilpiperidin-4-il] (etil)amino}—N—[ (4, 6 — dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil]-5-fluoro-2-metilbenzamida (50,1 mg, 0, 0860 mmol) em MeOH (2 mL) foi adicionado Pd/C (100 mg) . A mistura reacional foi agitada durante 3 horas sob atmosfera de hidrogénio a 23 °C. Depois de purgar com azoto, a mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NAM-300H sílica gel produzida por Nagara Science Co., Ltd., acetato de etilo/MeOH=4/1 a acetato de etilo/MeOH/trietilamina= 1/1/0,01). As frações alvo foram recolhidas e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre sílica gel (NH-SiCç, acetato de etilo/MeOH=30/l a 20/1 a 8/1). As frações alvo foram recolhidas e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por TLC preparativa (TLC sílica gel 6OF254, MERCK, MeOH/Et3N=lΟ Ο/1) para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (17,2 mg, 45% de rendimento) . RMN de (400 MHz, CDC13) õppm; 7,10 (m, 1H) , 6,81 (m, 2H) , 5,91 (s, 1H) , 4,52 (d, J = 6, 0Hz, 2H) , 3,61 (m, 1H) , 3,23-2,73 (m, 4H) , 2,40 (s, 3H) , 2,28 (s, 3H) , 2,24 (s, 3H) , 1,64- 1,05 (m, 4H) , 1,05-0, 86 (m, 6H) , 0,82 (t, J= 7,2Hz, 3H) . (-2H) ; LC-MS: m/z [M+H] 443,2, [M+Na] 465,3; HPLC; 97,4% de pureza.
Exemplo 45: Sínteses de Compostos 6, 9, 11-12, 19, 22, 24, 27, 29, 34-35, 37-47, 65-90, 93-96, 99-101, 103, 106-116, 124, 125, 128-136, 138-143, 145-156, 158-190, 193-204, 210, 211, 214-221, 223-242, 244-267, 270-272, 274, 275, 280, 281, 288, 289, 291-300, 303-305, 307, 312, 314, 316-318, 323-327, 329-331, 337, 338, 341-343, 345, 346, 350-355, 357-385, 388, 391 e 418
Os compostos 6, 9, 11-12, 19, 22, 24, 27, 29, 34-35, 37-47, 65-90, 93-96, 99-101, 103, 106-116, 124, 125, 128-136, 138-143, 145-156, 158-190, 193-204, 210, 211, 214-221, 223-242, 244-267, 270-272, 274, 275, 280, 281, 288, 289, 291-300, 303-305, 307, 312, 314, 316-318, 323-327, 329-331, 337, 338, 341-343, 345, 346, 350-355, 357-385, 388, 391, e 418 foram sintetizados por métodos semelhante aos descritos para os Exemplos 1-44 ou por esquemas reacionais representados nos esquemas gerais.
Exemplo 46: Protocolo de bioensaio e Métodos Gerais
Protocolo para os Ensaios da Enzima PRC2 de Tipo Selvagem e Mutante
Materiais Gerais. S-adenosilmetionina (SAM), S-adenosil-homocisteína (SAH), bicina, KC1, Tween20, dimetilsulfóxido (DMSO) e gelatina de pele bovina (BSG) foram adquiridos de Sigma-Aldrich ao nível mais elevado de pureza possível. Ditiotreitol (DTT) foi adquirido de EMD. A 3H-SAM foi adquirida de American Radiolabeled Chemicals com uma atividade específica de 80 Ci/mmol. As Flashplates de 384 poços com estreptavidina foram adquiridas de PerkinElmer.
Substratos. Os péptidos representativos dos resíduos 21 -44 da histona H3 humana contendo uma lisina 27 não modificada (H3K27me0) ou lisina 27 dimetilada (H3K27me2) foram sintetizados com uma unidade de ligação G(K-biotina)-motivo de etiqueta de afinidade C-terminal e uma terminação de amida C-terminal pela 21st Century Biochemicals. Os péptidos foram purificados por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) até mais do que 95% de pureza e confirmados por cromatografia líquida-espetrometria de massa (LC-MS). As sequências são listadas abaixo. H3K27me0: ATKAARKSAPATGGVKKPHRYRPGGK(biotina)-amida (SEQ ID NO: 1) H3K27me2: ATKAARK(me2)SAPATGGVKKPHRYRPGGK(biotina)-amida (SEQ ID NO:2)
Os oligonucleossomas de eritrócitos de galinha foram purificados de sangue de galinha de acordo com procedimentos estabelecidos.
Enzimas de PRC2 recombinantes. As enzimas de PRC2 humanas foram purificadas como complexos enzimáticos de 4 componentes coexpressos em células de Spodoptera frugiperda (sf9) utilizando um sistema de expressão de baculovírus. As subunidades expressas foram a EZH2 de tipo selvagem (NM_004456) ou os mutantes Y641F, N, H, S ou C de EZH2 gerados a partir da construção de EZH2 de tipo selvagem, EED (NM_00 37 97) , Suzl2 (NM_015355) e RbAp48 (NM_005610). A subunidade EED continha uma etiqueta FLAG N-terminal que foi utilizada para purificar todo o complexo de 4 componentes a partir dos lisados de células sf9. A pureza dos complexos satisfazia ou excedia os 95% como determinado por SDS-PAGE e análise no Bioanalyzer da Agilent. As concentrações das soluções-mães de enzima (geralmente 0,3 -1,0 mg/mL) foram determinadas utilizando um ensaio Bradford contra um padrão de albumina de soro bovino (BSA).
Procedimento Geral para os Ensaios da Enzima PRC2 em Substratos Peptidicos. Os ensaios foram todos realizados num tampão consistindo em bicina 20 mM (pH = 7,6), DTT 0,5 mM, 0,005% BSG e 0,002% Tween20, preparado no dia da utilização. Os compostos em DMSO a 100% (1 pL) foram aplicados em placas de 384 poços com fundo em V de polipropileno (Greiner) utilizando um Platemate 2X3 equipado com uma cabeça de pipeta de 384 canais (Thermo). Foi adicionado DMSO (1 pL) às colunas 11, 12, 23, 24, linhas A - H para o controlo do sinal máximo e foi adicionado SAH, um produto conhecido e inibidor de PRC2 (1 pL), às colunas 11,12, 23, 24, linhas I-P para o controlo de sinal minimo. Um cocktail (40 pL) contendo a enzima PRC2 de tipo selvagem e o péptido H3K27me0 ou qualquer uma das enzimas mutantes Y641 e o péptido H3K27me2 foi adicionado pelo Multidrop Combi (Thermo). Os compostos foram deixados incubar com PRC2 durante 30 min a 25 °C, em seguida foi adicionada um cocktail (10 pL) contendo uma mistura de SAM não radioativa e 3H-SAM para iniciar a reação (volume final = 51 pL) . Em todos os casos, as concentrações finais foram como se segue: enzima PRC2 de tipo selvagem ou mutante foi 4 nM, SAH nos poços de controlo de sinal minimo foi 1 mM e a concentração de DMSO foi 1%. As concentrações finais do resto dos componentes são indicadas na Tabela 2, abaixo. Os ensaios foram parados pela adição de SAM não radioativa (10 pL) a uma concentração final de 600 μΜ, o que dilui o 3H-SAM até um nivel onde a sua incorporação no substrato peptidico já não é detetável. 50 pL da reação na placa de 384 poços de polipropileno foram em seguida transferidos para uma Flashplate de 384 poços e deixou-se que os péptidos biotinilados se ligassem à superfície de estreptavidina durante pelo menos 1 h, antes de ser lavada três vezes com Tween20 a 0,1 % num dispositivo de lavagem de placas ELx405 da Biotek. As placas foram em seguida lidas num leitor de placas TopCount PerkinElmer para medir a quantidade de péptido marcado com 3H ligado à superfície da Flashplate, medida como desintegrações por minuto (dpm) ou alternativamente, referida como contagens por minuto (cpm).
Tabela 2: Concentrações finais de componentes para cada variante de ensaio com base na identidade de EZH2 (EZH2de tipo selvagem ou mutante Y641)
Procedimento Geral para o Ensaio da Enzima PRC2 de Tipo Selvagem no Substrato de Oligonucleossoma. Os ensaios foram realizados num tampão consistindo em bicina 20 mM (pH = 7,6), DTT 0,5 mM, 0,005% de BSG, KC1 100 mM e 0,002% de
Tween20, preparado no dia de utilização. Os compostos em DMSO a 100% (1 pL) foram aplicados em placas de 384 poços de fundo em V de polipropileno (Greiner) utilizando um Platemate 2X3 equipado com uma cabeça de pipeta de 384 canais (Thermo) . Foi adicionado DMSO (1 pL) às colunas 11, 12, 23, 24, linhas A - H para o controlo de sinal máximo e foi adicionado SAH, um produto conhecido e inibidor de PRC2 (1 pL) , às colunas 11,12, 23, 24, linhas I - P para o controlo de sinal minimo. Um cocktail (40 pL) contendo a enzima PRC2 de tipo selvagem e oligonucleossoma de eritrócitos de galinha foi adicionado pelo Multidrop Combi (Thermo). Os compostos foram deixados incubar com PRC2 durante 30 min a 25 °C, em seguida foi adicionado um cocktail (10 pL) contendo uma mistura de SAM não radioativa e 3H-SAM para iniciar a reação (volume final = 51 pL) . As concentrações finais foram como se segue: enzima PRC2 de tipo selvagem foi 4 nM, SAM não radioativa foi 430 nM, 3H-SAM foi 120 nM, oligonucleossoma de eritrócitos de galinha foi 120 nM, a SAH nos poços de controlo de sinal minimo foi 1 mM e as concentração de DMSO foi 1%. O ensaio foi parado pela adição de SAM não radioativa (10 pL) a uma concentração final de 600 pM, a qual dilui a 3H-SAM até um nivel onde a sua incorporação no substrato de oligonucleossoma de eritrócitos de galinha já não é detetável. 50 pL da reação na placa de 384 poços de polipropileno foram em seguida transferidos para uma Flashplate de 384 poços e os nucleossomas de eritrócitos de galinha foram imobilizados na superfície da placa, que foi em seguida lavada três vezes com Tween20 a 0,1 % num dispositivo de lavagem de placas ELx405 da Biotek. As placas foram em seguida lidas num leitor de placas TopCount da PerkinElmer para medir a quantidade de oligonucleossoma de eritrócitos de galinha marcado com 3H ligado à superfície da Flashplate, medida como desintegrações por minuto (dpm) ou alternativamente, referida como contagens por minuto (cpm). Cálculo da % de Inibição
em que dpm = desintegrações por minuto, cmpd = sinal no poço de ensaio e min e max são os respetivos controlos de sinal minimo e máximo.
Ajuste de IC5o de Quatro Parâmetros
Onde topo e fundo são normalmente deixados variar, mas podem ser fixados em 100 ou 0 respetivamente num ajuste de 3 parâmetros. O Coeficiente de Hill é normalmente deixado variar, mas pode ser também fixado em 1 num ajuste de 3 parâmetros. Y é a % inibição e X é a concentração do composto.
Os valores de IC50 para os ensaios da enzima PRC2 nos substratos peptidicos (por exemplo, EZH2 de tipo selvagem e Y641F) são apresentados na Tabela 3 abaixo.
Ensaio de Metilação de WSU-DLCL2
As células WSU-DLCL2 em suspensão foram adquiridas de DSMZ (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures, Braunschweig, Alemanha). Meio RPMI/Glutamax, Penicilina-
Estreptomicina, Soro Fetal Bovino Termicamente Inativado e D-PBS foram adquiridos de Life Technologies, Grand Island, NY, EUA. Tampão de Extração e Tampão de Neutralização (5X) foram adquiridos de Active Motif, Carlsbad, CA, EUA. 0 anticorpo de coelho anti-Histona H3 foi adquirido de Abcam, Cambridge, MA, EUA. 0 anticorpo de coelho anti-H3K27me3 e anti-IgG de coelho conjugado com HRP foram adquiridos de Cell Signaling Technology, Danvers, MA, EUA. 0 substrato TMB "Super Sensível" foi proveniente de BioFX Laboratories, Owings Mills, MD, EUA. Albumina de Soro Bovino isenta de IgG foi adquirida de Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA, EUA. PBS com Tween (10X PBST) foi adquirido de KPL, Gaithersburg, MD, EUA. Ácido sulfúrico foi adquirido de Ricca Chemical, Arlington, TX, EUA. As placas de ELISA Immulon foram adquiridas de Thermo, Rochester, NY, EUA. As placas de cultura de células de fundo em V foram adquiridas de Corning Inc., Corning, NY, EUA. As placas de polipropileno de fundo em V foram adquiridas de Greiner Bio-One, Monroe, NC, EUA.
As células WSU-DLCL2 em suspensão foram mantidas em meio de crescimento (RPMI 1640 suplementado com 10% v/v de soro fetal bovino termicamente inativado e 100 unidades/mL de penicilina-estreptomicina) e cultivadas a 37 °C sob 5% de CCu. Nas condições de ensaio, as células foram incubadas em Meio de Ensaio (RPMI 1640 suplementado com 20% v/v de soro fetal bovino termicamente inativado e 100 unidades/mL de penicilina-estreptomicina) a 37 °C sob 5% de C02 num agitador de placas.
As células WSU-DLCL2 foram aplicadas em meio de ensaio a uma concentração de 50 000 células por mL a uma placa de cultura de células de 96 poços de fundo em V com 200 pL por poço. O composto (1 pL) das placas fontes de 96 poços foi adicionado diretamente à placa de células de fundo em V. As placas foram incubadas num agitador de placas de título a 37 °C, 5% de C02 durante 96 horas. Após quatro dias de incubação, as placas foram centrifugadas a 241 x g durante cinco minutos e o meio foi aspirado suavemente de cada poço da placa de células sem perturbar o sedimento celular. 0 sedimento foi ressuspenso em 200 pL de DPBS e as placas foram novamente centrifugadas a 241 x g durante cinco minutos. O sobrenadante foi aspirado e foi adicionado tampão de Extração (100 pL) frio (4 °C) por poço. As placas foram incubadas a 4 °C num agitador orbital durante duas horas. As placas foram centrifugadas a 3427 x g x 10 minutos. O sobrenadante (80 pL por poço) foi transferido para o seu respetivo poço na placa de 96 poços de fundo em V de polipropileno. Foi adicionado Tampão Neutralização 5X (20 pL por poço) à placa de polipropileno de fundo em V que contém o sobrenadante. As placas de polipropileno de fundo em V que contêm a preparação de histona em bruto (CHP) foram incubadas no agitador orbital x cinco minutos. As Preparações de Histona Em Bruto foram adicionadas (2 pL por poço) a cada respetivo poço em placas ELISA de 96 poços duplicadas contendo 100 pL de Tampão de Revestimento (IX PBS + BSA a 0,05% p/v). As placas foram seladas e incubadas de um dia para o outro a 4 °C. No dia seguinte, as placas foram lavadas três vezes com 300 pL por poço de IX PBST. Os poços foram bloqueados durante duas horas com 300 pL por poço de Diluente de ELISA ((PBS (IX) BSA (2% p/v) e Tween20 (0,05% v/v)). As placas foram lavadas três vezes com IX PBST. Para a placa de deteção da Histona H3, foram adicionados 100 pL por poço de anticorpo anti-Histona-H3 (Abcam, abl791) diluído 1:10 000 em Diluente de ELISA. Para a placa de deteção da trimetilação de H3K27, foram adicionados 100 pL por poço de anti-H3K27me3 diluído 1:2000 em diluente de ELISA. As placas foram incubadas durante 90 minutos à temperatura ambiente. As placas foram lavadas três vezes com 300 pL de IX PBST por poço. Para deteção da
Histona H3, foram adicionados 100 pL de anticorpo anti-IgG de coelho conjugado com HRP diluido a 1:6000 em diluente de ELISA por poço. Para deteção de H3K27me3, foram adicionados 100 pL de anticorpo anti-IgG de coelho conjugado com HRP diluido a 1:4000 em diluente de ELISA por poço. As placas foram incubadas à temperatura ambiente durante 90 minutos. As placas foram lavadas quatro vezes com300 pL de IX PBST por poço. Foram adicionados 100 pL de substrato TMB por poço. As placas de Histona H3 foram incubadas durante cinco minutos à temperatura ambiente. As placas H3K27me3 foram incubadas durante 10 minutos à temperatura ambiente. A reação foi parada com ácido sulfúrico IN (100 pL por poço). A absorvância para cada placa foi lida a 450 nm.
Primeiro, foi determinada a razão para cada poço através
Cada placa incluiu oito poços de controlo de tratamento com apenas DMSO (Inibição Minima) bem como oito poços de controlo para inibição máxima (Poços de fundo). A média dos valores das razões para cada tipo de controlo foi calculada e utilizada para determinar a percentagem de inibição para cada poço de ensaio na placa. O composto de ensaio foi diluido sucessivamente para três vezes em DMSO para um total de dez concentrações de ensaio, começando a 25 μΜ. A percentagem de inibição foi determinada e as curvas de IC50 foram geradas utilizando poços duplicados por concentração de composto. Os valores de IC50 para este ensaio são apresentados na Tabela 3 abaixo.
Análise da proliferação celular
As células WSU-DLCL2 em suspensão foram adquiridas de DSMZ (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures, Braunschweig, Alemanha). Meio RPMI/Glutamax, Penicilina-Estreptomicina, Soro Fetal Bovino Termicamente Inativado foram adquiridos de Life Technologies, Grand Island, NY, EUA. As placas de polipropileno de fundo em V de 384 poços foram adquiridas de Greiner Bio-One, Monroe, NC, EUA. As placas opacas brancas de cultura de células 384 poços foram adquiridas de Perkin Elmer, Waltham, MA, EUA. 0 Cell-Titer Glo® foi adquirido de Promega Corporation, Madison, WI, EUA. 0 leitor de placas SpectraMax M5 foi adquirido de Molecular Devices LLC, Sunnyvale, CA, EUA.
As células WSU-DLCL2 em suspensão foram mantidas em meio de crescimento (RPMI 1640 suplementado com 10% v/v de soro fetal bovino termicamente inativado e cultivadas a 37 °C sob 5% de CO2. Nas condições de ensaio, as células foram incubadas em Meio de Ensaio (RPMI 1640 suplementado com 20% v/v de soro fetal bovino termicamente inativado e 100 unidades/mL de penicilina-estreptomicina) a 37 °C sob 5% de C02.
Para a avaliação do efeito dos compostos na proliferação da linha de células WSU-DLCL2, células em crescimento exponencial foram aplicadas em placas opacas brancas de 384 poços a uma densidade de 1250 célula/mL num volume final de 50 yL de meio de ensaio. Uma placa fonte de compostos foi preparada realizando diluições sucessivas de três vezes em nove pontos em triplicado em DMSO, começando a 10 mM (concentração máxima final do composto no ensaio foi 20 μΜ e do DMSO foi 0,2%). Uma alíquota de 100 nL da placa fonte de compostos foi adicionada ao respetivo poço na placa de células. O controlo de 100% de inibição consistiu em
células tratadas com uma concentração final de 200 nM de estaurosporina e o controlo de inibição de 0% consistiu em células tratadas com DMSO. Após adição de compostos, as placas de ensaio foram incubadas durante 6 dias a 37 °C, 5% de CO2, humidade relativa > 90% durante 6 dias. A viabilidade das células foi medida por quantificação do ATP presente nas culturas de células, adicionando 35 yL de reagente Cell-Titer Glo® às placas de células. A luminescência foi lida no SpectraMax M5. A concentração que inibe a viabilidade das células em 50% foi determinada utilizando um ajuste tetra-paramétrico das curvas dose-resposta normalizadas. Os valores de IC50 para este ensaio são também apresentados na Tabela 3 abaixo.
Tabela 3
Exemplo 47: Derivação da Concentração Citotóxica Mais Baixa (LCC)
Está bem estabelecido que a proliferação celular ocorre através da divisão celular que resulta numa duplicação do número de células após divisão, relativamente ao número de células antes da divisão. Sob um conjunto fixo de condições ambientais (por exemplo, pH, força iónica, temperatura, densidade celular, conteúdo de proteínas e fatores de crescimento no meio e semelhantes) as células proliferarão por duplicação consecutiva (isto é, divisão) de acordo com a seguinte equação, na condição de que estejam disponíveis nutrientes suficientes e outros fatores necessários.
(A.l) em que Nt é o número de células num ponto no tempo (t) depois do inicio do periodo de observação, No é o número de células no inicio do periodo de observação, t é o tempo após o início do período de observação e tD é o intervalo de tempo necessário para duplicação das células, também referido como o tempo de duplicação. A Equação A.l pode ser convertida na forma mais conveniente de uma equação exponencial de base e, tirando partido a igualdade, 0,693 = ln (2) .
(A.2) A constante de velocidade para a proliferação celular (kp) está inversamente relacionada com o tempo de duplicação como se segue.
(A-3)
Combinando as equações A.2 e A.3 produz,
(A.4)
Assim, de acordo com a equação A.4 prevê-se que o número de células aumente exponencialmente com tempo (Figura 1 A) durante o período inicial de crescimento de células referido como fase logarítmica de crescimento. As equações exponenciais como a equação A.4 podem ser linearizadas considerando o logaritmo natural de cada lado.
(A.5)
Assim, prevê-se que um gráfico de ln(Nt) como uma função do tempo produza uma linha linear ascendente com um declive igual a kp e interceção nos y igual a ln(No), como se ilustra na Figura 1B.
Alterações nas condições ambientais podem resultar numa alteração na velocidade de proliferação celular que é quantificável como alterações na constante de velocidade da proliferação kp. Entre as condições que podem resultar numa alteração na velocidade de proliferação encontra-se a introdução no sistema de um composto antiproliferativo no inicio do periodo de observação (isto é, em t = 0). Quando um composto antiproliferativo tem um impacto imediato na proliferação celular, prevê-se que os gráficos de ln(Nt) como uma função do tempo continuem a ser lineares a todas as concentrações de composto, com valores decrescentes de kp para concentrações crescentes de composto.
Dependendo da base mecanistica da ação antiproliferativa, alguns compostos podem não efetuar imediatamente uma alteração na velocidade de proliferação. Em vez disso, pode haver um periodo de latência antes do impacto do composto ser notado. Nesses casos, um gráfico de ln(Nt) como uma função do tempo será bifásico e o ponto no tempo ao qual o impacto do composto começa pode ser identificado como o ponto de rutura entre as fases (Figura 2) . Independentemente de se o impacto de um composto na proliferação é imediato ou começa após um periodo de latência, a constante de velocidade para a proliferação a cada concentração do composto é melhor definida pelo declive da curva ln (Nt) vs. tempo a partir do ponto no tempo ao qual o composto impacto começa até ao fim do periodo de observação da experiência.
Um composto aplicado às células em crescimento pode afetar a proliferação observada em uma de duas formas gerais: por inibição da divisão celular posterior (citostase) ou por morte celular (citotoxicidade). Se um composto é citostático, o aumento da concentração do composto reduzirá o valor de kp até não haver mais divisão celular. Neste ponto, a velocidade de crescimento de células e, por conseguinte, o valor de kp, será zero. Se, por outro lado, o composto é citotóxico, então o valor de kp será constituído por duas constantes de velocidade: uma constante de velocidade para crescimento celular continuado na presença do composto (kg) e uma constante de velocidade para a morte celular pelo composto (kd) . A constante de velocidade global para a proliferação a uma concentração fixa de composto será, assim, a diferença entre os valores absolutos destas constantes de velocidade em oposição.
(A.6) Às concentrações do composto para as quais a velocidade do crescimento celular excede o da morte celular, o valor de kp terá um valor positivo (isto é, kp > 0). A concentrações do composto às quais a velocidade de crescimento celular é inferior à da morte celular, o valor de kp terá um valor negativo (isto é, kp < 0) e o número de células diminuirá com tempo, indicativo de citotoxicidade robusta. Quando kg coincide exatamente com kd então a constante de velocidade da proliferação global, kp, terá um valor de zero. Assim, podemos definir a concentração citotóxica mais baixa (LCC) como aquela concentração de composto que resulta num valor de kp igual a zero, porque qualquer concentração superior a esta resultará em citotoxicidade claramente observável. Nota bene: a concentrações abaixo da LCC há probabilidade de que ocorra morte celular, mas a uma velocidade que é inferior à proliferação celular residual. O tratamento aqui não pretende definir os pormenores biológicos da ação do composto. Em vez disso, o objetivo aqui é apenas definir um parâmetro prático com o qual quantificar objetivamente a concentração de composto à qual a velocidade da morte celular excede o crescimento de novas células. De facto, a LCC representa um ponto de rutura ou concentração critica acima do qual é observada citotoxicidade franca, em vez de uma concentração citotóxica per se. A este respeito, a LCC pode ser vista como sendo semelhante a outras métricas de pontos de rutura fisicos, tais como a concentração micelar critica (CMC) utilizada para definir a concentração de lipido, deterqente ou outra espécie tensioativa acima da qual todas as moléculas incorporam-se em estruturas micelares.
Tradicionalmente, o impacto dos compostos antiproliferativos sobre o crescimento celular tem sido mais comummente quantificado pelo valor de IC50, o qual é definido como aquela concentração de composto que reduz a velocidade da proliferação celular a metade daquela observada na ausência de composto (isto é, para o veiculo ou amostra de controlo de solvente; Figura 2) . A IC50, contudo, não permite que o investigador distinga entre compostos citostáticos e citotóxicos. A LCC, pelo contrário, permite fazer facilmente uma tal diferenciação e ainda quantificar a concentração à qual ocorre a transição para o comportamento citotóxico robusto.
Se limitar a janela de tempo de observação entre o inicio do impacto (como definido acima e na Figura 2) e o fim da experiência, então os dados ajustar-se-ão geralmente bem a uma equação linear quando representada graficamente como ln (Nt) como uma função do tempo (vide supra) . A partir de ajustes deste tipo, o valor de kp pode ser determinado a cada concentração de composto testada. Um nova representação gráfica do valor de kp como uma função da concentração do composto ([I]) terá a forma de uma isotérmica descendente, com um valor máximo a [I] = 0 de kmax (definido pelo veiculo ou amostra de controlo de solvente) e um valor minimo a uma concentração de composto infinita de kmin (Figura 3) .
(A.7) em que Imid é a concentração de composto que produz um valor de kp que está a meio entre os valores de kmax e kmin (refira-se que o valor de Imid não é o mesmo que a IC50, exceto no caso de um composto completa e puramente citostático) . Assim, o ajuste dos dados da nova representação gráfica à equação A.7 proporciona estimativas de kmax, kmln e Imici· Se um composto é citostático (como aqui definido), o valor de kmin não pode ser inferior a zero. Para compostos citotóxicos, kmin será inferior a zero e o valor absoluto de kmln relacionar-se-á diretamente com a eficácia do composto na morte das células.
Os valores ajustados derivados de equação A. 7 podem ser também utilizados para determinar o valor da LCC. Por definição, quando [I] = LCC, kp = 0. Assim, nestas condições a equação A.7 torna-se.
(A.8) O rearranjo algébrico da equação A.8 produz uma equação para a LCC.
(A.9)
Esta análise é simples de implementar com um software de ajuste de curva não linear e pode ser aplicada durante os ensaios celulares da atividade do composto ao longo do processo de descoberta e desenvolvimento do fármaco. Desta maneira, a LCC pode proporcionar uma métrica valiosa para a avaliação da SAR do composto (relação estrutura-atividade). A Tabela 4 abaixo proporciona os dados de LCC e IC50 para certos compostos da invenção sobre células WSU-DLCL2.
Tabela 4
Exemplo 48: Ensaio In vivo Ratos
Os ratos fêmea Fox Chase SCID® (CB17/Icr-Prkdcscid/IcrlcoCrl, Charles River Laboratories) ou ratos glabros atímicos (Cri:NU(Ncr)-Foxnlnu, Charles River
Laboratories) tinham 8 semanas de idade e uma gama de peso corporal (BW) de 16,0-21,1 g no Dl do estudo. Os animais foram alimentados ad libitum com água (osmose inversa 1 ppm Cl) e Lab Diet® NIH 31 Modificada e Irradiada consistindo em 18,0% de proteína bruta, 5,0% de gordura bruta e 5,0% de fibra bruta. Os ratos foram alojados em leito Enrich-o'cobs™ irradiado em microisoladores estáticos com um ciclo de luz de 12 horas a 20-22 °C (68-72 °F) e 40-60% de humidade. Todos os procedimentos satisfazem as recomdações do Guide for Care and Use of Laboratory Animais em relação a contenção, criação, procedimentos cirúrgicos, regulação de alimentos e líquidos, e cuidado veterinário.
Cultura de Células Tumorais
As linhas de células de linfomas humanos foram obtidas de diferentes fontes (ATCC, DSMZ) e mantidas em Piedmont como culturas em suspensão em meio RPMI-1640 contendo 100 unidades/mL de sal de sódio de penicilina G, 100 g/mL de estreptomicina e 25 g/mL de gentamicina. O meio foi suplementado com 10% de soro fetal bovino e glutamina 2 mM. As células foram cultivadas em balões de cultura de tecido numa incubadora humidificada a 37 °C, numa atmosfera de 5% de CO2 e 95% de ar.
Implantação do Tumor In Vivo
Linhas de células de linfoma humano foram colhidas durante a fase crescimento mid-log e ressuspensas em PBS com 50% de Matrigel™ (BD Biosciences). Cada rato recebeu 1 x 107 células (0,2 mL de suspensão celular) por via subcutânea no flanco direito. Os tumores foram medidos com um paquímetro em duas dimensões para monitorizar o crescimento à medida que o volume médio se aproximava da gama desejada de 80-120 mm3. O tamanho do tumor, em mm3, foi calculado a partir de:
em que w = largura e 1 = comprimento, em mm, do tumor. O peso do tumor pode ser estimado assumindo que 1 mg é equivalente a 1 mm3 de volume tumoral. Após 10-30 dias (dependendo da linha de células utilizada), os ratos com tumores com 108-126 mm3 foram divididos em oito grupos de tratamento com volumes tumorais médios de 117-119 mm3.
Artigos de Ensaio
Os compostos de ensaio foram armazenados à temperatura ambiente e protegidos da luz. Em cada dia de tratamento foram preparadas formulações frescas de compostos suspendendo os pós em carboximetilcelulose sódica (NaCMC) a 0,5% e Tween®80 a 0,1% em água desionizada. O veículo EM10, NaCMC a 0,5% e Tween® 80 a 0,1% em água desionizada, foram utilizados para tratar os grupos de controlo com os mesmos planos. As formulações foram armazenadas afastadas da luz a 4 °C antes da administração.
Plano de Tratamento
Os ratos foram tratados a doses de composto que variam desde 1 - 1000 mg/kg e em posologias TID (3 vezes por dia, a cada 8 h), BID (2 vezes por dia, a cada 12 h) ou QD (uma vez por dia) durante várias quantidades de dias por sonda oral ou injeções através das vias intravenosa, intraperitoneal ou subcutânea. Cada dose foi administrada num volume de 0,2 mL/20 g de rato (10 mL/kg) e ajustada para o último registo de peso dos animais individuais. A duração de tratamento máxima foi de 28 dias.
Análise do Volume Tumoral Mediano (MTV) e Inibição do Crescimento de Tumores (TGI) A eficácia do tratamento foi determinada no último dia de tratamento. O MTV(η), o volume tumoral mediano para o número de animais, n, que pode ser avaliado no último dia, foi determinado para cada grupo. A percentagem de inibição do crescimento de tumores (%TGI) pode ser definida de várias maneiras. Primeiro, a diferença entre o MTV (n) do grupo de controlo designado e o MTV(n) do grupo tratado com fármaco é expressa como uma percentagem do MTV(n) do grupo de controlo:
Outra maneira de calcular a %TGI é considerando a alteração do tamanho do tumor desde o dia 1 até ao dia n, sendo η o último dia de tratamento.
Análise do atraso no crescimento de tumores
Alternativamente, os ratos foram mantidos vivos após o último dia de tratamento para a análise do atraso no crescimento de tumores. Os tumores foram medidos com paquímetro duas vezes por semana e cada animal de ensaio foi sacrificado quando o seu neoplasma atingiu o volume final de 2000 mm3 ou no último dia pré-especif içado do estudo, aquele que ocorreu primeiro. O tempo até ao critério terminal (TTE) para cada rato foi calculado a partir da seguinte equação:
em que b é a interceção e m é o declive da linha obtida por regressão linear de um conjunto de dados de crescimento de tumores transformados logaritmicamente. Os conjuntos de dados eram constituídos pela primeira observação que excedeu o volume final do estudo e as três observações consecutivas que precederam imediatamente a obtenção do volume final. Aos animais que não atingiram o critério de volume foi atribuído um valor de TTE igual ao último dia do estudo (pré-especifiçado). Qualquer animal classificado como uma morte relacionada com o tratamento (TR) foi atribuído um valor de TTE igual ao dia da morte. Qualquer animal classificado como uma morte não relacionada com o tratamento (NTR) foi excluído dos cálculos de TTE e de todas as análises posteriores. O resultado do tratamento foi determinado a partir do atraso no crescimento de tumores (TGD), definido como o aumento da mediana de TTE num grupo de tratamento em comparação com o grupo de controlo:
exprimido em dias, ou como uma percentagem da mediana de TTE do grupo de controlo:
em que: T = mediana de TTE para um grupo de tratamento C = mediana de TTE para o grupo de controlo
Toxicidade
Os animais foram pesados diariamente nos Dias 1-5, e, em seguida, duas vezes por semana até ao fim do estudo. Os ratos foram examinados frequentemente para sinais notórios de quaisquer efeitos secundários adversos, relacionados com o tratamento, os quais foram documentados. A toxicidade aceitável para a dose tolerada máxima (MTD) foi definida como uma perda do BW médio do grupo inferior a 20% durante o teste e não mais do que 10% de mortalidade devido a mortes TR. Uma morte era classificada como TR se fosse atribuível a efeitos secundários do tratamento como evidenciado por sinais clinicos e/ou necropsia ou devido a causas desconhecidas durante o periodo de administração. Uma morte era classificada como NTR se houvesse evidência de que a morte não estava relacionada com efeitos secundários do tratamento. As mortes NTR durante o intervalo de administração seriam tipicamente classificadas como NTRa (devido a um acidente ou erro humano) ou NTRm (devido a disseminação do tumor por invasão e/ou metástase, confirmada por necropsia). Os animais tratados por via oral que morreram de causas desconhecidas durante o periodo de administração podem ser classificados como NTRu quando o desempenho do grupo não apoia uma classificação TR e a necropsia, para despistar um erro de administração, não é exequível.
Amostragem
Em vários dias durante o estudo, os ratos foram amostrados de uma maneira pré-especifiçada. A amostragem incluiu sangramentos não terminais (0,25 mL) a partir da veia mandibular sem anestesia e a colheita do volume total de sangue via punção cardíaca terminal sob anestesia de CO2. As amostras de sangue foram processadas para o plasma, com K2-EDTA como anticoagulante. As amostras de plasma foram congeladas a -80 °C e armazenadas antes da bioanálise dos níveis dos compostos.
Os tumores foram colhidos a partir de ratos especificados sob condições isentas de RNAse e bissetados. Uma fatia com 2 mm de espessura de uma metade de cada tumor foi fixa com formalina durante 24 h e transferida para etanol a 70%. Os tecidos tumorais fixos foram embutidos em parafina. O tecido tumoral remanescente de cada animal foi congelado instantaneamente em N2 líquido e pulverizado com um almofariz e mão de almofariz.
Ratos especificados foram amostrados quanto aos tecidos sucedâneos incluindo baço, pele, medula óssea e bigodes. Cada tecido foi isolado e fixo e/ou congelado instantaneamente.
Análises Estatísticas e Gráficas
Todas as análises estatísticas e gráficas foram realizadas com o Prism 3.03 (GraphPad) para Windows. Foram aplicados vários métodos de análise. Os volumes tumorais D29 medianos foram comparados com o teste de Kruskal-Wallis e um teste de comparação múltipla post-hoc de Dunn. Estes testes foram realizados três vezes.
As análises estatísticas bilaterais foram realizadas a P = 0,05. O Prism indica os resultados como não significativos (ns) a P > 0,05, significativos (simbolizados por "*") a 0,01 < P < 0,05, muito significativos ("**") a 0,001 < P < 0,01 e extremamente significativos ("***") a P < 0,001.
Para testar a significância estatística entre os grupos de controlo e tratados durante todo o tempo de tratamento foram utilizados um teste ANOVA de medições repetidas, seguido de um pós-teste de comparação múltipla de Dunnets ou um teste ANOVA bifatorial.
Para representações gráficas, foi construído um diagrama "caixa de bigodes" para mostrar a distribuição dos volumes tumorais individuais para cada grupo. A caixa representa os percentis 25 e 75 das observações, a linha horizontal corresponde ao valor mediano, e os "bigodes" indicam os valores máximo e minimo. Os volumes tumorais medianos ou médios (± EPM) foram representados graficamente num gráfico semilogaritmico ou linear como função do tempo. As alterações no BW médio do grupo durante o estudo foram representadas graficamente como alteração percentual, ± EPM, de Dl.
Foi construído um gráfico de dispersão para mostrar os valores de TTE, por grupo. O gráfico de TTE inclui as mortes NTR, as quais são excluídas de todas as outras análises gráficas. Quando um animal saiu do estudo devido ao tamanho do tumor, o volume tumoral final registado para o animal foi incluido nos dados utilizados para calcular o volume mediano em pontos no tempo subsequentes. A percentagem de animais em cada grupo que permaneceram no estudo em função do tempo foi apresentada num gráfico de sobrevivência de Kaplan-Meier.
Extração de Histonas
Para o isolamento de histonas, 60-90 mg de tecido tumoral foi homogeneizado em 1,5 mL de tampão de extração nuclear (Tris-HCl 10 mM, MgC12 10 mM, KC1 25 mM, 1% de Triton X-100, 8,6% de Sacarose, mais um comprimido inibidor de proteases 1836145 da Roche) e incubado sobre gelo durante 5 minutos. Os núcleos foram recolhidos por centrifugação a 600 g durante 5 minutos a 4 °C e lavados uma vez em PBS. O sobrenadante foi removido e as histonas extraídas durante uma hora, sob agitação em vórtice a cada 15 minutos, com ácido sulfúrico 0,4 N frio. Os extratos foram tornados transparentes por centrifugação a 10000 g durante 10 minutos a 4 °C, e transferidos para um tubo de microcentrifugadora fresco contendo lOx volume de acetona gelada. As histonas foram precipitadas a -20 °C durante 2 horas-de um dia para o outro, sedimentadas por centrifugação a 10000 g durante 10 minutos e ressuspensas em água.
Análise de transferência de Western
As concentrações de proteina para as histonas extraídas com ácido foram determinadas pelo ensaio BCA (Pierce). 400- 800 ng de cada lisado foi fracionado em gel de Tris-Glicina a 10-20% (Biorad), transferido utilizando iBlot (7 minutos no programa 3, utilizando pilhas de transferência em Nitrocelulose), e pesquisado com os seguintes anticorpos em tampão de bloqueio Odyssey: coelho anti-H3K27me3 (CST 9733; diluição a 1:20000) e rato anti-H3 Total (CST 3638; diluição a 1:20000) . Após incubação com o Ab primário, as membranas foram pesquisadas com Ab secundário de burro anti-IgG de rato IRDye 800CW (LiCOR #926-32212) e de cabra anti-IgG de coelho Alexa Fluor 680 (Invitrogen #A-21076) e visualizado utilizando o sistema LiCOR Odyssey.
ELISA
As histonas foram preparadas em concentrações equivalentes em tampão de revestimento (PBS+0,05% de BSA) produzindo 0,5 ng/uL de amostra e foram adicionados 100 uL de amostra ou padrão em duplicado a 2 placas ELISA de 96 poços (Thermo Labsystems, Immulon 4HBX #3885). As placas foram seladas e incubadas de um dia para o outro a 4 °C. No dia seguinte, as placas foram lavadas 3x com 300 ul/poço de PBST (PBS+0,05% de Tween 20; 10X PBST, KPL #51-14-02) num dispositivo de lavagem de placas Bio Tek. As placas foram bloqueadas com 300 uL/poço de diluente (PBS+2% de BSA+0,05% de Tween 20), incubadas à TA durante 2 horas e lavadas 3x com PBST. Todos os anticorpos foram diluídos em diluente. Foram adicionados 100 uL/poço de anti-H3K27me3 (CST #9733, solução-mãe a 1:1 000 em glicerol a 50%) ou anti-H3 total (Abcam abl791, a 1:10 000 em glicerol a 50%) a cada placa. As placas foram incubadas durante 90 min à TA e lavadas 3x com PBST. Foram adicionados 100 uL/poço de anti-Rb-IgG-HRP (Cell Signaling Technology, 7074) a 1:2 000 à placa de H3K27Me3 e a 1:6 000 à placa H3 e incubadas durante 90 min à TA. As placas foram lavadas 4X com PBST. Para deteção, foram adicionados 100 uL/poço de substrato TMB (BioFx Alboratories, #TMBS) e as placas incubadas no escuro à TA durante 5 min. A reação foi parada com 100 uL/poço de H2SO4 IN. A absorvância a 450 nm foi lida no leitor de microplacas SpectaMax M5.
Os resultados in vivo para o Composto 222 foram mostrados nas Figuras 4 e 5. A Figura 4 mostra o crescimento de tumores de ratos portadores de xenoenxerto de WSU-DLCL2 tratados com Composto 222 ao longo de 27 dias. Foi observada inibição do crescimento de tumores a todas as 3 doses 100 mg/kg (b.i.d., 27 dias), 200 mg/kg (b.i.d., 27 dias) e 400 mg/kg (400 mg/kg b.i.d. 7 dias, 0 mg/kg durante 7 dias e 300 mg/kg b.i.d., 13 dias dias). A Figura 5 mostra a metilação global de H3K27me3 em tumores WSU-DLCL2 de ratos tratados com o composto 222 ou veículo durante 27 dias. Esta figura mostra uma redução no indicador H3K27Me3 para cada um dos grupos de dose. A invenção pode ser materializada noutras formas específicas sem se afastar das características essenciais da mesma. Por conseguinte, as formas de realização precedentes são para ser consideradas, em todos os aspetos, ilustrativas, em vez de limitativas, da invenção aqui descrita. O âmbito da invenção é assim indicado pelas reivindicações apensas, e não pela descrição precedente.
LISTA DE SEQUÊNCIAS <110> EPIZYME, INC.
<120> COMPOSTOS DE BENZENO SUBSTITUÍDO
<130> 41478-508001WO <150> 61/474,825 <151> 2011-04-13 <150> 61/505,676 <151> 2011-07-08 < 16 Ο > 2 <17Ο> Patentln versão 3.5
<210> 1 <211> 26 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Polipéptido sintetizado quimicamente <22 0> <221> CARACTERÍSTICA_MISTA <222> (26) . . (26) <223> em que estão conjugadas uma biotina e uma amida <4 0 0> 1
Ala Thr Lys Ala Ala Arg Lys Ser Ala Pro Ala Thr Gly Gly Vai Lys 15 10 15
Lys Pro His Arg Tyr Arg Pro Gly Gly Lys 20 25
<210> 2 <211> 26 <212> PRT <213> Sequência Artificial <22 0> <223> Polipéptido sintetizado quimicamente <22 0> <221> CARACTERÍSTICA_MISTA <222> (7)..(7) <223> em que a lisina está dimetilada <22 0> <221> CARACTERÍSTICA_MISTA <222> (26) . . (26) <223> em que estão conjugadas uma biotina e uma amida <400> 2
Ala Thr Lys Ala Ala Arg Lys Ser Ala Pro Ala Thr Gly Gly Vai Lys 15 10 15
Lys Pro His Arg Tyr Arg Pro Gly Gly Lys 20 25

Claims (15)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Composto de Fórmula (Ie) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:
    em que Z é NR7Rg ou S(0)aR7, em que a é 0; Ri é H ou alquilo Ci-Cô opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados de hidroxilo, alcoxilo Ci-Cê, amino, mono-alquil Ci-Cg-amino, di- alquil Ci-C6-amino, e arilo C6-C10; cada um de R2 e R4 é, independentemente, -Q1-T1 , em que Qi é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C7-C3 opcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados de halo e hidroxilo, e T7 é H, halo ou azido; R3 é H ou halo; R5 é H ou alquilo Ci-C6; R6 é H, halo, ciano, azido, ORa, -NRaRb, -C(0)NRaRb, -S(0)bRa, em que b é 0, 1 ou 2 ou Rs2; em que Rs2 é alquilo C1-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, ou heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, e em que cada um de Ra e Rb é, independentemente, H, alquilo C1-C6, ou heterocicloalquilo de 4 a 12 membros; ou Ra e Rb, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional; e cada um de Ra, RS2 e o anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros formado por Ra e Rb, está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2; em que Q2 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3, e T2 é H, halo, -0RC, -NRcRd, -C(0)0Rc, alquilo Ci-C6 ou RS4, em que cada um de Rc e Rd é, independentemente, H ou alquilo C1-C6, Rs4 é cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros e Rs4 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q3-T3, em que Q3 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3 cada opcionalmente substituída com halo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo C1-C6, e T3 é selecionado do grupo que consiste em halo, ciano, alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, 0Re, COORe, -S(0)2Re, _NReRf, e -C(0)NReRf, em que cada um de Re e Rf é independentemente H ou alquilo C1-C6 ou Re e Rd, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional e opcionalmente substituído com alquilo Ci-Cg; R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C4 e T4 é H, alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, C (0) -alquilo C1-6, C (0)-cicloalquilo C3_6, ou heterocicloalquilo de 4 a 14 membros, cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5, em que Q5 é uma ligação, C (0) , C(0)NRk, NRkC (0) , S (0) 2, ou unidade de ligação alquilo C1-C3, em que Rk é H ou alquilo Ci-C6, e T5 é H, halo, alquilo C1-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono- alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, ou S(0)qRq em que q é 0, 1 ou 2 e Rq é alquilo Ci-Cô, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e T5 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, alquilo Ci-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo C1-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros exceto quando T5 é H, halo, hidroxilo, ou ciano; ou -Q5-T5 é oxo; R8 é H, alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com halo, hidroxilo ou alcoxilo C1-C6, alcenilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros; ou R7 e R8, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 a 2 heteroátomos adicionais, e o anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros formado por R7 e R8 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q6-T6, em que CR é uma ligação, C(0), C(0)NRm, NRmC (0) , S(0)2, ou unidade de ligação alquilo Ci~C3, em que Rm é H ou alquilo Ci-C6, e T6 é H, halo, alquilo C1-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo Ci-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, ou S(0)pRp em que p é 0, 1 ou 2 e Rp é alquilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, alcinilo C2-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou heteroarilo de 5 ou 6 membros, e T6 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, alquilo Ci-C6, hidroxilo, ciano, alcoxilo Ci-C6, amino, mono-alquil Ci-C6-amino, di-alquil Ci-C6-amino, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-C10, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros e heteroarilo de 5 ou 6 membros exceto quando T6 é H, halo, hidroxilo, ou ciano; ou -Qg-T6 é oxo; e R12 é halo, alcoxilo Ci-C6, alcenilo C2-C6, ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído com halo.
  2. 2. Composto da reivindicação 1, em que Ri é H ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído uma ou mais vezes com um substituinte selecionado de hidroxilo, alcoxilo C1-C6 e arilo Cg-Cio; R7 é -Q4-T4, em que Q4 é uma ligação ou uma unidade de ligação alquilo C1-C4, e T4 é alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, arilo C6-Ci0, C (0)-alquilo Ci-C6, C(0)-cicloalquilo C3-C6, di-hidropiranilo, tetra-hidropiranilo, tetra-hidrotiopiranilo, piperidinilo, pirrolidinilo, azetidinilo e oxetanilo, cada opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados de oxo e -Q5-T5; R8 é H ou alquilo Ci-Cg, haloalquilo Ci-Cg, alcenilo C2-C6 ou cicloalquilo C3-C8; e Ri2 é halo, alquilo Ci-Cg, haloalquilo Ci-Cg ou alcoxilo Cg-Cg.
  3. 3. Composto da reivindicação 1 ou 2, em que Z é NR2R8 ou SR7; Rg é H, halo, ciano, 0Ra, -C(0)NRaRb, -S(0)2Ra ou Rs2; em que Rs2 é alquilo Ci-Cg, alcenilo C2-Cg, alcinilo C2-Cg, ou heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, e em que cada um de Ra e Rb é, independentemente, H ou alquilo Ci-C6; ou Ra e Rb, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional; e cada um de Rs2 e o anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros formado por Ra e Rb, está opcionalmente substituído com um ou mais -Q2-T2,· em que Q2 é uma ligação ou unidade de ligação alquilo C1-C3, e T2 é H, halo, -0RC, -NRcRd, -C (0) Oalquilo C1-C6, ou alquilo Cq-C6, em que cada um de Rc e Rd é, independentemente, H ou alquilo C1-C6 ou Rc e Rd, em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um anel heterocicloalquilo de 4 a 12 membros possuindo 0 ou 1 heteroátomo adicional e 0 ou 1 substituintes alquilo Ci-C6; R7 é alquilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8, di-hidropiranilo, tetra-hidropiranilo, tetra- hidrotiopiranilo, piperidinilo, pirrolidinilo, azetidinilo e oxetanilo, cada opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente selecionados de oxo e -Q5-T5; e R12 é halo ou alquilo C1-C6.
  4. 4. Composto de qualquer uma das reivindicações 1-3, em que R2, R4 e R12 são, cada, independentemente alquilo Ci-Cg e R5 é H.
  5. 5. Composto da reivindicação 1, em que R7 é ciclo-hexilo, di-hidropiranilo, tetra-hidropiranilo, tetra- hidrotiopiranilo, piperidinilo, pirrolidinilo, azetidinilo oxetanilo, 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ilo, 1-oxaespiro[4.5]decan-8-ilo, 3 Ή-espiro[ciclo-hexano-1,1'-isobenzofuran]-4-ilo, 7'H-espiro[ciclo-hexano-l,5'-furo[3,4-b]piridin]-4-ilo, 3'H- espiro[ciclo-hexano-1,1'-furo[3,4-c]piridin]-4-ilo ou 1-azaespiro[4.5]decan-8-ilo, cada substituído com um ou mais -Q5-T5.
  6. 6. Composto de qualquer uma das reivindicações 1-5, em que Z é selecionado do grupo que consiste em piperidinilo, morfolinilo, piperazinilo, azetidinilo, pirrolidinilo, 2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-ilo e l,4-dioxa-8-azaespiro[4.5]decan-8-ilo, cada opcionalmente substituído com um -Q6-T6.
  7. 7. Composto de qualquer uma das reivindicações 1-5, em que R-6 é halo e Z é SR7, em que R7 é alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 7 membros e R7 está opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5.
  8. 8. Composto de qualquer uma das reivindicações 1-5, em que R6 é -S(0)bRa ou azido, em que b é 0, 1 ou 2 e Ra é alquilo Ci-C6 ou cicloalquilo C3-C8; e Z é NR7R8, em que R7 é cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 14 membros, cada opcionalmente substituído com um ou mais -Q5-T5; e R8 é H ou alquilo Ci-C6.
  9. 9. Composto de qualquer uma das reivindicações 1-5, em que o composto é de Fórmula (II):
    em que n é 0, 1 ou 2; U é O, S, N-Q5-T5 ou CH-Q5-T5; e R12 é Cl, Br, ou metilo, e preferencialmente U é CH-Q5-T5 e n é 0.
  10. 10. Composto de qualquer uma das reivindicações 1-5 ou 9, em que o composto é de Fórmula (IIA):
    em que n é 0, 1 ou 2; U é O, S, N-Q5-T5 ou CH-Q5-T5; e R12 é Cl, Br ou metilo, e preferencialmente U é CH-Q5-T5 e n é 0.
  11. 11. Composto da reivindicação 10, em que (i) Q5 é uma ligação e T5 é H, alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, heteroarilo de 5 ou 6 membros, amino, mono-alquil Ci-C6-amino ou di-alquil Ci-Cg-amino, em que T5 está opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxilo, alcoxilo Ci~ C 6 ou cicloalquilo C3-C8; (ii) Qs é CO, S(0)2 ou NHC (O) ; e T5 é alquilo Ci-C6, alcoxilo Ci-C6, cicloalquilo C3-C8 ou heterocicloalquilo de 4 a 12 membros, (iii) Q5 é unidade de ligação alquilo C1-C3 e T5 é H ou arilo C6-C10, (iv) Qs é unidade de ligação alquilo C1-C3 e T5 é cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo de 4 a 12 membros ou S(0)qRq, (v) Q5 é NHC (0) e T5 é alquilo C1-C6 ou alcoxilo C1-C6, ou (vi) um ou mais -Q5-T5 são oxo.
  12. 12. Composto de qualquer uma das reivindicações 1-11, em que um ou mais -Q6_T6 são oxo, ou quando Q6 é uma ligação ou C(0), T6 é alquilo Ci-C6 ou alcoxilo Ci-C6.
  13. 13. Composto da reivindicação 1 selecionado de
    e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
  14. 14. Composição farmacêutica que compreende um composto de qualquer uma das reivindicações 1-13, N-(5-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-2-metilfenil)furan-2-carboxamida, N,N'-(5-(((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)carbamoil)-1,3-fenileno)diacetamida, N- ( (4,6-dimetil-2-oxo-1,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3-pivalamidobenzamida, 3-(3,4-di-hidro-2H- benzo[b][1,4]dioxepina-7-sulfonamido)-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)benzamida, N- ((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)- 3,5-dimetoxibenzamida, N- ( (4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-3,4,5-trimetoxibenzamida, 3-alil-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4,5-dimetoxibenzamida, 4-(2-amino-2- oxoetoxi)-3-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-metoxibenzamida, 3-cloro-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-4-hidroxi-5-metoxibenzamida ou 3-bromo-N-((4,6-dimetil-2-oxo-l,2-di-hidropiridin-3-il)metil)-5-metoxi-4-propoxibenzamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um veiculo farmaceuticamente aceitável.
  15. 15. Composto de qualquer uma das reivindicações 1-13 para utilização num método de tratamento ou prevenção de cancro.
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