RU2785567C2 - Арил- или гетероарилзамещенные бензольные соединения - Google Patents

Арил- или гетероарилзамещенные бензольные соединения Download PDF

Info

Publication number
RU2785567C2
RU2785567C2 RU2017132054A RU2017132054A RU2785567C2 RU 2785567 C2 RU2785567 C2 RU 2785567C2 RU 2017132054 A RU2017132054 A RU 2017132054A RU 2017132054 A RU2017132054 A RU 2017132054A RU 2785567 C2 RU2785567 C2 RU 2785567C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
alkyl
optionally substituted
halogen
cancer
membered heterocycloalkyl
Prior art date
Application number
RU2017132054A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2017132054A (ru
RU2017132054A3 (ru
Inventor
Кевин Уэйн КУНТЦ
Ричард ЧЕСУОРТ
Кеннет Уилльям ДУНКАН
Хайке КАЙЛЬХАК
Натали ВАРХОЛИК
Кристин КЛАУС
Масаси СЕКИ
Сюдзи СИРОТОРИ
Сатоси КАВАНО
Тимоти Джеймс Нельсон ВИГЛ
Original Assignee
Эпизайм, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Эпизайм, Инк. filed Critical Эпизайм, Инк.
Publication of RU2017132054A publication Critical patent/RU2017132054A/ru
Publication of RU2017132054A3 publication Critical patent/RU2017132054A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2785567C2 publication Critical patent/RU2785567C2/ru

Links

Images

Abstract

Настоящее изобретение относится к фармацевтической химии и представляет собой способ ингибирования активности гистонметилтрансферазы EZH2 у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В формуле (I) X1 представляет собой N или CR11; X2 представляет собой N или CR13; Z представляет собой NR7R8 или CR7R8R14; каждый из R1, R5, R9 и R10 независимо представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена и гидроксила; каждый из R2, R3 и R4 независимо представляет собой -Q1-T1; R6 представляет собой фенил или 5- или 6-членный гетероарил, содержащий 1-4 гетероатома, выбранных из N, O и S, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2; R7 представляет собой -Q4-T4; каждый из R8, R11, R12 и R13 независимо представляет собой H, галоген, гидроксил или RS6, где RS6 представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 гетероатом, выбранный из N, O и S, и RS6 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино и ди-C1-C6алкиламино; или R7 и R8 образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 6-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 дополнительных гетероатомов, или R7 и R8 образуют вместе с атомом C, к которому они присоединены, C3-C8циклоалкил; R14 отсутствует или представляет собой H или C1-C6алкил; где -Q1-T1, -Q2-T2, -Q4-T4 являются такими, как указано в формуле изобретения. Технический результат – ингибирование активности гистонметилтрансферазы EZH2 у субъекта путем введения субъекту эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. 58 з.п. ф-лы, 12 ил, 7 табл., 200 пр.

Description

Родственные заявки
По данной заявке испрашивается приоритет на основании и интересах предварительных заявок на выдачу патента США №№ 61/474,821, поданной 13 апреля 2011 года, и 61/499,595, поданной 21 июня 2011 года, полное содержание которых включено во всей их полноте в настоящий документ посредством ссылки.
Включение посредством ссылки последовательности секвенирования
Информация, содержащаяся в созданном 28 марта 2012 года текстовом файле размером 2 KB, озаглавленном «41478-507001WO_ST25.txt», включена во всей своей полноте в настоящий документ посредством ссылки.
Предпосылки создания изобретения
В эукариотических клетках ДНК находится в упакованном виде с гистонами для образования хроматина. Изменения в упорядоченной структуре хроматина могут приводить к изменениям в транскрипции ассоциированных генов. Контроль изменений структуры хроматина (и, следовательно, транскрипции) опосредован ковалентными модификациями гистонов, особенно их N-концевых участков. Данные модификации часто называют эпигенетическими, поскольку они могут приводить к наследуемым изменениям в экспрессии гена, но не влияют на саму последовательность ДНК. Ковалентные модификации (например, метилирование, ацетилирование, фосфорилирование и убиквитинирование) боковых цепей аминокислот являются ферментативно опосредованными. Селективное добавление метильных групп к определенным аминокислотным участкам в гистонах регулируется функционированием уникального семейства ферментов, известных как метилтрансферазы гистонов (HMT).
Скоординированная сборка биохимических систем вслед за транскрипционной регуляцией должна строго регулироваться с тем, чтобы рост и дифференцировка клеток происходили оптимально. Если при аберрантной экспрессии и/или активности ферментов, ответственных за модификацию ДНК и гистона, указанные системы регуляции нарушаются, то возникают патологические состояния. Существует растущая совокупность доказательств предположения, что, например, при видах рака человека, нарушенная активность эпигенетических ферментов способствует неконтролируемой пролиферации клеток, ассоциированной с раком, а также возникновению других связанных с раком клинических проявлений, таких как увеличенная миграция и инвазия клеток. Помимо рака, существует растущее число доказательств роли эпигенетических ферментов в целом ряде других заболеваний человека, включающих в себя метаболические заболевания (такие как сахарный диабет), воспалительные заболевания (такие как болезнь Крона), нейродегенеративные заболевания (такие как болезнь Альцгеймера) и сердечно-сосудистые заболевания. Поэтому, селективное модулирование аберрантного действия эпигенетических ферментов может быть перспективным в отношении лечения ряда заболеваний.
Белки группы поликомб (PcG) и группы триторакс (trxG), как известно, являются частью системы клеточной памяти (см., например, Francis et al. (2001) Nat Rev Mol Cell Biol 2:409-21 и Simon et al. (2002) Curr Opin Genet Dev 12:210-8). В целом, белки PcG являются репрессорами транскрипции, которые поддерживают «нерабочее состояние», и белки trxG являются активаторами транскрипции, которые поддерживают «рабочее состояние». Поскольку представители белков PcG и trxG характеризуются присущей им активностью гистонметилтрансферазы (HMTазы), белки PcG и trxG могут участвовать в клеточной памяти посредством метилирования коровых гистонов (см., например, Beisel et al. (2002) Nature 419:857-62; Cao et al. (2002) Science 298:1039-43; Czermin et al. (2002) Cell 111:185-96; Kuzmichev et al. (2002) Genes Dev 16:2893-905; Milne et al. (2002) Mol Cell 10:1107-17; Muller et al. (2002) Cell 111:197-208; и Nakamura et al. (2002) Mol Cell 10:1119-28).
Биохимические и генетические исследования представили доказательства, что белки PcG дрозофилы действуют, по меньшей мере, в двух различных белковых комплексах, репрессорном комплексе поликомб 1 (PRC1) и комплексе ESC-E(Z) (также известном как репрессорный комплекс поликомб 2 (PRC2)) (Otte et al. (2003) Curr Opin Genet Dev 13:448-54). Исследования на дрозофилах продемонстрировали, что комплексы ESC-E(Z)/EED-EZH2 (то есть, PRC2) обладают присущей им активностью гистонметилтрансферазы. Хотя составы комплексов, выделенных из различных групп, слегка различаются, они, как правило, содержат EED, EZH2, SUZ12 и RbAp48 или их гомологи у дрозофилы. Однако, реконструированный комплекс, содержащий только EED, EZH2 и SUZ12, сохраняет активность гистонметилтрансферазы в отношении лизина 27 гистона H3 (патент США 7,563,589).
Из различных белков, составляющих комплексы PRC2, EZH2 (гомолог белка-энхансера Zeste 2) представляет собой каталитическую субъединицу. В свою очередь, каталитический участок EZH2 находится в домене SET, мотиве высококонсервативной последовательности (носящем имя Su(var)3-9, энхансер Zeste, триторакс), который обнаружен у нескольких ассоциированных с хроматином белков, включая представителей как группы триторакс, так и группы поликомб. Домен SET является характеристичным для всех известных лизиновых метилтрансфераз гистонов, за исключением метилтрансферазы DOT1 для H3-K79.
В дополнение к выключению гена Hox, опосредованное PRC2 метилирование гистона H3-K27, как было показано, участвует в X-инактивации (Plath et al. (2003) Science 300:131-5; Silva et al. (2003) Dev Cell 4:481-95). Рекрутирование комплекса PRC2 для Xi и последующего триметилирования гистона H3-K27 имеет место во время стадии инициации X-инактивации и зависит от Xist РНК. Кроме того, было обнаружено, что EZH2 и его связанная с гистоном активность в качестве H3-K27 метилтрансферазы отличительно характеризуют полипотентные клетки эпибласта и дифференцированную трофэктодерму, и в соответствии с ролью EZH2 по поддержанию паттернов эпигенетической модификации полипотентных клеток эпибласта, опосредованная Cre делеция EZH2 приводит к отсутствию метилирования гистона H3-K27 в клетках (Erhardt et al. (2003) Development 130:4235-48). Кроме того, исследования клеточных линий и тканей рака предстательной железы и молочной железы выявили корреляцию между уровнями EZH2 и SUZ12 и инвазивностью данных видов рака, указывающую на то, что дисфункция комплекса PRC2 может способствовать развитию рака (Bracken et al. (2003) EMBO J 22:5323-35; Kirmizis et al. (2003) Mol Cancer Ther 2:113-21; Kleer et al. (2003) Proc Natl Acad Sci USA 100:11606-11; Varambally et al. (2002) Nature 419:624-9).
Как недавно сообщалось, что соматические мутации тирозина 641 (Y641C, Y641F, Y641N, Y641S и Y641H, иногда также называемых Y646C, Y646F, Y646N, Y646S и Y646H, соответственно) в EZH2 ассоциированы с фолликулярной лимфомой (FL) и подтипом подобной В-клеточной, возникшей из зародышевого центра (GCB), диффузной B-крупноклеточной лимфомы (DLBCL) (Morin et al. (2010) Nat Genet 42:181-5). Во всех случаях, было обнаружено, что наличие мутантного гена EZH2 являлось гетерозиготным, и экспрессию аллелей как дикого типа, так и мутантных, детектировали в мутантных образцах, профили которых получали при транскриптомном секвенировании. Также было показано, что все мутантные формы EZH2 могли встраиваться в мультибелковый комплекс PRC2, и что получившиеся комплексы теряли способность катализировать метилирование эквивалентного H3-K27 остатка в пептидном субстрате. Таким образом, пришли к заключению, что ассоциированные с заболеванием изменения Tyr641 в EZH2 приводят к потере функции применительно к катализируемому EZH2 метилированию H3-K27.
Краткое описание сущности изобретения
Согласно одному аспекту, настоящее изобретение относится к арил- или гетероарилзамещенному бензольному соединению представленной ниже формулы (I), или к его фармацевтически приемлемой соли или сложному эфиру.
Figure 00000001
В указанной формуле
X1 представляет собой N или CR11;
X2 представляет собой N или CR13;
Z представляет собой NR7R8, OR7, S(O)nR7 или CR7R8R14, где n равно 0, 1 или 2;
каждый из R1, R5, R9 и R10 независимо представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
каждый из R2, R3 и R4 независимо представляет собой -Q1-T1, где Q1 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или C1-C6алкокси, и T1 представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано или RS1, где RS1 представляет собой C1-C3алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C1-C6алкоксил, C(O)O-C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и RS1 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, оксо, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
R6 представляет собой C6-C10арил или 5- или 6-членный гетероарил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или C1-C6алкокси, и T2 представляет собой H, галоген, циано, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra, -S(O)2NRaRb или RS2, где каждый из Ra, Rb и Rc независимо представляет собой H или RS3, A- представляет собой фармацевтически приемлемый анион, каждый из RS2 и RS3 независимо представляет собой C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, или Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, и каждый из RS2, RS3 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, образованного Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, где Q3 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или C1-C6алкокси, и T3 выбирают из группы, состоящей из галогена, циано, C1-C6алкила, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила, 5- или 6-членного гетероарила, ORd, COORd, -S(O)2Rd, -NRdRe и -C(O)NRdRe, причем каждый из Rd и Re независимо представляет собой H или C1-C6алкил, или -Q3-T3 представляет собой оксо; или любые два смежных -Q2-T2 образуют вместе с атомами, к которым они присоединены, 5- или 6-членное кольцо, необязательно содержащее 1-4 гетероатома, выбранных из N, O и S, и необязательно замещенное одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь, C1-C4алкильный линкер или C2-C4алкенильный линкер, причем каждый линкер необязательно замещен галогеном, циано, гидроксилом или C1-C6алкокси, и T4 представляет собой H, галоген, циано, NRfRg, -ORf, -C(O)Rf, -C(O)ORf, -C(O)NRfRg, -C(O)NRfORg, -NRfC(O)Rg, -S(O)2Rf или RS4, где каждый из Rf и Rg независимо представляет собой H или RS5, каждый из RS4 и RS5 независимо представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и каждый из RS4 и RS5 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5, где Q5 представляет собой связь, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2 или C1-C3алкильный линкер, Rk представляет собой H или C1-C6алкил, и T5 представляет собой H, галоген, C1-C6алкил, гидроксил, циано, C1-C6алкоксил, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)qRq, где q равно 0, 1 или 2, и Rq представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и T5 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, C1-C6алкила, гидроксила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда T5 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q5-T5 представляет собой оксо;
каждый из R8, R11, R12 и R13 независимо представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано, RS6, ORS6 или COORS6, где RS6 представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил, 4-12-членный гетероциклоалкил, амино, моно-C1-C6алкиламино или ди-C1-C6алкиламино, и RS6 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино и ди-C1-C6алкиламино; или R7 и R8 образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-11-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0-2 дополнительных гетероатома, или R7 и R8 образуют вместе с атомом C, к которому они присоединены, C3-C8циклоалкил или 4-11-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее от 1 до 3 гетероатомов, и каждый из 4-11-членных гетероциклоалкильных колец или C3-C8циклоалкила, образованного R7 и R8, необязательно замещен одним или несколькими -Q6-T6, где Q6 представляет собой связь, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2 или C1-C3алкильный линкер, Rm представляет собой H или C1-C6алкил, и T6 представляет собой H, галоген, C1-C6алкил, гидроксил, циано, C1-C6алкоксил, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)pRp, где p равно 0, 1 или 2, и Rp представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и T6 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, C1-C6алкила, гидроксила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда T6 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q6-T6 представляет собой оксо; и
R14 отсутствует или представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила.
Одна подгруппа соединений формулы (I) включает в себя соединения формулы (Ia):
Figure 00000002
Другая подгруппа соединений формулы (I) включает в себя соединения формул (Ib), (Ic) или (Id):
Figure 00000003
Другая подгруппа соединений формулы (I) включает в себя соединения формул (Ie), (Ig), (II) или (IIa):
Figure 00000004
Figure 00000005
Соединения формулы (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (Ig), (II) или (IIa) могут характеризоваться одним или несколькими из следующих признаков:
X1 представляет собой CR11, и X2 представляет собой CR13.
X1 представляет собой CR11, и X2 представляет собой N.
X1 представляет собой N, и X2 представляет собой CR13.
X1 представляет собой N, и X2 представляет собой N.
Z представляет собой NR7R8.
Z представляет собой CR7R8R14.
Z представляет собой OR7.
Z представляет собой S(O)nR7, где n равно 0, 1 или 2.
R6 представляет собой незамещенный C6-C10арил или незамещенный 5- или 6-членный гетероарил.
R6 представляет собой C6-C10арил, замещенный одним или несколькими -Q2-T2, или 5- или 6-членный гетероарил, замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
R6 представляет собой фенил, замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
R6 представляет собой 5- или 6-членный гетероарил, содержащий 1-3 дополнительных гетероатома, выбранные из N, O и S, и необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
R6 представляет собой хинолинил, тетразолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, фурил или тиенил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2.
T2 представляет собой C1-C6алкил, C6-C10арил, галоген, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra или -S(O)2NRaRb.
T2 представляет собой -NRaRb, где каждый из Ra и Rb независимо представляет собой H или C1-C6алкил, или Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, C1-C6алкил и 4-12-членное (например, 4-7-членное) гетероциклоалкильное кольцо, необязательно замещенное одним или несколькими -Q3-T3.
Q2 представляет собой C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном или гидроксилом.
Q2 представляет собой связь или метильный или этильный линкер, и T2 представляет собой H, галоген, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- или -S(O)2NRaRb.
R7 не представляет собой H.
R7 представляет собой C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил или 4-12-членный (например, 4-7-членный) гетероциклоалкил, каждый необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
R7 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
R7 представляет собой пиперидинил, тетрагидропиран, циклопентил или циклогексил, каждый необязательно замещенный одним -Q5-T5.
T5 представляет собой H, галоген, C1-C6алкил, C1-C6алкоксил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил или 4-12-членный (например, 4-7-членный) гетероциклоалкил.
Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил или 4-12-членный (например, 4-7-членный) гетероциклоалкил.
Q5 представляет собой CO, S(O)2 или NHC(O); и T5 представляет собой C1-C6алкил, C1-C6алкоксил, C3-C8циклоалкил или 4-12-членный (например, 4-7-членный) гетероциклоалкил.
Q5 представляет собой C1-C3алкильный линкер, и T5 представляет собой H или C6-C10арил.
Q5 представляет собой C1-C3алкильный линкер, и T5 представляет собой C3-C8циклоалкил, 4-7-членный гетероциклоалкил или S(O)qRq.
R11 представляет собой H.
R7 представляет собой циклопентил или циклогексил, каждый необязательно замещенный одним -Q5-T5.
Q5 представляет собой NHC(O), и T5 представляет собой C1-C6алкил или C1-C6алкокси.
R7 представляет собой изопропил.
Каждый из R2 и R4 независимо представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино или C6-C10арилом.
Каждый из R2 и R4 представляет собой метил.
R1 представляет собой H.
R12 представляет собой H, метил, этил, этенил или галоген.
R12 представляет собой метил.
R12 представляет собой этил.
R12 представляет собой этенил.
R8 представляет собой H, метил или этил.
R8 представляет собой метил.
R8 представляет собой этил.
R8 представляет собой 4-7-гетероциклоалкил, например, тетрагидропиран.
Z представляет собой NR7R8 или CR7R8R14, где R7 и R8 образуют вместе с атомом, к которому они присоединены, кольцо, выбранное из группы, состоящей из пиперидинила, морфолинила, пиперазинила и циклогексенила, причем каждый необязательно замещен одним -Q6-T6.
R13 представляет собой H или метил.
R13 представляет собой H.
R3 представляет собой H.
A- представляет собой Br-.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим один или несколько фармацевтически приемлемых носителей и одно или несколько соединений, выбранных из соединений любой формулы, раскрытых в настоящем документе.
Другим аспектом настоящего изобретения является способ лечения или профилактики рака. Способ включает в себя введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений, выбранных из соединений любой формулы, раскрытых в настоящем документе.
Если иное не указано особо, то любое описание способа лечения включает в себя применения соединений для обеспечения лечения или профилактики, такого как представлено в описании, а также применения соединений для получения лекарственного средства для лечения или профилактики такого состояния. Лечение включает в себя лечения людей или отличных от челевека животных, таких как грызуны и другие модели заболеваний.
Например, способ включает в себя стадию введения пациенту, страдающему раком с аберрантным метилированием H3-K27, эффективного количества одного или нескольких соединений любой из формул, раскрытых в настоящем документе, где соединение(ия) ингибирует(ют) гистонметилтрансферазную активность EZH2, проводя тем самым лечение рака. Примеры аберрантного метилирования H3-K27 могут включать в себя общее увеличение и/или изменение распределения ди- или триметилирования H3-K27 в хроматине злокачественной клетки.
Например, рак выбирают из группы, состоящей из видов рака, которые экспрессируют увеличенное количество EZH2 или других субъединиц PRC2, содержат мутации с потерей функции в деметилазах H3-K27, таких как UTX, или экспрессируют увеличенное количество вспомогательных белков, таких как PHF19/PCL3, способных увеличивать и или смещать активность EZH2 (см. ссылки в Sneeringer et al. Proc Natl Acad Sci USA 107(49):20980-5, 2010).
Например, способ включает в себя стадию введения пациенту, страдающему раком с повышенной экспрессией EZH2, терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений любой из формул, раскрытых в настоящем документе, где соединение(ия) ингибирует(ют) гистонметилтрансферазную активность EZH2, осуществляя тем самым лечение рака.
Например, способ включает в себя cтадию введения пациенту, страдающему раком с мутацией с потерей функции деметилазы H3-K27 UTX, терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений любой формулы, раскрытой в настоящем документе, где соединение(ия) ингибирует гистонметилтрансферазную активность EZH2, проводя тем самым лечение рака.
Например, способ включает в себя стадию введения пациенту, страдающему раком с повышенной экспрессией вспомогательного компонента(ов) PRC2, такого как PHF19/PCL3, терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений любой формулы, раскрытой в настоящем документе, где соединение(ия) ингибирует гистонметилтрансферазную активность EZH2, осуществляя тем самым лечение рака.
Согласно другому аспекту, настоящее изобретение относится к способу модулирования активности EZH2 дикого типа, каталитической субъединицы комплекса PRC2, которая катализирует от моно- до триметилирования лизина 27 в гистоне H3 (H3-K27). Например, настоящее изобретение относится к способу ингибирования активности EZH2 в клетке. Данный способ может быть осуществлен либо in vitro, либо in vivo.
Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение относится к способу ингибирования у пациента преобразования H3-K27 в триметилированный H3-K27. Способ включает в себя введение пациенту терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений любой из формул, раскрытых в настоящем документе, для ингибирования гистонметилтрансферазной активности EZH2, ингибируя тем самым преобразование H3-K27 в триметилированный H3-K27 у пациента.
Например, способ включает в себя стадию введения пациенту, страдающему раком с экспрессией мутанта EZH2 по остатку Y641, терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений любой формулы, раскрытой в настоящем документе, где соединение(ия) ингибирует(ют) гистонметилтрансферазную активность EZH2, осуществляя тем самым лечение рака.
Например, рак выбирают из группы, состоящей из фолликулярной лимфомы и диффузной B-крупноклеточной лимфомы (DLBCL) из подобных В-клеткам клеток зародышевого центра (GCB). Например, рак представляет собой лимфому, лейкоз или меланому. Предпочтительно, лимфома представляет собой неходжкинскую лимфому, фолликулярную лимфому или диффузную крупноклеточную B-клеточную лимфому. В качестве альтернативы, лейкоз представляет собой хронический миелоидный лейкоз (CML), острый миелолейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз или лейкоз смешанного происхождения. Преканцерозным состоянием является миелодиспластический синдром (MDS, ранее известный как предлейкоз). Например, рак представляет собой рак системы крови.
Например, способ включает в себя введение пациенту, страдающему раком, экспрессирующим мутант EZH2 по остатку Y641, терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений любой формулы, раскрытой в настоящем документе, где соединение(ия) селективно ингибирует(ют) гистонметилтрансферазную активность мутанта EZH2 по остатку Y641, осуществляя тем самым лечение рака.
Например, способ дополнительно включает в себя стадии проведения анализа для определения мутанта EZH2 по остатку Y641 в образце, содержащем злокачественные опухолевые клетки пациента, страдающего раком.
Согласно другому аспекту, настоящее изобретение относится к способу модулирования гистонметилтрансферазной активности EZH2 дикого типа и мутанта EZH2, каталитической субъединицы комплекса PRC2, который катализирует от моно- до триметилирования лизина 27 в гистоне H3 (H3-K27). Например, настоящее изобретение относится к способу ингибирования активности определенных мутантных форм EZH2 в клетке. Мутантные формы EZH2 включают в себя замену другим аминокислотным остатком тирозина 641 (Y641, также Tyr641) в EZH2 дикого типа. Способ включает в себя воздействие на клетку эффективным количеством одного или нескольких соединений любой из формул, раскрытых в настоящем документе. Данный способ можно осуществлять либо in vitro, либо in vivo.
Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение относится к способу ингибирования у пациента преобразования H3-K27 в триметилированный H3-K27. Способ включает в себя введение пациенту, экспрессирующему мутанта EZH2 по остатку Y641, терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений любой из формул, раскрытых в настоящем документе, для ингибирования гистонметилтрансферазной активности EZH2, ингибируя тем самым преобразование H3-K27 в триметилированный H3-K27 у пациента. Например, ингибированная гистонметилтрансферазная активность представляет собой гистонметилтрансферазную активность мутанта EZH2 по остатку Y641. Например, соединение согласно настоящему изобретению селективно ингибирует гистонметилтрансферазную активность мутанта EZH2 по остатку Y641. Например, мутант EZH2 по остатку Y641 выбирают из группы, состоящей из Y641C, Y641F, Y641H, Y641N и Y641S.
Способ ингибирования у пациента преобразования H3-K27 в триметилированный H3-K27 может также включать в себя проведение анализа для определения мутанта EZH2 по остатку Y641 в образце пациента до введения пациенту, экспрессирующему мутант EZH2 по остатку Y641, терапевтически эффективного количества одного или нескольких соединений любой из формул, раскрытых в настоящем документе. Например, проведение анализа для определения мутанта EZH2 по остатку Y641 включает в себя полногеномное ресеквенирование или ресеквенирование целевых участков, которое выявляет нуклеиновую кислоту, кодирующую мутантный Y641 в EZH2. Например, проведение анализа для определения мутанта EZH2 по остатку Y641 включает в себя взаимодействие образца с антителом, которое специфически связывается с полипептидом или его фрагментом, характеристичным для мутанта EZH2 по остатку Y641. Например, проведение анализа для определения мутанта EZH2 по остатку Y641 включает в себя взаимодействие образца в очень строгих условиях с зондом нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется с нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептид или его фрагмент, характеристичный для мутанта EZH2 по остатку Y641.
Кроме того, настоящее изобретение также относится к способу идентификации ингибитора мутанта EZH2 по остатку Y641. Способ включает в себя стадии объединения выделенного мутанта EZH2 по остатку Y641 с гистоновым субстратом, донором метильной группы и тестируемым соединением, где гистоновый субстрат включает в себя форму H3-K27, выбранную из группы, состоящей из неметилированного H3-K27, монометилированного H3-K27, диметилированного H3-K27 и любого их сочетания; и проведения анализа для выявления метилирования H3-K27 (например, образования триметилированного H3-K27) в гистоновом субстрате, идентифицируя тем самым тестируемое соединение в качестве ингибитора мутанта EZH2 по остатку Y641, когда метилирование H3-K27 (например, образование триметилированного H3-K27) в присутствии тестируемого соединения меньше, чем метилирование H3-K27 (например, образование триметилированного H3-K27) в отсутствие тестируемого соединения.
Согласно одному варианту осуществления, проведение анализа для выявления метилирования H3-K27 в гистоновом субстрате включает в себя измерение встраивания меченых метильных групп.
Согласно одному варианту осуществления, меченые метильные группы представляют собой меченные изотопом метильные группы.
Согласно одному варианту осуществления, проведение анализа для выявления метилирования H3-K27 в гистоновом субстрате включает в себя взаимодействие гистонового субстрата с антителом, которое специфически связывается с триметилированным H3-K27.
Кроме того, под объем настоящего изобретения подпадает способ идентификации селективного ингибитора мутанта EZH2 по остатку Y641. Способ включает в себя стадии объединения выделенного мутанта EZH2 по остатку Y641 с гистоновым субстратом, донором метильной группы и тестируемым соединением, где гистоновый субстрат включает в себя форму H3-K27, выбранную из группы, состоящей из монометилированного H3-K27, диметилированного H3-K27 и сочетания монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27, с получением тем самым тестируемой смеси; объединения выделенного EZH2 дикого типа с гистоновым субстратом, донором метильной группы и тестируемым соединением, где гистоновый субстрат включает в себя форму H3-K27, выбранную из группы, состоящей из монометилированного H3-K27, диметилированного H3-K27 и сочетания монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27, с получением тем самым контрольной смеси; проведения анализа для определения триметилирования гистонового субстрата в каждой из тестируемой смеси и контрольной смеси; вычисления соотношения (a) триметилирования с использованием мутанта EZH2 по остатку Y641 и тестируемого соединения (M+) к (b) триметилированию с использованием мутанта EZH2 по остатку Y641 без тестируемого соединения (M-); вычисления соотношения (c) триметилирования с использованием EZH2 дикого типа и тестируемого соединения (WT+) к (d) триметилированию с использованием EZH2 дикого типа без тестируемого соединения (WT-); сравнения соотношения (a)/(b) с соотношением (c)/(d); и идентификации тестируемого соединения в качестве селективного ингибитора мутанта EZH2 по остатку Y641, когда соотношение (a)/(b) меньше, чем соотношение (c)/(d).
Настоящее изобретение дополнительно относится к способу определения пациента в качестве кандидата для лечения одним или несколькими соединениями согласно настоящему изобретению. Способ включает в себя стадии проведения анализа для определения мутанта EZH2 по остатку Y641 в образце пациента; и выявления пациента, экспрессирующего мутант EZH2 по остатку Y641, в качестве кандидата для лечения одним или несколькими соединениями согласно настоящему изобретению, где соединение(ия) ингибирует(ют) гистонметилтрансферазную активность EZH2.
Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение относится к способу ингибирования преобразования H3-K27 в триметилированный H3-K27. Способ включает в себя стадию взаимодействия мутанта EZH2 по остатку Y641 с гистоновым субстратом, содержащим H3-K27 и эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению, где соединение ингибирует гистонметилтрансферазную активность EZH2, ингибируя тем самым преобразование H3-K27 в триметилированный H3-K27.
Кроме того, соединения или способы, описанные в настоящем документе, могут быть использованы для исследования (например, изучения эпигенетических ферментов) и для других, не относящихся к терапии целей.
Если иное не указано особо, то все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют те же значения, что обычно понимаемые средним специалистом в области техники, к которой относится настоящее изобретение. В настоящем описании, формы единственного числа также включают в себя множественные числа, если контекст документа четко не диктует иное. Хотя при применении на практике или тестировании настоящего изобретения могут быть использованы способы и вещества, сходные или эквивалентные описанным в настоящем документе, подходящие способы и вещества описаны ниже. Все публикации, заявки на выдачу патента, патенты и другие материалы, процитированные в настоящем документе, включены в него посредством ссылки. Материалы, процитированные в настоящем документе, не признаются в качестве уровня техники, предшествующего заявляемому изобретению. В случае конфликта, настоящее описание, включая определения, будет иметь преимущественную силу. Кроме того, вещества, способы и примеры являются иллюстративными и не призваны быть ограничивающими.
Другие черты и преимущества настоящего изобретения станут очевидны из последующего подробного описания и формулы изобретения.
Краткое описание чертежей
Фигура 1 (A) представляет собой идеализированный график зависимости числа клеток (то есть, количества клеток) от времени, отражающий экспоненциальную пролиферацию в процессе log-фазы роста клеток.
Фигура 1(B) представляет собой идеализированный график зависимости ln(число клеток) от времени для данных, представленных на панели (A).
Фигура 2 представляет собой график, отражающий двухфазные кривые роста клеток в присутствии антипролиферативного соединения, для которого имеет место задержка до того, как реализуется воздействие соединения на клеточный рост. Соединение начинает воздействовать на клеточный рост в момент времени, отмеченный «начало воздействия». Сплошные кружки представляют собой идеализированные данные для контрольного образца с носителем (или растворителем), который не обрабатывался соединением. Другими символами представлены двухфазные кривые роста для клеток, обработанных разными концентрациями соединения (т.е., лекарственного средства).
Фигура 3 представляет собой перестроенный график зависимости kp от концентрации соединения цитостатического (A) и цитотоксического (B) соединения, иллюстрирующий графическое определение LCC для цитотоксического средства. Следует отметить, что для цитостатического соединения (панель A), величина kp никогда не может опуститься ниже нуля.
Фигура 4 представляет собой диаграмму, отражающую полное метилирование H3K27me3 в опухолях WSU-DLCL2 у мышей, получавших соединение 87 в течение 7 суток.
Фигура 5 представляет собой диаграмму, отражающую полное метилирование H3K27me3 в опухолях WSU-DLCL2 у мышей, получавших соединение 141 в течение 7 суток.
Фигура 6 представляет собой диаграмму, отражающую рост опухоли на протяжении 28 дней курса лечения у несущих ксенотрансплантат WSU-DLCL2 мышей, которым вводили носитель или соединение 141.
Фигура 7 представляет собой диаграмму, отражающую рост опухоли у содержащих ксенотрансплантат WSU-DLCL2 мышей, получавших соединение 44.
Фигура 8 представляет собой диаграмму, отражающую полное метилирование H3K27me3 в опухолях WSU-DLCL2 у мышей, получавших соединение 44 в течение 28 и 7 суток.
Фигура 9 представляет собой диаграмму, отражающую рост опухоли у содержащих ксенотрансплантат WSU-DLCL2 мышей, получавших соединение 44 при разных режимах дозирования.
Фигура 10 представляет собой диаграмму, отражающую полное метилирование H3K27me3 в опухолях WSU-DLCL2 у мышей, получавших соединение 44 при разных режимах дозирования в течение 28 суток.
Фигура 11 представляет собой диаграмму, отражающую воздействие соединения 44 на массу тела мыши. Данные представляют собой среднее значение ±SD (n=9). Дозировки, которые приводили к летальным случаям, на графике не представлены.
Фигура 12 представляет собой диаграмму, отражающую противоопухолевые эффекты перорально вводимого соединения 44 в отношении ксенотрансплантата KARPAS-422 диффузной B-крупноклеточной лимфомы у мышей. Данные представляют собой среднее значение ±SD (n=9). *P<0,05 относительно контроля с носителем на 29-е сутки (дисперсионный анализ повторных измерений с последующим тестом множественного сравнения по критерию Даннетта). Дозировки, которые приводили к летальным случаям, на графике не представлены.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к новым арил- или гетероарилзамещенным бензольным соединениям, к синтетическим способам получения указанных соединений, к содержащим их фармацевтическим композициям и к различным применениям указанных соединений.
1. Арил- или гетероарилзамещенные бензольные соединения
Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I):
Figure 00000006
или к их фармацевтически приемлемым солям или сложным эфирам. В приведенной формуле:
X1 представляет собой N или CR11;
X2 представляет собой N или CR13;
Z представляет собой NR7R8, OR7, S(O)nR7 или CR7R8R14, где n равно 0, 1 или 2;
каждый из R1, R5, R9 и R10 независимо представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
каждый из R2, R3 и R4 независимо представляет собой -Q1-T1, где Q1 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или C1-C6алкокси, и T1 представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано или RS1, где RS1 представляет собой C1-C3алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C1-C6алкоксил, C(O)O-C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и RS1 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, оксо, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
R6 представляет собой C6-C10арил или 5- или 6-членный гетероарил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или C1-C6алкокси, и T2 представляет собой H, галоген, циано, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra, -S(O)2NRaRb или RS2, где каждый из Ra, Rb и Rc независимо представляет собой H или RS3, A- представляет собой фармацевтически приемлемый анион, каждый из RS2 и RS3 независимо представляет собой C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, или Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, и каждый из RS2, RS3 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, образованного Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, где Q3 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, каждый необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или C1-C6алкокси, и T3 выбирают из группы, состоящей из галогена, циано, C1-C6алкила, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила, 5- или 6-членного гетероарила, ORd, COORd, -S(O)2Rd, -NRdRe и -C(O)NRdRe, каждый из Rd и Re независимо представляет собой H или C1-C6алкил, или -Q3-T3 представляет собой оксо; или любые два смежных -Q2-T2 образуют вместе с атомами, к которым они присоединены, 5- или 6-членное кольцо, необязательно содержащее 1-4 гетероатома, выбранные из N, O и S, и необязательно замещенное одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь, C1-C4алкильный линкер или C2-C4алкенильный линкер, каждый линкер необязательно замещен галогеном, циано, гидроксилом или C1-C6алкокси, и T4 представляет собой H, галоген, циано, NRfRg, -ORf, -C(O)Rf, -C(O)ORf, -C(O)NRfRg, -C(O)NRfORg, -NRfC(O)Rg, -S(O)2Rf или RS4, где каждый из Rf и Rg независимо представляет собой H или RS5, каждый из RS4 и RS5 независимо представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и каждый из RS4 и RS5 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5, где Q5 представляет собой связь, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2 или C1-C3алкильный линкер, Rk представляет собой H или C1-C6алкил, и T5 представляет собой H, галоген, C1-C6алкил, гидроксил, циано, C1-C6алкоксил, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)qRq, где q равно 0, 1 или 2, и Rq представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и T5 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, C1-C6алкила, гидроксила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда T5 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q5-T5 представляет собой оксо;
каждый из R8, R11, R12 и R13 независимо представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано, RS6, ORS6 или COORS6, где RS6 представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил, 4-12-членный гетероциклоалкил, амино, моно-C1-C6алкиламино или ди-C1-C6алкиламино, и RS6 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино и ди-C1-C6алкиламино; или R7 и R8 образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-11-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0-2 дополнительных гетероатома, или R7 и R8 образуют вместе с атомом C, к которому они присоединены, C3-C8циклоалкил или 4-11-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее от 1 до 3 гетероатомов, и каждый из 4-11-членных гетероциклоалкильных колец или C3-C8циклоалкила, образованного R7 и R8, необязательно замещены одним или несколькими -Q6-T6, где Q6 представляет собой связь, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2 или C1-C3алкильный линкер, Rm представляет собой H или C1-C6алкил, и T6 представляет собой H, галоген, C1-C6алкил, гидроксил, циано, C1-C6алкоксил, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)pRp, где p равно 0, 1 или 2, и Rp представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и T6 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, C1-C6алкила, гидроксила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда T6 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q6-T6 представляет собой оксо; и
R14 отсутствует или представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила.
Например, X1 представляет собой CR11, и X2 представляет собой CR13.
Например, X1 представляет собой CR11, X2 представляет собой N.
Например, X1 представляет собой N, и X2 представляет собой CR13.
Например, X1 представляет собой N, и X2 представляет собой N.
Например, Z представляет собой NR7R8.
Например, Z представляет собой CR7R8R14.
Например, Z представляет собой OR7.
Например, Z представляет собой S(O)nR7, где n равно 0, 1 или 2.
Например, Z представляет собой SR7.
Например, R6 представляет собой незамещенный C6-C10арил или незамещенный 5- или 6-членный гетероарил.
Например, R6 представляет собой C6-C10арил, замещенный одним или несколькими -Q2-T2, или 5- или 6-членный гетероарил, замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
Например, R6 представляет собой незамещенный фенил.
Например, R6 представляет собой фенил, замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
Например, R6 представляет собой 5-6-членный гетероарил, содержащий 1-3 дополнительных гетероатома, выбранных из N, O и S, и необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2.
Например, R6 представляет собой пиридинил, пиразолил, пиримидинил, хинолинил, тетразолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, фурил или тиенил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2.
Например, Q2 представляет собой связь.
Например, Q2 представляет собой незамещенный C1-C3алкильный линкер.
Например, T2 представляет собой C1-C6алкил или C6-C10арил, причем каждый необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3.
Например, T2 представляет собой незамещенный или замещенный неразветвленный C1-C6 или разветвленный C3-C6алкил, включая без ограничения метил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, втор-пентил и н-гексил.
Например, T2 представляет собой фенил.
Например, T2 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и йод).
Например, T2 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиран, морфолинил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил, и т.п.), необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3.
Например, T2 представляет собой -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra или -S(O)2NRaRb.
Например, T2 представляет собой -NRaRb или -C(O)NRaRb, где каждый из Ra и Rb независимо представляет собой H или C1-C6алкил, или Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, причем C1-C6алкил и 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо необязательно замещены одним или несколькими -Q3-T3.
Например, Q2 представляет собой C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном или гидроксилом.
Например, Q2 представляет собой связь или метильный линкер, и T2 представляет собой H, галоген, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- или -S(O)2NRaRb.
Например, каждый из Ra, Rb и Rc независимо представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3.
Например, один из Ra, Rb и Rc представляет собой H.
Например, Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 гетероатом в дополнение к атому N (например, азетидинил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, морфолинил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил, и т.п.), и кольцо необязательно замещено одним или несколькими -Q3-T3.
Например, -Q3-T3 представляет собой оксо.
Например, T2 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил или C3-C8циклоалкил, и один или несколько -Q3-T3 представляют собой оксо.
Например, Q3 представляет собой связь или незамещенный или замещенный C1-C3алкильный линкер.
Например, T3 представляет собой H, галоген, 4-7-членный гетероциклоалкил, C1-C3алкил, ORd, COORd,-S(O)2Rd или -NRdRe.
Например, один из Rd и Re представляет собой H.
Например, R7 не представляет собой H.
Например, R7 представляет собой -C(O)Rf.
Например, R7 представляет собой -C(O)Rf, где Rf представляет собой C3-C8циклоалкил.
Например, R7 представляет собой C6-C10арил, замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой фенил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой C1-C6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой C3-C8циклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиран и морфолинил, и т.п.), необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой 5-6-членный гетероциклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой изопропил.
Например, R7 представляет собой пирролидинил, пиперидинил, тетрагидропиран, циклопентил, циклогексил или циклогептил, каждый необязательно замещенный одним -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой циклопентил или циклогексил, каждый необязательно замещенный одним -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой пирролидинил, пиперидинил, тетрагидропиран, тетрагидро-2H-тиопиранил, циклопентил, циклогексил или циклогептил, каждый необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой циклопентил, циклогексил или тетрагидро-2H-тиопиранил, каждый необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, один или несколько -Q5-T5 представляют собой оксо.
Например, R7 представляет собой тетрагидро-2H-тиопиранил-1-оксид или тетрагидро-2H-тиопиранил-1,1-диоксид.
Например, Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой амино, моно-C1-C6алкиламино или ди-C1-C6алкиламино.
Например, Q5 представляет собой NHC(O), и T5 представляет собой C1-C6алкил или C1-C6алкокси.
Например, -Q5-T5 представляет собой оксо.
Например, T4 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил или C3-C8циклоалкил, и один или несколько -Q5-T5 представляют собой оксо.
Например, T5 представляет собой H, галоген, C1-C6алкил, C1-C6алкоксил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
Например, Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил и 4-7-членный гетероциклоалкил.
Например, Q5 представляет собой CO, S(O)2 или NHC(O); и T5 представляет собой C1-C6алкил, C1-C6алкоксил, C3-C8циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
Например, T5 представляет собой C1-C6алкил или C1-C6алкоксил, каждый необязательно замещенный галогеном, гидроксилом, циано, C1-C6алкоксилом, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино или C3-C8циклоалкилом.
Например, Q5 представляет собой C1-C3алкильный линкер, и T5 представляет собой H или C6-C10арил.
Например, Q5 представляет собой C1-C3алкильный линкер, и T5 представляет собой C3-C8циклоалкил, 4-7-членный гетероциклоалкил или S(O)qRq.
Например, R11 представляет собой H.
Например, каждый из R2 и R4 независимо представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино или C6-C10арилом.
Например, каждый из R2 и R4 независимо представляет собой C1-C3алкил, необязательно замещенный C1-C6алкоксилом.
Например, каждый из R2 и R4 представляет собой метил.
Например, R1 представляет собой H.
Например, R12 представляет собой H, метил, этил, этенил или галоген.
Например, R12 представляет собой метил.
Например, R12 представляет собой этил.
Например, R12 представляет собой этенил.
Например, R8 представляет собой H, метил, этил или этенил.
Например, R8 представляет собой метил.
Например, R8 представляет собой этил.
Например, R8 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиран, морфолинил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил, и т.п.).
Например, R8 представляет собой тетрагидропиран.
Например, R8 представляет собой тетрагидропиран, и R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь или C1-C4алкильный линкер, и T4 представляет собой H, C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
Например, Z представляет собой NR7R8 или CR7R8R14, где R7 и R8 образуют вместе с атомом, к которому они присоединены, 4-11-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее от 1 до 3 гетероатомов (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиран и морфолинил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, и т.п.), или C3-C8циклоалкил, причем каждый необязательно замещен одним или несколькими -Q6-T6.
Например, кольцо, образованное R7 и R8, выбирают из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканила и циклогексенила, причем каждый необязательно замещен одним -Q6-T6.
Например, -Q6-T6 представляет собой оксо.
Например, T6 представляет собой H, галоген, C1-C6алкил, C1-C6алкоксил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
Например, Q6 представляет собой связь, и T6 представляет собой C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
Например, Q6 представляет собой CO, S(O)2 или NHC(O); и T6 представляет собой C1-C6алкил, C1-C6алкоксил, C3-C8циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
Например, T6 представляет собой C1-C6алкил или C1-C6алкоксил, каждый необязательно замещенный галогеном, гидроксилом, циано, C1-C6алкоксилом, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино или C3-C8циклоалкилом.
Например, Q6 представляет собой C1-C3алкильный линкер, и T6 представляет собой H или C6-C10арил.
Например, Q6 представляет собой C1-C3алкильный линкер, и T6 представляет собой C3-C8циклоалкил, 4-7-членный гетероциклоалкил или S(O)pRp.
Например, каждый из Rp и Rq независимо представляет собой C1-C6алкил.
Например, R13 представляет собой H или метил.
Например, R13 представляет собой H.
Например, R3 представляет собой H.
Например, A- представляет собой Br-.
Например, каждый из R5, R9 и R10 представляет собой H.
Настоящее изобретение относится к соединению формулы (Ia)
Figure 00000007
или к его фармацевтические приемлемой соли или сложному эфиру, где:
X1 представляет собой N или CR11;
X2 представляет собой N или CR13;
Z представляет собой NR7R8, OR7, S(O)nR7 или CR7R8R14, где n равно 0, 1 или 2;
каждый из R1 и R5 независимо представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
каждый из R2, R3 и R4 независимо представляет собой -Q1-T1, где Q1 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или C1-C6алкокси, и T1 представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано или RS1, где RS1 представляет собой C1-C3алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C1-C6алкоксил, C(O)O-C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и RS1 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, оксо, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
R6 представляет собой C6-C10арил или 5- или 6-членный гетероарил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или C1-C6алкокси, и T2 представляет собой H, галоген, циано, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra, -S(O)2NRaRb или RS2, где каждый из Ra, Rb и Rc независимо представляет собой H или RS3, A- представляет собой фармацевтически приемлемый анион, каждый из RS2 и RS3 независимо представляет собой C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, или Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-12-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, и каждый из RS2, RS3 и 4-12-членного гетероциклоалкильного кольца, образованного Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, где Q3 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, циано, гидроксилом или C1-C6алкокси, и T3 выбирают из группы, состоящей из галогена, циано, C1-C6алкила, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила, 5- или 6-членного гетероарила, ORd, COORd, -S(O)2Rd, -NRdRe и -C(O)NRdRe, каждый из Rd и Re независимо представляет собой H или C1-C6алкил, или -Q3-T3 представляет собой оксо; или любые два смежных -Q2-T2 образуют вместе с атомами, к которым они присоединены, 5- или 6-членное кольцо, необязательно содержащее 1-4 гетероатома, выбранных из N, O и S, и необязательно замещенное одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила;
R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь, C1-C4алкильный линкер или C2-C4алкенильный линкер, причем каждый линкер необязательно замещен галогеном, циано, гидроксилом или C1-C6алкокси, и T4 представляет собой H, галоген, циано, NRfRg, -ORf, -C(O)Rf, -C(O)ORf, -C(O)NRfRg, -C(O)NRfORg, -NRfC(O)Rg, -S(O)2Rf или RS4, где каждый из Rf и Rg независимо представляет собой H или RS5, каждый из RS4 и RS5 независимо представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и каждый из RS4 и RS5 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5, где Q5 представляет собой связь, C(O), C(O)NRk, NRkC(O), S(O)2 или C1-C3алкильный линкер, Rk представляет собой H или C1-C6алкил, и T5 представляет собой H, галоген, C1-C6алкил, гидроксил, циано, C1-C6алкоксил, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)qRq, где q равно 0, 1 или 2, и Rq представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и T5 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, C1-C6алкила, гидроксила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда T5 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q5-T5 представляет собой оксо;
каждый из R8, R11, R12 и R13 независимо представляет собой H, галоген, гидроксил, COOH, циано, RS6, ORS6 или COORS6, где RS6 представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил, 4-12-членный гетероциклоалкил, амино, моно-C1-C6алкиламино или ди-C1-C6алкиламино, и RS6 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино и ди-C1-C6алкиламино; или R7 и R8 образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-11-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее от 0 до 2 дополнительных гетероатомов, или R7 и R8 образуют вместе с атомом C, к которому они присоединены, C3-C8циклоалкил или 4-11-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее от 1 до 3 гетероатомов, и каждый из 4-11-членных гетероциклоалкильных колец или C3-C8циклоалкила, образованного R7 и R8, необязательно замещен одним или несколькими -Q6-T6, где Q6 представляет собой связь, C(O), C(O)NRm, NRmC(O), S(O)2 или C1-C3алкильный линкер, Rm представляет собой H или C1-C6алкил, и T6 представляет собой H, галоген, C1-C6алкил, гидроксил, циано, C1-C6алкоксил, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-12-членный гетероциклоалкил, 5- или 6-членный гетероарил или S(O)pRp, где p равно 0, 1 или 2, и Rp представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил, 4-7-членный гетероциклоалкил или 5- или 6-членный гетероарил, и T6 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, C1-C6алкила, гидроксила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила, за исключением случая, когда T6 представляет собой H, галоген, гидроксил или циано; или -Q6-T6 представляет собой оксо; и
R14 отсутствует или представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино, C3-C8циклоалкила, C6-C10арила, 4-12-членного гетероциклоалкила и 5- или 6-членного гетероарила.
Например, X2 представляет собой CR13.
Например, X2 представляет собой N.
Например, Z представляет собой NR7R8.
Например, Z представляет собой CR7R8R14.
Например, Z представляет собой OR7.
Например, Z представляет собой S(O)nR7, где n равно 0, 1 или 2.
Например, Z представляет собой SR7.
Например, R6 представляет собой незамещенный C6-C10арил или незамещенный 5- или 6-членный гетероарил.
Например, R6 представляет собой C6-C10арил, замещенный одним или несколькими -Q2-T2, или 5- или 6-членный гетероарил, замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
Например, R6 представляет собой незамещенный фенил.
Например, R6 представляет собой фенил замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
Например, R6 представляет собой 5-6-членный гетероарил, содержащий 1-3 дополнительных гетероатома, выбранных из N, O и S, и необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
Например, R6 представляет собой пиридинил, пиразолил, пиримидинил, хинолинил, тетразолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, фурил или тиенил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2.
Например, Q2 представляет собой связь.
Например, Q2 представляет собой незамещенный C1-C3алкильный линкер.
Например, T2 представляет собой C1-C6алкил или C6-C10арил, причем каждый необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3.
Например, T2 представляет собой незамещенный или замещенный неразветвленный C1-C6 или разветвленный C3-C6алкил, включая без ограничения метил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, втор-пентил и н-гексил.
Например, T2 представляет собой фенил.
Например, T2 представляет собой галоген (например, фтор, хлор, бром и йод).
Например, T2 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиран, морфолинил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил, и т.п.), необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3.
Например, T2 представляет собой -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbC(O)ORa, -S(O)2Ra или -S(O)2NRaRb.
Например, T2 представляет собой -NRaRb или -C(O)NRaRb, где каждый из Ra и Rb независимо представляет собой H или C1-C6алкил, или Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, C1-C6алкил и 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, необязательно замещенное одним или несколькими -Q3-T3.
Например, Q2 представляет собой C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном или гидроксилом.
Например, Q2 представляет собой связь или метильный линкер, и T2 представляет собой H, галоген, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- или -S(O)2NRaRb.
Например, каждый из Ra, Rb и Rc независимо представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3.
Например, один из Ra, Rb и Rc представляет собой H.
Например, Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 гетероатом в дополннение к атому N (например, азетидинил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, морфолинил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил, и т.п.), и кольцо необязательно замещено одним или несколькими -Q3-T3.
Например, -Q3-T3 представляет собой оксо.
Например, T2 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил или C3-C8циклоалкил, и один или несколько -Q3-T3 представляют собой оксо.
Например, Q3 представляет собой связь или незамещенный или замещенный C1-C3алкильный линкер.
Например, T3 представляет собой H, галоген, 4-7-членный гетероциклоалкил, C1-C3алкил, ORd, COORd, -S(O)2Rd или -NRdRe.
Например, один из Rd и Re представляет собой H.
Например, R7 не представляет собой H.
Например, R7 представляет собой -C(O)Rf.
Например, R7 представляет собой -C(O)Rf, где Rf представляет собой C3-C8циклоалкил.
Например, R7 представляет собой C6-C10арил, замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой фенил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой C1-C6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой C3-C8циклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиран и морфолинил, и т.п.), необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой 5-6-членный гетероциклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой изопропил.
Например, R7 представляет собой пирролидинил, пиперидинил, тетрагидропиран, циклопентил, циклогексил или циклогептил, каждый необязательно замещенный одним -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой циклопентил или циклогексил, каждый необязательно замещенный одним -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой пирролидинил, пиперидинил, тетрагидропиран, тетрагидро-2H-тиопиранил, циклопентил, циклогексил или циклогептил, каждый необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой циклопентил, циклогексил или тетрагидро-2H-тиопиранил, каждый необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, один или несколько -Q5-T5 представляют собой оксо.
Например, R7 представляет собой тетрагидро-2H-тиопиранил-1-оксид или тетрагидро-2H-тиопиранил-1,1-диоксид.
Например, Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой амино, моно-C1-C6алкиламино или ди-C1-C6алкиламино.
Например, Q5 представляет собой NHC(O), и T5 представляет собой C1-C6алкил или C1-C6алкокси.
Например, -Q5-T5 представляет собой оксо.
Например, T4 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил или C3-C8циклоалкил, и один или несколько -Q5-T5 представляют собой оксо.
Например, T5 представляет собой H, галоген, C1-C6алкил, C1-C6алкоксил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
Например, Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил и 4-7-членный гетероциклоалкил.
Например, Q5 представляет собой CO, S(O)2 или NHC(O); и T5 представляет собой C1-C6алкил, C1-C6алкоксил, C3-C8циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
Например, T5 представляет собой C1-C6алкил или C1-C6алкоксил, каждый необязательно замещенный галогеном, гидроксилом, циано, C1-C6алкоксилом, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино или C3-C8циклоалкилом.
Например, Q5 представляет собой C1-C3алкильный линкер, и T5 представляет собой H или C6-C10арил.
Например, Q5 представляет собой C1-C3алкильный линкер, и T5 представляет собой C3-C8циклоалкил, 4-7-членный гетероциклоалкил или S(O)qRq.
Например, R11 представляет собой H.
Например, каждый из R2 и R4 независимо представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино или C6-C10арилом.
Например, каждый из R2 и R4 независимо представляет собой C1-C3алкил, необязательно замещенный C1-C6алкоксилом.
Например, каждый из R2 и R4 представляет собой метил.
Например, R1 представляет собой H.
Например, R5 представляет собой H.
Например, R12 представляет собой H, метил, этил, этенил или галоген.
Например, R12 представляет собой метил.
Например, R12 представляет собой этил.
Например, R12 представляет собой этенил.
Например, R8 представляет собой H, метил, этил или этенил.
Например, R8 представляет собой метил.
Например, R8 представляет собой этил.
Например, R8 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиран, морфолинил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил, и т.п.).
Например, R8 представляет собой тетрагидропиран.
Например, R8 представляет собой тетрагидропиран, и R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь или C1-C4алкильный линкер, и T4 представляет собой H, C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
Например, Z представляет собой NR7R8 или CR7R8R14, где R7 и R8 образуют вместе с атомом, к которому они присоединены, 4-11-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее от 1 до 3 гетероатомов (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиран и морфолинил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, и т.п.), или C3-C8циклоалкил, каждый необязательно замещенный одним или несколькими -Q6-T6.
Например, кольцо, образованное R7 и R8, выбирают из группы, состоящей из азетидинила, пирролидинила, пиперидинила, морфолинила, пиперазинила, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканила и циклогексенила, каждый необязательно замещенный одним -Q6-T6.
Например, -Q6-T6 представляет собой оксо.
Например, T6 представляет собой H, галоген, C1-C6алкил, C1-C6алкоксил, C3-C8циклоалкил, C6-C10арил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
Например, Q6 представляет собой связь, и T6 представляет собой C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
Например, Q6 представляет собой CO, S(O)2 или NHC(O); и T6 представляет собой C1-C6алкил, C1-C6алкоксил, C3-C8циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
Например, T6 представляет собой C1-C6алкил или C1-C6алкоксил, каждый необязательно замещенный галогеном, гидроксилом, циано, C1-C6алкоксилом, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино или C3-C8циклоалкилом.
Например, Q6 представляет собой C1-C3алкильный линкер, и T6 представляет собой H или C6-C10арил.
Например, Q6 представляет собой C1-C3алкильный линкер, и T6 представляет собой C3-C8циклоалкил, 4-7-членный гетероциклоалкил или S(O)pRp.
Например, каждый из Rp и Rq независимо представляет собой C1-C6алкил.
Например, R13 представляет собой H или метил.
Например, R13 представляет собой H.
Например, R3 представляет собой H.
Например, A- представляет собой Br-.
Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (Ib), (Ic) или (Id):
Figure 00000008
или к их фармацевтически приемлемым солям или сложным эфирам, где значения Z, X2, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R11 и R12 определены в настоящем документе.
Другая подгруппа соединений формулы (I) включает в себя соединения формулы (Ie) или (Ig):
Figure 00000009
или их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры, где значения Z, X2, R2, R3, R4, R6 и R12 определены в настоящем документе.
Например, каждый из R2, R4 и R12 независимо представляет собой C1-6алкил.
Например, R6 представляет собой C6-C10арил или 5- или 6-членный гетероарил, каждый из которых необязательно независимо замещен одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, и T2 представляет собой H, галоген, циано, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A-, -C(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -S(O)2Ra или RS2, где каждый из Ra и Rb независимо представляет собой H или RS3, каждый из RS2 и RS3 независимо представляет собой C1-C6алкил, или Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, и каждый из RS2, RS3 и 4-7-членного гетероциклоалкильного кольца, образованного Ra и Rb, необязательно независимо замещен одним или несколькими -Q3-T3, где Q3 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, и T3 выбирают из группы, состоящей из галогена, C1-C6алкила, 4-7-членного гетероциклоалкила, ORd, -S(O)2Rd и -NRdRe, каждый из Rd и Re независимо представляет собой H или C1-C6алкил, или -Q3-T3 представляет собой оксо; или любые два смежных -Q2-T2 образуют вместе с атомами, к которым они присоединены, 5- или 6-членное кольцо, необязательно содержащее 1-4 гетероатома, выбранные из N, O и S.
Другая группа соединений формулы (I) включает в себя соединения формулы (II):
Figure 00000010
или их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры, где
Q2 представляет собой связь или метильный линкер;
T2 представляет собой H, галоген, -ORa, -NRaRb, -(NRaRbRc)+A- или -S(O)2NRaRb; и
значения R7, R8, Ra, Rb и Rc определены в настоящем документе.
Например, Q2 представляет собой связь.
Например, Q2 представляет собой метильный линкер.
Например, T2 представляет собой -NRaRb или -(NRaRbRc)+A-.
Другая группа соединений формулы (I) включает в себя соединения формулы (IIa):
Figure 00000011
или их фармацевтически приемлемые соли или сложные эфиры, где значения R7, R8, Ra, Rb и Rc определены в настоящем документе.
Соединения формулы (II) или (IIa) могут характеризоваться одним или несколькими из следующих признаков:
Например, каждый из Ra и Rb независимо представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3.
Например, один из Ra и Rb представляет собой H.
Например, Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 гетероатом в дополнение к атому N (например, азетидинил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, морфолинил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, и т.п.), и кольцо необязательно замещено одним или несколькими -Q3-T3.
Например, Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, азетидинил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил или морфолинил, и кольцо необязательно замещено одним или несколькими -Q3-T3.
Например, один или несколько -Q3-T3 представляют собой оксо.
Например, Q3 представляет собой связь или незамещенный или замещенный C1-C3алкильный линкер.
Например, T3 представляет собой H, галоген, 4-7-членный гетероциклоалкил, C1-C3алкил, ORd, COORd,-S(O)2Rd или -NRdRe.
Например, один из Rd и Re представляет собой H.
Например, R7 представляет собой C3-C8циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил, каждый необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой пиперидинил, тетрагидропиран, тетрагидро-2H-тиопиранил, циклопентил, циклогексил, пирролидинил или циклогептил, каждый необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, R7 представляет собой циклопентил, циклогексил или тетрагидро-2H-тиопиранил, каждый необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
Например, Q5 представляет собой NHC(O), и T5 представляет собой C1-C6алкил или C1-C6алкокси.
Например, один или несколько -Q5-T5 представляют собой оксо.
Например, R7 представляет собой тетрагидро-2H-тиопиранил-1-оксид или тетрагидро-2H-тиопиранил-1,1-диоксид.
Например, Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино.
Например, Q5 представляет собой CO, S(O)2 или NHC(O); и T5 представляет собой C1-C6алкил, C1-C6алкоксил, C3-C8циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил.
Например, R8 представляет собой H или C1-C6алкил, который необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, COOH, C(O)O-C1-C6алкила, циано, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино и ди-C1-C6алкиламино.
Например, R8 представляет собой H, метил или этил.
Согласно другому аспекту, настоящее изобретение относится к соединениям формулы (III):
Figure 00000012
или к их фармацевтически приемлемым солям или сложным эфирам,
где
R3 представляет собой водород, C1-C3алкил или галоген;
R4 представляет собой C1-C3алкил,
R7 представляет собой C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил или 4-7-членный гетероциклоалкил, необязательно замещенный одним или несколькими Rs,
R8 представляет собой C1-C6алкил;
Rh представляет собой -Qh-Th, где Qh представляет собой связь, C1-C3алкильный линкер или N(RN); Th представляет собой ORh1 или -NRh1Rh2, где Rh1 и Rh2 независимо представляют собой водород или C1-C6алкил, или один из Rh1 и Rh2 представляет собой метил, а другой представляет собой 6-членный N-содержащий гетероциклоалкил, необязательно замещенный одним или двумя метилами, или Rh1 и Rh2 образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, выбранный из кислорода и азота, причем указанное гетероциклоалкильное кольцо необязательно замещено одним или несколькими Ri;
Ri представляет собой C1-C3алкил, -NRN1RN2 или C3-C8циклоалкил, или 5- или 6-членный гетероцикл, причем каждый циклоалкил или гетероцикл независимо необязательно замещен Rj;
RN представляет собой водород, C1-C6алкил или C3-C8циклоалкил;
Rj представляет собой C1-C3 алкил, -NRN1RN2 или -NC(O)RN;
каждый из RN1 и RN2 независимо представляет собой водород, C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил, 5- или 6-членный гетероцикл, причем каждый циклоалкил или гетероцикл независимо необязательно замещен Rj.
Например, R3 представляет собой водород.
Например, R3 представляет собой галоген, такой как, например, фтор или хлор. Например, R3 представляет собой фтор.
Например, R4 представляет собой метил, этил, пропил или изопропил. Например, R4 представляет собой метил. Например, R4 представляет собой изопропил.
Например, R7 представляет собой 4-7-членный гетероциклоалкил (например, азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил, тетрагидро-2H-пиранил, 3,6-дигидро-2H-пиранил, тетрагидро-2H-тиопиран и морфолинил, и т.п.).
Например, R7 представляет собой 5- или 6-членный циклоалкил или гетероциклоалкил.
Например, R7 представляет собой 6-членный циклоалкил или гетероциклоалкил.
Согласно некоторым вариантам осуществления, R7 представляет собой пиперидинил, тетрагидропиранил, циклопентил или циклогексил.
Согласно некоторым вариантам осуществления, Rj представляет собой метил. Согласно некоторым вариантам осуществления, Rj представляет собой NH2.
Например, R8 представляет собой C1, C2 или C3алкил. Например, R8 представляет собой метил. Например, R8 представляет собой этил.
Согласно некоторым вариантам осуществления, Qh представляет собой связь. В других случаях Qh представляет собой метилен.
Согласно некоторым вариантам осуществления, Th представляет собой N(CH3)2.
Согласно некоторым вариантам осуществления, один из Rh1 и Rh2 представляет собой метил, а другой представляет собой 6-членный N-содержащий гетероциклоалкил, необязательно замещенный одним или двумя метилами. Например, 6-членный N-содержащий гетероциклоалкил не содержит в кольце дополнительных гетероатомов. Например, 6-членный N-содержащий гетероциклоалкил дополнительно не замещен, кроме одной или двух метильных групп.
Согласно некоторым вариантам осуществления, Rh1 и Rh2 образуют вместе с N, к которому они присоединены, 6-членное кольцо. Например, Th выбирают из пиперидина, морфолина, пиперазина и N-метилпиперазина.
Например, Th представляет собой морфолин.
Согласно некоторым вариантам осуществления, Ri представляет собой метил или N(CH3)2. Согласно некоторым вариантам осуществления, Ri представляет собой C3-C8циклоалкил или 5- или 6-членный гетероцикл. Например, Ri представляет собой 6-членный циклоалкил или гетероцикл, не замещенный или замещенный одним Rj.
Согласно некоторым вариантам осуществления, RN представляет собой H или метил.
В некоторых соединениях формулы (III), соединениях формулы IIIa, R3 представляет собой водород, R4 представляет собой CH3, и Qh представляет собой метилен.
В некоторых соединениях формулы III, соединениях формулы IIIb, R3 представляет собой фтор, R4 представляет собой изопропил, и Qh представляет собой связь.
В некоторых соединениях формулы III, соединениях формулы IIIc, R3 представляет собой водород, R4 представляет собой пропил или изопропил, и Qh представляет собой метилен.
В некоторых соединениях формулы III, соединениях формулы IIId, R3 представляет собой водород, R4 представляет собой пропил или изопропил, и Qh представляет собой связь.
В некоторых соединениях формулы III, соединениях формулы (IIIe)
Figure 00000013
где
R3 представляет собой H или F,
R4 представляет собой метил, изо-пропил или н-пропил,
Rh представляет собой
Figure 00000014
где Ri представляет собой H, метил или
Figure 00000015
.
Типичные соединения согласно настоящему изобретению включают в себя соединения, перечисленные в таблице 1. В представленной ниже таблице каждый случай
Figure 00000016
следует истолковывать как
Figure 00000017
.
Figure 00000018
Figure 00000019
Figure 00000020
Figure 00000021
Figure 00000022
Figure 00000023
Figure 00000024
Figure 00000025
Figure 00000026
Figure 00000027
Figure 00000028
Figure 00000029
Figure 00000030
Figure 00000031
Figure 00000032
Figure 00000033
Figure 00000034
Figure 00000035
Figure 00000036
Figure 00000037
Figure 00000038
Figure 00000039
Figure 00000040
Figure 00000041
Figure 00000042
Figure 00000043
Figure 00000044
Figure 00000045
Figure 00000046
Figure 00000047
Figure 00000048
Figure 00000049
Figure 00000050
Figure 00000051
Figure 00000052
Figure 00000053
Figure 00000054
Figure 00000055
Figure 00000056
Подразумевается, что используемый в настоящем документе «алкил», «C1, C2, C3, C4, C5 или C6алкил» или «C1-C6алкил» включает в себя неразветвленные (линейные) насыщенные алифатические C1, C2, C3, C4, C5 или C6углеводородные группы и разветвленные насыщенные алифатические C3, C4, C5 или C6углеводородные группы. Например, подразумевается, что C1-C6алкил включает в себя C1, C2, C3, C4, C5 и C6алкильные группы. Примеры алкила включают в себя фрагменты, содержащие от одного до шести атомов углерода, например, без ограничения метил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, втор-пентил или н-гексил.
Согласно определенным вариантам осуществления, неразветвленный или разветвленный алкил содержит шесть или менее атомов углерода (например, C1-C6 для неразветвленной цепи, C3-C6 для разветвленной цепи), и согласно другому варианту осуществления, неразветвленный или разветвленный алкил содержит четыре или менее атомов углерода.
Используемый в настоящем документе термин «циклоалкил» относится к насыщенной или ненасыщенной неароматической углеводородной моно- или мультициклической системе (например, конденсированной, соединенной мостиковой связью или спироциклической), содержащей от 3 до 30 атомов углерода (например, C3-C10). Примеры циклоалкила включают в себя без ограничения циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, циклопентенил, циклогексенил, циклогептенил и адамантил. Если иное не указано особо, то термин «гетероциклоалкил» относится к насыщенной или ненасыщенной неароматической 3-8-членной моноциклической, 7-12-членной бициклической (конденсированной, соединенной мостиковой связью или спироциклической) или 11-14-членной трициклической кольцевой системе (конденсированной, соединенной мостиковой связью или спироциклической), содержащей один или несколько гетероатомов (например, O, N, S или Se). Примеры гетероциклоалкильных групп включают в себя без ограничения пиперидинил, пиперазинил, пирролидинил, диоксанил, тетрагидрофуранил, изоиндолинил, индолинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, оксиранил, азетидинил, оксетанил, тиетанил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, тетрагидропиранил, дигидропиранил, пиранил, морфолинил, 1,4-диазепанил, 1,4-оксазепанил, 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил, 2,6-диазаспиро[3.3]гептанил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]деканил, и т.п.
Термин «необязательно замещенный алкил» относится к незамещенному алкилу или алкилу, содержащему обозначенные заместители, заменяющие один или несколько атомов водорода на одном или нескольких атомах углерода углеводородного скелета. Такие заместители могут включать в себя, например, алкил, алкенил, алкинил, галоген, гидроксил, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, алкилкарбонил, арилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкиламинокарбонил, диалкиламинокарбонил, алкилтиокарбонил, алкоксил, фосфат, фосфонато, фосфинато, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, алкилсульфинил, сульфонато, сульфамиол, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, азидо, гетероциклил, алкиларил или ароматический или гетероароматический фрагмент.
«Арилалкильный» или «аралкильный» фрагмент представляет собой алкил, замещенный арилом (например, фенилметил (бензил)). «Алкиларильный» фрагмент представляет собой арил, замещенный алкилом (например, метилфенил).
Подразумевается, что используемый в настоящем документе «алкильный линкер» включает в себя неразветвленные (линейные) насыщенные двухвалентные алифатические C1, C2, C3, C4, C5 или C6углеводородные группы и разветвленные насыщенные алифатические C3, C4, C5 или C6углеводородные группы. Например, подразумевается, что C1-C6алкильный линкер включает в себя C1, C2, C3, C4, C5 и C6алкильные линкерные группы. Примеры алкильного линкера включают в себя фрагменты, содержащие от одного до шести атомов углерода, например, без ограничения метил (-CH2-), этил (-CH2CH2-), н-пропил (-CH2CH2CH2-), изо-пропил (-CHCH3CH2-), н-бутил (-CH2CH2CH2CH2-), втор-бутил (-CHCH3CH2CH2-), изобутил (-C(CH3)2CH2-), н-пентил (-CH2CH2CH2CH2CH2-), втор-пентил (-CHCH3CH2CH2CH2-) или н-гексил (-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-).
«Алкенил» включает в себя ненасыщенные алифатические группы, аналогичные по длине и возможности замещения описанными выше алкилами, но содержащие, по меньшей мере, одну двойную связь. Например, термин «алкенил» включает в себя неразветвленные алкенильные группы (например, этенил, пропенил, бутенил, пентенил, гексенил, гептенил, октенил, ноненил, деценил) и разветвленные алкенильные группы. Согласно определенным вариантам осуществления, неразветвленная или разветвленная алкенильная группа содержит шесть или менее атомов углерода в своем скелете (например, C2-C6 для неразветвленной цепи, C3-C6 для разветвленной цепи). Термин «C2-C6» включает в себя алкенильные группы, содержащие от двух до шести атомов углерода. Термин «C3-C6» включает в себя алкенильные группы, содержащие от трех до шести атомов углерода.
Термин «необязательно замещенный алкенил» относится к незамещенному алкенилу или алкенилу, содержащему обозначенные заместители, заменяющие один или несколько атомов водорода на одном или нескольких атомах углерода углеводородного скелета. Такие заместители могут включать в себя, например, алкил, алкенил, алкинил, галоген, гидроксил, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, алкилкарбонил, арилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкиламинокарбонил, диалкиламинокарбонил, алкилтиокарбонил, алкоксил, фосфат, фосфонато, фосфинато, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, алкилсульфинил, сульфонато, сульфамиол, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, гетероциклил, алкиларил или ароматический или гетероароматический фрагмент.
«Алкинил» включает в себя ненасыщенные алифатические группы, аналогичные по длине и возможности замещения описанными выше алкилами, но содержащие, по меньшей мере, одну тройную связь. Например, «алкинил» включает в себя неразветвленные алкинильные группы (например, этинил, пропинил, бутинил, пентинил, гексинил, гептинил, октинил, нонинил, децинил) и разветвленные алкинильные группы. Согласно определенным вариантам осуществления, неразветвленная или разветвленная алкинильная группа содержит шесть или менее атомов углерода в своем скелете (например, C2-C6 для неразветвленной цепи, C3-C6 для разветвленной цепи). Термин «C2-C6» включает в себя алкинильные группы, содержащие от двух до шести атомов углерода. Термин «C3-C6» включает в себя алкинильные группы, содержащие от трех до шести атомов углерода.
Термин «необязательно замещенный алкинил» относится к незамещенному алкинилу или алкинилу, содержащему обозначенные заместители, заменяющие один или несколько атомов водорода на одном или нескольких атомах углерода углеводородного скелета. Такие заместители могут включать в себя, например, алкил, алкенил, алкинил, галоген, гидроксил, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, алкилкарбонил, арилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкиламинокарбонил, диалкиламинокарбонил, алкилтиокарбонил, алкоксил, фосфат, фосфонато, фосфинато, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, алкилсульфинил, сульфонато, сульфамиол, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, азидо, гетероциклил, алкиларил или ароматический или гетероароматический фрагмент.
Другие необязательно замещенные фрагменты (например, необязательно замещенный циклоалкил, гетероциклоалкил, арил или гетероарил) включают в себя как незамещенные фрагменты, так и фрагменты, содержащие один или несколько обозначенных заместителей. Например, замещенный гетероциклоалкил включает в себя группы, замещенные одной или несколькими алкильными группами, такие как 2,2,6,6-тетраметилпиперидинил и 2,2,6,6-тетраметил-1,2,3,6-тетрагидропиридинил.
«Арил» включает в себя обладающие свойством ароматичности группы, включая «конъюгированные» или мультициклические системы, по меньшей мере, с одним ароматическим кольцом, и не содержит ни одного гетероатома в кольцевой структуре. Примеры включают в себя фенил, бензил, 1,2,3,4-тетрагидронафталенил, и т.д.
«Гетероарильные» группы представляют собой определенные выше арильные группы, за исключением групп, которые содержат в кольцевой структуре от одного до четырех гетероатомов, и также могут называться «арилгетероциклами» или «гетероароматическими соединениями». Подразумевается, что используемый в настоящем документе термин «гетероарил» включает в себя стабильное 5-, 6- или 7-членное моноциклическое или 7-, 8-, 9-, 10-, 11- или 12-членное бициклическое ароматическое гетероциклическое кольцо, которое состоит из атомов углерода и одного или нескольких гетероатомов, например, 1 или 1-2 или 1-3 или 1-4 или 1-5 или 1-6 гетероатомов, или, например, 1, 2, 3, 4, 5 или 6 гетероатомов, независимо выбранных из группы, состоящей из азота, кислорода и серы. Атом азота может быть замещенным или незамещенным (т.е., N или NR, где R представляет собой H или другие заместители, определенные ранее). Гетероатомы азота и серы необязательно могут быть окислены (т.е., N→O и S(O)p, где p=1 или 2). Следует отметить, что общее число атомов S и O в ароматическом гетероцикле не превышает 1.
Примеры гетероарильных групп включают в себя пиррол, фуран, тиофен, тиазол, изотиазол, имидазол, триазол, тетразол, пиразол, оксазол, изоксазол, пиридин, пиразин, пиридазин, пиримидин, и т.п.
Кроме того, термины «арил» и «гетероарил» включают в себя мультициклические арильные и гетероарильные группы, например, трициклические, бициклические, например, нафталин, бензоксазол, бензoдиоксазол, бензoтиазол, бензoимидазол, бензoтиофен, метилендиоксифенил, хинолин, изохинолин, нафтиридин, индол, бензoфуран, пурин, бензoфуран, деазапурин, индолизин.
В случае мультициклических ароматических колец необходимо, чтобы только одно из колец было ароматическим (например, 2,3-дигидроиндол), хотя и все кольца могут быть ароматическими (например, хинолин). Второе кольцо также может быть конденсированным или соединенным мостиковой связью.
Циклоалкильное, гетероциклоалкильное, арильное или гетероарильное кольцо может быть замещено по одному или нескольким положениям кольца (например, по образующему кольцо атому углерода или гетероатому, такому как N) описанными выше заместителями, например, алкилом, алкенилом, алкинилом, галогеном, гидроксилом, алкокси, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилатом, алкилкарбонилом, алкиламинокарбонилом, аралкиламинокарбонилом, алкениламинокарбонилом, алкилкарбонилом, арилкарбонилом, аралкилкарбонилом, алкенилкарбонилом, алкоксикарбонилом, аминокарбонилом, алкилтиокарбонилом, фосфатом, фосфонато, фосфинато, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрилом, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилатом, сульфатами, алкилсульфинилом, сульфонато, сульфамиолом, сульфонамидо, нитро, трифторметилом, циано, азидо, гетероциклилом, алкиларилом или ароматическим или гетероароматическим фрагментом. Арильные и гетероарильные группы также могут быть конденсированы или соединены мостиковой связью с алициклическими или гетероциклическими кольцами, которые не являются ароматическими, так что образуется мультициклическая система (например, тетралин, метилендиоксифенил).
Подразумевается, что используемый в настоящем документе термин «карбоцикл» или «карбоциклическое кольцо» включает в себя любое стабильное моноциклическое, бициклическое или трициклическое кольцо с указанным числом атомов углерода, каждое из которых может быть насыщенным, ненасыщенным или ароматическим. Карбоцикл включает в себя циклоалкил и арил. Например, подразумевается, что C3-C14карбоцикл включает в себя моноциклическое, бициклическое или трициклическое кольцо, содержащее 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 атомов углерода. Примеры карбоциклов включают в себя без ограничения циклопропил, циклобутил, циклобутенил, циклопентил, циклопентенил, циклогексил, циклогептенил, циклогептил, циклогептенил, адамантил, циклооктил, циклооктенил, циклооктадиенил, флюоренил, фенил, нафтил, инданил, адамантил и тетрагидронафтил. Соединенные мостиковой связью кольца также включены в определение карбоцикла, включая, например, [3.3.0]бициклооктан, [4.3.0]бициклононан, [4.4.0]бициклодекан и [2.2.2]бициклооктан. Соединенные мостиковой связью кольца возникают, когда один или несколько атомов углерода связывают два не смежных атома углерода. Согласно одному варианту осуществления, мостик колец представляет собой один или два атома углерода. Следует отметить, что мостик всегда преобразует моноциклическое кольцо в трициклическое кольцо. Если кольцо соединено мостиковой связью, то перечисленные заместители кольца также могут присутствовать на мостике. Также включены конденсированные (например, нафтил, тетрагидронафтил) и спирокольца.
Используемый в настоящем документе «гетероцикл» или «гетероциклическая группа» включает в себя любую кольцевую структуру (насыщенную, ненасыщенную или ароматическую), которая содержит, по меньшей мере, один кольцевой гетероатом (например, N, O или S). Гетероцикл включает в себя гетероциклоалкил и гетероарил. Примеры гетероциклов включают в себя без ограничения морфолин, пирролидин, тетрагидротиофен, пиперидин, пиперазин, оксетан, пиран, тетрагидропиран, азетидин и тетрагидрофуран.
Примеры гетероциклических групп включают в себя без ограничения акридинил, азоцинил, бензимидазолил, бензoфуранил, бензoтиофуранил, бензoтиофенил, бензоксазолил, бензоксазолинил, бензтиазолил, бензтриазолил, бензтетразолил, бензизоксазолил, бензизотиазолил, бензимидазолинил, карбазолил, 4aH-карбазолил, карболинил, хроманил, хроменил, циннолинил, декагидрохинолинил, 2H,6H-1,5,2-дитиазинил, дигидрофуро[2,3-b]тетрагидрофуран, фуранил, фуразанил, имидазолидинил, имидазолинил, имидазолил, 1H-индазолил, индоленил, индолинил, индолизинил, индолил, 3H-индолил, изатиноил, изобензoфуранил, изохроманил, изоиндазолил, изоиндолинил, изоиндолил, изохинолинил, изотиазолил, изоксазолил, метилендиоксифенил, морфолинил, нафтиридинил, октагидроизохинолинил, оксадиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазол-5(4H)-он, оксазолидинил, оксазолил, оксиндолил, пиримидинил, фенантридинил, фенантролинил, феназинил, фенотиазинил, феноксатинил, феноксазинил, фталазинил, пиперазинил, пиперидинил, пиперидонил, 4-пиперидонил, пиперонил, птеридинил, пуринил, пиранил, пиразинил, пиразолидинил, пиразолинил, пиразолил, пиридазинил, пиридооксазол, пиридоимидазол, пиридотиазол, пиридинил, пиридил, пиримидинил, пирролидинил, пирролинил, 2H-пирролил, пирролил, хиназолинил, хинолинил, 4H-хинолизинил, хиноксалинил, хинуклидинил, тетрагидрофуранил, тетрагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил, тетразолил, 6H-1,2,5-тиадиазинил, 1,2,3-тиадиазолил, 1,2,4-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, тиантренил, тиазолил, тиенил, тиенотиазолил, тиенооксазолил, тиеноимидазолил, тиофенил, триазинил, 1,2,3-триазолил, 1,2,4-триазолил, 1,2,5-триазолил, 1,3,4-триазолил и ксантенил.
Используемый в настоящем документе термин «замещенный» означает, что любой или несколько атомов водорода на обозначенном атоме заменяют выбранной из числа указанных групп при условии, что нормальная валентность обозначенного атома не превышена, и что замещение приводит к стабильному соединению. Если заместитель представляет собой оксо или кето (т.е., =O), тогда на атоме замещено 2 атома водорода. Кетозаместители не присутствуют на ароматических фрагментах. Используемые в настоящем документе двойные связи кольца представляют собой двойные связи, которые образованы между двумя смежными кольцевыми атомами (например, C=C, C=N или N=N). Подразумевается, что «стабильное соединение» и «стабильная структура» означает соединение, которое достаточно устойчиво и сохраняется после выделения из реакционной смеси с пригодной степенью чистотой и после включения в состав эффективного терапевтического агента.
Если показано, что связь с заместителем пересекает связь, соединяющую два атома в кольце, то такой заместитель может быть связан с любым атомом в кольце. Если при описании заместителя атом, через который такой заместитель связан с остатком соединения представленной формулы, не обозначен, то такой заместитель может быть связан через любой атом такой формулы. Комбинации заместителей и/или переменных являются допустимыми лишь, если такие комбинации приводят к стабильным соединениям.
Если любая переменная (например, R1) встречается более одного раза в каждом компоненте или формуле соединения, то ее определение в каждом случае не зависит от ее определения в каждом другом случае. Таким образом, например, если показано, что группа замещена 0-2 фрагментами R1, то группа необязательно может быть замещена R1 фрагментами в количестве до двух, и в каждом случае R1 независимо выбирают из определения R1. Кроме того, комбинации заместителей и/или переменных являются допустимыми лишь, если такие комбинации приводят к стабильным соединениям.
Термин «гидрокси» или «гидроксил» включает в себя группы с -OH или -O-.
Используемый в настоящем документе «гало» или «галоген» относится к фтору, хлору, брому и йоду. Термин «пергалогенированный», как правило, относится к фрагменту, где все атомы водорода замещены атомами галогена. Термин «галогеналкил» или «галогеналкоксил» относится к алкилу или алкоксилу, замещенному одним или несколькими атомами галогена.
Термин «карбонил» включает в себя соединения и фрагменты, которые содержат атом углерода, соединенный при помощи двойной связи с атомом кислорода. Примеры фрагментов, содержащих карбонил, включают в себя без ограничения альдегиды, кетоны, карбоновые кислоты, амиды, сложные эфиры, ангидриды, и т.д.
Термин «карбоксил» относится к -COOH или его сложному C1-C6алкильному эфиру.
«Ацил» включает в себя фрагменты, которые содержат ацильный радикал (R-C(O)-) или карбонильную группу. «Замещенный ацил» включает в себя ацильные группы, где один или несколько атомов водорода замещены, например, алкильными группами, алкинильными группами, галогеном, гидроксилом, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилатом, алкилкарбонилом, арилкарбонилом, алкоксикарбонилом, аминокарбонилом, алкиламинокарбонилом, диалкиламинокарбонилом, алкилтиокарбонилом, алкоксилом, фосфатом, фосфонато, фосфинато, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрилом, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилатом, сульфатами, алкилсульфинилом, сульфонато, сульфамиолом, сульфонамидо, нитро, трифторметилом, циано, азидо, гетероциклилом, алкиларилом или ароматическим или гетероароматическим фрагментом.
«Ароил» включает в себя фрагменты с арилом или гетероароматическим фрагментом, связанным с карбонильной группой. Примеры ароильных групп включают в себя фенилкарбокси, нафтилкарбокси, и т.д.
«Алкоксиалкил», «алкиламиноалкил» и «тиоалкоксиалкил» включают в себя описанные выше алкильные группы, где атомы кислорода, азота или серы замещены одним или несколькими атомами углерода углеводородного скелета.
Термин «алкокси» или «алкоксил» включает в себя замещенные и незамещенные алкильные, алкенильные и алкинильные группы, ковалентно связанные с атомом кислорода. Примеры алкоксигрупп или алкоксильных радикалов включают в себя без ограничения метокси, этокси, изопропилокси, пропокси, бутокси и пентоксигруппы. Примеры замещенных алкоксигрупп включают в себя галогенированные алкоксигруппы. Алкоксигруппы могут быть замещены группами, такими как алкенил, алкинил, галоген, гидроксил, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, алкилкарбонил, арилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкиламинокарбонил, диалкиламинокарбонил, алкилтиокарбонил, алкоксил, фосфат, фосфонато, фосфинато, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, алкилсульфинил, сульфонато, сульфамиол, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, азидо, гетероциклил, алкиларил или ароматические или гетероароматические фрагменты. Примеры галогензамещенных алкоксигрупп включают в себя без ограничения фторметокси, дифторметокси, трифторметокси, хлорметокси, дихлорметокси и трихлорметокси.
Термин «эфир» или «алкокси» включает в себя соединения или фрагменты, которые содержат атом кислорода, связанный с двумя атомами углерода или гетероатомами. Например, термин включает в себя «алкоксиалкил», который относится к алкильной, алкенильной или алкинильной группе, ковалентно связанной с атомом кислорода, который ковалентно связан с алкильной группой.
Термин «сложный эфир» включает в себя соединения или фрагменты, которые связаны с атомом углерода или гетероатомом, связанным с атомом кислорода, который связан с атомом углерода карбонильной группы. Термин «сложный эфир» включает в себя алкоксикарбоксигруппы, такие как метоксикарбонил, этоксикарбонил, пропоксикарбонил, бутоксикарбонил, пентоксикарбонил, и т.д.
Термин «тиоалкил» включает в себя соединения или фрагменты, которые содержат алкильную группу, соединенную с атомом серы. Тиоалкильные группы могут быть замещены группами, такими как алкил, алкенил, алкинил, галоген, гидроксил, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, карбоновая кислота, алкилкарбонил, арилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкиламинокарбонил, диалкиламинокарбонил, алкилтиокарбонил, алкоксил, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, алкилсульфинил, сульфонато, сульфамиол, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, азидо, гетероциклил, алкиларил или ароматические или гетероароматические фрагменты.
Термин «тиокарбонил» или «тиокарбокси» включает в себя соединения и фрагменты, которые содержат атом углерода, соединенные при помощи двойной связи с атомом серы.
Термин «тиоэфир» включает в себя фрагменты, которые содержат атом серы, связанный с двумя атомами углерода или гетероатомами. Примеры тиоэфиров включают в себя без ограничения алктиоалкилы, алктиоалкенилы и алктиоалкинилы. Термин «алктиоалкилы» включает в себя фрагменты с алкильной, алкенильной или алкинильной группой, связанной с атомом серы, который связан с алкильной группой. По аналогии, термин «алктиоалкенилы» относится к фрагментам, где алкильная, алкенильная или алкинильная группа связана с атомом серы, который ковалентно связан с алкенильной группой; и термин «алктиоалкинилы» относится к фрагментам, где алкильная, алкенильная или алкинильная группа связана с атомом серы, который ковалентно связан с алкинильной группой.
Используемый в настоящем документе «амин» или «амино» относится к незамещенному или замещенному -NH2. «Алкиламино» включает в себя группы соединений, где атом азота -NH2 связан, по меньшей мере, с одной алкильной группой. Примеры алкиламиногрупп включают в себя бензиламино, метиламино, этиламино, фенэтиламино, и т.д. «Диалкиламино» включает в себя группы, где атом азота -NH2 связан, по меньшей мере, с двумя дополнительными алкильными группами. Примеры диалкиламиногрупп включают в себя без ограничения диметиламино и диэтиламино. «Ариламино» и «диариламино» включают в себя группы, где атом азота связан, по меньшей мере, с одной или двумя арильными группами, соответственно. «Аминоарил» и «аминоарилокси» относятся к арилу и арилокси, замещенным амино. «Алкилариламино», «алкиламиноарил» или «ариламиноалкил» относится к аминогруппе, которая связана, по меньшей мере, с одной алкильной группой и, по меньшей мере, с одной арильной группой. «Алкаминоалкил» относится к алкильной, алкенильной или алкинильной группе, связанной с атомом азота, который также связан с алкильной группой. «Ациламино» включает в себя группы, где атом азота связан с ацильной группой. Примеры ациламино включают в себя без ограничения алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоильные и уреидогруппы.
Термин «амид» или «аминокарбокси» включает в себя соединения или фрагменты, которые содержат атом азота, который связан с атомом углерода карбонильной или тиокарбонильной группы. Термин включает в себя «алкаминокарбокси» группы, которые включают в себя алкильные, алкенильные или алкинильные группы, связанные с аминогруппой, которая связана с атомом углерода карбонильной или тиокарбонильной группы. Он также включает в себя «ариламинокарбокси» группы, которые включают в себя арильные или гетероарильные фрагменты, связанные с аминогруппой, которая связана с атомом углерода карбонильной или тиокарбонильной группы. Термины «алкиламинокарбокси», «алкениламинокарбокси», «алкиниламинокарбокси» и «ариламинокарбокси» включают в себя фрагменты, где алкильные, алкенильные, алкинильные и арильные фрагменты, соответственно, связаны с атомом азота, который в свою очередь связан с атомом углерода карбонильной группы. Амиды могут быть замещены заместителями, такими как алкил с неразветвленной цепью, алкил с разветвленной цепью, циклоалкил, арил, гетероарил или гетероцикл. Заместители на амидных группах могут быть дополнительно замещены.
Соединения согласно настоящему изобретению, которые содержат атомы азота, могут быть преобразованы в N-оксиды путем обработки окислителем (например, 3-хлорпероксибензoйной кислотой (mCPBA) и/или пероксидом водорода) с получением других соединений согласно настоящему изобретению. Таким образом, учитываются все представленные или заявленные азотсодержащие соединения, включающие (если это позволяет валентность и структура) и представленное соединение, и его N-оксидное производное (которое может быть обозначено как N→O или N+-O-). Кроме того, в других случаях, атомы азота в соединениях согласно настоящему изобретению могут быть преобразованы в N-гидрокси или N-алкоксисоединения. Например, N-гидроксисоединения могут быть получены путем окисления исходного амина окислителем, таким как mCPBA. Также учитываются все представленные или заявленные азотсодержащие соединения, охватывающие (если это позволяет валентность и структура) и представленное соединение, и его N-гидрокси (т.е., N-OH) и N-алкокси (т.е., N-OR, где R замещен или незамещен C1-C6алкилом, C1-C6алкенилом, C1-C6алкинилом, 3-14-членным карбоциклом или 3-14-членным гетероциклом) производные.
Согласно настоящему описанию, в некоторых случаях для удобства структурная формула соединения представляет собой определенный изомер, но настоящее изобретение включает в себя все изомеры, такие как геометрические изомеры, оптические изомеры на основе асимметрического атома углерода, стереоизомеры, таутомеры, и т.п., при понимании того, что не все изомеры могут обладать тем же уровнем активности. Кроме того, для представленных формулой соединений может наблюдаться кристаллический полиморфизм. Следует отметить, что любая кристаллическая форма, смесь кристаллической формы или ее ангидрид или гидрат включены в объем настоящего изобретения. Более того, в объем настоящего изобретения включен так называемый метаболит, который получается путем распада in vivo соединения согласно настоящему изобретению.
«Изомерия» означает соединения, которые характеризуются идентичными молекулярными формулами, но отличаются последовательностью связывания их атомов или расположением их атомов в пространстве. Изомеры, которые отличаются расположением их атомов в пространстве, называют «стереоизомерами». Стереоизомеры, которые не являются зеркальными изображениями друг друга, называются «диастереоизомеры», и стереоизомеры, которые являются неналагающимися зеркальными изображениями друг друга, называют «энантиомерами» или иногда оптическими изомерами. Смесь, содержащую равные количества отдельных энантиомерных форм противоположной хиральности, называют «рацемической смесью».
Атом углерода, связанный с четырьмя неидентичными заместителями, называют «хиральным центром».
«Хиральный изомер» означает соединение, по меньшей мере, с одним хиральным центром. Соединения более чем с одним хиральным центром могут существовать или в виде отдельного диастереомера, или в виде смеси диастереомеров, называемой «диастереомерной смесью». Если присутствует один хиральный центр, то стереоизомер может характеризоваться абсолютной конфигурацией (R или S) этого хирального центра. Абсолютная конфигурация относится к расположению в пространстве заместителей, присоединенных к хиральному центру. Заместители, присоединенные к рассматриваемому хиральному центру, рассматривают с соответствии с правилом последовательности Кана - Ингольда - Прелога (Cahn et al., Angew. Chem. Inter. Edit. 1966, 5, 385; errata 511; Cahn et al., Angew. Chem. 1966, 78, 413; Cahn and Ingold, J. Chem. Soc. 1951 (London), 612; Cahn et al., Experientia 1956, 12, 81; Cahn, J. Chem. Educ. 1964, 41, 116).
«Геометрический изомер» означает диастереомеры, которые существуют благодаря затрудненному вращению вокруг двойных связей, или циклоалкильный линкер (например, 1,3-циклобутил). Эти конфигурации различают по названиям при помощи префиксов цис и транс, или Z и E, которые означают, что группы находятся на той же или на противоположной стороне относительно двойной связи в молекуле согласно правилам Кана - Ингольда - Прелога.
Следует понимать, что соединения согласно настоящему изобретению могут быть изображены как различные хиральные изомеры или геометрические изомеры. Также следует понимать, что если соединения содержат хиральные изомерные или геометрические изомерные формы, то подразумевается, что все изомерные формы включены в объем настоящего изобретения, и наименование соединений не исключает каких-либо изомерных форм, и при этом понимают, что не все изомеры могут обладать тем же уровнем активности.
Кроме того, структуры и другие соединения, обсуждаемые в настоящем изобретении, включают в себя все их атропоизомеры, и при этом понимают, что не все атропоизомеры могут обладать одинаковым уровнем активности. «Атропоизомеры» представляют собой тип стереоизомера, в котором атомы двух изомеров по-разному расположены в пространстве. Атропоизомеры существуют благодаря своему ограниченному вращению, обусловленному затруднением вращения больших групп вокруг центральной связи. Такие атропоизомеры обычно существуют в виде смеси, однако в результате недавних достижений в области хроматографических методик стало возможным разделять смеси двух атропоизомеров в избранных случаях.
«Таутомер» представляет собой один из двух или нескольких структурных изомеров, которые существуют в равновесии, и легко преобразуется из одной изомерной формы в другую. Это преобразование приводит к перемещению атома водорода по типу формаля, что сопровождается сменой мест смежных конъюгированных двойных связей. Таутомеры существуют в виде смеси таутомеров в растворе. В растворах, в которых возможна таутомеризация, достигается химическое равновесие таутомеров. Точное соотношение таутомеров зависит от нескольких факторов, включая температуру, растворитель и значение pH. Таутомерией называют представление о таутомерах, способных к взаимопревращению путем таутомеризации.
Среди различных типов возможной таутомерии обычно наблюдают два вида. При кето-енольной таутомерии возникает одновременный сдвиг электронов и атома водорода. Кольчато-цепная таутомерия возникает в результате взаимодействия альдегидной группы (-CHO) в цепной молекуле сахара с одной из гидроксильных групп (-OH) в той же молекуле с получением ее циклической (кольцеобразной) формы, что наблюдается у глюкозы.
Обычными таутомерными парами являются: кетон-енол, амид-нитрил, лактам-лактим, амид-имидная кислота в гетероциклических кольцах (например, в нуклеиновых основаниях, таких как гуанин, тимин и цитозин), имин-енамин и енамин-енамин. Пример кето-енольного равновесия между пиридин-2(1H)-онами и соответствующими пиридин-2-олами представлен ниже.
Figure 00000057
Следует понимать, что соединения согласно настоящему изобретению могут быть представлены в виде различных таутомеров. Также следует понимать, что если соединения обладают таутомерными формами, то подразумевается, что все таутомерные формы включены в объем настоящего изобретения, и наименование соединений не исключает какой-либо таутомерной формы. Следует понимать, что определенные таутомеры могут обладать более высоким уровнем активности, по сравнению с другими.
Термин «кристаллические полиморфы», «полиморфы» или «кристаллические формы» означает кристаллические структуры, в которых соединение (или его соль или сольват) может кристаллизоваться до кристаллов с различной упаковкой, которые все характеризуются одинаковым химическим составом. Различные кристаллические формы обычно характеризуются различными рентгенодифрактограммами, инфракрасными спектрами, точками плавления, плотностью, твердостью, кристаллической формой, оптическими и электрическими свойствами, стойкостью и растворимостью. Используемый для перекристаллизации растворитель, скорость кристаллизации, температура хранения и другие факторы могут обуславливать преобладание одной кристаллической формы. Кристаллические полиморфы соединений могут быть получены путем кристаллизации в различных условиях.
Соединения любой из раскрытых в настоящем документе формул включают в себя сами соединения, а также их соли, их сложные эфиры, их сольваты и их пролекарства, если это применимо к данному случаю. Соль, например, может быть образована анионом и положительно заряженной группой (например, амино) на арил- или гетероарилзамещенном бензольном соединении. Подходящие анионы включают в себя хлорид, бромид, йодид, сульфат, бисульфат, сульфамат, нитрат, фосфат, цитрат, метансульфонат, трифторацетат, глютамат, глюкуронат, глутарат, малат, малеат, сукцинат, фумарат, тартрат, тозилат, салицилат, лактат, нафталинсульфонат и ацетат (например, трифторацетат). Термин «фармацевтически приемлемый анион» относится к аниону, подходящему для образования фармацевтически приемлемой соли. По аналогии, соль также может быть образована катионом и отрицательно заряженной группой (например, карбоксилатом) на арил- или гетероарилзамещенном бензольном соединении. Подходящие катионы включают в себя ион натрия, ион калия, ион магния, ион кальция и катион аммония, такой как ион тетраметиламмония. Арил- или гетероарилзамещенные бензольные соединения также включают в себя соли, содержащие четвертичные атомы азота. Примеры пролекарств включают в себя сложные эфиры и другие фармацевтически приемлемые производные, которые при введении субъекту способны обеспечивать активные арил- или гетероарилзамещенные бензольные соединения.
Кроме того, соединения согласно настоящему изобретению, например, соли соединений, могут существовать либо в гидратированной, либо в негидратированной (безводной) форме, или в виде сольватов с молекулами другого растворителя. Неограничивающие примеры гидратов включают в себя моногидраты, дигидраты, и т.д. Неограничивающие примеры сольватов включают в себя этанольные сольваты, ацетоновые сольваты, и т.д.
«Сольват» означает формы присоединения растворителя, которые содержат либо стехиометрические, либо нестехиометрические количества растворителя. Некоторые соединения имеют склонность захватывать постоянное количество молей растворителя в кристаллическом твердом состоянии, образуя тем самым сольват. Если растворителем является вода, то образованный сольват представляет собой гидрат; и если растворителем является спирт, то образованный сольват представляет собой алкоголят. Гидраты образуются путем объединения одной или нескольких молекул воды с одной молекулой вещества, где вода сохраняет свое молекулярное состояние как H2O.
Используемый в настоящем документе термин «аналог» относится к химическому соединению, которое структурно подобно другому, но слегка отличается по составу (как при замене одного атома атомом другого элемента или в присутствии особой функциональной группы, или при замене одной функциональной группы другой функциональной группой). Таким образом, аналог представляет собой соединение, которое подобно или сопоставимо по функции и внешнему виду, но не по структуре или происхождению со сравниваемым соединением.
Используемый в настоящем документе термин «производное» относится к соединениям, характеризующимся общей структурной основой и замещенным описанными в настоящем документе различными группами. Например, все соединения, представленные формулой (I), представляют собой арил- или гетероарилзамещенные бензольные соединения и характеризуются формулой (I) в виде общей структурной основы.
Термин «биоизостер» относится к соединению, полученному при замене атома или группы атомов другим, во многом сходном, атомом или группой атомов. Целью биоизостерной замены является образование нового соединения с биологическими свойствами, подобными таковым для исходного соединения. Биоизостерная замена может проводиться по физико-химическим или топологическим основаниям. Примеры биоизостеров карбоновой кислоты включают в себя без ограничения ацилсульфонимиды, тетразолы, сульфонаты и фосфонаты (см., например, Patani and LaVoie, Chem. Rev. 96, 3147-3176, 1996).
Подразумевается, что настоящее изобретение включает в себя все изотопы атомов, содержащихся в соединениях согласно настоящему изобретению. Изотопы включают в себя такие атомы, которые характеризуются одинаковым атомным числом, но различным массовым числом. В качестве общего примера и без ограничения изотопы водорода включают в себя тритий и дейтерий, и изотопы углерода включают в себя 13C и 14C.
2. Синтез арильных- или гетероарилзамещенных бензольных соединений
Настоящее изобретение относится к способам синтеза соединений любой из формул, описанных в настоящем документе. Настоящее изобретение также относится к детальным способам синтеза различных раскрытых соединений согласно настоящему изобретению в соответствии с последующими схемами, представленными в разделе «Примеры».
На всем протяжении описания, если композиции описаны как содержащие, включающие в себя или заключающие в себе конкретные компоненты, то предполагается, что композиции также по существу состоят или состоят из перечисленных компонентов. По аналогии, если способы или процессы описаны как содержащие, включающие в себя или заключающие в себе конкретные стадии обработки, то процессы также по существу состоят или состоят из перечисленных стадий обработки. Кроме того, следует понимать, что порядок стадий или порядок проведения определенных действий является несущественным до тех пор, пока изобретение остается действующим. Более того, две или несколько стадий или действий могут проводиться одновременно.
Процессы синтеза согласно настоящему изобретению могут допускать большое разнообразие функциональных групп, а потому могут быть использованы различным образом замещенные исходные вещества. Как правило, процессы обеспечивают целевое конечное соединение в конце или почти в конце всего процесса, хотя в некоторых случаях может быть желательным дополнительное преобразование соединения в его фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или пролекарство.
Соединения согласно настоящему изобретению могут быть получены различными способами с использованием коммерчески доступных исходных веществ, известных из литературы соединений, или из легко получаемых промежуточных соединений, с применением стандартных способов получения и методик, либо известных специалистам в данной области техники, либо будущих очевидными для квалифицированного специалиста в свете изложенных в настоящем документе идей. Стандартные способы получения и методики получения органических молекул и преобразований и манипуляций с функциональными группами могут быть получены из соответствующей научной литературы или из стандартных руководств в данной области техники. Не ограничиваясь каким-либо одним или несколькими источниками, классические пособия, такие как Smith, M. B., March, J., March’s Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5th edition, John Wiley & Sons: New York, 2001; Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons: New York, 1999; R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); и L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995), включенные в настоящий документ посредством ссылки, являются применимыми и признанными справочными пособиями по органическому синтезу, известными специалистам в данной области техники. Последующие описания способов синтеза предназначены для иллюстрации, но не для ограничения, обычных методик получения соединений согласно настоящему изобретению.
Соединения согласно настоящему изобретению могут быть подходящим образом получены различными способами, хорошо известными специалистам в данной области техники. Описанные в настоящем документе соединения любой из формул согласно настоящему изобретению могут быть получены при помощи методик, представленных ниже на схемах 1-10, из коммерчески доступных исходных веществ или исходных веществ, которые могут быть получены с использованием методик из литературы. Если иное не отмечено особо, то группы Z и R (такие как R2, R3, R4, R6, R7, R8 и R12) на схемах 1-10 характеризуются значениями, определенными для любой из формул, раскрытых в настоящем документе.
Специалисту в данной области техники следует отметить, что на протяжении последовательности реакций и схем синтеза, описанных в настоящем документе, может быть изменен порядок определенных стадий, таких как введение и удаление защитных групп.
Специалисту в данной области техники следует отметить, что определенным группам может требоваться защита от реакционных условий с использованием защитных групп. Защитные группы также могут использоваться для проведения различий между подобными функциональными группами в молекулах. Перечень защитных групп и описание процессов введения и удаления указанных групп могут быть обнаружены в Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons: New York, 1999.
Предпочтительные защитные группы включают в себя без ограничения:
Для гидроксильного фрагмента: TBS, бензил, THP, Ac
Для карбоновых кислот: сложный бензиловый эфир, сложный метиловый эфир, сложный этиловый эфир, сложный аллиловый эфир
Для аминов: Cbz, BOC, DMB
Для диолов: Ac (×2), TBS (×2), или ацетониды при совместном использовании
Для тиолов: Ac
Для бензимидазолов: SEM, бензил, PMB, DMB
Для альдегидов: диалкилацетали, такие как диметоксиацеталь или диэтилацеталь.
В описанных в настоящем документе реакционных схемах может быть получено множество стереоизомеров. Если не указан какой-либо конкретный стереоизомер, то следует понимать, как обозначение всех возможных стереоизомеров, которые могут быть получены в реакции. Среднему специалисту в данной области техники следует понимать, что взаимодействия могут быть оптимизированы для предпочтительного получения одного изомера, или могут быть разработаны новые схемы для получения единственного изомера. При получении смесей, для разделения изомеров могут быть использованы такие методики, как препаративная тонкослойная хроматография, препаративная ВЭЖХ, препаративная хиральная ВЭЖХ или препаративная SFC.
Следующие аббревиатуры использовали по всему описанию, и они представлены ниже:
AA ацетат аммония
ACN ацетонитрил
Ac ацетил
AcOH уксусная кислота
атм атмосфер
водн. водный
BID или b.i.d. дважды в день (два раза в день)
tBuOK трет-бутоксид калия
Bn бензил
BOC трет-бутоксикарбонил
BOP (бензoтриазол-1-илокси)трис(диметиламино)фосфония гексафторфосфат
Cbz бензилоксикарбонил
CDCl3 дейтерированный хлороформ
CH2Cl2 дихлорметан
COMU (1-циано-2-этокси-2-оксоэтилиденаминоокси)-диметиламиноморфолинокарбения гексафторфосфат
сут суток
DBU 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен
DCE 1,2-дихлорэтан
DCM дихлорметан
DEAD диэтилазодикарбоксилат
DIAD диизопропилазодикарбоксилат
DiBAL-H диизобутилалюминия гидрид
DIPEA N,N-диизопропилэтиламин (основание Хунига)
DMA диметилацетамид
DMAP N,N-диметил-4-аминопиридин
DMB 2,4-диметоксибензил
DMF N,N-диметилформамид
DMSO диметилсульфоксид
DPPA дифенилфосфония азид
EA или EtOAc этилацетат
EDC или EDCI N-(3-диметиламинопропил)-N′-этилкарбодиимид
Et2O диэтиловый эфир
ELS испарительное светорассеивание
ESI- способ электрораспыления отрицательных ионов
ESI+ способ электрораспыления положительных ионов
Et3N или TEA триэтиламин
EtOH этанол
FA муравьиная кислота
FC или FCC флэш-хроматография
ч часы
H2O вода
HATU O-(7-азабензoтриазол-1-ил)-N,N,N′,N′-тетраметилурония гексафторфосфат
HOAT 1-гидрокси-7-азабензoтриазол
HOBt 1-гидроксибензoтриазол
HO-Su N-гидроксисукцинимид
HCl хлорид водорода или соляная кислота
ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография
K2CO3 карбонат калия
KHMD гексаметилдисилазид калия
ЖХ/МС или ЖХ-МС жидкостная хроматография/массовая спектрометрия
LDA диизопропиламид лития
LiHMD гексаметилдисилазид лития
LG уходящая группа
M моль/л
m/z соотношение масса/заряд
m-CPBA мета-хлорпербензoйная кислота
MeCN ацетонитрил
MeOD d4-метанол
MeI метилйодид
MS3Å 3Å молекулярные сита
MgSO4 сульфат магния
мин минуты
Ms мезил
MsCl мезилхлорид
MsO мезилат
МС масс-спектрометрия
MWI микроволновое излучение
Na2CO3 карбонат натрия
Na2SO4 сульфат натрия
NaHCO3 бикарбонат натрия
NaHMD гексаметилдисилазид натрия
NaOH гидроксид натрия
NaHCO3 бикарбонат натрия
Na2SO4 сульфат натрия
NIS N-йодсукцинимид
ЯМР ядерно-магнитный резонанс
в/н или В/Н в течение ночи
Pd/C палладированный уголь
Pd(dppf)Cl2·DCM комплекс дихлор[1,1′-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладия(II) с дихлорметаном
PPAA циклический ангидрид 1-пропанфосфоновой кислоты
Pd(OH)2 дигидроксид паладия
PE петролейный эфир
PG защитная группа
PMB пара-метоксибензил
п/о перорально (пероральное введение)
ppm м.д. (миллионных долей)
преп. ВЭЖХ препаративная высокоэффективная жидкостная хроматография
преп. ТСХ препаративная тонкослойная хроматография
p-TsOH пара-толуолсульфоновая кислота
PyBOP (бензoтриазол-1-илокси)трипирролидинофосфония гексафторфосфат
QD или q.d. ежедневно (один раз в сутки)
RBF круглодонная колба
ОФ-ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой
к.т. или КТ комнатная температура
SEM (триметилсилил)этоксиметил
SEMCl (триметилсилил)этоксиметилхлорид
SFC сверхкритическая хроматография
SGC хроматография на силикагеле
STAB триацетоксиборгидрид натрия
TBAF тетра-н-бутиламмония фторид
TBME трет-бутилметиловый эфир
TEA триэтиламин
TFA трифторуксусная кислота
TfO трифлат
THF тетрагидрофуран
THP тетрагидропиран
TID или t.i.d трижды в сутки (три раза в сутки)
ТСХ тонкослойная хроматография
TMSCl триметилсилилхлорид
Ts тозил
TsOH тозиловая кислота
УФ ультрафиолет
Схема 1
Figure 00000058
На схеме 1 представлен синтез модифицированных арильных аналогов в соответствии с общим путем, в котором используют общепринятые методы химии. Замещенные нитробензойные кислоты, многие из которых являются коммерчески доступными или могут быть получены путем нитрования подходящих замещенных бензойных кислот или другими методами химии, известными специалистам в данной области техники, могут быть преобразованы в их сложные метиловые эфиры путем обработки метилйодидом в полярном растворителе, таком как DMF, в присутствии подходящего основания, такого как карбонат натрия, при подходящей температуре, например, при 60°C (стадия 1). Нитрогруппа может быть восстановлена до амина с использованием подходящего восстановителя, такого как железо, в присутствии кислоты, такой как хлорид аммония, в протонном растворителе, таком как этанол, при подходящей температуре, например, при 80°C (стадия 2). R7 может быть введен с использованием восстановительного аминирования с соответствующим кетоном или альдегидом в присутствии соответствующего восстановителя, такого как цианборгидрид натрия, и катализатора-кислоты, такой как уксусная кислота, в подходящем растворителе, таком как метанол. Разнообразные группы R8 могут быть введены путем алкилирования с использованием R8-LG, где LG представляет собой уходящую группу, такую как йод, в присутствии слабого основания, такого как карбонат цезия, в подходящем полярном растворителе, таком как ацетонитрил, при подходящей температуре, например, при 80°C (стадия 4). В качестве альтернативы, группы R8 могут быть введены путем восстановительного аминирования с R8-кетоном или R8-альдегидом в присутствии подходящего восстановителя, такого как цианборгидрид натрия, и катализатора-кислоты, такой как уксусная кислота, в подходящем растворителе, таком как метанол. Сложноэфирный фрагмент может быть преобразован в амид с использованием стандартного двухстадийного протокола. Сложный эфир может быть гидролизован до соответствующей кислоты с использованием подходящего основания, такого как гидроксид натрия, в полярном растворителе, таком как этанол (стадия 5). Затем кислоту подвергают стандартной реакции амидного сочетания, добавляя при этом подходящий амин вместе с подходящим агентом амидного сочетания, таким как PYBOP, в подходящем растворителе, таком как DMSO, с получением целевого амида (стадия 6).
Схема 2
Figure 00000059
В зависимости от природы заместителя R6, для преобразования заместителя R6 в альтернативный заместитель R6 может применяться дальнейшая химическая модификация. Типичный пример таких модификаций может включать в себя гидрирование, удаление защитной группы с последующим проведением дополнительных реакций амидного сочетания, катализируемые палладием реакции сочетания, реакции восстановительного аминирования или реакции алкилирования. Например, как представлено на схеме 2, если R6 представляет собой бромид, то альтернативные заместители R6 могут быть введены с использованием стандартных протоколов, основанных на применении металлов переменной валентности, которые зависят от уходящей группы, такой как бромид, в качестве точки присоединения. Бромид может быть объединен с соответствующим производным сложного эфира бороновой кислоты в присутствии слабого основания и палладиевого катализатора в полярном растворителе, таком как диоксан/вода, при повышенной температуре с получением целевого нового заместителя R6 (т.е., реакция по Судзуки). Например, как представлено на схеме 3, если реакцию по Судзуки проводят с производным сложного эфира бороновой кислоты, содержащим формильную группу, то с целью введения аминогрупп может проводиться дальнейшая модификация путем проведения реакции восстановительного аминирования первичными и вторичными аминами (например, морфолин, диметиламин).
Схема 3
Figure 00000060
В зависимости от природы заместителя R7, для преобразования заместителя R7 в альтернативный заместитель R7 может применяться дальнейшая химическая модификация, последующая стадии 6 на схеме 1. Например, с защищенной аминогруппы, которая заключена в состав R7, могут быть сняты защитные группы (например, снятие Boc группы) с получением свободных аминогрупп. Такие свободные аминогруппы могут подвергаться реакциям восстановительного аминирования или реакциям алкилирования с получением замещенных аминов.
На схеме 4 представлены общая схема синтеза 2,6-дизамещенных изоникотинамидных соединений. Для введения арильной группы, которая может быть замещена функциональной группой X, подходящей для последующего преобразования, на стадии 1 может проводиться реакция по Судзуки между арилбороновой кислотой и исходным метил-2,6-дихлоризоникотинатом. Такие группы X включают в себя формил или гидроксиметил, которые могут быть легко преобразованы на стадии 2 в различные группы Y. Такие группы Y включают в себя аминометильные, моноалкиламинометильные и диалкиламинометильные группы. Последние могут быть получены путем восстановительного аминирования в том случае, если X представляет собой формил, или путем преобразования X = гидроксиметил до бромметила с последующим алкилированием амином. Гидролиз сложного эфира на последующей стадии дает в результате промежуточную кислоту, которая может быть сочетана с соответствующими 3-(аминометил)пиридин-2(1H)-онами с получением предпоследнего промежуточного 2-хлор-6-арилизоникотанамидного соединения. Затем в реакции по Судзуки или в реакции аминирования получают соединения, замещенные группой Z по 2-положению. В случае реакции аминирования примерами Z могут являться моноалкиламино или диалкиламино. В случае реакции по Судзуки Z может представлять собой арил, дигидроарил или тетрагидроарил, такой как циклогексенил.
Схема 4
Figure 00000061
На схеме 5 представлен общий путь синтеза 6-арил-3-метилпиколинамидов, содержащих в 4-положении моноалкиламино- или диалкиламиногруппы. Метил-3-бром-4,6-дихлорпиколинат получают, начиная с окисления метил-3-бром-6-хлорпиколината до N-оксида с последующим хлорированием оксихлоридом фосфора. Хлор в 4-положении может быть селективно замещен различными моно- и диалкиламинами, которые также могут содержать функциональные или защищенные функциональные группы, с которых на более поздней стадии может быть снята защита. Предпоследние промежуточные 2-хлорпиридиновые соединения получают путем катализируемого палладием метилирования тетраметилоловом с последующим гидролизом сложного эфира и реакцией амидного сочетания с соответствующими 3-(аминометил)пиридин-2(1H)-онами. Проведение реакций сочетания по Судзуки указанных промежуточных соединений с арилбороновыми кислотами приводит к замене хлора в 2-положении арильной группой. Таким образом, получают 6-арил-3-метил-пиколинамиды, содержащие моноалкиламино- или диалкиламиногруппы в 4-положении. Арильную группу, которая может быть замещена функциональной группой X, которая остается в готовом продукте, преобразовывают в другую группу путем снятия защитных групп или в реакции преобразования функциональной группы, например, путем восстановительного аминирования.
Схема 5
Figure 00000062
Общие процессы синтеза промежуточных 3-(аминометил)пиридин-2(1H)-оновых соединений для указанной на схеме 1 реакции амидного сочетания представлены ниже на схеме 6. Согласно одному способу, дикетон может быть конденсирован с 2-цианоацетамидом в присутствии подходящего реагента, такого как пиперидинацетат, в полярном растворителе, таком как этанол, с получением цианопиридона (стадия 9). Согласно другому способу, если R3 представляет собой H, то замещенный соответствующим образом алкинилкетон может быть конденсирован с 2-цианоацетамидом в присутствии подходящего реагента, такого как пиперидинацетат, в полярном растворителе, таком как этанол, с получением цианопиридона (стадия 11). Цианогруппа может быть восстановлена в соответствующих условиях, таких как гидрирование в присутствии катализатора никеля Ренея в полярном растворителе, таком как аммиак в метаноле, с получением амина (стадия 10).
Схема 6
Figure 00000063
Кроме того, в зависимости от природы групп R2, R3 или R4, для независимого преобразования каждой из них в альтернативный заместитель могут использоваться дальнейшие химические модификации. Типичный пример таких модификаций может включать в себя гидрирование, удаление защитной группы с последующим проведением дополнительных реакций амидного сочетания, катализируемые палладием реакции сочетания, реакции восстановительного аминирования или реакции алкилирования.
На схеме 4 представлен вариант общего пути синтеза согласно схеме 1, основанный на использовании исходных метил-3-амино-5-бромбензоатов (заместитель представляет собой группу R12), замещенных по 2-положению. Указанные исходные вещества, в свою очередь, могут быть получены из замещенных по 2-положению 3-нитробензойных кислот, которые являются коммерчески доступными или могут быть получены нитрованием замещенных по 2-положению бензойных кислот. Таким образом, подходящие замещенные по 2-положению 3-нитро-5-бромбензойные кислоты получают путем бромирования замещенных по 2-положению 3-нитробензойных кислот подходящим реагентом, таким как 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион. Затем для получения исходных замещенных по 2-положению метил-3-амино-5-бромбензоатов из замещенных по 2-положению 3-нитро-5-бромбензойных кислот могут последовательно осуществляться различные процедуры этерификации с последующим восстановлением нитрогруппы.
Схема 7
Figure 00000064
Как представлено на схеме 7, на стадии 1 группа R7 может быть введена из замещенных по 2-положению метил-3-амино-5-бромбензоатов с использованием восстановительного аминирования подходящим R7-кетоном или R7-альдегидом в присутствии подходящего восстановителя, такого как цианборгидрид натрия, и катализатора-кислоты, такой как уксусная кислота, в подходящем растворителе, таком как метанол. По аналогии, на стадии 2 группы R8 могут быть введены путем восстановительного аминирования R8-кетоном или R8-альдегидом в присутствии подходящего восстановителя, такого как цианборгидрид натрия, и катализатора-кислоты, такой как уксусная кислота, в подходящем растворителе, таком как метанол. В качестве альтернативы, различные группы R8 могут быть введены путем алкилирования с использованием R8-LG, где LG представляет собой уходящую группу, такую как йод, в присутствии слабого основания, такого как карбонат цезия, в подходящем полярном растворителе, таком как ацетонитрил, при подходящей температуре, например, при 80°C. На стадии 3, арильные группы, соответствующие R6, могут быть введены в реакции по Судзуки промежуточного бромида с подходящей арилбороновой кислотой или сложноэфирным производным, например, X-Ar-B(OH)2, в присутствии слабого основания и палладиевого катализатора, в полярном растворителе, таком как диоксан/вода, при повышенной температуре. Группа X в X-Ar-B(OH)2 может представлять собой окончательный заместитель на арильном кольце или может представлять собой функциональную группу, которая может быть преобразована в другую группу путем модификации функциональной группы. Типичный пример таких модификаций может включать в себя гидрирование, удаление защитной группы с последующим проведением дополнительных реакций амидного сочетания, катализируемые палладием реакции сочетания, реакции восстановительного аминирования или реакции алкилирования. Например, если реакцию по Судзуки проводят с производным бороновой кислоты, содержащим формильную группу, то для введения аминогрупп может проводиться дополнительная модификация путем проведения реакции восстановительного аминирования первичными и вторичными аминами (например, морфолин, диметиламин). На стадии 4 сложноэфирный фрагмент может быть гидролизован до соответствующей кислоты с использованием подходящего основания, такого как гидроксид натрия, в полярном растворителе, таком как этанол. На стадии 5, кислота может быть подвергнута стандартной реакции амидного сочетания, при этом добавляют подходящий амин вместе с подходящим агентом амидного сочетания, таким как PYBOP, в подходящем растворителе, таком как DMSO, с получением целевого амида. В зависимости от природы заместителя R7, для преобразования заместителя R7 в альтернативный заместитель R7 может использоваться дальнейшая химическая модификация, последующая стадии 5 на схеме 4. Например, защищенная аминогруппа, которая заключена в состав R7, может подвергаться реакции снятия защитных групп (например, снятие Boc-группы) с получением свободных аминогрупп. Такие свободные аминогруппы могут быть подвергнуты реакциям восстановительного аминирования или реакциям алкилирования с получением замещенных аминов.
Ниже на схеме 8 представлен общий путь синтеза 2-моноалкиламино- и 2-диалкиламино-3-замещенных 6-арилизоникотинамидов, где заместитель по 3-положению соответствует R12, и 6-арильная группа соответствует R6 формулы I. На стадии 1, заместитель по 3-положению может быть введен способом, описанным Epsztain J. et al. Tetrahedron, 1991, v. 47, 1697-16708, путем металлирования 2-хлоризоникотинанилида н-бутиллитием с последующим захватом алкилйодидом, таким как метилйодид, или альдегидом или другой электрофильной группой.
Схема 8
Figure 00000065
В случаях, если захват реагента приводит к заместителю с функциональной группой, то эта группа может быть скрыта или преобразована в другую функциональную группу, совместимую с последующими химическими стадиями. На стадии 2, после синтеза сложного метилового эфира в стандартных условиях, например, как показано с метилйодидом и основанием, может проводиться анилид-амидный гидролиз в стандартных кислых условиях с получением соответствующих метил-2-хлор-3-замещенных изоникотинатов. На стадии 4, алкиламиногруппа может быть введена в реакции сочетания по Бухвальду R7NH2 моноалкиламина с метил-2-хлор-3-замещенными изоникотинатами. Указанная реакция является часто встречающимся в химической литературе примером для различных 2-хлорпиридиновых систем. На необязательной для диалкиламиновых соединений стадии 5, группы R8 могут быть введены при помощи восстановительного аминирования с R8-кетоном или R8-альдегидом в присутствии подходящего восстановителя, такого как цианборгидрид натрия, и катализатора-кислоты, такой как уксусная кислота, в подходящем растворителе, таком как метанол. В качестве альтернативы, различные группы R8 могут быть введены посредством алкилирования с использованием R8-LG, где LG представляет собой уходящую группу, такую как йод, в присутствии слабого основания, такого как карбонат цезия, в подходящем полярном растворителе, таком как ацетонитрил, при подходящей температуре, например, при 80°C. На стадии 6, путем окисления до N-оксида с последующим хлорированием оксихлоридом фосфора получают метил-6-хлор-2-моно- или диалкиламино-3-замещенные изоникотинаты. На стадии 7, сложноэфирный фрагмент может быть гидролизован до соответствующей кислоты с использованием подходящего основания, такого как гидроксид натрия, в полярном растворителе, таком как этанол. На стадии 8, кислота может быть подвергнута стандартной реакции амидного сочетания, при этом добавляют подходящий амин или замещенный 3-(аминометил)пиридин-2(1H)-он вместе с подходящим агентом амидного сочетания, таким как PYBOP, в подходящем растворителе, таком как DMSO, с получением целевого амида. На стадии 9, арильные группы, соответствующие R6, могут быть введены в реакции по Судзуки промежуточного бромида с соответствующей арилбороновой кислотой или сложноэфирным производным, например, X-Ar-B(OH)2, в присутствии слабого основания и палладиевого катализатора в полярном растворителе, таком как диоксан/вода, при повышенной температуре. Группа X в X-Ar-B(OH)2 может представлять собой окончательный заместитель на арильном кольце или может представлять собой функциональную группу, которая может быть преобразована в другую группу путем модификации функциональной группы. Типичный пример таких модификаций может включать в себя гидрирование, удаление защитной группы с последующим проведением дополнительных реакций амидного сочетания, катализируемые палладием реакции сочетания, реакции восстановительного аминирования или реакции алкилирования. Например, если реакцию по Судзуки проводят с производным бороновой кислоты, содержащим формильную группу, то для введения аминогрупп может быть проведена дополнительная модификация в реакции восстановительного аминирования первичными и вторичными аминами (например, морфолин, диметиламин). В зависимости от природы заместителя R7, для преобразования заместителя R7 в альтернативный заместитель R7 могут быть использованы стадии дальнейших химических модификаций. Например, защищенная аминогруппа, которая заключена в состав R7, может подвергаться реакции снятия защитных групп (например, снятие Boc-группы) с получением свободных аминогрупп. Такие свободные аминогруппы могут подвергаться реакциям восстановительного аминирования или реакциям алкилирования с получением замещенных аминов.
Схема 9
Figure 00000066
На схеме 9 представлен синтез модифицированных арильных аналогов в соответствии с общим путем, в котором используют общепринятые методы химии. Нитроаналог может быть получен, начиная с замещенной бензойной кислоты, такой как 5-хлор-2-метилбензойная кислота, с использованием нитрования в стандартных условиях, таких как обработка конц. H2SO4 и конц. HNO3. Этерификация кислоты может достигаться посредством применения алкилирующего агента, такого как метилйодид, в присутствии основания, такого как карбонат натрия, в полярном растворителе, таком как DMF. Нитрогруппа может быть восстановлена с использованием таких условий, как железо и хлорид аммония в протонном растворителе, таком как этанол, с нагреванием, например, до температуры 80°C. Полученный анилин может быть преобразован в бромид с использованием реакции Сандмейера, например, путем обработки CuBr2 и трет-бутилнитритом в растворителе, таком как ацетонитрил. Катализируемая палладием реакция сочетания тиола с бромидом может проводиться с использованием источника палладия, такого как Pd(OAc)2, с лигандом, таким как Xanthphos, в присутствии основания, такого как N,N-диизопропилэтиламин, в растворителе, таком как 1,4-диоксан, с необязательным нагреванием, например, до температуры 100°C. Сложный эфир может быть гидролизован водным основанием, таким как NaOH в воде. Полученная кислота может быть сочетана с 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-онами в стандартных условиях сочетания аминокислот, например, PyBOP в DMSO. Полученный тиоэфир может быть окислен до соответствующего сульфоксида или сульфона с использованием соответствующих эквивалентов окислителей, таких как mCPBA, в растворителе, таком как DCM. Арильные заместители могут быть введены с использованием сочетания с использования палладия, например, в реакции по Судзуки, как описано выше.
Схема 10
Figure 00000067
На схеме 10 отражен синтез модифицированных арильных аналогов в соответствии с общим путем, в котором используют общепринятые методы химии. Начиная с замещенного анилина, такого как метил-3-амино-5-хлор-2-метилбензoат, анилин может быть преобразован в фенол в реакции Сандмейера, например, путем обработки водным раствором NaNO2 в водной кислоте, такой как 50% H2SO4. Фенол может быть алкилирован с использованием алкилирующего агента, такого как тетрагидро-2H-пиран-4-ил-4-метилбензолсульфонат, в присутствии подходящего основания, такого как карбонат цезия, в полярном растворителе, таком как DMF, с необязательным нагреванием, например, до температуры 80°C. Сложный эфир может быть гидролизован водным основанием, таким как NaOH в воде. Полученная кислота может быть сочетана с 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-оном в стандартных условиях сочетания аминокислот, например, PyBOP в DMSO. Арильные заместители могут быть введены с использованием сочетания с использования палладия, например, в реакции по Судзуки, как описано выше.
3. Способы лечения
Соединения согласно настоящему изобретению ингибируют гистонметилтрансферазную активность EZH2 или ее мутанта, и, соответственно, настоящее изобретение также относится к способам лечения состояний и заболеваний, на течение которых может влиять модулирование статуса метилирования гистонов или иных белков, причем указанный статус метилирования, по меньшей мере, частично опосредован активностью EZH2. Согласно одному аспекту изобретения, некоторые раскрытые в настоящем документе соединения являются кандидатами для лечения или профилактики определенных состояний и заболеваний. Модулирование статуса метилирования гистонов, в свою очередь, способно влиять на уровень экспрессии целевых генов, активируемых метилированием, и/или целевых генов, супрессируемых метилированием. Способ включает в себя введение нуждающемуся в таком лечении субъекту терапевтически эффективного количества соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа, сольвата или стереоизомера.
Нарушение, в развитии которого играет роль EZH2-опосредованное метилирование белков, может представлять собой рак или преканцерозное состояние. Настоящее изобретение дополнительно относится к использованию соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата для лечения рака или предрака, на течение которых может влиять модулирование EZH2-опосредованного метилирования белков, либо для приготовления лекарственного препарата, применимого для лечения такой рака или предрака. Типичные виды рака, которые могут быть подвергнуты лечению, включают в себя лимфомы, включая неходжкинскую лимфому, фолликулярную лимфому (FL) и диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому (DLBCL); меланому; и лейкоз, включая CML. Типичное преканцерозное состояние включает в себя миелодиспластический синдром (MDS; ранее известный как предлейкоз).
Настоящее изобретение также относится к способам защиты от заболеваний, в развитии которых играет роль EZH2-опосредованное метилирование белков, у нуждающегося в этом субъекта путем введения нуждающемуся в таком лечении субъекту терапевтически эффективного количества соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата. Заболевание может представлять собой рак, например, рак, в развитии которого играет роль EZH2-опосредованное метилирование белков. Настоящее изобретение также относится к использованию соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира, пролекарства, метаболита, полиморфа, сольвата или стереоизомера для приготовления лекарственного препарата, применимого для профилактики клеточного пролиферативного нарушения, по меньшей мере, частично ассоциированного с EZH2-опосредованным метилированием белков.
Соединения согласно настоящему изобретению могли бы или могут быть использованы для модулирования метилирования белков (например, гистонов), например, для модулирования гистонметилтрансферазной или гистондеметилазной ферментативной активности. По меньшей мере, некоторые соединения согласно изобретению могут быть применены in vivo или in vitro для модулирования метилирования белков. Сообщалось, что метилирование гистонов вовлечено в аномальную экспрессию некоторых генов в видах рака и в сайленсинг нейрональных генов в отличных от нейронов клетках. По меньшей мере, некоторые раскрытые в настоящем документе соединения являются кандидатами для лечения указанных заболеваний, т.е. для ослабления метилирования или восстановления метилирования приблизительно до его уровня в соответствующих нормальных клетках.
Соединения, являющиеся модуляторами метилирования, могли бы или могут быть использованы для модулирования клеточной пролиферации. Например, в некоторых случаях избыточная пролиферация может быть ослаблена средствами, ослабляющими метилирование, тогда как недостаточная пролиферация может быть простимулирована средствами, усиливающими метилирование. Соответственно, заболевания, которые могут подвергаться лечению соединениями согласно изобретению, могут включать в себя гиперпролиферативные заболевания, такие как доброкачественные новообразования и злокачественные новообразования.
Используемый в настоящем документе термин «нуждающийся в этом субъект» относится к субъекту, страдающему нарушением, в развитии которого играет роль EZH2-опосредованное метилирование белков, или к субъекту, характеризующемуся повышенным риском развития такого нарушения относительно популяции в целом. Нуждающийся в этом субъект может страдать преканцерозным состоянием. Предпочтительно, нуждающийся в этом субъект страдает раком. Термин «субъект» включает в себя млекопитающее. Млекопитающее может представлять собой, например, человека или подходящее отличное от человека млекопитающее, такое как примат, мышь, крыса, собака, кошка, корова, лошадь, коза, верблюд, овца или свинья. Субъект также может представлять собой птицу или домашнюю птицу. Согласно одному варианту осуществления, млекопитающее представляет собой человека.
Используемый в настоящем документе термин «клеточное пролиферативное нарушение» относится к состояниям, при которых нерегулируемый или аномальный рост клеток, или оба вида роста, могут приводить к развитию нежелательного состояния или заболевания, которое может быть или не быть злокачественным. Типичные клеточные пролиферативные нарушения, которые могут подвергаться лечению соединениями согласно настоящему изобретению, охватывают целый ряд состояний, при которых клеточное деление является разрегулированным. Типичное клеточное пролиферативное нарушение включает в себя без ограничения неоплазмы, доброкачественные опухоли, злокачественные опухоли, преканцерозные состояния, опухоли in situ, инкапсулированные опухоли, метастатические опухоли, жидкие опухоли, солидные опухоли, опухоли иммунной системы, опухоли системы крови, рак, карциномы, лейкозы, лимфомы, саркомы и быстро делящиеся клетки. Используемый в настоящем документе термин «быстро делящаяся клетка» определяется как любая клетка, которая делится со скоростью, превышающей или большей ожидаемой или наблюдаемой среди соседних или близлежащих клеток в пределах той же ткани. Клеточное пролиферативное нарушение включает в себя предрак или преканцерозное состояние. Клеточное пролиферативное нарушение включает в себя рак. Способы и применения, представленные в настоящем документе, могут быть или могли бы быть использованы для лечения или облегчения симптома рака или для определения подходящих кандидатов для таких целей. Термин «рак» включает в себя солидные опухоли, а также опухоли системы крови и/или злокачественные новообразования. Термины «предраковая клетка» или «преканцерозная клетка» представляют собой клетку, манифестирующую клеточное пролиферативное нарушение, которое представляет собой предрак или преканцерозное состояние. Термины «раковая клетка» или «канцерозная клетка» представляют собой клетку, манифестирующую клеточное пролиферативное нарушение, которое представляет собой рак. Для идентификации раковых клеток или преканцерозных клеток могут быть использованы любые воспроизводимые методы. Раковые клетки или преканцерозные клетки могут быть определены путем гистологического типирования или сортировки образца ткани (например, биопсийного образца). Раковые клетки или преканцерозные клетки могут быть идентифицированы посредством использования соответствующих молекулярных маркеров.
Типичные не относящие к опухолям состояния или нарушения, которые могут подвергаться лечению с использованием одного или нескольких соединений согласно настоящему изобретению, включают в себя без ограничения ревматоидный артрит; воспаление; аутоиммунное заболевание; лимфопролиферативные состояния; акромегалию; ревматоидный спондилит; остеоартрит; подагру после артритических состояний; сепсис; септический шок; эндотоксический шок; грамотрицательный сепсис; синдром токсического шока; бронхиальную астму; респираторный дистресс-синдром взрослых; хроническую обструктивную болезнь легких; хроническое легочное воспаление; воспалительное заболевание кишечника; болезнь Крона; псориаз; экзему; язвенный колит; панкреатический фиброз; фиброз печени; острое и хроническое почечное заболевание; синдром раздраженного кишечника; лихорадку; рестеноз; церебральную малярию; инсульт и ишемическое повреждение; невральную травму; болезнь Альцгеймера; болезнь Гентингтона; болезнь Паркинсона; острую и хроническую боль; аллергический ринит; аллергический конъюнктивит; хроническую сердечную недостаточность; острый коронарный синдром; кахексию; малярию; лепру; лейшманиоз; болезнь Лайма; синдром Рейтера; острый синовит; мышечную дегенерацию; бурсит; тендинит; теносиновит; синдром грыжевого, оскольчатого или пролабирующего межпозвоночного диска; остеопетроз; тромбоз; рестеноз; силикоз; легочный саркоз; нарушения резорбции костной ткани, такие как остеопороз; реакцию трансплантат против хозяина; рассеянный склероз; волчанку; фибромиалгию; СПИД и другие вирусные инфекции, такие как Herpes Zoster, Herpes Simplex I или II, вирус гриппа и цитомегаловирус; и сахарный диабет.
Типичные виды рака, которые могут подвергаться лечению с использованием одного или нескольких соединений согласно настоящему изобретению, включают в себя без ограничения адренокортикальную карциному, СПИД-ассоциированные виды рака, СПИД-ассоциированную лимфому, рак ануса, аноректальный рак, рак анального канала, рак аппендикса, астроцитому мозжечка детского возраста, церебральную астроцитому детского возраста, базальноклеточную карциному, рак кожи (немеланомную), билиарный рак, рак внепеченочных желчевыводящих путей, рак внутрипеченочных желчевыводящих путей, рак желчного пузыря, рак мочевого пузыря, рак костей и суставов, остеосаркому и злокачественную фиброзную гистиоцитому, рак головного мозга, опухоль головного мозга, глиому ствола головного мозга, астроцитому мозжечка, церебральную астроцитому/злокачественную глиому, эпендимому, медуллобластому, супратенториальные примитивные нейроэктодермальные опухоли, глиому зрительного пути и гипоталамуса, рак молочной железы, бронхиальные аденомы/карциноиды, карциноидную опухоль, рак желудочно-кишечного тракта, рак нервной системы, лимфому нервной системы, рак центральной нервной системы, лимфому центральной нервной системы, рак шейки матки, виды рака детского возраста, хронический лимфолейкоз, хронический миелогенный лейкоз, хронические миелопролиферативные нарушения, рак толстой кишки, колоректальный рак, кожную Т-клеточную лимфому, лимфосаркому, грибовидный микоз, синдром Сезари, рак эндометрия, рак пищевода, экстракраниальную эмбрионально-клеточную опухоль, внегонадную эмбрионально-клеточную опухоль, рак внепеченочных желчевыводящих путей, рак глаза, интраокулярную меланому, ретинобластому, рак желчного пузыря, рак желудка, карциноидную опухоль желудочно-кишечного тракта, стромальную опухоль желудочно-кишечного тракта (GIST), эмбрионально-клеточную опухоль, эмбрионально-клеточную опухоль яичника, гестационную трофобластическую глиому, рак головы и шеи, гепатоцеллюлярный (печеночный) рак, лимфому Ходжкина, гипофарингеальный рак, интраокулярную меланому, рак глаза, опухоли островков поджелудочной железы (эндокринной части поджелудочной железы), саркому Капоши, рак почки, ренальный рак, рак почки, рак гортани, острый лимфобластный лейкоз, острый миелолейкоз, хронический лимфолейкоз, хронический миелогенный лейкоз, волосато-клеточный лейкоз, рак губы и ротовой полости, рак печени, рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточный рак легкого, СПИД-ассоциированную лимфому, неходжкинскую лимфому, первичную лимфому центральной нервной системы, макроглобулинемию Вальденстрема, медуллобластому, меланому, интраокулярную (глазную) меланому, карциному из клеток Меркеля, злокачественную мезотелиому, мезотелиому, метастатический сквамозный рак шеи, рак ротовой полости, рак языка, синдром множественной эндокринной неоплазии, грибовидный микоз, миелодиспластический синдром, миелодиспластические/миелопролиферативные заболевания, хронический миелогенный лейкоз, острый миелолейкоз, множественную миелому, хронические миелопролиферативные нарушения, назофарингеальный рак, нейробластому, рак рта, рак ротовой полости, орофарингеальный рак, рак яичника, эпителиальный рак яичника, пограничную опухоль яичника, рак поджелудочной железы, рак островков поджелудочной железы, рак околоносовой пазухи и носовой полости, рак паращитовидной железы, рак полового члена, фарингеальный рак, феохромацитому, пинеобластому и супратенториальные примитивные нейроэктодермальные опухоли, опухоль гипофиза, плазмаклеточную неоплазму/множественную миелому, плевролегочную бластому, рак предстательной железы, рак прямой кишки, рак почечной лоханки и мочеточника, переходно-клеточный рак, ретинобластому, рабдомиосаркому, рак слюнной железы, семейство сарком Юинга, Саркому Капоши, саркому мягких тканей, рак матки, саркому матки, рак кожи (немеланомный), рак кожи (меланомный), кожную карциному из клеток Меркеля, рак тонкого кишечника, саркому мягких тканей, сквамозно-клеточную карциному, рак желудка, супратенториальные примитивные нейроэктодермальные опухоли, рак яичка, рак гортани, тимому, тимому и карциному тимуса, рак щитовидной железы, переходно-клеточный рак почечной лоханки и мочеточника и других органов мочевыводящей системы, гестационную трофобластическую опухоль, рак уретры, эндометриальный рак матки, саркому матки, рак тела матки, вагинальный рак, рак наружных половых органов и опухоль Вильма.
Термин «клеточное пролиферативное нарушение системы крови» представляет собой клеточное пролиферативное нарушение, вовлекающее клетки системы крови. Клеточное пролиферативное нарушение системы крови может включать в себя лимфому, лейкоз, миелоидные неоплазмы, неоплазмы тучных клеток, миелодисплазию, доброкачественную моноклональную гаммапатию, лимфогранулематоз, лимфатоидный папулез, истинную полицитемию, хронический миелолейкоз, агногенную миелоидную метаплазию и идиопатическую тромбоцитемию. Клеточное пролиферативное нарушение системы крови может включать в себя гиперплазию, дисплазию и метаплазию клеток системы крови. Согласно одному аспекту, композиции согласно настоящему изобретению могут быть использованы для лечения рака, выбранного из группы, состоящей из рака системы крови согласно настоящему изобретению или клеточного пролиферативного нарушения системы крови согласно настоящему изобретению, или могут быть использованы для определения подходящих кандидатов для таких целей. Рак системы крови согласно настоящему изобретению может включать в себя множественную миелому, лимфому (включая ходжкинскую лимфому, неходжкинскую лимфому, лимфомы детского возраста и лимфомы лимфоцитарного и кожного происхождения), лейкоз (включая лейкоз детского возраста, волосато-клеточный лейкоз, острый лимфолейкоз, острый миелолейкоз, хронический лимфолейкоз, хронический миелолейкоз, хронический миелогенный лейкоз и тучноклеточный лейкоз), миелоидные неоплазмы и тучноклеточные неоплазмы.
Термин «клеточное пролиферативное нарушение легкого» представляет собой клеточное пролиферативное нарушение, вовлекающее клетки легкого. Клеточные пролиферативные нарушения легкого могут включать в себя все формы клеточных пролиферативных нарушений, поражащих клетки легкого. Клеточные пролиферативные нарушения легкого могут включать в себя рак легкого, предрак или преканцерозное состояние легкого, доброкачественные новообразования или патологические изменения легкого и злокачественные новообразования или патологические изменения легкого, и метастатические патологические изменения в тканях и органах организма, отличных от легкого. Согласно одному аспекту, композиции согласно настоящему изобретению могут быть использованы для лечения рака легкого или клеточных пролиферативных нарушений легкого, или могут быть использованы для определения подходящих кандидатов для таких целей. Рак легкого может включать в себя все формы рака легкого. Рак легкого может включать в себя злокачественные неоплазмы легкого, карциному in situ, типичные карциноидные опухоли и атипичные карциноидные опухоли. Рак легкого может включать в себя мелкоклеточный рак легкого (SCLC), немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), сквамозно-клеточную карциному, аденокарциному, мелкоклеточную карциному, крупноклеточную карциному, аденосквамозную клеточную карциному и мезотелиому. Рак легкого может включать в себя рубцовую карциному, бронхиоальвеолярную карциному, гигантоклеточную карциному, веретеноклеточную карциному и крупноклеточную нейроэндокринную карциному. Рак легкого может включать в себя неоплазмы легкого, обладающие гистологической и ультраструктурной гетерогенностью (например, смешанные типы клеток).
Клеточные пролиферативные нарушения легкого могут включать в себя все формы клеточных пролиферативных нарушений, поражащих клетки легкого. Клеточные пролиферативные нарушения легкого могут включать в себя рак легкого, преканцерозные состояния легкого. Клеточные пролиферативные нарушения легкого могут включать в себя гиперплазию, метаплазию и дисплазию легкого. Клеточные пролиферативные нарушения легкого могут включать в себя индуцированную асбестом гиперплазию, сквамозную метаплазию и доброкачественную реактивную мезотелиальную метаплазию. Клеточные пролиферативные нарушения легкого могут включать в себя замещение цилиндрического эпителия многослойным плоским эпителием и дисплазию слизистой. Индивидуумы, подвергающиеся вдыханию вредных веществ окружающей среды, таких как сигаретный дым и асбест, могут иметь повышенный риск развития клеточных пролиферативных заболеваний легкого. Первичные легочные заболевания, которые могут предрасполагать индивидуумов к развитию клеточных пролиферативных нарушений легкого, могут включать в себя хроническую интерстициальную болезнь легкого, некротическую легочную болезнь, склеродермию, ревматоидное заболевание, саркоидоз, интерстициальный пневмонит, туберкулез, рецидивирующие пневмонии, идиопатический легочный фиброз, грануломатоз, асбестоз, фиброзирующий альвеолит и болезнь Ходжкина.
Термин «клеточное пролиферативное нарушение толстого кишечника» представляет собой пролиферативное нарушение, вовлекающее клетки толстого кишечника. Предпочтительно, клеточное пролиферативное заболевание толстого кишечника представляет собой рак толстого кишечника. Согласно одному аспекту, композиции согласно настоящему изобретению могут быть использованы для лечения рака толстого кишечника или клеточного пролиферативного заболевания толстого кишечника, или могут быть использованы для определения подходящих кандидатов для таких целей. Рак толстого кишечника может включать в себя все формы рака толстого кишечника. Рак толстого кишечника может включать в себя спорадический и наследственный рак толстого кишечника. Рак толстого кишечника может включать в себя злокачественные неоплазмы толстого кишечника, карциному in situ, типичные карциноидные опухоли и атипичные карциноидные опухоли. Рак толстого кишечника может включать в себя аденокарциному, сквамозно-клеточную карциному и аденосквамозную клеточную карциному. Рак толстого кишечника может быть ассоциирован с наследственным синдромом, выбранным из группы, состоящей из наследственного неполипозного колоректального рака, семейного аденоматозного полипоза, синдрома Гарднера, синдрома Пейтца-Егерса, синдрома Турко и ювенильного полипоза. Рак толстого кишечника может быть вызван наследственным синдромом, выбранным из группы, состоящей из наследственного неполипозного колоректального рака, семейного аденоматозного полипоза, синдрома Гарднера, синдрома Пейтца-Егерса, синдрома Турко и ювенильного полипоза.
«Клеточные пролиферативные нарушения толстой кишки» могут включать в себя все формы клеточных пролиферативных нарушений, поражающих клетки толстой кишки. Клеточные пролиферативные нарушения толстой кишки могут включать в себя рак толстой кишки, преканцерозные состояния толстой кишки, аденоматозные полипы толстой кишки и метахронные патологические изменения толстой кишки. Клеточное пролиферативное нарушение толстой кишки может включать в себя аденому. Клеточные пролиферативные нарушения толстой кишки могут характеризоваться гиперплазией, метаплазией и дисплазией толстой кишки. Первичные заболевания толстой кишки, которые могут предрасполагать индивидуумов к развитию клеточных пролиферативных нарушений толстой кишки, могут включать в себя первичный рак толстой кишки. Текущее заболевание, которое может предрасполагать индивидуумов к развитию клеточных пролиферативных нарушений толстой кишки, может включать в себя болезнь Крона и неспецифический язвенный колит. Клеточное пролиферативное нарушение толстой кишки может быть ассоциировано с мутацией гена, выбранного из группы, состоящей из p53, ras, FAP и DCC. Индивидуум может обладать повышенным риском развития клеточного пролиферативного нарушения толстой кишки вследствие наличия мутации гена, выбранного из группы, состоящей из p53, ras, FAP и DCC.
«Клеточное пролиферативное нарушение поджелудочной железы» представляет собой клеточное пролиферативное нарушение, вовлекающее клетки поджелудочной железы. Клеточные пролиферативные нарушения поджелудочной железы могут включать в себя все формы клеточных пролиферативных нарушений, поражающих клетки поджелудочной железы. Клеточные пролиферативные нарушения поджелудочной железы могут включать в себя рак поджелудочной железы, предрак или преканцерозное состояние поджелудочной железы, гиперплазию поджелудочной железы и дисплазию поджелудочной железы, доброкачественные новообразования или патологические изменения поджелудочной железы и злокачественные новообразования или патологические изменения поджелудочной железы, и метастатические патологические изменения в тканях и органах тела, отличных от поджелудочной железы. Рак поджелудочной железы включает в себя все формы рака поджелудочной железы. Рак поджелудочной железы может включать в себя протоковую аденокарциному, аденосквамозную клеточную карциному, плеоморфную гигантоклеточную карциному, муцинозную аденокарциному, остеокластоподобную гигантоклеточную карциному, муцинозную цистаденокарциному, ацинарно-клеточную аденокарциному, неклассифицированную крупноклеточную карциному, мелкоклеточную карциному, панкреабластому, папиллярную неоплазию, муцинозную цистаденому, папиллярную кистозную неоплазию и серозную цистаденому. Рак поджелудочной железы может также включать в себя неоплазмы поджелудочной железы, характеризующиеся гистологической и ультраструктурной гетерогенностью (например, смешанные типы клеток).
«Клеточное пролиферативное нарушение предстательной железы» представляет собой клеточное пролиферативное нарушение, вовлекающее клетки предстательной железы. Клеточные пролиферативные нарушения предстательной железы могут включать в себя все формы клеточных пролиферативных нарушений, поражающих клетки предстательной железы. Клеточные пролиферативные нарушения предстательной железы могут включать в себя рак предстательной железы, предрак или преканцерозное состояние предстательной железы, доброкачественные новообразования или патологические изменения предстательной железы и злокачественные новообразования или патологические изменения предстательной железы, и метастатические патологические изменения в тканях и органах тела, отличных от предстательной железы. Клеточные пролиферативные нарушения предстательной железы могут включать в себя гиперплазию, метаплазию и дисплазию предстательной железы.
«Клеточное пролиферативное нарушение кожи» представляет собой клеточное пролиферативное нарушение, вовлекающее клетки кожи. Клеточные пролиферативные нарушения кожи могут включать в себя все формы клеточных пролиферативных нарушений, поражающих клетки кожи. Клеточные пролиферативные нарушения кожи могут включать в себя предрак или преканцерозное состояние кожи, доброкачественные новообразования или патологические изменения кожи, меланому, злокачественную меланому и другие злокачественные новообразования или патологические изменения кожи, и метастатические патологические изменения в тканях и органах тела, отличных от кожи. Клеточные пролиферативные нарушения кожи могут включать в себя гиперплазию, метаплазию и дисплазию кожи.
«Клеточное пролиферативное нарушение яичника» представляет собой клеточное пролиферативное нарушение, вовлекающее клетки яичника. Клеточные пролиферативные нарушения яичника могут включать в себя все формы клеточных пролиферативных нарушений, поражающих клетки яичника. Клеточные пролиферативные нарушения яичника могут включать в себя предрак или преканцерозное состояние яичника, доброкачественные новообразования или патологические изменения яичника, рак яичника, злокачественные новообразования или патологические изменения яичника, и метастатические патологические изменения в тканях и органах тела, отличных от яичника. Клеточные пролиферативные нарушения кожи могут включать в себя гиперплазию, метаплазию и дисплазию клеток яичника.
«Клеточное пролиферативное нарушение молочной железы» представляет собой клеточное пролиферативное нарушение, вовлекающее клетки молочной железы. Клеточные пролиферативные нарушения молочной железы могут включать в себя все формы клеточных пролиферативных нарушений, поражающих клетки молочной железы. Клеточные пролиферативные нарушения молочной железы могут включать в себя рак молочной железы, предрак или преканцерозное состояние молочной железы, доброкачественные новообразования или патологические изменения молочной железы и злокачественные новообразования или патологические изменения молочной железы, и метастатические патологические изменения в тканях и органах тела, отличных от молочной железы. Клеточные пролиферативные нарушения молочной железы могут включать в себя гиперплазию, метаплазию и дисплазию молочной железы.
Клеточное пролиферативное нарушение молочной железы может включать в себя преканцерозное состояние молочной железы. Композиции согласно настоящему изобретению могут применяться для лечения преканцерозного состояния молочной железы. Преканцерозное состояние молочной железы может включать в себя атипичную гиперплазию молочной железы, протоковую карциному in situ (DCIS), интрадуктальную карциному, лобулярную карциному in situ (LCIS), лобулярную неоплазию и новообразование или патологическое изменение молочной железы стадии 0 или степени 0 (например, рак молочной железы стадии 0 или степени 0 или карциному in situ). Преканцерозное состояние молочной железы может быть разделено на стадии в соответствии со классификационной схемой TNM, принятой Американским объединенным онкологическим комитетом (AJCC), где первичной опухоли (T) присваивают стадию Т0 или Tis; и где регионарным лимфатическим узлам (N) присваивают стадию N0; и где отдаленным метастазам (М) присваивают стадию M0.
Клеточное пролиферативное нарушение молочной железы может представлять собой рак молочной железы. Согласно одному аспекту, композиции согласно настоящему изобретению могут быть использованы для лечения рака молочной железы или могут быть использованы для определения подходящих кандидатов для таких целей. Рак молочной железы может включать в себя все формы рака молочной железы. Рак молочной железы может включать в себя первичные эпителиальные виды рака молочной железы. Рак молочной железы может включать в себя виды рака, в которые молочная железа вовлечена другими опухолями, такими как лимфома, саркома или меланома. Рак молочной железы может включать в себя карциному молочной железы, протоковую карциному молочной железы, лобулярную карциному молочной железы, недифференцированную карциному молочной железы, листовидную цистосаркому молочной железы, ангиосаркому молочной железы и первичную лимфому молочной железы. Рак молочной железы может включать в себя виды рака молочной железы I, II, IIIA, IIIB, IIIC и IV стадий. Протоковая карцинома молочной железы может включать в себя инвазивную карциному, инвазивную карциному in situ с преимущественной интрадуктальной карциномой, отечно-инфильтрационный рак молочной железы и протоковую карциному молочной железы с гистологическим типом, выбранным из группы, состоящей из угревидного, муцинозного (коллоидного), медуллярного, медуллярного с лимфоцитарным инфильтратом, папиллярного, скиррозного и тубулярного. Лобулярная карцинома молочной железы может включать в себя инвазивную лобулярную карциному с преимущественным компонентом in situ, инвазивную лобулярную карциному и инфильтративную лобулярную карциному. Рак молочной железы может включать в себя болезнь Паджета, болезнь Паджета с интрадуктальной карциномой и болезнь Паджета с инвазивной протоковой карциномой. Рак молочной железы может включать в себя неоплазмы молочной железы, обладающие гистологической и ультраструктурной гетерогенностью (например, смешанные типы клеток).
Соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват могут быть использованы для терапии рака молочной железы или могут быть использованы для определения подходящих кандидатов для таких целей. Подлежащий лечению рак молочной железы может включать в себя семейный рак молочной железы. Подлежащий лечению рак молочной железы может включать в себя спорадический рак молочной железы. Подлежащий лечению рак молочной железы может возникать у субъекта мужского пола. Подлежащий лечению рак молочной железы может возникать у субъекта женского пола. Подлежащий лечению рак молочной железы может возникать у субъекта женского пола в предклимактерическом периоде или у субъекта женского пола в постклимактерическом периоде. Подлежащий лечению рак молочной железы может возникать у субъекта в возрасте 30 лет или старше, или у субъекта в возрасте до 30 лет. Подлежащий лечению рак молочной железы может возникать у субъекта в возрасте 50 лет или старше, или у субъекта в возрасте до 50 лет. Подлежащий лечению рак молочной железы может возникать у субъекта в возрасте 70 лет или старше, или у субъекта в возрасте до 70 лет.
Подлежащий лечению рак молочной железы может быть типирован с целью идентификации семейной или спорадической мутации в генах BRCA1, BRCA2 или p53. Подлежащий лечению рак молочной железы может быть типирован как характеризующийся амплификацией гена HER2/neu, как сверхэкспрессирующая HER2/neu, или как обладающая низким, средним или высоким уровнем экспрессии HER2/neu. Подлежащий лечению рак молочной железы может быть типирован по маркеру, выбранному из группы, состоящей из эстрогенового рецептора (ER), прогестеронового рецептора (PR), рецептора к человеческому эпидермальному фактору роста 2, Ki-67, CA 15-3, CA 27-29 и c-Met. Подлежащий лечению рак молочной железы может быть типирован как характеризующийся неизвестной экспрессией ER, высокой экспрессией ER или слабой экспрессией ER. Подлежащий лечению рак молочной железы может быть типирован как ER-отрицательный или ER-положительный. Типирование рака молочной железы по ER может быть проведено любым воспроизводимым способом. Типирование рака молочной железы по ER может быть проведено, как изложено в Onkologie 27: 175-179 (2004). Подлежащий лечению рак молочной железы может быть типирован как характеризующийся неизвестной экспрессией PR, высокой экспрессией PR или слабой экспрессией PR. Подлежащий лечению рак молочной железы может быть типирован как PR-отрицательный или PR-положительный. Подлежащий лечению рак молочной железы может быть типирован как рецептор-отрицательный или рецептор-положительный. Подлежащий лечению рак молочной железы может быть типирована как ассоциированный с повышенной концентрацией CA 15-3, CA 27-29, или и того и другого, в крови.
Подлежащий лечению рак молочной железы может включать в себя локализованную опухоль молочной железы. Подлежащий лечению рак молочной железы может включать в себя опухоль молочной железы, ассоциированную с отрицательной биопсией сигнального лимфатического узла (SLN). Подлежащий лечению рак молочной железы может включать в себя опухоль молочной железы, ассоциированную с положительной биопсией сигнального лимфатического узла (SLN). Подлежащий лечению рак молочной железы может включать в себя опухоль молочной железы, ассоциированную с одним или более положительных подмышечных лимфатических узлов, где стадия подмышечных лимфатических узлов была определена любым применимым способом. Подлежащий лечению рак молочной железы может включать в себя опухоль молочной железы, типированную как характеризующуюся отрицательным статусом лимфатических узлов (например, без поражения узлов) или положительным статусом лимфатических узлов (например, с поражением узлов). Подлежащий лечению рак молочной железы может включать в себя опухоль молочной железы, которая метастазировала в другие части тела. Подлежащий лечению рак молочной железы может включать в себя опухоль молочной железы, которая метастазировала в часть тела, выбранную из группы, состоящей из кости, легкого, печени или головного мозга. Подлежащий лечению рак молочной железы может быть классифицирован в соответствии с характеристикой, выбранной из группы, состоящей из метастатической, локализованной, регионарной, местно-регионарной, местно-распространенной, отдаленной, мультицентрической, двусторонней, ипсилатеральной, контралатеральной, выявленной впервые, рецидивирующей и неоперабельной.
Соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, сложный эфир, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват могут быть использованы для лечения или профилатики клеточного пролиферативного заболевания молочной железы или для лечения или профилатики рака молочной железы у субъекта, характеризующегося повышенным риском развития рака молочной железы относительно популяции в целом, либо использованы для идентификации подходящих кандидатов для таких целей. Субъект с повышенным риском развития рака молочной железы относительно популяции в целом представляет собой субъекта-женщину с семейным анамнезом или личным анамнезом рака молочной железы. Субъект с повышенным риском развития рака молочной железы относительно популяции в целом представляет собой субъекта-женщину, содержащую герминативную или спонтанную мутацию в BRCA1 или BRCA2, или и то и другое. Субъект с повышенным риском развития рака молочной железы относительно популяции в целом представляет собой субъекта-женщину с семейным анамнезом рака молочной железы и герминативной или спонтанной мутацией в BRCA1 или BRCA2, или и тем и другим. Субъект с повышенным риском развития рака молочной железы относительно популяции в целом представляет собой женщину старше 30 лет, старше 40 лет, старше 50 лет, старше 60 лет, старше 70 лет, старше 80 лет или старше 90 лет. Субъект с повышенным риском развития рака молочной железы относительно популяции в целом представляет собой субъекта с атипичной гиперплазией молочной железы, протоковой карциномой in situ (DCIS), внутрипротоковой карциномой, лобулярной карциномой in situ (LCIS), лобулярной неоплазией или новообразованием стадии 0 или повреждением молочной железы (например, рак молочной железы стадии 0 или степени 0, или карцинома in situ).
Подлежащий лечению рак молочной железы может быть гистологически дифференцирован в соответствии с системой Скарфа-Блума-Ричардсона, согласно которой опухоли молочной железы присваивают оценку митотического индекса 1, 2 или 3; оценку ядерного плейоморфизма 1, 2 или 3; оценку образования микротрубочек 1, 2 или 3; и общую оценку Скарфа-Блума-Ричардсона от 3 до 9. Подлежащему лечению раку молочной железы может быть присвоена степень опухоли согласно рекомендациям Международной согласительной комиссии по лечению рака молочной железы, выбранная из группы, состоящей из степени 1, степени 1-2, степени 2, степени 2-3 или степени 3.
Стадия подлежащего лечению рака может быть дифференцирована в соответствии с системой классификации TNM Американского объединенного комитета по видам рака (AJCC), согласно которой опухоли (T) присваивают степень TX, T1, T1mic, T1a, T1b, T1c, T2, T3, T4, T4a, T4b, T4c или T4d; и согласно которой регионарным лимфатическим узлам (N) присваивают степень NX, N0, N1, N2, N2a, N2b, N3, N3a, N3b или N3c; и согласно которой отдаленным метастазам (M) может быть присвоена степень MX, M0 или M1. Стадия подлежащего лечению рака может быть дифференцирована в соответствии с классификацией Американского объединенного комитета по видам рака (AJCC) как стадия I, стадия IIA, стадия IIB, стадия IIIA, стадия IIIB, стадия IIIC или стадия IV. Стадия подлежащего лечению рака может быть дифференцирована в соответствии с классификацией AJCC как стадия GX (например, стадия не может быть установлена), стадия 1, стадия 2, стадия 3 или стадия 4. Стадия подлежащего лечению рака может быть дифференцирована в соответствии с патологической классификацией AJCC (pN) как pNX, pN0, PN0 (I-), PN0 (I+), PN0 (mol-), PN0 (mol+), PN1, PN1(mi), PN1a, PN1b, PN1c, pN2, pN2a, pN2b, pN3, pN3a, pN3b или pN3c.
Подлежащий лечению рак может включать в себя опухоль, которая определена как характеризующаяся диаметром, меньшим или равным приблизительно 2 сантиметрам. Подлежащий лечению рак может включать в себя опухоль, которая определена как характеризующаяся диаметром, равным от приблизительно 2 до приблизительно 5 сантиметров. Подлежащий лечению рак может включать в себя опухоль, которая определена как характеризующаяся диаметром, превышающим или равным приблизительно 3 сантиметрам. Подлежащий лечению рак может включать в себя опухоль, которая определена как характеризующаяся диаметром, превышающим приблизительно 5 сантиметров. Подлежащий лечению рак может быть классифицирован по данным микроскопического исследования как высокодифференцированный, умеренно дифференцированный, низкодифференцированный и недифференцированный. Подлежащий лечению рак может быть классифицирован по данным микроскопического исследования в зависимости от митотического индекса (например, количества событий клеточного деления) или ядерного плейоморфизма (например, изменения клеток). Подлежащий лечению рак может быть классифицирован по данным микроскопического исследования как ассоциированный с зонами некроза (например, зонами погибающих или дегенерирующих клеток). Подлежащий лечению рак может быть классифицирован как характеризующийся аномальным кариотипом, содержащий аномальное число хромосом или содержащий одну или несколько хромосом аномального вида. Подлежащий лечению рак может быть классифицирован как характеризующийся анеуплоидией, триплоидией, тетраплоидией или как характеризующийся измененной плоидностью. Подлежащий лечению рак может быть классифицирован как содержащий хромосомную транслокацию или делецию или удвоение целой хромосомы или зону делеции, удвоения или амплификации части хромосомы.
Подлежащий лечению рак может быть оценен методами ДНК-цитометрии, проточной цитометрии или отображающей цитометрии. Подлежащий лечению рак может быть типирован как содержащий 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90% клеток в синтетической стадии клеточного цикла (например, в S-фазе клеточного цикла). Подлежащий лечению рак может быть типирован как содержащий малую фракцию в S-фазе или большую фракцию в S-фазе.
Используемый в настоящем документе термин «нормальная клетка» относится к клетке, которая не может быть классифицирована как часть «клеточного пролиферативного нарушения». Нормальная клетка характеризуется отсутствием нерегулируемого или аномального роста, или и того и другого, которые могли бы привести к развитию нежелательного состояния или заболевания. Предпочтительно, нормальная клетка характеризуется нормально функционирующими контрольными механизмами контрольных точек клеточного цикла.
Используемый в настоящем документе термин «приведение в контакт с клеткой» относится к состоянию, при котором соединение или иная композиция приведены в непосредственный контакт с клеткой или находятся настолько близко, чтобы индуцировать в клетке желаемый биологический эффект.
Используемый в настоящем документе термин «соединение-кандидат» относится к соединению согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру, пролекарству, метаболиту, полиморфу или сольвату, которые протестированы или будут протестированы в одном или нескольких биологических методах анализа in vitro или in vivo в целях определения, вероятно ли индуцирование этим соединением желаемого биологического или медицинского ответа, искомого исследователем или врачом, в клетке, ткани, системе, животном или человеке. Соединение-кандидат представляет собой соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват. Биологический или медицинский ответ может заключаться в излечении от рака. Биологический или медицинский ответ может заключаться в излечении или профилактике клеточного пролиферативного нарушения. Биологический ответ или эффект также могут включать в себя изменение клеточной пролиферации или роста, наблюдаемого in vitro или на животной модели, равно как и иные биологические изменения, наблюдаемые in vitro. Биологические методы анализа in vitro или in vivo могут включать в себя без ограничения методы анализа ферментативной активности, методы анализа сдвига электрофоретической подвижности, методы анализа с использованием репортерных генов, методы анализа клеточной жизнеспособности in vitro и методы анализа, описанные в настоящем документе.
Используемый в настоящем документе термин «монотерапия» относится к введению нуждающегося в этом субъекта единственного активного или лекарственного соединения. Предпочтительно, монотерапия предусматривает введение терапевтически эффективного количества активного соединения. Например, монотерапия рака одним соединением согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой солью, пролекарством, метаболитом, аналогом или производным у нуждающегося в лечении рака субъекта. Монотерапия является противоположностью комбинированной терапии, при которой вводят комбинацию множества активных соединений, причем предпочтительно каждый компонент комбинации присутствует в терапевтически эффективном количестве. Монотерапия соединением согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой солью, пролекарством, метаболитом, полиморфом или сольватом может более эффективно вызывать желаемый биологический эффект, чем комбинированная терапия.
Используемые в настоящем документе термины «лечение» или «лечить» относятся к ведению и уходу за больным с целью борьбы с заболеванием, состоянием или нарушением и включают в себя введение соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата для облегчения симптомов или осложнений заболевания, состояния или нарушения либо для устранения заболевания, состояния или нарушения. Термин «лечить» также может включать в себя обработку клетки in vitro или животной модели.
Соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват могли бы или могут быть также использованы для профилактики релевантного заболевания, состояния или нарушения, или применены для идентификации подходящих кандидатов для таких целей. Используемые в настоящем документе термины «профилактика» или «предотвращать» относятся к сокращению или исключению манифестации симптомов или осложнений такого заболевания, состояния или нарушения.
Подразумевается, что используемый в настоящем документе термин «облегчать» описывает процесс уменьшения тяжести признака или симптома нарушения. Важным представляется то, что признак или симптом могут быть ослаблены, не будучи устранены совсем. Введение фармацевтических композиций согласно изобретению может или способно приводить к устранению признака или симптома, однако устранение необязательно. Следует ожидать, что эффективные дозы будут уменьшать тяжесть признака или симптома. Например, признак или симптом такого нарушения, как рак, который может развиться во множестве локализаций, облегчается, если тяжесть рака уменьшается, по меньшей мере, в одной из множества локализаций.
Подразумевается, что используемый в настоящем документе термин «тяжесть» описывает способность рака трансформироваться из преканцерозного, или доброкачественного, состояния в злокачественное состояние. В качестве альтернативы или в дополнение, подразумевается, что термин «тяжесть» описывает стадию рака, например, в соответствии с системой TNM (принятой Международным союзом по борьбе с видами рака (UICC) и Американским объединенным комитетом по видам рака (AJCC)) или в соответствии с иными принятыми в настоящей области техники методами. Стадия рака относится к степени или тяжести рака, зависящих от таких факторов, как локализация первичной опухоли, размер опухоли, количество опухолей, вовлечение лимфатических узлов (распространение рака в лимфатические узлы). В качестве альтернативы или в дополнение, подразумевается, что термин «тяжесть» описывает стадию опухоли, определенную в соответствии с принятыми в настоящей области техники методами (см. Национальный институт онкологии, www.cancer.gov). Дифференцирование опухолей по степеням представляет собой систему, используемую для классификации злокачественных клеток на основании того, насколько аномально они выглядят под микроскопом и насколько быстро опухоль, предположительно, будет расти и распространяться. При определении степени опухоли во внимание принимают множество факторов, включая структуру и профиль роста клеток. Специфические факторы, используемые для определения степени опухоли, варьируют в зависимости от конкретного типа рака. Термин «тяжесть» также описывает гистологическую степень, также называемую дифференцировкой, которая относится к тому, насколько опухолевые клетки напоминают нормальные клетки ткани того же типа (см. Национальный институт онкологии, www.cancer.gov). Кроме того, термин «тяжесть» описывает степень полиморфизма ядер, которая относится к размеру и форме ядер опухолевых клеток и проценту делящихся опухолевых клеток (см. Национальный институт онкологии, www.cancer.gov).
Термин «тяжесть» также может описывать степень, в которой опухоль секретировала факторы роста, разрушала межклеточный матрикс, васкуляризовывалась, теряла связь с прилежащими тканями или метастазировала. Более того, термин «тяжесть» может описывать количество локализаций, в которые метастазировала первичная опухоль. Наконец, тяжесть может включать в себя трудность лечения опухолей различных типов и локализаций. Например, наиболее тяжелыми считаются неоперабельные опухоли, виды рака, которые имеют больший доступ к множеству систем организма (опухоли системы крови и иммунной системы), и те, которые наиболее устойчивы к традиционным способам лечения. В этих ситуациях облегчением признака или симптома рака считаются увеличение прогнозируемого времени жизни субъекта и/или ослабление боли, уменьшение доли злокачественных клеток или ограничение локализации клеток одной системой и улучшение стадии рака/степени опухоли/гистологической степени/ядерной степени.
Используемый в настоящем документе термин «симптом» определяют как проявление заболевания, болезни, повреждения и того, что в организме что-то не в порядке. Симптомы ощущаются или замечаются лицом, у которого проявился симптом, но не могут быть легко замечены остальными. Остальных определяют как непрофессионалов в области здравоохранения.
Используемый в настоящем документе термин «признак» также определяют как проявление того, что в организме что-то не в порядке. Но признаки определяют как нечто, что может быть выявлено врачом, медицинской сестрой или иным профессионалом в области здравоохранения.
Рак представляет собой группу заболеваний, которые могут вызывать почти любой признак или симптом. Признаки и симптомы будут зависеть от локализации рака, размера рака, степени его влияния на соседние органы или структуры. При распространении рака (метастазировании) симптомы могут манифестировать в различных отделах организма.
По мере роста рака он начинает сдавливать соседние органы, кровеносные сосуды и нервы. Это сдавливание вызывает некоторые признаки и симптомы рака. Если рак локализован в жизненно важной области, такой как некоторые отделы головного мозга, то даже минимальная опухоль может вызвать проявление ранних симптомов.
Но иногда виды рака локализуются в таких местах, где они не вызывают никаких симптомов до тех пор, пока рак не вырастает весьма большой. Раки поджелудочной железы, например, обычно не вырастают достаточно большими, чтобы их можно было нащупать извне организма. Некоторые виды рака поджелудочной железы не вызывают симптомов, пока не начинают прорастать вокруг соседних нервов (это вызывает боль в спине). Другие прорастают вокруг желчного протока, что блокирует отток желчи и приводит к пожелтению кожи, известному как желтуха. К тому времени, как рак поджелудочной железы вызывает эти признаки или симптомы, он уже обычно достигает развернутой стадии.
Рак также может вызывать такие симптомы, как лихорадка, усталость или снижение массы тела. Это может возникать по причине того, что злокачественные клетки используют большую часть энергоресурсов организма или выделяют вещества, изменяющие метаболизм в организме. Либо рак может вызывать такую реакцию иммунной системы, которая вызывает указанные симптомы.
Иногда злокачественные клетки выделяют в кровоток вещества, вызывающие симптомы, которые обычно не ассоциируются с видами рака. Например, некоторые виды рака поджелудочной железы могут выделять вещества, которые вызывают тромбообразование в венах ног. Некоторые виды рака легких продуцируют гормоноподобные вещества, которые влияют на содержание кальция в крови, влияют на нервы и мышцы и вызывают слабость и головокружение.
При раке проявляются несколько общих признаков или симптомов, возникающих при наличии целого ряда подтипов раковых клеток. У большинства людей с раком происходит потеря массы тела в определенный момент их заболевания. Необъяснимая (непреднамеренная) потеря массы тела на 10 фунтов или более может представлять собой первый признак рака, в частности рака поджелудочной железы, желудка, пищевода или легких.
Жар весьма обычен при раке, но чаще наблюдается на поздних стадиях заболевания. Почти у всех пациентов с раком наблюдается жар в некоторые моменты, в особенности, если рак или его терапия оказывает влияние на иммунную систему и усложняет борьбу организма с инфекцией. Реже, жар может представлять собой ранний признак рака, такой как лейкоз или лимфома.
Усталость может представлять собой важный симптом при прогрессировании рака. Хотя, при таких видах рака, как лейкоз, или в случае, когда рак вызывает постоянную потерю крови, как при некоторых видах рака толстой кишки или желудка, она может возникать на ранних стадиях.
Боль может представлять собой ранний симптом при некоторых видах раках, таких как рак кости либо рак яичек. Но наиболее часто боль представляет собой симптом поздних стадий заболевания.
Наряду с видами рака кожи (см. следующий раздел), при некоторых видах рака внутренних органов на коже могут проявляться видимые признаки. Таковые изменения включают в себя потемнение кожи (гиперпигментацию), пожелтение (желтуху) или покраснение (эритему); зуд; или чрезмерный рост волос.
В качестве альтернативы, или в дополнение, у подтипов рака проявляются особые признаки или симптомы. На рак могут указывать изменения ритма дефекации или опорожнения мочевого пузыря. Длительный запор, диарея или изменение объема стула могут быть признаком рака толстой кишки. Боль при мочеиспускании, кровь в моче или изменение ритма опорожнения мочевого пузыря (такое как более частое или менее частое мочеиспускание) могут быть связаны с раком мочевого пузыря или раком предстательной железы.
Изменения в состоянии кожи или проявление нового состояния кожи может указывать на рак. Рак кожи может кровоточить и выглядеть как воспаления, которые не заживают. Длительные воспаления во рту могут представлять собой рак полости рта, особенно у пациентов, которые курят, жуют табак или часто употребляют алкоголь. Воспаления на пенисе или влагалище могут быть признаками либо инфекции, либо рака на ранней стадии.
Необычное кровотечение или выделение может указывать на рак. Необычное кровотечение может происходить как на ранних, так и на поздних стадиях рака. Кровь в слюне (мокроте) может представлять собой признак рака легких. Кровь в стуле (либо темный или черный стул) может представлять собой признак рака толстой кишки или рака прямой кишки. Рак шейки матки или рак эндометрия (слизистой оболочки матки) может вызывать вагинальное кровотечение. Кровь в моче может представлять собой признак рака мочевого пузыря или рака почек. Кровянистое выделение из соска может представлять собой признак рака молочной железы.
Уплотнение или припухлость молочной железы или других частей тела может указывать на наличие рака. Многие виды рака можно прощупать через кожу, главным образом в молочной железе, яичке, лимфатических узлах (гландах) и мягких тканях тела. Припухлость или уплотнение может представлять собой ранний или поздний признак рака. Любая припухлость или уплотнение может указывать на рак, в особенности, если образование является новым или увеличилось в размере.
Несварение желудка или затруднение с проглатыванием может указывать на рак. Хотя указанные симптомы обычно имеют другие причины, несварение желудка или затруднение глотания может представлять собой признак рака пищевода, желудка или глотки (горла).
Недавние изменения бородавки или родинки может указывать на рак. Любая бородавка, родинка или веснушка, изменяющая цвет, размер или форму, или теряющая свои четкие границы, указывает на потенциальное развитие рака. Например, патологическое изменение кожи может представлять собой меланому.
Непрекращающийся кашель или хрипота может указывать на рак. Непроходящий кашель может быть признаком рака легкого. Хрипота может быть признаком рака гортани (голосового аппарата) или щитовидной железы.
Хотя перечисленные выше признаки и симптомы являются более часто встречающимися, чем наблюдаемые при раке, существует много других, которые являются менее часто встречающимися и не перечислены в настоящем документе.
Лечение видов рака может приводить или способно приводить к уменьшению размера опухоли. Уменьшение размера опухоли также может быть названо «регрессией опухоли». Предпочтительно, после лечения размер опухоли мог бы быть уменьшен на 5% или более относительно ее размера до лечения; более предпочтительно, размер опухоли сокращен на 10% или более; более предпочтительно, сокращен на 20% или более; более предпочтительно, сокращен на 30% или более; более предпочтительно, сокращен на 40% или более; еще более предпочтительно, сокращен на 50% или более; и наиболее предпочтительно, сокращен на 75% или более. Размер опухоли может быть измерен любым воспроизводимым средством измерения. Размер опухоли может быть измерен как диаметр опухоли.
Лечение видов рака может приводить или способно приводить к уменьшению объема опухоли. Предпочтительно, после лечения объем опухоли мог бы быть уменьшен на 5% или более относительно ее объема до лечения; более предпочтительно, объем опухоли сокращен на 10% или более; более предпочтительно, сокращен на 20% или более; более предпочтительно, сокращен на 30% или более; более предпочтительно, сокращен на 40% или более; еще более предпочтительно, сокращен на 50% или более; и наиболее предпочтительно, сокращен на 75% или более. Объем опухоли может быть измерен любым воспроизводимым средством измерения.
Лечение видов рака может приводить или способно приводить к уменьшению числа опухолей. Предпочтительно, после лечения число опухолей могло бы быть сокращено на 5% или более относительно их числа до лечения; более предпочтительно, число опухолей сокращено на 10% или более; более предпочтительно, сокращено на 20% или более; более предпочтительно, сокращено на 30% или более; более предпочтительно, сокращено на 40% или более; еще более предпочтительно, сокращено на 50% или более; и наиболее предпочтительно, сокращено на 75% или более. Число опухолей может быть измерено любым воспроизводимым средством измерения. Число опухолей может быть измерено путем подсчета опухолей, видимых невооруженным взглядом либо при определенном увеличении. Предпочтительно, определенное увеличение равно 2×, 3×, 4×, 5×, 10× или 50×.
Лечение видов рака может приводить или способно приводить к уменьшению числа метастатических очагов в других тканях или органах, удаленных от первичной локализации опухоли. Предпочтительно, после лечения число метастатических очагов могло бы быть сокращено на 5% или более относительно их числа до лечения; более предпочтительно, число метастатических очагов сокращено на 10% или более; более предпочтительно, сокращено на 20% или более; более предпочтительно, сокращено на 30% или более; более предпочтительно, сокращено на 40% или более; еще более предпочтительно, сокращено на 50% или более; и наиболее предпочтительно, сокращено на 75% или более. Число метастатических очагов может быть измерено любым воспроизводимым средством измерения. Число метастатических очагов может быть измерено путем подсчета метастатических очагов, видимых невооруженным взглядом либо при определенном увеличении. Предпочтительно, определенное увеличение равно 2×, 3×, 4×, 5×, 10× или 50×.
Лечение видов рака может приводить или способно приводить к увеличению среднего времени выживания в популяции субъектов, получавших лечение, по сравнению с таковым в популяции, получавшей только носитель. Предпочтительно, среднее время выживания могло бы быть увеличено более чем на 30 суток; более предпочтительно, более чем на 60 суток; более предпочтительно, более чем на 90 суток; и наиболее предпочтительно, более чем на 120 суток. Увеличение среднего времени выживания в популяции может быть измерено любым воспроизводимым средством. Увеличение среднего времени выживания в популяции может быть измерено, например, путем подсчета для популяции средней продолжительности выживания после начала лечения активным соединением. Увеличение среднего времени выживания в популяции также может быть измерено, например, путем подсчета для популяции средней продолжительности выживания после завершения первого курса лечения активным соединением.
Лечение рака может приводить или способно приводить к увеличению среднего времени выживания в популяции субъектов, получавших лечение, по сравнению с таковым в популяции субъектов, не получавших лечение. Предпочтительно, среднее время выживания могло бы быть увеличено более чем на 30 суток; более предпочтительно, более чем на 60 суток; более предпочтительно, более чем на 90 суток; и наиболее предпочтительно, более чем на 120 суток. Увеличение среднего времени выживания в популяции может быть измерено любым воспроизводимым средством. Увеличение среднего времени выживания в популяции может быть измерено, например, путем подсчета для популяции средней продолжительности выживания после начала лечения активным соединением. Увеличение среднего времени выживания в популяции также может быть измерено, например, путем подсчета для популяции средней продолжительности выживания после завершения первого курса лечения активным соединением.
Лечение рака может приводить или способно приводить к увеличению среднего времени выживания в популяции субъектов, получавших лечение, по сравнению с таковым в популяции, получавшей монотерапию лекарственным средством, отличным от соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, аналога или производного. Предпочтительно, среднее время выживания могло бы быть увеличено более чем на 30 суток; более предпочтительно, более чем на 60 суток; более предпочтительно, более чем на 90 суток; и наиболее предпочтительно, более чем на 120 суток. Увеличение среднего времени выживания в популяции может быть измерено любым воспроизводимым средством. Увеличение среднего времени выживания в популяции может быть измерено, например, путем подсчета для популяции средней продолжительности выживания после начала лечения активным соединением. Увеличение среднего времени выживания в популяции также может быть измерено, например, путем подсчета для популяции средней продолжительности выживания после завершения первого курса лечения активным соединением.
Лечение рака может приводить или способно приводить к снижению уровня смертности в популяции субъектов, получавших лечение, по сравнению с таковым в популяции, получавшей только носитель. Лечение рака может приводить или способно приводить к снижению уровня смертности в популяции субъектов, получавших лечение, по сравнению с таковым в популяции, не получавшей лечение. Лечение рака может приводить или способно приводить к снижению уровня смертности в популяции субъектов, получавших лечение, по сравнению с таковым в популяции, получавшей монотерапию лекарственным средством, отличным от соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, аналога или производного. Предпочтительно, уровень смертности мог бы быть снижен более чем на 2%; более предпочтительно, более чем на 5%; более предпочтительно, более чем на 10%; и наиболее предпочтительно, более чем на 25%. Снижение уровня смертности в популяции субъектов, получавших лечение, может быть измерено любым воспроизводимым средством. Снижение уровня смертности в популяции может быть измерено, например, путем подсчета для популяции среднего числа связанных с заболеванием смертей в единицу времени после начала лечения активным соединением. Снижение уровня смертности в популяции также может быть измерено, например, путем подсчета для популяции среднего числа связанных с заболеванием смертей в единицу времени после завершения первого курса лечения активным соединением.
Лечение рака может приводить или способно приводить к уменьшению скорости роста опухоли. Предпочтительно, после лечения скорость роста опухоли могла бы быть снижена, по меньшей мере, на 5% относительно ее значения до лечения; скорость роста опухоли могла бы быть снижена, по меньшей мере, на 10%; более предпочтительно, снижена, по меньшей мере, на 20%; более предпочтительно, снижена, по меньшей мере, на 30%; более предпочтительно, снижена, по меньшей мере, на 40%; еще более предпочтительно, снижена, по меньшей мере, на 50%; и наиболее предпочтительно, снижена, по меньшей мере, на 75%. Скорость роста опухоли может быть измерена любым воспроизводимым средством измерения. Скорость роста опухоли может быть измерена по изменению диаметра опухоли в единицу времени.
Лечение рака может приводить или способно приводить к ослаблению повторного роста опухоли. Предпочтительно, после лечения повторный рост опухоли мог бы составить менее 5%; более предпочтительно, повторный рост опухоли мог бы составить менее 10%; более предпочтительно, менее 20%; более предпочтительно, менее 30%; более предпочтительно, менее 40%; еще более предпочтительно, менее 50%; и наиболее предпочтительно, менее 75%. Повторный рост опухоли может быть измерен любым воспроизводимым средством измерения. Повторный рост опухоли может быть измерен по увеличению диаметра опухоли после предшествовавшего уменьшения, имевшего место после лечения. Ослабление повторного роста опухоли указывает на неспособность опухолей к рецидиву после прекращения лечения.
Лечение или профилактика клеточного пролиферативного нарушения может приводить или способно приводить к уменьшению скорости клеточной пролиферации. Предпочтительно, после лечения скорость клеточной пролиферации могла бы быть снижена, по меньшей мере, на 5%; более предпочтительно, по меньшей мере, на 10%; более предпочтительно, по меньшей мере, на 20%; более предпочтительно, по меньшей мере, на 30%; более предпочтительно, по меньшей мере, на 40%; еще более предпочтительно, по меньшей мере, на 50%; и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, на 75%. Скорость клеточной пролиферации может быть измерена любым воспроизводимым средством измерения. Скорость клеточной пролиферации измеряют, например, путем измерения количества делящихся клеток в образце ткани в единицу времени.
Лечение или профилактика клеточного пролиферативного нарушения может приводить или способно приводить к уменьшению доли пролиферирующих клеток. Предпочтительно, после лечения доля пролиферирующих клеток могла бы быть снижена, по меньшей мере, на 5%; более предпочтительно, по меньшей мере, на 10%; более предпочтительно, по меньшей мере, на 20%; более предпочтительно, по меньшей мере, на 30%; более предпочтительно, по меньшей мере, на 40%; еще более предпочтительно, по меньшей мере, на 50%; и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, на 75%. Доля пролиферирующих клеток может быть измерена любым воспроизводимым средством измерения. Предпочтительно, долю пролиферирующих клеток измеряют, например, путем количественного определения числа делящихся клеток относительно числа неделящихся клеток в образце ткани. Доля пролиферирующих клеток может быть эквивалентна митотическому индексу.
Лечение или профилактика клеточного пролиферативного нарушения может приводить или способно приводить к уменьшению размера области или зоны клеточной пролиферации. Предпочтительно, после лечения размер области или зоны клеточной пролиферации мог бы быть сокращен, по меньшей мере, на 5% относительно размера до лечения; более предпочтительно, сокращен, по меньшей мере, на 10%; более предпочтительно, сокращен, по меньшей мере, на 20%; более предпочтительно, сокращен, по меньшей мере, на 30%; более предпочтительно, сокращен, по меньшей мере, на 40%; еще более предпочтительно, сокращен, по меньшей мере, на 50%; и наиболее предпочтительно, сокращен, по меньшей мере, на 75%. Размер области или зоны клеточной пролиферации может быть измерен любым воспроизводимым средством измерения. Размер области или зоны клеточной пролиферации может быть измерен как диаметр или ширина области или зоны клеточной пролиферации.
Лечение или профилактика клеточного пролиферативного нарушения может приводить или способно приводить к уменьшению числа или доли клеток, характеризующихся аномальным видом или морфологией. Предпочтительно, после лечения число клеток, характеризующихся аномальной морфологией, могло бы быть сокращено, по меньшей мере, на 5% относительно его значения до лечения; более предпочтительно, сокращено, по меньшей мере, на 10%; более предпочтительно, сокращено, по меньшей мере, на 20%; более предпочтительно, сокращено, по меньшей мере, на 30%; более предпочтительно, сокращено, по меньшей мере, на 40%; еще более предпочтительно, сокращено, по меньшей мере, на 50%; и наиболее предпочтительно, сокращено, по меньшей мере, на 75%. Аномальный вид или морфология клеток могут быть измерены любым воспроизводимым средством измерения. Аномальная клеточная морфология может быть измерена микроскопически, например, методом инвертированной микроскопии тканевых культур. Аномальная клеточная морфология может принимать форму ядерного плейоморфизма.
Используемый в настоящем документе термин «селективно» означает тенденцию к возникновению с большей частотой в одной популяции, нежели в другой популяции. Сравниваемые популяции могут представлять собой клеточные популяции. Соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват могут или способны селективно воздействовать на злокачественную или преканцерозную клетку, но не на нормальную клетку. Соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват могут или способны селективно воздействовать, модулируя одну молекулярную мишень (например, целевую протеинметилтрансферазу), но существенно не модулируя другую молекулярную мишень (например, нецелевую протеинметилтрансферазу). Изобретение также относится к способу селективного ингибирования активности фермента, такого как протеинметилтрансфераза. Предпочтительно, событие происходит селективно в популяции A относительно популяции B, если оно происходит в популяции A более чем в два раза чаще по сравнению с популяцией B. Событие происходит селективно, если оно происходит в популяции A более чем в пять раз чаще. Событие происходит селективно, если оно происходит в популяции A более чем в десять раз чаще; более предпочтительно, более чем в пятьдесят раз; еще более предпочтительно, более чем в 100 раз; и наиболее предпочтительно, более чем в 1000 раз чаще в популяции A по сравнению с популяцией B. Например, о клеточной гибели говорят, что она селективно происходит в злокачественных клетках, если она происходит в злокачественных клетках более чем в два раза чаще по сравнению с нормальными клетками.
Соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват могут или способны модулировать активность молекулярной мишени (например, целевой протеинметилтрансферазы). Модулирование относится к стимулированию или ингибированию активности молекулярной мишени. Предпочтительно, соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват модулируют активность молекулярной мишени, если они стимулируют или ингибируют активность молекулярной мишени, по меньшей мере, в 2 раза относительно активности молекулярной мишени в тех же условиях, но лишь в отсутствие указанного соединения. Более предпочтительно, соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват модулируют активность молекулярной мишени, если они стимулируют или ингибируют активность молекулярной мишени, по меньшей мере, в 5 раз, по меньшей мере, в 10 раз, по меньшей мере, в 20 раз, по меньшей мере, в 50 раз, по меньшей мере, в 100 раз, относительно активности молекулярной мишени в тех же условиях, но лишь в отсутствие указанного соединения. Активность молекулярной мишени может быть измерена любым воспроизводимым средством. Активность молекулярной мишени может быть измерена in vitro или in vivo. Например, активность молекулярной мишени может быть измерена in vitro с помощью анализа ферментативной активности или анализа связывания ДНК, или активность молекулярной мишени может быть измерена in vivo с помощью анализа экспрессии с использованием репортерного гена.
Соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват существенно не модулируют активность молекулярной мишени, если добавление соединения не стимулирует или не ингибирует активность молекулярной мишени более чем на 10% относительно активности молекулярной мишени в тех же условиях, но лишь в отсутствие указанного соединения.
Используемый в настоящем документе термин «селективный для изофермента» означает преимущественное ингибирование или стимулирование первой изоформы фермента по сравнению со второй изоформой фермента (например, преимущественное ингибирование или стимулирование белка изофермента альфа метилтрансферазы по сравнению с белком изоферментом бета метилтрансферазы). Предпочтительно, соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват демонстрируют как минимум четырехкратное различие, предпочтительно десятикратное различие, более предпочтительно пятидесятикратное различие в дозировке, необходимой для достижения биологического эффекта. Предпочтительно, соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват, демонстрируют такое различие во всем диапазоне ингибирования, и различие представлено на примере IC50, т.е. 50% ингибирования в отношении интересующей молекулярной мишени.
Введение соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата в клетку или нуждающемуся в этом пациенту может приводить или способно приводить к модулированию (то есть, стимулированию или ингибированию) активности представляющего интерес белка метилтрансферазы.
Настоящее изобретение относится к способам оценки биологической активности соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата или к способам идентификации тестируемого соединения в качестве ингибитора мутанта EZH2 по остатку Y641. Согласно одному варианту осуществления, способ включает в себя смешивание выделенного мутанта EZH2 по остатку Y641 с гистоновым субстратом, донором метильной группы (такой как S-аденозилметионин (SAM)) и тестируемым соединением, где гистоновый субстрат включает формы H3-K27, выбранные из группы, состоящей из неметилированного H3-K27, монометилированного H3-K27, диметилированного H3-K27 и любого их сочетания; и проведения анализа для определения метилирования H3-K27 в гистоновом субстрате, идентифицируя тем самым тестируемое соединение в качестве ингибитора мутанта EZH2 по остатку Y641 в том случае, когда метилирование H3-K27 в присутствии тестируемого соединения меньше, чем метилирование H3-K27 в отсутствие тестируемого соединения. Анализ для определения метилирования H3-K27 можно выбрать для измерения скорости метилирования, степени метилирования или одновременно скорости и степени метилирования.
Мутант EZH2 по остатку Y641 выделяют в виде комплекса PRC2 или его функционального эквивалента. Используемый в настоящем документе термин «выделенный» означает по существу отделенный от других компонентов, с которыми комплекс можно обнаружить, когда он встречается в природе. Соединение может быть выделено без необходимости быть очищенным. Согласно одному варианту осуществления, мутант EZH2 выделяют в виде комплекса мутанта EZH2 по остатку Y641 совместно с EED и SUZ12. Согласно другому варианту осуществления, мутант EZH2 выделяют в виде комплекса мутанта EZH2 по остатку Y641 совместно с EED, SUZ12 и RbAp48. В соответствующих условиях комплекс PRC2 или его функциональный эквивалент проявляет гистонметилтрансферазную активность в отношении H3-K27. Согласно одному варианту осуществления, комплекс состоит из рекомбинантно экспрессированных составляющих полипептидов, например, EZH2, EED, SUZ12 с или без RbAp48.
Выделенный мутант EZH2 по остатку Y641 смешивают с гистоновым субстратом. Гистоновый субстрат включает в себя подходящий источник полипептидов гистонов или их фрагментов, которые могут служить в качестве субстрата для EZH2. Согласно одному варианту осуществления, гистоновый субстрат включает в себя гистоны, выделенные от пациента. Гистоны могут быть выделены из клеток пациента с использованием любого подходящего способа; такие способы хорошо известны специалистам в данной области, и нет необходимости их дополнительного описания в настоящем документе (см., например, Fang et al. (2004) Methods Enzymol 377:213-26). В соответствии с описанными ниже примерами, согласно одному варианту осуществления, гистоновый субстрат получают как нуклеосомы. В соответствии с описанными ниже примерами, согласно одному варианту осуществления гистоновый субстрат получают как нуклеосомы птичьих эритроцитов (цыпленка).
Гистоновый субстрат, полученный таким образом, может включать в себя примесь форм модификации гистона, включая различные формы метилирования H3-K27, исходя из Вестерн-блоттинга с антителами, специфичными для форм метилирования H3-K27. Согласно одному варианту осуществления, гистоновый субстрат может быть получен в виде очищенного полноразмерного гистона H3. Такой очищенный полноразмерный гистон H3 может быть получен в качестве гомогенного препарата относительно форм метилирования H3-K27, или в качестве смеси различных форм метилирования H3-K27. Гомогенные препараты выделенного гистона H3 относительно форм метилирования H3-K27 могут быть получены, помимо всего прочего, при пропускании через иммуноаффинную колонку, загруженную подходящими специфичными для формы метилирования H3-K27 антителами, или при иммуноосаждении с использованием магнитных шариков, покрытых подходящими специфичными для формы метилирования H3-K27 антителами. В качестве альтернативы или в дополнение, форма метилирования H3-K27 может быть охарактеризована в рамках проведения анализа. Например, гистоновый субстрат из исходного материала может быть охарактеризован как содержащий 50 процентов неметилированного H3-K27, 40 процентов монометилированного H3-K27, 10 процентов диметилированного H3-K27 и 0 процентов триметилированного H3-K27.
Согласно одному варианту осуществления, гистоновый субстрат включает в себя пептидную библиотеку или подходящий пептид, содержащий одну или несколько аминокислотных последовательностей, относящихся к гистону H3, включая, в частности, последовательность, которая окружает H3-K27. Например, согласно одному варианту осуществления, гистоновый субстрат представляет собой пептидный фрагмент, который соответствует аминокислотным остаткам 21-44 гистона H3. Пептидная библиотека или пептид могут быть получены при помощи пептидного синтеза согласно методикам, хорошо известным в данной области и, необязательно, модифицированным так, чтобы предусмотреть любую желаемую степень метилирования лизина, соответствующего H3-K27. Как описано ниже в примерах, такие пептиды также могут быть модифицированы для введения метки, такой как биотин, применимой для проведения последующих анализов. Согласно одному варианту осуществления, метку присоединяют к амино-(N)-концу пептида(ов). Согласно одному варианту осуществления, метку присоединяют к карбокси-(C)-концу пептида(ов).
Определение метилирования H3-K27 может быть проведено с использованием любого подходящего способа. Согласно одному варианту осуществления, источник донорных метильных групп включает в себя метильные группы, которые помечены детектируемой меткой. Согласно одному варианту осуществления, детектируемая метка представляет собой изотопную метку, например, тритий. Другие типы меток могут включать в себя, например, флуоресцентные метки.
Определение образования триметилированного H3-K27 может быть проведено с использованием любого подходящего способа. Например, определение образования триметилированного H3-K27 может быть проведено с использованием анализа определения встраивания меченных метильных групп, таких как описано выше, необязательно, в сочетании с хроматографическим или другим способом разделения меченых продуктов по размеру, например, электрофорезом в полиакриламидном геле (PAGE), капиллярным электрофорезом (CE) или жидкостной хроматографией при высоких давлениях (HPLC). В качестве альтернативы или в дополнение, определение образования триметилированного H3-K27 может быть проведено с использованием антител, которые специфичны для триметилированного H3-K27.
Определение преобразования монометилированного H3-K27 в диметилированный H3-K27 может быть проведено с использованием любого подходящего способа. Согласно одному варианту осуществления, преобразование определяют с использованием антител, которые специфичны для монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27. Например, исходные количества или концентрации монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27 могут быть определены с использованием соответствующих антител, специфичных для монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27. После объединения фермента, субстрата, донора метильной группы и тестируемого соединения, с использованием соответствующих антител, специфичных для монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27, могут быть определены полученные количества или концентрации монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27. Затем могут быть сравнены исходные и полученные количества или концентрации монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27. В качестве альтернативы или в дополнение, могут быть сравнены исходные и полученные количества или концентрации монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27 с соответствующими количествами концентраций из отрицательного контроля. Реакция отрицательного контроля, при которой в анализ не включают никакое тестируемое средство, может быть проведена параллельно или в качестве исторического контроля. Результаты такой контрольной реакции могут быть необязательно рассчитаны из соответствующих результатов экспериментальной реакции перед проведением сравнения, упомянутого выше, или совместно с ним.
Поскольку диметилированная форма H3-K27 может в дальнейшем метилироваться в том же самом анализе, снижение количества или концентрации монометилированного H3-K27, по-видимому, может не соответствовать напрямую увеличению диметилированного H3-K27. Однако в данном случае можно предположить, что снижение количества или концентрации монометилированного H3-K27 само по себе отражает преобразование монометилированного H3-K27 в диметилированный H3-K27.
Определение преобразования диметилированного H3-K27 в триметилированный H3-K27 может быть проведено с использованием любого подходящего способа. Согласно одному варианту осуществления, преобразование определяют с использованием антител, специфичных для диметилированного H3-K27 и триметилированного H3-K27. Например, исходные количества или концентрации диметилированного H3-K27 и триметилированного H3-K27 могут быть определены с использованием соответствующих антител, специфичных для диметилированного H3-K27 и триметилированного H3-K27. После объединения фермента, субстрата и тестируемого соединения, с использованием соответствующих антител, специфичных для диметилированного H3-K27 и триметилированного H3-K27, могут быть определены полученные количества или концентрации диметилированного H3-K27 и триметилированного H3-K27. Затем могут быть сравнены исходные и полученные количества или концентрации диметилированного H3-K27 и триметилированного H3-K27. В качестве альтернативы или в дополнение, исходные и полученные количества или концентрации диметилированного H3-K27 и триметилированного H3-K27 можно затем сравнить с соответствующими количествами концентраций из отрицательного контроля. Реакцию отрицательного контроля, при которой в анализ не включают никакое тестируемое средство, можно проводить параллельно или в качестве исторического контроля. Результаты такой контрольной реакции могут быть необязательно рассчитаны из соответствующих результатов экспериментальной реакции перед проведением сравнения, упомянутого выше, или совместно с ним.
Тестируемое средство идентифицируют в качестве ингибитора мутанта EZH2 по остатку Y641 в том случае, когда метилирование H3-K27 с использованием тестируемого соединения меньше, чем метилирование H3-K27 без использования тестируемого соединения. Согласно одному варианту осуществления, тестируемое средство идентифицируют в качестве ингибитора мутанта EZH2 по остатку Y641 в том случае, когда образование триметилированного H3-K27 в присутствии тестируемого соединения меньше, чем образование триметилированного H3-K27 в отсутствие тестируемого соединения.
Настоящее изобретение также относится к способу идентификации селективного ингибитора мутанта EZH2 по остатку Y641. Согласно одному варианту осуществления, способ включает в себя объединение выделенного мутанта EZH2 по остатку Y641 с гистоновым субстратом, донором метильной группы (например, SAM), и тестируемым соединением, где гистоновый субстрат содержит форму H3-K27, выбранную из группы, состоящей из монометилированного H3-K27, диметилированного H3-K27 и комбинации монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27, образуя тем самым тестируемую смесь; объединение выделенного EZH2 дикого типа с гистоновым субстратом, донором метильной группы (например, SAM) и тестируемым соединением, где гистоновый субстрат содержит форму H3-K27, выбранную из группы, состоящей из монометилированного H3-K27, диметилированного H3-K27 и комбинации монометилированного H3-K27 и диметилированного H3-K27, образуя тем самым контрольную смесь; проведение анализа для определения триметилирования гистонового субстрата в каждой из тестируемой смеси и контрольной смеси; вычисление соотношения (a) триметилирования с использованием мутанта EZH2 по остатку Y641 и тестируемого соединения (M+) к (b) триметилированию с использованием мутанта EZH2 по остатку Y641 без тестируемого соединения (M-); вычисление соотношения (с) триметилирования с использованием EZH2 дикого типа и тестируемого соединения (WT+) к (d) триметилированию с использованием EZH2 дикого типа без тестируемого соединения (WT-); сравнение соотношения (a)/(b) с соотношением (c)/(d); и идентификацию тестируемого соединения в качестве селективного ингибитора мутанта EZH2 по остатку Y641 в случае, когда соотношение (a)/(b) меньше, чем соотношение (c)/(d). Согласно одному варианту осуществления, способ дополнительно включает принятие в расчет отрицательного контроля без тестируемого соединения для любой из тестируемой смеси и контрольной смеси, или обеих вместе.
В некоторых методах анализа используются иммунологические реагенты, например, антитела и антигены. В некоторых методах анализа для измерения ферментативной активности может быть использована флуоресценция. Используемый в настоящем документе термин «флуоресценция» относится к процессу, в процессе которого молекула испускает фотон в результате поглощения падающего фотона большей энергии той же молекулой. Конкретные способы оценки биологической активности раскрытых соединений описаны в разделе «Примеры».
Введение соединения согласно настоящему изобретению, или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата, в клетку или субъекта, нуждающегося в этом, может или способно приводить к модулированию (т.е. стимулированию или ингибированию) активности внутриклеточной мишени (например, субстрат). Несколько внутриклеточных мишений могут или способны модулироваться соединениями согласно настоящему изобретению, включая без ограничения протеинметилтрансферазу.
Активация относится к приведению химического соединения (например, белка или нуклеиновой кислоты) в состояние, подходящее для выполнения желаемой биологической функции. Химическое соединение, способное к активации, также имеет неактивное состояние. Активированное химическое соединение может выполнять ингибирующую или стимулирующую биологическую функцию, или и то и другое.
Повышение относится к увеличению желаемой биологической активности химического соединения (например, белка или нуклеиновой кислоты). Повышение может происходить посредством увеличения концентрации химического соединения.
Используемый в этом документе термин «каскад реакций контрольной точки клеточного цикла» относится к каскаду биохимических реакций, который вовлечен в модулирование контрольной точки клеточного цикла. Каскад реакций контрольной точки клеточного цикла может обладать стимулирующим или ингибирующим эффектами, или и тем и другим, в отношении одной или нескольких функций, составляющих контрольную точку клеточного цикла. Каскад реакций контрольной точки клеточного цикла состоит, по меньшей мере, из двух химических соединений, предпочтительно белков, которые оба вносят вклад в модулирование контрольной точки клеточного цикла. Каскад реакций контрольной точки клеточного цикла может быть активирован посредством активации одного или нескольких участников каскада реакций контрольной точки клеточного цикла. Предпочтительно, каскад реакций контрольной точки клеточного цикла представляет собой биохимический путь передачи сигнала.
Используемый в этом документе термин «регулятор контрольной точки клеточного цикла» относится к химическому соединению, которое может участвовать, по меньшей мере, частично, в модулировании контрольной точки клеточного цикла. Регулятор контрольной точки клеточного цикла может обладать стимулирующим или ингибирующим эффектами, или и то и другое, в отношении одной или нескольких функций, составляющих контрольную точку клеточного цикла. Регулятор контрольной точки клеточного цикла может представлять собой белок или не являться им.
Лечение рака или клеточного пролиферативного нарушения может приводить или способно приводить к гибели клеток, и предпочтительно, гибель клеток могла бы приводить к уменьшению числа клеток в популяции, по меньшей мере, на 10%. Более предпочтительно, гибель клеток означает уменьшение, по меньшей мере, на 20%; более предпочтительно, уменьшение, по меньшей мере, на 30%; более предпочтительно, уменьшение, по меньшей мере, на 40%; более предпочтительно, уменьшение, по меньшей мере, на 50%; более предпочтительно, уменьшение, по меньшей мере, на 75%. Число клеток в популяции может быть измерено любым воспроизводимым способом. Число клеток в популяции может быть измерено посредством клеточной сортировки с активацией флуоресцеции (FACS), иммунофлуоресцентной микроскопии и световой микроскопии. Спсобы оценки гибели клеток представлены в Li et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 100(5): 2674-8, 2003. Согласно одному аспекту, гибель клеток происходит путем апоптоза.
Предпочтительно, если бы эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению, или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата, не было в значительной мере цитотоксичным в отношении нормальных клеток. Терапевтически эффективное количество соединения не является в значительной мере цитотоксичным в отношении нормальных клеток, если введение соединения в терапевтически эффективном количестве не индуцирует гибель более чем 10% нормальных клеток. Терапевтически эффективное количество соединения не влияет в значительной мере на жизнеспособность нормальных клеток, если введение соединения в терапевтически эффективном количестве не индуцирует гибель более чем 10% нормальных клеток. Согласно одному аспекту, гибель клеток происходит путем апоптоза.
Приведение клеток в контакт с соединением согласно настоящему изобретению, или с его фармацевтически приемлемой солью, пролекарством, метаболитом, полиморфом или сольватом, может или способно индуцировать или активировать гибель клеток избирательно в злокачественных опухолевых клетках. Введение нуждающемуся в этом субъекту соединения согласно настоящему изобретению, или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата, может или способно индуцировать или активировать гибель клеток избирательно в злокачественных опухолевых клетках. Приведение клеток в контакт с соединением согласно настоящему изобретению, или с его фармацевтически приемлемой солью, пролекарством, метаболитом, полиморфом или сольватом, может или способно индуцировать или активировать гибель клеток избирательно в одной или нескольких клетках, пораженных клеточным пролиферативным нарушением. Предпочтительно, если бы введение нуждающемуся в этом субъекту соединения согласно настоящему изобретению, или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата, могло индуцировать гибель клеток избирательно в одной или нескольких клетках, пораженных клеточным пролиферативным нарушением.
Настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики рака (например, на развитие которой возможно повлиять посредством модулирования EZH2-опосредованного метилирования белка) путем введения соединения согласно настоящему изобретению, или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата, нуждающемуся в этом субъекту, где введение соединения согласно настоящему изобретению, или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата, приводит к одному или нескольким из следующего: предупреждение пролиферации злокачественных опухолевых клеток посредством накопления клеток на одной или нескольких фазах клеточного цикла (например, G1, G1/S, G2/M) или индукции старения клеток, или стимулирования дифференцировки опухолевых клеток; активации гибели злокачественных опухолевых клеток посредством цитотоксичности, некроза или апоптоза без заначительного показателя гибели нормальных клеток, противоопухолевая активность на животных с терапевтическим индексом, по меньшей мере, равным 2. Используемый в настоящем документе термин «терапевтический индекс» представляет собой максимально переносимую дозу, поделенную на эффективную дозу. Настоящее изобретение также относится к способу, используемому для идентификации подходящих кандидатов для лечения или профилактики рака.
Для детального описания известных методик, рассматриваемых в настоящем документе, или эквивалентных методик специалист в данной области техники может обратиться к тексту общих справочных материалов. Такие материалы включают в себя Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Inc. (2005); Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (3rd edition), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2000); Coligan et al., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, N.Y.; Enna et al., Current Protocols in Pharmacology, John Wiley & Sons, N.Y.; Fingl et al., The Pharmacological Basis of Therapeutics (1975), Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18th edition (1990). На указанные материалы, безусловно, можно ссылаться при приготовлении или использовании некоторого аспекта согласно настоящему изобретению.
Используемый в настоящем документе термин «сочетанная терапия» или «котерапия» включает в себя введение соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства, метаболита, полиморфа или сольвата и, по меньшей мере, второго средства, как части специфической схемы лечения, предназначенной для обеспечения благоприятного эффекта в результате сочетанного действия указанных терапевтических средств. Благоприятный эффект сочетания может включать в себя без ограничения сочетанное фармакокинетическое или фармакодинамическое действие, возникающее вследствие сочетания терапевтических средств. Введение таких терапевтических средств в сочетании обычно проводят через определенный промежуток времени (обычно минуты, часы, дни или недели, в зависимости от выбранного сочетания). Термин «сочетанная терапия» может предназначаться, но, как правило, не предназначается, для того, чтобы охватить введение двух или нескольких из указанных терапевтических средств как части отдельных схем монотерапии, которые случайно и произвольно приводят к сочетаниям согласно настоящему изобретению.
Термин «сочетанная терапия» подразумевает включение последовательного введения таких терапевтических средств, при котором каждое терапевтическое средство вводят в различное время, а также введение таких терапевтических средств, или, по меньшей мере, двух терапевтических средств практически одновременно. Практически одновременное введение может быть осуществлено, например, путем введения субъекту одной капсулы, содержащей фиксированное соотношение каждого терапевтического средства, или в виде множества отдельных капсул для каждого терапевтического средства. Последовательное или практически одновременное введение каждого терапевтического средства может производиться любым подходящим путем, включая в себя без ограничения, пероральные пути, внутривенные пути, внутримышечные пути и прямое всасывание через мембрану слизистой оболочки. Такие терапевтические средства могут быть введены одним и тем же путем или различными путями. Например, первое терапевтическое средство выбранного сочетания может быть введено посредством внутривенной инъекции, тогда как другие терапевтические средства сочетания могут быть введены перорально. В качестве альтернативы, например, все терапевтические средства могут быть введены перорально, или все терапевтические средства могут быть введены посредством внутривенной инъекции. Последовательность, в которой вводятся терапевтические средства, не является существенно важной.
Термин «сочетанная терапия» также охватывает введение описанных выше терапевтических средств в дополнительном сочетании с другими биологически активными ингредиентами и нелекарственными терапиями (например, хирургическое или лучевое лечение). Если сочетанная терапия дополнительно включает в себя нелекарственное лечение, то нелекарственное лечение может быть проведено в любое подходящее время при условии, что достигается благоприятный эффект совместного действия сочетания терапевтических средств и нелекарственного лечения. Например, в соответствующих случаях, благоприятный эффект все еще достигается, когда при введении терапевтических средств нелекарственное лечение временно отменяют, возможно на дни или даже недели.
Соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, аналог или производное может быть ведено в сочетании со вторым химиотерапевтическим средством. Второе химиотерапевтическое средство (также называемое антинеоплатическим средством или антипролиферативным средством) может представлять собой алкилирующее средство; антибиотик; антиметаболит; детоксификатор; интерферон; поликлональное или моноклональное антитело; ингибитор EGFR; ингибитор HER2; ингибитор деацетилазы гистонов; гормон; ингибитор митоза; ингибитор MTOR; мультикиназный ингибитор; ингибитор сериновых/треониновых киназ; ингибиторы тирозинкиназы; ингибитор VEGF/VEGFR; таксан или производное таксана, ингибитор ароматазы, антрациклин, нацеленное на микротрубочки лекарство, токсичное для топоизомеразы лекарство, ингибитор молекулярной мишени или фермента (например, киназа или протеинметилтрансфераза), лекарство-аналог цитидина или любое химиотерапевтическое, антинеопластическое или антипролиферативное средство, включенное в список согласно www.cancer.org/docroot/cdg/cdg_0.asp.
Типичные алкилирующие средства включают в себя без ограничения циклофосфамид (Цитоксан; Неозар); хлорамбуцил (Лейкеран); мелфалан (Алкеран); кармустин (BiCNU); бусульфан (Бусульфекс); ломустин (CeeNU); дакарбазин (DTIC-Dome); оксалиплатин (Элоксатин); кармустин (Глиадел); ифосфамид (Ифекс); мехлорэтамин (Мустарген); бусульфан (Милеран); карбоплатин (Параплатин); цисплатин (CDDP; Платинол); темозоломид (Темодар); тиотепа (Тиоплекс); бендамустин (Треанда); или стрептозоцин (Занозар).
Типичные антибиотики включают в себя без ограничения доксорубицин (Адриамицин); липосомальный доксорубицин (Доксил); митоксантрон (Новантрон); блеомицин (Бленоксан); даунорубицин (Церубидин); липосомальный даунорубицин (ДауноКсом); дактиномицин (Космеген); эпирубицин (Элленс); идарубицин (Идамицин); пликамицин (Митрацин); митомицин (Мутамицин); пентостатин (Нипент); или валрубицин (Валстар).
Типичные антиметаболиты включают в себя без ограничения фторурацил (Адруцил); капецитабин (Кселода); гидроксимочевину (Гидреа); меркаптопурин (Пуринетол); пеметрексед (Алимта); флударабин (Флудара); неларабин (Арранон); кладрибин (Кладрибин Новаплюс); клофарабин (Клолар); цитарабин (Цитозар-U); децитабин (Дакоген); липосомальный цитарабин (ДепоЦит); гидроксимочевину (Дроксиа); пралатрексат (Фолотин); флоксуридин (FUDR); гемцитабин (Гемзар); кладрибин (Лейстатин); флударабин (Офорта); метотрексат (MTX; Ревматрекс); метотрексат (Трексалл); тиогуанин (Таблоид); TS-1 или цитарабин (Тарабин PFS).
Типичные детоксификаторы включают в себя без ограничения амифостин (Этиол) или месна (Меснекс).
Типичные интерфероны включают в себя без ограничения интерферон альфа-2b (Интрон A) или интерферон альфа-2a (Роферон-A).
Типичные поликлональные или моноклональные антитела включают в себя без ограничения трастузумаб (Герцептин); офатумумаб (Арзерра); бевацизумаб (Авастин); ритуксимаб (Ритуксан); цетуксимаб (Эрбитукс); панитумумаб (Вектибикс); тозитумумаб/йод131 тозитумумаб (Bexxar); алемтузумаб (Кампат); ибритумомаб (Зевалин; In-111; Y-90 Зевалин); гемтузумаб (Милотарг); экулизумаб (Солирис) орденозумаб.
Типичные ингибиторы EGFR включают в себя без ограничения гефитиниб (Иресса); лапатиниб (Тайкерб); цетуксимаб (Эрбитукс); эрлотиниб (Тарцева); панитумумаб (Вектибикс); PKI-166; канертиниб (CI-1033); матузумаб (Emd7200) или EKB-569.
Типичные ингибиторы HER2 включают в себя без ограничения трастузумаб (Герцептин); лапатиниб (Тайкерб) или AC-480.
Ингибиторы деацетилазы гистонов включают в себя без ограничения вориностат (Золинза).
Типичные гормоны включают в себя без ограничения тамоксифен (Солтамокс; Нолвадекс); ралоксифен (Эвиста); мегестрол (Мегас); лейпролид (Лупрон; Лупрон Депо; Элигард; Виадур); фулвестрант (Фаслодекс); летрозол (Фемара); трипторелин (Трелстар LA; Трелстар Депо); эксеместан (Аромазин); гозерелин (Золадекс); бикалютамид (Касодекс); анастрозол (Аримидекс); флуоксиместерон (Андрокси; Галотестин); медроксипрогестерон (Провера; Депо-Провера); Эстрамустин (Эмцит); флутамид (Эйлексин); торемифен (Фарестон); дегареликс (Фирмагон); нилутамид (Ниландрон); абареликс (Пленаксис); или тестолактон (Теслак).
Типичные ингибиторы митоза включают в себя без ограничения паклитаксел (Таксол; Онксол; Абраксан); доцетаксел (Таксотер); винкристин (Онковин; Винказар PFS); винбластин (Велбан); этопозид (Топозар; Этопофос; ВеПезид); тенипозид (Вумон); иксабепилон (Иксемпра); нокодазол; эпотилон; винорелбин (Навелбин); каптотецин (CPT); иринотекан (Капмтозар); топотекан (Гикамтин); амсакрин или ламелларин D (LAM-D).
Типичные ингибиторы MTOR включают в себя без ограничения эверолимус (Афинитор) или тамсиролимус (Торисел); рапамун, ридафоролимус; или AP23573.
Типичные мультикиназные ингибиторы включают в себя без ограничения сорафениб (Нексавар); сунитиниб (Сутент); BIBW 2992; E7080; Zd6474; PKC-412; мотезаниб; или AP24534.
Типичные ингибиторы сериновых/треониновых киназ включают в себя без ограничения рубоксистаурин; эрил/фасудил гидрохлорид; флавопиридол; селициклиб (CYC202; Росковитрин); SNS-032 (BMS-387032); Pkc412; бриостатин; KAI-9803;SF1126; VX-680; Azd1152; Arry-142886 (AZD-6244); SCIO-469; GW681323; CC-401; CEP-1347 или PD 332991.
Типичные ингибиторы тирозиновых киназ включают в себя без ограничения эрлотиниб (Тарцева); гефитиниб (Иресса); иматиниб (Гливек); сорафениб (Нексавар); сунитиниб (Сутент); трастузумаб (Герцептин); бевацизумаб (Авастин); ритуксимаб (Ритуксан); лапатиниб (Тайкерб); цетуксимаб (Эрбитукс); панитумумаб (Вектибикс); эверолимус (Афинитор); алемтузумаб (Кампат); гемтузумаб (Милотарг); темсиролимус (Торисел); пазопаниб (Вотриент); дазатиниб (Спрайсел); нилотиниб (Тасигна); ваталаниб (Ptk787; ZK222584); CEP-701; SU5614; MLN518; XL999; VX-322; Azd0530; BMS-354825; SKI-606 CP-690; AG-490; WHI-P154; WHI-P131; AC-220; или AMG888.
Типичные ингибиторы VEGF/VEGFR включают в себя без ограничения бевацизумаб (Авастин); сорафениб (Нексавар); сунитиниб (Сутент); ранибизумаб; пегаптаниб; или вандетиниб.
Типичные нацеленные на микротрубочки лекарства включают в себя без ограничения паклитаксел, доцетаксел, винкристин, винбластин, нокодазол, эпотилоны и навелбин.
Типичные токсичные для топоизомеразы лекарства включают в себя без ограничения тенипозид, этопозид, адриамицин, камптотецин, даунорубицин, дактиномицин, митоксантрон, амсакрин, эпирубицин и идарубицин.
Типичные таксаны и производные таксана включают в себя без ограничения паклитаксел и доцетаксел.
Типичные общие химиотерапевтические, антинеопластические, антипролиферативные средства включают в себя без ограничения алтретамин (Гексален); изотретиноин (Аккутан; Амнестим; Кларавис; Сотрет); третиноин (Весаноид); азацитидин (Видаза); бортезомиб (Велкейд) аспарагиназа (Элспар); левамизол (Эргамизол); митотан (Лизодрен); прокарбазин (Матулан); пэгаспаргаза (Онкаспар); денилейкин дифтитокс (Онтак); порфимер (Фотофрин); альдеслейкин (Пролейкин); леналидомид (Ревлимид); бексаротен (Таргретин); талидомид (Таломид); темсиролимус (Торисел); триоксиб мышьяка (Трисенокс); вертепорфин (Визудин); мимозин (Лейценол); (1M тегафур - 0,4M 5-хлор-2,4-дигидроксипиримидин - 1M оксонат калия) или ловастатин.
Согласно другому аспекту, второе химиотерапевтическое средство может представлять собой цитокин, такой как G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор). Согласно другому аспекту, соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, аналог или производное может быть введено в сочетании с лучевой терапией. Лучевая терапия также может быть применена в сочетании с соединением согласно настоящему изобретению и другим химиотерапевтическим средством, описанным в настоящем документе как часть комплексной терапии. Согласно еще другому аспекту, соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, аналог или производное может быть введено в сочетании со стандартными химиотерапевтическими сочетаниями, такими как, без ограничения, CMF (циклофосфамид, метотрексат и 5-фторурацил), CAF (циклофосфамид, адриамицин и 5-фторурацил), AC (адриамицин и циклофосфамид), FEC (5-фторурацил, эпирубицин и циклофосфамид), ACT или ATC (адриамицин, циклофосфамид и паклитаксел), ратуксимаб, Кселода (капецитабин), Цисплатин (CDDP), Карбоплатин, TS-1 (тегафур, гиместат и отастат калия в молярном соотношении 1/0,4/1), Камптотецин-11 (CPT-11, Иринотекан или Камптозар™), CHOP (циклофосфамид, гидроксидаунорубицин, онковин и преднизон или преднизолон), R-CHOP (ритуксимаб, циклофосфамид, гидроксидаунорубицин, онковин, преднизон или преднизолон), или CMFP (циклофосфамид, метотрексат, 5-фторурацил и преднизон).
Согласно предпочтительным вариантам осуществления, соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, пролекарство, метаболит, полиморф или сольват может быть введено с ингибитором фермента, такого как рецепторная или нерецепторная киназа. Рецепторные и нерецепторные киназы представляют собой, например, тирозинкиназы или сериновые/треониновые киназы. Ингибиторы киназ, описанные в настоящем документе, представляют собой малые молекулы, полинуклеиновые кислоты, полипептиды или антитела.
Типичные ингибиторы киназ включают в себя без ограничения Бевацизумаб (нацелен на VEGF), BIBW 2992 (нацелен на EGFR и Erb2), Цетуксимаб/Эрбитукс (нацелен на Erb1), Иматиниб/Гливек (нацелен на Bcr-Abl), Трастузумаб (нацелен на Erb2), Гефитиниб/Иресса (нацелен на EGFR), Ранибизумаб (нацелен на VEGF), Пегаптаниб (нацелен на VEGF), Эрлотиниб/Тарцева (нацелен на Erb1), Нилотиниб (нацелен на Bcr-Abl), Лапатиниб (нацелен на Erb1 и Erb2/Her2), GW-572016/лапатиниб дитозилат (нацелен на HER2/Erb2), Панитумумаб/Вектибикс (нацелен на EGFR), Вандетиниб (нацелен на RET/VEGFR), E7080 (множественные мишени, включая RET и VEGFR), Герцептин (нацелен на HER2/Erb2), PKI-166 (нацелен на EGFR), Канертиниб/CI-1033 (нацелен на EGFR), Сунитиниб/SU-11464/Сутент (нацелен на EGFR и FLT3), матузумаб/Emd7200 (нацелен на EGFR), EKB-569 (нацелен на EGFR), Zd6474 (нацелен на EGFR и VEGFR), PKC-412 (нацелен на VEGR и FLT3), Ваталаниб/Ptk787/ZK222584 (нацелен на VEGR), CEP-701 (нацелен на FLT3), SU5614 (нацелен на FLT3), MLN518 (нацелен на FLT3), XL999 (нацелен на FLT3), VX-322 (нацелен на FLT3), Azd0530 (нацелен на SRC), BMS-354825 (нацелен на SRC), SKI-606 (нацелен на SRC), CP-690 (нацелен на JAK), AG-490 (нацелен на JAK), WHI-P154 (нацелен на JAK), WHI-P131 (нацелен на JAK), сорафениб/Нексавар (нацелен на RAF киназу, VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-ß, KIT, FLT-3 и RET), Дазатиниб/Спрайсел (нацелен на BCR/ABL и Src), AC-220 (нацелен на Flt3), AC-480 (нацелен на все HER белки, panHER), Мотезаниб дифосфат (нацелен на VEGF1-3, PDGFR и c-kit), Денозумаб (нацелен на RANKL, ингибирует SRC), AMG888 (нацелен на HER3) и AP24534 (множественные мишени, включая Flt3).
Типичные ингибиторы сериновой/треониновой киназы включают в себя без ограничения Рапамун (нацелен на mTOR/FRAP1), Дефоролимус (нацелен на mTOR), Цертикан/Эверолимус (нацелен на mTOR/FRAP1), AP23573 (нацелен на mTOR/FRAP1), Эрил/Фасудил гидрохлорид (нацелен на RHO), Флавопиридол (нацелен на CDK), Селициклиб/CYC202/Росковитрин (нацелен на CDK), SNS-032/BMS-387032 (нацелен на CDK), Рубоксистаурин (нацелен на PKC), Pkc412 (нацелен на PKC), Бриостатин (нацелен на PKC), KAI-9803 (нацелен на PKC), SF1126 (нацелен на PI3K), VX-680 (нацелен на киназу Аврора), Azd1152 (нацелен на киназу Аврора), Arry-142886/AZD-6244 (нацелен на MAP/MEK), SCIO-469 (нацелен на MAP/MEK), GW681323 (нацелен на MAP/MEK), CC-401 (нацелен на JNK), CEP-1347 (нацелен на JNK) и PD 332991 (нацелен на CDK).
Нарушение, в котором играет роль EZH2-опосредованное метилирование белка, может представлять собой неврологическое заболевание. Поэтому, соединение согласно настоящему изобретению также может быть использовано для лечения или изучения неврологических заболеваний, таких как эпилепсия, шизофрения, биполярное нарушение или другие психологические и/или психиатрические нарушения, нейропатии, скелетно-мышечная атрофия и нейродегенеративные заболевания, например, нейродегенеративного заболевания. Типичные нейродегенеративные заболевания включают в себя болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз (ALS) и болезнь Паркинсона. Другой класс нейродегенеративных заболеваний включает в себя заболевания, обусловленные, по меньшей мере, частично, агрегацией полиглутамина. Заболевания этого класса включают в себя: болезнь Гентингтона, спинально-бульбарную мышечную атрофию (SBMA или болезнь Кеннеди), дентато-рубро-паллидо-льюисову атрофию (DRPLA), спиноцеребеллярную атаксию 1 (SCA1), спиноцеребеллярную атаксию 2 (SCA2), болезнь Мачадо-Джозефа (MJD; SCA3), спиноцеребеллярную атаксию 6 (SCA6), спиноцеребеллярную атаксию 7 (SCA7) и спиноцеребеллярную атаксию 12 (SCA12).
Любое другое заболевание, в котором играет роль эпигенетическое метилирование, опосредованное EZH2, может подлежать лечению или профилактике с использованием соединений и способов, описанных в настоящем документе, или такие заболевания и их потенциальные виды лечения могут быть исследованы с использованием соединений, описанных в настоящем документе.
4. Фармацевтические композиции
Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение любой формулы, раскрытой в настоящем документе, в сочетании, по меньшей мере, с одним фармацевтически приемлемым наполнителем или носителем.
Термин «фармацевтическая композиция» представляет собой лекарственную форму, содержащую соединения согласно настоящему изобретению в форме, подходящей для введения субъекту. Согласно одному варианту осуществления, фармацевтическая композиция представляет собой нерасфасованную лекарственную форму или стандартную лекарственную форму. Стандартная лекарственная форма представляет собой любую из целого ряда форм, включая, например, капсулу, пакет для внутривенного вливания, таблетку, однократное нажатие на аэрозольный ингалятор или флакон. Количество активного ингредиента (например, лекарственная форма раскрытого соединения или его соли, гидрата, сольвата или изомера) в стандартной дозе композиции представляет собой эффективное количество и варьирует в соответствии с конкретно рассматриваемым лечением. Специалисту в данной области техники следует понимать, что в зависимости от возраста и состояния пациента иногда необходимо вносить рутинные изменения в дозировку. Дозировка также будет зависеть от пути введения. Предусмотрен целый ряд путей введения, включая пероральный, пульмональный, ректальный, парентеральный, чрескожный, подкожный, внутривенный, внутримышечный, интраперитонеальный, ингаляционный, буккальный, подъязычный, интраплевральный, интратекальный, интраназальный и т.п. Лекарственные формы для местного или чрескожного введения соединения согласно настоящему изобретению включают порошки, спреи, мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, растворы, пластыри и средства для ингаляции. Согласно одному варианту осуществления, активное соединение смешивают в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем, и с любыми консервантами, буферами или пропеллентами, которые требуются.
Используемое в настоящем документе выражение «фармацевтически приемлемый» относится к таким соединениям, анионам, катионам, веществам, композициям, носителям и/лекарственным формам, которые подходят в рамках здравого медицинского суждения для использования в контакте с тканями людей и животных без проявления чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, соразмерно с приемлемым соотношением пользы и риска.
Термин «фармацевтически приемлемый наполнитель» означает наполнитель, который применим для приготовления фармацевтической композиции, который в целом безопасен, нетоксичен и не является нежелательным ни с биологической, ни с какой-либо другой точки зрения, и включает наполнитель, который приемлем для применения в ветеринарии, а также для фармацевтического применения у людей. Используемый в настоящем описании и формуле изобретения термин «фармацевтически приемлемый наполнитель» включает как один, так и несколько таких наполнителей.
Фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению составляют так, чтобы она была совместима с предполагаемым путем введения. Примеры путей введения включают парентеральное, например, внутривенное, внутрикожное, подкожное, пероральное (например, ингаляционное), чрескожное (местное) и чресслизистое введение. Растворы или суспензии, используемые для парентерального, внутрикожного или подкожного применения, могут включать следующие компоненты: стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, солевой раствор, жирные масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные средства, такие как бензиловый спирт или метилпарабены; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатирующие средства, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота; буферы, такие как ацетаты, цитраты или фосфаты, и средства для регулирования тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза. Значение рН может корректироваться кислотами или основаниями, такими как соляная кислота или гидроксид натрия. Парентеральные препараты могут быть упакованы в ампулы, шприцы-тюбики или флаконы для многократного дозирования, сделанные из стекла или пластика.
Соединение или фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению могут быть введены субъекту множеством хорошо известных способов, используемых в настоящее время для химиотерапевтического лечения. Например, для лечения видов рака, соединение согласно настоящему изобретению может быть инъецировано прямо в злокачественные опухоли, инъецировано в кровь или полости тела, или введено перорально или нанесено через кожу с помощью пластырей. Выбранная доза должна быть достаточной для осуществления эффективного лечения, но не настолько высокой, чтобы вызывать неприемлемые побочные эффекты. В процессе лечения и в течении разумного периода времени после лечения предпочтительно следует проводить тщательный мониторинг стадии заболевания (например, рак, предрак и т.п.) и общего состояния здоровья пациента.
Используемый в этом документе термин «терапевтически эффективное количество» относится к количеству фармацевтического средства, необходимого для лечения, облегчения или профилактики выявленного заболевания или состояния, или демонстрирующего заметный терапевтический или ингибирующий эффект. Эффект может быть определен посредством любого метода анализа, известного в данной области техники. Конкретное эффективное для субъекта количество будет зависеть от массы тела, размера и общего состояния здоровья субъекта; природы и продолжительности состояния; и терапевтического средства или сочетания терапевтических средств, выбранных для введения. Терапевтически эффективные количества для конкретной ситуации могут быть определены путем обычного эксперимента, который находится в пределах квалификации и суждения практикующего врача. Согласно предпочтительному аспекту, подлежащее лечению заболевание или состояние представляет собой рак. Согласно другому аспекту, подлежащее лечению заболевание или состояние представляет собой клеточное пролиферативное нарушение.
Для любого соединения терапевтически эффективное количество может быть первоначально оценено либо при анализе на клеточных культурах, например, на неопластических клетках, либо в моделях на животных, обычно на крысах, мышах, кроликах, собаках или свиньях. Модели на животных также могут быть использованы для определения подходящего диапазона концентраций и пути введения. Такая информация может быть далее использована для определения применимых доз и путей введения у людей. Терапевтическая/профилактическая эффективность и токсичность могут быть определены посредством стандартных фармацевтических процедур на клеточных культурах или экспериментальных животных, например, путем определения ED50 (терапевтически эффективная доза для 50% популяции) и LD50 (летальная доза для 50% популяции). Дозовое соотношение между токсичностью и терапевтическими эффектами представляет собой терапевтический индекс, и он может быть выражен в виде отношения LD50/ED50. Фармацевтические композиции, которые проявляют высокие терапевтические индексы, являются предпочтительными. Дозировка может варьировать в пределах диапазона, в зависимости от используемой лекарственной формы, чувствительности пациента и пути введения.
Дозировку и введение адаптируют для обеспечения достаточных уровней активного(ых) средства(средств) или для сохранения желаемого эффекта. Факторы, которые могут быть приняты во внимание, включают тяжесть болезненного состояния, общее состояние здоровья субъекта, возраст, вес и пол субъекта, рацион питания, время и частоту введения, сочетание(я) лекарств, чувствительность в реакциях и толерантность/отвечаемость на терапию. Долго действующие фармацевтические композиции могут вводиться каждые 3 или 4 дня, каждую неделю, или один раз каждые две недели в зависимости от времени полувыведения и скорости выведения конкретной лекарственной формы.
Фармацевтические композиции, содержащие активные соединения согласно настоящему изобретению, могут быть изготовлены общеизвестным способом, например, посредством общепринятых процессов смешивания, растворения, гранулирования, приготовления драже, растирания в порошок, эмульгирования, заключения в капсулы, захвата или лиофилизации. Фармацевтические композиции могут быть составлены общепринятым способом с использованием одного или нескольких фармацевтически приемлемых носителей, содержащих наполнители и/или вспомогательные средства, которые способствуют переработке активных соединений в препараты, которые могут быть использованы фармацевтически. Безусловно, подходящая лекарственная форма зависит от выбранного пути введения.
Фармацевтические композиции, подходящие для инъекционного применения, включают стерильные водные растворы (если препарат растворим в воде) или коллоидные растворы и стерильные порошки для экстемпорального приготовления стерильных инъекционных растворов или коллоидных растворов. Для внутривенного введения, подходящие носители включают физиологический солевой раствор, бактериостатическую воду, Кремофор ELTM (BASF, Parsippany, N.J.) или фосфатный буферный солевой раствор (PBS). Во всех случаях, композиция должна быть стерильной и должна быть жидкой до такой степени, чтобы существовала возможность вводить ее через иглу. Она должна быть стабильной в условиях изготовления и хранения и должна быть предохранена от контаминационного действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Носитель может представлять собой раствор или дисперсионную среду, содержащую, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль, и т.п.), и их подходящие смеси. Подходящая текучесть может поддерживаться, например, посредством использования покрытия, такого как лецитин, посредством обеспечения необходимого размера частиц в случае коллоидного раствора и посредством применения поверхностно-активных веществ. Профилактика действия микроорганизмов может достигаться посредством различных антибактериальных и противогрибковых средств, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, аскорбиновой кислоты, тимеросала и т.п. Во многих случаях, будет предпочтительным включение в композицию изотонических средств, например, сахаров, полиспиртов, таких как маннит и сорбит, и хлорида натрия. Пролонгированная абсорбция инъекционных композиций может достигаться посредством включения в композицию средства, которое задерживает всасывание, например, моностеарат алюминия и желатин.
Стерильные инъекционные растворы могут быть приготовлены путем заключения активного соединения в необходимом количестве в подходящий растворитель вместе с одним или с сочетанием перечисленных выше ингредиентов, при необходимости, с последующей стерилизацией фильтрованием. Обычно коллоидные растворы приготавливают путем заключения активного соединения в стерильную основу, которая содержит основную дисперсную среду и другие необходимые ингредиенты из числа тех, что перечислены выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъекционных растворов, способы приготовления представляют собой вакуумную сушку и лиофилизацию, в результате которых получают порошок активного ингредиента плюс любой дополнительный желаемый ингредиент из его раствора, предварительно стерилизованного фильтрацией.
Пероральные композиции обычно включают инертный разбавитель или пригодный к употреблению фармацевтически приемлемый носитель. Они могут быть заключены в желатиновые капсулы или спрессованы в таблетки. С целью перорального терапевтического введения, активное соединение может включать наполнители и использоваться в форме таблеток, пастилок или капсул. Пероральные композиции также могут быть приготовлены с использованием жидкого носителя для применения в качестве ополаскивателя для рта, в котором соединение в жидком носителе применяют перорально и выплевывают или проглатывают после полоскания. Фармацевтически совместимые связующие вещества и/или вспомогательные вещества могут быть включены как часть композиции. Таблетки, пилюли, капсулы, пастилки и т.п. могут содержать любой из следующих ингредиентов или соединения сходной природы: связующее вещество, такое как микрокристаллическая целлюлоза, трагакантовая камедь или желатин; наполнитель, такой как крахмал или лактоза, разрыхлитель, такой как альгиновая кислота, Примогель или кукурузный крахмал; смазка, такая как стеарат магния или Sterotes; глидант, такой как коллоидный диоксид кремния; подсластитель, такой как сахароза или сахарин; или вкусоароматизатор, такой как мята, метилсалицилат или апельсиновый вкусоароматизатор.
Для введения путем ингаляции соединения предоставляют в форме аэрозоля, распыляемого спрея из контейнера под давлением или распылителя, который содержит подходящий пропеллент, например, газ, такой как диоксид углерода, или небулайзера.
Системное введение также может проводиться чресслизистым или чрескожным путем. Для чресслизистого или чрескожного введения, в лекарственной форме используют пенетранты, подходящие для проникновения через барьер. Такие пенетранты обычно известны в данной области техники, и для чресслизистого введения включают, например, детергенты, соли желчных кислот и производные фусидовой кислоты. Чресслизистое введение может быть осуществлено посредством использования назальных спреев или суппозиториев. Для чрескожного введения активные соединения включают в состав мази, бальзама, геля или крема, обычно известных в данной области техники.
Активные соединения могут быть приготовлены с фармацевтически приемлемыми носителями, которые будут защищать соединение от быстрого выведения из организма, такими как лекарственные формы с контролируемым высвобождением, включая импланты и микроинкапсулированные системы доставки. Могут быть использованы биоразлагаемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолиевая кислота, коллаген, сложные полиортоэфиры и полимолочная кислота. Способы приготовления таких лекарственных форм будут очевидны специалисту в данной области техники. Такие вещества также могут быть коммерчески доступны от Alza Corporation и Nova Pharmaceuticals, Inc. В качестве фармацевтически приемлемых носителей также могут быть использованы липосомальные суспензии (включая нацеленные на инфицированные клетки липосомы с моноклональными антителами к вирусным антигенам). Они могут быть приготовлены в соответствии со способами, известными специалисту в данной области техники, например, как описано в патенте США № 4522811.
Для облегчения введения и равномерности дозировки особенно эффективно приготавливать пероральные или парентеральные композиции в стандартной лекарственной форме. Используемый в настоящем документе термин «стандартная лекарственная форма» относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве однократных дозировок для подлежащего лечению субъекта; причем каждая единица содержит заранее определенное количество активного соединения, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем. Спецификация для стандартных лекарственных форм согласно настоящему изобретению диктуется и напрямую зависит от уникальных характеристик активного соединения и конкретного терапевтического эффекта, который должен быть достигнут.
При терапевтических применениях, дозировки фармацевтических композиций, используемых в соответствии с настоящим изобретением, варьируют в зависимости от средства, возраста, веса и клинического состояния пациента-реципиента, и от опыта и суждения назначающего терапию клинициста или практикующего врача наряду с другими факторами, влияющими на выбранную дозировку. Как правило, доза должна быть достаточной, чтобы приводить к замедлению и, предпочтительно, регрессии роста опухолей, а также, предпочтительно, приводить к полной регрессии рака. Дозировки могут варьировать приблизительно от 0,01 мг/кг в сутки приблизительно до 5000 мг/кг в сутки. Согласно предпочтительным аспектам, дозировки могут варьировать приблизительно от 1 мг/кг в сутки приблизительно до 1000 мг/кг в сутки. Согласно некоторому аспекту, доза будет варьировать приблизительно от 0,1 мг/сутки приблизительно до 50 г/сутки; приблизительно от 0,1 мг/сутки приблизительно до 25 г/сутки; приблизительно от 0,1 мг/сутки приблизительно до 10 г/сутки; приблизительно от 0,1 мг/сутки приблизительно до 3 г/сутки; или приблизительно от 0,1 мг/сутки приблизительно до 1 г/сутки, в виде однократной, дробной или непрерывной доз (причем дозу следует скорректировать на вес пациента в кг, площадь поверхности тела в м2 и возраст в годах). Эффективное количество фармацевтического средства представляет собой такое количество, которое обеспечивает объективно определяемое улучшение, отмеченное клиницистом или другим квалифицированным наблюдателем. Например, регрессия опухоли у пациента может быть оценена на основании диаметра опухоли. Уменьшение диаметра опухоли указывает на регрессию. На регрессию также указывает прекращение рецидивов опухолей после остановки лечения. Используемый в настоящем документе термин «способ эффективного дозирования» относится к количеству активного соединения, способного давать желаемый биологический эффект у субъекта или клетки.
Фармацевтические композиции могут быть заключены в контейнер, упаковку или дозатор вместе с инструкциями по применению.
Соединения согласно настоящему изобретению также способны образовывать соли. Все такие формы также подпадают под объем настоящего изобретения.
Используемый в этом документе термин «фармацевтически приемлемые соли» относится к производным соединений согласно настоящему изобретению, в которых исходное соединение модифицировано путем создания его солей с кислотами или основаниями. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают без ограничения соли неорганических или органических кислот с остатками оснований, таких как амины, щелочные металлы, или органические соли остатков кислот, таких как карбоновые кислоты, и т.п. Фармацевтически приемлемые соли включают общепринятые нетоксичные соли или соли четвертичного аммония исходного соединения, образованные, например, нетоксичными неорганическими или органическими кислотами. Например, такие общепринятые нетоксичные соли включают без ограничения соли, полученные из неорганических и органических кислот, выбранных из 2-ацетоксибензойной, 2-гидроксиэтансульфоновой, уксусной, аскорбиновой, бензолсульфоновой, бензойной, бикарбоновой, карбоновой, лимонной, этилендиаминтетрауксусной, этандисульфоновой, 1,2-этансульфоновой, фумаровой, глюкогептоновой, глюконовой, глутаминовой, гликолевой, гликолиларсаниловой, гексилрезорциновой, гидрабамовой, бромистоводородной, соляной, йодистоводородной, гидроксималеиновой, гидроксинафтойной, изэтиновой, молочной, лактобионовой, лаурилсульфоновой, малеиновой, яблочной, миндальной, метансульфоновой, напсиловой, азотной, щавелевой, памоевой, пантотеновой, фенилуксусной, фосфорной, полигалактуроновой, пропионовой, салициловой, стеариновой, субуксусной, янтарной, сульфаминовой, сульфанильной, серной, танниновой, винной, толуолсульфоновой кислот и часто встречающихся аминокислот, например, глицина, аланина, фенилаланина, аргинина и т.п.
Другие примеры фармацевтически приемлемых солей включают соли капроновой кислоты, циклопентанпропионовой кислоты, пировиноградной кислоты, малоновой кислоты, 3-(4-гидроксибензоил)бензойной кислоты, коричной кислоты, 4-хлорбензолсульфоновой кислоты, 2-нафталинсульфоновой кислоты, 4-толуолсульфоновой кислоты, камфорсульфоновой кислоты, 4-метилбицикло[2.2.2]окт-2-ен-1-карбоновой кислоты, 3-фенилпропионовой кислоты, триметилуксусной кислоты, трет-бутилуксусной кислоты, муконовой кислоты и т.п. Настоящее изобретение также охватывает соли, образованные в том случае если протон кислоты, присутствующий в исходном соединении, либо замещен ионом металла, например ионом щелочного металла, ионом щелочноземельного металла или ионом алюминия; либо образует координационную связь с органическим основанием, таким как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, трометамин, N-метилглюкамин и т.п.
Следует понимать, что все ссылки на фармацевтически приемлемые соли включают определенные в настоящем документе формы присоединения растворителя (сольваты) или кристаллические формы (полиморфы) той же соли.
Соединения согласно настоящему изобретению также могут быть приготовлены в виде сложных эфиров, например, фармацевтически приемлемых сложных эфиров. Например, функциональная группа карбоновой кислоты в соединении может быть преобразована до его соответствующего сложного эфира, например, метилового, этилового или другого сложного эфира. Кроме того, спиртовая группа в соединении может быть преобразована до его соответствующего сложного эфира, например, ацетата, пропионата или другого сложного эфира.
Соединения согласно настоящему изобретению также могут быть приготовлены в качестве пролекарств, например, фармацевтически приемлемых пролекарств. Термины «про-лекарство» и «пролекарство» используются в настоящем документе взаимозаменяемо и относятся к любому соединению, которое высвобождает in vivo активное исходное лекарство. Поскольку известно, что пролекарства усиливают множество желаемых свойств фармацевтических препаратов (например, растворимость, биодоступность, получение, и т.п.), соединения согласно настоящему изобретению могут доставляться в форме пролекарства. Таким образом, предполагается, что настоящее изобретение охватывает пролекарства заявленных в настоящем документе соединений, способы их доставки и композиции, содержащие такие пролекарства. Предполагается, что «пролекарства» включают любые ковалентно связанные носители, которые высвобождают in vivo активное исходное лекарство согласно настоящему изобретению, при введении субъекту такого пролекарства. Пролекарства согласно настоящему изобретению приготавливают посредством такой модификации функциональных групп, присутствующих в соединении, при которой такие модификации расщепляются до исходного соединения либо посредством обычных манипуляций, либо in vivo. Пролекарства включают соединения согласно настоящему изобретению, в которых гидроксильная, аминогруппа, сульфгидрильная, карбоксильная или карбонильная группа связана с любой группой, которая может быть расщеплена in vivo с образованием свободной гидроксильной, свободной аминогруппы, свободной сульфгидрильной, свободной карбоксильной или свободной карбонильной группы, соответственно.
Примеры пролекарств включают без ограничения сложные эфиры (например, ацетат, диалкиламиноацетаты, формиаты, фосфаты, сульфаты и производные бензоата) и карбаматы (например, N,N-диметиламинокарбонил) гидроксильных функциональных групп, сложные эфиры (например, сложные этиловые эфиры, сложные эфиры морфолинэтанола) карбоксильных функциональных групп, N-ацильные производные (например, N-ацетил) оснований Манниха, оснований Шиффа и енаминоны функциональных аминогрупп, оксимы, ацетали, кетали и енольные сложные эфиры кетонов и альдегидные функциональные группы в соединениях согласно настоящему изобретению и т.п., (см. Bundegaard, H., Design of Prodrugs, p. 1-92, Elesevier, New York-Oxford (1985)).
Соединения или их фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры или пролекарства вводят перорально, назально, чрескожно, пульмонально, ингаляционно, буккально, подъязычно, интраперитонеально, подкожно, внутримышечно, внутривенно, ректально, интраплеврально, интратекально и парентерально. Согласно одному варианту осуществления, соединение вводят перорально. Специалист в данной области техники может оценить преимущества конкретных путей введения.
Схема дозирования соединений выбирают в соответствии с рядом факторов, включая тип, вид, возраст, вес, пол и медицинское состояние пациента; тяжесть подлежащего лечению состояния; путь введения; функции почек и печени пациента; и конкретное используемое соединение или его соль. Квалифицированный врач или ветеринар может без труда определить и выписать эффективное количество лекарства, необходимое для профилактики, противодействия или подавления прогрессирования состояния.
Методики для приготовления составов и введения раскрытых соединений согласно настоящему изобретению могут быть найдены в Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, Mack Publishing Co., Easton, PA (1995). Согласно некоторому варианту осуществления, описанные в настоящем документе соединения и их фармацевтически приемлемые соли используют в фармацевтических препаратах в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Подходящие фармацевтически приемлемые носители включают инертные твердые наполнители или разбавители и стерильные водные или органические растворы. Соединения будут содержаться в таких фармацевтических композициях в количествах, достаточных для обеспечения желаемого дозированного количества в диапазоне, описанном в настоящем документе.
Если иное не указано особо, то все процентные содержания и соотношения, используемые в настоящем документе, представлены по весу. Другие характерные черты и преимущества настоящего изобретения очевидны из различных примеров. Представленные примеры иллюстрируют различные компоненты и методики, пригодные при применении на практике настоящего изобретения. Примеры не ограничивают заявленное изобретение. Основываясь на раскрытии настоящего изобретения, специалист в данной области техники сможет определить и применить другие компоненты и методики, пригодные при применении на практике настоящего изобретения.
Для простоты, в схемах синтеза, описанных в настоящем документе, соединения могут быть получены в одной конкретной конфигурации. Такие конкретные конфигурации не должны истолковываться как ограничивающие настоящее изобретение одним или другим изомером, таутомером, региоизомером или стереоизомером, и не должны исключать смеси изомеров, таутомеров, региоизомеров или стереоизомеров; однако следует понимать, что данный изомер, таутомер, региоизомер или стереоизомер может обладать более высоким уровнем активности, чем другой изомер, таутомер, региоизомер или стереоизомер.
Соединения, разработанные, выбранные и/или оптимизированные посредством способов, описанных выше, могут быть охарактеризованы после получения с использованием ряда методов анализа, известных специалисту в данной области техники, для определения того, обладают ли соединения биологической активностью. Например, молекулы могут быть охарактеризованы посредством общепринятых методов анализа, включая без ограничения методы анализа, описанные ниже, для определения того, обладают ли они предсказанной активностью, активностью связывания и/или специфичностью связывания.
Кроме того, для ускорения анализа с использованием таких методов анализа может быть использован высокопроизводительный скрининг. В результате, существует возможность провести быстрый скрининг описанных в настоящем документе молекул на предмет их активности с использованием методик, известных в данной области техники. Общая методология для проведения высокопроизводительного скрининга описана, например, в Devlin (1998) High Throughput Screening, Marcel Dekker; и в патенте США № 5,763,263. В высокопроизводительных методах анализа могут использоваться одна или несколько различных методик анализа, включая без ограничения представленные ниже.
Все публикации и патентные документы, процитированные в настоящем документе, включены в настоящий документ посредством ссылки, как если бы каждая такая публикация или документ были бы конкретно и индивидуально указаны, как подлежащие включению в настоящий документ посредством ссылки. Не подразумевается, что цитирование публикаций и патентных документов является признанием того, что какие-либо из них являются релевантными источниками уровня техники, либо создает основание для какого-либо признания, связанного с их содержанием или датировкой. Поскольку изобретение описано посредством письменного раскрытия сущности изобретения, специалисты в данной области техники должны осознавать, что настоящее изобретение может применяться на практике согласно целому ряду вариантов осуществления, и что вышеизложенное описание и приведенные ниже примеры представлены лишь с иллюстративной целью, а не для ограничения последующей формулы изобретения.
5. Примеры
Общая экспериментальная часть
ЯМР
Если иное не указано особо, то 1H-ЯМР спектры получали с использованием CDCl3 и измеряли при 400 или 500 МГц с использованием спектрометров Varian или Oxford instruments (500 MHz). Указанные мультиплетности: с = синглет, д = дублет, т = триплет, кв = квартет, квинт = квинтет, секст = секстет, м = мультиплет, дд = дублет дублетов, дт = дублет триплетов; ушир. означает уширенный сигнал.
ЖХ/МС и ВЭЖХ
Системы Shimadzu LC-Q, Shimadzu ЖХ/МС-2010EV или Waters Acquity Ultra Performance LC. ВЭЖХ: продукты анализировали на системе Shimadzu SPD-20A с использованием колонки 150×4,5 мм YMC ODS-M80 или колонки 150×4,6 мм YMC-Pack Pro C18 при скорости потока 1,0 мл/мин.
Подвижная фаза представляла собой MeCN/H2O=3/2 (с добавлением 0,3% SDS или 0,05% H3PO4),
0,05% TFA в воде, 0,05% TFA в ацетонитриле (градиент: исходно 20%, затем 20%→95% 0,05% TFA/MeCN в течение 3 мин, выдерживание в течение 0,5 мин, а затем 3,51-4,50 мин 20% 0,05% TFA/MeCN).
В качестве альтернативы, использовали 2 различных способа ЖХ/МС; один использовали преимущественно для высоких значений pH (METCR1600), а другой - для более стандартных соединений (METCR1416).
0,1% Муравьиная кислота в воде - подвижная фаза «A»; 0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле - подвижная фаза «B»; с использованием колонки Waters Atlantis dC18, 2,1 мм ×100 мм, 3 мкм, скорость потока = 0,6 мл/мин, температура колонки = 40°C; Время (мин) %B: 0,00 мин - 5% B, 5,0 мин - 100% B, 5,4 мин - 100% B и 5,42 мин - 5% B
«Способ 3,5 минут» относится к колонке Atlantis dC18, 2,1 мм ×50 мм, 3 мкм, скорость потока 1 мл/мин при 40°C; подвижная фаза A=0,1% муравьиная кислота (водн.), подвижная фаза B=0,1% муравьиная кислота (MeCN), инжекция 3 мкл, градиент: 0 мин - (5% органического растворителя), 2,5 мин - (100% органического растворителя), 2,7 мин - (100% органического растворителя), 2,71 мин - (5% органического растворителя), 3,5 мин - (5% органического растворителя)
«Способ 7,0 минут» относится к колонке Atlantis dC18, 2,1 мм ×100 мм, 3 мкм, скорость потока 0,6 мл/мин при 40ºC; подвижная фаза A=0,1% муравьиная кислота (водн.), подвижная фаза B=0,1% муравьиная кислота (MeCN), инжекция 3 мкл, градиент: 0 мин - (5% органического растворителя), 5,0 мин - (100% органического растворителя), 5,4 мин - (100% органического растворителя), 5,42 мин - (5% органического растворителя), 7 мин - (5% органического растворителя)
Оба способа («3,5 минут» и «7 минут») проводили на системе MS18 Shimadzu ЖХ/МС-2010EV или MS19 Shimadzu ЖХ/МС-2010EV с использованием насосов LC-20AB и фотодиодных детекторов SPD-M20A.
Продукты очищали методом ВЭЖХ/МС с использованием системы Waters AutoPurification System с масс-детектором 3100.
ВЭЖХ-анализ также проводили на системе Shimdazu LC-2010 CHT с использованием колонки YMC ODS-A, C18 (150×4,6 мм × 5 мкм) при температуре окружающей среды со скоростью потока 1,4 мл/мин. Проводили инжекцию 10 мкл, и проводили детекцию при помощи УФ-фотодиодного детектора. Подвижная фаза A представляла собой 0,05% TFA в воде, и подвижная фаза B представляла собой 0,05% TFA в ацетонитриле с градиентом: исходно 5% B, 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 0,5% B. Разбавитель представляет собой подвижную фазу.
Другое
Автоматизированную колоночную флэш-хроматографию проводили на 10 г SNAP картридже Biotage Isolera version 4 со скоростью потока 12 мл/мин или на 25 г SNAP картридже со скоростью потока 25 мл/мин с детектированием при 254 нм и 280 нм.
Селективное восстановление нитрилов может проводиться на ThalesNano H-Cube® в соответствии с условиями, описанными в методике эксперимента.
Пример 1: Синтез соединения 1: 5-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4’-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000068
Соединение 1
Стадия 1: 5-бром-2-метил-3-нитробензойная кислота
Figure 00000069
К перемешанному раствору 2-метил-3-нитробензойной кислоты (50 г, 276,2 ммоль) в конц. H2SO4 (200 мл) при комнатной температуре порциями добавляли 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (43,4 г, 151,8 ммоль), и перемешивали реакционную массу при комнатной температуре в течение 5 ч. По завершении реакции, реакционную массу выливали в ледяную воду, выпавшее в осадок твердое вещество фильтровали, полученный остаток промывали водой и сушили в условиях вакуума с получением целевого соединения (71,7 г, 100%).
Стадия 2: Синтез метил-5-бром-2-метил-3-нитробензоата
Figure 00000070
К перемешанному раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (287 г, 1103 ммоль) в DMF (150 мл) добавляли карбонат натрия (468 г, 4415 ммоль) и метилйодид (626,63 г, 4415 ммоль). Полученную реакционную массу нагревали при 60°C в течение 8 ч. По завершении реакции, выпавшее в осадок твердое вещество фильтровали, остаток промывали диэтиловым эфиром (5 раз). Объединенные органические слои сушили, концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного целевого соединения (302 г, 99%).
Стадия 3: метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоат
Figure 00000071
К перемешанному раствору метил-5-бром-2-метил-3-нитробензоата (150 г, 544 ммоль) в этаноле (750 мл) при перемешивании добавляли хлорид аммония (150 г, 2777 ммоль), растворенный в воде (750 мл), и железный порошок (93,3 г, 1636 ммоль). Полученную реакционную массу нагревали при 80°C в течение 7 ч. По завершении реакции, реакционную массу фильтровали через целит, промывая водой и этилацетатом, и экстрагировали фильтрат этилацетатом. Объединенные органические слои сушили и концентрировали в условиях пониженного давления с получением целевого соединения.
Стадия 4: метил-5-бром-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоат
Figure 00000072
К перемешанному раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (0,3 г, 1,33 ммоль) и циклопентанона (0,56 г, 6,6 ммоль) в метаноле (3 мл) добавляли уксусную кислоту (0,159 г, 2,6 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 3 ч. Затем добавляли цианборгидрид натрия (0,208 г, 3,3 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением целевого соединения.
Стадия 5: метил-5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-2-метилбензоат
Figure 00000073
К перемешанному раствору неочищенного метил-5-бром-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата (0,7 г, 2,25 ммоль) в ацетонитриле (15 мл) добавляли карбонат цезия (1,47 г, 4,50 ммоль) и метилйодид (1,6 г, 11,26 ммоль); полученную реакционную массу нагревали при 80°C в течение 7 ч. По завершении реакции, реакционную массу охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом, фильтрат концентрировали, а затем очищали методом колоночной хроматографии с получением целевого соединения (0,6 г, 82%).
Стадия 6: 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
Figure 00000074
К раствору метил-5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-2-метилбензоата (0,6 г, 1,8 ммоль) в MeOH (1,5 мл) добавляли водный NaOH (0,11 г, 2,75 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции, в условиях пониженного давления удаляли этанол, подкисляли до pH 6 с использованием разбавленной HCl и корректировали значение pH до 4 с использованием лимонной кислоты. Проводили экстрагирование с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,5 г, 87%).
Кислоту (0,5 г, 1,60 ммоль) затем растворяли в DMSO (3 мл), и добавляли к ней 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,49 г, 3,22 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего к ней добавляли PYBOP (1,25 г, 2,41 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. После завершения реакции, реакционную массу выливали на лед с получением твердого вещества, которое фильтровали и промывали ацетонитрилом, а затем эфиром, с получением целевого соединения (0,315 г, 44%).
Стадия 7: Синтез 5-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-формил-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000075
Раствор 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1 эквив.), (4-формилфенил)бороновой кислоты (1,2 эквив.) и Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.) в 1,4-диоксане (4 мл) продували аргоном в течение 10 мин. Затем к нему добавляли 2M раствор Na2CO3 (3,6 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 ч. После завершения реакции, к смеси добавляли воду и проводили экстрагирование с использованием DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (60-120 меш) с получением целевого соединения (0,1 г, 44%).
Стадия 8: Синтез 5-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4’-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000076
К перемешанному раствору 5-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-формил-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (0,1 г, 0,212 ммоль) и N,N-диметиламина (0,047 г, 1,06 ммоль) в метаноле (3 мл) добавляли уксусную кислоту (0,1 г, 0,21 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 3 ч. Затем добавляли цианборгидрид натрия (0,033 г, 0,53 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи. По завершении реакции, в условиях пониженного давления удаляли растворитель, и очищали остаток методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением целевого соединения (0,04 г, 37%). ЖХ/МС: 501,39 (M+1)+; ВЭЖХ: 90,78% (детекция при 254 нм) (Rt 4,171; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,17 (т, 1H), 7,57 (д, 2H, J=8 Гц), 7,33-7,37 (м, 3H), 7,17 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,27 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,52 (т, 1H, J=7,2 Гц), 3,04 (с, 2H), 2,54 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 2,19 (с, 3H), 2,15 (с, 6H), 2,09 (с, 3H), 1,70-1,72 (м, 2H), 1,61 (м, 2H), 1,43-1,50 (м, 4H).
Пример 2: Синтез соединения 2: 5-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000077
Соединение 2
Раствор 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1 эквив.), (4-(морфолинометил)фенил)бороновой кислоты (1,2 эквив.) и Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.) в 1,4-диоксане (4 мл) продували аргоном в течение 10 мин. Затем к нему добавляли 2M раствор Na2CO3 (3,6 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 ч. После завершения реакции, к смеси добавляли воду, и проводили экстрагирование с использованием DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (60-120 меш) с получением целевого соединения (0,02 г, 16%). ЖХ/МС: 543,22 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,53% (детекция при 254 нм) (Rt 4,181; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,17 (т, 1H, J=4,4 Гц), 7,98 (с, 1H), 7,73 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,57 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,37 (с, 2H), 7,17 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,27 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,44-3,57 (м, 7H), 2,54 (с, 3H), 2,32-2,36 (м, 4H), 2,23 (с, 3H), 2,19 (с, 3H), 2,09 (с, 3H), 1,69-1,72 (м, 2H), 1,61 (м, 2H), 1,43-1,50 (м, 4H).
Пример 3: Синтез 5-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000078
Соединение 3
Стадия 1: Синтез 5-бром-3-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
К раствору метил-5-бром-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата (0,39 г, 1,25 ммоль) в MeOH (5 мл) добавляли водный NaOH (0,1 г, 2,5 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. Этанол удаляли в условиях пониженного давления, и подкисляли раствор до pH 6 с использованием разбавленной HCl и до pH 4 с использованием лимонной кислоты. Продукт экстрагировали этилацетатом, и концентрировали объединенные органические слои с получением целевой кислоты (0,26 г, 0,82 ммоль). Кислоту растворяли в DMSO (3 мл), и добавляли к раствору 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,25 г, 1,68 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего к ней добавляли PYBOP (0,65 г, 1,26 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. Реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, это твердое вещество собирали путем фильтрования и промывали ацетонитрилом, а затем эфиром, с получением 5-бром-3-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,178 г, 50%).
Стадия 2: Синтез 5-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-формил-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Раствор 5-бром-3-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1 эквив.), (4-формилфенил)бороновой кислоты (1,2 эквив.) и Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.) в 1,4-диоксане (4 мл) продували аргоном в течение 10 мин. Затем к нему добавляли 2M раствор Na2CO3 (3,6 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры к смеси добавляли воду, а затем экстрагировали продукт DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (60-120 меш) с получением 5-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-формил-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида.
Стадия 3: 5-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
К перемешанному раствору 5-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-формил-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (0,11 г, 0,24 ммоль) и N,N-диметиламина (0,044 г, 1,2 ммоль) в метаноле (3 мл) добавляли уксусную кислоту (0,014 г, 0,24 ммоль), и перемешивали раствор при комнатной температуре в течение 3 ч. Затем добавляли цианборгидрид натрия (0,030 г, 0,48 ммоль), и перемешивали раствор в течение ночи. Растворитель удаляли в условиях пониженного давления, и очищали остаток методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением целевого 5-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида.
ЖХ/МС: 486,21 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,84% (детекция при 254 нм) (Rt 4,799; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,44 (с,1H), 8,02-8,03 (м,1H), 7,62 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,44 (с, 2H), 6,80 (с, 1H), 6,73 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,65 (д, 1H, J=6,4 Гц), 4,27 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,89 (д, 2H, J= 5,2 Гц), 2,49 (7H сливается с пиком растворителя), 1,98-2,19 (м, 11H), 1,55-1,70 (м, 6H).
Пример 4: Синтез 5-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000079
Соединение 4
Раствор 5-бром-3-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1 эквив.), (4-(морфолинометил)фенил)бороновой кислоты (1,2 эквив.) и Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.) в 1,4-диоксане (4 мл) продували аргоном в течение 10 мин. Затем к нему добавляли 2M раствор Na2CO3 (3,6 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 ч. После завершения реакции, к смеси добавляли воду, и проводили экстрагирование с использованием DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (60-120 меш) с получением 5-(циклопентиламино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида, который дополнительно очищали с использованием метода ВЭЖХ с получением трифторацетата.
ЖХ/МС: 529,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,46% (детекция при 254 нм) (Rt 4,782; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 9,90 (с, 1H), 8,06 (с, 1H), 7,72 (д, 2H, J=8 Гц), 7,55 (д, 2H, J=8 Гц), 6,83 (с, 1H), 6,76 (с, 1H), 5,86 (с, 1H),4,37 (с, 2H), 4,27 (д, 2H, J=4 Гц), 3,89-3,98 (м, 3H), 3,28-3,31 (м, 2H), 3,14 (с, 2H), 2,19 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 2,05 (с, 3H), 1,98-1,99 (м, 2H), 1,70 (с, 2H), 1,55 (с, 4H).
Пример 5: Синтез 2-(циклогекс-1-ен-1-ил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-6-(4-((диметиламино)метил)фенил)изоникотинамида
Figure 00000080
Соединение 5
Стадия 1: Синтез метил-2-хлор-6-(4-(гидроксиметил)фенил)изоникотината
Раствор метил-2,6-дихлоризоникотината (1 г, 4,85 ммоль), бороновой кислоты (0,73 г, 4,8 ммоль) и PdCl2(PPh3)2 (0,15 г, 0,218 ммоль) в THF (20 мл) дегазировали в течение 15 мин. Затем добавляли Cs2CO3, и снова продували реакционную массу в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 70°C в течение 2 ч. По завершении реакции, реакционную массу концентрировали и очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением метил-2-хлор-6-(4-(гидроксиметил)фенил)изоникотината (0,45 г, 33%).
Стадия 2: Синтез метил-2-(4-(бромметил)фенил)-6-хлоризоникотината
К раствору метил-2-хлор-6-(4-(гидроксиметил)фенил)изоникотината (0,67 г, 2,418 ммоль) в DCM (10 мл) при 0°C добавляли трифенилфосфин (1 г, 3,86 ммоль) и тетрабромид углерода (1,63 г, 3,87 ммоль), и перемешивали реакционную массу в течение ночи при к.т. По завершении реакции, реакционную массу концентрировали и очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением метил-2-(4-(бромметил)фенил)-6-хлоризоникотината (0,53 г, 64%).
Стадия 3: Синтез метил-2-хлор-6-(4-((диметиламино)метил)фенил)изоникотината
К раствору метил-2-(4-(бромметил)фенил)-6-хлоризоникотината (0,533 г, 1,56 ммоль) в THF добавляли диметиламин (7,8 мл, 2M раствор в THF), и перемешивали реакционную массу при к.т. в течение ночи. По завершении реакции, реакционную массу концентрировали и очищали полученное неочищенное вещество методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением чистого метил-2-хлор-6-(4-((диметиламино)метил)фенил)изоникотината (0,48 г, 99%).
Стадия 4: Синтез 2-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-6-(4-((диметиламино)метил)фенил)изоникотинамида
К раствору метил-2-хлор-6-(4-((диметиламино)метил)фенил)изоникотината (0,48 г, 1,578 ммоль) в этаноле (5 мл) добавляли NaOH (0,094 г, 2,368 ммоль), растворенный в воде (1 мл), и нагревали реакционную массу при 60°C в течение 1 ч. По завершении реакции, выпаривали растворитель в условиях пониженного давления. Остаток промывали эфиром и подкисляли до pH 8 добавлением 1н HCl, а затем до pH 5-6 добавлением лимонной кислоты. Водный слой экстрагировали 20% MeOH в DCM, и концентрировали объединенные органические слои в условиях пониженного давления с получением кислоты (0,47 г, неочищенный продукт), которую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. К раствору этой кислоты (0,47 г, 1,64 ммоль) в DMSO (4 мл) добавляли PyBOP (1,26 г, 2,43 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при к.т. в течение 15 мин. Затем добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,49 г, 3,28 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи. По завершении реакции, добавляли воду и экстрагировали водный слой 20% MeOH в DCM. Объединенные органические слои концентрировали, и очищали остаток методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением 2-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-6-(4-((диметиламино)метил)фенил)изоникотинамида (0,3 г, 43,6%).
Стадия 5: Синтез 2-(циклогекс-1-ен-1-ил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-6-(4-((диметиламино)метил)фенил)изоникотинамида
К перемешанному раствору 2-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-6-(4-((диметиламино)метил)фенил)изоникотинамида (0,11 г, 0,25 ммоль), бороновой кислоты (0,059 г, 0,27 ммоль) в смеси диоксан/вода (3 мл + 1,5 мл) добавляли Na2CO3 (0,098 г, 3,6 ммоль), и продували реакционную массу аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,028 г, 0,025 ммоль), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 3 ч. По завершении реакции, реакционную массу фильтровали через целит, и промывали слой целита этилацетатом. Объединенные фильтраты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением 2-(циклогекс-1-ен-1-ил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-6-(4-((диметиламино)метил)фенил)изоникотинамида.
Аналитические данные: ЖХ/МС: 471,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 95,64% (детекция при 254 нм) (Rt 5,661; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,52 (с, 1H), 8,79 (т, 1H), 8,13 (с, 1H), 8,10 (д, 2H, J=7,60 Гц), 7,81 (с, 1H), 7,41 (д, 2H, J=7,60 Гц), 6,90 (шир. с, 1H), 5,88 (с, 1H), 4,34 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,44 (с, 2H), 2,56 (шир. с, 2H), 2,26 (шир. с, 2H), 2,18 (с, 3H), 2,17 (с, 6H), 2,12 (с, 3H), 1,80-1,72 (м, 2H), 1,68-1,60 (м, 2H).
Пример 6: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-(4-((диметиламино)метил)фенил)-6-(пиперидин-1-ил)изоникотинамида
Figure 00000081
Соединение 6
Стадия 1: Синтез метил-2-хлор-6-(пиперидин-1-ил)изоникотината
Раствор метил-2,6-дихлоризоникотината (1 г, 4,85 ммоль), пиперидина (0,61 г, 7,28 ммоль), K2CO3 (1,38 г, 9,7 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) нагревали при 90°C в течение 20 ч. После завершения реакции, реакционную массу фильтровали, фильтрат концентрировали и очищали методом колоночной хроматографии с получением чистого метил-2-хлор-6-(пиперидин-1-ил)изоникотината (1,23 г, 90%).
Стадия 2: Синтез 2-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-6-(пиперидин-1-ил)изоникотинамида
К раствору метил-2-хлор-6-(пиперидин-1-ил)изоникотината (1,1 г, 4,33 ммоль) в этаноле (10 мл), добавляли NaOH (0,207 г, 5,196 ммоль), растворенный в воде (2 мл), и нагревали реакционную массу при 60°C в течение 1 ч. По завершении реакции, выпаривали растворитель в условиях пониженного давления. Остаток промывали эфиром и подкисляли до pH 8 добавлением 1н HCl, а затем до pH 5-6 добавлением лимонной кислоты. Полученное твердое вещество фильтровали, промывали водой и в завершение сушили в условиях пониженного давления с получением кислоты (0,92 г, 89%), которую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. К раствору этой кислоты (0,9 г, 3,75 ммоль) в DMSO (10 мл) добавляли PyBOP (3,9 г, 7,5 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при к.т. в течение 15 мин. Затем добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (1,5 г, 10 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи. По завершении реакции, добавляли воду, выпавшее в осадок твердое вещество фильтровали, промывали водой и сушили с получением 2-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-6-(пиперидин-1-ил)изоникотинамида (1 г, 74%).
Стадия 3: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-(4-формилфенил)-6-(пиперидин-1-ил)изоникотинамида
К перемешанному раствору 2-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-6-(пиперидин-1-ил)изоникотинамида (0,6 г, 1,6 ммоль), бороновой кислоты (0,263 г, 1,76 ммоль) в смеси диоксан/вода (15 мл + 5 мл) добавляли Na2CO3 (0,61 г, 5,76 ммоль), и продували реакционную массу аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,184 г, 0,16 ммоль), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 3 ч. По завершении реакции, реакционную массу фильтровали через целит, и промывали слой целита этилацетатом. Объединенные фильтраты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-(4-формилфенил)-6-(пиперидин-1-ил)изоникотинамида (0,5 г, 71%).
Стадия 4: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-(4-((диметиламино)метил)фенил)-6-(пиперидин-1-ил)изоникотинамида
К раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-(4-формилфенил)-6-(пиперидин-1-ил)изоникотинамида (0,2 г, 0,45 ммоль) в метаноле (12 мл) добавляли диметиламин (2,6 мл, 4,5 ммоль, 2M раствор в THF) и уксусную кислоту (0,02 г, 0,45 ммоль), и перемешивали реакционную массу при к.т. в течение 90 мин. Затем реакционную массу охлаждали до 0°C, и добавляли цианборгидрид натрия (0,056 г, 0,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 2 ч, а затем при к.т. в течение ночи. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, остаток обрабатывали водой и экстрагировали этилацетатом. Объединенные этилацетатные слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-(4-((диметиламино)метил)фенил)-6-(пиперидин-1-ил)изоникотинамида в виде светло-зеленого твердого вещества (0,173 г, 79%).
Аналитические данные: ЖХ/МС: 474,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,15% (детекция при 254 нм) (Rt 5,257; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,50 (с, 1H), 8,61 (т, 1H, J=4,4 Гц), 8,03 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,52 (с, 1H), 7,40 (д, 2H, J=8,4 Гц), 7,13 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,32 (д, 2H, J=4 Гц), 3,63 (шир. с, 6H), 2,26 (шир. с, 6H), 2,18 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,59 (шир. с, 6H).
Пример 7: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-(4-((диметиламино)метил)фенил)-6-(изопропиламино)изоникотинамида
Figure 00000082
Соединение 7
Стадия 1: Синтез метил-2-хлор-6-(изопропиламино)изоникотината
Раствор метил-2,6-дихлоризоникотината (1 г, 4,85 ммоль), изопропиламина (0,286 г, 4,85 ммоль), Cs2CO3 (2,06 г, 6,3 ммоль) в толуоле (30 мл) продували аргоном в течение 10 мин. Затем добавляли Pd(OAc)2 (0,108 г, 0,485 ммоль) и BINAP (0,3 г, 0,485 ммоль), и снова продували аргоном в течение 15 мин. Реакционную массу перемешивали при 80°C в течение 6 ч. По завершении реакции, реакционную массу фильтровали, и тщательно промывали остаток этилацетатом. Объединенные фильтраты концентрировали и очищали на колонке с силикагелем с получением чистого метил-2-хлор-6-(изопропиламино)изоникотината (0,3 г, 27,27%).
Стадия 2: Синтез 2-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-6-(изопропиламино)изоникотинамида
К раствору метил-2-хлор-6-(изопропиламино)изоникотината (0,393 г, 1,7 ммоль) в этаноле (4 мл), добавляли NaOH (0,082 г, 2,06 ммоль), воду (0,8 мл), и нагревали реакционную массу при 60°C в течение 1 ч. По завершении реакции, выпаривали растворитель в условиях пониженного давления. Остаток промывали эфиром и подкисляли до pH 8 добавлением 1н HCl, а затем до pH 5-6 добавлением лимонной кислоты. Полученное твердое вещество фильтровали, промывали водой, и в завершение сушили в условиях пониженного давления с получением кислоты (0,36 г, 97%), которую использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. К раствору этой кислоты (0,36 г, 1,68 ммоль) в DMSO (1,5 мл) добавляли PyBOP (1,3 г, 2,5 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при к.т. в течение 15 мин. Затем добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,383 г, 2,5 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи. По завершении реакции, добавляли воду, и экстрагировали водный слой 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением неочищенного 2-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-6-(изопропиламино)изоникотинамида (0,58 г, 100%), который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 3: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-(4-формилфенил)-6-(изопропиламино)изоникотинамида
К перемешанному раствору 2-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-6-(изопропиламино)изоникотинамида (0,58 г, 1,67 ммоль), бороновой кислоты (0,277 г, 1,84 ммоль) в смеси диоксан/вода (7 мл + 3 мл) добавляли Na2CO3 (0,64 г, 6,037 ммоль), и продували реакционную массу аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,194 г, 0,168 ммоль), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 3 ч. По завершении реакции, реакционную массу фильтровали через целит, и промывали слой целита этилацетатом. Объединенные фильтраты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-(4-формилфенил)-6-(изопропиламино)изоникотинамида (0,6 г, 85,7%).
Стадия 4: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-(4-((диметиламино)метил)фенил)-6-(изопропиламино)изоникотинамида
К раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-(4-формилфенил)-6-(изопропиламино)изоникотинамида (0,6 г, 1,44 ммоль) в метаноле (6 мл) добавляли диметиламин (7,1 мл, 14,33 ммоль, 2M раствор в THF) и уксусную кислоту (0,086 г, 1,44 ммоль), и перемешивали реакционную массу при к.т. в течение 1 ч. Затем добавляли цианборгидрид натрия (0,18 г, 2,8 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при к.т. в течение 2 ч. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, остаток обрабатывали водой и экстрагировали этилацетатом. Объединенные этилацетатные слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом препаративной ВЭЖХ целевой молекулы синтеза, N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-(4-((диметиламино)метил)фенил)-6-(изопропиламино)изоникотинамида, в виде светло-желтого твердого вещества.
Аналитические данные: ЖХ/МС: 448,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,22% (детекция при 254 нм) (Rt 4,170, Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (CD3OD, 400 МГц) δ 8,01 (д, 2H, J=8 Гц), 7,67 (д, 2H, J=8 Гц), 7,39 (с, 1H), 7,19 (с, 1H), 6,14 (с, 1H), 4,50 (с, 2H), 4,40 (с, 2H), 4,17-4,11 (м, 1H), 2,89 (с, 6H), 2,38 (с, 3H), 2,25 (с, 3H), 1,33 (д, 6H, J=6H).
Пример 8: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000083
Соединение 8
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата
К перемешанному раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (2,5 г, 10,2 ммоль) и дигидро-2H-пиран-4(3H)-она (1,3 г, 13,3 ммоль) в метаноле (20 мл) добавляли уксусную кислоту (0,61 г, 10,2 ммоль), и перемешивали раствор при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (1,2 г, 20,48 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи при комнатной температуре. Затем удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии с получением метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (2,2 г, 66%).
Стадия 2: Синтез метил-5-бром-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата
К перемешанному раствору метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (1,0 г, 3,15 ммоль) в ацетонитриле (15 мл) добавляли карбонат цезия (1,97 г, 6,10 ммоль) и метилйодид (2,15 г, 15,27 ммоль); полученный раствор нагревали при 80°C в течение 20 ч. Раствор охлаждали до комнатной температуры, фильтровали, и промывали остаток этилацетатом. Фильтрат концентрировали и очищали продукт методом колоночной хроматографии с получением метил-5-бром-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (0,82 г, 80%).
Стадия 3: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида
К раствору метил-5-бром-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (0,82 г, 2,4 ммоль) в MeOH (20 мл) добавляли водный NaOH (0,19 г, 4,89 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. Этанол удаляли в условиях пониженного давления, и подкисляли раствор до pH 6 с использованием разбавленной HCl и до pH 4 с использованием лимонной кислоты. Продукт экстрагировали этилацетатом, объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,70 г). Затем кислоту растворяли в DMSO (3 мл), и добавляли к ней 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,74 г, 4,89 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, затем к ней добавляли PYBOP (1,9 г, 3,6 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. Раствор выливали на лед с получением твердого вещества, которое фильтровали и промывали ацетонитрилом, а затем очищали методом колоночной хроматографии с получением 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида (0,6 г, 54%).
Стадия 4: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)бензамида
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида (1 эквив.) и 4-(2-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-ил)этил)морфолина (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Раствор нагревали при 100°C в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением целевого N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)бензамида (0,045 г, 36,9%).
ЖХ/МС: 563,00 (M+1)+; HPLC% 99,26 (детекция при 254 нм) (Rt 3,774; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,17 (с, 1H), 8,06 (т, 1H, J=4,8 Гц), 7,82 (с, 1H), 7,29 (с, 1H), 7,11 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,27 (д, 2H, J=4,8 Гц), 4,21 (т, 2H, J=6,4 Гц), 3,85 (д, 2H, J=11,2 Гц), 3,54 (т, 4H), 3,23-3,26 (м, 2H), 2,99 (м, 1H), 2,72 (т, 2H, J=6,4 Гц), 2,60 (с, 3H), 2,40 (шир. с, 4H), 2,20 (с, 3H), 2,16 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,58-1,59 (м, 4H).
Пример 9: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000084
Соединение 9
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида (1 эквив.) и 1-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.) и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Раствор нагревали при 100°C в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением целевого N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)бензамида (0,02 г, 20%). ЖХ/МС: 464,30 (M+1)+; HPLC% 97,80 (детекция при 254 нм) (Rt 4,286; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,12 (с, 1H), 8,06 (т, 1H), 7,81 (с, 1H), 7,28 (с, 1H), 7,10 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,27 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,83-3,86 (м, 5H), 3,23-3,29 (м, 2H), 2,99 (м, 1H), 2,59 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,16 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,58 (м, 4H).
Пример 10: Синтез 3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)бензамид
Figure 00000085
Соединение 10
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-3-(циклогексиламино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (5,0 г, 20,6 ммоль) и циклогексанона (4,03 г, 41,2 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляли уксусную кислоту (0,247 г, 20,6 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 3 ч. Затем добавляли цианборгидрид натрия (1,55 г, 24,6 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии с получением метил-5-бром-3-(циклогексиламино)-2-метилбензоата (2,75 г, 41%).
Стадия 2: Синтез метил-5-бром-3-(циклогексил(метил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-5-бром-3-(циклогексиламино)-2-метилбензоата (2,75 г, 8,45 ммоль) в ацетонитриле (25 мл) добавляли карбонат цезия (5,45 г, 16,9 ммоль) и метилйодид (6 г, 42,3 ммоль); полученный раствор нагревали при 80°C в течение 20 ч. По завершении реакции, раствор охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, и промывали остаток этилацетатом. Фильтрат концентрировали, а затем очищали методом колоночной хроматографии с получением метил-5-бром-3-(циклогексил(метил)амино)-2-метилбензоата (2,5 г, 87%).
Стадия 3: Синтез 5-бром-3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
К раствору метил-5-бром-3-(циклогексил(метил)амино)-2-метилбензоата (2,5 г, 7,35 ммоль) в MeOH (15 мл) добавляли водную NaOH (0,55 г, 14,7 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции, этанол удаляли в условиях пониженного давления, и подкисляли с использованием разбавленной HCl до pH 6 и лимонной кислоты до pH 4. Продукт экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (2,5 г, 87%). Затем кислоту растворяли в DMSO (20 мл), и добавляли к ним 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (2,34 г, 15,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли к ней PYBOP (5,85 г, 11,05 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. Затем реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, которое собирали путем фильтрования и промывали ацетонитрилом. Методом колоночной хроматографии на силикагеле получали 5-бром-3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид (1,5 г, 44,19%).
Стадия 4: Синтез 3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)бензамида
К перемешанному раствору 5-бром-3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1 эквив.) и 1-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл +1 мл), добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. После охлаждения, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта. Путем очистки методом колоночной хроматографии на силикагеле получали указанное в заголовке соединение (0,02 г, 20%).
ЖХ/МС: 462,40 (M+1)+; HPLC% 88,48 (детекция при 254 нм) (Rt 4,683; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,11 (с, 1H), 8,06 (т, 1H), 7,79 (с, 1H), 7,22 (с, 1H), 7,06 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,26 (д, 2H, J=4 Гц), 3,83 (с, 3H), 2,71 (т, 1H), 2,60 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,69 (м, 4H), 1,53-1,55 (м, 1H), 1,39-1,41 (м, 2H), 1,06-1,19 (м, 3H).
Пример 11: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-5-(метил(пиперидин-4-ил)амино)-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000086
Соединение 11
Стадия 1: Синтез трет-бутил-4-((5-бром-3-(метоксикарбонил)амино)пиперидин-1-карбоксилата
К перемешанному раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (5,0 г, 20,6 ммоль) и трет-бутил-4-оксопиперидин-1-карбоксилата (8,2 г, 41,1 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляли уксусную кислоту (1,2 г, 20,6 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 8 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (1,55 г, 24,6 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляли в условиях пониженного давления, и очищали продукт методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-4-((5-бром-3-(метоксикарбонил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (5,0 г, 57%).
Стадия 2: Синтез трет-бутил-4-((5-бром-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата
К перемешанному раствору трет-бутил-4-((5-бром-3-(метоксикарбонил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (3,0 г, 7,06 ммоль) в ацетонитриле (25 мл) добавляли карбонат цезия (4,57 г, 14,1 ммоль) и метилйодид (5,0 г, 35,2 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 80°C в течение 20 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, промывая этилацетатом. Фильтрат концентрировали и очищали продукт методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-4-((5-бром-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (2,5 г, 81%).
Стадия 3: Синтез трет-бутил-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата
К раствору трет-бутил-4-((5-бром-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (2,0 г, 4,69 ммоль) в MeOH (20 мл) добавляли водный NaOH (0,37 г, 9,38 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции, удаляли этанол в условиях пониженного давления, и подкисляли раствор до pH 6 с использованием разбавленной HCl и до pH 4 с использованием лимонной кислоты. Продукт экстрагировали с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (1,7 г, 90%). Затем кислоту растворяли в DMSO (10 мл), и добавляли к ней 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (1,42 г, 9,38 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли к ней PYBOP (3,66 г, 7,04 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. После завершения, реакционную массу выливали на лед с получением твердого вещества, которое фильтровали и промывали ацетонитрилом, а затем очищали методом колоночной хроматографии с получением трет-бутил-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (1,3 г, 50%).
Стадия 4: Синтез трет-бутил-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата
К перемешанному раствору трет-бутил-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (1 эквив.) и 4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)морфолина (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 5 ч. После охлаждения, реакционную смесь разбавляли водой, и экстрагировали продукт 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата.
Стадия 5: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-5-(метил(пиперидин-4-ил)амино)-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Перемешанный раствор трет-бутил-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (1 ммоль) в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли к нему TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. По завершении реакции, раствор концентрировали досуха. Остаток очищали путем промывания растворителем с получением указанного в заголовке соединения (0,07 г, 86%).
ЖХ/МС: 558,45 (M+1)+; HPLC% 98,81 (детекция при 254 нм) (Rt 4,009; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 10,1 (шир. с, 1H), 8,51 (д, 1H), 8,16 (т, 2H), 7,77 (д, 2H, J=8 Гц), 7,57 (д, 2H, J=8 Гц), 7,42 (с, 1H), 7,26 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,33 (шир. с, 2H), 4,29 (д, 2H, J=19,2 ГЦ), 3,96 (м, 2H), 3,25 (м, 4H), 3,15 (м, 4H), 2,89-2,91 (м, 2H), 2,64 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,81 (м, 4H).
Пример 12: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-5-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000087
Соединение 12
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида (1 эквив.) и 4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)морфолина (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Раствор нагревали при 100°C в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,065 г, 55%). ЖХ/МС: 559,35 (M+1)+; HPLC% 99,26 (детекция при 254 нм) (Rt 3,983; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,15 (т, 1H), 7,58 (д, 2H, J=8 Гц), 7,36 (д, 3H, J=8,4 Гц), 7,18 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,84 (д, 2H, J=11,2 Гц), 3,57 (м, 3H), 3,48 (м, 3H), 3,24 (м, 2H), 3,40 (м, 1H), 2,63 (с, 3H), 2,36 (м, 4H), 2,23 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,60 (м, 4H).
Пример 13: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-5-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000088
Соединение 13
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида (1 эквив.) и N,N-диметил-1-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)метанамина (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Раствор нагревали при 100°C в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,01 г, 9%). ЖХ/МС: 517,30 (M+1)+; HPLC% 98,12 (детекция при 254 нм) (Rt 3,972; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,16 (т, 1H), 7,58 (д, 2H, J=8 Гц), 7,34-7,36 (м, 2H), 7,18 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4 Гц), 3,84 (д, 2H, J=10,8 Гц), 3,42 (с, 2H), 3,02 (м, 2H), 2,66 (м, 1H), 2,63 (с, 3H), 2,50 (3H сливается с пиком растворителя), 2,23 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,16 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,60 (м, 4H).
Пример 14: Синтез 5-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000089
Соединение 14
К перемешанному раствору 5-бром-3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1 эквив.) и (4-(морфолинометил)фенил)бороновой кислоты (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували раствор в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4,и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,070 г, выход 29%). ЖХ/МС: 557,40 (M+1)+; HPLC% 98,83 (детекция при 254 нм) (Rt 4,303; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,15 (т, 1H, J=4 Гц), 7,56 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,36 (д, 2H, J=8 Гц), 7,28 (с, 1H), 7,13 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,57 (м, 4H), 3,48 (с, 2H), 2,74 (т, 1H), 2,64 (с, 3H), 2,36 (м, 4H), 2,20 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,69-1,71 (м, 3H), 1,53-1,56 (м, 2H), 1,41-1,44 (м, 2H), 1,10-1,23 (м, 3H).
Пример 15: Синтез 3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000090
Соединение 15
К перемешанному раствору 5-бром-3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1 эквив.) и (1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)бороновой кислоты (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували раствор в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,06 г, выход 25%). ЖХ/МС: 561,35 (M+1)+; HPLC% 96,87 (детекция при 254 нм) (Rt 4,209; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,44 (с, 1H), 8,15 (с, 1H), 8,06 (т, 1H), 7,81 (с, 1H), 7,22 (с, 1H), 7,06 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,8 Гц), 4,21 (т, 2H, J=6 Гц), 3,54 (м, 4H), 2,72 (т, 2H, J=6,8 Гц), 2,61 (с, 3H), 2,40 (м, 4H), 2,20 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,70 (м, 4H), 1,53-1,56 (м, 3H), 1,10-1,23 (м, 4H).
Пример 16: Синтез 5-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000091
Соединение 16
К перемешанному раствору 5-бром-3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1 эквив.) и (4-((диметиламино)метил)фенил)бороновой кислоты (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували раствор в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,065 г, выход 29%). ЖХ/МС: 515,40 (M+1)+; HPLC% 96,73 (детекция при 254 нм) (Rt 4,362; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,16 (т, 1H), 7,64 (д, 2H, J=6,8 Гц), 7,45 (д, 2H), 7,30 (с, 1H), 7,16 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 2,75 (т, 1H), 2,65 (с, 3H), 2,32-2,42 (м, 6H), 2,20 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,69 (м, 4H), 1,53-1,56 (м, 1H), 1,42-1,45 (м, 2H), 1,10-1,23 (м, 4H), [1H сливается с пиком растворителя].
Пример 17: Синтез 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000092
Соединение 17
Стадия 1: Синтез 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамида
К перемешанному раствору 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,5 г, 1,12 ммоль) и (6-формилпиридин-3-ил)бороновой кислоты (0,39 г, 1,68 ммоль) в смеси диоксан/вода (15 мл + 3 мл) добавляли Na2CO3 (0,42 г, 4,09 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,130 г, 0,112 ммоль), и снова продували смесь в течение 10 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,35 г, выход 66%).
Стадия 2: Синтез 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
К перемешанному раствору 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамида (1 эквив.) и морфолина (5 эквив.) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (2 эквив.), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (2,5 эквив.), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии с получением соединения и нечищеного вещества которое очищали методом препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,022 г, 22%). ЖХ/МС: 544,35 (M+1)+; HPLC% 98,42 (детекция при 254 нм) (Rt 4,143; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,17 (т, 1H), 8,01 (д, 1H, J=7,6) 7,50 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,42 (с, 1H), 7,22 (с, 1H), 7,06 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H), 3,59-3,61 (м, 8H), 3,35-3,37 (м, 2H), 2,66 (с, 1H), 2,55 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 2,19 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,72 (м, 2H), 1,61 (м, 2H), 1,48 (м, 4H).
Пример 18: Синтез 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000093
Соединение 18
Раствор 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1 эквив.), (1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)бороновой кислоты (1,2 эквив.) и Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.) в 1,4-диоксане (4 мл) продували аргоном в течение 10 мин. Затем к раствору добавляли 2M раствор Na2CO3 (3,6 эквив.), и снова продували смесь в течение 10 мин. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 ч. После завершения реакции, к реакционной смеси добавляли воду, и проводили экстрагирование с использованием DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (60-120 меш) с получением указанного в заголовке соединения (0,08 г, 66%). ЖХ/МС: 547,35 (M+1)+; HPLC% 97,60 (детекция при 254 нм) (Rt 4,071; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,44 (с, 1H), 8,17 (с, 1H), 8,05 (т, 1H), 7,81 (с, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,10 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,26 (д, 2H, J=4 Гц), 4,20 (д, 2H, J=6,4 Гц), 3,49-3,53 (м, 6H), 2,72 (т, 2H), 2,40 (шир. с, 6H), 2,20 (с, 3H), 2,17 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,61-1,70 (м, 4H), 1,42-1,50 (м, 4H).
Пример 19: Синтез 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000094
Соединение 19
Раствор 5-бром-3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1 эквив.), (1-метил-1H-пиразол-4-ил)бороновой кислоты (1,2 эквив.) и Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.) в 1,4-диоксане (4 мл) продували аргоном в течение 10 мин. Затем к раствору добавляли 2M раствор Na2CO3 (3,6 эквив.), и снова продували смесь в течение 10 мин. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 ч. После завершения реакции, добавляли воду, и проводили экстрагирование с использованием DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (60-120 меш) с получением указанного в заголовке соединения (0,07 г, 70%) ЖХ/МС: 448,25 (M+1)+; HPLC% 98,34 (детекция при 254 нм) (Rt 4,578; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,44 (с, 1H), 8,11 (с, 1H), 8,05 (т, 1H), 7,80 (с, 1H), 7,29 (с, 1H), 7,09 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,26 (д, 2H, J=3,2 Гц), 3,83 (с, 3H), 3,49 (м, 1H), 2,20 (с, 3H), 2,16 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,69 (м, 2H), 1,60 (м, 2H), 1,42-1,49 (м, 4H), [3H сливается с пиком растворителя].
Пример 20: Синтез 5-(((1s,4s)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000095
Соединение 20
Стадия 1: Синтез 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты
К перемешанному раствору 2-метил-3-нитробензойной кислоты (50 г, 276,2 ммоль) в конц. H2SO4 (200 мл) при комнатной температуре порциями добавляли 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (43,4 г, 151,8 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 5 ч. По завершении реакции, реакционную смесь выливали на ледяную воду, полученный осадок фильтровали, остаток промывали водой и сушили в условиях вакуума с получением 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (71,7 г, 99,9%) которую использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия 2: Синтез метил-5-бром-2-метил-3-нитробензоата
К перемешанному раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (287 г, 1103 ммоль) в DMF (150 мл) добавляли карбонат натрия (468 г, 4415 ммоль) и метилйодид (626,63 г, 4415 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 8 ч. По завершении реакции, выпавшее в осадок твердое вещество собирали путем фильтрования, и промывали остаток диэтиловым эфиром (5 раз). Объединенные органические слои сушили, концентрировали в условиях пониженного давления с получением метил-5-бром-2-метил-3-нитробензоата (302 г, 99%) который использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия 3: Синтез метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-5-бром-2-метил-3-нитробензоата (150 г, 544 ммоль) в этаноле (750 мл) при перемешивании добавляли хлорид аммония (150 г, 2777 ммоль), растворенный в воде (750 мл), и железный порошок (93,3 г, 1636 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 ч. По завершении реакции, реакционную смесь фильтровали через целит; остаток промывали водой и этилацетатом, и экстрагировали фильтрат этилацетатом. Объединенные органические слои сушили, концентрировали в условиях пониженного давления с получением метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата, который использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия 4: Синтез метил-5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (5 г, 20,57 ммоль) и трет-бутил-(4-оксоциклогексил)карбамата (5,6 г, 26,7 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляли уксусную кислоту (1,2 г, 20,57 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 8 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (1,6 г, 26,74 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии, дважды элюируя этилацетатом/гексаном, с получением метил-5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата: 4 г (44%) неполярного изомера (цис-изомер, с примесью исходного вещества) и 3 г (33%) чистого полярного изомера (транс-изомер).
Стадия 5: Синтез метил-5-бром-3-((1s,4s)(4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(метил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору цис-изомера метил-5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (4 г, 9,09 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) добавляли карбонат цезия (5,9 г, 18,18 ммоль) и метилйодид (6,45 г, 45,45 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 ч. По завершении реакции, реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом, а затем очищали сконцентрированный фильтрат методом колоночной хроматографии с получением 4,0 г (44%) менее полярного цис-изомера, метил-5-бром-3-(((1s,4s)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата, и 3,0 г (33%) более полярного транс-изомера, метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата.
Стадия 6: Синтез трет-бутил-(1s,4s)(4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К раствору метил-5-бром-3-(((1s,4s)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(метил)амино)-2-метилбензоата (1,3 г, 2,86 ммоль) в MeOH (20 мл) добавляли водный NaOH (0,23 г, 5,72 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции, этанол удаляли в условиях пониженного давления, и подкисляли с использованием разбавленной HCl до pH 6 и корректировали значение pH до 4 добавлением лимонной кислоты. Проводили экстрагирование с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением неочищенной кислоты (1,13 г, 90,1%).
Затем кислоту (1,13 г, 2,57 ммоль) растворяли в DMSO (10 мл), и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,87 г, 5,72 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли PYBOP (2,23 г, 4,28 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. После завершения реакции, реакционную смесь выливали на лед с получением твердого вещества, которое фильтровали и промывали ацетонитрилом, а затем очищали методом колоночной хроматографии с получением трет-бутил-(1s,4s)(4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,8 г, 48,7%).
Стадия 7: Синтез 3-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
К перемешанному раствору трет-бутил-(4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,8 г, 1,39 ммоль) в DCM (25 мл) при 0°C добавляли TFA (5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. По завершении реакции, реакционную смесь концентрировали досуха. Остаток подщелачивали добавлением водного бикарбоната натрия до pH 8, и экстрагировали водный слой 20% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали с получением 3-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (600 мг, 90,9%).
Стадия 8: Синтез 3-((1s,4s)(4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
К перемешанному раствору 3-((4-аминоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,275, 0,580 ммоль) в DMF (5 мл) добавляли EDCI·HCl (0,168 г, 0,870 ммоль), HOBt (0,078 г, 0,58 ммоль) и уксусную кислоту (0,07 г, 1,16 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 18 ч. По завершении реакции, добавляли воду, и экстрагировали органические слои 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением неочищенного вещества, которое сушили методом колоночной хроматографии с получением 3-(((1s,4s)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,25 г, 83,6%).
Стадия 9: Синтез 5-(((1s,4s)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору 3-((4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1 эквив.) и 4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)морфолина (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,06 г, 50,8%). ЖХ/МС: 614,40 (M+1)+; HPLC% 99,44 (детекция при 254 нм) (Rt 3,948; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,17 (т, 1H), 7,76 (д, 1H, J=7,2 Гц), 7,55 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,36 (д, 3H, J=8 Гц), 7,16 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,71 (шир. с, 1H), 3,57 (м, 4H), 3,47 (с, 2H), 2,98 (м, 1H), 2,59 (с, 3H), 2,36 (м, 4H), 2,26 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,74-1,81 (м, 5H), 1,49-1,56 (м, 3H), 1,40-1,48 (м, 3H).
Пример 21: 5-(((1r,4r)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид получали способом, аналогичным описанному в примере 20, из транс-изомера, метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата, описанного в примере 20.
Figure 00000096
Соединение 21
Аналитические данные для 1258-транс: ЖХ/МС: 614,40 (M+1)+; HPLC% 99,64 (детекция при 254 нм) (Rt 3,917; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,16 (т, 1H), 7,76 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,57 (д, 2H, J=7,2 Гц), 7,36 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,29 (с, 1H), 7,14 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H), 3,57 (шир. с, 5H), 3,48 (м, 2H), 2,71 (м, 1H), 2,64 (с, 3H), 2,36 (м, 4H), 2,20 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,68-1,81 (м, 7H), 1,51-1,53 (м, 2H), 1,10-1,13 (м, 2H).
Пример 22: Синтез 3-(((1s,4s)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000097
Соединение 22
К перемешанному раствору 3-(((1s,4s)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1 эквив.) и 1-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,02 г, 20%). ЖХ/МС: 519,40 (M+1)+; HPLC% 96,24 (детекция при 254 нм) (Rt 4,247; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,44 (с, 1H), 8,10 (с, 1H), 8,07 (т, 1H), 7,79 (с, 1H), 7,75 (д, 1H, J=7,2 Гц), 7,27 (с, 1H), 7,09 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,27 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,83 (с, 3H), 3,69 (шир. с, 1H), 2,96 (м, 1H), 2,56 (с, 3H), 2,20 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,81 (с, 3H), 1,74-1,76 (м, 2H), 1,54 (м, 2H), 1,36-1,46 (м, 4H).
Пример 23: Синтез 3-(((1r,4r)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000098
Соединение 23
Получали способом, аналогичным описанному в примере 22 (0,06 г, 40%). ЖХ/МС: 519,30 (M+1)+; HPLC% 98,21 (детекция при 254 нм) (Rt 4,155; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,12 (с, 1H), 8,07 (т, 1H), 7,80 (с, 1H), 7,66 (д, 1H, J=7,2 Гц), 7,23 (с, 1H), 7,07 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,26 (д, 2H, J=2,8 Гц), 3,83 (с, 3H), 3,44 (м, 1H), 2,66-2,69 (м, 1H), 2,61 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,13 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,78-1,80 (м, 2H), 1,74 (с, 3H), 1,67-1,70 (м, 2H), 1,48-1,51 (м, 2H), 1,10-1,13 (м, 2H).
Пример 24: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(пиперидин-4-ил)амино)-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000099
Соединение 24
Стадия 1: Синтез трет-бутил-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата
трет-Бутил-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилат (0,5 г, 0,892 ммоль), (6-формилпиридин-3-ил)бороновую кислоту (0,31 г, 1,33 ммоль) и Pd(PPh3)4 (0,103 г, 0,082 ммоль) в 1,4-диоксане (10 мл) продували аргоном в течение 10 мин. Затем к смеси добавляли 2M раствор Na2CO3 (0,34 г, 3,21 ммоль), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 ч. После завершения реакции, к реакционной смеси добавляли воду, и проводили экстрагирование с использованием 5% MeOH в DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (60-120 меш) с получением трет-бутил-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (0,40 г, 87,9%).
Стадия 2: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(пиперидин-4-ил)амино)-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
К перемешанному раствору трет-бутил-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (1 эквив.) и морфолина (5 эквив.) в метаноле (5 мл для 0,3 ммоль) добавляли уксусную кислоту (1 эквив.), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 4 ч. Затем добавляли восстановитель NaBH3CN (1 эквив.), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали остаток методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением целевого трет-бутил-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)фенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата. Затем указанное вещество растворяли в DCM (5 мл) и охлаждали до 0°C. К нему добавляли TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. По завершении реакции, реакционную смесь концентрировали досуха. Остаток очищали путем промывания растворителем с получением указанного в заголовке соединения (0,1 г, 65,78%). ЖХ/МС: 559,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 95,60% (детекция при 254 нм) (Rt 3,906; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,96 (с, 1H), 8,67 (м, 1H), 8,22 (д, 2H, J=8 Гц), 8,17 (т, 1H), 7,61 (д, 1H, J=8 Гц), 7,48 (с, 1H), 7,32 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,52 (с, 2H), 4,29 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,84 (шир. с, 4H), 3,26 (шир. с, 6H), 3,16 (т, 1H), 2,89-2,91 (м, 2H), 2,64 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,81 (шир. с, 4H).
Пример 25: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(пиперидин-4-ил)амино)-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000100
Соединение 25
К перемешанному раствору трет-бутил-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (1 эквив.) и 4-(2-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-ил)этил)морфолина (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 5 ч. После охлаждения, реакционную смесь разбавляли водой, и экстрагировали продукт 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)фенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата. Перемешанный раствор указанного соединения (1 ммоль) в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли к нему TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. По завершении реакции, раствор концентрировали досуха. Остаток очищали путем промывания растворителем с получением указанного в заголовке соединения (0,06 г, 89%). ЖХ/МС: 562,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,01% (детекция при 254 нм) (Rt 3,838; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,52 (с, 1H), 8,26 (с, 1H), 8,23 (м, 1H), 8,05 (т, 1H), 8,00 (с, 1H), 7,34 (с, 1H), 7,16 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,53 (т, 2H), 4,27 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,25 (м, 4H), 3,10-3,16 (м, 4H), 2,87 (м, 2H), 2,60 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,79 (шир. с, 4H), [5 H сливается с пиком растворителя].
Пример 26: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(пиперидин-4-ил)амино)-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000101
Соединение 26
К перемешанному раствору трет-бутил-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (1 эквив.) и 1-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 5 ч. После охлаждения, реакционную смесь разбавляли водой, и экстрагировали продукт 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)фенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата. Перемешанный раствор указанного соединения (1 ммоль) в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли к нему TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. По завершении реакции, раствор концентрировали досуха. Остаток очищали путем промывания растворителем с получением указанного в заголовке соединения (0,07 г, 87%). ЖХ/МС: 463,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,02% (детекция при 254 нм) (Rt 4,145; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,47 (шир. с, 1H), 8,12 (с, 2H), 8,05 (с, 1H), 7,83 (с, 1H), 7,32 (с, 1H), 7,14 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,28 (м, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,24-3,27 (м, 2H), 3,11 (шир. с, 1H), 2,87-2,89 (м, 2H), 2,59 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,18 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,77-1,80 (м, 4H).
Пример 27: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-5-(метил(пиперидин-4-ил)амино)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000102
Соединение 27
К перемешанному раствору трет-бутил-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (1 эквив.) и N,N-диметил-1-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)метанамина (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 5 ч. После охлаждения, реакционную смесь разбавляли водой, и экстрагировали продукт 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата. Перемешанный раствор указанного соединения (1 ммоль) в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли к нему TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. По завершении реакции, раствор концентрировали досуха. Остаток очищали путем промывания растворителем с получением указанного в заголовке соединения (0,06 г, 90%). ЖХ/МС: 516,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,28% (детекция при 254 нм) (Rt 3,930; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 9,82 (шир. с, 1H), 8,51 (шир. с, 1H), 8,17 (с, 2H), 7,77 (д, 2H, J=7,2 Гц), 7,55 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,43 (с, 1H), 7,27 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,30 (м, 4H), 3,25 (4H сливается с пиком растворителя), 2,88-2,91 (м, 1H), 2,75 (с, 6H), 2,64 (с, 3H), 2,25 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,81 (м, 4H).
Пример 28: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000103
Соединение 28
Стадия 1: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамид
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида (0,4 г, 0,86 ммоль) и (6-формилпиридин-3-ил)бороновой кислоты (0,3 г, 1,29 ммоль) в смеси диоксан/вода (10 мл + 2 мл) добавляли Na2CO3 (0,32 г, 3,09 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,092 г, 0,086 ммоль), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 6 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида (0,28 г, 66%).
Стадия 2: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамид
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида (1 эквив.) и морфолина (5 эквив.) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (2 эквив.), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (2,5 эквив.), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (0,08 г, 70%). ЖХ/МС: 560,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,22% (детекция при 254 нм) (Rt 3,944; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,76 (с, 1H), 8,17 (т, 1H), 8,02 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,50 (д, 1H, J=8 Гц), 7,41 (с, 1H), 7,23 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,85 (д, 2H, J=11,2 Гц), 3,61 (с, 3H), 3,59-3,60 (м, 3H), 3,24-3,29 (м, 2H), 3,02-3,05 (м, 1H), 2,64 (с, 3H), 2,42 (шир. с, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,61 (шир. с, 4H).
Пример 29: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-(гидроксиметил)пиридин-3-ил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида
Figure 00000104
Соединение 29
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида (1 эквив.) и диметиламина (5 эквив.) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (2 эквив.), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (2,5 эквив.), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии с получением the title compound. ЖХ/МС: 491,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,58% (детекция при 254 нм) (Rt 3,984; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 8,05 (д, 1H, J=8,4 Гц), 7,52 (д, 1H, J=8,4 Гц), 7,41 (с, 1H), 7,24 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 5,44 (т, 1H, J=5,6 Гц), 4,59 (д, 2H, J=5,6 Гц), 4,28 (д, 2H, J=4 Гц), 3,85 (д, 2H, J=10,4 Гц), 3,32 (2H сливается с пиком растворителя), 3,03 (м, 1H), 2,64 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,61 (шир. с, 4H).
Пример 30: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида
Figure 00000105
Соединение 30
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метил-3-(метил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида (1 эквив.) и диметиламина (5 эквив.) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (2 эквив.), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (2,5 эквив.), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (0,03 г, 26%). ЖХ/МС: 518,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 89,16% (детекция при 254 нм) (Rt 3,982; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,81 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 8,08 (д, 1H, J=8 Гц), 7,52 (д, 1H, J=8 Гц), 7,43 (с, 1H), 7,26 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,83-3,86 (м, 4H), 3,32 (2H сливается с пиком растворителя), 3,03 (м, 1H), 2,64 (с, 3H), 2,50 (3H сливается с пиком растворителя), 2,40 (шир. с, 3H), 2,24 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,60 (шир. с, 4H).
Пример 31: Синтез 3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000106
Соединение 31
Стадия 1: Синтез 3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамида
К перемешанному раствору бромсодержащего 5-бром-3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,6 г, 1,30 ммоль) и (6-формилпиридин-3-ил)бороновой кислоты (0,450 г, 1,95 ммоль) в смеси диоксан/вода (8 мл + 2 мл) добавляли Na2CO3 (0,498 г, 4,5 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,15 г, 0,129 ммоль), и снова продували смесь в течение 10 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением 3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамида (0,525 г, 83%).
Стадия 2: Синтез 3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
К перемешанному раствору 3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамида (1 эквив.) и морфолина (5 эквив.) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (2 эквив.), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 8 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (2,5 эквив.), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии с получением 3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида (0,089 г, выход 53%). ЖХ/МС: 558,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,52% (детекция при 254 нм) (Rt 4,375; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 8,01 (д, 1H, J=6,8 Гц), 7,49 (д, 1H, J=8 Гц), 7,33 (с, 1H), 7,18 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,59-3,61 (м, 6H), 2,75 (м, 1H), 2,65 (с, 3H), 2,43 (шир. с, 4H), 2,21 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,70 (шир. с, 4H), 1,53-1,56 (м, 1H), 1,42-1,44 (м, 1H), 1,09-1,23 (м, 4H).
Пример 32: Синтез 3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метилбензамида
Figure 00000107
Соединение 32
К перемешанному раствору соединения 3-(циклогексил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамида (1 эквив.) и диметиламина (5 эквив.) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (2 эквив.), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 8 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (2,5 эквив.), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (0,017 г, выход 11%). ЖХ/МС: 516,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 90,32% (детекция при 254 нм) (Rt 4,203; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,78 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 8,05 (д, 1H, J=6 Гц), 7,50 (д, 1H, J=8,4 Гц), 7,34 (с, 1H), 7,20 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,75 (шир. с, 2H), 2,75 (м, 1H), 2,65 (с, 3H), 2,34 (шир. с, 6H), 2,22 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,69-1,71 (м, 4H), 1,54-1,56 (м, 2H), 1,42-1,45 (м, 2H), 1,08-1,23 (м, 2H).
Пример 35: Синтез 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метилбензамида
Figure 00000108
Соединение 35
К перемешанному раствору 3-(циклопентил(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамида (1 эквив.) и диметиламина (5 эквив.) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (2 эквив.), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (2,5 эквив.), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии с получением соединения и неочищенного вещества, которое очищали методом препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,12 г, 57%). ЖХ/МС: 502,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,07% (детекция при 254 нм) (Rt 4,059; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,50 (с, 1H), 10,04 (шир. с, 1H), 8,96 (с, 1H), 8,22 (м, 2H), 7,57-7,61 (м, 1H), 7,35 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,49 (с, 2H), 4,28 (д, 2H, J=2 Гц), 3,65 (шир. с, 1H), 2,83 (с, 6H), 2,65 (с, 3H), 2,28 (с, 3H), 2,12 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,73 (шир. с, 2H), 1,63 (шир. с, 2H), 1,50 (м, 4H).
Пример 36: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-5-(метил(пиперидин-4-ил)амино)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000109
Соединение 36
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (5 г, 20,57 ммоль) и циклопентанона (8,64 г, 102,8 ммоль) в метаноле (30 мл) добавляли уксусную кислоту (2,46 г, 41,1 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 3 ч. Затем добавляли цианборгидрид натрия (3,23 г, 51,4 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии с получением метил-5-бром-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата (4 г, 78,2%).
Стадия 2: Синтез метил-5-бром-3-(циклопентил(этил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору 5-бром-3-(циклопентиламино)-2-метилбензоата (2 г, 6,43 ммоль) в DMF (15 мл) добавляли карбонат цезия (4,18 г, 12,8 ммоль) и этилйодид (5,01 г, 32,15 ммоль); полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 18 ч. По завершении реакции, реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, остаток промывали этилацетатом и концентрировали фильтрат с получением неочищенного целевого соединения, которое очищали методом колоночной хроматографии с получением метил-5-бром-3-(циклопентил(этил)амино)-2-метилбензоата (0,7 г, 32,1%).
Стадия 3: Синтез 5-бром-3-(циклопентил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
К раствору метил-5-бром-3-(циклопентил(этил)амино)-2-метилбензоата (0,7 г, 2,06 ммоль) в этаноле (5 мл) добавляли водный NaOH (0,126 г, 3,09 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции, этанол удаляли в условиях пониженного давления, и подкисляли водный слой до pH 6 с использованием разбавленной HCl и до pH 4 с использованием лимонной кислоты. Продукт экстрагировали с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением неочищенной кислоты (0,5 г, 75%). Затем кислоту (0,5 г, 1,53 ммоль) растворяли в DMSO (5 мл), и добавляли к ней 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,467 г, 3,07 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего к ней добавляли PYBOP (1,19 г, 2,30 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. После завершения реакции, реакционную смесь выливали на лед, и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали, а затем очищали продукт методом колоночной хроматографии с получением 5-бром-3-(циклопентил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,3 г, 42%).
Стадия 4: Синтез 5-(циклопентил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору 5-бром-3-(циклопентил(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,3 г, 0,653 ммоль) и (4-(морфолинометил)фенил)бороновой кислоты (0,216 г, 0,98 ммоль) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (0,249 г, 2,35 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,075 г, 0,065 ммоль), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 3 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,15 г, 41%). ЖХ/МС: 557,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,13% (детекция при 254 нм) (Rt 4,128; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,44 (с, 1H), 8,17 (т, 1H), 7,57 (д, 2H, J=8 Гц), 7,41 (с, 1H), 7,37 (д, 2H, J=8 Гц), 7,20 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,56-3,57 (м, 4H), 3,48 (с, 3H), 3,00-3,02 (м, 2H), 2,36 (м, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,69-1,70 (м, 2H), 1,60 (м, 2H), 1,47-1,48 (м, 4H), 0,81 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 37: Синтез 3-(((1r,4r)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000110
Соединение 37
К перемешанному раствору 3-(((1r,4r)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1 эквив.) и 4-(2-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-ил)этил)морфолина (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,050 г, 28%). ЖХ/МС: 618,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 95,34% (детекция при 254 нм) (Rt 3,760; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,17 (с, 1H), 8,09 (т, 1H), 7,82 (с, 1H), 7,67 (д, 1H, J=7,2 Гц), 7,23 (с, 1H), 7,08 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,26 (д, 2H, J=3,2 Гц), 4,21 (т, 2H, J=6 Гц), 3,44-3,53 (м, 5H), 2,72 (т, 3H, J=5,6 Гц), 2,61 (с, 3H), 2,40 (м, 4H), 2,20 (с, 3H), 2,13 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,67-1,88 (м, 7H), 1,46-1,55 (м, 2H), 1,07-1,15 (м, 2H).
Пример 38: Синтез 3-(((1s,4s)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000111
Соединение 38
Получали способом, аналогичным описанному для соединения 37 (0,020 г, 11%). ЖХ/МС: 618,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,00% (детекция при 254 нм) (Rt 3,732; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,16 (с, 1H), 8,09 (т, 1H), 7,82 (с, 1H), 7,77 (д, 1H, J=7,2 Гц), 7,28 (с, 1H), 7,09 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,45 (шир. с, 1H), 4,27 (д, 2H, J=4 Гц), 4,22 (с, 2H), 3,70 (шир. с, 1H), 3,54 (м, 4H), 2,97 (м, 1H), 2,67-2,72 (м, 2H), 2,56 (с, 3H), 2,42 (м, 3H), 2,20 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,74-1,81 (м, 5H), 1,55 (м, 2H), 1,39-1,41 (м, 4H).
Пример 39: Синтез 5-(((1r,4r)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000112
Соединение 39
К перемешанному раствору 3-(((1r,4r)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (1 эквив.) и N,N-диметил-1-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)метанамина (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,05 г, 30%). ЖХ/МС: 572,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,88% (детекция при 254 нм) (Rt 3,900; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,67 (д, 1H, J=6,8 Гц), 7,57 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,34 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,30 (с, 1H), 7,14 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,27 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,39 (м, 3H), 2,72 (м, 1H), 2,64 (с, 3H), 2,20 (с, 6H), 2,15 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,78-1,81 (м, 2H), 1,74 (с, 3H), 1,68 (м, 2H), 1,51-1,56 (м, 2H), 1,08-1,23 (м, 2H).
Пример 40: Синтез 5-(((1s,4s)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000113
Соединение 40
Получали способом, аналогичным описанному в примере 39 (0,06 г, 36%). ЖХ/МС: 572,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 94,79% (детекция при 254 нм) (Rt 3,936; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,78 (д, 1H, J=7,2 Гц), 7,56 (д, 2H, J=8 Гц), 7,33-7,35 (м, 3H), 7,17 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,70 (шир. с, 1H), 3,37-3,40 (м, 2H), 2,98 (м, 1H), 2,59 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 2,20 (м, 3H), 2,15 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,81 (с, 3H), 1,74 (м, 2H), 1,55 (м, 2H), 1,40-1,48 (м, 4H).
Пример 41: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метил-3-(метил(пиперидин-4-ил)амино)бензамида
Figure 00000114
Соединение 41
К перемешанному раствору трет-бутил-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (1 эквив.) и морфолина (5 эквив.) в метаноле (5 мл, 0,3 ммоль) добавляли уксусную кислоту (1 эквив.), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 4 ч. Затем добавляли восстановитель NaBH3CN (1 эквив.), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали остаток методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением целевого трет-бутил-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)пиперидин-1-карбоксилата. Затем указанное соединение растворяли в DCM (5 мл) и охлаждали до 0°C. К нему добавляли TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. По завершении реакции, реакционную смесь концентрировали досуха. Остаток очищали путем промывания растворителем с получением указанного в заголовке соединения (0,06 г, 40%). ЖХ/МС: 517,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,07% (детекция при 254 нм) (Rt 3,913; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,48 (с, 1H), 10,08 (шир. с, 1H), 8,97 (с, 1H), 8,57 (шир. с, 1H), 8,23 (д, 2H, J=7,6 Гц), 8,18 (с, 1H), 7,60 (д, 1H, J=8 Гц), 7,50 (с, 1H), 7,34 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,49 (д, 2H), 4,30 (с, 2H), 3,25 (д, 2H), 3,16 (с, 1H), 2,89 (м, 2H), 2,83 (с, 6H), 2,64 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,81 (шир. с, 4H).
Пример 42: Синтез 5-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000115
Соединение 42
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-3-(((1s,4s)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(метил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору менее полярного цис-изомера, метил-5-бром-3-(((1s,4s)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата, (4 г, 9,09 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) добавляли карбонат цезия (5,9 г, 18,18 ммоль) и метилйодид (6,45 г, 45,45 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, и промывали собранные твердые вещества этилацетатом. Фильтрат концентрировали с получением целевого продукта, который очищали методом колоночной хроматографии с получением метил-5-бром-3-(((1s,4s)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(метил)амино)-2-метилбензоата (1,4 г, 34,14%).
Стадия 2: Синтез трет-бутил-((1s,4s)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К раствору метил-5-бром-3-(((1s,4s)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(метил)амино)-2-метилбензоата (1,3 г, 2,86 ммоль) в MeOH (20 мл) добавляли водный NaOH (0,23 г, 5,72 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. Этанол удаляли в условиях пониженного давления, и подкисляли смесь до pH добавлением разбавленной HCl и до pH 4 добавлением лимонной кислоты. Смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушили и концентрировали giving с получением соответствующей кислоты (1,13 г, 90,1%).
Затем кислоту (1,13 г, 2,57 ммоль) растворяли в DMSO (10 мл) и добавляли к ней 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,87 г, 5,72 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли PyBOP (2,23 г, 4,28 ммоль). Затем продолжали перемешивание в течение ночи. Реакционную смесь выливали на ледяную воду. Полученный осадок фильтровали, промывали ацетонитрилом и очищали методом колоночной хроматографии с получением трет-бутил-((1s,4s)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,8 г, 48,7%).
Стадия 3: Синтез трет-бутил-((1s,4s)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору трет-бутил-((1s,4s)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (1 эквив.) и 4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)морфолина (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.). Затем раствор продували аргоном в течение 15 мин. Добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-((1s,4s)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,08 г, 45,71%).
Стадия 4: Синтез 5-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Перемешанный раствор трет-бутил-((1s,4s)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,08 г) в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,06 г, 88,2%). ЖХ/МС: 572,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 95,39% (детекция при 254 нм) (Rt 3,719; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 10,05 (шир. с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,74-7,78 (м, 4H), 7,56 (д, 2H, J=6,8 Гц), 7,46 (с, 1H), 7,24 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,38 (шир. с, 2H), 4,29 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,95 (м, 2H), 3,60-3,63 (м, 2H), 3,27-3,30 (м, 2H), 3,13-3,19 (м, 4H), 2,54 (с, 3H), 2,30 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,86 (м, 2H), 1,59-1,64 (м, 4H), 1,49-1,51 (м, 2H).
Пример 43: Синтез 5-(((1r,4r)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000116
Соединение 43
Стадия 1: Синтез 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты
К перемешанному раствору 2-метил-3-нитробензойной кислоты (50 г, 276,2 ммоль) в конц. H2SO4 (200 мл) при комнатной температуре порциями добавляли 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (43,4 г, 151,8 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 5 ч. Реакционную смесь выливали на ледяную воду; выпавшее в осадок твердое вещество фильтровали, промывали водой и сушили в условиях вакуума с получением целевого соединения, 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (71,7 г, 99,9%), которую использовали как есть в последующих реакциях.
Стадия 2: Синтез метил-5-бром-2-метил-3-нитробензоата
К перемешанному раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (287 г, 1103 ммоль) в DMF (150 мл) добавляли карбонат натрия (468 г, 4415 ммоль) и метилйодид (626,63 г, 4415 ммоль). Затем реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 8 ч. Выпавшие в осадок твердые вещества фильтровали и промывали диэтиловым эфиром (5 раз). Объединенные органические фильтраты сушили, концентрировали в условиях пониженного давления с получением целевого соединения, метил-5-бром-2-метил-3-нитробензоата (302 г, 99%), которое использовали как есть в последующих реакциях.
Стадия 3: Синтез метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-5-бром-2-метил-3-нитробензоата (150 г, 544 ммоль) в этаноле (750 мл) при перемешивании добавляли хлорид аммония (150 г, 2777 ммоль), растворенный в воде (750 мл), и железный порошок (93,3 г, 1636 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, и промывали собранные твердые вещества водой и этилацетатом. Фильтрат экстрагировали этилацетатом, экстракт сушили и концентрировали в условиях пониженного давления с получением целевого соединения, метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата, который использовали как есть в последующих реакциях.
Стадия 4: Синтез метил-5-бром-3-((4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (5,0 г, 20,6 ммоль) и трет-бутил-(4-оксоциклогексил)карбамата (5,6 г, 26,7 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляли уксусную кислоту (1,2 г, 20,57 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 8 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (1,6 г, 26,74 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи. Растворитель удаляли в условиях пониженного давления, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии (дважды), элюируя этилацетатом/гексаном, с получением 4 г (44%) менее полярного цис-изомера, метил-5-бром-3-(((1s,4s)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (с примесью некоторого количества исходного вещества), и 3 г (33%) чистого более полярного транс-изомера, метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата.
Стадия 5: Синтез метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(метил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору более полярного транс-изомера, метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата, (3 г, 6,81 ммоль) в ацетонитриле (40 мл) добавляли карбонат цезия (4,4 г, 13,62 ммоль) и метилйодид (4,83 г, 34,05 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 7 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, и промывали твердые вещества этилацетатом. Фильтрат концентрировали с получением неочищенного целевого соединения, которое очищали методом колоночной хроматографии с получением метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(метил)амино)-2-метилбензоата (1,3 г, 43,33%).
Стадия 6: Синтез трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К раствору метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(метил)амино)-2-метилбензоата (1,3 г, 2,86 ммоль) в MeOH (20 мл) добавляли водный NaOH (0,23 г, 5,72 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции, метанол удаляли в условиях пониженного давления, и подкисляли остаток до pH 6 добавлением разбавленной HCl и до pH 4 добавлением лимонной кислоты. Подкисленную смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (1 г, 83%).
Полученную кислоту (1 г, 2,27 ммоль) растворяли в DMSO (5 мл) и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,65 г, 4,54 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли PyBOP (1,7 г, 3,4 ммоль). Перемешивание продолжали в течение ночи. Реакционную смесь выливали на ледяную воду. Полученный осадок фильтровали, промывали ацетонитрилом и очищали методом колоночной хроматографии с получением трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,7 г, 53,8%).
Стадия 7: Синтез трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (1 эквив.) и 4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)морфолина (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували реакционную колбу аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,07 г, 40%).
Стадия 8: Синтез 5-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Перемешанный раствор трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,07 г) в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,05 г, 84,74%). ЖХ/МС: 572,60 (M+1)+; ВЭЖХ: 88,92% (детекция при 254 нм) (Rt 3,546; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 10,05 (шир. с, 1H), 8,16 (т, 1H), 7,74-7,76 (м, 4H), 7,56 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,34 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,38 (шир. с, 2H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,95 (м, 2H), 3,63 (м, 2H), 3,27 (м, 1H), 3,12 (м, 2H), 2,97 (м, 2H), 2,74 (т, 1H), 2,66 (с, 3H), 2,20 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,93-1,95 (м, 2H), 1,74-1,77 (м, 2H), 1,54-1,57 (м, 2H), 1,28-1,31 (м, 2H).
Пример 44: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000117
Соединение 44
Стадия 1: Синтез 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты
Figure 00000118
К перемешанному раствору 2-метил-3-нитробензойной кислоты (100 г, 552 ммоль) в конц. H2SO4 (400 мл) при комнатной температуре порциями добавляли 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (88 г, 308 ммоль), а затем перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 5 ч. Реакционную смесь выливали на ледяную воду, выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывали, промывали водой и сушили в условиях вакуума с получением целевого соединения в виде твердого вещества (140 г, 98%). Выделенное соединение переносили непосредственно на последующую стадию. 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 8,31 (с, 1H), 8,17 (с, 1H), 2,43 (с, 3H).
Стадия 2: Синтез метил-5-бром-2-метил-3-нитробензоата
Figure 00000119
К перемешанному раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (285 г, 1105 ммоль) в DMF (2,8L) при комнатной температуре добавляли карбонат натрия (468 г, 4415 ммоль), а затем добавляли метилйодид (626,6 г, 4415 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 8 ч. После завершения реакции (по данным мониторинга методом ТСХ), реакционную смесь фильтровали (для удаления карбоната натрия) и промывали этилацетатом (1 л ×3). Объединенный фильтрат промывали водой (3 л ×5), и экстрагировали водную фазу введением в этилацетат (1 л ×3). Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества (290 г, выход 97%). Выделенное соединение переносили непосредственно на последующую стадию. 1H-ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 8,17 (с, 1H), 7,91 (с, 1H), 3,96 (с, 3H), 2,59 (с, 3H).
Стадия 3: Синтез метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата
Figure 00000120
К перемешанному раствору метил-5-бром-2-метил-3-нитробензоата (290 г, 1058 ммоль) в этаноле (1,5 л) добавляли водный хлорид аммония (283 г, 5290 ммоль, растворены в 1,5 л воды). Полученную смесь перемешивали при 80°C, и порциями добавляли к ней железный порошок (472 г, 8451 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 12 ч. После завершения реакции (по данным метода ТСХ), реакционную смесь фильтровали горячей через Celite®, слой целита промывали метанолом (5 л), а затем промывали 30% MeOH в DCM (5 л). Объединенный фильтрат концентрировали в условиях вакуума, полученный остаток разбавляли водным раствором бикарбоната натрия (2 л) и экстрагировали этилацетатом (5 л ×3). Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества (220 г, 85%). Соединение переносили непосредственно на последующую стадию. 1H-ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 7,37 (с, 1H), 6,92 (с, 1H), 3,94 (с, 3H), 3,80 (шир. с, 2H), 2,31 (с, 3H).
Стадия 4: Синтез метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата
Figure 00000121
К перемешанному раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (15 г, 61,5 ммоль) и дигидро-2H-пиран-4(3)-она (9,2 г, 92 ммоль) в дихлорэтане (300 мл) добавляли уксусную кислоту (22 г, 369 ммоль), реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем реакционную смесь охлаждали до 0°C, и добавляли триацетоксиборгидрид натрия (39 г, 184 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После завершения реакции (по данным метода ТСХ), к реакционной смеси добавляли водный раствор бикарбоната натрия до достижения pH 7-8. Органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Неочищенное соединение очищали методом колоночной хроматографии (силикагель 100-200 меш), элюируя этилацетатом/гексаном, с получением целевого соединения в виде твердого вещества (14 г, 69%). 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 7,01 (с, 1H), 6,98 (с, 1H), 5,00 (д, 1H, J=7,6 Гц), 3,84-3,87 (м, 2H), 3,79 (с, 3H), 3,54-3,56 (м, 1H), 3,43 (т, 2H, J=12 Гц), 2,14 (с, 3H), 1,81-1,84 (м, 2H), 1,47-1,55 (м, 2H).
Стадия 5: Синтез метил-5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата
Figure 00000122
К перемешанному раствору метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (14 г, 42,7 ммоль) в дихлорэтане (150 мл) добавляли ацетальдегид (3,75 г, 85,2 ммоль) и уксусную кислоту (15,3 г, 256 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Смесь охлаждали до 0°C, и добавляли триацетоксиборгидрид натрия (27 г, 128 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. После завершения реакции (по данным метода ТСХ), к реакционной смеси добавляли водный раствор бикарбоната натрия до достижения pH 7-8, органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Неочищенное соединение очищали методом колоночной хроматографии (силикагель 100-200 меш), элюируя этилацетатом/гексаном, с получением целевого соединения в виде вязкой жидкости (14 г, 93%). 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 7,62 (с, 1H), 7,52 (с, 1H), 3,80 (шир. с, 5H), 3,31 (т, 2H), 2,97-3,05 (м, 2H), 2,87-2,96 (м, 1H), 2,38 (с, 3H), 1,52-1,61 (м, 2H), 1,37-1,50 (м, 2H), 0,87 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Стадия 6: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида
Figure 00000123
К перемешанному раствору 5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (14 г, 39,4 ммоль) в этаноле (100 мл) добавляли водный NaOH (2,36 г, 59,2 ммоль в 25 мл воды), и перемешивали полученную смесь при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции (по данным метода ТСХ), удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и подкисляли полученный остаток добавлением 1н HCl до достижения pH 7, а затем добавляли водный раствор лимонной кислоты до достижения pH 5-6. Водный слой экстрагировали 10% MeOH в DCM (200 мл ×3), объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением соответствующей кислоты (14 г, 100%).
Полученную выше кислоту (14 г, 40,9 ммоль) растворяли в DMSO (70 мл), и добавляли к ней 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (12,4 г, 81,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут, затем добавляли PYBOP (31,9 г, 61,4 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи при комнатной температуре. После завершения реакции (по данным метода ТСХ), реакционную смесь выливали на ледяную воду (700 мл), перемешивали в течение 30 минут, выпавшее в осадок твердое вещество собирали путем фильтрования, промывали водой (500 мл) и сушили на воздухе. Полученное твердое вещество перемешивали ацетонитрилом (75 мл ×2), фильтровали и сушили на воздухе. Полученное твердое вещество снова перемешивали с 5% MeOH в DCM (100 мл), фильтровали и полностью высушивали в условиях вакуума с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества (14 г, 74%). 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,23 (т, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,08 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,23 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81 (д, 2H, J=10,4 Гц), 3,20-3,26 (м, 2H), 3,00-3,07 (м, 1H), 2,91-2,96 (м, 2H), 2,18 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,58-1,60 (м, 2H), 1,45-1,50 (м, 2H), 0,78 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Стадия 7: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000124
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (14 г, 29,5 ммоль) в смеси диоксан/вода (70 мл/14 мл) добавляли 4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)морфолин (13,4 г, 44,2 ммоль), а затем добавляли Na2CO3 (11,2 г, 106,1 ммоль). Раствор продували аргоном в течение 15 минут, затем добавляли Pd(PPh3)4 (3,40 г, 2,94 ммоль), и снова продували раствор аргоном еще в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. После завершения реакции (по данным метода ТСХ), реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Неочищенное соединение очищали методом колоночной хроматографии (силикагель 100-200 меш), элюируя метанолом/DCM, с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества (12 г, 71%). Аналитические данные: ЖХ/МС: 573,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,5% (детекция при 254 нм) (Rt 3,999; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,57 (д, 2H, J=7,2 Гц), 7,36-7,39 (м, 3H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=2,8 Гц), 3,82 (д, 2H, J=9,6 Гц), 3,57 (шир. с, 4H), 3,48 (с, 2H), 3,24 (т, 2H, J=10,8Гц), 3,07-3,09 (м, 2H), 3,01 (м, 1H), 2,36 (м, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,53 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Стадия 8: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида тригидрохлорида
Figure 00000125
N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид (12 г, 21,0 ммоль) растворяли в растворе HCl в метаноле (200 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. После 3 часов перемешивания, реакционную смесь концентрировали в условиях пониженного давления. Полученное твердое вещество перемешивали с эфиром (100 мл ×2) с получением целевой соли в виде твердого вещества (11 г, 77%). Аналитические данные для тригидрохлорида: ЖХ/МС: 573,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,1% (детекция при 254 нм) (Rt 3,961; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (D2O 400 МГц) δ 7,92 (шир. с, 1H,) 7,80 (с, 1H), 7,77 (д, 2H, J=8 Гц), 7,63 (с, 1H), 7,61 (с, 1H), 6,30 (с, 1H), 4,48 (с, 2H), 4,42 (с, 2H), 4,09-4,11 (м, 4H), 3,95-3,97 (м, 2H), 3,77 (т, 3H, J=10,4 Гц), 3,44-3,47 (м, 3H), 3,24-3,32 (м, 3H), 2,42 (с, 3H), 2,35 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 2,01 (м, 2H), 1,76 (м, 2H), 1,04 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 45: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000126
Соединение 45
Стадия 1: Синтез трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (1 эквив.) и 1-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и продували реакционную колбу аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,07 г, 46,6%).
Стадия 2: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Перемешанный раствор трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,07 г) в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,07 г, 98,59%). ЖХ/МС: 477,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,16% (детекция при 254 нм) (Rt 3,796; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,12 (с, 1H), 8,08 (т, 1H), 7,82 (с, 1H), 7,74 (м, 3H), 7,28 (с, 1H), 7,11 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,26 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,84 (с, 3H), 2,96 (шир. с, 1H), 2,73 (шир. с, 1H), 2,63 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,92-1,95 (м, 2H), 1,74-1,77 (м, 2H), 1,48-1,57 (м, 2H), 1,23-1,32 (м, 2H).
Пример 46: Синтез 3-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000127
Соединение 46
Стадия 1: Синтез трет-бутил-((1s,4s)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору трет-бутил-((1s,4s)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (1 эквив.) и 1-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразола (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.). Затем раствор продували аргоном в течение 15 мин. Добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-((1s,4s)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,05 г, 33,3%).
Стадия 2: Синтез 3-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Перемешанный раствор трет-бутил-((1s,4s)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,05 г) в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,03 г, 73,1%). ЖХ/МС: 477,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,76% (детекция при 254 нм) (Rt 3,862; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,08-8,12 (м, 2H), 7,76-7,81 (м, 4H), 7,33 (с, 1H), 7,12 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,27 (д, 2H, J=4 Гц), 3,83 (с, 3H), 3,16 (м, 2H), 2,50 (3H сливается с пиком растворителя), 2,22 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,84 (м, 2H), 1,57-1,63 (м, 4H), 1,47-1,50 (м, 2H).
Пример 47: Синтез 5-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000128
Соединение 47
Стадия 1: Синтез трет-бутил-((1s,4s)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору трет-бутил-((1s,4s)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (1 эквив.) и N,N-диметил-1-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)метанамина (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.). Затем раствор продували аргоном в течение 15 мин. Добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-((1s,4s)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,100 г, 61%).
Стадия 2: Синтез 5-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Перемешанный раствор трет-бутил-((1s,4s)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,10 г) в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,05 г, 59,5%). ЖХ/МС: 530,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,13% (детекция при 254 нм) (Rt 3,672; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,44 (с, 1H), 9,47 (шир. с, 1H), 8,17 (т, 1H), 7,74-7,76 (м, 4H), 7,55 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,44 (с, 1H), 7,25 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,30 (м, 4H), 3,12 (м, 2H), 2,74 (с, 6H), 2,54 (с, 3H), 2,30 (с, 3H), 2,12 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,84 (шир. с, 2H), 1,59-1,63 (м, 4H), 1,48 (м, 2H).
Пример 48: Синтез 3-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000129
Соединение 48
Стадия 1: Синтез трет-бутил-((1s,4s)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору трет-бутил-((1s,4s)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (1 эквив.) и 4-(2-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-ил)этил)морфолина (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.). Затем раствор продували аргоном в течение 15 мин. Добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,120 г, 75,4%).
Стадия 2: Синтез 3-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Перемешанный раствор трет-бутил-((1s,4s)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,10 г) в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,06 г, 58,82%). ЖХ/МС: 576,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,89% (детекция при 254 нм) (Rt 3,481; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,25 (с, 1H), 8,08 (т, 1H), 7,79 (с, 1H), 7,74-7,79 (м, 3H), 7,34 (с, 1H), 7,15 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,51 (шир. с, 2H), 4,27 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,16 (м, 6H), 2,50 (3H сливается с пиком растворителя), 2,23 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,84 (шир. с, 2H), 1,57-1,63 (м, 4H), 1,47-1,49 (м, 2H), [3 H сливается с пиком растворителя].
Пример 49: Синтез 3-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000130
Соединение 49
Стадия 1: Синтез трет-бутил-((1s,4s)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору трет-бутил-((1s,4s)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,5 г, 8,71 ммоль) и (6-формилпиридин-3-ил)бороновой кислоты (0,264 г, 1,13 ммоль) в смеси диоксан/вода (10 мл + 2 мл) добавляли Na2CO3 (0,333 г, 2,8 ммоль). Затем раствор продували аргоном в течение 15 мин. Добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 г, 0,086 ммоль), и снова продували раствор аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-((1s,4s)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,3 г, 57,3%).
Стадия 2: Синтез трет-бутил-((1s,4s)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору трет-бутил-((1s,4s)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (1 эквив.) и морфолина (5 эквив.) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (2 эквив.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (2,5 эквив.), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляли в условиях пониженного давления, и очищали неочищенный продукт методом колоночной хроматографии с получением трет-бутил-((1s,4s)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата.
Стадия 3: Синтез 3-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
Перемешанный раствор трет-бутил-((1s,4s)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха, и очищали продукт путем промывания растворителем с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,1 г, 94,33%). ЖХ/МС: 573,45 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,94% (детекция при 254 нм) (Rt 3,618; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,94 (с, 1H), 8,19-8,21 (м, 2H), 7,80 (с, 3H), 7,60 (д, 1H, J=8 Гц), 7,49 (с, 1H), 7,31 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,52 (шир. с, 2H), 4,29 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,83 (шир. с, 4H), 3,27 (м, 4H), 3,14-3,21 (м, 2H), 2,55 (с, 3H), 2,30 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,87 (шир. с, 2H), 1,59-1,64 (м, 4H), 1,49-1,51 (м, 2H).
Пример 50: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000131
Соединение 50
Стадия 1: Синтез трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,4 г, 0,696 ммоль) и (6-формилпиридин-3-ил)бороновой кислоты (0,21 г, 0,906 ммоль) в смеси диоксан/вода (8 мл + 2 мл) добавляли Na2CO3 (0,332 г, 3,13 ммоль). Затем реакционный раствор продували аргоном в течение 15 мин. Добавляли Pd(PPh3)4 (0,080 г, 0,069 ммоль), и снова проводили продувание аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,28 г, 66,98%).
Стадия 2: Синтез трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (1 эквив.) и морфолина (5 эквив.) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (2 эквив.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (2,5 эквив.), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляли в условиях пониженного давления, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии с получением трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата.
Стадия 3: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
Перемешанный раствор трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли к нему TFA (2 мл). Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха, и очищали твердый продукт путем промывания растворителем с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,07 г, 82,3%). ЖХ/МС: 573,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 91,56% (детекция при 254 нм) (Rt 3,591; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,95 (с, 1H), 8,19-8,22 (м, 2H), 7,78 (шир. с, 3H), 7,61 (д, 1H, J=8 Гц), 7,40 (с, 1H), 7,27 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,52 (шир. с, 2H), 4,28 (д, 2H, J=3,2 Гц), 3,84 (шир. с, 4H), 3,27 (шир. с, 4H), 2,97 (шир. с, 1H), 2,75 (м, 1H), 2,66 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,93 (м, 2H), 1,74-1,76 (м, 2H), 1,54-1,57 (м, 2H), 1,28-1,31 (м, 2H).
Пример 51: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000132
Соединение 51
Стадия 1: Синтез трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (1 эквив.) и 4-(2-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-ил)этил)морфолина (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и продували реакционную колбу аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,08 г, 45,45%).
Стадия 2: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Перемешанный раствор трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-(2-морфолиноэтил)-1H-пиразол-4-ил)фенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,08 г) в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,07 г, 86,41%). ЖХ/МС: 576,45 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,26% (детекция при 254 нм) (Rt 3,413; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,26 (с, 1H), 8,08 (т, 1H), 7,99 (с, 1H), 7,75 (м, 3H), 7,28 (с, 1H), 7,13 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,53 (т, 2H), 4,27 (д, 2H, J=3,6 Гц), 2,97-3,16 (м, 4H), 2,67-2,71 (м, 1H), 2,62 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,92-1,94 (м, 2H), 1,72 (м, 2H), 1,52-1,55 (м, 2H), 1,23-1,29 (м, 2H).
Пример 52: Синтез 3-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метилбензамида
Figure 00000133
Соединение 52
Стадия 1: Синтез трет-бутил-((1s,4s)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору трет-бутил-((1s,4s)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (1 эквив.) и диметиламина (5 эквив.) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (2 эквив.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (2,5 эквив.), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляли в условиях пониженного давления, и очищали неочищенный продукт методом колоночной хроматографии с получением трет-бутил-((1s,4s)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата.
Стадия 2: Синтез 3-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метилбензамида
Перемешанный раствор трет-бутил-((1s,4s)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха, и очищали продукт путем промывания растворителем с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,07 г, 93,3%). ЖХ/МС: 531,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,59% (детекция при 254 нм) (Rt 3,680; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 10,01 (с, 1H), 8,95 (с, 1H), 8,20 (д, 2H, J=5,2 Гц), 7,80 (шир. с, 3H), 7,59 (д, 1H, J=8 Гц), 7,51 (с, 1H), 7,32 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,48 (шир. с, 2H), 4,29 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,21 (м, 1H), 3,14-3,16 (м, 1H), 2,83 (с, 6H), 2,55 (с, 3H), 2,31 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,86 (шир. с, 2H), 1,59-1,64 (м, 4H), 1,49-1,51 (м, 2H).
Пример 53: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метилбензамида
Figure 00000134
Соединение 53
Стадия 1: Синтез трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (1 эквив.) и диметиламина (5 эквив.) в метаноле (10 мл) добавляли уксусную кислоту (2 эквив.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (2,5 эквив.), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляли в условиях пониженного давления, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии с получением трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата.
Стадия 2: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метилбензамида
Перемешанный раствор трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли к нему TFA (2 мл). Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха, и очищали твердый продукт путем промывания растворителем с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,05 г, 66,6%). ЖХ/МС: 531,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,59% (детекция при 254 нм) (Rt 3,564; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 10,01 (с, 1H), 8,95 (с, 1H), 8,20 (шир. с, 2H), 7,78 (шир. с, 2H), 7,59 (д, 1H, J=6 Гц), 7,41 (с, 1H), 7,28 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,48 (шир. с, 2H), 4,29 (м, 2H), 2,97 (шир. с, 2H), 2,83 (с, 6H), 2,66 (с, 3H), 2,21 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,93 (м, 2H), 1,74 (м, 2H), 1,55-1,57 (м, 2H), 1,28-1,31 (м, 2H).
Пример 54: Синтез 3-(((1r,4r)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000135
Соединение 54
Соединение 54 получали способом, сходным с описанным в примере 57.
Аналитические данные: ЖХ/МС: 615,55 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,75% (детекция при 254 нм) (Rt 3,854; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 8,02 (д, 1H, J=8 Гц), 7,67 (д, 1H, J=7,2 Гц), 7,49 (д, 1H, J=8 Гц), 7,35 (с, 1H), 7,19 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,59-3,61 (м, 4H), 3,47-3,55 (м, 2H), 2,76 (т, 2H, J=4 Гц), 2,65 (с, 3H), 2,42 (шир. с, 4H), 2,21 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,78-1,90 (м, 2H), 1,68-1,74 (м, 5H), 1,48-1,57 (м, 2H), 1,03-1,23 (м, 2H).
Пример 55: Синтез 3-(((1s,4s)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-2-метилбензамида
Figure 00000136
Соединение 55
Стадия 1: Синтез 3-(((1s,4s)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамид
К 3-(((1s,4s)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамиду (0,65 г, 1,25 ммоль) и (6-формилпиридин-3-ил)бороновой кислоте (0,38 г, 1,63 ммоль) в смеси диоксан/вода (10 мл + 2 мл) добавляли Na2CO3 (0,48 г, 4,53 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли, Pd(PPh3)4 (0,14 г, 0,12 ммоль), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением цис-изомера 3-((4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамида (0,35 г, 51,16%).
Стадия 2: Синтез
К перемешанному раствору 3-(((1s,4s)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамида (1 эквив.) и диметиламина (5 эквив.) в 5 мл MeOH (0,3 ммоль) добавляли уксусную кислоту (2 эквив.), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре. Затем добавляли NaBH3CN (1,5 эквив.), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали остаток методом колоночной хроматографии на силикагеле, или как указано, с получением указанного в заголовке соединения (0,006 г, 3,2%). ЖХ/МС: 573,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 95,52% (детекция при 254 нм) (Rt 3,899; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,88 (с, 1H), 8,20 (т, 1H), 8,14 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,78 (д, 1H, J=7,2 Гц), 7,55 (д, 1H, J=8 Гц), 7,44 (с, 1H), 7,26 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=3,2 Гц), 4,26 (шир. с, 1H), 3,71 (шир. с, 1H), 3,01 (шир. с, 1H), 2,61-2,66 (м, 8H), 2,28 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,81 (м, 5H), 1,56 (м, 2H), 1,40-1,46 (м, 2H), 1,23 (м, 2H), [2H сливается с пиком растворителя].
Пример 56: Синтез 3-(((1s,4s)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-(гидроксиметил)пиридин-3-ил)-2-метилбензамида
Figure 00000137
Соединение 56
Соединение 56 получали в той же реакции, что и соединение 55. ЖХ/МС: 546,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,40% (детекция при 254 нм) (Rt 3,845; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,74 (с, 1H), 8,20 (т, 1H), 8,04 (д, 1H, J=8 Гц), 7,77 (д, 1H, J=7,2 Гц), 7,52 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,40 (с, 1H), 7,22 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 5,45 (т, 1H, J=5,2 Гц), 4,59 (д, 2H, J=5,6 Гц), 4,27 (д, 2H, J=4 Гц), 3,71 (шир. с, 1H), 3,00 (шир. с, 1H), 2,60 (с, 3H), 2,27 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,81 (м, 5H), 1,56 (м, 2H), 1,40-1,48 (м, 4H).
Пример 57: Синтез 3-(((1s,4s)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000138
Соединение 57
К перемешанному раствору 3-(((1s,4s)-4-ацетамидоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамида (1 эквив.) и морфолина (5 эквив.) в 5 мл MeOH (0,3 ммоль) добавляли уксусную кислоту (2 эквив.), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре. Затем добавляли NaBH3CN (1,5 эквив.), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали остаток методом колоночной хроматографии на силикагеле, или как указано, с получением указанного в заголовке соединения (0,08 г, 43%). ЖХ/МС: 615,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,64% (детекция при 254 нм) (Rt 3,900; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 8,01 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,77 (д, 1H, J=7,2 Гц), 7,50 (д, 1H, J=8 Гц), 7,40 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,71 (шир. с, 1H), 3,59-3,61 (м, 4H), 3,50 (т, 1H, J=4,4 Гц), 3,00 (шир. с, 1H), 2,68 (т, 1H, J=4,4 Гц), 2,60 (с, 3H), 2,42 (шир. с, 4H), 2,27 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,81 (м, 5H), 1,56 (м, 2H), 1,40-1,45 (м, 2H), 1,16-1,29 (м, 2H).
Пример 59: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-5-(пропил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000139
Соединение 59
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата
К перемешанному раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (15 г, 61,5 ммоль) и дигидро-2H-пиран-4(3)-она (9,2 г, 92 ммоль) в дихлорэтане (300 мл) добавляли уксусную кислоту (22 г, 369 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 15 минут, после чего реакционную смесь охлаждали до 0°C, и добавляли триацетоксиборгидрид натрия (39 г, 183,96 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Затем к реакционной смеси добавляли водный бикарбонат натрия для корректировки значения pH до 7-8. Органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу этилацетатом. Объединенные экстракты сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии (силикагель 100-200 меш), элюируя этилацетатом/гексаном, с получением метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата в виде не совсем белого твердого вещества (14 г, 69%).
Стадия 2: Синтез метил-5-бром-2-метил-3-(пропил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата
К перемешанному раствору 5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (1 г, 3,04 ммоль) и пропиональдегида (0,354 г, 6,09 ммоль) в дихлорэтане (10 мл) добавляли уксусную кислоту (1,12 г, 18,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (1,94 г, 9,14 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и добавляли к остатку воду. Смесь экстрагировали DCM. Объединенные экстракты сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии с получением метил-5-бром-2-метил-3-(пропил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (0,96 г, 85,7%).
Стадия 3: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(пропил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида
К раствору 5-бром-2-метил-3-(пропил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (0,96 г, 2,59 ммоль) в этаноле (5 мл) добавляли водный NaOH (0,156 г, 3,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 60°C в течение 1 ч. Затем удаляли этанол в условиях пониженного давления, и подкисляли остаток до pH 6 с использованием разбавленной HCl и до pH 4 добавлением лимонной кислоты. Смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты сушили, фильтровали и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,8 г, 86,67%).
Полученную кислоту (0,8 г, 2,24 ммоль) растворяли в DMSO (5 мл), и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,683 г, 4,49 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего к ней добавляли PyBOP (1,75 г, 3,36 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. Реакционную смесь выливали на ледяную воду и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили, фильтровали и концентрировали с получением неочищенного продукта, который очищали путем промывания растворителем с получением 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(пропил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида (0,9 г, 81,8%).
Стадия 4: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-5-(пропил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(пропил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензамида (0,2 г, 0,412 ммоль) и 4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)морфолина (0,148 г, 0,488 ммоль) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (0,108 г, 1,01 ммоль), и продували реакционную смесь аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,048 г, 0,042 ммоль), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,20 г, 83,68%). ЖХ/МС: 587,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,68% (детекция при 254 нм) (Rt 4,257; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,19 (т, 1H, J=4,8 Гц), 7,56 (д, 2H, J=8 Гц), 7,38 (т, 3H, J=8 Гц), 7,19 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,82-3,85 (м, 2H), 3,57 (м, 4H), 3,48 (с, 2H), 3,23 (т, 2H, J=10,8 Гц), 2,94-3,02 (м, 3H), 2,36 (шир. с, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,56-1,65 (м, 4H), 1,20-1,25 (м, 2H), 0,76 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 60: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(изобутил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000140
Соединение 60
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-3-(изобутил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (1 г, 3,04 ммоль) и изобутиральдегида (1,09 г, 15,24 ммоль) в метаноле (15 мл) добавляли уксусную кислоту (0,456 г, 7,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (0,522 г, 7,56 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. Затем удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали неочищенный продукт методом колоночной хроматографии с получением метил-5-бром-3-(изобутил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (0,52 г, 54,33%).
Стадия 2: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(изобутил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида
К раствору метил-5-бром-3-(изобутил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (0,5 г, 1,30 ммоль) в этаноле (15 мл) добавляли водный NaOH (0,104 г, 2,61 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. Затем удаляли этанол в условиях пониженного давления, и подкисляли до pH 6 добавлением разбавленной HCl и до pH 4 добавлением лимонной кислоты. Смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,375 г, 76,9%).
Полученную выше кислоту (0,350 г, 9,45 ммоль) растворяли в DMSO (5 мл), и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,283 г, 18,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли PyBOP (0,737 г, 14,17 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь выливали на ледяную воду, полученный осадок собирали и очищали путем промывания растворителем с получением 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(изобутил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (0,2 г, 42,01%).
Стадия 3: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(изобутил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(изобутил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (0,14 г, 0,277 ммоль) и 4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)морфолина (0,100 г, 0,333 ммоль) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (0,108 г, 1,01 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,032 г, 0,027 ммоль), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,039 г, 23,49%). ЖХ/МС: 601,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,88% (детекция при 254 нм) (Rt 5,225; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 9,83 (шир. с, 1H), 8,20 (т, 1H), 7,73 (д, 2H, J=8 Гц), 7,56 (д, 2H, J=8 Гц), 7,43 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,39 (шир. с, 2H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,95-3,98 (м, 2H), 3,85-3,87 (м, 2H), 3,62 (т, 2H, J=11,2 Гц), 3,15-3,31 (м, 9H), 2,84 (м, 1H), 2,26 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,62 (шир. с, 2H), 1,37-1,40 (м, 2H), 0,80 (д, 6H, J=6 Гц).
Пример 61: Синтез 5-((циклопропилметил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000141
Соединение 61
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-3-((циклопропилметил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (1 г, 3,04 ммоль) и циклопропанкарбальдегида (1,06 г, 15,24 ммоль) в метаноле (15 мл) добавляли уксусную кислоту (0,456 г, 7,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 ч. Затем при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (0,488 г, 7,62 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. Затем удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали неочищенный продукт методом колоночной хроматографии с получением метил-5-бром-3-((циклопропилметил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (0,275 г, 23,70%).
Стадия 2: Синтез 5-бром-3-((циклопропилметил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
К раствору метил-5-бром-3-((циклопропилметил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (0,275 г, 0,943 ммоль) в этаноле (5 мл) добавляли водный NaOH (0,056 г, 1,45 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. Затем удаляли этанол в условиях пониженного давления, и подкисляли до pH 6 добавлением разбавленной HCl и до pH 4 добавлением лимонной кислоты. Смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,25 г, 93,28%).
Полученную кислоту (0,250 г, 0,68 ммоль) растворяли в DMSO (3 мл), и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,155 г, 1,02 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли PyBOP (0,708 г, 1,36 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь выливали на ледяную воду, полученный осадок собирали и очищали путем промывания растворителем с получением 5-бром-3-((циклопропилметил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,25 г, 73,31%).
Стадия 3: Синтез 5-((циклопропилметил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору 5-бром-3-((циклопропилметил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,25 г, 0,499 ммоль) и 4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)морфолина (0,181 г, 0,598 ммоль) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (0,19 г, 1,79 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,057 г, 0,049 ммоль), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,085 г, 28,52%). ЖХ/МС: 599,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,21% (детекция при 254 нм) (Rt 4,191; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,51 (с, 1H), 9,83 (шир. с, 1H), 8,20 (с, 1H), 7,77 (д, 2H, J=6,4 Гц), 7,53-7,58 (м, 3H), 7,28 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,39 (шир. с, 2H), 4,29 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,95-3,98 (м, 2H), 3,59-3,65 (м, 2H), 3,31-3,21 (м, 5H), 3,05-3,16 (м, 3H), 2,93 (м, 2H), 2,32 (м, 4H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,65 (шир. с, 2H), 1,50 (м, 2H), 0,66 (шир. с, 1H), 0,28 (д, 2H, J=7,2 Гц).
Пример 62: Синтез 5-(бутил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000142
Соединение 62
Соединение 62 получали способом, сходным с описанным в примере 61.
Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 601,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,41% (детекция при 254 нм) (Rt 4,482; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 9,89 (шир. с, 1H), 8,22 (т, 1H), 7,75 (д, 2H, J=8 Гц), 7,57 (д, 2H, J=8 Гц), 7,44 (с, 1H), 7,25 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,39 (шир. с, 2H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,95-3,98 (м, 3H), 3,83-3,86 (м, 4H), 3,21-3,30 (м, 4H), 3,08-3,11 (м, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,62 (м, 4H), 1,20 (м, 4H), 0,79 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 63: Синтез 5-((циклобутилметил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000143
Соединение 63
Соединение 63 получали способом, сходным с описанным в примере 61.
Аналитические данные: ЖХ/МС: 613,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,25% (детекция при 254 нм) (Rt 4,586; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,56 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,41 (с, 1H), 7,37 (д, 2H, J=8 Гц), 7,20 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,45 (м, 2H), 4,28 (д, 2H, J=4 Гц), 3,83-3,85 (м, 2H), 3,57 (м, 3H), 3,48 (с, 2H), 3,19-3,22 (м, 2H), 3,08 (шир. с, 2H), 2,86 (м, 1H), 2,36 (м, 4H), 2,20 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,70-1,78 (м, 4H), 1,56-1,63 (м, 6H).
Пример 64: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000144
Соединение 64
Стадия 1: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамида
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (1 г, 2,15 ммоль) и (6-формилпиридин-3-ил)бороновой кислоты (0,539 г, 2,31 ммоль) в смеси диоксан/вода (15 мл +3 мл) добавляли Na2CO3 (0,82 г, 7,74 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,288 г, 0,25 ммоль), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную массу нагревали при 80°C в течение 2 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением целевого соединения (0,60 г, 57%).
Стадия 2: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамида (0,2 г, ммоль) в дихлорэтане (3 мл) добавляли морфолин (5 эквив.) в 5 мл MeOH и уксусную кислоту (2 эквив.), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем добавляли NaBH3CN (1,5 эквив.), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 16 часов. После завершения реакции (по данным метода ТСХ), к реакционной смеси добавляли водный бикарбонат натрия до pH 7-8, органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Неочищенное соединение очищали методом колоночной хроматографии (силикагель 100-200 меш) элюируя этилацетатом/гексаном, с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества. ЖХ/МС: 574,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,17% (детекция при 254 нм) (Rt 3,906; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,20 (т, 1H), 8,01 (д, 1H, J=7,2 Гц), 7,50 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,46 (с, 1H), 7,27 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,81-3,83 (м, 2H), 3,59-3,61 (м, 6H), 3,22-3,30 (м, 2H), 3,08-3,10 (м, 2H), 3,03 (м, 1H), 2,43 (с, 4H), 2,25 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,65-1,67 (м, 2H), 1,51-1,53 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 65: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-((диметиламино)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000145
Соединение 65
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (14 г, 42,68 ммоль) и ацетальдегида (3,75 г, 85,36 ммоль) в дихлорэтане (150 мл) добавляли уксусную кислоту (15,36 г, 256,08 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (27,01 г, 128,04 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и добавляли к остатку воду. Смесь экстрагировали DCM. Объединенные экстракты сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии с получением метил-5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (14 г, 93,33%).
Стадия 2: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида
К раствору метил-5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (14 г, 39,43 ммоль) в этаноле (100 мл) добавляли водный NaOH (2,36 г, 59,15 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. Затем удаляли этанол в условиях пониженного давления, и подкисляли до pH 6 добавлением разбавленной HCl и до pH 4 добавлением лимонной кислоты. Смесь экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (13,9 г, 100%).
Полученную кислоту (10 г, 29,23 ммоль) растворяли в DMSO (25 мл), и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (8,8 г, 58 ммоль) и триэтиламин (5,6 г, 58,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли PyBOP (22 г, 43,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь выливали на ледяную воду и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили и концентрировали с получением неочищенного продукта, который очищали путем промывания растворителем с получением 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (14 г, 73,68%).
Стадия 3: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-((диметиламино)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (0,2 г, 0,42 ммоль) и (4-((диметиламино)метил)фенил)бороновой кислоты (0,15 г, 0,505 ммоль) в смеси диоксан/вода (5 мл +1 мл) добавляли Na2CO3 (0,16 г, 1,51 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,048 г, 0,042 ммоль), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,120 г, 53,8%). ЖХ/МС: 531,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 94,88% (детекция при 254 нм) (Rt 3,949; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,19 (т, 1H, J=4,4 Гц), 7,61 (д, 2H, J=8 Гц), 7,39-7,41 (м, 3H), 7,23 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,62-3,84 (м, 4H), 3,22-3,38 (м, 2H), 3,02-3,06 (м, 3H), 2,30 (шир. с, 6H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,53 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 66: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000146
Соединение 66
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (0,2 г, 0,42 ммоль) и (4-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)фенил)бороновой кислоты (0,159 г, 0,505 ммоль) в смеси диоксан/вода (5 мл +1 мл) добавляли Na2CO3 (0,16 г, 1,51 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,048 г, 0,042 ммоль), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,110 г, 44,7%). ЖХ/МС: 586,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,03% (детекция при 254 нм) (Rt 3,803; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,23 (т, 1H), 7,69 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,47 (т, 3H, J=8 Гц), 7,29 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,28 (д, 4H, J=4 Гц), 3,93 (с, 3H), 3,83-3,86 (м, 2H), 3,43 (м, 2H), 3,16-3,27 (м, 8H), 2,81 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,66 (м, 2H), 1,57 (м, 2H), 0,84 (т, 3H, J=6 Гц).
Пример 67: Синтез 4’-((1R, 4R)-2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-илметил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамида (0,1 г, 28%)
Figure 00000147
Соединение 67
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (14 г, 43 ммоль) и ацетальдегида (3,75 г, 85,4 ммоль) в дихлорэтане (150 мл), добавляли уксусную кислоту (15,36 г, 256 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 20 минут, при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (27,0 г, 128 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и гасили добавлением водного бикарбоната натрия. Органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением метил-5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (14 г, 93%).
Стадия 2: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида
К перемешанному раствору метил-5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (14 г, 39 ммоль) в этаноле (100 мл) добавляли водный NaOH (2,36 г, 59,1 ммоль). После перемешивания при 60°C в течение 1 ч, этанол удаляли в условиях пониженного давления и подкисляли до pH 4 с использованием разбавленной HCl, а затем цитратным буферным раствором. Смесь экстрагировали этилацетатом, объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (13,9 г).
К перемешанному раствору полученной кислоты (10 г, 29 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она (8,8 г, 58 ммоль) и триэтиламина (5,6 г, 58 ммоль) в DMSO (25 мл) при 0°C добавляли PYBOP (22 г, 44 ммоль). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре, смесь выливали на лед и экстрагировали 10% MeOH в CH2Cl2. Объединенные органические слои сушили и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества. В результате растирания неочищенного вещества с растворителем получали 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамид (14 г, 73%).
Стадия 3: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4'-формил-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (5,0 г, 10 ммоль) и (4-формилфенил)бороновой кислоты (2,35 г, 15,8 ммоль) в смеси диоксан/вода (30 мл/10 мл) добавляли Na2CO3 (4,01 г, 37,9 ммоль). Раствор продували аргоном в течение 15 мин, добавляли Pd(PPh3)4 (1,21 г, 1,05 ммоль), и нагревали смесь при 100°C в течение 2 ч. Смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры, разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в CH2Cl2. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и удаляли растворитель в условиях пониженного давления. Полученное неочищенное вещество очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4'-формил-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамида (3,5 г, 66%).
Для синтеза соединений 67-105 использовали следующую методику восстановительного аминирования
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4'-формил-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамида (1,0 ммоль) и соответствующего амина (3,0 ммоль) в дихлорэтане (10 мл) добавляли уксусную кислоту (6,0 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 20 минут, при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (0,63 г, 3,0 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и гасили добавлением водного бикарбоната натрия. Органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле или методом ВЭЖХ с обращенной фазой с получением продукта в виде свободного основания или в форме трифторацетата.
Аналитические данные для 4’-((1R,4R)-2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-илметил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамида: ЖХ/МС: 585,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,65% (детекция при 254 нм) (Rt 4,019; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,55 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,39-7,41 (м, 3H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,35 (с, 2H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,93 (д, 2H, J=7,2 Гц), 3,82 (д, 2H, J=9,6 Гц), 3,72 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,44-3,53 (м, 3H), 3,22-3,27 (м, 1H), 3,01-3,09 (м, 2H), 2,73 (д, 1H, J=9,2 Гц), 2,23 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,79-1,82 (м, 1H), 1,51-1,67 (м, 5H), 0,82 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 68: 4’-((1S, 4S)-2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-илметил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид (0,15 г, 43%)
Figure 00000148
Соединение 68
Аналитические данные: ЖХ/МС: 585,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,99% (детекция при 254 нм) (Rt 3,95; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 8,18(с, 1H), 7,56-7,54 (м, 2H), 7,41-7,39 (м, 3H), 7,21 (с, 1H), 5,87(с, 1H), 4,34 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4Гц),3,93 (д, 1H, J=7,6 Гц), 3,83-3,81 (м, 2H), 3,74-3,72 (м, 2H), 3,52 (д, 1H, J=6,8 Гц), 3,44(с, 1H), 3,28-3,22 (м, 2H), 3,09-3,08 (м, 3H), 2,73 (д, 1H J=10 Гц), 2,41 (д, 1H J=10 Гц), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,79 (м, 1H), 1,67-1,51 (м, 5H), 0,83 (т, 3H J=6,8 Гц).
Пример 69: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4’-(пирролидин-1-илметил)-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид (0,19 г)
Figure 00000149
Соединение 69
Аналитические данные: ЖХ/МС: 557,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,70% (детекция при 254 нм) (Rt 4,075; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,19 (т, 1H, J=4,4 Гц), 7,55 (д, 2H, J=8 Гц), 7,38 (д, 2H, J=6,4 Гц), 7,35 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,58 (с, 2H), 3,22-3,27 (м, 2H), 3,06-3,09 (м, 2H), 2,99-3,04 (м, 1H), 2,43 (шир. с, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,64-1,69 (м, 6H), 1,51-1,56 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 70: (S)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4’-(3-гидроксипирролидин-1-илметил)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамида трифторацетат (0,15 г, 44%)
Figure 00000150
Соединение 70
Аналитические данные: ЖХ/МС: 573,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,97% (детекция при 254 нм) (Rt 3,965; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 10,03-10,30 (м, 1H), 8,23 (с, 1H), 7,75 (д, 2H, J=7,2 Гц), 7,60 (д, 2H, J=8 Гц), 7,52 (с, 1H), 7,32 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,45-4,46 (м, 2H), 4,39-4,40 (м, 2H), 4,29 (д, 2H, J=5,2 Гц), 3,83-3,86 (м, 2H), 3,43-3,55 (м, 2H), 3,01-3,36 (м, 6H), 2,32-2,37 (м, 2H), 2,27 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,67 (м, 2H), 1,58 (м, 2H), 0,84 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 71: (R)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4’-(3-гидроксипирролидин-1-илметил)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид (0,125 г, 55%)
Figure 00000151
Соединение 71
Аналитические данные: ЖХ/МС: 573,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,12% (детекция при 254 нм) (Rt 3,921; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,56 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,39 (с, 1H), 7,36 (д, 2H, J=8 Гц), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,68 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4 Гц), 4,19 (шир. с, 1H), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,56-3,59 (м, 2H), 3,22-3,25 (м, 2H), 3,08-3,09 (м, 2H), 3,01 (м, 1H), 2,57-2,67 (м, 2H), 2,32 (м, 2H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,97-2,00 (м, 1H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,53 (м, 3H), 0,83 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 72: (S)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4’-(3-фторпирролидин-1-илметил)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид (0,05 г)
Figure 00000152
Соединение 72
Аналитические данные: ЖХ/МС: 575,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,44% (детекция при 254 нм) (Rt 4,081; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,56 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,39 (с, 1H), 7,34 (д, 2H, J=8 Гц), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 5,09-5,25 (м, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4 Гц), 3,81-3,86 (м, 2H), 3,65 (с, 2H), 3,53-3,55 (м, 2H), 3,17-3,25 (м, 2H), 3,07-3,16 (м, 7H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,53 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 73: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4’-(пиперазин-1-илметил)-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамида трифторацетат (0,18 г, 50%)
Figure 00000153
Соединение 73
Аналитические данные: ЖХ/МС: 572,10 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,61% (детекция при 254 нм) (Rt 3,736; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,81 (шир. с, 2H), 8,20 (с, 1H), 7,66 (д, 2H, J=7,2 Гц), 7,47 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,42 (м, 1H), 7,25 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4 Гц), 3,82-3,85 (м, 4H), 3,11-3,27 (м, 9H), 2,88 (м, 4H), 2,25 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,65 (м, 2H), 1,53-1,55 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6 Гц).
Пример 74: (R)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4’-(3-фторпирролидин-1-илметил)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид (0,07 г, 31%)
Figure 00000154
Соединение 74
Аналитические данные: ЖХ/МС: 575,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,53% (детекция при 254 нм) (Rt 4,079; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,57 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,38 (д, 2H, J=4,4 Гц), 7,36 (с, 1H), 7,22 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 5,12-5,26 (м, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,63 (с, 2H), 3,22-3,25 (м, 2H), 3,08-3,09 (м, 2H), 3,02 (м, 1H), 2,73-2,83 (м, 2H), 2,32 (м, 1H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,89 (м, 1H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,53 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=7,2 Гц).
Пример 75: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4’-(пиперидин-1-илметил)-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид (0,1 г, 88%)
Figure 00000155
Соединение 75
Аналитические данные: ЖХ/МС: 571,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,25% (детекция при 254 нм) (Rt 4,147; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,19 (т, 1H, J=5,2 Гц), 7,55 (д, 2H, J=8 Гц), 7,39 (с, 1H), 7,34 (д, 2H, J=8 Гц), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,82-3,83 (м, 2H), 3,43 (с, 2H), 3,24 (т, 2H, J=11,2 Гц), 3,06-3,09 (м, 2H), 2,99-3,01 (м, 1H), 2,32 (шир. с, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,47-1,56 (м, 6H), 1,38-1,39 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=7,2 Гц).
Пример 76: (S)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4’-((3-гидроксипиперидин-1-ил)метил)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид (0,25 г, 71,4%)
Figure 00000156
Соединение 76
Аналитические данные: ЖХ/МС: 587,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,63% (детекция при 254 нм) (Rt 3,997; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,18 (т, 1H, J-4,8 Гц), 7,56 (д, 2H, J=8 Гц), 7,39 (с, 1H), 7,34 (д, 2H, J=8 Гц), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,55 (д, 1H, J=4,8 Гц), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,51-3,54 (м, 2H), 3,43-3,45 (м, 1H), 3,06-3,09 (м, 3H), 2,99-3,01 (м, 2H), 2,79 (д, 1H, J=6,8 Гц), 2,65 (д, 1H, J=10,8 Гц), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,78-1,88 (м, 2H), 1,58-1,71 (м, 2H), 1,39-1,51 (м, 4H), 1,04-1,10 (м, 1H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 77: (R)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4’-((3-гидроксипиперидин-1-ил)метил)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид (0,11 г, 48,6%)
Figure 00000157
Соединение 77
Аналитические данные: ЖХ/МС: 587,45 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,65% (детекция при 254 нм) (Rt 3,976; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,44 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,56 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,39 (с, 1H), 7,35 (д, 2H, J=8 Гц), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,40-3,54 (м, 3H), 3,22-3,25 (м, 2H), 3,08-3,09 (м, 2H), 3,02 (м, 1H), 2,78-2,80 (м, 2H), 2,66 (м, 2H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,80-1,86 (м, 3H), 1,53-1,67 (м, 3H), 1,40-1,51 (м, 3H), 1,04-1,06 (м, 1H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 78: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4’-((4-гидроксипиперидин-1-ил)метил)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид (0,2 г, 57%)
Figure 00000158
Соединение 78
Аналитические данные: ЖХ/МС: 587,20 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,89% (детекция при 254 нм) (Rt 1,456; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,19 (т, 1H, J=4,4 Гц), 7,56 (д, 2H, J=8 Гц), 7,39 (с, 1H), 7,34 (д, 2H, J=8 Гц), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,53 (д, 1H, J=3,6 Гц), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,44 (с, 3H), 3,22-3,27 (м, 2H), 3,07-3,09 (м, 2H), 3,01-3,06 (м, 1H), 2,66 (м, 2H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 2,00-2,04 (м, 2H), 1,64-1,67 (м, 4H), 1,51-1,53 (м, 2H), 1,36-1,39 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=7,2 Гц).
Пример 79: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4’-((3-фторпиперидин-1-ил)метил)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид (0,2 г, 56%)
Figure 00000159
Соединение 79
Аналитические данные: ЖХ/МС: 589,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,06% (детекция при 254 нм) (Rt 4,092; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,57 (д, 2H, J=7,2 Гц), 7,40 (с, 1H), 7,35 (д, 2H, J=7,2 Гц), 7,22 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,56-4,68 (м, 1H), 4,28 (д, 2H), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,52 (с, 2H), 3,22-3,28 (м, 3H), 3,08-3,09 (м, 2H), 3,02 (м, 1H), 2,65-2,72 (м, 1H), 2,39 (м, 2H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,78-1,81 (м, 2H), 1,64-1,68 (м, 2H), 1,50-1,53 (м, 4H), 0,83 (т, 3H).
Пример 80: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4’-((4-фторпиперидин-1-ил)метил)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид (0,09 г, 25%)
Figure 00000160
Соединение 80
Аналитические данные: ЖХ/МС: 589,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 95,46% (детекция при 254 нм) (Rt 4,156; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,56 (д, 2H), 7,39 (с, 1H), 7,37 (д, 2H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,62-4,74 (м, 1H), 4,28 (д, 2H, J=3,2 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,49 (с, 2H), 3,22-3,25 (м, 3H), 3,08-3,09 (м, 3H), 3,02 (м, 1H), 2,32 (м, 2H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,82-1,85 (м, 2H), 1,64-1,67 (м, 4H), 1,51-1,53 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 81: 4’-((4,4-дифторпиперидин-1-ил)метил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид (0,1 г, 27%)
Figure 00000161
Соединение 81
Аналитические данные: ЖХ/МС: 607,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 95,48% (детекция при 254 нм) (Rt 4,237; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,58 (д, 2H, J=8 Гц), 7,38 (д, 2H, J=3,6 Гц), 7,36 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,56 (с, 2H), 3,22-3,27 (м, 2H), 3,08-3,09 (м, 2H), 2,99-3,01 (м, 1H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,90-1,99 (м, 4H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,48-1,56 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,4 Гц), [4 H сливается с пиком растворителя].
Пример 82: 4’-(азетидин-1-илметил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000162
Соединение 82
Аналитические данные: ЖХ/МС: 543,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,50% (детекция при 254 нм) (Rt 4,010; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,19 (т, 1H, J=4,4 Гц), 7,54 (д, 2H, J=8 Гц), 7,38 (с, 1H), 7,32 (д, 2H, J=8 Гц), 7,20 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,52 (с, 2H), 3,22-3,27 (м, 2H), 2,98-3,11 (м, 7H), 2,23 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,94-2,01 (м, 2H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,56 (м, 2H), 0,82 (т, 3H, J=7,2 Гц).
Пример 83: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4’-((3-гидроксиазетидин-1-ил)метил)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000163
Соединение 83
Аналитические данные: ЖХ/МС: 559,80 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,10% (детекция при 254 нм) (Rt 3,917; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,54 (д, 2H, J=8 Гц), 7,38 (с, 1H), 7,31 (д, 2H, J=4,4 Гц), 7,20 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 5,28 (д, 1H, J=6,4 Гц), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 4,17-4,19 (м, 1H), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,56 (с, 2H), 3,48 (т, 2H, J=6,4 Гц), 3,22-3,27 (м, 2H), 3,06-3,09 (м, 2H), 3,01 (м, 1H), 2,75 (т, 2H, J=6,8 Гц), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,53 (м, 2H), 0,82 (т, 3H, J=7,2 Гц).
Пример 84: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4’-((3-фторазетидин-1-ил)метил)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000164
Соединение 84
Аналитические данные: ЖХ/МС: 561,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,99% (детекция при 254 нм) (Rt 4,021; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,57 (д, 2H, J=7,2 Гц), 7,37-7,40 (м, 3H), 7,22 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 5,27 (м, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,63 (с, 2H), 3,22-3,27 (м, 2H), 3,08-3,09 (м, 2H), 3,01 (м, 1H), 2,77 (м, 2H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 1,65-1,67 (м, 2H), 1,51-1,53 (м, 2H), 1,04-1,06 (м, 1H), 0,83 (т, 3H, J=7,2 Гц) [2H сливается с пиком растворителя].
Пример 86: 4’-((1,4-диазепан-1-ил)метил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000165
Соединение 86
Аналитические данные: ЖХ/МС: 585,37 (M+1)+; ВЭЖХ: 87,74% (детекция при 254 нм) (Rt 3,715; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,57 (д, 2H, J=6,8 Гц), 7,39 (м, 3H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,29 (д, 2H), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,66 (с, 2H), 3,08-3,09 (м, 3H), 3,02 (шир. с, 4H), 2,96 (м, 3H), 2,64-2,66 (м, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,78 (м, 2H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,53 (м, 2H), 0,83 (т, 3H).
Пример 87: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4’-((4-метил-1,4-диазепан-1-ил)метил)-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000166
Соединение 87
Аналитические данные: ЖХ/МС: 600,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,46% (детекция при 254 нм) (Rt 3,713; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,44 (с, 1H), 8,17 (т, 1H), 7,56 (д, 2H, J=8 Гц), 7,38 (д, 2H, J=5,6 Гц), 7,36 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=5,2 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,61 (с, 2H), 3,09-3,28 (м, 3H), 3,06-3,09 (м, 2H), 3,02 (м, 1H), 2,59-2,65 (м, 5H), 2,56 (т, 2H, J=6 Гц), 2,24 (с, 6H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,64-1,72 (м, 4H), 1,51-1,53 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 88: 4’-((1,4-оксазепан-4-ил)метил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000167
Соединение 88
Аналитические данные: ЖХ/МС: 587,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,85% (детекция при 254 нм) (Rt 4,055; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,18 (т, 1H, J=4,8 Гц), 7,56 (д, 2H, J=8 Гц), 7,37-7,39 (м, 3H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,69 (т, 3H, J=6 Гц), 3,64 (с, 1H), 3,59-3,61 (м, 2H), 3,22-3,27 (м, 2H), 2,99-3,09 (м, 3H), 2,59-2,64 (м, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,77-1,83 (м, 2H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,48-1,56 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=7,2 Гц).
Пример 89: 4’-(Аминометил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000168
Соединение 89
Аналитические данные: ЖХ/МС: 503,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 79,83% (детекция при 254 нм) (Rt 3,846; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,63 (д, 2H, J=8,4 Гц), 7,47 (д, 2H, J=8 Гц), 7,39 (с, 1H), 7,23 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,92 (с, 2H), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,22-3,32 (м, 2H), 3,08-3,10 (м, 2H), 3,01 (м, 1H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,65-1,67 (м, 2H), 1,51-1,56 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 90: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4’-((метиламино)метил)-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000169
Соединение 90
Аналитические данные: ЖХ/МС: 517,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,05% (детекция при 254 нм) (Rt 3,886; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,51 (с, 1H), 8,19 (т, 1H, J=4,4 Гц), 7,55 (д, 2H, J=8 Гц), 7,38 (д, 2H), 7,36 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,66 (с, 2H), 3,11-3,25 (м, 3H), 3,04-3,09 (м, 2H), 2,99-3,01 (м, 1H), 2,26 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,65-1,67 (м, 2H), 1,48-1,56 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 91: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4’-((этиламино)метил)-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000170
Соединение 91
Аналитические данные: ЖХ/МС: 531,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,28% (детекция при 254 нм) (Rt 3,977; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,18 (т, 1H, J=4,8 Гц), 7,55 (д, 2H, J=8 Гц), 7,39 (с, 1H), 7,37 (д, 2H, J=2 Гц), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=6 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,71 (с, 2H), 3,22-3,28 (м, 2H), 3,01-3,11 (м, 3H), 2,52-2,55 (м, 2H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,65-1,67 (м, 2H), 1,50-1,53 (м, 2H), 1,03 (т, 3H, J=7,2 Гц), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 92: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4’-((изопропиламино)метил)-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамида трифторацетат
Figure 00000171
Соединение 92
Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 545,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 94,74% (детекция при 254 нм) (Rt 4,081; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,66 (шир. с, 1H), 8,20 (с, 1H), 7,74 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,57 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,43 (с, 1H), 7,27 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 4,19 (т, 2H), 3,82-3,85 (м, 2H), 3,25 (т, 2H, J=10,8 Гц), 3,09-3,22 (м, 3H), 2,25 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,65 (м, 2H), 1,53-1,55 (м, 3H), 1,28 (д, 6H, J=6,4 Гц), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 93: 4’-((циклопропилметил)амино)метил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000172
Соединение 93
Аналитические данные: ЖХ/МС: 557,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,44% (детекция при 254 нм) (Rt 4,182; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,55 (д, 2H, J=7,2 Гц), 7,37-7,39 (м, 3H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,73 (с, 2H), 3,22-3,24 (м, 3H), 3,06-3,09 (м, 2H), 3,01 (м, 1H), 2,36 (д, 2H, J=6,8 Гц), 2,23 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,56 (м, 2H), 0,81-0,84 (м, 4H), 0,38-0,39 (м, 2H), 0,07-0,08 (м, 2H).
Пример 94: 4’-((диэтил)амино)метил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000173
Соединение 94
Аналитические данные: ЖХ/МС: 559,20 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,33% (детекция при 254 нм) (Rt 4,126; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,19 (т, 1H, J=5,2 Гц), 7,55 (д, 2H, J=8 Гц), 7,38 (д, 2H, J=5,2 Гц), 7,36 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81-3,83 (м, 2H), 3,54 (с, 2H), 3,22-3,37 (м, 2H), 3,06-3,11 (м, 2H), 2,99-3,01 (м, 1H), 2,43-2,47 (м, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,48-1,56 (м, 2H), 0,98 (т, 6H, J=7,2 Гц), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 95: (R)-4’-(((2,3-дигидроксипропил)амино)метил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000174
Соединение 95
Аналитические данные: ЖХ/МС: 599,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 93,58% (детекция при 254 нм) (Rt 3,808; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,18 (т, 1H, J=4,8 Гц), 7,56 (д, 2H, J=8 Гц), 7,37-7,39 (м, 3H), 7,16 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,51-4,56 (м, 2H), 4,28 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,73 (с, 2H), 3,55 (м, 1H), 3,11-3,25 (м, 3H), 3,01-3,09 (м, 3H), 2,56-2,61 (м, 1H), 2,41-2,46 (м, 2H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 1,65-1,67 (м, 2H), 1,48-1,56 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 96: (S)-4’-(((2,3-дигидроксипропил)амино)метил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000175
Соединение 96
Аналитические данные: ЖХ/МС: 577,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,96% (детекция при 254 нм) (Rt 3,812; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,19 (т, 1H, J=4,8 Гц), 7,55 (д, 2H, J=8 Гц), 7,37-7,39 (м, 3H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,55 (м, 3H), 4,28 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,81-3,83 (м, 2H), 3,72 (с, 2H), 3,55 (шир. с, 1H), 3,22-3,28 (м, 3H), 3,01-3,11 (м, 3H), 2,57-2,60 (м, 1H), 2,41-2,45 (м, 2H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,56 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=7,2 Гц).
Пример 97: 4'-(((циклопропилметил)(метил)амино)метил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000176
Соединение 97
Аналитические данные: ЖХ/МС: 571,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,80% (детекция при 254 нм) (Rt 4,243; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,18 (т, 1H, J=4,8 Гц), 7,57 (д, 2H, J=8 Гц), 7,40 (с, 1H), 7,37 (д, 2H, J=8 Гц), 7,22 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81-3,83 (м, 2H), 3,53 (с, 2H), 3,11-3,25 (м, 2H), 2,99-3,09 (м, 3H), 2,25-2,32 (м, 2H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,65-1,67 (м, 2H), 1,48-1,56 (м, 2H), 0,88 (м, 1H), 0,83 (т, 3H, J=7,2 Гц), 0,46-0,47 (м, 2H), 0,081 (м, 2H).
Пример 98: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4’-(((2-гидроксиэтил)амино)метил)-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000177
Соединение 98
Аналитические данные: ЖХ/МС: 547,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,46% (детекция при 254 нм) (Rt 3,862; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,44 (с, 1H), 8,19 (т, 1H, J=4,4 Гц), 7,55 (д, 2H, J=8 Гц), 7,38 (д, 2H, J=4,4 Гц), 7,37 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,47 (шир. с, 2H), 4,28 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,81-3,83 (м, 2H), 3,72 (с, 2H), 3,46 (м, 2H), 3,22-3,27 (м, 2H), 3,07-3,09 (м, 2H), 3,01-3,06 (м, 1H), 2,55-2,57 (м, 2H), 2,23 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,53 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 99: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4’-(((3-гидроксипропил)амино)метил)-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000178
Соединение 99
Аналитические данные: ЖХ/МС: 561,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,82% (детекция при 254 нм) (Rt 3,911; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,55 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,39 (д, 2H), 7,37 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,46 (шир. с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81-3,83 (м, 2H), 3,69 (с, 2H), 3,45 (т, 2H, J=6,4 Гц), 3,22-3,27 (м, 2H), 3,07-3,09 (м, 2H), 3,01-3,06 (м, 1H), 2,23 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,14 (с, 3H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,61 (м, 4H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц) [1 H сливается с пиком растворителя].
Пример 100: 4’-((бис(2-гидроксиэтил)амино)метил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамида трифторацетат
Figure 00000179
Соединение 100
Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 591,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,00% (детекция при 254 нм) (Rt 3,860; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 9,38 (с, 1H), 8,25 (с, 1H), 7,77 (д, 2H, J=3,2 Гц), 7,65 (с, 2H), 7,63 (с, 1H), 7,33 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,46 (с, 2H), 4,29 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,78-3,90 (м, 6H), 3,18-3,28 (м, 9H), 2,27 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,58-1,67 (м, 4H), 0,85 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 101: 4’-(((2-аминоэтил)амино)метил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000180
Соединение 101
Аналитические данные: ЖХ/МС: 546,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 93,12% (детекция при 254 нм) (Rt 3,721; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 9,19 (шир. с, 1H), 8,20 (т, 1H), 7,99 (шир. с, 2H), 7,74 (д, 2H, J=8 Гц), 7,57 (д, 2H, J=8 Гц), 7,42 (с, 1H), 7,26 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,26-4,29 (м, 3H), 3,82-3,84 (м, 2H), 3,11-3,27 (м, 8H), 3,03 (с, 2H), 2,24 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,55 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6 Гц).
Пример 102: 4’-(((3-аминопропил)амино)метил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамида трифторацетат
Figure 00000181
Соединение 102
Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 560,20 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,90% (детекция при 254 нм) (Rt 3,611; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,48 (с, 1H), 8,93 (шир. с, 2H), 8,20 (т, 1H), 7,79 (шир. с, 2H), 7,73 (д, 2H, J=8 Гц), 7,55 (д, 2H, J=8 Гц), 7,43 (с, 1H), 7,27 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 4,19 (м, 2H), 3,81-3,85 (м, 2H), 3,25 (т, 2H, J=11,2 Гц), 3,11-3,16 (м, 3H), 3,01 (м, 3H), 2,87-2,88 (м, 1H), 2,24 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,89-1,92 (м, 2H), 1,65-1,68 (м, 2H), 1,53-1,55 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 103: 4’-(((2,2-дифторэтил)амино)метил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000182
Соединение 103
Аналитические данные: ЖХ/МС: 567,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 92,86% (детекция при 254 нм) (Rt 3,984; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,57 (д, 2H, J=7,2 Гц), 7,38-7,40 (м, 3H), 7,21 (с, 1H), 6,01 (т, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,77 (с, 2H), 3,22-3,28 (м, 2H), 3,06-3,09 (м, 2H), 3,01 (м, 1H), 2,84 (т, 2H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,65-1,67 (м, 2H), 1,51-1,53 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 104: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4’-(((2,2,2-трифторэтил)амино)метил)-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000183
Соединение 104
Аналитические данные: ЖХ/МС: 585,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,52% (детекция при 254 нм) (Rt 4,175; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,58 (д, 2H, J=8 Гц), 7,39-7,40 (м, 3H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,80-3,83 (м, 4H), 2,93-3,27 (м, 8H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,53 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 105: 4’-(2-окса-6-азаспиро[3.3]гептан-6-илметил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000184
Соединение 105
Аналитические данные: ЖХ/МС: 585,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,67% (детекция при 254 нм) (Rt 3,99; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H,) 8,18 (с, 1H), 7,55-7,54 (м, 2H), 7,38 (с, 1H), 7,31-7,29 (м, 2H), 7,20 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,60 (с, 3H), 4,28 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,83-3,81 (м, 2H), 3,53 (с, 2H), 3,83-3,81 (м, 2H), 3,32 (2 протона сливаются с пиком растворителя), 3,24-3,22 (м, 4H), 3,09-3,01 (м, 3H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,67-1,64 (м, 2H), 1,53-1,51 (м, 2H), 0,83 (т, 3H J=6,4 Гц).
Пример 108: Синтез 5-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000185
Соединение 108
Стадия 1: Синтез трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (1 эквив.) и N,N-диметил-1-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)метанамина (1,2 эквив.) в смеси диоксан/вода (5 мл + 1 мл) добавляли Na2CO3 (3,6 эквив.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 эквив.), и продували реакционную колбу аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,08 г, 48,78%).
Стадия 2: Синтез 5-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(метил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Перемешанный раствор трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4'-((диметиламино)метил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-ил)(метил)амино)циклогексил)карбамата (0,08 г) в DCM (5 мл) охлаждали до 0°C, и добавляли TFA (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,06 г, 89,55%). ЖХ/МС: 530,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 89,74% (детекция при 254 нм) (Rt 3,557; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 9,74 (шир. с, 1H), 8,17 (т, 1H), 7,74-7,76 (м, 4H), 7,55 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,36 (с, 1H), 7,22 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,28-4,31 (м, 4H), 2,97 (шир. с, 1H), 2,74 (д, 6H, J=4,4 Гц), 2,66 (с, 3H), 2,20 (д, 6H, J=2 Гц), 2,10 (с, 3H), 1,92-1,95 (м, 2H), 1,74-1,77 (м, 2H), 1,52-1,57 (м, 2H), 1,28-1,30 (м, 2H) [1H сливается с пиком растворителя].
Пример 109: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Figure 00000186
Соединение 109
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (0,2 г, 0,42 ммоль) и (1-метил-1H-пиразол-4-ил)бороновой кислоты (0,105 г, 0,505 ммоль) в смеси диоксан/вода (5 мл +1 мл) добавляли Na2CO3 (0,16 г, 1,51 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,048 г, 0,042 ммоль), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Затем реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (0,100 г, 50%). ЖХ/МС: 478,20 (M+1)+; ВЭЖХ: 95,82% (детекция при 254 нм) (Rt 4,322; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,12 (с, 1H), 8,10 (т, 1H), 7,81 (с, 1H), 7,33 (с, 1H), 7,13 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,27 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,81-3,83 (м, 5H), 3,21-3,26 (м, 2H), 2,98-3,08 (м, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,17 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,63-1,66 (м, 2H), 1,48-1,52 (м, 2H), 0,86 (т, 3H, J=7,2 Гц).
Пример 110: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида
Figure 00000187
Соединение 110
Стадия 1: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамида
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (1 г, 2,15 ммоль) и (6-формилпиридин-3-ил)бороновой кислоты (0,539 г, 2,31 ммоль) в смеси диоксан/вода (15 мл +3 мл) добавляли Na2CO3 (0,82 г, 7,74 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,288 г, 0,25 ммоль), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную массу нагревали при 80°C в течение 2 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением целевого соединения (0,60 г, 57%).
Стадия 2: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-((диметиламино)метил)пиридин-3-ил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамида (0,102 г, 0,203 ммоль) и диметиламина (0,044 г, 2M 0,507 мл, 1,01 ммоль) в дихлорэтане (3 мл) добавляли уксусную кислоту (0,073 г, 1,021 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (0,129 г, 0,609 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение 4 ч при комнатной температуре. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, добавляли воду, и проводили экстрагирование 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (0,08 г, 75%). ЖХ/МС: 532,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,53% (детекция при 254 нм) (Rt 3,878; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,75 (д, 1H, J=1,2 Гц), 8,20 (т, 1H, J=4,8 Гц), 8,02 (д, 1H, J=6,4 Гц), 7,49 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 7,27 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,56 (с, 2H), 3,22-3,24 (м, 2H), 3,02-3,12 (м, 3H), 2,25 (с, 3H), 2,21 (с, 6H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,65-1,67 (м, 2H), 1,50-1,56 (м, 2H), 0,82 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 111: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-5-(6-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000188
Соединение 111
Стадия 1a: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метилбензамида
Figure 00000189
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (1 г, 2,15 ммоль) и (6-формилпиридин-3-ил)бороновой кислоты (0,539 г, 2,31 ммоль) в смеси диоксан/вода (15 мл +3 мл) добавляли Na2CO3 (0,82 г, 7,74 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,288 г, 0,25 ммоль), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную массу нагревали при 80°C в течение 2 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением целевого соединения (0,60 г, 57%).
Стадия 1b: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(6-(гидроксиметил)пиридин-3-ил)-2-метилбензамид
Figure 00000190
При проведении реакции с 1,5 г объемом вещества выделяли N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(6-(гидроксиметил)пиридин-3-ил)-2-метилбензамид (0,350 г, 22%).
Стадия 2: Синтез 5-(6-(бромметил)пиридин-3-ил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида
Figure 00000191
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(6-(гидроксиметил)пиридин-3-ил)-2-метилбензамида (0,35 г, 0,694 ммоль) в DCM (5 мл) добавляли трифенилфосфин (0,361 г, 1,38 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем к раствору порциями добавляли CBr4 (0,318 г, 1,38 ммоль), и перемешивали полученный раствор при комнатной температуре в течение 18 ч. По завершении реакции, к реакционной массе добавляли воду, и проводили экстрагирование с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое затем очищали на колонке с получением целевого вещества (0,35 г, 89%).
Стадия 3: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-5-(6-((4-метилпиперазин-1-ил)метил)пиридин-3-ил)бензамида
К перемешанному раствору 5-(6-(бромметил)пиридин-3-ил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (0,175 г, 0,309 ммоль), растворенного в THF (2 мл), при комнатной температуре добавляли 1-метил-пиперазин (0,309 г, 1,54 ммоль), и перемешивали при той же температуре в течение 18 ч. По завершении реакции, к реакционной массе добавляли воду, и проводили экстрагирование с использованием DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое затем очищали методом препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,028 г, 15%). ЖХ/МС: 587,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,05% (детекция при 254 нм) (Rt 3,831; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,89 (с, 1H), 8,21 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,59 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,35 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,29 (д, 2H, J=4 Гц), 3,96-4,04 (м, 2H), 3,83-3,86 (м, 2H), 3,16-3,43 (м, 13H), 2,81 (с, 3H), 2,27 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,67 (м, 2H), 1,56 (м, 2H), 0,84 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 112: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4,4'-диметил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000192
Соединение 112
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (200 мг, 0,42 ммоль) и пара-толилбороновой кислоты (86 мг, 0,63 ммоль) в диоксане (3 мл) добавляли 2M водный раствор Na2CO3 (0,75 мл, 1,51 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (48 мг, 0,04 ммоль), и снова продували аргоном в течение 15 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 2 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали указанное в заголовке соединение (150 мг, 73%). ЖХ/МС: 488,20 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,33% (детекция при 254 нм) (Rt 5,393; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,51 (д, 2H, J=8 Гц), 7,37 (с, 1H), 7,25 (д, 2H, J=8 Гц), 7,19 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,81-3,83 (м, 2H), 3,22-3,27 (м, 2H), 3,07-3,09 (м, 2H), 3,01 (м, 1H), 2,33 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,55 (м, 2H), 0,82 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 113: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4'-(гидроксиметил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000193
Соединение 113
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (200 мг, 0,42 ммоль) и 4-(гидроксиметил)фенилбороновой кислоты (96 мг, 0,63 ммоль) в диоксане (2,5 мл) добавляли 2M водный раствор Na2CO3 (0,75 мл, 1,51 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (48 мг, 0,04 ммоль), и снова продували аргоном в течение 15 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали указанное в заголовке соединение (130 мг, 62%). ЖХ/МС: 504,15 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,86% (детекция при 254 нм) (Rt 4,240; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,57 (д, 2H, J=7,2 Гц), 7,39 (с, 1H), 7,37 (д, 2H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 5,20 (т, 1H, J=5,2 Гц), 4,52 (д, 2H, J=5,6 Гц), 4,28 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,22-3,32 (м, 2H), 3,08-3,09 (м, 2H), 3,01 (м, 1H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,65-1,67 (м, 2H), 1,51-1,53 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 114: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-3'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000194
Соединение 114
Стадия 1: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-3'-формил-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (400 мг, 0,84 ммоль) и (3-формилфенил)бороновой кислоты (189 мг, 1,26 ммоль) в диоксане (2 мл) добавляли 2M водный раствор Na2CO3 (1,5 мл, 3,03 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (97 мг, 0,08 ммоль), и снова продували аргоном в течение 15 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали указанное в заголовке соединение (270 мг, 64%).
Стадия 2: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-3'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-3'-формил-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (270 мг, 0,53 ммоль) и морфолина (94 мг, 1,07 ммоль) в дихлорэтане (5 мл) добавляли уксусную кислоту (194 мг, 3,23 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем к реакционной смеси при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (343 мг, 1,61 ммоль), оставляли нагреваться до комнатной температуры, и продолжали перемешивание в течение ночи. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли дихлорметаном, промывали водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали указанное в заголовке соединение (200 мг, 65%). ЖХ/МС: 573,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 90,21% (детекция при 254 нм) (Rt 4,048; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,20 (т, 1H), 7,52 (с, 1H), 7,49 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,39 (д, 1H, J=5,6 Гц), 7,29 (д, 1H, J=7,2 Гц), 7,20 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,82-3,84 (м, 2H), 3,56 (м, 4H), 3,52 (с, 2H), 3,22-3,30 (м, 2H), 3,08-3,10 (м, 2H), 3,01 (м, 1H), 2,37 (с, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,65-1,67 (м, 2H), 1,51-1,54 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 115: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-((3-(морфолинометил)азетидин-1-ил)метил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000195
Соединение 115
Соединение 115 получали способом, сходным с описанным в примере 67. Аналитические данные: ЖХ/МС: 642,45 (M+1)+; ВЭЖХ: 93,13% (детекция при 254 нм) (Rt 3,803; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,54 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,38 (с, 1H), 7,31 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,20 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4 Гц), 3,81-3,83 (м, 2H), 3,52-3,53 (м, 6H), 3,22-3,24 (м, 2H), 3,07-3,09 (м, 2H), 3,01 (м, 1H), 2,79 (с, 2H), 2,56-2,58 (м, 2H), 2,29 (м, 2H), 2,28 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,53 (м, 2H), 0,82 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 116: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-5-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000196
Соединение 116
Стадия 1: Синтез метил-4-метил-4'-(морфолинометил)-5-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксилата
К перемешанному раствору метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (600 мг, 1,83 ммоль) и 4-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил]морфолина (833 мг, 2,75 ммоль) в диоксане (9 мл) добавляли 2M водный раствор Na2CO3 (3,30 мл, 6,60 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (211 мг, 0,18 ммоль), и снова продували аргоном в течение 15 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали указанное в заголовке соединение (500 мг, 77%).
Стадия 2: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-5-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору метил-4-метил-4'-(морфолинометил)-5-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксилата (500 мг, 1,17 ммоль) в этаноле (10 мл) добавляли водный NaOH (73 мг, 1,76 ммоль), и продолжали перемешивание при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции, этанол удаляли в условиях пониженного давления и подкисляли до pH 6 с использованием разбавленной HCl. Водный слой экстрагировали этилацетатом (5 раз), и сушили объединенный органический слой над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления получали соответствующую кислоту (350 мг, 72,4%).
К перемешанному охлажденному на льду раствору полученной кислоты (200 мг, 0,48 ммоль) в DMF (10 мл) добавляли EDCI (139 мг, 0,73 ммоль) и триэтиламин (0,17 мл, 1,21 ммоль). Затем после перемешивания в течение 15 минут при 0°C добавляли HOBT (78 мг, 0,58 ммоль), а затем 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (148 мг, 0,97 ммоль). Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры, и продолжали перемешивание в течение ночи. По завершении реакции, реакционную массу выливали на лед и экстрагировали 10% MeOH в DCM (5 раз). Объединенный органический слой промывали водой и сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующим промыванием растворителем получали указанное в заголовке соединение (50 мг, 19%). ЖХ/МС: 545,15 (M+1)+; ВЭЖХ: 95,86% (детекция при 254 нм) (Rt 4,382; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,03 (м, 1H), 7,71 (шир. с, 1H), 7,54 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,34 (д, 2H, J=7,6 Гц), 6,85 (с, 1H), 6,70 (с, 1H), 5,83 (д, 2H, J=7,6 Гц), 4,58 (д, 1H, J=7,6 Гц), 4,26 (д, 2H, J=4 Гц), 4,04 (д, 2 H, J=4,8 Гц), 3,85-3,88 (м, 2H), 3,62 (м, 1H), 3,57 (т, 2H), 3,41-3,47 (м, 3H), 2,32-2,36 (м, 4H), 2,19 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 2,05 (с, 3H), 1,88-1,91 (м, 2H), 1,50-1,52 (м, 2H).
Пример 117: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этиламино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000197
Соединение 117
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-3-(этиламино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (1,0 г, 4,09 ммоль) и ацетальдегида (180 мг, 4,09 ммоль) в дихлорэтане (10 мл) добавляли уксусную кислоту (1,47 г, 24,58 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (2,6 г, 12,29 ммоль), смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры, и продолжали перемешивание в течение 2 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли дихлорметаном, промывали водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали целевое соединение (600 мг, 55%).
Стадия 2: Синтез метил-5-(этиламино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксилата
К перемешанному раствору метил-5-бром-3-(этиламино)-2-метилбензоата (600 мг, 2,2 ммоль) и 4-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил]морфолина (1,0 г, 3,3 ммоль) в диоксане (5 мл) добавляли 2M водный раствор Na2CO3 (3,96 мл, 7,93 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (255 мг, 0,22 ммоль), и снова продували аргоном в течение 15 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали целевое соединение (800 мг, 98%).
Стадия 3: Синтез 5-(этиламино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты
К перемешанному раствору соединения 6 (800 мг, 2,17 ммоль) в этаноле (10 мл) добавляли водный NaOH (130 мг, 3,25 ммоль), и продолжали перемешивание при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции, этанол удаляли в условиях пониженного давления, и подкисляли до pH~6 с использованием разбавленной HCl. Водный слой экстрагировали этилацетатом (5 раз), и сушили объединенный органический слой над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления получали целевое соединение (700 мг, 91%). ЖХ/МС: 355,05 (M+1)+; ВЭЖХ: 89,74% (детекция при 254 нм) (Rt 3,854; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (CD3OD, 400 МГц) δ 8,24 (с, 1H), 7,88 (с, 1H), 7,84 (д, 2H, J=8 Гц), 7,71 (д, 2H, J=8,4 Гц), 4,45 (с, 2H), 4,06 (д, 2H, J=11,2 Гц), 3,79 (т, 2H, J=12 Гц), 3,53 (кв., 2H, J=7,2 Гц), 3,40-3,43 (м, 2H), 3,22-3,31 (м, 2H), 2,66 (с, 3H), 1,45 (т, 3H, J=7,2 Гц).
Стадия 4: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этиламино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
5-(Этиламино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоновую кислоту (300 мг, 0,84 ммоль) растворяли в DMSO (2 мл), и добавляли к ней 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (257 мг, 1,69 ммоль). После перемешивания в течение 15 минут при комнатной температуре к реакционной смеси добавляли PyBOP (660 мг, 1,26 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. После завершения реакции, реакционную массу выливали на лед и экстрагировали 10% MeOH в DCM (5 раз). Объединенный органический слой промывали водой и сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующим промыванием растворителем получали указанное в заголовке соединение (100 мг, 24%). ЖХ/МС: 489,20 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,41% (детекция при 254 нм) (Rt 4,060; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30ºC; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 9,90 (с, 1H), 8,06 (т, 1H), 7,73 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,55 (д, 2H, J=7,2 Гц), 6,80 (д, 2H, J=7,6 Гц), 5,86 (с, 1H), 4,38 (с, 2H), 4,27 (д, 2H, J=4 Гц), 3,95 (м, 2H), 3,62-3,65 (м, 2H), 3,28-3,31 (м, 2H), 3,20-3,24 (м, 2H), 3,14-3,19 (м, 2H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 2,06 (с, 3H), 1,21 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 118: Синтез 5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-(гидроксиметил)-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000198
Соединение 118
Стадия 1: Синтез трет-бутилдиметил(проп-2-ин-1-илокси)силана
К охлажденному на льду перемешанному раствору проп-2-ин-1-ола (10,0 г, 178,3 ммоль) и имидазола (18,2 мг, 267,5 ммоль) в дихлорэтане (500 мл), добавляли TBDMSCl (40,24 г, 267,5 ммоль), и продолжали перемешивание при 0°C в течение 1,5 ч. По завершении реакции, к реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония, и экстрагировали этилацетатом (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующим промыванием растворителем получали целевое соединение (20 г, 67%).
Стадия 2: Синтез 5-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пент-3-ин-2-она
К перемешанному раствору трет-бутилдиметил(проп-2-ин-1-илокси)силана (20,0 г, 116,9 ммоль) в THF (400 мл) при -78°C добавляли n-BuLi (90 мл, 140,0 ммоль), и оставляли реакционную смесь нагреваться до комнатной температуры в течение 2 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до -78°C, и добавляли бора трифторида эфират (18 мл, 140,0 ммоль). После перемешивания в течение 10 минут, добавляли уксусный ангидрид (15 мл, 153,0 ммоль), и оставляли реакционную смесь нагреваться до комнатной температуры в течение 2,5 ч. Реакционную смесь гасили добавлением 1н водного раствора NaOH и экстрагировали этилацетатом (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующим промыванием растворителем получали C (13 г, 52%).
Стадия 3: Синтез 4-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила
К перемешанному раствору 5-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пент-3-ин-2-она (13,0 г, 61,0 ммоль) и цианацетамида (6,2 г, 73,2 ммоль) в смеси этанол/вода (9/1, 270 мл) при комнатной температуре добавляли пиперидинацетат (каталитическое количество), и нагревали реакционную смесь до температуры возгонки 5 ч. После удаления растворителя, добавляли воду, и фильтровали твердый продукт. Твердый продукт промывали водой, а затем эфиром и гексаном, и получали целевое соединение (5,5 г, 32%).
Стадия 4: Синтез 3-(аминометил)-4-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)-6-метилпиридин-2(1H)-она
К перемешанному раствору 4-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (5,5 г, 19,7 ммоль) в метаноле (100 мл) и аммиаке (30 мл) добавляли никель Ренея (колич.), и перемешивали реакционную смесь в течение 14 ч в присутствии водорода, подаваемого под давлением из баллона. По завершении реакции, реакционную смесь фильтровали через целит и промывали метанолом. После удаления растворителя в условиях пониженного давления получали целевое соединение (3,5 г, 63%).
Стадия 5: Синтез 5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-(гидроксиметил)-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
К перемешанному раствору метил-5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (400 мг, 1,1 ммоль) в этаноле (60 мл) добавляли водный NaOH (70 мг, 1,7 ммоль), и продолжали перемешивание при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции, этанол удаляли в условиях пониженного давления и подкисляли до pH~6 с использованием разбавленной HCl. Водный слой экстрагировали этилацетатом (5 раз), и сушили объединенный органический слой над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления получали соответствующую кислоту (320 мг, 83,55%).
Полученную кислоту (400 мг, 1,1 ммоль) затем растворяли в DMSO (4 мл), и добавляли к ней 3-(аминометил)-4-(((трет-бутилдиметилсилил)окси)метил)-6-метилпиридин-2(1H)-он (525 мг, 1,7 ммоль). После перемешивания в течение 15 минут при комнатной температуре к реакционной смеси добавляли PyBOP (900 мг, 1,6 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. После завершения реакции, реакционную массу выливали на лед и экстрагировали 10% MeOH в DCM (5 раз). Объединенный органический слой промывали водой и сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующим промыванием растворителем получали целевое соединение (230 мг, 40%).
Стадия 6: Синтез 5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-(гидроксиметил)-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору 5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-(гидроксиметил)-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (250 мг, 0,5 ммоль) и 4-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил]морфолина (230 мг, 7,6 ммоль) в диоксане (5 мл) добавляли 2M водный раствор Na2CO3 (0,9 мл, 1,8 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (57 мг, 0,05 ммоль), и снова продували аргоном в течение 15 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали указанное в заголовке соединение (60 мг, 25%). ЖХ/МС: 589,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 95,58% (детекция при 254 нм) (Rt 3,524; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,54 (с, 1H), 8,22 (т, 1H), 7,57 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,38 (д, 2H, J=5,6 Гц), 7,36 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 6,16 (с, 1H), 5,28 (м, 1H), 4,52 (д, 2H, J=4,8 Гц), 4,25 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,81-3,83 (м, 2H), 3,57 (м, 4H), 3,48 (с, 2H), 3,01-3,09 (м, 3H), 2,36 (м, 4H), 2,23 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 1,64-1,67 (м, 2H), 1,51-1,53 (м, 2H), 1,23 (м, 2H), 0,82 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 119: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-5-(N-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)ацетамидо)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000199
Соединение 119
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-2-метил-3-(N-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)ацетамидо)бензоата
Раствор метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (520 мг, 1,58 ммоль) нагревали при 70°C в 3 мл уксусного ангидрида в течение 6 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, гасили добавлением насыщенного NaHCO3 и экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (100-200 меш) с получением целевого соединения (400 мг, 68%).
Стадия 2: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(N-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)ацетамидо)бензамида
Смесь метил-5-бром-2-метил-3-(N-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)ацетамидо)бензоата (400 мг, 1,08 ммоль) и NaOH (47 мг, 1,13 ммоль) в 5 мл смеси этанол/вода (2:1) нагревали при 70°C в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха, неочищенное вещество растворяли в воде, корректировали значение pH до 5-6 медленным добавлением разбавленной HCl и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали в условиях пониженного давления с получением 400 мг кислоты.
Смесь неочищенной кислоты (400 мг, 1,23 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она (370 мг, 2,46 ммоль), PyBOP (960 мг, 1,85 ммоль) и триэтиламина (0,17 мл, 1,23 ммоль) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи в 2 мл DMSO. Реакционную смесь разбавляли водой, соединение экстрагировали введением в 10% MeOH в DCM, сушили над Na2SO4, концентрировали, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии на силикагеле (100-200 меш) с получением 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(N-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)ацетамидо)бензамида (95 мг, 17,3%).
Стадия 3: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-5-(N-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)ацетамидо)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Раствор 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-3-(N-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)ацетамидо)бензамида (50 мг, 0,10 ммоль), (4-(морфолинометил)фенил)бороновой кислоты (41 мг, 0,13 ммоль), карбоната натрия (27 мг, 0,25 ммоль) в 3 мл диоксана дегазировали аргоном в течение 20 мин, добавляли к смеси Pd(PPh3)4 (12 мг, 0,0012 ммоль), и нагревали до 100°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой, после чего экстрагировали 10% MeOH в DCM, органические слои сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали полученный неочищенный продукт методом хроматографии на силикагеле (100-200 меш) с получением указанного в заголовке соединения (26 мг, 23%). ЖХ/МС: 609,35 (M + 23)+; ВЭЖХ: 97,81% (детекция при 254 нм) (Rt 4,407; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,48 (шир. с, 1H), 8,41 (т, 1H), 7,67-7,69 (м, 2H), 7,39-7,56 (м, 4H), 5,87 (с, 1H), 4,54-4,57 (м, 1H), 4,30-4,31 (д, 2H, J=4 Гц), 3,77-3,85 (м, 2H), 3,50-3,58 (м, 6H), 2,37 (м, 4H), 2,22 (с, 3H), 2,16 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,88-1,91 (м, 1H), 1,51-1,65 (м, 6H), 2 протона сливаются с пиком растворителя.
Пример 120: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-3'-фтор-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000200
Соединение 120
Стадия 1: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-3'-фтор-4'-формил-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (300 мг, 0,63 ммоль) и (3-фтор-4-формилфенил)бороновой кислоты (160 мг, 0,94 ммоль) в диоксане (6 мл) добавляли 2M водный раствор Na2CO3 (1,15 мл, 2,3 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (72 мг, 0,06 ммоль), и снова продували аргоном в течение 15 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали указанное в заголовке соединение (288 мг, 88%).
Стадия 2: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-3'-фтор-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-3'-фтор-4'-формил-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (285 мг, 0,55 ммоль) и морфолина (149 мг, 1,64 ммоль) в дихлорэтане (5 мл) добавляли уксусную кислоту (0,2 мл, 3,29 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем к реакционной смеси при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (349 мг, 1,64 ммоль), оставляли ее нагреваться до комнатной температуры, и продолжали перемешивание в течение ночи. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли дихлорметаном, промывали водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методами колоночной хроматографии и преп. ВЭЖХ получали указанное в заголовке соединение (70 мг, 20%). ЖХ/МС: 591,45 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,96% (детекция при 254 нм) (Rt 4,034; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,5 (шир. с, 1H), 10,1 (шир. с, 1H), 8,24 (с, 1H), 7,66-7,73 (м, 3H), 7,54 (с, 1H), 7,36 (с, 1H), 5,88 (с, 1H), 4,44 (с, 2H), 4,30 (м, 5H), 3,96 (м, 2H), 3,66-3,86 (м, 6H), 3,17-3,34 (м, 4H), 2,27 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 2,11(с, 3H), 1,57-1,67 (м, 4H), 0,84 (т, 3H, J=6 Гц).
Пример 121: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2'-фтор-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000201
Соединение 121
Стадия 1: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2'-фтор-4'-формил-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (300 мг, 0,62 ммоль) и (2-фтор-4-формилфенил)бороновой кислоты (158 мг, 0,94 ммоль) в диоксане (3 мл) добавляли 2M водный раствор Na2CO3 (1,13 мл, 2,26 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (72 мг, 0,06 ммоль), и снова продували аргоном в течение 15 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали целевое соединение (300 мг, 91%).
Стадия 2: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2'-фтор-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2'-фтор-4'-формил-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (300 мг, 0,57 ммоль) и морфолина (100 мг, 1,15 ммоль) в дихлорэтане (4 мл) добавляли уксусную кислоту (207 мг, 3,46 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем к реакционной смеси при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (367 мг, 1,73 ммоль), оставляли ее нагреваться до комнатной температуры, и продолжали перемешивание в течение ночи. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли дихлорметаном, промывали водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали указанное в заголовке соединение (300 мг, 87,97%).
ЖХ/МС: 591,30 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,03% (детекция при 254 нм) (Rt 4,077; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 8,17 (т, 1H), 7,47 (т, 1H, J=8Гц), 7,30 (с, 1H), 7,21-7,23 (м, 2H), 7,10 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,50-3,59 (м, 6H), 3,22-3,25 (м, 2H), 3,00-3,06 (м, 3H), 2,38 (м, 4H), 2,25(с, 3H), 2,19 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,51-1,66 (м, 4H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 122: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2',4-диметил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000202
Соединение 122
Стадия 1: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4'-формил-2',4-диметил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (400 мг, 0,84 ммоль) и 3-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензальдегида (310 мг, 1,26 ммоль) в диоксане (2 мл) добавляли 2M водный раствор Na2CO3 (1,5 мл, 3,03 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (97 мг, 0,08 ммоль), и снова продували аргоном в течение 15 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали целевое соединение (300 мг, 69,28%).
Стадия 2: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2',4-диметил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4'-формил-2',4-диметил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (410 мг, 0,79 ммоль) и морфолина (210 мг, 2,38 ммоль) в дихлорэтане (10 мл) добавляли уксусную кислоту (280 мг, 4,77 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем к реакционной смеси при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (580 мг, 2,71 ммоль), оставляли ее нагреваться до комнатной температуры, и продолжали перемешивание в течение ночи. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли дихлорметаном, промывали водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали указанное в заголовке соединение (125 мг, 26,76%).
ЖХ/МС: 587,55 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,23% (детекция при 254 нм) (Rt 4,065; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 9,91 (шир. с, 1H), 8,17 (шир. с, 1H), 7,32-7,42 (м, 3H), 7,15 (шир. с, 1H), 6,92 (шир. с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,27-4,35 (м, 4H), 3,86 (м, 2H), 3,64-3,67 (м, 3H), 3,12-3,32 (м, 10H), 2,33 (шир. с, 6H), 2,19(с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,55-1,64 (м, 4H), 0,84 (т, 3H, J=6 Гц), 2 протона сливаются с пиком растворителя.
Пример 123: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолин-4-карбонил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000203
Соединение 123
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (300 мг, 0,63 ммоль) и морфолино(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)метанона (260 мг, 0,82 ммоль) в диоксане (10 мл) добавляли 2M водный раствор Na2CO3 (1,13 мл, 2,27 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (72 мг, 0,06 ммоль), и снова продували аргоном в течение 15 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали указанное в заголовке соединение (250 мг, 68%). ЖХ/МС: 587,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 93,85% (детекция при 254 нм) (Rt 4,535; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 8,21 (т, 1H), 7,69-7,71 (м, 2H), 7,45-7,49 (м, 3H), 7,26 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,29 (д, 2H, J=4Гц), 3,82-3,84 (м, 2H), 3,48-3,60 (м, 8H), 3,23-3,25 (м, 2H), 3,09-3,11 (м, 3H), 2,26 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,52-1,68 (м, 4H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 124: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(1-(метилсульфонил)пиперидин-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000204
Соединение 124
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(пиперидин-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (0,2 г, 0,35 ммоль) в DCM (8 мл) при 0°C добавляли триэтиламин (0,106 г, 1,04 ммоль) и мезилхлорид (0,08 г, 0,69 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После завершения реакции, к реакционной смеси добавляли воду и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое затем растворяли в метаноле (10 мл), и добавляли NaOH (0,021 г, 0,52 ммоль). Эту смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. После завершения реакции, проводили экстрагирование 20% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, концентрировали и очищали неочищенное вещество путем промывания растворителями с получением указанного в заголовке соединения (0,1 г, 45,45%).
ЖХ/МС: 650,85 (M+1)+; ВЭЖХ: 95,37% (детекция при 254 нм) (Rt 4,258; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,57-7,59 (м, 3H), 7,37-7,39 (м, 2H), 7,22 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,29 (д, 2H, J=4,4Гц), 3,58 (м, 4H), 3,48-3,52 (м, 4H), 3,09-3,11 (м, 2H), 2,94 (м, 1H), 2,82 (с, 3H), 2,67-2,72 (м, 2H), 2,36 (м, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,81-1,83 (м, 2H), 1,59-1,61 (м, 2H), 0,84 (т, 3H, J=6 Гц).
Пример 125: Синтез 5-((1-ацетилпиперидин-4-ил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000205
Соединение 125
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(пиперидин-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (0,25 г, 0,44 ммоль) и уксусной кислоты (0,052 г, 0,86 ммоль) в DMF (3 мл) добавляли EDCI (0,123 г, 0,64 ммоль) и HOBt (0,087 г, 0,64 ммоль), а затем добавляли триэтиламин (0,108 г, 1,06 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции, к реакционной смеси добавляли воду, и проводили экстрагирование с использованием 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (0,1 г, 37,31%).
ЖХ/МС: 614,75 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,57% (детекция при 254 нм) (Rt 4,140; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,57 (д, 2H, J=7,2 Гц), 7,37-7,39 (м, 3H), 7,22 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,29 (д, 2H, J=4,4Гц), 3,78 (м, 1H), 3,49-3,58 (м, 6H), 2,99-3,08 (м, 4H), 2,36 (м, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,97 (с, 3H), 1,74 (м, 2H), 1,31-1,52 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц), 2 протона сливаются с пиком растворителя.
Пример 126: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(пиперидин-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000206
Соединение 126
Стадия 1: Синтез трет-бутил-4-((5-бром-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил)амино)пиперидин-1-карбоксилата
К перемешанному раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (4,5 г, 18,44 ммоль) и трет-бутил-4-оксопиперидин-1-карбоксилата (11,01 г, 55,33 ммоль) в дихлорэтане (50 мл) добавляли уксусную кислоту (6,64 г, 110,6 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (11,72 г, 55,28 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии с получением целевого соединения (5,2 г, 66,24%).
Стадия 2: Синтез трет-бутил-4-((5-бром-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил)(этил)амино)пиперидин-1-карбоксилата
К перемешанному раствору трет-бутил-4-((5-бром-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (5 г, 11,70 ммоль) и ацетальдегида (1,58 г, 35,12 ммоль) в дихлорэтане (60 мл) добавляли уксусную кислоту (4,24 г, 70,66 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (7,44 г, 35,09 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 ч. По завершении реакции, реакционную смесь гасили добавлением водного бикарбоната натрия, органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии с получением целевого продукта (5 г, 93,45%).
Стадия 3: Синтез трет-бутил-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-фенил)(этил)амино)пиперидин-1-карбоксилата
К раствору трет-бутил-4-((5-бром-3-(метоксикарбонил)-2-метилфенил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (5 г, 10,94 ммоль) в этаноле (50 мл) добавляли водный NaOH (0,7 г, 17,50 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции, этанол удаляли в условиях пониженного давления и подкисляли с использованием разбавленной HCl до pH 6 и корректировали pH до 4 с использованием лимонной кислоты. Проводили экстрагирование с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (4,8 г, 99,17%).
Полученную кислоту (4,8 г, 10,90 ммоль) затем растворяли в DMSO (20 мл), и добавляли к ней 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (3,32 г, 21,81 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли к ней PYBOP (8,50 г, 16,35 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-фенил)(этил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (4,4 г, 70,96%).
Стадия 4: Синтез трет-бутил-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(этил)амино)пиперидин-1-карбоксилата
К перемешанному раствору трет-бутил-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-фенил)(этил)амино)пиперидин-1-карбоксилата (2 г, 3,47 ммоль) и 4-(морфолинометил)фенил)бороновой кислоты (1,58 г, 5,21 ммоль) в смеси диоксан/вода добавляли Na2CO3 (1,32 г, 12,45 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,4 г, 0,35 ммоль), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 90°C в течение 3,5 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением целевого соединения (1,6 г, 68,66%).
Стадия 5: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(пиперидин-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
трет-Бутил-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(этил)амино)пиперидин-1-карбоксилат (1,3 г, 0,1,93 ммоль) переносили в DCM (20 мл), при 0°C добавляли к нему TFA (10 мл), и перемешивали при к.т. в течение 2 ч. После завершения реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, реакционную смесь гасили добавлением водного бикарбоната натрия и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое затем очищали промыванием ацетонитрилом с получением указанного в заголовке соединения (0,9 г, 81,81%).
ЖХ/МС: 572,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,59% (детекция при 254 нм) (Rt 3,964; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 8,19 (т, 1H), 7,57 (д, 2H, J=8 Гц), 7,38 (м, 3H), 7,21 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,29 (д, 2H, J=4Гц), 3,48-3,57 (м, 8H), 2,98-3,10 (м, 4H), 2,88 (м, 1H), 2,36 (м, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,70-1,73 (м, 2H), 1,48-1,51 (м, 2H), 0,84 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 127: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(1-пивалоилпиперидин-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000207
Соединение 127
N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(пиперидин-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид (0,2 г, 0,34 ммоль) растворяли в DMSO (2 мл), и добавляли к нему пивалевую кислоту (0,107 г, 1,04 ммоль) и триэтиламин (0,106 г, 1,04 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли к ней PYBOP (0,27 г, 0,52 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. После завершения реакции, реакционную смесь выливали на лед, экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали с получением неочищенного вещества, которое затем очищали методом колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (0,14 г, 60,86%).
ЖХ/МС: 656,65 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,51% (детекция при 254 нм) (Rt 4,555; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,57 (д, 2H, J=7,2), 7,37-7,40 (м, 3H), 7,21 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,21-4,29 (м, 4H), 3,49-3,58 (м, 6H), 3,06-3,08 (м, 3H), 2,73-2,79 (м, 2H), 2,37 (м, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,75-1,78 (м, 2H), 1,38-1,41 (м, 2H), 1,17 (с, 9H), 0,83 (т, 3H, J=7,2 Гц).
Пример 128: Синтез 5-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000208
Соединение 128
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (5 г, 20,57 ммоль) и трет-бутил-(4-оксоциклогексил)карбамата (5,6 г, 26,74 ммоль) в дихлорэтане (50 мл) добавляли уксусную кислоту (7,4 г, 123,33 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (13 г, 61,72 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. По завершении реакции, реакционную смесь гасили добавлением водного бикарбоната натрия, органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (3,5 г, 38,88%).
Стадия 2: Синтез метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (1,4 г, 3,18 ммоль) и ацетальдегида (0,419 г, 9,52 ммоль) в дихлорэтане (20 мл) добавляли уксусную кислоту (1,14 г, 19,0 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (2 г, 9,43 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 ч. По завершении реакции, реакционную смесь гасили добавлением водного бикарбоната натрия, органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (1,25 г, 84,45%).
Стадия 3: Синтез трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата
К раствору метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата (1,25 г, 2,67 ммоль) в этаноле (10 мл) добавляли водный NaOH (0,16 г, 4,0 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции, этанол удаляли в условиях пониженного давления, и подкисляли с использованием разбавленной HCl до pH 6 и корректировали pH до 4 с использованием лимонной кислоты. Проводили экстрагирование с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (1,1 г, 90%).
Полученную кислоту (1,1 г, 2,42 ммоль) затем растворяли в DMSO (10 мл), и добавляли к ней 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,736 г, 4,84 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли к ней PYBOP (1,88 г, 3,61 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,75 г, 53,57%).
Стадия 4: Синтез трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(этил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (0,7 г, 1,19 ммоль) и (4-(морфолинометил)фенил)бороновой кислоты (0,489 г, 1,78 ммоль) в смеси диоксан/вода добавляли Na2CO3 (0,454 г, 4,28 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,137 г, 0,119 ммоль), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 90°C в течение 3,5 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,55 г, 67,48%).
Стадия 5: Синтез 5-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
трет-Бутил-((1r,4r)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(этил)амино)циклогексил)карбамат (0,55 г, 0,80 ммоль) переносили в DCM (10 мл), при 0°C добавляли к нему TFA (3 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, реакционную смесь гасили добавлением водного бикарбоната натрия и экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который затем очищали промыванием ацетонитрилом с получением указанного в заголовке соединения (0,42 г, 89,36%).
ЖХ/МС: 586,45 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,38% (детекция при 254 нм) (Rt 3,667; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 8,18 (т, 1H), 7,56 (д, 2H, J=7,6), 7,35-7,38 (м, 3H), 7,18 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,29 (д, 2H, J=3,2Гц), 3,58 (м, 4H), 3,49 (м, 2H), 3,09-3,10 (м, 2H), 2,63-2,66 (м, 2H), 2,37 (м, 4H), 2,21 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,75-1,78 (м, 4H), 1,40-1,43 (м, 2H), 1,05-1,08(м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 129: Синтез 5-(((1r,4r)-4-ацетамидоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000209
Соединение 129
К перемешанному раствору 5-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (0,25 г, 0,42 ммоль) и уксусной кислоты (0,151 г, 0,85 ммоль) в DMF (3 мл) добавляли EDCI (0,123 г, 0,64 ммоль) и HOBt (0,057 г, 0,42 ммоль), а затем добавляли триэтиламин (0,064 г, 0,63 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции, к реакционной смеси добавляли воду, и проводили экстрагирование с использованием 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (0,11 г, 41,04%).
ЖХ/МС: 628,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,79% (детекция при 254 нм) (Rt 3,902; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,56-7,66 (м, 3H), 7,36-7,38 (м, 3H), 7,18 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,29 (д, 2H, J=4Гц), 3,99 (м, 1H), 3,48-3,58 (м, 6H), 3,10-3,11 (м, 2H), 2,67 (м, 1H), 2,37 (м, 4H), 2,22 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,74-1,79 (м, 6H), 1,43-1,46 (м, 2H), 1,08-1,11 (м, 2H), 0,81-0,94 (т, 4H).
Пример 130: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-фтор-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000210
Соединение 130
Стадия 1: 6-фтор-2-метил-3-нитробензойная кислота
Раствор 2-фтор-6-метилбензойной кислоты (2 г, 12,98 ммоль) в концентрированной H2SO4 (15,77 мл, 295,85 ммоль) охлаждали на воздухе до -5°C на бане с ацетоном/льдом. К реакционной смеси при -5-0°C в течение 15 минут по каплям добавляли смесь концентрированной азотной кислоты (1,08 мл, 16,87 ммоль) и концентрированной H2SO4 (1 мл, 18,76 ммоль). Бледно-желтую реакционную смесь перемешивали при -5-0°C в течение 30 минут, после чего выливали на лед (100 г). Полученный осадок фильтровали и растворяли в EtOAc (50 мл), и органическую фазу промывали деионизованной водой (25 мл), а затем солевым раствором (25 мл). Органическую фазу сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением 2 г (77%) 6-фтор-2-метил-3-нитробензойной кислоты в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС 99%, 1,31 мин (способ ЖХ/МС «3 минуты»), m/z=198,0. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 8,04 (дд, J=9,1, 5,0 Гц, 1H), 7,16 (т, J=8,6 Гц, 1H), 2,63 (с, 3H).
Стадия 2: Синтез 3-бром-2-фтор-6-метил-5-нитробензойной кислоты
К раствору 6-фтор-2-метил-3-нитробензойной кислоты (100 мг, 0,5 ммоль) в концентрированной H2SO4 (0,5 мл, 9,38 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли 1,3-дибром-5,5-диметилимидазолидин-2,4-дион (79 мг, 0,28 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов, в процессе чего формировался осадок. Реакционную смесь медленно добавляли к деионизованной воде (3 мл), и фильтровали полученный осадок. Твердое вещество промывали деионизованной водой (2 мл) и сушили на воздухе в течение 2 часов с получением 123 мг (88%) 3-бром-2-фтор-6-метил-5-нитробензойной кислоты в виде бледно-желтого твердого вещества. ЖХ/МС 94%, 1,61 мин (способ ЖХ/МС «3 минуты»), m/z=275,9/277,9 (ES-). 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 8,25 (д, J=6,2 Гц, 1H), 2,58 (с, 3H).
Стадия 3: Синтез метил-3-бром-2-фтор-6-метил-5-нитробензоата
К раствору 3-бром-2-фтор-6-метил-5-нитробензойной кислоты (2,41 г, 8,67 ммоль) в N,N-диметилформамиде (25 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли K2CO3 (2,4 г, 17,34 ммоль), а затем йодметан (0,7 мл, 11,27 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, после чего разбавляли деионизованной водой (100 мл) и экстрагировали EtOAc (3×50 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным NaHCO3 (водн.) (50 мл), а затем сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Остаток дважды очищали методом FCC (50 г силикагеля, картридж Isolute, градиент элюентов: 98/2 гептан/EtOAc→9/1 гептан/EtOAc) с получением 2,43 г (89%)метил-3-бром-2-фтор-6-метил-5-нитробензоата в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС 99%, 2,18 мин (способ ЖХ/МС «3 минуты»), m/z=ионизация отсутствует. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 8,22 (д, J=6,2 Гц, 1H), 4,00 (с, 3H), 2,48 (с, 3H).
Стадия 4: Синтез метил-3-амино-5-бром-6-фтор-2-метилбензоата
К раствору метил-3-бром-2-фтор-6-метил-5-нитробензоата (2,43 г, 8,32 ммоль) в метаноле (80 мл) при комнатной температуре добавляли хлорид аммония (4,37 г, 83,2 ммоль), а затем деионизованную воду (40 мл). Смесь нагревали на воздухе до 70°C, после чего добавляли железо (2,79 г, 49,92 ммоль). Реакционная смесь становилась коричневой в течение 2,5 часов, и ее перемешивали при 70°C. Эту смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры и фильтровали через Kieselgel. Осадок на фильтре промывали MeOH (80 мл), и концентрировали фильтрат в условиях пониженного давления. Остаток растворяли в насыщенном NaHCO3 (водн.) (50 мл) и EtOAc (150 мл). Фазы разделяли, и промывали органическую фазу насыщенным NaHCO3 (водн.) (50 мл), после чего сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Остаток очищали методом FCC (50 г силикагеля, картридж Isolute, градиент элюентов: 95/5 гептан/EtOAc→7/3 гептан/EtOAc) с получением 2,23 г (95%, скорректированный выход 77%) метил-3-амино-5-бром-6-фтор-2-метилбензоата в виде желтого масла. Это вещество переносили на последующую стадию без дополнительной очистки. ЖХ/МС 81%, 1,87 мин (способ ЖХ/МС «3 минуты»), m/z=261,9/263,9. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 6,89 (д, J=6,0 Гц, 1H), 3,94 (с, 3H), 3,60 (с, 2H), 2,08 (с, 3H).
Стадия 5: Синтез метил-3-бром-2-фтор-6-метил-5-[(оксан-4-ил)амино]бензоата
К раствору метил-3-амино-5-бром-6-фтор-2-метилбензоата (2,23 г, 8,08 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (32 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли оксан-4-он (1,49 мл, 16,17 ммоль), а затем уксусную кислоту (2,78 мл, 48,5 ммоль). Этот раствор перемешивали в течение 5 минут, после чего при комнатной температуре добавляли триацетоксиборгидрид натрия (5,14 г, 24,25 ммоль). После перемешивания в течение 5,5 часов, непрореагировавшее исходное отсутствовало согласно данным ЖХ/МС. Добавляли деионизованную воду (32 мл), и нейтрализовали смесь добавлением твердого NaHCO3. Фазы разделяли, и экстрагировали водный слой EtOAc (2×32 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Остаток очищали методом FCC (50 г силикагеля, картридж Isolute, градиент элюентов: 95/5 гептан/EtOAc→6/4 гептан/EtOAc) с получением 2,3 г (82%) метил-3-бром-2-фтор-6-метил-5-[(оксан-4-ил)амино]бензоата в виде не совсем белого твердого вещества. ЖХ/МС 99%, 2,13 мин (способ ЖХ/МС «3 минуты»), m/z=245,9/247,9. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 6,78 (д, J=5,9 Гц, 1H), 4,01 (дт, J=11,9, 3,4 Гц, 2H), 3,93 (с, 3H), 3,53 (тд, J=11,7, 2,1 Гц, 2H), 3,49-3,42 (м, 1H), 3,34 (с, 1H), 2,04 (с, 5H), 1,48 (кв. д, J=11,0, 4,2 Гц, 2H).
Стадия 6: Синтез метил-3-бром-5-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-фтор-6-метилбензоата
К раствору метил-3-бром-2-фтор-6-метил-5-[(оксан-4-ил)амино]бензоата (500 мг, 1,44 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (15 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли ацетальдегид (0,81 мл, 14,44 ммоль), а затем уксусную кислоту (0,5 мл, 8,67 ммоль). Этот раствор перемешивали в течение 5 минут, после чего при комнатной температуре добавляли триацетоксиборгидрид натрия (3,06 г, 14,44 ммоль). После перемешивания в течение 2 часов, добавляли деионизованную воду (20 мл), и нейтрализовали смесь добавлением твердого NaHCO3. Фазы разделяли, и экстрагировали водный слой EtOAc (2×20 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Остаток очищали методом FCC (10 г силикагеля, картридж Isolute, градиент элюентов: 95/5 гептан/EtOAc→85/15 гептан/EtOAc) с получением 519 мг (96%) метил-3-бром-5-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-фтор-6-метилбензоата в виде бледно-желтого масла, которое отверждалось при отстаивании. ЖХ/МС 94%, 2,45 мин (способ ЖХ/МС «3 минуты»), m/z=373,9/375,9. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 7,33 (д, J=6,6 Гц, 1H), 3,95 (с, 5H), 3,32 (тд, J=11,7, 2,1 Гц, 2H), 3,00 (кв., J=7,1 Гц, 2H), 2,88 (тт, J=10,9, 4,0 Гц, 1H), 2,25 (с, 3H), 1,73-1,54 (м, 4H), 0,85 (т, J=7,1 Гц, 3H).
Стадия 7: Синтез 3-бром-5-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-фтор-6-метилбензойной кислоты
К раствору метил-3-бром-5-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-фтор-6-метилбензоата (519 мг, 1,39 ммоль) в тетрагидрофуране (13 мл) и MeOH (4 мл) добавляли 4M NaOH (13,87 мл). Реакционную смесь перемешивали на воздухе при 50°C в течение 72 часов. Реакционную смесь подкисляли до pH 2-3 добавлением 6M HCl и экстрагировали DCM (5×15 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением 526 мг (95%) 3-бром-5-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-фтор-6-метилбензойной кислоты в виде бежевой пены. ЖХ/МС 88%, 1,77 мин (способ ЖХ/МС «3 минуты»), m/z=359,9/361,9. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 7,43-7,31 (м, 1H), 4,00 (д, J=11,3 Гц, 2H), 3,41-3,29 (м, 2H), 3,16-2,91 (м, 3H), 2,40 (с, 3H), 1,84-1,59 (м, 4H), 0,99-0,82 (м, 3H).
Стадия 8: Синтез 3-бром-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-5-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-фтор-6-метилбензамида
К раствору 3-бром-5-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-фтор-6-метилбензойной кислоты (200 мг, 0,56 ммоль) в N,N-диметилформамиде (2 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли PyBOP (346,72 мг, 0,67 ммоль), а затем N-этил-N-(пропан-2-ил)пропан-2-амин (145 мкл, 0,83 ммоль) и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-он (89%, 104 мг, 0,61 ммоль). После перемешивания в течение 1 часа при комнатной температуре исходное вещество не обнаруживалось согласно методу ЖХ/МС. К реакционной смеси добавляли EtOAc (20 мл), и промывали ее деионизованной водой (5 мл), а затем насыщенным NaHCO3(водн.) (3×5 мл). Органическую фазу сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Затем остаток очищали методом FCC (5 г силикагеля, картридж Isolute, градиент элюентов: 100% DCM→97/3 DCM/MeOH) с получением 112 мг (41%) 3-бром-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-5-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-фтор-6-метилбензамида в виде бледно-желтого твердого вещества. ЖХ/МС 97%, 1,85 мин (способ ЖХ/МС «3 минуты»), m/z=494,0/496,0. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 11,66 (с, 1H), 7,23 (д, J=6,5 Гц, 1H), 5,95 (с, 1H), 4,65-4,43 (м, 2H), 3,93 (д, J=11,0 Гц, 2H), 3,38-3,22 (м, 2H), 2,97 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 2,91-2,79 (м, 1H), 2,37 (с, 3H), 2,24-2,11 (м, 6H), 1,72-1,53 (м, 4H), 0,83 (т, J=7,0 Гц, 3H).
Стадия 9: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-фтор-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К раствору 3-бром-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-5-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-фтор-6-метилбензамида (112 мг, 0,23 ммоль) в 1,4-диоксане (2 мл) и воде (1 мл) добавляли 4-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил]морфолин (103 мг, 0,34 ммоль), а затем Na2CO3 (84,04 мг, 0,79 ммоль). Раствор продували азотом в течение 5 минут, после чего добавляли палладий/трифенилфосфин (1/4) (26 мг, 0,02 ммоль). Затем желтую смесь продували азотом в течение 5 минут, после чего нагревали до 100°C. Спустя 4 часа, методом ЖХ/МС исходное вещество не обнаруживали. Темную реакционную смесь разбавляли деионизованной водой (5 мл) и экстрагировали 10% MeOH в DCM (5×5 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Остаток очищали методом FCC (5 г силикагеля, картридж Isolute, градиент элюентов: 99/1 DCM/MeOH→95/5 DCM/MeOH) с получением 69 мг (52%) указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества. ЖХ/МС 97%, 2,70 мин (ЖХ/МС способ «7 минут»), m/z=591,2. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 12,10 (шир. с, 1H), 7,53-7,30 (м, 4H), 7,13 (д, J=7,4 Гц, 1H), 7,07 (шир. с, 1H), 5,88 (с, 1H), 4,55 (шир. с, 2H), 3,93 (д, J=11,2 Гц, 2H), 3,73-3,69 (м, 4H), 3,52 (с, 2H), 3,30 (т, J=10,8 Гц, 2H), 3,02 (кв., J=6,9 Гц, 2H), 2,92 (ддд, J=14,6, 10,7, 3,7 Гц, 1H), 2,46 (с, 4H), 2,35 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 2,12 (с, 3H), 1,79-1,43 (м, 4H), 0,86 (т, J=7,0 Гц, 3H).
Пример 131: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-((3-оксоморфолино)метил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000211
Соединение 131
Стадия 1: Синтез 4'-(бромметил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К охлажденному на льду перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4'-(гидроксиметил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (450 мг, 0,89 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли трифенилфосфин (469 мг, 1,78 ммоль) и тетрабромид углерода (741 мг, 2,25 ммоль). Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры, и продолжали перемешивание в течение 16 ч. По завершении реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии с получением соединения 8 (300 мг, 59%).
Стадия 2: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-((3-оксоморфолино)метил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К охлажденному на льду перемешанному раствору 4'-(бромметил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (250 мг, 0,44 ммоль) и морфолин-3-она (67 мг, 0,66 ммоль) в DMF (30 мл) добавляли гидрид натрия (27 мг, 0,66 ммоль). Спустя 10 минут, лед удаляли, и продолжали перемешивание в течение 16 ч при комнатной температуре. По завершении реакции, добавляли воду и экстрагировали DCM (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления и последующей очистки методами колоночной хроматографии и преп. ВЭЖХ получали указанное в заголовке соединение (75 мг, 29%). ЖХ/МС: 587,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,69% (детекция при 254 нм) (Rt 4,604; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,50 (шир. с, 1H), 8,25 (м, 1H), 7,65 (м, 2H), 7,37-7,35 (м, 3H), 5,87 (с, 1H), 4,59 (м, 2H), 4,29 (д, 2H), 4,12 (с, 2H), 3,82 (м, 4H), 3,28 (м, 4H), 3,17-3,09 (м, 2H), 2,32-2,28 (м, 4H), 2,22 (с, 3H), 2,11 (с, 3H),1,57 (м, 4H), 0,86 (т, 3H).
Пример 132: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000212
Соединение 132
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)бензоата
К перемешанному раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (2,5 г, 10,24 ммоль) и дигидро-2H-тиопиран-4(3H)-она (1,42 г, 12,29 ммоль) в дихлорэтане (50 мл) добавляли уксусную кислоту (3,6 мл, 61,47 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 10 мин. Реакционную смесь охлаждали до 0°C, добавляли триацетоксиборгидрид натрия (6,5 г, 30,73 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь нейтрализовывали добавлением нас. NaHCO3, экстрагировали соединение введением в DCM, сушили над Na2SO4, концентрировали в условиях пониженного давления. Путем очистки неочищенного вещества методом колоночной хроматографии получали метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)бензоат (2,5 г, 71,0%).
Стадия 2: Синтез метил-5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)бензоата (2,5 г, 5,83 ммоль) и ацетальдегида (513 мг, 11,66 ммоль) в дихлорэтане (50 мл) добавляли уксусную кислоту (2,0 мл, 34,9 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 20 минут. Реакционную смесь охлаждали до 0°C, добавляли триацетоксиборгидрид натрия (3,7 г, 17,49 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь нейтрализовывали добавлением нас. NaHCO3, соединение экстрагировали введением в DCM, сушили над Na2SO4, концентрировали в условиях пониженного давления. Неочищенное вещество очищали методом колоночной хроматографии с получением метил-5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (2,0 г, 74,0%).
Стадия 3: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида
Смесь метил-5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (2,0 г, 5,39 моль) и NaOH (0,323 г, 8,08 моль) в 3 мл смеси этанол/вода (2/1) нагревали при 70°C в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха, неочищенное вещество распределяли между водой и DCM, органический слой сушили над Na2SO4, концентрировали в условиях пониженного давления с получением 1,8 г кислоты.
Смесь неочищенной кислоты (1,8 г, 5,04 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она (1,53 мг, 10,08 ммоль) и PyBOP (3,9 г, 7,56 ммоль) перемешивали в 3 мл DMSO при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли водой, соединение экстрагировали введением в DCM. Органический слой сушили над Na2SO4, концентрировали в условиях пониженного давления и очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (100-200 меш) (элюируя 4% MeOH в DCM) с получением 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (1,5 г, 60,7%).
Стадия 4: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Раствор 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (800 мг, 1,629 ммоль), 4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)морфолина (740 мг, 2,443 ммоль), карбоната натрия (621 мг, 5,86 ммоль) в 20 мл диоксана дегазировали аргоном в течение 20 мин, к смеси добавляли Pd(PPh3)4 (188 мг, 0,16 ммоль), и нагревали до 100°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой, соединение экстрагировали введением в 10% MeOH в DCM, сушили над Na2SO4, концентрировали, и очищали неочищенное вещество методом хроматографии на силикагеле (100-200 меш) с получением указанного в заголовке соединения (700 мг, 73,0%).
ЖХ/МС: 589,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,75% (детекция при 254 нм) (Rt 4,869; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (D2O, 400 МГц) δ 7,78-7,89 (м, 4H), 7,64-7,66 (м, 2H), 6,33 (с, 1H), 4,52 (с, 2H), 4,45 (с, 2H), 4,13 (д, J=13,2 Гц, 2H), 3,77-3,89 (м, 5H), 3,49 (д, J=12,0 Гц, 2H), 3,30-3,33 (м, 2H), 2,73-2,82 (м, 5H), 2,44, 2,38, 2,30 (3 с, 9H), 1,89 (м, 2H), 1,06 (т, J=7,2 Гц, 3H).
Пример 133: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(1-оксидотетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000213
Соединение 133
К охлажденному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (200 мг, 0,34 ммоль) в 2 мл DCM при 0°C добавляли m-CPBA (70 мг, 0,41 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч (мониторинг методом ТСХ). Реакционную смесь гасили добавлением нас. NaHCO3, соединение экстрагировали введением в DCM, сушили над Na2SO4, концентрировали в условиях пониженного давления и очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (100-200 меш) с получением указанного в заголовке соединения (60 мг, 29,3%).
ЖХ/МС: 605,25 (M+1)+; ВЭЖХ: 44,06% & 54,42% (детекция при 254 нм) (Rt 4,092 & 4,448; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,18 (т, 1H), 7,59-7,57 (м, 2H), 7,39-7,37 (м, 3H), 7,23-7,21 (м, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,29 (д, 2H, J=4 Гц), 3,58 (м, 3H), 3,48 (м, 3H), 3,18-2,86 (м, 5H), 2,67-2,59 (м, 4H), 2,37-2,33 (м, 4H), 2,25 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,77 (м, 2H), 0,85 (т, 3H).
Пример 134: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-3',4-диметил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000214
Соединение 134
Соединение 134 получали способом, сходным с описанным в примере 131. Аналитические данные: ЖХ/МС: 587,4 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,76% (детекция при 254 нм) (Rt 4,11; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30ºC; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 8,17 (шир. с, 1H), 7,41-7,20 (м, 5H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, J=4 Гц, 2H), 3,82 (д, J=10 Гц, 2H), 3,55 (м, 4H), 3,44 (шир. с, 2H), 3,27-3,22 (м, 2H), 3,09-3,01 (м, 3H), 2,39 (м, 7H), 2,23 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,67-1,51 (м, 4H), 0,83 (т, J=6,8 Гц, 3H).
Пример 135: 4-((3'-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5'-(этил(1-оксидотетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)-4'-метил-[1,1'-бифенил]-4-ил)метил)морфолин-4-оксид
Figure 00000215
Соединение 135
В процессе описанной выше очистки методом преп. ВЭЖХ также получали 4-((3'-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5'-(этил(1-оксидотетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)-4'-метил-[1,1'-бифенил]-4-ил)метил)морфолин-4-оксид.
ЖХ/МС: 621,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,69% (детекция при 254 нм) (Rt 4,157; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30ºC; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 12,18 (с, 1H), 11,45 (с, 1H), 8,20 (т, 1H), 7,79 (д, 2H, J=6,8 Гц), 7,62 (д, 2H, J=6,8 Гц), 7,45 (с, 1H), 7,27 (с, 2H), 5,86 (с, 1H), 4,89 (с, 2H), 4,30 (д, 2H, J=4 Гц), 4,00-3,80 (м, 7H), 3,19 (м, 2H), 3,00-2,85 (м, 4H), 2,70-2,60 (м, 2H), 2,30 (шир. с, 2H), 2,26 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,75 (м, 2H), 0,87 (т, 3H, J=6 Гц).
Пример 136: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-((1,1-диоксидотетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)(этил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000216
Соединение 136
К охлажденному раствору соединения N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-тиопиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (200 мг, 0,34 ммоль) в 2 мл DCM при 0ºC добавляли m-CPBA (117 мг, 0,68 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов (мониторинг методом ТСХ). Реакционную смесь гасили добавлением насыщенного NaHCO3, экстрагировали введением в DCM, сушили над Na2SO4 и концентрировали в условиях пониженного давления. После проведения колоночной хроматографии, указанное в заголовке соединение получали в виде трифторацетата после дополнительной очистки методом преп. ВЭЖХ (80 мг, 38,1%).
ЖХ/МС: 621,45 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,93% (детекция при 254 нм) (Rt 4,522; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30ºC; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 12,22 (с, 1H), 11,45 (с, 1H), 8,20 (т, 1H), 7,78 (д, 2H, J=8 Гц), 7,61 (д, 2H, J=8 Гц), 7,43 (с, 1H), 7,28 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,89 (с, 2H), 4,29 (д, 2H, J=4,4 Гц), 4,00-3,80 (м, 7H), 3,32 (м, 2H), 3,04 (м, 4H), 2,65-2,55 (м, 2H), 2,26 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,17 (м, 2H), 2,10 (с, 3H), 1,78 (м, 2H), 0,83 (т, 3H, J=6,4 & 7,2 Гц).
Пример 137: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4,4'-диметил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000217
Соединение 137
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4,4'-диметил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (200 мг, 0,35 ммоль) в дихлорметане при комнатной температуре добавляли m-CPBA (60 мг, 0,35 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи при комнатной температуре. По завершении реакции, реакционную смесь гасили добавлением насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и экстрагировали 10% MeOH в DCM (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующим промыванием растворителем получали указанное в заголовке соединение (120 мг, 58%). ЖХ/МС: 589,35 (M)+; ВЭЖХ: 95,56% (детекция при 254 нм) (Rt 4,143; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,5 (шир. с, 1H), 8,22 (т, 1H), 7,66-7,60 (м, 4H), 7,42 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,34-4,28 (м, 4H), 4,12-4,07 (м, 2H), 3,83-3,81 (м, 2H), 3,62-3,60 (м, 2H), 3,42-3,39 (м, 2H), 3,33-3,22 (м, 2H), 3,16-3,08 (м, 3H), 2,65-2,62 (м, 2H), 2,25-2,10 (м, 9H), 1,67-1,51 (м, 4H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 138: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-5-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)(2,2,2-трифторэтил)амино)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000218
Соединение 138
Стадия 1: Синтез 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты
Раствор 5-бром-2-метилбензойной кислоты (5,0 г, 23 ммоль) в концентрированной H2SO4 (27 мл, 512 ммоль) охлаждали до 5°C на бане с ацетоном/льдом. К реакционной смеси при -5-0°C в течение 15 минут по каплям добавляли смесь концентрированной азотной кислоты (1,9 мл, 30 ммоль) и концентрированной H2SO4 (2,8 мл, 52 ммоль). Желтую реакционную смесь перемешивали при -5-0°C в течение 2 часов, в процессе чего формировался желтый осадок. Реакционную смесь выливали на лед (150 г), а затем собирали осадок путем фильтрования. Осадок сушили на воздухе с получением указанного в заголовке соединения (5,5 г, 52%) в виде бледно-желтого твердого вещества. ЖХ/МС 57%, 1,82 мин (ЖХ/МС способ «3,5 минуты»), ионизация отсутствует; 1H-ЯМР (500 МГц, ДМСО-d6) δ ч.млн. 8,29 (с, 1 H) 8,13 (д, J=1,58 Гц, 1 H) 2,43 (с, 3 H).
Стадия 2: Синтез метил-5-бром-2-метил-3-нитробензоата
К раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (5,5 г, 21 ммоль) в DMF (42 мл) в атмосфере азота добавляли Na2CO3 (3,4 г, 32 ммоль), а затем йодметан (2,0 мл, 32 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Смесь разбавляли деионизованной водой (150 мл) и экстрагировали EtOAc (4×50 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным NaHCO3 (водн.) (2×50 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях вакуума с получением указанного в заголовке соединения (6,3 г, 61%) в виде желтого масла. ЖХ/МС 57%, 2,20 мин (ЖХ/МС способ «3,5 минуты»), ионизация отсутствует; 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 7,38 (д, J=2,05 Гц, 1H) 7,23 (д, J=2,05 Гц, 1H) 3,20 (с, 3H) 1,82 (с, 3H).
Стадия 3: Синтез метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата
К раствору метил-5-бром-2-метил-3-нитробензоата (6,3 г, 21 ммоль) в метаноле (150 мл) добавляли хлорид аммония (11,0 г, 209 ммоль), а затем деионизованную воду (75 мл). Смесь нагревали до 70°C, после чего добавляли железо (7,0 г, 125 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 70°C в течение 2 часов, после чего оставляли охлаждаться до комнатной температуры и фильтровали через Kieselgel. Осадок на фильтре промывали MeOH (150 мл), и концентрировали фильтрат в условиях вакуума. Остаток растворяли в насыщенном NaHCO3 (водн.) (50 мл) и EtOAc (150 мл). Фазы разделяли, органическую фазу промывали насыщенным NaHCO3 (водн.) (3×50 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях вакуума. Остаток очищали методом колоночной флэш-хроматографии (50 г силикагеля, картридж Isolute, 5-20% EtOAc/гептаны) с получением указанного в заголовке соединения (3,0 г, 51%) в виде вязкого бледно-желтого масла. ЖХ/МС 87%, 1,89 мин (ЖХ/МС способ «3,5 минуты»), m/z=243,9, 244,9, 245,9, 246,9; 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 7,34 (д, J=1,89 Гц, 1H) 6,95 (д, J=1,89 Гц, 1H) 3,88 (с, 3H) 3,80 (шир. с, 2H) 2,29 (с, 3H).
Стадия 4: Синтез метил-5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата
К раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (3,0 г, 12 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (48 мл) в атмосфере азота добавляли оксан-4-он (2,3 мл, 25 ммоль), а затем уксусную кислоту (4,2 мл, 74 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 минут, после чего добавляли триацетоксиборгидрид натрия (7,8 г, 37 ммоль). После перемешивания в течение 64 часов, добавляли деионизованную воду (100 мл), и нейтрализовали смесь добавлением твердого NaHCO3. Фазы разделяли, и экстрагировали водный слой EtOAc (4×50 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях вакуума. Остаток очищали методом колоночной флэш-хроматографии (50 г силикагеля, картридж Isolute, 1030% EtOAc/гептаны) с получением указанного в заголовке соединения (3,5 г 85%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС 99,8%, 2,18 мин (ЖХ/МС способ «3,5 минуты»), m/z=327,9, 328,9, 329,9, 330,9; 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 7,24 (д, J=1,73 Гц, 1H) 6,85 (д, J=1,58 Гц, 1H) 4,03 (дт, J=11,82, 3,31 Гц, 2H) 3,88 (с, 3H) 3,66 (шир. с, 1H) 3,56 (тд, J=11,55, 1,97 Гц, 2H) 3,47-3,55 (м, 1H) 2,24 (с, 3H) 2,06 (д, J=13,56 Гц, 2H) 1,47-1,60 (м, 2H).
Стадия 5: Синтез метил-5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)(2,2,2-трифторэтил)амино]бензоата
В двугорлую круглодонную колбу емкостью 100 мл, содержащую метил-5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоат (500 мг, 1,5 ммоль) и TFA (15 мл), порциями в течение 5 минут добавляли тетрагидроборат натрия (1,0 г, 26 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, а затем нагревали до 50°C в течение 3 часов, и обрабатывали дополнительной аликвотой NaBH4 (300 мг) в течение 25 минут. Затем реакционную смесь нагревали до 60°C в течение 2 часов и оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 17 часов. Реакционную смесь обрабатывали TFA (5 мл) и NaBH4 (200 мг) и снова нагревали до 60°C в течение 3,5 часов. В течение 15 минут добавляли дополнительную аликвоту NaBH4 (200 мг) вместе с TFA (5 мл) и продолжали перемешивание еще в течение 3 часов, после чего оставляли отстаиваться при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь выливали на лед (75 мл) и перемешивали до тех пор, пока лед не растает. Затем реакционную смесь подщелачивали добавлением 6M NaOH (водн.) (40 мл) и снова корректировали до pH 7 с использованием 1M HCl (водн.) (40 мл). Полученную белую суспензию собирали путем фильтрования, твердое вещество промывали водой (20 мл) и сушили в условиях вакуума при 40°C в течение 3 часов с получением указанного в заголовке соединения (577 мг, 91%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС 98,2%, 2,42 мин (ЖХ/МС способ «3,5 минуты»), m/z=409,90, 410,9, 411,90, 412,9; 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 7,80 (д, J=1,73 Гц, 1H) 7,41 (д, J=1,73 Гц, 1H) 4,01 (дд, J=11,51, 4,10 Гц, 2H) 3,91 (с, 3H) 3,64 (д,J=5,20 Гц, 2H) 3,32 (т, J=11,82 Гц, 2H) 2,99 (тт, J=11,43, 3,63 Гц, 1H) 2,48 (с, 3H) 1,80 (дд, J=12,53, 1,50 Гц, 2H) 1,54-1,62 (м, 2H).
Стадия 6: Синтез 5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)(2,2,2-трифторэтил)амино]бензойной кислоты
К перемешанному раствору метил-5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)(2,2,2-трифторэтил)амино]бензоата (572 мг, 1,4 ммоль) в смеси THF (14 мл) и MeOH (2,1 мл) добавляли 4M NaOH (водн.) (13,9 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 5,5 часов, а затем перемешивали при комнатной температуре в течение 17 часов. Удаляли THF путем концентрирования в условиях вакуума, и подкисляли водный остаток до pH 4 добавлением 6M HCl (водн.) (9,5 мл). Полученную суспензию оставляли отстаиваться при комнатной температуре в течение 20 минут, после чего собирали твердое вещество путем фильтрования. Твердое вещество промывали водой (20 мл) и сушили в условиях высокого вакуума в течение 2 часов с получением указанного в заголовке соединения (507 мг, 90%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС 98%, 2,04 мин (ЖХ/МС способ «3,5 минуты»), m/z=395,9, 396,9, 397,9, 398,9; 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 7,97 (д, J=1,73 Гц, 1H) 7,48 (д, J=1,73 Гц, 1H) 4,02 (дд, J=11,35, 3,94 Гц, 2H) 3,65 (шир. с, 2 H) 3,33 (т, J=11,59 Гц, 2H) 3,00 (тт, J=11,49, 3,80 Гц, 1H) 2,55 (с, 3H) 1,82 (д, J=11,98 Гц, 2H) 1,55-1,69 (м, 2H), OH незаметен.
Стадия 7: Синтез 5-бром-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метил-3-[(оксан-4-ил)(2,2,2-трифторэтил)амино]бензамида
Перемешанный раствор метил-5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)(2,2,2-трифторэтил)амино]бензоата (250 мг, 0,63 ммоль) в безводном DMF (3,0 мл) при 0°C по каплям обрабатывали HATU (288 мг, 0,76 ммоль) и DIPEA (220 мкл, 1,3 ммоль) в условиях подачи из баллона азота. Полученный раствор перемешивали в течение 5 минут, а затем обрабатывали 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-оном (89%, 119 мг, 0,69 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 0°C в течение 20 минут, а затем перемешивали при комнатной температуре в течение 16,5 часов. Реакционную смесь обрабатывали 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-оном (30 мг). Перемешивание продолжали еще в течение 23 часов, а затем распределяли реакционную смесь между водой (30 мл) и CH2Cl2 (20 мл). Слои разделяли, и экстрагировали водную фазу CH2Cl2 (3×20 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (50 мл), водой (60 мл), солевым раствором (2×40 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях вакуума. Неочищенный остаток очищали методом колоночной флэш-хроматографии (10 г SNAP картридж, Isolera, 0-10% MeOH/CH2Cl2) и растирали с эфиром (10 мл) с обработкой ультразвуком. Полученный осадок собирали путем фильтрования и сушили в условиях вакуума с получением указанного в заголовке соединения (249 мг, 74%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС 100%, 4,08 мин (ЖХ/МС способ «7 минут»), m/z=530,0, 531,0, 532,0, 533,0; 1H-ЯМР (500 МГц, Ацетон) δ 10,67 (с, 1H), 7,55 (д, J=1,8 Гц, 2H), 7,27 (д, J=1,9 Гц, 1H), 5,90 (с, 1H), 4,40 (д, J=5,5 Гц, 2H), 3,90 (дд, J=11,2, 4,6 Гц, 4H), 3,28 (т, J=11,6 Гц,2H), 3,07-2,97 (м, 1H), 2,32 (с, 3H), 2,29 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,76 (дд, J=12,3, 1,6 Гц, 2H), 1,61 (кв. д, J=12,0, 4,5 Гц, 2H).
Стадия 8: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-5-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)(2,2,2-трифторэтил)амино)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
В двугорлой круглодонной колбе 5-бром-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метил-3-[(оксан-4-ил)(2,2,2-трифторэтил)амино]бензамид (200 мг, 0,38 ммоль), 4-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил]морфолин (126 мг, 0,41 ммоль) в 1,4-диоксане (3,0 мл) обрабатывали раствором, содержащим Na2CO3 (140 мг, 1,3 ммоль) в воде (1,0 мл). Смесь барботировали азотом при помощи длинной иглы в течение 5 минут, после чего добавляли палладий/трифенилфосфин (1/4) (44 мг, 0,04 ммоль). Желтую суспензию барботировали азотом еще в течение 5 минут, после чего реакционную смесь нагревали до 100°C в течение 5,5 часов. Реакционную смесь разбавляли водой (10 мл) и 10% MeOH в CH2Cl2 (10 мл). Слои разделяли, и экстрагировали водную фазу 10% MeOH в CH2Cl2 (3×15 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (40 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях вакуума. Неочищенный остаток очищали методом колоночной хроматографии (10 г SNAP картридж, Isolera, 0-4% MeOH/CH2Cl2) с получением указанного в заголовке соединения (193 мг, 82%) в виде не совсем белого порошка. ЖХ/МС 100%, 3,34 мин (ЖХ/МС способ «7 минут»), m/z=627,5; 1H-ЯМР (500 МГц, Ацетон) δ 10,76 (с, 1H), 7,65 (д, J=1,5 Гц, 1H), 7,60 (д, J=8,2 Гц, 2H), 7,57 (т, J=5,6 Гц, 1H), 7,43 (д, J=1,5 Гц, 1H), 7,39 (д, J=8,1 Гц, 2H), 5,91 (с, 1H),4,44 (д, J=5,5 Гц, 2H), 3,97 (с, 2H), 3,90 (дд, J=11,4, 4,1 Гц, 2H), 3,61 (т, J=4,6 Гц, 4H), 3,50 (с, 2H), 3,29 (т, J=11,5 Гц, 2H), 3,06 (тт, J=11,4, 3,8 Гц, 1H), 2,39 (д, J=5,0 Гц, 7H), 2,34 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 1,82 (дд, J=12,3, 1,7 Гц, 2H), 1,70-1,56 (м, 2H).
Пример 139: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-этил-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000219
Соединение 139
Стадия 1: Синтез метил-5-хлор-2-[2-(триметилсилил)этинил]бензоата
К раствору метил-2-бром-5-хлорбензоата (14,8 г, 59 ммоль) в TEA (124 мл, 889,82 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли йодид меди(I) (338 мг, 1,78 ммоль) и трифенилфосфин (778 мг, 2,97 ммоль). Эту смесь барботировали азотом в течение 10 минут, после чего добавляли этинил(триметил)силан (12,45 мл, 89 ммоль) и Pd(OAc)2 (266 мг, 1,19 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 20 часов, после чего концентрировали в условиях пониженного давления. Остаток растворяли в деионизованной воде (50 мл) и EtOAc (50 мл) и фильтровали через Celite. Осадок на фильтре промывали EtOAc (50 мл), после чего фазы разделяли, и экстрагировали водный слой EtOAc (2×50 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Остаток очищали методом FCC (10 г силикагеля, картридж Isolute, градиент элюентов: 99/1 гептан/EtOAc→85/15 гептан/EtOAc) с получением 16,2 г (102,4%) метил-5-хлор-2-[2-(триметилсилил)этинил]бензоата в виде оранжевого масла, которое отверждалось при отстаивании. Образец содержал гептан. ЖХ/МС 91%, 2,57 мин (способ ЖХ/МС «3 минуты»), m/z=267,4/268,9. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 7,89 (д, J=2,2 Гц, 1H), 7,51 (д, J=8,3 Гц, 1H), 7,41 (дд, J=8,3, 2,3 Гц, 1H), 3,92 (с, 3H), 0,27 (с, 9H).
Стадия 2: Синтез метил-5-хлор-2-этинилбензоата
К раствору метил-5-хлор-2-[2-(триметилсилил)этинил]бензоата (10 г, 37,5 ммоль) в метаноле (150 мл) при комнатной температуре на воздухе добавляли K2CO3 (10,36 г, 75 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа, после чего концентрировали в условиях пониженного давления. Остаток растворяли в деионизованной воде (50 мл) и EtOAc (50 мл). Фазы разделяли, и экстрагировали водный слой EtOAc (2×50 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Остаток очищали методом FCC (50 г силикагеля, картридж Isolute, градиент элюентов: 95/5 гептан/EtOAc→9/1 гептан/EtOAc) с получением 5,75 г (55,2%) метил-5-хлор-2-этинилбензоата в виде оранжевого масла, которое отверждалось при отстаивании. Это вещество, содержащее 30% этилового эфира, было приемлемым для использования без какой-либо дополнительной очистки. ЖХ/МС 38%, 1,98 мин (способ ЖХ/МС «3 минуты»), m/z=195,0/196,9. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 7,93 (д, J=2,2 Гц, 1H), 7,55 (д, J=8,3 Гц, 1H), 7,45 (дд, J=8,3, 2,3 Гц, 1H), 3,94 (с, 3H), 3,43 (с, 1H).
Стадия 3: Синтез метил-5-хлор-2-этилбензоата
К раствору метил-5-хлор-2-этинилбензоата (5,34 г, 27,44 ммоль) в этилацетате (135 мл) добавляли Pd/C (10%) (50% воды, 2,92 г, 1,37 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 3 часов. Методом ЖХ/МС обнаруживали завершение реакции, и фильтровали смесь через Celite. Осадок на фильтре промывали EtOAc (50 мл), и концентрировали фильтрат в условиях пониженного давления с получением 5,12 г (93,9%) метил-5-хлор-2-этилбензоата в виде коричневого масла, которое было приемлемым для использования без какой-либо дополнительной очистки. ЖХ/МС 56%, 2,21 мин (способ ЖХ/МС «3 минуты»), m/z=198,9/200,9. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 7,84 (д, J=2,3 Гц, 1H), 7,39 (дд, J=8,3, 2,3 Гц, 1H), 7,21 (д, J=8,3 Гц, 1H), 3,90 (с, 3H), 2,94 (кв., J=7,5 Гц, 2H), 1,21 (т, J=7,5 Гц, 3H).
Стадия 4: Синтез метил-5-хлор-2-этил-3-нитробензоата
Раствор метил-5-хлор-2-этилбензоата (5,12 г, 25,77 ммоль) в концентрированной H2SO4 (31 мл, 587 ммоль) охлаждали на воздухе до -5°C на бане с ацетоном/льдом. К реакционной смеси при -5-0°C в течение 15 минут по каплям добавляли смесь концентрированной азотной кислоты (2,15 мл, 33,51 ммоль) и концентрированной H2SO4 (2 мл, 37,52 ммоль). Бледно-желтую реакционную смесь перемешивали при -5-0°C в течение 1 часа, после чего выливали на лед (500 мл) и экстрагировали EtOAc (3×100 мл). Объединенные органические фазы промывали деионизованной водой (100 мл), а затем солевым раствором (100 мл). Органическую фазу сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Методами ЖХ/МС и ЯМР обнаруживали ~30% гидролиз сложного эфира. Неочищенное вещество растворяли в метаноле (30 мл) и охлаждали до 0°C в атмосфере азота, после чего медленно добавляли SOCl2 (2,25 мл, 30,93 ммоль). Затем реакционную смесь нагревали до температуры возгонки в течение 6 часов, после чего концентрировали в условиях пониженного давления с получением 6,18 г (98,4%) метил-5-хлор-2-этил-3-нитробензоата в виде оранжевого масла. Продукт содержал смесь (1/1) 3-нитро/6-нитро изомеров вместе с некоторым количеством сложного этилового эфира и был приемлемым для использования без какой-либо дополнительной очистки.
Стадия 5: Синтез метил-3-амино-5-хлор-2-этилбензоата
К раствору метил-5-хлор-2-этил-3-нитробензоата (6,18 г, 25,36 ммоль) в метаноле (250 мл) при комнатной температуре добавляли хлорид аммония (13,31 г, 253,65 ммоль), а затем деионизованную воду (125 мл). Смесь нагревали на воздухе до 70°C, после чего добавляли железо (8,5 г, 152,19 ммоль). Реакционная смесь приобретала темное окрашивание в течение 2,5 часов, и ее перемешивали при 70°C. Эту смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры и фильтровали через Kieselgel. Осадок на фильтре промывали MeOH (250 мл), и концентрировали фильтрат в условиях пониженного давления. Остаток растворяли в насыщенном NaHCO3 (водн.) (50 мл) и EtOAc (150 мл). Фазы разделяли, органическую фазу промывали насыщенным NaHCO3(водн.) (2×50 мл), после чего сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Остаток очищали методом FCC (50 г силикагеля, картридж Isolute, градиент элюентов: 95/5 гептан/EtOAc→75/25 гептан/EtOAc) с получением 2,42 г (22%, скорректированный выход 7%) метил-3-амино-5-хлор-2-этилбензоата в виде желтого масла. Продукт содержал ~25% сложного этилового эфира и приблизительно ~15% 4-нитропродуктов. Это вещество переносили на последующую стадию без дополнительной очистки. ЖХ/МС 31%, 2,00 мин (способ ЖХ/МС «3 минуты»), m/z=295,0. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 7,17 (д, J=2,1 Гц, 1H), 6,79 (д, J=2,1 Гц, 1H), 3,87 (с, 3H), 3,86-3,81 (м, 2H), 2,74 (кв., J=7,5 Гц, 2H), 1,20 (т, J=7,5 Гц, 3H).
Стадия 6: Синтез метил-5-хлор-2-этил-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата
К раствору метил-3-амино-5-хлор-2-этилбензоата (1,5 г, 7,02 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (28 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли оксан-4-он (1,3 мл, 14,04 ммоль), а затем уксусную кислоту (2,41 мл, 42,12 ммоль). Этот раствор перемешивали в течение 5 минут, после чего при комнатной температуре добавляли триацетоксиборгидрид натрия (4,46 г, 21,06 ммоль). После перемешивания в течение 20 часов, добавляли деионизованную воду (28 мл), и нейтрализовали смесь добавлением твердого NaHCO3. Фазы разделяли, и экстрагировали водный слой EtOAc (2×28 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Остаток очищали методом FCC (50 г силикагеля, картридж Isolute, градиент элюентов: 95/5 гептан/EtOAc→8/2 гептан/EtOAc) с получением 1,76 г (84%, скорректированный выход 50%) метил-5-хлор-2-этил-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата в виде белого твердого вещества. Продукт содержал ~25% сложного этилового эфира. Это вещество переносили на последующую стадию без дополнительной очистки. ЖХ/МС 60%, 2,27 мин (способ ЖХ/МС «3 минуты»), m/z=298,0/300,0. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 7,07 (д, J=2,0 Гц, 1H), 6,71 (д, J=1,9 Гц, 1H), 4,01 (дт, J=11,8, 3,4 Гц, 2H), 3,87 (с, 3H), 3,82-3,76 (м, 1H), 3,64-3,47 (м, 3H), 2,79-2,63 (м, 2H), 2,06 (д, J=13,2 Гц, 2H), 1,55-1,46 (м, 2H), 1,18 (т, J=7,5 Гц, 3H).
Стадия 7: Синтез 5-хлор-2-этил-3-[этил(оксан-4-ил)амино]бензойной кислоты
К раствору метил-5-хлор-2-этил-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата (350 мг, 1,18 ммоль) в DCE (10 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота добавляли ацетальдегид (0,66 мл, 11,75 ммоль), а затем уксусную кислоту (0,4 мл, 7,05 ммоль). Этот раствор перемешивали в течение 5 минут, после чего при комнатной температуре добавляли триацетоксиборгидрид натрия (2,49 г, 11,75 ммоль). После перемешивания в течение 23 ч, дополнительно добавляли ацетальдегид (0,66 мл, 11,75 ммоль), а затем триацетоксиборгидрид натрия (2,49 г, 11,75 ммоль). После перемешивания еще в течение 3 часов, добавляли деионизованную воду (15 мл), и нейтрализовали смесь добавлением твердого NaHCO3. Фазы разделяли, и экстрагировали водный слой EtOAc (2×15 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления. Остаток очищали методом FCC (10 г силикагеля, картридж Isolute, градиент элюентов: 99/1 гептан/EtOAc→85/15 гептан/EtOAc) с получением указанного в заголовке соединения (317 мг) в виде смеси (2/1) сложного метилового и сложного этилового эфиров, которую использовали на последующей стадии.
К смеси сложных эфиров добавляли THF (10 мл) и 4M NaOH (9,7 мл, 38,9 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при 50°C в течение 27 часов, после чего к реакционной смеси добавляли MeOH (5 мл), и перемешивали ее еще в течение 21 ч при 50°C. Реакционную смесь подкисляли до pH 2-3 добавлением 6M HCl и экстрагировали DCM (5×10 мл). Объединенные органические экстракты сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением указанного в заголовке соединения в виде оранжевого кристаллического вещества (289 мг, 79% в два этапа). ЖХ/МС 100%, 2,09 мин (ЖХ/МС способ «3,5 минуты»), m/z= 312,0/314,0. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,73 (д, J=1,7 Гц, 1H), 7,29 (д, J=1,8 Гц, 1H), 3,99 (д, J=11,0 Гц, 2H), 3,38-3,29 (м, 2H), 3,20-3,03 (м, 4H), 3,02-2,91 (м, 1H), 1,78 -1,61 (м, 4H), 1,13 (т, J=7,4 Гц, 3H), 0,91 (т, J=7,0 Гц, 3H).
Стадия 8: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-этил-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К раствору 5-хлор-2-этил-3-[этил(оксан-4-ил)амино]бензойной кислоты (191 мг, 0,61 ммоль) в DMF (3 мл) при 0°C добавляли HATU (280 мг, 0,74 ммоль), а затем DIPEA (213 мкл, 1,26 ммоль) и 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-он (89%, 115 мг, 0,67 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч, после чего реакционную смесь вливали в деионизованную воду (50 мл), а полученное твердое вещество фильтровали и промывали водой. Водную фазу промывали DCM (3×50 мл), объединенные органические фазы промывали солевым раствором (30 мл), сушили с MgSO4, фильтровали и упаривали с получением масла. Твердое вещество и масло объединяли и очищали с использованием 10 г колонки Isolute, элюируя 0%→3% MeOH в DCM, и упаривали, после чего очищали с использованием 10 г колонки Isolute, элюируя 0%→3% MeOH в EtOAc, с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества (234 мг, 79%). ЖХ/МС 92%, 1,78 мин (ЖХ/МС способ «3,5 минуты»), m/z= 446,2/448. К перемешанному раствору 5-хлор-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-этил-3-[этил(оксан-4-ил)амино]бензамида (117 мг, 0,26 ммоль) в дегазированной смеси диглима (4 мл) и MeOH (2 мл), который барботировали азотом, добавляли 2'-(дициклогексилфосфанил)-N,N-диметилбифенил-2-амин (21 мг, 0,05 ммоль), палладия диацетат (5,89 мг, 0,03 ммоль), цезия фторид (120 мг, 0,79 ммоль) и 4-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил]морфолин (119 мг, 0,39 ммоль). Барботирование азотом продолжали в течение 10 мин, затем реакционную смесь нагревали до 70°C в течение 16 ч, после чего дополнительно добавляли 4-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил]морфолин (119 мг, 0,39 ммоль), и продолжали нагревание в течение 6 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через Keiselguhr, и промывали осадок на фильтре MeOH. К фильтрату добавляли дистиллированную воду (20 мл), а затем экстрагировали EtOAc (3×50 мл), затем объединенные органические фазы промывали солевым раствором (2×50 мл), сушили с MgSO4, фильтровали и упаривали. Полученный остаток очищали с использованием 25 г колонки Isolute, элюируя градиентом 0%→10% MeOH в DCM, с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (32 мг, 21%). ЖХ/МС 99%, 2,72 мин (ЖХ/МС способ «7 минут»), m/z= 294,3 (M+H/2). 1H-ЯМР (500 МГц, Ацетон-d6) δ 10,80 (с, 1H), 7,60-7,54 (м, 3H), 7,51 (с, 1H), 7,39 (д, J=7,9 Гц, 2H), 7,36 (д, J=1,4 Гц, 1H), 5,92 (с, 1H), 4,45 (д, J=5,6 Гц, 2H), 3,88 (д, J=8,0 Гц, 2H), 3,66-3,56 (м, 4H),3,51 (с, 2H), 3,29 (т, J=11,2 Гц, 2H), 3,17 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 3,09 (т, J=11,2 Гц, 1H), 2,98 (кв., J=7,4 Гц, 2H), 2,41 (с, 4H), 2,36 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 1,76 (д, J=11,2 Гц, 2H), 1,65-1,56 (м, 2H), 1,08 (т, J=7,4Гц, 3H), 0,91 (т, J=7,0 Гц, 3H).
Пример 140: Синтез 3'-циано-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000220
Соединение 140
Стадия 1: Синтез 5-бром-2-(морфолинометил)бензонитрила
К перемешанному раствору 5-бром-2-формилбензонитрила (200 мг, 0,95 ммоль) и морфолина (248 мг, 2,85 ммоль) в дихлорэтане (10 мл) добавляли уксусную кислоту (342 мг, 5,7 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем к реакционной смеси при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (604 мг, 2,85 ммоль), оставляли ее нагреваться до комнатной температуры, и продолжали перемешивание в течение ночи. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли дихлорметаном, промывали водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали целевое соединение (150 мг, 56%).
Стадия 2: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензамида
К перемешанной смеси 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (1,0 г, 2,1 ммоль), бис(пинаколато)дибора (2,67 г, 10,5 ммоль) и калия ацетата (610 мг, 6,31 ммоль) в диоксане (10 мл) продували аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли комплекс дихлор[1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладия(II) и дихлорметана (85 мг, 0,10 ммоль), и снова продували аргоном в течение 15 мин. Реакционную массу нагревали при 80°C в течение 7 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали целевое соединение (250 мг, 27%).
Стадия 3: Синтез 3'-циано-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору 5-бром-2-(морфолинометил)бензонитрила (190 мг, 0,68 ммоль) и N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензамида (200 мг, 0,45 ммоль) в диоксане (6 мл) добавляли 2M водный раствор Na2CO3 (0,81 мл, 1,63 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (52 мг, 0,04 ммоль), и снова продували аргоном в течение 15 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM (трижды). Объединенный органический слой сушили над сульфатом натрия. После удаления растворителя в условиях пониженного давления с последующей очисткой методом колоночной хроматографии получали указанное в заголовке соединение (16 мг, 6%). ЖХ/МС: 598,20 (M+1)+; ВЭЖХ: 89,15% (детекция при 254 нм) (Rt 4,039; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 8,20 (т, 1H), 8,15 (с, 1H), 7,94 (д, 1H, J=6,8 Гц), 7,63 (д, 1H, J=8,4 Гц), 7,51 (с, 1H), 7,31 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,29 (м, 2H), 3,84-3,82 (м, 2H), 3,66-3,58 (м, 6H), 3,32 (м, 5H), 3,11-3,03 (м, 4H), 2,25 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,65-1,51 (м, 4H), 0,82 (т, 3H, J=6 Гц).
Пример 141: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000221
Соединение 141
Стадия 1: 5-бром-2-метил-3-нитробензойная кислота
К перемешанному раствору 2-метил-3-нитробензойной кислоты (100 г, 552,48 ммоль) в конц. H2SO4 (400 мл) при комнатной температуре порциями добавляли 1,3-дибром-5,5-диметил-2,4-имидазолидиндион (87,98 г, 307,70 ммоль). Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Реакционную смесь выливали на ледяную воду, выпавшее в осадок твердое вещество собирали путем фильтрования, промывали водой и сушили в условиях вакуума с получением целевого 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты в виде не совсем белого твердого вещества (140 г, выход 97,90%). 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 8,31 (с, 1H), 8,17 (с, 1H), 2,43 (с, 3H).
Стадия 2: метил-5-бром-2-метил-3-нитробензоат
К перемешанному раствору 5-бром-2-метил-3-нитробензойной кислоты (285 г, 1104,65 ммоль) в DMF (2,8 л) добавляли карбонат натрия (468 г, 4415,09 ммоль), а затем при комнатной температуре добавляли метилйодид (626,63 г, 4415 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 60°C в течение 8 ч. Затем реакционную смесь фильтровали для удаления твердых веществ, которые тщательно промывали этилацетатом (3×1 л). Объединенные фильтраты тщательно промывали водой (5×3 л), и снова экстрагировали водную фазу этилацетатом (3×1 л). Объединенные органические экстракты сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением метил-5-бром-2-метил-3-нитробензоата в виде не совсем белого твердого вещества (290 г, выход 97%). 1H-ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 8,17 (с, 1H), 7,91 (с, 1H), 3,96 (с, 3H), 2,59 (с, 3H).
Стадия 3: метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоат
К перемешанному раствору метил-5-бром-2-метил-3-нитробензоата (290 г, 1058,39 ммоль) в этаноле (1,5 л) добавляли водный хлорид аммония (283 г, 5290 ммоль растворены в 1,5 л воды). Полученную смесь перемешивали и нагревали при 80°C, а затем при 80°C порциями добавляли железный порошок (472 г, 8451 ммоль). Полученную реакционную смесь нагревали при 80°C в течение 12 ч. Затем реакционную смесь фильтровали горячей через Celite®, слой Celite® тщательно промывали метанолом (5 л), а затем 30% MeOH в DCM (5 л). Объединенные фильтраты концентрировали в условиях вакуума, полученный остаток разбавляли водным бикарбонатом (2 л) и экстрагировали этилацетатом (3×5 л). Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата в виде коричневого твердого вещества (220 г, 89,41% выход).
Порцию продукта (5 г) растворяли в горячем этаноле (20 мл), нерастворимый остаток отфильтровывали, и концентрировали маточный раствор с получением метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (3,5 г, выход 70%) с чистотой 93,81% согласно ВЭЖХ в виде светло-коричневого твердого вещества. 1H-ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 7,37 (с, 1H), 6,92 (с, 1H), 3,94 (с, 3H), 3,80 (шир. с, 2H), 2,31 (с, 3H).
Стадия 4: метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоат
К перемешанному раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (5 г, 20,5 ммоль) и трет-бутил-(4-оксоциклогексил)карбамата (5,69 г, 26,7 ммоль) в дихлорэтане (50 мл) добавляли уксусную кислоту (7,4 г, 123 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (13,1 г, 61,7 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь гасили добавлением водного бикарбоната натрия, органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в условиях вакуума. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (100-200 меш), элюируя 10% этилацетатом в гексане, с получением 3,5 г более полярного (транс) изомера, метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата, в виде твердого вещества (38,46%). 1H-ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 7,21 (с, 1H), 6,80 (с, 1H), 4,41 (шир. с, 1H), 3,85 (с, 3H), 3,60 (м, 1H), 3,45 (м, 1H), 3,20 (м, 1H), 2,22 (с, 3H), 2,15 (шир. с, 2H), 2,05 (шир. с, 2H), 1,45 (с, 9H), 1,30 (м, 4H).
Стадия 5: метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоат
К перемешанному раствору метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата (55 г, 0,124 моль) и ацетальдегида (11 г, 0,25 моль) в дихлорэтане (550 мл) добавляли уксусную кислоту (44,64 г, 0,744 моль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (79 г, 0,372 моль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь гасили добавлением водного бикарбоната натрия, органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединенные экстракты сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в условиях вакуума. Неочищенное соединение очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (100-200 меш), элюируя 10% этилацетатом в гексане, с получением 44 г метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата (75,2%) в виде твердого вещества. 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 7,55 (с, 1H), 7,45 (с, 1H), 6,65 (д, 1H), 3,80 (с, 3H), 3,15 (шир. с, 1H), 3,05 (кв., 2H), 2,60 (м, 1H), 2,30 (с, 3H), 1,75 (м, 4H), 1,40 (м, 2H), 1,35 (с, 9H), 1,10 (м, 2H), 0,80 (т, 3H).
Стадия 6: трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамат
К раствору метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата (25 г, 0,053 моль) в EtOH (100 мл) добавляли водный NaOH (3,5 г, 0,08 моль в 10 мл H2O), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. Затем удаляли этанол в условиях пониженного давления и подкисляли до pH 8 добавлением разбавленной HCl и до pH 6 добавлением лимонной кислоты. Смесь экстрагировали 10% метанолом в DCM (3×200 мл). Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (24,2 г, 99,0%). 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 13,13 (с, 1H), 7,54 (с, 1H), 7,43 (с, 1H), 6,68 (д, 1H), 3,14 (шир. с, 1H), 3,03 (кв., 2H), 2,56 (м, 1H), 2,33 (с, 3H), 1,80-1,65 (м, 4H), 1,40 (м, 2H), 1,35 (с, 9H), 1,10 (м, 2H), 0,77 (т, 3H).
Кислоту (24 г, 0,053 моль) растворяли в DMSO (100 мл), и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (16 г, 0,106 моль) и триэтиламин (5,3 г, 0,053 моль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли PyBop (41 г, 0,079 ммоль), а затем продолжали перемешивание в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь выливали на ледяную воду (1 л). Полученный осадок собирали путем фильтрования, тщательно промывали водой (2×1 л) и сушили. Затем полученный продукт очищали путем промывания ацетонитрилом (3×200 мл) и DCM (100 мл) с получением трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (24 г, 77%). 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (с, 1H), 8,24 (т, 1H), 7,25 (с, 1H), 7,04 (с, 1H), 6,67 (д, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,24 (д, 2H), 3,13 (шир. с, 1H), 3,01 (кв., 2H), 2,53 (м, 1H), 2,18 (с, 3H), 2,10 (с, 6H), 1,80-1,65 (м, 4H), 1,40 (м, 2H), 1,35 (с, 9H), 1,10 (м, 2H), 0,77 (т, 3H).
Стадия 7: трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(этил)амино)циклогексил)карбамат
К перемешанному раствору трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (24 г, 0,041 моль) и 4-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил)морфолина (18 г, 0,061 моль) в смеси диоксан/вода (160 мл + 40 мл) добавляли Na2CO3 (15 г, 0,15 моль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (4,7 г, 0,041 моль), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 4 ч. Затем реакционную смесь разбавляли 10% MeOH в DCM (500 мл) и фильтровали. Фильтрат концентрировали, разбавляли водой (500 мл) и экстрагировали 10% MeOH в DCM (3×500 мл). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (100-200 меш), элюируя 7% MeOH в DCM, с получением трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (20 г, 71,43%). 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,20 (т, 1H), 7,56 (д, 2H), 7,36 (м, 3H), 7,17 (с, 1H), 6,66 (д, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H), 3,57 (шир. с, 4H), 3,48 (с, 2H), 3,20-3,05 (м, 3H), 2,62 (м, 1H), 2,36 (шир. с, 4H), 2,20 (с, 6H), 2,10 (с, 3H), 1,75 (м, 4H), 1,42 (м, 2H), 1,35 (с, 9H), 1,10 (м, 2H), 0,82 (т, 3H).
Стадия 8: 5-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
К перемешанному раствору трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (20 г, 0,03 моль) в DCM (200 мл) при 0°C добавляли TFA (75 мл), и перемешивали реакционную смесь в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь концентрировали досуха, и подщелачивали остаток до pH 8 добавлением насыщенного водного раствора бикарбоната (300 мл). Смесь экстрагировали 20% метанолом в DCM (4×200 мл). Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением 5-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (15,5 г, 91%), который использовали как есть в последующей реакции. 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 8,18 (шир. с, 1H), 7,57 (д, 2H), 7,38 (м, 3H), 7,20 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,29 (д, 2H), 3,57 (шир. с, 4H), 3,48 (с, 2H), 3,31 (шир. с, 2H), 3,10 (м, 2H), 2,91 (м, 1H), 2,67 (м, 1H), 2,36 (шир. с, 4H), 2,21 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,90 (м, 2H), 1,83 (м, 2H), 1,45 (м, 2H), 1,23 (м, 2H), 0,83 (т, 3H).
Стадия 9: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
К перемешанному раствору 5-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (14 г, 0,023 моль) в дихлорметане (150 мл) при 0°C добавляли 35% водный раствор формальдегида (2,4 г, 0,080 моль). После перемешивания в течение 20 мин, добавляли Na(OAc)3BH (12,2 г, 0,057 моль), и продолжали перемешивание в течение 2 ч при 0°C. Затем к реакционной смеси добавляли воду (100 мл), и экстрагировали смесь 20% метанолом в DCM (3×200 мл). Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии на щелочном оксиде алюминия, элюируя 6-7% MeOH в DCM, с получением указанного в заголовке соединения (10 г, 63,6%). ЖХ/МС: 614,65 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,88% (детекция при 210-370 нм) (Rt 3,724; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (с, 1H), 8,17 (т, 1H), 7,56 (д, 2H, J=8 Гц), 7,36 (м, 3H), 7,17 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,29 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,57 (шир. с, 4H), 3,48 (с, 2H), 3,09 (кв., 2H), 2,66 (м, 1H), 2,36 (шир. с, 4H), 2,21 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,11 (с, 9H), 1,79 (м, 4H), 1,36 (м, 2H), 1,11 (м, 2H), 0,82 (т, 3H, J=6,4 & 6,8 Гц).
Пример 142: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-((2-метоксиэтил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000222
Соединение 142
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-3-((2-метоксиэтил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (400 мг, 1,22 ммоль) и 2-метоксиацетальдегида (1,3 мг, 17,56 ммоль) в 7 мл дихлорэтана добавляли уксусную кислоту (0,42 мл, 7,33 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Реакционную смесь охлаждали до 0°C, добавляли триацетоксиборгидрид натрия (777 мг, 3,66 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем реакционную смесь нейтрализовывали добавлением нас. NaHCO3 и экстрагировали DCM, органический слой сушили над Na2SO4, концентрировали в условиях пониженного давления с получением 260 мг неочищенного продукта.
Стадия 2: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((2-метоксиэтил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида
Смесь метил-5-бром-3-((2-метоксиэтил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (260 мг, 0,67 ммоль) и NaOH (40 мг, 1,01 ммоль) в 5 мл смеси этанол/вода (2/1) нагревали при 70°C в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха, неочищенное вещество растворяли в воде, корректировали значение pH до 5-6 путем медленного добавления HCl, и экстрагировали соединение введением в 10% MeOH в DCM. Органический слой сушили над Na2SO4, концентрировали в условиях пониженного давления с получением 230 мг кислоты.
Смесь неочищенной кислоты (230 мг, 0,62 ммоль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она (188 мг, 1,24 ммоль), PyBOP (483 мг, 0,93 ммоль) и триэтиламина (0,17 мл, 1,238 ммоль) перемешивали в 3 мл DMSO при к.т. в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли водой, соединение экстрагировали введением в 10% MeOH в DCM, сушили над Na2SO4, концентрировали и очищали неочищенное вещество методом колоночной хроматографии на силикагеле (100-200 меш) с получением 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((2-метоксиэтил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (110 мг, 35%).
Стадия 3: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-((2-метоксиэтил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Раствор 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-((2-метоксиэтил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (110 мг, 0,21 ммоль), (4-(морфолинометил)фенил)бороновой кислоты (99 мг, 0,33 ммоль), карбоната натрия (83 мг, 0,78 ммоль) в 4 мл диоксана дегазировали аргоном в течение 20 мин, к смеси добавляли Pd(PPh3)4 (25 мг, 0,02 ммоль), и нагревали до 100°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой, соединение экстрагировали введением в 10% MeOH в DCM, сушили над Na2SO4, концентрировали, и очищали неочищенный продукт методом хроматографии на силикагеле (100-200 меш) с получением указанного в заголовке соединения (50 мг, 38%).
ЖХ/МС: 603,45 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,60% (детекция при 254 нм) (Rt 4,492; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 8,20 (т, 1H), 7,58 (д, 2H, J=7,2Гц), 7,47 (с, 1H), 7,37 (д, 2H, J=7,2Гц), 7,23 (с, 1H), 5,86 (с, 1H ), 4,29 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,82-3,85 (м, 2H), 3,49-3,58 (м, 6H), 3,15-3,3,23 (м, 9H), 2,98 (м, 1H), 2,36 (м, 4H), 2,23 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,51-1,68 (м, 4H).
Пример 143: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил-d 5 (тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000223
Соединение 143
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-3-(этил-d 5 (тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору соединения метил-5-бром-2-метил-3-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бензоата (1 г, 3,05 ммоль) и триацетоксибордейтерида натрия (0,2 г, 4,76 ммоль) в дихлорэтане (15 мл) добавляли уксусную кислоту (1,65 г, 27,5 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при 5-10°C в течение 2 ч. Затем при 0°C добавляли ацетальдегид-d4 (0,264 г, 6,00 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. По завершении реакции, реакционную смесь гасили добавлением водного бикарбоната натрия, органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии с получением целевого продукта (1 г, 91%).
Стадии 2 и 3: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил-d 5 (тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида
К раствору метил-5-бром-3-(этил-d5(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (1 г, 2,77 ммоль) в этаноле (10 мл) добавляли водный NaOH (0,166 г, 4,15 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции, этанол удаляли в условиях пониженного давления, подкисляли до pH 6 с использованием разбавленной HCl и корректировали значение pH до 4 с использованием лимонной кислоты. Проводили экстрагирование с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,7 г, 2,01 ммоль, 73%), которую затем растворяли в DMSO (7 мл), и добавляли к ней 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,611 г, 4,01 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего к ней добавляли PYBOP (1,56 г, 3,01 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. После завершения преобразования, реакционную массу выливали на лед и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали с получением неочищенного вещества, которое затем очищали путем промывания растворителем с получением целевого продукта (0,6 г, 62%).
Стадия 4: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил-d 5 (тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4'-формил-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил-d5(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (0,3 г, 0,62 ммоль) и (4-(морфолинометил)фенил)бороновой кислоты (0,283 г, 0,93 ммоль) в смеси диоксан/вода добавляли Na2CO3 (0,24 г, 2,26 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,072 г, 0,062 ммоль), и снова продували смесь в течение 10 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением целевого указанного в заголовке соединения (0,22 г, 61%). Аналитические данные для N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил-d5(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4'-формил-4-метил-[1,1’-бифенил]-3-карбоксамида: ЖХ/МС: 578,35 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,50% (детекция при 254 нм) (Rt 4,176; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 8,19 (т, 1H), 7,57 (д, 2H, J=7,6), 7,36-7,39 (м, 3H), 7,21 (с, 1H), 5,86 (с, 1H ), 4,29 (д, 2H, J=3,2 Гц), 3,81-3,84 (м, 2H), 3,48-3,57 (м, 6H), 3,22-3,25 (м, 2H), 3,02 (м, 1H), 2,36 (м, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,51-1,67 (м, 4H).
Пример 144: Синтез 5-((2,2-дифторэтил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000224
Соединение 144
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-3-[(2,2-дифторэтил)(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензоата
В двугорлой круглодонной колбе емкостью 100 мл, перемешанный раствор метил-5-бром-2-метил-3-[(оксан-4-ил)амино]бензоата (500 мг, 1,5 ммоль) в дифторуксусной кислоте (15 мл) в течение 12 минут (ОСТОРОЖНО!) порциями обрабатывали тетрагидроборатом натрия (1000 мг, 26 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 50°C и перемешивали в течение 4 часов. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры, а затем выливали на лед (130 мл) и оставляли на 5 минут. Смесь подщелачивали добавлением 6M NaOH (водн.) (35 мл), и корректировали значение pH до 7 с использованием 1M HCl (водн.) (20 мл). Полученную суспензию оставляли отстаиваться до момента, когда раствор не становился прозрачным, полученное твердое вещество собирали путем фильтрования и сушили в условиях вакуума при 40°C с получением указанного в заголовке соединения (572 мг, 96%) в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС 100%, 2,32 мин (ЖХ/МС способ «3,5 минуты»), m/z=391,9, 392,9, 393,9, 394,9; 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 7,79 (д, J=1,89 Гц, 1 H) 7,44 (д, J=1,89 Гц, 1 H) 5,44-5,71 (м, 1 H) 4,00 (дд, J=11,51, 4,10 Гц, 2 H) 3,91 (с, 3 H) 3,41 (тд, J=13,99, 4,18 Гц, 2 H) 3,32 (т, J=11,27 Гц, 2 H) 2,97 (тт, J=11,37, 3,84 Гц, 1 H) 2,47 (с, 3 H) 1,72-1,81 (м, 2 H) 1,59-1,67 (м, 2 H).
Стадия 2: Синтез 5-бром-3-[(2,2-дифторэтил)(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензойной кислоты
К перемешанному раствору метил-5-бром-3-[(2,2-дифторэтил)(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензоата (571 мг, 1,5 ммоль) в смеси THF (14,6 мл) и MeOH (2,2 мл) добавляли 4M NaOH (14,6 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 7 часов. Нагревание выключали, и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 16,5 часов. Удаляли THF в условиях вакуума, и подкисляли водный остаток до pH 4 путем добавления 6M HCl (водн.) (10 мл) при охлаждении на льду. Полученное твердое вещество собирали путем фильтрования и промывали водой (20 мл), сушили в условиях вакуума при 30-40°C в течение 3 часов с получением указанного в заголовке соединения (526 мг, 96%) в виде светло-бежевого твердого вещества. ЖХ/МС 100%, 1,98 мин (ЖХ/МС способ «3,5 минуты»), m/z=377,9, 378,9, 379,9, 380,9; 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 7,91 (д, J=1,58 Гц, 1 H) 7,49 (д, J=1,58 Гц, 1 H) 5,43-5,75 (м, 1 H) 4,01 (дд, J=11,43, 3,55 Гц, 2 H) 3,42 (тд, J=13,95, 3,78 Гц, 2 H) 3,32 (т, J=11,35 Гц, 2 H) 2,98 (тт, J=11,37, 3,53 Гц, 1 H) 2,52 (с, 3 H) 1,77 (д, J=10,88 Гц, 2 H) 1,56-1,69 (м, 2 H), OH незаметен.
Стадия 3: Синтез 5-бром-3-[(2,2-дифторэтил)(оксан-4-ил)амино]-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метилбензамида
Перемешанный раствор 5-бром-3-[(2,2-дифторэтил)(оксан-4-ил)амино]-2-метилбензойной кислоты (250 мг, 0,66 ммоль) в безводном DMF (3,0 мл) при 0°C в атмосфере подаваемого из баллона азота по каплям обрабатывали HATU (327 мг, 0,86 ммоль) и DIPEA (230 мкл, 1,3 ммоль). Полученный раствор перемешивали в течение 5 минут, а затем обрабатывали 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-оном (89%, 136 мг, 0,79 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 0°C в течение 20 минут, а затем перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Спустя 18 часов, добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-он (25 мг), и продолжали перемешивание еще в течение 25 часов. Реакционную смесь разбавляли водой (30 мл) и CH2Cl2 (30 мл). Слои разделяли, и экстрагировали водную фазу CH2Cl2 (3×15 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (45 мл), водой (2×50 мл), солевым раствором (2×50 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в условиях вакуума. Остаток очищали методом колоночной хроматографии (10 г SNAP картридж, Isolera, 0-3% MeOH/CH2Cl2), а затем растирали с эфиром. Полученное твердое вещество собирали путем фильтрования и сушили в условиях вакуума при 40°C с получением указанного в заголовке соединения (259 мг, 77%) в виде не совсем белого твердого вещества. ЖХ/МС 100%, 4,04 мин (ЖХ/МС способ «7 минут»), m/z=512,0, 513,0, 514,0, 515,0; 1H-ЯМР (500 МГц, Ацетон) δ 10,71 (с, 1H), 7,57-7,49 (м, 2H), 7,25 (д, J=1,9 Гц, 1H), 5,91 (с, 1H), 5,76 (тт, J=56,2, 4,3 Гц, 1H), 4,40 (д, J=5,5 Гц, 2H), 3,88 (дд, J=11,3, 4,2 Гц, 2H), 3,52 (тд, J=14,6, 4,2 Гц, 2H), 3,33-3,23 (м, 2H), 3,02 (тт, J=11,6, 3,9 Гц, 1H), 2,32 (с, 3H), 2,28 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 1,73 (дд, J=12,4, 1,9 Гц, 2H), 1,59 (кв. д, J=12,2, 4,5 Гц, 2H).
Стадия 4: Синтез 5-((2,2-дифторэтил)(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
В двугорлой круглодонной колбе 5-бром-3-[(2,2-дифторэтил)(оксан-4-ил)амино]-N-[(4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил]-2-метилбензамид (200 мг, 0,39 ммоль) и 4-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензил]морфолин (130 мг, 0,43 ммоль) в диоксане (3,0 мл) обрабатывали раствором Na2CO3 (145 мг, 1,4 ммоль) в воде (1,0 мл). Смесь недолго обрабатывали ультразвуком, и барботировали полученную суспензию азотом через длинную иглу в течение 5 минут. Затем суспензию обрабатывали палладием/трифенилфосфином (1/4) (45 мг, 0,04 ммоль), и барботировали полученную суспензию азотом еще в течение 5 минут. Затем реакционную смесь нагревали до 100°C в течение 8 часов, и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь обрабатывали водой (20 мл) и 10% MeOH в CH2Cl2 (15 мл). Слои разделяли, и экстрагировали водный слой 10% MeOH в CH2Cl2 (3×15 мл). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором (55 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в условиях вакуума. Неочищенный остаток очищали методом колоночной хроматографии (10 г SNAP картридж, Isolera, 0-5% MeOH в CH2Cl2) и обрабатывали эфиром (10 мл), недолго обрабатывали ультразвуком, нагревали в водяной бане и охлаждали на льду. Полученное белое твердое вещество собирали путем фильтрования и промывали эфиром (5 мл). Твердое вещество сушили в условиях вакуума при 40°C в течение 35 часов с получением указанного в заголовке соединения (159 мг, 67%) в виде не совсем белого твердого вещества. ЖХ/МС 100%, 3,09 мин (ЖХ/МС способ «7 минут»), m/z=609,15; 1H-ЯМР (500 МГц, Ацетон) δ 10,72 (с, 1H), 7,63 (д, J=1,5 Гц, 1H), 7,60 (д, J=8,1 Гц, 2H), 7,54 (т, J=5,2 Гц, 1H), 7,41 (д, J=1,6 Гц, 1H), 7,39 (д, J=8,1 Гц, 2H), 5,91 (с, 1H), 5,76 (ттт, J=56,4, 30,4, 4,4 Гц, 1H), 4,44 (д, J=5,5 Гц, 2H), 3,89 (дд, J=11,4, 3,9 Гц, 2H), 3,65-3,55 (м, 6H), 3,50 (с, 2H), 3,29 (т, J=11,3 Гц, 2H), 3,07 (тт, J=11,5, 3,6 Гц, 1H), 2,40(с, 4H), 2,37 (с, 3H), 2,34 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 1,82-1,75 (м, 2H), 1,61 (кв. д, J=11,9, 4,1 Гц, 2H).
Пример 145: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1s,4s)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)бензамид
Figure 00000225
Соединение 145
Стадия 1: Синтез 3-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
К охлажденному раствору трет-бутил-((1s,4s)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (1,0 г, 1,60 ммоль) в 10 мл DCM по каплям добавляли 2 мл TFA, и перемешивали реакционную смесь при к.т. в течение 2 ч. Реакционную массу концентрировали досуха в условиях пониженного давления, полученное неочищенное вещество растворяли в 10% MeOH в DCM и промывали нас. NaHCO3, водой и солевым раствором. Органическую фазу сушили над Na2SO4, концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного целевого соединения (650 мг, 81%).
Стадия 2: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1s,4s)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида
К перемешанному раствору неочищенного соединения 3-(((1s,4s)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (650 мг, 1,32 ммоль) и формальдегида (0,5 мл 38% раствора, 13,26 ммоль) в 10 мл метанола при 0°C добавляли цианборгидрид натрия (82 мг, 1,32 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь распределяли между водой и 10% MeOH в DCM, органический слой сушили над Na2SO4, концентрировали в условиях пониженного давления. Неочищенное вещество очищали на колонке со щелочным оксидом алюминия с получением целевого продукта (450 мг, 65%).
Стадия 3: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1s,4s)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)бензамида
Раствор 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1s,4s)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (150 мг, 0,29 ммоль), (1-метил-1H-пиразол-4-ил)бороновой кислоты (72 мг, 0,34 ммоль), карбоната натрия (110 мг, 1,06 ммоль) в 10 мл диоксана дегазировали аргоном в течение 20 мин, к смеси добавляли Pd(PPh3)4 (33 мг, 0,03 ммоль), и нагревали до 100°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой, соединение экстрагировали введением в 10% MeOH в DCM, сушили над Na2SO4, концентрировали, и очищали неочищенное вещество методом хроматографии на силикагеле (100-200 меш) с получением указанного в заголовке соединения (40 мг, 26%).
Аналитические данные: ЖХ/МС: 519,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 95,98% (детекция при 254 нм) (Rt 3,987; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45(шир. с, 1H), 8,12-8,09 (м, 2H), 7,80 (с, 1H), 7,29 (с, 1H), 7,10 (с,1H), 5,86 (с,1H), 4,27 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,84 (с, 3H), 3,07-305 (м, 2H), 2,67-2,63 (м, 2H), 2,21 (с, 3H), 2,15 (с, 3H), 2,12-2,11 (с, 3H+3H+3H), 1,79-1,75 (м, 4H), 1,36-1,11 (м, 4H), 0,80 (т, 3H, J=6,0 Гц).
Пример 146: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1s,4s)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4-метил-4'-((4-метил-1,4-диазепан-1-ил)метил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000226
Соединение 146
Стадия 1: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1s,4s)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4'-формил-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Раствор соединения 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1s,4s)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (380 мг, 0,73 ммоль), (4-формилфенил)бороновой кислоты (165 мг, 1,10 ммоль), карбоната натрия (280 мг, 2,6 ммоль) в 5 мл диоксана дегазировали аргоном в течение 20 мин, к смеси добавляли Pd(PPh3)4 (84 мг, 0,07 ммоль), и нагревали до 100°C в течение 5 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой, соединение экстрагировали введением в 10% MeOH в DCM, сушили над Na2SO4, концентрировали, и очищали неочищенное вещество методом хроматографии на силикагеле (100-200 меш) с получением целевого соединения (250 мг, 63%).
Стадия 2: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1s,4s)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4-метил-4'-((4-метил-1,4-диазепан-1-ил)метил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1s,4s)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4'-формил-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (90 мг, 0,16 ммоль) и 1-метил-1,4-диазепана (0,56 г, 0,49 ммоль) в 2 мл метанола добавляли уксусную кислоту (0,03 мл, 0,49 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Реакционную смесь охлаждали до 0°C, добавляли цианборгидрид натрия (25 мг, 0,41 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь нейтрализовывали добавлением нас. NaHCO3, соединение экстрагировали введением в DCM, сушили над Na2SO4, концентрировали в условиях пониженного давления, очищали методом преп. ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (26 мг, 25%).
Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 641,50 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,72% (детекция при 254 нм) (Rt 3,783; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-D6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 9,54 (с, 1H), 8,20 (с, 1H), 7,74 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,57 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,42 (с, 1H), 7,26 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,29 (д, J=4,0 Гц, 2H), 3,83 (м, 4H), 3,25 (м, 3H), 3,17-3,12 (м, 4H), 2,84 (с, 3H), 2,69, 2,68 (2с, 6H), 2,24 (с, 3H), 2,21(с, 3H), 2,11 (с, 3H), 2,10-1,89 (м, 6H), 1,46-1,44 (м, 4H), 0,84 (т, J=7,2 Гц, 3H).
Пример 147: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000227
Соединение 147
Стадия 1: метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоат
К перемешанному раствору метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (10 г, 22,72 ммоль) и ацетальдегида (2,99 г, 67,95 ммоль) в дихлорэтане (100 мл) добавляли уксусную кислоту (8,18 г, 136,33 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (14,45 г, 68,16 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляли в условиях пониженного давления, остаток переносили в воду и экстрагировали с использованием 5% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили и концентрировали с получением метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата, который использовали как есть в последующих реакциях (9 г, 84,66%).
Стадия 2: трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)амино)циклогексил)карбамат
К раствору метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата (9 г, 19,23 ммоль) в этаноле (10 мл) добавляли водный NaOH (1,15 г, 28,84 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. Этанол удаляли в условиях пониженного давления и подкисляли до pH 6 с использованием разбавленной HCl, а затем до pH 4 с использованием лимонной кислоты. Смесь экстрагировали ацетатом. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (8,6 г, 98,50%).
Полученную кислоту (8,6 г, 18,90 ммоль) растворяли в DMSO (7 мл), и добавляли 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (5,74 г, 37,80 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли PyBOP (14,70 г, 28,35 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь выливали на ледяную воду и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили и концентрировали с получением неочищенного продукта, который очищали путем промывания растворителем с получением трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)амино)циклогексил)карбамата (10,2 г, 91,89%).
Стадия 3: 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид
трет-Бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил)амино)циклогексил)карбамат (3 г, 5,10 ммоль) переносили в DCM (20 мл), а затем добавляли к нему TFA (5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли в условиях пониженного давления, и добавляли насыщенный раствор NaHCO3. Смесь экстрагировали 10% MeOH в DCM, объединенные экстракты промывали водой и солевым раствором, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (2,2 г, 87,50%).
Стадия 4: 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамид
3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамид (2,2 г, 4,50 ммоль) растворяли в DCM (25 мл) и охлаждали до 0°C, а затем добавляли формалин (0,49 г, 16,26 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при той же температуре в течение 20 минут. Затем добавляли триацетоксиборгидрид натрия (2,39 г, 11,22 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 1 ч. Удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и добавляли к остатку воду. Смесь экстрагировали с использованием 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили и концентрировали в условиях пониженного давления с получением 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (2,3 г, 98,71%), который использовали как есть в последующих реакциях.
Стадия 5: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (1 экв.) и фенилбороновой кислоты (1,5 экв.) в смеси диоксан/вода добавляли Na2CO3 (3,6 экв.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 экв.), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,07 г, 23,92%). ЖХ/МС: 515,45 (M+1)+; ВЭЖХ: 92,45% (детекция при 254 нм) (Rt 4,672; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,48 (шир. с, 1H), 9,41 (шир. с, 1H), 8,23 (шир. с, 1H), 7,63 (д, 2H, J=4,8 Гц), 7,50-7,20 (м, 5H), 5,86 (с, 1H), 4,29 (д, 2H), 3,12 (м, 3H), 2,68 (с, 6H), 2,25 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,95 (м, 4H), 1,44 (м, 4H), 0,84 (т, 3H).
Пример 148: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4,4'-диметил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000228
Соединение 148
Стадия 1: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4,4'-диметил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (1 экв.) и пара-толилбороновой кислоты (1,5 экв.) в смеси диоксан/вода добавляли Na2CO3 (3,6 экв.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 экв.), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100ºC в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,15 г, 51,30%). ЖХ/МС: 529,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 93,61% (детекция при 254 нм) (Rt 4,761; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30ºC; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (шир. с, 1H), 9,40 (шир. с, 1H), 8,21 (шир. с, 1H), 7,53 (д, 2H, J=6,8Гц), 7,38 (шир. с, 1H), 7,26 (д, 2H, J=7,6 Гц), 5,86 (с, 1H), 4,29 (д, 2H, J=4 Гц), 3,15 (м, 2H), 2,69 (с, 3H), 2,68 (с, 3H), 2,33 (с, 3H), 2,24 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,95 (м, 4H), 1,44 (м, 4H), 0,84 (т, 3H).
Пример 149: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4-метил-4'-(трифторметил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000229
Соединение 149
Стадия 1: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4-метил-4'-(трифторметил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (1 экв.) и (4-(трифторметил)фенил)бороновой кислоты (1,5 экв.) в смеси диоксан/вода добавляли Na2CO3 (3,6 экв.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 экв.), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100ºC в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,08 г, 23,52%). ЖХ/МС: 583,45 (M+1)+; ВЭЖХ: 94,04% (детекция при 254 нм) (Rt 5,168; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30ºC; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,48 (с, 1H), 9,41 (шир. с, 1H), 8,27 (шир. с, 1H), 7,88 (д, 2H, J=8Гц), 7,81 (д, 2H, J=8Гц), 7,51 (с, 1H), 7,34 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,30 (д, 2H, J=4,4Гц), 3,16 (м, 3H), 2,85 (м, 1H), 2,69 (с, 3H), 2,68 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,94 (м, 4H), 1,45 (м, 4H), 0,85 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 150: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4-метил-4'-(метилсульфонил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000230
Соединение 150
Стадия 1: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4-метил-4'-(метилсульфонил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (1 экв.) и (4-(метилсульфонил)фенил)бороновой кислоты (1,5 экв.) в смеси диоксан/вода добавляли Na2CO3 (3,6 экв.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 экв.), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,12 г, 34,68%). ЖХ/МС: 593,45 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,74% (детекция при 254 нм) (Rt 4,194; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,48 (шир. с, 1H), 9,43 (с, 1H), 8,26 (с, 1H), 7,99 (д, 2H, J=8,4Гц), 7,93 (д, 2H, J=8,4Гц), 7,51 (с, 1H), 7,34 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,30 (д, 2H, J=4,4Гц), 3,24 (с, 3H), 3,30 (м, 3H), 2,80 (м, 1H), 2,69 (с, 3H), 2,68 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,93 (м, 4H), 1,45 (м, 4H), 0,84 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 151: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(пиримидин-5-ил)бензамид
Figure 00000231
Соединение 151
Стадия 1: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(пиримидин-5-ил)бензамид
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (1 экв.) и пиримидин-5-илбороновой кислоты (1,5 экв.) в смеси диоксан/вода добавляли Na2CO3 (3,6 экв.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 экв.), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом хроматографии на силикагеле с получением N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(пиримидин-5-ил)бензамида трифторацетата (0,12 г, 39,33%). ЖХ/МС: 517,60 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,55% (детекция при 210-370 нм) (Rt 3,996; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (шир. с, 1H), 9,43(шир. с, 1H), 9,18 (с, 1H), 9,14 (с, 2H), 8,22 (с, 1H), 7,59(с, 1H), 7,41 (с, 1H), 5,87 (с, 1H),4,30 (д, 2H), 3,14 (м, 3H), 2,69 (с, 3H+3H), 2,27 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 2,11-2,07 (м, 4H), 1,95 (м, 4H), 1,44 (м, 4H), 0,84 (т, 3H).
Пример 152: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(фуран-2-ил)-2-метилбензамида трифторацетата
Figure 00000232
Соединение 152
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата
Figure 00000233
К перемешанному раствору метил-3-амино-5-бром-2-метилбензоата (5,0 г, 2,0 ммоль) и 4-N-Boc-аминоциклогексанона (5,69 г, 2,67 ммоль) в дихлорэтане (50 мл) добавляли уксусную кислоту (7,4 г, 12 ммоль). При 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (13,1 г, 6,17 ммоль), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь гасили добавлением водного бикарбоната натрия, органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в условиях вакуума. Неочищенное соединение очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (100-200 меш), элюируя 10% этилацетатом в гексане, с получением 3,5 г более полярного транс-изомера, 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (38%), в виде не совсем белого твердого вещества. 1H-ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ 7,21 (с, 1H), 6,89 (с, 1H), 4,41 (шир. с, 1H), 3,85 (с, 3H), 3,41-3,64 (м, 2H), 2,11-2,21 (м, 6H), 1,42 (с, 9H), 1,22-1,36 (м, 5H).
Стадия 2: Синтез метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата
Figure 00000234
К перемешанному раствору 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (55 г, 0,12 моль) и ацетальдегида (11 г, 0,25 моль) в дихлорэтане (550 мл) добавляли уксусную кислоту (44,6 г, 0,74 моль). При 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (79 г, 0,37 моль), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 16 часов. Добавляли водный бикарбонат натрия, органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в условиях вакуума. Неочищенное соединение очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (35 г, 59%) в виде не совсем белого твердого вещества.
Стадия 3: Синтез трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил(этил)амино)циклогексил)карбамата
Figure 00000235
К перемешанному раствору метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата (25 г, 0,053 моль) в EtOH (100 мл) добавляли водный NaOH (3,5 г, 0,08 моль в 10 мл H2O). После перемешивания при 60°C в течение 1 ч, смесь подкисляли до pH 4 и экстрагировали 10% метанолом в DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением 24,2 г соответствующей кислоты. К перемешанному раствору кислоты (24 г, 0,053 моль), 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она (16 г, 0,11 моль) и триэтиламина (5,3 г, 0,053 ммоль) в DMSO (50 мл) добавляли PyBop (41 г, 0,079 моль). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре, смесь выливали на ледяную воду и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления. Неочищенное вещество промывали водой (1 л ×2), а затем ацетонитрилом (150 мл ×3) с получением указанного в заголовке соединения (24 г, 77%).
Стадия 4: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
Figure 00000236
К перемешанному раствору трет-бутил-((1r,4r)-4-((5-бром-3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метилфенил(этил)амино)циклогексил)карбамата (6,0 г, 10 моль) в DCM (30 мл) при 0°C добавляли TFA (10 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре и концентрировали досуха. Остаток нейтрализовывали добавлением насыщенного раствора бикарбоната (40 мл), а затем экстрагировали 20% метанолом в DCM (100 мл ×4). Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением 5,0 г указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки.
Стадия 4: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида
Figure 00000237
К перемешанному раствору 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (5,0 г, 10 ммоль) в дихлорметане (50 мл) при 0°C добавляли 35% водн. раствор формальдегида (2,9 г, 36 ммоль). Добавляли Na(OAc)3BH (5,43 г, 25,6 ммоль), и перемешивали смесь в течение 2 ч при 0°C. Добавляли воду (100 мл), а затем экстрагировали 20% метанолом в DCM (200 мл ×3). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления. Остаток очищали методом колоночной хроматографии на щелочном оксиде алюминия, элюируя 6-7% MeOH в DCM, с получением указанного в заголовке соединения (4,5 г, 94%).
Общая методика реакции по Судзуки для синтеза соединений 152-156, 158-162, 165 и 167
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (1 экв.) и данных пинаколовых эфиров бороновых кислот (1,2 экв.) в смеси диоксан/вода (4:1) добавляли Na2CO3 (3,6 экв.). Раствор продували аргоном в течение 15 мин. Добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 экв.). Перемешанную реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2-4 ч в атмосфере аргона. После охлаждения до комнатной температуры, смесь разбавляли 10% MeOH в DCM и фильтровали. Фильтрат концентрировали, разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления. Неочищенные продукты очищали либо методом колоночной хроматографии на силикагеле (100-200 меш), либо методом препаративной ВЭЖХ, с получением продуктов в виде свободного основания или трифторацетата, соответственно.
Аналитические данные для N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(фуран-2-ил)-2-метилбензамида трифторацетата (0,08 г, 27%); ЖХ/МС: 505,55 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,76% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,192; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 8,21 (с, 1H), 8,17 (с, 1H), 7,71 (с, 1H), 7,42 (с, 1H), 7,25 (с, 1H), 6,93(с, 1H), 6,57 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,29 (д, 2H), 3,08-3,06 (м, 3H), 2,67 (м, 1H), 2,21 (с, 3H+3H+3H), 2,18-2,11 (с, 3H+3H), 1,80 (м, 4H), 1,37-1,19 (м, 4H), 0,81 (т, 3H).
Пример 153: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(хинолин-8-ил)бензамида трифторацетат (0,09 г, 27%)
Figure 00000238
Соединение 153
Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 566,70 (M+1)+; ВЭЖХ: 93,94% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,352; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,43(шир. с, 1H), 9,34 (шир. с, 1H), 8,88 (с, 1H), 8,45 (д, 1H, J=7,6 Гц), 8,16 (т, 1H), 8,00 (д, 1H, J=7,2Гц), 7,80-7,79 (м, 1H), 7,70-7,69 (м, 1H), 7,59-7,57 (м, 1H), 7,49 (м, 1H), 7,29 (с,1H), 5,85 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,16-3,11 (м, 3H), 2,70-2,69 (м, 1H+3H+3H), 2,30 (с, 3H), 2,19 (с, 3H), 2,09 (с, 3H), 1,99 (м, 4H), 1,45 (м, 4H), 0,93 (т, 3H).
Пример 154: 5-(2-аминопиримидин-5-ил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино-2-метилбензамида трифторацетат (0,14 г, 45%)
Figure 00000239
Соединение 154
Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 532,65 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,49% (детекция при 210-370 нм) (Rt 3,692; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,48 (шир. с, 1H), 9,45 (шир. с, 1H), 8,17(с,1H), 7,42 (с, 1H), 7,24 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,12(м, 3H), 2,69 (с, 3H+3H), 2,23 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,96 (м, 4H), 1,43 (м, 4H), 0,83 (т, 3H).
Пример 155: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(пиридин-4-ил)бензамида трифторацетат (0,17 г, 56%)
Figure 00000240
Соединение 155
Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 516,60 (M+1)+; ВЭЖХ: 92,58% (детекция при 210-370 нм) (Rt 3,775; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 9,74 (шир. с, 1H), 8,85 (д, 2H, J=5,2 Гц), 8,30 (т, 1H), 8,24 (д, 2H, J=4,8 Гц), 7,71 (с, 1H), 7,55 (с, 1H), 5,88 (с,1H), 4,31 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,16 (м, 3H), 2,79 (м, 1H), 2,69 (с, 3H+3H), 2,28 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,98-1,90 (м, 4H), 1,47-1,45 (м, 4H), 0,84 (т, 3H).
Пример 156: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(тиофен-3-ил)бензамида трифторацетат (0,07 г, 56%)
Figure 00000241
Соединение 156
Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 521,55 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,64% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,366; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (шир. с, 1H), 9,45 (шир. с, 1H), 8,18 (с, 1H), 7,87 (с, 1H), 7,63 (с, 1H), 7,54 (м, 2H), 7,32 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,29 (д, 2H), 3,13 (м, 3H), 2,69 (м, 6H+1H), 2,22 (с, 3H+3H), 2,11 (с,3H), 1,96 (м, 4H) 1,44 (м,4H), 0,84 (т,3H).
Пример 158: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(6-метилпиридин-3-ил)бензамид
Figure 00000242
Соединение 158
Аналитические данные: ЖХ/МС: 530,55 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,45% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,192; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,19 (с, 1H), 7,95-7,90 (д, 1H, J=8,0Гц), 7,39 (с, 1H), 7,35-7,30 (д, 1H, J=7,6Гц), 7,22 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,29 (д, 2H), 3,05-3,15 (м, 2H), 2,60-2,70 (м, 1H). Три протона сливаются с пиком растворителя, 2,25-2,35 (м, 6H+1H), 2,0-2,25 (3H+3H+3H), 1,70-1,90 (м, 4H), 1,30-1,20 (м, 2H), 1,0-1,20 (м, 2H), 0,75-0,85 (т, 3H).
Пример 159: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(3,5-диметилизоксазол-4-ил)-2-метилбензамида трифторацетат (0,13 г, 50%)
Figure 00000243
Соединение 159
Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 534,60 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,65% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,352; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 9,42 (с, 1H), 8,17 (с, 1H), 7,13 (с, 1H), 6,92 (с, 1H), 5,85 (с, 1H), 4,25-4,30 (д, 2H), 3,0-3,20 (м, 3H), 2,65-2,75 (м, 3H+3H). Три протона сливаются с пиком растворителя, 2,39 (с, 3H), 2,05-2,25 (м, 3H+3H+3H+1H), 1,90-2,0 (м, 2H), 1,80-1,90 (м, 2H), 1,35-1,50 (м, 4H), 0,80-0,90 (т, 3H).
Пример 160: 5-(1,5-диметил-1H-пиразол-4-ил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида трифторацетат (0,06 г, 58%)
Figure 00000244
Соединение 160
Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 533,80 (M+1)+; ВЭЖХ: 90,76% (детекция при 254 нм) (Rt 5,583; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 9,27 (с, 1H), 8,11 (с, 1H), 7,52 (с, 1H), 7,11 (с, 1H), 6,95 (с, 1H), 5,85(с, 1H), 4,20-4,30 (д, 2H), 3,76 (с, 2H), 3,0-3,20 (м, 2H), 2,60-2,75 (м, 3H+3H), 2,33 (с, 3H), 2,19 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,80-2,0 (м, 4H), 1,35-1,50 (м, 4H), 0,80-0,90 (т, 3H).
Пример 161: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(1-метилпиразол-3-ил)-2-метилбензамида трифторацетат (0,1 г, 33%)
Figure 00000245
Соединение 161
Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 519,45 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,61% (детекция при 254 нм) (Rt 6,026; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (шир. с, 1H), 9,46 (с, 1H), 8,20 (с, 1H), 7,45 (с, 1H), 7,28 (с, 1H), 7,06 (с, 1H), 6,38 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,20-4,25 (д, 2H), 3,83 (с, 3H), 3,0-3,15 (м, 3H), 2,60-2,80 (м, 1H+3H+3H), 2,24 (с, 3H), 2,19 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,80-2,0 (м, 2H+2H), 1,40-1,50 (м, 4H), 0,80-0,90 (т, 3H).
Пример 162: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-5-(пиридин-3-ил)-2-метилбензамида трифторацетат (0,1 г, 33%)
Figure 00000246
Соединение 162
Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 516,50 (M+1)+; ВЭЖХ: 89,96% (детекция при 254 нм) (Rt 6,026; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 9,35 (с, 1H), 8,96 (с, 1H), 8,63 (с, 1H), 8,22 (м, 2H), 7,61 (с, 1H), 7,51 (с, 1H), 7,33 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,25-4,35 (д, 2H), 3,05-3,15 (м, 3H), 2,6-2,80 (м, 1H+3H+3H), 2,25 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,90-2,0 (м, 2H+2H), 1,40-1,50 (м, 4H), 0,80-0,90 (т, 3H).
Пример 163: NN-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4-метил-4'-(2H-тетразол-5-ил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000247
Соединение 163
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (1 экв.) и 5-(4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил)-2H-тетразола (1,5 экв.) в смеси диоксан/вода добавляли Na2CO3 (3,6 экв.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 экв.), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом хроматографии на силикагеле, а затем преп. ВЭЖХ, с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,125 г, 35,50%). ЖХ/МС: 583,40 (M+1)+; ВЭЖХ: 90,26% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,130; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 9,32 (шир. с, 1H), 8,23-8,11 (м, 3H), 7,90 (д, 2H, J=7,2Гц), 7,50 (с, 1H), 7,34 (с, 1H), 5,87 (с, 1H,), 4,30(д, 2H, J=4,4Гц), 3,59 (с, 1H), 3,13 (м, 3H), 2,69-2,68 (м, 6H), 2,26-2,10 (м, 9H), 1,94 (м, 4H), 1,44 (м, 4H) 0,85(м, 3H).
Пример 164: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(2-метилпиримидин-5-ил)бензамид
Figure 00000248
Соединение 164
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (1 экв.) и 2-метил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиримидина (1,5 экв.) в смеси диоксан/вода добавляли Na2CO3 (3,6 экв.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 экв.), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом хроматографии на силикагеле, а затем преп. ВЭЖХ, с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,08 г, 25,97%). ЖХ/МС: 531,65 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,61% (детекция при 210-370 нм) (Rt 3,981; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (шир. с, 1H),9,46 (шир. с, 1H), 9,00 (м,2H), 8,20 (с, 1H), 7,53 (с, 1H), 7,35 (с, 1H), 5,86 (с, 1H), 4,29 (м, 2H), 3,125-3,127 (м, 3H), 2,69-2,50 (м, 10H), 2,25-2,10 (м, 9H), 1,94 (м, 4H), 1,43 (м, 4H), 0,83 (м, 3H).
Пример 165: 5-(1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино-2-метилбензамида трифторацетат (0,18 г, 69%)
Figure 00000249
Соединение 165
Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 533,80 (M+1)+; ВЭЖХ: 87,18% (детекция при 210-370 нм) (Rt 3,946; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (D2O-d6, 400 МГц) δ 7,93 (с, 1H), 7,62-7,57 (м, 2H), 6,31 (с, 1H), 4,492-4,494 (м, 2H), 3,92-3,80 (м, 6H), 3,33 (м, 1H), 2,82 (м, 6H), 2,39-2,28 (м, 16H), 1,66 (м, 4H), 1,04 (м, 3H).
Пример 166: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(тиазол-4-ил)бензамид
Figure 00000250
Соединение 166
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензамида (1 экв.) и 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)тиазола (1,5 экв.) в смеси диоксан/вода добавляли Na2CO3 (3,6 экв.), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,1 экв.), и снова продували реакционную смесь аргоном в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные экстракты сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта, который очищали методом хроматографии на силикагеле, а затем преп. ВЭЖХ, с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,07 г, 28,40%). ЖХ/МС: 522,50 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,22% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,114; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,48 (шир. с, 1H), 9,36 (шир. с, 1H), 9,18 (с, 1H), 8,19 (шир. с, 2H), 7,79 (с, 1H), 7,58 (с, 1H), 5,87 (с, 1H ), 4,30 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,11 (м, 3H), 2,73-2,68 (м, 7H), 2,22 (с, 6H), 2,11 (с, 3H), 1,95 (м, 4H), 1,44 (м, 4H), 0,83 (т, 3H).
Пример 167: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(тиофен-2-ил)бензамида трифторацетат (0,05 г, 50%)
Figure 00000251
Соединение 167
Аналитические данные: ЖХ/МС: 521,55 (M+1)+; ВЭЖХ: 88,13% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,412; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (шир. с, 1H), 9,32 (шир. с, 1H), 8,22 (т, 1H), 7,53-7,38 (м, 3H), 7,20-7,13 (м, 2H), 5,87 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,10 (м, 3H), 2,69-2,68 (м, 7H), 2,21 (с, 6H), 2,11 (с, 3H), 1,95-1,90 (м, 4H), 1,44 (м, 4H), 0,83 (т, 3H).
Пример 168: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(тиазол-2-ил)бензамида трифторацетата
Figure 00000252
Соединение 168
Стадия 1: Синтез метил-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(тиазол-2-ил)бензоата
К перемешанному раствору метил-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензоата (0,5 г, 1,2 ммоль) и 2-бромтиазола (0,22 г, 1,38 ммоль) в смеси диоксан/вода при комнатной температуре добавляли Cs2CO3 (0,94 г, 2,88 ммоль). Раствор продували аргоном в течение 15 мин, и добавляли PdCl2(PPh3)2 (0,08 г, 0,11 ммоль). Смесь нагревали при 100°C в течение 3 ч в атмосфере аргона, разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления. Неочищенное вещество очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,36 г, 71%).
Стадия 2: Синтез трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(тиазол-2-ил)фенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору метил-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(тиазол-2-ил)бензоата (0,36 г, 0,76 ммоль) в этаноле (5 мл) при комнатной температуре добавляли водный NaOH (0,064 г, 1,60 ммоль). Смесь нагревали при 60°C в течение 1 ч и концентрировали в условиях пониженного давления. Концентрат подкисляли до pH 4 и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением 0,26 г неочищенной кислоты. К перемешанному раствору неочищенной кислоты (0,26 г, ~0,56 ммоль) и 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она (0,17 г, 1,13 ммоль) в DMSO (3 мл) при комнатной температуре добавляли PYBOP (0,44 г, 0,85 ммоль). После перемешивания в течение ночи, смесь выливали на лед и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали в условиях пониженного давления с получением указанного в заголовке соединения (0,15 г), которое использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия 3: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(тиазол-2-ил)бензамида
К перемешанному раствору трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(тиазол-2-ил)фенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (0,15 г, 0,25 ммоль) в дихлорметане (3 мл) добавляли TFA (1 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, концентрировали в условиях пониженного давления, и добавляли к концентрату раствор NaHCO3. После экстрагирования 10% MeOH в DCM, объединенные органические слои промывали водой и солевым раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в условиях пониженного давления с получением 0,11 г указанного в заголовке соединения, которое использовали непосредственно на следующей стадии.
Стадия 4: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(тиазол-2-ил)бензамида трифторацетата
К перемешанному раствору 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(тиазол-2-ил)бензамида (0,1 г, 0,20 ммоль) в метаноле (3 мл) при 0°C добавляли формалин (0,06 г, 2,0 ммоль). Добавляли цианборгидрид натрия (0,025 г, 0,59 ммоль), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили добавлением воды и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали в условиях пониженного давления до твердого вещества, которое очищали методом препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,06 г, 56%). Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 522,60 (M+1)+; ВЭЖХ: 92,00% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,255; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 9,39 (шир. с, 1H), 8,30 (т, 1H), 7,90 (д, 1H, J=3,2 Гц), 7,78 (д, 1H, J=2,4 Гц), 7,71 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 5,88 (с, 1H ), 4,30 (д, 2H, J=4 Гц), 3,11 (м, 3H), 2,77-2,68 (м, 7H), 2,24 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,96-1,89 (м, 4H), 1,45 (м, 4H), 0,84 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 169: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)бензамида
Figure 00000253
Соединение 169
Стадия 1: Синтез метил-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)бензоата
К перемешанному раствору метил-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензоата (0,5 г, 1,15 ммоль) и 2-бром-1-метил-1H-имидазола (0,22 г, 1,38 ммоль) в смеси диоксан/вода в атмосфере аргона добавляли Cs2CO3 (0,94 г, 2,88 ммоль). Добавляли PdCl2(PPh3)2 (0,08 г, 0,11 ммоль), и нагревали смесь при 100°C в течение 4 ч в атмосфере аргона. Добавляли воду, и экстрагировали смесь 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением метил-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)бензоата (0,22 г, 40%).
Стадия 2: Синтез трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)фенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору метил-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)бензоата (0,22 г, 0,47 ммоль) в этаноле (3 мл) добавляли водный NaOH (0,028 г, 0,70 ммоль). После перемешивания при 60°C в течение 1 ч, смесь концентрировали в условиях пониженного давления, подкисляли до pH 4 и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением 0,16 г неочищенной кислоты. К перемешанному раствору неочищенной кислоты (0,16 г, 0,35 ммоль) и 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она (0,11 г, 0,70 ммоль) в DMSO (3 мл) добавляли PYBOP (0,27 г, 0,53 ммоль). После перемешивания в течение ночи, смесь выливали на ледяную воду и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали в условиях пониженного давления с получением 0,12 г трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)фенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата, который использовали без дополнительной очистки.
Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)бензамида
К перемешанному раствору трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)фенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (0,12 г, 0,20 ммоль) в DCM (3 мл) добавляли TFA (1 мл). После перемешивания в течение 1 ч при комнатной температуре, смесь концентрировали в условиях пониженного давления. К остатку добавляли насыщенный раствор NaHCO3, а затем экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои промывали водой и солевым раствором; сушили и концентрировали в условиях пониженного давления с получением 0,1 г 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)бензамида, который использовали без дополнительной очистки.
Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)бензамида трифторацетата
К перемешанному раствору 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(1-метил-1H-имидазол-2-ил)бензамида (0,1 г, 0,20 ммоль) в метаноле (3 мл) при 0°C добавляли формалин (0,06 г, 2,0 ммоль). Добавляли цианборгидрид натрия (0,025 г, 0,59 ммоль), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли воду, а затем экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали в условиях пониженного давления до твердого вещества, которое очищали методом препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,03 г, 28%). Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 519,65 (M+1)+; ВЭЖХ: 96,10% (детекция при 254 нм) (Rt 3,976; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (шир. с, 1H), 9,60 (шир. с, 1H), 8,24 (шир. с, 1H), 7,82 (с, 1H), 7,78 (с, 1H), 7,52 (с, 1H), 7,35 (с, 1H), 5,87 (с, 1H ), 4,30 (шир. с, 2H), 3,86 (с, 3H), 3,10 (м, 3H), 2,69 (шир. с, 7H), 2,28 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,96-1,88 (м, 4H), 1,46 (м, 4H), 0,84 (шир. с, 3H).
Пример 170: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамид
Figure 00000254
Соединение 170
Соединение 170 получали способом, сходным с описанным ниже в примере 183.
Аналитические данные: ЖХ/МС: 614,75 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,17% (детекция при 210-370 нм) (Rt 3,598; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 10,10 (шир. с, 1H), 9,68 (шир. с, 1H), 8,21 (м, 2H), 7,47 (с, 1H), 7,38 (с, 1H), 7,16 (с, 1H), 7,05 (д, 1H, J=4,8 Гц), 5,87 (с, 1H ), 4,54-4,51 (м, 2H), 4,30 (д, 2H, J=4 Гц), 3,53 (м, 2H), 3,13 (м, 7H), 2,86 (с, 3H), 2,76-2,68 (м, 7H), 2,24 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,97-1,90 (м, 4H), 1,43 (м, 4H), 0,83 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 171: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-5-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамид
Figure 00000255
Соединение 171
Соединение 171 получали способом, сходным с описанным ниже в примере 183.
Аналитические данные: ЖХ/МС: 573,75 (M+1)+; ВЭЖХ: 95,92% (детекция при 210-370 нм) (Rt 3,891; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 8,19 (т, 1H), 8,14 (д, 1H, J=4,8 Гц), 7,44 (с, 1H), 7,32 (с, 1H), 6,97 (с, 1H), 6,88 (д, 1H, J=4,8 Гц), 5,86 (с, 1H), 4,29 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,84-3,81 (м, 2H), 3,54 (м, 4H), 3,28-3,22 (м, 2H), 3,10-3,02 (м, 3H), 2,42 (м, 4H), 2,24 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,66-1,50 (м, 4H), 0,82 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 172: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(6-(пиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамид
Figure 00000256
Соединение 172
Соединение 172 получали способом, сходным с описанным ниже в примере 183.
Аналитические данные: ЖХ/МС: 600,75 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,58% (детекция при 210-370 нм) (Rt 3,460; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 9,59 (шир. с, 1H), 8,92 (шир. с, 2H), 8,47 (с, 1H), 8,16 (с, 1H), 7,92 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,39 (шир. с, 1H), 7,21 (шир. с, 1H), 7,01 (д, 1H, J=8,8 Гц), 5,87 (с, 1H), 4,29 (д, 2H, J=5,2 Гц), 3,75 (кв., 4H, J=5,2 Гц), 3,22 (м, 4H), 3,12 (м, 3H), 2,75 (м, 1H), 2,69 (с, 3H), 2,68 (с, 3H), 2,23 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,97 (м, 4H), 1,44 (м, 4H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 173: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-5-(6-(пиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамид
Figure 00000257
Соединение 173
Соединение 173 получали способом, сходным с описанным ниже в примере 183.
Аналитические данные: ЖХ/МС: 559,55 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,43% (детекция при 210-370 нм) (Rt 3,731; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 8,86 (с, 2H), 8,48 (шир. с, 1H), 8,21 (шир. с, 1H), 7,94 (шир. с, 1H), 7,45 (шир. с, 1H), 7,25 (шир. с, 1H), 7,02 (д, 1H, J=8,4 Гц), 5,87 (с, 1H), 4,29 (д, 2H, J=3,6 Гц), 3,83 (м, 3H), 3,76 (шир. с, 4H), 3,30-3,15 (м, 7H), 3,10 (м, 1H), 2,25 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,75-1,50 (м, 4H), 0,84 (т, 3H).
Пример 174: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(пиразин-2-ил)бензамида
Figure 00000258
Соединение 174
Стадия 1: Синтез метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата
К перемешанному раствору 5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)амино)-2-метилбензоата (10 г, 23 ммоль) и ацетальдегида (2,99 г, 68 ммоль) в дихлорэтане (100 мл) добавляли уксусную кислоту (8,18 г, 136 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 20 минут. При 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (14,45 г, 68 ммоль), и перемешивали смесь в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляли в условиях пониженного давления, добавляли воду, а затем экстрагировали 5% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением 9 г указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки.
Стадия 2: Синтез метил-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензоата
К перемешанному раствору метил-5-бром-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метилбензоата (2,0 г, 4,3 ммоль) и бис(пинаколато)дибора (5,42 г, 21 ммоль) в диоксане в атмосфере аргона добавляли калия ацетат (1,25 г, 12,82 ммоль). Добавляли PdCl2(dppf)DCM (0,35 г, 0,42 ммоль), и нагревали смесь при 80°C в течение 3 ч в атмосфере аргона. Добавляли воду, а затем экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (1,3 г, 70%).
Стадия 3: Синтез метил-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(пиразин-2-ил)бензоата
К перемешанному раствору метил-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензоата (0,50 г, 1,15 ммоль) и 2-бромпиразина (0,24 г, 1,49 ммоль) в смеси диоксан/вода) в атмосфере аргона добавляли Cs2CO3 (0,94 г, 2,89 ммоль). Добавляли PdCl2(PPh3)2 (0,08 г, 0,11 ммоль), и нагревали смесь при 100°C в течение 3 ч в атмосфере аргона. Добавляли воду, а затем экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,29 г, 53%).
Стадия 4: Синтез трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(пиразин-2-ил)фенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата
К перемешанному раствору метил-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(пиразин-2-ил)бензоата (0,29 г, 0,62 ммоль) в этаноле (3 мл) при комнатной температуре добавляли водный NaOH (0,037 г, 0,93 ммоль). После перемешивания при 60°C в течение 1 ч, смесь концентрировали в условиях пониженного давления, подкисляли до pH 4 и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением 0,24 г неочищенной кислоты. К перемешанному раствору неочищенной кислоты (0,24 г, 0,52 ммоль) и 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она (0,16 г, 1,05 ммоль) в DMSO (3 мл) добавляли PYBOP (0,41 г, 0,79 ммоль). После перемешивания в течение ночи, смесь выливали на ледяную воду и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали в условиях пониженного давления с получением 0,3 г указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки.
Стадия 5: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(пиразин-2-ил)бензамида
К перемешанному раствору трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(пиразин-2-ил)фенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (0,3 г, 0,51 ммоль) в DCM (3 мл) добавляли TFA (1 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч, смесь концентрировали в условиях пониженного давления. Добавляли насыщенный раствор NaHCO3, а затем экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои промывали водой и солевым раствором, сушили и концентрировали в условиях пониженного давления с получением 0,24 г указанного в заголовке соединения, которое использовали непосредственно без дополнительной очистки.
Стадия 6: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(пиразин-2-ил)бензамида трифторацетата
К перемешанному раствору 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(пиразин-2-ил)бензамида (0,24 г, 0,51 ммоль) в метаноле (3 мл) при 0°C добавляли формалин (0,15 г, 5,1 ммоль). Добавляли цианборгидрид натрия (0,06 г, 1,0 ммоль), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли воду, а затем экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали в условиях пониженного давления. Полученное твердое вещество очищали методом препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,12 г, 47%). Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 517,50 (M+1)+; ВЭЖХ: 99,49% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,072; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (шир. с, 1H), 9,45 (шир. с, 1H), 9,26 (с, 1H), 8,71 (с, 1H), 8,61 (с, 1H), 8,23 (т, 1H), 7,92 (с, 1H), 7,74 (с, 1H), 5,88 (с, 1H), 4,31 (д, 2H, J=4 Гц), 3,13 (м, 3H), 2,78 (м, 1H), 2,69 (д, 6H, J=4,8 Гц), 2,28 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 2,12 (с, 3H), 1,96-1,92 (м, 4H), 1,45 (м, 3H), 0,84 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 175: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(5-метилпиразин-2-ил)бензамида
Figure 00000259
Соединение 175
Стадия 1: Синтез метил-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(5-метилпиразин-2-ил)бензоата
К перемешанному раствору метил-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензоата (0,40 г, 0,92 ммоль) и 2-бром-5-метилпиразина (0,21 г, 1,19 ммоль) в смеси диоксан/вода в атмосфере аргона добавляли Cs2CO3 (0,75 г, 2,30 ммоль). Добавляли PdCl2(PPh3)2 (0,064 г, 0,092 ммоль), и нагревали смесь при 100°C в течение 3 ч в атмосфере аргона. Добавляли воду, а затем экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,3 г, 56%).
Стадия 2: Синтез трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(5-метилпиразин-2-ил)фенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата
К раствору метил-3-(((1r,4r)-4-((трет-бутоксикарбонил)амино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(5-метилпиразин-2-ил)бензоата (0,29 г, 0,49 ммоль) в этаноле (3 мл)) при комнатной температуре добавляли водный NaOH (0,029 г, 0,75 ммоль). После перемешивания при 60°C в течение 1 ч, смесь концентрировали в условиях пониженного давления, подкисляли до pH 4 и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением 0,25 г неочищенной кислоты. К перемешанному раствору неочищенной кислоты (0,25 г, 0,44 ммоль) и 3-(аминометил)-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она (0,13 г, 0,88 ммоль) в DMSO (3 мл) при комнатной температуре добавляли PYBOP (0,34 г, 0,66 ммоль). После перемешивания в течение ночи, смесь выливали на ледяную воду и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои промывали водой, сушили и концентрировали в условиях пониженного давления с получением 0,2 г указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки.
Стадия 3: Синтез 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(5-метилпиразин-2-ил)бензамида
К перемешанному раствору трет-бутил-((1r,4r)-4-((3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-2-метил-5-(5-метилпиразин-2-ил)фенил)(этил)амино)циклогексил)карбамата (0,2 г, 0,33 ммоль) в DCM (3 мл) добавляли TFA (1 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч, смесь концентрировали в условиях пониженного давления. Добавляли насыщенный раствор NaHCO3, а затем экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои промывали водой и солевым раствором, сушили и концентрировали в условиях пониженного давления с получением 0,15 г указанного в заголовке соединения, которое использовали без дополнительной очистки.
Стадия 4: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(5-метилпиразин-2-ил)бензамида трифторацетата
К перемешанному раствору 3-(((1r,4r)-4-аминоциклогексил)(этил)амино)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(5-метилпиразин-2-ил)бензамида (0,15 г, 0,29 ммоль) в метаноле (3 мл) при 0°C добавляли формалин (0,089 г, 2,98 ммоль). Добавляли цианборгидрид натрия (0,037 г, 0,59 ммоль), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли воду, а затем экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали в условиях пониженного давления. Полученное твердое вещество дополнительно очищали методом препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,12 г, 75%). Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 531,50 (M+1)+; ВЭЖХ: 88,93% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,130; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B; 0,05% TFA в ацетонитриле; объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,49 (шир. с, 1H), 9,54 (шир. с, 1H), 9,10 (с, 1H), 8,59 (с, 1H), 8,23 (т, 1H), 7,88 (с, 1H), 7,69 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,30 (шир. с, 2H), 3,12 (м, 3H), 2,77-2,69 (м, 7H), 2,53 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,95-1,91 (м, 4H), 1,44 (м, 4H), 0,83 (т, 3H).
Пример 176: Синтез 5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000260
Соединение 176
Стадия 1: Синтез 6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила
К перемешанному раствору t-BuOK (1 г, 8,9 ммоль) в DMSO (15 мл) при к.т. добавляли цианацетамид (0,824 г, 9,8 ммоль) и (E)-гепт-3-ен-2-он (1 г, 8,91 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при к.т. Дополнительно добавляли t-BuOK (3 г, 26,7 ммоль), и перемешивали реакционную смесь на воздухе при к.т. По завершении реакции, смесь разбавляли H2O и медленно 4н HCl. Выпадшие в осадок твердые вещества фильтровали, промывали водой и сушили. Неочищенный продукт растирали с эфиром с получением указанного в заголовке соединения (0,5 г, 33%).
Стадия 2: Синтез 3-(аминометил)-6-метил-4-пропилпиридин-2(1H)-она
К раствору 6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (1,3 г, 7,38 ммоль) в метаноле и водн. растворе аммиака (50 мл, 9/1) добавляли каталитическое количество никеля Ренея. Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода (подача из баллона) в течение 5 ч. После завершения реакции, смесь фильтровали через слой целита, и концентрировали фильтрат в условиях пониженного давления с получением указанного в заголовке соединения (1,2 г, 92%).
Стадия 3: Синтез 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида
К раствору метил-5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (14 г, 39,43 ммоль) в этаноле (100 мл) добавляли водный NaOH (2,36 г, 59,15 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции, этанол удаляли в условиях пониженного давления, подкисляли до pH 6 с использованием разбавленной HCl и корректировали значение pH до 4 с использованием лимонной кислоты. Проводили экстрагирование с использованием этилацетата. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (13,9 г, 99%).
Полученную кислоту (0,6 г, 1,75 ммоль) затем растворяли в DMSO (5 мл), и добавляли к ней 3-(аминометил)-6-метил-4-пропилпиридин-2(1H)-он (0,64 г, 3 ммоль) и триэтиламин (0,49 г, 5,26 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли к ней PyBOP (1,36 г, 2,63 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. После завершения реакции, реакционную смесь выливали на лед и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали с получением неочищенного вещества, которое затем очищали путем промывания растворителем с получением указанного в заголовке соединения (0,75 г, 84,7%).
Стадия 4: Синтез 5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (0,3 г, 0,59 ммоль) и пинаколового эфира 4-((морфолино)метил)фенилбороновой кислоты (0,22 г, 0,71 ммоль) в смеси диоксан/вода (5 мл +1 мл) добавляли Na2CO3 (0,23 г, 2,14 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,068 г, 0,059 ммоль), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,25 г, 70%). ЖХ/МС: 601,55 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,21% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,380; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 8,16 (шир. с, 1H), 7,57 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,38 (т, 3H, J=6,8 Гц), 7,21 (с, 1H), 5,89 (с, 1H), 4,30 (м, 2H), 3,84-3,82 (м, 2H), 3,57 (шир. с, 3H), 3,48 (с, 3H), 3,28-3,22 (м, 2H), 3,09-3,02 (м, 3H), 2,36 (шир. с, 4H), 2,25 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,67-1,54 (м, 6H), 0,93 (т, 3H, J=7 Гц), 0,84 (т, 3H), 2H сливается с пиком растворителя.
Пример 177: Синтез N-((5-бром-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000261
Соединение 177
Стадия 1: Синтез метил-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксилата
К перемешанному раствору метил-5-бром-3-(этил-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензоата (1 г, 2,82 ммоль) и сложного пинаколового эфира 4-((морфолино)метил)фенилбороновой кислоты (1,03 г, 3,38 ммоль) в смеси диоксан/вода (10 мл + 2 мл) добавляли Na2CO3 (1,08 г, 10,14 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли Pd(PPh3)4 (0,325 г, 0,28 ммоль), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 2 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (0,75 г, 59%).
Стадия 2: Синтез 5-бром-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила
К перемешанной суспензии 4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (5 г, 33,78 ммоль) в AcOH (25 мл) при к.т. по каплям добавляли бром (2,5 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч. Растворитель удаляли в условиях пониженного давления. Полученное твердое вещество перекристаллизовывали введением в горячий EtOH и H2O с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (5,5 г, 72%).
Стадия 3: Синтез 3-(аминометил)-5-бром-4,6-диметилпиридин-2(1H)-она
К перемешанному раствору 5-бром-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (1 г, 4,44 ммоль) и NiCl2·6H2O (0,21 г, 0,89 ммоль) в метаноле при 0°C порциями добавляли NaBH4 (0,68 г, 17,78 ммоль). Затем реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. По завершении реакции, смесь подкисляли с использованием 3н HCl и перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Растворитель удаляли в условиях пониженного давления. Остаток промывали диэтиловым эфиром и подщелачивали добавлением водн. NH4OH. Соединение экстрагировали введением в 10% MeOH в DCM и сушили над безводным Na2SO4 с получением указанного в заголовке соединения (0,96 г, 94%), которое использовали как есть в реакции сочетания.
Стадия 4: Синтез N-((5-бром-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
К раствору соединения 7 (0,5 г, 1,11 ммоль) в EtOH/H2O (4/1) (10 мл) добавляли водный NaOH (0,06 г, 1,66 ммоль), и перемешивали при 60°C в течение 1 ч. После завершения реакции, этанол удаляли в условиях пониженного давления, реакционную массу подкисляли до pH 6 с использованием разбавленной HCl и корректировали значение pH до 4 с использованием лимонной кислоты. Проводили экстрагирование с использованием 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили и концентрировали с получением соответствующей кислоты (0,35 г, 72%).
Полученную кислоту (0,266 г, 0,61 ммоль) затем растворяли в DMSO (2,5 мл), и добавляли к ней 3-(аминометил)-5-бром-4,6-диметилпиридин-2(1H)-он (0,42 г, 1,83 ммоль) и триэтиламин (0,095 г, 0,91 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли к ней PYBOP (0,63 г, 1,22 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. После завершения реакции, реакционную массу выливали на лед и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали с получением неочищенного вещества, которое затем очищали путем промывания растворителем с получением указанного в заголовке соединения (0,035 г, 7,6%).
ЖХ/МС: 653,65 (M+1)+, ВЭЖХ: 89,23% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,421; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30ºC; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 9,88 (шир. с,1H), 8,30 (шир. с, 1H), 7,76 (м, 2H), 7,57 (д, 2H, J=7,6 Гц), 7,44 (шир. с, 1H), 7,27 (шир. с, 1H), 4,39 (м, 4H), 3,99-3,96 (м, 5H), 3,84 (д, 2H, J=8,4 Гц), 3,65-3,62 (м, 2H), 3,28-3,23 (м, 4H), 3,12 (м, 4H), 2,35 (с, 3H), 2,31 (с, 3H), 2,26 (с, 3H), 1,65-1,55 (м, 4H), 0,84 (т, 3H).
Пример 178: 4-хлор-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000262
Соединение 178
Соединение 178 получали способом, сходным с описанным в примере 177. Аналитические данные: ЖХ/МС: 593,60 (M+1)+; ВЭЖХ: 95,50% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,566; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с,1H), 8,34 (м, 1H), 7,61-7,24 (м, 6H), 5,86 (с, 1H), 4,29 (м, 2H), 3,86-3,84 (м, 2H), 3,57-3,49 (м, 6H), 3,25-3,16 (м, 5H), 2,36 (м, 4H), 2,21 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,68-1,58 (м, 4H), 0,86 (т, 3H).
Пример 179: Синтез 5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((5-фтор-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Figure 00000263
Соединение 179
Стадия 1: Синтез 5-фтор-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила
К перемешанному раствору 2-цианацетамида (689 мг, 8,2 ммоль) в безводном EtOH (7,0 мл) при 75°C добавляли 3-фторпентан-2,4-дион (880 мг, 7,5 ммоль), а затем пиперидин (96 мкл, 0,97 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при указанной температуре в течение 3 часов, реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры, после чего хранили в холодильнике в течение 4 суток. Бежевое твердое вещество собирали путем фильтрования и промывали холодным EtOH (4×0,4 мл) до тех пор, пока фильтрат не становился прозрачным. Полученное бежевое твердое вещество сушили в условиях вакуума при 40°C в течение 5 часов с получением указанного в заголовке соединения (733 мг, 58%) в виде бежевого твердого вещества. ЖХ/МС 97%, 1,18 мин (ЖХ/МС способ «3,5 минуты»); m/z=166,9. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 13,67 (шир. с, 1 H) 2,46 (д, J=2,05 Гц, 3 H) 2,45 (д, J=2,84 Гц, 3 H).
Стадия 2: Синтез 3-(аминометил)-5-фтор-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-она
0,05M раствор 5-фтор-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (731 мг, 4,4 ммоль) в 1,75M NH3 в MeOH (87 мл) пропускали через H-Cube при 80°C и давлении 50 бар со скоростью потока 1 мл/мин. Полученный раствор концентрировали в условиях вакуума. Полученное твердое вещество разделяли на две партии, и очищали 350 мг неочищенного продукта методом колоночной хроматографии (25 г SNAP картридж, Isolera, 0-25% MeOH (с добавлением 10% NH4OH)/CH2Cl2) с получением указанного в заголовке соединения (307 мг, 20%) в виде не совсем белого твердого вещества и смеси (1/1) продукта/исходного вещества. ЖХ/МС (ELS) 100%, 0,23 мин (ЖХ/МС способ «3,5 минуты»), m/z=170,9. 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ ч.млн. 3,79 (с, 2 H) 2,31 (д, J=2,84 Гц, 3 H) 2,25 (д, J=2,05 Гц, 3 H).
Стадия 3: Синтез 5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((5-фтор-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида
Перемешанный раствор 3-[этил(оксан-4-ил)амино]-2-метил-5-[4-(морфолин-4-илметил)фенил]бензойной кислоты (100 мг, 0,22 ммоль) в безводном DMF (4,0 мл) при 0°C по каплям обрабатывали HATU (99 мг, 0,26 ммоль) и DIPEA (75 мкл, 0,43 ммоль) в атмосфере подаваемого из баллона азота. Полученный раствор перемешивали в течение 10 минут, а затем обрабатывали 3-(аминометил)-5-фтор-4,6-диметил-1,2-дигидропиридин-2-оном (50%, 81 мг, 0,24 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при 0°C в течение 30 минут, а затем перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Реакционную смесь распределяли между водой (20 мл) и CH2Cl2 (15 мл). Слои разделяли, и экстрагировали водную фазу CH2Cl2 (3×15 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным раствором NaHCO3 (водн.) (40 мл), водой (2×25 мл), солевым раствором (20 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в условиях вакуума. Неочищенный остаток очищали методом колоночной флэш-хроматографии (10 г SNAP картридж, Isolera, 0-6% MeOH в CH2Cl2), а затем растворяли в смеси EtOAc (40 мл) и CH2Cl2 (10 мл), и промывали водой (6×30 мл), солевым раствором (2×30 мл), сушили (MgSO4), фильтровали и концентрировали в условиях вакуума. Твердое вещество тщательно высушивали в условиях вакуума при 40°C в течение 40 часов с получением 5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((5-фтор-4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-4-метил-4'-(морфолинометил)-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамида (93 мг, 73%) в виде порошкообразного белого твердого вещества. ЖХ/МС 100%, 2,76 мин (ЖХ/МС способ «7 минут»), m/z=591,2; 1H-ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 11,79 (с, 1H), 7,44 (д, J=8,1 Гц, 2H), 7,34 (д, J=8,4 Гц, 3H), 7,08 (т, J=6,0 Гц, 1H), 4,56 (д, J=6,0 Гц, 2H), 3,95 (д, J=11,2 Гц, 2H), 3,76-3,66 (м, 4H), 3,51 (с, 2H), 3,31 (тд, J=11,3, 2,7 Гц, 2H), 3,10 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 3,00 (тт, J=9,6, 4,6 Гц, 1H), 2,45 (с, 4H), 2,43 (д, J=1,8 Гц, 3H), 2,34 (с, 3H), 2,13 (д, J=2,7 Гц, 3H), 1,74-1,62 (м, 4H), 0,89 (т, J=7,0 Гц, 3H). Один протон, предположительно, совпадает с пиком растворителя.
Пример 180: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-2-метил-5-(1-метил-1H-имидазол-4-ил)бензамид
Figure 00000264
Соединение 180
Соединение 180 получали способом, сходным с описанным в примере 169.
Аналитические данные: ЖХ/МС: 519,55 (M+1)+; ВЭЖХ: 89,93% (детекция при 210-370 нм) (Rt 3,676; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,50 (шир. с, 1H), 9,77 (шир. с, 1H), 9,11 (с, 1H), 8,20-8,17 (м, 2H), 7,60 (с, 1H), 7,38 (с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,30 (д, 2H, J=5,2 Гц), 3,87 (с, 3H), 3,11 (м, 3H), 2,68-2,67 (м, 6H), 2,72-2,64 (м,1H), 2,22 (с, 6H), 2,11 (с, 3H), 1,99-1,87 (м, 4H), 1,48-1,40 (м, 4H), 0,81 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 181: 4'-(азетидин-1-карбонил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3-карбоксамид
Figure 00000265
Соединение 181
Аналитические данные: ЖХ/МС: 598,60 (M+1)+; ВЭЖХ: 94,88% (детекция при 210-370 нм) (Rt 3,823; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,44 (шир. с, 1H), 9,56 (шир. с, 1H), 8,21 (м, 1H), 8,05-7,96 (м, 4H), 7,54 (шир. с, 1H), 7,38 (шир. с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,82-4,81 (м, 2H), 4,31 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,69 (т, 2H, J=5,6 Гц), 3,17-3,14 (м, 3H), 2,77 (шир. с, 1H), 2,69-2,68 (м, 6H), 2,26 (с, 3H), 2,22 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,97-1,91 (м, 4H), 1,46-1,44 (м, 4H), 0,85 (т, 3H, J=6,8 Гц), 2H сливается с пиком растворителя.
Пример 182: N3-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(((1r,4r)-4-(диметиламино)циклогексил)(этил)амино)-N4'-(3-гидроксипропил)-4-метил-[1,1'-бифенил]-3,4'-дикарбоксамид
Figure 00000266
Соединение 182
Аналитические данные: ЖХ/МС: 617,70 (M+1)+; ВЭЖХ: 93,27% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,009; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 9,47 (шир. с, 1H), 8,48 (м, 1H), 8,23 (шир. с, 1H), 7,93-7,73 (м, 4H), 7,47 (шир. с, 1H), 7,31 (шир. с, 1H), 5,87 (с, 1H), 4,31-4,30 (м, 2H), 3,47 (т, 2H, J=6 Гц), 3,34-3,33 (м, 2H), 3,13 (шир. с, 3H), 2,69-2,68 (м, 6H), 2,26 (с, 3H), 2,21 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,96 (м, 4H), 1,69 (т, 2H, J=6,6 Гц), 1,45 (м, 4H), 0,85 (т, 3H), 1H сливается с пиком растворителя.
Пример 183: 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамид
Figure 00000267
Соединение 183
Аналитические данные: ЖХ/МС: 601,65 (M+1)+; ВЭЖХ: [99,85% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,256; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,48 (шир. с, 1H), 9,84 (шир. с, 1H), 8,47 (шир. с, 1H), 8,17 (шир. с, 1H), 7,94 (с, 1H), 7,41 (м, 2H), 7,04 (д, 1H, J=8 Гц), 5,89 (с, 1H), 4,44 (д, 2H, J=12Гц), 4,30 (с, 2H), 3,84 (шир. с, 2H), 3,52 (д, 2H, J=9Гц), 3,12-3,24 (м, 8Гц), 2,85 (с, 3H), 2,25 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,54-1,65 (м, 6H), 0,84-0,94 (м, 6H). Три протона сливаются с пиком растворителя.
Пример 184: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-(пиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000268
Соединение 184
Раствор 5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида (0,7 г, 1,38 ммоль), соответствующего сложного эфира бороновой кислоты (0,601 г, 2,08 ммоль) и тетракис (0,160 г, 0,138 ммоль) в диоксане (10 мл) продували аргоном в течение 10 мин. К раствору добавляли водн. Na2CO3 (0,529 г, 4,99 ммоль, 2 мл), и снова дегазировали в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 16 ч. По завершении реакции, смесь концентрировали с получением неочищенного вещества, которое очищали на колонке с получением указанного в заголовке соединения (0,50 г, 61,5%). Аналитические данные: ЖХ/МС: 587,55 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,87% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,217; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 8,38 (д, 1H, J=2,4 Гц), 8,14 (т, 1H, J=4,4 Гц), 7,78 (дд, 1H, J=2,4, 9,2 Гц), 7,35 (д, 1H, J=1,2 Гц), 7,15 (д, 1H, J=1,2 Гц), 6,85 (д, 1H, J=8,4 Гц), 5,88 (с, 1H), 4,29 (д, 2H, J=4,8 Гц), 3,82 (д, 2H, J=10 Гц), 3,43 (т, 4H, J=5,2 Гц), 3,24 (т, 2H, J=11,2 Гц), 3,10-2,98 (м, 3H), 2,78 (т, 4H, J=4,8 Гц), 2,22 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,67-1,47 (м, 6H), 0,93 (т, 3H, J=7,2 Гц), 0,81 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 185: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(пиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000269
Соединение 185а
Раствор 5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,5 г, 0,99 ммоль), 1-(5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-ил)пиперазина (0,43 г, 1,48 ммоль) и тетракис (0,114 г, 0,09 ммоль) в диоксане (7 мл) продували аргоном в течение 10 мин. К раствору добавляли водн. Na2CO3 (0,377 г, 3,5 ммоль, 2 мл), и снова дегазировали в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 16 ч. По завершении реакции, смесь концентрировали с получением неочищенного вещества, которое очищали на колонке с получением указанного в заголовке соединения (0,35 г, 60,13%).
Аналитические данные: ЖХ/МС: 586,36 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,03% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,10; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 8,37 (шир. с, 1H), 8,17 (шир. с, 1H), 7,78 (д, 1H, J=7,6Гц), 7,35 (с,1H), 7,15 (с, 1H), 6,85 (д, 1H, J=8,8Гц), 5,99 (с, 1H), 4,34 (д, 2H, J=4Гц), 3,83-3,81 (м, 2H), 3,42(шир. с, 4H), 3,27-3,21 (м, 3H), 3,02-3,01 (м, 3H), 2,77 (шир. с, 4H), 2,22 (с, 3H), 2,13 (с, 3H), 1,67-1,49 (м, 4H), 1,13 (с, 3H), 1,12 (с, 3H), 0,81 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 186: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000270
Соединение 186
Стадия 1: Синтез 4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила
К перемешанному раствору 2-цианацетамида (4,1 г, 49 ммоль) и t-BuOK (4,9 г, 44,6 ммоль) в DMSO при 0°C добавляли 5-метилгекс-3-ен-2-он (5 г, 44,6 ммоль), и перемешивали в течение 30 мин. К реакционной смеси дополнительно добавляли t-BuOK (15 г, 133,9 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре еще в течение 1 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой (50 мл) и медленно подкисляли добавлением 4н HCl. Осадок фильтровали, промывали водой и сушили с получением соединения B (2,2 г, 28,2%).
Стадия 2: Синтез 3-(аминометил)-4-изопропил-6-метилпиридин-2(1H)-она
К раствору цианосоединения B (2,2 г, 12,5 ммоль) в метаноле и водн. растворе аммиака (10 мл, 4/1) добавляли каталитическое количество никеля Ренея. Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода (подача из баллона) в течение 4 ч. После завершения реакции, смесь фильтровали через слой целита, и концентрировали фильтрат в условиях пониженного давления с получением указанного в заголовке соединения (2 г, 91%).
Стадия 3: Синтез 5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
5-Бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензойную кислоту (2,0 г, 0,0058 моль) растворяли в DMSO (20 мл), и добавляли к ней 3-(аминометил)-4-изопропил-6-метилпиридин-2(1H)-он (2,1 г, 11,7 ммоль) и триэтиламин (0,585 г, 5,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, после чего добавляли к ней PyBOP (4,5 г, 8,7 ммоль), и продолжали перемешивание в течение ночи. После завершения реакции, реакционную смесь выливали на лед и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили, концентрировали с получением неочищенного вещества, которое затем очищали путем промывания растворителем с получением указанного в заголовке соединения (2,0 г, 68,9%).
Стадия 4: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида
Раствор 5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,3 г, 0,99 ммоль), соответствующего сложного пинаколового эфира бороновой кислоты (0,216 г, 0,715 ммоль) и тетракис (0,068 г, 0,0596 ммоль) в диоксане (10 мл) продували аргоном в течение 10 мин. К раствору добавляли водн. Na2CO3 (0,227 г, 2,14 ммоль, 2 мл), и снова дегазировали в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 16 ч. По завершении реакции, смесь концентрировали с получением неочищенного вещества, которое очищали с использованием преп. ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,12 г, 33,6%).
Аналитические данные для трифторацетата: MS: 601,55 (M+1)+. ВЭЖХ: 96,78% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,197; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,49 (шир. с, 1H), 9,94 (шир. с, 1H), 8,493 (д, 1H, 6 Гц), 7,957 (шир. с, 1H), 7,65-7,258 (м, 3H), 7,056 (д, 1H, 8,4 Гц), 6,014 (с, 1H), 4,46 (д, 2H, 12,8 Гц), 4,349 (д, 2H, 4,8 Гц), 3,849 (д, 2H, 7,2 Гц), 3,530 (д, 2H, 10,8 Гц), 3,28-3,075 (м, 10H), 2,85 (с, 3H), 2,26 (шир. с, 3H), 2,14 (с, 3H), 1,64 (шир. с, 2H), 1,56 (шир. с, 2H), 1,14 (с, 3H), 1,12 (с, 3H), 0,845 (т, 3H, 7,6 Гц).
Пример 187: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-5-(6-(4-(1-метилпиперидин-4-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000271
Соединение 187
К перемешанному раствору N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-5-(6-(пиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида (0,1 г, 0,179 ммоль) и 1-метилпиперидин-4-она (0,04 г, 0,358 ммоль) в дихлорэтане (2 мл) добавляли уксусную кислоту (0,07 мл, 1,07 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 15 мин. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (0,113 г, 0,53 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение ночи при комнатной температуре. По завершении реакции, реакционную смесь гасили добавлением водного бикарбоната натрия, органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом преп. ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде трифторацетата (0,08 г, 22,72%).
Аналитические данные для трифторацетата: ESMS: 656,41 (M+1)+; ВЭЖХ: [97,76% (детекция при 210-370 нм) (Rt 3,667; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,49 (шир. с, 1H), 10,33 (шир. с, 1H), 9,86 (шир. с, 1H), 8,49 (шир. с, 1H), 8,20 (шир. с, 1H), 7,96 (шир. с, 1H), 7,24-7,39 (м, 2H), 7,07 (д, 1H, J=9Гц), 5,87 (с, 1H), 4,47 (шир. с, 2H), 4,28 (д, 2H, J=4Гц), 3,84 (с, 2H), 3,60 (д, 5H, J=11Гц), 3,16-3,28 (м, 7H), 2,99 (шир. с, 2H), 2,79 (с, 3H), 2,11-2,25 (м, 11H), 1,87-1,90 (м, 2H), 1,56-1,64 (м, 3H), 0,85 (с, 3H).
Пример 188: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(4-(1-метилпиперидин-4-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000272
Соединение 188
К перемешанному раствору 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(пиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида (0,3 г, 0,51 ммоль) и 1-метилпиперидин-4-она (0,086 г, 0,76 ммоль) в дихлорэтане (5 мл) добавляли уксусную кислоту (0,18 г, 3,06 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (0,33 г, 1,55 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 ч. По завершении реакции, реакционную смесь гасили добавлением водного бикарбоната натрия, органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом преп. ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (0,12 г, 34,38%).
Аналитические данные: ЖХ/МС: 683,45 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,65% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,04; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,47 (шир. с, 1H), 10,24 (шир. с, 1H), 9,79 (шир. с, 1H), 8,46 (шир. с, 1H), 8,19 (шир. с, 1H), 7,92 (шир. с, 1H), 7,38 (шир. с, 1H), 7,19 (шир. с, 1H), 7,06 (д, 1H, J=9,2 Гц), 6,0 (с, 1H), 4,47 (шир. с, 2H), 4,34 (д, 2H, J=7,6 Гц), 3,83 (д, 2H J=8,8 Гц), 3,6 (д, 4H, J=12 Гц), 3,43 (м, 1H), 3,27-3,16 (м, 8H), 2,99-2,97 (м, 3H), 2,79 (с, 3H), 2,37-2,33 (м, 3H), 2,24 (шир. с, 3H), 2,13 (с, 3H), 1,90-1,82 (м, 2H), 1,64-1,53 (м, 4H), 1,13 (с, 3H), 1,12(с, 3H), 0,83 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 189: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-(4-(1-метилпиперидин-4-ил)пиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000273
Соединение 189
К перемешанному раствору 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-(пиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида (0,45 г, 0,76 ммоль) и 1-метилпиперидин-4-она (0,173 г, 1,53 ммоль) в дихлорэтане (10 мл) добавляли уксусную кислоту (0,276 г, 4,6 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (0,488 г, 2,3 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 ч. По завершении реакции, реакционную смесь гасили добавлением водного бикарбоната натрия, органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (0,215 г, 41%).
Аналитические данные: ЖХ/МС: 684,45 (M+1)+; ВЭЖХ: 93,41% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,140; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 8,38 (с, 1H), 8,13 (шир. с, 1H), 7,78 (д, 1H, J=9 Гц), 7,35 (с, 1H), 7,15 (с, 1H), 6,8 (д, 1H, J=9), 5,88 (с, 1H), 4,28 (д, 2H, J=4 Гц), 3,82 (д, 2H, 10 Гц), 3,49 (с, 4H), 3,24 (т, 2H, J=11 Гц), 3,0-3,08 (м, 3H), 2,78 (д, 2H, J=10 Гц), 2,56 (с, 4H), 2,22 (с, 3H), 2,13 (с, 1H), 2,11 (с, 1H), 1,57-1,86 (м, 6H), 1,46-1,55 (м, 6H), 0,91 (т, 3H, J=8 Гц), 0,81 (т, 3H, J=6 Гц).
Пример 190: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000274
Соединение 190
Стадия 1: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
Раствор 5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,4 г, 0,793 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиколинальдегида (0,28 г, 1,19 ммоль) и тетракис (0,091 г, 0,079 ммоль) в диоксане (5 мл) продували аргоном в течение 10 мин. К раствору добавляли водн. Na2CO3 (0,301 г, 2,83 ммоль), и снова дегазировали в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 16 ч. По завершении реакции, смесь концентрировали с получением неочищенного вещества, которое очищали на колонке с получением указанного в заголовке соединения (0,28 г, 66,50%).
Стадия 2: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
К перемешанному раствору 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,28 г, 0,528 ммоль) и морфолина (0,07 г, 0,79 ммоль) в дихлорэтане (3 мл) добавляли уксусную кислоту (0,19 г, 3,16 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (0,33 г, 1,55 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 ч. По завершении реакции, реакционную смесь гасили добавлением водного бикарбоната натрия, органическую фазу разделяли, и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое очищали методом преп. ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (0,12 г, 38,70%).
Аналитические данные для трифторацетата: ЖХ/МС: 601,36 (M+1)+; ВЭЖХ: 95,48% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,28; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,45 (шир. с, 1H), 10,45 (шир. с, 1H), 8,95 (с, 1H), 8,23-8,21 (м, 2H), 7,62-7,52 (м, 2H), 7,34 (шир. с, 1H), 6,01 (с, 1H), 4,55 (с, 2H), 4,35 (д, 2H, J=5,2 Гц), 3,84 (шир. с, 6H), 3,29-3,13 (м, 8H), 2,27 (с, 3H), 2,13 (с, 3H), 1,66-1,56 (м, 4H), 1,13 (с, 3H), 1,12 (с, 3H), 0,83 (т, 3H, J=6,8). 2H протоны сливаются с пиками растворителя.
Пример 191: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000275
Соединение 191
Стадия 1: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида
Раствор 5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида (0,5 г, 0,99 ммоль), 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиколинальдегида (0,346 г, 1,48 ммоль), и тетракис (0,114 г, 0,99 ммоль) в диоксане (10 мл) продували аргоном в течение 10 мин. К раствору добавляли водн. Na2CO3 (0,378 г, 3,56 ммоль, 1,8 мл), и снова дегазировали в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 16 ч. По завершении реакции, смесь концентрировали с получением неочищенного вещества, которое очищали на колонке с получением указанного в заголовке соединения (0,40 г, 76,0%).
Стадия 2: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
К перемешанному раствору 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(6-формилпиридин-3-ил)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида (0,315 г, 0,59 ммоль) в EDC (8 мл) при 0°C добавляли морфолин (0,1 г, 1,18 ммоль), и перемешивали при к.т. в течение 10 мин. Затем добавляли NaBH(OAc)3 (0,377 г, 1,78 ммоль), и перемешивали в течение 16 ч. По завершении реакции, реакционную смесь гасили добавлением воды. Добавляли MeOH (8 мл), слои разделяли и экстрагировали 10% MeOH в DCM и очищали методом колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (0,2 г, 56%).
Аналитические данные: ЖХ/МС: 602,60 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,12% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,374; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,48 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,19 (т, 1H, J=4 Гц), 7,99-8,02 (м, 1H), 7,49 (т, 2H, J=8 Гц), 7,26 (с, 1H), 5,88 (с, 1H), 4,29 (д, 2H, J=4 Гц), 3,82 (д, 2H, J=10 Гц), 3,59-3,61 (м, 6H), 3,24 (т, 2H, J=12 Гц), 2,99-3,10 (м, 3H), 2,42 (с, 4H), 2,25 (с, 3H), 2,11 (с, 3H), 1,48-1,67 (м, 6H), 0,926 (т, 3H, J=8 Гц), 0,824 (т, 3H, J=7 Гц).
Пример 192: N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)пиридин-3-ил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамид
Figure 00000276
Соединение 192
Стадия 1: Синтез трет-бутил-(1-(5-(3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метилфенил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)карбамата (9):
К перемешанному раствору 5-бром-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (0,35 г, 0,736 ммоль) и соответствующего сложного пинаколового эфира бороновой кислоты (0,35 г, 0,88 ммоль) в диоксане (5 мл) добавляли Na2CO3 (0,28 г, 2,65 ммоль), и продували раствор аргоном в течение 15 мин. Затем добавляли тетракис (0,085 г, 0,073 ммоль), и снова продували аргоном в течение 10 мин. Реакционную массу нагревали при 100°C в течение 4 ч. По завершении реакции, реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали 10% MeOH в DCM. Объединенные органические слои сушили над Na2SO4, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и очищали методом колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (0,39 г, 79%).
Стадия 2: Синтез 5-(6-(4-аминопиперидин-1-ил)пиридин-3-ил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (10):
К перемешанному раствору трет-бутил-(1-(5-(3-(((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-5-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метилфенил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)карбамата (0,39 г, 0,058 ммоль) в DCM (4 мл) при 0°C добавляли TFA (2 мл), и перемешивали реакционную смесь в течение 1 ч при комнатной температуре. После завершения реакции, реакционную смесь концентрировали досуха. Затем остаток подщелачивали до pH 8 нас. водным раствором бикарбоната (30 мл), и экстрагировали водный слой 20% метанолом в DCM (50 мл ×4). Объединенную органическую фазу сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением указанного в заголовке соединения (0,3 г, 90,63%), которое использовали как есть в последующей реакции.
Стадия 3: Синтез N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-5-(6-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)пиридин-3-ил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида
К перемешанному раствору 5-(6-(4-аминопиперидин-1-ил)пиридин-3-ил)-N-((4,6-диметил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензамида (0,3 г, 0,524 ммоль) в DCM (3 мл) при 0°C добавляли 37-41% водн. раствор формалина (0,277 г, 1,31 ммоль), и перемешивали при к.т. в течение 10 мин. Затем добавляли NaBH(OAc)3 (0,277 г, 1,31 ммоль), и перемешивали в течение 2 ч. По завершении реакции, реакционную смесь гасили добавлением воды. Добавляли MeOH (10 мл), слои разделяли и экстрагировали 10% MeOH в DCM, и очищали на колонке с получением указанного в заголовке соединения (0,12 г, 38%).
Аналитические данные: ЖХ/МС: 602,00 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,22% (детекция при 210-370 нм) (Rt 3,757; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (шир. с, 1H), 8,38 (с, 1H), 8,15 (т, 1H), 7,78 (д, 1H, J=8,4 Гц), 7,35 (с, 1H), 7,16 (с, 1H), 6,90 (д, 1H, J=8,8 Гц), 5,85 (с, 1H), 4,35 (д, 2H, J=13,2 Гц), 4,28 (д, 2H, J=4 Гц), 3,82 (д, 2H, J=10 Гц), 3,30-3,20 (м, 2H), 3,10-3,00 (м, 3H), 2,90-2,80 (м, 2H), 2,28 (с, 6H), 2,22 (с, 3H), 2,20 (с, 3H), 2,10 (с, 3H), 1,90-1,80 (м, 3H), 1,70-1,60 (м, 2H), 1,60-1,50 (м, 2H), 1,40-1,30 (м, 2H), 0,82 (т, 3H, J=6,4 Гц).
Пример 193: Синтез 5-(6-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)пиридин-3-ил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
Figure 00000277
Соединение 193
Синтез трет-бутил-(1-(5-(3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метилфенил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)карбамата
Раствор 5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,35 г, 0,69 ммоль), трет-бутил-(1-(5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)карбамата (0,33 г, 0,83 ммоль) и тетракис (0,079 г, 0,069 ммоль) в диоксане (5 мл) продували аргоном в течение 10 мин. К раствору добавляли водн. Na2CO3 (0,263 г, 2,48 ммоль, 2 мл), и снова дегазировали в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 16 ч. По завершении реакции, смесь концентрировали с получением неочищенного вещества, которое очищали на колонке с получением указанного в заголовке соединения (0,31 г, 63%).
Синтез 5-(6-(4-аминопиперидин-1-ил)пиридин-3-ил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
трет-Бутил-(1-(5-(3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метилфенил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)карбамат (0,31 г, 0,44 ммоль) переносили в DCM (5 мл), добавляли к нему TFA (1 мл), и перемешивали при к.т. в течение 2 ч. После завершения реакции, удаляли растворитель в условиях пониженного давления, и добавляли к смеси насыщенный раствор NaHCO3. Проводили экстрагирование с использованием 10% MeOH в DCM, объединенные органические слои промывали водой и солевым раствором, сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением указанного в заголовке соединения (0,26 г, 98,11%).
Синтез 5-(6-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)пиридин-3-ил)-3-(этил-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида
К перемешанному раствору 5-(6-(4-аминопиперидин-1-ил)пиридин-3-ил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метилбензамида (0,26 г, 0,43 ммоль) в DCM (4 мл) добавляли формалин (0,045 г, 1,51 ммоль), и перемешивали реакционную смесь при 0°C в течение 10 минут. Затем при 0°C добавляли триацетоксиборгидрид натрия (0,23 г, 1,08 ммоль), и перемешивали реакционную смесь в течение 1 ч. По завершении реакции, к реакционной массе добавляли воду, и проводили экстрагирование с использованием DCM. Объединенные органические слои промывали раствором бикарбоната, сушили над сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного вещества, которое затем очищали путем промывания растворителем с получением указанного в заголовке соединения (0,17 г, 62%).
Аналитические данные: ЖХ/МС: 629,70 (M+1)+; ВЭЖХ: 97,74% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,176; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 10,33 (шир. с, 1H), 8,39 (д, 1H), 8,16 (т, 1H), 7,81 (д, 1H, J=6,8 Гц), 7,35 (с, 1H), 7,16 (с, 1H), 6,97 (д, 1H, J=9,2 Гц), 5,99 (с, 1H), 4,50 (д, 2H, J=12,8 Гц), 4,34 (д, 2H, J=4,4 Гц), 3,82 (д, 2H, J=9,6 Гц), 3,39 (м, 1H), 3,24 (м, 3H), 3,10-3,00 (м, 3H), 2,90-2,80 (м, 2H), 2,69 (с, 6H), 2,22 (с, 3H), 2,13 (с, 3H), 2,10-2,05 (м, 2H), 1,70-1,60 (м, 2H), 1,60-1,45 (м, 4H), 1,13 (д, 6H, J=6,4 Гц), 0,82 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 194: Синтез 5-(6-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)пиридин-3-ил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида
Figure 00000278
Соединение 194
Синтез трет-бутил-(1-(5-(3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-5-(((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)фенил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)карбамата
Раствор 5-бром-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида (0,5 г, 0,99 ммоль), соответствующего сложного пинаколового эфира бороновой кислоты (0,6 г, 1,48 ммоль) и тетракис (0,114 г, 0,99 ммоль) в диоксане (7 мл) продували аргоном в течение 10 мин. К раствору добавляли водн. Na2CO3 (0,377 г, 3,5 ммоль, 2 мл), и снова дегазировали в течение 10 мин. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 16 ч. По завершении реакции, смесь концентрировали с получением неочищенного вещества, которое очищали на колонке с получением указанного в заголовке соединения (0,40 г, 57,47%).
Синтез 5-(6-(4-аминопиперидин-1-ил)пиридин-3-ил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида
К перемешанному раствору трет-бутил-(1-(5-(3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-4-метил-5-(((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)фенил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)карбамата (0,4 г, 0,00051 моль) в DCM (10 мл) при 0°C добавляли TFA (10 мл), и перемешивали реакционную смесь в течение 2 ч при комнатной температуре. После завершения реакции, реакционную смесь концентрировали досуха. Затем остаток подщелачивали до pH 8 добавлением нас. водного раствора бикарбоната (80 мл), и экстрагировали водный слой 20% метанолом в DCM (60 мл ×4). Объединенную органическую фазу сушили над Na2SO4, и удаляли растворитель в условиях пониженного давления с получением указанного в заголовке соединения (0,315 г, 92,1%), которое использовали как есть в последующей реакции.
Синтез 5-(6-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)пиридин-3-ил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида
К перемешанному раствору 5-(6-(4-аминопиперидин-1-ил)пиридин-3-ил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-N-((6-метил-2-оксо-4-пропил-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)бензамида (0,315 г, 0,52 ммоль) в DCM (8 мл) при 0°C добавляли 37-41% водн. раствор формальдегида (0,078 г, 2,6 ммоль), и перемешивали при к.т. в течение 10 мин. Затем добавляли NaBH(OAc)3 (0,275 г, 1,3 ммоль), и перемешивали в течение 2 ч. По завершении реакции, реакционную смесь гасили добавлением воды. Добавляли MeOH (8 мл), слои разделяли и экстрагировали 10% MeOH в DCM, и перекристаллизовывали из эфира, ацетонитрила и пентана с получением указанного в заголовке соединения (0,27 г, 82%).
Аналитические данные: ЖХ/МС: 630,00 (M+1)+; ВЭЖХ: 98,21% (детекция при 210-370 нм) (Rt 4,155; Способ: колонка YMC ODS-A 150 мм ×4,6 мм × 5 мкм; подвижная фаза: A (0,05% TFA в воде)/B (0,05% TFA в ацетонитриле); объем инжекции: 10 мкл, температура колонки: 30°C; скорость потока: 1,4 мл/мин; градиент: 5% B→95% B в течение 8 мин, выдерживание в течение 1,5 мин, 9,51-12 мин 5% B); 1H-ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,46 (с, 1H), 8,37 (д, 1H, J=1,6 Гц), 8,13 (т, 1H, J=4,4 Гц), 7,76 (дд, 1H, J=2,4 & 9,2 Гц), 7,35 (с, 1H), 7,15 (с, 1H), 6,89 (д, 1H, J=8,8 Гц), 5,88 (с, 1H), 4,25-4,35 (м, 4H), 3,82 (д, 2H, J=10 Гц), 3,24 (м, 2H), 3,10-3,00 (м, 3H), 2,90-2,80 (м, 2H), 2,35 (м, 1H), 2,22 (с, 3H), 2,18 (с, 6H), 2,11 (с, 3H), 1,80 (м, 2H), 1,70-1,60 (м, 2H), 1,60-1,45 (м, 4H), 1,40-1,30 (м, 2H), 0,93 (т, 3H, J=7,2 Гц), 0,81 (т, 3H, J=6,8 Гц).
Пример 195: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(пиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000279
Соединение 195
Стадия 1: Синтез 5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила
К перемешанному раствору 6-метил-2-оксо-4-(пропан-2-ил)-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрила (225 мг, 1,277 ммоль) в MeCN (6 мл) добавляли Selectfluor (620 мг, 1,75 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 3 ч. После охлаждения до 23°C, реакционную смесь концентрировали в условиях вакуума. Остаток очищали методом колоночной хроматографии (50%→100% EtOAc в гептане с получением указанного в заголовке соединения (90 мг, 36%). 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч.млн. 3,39 (м, 1 H), 2,44 (д, J=3,1 Гц, 3 H), 1,41 (дд, J=7,0, 3,1 Гц, 6 H); ЖХМС E-S (M+H)=195,2.
Стадия 2: Синтез 3-(аминометил)-5-фтор-4-изопропил-6-метилпиридин-2(1H)-она
5-Фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбонитрил (100 мг, 0,515 ммоль) в колбе емкостью 100 мл растворяли в смеси MeOH (6 мл) и 2 мл NH3 (водн.) (2 мл, 25%). Восстановление проводили с использованием H-Cube и никеля Ренея в качестве катализатора при комнатной температуре в течение 3-4 ч. После завершения реакции (мониторинг методом ТСХ), реакционную смесь концентрировали в условиях пониженного давления с получением указанного в заголовке соединения в виде серого твердого вещества (90 мг, 90%). 1H-ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ ч.млн. 4,04 (с, 2 H), 3,22 (м, 1 H), 2,24 (д, J=3,4 Гц, 3 H), 1,32 (дд, J=7,0, 1,8 Гц, 6 H); ЖХМС E-S (M+H)=199,2.
Стадия 3: трет-бутил-4-(5-(3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(метоксикарбонил)-4-метилфенил)пиридин-2-ил)пиперазин-1-карбоксилат
Получали в соответствии с общей методикой проведения реакции сочетания по Судзуки.
1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч.млн. 8,42 (дд, J=2,4 Гц, 1H), 7,70-7,74 (м, 2H), 7,41 (д, J=2,1 Гц, 1H), 6,72 (д, J=8,8 Гц, 1H), 3,97 (м, 2H), 3,93 (с, 3H), 3,58 (с, 8H), 3,34 (м, 2H), 3,11 (кв., J=7,0 Гц, 2H), 3,02 (м, 1H), 2,53 (с, 3H), 1,64-1,76 (м, 4H), 1,50 (с, 9H), 0,91 (т, J=7,0 Гц, 3H). МС (ES) (M+H)=539,5.
Стадия 4: Синтез трет-бутил-4-(5-(3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(((5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метилфенил)пиридин-2-ил)пиперазин-1-карбоксилата
В результате гидролиза трет-бутил-4-(5-(3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(метоксикарбонил)-4-метилфенил)пиридин-2-ил)пиперазин-1-карбоксилата, проведенного в соответствии со способами, сходными с описанным в представленных выше примерах, получали неочищенную соответствующую карбоновую кислоту, 5-(6-(4-(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метилбензойную кислоту. Затем эту кислоту сочетали с 3-(аминометил)-5-фтор-4-изопропил-6-метилпиридин-2(1H)-оном в соответствии со способами, описанными выше. После очистки методом ВЭЖХ с обращенной фазой (ACN-H2O с добавлением 0,1% муравьиной кислоты) получали указанное в заголовке соединение. 1H-ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ ч.млн. 8,33 (д, J=2,6 Гц, 1H), 7,81 (дд, J=2,6, 8,8 Гц, 1H), 7,41 (д, J=2,0 Гц, 1H), 7,26 (д, J=2,0 Гц, 1H), 6,91 (д, J=8,8 Гц, 1H), 4,54 (с, 2H), 3,92 (м, 2H), 3,46-3,56 (м, 9H), 3,34 (м, 2H), 3,07-3,18 (м, 3H), 2,33 (с, 3H), 2,24 (д, J=3,2 Гц, 3H), 1,74-1,77 (м, 2H), 1,62-1,69 (м, 2H), 1,49 (с, 9H), 1,37 (дд, J=1,6, 6,8 Гц, 6H), 0,90 (т, J=6,8 Гц, 3H); МС (ES) (M+H) 705,7.
Стадия 5: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(пиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида формиата
К раствору трет-бутил-4-(5-(3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(((5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)карбамоил)-4-метилфенил)пиридин-2-ил)пиперазин-1-карбоксилата (450 мг, 0,639 ммоль) в этаноле (4,3 мл) при комнатной температуре добавляли 4M HCl в диоксане (2 мл, 8,00 ммоль). Спустя 2 часа, методом ЖХ/МС обнаруживали оба продукта и оставшееся исходное вещество. Дополнительно добавляли 4M HCl в 1,4-диоксане (1,5 мл, 6,00 ммоль), и спустя 4 ч, методом ЖХ/МС обнаруживали завершение реакции. Реакционную смесь концентрировали досуха и подвергали азеотропной перегонке с толуолом/метанолом с получением неочищенного гидрохлорида (454 мг, 111%). Образец гидрохлорида массой 125 мг очищали методом ОФ-ВЭЖХ/МС (ACN-H2O, 0,1% муравьиная кислота) с получением 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(пиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида формиата (65 мг) в виде бесцветной стекловидной пленки. 1H-ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ ч.млн. 8,35-8,40 (м, 2H), 7,86 (дд, J=2,4, 8,8 Гц, 1H), 7,42 (д, J=1,6 Гц, 1H), 7,27 (д, J=1,6 Гц, 1H), 6,99 (д, J=8,8 Гц, 1H), 4,54 (с, 2H), 3,92 (м, 2H), 3,84 (м, 4H), 3,54 (м, 1H), 3,30-3,38 (м, 6H), 3,07-3,18 (м, 3H), 2,33 (с, 3H), 2,24 (д, J=2,8 Гц, 3H), 1,73-1,76 (м, 2H), 1,62-1,68 (м, 2H), 1,37 (д, J=6,8 Гц, 6H), 0,89 (т, J=6,8 Гц, 3H); MС (ES)(M+H) 605,6.
Пример 196: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000280
Соединение 196
К раствору 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(пиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида гидрохлорида (160 мг, 0,25 ммоль) в метаноле (2 мл) при 0°C добавляли 35% раствор формальдегида в воде (0,196 мл, 2,495 ммоль). После перемешивания в течение 20 мин, добавляли цианборгидрид натрия (31,4 мг, 0,499 ммоль). Спустя 1,5 ч при 0°C, реакционную смесь гасили добавлением воды (3 мл), удаляли охлаждающую баню, и перемешивали смесь в течение 10 мин. Затем добавляли DCM (10 мл) и насыщенный водн. NaHCO3 (1 мл). Органический слой разделяли, водный слой экстрагировали DCM (2×15 мл), объединенные органические экстракты сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Продукт очищали методом ОФ-ВЭЖХ/МС (ACN-H2O, 0,5% муравьиная кислота) с получением 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(4-метилпиперазин-1-ил)пиридин-3-ил)бензамида формиата (31 мг, 0,047 ммоль, выход 19%) в виде бесцветной стекловидной пленки.
1H-ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ ч.млн. 8,42 (шир. с, 1H), 8,38 (д, J=2,4 Гц, 1H), 7,85 (дд, J=2,8, 8,8 Гц, 1H), 7,42 (д, J=1,6 Гц, 1H), 7,27 (д, J=1,6 Гц, 1H), 6,98 (д, J=8,8 Гц, 1H), 4,54 (с, 2H), 3,91 (м, 2H), 3,82 (шир. с, 4H), 3,54 (м, 1H), 3,31-3,38 (м, 2H), 3,05-3,21 (м, 7H), 2,81 (с, 3H), 2,33 (с, 3H), 2,24 (д, J=2,8 Гц, 3H), 1,73-1,76 (м, 2H), 1,58-1,68 (м, 2H), 1,37 (дд, J=1,6, 6,8 Гц, 6H), 0,89 (т, J=6,8 Гц, 3H); MС (ES) (M+H) 619,7.
Пример 197: Синтез 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида
Figure 00000281
Соединение 197
Стадия 1: метил-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино) -2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензоат
Соединение 197 получали в соответствии с общей методикой проведения реакции сочетания по Судзуки. 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ч.млн. 8,77 (дд, J=0,9, 2,4 Гц, 1H), 7,84 (дд, J=2,4, 7,9 Гц, 1H), 7,78 (д, J=1,8 Гц, 1H), 7,49 (д, J=7,9 Гц, 1H), 7,45 (д, J=2,1 Гц, 1H), 3,98 (м, 2H), 3,94 (с, 3H), 3,75-3,78 (м, 4H), 3,72 (с, 2H), 3,34 (м, 2H), 3,13 (кв., J=7,1 Гц, 2H), 3,03 (м, 1H), 2,56 (м, 7H), 1,64-1,76 (м, 4H), 0,92 (т, J=7,1 Гц, 3H). MС (ES) (M+H)=454,5.
Стадия 2: 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-N-((5-фтор-4-изопропил-6-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)метил)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензамида формиат
В результате гидролиза метил-3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-2-метил-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензоата в соответствии со способами, сходными с представленными выше, получали соответствующую карбоновую кислоту, 3-(этил(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)-5-(6-(морфолинометил)пиридин-3-ил)бензойную кислоту. Затем проводили сочетание указанной кислоты с 3-(аминометил)-5-фтор-4-изопропил-6-метилпиридин-2(1H)-оном в соответствии со способом, описанным выше. После очистки методом ВЭЖХ с обращенной фазой (ACN-H2O с добавлением 0,1% муравьиной кислоты) получали указанное в заголовке соединение. 1H-ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ ч.млн. 8,77 (д, J=1,8 Гц, 1H), 8,25 (шир. с, 1H), 8,07 (дд, J=2,3, 8,2 Гц, 1H), 7,61 (д, J=8,2 Гц, 1H), 7,52 (д, J=1,8 Гц, 1H), 7,37 (д, J=1,8 Гц, 1H), 4,54, (с, 2H), 3,97 (с, 2H), 3,91 (м, 2H), 3,78 (м, 4H), 3,55 (м, 1H), 3,35 (м, 2H), 3,08-3,20 (м, 3H), 2,81 (м, 4H), 2,36 (с, 3H), 2,24 (д, J=2,9 Гц, 3H), 1,60-1,77 (м, 4H), 1,37 (дд, J=1,5, 7,0 Гц, 6H), 0,90 (т, J=6,9 Гц, 3H). MС (ES) (M+H) 620,6.
Пример 198: Протокол биоанализа и основные способы
Протокол для ферментативного анализа PRC2 дикого типа и его мутанта
Основные материалы. S-аденозилметионин (SAM), S-аденозилгомоцистеин (SAH), бицин, KCl, Tween20, диметилсульфоксид (DMSO) и желатин кожи крупного рогатого скота (BSG) наивысшего из возможных уровня чистоты приобретали у Sigma-Aldrich. Дитиотреитол (DTT) приобретали у EMD. 3H-SAM со специфичной активностью 80 Ки/ммоль приобретали у American Radiolabeled Chemicals. Покрытые стрептавидином 384-луночные планшеты Flashplates приобретали у PerkinElmer.
Субстраты. Типичные пептиды из остатков 21-44 гистона H3 человека, содержащие либо немодифицированный лизин 27 (H3K27me0), либо диметилированный лизин 27 (H3K27me2), синтезировали с C-концевым мотивом линкера-аффиной метки G(K-биотин) и C-концевым амидным кэпом в 21st Century Biochemicals. Пептиды очищали высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) до чистоты более 95%, и подтверждали жидкостной хроматографией/масс-спектрометрией (ЖХ/МС). Последовательности указаны ниже.
H3K27me0: ATKAARKSAPATGGVKKPHRYRPGGK(биотин)-амид (SEQ ID № 1)
H3K27me2: ATKAARK(me2)SAPATGGVKKPHRYRPGGK(биотин)-амид (SEQ ID № 2)
Олигонуклеосомы эритроцитов цыпленка очищали из крови цыпленка согласно общепринятым способам.
Рекомбинантные комплексы PRC2. Комплексы PRC2 человека очищали как 4-компонентные комплексы ферментов, коэкспрессированных в клетках Spodoptera frugiperda (sf9), с использованием бакуловирусной системы экспрессии. Экспрессированные субъединицы представляли собой EZH2 дикого типа (NM_004456) или мутанты EZH2 Y641F, N, H, S или C, полученные из конструкта EZH2 дикого типа, EED (NM_003797), Suz12 (NM_015355) и RbAp48 (NM_005610). Субъединица EED содержала N-концевую метку FLAG, которую использовали для очистки всего 4-компонентного комплекса из лизатов клеток sf9. Чистота комплексов соответствовала или превышала 95%, как было определено анализом SDS-PAGE и в Agilent Bioanalyzer. Концентрации маточной концентрации фермента (как правило, 0,3-1,0 мг/мл) определяли с использованием анализа по Бредфорду с бычьим сывороточным альбумином (BSA) в качестве стандарта.
Основной способ для анализа ферментов PRC2 на пептидных субстратах. Все анализы проводили в буфере, содержащем 20 мМ бицина (pH=7,6), 0,5 мМ DTT, 0,005% BSG и 0,002% Tween20, приготовленном в день использования. Соединения в 100% DMSO (1 мкл) наносили в полипропиленовые 384-луночные планшеты с V-образным дном (Greiner) с использованием системы Platemate 2×3, оснащенной 384-канальной раскапывающей насадкой (Thermo). Добавляли DMSO (1 мкл) в колонки 11, 12, 23, 24, строки A-H для контроля максимального сигнала и SAH, известный продукт и ингибитор PRC2 (1 мкл) добавляли в колонки 11, 12, 23, 24, строки I-P для контроля минимального сигнала. Смесь (40 мкл), содержащую фермент PRC2 дикого типа и пептид H3K27me0 или любой из мутантных по остатку Y641 ферментов и пептид H3K27me2, добавляли при помощи Multidrop Combi (Thermo). Соединения оставляли инкубироваться с PRC2 в течение 30 мин при 25°C, затем смесь (10 мкл), содержащую смесь нерадиоактивного и 3H-SAM, добавляли для инициации реакции (конечный объем = 51 мкл). Во всех случаях, конечные концентрации составляли величины, приведенные ниже: фермент PRC2 дикого типа или мутантный находился в концентрации 4 нМ, SAH в лунках с контролем минимального сигнала находился в концентрации 1 мМ, и концентрация DMSO составляла 1%. Конечные концентрации остальных компонентов указаны ниже в таблице 2. Анализы останавливали, добавляя нерадиоактивный SAM (10 мкл) до конечной концентрации 600 мкМ, которым разбавляли 3H-SAM до уровня, когда встраивание в пептидный субстрат больше не детектировалось. Затем 50 мкл реакционной смеси из 384-луночного полипропиленового планшета переносили в 384-луночный планшет Flashplate, и позволяли биотинилированным пептидам связаться со стрептавидиновой поверхностью в течение, по меньшей мере, 1 ч, после чего отмывали трижды с использованием 0,1% Tween20 в машине для мойки планшетов Biotek ELx405. Затем планшеты считывали в спектрофотометре для считывания планшетов PerkinElmer TopCount для определения количества 3H-меченного пептида, связанного с поверхностью планшета Flashplate, измеренного как число распадов в минуту (dpm) или альтернативно обозначаемого как число импульсов в минуту (cpm).
Таблица 2
Конечные концентрации компонентов для каждого варианта анализа в зависимости от природы EZH2
(дикий тип или мутант EZH2 по остатку Y641)
Фермент PRC2
(обозначение по отличительной черте EZH2)		 Пептид (нМ) Нерадиоактивный SAM (нМ) 3H-SAM (нМ)
Дикого типа 185 1800 150
Y641F 200 850 150
Y641N 200 850 150
Y641H 200 1750 250
Y641S 200 1300 200
Y641C 200 3750 250
Основной способ для анализа фермента PRC2 дикого типа с олигонуклеосомным субстратом. Анализы проводили в буфере, содержащем 20 мМ бицина (pH=7,6), 0,5 мМ DTT, 0,005% BSG, 100 мМ KCl и 0,002% Tween20, приготовленном в день использования. Соединения в 100% DMSO (1 мкл) наносили в полипропиленовые 384-луночные планшеты с V-образным дном (Greiner) с использованием системы Platemate 2×3, оснащенной 384-канальной раскапывающей насадкой (Thermo). Добавляли DMSO (1 мкл) в колонки 11, 12, 23, 24, строки A-H для контроля максимального сигнала и SAH, известный продукт и ингибитор PRC2 (1 мкл) добавляли в колонки 11, 12, 23, 24, строки I-P для контроля минимального сигнала. Смесь (40 мкл), содержащую фермент PRC2 дикого типа и олигонуклеосомы эритроцитов цыпленка, добавляли при помощи Multidrop Combi (Thermo). Соединения оставляли инкубироваться с PRC2 в течение 30 мин при 25°C, затем смесь (10 мкл), содержащую смесь нерадиоактивного и 3H-SAM, добавляли для инициации реакции (конечный объем = 51 мкл). Конечные концентрации составляли величины, приведенные ниже: фермент PRC2 дикого типа находился в концентрации 4 нМ, нерадиоактивный SAM находился в концентрации 430 нМ, 3H-SAM находился в концентрации 120 нМ, олигонуклеосома эритроцитов цыпленка находилась в концентрации 120 нМ, SAH в лунках с контролем минимального сигнала находился в концентрации 1 мМ, и концентрация DMSO составляла 1%. Анализы останавливали, добавляя нерадиоактивный SAM (10 мкл) до конечной концентрации 600 мкМ, которым разбавляли 3H-SAM до уровня, когда встраивание в субстрат олигонуклеосомы эритроцитов цыпленка больше не детектировалось. Затем 50 мкл реакционной смеси из 384-луночного полипропиленового планшета переносили в 384-луночный планшет Flashplate и олигонуклеосомы эритроцитов цыпленка иммобилизировали на поверхность планшета, который затем трижды промывали с использованием 0,1% Tween20 в машине для мойки планшетов Biotek ELx405. Затем планшеты считывали в спектрофотометре для считывания планшетов PerkinElmer TopCount для определения количества 3H-меченного пептида, связанного с поверхностью планшета Flashplate, измеренного как число распадов в минуту (dpm) или альтернативно обозначаемое как число импульсов в минуту (cpm).
Вычисление ингибирования, выраженного в процентах (%inh):
Figure 00000282
где dpm = число распадов в минуту, cmpd = сигнал в лунке для анализа, и min и max представляют собой соответствующие контроли минимального и максимального сигналов.
Четырехпараметрическая аппроксимация IC 50
Figure 00000283
где значения «top» и «bottom» обычно свободно варьируют, но могут быть зафиксированы как 100 или 0, соответственно, при трехпараметрической аппроксимации. Коэффициент Хилла (Hill Coefficient) обычно свободно варьирует, но может быть задан как 1 при трехпараметрической аппроксимации. Y представляет собой ингибирования (в %), и X представляет собой концентрацию соединения.
Величины IC50 для методов анализа ферментов PRC2 на пептидных субстратах (например, EZH2 дикого типа и Y641F) представлены ниже в таблице 3.
Анализ метилирования в WSU-DLCL2
Суспензии клеток WSU-DLCL2 приобретали у DSMZ (Немецкая коллекция микроорганизмов и клеточных культур, Braunschweig, Germany). Среду RPMI/Glutamax Medium, пенициллин-стрептомицин, термоинактивированную эмбриональную телячью сыворотку и D-PBS приобретали у Life Technologies, Grand Island, NY, USA. Буфер для экстракции и нейтрализующий буфер (5×) приобретали у Active Motif, Carlsbad, CA, USA. Кроличье антитело против гистона H3 приобретали у Abcam, Cambridge, MA, USA. Кроличье антитело против H3K27me3 и HRP-конъюгированное антитело против IgG кролика приобретали у Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA. Субстрат TMB «Super Sensitive» был получен от BioFX Laboratories, Owings Mills, MD, USA. Не содержащий IgG бычий сывороточный альбумин приобретали у Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA, USA. PBS с Tween (10× PBST) приобретали у KPL, Gaithersburg, MD, USA. Серную кислоту приобретали у Ricca Chemical, Arlington, TX, USA. Планшеты для ELISA с Immulon приобретали у Thermo, Rochester, NY, USA. Планшеты для культур клеток с V-образным дном приобретали у Corning Inc., Corning, NY, USA. Полипропиленовые планшеты с V-образным дном приобретали у Greiner Bio-One, Monroe, NC, USA.
Суспензии клеток WSU-DLCL2 сохраняли в среде для выращивания (RPMI 1640, с добавлением 10% об./об. термоинактивированной эмбриональной телячьей сывороткой и 100 единиц/мл пенициллина-стрептомицина) и культивировали при 37°C в 5% CO2. В аналитических условиях клетки инкубировали в среде для количественного анализа (RPMI 1640 с добавлением 20% об./об. термоинактивированной эмбриональной телячьей сывороткой и 100 единиц/мл пенициллина-стрептомицина) при 37°C в 5% CO2 на шейкере для планшетов.
Клетки WSU-DLCL2 высевали в среде для количественного анализа при концентрации 50000 клеток на мл в 96-луночный планшет для культур клеток с V-образным дном в количестве 200 мкл на лунку. Соединение (1 мкл) из исходных 96-луночных планшетов добавляли непосредственно в планшет для клеток с V-образным дном. Планшеты инкубировали на шейкере для титровальных планшетов при 37°C, 5% CO2 в течение 96 часов. После четырех дней инкубации планшеты центрифугировали при 241×g в течение пяти минут, и среду аккуратно отбирали из каждой лунки планшета для клеток, не затрагивая клеточный осадок. Осадок ресуспендировали в 200 мкл DPBS и планшеты снова центрифугировали при 241×g в течение пяти минут. Надосадочную жидкость отбирали и охлаждали (4°C). Буфер для экстракции (100 мкл) добавляли в каждую лунку. Планшеты инкубировали при 4°C на орбитальном шейкере в течение двух часов. Планшеты центрифугировали при 3427×g×10 минут. Надосадочную жидкость (80 мкл на лунку) переносили в его соответствующую лунку в 96-луночный полипропиленовый планшет с V-образным дном. Нейтрализующий буфер 5× (20 мкл на лунку) добавляли в полипропиленовый планшет с V-образным дном, содержащий надосадочную жидкость. Полипропиленовые планшеты с V-образным дном, содержащие неочищенный гистоновый препарат (CHP) инкубировали на орбитальном шейкере × пять минут. Неочищенные гистоновые препараты добавляли (2 мкл на лунку) в каждую соответствующую лунку в 96-луночные планшеты для ELISA в двух повторах, содержащие 100 мкл буфера для иммобилизации (1× PBS + BSA 0,05% масс./об.). Планшеты герметично закрывали и инкубировали в течение ночи при 4°C. На следующий день планшеты промывали три раза с использованием 300 мкл на лунку 1× PBST. Лунки блокировали в течение двух часов с использованием 300 мкл на лунку раствора для разведения для ELISA ((PBS (1× ) BSA (2% масс./об.) и Tween20 (0,05% об./об.)). Планшеты промывали три раза с использованием 1× PBST. Что касается планшета для определения гистона H3, добавляли 100 мкл на лунку антитела против гистона-H3 (Abcam, ab1791), разбавленного 1:10000 в растворе для разведения для ELISA. Что касается планшета для определения триметилирования H3K27, добавляли 100 мкл на лунку антитела против H3K27me3, разбавленного 1:2000 в растворе для разведения для ELISA. Планшеты инкубировали в течение 90 минут при комнатной температуре. Планшеты промывали три раза с использованием 300 мкл 1× PBST на лунку. Что касается определения гистона H3, 100 мкл HRP-конъюгированного антитела против кроличьих IgG, разбавленных 1:6000 в растворе для разведения для ELISA, добавляли в каждую лунку. Что касается определения H3K27me3, 100 мкл HRP-конъюгированного антитела против кроличьих IgG, разбавленных 1:4000 в растворе для разведения для ELISA, добавляли в каждую лунку. Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 90 минут. Планшеты промывали четыре раза с использованием 1×PBST 300 мкл на лунку. 100 мкл субстрата TMB добавляли в каждую лунку. Планшеты с гистоном H3 инкубировали в течение пяти минут при комнатной температуре. Планшеты с H3K27me3 инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре. Реакцию останавливали с использованием 1н серной кислотой (100 мкл на лунку). Поглощение для каждого планшета считывали при 450 нм.
Сначала для каждой лунки определяли соотношение (Опт.пл. при 450 нм для образца с H3K27me3/Опт.пл. при 450 нм для образца с гистоном H3).
Каждый планшет включал в себя восемь контрольных лунок с обработкой только DMSO (минимальное ингибирование), а также восемь контрольных лунок для максимального ингибирования (фоновые лунки).
Вычисляли средние величины соотношений для каждого контрольного типа и использовали для определения процента ингибирования для каждой тестируемой лунки в планшете. Тестируемое соединение последовательно трехкратно разводили в DMSO в общей сложности для десяти тестируемых концентраций, начиная с 25 мкМ. Определяли процент ингибирования и получали кривые IC50, используя лунки в двух повторах на каждую концентрацию соединения. Величины IC50 для данного анализа представлены ниже в таблице 3.
Процент ингибирования =
100-{[(Соотношение в индивидуальном тестируемом образце)-(Фоновое среднее соотношение)/(Соотношение при минимальном ингибировании)-(Фоновое среднее соотношение)]×100}
Анализ пролиферации клеток
Суспензии клеток WSU-DLCL2 приобретали у DSMZ (Немецкая коллекция микроорганизмов и клеточных культур, Braunschweig, Germany). Среду RPMI/Glutamax Medium, пенициллин-стрептомицин, термоинактивированную эмбриональную телячью сыворотку приобретали у Life Technologies, Grand Island, NY, USA. Полипропиленовые 384-луночные планшеты с V-образным дном приобретали у Greiner Bio-One, Monroe, NC, USA. Белые непрозрачные 384-луночные планшеты для клеточных культур приобретали у Perkin Elmer, Waltham, MA, USA. Cell-Titer Glo® приобретали у Promega Corporation, Madison, WI, USA. Спектрофотометр для считывания планшетов SpectraMax M5 приобретали у Molecular Devices LLC, Sunnyvale, CA, USA.
Суспензии клеток WSU-DLCL2 сохраняли в среде для выращивания (RPMI 1640, с добавлением 10% об./об. термоинактивированной эмбриональной телячьей сывороткой) и культивировали при 37°C в 5% CO2. В аналитических условиях клетки инкубировали в среде для количественного анализа (RPMI 1640 с добавлением 20% об./об. термоинактивированной эмбриональной телячьей сывороткой и 100 единиц/мл пенициллина-стрептомицина) при 37°C в 5% CO2.
Для оценки воздействия соединений на пролиферацию клеточной линии WSU-DLCL2, экспоненциально растущие клетки высевали в белые непрозрачные 384-луночные планшеты при плотности 1250 клетки/мл в конечном объеме 50 мкл среды для количественного анализа. Исходный планшет с соединением получали, проводя девятиточечные 3-кратные серийные разведения в DMSO в трех повторах, начиная с 10 мМ (конечная верхняя концентрация соединения в анализе составляла 20 мкМ и концентрация DMSO составляла 0,2%). Аликвоту в количестве 100 нл из планшета с исходными растворами соединения добавляли в их соответствующую лунку на планшете с клетками. Контроль со 100% ингибированием состоял из клеток, обработанных стауроспорином в конечной концентрации 200 нМ, и контроль с 0% ингибированием состоял из клеток, обработанных DMSO. После добавления соединений планшеты для анализа инкубировали в течение 6 дней при 37°C, 5% CO2, относительной влажности >90% в течение 6 дней. Жизнеспособность клеток измеряли, определяя количество АТФ, присутствующего в клеточных культурах, добавляя 35 мкл реагента Cell Titer Glo® в планшеты с клетками. Люминесценцию считывали в SpectraMax M5. Концентрацию, ингибирующую жизнеспособность клеток на 50%, определяли с использованием четырехпараметрической аппроксимации нормализованных кривых доза-эффект. Величины IC50 для данного анализа также представлены ниже в таблице 3.
Таблица 3
Соединение № EZH2 IC50 пептида v2 (мкМ) Y641F IC50 (мкМ) WSU пролиф. IC50 (мкМ) WSU ELISA IC50 (мкМ)
1 0,01745 0,56475
2 0,0549
3 0,24203
4 0,28847
5 11,21319
6 0,12452
7 28,43469
8 0,13466
9 0,169
10 0,10131
11 0,01409 1,46188
12 0,07053
13 0,03835
14 0,05688
15 0,1125
16 0,05995
17 0,02059
18 0,11596
19 0,05865
20 0,03908
21 0,04017
22 0,09501
23 0,04153
24 0,03473 0,0101
25 0,05556
26 0,0396 0,0273
27 0,02365 0,00721 2,88863
28 0,03924
29 0,0919
30 0,11932
31 0,045
32 0,06179
35 0,04574 0,01625
36 0,0149 0,00845 1,54311
37 0,02701 0,05492
38 0,0821 0,06699
39 0,01275 0,01432 0,44838
40 0,03107 0,01129
41 0,03176 0,01044
42 0,04322 0,02206
43 0,02548 0,03009 0,8697
44 0,01299 0,01107 0,369 0,29
45 0,07098 0,06219
46 0,0999 0,07546
47 0,03985 0,02028
48 0,09673 0,07426
49 0,0675 0,04624
50 0,05468 0,0484
51 0,1252 0,1399
52 0,05805 0,03053
53 0,05837 0,05602
54 0,01367 0,01527 2,40618
55 0,06006 0,02521
56 0,03609 0,01737
57 0,03226 0,02333
59 0,01098 0,01513 0,52906
60 0,23283 0,21286
61 0,04662 0,0414
62 0,17274 0,26915
63 0,0857 0,06826
64 0,01055 0,01235
65 0,01132 0,0089 0,15349
66 0,07159 0,04481 0,16735
67 0,00653 0,00586 0,11483
68 0,01343 0,02623 0,19913
69 0,00349 0,0026 0,10184
70 0,03787 0,02958 0,20278
71 0,00415 0,00219 0,18483
72 0,01052 0,00841 0,27494
73 0,00884 0,00698 0,17821
74 0,00842 0,00632 0,24789
75 0,00507 0,00348 0,07676
76 0,00374 0,00572 0,09675
77 0,00989 0,00512 0,15768
78 0,00324 0,00476 2,64294
79 0,00608 0,00778 0,15765
80 0,00311 0,00388 0,14286
81 0,01054 0,01073 0,40873
82 0,00352 0,00281 0,11923
83 0,00544 0,00418 0,18335
84 0,01128 0,00612 0,27874
86 0,00499 0,00112 0,42897
87 0,00568 0,00429 0,15758 0,3332
88 0,00856 0,00591 0,15727
89 0,00546 0,46186
90 0,00199 0,00361 0,15639
91 0,00315 0,00052 0,13796
92 0,01169 0,01936
93 0,00258 0,00087 0,10715
94 0,00246 0,00207 0,08649
95 0,00277 0,00155 0,49957
96 0,01193 0,00899 1,52182
97 0,0034 0,00296 0,08061
98 0,00582 0,00708 0,35879
99 0,00237 0,00256 0,37993
100 0,02155 0,0297 0,43561
101 0,00446 0,01163 0,79789
102 0,02536 0,01484 0,58584
103 0,00502 0,0082 0,35135
104 0,00963 0,01291 0,33294
105 0,00451 0,01065 0,16055
108 0,02337 2,54651
109 0,01921 0,01627 0,68878
110 0,00591 0,01239 0,11551
111 0,00766 0,00718
112 0,01831 0,01171 1,17698
113 0,01883 0,01083 0,35799
114 0,01503 0,01044 0,50615
115 0,00783 0,00446 0,21772
116 1,79155 1,2309
117 3,81396 2,30794 >20,0 мкМ
118 0,53042 0,388 4,87739
119 1,5035 0,65543 >20,0 мкМ
120 0,03304 0,01566 0,31157
121 0,03614 0,03716 0,29603
122 0,10684 0,07602 0,70354
123 0,01159 0,01009 0,29189
124 0,0129 0,00879 0,29994
125 0,02473 0,02022 0,44695
126 0,01495 0,01178 0,4696
127 0,01177 0,02567 0,3175
128 0,00594 0,00695 0,26136
129 0,01782 0,02561 0,29282
130 0,01581 0,03293 0,63755
131 0,01136 0,02444 0,38733
132 0,00466 0,01225 0,71249
133 0,01687 0,02975 0,49827
134 0,01118 0,0189 0,49018
135 0,02757 0,0484 11,06003
136 0,04262 0,08657 12,29135
137 0,03317 0,02548 1,56152
138 0,01173 1,40104
139 0,00707 0,00503 0,30711
140 0,00369 0,00454 0,37804
141 0,00151 0,00195 0,07815 0,05978
142 1,20523 0,88814 13,37514
143 0,00319 0,01274 0,174
144 0,00806 0,00791 0,9863
145 0,00139 0,00553 0,44891
146 0,01633 0,01575 1,45675
147 0,00344 0,00794 0,19934
148 0,01171 0,02295 0,18403
149 0,04316 0,07359 0,63041
150 0,01596 0,0559 1,46316
151 0,03901 0,03888
152 0,01101 0,02114 0,4062
153 0,00437 0,00603 0,29683
154 0,02378 0,02848
155 0,01732 0,01753 1,23055
156 0,00357 0,00814 0,1114
158 0,0043 0,00509 0,27572
159 0,01524 0,01214 1,74831
160 0,01211 0,01466
161 0,00438 0,00471
162 0,00574 0,00679
163 0,00981 0,00995 4,04577
164 0,01324 0,00514 0,5309
165 0,01133 0,00498 0,54719
166 0,04563 0,01346 0,80396
167 0,02564 0,00796 0,24542
168 0,00995 0,59705
169 0,01238 0,00274 3,26552
170 0,00579 0,00163 0,41075
171 0,00397 0,00076 0,3574 0,35597
172 0,00926 0,00421
173 0,01293 0,00928 0,62489
174 0,0067 0,00289 0,38381
175 0,01195 0,00955 0,28812
176 0,01339 0,01035 0,37475
177 >10,0 мкМ 3,28759 8,1459
178 0,01447 0,00507
179 0,24404 0,18351 >25,0 мкМ
180 0,00994 0,00807
181 0,00512 0,00223
182 0,00666 0,00569
183 0,00466 0,00387 1,52598
184 0,00092 0,57596
185 0,00338 0,00374 0,41458
186 0,00984 0,52611
188 0,01121 0,52668
189 0,00164 0,00182 0,1809
190 0,01559 0,53272
191 0,00384 0,00282 0,37332
192 0,00322 0,34642
193 0,00675 0,0082 0,34313
194 0,00462 0,00536 0,64562
Пример 199: Вычисление наименьшей цитотоксической концентрации (LCC)
Хорошо установлено, что клеточная пролиферация происходит посредством клеточного деления, которое приводит к удвоению количества клеток после деления относительно количества клеток до деления. При неизменном наборе условий окружающей среды (например, pH, ионная сила, температура, плотность клеток, среднее содержание белков и факторов роста и тому подобное) клетки будут пролиферировать последовательным удвоением (то есть, делением) согласно следующему ниже уравнению, при условии, что доступны достаточные питательные вещества и другие необходимые факторы.
Figure 00000284
где Nt представляет собой количество клеток во временной точке (t) после начала периода наблюдения, N0 представляет собой количество клеток в начале периода наблюдения, t представляет собой время после начала периода наблюдения и tD представляет собой временной интервал, необходимый для удвоения количества клеток, также обозначаемый как время удвоения. Уравнение A.1 можно преобразовать в более удобную форму экспоненциального уравнения по основанию e, пользуясь равенством, 0,693=ln(2).
Figure 00000285
Константа скорости для клеточной пролиферации (kp) обратно пропорциональна времени удвоения, как показано ниже.
Figure 00000286
Объединяя уравнения A.2 и A.3, получаем,
Figure 00000287
Таким образом, согласно уравнению A.4 количество клеток, как ожидается, экспоненциально увеличивается в зависимости от времени (фигура 1 A) в раннем периоде клеточного роста, обозначаемом как log-фаза роста. Экспоненциальные уравнения, подобные уравнению A.4, можно привести к линейному виду, взяв натуральный логарифм для каждой стороны.
Figure 00000288
Таким образом, график ln(Nt) как функция от времени, как ожидают, приведет к получению возрастающей прямой линии с наклоном, равным kp, и точкой пересечения с осью y, равной ln(N0), как представлено на фигуре 1B.
Изменения условий окружающей среды могут приводить к изменению скорости клеточной пролиферации, которая количественно измеряема как изменение константы скорости пролиферации kp. Среди условий, которые могут приводить к изменению скорости пролиферации, находится введение в систему антипролиферативного соединения в начале периода наблюдения (то есть, в t=0). Когда антипролиферативное соединение окажет непосредственное воздействие на пролиферацию клеток, ожидают, что графики ln(Nt) как функция от времени останутся линейными при всех концентрациях соединения с уменьшающимися величинами kp при увеличивающихся концентрациях соединения.
В зависимости от основы механизма антипролиферативного действия, некоторые соединения не могут сразу же вызвать изменение скорости пролиферации. Вместо этого, может иметь место латентный период до того, как реализуется воздействие соединения. В таких случаях график ln(Nt) как функция от времени будет казаться двухфазным, и момент времени, при котором начинается воздействие соединения, можно определить в качестве точки излома кривой между фазами (фигура 2). Независимо от того, является ли воздействие соединения на пролиферацию немедленным или начинается после латентного периода, константа скорости для пролиферации при каждой концентрации соединения, лучше всего определяется наклоном ln(Nt) по сравнению с кривой зависимости от времени от временной точки, в которой начинается воздействие соединения до конца периода наблюдения за экспериментом.
Соединение, применяемое к растущим клеткам, может воздействовать на наблюдаемую пролиферацию одним из двух основных способов: ингибируя дальнейшее клеточное деление (цитостаз) или убивая клетку (цитотоксичность). Если соединение является цитостатиком, увеличение концентрации соединения будет снижать величину kp, не будет никакого дальнейшего деления клеток. На данном этапе скорость роста клетки и, следовательно, величина kp, будет равна нулю. Если, с другой стороны, соединение является цитотоксичным, то величина kp будет состоять из двух констант скорости: константа скорости продолжающегося роста клеток в присутствии соединения (kg) и константа скорости для гибели клеток от соединения (kd). Общая константа скорости для пролиферации при неизменной концентрации соединения будет, таким образом, представлять собой разность между абсолютными величинами данных противоположных констант скорости.
Figure 00000289
При концентрации соединения, при которой скорость роста клеток превышает скорость гибели клеток, величина kp будет положительной величиной (то есть, kp>0). При концентрации соединения, при которой скорость роста клеток меньше, чем скорость гибели клеток, величина kp будет отрицательной величиной (то есть, kp<0), и количество клеток будет снижаться в зависимости от времени, указывая на устойчивую цитотоксичность. Когда kg точно совпадает с kd, то общая константа скорости пролиферации, kp, будет равна нулю. Авторы изобретения, таким образом, могут определить наименьшую цитотоксическую концентрация (LCC) как такую концентрацию соединения, которая приводит к величине kp, равной нулю, поскольку любая концентрация будет приводить к очевидно наблюдаемой цитотоксичности. Обратите внимание: при концентрации ниже LCC, вероятно, будет иметь место гибель клетки, но при скорости, которая меньше, чем скорость остаточной пролиферации клеток. В настоящем документе обработка не предназначена для определения биологических деталей действия соединения. Скорее, цель в настоящем документе состоит в том, чтобы просто определить практический параметр, с которым можно объективно количественно определить концентрацию соединения, при которой скорость гибели клетки превышает новый рост клеток. На самом деле, LCC представляет собой точку перехода или критическую концентрацию, выше которой наблюдают выраженную цитотоксичность, а не цитостатическая концентрация по существу. В этом отношении LCC можно рассматривать подобными другими физическим мерами точки перехода, таким как критическая концентрация мицеллобразования (CMC), используемая для определения концентрации липида, детергента или других видов поверхностно-активного вещества, выше которой все молекулы объединяются в мицеллярные структуры.
Традиционно, воздействие антипролиферативных соединений на клеточный рост обычно количественно определяли по величине IC50, которая определяется как такая концентрация соединения, которая снижает скорость клеточной пролиферации до половины от скорости, наблюдаемой в отсутствие соединения (то есть, для контрольного образца с носителем или растворителем; фигура 2). Однако значение IC50 не позволяет исследователю различить цитостатические и цитотоксические соединения. Напротив, значение LCC легко позволяет провести такое различие и дополнительно количественно определить концентрацию, при которой происходит переход к устойчивому цитостатическому состоянию.
Если ограничить окно времени наблюдения в диапазоне между началом воздействия (как определено выше и на фигуре 2) и концом эксперимента, то данные будут, как правило, хорошо соответствовать линейному уравнению при изображении на графике как ln(Nt) в виде функции от времени (смотри выше). Исходя из соответствия данного типа, величину kp можно определить при каждой концентрации тестируемого соединения. Заново построенный график для величины kp в виде функции от концентрации соединения ([I]) будет иметь форму снижающейся изотермы с kmax максимальным значением при [I]=0 (определяемой по контрольному образцу с носителем или растворителем) и с kmin минимальным значением при бесконечно большой концентрации соединения (фигура 3).
Figure 00000290
где Imid представляет собой концентрацию соединения, дающую величину kp, которая является средней между величинами kmax и kmin (заметьте, что величина Imid не является той же самой величиной, что и IC50, за исключением случая полностью и совершенно цитостатического соединения). Таким образом, соответствие заново изображенных на графике данных уравнению A.7 предоставляет возможность оценить kmax, kmin и Imid. Если соединение является цитостатиком (как определено в настоящем документе), то величина kmin не может быть меньше нуля. Для цитотоксических соединений, kmin будет меньше нуля, и абсолютная величина kmin будет напрямую относиться к эффективности соединения в уничтожении клеток.
Расчетные величины, полученные из уравнения A.7, также можно использовать для определения величины LCC. По определению, когда [I]=LCC, kp=0. Таким образом, при данных условиях уравнение A.7 становится следующим.
Figure 00000291
Алгебраическая перестановка в уравнении A.8 приводит в результате к уравнению для LCC.
Figure 00000292
Данный анализ прост для реализации с программным обеспечением для сглаживания нелинейных кривых и может применяться при проведении клеточных методов анализа активности соединения на всем протяжении процесса обнаружения и разработки лекарственного средства. Таким образом, LCC может обеспечить появление важной меры для оценки SAR (взаимосвязи структура-активность) соединения.
Ниже в таблице 4 приведены данные LCC и IC50 для определенных соединений согласно настоящему изобретению в отношении клеток WSU-DLCL2.
Таблица 4
Соединение № 11-суточн. LCC (мкМ) IC50 (мкм)
WSU-DLCL2 WSU-DLCL2
1 0,68 0,087
2 1,79 0,082
13 0,707 0,018
17 3,32 0,0072
36 0,368 0,011
44 0,182 0,0093
59 3,15 0,026
65 0,122 0,0018
69 0,0811 0,0062
75 0,0559 0,00097
87 0,0597 0,0057
67 0,084 0,0028
76 0,165 0,0062
141 0,0153 0,0023
Пример 200: Методы анализа in vivo
Мыши
Возраст самок мышей Fox Chase SCID® (CB17/Icr-Prkdcscid/IcrIcoCrl, Charles River Laboratories) или бестимусных мышей с мутацией по гену nude (Crl:NU(Ncr)-Foxn1nu, Charles River Laboratories) составлял 8 недель, и диапазон их массы тела (BW) составлял 16,0-21,1 г в D1 исследования. Животные неограниченно получали воду (обратный осмос 1 м.д. Cl) и диету NIH 31 Modified and Irradiated Lab Diet®, содержащую 18,0% общего белка, 5,0% общих жиров и 5,0% сырой клетчатки. Мышей размещали на облученной подстилке Enrich-o’cobsTM в стационарных микроизоляторах с 12-часовым циклом освещения при 20-22°C (68-72°F) и влажности 40-60%. Все процедуры соответствуют рекомендациям Руководства по содержанию и использованию лабораторных животных в отношении ограничения движения, условий содержания животных, хирургических процедур, регуляции ввода пищи и жидкостей и ветеринарного ухода.
Культура опухолевых клеток
Клеточные линии лимфомы человека получали из различных источников (ATCC, DSMZ), например, WSU-DLCL2 получали из DSMZ. Клеточные линии сохраняли в Piedmont в виде суспензионной культуры в среде RPMI-1640, содержащей 100 единиц/мл натриевой соли пенициллина G, 100 г/мл стрептомицина и 25 г/мл гентамицина. К среде добавляли 10% эмбриональной телячьей сывороткой и 2 мМ глутамина. Клетки культивировали во флаконах для тканевых культур во влажной камере при 37°C, в атмосфере 5% CO2 и 95% воздуха.
Имплантация опухоли in vivo
Клеточные линии лимфомы человека, например, клетки WSU-DLCL2, собирали во время середины log-фазы роста и ресуспендировали в PBS с использованием 50% MatrigelTM (BD Biosciences). Каждая мышь получала 1×107 клеток (0,2 мл клеточной суспензии) подкожно в правый бок. Опухоли для контроля роста измеряли циркулем в двух направлениях в пересчете на средний объем, достигающий требуемого диапазона 80-120 мм3. Объем опухоли в мм3 вычисляли из формулы:
Figure 00000293
где w = ширина и l = длина опухоли в мм. Вес опухоли можно оценить, учитывая, что 1 мг равен 1 мм3 объема опухоли. Через 10-30 дней мыши с опухолями 108-126 мм3 были разделены на экспериментальные группы со средним объемом опухоли 117-119 мм3.
Исследуемые образцы
Тестируемые соединения хранили при комнатной температуре и защищали от света. В каждый день обработки свежие препараты соединений (например, препарат тригидрохлорида соли соединения 44 или тригидрохлорида соли соединения 87) приготавливали, суспендируя порошок в 0,5% карбоксиметилцеллюлозе натрия (NaCMC) и 0,1% Tween® 80 в деионизованной воде. Соединение 141 (свободное основание) растворяли в стерильном физиологическом растворе, и величину корректировали каждые сутки значение pH до 4,5 добавлением свежего HCl. Носители, 0,5% NaCMC и 0,1% Tween® 80 в деионизованной воде или стерильном физиологическом растворе при pH 4,5, использовали для обработки контрольных групп по тем же самым схемам. Препараты перед введением хранили вдали от света при 4°C. Если не указано иначе, то соединения указанные и тестируемые в данном эксперименте, находились в виде их определенных солей, упомянутых в данном разделе.
План лечения
Мышей обрабатывали дозами соединений в диапазоне 12,5-600 мг/кг по схеме TID (три раза в сутки каждые 8 ч), BID (2 раза в сутки каждые 12 ч) или QD (один раз в сутки) в течение различного количества дней путем перорального чреззондового питания (соединение 44 или 87) или инъекций посредством интраперитонеального способа введения (соединение 141). Каждую дозу вводили в объеме 0,2 мл/20 г мыши (10 мл/кг), и корректировали с учетом последнего зарегистрированного веса отдельных животных. Максимальная продолжительность обработки составляла 28 дней.
Анализ среднего объема опухоли (MTV) и ингибирование роста опухоли (TGI)
Эффективность лечения определяли в последние сутки обработки. MTV(n), средний объем опухоли для количества животных, n, подлежащих оценке в последние сутки, определяли для каждой группы. Процент ингибирования роста опухоли (%TGI) можно определить несколькими способами. Сначала, различие между MTV(n) в обозначенной контрольной группе и MTV(n) в получавшей лекарственное средство (treated) группе выражают как процент MTV(n) контрольной (control) группы:
Figure 00000294
Другой способ вычисления %TGI учитывает изменение размера опухоли от суток 1 до суток n, причем n представляет собой последние сутки обработки.
Figure 00000295
Figure 00000296
Figure 00000297
Токсичность
Животных взвешивали ежедневно на сутки 1-5, и затем два раза в неделю до завершения исследования. Мышей часто обследовали в отношении выраженных признаков любых нежелательных связанных с обработкой побочных эффектов, которые документировали. Приемлемую токсичность для максимально переносимой дозы (MTD) определяли как среднюю потерю в BW в группе, менее чем 20% во время исследования, но не более чем 10% смертность вследствие смертельных случаев TR. Смертельный случай следовало классифицировать как TR, если он был связан с побочными эффектами обработки, что подтверждалось клиническими признаками и/или при вскрытии, или если он происходил вследствие неизвестных причин во время периода введения доз. Смертельный случай следовало классифицировать как NTR, если существовали доказательства, что смертельный случай не был связан с побочными эффектами обработки. Смертельные случаи NTR во время периода введения доз типично подразделялись на NTRa (вследствие несчастного случая или человеческой ошибки) или NTRm (вследствие подтвержденного при вскрытии распространения опухоли при инвазии и/или метастазировании). Перорально получавшие лечение животные, которые умерли от неизвестных причин по время периода введения доз, можно классифицировать как NTRu, когда характеристика группы не поддерживается классификацией TR и когда вскрытие для исключения ошибки дозирования непригодно.
Получение образцов
На сутки 7 или 28 исследования мышей отбирали предварительно указанным способом для того, чтобы оценить ингибирование мишени в опухолях. Опухоли получали от указанных мышей в не содержащих РНКазу условиях и разделяли пополам. Замороженную ткань опухоли от каждого животного быстро замораживали в жидком N2 и тонко измельчали пестиком в ступке.
Статистический и графический анализы
Все статистические и графические анализы проводили при помощи Prism 3.03 (GraphPad) для Windows. Для проверки статистической значимости между контрольными и тестируемыми группами на протяжении всего периода действия обработки применяли анализ ANOVA повторных измерений с апостериорным критерием множественного сравнения Даннетта или двухфакторный ANOVA. В Prism результаты представлены как незначимые (ns) при P>0,05, значимые (обозначенные «*») при 0,01<P<0,05, весьма значимые («**») при 0,001<P<0,01 и крайне значимые («***») при P<0,001.
Экстракция гистонов
Для выделения гистонов, 60-90 мг ткани опухоли гомогенизировали в 1,5 мл буфера для экстракции ядер (10 мМ Tris-HCl, 10 мМ MgCl2, 25 мМ KCl, 1% тритон X-100, 8,6% сахароза с добавлением таблетки ингибиторов протеаз Roche 1836145) и инкубировали на льду в течение 5 минут. Ядра собирали посредством центрифугирования при 600 g в течение 5 минут при 4°C и один раз промывали в PBS. Удаляли надосадочную жидкость и экстрагировали гистоны в течение одного часа при встряхивании каждые 15 минут с 0,4н холодной серной кислотой. Экстракты очищали посредством центрифугирования при 10000×g в течение 10 минут при 4°C и переносили в чистую пробирку для микроцентрифугирования, содержащую 10× объем ледяного ацетона. Гистоны осаждали при -20°C в течение 2 часов - в течение ночи, получали в виде осадка посредством центрифугирования при 10000×g в течение 10 минут, и ресуспендировали в воде.
ELISA
Гистоны приготавливали в равных концентрациях в буфере для иммобилизации (PBS+0,05%BSA), получая 0,5 нг/мкл образца, и 100 мкл образца добавляли в двух повторах в 2 96-луночные планшеты для ELISA (Thermo Labsystems, Immulon 4HBX #3885). Планшеты герметично закрывали и инкубировали в течение ночи при 4°C. На следующий день планшеты промывали 300 мкл/лунка 3×PBST (PBS+0,05% Tween 20; 10×PBST, KPL #51-14-02) в машине для промывания планшетов Bio Tek. Планшеты блокировали растворителем в количестве 300 мкл/лунка (PBS+2%BSA+0,05% Tween 20), инкубировали при к.т. в течение 2 часов и промывали 3×PBST. Все антитела разводили в растворителе. В каждый планшет добавляли 100 мкл/лунка антитела против H3K27me3 (CST #9733, 50% исходный раствор глицерина 1:1000) или против общего H3 (Abcam ab1791, 50% глицерин 1:10000). Планшеты инкубировали в течение 90 мин при к.т. и промывали 3×PBST. Добавляли 100 мкл/лунка антитела против Rb-IgG-HRP (Cell Signaling Technology, 7074) в соотношении 1:2000 в планшет с H3K27Me3 и в соотношении 1:6000 в планшет с H3, и инкубировали в течение 90 мин при к.т. Планшеты промывали 4×PBST. Для детекции добавляли 100 мкл/лунка субстрата TMB (BioFx Laboratories, #TMBS), и инкубировали планшеты в темноте при к.т. в течение 5 мин. Реакцию останавливали добавлением 100 мк/лунка 1н H2SO4. Оптическую плотность при 450 нм считывали на спектрофотометре для микропланшетов SpectaMax M5.
Результаты:
Исследование PD с использованием соединения 87 в течение 7 суток
Для того чтобы проверить, может ли соединение 87 модулировать уровень H3K27me3 в опухолях in vivo, мышей с ксенотрансплантатами опухоли WSU-DLCL2, обрабатывали соединением 87 либо в дозе 200 мг/кг BID, либо в дозе 400 мг/кг QD или носителем (по схеме BID) в течение 7 суток. В каждую группу входило по 4 животных. Животных подвергали эвтаназии через 3 ч после введения последней дозы, и фиксировали опухоль в замороженном состоянии, как описано выше. После экстракции гистонов образцы использовали для ELISA анализа с применением антител против триметилированного состояния гистона H3K27 (H3K27me3) или общего гистона H3. На основании этих данных вычисляли соотношение полностью метилированного и общего H3K27. На фигуре 4 показаны средние соотношения полного метилирования для всех групп, измеренные при помощи ELISA, и ингибирование мишени в диапазоне от приблизительно 62,5% (400 мг/кг QD×7) до 37,5% (200 мг/кг BID×7) по сравнению с носителем.
Исследование эффективности соединения 141 в модели ксенотрансплантата WSU-DLCL2 в течение 28 дней
Для того чтобы проверить, может ли соединение 141 индуцировать ингибирование роста опухоли in vivo, мышей с ксенотрансплантатами опухоли WSU-DLCL2 обрабатывали соединением 141 в количестве 12,5, 25 или 50 мг/кг QD в течение 28 суток посредством интраперитонеальной инъекции. Объем опухоли и массу тела определяли два раза в неделю. Соединение 141 хорошо переносилось при всех дозах с минимальной потерей массы тела. Параллельную группу мышей (n=4 на группу) обрабатывали теми же самыми дозами в течение 7 суток, и мышей подвергали эвтаназии на 7 сутки через 3 ч после последней дозы для выделения образца опухоли и оценки ингибирования мишени. На фигуре 5 показан результат детекции методом ELISA полного метилирования H3K27me3, нормализованного к общему H3. Наблюдали зависимое от дозы ингибирование мишени в диапазоне от 39% до 67% по сравнению с носителем.
На фигуре 6 представлен рост опухоли на протяжении курса обработки длительностью 28 суток для групп, обработанных носителем или соединением 141.
Можно наблюдать эффект введения носителя, введенного посредством интраперитонеального способа введения, поскольку рост опухоли был более медленным в группе с носителем по сравнению с необработанной группой. Только группа с наивысшей дозой соединения 141 (50 мг/кг QD×28) показала ингибирование роста опухоли по сравнению с обработанной носителем группой (33%, вычисленные на основании 1 суток, 43%, вычисленные на основании 7 суток). Рост опухоли не был статистически значимым по сравнению с носителем, исходя из применения анализа ANOVA повторных измерений с апостериорным критерием Даннета, но конечный размер опухоли был значительно меньше в группе, получавшей 50 мг/кг DQ, по сравнению с носителем (двухфакторный ANOVA с апостериорным критерием Бонферрони, p<0,0001).
Исследование эффективности соединения 44 в модели ксенотрансплантата WSU-DLCL2
Для того чтобы проверить, может ли соединение 44 индуцировать противоопухолевый эффект in vivo, мышей с ксенотрансплантатами опухоли WSU-DLCL2 обрабатывали соединением 44 при 37,5, 75 или 150 мг/кг TID в течение 28 суток. Для эксперимента по эффективности режима лечения в каждую группу включали по 12 мышей. Для оценки ингибирования мишени через 7 суток параллельной группе (n=6 на группу) в течение 7 суток вводили те же дозы и по одинаковым схемам. На фигуре 7 представлен рост опухоли на протяжении курса обработки длительностью 28 дней для групп, получавших носитель и соединение 44. Можно наблюдать явное ингибирование роста опухоли, зависимое от дозы. Только группа с наиболее высокой дозировкой статистически значимо различалась от носителя при проведении ANOVA повторных измерений с апостериорном критерием Даннета. Ингибирование роста опухоли для группы с наивысшей дозировкой составляло 58% (на основании 1 суток) или 73% (на основании 7 суток) по сравнению с носителем.
Для группы исследования эффективности (через 3 ч после последнего введения дозы для каждой группы) гистоны экстрагировали из опухолей, собранных через 7 суток после введения доз (параллельная группа PD) и в конце исследования на 28 сутки. На фигуре 8 представлено, что уровень метила H3K27me3 модулируется при обработке зависимым от дозы образом, и что наилучшее статистически значимое ингибирование мишени имеет место на 28 сутки по сравнению с 7 сутками для группы с наивысшей дозировкой (150 мг/кг TID).
Исследование эффективности с использованием соединения 44 при разных режимах дозирования
Для того чтобы оценить, будет ли соединение 44 приводить к ингибированию роста опухоли при других режимах дозирования, помимо TID, проводили исследование эффективности с ксенотрансплантатом WSU-DLCL2, где одновременно сравнивали режимы TID, BID и QD. В каждую группу входило по 12 животных, и мышей обрабатывали в течение 28 суток. На фигуре 9 представлен рост опухоли на протяжении курса обработки длительностью 28 суток для групп, получавших носитель и соединение 44. Ингибирование роста опухоли смогли достичь при всех дозировках и режимах (таблица 5 ниже: обобщенные результаты по ингибированию роста опухолей, вызванного при различных режимах дозирования соединения 44 в ксенотрансплантатах WSU-DLXC2). В то время как только 150 мг/кг TID и 225 мг/кг BID статистически значимо различались от носителя при ANOVA повторных измерений с апостериорным критерии Даннета, все конечные размеры опухоли в группах, получавших соединение 44, статистически отличались от носителя при ANOVA и апостериорном критерии Бонферрони (p<0,0001).
Таблица 5
Группа % TGI от суток 1 % TGI от суток 7
150 мг/кг TID 73 86
225 мг/кг BID 71 80
300 мг/кг BID 57 67
600 мг/кг QD 58 70
На 28 сутки мышей подвергали эвтаназии, и собирали опухоли через 3 ч после последнего дозирования для оценки ингибирования мишени. На фигуре 10 представлено, что обработка соединением 44 вызывала сходные степени ингибирования мишени для всех дозировок и режимов.
Пример 201: Противоопухолевое воздействие соединения 44 в мышиной модели ксенотрансплантата диффузной крупноклеточной B-клеточной лимфомы человека KARPAS-422
Соединение 44 (в виде гидрохлорида) проверяли на его противоопухолевую активность в мышиной модели ксенотрансплантата KARPAS-422, которая представляет собой модель ксенотрансплантата диффузной крупноклеточной B-клеточной лимфомы человека. Если не указано иное, то указанное и тестируемое в данном эксперименте соединение 44 находилось в виде его тригидрохлорида. Исходя из объема опухоли (TV) отбирали 45 самок мышей линии CAnN.Cg-Foxn1nu/CrlCrlj (Charles River Laboratories Japan) с опухолями KARPAS-422, у которых средний TV достигал приблизительно 150 мм3, и делили случайным образом на пять групп. Пероральное введение соединения 44 (80,5, 161, 322 и 644 мг/кг) или носителя начинали на сутки 1. Соединение 44 давали один раз в сутки на сутки 1 и сутки 29 и дважды в сутки на сутки 2-28 дня. Перед введением вычисляли объем введения (0,1 мл/10 г массы тела), исходя из массы тела. Дважды в неделю измеряли TV и массу тела. План данного эксперимента представлен в таблице 6.
Таблица 6
Режим дозирования
Группа Число животных Лечение
(дважды в сутки)		 Путь и схема приема
1 9 Носитель (0,5% метилцеллюлоза, 0,1% Твин-80) п/о; bid×28 суток
2 9 80,5 мг/кг соединения 44 (гидрохлорид) п/о; bid×28 суток
3 9 161 мг/кг соединения 44 (гидрохлорид) п/о; bid×28 суток
4 9 322 мг/кг соединения 44 (гидрохлорид) п/о; bid×28 суток
5 9 644 мг/кг соединения 44 (гидрохлорид) п/о; bid×28 суток
Значение TV вычисляли, исходя их измерений циркулем по формуле для объема вытянутого эллипсоида (L×W2)/2, где L и W представляют собой соответствующие перпендикулярные измерения длины и ширины (мм).
Данные выражали в виде среднего значения ± стандартного отклонения (SD). Различия в значениях TV между группами, обработанных носителем и обработанных соединением 44, анализировали посредством дисперсионного анализа повторных измерений (ANOVA) с критерием множественного сравнения Даннета. Величину P<0,05 (двусторонний) рассматривали статистически значимой. Статистический анализ проводили с использованием программного пакета Prism 5 версии 5.04 (GraphPad Software, Inc., CA, USA).
Во время периода обработки дозировка 644 мг/кг привела в гибели двух из девяти мышей. Максимально переносимую дозу, при которой в исследовании не было зарегистрировано никакой смертности или потери массы тела, определили равной 322 мг/кг, (фигура 11 и таблица 7).
Соединение 44 продемонстрировало значительные дозозависимые противоопухолевые эффекты в отношении ксенотрансплантата диффузной крупноклеточной B-клеточной лимфомы человека KARPAS-422 при всех дозах на сутки 29 (фигура 12). Эффект ингибирования роста опухоли наблюдали при 80,5 мг/кг. Регрессию опухоли наблюдали при 161 и 322 мг/кг.
Таблица 7
Воздействие соединения 44 на смертность у мышей
Лечение (дважды в сутки) Число
мертвых/всего
Носитель 0/9
Соединение 44 (гидрохлорид) 80,5 мг/кг 0/9
Соединение 44 (гидрохлорид) 161 мг/кг 0/9
Соединение 44 (гидрохлорид) 322 мг/кг 0/9
Соединение 44 (гидрохлорид) 644 мг/кг 2/9
ВКЛЮЧЕНИЕ ПОСРЕДСТВОМ ССЫЛКИ
Полное раскрытие каждого из патентных документов и научных статей, на которые приводятся ссылки в настоящем документе, включены в него посредством ссылки во всех смыслах.
ЭКВИВАЛЕНТЫ
Настоящее изобретение может быть инкорпорировано в другие конкретные формы без отступления от его существа или существенных характеристик. Поэтому, предшествующие варианты осуществления подлежат рассмотрению во всех отношениях скорее как иллюстративные, чем ограничивающие изобретение, описанное в настоящем документе. Таким образом, объем настоящего изобретения определяется скорее прилагаемой формулой изобретения, чем предшествующим описанием, и все изменения, которые подпадают под значение и объем эквивалентов формулы изобретения, подлежат включению в него.

Claims (134)

1. Способ ингибирования активности гистонметилтрансферазы EZH2 у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли:
Figure 00000298
где:
X1 представляет собой N или CR11;
X2 представляет собой N или CR13;
Z представляет собой NR7R8 или CR7R8R14;
каждый из R1, R5, R9 и R10 независимо представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена и гидроксила;
каждый из R2, R3 и R4 независимо представляет собой -Q1-T1, где Q1 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, и T1 представляет собой H, галоген, гидроксил или RS1, где RS1 представляет собой C1-C3алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил, и RS1 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена и гидроксила;
R6 представляет собой фенил или 5- или 6-членный гетероарил, содержащий 1-4 гетероатома, выбранных из N, O и S, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, и T2 представляет собой H, галоген, циано, -ORa, -NRaRb, -C(O)NRaRb, -S(O)2Ra или RS2, где каждый из Ra, Rb и Rc независимо представляет собой H или RS3, каждый из RS2 и RS3 независимо представляет собой C1-C6алкил, 4-7-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из O и N, или Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, выбранный из O и N, и каждый из RS2, RS3 и 4-7-членного гетероциклоалкильного кольца, образованного Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, где Q3 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, и T3 выбирают из группы, состоящей из галогена, C1-C6алкила, C3-C8циклоалкила, 4-6-членного гетероциклоалкила, содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из O и N, ORd и -NRdRe, каждый из Rd и Re независимо представляет собой H или C1-C6алкил, или -Q3-T3 представляет собой оксо; или любые два смежных -Q2-T2 образуют вместе с атомами, к которым они присоединены, 6-членное кольцо, необязательно содержащее 1 гетероатом N;
R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь, C1-C4алкильный линкер или C2-C4алкенильный линкер, каждый линкер необязательно замещен галогеном, и T4 представляет собой H, галоген, -ORf, -C(O)Rf или RS4, где каждый Rf независимо представляет собой RS5, RS4 представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 гетероатом, выбранный из N, O и S, RS5 представляет собой C1-С6алкил, С2-С6алкенил или С2-С6алкинил, и RS4 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5, где Q5 представляет собой связь, C(O), NRkC(O) или S(O)2, Rk представляет собой H, и T5 представляет собой галоген, C1-C6алкил, гидроксил, C1-C6алкоксил, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино или S(O)qRq, где q равно 0, 1 или 2, и Rq представляет собой C1-C6алкил; или -Q5-T5 представляет собой оксо;
каждый из R8, R11, R12 и R13 независимо представляет собой H, галоген, гидроксил или RS6, где RS6 представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 гетероатом, выбранный из N, O и S, и RS6 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино и ди-C1-C6алкиламино; или R7 и R8 образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 6-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 дополнительных гетероатомов, или R7 и R8 образуют вместе с атомом C, к которому они присоединены, C3-C8циклоалкил; и
R14 отсутствует или представляет собой H или C1-C6алкил.
2. Способ по п.1, где
X1 представляет собой N или CR11;
X2 представляет собой N или CR13;
Z представляет собой NR7R8 или CR7R8R14;
каждый из R1, R5, R9 и R10 независимо представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена и гидроксила;
каждый из R2, R3 и R4 независимо представляет собой -Q1-T1, где Q1 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, и T1 представляет собой H, галоген, гидроксил или RS1, где RS1 представляет собой C1-C3алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил или C3-C8циклоалкил, и RS1 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена и гидроксила;
R6 представляет собой фенил или 5- или 6-членный гетероарил, содержащий 1-4 гетероатома, выбранных из N, O и S, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном, и T2 представляет собой H, галоген, циано, -ORa, -NRaRb, -C(O)NRaRb, -S(O)2Ra или RS2, где каждый из Ra, Rb и Rc независимо представляет собой H или RS3, каждый из RS2 и RS3 независимо представляет собой C1-C6алкил или 4-7-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 или 2 гетероатома, выбранных из O и N, или Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, выбранный из O и N, и каждый из RS2, RS3 и 4-7-членного гетероциклоалкильного кольца, образованного Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, где Q3 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, и T3 выбирают из группы, состоящей из галогена, C1-C6алкила, C3-C8циклоалкила или 4-6-членного гетероциклоалкила, содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из O и N, ORd и -NRdRe, каждый из Rd и Re независимо представляет собой H или C1-C6алкил, или -Q3-T3 представляет собой оксо; или любые два смежных -Q2-T2 образуют вместе с атомами, к которым они присоединены, 6-членное кольцо, необязательно содержащее 1 атом N; при условии, что -Q2-T2 не представляет собой H;
R7 представляет собой -Q4-T4, где Q4 представляет собой связь, C1-C4алкильный линкер или C2-C4алкенильный линкер, каждый линкер необязательно замещен галогеном, и T4 представляет собой H, галоген, -ORf, -C(O)Rf или RS4, где каждый Rf независимо представляет собой RS5, RS4 представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил, C2-C6алкинил, C3-C8циклоалкил или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 гетероатом, выбранный из N, O и S, RS5 представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил или C2-C6алкинил, и каждый RS4 необязательно замещен одним или несколькими -Q5-T5, где Q5 представляет собой связь, C(O), NRkC(O) или S(O)2, Rk представляет собой H, и T5 представляет собой галоген, C1-C6алкил, гидроксил, C1-C6алкоксил, амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино или S(O)qRq, где q равно 0, 1 или 2, и Rq представляет собой C1-C6алкил; или -Q5-T5 представляет собой оксо; при условии, что R7 не представляет собой H;
каждый из R8, R11, R12 и R13 независимо представляет собой H, галоген, гидроксил или RS6, где RS6 представляет собой C1-C6алкил, C2-C6алкенил или C2-C6алкинил, и RS6 необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино и ди-C1-C6алкиламино; или R7 и R8 образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 6-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 дополнительных гетероатомов, или R7 и R8 образуют вместе с атомом C, к которому они присоединены, C3-C8циклоалкил; и
R14 отсутствует или представляет собой H или C1-C6алкил.
3. Способ по п.1, где соединение представляет собой соединение формулы (Ia):
Figure 00000299
4. Способ по любому одному из пп.1-3, где X1 представляет собой CR11, и X2 представляет собой CR13.
5. Способ по любому одному из пп.1-3, где X1 представляет собой CR11, и X2 представляет собой N.
6. Способ по любому одному из пп.1-3, где X1 представляет собой N, и X2 представляет собой CR13.
7. Способ по любому одному из пп.1-3, где X1 представляет собой N, и X2 представляет собой N.
8. Способ по любому одному из пп.1-7, где Z представляет собой NR7R8.
9. Способ по любому одному из пп.1-7, где Z представляет собой CR7R8R14.
10. Способ по любому одному из пп.1-9, где R6 представляет собой фенил, замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
11. Способ по любому одному из пп.1-9, где R6 представляет собой 5- или 6-членный гетероарил, содержащий 1-4 гетероатома, выбранных из N, O и S, и необязательно замещенный одним или несколькими -Q2-T2.
12. Способ по любому одному из пп.1-9 и 11, где R6 представляет собой пиридинил, пиразолил, пиримидинил, тетразолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, фурил или тиенил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2.
13. Способ по любому одному из пп.1-12, где T2 представляет собой -NRaRb или -C(O)NRaRb, где каждый из Ra и Rb независимо представляет собой H или C1-C6алкил, или Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, выбранный из O и N, и 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо необязательно замещено одним или несколькими -Q3-T3.
14. Способ по любому одному из пп.1-12, где Q2 представляет собой связь, и T2 представляет собой -NRaRb, где Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, выбранный из O и N.
15. Способ по любому одному из пп.1-12, где Q2 представляет собой C1-C3алкильный линкер, необязательно замещенный галогеном.
16. Способ по любому одному из пп.1-15, где R7 представляет собой C1-C6алкил, C3-C8циклоалкил или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий один гетероатом, выбранный из O, N и S, каждый необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
17. Способ по любому одному из пп.1-16, где R7 представляет собой 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 гетероатом, выбранный из O, N и S, необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
18. Способ по любому одному из пп.1-16, где R7 представляет собой пиперидинил, тетрагидропиран, тетрагидро-2H-тиопиранил, циклопентил или циклогексил, каждый необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
19. Способ по любому одному из пп.1-16, где R7 представляет собой тетрагидропиран.
20. Способ по любому одному из пп.1-18, где один или несколько -Q5-T5 представляют собой оксо.
21. Способ по любому одному из пп.1-18, где T5 представляет собой галоген, C1-C6алкил или C1-C6алкоксил.
22. Способ по любому одному из пп.1-18, где Q5 представляет собой связь, и T5 представляет собой амино, моно-C1-C6алкиламино, ди-C1-C6алкиламино или C1-C6алкил.
23. Способ по любому одному из пп.1-18, где Q5 представляет собой CO, S(O)2 или NHC(O); и T5 представляет собой C1-C6алкил или C1-C6алкоксил.
24. Способ по любому одному из пп.1-23, где R11 представляет собой H.
25. Способ по любому одному из пп.1-16 и 24, где R7 представляет собой циклопентил или циклогексил, каждый необязательно замещенный одним -Q5-T5.
26. Способ по любому одному из пп.1-16 и 22, 23, где Q5 представляет собой NHC(O), и T5 представляет собой C1-C6алкил или C1-C6алкокси.
27. Способ по любому одному из пп.1-18 и 24, где R7 представляет собой изопропил.
28. Способ по любому одному из пп.1-27, где каждый из R2 и R4 независимо представляет собой H или C1-C6алкил.
29. Способ по любому одному из пп.1-28, где каждый из R2 и R4 представляет собой метил.
30. Способ по любому одному из пп.1-29, где R1 представляет собой H.
31. Способ по любому одному из пп.1-30, где R12 представляет собой H, метил, этил, этенил или галоген.
32. Способ по любому одному из пп.1-31, где R12 представляет собой метил.
33. Способ по любому одному из пп.1-31, где R12 представляет собой этил.
34. Способ по любому одному из пп.1-33, где R8 представляет собой H, метил или этил.
35. Способ по любому одному из пп.1-33, где R8 представляет собой метил.
36. Способ по любому одному из пп.1-33, где R8 представляет собой этил.
37. Способ по любому одному из пп.1-14 и 28-33, где Z представляет собой NR7R8 или CR7R8R14, где R7 и R8 образуют вместе с атомом, к которому они присоединены, кольцо, выбранное из группы, состоящей из пиперидинила и циклогексенила.
38. Способ по любому одному из пп.1-37, где R13 представляет собой H или метил.
39. Способ по любому одному из пп.1-38, где R13 представляет собой H.
40. Способ по любому одному из пп.1-39, где R3 представляет собой H.
41. Способ по любому одному из пп.1-39, где каждый из R5, R9 и R10 представляет собой H.
42. Способ по любому одному из пп.1-3, где соединение представляет собой соединение формулы (Ie):
Figure 00000300
43. Способ по любому одному из пп.1-3, где соединение представляет собой соединение формулы (Ig):
Figure 00000301
где каждый R2, R4 и R12 независимо представляет собой C1-6алкил.
44. Способ по любому одному из пп.1-3, 42 и 43, где R6 представляет собой фенил или 5- или 6-членный гетероарил, содержащий 1-4 гетероатома, выбранных из N, O и S, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими -Q2-T2, где Q2 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, и T2 представляет собой H, галоген, циано, -ORa, -NRaRb, -C(O)NRaRb, -S(O)2Ra или RS2, где каждый из Ra и Rb независимо представляет собой H или RS3, каждый из RS2 и RS3 независимо представляет собой C1-C6алкил, или Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом, выбранный из O и N, и каждый из RS2, RS3 и 4-7-членного гетероциклоалкильного кольца, образованного Ra и Rb, необязательно замещен одним или несколькими -Q3-T3, где Q3 представляет собой связь или C1-C3алкильный линкер, и T3 выбирают из группы, состоящей из галогена, C1-C6алкила, 4-6-членного гетероциклоалкила, содержащего 1 или 2 гетероатома, выбранных из O и N, ORd и -NRdRe, каждый из Rd и Re независимо представляет собой H или C1-C6алкил, или -Q3-T3 представляет собой оксо; или любые два смежных -Q2-T2 образуют вместе с атомами, к которым они присоединены, 6-членное кольцо, необязательно содержащее 1 атом N.
45. Способ по любому одному из пп.1-3, 42 и 43, где соединение представляет собой соединение формулы (II):
Figure 00000302
,
где Q2 представляет собой связь или метильный линкер; T2 представляет собой H, галоген, -ORa или -NRaRb; R7 представляет собой пиперидинил, тетрагидропиран, циклопентил или циклогексил, каждый из которых необязательно замещен одним -Q5-T5, и R8 представляет собой этил.
46. Способ по любому одному из пп.1-3, 42 и 43, где соединение представляет собой соединение формулы (IIa):
Figure 00000303
47. Способ по любому одному из пп.1-3, 42, 43, 45 и 46, где каждый из Ra и Rb независимо представляет собой H или C1-C6алкил, необязательно замещенный одним или несколькими -Q3-T3.
48. Способ по любому одному из пп.1-3, 42, 43, 45 и 46, где один из Ra и Rb представляет собой H.
49. Способ по любому одному из пп.1-3, 42, 43, 45 и 46, где Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее 0 или 1 дополнительный гетероатом в дополнение к атому N, и кольцо необязательно замещено одним или несколькими -Q3-T3.
50. Способ по любому одному из пп.1-3, 42, 43, 45 и 46, где Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, азетидинил, пирролидинил, имидазолидинил, пиразолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, триазолидинил, тетрагидрофуранил, пиперидинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, пиперазинил или морфолинил, и кольцо необязательно замещено одним или несколькими -Q3-T3.
51. Способ по п.50, где Ra и Rb образуют вместе с атомом N, к которому они присоединены, морфолинил.
52. Способ по любому одному из пп.1-3, 42, 43 и 45-51, где R7 представляет собой C3-C8циклалкил или 6-членный гетероциклоалкил, каждый необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
53. Способ по любому одному из пп.1-3, 42, 43 и 45-51, где R7 представляет собой пиперидинил, тетрагидропиран, тетрагидро-2H-тиопиранил, циклопентил, циклогексил или циклогептил, каждый необязательно замещенный одним или несколькими -Q5-T5.
54. Способ по любому одному из пп.1-3, 42, 43 и 45-51, где R7 представляет собой тетрагидропиран.
55. Способ по любому одному из пп.1-3, 42, 43 и 45-54, где R8 представляет собой H или C1-C6алкил, который необязательно замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, C1-C6алкоксила, амино, моно-C1-C6алкиламино и ди-C1-C6алкиламино.
56. Способ по любому одному из пп.1-3, 42, 43 и 45-54, где R8 представляет собой H, метил или этил.
57. Способ по п.1, где соединение выбирают из следующих:
Figure 00000304
Figure 00000305
Figure 00000306
Figure 00000307
Figure 00000308
Figure 00000309
Figure 00000310
Figure 00000311
Figure 00000312
Figure 00000313
Figure 00000314
Figure 00000315
Figure 00000316
Figure 00000317
Figure 00000318
Figure 00000319
Figure 00000320
Figure 00000321
Figure 00000322
Figure 00000323
Figure 00000324
Figure 00000325
Figure 00000326
Figure 00000327
Figure 00000328
Figure 00000329
Figure 00000330
Figure 00000331
Figure 00000332
Figure 00000333
Figure 00000334
Figure 00000335
Figure 00000336
Figure 00000337
Figure 00000338
Figure 00000339
Figure 00000340
Figure 00000341
58. Способ по п.1, где соединение выбирают из следующих:
Figure 00000342
Figure 00000343
Figure 00000344
Figure 00000345
Figure 00000346
Figure 00000347
Figure 00000348
Figure 00000349
и их фармацевтически приемлемых солей.
59. Способ по п.1, где соединение представляет собой
Figure 00000350
или его фармацевтически приемлемую соль.
RU2017132054A 2011-04-13 2012-04-13 Арил- или гетероарилзамещенные бензольные соединения RU2785567C2 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161474821P 2011-04-13 2011-04-13
US61/474,821 2011-04-13
US201161499595P 2011-06-21 2011-06-21
US61/499,595 2011-06-21

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2013150345A Division RU2632193C2 (ru) 2011-04-13 2012-04-13 Арил-или гетероарилзамещенные бензольные соединения

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2022131297A Division RU2022131297A (ru) 2011-04-13 2022-12-01 Арил- или гетероарилзамещенные бензольные соединения

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2017132054A RU2017132054A (ru) 2019-02-06
RU2017132054A3 RU2017132054A3 (ru) 2021-05-14
RU2785567C2 true RU2785567C2 (ru) 2022-12-08

Family

ID=

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5716993A (en) * 1993-12-27 1998-02-10 Eisai Co., Ltd. Anthranilic acid derivatives
US20040082619A1 (en) * 2000-12-28 2004-04-29 Yukio Tada Pyridone derivatives having affinity for cannabinoid 2-type receptor

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5716993A (en) * 1993-12-27 1998-02-10 Eisai Co., Ltd. Anthranilic acid derivatives
US20040082619A1 (en) * 2000-12-28 2004-04-29 Yukio Tada Pyridone derivatives having affinity for cannabinoid 2-type receptor

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11052093B2 (en) Aryl-or heteroaryl-substituted benzene compounds
RU2785567C2 (ru) Арил- или гетероарилзамещенные бензольные соединения
AU2019280102A1 (en) Aryl-or heteroaryl-substituted benzene compounds