PT2683244T - Moduladores heterocíclicos de síntese de lipídios - Google Patents

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D Oslob Johan
S Mcdowell Robert
Johnson Russell
Yang Hanbiao
Evanchik Marc
A Zaharia Cristiana
Cai Haiying
W Hu Lily
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3-V Biosciences Inc
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Description

DESCRIÇÃO
MODULADORES HETEROCÍCLICOS DE SÍNTESE DE LIPÍDIOS PEDIDOS RELACIONADOS
Este pedido reivindica o benefício do Pedido U.S. depositado anteriormente N° 61'450,561 depositado em 8 de Março de 2011; Pedido U.S. N° 61'508,611 depositado em 16 de Julho de 2011 e Pedido U.S. N° 61'585,642 depositado em 11 de Janeiro de 2012.
CAMPO A presente descrição refere-se genericamente aos moduladores heterocíclicos de síntese de lipídeos e os métodos de uso dos mesmos. Os presentes moduladores heterocíclicos de síntese de lípidios podem ser utilizados para o tratamento de desordens caracterizadas por desregulação na função de ácido graxo sintase em um indivíduo através da modulação da via de ácido graxo sintase e'ou a função de ácido graxo sintase.
ANTECEDENTES A doença virai é uma preocupação de saúde significativa que ameaça grandes segmentos das populações humanas. Algumas das características relacionadas com a infeção virai que são motivo de preocupação para os profissionais de saúde incluem a sua natureza altamente contagiosa (por exemplo, HIV, SARS, etc.) e alta mutabilidade. Alguns vírus também são oncogénicos (tais como, HPV, EBV e HBV) . Embora os vírus estejam estruturalmente entre os mais simples dos organismos ,os mesmos são considerados estar entre os mais difíceis de controlar e representar um desafio formidável para o medicamento antiviral RED.
Até agora, tem havido algumas drogas antivirais utilizadas em pacientes, tais como a Amantadina e Oseltamivir para influenza, Aciclovir para infeções relacionadas aHSV, Ganciclovir para a infeção por CMV, e vários agentes, incluindo drogas co-formuladas úEfavirenz, emtricitabina e tonfovir disoproxil fumaratoIXI para tratamentos de ADS. Essas drogas possuem uma variedade de efeitos colaterais imunológicos e metabólicos, neurológicos indesejáveis. Portanto, o desenvolvimento de uma nova terapia antiviral tornou-se um grande foco de pesquisa e desenvolvimento médico e farmacêutico. A infeção pelo vírus da hepatite C úHCVlEl é um grave problema de saEl de. Estima-se que 170 milhões de pesoas em todo o mundo estão cronicamente infetadas com o HCV. Infeção por HCV pode levar à hepatite crónica, cirrose, insuficiência hepática e carcinoma hepatocelular. A infeção por HCV crónica é, portanto, a principal causa mundial de mortalidade prematura relacionada com o fígado. 0 presente padrão de regime de tratamento de cuidado para a infeção por HCV envolve terapia de combinação com interferon-alfa e ribavirina, muitas vezes com a adição de um inibidor de protéase de ação direta úTelaprevir e BoceprevirS . O tratamento é complicado e algumas vees tem efeitos colaterais graves e debilitantes. Por esta razão, muitos pacientes não são tratados nas primeiras fases da doença. Além disso, algumas populações de pacientes não respondem ao tratamento duradouro. São urgentemente necessários novos e eficazes métodos de tratamento da infeção por HCV.
As pesquisas terapêuticas dominantes que são atualmente empregues para o tratamento do cancro incluem a remoção cirúrgica dos tumores primários, a irradiação do tumor, e aplicação parentérica de agentes citotõxicos anti- mitóticos. Infelizmente, apenas uma seção transversal relativamente pequena de pacientes com cancro tem tumores que são "viciados" a uma via específica, e pode, portanto, ser tratada com novos agentes alvo. 0 domínio contínuo destas terapias estabelecidas longas é espelhado pela falta de melhora nas taxas de sobrevivência para a maioria dos tipos de cancro. Além disso, para o sucesso clínico limitado, efeitos colaterais devastadores acompanham terapias clássicas. Tanto a radiação e terapias com base em citotóxico resultam na destruição de células hematopoiéticas que se dividem rapidamente e epiteliais intestinais levando à função imune comprometida, anemia, e na absorção denutriente comprometida. A intervenção cirúrgica, muitas vezes, resulta em uma liberação de células tumorais para os sistemas de circulação ou linfa a partir dos quais os tumores metastáticos podem ser posteriormente estabelecidos. São necessários métodos melhorados para o tratamento do cancro.
SUMARIO A invenção é definida pelas reivindicações anexas. A presente descrição aborda as deficiências de tratamentos antivirais e anticancerígenos, fornecendo novos moduladores heterocíclicos de síntese de lipídeos tendo atividades antivirais e anticancerígenas melhoradas.
Em vários aspetos, compostos de Estrutura IX são fornecidosp
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em quep R1 é H, -CM, halogénio, alquilo Ci~C4 linear ou ramificado, -0- úcicloalquilo C3-C5õ, -0- úalquilo C1-C4 linear ou ramificadoõ em quep cicloalquilo C3-C5 opcionalmente inclui um heteroátomo de oxigénio ou azoto,· e quando R1 não é H, -CN ou halogénio, é opcionalmente substituído com um ou mais halogéneos; cada R2 é independentemente hidrogénio, halogénio ou alquilo Ci-C4 linear ou ramificado; R3 é H, -OH ou halogénio; R21 é H, halogéneo, alquilo C1-C4 linear ou ramificado, cicloalquilo C3-C5, em que o cicloalquilo C3-C5 inclui opcionalmente um heteroátomo de oxigénio ou de azoto; R22 é H, halogéneo ou alquilo Ci-C2; R24 é H, alquilo C1-C4 linear ou ramificado, -úalquil Ci-C4õt-0H, -úalquil Ci-C4õt-0t- úcicloalquilo C3-C5õ ou úalquilo C1-C4Õ-O-úalquilo C1-C4 linear ou ramificadoõ em quep t é 0 OU 1; 0 cicloalquilo C3-C5 opcionalmente inclui um heteroátomo de oxigénio ou de azoto; L1 é CR23 ou N; L2 é CH OU N; pelo menos um de L1 ou L2 é N; e R23 é H ou alquilo Ci~C4 linear ou ramificado.
Em alguns aspetos da Estrutura úIXõ, R24 ê alquilo C1-C4 linear ou ramificado ou - úalquilo Ci-C4õt-0- úC:L-C4 alquilo linear ou ramificadoõ em que t é 0 ou 1.
Em alguns aspetos da Estrutura úIXõ, R21 é halogénio, alquilo Ci-C4 linear ou ramificado, cicloalquilo C3-C5 em que o cicloalquilo C3-C5 inclui opcionalmente um heteroátomo de oxigénio ou azoto, -S úOõ u- úalquilo Ci-C4 linear ou ramificadoõ em que u é 0 ou 2, ou -SúOõu- úcicloalquilo C3-C5õ em que u é 0 ou 2;
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXõ, R3 é H ou halogéneo.
Em alguns aspetos da estrutura ÚIXõ, R1 é halogénio, -CN ou haloalquilo Ci-C2.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXõ, tanto L1 como L2 são N.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXõ, R21 é alquilo Ci-C2 ou cicloalquilo C3-C5 e R22 é alquilo Ci-C2.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXõ, R21 é cicloalquilo C3- C5 e R22 é alquilo C:L-C2.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXõ, R24 é - úalquilo Cx-C2õt-0- úalquilo C1-C2õ em que t é 0 ou 1.
Em alguns aspetos da Estrutura úIXõ, R21 é cicloalquilo C3-C5, R22 é alquilo Ci-C2 e R24 é alquilo Ci-C2.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXH , fe1 é ciclobutilo, R22 é alquilo Ci-C2 e R24 é alquilo Ci-C2.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXS , fe- é ciclobutilo.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIX0 , fe é H ou F.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXIEI , fe é -CN.
Em alguns aspetos da Estrutura úIXH , feé -CF3.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXõ, R22 é H, metilo ou etilo.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIX0 , ^ é H.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIX0 , fe2 é metilo.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIX0 , fe é -CN, cada R2 é H, R3 é H ou F, R21 é C3-C4 cicloalquilo, R22 é metilo, L1 e L2 são N e R24 é metilo, Etilo, hidroximetilo, metoximetilo, 2-metoxietilo.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIX0 , fe é -CN, cada R2 é H, R3 é H ou F, R21 é C3-C4 cicloalquilo, R22 é metilo, L1 e L2 são N e R24 é metoxi ou etoxi.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIX0 , feé -CN, cada R2 é H, R3 é H ou F, R21 é C3-C4 cicloalquilo, R22 é metilo, L1 é CH, L2 é N e R24 é metilo, etilo, hidroximetilo, metoximetilo ou 2-metoxietilo.
Em alguns aspetos da Estrutura úIXõ, R1 é -CN, cada R2 é H, R3 é H ou F, R21 é C3-C4 cicloalquilo, R22 é metilo, L1 é N, L2 é CH e R24 é metilo, etilo, hidroximetilo, metoximetilo ou 2-metoxietilo.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIX0 , os compostos êm uma estrutura selecionada do grupo que consiste emp
Em vários aspetos, a presente divulgação proporciona composições farmacêuticas compreendendo qualquer um dos compostos de Estrutura ÚIXH e um veículo, excipienfe ou diluente farmaceuticamente aceitável.
Em vários aspetos, a presente invenção fornece métodos de tratar uma condição caracterizada pela desregulação de uma função de ácido graxo sintase em um indivíduo, o método que compreende administrar ao indivíduo em necessidade de tal tratamento uma quantidade eficaz de um composto da Estrutura ÚXI0 . Em vários aspetos, a condição caraterizada pela desregulação da função de ácido graxo sintase é uma infeção virai ou cancro. Em vários aspetos, a infeção virai é tratada usando um composto da Estrutura ÚIX0 em combinação com um ou mais tratamentos de cancro adicionais.
Em vários aspetos, a infeção viral é hepatite C.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS FIG. 1 ilustra uma relação entre inibição FASN e inibição HCV.
DESCRIÇÃO DETALHADA A presente invenção refere-se a deficiências no tratamento de condições caracterizadas pela desregulação da função FASN em um indivíduo, tais como infeção virai, cancro e desordens metabólicas, fornecendo novos moduladores heterocíclicos de sínteses de lipídeo.
Em certos aspetos, a presente invenção fornece composições e métodos para o tratamento de infeções virais. Em geral, as composições e métodos para o tratamento de infeções virais são direcionados através de modulação da via de sínteses de ácido graxo. A via de sínteses de ácido graxo é envolvida na replicação de vírus nas células hospedeiras. A presente invenção engloba métodos para o tratamento de infeção virai, tais como infeções de hepatite C, infeções de febre amarela, e infeções de rinovírus humano, ou qualquer vírus que vise a via de sínteses de ácido graxo.
Em certos aspetos, a presente invenção fornece composições e métodos para o tratamento de cancro. Ácido graxo sintase é responsável para conversão de malonil-CoA em ácidos graxos de cadeia longa, o qual é uma reação inicial em biossínteses de ácidos graxos. Ácido graxo sintase é superexpresso em muitas células de cancro. Sem estar ligado por qualquer teoria particular, o mesmo é uma hipótese de inibição de expressão de ácido graxo sintase ou a seletividade de atividade de ácido graxo sintase reprime a proliferação e induz morte celular de células de cancro, com pouca toxicidade através de células normais.
Além disso, a presente invenção fornece compostos e métodos para modular alvos de célula hospedeira que são alvejados por vírus. Tal modulação de alvos de célula hospedeira pode incluir ou ativação ou inibição de alvos de célula hospedeira. Consequentemente, compostos que modulam, por exemplo, inibem a atividade de uma proteína não-viral, por exemplo, uma proteína de célula hospedeira, por exemplo, componentes da via de sínteses de ácido graxo, podem ser usados como agentes farmacêuticos antivirais.
Definições
Porções químicas referidas como porções químicas univalentes úpor exemplo, alquil, aril, etc.® també englobam estruturalmente porções multivalentes permissíveis, como entendido por aqueles versados na técnica. Por exemplo, enquanto uma porção "alquil" geralmente refere-se a um radical monovalente úpor exemplo, CH3CH2-® , em circunstâncias apropriadas uma porção "alqui" pode também se referir a um radical divalente úpor exemplo, -CH2CH2-, que é equivalente a um grupo "alquileno"0 . Similarmente, mediante circunstâncias onde uma porção divalente é necessária, aqueles versados na técnica irão entender que o termo "aril" refere-se ao grupo arileno divalente correspondente.
Todos os átomos são entendidos para ter seus n® mere de valências normais para formação da ligação úpor exemplo, 4 para carbono, 3 para N, 2 para 0, e 2, 4, ou 6 para S, dependendo do estado de oxidação dos átomos® . Sobre ocasião, uma porção pode ser definida, por exemplo, como úAHaB, em que a é 0 ou 1. Em tais exemplos, quando a é 0, a porção é B e quando a é 1 a porção é AB.
Onde um substituinte pode variar no nS mero de átomo ou grupos do mesmo tipo úpor exemplo, grupos alquil podem ser Ci, C2, C3, etc.S , o nEEI mero de átomos repetidos ou grupos pode ser representado por uma faixa úpor exemplo, Ci-C6 alquilS a qual inclui cada uma e todo nS mero na f&à e qualquer e todas as subfaixas. Por exemplo, Ci-C3 alquil inclui Ci, C2, C3, Ci-2/ Ci_3, e C2~3 alquil. "Alcanoil" refere-se a um grupo carbonil com um grupo alquil inferior como um substituinte. "Alquilamino" refere-se a um grupo amino substituído por um grupo alquil. "Alcóxi" refere-se a um átomo de 0 substituído por um grupo alquil como definido aqui, por exemplo, metóxi [-0CH3, um Cialcóxi] . 0 termo "Ci_6 alcóxi" engloba Ci alcóxi, C2 alcóxi, C3 alcóxi, C4 alcóxi, C5 alcóxi, Cs alcóxi, e qualquer subfaixa do mesmo. "Alcoxicarbonil" refere-se a um grupo carbonil com um grupo alcóxi como um substituinte. "Alquil," "alquenil," e "alquinil" referem-se a grupos alifãticos de cadeia reta ou ramificada opcionalmente substituídos tendo de cerca de 1 a 30 átomos de carbono, ou de preferência de cerca de 1 a 15 átomos de carbono, ou mais de preferência de cerca de 1 a 6 átomos de carbono. Exemplos de grupos alquil incluem, sem limitação, metil, etil, propil, isopropil, butil, tert-butil, isobutil, pentil, hexil, vinil, allil, isobutenil, etinil, e propinil. 0 termo "heteroalquil" como usado aqui engloba um alquil com um ou mais heteroátomos. "Alquileno" refere-se a um radival divalente opcionalmente substituído que é um fragmento de hidrocarboneto ramificado ou não-ramificado contendo o número específico de átomos de carbono, e tendo dois pontos de fixação. Um exemplo é propileno [-CH2CH2CH2-, um C3 alquileno] . "Amino" refere-se ao grupo -NH2. "Aril" refere-se aos grupos aromáticos opcionalmente substituídos que têm pelo menos um anel tendo um sistema de elétron pi conjugado e inclui grupos aril carbocíclicos, e biaril, todos dos quais podem ser opcionalmente substituídos. Grupos fenil e naftil são grupos aril carbocíclicos preferidos. "Aralquil" ou "arilalquil" refere-se aos grupos aril alquil-substituídos. Exemplos de grupos aralquil incluem butilfenil, propilfenil, etilfenil, metilfenil, 3,5-dimetilfenil, tert-butilfenil. "Carbamoil" como usado aqui engloba um grupo de estrutura
em que RN é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogénio, -OH, C:1 a C:L2 alquil, Ci a C;L2 heteroalquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, heterociclo, aril, heteroaril, aralquil, alcóxi, alcoxicarbonil, alcanoil, carbamoil, sulfonil, sulfonato e sulfonamida. "Carbonil" refere-se a um grupo de estrutura
"Cicloalquil" refere-se a um anel opcionalmente substituído, o qual pode ser saturado ou insaturado e monocíclico, bicíclico, ou tricíclico formado inteiramente a partir de átomos de carbono. Um exemplo de um grupo cicloalquil é o grupo ciclopentenil úC5H7-õ, que é um grupo cicloalquil insaturado de cinco carbonos úC5õ. "Heterociclo" refere-se a um sistema de anel cicloalquil de 5 a 7 membros opcionalmente substituído contendo 1, 2 ou 3 heteroãtomos, que pode ser o mesmo ou diferente, selecionado a partir de N, 0 ou S, e opcionalmente contendo uma ligação dupla. "Halogênio" refere-se a um cloro, bromo, flB or ou adical de átomo de iodo. 0 termo "halogênio" também engloba o termo "halo" ou "haleto". "Heteroátomo" refere-se a um átomo de não-carbono, onde boro, nitrogénio, oxigénio, enxofre e fósforo são heteroãtomos preferidos, com nitrogénio, oxigénio e enxofre sendo heteroãtomos particularmente preferidos nos compostos da presente invenção. "Heteroaril" refere-se a grupos aril opcionalmente substituídos tendo de 1 a % átomos de carbono e o restante dos átomos é heteroátomo, e inclui aqueles sistemas heterocíclicos descritos em "Handbook of Chemistry and Phisics," 4%th edition, 1%68, R. C. Weast, editor; The Chemical Rubber Co., Cleveland, Ohio. Ver particularmente Section C, Rules for Naming Organic Compounds, B.
Fundamental Heterocyclic Systems. Heteroarils adequados incluem tienil, pirril, furil, piridil, pirimidil, pirazinil, pirazolil, oxazolil, isoxazolil, imidazolil, tiazolil, piranil, tetrazolil, pirrolil, pirrolinil, piridazinil, triazolil, indolil, isoindolil, indolizinil, benzimidazolil, quinolil, isoquinolil, indazolil, benzotriazolil, tetrazolopiridazinil, oxadiazolil, benzoxazolil, benzoxadiazolil, tiadiazolil, benzotiazolil, benzotiadiazolil, e similares .
Uma porção "opcionalmente substituída" pode ser substituída por um a quatro, ou de preferência por um a três, ou mais de preferência um ou dois substituintes de não-hidrogénio. A menos que especificado de outra maneira, quando o substituinte é um carbono, o mesmo é selecionado a partir do grupo consistindo em -OH, -CN, -N02, halogênio, Ci a Ci2 alquil, Ci a Ci2 heteroalquil, cicloalquil, heterociclo, aril, heteroaril, aralquil, alcóxi, alcoxicarbonil, alcanoil, carbamoil, sulfonil substituído, sulfonato, sulfonamida e amino, nenhum dos quais são ainda substituídos. A menos que especificado de outra maneira, quando o substituinte é um nitrogénio, o mesmo é selecionado a partir do grupo consistindo em Ci a Ci2 alquil, Ci a Ci2 heteroalquil, cicloalquil, heterociclo, aril, heteroaril, aralquil, alcóxi, alcoxicarbonil, alcanoil, carbamoil, sulfonil, sulfonato e sulfonamida, nenhum dos quais são ainda substituídos. 0 termo "sulfonamida" como usado aqui engloba um grupo tendo a estrutura
em que RN é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogénio, -OH, Ci a Ci2 alquil, Ci a C12 heteroalquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, heterociclo, aril, heteroaril, aralquil, alcóxi, alcoxicarbon.il, alcanoil, carbamoil, sulfonil substituído, sulfonato e sulfonamida. 0 termo "sulfonato" como usado aqui engloba um grupo tendo a estrutura
em que R8 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogénio, C;L-Ci0 alquil, C2-C10 alquenil, C2-Ci0 alquinil, C1-C10 alcanoil, ou Ci-C10 alcoxicarbonil. "Sulfonil" como usado aqui sozinho ou como parte de outro grupo refere-se a um grupo S02. A porção S02 é opcionalmente substituída.
Compostos da presente invenção podem existir como estereoisômeros, em que centros assimétricos ou quirais estão presentes. Estereoisômeros são nomeados úRõ ou úSõ dependendo da configuração dos substituintes em torno do átomo de carbono quiral. Os termos ÚRõ e ÚSõ usados aqui são configuraçB es como definidas em IUPAC 1%74
Recommendations for Section E, Fundamental Stereochemistry, Pure Appl. Chem., úl%76õ, 45μ 13-30, aqui incorporadas por referência. A presente invenção engloba vários estereoisômeros e misturas dos mesmos e são especificamente incluídos dentro do âmbito da presente invenção. Estereoisômeros incluem enanciômeros, diastereômeros, e misturas de enanciômeros ou diastereômeros. Estereoisômeros individuais de compostos da presente invenção podem ser preparados sinteticamente a partir de materiais de partida comercialmente preferidos que contêm centros assimétricos ou quirais ou por preparação de misturas racêmicas seguidas pela resolução bem conhecida por aqueles versados na técnica. Esses métodos de resolução são exemplificados por úlõ fixação de uma mistura de enanciômeros a um auxiliar quiral, separação da mistura resultante de diastereômeros por recristalização ou cromatografia e liberação do produto opcionalmente puro a partir de separação auxiliar ou Ú2õ direta da mistura de enanciômeros óticos sobre colunas cromatográficas quirais.
Também, porçH es descritas aqui as quais existem em mH ltiplas formas tautoméricas incluem todas as tais formas englobadas por uma determinada estrutura tautomérica. Átomos individuais nos compostos descritos podem ser qualquer isótopo daquele elemento. Por exemplo, hidrogénio pode estar na forma de deutério. "Farmaceuticamente aceitável" significa aprovado ou aprovável por uma agência reguladora do governo do estado ou Federal ou listado na Farmacopeia U.S. ou outra Farmacopeia geralmente reconhecida para uso em animais, e mais particularmente em seres humanos. 0 mesmo pode ser material que não é biologicamente ou de outra maneira indesejável, isto é, o material pode ser administrado a um indivíduo sem causar quaisquer efeitos biológicos indesejáveis ou interagir em uma maneira deletéria com qualquer um dos componentes da composição em que o mesmo é contido. 0 termo "sal farmaceuticamente aceitável" de um composto significa um sal que é farmaceuticamente aceitável e que possui a atividade farmacológica desejada do composto de origem. Tais sais incluem, por exemplo, sais de adição ácidos e sais de adição bases. "Sais de adição ácidos" de acordo com a presente invenção são formados com ácidos inorgânicos, tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, e similares; ou formados com ácidos orgânicos, tais como ácido acético, ácido propiônico, ácido hexanóico, ácido ciclopentanopropiônico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido malônico, ácido succínico, ácido málico, ácido maléico, ácido fumãrico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido 3-(4-hidroxibenzoil)benzóico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfônico, ácido 1,2-etanodissulfônico, ácido 2-hidroxietanossulfónico, ácido benzenossulfônico, ácido 2-naftalenossulfónico, ácido 4-metilbiciclo-[2.2.2]oct-2-eno- 1-carboxílico, ácido glucoheptônico, 4,4'-metilenobis-(ácido 3-hidróxi-2-eno-1-carboxílixo), ácido 3-fenilpropiônico, ácido trimetilacético, ácido butilacético terciário, ácido lauril sulfúrico, ácido glucônico, ácido glutâmico, ácido hidroxinaftóico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido mucônico, e similares. "Sais de adição bases" de acordo com a presente invenção são formados quando um protão acídico presente no composto de origem ou é substituído por um íon de metal, por exemplo, um íon de metal alcalino, um íon de metal alcalino-terroso, ou um íon de alumínio; ou coordenado com uma base orgânica. Bases orgânicas aceitáveis incluem etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina, e similares. Bases inorgânicas aceitáveis incluem hidróxido de alumínio, hidróxido de cálcio, hidróxido de potássio, carbonato de sódio, hidróxido de sódio, e similares. 0 mesmo deve ser entendido que uma referência a um sal farmaceuticamente aceitável inclui as formas de adição de solvente ou formas de cristal das mesmas, particularmente solvatos ou polimorfos. Solvatos contêm ou quantidades estequiométricas ou não-estequiométricas de um solvente, e sâo frequentemente formados durante o processo de cristalização. Hidratos são formados quando o solvente é água, ou alcoolatos são formados quando o solvente é álcool. Polimorfos incluem os arranjos de embalagem cristal diferentes da mesma composição elementar de um composto. Polimorfos geralmente têm padrões de difração de raio-X diferentes, espectros infravermelhos, pontos de fusão, densidade, dureza, forma de cristal, propriedades óticas e elétricas, estabilidade, e solubilidade. Vários fatores, tais como o solvente de recristalização, taxa de cristalização, e temperatura de armazenamento podem causar uma forma de cristal única para dominar. 0 termo "tratamento" inclui a administração dos compostos ou agentes da presente invenção a um indivíduo para prevenir ou retardar, aliviar, ou descansar ou inibir o desenvolvimento dos sintomas ou condições associadas com desordens associadas a ácido graxo sintase, por exemplo, crescimento de tumor associado com cancro. Um versado na técnica irá conhecer como usar os métodos padrão para determinar se um paciente está sofrendo de uma doença associada com atividade de ácido graxo sintase, por exemplo, examinando o paciente e determinando se o paciente está sofrendo de uma doença conhecida para ser associada com atividade de ácido graxo sintase ou ensaiando para níveis de ácido graxo sintase em plasma sanguíneo ou de tecido do indivíduo suspeito de sofrer de doença associada a ácido graxo sintase e comparando os níveis de ácido graxo sintase no plasma sanguíneo ou tecido do indivíduo suspeito de sofrer de uma doença associada a ácido graxo sintase, níveis de ácido graxo sintase no plasma sanguíneo ou de tecido de um indivíduo saudável. Níveis de securin aumentados são indicativos de doença. Consequentemente, a presente invenção fornece, inter alia, métodos de administrar um composto da presente invenção a um indivíduo e determinar atividade de ácido graxo sintase no indivíduo. Atividade de ácido graxo sintase no indivíduo pode ser determinada antes e'ou após administração do composto.
Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" ou "quantidade farmaceuticamente eficaz" significa a quantidade que, quando administrada a um indivíduo, produz efeitos para que a mesma seja administrada. Por exemplo, uma "quantidade terapeuticamente eficaz," quando administrada a um indivíduo para inibir atividade de ácido graxo sintase, é suficiente para inibir atividade de ácido graxo sintase. Uma "quantidade terapeuticamente eficaz," quando administrada a um indivíduo para tratar uma doença, é suficiente para realizar o tratamento para aquela doença.
Exceto quando notado, o termo "indivíduo" ou "paciente" é usado indistintamente e refere-se a mamíferos, tais como pacientes humanos e primatas não-humanos, bem como animais experimentais tais como, coelhos, ratos e, camundongos, e outros animais. Consequentemente, o termo "indivíduo" ou "paciente" como usado aqui significa qualquer paciente mamífero ou indivíduo a que os compostos da invenção podem ser administrados. Em um aspeto exemplar da presente invenção, para identificar pacientes para tratamento de acordo com os métodos da invenção, métodos de pré-seleção aceitos são empregados para determinar os fatores de risco associados com uma doença ou condição alvo ou suspeita ou para determinar o status de uma doença ou condição existente em um indivíduo. Esses métodos de pré-seleção incluem, por exemplo, trabalhos convencionais para determinar os fatores de risco que são associados com a doença ou condição alvo ou suspeita. Esses e outros métodos de rotina permitem que o clínico selecione os pacientes em necessidade de terapia usando os métodos e formulações da presente invenção.
Moduladores da via de FASN
Um aspeto da presente invenção inclui um método de inibir infeção virai ou tratar cancro colocando em contato uma célula com um agente que modula a via de sínteses de ácido graxo. Este método de inibir infeção virai ou tratar cancro pode ser realizado in vitro colocando em contato células cancerosas'viralmente infetadas com um agente que modula a via de sínteses de ácido graxo, ou in vivo administrando um agente que modula a via de sínteses de ácido graxo para um indivíduo infetado com um vírus'tendo cancro. Em um aspeto, um agente pode ser um inibidor da via de sínteses de ácido graxo.
Exemplos de inibidores da via de sínteses de ácido graxo que podem ser usados nos métodos e composições da presente invenção são descritos abaixo.
Em vários aspetos, compostos de fórmula IX são fornecidosp
(IX) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em quep R1 é H, -CN, halogénio, alquilo Ci-C4 linear ou ramificado, -0- úcicloalquilo C3-C5S , -0- úalquilo Ç-C4 linear ou ramificado^ em quep cicloalquilo C3-C5 opcionalmente inclui um heteroãtomo de oxigénio ou azoto; e quando R1 não é H, -CN ou halogénio, é opcionalmente substituído com um ou mais halogéneos; cada R2 é independentemente hidrogénio, halogénio ou alquilo Ci-C4 linear ou ramificado; R3 é H, -OH ou halogénio; R2L é H, halogéneo, alquilo Ci-C4 linear ou ramificado, cicloalquilo C3-C5, em que o cicloalquilo C3-C5 inclui opcionalmente um heteroãtomo de oxigénio ou de azoto; R22 é H, halogéneo ou alquilo Ci~C2; R24 é H, alquilo C1-C4 linear ou ramificado, -úalquil Ci-C4St-0H, -úalquil Ci-C4St-0t- úcicloalquilo C3-C5S ou úalquilo C1-C4H -0-úalquilo C-C4 linear ou ramificadoS em quep t é 0 ou 1; 0 cicloalquilo C3-C5 opcionalmente inclui um heteroãtomo de oxigénio ou de azoto; L1 é CR23 ou M; L2 é CH OU N; pelo menos um de L1 ou L2 é N; e R23 é H ou alquilo Ci-C4 linear ou ramificado.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXH , ff é alquilo Ci-C4 linear ou ramificado ou - úalquilo Ci-C40t-O- ÚC1-C4 alquilo linear ou ramificadoS em que t é 0 ou 1.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIX0 , ff é halogénio, alquilo Ci-C4 linear ou ramificado, cicloalquilo C3-C5 em que o cicloalquilo C3-C5 inclui opcionalmente um heteroátomo de oxigénio ou azoto, -S úOõ u- úalquilo Ci-C4 linear ou ramificadoõ em que u é 0 ou 2, ou -SúOõu. úcicloalquilo C3-C5õ em que u é 0 OU 2;
Em alguns aspetos da Estrutura úIXõ, R3 é H ou halogéneo.
Em alguns aspetos da estrutura ÚIXõ, R1 é halogénio, -CN ou haloalquilo Ci~C2.
Em alguns aspetos da Estrutura úIXõ, tanto L1 como L2 são N.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXõ, R21 é alquilo Ci-C2 ou cicloalquilo C3-C5 e R22 ê alquilo Ci-C2.
Em alguns aspetos da Estrutura úIXõ, R21 é cicloalquilo C3-C5 e R22 é alquilo Ci-C2.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXõ, R24 é - úalquilo C3-C2õt-0- úalquilo Cx-C20 em que t é 0 ou 1.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXE3 , RL é cicloalquilo C3-C5, R22 ê alquilo Ci-C2 e R24 é alquilo Ci-C2.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXB , R é ciclobutilo, R22 é alquilo Ci-C2 e R24 é alquilo Ci-C2.
Em alguns aspetos da Estrutura úIX0 , S1 é ciclobutilo.
Em alguns aspetos da Estrutura úIX® , fe é H ou F.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIX0 , Ré -CN.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXS , Ré -CF3.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXS , & é H, metilo ou etilo.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIX0 , ff é H.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXH , ff é metilo.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIX0 , k é -CN, cada R2 é H, R3 é H ou F, R2i é C3-C4 cicloalquilo, R22 é metilo, L1 e L2 são N e R24 é metilo, Etilo, hidroximetilo, metoximetilo, 2-metoxietilo.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIX0 , fe é -CN, cada R2 é H, R3 é H ou F, R2i é C3-C4 cicloalquilo, R22 é metilo, L1 e L2 são N e R24 é metoxi ou etoxi.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXH , k é -CN, cada R2 é H, R3 é H ou F, R21 é C3-C4 cicloalquilo, R22 é metilo, L1 é CH, L2 é N e R24 é metilo, etilo, hidroximetilo, metoximetilo ou 2-metoxietilo.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIXB , k é -CN, cada R2 é H, R3 é H ou F, R21 é C3-C4 cicloalquilo, R22 é metilo, L1 é N, L2 é CH e R24 é metilo, etilo, hidroximetilo, metoximetilo ou 2-metoxietilo.
Em alguns aspetos da Estrutura ÚIX0 , os compostos êm uma estrutura selecionada do grupo que consiste emp
Sínteses de Compostos
Também descritos aqui são os métodos de sintetizar os compostos da presente invenção. Compostos da presente invenção podem ser sintetizados como indicados nos ESQUEMAS SINTÉTICOS 1-13 abaixo.
Esquema 1
R" é hidrogénio ou alquil;
Ri é hidrogénio, ciano, halo, Ci_6 alquil, Ci_6 alcóxi, -Cú=OõNúRi3õúRi4õ , -úCH2õqCú=OõNúRi3ÕúRi4õ, CF3, -OCF3, ou Sú=Oõ2R2o ; q é 0, 1, 2, 3, ou 4; R20 é hidrogénio ou Ci_6 alquil, Ci_6 alcóxi, ou -NúRi3õúRi4õ; R2 é hidrogénio, halo, Ci-6 alcóxi, ou Ci_6 alquil; R3 é hidrogénio, hidroxil, halo, Ci_6 alquil, ou Ci_6 alcóxi; R21 e R22 são, cada um, independentemente hidrogénio, halo, ciano, Ci-6 alquil, Ci_6 alcóxi, CF3, -OCF3, ou -Sú=Oõ2R2o; R13 e R14 são, cada um, independentemente hidrogénio, Ci-6 alquil, cicloalquil, aril, heterociclil, heteroaril, hidroxialquil, alquilamino, -NúRi5Ri6õ, ou -Sú=Oõ2R2o;
Ris e Rie são, cada um, independentemente hidrogénio, Ci-6 alquil, cicloalquil, aril, heterociclil, heteroaril, hidroxialquil, ou alquilamino; e
Riv é hidrogénio ou aquil.
Esquema 2
em queμ
Rx é hidrogénio, ciano, halo, Ci_6 alquil, C±-6 alcõxi, Cú=OÕNúRi3ÕúRi4Õ, - úCH2ÕqCú=0ÕNúRi3ÕúRi4Õ, CF3, -OCF3, ou Sú=Oõ2R2o ; q ê 0, 1, 2, 3, ou 4; R2o é hidrogénio ou Ci-6 alquil, Ci-.6 alcóxi, ou -NúRi3õúRi4õ; R2 é hidrogénio, halo, Ci_6 alcóxi, ou Ci_6 alquil; R3 é hidrogénio, hidroxil, halo, Ci_6 alquil, ou Ci_6 alcóxi; R21 e R22 são, cada um, independentemente hidrogénio, halo, ciano, C1-6 alquil, Ci-6 alcóxi, CF3, -OCF3, ou -Sú=Oõ2R20; R13 e R14 são, cada um, independentemente hidrogénio, Ci-6 alquil, cicloalquil, aril, heterociclil, heteroaril, hidroxialquil, alquilamino, -NúRisRisõ, ou -Sú=Oõ2R20;
Ris e Ri6 são, cada um, independentemente hidrogénio, Ci-6 alquil, cicloalquil, aril, heterociclil, heteroaril, hidroxialquil, ou alquilamino; R23 é hidrogénio, NÚR13ÕÚR1.4Õ, Ci-5 alquil, Ci_6 alcóxi, está ausente se Li for N, ou R23 e R24 realizados juntos com os átomos aos quais são ligados juntos para formar um heterociclil, heteroaril, ou cicloalquil; e R24 é hidrogénio, -NúR:L3õúRi4õ, Ci_6 alquil, Ci_6 alcóxi, -úCi_6 alcóxiõúheterociclilõ, heterociclil, ou R23 e R24 realizados juntos com os átomos aos quais são ligados juntos para formar um heterociclil, heteroaril, ou cicloalquil.
Esquema 3
em quep LG é um grupo de partida;
Nu é a nucleófilo; L2, L3j L4, e L4 são, cada um, independentemente CH ou N;
Ri é hidrogénio, ciano, halo, C:L-S alquil, Ci-6 alcóxi, CÚ=OÕNÚRi3ÕÚR14Õ,-ÚCH2ÕqCÚ=OÕNÚR13ÕÚRi4Õ, CF3, -OCF3, ou Sú=Oõ2R20 ; qe 0, 1, 2, 3, ou 4; R20 é hidrogénio ou Ci_6 alquil, Ci_6 alcóxi, ou -NúRi3õúRi4õ; R2 é hidrogénio, halo, Ci_6 alcóxi, ou Ci_6 alquil; R3 é hidrogénio, hidroxil, halo, Ci-6 alquil, ou Ci-s alcóxi ; R2i e R22 são, cada um, independentemente hidrogénio, halo, ciano, Ci-6 alquil, Ci_6 alcóxi, CF3, -OCF3, ou -Sú=Oõ2R20;
Ris e Ri4 são, cada um, independentemente hidrogénio, Ci_6 alquil, cicloalquil, aril, heterociclil, heteroaril, hidroxialquil, alquilamino, -NúRisRieõ, ou -Sú=Oõ2R2o;
Ris e Ris são, cada um, independentemente hidrogénio, Ci_6 alquil, cicloalquil, aril, heterociclil, heteroaril, hidroxialquil, ou alquilamino; e R17 é hidrogénio ou alquil.
Esquema 4
em quep
Ri é hidrogénio, ciano, halo, Ci_6 alquil, Ci-6 alcóxi, - Cú=OS Núgjia ú&E , -úCgaqCú=O0 NúBjS úrB , CF, -0CF3, ou -SÚ=O02R-2O í q é 0, 1, 2 , 3, ou 4 ; R20 é hidrogénio ou Ci_6 alquil, Ci_6 alcóxi, ou -NúRi3õúR14õ; r2 é hidrogénio, halo, Ci-6 alcóxi, ou Ci-6 alquil ; R3 é hidrogénio, hidroxil, halo, Ci-S alquil, ou Ci-6 alcóxi ; r2i e R22 são, cada um, independentemente hidrogénio, halo, ciano, Ci-6 alquil, Ci_6 alcóxi, CF3, -OCF3, ou -Sú=Oó2R2o; R13 e R14 são, cada um, independentemente hidrogénio, Ci-6 alquil, cicloalquil, aril, heterociclil, heteroaril, hidroxialquil, alquilamino, -NÚR15R16Õ, ou -Sú=Oõ2R2o; R1S e Ri6 são, cada um, independentemente hidrogénio, Ci_6 alquil, cicloalquil, aril, heterociclil, heteroaril, hidroxialquil, ou alquilamino; R17 é hidrogénio ou alquil; e R24 é hidrogénio, -NúR13õúRi4ó, Ci-6 alquil, Ci-6 alcóxi, -úCi-6 alcóxiõúheterociclilõ, ou heterociclil.
Esquema 5
em queu R] é hidrogénio, ciano, halo, Ci-6 alquil, C:L-6 alcóxi, CÚ=OÕNÚRi3ÕÚRi4Õ , -ÚCH2ÕqCÚ=0ÕNÚRi3ÕÚRi4Õ, CF3, -OCF3, ou Sú=Oõ2R20 ; q é 0, 1, 2, 3, ou 4; R20 é hidrogénio ou alquil, Ci_6 alcóxi, ou -NúRi3õúRi4õ; R2 é hidrogénio, halo, Ci-5 alcóxi, ou Ci-6 alquil; R3 é hidrogénio, hidroxil, halo, Ci-S alquil, ou Ci-6 alcóxi; R2i e R22 são, cada um, independentemente hidrogénio, halo, ciano, Ci-6 alquil, Ci~s alcóxi, CF3, -OCF3, ou -Sú=Oõ2R2o; R13 e R14 são, cada um, independentemente hidrogénio, Ci-5 alquil, cicloalquil, aril, heterociclil, heteroaril, hidroxialquil, alquilamino, “NúR15Ri6ó, ou -Sú=Oõ2R20;
Ris e R:L6 são, cada um, independentemente hidrogénio, Ci_6 alquil, cicloalquil, aril, heterociclil, heteroaril, hidroxialquil, ou alquilamino; R17 é hidrogénio ou alquil; R24 é hidrogénio, -NúR13õúRi4ó, Ci_6 alquil, Ci-6 alcóxi, -úCi-s alcóxiõúheterociclilõ, ou heterociclil; R2% é hidrogénio, Ci_6 alquil, Ci_s alcóxi, hidroxialquil, heteroaril, heterociclil, -NúRisRisõ, -Cú=OõR46, ou R48Cu=0oR47; R34 é hidrogénio, Ci_6 alquil, Ci-6 alcóxi, cicloalquil, hidroxil, hidroxialquil, aril, heterociclil, heteroaril, alquilamino, CF3, -OCF3, -Sú=Oõ2R20, ou -NúRi5Risõ; e m 0, 1, ou 2.
Esquemas 6-13 fornecem uma síntese para compostos exemplares de fórmula IX, em quep R1 é H, -CN, halogênio, Ci-C4 alquil reto ou ramificado, -0-ÚC3-C5 cicloalquilS , -0-ú Ç-C4 alquil reto ou ramificado^ em quep C3-C5 cicloalquil opcionalmente inclui um oxigénio ou heteroátomo de nitrogénio; e quando R1 não for H, -CN ou halogênio, o mesmo é opcionalmente substituído por um ou mais halogênios; cada R2 é independentemente hidrogénio, halogênio ou C1-C4 alquil reto ou ramificado; R3 é H, -OH, ou halogênio; R21 é H, halogênio, C1-C4 alquil reto ou ramificado, C3-C5 cicloalquil em que o C3-C5 cicloalquil opcionalmente inclui um oxigénio ou heteroátomo de nitrogénio; R22 é H, halogênio, ou Ci-C2 alquil; R23 é H ou C1-C4 alquil reto ou ramificado; e R24 é H, C1.-C4 alquil reto ou ramificado, -ÚC1-C4 alquilõt-0H, -ÚC1-C4 alquilõt -0t-úC3-C5 cicloalquilÕ, ou -ÚC1-C4 alquilõt-0-úCi-C4 alquil reto ou ramificadoõ em quep t é 0 ou 1; e o C3-C5 cicloalquil opcionalmente inclui um oxigénio ou heteroátomo de nitrogénio.
Esquema 6
Esquema 7
Esquema 8
Esquema %
Esquema 10
Esquema 11
Esquema 12
Esquema 13
Métodos adicionais para produzir os compostos particulares de acordo com a presente invenção são fornecidos nos EXEMPLOS. Um versado na técnica reconhecerá que outros compostos de estruturas podem ser feitos por modificações aos esquemas especificamente descritos que empregam métodos conhecidos por aqueles versados na técnica. Exemplos adicionais podem ser encontrados na Tabela 1.
Muitas dessas técnicas são bem conhecidas na técnica. No entanto, muitas das técnicas conhecidas são elaboradas no Resumo de Métodos Sintéticos Orgânicos úVol. 1, 1%71; Vol. 2, 1 % 7 4; Vol. 3, 1%77; Vol . 4, 1%80; Vol. 5, 1%84; e Vol. 6, bem como March in Advanced Organic Chemistry úl%850 ; Comprehensive Organic Synthesis. Selectivity, Strategy &
Efficiency in Modern Organic Chemistry. Em % Volumes úl%%30 ; Advanced Organic Chemistry Part Βμ Reaction and Synthesis, Second Edition úl%830 ; Advanced Organic Chemistry, Reactions, Mechanisms, and Structure, Second
Edition úl%770 ; Protecting Groups in Organic Synthsis, Second Edition; and Comprehensive Organic Transformations úl%%%H .
Vias de Infeção Viral
As células hospedeiras alvo inibidas pelos presentes compostos e métodos desempenham um papel na replicação do vírus e'ou nas vias de infeção. Segmentação de tais células hospedeiras alvo modula a replicação e'ou as vias de infeção do vírus. Em aspetos preferidos, as células hospedeiras alvo identificadas estão diretamente ou indiretamente moduladas utilizando as composições da presente invenção. A modulação de tais células hospedeiras alvo também pode ser realizada visando entidades nas vias de sinalização a montante ou a jusante das células hospedeiras alvo.
De acordo com a presente invenção, infeção virai pode ser tratada visando a via de sínteses de ácido graxo, e em particular ácido graxo sintase. HRV é representativo de vírus que podem ser tratados de acordo com a presente invenção. Como outros vírus, a replicação de HRV envolve seis fases; a transmissão, a entrada, a replicação, a biossíntese, a montagem, e saída. Entrada ocorre por endocitose, replicação e montagem vRNP ocorre no núcleo, e o vírus embrião a partir da membrana plasmática. No paciente infetado, o vírus tem como alvo as células epiteliais das vias respiratórias. Os presentes compostos e métodos alvo e modulam pelo menos uma célula hospedeira alvo envolvida em tais vias.
Alguns vírus de muito progresso têm sido feitos na elucidação das etapas envolvidas durante a infeção de células hospedeiras. Por exemplo, as experiências iniciadas no início da década de 1%80 mostraram que o vírus da gripe segue um programa de entrada endocítico, gradual com elementos compartilhados com outros vírus, tais como vírus alfa e vírus rabdo (Marsh and Helenius 1%8%; Whittaker 2006). As etapas incluemp 1) ligação inicial de ácido siálico contendo recetores de glicoconjugados em superfície celular; 2) sinalização induzida pela partícula de vírus; 3) endocitose por mecanismo celular independente de clatrina e dependente de clatrina; 4) ácido induzido, penetração mediada por hemaglutinina (HA) a partir dos endossomos finais; 5) ácido ativado, proteína de matriz e M2 (Ml) dependente do não-revestimento de capsídeo; e, 6) transporte intra-citosólico e importação nuclear de vRNPs. Estas etapas dependem da assistência a partir da célula hospedeira na forma de recetores de triagem, máquinas de formação de vesículas, regulação mediada por quinase, acidificação de organela, e, muito provavelmente, atividades do citoesqueleto. A fixação da gripe à superfície das células ocorre por meio de aglutinação da subunidade HA1 às glicoproteínas da superfície celular e glicolipídeos que transportam porções de oligossacarídeos com resíduos de ácido siãlico terminais úSkehel and Wiley, 20000 . A ligação através da qualo ácido siãlico é ligado ao próximo sacarídeo contribui para a especificidade da espécie. Cepas aviárias incluindo H5N1 preferem uma ligação a-ú2,30 e ligação de cepas humnas a-Ú2,60 úMatrosovich 20060 . Em células epiteliais, a aglutinação ocorre preferencialmente a microvilosidades na superfície apical, e endocitose ocorre na base destas extensões úMatlin 1%820 . Se a aglutinação do recet© induz sinais que preparam a célula para a invasão é ainda não conhecida, mas é provavelmente porque a ativação da proteína quinase C e sínteses de fosfatidilinositol-3-fosfato ÚPI3P0 são necessárias para uma entrada efõiente úSieczkarski et al. 2003; Whittaker 20060 .
Internalização endocítica ocorre em poucos minutos após a aglutinação úMatlin 1%82; Yoshimura and Ohnishi 1%840 . Em vírus da gripe de células de cultura de tecido faz uso de três tipos diferentes de processos celulares; 10 dpressões revestidas de clatrina preexistente, 20 depressões revestidas de clatrina induzida por vírus, e 30 endcitose em vesículas sem revestimento visível úMatlin 1%82; Sieczkarski and Whittaker 2002; Rust et al. 20040 .
Microscopia por vídeo usando vírus fluorescentes mostrou que as partículas de vírus submetidas ao movimento rápido mediado por actina na periferia da célula seguida pela menor extremidade direcionada, transporte mediado por microtúbulos para a área perinuclear da célula. Imagens de células vivas indicaram que as partículas de vírus pela primeira vez entraram em uma subpopu1ação de endossomos iniciais periféricos, móveis que ao carregã-los mais profundamente no citoplasma antes da penetração ocorrer 0 Lakadamyali et al. 2003; Rust et al. 2004Õ. 0 proesso endocítico é regulado por cinases de proteína e de lipídeos, o proteassoma, bem como por fatores eletrónicos dependentes de ubiquitina e Rabs 0 Khor et al. 2003; Whittaker 2006Õ. A etapa de penetração da membrana é mediada pela ativação mediada pelo pH baixo do HA trimérico, metastável, e a conversão desse Tipo I de proteína de fusão virai para uma conformação competente de fusão de membrana 0 Maedaet al. 1%81; White et al. l%82õ . Isso ocorre em torno de 16 minutos após a internalização, e o limite de pH varia entre cepas na faixa de 5,0-5,6. A membrana alvo é a membrana limitante de intermediário ou endossomos posteriores. 0 mecanismo de fusão tem sido extensamente estudado l3Kielian and Rey, 20Q6Õ. Além disso, observou-se que a própria fusão parece não exigir quaisquer componentes de células hospedeiras exceto uma membrana de bicamada de lipídeo e um sistema de acidificação funcional 13 Maeda et al. 1%8; White et al. l%82õ. A etapa de penetração é inibida por agentes tais como bases fracas lisossomotrõpicas, ionóforos carboxílicos, e inibidores da bomba de protãos 13 Matin 1%82; Whittaker 2006Õ.
Para permitir a importação nuclear da entrada de vRNPs, o capsídeo tem de ser desmontado. Esta etapa envolve a acidificação do interior do vírus através dos canais M2 sensíveis à amantadina que provoca a dissociação de Ml a partir de vRNPs 13 Bukrinskaya et al. 1 %82; Martin ad
Helenius 1%%1; Pinto et al. 1%%2§ . 0 transporte dosvRNPs individuais para os complexos de poro nuclear e transferência para dentro do núcleo depende dos recetores de transporte nucleares celulares 0 O'Neill et al. %%5; Cros et al. 2005Õ. Replicação dos RNAs virais 0 sínfeses de filamentos positivos e negativosõ, e a transcrição ocorrem em complexos fortemente associados com a cromatina no núcleo. É evidente que, apesar de muitos das etapas serem catalisadas pela polimerase virai, fatores celulares estão envolvidos incluindo fatores de ativação de RNA polimerase, um acompanhante HSP%0, hCLE, e o fator de união humano UAP56. Expressão do gene virai é submetida ao controle celular complexo ao nível da transcrição, um sistema de controle dependente de quinases celulares Ή Whittake, 2005Õ. A montagem final de uma partícula de influenza ocorre durante um processo de brotamento na membrana plasmática. Em células epiteliais, o brotamento ocorre somente no domínio da membrana apical B Rodriguez-Boulan l%83õ. Em primeiro lugar, os vRNPs descendentes são transportados no interior do nucleoplasma para o envelope nuclear, em seguida, a partir do núcleo para o citoplasma, e finalmente os mesmos se acumulam na periferia da célula. Sair do núcleo é dependente sobre a proteína viral NEP e Ml, e uma variedade de proteínas celulares incluindo CRM1 0 umrecetor de exportação nuclearõ, caspases, e possivelmente alguns acompanhantes de proteínas nucleares. Fosforilação desempenha um papel na exportação nuclear regulando as sínteses de Ml e NEP, e também através do sistema de MAPK'ERK 0 Bui et al. 1%%6; Ludwig 2006Õ. A proteínaG e a sinalização de proteína quinase são envolvidas na brotação do vírus da gripe a partir das células hospedeiras infetadas IEI Hui E. and Nayak D, 2002Õ.
As três proteínas da membrana do vírus são sintetizadas, dobradas e montadas em oligômeros no ER úDoms et al. 1%%3Õ. As mesmas passam pelo complexo de Golgi; sofrem maturação através da modificação de suas porçB es de carbohidato e clivagem proteolítica. Após atingir a membrana plasmática as mesmas se associam com Ml e os vRNPs em um processo de brotamento que resulta na inclusão de todos os oito vRNPs e exclusão da maioria dos componentes da célula hospedeira exceto lipídeos.
Infeção por gripe é associada com a ativação de várias cascatas de sinalização incluindo a via MAPK úERK, JNK, p38 e BMK-1'ERK5Õ, o módulo de sinalização IkB'NF-kB, a cascata Raf'MEK'ERK, e morte celular programada úLudwig 2006Õ Estas resultam de uma variedade de efeitos que limitam o curso da infeção, tais como a ativação transcriptacionai de IFNb, a morte celular apoptótica, e um bloco no escape do vírus a partir dos endossomas posteriores úLudwig 2006Õ. A maioria dos estudos prévios sobre interaçS es víra-célula foi realizada em cultura de tecido usando cepas de vírus adaptadas por ovo ou cultura de tecido. Os vírus nestes exemplos foram adaptados de tal maneira que alteraç0 es foram induzidas as quais afetam a aglutinação ao recetor e tropismo úMatrosovich 2006Õ. A infeção com cepas patogênicas do tipo selvagem é fornecida em uma imagem mais natural de interação viral com proteínas hospedeiras. Sabe-se que no ser humano a gripe por vias aéreas A e B infeta principalmente as células epiteliais não-ciliadas na trato respiratório superior transportando NeuSAc a-ú2,6õ-Gal, enquanto que as cepas aviárias infetam as células epiteliais ciliadas com a-ú2,3õ-ligado a ácidos siálicos mais profunda nas vias aéreas úMatrosovich et al. 2004aõ.
Além disso, o progresso tem sido feito na elucidação das etapas envolvidas durante a infeção por HRV de células hospedeiras. Acontecimentos selecionados em infeção do rinovírus das vias respiratórias humanas normais podem ser considerados como ocorrendo sequencialmente. As etapas iniciais na patogénese de rinovírus são acreditadas para incluir a entrada do vírus através do nariz, o transporte mucociliar do vírus, a parte posterior da faringe, e iniciação da infeção em células epiteliais não-ciliadas e ciliadas das vias aéreas superiores. Picos de replicação virai, em média, dentro de 48h após o início da infeção persistem por até 3 semanas. Infeção é seguida pela activação de vários mecanismos inflamatórios, que podem incluir a liberação ou geração de interleucinas, bradicininas, prostaglandinas, e possivelmente histamina e estimulação de reflexos parassimpáticos. Processos patofisiolõgicos são iniciados, os quais incluem a vasodilatação dos vasos sanguíneos nasais, transudação de plasma, secreção glandular, e estimulação das fibras nervosas, causando dor e provocando espirros e reflexos de tosse. A doença clínica resultante é uma rinossinusite, faring!te, e bronquite, que, em média, dura uma semana.
Mudanças nos perfis de expressão do gene durante as infeções por rinovírus in vivo foram identificadas úProud D. et al. Am J Respir Crit Care Med Vol 178. pp %62-%68, 20080 . Raspagens epiteliais nasais foram obtidas abes e durante a infeção por rinovírus experimental, e expressão de gene foi avaliada por microensaio. Viperin é identificado como uma proteína antiviral induzida por interferon ÚIFN0 , infeções virais, e moléculas assoiadas ao patogênio. Naturalmente infeções por rinovírus adquiridas, células epiteliais humanas culturadas, e knockdown de RNA interferente curto foram utilizados para avaliar melhor o papel de viperin em infeções por rinovírus. Resultados dos sintomas e títulos virais foram medidos em indivíduos inoculados com rinovírus ou um controle simulado, e mudanças na expressão de gene foram avaliadas 8 e 48 horas após a inoculação. Alterações induzidas por rinovírus na expressão de gene não foram observadas em 8 horas após a infeção virai, mas 11.887 transcritos do gene foram significativamente alterados em raspagens obtidas 2 dias pós-inoculação. Principais grupos de genes super-regulados incluem quimiocinas, moléculas de sinalização, genes responsivos por interferon, e antivirais. Infeção por rinovírus altera significativamente a expressão de muitos genes associados com a resposta imunitária, incluindo quimiocinas e antivirais. Alguns dos genes induzidos marcadamente por infeção por HRV-16 incluem, mas não são limitados a, CCL2, CCL8, CXCL11, CXCL10, CXCL13, CXCL%, CCL20, IFIT2, GBP1, IFIT1, GIP2, IFIT4, IL28B, IRF7, CIG5, N0S2A, 0AS3, OASL, 0AS2, 0AS1, MX2, MX1, PLSCR1, S0CS1, S0CS2, MDA5, RIGI, S0CS3, ICAM-1, HAPLN3, MMP12, EPSTI1, e TNC.
Vias de Sínteses de Ácido Graxo Vários aspetos da presente invenção referem-se a composições e métodos que modulam a atividade da via de sínteses de ácido graxo para tratar uma infeção virai ou tratar o cancro. Vias de sínteses de ácido graxo em seres humanos podem ser utilizadas em quatro enzimasp 10 acetil-CoA carboxilase ÚACC0 , que pode sintetizar malonilGoA; 213 enzima málica, que pode produzir NADPH; 30 citratoliase, que pode sintetizar acetil-CoA; e 40 ácidos graxossintase, que pode catalisar as sínteses dependentes de NADPH de ácidos graxos a partir de acetil-CoA e malonil-CoA. Em vários aspetos, a presente invenção refere-se ao tratamento de infeções virais e cancro por modular a atividade da proteína de ácido graxo sintase.
Os produtos finais de ácidos graxos sintase são os ácidos graxos livres que podem ser utilizados para derivatização enzimática separada com coenzima- A para incorporação em outros produtos. Nos seres humanos, as sínteses de ácidos graxos podem ocorrer em dois locaisp o fígado, onde o ácido palmítico pode ser feito úRoncari, úl%740 Can. J. Biochem., 52μ221 -2300 e lactação da glândula mamária, onde Q- Ci4 ácidos graxos podem ser feitos úThompson, et al. , úl%85 0 Pediatr. Res., 1%μ13%-1430 .
Os ácidos graxos podem ser sintetizados no citoplasma a partir de acetil-CoA. Acetil-CoA pode ser gerado a partir de piruvato por dehirodenase piruvato ÚPDH0 e por β-oxidação de ácidos graxos nas mitocôndrias. Um "citrato transportador" pode transportar o acetil-CoA a partir da mitocôndria para o citoplasma. Acetil-CoA pode reagir com o oxaloacetato para render citrato, e um tricarboxilato de translocase pode transportar citrato a partir de mitocôndria para o citosol. No citoplasma, o citrato pode ser clivado de volta para o oxaloacetato e acetil-CoA, uma reação que pode ser catalisada por ATP-citrato liase. Oxaloacetato pode ser convertido de volta para piruvato para a reentrada na mitocôndria.
Acetil-CoA pode ser convertido para malonil-CoA. Acetil-CoA carboxilase ÚACC0 é um complexo multifuncional, cohendo biotina, sistema de enzima que pode catalisar a carboxilação da acetil-CoA para malonil-CoA. Esta conversão é uma etapa limitante de taxa, irreversível nas sínteses de ácido graxo. ACC pode realizar três funçõesp proteína veículo de biotina carbóxi, biotina carboxilase e carboxiltransferase. Carboxilação dependente de ATP da biotina, um grupo prostético úcofatorõ pode ser seguido por transferência do grupo carboxila para acetil-CoA.
HC03“ + ATP + acetil-CoA -Á ADP + Pi + malonil-CoA
Existem duas formas de ACC, alfa e beta, codificadas por dois genes diferentes ACC-alfa útambém conhecidas como ACC, ACAC, ACC1, ACCA, e ACACA) podem codificar proteínas altamente enriquecidas em tecidos lipogênicos. Várias variantes do transcrito de união alternativo divergentes na sequência e que codificam as isoformas distintas foram encontradas para este gene. ACC-beta útambém conhecido como ACC2, ACCB, HACC275, e ACACBõ pode codificar proteínas para controlar a oxidação dos ácidos graxos por meio da capacidade de malonil-CoA para inibir a carnitina-palmitoil-CoA-transferase I, a etapa limitante da taxa na velocidade na absorção de ácidos graxos e oxidação pela mitocôndria. ACC-beta pode estar envolvido na regulação da oxidação dos ácidos graxos, ao invés de biossínteses de ácidos graxos. Há evidência para a presença de duas isoformas ACC-beta. 0 ACC pode ser regulado pela fosforilação'desfosforilação dos resíduos de serina alvo. Por exemplo, quinase ativada por AMP úAMPKõ pode fosforilar ACC, e esta fosforilação pode inibir a capacidade de ACC para produzir malonil-CoA. Em ACACA, AMPK pode fosforilar Ser7%, Serl200, e Serl215 úPark S.H. et al. Ú2002Õ J. Appl. Physiol. %2μ24 75 - 82õ. AMPK pode fosforilar Ser218 em ACACB úHardie D.G. úl%%2õ Biochim. Biophys. Acta 1123μ231-80. Além disso, a proteína quinase dependente de cAMP úProteína Quinase A, ou PKAõ pode fosforilar ACC. ACC pode ser regulado por transformação alostérica pelo citrato ou palmitoil- CoA. Por exemplo, o citrato pode ser um efetor positivo úisto é, o citrato pode ativar alostericamente ACCõ. Concentração de citrato pode ser elevada quando não é adequada acetil-CoA entrar no Ciclo de Krebs. Excesso de aceteil-CoA pode, em seguida, ser convertido através de malonil-CoA para ácidos graxos. Palmitoil-CoA pode ser um efetor negativo. Palmitoil-CoA, que é o produto de Ácido Graxo Sintase úFASNõ, pode promover a conformação inativa do ACC, o que pode reduzir a produção de malonil-CoA úum processo de inibição de feedbackõ. AMP pode regular as sínteses de ácidos graxos através da regulação da disponibilidade de malonil-CoA. Insulina aglutinando um recetor pode ativar uma fosfatase para desfosforilar ACC, que pode remover o efeito inibitório. 0 gene de ácido graxo sintase útambém conhecido como FAS, 0A-51%, SDR27X1; MGC14367; MGC15706; FASNõ é envolvido nas sínteses de ácido graxo. A enzima codificada por este gene é uma proteína multifuncional de aproximadamente 272 kDa, com mH ltiplos domínios, cada um com atividades enzmáticas distintas que podem desempenhar um papel nas biossínteses de ácidos graxos. FASN pode catalisar as sínteses de palmitato a partir de acetil-CoA e malonil-CoA, na presença de NADPH, em ácidos graxos saturados de cadeia longa. Em algumas linhagens de células de cancro, a proteína FASN foi encontrada para ser fundida com o estrogênio de recetor alfa úER-alfaõ, na qual o N-terminal de FASN é fundido em estrutura com o C-terminal de ER-alfa.
Proteína FASN pode existir no citosol como um dímero de subunidades idênticas. FASN consiste em três domínios catalíticos na seção N-terminal úketoacil sintase úKSõ, malonil'acetiltransferase ÚMAT0 , e dehidrase ÚDH0 0A.seção N-terminal é separada por uma região de núcleo de cerca de 6 00 aminoácidos de quatro domínios C-terminais 0 enól redutase 0 ERõ, ketoacil redutase 0 KRõ, proteína veálo acil 0 ACPõ, e tioesterase 0 TEõõ. A estrutura crisftàna de um ácido graxo sintase de mamífero tem sido relatada 0 Maier, T. et al. 0 2008<3Bcience 321μ1315-1322δ. Cada um dos domínios catalíticos de FASN pode ser alvo nos métodos de tratamento da infeção virai da invento fornecida.
As etapas enzimãticas de sínteses de ácidos graxos podem envolver condensação descarboxilativa, redução, desidratação, e outra redução e podem resultar em uma porção acil saturada. NADPH pode ser um doador de elétrons nas reações redutivas.
Atividade Antiviral
Em vários aspetos, a presente invenção fornece métodos para o tratamento da infeção virai em um indivíduo, o método que compreende a administrar a um indivíduo com necessidade de tal tratamento, uma quantidade eficaz de um composto de Estrutura 0 IXõ ou como previsto na Tabela 1.
Em vários aspetos, a presente invenção fornece métodos para o tratamento da infeção virai, o método que compreende administrar os compostos da presente invenção a um indivíduo com necessidade do mesmo agente. A presente invenção engloba o tratamento de qualquer infeção virai que tem como alvo a via das sínteses de ácido graxo em um hospedeiro, e, em particular, através da modulação da atividade de ácidos graxos sintase. Por exemplo, os presentes métodos podem ser utilizados para tratar a infeção da gripe, a infeção por adenovirus, a infeção pelo vírus sincicial respiratório, a infeção por poxvirus, infeção por poliomielite, a infeção por hepatite C, a infeção por febre amarela, a infeção por febre da dengue, a infeção por rinovírus, e similares.
Em vários aspetos, a presente invenção fornece métodos para o tratamento da infeção por hepatite C administrando ao indivíduo um ou mais compostos aqui descritos. Na modulação, a via de FASN no indivíduo, a infeção por hepatite C é tratada. Tem sido demonstrado que a expressão de FASN é regulada positivamente em linhagens celulares de hepatoma humano Huh7, quando estas células são infetadas com o HCV. Inibição da produção de FASN com um inibidor FASN reduziu a produção de HCV. Assim, a administração a um indivíduo dos compostos da presente invenção úYang, W. et al. Ú2008Õ Hepatology 4 8ύ5όμ13%6-14 03Õ é demonstrada nos EXEMPLOS, em que a inibição FASN se correlaciona com a inibição de HCV.
Em determinados aspetos, os métodos de inibição da infeção virai podem ser realizados in vitro. Em outros aspetos, os métodos de inibição da infeção virai podem ser realizados in vivo.
Em determinados aspetos, os compostos da presente invenção podem ser utilizados em combinação com outros tratamentos antivirais no tratamento de infeção virai.
Em vários aspetos, a infeção virai é uma infeção por febre amarela em ser humano. Em outros aspetos, a infeção virai é uma infeção por hepatite C em ser humano. Ainda em outros aspetos, a infeção virai é uma infeção rinoviral em ser humano.
Em vários aspetos, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para o tratamento de infeção de um sujeito animal, tal como um ser humano, por qualquer um de uma pletora de vírus.
Em certos aspetos, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para a inibição de um hospedeiro por um vírus respiratório. Os vírus respiratórios são mais comumente transmitidos por gotículas transmitidas pelo ar ou secreções nasais e podem levar a um amplo espectro de doenças. Os vírus respiratórios incluem o vírus respiratório sincicial úRSVB , vírus da gripe, coroavírus tais como SARS, adenovirus, vírus parainfluenza e rinovírus ÚHRVB .
De acordo com um aspeto, a presente invenção pode ser utilizada para tratar a infeção por HRV. 0 gênero de rinovírus é um membro da família Picornavíridae de vírus. Gêneros dentro da família incluem os Gêneros Enterovirus, Rhinovirus, Cardiovirus, Aphthovírus, Hepatovirus, Parechovirus, Erbovirus, Kobuvirus, Teschovírus. Rinovírus humano úHRVõ incluem os vírus mais comuns que infetam seres humanos e podem causar o resfriado comum. HRV são líticas na natureza. Rinovírus têm genomas de RNA de sentido positivo de filamento B nico dentre 7,2 e 8.5kb de comprimento. Na extremidade 5' desses genomas é uma proteína codificada pelo vírus, e como mRNA de mamífero, existe também uma parte traseira poli-A 3'. 0 UMP 5' - terminal do RNA virai é covalentemente ligado à pequena proteína virai VPg úPaul AV, et al. Nature 1%%8, 3%3 Ú6682õp280 -284õ. UTR 5' contém dois elementos estruturais. Um é a estrutura de folha de trevo 5' envolvida nas sínteses de RNA de filamento duplo e no processo de interrupção de tradução para a replicação úHuang H, et al. Biochemistry 2001, 40Ê3 27õp8055-8064õ. 0 outro é o local da entrada ribossomal interno H IRESõ que promove a trdução da poliproteína. Além disso, elementos de replicação atuando em cis interno de espécies específicas úcreõ foram identificados em enterovirus humanos uVHEõ, HRV-A e HRV-B úGerber K, Wimmer E, Paul AV, J Virol 2001, 75 ύ22ομ10%7%- 10%%0õ. As partículas virais em si não são envolvidas e são icosaédricas na estrutura. Rinovírus também crescem melhor em temperaturas entre 33-35°C. Os mesmos são também sensíveis ao ambiente acídico.
Proteínas virais por HRV são transcritas como um 0 ico polipeptídeo longo, que é clivado para as proteínas não-estruturais e estruturais virais. Rinovírus são compostos por um capsídeo, que contém quatro proteínas virais VP1, VP2, VP3 e VP4 úRossmann M. , et al. 1%85 Nature 317 ύ6033δμ145-53; Smith T, et al. 1%86, Science 233 ύ4770ομ1286-%3õ. Os nucleocapsídeos isométricos são 22-40 nm de diâmetro. VP1, VP2, e VP3 formam a maior parte do capsídeo de proteína. A proteína VP4 muito menor tem uma estrutura mais prolongada e encontra-se na interface entre o capsídeo e o genoma de RNA. Existem 60 cópias da cada uma destas proteínas montadas como um icosaedro. Os anticorpos humanos que os epítopos alvo encontram-se sobre as regiS es exteriores de VP1-VP3 desempenham um papel na resposta imune a HRVs. HRVs têm dois modos gerais de transmissãop lõ através de aerossóis de gotículas respiratórias e 2õ a partir de superfícies contaminadas, incluindo o contato direto de pessoa para pessoa. A principal via de entrada para rinovírus é o trato respiratório superior. Depois, um HRV liga-se a ICAM-1 úMolécula de Adesão Inter- Celular lõ, também conhecido como recetores CD54 úGrupo de Deferenciação 54õ nas células epiteliais respiratórias. À medida que o vírus se replica e se espalha, as células infetadas liberam citocinas e quimiocinas que, por sua vez, ativam os mediadores inflamatórios. A infeção ocorre rapidamente, com o rinovírus aderindo aos recetores de superfície de 15 minutos antes de entrar no trato respiratório. 0 período de incubação é geralmente de 8-10 horas antes que os sintomas começam a ocorrer. HRVs são a causa mais frequente de infeção em todas as faixas etárias da população humana. Replicação é muitas vezes restringida ao trato respiratório superior que conduz a doenças auto-limitadas, tal como o resfriado comum. No entanto, infeções por HRV também podem agravar desordens das vias respiratórias preexistentes, invadir o trato respiratório inferior e levar a complicações graves.
Em outro aspeto, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para o tratamento de infeção pelo vírus da gripe através de segmentação das vias que o vírus depende para replicação ou infeção. Os vírus da gripe pertencem à família Orthomyxoviridae de vírus. Esta família também inclui vírus de Thogoto e Dhoriviruses. Existem vários tipos e subtipos de vírus da gripe conhecidos, que infetam os seres humanos e outras espécies. Vírus A do tipo da gripe infetam pessoas, pássaros, porcos, cavalos, focas e outros animais, mas as aves selvagens são os hospedeiros naturais para estes vírus. Vírus A do tipo da gripe são divididos em subtipos e nomeados na base de duas proteínas na superfície dos vírusp hemaglutinina úHAõ e neuraminidase úNAõ. Por exemplo, um "vírus H7N2" designa um subtipo A de gripe que tem uma proteína HA 7 e uma proteína NA 2. Similarmente, um vírus "H5N1" tem uma proteína HA 5 e uma proteína NA 1. Há 16 subtipos de HA conhecidos e % subtipos de NA conhecidos. Muitas combinações diferentes de proteínas HA e NA são possíveis. Apenas alguns subtipos de gripe A 0 isto é, H1N1, H1N2, e H3N2Õ estão atualmehe em circulação geral entre as pessoas. Outros subtipos são encontrados mais comumente em outras espécies animais. Por exemplo, vírus H7N7 e H3N8 causam doença em cavalos, e H3N8 também foi recentemente mostrado para causar a doença nos cães 0 ver, www,cdc.gov'f lu'avian'gen-info' flu-virues.htmõ.
Agentes antivirals os quais proteínas da célula hospedeira alvo envolvidas na infeção por gripe podem ser usados para proteger os grupos de alto risco 0 unidades hospitaàres, instituições que cuidam de idosos, indivíduos imunodeprimidosõ, e em um caso por base de caso. Um uso potencial para agentes antivirais é para limitar a propagação e gravidade das futuras pandemias se causadas pela gripe aviária H5N1 ou outras cepas de vírus da gripe. Vírus da gripe A aviária dos subtipos H5 e H7, incluindo H5N1, H7N7, e vírus H7N3, têm sido associados com alta patogenicidade, e infeção humana e com estes vírus variam de leve ÚH7N3, H7N7E para doença fatal e grave ÚH7M, H5N1Õ. Doença humana devido à infeção com o vírus de baixa patogenicidade tem sido documentada, incluindo sintomas muito leves úpor exemplo, conjuntiviteõ para doenças semelhantes à gripe. Exemplos de vírus de baixa patogenicidade que infetaram seres humanos incluem H7N7, H%N2, e H7N2 úver, www.cdc. gov'flu'avian'gen-info'flu-viruses.htmõ. Vírus B da gripe são normalmente encontrados em seres humanos, mas também podem infetar selos. Ao contrário dos vírus da gripe A , esses vírus não são classificados de acordo com o subtipo. Os vírus da gripe B podem causar morbidade e mortalidade entre os seres humanos, mas em geral são associados com epidemias menos graves do que os vírus da gripe A. Embora os vírus da gripe do tipo B possam causar epidemias em seres humanos, os mesmos não causaram pandemias. úver, www,cdc, gov'flu'avian'gen-info'flu-viruses.htmõ. Vírus da gripe do tipo C causam uma doença leve em seres humanos e não causam epidemias ou pandemias. Esses vírus também podem infetar cães de porcos. Estes vírus não são classificados de acordo com o subtipo. úver, www.cdc. gov'flu'avian'gen-info'flu-viruses.htmõ.
Os vírus da gripe diferem um do outro no que diz respeito à especificidade do recetor de superfície celular e tropismo celular, porém os mesmos usam as vias de entrada comuns. Os compostos da presente invenção, vantajosamente, atingem as vias que são comuns a vários vírus, dando origem a uma atividade antiviral mais ampla. Assim, os presentes compostos podem também ser S teis contra os vírus nã-relacionados que utilizam as vias similares. Por exemplo, os agentes podem proteger as células epiteliais das vias aéreas contra vários vírus diferentes, além dos vírus da gripe.
Em certos aspetos, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para o tratamento de infeção por adenovirus. A maioria dos adenovirus comumente causam doença respiratória; sintomas de doenças respiratórias causados por infeção de adenovirus varia a partir da síndrome de resfriado comum a pneumonia, difteria, e bronquite. Os pacientes com sistemas imunes comprometidos são especialmente suscetíveis a complicaçS es graves de infeção de adenovirus. Doença respiratória aguda úARDõ, pela primeira vez reconhecida entre os recrutas militares durante a II Guerra Mundial, pode ser causada por infeções por adenovirus durante as condições de aglomeração e estresse. Os adenovirus são de tamanho médio ú%0-100 nmH , vírus icosaédrico não-enve1opado contendo DNA de filamento duplo. Existem 4% tipos imunologicamente distintos Ú6 subgênerosp A a FE3 que podem causar infeções humana. Os adenovirus são excepcionalmente estáveis aos agentes químicos ou físicos e condições de pH adversas, permitindo a sobrevivência prolongada fora do corpo. Alguns adenovirus, tais como AD2 e Ad5 úespécie CE3 usam càtrina mediada por endocitose e macropinocitose para a entrada infecciosa. Outros adenovirus, tal como Ad3 úespécie B0 usam endocitose dependente de dinamin e macropinocitose para a entrada infecciosa.
Em certos aspetos, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para o tratamento de infeção pelo vírus sincicial respiratório ÚRSV0 . RSV é a causa mais cmum de bronquiolite e pneumonia entre as crianças e crianças com menos de 1 ano de idade. Doença começa mais frequentemente com febre, coriza, tosse, e às vezes pieira. Durante sua primeira infeção por RSV, entre 25% e 40% das crianças e jovens têm sinais ou sintomas de bronquiolite ou pneumonia, e 0,5% a 2% requerem hospitalização. A maioria das crianças se recupera da doença em 8 a 15 dias. A maioria das crianças hospitalizadas com infeção por RSV está com menos de 6 meses de idade. RSV também provoca infeções repetidas ao longo da vida, geralmente associado a sintomas gripais moderados a grave; no entanto, a doença do trato respiratório inferior grave pode ocorrer em qualquer idade, especialmente entre o idoso ou entre aqueles com sistemas cardíacos comprometidos, pulmonares, ou imunes. RSV é um vírus de RNA enve1opado, negativo-sensível. 0 vírion é variável em forma e tamanho údiâmetro médio dentre 120 e 300 nmõ, ê instável no meio ambiente úsobrevivendo apenas em algumas horas em superfícies ambientaisõ, e é prontamente inativado com sabão e água e desinfetantes.
Em certos aspetos, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para o tratamento de infeção pelo vírus da parainfluenza humano úHPIVõ. HPIVs estão em segundo lugar para o vírus sincicial respiratório úRSVõ como uma causa comum da doença do trato respiratório inferior em crianças pequenas. Similar ao RSV, HPIVs podem causar infeçSes repetidas ao longo da vida, geralmente se manifestam por uma doença do trato respiratório superior úpor exemplo, a frio e'ou dor de gargantaõ. HPIVs também podem causar a doença do trato respiratório inferior grave com infeção de repetição úpor exemplo, pneumonia, bronquite e bronquioliteõ, especialmente entre os idosos, e em pacientes com sistemas imunes comprometidos. Cada um dos quatro HPIVs tem diferentes características clínicas e epidemiológicos. A característica clínica mais marcante de HPIV-1 e HPIV-2 é garrotilho úisto é, laringotraqueobonquiteõ; HPIV-1 é a principal causa de garrotilho em crianças, enquanto HPIV- 2 e menos frequentemente detectado. Ambos HPIV-1 e -2 podem causar outras doenças do trato respiratório superior e inferior. HPIV-3 é mais frequentemente associado com bronquiolite e pneumonia. HPIV-4 é raramente detectado, possivelmente porque é menos provável de causar doença grave. 0 período de incubação para HPIVs é geralmente de 1 a 7 dias. HPIVs são de vírus de sentido negativo, vírus de RNA de filamento § nico que possuem fusão e "picos" de glicoproteína hemaglutinina-neuraminidase na sua superfície. Existem quatro tipos de serotipos de HPIV úl a 4õ e dois subtipos Ú4a e 4bõ. 0 vírion varia em tamanho údiâmetro médio entre 150 e 300 nmõ e forma, é instável no meio ambiente úsobreviver a algumas horas em superfícies ambientaisõ, e é facilmente inativado com sabão e água.
Em vários aspetos, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para o tratamento de infeção por coronavírus. Coronavírus é um gênero de vírus animal que pertence à família de Coronaviridae. Os coronavírus são vírus envelopados com um genoma de RNA de filamento único de sentido positivo e uma simetria helicoidal. 0 tamanho do genoma de coronavírus varia de aproximadamente 16 a 31 quilobases, extraordinariamente maiores para um vírus de RNA. 0 nome "coronavírus" é derivado a partir da corona Latin, que significa coroa, como o envelope do vírus aparece sob microscopia de elétron para ser coroado por um anel característico de pequenas estruturas protuberantes. Esta morfologia é efetivamente formada pelos peplômeros de picos virais, que são proteínas que povoam a superfície do vírus e determinam o tropismo hospedeiro. Os coronavírus são agrupados na ordem de Nidovirales, nomeados para o nidus Latin, o que significa ninho, como todos os vírus este fim para produzir um conjunto aninhado co-terminal 3' de mRNAs subgenômicos durante a infeção. As proteínas que contribuem para a estrutura geral de todos os coronavírus são o pico, o envelope, a membrana e o nucleocapsídeo. No caso específico de SARS um domínio de recetor-aglutinação em S medeia a ligação do vírus ao seu recetor celular, enzima conversora de angiotensina 2. A presente invenção engloba o tratamento de qualquer infeção virai que tem como alvo a via de sínteses de ácido graxo em um hospedeiro, e, em particular, modular a atividade de ácido graxo sintase. Por exemplo, os presentes métodos podem ser utilizados para tratar infeções causadas por vírus da leucemia Abelson, vírus da leucemia de murino
Abelson, vírus de Abelson, vírus de laringotraqueobonquite aguda, vírus Adelaide River, grupo de vírus associado ao Adeno, Adenovirus, vírus da doença de cavalo Africano, vírus da peste suína Africano, vírus da AIDS, parvovirus de doença Aleutian mink, Alfaretrovírus, Alfavírus, vírus relacionado a ALV, vírus Amapari, Aftovírus, Aquareovírus, Arbovirus, Arbovirus C, grupo arbovirus A, grupo arbovirus B, grupo Arenavirus, vírus da febre hemorrágica Argentina, vírus da febre hemorrágica Argentina, Arterivírus, Astrovírus, grupo herpesvirus Ateline, vírus da doença Auj ezky, vírus Aura, vírus da doença Ausduk, lyssavírus de morcego Australiano, Aviadenovirus, vírus de eritroblastose de aves, vírus da bronquite infecciosa de aves, vírus da leucemia de aves, vírus da leucose de aves, vírus da linfomatose de aves, vírus mieloblastose de aves, paramixovírus de aves, vírus pneumoenc e f a1i te de aves, vírus reticuloendoteliose de aves, vírus do sarcoma de aves, grupo retrovirus C do tipo de aves, Avihepadnavírus, Avipoxvírus, vírus B, vírus Bl%, vírus Babanki, herpesvirus babuíno, baculovírus, vírus Barmah Floresta, vírus Bebaru, vírus Berrimah, Betaretrovírus, Birnavírus, vírus Bittner, vírus BK, vírus Black Creek Canal, vírus da lingua azul, vírus da febre hemorrágica Boliviano, vírus da doença Boma, doença limite do vírus da ovelha, vírus borna, alfaherpesvírus de bovino 1, alfaherpesvírus de bovino 2, coronavírus de bovino, vírus da febre efémera de bovino, vírus de imunodefieiência de bovino, vírus da leucemia de bovino, vírus de leucose de bovino, vírus mamilite de bovino, papiloma vírus de bovino, vírus da estomatite papular de bovino, parvovirus de bovino, vírus sincicial de bovino, oncovirus do tipo C de bovino, vírus da diarreia virai de bovino, vírus Buggy Creek, grupo de vírus em forma de bala, supergrupo de vírus Bunyamwera, Bunyavirus, vírus do linfoma de Burkitt, Febre Bwamba, vírus CA, Calicivírus, vírus da encefalite de Califórnia, vírus camelpox, vírus de canários, herpesvirus de canídeo, coronavírus canino, vírus da cinomose canina, herpesvirus canino, vírus minuto canino, parvovirose, vírus Cano Delgadito, vírus de artrite de caprino, vírus da encefalite de caprino, Vírus da Herpes de caprino, vírus Capripox, Cardiovírus, herpesvirus caviid 1, herpesvirus Cercopithecid 1, herpesvirus Cercopitecino 1, herpesvirus Cercopitecino 2, vírus Chandipura, vírus Changuinola, vírus bagre do canal, vírus Charleville, vírus da varicela, vírus Chikungunya, herpesvirus de chimpanzé, reovírus caboz, vírus de salmão chum, vírus Cocai, reovírus de salmão Coho, vírus exantema coital, vírus da febre da carraça tick de Colorado, Coltivírus, vírus SK de Columbia, vírus da gripe comum, vírus ecthima contagioso, vírus de dermatite pustular contagioso, Coronavírus, vírus Corriparta, vírus da coriza, vírus da varíola bovina, vírus coxsackie, CPV úvírus de polihedrose citoplasmáticaõ, vírus de paralisia críquete, vírus da febre hemorrágica Crimean-Congo, vírus associado ao garrotilho, Criptovírus, Cipovírus, Citomegalovírus, grupo citomegalovírus, vírus de polihedrose citoplasmática, papiloma vírus de veado, deltaretrovírus, vírus da dengue, Densovírus, Dependovírus, vírus Dhori, vírus diplorna, vírus C Drosophila, vírus da hepatite B de pato, vírus 1 da hepatite de pato, vírus 2 da hepatite de pato, duovírus, vírus Duvenhage, vírus DWV de asa deformada, vírus da encefalite equina oriental, vírus da encefalite equina oriental, vírus EB, vírus Ebola, vírus do tipo Ebola, vírus echo, echovírus, echovírus 10, echovírus 28, echovírus %, vírus ectromelia, vírus EEE, vírus EIA, vírus EIA, vírus da encefalite, vírus do grupo da encefalomiocardite, vírus da encefalomiocardite, Enterovirus, vírus elevando enzima, vírus elevando enzima úLDHõ, vírus de febre hemorrágica epidêmica, vírus da doença hemorrágica epizoótica, vírus Epstein-Barr, alphaherpesvirus equid 1, alphaherpesvirus equid 4, herpesvirus equid 2, virus do aborto equino, virus da arterite equina, virus da encefalomielite equina, virus da anemia infecciosa equina, morbilivirus equino, virus rhinopneumonitis equino, rinovírus equino, virus Eubenangu, papiloma virus de alces Européia, virus da febre suína Européia, virus Everglades, vírus Eyach, herpesvirus felino 1, calicivírus felino, vírus fibrossarcoma felino, herpesvirus felino, vírus da imunodeficiência felino, vírus da peritonite infecciosa felino, leucemia felina'vírus sarcoma, vírus da leucemia felina, vírus da panleucopenia felina, parvovirus felino, vírus do sarcoma felino, vírus sincicial felino, Filovírus, vírus Flanders, Flavivírus, vírus da doença da boca e pé, vírus Fort Morgan, hantavirus Four Corners, adenovirus de ave 1, vírus da bouba aviária, vírus amigo, Gammaretrovirus, vírus da hepatite GB, vírus GB, vírus do sarampo Alemão, vírus Getah, vírus da leucemia de macaco gibão, vírus da febre glandular, vírus goatpox, vírus shinner dourado, vírus Gonometa, parvovirus de ganso, vírus de granulose, vírus Gross, vírus espermófilo-listado de hepatite B, arbovirus de grupo A, vírus Guanarito, cobaia de citomegalovírus, vírus de cobaia do tipo C, vírus Hantaan, Hantavirus, reovírus de molusco difícil, vírus de fibroma de lebre, HCMV úcitomegalovírus humanoõ, vírus 2 de hemadsorção, vírus hemaglutinante do Japão, vírus da febre hemorrágica, vírus hendra, henipaviruses, Hepadnavírus, vírus da hepatite A, grupo de vírus da hepatite B, vírus da hepatite C, vírus da hepatite D, vírus da hepatite delta, vírus da hepatite E, vírus da hepatite F, vírus da hepatite G, vírus da hepatite nonA nonB, vírus da hepatite, vírus da hepatite únão-humanoõ, reovírus 3 de hepatoencefalomielite, Hepatovírus, vírus da hepatite B de garça, vírus da herpes B, vírus da herpes simples, vírus da herpes simples 1, vírus da herpes simples 2, herpesvirus, herpesvirus 7,
Herpesvirus ateies, Herpesvirus hominis, infeção de Herpesvirus, Herpesvirus saimiri, Herpesvirus suis, Herpesvirus varicellae, vírus J Highlands, rhabdovirus Hirame, virus da cólera de porco, adenovirus humano 2, virus da herpes alfa humano 1, virus da herpes alfa humano 2, virus da herpes alfa humano 3, vírus linfotrópico humano B, virus da herpes beta humano 5, coronavirus humano, grupo citomegalovírus humano, vírus espumoso humano, vírus da herpes gama humano 4, vírus da herpes gama humano 6, vírus humano de hepatite A, grupo 1 do vírus da herpes humano, grupo 2 do vírus da herpes humano, grupo 3 do vírus da herpes humano, grupo 4 do vírus da herpes humano, herpesvirus humano 6, herpesvirus humano 8, vírus de imunodeficiência humano, vírus de imunodeficiência humano 1, vírus de imunodeficiência humano 2, papiloma vírus humano, vírus da leucemia de células T humanas, vírus da leucemia de células T humanas, vírus da leucemia de células T humanas II, vírus da leucemia de células T humanas III, vírus do linfoma de células T humanas I, vírus do linfoma de células T humanas II, tipo 1 do vírus linfotrópico de células T humanas, tipo 2 do vírus linfotrópico de células T humanas, T vírus I linfotrópico humano, vírus II linfotrópico T humano, vírus III linfotrópico T humano, Ichnovirus, vírus da gastroenterite infantil, vírus da rinotraqueíte bovina infecciosa, vírus da necrose hematopoiética infecciosa, vírus da necrose pancreãtica infecciosa, vírus da gripe A, vírus da gripe B, vírus C da gripe, vírus D da gripe, vírus pr8 da gripe, vírus iridescente de inseto, vírus de inseto, iridovírus, vírus B Japonês, vírus da encefalite Japonês, vírus JC, vírus Junin, vírus da herpes associados ao sarcoma Kaposi, vírus Kemerovo, vírus do rato de Kilham, vírus Klamath, vírus Kolongo, vírus da febre hemorrágica Coreano, vírus Kumba, vírus da doença da floresta Kysanur, vírus Kyzylagach, vírus La Crosse, vírus elevando dehidrogenase láctica, vírus de dehidrogenase láctica, vírus Lagos bat, vírus Langur, parvovirus lapine, vírus da febre de Lassa, vírus de Lassa, vírus de rato latente, vírus LCM, vírus Leaky, Lentivírus, Leporipoxvirus, vírus da leucemia, leukovirus, vírus da doença de pele lumpi, vírus associado a linfadenopatia, Linfocriptovírus, vírus de coriomeningite linfocítica, grupo de vírus linfoproliferativo, vírus Machupo, vírus da coceira louca, grupo oncovirus do tipo de mamífero B, retrovirus do tipo de mamífero B, grupo retrovirus do tipo de mamífero C, retrovirus do tipo de mamífero D, vírus do tumor mamário, vírus Mapuera, vírus Marburg, vírus do tipo Marburg, vírus de macaco Mason Pfizer, Mastadenovirus, vírus Mayaro, vírus ME, vírus do sarampo, vírus Menangle, vírus Mengo, Mengovirus, vírus Middelburg, vírus do nódulo ordenhadores, vírus da enterite vison, vírus minuto de camundongos, vírus relacionado a MLV, vírus MM, vírus Mokola, Molluscipoxvirus, vírus contagioso de molusco, vírus de macaco B, vírus de macaco pox, Mononegavirales, Morbillivirus, vírus Mount Elgon bat, citomegalovírus de camundongo, vírus da encefalomielite de camundongo, vírus da hepatite de camundongo, vírus de camundongo K, vírus da leucemia de camundongo, vírus do tumor mamário de camundongo, vírus minuto de camundongo, vírus de pneumonia de camundongo, vírus da poliomielite de camundongo, poliomavírus de camundongo, vírus do sarcoma de camundongo mouse, vírus mousepox, vírus de Moçambique, vírus Mucambo, vírus da doença da mucosa, vírus da caxumba, vírus da herpes beta de murid 1, citomegalovírus de murid 2, grupo citomegalovírus de murino, vírus da encefalomielite de murino, vírus da hepatite de murino, vírus da leucemia de murino, vírus induzindo nódulo de murino, poliomavírus de murino, vírus do sarcoma de murino, Muromega1ονirus, vírus da encefalite Murray Valley, vírus mixoma, Myxovirus, Myxovirus multiforme, Myxovirus parotitidis, vírus da doença de ovelha Nairobi, Nairovirus, Nanirnavirus, virus Nariva, virus Ndumo, virus Neethling, virus Nelson Bay, virus neurotrópico. Novo Arenavirus Mundial, virus pneumonite do recém-nascido, vírus da doença de Newcastle, vírus Nipah, vírus noncitopatogênico, virus Norwalk, virus de polihedrose nuclear úNPVH , virus de pescoço mamilo, vírus 0'nyong'nyong, virus Ockelbo, virus oncogênico, partícula do tipo vírus oncogênico, oncornavirus, Orbivirus, vírus Orf, vírus Oropouche, Orthohepadnavirus, Orthomyxovirus, Orthopoxvirus, Orthoreovirus, Orungo, papiloma vírus ovinos, virus da febre catarral ovinos, vírus da herpes de coruja macaco, virus Palyam, Papiloma virus, Papiloma virus sylvilagi, Papovavirus, virus da parainfluenza, virus da parainfluenza tipo 1, virus da parainfluenza tipo 2, virus da parainfluenza tipo 3, virus da parainfluenza tipo 4, Paramyxovirus, Parapoxvirus, virus paravaccinia. Parvovirus, Parvovirus Bl%, grupo parvovirose, Pestivirus, Phlebovirus, virus da cinomose focina, Picodnavirus, Picornavirus, citomegalovírus de porco - virus pigeonpox, virus Piry, virus Pixuna, virus da pneumonia de camundongos, Pneumovirus, vírus da poliomielite, poliovirus, Polydnavirus, vírus poliédrico, virus do polioma, Polyomavirus, Polyomavirus bovis, Polyomavirus cercopitheci, Polyomavirus hominis 2, Polyomavirus maccacae 1, Polyomavirus muris 1, Polyomavirus muris 2, Polyomavirus papionis 1, Polyomavirus papionis 2, Polyomavirus sylvilagi, Pongine herpes virus 1, vírus da diarreia epidêmica suína, vírus da encefalomielite hemaglutinante suína, parvovirus suíno, vírus da gastroenterite transmissível suíno, vírus tipo C suíno, vírus da varíola, poxvirus, poxvirus Variolae, vírus Prospect Hill, Provírus, vírus pseudocowpox, vírus de pseudorraiva, vírus psittacinepox, virus quailpox, virus fibroma de coelho, vírus vaculolating renal de coelho, papiloma vírus de coelho, vírus da raiva, parvovirose guaxinim, vírus raccoonpox, vírus Ranikhet, citomegalovírus de rato, parvovirose de rato, vírus de rato, vírus de Rauscher, vírus vaccinia recombinante, vírus recombinante, reovírus 1, reovírus 2, reovírus 3, vírus répteis do tipo C, vírus de infeção respiratória, vírus sincicial respiratório, vírus respiratório, vírus reticuloendoteliose, Rhabdovirus, Rhabdovirus Carpia, Rhadinovirus, Rinovírus, Rhizidiovirus, vírus da febre Rift Valley, vírus de Riley, vírus da peste bovina, vírus do tumor de RNA, vírus Ross River, Rotavirus, vírus rougeole, vírus do sarcoma de Rous, vírus da rubelle, vírus da rubéola, Rubi vírus, vírus encefalite de outono Russo, vírus símio SA 11, vírus SA2, vírus Sabiá, vírus Sagiyama, vírus da herpes de Saimirine 1, vírus da glândula salivar, grupo de vírus da febre sandfly, vírus Sandjimba, vírus de SARS, SDAV úvírus sialodacryoadenitisõ, vírus sealpox, Vírus Semliki de Floresta, vírus Seoul, vírus sheeppox, vírus de fibroma Shope, vírus de papiloma Shope, vírus espumoso símio, vírus da hepatite A símio, vírus da imunodeficiência humano símio, vírus da imunodeficiência símio, vírus da parainfluenza símio, vírus linfotrópico de células T símio, vírus símio, vírus símio 40, Simplexvirus, vírus Sin Nornbre, vírus Sindbis, vírus da varíola, vírus da febre hemorrágica da América do Sul, vírus sparrowpox, Spumavirus, vírus do fibroma de esquilo, retrovirus de macaco esquilo, grupo de vírus SSV 1, STLV úvírus linfotrópico T símioõ do tipo I, STLV úvírus linfotrópico T símioõ do tipo II, STLV úvírus linfotrópico T símioõ do tipo III, vírus da estomatite papulosa, vírus submandibular, vírus da herpes alfa suid 1, vírus da herpes suid 2, Suipoxvirus, vírus da febre de pântano, vírus da varíola suíno, vírus da leucemia de camundongo da Suíça, vírus TAC, vírus complexo Tacaribe, vírus Tacaribe, vírus Tanapox, vírus Taterapox, reovírus Tench, vírus da encefalomielite de Theiler, vírus de Theiler, vírus Thogoto, vírus Thottapalayam, vírus da encefalite Tick borne, vírus Tioman, Togavírus, Torovírus, vírus de tumor, vírus Tupaia, vírus de rinotraqueíte, vírus turkeypox, retrovirus do tipo C, oncovirus do tipo D, grupo retrovirus do tipo D, rhabdovirus de doença ulcerativa, vírus Una, grupo de vírus Uukuniemi, vírus vaccinia, vírus vacuolating, vírus zoster varicela, Varicellovirus, vírus Varicola, vírus principal da varíola, vírus da varíola, vírus da doença Vasin Gishu, vírus VEE, vírus da encefalite equina da Venezuela, vírus da encefalomielite equina da Venezuela, vírus da febre hemorrágica da Venezuela, vírus da estomatite vesicular, Vesiculovirus, vírus Vilyuisk, retrovirus de víbora, vírus da septicemia hemorrágica virai, vírus Visna Maedi, vírus Visna, vírus volepox, VSV úvírus da estomatite vesicularõ, vírus Wallal, vírus Warrego, vírus da verruga, vírus WEE, vírus West Nile, vírus da encefalite equina ocidental, vírus da encefalomielite equina ocidental, vírus Whataroa, vírus do vómito de inverno, vírus marmota de hepatite B, vírus do sarcoma de macaco 1anoso, vírus tumor de ferida, vírus WRSV, vírus tumor de macaco Yaba, vírus Yaba, Yatapoxvirus, vírus da febre amarela, e o vírus Yug Bogdanovac.
Utilidade nas Desordens Metabólicas
Em vários aspetos, os compostos da presente invenção têm utilidade no tratamento de doenças metabólicas. FASN demonstrou estar envolvido na regulação da glicose, metabolismo de lipídeos e colesterol. Camundongos com uma inativação específica do fígado de FASN têm fisiologia normal, a não ser que alimentados com uma dieta de teor de gordura zero, no caso em que os mesmos desenvolvem hipoglicemia e fígado gordo, ambos os quais são invertidos com a gordura alimentar. úChakravarthy, M.V., et al. Ú2005Õ Cell Metabolism 1μ30%-322<5. Camundongos Db'+ alimentados com uma dieta de alto teor de frutose exibem níveis de triglicerídeos do fígado reduzidos e melhoram a sensibilidade à insulina quando tratados por 28 dias com platensimicin, um inibidor covalente de FASN. úWu, M. et al. Ú2Q11Õ PNAS 108 Ú13õp5378-5383õ. Os níveis de glicose no ambiente são também reduzidos em camundongos db/db seguindo tratamento com platensimicin. Estes resultados fornecem evidências de que a inibição de FASN pode trazer benefícios terapêuticos relevantes em modelos animais de diabetes e desordens metabólicas relacionadas. Assim, os inibidores de FASN descritos são 0 teis no tratamento de doenças caracterizadas por desregulação nestes sistemas. Sem limitação, os exemplos incluem esteatose e diabete.
Atividade de Anticancro
Em vários aspetos, a presente invenção fornece métodos para tratar o cancro no indivíduo, o método que compreende administrar a um indivíduo com necessidade de tal tratamento uma quantidade eficaz de um composto de Estruturas úlõ, úllõ, úlllõ, úIVõ, úVõ, ÚVIÕ, úVIIõ, úVIIIõ, úIXÕ, úXõ, úXIõ, ou tal como previsto na Tabela 1. Em outros aspetos, os compostos possuindo a Estrutura úló, úllõ, úlllõ, úIVõ, úVõ, ÚVIÕ, úVIIõ, úVIIIõ, ÚIXÕ, ÚXõ, úXIõ ou tal como fornecidos na Tabela 1 podem ser utilizados para a fabricação de um medicamento para o tratamento do cancro.
Em certos aspetos, a presente invenção fornece um método para inibir o crescimento de células tumorais em um indivíduo, o método que compreende administrar a um indivíduo com necessidade de tal tratamento uma quantidade eficaz de um composto de Estrutura úlõ, úllõ, úlllõ, ÚIVÕ, úVõ, úVIõ, úVIIõ, úVIIIõ, ÚIXÕ, ÚXÕ, ÚXIÕ, ou, tal como previsto na Tabela 1. Em outros aspetos, o tumor pode ser derivado a partir de ovário, mama, pulmão, tiroide, nódulo linfático, rim, uréter, bexiga, ovário, teste, próstata, osso, músculo esquelético, medula óssea, estômago, esófago, intestino delgado, cólon, reto, pâncreas, fígado, músculo liso, cérebro, medula espinal, nervos, ouvidos, olhos, nasofaringe, orofaringe, glândula salivar, ou tecido do coração. Em certos aspetos, os compostos presentes podem ser administrados concomitantemente com um ou mais tratamentos de anticancro adicionais. Células cancerosas se proliferam rapidamente para ativar a via de sínteses de ácido graxo para fornecer os altos níveis de lipídeos necessários para o conjunto de membrana e metabolismo oxidativo. 0 Flavin, R. et ai. 0 2010ÕFuture Oncology. 50 4õp551-562õ. Inibidores das sínteses de ácidos graxos foram demonstrados em atividade in vivo em modelos de cancro pré-clínicos. 0 Orita, H. et al. 0 2001õ Clinicai Cancer Research. 130 23ομ713%-7145 and Puig, T. et al. 0 2011õBreast Cancer Research, 13 0 6õpR131õ. Além disso, as sínteses de ácidos graxos suportam nova formação de vasos sanguíneos e inibidores desta via têm atividade em modelos in vitro de angiogeneses. 0 Browne, C.D.,et al. 0 2006Õ, The FASEB Journal, 200 12όμ2027-2035ό. Os compostos presentemente descritos demonstraram a capacidade de induzir seletivamente a captura do ciclo de células em células HUVEC, sem causar a morte celular em geral por apoptose. Ver EXEMPLOS. 0 tratamento do cancro da presente invenção inclui um efeito anti tumoral que pode ser avaliado por meios convencionais, tais como a taxa de resposta, o tempo para a progressão da doença e'ou a taxa de sobrevivência. Efeitos antitumorais da presente invenção incluem, mas não são limitados a, inibição do crescimento tumoral, atraso do crescimento tumoral, regressão do tumor, encolhimento do tumor, aumento do tempo de regeneração do tumor na cessação do tratamento e retardamento da progressão da doença. Por exemplo, o mesmo é esperaro que quando a combinação da presente invenção é administrada a um animal de sangue quente, tal como um ser humano, em necessidade de tratamento para o cancro envolvendo um tumor sólido, um tal método de tratamento produzirá um efeito, como medido, por exemplo, um ou mais dep a extensão do efeito antitumoral, a taxa de resposta, o tempo para a progressão da doença e taxa de sobrevivência. Métodos de Tratamento
Também aqui fornecidas são as composições farmacêuticas que compreendem os compostos da presente invenção. As composições presentes e métodos têm atividade antiviral e'ou anticancro.
Em vários aspetos, a presente invenção fornece composições farmacêuticas que compreendem qualquer um dos compostos de Estruturas úlH , úIlEI , úIIlEI , ÚIVH , ÚV0 , úVlEI , ,ύνΐΐΗ úVlllUS , úixES , úXlEI , ou ÚXI0 , e um veículo, excipéentou diluente farmaceuticamente aceitável.
Em certos aspetos, a presente invenção fornece composições farmacêuticas que compreendem qualquer um dos compostos da Tabela 1 e um veículo, excipiente, ou diluente farmaceuticamente aceitável.
Certos aspetos da presente invenção referem-se a métodos de utilização de composições farmacêuticas e kits que compreendem um ou mais agentes que inibem as vias de sínteses de ácido graxo para inibir ou diminuir uma infeção virai ou para o tratamento de cancro. Certos aspetos da presente invenção referem-se a métodos de utilização de composições farmacêuticas e kits que compreendem um ou mais agentes que inibem ácido graxo sintase para inibir ou diminuir uma infeção virai ou para o tratamento de cancro. Outro aspeto da presente invenção proporciona métodos, composições farmacêuticas, e kits para o tratamento de indivíduos animais que têm uma infeção virai ou cancro ou em risco de desenvolver uma infeção virai ou cancro. 0 termo "indivíduo" como usado aqui inclui seres humanos bem como outros. 0 termo "tratamento" como usado aqui inclui atingir um benefício terapêutico e'ou um benefício profilático. Pelo benefício terapêutico significou a erradicação ou melhoria da infeção virai subjacente. Além disso, um benefício terapêutico é alcançado com a erradicação ou melhoria de um ou mais dos sintomas fisiológicos associados com a infeção virai subjacente tal que um aperfeiçoamento é observado no indivíuo animal, não obstante o fato de que o indivíuo ainda pode ser atingido com o vírus subjacente.
Durante os aspetos onde um benefício profilático é desejado, uma composição farmacêutica da invenção pode ser administrada a um paciente em risco de desenvolver infeção virai, tal como HRV, ou HIV, ou a um paciente com um mais dos sintomas fisiológicos de uma infeção virai, embora o diagnóstico da condição pode não ter sido feito. Administração pode prevenir a infeção viral a partir do desenvolvimento, ou pode reduzir, diminuir, encurtar e'ou de outra forma melhorar o desenvolvimento da infeção virai. A composição farmacêutica pode modular a via de sínteses de ácido graxo, por exemplo, expressão do gene FASN ou atividade de proteína FASN. Em que, o termo modular inclui inibição da via de sínteses de ácido graxo, por exemplo, expressão do gene FASN ou atividade de proteína FASN ou alternativamente ativação da via de sínteses de ácido graxo, por exemplo, expressão do gene FASN ou atividade de proteína FASN.
Reduzir a atividade da via de sínteses de ácido graxo, por exemplo, expressão do gene FASN ou atividade de proteína FASN, é também conhecida como "inibir" a via de sínteses de ácido graxo, por exemplo, expressão do gene FASN ou atividade de proteína FASN. 0 termo "inibir" e suas conjugações gramaticais, tal como "inibitório", não requerem a inibição completa, mas referem-se a uma redução na atividade de sínteses de ácido graxo, por exemplo, expressão do gene FASN ou atividade de proteína FASN. Em outro aspeto, essa redução é de pelo menos 50%, pelo menos 75%, pelo menos 0 0%, e pode ser de, pelo menos 0 5%ia atividade da enzima na ausência do efeito inibidor, por exemplo, na ausência de um inibidor. Por outro lado, a frase "não inibir" e suas conjugações gramaticais referem-se a situações em que não há menos do que 20%, menos do que 10%, e pode ser menos do que 5%, de redução na atividade enzima na presença do agente. Além disso, a frase "não inibe substancialmente" e suas conjugações gramaticais referem-se a situações em que não é menos do que 30%, menos do que 20%, e em alguns aspetos, menos do que 10% de redução na atividade de enzima na presença do agente.
Aumentar a atividade da via de sínteses de ácido graxo, por exemplo, expressão do gene FASN ou atividade de proteína FASN é também conhecida como "ativar" a via de sínteses de ácido graxo, por exemplo, expressão do gene FASN ou atividade de proteína FASN. 0 termo "ativado" e suas conjugações gramaticais, tal como "ativar", não necessitam de ativação completa, mas referem-se a um aumento na atividade da via de sínteses de ácido graxo, por exemplo, expressão do gene FASN ou atividade de proteína FASN. Em outro aspeto, tal aumento é de pelo menos 50%, pelo menos 75%, pelo menos § 0%, e pode ser de, pelo menos S 5%ãa atividade da enzima na ausência do efeito de ativação, por exemplo, na ausência de um ativador. Por outro lado, a frase "não ativa" e suas conjugações gramaticais referem-se a situações em que não é menos do que 20%, menos do que 10%, e pode ser menos do que 5%, de um aumento na atividade de enzima na presença do agente. Além disso, a frase "não ativa substancialmente" e suas conjugações gramaticais referem-se a situações em que não é menos do que 30%, menos do que 20%, e em outro aspeto menos do que 10% de um aumento na atividade de enzima na presença do agente. A capacidade de reduzir a atividade da enzima é uma medida da potência ou a atividade de um agente, ou combinação de agentes, para ou contra a enzima. Potência pode ser medida pela célula livre, células inteiras e'ou ensaios in vivo em termos de IC50, Kj. e'ou os valores de ED50. Um valor de IC50 representa a concentração de um agente necessária para inibir a atividade da enzima para metade (50%), sob um determinado conjunto de condições. Um valor de Ki representa a constante de afinidade de equilíbrio para a aglutinação de um agente de inibição para a enzima. Um valor de ED50 representa a dose de um agente necessária para efetuar uma resposta semimáxima em um ensaio biológico. Mais detalhes sobre estas medidas serão apreciados por aqueles versados na técnica, e podem ser encontrados em textos padrão na bioquímica, enzimologia, e similares. A presente invenção também inclui kits que podem ser usados para tratar infeções virais ou tratar cancro. Estes kits compreendem um agente ou combinação de agentes que inibem a via de síntese de ácido graxo, por exemplo, expressão de gene FASN ou atividade de proteína FASN e, opcionalmente, instruções ensinando o uso do kit de acordo com os vários métodos e abordagens descritos aqui. Tais kits também podem incluir informações, tais como referências de literatura, materiais de instrução de embalagem, resultados de processo clínico e'ou resumos destes e similares, as quais indicam ou estabelecem as atividades e'ou vantagens do agente. Tais informações podem ser baseadas nos resultados de vários estudos, por exemplo, estudos usando animais experimentais envolvendo modelos in vivo e estudos baseados em processos clínicos com ser humano. Os kits descritos aqui podem ser fornecidos, comercializados e'ou promovidos para profissionais de saúde, incluindo médicos, enfermeiros, farmacêuticos, funcionários de farmácia e terapêutica, e similares.
Formulações, Vias de Administração e Doses Eficazes
Outro aspeto da presente invenção refere-se a formulações, vias de administração e doses eficazes para composições farmacêuticas compreendendo um agente ou combinação de agentes da presente invenção. Tais composições farmacêuticas podem ser usadas para tratar infeções virais, conforme descrito acima.
Compostos da invenção podem ser administrados como formulações farmacêuticas incluindo aquelas adequadas para administração oral úincluindo bucal e sublingualS , retal, nasal, tópica, por adesivo transdérmico, pulmonar, vaginal, por supositório ou parenteral úincluindo intramuscular, intra-arterial, intratecal, intradérmica, intraperitoneal, subcutânea e intravenosaõ ou em uma forma adequada para administração por aerossol, inalação ou insuflação. InformaçEI es gerais sobre sistemas de administraçãode droga podem ser encontradas em Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems úLippencott Williams &amp; Wilkins, Baltimore Md. úl%%%õõ.
Em vários aspetos, a composição farmacêutica inclui veículos e excipientes úincluindo, mas não limitado a, tampS es, carboidratos, manitol, proteínas, polipepideos ou aminoãcidos, tais como glicina, antioxidantes, bacteriostáticos, agentes quelantes, agentes de suspensão, agentes espessantes e/ou conservantesó, água, óleos incluindo aqueles de petróleo, de origem animal, vegetal ou sintética, tais como óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de sésamo e similares, soluçS es salias, soluçH es de dextrose e glicerol aquosas, agentes aromatizantes, agentes corantes, removedores de autocolantes e outros aditivos, adjuvantes ou ligantes aceitáveis, outras substâncias auxiliares farmaceuticamente aceitáveis, conforme necessário, para aproximar condiçS es fisiológicas, tais como agentes tamponantes de pH, agentes de ajuste de tonicidade, agentes emulsificantes, agentes umectantes e similares. Exemplos de excipientes incluem amido, glicose, lactose, sacarose, gelatina, malte, arroz, farinha, giz, gel de sílica, estearato de sódio, monoestearato de glicerol, talco, cloreto de sódio, leite desnatado seco, glicerol, propileno, glicol, água, etanol e similares. Em outro aspeto, a preparação farmacêutica é substancialmente livre de conservantes. Em outro aspeto, a preparação farmacêutica pode conter pelo menos um conservante. Metodologia geral sobre formas de dosagem farmacêuticas é encontrada em Ansel et al. , Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems úLippencott Williams É Wilkins, Baltimore Md. úl%%%õõ. Será reconhecido que, embora qualquer veículo adequado conhecido àqueles versados na técnica possa ser empregado para administrar as composições desta invenção, o tipo de veículo variará dependendo do modo de administração.
Os compostos também podem ser encapsulados dentro de lipossomas usando tecnologia bem conhecida. Microesferas biodegradáveis também podem ser empregues como veículos para as composições farmacêuticas desta invenção.
Microesferas biodegradáveis adequadas são divulgadas, por exemplo, nas Patentes dos Estados Unidos Nos. 4.80 7268, 5.075.100 , 5.0 28.647, 5.811.128, 5.820.883, 5.85363, 5.814.344 e 5.0 42.252. 0 composto pode ser administrado em lipossomas ou microesferas úou micropartículasõ. Métodos para preparar lipossomas e microesferas para administração a um paciente são bem conhecidos àqueles versados na técnica. A Patente dos Estados Unidos No. 4.78%.734, cujo conte0 do é incorporado aqui por referência, descreve métodos para encapsular materiais biológicos em lipossomas. Essencialmente, o material é dissolvido em uma solução aquosa, os fosfolipídeos e lipídeos adequados adicionados, juntamente com tensoativos se necessário, e o material dialisado ou sonicado, conforme necessário. Uma revisão de métodos conhecidos é fornecida por G. Gregoriadis, Capítulo 14, "Liposomes", Drug Carriers in Biology and Medicine, pp. 2.sup.87-341 úlmpressão Acadêmica, 1%7%Õ.
Microesferas formadas de polímeros ou proteínas são bem conhecidas àqueles versados na técnica e podem ser adaptadas para a passagem através do trato gastrointestinal diretamente para a corrente sanguínea. Alternativamente, o composto pode ser incorporado e as microesferas, ou compósito de microesferas, implantadas para liberação lenta ao longo de um período de tempo variando de dias a meses. Ver, por exemplo, Patentes dos Estados Unidos Nos. 4.%06.474, 4.%25.673 e 3.625.214, e Jein, TIPS 1%μ155-157 úl%%8õ, cujos conteB dos são incorporados aqui por referência. A concentração de droga pode ser ajustada, o pH da solução tamponada e a isotonicidade ajustados para serem compatíveis com injeção intravenosa, como é bem conhecido na técnica.
Os compostos da invenção podem ser formulados como uma solução ou suspensão estéril, em veículos adequados, bem conhecida na técnica. As composiçB es farmacêuticas podem ser esterilizadas por técnicas de esterilização convencionais bem conhecidas ou podem ser esterilizadas por filtração. As soluçS es aquosas resultantes podem se embaladas para uso no estado em que se encontram ou liofilizadas, a preparação liofilizada sendo combinada com uma solução estéril antes da administração. FormulaçS es e veículos adicionais adequados são descritos em Remington "The Science and Practice of Pharmacy" ú20a ed., Lippincott Williams &amp; Wilkins, Baltimore MDõ, cujos ensinamentos são incorporados aqui por referência em suas totalidades.
Os agentes ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser fornecidos isoladamente ou em combinação com um ou mais agentes diferentes, ou com uma ou mais formas diferentes.
Por exemplo, uma formulação pode compreender um ou mais agentes em proporções específicas, dependendo das potências relativas de cada agente e da indicação pretendida. Por exemplo, em composições para atingir dois alvos hospedeiros diferentes e onde potências são similares, cerca de uma proporção de Ιμΐ de agentes pode ser usada. As duas formas podem ser formuladas em conjunto, na mesma unidade de dosagem, por exemplo, em um creme, supositório, comprimido, cápsula, spray aerossol, ou pacote de pó para ser dissolvido em uma bebida; ou cada forma pode ser formulada em uma unidade separada, por exemplo, dois cremes, dois supositórios, dois comprimidos, duas cápsulas, um comprimido e um líquido para dissolver o comprimido, dois sprays aerossol, ou um pacote de pó e um líquido para dissolver o pó, etc. 0 termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se àqueles sais que mantêm a eficácia e propriedades biológicas dos agentes usados na presente invenção, e os quais não são biologicamente, ou de outra forma, indesejáveis. Por exemplo, um sal farmaceuticamente aceitável não interfere no efeito benéfico de um agente da invenção de inibição da via de síntese de ácido graxo, por exemplo, inibindo expressão de gene FASN ou atividade de proteína FASN.
Sais típicos são aqueles dos íons inorgânicos, tais como, por exemplo, íons de sódio, potássio, cálcio, magnésio, e similares. Tais sais incluem sais com ácidos inorgânicos ou orgânicos, tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido fosfórico, ácido nítrico, ácido sulfúrico, ácido metanossulfónico, ácido p-toluenossulfónico, ácido acético, ácido fumárico, ácido succínico, ácido lático, ácido mandélico, ácido málico, ácido cítrico, ácido tartárico ou ácido maleico. Além disso, se o agente(s) contiver um grupo carbóxi ou outro grupo ácido, este pode ser convertido em um sal de adição farmaceuticamente aceitável com bases inorgânicas ou orgânicas. Exemplos de bases adequadas incluem hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, amónia, ciclohexilamina, dieiclohexilamina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, e similares.
Um éster ou amida farmaceuticamente aceitável refere-se àqueles que mantêm eficácia e propriedades biológicas dos agentes usados na presente invenção, e os quais não são biologicamente, ou de outra forma, indesejáveis. Por exemplo, o éster ou amida não interfere no efeito benéfico de um agente da invenção de inibição da via de síntese de ácido graxo, por exemplo, inibindo expressão de gene FASN ou atividade de proteína FASN. Ésteres típicos incluem etil, metil, isobutil, etilenoglicol, e similares. Amidas típicas incluem amidas não substituídas, alquil amidas, dialquil amidas, e similares.
Em outro aspeto, um agente pode ser administrado em combinação com um ou mais compostos, formas e'ou agentes diferentes, por exemplo, conforme descrito acima. Composições farmacêuticas compreendendo combinações de um inibidor de via de síntese de ácido graxo, por exemplo, um inibidor de expressão de gene FASN ou atividade de proteína FASN, com um ou mais agentes ativos diferentes podem ser formuladas para compreender algumas proporções molares. Por exemplo, proporções molares de cerca %%μ1 a cerca de 1μ%% de um inibidor de via de síntese de ácido graxo, por exemplo, um inibidor de expressão de gene FASN ou atividade de proteína FASN, para o outro agente ativo podem ser usadas. Em um subconjunto dos aspetos, a faixa de proporções molares de inibidor de via de síntese de ácido graxo, por exemplo, um inibidor de expressão de gene FASN ou atividade de proteína FASNp outro agente ativo é selecionada de cerca de 80μ20 a cerca de 20μ80, cerca de 75μ25 a cerca de 25μ75, cerca de 70μ30 a cerca de 30μ70, cerca de 66μ33 a cerca de 33μ66, cerca de 60μ40 a cerca de 40μ60, cerca de 50μ50, e cerca de %0μ10 a cerca de 10μ%0. A proporção molar de um inibidor de via de síntese de ácido graxo, por exemplo, um inibidor de expressão de gene FASN ou atividade de proteína FASNp outro agente ativo pode ser de cerca de 1μ% e, em outro aspeto, pode ser de cerca de Ιμΐ. Os dois agentes, formas e' ou compostos podem ser formulados em conjunto, na mesma unidade de dosagem, por exemplo, em um creme, supositório, comprimido, cápsula ou pacote de pó para ser dissolvido em uma bebida; ou cada agente, forma e'ou composto pode ser formulado em unidades separadas, por exemplo, dois cremes, supositórios, comprimidos, duas cápsulas, um comprimido e um líquido para dissolver o comprimido, um spray aerossol, um pacote de pó e um líquido para dissolver o pó, etc.
Se necessário ou desejável, os agentes e'ou combinações de agentes ainda podem ser administrados com outros agentes. A escolha dos agentes que podem ser coadministrados com os agentes e'ou combinações de agentes da presente invenção pode depender, pelo menos em parte, da condição a ser tratada. Agentes de uso específico nas formulações da presente invenção incluem, por exemplo, qualquer agente tendo um efeito terapêutico para uma infeção virai, incluindo, por exemplo, drogas usadas para tratar condições inflamatórias. Por exemplo, em tratamentos para HRV, em alguns aspetos, as formulações da presente invenção podem adicionalmente conter uma ou mais drogas anti-infamatórias convencionais, tal como uma NSAID, por exemplo, ibuprofeno, naproxeno, acetaminofeno, cetoprofeno ou aspirina. Em alguns aspetos alternativos para o tratamento de influenza, as formulações da presente invenção podem adicionalmente conter um ou mais agentes antivirals de influenza convencionais, tais como amantadina, rimantadina, zanamivir e oseltamivir. Em tratamentos para infeções retrovirais, tal como HIV, as formulações da presente invenção podem adicionalmente conter uma ou mais drogas antivirais convencionais, tais como inibidores de protease úlopinavir'ritonavir úKaletra® , indinavir úCrixivaB , ritonavir úNorvir® , nelfina\^ir úviracept® , cãpsulasígidas em gel de saquinavir úlnvirase® , atazanavir úReyata® , amprenavir úAgenerase® , fosamprenavir úTdzir® , tipnavir úAptivus® 13 , inibidores de transcriptase reversa, câtuindo inibidores não nucleosídeos e nucleosídeos'nucleotídeos ÚAZT úzidovudina, Retrovir® , ddl údidanosina, Vide® , 3TC úlamivudina, Epivir® , d4T úestavudina, Zerit® , abasrir úziagen® , FTC úemtricitabina, Emtriva® , tenofovirVáread® , efavirenz úSustiva® e nevirapina úviramune® ® , indbres de fusão T20 úenfuvirtida, Fuzeon® , inibidores de intgrase ÚMK- 0518 e GS- %137® , e inibidores de maturação úS-457 úBevirimat® 13 . Como outro exemplo, as formulações pem adicionalmente conter um ou mais suplementos, tais como vitamina C, E e outros antioxidantes.
Em alguns aspetos, os compostos da presente divulgação podem ser administrados em combinação com um agente terapêutico de cancro conhecido. Por exemplo, os compostos podem ser administrados em combinação com paclitaxel úcomercialmente disponível como Taxol, Bristol-Myers Squibb® , doxorrubicina útambém conhecida com o nome comercial de adriamicina® , vincristina úconhecida ora os nomes comerciais de oncovin, vincasar PES e vincrex® , actinomicina D, altretamina, asparaginase, bleomicina, bussulfano, capecitabina, carboplatina, carmustina, clorambucil, cisplatina, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina, daunorrubicina, epirrubicina, etoposide, fludarabina, fluorouracil, gemcitabina, hidroxiureia, idarrubicina, ifosfamida, irinotecano, lomustina, melfalano, mercaptopurina, metotrexato, mitomicina, mitozantrona, oxaliplatina, procarbazina, esteroides, estreptozocina, taxotere, tamozolomida, tioguanina, tiotepa, tomudex, topotecano, treosulfan, UFT úuracil- tegufurS , vinblastina e vindesina, ou similares. 0 agenteúsB úou sais, ésteres ou amidas farmaceutiamente aceitáveis do mesmoõ pode ser administrado por si só ou na forma de uma composição farmacêutica em que o agente ativoúsõ está em uma mescla ou mistura com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis. Uma composição farmacêutica, conforme usado aqui, pode ser qualquer composição preparada para administração a um indivíduo. Composições farmacêuticas para uso de acordo com a presente invenção podem ser formuladas de um modo convencional usando um ou mais veículos fisiologicamente aceitáveis, compreendendo excipientes, diluentes e'ou auxiliares, por exemplo, os quais facilitam o processamento dos agentes ativos em preparações que podem ser administradas. Formulação adequada pode depender, pelo menos em parte, da via de administração escolhida. 0 agenteúsõ 0 til na presente invenção, ou sais, ésteres ou amidas farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, pode ser administrado a um paciente usando uma série de vias ou modos de administração, incluindo aplicações oral, bucal, tópica, retal, transdérmica, transmucosal, subcutânea, intravenosa e intramuscular, bem como por inalação.
Para a administração oral, os agentes podem ser formulados facilmente por combinação do agente ativoúsõ com veículos farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos na técnica.
Tais veículos permitem que os agentes da invenção sejam formulados como comprimidos, incluindo comprimidos mastigáveis, pílulas, drãgeas, cápsulas, pastilhas, balas, líquidos, géis, xaropes, pastas, pós, suspensões, elixires, wafers, e similares, para ingestão oral por um paciente a ser tratado. Tais formulações podem compreender veículos farmaceuticamente aceitáveis incluindo diluentes ou excipientes sólidos, meios aquosos estéreis e vários solventes orgânicos não tóxicos. Um veículo sólido pode ser uma ou mais substâncias que também podem atuar como diluentes, agentes aromatizantes, solubilizantes, lubrificantes, agentes de suspensão, ligantes, conservantes, agentes de desintegração de comprimido, ou um material encapsulante. Em pós, o veículo é geralmente um sólido finamente dividido que é uma mistura com o componente ativo finamente dividido. Em comprimidos, o componente ativo é geralmente misturado com o veículo tendo a capacidade de ligação necessária em proporções adequadas e compactados na forma e tamanho desejados. Os pós e comprimidos preferencialmente contêm de cerca de um (1) a cerca de setenta (70) por cento do composto ativo. Veículos adequados incluem, mas não estão limitados a, carbonato de magnésio, estearato de magnésio, talco, açúcar, lactose, pectina, dextrina, amido, gelatina, tragacanto, metilcelulose, carboximetilcelulose de sódio, uma cera de baixo ponto de fusão, manteiga de cacau, e similares. Geralmente, os agentes da invenção serão incluídos em níveis de concentração variando de cerca de 0,5%, cerca de 5%, cerca de 10%, cerca de 20%, ou cerca de 30% a cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 80% ou cerca de S 0% em peso da composição total de formas de dosagm orais, em uma quantidade suficiente para fornecer uma unidade de dosagem desejada.
As suspensões aquosas para utilização oral podem conter agenteúsõ desta invenção com excipientes farmaceuticamente aceitáveis, tais como um agente de suspensão úpor exemplo, metilceluloseõ, um agente umectante úpor exemplo, lecitina, lisolecitina e'ou um álcool graxo de cadeia longaõ, bem como agentes corantes, conservantes, agentes aromatizantes, e similares.
Em outro aspeto, óleos ou solventes não aquosos podem ser requeridos para que os agentes resultem em uma solução, devido a, por exemplo, presença de grandes porç0 es lipofílicas. Alternativamente, emulsH es, suspense esou outras preparaçH es, por exemplo, preparaçS es lipooaais, podem ser usadas. No que diz respeito às preparaçlS e lipossomais, quaisquer métodos conhecidos de preparação de lipossomas para o tratamento de uma condição podem ser usados. Ver, por exemplo, Bangham et al., J. Mol. Biol. 23μ238-252 úl%65õ e Szoka et al. Proc. Natl Acad. Sei.
Estados Unidos 75μ41%4-41%8 úl%78õ, incorporados aqui por referência. Ligantes também podem ser vinculados aos lipossomas para direcionar essas composiç0 es a sítès de ação específicos. Agentes desta invenção também podem ser integrados em alimentos, por exemplo, creme de queijo, manteiga, molho de salada ou sorvete para facilitar solubilização, administração e'ou adesão em algumas populaçS es de paciente.
As preparaçS es farmacêuticas para uso oral podem se obtidas como um excipiente sólido, opcionalmente triturando uma mistura resultante, processando a mistura de grânulos e, então, adicionando auxiliares adequados, se desejado, para obter comprimidos ou nlEI cleos de drágea. Excipèntes adequados são, em particular, excipientes tais como aç!8 cares, incluindo lactose, sacarose, manitol ou erbitol; elementos aromatizantes, preparaçES es de celulose tàs como, por exemplo, amido de milho, amido de trigo, amido de arroz, amido de batata, gelatina, goma de tragacanto, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, carboximetilcelulose de sódio, e' ou polivinilpirrolidona ÚPVP0 . Se desejado, agentes de desintegração podem ser adicionados, tais como a polivinilpirrolidona reticulada, Agar, ou ácido algínico ou um sal do mesmo tal como alginato de sódio. Os agentes também podem ser formulados como uma preparação de liberação sustentada. Núcleos de drãgea podem ser fornecidos com revestimentos adequados. Para este fim, soluções concentradas de açúcar podem ser usadas, as quais podem opcionalmente conter goma arábica, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenoglicol, e' ou dióxido de titânio, soluções de laca, e solventes orgânicos ou misturas de solvente adequadas. Corantes ou pigmentos podem ser adicionados aos comprimidos ou revestimentos de drágea para identificação ou caracterização de diferentes combinações de agentes ativos.
As preparações farmacêuticas que podem ser usadas oralmente incluem cápsulas duras feitas de gelatina, bem como cápsulas moles seladas feitas de gelatina e um plastificante, tal como glicerol ou sorbitol. As cápsulas duras podem conter os ingredientes ativos em mescla com excipiente tal como lactose, ligantes tais como amidos, e'ou lubrificantes tal como talco ou estearato de magnésio e, opcionalmente, estabilizantes. Mas cápsulas moles, os agentes ativos podem ser dissolvidos ou suspensos em líquidos adequados, tais como óleos graxos, parafina líquida ou polietilenoglicois líquidos. Além disso, estabilizantes podem ser adicionados. Todas as formulações para administração oral devem estar em dosagens adequadas para administração.
Outras formas adequadas para administração oral incluem preparações em forma líquida incluindo emulsões, xaropes, elixires, soluções aquosas, suspensões aquosas, ou preparações em forma sólida que são destinadas a serem convertidas, pouco antes da utilização, para preparações em forma líquida. As emulsões podem ser preparadas em soluções, por exemplo, em soluções de propilenoglicol aquosas ou podem conter agentes emulsificantes, por exemplo, tais como lecitina, monooleato de sorbitano ou acácia. As soluções aquosas podem ser preparadas por dissolução do componente ativo em água e adição de agentes corantes, aromatizantes, estabilizantes e espessantes adequados. As suspensões aquosas podem ser preparadas por dispersão do componente ativo finamente dividido em água com material viscoso, tais como gomas naturais ou sintéticas, resinas, metilcelulose, carboximetilcelulose de sódio, e outros agentes de suspensão bem conhecidos. Excipientes ou veículos adequados com os quais as composições podem ser administradas incluem Agar, álcool, gorduras, lactose, amido, derivados de celulose, polissacarídeos, polivinilpirrolidona, sílica, salina estéril, e similares, ou misturas dos mesmos usadas em quantidades adequadas. As preparações em forma sólida incluem soluções, suspensões e emulsões, e podem conter, além do componente ativo, agentes corantes, aromatizantes, estabilizantes, tampões, adoçantes artificiais e naturais, dispersantes, espessantes, solubilizantes, e similares.
Um xarope ou suspensão pode ser feito por adição do composto ativo a uma solução aquosa concentrada de um açúcar, por exemplo, sacarose, à qual também podem ser adicionados quaisquer ingredientes acessórios. Tais ingredientes acessórios podem incluir aromatizante, um agente para retardar a cristalização do açúcar ou um agente para aumentar a solubilidade de qualquer outro ingrediente, por exemplo, como um álcool poli-hídrico, por exemplo, glicerol ou sorbitol.
Ao formular os compostos da invenção para administração oral, pode ser desejável utilizar formulações gastrorretentivas para aumentar a absorção do trato gastrointestinal ® GI® . Uma formulação que é retidano estômago por várias horas pode liberar compostos da invenção lentamente e fornecer uma liberação sustentada que pode ser usada em métodos da invenção. Divulgação de tais formulações gastrorretentivas é encontrada em Klausner, E.A.; Lavy, E. ; Barta, M. ; Cserepes, E. ; Friedman, M. ; Hoffman, A. 2003 "Novel gastroretentive dosage formsp evaluation of gastroretentivity and its effects on levodopa in humans". Pharm. Res. 20, 1466-73, Hoffman, A. ; Stepensky, D. ; Lavy, E. ; Eyal, S. Klausner, E. ; Friedman, M. 2004 "Pharmacokinetic and pharmacodynamic aspects of gastroretentive dosage forms" Int. J. Pharm. 11, 141-53, Streubel, A.; Siepmann, J.; Bodmeier, R.; 2006 "Gastroretentive drug delivery systems" Expert Opin. Drug Deliver. 3, 217-3, e Chavanpatil, M.D.; Jain, P. ; Chaudhari, S. ; Shear, R. ; Vavia, P.R. "Novel sustained release, swellable and bioadhesive gastroretentive drug delivery system for olfoxacin" Int. J. Pharm. Publicação Eletrónica 24 de março de 2006. Técnicas flutuantes e bioadesivas expansíveis podem ser utilizadas para maximizar a absorção dos compostos da invenção.
Os compostos da invenção podem ser formulados para administração parenteral ® por exemplo, por injeção, por exemplo, injeção de bolus ou infusão contínua® e pdem ser apresentados em forma de dose única em ampolas, seringas pré-enchidas, infusão de volume pequeno ou em recipientes multidose com um conservante adicionado. As composições podem conter formas como suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos, por exemplo, soluções em polietilenoglicol aquoso.
Para formulações injetáveis, o veículo pode ser escolhido entre aqueles conhecidos na técnica como sendo adequados, incluindo soluções aquosas ou suspensões de óleo, ou emulsões, com óleo de sésamo, óleo de milho, óleo de semente de algodão, ou óleo de amendoim, bem como elixires, manitol, dextrose, ou uma solução aquosa estéril, e veículos farmacêuticos similares. A formulação também pode compreender composições de polímero que são biocompatíveis e biodegradáveis, tal como ácido poli (lático-co-glicólico). Estes materiais podem ser transformados em micro ou nanoesferas, carregados com droga e adicionalmente revestidos ou derivatizados para fornecer desempenho superior de liberação sustentada. Os veículos adequados para injeção periocular ou intraocular incluem, por exemplo, suspensões de agente terapêutico em água de grau de injeção, lipossomas e veículos adequados para substâncias lipofílicas. Outros veículos para injeção periocular ou intraocular são bem conhecidos na técnica.
Em um aspeto preferido, a composição é formulada, de acordo com procedimentos de rotina, como uma composição farmacêutica adaptada para administração intravenosa em seres humanos. Tipicamente, as composições para administração intravenosa são soluções em tampão aquoso isotónico estéril. Sempre que necessário, a composição também pode incluir um agente solubilizante e um anestésico local, tal como lidocaína, para aliviar a dor no sítio da injeção. Geralmente, os ingredientes são fornecidos separadamente ou misturados em conjunto em uma forma de dose única, por exemplo, como um pó liofilizado seco ou concentrado livre de água em um recipiente hermeticamente selado, tal como uma ampola ou saqueta, indicando a quantidade de agente ativo. Quando a composição é administrada por infusão, esta pode ser dispensada com um frasco de infusão contendo salina ou água de grau farmacêutico estéril. Quando a composição é administrada por injeção, uma ampola de água estéril para injeção ou salina pode ser fornecida de modo que os ingredientes possam ser misturados antes da administração.
Quando a administração é por injeção, o composto ativo pode ser formulado em soluções aquosas, especificamente em tampões fisiologicamente compatíveis, tais como solução de Hanks, solução de Ringer, ou tampão de salina fisiológica. A solução pode conter agentes de formulação, tais como agentes de suspensão, estabilizantes e'ou dispersantes. Alternativamente, o composto ativo pode estar na forma de um pó para constituição com um veículo adequado, por exemplo, água livre de pirogénico estéril, antes da utilização. Em outro aspeto, a composição farmacêutica não compreende um adjuvante ou qualquer outra substância adicionada para aumentar a resposta imune estimulada pelo peptídeo. Em outro aspeto, a composição farmacêutica compreende uma substância que inibe uma resposta imune ao peptídeo. Métodos de formulação são conhecidos na técnica, por exemplo, como divulgado em Remington® s Pharmacetical Sciences, última edição, Publicação Mack Co., Easton P.
Além das formulações descritas anteriormente, os agentes também podem ser formulados como uma preparação de depósito. Tais formulações de longa atuação podem ser administradas por implantação ou administração transcutânea úpor exemplo, subcutaneamente ou intramuscularmenteõ, injeção intramuscular ou uso de um adesivo transdérmico. Assim, por exemplo, os agentes podem ser formulados com materiais poliméricos ou hidrofóbicos adequados úpor exemplo, como uma emulsão em um óleo aceitávelõ ou resinas de troca iônica, ou como derivados moderadamente solEI veis, por exemplo, como um sal moderadamente solS vel.
Em outro aspeto, as composiçS es farmacêuticas compeendendo um ou mais agentes da presente invenção exercem efeitos locais e regionais quando administradas topicamente ou injetadas em ou perto dos sítios específicos de infeção. Aplicação tópica direta, por exemplo, de um líquido viscoso, solução, suspensão, soluçS es à base de dimetilsulfóxido úDMSOõ, formulaçS es lipossomais, §1, geleia, creme, loção, pomada, supositório, espuma ou spray aerossol, pode ser usada para administração local, para produzir, por exemplo, efeitos locais e/ou regionais. Veículos farmaceuticamente adequados para tal formulação incluem, por exemplo, álcoois alifáticos inferiores, poliglicois úpor exemplo, glicerol ou polietilenoglicolõ, ésteres de ácidos graxos, óleos, gorduras, silicones, e similares. Tais preparaçEJ es também podem incluir conservantes úpor exemplo, ésteres de ácido p-hidroxibenzóicoõ e/ou antioxidantes úpor exemplo, ácido ascórbico e tocoferolõ. Ver também Dermatological
Formulationsp Percutaneous absorption, Barry úEd.õ, Marcel Dekker Incl, 1%83. Em outro aspeto, as formulaçS es local/tópica compreendendo um inibidor de via de síntese de ácido graxo, por exemplo, um inibidor de expressão de gene FASN ou atividade de proteína FASN, são usadas para tratar infeçS es virais da epiderme ou mucosa.
As composiçS es farmacêuticas da presente invenção pdem conter um veículo cosmeticamente ou dermatologicamente aceitável. Tais veículos são compatíveis com pele, unhas, membranas mucosas, tecidos e'ou cabelo, e podem incluir qualquer veículo cosmético ou dermatológico convencionalmente utilizado satisfazendo estes requisitos. Tais veículos podem ser facilmente selecionados por uma pessoa versada na técnica. Na formulação de pomadas de pele, um agente ou combinação de agentes da presente invenção pode ser formulada em uma base de hidrocarboneto oleaginosa, uma base de absorção anidra, uma base de absorção de água em óleo, uma base removível por água de óleo em água e'ou uma base solúvel em água. Exemplos de tais veículos e excipientes incluem, mas não estão limitados a, umectantes EI por exemplo, ureiaõ, glicós ESI por exemplo, propilenoglicolõ, álcoois Ei por exemplo, e&amp;nolõ, ácidos graxos EI por exemplo, ácido oleicoõ, tensoatios EI por exemplo, isopropil miristato e lauril sulfato de sódioõ, pirrolidonas, monolaurato de glicerol, sulfóxidos, terpenos EI por exemplo, mentolõ, aminas, amidas, alcanos, alanóis, água, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, vários açúcares, amidos, derivados de celulose, gelatina, e polímeros, tais como polietilenoglicois.
As pomadas e cremes podem, por exemplo, ser formulados com uma base aquosa ou oleosa com a adição de agentes espessantes e'ou gelificantes adequados. As loções podem ser formuladas com uma base aquosa ou oleosa e, em geral, também conterão um ou mais agentes emulsificantes, agentes estabilizant.es, agentes dispersantes, agentes de suspensão, agentes espessantes ou agentes corantes. A construção e uso de adesivos transdérmicos para a administração de agentes farmacêuticos são bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Patentes dos Estados Unidos Nos. 5.023.252 , 4.%%2.445 e 5.001.13%. Tais adesivos podem ser construídos para administração contínua, pulsátil ou sob demanda de agentes farmacêuticos.
Lubrificantes que podem ser usados para formar composições farmacêuticas e formas de dosagem da invenção incluem, mas não estão limitados a, estearato de cálcio, estearato de magnésio, óleo mineral, óleo mineral leve, glicerina, sorbitol, manitol, polietilenoglicol, outros glicóis, ácido esteárico, lauril sulfato de sódio, talco, óleo vegetal hidrogenado (por exemplo, óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de girassol, óleo de sésamo, óleo de oliva, óleo de milho e óleo de soja) , estearato de zinco, etil oleato, etil laureato, Agar, ou misturas dos mesmos. Lubrificantes adicionais incluem, por exemplo, um gel de sílica Syloid, um aerossol coagulado de sílica sintética, ou misturas dos mesmos. Um lubrificante pode opcionalmente ser adicionado em uma quantidade de menos de cerca de 1 por cento em peso da composição farmacêutica.
As composições, de acordo com a presente invenção, podem estar em qualquer forma adequada para aplicação tópica, incluindo soluções aquosas, aquoso-alcoólicas ou oleosas, dispersões de loção ou soro, géis aquosos, anidros ou oleosos, emulsões obtidas por dispersão de uma fase graxa em uma fase aquosa (0'W ou óleo em água) ou, de modo inverso, (W'0 ou água em óleo), microemulsões ou alternativamente dispersões de microcápsulas, micropartículas ou vesícula lipídica de tipo iônico e'ou não iônico. Estas composições podem ser preparadas de acordo com métodos convencionais. Exceto os agentes da invenção, as quantidades dos vários constituintes das composições de acordo com a invenção são aquelas usadas convencionalmente na técnica. Estas composições, em particular, constituem cremes, leites, loções, géis ou espumas de proteção, tratamento ou cuidado para a face, para as mãos, para o corpo e'ou para as membranas mucosas, ou para a limpeza da pele. As composições também podem consistir em preparações sólidas constituindo sabões ou barras de limpeza.
As composições da presente invenção também podem conter adjuvantes comuns aos campos cosmético e dermatológico, tais como agentes gelificantes hidrofílicos ou lipofílicos, agentes ativos hidrofílicos ou lipofílicos, agentes conservantes, antioxidantes, solventes, fragrâncias, excipientes, protetores solares, absorvedores de odor e corantes. As quantidades destes vários adjuvantes são aquelas convencionalmente usadas nos campos considerados e, por exemplo, são de cerca de 0,01% a cerca de 20% do peso total da composição. Dependendo de suas naturezas, estes adjuvantes podem ser introduzidos na fase graxa, na fase aquosa e'ou nas vesículas lipídicas.
Em outro aspeto, infeções virais oculares podem ser eficazmente tratadas com soluções, suspensões, pomadas ou insertos oftálmicos compreendendo um agente ou combinação de agentes da presente invenção. Colírios podem ser preparados por dissolução do ingrediente ativo em uma solução aquosa estéril tais como, salina fisiológica, solução de tampão, etc., ou por combinação de composições em pó a serem dissolvidas antes da utilização. Outros veículos podem ser escolhidos, como é conhecido na técnica, incluindo, mas não limitados ap solução de sal equilibrada, solução salina, poliéteres solúveis em água tal como polietilenoglicol, polivinis tais como polivinil álcool e povidona, derivados de celulose tais como metilcelulose e hidroxipropilmetilcelulose, derivados de petróleo tais como óleo mineral e vaselina branca, gorduras animais tal como lanolina, polímeros de ácido acrílico tal como gel de carboxipolimetileno, gorduras vegetais tal como óleo de amendoim e polissacarídeos tais como dextranos, e glicosaminoglicanos tal como hialuronato de sódio. Se desejado, aditivos normalmente usados em colírios podem ser adicionados. Tais aditivos incluem agentes isotonizantes úpor exemplo, cloreto de sódio, etc.Hl , agente de tapão úpor exemplo, ácido bórico, monohidrogénio fosfato de sódio, dihidrogénio fosfato de sódio, etc.õ, conservantes úpor exemplo, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, clorobutanol, etc.õ, espessantes úpor exemplo, sacarídeo tais como lactose, manitol, maltose, etc., por exemplo, ácido hialurônico ou um sal do mesmo tais como hialuronato de sódio, hialuronato de potássio, etc., por exemplo, mucopolissacarídeo tal como sulfato de condroitina, etc., por exemplo, poliacrilato de sódio, carboxivinil polímero, poliacrilato reticulado, polivinil álcool, polivinilpirrolidona, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, hidroxietilcelulose, carboximetilcelulose, hidroxipropilcelulose ou outros agentes conhecidos por aqueles versados na técnicaõ. A solubilidade dos componentes das presentes composiçHI es pode ser aumentada por um tensoativo ou outro cossolvente adequado na composição. Tais cossolventes incluem polissorbato 20, 60 e 80, Pluronic F68, F-84 e P-103, ciclodextrina, ou outros agentes conhecidos àqueles versados na técnica. Tais cossolventes podem ser empregados em um nível de cerca de 0,0lH3 a 2Hl em peso.
As composições da invenção podem ser embaladas em forma multidose. Conservantes podem ser preferidos para prevenir contaminação microbiana durante a utilização. Conservantes adequados incluemp cloreto de benzalcônio, timerosal, clorobutanol, metil parabeno, propil parabeno, feniletil álcool, edetato dissódico, ácido sórbico, Onamer M, ou outros agentes conhecidos àqueles versados na técnica. Nos produtos oftálmicos da técnica anterior, tais conservantes podem ser empregados em um nível de cerca de 0,004% a 0,02 %. Nas composições do presente pedido, o conservante, de preferência cloreto de benzalcônio, pode ser empregado em um nível de cerca de 0,001% para menos de 0,01%, por exemplo, de 0,001% a 0,008%, preferencialmente cerca de 0,005% em peso. Descobriu-se que uma concentração de cloreto de benzalcônio de 0,005% pode ser suficiente para proteger as composições da presente invenção de ataque microbiano.
Em outro aspeto, infeções virais do ouvido podem ser eficazmente tratadas com soluções, suspensões, pomadas ou insertos óticos compreendendo um agente ou combinação de agentes da presente invenção.
Em outro aspeto, os agentes da presente invenção são administrados em forma solúvel em vez de suspensão, o que permite uma absorção mais rápida e quantitativa aos sítios de ação. Em geral, formulações tais como geleias, cremes, loções, supositórios e pomadas podem fornecer uma área com uma exposição mais prolongada aos agentes da presente invenção, enquanto que formulações em solução, por exemplo, sprays, fornecem uma exposição mais imediata e de curto prazo.
Em outro aspeto relativo à aplicação tópica/local, as composições farmacêuticas podem incluir um ou mais potenciadores de penetração. Por exemplo, as formulações podem compreender veículos ou excipientes em fase sólida ou em gel adequados que aumentam a penetração ou ajudam a administração de agentes ou combinação de agentes da invenção através de uma barreira de permeabilidade, por exemplo, a pele. Muitos destes compostos de aumento de penetração são conhecidos na técnica de formulação tópica, e incluem, por exemplo, água, álcoois Ê3 por exemplo, terpenos tais como metanol, etanol, 2-propanolõ, sulfóxidos úpor exemplo, dimetil sulfóxido, decilmetil sulfõxido, tetradecilmetil sulfóxidoó, pirrolidonas úpor exemplo, 2-pirrolidona, N-metil-2-pirrolidona, N-ú2-hidroxietilõ pirrolidonaó, laurocapram, acetona, dimetilacetamida, dimet i1formamida, tetrahidrofurfuril álcool, L-a-aminoácidos, tensoativos aniônicos, catiônicos, anfotéricos ou não iônicos úpor exemplo, isopropil miristato e lauril sulfato de sódioõ, ácidos graxos, álcoois graxos úpor exemplo, ácido oleicoõ, aminas, amidas, amidas de ácido clofíbrico, lauramida de hexametileno, enzimas proteolíticas, α-bisabolol, d-limoneno, ureia e N,N-dietil-m-toluamida, e similares. Exemplos adicionais incluem umectantes úpor exemplo, ureiaõ, glicóis úpor exemplo, propilenoglicol e polietilenoglicolõ, monolaurato de glicerol, alcanos, alcanóis, ORGELASE, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, vários aç0 cares, amidos, derivados de celulose, gelatina, e'ou outros polímeros. Em outro aspeto, as composições farmacêuticas incluirão um ou mais dos referidos potenciadores de penetração.
Em outro aspeto, as composições farmacêuticas para aplicação local'tópica podem incluir um ou mais conservantes antimicrobianos, tais como compostos quaternários de amónio, mercuriais orgânicos, p-hidroxibenzoatos, álcoois aromáticos, clorobutanol, e similares.
Infeções virais gastrointestinais podem ser eficazmente tratadas com soluções, suspensões, pomadas, clisteres e'ou supositórios administrados por via oral ou retal compreendendo um agente ou combinação de agentes da presente invenção.
Infeções virais respiratórias podem ser eficazmente tratadas com soluções, suspensões ou pós secos em aerossol compreendendo um agente ou combinação de agentes da presente invenção. Administração por inalação é particularmente útil no tratamento de infeções virais do pulmão, tal como uma infeção por HRV. 0 aerossol pode ser administrado através do sistema respiratório ou passagens nasais. Por exemplo, uma pessoa versada na técnica reconhecerá que uma composição da presente invenção pode ser suspensa ou dissolvida em um veículo adequado, por exemplo, um propulsor farmaceuticamente aceitável, e administrada diretamente nos pulmões usando um spray ou inalante nasal. Por exemplo, uma formulação em aerossol compreendendo um inibidor de via de síntese de ácido graxo, por exemplo, um inibidor de expressão de gene FASN ou atividade de proteína FASN, pode ser dissolvida, suspensa ou emulsificada em um propulsor ou uma mistura de solvente e propulsor, por exemplo, para administração como um spray ou inalante nasal. As formulações em aerossol podem conter qualquer propulsor aceitável sob pressão, tal como um propulsor cosmeticamente, dermatologicamente ou farmaceuticamente aceitável, como convencionalmente usado na técnica.
Uma formulação em aerossol para administração nasal é geralmente uma solução aquosa destinada a ser administrada às passagens nasais em gotas ou sprays. As soluções nasais podem ser semelhantes às secreções nasais, em que estas são geralmente isotônicas e ligeiramente tamponadas para manter um pH de cerca de 5,5 a cerca de 6,5, embora valores de pH fora desta faixa possam ser adicionalmente usados. Agentes ou conservantes antimicrobianos também podem ser incluídos na formulação.
Uma formulação em aerossol para inalações e inalantes pode ser destinada de modo que o agente ou combinação de agentes da presente invenção seja levado para a árvore respiratória do indivíduo quando administrado pela via respiratória nasal ou oral. As soluções de inalação podem ser administradas, por exemplo, por um nebulizador. Inalações ou insuflações compreendendo drogas líquidas ou em pó fino podem ser administradas ao sistema respiratório como um aerossol farmacêutico de uma solução ou suspensão do agente ou combinação de agentes em um propulsor, por exemplo, para auxiliar no custeamento. Propulsores podem ser gases liquefeitos, incluindo halocarbonetos, por exemplo, fluorcarbonetos tais como hidrocarbonetos clorados fluorados, hidroclorofluorcarbonetos e hidroclorocarbonetos, bem como hidrocarbonetos e éteres hidrocarbonados.
Propulsores de halocarboneto úteis na presente invenção incluem propulsores de fluorcarboneto, no quais todos os hidrogénios são substituídos por flúor, propulsores de clorofluorcarboneto, nos quais todos os hidrogénios são substituídos por cloro e pelo menos um flúor, propulsores de fluorcarboneto contendo hidrogénio, e propulsores de clorofluorcarboneto contendo hidrogénio. Propulsores de halocarboneto são descritos em Jolmson, Patente dos Estados Unidos No. 5.376.35%, concedida em 27 de dezembro de 1%%4; Byron et al., Patente dos Estados Unidos No. 5.1%0.02%, concedida em 02 de março de 1%%3; e Purewal et al., Patente dos Estados Unidos No. 5.776.434, concedida em 7 de julho de 1%%8. Propulsores de hidrocarboneto úteis na invenção incluem, por exemplo, propano, isobutano, n-butano, pentano, isopentano e neopentano. Uma mistura de hidrocarbonetos também pode ser usada como um propulsor. Propulsores de éter incluem, por exemplo, dimetil éter, bem como os éteres. Uma formulação em aerossol da invenção também pode compreender mais de um propulsor. Por exemplo, a formulação em aerossol pode compreender mais de um propulsor da mesma classe, tais como dois ou mais fluorcarbonetos; ou mais de um, mais de dois, mais de três propulsores de classes diferentes, tais como um fluorhidrocarboneto e um hidrocarboneto. As composições farmacêuticas da presente invenção também podem ser dispensadas com um gás comprimido, por exemplo, um gás inerte, tais como dióxido de carbono, óxido nitroso ou nitrogénio.
As formulações em aerossol também podem incluir outros componentes, por exemplo, etanol, isopropanol, propilenoglicol, bem como tensoativos ou outros componentes, tais como óleos e detergentes. Estes componentes podem servir para estabilizar a formulação e'ou lubrificar componentes de válvula. A formulação em aerossol pode ser embalada sob pressão e pode ser formulada como um aerossol usando preparações de soluções, suspensões, emulsões, pós e semissólidos. Por exemplo, uma formulação em aerossol de solução pode compreender uma solução de um agente da invenção, tal como um inibidor de via de síntese de ácido graxo, por exemplo, um inibidor de expressão de gene FASN ou atividade de proteína FASN, em (substancialmente) propulsor puro ou como uma mistura de propulsor e solvente. 0 solvente pode ser usado para dissolver o agente e'ou retardar a evaporação do propulsor. Solventes úteis na invenção incluem, por exemplo, água, etanol e glicóis. Qualquer combinação de solventes adequados pode ser usada, opcionalmente combinados com conservantes, antioxidantes e'ou outros componentes em aerossol.
Uma formulação em aerossol também pode ser uma dispersão ou suspensão. Uma formulação em aerossol de suspensão pode compreender uma suspensão de um agente ou combinação de agentes da presente invenção, por exemplo, um inibidor de via de síntese de ácido graxo, por exemplo, um inibidor de expressão de gene FASN ou atividade de proteína FASN, e um agente dispersante. Agentes dispersantes úteis na invenção incluem, por exemplo, trioleato de sorbitano, oleil álcool, ácido oleico, lecitina e óleo de milho. Uma formulação em aerossol de suspensão também pode incluir lubrificantes, conservantes, antioxidantes, e' ou outros componentes em aerossol.
Uma formulação em aerossol pode ser semelhantemente formulada como uma emulsão. Uma formulação em aerossol de emulsão pode incluir, por exemplo, um álcool, tal como etanol, um tensoativo, água e um propulsor, bem como um agente ou combinação de agentes da invenção, por exemplo, um inibidor de via de síntese de ácido graxo, por exemplo, um inibidor de expressão de gene FASN ou atividade de proteína FASN. 0 tensoativo usado pode ser não iônico, aniônico ou catiônico. Um exemplo de uma formulação em aerossol de emulsão compreende, por exemplo, etanol, tensoativo, água e propulsor. Outro exemplo de uma formulação em aerossol de emulsão compreende, por exemplo, óleo vegetal, gliceril monoestearato e propano.
Os compostos da invenção podem ser formulados para administração como supositórios. Uma cera de baixo ponto de fusão, tal como uma mistura de triglicerídeos, glicerídeos de ácido graxo, Witepsol S55 0 marca registrada de pnamite Nobel Chemical, Alemanhaõ, ou manteiga de cacau é primeiramente fundida e o componente ativo é disperso homogeneamente, por exemplo, por agitação. A mistura homogénea fundida é então derramada em moldes de tamanho conveniente, deixada esfriar e solidificar.
Os compostos da invenção podem ser formulados para administração vaginal. Pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou sprays contendo além do ingrediente ativo tais veículos conhecidos na técnica como sendo adequados.
Adicionalmente, prevê-se que os compostos da invenção podem ser ligados de forma removível a polímeros biocompatíveis para uso em formulações de liberação sustentada sobre, em ou ligadas a insertos para administração tópica, intraocular, periocular ou sistémica. Além disso, a liberação controlada de um polímero biocompatível pode ser utilizada com um polímero solE3 vel em água para forar uma formulação de instilação. A liberação controlada de um polímero biocompatível, tal como, por exemplo, microesferas ou nanoesferas de PLGA, também pode ser utilizada em uma formulação adequada para implantação ou injeção intraocular para administração de liberação sustentada. Qualquer polímero biodegradável e biocompatível adequado pode ser usado.
Composições farmacêuticas adequadas para uso na presente invenção incluem composições em que os ingredientes ativos estão presentes em uma quantidade eficaz, ou seja, em uma quantidade eficaz para alcançar benefício terapêutico e'ou profilático em um hospedeiro com pelo menos uma infeção virai ou em um indivíduo com cancro. A quantidade real eficaz para uma aplicação específica dependerá da condição ou condições sendo tratadas, da condição do indivíduo, da formulação e da via de administração, bem como de outros fatores conhecidos àqueles versados na técnica. A determinação de uma quantidade eficaz de um inibidor de via de síntese de ácido graxo, por exemplo, um inibidor de expressão de gene FASN ou atividade de proteína FASN, está bem dentro das capacidades daqueles versados na técnica, em face da presente divulgação, e será determinada usando técnicas de otimização de rotina. A quantidade eficaz para uso em seres humanos pode ser determinada a partir de modelos animais. Por exemplo, uma dose para seres humanos pode ser formulada para alcançar concentrações hepáticas, tópicas e' ou gastrointestinais circulantes, as quais demonstraram ser eficazes em animais. Uma pessoa versada na técnica pode determinar a quantidade eficaz para uso humano, especialmente em face dos dados experimentais de modelo animal descritos aqui. Com base nos dados de animal, e outros tipos de dados semelhantes, aqueles versados na técnica podem determinar as quantidades eficazes de composições da presente invenção adequadas para seres humanos. A quantidade eficaz, referindo-se a um agente ou combinação de agentes da invenção, geralmente significará as faixas de dosagem, modos de administração, formulações, etc., que foram recomendados ou aprovados por quaisquer das várias organizações regulatórias ou consultivas nas técnicas médica ou farmacêutica (por exemplo, FDA, AMA) ou pelo fabricante ou fornecedor.
Além disso, doses adequadas para um inibidor de via de síntese de ácido graxo, por exemplo, um inibidor de expressão de gene FASN ou atividade de proteína FASN, podem ser determinadas com base em resultados experimentais in vitro. Por exemplo, a potência in vitro de um agente de inibição de um componente de via de síntese de ácido graxo, por exemplo, expressão de gene FASN ou atividade de proteína FASN, fornece informação útil no desenvolvimento de dosagens in vivo eficazes para alcançar efeitos biológicos semelhantes.
Em outro aspeto, a administração de agentes da presente invenção pode ser intermitente, por exemplo, administração uma vez a cada dois dias, a cada três dias, a cada cinco dias, uma vez por semana, uma vez ou duas vezes por mês, e similares. Em outro aspeto, a quantidade, formas, e'ou quantidades das diferentes formas podem ser variadas em diferentes tempos de administração.
Uma pessoa versada na técnica será capaz de monitorar em um paciente o efeito da administração de um agente específico. Por exemplo, níveis de carga viral de HIV podem ser determinados por meio de técnicas padrão na técnica, tais como medição de contagens de célula CD4, e'ou níveis virais conforme detectados por PCR Outras técnicas serão evidentes a uma pessoa versada na técnica.
Após a descrição geral de vários aspetos e aspetos da invenção, a mesma será mais facilmente compreendida através da referência aos seguintes exemplos, os quais são fornecidos a título de ilustração, e não são destinados a serem limitantes, a menos que especificado.
EXEMPLOS
Exemplos que não se encontram no âmbito das reivindicações para propósitos ilustrativos. Exemplo - Síntese de Compostos da Presente Divulgação
Geralp Todas as reações e manipulações descritas foram realizadas em capelas químicas bem ventiladas. As operações e reações realizadas em pressão elevada ou reduzida foram realizadas atrás de escudos contra explosão. Abreviaçõesp ACN, acetonitrila; AcOH, ácido acético; AIBN, azobisisobutironitrila; BuLi, butil lítio; GDI, 1,1-carbonildiimidazol; DBU, 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno; DCE, 1,2-dicloroetano; D CM, di c1orornetano ou cloreto de metileno; DlEA, N,N-diisopropiletilamina; DMAP, 4-dimetilaminopiridina; DMF, N,N-dimetilformamida; DMSO, dimetilsulfóxido; EDC, l-etil-3-ú3-dimet ilaminopropilõcarbodi imida; EDCI, cloridrato de 1-etil-3-Ú3-dimetilaminopropilõcarbodiimida; EtOAc, etil acetato; EtOH, Etanol; HATU, hexafluorofosfato de 2-Ú1H-7-azabenzotriazol-l-ilõ-1,1,3,3-tetrametilurónio; HBTU, 0-benzotriazol-N,N,N' , N'-tetrametil-urónio-hexafluoro-fosfato ou hexafluorofosfato de 2-úlH-benzotriazol-l-ilõ-l,1,3,3-tetrametilamínio; HMPA, hexame tilfosforamida; HOAc, ácido acético, HOBT, 1-hidroxibenzotriazol; LDA, diisopropilamina de lítio, MeOH, metanol; MsCl, cloreto de metanossulfonil; MsOH, ácido metanossulfônico; NBS, N-bromosuccinimida; NIS, N-iodosuccinimida; PE, éter de petróleo; PTAT, tribrometo de feniltrimetilamónio; PTSA, ácido p-toluenossulfónico; Py, piridina; Pyr, piridina, TEA, trietilamina; TFA, ácido trifluoracético; THF, tetrahidrofurano; TMSCI, clorotrimetilsilano; TsOH, ácido p-toluenossulfônico.
Composto 1.1. terc-Butil 4-Ú4-bromofenil0 -4- hidroxipiperidina-1-carboxilato. A uma solução agitada de 1-bromo-4-iodobenzeno ú%3,7 g, 331,21 mmol, 1,10 equivS em tetrahidrofurano Ú800 mLõ sob nitrogénio a -78°C foi adicionada, gota a gota, uma solução de butil lítio Ú150 mL; 2,43 M em THF, 1,05 equivõ por 30 minutos. A solução resultante foi agitada por 2 horas a -78°C. Foi então adicionada uma solução de terc-butil 4-oxopiperidina-l-carboxilato Ú60g, 301,13 mmol, 1,00 equivõ em tetrahidrofurano Ú800 mLõ gota a gota com agitação a -78°C por 30 minutos. Após agitação por 1 hora a -78°C, a reação foi cuidadosamente resfriada bruscamente com 350 mL de H20. A mistura resultante foi extraída com 2x400 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ200-1μ10ό como eluente para produzir %lg Ú850 õ do composto titular como um óleo amarelo.
Composto 1.2. terc-Butil 4-ú4-cianofenilõ-4- hidroxipiperidina-1-carboxilato. Uma solução de terc-butil 4-ú4-bromofenilõ-4-hidroxipiperidina-1-carboxilato úcomposto 1.1, 36 g, 101,05 mmol, 1,00 equivõ, Pd úPPh3õ4 úll,7 g, 10,12 mmol, 0,05 equivõ, e ZnúCNõ2 Ú17,% g, 152,44 mmol, 1,51 equivõ em DMF Ú400 mLõ sob nitrogénio foi agitada durante a noite a 80°C. Após atingir temperatura ambiente, a reação foi então resfriada bruscamente pela adição de 600 mL de FeS04 úaq. , sat.ó e diluída com etil acetato. A mistura resultante foi vigorosamente agitada, filtrada através de celite e lavada com 1 M FeS04, água e etil acetato. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 2x300 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1x200 mL de carbonato de potássio úaq., sat.õ seguido por 1x200 mL de salmoura, secas úNa2S04õ e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ200-1μ5ό como eluente para produzir 23 g ú75%õ do composto titular como um sólido branco.
Composto 1.3. terc-Butil 4-ú4-cianofenilõ-5,6- dihidropiridina-lú2Hõ-carboxilato. Em um balão de vidro, foi colocada uma solução de terc-butil 4-ú4-cianofenilõ-4-hidroxipiperidina-1-carboxilato úcomposto 1.2, 2 g, 6,61 mmol, 1,00 equivõ em piridina Ú40 mLõ. P0C13 Ú10,16 g, 66,26 mmol, 10,02 equivõ foi cuidadosamente adicionado. A mistura resultante foi agitada sob nitrogénio durante a noite à temperatura ambiente e, em seguida, concentrada sob vácuo. 0 resíduo foi colocado em 20 mL de D CM, lavado com 2x20 mL de bicarbonato de sódio úaqõ, seco úNa2S04õ e concentrado sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com PE'EtOAc ύ100μ1-30μ1δ como eluente para produzir 1,4 g Ú740 õ do composto titular como um sólido branco.
Composto 1.4. terc-Butil 4-ú4-cianofenilõ-piperidina-l-carboxilato. Um balão de vidro contendo uma solução de terc-butil 4-ú4-cianofenil0 -5,6-dihidropiridina-lúHH -
carboxilato úcomposto 1.3, 500 mg, 1,76 mmol, 1,00 equivS em etil acetato Ú20 mL0 foi expurgado com gãs nitrgênio. À solução foi então adicionado paládio em carbono Ú0,1 g, 10Õ, 6 0ó de águaõ e, em seguida, o balão de vidro foi adicionalmente expurgado com nitrogénio. A atmosfera foi então mudada para hidrogénio e a mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. ApB s expurgção do sistema com nitrogénio, os s§ lidos foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir 0,2 g Ú4 0ÓÕ do composto titular como um IEI leo amarelo.
Composto 1.5. Cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Dentro de um balão de vidro com 3 gargalos de 100 mL foi colocada uma solução de terc-butil 4-ú4-cianofenilõ-piperidina-1-carboxilato úcomposto 1.4, 4 g, 13,%% mmol, 1,00 equivõ em etil acetato Ú60 mLõ. Cloreto de hidrogénio úgásõ foi borbulhado através da solução e a mistura resultante foi agitada por 1 hora à temperatura ambiente. 0 precipitado formado foi coletado por filtração e seco para produzir 2,2 g Ú71óõ do composto titular como um sBlido branco, m/z ÚES+0 187 úm+ Η®. LH RMN Ú300 MHz, CD3ODS ú 7,72 úd, J = 8,4 Hz, 2H0 , 7,50 údvT = 8,4 Hz, 2H0 , 3,54 úd com estrutura fina, J = 12,6 Hz, 2HB , 3,18 út com estrutura fina, J = 12,2 Hz, 2ΊΜ , 3,12-1, %7 úm, 1H0 , 2,11 úd com estrutura fina, J = 14,1 Hz, 2ΐΜ , 2,04-1,84 úm, 2H0
Composto 1.6. Metil 3-bromo-4-metilbenzoato. Uma solução de ácido 3-bromo-4-metilbenzl8 ico Ú20 g, %3,00 mmol, 1Q0 equivõ e ácido sulfúrico Ú20 mLõ em metanol Ú100 mLõ foi agitada durante a noite a 80°C. A mistura foi então concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi diluído com 500 mL de etil acetato. A mistura resultante foi lavada com 3x200 mL de água, 1x200 mL de bicarbonato de sódio úaq.õ, seguido por 1x200 mL de salmoura. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro, concentrada sob pressão reduzida e seca para produzir 20 g ú%40 ó do composto titular como um óleo vermelho escuro.
Composto 1.7. Metil 3-ciano-4-metilbenzoato. Uma mistura de metil 3-bromo-4-metilbenzoato úcomposto 1.6, 18 g, 78,58 mmol, 1,00 equivõ, Zn úCNõ2 úll, 1 g; %4,87 mmol, 1,20 equivõ e Pd úPPh3õ4 ú7,3 g, 6,32 mmol, 0,08 equivõ em N,N-dimetilformamida Ú250 mLõ foi agitada sob uma atmosfera de nitrogénio a 100°C durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi então resfriada bruscamente por adição cuidadosa de 200 mL de FeS04 úaq., sat.S e diluída com etil acetato. A mistura resultate foi agitada vigorosamente, em seguida, filtrada através de celite e lavada com 1 M FeS04, água e etil acetato. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 2x500 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 3x200 mL de salmoura, secas sobre úNa2S04S e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo fà purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo úlp50S como eluefie para produzir 11 g Ú76%õ do composto titular como um sólido esbranquiçado.
Composto 1.8. Metil 3-úN1 -hidroxicarbamimidoilS 4-metilbenzoato. Uma mistura de metil 3-ciano-4-metilbenzoato úcomposto 1.7, 8 g, 43,38 mmol, 1,00 equiv, %5%õ, NH2OH.HC1 Ú3,785 g, 54,86 mmol, 1,20 equivõ, e N,N-diisopropiletilamina ÚDIEA, 17,7 g, 136,%5 mmol, 3,00 equivõ em tetrahidrofurano Ú100 mLõ foi agitada durante a noite a 70°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi colocado em água e o pH foi ajustado para 2-3 com cloreto de hidrogénio úaquoso, 1 MS . Após lavagem d mistura com 3x40 mL de etil acetato, o pH da camada aquosa foi ajustado para 8-% com NaOH úaquoso, 2 MS , segudo por extração com 3x30 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre úNa2S04S e concentradas sob pressão reduzida para produzir 2,76 g u2%S õ do compsto titular como um sólido branco.
Composto 1.%. Metil 3-carbamimidoil-4-metilbenzoato. Um balão de vidro contendo uma solução de metil 3 -ÚN'- hidroxicarbamimidoilõ-4-metilbenzoato úcomposto 1.8, 8 g, 36,50 mmol, 1,00 equiv, %5óõ em metanol Ú150 mLõ foi expurgado com gás nitrogénio. À solução foi adicionado paládio em carbono ú% g, 10ό, 60ó de ãguaõ e, em seguida, o balão de vidro foi adicionalmente expurgado com gás nitrogénio. A atmosfera foi então mudada para hidrogénio e a mistura foi agitada durante a noite a 25°C sob um balão. ApE3 s expurgação do sistema com nitrogénio, os s0 lõd foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir 4 g ú54óõ do composto titular como um sB lido marrom.
Composto 1.10.13-Bromodihidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona. A uma mistura de dihidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona Ú10 g, %%,88 mmol, 1.00 equivõ e NH40Ac Ú3,56 g, 46,23 mmolõ em tetrahidrofurano Ú100 mLõ a 0 °C sob nitrogénio foi adicionada, em vários lotes, N-bromossuccinimida Ú17,8 g, 100.00 mmol, 1,00 equivõ. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 30°C sob nitrogénio. A mistura de reação foi então filtrada e o filtrado foi concentrado. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo úl'10-1'5õ como eluente para produzir 15 g Ú50H ó do composto titula como um óleo marrom.
Composto 1.10. Metil 4-metil-3-ú3,4,6,7-tetrahidropirano[3,4-d] imidazol-2-ilõbenzoato. Uma mistura de metil 3-carbamimidoil-4-metilbenzoato ucomposto 1.%, 400 mg, 1, %8 mmol, 1,00 equiv, %5S õ, 3-bromodihidro-2Hpiran-4ú3Hõ-ona úcomposto 1.10.1, 750 mg, 2,0% mmol, 1,00 equivõ, e carbonato de potássio Ú580 mg, 4,20 mmol, 2,00 equivõ em CH3CN Ú15 mLõ foi agitada durante a noite a 80 °C sob nitrogénio. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em 50 mL de etil acetato e lavado com 2x10 mL de H20. A fase orgânica foi seca sobre úNa2S04õ e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica e purificado usando etil acetato'éter de petróleo úl' 3õ para produzir 0,21 g Ú37H õ do composto titular como um sólido branco.
Composto 1.11. Ácido 4-metil-3-Ú3,4,6,7-tetrahidropirano[3,4-d] imidazol-2-ilõbenzóico. Uma mistura de metil 4-metil-3-ú3,4,6,7-tetrahidropirano[3,4- d]imidazol-2-ilS benzoato úcomposto 1.10, 210 mg, 073 mmol, 1.00 equiv, %5S õ e hidróxido de sódio ú%2,65 mg, 232 mmol, 3.00 equivS em 12 mL de metanol'£D ύ2μΐΕ foi agitada a 60°C em um banho de óleo. Após 2 horas, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi colocado em 5 mL de H20. A mistura resultante foi lavada com 3x10 mL de etil acetato e o pH da camada aquosa foi então ajustado para 2-3 usando cloreto de hidrogénio úaq., 2 Mõ. A mistura resultante foi extraída com 3x30 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas sob pressão reduzida para produzir 0,21 g Ú8%EEI õ do composto titular como um sólido braco.
Composto 1. Metil 4-Ú1-Ú4-metil-3-Ú3,4,6,7- tetrahidropirano[3,4- d]imidazol-2-ilõ-benzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Uma mistura de ácido 4-metil-3-Ú3,4,6,7-tetrahidropirano [3,4-d]-imidazol-2-iliEI benzóico úcoposto 1.11, 60 mg, 0,22 mmol, 1,00 equiv, %50 õ, EDCI Ú8B4 mg, 0,4 6 mmol, 2,00 equivõ, DMAP Ú85,12 mg, 0,70 mmol, 3,00 equivõ e cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 52 mg, 0,23 mmol, 1,00 equivõ em DMF foi agitada à temperatura ambiente. Após 3 horas, a mistura de reação foi diluída com 40 mL de DCM e lavada com 2x10 mL de NH4C1 uaq., sat.õ seguido por 2x10 mL de salmoura. A camada orgânica foi seca úNa2S04õ e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto ú~100 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#-Pre-HPLC-006 úWatersS 0 μ Coluna, SunFire Prep C18, l%±150mm 5um;fase
móvel, água com 0,050 TFA e CH3CN Ú15,00 CH3CN até2,00 em 12 minutos, até 100,00 em 1 minutoõ; Detector, UV
254'220nm. As frações contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 32,% mg Ú340 õ do composto titular como um sólido branco, m/z úES+0 427 ÚM+ H0+. ΧΗ RMN Ú3 00 MHz, CD3OD0 p 7,73-7,65 úm, 4H0 , 7,61 úd ,J = 5,7 Hz, 1H0 , 7,50 úd, J = 6,0 Hz, 2H0 , 4,8%-4,78 Ú1H parcialmente obscurecido por pico de águaõ, 4,81 ús, 2Hõ, 4,10 út, J = 4,1 Hz, 2HÕ, 3, %4-3,81 úm, 1HÕ, -3,35 Ú1H parcialmente obscurecido por pico de solvente metanolõ, 3.08- 1,%5 úm, 2HÕ, 2,%2 út, J = 4,1 Hz, 2HÕ, 2,52 ús, 3HÕ, 2.08- 1, %2 úm, 1HÕ, 1, %2-l, 65 úm, 3HÕ. XH RMN Ú400 MHz, CDCl3õpõ 7,63 úd, J = 8,3 Hz, 2HÕ, 7,34 úd, J = 8,3 Hz, 2HÕ, 7,30 ús, 1HÕ, 7,50 úm, 2HÕ, 4,8% úd, J = 13,0 Hz, 1HÕ, 4,81 ús, 2HÕ, 4,05 út, J = 5,2 Hz, 2HÕ, 3,77 úd, J = 13,2 Hz, 1HÕ, 3,30 Út, J = 13,0 Hz, 1HÕ, 3,01-2,84 úm, 4HÕ, 2,34 Ús, 3HÕ, 2,06 úd, J = 13,7 Hz, 1HÕ, 1,86 Úd, J = 12,% Hz, 1HÕ, 1,76 Úq, J = 12,8 Hz, 1HÕ, 1,57 úq, J = 11,7 Hz, 1HÕ.
Composto 2.1. Ácido 5-iodo-2,4-dimetilbenzóico. Uma solução de ácido 2,4-dimetilbenzóico Ú20 g, 133,18 mmol, 1,00 equiv0 , periodato de sódio Ú14,27 g, 66,72 mmol, 0,50 equiv0 , iodo Ú37,25 g, 146,76 mmol, 1,10 equiv0 , e ácido sulf0 <rch úl,%6 g, 1%,%8 mmol, 0,15 equivõ em ácido acético Ú15Q mLõ foi agitada a 110°C em um banho de óleo. Após 6 horas, a mistura de reação foi permitida atingir temperatura ambiente e foi então diluída com 1,2 L de água. Em seguida, foram cuidadosamente adicionados 800 mL de Na2S203 aq úaq., sat.0 . Os sólidos resultantes foram coletados por filtração, dissolvidos em 1,2 L de etil acetato e lavados com 1x300 mL de Na2S203 úaq., sat.0 seguido por 1x400 mL de salmoura. A camada orgânica foi seca úNa2S04õ e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi recristalizado de etanoliaH20 Ú2plõ para produzir 30 g ú82óõ do composto titular como um sólido branco.
Composto 2.2. Metil 5-iodo-2,4-dimetilbenzoato. Uma solução de ácido 5-iodo-2,4-dimetilbenzóico úcomposto 2.1, 10 g, 32,60 mmol, 1,00 equiv, %0óõ e ácido sulfS rico úlOmLõ em metanol Ú100 mLõ foi agitada durante a noite a 80°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi diluído com 200 mL de etil acetato. A mistura resultante foi lavada com 3x50 mL de água, 2x50 mL de bicarbonato de sódio úaq., sat.õ, seguido por 2x50 mL de salmoura. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para produzir %,2 g ú88õõ do composto titular como um óleo amarelo.
Composto 2.3. Metil 5-ciano-2,4-dimetilbenzoato. Uma solução de metil 5-iodo-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 2.2, %, 2 g, 31,71 mmol, 1,00 equivõ, ZnúCNõ2 Ú4,46 g, 38,12 mmol, 1,20 equivõ e PdúPPh3õ4 Ú2,%3 g, 2,54 mmol, 0,08 equivE em N,N-dimetilformamida Ú120 mLS foi agitadaob uma atmosfera de nitrogénio a 100 °C durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi então resfriada bruscamente por adição cuidadosa de 100 mL de FeS04 úaq., sat.õ e diluída com etil acetato. A mistura resultante foi agitada vigorosamente, em seguida, filtrada através de celite e lavada com 1M FeS04, água e etil acetato. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 2x100 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x20 mL de salmoura, secas úNa2S04õ e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ5ό como eluente para produzir 6,2 g ú%30 õ do composto titular como um sóido branco.
Composto 2.4. Metil 5-úN1-hidroxicarbamimidoilõ-2,4-dimetilbenzoato. Uma solução de metil 5-ciano-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 2.3, 6 g, 28,54 mmol, 1,00 equiv, %O0 õ e N£DH Ú10 mL, 5,00 equiv, 50% em águaõ em EtOH Ú20 mLõ foi agitada a 100°C em um banho de óleo. Após 2 horas, a mistura foi arrefecida para temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com 100 mL de etil acetato, lavado com 2x2 0 mL de salmoura, seco úNa2S04õ e concentrado sob pressão reduzida para produzir 4,66 g Ú660 õ do composto titular como um élido branco.
Composto 2.5. Cloridrato de metil 5-carbamimidoi1-2,4-dimetilbenzoato. Uma solução de metil 5-úN'-hidroxicarbamimidoilS -2,4-dimetilbenzoato úcomposto 2.4, 4,66 g, 18,87 mmol, 1,00 equiv, %0ôõ e Ac20 Ú2,36 g, 23,0% mmol, 1,10 equivõ em AcOH Ú21 mLõ foi agitada à temperatura ambiente. Após 5 minutos, o balão de vidro foi expurgado com nitrogénio e HCOOK ú8,8 g, 104,76 mmol, 5,00 equivõ e paládio em carbono úlOó, 2,33 gõ foram adicionados. 0 balão de vidro foi expurgado com nitrogénio seguido por hidrogénio. A mistura foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio úbalãoõ à temperatura ambiente por 4 horas. Após expurgação do sistema com nitrogénio, os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em 50 mL de etanol e o pH foi ajustado para 5-6 com cloreto de hidrogénio uaq. , 5Mõ. Os sólidos resultantes foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir 4 g do composto titular como um sólido branco.
Composto 2.6. terc-Butil 2-ú5-úmetoxicarbonilõ-2,4-dimetilfenilõ-6,7-dihidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-5ú4Hõ-carboxilato. Uma mistura de cloridrato de metil 5- carbamimidoil-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 2.5, 500 mg, %0óõ, terc-butil 3-bromo-4-oxopiperidina-l-carboxilato Ú860 mg, 2,78 mmolõ e carbonato de potássio Ú570 mg, 4,12 mmolδ em CH3CN Ú15 mL0 foi agitada durante a noite sob nitrogêmo a 80°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em 25 mL de etil acetato e lavado com 2x10 mL de H20. A fase orgânica foi seca úNa2SO40 e concentrada sob pressão reduzida. 0 produto bruto assim obtido foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ3δ como eluente para produzir 0,3 g do composto titular como um sólido branco.
Composto 2.7. Ácido 5-ú5-úterc-butoxicarbonilõ-4,5,6,7-tetrahidro-3H- imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4- dimetilbenzóico. Uma mistura de terc-butil 2-ú5- úmetoxicarbonilõ-2,4-dimetilfenilõ-6,7-dihidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-5ú4Hõ- carboxilato úcomposto 2.6, 300 mg, 0,70 mmol, 1,00 equiv, %0óõ e hidrS xido de sS dio Ú62 mg, 1,55 mmol, 2,00 equivõ em 15 mL metanol'H20 ύ2μ1δ foi agitada a 40°C em um banho de 0 leo. AplE3 s 2 ho&amp;a a mistura de reação foi concentrada para cerca de 1'3 do volume sob pressão reduzida. 0 valor do pH da mistura remanescente foi ajustado para 3-4 com cloreto de hidrogénio úaq., lMõ. Os sólidos resultantes foram coletados por filtração e secos em um forno sob pressão reduzida para produzir 0,2 g ú6%óõ do composto titular como um sólido amarelo.
Composto 2.8. terc-Butil 2-ú5-Ú4-ú4-cianofenilS -piperidina-l-carbonil0 -2,4-dimetilf enilÊEI -6,7-dihidro-3H-imidaá4,5-c]piridina-5ú4Hl3 -carboxilato. Uma solução do compoto 2.7 Ú125 mg, 0,30 mmol, 1,00 equiv, %0óõ, DlEA Ú130,5 mg, 1,01 mmol, 3,00 equivõ, HBTU Ú256,2 mg, 0,68 mmol, 2,00 equivõ e cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõ benzonitrila úcomposto 1.5, 75 mg, 0,30 mmol, 1,00 equivõ em DMF Ú5 mLõ foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura de reação foi então diluída com 50 mL de etil acetato, lavada com 2x20 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica e purificado usando etil acetato'éter de petróleo úlplõ para produzir 0,1 g Ú550 õ do composto titular como um sólido amarelo.
Composto 2.%. 4-úl-ú2,4-Dimetil-5-ú4,5,6,7-tetrahidro-3H- imidazo[4,5- c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4- ilõbenzonitrila. A uma solução de terc-butil 2-Ú5-Ú4-Ú4-cianofenilõ-piperidina-1-carbonilõ-2,4-dimetilfenilõ-6,7 - dihidro-3H-imidazo[4,5 c]piridina-5ú4H0 -carboxilato úcomposto 2.8, 100 mg, 0,17 mmol, 1,00 equiv, %0óõ em diclorometano Ú3 mLõ foi adicionado ácido trifluoroacético úl mLõ. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente. Após 2 horas, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi colocado em diclorometano e lavado com bicarbonato de sódio úaq., sat.õ. A fase orgânica foi seca úNa2S04õ e concentrada sob pressão reduzida para produzir 0,lg Ú6S0 õ do compofeo titular como um sólido amarelo.
Composto 2. 4-úl-ú5-ú5-Acetil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c] piridin-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4 -ilõbenzonitrila. A uma mistura agitada de 4 -úl-ú.2,4 -dimetil-5-ú4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 2.%, 20 mg, 0,02 mmol, 1,00 equiv, 500 õ em DMF ú2 mLõ sob nitrogénio foi adicionada uma solução de Ac20 Ú2,4 mg, 0,02 mmol, 1,00 equivõ em DMF Ú0,2 mLõ gota a gota a 0°C. A solução resultante foi agitada por 1 hora a 0~3°C em um banho de água/gelo. A mistura de reação foi então diluída com 50 mL de etil acetato e lavada com 2x20 mL de salmoura. A fase orgânica foi seca úNa2S04õ e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto Ú50 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiç0 es úl#-Pre-HPLC-006 úHtersõõ: Coluna, xbridge Cl8,· fase móvel, água com 0,050 Np, H20 e CH3CN uretenção 50 C|CN em 2 minutos, até 200 -460 em 10 minutos, até 1000 em 12 minutos, abaixo de 200 em 41 minutos® ; Detectorp UV 254'220nm. As frações contedo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 5,5 mg do composto titular como um sólido branco, m/z ÚES+® 482 ÚM+H®+. XH RMN Ú300 MHz, CD3OD® μδ 7,6% úd, J = 8,1 Hz, 2H® , 7,48 úd,J = 8,1 Hz, 2H® , 7,3%-7,28 úm, 2H® , 4,%0 úm, 1H, parcialmente obscurecido pelo pico de solvente®, 4,67 e 4,62 Ú2 singletos, rotâmeros de acetamida, MeCONCH2-imidazol, 2HÕ, 3, %2 úm, 2HÕ, 3,66 úm, IHõ, 3,23 úm, 1HÕ, 3,00 úm, 2HÕ, 2,85-2,76 Úm, 2HÕ, 2,48 ús, 3HÕ, 2,41 e 2,31 Ú2 singletos, rotâmeros de aril amida, ArCH3, 3Hõ, 2,25 e 2,22 ú2 singletos, rotâmeros de acetamida, Cfí3CON, 3Hõ, 2,04 úm, IHõ, 1, %2-l, 20 úm, 3HÕ.
Composto 3. 4-úl-ú3-ú5-Acetil-4,5,6,7-tetrahidro-3H- imidazo[4,5-c] piridin-2-ilõ-4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2. m/z ÚES+® 468 ÚM+H®.
Composto 4. 4-úl-ú4-Metil-3-ú5-úmetilsulfonil® -4,5$,7- tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilB benzoil0 pèridin-4-ilEEI benzonitrila. 0 composto titular foi preparadousando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2. m/z ÚES+Õ 504 uM+Hõh'.
Composto 5. 4-úl-ú5-ú5-úIsopropilsulfonilõ-4,5,6,7- tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4 -dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulaçõ es químicaspadrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2. m/z úES+õ 546 ÚM+Hõ+.
Composto 6. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil- 5-Ú3,4,6,7- tetrahidropirano[3,4-d] imidazol-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõ-2-fluorobenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulaçõ es químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2. m/z úES+õ 45% úM+Hõ+.
Composto 7. 2-ú5-ú4-ú4-Cianofenill8 piperidina-l-carbnilEI - 2,4-dimetilf enillEI -N, N-dimetil-6,7-dihidro-3H-imidao [4,5- c] piridina-5ú4H0 -sulfonamida. 0 composto titular fd> preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2. m/z ÚES+B 547 ÚM+Hi.
Composto 8. ú2,4-Dimetil- 5-ú3,4,6,7-tetrahidropirano[3,4- d] imidazol-2-ilH fenilEI Ú4-Ú4- útrifluorometilB fenil0 piperidin-l-ilEI metanona. 0 mposto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2. m/z úES+0 484 ÚM+H0.
Composto %. 2-ú5-ú4-ú4-CianofenilI3 piperidina-l-carbnillEI - 2,4-dimetilfenil0 -N-metil-4,5,6,7-tetrahidro-lH-benzo[d]imidazol-6-carboxamida. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2. m/z úES+0 4%6 ÚM+H0.
Composto 11.1. terc-Butil 4-ú4-cianofenil0 -4- fluoropiperidina-l-carboxilato. A uma solução agitada do composto 1.2 Ú5 g, 16,54 mmol, 1,00 equivH em dicloometano Ú250 mLõ sob nitrogénio a -78°C foi adicionado, gota a gota, Deoxo-Fluor® ú4,4 g, 1%, 8% mmol, 1,20 equivS . A mistura resultante foi agitada por 1 hora a -78°C. A mistura de reação foi então cuidadosamente resfriada bruscamente pela adição de 50 mL de bicarbonato de sódio úaq,, sat.0 e extraída com 3x100 mL de diclorometao. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 150 mL de salmoura, secas sobre sulfato de magnésio anidro e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato/éter de petróleo úl: 300 como eluente paraproduzir 2,5 g Ú350 0 do composto titular como um sólido brao.
Composto 11.2. 4-ú4-Fluoropiperidin-4-il0 benzonitrla. A uma solução agitada do composto 11.1 Ú620 mg, 1,02 mmol, 1,00 equiv, 50óõ em DCM Ú40 mLõ foi adicionado, gota a gota, ácido trifluoroacético Ú6 g, 52,62 mmol, 51,66 equivõ. Após agitação à temperatura ambiente por 2 horas, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi colocado em DCM e tratado com bicarbonato de sódio aquoso. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com 2x50 mL de DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro e concentradas sob pressão reduzida para produzir 0,4 g do composto titular como um sólido amarelo claro, m/z úES+õ 205 ÚM+Hõ+.
Composto sal HC1 11.2. Cloridrato de 4-ú4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulaçlKi es químicas padrão e um procedimento simlar àquele usado para a preparação do composto 1.5 e usando o composto 11.1 em vez do composto 1.4. m/z ÚES+õ 205 ÚM+Hõ+. ]'H RMN Ú3 00 MHz, CD30Dõp δ 7,83 úd, J = 6,3 Hz, 2HÕ, 7,68 úd, J - 6,3 Hz, 2HÕ, 3,55-3,32 úm, 4HÕ, 2.58-2,40 úm, 2HÕ, 2,28-2,22 úm, 2HÕ.
Composto 11. 4-úl-Ú2,4-Dimetil- 5-Ú3,4,6,7 -tetrahidropirano[3,4-d] imidazol-2-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2 e usando o composto 11.2 em vez do composto 1.5. m/z ÚES+0 45% úM+HlEI.
Composto 12. Ú4-Ú4-Clorof enilS piperidin-1 -il0 Ú2,4itàetil-5-Ú3,4,6,7- tetrahidropirano[3,4-d]imidazol-2-ill3 fenillEI metanona. 0 composto titular foi preparadosando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2. m/z ÚES+Õ 4 50 ÚM+Hõ+.
Composto 13. 2-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ- 2,4-dimetilfenilõ-N-metil-l,4,5,6- tetrahidrociclopenta[d]imidazol-5-carboxamida. 0 composto titular foi preparado usando manipulaçõ es químicaspadrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2. m/z úES+õ 482 úM+Hõ+.
Composto 14. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil- 5-Ú3,4,6,7-tetrahidropirano [3,4- d] imidazol-2-ilE3 benzoil® pipédin-4-ilB benzonitrila. 0 composto titular foi preparado aando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2. m/z ÚES+Õ 441 ÚM+Hõ+ .
Composto 15. Ú2,4-Dimetil- 5-Ú3,4,6,7-tetrahidropirano[3,4-d]imidazol-2 -ilõfenilõú4-Ú4 - útrifluorometoxiõfenilõpiperidin-l-ilõmetanona. 0 composto titular foi preparado usando manipulaçõ es químicaspadrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2. m/z úES+õ 500 ÚM+Hõ+.
Composto 16.1. N2-ú2-Metoxietilõ-N2-metil-5-nitropiridina- 2,4-diamina. Uma solução de 2-cloro-5-nitropiridin-4-amina Ú500 mg, 2,88 mmol, 1,00 equivõ, trietilamina úl,167 g, 11,53 mmol, 4,00 equivS e ú2-metoxietilB úmetilS a®iiá514 mg, 5,77 mmol, 2,00 equivS em DMF Ú20 mL0 foi agitia em urn tubo selado a 55°C atrás de urn escudo contra explosão durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi diluída com 100 mL de água e extraída com 3x150 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas sob pressão reduzida para produzir 723 mg úbrutoõ do composto titular como um óleo vermelho escuro.
Composto 16.2. N2-ú2-Metoxietilõ-N2-metilpiridina-2,4,5-triamina. Um balão de vidro contendo uma solução do composto 16.1 Ú4 00 mg, 1,77 mmol, 1,00 equivõ em metanol Ú30 mLõ foi expurgado com gás nitrogénio. À solução foi então adicionado paládio em carbono Ú40 mg, 10%, 60% de águaõ. 0 balão de vidro foi adicionalmente expurgado com nitrogénio e a atmosfera foi então mudada para hidrogénio. A mistura foi agitada à temperatura ambiente sob um balão com hidrogénio por 4 horas. Após expurgação do sistema com nitrogénio, os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir 300 mg ú86%õ do composto titular como um sólido marrom claro. 0 produto bruto foi considerado instável e usado imediatamente.
Composto 16.3. Ácido 5 -formil-2,4-dimetilbenzóico. A uma solução agitada de ácido 5-iodo-2,4-dimetilbenzóico úcomposto 2.1, 5 g, 18,11 mmol, 1,00 equivõ em tetrahidrofurano Ú150 mLõ sob nitrogénio a -78°C foi adicionado n-BuLi Ú2,5 M em THF, 18 mL, 2,50 equivõ gota a gota. Após agitação a -78°C por 1 hora, DMF ú5 g, 6 8,4 mmol, 3,80 equivõ foi adicionada gota a gota. A mistura resultante foi agitada a -78°C por um período adicional de 0,5 hora e então cuidadosamente resfriada bruscamente por lenta adição de 50 mL de água. 0 pH foi então ajustado para ~3-4 usando HC1 aquoso úaq., 6 Mõ. A mistura foi extraída com 3x200 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo assim obtido foi purificado usando cromatograf ia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ10-1μ5δ como gradiente para produzir 2,4 g ú74%õ do composto titular como um sólido branco.
Composto 16.4. 4-úl-ú5-Formil-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõ benzonitrila. A uma solução agitada de ácido 5-formil-2,4-dimetilbenzóico úcomposto 16.3, 950 mg, 5,33 mmol, 1,10 equivõ em DMF Ú15 mLõ adicionou-se DlEA ú2,48 g, 19,19 mmol, 4,00 equivõ seguido por HBTU Ú3,67 g, 9,68 mmol, 2,00 equivõ e cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 1,07 g, 4,80 mmol, 1,00 equivõ. Após agitação durante a noite à temperatura ambiente, a reação foi resfriada bruscamente pela adição de 60 mL de água, A mistura resultante foi extraída com 3x150 mL de etil acetato e as camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida, 0 resíduo foi purificado usando cromatograf ia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ10-1μ3ό como eluente para produzir 1,4 g ú84%õ do composto titular como um óleo marrom.
Composto 16. 4-Ú1-Ú5-Ú6-úú2-Metoxietilõúmetilõaminoõ-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Uma solução do composto 16.2 Ú300 mg, 1,53 mmol, 1,30 equivõ, composto 16.4 Ú407 mg, 1,17 mmol, 1,00 equivõ e acetato de amónio Ú362 mg, 4,70 mmol, 4,00 equivõ em etanol 8 20 mLõ foi agitada durante a noite a 70S em um banho de óleo. A mistura resultante foi então concentrada sob vácuo e o resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ10-2μ1ο como eluente para produzir -200 mg de produto, o qual foi adicionalmente purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#-Pre-HPLC-006úWatersõõp Coluna, SunFire Prep Cl8, 19*150mm 5um; fase móvel, água com 0,05% TFA e CH3CN úretenção 5,0% CH3CN em 2 minutos, até 25,0% em 1 minuto, até 55,0% em 12 minutos, até 100,0% em 1 minutoõ; Detector, UV 254'220nm. As frações contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 150 mg Ú240 õ do composto titular como um sólido braco. m/z ÚES+E3 523 úM+HEL :lH Ú300 MHz, CDC130 μδ 8,57-8,38 úm, 1ΗΗ , 7,78-7,53 Úm, 4H0 , 7,34 úd,J = 7,5 Hz, 2H0 , 7,28-7,12 úm, 2H0 , 5,06-4,88 úm, mH , 3,71 úapp s, 5H0 , 3,50 ύφΕΐΗ , 3,41-3,05 Úm, 4H0 , 3,01-2,75 Úm, 2H0 , 2,68 ús, 3H02,42 É 2,31 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3Hõ, 2,12-1,%3 úm, 1HÕ, 1, %3-1,3% úm, 3HÕ.
Composto 17. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú6-morfolino-3H-imidazo[4,5-c] piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulaçõ es químicas padrão e procedimentos similses àqueles usados para a preparação do composto 16. m/z úES+õ 521 ÚM+Hõ+.
Composto 18. 4-úl-Ú2,4-Dimetil-5-ú6-Ú4-metilpiperazin-1-ilõ-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4- ilS benzonitrila. 0 composto titular foi preparado aando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 16. m/z úES+õ 534 ÚM+HÕ+. XH RMN Ú300 MHz, DMSO-d6õp 8,73 Ús, 1HÕ, 7,76 úd, J = 7,5 Hz, 2Hõ, 7,66 É 7,56 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar-H, 1HÕ, 7,4% úd, J = 8,1 Hz, 2HÕ, 7,37 ús, 1HÕ, 7,12 ús, 1HÕ, 4,81-4,67 úm, 1HÕ, 4,30 úbr s, 2HÕ, 3,70-3,37 úm, 3Hõ, 3,37-3,05 úm, 5HÕ, 3,05-1,80 úm, 5HÕ, 2,60 ús, 3Hõ, 2,37 É 2,27 ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar-CH3, 3HÕ, 2,02-1,87 úm, 1HÕ, 1,87-2,40 úm, 3HÕ.
Composto 1%. 4-úl-Ú2,4-Dimetil-5-ú6-úpiperazin-1-ilõ-3H- imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 16. m/z úES+õ 51% ÚM+HÕ+ .
Composto 20.1. 5-Nitro-2-úpirrolidin-l-ilõpiridin-4-amina. Um balão de vidro de 500 mL equipado com um condensador de refluxo foi carregado com 2-cloro-5-nitropiridin-4-amina Ú2,00 g, 11,5 mmol, 1,0 equivS , pirrolidina ú2,86 &amp;, 34,6 mmol, 3,0 equivH , carbonato de potássio ú4,78 g, 346 mmol, 3,0 equivH e acetonitrila Ú50 mLÍXI . A mistura foi aqcida a 70°C durante a noite sob nitrogénio e depois arrefecida para temperatura ambiente. Os sólidos amarelos foram coletados por filtração e lavados com acetonitrila, água e hexanos. Os sólidos foram secos para obtenção do composto titular como um sólido amarelo claro úl,43 g, primeira coletaõ. Os solventes do filtrado foram removidos e a solução aquosa foi extraída com etil acetato. Os extratos orgânicos foram secos úNa2S04õ, filtrados e removidos in vacuo para obtenção de produto adicional como um sólido laranja'amarelo Ú820 mg, segunda coletaõ. A segunda coleta de produto foi triturada com etil acetato ú3 mLõ, então filtrada e lavada com etil acetato Ú2xl mLõ e dietil éter Ú3 mLõ para obtenção de um sólido amarelo claro Ú751 mgõ. 0 rendimento total de 5-nitro-2-úpirrolidin-l-ilõpiridin-4-amina obtido foi 2,18 g ú%10 õ. m/z úES+õ 20%,1 úM+Hõ+. αΉ RMN Ú4 00 MHz, DMS0-dsÕ: δ 8,7% ús, 1HÕ, 7,3% úbr s, 2HÕ, 5,63 ús, 1HÕ, 3,40 úbr s, 4HÕ, 1,%3 úbr s, 4HÕ.
Composto 20.2. 6-úPirrolidin-1-ilõpiridina-3,4-diamina. A um balão de vidro de 100 mL adicionou-se 5-nitro-2-úpirrolidin-l-ilõpiridin-4-amina úcomposto 20.1, 800 mg, 3,84 mmol, 1,0 equivõ e Pd em carbono Ú10E3 em pesoPd, 400 mg, 0,38 mmol, 0,1 equivõ. O sistema foi expurgado com nitrogénio e carregado com metanol úl% mLõ seguido por hidrogénio. A mistura foi agitada à temperatura ambiente sob hidrogénio por 4 horas e então expurgada com nitrogénio. A mistura foi filtrada através de celite e lavada extensivamente com MeOH. Os solventes foram removidos in vacuo para obtenção do composto titular como um sólido roxo Ú641 mg, %4E3 õ.m/z úES+õ 17%, 3 ÚM+Hõ+. ^ RMN Ú400 MHz, DMSO-d6Õp δ 7,27 ús, 1HÕ, 5,62 ús, 1HÕ, 5,14 úbr s, 2HÕ, 3,67 úbr s, 2HÕ, 3,23-3,13 úm, 4HÕ, 1, %1-1,7% úm, 4HÕ.
Composto 20. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú6-úpirrolidin-l-ilõ-3H-imidazo[4,5-c] piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um balão de vidro de 100 mL adicionou-se 6-úpirrolidin-l-ilõpiridina-3,4-diamina úcomposto 20.2, 641 mg, 3,60 mmol, 1,0 equivõ, 4-úl-ú5-formil-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 16.4, 1,25 g, 3,60 mmol, 1,0 equivõ, metabissulfito de sódio Ú8%0 mg, 4,68 mmol, 1,3 equivõ e DMF Ú36 mLõ. A mistura foi aquecida a 100°C sob ar por 22 horas e então permitida arrefecer para temperatura ambiente. Água Ú80 mLõ foi adicionada lentamente à solução agitada até que nenhum produto adicional se precipitasse. Os sólidos foram filtrados, lavados com água Ú2xl5 mLõ e secos para um sólido marrom úl,42 gõ. Produto adicional precipitado do filtrado após repouso foi filtrado e lavado com água Ú2xl0 mLõ para obtenção de um sólido esbranquiçado Ú241 mgõ. A reação acima foi repetida uma segunda vez da mesma forma e quantidades conforme descrito para produção de produto adicional úl,26 g de sólido marrom com precipitação inicial, mais 288 mg de sólido esbranquiçado da precipitação adicionalõ. Os filtrados aquosos destas duas reaçS es foram combinados e NaH03 aquoso foi adicionado para ajustar o pH para 7. A aquosa foi extraída com D CM' 2% MeOH Ú300 mLH , seca úNgGO40 , filtrada e evaporada para a obtenção de um sólido marrom Ú54 7 mg õ. Todos os produtos obtidos foram combinados e purificados por cromatografia de gel de sílica uDCM'MeOHo para obtenção do composto titular como um sólido amarelo Ú2,37 g, 65§ com base no rendimento teórico para as duas reaçH esõ.rrt/z úES+õ 505,1 ÚM+HÕ+. RMN Ú400 MHz, DMSO-d6Õp δ 12,41 úbr s, 1HÕ, 8,52 ÚS, 1HÓ, 7,77 úd, J = 82Hz, 2HÕ, 7,66 &amp; 7,56 Ú2 br singletos, rotâmeros de amida, ArH, 1HS , 7,4% ús, J = 8,2 Hz, 2H0 , 7,2% ús, ÍHIEI , 6.31 úbr s, 1H0 , 4,7%-4,67, úm, 1H0 , 3,5434 úm, 5H0 , 3,17 úapp t,J = 11,8, 1H0 , 2,%%-2,8% úm, 2ΐΜ , 2,63 ús, 3Hõ, 2,33 &amp; 2,24 ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3HÕ, 2,03-1,87 úm, 5HÕ, 1,82-1,38 úm, 3HÕ. Análise fundamental úC3iH32N601,3H20, 528,040, encontrado úcalcdõ, Ομ 70,66 Ú70,51Õ, Ημ 6,54 Ú6,60Õ, Νμ 15,78 Ú15,%2õ.
Composto sal HC1 20. Cloridrato de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú6-úpirrolidin-l-ilõ-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Diclorometano ú~50 mLõ foi adicionado a 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú6-úpirrolidin-l-ilõ-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 20 base livre, 2,31 g, 4,58 mmolõ até sua completa dissolução e, em seguida, 4M HC1 em dioxano Ú5 mL, 20 mmol, 4,3 equiv0 foi adicionado. Os solventes foram removidos e o resíduo foi dissolvido em DCM e removido in vacuo. 0 sal cloridrato resultante foi recristalizado de etanol fervente Ú180 mL0 e permiido arrefecer lentamente para temperatura ambiente. A mistura foi deixada à temperatura ambiente durante a noite e, em seguida, colocada no freezer por 4 horas. Os sólidos resultantes foram filtrados e lavados com etanol frio Ú25 rnLõ seguido por dietil éter Ú25 mLõ. Os sólidos foram secos para obtenção de um sólido esbranquiçado a cinza claro Úl, 82 g, 73%Õ. XH RMN Ú4Q0 MHz, DMS0-d6õp δ 13,50 &amp; 13,46 Ú2 br singletos, NH-tautômeros de imidazol, IHó, 13,20 úbr s, 1HÕ, 8,62 úbr s, 1HÕ, 7,83 &amp; 7,67 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArH, IHó, 7,78 úd, J ~ 7,8 Hz, 2Hõ, 7,58-7,45 úm, 2HÕ, 7,37 ÚS, 1HÕ, 6,71 úbr s, 1HÕ, 4,80-4,68 Úm, 1HÕ, 3,65-3,38 Úm, 5HÕ, 3,25-3,12 úm, IHó, 3,00-2,82 úm, 2Hó, 2,66 ús, 3Hó, 2,37 &amp; 2,27 ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3Hõ, 2,13-2, Olúm, 4Hó, 1,0 8-1,87 úm, 1HÕ, 1,82-1,40 úm, 3Hõ. Análise fundamental ύ03ιΗ32Μ60·1,0 HC1*2,4 H20, 584,320, encontrado úcalcdõ, Ομ 63,80 Ú63,72õ, Ημ 6,32 Ú6,52ó; Νμ 14,25 Ú14,38Õ.
Composto sal MsOH 20. Metanossulfonato de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú6-úpirrolidin-l-ilõ-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilóbenzonitrila. Cloridrato de 4-úl-Ú2,4-dimetil-5-ú6-úpirrolidin-l-ilõ-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ benzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto sal HC1 20, 1,82 g, 3,36 mmolS foi adicioado à água Ú100 mLõ com NaHC03 saturado Ú50 mLl3 e extraído com Ιμΐ DCM'EtOAc Ú500 mLõ mais MeOH Ú25 mLõ. Após a completa dissolução de todo o produto, as camadas foram separadas e a aquosa foi extraída com Ιμΐ DCM'EtOAc adicional Ú100 mLfêJ . As orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ, filtradas e evaporadas para um pó amarelo claro úl,68 g, 3,33 mmolõ. O material de base livre foi dissolvido em acetonitrila quente E 10 mLõ, então, uma solução de ácido metanossulfônão aquosa 1,0 M 0 3,33 mL, 3,33 mmol, 1,0 equivõ foi adicionad. e bem misturada. Água adicional Ú6 mLõ foi adicionada e a mistura foi congelada e seca no liofilizador para obtenção de um pó amarelo 0 1,%% g, %%0 õm/z E ES+õ 505,1 0 M+Hõ λΐΙ RMN 0 400 MHz, DMSO-d6õp δ 13,2% 0 br s, 1HÕ, 13,10 E br s, IHõ, 8,65 E br s, IHõ, 7,78 E d, J = 8,2 Hz, 2HÕ, 7,74 &amp; 7,64 E 2 singletos, rotâmeros de amida, ArH, IHõ, 7,50 úd, J = 8,3 Hz, 2HÕ, 7,37 E s, IHõ, 6,74 E br s, IHõ, 4,80-4,68 E m, IHõ, 3,6538 E m, 5Hõ, 3,26-3,12 E m, IHõ, 3,01-2,83 E m, 2HÕ, 2,64 E SJfô, 2,37 &amp; 2,27 ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3Hõ, 2,32 ús, 3Hõ, 2,12-2,00 úm, 4HÕ, 1, %8-l, 88 úm, IHõ, 1,82-1,3% úm, 3Hõ. Análise Fundamental ύθ3ΐΗ32Ν50·1,0 MsOH*l, 7 H20, 631,360, encontrado úcalcdõ, Cp 60,%6 Ú60,88õ, Ημ 6,14 Ú6,2%õ; Νμ 13,21 Ú13,31Õ, Sp 5,08 Ú5,08Õ.
Composto 21. 4-13 1-3 5-0 6-0 Azetidin-l-ilõ-3H-imidá?5{ c]piridin-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 16. m/z úES+õ 4%1 ÚM+Hõ*.
Composto 22. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú6-úmetilsulfonilõ-3H- imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 16. m/z úES+õ 514 ÚM+HÕ+ .
Composto 23. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú6-úmetilsulfonilõ-3H- imidazo[4,5-b]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 16. m/z úES+õ 514 ÚM+Hõ+. ΧΗ RMN Ú300 MHz, DMSO-d6 + ϋ200μ δ 8,87 úd, J = 1,8 Hz, IHõ, 8,52 Úd, J = 2,1 Hz, 1HÕ, 7,74 úd, J = 7,5 Hz, 2Hõ, 7,66 É 7,56 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar-H, IHÕ, 7,48 úd, J = 8,4 Hz, 2HÕ, 7,38 úbr s, IHõ, 4,76-4,63 úm, IKS , 3,57-3,38 úm, 1H0 , 3,31 ús, 3H0 , 3,28-3 , iBn, IHõ, 3,03-2,85 úm, 2HÕ, 2,60 ús, 3HÕ, 2,35 É 2,27 Ú2 singletos, rotânieros de amida, Ar-CH3, 3Hõ, 2,00-1,85 úm, IHõ, 1,85-1/32 úm, 3HÕ.
Composto 24. 4-úl-ú5-ú5-úAzetidin-l-ilõ-lH-imidazo[4,5-b]piridin-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 16, mas usando 6-cloro-3-nitropiridin-2-amina e cloridrato de azetidina em vez de 2-cloro-5-nitropiridin-4-amina e Ú2- metoxietilõúmetilõamina, respectivamente. m/z úES+õ 4%1 ÚM+Hõ+. ΧΗ NMR Ú300 MHz, CD30Dõp δ 8,06 úd, J = %,0 Hz, IHõ, 7,70-7,42 úm, 6HÕ, 6,60 Úd, J = %, 0 Hz, IHÕ, 4, %0 Úm, 1H, parcialmente obscurecido pelo pico de solventeõ, 4,32 úm, 4Hõ, 3,65 úm, IHõ, 3,03 úm, IHõ, 2,62 ús, 3HÕ, 2,57 úm, 3Hõ, 2,48 e 2,38 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3HÕ, 2,04 úm, IHÕ, 1,%6-1,68 úm, 4HÕ.
Composto 25. 4-úl-ú5-ú6-úAzetidin-l-ilK -3H-imidazo4,5-c]piridin-2-il0 -2,4-dimetilbenzoilS -4-fluoropiperid-4-ilS benzonitrila. 0 composto titular foi preparado aando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 16 e usando o composto 11.2 em vez do composto 1.5. m/z ÚES+Õ 50% úM+Hõ+.
Composto 26.1. terc-Butil 4-ú5-bromopiridin-2-ilõ-4-hidroxipiperidina-1-carboxilato. A uma solução agitada de 2,5-dibromopiridina Ú10 g, 42,1% mmol, 1,00 equivõ em tolueno Ú1000 mLõ sob nitrogénio a -78°C foi adicionado, gota a gota, n-BuLi Ú18 mL, 2,5 M em toluenoS . Apósl hora a -78°C, uma solução de terc-butil 4-oxopiperidina-l-carboxilato Ú10 g, 50,25 mmol, 1,1% equivõ em tolueno Ú200 mLõ foi adicionada gota a gota durante agitação. Após 2 horas adicionais de agitação a -78°C, a reação foi então cuidadosamente resfriada bruscamente pela adição de 300 mL de água. A mistura resultante foi extraída com 3x500 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1x300 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato/éter de petróleo úl:100-1:50 para produzir 6,5 g ú42%õ do composto titular como um óleo amarelo.
Composto 26.2. terc-Butil 4-ú5-cianopiridin-2- ilEEI -4-hidroxipiperidina-1-carboxilato. Uma mistura de terc-butil 4-ú5-bromopiridin-2-il0 -4-hidroxipiperidina-l-carbssilato úcomposto 26.1, 1 g, 2,80 mmol, 1,00 equivS , cianeto de zinco Ú400 mg, 3,42 mmol, 1,22 equivE , Pd ÚPP|S4 Ú200 mg, 0,17 mmol, 0,06 equivE em DMF Ú50 mL0 foi agitada ob nitrogénio por 2 horas a 100°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi então resfriada bruscamente pela adição cuidadosa de 300 mL de FeS04 úaq., sat.õ e diluída com etil acetato. A mistura resultante foi agitada vigorosamente, em seguida, filtrada através de celite e lavada com 1M FeS04, água e etil acetato. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 2x100 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1x100 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ100-1μ4δ para produzir 0,5 g ú5B%õ do composto titular como um óleo amarelo.
Composto 26.3. terc-Butil 4-ú5-cianopiridin-2-ilõ-4-fluoropiperidina-1-carboxilato. A uma solução de terc-butil 4-ú5-cianopiridin-2-ilõ-4-hidroxipiperidina-i-carboxilato úcomposto 26.2, 1 g, 3,13 mmol, 1,00 equiv, 95%õ em diclorometano Ú50 mLõ sob nitrogénio a -78°C foi adicionada, gota a gota, uma solução de trifluoreto de bisú2-metoxietilE aminosulfur Ú830 mg, 3,75 mmol, 120 equivS em diclorometano Ú10 mL0 durante o curso del minuto. A mistura resultante foi agitada por 1 hora a -78°C. A reação foi então cuidadosamente resfriada bruscamente por adição gota a gota de água e lavada com 2x20 mL de bicarbonato de sódio úaq.õ, em seguida com 3x20 mL de salmoura. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo úlplOõ para produzir 0,38 g ú38%õ do composto titular como um sólido branco.
Composto 26.4. Trifluoroacetato de 6-ú4-fluoropiperidin-4-ilõnicotinonitrila. A uma solução agitada de terc-butil 4-ú5-cianopiridin-2-ilõ-4-fluoropiperidina-l-carboxilato úcomposto 26.3, 1 g, 3,11 mmol, 1,00 equiv, 0 5%õ em diclorometano Ú2Q mLõ foi adicionado, gota a gota, TFA Ú3,75 g, 32,80 mmol, 10,57 equivõ. Após agitação p® 1 hora a 25°C, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida para produzir 0,5 g do composto titular como um óleo marrom.
[0525] Composto 26. 6-úl-ú5-ú6-úAzetidin-l-il0 -3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il0 -2,4-dimetilbenzoilS -4-fluoropiperidin-4-ilS nicotinonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 16, mas usando o composto 26.4 em vez do composto 1.5. m/z ÚES+0 50% ÚM+HE.
Composto 27. 4-úl-ú4-Metil-3-ú6-úpirrolidin-l-ilEI -H-imidazo[4,5-c]piridin-2-illKI benzoil0 piperidin-4-ilIEI benzonitrila. 0 composto titular foi preparado aando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 16, mas usando ácido 3-bromo-4-metilbenzóico em vez de ácido 5-iodo-2,4-dimetilbenzóico. m/z úES+13 4%1 úM+HlEI.
Composto 28. 4-úl-ú3-úlH-Imidazo[4,5-c]piridin-2-ilEI -4-metilbenzoilE] piperidin-4-ilEl benzonitrila. 0 compost titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 16 e 27. m/z ÚES+H 422 úM+HB. xH RMN Ú300 MHz, CD3OD§ μδ %,35 ÚS, 1ΗΗ , 8,6 0 úd,J = 6,6 Hz, IKS , 8,1% Úd, J = 6,6 Hz, 1HB , 7,%2 ús, 1H0 , 7,73-7,58 úm, 4H0 , 0,5 úd, J = 8,1 Hz, ÍHIEI , -4, % úlH, parcialmente obscurecidopor pico de ãguaES , 4,06-3,87 úm, 1H0 , 3,13-2, %5 úm, 3H0 2,73 ús, 3H0 , 2,11-1,63 úm, 4H0 .
Composto 2%. 4-úl-ú3-úlH-Benzo[d]imidazol-2-ilE] -4 - metilbenzoilEI piperidin-4-il0 benzonitrila. O compost titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 16 e 27. m/z úES+S 421 úM+Hi. 1H RMN Ú300 MHz, CD3OD® μδ 7,87-7,77 úm, 3HH , 7,75-7,60 Úm, 4H§ , 7,60- 7,47 úm, 4HE3 , -4,85 ÚlH, parcialmente obscurecido pr pico de águaS , 4,04-3,8% úm, ihH , 3,13-2,%5 úm, 3H0 , 2, Sis, 3HEI , 2,11-1,6% úm, 4H0 .
Composto 30. 4-úl-ú3-ú6-Cloro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il0 -4-metilbenzoilS piperidin-4-il0 benzonitrila. Gbmposto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 16 e 27. m/z ÚES+0 456 ÚM+H0.
Composto 31. 4-úl-ú2-Metil-5-ú6-úpirrolidin-1-il0 -H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il0 benzoil0 piperidin-4-il0 benzonitrila. 0 composto titular foi preparado aando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 16, mas usando ácido 5-bromo-2-metilbenzóico em vez de ácido 5-iodo-2,4-dimetilbenzóico úcomposto 2.10 . m/z úES+0 4%1 ÚM+H0. 1H RMN Ú300 MHz, DMSO-ds0 μ δ 12,63 Úbr s, 1H0 , 8,06 Úd, J = 7,8 Hz, lHõ, 8,01 &amp; 7, %1 ú2 single tos, rotâmeros de amida, Ar-H, 1HÕ, 7,81 úd, J = 6,6 Hz, 2HÕ, 7,58-7,42 úm, 3HÕ, 6,31 ús, lHõ, 4,85 úm, lHõ, 3,57-3,35 úm, 5HÕ, 3,30-3,13 úm, lHõ, 3,07-1,85 úm, 2Hõ, 2,3% &amp; 2,2% Ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar-CH3l 3Hõ, 2,10-1,8% úm, 5HÕ, 1,87- 1,40 úm, 3HB .
Composto 32. 4-úl-ú2-Metoxi-5-ú6-úpirrolidin-l-il0 3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilH benzoilS piperidin-4-ilIEI benzonitrila. O composto titular foi preparado Bando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 16. m/z úES+õ 507 ÚM+HÕ+ .
Composto 33. 2-ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-4-ú6-úpirrolidin-l-ilõ-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulaçH es químicas padrão e procedimentos similaes àqueles usados para a preparação do composto 16. m/z úES+õ 502 úM+Hõ+.
Composto 34. 4-úl-ú2-Cloro-5-ú6-úpirrolidin-l-ilS -H-imidazo [4,5-c] piridin-2-illEI benzoilE piperidin-4-il0 benzonitrila. 0 composto titular foi preparado Bando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 16. m/z úES+õ 511 ÚM+Hõ+.
Composto 35. 4-úl-ú5-ú6-úPirrolidin-l-ilõ-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2-útrifluorometoxiõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulaçS es químicas padrão e procedimentos similaes àqueles usados para a preparação do composto 16. m/z úES+õ 561 ÚM+Hõ+.
Composto 36. 4-úl-ú3-ú6-úPirrolidin-l-ilS -3H-imidao[4,5-c]piridin-2-il0 benzoilB piperidin-4-illEI benzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 16. m/z úES+õ 477 ÚM+Hõ+. ‘Ή RMN Ú300 MHz, CD3ODH μδ 8,44 ús, 1ΗΗ , 8,25-8,17 úm, 2H0 , 7,77-7,63 úm, 4H0 , 7,51 úd,J = 8,1 Hz, 2ΗΗ , 6,5% ús, 1H0 , -4,85 úlH, parcialmente obscurecido por pico de águaS , 3%8-3,83 úm, ÍHIEI , 3,61-3,48 úm, 4H0 , -3,4 úlH, parcialmente obscurecido por pico de solvente metanol^ , 3,12-2,8 úm, 2HB , 2,22-2,0% úm, 4HS , 2,0%-l,%5 úm, 1H® , 1,%5 Ú&amp;H0 .
Composto 37. 4-úl-ú3-ú6-úlsopropilamino0 -3H-imidazc&amp;4,5- c]piridin-2-ilS benzoilB piperidin-4-ilS benzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 16. m/z úES+õ 465 úM+Hõ+.
Composto 38.1. Metil tetrahidrofuran-3-carboxilato. Uma solução de ácido tetrahidrofuran-3-carboxílico Ú540 mg, 4,65 mmol, 1,00 equivõ e TsOH Ú10 mg, 0,06 mmol, 0,01 equivõ em metanol Ú40 mLõ foi agitada a 66°C em um banho de óleo. Após 16 horas, a mistura resultante foi arrefecida para temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em 10 mL de éter, lavado com 1x20 mL de NaHC03 úaq., sat.õ seguido por 3x20 mL de salmoura e concentrado sob pressão reduzida para produzir 0,40 g Ú66%õ do composto titular como um óleo incolor.
Composto 38.2. Tetrahidrofuran-3-carbohidraz ida. Em um balão de vidro foi colocado hidrato de hidrazina Ú20 mLõ. Então, foi adicionado metil tetrahidrofuran-3-carboxilato úcomposto 38.1, 30 0 mg, 3,00 mmol, 1,00 equivõ gotaa gota com agitação. A mistura resultante foi agitada a 50°C em um banho de óleo. Após 3 horas, a mistura de reação foi concentrada e seca sob pressão reduzida para produzir 0,20 g Ú74%õ do composto titular como um óleo incolor.
Composto 38.3. Metil 3-carbamotioil-4-metilbenzoato. Uma solução de metil 3-ciano-4-metilbenzoato úcomposto 1.7, 880 mg, 5,02 mmol, 1,00 equivB e 0,0'-dietil ditiofosffeo úl,41 g, 8,2% mmol, 1,50 equiv0 em THF'£D Ú40 mL0 foi agitada a 80°C úPRECAUÇÃOp ocorrência de evolução de gás significativa - esta e todas as outras reações descritas aqui devem ser realizadas em capelas químicas bem ventiladas^ . Após 3 horas, o solvente orgânico foiremovido sob pressão reduzida e a fase aquosa residual foi extraída com 3x20 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para produzir 0,85 g Ú7%E3 E do composto titular como umô&amp;ido amarelo claro.
Composto 38.4. Metil 3-úiminoúmetiltioS metilS -4-metilbenzoato. A uma solução agitada de metil 3 -carbamotioil-4-metilbenzoato úcomposto 38.3, 2,10 g, %,85 mmol, 1,00 equivE em tetrahidrofurano Ú30 mLEI foi adicionado iodometano ú2,8 g, 1%,73 mmol, 2,00 equivE gota a gota. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente. Após 3 horas, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi seco sob vácuo para produzir 1,6 g Ú730 E do composto titular como um Èódo amarelo claro.
Composto 38.5. Metil 4-metil-3-ú5-útetrahidrofuran-3-il0 -4H-1,2,4-triazol-3-ilB benzoato. Uma solução de tetrahidrofuran-3-carbohidrazida úcomposto 38.2, 1%5 mg, 1,50 mmol, 1,50 equivS e composto 38.4 Ú223 mg, 1,0 mmol, 1,00 equivõ em AcOH Ú30 mLõ foi agitada a 80°C. Após 4 horas, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi seco sob alto vácuo para produzir 153 mg Ú53ÓÕ do composto titular como um óleo amarelo.
Composto 38.6. Ácido 4-metil-3-Ú5-útetrahidrofuran-3 - ilõ-4H-1,2,4 -triazol-3-ilõbenzóico. A uma solução agitada do composto 38.5 Ú57 mg, 0,20 mmol, 1,00 equivõ em metanol Ú20 mLõ foi adicionado hidróxido de sódio úaquoso, 1M, 0,2 mLõ gota a gota. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente. Após 4 horas, o solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida. A camada aquosa residual foi lavada com 2x20 mL de etil acetato. 0 pH da fase aquosa foi então ajustado para 4 com cloreto de hidrogénio úaq., IMS e os sólidos resultantes foram coletados por filtração e secos para produzir 23 mg ú42óõ do composto titular como um sólido amarelo claro.
Composto 38. 4-Ú1-Ú4-Metil-3-Ú5-útetrahidrofuran-3-ilõ-4H-1,2,4-triazol-3- ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Uma mistura do composto 38.6 Ú137 mg, 0,50 mmol, 1,00 equiv0 , HBTU Ú228 mg, 0,60 mmol, 1,20 equiv0 , DIE&amp;162 mg, 1,25 mmol, 2,50 equivS e cloridrato de 4-úpiperidÍH4-Í10 benzonitrila Ú1.5, 111 mg, 0,50 mmol, 1,00 equiS em DMF Ú20 mLõ foi agitada à temperatura ambiente. Após 1 hora, a reação foi resfriada bruscamente pela adição de 20 mL de água e a mistura resultante foi extraída com 3x20 mL de etil acetato. As fases orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ100-1μ3ό para produzir 35 mg úl6%õ do composto titular como um sólido marrom, m/z ÚES+Õ 442 ÚM+HÕ+ .
Composto 30 .1. Ácido 3-formil-4-metilbenzóico. A ua solução agitada de ácido 3-bromo-4-metilbenzóico ú2,14 g, 10,00 mmol, 1,00 equivõ em tetrahidrofurano Ú30 mLõ sob nitrogénio a -78°C foi adicionado n-BuLi Ú10 mL, 2,5 M em THF, 2,50 equivõ gota a gota. Após agitação por 1 hora abaixo de -70°C, DMF ú5 mLõ foi adicionada lentamente. A solução resultante foi aquecida lentamente para temperatura ambiente e agitada por 1 hora. Após o resfriamento cuidadoso da reação por adição lenta de 50 mL de água, o pH foi ajustado para -3-4 usando HC1 aquoso ú6Mõ. A mistura resultante foi extraída com 2x50 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para produzir 1,6 g Ú0 8%õ do composto titular como um sõido amarelo.
Composto 3%.2. 4-úl-ú3-Formil-4-metilbenzoil0 piperdin-4-110 benzonitrila. Uma mistura de ácido 3-formil-4-metilbenzóico úcomposto 3%.1, 660 mg, 4,02 mmol, 1,00 equivõ, HBTU Ú2 g, 5,28 mmol, 1,30 equivõ em N, N-dimetilformamida Ú20 mLõ foi agitada à temperatura ambiente. Após 1 hora, cloridrato de 4-úpiperidin-4- ilõbenzonitrila úl.5, 8%0 mg, 4,01 mmol, 1,00 equivõ e DlEA úl,03 g, 7,%8 mmol, 2,00 equivõ foram adicionados. A mistura resultante foi agitada por 5 horas à temperatura ambiente e, em seguida, durante a noite a 60°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com 100 mL de EtOAc e lavada com 2x50 mL de NH4C1 úaq. , sat.õ seguido por 2x50 mL de bicarbonato de sódio úaq., sat.õ. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para produzir 1 g ú75%õ do composto titular como um óleo marrom.
Composto 30 .3. Ácido 5-ú4-ú4-cianofenilõpiperidinal- carbonilõ-2-metilbenzóico. A uma mistura agitada de 4-úl-ú3-formil-4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõ benzonitrila úcomposto 30 .2, 600 mg, 1,81 mmol, 1,00 equivõ em fflF Ú5 mLõ foi adicionada, gota a gota, uma solução de KMn04 úl gõ em água úlO mL0 , A mistura resultante foi agitada drante a noite a 60°C em um banho de óleo. Após arrefecimento para temperatura ambiente, os sólidos foram removidos por filtração e o pH do filtrado foi ajustado para > 10 com hidróxido de sódio úaquoso, IMõ. A mistura resultante foi lavada com 20 mL de etil acetato. 1M HC1 aquoso foi então empregado para ajustar o pH da camada aquosa para ~4. A fase aquosa resultante foi extraída com 2x100 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para produzir 500 mg ú80%õ do composto titular como um óleo amarelo claro.
Composto 30 .4. Metil 5-ú4-ú4-cianofenilõpiperidinal- carboni lõ-2-metilbenzoato. A uma mistura agitada de ácido 5-ú4-ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-metilbenzóico úcomposto 30 .3, 1,30 2 g, 4,00 mmol, 1,00 equivõ emetano1 Ú50 mLõ foi adicionado ácido sulfúrico Ú784 mg, 7,%% mmol, 2,00 equivõ gota a gota. A mistura resultante foi aquecida a refluxo durante a noite em um banho de óleo. Após arrefecimento para temperatura ambiente, o solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com 20 mL de EtOAc e lavado com 1x100 mL de bicarbonato de sódio saturado uaq.õ seguido por 1x100 mL de salmoura. A camada orgânica foi seca úNa2S04õ e concentrada sob pressão reduzida para produzir 1,303 g ú%O0 õ do composto titular como um sólido branco.
Composto 3%. 5. 5-ú4-ú4-Cianof enil0 piperidina-1-carbnil0 -2-metilbenzohidrazida. Uma solução do composto 3%.4 úl,503 g, 4,15 mmol, 1,00 equiv0 e hidrato de hidrazina Ú10 ffii0 em etanol Ú50 mL0 foi aquecida a refluxo em um banho é óleo. Ap0 s 2 horas, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em 20 mL de EtOAc. A mistura resultante foi lavada com 1x50 mL de H20 e 1x50 mL de salmoura. A camada orgânica foi seca úNa2S04õ e concentrada sob pressão reduzida para produzir 1,353g ú%0%õ do composto titular como um sólido branco.
Composto 30 .6. 4-Ú1-Ú3-Ú5-Amino-1,3,4-oxadiazol-2-lõ-4- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Uma mistura do composto 30 .5 Ú380 mg, 1,05 mmol, 1,00 equivõ e biarbonato de sódio Ú105,8 mg, 1,26 mmol, 1,20 equivõ em dioxano'H20 ύΐμΐό Ú50 mLõ foi agitada à temperatura ambiente. Após 5 minutos, brometo de cianogênio Ú212 mg, 2,00 mmol, 2,00 equivõ foi adicionado. A mistura resultante foi agitada por 3 horas à temperatura ambiente. A solução resultante foi agitada por 3 horas à temperatura ambiente, resfriada bruscamente com 3 0 mL de FeS04 úaq. , sat.õ e diluída com etil acetato. A mistura resultante foi agitada vigorosamente, em seguida, filtrada através de celite e lavada com 1M FeS04, água e etil acetato. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 2x50 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x50 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. Isto resultou em 3%7 mg ú%8óõ de um sólido esbranquiçado.
Composto 3%. 4-úl-ú3-ú5-Etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Uma mistura do composto 3%. 6 Ú3%7 mg, 1,02 mmol, 1,00 equivõ e hidróxido de potássio Ú287 mg, 5,12 mmol, 5,00 equiv® em etaol Ú25 mLõ foi aquecida a refluxo durante a noite. Após arrefecimento da mistura de reação para temperatura ambiente com um banho de água, o pH foi ajustado para ~7 com ácido acético. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi colocado em etil acetato e lavado com água. A camada orgânica foi seca úNa2S04õ e concentrada. O resíduo bruto foi purificado usando cromatograf ia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ5-1μ0ο. 0 produto foi adicionalmente purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiç® es úl#-Pre-HPLC-006 úWatersõõp Coluna, SunFre Prep C18, 5um, l%*150mm; fase móvel, água com 0,05® TFAe CH3CN úretenção 5,0® C£CN em 2 minutos, até 30,0® em 1 minuto, até 5%,0® em 12 minutos, até 100,0® em 2 minutosõ; Detector, UV 254'220nm. As fraç® es contendo compose puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 51,% mg Ú12® õ do composto titular como um sólido branco, m/z úES+õ 416 ÚM+H0+ .
Composto 40.1. terc-Butil 4-ú4-cianofenil0 -4- hidroxiazepano-l-carboxilato. Uma solução de 4-iodobenzonitrila Ú510 mg, 2,22 mmol, 1,1 equivS emTHF ú3 mbS foi adicionada a um balão de vidro de 10 mL e osistema foi expurgado com nitrogénio. A mistura foi arrefecida para -40°C, em seguida, cloreto de isopropilmagnésio úl,16 mL de uma solução 2.0 M em THF, 2,32 mmol, 1,15 equivõ foi adicionado gota a gota por 20 minutos. A mistura resultante foi agitada a -40°C por 2 horas e, em seguida, terc-butil 4-oxoazepano-1-carboxilato Ú431 mg, 2,02 mmol, 1,0 equivõ em THF Ú0,5 mLõ foi adicionado gota a gota por 15 minutos. A mistura resultante foi agitada a -40°C por 1 hora, então, diluída em etil acetato Ú15 mLõ e lavada com 0,2M HC1 ú.10 mLõ, 0,1M HC1 Ú5 mLõ, bicarbonato de sódio saturado Ú5 mLõ e depois salmoura ú5 mLõ. As orgânicas foram secas úNa2S04õ, filtradas e evaporadas. Para remoção de subproduto aldólico e cetona remanescentes, o resíduo foi dissolvido em acetonitrila Ú3 mLõ, então, hidrazina Ú0,2 mLõ foi adicionada e aquecida a 60°C por 4 horas. A mistura foi diluída com EtOAc Ú20 mLõ e lavada com água Ú20 mLõ, seguido por 0,5M ácido fosfórico Ú3x20 mLõ, bicarbonato de sódio saturado Ú10 mLõ e salmoura Ú10 mLõ. As orgânicas foram secas úNa2S04õ, filtradas e evaporadas. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica úhexanos/etil acetatoõ para obtenção do composto titular como um óleo rosa, o qual se solidificou após repouso Ú303 mg, 47óõ. m/z ÚES+0 317 úM+hE.
Composto 40.2. terc-Butil 4-Ú4-cianofenilS -2,3,6,7- tetrahidro-lH-azepina-l-carboxilato e terc-butil 5-Ú4-cianofenilS -2,3,4,7-tetrahidro-lH-azepina-l-carboxiato. Em um frasco contendo terc-butil 4-ú4-cianofenilS -4-hidroxiazepano-l-carboxilato úcomposto 40.1, 200 mg, 0,63 mmol, 1,0 equivB foi adicionada piridina Ú3 mL0 e oxicloreto de fósforo Ú438 pL, 4,7 mmol, 7,5 equivõ e a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 45 horas. Os solventes foram removidos in vacuo e o resíduo foi dissolvido em DCM ú5 mLõ e lavado com água Ú10 mLõ. A camada aquosa foi extraída com DCM Ú5 mLõ e as orgânicas combinadas foram lavadas com bicarbonato de sódio saturado Ú2xl0 mLõ, secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas para obtenção de uma mistura do composto titular como um óleo amarelo claro Ú167 mg, 8%B õ.m/z úES+õ 2%% úM+Hõ+.
[0553] Composto 40.3. terc-Butil 4-ú4-cianofenilõazepano-1-carboxilato. A um balão de vidro de 2 5 mL contendo uma mistura de terc-butil 4-ú4-cianofenilõ-2,3,6,7-tetrahidro-lH-azepina-1-carboxilato e terc-butil 5-ú4-cianofenilõ-2,3,4,7-tetrahidro-lH-azepina-l-carboxilato úcomposto 40.2, 167 mg, 0,56 mmolõ adicionou-se 10IEI de paládio em arbono Ú40 mgõ e etil acetato Ú6 mLõ. 0 sistema foi expurgado com nitrogénio, então carregado com hidrogénio e agitado à temperatura ambiente. Após expurgação do sistema com nitrogénio, a mistura foi filtrada através de celite e o filtrado foi concentrado. 0 resíduo foi purificado por TLC preparativa para obtenção de uma cera incolor Ú77 mg, 45%õ. m/z úES+0 245 ÚM menos t-butil+H0.
Composto 40.4. 4-úAzepan-4-il0 benzonitrila. A um fasco contendo terc-butil 4-ú4-cianofenil0 azepano-l-carbsdlato úcomposto 40.3, 77 mg, 0,257 mmol, 1,0 equivB adiccbnou-se D CM Ú500 pLõ e ácido trif luoroacético úl%8 pL, 2,57 mmol, 10 equivõ e a mistura foi agitada com ventilação por %0 minutos. A mistura foi diluída em etil acetato ú5 mLõ e lavada com bicarbonato de sódio saturado Ú5 mLõ. A aquosa foi ajustada para pH 10-11 e extraída com adição de etil acetato até que nenhum produto remanescesse. As orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas para obtenção do composto titular como um óleo amarelo Ú51 mg, teóricoõ. m/z úES+õ 201 ÚM+Hõ+.
Composto 40.5. 4-Ú1-Ú3-Amino-4-metilbenzoilõazepan-4-ilõbenzonitrila. A um frasco de 4 mL adicionou-se ácido 3-amino-4-metilbenzóico Ú27 mg, 0,18 mmol, 1,0 equivõ, 4-úazepan-4-ilõbenzonitrila úcomposto 40.4, 40 mg, 0,2 mmol, 1,1 equivõ, hidroxibenzotriazol Ú3% mg de 200 em peo de H20, 0,23 mmol, 1,3 equivõ, 1-etil-3-Ú3- dimetilaminopropilS carbodiimida Ú44 mg, 0,23 mmol, 1,3 equiv0 , DMF úl mL0 ÔL N-diisopropiletilamina ú%3 pL, 0,54 mmol, 3,0 equivõ. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 4 horas, em seguida, diluída em etil acetato Ú10 mL0 e lavada com salmoura Ú10 mL0 . A aquosa foi extraída com etil acetato Ú3 mLõ e as orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura Ú10 mLõ, 1M NaH2P04 ú5 mLõ e salmoura Ú10 mLõ. As orgânicas foram secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas para obtenção do composto titular como um sólido marrom Ú45 mg, 74%õ. m/z úES+õ 334 úM+Hõf.
Composto 40.6. N-Ú5-Ú4-Ú4-Cianofenilõazepano-l-carbonilõ-2-metilfenilõ-6 -fluoronicotinamida. A um frasco de 4 mL contendo 4-úl-Ú3-amino-4-metilbenzoilõazepan-4- ilõbenzonitrila úcomposto 40.5, 44 mg, 0,13 mmol, 1,0 equivõ adicionou-se diclorometano úl mLõ e N, Ardi isopropi let i lamina Ú35 pL, 0,20 mmol, 1,5 equivõ. Uma solução de cloreto de 6-fluoronicotinoil Ú22 mg, 0,14 mmol, 1,05 equivõ em diclorometano úl mLõ foi adicionada gota a gota por aproximadamente 2 minutos. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por 10 horas, ehão diluída com diclorometano ú5 mLõ e lavada com 1M NaH2P04 Ú3 mLõ, bicarbonato de sódio saturado ú3 mLõ e salmoura Ú3 mLõ. As orgânicas foram secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas para obtenção do composto titular como uma cera marrom Ú64 mg, teóricoõ. m/z úES+õ 457 úM+Hõ+.
Composto 40. N-Ú5-Ú4-ú4-Cianofenil0 azepano-l-carboml0 -2- metilfenil0 -6-úisopropilaminoES nicotinamida. A um ásco contendo N-ú5-ú4-ú4-cianofenil0 azepano-l“Carbonil02~ metilf enilEI -6-fluoronicotinamida úcomposto 40.6, 61 mg, 0,13 mmolõ adicionou-se dimetilsulfóxido úl mLõ e isopropilamina úl mLõ. A mistura foi agitada a 35°C por 2 horas e depois à temperatura ambiente por 16 horas, em seguida, a 35°C por 4 horas adicionais. 0 excesso de isopropilamina foi removido in vacuo e a solução remanescente foi purificada por HPLC preparativa para produzir o produto como um pó esbranquiçado úsal TFA, 3% mg, 40 %õ.m/z ÚES+0 4%6 ÚM+H0.
Composto 41.1. 5-Nitro-2-úpirrolidin-l-il0 piridina. Uma mistura de 2-cloro-5-nitropiridina úl,58 g, 10,00 mmol, 1,00 equivS , pirrolidina Ú710 mg, 10,00 mmol, 1,OOequiv0 e carbonato de potássio Ú2,76 g, 20,00 mmol, 2,00 equivõ em CH3CN Ú20 mLõ foi agitada a 60°C em um banho de óleo. Após 2 horas, a mistura de reação foi permitida atingir a temperatura ambiente. Os sólidos foram filtrados e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. 0 resíduo foi triturado com 1x20 mL de éter de petróleo para produzir 1,8 g ú%30 õ do composto titular como um sólido amaelo.
Composto 41.2. 6-úPirrolidin-1-ilB piridin-3-amina.Um balão de vidro contendo uma solução de 5-nitro-2-úpirrolidin-1-ilõpiridina úcomposto 40.1, 1,%3 g, 10,00 mmol, 1,00 equivõ em etanol Ú30 mLõ foi expurgado com nitrogénio. Paládio em carbono Ú0,4 g, 10ό, 60ó de águaõ foi adicionado. ApS s expurgação adicional do sistema com nitrogénio, a atmosfera foi mudada para hidrogénio e a mistura resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. ApSs expurgação do sistema com nitrogénio, os s0 lidos fcam filtrados e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e seco para produzir 1,6 g ú%8óõ do composto titular como um sE3 lido marrom.
Composto 41. 5-Ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-2 - metil-N-Ú6-úpirrolidin -l-ilõpiridin-3-ilõbenzamida. Uma mistura do composto 3%.3 Ú528 mg, 1,52 mmol, 1,00 equivõ e HBTU Ú63 5 mg, 2,2 8 mmol, 1,50 equivõ em DMF Ú3 0 mLõ foi agitada por 30 minutos à temperatura ambiente. A esta mistura adicionou-se 6-úpirrolidin-1-ilõpiridin-3-amina úcomposto 41.2, 2%% mg, 1,82 mmol, 1,20 equivõ e DIEA Ú50 mg 0 . A mistura resultante foi agitada durante a note a 60 °C em um banho de óleo. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com 50 mL de EtOAc e lavada com 2x30 mL de NH4C1 úaq. , sat.0 , seguido por 2x30 mL de bicarbonato de sódio úaq., sat.õ. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. 0 produto bruto foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#-Pre-HPLC-016 úWatersõõp Coluna, SunFire Prep C18, 10 ±150mm 5um; fase móvel, água com 50 mmol NH4HC03 e CH3CN Ú10% CH3CN até 32 % em 3 minutos, até 51% em 20 minutos, até 100% em 1 minuto, abaixo de 10% em 1 minutoõ; Detector, UV 220NMnm. As frações contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 50 mg ú7%õ do composto titular como um sólido, m/z ÚES+0 4%4 ÚM+H0.
Composto 42.1. Ácido 5-amino-2,4-dimetilbenzõico. Uma mistura de metil 5-amino-2,4-dimetilbenzoato úl,2 g, 6,70 mmol, 1,00 equivõ e hidróxido de sódio úl, 5 g, 37,50 mmol, 5,60 equivõ em metanol/H20 Ú20/20 mLõ foi agitada durante a noite a 50°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a fase orgânica foi removida sob pressão reduzida. 0 pH da camada aquosa remanescente foi ajustado para -4-5 com cloreto de hidrogénio úaq., 2Mõ. Os sólidos resultantes foram coletados por filtração e secos para produzir 1,0 g de um sólido amarelo.
Composto 42.2. 4-úl-ú5-Amino-2,4-dimetilbenzoil0 -4- fluoropiperidin-4-il0 benzonitrila. Uma mistura de áido 5-amino-2,4-dimetilbenzóico úcomposto 42.1, 2,264 g, 13,71 mmol, 1,00 equivõ, HBTU Ú7,803 g, 20,50 mmol, 1,50equivõ, 4-Ú4- fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 11.2, 2,8 g, 13,71 mmol, 1,00 equivõ e Dl EA Ú3,541 g, 27,45 mmol, 2,00 equivõ em DMF Ú50 mLõ foi agitada à temperatura ambiente. Após 1 hora, a mistura foi diluída com 100 mL de EtOAc e lavada com 1x100 mL de água, seguido por 1x100 mL de salmoura. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para produzir 3,51 g ú73%õ do composto titular como um sólido branco.
Composto 42.3. 6-Cloro-N-ú5-ú4-ú4-cianofenilõ-4- fluoropiperidina-l-carbonilõ-2,4-dimetilfenilõnicotinamida. A uma mistura do composto 42.2 Ú3,51 g, 0 ,0 0 rnmoU,, 00 equivõ e trietilamina ú2,02 g, 10 ,0 6 mmol, 2,00 equõ em D CM Ú50 mLõ sob nitrogénio a 0°C foi adicionada, gota a gota, uma solução de cloreto de 6-cloropiridina-3-carbonil úl, 0 36 g, 11,00 mmol, 1,10 equivõ em DCM Ú50 mLõ. pós agitação por 1 hora a 0°C, a mistura de reação foi resfriada bruscamente por adição cuidadosa de 50 mL de água e extraída com 2x50 mL de diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x50 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para produzir 4,41 g ú%0%õ do composto titular como um sólido amarelo.
Composto 42. N-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-1-carbonilõ-2,4 -dimet i1f enilõ-6-úi sopropilaminoõnicot inamida. Uma mistura do composto 42.3 Ú30 2 mg, 0,80 mmol, 1Q0 equiv0 , propan-2-amina Ú472 mg, 7,%% mmol, 10,00 eqivEEI , carbonato de potássio Ú221 mg, 1,60 mmol, 2,01 equivõ, Kl Ú66,4 mg, 0,4 0 mmol, 0,50 equivõ em DMSO Ú10 mLõ foi aquecida a 100 °C em um tubo selado atrás de um escudo contra explosão. Após 48 horas, a mistura foi permitida atingir a temperatura ambiente e foi então diluída com 20 mL de EtOAc. A mistura foi lavada com 1x20 mL de água, seguido por 1x2 0 mL de salmoura. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. 0 produto bruto ú~300 mgH foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições 0 #l-Pre-HPLC-02 úAgilentõõp Coluna, Sunfire Prep C18, l%*150mm 5um; fase móvel, água com 0,05% TFA e CH3CN Ú15,0% CH3CN até 40,0% em 6 minutos, até 100,0% em 2 minutos, abaixo de 15,0% em 2 minutosõ; Detectorp UV 220&amp;254nm. As fraçS es contedo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 158 mg u30 %õ do composto titular como um sólido esbranquiçado, m/z ÚES+0 514 ÚM+H0. 1H RMN Ú300 MHz, CD3OD, ρρηΜ μδ 8,4% ÚS, 1H0 , 8,32 úd, J = %,% Hz, 1H0 , 7,7% úd,J = 8,1 Hz, 2H0 , 7,67 úd, J = 7,5 Hz, 2H0 , 7,40-7,22 úm, 2H0 , 7,07 úd, J = %,6 Hz, 1H0 , 4,85 Úm, 1H0 , 4,03 úm, 1H0 , 3,80-3,42 úm, 2H0 , 3,2% úm, 1H0 , 2,48-2,03 úm, %H0 , l,%Sn, 1H0 , 1,3% úd,J = 6,3 Hz, 6H0 .
Composto 43. N-ú5-ú4-ú4-Cianofenil0 -4 -fluoropiperidna-1-carbonil0 -2,4-dimetilf enillEI -6 -morfolinonicotinamida Uma mistura do composto 42.3 ú3%2 mg, 0,80 mmol, 1,00 equivEI , morfolina Ú34 8 mg, 3, %% mmol, 5,00 equivS e carbon&amp;o de potássio Ú221 mg, 1,60 mmol, 2,01 equivõ em DM50 Ú10 mLõ foi agitada durante a noite a 100°C em um tubo selado atrás de um escudo contra explosão. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com 2 0 mL de EtOAc e lavada com 1x2 0 mL de água, seguido por 1x2 0 mL de salmoura. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. 0 produto bruto Ú300 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiçS es úl#-Pre-HPLC-002 úAgilentõõpColuna, l#-PrepC-005 úXbridge C18 1%*150 186002%7% 170130047113 03õ, n; fase móvel, água com 0,050 TFA e C|EN Ú15,00 CiEN até 50,00 em 10 minutos, até 100,00 em 1 minuto, tenção 100,0 0 em 1 minuto, abaixo de 15,00 em 2 minutosõ;
Detectorp UV 220&amp;254nm. As fraç0 es contendo compost) puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 106 mg Ú250 õ do composto titular como um solido branco. m/z úES+0 542 ÚM+Hl3+.
Composto 44. N-Ú5-Ú4-ú4-CianofenilS -4-fluoropiperidna-1- carbonilS -2,4-dimetilfenil0 -6-ÚÚ2- metoxietilES úmetilS aminoH nicotinamida. 0 compostottiiar foi sintetizado de um modo semelhante àquele descrito para o composto 43 para produzir um sólido branco Ú21% mg, 50%õ. m/z ÚES+õ 544 ÚM+HÕ+. XH RMN Ú300 MHz, CD3ODÕp δ 8,56 ÚS com estrutura fina, 1H0 , 8,41 úd com estrutura fina,J = %,% Hz, 1HH , 7,7% úbr d, J = 8,1 Hz, 2H0 , 7,67 úbr d, J = 6,% Hz, 2H0 , 7,44-7,1% úm, 3H§ , 4,88-4,73 úm, mH , 3,%4 úff, = 5,0 Hz, 2H0 , 3,73 út, J — 5,0 Hz, 2ΗΗ , 3,70-3,47 úm, 2H0 , 3,3% ÚS, 3H0 , 3,36 ÚS, 3HH , 3,36-3,21 úm, 1ΗΗ , 2,46-2,fia, 6H§ , 2,22-1,85 úm, 4H0 .
Composto 45. N-ú5-ú4-ú4-Cianofenil0 -4-fluoropiperidna-l-carbonilS -2,4-dimetilfenilS -6-ú4-metilpiperazin-l- ilIEI nicotinamida. O composto titular foi sintetizado de um modo semelhante àquele descrito para o composto 43 para produzir um sólido branco Ú180 mg, 44%õ. m/z ÚES+õ 555 úm+ηΕΓ .
Composto 46. 6 -úAzetidin-l-ilH -N-ú5-ú4-ú4-cianofenlE£l -4- f luoropiperidina-l-carboniliEI -2,4-dimetilf enilS nicõhamida. 0 composto titular foi sintetizado de um modo semelhante àquele descrito para o composto 43 para produzir um sólido branco Ú180 mg, 44óõ. m/z úES+õ 512 ÚM+Hõ4 .
Composto 47.1. 6 - úl-ú5-Amino-4 -etil-2 - metilbenzoil[3-4 - fluoropiperidin-4-ilES nicotinonitrila. 0 composto tiular foi sintetizado de um modo semelhante àquele descrito para 42.2 e usando o composto 26.4 em vez do composto 1.5 para produzir um óleo marrom Ú280 mg, 8E3 %õ.
Composto 47.2. 6-Cloro-N-ú5-ú4-ú5-cianopiridin-2-ilõ-4-fluoropiperidina-1-carbonilõ-2-etil-4 - metilfenilõnicotinamida. 0 composto titular foi sintetizado de um modo semelhante àquele descrito para o composto 42.3 para produzir um óleo marrom Ú350 mg, 13 l%õ.
Composto 47. 6-úAzetidin-l-ilõ-N-ú5-ú4-ú5-cianopiridin-2-ilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-2-etil-4-metilfenilõnicotinamida. 0 composto titular foi sintetizado de um modo semelhante àquele descrito para o composto 43 para produzir um sólido branco Ú187 mg, 54%õ, m/z úES+õ 527 ÚM+Hõ+. 1H RMN Ú300 MHz, DMSO-d6Õp δ 0 , 88 ús, 1HÕ, 0 ,06 ÚS, 1HÕ, 8,50 Úd, J = 1,8 Hz, 1H0 , 8,43 Údd, J = 8,4 Hz, J = 2,1 Hz, 1H0 , 8,23 Úd, J = %,3 Hz, 1H0 , 7.81 úd, J = 8,1 Hz, 1H0 , 7,22 ús, 1H0 , 7,17 úbr s, 1H0 , 6,74 údT, = %, 0 Hz, 1H0 , 4,68-4,53 úm, 1H0 , 4,23 ú t J = 7,7 Hz, 4H0 , 3,54- 3,32 úm, 2H0 , 3,22-3,05 úm, 1H0 , 2,5% úqj = 7,5 Hz, 2H0 , 2,50-2,38 úm, 2H0 , 2,35-1,80 úm, 7H0 , 1,14 út, 3H0 .
Composto 48.1. Metil 2-etil-4-metilbenzoato. A uma mistura agitada de ZnBr2 Ú13 g, 57,72 mmol, 2,00 equiv0 em THF Ú230 mLõ sob nitrogénio a 0°C foi adicionado, gota a gota, EtMgBr Ú10 ,5 mL, 3M em THFõ. Após 30 minutos a 0°C, a temperatura foi baixada para -78°C e PdúdppfÕC12 Ú2 g, 2,73 mmol, 0,0% equivõ foi adicionado, seguido por adição gota a gota de uma solução de metil 2-bromo-4-metilbenzoato ú6,6 g, 28,81 mmol, 1,00 equiv0 em tetrahidrofurano ú2OOmL0 . A mistura resultante foi permitida atingir lentamente a temperatura ambiente e agitada sob nitrogénio durante a noite. A mistura de reação foi resfriada bruscamente pela adição cuidadosa de 20 mL de NH4C1 úaq., sat.õ e extraída com 3x100 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1x200 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ30ό como eluente para produzir 3,7 g ú72%õ do composto titular como um óleo incolor.
Composto 48.2. Ácido 2-etil-4-metilbenzóico. Uma mistura do composto 48.1 Ú3,7 g, 20,75 mmol, 1,00 equivó e hidróxido de sódio Ú4 g, 100,01 mmol, 4,82 equivõ em metanol'H20 Ú30'20 mLõ foi agitada durante a noite a 50°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, o solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida. 0 pH da camada aquosa residual foi ajustado para 3-4 com cloreto de hidrogénio úaq., IMõ. 0 precipitado resultante foi coletado por filtração e seco para produzir 3,0 g Ú83%õ do composto titular como um sólido branco.
Composto 48.3. Ácido 2-etil-4-metil-5-nitrobenzóico. A uma mistura agitada de ácido 2-etil-4-metilbenzóico úcomposto 48.2, 2 g, 12,18 mmol, 1,00 equivõ em ácido sulfúrico Ú30 mLõ a -10°C foi adicionada, gota a gota, uma solução de ácido nítrico úl, 6 g, 16,50 mmol, 2,08 equivõ em ácido sulfúrico § 10 mLõ. Após agitação por 30 minutos a 10°C, 200 mL de H20'gelo foram cuidadosamente adicionados e a mistura resultante foi extraída com 50 mL de etil acetato. A fase orgânica foi lavada com 2x50 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. 0 produto bruto foi purificado por recristalização de etil acetato'éter de petróleo na proporção de 1μ10 para produzir 1,0 g 0 37%õ de ácido 2-etil-4-metil-5-nitrobenzóicocomo um sólido amarelo claro.
Composto 48.4. Ácido 5-amino-2-etil-4-metilbenzóico. O composto titular foi sintetizado do 48.3 0 1 g, 4,78mmolõ usando um procedimento similar àquele descrito para a preparação do 1.9 para produzir o composto titular como um sólido rosa claro 0 900 mg, 97%õ.
Composto 48.5. 4-0 1-0 5-Amino-2-etil-4-metilbenzoilõ-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. Uma mistura de ácido 5-amino-2-etil-4-metilbenzóico 0 composto 48.4, 100 mg 0,56 mmol, 1,00 equivS , 4-Ú4-fluoropiperidin-4-ill3 benzohrila úcomposto 11.2, 140 mg, 0,6% mmol, 1,23 equivlEI , HBW Ú320 mg, 0,84 mmol, 1,51 equivlEI e DIEA Ú15Q mg, 1,16 mmcb, 2,08 equivõ em DMF Ú20 mLõ foi agitada por 48 horas à temperatura ambiente. Água Ú30 mLõ foi adicionada e a mistura resultante foi extraída com 3x20 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1x50 mL de salmoura, secas sobre Na2S04 e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com PEpEtOAc ύΐμΐδ para produzir 130 mg ú38%õ do composto titular como um sólido amarelo claro.
Composto 48.6. 6-Cloro-N-ú5-ú4-ú4-cianofenilõ-4- fluoropiperidina-l-carbonilõ-4-etil-2- metilfenilõnicotinamida. 0 composto titular foi sintetizado de um modo semelhante àquele descrito para o composto 42.3 e usando o composto 48.5 em vez do composto 42.2 para produzir um sólido amarelo claro Ú200 mg, 87%õ.
Composto 48. N-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-1-carbonilõ-4-etil-2-metilfenilõ-6 - úisopropilaminoõnicotinamida. 0 composto titular foi sintetizado de um modo semelhante àquele descrito para o composto 43 e usando o composto 48.6 em vez do composto 42.3 para produzir um sólido esbranquiçado Ú32 mg, 30óõ. m/z ÚES+Õ 528 ÚM+Hõ+.
Composto 4%. N-Ú5-Ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-1-carbonilõ-2-metilfenilõ-6-úisopropilaminoõnicotinamida. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 43. m/z úES+õ 500 ÚM+Hõ+.
[
Composto 50.1. terc-Butil 5-ciano-5',6'-dihidro-[2,4'-bipiridina]-1'Ú2'Hõ-carboxilato. A uma mistura agitada de terc-butil 4-Ú5-cianopiridin-2-ilõ-4-hidroxipiperidina-1-carboxilato úcomposto 26.2, 500 mg, 1,65 mmol, 1,00 equivõ em piridina Ú20 mLõ foi adicionado, gota a gota, fosforil tricloreto Ú2,5 g, 16,34 mmol, %,%0 equivõ a 10-15°C. A solução resultante foi agitada por 18 horas a 15~20°C. A reação foi então cuidadosamente resfriada bruscamente pela adição de 20 mL de água e extraída com 3x100 mL de etil acetato. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com 2x50 mL de HC1 aquoso úlMõ, seguido por 1x100 mL de salmoura. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύΙμΙΟΟ a 1μ7ό como eluente para produzir 0,3 g Ú64%õ do composto titular como um sólido amarelo.
Composto 50.2. terc-Butil 4-ú5-cianopiridin-2-ilõpiperidina-l-carboxilato. Um balão de vidro contendo uma solução do composto 50.1 Ú300 mg, 1,05 mmol, 1,00 equivõ em etil acetato ú20 mLõ foi expurgado com gás nitrogénio. Ã solução foi então adicionado paládio em carbono Ú40 mg, 10%õ e o balão de vidro foi adicionalmente expurgado com gás nitrogénio. A atmosfera foi então mudada para hidrogénio e a mistura foi agitada por 16 horas a 15~20°C. Após expurgação do sistema com nitrogénio, os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir 0,2 g Ú66 %õ do composto titular como um óleo amarelo.
Composto 50.3. Cloridrato de 6-úpiperidin-4-ilõnicotinonitrila. Através de uma solução de terc-butil 4-ú5-cianopiridin-2-ilõpiperidina-l-carboxilato úcomposto 50.2, 200 mg, 0,70 mmol, 1,00 equivõ em etil acetato Ú20 mLE foi borbulhado gás HC1. A mistura resultante fd> agitada por 40 minutos a 5-10°C. 0 precipitado resultante foi coletado por filtração e seco para produzir 150 mg ú%7óõ do composto titular como um sE3 lido branco.
Composto 50. N-Ú5-Ú4-ú5-Cianopiridin-2-ilõpiperidina-1- carbonilõ-2-metilfenilõ-6-úisopropilaminoõnicotinamida. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 43, mas usando o composto 50.3 em vez do composto 11.2. m/z úES+õ 483 úM+Hõ+,
Composto 51.1. terc-Butil 4-ú6-bromopiridin-3-ilõ-4- hidroxipiperidina-1-carboxilato. A uma solução de 2,5-dibromopiridina 0 10 g, 42,55 mmol, 1,00 equivõ em tetrahidrofurano Ú400 mLõ sob nitrogénio a -78°C foi adicionado, gota a gota, n-BuLi úl% mL, 2,4M em THFõ. Após 1 hora a -78°C, uma solução de terc-butil 4- oxopiperidina-1-carboxilato ú%, 5 g, 47,74 mmol, 1,12 equivõ em tetrahidrofurano Ú100 mLõ foi adicionada gota a gota. A mistura resultante foi agitada por 1 hora adicional a - 78°C. A reação foi então aquecida para -30°C e cuidadosamente resfriada bruscamente pela adição de 300 mL de água. A mistura resultante foi extraída com 3x200 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1x200 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo úlp3õ como eluente para produzir 5 g Ú33óõ do composto titular como um sS lido amarelo.
Composto 51.2. terc-Butil 4-ú6-cianopiridin-3-ilõ-4- hidroxipiperidina-l-carboxilato. A uma mistura de terc-butil 4-ú6-bromopiridin-3-ilõ-4-hidroxipiperidina-1- carboxilato úcomposto 51.1, 1 g, 2,81 mmol, 1,00 equivõ em DMF Ú50 mLõ sob nitrogénio a 50°C foi adicionado ZnúCNõ2 Ú400 mg, 3,42 mmol, 1,22 equivõ a 50°C, seguido por PdúPPh3õ4 Ú200 mg, 0,17 mmol, 0,06 equivõ a 80°C. A mistura resultante foi então agitada por 1 hora a 120°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi resfriada bruscamente pela adição de 200 mL de FeS04 úaq., sat.õ e diluída com etil acetato. A mistura resultante foi agitada vigorosamente, em seguida, filtrada através de celite e lavada com 1M FeS04, água e etil acetato. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 2x100 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1x200 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ5-1μ3δ como eluente para produzir 0,6 g Ú70I3 õ do compostotitular como um óleo amarelo claro.
Composto 51.3. terc-Butil 6-ciano-5§ , 613 -dihidro- [3,40 -bipiridina] -113 ú20 Hó-carboxilato. A uma solução deetc-butil 4-Ú6-cianopiridin-3-ilõ-4-hidroxipiperidina-l-carboxilato úcomposto 51.2, 600 mg, 1,%8 mmol, 1,00 equivõ em piridina Ú15 mLõ sob nitrogénio a 10-15°C foi adicionado cuidadosamente P0C13 Ú3 g, 1%,74 mmol, %,%7 equivó. Após agitação durante a noite sob nitrogénio em um banho de água'gelo, a mistura foi concentrada e o resíduo foi dissolvido em 50 mL de etil acetato. A fase orgânica foi lavada com 1x50 mL de cloreto de hidrogénio úaq. IMõ, seguido por 1x50 mL de bicarbonato de sódio úaq., sat.ó. A camada orgânica foi então seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύΙμΙΟό como o eluente para produzir 0,26 g Ú460 õ do composto titular como um sólido braco.
Composto 51.4. terc-Butil 4-ú6-cianopiridin-3- ilõpiperidina-l-carboxilato. Um balão de vidro contendo uma solução do composto 51.3 Ú260 mg, 0,%1 mmol, 1,00 equivõ em etil acetato Ú4 0 mLõ foi expurgado com gás nitrogénio. A solução foi então adicionado paládio em carbono ú.0,1 g, 10%, 60% de águaõ e o balão de vidro foi adicionalmente expurgado com gãs nitrogénio. A atmosfera foi então mudada para hidrogénio e a mistura foi agitada por 16 horas a 15~20°C. Após expurgação do sistema com nitrogénio, os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo úlp5õ. Isto resultou em 0,18 g ú6%0 õ do composto titular como um óleo incocbr. í
Composto 51.5. Cloridrato de 5-úpiperidin-4- ilõpicolinonitrila. Em uma solução arrefecida ú5-10°Cõ de terc-butil 4-ú6-cianopiridin-3-ilõpiperidina-l-carboxilato Ú51.4, 180 mg, 0,63 mmol, 1,00 equivõ em etil acetato Ú30 mLõ foi borbulhado gás cloreto de hidrogénio. A mistura foi agitada por 30 minutos a 5-10°C e os sólidos resultantes foram coletados por filtração e secos para produzir 0,11 g Ú780 õ de cloridrato de 5-úpiperidin-4-ilõpicolinonirila como um sólido branco.
Composto 5i. N-ú5-ú4-ú6-Cianopiridin-3-ilõpiperidina-l- carbonilõ-2-metilfenilõ-6-úisopropilaminoõnicotinamida. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares aqueles descritos para o composto 43, mas usando o composto 51,5 em vez do composto 11.2. m/z úES+õ 483 úM+Hõ+.
Composto 52. N-Ú5-Ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-1- carbonilõpiridazin-3-ilõ-6-úisopropilaminoõnicotinamida. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 43. m/z ÚES+õ 470 úM+Hõ+.
Composto 53. 2-úAzetidin-l-ilõ-N-ú5-ú4-ú5-cianopiridin-2-ilõpiperidina-1-carbonilõ-2-metilfenilõpirimidina-5-carboxamida. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 50. m/z úES+õ 482 úM+Hõ+.
Composto 54. 2-úAzetidin-l-ilõ-N-ú5-ú4-ú5-cianopiridin-2-ilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-2-metilfenilõpirimidina-5-carboxamida. O composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 47. m/z úES+õ 500 ÚM+Hõ+.
Composto 55. 6-úAzetidin-l-ilõ-N-ú5-ú4-ú4-cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-2-etilfenilõnicotinamida. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 43. m/z ÚES+õ 512 úM+HcT.
Composto 56. 6-úAzetidin-1-Í1Õ-N-Ú5-Ú4-fluoro-4-ú5 -metoxipiridin-2-ilõpiperidina-l-carbonilõ-2- metilfenilõnicotinamida. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 43. m/z úES+õ 504 ÚM+Hõ+,
Composto 57. 6-úAzetidin-l-ilõ-N-ú2-cloro-5-ú4-ú4- cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõfenilõnicotinamida. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para composto 43. m/z úES+õ 518 ÚM+Hõ+.
Composto 58. N-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-1-carbonilõ-2-etil-4-metilfenilõ-6-morfolinonicotinamida. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 43. m/z úES+õ 556 ÚM+Hõ+.
Composto 60. N-Ú5-Ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-1-carbonilõ-2-etil-4-metilfenilõ-6-úú2- metoxietilõúmetilõaminoõnicotinamida. O composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 43. m/z ÚES+Õ 558 ÚM+HÕ+.
Composto 61. N-Ú5-Ú4-ú5-Cianopiridin-2-ilõ-4- fluoropiperidina-1-carbonilõ-2,4-dimetilfenilõ-2-morfolinopirimidina-5-carboxamida. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 47. m/z ÚES+Õ 544 uM+HÕ+.
Composto 62. N-Ú5-Ú4-ú5-Cianopiridin-2-ilõ-4- fluoropiperidina-l-carbonilõ-2-etil-4-metilfenilõ-2-morfolinopirimidina-5-carboxamida. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 47. m/z ÚES+Õ 558 ÚM+Hõ+.
Composto 63. N-ú5-ú4-ú5-Cianopiridin-2-ilõ-4- fluoropiperidina-l-carbonilõ-2-etil-4-metilfenilõ-6-morfolinonicotinamida. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 47. m/z úES+õ 557 ÚM+Hõ+.
Composto 64. úRõ-1-ú5-Ú4-Ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-2 , 4-dimetilfenilõ-3-úútetrahidrofuran-2-ilõmetilõureia. Uma mistura de 4-úl-ú5-amino-2,4-dimetilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 42.2, 150 mg, 0,43 mmol, 1,00 equivõ, DIEA Ú560 mg, 4,33 mmol, 10,15 equivõ e COÚOCC13Õ2 Ú160 mg, 0,54 mmol, 1,26 equivõ em DCM Ú50 mLõ foi agitada sob nitrogénio à temperatura ambiente. Após 0,5 hora, úRõ-útetrahidrofuran-2-ilõmetanamina Ú52 mg, 0,51 mmol, 1,20 equivõ foi adicionada. Após agitação por 2 horas â temperatura ambiente, a mistura foi lavada com 2x50 mL de água e 1x50 mL de salmoura. A fase orgânica foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo ú~200 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#-Pre-HPLC-006 úWatersõõp Coluna, SunFire Prep Cl8, l%*150mm 5um; fase móvel, água com 0,050 TFA e CH3CN úretenção 5,00 CH3CN em 2 minutos, até 35,00 em 1 imuto, até 65,00 em 12 minutos, até 100,00 em 1 minutoõ; eBector, UV 254/220nm. As fraç0 es contendo composto puro foam combinadas e liofilizadas para produzir 110 mg Ú540Õ do composto titular como um sólido amarelo claro, m/z úES+õ 47% ÚM+HÕ*. 1H RMN Ú300 MHz, DMSO, ppmõp δ 7, %1 úd, J = 8,1 Hz, 2HÕ, 7,77-7,6% úm, 4HÕ, 7,04 ÚS, 1HÕ, 6,68 ÚS, 1HÕ, 4,64 úm, IHõ, 3,8%-3,82 úm, 2HÕ, 3,71 úm, 1HÕ, 3,33-3,23 úm, 3HÕ, 3,11-3,0% úm, 2HÕ, 2,18-2,03 Úm, 8HÕ, 1, %7-l, 84 úm, 4HÕ, 1,57 úm, IHõ.
Composto 65. l-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-2 , 4-dimetilfenilõ-3-útetrahidro-2H-piran-3-ilõureia. 0 composto titular foi sintetizado de um modo semelhante àquele descrito para o composto 64 para produzir um sólido amarelo úlll mg, 53%õ. m/z úES+õ 47(3 ÚM+HÔ. 1H RMN Ú300 MHz, CD3ODõp δ 7,80 Úd, J = 8,1 Hz, 2HÕ, 7,78-7,50 úm, 3Hõ, 7,13 ús, IHõ, 4,88-4,72 úm, IHõ, 3, %4 - 8,82 úm, 1HÕ, 3,82-3,68 úm, 2HÕ, 3,68-3,33 úm, 3HÕ, 3,33-3,1% úm, 2HÕ, 2,42-2,08 úm, 8HÕ, 2,08-1,74 úm, 4HÕ, 1,74-1,54 úm, 2HÕ.
Composto 66. úRõ-1-Ú5-Ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-2 , 4-dinaetilf enilõ-3 -útetrahidrofuran-3 -ilõureia. 0 composto titular foi sintetizado de um modo semelhante àquele descrito para o composto 64 para produzir um sólido amarelo claro Ú105 mg, 53%õ. m/z úES+õ 465 ÚM+Hõ+.
Composto 67. úRõ-1-Ú5-Ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-1-carbonilõ-4-etil-2-metilfenilõ-3-úútetrahidrofuran-2-ilõmetilõureia. 0 composto titular foi sintetizado de um modo semelhante àquele descrito para o composto 64, mas usando o composto 48.5 em vez do composto 42.2. m/z úES+õ 4%3 ÚM+Hõ+.
Composto 68. l-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-4-etil-2-metilfenilõ-3-útetrahidro-2H-piran-3-ilõureia. 0 composto titular foi sintetizado de um modo semelhante àquele descrito para o composto 64, mas usando o composto 48.5 em vez do composto 42.2. m/z úES+õ 4%3 ÚM+Hõ+.
Composto 6%. 1-ú5-Ú4-ú4-Cianofenilõ-4 -fluoropiperidina-1-carbonilõ-2-metilfenilõ-3-útetrahidro-2H-piran-4-ilõureia. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 64. m/z úES+õ 465 ÚM+Hõ+.
Composto 70. 1-Ú5-Ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-1-carbonilõ-2-metilfenilõ-3-útetrahidro-2H-piran-3-ilõureia. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 64. m/z úES+õ 465 ÚM+Hõ+.
Composto 71. l-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-1-carbonilõ-2-metilfenilõ-3-ciclopentilureia. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 64. m/z ÚES+õ 44% úM+Hõ+.
Composto 72. úRõ-l-ú5-ú4-ú5-Cianopiridin-2-ilõ-4- fluoropiperidina-1-carbonilõ-2-metilfenilõ-3-útetrahidrofuran-3-ilõureia. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 64. m/z ÚES+õ 452 ÚM+Hõ+.
Composto 73. úRõ-1-Ú5-Ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina- 1-carbonilõ-2-metilfenilõ-3-útetrahidrofuran-3-ilõureia. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para composto 64. m/z úES+õ 451 úM+Hõ+.
Composto 74. l-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-2 -metoxifenilõ-3-útetrahidrofuran-3 -ilõureia. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 64. m/z ÚES+Õ 467 ÚM+Hõ+.
Composto 75. l-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-2 -fluorofenilõ-3-útetrahidrofuran-3 -ilõureia. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 64. m/z úES+õ 455 ÚM+Hõ+.
Composto 76. l-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l- carbonilõ-2-etilfenilõ-3-útetrahidrofuran-3-ilõureia. Ο composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para composto 64. m/z úES+õ 465 úM+Hõ+.
Composto 77. l-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-2-útrifluorometilõfenilõ-3-útetrahidrofuran-3-ilõureia. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 64. m/z úES+õ 505 úM+Hõ+.
Composto 78. úRõ-1-Ú5-Ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina- 1-carbonilõ-2-metilfenilõ-3-úútetrahidrofuran-2-ilõmetilõureia. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 64. m/z úES+õ 465 ÚM+Hõf.
Composto 7%. l-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-1-carbonilõ-2-metilfenilõ-3-ú2-metoxietilõureia. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 64. m/z úES+õ 43% ÚM+Hõ+.
[0617] Composto 80.1. úRõ-Tetrahidrofuran-3-il IH-imidazol- 1-carboxilato. Uma solução de 0 Rõ-tetrahidrofuran-3ol 0 500 mg, 5,68 mmol, 1,00 equivõ e GDI B 2 g, 12,33 mmol, 2,17 equivõ em tetrahidrofurano B 50 mLõ foi agitada durate a noite sob nitrogénio a 60°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em 30 mL de DCM e lavado com 1x50 mL de H20. A camada orgânica foi seca úNa2S04õ e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo úl:ló para produzir 0,%5 g ú%2B õ do composto titular como um sólido branco.
Composto 80. úRõ-Tetrahidrofuran-3-ilú5-Ú4-ú4-cianofenilõ-4 -fluoropiperidina-1-carbonilõ-2,4-dimetilfenilõcarbamato.
Uma mistura do composto 42.2 Ú200 mg, 0,57 mmol, 1,00
equivõ, úRõ-tetrahidrofuran-3-il lH-imidazol-l-carboxilato ú 80.1, 124 mg, 0,68 mmol, 1,20 equivõ e DBU Ú2,6 mg, 0,02 mmol, 0,03 equivõ em DMF Ú50 mLõ foi agitada por 16 horas sob nitrogénio a 120°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi resfriada bruscamente pela adição de 200 mL de água. A mistura resultante foi extraída com 3x100 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1x100 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo Ú200 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiç0 es úl#-Pre-HPLC-002 úAgilentõõp Coluna, Sunfre Prep C18, l%*150mm 5um; fase móvel, água com 0,050 TFA eCH3CN Ú40,00 CH3CN até 45,00 em 8 minutos, retenção 45,00 em 2 minutos, até 100,00 em 1 minuto, abaixo de 40,00 err2 minutosõ; Detectorp UV 220 254nm. 47,4 mg de produto foram obtidos. As frações contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 47,4 mg úl8%õ do composto titular como um sólido branco, m/z úES+õ 466 ÚM+Hõ+.
Composto 81. l-Acetilpirrolidin-3-ilú5-ú4-ú4-cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-2,4-dimetilfenilõcarbamato. 0 composto titular foi sintetizado de um modo semelhante àquele descrito para o composto 80 para produzir um sólido branco Ú113 mg, 3%0 õ. m/z úES+õ 507 úM+HcÚ . ’Ή RMN Ú300 MHz, CD30Dõp δ 7,80 úd, J = 8,1 Hz, 2HÕ, 7,77-7,61 úm, 2HÕ, 7,52 É 7,33 Ú2 br singletos, rotâmeros de amida, Ar-H, 1HÕ, 7,17 ÚS, 1HÕ, 5,41-5,28 úm, 1HÕ, 4,87-4,72 úm, 1HÕ, 3,88- 3,42 úm, 6HÕ, 3,33-3,1% úm, 1HÕ, 2,42-1,82 úm, 15HÕ.
[0620] Composto 82. úRõ-Tetrahidrofuran-3-ilú5-ú4-ú4-cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carboniló-2- metilfenilõcarbamato. 0 composto titular foi sintetizado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles descritos para o composto 80. m/z úES+õ 4 52 ÚM+Hõ+.
[0621] Os compostos na tabela a seguir foram preparados usando manipulações químicas padrão, materiais primários prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2μ
Composto 105. 4- Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú6-úpirrolidin-l-ilõ-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 20, com exceção do composto sal HC1 11.2 sendo usado em vez do composto 1.5. m/z úES+õ 523 ÚM+Hõ+.
Composto 106. 4-úl-ú5-ú6-úAzetidin-l-ilõ-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-4-fluoro-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 20, com exceção de ácido 4-fluoro-2-metilbenzóico e azetidina sendo usados em vez de ácido 2,4-dimetilbenzóico e pirrolidina, respectivamente. m/z úES+õ 4%5 úM+Hõ+.
Os compostos na tabela a seguir foram preparados usando manipulaçS es químicas padrão, materiais primários prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 20μ
Composto 118.1. Tetrametil 2-Ú4-metoxifenilõpropano-1,1,3,3-tetracarboxilato. Uma mistura de ÚEÕ-N-Ú4-metoxibenzilidenoõ-4- metilbenzenossulfonamida Ú2,8% g, 10 mmolõ, dimetil malonato ú3,43 mL, 30 mmolõ, t-BuOK ú2,24 g, 20 mmolõ em t-BuOH anidro Ú20 mLõ foi aquecida a 50 0C por 4 horas. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi despejada em NH4C1 aquoso saturado e extraída com CH2C12 ú3xõ. A camada orgânica combinada foi seca sobre MgS04, filtrada e então concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash com EtOAc em hexano Ú10%, 20%, 30% e, então, 40%õ para produzir o composto titular como um óleo límpido ú3,255 g, 85% de rendimentoõ.
Composto 118.2. Ácido 3-ú4-metoxifenilõpentanodióico e ácido 3-Ú4-hidroxifenilõpentanodióico. Uma mistura de tetrametil 2-Ú4-metoxifenilõpropano-1,1,3,3-tetracarboxilato úcomposto 118.1, 6,0 g, 15,7 mmolõ em HC1 concentrado ú37%, 80 mLõ foi aquecida sob refluxo durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a suspensão foi filtrada. 0 filtrado foi lavado com água e seco sob vácuo para produzir 2,66 g de produto como uma mistura de ácido 3-Ú4-metoxifenilõpentanodióico úmaior, LCMS observado [M-H]" 237õ e ácido 3-Ú4-hidroxifenilõpentanodióico úmenor, LCMS observado [M-H]' 223Õ.
Composto 118.3. Dimetil 3-Ú4-metoxifenilõpentanodioato. Uma mistura do produto úcomposto 118.2õ obtido da etapa anterior Ú2,66 gõ, K2C03 Ú6,56 g, 47,5 mmolõ e CH3I ú3 mL, 47,5 mmolõ em DMF úlO mLõ foi aquecida a 50°C em um tubo de pressão durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi despejada em NaHC03 aquoso saturado e extraída com EtOAc ú3xõ. 0 extrato orgânico combinado foi seco sobre MgS04, filtrado e concentrado. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash com EtOAc em hexano Ú20%, 30%, 40% e, então, 50%õ para produzir o composto titular como um óleo límpido Ú2,0 g, 48% de rendimento ao longo de duas etapasõ.
[0628] Composto 118.4. Dimetil 3-Ú4-metoxifenilõciclopropano-1,2-dicarboxilato. A uma solução de LDA úl8,8 mmolõ em THF Ú60 mLõ a -78°C foi adicionada uma solução de dimetil 3-Ú4-metoxifenilõpentanodioato Ú2,0 g, 7,52 mmolõ em THF úlO mLõ gota a gota. Após agitação a -78°C por 1 hora, o banho de gelo seco-acetona foi removido. A mistura de reação foi agitada por 30 minutos antes de ser arrefecida para -78°C. Sólido AgCl Ú2,2 g, 15,4 mmolõ foi adicionado de uma só vez. A mistura de reação foi agitada a -78°C por 1 hora e depois à temperatura ambiente durante a noite. NH4C1 aquoso saturado foi adicionado. A mistura foi vigorosamente agitada por 10 minutos. A suspensão foi filtrada através de celite. 0 filtrado foi extraído com EtOAc Ú3xõ. 0 extrato orgânico combinado foi seco sobre MgS04, filtrado e concentrado. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash com EtOAc em hexano Ú10%, 15%, 20% e, então, 30%õ para produzir o composto titular como um sólido amarelo claro Ú0,87 g, 44% de rendimentoõ. RMN ÚCDCI3, 400Ηζομ δ 7,0® úd, J = 8,8 Hz, 2HÕ, 6,86 úd, J = 8,8 Hz, 2HÕ, 3,82 ÚS, 3HÕ, 3,77 ús, 6HÕ, 3,17 út, J = 7,6 Hz, 1HÕ, 2,36 úd, J = 7,6 Hz, 2HÕ.
Composto 118.5. Ácido 3-Ú4-metoxifenilõciclopropano-1,2 -dicarboxílico. Uma mistura de dimetil 3-Ú4 -metoxifenilõciclopropano-1,2-dicarboxilato Ú0,88 g, 3,33 mmolõ e LiOH ú2 M em H20, 10 mLõ em THF Ú30 mLõ foi agitada a 55°C durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi despejada em IN HC1 e extraída com EtOAc ú3xõ. 0 extrato orgânico combinado foi seco sobre MgS04, filtrado e concentrado para produzir o composto titular como um sólido amarelo claro.
Composto 118.6. 6-ú4-Metoxifenilõ-3-oxabiciclo[3.1.0]hexano-2,4-diona. Uma mistura de ácido 3- ú4-metoxifenilõciclopropano-l,2-dicarboxílico úproduto bruto da etapa anteriorõ em Ac20 Ú20 mLõ foi aquecida sob refluxo por 1 hora. 0 excesso de Ac20 foi removido sob pressão reduzida. 0 produto bruto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.
Composto 118.7. 3-ú4-Metoxibenzilõ-6-ú4-metoxifenilõ-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2,4-diona. Uma mistura de 6-Ú4-metoxifenilõ-3-oxabiciclo[3.1.0]hexano-2,4-diona úproduto bruto da etapa anteriorõ e ú4-metoxifenilõmetanamina foi aquecida a 180°C por 1,5 hora. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi dissolvida em CH2C12 e purificada por cromatografia em coluna flash com EtOAc em hexano ú20%, 3 0% e, então, 4 0%õ para produzir o composto titular como um sólido amarelo ú0,71 g, 63% de rendimento ao longo de três etapasõ. MS [M+H]+ μ 338.
Composto 118.8. 3-Ú4-Metoxibenzilõ-6-Ú4-metoxifenilõ-3-azabiciclo[3.1.0]hexano. Uma mistura de 3-Ú4-metoxibenzilõ-6-Ú4-metoxifenilõ-3-azabiciclo[3.1.0 3 hexano-2,4-diona Ú0,86 g, 2,6 mmolõ, NaBH4 Ú0,2Ê3 6 g, 7,8 mmolõ e BF eterato úl,0 mL, 7,8 mmolõ em THF foi aquecida sob refluxo durante a noite. Após arrefecimento para 0°C, uma solução de piperazina ú2 gõ em H20 Ú20 mLõ foi adicionada. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas, despejada em H20 e extraída com EtOAc Ú3xõ. 0 extrato orgânico combinado foi seco sobre MgS04, filtrado e então concentrado. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash com EtOAc em hexano úlOó, 206 e, então, 30óõ para produzir um s0 lido branco. A uma suspensão dos0 lido em THF Ú20 mLõ e H20 Ú10 mLõ foi adicionada piperazina Ú3 gõ. Ap0 s aquecimento da mistura sob refluxo durante a noite, esta foi despejada em salmoura e extraída com EtOAc Ú3xõ. 0 extrato orgânico combinado foi seco sobre MgS04, filtrado e concentrado para produzir o composto titular como um sólido branco Ú0,51 g, 6 5% de rendimentoõ. MS [M+H] + μ 310 .
Composto 118.0 . 6-ú4-Metoxifenilõ-3- azabiciclo[3.1.0]hexano. A uma solução de úlR,5S,6SÕ-3-Ú4-metoxibenzilõ-6-ú4-metoxifenilõ-3-azabiciclo[3.1.0]hexano Ú0,5 g, 1,6 mmolõ em DCE Ú30 mLõ a 0°C foi adicionado 1-cloroetil cloroformato Ú0,21 mL, 1, % mmol, 1,2 equivõ. A mistura de reação foi agitada a 0°C por 30 minutos, aquecida sob refluxo por 1 hora e então concentrada sob pressão reduzida. MeOH u2Q mLõ foi adicionado. A mistura resultante foi aquecida sob refluxo por 40 minutos e então concentrada. 0 resíduo foi purificado por TLC preparativa para produzir o composto titular como um sólido cristalino branco Ú155 mg, 51% de rendimentoõ. MS [M+H]+ μ 10 0.
Composto 118.10. Ú3-Amino-4-metilfenilõúô-Ú4-metoxifenilõ- 3- azabiciclo[3.1.0]hexan-3-ilõmetanona. Uma mistura de 6-ú4-metoxifenilõ-3- azabiciclo[3.1.0]hexano Ú0,124 g, 0,82 mmolõ, ácido 3-amino-4-metilbenzóico Ú0,155 g, 0,82 mmolõ, 1-etil-3-Ú3-dimetilaminopropilõcarbodiimida úEDCI, 0,172 g, 0, %0 mmolõ, 1-hidroxibenzotriazol ú~2O0 |D, 0,122 g, 0, %0 mmolõ e diisopropiletilamina Ú0,71 mL, 4,1 mmolõ em DMF ú3 mLõ foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi despejada em NaHC03 aquoso saturado e extraída com EtOAc Ú3xõ. 0 extrato orgânico combinado foi seco sobre MgS04, filtrado e concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash com EtOAc em hexano Ú6O0 e, então, 1000 õ para produzir o compost titular como uma espuma branca Ú0,15 g, 570 de rendmentoõ.
Composto 118.11. 6-Cloro-N-ú5-ú6-ú4-metoxifenilõ-3 - azabiciclo[3.1.0]hexano-3 -carbonilõ-2 - metilfenilõnicotinamida. A uma solução de Ú3-amino-4- metilfenilõú6-ú4-metoxifenilõ-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-ilõmetanona Ú150 mg, 0,47 mmolõ e Et3N Ú0,25 mL, 1,8 mmolõ em CH2C12 ú4 mLõ a 0°C foi adicionado 6- cloronicotinoil cloreto Ú106 mg, 0,6 mmolõ. O banho de gelo foi removido após a adição. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 1,5 horas e, em seguida, purificada por cromatografia em coluna flash com EtOAc em hexano ú60% e, então, 100%õ para produzir o composto titular como uma espuma branca ÚO, 172 g, 80S de rendimentoõ. MS [M+H]+ μ 462, 464.
Composto 118. 6-úIsopropilaminoõ-N-ú5-ú6-ú4-metoxifenilõ-3-azabiciclo[3.1.0]hexano- 3 -carbonilõ-2 - metilfenilõnicotinamida. Uma mistura de 6-cloro-N-ú5-ú6-ú4-metoxifenilõ-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carbonilõ-2 -metilfenilõnicotinamida úcomposto 118.11, 0,107 g, 0,23 mmolõ e isopropilamina úl, 5 mLõ em DMSO úl, 5 mLõ foi aquecida a 120°C em um tubo de pressão selado durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi despejada em NaHC03 aquoso saturado e extraída com EtOAc Ú3xõ. O extrato orgânico combinado foi seco sobre MgS04, filtrado e concentrado. 0 resíduo foi triturado com hexano para produzir o composto titular como um pS branco Ú4 0 mg, 36ó de rendimentoõ. MS [M+H]μ 485. RMN úDMS0-d6, 400Hz 0μ δ %, 63 ÚS, 1HÕ, 8,6% Úd, J = 3 Hz, 1HÕ, 7, %5-7, %0 úm, 1HÕ, 7,55-7,51 úm, 1HÕ, 7,3%-7,30 úm, 2HÕ, 7,10-7,03 úm, 3HÕ, 6,84 úd, J = %,2 Hz, 2HÕ, 6,52 úd, J = %,2 Hz, 1HÕ, 4,17-4,07 úm, 2HÕ, 3,85-3,77 úm, 1HÕ, 3,74 ús, 3HÕ, 3,65-3,51 úm, 2HÕ, 2,30 ÚS, 3HÕ, 1,87 ús, 2HÕ, 1,6% út, J = 3,7 Hz, 1HÕ, 1,20 úd, J = 7,2 Hz, 6HÕ.
Composto 11%· 6-úEtilaminoõ-N-ú5-ú6-ú4-metoxifenilõ-3- azabiciclo[3.1-0]hexano-3 -carbonilõ-2 - metilfenilõnicotinamida. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 118. MS [Μ+ΗΓ μ 471. XH RMN ÚDMS0-d6, 400Ηζομ δ %, 62 ús, 1HÕ, 8,66 Úd, J = 2,4 Hz, 1HÕ, 7,%1 Údd, J = 2,4, %,0 Hz, 1HÕ, 7,50 ús, 1HÕ, 7,34-7,24 úm, 2HÕ, 7,18 út, J = 6,0 Hz, 1HÕ, 7,02 úd, J = 8,8 Hz, 2HÕ, 6,81 úd, J = 8,8 Hz, 2HÕ, 6,50 úd, J = %, 2 Hz, 1HÕ, 4,08 úd, J = 12,4 Hz, 1HÕ, 3,81-3,75 úm, 1HÕ, 3,70 ús, 3HÕ, 3,5% úd, J = 11,2 Hz, 1HÕ, 3,52 úd, J = 13,2 Hz, 1HÕ, 3,37-3,30 úm, 2HÕ, 2,26 ús, 3HÕ, 1,84 ús, 2HÕ, 1,66 út, J = 3,2 Hz, 1HÕ, 1,16 út, J = 8,4 Hz, 3HÕ.
Composto 120. 1-Ú5-Ú6-Ú4-Metoxifenilõ-3- azabiciclo[3.1.0]hexano-3 -carbonilõ-2-metilfenilõ-3-útetrahidrofuran-3-ilõureia. O composto titular foi preparado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 64 e 118. m/z úES+õ 436 ÚM+Hõ+.
Composto 121.1. 4-Ú1-Ú3-Amino-4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Uma solução de ácido 3-amino-4-metilbenzóico úl,36 g, %,0 mmolõ, sal HC1 de Ú4-úpiperidin- 4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 2,0 g, %, 0 mmolõ, EDCI úl,8% g, %,% mmolõ, HOBT úl,66 g, %,% mmol, com 200 H2Oõ e DIEA ú3,13mL, 18.0 mmolõ em DMF Ú50 mlõ foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi despejada em água fria Ú300 mlõ e os sólidos esbranquiçados precipitados. 0 precipitado foi filtrado, lavado com água e seco sob pressão reduzida em um forno para produzir 2,88 g Ú100%õ do composto titular, m/z úES+õ 320 ÚM+HÕ+ .
Composto 121. 6-ÚÚ5-Ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-metilfenilõaminoõ-N-isopropilnicotinamida. Uma mistura de 6-cloro-N-isopropilnicotinamida Ú0,055 g, 0,26 mmolõ, 4-úl-Ú3-amino-4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila Ú121.1, 0,1 g, 0,31 mmolõ, K2C03 Ú0,171 g, 1,24 mmolõ, PdúOAcõ2 Ú6,7 mg, 0,03 mmolõ e o ligante Ú10,2 mg, 0,03 mmolõ em tolueno Ú5 mLõ foi aquecida a %0°C sob argônio por 3 horas. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com H20 e extraída com EtOAc. 0 extrato orgânico combinado foi seco sobre MgS04, filtrado e concentrado. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash com EtOAc em hexano Ú60ó, 80ó e, então, lOOóõ para produzir o composto titular como um pó esbranquiçado após liofilização de CH3CN'H20 úll,2 mg, %0 de rendimentoõ.m/z úES+õ 482 ÚM+Hõ+ .
Composto 122. 4-úl-ú4-Metil-3-úú5-ú4-metilpiperazina-l-carbonilõpiridin-2-ilóaminoõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 121, substituindo K2C03 por t-BuONa. m/z úES+S 524 úM+HlH.
Composto 123. N-Ú4-ú4-ú4-CianofenilE piperidina-1- carbonilH piridin-2-il0 -6-úpirrolidin-l-ilE nicotimda. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 43, e usando ácido 2 - aminoisonicotínico em vez de ácido 3-amino-4-metilbenzóico. m/z úES+õ 481 ÚM+HÕ+ ·
Composto 124. 1-Ú4-ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-l- carbonilõpiridin-2-ilõ-3-isobutilureia. 0 composto titular
foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 64, e usando ácido 2-aminoisonicotínico em vez de ácido 3-amino-4-metilbenzóico. m/z ÚES+0 406 úM+HHL
Composto 125. N-ú4-ú4-ú4-CianofenilB piperidina-1-
carbonil® piridin-2-ilS pirrolidina-l-carboxamida. Qomposto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 64, e usando ácido 2-aminoisonicotínico em vez de ácido 3-amino-4-metilbenzóico. m/z úES+0 404 úM+HHL
Composto 126. N-Ú3-Ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-1-carbonilõ-2,4-dimetilfenilõ-6-úisopropilaminoõnicotinamida. 0 composto titular foi preparado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 43, e usando ácido 3-amino-2,6-dimetilbenzóico em vez de ácido 3-amino-4-metilbenzóico. m/z ÚES+0 514 ÚM+H®.
Composto 127. 4-úl-ú5-ú5-Etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-etil- 4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 3%. m/z 0 ES+õ 445 0 M+Eõ
Composto 128. 4-® 1-0 3-0 5-0 Metoximetilõ-4H-l,2,4afc©l-3- ilõ-4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-metil-3-ú5-útetrahidrofuran-3-il0 -4H-1,2,4friazol- 3- ilB benzoilS piperidin-4-il0 benzonitrila úcompostôSS . m/z ÚES+Õ 416 ÚM+Hõ+.
Composto 12%. 4-Ú1-Ú3-ú5-úMetoximetilõ-4H-l,2,4-triazol-3- ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 38. m/z úES+õ 402 úM+Hõ+.
Composto 130.1. Metil 5-carbamotioil-2,4-dimetilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 5-ciano-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 2.3, 1,78 g, %,41 mmol, 1,00 equivõ em tetrahidrofurano'H20 Ú30'3 mLõ. 0,00 -dietil ditiofosfato Ú3,30 g, 17,7 mmol, 2,00 equivõ foi adicionado e a mistura resultante foi agitada por 2 dias a 85°C ÚPRECAUÇÃO: ocorrência de evolução de gás significativa -esta e todas as outras reações descritas aqui devem ser realizadas em capelas químicas bem ventiladasS . Apé arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi extraída com 2x50 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. 0 resíduo bruto foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύΙμΙΟδ como eluente para fornecer 1,20 g Ú57 I õ do composto titular como um sólido aarelo.
Composto 130.2. Metil 5-úiminoúmetiltioõmetilõ-2,4 - dimetilbenzoato. A uma solução de metil 5-carbamotioil-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 130.1, 3,10 g, 12,5 mmol, 1,00 equiv, %O0 õ em tetrahidrofurano Ú3Q mLõ foi adicioado CH3I Ú3,%5 g, 27,8 mmol, 2,00 equivõ e a mistura resultante foi agitada durante a noite a 25°C. A camada orgânica foi lavada com 2x3 0 mL de Na2S204 úaq.õ e 1x30 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo. Isto resultou em 2,10 g Ú640 õ de metil 5- úiminoúmetiltioõmetilõ-2,4-dimetilbenzoato como um óleo amarelo.
Composto 130.3. Metil 2-útetrahidrofuran-3-ilõacetato. Uma mistura de ácido 2-útetrahidrofuran-3-ilõacético ú2,00 g, 15,4 mmol, 1,00 equivõ e ácido sulfS rico ú2 mLõ emmetano1 Ú20 mLõ foi agitada por 3horas a 80°C em um banho de óleo. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi diluída com 50 mL de éter e lavada com 2x20 mL de água, 2x20 mL de bicarbonato de sódio úaq., sat. Observaçãop evolução de gásõ e 2x 20 mL de salmoura. A fase orgânica foi então seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo para produzir 1,50 g ú58%õ do composto titular como um óleo amarelo.
Composto 130.4. 2-úTetrahidrofuran-3-ilõacetohidrazida. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 2-útetrahidrofuran-3-ilB acetato úcomposto 130.3, 1,50g, 10,4 mmol, 1,00 equivE e N£NH2 · H20 úl, 04 g, 20,8 mmol, 2,00 equivS em metanol Ú15 mLl3 . A mistura resultante foàgitada durante a noite a 80°C em um banho de óleo. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrado in vacuo para produzir 1,20 g Ú80%B do composto titular como um óleo amarelo.
Composto 130.5. Metil 2,4-dimetil-5-ú5-úútetrahidrofuran-3-ilS metilS -4H-1,2,4-triazol-3-il0 benzoato. A um balãde vidro foi adicionada uma solução de 2-útetrahidrofuran-3 -ilS acetohidrazida úcomposto 130.4, 1,20 g, 8,32 mmó, 1,50 equivõ em ácido acético Ú4 mLõ. Metil 2,4-dimetil-5-úmeti1sulfanilõcarboximidoilbenzoato úcomposto 130.2, 1,30 g, 5,48 mmol, 1,00 equivõ foi adicionado e a mistura resultante foi agitada durante a noite a 100°C em um banho de óleo. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada in vacuo. 0 resíduo foi diluído com 50 mL de etil acetato, depois lavado com 2x20 mL de água e 2x20 mL de salmoura. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ0μ1-1μ10-1μ1δ como eluente para fornecer 0,600 g ú35%õ do composto titular como um sólido amarelo.
Composto 130.6. Ácido 2,4-dimetil-5-ú5-úútetrahidrofuran-3-ilõmetilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzóico. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 2,4-dimetil-5-ú5-úútetrahidrofuran-3-ilõmetilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoato úcomposto 130.5, 600 mg, 1,0 0 mmol, 1,0 equivó em metanol Ú10 mLõ. Uma solução de hidróxido de sódio Ú381 mg, 0 ,53 mmol, 5,00 equivó em água Ú5 mLõ foi adiccbnada e a mistura resultante foi agitada por 3 horas a 7 0°C em um banho de óleo. Após arrefecimento para temperatura ambiente, o solvente orgânico foi então removido sob pressão reduzida e o pH da fase aquosa remanescente foi ajustado para 3-4 com cloreto de hidrogénio úaq. , IMõ. Os sólidos resultantes foram coletados através de filtração e secos em um forno sob pressão reduzida para produzir 0,500 g Ú87%õ do composto titular como um sólido amarelo.
Composto 130. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú5-úútetrahidrofuran-3- ilõmetilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Uma mistura do composto 130.6 Ú200 mg, 0,660 mmol, 1,00 equivõ, EDCI Ú253 mg, 1,32 mmol, 2,00 equivõ, DMAP Ú243 mg, 1,%% mmol, 3,00 equivõ e cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1,5, 148 mg, 0,660 mmol, 1,0 0 equivõ em DMF ú5 mLõ foi agitada por 3 horas a 25°C, então diluída com 50 mL de etil acetato. A camada orgânica foi lavada com 2x10 mL de água, 2x10 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo. 0 produto bruto ú~300 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiç0 es úl#-Pre-HPLC-01 úShimadzuõõp Coluna, SunFire Prep C18, l%*150mm 5um; fase móvel, água com 0,050 TFA e CiCN Ú280 C|EN até 520 em 8 minutos, até 1000 em 1 minuto, abaixo de 280 em 1 imutoõ,* Detector, Waters 248% 254&amp;220nm. As fraç0 es contend composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 168 mg Ú520 õ do composto titular como um sólido braco. m/z ÚES+Õ 470 ÚM+Hõ+. XH RMN Ú400 Hz, CD30Dõp δ 7,68 úd, J = 8,0 Hz, 2Hõ, 7.61 ús, 1HÕ, 7,50-7,4% úm, 2HÕ, 7,33-7,31 úm, 1HÕ, 4 , %0-4,88 úm, 1HÕ, 3 , %5-3 , %2 úm, 2HÕ, 3 , %0-3,81 úm, 1HÕ, 3,7%-3,77 úm, 1HÕ, 3,6%-3,55 úm, 1HÕ, 3,28-3,25 úm, 1HÕ, 3,03-2, %4 úm, 4HÕ, 2,81-2,73 úm, 1HÕ, 2,53 ús, 3HÕ, 2,43 e 2,33 Ú2s, rotâmeros de amida, Ar CH3, 3Hõ, 2, l%-2,15 úm, 1HÕ, 2,13-2,05 úm, 1HÕ, 1,%4-l,68 úm, 4HÕ.
Composto 131. 4-úl-ú5-ú5-ú2-Metoxietilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú5-úútetrahidrofuran-3-ilõmetilõ-4H-1,2,4 -triazol-3 -ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 130õ, usando 3- metoxipropanohidraz ida úcomposto 143.lõ em vez de 2 -útetrahidrofuran-3-ilõacetohidrazida úcomposto 130.4õ. m/z ÚES+Õ 444 ÚM+HÕ+ .
Composto 132 . 4-úl-ú5-ú5-úMetoximetilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú5-úútetrahidrofuran-3-ilõmetilõ-4H-l,2,4-triazol-3 -ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 13Oõ, usando 2- metoxiacetohidrazida úcomposto 1%0.6Õ em vez de 2-útetrahidrofuran-3-ilõacetohidrazida úcomposto 130.4õ. m/z ÚES+Õ 43 0 ÚM+Hõ+ .
Composto 133.1. ú.Rõ-Tetrahidrofuran-2-carbohidrazida. Uma mistura de ácido ÚR0 -tetrahidrofuran-2-carboxílicoúS,00 g, 43,1 mmol, 1,00 equivB , EDCI Ú12,4 g, 64,6 mmol, 150 equivõ e HOBt Ú8,70 g, 64,4 mmol, 1,50 equivõ em diclorometano Ú100 mLõ foi agitada por 30 minutos a 25°C. À mistura foi então adicionada hidrazina ú2,00 g, 62,4 mmol, 1,50 equivõ gota a gota. A mistura resultante foi gitada durante a noite a 25°C. Os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado in vacuo para fornecer 25,0 g úbrutoS de ÚR0 -tetrahidrofuran-2-carbohidrazida como um óleo amarelo.
Composto 133. úi?IEI -4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú5-útetrahidrofuran- 2-i 113 -4H-1,2,4-triazol-3-ilS benzoilS piperidin-4-ilS benzonitrila. 0 composto titular foi preparado aando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú5-úútetrahidrofuran-3-ilõmetilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 130õ, usando úRõ-tetrahidrofuran-2-carbohidrazida úcomposto 133.lõ em vez de 2-útetrahidrofuran-3-ilõacetohidrazida úcomposto 130.4õ. m/z ÚES+Õ 446 ÚM+Hõ+ .
Composto 134.1. Etil 2-hidrazinil-2-oxoacetato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de dietil oxalato ú.10,0 g, 68,4 mmol, 1,00 equivõ em etanol Ú100 mLõ. Hidrato de hidrazina ú2,75 g, 85,8 mmol, 1,00 equivõ foi adicionado e a mistura resultante foi agitada por 3 horas a 80°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, os sólidos foram removidos via filtração e o filtrado foi concentrado in vacuo para produzir 8,00 g Ú80óõ do composto titular como um óleo incolor.
Composto 134.2. 2-Hidrazinil-N-metil-2-oxoacetamida. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de etil 2 -hidrazinil-2-oxoacetato úcomposto 134.1, 300 mg, 2,04 mmol, 1,00 equiv, %0óõ em metanol Ú10 mLõ. Metil amina Ú10 mL, 400 em águaõ foi adicionada e a mistura resultante foi agitada durante a noite a 70°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, os sólidos foram coletados por filtração e secos para produzir 250 mg ú%40 õ do coposto titular como um sólido branco.
Composto 134. 5-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ- 2.4- dimetilfenilõ-N-metil-4H-1,2,4-triazol-3-carboxamida. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 130, usando o composto 134.2 em vez do composto 130.4. m/z ÚES+Õ 443 ÚM+Hõ+. XH RMN Ú300 MHz, CD30Dõp δ 7,6% úd, J = 8,1 Hz, 2HÕ, 7,62-7,43 úm, 3HÕ, 7,32 ús, lHõ, ~4, % úlH parcialmente obscurecido por pico de ãguaS , 3,73-3,58 úm, 1H0 , 3,32-3,18 úm, 1H parciaèmte obscurecido por pico de solvente met ano 118 , 3,07-1,% úm, 5Hõ, 2,58 ús, 3Hõ, 2,43 &amp; 2,33 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3Hõ, 2,10-1,%3 úm, IHõ, 1,%3-l,52 úm, 3Hõ .
Composto 135.1. 2-Hidrazinil-i\r, JV-dimetil-2-oxoacetamida. A um balão de vidro foi adicionado etil 2-hidrazinil-2-oxoacetato úcomposto 134.1, 2,00 g, 13,6 mmol, 1,00 equiv, %0%õ. Dimetilamina Ú10 mLõ foi adicionada à reação e, em seguida, a reação foi agitada durante a noite a 70°C em um banho de óleo. A mistura foi arrefecida para temperatura ambiente e concentrada in vacuo para produzir 1,50 g Ú76%õ do composto titular como um óleo incolor.
Composto 135. 5-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ- 2.4- dimetilf enilõ-27, N-dimetil-4H-l, 2,4-triazol-3- carboxamida. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú5-úútetrahidrofuran-3-ilõmetilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1305, usando 2 -hidraz inil -ΛΓ, JV-dimet il - 2 -oxoacetamida úcomposto 135.lõ em vez de 2-útetrahidrofuran-3-ilõacetohidrazida úcomposto 13 0.4Õ. m/z úES+õ 457 ÚM+Hõ+.
Composto 136.1. úSõ-Tetrahidrofuran-2-carbohidrazida. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de ácido úSõ-tetrahidrofuran-2-carboxílico ú3,00 g, 23,3 mmol, 1,00 equiv, %0%õ em diclorometano Ú40 mLõ. NH2NH2 Ú2 mL, 2,00 equivõ, HOBt Ú5,20 g, 38,5 mmol, 1,50 equivõ e EDCI Ú7,50 g, 3%, 1 mmol, 1,50 equivõ foram adicionados e a mistura resultante foi agitada durante a noite a 25°C. Os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado in vacuo para fornecer 2,50 g Ú74%õ de úSõ-tetrahidrofuran- 2-carbohidrazida como um óleo amarelo.
Composto 136. úSõ-4-úl-ú2,4-Dimetil-5-ú5-útetrahidrofuran-2-Í1Õ-4H-1,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú5- úútetrahidrofuran-3-ilõmetilõ-4H-1,2,4 -triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 130õ, usando úSõ-tetrahidrofuran-2-carbohidrazida úcomposto 136.lõ em vez de 2-útetrahidrofuran-3-ilõacetohidrazida úcomposto 130.4õ. m/z ÚES+Õ 456 ÚM+HÕ+.
Composto 137.1. Metil tetrahidro-2H-piran-4-carboxilato. A uma solução de ácido tetrahidro-2H-piran-4-carboxílico Ú520 mg, 4,00 mmol, 1,00 equivõ em metanol Ú50 mLõ foi adicionado PTSA ú35,0 mg, 0,200 mmolõ. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 80°C em um banho de óleo, depois arrefecida para temperatura ambiente e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi diluído com 30 mL de água e extraído com 3x30 mL de DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro e concentradas in vacuo. Isto resultou em 500 mg Ú87%E3 de metil tetrahidro-2H-piran-4-carboxilato como um óleo incolor.
Composto 137.2. Tetrahidro-2H-piran-4-carbohidrazida. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil tetrahidro-2H-piran-4-carboxilato úcomposto 137.1, 5,00 g, 31,2 mmol, 1,00 equiv, %O%0 em metanol Ú50 mLE3 . HiãLto de hidrazina ú5,20 g, 83,2 mmol, 3,00 equivS foi adicõnado e a mistura resultante foi agitada durante a noite a 40°C em um banho de óleo. Após arrefecimento para temperatura ambiente. a mistura foi concentrada in vacuo para produzir 4,00 g Ú8O0 õ de tetrahidro-2H-piran-4-carbohidrazida como um sólido branco.
Composto 137. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú5-útetrahidro-2H-piran- 4-Í1Õ-4H-1,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila . O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú5-úútetrahidrofuran-3-il0 metil0 -4H-1,2,4-triazol-3-ilIEI benzoil0 piperidin-4-il0 benzonitrila úcomposto 003, usando tetrahidro-2H-piran-4-carbohidrazida úcomposto 137.20 em vez de 2-útetrahidrofuran-3-il0 acetohidráda úcomposto 130.40 .m/z ÚES+0 470 ÚM+H0.
Composto 138.1. 2-úTetrahidrofuran-2-il0 acetohidraida. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de etil 2-útetrahidrofuran-2-il0 acetato Ú2,00 g, 12,6 mmol, 100 equiv0 em etanol Ú20 mL0 . -H20 úl, 27 g, 25,4 mmol, 2,00 equiv0 foi adicionado à reação. A solução resútante foi agitada durante a noite a 80°C em um banho de óleo, depois arrefecida para temperatura ambiente e concentrada in vacuo. Isto resultou em 2,10 g ú%20 0 de 2-útetrahidrofuran-2-il0 acetohidrazida como um óleo aarelo.
Composto 138. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú5-úútetrahidrofuran-2- ilõmetilõ-4H-l,2,4 -triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú5-úútetrahidrofuran-3-ilõmetilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 130Õ, usando 2-útetrahidrofuran-2-ilõacetohidrazida úcomposto 138.lõ em vez de 2-útetrahidrofuran-3-ilõacetohidrazida úcomposto 130.4õ. m/z úES+õ 470 ÚM+Hõ+.
Composto 13%.1. 2-Cianoacetohidrazida. A uma solução de ΝΗ2ΝΗ2·Η20 Ú3,50 g, 70,0 mmol, 1,00 equivõ em uma mistura solvente de etanol e Et20 Ú35'35 mLõ a 0°C foi adicionada, gota a gota, uma solução de metil 2-cianoacetato ú7,00 g, 70,6 mmol, 1,00 equivS em etanol ú5 mLS . A mistura resultante foi agitada por 3 horas à temperatura ambiente, em seguida lavada com 2x30 mL de éter. Os sólidos foram coletados por filtração para produzir 5,00 g ú68%õ de 2-cianoacetohidrazida como um sólido branco.
Composto 13%. 4-úl-ú5-ú5-úCianometilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2,4- dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-Ú2,4-dimetil-5-Ú5-úútetrahidrofuran-3 -ilõmetilõ-4H-l,2,4 -triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 130Õ, usando 2- cianoacetohidrazida úcomposto 13%.lõ em vez de 2-útetrahidrofuran-3-ilõacetohidrazida úcomposto 130.4õ. m/z ÚES+õ 425 ÚM+Hõ+. ^-H-NMR Ú300 Hz, CD30Dõp δ 7,70 úd, J = 8,4 Hz, 2HÕ, 7,54-7,42 úm, 3HÕ, 7,35 ús, 1HÕ, 4,87-4,80 úm, 1HÕ, 4,12 ús, 2HÕ, 3,77-3,65 úm, 1HÕ, 3,27-3,23 úm, 1HÕ, 3,0%-2,%% úm, 2HÕ, 2,55 ús, 3HÕ, 2,43 e 2,33 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar CH3, 3HÕ, 2,05-2,00 úm, lHõ, 1,83-1,76 úm, 3HÕ.
Composto 140.1. 3-Cianopropanohidrazida, A um balão de vidro foi adicionada uma solução de NH2NH2 ·H20 úl,25 g, 2 5,1 mmol, 1,00 equivõ em éter' EtOH 0 8'8 mLõ. Foi então adicionado metil 3-cianopropanoato 0 2,84 g, 25,1 mml, 1,00 equivS gota a gota. A solução resultante foi agitad por 2 horas à temperatura ambiente, depois concentrada in vacuo. Isto resultou em 1,40 g ú4%%õ de 3- cianopropanohidrazida como um óleo incolor.
Composto 140. 4-úl-Ú5-ú5-Ú2-Cianoetilõ-4H-1,2,4-triazol-3 -
ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú5-úútetrahidrofuran-3-ilõmetilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 130Õ, usando 3- cianopropanohidrazida úcomposto 140.lõ em vez de 2-útetrahidrofuran-3-ilõacetohidrazida úcomposto 130.4õ. m/z ÚES+Õ 43H ÚM+HÕ. 1H-NMR Ú300 Hz, CD30Dõp δ 7,68 úd, 2HÕ, 7,58-4,47 úm, 3HÕ, 7,30 ús, IHõ, 4,8%-4,80 úm, 1HÕ, 3,65- 3,62 úm, IHõ, 3,32-3,30 úm, IHÕ, 3,15 út, 2HÕ, 3,03-2, %5 úm, 4Hõ, 2,50 ús, 3Hõ, 2,42 e 2,32 ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3HÕ, 2,03-2,00 úm, IHõ, 1,83-1,78 úm, 3HÕ.
Composto 141. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú5-úoxetan-3-ilmetilõ-4H- 1,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú2,4-dimetil-5-ú5-úútetrahidrofuran-3-ilõmetilõ-4H-1,2,4 -triazol-3 -ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 130Õ. m/z úES+õ 456 úM+Hõ+.
Composto 142.1. Metil 4-ciclopropil-2-metilbenzoato. A uma solução de metil 4-bromo-2-metilbenzoato ú5,00 g, 20,7 mmol, 1,00 equiv, %5® õ em uma mistura de tolueno eH20 Ú20 mL'l mLõ foram adicionados carbonato de potássio ú6,10 g, 44,1 mmol, 2,00 equivõ, ácido ciclopropilborônico ú2,30 g, 26,8 mmol, 1,20 equivõ, PdúdppfõCl2 ú%00 mg, 1,23 mmol, 0,05 equivõ e PdúOAcõ2 Ú250 mg, 1,12 mmol, 0,05 equivõ. A mistura de reação foi expurgada com nitrogénio e agitada a 80°C durante a noite. Apõs arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi então concentrada in vacuo. 0 resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo úl:50õ como eluente para produzir 2,68 g Ú61® õ de mtil 4-ciclopropil-2-metilbenzoato como um óleo incolor.
Composto 142,2. Metil 4-ciclopropil-5-iodo-2-metilbenzoato.
A uma solução de metil 4-ciclopropil-2-metilbenzoato úcomposto 142.1, 2,68 g, 13,4 mmol, 1,00 equiv, %5®õ em AcOH Ú50 mLõ foram adicionados NaI04 úl,51 g, 7,08 mmol, 0,50 equivõ, I2 ú3,58 g, 14,1 mmol, 1,00 equiv® e ácido sul f 13 rico Ú201 mg, 2,01 mmol, 0,15 equiv, %80 õ. A mistura de reação foi agitada a 110°C durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, 100 mL de água foram adicionados. A mistura resultante foi diluída com 100 mL de etil acetato, então lavada com 3x30 mL de Na2S203 úaq., sat.0 e 1x30 mL de salmoura. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica com de etil acetato'éter de petróleo úl'50õ como eluente para produzir 2,00 g ú45%õ de metil 4-ciclopropil-5-iodo-2-metilbenzoato como um óleo incolor.
Composto 142.3. Metil 5-ciano-4-ciclopropil-2- metilbenzoato. A uma solução de metil 4-ciclopropil-5-iodo-2-metilbenzoato úcomposto 142.2, 2,00 g, 6,01 mmol, 1,00 equiv, %50 õ em DMF Ú16 mLõ foram adicionados ZnúCNp Ú8%0 mg, 7,58 mmol, 1,27 equivõ e PdúPPh3õ4 Ú731 mg, 0,630 mmol, 0,11 equivõ. A solução resultante foi agitada a 100°C sob nitrogénio durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi então resfriada bruscamente pela adição de 100 mL de FeS04 úaq., sat.õ e diluída com etil acetato. A mistura resultante foi agitada vigorosamente, então filtrada através de celite e lavada com 1M FeS04, água e etil acetato. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 2x100 mL de etil acetato. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo úl'50õ como eluente para produzir 1,10 g Ú81IH õ de metil-5-ciano-4-ciclopropl-2-metilbenzoato como um óleo amarelo claro.
Composto 142.4. Metil 5-carbamotioil-4-ciclopropil-2- metilbenzoato. A uma solução de metil 5-ciano-4- ciclopropil-2-metilbenzoato úcomposto 142.3, 1,65 g, 7,28 mmol, 1,00 equiv, %50 õ em uma mistura de tetrahidróurano e H20 Ú20 mL'5 mLõ foi adicionado O,0'-dietilfosforoditioato Ú3,7% g, 22,3 mmol, 2,00 equivõ. A mistura resultante foi agitada a 80°C durante a noite úPRECAUÇÃOp ocorrência de evolução de gás significativa - esta e todas as outras reações descritas aqui devem ser realizadas em capelas químicas bem ventiladasS . Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi resfriada bruscamente com 100 mL de água. A solução resultante foi extraída com 100 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 3x30 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo úl'50 como eluente paa fornecer 0,880 g Ú460 0 de metil 5-carbamotioil-4-ciclopropil-2-metilbenzoato como um sólido branco.
Composto 142.5. Metil 4-ciclopropil-2-metil-5- úmetilsulf anilE3 carboximidoilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 5-carbamotioil-4-ciclopropil-2-metilbenzoato úcomposto 142.4, 880 mg, 3,35 mmol, 1,00 equiv, %50 0 em tetrahidrofurano Ú10 mL0 .
Iodometano úl,00 g, 7,05 mmol, 2,00 equivS foi aditronado e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi então concentrada in vacuo para produzir 0,800 g Ú86H B de metil 4-ciclopropi2-metil- 5-úmetilsulfanilõcarboximidoilbenzoato como um líquido incolor.
Composto 142.6. Cloridrato de metil 3- údimetilaminoE propanoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de ácido 3-údimetilaminoõpropanóico Ú2,00 g, 17,1 mmol, 1,00 equivõ em metanol Ú60 mLõ. Cloreto de hidrogénio úgõ foi borbulhado na mistura de reação e a solução resultante foi agitada por 4 horas a 25°C.
Concentração da mistura de reação in vacuo forneceu 2,00 g do composto titular como um óleo incolor.
Composto 142.7. 3-úDimetilaminoõpropanohidrazida. A uma solução de cloridrato de metil 3-údimetilaminoõpropanoato úcomposto 142.6, 2,00 g, 15,3 mmol,1,00 equivõ em metanol Ú40 mLõ foi adicionado hidrato de hidrazina Ú6 mL, 6,00 equivõ. A mistura de reação foi agitada a 70°C por 3 horas. A mistura foi concentrada in vacuo, então dissolvida em 50 mL de H20 e lavada com 2x10 mL de etil acetato. As camadas aquosas foram combinadas e concentradas in vacuo para fornecer 1,30 g Ú65%õ de 3-údimetilaminoõpropanohidrazida como um óleo incolor.
Composto 142.8. Metil 4-ciclopropil-5-ú5-ú2- údimetilaminoH etilS -4H-1,2,4-triazol-3-ilE -2-metéíiboato. Uma solução de 3-údimetilaminoS propanohidraz ida úcmposto 142.7, 1,20 g, %, 15 mmol, 5,00 equivS e metil 4- ciclopropil-2-metil-5-úmetilsulfanil0 carboximidoiltenzoato úcomposto 142.5, 600 mg, 2,28 mmol, 1,00 equivS emAcOH Ú30 mLõ foi agitada a 80°C durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, o pH foi ajustado para 8-% com hidróxido de sódio úaq., IMõ. A mistura resultante foi extraída com 2x100 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica com diclorometano'metanol Ú10'1E3 como eluente para prodzir 504 mg ú67%õ do composto titular como um sólido branco.
Composto 142.%. Ácido 4-ciclopropil-5-ú5-ú2- údimetilaminoõetilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzóico. A uma solução do composto 142.8 Ú200 mg, 0,610 mmol, 1,00 equivS em uma mistura de metanol e HD Ú6 mL' 3 mL0 foi adicionado hidróxido de sódio ú%7,6 mg, 2,44 mmol, 4,00 equivõ em água úl mLõ. Após agitação a 60°C durante a noite, o solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida. A camada aquosa residual foi lavada com 20 mL de etil acetato. 0 pH foi então ajustado para 4-5 com HC1 úaq., 3Mõ e a mistura resultante foi extraída com etil acetato Ú3x20 mLõ. As camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas in vacuo para fornecer 280 mg Ú73ÓÕ do composto titular como um sólido marrom.
Composto 142. 4-úl-ú4-Ciclopropil-5-ú5-ú2- údimetilaminoõetilõ-4H-l,2,4 -triazol-3-ilõ-2- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A uma solução do composto 2661.% Ú250 mg, 0,800 mmol, 1,00 equivõ em N,N-dimetilformamida ú3 mLõ foram adicionados cloridrato de 4-úpiperidin-4-il0 benzonitrila ucomposto 1.5, 175 mg, 0,7%0 mmol, 1,00 equiv0 , EDCI Ú302 mg, 1,58 mmol 2,00 eqmv0 e DMAP úl%4 mg, 1,5% mmol, 2,00 equiv0 . A mistura reultante foi agitada a 25°C durante a noite e, então, diluída com água. A mistura foi extraída com 3x50 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x20 mL de NH4C1 úaqõ e 2x20 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica com diclorometano'metanol Ú10'lõ como eluente. 0 produto ú~150 mgõ foi adicionalmente purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiç0 es [úl#-Pre-HPLC-001 úShimadzuõõ: Coluna, Xbridge Prep C18, 5um, l%*150mm; fase móvel, água com 0,030 NH3H2O e CH3CN Ú32,00 CpCN até 47,00 em 7 minutos, até 100,00 em 1 minuto, abaixo de 32,00 em 1 minutoõ; Detector Waters 248% 254&amp;220nm]. As fraç0 es contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 70,3 mg Ú180 õ do composto titular como um sólido branco, m/z úES+õ 483 úM+Hõ+.
Composto 143.1, 3-Metoxipropanohidrazida. Uma mistura de metil 3- metoxipropanoato Ú5,0 g, 42,33 mmolõ e hidrazina úl, 36 g, 42,33 mmolõ foi aquecida a 50°C por 2 horas. A mistura foi concentrada e seca sob pressão reduzida para produzir o produto como um óleo límpido. Rendimentop 5,0 g, 1000 . m/z ÚES+Õ 11% ÚM+Hõ+. lH RMN Ú400 MHz, Clorofórmio-dõp δ 7,86 úbr, 1HÕ, 4,05-3,71 úm, 2HÕ, 3,63 út, 2HÕ, 3,34 ús, 3Hõ, 2,42 út, 2Hõ.
Composto 143. 4-úl-ú4-Ciclopropil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H- 1,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 142, e usando o composto 143.1 em vez do 142.7. m/z úES+0 471 ÚM+H0.
Composto 144. 4-úl-ú4-Ciclopropil-5-ú5- úúdimetilaminoS metilS -4H-1,2,4-triazol-3-il0 -2-metilbenzoilS piperidin-4-il0 benzonitrila. 0 compost titular foi preparado usando manipulaçS es químicaspadrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 142. m/z ÚES+Õ 45% ÚM+HÕ+. ^ RMN Ú300 MHz, CD3ODõp δ 7,6% úd, J = 6,3 Hz, 2HÕ, 7,4% úd, J = 6,0 Hz, 2HÕ, 7,47 É 7,3% ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar-H, 1HÕ, 7,03 ús, lHõ, ~4, % Ú1H parcialmente obscurecido por pico de águaõ, 3,74 ús, 2HÕ, 3,72-3,57 úm, IHõ, 3,32-3,22 úm, 1H parcialmente obscurecido por pico de solvente metanolõ, 3,00 út com estrutura fina, J = 8,% Hz, 2Hõ, 2,4%-2,27 úm, 2Hõ, 2,10-1, %8 úm, 2HÕ, 1, %3-l, 51 úm, 3HÕ, 1,05-0, %0 úm, 2Hõ, 0,7%-0,64 úm, 2HÕ.
Composto 145. 4-úl-ú5-ú5-úAzetidin-l-ilmetilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-4-ciclopropil-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulaçS es químicas padrão e procedimentos similaes àqueles usados para a preparação do composto 142. m/z úES+õ 481 ÚM+Hõ+.
Composto 146. 2-ú5-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-ciclopropil-4-metilfenilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-W,i\r-dimetilacetamida. 0 composto titular foi preparado usando manipulaçE es químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 142. m/z úES+õ 4%7 úM+Hõ+.
Composto 147.1. Metil 4-etil-2-metilbenzoato. A uma mistura agitada de ZnBr2 Ú4,50 g, 2 0,0 mmol, 2,00 equivõ em t et rahidrof urano Ú50 mLõ sob nitrogénio a 0°C foi adicionado EtMgBr ú6,6 mL, 2,00 equiv, 3M em THFõ gota a gota. Após agitação por 30 minutos a 0°C, a temperatura foi baixada para -78°C e PdúdppfõCl2 úl,08 g, 1,48 mmol, 0,30 equivõ foi adicionado, seguido por uma solução de metil 4-bromo-2-metilbenzoato úcomposto 152.1, 2,30 g, 10,0 mmol, 1,00 equivõ em tetrahidrofurano Ú20 mLõ. A mistura resultante foi agitada por 30 minutos a -78°C, aquecida para temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura de reação foi cuidadosamente resfriada bruscamente com 60 mL de NH4C1 úaq.õ e extraída com 3x50 mL de etil acetato. As fases orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatograf ia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo úl:100-1: 5õ como eluente para fornecer 1,50 g Ú84%õ de metil 4-etil-2-metilbenzoato como um óleo marrom.
Composto 147.2. Ácido 4-etil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzóico. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 142.%, e usando os compostos 147.1 e 143.1 em vez dos compostos 142.1 e 142.7.
Composto 147. 4-úi-Ú4-Etil- 5-Ú5-Ú2-metoxietilõ-4H-1,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A uma solução do composto 147.2 Ú100 mg, 0,350 mmol, 1,00 equiv0 em DMF Ú10 mL0 sob nitrogénio foram adiciodas EDCI Ú132 mg, 0,6%0 mmol, 2,00 equiv0 e DMAP Ú85,0 mg, 0700 mmol, 2,00 equivõ. A mistura resultante foi agitada por 30 minutos a 25°C, seguido pela adição de cloridrato de 4-úpiperidin-4-il0 benzonitrila úcomposto 1.5, 12% mg, 2,77 mmol, 2,00 equiv0 . A mistura de reação foi agitadapor 25 horas a 25°C, então resfriada bruscamente com 40 mL de água gelada e extraída com 3x50 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1x50 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato/éter de petróleo úl:100-1:10 como eluente. 0 produto bruto Ú50 mg0 of purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#-Pre-HPLC-001 úShimadzu0 0 : Coluna, Xbridge Prep C18,5um, l%*150mm; fase móvel, água com 0,030 NiH20 e CH3CN Ú330 CH3CN até 520 em 10 minutos, até 1000 em 1 minuto, abao de 330 em 1 minutoõ; Detector, Waters 248% 254&amp;220m. As frações contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 20,2 mg úl2%0 do composb titular como um sólido branco, m/z úES+0 458 ÚM+H0.
Composto 148. 4-úl-ú4-Etil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H-1,2,4- triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 147, e usando o composto sal HC1 11.2 em vez do composto 1.5. m/z ÚES+õ 476 ÚM+Hõ+.
Composto 14%. 4-úl-ú5-ú5-úEtoximetilõ-4H-l,2,4-triazol-3- ilõ-4-etil-2-metilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 147 e 148. m/z ÚES+õ 476 ÚM+HÕ+.
_ , _Λ . _i'í4_pt-il-2-metil-5-ú5-útetrahidrofuran-3-
Composto 150. 4-ul
Ua-4H-l,2,4-triaZol-3-il6t>enzoilõpiperidin-4- ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-etil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 147õ. m/z ÚES+Õ 470 ÚM+Hõ+.
Composto 151. 4-úl-ú4-Etil-5-ú5-úisopropoximetilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 147 e 148. m/z ÚES+Õ 4%0 ÚM+Hõ\ 1H-NMR Ú300 MHz, CD30Dõp δ 7,78 úd, 2Hõ, 7,6 % - 7,34 úm, 4HÕ, 4,82-4,78 úm, IHõ, 4,72 ús, 2HÕ, 3,80 úquinteto, IHõ, 3,57-3,55 úm, 2HÕ, 3,30-3,25 úm, IHõ, 2,0 4 úq, 2Hõ, 2,46 e 2,35 Ú2 singletos, rotâmeros d amida, ArCH3i 3HÕ, 2,35-2,1 úm, 3HÕ, 2,0-1,0 5 úm, IHõ, 1,30 úd, 6HÕ, 1,14 Út, 3HÕ.
Composto 152.1. Metil 4-bromo-2-metilbenzoato. A uma solução de ácido 4-bromo-2-metilbenzóico Ú5,11 g, 23,8 mmol, 1,0 equiv0 em metanol Ú25 mL0 foi adicionadcácido sulfúrico ú2,0 mL0 gota a gota por cerca de 3 minubs úlevemente exotérmico0 . A mistura resultante foi réluxada por 4 horas. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi cuidadosamente resfriada bruscamente em NaHC03 aquoso saturado Ú100 mLH úObservação evolução de gás significativaõ e extraída com diclorometano Ú200 mL x 1, então, 50 mL xlõ. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com uma mistura de salmoura'NaHC03 saturado ú%plõ Ú50 mLõ, secas úNa2S04õ e concentradas sob pressão reduzida para obtenção do composto titular como um óleo incolor ú5,28 g, %7§ õ. "H RMN Ú400 MHz, CDCl3Õp δ 7,78 úd, J = 8,0 Hz, 1HÕ, 7,42 úd, J = 1,6 Hz, 1HÕ, 7,38 údd, J = 1,6 Hz, 1HÕ, 3,8% ús, 3HÕ, 2,58 ús, 3HÕ.
Composto 152.2. Metil 4-ciclobutil-2-metilbenzoato. Brometo de ciclobutilzincoúllõ Ú50 ml, 0,5 M em THF, 25,0 mmolõ foi adicionado a uma mistura de metil 4-bromo-2-metilbenzoato úcomposto 152.1, 5,2 g, 22,7 mmoló e PdCl2údppfõCH2Cl2 úl, 85 g, 2,27 mmolõ. A mistura foi desgaseifiçada e o frasco foi preenchido com argônio através de um balão. A mistura foi aquecida a 65°C sob argônio por 24 horas. A mistura foi arrefecida para 0°C e resfriada bruscamente com água Ú10 mLõ. A mistura foi diluída com EtOAc Ú200 mLõ, lavada com água e, então, com salmoura. A camada de EtOAc foi seca úNa2S04õ, concentrada sob pressão reduzida e purificada usando cromatografia em coluna úgel de sílicaõ úhexanospEtOAc 3 0μ1 a 20μ1ο. Rendimentop 4,1 g, óleo límpido, 8%,lS .¾ RMN Ú400 MHz, Clorofórmio-dõp δ 7,86 úd, IHõ, 7,12-7,02 úm, 2HÕ, 3,88 ÚS, 3Hõ, 3,5%-3,48 úm, 1HÕ, 2,5% ÚS, 3HÕ, 2,35 Úm, 2HÕ, 2,22-1, %6 Úm, 3HÕ, 1,86-1,84 úm, 1HÕ.
Composto 152,3. Metil 4-ciclobutil-5-iodo-2-metilbenzoato. N-iodossuccinimida ú3,52 g, 15,6 mmolõ foi adicionada, em porções, a uma solução de metil 4-ciclobutil-2-metilbenzoato úcomposto 152.2, 3,2 g, 15,6 mmolE em ácido sulfúrico concentrado 13 25 mlõ a 0°C. A mistura foiagitada a 0°C por 30 minutos e à temperatuta ambiente por 2 horas. A mistura se tornou muito espessa. A mistura foi arrefecida para 0°C novamente e MeOH 13 30 mlõ foi adicionado. Amistura foi aquecida a 60°C por 2 horas. 0 metanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi despejado em água gelada 13 100 mlõ. A mistura foi extraída com EtOAc 13 2xõ. Asamadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, em seguida com IN NaHC03 aq. 0 Observação - evolução de gás significativaõ, secas 0 N§fí04õ e concentradas. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna E gel de sílicaõ 13 hexanospEtOAc 30μ1 a 20μ1ο Ηβηχϋπιβη^μ 4,1 g, óleo amarelo claro, 81%. RMN ESI 400 MHz, Οΐο^ίόπηϊο-άομδ 8,33 E s, 1HÕ, 7,14 13 s, 1HÕ, 3,87 E s, 3HÕ, 3,67-3,®m, IHõ, 2,57 13 s, 3HÕ, 251-2,40 Í3 m, 2HÕ, 2,14-1,97 E ηΒ,Ηο, 1,82-1,79 E m, IHõ.
Composto 152.4. Metil 5-ciano-4-cidobucil-2-metilbenzoato.
Uma mistura de metil 4-ciclobutil-5-iodo-2-metilbenzoato úcomposto 152.3, 4,17 g, 12,64 mmolõ, ZnúCNõ2 Ú2,%6 g, 25,21 mmolõ e PdúPPh3õ4 ÚO,73 g, 0,63 mmolõ em DMF Ú30 mlõ foi desgaseifiçada e o frasco foi preenchido com argônio através de um balão. A mistura foi aquecida a 100°C sob argônio durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi resfriada bruscamente com FeS04 aq. saturado Ú20 mlS e diluída com EtOAc Ú200 mlS . 0 sólido esverdeado foi removido por filtraçãoatravés de celite. 0 filtrado foi particionado entre água e EtOAc. A camada de EtOAc foi lavada com salmoura, seca úNa2SO40 e concentrada. O resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna úgel de sílica0 úhexanospEtOAc 30μ1 a 2Ofli0 . Rendimentop 2,55 g, sólido branco, 88B . RMN Ú4 00 MHz, Clorofórmio-dS μδ 8,16 us, IBM , 7,28 ús, 1H0 , 3,%0 ús, 3H§ , 3,86-3,82 úm, ÍHE , 2,68 ús, 3H0 , 2,55-2,45 úm, 2H02„27- 2,04 úm, 3H0 , 1,8%-l,87 úm, 1H0 .
Composto 152.5. Metil 5-carbamotioil-4-ciclobutil-2-metilbenzoato. A um balão de vidro foram adicionados metil 5-ciano-4-ciclobutil-2-metilbenzoato úcomposto 152.4, 3,63 g, 0,015 molõ, 0,013 -dietil ditiofosfato Ú10 mLõ e §ua úl mLH . A mistura de reação foi aquecida a 80 °C por 3 horas úPRECAUÇÃOp ocorrência de evolução de gás significativa -esta e todas as outras reações descritas aqui devem ser realizadas em capelas químicas bem ventiladas^ . Apé arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi particionada entre etil acetato Ú50 mLlEI e água Ú50 mLõ. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas sucessivamente com NaHC03 aquoso saturado Ú50 mLõ e salmoura Ú50 mLõ, secas sobre Na2S04 e concentradas in vacuo. Purificação por cromatografia flash de Si02 úhexanos'etil acetato = 80'20 a 50'50õ forneceu metil 5-carbamotioil-4-ciclobuti1-2-metilbenzoato como um sólido amarelo ú3,06 g, 780 de rendimentoõ.m/z úES+õ 264 úM+Hõ*. RMN Ú4 00 MHz, CDC13õu δ 7, %3 ÚS, 1HÕ, 7,82 ÚS, 1HÕ, 7,26 ÚS, 1HÕ, 6,%2 ÚS, 1HÕ, 4,1% úm, 1HÕ, 3,8% ÚS, 3HÕ, 2,64 ÚS, 3HÕ, 2,40 Úm, 2HÕ, 2,2%-2,15 Úm, 2HÕ, 2,12-2,00 úm, 1HÕ, 1,%5-l,84 úm, 1HÕ.
Composto 152.6. Metil 4-ciclobutil-5-úiminoúmeti11io0 metil® -2-metilbenzoato. A um balãde vidro foi adicionado metil 5-carbamotioil-4-ciclobutil-2-metilbenzoato úcomposto 152.5, 861 mg, 3,27 mmol® m THF Ú10 mL0 . Iodometano ú%12 mg, 6,42 mmol® foi adiciado gota a gota e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 7 horas. A mistura de reação foi concentrada in vacuo e purificada por cromatografia flash de Si02 úetil acetato a etil acetato'metanol = %5'5õ para fornecer metil 4-ciclobutil-5-úiminoúmetiltioõmetilõ-2-metilbenzoato como um óleo amarelado Ú807 mg, 8%0 de rendimentoõ. m/z úES+õ 278 ÚM+Hõ+. RMN Ú400 MHz, DMSO-dgÕp δ 7,67 ÚS, 1HÕ, 7,40 ús, lHõ, 3,88-3,71 úm, 4Hõ, 2,57 ús, 3HÕ, 2,44 ús, 3Hõ, 2,22-2,1% úm, 2Hõ, 2,12 úm, 2HÕ, 1,%8-l,86 úm, 1HÕ, 1,82-1,70 úm, lHõ.
Composto 152.7. Metil 4-ciclobutil-2-metil-5-ú5-metil-4H- 1.2.4- triazol-3-ilõbenzoato. A um balão de vidro foram adicionados metil 4-ciclobutil-5-úiminoúmetiltioõmetilõ-2-metilbenzoato úcomposto 152.6, 556 mg, 0,002 molõ e acetohidrazida Ú223 mg, 0,003 molõ em 6 mL de ácido acético. A mistura de reação foi aquecida a %0°C por 3 horas. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi particionada entre água Ú50 mLõ e etil acetato Ú50 mLõ. A camada orgânica foi lavada com salmoura Ú2x50 mLõ, seca sobre Na2S04 e concentrada in vacuo. Purificação por cromatografia flash de Si02 úhexanos'etil acetato = 50'50 a 30'70õ forneceu o composto titular como um solido branco Ú243 mg, 43 0 de rendmentoõ. m/z ÚES+Õ 286 ÚM+HÕ+. ΧΗ RMN Ú400 MHz, CDCl3Õp δ 8,23 ús, 1HÕ, 7,32 ús, 1HÕ, 4,24-4,05 úm, 1HÕ, 3,8% ús, 3HÕ, 2,6% ús, 3Hõ, 2,54 ús, 3HÕ, 2,23-2,20 úm, 2HÕ, 2,16-2,05 úm, 2HÕ, 2,05-1,88 úm, 1HÕ, 1,88-1,71 úm, 1HÕ.
Composto 152.8. Ácido 4-ciclobutil-2-metil-5-ú5-metil-4H- 1.2.4- triazol-3-ilõbenzóico. A uma solução de metil 4- ciclobutil-2-metil-5-Ú5-metil-4H-1,2,4-triazol-3-ilõbenzoato úcomposto 152.7, 240 mg, 0,842 mmolõ em metanol ú5 mLõ foi adicionado NaOH aquoso ú6 mL, IMõ. A mistura resultante foi aquecida a 50°C por 6 horas. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi acidificada com IN HC1 a pH 2 e extraída com etil acetato Ú3x50 mLõ. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura Ú50 mLõ, secas sobre Na2S04 e concentradas in vacuo para fornecer ácido 4-ciclobutil-2-metil-5-ú5-metil-4H-l,2,4-triazol-3-ilH benzõico Ú260 mg, quantitativos^! como um sólidioranco. m/z úES+õ 272 ÚM+HÕ+.
Composto 152. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-metil-5-ú5-metil-4H- 1.2.4- triazol-3- ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A uma solução de ácido 4-ciclobutil-2-metil-5-Ú5-metil-4H- 1.2.4- triazol-3-ilS benzõico úcomposto 152.8, 260 mg 0, %5 mmol0 em DMF ú4 mL0 foram adicionados sal cloridratde 4-úpiperidin-4-ilS benzonitrila úcomposto 1.5, 232 mg, 1,045 mmolõ, EDC Ú272 mg, 1,425 mmolõ, HOBt Ú3% mg, 0,285 mmolõ e DIEA Ú367,7 mg, 2,85 mmolõ. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. A mistura foi resfriada bruscamente com NaHC03 aquoso saturado Ú20 mLõ e extraída com etil acetato Ú2x50 mLõ. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura Ú50 mLõ, secas sobre Na2S04, filtradas e concentradas in vacuo. Purificação por cromatografia em coluna de Si02 údiclorometano'metanol = %5'5õ forneceu 4-Ú1-Ú4- ciclobutil-2-metil-5-Ú5-metil-4H- 1.2.4- triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila como um sólido branco úl%3 mg, 440 de rendimentoõ.m/z úES+õ 440 ÚM+Hõ*. ^ RMN Ú300 MHz, CD30Dõp δ 7,6% úd, J = 5,4 Hz, 2HÕ, 7,56-7,30 úm, 4H0 , 1 protão obscurecido por pico de solvente metanol, 4,10-3,%8 úm, lHõ, 3,64 út, J = 10,7 Hz, IHõ, 3,33-3,21 úm, 1HÕ, 3,00 út, J = 8,% Hz, 2HÕ, 2,58 ÚS, 3Hõ, 2,48 e 2,38 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3HÕ, 2.28-1, %2 úm, 6HÕ, 1, %2-l, 55 úm, 4HÕ. λΒ. RMN Ú4Q0 MHz, DMSO-dgõu δ 13,66 ús, IHõ, 7,77 úd, J = 8,0 Hz, 2HÕ, 7,62-7,34 úm, 4HÕ, 4,78-4,63 úm, IHÕ, 4,31 úbr s, IHÕ, 3,45 úbr s, IHõ, 3,15 úapp t, J = 12,3 Hz, IHõ, 2, %%-2,78 úm, 2HÕ, 2,44-1,80 úm, 12HÕ, 1,80-1,37 úm, 4HÕ.
Composto 153. 4-Ú1-Ú4-Ciclobutil-5-Ú5-Ú2-metoxietilõ-4H- 1,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-2-metil-5-ú5-metil-4H-1,2,4-triazol-3-il0 benzoil0 pipédin-4-il0 benzonitrila úcomposto 1520 , mas usando 3- metoxipropanohidrazida úcomposto 143.10 em vez de acetohidrazida. m/z úES+0 484 ÚM+H0, %67 Ú2M+H0+. RMN Ú400 MHz, Clorofórmio-dõp δ 11,50-11,33 úbr s, IHõ, 7,66- 7,44 úm, 3HÕ, 7,33-7,27 úm, 3HÕ, 4, %8 úd, IHÕ, 4,24-4,12 úm, IHõ, 3,78 út, 2Hõ, 3,70 úd, IHõ, 3,44 ús, 3Hõ, 3,14- 3,03 úm, 3Hõ, 2, %0-2,75 úm, 2HÕ, 2,42 e 2,34 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCHj, 3Hõ, 2,17 úd, 2Hõ, 2,08-1,88 úm, 3Hõ, 1,84-1,51 úm, 5HÕ.
Composto 154. 4-úl-Ú4-Ciclobutil-5-Ú5-úmetoximetilõ-4H- 1.2.4 -triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4- ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-2-metil-5-ú5-metil-4H-l,2,4 -triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 152õ, mas usando 2-metoxiacetohidrazida úcomposto 1%0.6Õ em vez de acetohidrazida. m/z úES+õ 470 úM+Hõ+. 1H RMN Ú400 MHz, CDCl3õp δ 12,15 úbr s, IHõ, 7,64-7,57 úm, 2HÕ, 7,43 É 7,33 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar-H, IHõ, 7,30 úd, J = 8.4 Hz, 2Hõ, 7,20 ús, IHõ, 5,Q4-4,%2 úm, IHõ, 4,65 ús, 2HÕ, 4,18-4,03 úm, IHÕ, 3,63 úbr d, J = 13,2 Hz, IHõ, 3,51 ús, 3Hõ, 3,08 út com uma estrutura fina, J = 12,8 Hz, IHõ, 2, %3 -2,77 úm, 2H0 , 2,38 É 2,30 Ú2 singletos, rotâmeos de amida, ArCH3, 3HB , 2,25-1,84 úm, 6H0 , 1,84-1,43 úm, 4H0 .
Composto 155. 4- Ú1-Ú4- Ciclobutil-5-Ú5-úhidroximetillE] -4H- 1,2,4-triazol-3- il® -2-metilbenzoil0 piperidin-4- ilS benzonitrila. O composto titular foi preparado aando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 152, mas usando 2-hidroxiacetohidrazida em vez de acetohidrazida. m/z ÚES+Õ 456 ÚM+Hõ+.
Composto 156. 4-Ú1-Ú4-Ciclobutil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H- 1,2,4 -triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 153õ, usando sal cloridrato de 4-ú4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto sal HC1 11.2õ em vez de sal cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto I. 50. m/z ÚES+Õ 501,8 ÚM+Hõ+. ΧΗ RMN Ú400 MHz, CDCl3õp δ II, 46 Úbr s, IHõ, 7,75-7,45 úm, 3HÕ, 7,4% úd, J = 8,4 Hz, 2Hõ, 7,32 ús, IHõ, 4,8% úbr d, J = 13,2 Hz, IHõ, 4,28-4,15 úm, IHõ, 3,7% út, J = 6,0 Hz, 2HÕ, 3,70-3,45 úm, 2HÕ, 3,46 ús, 3HÕ, 3,31-3,17 úm, IHõ, 3,13 út, J = 6,0 Hz, 2HÕ, 2,45 É 2,3 8 ú2 br singletos, rotâmeros de amida, Ar-CH3, 3HIEI , 2,30-1,68 úm, 1OH0 .
Composto 157. ú4-Ciclobutil”5-ú5“ú2-metoxietilE -4H1,2,4- triazol-3 -ilõ-2-metilfenilõú4-Ú4- útrifluorometilõfenilõpiperidin-1-ilõmetanona, 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-Ú4-ciclobutil- 5-Ú5-Ú2-metoxietilS -4H-1,2,4 -tràzol-3 -il0 -2-metilbenzoilE piperidin-4-il0 benzonitrila úpomto 1530 , usando sal cloridrato de 4-ú4- útrifluorometilB fenil0 piperidina em vez de sal clódrato de 4-úpiperidin-4-il0 benzonitrila úcomposto 1.50 m/z úES+õ 527 ÚM+Hõ+. XH RMN Ú4 00 MHz, Clorofórmio-dõp δ 11,30-11,10 úbr, IHõ, 7,60-7,47 úm, 3HÕ, 7,35-7,28 úm, 3HÕ, 5,10-4, %3 Úm, IHÕ, 4,24-4,13 Úm, IHÕ, 3,78 Út , 2HÕ, 3,70 Úd, IHÕ, 3,45 ÚS, 3HÕ, 3,12 út, 2HÕ, 3,15-3,05 úm, IHõ, 2, %0-2,75 úm, 2Hõ, 2,44 e 2,35 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3/ 3HÕ, 2,25-2,13 úm, 2HÕ, 2,13-1,85 úm, 4HÕ, 1,87-1,66 úm, 4HÕ.
Composto 158. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-metil-5-ú5-metil-4H- I, 2,4-triazol-3-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-Ú4-ciclobutil-2 -metil-5-ú5-metil-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 152õ, usando o composto sal HC1 II. 2 em vez do composto 1.5. m/z ÚES+õ 458 ÚM+Hõ+. RMN Ú400 MHz, DMSO-dgõp δ 13,66 ús, IHÕ, 7,66 úd, 2HÕ, 7,51 úd, 3Hõ, 7,38 ús, IHõ, 4,72 úd, IHõ, 4,30 úbr s, IHõ, 3,46 úbr s, IHõ, 3,16 údd, IHõ, 3,04-2,78 úm, 2HÕ, 2,38 e 2,36 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3Hõ, 2,35-2,27 úm, 3HÕ, 2,22-1,82 úm, 6HÕ, 1,81-1,56 úm, 3HÕ.
Composto 15%. Ú4-Ciclobutil-2-metil- 5-ú5-metil-4H-l,2,4-triazol-3 -ilõfenilõú4-Ú4-útrifluorometilõfenilõpiperidin-1-ilõmetanona. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-Ú1-Ú4-ciclobutil-2-metil-5-Ú5-metil-4H-1,2,4-triazol-3-ilE3 benzoilS pipédin-4-il0 benzonitrila úcomposto 1520 m/z ÚES+0 483 ÚM+H0.
Composto 160. 4-úl-Ú4-Ciclobutil-5-Ú5-etil-4H-1,2,4-triazol-3-il0 -2-metilbenzoil0 piperidin-4-il0 benzònila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 152, e usando propionohidrazida em vez de acetohidrazida. m/z úES+0 4 54 ÚM+H0. 1H RMN Ú4 00 MHz, Clorofórmio-dõp δ 7,75-7,43 úm, 3HÕ, 7,40-7,17 úm, 3HÕ, 5,18-4,81 úm, 1HÕ, 4,30-3,%l úm, IHõ, 3,84-3,55 úm, 1HÕ, 3,21-2,%% úm, IHõ, 2, %2-2,6% úm, 4HÕ, 2,40 e 2,32 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar CH3, 3Hõ, 2,25-1,84 úm, 7HÕ, 1,83-1,42 úm, 3HÕ, 1,32 út, 3HÕ.
Composto 161. 4-úl-ú4-Ciclobutil-5-ú5-etil-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-2-metil-5-ú5-met.il-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 152Õ. m/z ÚES+õ 472 ÚM+Hõ+. RMN Ú400 MHz, Clorof órmio-dõp δ 7,7%-7,57 úm, 2HÕ, 7,57- 7,18 úm, 4HÕ, 4,86 údd, 1HÕ, 4,14 ús, IHõ, 3,62-3,40 úm, 4HÕ, 3,22 út, IHõ, 2,77 úq, 2HÕ, 2,31 &amp; 2,41 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, 3Hõ, 2,2%-l,47 úm, 8Hõ, 1,30 út, 3Hõ.
Composto 162. 4-úl-ú4-Ciclobutil-5-ú5-isopropil-4H-l,2,4- triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-2-metil-5-ú5-metil-4H- 1,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 152Õ. m/z ÚES+õ 468 ÚM+HÕ+. ΧΗ RMN Ú400 MHz, DMSO-d6Õp δ 13,67 ús, IHÕ, 7,77 úd, 2HÕ, 7,4%-7,47 úm, 3HÕ, 7,36 ÚS, IHÕ, 4,72 úd, IHÕ, 4,2% ÚS, IHÕ, 3,46 Úd, IHÕ, 3,12 úm, 2Hõ, 2, %8-2,75 úm, 2HÕ, 2,31 úd, 3HÕ, 2,23-1,81 úm, 6Hõ, 1,83-1,36 úm, 4HÕ, 1,31 úd, 6HÕ.
Composto 163. 4-Ú1-Ú4-Ciclobutil-5-Ú5-isopropil-4H-1,2,4- triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-Ú1-Ú4-ciclobutil-2-metil-5-ú5-metil-4H-l,2,4 -triazol-3 -ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 152õ. m/z úES+õ 486 ÚM+Hõ+.
Composto 164.1. 4-úl-ú4-Ciclobut.il-5-ú5-isopropil-4H-l, 2,4 -triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 152.7, e usando propionohidrazida em vez de acetohidrazida.
Composto 164.2. Metil 4-ciclobutil-5-Ú5-etil-N-metil-4H- 1,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzoato. Metil 4-ciclobutil-5-ú5-etil-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzoato úcomposto 164.1, 87 mg, 0,2% mmolõ foi dissolvido em metanol e diclorometano υΐμΐ ν' v0 ύβ mlE3 . úúTrimetilsililB metilS diazometano ú2,0 M em éter022ú ul, 0,44 mmol0 foi adicionado. A mistura foi agitada p® 16 horas e resfriada bruscamente com HOAc Ú300 ulS . Os voláteis foram removidos in vacuo para fornecer um óleo Ú85 mgõ. 0 resíduo foi levado como bruto para a etapa seguinte sem purificação adicional, m/z úES+õ 314 úM+Hõ+.
Composto 164. 4 -Ú1-Ú4-Ciclobutil-5-ú5-etil-N-metil-4H- 1,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular úmistura de isômeros de N-metilõ foi preparado usando manipulaçS es químicaspadrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 152, e usando o composto 164.2 em vez do composto 152.7. m/z ÚES+õ 468 ÚM+Hõ+.
Composto 165. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-metil-5-ú5- útrifluorometilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulaçS es químicas padrão e procedimentos similaes àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-2- metil-5-ú5-metil-4H-l,2,4 -triazol-3 -ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 152õ. m/z úES+Õ 4%4,0 úM+Hõ+.
Composto 166. 4-úl-ú4-Ciclobutil-5-ú5-údifluorometilõ-4H- 1.2.4- triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4- ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-2-metil-5-ú5-metil-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 152Õ. m/z úES+õ 476 ÚM+Hõ+.
Composto 167. 4-úl-Ú4-Ciclobutil- 5-Ú5-údifluorometilõ-4H- 1.2.4- triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4- ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4- [1- [4-ciclobutil-2-metil-5-ú5-metil-4H-l,2,4 -triazol-3-ilõbenzoil]-4 -piperidil]benzonitrila úcomposto 152õ. m/z úES+õ 4%4 ÚM+Hõ*.
Composto 168.1. Metil 4-ciclobutilbenzoato. A uma mistura agitada de ZnBr2 Ú83,0 g, 368,53 mmol, 4,00 equivõ em THF Ú500 mLõ sob nitrogénio a 0°C foi adicionada uma solução de bromoúciclobutilõmagnésio Ú242 mL, 364 mmol, 1,5 M em THFõ gota a gota por 20 minutos. À mistura resultante foram adicionados PdúdppfõCl2 Ú2,00 g, 0,10 equivõ e metil 4-bromobenzoato Ú20 g, %3,00 mmol, 1,00 equivõ a -40°C. A mistura resultante foi agitada a -40°C por 1 hora sob nitrogénio e, em seguida, cuidadosamente resfriada bruscamente com 500 mL de NH4C1 úaq., sat.õ. A mistura foi extraída com 3x500 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 3x500 mL de salmoura, então secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para produzir 18,0 g úbrutoõ do composto titular como um óleo amarelo claro.
Composto 168.2. Metil 4-ciclobutil- 3 -iodobenzoato. A uma solução de metil 4-ciclobutilbenzoato Ú168.1, 2,00 g, 10,5 mmol, 1,00 equivõ em ácido acético Ú30 mLõ foram cuidadosamente adicionados periodato de sódio úl,00 g, 4,68 mmol, 0,50 equivõ, iodo Ú3,00 g, 11,8 mmol, 1,10 equivõ e ácido sulfúrico Ú0,15 g, 0,15 equivõ. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 100°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi então resfriada bruscamente por adição cuidadosa de 30 mL de Na2S203 úaq., sat.õ e a mistura resultante foi extraída com 3x20 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 3x20 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para produzir 1,50 g ú45%H do composto titular como um óleo amarèo.
Composto 168.3. Metil 3-ciano-4-ciclobutilbenzoato. 0 composto titular ú2,60 g ú%5%0 , sólido brancoH foi preparado usando manipulações químicas padrão e um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 152.4, e usando o composto 168.2 ú4,00 g, 12,7 mmolõ em vez do composto 152.3.
Composto 168. 4-Ú1-Ú4-Ciclobutil-3-ú5-etil-4H-l,2,4 - triazol-3- ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 152, e usando 168.3 em vez de 152.4. m/z úES+0 458 úM+HS.
Composto 16%. 4-úl-Ú4-Ciclobutil-3-Ú5-etil-4H-1,2,4- triazol-3- ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 152, e usando 168.3 em vez de 152.4. m/z úES+õ 440 ÚM+Hõ+. XH RMN Ú300 MHz, CD3ODEI μδ 7,88 úd, 2H0 , 7,67-7,50 úm, 3H0 , 7,47 úd, 2H0 , 4,8 % - 4,7 5 úm, 1H0 , 4,25-3,73 úm, 2H03,, 35-3,25 úm, im , 3,16-2,75 úm, 4H0 , 2,30-l,%4 úm, 6H01„%3-1,56 úm, 4H0 , 1,51-1,32 úm, 3H0 .
Composto 170. 4-úl-Ú4-Ciclobutil-3-Ú5-metil-4H-1,2,4- triazol-3-illEI benzoilH -4-fluoropiperidin-4-ilE benitonila, 0 composto titular foi preparado usando procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 152, e usando os compostos 168.3 e sal HC1 11.2 em vez dos compostos 152.4 e 1.5, respectivamente. m/z úES+õ 444 ÚM+Hõ+.
Composto 171. 4-Ú1-Ú4-Ciclobutil-3-Ú5-Ú2-metoxietilõ-4H- 1,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 152 e 156, e usando 168.3 em vez de 152.4. m/z ÚES+õ 488 ÚM+HÕ+.
Composto 172.1. úSõ-Tetrahidrofuran-2-carbohidrazida. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de ácido úSõ-tetrahidrofuran-2-carboxílico Ú3,00 g, 25,8 mmol, 1,00 equivõ em diclorometano Ú40 mLõ. EDC-HC1 ú7,50 g, 3%,1 mmol, 1,50 equivõ, HOBT Ú5,20 g, 38,5 mmol, 1,50 equivõ e hidrato de hidrazina u.2 mL, 2,00 equiv, %%%õ foram adicionados à reação. A solução resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. Os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado in vacuo para fornecer 5,38 g Ú80%õ do composto titular como um óleo amarelo.
Composto 172. úSõ-4-úl-ú4-Ciclobutil-2-naetil-5-ú5- útetrahidrofuran-2-ilõ-4H-l,2,4-triazol-3- ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4 - úl-Ú4 - ciclobutil-2 - metil-5-Ú5- met.il- 4H-1,2,4 - triazol-3 -ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 152o, usando úSõ-tetrahidrofuran-2-carbohidrazida úcomposto 172.lõ em vez de acetohidrazida. m/z uES+õ 4%6 úM+Hõ+.
Composto 173. úSõ-4-úl-ú4-Ciclobutil-2-metil-5-ú5- útetrahidrofuran-2-ilõ-4H-l,2,4 -triazol-3-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 172, e usando o composto sal HC1 11.2 em vez do composto 1.5. m/z úES+õ 514 úM+Hõ+.
Composto 174.1. úi?õ-Tetrahidrofuran-2 - carbohidrazida. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de ácido úJ?õ-tetrahidrofuran-2-carboxílico ú3,00 g, 25,8 mmol, 1,00 equivõ em diclorometano Ú60 mLõ. EDC-HC1 ú7,37 g, 38,5 mmol, 1,50 equivõ, HOBt ú5,24 g, 3 8,8 mmol, 1,50 equivõ e hidrato de hidrazina ú2,60 g, 51,% mmol, 2,00 equivõ foram adicionados à reação. A solução resultante foi agitada durante a noite a 25°C. Os sólidos foram removidos com filtração. 0 filtrado foi concentrado in vacuo para produzir 2,00 g ú5%%õ de úRõ-tetrahidrofuran-2-carbohidrazida como um óleo amarelo.
Composto 174. úRõ-4-úl-ú4-Ciclobutil-2-metil-5-ú5- útetrahidrofuran-2-Í1Õ-4H-1,2,4-triazol-3- ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-Ú4-ciclobutil-2-metil-5-Ú5-metil-4H-1,2,4-triazol-3-il® benzoil® piperidin-4-il® benzonitrila úcomposto 2®5, usando ÚR® -tetrahidrofuran-2 -carbohidrazida úcomposto 174. lõ em vez de acetohidrazida. m/z úES+õ 4%6 úM+Hõ+. XH RMN Ú3 00 MHz, CD3ODõp δ 7,70 úd , 2HÕ, 7,4%-7,41 úm, 4HÕ, 5,15 ut, 1HÕ, 4,8%-4,80 úm, 1HÕ, 4,14-3,%2 úm, 3HÕ, 3,65- 3,51 úm, 1HÕ, 3,33-3,27 úm, 1HÕ, 3,03-2, %5 úm, 2HÕ, 2,47-2,37 úm, 4HÕ, 2,24-1, %1 úm, %Hõ, 1,83-1,71 úm, 4HÕ.
Composto 175.1. Ácido 4-ciclopentil-2-metil-5-ú5-metil-4H- 1,2,4-triazol-3-ilõbenzóico. 0 composto titular foi sintetizado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 152.8, e usando bromoúciclopentilõmagnésio em vez de bromoúciclobutilõmagnésio.
Composto 175. 4-úl-ú4-Ciclopentil-2-metil-5-ú5-metil-4H-1,2,4 -triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi sintetizado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 152, e usando o composto 175.1 em vez do composto 152.8. m/z úES+õ 4%5 ÚM+Hõ'\
Composto 176.1. terc-Butil 4-ú4-bromofenilõ-4-hidroxi-2 -metilpiperidina-l-carboxilato. 0 composto titular foi sintetizado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 1.1, e usando terc- butil 2-meti1-4-oxopiperidina-1-carboxilato em vez de terc-butil 4-oxopiperidina-l-carboxilato.
Composto 176.2. terc-Butil 4-Ú4-cianofenilõ-2-metilpiperidina-l-carboxilato. 0 composto titular foi sintetizado usando procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 1.4, e usando o composto 176.1 em vez do composto 1.1.
Composto 176.3. 4-Ú2-Metilpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A uma solução de terc-butil 4-ú4-cianofenilKI -2-metilpiperidina-l-carboxilato úcomposto 176.2, 500 mg, 1,50 mmol, 1,00 equiv, %0H K em diclorometano Ú3 mLlEI foi adicionado TFA gota a gota úl mL0 . A mistura resulánte foi agitada por 1,5 horas â temperatura ambiente, então diluída com 30 mL de diclorometano. A mistura resultante foi lavada com bicarbonato de sódio úaq., 1M. Observaçãop evolução de gás significativaõ. A fase aquosa foi extraída com 2x50 mL de diclorometano e as camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com metanol'diclorometano ύ1μ5Ο-1μ2Ο0 como eluente para produzir 280 mg ú%3lE3 13 de 4-ú2-metilpiperidin-4-ilE3 benzonitrila como um óleo incolor.
Composto 176.4. terc-Butil 4-Ú4-cianofenilõ-2- metilpiperidina-l-carboxilato. O composto titular foi sintetizado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 152.8, e usando o composto 164.1 em vez do composto 152.7.
Composto 176. 4-úl-Ú4-Ciclobutil-5-ú5-etil-4H-l,2,4- triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõ-2-metilpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de 4-ú2-metilpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 176.3, 210 mg, 0,%40 mmol, 1,00 equiv, %0óõ em N, N-dimeti 1 formamida ú2 mLõ. EDC-HC1 Ú404 mg, 2,11 mmol, 2,00 equivõ, 4-dimetilaminopiridina Ú257 mg, 2,10 mmol, 2,00 equiv0 e ácido 4-ciclobutil-5-ú5-etil-4H-l,2,4 -triaol-3-ilõ-2-metilbenzóico úcomposto 176.4, 300 mg, 1,05 mmol, 1,00 equiv0 foram adicionados à mistura de reação. A solução resultante foi agitada por 4horas a 25°C, então diluída com 50 mL de etil acetato. A mistura resultante foi lavada com 2x30 mL de NH4C1 úaq., sat.õ e 2x30 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com diclorometano'metanol 02Ομ1ό como eluente. 0 produto bruto 0 ~20 mgõ foi adicionãmente purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiç0 esúl#-Pre-HPLC-001 úShimadzuõõp Coluna, SunFire Prep Cl8, l%*150mm 5um; fase móvel, água com 0,050 TFA e C1EN Ú480 CH3CN até 4%0 em 8 minutos, até 1000 em 3 minutos, albao de 480 em 2 minutosõ; Detector, Waters 248% 254&amp;22fim. As fraç0 es contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 3,8 mg Ú10 õ do compostotitular como um sólido branco, m/z úES+ó 468 úM+Hõ+.
Composto 177.1. Ácido 4-cloro-5-iodo-2-metilbenzóico. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de ácido 4-cloro- 2-metilbenzóico Ú30,0 g, 176 mmol, 1,00 equivõ em ácido acético Ú300 mLõ. NaI04 úl%,0 g, 88,8 mmol, 0,50 equivõ, I2 Ú4%, 0 g, 1%3 mmol, 1,10 equivõ e ácido sulfS rico ú3 mLõ foram adicionados à reação. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 110°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi cuidadosamente resfriada bruscamente com 500 mL de Na2S203 úaq., sat.õ. Os sólidos resultantes foram coletados por filtração e, em seguida, dissolvidos em 500 mL de etil acetato. A fase orgânica foi lavada com 2x200 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. Isto resultou em 20,0 g Ú380 õ de ácido 4-cloro-5-iodo-2-metilbenzóico como um sólido branco.
Composto 177.2. Metil 4-cloro-5-iodo-2-metilbenzoato. A uma solução de ácido 4-cloro-5-iodo-2-metilbenzóico úcomposto 177.1, 20,0 g, 67,5 mmol, 1,00 equivõ em metanol Ú100 mLõ foi adicionado ácido sulf0 rico ú5 mLõ gota a gota. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 75°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, o metanol foi removido sob pressão reduzida. 0 valor do pH da camada aquosa remanescente foi cuidadosamente ajustado para 7 com bicarbonato de sódio úaq., 1M. Observação: evolução de gás significativaõ. A fase aquosa foi extraída com 2x200 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x100 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob vácuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ50δ como eluente para fornecer 20,0 g ú%5Ê3 õ de metil 4-cloro-5-iodo-2- metilbenzoato como um líquido amarelo claro.
Composto 177.3. Ácido 4-cloro-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H-l,2,4-triazol-3- ilõ-2-metilbenzóico. O composto titular foi preparado usando manipulaçE es químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 152.8, mas usando os compostos 177.2 e 143.1 em vez do composto 152.3 e acetohidrazida, respectivamente.
Composto 177. 4-úl-ú4-Cloro-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulaçS esquímicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 152, mas usando o composto 177.3 em vez do composto 152.8. m/z úES+õ 464 ÚM+Hõ+.
Composto 178.1. 2-Bromo-4-clorobenzoato. 0 composto titular Ú17,0 g, sólido amarelo claro, 800 õ foi preparado eando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 177.2, mas usando ácido 2-bromo-4-clorobenzóico Ú20,0 gõ em vez do composto 177.1.
Composto 178.2. Metil 4-cloro-2-etilbenzoato. 0 composto titular ú2,20 g, líquido incolor límpido, 550 õ foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 48.1, mas usando o composto 178.1 Ú5,00 gõ em vez de metil 2-bromo-4-metilbenzoato.
Composto 178.3. Ácido 4-cloro-2-etil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H-1,2,4- triazol-3-ilõbenzóico. O composto titular foi preparado usando manipulaç0 es químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 152.8, usando o composto 178.2 e 3-metoxipropanohidrazida úcomposto 143.lõ em vez do composto 152.2 e acetohidrazida, respectivamente.
Composto 178. 4-úl-ú4-Cloro-2-etil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H- 1,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 152, mas usando o composto 178.3 em vez do composto 152.8. m/z úES+õ 478 ÚM+Hõ+.
Composto 17%. 4-úl-ú4-Cloro-2-etil-5-ú5-útetrahidrofuran-3-Í1Õ-4H-1,2,4 - t.riazol-3 -ilõbenzoilõpiperidin-4 -ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 38 e 178. m/z ÚES+0 4%Q úM+HlEI.
Composto 180.1. Metil 4-bromo-2-fluorobenzoato. A um balão de vidro com 3 gargalos de 500-mL foi adicionada uma solução de ácido 4-bromo-2-fluorobenzóico ú.30,0 g, 137 mmol, 1,00 equivB em metanol Ú200 mL0 . S0£lú24,0 g, 202 mmol, 1,50 equivS foi adicionado gota a gota a 0°C. A solução resultante foi agitada por 10 minutos a 0°C, por 30 minutos a 25 °C e, em seguida, por 3 horas a 50 °C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi particionado entre água Ú100 mLE3 e etil acetatoÚ100 mLõ. A fase aquosa foi extraída com 100 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1x100 mL de água, 1x100 mL de bicarbonato de sódio úaq., sat.õ e 1x100 mL de salmoura. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para produzir 30,0 g ú%40 õ do composto titular como um sólido amarelo claro.
Composto 180.2. Metil 4-etil-2-fluorobenzoato. 0 composto titular ú3,80 g, óleo incolor límpido, %70 õ foi prparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 48.1, mas usando o composto 180.1 Ú5,Q0 gõ em vez de metil 2-bromo-4-metilbenzoato.
Composto 180.3. Ácido 4-etil-2-fluoro-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H-1,2,4 -triazol-3-ilõbenzóico. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 152.8, usando os compostos 180.2 e 143.1 em vez do composto 152.2 e acetohidrazida, respectivamente.
Composto 180. 4-úl-ú4-Etil-2-fluoro-5-Ú5-Ú2-met.oxietilõ-4H- 1,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 152, mas usando o composto 180.3 em vez do composto 152.8. m/z úES+õ 462 ÚM+Hõ+.
Composto 181.1. Ácido 4-bromo-2-etilbenzóico. A um balão de vidro com 3 gargalos de 1 L, o qual foi expurgado e mantido com uma atmosfera de nitrogénio, foi adicionado ácido 4-bromo-2-fluorobenzóico Ú50,0 g, 228 mmol, 1,00 equivõ em tetrahidrofurano Ú500 mLõ. Uma solução de brometo de etilmagnésio Ú250 mL, 3M em THFõ foi adicionada gota a gota a 0°C. A solução resultante foi agitada por 3-4 horas a 0 °C. A mistura foi então cuidadosamente resfriada bruscamente pela adição gota a gota de água a 0°C. Após completo resfriamento da reação, água adicional foi adicionada e o pH foi ajustado para 2-3 com cloreto de hidrogénio úaquoso, 2Mõ. A mistura foi extraída com 2x200 mL de etil acetato e as camadas orgânicas foram combinadas. Hidróxido de sódio Ú2N, aq.õ foi empregado para ajustar o pH para 7-8. A mistura resultante foi lavada com 2x200 mL de etil acetato. 0 valor do pH da solução aquosa foi ajustado para 2-3 com 2N cloreto de hidrogénio, então extraída com 2x200 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. Isto resultou em 30,0 g Ú570 õ de ácido 4-bromo-2- etilbenzóico como um sólido amarelo.
Composto 181.2. Metil 4-bromo-2-etilbenzoato. 0 composto titular Ú25,0 g, líquido amarelo claro, 7%%õ foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 177.2 , mas usando o composto 181.1 Ú30,0 g0 em vez do composto 177.1.
Composto 181.3. Metil 4-ciclobutil-2-etilbenzoato. A uma mistura agitada de ZnBr2 Ú33,5 g, 14% mmol, 4,00 equivS em THF Ú350 mL0 sob nitrogénio a 0°C foi adicionada, gta a gota, uma solução de brometo de ciclobutilmagnésio S 148 mmol em 50 mL THF0 . Após agitação a 0°C por 0,5 hoa, a temperatura foi baixada para -78°C e PdúdppfóCl2 Ú2,00 g, 2,73 mmol, 0,07 equivó foi adicionado, seguido pela adição de uma solução de metil 4-bromo-2-etilbenzoato úcomposto 181.2, %, 00 g, 37,0 mmol, 1,00 equivõ em tetrahidrofurano Ú10 mL0 gota a gota à mesma temperatura. A mistura de reação foi permitida alcançar lentamente a temperatura ambiente e, em seguida, agitada durante a noite. A reação foi cuidadosamente resfriada bruscamente com uma solução aquosa de NH4C1 saturada Ú100 mL0 . A mistura resultante foi extraída com 500 mL de etil acetato. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ50ό para fornecer 8,00 g ú%%B õ do produto desejado como um óleo amarelo càro.
Composto 181.4. Metil 4-ciclobutil-2-etil-5-iodobenzoato. A uma solução de metil 4-ciclobutil-2-etilbenzoato úcomposto 181.3, 7,70 g, 35,3 mmol, 1,00 equivõ em ácido acético Ú80 mLõ foram adicionados iodo ú8,%8 g, 35,4 mmol, 1,00 equivõ, NaI04 ú3,78 g, 17,7 mmol, 0,50 equivõ e ácido sulf0 rico Ú0,870 g, 8,87 mmol, 0,25 equivõ. A mistura de reação foi agitada a 60°C durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi lentamente resfriada bruscamente com Na2S203 úaq., sat.õ. A mistura foi extraída com 200 mL de etil acetato e a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύΐμ 50õ para fornecer 10,5 g Ú860 õ do produto desejado como um sólido inolor.
Composto 181.5. Metil 5-ciano-4-ciclobutil-2-etilbenzoato. A um balão de vidro, o qual foi expurgado e mantido com uma atmosfera de nitrogénio, foi adicionada uma solução de metil 4-ciclobutil-2-etil-5-iodobenzoato úcomposto 181.4, 5,50 g, 16,0 mmol, 1,00 equivB exaN,i\7-dimetilformamida Ú150 mL0 . Cianeto de zinco Ú2,78 g, 23,7 mmol, 1,50 equv0 e PdúPPh304 úl,83 g, 1,5% mmol, 0,10 equivS foram adicionados à mistura de reação. A solução resultante foi agitada a 100°C por 15 horas sob nitrogénio. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi cuidadosamente resfriada bruscamente com 300 mL de FeS04 úaq., sat.õ e diluída com etil acetato. A mistura resultante foi agitada vigorosamente, então filtrada através de celite e lavada com 1M FeS04, água e etil acetato. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 2x300 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x300 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatograf ia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ100-1μ50δ como eluente para fornecer 3,20 g Ú82%õ de metil 5-ciano-4-ciclobutil-2-etilbenzoato como um óleo amarelo claro.
Composto 181.6. Metil 5-carbamotioil-4-ciclobutil-2-etilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 5-ciano-4-ciclobutil-2-etilbenzoato úcomposto 181.5, 3,00 g, 12,3 mmol, 1,00 equivó em uma mistura solvente de tetrahidrofurano e H20 Ú80 mL'40 mLõ.
Então, foi adicionado 0,0'-dietil ditiofosfato Ú6,6% g, 35,% mmol, 3,00 equivõ gota a gota com agitação. A solução resultante foi agitada a 85°C por 48 horas úPRECAUÇÃOp ocorrência de evolução de gás significativa - esta e todas as outras reaç0 es descritas aqui devem ser realizads em capelas químicas bem ventiladasõ. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi então concentrada in vacuo. 0 produto bruto foi purificado por recristalização de éter de petróleo para fornecer 1,30 g Ú38S õ de atil 5-carbamotioil-4-ciclobutil-2-etilbenzoato como um sólido amarelo claro.
Composto 181.7. Metil 4-ciclobutil-2-etil-5-úiminoúmetiltioómetilõbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 5-carbamotioil-4-ciclobutil-2-etilbenzoato úcomposto 181.6, 1,50 g, 5,41 mmol, 1,00 equivõ em tetrahidrofurano Ú30 mLõ. Em seguida, foi adicionado iodometano Ú3,80 g, 26,8 mmol, 5,00 equivõ gota a gota com agitação. A solução resultante foi agitada a 25°C por 15 horas, então concentrada in vacuo. Isto resultou em 1,80 g ú%7E3 õ do composto titular como ra óleo amarelo.
Composto 181.8. Metil 4-ciclobutil-2-etil-5-ú5-etil-4H- 1,2,4-triazol-3-ilõbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 4-ciclobutil-2-etil-5-úmetilsulf anilKI carboximidoilbenzoato úcomposto 1817, %00 mg, 3,0% mmol, 1,00 equivKi em AcOH Ú20 mL0 .
Propionohidrazida Ú880 mg, %,%% mmol, 3,00 equivKI <Bi adicionada e a mistura resultante foi agitada a %0°C por 2 horas. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi então concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ50-1μ3ό como eluente para produzir 0,360 g Ú37H õ do composto titular com um óleo claro.
Composto 181.Kl . Ácido 4-ciclobutil-2-etil-5-ú5-etil4H-1,2,4 -triazol-3-ilõbenzB ico. A um balão de vidro fé adicionada uma solução de metil 4-ciclobutil-2-etil-5-ú5-etil-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoato úcomposto 181.8, 360 mg, 1,15 mmol, 1,00 equivõ em metanol Ú20 mLõ. Uma solução de hidrS xido de s0 dio Ú4 60 mg, 11,5 mmol, 10,0 equm em água Ú10 mLõ foi adicionada à mistura de reação. A solução resultante foi agitada a 25°C por 15 horas. O solvente orgânico foi então removido sob pressão reduzida. O valor do pH da fase aquosa remanescente foi ajustado para 2-3 com cloreto de hidrogénio úaq., 2Mõ. O precipitado resultante foi coletado por filtração e seco sob alto vácuo para produzir 320 mg ú%3%õ do composto titular como um sólido branco.
Composto 181. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-etil-5-ú5-etil-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A uma solução de ácido 4-ciclobutil-2-etil-5-ú5-etil-4H-l,2,4 -triazol-3- ilõbenzóico úcomposto 181.%, 160 mg, 0,530 mmol, 1,00 equivõ em N, N-dimetilformamida Ú20 mLõ foram adicionados EDCI Ú113 mg, 0,5%0 mmol, 1,11 equivõ, DMAP úl%7 mg, 1,62 mmol, 3,03 equivõ e HOBT Ú87,5 mg, 0,650 mmol, 1,21 equivõ. Após 5 minutos, cloridrato de 4- úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 110 mg, 0,5%0 mmol, 1,10 equivõ foi adicionado. A mistura resultante foi agitada a 25°C por 15 horas, em seguida resfriada bruscamente com 100 mL de água gelada. A mistura foi extraída com 2x150 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 3x150 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas. 0 produto bruto ú~150 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições 0 1#-Pre-HPLC-001 0 Shimadzuõõp oíCuna, SunFire Prep C18, l%*150mm 5um; fase móvel, água com 0,05% TFA e CH3CN ú47% CH3CN até 61% em 6 minutos, até 100% em 1,5 minutos, abaixo de 47% em 1,5 minutosõ; Detector, Waters 248% 254&amp;220nm. As fraç0 es contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir %%,5 mg Ú4O0 õ do composto titular como um sólido branco, m/z úES+0 468 ÚM+HEP. 1H - NMR Ú300 MHz, CD3OD0 μδ 7,71-7,6% úm, 2H0 , 7,50- 7,32 úm, 4H0 , 4,03-3,%% úm, 1H0 , 3,65-3,5 úm, 1H03„32- 3,20 úm, 1H0 , 2,%0-2,%5 úm, 4H0 , 2,70-2,74 úm, 2H02„20- 1, %8 úm, 6H0 , 1, %8-1,7% úm, 4H0 , 1,41 út, 3H0 , 171%28 úm, 3H0 .
Composto 182. 4-úl-ú4-Ciclopropil-2-etil-5-ú5-ú2- metoxietilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 143 e 181. m/z ÚES+Õ 484 ÚM+Hõ+. lH-NMR Ú300 MHz, CD3ODõp δ 7,67 úd, 2HÕ, 7,4%-7,37 úm, 3HÕ, 7,11-7,05 úm, 1HÕ, 4,8%-4,80 úm, 1HÕ, 3,81 út, 2HÕ, 3,77-3,60 úm, 1HÕ, 3,4 ús, 3HÕ, 3,37- 3,32 úm, 1HÕ, 3,14 út, 2HÕ, 3,15-2,% úm, 2HÕ, 2, %2-2,5 úm, 2HÕ, 2,3 % - 2,3 6 úm, 1HÕ, 2,02-1,85 úm, IHõ, 1,85-1,6% úm, 3HÕ, 1,32-1,21 úm, 3HÕ, l,0-0,%5 úm, 2HÕ, 0,77-0,6% úm, 2HÕ.
Composto 183. 4-úl-ú4-Ciclopropil-2-etil-5-ú5- úmetoximetilõ-4H-l,2,4 -triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 143 e 181. m/z ÚES+Õ 4 70 ÚM+Hõ+.
Composto 184. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-etil-5-ú5-úmetoximetilõ-4H-1,2,4 -triazol-3-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 143 e 181, e usando o composto sal HC1 11.2 em vez do composto 1.5. m/z ÚES+õ 502 ÚM+Hõ+ .
Composto 185. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-etil-5-ú5-úmetoximetilõ-4H-1,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 143 e 181. m/z ÚES+õ 484 ÚM+Hõ+.
Composto 186. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-etil-5-ú5-etil-4H-l, 2,4-triazol-3 -ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 181, e usando o composto sal HC1 11.2 em vez do composto 1.5. m/z ÚES+õ 486 ÚM+Hõ+.
Composto 187. 4-úl-Ú4-Ciclobutil-2-etil-5-Ú5-Ú2- metoxietilõ-4H-l,2,4 -triazol-3-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 143 e 181, e usando o composto sal HC1 11.2 em vez do composto 1.5. m/z úES+õ 516 úM+Hõ+. ^-NMR Ú300 MHz, CD3ODÕp δ 7,77 úd, 2HÕ, 7,66-7,47 úm, 2HÕ, 7,47-7,35 úm, 2HÕ, 4,8%-4,83 úm, 1HÕ, 4,08-4,03 út, 1HÕ, 3,7% út , 2HÕ, 3,55 út, 2HÕ, 3,33 ÚS, 3HÕ, 3,28-3,20 úm, 1HÕ, 3,12 Út, 2HÕ, 2,80-2,68 Úm, 2HÕ, 2,27-1,68 úm, 10HÕ, 1,27 út, 3HÕ.
Composto 188. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-etil-5-ú5-ú2- metoxietilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 143 e 181. m/z ÚES+Õ 4%8 ÚM+HÕ+. 1H-NMR Ú300 MHz, CD3ODõu δ 7,67 úd, 2HÕ, 7,44-7,31 úm, 4HÕ, 4,8% ús, 1HÕ, 4,04 -3, %8 úm, 1HÕ, 3,7% út, 2HÕ, 3,66-3,60 úm, 1HÕ, 3,33 ús, 3HÕ, 3,23-3,12 úm, 1HÕ, 3,10 út, 2HÕ, 3,02 út, 2HÕ, 2,77-2,66 úm, 2HÕ, 2,l%-2,04 úm, 6HÕ, 1,80-1,68 úm, 4HÕ, 1,31-1,26 Úm, 3HÕ.
Composto 18%.1. Metil 4-úciclobutilmetilõ-2-metilbenzoato. 0 composto titular ú4,00 g, óleo amarelo, 840 õ foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 181.3, usando o composto 152.1 Ú5,00 gõ e brometo de ciclobutilmetilmagnésio em vez do composto 181.2 e brometo de ciclobutilmagnésio, respectivamente.
Composto 18%. 2. Metil 4-úciclobutilmetilõ-5 - iodo-2 -metilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 4-0 ciclobutilmetilõ-2-metilbenzoat> 0 composto 18%.1, 8,40 g, 38,5 mmol, 1,00 equivõ em Ac OH 0 150 mLõ. NaI0 0 5,00 g, 23,4 mmol, 0,50 equivõ, iodo 0 10,0 g, 3%,4 mmol, 1,00 equivõ e ácido sulf0 rico Ú0,3 mB foram adicionados à mistura de reação. A solução resultante foi agitada a 60°C por 12 horas. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi resfriada bruscamente com 200 mL de NaHS03 úaqõ. A mistura foi extraída com 2x200 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ20μ1ό como eluente para fornecer 8,00 g Ú6O0 õ de etil 4-úciclobutilmetilõ-5-iodo-2-metilbenzoato como um sólido branco.
Composto 18%.3. Metil 5-ciano-4-úciclobutilmetilõ-2-metilbenzoato. 0 composto titular ú5,0 g, óleo amarelo claro, 880 õ foi preparado usando um procedimento smilar àquele usado para a preparação do composto 181.5, usando o composto 18%.2 ÚS,00 gó em vez do composto 181.4.
Composto 18%.4. Metil 5-carbamotioil-4-úciclobutilmetilõ-2-metilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 5-ciano-4-úciclobutilmetilõ-2-metilbenzoato úcomposto 18%. 3, 5,00 g, 20,6 mmol, 1,00 equivõ em uma mistura solvente de THF e H20 Ú50 mL' 25 mLõ. 0,00 -dietil ditiofosfato Ú15,0 g, 80,5 mmol, 4,00 quivõ foi adicionado ao balão de reação. A solução resultante foi agitada a 80°C por 48 horas úPRECAUÇÃOp ocorrência de evolução de gás significativa - esta e todas as outras reações descritas aqui devem ser realizadas em capelas químicas bem ventiladasõ. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi cuidadosamente resfriada bruscamente com 50 mL de salmoura. A mistura foi extraída com 3x50 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatograf ia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo (1μ4ο como eluente para fornecer 1,20 g (21%õ do composto titular como um óleo amarelo.
Composto 180 .5. Metil 4- (ciclobutilmetilõ-2-metil-5 (metilsulfanilõcarboximidoilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 5-carbamotioil-4-(ciclobutilmetilõ-2-metilbenzoato (composto 180 .4,1,20 g, 4,33 mmol, 1,00 equivõ em t et rahidrof urano (25 mLõ. Iodometano (5,00 g, 35,2 mmol, 8,00 equivõ foi adicionado à mistura de reação. A solução resultante foi agitada a 20°C por 12 horas e então concentrada in vacuo. Isto resultou em 1,10 g (87%õ de metil 4-(ciclobutilmetilõ-2-metil-5-(metilsulfanilõcarboximidoilbenzoato como um óleo amarelo.
Composto 18%.6. Metil 4-úciclobutilmetilõ-5-Ú5-etil-4H-1,2,4 -triazol-3-ilõ-2-metilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 4-úciclobutilmetilõ-2-metil-5-úmetilsulfanilõcarboximidoilbenzoato úcomposto 180 .5, 1,00 g, 3,43 mmol, 1,00 equivõ em AcOH Ú2 5 ffiiõ. Propionohidrazida úl,20 g, 13,6 mmol, 4,00 equivõ foi adicionada e a mistura resultante foi agitada a 100°C por 1 hora. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo úlpSõ como eluente para fornecer 300 mg ú28%õ do composto titular como um sólido branco.
Composto 18%.7. Ácido 4-úciclobutilmetilS -5-ú5-etil4H- 1,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzóico. 0 composto titular Ú260 mg, sólido branco, %l%õ foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 181.%, usando o composto 18%.6 Ú300 mgõ em vez do composto 181.8.
Composto 18%. 4-úl-Ú4-úCiclobutilmetilõ-5-Ú5-etil-4H-1,2,4- triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular Ú28 mg, sólido branco,18EI õ foi prparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 181, usando o composto 18%.7 EI 100 mgõ em vez do composto 181.%. m/z § ES+õ 468 Ei M+Sõ 1H-NMR 0 300 MHz, CPODÕU δ 7,67 E d, 2HÕ, 7,52-7,47 E m, 3HÕ, 7,26 E s, 1HÕ, 3,66-3,22 E m, 1HÕ, 3,33-3,22 E m, 1HÕ, 3rB$%% E m, 4HÕ, 2, %7 E q, 2HÕ, 2,53-2,47 E m, 1HÕ, 2,47 e 43, EI 2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3Hõ 2,00-1,50 úm, 10HÕ, 1,41 út, 3HÕ.
Composto lE 0.1. Metil 2-bromo-5-iodo-4-metilbenzoat>. A um balão de vidro foi adicionada uma mistura de metil 2 -bromo-4-metilbenzoato ú2,00 g, 7,86 mmol, 1,00 equivõ em AcOH Ú20 mLõ. I2 Ú2,45 g, EI ,65 mmol, 1,10 equivõ, NalQ úEI 50 mg, 4,42 mmol, 0,50 equivõ e ácido sulfúrico Ú0,1 mL, 0,15 equivõ foram adicionados e a mistura resultante foi agitada a 100°C durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi cuidadosamente resfriada bruscamente com Na2S203 EI aq., sat.õ. A mistura resultante foi extraída com 2x50 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas in vacuo para produzir 2,50 g Ú81EI õ do composto titular com um sólido esbranquiçado.
Composto 1%0.2. Metil 2-bromo-5-ciano-4-metilbenzoato. 0 composto titular úl,10 g, sólido branco, 6lH õ foi peparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 181.5, usando o composto 1%0.1 0 2,50 gõ em vez do composto 181.4.
Composto 1%0.3. Metil 5-ciano-2-ciclopropil-4- metilbenzoato. A uma solução de metil 2-bromo-5-ciano-4-metilbenzoato IEE composto 1%0.2, 600 mg, 2,13 mmol, 100 equiv, %0lEI õ em tolueno Ú20 mLõ sob nitrogénio foram adicionados ácido ciclopropilborônico Ú552 mg, 6,43 mmol, 2,00 equivõ, uma solução de carbonato de potássio Ú876 mg, 6,34 mmol, 2,00 equivõ em água úl mLõ, Pdúdppf ÕC12 Ú252 mg, 0,10 equivõ e PdúOAcõ2 Ú70 mg, 0,10 equivõ. A mistura resultante foi agitada sob nitrogénio a 100°C durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi diluída com 20 mL de H20 e então extraída com 3x50 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas in vacuo para fornecer 450 mg Ú8%É3 õ de metil 5-ciano-2-ciclopropil-4-metiB>enzoato como um sólido branco.
Composto 1%0.4. Metil 5-carbamotioil-2-ciclopropil-4-metilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 5-ciano-2-ciclopropil-4-metilbenzoato úcomposto 1%0.3, 220 mg, 0, %20 mmol, 1,00 equiv, %0® δ em tetrahidrofurano u.6 mL® . Uma solução de Ο,Ο'-dietil ditiofosfato Ú300 mg, 1,61 mmol, 2,00 equivõ em água úl, 5 mL® foi adicionada à solução e a mistura resultante foi agitada durante a noite a 80°C em um banho de óleo úPRECAUÇÃOp ocorrência de evolução de gás significativa -esta e todas as outras reações descritas aqui devem ser realizadas em capelas químicas bem ventiladas® . Apé arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatograf ia em coluna de gel de sílica com etil acetato/éter de petróleo ύ5μ1® como eluente. As frções coletadas foram combinadas e concentradas in vacuo para fornecer 100 mg ú3%® ® de metil 5-carbamotioi1-2-clopropi1-4-metilbenzoato como um sólido amarelo.
Composto 1%0.5. Metil 2-ciclopropil-4-metil-5- úmetilsulfanil® carboximidoilbenzoato. A uma solução de metil 5-carbamotioil-2- ciclopropil-4-metilbenzoato úcomposto 1%0.4, 600 mg, 2,17 mmol, 1,00 equiv, %0®® em THF Ú55 mL® foi adicionado iodometano úl mL® gota a gat A mistura resultante foi agitada durante a noite a 25°C, depois concentrada e seca sob pressão reduzida para produzir 400 mg Ú56® ® do composto titular como umoisido amarelo.
Composto 1%0.6. 2-Metoxiacetohidrazida. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de etil 2-metoxiacetato ύΙΟ,Ο g, 76,2 mmol, 1,00 equiv, %0H õ e N£NH2 ·H20 Ú12 mL, 3,00 equivõ em etanol Ú100 mLõ. A solução resultante foi agitada por 3 horas a 80°C em um banho de óleo, depois concentrada e seca sob pressão reduzida para produzir 6 g Ú680 õ de 2-metoxiacetohidrazida como um sólido branco.
Composto 1%0.7. Metil 2-ciclopropil-5-ú5-úmetoximetilõ-4H- 1,2,4-triazol-3-ilõ-4-metilbenzoato. Uma solução de metil 2-ciclopropil-4-metil-5- úmetilsulfanilõcarboximidoilbenzoato úcomposto 10 05, 400 mg, 1,37 mmol, 1,00 equiv, %O0 õ e 2-metoxiacetohidazida úcomposto 1%0.6, 88% mg, 7,6% mmol, 5,00 equivõ em AcOH Ú25 mLõ foi agitada durante a noite a 0 0°C. Após arrefeimento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo Ú2plõ como eluente. As frações coletadas foram combinadas e concentradas in vacuo para fornecer 200 mg Ú440 õ de metil 2-ciclopropil-5-Ú5-úmetoximetilõ-4H-1,2,4-triazol-3-ilõ-4-metilbenzoato como um sólido branco.
Composto 1%0.8. Ácido 2-ciclopropil-5-ú5-úmetoximetilõ-4H- 1,2,4 -triazol-3-ilõ-4-metilbenzóico. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 2-ciclopropil-5-ú5-úmetoximetilõ-4H-1,2,4 -triazol-3 -ilõ-4-metilbenzoato úcomposto 1%0.7, 200 mg, 0,600 mmol, 1,00 equiv, %0Ê3 õ em metanol Ú4 mLõ. Uma solução de hidróxido de sódio Ú106 mg, 2,6 5 mmol, 4,00 equivUS em água Ú2 mL0 foi adicionad à mistura de reação. A solução resultante foi agitada por 2 horas a 60°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, o solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida e o pH da camada aquosa remanescente foi ajustado para 2-3 com cloreto de hidrogénio úaq, 6 Mõ. Os sólidos resultantes foram coletados por filtração e secos para produzir 170 mg Ú8%õõ do composto titular como um sB lido branco.
Composto 1%0. 4-úl-ú2-Ciclopropil-5-ú5-úmetoximetilõ-4H-
1,2,4-triazol-3-ilõ-4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular Ú115,5 mg, s0 Ido branco, 51óõ foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 181, usando o composto 1%0.8 Ú150 mgõ em vez do composto 181.%. m/z úES+õ 456 ÚM+HÕU
Composto 10 1.1. Ácido 2-etil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H-l, 2,4-triazol-3-ilõ-4-metilbenzóico. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 10 0.8.
Composto 10 1. 4”úl"ú2”Etil-5-ú5-ú2-metOXÍetilÕ-4H-í2,4-triazol-3 -ilõ-4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular ú74,8 mg, sólido branco, 33óõ foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 181, usando o composto 1%1.1 Ú145 mgõ em vez do composto 181.%. m/z ÚES+õ 458 ÚM+Hõ+.
Composto 1%2. 4-úl-ú2-Etil-4-metil-5-ú5-útetrahidrofuran-3-ilõ-4H ”1,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 10 1.m/z úES+õ 4 70 úM+Hõ+.
Composto 1%3. 4-úl-ú2-Etil-5-ú5-úl-metoxipropan-2-ilõ-4H- 1.2.4 -triazol-3-ilõ-4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 1%1. m/z úES+õ 4 72 ÚM+HÕ'\
Composto 1%4. 4-úl-ú2-Etil-5-ú5-úmetoximetilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 1%1. m/z ÚES+õ 444 úM+Hõ+.
Composto 1%5. 4-úl-ú2-Ciclobutil-5-ú5-úmetoximetilõ-4H- 1.2.4 -triazol-3-ilõ-4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 1%0. m/z úES+õ 470 ÚM+Hõ+.
Composto 1%6.1. Metil 2-isopropil-4-metilbenzoato. A uma mistura agitada de dibromozinco ú3%,0 g, 173 mmol, 4,00 equivõ em THF Ú500 mLõ sob nitrogénio a -48°C foi adicionado, gota a gota, brometo de isopropilmagnésio Ú3M em THF, 170 mmolõ por um período de 30 minutos. PdúdppfõCl2 Ú0,5 g, 0,05 equivõ e metil 2-bromo-4-metilbenzoato ύΙΟ,Ο g, 43,7 mmol, 1,00 equivõ foram adicionados à mistura de reação mencionada acima. Após agitação por 1 hora a -48°C, a mistura de reação foi resfriada bruscamente pela adição cuidadosa de 500 mL de NH4C1 úaq.õ. A mistura resultante foi extraída com 3x500 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 3x 500 mL de salmoura e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com éter de petróleo ύΙμίΕΙ como eluente. Isto resultou em 6,50g Ú77%õ de metil 2-isopropil-4-metilbenzoato como um óleo amarelo.
Composto 1%6.2. Metil 5-iodo-2-isopropil-4-metilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 2-isopropil-4-metilbenzoato úcomposto 1%6.1, 6,50 g, 33,8 mmol, 1,00 equivõ em ácido acético Ú60 mLõ. Iodeto ú%,50 g, 37,4 mmol, 1,10 equivõ, periodato de sódio Ú3,60 g, 16,8 mmol, 0,50 equivõ e ácido sulfúrico Ú0,500 g, 0,15 equivõ foram adicionados à mistura de reação. A solução resultante foi agitada durante a noite a 100°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi resfriada bruscamente com Na2S203 úaq., sat.õ. A mistura foi extraída com 3x100 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 3x100 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. Isto resultou em 6,00 g Ú56%K de metil 5- iodo-2 -isopropl- 4 -metilbenzoato como um óleo amarelo.
Composto 1%6.3 . Metil 5-ciano-2-isopropil-4-metilbenzoato. 0 composto titular Ú0,8 g, sólido branco, 37%õ foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 181.5, usando o composto 1%6.2 Ú3,20 gõ em vez do composto 181.4.
Composto 1%6.4. Metil 5-carbamotioil-2-isopropil-4-metilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 5-ciano-2-isopropil-4-metilbenzoato úcomposto 1% 6.3, 800 mg, 3,68 mmol, 1,00 equivõ em tetrahidrof urano' H20 úl0'5 mLõ. 0,0Ê3 -dietil ditiofosfato Ú2,05 g, 11,0 mmol, 3,00 equivõ foi adicionado à mistura de reação. A solução resultante foi agitada por 15 horas a 85°C em um banho de óleo úPRECAUÇÃOp ocorrência de evolução de gás significativa - esta e todas as outras reações descritas aqui devem ser realizadas em capelas químicas bem ventiladas). Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi extraída com 2x100 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04) e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado usando cromatograf ia em coluna de gel de sílica com etil acetato/éter de petróleo ύ1μ100-1μ50-1μ0) como eluente para fornecer 0,800 g Ú86%) de metil 5-carbamotioi1-2-isopropi1-4-metilbenzoato como um óleo amarelo.
Composto 10 6.5. Metil 5-úiminoúmetiltio) metil) -2-ispropil- 4- metilbenzoato. 0 composto titular ú0,800 g, óleo amarelo, 0 2%) foi preparado usando um procedimento similar quele usado para a preparação do composto 181.7, usando o composto 10 6.4 Ú820 mg) em vez do composto 181.6.
Composto 10 6.6. Metil 2-isopropi1-5-Ú5-úmetoximeti1-4H- 1,2,4-triazol-3-il)-4-metilbenzoato. Uma solução de metil 5- úiminoúmetiltio)metil)-2 -i sopropi1-4 - metilbenzoato úcomposto 10 6.5, 800 mg, 3,01 mmol, 1,00 equiv) e 2 metoxiacetohidrazida úcomposto 10 0.6, 1,0 0 g, 18,3nmol, 5,00 equiv) em ácido acético Ú30 mL) foi agitada por 2 horas a 80°C em um banho de óleo, em seguida, concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ5Ο-1μ20 como eluente para produzir 250 mg Ú27S Se metil 2-isopropi1-5-Ú5-úmetoximetiIS -4H-1,2,4-triazol-3-10 -4-metilbenzoato como um óleo límpido.
Composto 1%6.7. Ácido 2-isopropil-5-ú5-úmetoximetilõ-4H- 1,2,4 -triazol-3-ilõ-4-metilbenzóico. 0 composto titular Ú0,20 g, sólido branco, 84%õ foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 181.%, usando o composto 1%6.6 Ú250 mgõ em vez do composto 181.8.
Composto 1%6 . 4-úl-Ú2-1sopropi1-5-Ú5-úmetoximetilõ-4H- 1,2,4-triazol-3- ilõ-4-metilbenzoilõpiperidin-4 - ilóbenzonitrila e Composto 1%7 . 4-úl-Ú5-ú5-úMetoximetilõ- 4H-1,2,4 -triazol-3-ilõ-4-metil-2-propilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A uma solução de ácido 2-isopropi1-5 -ú5 -úmetoximetilõ-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-4-metilbenzóico úcomposto 1%6.7, 200 mg, 0,6%0 mmol, 1,00 equivõ em DMF Ú20 mLõ foram adicionados EDCI Ú200 mg, 1,04 mmol, 1,51 equivõ, DMAP Ú250 mg, 2,05 mmol, 2,%6 equivõ e HOBT Ú110 mg, 0,810 mmol, 1,18 equivõ. Após agitação por 30 minutos à temperatura ambiente, o composto 1.5 Ú142 mg, 0,640 mmol, 0, %2 equiv0 foi adicionado e a solução resultante <5i agitada por 15 horas a 25°C, depois resfriada bruscamente com 100 mL de água gelada. A mistura resultante foi extraída com 2x200 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x100 mL de salmoura, então secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ50-1μ1-1μ0ό como eluente. 0 produto bruto ú~120 mgõ foi adicionalmente purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#-Pre-HPLC-001 úShimadzu0 13 μ Coluna, Sfimre Prep C18, l%*150mm 5um; fase móvel, água com 0,050 TFA e CH3CN Ú40,00 C£CN até 55,00 em 8 minutos, até 100,00 em 1 minuto, abaixo de 40,00 em 1 minuto0 ; Detector, Wats 248% 254&amp;220nm. As frações contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 57,4 mg Ú180 0 do composto 1%6 e 11,7 mg Ú40 0 do composto 1%7 como Èódos brancos. Composto 1%6. m/z úES+0 458 ÚM+H0. iH-NMR Ú300 MHz, CD3OD0 μ δ 7,65-7,62 úm, 2H0 , 7,55-7,28 úm, 4H0 , 4,61 ús, 2H0 , 3,67-3,62 úm, 1H0 , 3,44 ús, 3H0 , 3,27-3,233rn, 1H0 , 3,04-2,86 úm, 3H0 , 2,51 us, 3H0 , 1,%%-1,68 úr5JH0 , 1,31-1,26 úm, 6H0 . Composto 1%7.m/z ÚES+0 458 ÚM+H0. 1H-NMR Ú300 MHz, CD3OD0 μ δ 7,66-7,63 úm, 2H0 , 7,55 ÚS, 1H0 , 7,46-7,37 úm, 2H0 , 7,28 úm, 1H0 , 4,61 ús, 2H0 , 37S?58 úm, 1H0 , 3,44 ús, 3H0 , 3, l%-3,05 úm, 2H0 , 3,04-2, %ftn, 2H0 , 2,73-2,45 úm, 5H0 , 1, %8-l, 54 úm, 6H0 , 1,05-B, Sim, 3H0 .
Composto 1%8.1. Metil 4-isopropil-2-metilbenzoato. Um balão de vidro seco com barra de agitação foi expurgado com nitrogénio e carregado com diisopropil zinco Ú25 mL de uma solução 1M em THF, 25 mrnol, 2,0 equivõ. Então, adicionou-se metil 4-bromo-2-metilbenzoato úcomposto 152.1, 2,86 g, 12,5 mrnol, 1,0 equivõ em 1,4-dioxano u25 mLõ, seguido por adição de Pdúdppf õ2Cl2 · DCM úl, 02 g, 1,2 5 mrnol, 0,1 equivõ úexotérmico após adição de catalisador^ . 0 sistema foi expurgado com nitrogénio adicional e depois argônio, aquecido a 100°C por 4 horas e, em seguida, agitado à temperatura ambiente por 12 horas. A mistura foi cuidadosamente resfriada bruscamente com 1M HC1 úaq., 12 mLõ úalgum borbulhamentoõ, então diluída com água Ú100 mLõ e etil acetato Ú150 mLõ e misturada. A mistura foi filtrada através de celite e lavada com água e etil acetato Ú2x25 mL cadaõ. As camadas foram separadas e a aquosa foi extraída com adição de etil acetato Ú50 mLõ. As orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura Ú50 mLõ, secas úNa2S04õ e concentradas sob pressão reduzida. 0 produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica úhexanos para 6% etil acetatoõ para obtenção do composto titular como um óleo incolor ú.2,31 g, 0 6%õ. XH RMN Ú400 MHz, CDCl3õ: δ 7,86 úd com estrutura fina, J = 8,8 Hz, IHõ, 7,12-7,07 úm, 2HÕ, 3,87 ús, 3HÕ, 2,%0 úseptet, J = 6,8 Hz, IHõ, 2,5% ÚS, 3HÕ, 1,25 Úd, J = 6,8 Hz, 6HÕ.
Composto 1%8.2. Metil 5-iodo-4-isopropil-2-metilbenzoato. À metil 4- isopropil-2-metilbenzoato úcomposto 1%8.1, 2,31 g, 12,0 mrnol, 1,0 equivõ em um balão de vidro de 100 ti foi cuidadosamente adicionado TFA Ú24 mLõ e a mistura foi arrefecida para 0 °C. JV-Iodossuccinimida ú2,70 g, 12,0 mmol, 1,0 equivH foi adicionada em porções por 2 minutose a mistura resultante foi adicionada sob nitrogénio, agitada a 0°C por 20 minutos e, depois, à temperatura ambiente por 15 horas. A mistura foi cuidadosamente diluída para uma mistura de diclorometano Ú50 mLõ e adicionada a fosfato dissódico aquoso saturado para manter um pH acima de 3 úfosfato dissódico total a cerca de 500 mLS . A mistira foi bem agitada, separada e a aquosa foi extraída com DCM adicional Ú5x25 mLõ. As orgânicas combinadas foram lavadas com uma mistura de sulfito de sódio saturado Ú10 mLõ mais água Ú40 mLõ seguido por salmoura Ú50 mLõ, secas úMa2S04õ, filtradas e removidas in vacuo. 0 produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica úhexanos para 3% etil acetatoõ para obtenção do composto titular como um óleo marrom claro. Ú3,513 g, S 4%õ!h RMN Ú400 MHz, CDCI3ÍH μδ 8,35 ÚS, 1H0 , 7,08 ÚS, ÍHB , 3,87 ÚS, 3HB , 3,17 úseptet, J = 6,8 Hz, IHõ, 2,5% ús, 3Hõ, 1,23 úd, J = 6,8 Hz, 6HÕ.
Composto 1%8.3 . Metil 5-ciano-4-isopropil-2-metilbenzoato. A um balão de vidro seco foram adicionados metil 5-iodo-4-i sopropi1-2 -metilbenzoato úcomposto 1%8.2, 2,00 g, 6,2% mmol, 1,0 equivõ, cianeto de zinco úl,48 g, 12,6 mmol, 2,0 equivõ, DMF Ú20 mLõ e PdúPPh3õ4 Ú364 mg, 0,315 mmol, 0,05 equivõ. 0 sistema foi expurgado com nitrogénio seguido por argônio e a mistura foi aquecida a 100°C por 15 horas. A reação foi permitida arrefecer para temperatura ambiente, então diluída com etil acetato Ú50 mLõ e resfriada bruscamente com 1M FeS04 Ú25 mLõ. A mistura foi agitada vigorosamente por 40 minutos, então filtrada através de celite e lavada com 1M FeS04 Ú15 mLõ, água Ú50 mLõ e etil acetato Ú150 mLõ. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com etil acetato Ú50 mLõ. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura Ú4xl00 mLõ, secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas in vacuo. 0 produto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica úhexanos para 8% etil acetatoõ para obtenção do composto titular úl,14 g, 83%õ. 1H RMN Ú400 MHz, CDCl3õp δ 8,10 ús, 1HÕ, 7,25 ÚS, 1HÕ, 3,0 1 ús, 3HÕ, 3,37 úsfept, J = 6,8 Hz, 1HÕ, 2,67 ús, 3HÕ, 1,32 úd, J = 6,8 Hz, 6HÕ.
Composto 10 8.4. Metil 5-úúetiltioõúiminoõmetilõ-4-isopropil-2-metilbenzoato. Metil 5-ciano-4-isopropil-2-metilbenzoato úcomposto 10 8.3, 1,12 g, 5,16 mmol, 10 equivõ, 0,0' -dietil ditiofosfato Ú0 0%õ Ú2,0 mL, 10,7 mmol, 2,1 equivõ e água Ú200 0 Lõ foram adicionados a um fasco de 16 mL e a mistura foi aquecida com a tampa frouxa a 80°C por 85 horas úPRECAUÇÃOp ocorrência de evolução de gás significativa - esta e todas as outras reaç0 es desertas aqui devem ser realizadas em capelas químicas bem ventiladasõ. É importante salientar que O,0'-dietil ditiofosfato ÚO, 5 mL, 2,7 mmol, 0,5 equivõ e água Ú50 0 Lõ adicionais foram adicionados em 6 horas e 14 horas. A tioamida intermediária também é observada por LC/MS durante a reação, e é aquecida até que a conversão para o produto desejado seja completa. A mistura de reação foi diluída com etil acetato Ú75 mLõ e lavada com NaHC03 aquoso saturado Ú20 mLõ, seguido por 1M NaH2P04 Ú10 mLõ e salmoura Ú10 mLõ. As orgânicas foram secas úNa2S04õ, filtradas e removidas in vacuo. 0 produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica úhexanos para 250 etil acetatoõ paa obtenção de um óleo incolor úl, 12 g, 7813 õ.m/z úES+õ 280 ÚM+Hõ+.
Composto 1%8.5. Metil 4-isopropil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H- 1,2,4 -triazol-3-ilõ-2-metilbenzoato. Metil 5- úúetiltioõúiminoõmetilõ-4-isopropil-2-metilbenzoato úcomposto 1%8.4, 33 mg, 0,12 mmol, 1,0 equivõ, 3- metoxipropanohidrazida úcomposto 143.1, 21 mg, 0,18 mmol, 1,5 equivõ e ácido acético úl,2 mLõ foram adicionados a um frasco de 4-mL e aquecidos a 80°C com uma tampa frouxa por 4 horas. 0 solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi dissolvido em DCM Ú10 mLõ, lavado com NaHC03 saturado Ú5 mLõ e, depois, salmoura Ú5 mLõ, seco úNa2S04õ, filtrado e evaporado para um óleo incolor úrendimento teórico®. m/z ÚES+0 318 ÚM+H0.
Composto 10 8.6. Ácido 4-isopropil-5-ú5-ú2-metoxiet1Õ-4H- 1,2,4-triazol-3- ilõ-2-metilbenzóico. À metil 4-isopropil- 5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H-l,2,4 -triazol-3-ilõ-2-metilbenzoato bruto úcomposto 1%8.5, 0,12 mmol, 1,0 equivõ da etapa anterior em um frasco de 4-mL foram adicionados hidróxido de lítio monohidratado Ú10,1 mg, 0,24 mmol, 2,0 equivõ, metanol Ú0,% mLõ e água Ú0,3 mLõ. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas, em seguida a 50°C por 3 horas e 40°C por 17 horas. Os solventes foram removidos in vacuo e o resíduo foi diluído com água Ú7 mLõ mais NaHC03 saturado úl mLõ, e a aquosa foi lavada com dietil éter ú2 mLõ. A orgânica foi extraída com, novamente, uma mistura de água Ú2 mLõ mais NaHC03 saturado Ú0,5 mLõ. A aquosa combinada foi acidificada para pH = 3 com 1M H3P04 e extraída com diclorometano Ú3x5 mLõ. As orgânicas foram secas úNa2S04õ, filtradas e removidas in vacuo para obtenção do composto titular como um sólido ceroso branco Ú31,5 mg, 88% ao longo de duas etapasõ. m/z úES+õ 304 úM+Hõ+.
Composto 118 8. 4-úl-ú4-Isopropil-5-ú5-ú2-metoxietilã4H- 1,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um frasco de 4-mL foram adicionados ácido 4-isopropil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H-l,2,4-triazol-3~ ilõ-2-metilbenzóico úcomposto lB 8.6, 31 mg, 0,10 mml, 1/0 equivõ, cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 23 mg, 0,10 mmol, 1,0 equivõ, hidrato de 1" hidroxibenzotriazol Ú20% em peso de ãguaõ Ú22 mg, 0,13 mmol, 1,25 equivõ, cloridrato de l-etil-3-ú3-dimetilaminopropilõcarbodiimida Ú21,5 mg, 0,11 mmol, 1/1 equivõ, DMF úl mLõ e DIEA Ú71 pL, 0,41 mmol, 4 equivõ. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 24 horas, então diluída com etil acetato Ú10 mL0 e lavada com salmoura Ú10 mL0 . A aquosa foi extraída com, novamate, etil acetato Ú3 mLõ e as orgânicas combinadas foram lavadas com NaHC03 saturado Ú5 mLõ, 1 M NaH2P04 Ú5 mLõ e salmoura Ú5 mLõ. As orgânicas foram secas úNa2S04õ, filtradas e removidas in vacuo. 0 resíduo bruto foi purificado por TLC preparativa ÚDCM'8% MeOHõ para obtenção do composto titular como um sólido esbranquiçado. Ú23 mg, 48%õ. m/z úES+õ 472 ÚM+Hõ+.
Composto 10 0 . 4-úl-Ú4-Isopropil-5-Ú5-úmetoximetilêH- 1,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulaç0 es químicas padrão e procedimentos similaes àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-isopropil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H-l,2,4 -triazol-3-ilõ-2- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 10 8õ. m/z ÚES+õ 458 ÚM+Hõ+.
Composto 200. 4-Ú1-Ú4-Isopropil-3-Ú5-Ú2-metoxietilõ-4H-
1.2.4 -triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-isopropil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H- 1.2.4- triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1%8Õ. m/z úES+õ 458 úM+Hõ+.
Composto 201. 4-úl-ú4-Isopropil-3-ú5-úmetoximetilõ-4H-
1.2.4 -triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-isopropil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H- 1.2.4- triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto l%8õ. m/z úES+õ 444 úM+Hõ+.
Composto 202.1. Metil 5-carbamoil-4-ciclobutil-2-metilbenzoato. A um frasco de 8-mL foram adicionados metil 5-ciano-4-ciclobutil-2-metilbenzoato Ú152.4, 100 mg, 0,436 mmol, 1,0 equivE , carbonato de potássio Ú181 mg, 131 mmol, 3.0 equivE e DMSO ú2,2 mLE , e agitação foi iniciada Peróxido de hidrogénio Ú50% em pesoõ Ú17 6 pL, 3,05 mmol,
7.0 equivõ foi adicionado ao longo de cerca de 1 minuto. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2% horas, então diluída em salmoura Ú10 mL0 mais 1M p?04 úl, 5 mL0 . A mistura foi extraída com etil acetato úlO mL x 1,3 mL x lS . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura úlO mLõ mais algumas gotas de 1M H3P04, seguido por uma mistura de água úlO mLlS mais NaHCQ saturado úl mLE3 , e finalmente salmoura Ú5 mLõ. As orgânicas foram secas úNa2S04õ, filtradas e evaporadas para obtenção do composto titular como um sólido branco Ú5% mg, 55%õ. m/z úES+õ 248,0 ÚM+Hõ f.
Composto 202.2. Metil 4-ciclobutil-2-metil-5-ú4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoato. A um frasco foi adicionado metil 5-carbamoil-4-ciclobutil-2-metilbenzoato úcomposto 202.1, 5% mg, 0,24 mmol, 1,0 equivõ e, em seguida, N,N-dimetilformamida dimetil acetal úl mLõ foi adicionado. A mistura foi aquecida a 80°C por 5 horas, então os solventes foram removidos in vacuo. Ao resíduo foram adicionados ácido acético Ú4 00 pLõ e uma solução de hidrazina anidra Ú8,2 pL, 0,26 mmol, 1,1 equivõ em ácido acético Ú100 pLõ. À suspensão espessa resultante foi adicionado ácido acético adicional Ú500 pLõ e a mistura foi agitada a 80°C por 1,5 horas, em seguida, os solventes foram removidos in vacuo. Etil acetato ú5 mLõ e DCM ú5 mLõ foram adicionados úalguns sólidos não dissolvidosõ. As orgânicas foram lavadas com NaHCCh saturado úlO mLõ e salmoura ú5 mLõ, e removidas in vacuo para obtenção do composto titular como um sólido branco úrendimento teóricoõ. m/z úES+õ 272 úM+Hõ+.
Composto 202.3. Ácido 4-cielobutil-2-metil-5-ú4H-l,2,4 -triazol-3-ilõbenzóico. À metil 4-ciclobutil-2-metil-5-ú4H- 1,2,4 -triazol-3-ilõbenzoato bruto úcomposto 202.2, 0,24 mmol, 1,0 equivõ da etapa anterior em um frasco de 4-mL foram adicionados metanol úl,5 mLõ, água Ú0,5 mLõ e hidróxido de lítio monohidratado Ú20 mg, 0,48 mmol, 2,0 equivõ. A mistura resultante foi agitada a 40°C por 42 horas. A mistura de reação foi diluída em água ú5 mLõ, acidificada para pH 3 com 1M H3P04 e extraída com DCM ú3x5mLõ. As orgânicas foram secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas in vacuo para obtenção do composto titular como um sólido branco Ú61 mg, %8ó ao longo de duas etapasõ. m/z ÚES+Õ 258 ÚM+Hõ+.
Composto 202. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-metil-5-ú4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um frasco de 4-mL foram adicionados ácido 4-ciclobutil-2-metil-5-ú4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzóico úcomposto 202.3, 31 mg, 0,12 mmol, 1,0 equivõ, cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 27 mg, 0,12 mmol, 1,0 equivõ, hidrato de 1-hidroxibenzotriazol Ú20E em peo de águalEI Ú2 5 mg, 0,15 mmol, 1,2 5 equivS , cloridrato dâ-etil- 3-Ú3-dimetilaminopropilS carbodiimida Ú25 mg, 0,13 mol, 1,1 equivõ, DMF Ú0,6 mLõ e Dl EA Ú83 pL, 0,48 mmol, 4 equivõ. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 4 horas, então diluída com etil acetato 0 10 mLõ e lavada com 1M NaH2P04 0 5 mLõ. A aquosa foi extraída com, novamente, etil acetato ú3 mLõ e as orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura ú.5 mLõ, NaHC03 saturado Ú5 mLõ e salmoura ú5 mLõ. As orgânicas foram secas úNa2S04õ, filtradas e removidas in vacuo. O resíduo bruto foi purificado por TLC preparativa ÚDCM'8% MeOHõ para obtenção do composto titular como um sólido branco Ú23 mg, 460 õ.m/z 0 ES+õ 426 0 M+fiõ
Composto 203. 4-Ú1-Ú4-Cic!Qbutil-2-metil-5-ú4H-l,2,4 - triazol-3- ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um frasco de 4-mL foram adicionados ácido 4-ciclobutil-2-metil-5-ú4H-l,2,4-triazol-3-il0 benzóico úcomposto 02.3, 31 mg, 0,12 mmol, 1,0 equivS , 4-Ú4-fluoropiperidin-4- il0 benzonitrila úcomposto 11.2, 31 mg, 0,13 mmol, 11 equivõ, hidrato de 1-hidroxibenzotriazol Ú2O0 em peo de águaS Ú25 mg, 0,15 mmol, 1,25 equivS , cloridrato dè-etil- 3-Ú3-dimetilaminopropilS carbodiimida Ú25 mg, 0,13 mol, 1,1 equivõ, DMF Ú0,6 mLõ e Dl EA Ú83 pL, 0,4 8 mmol, 4 equivõ. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 4 horas, então diluída com etil acetato 0 10 mLõ e lavada com 1M NaH2P04 0 5 mLõ. A aquosa foi extraída com, novamente, etil acetato Ú3 mLõ e as orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura Ú5 mLõ, NaHC03 saturado Ú5 mLõ e salmoura Ú5 mLõ.
As orgânicas foram secas úNa2S04õ, filtradas e removidas in vacuo. 0 resíduo bruto foi purificado por TLC preparativa ÚDCM'80 MeOHõ para obtenção do composto titular com um sólido branco Ú30 mg, 5613 õ.m/z úES+õ 444 úM+Hõ+.
Composto 204.1. Metil 2,4-dibromobenzoato. Uma solução de ácido 2,4-dibromobenzóico Ú52,0 g, 176 mmol, 1,00 equiv, %5l3 õ e ácido sulfB rico Ú20 mLõ em metanol Ú400 mLcfoi agitada a %0°C durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com 500 mL de etil acetato e lavado com 3x100 mL de H20, seguido por 1x100 mL de NaHC03 úaq., sat. Observação: ocorrência de evolução de gãsõ. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo. Isto resultou em 45,0 g Ú78I3 õ de metil 2,4-dibromobenzoato como um óleo amaelo.
Composto 204.2. Metil 2,4-dietilbenzoato. A uma mistura agitada de ZnBr2 Ú40,0 g, 176 mmol, 5,44 equiv, %%E3 õ em THF Ú100 mLõ sob nitrogénio a 0°C foi adicionado, gota a gota, EtMgBr Ú60 mL, 3M em THFõ. Após 0,5 hora a 0 °C, a temperatura foi baixada para -78°C e PdCl2údppfõ Ú3,72 g, 5,03 mmol, 0,16 equiv, %%I3 ó foi adicionado, seguido pela adição gota a gota de uma solução de metil 2,4-dibromobenzoato úcomposto 204.1, 10,0 g, 32,3 mmol, 1,00 equiv, %50 0 em THF Ú200 mL0 . A reação foi agitadardnte a noite à temperatura ambiente, então cuidadosamente resfriada bruscamente com água e depois HC1 úaq., 1MÕ. A mistura resultante foi extraída com 3x500 mL de etil acetato, e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 3x50 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύΙμβΟό como eluente para fornecer 6,30 g ú%60 õ de metil 2,4 -dietilbenzoato como um óèo incolor.
Composto 204.3, Metil 2,4-dietil-5-iodobenzoato. 0 composto titular ú4,0 g, óleo amarelo claro, 6%0 õ foi prepaado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 181.4, usando o composto 204.2 ú3,50 gõ em vez do composto 181.3.
Composto 204.4. Ácido 2,4-dietil-5-iodobenzóico. 0 composto titular ú3,24 g, sólido branco, 850 õ foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 181.%, usando o composto 204.3 ú4,00 g0 emvez do composto 181.8.
Composto 204.5, Ácido 2,4-dietil-5-úmetoxicarbonilõbenzóico. A uma solução agitada de ácido 2,4-dietil-5-iodobenzóico úcomposto 204.4, 500 mg, 1,64 mmol, 1,00 equiv, %0%õ em tetrahidrofurano Ú20 mLõ a -78°C sob nitrogénio foi adicionada, gota a gota, uma solução de n-BuLi úl,73 mL, 4,10 mmol, 2,36 M em THFõ. Após 5 minutos, uma solução de metil cloroformato Ú0,315 mL, 4,10 mmol 2,50 equivõ em THF ú5 mLõ foi adicionada gota a gota à reação a -78°C ao longo de 5 minutos. A reação foi agitada por mais 5 minutos a -78°C e então cuidadosamente resfriada bruscamente com 10 mL de água. 0 pH foi ajustado para 1-2 com ácido clorídrico Ú6MÕ e a mistura resultante foi extraída com etil acetato Ú2x30 mLõ. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 20 mL de salmoura, então secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato/éter de petróleo úl:20õ como eluente para produzir %6 mg ú25%õ do composto titular como um sólido esbranquiçado.
Composto 204.6. Metil 5-ú4-ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2,4-dietilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de ácido 2,4-dietil-5-úmetoxicarbonilõbenzóico úcomposto 204.5, 500 mg, 2,12 mmol, 1,00 equivõ, cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 470 mg, 2,12 mmol, 1 equivõ, EDC-HC1 Ú810 mg, 4,24 mmol, 2,00 equivõ e 4- dimetilaminopiridina Ú520 mg, 4,24 mmol, 2 equivõ em N, N-dimeti1formamida Ú15 mLH . A reação foi agitada duante a noite a 25°C. Após conclusão da reação, a mistura de reação foi diluída com 30 mL de etil acetato, então lavada com 1x20 mL de NH4CI úaq.õ e 1x20 mL de salmoura. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de gel de sílica com uma mistura solvente de etil acetato e éter de petróleo úlplõ para produzir 500 mg Ú60%õ do composto titular como um sólido amarelo claro.
Composto 204.7. 5-Ú4-Ú4-Cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ- 2,4-dietilbenzohidrazida. A uma solução do composto 204.6 Ú500 mg, 1,05 mmol, 1,00 equiv, 85%õ em etanol ú6 mLõ foi adicionado hidrato de hidrazina Ú3 mLõ. A solução resultante foi agitada durante a noite a 0 0°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada in vacuo. 0 resíduo foi diluído com 20 mL de etil acetato, em seguida lavado com 1x5 mL de salmoura, seco sobre sulfato de sódio anidro e concentrado in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica com diclorometano'metanol ύ20μ1ο como eluente para produzir 260 mg Ú55%õ do composto desejado como um sólido amarelo.
Composto 204.8. 4-úl-Ú5-Ú5-Amino-1,3,4-oxadiazol-2-ilõ-2,4-dietilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de 5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2,4 -dietilbenzohidrazida úcomposto 204.7, 100 mg, 0,220 mmol, 1,00 equiv, %0E3 õ em uma mistura solvente de água Ú2 mLõ e dioxano Ú3 mLõ. Bicarbonato de sódio Ú52 mg, 0,740 mmol, 3,00 equivõ foi adicionado à mistura de reação à temperatura ambiente e esta foi agitada por 5 minutos. BrCN Ú75 mg, 0,740 mmol, 3,00 equivõ foi então adicionado à reação à temperatura ambiente. A solução resultante foi agitada por 2 horas à temperatura ambiente, então resfriada bruscamente com 30 mL de FeS04 úaq., sat.õ e diluída com etil acetato. A mistura resultante foi vigorosamente agitada, então filtrada através de celite e lavada com 1M FeS04, água e etil acetato. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 2x50 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x50 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. Isto resultou em 100 mg ú8%0 õ do composto titular como m sólido amarelo. 0 composto foi usado na reação da etapa seguinte sem purificação adicional.
Composto 204.%. 4-úl-Ú5-Ú5-Etoxi-4H-1,2,4 -triazol-3-ilõ- 2.4- dietilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzamida. Uma mistura do composto 204.8 Ú100 mg, 0,200 mmol, 1,00 equiv, 8500 e hidróxido de potássio Ú132 mg, 2,35 mmol, 10,0 equivE em etanol Ú10 mL0 foi agitada a 85°C durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, o pH foi ajustado para 7 com ácido acético e a solução resultante foi concentrada in vacuo. 0 resíduo foi diluído com 50 mL de etil acetato, lavado com 2x20 mL de salmoura, então concentrado in vacuo. 0 produto bruto foi seco em um forno a vácuo, antes de ser carregado em uma coluna de gel de sílica, e purificado com diclorometano'metanol ύ20μ1ό para fornecer 100 mg ú85óõ do composto titular como um s0 lido amarelo.
Composto 204 . 4-úl-Ú5-Ú5-Etoxi-4H-1,2,4-triazol-3-ilõ-2,4- dietilbenzoilópiperidin-4-ilóbenzonitrila. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de 4-úl-ú5-ú5-etoxi-4H- 1.2.4- triazol-3-ilõ-2,4-dietilbenzoilõpiperidin-4- ilõbenzamida úcomposto 204.%, 100 mg, 0,170 mmol, 1,00 equivõ em diclorometano Ú10 mLõ. Trietilamina ú.170 mg, 1,68 mmol, 8,00 equivõ foi adicionada à reação à temperatura ambiente, seguido por adição gota a gota de uma solução de úCF3C0õ20 Ú160 mg, 0,760 mmol, 4,50 equivõ em diclorometano Ú0,5 mLõ a 0-5°C. A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente por mais 2 horas. A mistura foi diluída com 60 mL de etil acetato, então lavada com 3x20 mL de salmoura. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de s0 dio anidro e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado por Prep-HPLC úSunFire Prep C18, l%*150mm 5um, água com 0,050 TFA e C|EN Ú53,O0 C|EN até 65,00 em 8 minutos, até 100,00 em 2 minutos, abaixo de 53,00 mel minutoõ. As fraçõ es contendo composto puro foram cmbinadas e liofilizadas para produzir 50 mg Ú5O0 õ do compost) titular como um sólido branco, m/z úES+0 458 ÚM+H0. 1H RMN Ú300 MHz, CD3OD0 μδ 7,63 úd, 2HÕ, 7,45-7,30 Úm, 4HÕ, 4,8%- 4,80 úm, 1H, sobrepostoõ, 4,36 úq, 2Hõ, 3,60-3,57 úm, IHõ, 3,2%-3,23 úm, IHÕ, 3,1%-2,85 úm, 4HÕ, 2,74-2,56 úm, 2HÕ, 2,00-1,82 úm, IHÕ, 1,77-1,66 úm, 3HÕ, 1,40 út, 3HÕ, 1,30- 1,21 úm, 3HÕ, 1,11 út, 3HÕ.
Composto 205 . 4-úl-ú5-ú5-Etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2,4- dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú5-ú5-etOXÍ-4H-l,2,4-triazol-3-il0 -2,4-dietilbenzoil0 piperidin-4-il0 benzonitrila úcomposto2040 . m/z ÚES+Õ 430 ÚM+Hõ". RMN Ú300 MHz, CD3ODõp δ 7,6% úd, 2Hõ, 7,52-7,47 úm, 3HÕ, 7,2% ús, IHõ, 4,8%-4,80 úm, 1H, sobrepostoõ, 4,42-4,40 úm, 2HÕ, 3,64-3,61 úm, IHõ, 3,02- 2, %6 úm, 2HÕ, 2,51 ús, 3HÕ, 2,41 e 2,31 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar CH3, 3HÕ, 2,05-2,02 úm, IHõ, 1,77- 1,46 úm, 3HÕ, 1,45 út, 3HÕ.
Composto 206. 4-úl-ú5-ú5-ú2-Metoxietoxiõ-4H-l,2,4-triazol- 3-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú5-ú5-etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2,4-dietilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 204õ. m/z ÚES+õ 460 ÚM+HÕ+.
Composto 207. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú5-úútetrahidrofuran-3- ilõoxiõ-4H-1,2,4 -triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú5-ú5-etoxi-4H- l,2,4-triazol-3-ilõ-2,4-dietilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 204õ. m/z úES+õ 472 ÚM+Hõ+. !H RMN Ú300 MHz, CD3ODÕp δ 7,6% úd, J = 6,0 Hz, 2HÕ, 7,58-7,37 úm, 3HÕ, 7,30 úbr s, 1HÕ, 5,40 úbr s, 1HÕ, ~4,% Ú1H parcialmente obscurecido por pico de águaEEI , 4,08-3%6 úm, 3H0 , 3, %6-3,88 úm, 1ΗΗ , 3,71-3,58 úm, 1ΗΗ , 3,33-2,2im, 1H0 , 3,00 út com estrutura fina,J = %,0 Hz, 2H0 , 2,52 ús, 3Hõ, 2,42 &amp; 2,32 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar-CH3, 3HÕ, 2,38-2,20 úm, 2Ηδ, 2,08-1, %7 úm, IHõ, 1, %3-l, 55 úm, 3HÕ.
Composto 208. 4-Ú1-Ú2,4-Dietil-5-ú5-metoxi-4H-l,2,4- triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de 4-Ú1-Ú5-Ú5-amino-1,3,4-oxadiazol-2-ilõ-2,4-dietilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 204.8, 80,0 mg, 0,150 mmol, 1,00 equiv, 8OKI õ e hidróxido de potássio Ú104 mg, 1,85 mol, 10,00 equivõ em metanol Ú10 mLõ. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, então concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com diclorometano'metanol ύ2Ομ10 como eluente. 0 produò bruto Ú50 mg0 foi adicionalmente purificado por Prep-HPLCcom as seguintes condições úl#-Pre-HPLC-001 úShimadzuõõp Coluna, SunFire Prep Cl8, l%*150mm 5um; fase móvel, água com 0,050 TFA e CH3CN Ú4O0 C£CN até 640 em 8 minutos, até 1000 em 1 minuto, abaixo de 400 em 1 minutoõ; Detector, Wates 248% 254&amp;220nm. As fraç0 es contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 1,7 mg Ú30 õ do composto titular como um sólido branco, m/z úES+õ 444 ÚM+Hõ+. XH RMN Ú300 MHz, CD30Dõp δ 7,63 úd, J = 5,7 Hz, 2HÕ, 7,45-7,30 úm, 4HÕ, 4,85-4,80 úm, IHÕ, 4,02 ús, 3HÕ, 3,65- 3,62 úm, IHõ, 3,15-3,10 úm, IHõ, 2, %0-2,84 úm, 4HÕ, 2,72- 2,60 úm, 2HÕ, 2,02-2,00 úm, IHõ, 1,72-1,65 úm, 3HÕ, 1,30- 1,25 úm, 3HÕ, 1,11 út, 3HÕ.
Composto 20%.1. Ácido 2,4-dietil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H- 1,2,4 -triazol-3-ilõbenzóico. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 1%8.6, mas usando metil 2,4-dietil-5-iodobenzoato úcomposto 204.30 em vez do composto 1%8.2 como o m&amp;erial primário.
Composto 20% . 4-úl-Ú2,4-Dietil-5-Ú5-Ú2-metoxietillE! 4H- 1,2,4-triazol-3-il0 benzoilS piperidin-4-il0 benzonits. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de ácido 2,4-dietil-5-ú5-ú2-metoxietil0 -4H-1,2,4-triazol-3-il0 beóico úcomposto 20%.1, 300 mg, 0,%40 mmol, 1,00 equiv, %50 0 em N,N-dimetilformamida Ú20 mL0 . Cloridrato de 4-úpiperidn-4-il0 benzonitrila úcomposto 1.5, 243 mg, 1,0% mmol, 110 equivS , EDC-HC1 Ú3 80 mg, 1,%8 mmol, 2,00 equivS e -4 dimetilaminopiridina Ú240 mg, 1, %6 mmol, 2,0% equivS foram adicionados à mistura de reação. A solução resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, então diluída com 100 mL de etil acetato. A camada orgânica foi lavada com 3x15 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato como eluente. 0 produto bruto Ú300 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úlf-Pre-HPLC-001 úShimadzu0 0 μ Coluna, SunFire Prep C18, l%±150mm 5um; fase móvel, água com 0,050 TFA e CgCN Ú350 CH3CN até 6 00 em 8 minutos, até 1000 em 1 minuto, abxd> de 350 em 1 minutoõ; Detector, Waters 248% 254&amp;220nm. As fraç0 es contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 188 mg Ú420 õ do compostotitular como um sólido branco, m/z úES+õ 472 ÚM+Hõ+.
Composto 210. 4-úl-Ú2,4-Dietil-5-Ú5-útetrahidrofuran-3-ilõ-4H-1,2,4 -triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulaç0 e químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-Ú1-Ú2,4-dietil-5-ú5-ú2-metoxietilõ-4H-1,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 20%õ, mas usando tetrahidrofuran-3-carbohidrazida úcomposto 38.2õ em vez de 3-metoxipropanohidrazida úcomposto 143.lõ. m/z ÚES+õ 484,05 ÚM+Hõ+.
Composto 211.2. Metil 2-etil-5-iodo-4-metilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 2-etil- 4-metilbenzoato úcomposto 48.1, 12,5 g, 70,1 mmol, 1,00 equivõ em Ac OH Ú100 mLõ. NaI04 Ú7,51 g, 35,1 mmol, 0,50 equivõ e I2 Ú21,4 g, 84,3 mmol, 1,2 0 equivõ foram adicionados em porções a 25°C. Ácido sulfúrico Kl 1,0 g, 16,3 mmol, 0,20 equivKI foi então adicionado à mistma de reação gota a gota a 25°C. A solução resultante foi agitada por 12 horas a 110 °C em um banho de óleo e depois arrefecida para temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente com 150 mL de Na2S203 Kl aq., sat.KI . A fase aquosa foi extraída com 2x200 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 3x300 mL de bicarbonato de sódio Kl aq.Ki e 1x150 mL de salmoura .A mistura foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo. Isto resultou em 20,0 g Kl %4K! Kl de metil 2-etil-5-iodo-4-metilbenzoato como um óleo amarelo.
Composto 211.3. Ácido 2-etil-5-iodo-4-metilbenzóico. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 2-etil- 5-iodo-4-metilbenzoato Kl composto 211.2, 10,0 g, 32¾ mmol, 1,00 equivKI em metanol Kl 4 0 mLKI . Uma solução de Na® 5,26 g, 132 mmol, 4,00 equivS em água Kl 20 mLKI foi adinàda gota a gota. Após agitação por 12 horas a 40°C, o solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida. 0 pH da fase aquosa remanescente foi ajustado para 4 com cloreto de hidrogénio 0 aq., 6 MS , então extraída com 2x100 mfle etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. Isto resultou em %,30 g Kl %7KI Kl de ácido 2-etil-5-iodo-4-metilbenzóico como um sólido branco.
Composto 211.4. Ácido 2-etil-5-formil-4-metilbenzóico. A uma solução agitada de ácido 2-etil-5-iodo-4-metilbenzóico úcomposto 211.3, 5,00 g, 17,2 mmol, 1,00 equivõ em tetrahidrofurano Ú100 mLõ a -78°C sob nitrogénio foi adicionado, gota a gota, n-BuLi Ú17 mL, 2M em THF, 2,00 equivõ. Após 1 hora a -78°C, DMF ú7,00 g, %5,8 mmol, 3,00 equivõ foi adicionada gota a gota a -78°C. A solução resultante foi lentamente aquecida para 25°C, então cuidadosamente resfriada bruscamente com água e depois com a adição de 10 mL de HC1 úaq., 6Mõ. A fase aquosa foi extraída com 3x100 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatograf ia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ú2:lõ como eluente para fornecer 450 mg, Ú14E3 õ de ácido 2-etil-5 -formil- 4-metilbenzóco como um sólido amarelo.
Composto 211.5. 4-úl-Ú2-Etil-5-formil-4 - metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de ácido 2-etil-5-formil-4-metilbenzóico úcomposto 211.4, 450 mg, 2,34 mmol, 1,00 equivõ em N,N- dimetilformamida ú5 mLõ. Dl EA ú%07 mg, 7,02 mmol, 3,00 equivõ e HBTU úl, 30 g, 3,43 mmol, 1,50 equivõ foram adicionados à mistura de reação. A solução resultante foi agitada por 30 minutos a 25°C. Uma solução de cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 524 mg, 2,80 mmol, 1,20 equivõ em DlEA Ú2 mLõ foi adicionada gota a gota. A solução resultante foi agitada por 30 minutos a 25°C, então resfriada bruscamente com 20 mL de água. A fase aquosa foi extraída com 3x30 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1x50 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado usando cromatograf ia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo Ú5plõ como eluente para fornecer 720 mg ú85%õ do composto titular como um sólido amarelo.
Composto 211.6. Ácido 5-ú4-ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-4-etil-2-metilbenzóico. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de 4-úl-ú2-etil-5-formil-4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 211.5, 720 mg, 2,00 mmol, 1,00 equivõ em tetrahidrofurano Ú20 mLõ. Uma solução de KMn04 Ú640 mg, 4,05 mmol, 2,00 equivõ em água Ú20 mLõ foi adicionada gota a gota. A solução resultante foi agitada por 15 horas a 60°C, então arrefecida para temperatura ambiente com um banho de água. Os sólidos foram removidos com filtração. 0 filtrado foi extraído com 3x30 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. Isto resultou em 600 mg Ú8O0 õ de ácido 5-ú4-ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-4-etil-2-metilbenzóico como um sólido amarelo claro.
Composto 211.7. Metil 5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-1- carbonilõ-4-etil-2-metilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de ácido 5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-4-etil-2-metilbenzóico úcomposto 211.6, 600 mg, 1,5% mmol, 1,00 equivõ em metanol Ú30 mLõ. Então, foi adicionado ácido sulfS rico Ú500mg 5,10 mmol, 3,2 0 equivõ gota a gota. A solução resultante foi agitada por 15 horas a 60°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada in vacuo. 0 resíduo foi diluído com 20 mL de H20. A fase aquosa foi extraída com 3x20 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. Isto resultou em 500 mg ú80%õ de metil 5-Ú4-ú4-cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-4-etil-2- metilbenzoato como um óleo amarelo.
Composto 211.8. 5-Ú4-Ú4-Cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ- 4-etil-2-metilbenzohidrazida. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-4-etil-2-metilbenzoato úcomposto 211.7, 500 mg, 1,28 mmol, 1,00 equivõ em etanol Ú20 mLõ. Hidrazina ú4 mLõ foi adicionada à mistura de reação. A solução resultante foi agitada por 15 horas a 80°C, então concentrada in vacuo. 0 resíduo foi particionado entre água e etil acetato. A camada aquosa foi extraída com etil acetato Ú2xõ. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo para produzir 400 mg ú80%õ de 5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-4-etil-2 -metilbenzohidrazida como um sólido amarelo claro.
Composto 211.%. N-úMorfolina-4-carbonotioilõbenzamida. A um balão de vidro com 3 gargalos de 50-mL, o qual foi expurgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi adicionada uma solução de morfolina úl,00 g, 11,5 mmol, 1,00 equivS em acetona Ú10 mL0 . TEA úl, 74 g, 17,2 mml, 1,50 equivõ foi adicionada à reação e a solução resultante foi agitada por 30 minutos a 25°C. Benzoil isotiocianato úl, 87 g, 11,5 mmol, 2,00 equivõ foi adicionado à reação gota a gota a 0°C. A solução resultante foi agitada por 30 minutos a 0°C, então resfriada bruscamente com 20 mL de água. A mistura foi extraída com 2x30 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatograf ia em coluna de gel de sílica com etil acetato/éter de petróleo úl :10-1:313 como eluente paa fornecer 2,30 g ú8Q%õ de N-úmorfolina-4- carbonotioilõbenzamida como um sólido amarelo.
Composto 211.10. Morfolina-4-carbotioamida. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de ΔΓ-úmorf olina-4-carbonotioilE benzamida IEI composto 211.%, 3,00 g, lQ,mmol, 1,00 equivõ em metanol Ú20 mLõ. Uma solução de hidróxido de sódio úl, 44 g, 3 6,0 mmol, 3,00 equivõ em água Ú2 0 mLõ foi adicionada à reação. A solução resultante foi agitada durante a noite a 60°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, o solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida. 0 resíduo foi extraído com 2x20 mL de etil acetato'éter de petróleo úlplõ. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. Isto resultou em 430 mg ú25%õ de morfolina-4-carbotioamida como um sólido amarelo.
Composto 211.11. 4-úMetilsulfanilõcarboximidoilmorfolina. Uma solução de morfolina-4-carbotioamida úcomposto 211.10, 430 mg, 2,13 4 mmol, 1,00 equivõ e iodometano úl, 25 g 8,81 mmol, 3,00 equivõ em tetrahidrofurano Ú10 mLõ foi agitada por 4 horas a 25°C, então concentrada in vacuo. Isto resultou em 471 mg Ú100%õ de 4-úmetilsulfanilõcarboximidoilmorfolina como um sólido amarelo.
Composto 211. 4-úl-ú2-Etil-4-metil-5-ú5-morfolino-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um tubo selado de 20-mL foi adicionada uma solução de 5-Ú4-Ú4-cianofenil0 piperidina-l-carbonil0 -4-etil-2-metilbenzohidrazida úcomposto 211.8, 225 mg, 0,580 mmol, 1,00 equiv0 em piridina Ú10 mL0 . 4- úMetilsulfanilS carboximidoilmorfolina úcomposto 21111, 200 mg, 1,25 mmol, 1,00 equivõ foi adicionada à mistura de reação. A solução resultante foi agitada por 3 dias a 100°C atrás de um escudo contra explosão. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi então concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com clorofórmio'metanol ύ30μ1ό como eluente. 0 produto bruto ú~100 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições 0 1#-Pre-HPLC-001 úShimadzuõõp Coluna, Xbridge Prep C18, 5um, l%*150mm; fase móvel, água com 0,03% NH3H20 e CH3CN Ú32% CH3CN até 55% em 8 minutos, até 100% em 2 minutos, abaixo de 32% em 1 minuto0 ; Detector, Waters 248% 254&amp;220nm. As fraç0 es contend composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 67,7 mg ú24%õ do composto titular como um sólido branco. m/z ÚES+Õ 485 ÚM+Hõ+. 1H-NMR Ú300 MHz, CD30Dõp δ 7,60 úd, 2HÕ, 7,40 -7,31 Úm, 4HÕ, 4,0 0-4,80 um, 1HÕ, 3,83-31SÚm, 4HÕ, 3,70 -3,65 úm, 1HÕ, 3,60-3,41 úm, 4HÕ, 3,40-3,1 úm, 1HÕ, 3,08-2,0 7 úm, 2HÕ, 2,76-2,71 úm, 2HÕ, 2,51 ús, 3HÕ, 2,02-1,0 8 úm, 1HÕ, 1,85-1,80 úm, 3HÕ, 1,33-1,30 úm,3HÕ.
Composto 212. 4-úl-Ú5-Ú5-úú2-Metoxietilõúmetilõaminoõ-4H- 1,2,4 -triazol-3-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú2-etil-4-metil-5-ú5-morfolino-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 211õ. m/z úES+õ 473 ÚM+Hõ+.
Composto 213. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-Ú5-morfolino-4H-1,2,4- triazol-3 -ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú2-etil-4-metil-5-ú5-morfolino-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 211Õ. m/z ÚES+Õ 471 ÚM+HÕ+.
Composto 214. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú5-úpirrolidin-l-ilõ-4H- 1,2,4 -triazol- 3 -ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú2-etil-4-metil-5-ú5-morfolino-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 211Õ. m/z ÚES+Õ 455 ÚM+Hõ+.
Composto 215.3. Ácido 4-ciclobutil-2-etil-5-iodobenzóico. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 4-ciclobutil-2-etil-5-iodobenzoato úcomposto 181.4, 10,3 g, 30,0 mmol, 1,00 equivõ em metanol Ú100 mLõ. Uma solução de hidróxido de sódio Ú3,60 g, 3,00 equivõ em água Ú10 mLõ foi adicionada gota a gota à mistura de reação agitada. A mistura resultante foi agitada por 2 horas a 60°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. 0 pH da mistura aquosa remanescente foi ajustado para ~4 usando HC1 úaq. , 1MB . 0 precipitado resultante foi coletado por filtração e seco para produzir %,00 g ú%lB B de ácido 4-ciclobutil-êfeil-5-iodobenzóico como um sólido branco.
Composto 215.4. Ácido 4-ciclobutil-2-etil-5- úmetoxicarbonilõbenzóico. A uma solução de ácido 4- ciclobutil-2-etil-5-iodobenzóico úcomposto 215.3, 3,30 g, 10,0 mmol, 1,00 equivõ em THF Ú40 mLõ foi adicionado n-BuLi Ú2,5 Μ, %, 50 mL, 2,38 equivõ gota a gota a -78°C sob atmosfera de nitrogénio. A solução resultante foi agitada por mais 20 minutos à mesma temperatura, seguido pela adição de uma solução de dimetil carbonato ú2,70 g, 30,0 mmol, 3,00 equivõ em tetrahidrofurano ú2 mLõ gota a gota. A temperatura de reação foi lentamente aumentada para 25°C e esta foi agitada por mais 1 hora, então lentamente resfriada bruscamente com 50 mL de água. 0 pH foi ajustado para ~4 com HC1 úaq., lMõ e a mistura resultante foi extraída com 100 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatograf ia de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo úlp3õ como eluente para fornecer 1,80 g ύβ%0 õ do produto desejado como um sólido branco.
Composto 215.5. Metil 5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-2-ciclobutil-4-etilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de ácido 4-ciclobutil-2-etil-5-úmetoxicarbonilõbenzóico úcomposto 215.4, 1,15 g, 4,38 mmol, 1,00 equivõ, cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 1,07 g, 4,80 mmol, 1,10 equivõ, HBTU Ú2,50 g, 6,5% mmol, 1,50 equivõ e Dl EA úl, 07 g, 8,2 8 mmol, 3,00 equivõ em N,N-dimetilformamida Ú10 mLõ. A solução resultante foi agitada por 1 hora a 25°C. A reação foi então resfriada bruscamente pela adição de 20 mL de água. A mistura resultante foi extraída com 2x50 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ3ό para produzir 1,80 g ú%5§ õ de metil 5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-2-ciclobutil-4 -etilbenzoato como um sólido amarelo.
Composto 215.6. 5-ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ- 2-ciclobutil- 4-etilbenzohidrazida. A uma solução de metil 5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-2-ciclobutil-4 -etilbenzoato úcomposto 215.5, 2,15 g, 4,%% mmol, 1,00 equivõ em metanol Ú20 mLõ foi adicionado hidrato de hidrazina Ú8O0 , 15 mLõ periodicamente. A reação foiagitada a 80°C durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi extraído com diclorometano Ú2xl00 mLõ. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de gel de sílica com diclorometano'metanol úlOOplõ para fornecer 1,13 g Ú530 õ do produto desejado como um sólido rosado.
Composto 215.7. 4-úl-Ú5-Ú5-Amino-1,3,4-oxadiazol-2-11Õ-4- ciclobutil-2-etilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A uma solução de 5-Ú4-Ú4-cianofenilS piperidina-l-carboni® -2- ciclobutil-4-etilbenzohidrazida úcomposto 215.6, 600 mg, 1,3% mmol, 1,00 equivS em 1,4-dioxano Ú10 mL0 foram adicionados 10 mL de uma solução aquosa de bicarbonato de sódio Ú3 50 mg, 4,17 mmol, 1,00 equivõ. Brometo de cianogênio Ú220 mg, 2,08 mmol, 1,50 equivEI foi adióonado à mistura de reação gota a gota. A mistura de reação foi agitada a 25°C por 2 horas, então resfriada bruscamente com 20 mL de FeS04 úaq., sat.õ e diluída com DCM. A mistura resultante foi vigorosamente agitada, então filtrada através de celite e lavada com 1M FeS04, água e etil acetato. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 2x50 mL de DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. Isto resultou em 600 mg ú%50 õ de 4-úl-Ú5-Ú5-amino-1,3,4-oxadiazol-2-ilõ-4-ciclobutil-2-etilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila como um sólido esbranquiçado.
Composto 215.8. 4-úl-ú4-Ciclobutil-5-ú5-etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-etilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzamida. A um tubo selado de 10-mL, o qual foi expurgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi adicionada uma solução de 4-úl-Ú5-Ú5-amino-1,3,4-oxadiazol-2-ilS -4 ciclobutil-2-etilbenzoilS piperidin-4-ilB benzonitrál úcomposto 215.7, 228 mg, 0,500 mmol, 1,00 equiv0 emetanol Ú5 mLõ. Isto foi seguido pela adição de hidróxido de potássio Ú280 mg, 4,%% mmol, 10,0 equiv0 em porções A solução resultante foi agitada por 5 horas a 80°C atrás de um escudo contra explosão. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi então resfriada bruscamente pela adição de 15 mL de água e extraída com 2x20 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. Isto resultou em 200 mg ú80%õ de 4-Ú1-Ú4-ciclobutil- 5-ú5-etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-etilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzamida como um sólido amarelo.
Composto 215. 4-úl-Ú4-Ciclobutil-5-Ú5-etoxi-4H-l,2,4- triazol-3-ilõ-2-etilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um balão de vidro foi adicionada uma solução do composto 215.8 Ú251 mg, 0,500 mmol, 1,00 equivõ em diclorometano Ú5 mLõ. Isto foi seguido pela adição de úCF3C0õ20 Ú158 mg, 1,50 equivõ gota a gota com agitação. Trietilamina Ú101 mg, 1,00 mmol, 2,00 equivõ foi adicionada gota a gota com agitação. A mistura resultante foi agitada a 25°C por 1 hora, então concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com diclorometano'metanol ú20plõ como eluente. 0 produto bruto Ú120 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiçS es úl#-Pre-HPLC-001 úShimadzuõõp Coluna, SuEire Prep C18, 10 *150mm 5um; fase móvel, água com 0,05%TFA e CH3CN Ú54,0% CH3CN até 64,0% em 6 minutos, até 100,0% em 1 minuto, abaixo de 54,0% em 1 minutoõ; Detector, Waters 2480 254&amp;220nm. As fraç0 es contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 60 mg ú25%õ do composto titular como um sólido branco, m/z úES+õ 484 ÚM+Hõ+. 1H-NMR Ú300 MHz, CD3ODÕp δ 7,64 úd, 2HÕ, 7,45-7,21 úm, 4Hõ, 4,37 úq, 2HÕ, 4,02-3, %6 úm, 1HÕ, 3,60-3,53 úm, IHõ, 3,2%-3,1% úm, 2HÓ, 2, %8-2, %0 úm, 2HÕ, 2,76-2,61 úm, 2HÕ, 2,15-2,12 úm, 2HÕ, 2,07-1, %2 úm, 4HÕ, 1,80-1,68 Úm, 4HÕ, 1,35 út, 3HÕ, 1,2%-1,20 Úm, 3HÕ.
Composto 216. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-etil-5-ú5-metoxi-4H- 1,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-5-ú5-etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-il0 -2-etilbenzoilS piperidin-4-il0 benzonita úcomposto 2150 . m/z ÚES+0 470 ÚM+H0. 1H-NMR Ú300 MHz, CD30Dõp δ 7,64 úd, 2HÕ, 7,45-7,38 úm, 3HÕ, 7,32 e 7,21 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, IHõ, 4,0 ús, 3Hõ, 4,00-3,%5 úm, IHõ, 3,63-3,56 úm, IHõ, 3,2%-3,1% úm, 2HÕ, 2,%8 úapp t, 2HÕ, 2,76-2,61 úm, 2HÕ, 2,17-1,8% úm, 6HÕ, 1,80-1,64 úm, 4HÕ, 1,32-1,20 úm, 3HÕ.
Composto 217.1. Metil 5-ú4-ú4-cianofenilõ-4- fluoropiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutil-4-etilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de ácido 4-c iclobut i1-2-etil-5-úmetoxicarbonilõbenzóico úcomposto 215.4, 70,0 mg, 0,270 mmol, 1,00 equivõ em Ν,Ν- dimetilf ormamida Ú5 mLõ. HBTU Ú210 mg, 0,550 mmol, 2,07 equivõ e DIEA Ú150 mg, 1,16 mmol, 4,35 equivõ foram adicionados à mistura de reação a 0°C e esta foi agitada por 30 minutos. Isto foi seguido pela adição de cloridrato de 4-ú4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto sal HC1 11.2, 80,0 mg, 0,330 mmol, 1,20 equivõ. A solução resultante foi agitada por 15 horas a 25°C, então resfriada bruscamente com 20 mL de água gelada. A mistura foi extraída com 2x50 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1x50 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ100-1μ50 como eluente para produzir 100 mg ú84%õ de metil 5-Ú4-Ú4-cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutil-4-etilbenzoato como um sólido branco.
Composto 217.2. 5-ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-1-carbonilõ-2-ciclobutil-4-etilbenzohidrazida. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 5-Ú4-Ú4-cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutil-4-etilbenzoato úcomposto 217.1, 1,10 g, 2,45 mmol, 1,00 equivõ em etanol Ú40 mLõ. Hidrato de hidrazina Ú20 mLõ foi adicionado à mistura de reação e a reação foi agitada a 80°C por 15 horas. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada in vácuo e depois diluída com 50 mL de H20. A mistura resultante foi extraída com 3x50 mL de diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x50 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύΙμΙ-ΙμΟό como eluente para produzir %00 mg Ú820 õ de 5-Ú4-Ú4-cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutil-4 -etilbenzohidrazida como um sólido branco.
Composto 217.3. 4-úl-Ú5-Ú5-Amino-1,3,4-oxadiazol-2-ilõ-4- ciclobutil-2-etilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de 5-Ú4-Ú4-cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-2 -ciclobutil -4 -etilbenzohidrazida úcomposto 217.2, 450 mg, 1,00 mmol, 1,00 equivõ em 1,4 -dioxano Ú10 mLõ. Uma solução de bicarbonato de sódio Ú252 mg, 3,00 mmol, 2, %% equivõ em água Ú10 mLõ e BrCN Ú128 mg, 1,21 mmol, 1,20 equivõ foram adicionados à mistura de reação. A solução resultante foi agitada por 3 horas à temperatura ambiente, então resfriada bruscamente com 30 mL de FeS04 úaq., sat.õ e diluída com etil acetato. A mistura resultante foi vigorosamente agitada, então filtrada através de celite e lavada com 1M FeS04, água e etil acetato. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 2x50 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x50 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. Isto resultou em 400 mg Ú84I8 õ de 4-úl-Ú5-Ú5-amino-1,3,4-oxadiazol-2-ilõ-4-ciclobutil-2-etilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila como um sólido marrom claro.
Composto 217. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-etil-5-ú5-metoxi-4H- 1,2,4 -triazol-3-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um balão de vidro, o qual foi expurgado e mantido com uma atmosfera de nitrogénio, foi adicionada uma solução de 4-úl-ú5-ú5-amino-l,3,4-oxadiazol-2-ilõ-4-ciclobutil-2-etilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 217.3, 200 mg, 0,420 mmol, 1,00 equivõ em metanol Ú20 mLõ. Hidróxido de potássio Ú237 mg, 4,22 mmol, 10,0 equivõ foi adicionado à mistura de reação. A solução resultante foi agitada por 15 horas a 70°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, o solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com 30 mL de H20, então extraído com 2x50 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x50 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 produto bruto Ú50 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#-Pre-BPLC-001 úShimadzuE E μ Coluna, SunFire Prep C18, 19*150mm 5um; fase móvel, água com 0,05% TFA e CH3CN Ú49,0% CH3CN até 63,0% em 8 minutos, até 100,0% em 1 minuto, abaixo de 49,0% em 1 minutoKI ; Detector, Waters 2489 254&amp;220nm. As frações contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 20 mg Ú10%EI do composto titular como um sólido branco, m/z úES+õ 488 ÚM+Hõ+. 1H - NMR Ú300 MHz, CD30Dõp δ 7,72 úd, 2HÕ, 7,64-7,61 úm, 2EE , 7,39-7,25 úm, 2H0 , 4,85- 4,78 úm, 1ΗΗ , 07θ,93 úm, 4H0 , 3,54-3,49 úm, 2H0 , 3,28-3,22 úm, ΙΗϋ , 278Q65 úm, 2HÕ, 2,26-1,84 úm, 10HÕ, 1,45-1,27 úm, 3HÕ.
Composto 218. 4-úl-ú4-Ciclobutil-5-ú5-etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-etilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-5-ú5-etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-etilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 215õ, e usando o composto sal HC1 11.2 em vez do composto 1.5. m/z úES+õ 502 ÚM+Hõ+, 543 [M+CH3CN+H] \ 1H-NMR Ú300 MHz, CD30Dõp δ 7,73 úd, 2HÕ, 7,64- 7,58 úm, 2HÕ, 7,3%-7,26 Úm, 2HÕ, 4,8%-4,82 úm, 1HÕ, 4,35 úq, 2Hõ, 4,10-3, %5 úm, 1HÕ, 3,50-3,38 úm, 2HÕ, 3,30-3,27 úm, IHõ, 2,75-2,65 úm, 2HÕ, 2,22-1,86 úm, 10HÕ, 1,41 út, 3Hõ, 1,35-1,20 úm, 3HÕ.
Composto 21%.1. Metil 2-bromo-4-metilbenzoato. A uma solução de ácido 2-bromo-4-metilbenzóico Ú10 gõ em MeOH ú50 mLõ foi adicionado, gota a gota, ácido sulfúrico concentrado Ú10 mlõ a 0°C. A mistura foi aquecida a 70°C por 2 horas. Após arrefecimento para temperatura ambiente, o metanol foi removido sob pressão reduzida. 0 resíduo foi despejado em água gelada Ú100 mlõ. A mistura foi extraída com EtOAc úx2õ. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaHC03 úaq., sat. Observaçãou evolução de gás0 e salmoura, secas sobre MgS04, filtradas e concentradas para produzir o produto como um óleo límpidop Rendimentop 10,5 g, %%%. 1H RMN Ú400 MHz, Clorofórmio-dõp δ 7,73 úd, IHõ, 7,50 úd, 1HÕ, 7,1% - 7,11 úm, 1HÕ, 3, %2 ús, 3HÕ, 2,36 ús, 3Hõ.
Composto 21%.2. Metil 2-ciclobutil-4-metilbenzoato. Brometo de ciclobutilzinco úllõ Ú50 ml, 0,5 M em THF, 25,0 mmoló foi adicionado a uma mistura de metil 2-bromo-4-metilbenzoato Ú21%. 1, 5,0 g, 21,8 mmolõ e PdCl2údppfõCH2Cl2 úl, 78 g, 2,20 mmolõ. A mistura foi desgaseifiçada e o frasco foi preenchido com argônio através de um balão. Depois que a mistura foi aquecida a 65°C sob argônio por 24 horas, esta foi arrefecida para 0°C e resfriada bruscamente com água Ú10 mlõ. A mistura foi diluída com EtOAc Ú2Q0 mLõ, lavada com água e, em seguida, com salmoura. A camada de EtOAc foi seca úNa2S04õ, concentrada e purificada usando cromatografia em coluna úgel de sílicaõ úhexanospEtOAc 30μ1 a 20μ1δ. Εβηάίπίθ^ομ 3,6 g, 81%. ΧΗ RMN Ú4 00 MHz, Clorofórmio-άδμ δ 7,68 úd, IHõ, 7,23-7,17 ús, IHõ, 7,03 úd, IHõ, 4,16 úm, IHõ, 3,86 ús, 3HÕ, 2,30 ús, 3HÕ, 2,34 úm, 2HÕ, 2,16-1,§ 6 úm, 3HÕ, 1,80 úm, IHõ.
Composto 21%.3. Metil 2-ciclobutil-5-iodo-4-metilbenzoato. N-iodossuccinimida Ú5,25 g, 23,3 mmolõ foi adicionada em porç0 es a uma solução de metil 2-ciclobutil-4-metilbenzoato Ú210 .2, 4,77 g, 23,3 mmolõ em ácido sulf0 rico connferado Ú100 mlõ a 0°C. A mistura se tornou muito espessa, então esta foi agitada a 0°C por 30 minutos e à temperatura ambiente por 2 horas. A mistura foi arrefecida para 0°C novamente e MeOH 0 100 mlõ foi adicionado. A mistura foi aquecida a 60°C por 2 horas. 0 metanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi despejado em água gelada 0 200 mlõ. A mistura foi extraída com EtOAc 0 2xõ. Asamadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, em seguida com IN NaHC03 aq., secas 0 N§fi04õ e concentradas. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna 0 gel de sílicaõ 0 hexanospEtOAc 30μ1 a 20plõ. Rendimentop 50 g, óleo límpido, 65%. ΧΗ RMN Ú400 MHz, Clorofórmio-dõp δ 8,1% ús, IHõ, 7,24 ús, 1HÕ, 4,17-4,04 úm, 1HÕ, 3,86 ús, 3HÕ, 2,48-2,44 ús, 3Hõ, 2,40-2,28 úm, 2HÕ, 2,13-1, %2 úm, 3HÕ, 1,85-1,75 úm, IHõ.
Composto 21%.4. Metil 5-ciano-2-ciclobutil-4-metilbenzoato. Uma mistura de metil 2-ciclobutil- 5 -iodo-4-metilbenzoato Ú21%.3, 3,0 g, %,1 mmolõ, ZnúCNõ2 Ú2,3 g, 1%,6 mmolõ e
PdúPPh3õ4 Ú0,55 g, 0,4 7 mmolõ em DMF Ú50 mlõ foi desgaseifiçada e o frasco foi preenchido com argônio através de um balão. A mistura foi aquecida a 100°C sob argônio durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi resfriada bruscamente com FeS04 aq. saturado 0 20 mlõ e diluída com EtOAc 0 200 mlõ. A mistura foi vigorosamente agitada, então filtrada através de celite e lavada com 1M FeS04, água e etil acetato. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas úNa2SO40 e concentradas. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna úgel de sílicaS úhexanospEtOAc 30μ1 a 20μΐΒ . Rendèmtop 2,0 g, %6%. ΧΗ RMN Ú400 MHz, Clorofórmio-dõp δ 8,03 ús, 1HÕ, 7,34 ÚS, 1HÕ, 4,26-4,13 úm, 1HÕ, 3,8% Ús, 3HÕ, 2,5% ús, 3HÕ, 2,46-2,32 úm, 2HÕ, 2,16-1, %8 úm, 3HÕ, 1, %0-l, 78 úm, 1HÕ.
Composto 21%.5. 5-Ciano-2-ciclobutil-4-metilbenzohidrazida. A uma solução de metil 5-ciano-2-ciclobutil-4-metilbenzoato Ú210 .4, 2,0 g, 8,73 mmolõ em EtOH Ú10 mlõ foi adicònada hidrazina anidra Ú2 ml, excessoKI à temperatura ambènte. A mistura foi aquecida a %0°C durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi particionada entre água Ú60 mlõ e EtOAc Ú200 mlõ. A camada de EtOAc foi lavada com água úx2õ e salmoura, seca com Na2S04 e concentrada para produzir o produto como um sólido branco. Rendimentop 1, % g, %5%. m/z úES+õ 230 ÚM+Hõ+. LH RMN Ú400 MHz, Clorofórmio-dÕp δ 7,52 ús, 1HÕ, 7,32 ús, 1HÕ, 6, %1 úbr, IHõ, 4,08 úbr, 2HÕ, 3,8% úm, 1HÕ, 2,61-2,52 úm, 3HÕ, 2,42-2,28 Úm, 2HÕ, 2,18-1, %8 úm, 3HÕ, 1, %1-1,78 Úm, IHõ.
Composto 21%.6. 5-ú5-Amino-l,3,4-oxadiazol-2-ilõ-4-ciclobutil-2-metilbenzonitrila. 0 composto titular ÚO,55 g, sólido branco, 1000 õ foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 217.3, e usando o composto 21%.5 ÚO,50 gõ em vez do composto 217.2. m/z úES+õ 255 ÚM+Hõ+. RMN Ú400 MHz, Clorofórmio-dõp δ 7, %3 ÚS, 1HÕ, 7,45 Ús, 1HÕ, 5,10 úbr, 2HÕ, 4,38 úm, 1HÕ, 2,61 ÚS, 3HÕ, 2,48-2,34 úm, 2HÕ, 2,17-1, %8 Úm, 3HÕ, 1, %1-1,7% úm, 1HÕ.
Composto 21%.7. 4-Ciclobutil-5-ú5-etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzonitrila. A uma solução de 5-ú5-amino-1,3,4-oxadiazol-2 -ilõ-4-ciclobutil-2-metilbenzonitrila Ú21%.6 g, 0,5 g, 2,0 mmolõ em EtOH Ú4 0 mlõ foi adicionado KOH úl, 11 g, 20,0 mmolõ. A mistura foi aquecida a 85°C durante a noite. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi neutralizada para pH 7 com IN HC1 a 0°C e então extraída com EtOAc úx2õ. As camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna úgel de sílicaõ úhexanospEtOAc Ιμΐ a EtOAcõ. Rendimentop 0,2 g, sólido branco, 340 . m/z ÚES+õ 283 ÚM+Hõ+. 1H RMN Ú400 MHz, Clorofórmio-dõp δ 7,84 ús, 1HÕ, 7,35 ús, 1HÕ, 4,48 út, 2HÕ, 4, l%-4,10 úm, 1HÕ, 2,58 ús, 3HÕ, 2,30-2,1% úm, 2HÕ, 2,11-1,%5 úm, 3Hõ, 1,85-1,76 úm, 1HÕ, 1,45 út, 3HÕ.
Composto 21%.8. 4-Ciclobutil-5-ú5-etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilS -2-metilbenzamida. A uma solução de 4-ciclobutil5-ú5-etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-il0 -2-metilbenzonitrila ú2%.7, 0,15 g, 0,53 mmolS em EtOH Ú10 ml0 foi adicionado H|DH Ú0,18 mL, 2,66 mmol, 14,8 N em H2OE3 , seguido por £D2 úl,8 mL, 26,6 mmol, 500 em £Dõ. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi arrefecida para 0°C e cuidadosamente resfriada bruscamente com uma solução de IN Na2S203 Ú26 mlõ. A mistura foi extraída com EtOAc Ú2xõ e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04, filtradas e concentradas. 0 resíduo foi purificado com Prep-TLC Ú5ó MeOH em CH2C12õ. Rendimentop 0,1 g, sólido branco, 62,50 .m/z ÚES-0 2%% ÚM-Η0Γ .
Composto 21%.%. Ácido 4-ciclobutil- 5-Ú5-etoxi-4H-1,2,4-triazol-3-il0 -2-metilbenzóico. A uma solução de 4-ciclobut.il-5- Ú5-etoxi-4H-1,2,4-triazol-3-il0 -2-metilbenzamida Ú21%.8, 0,1 g, 0,33 mmolIEI em TFA Ú5ml0 foi adicionado NaN02 Ú0,046 g, 0,6 6 mmol0 a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C por 1 hora e em seguida à temperatura ambiente por 2 horas. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi particionado entre EtOAc e salmoura. A camada aquosa foi extraída com EtOAc, As camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas para produzir um óleo límpido. Rendimentop 0,1 g, 10013 . m/z úES-õ 300 ÚM-Hõ“.
Composto 21%. 4-Ú1-Ú4-Ciclobutil-5-ú5-etoxi-4H-1,2,4 - triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila.
Uma solução de ácido 4-ciclobutil-5-ú5-etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzóico úcomposto 21%.%, 40 mg, 0,13 mmolõ, Dl EA Ú0,07 mL, 0,3% mmolõ, HOBT Ú34 mg, 0,1% mmol, com 20H de águaõ, EDCI Ú38 mg, 0,1% mmolõ e cloridato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 36 mg, 0,16 mmolõ em N,N-dimeti 1 formamida ú3 mLõ foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura de reação foi então diluída com 50 mL de etil acetato e lavada com 2x20 mL de salmoura. A mistura foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi aplicado sobre uma placa de Prep-TLC de gel de sílica e desenvolvido usando etil acetato'hexanos úlplõ para produzir 0,1 g Ú680 õ do composto titular como um sólido branco, m/z úES+õ 470 úM+Hõ+.
Composto 220. 4-úl-Ú4-Ciclobutil- 5-Ú5-etoxi-4H-1,2,4- triazol-3 -ilõ-2-metilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulates es químicas padrão e procedimentos similaes àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-5-Ú5-etoxi-4H-1,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 21%õ, usando o composto sal HC1 11.2 em vez do composto 1.5. m/z úES+õ 488 ÚM+Hõ+. 1H RMN Ú400 MHz, CDCl3õp δ 11,10 úbr s, 1HÕ, 7,72-7,63 úm, 2HÕ, 7,47 úd, J = 8,4 Hz, 2HÕ, 7,42 É 7,33 Ú2 singletos,
rotâmeros de amida, Ar-H, lHõ, 7,25 ús, lHõ, 4,86 úbr d, J = 11,2 Hz, lHõ, 4,41 úq, J = 7,1 Hz, 2HÕ, 4,17-4,03 úm, 1HÕ, 3,61-3,38 úm, 2HÕ, 3,2%-3,14 úm, lHõ, 2,46-1,70 úm, 13HÕ, 1,45 út, J = 7,2 Hz, 3HÕ.
[0868] Composto 221. ú4-Ciclobutil-5-Ú5-etoxi-4H-1,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilfenilõú4-fluoro-4-ú4- útrifluorometilõfenilõpiperidin-l-ilõmetanona. 0 composto titular foi preparado usando manipulaçS es químicaspadrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-Ú1-Ú4-ciclobutil-5-Ú5-etoxi-4H-1,2,4 -triazol-3 -ilõ- 2- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 21%õ. m/z ÚES+õ 531 ÚM+Hõ+.
Composto 222.1. 4-Ciclobutil-5-ú5-metoxi-4H-l,2,4-triazol- 3-ilõ-2-metilbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 4-ciclobutil-5-ú5-etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzonitrila úcomposto 21%.7õ, com exceção de MeOH sendo usado como o solvente em vez de EtOH. m/z úES+õ 26% ÚM+Hõ+. ^ RMN Ú400 MHz, Clorofórmio-dõp δ 10,0 6 úbr, 1HÕ, 7,82 ÚS, 1HÕ, 7,35 ÚS, 1HÕ, 4,11 ús, 3HÕ, 4,15-4,05 úm, 1HÕ, 2,5% ÚS, 3HÕ, 2,31-2,16 úm, 2HÕ, 2,14-1,8% úm, 3HÕ, 1,87-1,71 úm, 1HÕ.
Composto 222.2 . 4-Ciclobutil-5-ú5-metoxi-4H-l,2,4-triazol- 3-ilõ-2-metilbenzamida. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-ciclobutil-5-ú5-etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzamida úcomposto 21%.8õ, mas usando o composto 222.1 em vez do composto 21%. 7. m/z ÚES+Õ 2 87 ÚM+HÕ+. 1H RMN Ú4 00 MHz, Metanol-d4õp δ 7,50 ús, 1HÕ, 7,33 ús, 1HÕ, 4,03 ús, 3HÕ, 3, %5-4,05 Úm, 1HÕ, 2,51 ÚS, 3HÕ, 2,23-2,11 úm, 2HÕ, 2,11-1,88 úm, 3HÕ, 1,83-1,71 úm, IHõ.
Composto 222.3. Ácido 4-ciclobutil-5-ú5-metoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzóico. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de ácido 4-ciclobutil-5-Ú5-etoxi-4H-1,2,4-triazol-3-il0 -2- metilbenzóico úcomposto 21%., mas usando o compoteo 222.2 em vez do composto 21%.8. m/z úES+õ 287 ÚM+Hõ+.
Composto 222. 4-úl-ú4-Ciclobutil-5-ú5-metoxi-4H-l, 2,4-triazol-3 -ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila.
Uma solução de ácido 4-ciclobutil-5-ú5-metoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilS -2-metilbenzóico úcomposto 222.3, 60 g, 0,21 mmollEI , Dl EA Ú0,11 ml, 0,63 mmolS , HOBT Ú53 mg, 0,32imol, com 20% de águaõ, EDCI Ú60 mg, 0,32 mmolõ e cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 47 mg, 0,21 mmolõ em N, N-dimeti 1 formamida Ú3 mLõ foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura de reação foi então diluída com 50 mL de etil acetato e lavada com 2x20 mL de salmoura. A mistura foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi aplicado sobre uma placa de Prep-TLC de gel de sílica e desenvolvido usando etil acetato/hexanos úl:10 para produzir 210 mg Ú22%õ do composto titular como um sólido branco, m/z ÚES+õ 456 ÚM+Hõ+. 1H RMN Ú400 MHz, Clorofórmio-dõp δ 11,54-10,86 úbr s, 1HÕ, 7,60 úd, 2HÕ, 7,38-7,20 um, 4HÕ, 5,04-4,%2 úm, 1HÕ, 4,06 us, 3HÕ, 4,14-4,00 úm, 1HÕ, 3,62 úd, 1HÕ, 3,15- 3,03 úm, 1HÕ, 2, %3 -2,76 úm, 2Hõ, 2,38 e 2,30 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar6¾, 3Hõ, 2,34-2,22 úm, 1HÕ, 2,20- 2,06 úm, 2HÕ, 2,05-1,84 úm, 3HÕ, 1,61-1,45 úm, 1HÕ.
Composto 223. 4-úl-Ú4-Ciclobutil- 5-Ú5-metoxi-4H-1,2,4- triazol-3 -ilõ-2-metilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-5-Ú5-metoxi-4H-1,2,4-triazol-3-il0 -2-metilbenzoilE pèpidin- 4-il0 benzonitrila úcomposto 2220 , mas usando o compto sal HC1 11.2 em vez do composto 1.5. m/z úES+õ 474 úM+Hõ+.
Composto 224. ú4-Ciclobutil-5-ú5-metoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilfenilõú4-ú4-útrifluorometilõfenilõpiperidin-1-ilõmetanona. O composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-5-Ú5-metoxi-4H-1,2,4-triazol-3-il0 -2-metilbenzoilS pèpidin- 4-ilõbenzonitrila Ú222Õ. m/z úES+õ 4%% úM+Hõ+.
Composto 225. ú4-Ciclobutil-5-ú5-metoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilfenilõú4-fluoro-4-ú4- útrifluorometilõfenilõpiperidin-1-ilõmetanona. 0 composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil- 5-Ú5-metoxi-4H-1,2,4-triazol-3- ilõ-2- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 222õ. m/z ÚES+Õ 517 ÚM+Hõ*.
Composto 226.3. Metil 4-ciclopropil-2-etilbenzoato. A uma mistura agitada de ZnBr2 Ú37,0 g, 164 mmol, 3,%% equivõ em tetrahidrofurano Ú150 mL0 sob nitrogénio foi adicioado bromoúciclopropilõmagnésio Ú3,28 M em THF, 50 mL, 4,00 equivõ gota a gota a 0°C. Após agitação por 15 minutos a 0°C, a temperatura foi baixada para -30°C, seguido pela adição gota a gota de uma solução de PdúdppfõCl2 Ú2,00 g, 2,73 mmol, 0,07 equivõ em te trahidrof urano Ú50 mLõ e uma solução de metil 4-bromo-2-etilbenzoato úcomposto 181.2, 10,0 g, 41,1 mmol, 1,00 equivõ em tetrahidrofurano Ú50 mLõ. A solução resultante foi lentamente aquecida para 25°C e agitada por 15 horas, então cuidadosamente resfriada bruscamente por lenta adição de 100 mL de NH4C1 úaq., sat.õ. A mistura foi extraída com 2x100 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ30ό como eluente para produzir 7,50 g ú8%0 õ de metil 4-ciclopropil-2-etiíbenzoato como um óleo amarelo claro.
Composto 226.4. Metil 4-ciclopropil-2-etil-5-iodobenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 4-ciclopropil-2-etilbenzoato úcomposto 226.3, 5.00 g, 24,5 mmol, 1,00 equivõ em AcOH Ú40 mLõ. I2 Ú6,80 g, 26,8 mmol, 1,10 equivõ, NaI04 Ú2,60 g, 12,2 mmol, 0,50 equivõ e ácido sulfH rico Ú400 mg, 4,08 mmol, 0,15 equivõ foram adáionados à reação. A solução resultante foi agitada por 2 horas a 50°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi cuidadosamente resfriada bruscamente com Na2S203 úaq., sat.õ. A mistura foi extraída com 2x100 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado usando cromatograf ia em coluna de gel de sílica com éter de petróleo'etil acetato Ú20plõ como eluente para fornecer 4,00 g ú4%0 õ de metil 4- ciclopropil-2-etil-5-iodobenzoâo como um óleo amarelo.
Composto 226.5. Ácido 4-ciclopropil-2-etil-5-iodobenzóico. A uma solução de metil 4-ciclopropil-2-etil-5-iodobenzoato úcomposto 226.4, 2,50 g, 7,57 mmol, 1,00 equivõ em metanol Ú40 mLõ foi adicionado hidróxido de sódio aquoso ú3,10 g, 77,5 mmol, 10,0 equiv, em 10 mL de ãguaõ. A mistura resultante foi agitada por 15 horas a 60°C em um banho de óleo. Após arrefecimento para temperatura ambiente, o solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida e o pH da camada aquosa remanescente foi ajustado para 4 com cloreto de hidrogénio úaquoso, 1MÕ. Os sólidos foram coletados por filtração e secos em um forno sob pressão reduzida para produzir 2,20 g úH 2%õ de ácido 4-ciccbpropil-2-etil-5-iodobenzóico como um sólido branco.
Composto 226.6. Ácido 4-ciclopropil-2-etil-5-úmetoxicarbonilõbenzóico. A uma solução de ácido 4-ciclopropil-2-etil-5-iodobenzóico úcomposto 226.5, 500 mg, 1,58 mmol, 1,00 equivõ em THF'Et20 úlO'10 mLõ sob nitrogénio a -78°C foi adicionado, gota a gota, n-butil lítio Ú2,5 M , 1,88 mL, 3,00 equivõ por 3 minutos. Após agitação por 10 minutos a -78°C, metil cloroformato Ú230 mg, 2,43 mmol, 1,50 equivõ foi adicionado gota a gota a -78°C. A solução resultante foi agitada por 40 minutos a -78°C, então lentamente aquecida para -35°C. A reação foi cuidadosamente resfriada bruscamente com 2 mL de água. 0 pH foi ajustado para ~4-5 com cloreto de hidrogénio úaq., lMõ. A mistura resultante foi extraída com 3x20 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas sob pressão reduzida para produzir 400 mg do composto titular como um sólido amarelo.
Composto 226.7. Metil 5-ú4-ú4-cianofenilõ-4- fluoropiperidina-l-carbonilõ-2-cic!opropil-4-etilbenzoato, A uma solução de ácido 4-ciclopropil-2-etil-5-úmetoxicarbonilõbenzóico úcomposto 226.6, 150 mg, 0,600 mmol, 1,00 equivõ em N, N- dimetilformamida Ú15 mLõ foram adicionados cloridrato de 4-ú4-fluoropiperidin-4- ilõbenzonitrila úcomposto 11.2, 150 mg, 0,620 mmol, 1,00 equivõ, DIPEA Ú450 mg, 3,4% mmol, 6,00 equivõ e HBTU Ú300 mg, 0,7%0 mmol, 1,30 equivõ. A solução resultante foi agitada por 4 horas a 20°C, então resfriada bruscamente pela adição de 20 mL de salmoura. A mistura resultante foi extraída com 4x30 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado por coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo úlp3õ como eluente. Isto resultou em 0,200 g Ú76K õ de meti 5-Ú4-ú4-cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l-carbonilõ-2-ciclopropil-4-etilbenzoato como um sólido amarelo claro.
Composto 226.8. 5-ú4-ú4-Cianofenilõ-4-fluoropiperidina-l- carbonilõ-2-ciclopropil-4-etilbenzohidrazida. A uma solução de metil 5-ú4-ú4-cianofenilõ-4-fluoropiperidina-1- carbonilõ-2-ciclopropil-4-etilbenzoato úcomposto 226.7, 200 mg, 0,460 mmol, 1,00 equivõ em etanol Ú15 mLõ foi adicionado hidrato de hidrazina Ú8O0 , 5 mLõ. A solção resultante foi agitada a 80°C por 15 horas. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a reação foi resfriada bruscamente com 50 mL de água, então extraída com 3x50 mL de diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo para produzir 150 mg Ú750 õ de 5-Ú4-Ú4-cianofenilõ4-fluoropiperidina-1-carbonilõ-2-ciclopropil-4 -etilbenzohidrazida como um óleo incolor.
Composto 226.%. 4-úl-Ú5-Ú5-Amino-1,3,4-oxadiazol-2-ilõ-4- ciclopropil-2- etilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4- ilõbenzonitrila. 0 composto titular Ú50 mg, sólido branco, %5óõ foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 217.3, e usando o composto 226.8 Ú50 mgõ em vez do composto 217.2.
Composto 226. 4-Ú1-Ú4-Ciclopropil-2-etil-5-ú5-metoxi-4H- 1,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular Ú50 mg, sólido branco, %5óõ foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 21%.7, e usando o composto 226.% Ú300 mgõ em vez do composto 21%.6. 0 produto bruto ú~30 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#-Pre-HPLC-001 úShimadzuõõp Coluna, SunFire Prep Cl8, l%±150mm 5um; fase móvel, água com 0,050 TFA e CH3CN Ú46,00 C|CN até 57, Oõ em 8 minutos, até 100,00 em 1 minuto, abaixo de 46,Oó em 1 minutoõ; Detector, Waters 248% 254&amp;220nm. As f raç0 es contendo composto puro óram combinadas e liofilizadas para produzir 15 mg do composto titular como um sólido branco, m/z úES+õ 474 ÚM+Hõ4'. 1H-NMR Ú300 MHz, CD30D, ppmõp δ 7,73 úd, 2HÕ, 7,65-7,57 úm, 2HÕ, 7,46-7,32 úm, 1HÕ, 7,03 ús, 1HÕ, 4,85-4,73 úm, 1HÕ, 4,00 ús, 3HÕ, 3,48-3,32 úm, 2HÕ, 3,28-3,21 úm, IHõ, 2,71-2,62 úm, 2HÕ, 2,28-2,14 úm , 2HÕ, 2,10-1,80 úm, 3HÕ, 1,28-1,20 Úm, 3HÕ, 0, %7- 0, %4 úm, 2HÕ, 0,75-0,50 úm, 2HÕ.
Composto 227. 4-úl-ú4-Ciclopropil-5-ú5-etoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-2-etilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto titular foi preparado usando manipulaç0 es químicas padrão e procedimentos similaes àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclopropil-2-etil-5-ú5-metoxi-4H-l,2,4-triazol-3-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 226õ. m/z úES+õ 4 88 ÚM+Hõ+. 1H-NMR Ú300 MHz, CD:30Dõp δ 7,80-7,78 úm, 2HÕ, 7,70-7,63 úm, 2Hõ, 7,51 úm, IHõ, 7,07 ús, IHõ, 4,8%-4,82 úm, IHõ, 4,40 úapp t, 2HÕ, 3,57-3,52 úm, 2HÕ, 3,28-3,25 úm, IHõ, 2,80-2,50 úm, 2HÕ, 2,40-2,10 Úm, 4HÕ, 1, %5-l, 80 Úm, 1HÕ, 1,45 út, 3Hõ, 1,32-1,22 úm, 3HÕ, 1,01-0,%% úm, 2HÕ, 0,73-0,73 úm, 2Hõ.
Composto 228.1. Metil 5-ú4-ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-ciclopropil-4-etilbenzoato. A um balão de vidro, o qual foi expurgado e mantido com uma atmosfera de nitrogénio, foi adicionada uma solução de ácido 4- ciclopropil-2-etil-5-úmetoxicarbonilõbenzóico úcomposto 226.6, 500 mg, 2,01 mmol, 1,00 equivõ em N,N- dimeti 1 formamida Ú20 mLõ. HBTU úl, 53 g, 4,03 mmol, 2,00 equivõ e DIEA Ú780 mg, 6,04 mmol, 3,00 equivõ foram adicionados à solução de reação e esta foi agitada por 5 minutos a 25 °C. Cloridrato de 4-úpiperidin-4- ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 410 mg, 2,20 mmol, 1,10 equivõ foi adicionado à mistura mencionada acima. Após agitação por 15 horas a 25°C, a reação foi resfriada bruscamente pela adição de água. A mistura foi extraída com 100 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 4x40 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ú4:lõ como eluente para fornecer 0,830 g ú%%£3 õ de metil 5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-ciclopropil-4-etilbenzoato como um óleo incolor.
Composto 228.2. 5-Ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ- 2-ciclopropil-4-etilbenzohidrazida. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de metil 5-Ú4-Ú4- cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-2-ciclopropil-4 -etilbenzoato úcomposto 228.1, 830 mg, 1, %% mmol, 1,00 equivõ em etanol Ú15 mLõ. Hidrazina Ú5 mL, 100 equivõ foi adicionada à reação. A solução resultante foi agitada por 15 horas a 100°C, então concentrada in vacuo. 0 resíduo foi extraído com 100 mL de diclorometano e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1x30 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. Isto resultou em 0,800 g ú%6S õ de 5-Ú4-Ú4-cianofenilõpipridina-1-carbonilõ-2-ciclopropil-4-etilbenzohidrazida como um sólido branco.
Composto 228.3. 4-úl-ú5-ú5-Amino-l,3,4-oxadiazol-2-ilõ-4-ciclopropil-2-etilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto titular Ú750 mg, sólido marrom claro, %4® õ foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 217.3, e usando o composto 228.2 Ú750 mgõ em vez do composto 217.2.
Composto 228.4. 4-úl-Ú4-Ciclopropil-5-Ú5-etoxi-4H-1,2,4- triazol-3-ilõ-2-etilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzamida. 0 composto titular Ú80 mg, sólido amarelo, 360 õ foi peparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 21%.7, e usando o composto 228.3 Ú200 mgõ em vez do composto 21%.6.
Composto 228. 4-Ú1-Ú4-Ciclopropil-5-ú5-etoxi-4H-l,2,4- triazol- 3 -ilõ-2-etilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um balão de vidro, o qual foi expurgado e mantido com uma atmosfera de nitrogénio, foi adicionada uma solução de 4-Ú1-Ú4-ciclopropil-5-Ú5-etoxi-4H-1,2,4-triazol-3-ilõ-2-etilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzamida úcomposto 228.4, 80,0 mg, 0,160 mmol, 1,00 equivõ em diclorometano Ú10 mLõ.
Anidrido trifluoroacético Ú34,0 mg, 0,160 mmol, 1,00 equivõ e trietilamina Ú33,0 mg, 0,330 mmol, 2,00 equivõ foram adicionados gota a gota à mistura agitada. A solução resultante foi agitada por 2 horas a 25°C, então lavada com 1x10 mL de salmoura. A camada aquosa foi extraída com 2x20 mL de diclorometano e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 produto bruto Ú30 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#- Pre-BPLC-001 úShimadzuõõ:
Coluna, SunFire Prep C18, l%±150mm Sum; fase móvel, água com 0,050 TFA e C|CN Ú420 CgCN até 570 em 8 minutos, até 100o em 1,5 minutos, abaixo de 42ó em 1 minutoõ; Detector, Waters 248% 254É220nm. As frações contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 15 mg Ú2OÓ0 do composto titular como um só lido esbranquiçado.m/z úES+0 4 70 ÚM+H0+. 1H-NMR Ú300 MHz, CD30D, ppm0 μ δ 7,64 úd, 2H0 , 7,46-7,28 úm, 3H0 , 7,02-7,01 Úm, 1H0 , 4,8%-4,80 úm,lH0 , 4.40-4,33 úm, 2H0 , 3,58-3,56 úm, 1H0 , 3,27-3,25 úm,lH0 , 3.04- 2,%0 úm, 2H0 , 2,73-2,58 úm, 2H0 , 2,31-2,2% úm,lH0 , 1, %4-1,%6 Úm, 1H0 , 1,82-1,78 Úm, 3H0 , 1,45 Út, 3H01„32- 1,12 úm, 3H0 , 0,%8-0,88 úm, 2H0 , 0,71-0,68 úm, 2H0 .
Composto 22%. 4-úl-ú4-Ciclopropil-2-etil-5-ú5-metoxi-4H-
1.2.4- triazol-3-il0 benzoil0 piperidin-4-il0 benzonita. O
composto titular foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 228. m/z úES+0 456 ÚM+H0. ‘Ή-NMR Ú300 MHz, CD30D, ppm0 μδ 7,64 úd, 2H0 , 7,43-7,27 úm, 3H0 , 7,03-7,02 úm, 1H0 , 4,0 ús, 3H0 , 3,5%-3,55 úm, 1H0 3„ 28- 3,27 úm, 1H0 , 3,04-2,%8 úm, 2H0 , 2,%7-2,56 úm, 2H02„53- 2,2% úm, 1H0 , 2,0-1, %8 úm, 1H0 , 1,76-1,42 úm, 3H01„ 30- 1,16 úm, 3H0 , 0,%%-0,%4 úm, 2H0 , 0,70-0,64 úm, 2H0 .
Composto 230.1. Ácido 4-ciclobutil-5-iodo-2-metilbenzóico. A uma solução de metil 4-ciclobutil-5-iodo-2-metilbenzoato úcomposto 152.3, 35,0 g, 106 mmol, 1,00 equivõ em metanol Ú200 mL0 a 0-5°C foi adicionado, gota a gota, hidráido de sódio aquoso Ú12,7 g, 318 mmol, 3,00 equiv em 100 mL de águaEl . A mistura resultante foi agitada por 3 horasa 6 0°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, o solvente orgânico foi então removido sob pressão reduzida. 0 pH da fase aquosa remanescente foi ajustado para ~4 com cloreto de hidrogénio úaquoso, 2Mõ. Os sólidos resultantes foram coletados por filtração e secos em um forno sob pressão reduzida para produzir 31,0 g ú%3%0 do composto titilar como um sólido branco.
Composto 230.2. Ácido 4-ciclobutil-5-úmetoxicarbonilõ-2-metilbenzóico. A uma solução de ácido 4-ciclobutil- 5-iodo-2-metilbenzõico úcomposto 230.1, 3,00 g, %, 4% mmol, 1,00 equivõ em THF Ú4 0 mLõ sob nitrogénio a -78°C foi adicionado, gota a gota, n-BuLi ú%,5 mL, 2,50 equiv, 2,5 M em THFõ. Após 10 minutos, uma solução de dimetil carbonato Ú2,56 g, 28,4 mmol, 3,00 equivõ em THF Ú10 mLõ foi adicionada gota a gota a -78°C. A solução resultante foi agitada por 1 hora a -78°C, então cuidadosamente resfriada bruscamente por lenta adição de 50 mL de água. 0 pH foi ajustado para -4 com cloreto de hidrogénio úaq., 1MÕ. A mistura resultante foi extraída com 2x80 mL de etil acetato, as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύΙμΙΟ-1μ2ό como eluente para fornecer 1,30 g Ú550 õ de ácido 4-ciclbutil-5-úmetoxicarbonilõ-2-metilbenzóico como um sólido branco.
Composto 230.3. Metil 5-ú4-ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutil-4-metilbenzoato. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de ácido 4-ciclobutil-5-úmetoxicarbonilõ-2-metilbenzóico úcomposto 230.2, 2,10 g, 8,46 mmol, 1,00 equivó em N,N- dimetilformamida Ú10 mLõ. Cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 1,88 g, 8,44 mmol, 1,00 equivó, EDC-HC1 Ú3,22 g, 16,8 mmol, 2.00 equivó e 4-dimetilaminopiridina Ú3,10 g, 25,4 mmol, 3.00 equivó foram adicionados à reação. A solução resultante foi agitada durante a noite a 25°C, então diluída com 100 mL de etil acetato. A mistura foi lavada com 2x30 mL de NH4C1 úaq. , sat.ó e 2x30 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ0μ1-1μ3ό como eluente para produzir 3,20 g ú%lEI õ de metil 5-Ú4-Ú4- cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutil-4~ metilbenzoato como um sólido branco.
Composto 230.4. 5-Ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ- 2-ciclobutil-4-metilbenzohidrazida. 0 composto titular Ú660 mg, sólido branco, 660 õ foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 21%.5, e usando o composto 230.3 úl,00 gõ em vez do composto 21%.4.
Composto 230. 4-úl-ú4-Ciclobutil-5-ú5-etil-l,3,4-oxadiazol-2-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um balão de vidro foi adicionada uma solução de 5-Ú4-Ú4-cianofenilópiperidina-1-carboniló-2-ciclobutil-4-metilbenzohidrazida úcomposto 230.4, 150 mg, 0,360 mmol, 1.00 equivõ em dioxano Ú5 mLõ. MeS03H ú7 mg, 0,07 mmol, 0,20 equivõ e 1,1,1-trietoxipropano úl%0 mg, 1,08 mmol, 3.00 equivõ foram adicionados à reação. A solução resultante foi agitada por 20 minutos a 110°C, então arrefecida para temperatura ambiente e diluída com 50 mL de etil acetato. A camada orgânica foi lavada com 2x20 mL de água, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada in vacuo. 0 produto bruto Ú200 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#-Pre-HPLC-OOlúShimadzuõõ: Coluna, SunFire Prep Cl 8, l%*150mm 5 um; fase móvel, água com 0,050 TFA e C|EN Ú64,O0 CgCN até 7 6,00 em 6 minutos, até 100,00 em 4 minutos, abaixcde 64.00 em 1 minutoõ; Detector, Waters 248% 254&amp;220nm As fraç0 es contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para produzir 12% mg ú7%0 õ do compostotitular como um sólido branco. m/z úES+õ 455 uM+Hõ+. 1H-NMR Ú300 MHz, CD30D, ppmõ: δ 7,73-7,67 úm, 3HÕ, 7,52-7,48 úm, 3HÕ, 5-4,%4 úm, IHõ, 4,25-4,20 úm, 1HÕ, 3,60-3,58 úm, IHõ, 3,33-3,24 úm, IHõ, 3,05-2,%7 úm, 4HÕ, 2,4% e 2,30 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, CH3, 3HÕ, 2,3%-2,34 úm, 2Hõ, 2,1%-1,%1 úm, 4Hõ, 1,88-1,66 úm, 4HÕ, 1,4%-l,42 út, 3HÕ.
Composto 231.1. Metil 4-etenil-2-metilbenzoato. A um balão de vidro, o qual foi expurgado e mantido com uma atmosfera de nitrogénio, foi adicionada uma solução de metil 4-bromo-2-metilbenzoato úcomposto 152.1, 14,0 g, 61,1 mmol, 1,00 equivõ em N, JV-dimetilformamida Ú150 mLõ.
Tributilúetenilõestanano ú2%,3 g, %2,4 mmol, 2,00 equivõ e PdúPPh3õ4 Ú7,10 g, 6,14 mmol, 0,10 equivõ foram adicionados à reação. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 100°C em um banho de óleo. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi diluída com 400 mL de etil acetato. A camada orgânica foi lavada com 2x400 mL de NH4C1 úaq.õ e 2x400 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e então concentrada in vacuo. 0 produto bruto foi purificado por CombiFlash com as seguintes condiçB es úlntelFlash-Ιομ fase móvel, éter de petrõleo/etil acetato = 1μ0 aumentando para éter de petróleo/etil acetato = 100μ1 em 20 minutos; Detector, UV 254 nm. Isto resultou em 6,81 g ú63%õ de metil 4- etenil-2-metilbenzoato como um óleo incolor.
Composto 231.2. Metil 2-metil-4-ú3-oxociclobutilõbenzoato. A uma solução de Nf N-dimetilacetamida ú5,5 mL0 em DCE Ú20 mLõ sob nitrogénio a -15°C foi adicionada uma solução de anidrido trifluorometanosulfônico Ú10 mLõ em DCE Ú50 mLõ gota a gota. A mistura foi então agitada por 10 minutos a -15°C para fazer a solução A. Ao outro frasco foi adicionado metil 4-etenil-2-metilbenzoato úcomposto 231.1, 5,30 g, 0,03 mol, 1,00 equivõ. Uma solução de 2,4,6- trimetilpiridina Ú5,5 mLõ em DCE Ú80 mLõ foi adicionada gota a gota a -15°C. A mistura resultante foi adicionada na solução A gota a gota sob uma atmosfera inerte de nitrogénio. A solução resultante foi agitada durante a noite a 80°C. Após arrefecimento para temperatura ambiente, a mistura foi cuidadosamente resfriada bruscamente com água. A mistura resultante foi extraída com 2x200 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 3x400 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ50-1μ5ο como eluente para fornecer 2,13 5 g Ú45%õ de metil 2-metil-4-ú3-oxociclobutilH benzoato como um óleo marrom.
Composto 231.3. Metil 4-ú3,3-difluorociclobutilH -2- metilbenzoato. A um balão de vidro, o qual foi expurgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi adicionada uma solução de metil 2-metil-4-ú3- oxociclobutilH benzoato úcomposto 231.2, 3,00 g, 138 mmol, 1,00 equivS em diclorometano Ú100 mL0 . DAST Ú22,2 , g 137 mmol, 10,00 equivõ foi adicionado à mistura de reação. A solução resultante foi agitada durante a noite a 25°C, então cuidadosamente resfriada bruscamente por lenta adição úprimeiramente gota a gotaõ de 500 mL de bicarbonato de sódio úaq.õ e gelo. A mistura foi extraída com 300 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x300 mL de bicarbonato de sódio úaq.õ e 2x300 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatograf ia em coluna de gel de sílica com etil acetato'éter de petróleo úlp20õ como eluente para fornecer 3,00 g Ú0 l%õ de metil 4-ú3,3-difluorociclobutilõ-2- metilbenzoato como um óleo marrom.
Composto 231.4. Metil 4-Ú3,3-difluorociclobutilõ-5-iodo-2-metilbenzoato. O composto titular ú3,02 g, sólido amarelo, 66%õ foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 181.4, e usando o composto 231.3 Ú3,00 gõ em vez do composto 181.3.
Composto 231.5. Ácido 4-Ú3,3-difluorociclobutilõ-5-ú5-etil-4H-1,2,4-triazol-3-ilõ-2-metilbenzóico. 0 composto titular foi sintetizado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 164.1, usando o composto 231.4 em vez do composto 152.3 .
Composto 231. 4-Ú1-Ú4-Ú3,3-Difluorociclobutilõ-5-ú5-etil- 4H -1, 2,4-triazol- 3-ilõ-2 - metilbenzoilõpiperidin-4 -ilõbenzonitrila. A um frasco de fundo redondo, foi adicionada uma solução de ácido 4-Ú3,3-difluorociclobutilõ-5-ú5-etil-4H-l,2,4-triazol-3 -ilõ-2-metilbenzóico úcomposto 231.5, 211 mg, 0,660 mmol, 1,00 equivõ em N,N-dimetilformamida Ú5 mLõ. Cloridrato de 4-úPiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 146 mg, 0,660 mmol, 1,00 equivõ, EDC-HC1 Ú252 mg, 1,31 mmol, 2,00 equivõ e 4-dimetilaminopiridina Ú160 mg, 1,31 mmol, 2,00 equivõ foram adicionados à reação. A solução resultante foi agitada por 3h a 30 °C em um banho de óleo, em seguida, diluída com 30 mL de etil acetato. A mistura foi lavada com 3 x 40 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada à vácuo. 0 produto bruto Ú448 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiçEI es úl#-Pre-HPLC-001 úSHIMADZlJõõp Coluna, SunFire Prep C18, l%*150mm 5um; fase móvel, água com 0,050 TFA e CH?1CN Ú48,00! CiEN até 62,001 em 6 min, até 100,001 em 4 min, até 48,00 em 2 minõ; Detector, Waters 248% 254&amp;220nm. As fraç0! es contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para render 186 mg Ú580I õ do composto d título como um sólido branco, m/z úES+õ 4%0 úM+Hõ+. ^Ή- NMR Ú3 00MHZ, CD30D, ppmõp δ 7,68 úd, J=8Hz, 2HÕ, 7,5%- 7,44 úm, 4HÕ, 4,8%-4,80 Úm, 1H) , 4,03-3, %8 úm, 1HÕ, 3,67-3,61 úm, IHõ, 3,28-3,24 úm, 1HÕ, 3,04-3,00 úm, 2HÕ, 2,%7-2,8% úm, 2Hõ, 2,87-2,83 (m, 2HÕ, 2,62-2,60 úm, 2HÕ, 2,48 e 2,38 (2 singletos, rotâmeros de ami da, ArCH3 , 3HÕ, 2,05-2,00 úm, 1HÕ, 1,88-1,58 Úm, 3HÕ, 1,41 út, 3HÕ.
Composto 232.1 Metil 5-ú5-údimetilcarbamoilõ-lH-imidazol-2-ilõ-2,4- dimetilbenzoato. Uma mistura de 3-bromo-N,N-dimetil-2-oxopropanami da Ú246 mgõ, metil cloridrato de 5-carbamimidoil-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 2.5, 237 mgõ, e carbonato de potássio Ú311 mgõ em acetonitrila Ú12 mlõ foi aquecida para refluxo por 48 horas. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada. 0 resíduo foi dissolvido em EtOAc e lavado com salmoura, seco sobre MgS04, concentrado, e purificado por cromatografia flash úSi02; EtOAcõ para dar 88 mg do composto do título, m/z úES+õ 3 02 ÚM+Hõ+ .
Composto 232.2. Ácido 5-Ú5-úDimetilcarbamoilõ-lH-imidazol-2-ilõ-2,4- dimetilbenzóico. Metil 5-(5-( dimetilcarbamoilõ-1H-imidazol-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 232.1, 113 mg, 0,37 mmolõ foi dissolvido em 2N LiOH aquoso úl mlõ e tetraidrofurano úTHFõ (5 mlõ e aquecido para 50 °C por 16 horas. Após resfriamento para temperatura ambiente, o solvente orgânico foi removido a vácuo. 0 pH da camada aquosa remanescente foi ajustado com 2N HC1 para pH 3-4. 0 precipitado resultante foi coletado por filtração e seco para gerar 56 mg de ácido 5-ú5-údimetilcarbamoilõ-lH-imidazol-2-ilõ-2,4-dimetilbenzóico Ú53Ó0 . m'z úES+0 288 úM+HET .
Composto 232. 2-ú5-u4-ú4-CianofenilB piperidina-l-cabonilS -2 4- dimetilfenilS -N,N-dimetil-1H-imidazol-5-carhoamida.
Uma mistura de ácido acima úcomposto 232.2, 56 mg, 0,2 mmolõ, cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 45 mg, 0,2 mmolõ, HBTU Ú152 mg, 0,4 mmolõ, e DIEA úl 05 ul 0,6 mmolõ em DMF ú2 mlõ foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. A reação foi diluída com salmoura e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre MgS04, e concentrada. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash úSi02; 4 ó Metanol em EtOAcõ para render 44 mg de uma espuma Ú480 õ. mt úES+õ 4 56 ÚM+Hõ+.
Composto 233. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú5-úmorfolina-4- carbonilõ-lH-imidazol-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 2-Ú5-Ú4-Ú4- cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-2,4-dimetilfenilõ-N,N-dimetil-lH-imidazol-5-carboxamida úcomposto 232õ. m'z úES+õ 4%8 ÚM+Hõ* .
Composto 234. Ácido 5-Ú4-Ú4-Cianofenilõpiperidina-1- carbonilõ-2-ciclobutil-4- metilbenzóico. A uma solução de metil 5-ú4-ú4-cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-2- ciclobutil-4-metilbenzoato úcomposto 230,3, 1,50 g, 3,60 mmoles, 1,00 equivõ em metanol 10 mLõ foi adicionado hidróxido de sódio aquoso Ú577 mg, 14,4 mmoles em 5 mL de águaõ em gotas a 0 °C. A solução resultante foi agitada por 2 ha 60 °Cemum banho de óleo. Após resfriamento para temperatura ambiente, o solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida. 0 pH da camada aquosa remanescente foi ajustado para 3-4 com cloreto de hidrogénio úaq., 2Mõ. Os sólidos resultantes foram coletados por filtração e secos em um forno sob pressão reduzida para render 1,20 g Ú83§ õ do composto do título como um sólido branco, m'z úES+õ 403 úM+Hõ+.
Composto 235.1. Cloreto de 5-ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutil-4-metilbenzoil. A um frasco de fundo redondo, foi adicionada uma solução de ácido 5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-2-ciclobutil-4- metilbenzóico úcomposto 234, 500 mg, 1,24 mmol, 1,00 equivõ em diclorometano Ú5 mLõ. Cloreto de oxalil Ú317 mg, 2,50 mmoles, 2,0 equivõ e N,N-dimetilformamida ú~5 mgõ foram adicionados em gotas à mistura. A solução resultante foi agitada por 1 h a 40 °C, então concentrada e seca sob pressão reduzida para render 480 mg ú%2%0 do compoSo do título como um óleo amarelo claro.
Composto 235.2. 4-úl-ú5-ú2-Bromoacetilõ-4-ciclobutil-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A uma solução de TMSCHN2 Ú2M em hexanoõ Ú0,476 mL, 2,00 equivõ em diclorometano Ú10 mLõ sob nitrogénio a 0 °C, foi adicionada em gotas uma solução de cloreto de 5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutil-4-metilbenzoil úcomposto 235.1, 200 mg, 0,480 mmol, 1,00 equivõ em diclorometano ú3 mLõ. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 25 °C. HBr ú40%õ Ú0,154 mL, 1,50 equivõ foi então adicionado em gotas a 0 °C e a mistura foi agitada por mais 2 h a 0 °C, em seguida, diluída com 50 mL de diclorometano. A camada orgânica foi lavada com 2 x 20 mL de água e 1 x 20 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato/éter de petróleo Ú0:1-1:50-1:5õ como eluente para fornecer 200 mg ú88%õ de 4-úl-ú5-ú2-bromoacetilõ-4-ciclobutil-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila como um óleo amarelo.
Composto 235. 4-úl-Ú4-Ciclobutil-5-Ú2-etil-1H-imidazol- 5-Í1Õ-2- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um frasco de fundo redondo, que foi purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi adicionada uma solução de 4-Ú1-Ú5-Ú2- bromoacetilõ-4-ciclobutil-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 235.2, 100 mg, 0,210 mmol, 1,00 equivõ em CH3CN Ú5 mLõ. Cloridrato de propionimidamida Ú22,8 mg, 1,00 equivõ e carbonato de potássio Ú86,6 mg, 0,63 mmol, 3,00 equivõ foram adicionados à reação. A solução resultante foi agitada por 3h a 80 °C, em seguida, resfriada para temperatura ambiente e concentrada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em 20 mL de água. A mistura foi extraída com 2 x 20 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas a vácuo. O produto bruto ú~100mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiç0 es úl#-Pre-HPLC-00lúSHIMADZUõõpCoíina, SunFire Prep C18, l%*150mm 5um; fase móvel, água com 0,050 TFA e CH3CN Ú2%0 CH3CN até 43,00 em 7 min, até 100,00 em 3 min, até 2%, 0 0 úem 2 minõ; Detector, Waters 248% 254&amp;220nm. As fraç0 es contendo composto puro foram
combinadas e liofilizadas para render 43 mg Ú440 õ d composto do título como um sólido branco, m/z úES+õ 453 ÚM+HÕT. 1H RMN Ú3Q0 MHz, CD30Dõp δ 7,68 ud com estrutura fina, J=7,8 Hz, 2HÕ, 7,56-7,53 úm, 4Hõ, 7,30 e 7,20 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar-H, IHõ, ~4,% úlH parcialmente obscurecido por pico de águaõ, 3,84-3,70 úm, IHõ, 3,70-3,53 úm, IHõ, 3,33-3,1% úm, 1 H parcialmente obscurecido por pico de solvente de metanolõ, 3,13-2, %2 úm, 4Hõ, 2,48 É 2,38 ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar-CH3, 3HÕ, 2,2%-2,11 úm, 4HÕ, 2,11-1, %3 úm, 2HÕ, 1, %3-l, 72 úm, 3HÕ, 1,72-1,53 úm, 1HÕ, 1,45 út, 3HÕ.
Composto 236.1. 4-Ú1-Ú5-Ú2-Bromoacetilõ-4-ciclobutil-2 - metilbenzoilõ-4- fluoropiperidin-4 -ilõbenzonitrila. 0 composto do título fed preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-Ú1-Ú5-Ú2- bromoacetilõ-4-ciclobutil-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 235.2õ porém usando composto 11.2 Sal de HC1 em vez do composto 1.5.
Composto 236. 4-Ú1-Ú4-Ciclobutil-2-metil-5-Ú2-metil-1H- imidazol-5- ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4 - ilõbenzonitrila. A um frasco de fundo redondo, que foi purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi adicionada uma solução de 4-Ú1-Ú5-Ú2-bromoacetilõ-4-ciclobutil-2-metilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 236.1, 40 mg, 0,08 mmol, 1,00 equivõ em CH3CN Ú10 mLõ. Cloridrato de acetimidamida Ú7,6 mg, 0,08 mmol, 1,00 equivõ e carbonato de potássio Ú33,4 mg, 0,24 mmol, 3,00 equivõ foram adicionados à reação, A solução resultante foi agitada por 2 ha 80 °Cem um banho de óleo, em seguida, resfriada para temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em 50 mL de etil acetato. A camada orgânica foi lavada com 2 x 20 mL de água, 2 x 20 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. 0 produto bruto Ú50 mg0 foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#-Pre-HPLC-OOlúSHIMADZUõõp Coluna, SunFire Prep C18,l%*150mm 5um; fase móvel, água com 0,05% TFA e CH3CN Ú20 ,0% C£EN até 43,0% em 8 min, até 100,0% em 2 min, até 20 ,0% em 2 minõ; Detector, Waters 248% 254&amp;220nm. As frações contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para render 13 mg ú35%õ do composto do título como um sólido branco. m/z ÚES+Õ 457 ÚM+Hõ". RMN Ú400 MHz, CD30Dõp δ 7,78 úd, 2HÕ, 7,65 úd, 2HÕ, 7,50-7,46 úm, 2HÕ, 7,35 e 7,23 Ú2 s, rotâmeros de amida, lHõ, 4,%l-4,83 úm, IHõ, 3,76-3,63 úm, 1 Hõ, 3,54-3,4% úm, 2HÕ, 3,32-3,30 úm, IHõ, 2,70 ÚS, 3HÕ, 2,4% e 2,3% Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3Hõ, 2,34-2,28 úm, 7HÕ, 1, %8-l, 80 Úm, 3HÕ.
Composto 237.1. N1-Hidróxi-3-metoxipropanimidamida. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de3-metoxipropanonitrila Ú10,0 g, 118 mmoles, 1,00 equivõ em etanol Ú2 0 mLõ. NH20H Ú50%õ em H20õ Ú10 mLõ foi adicionado à reação. A solução resultante foi agitada durante a noite a %0 °C em um banho de óleo, em seguida, resfriada para temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com 30 mL de H20 e lavado com 2x20 mL de etil acetato. As camadas aquosas foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para render 10,0 g Ú650 õ do composto do título como um óleo inolor.
Composto 237.2. Cloridrato de 3-metoxipropanimidamida. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de N'-hidróxi-3-metoxipropanamidina úcomposto 237.1, 10,0 g, 76,2 mmoles, 1,00 equiv, %0l3 õ em AcOH Ú50 mLõ. Anidido acético úM ,50 g, Kl 3,1 mmoles, 1,10 equivõ foi adicionado em gotas e a mistura resultante foi agitada por 30 min à temperatura ambiente. Após pugar o frasco com nitrogénio, paládio em carbono úlOES , 60S de água 5 gó foi adicionado. 0 frasco foi cuidadosamente purgado com nitrogénio novamente e a atmosfera foi então alterada para hidrogénio. A mistura foi agitada durante a noite a 20°C sob pressão atmosférica de hidrogénio. Após purgar o sistema com nitrogénio, os sólidos foram, então, removidos por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com 50 mL de H20. O valor de pH da solução foi ajustado para 2-3 com cloreto de hidrogénio Ú12 mol/Lõ, então, lavada com 2x30 mL de etil acetato. As camadas aquosas foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 5,00 g ú40óõ do composto do título como um s§ lido esbranquiçado.
Composto 237. 4-úl-ú4-Ciclobutil-5-ú2-ú2-metoxietilõ-1H-imidazol- 5 -ilõ-2-metilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-Ú1-Ú4-ciclobutil-2“metil“5-ú2-metil“lH“imidazol-5-ilõbenzoilõ-4-Fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 236õ e usando 237.2 no lugar de cloridrato de acetimidamida. m/z úES+õ 501 úM+Hõ+.
Composto 238.1. Metil 5-acetil-4-ciclobutil-2- metilbenzoato. A uma solução de metil-4-eielobutil-5-iodo-2-rnetilbenzoato Ú152.3, 5,00 g, 15,1 mmoles, 1,00 equivõ em DMSO Ú50 mLõ sob nitrogénio, foram adicionados 1-úetenilóxiõbutano Ú3,03 g, 30,3 mmoles, 2,0 0 equivõ, DPPP Ú624 mg, 1,51 mmol, 0,10 equivõ, PdúOAcõ2 Ú324 mg, 1,51 mmol, 0,10 equivõ, e TEA Ú3,06 g, 30,2 mmoles 2,00 equivõ. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 120 °C sob nitrogénio, em seguida, resfriada para temperatura ambiente e diluída com água. O pH foi ajustado para 1 com cloreto de hidrogénio úaq., 6 Mõ. A mistura resultante foi diluída com 200 mL de etil acetato, lavada com salmoura Ú3x200 mLõ, seca úNa2S04õ, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato/éter de petróleo úl:30õ como eluente para fornecer 2,28 g ú 61%õ do composto do título como um óleo amarelo.
Compostos 238.2 e 238.3. Metil 5-Ú2-bromoacetilõ-4-ciclobutil-2- metilbenzoato e metil 4-ciclobutil-5-Ú2,2 -dibromoacetilõ-2-metilbenzoato. A uma solução de metil 5-acetil-4-ciclobutil-2-metilbenzoato Ú238.1, 500 mg, 1,83 mmol, 1 ,00 equiv, %0§ õ em clorofórmio ú5mLõ foi adicionado em gotas Br2 Ú325 mg, 2,03 mmoles, 1,00 e qu i võú PRECAUÇÃOp reação exotérmica com evolução significante de HBrõ. A mistura resultante foi agitada por 3 ha 25 °C, e em seguida, extinta pela adição de 5 mL de K20. A mistura foi então extraída com 50 mL de etil acetato. A fase orgânica foi lavada com 2x10 mL de Na2S203 úaq. , sat.õ seguida por 1x2 0 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro, e concentrada sob pressão reduzida para render 500 mg de uma mistura dos compostos do título como um óleo amarelo.
Composto 238.4. Metil 4-ciclobutil-5-ú2-ú2-metoxietilõ-lH-imidazol-5- ilõ-2-metilbenzoato. Em um frasco de fundo redondo, que foi purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi colocada uma solução de uma mistura de compostos 238.2 e 238.3 Ú500 mg, ~0,6 mmol, 80H õ, carbonato de potássio Ú640 mg,
3,00 equivõ, cloridrato de 3-metoxipropanimidamida úcomposto 237.2, 213 mg, 1,54 mmolõ em acetonitrila. A solução resultante foi agitada durante a noite a 80°C em um banho de óleo, em seguida, resfriada para temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com 60 mL de etil acetato. A camada orgânica foi lavada com 2x25 mL de água, 2x25 mL de salmoura, seco sobre sulfato de sódio anidro, e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo ύ2μ1ο como eluente para fornecer %0 mg Ú43E õ do composto do títilo como um sólido amarelo.
Composto 238.5. Ácido 4-Ciclobutil-5-ú2-ú2-metoxietilõ-lH-imidazol-5-ilõ-2- metilbenzóico. Uma mistura do composto 238.4, %0 mg, 0,25 mmol, 1,00 equiv, %0B õ e hidróxido de sódio aquoso Ú44 mg, 1,10 mmol, 4,00 equiv em 1 mL de ãguaõ em metanol Ú3 mLõ foi agitada por 2 h a 60 °C. Após resfriamento para temperatura ambiente, o metanol foi removido sob pressão reduzida. 0 pH da camada aquosa residual foi ajustado para 3-4 com cloreto de hidrogénio úaquoso, 2Mõ. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida para gerar 80 mg úbrutoõ do composto do título como um sólido amarelo.
Composto 238. 4-úl-Ú4-Ciclobutil-5-Ú2-Ú2-metoxietilõ-lH- imidazol-5 -ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. em um frasco de fundo redondo, que foi purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi colocada uma solução do composto 238.5 ÚSQ mg, 0,23 mmol, 1,00 equiv, %O0 õ em N,N-dimetilformamida ú.2 iiõ.
Cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 54 mg, 0,2 4 mmol, 1 ,00 equivõ, EDC-HC1 ú%3 mg, 0,4% mmol, 2,00 equivõ, e 4-dimetilaminopiridina ú5% mg, 0,48 mmol, 2,00 equivõ foram adicionados à solução. A mistura resultante foi agitada por 3 h a 30 °C, em seguida, diluída com 50 mL de etil acetato. A camada orgânica foi lavada com 2x2 0 mL de água, 2x2 0 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro, e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com clorofórmio/metanol Ú20:lõ como eluente. 0 produto ú~50 mgõ foi adicionalmente purificado por Prep- HPLC com as seguintes condições úl#-Pre-BPLC-001 úSHIMADZUõõ: Coluna, SunFire Prep C18, 1% * 15 Omm 5 um; fase móvel, água com 0,050 TFA e C|EN ú2%0 CJEÍN até 430 em 8 min, até 1000 em 6 min, até 2%0 em 1 minõ; DetectçrWaters 248% 254&amp;220nrn. As frações contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para render 20,6 mg úl%0 õ do composto do título como um sólido branco, m/z úES+õ 483 úM+Hõ+.
[0%20] Os compostos na tabela a seguir foram preparados usando manipulações químicas padrão, materiais de partida prontamente disponíveis, e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de compostos 236, 237, e 238:
Composto 245.1. Metil cloridrato de 5-carbamimidoil-4 -ciclobut.il-2-metilbenzoato. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de metil 5-ÚN'-hidroxicarbamimidoilõ-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 2.4õ e metil cloridrato de 5-carbamimidoil-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 2.5õ usando metil 5-ciano-4-ciclobutil-2-metilbenzoato úcomposto 152.4õ em vez de metil 5-ciano-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 2.3õ.
Composto 245.2. Metil 4-ciclobutil-5-ú5-etil-1H-imidazol-2 -ilõ-2- metilbenzoato. A um frasco de fundo redondo, que foi purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi adicionada uma solução de metil cloridrato de 5-carbamimidoil-4-ciclobutil-2- metilbenzoato úcomposto 245.1, 350 mg, 1,11 mmol, 1,00 equiv, %O0 õ em ACN fiO mLõ. 1-Bromobutan-2-ona Ú186 mg, 1,23 mmol, 1,00 equivõ e carbonato de potássio Ú513 mg, 3,53 mmoles, 3,00 equiv, %50 õ foram adicionados à reação. A solução resultate foi agitada durante a noite a 80 °C. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi diluída com etil acetato e lavada com 3 x 30 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro, e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo úl:5õ como eluente para fornecer 2%0 mg ú83óõ de metil 4-ciclobutil-5-ú5-etil-1 H-imidazol-2-ilõ-2-metilbenzoato como um sólido amarelo.
Composto 245.3. Ácido 4-Ciclobutil-5-Ú5-etil-1H-imidazol-2- ilõ-2-metilbenzõico. Uma mistura de metil 4-ciclobutil-5-ú5-etil-lH-imidazol-2-ilõ-2-metilbenzoato úcomposto 245.2, 2 00 mg, 0,6 00 mmol, 1,00 equiv, %O0 õ e hidróxido de sódio Ú107 mg, 2,68 mmoles, 4,00 equivõ em uma mistura solvente de metanol e água Ú4'2 mLõ foi agitada por 3 h a 60 °C. Após resfriamento para temperatura ambiente, o pH foi ajustado para 3-4 com cloreto de hidrogénio úaq., 6 Mõ. A mistura resultante foi concentrada a vácuo para render 150 mg de um sólido branco.
Composto 245. 4-úl-Ú4-Ciclobutil-5-ú5-etil-lH-imidazol-2 - ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um frasco de fundo redondo, foi adicionada uma solução de ácido 4-ciclobutil-5-ú5-etil-lH-imidazol-2-ilõ-2-metilbenz0ico úcomposto 245.3, 153 mg, 0,480 mmol, 1,00 equiv, %0óõ em N, N-dimetilformamida Ú5 mLõ. Cloridrato de 4-úPiperidin-4- ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 132 mg, 0,5%0 mmol, 1,10 equivõ, EDC-HC1 Ú204 mg, 1,01 mmol, 2,00 equiv, %5óõ e 4- dimetilaminopiridina Ú131 mg, 1,02 mmol, 2,00 equiv, %5óõ foram adicionados à reação. A solução resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, então concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo Ú2plõ como eluente. 0 produto bruto ú~150 mgõ foi adicionalmente purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiç0 es úl#-Pre- HPLC-001 úSHIMADZUõõpColuna, SunFire Prep C18, l%*150mm 5um; fase móvel, água com O, 050 TFA e CJEN Ú280 C£CN até 430 em 7 min, até 1000 em 2 min, até 280 em 2 minõp Detector, Waters 248% 254&amp;20nm. As frações contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para render 62 mg ú2%0 õ do composto dotítulo como um sólido branco, m' z úES+õ 453 ÚM+Hõ+. RMN Ú400 MHz, CD3ODõ δ 7,75-7,67 úm, 2HÕ, 7,4%- 7,34 úm, 5HÕ, 4,8%- 4,80 Úm, 1HÕ, 3,75-3,72 úm, 1HÕ, 3,64-3,5% Úm, 1HÕ, 3,27- 3,23 úm, 1HÕ, 3,05-2,%0 úm, 2HÕ, 2,83 úq, 2HÕ, 2,40 e 2,30 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3Hõ, 2,27-1,0 7 úm, 6HÕ, 1,0 0-1,70 úm, 4HÕ, 1,40 út, 3HÕ.
Composto 246.1. Cloreto de 2-Metoxiacetil. A uma solução de ácido 2-metoxiacético Ú2,00 g, 22,2 mmoles, 1,00 equivõ em diclorometano Ú20 mLõ, foi adicionado em gotas úCOClõ2 Ú5,65 g, 2,00 equivõ em N,N-dimetilformamida Ú0,1 mLõ úobservada evolução de gásõ. A reação foi agitada por 1 h a 40 °C. A mistura resultante foi então concentrada sob pressão reduzida para render 2,10 g Ú70óõ de cloreto de 2-Metoxiacetil como um óleo amarelo.
Composto 246.2. 1-Bromo-3-metoxipropan-2-ona. A uma solução de TMSCHN2 Ú2M em hexanoõ Ú16 mL, 2,00 equivõ em diclorometano Ú40 mLõ, foi adicionado cloreto de 2-metoxiacetil úcomposto 246.1, 2,10 g, 15,5 mmoles, 1,00 equiv, 80óõ em gotas at 0 °C. Após agitação por 20 min, HBr Ú48Ó, 2 mLõ foi adicionado à reação. A solução resultante foi agitada por 30 min a 25 °C. A mistura foi lavada com 1 x 20 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada a vácuo. Isto resultou em 2,30 g Ú71óõ de 1- bromo-3-metoxipropan- 2 -ona como um óleo amarelo.
Composto 246.3. Metil 4-ciclobutil- 5-ú5-úmetoximetilõ-1H-imidazol-2- ilõ-2-metilbenzoato. A um frasco de fundo redondo, foi adicionada uma solução de 1-bromo-3-metoxipropan-2-ona úcomposto 246,2, 505 mg, 1,81 mmol, 1,00 equiv, 60S õ em C|EN Ú16 mLõ. Metil cloridrato de 5-carbamimidoi1-4-ciclobuti1-2-metilbenzoato úcomposto 245,1, 450 mg, 1,50 mmol, 1.00 equivõ e carbonato de potásio Ú554 mg, 3,61 mmoles, 3.00 equiv, %0óõ foram adicionados à reação. A solução resultante foi agitada durante a noite a 80 °C sob nitrogénio. Após resfriamento para temperatura ambiente, a reação foi cuidadosamente extinta pela adição de água. A mistura resultante foi extraída com 2x50 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04 õ, e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatograf ia de coluna de sílica gel com etil acetato/éter de petróleo úl:2õ como eluente para fornecer 170 mg Ú240 õ de metil 4-ciclobutil-5-Ú5-úmetoximetlõ-lH-imidazol-2-ilõ-2-metilbenzoato como um sólido branco.
Composto 246.4. Ácido 4-Ciclobutil-5-Ú5-úmetoximetilõ-1H-imidazol-2-ilõ-2- metilbenzóico. Uma solução de metil 4 -ciclobutil-5-ú5-úmetoximetilõ-lH-imidazol-2-ilõ-2- metilbenzoato úcomposto 246,3, 150 mg, 0,430 mmol, 1.00 equiv, %O0 õ e hidróxido de sódio aquoso Ú76,0 mg, 1%0 mmol, 4.00 equiv em 2 mL de ãguaõ em metanol Ú4 mLõ foi agitada por 2 h a 60 °C. Após resfriamento para temperatura ambiente, o solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida. 0 valor de pH da fase aquosa remanescente foi ajustado para ~4 com cloreto de hidrogénio úaq. , 4 Mó. A mistura resultante foi extraída com 2 x 50 mL de etil acetato, e as camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas a vácuo. Isto resultou em 120 mg Ú84óõ de ácidp 4-ciclobutil-5-ú5-úmetoximetilõ-lH-imidazol-2-ilõ-2-metilbenz0 ico como um s0 lido branco.
Composto 246. 4-úl-Ú4-Ciclobutil-5-ú5-úmetoximetilõ-1H-imidazol-2 -ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um frasco de fundo redondo, foi adicionada uma solução de ácido 4-ciclobutil-5-Ú5-úmetoximetilõ-lH-imidazol-2-ilõ-2-metilbenzõico úcomposto 246.4, 50,0 mg, 0,150 mmol, 1.00 equiv, %0lEI õ em N, N-dimetilfonnamida Ú3 mLõ. Cloridato de 4-úPiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 41,0 mg, 0,170 mmol, 1.10 equivõ, EDC-HC1 Ú64,0 mg, 0,330 mmol, 2.00 equivõ, e 4-dimetilaminopiridina Ú41,0 mg, 0,340 mmol, 2.00 equivõ foram adicionados à reação. A solução resultante foi agitada por 3 h a 25 °C, em seguida, extinta com água e extraída com 2 x 30 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas a vácuo. 0 produto bruto ú~50 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#-Pre-HP:LC-OOlúSHIMADZUõõ: Coluna, SunFire Prep C18, l%*150mm 5um; fase mS vel, água cm 0. 050 TFA e CH3CN Ú26,00 CH3CN até 42,00 em 7 min,tea 100,0ό em 2 min, até 26,0ό em 1 minõp Detector, Waters 248% 254É220nm. As frações contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para render 18 mg Ú250 õ d composto do título como um sólido branco, m' z úES+õ 46% ÚM+Hõ+, ΧΗ RMN Ú3 00 MHz, CD30Dõp δ 7,73-7,64 úm, 3HÕ, 7,52-7,32 úm, 4Hõ, ~4,% úlH parcialmente obscurecido por pico de ãgua0 , 4,60 ús, 2H0 , 3,81-3,68 úm, 1H0 , 3,68-3,5Si, Ú1H0 , 3,46 ús, 3H0 , 3,35-3,22 úm, 1H parcialmente obscureido por pico de solvente de metanol0 , 3,0%-2,%5 úm, 2H0 , S2 É 2,41 ú2 singletos, rotãmeros de amida, Ar-CH3, 3Hõ, 2,16- 1, %7 úm, 6HÕ, 1,%4-1,58 úm, 4HÕ.
Composto 247. 4-úl-ú4-Ciclobutil-5-ú5-úmetoximetilõ-lH- imidazol-2 -ilõ-2-metilbenzoilõ-4-f luoropiperidin-4-ilõbenzonitrila . O composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-5-Ú5-úmetoximetilõ-1H-imidazol-2-ilõ-2- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 246õ, usando cloridrato de 4-ú4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 11.2 Sal de HClõ em vez de cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5õ. m'z úES+õ 487 ÚM+HÕ+. ΧΗ RMN Ú400 MHz, CD30Dõp δ 7,7%-7,67 úm, 2HÕ, 7,66 úd, 3H,Õ, 7,53-7,3% úm, 2HÕ, 4, %%-4, %3 úm, 1HÕ, 4,85 ús, 2HÕ, 3,76-3,56 úm, 3HÕ, 3,50 ús, 3HÕ 2,42 e 2,34 Ú2 singletos, rotãmeros de amida, ArCH3, 3Hõ, 2,27-1,%7 úm, 8HÕ, 1, %2-1,81 úm, 2HÕ, 1,35-1,26 úm, 1 Hõ.
Composto 248. 4-úl-ú4-Ciclobutil-5-ú5-úmetoximetilõ-4-metil-1H-imidazol-2 -ilõ-2-Metilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-Ú1-Ú4-ciclobutil-5-ú5-úmetoximetilõ-lH-imidazol-2-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 246Õ, m'z ÚES+Õ 501 ÚM+Hõ+. 1H RMN Ú400 MHz, CD30Dõp δ 7,7%-7,77 úm, 2HÕ, 7,66 úd, 2HÕ, 7,52-7,38 úm, 2HÕ, 4,87-4,80 úm, 1HÕ, 4,55 ús, 2HÕ, 3,78-3,74 úm, IHõ, 3,62-3,56 úm, 2HÕ, 3,50 ús, 3Hõ, 3,44-3,32 úm, IHõ, 2,52 e 2,42 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3Hõ, 2,44 ús, 3Hõ, 2,11-1,0 0 úm, 8HÕ, 1,0 3- 1,83 úm, 2HÕ.
Composto 240 . 4-úl-Ú4-Ciclobutil-5-Ú4,5-dimetil-1H- imidazol-2-ilõ-2- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-5-ú5-úmetoximetilõ-1H-imidazol-2-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4- ilõbenzonitrila úcomposto 246Õ. m'z úES+õ 453 úM+Hõ+. RMN Ú4 00 MHz, CD3ODõp δ 7,68 úd, 2HÕ, 7,51 úd, 2HÕ, 7,31 úd, lHõ, 7,32 e 7,30 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArH, 1HÕ, 4, %0-4,88 úm, 1HÕ, 3, %6-3,87 úm, 1HÕ, 3,70-3,62 úm, 1HÕ, 3,32-3,2% úm, 1HÕ, 3,02 út, 2HÕ, 2,44 e 2,33 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3Hõ, 2,20 ús, 6Hõ, 2,18-1, %0 úm, 7Hõ, 1,88- 1,78 úm, 3HÕ.
Composto 250. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-metil-5-ú5-metil-lH-imidazol-2- ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-5-ú5-úmetoximetilõ-1H -imidazol-2 -ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4- ilõbenzonitrila úcomposto 246Õ. m'z ÚES+õ 43% ÚM+Hõ+. XH RMN Ú4 00 MHz, CD30Dõp δ 7,6 8 úd, 2Hõ, 7,4%-7,3% úm, 4HÕ, 7,36 e 7,34 ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArH, lHõ, 4, %0- 4,86 úm, lHõ, 3,75-3,70 úm, lHõ, 3,63-3,55 úm, lHõ, 3,33-3,24 úm, 1HÕ, 3,04-2,%% úm, 2HÕ, 2,51 e 2,41 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3Hõ, 2,44 ús, 3Hõ, 2,28-1, %6 úm, 6HÕ, 1,8%- 1,81 úm, 3HÕ, 1,77-1,74 úm, lHõ.
Composto 251. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-metil-5-ú5- útrifluorometilõ-1H-imidazol-2 -ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-5-ú5-úmetoximetil Õ-1H -imidazol-2-il õ-2- metilbenzoilõpiperidin-4- ilõbenzonitrila úcomposto 246õ. m'z ÚES+Õ 4%3 ÚM+Hõ+.
Composto 252. 4-Ú1-Ú5-Ú5-Cloro-1H-imidazol-2-ilõ-4 - ciclobutil-2- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 4-úl-ú4-ciclobutil-5-ú5-úmetoximetilõ-1H-imidazol-2 -ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 246Õ. m'z úES+õ 45% ÚM+Hõ+.
Composto 253. 2-Ú5-Ú4-Ú4-Cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-2-ciclobutil-4-metilfenilõ-lH-imidazol-5-carbonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 246. m'z ÚES+õ 450 ÚM+Hõ+.
Composto 254. 5-Ú4-Ú4-Cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2- ciclobutil-N,4-dimetilbenzamida. A uma solução de ácido 5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutil-4-metilbenzóico úcomposto 234, 50 mg, 0,124 mmolõ em DMF Ú2 mLõ, foram adicionados EDCI Ú36 mg, 0,186 mmolõ, HOBt Ú10 mg, 0,5 mmolõ, diisopropiletil amina Ú54 mg, 0,434 mmolõ, e metil amina Ú125 ul, 2.5 M em THFõ. A mistura de reação foi agitada por 12 horas à temperatura ambiente e extinta com NaHC03 aquoso saturado Ú50 mLõ. Após extração com etil acetato Ú2 x 50 mLõ, as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04, filtradas, e concentradas a vácuo. Purificação via cromatografia flash de Si02 com etil acetato para etil acetato'metanol = %8'2 gerou 5-Ú4-Ú4- cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-2-ciclobutil-N,4 -dimetilbenzamida Ú2S,3 mg, 550 de rendimentoõ como um sólido branco. m'z ÚES+Õ 416 ÚM+Hõ+. 1H RMN Ú400 MHz, DMSO-d6õp δ 8,13 úq, J= 4,5 Hz, 1HÕ, 7,77 úd, J=8,3 Hz, 2HÕ, 7,55-7,45 úm, 2HÕ, 7,26 úbr s, 1HÕ, 7,12 &amp; 6,%% Ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar-H, 1 Hõ, 4,70 úbr d, J=11,0 Hz, 1HÕ, 3,86-3,72 úm, 1 Hõ, 3,50-3,35 úm, 1 Hõ, 3,13 út com estrutura fina, J = 12,3 Hz, 1HÕ, 2,0 02T78 úm, 2HÕ, 2,72 úd, J = 4,6 Hz, 3HÕ, 2,30 -2,17 úm, 5HÕ, 217-1,0 8 úm, 2HÕ, 1,0 8-1,81 úm, 2HÕ, 1,81-1,35 úm, 4HÕ.
Composto 255. 5-Ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2- ciclobutil-N-ú2-metoxietilõ-4-metilbenzamida. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 5-ú4-ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutil-N,4-dimetilbenzamida úcomposto 254õ. m'z úES+õ 460 úM+Hõ+. "H RMN Ú400 MHz, DMS0-d6Õ δ 8,27 út, 1HÕ, 7,78 Úd, 2HÕ, 7,4% úd, 2Hõ, 7,26 ús, 1HÕ, 7,12 e 6, %8 ú2 singletos, rotâmeros de amida, 1HÕ, 4,70 úd, 1HÕ, 3,85-3,75 úm, 1HÕ, 3,44 út, 3HÕ, 3,30 ,-3,33 úm, 2HÕ, 3,30 ús, 3HÕ, 3,10 -3,03 úmlHõ, 3,02 - 2,71 úm, 2Hõ, 2,32 e 2,26 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3HÕ, 2,38 - 2,17 úm, 2Hõ, 2,15-2,00 úm, 2HÕ, 1.0 8- 1,81 úm, 2HÕ, 1,83- 1,47 úm, 4HÕ.
Composto 256. 5-Ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2- _ r ciclobutil-N-etil-4-metilbenzamida. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de 5-Ú4-ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutil-N,4 -dimetilbenzamida úcomposto 254õ. m'z úES+õ 430 ÚM+Hõ+. 1H RMN Ú400 MHz, DMS0-dêõ δ 8,21 út, 1HÕ, 7,78 úd, 2HÕ, 7,56-7,45 úm, 2HÕ, 7,31-7,20 úm, 1HÕ, 7,11 e 6,%8 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, IHõ, 4,74-4,65 úm, IHõ, 3,85-3,74 úm, 1HÕ, 3,50-3,37 úm, IHõ, 3,22 úq, 2HÕ, 3,20 - 3,05 úm, 2HÕ, 3,32 e 2,22 ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3Hõ, 3.01 - 2,76 úm, 2Hõ, 2,38 -2,17 úm, 2HÕ, 2,18-1,0 7úm, 2Hõ, 1,0 8- 1,84 úm, 2HÕ, 1,81-1,38 úm, 3HÕ, 1,10 út, 3HÕ
Composto 257.1. Cloreto de úSõ-Tetraidrofurano-2-carbonil. A um frasco de fundo redondo, foi adicionada uma solução de ácido úSõ-tetraidrofurano-2-carboxílico ú4,64 g, 40,0 mmoles, 1.00 equivõ em diclorometano Ú25 mLõ. N, N- dimeti1formamida Ú0,05 mL, 0.05 equivõ e úC0Clõ2 Ú5,2 mL, 1.50 equivõ foram adicionados em gotas à reação. Asolução resultante foi agitada por 1 h a 25 °C, então, concentrada a vácuo para render 5,00 g ú%30 õ de cloreto de úSõ-tetraidrofurano-2-carbonil como um óleo amarelo.
Composto 257.2. úSõ-2-Bromo-1-útetraidrofuran-2-ilõetanona. A um frasco de fundo redondo com três gargalos e 250-mL, que foi purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi adicionada uma solução de údiazometilõtrimetilsilano Ú20 mL, 2M em hexanoõ em éter Ú150 mLõ. Uma solução de cloreto de úSõ-tetraidrofurano-2-carbonil úcomposto 257.1, 5,00 g, 37,2 mmoles, 1.00 equivõ em éter'DCM Ú25'10 mLõ foi adicionada em gotas a 0 °C e agitada por 20 mín a 0 °C. Brometo de hidrogénio Ú48ó;õ Ú8 mL, 1.50 equivõ foi adicionado em gotas. A solução resultante foi agitada por 30 min a 10 °C, então lavada com 2 x 100 mL de água e 1 x 50 mL de salmoura. A mistura foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo úlp50õ como eluente para fornecer 2,50 g ú35óõ de úSõ-2-bromo-l- útetraidrofurano-2-ilõetanona como um óleo amarelo.
Composto 257.3. úSõ-Metil 2 4-dimetil-5-Ú5-útetraidrofuran-2-ilõ-lH- imidazol-2-ilõbenzoato. A um frasco de fundo Redondo, foi adicionada uma solução de metil cloridrato de 5-carbamimidoil-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 2.5, 1,30 gõ em CR3CN Ú30 naLõ. úSõ-2-bromo-1-útet raidrof uran-2-ilõetanona úcomposto 257.2, 1, %2 g, %,%5 mmolesõ e carbonato de potássio Ú4,20 g, 30,4 mmolesõ foram adicionados à reação. A solução resultante foi agitada por 3 dias a 75 °C sob nitrogénio. Após resfriamento para temperatura ambiente, os sólidos foram removidos por filtração. 0 filtrado foi concentrado a vácuo e diluído com 30 mL de H20. A fase aquosa foi extraída com 3 x 50 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro, então concentradas a vácuo. A mistura foi purificada usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo úlp2õ como eluente para render 400 mg Ú250 õ de úSõ-metil 2,4-dmetil-5-ú5-útetraidrofuran-2-ilõ-lH-imidazol-2 -ilõbenzoato como um sólido amarelo claro.
Composto 257.4. Ácido úSõ-2,4-Dimetil-5-ú5-útetraidrofuran-2-ilõ-lH-imidazol-2-ilõbenzóico. A um frasco de fundo redondo, foi adicionada uma solução de ÚSõ-metil 2,4- dimetil- 5-Ú5-útetraidrofuran-2-ilõ-1H-imidazol-2 -ilõbenzoato úcomposto 257.3, 400 mg, 1,33 mmol, 1.00 equivõ e hidróxido de sódio Ú300 mg, 7,50 mmoles, 5.63 equivõ em uma mistura de solvente de metanol e H20 Ú20'10 mLõ. A solução resultante foi agitada por 2 h a 70 °C. Após resfriamento para temperatura ambiente, o solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida. A camada aquosa residual foi lavada com 2 x 50 mL de etil acetato. 0 pH da camada aquosa foi ajustado para 5-6 com cloreto de hidrogénio úaq., 6 Mõ, então extraído com 3 x 50 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas a vácuo. Isto resultou em 340 mg ú%0E3 õ de úSõ-metil 2,4-dimetil-5-ú5-útetraidrofurano-2 -ilõ-1H-imidazol-2 -ilõbenzoato como um sólido amarelo.
Composto 257. ÚSÕ-4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú5-útetraidrofuran-2-ilõ-lH-imidazol-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um frasco de fundo redondo, foi adicionada uma solução de úSõ-metil 2,4-dimetil-5-ú5-útetraidrofuran-2-ilõ-1H- imidazol-2-ilõbenzoato úcomposto 257.4, 143 mg, 0,500 mmol, 1.00 equivõ em N,N-dimetilformamida Ú10 mLõ. HBTU Ú285 mg, 0,750 mmol, 1.50 equivõ foi adicionado à reação, e esta foi agitada por 30 min a 25 °C. A esta, foi adicionado cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 133 mg, 0,600 mmol, 1.20 equivõ e Dl EA Ú3%0 mg, 3,02 mmoles, 6.04 equivõ em gotas. A solução resultante foi
agitada por 30 min a 25 °C, em seguida, extinta com 20 mL de água. A mistura foi extraída com 3 x 25 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de s0 dio anidro e concentradas a vácuo, 0 esíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com metanol'etil acetato ύ1μ300 como eluente. 0 produto ú~100 mgõ foi ainda purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#-Pre- HPLC-OO1ÚSHIMADZU0 0 p(Cona, Xbridge Prep C18, 5 um, 1%+I50mm; fase móvel, água com 0,030 N^H20 e CH3CN Ú350 C|CN até 520 em 8 min, até 1000 em 1 min, até 350 em 1 min0 μ Detector, Waters 248% 2S320nm.
As frações contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para render 34,6 mg Ú150 0 do compostodo título como um sólido branco. m'z úES+0 455 ÚM+H0.
Composto 258.1. Ácido 5-ú5-Etil-4H-l 2,4-triazol-3-il0 -4-fluoro-2-metilbenzóico. 0 composto do título foi sintetizado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 152.8 usando ácido 4-fluoro-2-metilbenzóico em vez ácido 4-bromo-2-metilbenzóico e propionohidrazida em vez acetohidrazida.
Composto 258.2. 4-úl-ú5-Ú5-Etil-4H-1,2,4-triazol-3-il0 -4 - fluoro-2- metilbenzoil0 piperidin-4-il0 benzonitrila.A um frasco de fundo redondo, foi adicionada uma solução de ácido 5-ú5-etil-4H-l,2,4-triazol-3-il0 -4-fluoro-2- metilbenzóico úcomposto 258.1, 125 mg, 0,500 mmol, 1.00 equivõ em DMF úlO mLõ. EDC-HC1 Ú143 mg, 0,750 mmol, 1.50 equivõ, cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 122 mg, 0,550 mmol, 1.10 equivõ, e 4- dimetilaminopiridina Ú183 mg, 1,50 mmol, 3.00 equivõ foram adicionados em porçH es. A solução resultante foi agtada por Ih a 40 °C em um banho de óleo, então extinta com 50 mL de NH4C1 úaq.sat.õ. A mistura foi extraída com 40 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 3 x 30 mL de NH4C1 úaq.sat.õ, secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob vácuo. Isto resultou em 180 mg Ú86%õ de 4-úl-ú5-ú5-etil-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-4-fluoro-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila como um sólido branco.
Composto 258. 4-úl-Ú4-úAzetidin-l-ilõ-5-ú5-etil-4H-l,2,4- triazol-3-ilõ-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um tubo vedado de 10-mL, foi adicionada uma solução de 4-úl-[[5-ú5-etil-4H-l,2,4-triazol-3-ilõ-4-fluoro-2-metilfenil]carbonil]piperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 258.2, 83,5 mg, 0,200 mmol, 1.00 equivõ em 1,4-dioxano Ú5 mLõ. Cloridrato de azetidina ú0 3,0 mg, 0,0 0 0 mmoB,.00 equivõ foi adicionado à reação em porç0 es. Carbonato de potássio Ú276 mg, 2,00 mmoles, 10.0 equivõ foi também adicionado à mistura acima. A solução resultante foi agitada durante a noite a 105 °C atrás de um escudo protetor, em seguida, resfriada para temperatura ambiente. A reação foi extinta com 20 mL de água. A mistura foi extraída com 30 mL de etil acetato e a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. 0 produto Ú80 mgõ foi adicionalmente purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úlí-Pre-HPLC-00lúSHIMADZUõõpColuna, SunFire Prep C18, 1%+I50mm 5um; fase móvel, água com 50mL NH4C03 e CH3CN Ú41,O0 ; CiCN até 43.00 em 8 min, até 100,00 em 2 min, até 41,O0eôt 2 minõ; Detector, Waters 248% 254&amp;220nm. As fraç0 es ontendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para render 18,0 mg ú20%õ do composto do título como um sólido branco, m/z ÚES+Õ 455 ÚM+Hõ+. !H RMN Ú300 MHz, CD30Dõp δ 7,68 úd, J=6,3 Hz, 2HÕ, 7,48 úd, J=5,7 Hz, 2HÕ, 7,24 &amp; 7,13 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar-H, IHõ, 6,52 ús, IHõ, 4,%l-7,77 úm, 1H parcialmente obscurecido por pico de águaõ, 3,81-3,67 úm, IHõ, 3,68 út,J= 5,6 Hz, 4HÕ, 3,32-3,18 úm, IHõ, 3,05 -1, %1 úm, 2HÕ, 2,84 úq, J= 5,8 Hz, 2HÕ, 2,45-2,1% úm, 5Hõ, 2,0%-l, %1 úm, IHõ, 1, %1-1,4% úm, 3HÕ, 1,3% út, J =5,7 Hz, 3HÕ.
Composto 25%. 4-úl-Ú5-Ú5-Etil-4H-1,2,4 -triazol-3-ilÕ-2- metil-4- úmetiltioõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A um frasco de fundo redondo, foi adicionada uma solução de 4-úl-ú5-ú5-etil-4H-l,2,4-triazol-3-ilÕ-4-fluoro-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 258.2, 20 mg, 0,050 mmol, 1.0 equivõ em N,N-dimetilformamida ú3 mLõ. Tiometóxido de sódio Ú70 mg, 0,10 mmol, 2.0 equivõ foi adicionado à reação. A mistura resultante foi agitada por 15 h a 110 °C em um banho de óleo, e em seguida, resfriada para temperatura ambiente e extinta com 100 mL de água gelada. A mistura foi extraída com 50 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2 x 50 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, e
concentradas sob pressão reduzida. 0 produto Ú50 mgõ foi adicionalmente purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#-Pre-HPLC-OOlúSHIMADZU0 0 pColuna, SunFé Prep C18, l%±150mm 5um; fase móvel, água com 0,050 TFA e CH3CN Ú370 C|CN até 4%0 em 7 min, até 1000 em 3 min, até 370 em 2 min0 ; Detector, Waters 248% 254&amp;220nm. As frações contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para render 4 mg úl%0 0 do composto do título como um sódo branco, m/z ÚES+0 446 ÚM+H0. XH RMN Ú300 MHz, CD3OD0 μ δ 7,6% úd, J= 8,4 Hz, 2H0 , 7,61-7,43 úm, 3H0 , 7,35 Ébs, 1H0 , -4,85 úlH parcialmente obscurecido por pico deágua0 , 3,77-3,60 úm, 1H0 , -3,3 úlH parcialmente obscurecid por pico de solvente de metanol0 , 3,08-2, %4 úm, 2H0 , 21 úq, J= 7,7 Hz, 2H0 , 2,51 ús, 3H0 , 2,47 &amp; 2,37 Ú2 singles, rotâmeros de amida, Ar-CH3, 3H0 , 2,10-1, %7 úm, 1H0 , 1,88- 1,55 úm, 3H0 , 1,40 Út, 3H0 . 10%4%] Os compostos na tabela a seguir foram preparados usando manipulações químicas padrão, materiais de partida prontamente disponíveis, e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 5-Ú4-Ú4- cianofenil0 piperidina-l-carboni10 -2-ciclobutil-N,4-dimetilbenzamida úcomposto 2540
μ
Os compostos da tabela a seguir foram preparados usando manipulações químicas padrão, materiais de partida prontamente disponíveis, e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de compostos 27, 38, e 211μ
Composto 280.1. N-Ú5-Ú4-Ú4-Cianofenilõpiperidina-l-úcarbonilõ-2 - metilfenilõ-2-isonicotinoilidrazinacarboxamida. Uma solução de 4-Ú1-Ú3-amino-4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 121.1, 0,1 g, 0,31 mmolõ e trietil amina Ú0,0% mL, 0,62 mmolõ em DCM ú5 mlõ foi adicionado a uma solução de fosgênio ú20ó em tolueno, 0,31 ml, 0,62 mmolõ em DCM Ú5 mlõ a 0°C. Após a mistura de reação resultante ser agitada à temperatura ambiente por 1.5 hora, todos os solventes foram removidos sob pressão reduzida. 0 resíduo foi seco sob alto vácuo por 30 minutos, então, foi re-dissolvido em EtOH ú5 mlõ. Isonicotinohidrazida Ú0,Q5 g, 0,34 mmolõ foi adicionado. A mistura foi aquecida a 80°C durante a noite. 0 etanol foi removido e o resíduo foi purificado usando prep. -TLC Ú10C3 MeOH em DCMõ para dar o produto como um sólido marrom claro. Rendimentop 0,14 g, %30 . m/z fiS+õ 4 83.2 ÚM+Hõ f.
Composto 280. 4-úl-ú4-Metil-3-ú5-úpiridin-4-ilõ-l,3,4-oxadiazol-2- ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A uma solução de N-Ú5-Ú4-Ú4- Cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-metilfenilõ-2-isonicotinoilidrazinacarboxamida úcomposto 280.1, 0,14 g, 0,2% mmolõ e PPh3 Ú0,0% g, 0,35 mmolõ em DCM úlOmlõ, foi adicionado trietil amina ú0,061 ml, 0,43 mmolõ seguido por CC14 Ú0,08 ml, 0,87 mmolõ. A mistura foi refluxada por 3 horas. TLC e LCMS mostraram que a reação estava completa. A mistura foi resfriada para temperatura ambiente, diluída com DCM úlOOmlõ, e lavada com água Ú20 mlõ. A camada orgânica foi seca com Na2S04 concentrada e purificada usando prep. -TLC Ú5% MeOH em CH2C12õ para render 54 mg Ú42%õ de um sólido branco. m'z úES+õ 465.0 ÚM+Hõ+. "H RMN Ú400 MHz, DMS0-d6Õ δ 10,00 úbr, 1HÕ, 8,77 Úd, 2HÕ, 7,%2 ús, IHõ, 7,81-7,73 úm, 4Hõ, 7,50 úd, 2Hõ, 7,33 úd, 1HÕ, 7,14 úd, IHõ, 4,64 úm, IHõ, 3,81 úm, IHõ, 3,17 úm, IHõ, 3,00-2,80 úm, 2HÕ, 2,35 ús, 3HÕ, 1, %5-l, 57 úm, 4HÕ.
Composto 281.1. N-Ú5-ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-2- metilfenilõ-lH-imidazol-l-carbotioamida. A uma solução de 4-úl-ú3-amino-4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila Ú121,1, 0,1 g, 0,32 mmolõ em DMF ú3 mlõ, foi adicionado 1,1'-tio-CDI Ú0,056 g, 0,32 mmolõ. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas. LCMS mostrou que a reação estava completa. A mistura foi levada para a etapa seguinte em um vaso sem trabalho ou purificação. m'z úES+H 430 úM+HlS.
Composto 281.2. 1-ú4-Aminopiridin-3-Í10 -3-Ú5-Ú4-Ú4- cianofenilKI piperidina-l-carbonillEJ -2-metilfenilB trema. A uma solução de N-ú5-ú4-ú4-cianofenil0 piperidina-1- carbonilB -2-metilfenilH -lH-imidazol-l-carbotioamidá281.10 em DMF continuada da etapa anterior, foi adicionado piridina-3,4-diamina Ú0,034, 0,32 mmolE . A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas. LCMS mostrou que a reação estava completa. A reação foi levada para a etapa seguinte sem trabalho or purificação. m'z ÚES+õ 471 ÚM+Hõ+.
Composto 281. 4-úl-ú3-úúlH-Imidazo[4,5-c]piridin-2- ilõaminoõ-4- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A uma solução de l-ú4-aminopiridin-3-ilõ-3-ú5-ú4-ú4- cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-metilfenilõtioureia Ú281.2Õ em DMF continuada da etapa anterior, foi adicionado EDCI Ú0,12 g, 0,64 mmolõ. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. 0 DMF foi removido sob alto vácuo e o resíduo foi purificado usando prep.-TLC Ú5% MeOH em EtOAcõ para render 76 mg ú56% por 3 etapasõ de um pó branco, m'z ÚES+õ 437 ÚM+Hõ+. ΧΗ RMN Ú400 MHz, DMSO-d6õ δ 8,84 úbr, 1HÕ, 8,48 ús, 1HÕ, 8,4 0 ús, 1HÕ, 8,08 úd, 1HÕ, 7,78úd, 2HÕ, 7,53 úd, 2HÕ, 7,2% úd, 2HÕ, 7,05 úd, 1HÕ, 4,65 úm, 1HÕ, 3, %1 úm, 1HÕ, 3,17 úm, 1HÕ, 3,04 -3,72 úm, 2HÕ, 2,36 ús, 3HÕ, 1,%7-l,60 úm, 4HÕ.
Composto 282.1 N-úú5-Ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-1- carbonilõ-2- metilfenilõcarbamotioilõisobutiramida. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de NH4SCN Ú72 mg, 0, %5 mmol, 2.00 equivõ em acetona Ú10 mLõ. Uma solução de cloreto de 2- metilpropanoil Ú50 mg, 0,47 mmol, 1.00 equivõ em acetona foi adicionada ú5 mLõ em gotas a 25 °C e a reação foi agitada durante a noite a 40 °C em um banho de óleo. A este, foi adicionado 4-Ú1-Ú3-amino-4-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 121.1, 150 mg, 0,42 mmol, 1.00 equivõ a 25 °C. A solução resultante foi agitada por 2 h a 25 °C, então concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com 100 mL de etil acetato. A camada orgânica foi lavada com 2x30 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com diclorometano'metanol Ú20plõ como eluente para fornecer 150 mg ú64%õ do composto do título como um óleo marrom.
Composto 282. 4-úl-Ú3-ÚÚ5-Isopropil-4H-1,2,4-triazol-3 - ilõaminoõ-4- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Em um tubo vedado de 10-mL, foi colocada uma solução de N-ÚÚ5- Ú4-ú4-cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-2- metilfenilõcarbamotioilõisobutiramida úcomposto 282.1, 200 mg, 0,40 mmol, 1.00 equiv, %O0 õ em etanol Ú3 mLõ. N2NH2HC1 Ú234 mg, 2,23 mmoles, 5.00 equivõ e carbonato de potássio Ú185 mg, 1,34 mmol, 3.00 equivõ foram adicionados à reação. A solução resultante foi agitada durante a noite a 80°C em um banho de óleo atrás de um escudo de proteção. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dividido entre etil acetato e água. A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca úNa2S04õ, e concentrada. 0 produto bruto ú~50 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiç0 es úlf-Pre-HPLC-006úWatersõõpColuna, SunFire Prep C18, 5um, 1%+I50mm; fase móvel, água com 0,050 TFAe CH3CN úmantido 5.00 CH2N em 2 min, até 30,00 em 1 min, até 60,00 em 12 min, até 100,00 em 1 minõ; Detector, UV 254'20nm. As fraç0 es contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para render 10,3 mg Ú60 õõ do composto do título como um sólido branco. m'z úES+õ 42% úM+Hõ+.
[0%58] Os compostos na tabela a seguir foram preparados usando manipulaç0 es químicas padrão, materiais de prtida prontamente disponíveis, e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de compostos 280, 121, 281, e 282μ
Os compostos na tabela a seguir foram preparados usando manipulações químicas padrão, materiais de partida prontamente disponíveis, e procedimentos similares àqueles usados para a preparação de compostos 26, 43, 48, 50, 51, 64, e 80μ
Composto 345.1. Ácido 2-úl-Benzil-4-hidroxipiperidin-4-ilõ-5-bromobenzóico. A uma solução agitada de ácido 2,5-dibromobenzóico Ú27,S g, 100 mmoles, 1.00 equivõ em THF' Et20 Ú4 50'50 mLõ sob nitrogénio a -78 °C, foi adicionado em gotas n-BuLi ú2.5Mõ Ú88 mL, 2.20 equivõ. Após 2 h a -78°C, foi adicionado l-benzilpiperidin-4-ona Ú26,5 g, 140 mmoles, 1.40 equivõ. A solução resultante foi agitada por 0,5 h a -78°C e então aquecida para temperatura ambiente, e agitada durante a noite. A reação foi extinta pela adição cuidadosa de 200 mL de água. 0 pH da mistura foi ajustado para 2-3 com cloreto de hidrogénio úaq., 2 Mõ. A fase aquosa foi extraída com 3x500 mL de etil acetato e 3x500 mL de tetraidrofurano. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para render 38,9 g úbrutoõ do composto do título como um sólido amarelo.
Composto 346.2. 1'-Benzil-5-bromo-3H-espiro[isobenzofuran- 1,4'-piperidin]-3-ona. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução do composto bruto 346.1 Ú38,% g, 100 mmoles, 1.00 equivõ em tetraidrofurano Ú800 mLõ. A isto, foi adicionado ácido sulfúrico ú8 itiLB em gotas. A elução resultante foi agitada durante a noite em refluxo em um banho de óleo. 0 valor de pH da solução foi lentamente ajustado para 10 com LiOH úaq.sat.Hl . A fase aquosa foi extraída com 3x500 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob vácuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatograf ia de coluna de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ8~1μ50 como eluente paa fornecer 8,00 g Ú22E3 õ do composto do título como umsólido branco.
Composto 346.3. 1'-Benzil-5-bromo-3H-espiro[isobenzofuran- 1,4'- piperidina]. A uma solução do composto 346.2 Ú10,0 g, 2 6,% mmoles, 1.00 equivõ em tetraidrofurano Ú150 mLõ sob nitrogénio a -10°C, foi adicionado em gotas BH3-THF Ú135 mL, 5.00 equivõ. A solução resultante foi agitada por 30 min à temperatura ambiente e então aquecida em temperatura de refluxo durante a noite. Após resfriamento para -10°C, cloreto de hidrogénio úaq., 6 M, 60 mL0 foi adicioado em gotas a -10°C. A solução resultante foi aquecida para refluxo por 5 h em um banho de óleo. A mistura de reação foi resfriada e o pH da solução foi ajustado para 10 com hidróxido de potássio úaq., 1 M0 . A fase aquosa foi extraída com 2x200 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x300 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio, e concentradas sob pressão reduzida para render 15,0 g ubrutoõ do composto do título como um óleo amarelo.
Composto 346.4. 1'-Benzil-3H-espiro[isobenzofuran-1,4'- piperidina]-5- carhonitrila. Em um frasco de fundo redondo de três gargalos, que foi purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi colocada uma solução do composto 346.3 Ú12,0 g, 33,6 mmoles, 1.00 equivõ em N,N-dimetilformamida Ú150 mLõ. ZnúCNõ2 Ú4,50 g, 38,5 mmoles, 1.14 equivõ e PdúPPh3õ4 Ú4,00 gõ foram adicionados à reação. A solução resultante foi agitada durante a noite a %0 °C em um banho de óleo. A mistura de reação foi resfriada para temperatura ambiente, em seguida, extinta com 200 mL de FeS04 úaq. sat.õ e diluída com etil acetato. A mistura resultante foi agitada vigorosamente, então, filtrada através de celite e lavada com 1M FeS04 , água, e etil acetato. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com 2 x 200 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x100 mL de cloreto de sódio úaq, sat.õ, secas sobre sulfato de sódio, e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com éter de petróleo'etil acetato ύ10μ1~5μ1δ como eluente para render %,12 g Ú8%0 õ do composto do título como um óleo amaelo
Composto 346.5. 3H-Espiro[isobenzofuran-1,40 -piperdina]-5-carbonitrila. A uma solução de 346.4 ú%,12 g, 30,0 mmoles, 1.00 equivõ em DCE Ú150 mLõ 0 °C, foi adicionado em gotas 1-cloroetil cloroformiato ú8,52 g, 60,0 mmoles, 2.00 equivõ. Após agitação em temperatura ambiente por 30 min, trietilamina ú%,0% g, 3.00 equivõ foi cuidadosamente adicionada à mistura. A solução resultante foi aquecida para retluxo por 2 h em um banho de óleo, então concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em 100 mL de metanol e então aquecido para refluxo por Ih em um banho de óleo. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi tomado em água Ú100 mLõ. 0 pH da mistura foi ajustado para 10 com hidróxido de sódio úaquoso, IMõ. A fase aquosa foi extraída com 3x200 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2 x 1 00 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato'metanol ύΙΟΟμΟ a 3; lõ como eluente para fornecer 3,50 g Ú460 õ do composto do título como um sólido aarelo.
Composto 346. N-ú5-ú5-Ciano-3H-espiro[isobenzofuran-1,4'-piperidin]-10 -ilcarbonilõ-2-metilfenilõ-6-úpirrolidn-1-ilõnicotinamida. 0 composto do título foi preparado usando procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 43 e usando o composto 346.5 no lugar do composto 11.2. m'z ÚES+Õ 522 ÚM+Hõ+.
Composto 347.1. terc-Butil 4-ú4-cianofenilõ-2- oxopiperidina-l-carboxilato. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de terc-butil 4-Ú4-cianofenilõpiperidina-l-carboxilato úcomposto 1.4, 515 mg, 1,80 mmol, 1.00 equivõ em etil acetato ú5 mLõ. Uma solução de NaI04 ú%63 mg, 4,50 mmoles, 2.50 equivõ em água Ú5 mLõ e RuC13 Ú74,7 mg, 0,36 mmol, 0.20 equivõ foi cuidadosamente adicionada. A mistura resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. Os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado foi lavado com 2x20 mL de água, seco sobre sulfato de sódio anidro, e concentrado sob pressão reduzida para render 432 mg ú80%õ do composto do título como um óleo amarelo claro.
Composto 347.2. 4-ú2-oxopiperidin-4-ilõbenzonitrila. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução do composto 347.1 Ú432 mg, 1,44 mmol, 1.00 equivõ em etil acetato Ú10 mLõ. Gás de cloreto de hidrogénio foi borbulhado através da solução e a mistura resultante foi agitada por 0,5h à temperatura ambiente. Os sólidos foram coletados por filtração, então, dissolvidos em 50 mL de etil acetato. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para render 254 mg ú88%õ do composto do título como um sólido branco.
Composto 347.3. 4-ú6-Metóxi-2,3,4,5-tetraidropiridin-4-ilõbenzonitrila. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de 4-ú2-oxopiperidin-4-ilõbenzonitrila Ú347.2, 220 mg, 1,10 mmol, 1.00 equivõ em diclorometano Ú10 mLõ. Trimetiloxônio tetrafluoroborato Ú244,2 mg, 1,65 mmol, 1.50 equivõ foi lentamente adicionado e a mistura resultante foi agitada por 2 h à temperatura ambiente. 0 pH foi cuidadosamente ajustado para 8 com bicarbonato de sódio úaq.õ. A camada orgânica foi lavada com 2x20 mL de H20, seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida para render 212 mg ú§ 0%õ do compofeo do título como um sólido branco.
Composto 347.4. 3-Amino-4-metilbenzohidrazida. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de metil 3-amino-4-metilbenzoato Ú6,60 g, 40,0 mmoles, 1.00 equivõ em etanol Ú100 mLõ, hidrato de hidrazina ύΙΟ,Ο g, 200 mmoles, 5.00 equivõ foi adicionado à reação. A solução resultante foi agitada por 2 h a 100 °C em um banho de óleo. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dividido entre água e etil acetato Ú20 mLõ. A camada aquosa foi extraída com 4x20 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro, concentradas sob pressão reduzida, e secas sob alto vácuo para render 4,60 g ú70%õ do composto do título como um sólido marrom.
Composto 347.5. 4-ú3-ú3-Amino-4-metilfenilõ-5,6,7,8-tetraidro-[1,2,4]triazolo[4,3-a]piridin-7-ilõbenzonitrila. A uma solução de 4-ú6-metóxi-2,3,4,5-tetraidropiridin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 347.3, 5,00 g, 23,36 mmoles, 1.00 equivõ em 1,2- diclorobenzeno Ú100 mLõ, foi adicionado 3-amino-4-metilbenzohidrazida úcomposto 347.4, 4,63 g, 28,0 mmoles, 1.20 equivõ. A solução resultante foi agitada durante a noite a 150 °C em um banho de óleo. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura resultante foi purificada usando cromatografia de coluna de sílica gel com diclorometano'metanol ύ1μ0~100μ1ο como eluente para fornecer 2,4 0 g Ú310 õ do composto do Étulo como um sólido branco.
Composto 347. N-Ú5-Ú7-Ú4-Cianofenilõ-5,6,7,8 -tetraidro- [1,2,4]triazolo[4,3-a]piridin-3-ilõ-2-metilfenilõ-6 -úisopropilaminoõnicotinamida. 0 composto do título foi preparado usando procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 43 e usando o composto 347.5 no lugar do composto 42.2. m'z úES+õ 40 2 úM+HÒ.
Composto 348.1. Ácido 2-Hidrõxi-6-metil-5-nitronicotínico. A uma solução de ácido 2-hidróxi-6-metilnicotínico Ú14,0 g, %1,5 mmoles, 1.00 equivõ em ácido sulf0 rico úconc .õ Ú140 mLõ a 0 °C foi adicionada em gotas uma solução de HN03 Ú12,0 g, 1%0 mmoles, 2.00 equivõ em ácido sulfS ricoúconc.õ Ú10 mLõ. A mistura resultante foi, então, agitada por 2 h a %0 °C, resfriada para temperatura ambiente, e em seguida, extinta com 250 mL de água gelada. Os sólidos resultantes foram coletados por filtração e secos em um forno sob pressão reduzida para render 15,8 g ú87% õ do compofeo do título como um sólido amarelo.
Composto 348.2. Metil 2-cloro-6-Metil~5-nitronicotinato. A uma solução de ácido 2-hidróxi-6-metil-5-nitronicotínico úcomposto 348.1, 15,0 g, 75,8 mmoles, 1.00 equivõ em clorobenzeno Ú150 mLõ, foram cuidadosamente adicionados tricloreto de fosforil Ú45.0 g, 2E3 6 mmoles, 4.00 eqivõ e N,N-dimetilformamida úl,5 mL, 0.10 equivõ. A mistura resultante foi agitada por 2 h a 135 °C, e então concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em 20 mL de DCM. A esta, foi adicionado metanol Ú20 mLõ em gotas. A solução resultante foi agitada por 3 h a 25 °C, e então concentrada sob pressão reduzida. Ao resíduo, foram cuidadosamente adicionados 100 mL de água e o pH da mistura resultante foi lentamente ajustado para 8 com bicarbonato de sódio úaqõ. A fase aquosa foi extraída com 2x200 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para render 17,6 g úbrutoõ do composto do título como um sólido amarelo.
Composto 348.3. Metil 5-amino-6-metilnicotinato. Um frasco de fundo redondo, contendo uma solução de metil 2-cloro-6-metil-5-nitronicotinato Ú12,8 g, 55,5 mmoles, 1.00 equivõ em metanol Ú12Q mLõ foi purgado com nitrogénio. Trietilamina Ú15,0 g, 14% mmoles, 2.68 equivõ e paládio em carbono úl.30 gõ foram adicionados. Após purga adicional do frasco com nitrogénio, a atmosfera foi alterada para hidrogénio e a solução resultante foi agitada por 2 dias à temperatura ambiente sob pressão atmosférica. Após purga do sistema com nitrogénio, os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ50-1μ5δ como eluente para fornecer 3,50 g Ú38%õ do composto do título como um sólido amarelo.
Composto 348.4. Ácido 5-Amino-6-metilnicotínico. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de metil 5-amino-6-metilnicotinato ú5,00 g, 30,1 mmoles, 1.00 equivó e hidróxido de sódio Ú2 0 gõ em Me0H'H20 Ú80'200 mLõ. A solução resultante foi aquecida em refluxo durante a noite Após resfriamento para temperatura ambiente, o metanol foi removido sob pressão reduzida. 0 pH da fase aquosa remanescente foi ajustado para 4 com cloreto de hidrogénio aquoso Ú2MÕ. A mistura resultante foi então concentrada sob pressão reduzida para render 5,00 g úbrutoõ do composto do título como um sólido amarelo.
Composto 348. N-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ- 2 - metilpiridin-3-ilõ-6-úpirrolidin-l-ilõnicotinamida. 0 composto do título foi preparado usando procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 43 e usandos compostos 348.4 e 1.5 no lugar de ácido 5-amino- 2,4-dimetilbenzóico e composto 11.2 respectivamente. m'z ÚES+Õ 4%5 ÚM+Hõ+ .
Composto 34Ê3 .1. 1-óxido de 2-Bromo-5-metilpiridina. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de 2-bromo-5-metilpiridina Ú10,0 g, 58,1 mmoles, 1.00 equivõ em diclorometano Ú250 mLõ. mCPBA Ú15,0 g, 86,% mmoles, 1.50 equivõ foi adicionado em várias bateladas à temperatura ambiente. A solução resultante foi agitada durante a noite at 30 °C, em seguida, diluída com 50 mL de 2N hidróxido de sódio úaq.õ. 0 valor de pH da solução foi ajustado para 10 com 2N hidróxido de sódio úaq.õ. A fase aquosa foi extraída com 3x100 mL de diclorometano e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro e concentradas sob pressão reduzida para render 11,0 g ú%l%õ de 2-bromo-5-metilpiridin-1-ium-1-olato como um sólido amarelo.
Composto 34%.2. 1-óxido de 2-Bromo-5-metil-4-nitropiridina.
Em um frasco de fundo redondo, foi colocado HN03 Ú15 mLõ, ácido sulfúrico ú.20 mLõ. A isto, foi adicionado o composto 34%. 1 úll, 0 g, 52,7 mmoles, 1.00 equiv. , ú%0% õ em árias bateladas em temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 100 °C, então, resfriada para temperatura ambientee extinta com 50 mL de água gelada. 0 pH foi lentamente ajustado para 2-3 com hidróxido de sódio úaq. 2Mõ e a mistura resultante foi extraída com 3x50 mL de diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna d sílica gel com etil acetato'éter de petróleo úlp2õ como eluente para fornecer 3,00 g Ú23® õ do composto do título como um sólido amarelo.
Composto 34%.3. Metil 4-amino-5-metilpicolinato. Em um autoclave de 250-mL Ú30 atm, PRECAUÇÃOp Realizar atrás de um escudo de proteçãoõ purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi colocada uma solução de 1-óxido de 2-bromo-5-metil-4-nitropiridina úcomposto 34%.2, 3,00 g, 12,% mmoles, 1.00 equivõ em metanol Ú120 mLõ. Trietilamina Ú2,60 g, 25,7 mmoles, 2.00 equivõ e PdúdppfõCl2 Ú600 mg, 0,82 mmol, 0.06 equivõ foram adicionados à reação. 0 autoclave foi purgado e a mistura foi então agitada durante a noite sob 30 atm de CO úgõ a %0 °C. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetatop metanol Ú20plõ como eluente para fornecer 1.50 g Ú670 õ de metil 4-amino-5-metilpiridina-2-carboxilato como urn. sólido amarelo.
Composto 34%.4. Ácido 4-Amin.o-5-metilpicolin.ico. Uma solução de metil 4- amino-5-metilpicolinato úcomposto 34%.3, 1,50 g, 8,12 mmoles, 1.00 equiv, %0%õ e 5N hidróxido de sódio úaq., 15 mLõ em metanol Ú15 mLõ foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, então concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com 20 mL de H20 e o pH foi ajustado para 3-4 com 2M cloreto de hidrogénio aquoso. 0 precipitado resultante foi coletado por filtração e seco para render 0,8 g Ú580 õ do coposto do título como um sólido amarelo.
Composto 34%. N-Ú2-Ú4-Ú4-CianofenilE piperidina-l-cabonil0 -5- metilpiridin-4-ilõ-6-úisopropilaminoõnicotinamida. 0 composto do título foi preparado usando procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 43 e usandos compostos 34%.4 e 1.5 no lugar de ácido 5-amino-2, 4 -dimetilbenzóico e composto 11.2 respectivamente. m'z ÚES+Õ 483 ÚM+Hõ+ .
Composto 350.1. 1-óxido de 2-Bromo-3-metilpiridina. 0 composto do título foi preparado Ú8,00 g, 8513 õ usado um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 34%.1 e usando 2-bromo-3-metilpiridina Ú8,60 gõ no lugar de 2-bromo-5-metilpiridina.
Composto 350.2. 6-Bromo-5-metilpicolinonitrila. A uma solução de 1-óxido de 2-bromo-3-metilpiridina úcomposto 350.1, 5,65 g, 30,1 mmoles, 1.00 equivõ em acetonitrila Ú50 mLõ foram adicionados tríetilamina Ú6,10 g, 60,3 mmoles, 2.00 equivõ e TMSCN ú8,%0 g, 3.00 equivõ. A solução resultante foi aquecida para retluxo e agitada durante a noite em um banho de óleo, em seguida, resfriada para temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo úlp5õ como eluente para render 2.00 g Ú34I3 õ do composto do títilo como um sólido amarelo.
Composto 350.3. 6-Bromo-5-metilpicolinimidamida. em um tubo vedado de 50-mL, foi colocada uma solução de 6-bromo-5-metilpicolinonitrila úcomposto 350.2, %00 mg, 4,57 mmoles, 1.00 equivõ em metanol Ú40 mLõ. NH3 úgõ foi borbulhado através da solução e a solução resultante foi agitada durante a noite a %5 °C em um banho de óleo atrás de um escudo de proteção. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida para render 800 mg Ú82I3 õ do composto do título como um sólido marrom claro.
Composto 350.4. 6-Amino-5-metilpicolinamida. Em um tubo vedado de 50-mL, foi colocada uma solução de 6-bromo-5-metilpicolinimidamida úcomposto 350.3, 800 mg, 3,74 mmoles, 1.00 equivõ e CuS04 Ú80 mgõ em NH3-H20 Ú4 0 mLõ. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 80 °C atrás de um escudo de proteção. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi então extraída com 2x50 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob pressão reduzida para render 750 mg úbrutoõ do composto do título como um sólido marrom.
Composto 350.5. Cloridrato de ácido 6-Amino-5-metilpicolínico. Into around- bottom flask foi colocada uma solução de 6-amino-5-metilpicolinamida úcomposto 350.4, 500 mg, 3,31 mmoles, 1.00 equivõ em cloreto de hidrogénio úconc., 15 mLõ. A solução resultante foi aquecida para refluxo durante a noite em um banho de óleo, então concentrada sob pressão reduzida para render 600 mg úbrutoõ do composto do título como um sólido amarelo claro.
Composto 350. N-Ú6-Ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-1-úcarbonilõ-3-metilpiridin-2-ilõ-6- úisopropilaminoõnicotinamida. 0 composto do título foi preparado usando procedimentos similareses àqueles usados para a preparação do composto 43 e usandos compostos 350.5 e 1.5 no lugar de ácido 5-amíno-2,4-dimetilbenzóico e composto 11.2 respectivamente. m'z úES+õ 483 úM+Hõ+.
Composto 351.1. Metil 5-nitro-lH-pirazol-3-carboxilato. Em um frasco de fundo redondo, que foi purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi colocada uma solução de ácido 5-nitro-lH-pirazol-3-carboxílico ú5,00 g, 31,% mmoles, 1.00 equivõ em metanol Ú150 mLõ. A isto, foi adicionado cloreto de tionil Ú5,60 g, 47,8 mmoles, 1.50 equivõ em gotas a 0 °C. A solução resultante foi agitada por 18 h a 30 °C em um banho de óleo, então concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo úl:30-1:100 como eluente para fornecer 5.00 g Ú780 õ do composto do título como um sólido marrom.
Composto 351.2 e 351.3. Metil l-metil-5-nitro-lH-pirazol-3-carboxilato e metil 1-meti1-3-nitro-1H-pirazol-5-carboxilato. Em um frasco de fundo redondo, que foi purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi colocada uma solução de metil 5-nitro-lH-pirazol-3-carboxilato Ú3,00 g, 17,5 mmoles, 1.00 equivõ em N, N-dimeti1formamida Ú30 mLõ. Carbonato de potássio ú4,84 g, 35,0 mmoles, 2.00 equivõ e CH3I Ú2,0 8 g, 21,0 mmoles, 1.20 equivõ foram adicionados at 0 °C. A solução resultante foi agitada por 2 h a 40 °C em um banho de óleo. Após resfriamento para temperatura ambiente, os sólidos foram removidos por filtração seguida pela adição de 120 mL de água gelada. A mistura foi extraída com 3x100 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio anidro e concentradas sob vácuo. 0 produto bruto foi purificado por re-cristalização a partir de éter. Isto resultou em 1,10 g Ú34%õ de metil l-metil-3-nitro-lH-pirazol-5-carboxilato como um sólido branco, m/z úES+õ 186 ÚM+HÕ+. ΧΗ - RMN, Ú300 MHz, DMS0-ds, ppmõ: □ 7,57 ÚS, 1HÕ, 4,22 ús, 3Hõ, 3,0 1 ús, 3Hõ. O filtrado foi concentsdo sob vácuo e o produto bruto Ú2 gõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#-Pre-HPLC-001úSHIMADZUõõ: Coluna, SunFire Prep Cl8, 10 *150mm 5um; fase móvel, água com 0,05% TFA e CH3CN Ú10% CH3CN até 56,5% em 10 minõ; Detector, uv 254 nm. As frações contendo composto puro foram combinadas e concentradas para render 470 mg úl5%õ de metil 1-metil-5-nitro-lH-pirazol-3-carboxilato como um sólido branco, m/z ÚES+õ 186 ÚM+Hõ+. "H-RMN, Ú300 MHz, DMSO-d6, ppmõ;[T.‘]7,64 Ú1H, sõ, 4,24 Ú3H, SÕ, 3,87 Ú3H, sõ.
Composto 351.4. Metil 5-amino-l-metil-lH-pirazol-3-carboxilato. A uma solução de metil 1-metil-5-nitro-1H-pirazol-3-carboxilato Ú3 51.2, 0,48 g, 2,60 mmolesõ em Me OH Ú15 mlõ sob nitrogénio foi adicionado paládio em carbono Ú10%, 0,25gõ. O frasco foi adicionalmente desgaseifiçado com nitrogénio e preenchido com H2 através de um balão. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 1,5 horas. Após purgar o sistema com nitrogénio, a mistura de reação foi filtrada através de um bolo de Celite e concentrada para dar 363 mg ú%0óõ de um s0 lido branco. m'z úESê 156 ÚM+HÕ+ .
Composto 351,5. Metil 5-Ú3-isobutilureídoõ-1-metil-1H-pirazol-3-carboxilato. A uma solução de metil 5-amino-1-metil-lH-pirazol-3-carboxilato úcomposto 351.4, 0,088 g, 0,57 mmolõ em THF ú5mlõ, foi adicionado trifosgênio Ú0,084 g, 0,28 mmolõ seguida por DIEA Ú0,2 ml, 1,14 mmolõ. ApS s a mistura ser agitada à temperatura ambiente por 2 horas, isobutil amina Ú0,225 mL, 2,28 mmolesõ foi adicionado. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi dividida entre água e EtOAc. A camada de EtOAc foi lavada com 1M de solução de NaH2P04 aquosa seguida por salmoura, seca com Na2S04, e concentrada para dar 120 mg Ú830 õ de um sólido amarelo claro, rtiz úES+õ 255 ÚM+HÕ4.
Composto 351.6. Ácido 5-ú3-Isobutilureídoõ-l-metil-lH-pirazol-3-carboxílico A uma solução de metil 5-Ú3-isobutilureídoõ-l-metil-lH-pirazol-3-carboxilato úcomposto 351,5, 0,12 g, 0,47 mmolõ em MeOH ú5 mlõ, foi adicionado 1M LiOH em H20 úl, 42 ml, 1,42 mmolõ. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 5 horas. TLC mostrou que a reação estava completa. A mistura foi acidificada para pH 3-4 a 0°C e então foi extraída com EcOAc ú2 x 50 mlõ. As camadas orgânicas combinadas foram secas com Na2S04, filtradas, e concentradas para dar 110 mg Ú1OO0 de um óleo claro m'z ÚES+õ 241 ÚM+Hõ+ .
Composto 351. 1-Ú3-Ú4-ú4-Cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-l-Metil-lH-pirazol-5-ilõ-3-isobutilureia. Uma solução de ácido 5-ú3-Isobutilureídoõ-l-metil-lH-pirazol-3-carboxílico úcomposto 351.6, 0,11 g, 0,46 mmolõ, 4-úpiperidin-4- ilõbenzonitrila sal de HC1 úcomposto 1.5, 0,0%7 g, 0,46 mmolõ, EDCI Ú0,0%0 g, 0,51 mmolõ, HOBT Ú0,065 g, 0,51 mmol, com 200 de £Dõ e DIEA Ú0,22 ml, 1,38 mmolõ em DMF Ú5 mlõ foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi, em seguida, diluída com 50 ml de etil acetato e lavada com 2x20 ml de salmoura. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando prep.-TLC e desenvolvido usando etil acetato puro para render 2 5 mg do composto do título como um sólido esbranquiçado. m'z úES+õ 40% úM+Hõ+. 1H RMN Ú400 MHz, DMSO- dsõ 88,46 ús, 1HÕ, 7,76 úd, 2HÕ, 7,4% úd, 2HÕ, 6,48 út, IHõ, 6,37 ús, 1HÕ, 4,84 úd, 1HÕ, 4,63 úd, 1HÕ, 3,65 ÚS, 3Hõ, 3,14 úm, IHõ, 2, %2 út, 3HÕ, 2,7% úm, 2HÕ, 1,85 úm, IHõ, 1,67 úm, IHõ, 1,57 úm, 2HÕ, 0,87 úd, 6HÕ.
[0%%4] Os compostos na tabela a seguir foram preparados usando manipulaçS es químicas padrão, materiais de prtida prontamente disponíveis, e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 346, 347, 348, 34%, 350 e 351μ
Composto 3 %2.1. Acido 4-Ciclobutil-5-formil-2-metilbenzóico. Em um frasco de fundo redondo de três gargalos, que foi purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi colocada uma solução de ácido 4-ciclobutil-5-iodo-2-metilbenzóico úcomposto 234.1, 5,00 g, 12,7 mmoles, 1.00 equiv, 80%õ em uma mistura de solvente de tetraidrofurano e Et20 Ú50'50 mLõ. Isto foi seguido pela adição de butil lítio Ú15 mL, 2.50 equiv, 0 5%õ em gtas com agitação a -78 °C. A isto, foi adicionado N, N-dimetilformamida Ú2,50 g, 32,5 mmoles, 2.00 equivõ. A solução resultante foi agitada por 1 h a -78 °C e então cuidadosamente extinta por adição lenta de 50 mL de NH4C1 úaq.õ. O pH foi ajustado para 1-2 com cloreto de hidrogénio Ú6 Mõ. A solução resultante foi diluída com 100 mL de etil acetato, então lavada com 4x50 mL de salmoura. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob vácuo. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo ύΐμία como eluente para fornecer 1,62 g Ú41 H õ de ácido 4-ciclobutil- 5 -formil-2-metilbenzóico como um sólido branco. composco z^z.z.
4-u±-u4-(jicioDutii-b-formil-2- metilbenzoilõpiperidin-4- ilõbenzonitrila. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de ácido 4 -ciclobutil- 5 -formil-2-metilbenzóico úcomposto 3%2.1, 4%0 mg, 1,57 mmol, 1.00 equiv, 70S õ em N,N- dimetilforamida Ú8 mLõ. Composto 1.5 Ú500 mg, 1,57 mmol, 1.00 equivõ, EDC-HC1 Ú860 mg, 4,26 mmoles, 2.00 equiv, %50 õ e 4-dimetilaminopiridina Ú550 mg, 4,28 mmoles, 2.00 equiv, %50 õ foram adicionados à mistura de reação. A solução resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente e, em seguida, diluída com 30 mL de etil acetato. A mistura resultante foi lavada com 4x30 mL de salmoura, então seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo 1μ2δ como eluente para render 560 mg ú74§ õ do composto d título como um sólido branco.
Composto 3§ 2, 4-úl-ú4-ciclobutil-5-formil-2- metilbenzoilõpiperidin-4- ilõbenzonitrila. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de 4-[1-[ú4-ciclobutil-5- formil-2-metilfenilõcarbonil]piperidin-4- il]benzonitrila Ú30 2.2, 300 mg, 0,74 mmol, 1.00 eqmv, %50 õ em N,N-dimetilformamida Ú10 mLõ. 3-Bromodiidro-2H-piran-
4ú3Hõ-ona úcomposto 1.10.1, 210 mg, 1,17 mmol, 1.00 equivõ, amónia Ú82 mg, 0,5% mmol, 3.00 equiv, 25ó aq.õ, e NH40Ac Ú270 mg, 2,81 mmoles, 4.50 equiv, 80óõ foram adicionados e a mistura resultante foi agitada durante a noite a 130 °C sob nitrogénio. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi diluída com 50 mL de etil acetato, lavada com 4x50 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro, e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato como eluente. 0 produto bruto ú~80 mgõ foi adicionalmente purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiçíH es úl#-Pre-HPLC-OOlúSHIMADZUõõp Coluna, Sunfre Prep Cl8, l%*150mm 5um; fase móvel, água com 0,05ó TFA e CH3CN Ú26Ó CH3CN até 41ó em 7 min, até 100o em 3 min, até 266 em 2 minõ; Detector, Waters 248% 254&amp;220nm. As fraç® es contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para render 24,6 mg ú7óõ do composto do título como um sólido branco, m/ z ÚES+Õ 481 ÚM+Hõ+. LH RMN Ú300 MHz, CD30Dõp δ 7.67 úd, J= 7.8 Hz, 2HÕ, 4.47 úd, J= 8.1 Hz, 2HÕ, 7.33 úbr s, IHõ, 7.26 &amp; 7.15 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar-H, IHõ, 4.% úlH parcialmente obscurecido por pico de águaõ, 4.68 ús, 2Hó, 4,06-3,88 úm, 3HÕ, 3,73-3,58 úm, IHõ, 3,33- 3,18 úm, IHõ, 3,07-2,%2 úm, 2HÕ, 2,83-2,73 úm, 2HÕ, 2,44 &amp; 2,34 ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar-CH3, 3Hõ, 2,25-1, %1 úm, 6HÕ, 1, %1 -1,50 úm, 4HÕ. LH RMN Ú400 MHz, CDCljÕp δ 7,64 úm, 2HÕ, 7,34 úm, 2HÕ, 7,13-6, %3 úm, 2HÕ, 4, %% úm, IHõ, 4 ,75 ús, 2Hõ, 3,%8 úm, 2HÕ, 3,73 úm, IHõ, 3,53 úm, IHõ, 3,31-2,83 úm, 5HÕ, 2,41 úm, IHõ, 2,37-1,61 úm, 11HÕ, 1,44 úm, 1HÕ,
Composto 30 3. 4-úl-ú2-Etil-4-metil-5-ú3,4,6,7- tetraidropirano[3,4- d]imidazol-2 -ilõbenzoilõpiperidin-4- ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2, mas composto 211.2 foi usado no lugar do composto 2.2. m'z ÚES+Õ 455 ÚM+HÕ+.
Composto 30 4. 4-úl-ú4-Etil-2-metil-5-ú3,4,6,7- tetraidropirano[3,4- d]imidazol-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 30 3, ms o composto 152.1 foi usado no lugar de metil 2-bromo-4- metilbenzoato. m'z úES+õ 455 ÚM+Hõ+.
Composto 30 5. 4-Ú1-Ú4-Etil-2-metil-5-ú3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 30 4, mas o composto 11.2 sal de HC1 foi uado no lugar do composto 1.5. m'z úES+õ 473 úM+Hõ+.
Composto 30 6. 4-úl-Ú2,4-Dietil-5-Ú3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2- ilõbenzoilõ-4- fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2, exceto que os compostos 204.3 e 11.2 foram usados no lugar dos compostos 2.2 e 1.5 respectivamente. m'z úES+õ 487 úM+Hõ*.
Composto 3® 7. 4-úl-Ú5-Ú5-Acetil-4,5,6,7-tetraidro-H- imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ- 2,4-dietilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2, exceto que o composto 204.3 foi usado no lugar do composto 2.2. m'z ÚES+Õ 510 ÚM+Hõ+.
Composto 313 8. 4-úl-ú5-ú5-Acetil-4,5,6,7-tetraidro-H- imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ- 4-etil-2- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1, 2 e 33 4. m'z uES+õ 43 6 úM+fiõ
Composto 33 3 . 4-úl-ú5-ú5-Acetil-4,5,6,7-tetraidroH3 imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-4-etil-2-metilbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1, 2 e 3%4, porém usando o composto 11.2 sal de HC1 no lugar do composto 1.5. m'z úES+õ 514 ÚM+Hõ+.
Composto 400.1. 3-Metildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona. Um frasco de fundo redondo de 1-L foi purgado e mantido com uma atmosfera de nitrogénio e uma solução de LDA Ú2M THF, 132 mL, 1.20 equivõ em tetraidrofurano Ú300 mLõ. A mistura foi resfriada para -78 °C, então uma solução de diidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona Ú22,0 g, 220 mmoles, 1.00 equivõ em hexametilfosforamida Ú40 mL, 230 mmoles, 1.05 equivõ foi adicionada em gotas seguida pela adição em gotas de met il iode to Ú34 mL, 550 mmoles, 2.5 equivõ a -78 °C. A solução resultante foi agitada a -78 °C por 5 min, então a 2 5 °C por 5 min. A reação foi cuidadosamente extinta com NH4C1 aquoso saturado Ú80 mLõ e extraída com éter ú2 x 100 mLõ. As camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com PE'Et20 Ú5plõ como o eluente para obter o composto do título como um óleo amarelo ú6,00 g, 24%õ
Composto 400.2. 3-Bromo-5-metildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona. Um frasco de fundo redondo de três gargalos e 250-mL foi purgado e mantido com uma atmosfera de nitrogénio. LDA ú2.0 M em THFõ Ú6 mL, 12 mmoles, 1.2 0 equivõ e tetraidrof urano Ú30 mLõ foram adicionados. A solução foi resfriada para -78 °C e então TMSC1 Ú7 mL, 55 mmolesõ foi adicionado em gotas e agitado a -78 °C por 5 min. Uma solução de-metildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona úcomposto 400.1, 1,14 g, %,%% mmoles, 1.00 equivõ em tetraidrofurano Ú20 mLõ foi adicionado em gotas e a mistura resultante foi agitada a -78 °C por 10 min. A mistura foi cuidadosamente extinta com uma mistura detrietilamina Ú15 mLõ e NaHC03 aquoso saturado Ú100 mLõ. A camada aquosa foi extraída com éter ú2 x 50 mLõ, e as orgânicas combinadas foram lavadas com ácido cítrico aquoso Ú3 x 100 mLõ, secas úK2C03õ, filtradas e concentradas a vácuo para obter o intermediário enol silil éter como um óleo colorido. 0 enol silil éter foi dissolvido em tetraidrofurano Ú20 mLõ e o sistema foi purgado com nitrogénio. A mistura foi resfriada para 0 °C, e então N-bromossuccinimida úl,%5 g, 11,0 mmoles, 1.10 equivõ foi adicionado em porçS es. A mistura resultante foi agtada a 2 5 °C por 1 h, então extinta com NaHC03 aquoso saturado Ú30 mLõ. A camada aquosa foi extraída com éter ú2 x 30 mLõ, e as orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatograf ia de sílica gel com PE/Et20 ú5: lõ como o eluente para obter o composto do título como um óleo incolor úl,00 g, 52§ õ.
Composto 400.3. Ácido 2-Etil-4-metil-5-ú7-metil-3,4,6,7-tetraidropirano[3,4- d]imidazol-2-ilõbenzóico. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de 3-bromo-5-metildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona úcomposto 400.2, 800 mg, 4,14 mmoles, 1.6 equivõ em N,N- dimetilfonnamida Ú5 mLõ.
Hidróxido de amónio Ú25Ó NH3 em H2O0 Ú530 mg, 7,8 mmoles, 3.0 equivS , NJDAc u%04 mg, 11,7 mmoles, 4.50 equiv0 e ácido 2-etil-5-formil-4-metilbenzóico úcomposto 211.4, 500 mg, 2,60 mmoles, 1.00 equivõ foram adicionados ao frasco. A mistura resultante foi agitada a 130 °C por 2h, então concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com d ic1orometano'metano1 Ú70'lõ como o eluente para obter o composto do título como um sólido branco Ú30,0 mg, 20 õ.
Composto 400. 4-úl-ú2-Etil-4-metil-5-ú7-metil-3,4 6,7-
tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de ácido 2-etil-4-metil-5-ú7-metil-3,4,6,7-tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzóico úcomposto 400.3, 30 mg, 0,10 mmol, 1.0 equivõ em DMF'DCM Ú5'5 mLõ. Cloridrato de 4-úPiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 50 mg, 0,22 mmol, 2.2 equivõ, EDC Ú4 0 mg, 2.0 equivõ e 4-dimetilaminopiridina Ú28 mg, 2.0 equivõ foram adicionados. A solução resultante foi agitada durante a noite a 25 °C, então extinta com água Ú10 mLõ. A mistura foi extraída com etil acetato ú3 x 5 mLõ, e as camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ, filtradas e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo Ú2:lõ como o eluente para obter o composto do título como um sólido amarelo claro Ú3,2 mg, 70 õ, rtiz úES+õ 46% ÚM+Hõ+.
Composto 401. 4-úl-ú4-Ciclopropil-2-metil-5-ú3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados por a preparação do composto 30 2, ma o composto 142.2 foi usado no lugar do composto 152.3. m' z ÚES+Õ 467 ÚM+Hõ+.
Composto 402. 4-úl-Ú4-Ciclopropil-2-etil-5-ú3,4,6,7- tetraidropirano[3,4- d]imidazol-2 -ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 30 2 ma composto 226.5 foi usado no lugar do composto 230.1. m'z ÚES+Õ 4 81 ÚM+HÕ+ .
Composto 403. Metil 2-ú5-ú4-ú4-cianofenilõpiperidina-1-úcarbonilõ-2-ciclopropil-4-metilfenilõ-6,7-diidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-5ú4Hõ-carboxilato. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2, mas o composto 142.2 e dimetil dicarbonato'DIEA foram usados no lugar do composto 2.2 and anidrido acético respectivamente. m'z úES+õ 524 úM+Hõ+.
Composto 404. 4-Ú1-Ú5-Ú5-Acetil-4,5,6,7-tetraidro-3H- imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-4-ciclopropil-2-metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação dos compostos 1 e 2, porém usando composto 142.2 no lugar do composto 2.2. m'z ÚES+õ 508 ÚM+Hõ+.
Composto 405. 4-Ú1-Ú4-Ciclobutil-2-metil-5-Ú3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 3%2, exceto que o composto 11.2 Sal de HC1 foi usado no lugar do composto 1.5. m'z úES+õ 40 0 úM+Sõ RMN Ú300 MHz, CD3ODõ δ 7,0 7 úm, 2HÕ, 7,0 7 úm, 2HÕ, 7,67- 7,53 úm, 2HÕ, 4,80 ús, 2HÕ, 4,10 úm, 2HÕ, 3,75 úm, 1HÕ, 3,55 úm, 2HÕ, 3,27 úm, 1HÕ, 2,0 0 úm, 2HÕ, 2,53 e 243 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3Hõ, 2,38-1,80 úm, 10Hõ.
Composto 406.1. Ácido 5-ú5-úterc-butoxicarbonilõ-4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-4-ciclobutil-2-metilbenzõico. A uma solução de 4- ciclobutil-5-formil-2-metilbenzóico acid úcomposto 3%2.1, 2,00 g, %, 16 mmoles, 1.00 equivõ em N, N-dimetilformamida Ú15 mLõ foram adicionados terc-butil 3-bromo-4-oxopiperidina-1- carboxilato ú%,00 g, 16,2 mmoles, 2.00 equivõ, hidróxido de amónio Ú3,84 g, 27,4 mmoles, 3.00 equiv, 25%õ, e NH40Ac Ú3,18 g, 41,3 mmoles, 4.50 equivõ. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 130 °C sob nitrogénio. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi diluída com 50 mL de etil acetato, lavada com 3x30 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro, e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com diclorometano/metanol Ú20:lõ como eluente para fornecer 2.00 g Ú27%õ do composto do título como um sólido marrom.
Composto 406.2. Terc-butil 2-Ú5-Ú4-Ú4- cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutil-4-metilfenilõ-6,7-diidro-3H-imidazo[ 4,5-c]piridina- 5ú4Hõ-carboxilato. A uma solução de ácido 5-ú5-úterc-butoxicarbonilõ-4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin- 2-ilõ-4-ciclobutil-2-metilbenzóico úcomposto 406.1, 1,00 g, 1,22 mmoles, 1.00 equiv, 500 õ em N, N-dimetilformamda Ú5 mLõ, foram adicionados sal de cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 270 mg, 1,21 mmol, 1.00 equivõ, EDC-HC1 Ú460 mg, 2,40 mmoles, 2.00 equivõ, e 4-dimetilaminopiridina ú2%6 mg, 2,42 mmoles, 2.00 equivõ. A mistura resultante foi agitada a 25 °C durante a noite. A mistura foi, em seguida, diluída com 30 mL de etil acetato, lavada com 3x30 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro, e concentrada sob pressão reduzida para render 8%0 mg Ú630 õ do composto do título como um sólido marrm.
Composto 406.3. 4-úl-Ú4-Ciclobutil-2-metil-5-ú4,5,6,7- tetraidro-3H-imidazo[4,5-c] piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Uma solução de terc-butil 2-Ú5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutil-4 -metilfenilõ-6,7-diidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-5ú4Hõ-carboxilato Ú406.2, 600 mg, 0,620 mmol, 1.00 equiv, 600 õ em diclorometano Ú3 mLõ e ácido trifluoroacético úl. 5 mLõ foi agitada por 3 h a 25°C, então diluída com 5 mL de ácido clorídrico Ú3 mol'Lõ e 10 mL de água. A mistura resultante foi lavada com 3x20 mL de etil acetato e o pH foi então ajustado para ~% com hidróxido de sódio úaq, 3Mõ. A mistura resultante foi extraída com 4x20 mL de diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ e concentradas sob pressão reduzida para render 140 mg Ú370 õ do composto do título como um sólido marrom.
Composto 406. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-metil-5-ú5-metil- 4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A uma solução de 4-Ú1-Ú4-ciclobutil-2-metil-5-ú4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila ú.406.3, 10 0 mg, 0,30 mmol, 1.00 eqmv, 75óõ em tetraidrofurano Ú10 mLõ, foram adicionados NaBHúOAcõ3 Ú252 mg, 1,13 mmol, 3.00 equiv, %5óõ e ECHO Ú37ÓÕ ú2,2 mL, 2.00 equivõ. A mistura resultante foi agitada por 2 h a 40 °C em um banho de óleo e então concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com diclorometano e lavado com bicarbonato de sódio aquoso saturado e salmoura. A camada orgânica foi seca úNa2S04õ e concentrada. O produto bruto ú~80 mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úlf-Pre-HPLC-0 0lúSHIMADZUõõp Coluna, Xbridge Prep CIS, 5um, l%±150mmp fase móvel, água com 0,030 NH3H20 e CH3CN Ú360 CiEN até 480 em 8 min, até 1000 em 1 min, até 360 em 1.5 minõ; Detector, Waters 248% 25E220nm.
As fraç0 es contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para render 23,4 mg Ú160 õ do composto do título como um sólido branco, m'z úES+õ 4%4 úM+Hõ+. RMN Ú300 MHz, CDjODõp δ 7,60 úd, J = 6,0 Hz, 2Hõ, 7,48 úd, J = 6.0 Hz, 2HÕ, 7,37-7,31 úm, 1HÕ, 7,26 É 7,15 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar-H, 1HÕ, ~4,% úlH parcialmente obscurecido por pico de águaõ, 4,02-3, %0 úm, 1HÕ, 3,73-3,57 Úm, 1HÕ, 3,57 ús, 2HÕ, 3,34-3,21 úm, 1HÕ, 3,06-2, %4 úm, 2HÕ, 2, %0-2,77 úm, 4HÕ, 2,54 ús, 3HÕ, 2,45 É 2,34 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3Hõ, 2,11-1,86 úm, 6HÕ, 1,86-1,54 úm, 4HÕ.
Composto 407. 4-Ú1-Ú4-Ciclobutil-2-metil-5-ú5-metil- 4,5,6,7 -tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 406, exceto que o composto 11.2 Sal de HC1 foi usado no lugar do composto 1.5. m'z úES+õ 512 úM+Hõ+.
Composto 408. 4-úl-ú4-Metil-3-ú5-metil-4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 406 exceto que ácido 3-iodo-4-metilbenzóico foi usado no lugar do composto 230.1. m'z ÚES+B 440 úM+HlEI.
Composto 40%. 4-úl-ú4-ciclobutil-2-metil-5-ú5-metil- 4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A uma solução de 4- úl-ú4-ciclobutil-2-metil-5-ú4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila Ú406.3, 180 mg, 0,300 mmol, 1.00 equiv, 80ó; õ em N, N-dimetilformanaida ú5 mLõ foram adicionados dimetil dicarbonato Ú176 mg, 1,31 mmol, 5.00 equivõ e DlEA Ú160 mg, 1,31 mmol, 5.00 equivõ. A solução resultaíae foi agitada durante a noite a 25 °C e então extinta com 20 mL de metanol. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida e o produto bruto foi purificado por Prep-HPLC usando as seguintes condições úl#-Pre-HPLC-OOlúSHIMADZUõõp Coluna, SunFire Prep C18, 1%±1 50mm 5um; fase móvel, água com 0,050 TFA e CH3CN Ú28°0 CH3CNté 430 em 8 min, até 1000 em 3 min, até 280 em 2 minõ; Debtor, waters 248% 254&amp;220nm. As fraç0 es contendo composto puro foram combinadas e Liofilizadas para render 2%, % mg úl%0 õ do composto do título como um sólido branco, m/z úES+õ 538 ÚM+Hõ+, λΕ RMN Ú400 MHz, CD30Dõp δ 7,70 Úm, 2HÕ, 7,50-7,35 úm, 4Hõ, 4,%0 úm, IHõ, 4,70 ús, 2Hõ, 4,00 úm, 2Hõ, 3,80 úm, 4Hõ, 3,60 úm, IHõ, 3,25 úm, IHõ, 3,05 úm, 2HÕ, 2,85 úm, 2Hõ, 2,50 e 2,4 0 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3Hõ, 2,16-2,00 úm, 6HÕ, 1,86-1,64 úm, 4HÕ.
Composto 410. Metil 2-Ú5-Ú4-Ú4-cianofenilõ-4- fluoropiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutil-4-metilfenilõ- 6,7-diidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-5ú4Hõ-carboxilato. 0 composto do título foi preparado usando manipulaç0 e químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 40%, exceto que o composto 11.2 foi usado no lugar do composto 1.5 m/z úES+õ 556 ÚM+Hõ\ ΧΗ RMN Ú4 00 MHz, CD3ODõ δ 7,78 úm, 2HÕ, 7,67 úm, 2HÕ, 7,35-7,20 úm, 2HÕ, 4,80 úm, 1HÕ, 4,55 ÚS, 2HÕ, 4,00 úm, lHõ, 4,84 úm, 2HÕ, 3,77 ús, 3Hõ, 3,60 úm, IHõ, 3,28 úm, 1HÕ, 2,80 ús, 2Hõ, 2,47 e 2,36 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, ArCH3, 3Hõ, 2,30-1,80 úm, %Hõ, 1,62 úm, 1 Hõ, 1,32 úm, IHõ.
Composto 411. Metil 2-ú5-ú4-ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-ciclopropil-4-etilfenilõ-6,7-diidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-5ú4Hõ-carboxilato. O composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 40%, exceto que o composto 226.5 foi usado no lugar do composto 230.1 m'z úES+õ 538 úM+Hõ+.
Composto 412. 4-úl-ú4-Ciclopropil-2-etil-5-ú5-metil- 4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-cjpiridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 406, exceto que o composto 226.5 foi usado no lugar do composto 230.1. m'z úES+õ 4%4 ÚM+Hõ+.
Composto 413.1. Ácido 4-Ciclobutil-3-iodobenzóico. Uma solução do composto 168.2 úll,0 g, 34,8 mmoles, 1.00 equivõ e hidróxido de sódio ú4,00 g, 100 mmoles, 3.00 equivõ em metanol ú~100 mLõ foi agitada a 50 °C durante a noite. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada para secagem. 0 resíduo foi tomado em água Ú50 mLõ equiv e lavado com etil acetato. 0 pH da camada aquosa foi ajustado para 3-4 com 6 M cloreto de hidrogénio aquoso. 0 precipitado resultante foi coletado por filtração e seco para render 8,60 g Ú820 õ do composto do título como um sólido branco.
Composto 413 . 4-úl-ú4-Ciclobutil-3-ú3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2 -ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 3%2, exceto que o composto 413.1 foi usado no lugar do composto 230.1. m/z ÚES+Õ 477 ÚM+HÕ+. 1H RMN Ú300 MHz, CD30DÕ δ 7,76-7,65 úm, 5Hõ, 7,48 úm, 2HÕ, 5,00 úm, 1HÕ, 4,80 ús, 2Hõ, 4,10 úm, 2HÕ, 3,80 úm, 2HÕ, 3,45 úm, 1HÕ, 3,04 úm, 2HÕ, 2, %0 úm, 2HÕ, 2,18-1, %5 úm, 6HÕ, 1,85-1,77 úm, 4HÕ.
Composto 414. 4_-úl-ú4-Ciclobutil-3-ú3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoilõ-2-4 -fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 413, exceto que o composto 11.2 Sal de HC1 foi usado no lugar do composto 1.5. m' z úES+õ 485 ÚM+Hõ+. Ή RMN Ú300 MHz, CD3ODÕ δ 7,82-7,77 úm, 3HÕ, 7,68-7,65 úm, 4Hõ, 4,80 úm, 3Hõ, 4,8 0 úm, 2HÕ, 3,83-3,46 úm, 3HÕ, 2,8 0 úm, 2HÕ, 2,28 úm, 1HÕ, 2,18-1,83 úm, 10HÕ.
Composto 415. 4-úl-Ú4-Ciclobutil-3-Ú7-metil-3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 414, exceto que 3-metildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona foi usado no lugar de diidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona. m' z úES+õ 48 8 úM+fiõ
Composto 416. 4-úl-ú4-Ciclopropil-3-ú7-metil-3,4,6,7-tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoilõpiperidin-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 413, exceto que b romoúc i c1opropi1õmagné s io e 3-metildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona foram usados no lugar de bromoúciclobutilõmagnésio e diidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona respectivamente. m'z úES+õ 467 úM+Hõ+ .
Composto 417. 4-úl-ú4-Ciclobutil-3-ú5-metil-4,5,6,7- tetraidro-3H-imidazo[4,5-c] piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 406, exceto que o composto 413.1 foi usado no lugar do composto 230.1. m'z ÚES+õ 480 ÚM+HÕ+. ΧΗ RMN Ú300 MHz, CD30Dõ δ 7,72- 7,63 úm, 4Hõ, 7,56 ús, 1HÕ, 7,40 úm, 2HÕ, 4,82 úm, 1HÕ, 4,56 ús, 2Hõ, 3,80 úm, 2HÕ, 3,80 úm, 2HÕ, 3,08 úm, 2HÕ, 3,04 ÚS, 3HÕ, 2,0 0 úm, 2HÕ, 2,18-1,66 úm, 11HÕ.
Composto 418. 4-Ú1-Ú4-Ciclobutil-3-ú5-metil-4,5,6,7- tetraidro-3H-imidazo[4,5-c] piridin-2-ilõbenzoilõ-4- fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 417, exceto que o composto 11.2 Sal de HC1 foi usado no lugar do composto 1.5. m'z úES+õ 40 8 úM+HÔ. ΧΗ RMN Ú300 MHz, CD3ODõ δ 7,70 úm, 2HÕ, 7,74-7,50 úm, 5HÕ, 4,73 úbr s, 1HÕ, 4,54 úbr s, 2Hõ, 3,0 4 úm, 2HÕ, 3,8 úbr s, 2HÕ, 3,61 úbr s, 1HÕ, 3,20 úbr s, 2HÕ, 3,16 ús, 3HÕ, 2,30 - 1,0 6 úm, 10HÕ, 1,70 úm, 1HÕ.
Composto 410 . Metil 2-ú5-Ú4-ú4-cianofenilõpiperidia-1-carbonilõ-2- ciclobutilfenilõ-6,7-diidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-5ú4Hõ-carboxilato. O composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 400 , exceto que o composto 413.1 foi usado no lugar do composto 230.1. m'z úES+õ 524 úM+Hõ.
Composto 420. Metil 2-Ú5-Ú4-Ú4-cianofenilõ-4- f luoropiperidina-l-carbonilõ-2 -ciclobutilf enilõ-6,7-di.id.ro~ 3H-imidazo[4,5-c] piridina-5ú4Hõ-carboxilato. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 40%, exceto que os compostos 413.1 e 11.2 foram usados no lugar dos compostos 230.1 e 1.5 respectivamente. m'z ÚES+Õ 542 ÚM+Hõ.
composto 421. hit n 2-ub-u4-u4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutilfenilõ-6,7-diidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-5ú4Hõ-carboxilato. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 40%, exceto que o composto 413.1 e dietil dicarbonato foram usados no lugar do composto 230.1 e dimetil dicarbonato respectivamente. m'z úES+õ 538 ÚM+Hõ.
Composto 422. Metil 2-ú5-ú4-ú4-cianofenilõpiperidina-l- carbonilõ-2- ciclopropilfenilõ-6,7-diidro-3H-imidazo[4,5- c]piridina-5ú4Hõ-carboxilato. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 421, exceto que bromou ciclopropilõmagnés i o e dimetil dietil dicarbonato foram usados no lugar de bromoúciclobutilõmagné s io e dietil dicarbonato respectivamente. m'z úES+õ 510 úM+Hõ.
Composto 423. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú5-úoxetan-3-ilõ 4,5,6,7-tetraidro-1H- imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Uma mistura de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5- Ú4,5,6,7-tetraidro-lH-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 2.0 , 62
mgõ, oxetan-3-ona Ú18 μίδ, cianotriidroborato de sódio Ú18 mgõ, e ácido acético Ú80 μίδ em MeOH'THF úl: 1 ν' võ foi agitada por 16 horas. A reação foi, em seguida, diluída com diclorometano, lavada com solução de bicarbonato de sódio saturado seguida por salmoura. A camada orgânica foi seca úMgS04õ e concentrada. 0 resíduo foi purificado por TLC preparativa a 8% MeOH em DCM para dar 42 mg de sólido branco Ú60%õ. m' z ÚES+õ 40 6 ÚM+HÔ. ΧΗ RMN Ú400 MHz, Clorofórmio-dõ δ 7.63 úd, 2HÕ, 7.32 úd, 2HÕ, 7.27 e 7.20 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, 1HÕ, 7.02 ús, 1HÕ, 4.0 6 ús, 1HÕ, 4.74 úm, 4HÕ, 3.88-3.77 úm, 1HÕ, 3.63 úd, 1HÕ, 3.40 úd, 2HÕ, 3.08 út, 1HÕ, 2.0 7-2.62 úm, 6HÕ, 2.45 úd, 3HÕ, 2.31 e 2.22 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, 3Hõ, 2.11-1.40 úm, 4Hõ.
Composto 424. 4-úl-ú5-ú5-Ciclopropil-4,5,6,7-tetraidro-lH-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ 2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulaç0 es químicas padrão e procedimentos similaes àqueles usados para a preparação do composto 423. m'z úES+õ 480 ÚM+Hõ+. □ ΧΗ RMN Ú400 MHz, Clorofórmio-dõ δ 10,58, 7,61 úd, 2Hõ, 7,33 úd, 2Hõ, 7,23 e 7,15 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, 1HÕ, 6,0 7 ús, 1HÕ, 4,0 3 ús, 1HÕ, 3,80-3$6úm, 2HÕ, 3,64-3,40 um, 1 Hõ, 3,02 úm, 3HÕ, 2,0 1-2,64 Úm4Hõ, 2,41 úd, 3Hõ, 2,28 e 2,18 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, 3HÕ, 2,07- 1,86 úm, 2HÕ, 1,84-1,37 Úm, 2HÕ, 0,66- 0,40 Úm, 4HÕ.
Composto 425. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú5-metil-4,5,6,7-tetraidro-lH-imidazo [4,5-c] piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulaç0 es químicas padrão e procedimentos similaes àqueles usados para a preparação do composto 406, porém usando composto 2.0 no lugar do composto 406.3. m'zúES+õ 454 ÚM+Hõ+.
Composto 426. 4-úl-ú5-ú5-Etil-4,5,6,7-tetraidro-1H- imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulaç0 es químicas padrão e procedimentos similaes àqueles usados para a preparação do composto 423. m'z úES+õ 468 ÚM+Hõ+. ΧΗ RMN Ú400 MHz, Clorofórmio~dõ δ 7,63 úd, 2HÕ, 7,40-7,10 úm, 3HÕ, 7,04 ÚS, 1 Hõ, 4,0 5 ÚS, 1 Hõ, 35-3,51 úm, 3HÕ, 3,00 úm, 1HÕ, 2,0 5- 2,77 úm, 6HÕ, 2,71 úm2Hõ, 2,46 ús, 3Hõ, 2,30 e 2,21 ú2 singletos, rotâmeros de amida, 3HÕ, 2,12-1,8% úm, 1HÕ, 1,85-1,43 úm, 3HÕ, 1,22 úm, 3HÕ.
Composto 427. 4-úl-ú5-ú5-ú2-Fluoroetilõ-4,5,6,7-tetraidro-IH-imidazo[4,5-c] piridin-2-ilõ-2,4 - dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Uma mistura de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú4,5,6,7-tetraidro-lH-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 2.0 , 88 mgõ, l-bromo-2-fluoroetano Ú150 0 lõ, iodetode potássio Ú50 mgõ, e trietil amina ú 140 μΐο em DMF Ú2 mlõ foi agitada por 48 horas. A mistura de reação foi, em seguida, diluída com diclorometano e lavada com salmoura. A camada orgânica foi seca úMgS04õ e concentrada. 0 resíduo foi purificado por prep.TLC usando 8ó MeOH em DCM para dar 51 mg de um sólido branco Ú52® õ, m'z úES+õ 486 ÚM+HÕ. 1H RMN Ú400 MHz, Clorofórmio-dõ 7,63 úd, 2HÕ, 7,32 úd, 2HÕ, 7,28 e 7,20 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, 1HÕ, 7,00 ús, 1HÕ, 4, %3 úm, 1HÕ, 4,67 údt, Ji=47,6 Hz, J2=4,% Hz, 2HÕ, 3,71 úd, 2HÕ, 3,62 úd, 1HÕ, 3,03-2,71 úm, 8HÕ, 2,43 úd, 3HÕ, 2,2% e 2,1% ú2 singletos, rotâmeros de amida, 3Hõ, 2,08- 1,8% úm, 2Hõ, 1,85-1,4% úm, 2Hõ, 3,18-3,05 úm, 1HÕ.
Composto 428. 4-ú4-Fluoro-l-ú5-ú5-ú2-fluoroetilõ-4,5,6,7-tetraidro-lH- imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4- dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 427 porém usando composto 11.2 Sal de HC1 em vez do composto 1.5. m'z ÚES+® 504 ÚM+H®. *Η RMN Ú400 MHz, Clorofórmio-d® δ 7,70 úd, 2H® , 7,50 úd, 2H® , 7,28 e 7,21 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, 1H® , 7,00 ús, 1H® , , %2-4,77 Úm, 1H® , 4,66 údt, Ífc47,7 Hz, J2=4,8 Hz, 2H® , 3,68 úd, 2H® , 3,58-3,35 úm, 2H® , 3,33-3,11 úm, 1H® , 2, %5 údt, 4HS2,76 úd, 2H® , 2,42 ús, 3H® , 2,28 e 2,20 Ú2 singletos, fcâmeros de amida, 3H® , 2,16-1,72 úm, 4H® .
Composto 42%.1. 1-terc-Butil 4-etil-5-oxoazepano-l,4-dicarboxilato. A uma solução de terc-butil 4-oxopiperidina-1-carboxilato Ú20,0 g, 100 mmoles, 1.00 equivõ em éter Ú60 mLõ -30 °C, foi adicionada em gotas uma solução de BF3.Et20 ύΙβ,Ο mL, 1.30 equivõ em éter Ú20 mLõ. Após agitação por 30 min a -30 °C, uma solução de etil 2-diazoacetato Ú16,0 g, 140 mmoles, 1.30 equivõ em éter Ú20 mLõ foi adicionada em gotas à reação a -30 °C. A solução resultante foi agitada por lh a -30 °C, então aquecida para 25 °C e agitada por 2 h. A reação foi então extinta com 100 mL de 30% carbonato de potássio aquoso. A mistura resultante foi extraída com 2x250 mL de etil acetato, e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x50 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com etil acetato/éter de petróleo úl/lOõ como eluente para fornecer 10 ,0 g ú66%õ do composto do título como umóleo amarelo claro.
Composto 420 .2. Terc-Butil 4-oxoazepano-1-carboxi1&amp;o. A uma solução de 1-terc- butil 4-etil-5-oxoazepano-l,4-dicarboxilato Ú420 .1, 10 ,0 g, 66,6 mmoles, 1.00 equõ em 1,4- dioxano Ú10 0 mLõ, foi adicionado em gotas hidóxido de sódio Ú4,00 g, 100 mmoles, 1.50 equivõ em água Ú100 mLõ. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. O pH foi então ajustado para 4-5 com cloreto de hidrogénio úaq. 3 Mõ e a solução resultante foi extraída com 2x50 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2x10 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi purificado por cromatografia de sílica gel usando etil acetato'éter de petróleo úlp3õ como eluente para fornecer 11,0 g Ú77óõ do composto do título como um óleo amarelo.
Composto 42%.3. Terc-Butil 4-bromo-5-oxoazepano-l-carboxilato. A uma solução de terc-butil 4-oxoazepano-l-carboxilato Ú42 %.2, 11,0 g, 51,6 mmoles, 1.00 equivõ em clorofórmio Ú22 0 mLõ 0 °C, foi adicionada em gotas uma solução de Br2 Ú12.4 g, 77,6 mmoles, 1.50 equivõ em clorofórmio Ú110 mLõ. A mistura resultante foi agitada a temperatura ambiente durante a noite. Os sólidos formados foram coletados por filtração e tomados em 200 mL de diclorometano. Et3N Ú12,2 gõ e úBocõ20 Ú8,70 g, 40,3 mmoles, 1.00 equivõ foram adicionados à mistura a 0 °C. A solução resultante foi agitada por 3h à temperatura ambiente, e então concentrada sob pressão. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia de sílica gel usando etil acetato'éter de petróleo úlplOõ como eluente para dar 4,00 g Ú27%õ do composto do título como um óleo amarelo.
Composto 42%.4. Terc-Butil 2-Ú5-Ú4-Ú4- úcianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2,4-dimetilfenilõ-
4,5,7,8-tetraidroimidazo[4,5-d]azepina-6úlHõ-carboxilato. A uma solução de terc-butil 4-bromo-5-oxoazepano-1-carboxi1ato Ú42%. 3, 844 mg, 2,8% mmoles, 2.00 equivõ em N, N- dimeti1formamida Ú5 mLõ, foram adicionados o composto 16.4 Ú500 mg, 1,44 mmol, 1.00 equivõ, NH40H Ú606 mg, 4,33 mmoles, 3.00 equiv, 25óõ, e NH40Ac Ú500 mg, 6,40 mmoles, 4.50 equivõ. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 130 °C sob nitrogénio. Após resfriamento para temperatura ambiente, 30 mL de etil acetato foi adicionado. A mistura resultante foi lavada com 3x20 mL de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro, e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatograf ia de sílica gel com etil acetato como eluente para render 343 mg Ú43IE3 õ do cmposto do título como um sólido marrom.
Composto 4213 .5. Trif luoroacetato de 4-Ú1-Ú5-Ú1,4,5$ , 7,8-Hexaidroimidazo[4,5-d]azepin-2-ilõ-2,4- dímetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A uma solução do composto 42%.4 Ú550 mg, 0,%%0 mmol, 1.00 equivõ em DCM ú3 mLõ, foi adicionado ácido trifluoroacético úl, 3 mLõ. Após agitação a 25 °C por 4 h, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida e seca para render 400 mg ú71õõ do composto do título como um sólido marrom.
Composto 420 . 4-úl-ú5-ú6-Acetil-l,4 5,6,7,8- hexaidroimidazo[4,5-d]azepin-2-ilõ-2,4- dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 2, exceto que o composto 42%.5 foi usado no lugar do composto 2.%. m'z ÚES+0 4%6 ÚM+H0, ΧΗ RMN Ú300 MHz, CD3OD0 δ 7,65 úd, J=8,1Hz, 2H0 , 7,44-7,32 um, 4H0 , 4,%0 úm, 1H0 , 3,86 Úm, 2H0 , 3,60 úm, 1H0 , 3,20 úm, 2H0 , 3 ffib 6H0 , 2,40-2,31 úm, 6H0 , 2,20 ús, 3H0 , 2,00 -1,6O,ÚSH0 .
Composto 430. Metil 2-ú5-ú4-ú4-cianofenil0 piperidia-1-carbonil0 -2,4- dimetilfenil0 -4,5,7,8-tetraidroimida[4,5-d] azepina-6úlH0 -carboxilato. 0 composto do título <6i preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 40%, exceto que o composto 42%.5 foi usado no lugar do composto 406.3. m'z úES+0 4%6 ÚM+H0.
Composto 431. 4-Ú1-Ú5-Ú6-isopropil-1,4,5,6,7,8- hexaidroimidazo[4,5-d]azepin-2-ilõ-2,4- dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A uma solução de trifluoroacetato de 4-úl-úS-úl,4,5,6,7,8- hexaidroimidazo[4,5-d]azepin-2-ilõ-2,4- dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila Ú420 .5,80,0 mg, 0,140 mmol, 1.00 equivõ em N,N- dimetilformamida Ú5 mLõ, foram adicionados 2-iodopropano Ú270 mg, 1,50 mmol, 0 .00 equivõ e Dl EA Ú205 mg, 1,50 mmol, 0 .00 equivõ. A èoção resultante foi agitada durante a noite a 80 °C em um banho de óleo. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi diluída com 50 mL de etil acetato, lavada com 3x2 0 mL de salmoura, seca úNa2S04 õ e concentrada. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo úlplOõ como eluente. 0 produto Ú50 mgõ foi adicionalmente purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiç0 es úl#-Pre-HBC-OOlúSHIMADZUõõp Coluna, Xbridge Prep C18, 5um, l%*150mm; fase móvel, água com 0,030 N|H20 e CH3CN Ú380 C|EN até 51.00 em 8 min, até 100,00 em 2 min, até 38,00 emminõ;
Detector, Waters 248% 254&amp;220nm. As fraç0 es contend composto puro foram combinadas e liofilizadas para render 15.0 mg Ú210 õ do composto do título como um sõlidobranco. m'z ÚES+Õ 4%6 ÚM+Hõf. ΧΗ RMN Ú400 MHz, CD30Dõ δ 7,6% úd, J=8,0 Hz, 2HÕ, 7,4% úm, 2HÕ, 7,33-7,23 úm, 2HÕ, 4,86 úm, IHõ, 3,65 úm, IHõ, 3,30 úm, 1HÕ, 3,15 úm, 1HÕ, 2, %% úm, 6Hõ, 2,80 úm, 4HÕ, 2,45 ús, 3HÕ, 2,40 e 2,2% Ú2 singletos, rotâmeros de amida, 3Hõ, 2,10 úm, IHõ, 1,70 úm, 3Hõ, 1,15 Úd, J=6,8 Hz, 6HÕ.
Composto 432. 4-úl-Ú5-Ú5-Etil-4,5,6,7- tetraid.ro- 1H- imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulaçS es químicas padrão e procedimentos similaes àqueles usados para a preparação do composto 431, exceto que o composto 2 . 0 foi usado no lugar do composto 30 .5. m/z ÚES+Õ 482 ÚM+Hõ+.
Composto 433. 4-úl-Ú4-Ciclopropil-5-Ú5-isopropil-4,5,6,7- tetraidro-3H- imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparados usando manipulaç0 es químicaspadrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 431, exceto que o composto 142.2 e terc-butil 3-bromo-4-oxopiperidina-1-carboxilato foram usados no lugar do composto 152.3 e terc-butil 4-etil 5-oxoazepano-1,4-dicarboxilato Ú420 . 2õ respectivamente. m'z úES+õ 5Θ ÚM+Hõ+.
Compostos 434 e 435. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-Ú4,5,7,8- tetraidro-lH-oxepino[4,5-d]imidazol-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila e 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-Ú4,6,7,8-tetraidro-lH-oxepino[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Os compostos do título foram preparados como uma mistura separável usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 42%, exceto que oxepan-4-ona foi usado no lugar do composto terc-butil 4 -oxoa z epano-1-carboxilato Ú42%. 20 . 434μ m' z úES+0 455 ÚM+ÉI0 4 3 5μ m'z ÚES+0 455 ÚM+H0.
Composto 436. 4-úl-ú5-ú6-ú2-Fluoroetil0 -1,4,5,6,7,8 hexaidroimidazo[4,5-d]azepin-2-il0 -2,4- dimetilbenzoil0 piperidin-4-il0 benzonitrila. 0 compòo do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 427, exceto que o composto 42%.5 foi usado no lugar do composto 2. %. m'z ÚES+0 500 ÚM+H0. ΧΗ RMN Ú4 00 MHz, CD3OD0 δ 7.64 úd, J=8.1 Hz, 2H0 , 7.43 úm, 2H0 , 7.28- 7.20 úm, 2H0 , 4.86 úm, 1H0 , 4.60 údt, ^7.7 Hz, J2=4.8
Hz, 2H0 , 3.60 úm, 1ΗΗ , 3.20 úm, 1H0 , 3.00 úm, 8HÍ.80 úm, 4H0 , 2.40 ús, 3H0 , 2.35 e 2.24 ú2 singletos, rotâmes de amida, 3Hõ, 1,13 13 úm, !Hõ, 1.70 úm, 3Hõ.
Composto 437. 4-Ú1-Ú4-Ciclobutil-3-Ú6-metil-1,4,5,6,7,8- hexaidroimidazo[4,5-d]azepin-2-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulaçE es químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 418, exceto que o composto 4213 .3 foi usado no lugar do composto terc-butil 3-bromo-4-oxopiperidina-1-carboxilato. m'z úES+õ 512 ÚM+Hõ+.
Composto 438. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-metil-5-ú6-metil- 1,4,5,6,7,8- hexaidroimidazo[4,5-d]azepin-2-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto do título foi preparado usando manipulaçH es químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 407, exceto que o composto 4213 .3 foi usado no lugar do composto terc-butil 3-bromo-4-oxopiperidina-1-carboxilato. m'z úES+õ 526 úM+Hõ+.
Composto 430 . 4-úl-ú4-Ciclobutil-3-ú6-metil-l,4,5,$7,8-hexaidroimidazo[4,5-d]azepin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 417, exceto que o composto 4 20 .3 foi usado no lugar do composto terc-butil 3-bromo-4-oxopiperidina-l-carboxilato. m' z úES+õ 40 4 ÚM +Hõ+.
Composto 440. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-metil-5-ú6-metil- 1,4,5,6,7,8- hexaidroimidazo[4.5-d]azepin-2- ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 406, exceto que o composto 420 .3 foi usado no lugar do composto terc-butil 3-bromo-4-oxopiperidina-l-carboxilato. m'z úES+õ 508 úM+Hõ+.
Composto 441. úRõ-l-ú2-cloro-5-ú4-ú4-cianofenilõ-4- fluoropiperidina-l-carbonilõ-4-etilfenilõ-3-úútetraidrofuran-2-ilõmetilõureia. 0 composto do título foi preparado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 67 e usando o composto 178.2 no lugar do composto 48.1. m'z úES+õ 513 ÚM+Hõ+.
Composto 442. ÚRÕ-1-Ú2-Cloro-4-etil- 5-Ú4-fluoro-4-Ú4- fluorofenilõpiperidina-l-carbonilõfenilõ-3- úútetraidrofuran-2-ilõmetilõureia. 0 composto do título foi preparado usando reagentes prontamente disponíveis e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 67 e usando o composto 178.2 no lugar do composto 48.1. m'z ÚES+Õ 506 ÚM+HÕ+.
Composto 443.1. Metil 4-ciclobutil-3-nitrobenzoato. A uma solução de metil 4-ciclobutilbenzoato úcomposto 168.1, 3,80 g, 20,0 mmoles, 1.00 equivõ em anidrido acético Ú12 mLõ 0 °C, foi adicionado em gotas HN03 fumado Ú5 mL, %7óõ. A mistura resultante foi agitada a 30 °C em um banho de óleo. Após 2 h, 30 mL de água foram cuidadosamente adicionados e a mistura foi extraída com 2x30 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaHC03 aquoso saturado únotap evolução de gãsõ, secas sobre sulfato de sódio anidro, e concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo úlp25õ como eluente para fornecer 3,00 g Ú640 õ do omposto do título como um óleo amarelo claro.
Composto 443.2. Metil 3-amino-4-ciclobutilbenzoato. Um frasco contendo uma solução de metil 4-ciclobutil-3-nitrobenzoato úcomposto 443.1, 2,50 g, 10.6 mmoles, 1.00 equivõ em metanol Ú30 mLõ foi purgado com nitrogénio. Paládio em carbono Ú10I3 , 6013 de água, 1,2 gõ foi ádionado e o frasco foi cuidadosamente purgado adicionalmente com nitrogénio. A atmosfera foi então alterada para hidrogénio e a mistura foi agitada durante a noite a 20 °C. Após purgar o sistema com nitrogénio, os sólidos foram, então, removidos por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado usando cromatograf ia de coluna com sílica gel com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ5ό como eluente para render 1,60 g Ú730 õ do composto do título como um sólido banco.
Composto 443.3. Ácido 3-Amino-4-ciclobutilbenzóico. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de metil 3-amino-4-ciclobutilbenzoato úl,00 g, 4,87 mmoles, 1.00 equivõ e hidróxido de sódio úcomposto 443.2, 800 mg, 20,0 mmoles, 4.00 equivõ em uma mistura de solvente de metanol e H20 Ú20'10 mLõ. A solução resultante foi agitada por 8 h a 20 °C. Após resfriamento para temperatura ambiente, o solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida. O pH da camada aquosa remanescente foi ajustado para 4-5 com HC1 úaquoso, lMõ. 0 precipitado resultante foi então coletado por filtração e seco para fornecer 500 mg ú54%õ do composto do título como um sólido branco.
Composto 443.4. 4-Ú1-Ú3-Amino-4-ciclobutilbenzoilõ-4 -fluoropiperidin-4- ilõbenzonitrila. O composto do título foi preparado usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 42.2, porém usando o composto 443.3 no lugar do composto 42.1.
Composto 443. úRõ-l-ú5-ú4-ú4-Cianofenilõ-4- fluoropiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutilfenilõ-3-útetraidrofurano-3-ilõureia. 0 composto do título foi preparado usando manipulaç0 es químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 64, usando o composto 443.4 e úRõ-tetraidrofurano- 3-amina no lugar do composto 42.2 e úRõ-útetraidrofuran-2-ilõmetanamina respectivamente. m'z úES+õ 40 1 úM+HÕ.
Composto 444. ÚSÕ-1-Ú5-Ú4-Ú4-Cianofenilõ-4- fluoropiperidina-l-carbonilõ-2-ciclobutilfenilõ-3-útetraidrofuran-3-ilõureia. 0 composto do título foi preparado usando manipulaç0 es químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 443, usando úSõ-tetraidrofurano-3-amina no lugar de úRõ-tetraidrofuran-3-amina. m'z úES+õ 40 1 úM+HÕ. 1H RMN Ú300 MHz, CD3ODÕp δ 7,83-7,77 úm, 3HÕ, 7,60 úd, J= 8,4 Hz, 2Hõ, 7,38 úd, J=8,1 Hz, IHõ, 7,22 údd, J=7,8 Hz, J=l, 5 Hz, 1HÕ, 4,80-4,62 úm, IHõ, 4,30 -4,31 úm, IHÕ, 4,02-3,8 úm, 4Hõ, 3,72-3,40 úm, 3Hõ, ~3,3 úlH parcialmente obscmecido por pico de solvente de metanolõ, 2,50-2,37 úm, 2Hõ, 2,37-1,78 úm, 10HÕ.
Composto 445.1. Metil 4-ciclobutil-2-metil-5 -Ú3 -oxopentanoilõbenzoato. A uma solução de metil 5-acetil-4-ciclobutil-2-metilbenzoato úcomposto 238.1, 500 mg, 2,03 mmoles, 1.00 equivõ em tetraidrofurano Ú15 mLõ a 0 °C, foi adicionada em gotas uma solução de LiHMDS Ú680 mg, 4,06 mmoles, 2.00 equivõ em tetraidrofurano Ú5 mLõ. Após 30 min de agitação a 0 °C, uma solução de cloreto de propanoil Ú280 mg, 3,03 mmoles, 1.50 equivS em tetraidrofurao Ú5 mL0 foi adicionada em gotas. A mistura resultante foi agitada por 3 h a 15 °C, e então concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com 40 mL de etil acetato, lavado com salmoura Ú3x40 mLõ, seco úNa2S04õ, e concentrado sob pressão reduzida. Isto resultou em 500 mg úbrutoõ do composto do título como um óleo marrom.
Composto 445.2. Metil 4-ciclobutil-5-ú5-etil-lH-pirazol-3-ilõ-2-metilbenzoato. A uma solução de metil 4-ciclobutil-2-metil-5-Ú3-oxopentanoilõbenzoato úcomposto 445.1, 300 mg, 0,0 0 0 mmol, 1.00 equivõ em metanol Ú15 mLõ, foi adionado NH2NH2 ·H20. A solução resultante foi agitada por 1.5 h a 80 °C em um banho de óleo, e então concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com 100 mL de etil acetato, então lavado com 3x100 mL de salmoura, seco sobre sulfato de sódio anidro e concentrado sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatografia de coluna de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo úlp5õ como eluente para render 188 mg Ú640 õ do composto do títilo como um óleo amarelo.
Composto 445.3. Ácido 4-Ciclobutil-5-ú5-etil-lH-pirazol-3-ilõ-2-metilbenzoico. A uma solução de metil 4-ciclobutil-5-ú5-etil-lH-pirazol-3-ilõ-2-metilbenzoato úcomposto 445.2, 188 mg, 0,630 mmol, 1.00 equivõ em metanol ú6 mLõ, foi adicionado hidróxido de sódio aquoso Ú76,0 mg, 1,0 0mmol, 3.00 equiv em 3 mL de ãguaõ. A solução resultante foi agitada por 2 h a 70 °C em um banho de óleo. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi diluído com 20 mL de H20. 0 pH da mistura foi ajustado para ~4 com HC1 aquoso Ú2MÕ. A mistura foi então extraída com 3x20 mL de etil acetato. As camadas orgânicas combinadas foram lavada com 3x2 0 mL de salmoura, secas úNa2S04 õ, e concentradas sob pressão reduzida. Isto resultou em 0,180 g úbrutoõ do composto do título como um óleo amarelo.
Composto 445. 4-úl-Ú4-Ciclobutil-5-ú5-etil-lH-pirazol-3-ilõ-2- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. A uma solução de ácido 4-ciclobutil-5-ú5-etil-lH-pirazol-3-ilõ-2-metilbensóico úcomposto 445.3, 130 mg, 0,460 mmol, 1.00 equivõ em N,N-dimetilformamida Ú5 mLõ, foram adicionados cloridrato de 4-úPiperidin-4-ilõbenzonitrila úl.5, 102 mg, 0,460 mmol, 1.00 equivõ, EDCI Ú176 mg, 0,0 2 0 mmol, 2.00 equivõ, e 4-dimetilaminopiridina Ú112 mg, 0,0 20 mmcb, 2.00 equivõ. A solução resultante foi agitada por 2h a 30 °C, e
em seguida, diluída com 40 mL de etil acetato. A mistura foi lavada com 3x40 mL de salmoura, seca úNa2S04õ, e concentrada sob pressão reduzida. 0 produto bruto foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condições úl#-Pre-HPLC-OOlúSHIMADZUõõp Coiuna, SunFire Prep C18, l%±150rnm 5 um; fase móvel, água com 0,050 TFA e C|CN
Ú5%,O0 C|CN até 73.00 em 6 min, até 100,00 em 7 min, até 5%,00 em 1 minõ; Detector, Waters 248% 254&amp;220nm. A fraç0 es contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para render 150 mg Ú720 õ do composto d título como um sólido branco. m/z úES+õ 453 úM+Hõ+.
Composto 446.1. Metil 4-ciclobutil-2-metil-5- úútrimetilsililõetinilõbenzoato. Uma mistura de metil 4-ciclobutil-5-iodo-2-metilbenzoato úcomposto 152.3, 1,32 g, 4 mmolesõ, trimetilsililacetileno Ú663 μΐ, 4,8 mmolesõ, PdúPPh3õ2Cl2 Ú85 mg, 0,12 mmolõ e iodeto de cobre úCul, 46 mg, 0,24 mmolõ em THF ú8 mlõ e trietilamina ú2 mlõ foi desgaseificado e então aquecido para 80 °C por 1.5 hora sob nitrogénio. Após resfriamento para temperatura ambiente, a reação foi filtrada através de celite e concentrada. 0 resíduo foi dissolvido em etil acetato úEtOAcõ, lavado com salmoura, seco sobre MgS04 e concentrado. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash úSi02; 30 EtOAc em Hexanoõ para dar 1,17 g ú%7 0 õ do composto do título como m líquido. ΧΗ RMN Ú400 MHz, CDC13Õ δ 8,01 ÚS, 1HÕ, 7,15 ÚS, 1HÕ, 4,01-3,75 úm, 4HÕ, 2,63 ús, 3HÕ, 2,54-2,31 úm, 2HÕ, 2,27- 2,12 úm, 2HÕ, 2,12-1, %8 úm, 1 Hõ, 1, %4-l, 80 úm, 1 Hõ, 0,28 ús, %Hõ.
Composto 446.2. Metil 4-ciclobutil-5-etinil-2- metilbenzoato. A uma solução do composto 446.1 úl,17 g, 3,13 mmolesS em THF ú6 ml0 a -20 °C, foi adicionado 4. Jnl de TBAF úl.O M em THFI3 . A mistura foi agitada por 30 mnutos nesta temperatura e foi, em seguida, diluída com água Ú15 mlõ e extraída com EtOAc duas vezes. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas úMgS04õ, e concentradas. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash úSi02; 20 EtOAc em Hexanoõ para dar 816 mg úE 1 13 õ do composto do título como um líquido, m' z úES-õ 227 úM-Hõ+. XH RMN Ú400 MHz, CDC13Õ δ 8,05 ús, 1HÕ, 7,20 ÚS, 1HÕ, 4,02- 3,80 úm, 4HÕ, 3,25 ús, 1HÕ, 2,64 ús, 3HÕ, 2,52-2,38 úm, 2HÕ, 2,20 - 2,13 úm, 2HÕ, 2,12- 1,13 8 úm, 1HÕ, 1,0 2T70 úm, 1HÕ.
Composto 446.3. Metil 4-ciclobutil-2-metil-5-Ú2H-1,2,3-triazol-4-ilõbenzoato. Metil 4-ciclobutil-5-etinil-2-metilbenzoato úcomposto 446.2, 180 mg, 0,60 mmolõ <6i dissolvido em TMSN3 úl mlõ em tubo vedado. A reação foi aquecida para 170 °C por 24 horas atrás de um escudo de proteção, em seguida, resfriada até 0 °C. EtOAc Ú10 mlõ e água Ú20 mlõ foram adicionados. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por 1 hr. A fase orgânica foi então lavada com salmoura, seca úMgS04õ, e concentrada. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash úSi02; 0-3 0% EtOAc em Hexanoõ para dar 13 2 mg Ú40 %õ do compõe do título como um líquido. m'z úES+õ Ú272Õ ÚM+Hõ+. 1H RMN Ú400 MHz, CDCI3Õ δ 8,04 ÚS, 1HÕ, 7,83 ús, 1HÕ, 7,35 ús, 1HÕ, 3,0 0 ÚS, 4HÕ, 2,60 ÚS, 3HÕ, 2,27- 2,15 úm, 2HÕ, 231 2,03 úm, 2HÕ, 1,E 0 -1,0 0 úm, 1HÕ, 1,86-1,76 úm, 1HÕ.
Composto 446.4. Acido 4-Ciclobutil-2-metil-5-ú2H-l,2,3-triazol-4-ilõbenzóico. Uma solução de metil 4-ciclobutil-2-metil-5-ú2H-l,2,3-triazol-4-ilõbenzoato úcomposto 446.3, %2 mg, 0,34 Mõ em 2N MaOH úl,5 mlõ e metanol úMeOHõ Ú4 mlõ foi aquecida a 50 °C por 16 horas. Após resfriamento para temperatura ambiente, o metanol foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi neutralized com 2N HC1 para pH 3-4 e extraído com EtOAc. A fase orgânica foi então lavada com salmoura, seca úMgS04õ, e concentrada para render 83 mg de um sólido branco que foi usado sem purificação adicional, m'z ÚES-Õ 256 ÚM-Hõ+.
Composto 44b. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-metil-5-ú2H-l,2,3-triazol-4-ilõbenzoilõ piperidin-4-ilõbenzonitrila. Uma mistura do ácido acima úcomposto 446.4, 44 mg, 0,17 mmolõ, composto 1.5 Ú42 mg, 0,1% Mõ, EDCI Ú4% mg, 0,26 mmolõ, HOBt Ú33 mg, 0,1% mmolõ e DIEA Ú120 μΐ, 0,68 mmolõ em DMF úl mLõ foi agitada à temperatura ambiente por 2.5 horas. A reação foi, em seguida, diluída com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre MgS04 e concentrada. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash úSi02; 8 £3 Metanol em diclorometanoõ e para render 46 mg em espuma do composto do título Ú70ÓÕ. m'z úES+õ 425 ÚM+Hõ+, ΧΗ RMN Ú400 MHz, CDC13Õ δ 12,20 ús, 1HÕ, 7,70 úd, 1HÕ, 7,66-7,4% um, 2HÕ, 7,44-7,21 um, 4HÕ, 5,01 Úd, 1HÕ, 3,83 úp, 1HÕ, 3,72 úd, 1HÕ, 3,27- 3,06 úm, 1HÕ, 2, %1 úm, 2HÕ, 2,46 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, 3Hõ, 2,27-1,8% úm, 3Hõ, 1,86-1,43 úm, 7HÕ.
Composto 447. 4-úl-ú4-Ciclobutil-2-metil-5-ú2H-l,2,3-triazol-4-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 446 e usando o composto 11.2 sal de HC1 no lugar do composto 1.5. m'z ÚES+õ Ú444Õ ÚM+Hõ+. ^ RMN Ú400 MHz, CDC13Õ δ 12,00 ús, 1HÕ, 7,77 ÚS, 1HÕ, 7,67 úm, 2HÕ, 7,4% úd, 2HÕ, 7,37 úm, 2HÕ, 4, %2 úd, 1HÕ, 3,85 út, 1HÕ, 3,61 úm, 1HÕ, 3,52 úm, IHõ, 3,25 úm, 1HÕ, 2,45 Ú2 singletos, rotâmeros de amida, 3Hõ, 2,28-1,8% úm, 8HÕ, 1,85 úm, 2HÕ.
Composto 448.1. Metil 5-Ú6,7-diidro-4H-pirano[4,3-d]tiazol-2-ilõ-2,4- dimetilbenzoato. A uma solução de metil 5-carbamotioil-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 130.1, 500 mg, 2,24 mmoles 1.00 equivõ em etanol Ú5 mLõ, foi adicionado bicarbonato de sE3 dio ú3%6 mg, 4,71 mmoles, 1.00 eqmvõ e 3- bromodiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona úcomposto 1.10.1, 186 mg, 1.04 mmol, 1.00 equivõ. A solução resultante foi agitada durante a noite a 80 °C sob nitrogénio. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi tomado em 10 mL de água e etil acetato. A fase aquosa foi extraída com 2x20 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram secas úMgS04õ, e concentradas sob pressão reduzida para render 400 mg ú56%õ do composto do título como um sólido amarelo.
Composto 448.2. Ácido 5-Ú6,7-Diidro-4H-pirano[4,3-d] tiazol-2-Í1Õ-2,4- dimetilbenzóico. Uma solução do composto 448.1 Ú304 mg, 1,00 mmolõ e hidróxido de sódio úaquoso, 280 mg, 7,00 mmoles em 3 mL de águaõ em metanol Ú5 mLõ foi agitada por lh a 56 °C em um banho de óleo. Após resfriamento para temperatura ambiente, o metanol foi removido sob pressão reduzida. 0 pH da camada aquosa remanescente foi ajustado para 3-4 com cloreto de hidrogénio úaq., 2Mõ. O precipitado resultante foi coletado por filtração e seco em um forno sob pressão reduzida para render 230 mg Ú70 %õ do compofeo do título como um sólido amarelo.
Composto 448. 4-Ú1-Ú5-Ú6,7-diidro-4H-pirano[4,3-d]tiazol-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Uma solução do composto 448.2 Ú100 mg, 0,35 mmol, 1.00 equivõ em N, N-dimetilformamida Ú3 mLõ, Dl EA Ú140 mg, 1,08 mmol, 3.00 equivõ, e HBTU úl%7 mg, 0,52 mmol, 1.50 equivõ foi agitada por 0,5 h a 25 °C. Uma solução de cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 0 2,2 mg 0,41 mmol, 1.10 equivõ em DlEA úl mLõ foi adicionada em gotas. A solução resultante foi agitada por 0,5 h a 25 °C, em seguida, extinta com 10 mL de água. A fase aquosa foi extraída com 2x20 mL de etil acetato e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 1x20 mL de água, 1x20 mL de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro e
concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado usando cromatograf ia de coluna de sílica gel com etil acetato'éter de petr0 leo úlplõ como eluente. 0 prodto foi adicionalmente purificado por Prep-HPLC usando as seguintes condições úl#-Pre-HPLC-OOlúSHIMADZU0 ESI μ Coluna, SumFe Prep C18, l%*150mm 5ump fase móvel, água com 0,050 TFA eCH3CN Ú250 C|EN até 800 em 7 min, até 1000 em 1 min, até 250 em 1 min0 ; Detector, Waters 248% 254&amp;220nm. As frações contendo composto puro foram combinadas e liofilizadas para render 134,% mg Ú850 0 do composto do título como umólido branco, m'z úES+0 458 ÚM+H0.
Composto 44%.1 e Composto 400.1. 3,3-Dimetildiidro-2H- piran-4ú3H0 -ona úcomposto 44%.10 e 3-metildiidro-2piran-4Ú3H0 -ona úcomposto 400.10 . A uma solução de LDA Ú0 M em heptanos'THF'etilbenzeno0 Ú28 mL, 55 mmoles0 , foi adicionado diidro-2H-piran-4ú3H0 -ona Ú4,612 g, 46 moles0 em THF Ú50 mL0 em gotas sob argônio a -78 °C. A mifeura foi agitada a -78 °C por 5 minutos, então iodometano Ú14 mL, 225 mmoles0 em THF Ú500 ml0 foi adicionado. A mista resultante foi deixada aquecer para 0 °C e agitada por 2 horas a 0 °C. A reação foi deixada aquecer para temperatura ambiente por 5 min, em seguida, resfriada de volta para 0 °C e extinta com cloreto de amónio saturado Ú30 mLõ e a mistura foi extraída com éter ú2 x 50 mLõ. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura Ú50 mLõ, secas úMgS04õ, filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel Ú15% etil acetato em hexanosõ para render 3,3-dimetildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona úcomposto 44%.lõ como um óleo ú6%4 mg, 13%õ e 3-metildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona úcomposto 400.lõ como um óleo Ú860 mg, 160 õ.
Composto 44%.2. 5-Bromo-3,3-dimetildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona. Uma solução de diisopropilamina de lítio ú2.0 M em heptanos'THF'etilbenzenoõ ú2,5 ml, 5,1 mmolesõ diluída com THF úlO mLõ sob argônio foi resfriada para -78 °C. Clorotrimetilsilano Ú2,5 mL, 1%, 5 mmolesõ foi adicionado seguido por 3,3-dimetildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona úcomposto 44%. 1, 500 mg, 3, % mmolesõ em THF ú5 mLõ e trietilamina ú8,0 mL, 57 mmolesõ. A mistura resultante foi agitada a -78 °C por 5 minutos e, em seguida, extinta com NaHC03 saturado Ú20 mLõ. A mistura foi extraída com éter Ú30 mLõ e os orgânicos foram lavados com 1M ácido cítrico Ú50 mLõ, secos úK2C03õ, filtrados e concentrados a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em THF ú5 mLõ e resfriado para 0 °C. N-bromossuccinimida ύβ%4 mg, 3, % mmolesõ foi adicionado e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas e, em seguida, extinta com saturated NaHC03 Ú10 mLõ. A mistura foi extraída com éter ú2 x 20 mLõ e as camadas orgânicas foram lavadas com salmoura, secas úMgS04õ, filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel Ú80 etil acetato emhexanoõ para render o composto do título como um óleo Ú150 mg, 18óõ.
Composto 44%.3. Metil 5-Ú7,7-dimetil-3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2 -ilõ-2,4-dimetilbenzoato.
Uma mistura de 5-bromo-3,3-dimetildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona úcomposto 44%.2, 150 mg, 0,72 mmolõ, metil cloridrato de 5-carbamimidoil-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 2.5, 135 mg, 0,55 mmolõ, e carbonato de potássio Ú228 mg, 1,65 mmolõ em acetonitrila ÚS mLõ foi aquecida a 100 °C por 48 horas. A mistura foi concentrada a vácuo e o resíduo foi dissolvido em etil acetato Ú10 mL0 e lavado com salmoura Ú20 ii0 , seco úMgSO40 , filtrado e concentrado a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel Ú5O0 etl acetato em hexanosõ para render o composto do título como um sólido branco Ú27 mg, 150 õ.
Composto 44%. 4. Ácido 5-Ú7,7-Dimetil-3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõ-2,4-dimetilbenzóico. A metil 5-Ú7,7-dimetil-3,4,6,7-tetraidropi rano[3,4- d]imidazol-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 44%.3, 27 mg, 0,086 mmolõ em THF ú3 mLõ, foi adicionado 2M hidróxido de lítio Ú430 μΐ, 0,86 mmolõ e a mistura foi aquecida a 50 °C por 16 horas. Os solventes voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo resultante foi neutralizado com 2M HC1 para pH = 3 e concentrado a vácuo para dar um sólido branco e usado na reação seguinte sem purificação adicional, m'z úES-ó 2%% úM-Hõ".
Composto 44%. 4-Ú1-Ú5-Ú7,7-Dimetil-3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõ-2,4- dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Ácido 5-Ú7,7-Dimetil-3,4,6,7-tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõ-2,4-dimetilbenzóico bruto úcomposto 44%.4, 0,086 mmolõ foi dissolvido em DMF úl mLõ. Cloridrato de 4-úPiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 1% mg, 0,086 mmolõ, hexafluorofosfato de 2-úlH-benzo[d][1,2,3]triazol-l-ilõ-1,1,3,3-tetrametilurônio úVõ úHBTUõ Ú65 mg, 0,17 mmolõ e DIEA Ú45 μΐ, 0,26 mmolõ foram adicionados e a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 16 horas. A mistura foi, em seguida, diluída com etil acetato Ú10 mLõ e lavada com salmoura Ú10 mLõ, seca úMgS04õ, filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel úetil acetatoõ para obter o composto do título como uma espuma sólida Ú15 mg, 300 õ. m'z úES+õ 46% ÚM+HÕ.
Composto 450. 4-úl-ú2,4-Dimetil-5-ú7-metil-3,4,6,7- tetraidropirano[3, 4-d]imidazol-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulaçS es químicas padrão e procedimentos similaes àqueles usados para a preparação do composto 440 , sceto que 3-metildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona úcomposto 400.lõ foi usado no lugar de 3,3-dimetildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona úcomposto 440 .lõ. m'z úES+õ 455 ÚM+HÕ.
Composto 451.1 e Composto 451.2. Terc-butil 3-metil-4-oxopiperidina-l-carboxilato e terc-butil 3,3-dimetil-4-oxopiperidina-l-carboxilato. Hidreto de sódio Ú60% em óleo mineralõ úl, 27 g, 31,8 mmolesõ, foi suspended em THF Ú80 mLõ sob uma atmosfera de nitrogénio. Terc-butil 4-oxopiperidina-l-carboxilato Ú6,0 g, 30 mmolesõ foi adicionado em porç0 es à temperatura ambiente. A mifeura foi agitada à temperatura ambiente por 1.5 hora e, então, metil iodeto Ú3,8 mL, 6,1 mmolesõ foi adicionado. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e, em seguida, resfriada para 0 °C e cuidadosamente extinta com água Ú20 mLõ. A mistura foi extraída com etil acetato Ú100 mLõ, seca úNa2S04õ, filtrada e concentrada a vácuo. 0 produto bruto foi purificado por cromatografia de sílica gel úlO:1 hexano'etil acetatoõ para obter composto 451.1 como um óleo claro úl, 7g, 27%õ e composto 451.2 como um sólido cristalino úB 63 mg, 14%õ.
Composto 451.3. Terc-butil 5-bromo-3,3-dimetil-4- oxopiperidina-l-carboxilato. Terc-butil 3,3-dimetil-4- oxopiperidina-l-carboxilato Ú0,§ 63 g, 4,24 mmolesõ foi dissolvido em THF úlO mLõ e, então, trimbrometo de feniltrimetilamônio úPTATõ úl,50 g, 4,24 mmolesõ fd> adicionado. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas, então, água Ú20 mLõ foi adicionada e a mistura foi extraída com etil acetato Ú100 mLõ. As camadas orgânicas foram secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas a vácuo. 0 produto bruto foi purificado por cromatografia de sílica gel ύΙΟμΙ hexano'etil acetatoõ para obter o composto 451.3 como um sólido cristalino branco úO,%4g, 73óõ.
Composto 451. 4-ú4-ú5-ú5-Acetil-7,7-dimetil-4,5,6,7- tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõciclohexilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados por a preparação do composto 2, exceto que terc-butil 5-bromo-3,3-dimetil-4-oxopiperidina-l-carboxilato úcomposto 451.3õ foi usado no lugar de terc-butil 3-bromo-4-oxopiperidina-l-carboxilato. m'z úES+õ 510 úM+Hõ+.
Composto 452. 4-úl-ú5-ú5-ISOpropil-7,7-dimetil-4,5,6,7-tetraidro-3H- imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 4-Ú1-Ú5-Ú7,7-Dimetil-4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úO,12 g, 0,26 mmolõ úintermediário preparado na síntese do composto 451õ, DMF ú4 mLõ, ácido acético Ú6% pL, 1,21 mmolõ, triacetoxiboroidreto de sódio Ú0,11 g, 0,52 mmolõ e acetona Ú0,50 mL, 6,8 mmolesõ foram misturados e agitados à temperatura ambiente por 2 horas. A reação foi cuidadosamente extinta com água ulO mLõ e a mistura foi extraída com etil acetato Ú60 mLõ e as camadas orgânicas foram secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas a vácuo. O produto bruto foi purificado por TLC preparativa úDCM'100 MeOHõ seguda por uma segunda TLC preparativa úetil acetato'5 0 MeOHõ paa obter o composto do título como um pó branco Ú4,1 mg, 8,10 õ m'z ÚES+Õ 510 ÚM+Hõ+.
Composto 454.1. Fenil 4-metóxi-2-metilpiridina-lú2Hõ-carboxilato. Um frasco de fundo redeondo de 4 gargalos e 3 litros foi purgado e mantido com uma atmosfera de nitrogénio e uma solução de 4-metoxipiridina Ú30,0 g, 275 mmoles, 1.00 equivõ em tetraidrofurano úl.2 Lõ foi adicionada. A mistura foi resfriada para -40 °C e fenil cloroformiato Ú45,0 g, 287 mmoles, 1.05 equivõ foi adicionado em gotas. A solução resultante foi agitada por 1 h a -40 °C, então, brometo de metilmagnésio Ú3M, 110 mL, 1.20 equivõ foi adicionado à mistura de reação enquanto mantendo a temperatura a -40 °C. A solução resultante foi aquecida lentamente para 5-10 °C e agitada por 2 h, então, cuidadosamente extinta com água gelada Ú100 mLõ. A mistura resultante foi extraída com etil acetato Ú2 x 1 Lõ e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura úl x 300 mLõ, secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas a vácuo para render o composto do título como um óleo marrom claro Ú71,Q g, Á teóricoõ.
Composto 454.2. Terc-butil 2-Metil-4-oxo-3,4-diidropiridina-lú2Hõ-carboxilato. Um frasco de fundo redondo de quatro gargalos e 3 litros foi purgado e mantido com uma atmosfera de nitrogénio e uma solução de fenil 4-metóxi-2-metilpiridina-lú2Hõ-carboxilato Ú454.1, 70,0 g, 285 mmoles, 1.00 equivõ em tetraidrofurano úl.2 Lõ foi adicionada. A solução foi resfriada para -78 °C, então, terc-butóxido de potássio Ú128 g, 1,14 mol, 4.00 equivõ foi adicionado em porçEl es. A mistura resultante foi agtada a 10-15 °C por 20 h, então, concentrada em vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em EtOAc úl, 5 Lõ, então, cuidadosamente extinto com água gelada Ú200 mLõ. As camadas foram separadas e a aquosa foi extraída com etil acetato adicional Ú100 mLõ. As orgânicas combinadas foram lavadas com hidróxido de sódio aquoso úl .5 M, 3 x 100 mLõ, ácido clorídrico aquoso úl M, 2 x 100 mLõ, e salmoura Ú200 mLõ, secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel úetil acetato/éter de petróleo, 1:200-1:200 como o eluente para obter o composto do título como um óleo amarelo claro ú.31.0 g, 51óõ.
Composto 453.1 e Composto 454.3. Terc-butil 6-Metil-4-úútrimetilsililõoxió-5,6-diidropiridina-lú2Hõ-carboxilato Ú453.1Õ e terc-butil 2-metil-4-úútrimetilsililõoxiõ-5,6-diidropiridina-lú2Hõ-carboxilato Ú454.3Õ. Um frasco de fundo redondo de 3 gargalos e 500 mL foi purgado e mantido com uma atmosfera de nitrogénio e uma solução de terc-butil 2-metil-4-oxo-3,4-diidropiridina-lú2Hõ-carboxilato úcomposto 454.2, 10,5 g, 4%,5 mmoles, 1.00 equivõ em tetraidrofurano Ú300 mLõ foi adicionado. A solução foi resfriada para -78 °C e L-Selectrida úl M em THF, 60 mL, 1.20 equivõ foi adicionado em gotas. A solução resultante foi agitada por 2 h a -78 °C, então, clorotrimetilsilano Ú6,%6 g, 64,1 mmoles, 1.30 equivõ foi adicionado em gotas com agitação. A solução resultante foi agitada por 16 h a 10-15 °C, e então concentrada a vácuo. 0 resíduo foi diluído com n-hexano Ú500 mLõ e os sólidos foram filtrados. 0 filtrado foi concentrado a vácuo e o resíduo purificado por cromatografia de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ100-1μ20ο como o eluente para obter uma mistura dos compostos do título como um sólido amarelo claro Ú10,0 g, 710 õ.
Composto 453.2 e Composto 454.4. Terc-butil 5-bromo-2- metil-4-oxopiperidina-l-carboxilato Ú453.2Õ e terc-butil 3-bromo-2-metil-4-oxopiperidina-l- carboxilato Ú454.4Õ. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de uma mistura de terc-butil 6-metil-4-úútrimetilsililõoxiõ-5,6-diidropiridina-lú2Hõ-carboxilato e terc-butil 2-metil-4-úútrimetilsililõoxiõ-5,6-diidropiridina-lú2Hõ-carboxilato úcomposto 453.1 e composto 454.2, 4,00 g, 12,5 mmoles, 1.00 equiv, 8%ó de pureza combinadaõ em tetraidrofurano Ú250 itiLõ. A mistura foi resfriada para 0-5 °C e N-bromosuccinimida Ú4,%7 g, 27,% mmoles, 2.2 equivõ foi adicionado à mistura de reação em porções. A mistura resultante foi agitada a 25 °C por 2 h, então, concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatograf ia de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ100-1μ10Ε3 as o eluente para obter uma mistura dos compostos do título como um óleo amarelo Ú2,50 g, 6%H B .
Composto 453.3 e Composto 454.5. Ácido 5-ú5-úterc-butoxicarbonilS -6-metil-4,5,6,7-tetraidro-3H-imidao[4,5-c]piridin-2-ilS -2,4-dimetilbenzóico Ú453.30 e ãcidc5-ú5-úterc-butoxicarbonil0 -4-metil-4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-il0 -2,4-dimetilbenzóico ú4i.5§ . Em um tubo vedado de 50 ml, foi colocada uma solução de uma mistura de terc-butil 5-bromo-2-metil-4-oxopiperidina-l-carboxilato e terc-butil 3-bromo-2-metil-4-oxopiperidina-l-carboxilato úcomposto 453.2 e composto 454.4, 1,60 g, 5,48 mmoles, 1.00 equivS em Ν,Ν-dimetilformamida Ú10 mLS Ácido 5-Formil-2,4-dimetilbenzóico úcomposto 16.3, %78 mg, 5,4% mmoles, 1.00 equivS , acetate de amónio úl,%0 g, 247 mmoles, 4.50 equivESI , e hidróxido de amónio Ú2,88 g, 16,4 mmoles, 3.00 equiv, 20 óõ foram adicionados e a mistura resultante foi agitada por 2 h a 130 °C. A mistura foi resfriada para 10-15 °C, em seguida, extinta com água gelada Ú50 mLH . A solução resultante foi extraída om etil acetato ú2 x 50 mLõ e as camadas orgânicas foram combinadas. 0 pH da camada aquosa foi ajustado para 6 com cloreto de hidrogénio ú2 Mõ e extraída com etil acetato ú2 x 150 mLõ e todos os extratos orgânicos foram combinados, secos úNa2S04IZI , filtrados e concentrados em vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ4-2μ1ΙΚΙ como o eluete para obter uma mistura dos compostos do título como um óleo amarelo claro Ú480 mg, 23óõ.
Composto 453.4 e Composto 454.6. Terc-butil 2-Ú5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2,4-dimetilfenilõ-6-metil-6,7-diidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-5ú4Hõ-carboxilato úcomposto 453.4õ e terc-butil 2-Ú5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2,4-dimetilfenilõ-4-metil-6,7-diidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-5ú4Hõ-carboxilato úcomposto 454.6Õ. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de uma mistura de ácido 5-ú5-úterc-butoxicarbonilH -6-metil-4,5,6,7-tetraido-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4-dimetilbenzóico e ácido 5-ú5-úterc-butoxicarbonilõ-4-metil-4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4-dimetilbenzóico úcomposto 4 53.3 e composto 4 54.5, 480 mg, 1,25 mmol, 1.00 equivõ em N, N-dimetilformamida Ú10 mLõ. Dl EA Ú643 mg, 4, %8 mmoles, 4.00 equivõ, EDC Ú476 mg, 2,48 mmoles, 2.00 equivõ, e 1-hidroxibenzotrizol Ú337 mg, 2,50 mmoles, 2.00 equivõ foram adicionados e a solução resultante foi agitada a 25 °C por 20 min. Cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 276 mg, 1,24 mmol, 1.00 equivõ foi, então, adicionado em porções a 0 °C. A solução resultante foi agitada a 25 °C por 16 h, e em seguida, extinta com água gelada Ú40 mLõ. Os sólidos resultantes foram coletados por filtração, e então dissolvidos em etil acetato Ú100 mLõ. As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura ú2 x 30 mLõ, secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas a vácuo para obter uma mistura dos compostos do título como um óleo amarelo claro Ú440 mg, 64%õ.
Composto 453.5 e composto 454.7. 2,2,2-trifluoroacetato de 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú6-metil-4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 453.5õ e 2,2,2-trifluoroacetato de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú4-metil-4,5,6,7-tetraidro-3H- imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 454.7õ. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de uma mistura de terc-butil 2-ú5-ú4-ú4-cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-2,4- dimetilfenilõ-6- metil-6,7-diidro-3H-imidazo[4,5- c]piridina-5ú4Hõ-carboxilato e terc-butil 2-Ú5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ-2,4-dimetilfenilõ-4-metil-6,7-diidro-3H- imidazo[4,5-c]piridina-5Ú4HÕ- carboxilato úcomposto 453.4 e composto 454.6, 440 mg, 0,70 0 mmol, 1.00 equiv0 em diclorometano Ú10 mL0 e ácido trifluoroacético Ú3 mLõ. A solução resultante foi agitada a 2 5 °C por 2 0 h, então concentrada a vácuo para obter uma mistura dos compostos do título como um óleo amarelo Ú450 mg, 0 0 %õ.
Compostos 453 e 454. Metil 2-Ú5-Ú4-Ú4- cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2,4-dimetilfenilõ-6-metil-6,7-diidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-5Ú4HÕ-carboxilato úcomposto 453o e metil 2-Ú5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonilõ-2,4-dimetilfenilõ-4-metil-6,7-diidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-5Ú4HÕ-carboxilato úcomposto 454Õ. Em um tubo vedado de 8 ml, foi colocada uma mistura de 2,2,2-trifluoroacetato de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú6-metil-4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-il õbenzonitrila e 2,2,2-trifluoroacetato de 4-Ú1-Ú2,4- dimetil-5-ú4-metil-4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 453.5 e composto 454.7, 100 mg, 0,176 mmol, 1.00 equivõ em diclorometano Ú6 mLõ. Dl EA Ú114 mg, 0,880 mmol, 5.00 equivõ foi adicionado e a mistura foi resfriada para 0 °C. Dimetil dicarbonato Ú20 ,6 mg, 0,220 mmol, 1.25equivõ foi adicionado em gotas com agitação a 0 °C, e então a
solução resultante foi agitada por 2,5 ha 0-5 °C. A mistura resultante foi concentrada a vácuo e o resíduo foi purificado por prep-HPLC úl #-Pre-HPLC- 0 0lúSHIMADZUõõp
Coluna, Xbridge Prep C18, Sum, l%±150mm; fase móvel, água com 0,030 NH3H2O e CH3CN Ú3%, 0Ó CH3CN até 52,00 em 7 min, até 100,00 em 1 min, até 3%,00 em 1 minõ; DetectorWaters 248% 254 É 220nm, Os compostos do título foram obtidos da prep-HPLC como uma mistura de isômeros Ú30 mgõ. A mistura isomérica foi purificada por prep-HPLC quiral 0 2#-Êlson Gx 281 ÚHPLC-0%οόμ Coluna, Chiralpak IA, 2±25cm, 5 um; fase móvel, Hex ÚO,10 DEAó e etanol úO,20 TEAõ úmantidcSO, 00 etanol Ú0,20 TEAõ em 10 minõ; Detector, UV 220'254m. As frações de prep-HPLC quiral contendo produtos separados puros foram apropriadamente combinadas e liofilizadas para obter metil 2-Ú5-Ú4-Ú 4-cianofenilõpiperidina-1 -carbonilõ- 2,4-dimetilfenilõ-6-metil- 6,7-diidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-5ú4Hõ-carboxilato úcomposto 453Õ como um sólido branco Ú14,2 mg, 130 õ e metil 2-Ú5-Ú4-Ú4-cianofenilõpiperidina-l-carbonil õ-2,4-dimetilfenilõ-4-metil-6,7-diidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-5ú4Hõ-carboxilato úcomposto 454õ como um sólido branco úll,8 mg, 100 õ. Composto 453μ m' z úES+õ 512 úM+HÕ. Composto 454μ m'z ÚES+Õ 512 ÚM+Hõ+.
Compostos 455 É 456. 4-Ú1-Ú5-Ú5,6-Dimetil-4,5,6,7- tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 455õ e 4-Ú1-Ú5-Ú4,5-dimetil-4, 5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5- c]piridin-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4- ilõbenzonitrila úcomposto 456õ. Em um tubo vedado de 10 ml, foi colocada uma solução de uma mistura de trifluoroacetato de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú6-metil-4,5,6,7-tetraidro- 3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila e trifluoroacetato de 4-Ú1-Ú2,4-dimetil-5-ú4-metil-4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 453.5 e composto 454.7, Ú100 mg, 0,22 mmol, 1.00 equivõ em tetraidrofurano Ú5 mLõ, Formaldeído úl ml, 37 0 empesoõ e triacetoxiborohidreto de sódio Ú162 mg, 0,760 mmol, 3.5 equivõ foram adicionados à mistura e agitados por 2,5 ha 40 °C. A mistura foi concentrada a vácuo e o resíduo foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiç0 esúl#-Pre-HPLC-OOlúSHIMADZUõõp Coluna, Xbridge Prep C18, 5um, l%*150mm; fase móvel, água com 0,0313 NH3H20 e CH3CNÚ320 CH3CN até 4213 em 8 min, até 1000 em 2 min, até 32lãm 1 minõ; Detector, Waters 248% 254nm &amp; 220nm. Os compostos do título foram obtidos da prep-HPLC como uma mistura de isômeros Ú50 mgõ. A mistura isomérica foi purificada por prep-HPLC quiral com as seguintes condiçS es ú2#-Gi£on Gx 2 8lúHPLC- 0 %õõp Coluna, Chiralpak IC, 2*25cm, 5um; fase móvel, HexúO, 20 TEAõ e etanol Ú0,20 TEAõ úmantido 0500 etanol Ú0,20 TEAõ em 27 minõp Detector, UV 220/254m. As fraç0 es de preo-HPLC quiral contendo produtos sepaados puros foram apropriadamente combinadas e liofilizadas para obter 4-Ú1-Ú5-Ú5,6-dimetil-4,5,6,7-tetraidro-3H- imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 455õ como um sólido branco Ú13,5 mg, 130 õ e 4-Ú1-Ú5-Ú4,5-dimetil-4,5,6,7-tetraidro-H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 456õ como um sólido branco ú6,8 mg, 70 õ. Composto 455μ m/z úES+õ 468 ÚM+HÕ. Composto 456μ m/z ÚES+õ 468 ÚM+Hõ+.
Composto 457.1 e composto 457.2. Terc-butil 3-bromo-2-metil-4-oxopiperidina-l-carboxilato úcomposto 457.lõ e terc-butil 5-bromo-2-metil-4-oxopiperidina-l-carboxilato úcomposto 457.2õ. Em um frasco de fundo redondo de 4 gargalos e 1 litro, que foi purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi colocada uma solução de terc-butil 2-metil-4-oxopiperidina-1-carboxilato ú5,00 g, 23,4 mmoles, 1.00 equivõ em éter Ú700 mLõ. Acetato de amónio ú%04 mg, 11,7 mmoles, 0.50 equivõ e azobisisobutironitrila úAIBNõ úl%2 mg, 1,17 mmol, 0.05 equivõ foram adicionados. A mistura foi resfriada para 0 °C, então, N-bromossuccinimida ú4,15 g, 23,5 mmoles, 1.00 equivõ foi adicionado em porçH es. A mistura resultate foi agitada por 4 h a 25 °C, então concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo ύΐμΐ 00-ΙμΙΟδ como o eluente para obter uma mistura dos compostos do título como um óleo amarelo claro ú4,10 g, 6013 õ.
Composto 457 . 4-úl-Ú5-Ú5-acetil-4-metil-4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4- dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 400 e composto 2, exceto que os uma mistura de terc-butil 3-bromo-2-metil-4-oxopiperidina-l-carboxilato úcomposto 457.lõ e terc-butil 5- bromo-2-metil-4 -oxopiperidina-l-carboxilato úcomposto 457.2õ foi usado no lugar de 3-bromo-5-metildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona úcomposto 400.2õ. 0 produto contém cerca de 10ό do outro metil regioisômero 4-úl-ú5-ú5-acetil-6-metil-4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-2,4 - dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. m' z úES+õ 4%6 ÚM+Hõ+.
Composto 458. 4-Ú1-Ú5-Ú51-Acetil-31,41,5!,61 - tetraidroespiro[ciclopropano-1,71-imidazo[4,5-c]piridin]-2’-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. O composto do título foi preparado usando manipulaçS θ químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 44% e composto 2, exceto que terc-butil 8-oxo-5-azaespiro[2.5]octano-5-carboxilato úRemen, L. et al. Bíoorg. And Med. Chem. Lett., 200%, 32, 351-357Õ foi usado no lugar de 3,3-dimetildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona úcomposto 44%.lõ. m'z ÚES+õ 508 ÚM+Hõ+. ^H-RMN Ú300MHZ, CD30Dõp δ 7,71 úd, J=8,1 Hz, 2HÕ, 7,47 úd, J=7,8 Hz, 2HÕ, 7,37-7,20 úm, 2HÕ, 4,77 e 4,71 Ú2 singletos, rotâmeros de acetil amida, CH2, 2Hõ, 3,77 e 3,72 úú2 singletos, rotâmeros de acetil amida, CH2, 2Hõ, 3,71-3,67 úm, 1HÕ, 3,30-3,18 úm, 1HÕ, 2, %% út, J = 11,6 Hz, 2HÕ, 2,48-2,27 úm, 6Hõ, 2,24 e 2,21 ú2 singletos, rotâmeros de acetil amida, acetil CH3, 3Hõ, 2,10-1,%5 úm, 1HÕ, 1,%2-1,52 úm, 3HÕ, 1,18-0, %6 úm, 4HÕ.
Composto 45%. 4-úl-ú5-ú6-metóxi-4,5,6,7-tetraidro-lH-benzo[d]imidazol-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 44%, exceto que 4-metoxiciclohexanona úKaiho, T. et al. J. Med. Chem., 1%8%, 32, 351-357Õ foi usado no lugar de 3,3-dimetildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona úcomposto 44%.lõ. m'z úES+õ 46% ÚM+Hõ+. ^-RMN Ú300MHZ, CD3ODõp δ 7,6% úd, J=8,1 Hz, 2HÕ, 7,53-7,44 úm, 2Hõ, 7,37-7,21 úm, 2Hõ, um protão estimado sob metanol Ú1HÕ, 3,84-3,75 úm, 1HÕ, 3,73-3,57 úm, 1 Hõ, 3,45 ÚS, 3HÕ, 3,27-3,1% úm, IHõ, 3,05-2 , %1 úm, 3HÕ, 2,7%-2,58 úm, 3HÕ, 2,46 ús, 3Hõ, 2,40 e 2,2% Ú2 singletos, rotâmeros de amida, 3HÕ, 2,17-1,%2 úm, 3HÕ, 1,%2-l,67 úm, 3HÕ.
Composto 460. 4-úl-Ú5-Ú6-Hidróxi-4,5 6,7-tetraidro-1H- benzo[d]imidazol-2-ilÕ-2,4-dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de 4-Ú1-Ú5-Ú6-metóxi-4,5,6,7- tetraidro-ΙΗ-benzo[d]imidazol-2-ilõ-2,4 - dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 45%, 80 mg, 0,17 mmol, 1.0 equivõ em uma mistura de solvente de acetonitrila e diclorometano úlO'10 mLõ. Tetraclorossilano Ú32 mg, 0,1% mmol, 1.1 equivõ e iode to de sódio Ú28 mg, 0,1% mmol, 1.1 equivõ foram adicionados a reação e a mistura resultante foi agitada durante a noite a 20 °C. A reação foi extinta com bicarbonato de sódio aquoso Ú10 mLõ e a camada aquosa foi extraída com etil acetato Ú3 x 10 mLõ. As camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas a vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com etil acetato como o eluente para obter o composto do título como um sólido amarelo Ú7,1 mg, %%õ. m'z úES+õ 455 ÚM+Hõ+.
Composto 461.1. 4-metoxihepta-1,6-dieno. Em a um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de hepta-1,6-dien-4-ol ú2,00 g, 17,8 mmoles, 1.00 equivõ e iodometano ú5,00 g, 35,2 mmoles, 2.00 equivõ em tetraidrofurano Ú30 mLõ. A solução foi resfriada para 0 °C e hidreto de sódio úl,00 g, 25,0 mmoles, 1.50 equiv, 60% em óleo mineralõ foi adicionado à reação em porções. A mistura resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, então cuidadosamente extinta com água Ú5 mL0 e diluída cm de éter Ú30 mL0 . As camadas orgânicas foram lavadas cm salmoura Ú2 x 20 mLB , secas ÚN§SO40 , filtradas e concentradas a vácuo para obter o composto do título como um óleo incolor ú2,00 g, 84%0 .
Composto 461.2. 4-Metoxiciclopent-l-eno. Em um frasco de fundo redondo, que foi purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, foi colocada uma solução de 4-metoxihepta-1,6-dieno úcomposto 461.1, 200 mg, 1,43 mmol, 1.00 equiv, %0óõ em diclorometano Ú25 mLõ. Catalisador Grubbs II Ú55 mg, 0,06 mmol, 0.04 equivõ foi adicionado e a solução resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura foi concentrada a vácuo para obter o composto do título como um óleo incolor Ú100 mg, 57óõ.
Composto 461.3. 2-Bromo-4-metoxiciclopentanol. Em um frasco de fundo redondo, foi adicionada uma solução de 4-metoxiciclopent-l-eno úcomposto 461.2, 1,00 g, 8,66 mmoles, 1.00 equiv, 850 õ em diclorometano Ú100 mLõ e uma sõução de N-bromossuccinimida Ú2,00 g, 11,3 mmoles, 1.00 equivõ em água Ú20 mLõ. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas e então a mistura resultante foi lavada com água Ú20 mLõ, seca úNa2S04õ, filtrada e concentrada a vácuo para obter o composto do título como um óleo incolor úl,00 g, 360 õ.
Composto 461.4. 2-Bromo-4-metoxiciclopentanona. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de 2-Bromo-4-metoxiciclopentanol úcomposto 461.3, 1,00 g, 3,08 mmoles, 1.00 equiv, 600 õ em diclorometano Ú100 mLõ. Dess-Mrtin períodoinano ú2,00 g, 4,72 mmoles, 1.10 equivõ foi adicionado em porçS es e a mistura foi agitada durahe a
noite à temperatura ambiente. A mistura foi, em seguida, diluída com água Ú20 mLõ e extinta com Na2S204 ú4 gõ. A camada aquosa foi extraída com diclorometano Ú100 mLõ e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura Ú30 mLõ, secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas a vácuo para obter o composto do título como um óleo marrom Ú800 mg, 81%õ.
Composto 461.5. Metil 5-ú3a-hidróxi-5-metóxi-l,3a,4,5,6,6a-hexahidrociclopenta[d]imidazol-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoato. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de 2-bromo-4-metoxiciclopentanona úcomposto 461.4, 600 mg, 1,86 mmol, 60%õ em ACN Ú15 mLõ. Metil cloridrato de 5-carbamimidoi1-2,4-dimet ilbenzoato úcomposto 2.5, 320 mgõ e carbonato de potássio Ú430 mg, 3,11 mmolesõ foram adicionados e a mistura foi agitada durante a noite a 80 °C. A mistura foi concentrada a vácuo e o resíduo foi diluído com etil acetato Ú50 mLõ e então lavada com salmoura ú2 x 20 mLõ, seca úNa2S04õ, filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com diclorometano'metanol úlOplõ como o eluente para obter o composto do título como um óleo marrom Ú200 mg, 27%õ.
Composto 461.6. Metil 5-Ú5-metóxi-1,4 5,6- tetraidrociclopenta[d]imidazol-2 -ilõ-2,4-dimetilbenzoato.
Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de metil 5-Ú3a-hidróxi-5-metóxi-1,3a, 4,5,6,6a- hexahidrociclopenta[d]imidazol-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 461.5, 200 mg, 0,38 mmol, 1.00 equiv, 6000 em Ν,Ν-dimetilformamida úmLõ. Ácido p-Toluenossulfónico Ú20 mg, 0,12 mmol, 0.18 equivõ foi adicionado e a solução resultante foi agitada durante a noite a 80 °C, então concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com diclorometano'metanol ύΙΟμΙδ como o eluente para obter o composto do título como um óleo marrom Ú100 mg, 660 õ,
Composto 461.7. Ácido 5-ú5-Metõxi-l,4,5,6- tetraidrociclopenta[d]imidazol-2-ilõ-2,4-dimetilbenzóico. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de metil 5-Ú5-metóxi-1,4,5,6-tetraidrociclopenta[d]imidazol-2-ilõ-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 461.6, 100 mg, 0,270 mmol, 1.00 equiv, 800 õ em metanol Ú3 mLõ. Uma solução dehidróxido de sódio Ú67,0 mg, 1,68 mmol, 5.00 equivõ em água ú3 mLõ foi adicionada e a mistura resultante foi agitada durante a noite a 70 °C, então concentrada a vácuo. 0 resíduo foi diluído com água ú3 mLõ e o pH da solução foi ajustado para 2-3 com cloreto de hidrogénio aquoso Ú12MÕ. A mistura foi extraída com etil acetato Ú3 x 10 mLõ, e as camadas orgânicas combinadas foram concentradas a vácuo para obter o composto do título como um sólido marrom Ú80 mg, 840 õ.
Composto 4 61. 4-úl-ú5-ú5-Metóxi-l, 4 5,6- tetraidrociclopenta[d]imidazol-2-ilõ-2,4- dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de ácido 5-Ú5-Metóxi-1,4,5,6-tetraidrociclopenta[d]imidazol-2-ilõ-2,4 -dimetilbenzóico úcomposto 461.7, 60 mg, 0,17 mmol, 1.00 equiv, 80óõ em N,N-dimetilformamida Ú4 mLõ, cloridrato de 4-úpiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 46 mg, 0,20 mmol, 1.00 equivõ, 4-dimetilaminopiridina Ú52 mg, 0,43 mmol, 2.00 equivõ, e EDC-HC1 Ú80 mg, 0,42 mmol, 2.00 equivõ foram adicionados e a mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A solução resultante foi diluída com etil acetato Ú3 0 mLõ e lavada com salmoura ú3 x 10 mLõ, seca úNa2S04õ, filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo Ú40 mgõ foi purificado por HPLC preparativa com as seguintes condiç0 es úl#-Pre-HPLC-001úSHIMADZUõõu Ccbuna, SunFire Prep C18, 10 *150mm 5um; fase móvel, água cm 0,05ó TFA e CH3CN Ú15.0Ó CH3CN até 55.00 em 7 min, até 100,00 em 1 min, até 15.00 em 1 minõ; Detector, Waters 248% 34 &amp; 220nm. As fraçS es contendo produto puro foram combnadas e liofilizadas para obter o composto do título como um sólido branco Ú8,% mg, llóõ. m/z úES+õ 4 55 ÚM+Hõ+.
Composto 462.1. 5-Bromo-2,2-dimetildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de 2,2-dimetiloxan-4-ona úl,00 g, 7,80 mmoles, 1.00 equivõ em éter Ú20 mLõ. N-Bromossuccinimida úl, 50 g, 25,5 mmoles, 3.25 equivS foi adicionado em porções, segmdo pela adição de acetato de amónio Ú60,0 mg, 0,78 mmol, 0,10 equivõ. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 25 °C, em seguida, diluída com etil acetato Ú20 mLõ. A mistura resultante foi lavada salmoura ú2 x 40 mLõ, seca úNa2S04õ, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo úlp30õ como o eluente para obter o composto do título como um óleo amarelo Ú508 mg, 31%õ.
Composto 462. 4-Ú1-Ú5-Ú6,6-Dimetil-3,4,6,7-tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõ-2,4- dimetilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulaçS es químicas pdrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 461, exceto que 5-bromo-2,2-dimetildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona úcomposto 462.lõ foi usado no lugar de 2-bromo-4-metoxiciclopentanona úcomposto 461.4õ. m'z úES+õ 469 ÚM+Hõ+.
Composto 463.1. Trimetilúú4-útrimetilsililõbut-3-in-l-ilõoxiõsilano. Em um frasco de fundo redondo de 3 gargalos e 1 litro, foi colocada uma solução de but-3-in-l-ol Ú20,0 g, 285 mmol, 1.00 equivõ em tetraidrofurano Ú300 mLõ e a mistura foi purgada com nitrogénio. A mistura foi resfriada para -78 °C, então n-butil lítio Ú2.5 M em THFKI Ú20 mL, 2,40 equivKI foi adicionado em gotas seguido pela adição de clorotrimetilsilane Ú67,0 g, 625 mmoles, 2.20 equiõ. A mistura resultante foi então agitada por 1 h a 25 °C, então cuidadosamente extinta com bicarbonato de sódio aquoso Ú25Q mLõ. A camada aquosa foi extraída com éter ú3 x 100 mLõ e as camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com éter'éter de petróleo ύΙμΙΟ-Ιμΐό como o eluente para obter o composto do título como um óleo incolor ύΙΟ,Ο g, 16%õ.
Composto 463.2. Trimetilúú4-útrimetilsililõbut-3-en-1-ilõoxiõsilano. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução do composto 463.1, 2,00 g, 7,46 mmoles, 1.00 equiv, 80%õ em hexano Ú30 mLõ. 0 sistema foi purgado com nitrogénio. Quinolina Ú0,1 mL, 0.10 equivõ e reagente Lindlar úcorrompido por Pbõ Ú0,2 g, 0.10 equiv, 5%õ foram adicionados à mistura. A mistura resultante foi hidrogenada durante a noite à temperatura ambiente sob pressão atmosférica de hidrogénio. Após término da reação, o sistema foi purgado com nitrogénio e os sólidos foram removidos por filtração. 0 filtrado foi concentrado a vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com hexano'éter ύ20μ1δ como o eluente para obter o composto do título como um óleo incolor úl,50 g, 74%õ.
Composto 463.3. 6-metil-3,6-diidro-2H-piran. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma mistura de trimetilúú4-útrimetilsililõbut-3-en-l-ilõoxiõsilano úcomposto 463.2, 1,50 g, 6,1 3 mmoles, 1.00 equivõ, acetaldeído Ú0 Oôg, 20,4 mmoles, 3.00 equivõ, e cloreto de índioúlllõ úl,50 g, 1.00 equivõ em diclorometano Ú15 mLõ. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 25 °C, em seguida, diluída com D CM Ú50 mLõ. As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura ú3 x 20 mLõ, secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas a vácuo para obter o composto do título como um óleo marrom Ú0,600 g, 88%0 .
Composto 463.4 e composto 463.5. 4-Bromo-2-metildiidro-2H-piran-3ú4H0 -ona úcomposto 463.413 e 3-bromo-2-metilâdro-2H-piran-4ú3H0 -ona úcomposto 463.50 . Em um frasco de uúdo redondo, foi colocada uma solução de ácido o-iodoxibenzóico úIBXõ Ú3,42 g, 6,11 mmoles, 2,00 equivõ em DMSO Ú12 mLõ. A mistura foi agitada por 30 min a 25 °C, então, uma solução de 6-metil-3,6-diidro-2H-piran úcomposto 463.3, 600 mg, 4,28 mmoles, 1.00 equiv, 70%õ em diclorometano Ú30 mLõ foi adicionada em gotas. A mistura foi resfriada para 0-5 °C, então N-bromossuccinimida úl,20 g, 6,74 mmoles, 1.10 equivõ foi adicionada em porções. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 25 °C, então os sólidos foram removidos por filtração. O filtrado foi diluído com diclorometano Ú50 mLõ e lavado com salmoura Ú3 x 20 mLõ. A mistura foi seco úNa2S04õ, filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo ύ1μ20ό como o eluente para obter uma mistura dos compostos do título como um óleo marrom Ú600 mg, 730 õ.
Composto 463. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú4-metil-3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 461, exceto que uma mistura de 4-bromo-2-metildiidro-2H-piran-3ú4H0 -ona úcomposto 463.40 e 3-bromo-2-metildiidro-2H-piran-á3H0 -ona úcomposto 463.50 foi usado no lugar de 2-bromo-4-metoxiciclopentanona úcomposto 461.40 . m'z úES+0 §5 ÚM+H0+.
Composto 464.1. 4-úAlilóxi0 pent-l-eno. Um frasco de fundo redondo de 4 gargalos e 500 mL foi purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, então uma suspensão de hidreto de sódio Ú14,0 g, 350 mmoles, 2.01 equiv, 600 0 em Ν,Ν-dimetilformamida Ú100 mL0 foi adicionada. A mifeura foi resfriada para 0 °C, então, uma solução de pent-4-en-2-o! Ú15,0 g, 174 mmoles, 1.00 equiv0 em N,N-dimetilforamida Ú100 mL0 foi adicionada em gotas e a mistura foi agtada por 20 min a 0 °C. A mistura foi resfriada para -20 °C e uma solução de 3- bromoprop-1 -eno ú.20,% g, 172 mmoles, 0 . %% equivõ em N,N-dimetilformamida Ú100 mLõ foi adicionada. A mistura resultante foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada durante a noite, então cuidadosamente extinta com H20 Ú500 mLõ. A camada aquosa foi extraída com etil acetato Ú4 x 100 mLõ e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura ú2 x 200 mLõ, secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas a vácuo para obter o composto do título como um óleo amarelo Ú13,3 g, 61%õ.
Composto 464.2. 2-metil-3,6-diidro-2H-piran. Um frasco de fundo redondo de 3 gargalos e 500 mL foi purgado e mantido com uma atmosfera inerte de nitrogénio, então uma solução de 4-úalilóxiõpent-l-eno úcomposto 464.1, 3,00 g, 23,8 mmoles, 1.00 equivõ em DCE Ú200 mLõ foi adicionada. Catalisador Grubbs foi adicionado Ú810 mg, 0,ESI 50 mini, 0.04 equivõ e a mistura foi agitada a 60 °C por 4 h. A mistura foi então concentrada a vácuo a 20 °C para obter o composto do título um óleo colorido Ú2,00 g, 86%õ.
Composto 464.3 e 464.4. 4-Bromo-6-metiltetraidro-2H-piran- 3-ol e 5-bromo-2-metiltetraidro-2H-piran-4-ol. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de metil-3,6-diidro-2H-piran úcomposto 464.2, 2,00 g, 20,4 mmoles, 1.00 equivõ em uma mistura de tetraidrofurano e H20 Ú20'20 mLõ. N-bromossuccinimida Ú3,60 g, 20,3 mmoles, 1.00 equivõ foi adicionado e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante a noite A mistura foi extraída com diclorometano ú2 x 20 mLõ e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura Ú2 x 20 mLõ, seca úNa2S04õ, filtradas e concentradas a vácuo para obter uma mistura dos compostos do título como um óleo amarelo úl,10 g, brutoõ.
Composto 464.5 e 464.6. 4-Bromo-6-metildiidro-2H-piran-3ú4Hõ-ona e 5-bromo-2-metildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma mistura de 4-bromo-6-metiltetraidro-2H-piran-3-ol úcomposto 464.3õ e 5-bromo-2-metiltetraidro-2H-piran-4-ol úcomposto 464.4õ úl,10 g, 5,64 mmoles, 1.00 equivõ como uma solução em diclorometano ú30 mLõ. Dess-Martin períodoinano Ú2,I3 0 g, 6,84 mmoles, 1.21 equivõ foi adicionado e a solução resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, em seguida, extinta com água Ú20 mLõ. A camada aquosa foi extraída com diclorometano Ú2 x 20 mLõ e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura ú2 x 50 mLõ, seca úNa2S04õ, filtradas e concentradas a vácuo para obter uma mistura dos compostos do título como um óleo amarelo Ú0,7 gõ.
Composto 464.7. Metil 2,4-dimetil-5-ú6-metil-3,4,6,7-tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoato. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma mistura de 4-bromo-6-metildiidro-2H-piran-3ú4Hõ-ona úcomposto 464.5õ e 5-bromo- 2-metildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona úcomposto 464.6õ Ú700 mg, 3,63 mmolesõ como uma solução em acetonitrila Ú20 mLõ. Metil cloridrato de 5-carbamimidoil-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 2.5, 750 mgõ e carbonato de potássio úl.00 g, 7,25 mmolesõ foram adicionados e a mistura foi agitada durante a noite a 75 °C sob nitrogénio. A mistura foi resfriada e os sólidos foram removidos por filtração. 0 filtrado foi concentrado a vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo ύΐμΐο como o eluente para obter o composto do título como um sólido amarelo Ú100 mg, %E õ.
Composto 464.8. Ácido 2,4-Dimetil-5-ú6-metil-3,4,6,7-tetraidropirano[3,4- d]imidazo]-2-ilõbenzóico. em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de metil 2,4-dimetil-5-ú6-metil-3,4,6,7-tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoato úcomposto 464.7, 100 mg, 0,330 mmol, 1.00 equivõ em metanol Ú10 mLõ. Uma solução de hidróxido de lítio Ú76 mg, 3,17 mmoles, 10.0 equivõ em água Ú10 mLõ foi adicionada e a solução resultante foi agitada por 4 h à temperatura ambiente. A mistura foi concentrada a vácuo e, então, HC1 aquoso foi adicionado até o pH ser de 5-6. A mistura foi ajustada para pH 5-6 com HC1 aquoso e, então, a mistura resultante foi concentrada a vácuo. MeOH ú5 mLõ foi adicionado ao resíduo e os sólidos foram removidos por filtração. 0 filtrado foi concentrado a vácuo para obter o composto do título como um sólido amarelo Ú60 mg, 63S õ.
Composto 464. 4-Ú1-Ú2,4-Dimetil-5-ú6-metil-3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de ácido 2,4-dimetil-5-[6-metil-3H,4H,6H,7H-pirano[3,4-d]imidazol-2-il]benzõico Ú50 mg, 0,17 mmol, 1.00 equivõ em N,N-dimetilformamida Ú10 mLõ. EDC-HC1 Ú67 mg, 0,35 mmol, 2.00 equivõ, 4-dimetilaminopiridina Ú64 mg, 0,52 mmol, 3.00 equivõ, e cloridrato de 4-úPiperidin-4-ilõbenzonit.rila úcomposto 1.5, 30 mg, 0,18 mmol, 1.00 equivõ foram adicionados e a solução foi agitada por 2 h à temperatura ambiente. A reação foi extinta com água Ú2Q mLõ e a camada aquosa foi extraída com etil acetato Ú2 x 20 mLõ. As camadas orgânicas combinadas foram secas úNa2S04õ, filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com etil acetato'éter de petróleo úlplõ como o eluente. 0 produto bruto Ú2Q mgõ foi purificado por Prep-HPLC com as seguintes condiç0 esúl#-Pre-HPLC- 0 0lúSHIMADZUõõp Coluna, Xbridge Prep Fenil, 5 um,
l%*150mm; fase móvel, água com 0.030 3SÇH20 e CH?)CN Ú3O0 C|EN até 600 em % min, até 1000 em 1 min, até 300 em íni;
Detector, Waters 248% 254nm &amp; 22Qnm. As fraç0 es cobendo produto puro foram combinadas e liofilizadas para obter o composto do título como um sólido branco u.8,0 mg, 10%õ. m' z ÚES+Õ 455 ÚM+Hõ+.
Composto 465. 2-ú5-Ú4-Ú4-Cianofenilõpiperidina-1-carbonilõ- 2,4-dimetilfenilõ-1,4 5,6-tetraidrociclopenta[d]imidazol-5-carbonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulaç0 es químicas padrão e procedimentos similaes àqueles usados para a preparação do composto 461, exceto que ciclopent-3-enocarbonitrila úJohnson, C. R. et. al. J. Org. Chem, 10 60 ,34, 86Q-864Õ foi usado no lugar de 4- metoxiciclopent-1-eno úcomposto 461.2õ. m'z úES+õ 450 ÚM+Hõ+.
Composto 466.1. Dimetanossulfonato de tetraidrofurano-3,4-diil. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de tetraidrofurano-3,4-diol Ú500 mg, 4,80 mmoles, 1.00 equivõ e trietilamina úl,45 g, 14,3 mmoles, 3.00 equivõ em diclorometano Ú8 mLõ. A mistura foi resfriada para 0-5 °C e uma solução de cloreto de metanossulfonil úl,40 g, 12,2 mmoles, 2.50 equivõ em diclorometano Ú2 mLõ foi adicionada em gotas. A solução foi agitada à temperatura ambiente por 2 h, e em seguida, diluída com diclorometano Ú100 mLõ. A solução foi lavada com NH4C1 aquoso Ú2 x 30 mLõ, então, salmoura Ú30 mLõ, seca úNa2S04õ, filtrada e concentrada em vácuo para obter o composto do título como um sólido marrom úl,00 g, 72%õ.
Composto 466.2. 3,4-diazidotetraidrofurano. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma mistura de dimetanossulfonato de tetraidrofurano-3,4-diil úcomposto 466.1, 2,00 g, 7,30 mmoles, 1.00 equiv, %50 õ e azid de sódio Ú4,00 g, 61,5 mmoles, 8.00 equivõ em N,N-dimetilformamida Ú20 mLõ. A mistura resultante foi agitada durante a noite a 100 °C atrás de um escudo de proteção, em seguida, resfriada e diluída com éter Ú100 mLõ. A mistura foi lavada com salmoura ú5 x 2 0 mLõ, seca úNa2S04õ, filtrada e concentrada a vácuo para obter o composto do título como um óleo incolor úl,00 g, 800 õ.
Composto 466.3. Tetraidrofurano-3,4-diamina. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de 3,4-diazidotetraidrofurano úcomposto 466.2, %00 mg, 5,26 mmoles, 1.00 equiv, %0ó em etanol Ú10 mLõ. 0 sistema foi purgado com nitrogénio e paládio sobre carbono Ú10 õ em peso Pdõ ú%00 mgõ foi adicionado. Após purge adicional do sistema com nitrogénio, a atmosfera foi alterada para hidrogénio e a suspensão resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente sob uma atmosfera de hidrogénio. Após purga do sistema com nitrogénio, os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado a vácuo para obter o composto do título como um óleo colorido Ú600 mg, %80 õ.
Composto 466.4. Metil cloridrato de 5-úiminoúmetoxiõmetilõ- 2.4- dimetilbenzoato. Em um frasco de fundo redondo de 3 gargalos e 50 ml, foi colocada uma solução de metil 5-ciano- 2.4- dimetilbenzoato úcomposto 2.3, %00 mg, 4,28 mmoles, 1.00 equiv, %Q0 õ em metanol Ú20 mLõ. Gás de cloreto de Mrogénio foi introduzido por borbulhamento através da solução por 0,5 h. A mistura de reação foi então transferida para um tubo vedado de 30 ml e agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi diluído com etil acetato Ú30 mLõ e extraído com água Ú10 mLõ. A camada aquosa foi concentrada a vácuo para obter o composto do título como um sólido branco Ú200 mg, 15óõ.
Composto 466.5. Metil 2,4-dimetil-5-ú3a,4,6,6a-tetraidro-lH-furo[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoato. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de tetraidrofurano-3,4-diamina úcomposto 466.3, 140 mg, 1,17 mmol, 1.00 equiv, 850 õõ em etanol Ú6 mLõ. Metil cloridrato de 5- úiminoúmetoxiõmetilõ-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 466.4, 300 mg, 0,%30 mmol, 1.00 equivõ e trietilamina Ú140 mg, 1,38 mmol, 1.00 equivõ foram adicionados e a solução resultante foi agitada durante a noite a 80 °C, então concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel com diclorometano'metanol úlOplõ como o eluente para obter o composto do título como um óleo marrom Ú12Q mg, 34óõ.
Composto 466.5. Ácido 2,4-Dimetil-5-ú3a,4,6,6a-tetraidro-1H-furo[3,4-d]imidazo]-2-ilõbenzõico, Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de metil 2,4-dimetil-5-Ú3a, 4,6,6a-tetraidro-lH-furo [3,4-d] imidazol-2-ilõbenzoato úcomposto 466.5, 100 mg, 0,330 mmol, 1.00 equiv, %0óõ e hidróxido de sódio Ú73 mg, 1,82 mmol, 5.00 equivõ em methanol'H20 Ú3'3 mLõ. A solução resultante foi agitada durante a noite a 70 °C, então concentrada em vácuo. 0 resíduo foi diluído com H20 Ú5 mLõ e o pH da solução foi ajustado para 2-3 com cloreto de hidrogénio Ú12 Nõ, então, extraído com etil acetato ú3 x 10 mLõ. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas a vácuo para obter o composto do título como um sólido amarelo Ú80,0 mg, 840 õ.
Composto 466. 4-úl-ú2,4-Dimetil-5-ú-3a,4,6,6a-tetraidro-1H-furo[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de ácido 2,4-dimetil-5-ú3a, 4,6,6a-tetraidro-1H-furo[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzóico úcomposto
466.5, 80,0 mg, 0.250 mmol, 1.00 equiv, 800 õ em N,N dimetilformamida ú4 mLõ. Cloridrato de 4-úPiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5, 82,0 mg, 0,350 mmol, 1.20 equivõ, 4-dimetilaminopiridina Ú76,0 mg, 0,620 mmoL 2.00 equivõ, e EDC-HC1 Ú116 mg, 0,610 mmol, 2.00 equivõ foram adicionados e a solução resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com etil acetato Ú30 mL0 e lavada com salmoura Ú3 x 15 mL0 , seca úNa2SO40 , filtrada e concentrada a vácuo. 0 produto bruto Ú50 mg0 foi purificado por Prep-HPLC com as eguintes condições úl#-Pre-HPLC-OQlúSHIMADZU0 0 μ Coluna, Xbdge Prep C 18, 5um, 1%+I50mm; fase móvel, água com 0,050 TFAe CH3CN Ú150 CPCN até 500 em % min, até 1000 em 1 min, até 150 em 1 minõ; Detector, Waters 248% 254nm &amp; 220 nm. As fraç0 es contendo produto puro foram combinadas e liofilizadas para obter o composto do título como um sólido branco Ú13 mg, 120 õ. m/z ÚES+Õ 42% ÚM+HÕ. ^-RMN Ú3 00MHZ, CD30Dõp δ 7,70 úd, 2HÕ, 7,53-7,36 úm, 4HÕ, 5,0% ús, 2HÕ, 4,17 úd, J=10,8 Hz, 2HÕ, 3,77 úd, J=10,5 Hz, 2HÕ, 3,60-3,44 úm, 1HÕ, ~3,3 úm, parcialmente sobreposto com água, IHõ, 3,10-2,%2 úm, 2Hõ, 2,48 ús, 3Hõ, 2,45 e 2,35 ú2 singletos, rotâmeros de amida, Ar-CH3,3Hõ, 2,1Q-1,%7 úm, IHõ, 1,%2-1,52 úm, 3HÕ.
Composto 467. 4-Ú1-Ú4-Fluoro-2-metil-5-ú3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazo]-2 -ilõbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulaç0 es químicas padrão e procedimentos símilaes àqueles usados para a preparação do composto 1 e composto 2, exceto que ácido 4-fluoro-2-metilbenzóico foi usado no lugar de ácido 2,4 dimetilbenzóico. m/z úES+õ 445 ÚM+Hõ+.
Composto 468, 4-úl-Ú5-Ú5-Acetil-4,5,6,7-tetrahidro-3H- imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-4-cloro-2- metilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulaçS es químicas pdrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 2, exceto que ácido 4-cloro-2-metilbenzóico foi usado no lugar de ácido 2,4-dimetilbenzóico. m'z úES+0 502 ÚM+H0+,
Composto 46%. l-ú2-ú2-Cloro-5-ú4-ú4-Fluorofenil0 pipridina-l-earhonil0 -4-metilfenilB -6,7-diidro-3H-imidazo [475 c]piridin-5Ú4HÕ-ilõetanona. 0 composto do título foi preparado usando manipulaç0 es químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 2 e composto 468. m'z úES+õ 40 5 ÚM+HÕ.
Composto 470.1. Metil 2-bromo-4-flurobenzoato. Em um frasco de fundo redondo, foi colocada uma solução de ácido 2-bromo-4-fluorobenzóico ú21,8 g, %%,5 mmoles, 1.00 equivõ em uma mistura de solvente de ácido sulf0 rico Ú2Q mLõ e metanol Ú20 mLõ. A solução resultante foi agitada por 5h a 85 °C, em seguida, resfriada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi diluído com etil acetato Ú200 mLõ e lavado com salmoura Ú200 mLõ, então, NaHC03 aquoso Ú100 mL, Nota: evolução de gásõ, seco úNa2S04õ, filtrado e concentrado a vácuo para obter o composto do título como um óleo amarelo claro Ú22,0 g, %5%õ.
Composto 470.1. Metil 2-etil-4-fluorobenzoato. 0 composto do título úóleo colorido, 14,5 g, %30 õ foi preparad usando um procedimento similar àquele usado para a preparação do composto 48.1 e usando metil 2-bromo-4-fluorobenzoato úcomposto 470.1, 20,0 gõ no lugar de metil 2-bromo-4- metilbenzoato.
Composto 470. 4-Ú1-Ú2-etil-4-fluoro-5-ú3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulaçE es químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 1 e composto 2, exceto que metil 2-etil-4-fluorobenzoato úcomposto 470.lõ foi usado no lugar de ácido 2,4-dimetilbenzõico, e cloridrato de 4-ú4-fluoropiperidin- 4-ilõbenzonitrila úcomposto 11.2õ foi usado no lugar de cloridrato de 4-úpiperidin-4- ilõbenzonitrila úcomposto 1.5Õ. m'z ÚES+Õ 477 ÚM+Hõ+.
Composto 471.1. Ácido 4-cloro-5-iodo-2-metilbenzõico. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 2.1, exceto que ácido 4-cloro-2-metilbenzõico foi usado no lugar de ácido 2,4-dimetilbenzõico.
Composto 471.2. Ácido 4-Cloro-5-formil-2-metilbenzóico. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 3%2.2, exceto que ácido 4-cloro-5-iodo-2-metilbenzõico (composto 471.1) foi usado no lugar de ácido 4-ciclobutil-5-iodo-2-metilbenzóico (composto 3%2.1).
Composto 471. 4-(1-(4-Cloro-2-metil-5-(3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-il)benzoil)-4-fluoropiperidin-4-il)benzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 400, exceto que ácido 4-cloro-5-formil-2-metilbenzóico (composto 471.2) foi usado no lugar de ácido 2-etil-5-formil-4-metilbenzóico (composto 211.4), 3- bromodiidro-2H-piran-4(3H)-ona foi usado no lugar de 3-bromo-5-metildiidro-2H-piran-4(3H)-ona (composto 400.2) e cloridrato de 4-(4-fluoropiperidin-4-il)benzonitrila (composto 11.2) foi usado no lugar de cloridrato de 4- úPiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5Õ. m'z úES+õ 470 ÚM+Hõ+.
Composto 472.1. Metil 4-cloro-2-etil-5-iodobenzoato. 0 composto do título foi preparado usando manipulaçO θ químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 211.2, exceto que metil 4-cloro-2-etilbenzoato úcomposto 178.2õ foi usado no lugar de metil 2-etil-4-metilbenzoato úcomposto 48.lõ.
Composto 472.2. Ácido 4-Cloro-2-etil-5-iodobenzóico. 0 composto do título foi preparado usando manipulaçS θ químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 211.3, exceto que metil 4-cloro-2-etil-5-iodobenzoato úcomposto 472.lõ foi usado no lugar de 2-etil-5-iodo-4-metilbenzoato úcomposto 211.2õ.
Composto 472. 4-Ú1-Ú4-Cloro-2-etil-5-ú3,4,6,7- tetraidropirano[3,4-d]imidazol-2-ilõbenzoilõ-4-fluoropiperidin~4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulaçS es químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 400, exceto que ácido 4-cloro-2-etil-5-iodobenzóico úcomposto 472.2õ foi usado no lugar de ácido 2-etil-5-formil-4-metilbenzóico Ú211.4Õ, 3-bromodiidro- 2H-piran-4ú3Hõ-ona foi usado no lugar de 3-bromo-5-metildiidro-2H-piran-4ú3Hõ-ona úcomposto 400.2õ e cloridrato de 4-ú4-fluoropiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 11.2õ foi usado no lugar de cloridrato de 4-úPiperidin-4-ilõbenzonitrila úcomposto 1.5Õ. m'z úES+õ 40 3 ÚM+Hõ+.
Composto 473. 4-úl-ú5-ú5-acetil-4,5,6,7-tetraidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-2-ilõ-4-cloro-2- etilbenzoilõpiperidin-4-ilõbenzonitrila. 0 composto do título foi preparado usando manipulações químicas padrão e procedimentos similares àqueles usados para a preparação do composto 2, exceto que metil 4-cloro-2-etil-5-iodobenzoato úcomposto 472.lõ foi usado no lugar de metil 5-iodo-2,4-dimetilbenzoato úcomposto 2.2õ. m'z úES+õ 516 úM+Hõ+. 1H- RMN Ú300MHZ, CD30Dõp δ 7,73-7,54 úm, 4HÕ, 7,53-7,42 úm, 2H õ, 4,75 e 4,70 Ú2 singletos, rotâmeros de acetil amida, CH2, 2HÕ, 4,02-3,88 úm, 2Hõ, 3,68-3,52 úm, 1HÕ, 3,32-3,20 úm, IHõ, 3,07-2,88 úm, 2HÕ, 2,88-2,58 Úm, 3HÕ, 2,25-2,22 Ú2 singletos, rotâmeros de acetil amida, acetil CH3, 3Hõ, 2,11-1, %8 úm, IHõ, 1,%3-1,53 úm, 3HÕ, 1,3%-1,22 úm, 3HÕ.
Compostos exemplares adicionais são encontrados na Tabela 1.
Exemplo 1 - Inibição de FASN por Compostos da Presente
Divulgação
Determinação de atividade bioquímica de FASN; A enzima FASN foi isolada de células SKBr3. SKBr3 é uma linhagem celular de cancro de mama humano com altos níveis de expressão de FASN. Estima-se que FASN compreenda cerca de 250 da proteínas citosõlicas nesta linhagem celular. Células SKBr3 foram homogeneizadas em um homogeneizador dounce, então, centrifugadas por 15 minutos a 4 °C para remover metéria particulada. 0 sobrenadante foi então analisado por teor de proteína, diluído para a concentração apropriada, e usado para medir atividade de FASN. A presença de FASN foi confirmada por análise western blot. Um método similar para isolamento de FASN a partir de células SKBr3 é descrito em Teresa, P. et al. úClin. Cancer Res. 200%; 15Ú24Õ, 7608- 7615Õ.
Atividade de FASN do extrato de célula SKBr3 foi determinada pela medição tanto da oxidação de NADPH ou da quantidade de coenzima A contend tiol úCoAõ liberada durante a reação de sintase de ácido graxo. 0 corante CPM ú7-dietilamino-3-ú4'-maleimidil-fenilõ-4- metilcumarinaõ contém um grupo reativo de tiol que aumenta sua emissão de fluorescência na reação com o grupo sulfidril de CoA. As atibidades bioquímicas mostradas na Tabela 1 foram determinadas usando a medição de fluorescência de liberação de CoA através de um procedimento descrito em Chung C.C. et al. úAssay and Drug Development Technologies, 2008, 6Ú3Õ, 361-374Õ.
Exemplo 2 - Atividade Antiviral A atividade antiviral de Estrutura úI-Zõ foi avaliada usando o Sistema replicon de HCVlbp
ϋ-ζ> Ο replicon foi construído usando a linhagem celular ET úluc-ubi-neo'ETõ, uma linhagem celular de hepatoma humano Huh7 abrigando um replicon de HCV com um repórter de luciferase estável úLucõ e três mutaçíH es adaptativas de cultua celular úPietschmann, et al Ú2002Õ J Virol. 76μ4008-4021ο. 0 ensaio de avaliação antiviral de replicon de HCV examinou os efeitos de compostos em seis concentraçS es de meiolog. Alfa-2b de interferon humano foi incluído em cada rodada como um composto de controle positivo. Culturas sub-confluentes da linhagem ET foram plaqueadas em placas de %6 cavidades que são dedicadas para a análise de nS mecos de células úcitotoxicidadeõ ou atividade antiviral e, no dia seguinte, drogas foram adicionadas às cavidades apropriadas. As células foram processadas 72 horas mais tarde quando as células ainda estavam sub-conf luentes. IC50 úconcentraç0 es inibindo o replicon em 500 e %O0 , respectivamenteõ,IC50 úconcentração reduzindo a viabilidade celular em 500 õ e valores SI úíndice seletivop ICSo'EC5oõ foram determinados. Níveis de replicon de HCV RNA foram avaliados como atividade de Luc derivada de replicon de HCV RNA ou como HCV RNA por TaqMan RT-PCR. Dois métodos foram usados para estimar contagens celulares úcitotoxicidadeõ. Quando o sistema de ensaio Luc foi empregado, o ensaio de proliferação celular CytoTox-1 colorimétrico úPromegaõ foi usado para estimar os tM meros de células, embora níveis de RNA ribossômio urRNAõ determinados através de TaqMan RT-PCR foram usados como uma indicação de n0 meros celulares no ensaio à base de RNA. Um resumo dos resultados é mostrado abaixo na Tabela 2.
Tabela 2 .
Exemplo 3- Inibição de FASN Correlata à Inibição de HCV
As atividades antivirais de 15 compostos da presente divulgação únúmeros correlatos aos compostos na Tabela lõ foram medidas usando o sistema de replicou de HCV.
Linhagem celular de replicou 1 b úReplicon HCV lb'Luc-Neo úlb Coni com gene Firefly integradoõõ foi estabelecido seguindo métodos publicados úLohmann et ai. úl%%%0 Science 2 8 5ύ54 24ί3μ110 -113 , Lohmann et al. Ú200113 J Virol. 75Ú3KI μ1437-144% e Qi et ai. (2009) Antiviral
Res. 81Ú2H μ166-173Husando Huh7 por seleção de G418. O replicou foi montado usando fragmentos de genes sintéticos. A linhagem GTlb possui PV-EKT econtempla 3 mutaçEI es adaptativas E1202GÚNS3Õ, T1280IÚNS3Õ, K1846TÚNS4BÕ e a estrutura é Conl. 0 meio de cultura ίοίμ aõ Suplemento DMEM com 10% FBS, G418 Ú2 50pg'mlõ, estreptomicina úlOOpg 'mlo'penicilina ulOOU'mlo, L-glutamina úlOOxõ, NEAA úlOOxõ bõ Meios preparados como seguei iõ 500 ml de meio DMEM uGibco, Cat#llH 60-077Õ iiõ 57 ml de Soro Bovino Fetal úGibco, Cat# 16140-071Õ iiiõ 5,7 ml de Penicilina-Estreptomicina ÚGibco, Cat#15140-122Õ ivõ 5,7 ml de aminoácidos não-essenciais MEM úGibco, Catí111140-050Õ võ 5,7 ml de L-glutamina ÚGibco, Catí125030-081Õ viõ 574,1 ml de meio + 2,87ml SOmg'ml G418 [final 0,25mg'ml] ÚGibco, Catí 10131-027Õ
Os compostos foram dissolvidos em DMSO para prover uma solução estoque de 10mM ou usados a partir de soluç0 es estoque de DMSO. Os compostos foram diluídos para gerar diluiçS es em série de 10-pontos meio-log ú3.16-dobasõ para ensaio em placas de 384 cavidades úEcho qualified 384-well PP úLabcyte CatíP-05525ÕÕ mais DMSO em duplicata. Este experimento foi repetido três vezes em três dias diferentes.
As células foram colhidas quando a confluência atingiu %O0 -1000 . As concentraçS es de células foram ajustadasapa 8xl04 células'ml e adicionadas a microplacas de ensaio brancas de 384 cavidades útecido-cultura tratada - Greiner CatÍ781QS0õ para alcançar uma densidade celular final de 2.000 células'cavidade. As placas foram incubadas a 50 Cg) e 37 °C por 72 horas.
Após 72 horas de incução, reagente Bright-Glo Luciferase úPromega, catÍE2650õ e Cell Titer Flo úPromega, catíG6080'1'2õ foram preparados e armazenados no escuro enquanto equilibrando para temperatura ambiente. As células tratadas foram equilibradas da mesmka forma para temperatura ambiente. 10 pL de Cell Titer Flo foram adicionados a cada cavidade de células tratadas com composto e incubadas em placas de microtitulação por aprox. 0,5 hora. A viabilidade celular foi medida usando um leitor Envision údisponível de Perkin Elmerõ para estimar a citotoxicidade. 30 μΐ de substrato de firefly luciferase foram adicionados a cada cavidade e a quimioluminescência foi medida como um indicador da extensão de replicação de HCV.
A atividade anti-replicon u.% de inibiçãoõ é calculada usando a equaçãoS
A citotoxicidade é calculada usando a equaçãolEI
Foi determinada ser uma correlação entre a potência de inibição de FASN e atividade antiviral como ilustrado na Tabela 3 abaixo e Fig. 1. Nota-se que nenhum dos compostos causou citotoxicidade significante.
Tabela 3
Exemplo 4 -- Inibidores de FASN Retêm Atividade contra
Mutantes HCV que Conferem Resistência a Agentes Antivirais de Ação Direta
Um dos principais desafios no tratamento de hepatite C é a rápida emergência de resistência em resposta a agentes antivirais de ação direta. A resistência tipicamente resulta quando o vírus gera um ponto mutante que suporta funções virais essenciais, mas impede que agentes antivirais se liguem. Três inibidores de FASN úcompostos 55, 20, e 70õ foram testados por sua capacidade de inibir mutantes de HCV que conferem resistência a agentes antivirais representativos. Cada um destes mutantes foi introduzido em um cons true to de GTlb com base emu ma estrutura de Conl contendo o gene PVIRES-Luciferase Ubi-Neo e abrigando 1 mutação adaptativa ÚS2204IÕ, úLohmann et al. úl%%%õ Science 285ύ5424ομ110-113, Lohmann et al. Ú2001Õ J. Virol. 75ύ3ομ1437-144% e Qi et al. Ú200%õ Antiviral Res. 81ύ2ομ166-173Õ. As atividades antivirais foram medidas pelo método descrito no Exemplo 3.
As mutações estudadas são mostradas na Tabela 4 abaixo.
Tabela 4. Mutações Estudadas
Um inibidor alostérico de NS4B conhecido úComposto Aõ, um inibidor de NS5A conhecido ÚComposto Bõ, um inibidor de NS5B não-nucleosídico conhecido úComposto Cõ, um inibidor de NS3'NS4A protease conhecido ÚComposto Dõ e um inibidor de NS5B nucleosídico conhecido ÚComposto Eõ foram testados em paralelo com os inibidores de FASN da presente divulgação para confirmer o desempenho das mutações de resistência. ECso's antivirals para os vários compostos contra o painel de mutantes, juntamente com eixo relativo em EC50 relativo ao replicon do tipo selvagem GTlb são mostrados abaixo. A variação de ensaio normal é ± 3-4 vezes. Desvios de EC50 fora desta faixa implicam em resistência e são indicados em negrito. Os 3 inibidores de FASN retêm atividade através do painel de mutantes, enquanto que agentes antivirais de ação direta apresentam resistência contra mutações em seus respectivos sítios de ligação.
Tabela 5. EC50's Antivirais.
Tabela 6. Eixo de dobras em EC50 em relação a tipo selvage
Exemplo 5 -- Inibidores de FASN Úteis em Terapias de
Combinação
Este exemplo descreve a atividade antiviral in vitro e citotoxicidade do composto da Estrutura úV-Kõ em combinação com IFN-oí, Ribavirina, Compostos B, C, D e E contra uma linhagem celular de replicon GTlb de HCV. i V-K)
Materiaisp Vírusp 0 plasmídeo de replicon GTlb foi montado usando fragmentos de gene sintético. 0 genoma de replicon contém segmentos de gene PVIRES-Luciferase Ubi-Neo e abriga 1 mutação adaptativa ÚS22041Õ, e a estrutura é Coni. A linhagem celular de replicon GTlb foi estabelecida pelos seguintes métodos publicados.
Meio e Reagentesp A Tabela 7 abaixo prove detalhes em relação aos reagentes do meio de cultura usados neste exemplo.
Tabela 7, Lista de reagentes do meio de cultura
Instrumentos Analíticosp Os seguintes instrumentos analíticos foram usados para realizer o ensaio neste exemplop • POD-810 • Topcount úPEõ • Envision ÚPEõ ® Multidrop úThermoõ Métodos:
Preparação de placas de composto para teste de composto únicop Compostos foram fornecidos como pós secos e foram reconstituídos em DMSO para gerar soluç® es estoque. 0 sistema POD-810 foi usado para gerar diluiç® es em érie de 10 pontos meio-log ú3.16-vezesõ para o ensaio em placas de %6 cavidades. As concentrações de teste mais altas são detalhadas para cada composto na Tabela 8.
Protocolos de Ensaio úcompostos I® nicosõp Cada competo foi analisado com diluições em série de 3.16-vezes úmeio log® para 10 concentrações mais DMSO em duplicata. Células GTlb de replicon de HCV foram colhidas e ajustadas para uma concentração celular de 8E+04 células'ml. Um Multidrop foi usado para plaquear ΙΟΟμΙ'1 em %6 microplacas de ensaio para alcançar uma densidade celular final de 8.000 células'cavidade. As placas foram incubadas a 50 deC02, 37 °C por 72 horas.
Ao final das 72 horas de incubação, a atividade antiviral e citotoxicidade foram medidas. Reagente Bright-Glo Luciferase e Cell Titer Flo foram preparados e armazenados no escuro equilibrando para temperatura ambiente. As placas de células foram deixadas equilibrar para temperatura ambiente também. Um Multidrop foi usado para adicionar 20pL de Cell Titer Flo a cada cavidade de células livres de composto e tratadas com composto. As placas são incubadas por 1 hora, e a viabilidade celular é medida em um leitor Envision para cálculo de citotoxicidade. Cinquenta microlitros de substrato de firefly luciferase are adicionados a cada cavidade, incubados por 2 minutos, e a quimioluminescência é medida para cálculo de EC50. A atividade anti-replicon úõ de inibiçãoõ foi calculada usando a seguinte equaçãop H Inhibition = [1-úúComposto-backgroundõ'úDMSO-bac^roundõõ x 100].
Compostos de teste e configuração do ensaio para estudos de combinação de dois compostosp Os DMSO estoques dos
compostos usados no teste de composto único foram também usados nesta análise. As matrizes de diluição de combinação foram geradas por P0D-S1Q em microplacas de ensaio de %6 cavidades. 0 sistema P0D-S1Q foi usado para gerar diluições em série de 2 vezes, 7-pontos em um formato de matriz. A concentração máxima testada para cada composto é detalhada abaixo.
Tabela 8, Atividades esperadas e concentrações superiores de compostos testados em agente único e estudos de combinação.
0 composto de estrutura IE3 V-Kõ foi testado sozinho e em combinação com compostos detalhados 11a Tabela %. Cada composto foi também testado sozinho como um agente único.
Tabela %. CombinaçS es de compostos para avaliaçãoín vitro.
Configuração do Ensaio Kl combínaçK! es de duas drogaUõ Cada composto foi avaliado com diluiçE es em série de 2-ezes para 7 concentrações em formato de matriz mais cada droga sozinha. Células GTlb de replicon HCV foram colhidas e ajustadas para uma concentração celular de 8E+04 células'ml. Um Multidrop foi usado para plaquear lOOpL em microplacas de 0 6 cavidades para alcançar uma densdade celular final de 8.000 células'cavidade. As placas foram incubadas a 5% C02, 37 °C por 72 horas.
Ao final das 72 horas de incubação, a atividade antiviral e citotoxicidade foram medidas. Reagente Bright-Glo Luiferase e Cell Titer Flo foram preparados e armazenados no escuro enquanto permitindo equilibrar para temperatura ambiente. As placas de células foram deixadas equilibrar para temperatura ambiente também. Um Multidrop foi usado para adicionar 20μ1 de Cell Titer Flo a cada cavidade de células livres de composto e tratadas por composto. As placas foram incubadas por 1 hora, e a viabilidade celular foi medida em um leitor Envision para cálculo de citotoxicidade. 0 líquido foi então removido das placas, após o que 50 pL de PBS e 50 pL de solução de substrato de firefly luciferase foram adicionados a cada cavidade, após um período de incubação de 2 minutos, quimioluminescência (para cálculo de replicação de HCV) foi medida. Os dados foram analisados usando MacSynergy™II .
Resultados do Ensaio:
Atividade e citotoxicidade dos compostos. Os valores de EC50 e CC50 são resumidos abaixo na Tabela 10.
Tabela 10. EC5o e CC5o de Cada Composto de Teste
Efeito de Combinação. 0 efeito de combinação dos pares de composto foi calculado usando MacSynergy™!! e tais resultados estão resumidos na Tabela 11 abaixo.
Tabela 11. Resumo dos efeitos de combinação dos pares de composto
±Nenhuma das combinaçE es causa citotoxicidade.
ConclusES es
Os fatores Z dos pares de composto resumidos na Tabela 12 indicam que o ensaio de qualidade é melhor do que o padrão QC.
Tabela 12. Resumo do fator Z dos pares de composto
Os valores de EC50 dos compostos individuais na matriz de combinação úresumidos na Tabela 13õ são consistentes com os dados de EC50 obtidos para inibição de composto único na Tabela 10,
Tabela 13. Resumo de EC50 de dose única em combinação de composto
0 composto da Estrutura úV-Kõ demonstrou ter atividade antiviral adicional sem citotoxicidade aumentada em combinação com agentes que representam uma variedade de mecanismos. Estes resultados são resumidos na Tabela 14 abaixo.
Tabela 14. Resumo de mecanismos antivirais que são adicionais com o composto da Estrutura ÚV-Kõ. 0 termo "antiviral de ação direta" ú"DAA"õ se refere a um composto que se liga a e inibe uma proteína virai, em vez de uma proteína hospedeira.
IFN-α e RBV representam cuidado padrão atual para tratamento de infeção por Hepatite C, e os inibidores de HCV protease Telaprevir e Boceprivir foram recentemente aprovados. A atividade antiviral adicional e falta de citotoxicidade aumentada em combinação com IFN-α e RBV adicionalmente sugerem que compostos desta invenção não irão interferir com processos hospedeiros críticos, tais como defesa celular úIFN-oíE ou biossíntese de nucleotídeo de guanidina úRBVSS . Compostos desta invenção, tais como o composto de Estrutura úV-KE devem, portanto, ser terapeuticamente úteis se administrados em regimes de combinação com técnicas padrão de cuidado. Além disso, as atividades antivirais adicionais observadas com Composto B, Composto C, e Composto E sugerem que moléculas desta invenção, tais como o composto de Estrutura úV-Kõ podem ser produtivamente combinadas com agentes atualmente em desenvolvimento que tem como alvo mecanismos mais novos úpor exemplo, inibidores de NS5A e NS5BÕ.
Exemplo 6 - Atividade Anti-tumor - Ensaio de Citoxicidade Multiplexada A células foram cultivadas em RPMI1640, 100 FBS, 2 mM L-alanil-L-Glutamina, 1 mM Na piruvato ou um meio especial em uma atmosfera umidifiçada de 50 CQ a 37 °C. As células foram semeadas em placas de 384 cavidades e incubadas em uma atmosfera umidif içada de 50 C0 a 37 °C. Os compostos foram adicionados 24 horas após semeamento das células. Ao mesmo tempo, uma placa de célula não tratada no tempo zero foi gerada.
Após um período de incubação de 72 horas, as células foram fixadas e manchadas com anticorpos fluorescentemente rotulados e corante nuclear para permitir visualização de núcleos, células apoptóticas e células mitóticas. Células apoptõticas foram detectadas anticorpo anti-caspase 3 anti-ativo. Células mitóticas foram detectadas usando um anticorpo de fosfo-histona-3.
Os compostos foram diluídos em série em incrementos de meio-log 0 3.16-vezesõ e avaliados em 10 concentraçSs em uma concentração de ensaio final de 0,10 DMSO a patir da mais alta concentração de teste especificada no capítulo de informação de amostra. Microscopia de fluorescência automatizada foi realizada usando um Analisador Celular GE
Healthcare IN 1000, e imagens foram coletadas com uma objetiva de 4X.
Imagens tiff de doze bits foram adquiridas usando o Analisador InCell 1000 3.2 e analisadas com software Developer Toolbox 1.6. Valores de EC50 e IC50 foram calculados usando regressão não-linear para ajustar dados a um ponto sigmoidal 4, modelo de resposta de dose One-Site de 4 parâmetros, ondep y úajusteõ =A+ [úB-Aõ'úl + tjdC'xo^ Dõõ] . Ajuste de curva, calculus de EC5o'IC50 e geração de relatório são realizados usando um software à base de MathlQ de mecanismo de redução de dados personalizado úAIMõ. 0 ensaio de citotoxicidade utiliza uma técnica de análise à base de imagem celular onde células são fixadas e manchadas com anticorpos fluorescentemente rotulados e corante nuclear para visualizar nSS cleos e células apoptõtias e mitóticas. Células mitóticas são detectadas usando um anticorpo de caspase-3 anti-ativo. Células mitóticas são detectadas usando um anticorpo de fosfo-histona-3. A proliferação cellular é medida pela intensidade de sinal do corante nuclear incorporado. A saída do ensaio de proliferação celular é referida como a contagem celular relativa. Para determinar o fechamento da proliferação cellular, a saída de dados de proliferação celular é transformada em percentagem de controle úPOCõ usando a seguinte fórmulap POC = contagem cellular relativa úcavidades de compostoõ'contagem celular relativaú cavidades de veículoõ x 100 A placa não tratada no tempo zero é usada para determinar o número de duplicações em um período de ensaio de 72 horasp Número de duplicações em 72 horas = LN[Número Celular B fechamento em 72 horasH ± Número celular ESI tempo zeroESI ] ' LNE3 2§ . A saída de cada biomarcador é dobractobre background de veículo normalizado para a contagem celular relativa em cada cavidade. 0 marcador de caspase-3 ativado rotula células dos estágios iniciais e posteriores da apoptose. A saída é mostrada como um aumento de células apoptõticas sobre backgroung de veículo normalizado para contagem celular relativa em cada cavidade. Concentrações de composto de teste que causam indução de 5 vezes no sina de caspase-3 indica significante indução de apoptose. Cavidades com concentrações superiores ao IC%5 de contagem celular relativa são eliminadas da análise de indução de caspase-3. 0 marcador de fosfo-histona-3 rotula células mitóticas. A saída é mostrada como uma indução de dobra de células mitóticas sobre backgroung de veículo normalizado para a ocntagem celular relativa em cada cavidade. Quando a indução de dobra de sinal de célula mitótica sobre o background é ~1, não há "nenhum efeito" no ciclo celular. Dois ou mais aumentos de dobra em sinal de fosfo-histona-3 sobre o background de veículo indica indução de composto de teste significativa de bloco mitõtico.
Duas ou mais reduções de dobra no sinal de fosfo-histona-3 podem indicar o bloco de G1'S apenas quando os níveis de citotoxicidade estão abaixo do IC%5 de contagem celular relativa medido. Quando 2 ou mais reduções de dobra no sinal de fosfo-histona-3 são observadas em concentrações superiores ao IC%5 de contagem celular relativa, a redução em contagens celulares relativas são provavelmente devido a um efeito de citotoxicidade geral em vez de um bloco de fase Gl'S real. Cavidades com concentraçH es superioes ao IC§ 5 de contagem celular relativa são eliminadas da análise de fosfo-histona-3.
Proliferação celular medida por contagens de células relativas foram o critério para resposta positiva.
Apoptosep
Aumento de Á5 vezes em sinal de caspase 3 ativado indica uma resposta a apoptose
Mitosep
Aumento de Á2 vezes em fosfo-histona-3 indica bloco mitótico
Redução de <2 vezes em fosfo-histona-3 indica bloco Gl'S Tabela 15. Resultados
Embora aspetos preferidos da presente invenção tenham sido mostrados e descritos neste documento, será óbvio àqueles versados na técnica que tais aspetos são providos para fins de exemplo apenas. Diversas variações, alterações e substituições irão ocorrer àqueles versados na técnica sem se afastar da invenção. Deve ser entendido que várias alternativas aos aspetos da invenção descritos neste documento podem ser empregues na prática da invenção. Pretende-se que as seguintes reivindicações definam o âmbito da invenção e que métodos e estruturas dentro do âmbito das reivindicações e seus equivalentes sejam cobertos por elas.

Claims (26)

  1. REIVINDICAÇÕES l.Um composto de estrutura ύΙΧομ
    (IX) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em quep R1 é H, -CN, halogénio, alquilo Ci-C4 linear ou ramificado, -0- úcicloalquilo C3-C5õ, -0- úalquilo Ci-C4 linear ou ramificadoõ em quep cicloalquilo C3-C5 opcionalmente inclui um heteroãtomo de oxigénio ou azoto; e quando R1 não é H, -CN ou halogénio, é opcionalmente substituído com um ou mais halogéneos; cada R2 é independentemente hidrogénio, halogénio ou alquilo Ci-C4 linear ou ramificado; R3 é H, -OH ou halogénio; R21 é H, halogéneo, alquilo Ci-C4 linear ou ramificado, cicloalquilo C3-C5, em que o cicloalquilo C3-C5 inclui opcionalmente um heteroãtomo de oxigénio ou de azoto; R22 é H, halogéneo ou alquilo Ci-C2; R24 é H, alquilo Ci-C4 linear ou ramificado, - úalquil Ci-C4õt-0H, - úalquil Ci-C4õt-0t- úcicloalquilo C3-C5õ ou úalquilo C1-C4Õ -0- úalquilo Ci-C4 linear ou ramificadoõ em queμ t é 0 ou 1; o cicloalquilo C3-C5 opcionalmente inclui um heteroãtomo de oxigénio ou azoto; L1 é CR23 ou N; L2 é CH OU N; Pelo menos um de L1 ou L2 é N; e R23 é H ou alquilo Ci~C4 linear ou ramificado.
  2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R“4 é alquilo C4-C4 linear ou ramificado ou - úalquilo Ci-C4õt-0-úalquilo C4-C4 linear ou ramificadoõ em que t é 0 ou 1.
  3. 3. Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por R24 ser alquilo Ci-C4 linear ou ramificado.
  4. 4. Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por R24 ser metilo.
  5. 5. Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo facto de L1 e L2 serem ambos N.
  6. 6. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que R21 é halogénio, alquilo C4-C4 linear ou ramificado ou cicloalquilo C3-C5, em que o cicloalquilo C3-C5 inclui opcionalmente um heteroãtomo de oxigénio ou de azoto.
  7. 7. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R21 ser cicloalquilo C3-C5.
  8. 8. Processo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado por R21 ser ciclobutilo. %.Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2 ou 5, caracterizado por Ri2 ser H, metilo ou etilo.
  9. 10. Processo de acordo com a reivindicação %, caracterizado por R22 ser metilo.
  10. 11. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que R3 é H ou halogéneo.
  11. 12. Composto de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por R3 ser H.
  12. 13. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que cada R2 é H.
  13. 14. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2 ou 4, em que R1 é halogénio, -CN ou haloalquilo Ci-C2.
  14. 15. Processo de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo facto de R1 ser -CN.
  15. 16. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R21 é alquilo Ci-C2 ou cicloalquilo C3-C5 e R22 é alquilo Ci-C2.
  16. 17. Processo de acordo com a reivindicação 16, caracterizado por R21 ser cicloalquilo C3-C5 e R22 ser alquilo Ci-C2.
  17. 18. Processo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado por R24 ser alquilo Ci-C2. 1%. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R1 é -CN, cada R2 é H, R3 é H ou F, R21 é C3-C4 cicloalquilo, R22 é metilo, L1 e L2 são N e R24 é metilo, etilo, hidroximetilo, metoximetilo, 2-metoxietilo.
  18. 20. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por possuir uma fórmula selecionada do grupo que consiste emp
  19. 21. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de ter a seguinte fórmulap
  20. 22. Composição farmacêutica compreendendo qualquer um dos compostos de acordo com as reivindicações 1-21 e um veículo, excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável.
  21. 23. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer um dos compostos das reivindicações 1-21 para utilização no tratamento de uma infeção virai num indivíduo.
  22. 24. Compostos para utilização de acordo com a reivindicação 23, em que a infeção virai compreende infeção por hepatite C.
  23. 25. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer um dos compostos de acordo com as reivindicações 1-21 para utilização no tratamento de uma condição caracterizada por desregulação de uma função de ácido gordo sintase num suj eito.
  24. 26. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer um dos compostos de acordo com as reivindicações 1-21 para utilização no tratamento de cancro num indivíduo.
  25. 27. Compostos para utilização de acordo com a reivindicação 26, em que o cancro é cancro da mama.
  26. 28. Compostos para utilização de acordo com a reivindicação 26 em que o cancro é cancro da mama. 2%. Compostos para utilização de acordo com a reivindicação 26, em que o cancro é cancro do pulmão, cancro do ovário, cancro da próstata, cancro do cólon, cancro rectal, cancro da tiroide, cancro do nó linfático, cancro do esófago, cancro da nasofaringe, cancro da orofaringe, cancro das glândulas salivares ou cancro do cérebro.
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