PT2336120E - Combinações contendo indazoles amida-substituídos como inibidores de poli(adp-ribose) polimerase (parp) - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO

"COMBINAÇÕES CONTENDO INDAZOLES AMIDA-SUBSTITUÍDOS COMO INIBIDORES DE POLI(ADP-RIBOSE) POLIMERASE (PARP)" A presente invenção refere-se a indazoles amida-substituídos que são inibidores da enzima poli(ADP-ribose)polimerase(PARP), anteriormente conhecida como poli(ADP-ribose)sintase e poli(ADP-ribosil)transferase. Os compostos da presente invenção são úteis como mono-terapêuticas em tumores com defeitos específicos em vias de reparação de ADN e como melhoradores de certos agentes de dano de ADN tais como agentes anti-cancro e radioterapia. Além disso, os compostos da presente invenção são úteis para reduzir a necrose celular (em acidente vascular cerebral e enfarte do miocárdio), regular negativamente inflamação e lesão tecidual, tratar infecções retrovirais e proteger contra a toxicidade de quimioterapia. A poli(ADP-ribose) polimerase (PARP) constitui uma super família de dezoito proteínas que contêm domínios catalíticos de PARP (Bioessays (2004) 26:1148). Estas proteínas incluem PARP-1, PARP-2, PARP-3, tanquirase-1, tanquirase-2, vaultPARP e TiPARP. PARP-1, o membro fundador, consiste em três domínios principais: um domínio amino (N) -terminal de ligação a ADN (DBD) que contêm dois dedos de zinco, o domínio de auto-modificação, e um domínio catalítico carboxi (C)-terminal.

As PARP são enzimas nucleares e citoplasmáticas que clivam NAD+ a nicotinamida e ADP-ribose para formar polímeros de ADP-ribose longos e ramificados em proteínas alvo, que incluem topoisomerases, histonas e a própria PARP (Biochem. Biophys. Res. Commun. (1998) 245:1-10). A poli(ADP-ribosil)ação foi implicada em diversos processos biológicos, que incluem reparação de ADN, transcrição de genes, progressão do ciclo celular, morte 1 ΕΡ2336120Β1 celular, funções de cromatina e estabilidade genómica. A actividade catalítica de PARP-1 e PARP-2 mostrou-se ser prontamente estimulada por meio de quebras da cadeia de ADN (veja-se Pharmacological Research (2005) 52:25-33). Em resposta ao dano de ADN, PARP-1 liga-se a cortes pontuais do ADN de cadeia simples ou dupla. Sob condições fisiológicas normais existe actividade de PARP mínima, no entanto, no dano de ADN uma activação imediata de actividade de PARP de até 500 vezes ocorre. Ambos PARP-1 e PARP-2 detectam interrupções de cadeia de ADN que agem como sensores de cortes pontuais, proporcionando sinais rápidos para pausar a transcrição e recrutar as enzimas requeridas para a reparação de ADN no local do dano. Uma vez que a radioterápica e muitas abordagens de quimioterapia para a terapêutica do cancro agem por meio da indução do dano de ADN, inibidores de PARP são úteis como quimio- e radio sensibilizadores para o tratamento do cancro. Reportou-se que os inibidores de PARP são eficazes em radio sensibilização de células tumorais hipóxicas (documento US 5.032.617, documento US 5.215.738 e documento US 5.041.653). A maioria dos efeitos biológicos de PARP refere-se a este processo de poli (ADP-ribosil) ação que influencia as propriedades e função das proteínas alvo; aos oligómeros PAR que, quando são clivados das proteínas poli(ADP-ribosil) adas, conferem efeitos celulares distintos; a associação física de PARP com proteínas nucleares para formar complexos funcionais; e a redução do nível celular de seu substrato NAD+ (Nature Review (2005) 4:421-440).

Além de estar envolvida na reparação de ADN, a PARP pode também agir como um mediador da morte celular. A sua activação excessiva em condições patológicas tais como isquemia e lesão de reperfusão pode resultar em depleção substancial da NAD+ intercelular, que pode levar à interrupção de diversas vias metabólicas dependentes de 2 ΕΡ2336120Β1 NAD+ e resultar em morte celular (veja-se Pharmacological Research (2005) 52:44-59). Como um resultado da activação de PARP, os níveis de NAD+ declinam significativamente. A activação de PARP extensiva leva a depleção grave de NAD+ em células gue sofrem de dano massivo de ADN. A semivida curta de poli(ADP-ribose) resulta numa taxa de renovação rápida, uma vez que quando a poli(ADP-ribose) é formada, é rapidamente degradada pela poli(ADP-ribose) glicohidrolase (PARG) constitutivamente activa. PARP e PARG formam um ciclo que converte uma grande quantidade de NAD+ para ADP-ribose, o que produz uma queda de NAD+ e ATP para menos de 20% do nível normal. Tal cenário é especialmente prejudicial durante a isquemia quando a privação de oxigénio já comprometeu drasticamente a produção de energia celular. Assume-se que a produção de radicais livres subsequente durante a reperfusão seja uma causa principal de dano tecidual. Parte da queda de ATP, que é típica em muitos órgãos durante isquemia e reperfusão, poderia estar ligada à depleção de NAD+ devido à renovação de poli(ADP-ribose) . Assim, espera-se que a inibição de PARP conserve o nível de energia celular deste modo potencializando a sobrevivência de tecidos isquémicos após traumatismo. Os compostos que são inibidores de PARP são, portanto, úteis para tratar condições que resultam da morte celular mediada por PARP, que incluem condições neurológicas tais como acidente vascular cerebral, trauma e doença de Parkinson.

Demonstrou-se que os inibidores de PARP são úteis para a destruição especifica de tumores deficientes de BRCA-1 e BRCA-2 (Nature (2005) 434:913-916 e 917-921; e Câncer Biology & Therapy (2005) 4:934-936).

Mostrou-se que os inibidores de PARP aumentam a eficácia de fármacos anti-cancro (Pharmacological Research (2005) 52:25-33), que incluem compostos de platina tais como cisplatina e carboplatina (Câncer Chemother Pharmacol (1993) 33:157-162 e Mol Câncer Ther (2003) 2:371-382). 3 ΕΡ2336120Β1

Mostrou-se que os inibidores de PARP aumentam a actividade antitumoral de inibidores da topoisomerase I tais como Irinotecano e Topotecano (Mol Câncer Ther (2003) 2:371-382; e Clin Câncer Res (2000) 6:2860-2867) e isto foi demonstrado em modelos in vivo (J Natl Câncer Inst (2004) 96:56-67).

Mostrou-se que os inibidores de PARP restauram a susceptibilidade aos efeitos citotóxicos e antiproliferativos de temozolomida (TMZ) (veja-se Curr Med Chem (2002) 9:1285-1301 e Med Chem Rev Online (2004) 1:144-150) . Isto foi demonstrado num número de modelos in vitro (Br J Câncer (1995) 72:849-856; Br J Câncer (1996) 74:1030-1036; Mol Pharmacol (1997) 52:249-258; Leucemia (1999) 13:901-909; Glia (2002) 40:44-54; e Clin Câncer Res (2000) 6: 2860-2867 e (2004) 10:881-889) e modelos in vivo (Blood (2002) 99:2241-2244; Clin Câncer Res (2003)9:5370-5379 e J Natl Câncer Inst (2004) 96:56-67). Mostrou-se também que os inibidores de PARP previnem o aparecimento de necrose induzida pelos agentes de metilação iV3-adenina selectivos tais como Me0S02 (CH2)-lexitropsina (Me-Lex) (Pharmacological Research (2005) 52:25-33).

Mostrou-se que os inibidores de PARP agem como sensibilizadores de radiação. Reportou-se que os inibidores de PARP são eficazes na radiossensibilização de células tumorais (hipóxicas) e eficazes em prevenir que as células tumorais se recuperem de dano de ADN potencialmente letal (Br. J. Câncer (1984) 49(Supl. VI):34-42; e Int. J. Radiat. Bioi. (1999) 75:91-100) e subletal (Clin. Oncol. (2004) 16(1):29-39) após radiação terapêutica, presumivelmente pela sua capacidade de prevenir que a quebra da cadeia de ADN se reagrupe e por afectar diversas vias de sinalização de dano de ADN.

Mostrou-se também que os inibidores de PARP são úteis para tratar doenças miocárdicas agudas e crónicas (veja-se Pharmacological Research (2005) 52:34-43) . Por exemplo, 4 ΕΡ2336120Β1 demonstrou-se que injecções individuais de inibidores de PARP reduziram o tamanho do enfarte causado pela isquemia e reperfusão do coração ou músculo esquelético em coelhos. Nestes estudos, uma única injecção de 3-amino-benzamida (10 mg/kg), um minuto antes da oclusão ou um minuto antes da reperfusão, causou reduções similares no tamanho do enfarte no coração (32-42%) enquanto 1,5-dihidroxiisoquinolina (1 mg/kg), outro inibidor de PARP, reduziu o tamanho do enfarte num grau comparável (38-48%). Estes resultados tornam razoável assumir que os inibidores de PARP poderiam salvar coração anteriormente isquémico ou lesão de reperfusão de tecido do músculo esquelético (PNAS (1997) 94:679-683). Reportou-se também achados similares em porcos (Eur. J. Pharmacol. (1998) 359:143-150 e Ann. Thorac. Surg. (2002) 73:575-581) e em cães (Shock. (2004) 21:426-32).

Mostrou-se que os inibidores de PARP são úteis para tratar certas doenças vasculares, choque séptico, lesão isquémica e neurotoxicidade (Biochim. Biophys. Acta (1989) 1014:1-7; J. Clin. Invest. (1997) 100: 723-735). Dano de ADN por radical de oxigénio que leva a quebras de cadeia em ADN, que são subsequentemente reconhecidas por PARP, é um factor principal contribuinte a tais estados de doença como foram mostrados por estudos de inibidor de PARP (J. Neurosci. Res. (1994) 39:38-46 e PNAS (1996) 93:4688-4692). As PARP demonstraram também que desempenham um papel na patogénese do choque hemorrágico (PNAS (2000) 97:10203-10208) .

Mostrou-se que os inibidores de PARP são úteis para o tratamento de doenças inflamatórias (veja-se Pharmacological Research (2005) 52:72-82 e 83-92).

Demonstrou-se também que infeção retroviral eficiente de células de mamíferos é bloqueada pela inibição de actividade de PARP. Mostrou-se que tal inibição de infeções por vector retroviral recombinante ocorre em vários tipos de células diferentes (J. Virology, (1996) 70(6):3992- 5 ΕΡ2336120Β1 4000) . Os inibidores de PARP têm assim sido desenvolvidos para utilização em terapêuticas antivirais e em tratamento de cancro (documento WO 91/18591).

Experiências in vitro e in vivo demonstraram que inibidores de PARP podem ser utilizados para o tratamento ou a prevenção de doenças autoimunes tais como diabetes Tipo I e complicações diabéticas (Pharmacological Research (2005) 52:60-71).

Especulou-se que a inibição de PARP atrasa os primeiros sintomas de caracteristicas de envelhecimento em fibroblastos humanos (Biochem. Biophys. Res. Comm. (1994) 201(2):665-672 e Pharmacological Research (2005) 52:93-99). Isto pode estar relacionado com o papel que PARP desempenha no controlo da função do telómero (Nature Gen., (1999) 23 (1) :76-80) . A vasta maioria de inibidores de PARP até à data interage com o domínio de ligação de nicotinamida da enzima e comporta-se como inibidores competitivos com relação a NAD+ (Expert Opin. Ther. Patents (2004) 14:1531-1551). Análogos estruturais da nicotinamida, tais como benzamida e derivados estavam entre os primeiros compostos a serem investigados como inibidores de PARP. No entanto, estas moléculas têm uma actividade inibitória fraca e possuem outros efeitos não relacionados a inibição de PARP. Assim, existe uma necessidade de proporcionar inibidores potentes da enzima PARP.

Inibidores de PARP estruturalmente relacionados foram anteriormente descritos. O documento WO 1999/59973 divulga anéis de benzeno amida-substituídos fusionados a anéis heteroaromáticos de 5 membros; o documento WO2001/85687 e o

documento WO2007/113596 divulgam índoles amida- substituídos; documento WO 1997/04771 , documento WO 2000/26192, documento WO 2000/32579, documento WO 2000/64878, documento WO 2000/68206, documento WO 2001/21615, documento WO 2002/068407, documento WO 6 ΕΡ2336120Β1 2003/106430, documento WO 2004/096793 e documento W02007/041357 divulgam benzoimidazoles amida-substituídos; documento WO 2000/29384 divulga benzoimidazoles e índoles amida-substituídos; e EP 0879820 divulga benzoxazoles amida-substituídos.

Foi agora surpreendentemente descoberto que indazoles amida-substituídos da presente invenção exibem particularmente níveis altos de inibição da actividade de poli(ADP-ribose)polimerase (PARP). Assim, os compostos da presente invenção são particularmente úteis como inibidores de PARP-1 e/ou PARP-2. Mostram também particularmente bons níveis de actividade celular, demonstrando bons efeitos anti-proliferativos em linhas de células deficientes de BRCAl e BRCA2. A presente invenção proporciona uma combinação compreendendo um composto de fórmula I:

em que: R1 é hidrogénio ou flúor; e R2 é hidrogénio ou flúor; ou sais farmaceuticamente aceitáveis, estereoisómeros ou tautómeros do mesmo, e temozolamida.

Numa forma de realização, R1 é hidrogénio.

Em outra forma de realização, R1 é flúor.

Numa forma de realização, R2 é hidrogénio.

Em outra forma de realização, R2 é flúor.

Numa forma de realização, R1 é hidrogénio e R2 é hidrogénio ou flúor. 7 ΕΡ2336120Β1

Em outra forma de realização, R1 é flúor e R2 é hidrogénio ou flúor.

Em outra forma de realização, R1 é hidrogénio e R2 é hidrogénio.

Em outra forma de realização, R1 é hidrogénio e R2 é flúor.

Em outra forma de realização, R1 é flúor e R2 é flúor.

Em outra forma de realização, R1 é hidrogénio ou flúor e R2 é hidrogénio. Em outra forma de realização, R1 é hidrogénio ou flúor e R2 é flúor. A presente invenção também proporciona combinações compreendendo compostos de fórmula II:

em que R1 e R2 são como definidos anteriormente; ou sais farmaceuticamente aceitáveis, estereoisómeros ou tautómeros do mesmo. A presente invenção também proporciona combinações compreendendo compostos de fórmula III:

aceitáveis ou tautómeros do em que R1 e R2 ou sais farmaceuticamente mesmo. A presente invenção também proporciona combinações compreendendo compostos de fórmula IV: 8 ΕΡ2336120Β1

em que R1 e R2 são como definidos anteriormente; ou sais farmaceuticamente aceitáveis ou tautómeros do mesmo.

As identidades preferidas com referência às fórmulas II, III e IV são como definidos anteriormente para a fórmula I mutatis mutandis. A presente invenção inclui também dentro do seu âmbito N-óxidos dos compostos de fórmula I anterior. Em geral, tais N-óxidos podem ser formados em qualquer átomo de nitrogénio disponível. Os N-óxidos podem ser formados por meios convencionais, tais como reagindo o composto de fórmula I com oxona na presença de alumina molhada. A presente invenção inclui dentro do seu âmbito pró-fármacos dos compostos de fórmula I anterior. Em geral, tais pró-fármacos serão derivados funcionais dos compostos de fórmula I os quais são prontamente conversíveis in vivo no composto necessário de fórmula I. Procedimentos convencionais para a seleção e preparação de derivados de pró-fármacos adequados são descritos, por exemplo, em Design of Prodrugs", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985.

Um pró-fármaco pode ser um derivado farmacologicamente inactivo de uma substância biologicamente activa (o "fármaco mãe" ou "molécula mãe") que requer transformação dentro do corpo de forma a libertar o fármaco activo, e que possui propriedades de distribuição melhoradas sobre a molécula de fármaco mãe. A transformação in vivo pode ser, por exemplo, como o resultado de algum processo metabólico, tal como hidrólise química ou enzimática de um éster carboxílico, fosfórico ou de sulfato, ou redução ou 9 ΕΡ2336120Β1 oxidação de uma funcionalidade susceptível. A presente invenção inclui dentro de seu âmbito solvatos dos compostos de fórmula I e sais dos mesmos, por exemplo, hidratos.

Os compostos da presente invenção podem ter centros assimétricos, eixos quirais, e planos quirais (como foram descritos em: E.L. Eliel e S.H. Wilen, Stereochemistry of Carbon Compounds, John Wiley & Sons, Nova Iorque, 1994, páginas 1119-1190), e ocorrem como racematos, misturas racémicas, e como diastereómeros individuais, com todos os possíveis isómeros e misturas dos mesmos, que incluem isómeros ópticos, todos tais estereoisómeros sendo incluídos na presente invenção. Além disso, os compostos divulgados no presente documento podem existir como tautómeros e pretende-se que ambas as formas tautoméricas estejam abrangidas pelo âmbito da invenção, mesmo embora somente uma estrutura tautomérica seja representada.

Os compostos podem existir em diferentes formas isoméricas, todas das quais são abrangidas pela presente invenção.

Os compostos podem existir num número de diferentes formas polimórficas.

Como é utilizado no presente documento, alquilCl-6 representa um grupo hidrocarboneto alifático saturado cíclico ramificado, de cadeia linear e que contém 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono. Por exemplo, "alquilCl-6" especificamente inclui metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, t-butilo, i-butilo, pentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo e ciclohexilo e assim por diante. Os grupos alquilo preferidos são metilo e etilo.

Os compostos particulares dentro do âmbito da presente invenção são:

Cloreto de 3-{ 4-[ 7-(aminocarbonil)-27íí-indazol-2- il]fenil}piperidínio; 10 ΕΡ2336120Β1 2 — { 4 — [ (3R) -Piperidin-3-il] fenil}-27i7-indazole-7-carboxamida; 2 — { 4 — [ (3S) -Piperidin-3-il] f enil}-2fí-indazole-7-carboxamida;

Trifluoroacetato de 3-{4-[7-(aminocarbonil)-5-fluoro-2H-indazol-2-il]fenil}piperidínio;

Trifluoroacetato de 5-fluoro-2-(3-fluoro-4-piperidin-3-ilfenil)-2H-indazole-7-carboxamida;

Trifluoroacetato de 3-{4-[7-(aminocarbonil)-2H[-indazol-2 — i1]fenil}piperidinio; 5-Fluoro-2-(4-piperidin-3-ilfenil)-2H-indazole-7-carboxamida; (3 S)-Cloreto de 3-{4-[7-(aminocarbonil)-2H-indazol-2-il]fenil}piperidinio; (3R)-Cloreto de 3-{4-[7-(aminocarbonil)-2H-indazol-2-il]fenil}piperidinio; (R) -5-Fluoro-2-(4-piperidin-3-ilfenil)-2H-indazole-7-carboxamida; (S) -5-Fluoro-2-(4-piperidin-3-ilfenil)-2H-indazole-7-carboxamida; (R) -5-Fluoro-2-{3-fluoro-4-piperidin-3-ilfenil} -2H-indazole-7-carboxamida; (S) -5-Fluoro-2-{3-fluoro-4-piperidin-3-ilfenil} -2H-indazole-7-carboxamida; e sais farmaceuticamente aceitáveis, bases livres ou tautómeros dos mesmos. Estereoisómeros dos mesmos destes compostos são também proporcionados.

Um composto particular da presente invenção é:

Cloreto de 3-{ 4-[ 7-(aminocarbonil)-2 7iT-indazol-2- il]fenil}piperidinio; ou umas bases livres farmaceuticamente aceitáveis ou tautómero do mesmo. Estereoisómeros do mesmo deste composto são também proporcionados.

Um composto particular da presente invenção é: 2-{4-[ (3R)-Piperidin-3-il]fenil}-27 Y-indazole-7- 11 ΕΡ2336120Β1 carboxamida; ou um sal farmaceuticamente aceitável, base livre ou tautómero do mesmo. Estereoisómeros do mesmo deste composto são também proporcionados.

Um composto particular da presente invenção é: 2- { 4- [ (3S) -Piperidin-3-il] fenil} - 2il-indazole-7-carboxamida; ou um sal farmaceuticamente aceitável, bases livres ou tautómero do mesmo. Estereoisómeros do mesmo deste composto são também proporcionados.

Um composto particular da presente invenção é:

Trifluoroacetato de 3-{4-[7-(aminocarbonil)-5-fluoro-2H-indazol-2-il]fenil}piperidinio; ou uma base livre farmaceuticamente aceitável ou tautómero do mesmo. Estereoisómeros do mesmo deste composto são também proporcionados.

Um composto particular da presente invenção é:

Trifluoroacetato de 5-fluoro-2-(3—fluoro-4-piperidin-3-ilfenil)-2H-indazole-7-carboxamida; ou uma base livre farmaceuticamente aceitável ou tautómero do mesmo. Estereoisómeros do mesmo deste composto são também proporcionados.

Um composto particular da presente invenção é: (3S)— 3 —{4 —[7-(aminocarbonil)-2H[-indazo 1-2- il]fenil}piperidinio 4-metilbenzenosulfonato; ou uma base livre farmaceuticamente aceitável ou tautómero do mesmo. Estereoisómeros do mesmo deste composto são também proporcionados.

Incluidos na presente invenção está a base livre de compostos de Fórmula I, bem como os sais farmaceuticamente aceitáveis e estereoisómeros do mesmo. Os compostos da presente invenção podem ser protonados no(s) átomo(s) N de uma amina e/ou N que contêm fracção heterociclo para formar sal. 0 termo "base livre" refere-se aos compostos de amina na forma de não sal. Os sais f armaceut icamente aceitáveis 12 ΕΡ2336120Β1 abrangidos não somente incluem os sais exemplificados para os compostos específicos descritos no presente documento, mas também todos os sais farmaceuticamente aceitáveis típicos da forma livre de compostos de Fórmula I. A forma livre dos compostos de sal específicos descritos pode ser isolada utilizando técnicas conhecidas na especialidade. Por exemplo, a forma livre pode ser regenerada por meio do tratamento do sal com uma solução de base aquosa diluída adequada tal como NaOH, carbonato de potássio, amónia e bicarbonato de sódio aquoso diluído. As formas livres podem diferir das suas respectivas formas de sal um pouco em certas propriedades físicas, tais como solubilidade em solventes polares, mas os sais de ácido e base são de outro modo farmaceuticamente equivalentes às suas respectivas formas livres para propósitos da invenção.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos presentes compostos podem ser sintetizados a partir dos compostos desta invenção que contêm uma fracção básica ou ácida por meio de métodos químicos convencionais. Geralmente, os sais dos compostos básicos são preparados por cromatografia de permuta iónica ou por fazer reagir a base livre com quantidades estequiométricas ou com um excesso do ácido orgânico ou inorgânico formador de sal desejado num solvente adequado ou várias combinações de solventes. De maneira similar, os sais dos compostos ácidos são formados por reacções com a base inorgânica ou orgânica apropriada.

Assim, os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos desta invenção incluem os sais não tóxicos convencionais dos compostos desta invenção como formados por meio de fazer reagir um composto instantâneo básico com um ácido inorgânico, orgânico ou ácido polimérico. Por exemplo, sais não tóxicos convencionais incluem aqueles derivados de ácidos inorgânicos tais como ácido hidroclorídrico, hidrobrómico, hidroiodico, sulfúrico, sulfuroso, sulfámico, fosfórico, fosforoso, nítrico e 13 ΕΡ2336120Β1 similares, bem como sais preparados a partir de ácidos orgânicos tais como ácido acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamóico, maléico, hidroximaléico, fenilacético, glutámico, benzóico, salicílico, sulfanílico, 2-acetoxi-benzóico, fumárico, toluenosulfónico, metanosulfónico, etano dissulfónico, oxálico, isetiónico, palmítico, glucónico, ascórbico, fenilacético, aspártico, cinámico, pirúvico, etanosulfónico, etano, dissulfónico, valérico, trifluoroacético e similares. Os exemplos de sais poliméricos adequados incluem aqueles derivados dos ácidos poliméricos tais como ácido tánico, carboximetil celulose. Preferentemente, um sal farmaceuticamente aceitável desta invenção contém 1 equivalente de um composto de fórmula (I) e 1, 2 ou 3 equivalentes de um ácido inorgânico ou orgânico. Numa forma de realização, um sal farmaceuticamente aceitável desta invenção contém 2 equivalentes de um composto de fórmula (I) e 1 equivalente de um ácido inorgânico ou orgânico. Mais particularmente, os sais farmaceuticamente aceitáveis desta invenção são os sais de trifluoroacetato, cloreto ou tosilato. Mais particularmente, os sais farmaceuticamente aceitáveis desta invenção são os sais de trifluoroacetato ou cloreto. Numa forma de realização, o sal é trifluoroacetato. Em outra forma de realização, o sal é cloreto. Em outra forma de realização, o sal é tosilato. 0 termo ácido toluenosulfónico pode ser utilizado intercambiavelmente com ácido 4-metilbenzeno sulfónico, e sulfonatos de tolueno podem também ser denominados como sais de tosilato.

Quando o composto da presente invenção é ácido, "sais farmaceuticamente aceitáveis" adequados referem-se a sais preparados a partir de bases não tóxicas farmaceuticamente aceitáveis que incluem bases inorgânicas e bases orgânicas. Sais derivados de bases inorgânicas incluem alumínio, 14 ΕΡ2336120Β1 amónio, cálcio, cobre, férrico, ferroso, litio, magnésio, sais mangánicos, manganoso, potássio, sódio, zinco e similares. Particularmente preferidos são os sais de amónio, cálcio, magnésio, potássio e sódio. Sais derivados de bases não tóxicas orgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas que incluem aminas substituídas que ocorrem naturalmente, aminas cíclicas e resinas de permuta iónica básica, tais como arginina, lisina, betaina cafeína, colina, N, N1-dibenziletilenodiamina, etilamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, dietanolamina, etilenodiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina tripropilamina, trometamina, diciclohexilamina, butilamina, benzilamina, fenilbenzilamina, trometamina e similares. A preparação dos sais farmaceuticamente aceitáveis descritos anteriormente e outros sais farmaceuticamente aceitáveis típicos é mais completamente descritos por Berg et al (1977) J. Pharm. Sei., 'Pharmaceutical Salts, 66:1-19.

Será notado também que os compostos da presente invenção são sais potencialmente internos ou zwiteriões, uma vez que sob condições fisiológicas uma fraeção ácida desprotonada no composto, tal como um grupo carboxilo, pode ser aniónico, e esta carga electrónica poderia então ser equilibrada internamente contra a carga catiónica de uma fraeção básica alquilada ou protonada, tal como um átomo azoto quaternário.

As combinações da invenção podem ser utilizadas num método de tratamento do corpo humano ou animal por terapêutica. 15 ΕΡ2336120Β1 A invenção proporciona combinações para utilização no tratamento ou prevenção de condições que podem ser melhoradas pela inibição de poli(ADP-ribose)polimerase (PARP) (veja-se, por exemplo, Nature Review Drug Discovery (2005) 4: 421- 440).

Assim, a presente invenção proporciona uma combinação para utilização no fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de condições que podem ser melhoradas pela inibição de poli(ADP-ribose)polimerase (PARP).

Os inibidores de PARP da presente invenção são úteis para o tratamento das doenças especificadas no documento WO 2005/082368.

As combinações da invenção são úteis para o tratamento de doenças inflamatórias, que incluem condições que resultam de rejeição de transplante de órgãos, tais como; doenças inflamatórias crónicas das juntas, que incluem artrite, artrite reumatóide, osteoartrite e doenças dos ossos associadas a reabsorção óssea aumentada; doenças inflamatórias intestinais tais como ileíte, colite ulcerativa, sindrome de Barrett, e doença de Crohn; doenças inflamatórias pulmonares tais como asma, sindrome da dificuldade respiratória do adulto, e doença pulmonar obstrutiva crónica; doenças inflamatórias dos olhos que incluem distrofia da córnea, tracoma, oncocerciase, uveite, endoftalmite e oftalmite simpática; doenças inflamatórias crónicas da gengiva, que incluem gengivite e periodontite; tuberculose; lepra; doenças inflamatórias do rim que incluem complicações urémicas, glomerulonefrite e nefrose; doenças inflamatórias da pele que incluem esclerodermatite, psoriase e eczema; doenças inflamatórias do sistema nervoso central, que incluem doenças crónicas desmielinizantes do sistema nervoso, esclerose múltipla, neurodegeneração relacionada com SIDA e doença de Alzheimer, meningite infecciosa, encefalomielite, doença de Parkinson, doença de 16 ΕΡ2336120Β1

Huntington, esclerose amiotrófica lateral e encefalite virai ou autoimune; complicações diabéticas, que incluem, mas não estão limitadas a, vasculite do complexo imune, lúpus eritematoso sistémico (SLE); doenças inflamatórias do coração tal como cardiomiopatia, doença isquémica do coração, hipercolesterolemia, e aterosclerose; bem como várias outras doenças que podem ter componentes inflamatórios significativos, que incluem pré-eclampsia, insuficiência hepática crónica, traumatismo do cérebro e medula espinhal e sindrome da disfunção de múltiplos órgãos (MODS) (insuficiência de múltiplos orgãos (MOF)). A doença inflamatória pode também ser uma inflamação sistémica do corpo, exemplificada por choque por bactérias gram-positivas ou gram negativas, choque hemorrágico ou anafilático, ou choque induzido por quimioterapia do cancro em resposta a citocinas pró-inflamatórias, por exemplo, choque associado a citocinas pró-inflamatórias. Tal choque pode ser induzido, por exemplo, por um agente quimioterapêutico que é administrado como um tratamento para o cancro.

Assim, a presente invenção proporciona uma combinação para utilização no fabrico de um medicamento para tratar ou prevenir doenças inflamatórias.

As combinações da presente invenção podem também ser úteis no tratamento ou prevenção de lesões de reperfusão, que resultam de episódios que ocorrem naturalmente e durante um procedimento cirúrgico, tal como lesão de reperfusão intestinal; lesão de reperfusão miocárdica; lesão de reperfusão que resultam de cirurgia de bypass cardiopulmonar, cirurgia de reparação de aneurisma aórtico, cirurgia de endarterectomia carotidea, ou choque hemorrágico; e lesão de reoxigenação que resultam de transplantação de órgãos tais como coração, pulmão, figado, rim, pâncreas, intestino, e córnea.

Assim, a presente invenção proporciona uma combinação 17 ΕΡ2336120Β1 para utilização no fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de lesões de reperfusão.

As combinações da presente invenção podem também ser úteis no tratamento ou prevenção de condições isguémicas, que incluem aquelas que resultam de transplantação de órgãos, tal como angina estável, angina instável, isquemia miocárdica, isquemia hepática, isquemia da artéria mesentérica, isquemia intestinal, isquemia limbica critica, isquemia limbica critica crónica, isquemia cerebral, isquemia cardíaca aguda, doença isquémica renal, doença isquémica hepática, distúrbio isquémico da retina, choque séptico, e uma doença isquémica do sistema nervoso central, tal como acidente vascular cerebral ou cerebral isquemia.

Assim, a presente invenção proporciona uma combinação para utilização no fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de condições isquémicas. A presente invenção proporciona uma composição para utilização no fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de acidente vascular cerebral.

As combinações da presente invenção podem também ser úteis para o tratamento ou prevenção de insuficiência renal crónica ou aguda.

Assim, a presente invenção proporciona uma combinação para utilização no fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de insuficiência renal.

As combinações da presente invenção podem também ser úteis para o tratamento ou prevenção de doenças vasculares que não sejam doenças cardiovasculares, tais como oclusão arterial periférica, tromboangeíte obliterante, fenómeno e doença de Reynaud, acrocianose, eritromelalgia, trombose venosa, veias varicosas, fístula arteriovenosa, linfedema e lipedema.

Assim, a presente invenção proporciona uma combinação para utilização no fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de doenças vasculares que não sejam 18 ΕΡ2336120Β1 doenças cardiovasculares.

As combinações da presente invenção podem também ser úteis para o tratamento ou prevenção de doenças cardiovasculares tais como crónica insuficiência cardíaca, aterosclerose, insuficiência cardíaca congestiva, choque circulatório, cardiomiopatia, transplante cardíaco, enfarte do miocárdio, e uma arritmia cardíaca, tal como fibrilação atrial, taquicardia supraventricular, flutter atrial, e taquicardia atrial paroxismal.

Assim, a presente invenção proporciona uma combinação para utilização no fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de doenças cardiovasculares.

As combinações desta invenção podem também ser úteis para o tratamento e prevenção de diabetes mellitus, que inclui diabetes Tipo I (Diabetes Mellitus Dependente de Insulina), diabetes Tipo II (Diabetes Mellitus Não Dependente de Insulina), diabetes gestacional, diabetes autoimune, insulinopatias, diabetes devido a doença pancreática, diabetes associadas a outras doenças endócrinas (tais como Sindrome de Cushing, acromegalia, feochromocitoma, glucagonoma, aldosteronismo primário ou somatostatinoma), sindrome da reisitência a insulina Tipo A, sindrome da reisitência a insulina Tipo B, diabetes lipoatrófica, e diabetes induzida por toxinas células β. Os compostos desta invenção podem também ser úteis para o tratamento ou prevenção de complicações diabéticas, tais como catarata diabética, glaucoma, retinopatia, nefropatia, (tal como microalbuminúria e nefropatia diabética progressiva) , polineuropatia, gangrena dos pés, doença aterosclerótica arterial coronária, doença arterial periférica, coma hiperosmolar hiperglicémico não cetótico, mononeuropatias, neuropatia autonômica, úlceras do pé, problemas de juntas, e uma complicação de pele ou membrana mucosa (tal como uma infecção, uma mancha na canela, um infecção por cândida ou necrobiose lipóidica diabética ou 19 ΕΡ2336120Β1 uma obesidade), hiperlipidemia, hipertensão, sindrome de resistência a insulina, doença de artéria coronária, retinopatia, diabética neuropatia, polineuropatia, mononeuropatias, neuropatia autonômica, uma úlcera do pé, um problema de juntas, uma infecção fúngica, uma infecção bacteriana, e cardiomiopatia.

Assim, a presente invenção proporciona uma combinação para utilização no fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de diabetes.

As combinações desta invenção podem também ser úteis para o tratamento ou prevenção de cancro incluindo tumores sólidos tais como fibrossarcoma, mixossarcoma, lipossarcoma, condrossarcoma, sacorma osteogénico, cordoma, angiossarcoma, endoteliossarcoma, linfangiossarcoma, linfangioendoteliossarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiossarcoma, rabdomiossarcoma, cancro de cólon, cancro colorrectal, cancro de rim, p cancro acreático, cancro ósseo, cancro de mama, cancro de ovário, cancro de próstata, cancro de esófago, cancro de estômago, cancro oral, cancro nasal, cancro de garganta, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basais, adenocarcinoma, carcinoma de glândula sudorípara, carcinoma de glândula sebácea, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilar, cistadenocarcinoma, carcinoma de medula, carcinoma broncogénico, carcinoma de célula renal, hepatoma, carcinoma do dueto biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionário, Tumor de Wilms, cancro cervical, cancro uterino, cancro testicular, carcinoma de pulmão de células pequenas, carcinoma de bexiga, cancro de pulmão, carcinoma epitelial, cancro de pele, melanoma, neuroblastoma e retinoblastoma; cancros no sangue tais como leucemia linfoblástica aguda ("ALL"), leucemia linfoblástica de células B aguda, leucemia linfoblástica de células T aguda, leucemia mieloblástica aguda ("AML"), leucemia promielocítica aguda ("APL"), leucemia 20 ΕΡ2336120Β1 monoblástica aguda, leucemia eritoleucémica aguda, leucemia megacarioblástica aguda, leucemia mielomonocítica aguda, leucemia não linfocitica aguda, leucemia indiferenciada aguda, leucemia mielocitica crónica ("CML"), leucemia linfocitica crónica ("CLL"), leucemia de células pilosas e mieloma múltiplo; leucemias aguda e crónica tais como linfoblástica, mielógena, linfocitica, leucemias mielocíticas; Linfomas tais como doença de Hodgkin, Linfoma de não Hodgkin, Mieloma múltiplo, macroglobulinemia de Waldenstrom, doença de cadeia pesada e Policitemia vera; cancros do SNC e cérebro tais como glioma, astrocitoma pilocítico, astrocitoma, astrocitoma anaplástico, glioblastoma multiforme, meduloblastoma, craniofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, acoustic neuroma, oligodendroglioma, meningioma, schwannoma vestibular, adenoma, tumor cerebral metastásico, meningioma, tumor espinhal e meduloblastoma.

Assim, a presente invenção proporciona uma combinação para utilização no fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de cancro.

As combinações da presente invenção podem também ser utilizadas para o tratamento de cancro que é deficiente em actividade de reparação de DSB de ADN dependente de Recombinação Homóloga (HR) (veja-se o documento WO 2006/021801). A via de reparação de DSB de ADN dependente de HR repara quebras de cadeia dupla (DSBs) em ADN via mecanismos homólogos para reformar um hélice de ADN continua (Nat. Genet. (2001) 27 (3) : 247-254) . Os componentes da via de reparação de DSB de ADN dependente de HR incluem, mas não são limitados a, ATM (NM-000051) , RAD51 (NM-002875) , RAD51 LI (NM-002877), RAD51 C (NM-002876), RAD51L3 (NM-002878), DMC1 (NM-007068), XRCC2 (NM7005431), XRCC3 (NM-005432), RAD52 (NM-002879), RAD54L (NM-003579), RAD54B (NM-012415), BRCA-1 (NM-007295), BRCA-2 (NM-000059), RAD50 (NM-005732), 21 ΕΡ2336120Β1 MREI IA (NM-005590), NBS1 (NM-002485), ADPRT (PARP-1), ADPRTL2, (PARP02) CTPS, RPA, RPA1, RPA2, RPA3, XPD, ERCC1, XPF, MMS19, RAD51, RAD51p, RAD51C, RAD51D, DMC1, XRCCR, XRCC3, BRCA1, BRCA2, RAD 52, RAD 54, RAD50, MRE11, NB51, WRN, BLMKU70, RU80, ATM, ATRCHK1, CHK2, FANCA, FANCB, FANCC, FANCD1, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, FANCC, FANCD1, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, RAD1 e RAD9. Outras proteínas envolvidas na via de reparação de DSB de ADN dependente de HR incluem factores reguladores tais como EMSY (Cell (2003) 115:523-535).

Um cancro que é deficiente em reparação de DSB de ADN dependente de HR pode compreender ou consistir numa ou mais células de cancro que têm uma capacidade reduzida ou nula para a reparação DSB de ADNs através dessa via, com relação às células normais isto é, a actividade da via de reparação de DSB de ADN dependente de HR pode ser reduzida ou abolida na uma ou mais células de cancro. A actividade de um ou mais componentes da via de reparação de DSB de ADN dependente de HR pode ser abolida na uma ou mais células de cancro de um indivíduo que tem um cancro que é deficiente em reparação de DSB de ADN dependente de HR. Os componentes da via de reparação de DSB de ADN dependente de HR são bem caracterizados na técnica (veja-se, por exemplo, Science (2001) 291:1284-1289) e incluem os componentes listados anteriormente. A presente invenção proporciona uma combinação para utilização no fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de um cancro que é deficiente em actividade de reparação de DSB de ADN dependente de HR.

Numa forma de realização, as células de cancro são deficientes na actividade de reparação de DSB de ADN dependente de HR de um ou mais fenótipos seleccionados de ATM (NM-000051), RAD51 (NM-002875), RAD51 LI (NM-002877), RAD51 C (NM-002876), RAD 51L 3 (NM-002878), DMC1 (NM-007068), XRCC2 (NM70 05431) , XRCC3 (NM-005432), RAD52 (NM-002879), 22 ΕΡ2336120Β1 RAD54L (NM-003579), RAD54B (ΝΜ-012415), BRCA-1 (ΝΜ-007295), BRCA-2 (ΝΜ-000059), RAD50 (ΝΜ-005732), MREI ΙΑ (ΝΜ-005590), NBS1 (ΝΜ-002485) , ADPRT (PARP-1) , ADPRTL2, (PARP02) CTPS, RPA, RPA1, RPA2, RPA3, XPD, ERCC1, XPF, MMS19, RAD51, RAD51p, RAD51C, RAD51D, DMC1, XRCCR, XRCC3, BRCA1, BRCA2, RAD52, RAD54, RAD50, MRE11, ΝΒ51, WRN, BLMKU70, RU80, ATM, ATRCHK1, CHK2, FANCA, FANCB, FANCC, FANCD1, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, FANCC, FANCD1, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, RAD1 e RAD 9.

Em outra forma de realização, as células de cancro têm um fenótipo deficiente de BRCA1 e/ou um BRCA2. Células de cancro com este fenótipo podem ser deficientes em BRCA1 e/ou BRCA2, isto é, a expressão e/ou actividade de BRCA1 e/ou BRCA2 pode ser reduzida ou abolida nas células de cancro, por exemplo, por meio de mutação ou polimorfismo no ácido nucleico codificante, ou por meio de amplificação, mutação ou polimorfismo num gene que codifica um factor regulador, por exemplo, o gene EMSY que codifica um factor regulador de BRCA2 (Cell (2003) 115:523-535). BRCA-1 e BRCA-2 são conhecidos supressores de tumor cujos alelos de tipo selvagem são com frequência perdidos em tumores de portadores heterozigotos (Oncogene, (2002) 21 (58) :8981-93; Trends Mol Med., (2002) 8(12):571-6). A associação de mutações BRCA-1 e/ou BRCA-2 com cancro de mama foi bem caracterizada (Exp Clin Câncer Res., (2002) 21 (3 Suppl):9-12). A amplificação do gene EMSY, que codifica um factor de ligação a BRCA-2, é também conhecida por estar associadas a cancro de mama e ovário. Portadores de mutações em BRCA-1 e/ou BRCA-2 estão também em risco elevado de cancro do ovário, próstata e pâncreas. A detecção de variação em BRCA-1 e BRCA-2 é bem conhecida na técnica e é descrita, por exemplo, no documento EP 699 754, EP 705 903, Genet. Test (1992) 1:75-83; Câncer Treat Res (2002) 107:29-59; Neoplasm (2003) 50(4):246-50; Ceska Gynekol (2003) 68(1):11-16). A determinação de amplificação 23 ΕΡ2336120Β1 de the BRCA-2 factor de ligação EMSY é descrito em Cell 115:523-535. Mostrou-se que os inibidores de PARP são úteis para a destruição específica de tumores deficientes de BRCA-1 e BRCA-2 (Nature (2005) 434:913-916 e 917-920).

Assim, a presente invenção proporciona uma combinação para utilização no fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de tumores deficientes em BRCA-1 ou BRCA-2.

Numa forma de realização, os inibidores de PARP do presente podem ser utilizados em terapêutica profilática para a eliminação de células deficiente BRCA2 (veja-se, Câncer Res. (2005) 65:10145).

As combinações desta invenção podem ser úteis para o tratamento ou prevenção de doenças neurodegenerativas, que incluem, neurodegeneração relacionada com expansão de poliglutamina, doença de Huntington, doença de Kennedy, degeneração espinocerebelar, atrofia dentatorubropalidoluisiana (DRPLA), neurodegeneração relecionada a agregação de proteínas, doença de Machado-Josef, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose amiotrófica lateral, encefalopatia espongiforme, um doença relacionada a prião e esclerose múltipla (MS).

Assim, a presente invenção proporciona uma combinação para utilização no fabrico de um medicamento para tratar ou prevenir doenças neurodegenerativas.

As combinações da presente invenção podem também ser úteis para o tratamento ou prevenção de infecção retroviral (documento US 5652260), dano na retina (Curr. Eye Res. (2004), 29:403), senescência da pele e dano na pele induzido por UV (documento US5589483 e Biochem. Pharmacol (2002) 63:921).

As combinações da invenção são úteis para o tratamento ou prevenção de envelhecimento prematuro e pospor os primeiros sintomas de disfunção celular relacionada com a idade (Pharmacological Research (2005) 52:93-99). 24 ΕΡ2336120Β1

As combinações desta invenção podem ser administradas a mamíferos, preferentemente seres humanos, sozinhas ou em combinação com transportadores farmaceuticamente aceitáveis, excipientes, diluentes, adjuvantes, cargas, tampões, estabilizantes, conservantes, lubrificantes, numa composição farmacêutica, de acordo com prática farmacêutica padrão.

As combinações desta invenção podem ser administradas a um indivíduo por meio de qualquer via de administração conveniente, ou sistemicamente/perifericamente ou no local de acção desejada, que incluem, mas não estão limitadas a, oral (por exemplo, por ingestão); tópica (que incluem, por exemplo, transdérmica, intranasal, ocular, bucal, e sublingual); pulmonar (por exemplo, por meio de inalação ou terapêutica de insuflação utilizando, por exemplo, um aerossol, por exemplo, através de boca ou nariz); rectal; vaginal; parentérica, (por exemplo, por meio de injecção, que incluem subcutânea, intradérmica, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intracardíaca, intratecal, intraespinhal, intracapsular, subcapsular, intraorbital, intraperitoneal, intratraqueal, subcuticular, intraarticular, subaracnóide, e intraesternal); e por meio de implante de um depot (por exemplo, subcutaneamente ou intramuscularmente). 0 indivíduo pode ser um eucariota, um animal, um animais vertebrado, um mamífero, um roedor (por exemplo, um cobaia, um hamster, um rato, um ratinho), murino (por exemplo, um ratinho), canino (por exemplo, um cão), felino (por exemplo, um gato), equino (por exemplo, um cavalo), um primata, símio (por exemplo, um macaco ou bugio), um macaco (por exemplo, sagui, babuíno), um bugio (por exemplo, gorila, chimpanzé, orangotango, gibão), ou um ser humano. A invenção também proporciona composições farmacêuticas que compreendem combinações que compreendem um ou mais compostos desta invenção e um transportador 25 ΕΡ2336120Β1 farmaceuticamente aceitável. As composições farmacêuticas que contêm o ingrediente activo podem ser numa forma adequada para administração oral, por exemplo, como comprimidos, trociscos, pastilhas, suspensões oleosas ou aquosas, pós dispersáveis ou grânulos, emulsões, cápsulas duras ou moles, ou xaropes ou elixires. As composições destinadas para administração oral podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técnica para o fabrico de composições farmacêuticas e tais composições podem conter um ou mais agentes seleccionados do grupo que consiste em agentes adoçantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes e agentes conservantes a fim de proporcionar preparações farmaceuticamente elegantes e palatáveis. Comprimidos contêm o ingrediente activo em mistura com excipientes farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos que são adequados para o fabrico de comprimidos. Estes excipientes podem ser, por exemplo, diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegrantes, por exemplo, celulose microcristalina, croscarmelose de sódio, amido de milho, ou ácido alginico; agentes aglutinantes, por exemplo, amido, gelatina, polivinil-pirrolidona ou goma arábica, e agentes lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos por meio de técnicas conhecidas para mascarar o sabor desagradável do fármaco ou atrasar a desintegração e absorção no tracto gastrointestinal e deste modo proporcionar uma acção sustentada ao longo de um período mais longo. Por exemplo, um material de mascaramento do sabor solúvel em água tal como hidroxipropil-metilcelulose ou hidroxipropilcelulose, ou um material de retardamento tal como etil celulose, celulose acetato butirato podem ser empregados.

As formulações para administração oral podem também 26 ΕΡ2336120Β1 ser apresentadas como cápsulas de gelatina dura em que o ingrediente activo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulino, ou como cápsulas de gelatina mole em que o ingrediente activo é misturado com transportador solúvel em água tal como polietilenoglicol ou um meio oleoso, por exemplo, óleo de amendoim, parafina liquida, ou azeite de oliva.

As suspensões aquosas contêm o material activo em mistura com excipientes adequados para o fabrico de suspensões aquosas. Tais excipientes são agentes de suspensão, por exemplo, carboximetilcelulose de sódio, metil-celulose, hidroxipropilmetil-celulose, alginato de sódio, polivinil-pirrolidona, goma tragacanto e goma arábica; agentes de dispersão ou humectantes podem ser um fosfatideo de ocorrência natural, por exemplo, lecitina, ou produtos de condensação de um óxido de alquileno com ácidos gordos, por exemplo, estearato de polioxietileno, ou produtos de condensação de óxido de etileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, por exemplo, heptadecaetilenooxicetanol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos gordos e um hexitol tal como monooleato de polioxietileno sorbitol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos gordos e anidridos de hexitol, por exemplo, monooleato de polietileno sorbitano. As suspensões aquosas podem também conter um ou mais conservantes, por exemplo, etilo, ou p-hidroxibenzoato de n-propilo, um ou mais agentes colorantes, um ou mais agentes aromatizantes, e um ou mais agentes adoçantes, tais como sacarose, sacarina ou aspartame.

As suspensões oleosas podem ser formuladas suspendendo o ingrediente activo num óleo vegetal, por exemplo, óleo de Arachis, azeite de oliva, óleo de gergelim ou óleo de coco, ou em óleo mineral tal como parafina liquida. As suspensões 27 ΕΡ2336120Β1 oleosas podem conter um agente espessante, por exemplo, cera de abelha, parafina dura ou álcool cetílico. Agentes adoçantes tais como aqueles expostos anteriormente, e agentes aromatizantes podem ser adicionados para proporcionar uma preparação oral palatável. Estas composições podem ser conservadas pela adição de um anti-oxidante tal como hidroxianisol butilado ou alfa-tocoferol. Pós dispersáveis e grânulos adequados para a preparação de uma suspensão aquosa pela adição de água proporcionam o ingrediente activo em mistura com um agente de dispersão ou humectante, agente de suspensão e um ou mais conservantes. Adequados agentes de dispersão ou humectantes e agentes de suspensão são exemplificados por aqueles já mencionados anteriormente. Excipientes adicionais, por exemplo, agentes adoçantes, aromatizantes e colorantes, podem também estar presentes. Estas composições podem ser conservadas pela adição de um anti-oxidante tal como ácido ascórbico.

As composições farmacêuticas da invenção podem também estar na forma de uma emulsão óleo-em-água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, por exemplo, azeite de oliva ou óleo de Arachis, ou um óleo mineral, por exemplo, parafina líquida ou misturas destes. Agentes emulsificantes adequados podem ser fosfatideos que ocorrem naturalmente, por exemplo, lecitina de soja, e ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos gordos e anidridos de hexitol, por exemplo, monooleato de sorbitano, e produtos de condensação dos ditos ésteres parciais com óxido de etileno, por exemplo, monooleato de polioxietileno sorbitano. As emulsões podem também conter agentes adoçantes, aromatizantes, conservantes e antioxidantes.

Xaropes e elixires podem ser formulados com agentes adoçantes, por exemplo, glicerol, propileno glicol, sorbitol ou sacarose. Tais formulações podem também conter um demulcente, um conservante, aromatizante e agentes 28 ΕΡ2336120Β1 colorantes e antioxidante.

As composições farmacêuticas podem estar na forma de soluções aquosas injectáveis estéreis. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão água, solução de Ringer e solução de cloreto de sódio isotônica. A preparação estéril injectável pode também ser uma microemulsão óleo-em-água injectável estéril onde o ingrediente activo é dissolvido na fase oleosa. Por exemplo, o ingrediente activo pode ser em primeiro lugar dissolvido numa mistura de óleo de soja e lecitina. A solução de óleo então introduzida numa mistura água e glicerol e processada para formar uma microemulsão.

As soluções ou microemulsões injectáveis podem ser introduzidas na corrente sanguínea de um paciente por meio de injecção em bolus local. Alternativamente, pode ser vantajoso administrar a solução ou microemulsão de tal maneira que mantenha uma concentração de circulação constante do presente composto. A fim de manter tal concentração constante, um dispositivo de administração intravenosa contínua pode ser utilizado. Um exemplo de tal dispositivo é a bomba intravenosa Deltec CADD-PLUS™ modelo 5400.

As composições farmacêuticas podem estar na forma de uma suspensão oleaginosa ou aquosa injectável estéril para administração intramuscular e subcutânea. Esta suspensão pode ser formulada de acordo com a técnica conhecida utilizando aqueles adequados agentes de dispersão ou humectantes e agentes de suspensão que foram mencionados anteriormente. A preparação injectável estéril pode também ser uma solução ou suspensão injectável estéril num diluente ou solvente parentericamente aceitável não tóxico, por exemplo, como ums solução em 1,3-butanodiol. Além disso, óleos fixos estéreis são convencionalmente empregados como um meio solvente ou de suspensão. Para este propósito qualquer óleo fixo suave pode ser empregado que 29 ΕΡ2336120Β1 incluem mono- ou diglicerídeos sintéticos. Além disso, ácidos gordos tais como ácido oléico encontram utilidade na preparação de injectáveis.

Os compostos de Fórmula I pode também ser administrados na forma de supositórios para administração rectal do fármaco. Estas composições podem ser preparadas misturando o fármaco com um excipiente não irritante adequado que é sólido a temperaturas comuns, mas liquido à temperatura rectal e, portanto, derreterá no recto para libertar o fármaco. Tais materiais incluem manteiga de cacau, gelatina glicerinada, óleos vegetais hidrogenados, misturas de polietilenoglicóis de vários pesos moleculares e ésteres de ácido gordo de polietilenoglicol.

Para uso tópico cremes, pomadas, geleias, soluções ou suspensões, etc., que contêm o composto de Fórmula I são empregados. (Para propósitos deste pedido de patente, aplicação tópica deve incluir soluções para lavagem da boca e para gargarejar.)

Os compostos para a presente invenção podem ser administrados em forma intranasal via uso tópico de veículos intranasais adequados e dispositivos de administração, ou por meio de vias transdérmicas, utilizando aquelas formas de pensos de pele transdérmicos bem conhecidas a aqueles especialistas comuns na especialidade. Para serem administrados na forma de um sistema de administração transdérmico, a administração da dosagem será, claro, contínua ao invés de intermitente ao longo do regime de dosagem. Os compostos da presente invenção podem também ser distribuídos como um supositório utilizando bases tais como manteiga de cacau, gelatina glicerinada, óleos vegetais hidrogenados, misturas de polietilenoglicóis de vários pesos moleculares e ésteres de ácido gordo de polietilenoglicol.

Quando um composto de acordo com esta invenção é administrado num indivíduo, o nível de dosagem seleccionado 30 ΕΡ2336120Β1 dependerá de uma variedade de factores que incluem, mas não estão limitadas a, a actividade do composto particular, a gravidade dos sintomas individuais, a via de administração, o tempo de administração, a taxa de excreção do composto, a duração do tratamento, outros fármacos, compostos, e/ou materiais utilizados em combinação, e a idade, sexo, peso, condição, saúde geral, e histórico médico anterior do paciente. A quantidade de composto e via de administração será no fim de contas ao critério do médico, embora geralmente a dosagem será para alcançar concentrações locais no local de acção que atingem o efeito desejado sem causar efeitos secundários prejudiciais ou deletérios substanciais. A administração in vivo pode ser realizada numa dose, continuamente ou intermitentemente (por exemplo, em doses divididas em intervalos apropriados) ao longo do curso de tratamento. Os métodos de determinação dos meios mais eficazes e dosagem de administração são bem conhecidos do perito na especialidade e variarão com a formulação utilizada para terapêutica, o propósito da terapêutica, a célula alvo que está a ser tratada, e o indivíduo que está a ser tratado. Administrações únicas ou múltiplas podem ser levadas a cabo com o nivel e modelo de dose que está a ser seleccionado pelo médico assistente.

Em geral, uma dose adequada do composto activo está no intervalo de aproximadamente 100 pg a aproximadamente 250 mg por quilograma de peso corporal do indivíduo por dia. Onde o composto activo é um sal, um éster, pró-fármaco, ou similares, a quantidade administrada é calculada com base no composto de origem e deste modo o peso real a ser utilizado é aumentado proporcionalmente.

As presentes combinações são também úteis em combinação com agentes anti-cancro ou agentes quimioterapêuticos.

As combinações desta invenção podem ser úteis como 31 ΕΡ2336120Β1 quimio- e radiossensibilizadores para o tratamento do cancro. São úteis para o tratamento de mamíferos que passaram anteriormente ou estão passando presentemente por tratamento para o cancro. Tais tratamentos anteriores incluem quimioterapia, radiação terapêutica, cirurgia ou imunoterapia anterior, tais como vacinas contra o cancro.

Assim, a presente invenção proporciona uma combinação de uma combinação das reivindicações e um agente anti-cancro para administração simultânea, separada ou sequencial. A presente invenção também proporciona uma combinação de uma combinação das reivindicações, radiação terapêutica e outro agente quimioterapêutico para administração simultânea, separada ou sequencial. A presente invenção também proporciona uma combinação das reivindicações para utilização no fabrico de um medicamento para utilização como um adjuvante em terapêutica do cancro ou para potencializar células tumorais por meio da combinação com radiação ionizante ou agentes quimioterapêuticos. A presente invenção também proporciona a utilização de uma combinação das reivindicações no fabrico de um medicamento para utilização como um adjuvante em terapêutica do cancro ou para potencializar células tumorais por meio da combinação com radiação ionizante e outros agentes quimioterapêuticos. As combinações podem também ser utilizadas em combinação com radiação ionizante e outros agentes quimioterapêuticos.

Em terapêutica de combinação, os compostos desta invenção podem ser administrados antes de (por exemplo, 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48, horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana , 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas, ou 12 semanas antes), concorrentemente com, ou subsequente (por exemplo, 5 32 ΕΡ2336120Β1 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas, ou 12 semanas após) à administração do outro agente anti-cancro a um indivíduo em necessidade do mesmo. Em várias formas de realização os presentes compostos e outro agente anti-cancro são administrados 1 minuto em separado, 10 minutos em separado, 30 minutos em separado, menos de 1 hora em separado, 1 hora a 2 horas em separado, 2 horas a 3 horas em separado, 3 horas a 4 horas em separado, 4 horas a 5 horas em separado, 5 horas a 6 horas em separado, 6 horas a 7 horas em separado, 7 horas a 8 horas em separado, 8 horas a 9 horas em separado, 9 horas a 10 horas em separado, 10 horas a 11 horas em separado, 11 horas a 12 horas em separado, não mais de 24 horas em separado, ou não mais de 48 horas em separado.

Os compostos desta invenção e o outro agente anti-cancro podem agir aditivamente ou sinergisticamente. Um combinação sinergistica dos presentes compostos e outro agente anti-cancro poderia permitir a utilização de dosagens menores de um ou ambos estes agentes e/ou dosagens menos frequentes de um ou ambos os presentes compostos e outros agentes anti-cancro e/ou administrar os agentes com menos frequência pode reduzir qualquer toxicidade associada à administração dos agentes a um indivíduo sem reduzir a eficácia dos agentes no tratamento de cancro. Além disso, um efeito sinergistico poderia resultar na eficácia melhorada destes agentes no tratamento de cancro e/ou a redução de quaisquer efeitos secundários não desejados ou adversos associados à utilização do agente sozinho.

Os exemplos de agentes contra o cancro ou agentes quimioterapêuticos para utilização em combinação com as combinações da presente invenção podem ser encontrados em Câncer Principies and Practice of Oncology por V.T. Devita 33 ΕΡ2336120Β1 e S. Hellman (editores), 6a edição (15 de Fevereiro de 2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishers. Um perito comum na especialidade seria capaz de discernir que combinações de agentes seriam úteis com base nas caracteristicas particulares dos fármacos e o cancro envolvido. Tais agentes anti-cancro incluem, mas não são limitados a, os seguintes: inibidores de HDAC, moduladores de receptor estrogénio, moduladores de receptor de androgénio, moduladores de receptor retinóide, agentes citotóxicos/citostáticos, agentes antiproliferativos, inibidores de prenil-proteina transferase, inibidores de HMG-CoA reductase, inibidores de protease de VIH, inibidores da transcriptase reversa e outros inibidores da angiogénese, inibidores de proliferação celular e sinalização de sobrevivência, agentes indutores da apoptose e agentes que interferem com pontos de controlo do ciclo celular. Os presentes compostos são particularmente úteis quando co-administrados com radiação terapêutica.

Os exemplos de "inibidores de HDAC" incluem ácido suberoilanilida hidroámico (SAHA), LAQ824, LBH589, PXD101, MS275, FK228, ácido valpróico, ácido butirico e CI-994. "Moduladores de receptor de estrogénio" referem-se a compostos que interferem com ou inibem a ligação de estrogénio ao receptor, independente do mecanismo. Os exemplos de moduladores de receptor de estrogénio incluem, mas não são limitados a, tamoxifeno, raloxifeno, idoxifeno, LY353381, LY117081, toremifeno, fulvestrant, 4-[7-(2,2- dimetil-l-oxopropoxi-4-metil-2-[4-[2-(1- piperidinil) etoxi] fenil] -2fí-l-benzopiran-3-il] -fenil-2,2-dimetilpropanoato, 4,4'-dihidroxibenzofenona-2,4- dinitrofenil-hidrazona, e SH646. "Moduladores de receptor de androgénio" referem-se a compostos que interferem ou inibem a ligação de androgens ao receptor, independente do mecanismo. Os exemplos de moduladores de receptor de androgénio incluem finasteride e 34 ΕΡ2336120Β1 outros 5a-reductase inibidores, nilutamida, flutamida, bicalutamida, liarozole, e abiraterone acetato. "Moduladores de receptor retinóide" refere-se a compostos que interfere ou inibem a ligação de retinóides ao receptor, independente do mecanismo. Os exemplos de tais moduladores de receptor retinóide incluem bexaroteno, tretinoina, ácido 13-cis-retinóico, ácido 9-cis-retinóico, α-difluorometilornitina, ILX23-7553, retinamida de trans-W-(4' -hidroxifenil) , e retinamida de iV-4-carboxifenilo. "Agentes citotóxicos/citostáticos" referem-se a compostos que causam a morte celular ou inibem a proliferação celular primariamente por interferir directamente com o funcionamento celular ou inibem ou interferem com mitose celular, que incluem agentes alquilantes, factores de necrose tumoral, intercaladores, compostos activáveis por hipoxia, inibidores dos microtúbulos/agentes estabilizadores dos microtúbulos, inibidores de cinesinas mitóticas, inibidores de quinases envolvidas em progressão mitótica, antimetabolitos, modificadors de resposta biológica; agentes terapêuticos hormonais/anti-hormonais, factores de crescimento hematopoiético, agentes terapêuticos direccionados a anticorpos monoclonais, inibidores da topoisomerase, inibidores do proteassoma e inibidores de ubiquitina ligase.

Os exemplos de agentes citotóxicos incluem, mas não são limitados a, ciclofosfamida, clorambucil carmustina (BC-NU), lomustina (CCNU), busulfan, treosulfan, sertenef, cachectina, ifosfamida, tasonermin, lonidamina, carboplatina, altretamina, prednimustina, dibromodulcitol, ranimustina, fotemustina, nedaplatina, aroplatina, oxaliplatina, temozolomida, metanosulfonato de metilo, procarbazina, dacarbazina, heptaplatina, estramustina, improsulfan tosilato, trofosfamida, nimustina, cloreto de dibrospídio, pumitepa, lobaplatina, satraplatina, 35 ΕΡ2336120Β1 profiromicina, cisplatina, irofulven, dexifosfamida, cis-aminadicloro(2-metil-piridina)platina, benzilguanina, glufosfamida, GPX100, (trans, trans, trans)-bis-mu-(hexano-1,6-diamina)-mu-[diamina- platina(II)]bis[diamina(cloro)platina (II)]tetracloreto, diarizidinilespermina, trióxido arsénico, 1-(11- dodecilamino-10-hidroxiundecil)-3,7-dimetilxantina, zorubicina, idarubicina, daunorubicina, bisantreno, mitoxantrona, pirarubicina, pinafida, valrubicina, amrubicina, doxorubicina, epirubicina, pirarubicina, antineoplastona, 3'-deamino-3'-morfolino-13-deoxo-10- hidroxicarminomicina, annamicina, galarubicina, elinafida, MEN10755 e 4-demetoxi-3-deamino-3-aziridinil-4-

metilsulfonil-daunorubicina (veja-se o documento WO 00/50032). Os exemplos adicionais incluem inibidores de Raf quinase (tais como Bay43-9006) e inibidores de mTOR (tais como Wyet's CCI-779 e Ariad AP23573). Os exemplos adicionais são inibidores de PI3K (por exemplo, LY294002).

Numa forma de realização, os compostos desta invenção podem ser utilizados em combinação com agentes alquilantes.

Os exemplos de agentes alquilantes incluem, mas não são limitados a, mostardas de azoto: ciclofosfamida, ifosfamida, trofosfamida e clorambucil; nitrosureias: carmustina (BCNU) e lomustina (CCNU); alquilsulfonatos: busulfan e treosulfan; triazenos: dacarbazina e procarbazina; platina que contém complexos: cisplatina, carboplatina, aroplatina e oxaliplatina.

Numa forma de realização, o agente alquilante é dacarbazina. Dacarbazina pode ser administrada a um individuo em dosagens variando desde aproximadamente 150 mg/m2 (de uma área superficial corporal do individuo) até aproximadamente 250 mg/m2. Em outra forma de realização, dacarbazina é administrada intravenosamente a um individuo uma vez ao dia durante cinco dias consecutivos a uma dose variando desde aproximadamente 150 mg/m2 até 36 ΕΡ2336120Β1 aproximadamente 250 mg/m2.

Numa forma de realização, o agente alquilante é procarbazina. Procarbazina pode ser administrada a um indivíduo em dosagens variando desde aproximadamente 50 mg/m2 (de uma área superficial corporal do indivíduo) até aproximadamente 100 mg/m2. Em outra forma de realização, procarbazina é administrada intravenosamente a um indivíduo uma vez ao dia durante cinco dias consecutivos a uma dose variando desde aproximadamente 50 mg/m2 até aproximadamente 100 mg/m2.

Numa forma de realização, temozolomida pode ser administrada a um indivíduo em dosagens variando desde aproximadamente 150 mg/m2 (de uma área superficial corporal do indivíduo) até aproximadamente 200 mg/m2. Em outra forma de realização, temozolomida é administrada oralmente a um animal uma vez ao dia durante cinco dias consecutivos a uma 150 mg/m2 até dose variando desde aproximadamente aproximadamente 200 mg/m2. anti-mitóticos incluem: colchicina, derivado de maitansina, rizoxina,

Os exemplos de agentes alocolchicina, halicondrina B, colchicina, dolastatina 10, tiocolchicina e tritil cisteína.

Um exemplo de um composto activável por hipoxia é tirapazamina.

Os exemplos de inibidores do proteassoma incluem, mas não são limitados a lactacistina, bortezomib, epoxomicina e aldeídos de péptidos tais como MG 132, MG 115 e PSI.

Os exemplos de inibidores de microtúbulos/agentes estabilizadores dos microtúbulos incluem paclitaxel, sulfato de vindesina, vincristina, vinblastina, vinorelbina, 3',4'-didehidro-4'-deoxi-8'- norvincaleucoblastina, docetaxol, rizoxina, dolastatina, isetionato de mivobulina, auristatina, cemadotina, RPR109881, BMS184476, vinflunine, criptoficina, 2,3,4,5,6- pentafluoro-N- (3 — fluoro-4-metoxifenil) benzeno sulfonamida, 37 ΕΡ2336120Β1 anidrovinblastina, N, JV-dimetil-L-valil-L-valil-N-metil-L-valil-L-prolil-L-prolina-t-butilamida, TDX258, as epotilonas (veja-se, por exemplo, Pat. U.S. N° 6.284.781 e 6.288.237) e BMS188797.

Alguns exemplos de inibidores da topoisomerase são topotecano, hicaptamina, irinotecano, rubitecano, exatecano, gimetecano, diflomotecano, silil-camptotecinas, 9-aminocamptotecina, camptotecina, crisnatol, mitomicina C, 6-etoxipropionil-3',4'-O-exo-benzilideno-chartreusina, 9-metoxi-N, W-dimetil-5-nitropirazolo[3,4,5-kl]acridina-2-(6H) propanamina, l-amino-9-etil-5-fluoro-2,3-dihidro-9-hidroxi-4-metil-lH, 12H-benzo[de]pirano[3',4' :b,7]-indolizino[1,2b] quinolina-10, 13(9H,15H)diona, lurtotecano, l-[2-(N- isopropilamino)etil]-(20S)camptotecina, BNP1350, BNPI1100, BN80915, BN80942, fosfato de etoposido, teniposido, sobuzoxano, 2'-dimetilamino-2'-deoxi-etoposido, GL331, N-[2- (dimetilamino) etil] -9-hidroxi-5, 6-dimetil-6fí-pirido [4,3-b]carbazole-l-carboxamida, asulacrina, (5a, 5aB, 8aa, 9b)-9 - [2 - [N- [2 - (dimetilamino) etil] -JV-metilamino] etil]-5-[4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil]-S,Sa,6, 8, 8a, 9- hexohidrofuro(3',4':6,7)nafto(2,3-d)-1,3-dioxol-6-one, 2,3-(metilenodioxi)-5-metil-7-hidroxi-8-metoxibenzo[c]-fenantridinio, 6,9-bis[(2- aminoetil)amino]benzo[g]isoguinolina-5,10-diona, 5 —(3 — aminopropilamino)-7,10-dihidroxi-2-(2- hidroxietilaminometil) -6i7-pirazolo [4,5, 1-de] acridin-6-ona, N- [ 1- [2 (dieti lamino) etil amino] -7-metoxi-9-oxo-9i7-tioxanten-4-ilmetil]formamida, N-(2-(dimetilamino)etil)acridina-4-carboxamida, 6-[ [2-(dimetilamino) et il ] amino ]-3-hidroxi-7i7-indeno[2,1-c] quinolin-7-ona, e dimesna; inibidores da topoisomerase-1 não camptotecina tais como indolocarbazoles; e inibidores topoisomerase-I e II duplos tais como benzofenazinas, XR20 115761MLN 576 e benzopiridoindoles.

Numa forma de realização, o inibidor de topoisomerase 38 ΕΡ2336120Β1 é irinotecano. Irinotecano pode ser administrado a um indivíduo em dosagens variando desde aproximadamente aproximadamente 50 mg/m2 (de uma área superficial corporal do indivíduo) até aproximadamente 150 mg/m2. Em outra forma de realização, o irinotecano é administrado intravenosamente a um indivíduo uma vez ao dia durante cinco dias consecutivos a uma dose variando desde aproximadamente 50 mg/m2 até aproximadamente 150 mg/m2 nos dias 1-5, então de novo intravenosamente uma vez ao dia durante cinco dias consecutivos nos dias 28-32 a uma dose variando desde aproximadamente 50 mg/m2 até aproximadamente 150 mg/m2, então de novo intravenosamente uma vez ao dia durante cinco dias consecutivos nos dias 55-59 a uma dose variando desde aproximadamente 50 mg/m2 até aproximadamente 150 mg/m2.

Os exemplos de inibidores de cinesinas mitóticas, e em particular a cinesina mitótica humana KSP, são descritos em Publicações PCT documento WO 01/30768, documento WO 01/98278, documento WO 02/056880, documento WO 03/050,064, documento WO 03/050,122, documento WO 03/049,527, documento WO 03/049,679, documento WO 03/049,678, documento WO 03/039460, documento WO 03/079973, documento WO 03/099211, documento WO 2004/039774, documento WO 03/105855, documento WO 03/106417, documento WO 2004/087050, documento WO 2004/058700, documento WO 2004/058148 e documento WO 2004/037171 e pedidos US 2004/132830 e documento US 2004/132719. Numa forma de realização, os inibidores de cinesinas mitóticas incluem, mas não são limitados a inibidores de KSP, inibidores de MKLPl, inibidores de CENP-E, inibidores de MCAK, inibidores de Kifl4, inibidores de Mfosfl e inibidores de Rab6-KIFL. "Inibidores de quinases envolvidas em progressão mitótica" incluem, mas não são limitados a, inibidores de aurora quinase, inibidores de quinases do tipo polo (PLK) (em particular inibidores de PLK-1), inibidores de bub-1 e 39 ΕΡ2336120Β1 inibidores de bub-Rl. "Agentes antiproliferativos" incluem ARN antisenso e oligonucleótidos de ADN tais como G3139, ODN698, RVASK-RAS, GEM231, e INX3001, e antimetabolitos tais como enocitabina, carmofur, tegafur, pentostatina, doxifluridina, trimetrexato, fludarabina, capecitabina, galocitabina, ocfosfato de citarabina, fosteabina de sódio hidratada, raltitrexed, paltitrexid, emitefur, tiazofurina, decitabina, nolatrexed, pemetrexed, nelzarabina, 2'-deoxi-2'-metilidenocitidina, 2'-fluor-ometileno-2'-deoxicitidina, N-[5-(2,3-dihidro-benzofuril)sulfonil]-N' -(3,4-diclorofenil)ureia, N6-[4-deoxi-4-[N2-[2 (E),4(E)- tetradecadienoil]glicilamino]-L-glicero-B-L-manno-heptopiranosil]adenina, aplidina, ecteinascidina, troxacitabina, ácido 4-[2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3fí-pirimidino [5,4-b] [l,4]tiazin-6-il-(S) -etil ] -2,5-tienoil-L-glutámico, aminopterina, 5-flurouracil, alanosina, éster de ácido ll-acetil-8- (carbamoiloximetil)-4-formil-6-metoxi-14-oxa-l,11-diazatet-raciclo(7.4.1.0.0)-tetradeca-2,4,6-trien-9-ilo acético, swainsonina, lometrexol, dexrazoxano, metioninase, 2' -ciano-2' -deoxi-7/4-palmitoil-l-B-D-arabino furanosilo citosina e 3-aminopiridina-2-carboxaldeido tiosemicarbazona.

Os exemplos de agentes terapêuticos direccionados a anticorpos monoclonais incluem aqueles agentes terapêuticos que têm agentes citotóxicos ou radioisótopos unidos a um anticorpo monoclonal especifico para célula de cancro ou especifico para célula alvo. Os exemplos incluem Bexxar. "Inibidores de HMG-CoA reductase" referem-se a inibidores de 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA reductase. Os exemplos de inibidores de HMG-CoA reductase que podem ser utilizados incluem, mas não são limitados a lovastatina (MEVACOR®; veja-se Pat. U.S. N° 4.231.938, 4.294.926 e 4.319.039), sinvastatina (ZOCOR®; veja-se Pat. U.S. N° 4.444.784, 4.820.850 e 4.916.239), pravastatina 40 ΕΡ2336120Β1 (PRAVACHOL®; veja-se Pat. U.S. N° 4.346.227, 4.537.859, 4.410.629, 5.030.447 e 5.180.589), fluvastatina (LESCOL®; veja-se Pat. U.S. N° 5.354.772, 4.911.165, 4.929.437, 5.189.164, 5.118.853, 5.290.946 e 5.356.896) e atorvastatina (LIPITOR®; veja-se Pat. U.S. N° 5.273.995, 4.681.893, 5.489.691 e 5.342.952). As fórmulas estruturais desdtes e inibidores de HMG-CoA reductase adicionais que podem ser utilizados nos presentes métodos são descritos na página 87 de M. Yalpani, "Cholesterol Lowering Drugs", Chemistry & Industry, pp. 85-89 (5 de Fevereiro de 1996) e Patente US N° 4.782.084 e 4.885.314. O termo inibidor de HMG-CoA reductase como é utilizado no presente documento inclui todas as formas de ácido aberto e lactona farmaceuticamente aceitáveis (isto é, onde o anel de lactona é aberto para formar o ácido livre) bem como formas de sal e éster de compostos que têm actividade inibitória de HMG-CoA reductase, e portanto a utilização de tais formas de sais, ésteres, ácido aberto e lactona é incluída dentro do âmbito desta invenção. "Inibidor de prenil-proteína transferase" refere-se a um composto que inibe qualquer uma ou qualquer combinação das enzimas prenil-proteína transferase, que incluem farnesil-proteína transferase (FPTase), geranilgeranil-proteína transferase tipo I (GGPTase-I) , e geranilgeranil-proteína transferase tipo-II (GGPTase-II, também denominada Rab GGPTase).

Os exemplos de inibidores de prenil-proteína transferase podem ser encontrados nas seguintes publicações e patentes: documento WO 96/30343, documento WO 97/18813, documento WO 97/21701, documento WO 97/23478, documento WO 97/38665, documento WO 98/28980, documento WO 98/29119, documento WO 95/32987, Pat. U.S. N° 5.420.245, Pat. U.S. N° 5.523.430, Pat. U.S. N° 5.532.359, Pat. U.S. N° 5.510.510, Pat. U.S. N° 5.589.485, Pat. U.S. N° 5.602.098, Publ. de Patente Europeia 0 618 221, Publ. de Patente Europeia 0 675 41 ΕΡ2336120Β1 112, Publ. de Patente Europeia 0 604 181, Publ. de Patente Europeia 0 696 593, documento WO 94/19357, documento WO 95/08542, documento WO 95/11917, documento WO 95/12612, documento WO 95/12572, documento WO 95/10514, Pat. U.S. N° 5.661.152, documento WO 95/10515, documento WO 95/10516, documento WO 95/24612, documento WO 95/34535, documento WO 95/25086, documento WO96/05529, documento WO96/06138, documento WO96/06193, documento W096/16443, documento WO96/2170 1, documento W096/21456, documento documento WO 96/24611, documento WO 96/24612, 96/05168, documento WO 96/05169, documento Pat. U.S. N° 5.571.792, documento WO 96/17861, 96/33159, documento WO 96/34850, documento documento WO 96/30017, documento WO 96/30018, 96/30362, documento WO 96/30363, documento documento WO 96/31477, documento WO 96/31478, 96/31501, documento WO 97/00252, documento WO 97/03047,

W096/22278, documento WO WO 96/00736, documento WO WO 96/34851, documento WO WO 96/31111, documento WO documento WO 97/03050, documento WO 97/04785, documento WO 97/02920, documento WO 97/17070, documento WO 97/23478, documento WO 97/26246, documento WO 97/30053, documento WO 97/44350, documento WO 98/02436, e Pat. U.S. N° 5.532.359. Para um exemplo do papel de um inibidor de prenil-proteina transferase na angiogénese veja-se European J. of Câncer (1999), 35 (9) : 1394-1401. "Inibidores da angiogénese" referem-se a compostos que inibem a formação de novos vasos sanguíneos, independente do mecanismo. Os exemplos de inibidores da angiogénese incluem, mas não são limitados a, inibidores da tirosina quinase, tais como inibidores dos receptores da tirosina quinase Flt-1 (VEGFR1) e Flk-l/KDR (VEGFR2), inibidores de derivados da epiderme, derivados de fibroblastos, ou factores de crescimento derivados de plaquetas, inibidores de MMP (metaloproteinase da matriz), bloqueadores de integrina, interferão-α, interleucina-12, pentosano polisulfato, inibidores de cicloxigenase, que incluem anti- 42 ΕΡ2336120Β1 inflamatórios não esteroidais (AINEs) como aspirina e ibuprofeno bem como inibidores de ciclooxigenase-2 selectivos como celecoxib e rofecoxib (PNAS (1992) 89:7384; JNCI (1982) 69:475; Arch. Opthalmol. (1990) 108:573; Anat. Rec. (1994) 238:68; FEBS Letters (1995) 372:83; Clin, Orthop. (1995) 313:76; J. Mol. Endocrinol. (1996) 16:107; Jpn. J. Pharmacol. (1997) 75:105; Câncer Res. (1997) 57:1625 (1997); Célula (1998) 93:705; Intl. J. Mol. Med. (1998) 2:715; J. Biol. Chem. (1999) 274:9116)), steroidal anti-inflamatórios (tais como corticosteróides, mineralocorticóides, dexametasona, prednisona, prednisolona, metilpred, betametasona), carboxiamidotriazole, combretastatina A-4, esqualamina, 6-O-cloroacetil-carbonil)-fumagilol, talidomida, angiostatina, troponina-1, antagonistas da angiotensina II (veja-se J. Lab. Clin. Med. (1985) 105:141-145), e anticorpos para VEGF (veja-se Nature Biotechnology (1999) 17:963-968; Kim et al (1993) Nature 362:841-844; documento WO 00/44777; e documento WO 00/61186).

Outros agentes terapêuticos que modulam ou inibem angiogénese e que podem também ser utilizados em combinação com os compostos da presente invenção incluem agentes que modulam ou inibem os sistemas de coagulação e fibrinólise (veja-se revisão em Clin. Chem. La. Med. (2000) 38:679-692). Os exemplos de tais agentes que modulam ou inibem as vias de coagulação e fibrinólise incluem, mas não são limitados a, heparina (veja-se Thromb. Haemost. (1998) 80:10-23), heparinas de baixo peso molecular e inibidores de carboxipeptidase U (também conhecidos como inibidores de inibidor de fibrinólise activável por trombina activa [TAFIa]) (veja-se Thrombosis Res. (2001) 101:329-354). Os inibidores de TAFIa foram descritos em Publicação de PCT WO 03/013,526 e Ser. No. U.S. 60/349.925 (depositado em 18 de Janeiro de 2002) . "Agentes que interferem com pontos de controlo do 43 ΕΡ2336120Β1 ciclo celular" referem-se a compostos que inibem as proteínas quinases que transluzem sinais de ponto de controlo do ciclo celular, deste modo sensibilizando a célula de cancro aos agentes de dano de ADN. Tais agentes incluem inibidores de ATR, ATM, the Chkl e Chk2 quinases e inibidores de cdk e cdc quinase e são especif icamente exemplificados por 7-hidroxiestaurosporina, estaurosporina, flavopiridol, CYC202 (Cyclacel) e BMS-387032. "Inibidores de proliferação celular e via de sinalização de sobrevivência" referem-se a agentes farmacêuticos que inibem receptores de superfície celular e cascatas de transdução de sinal a jusante daqueles receptores de superfície. Tais agentes incluem inibidores de inibidores de EGFR (por exemplo, gefitinib e erlotinib), inibidores de ERB-2 (por exemplo, trastuzumab), inibidores de IGFR (por exemplo, aqueles divulgados no documento WO 03/059951), inibidores de receptores de citocina, inibidores de MET, inibidores de PI3K (por exemplo, LY294002), serina/treonina quinases (que incluem, mas não estão limitadas a inibidores de Akt tal como foi descrito em (documento WO 03/086404, documento WO 03/086403, documento WO 03/086394, documento WO 03/086279, documento WO 02/083675, documento WO 02/083139, documento WO 02/083140 e documento WO 02/083138), inibidores de Raf quinase (por exemplo, BAY-43-9006) , inibidores de MEK (por exemplo, CI-1040 e PD-098059) e inibidores de mTOR (por exemplo, Wyet CCI-779 e Ariad AP23573). Tais agentes incluem compostos inibidores de moléculas pequenas e antagonistas de anticorpo. "Agentes indutores da apoptose" incluem activadores de membros da família do receptor de TNF (que incluem os receptores de TRAIL).

Numa forma de realização, as combinações da presente invenção são úteis para tratar cancro em combinação com um ou mais, particularmente um, dois ou três agentes 44 ΕΡ2336120Β1 seleccionados de cisplatina, carboplatina, oxaliplatina, irinotecano e topotecano.

Uma combinação da presente invenção pode também ser útil para tratar cancro em combinação com qualquer um ou mais dos seguintes agentes terapêuticos: abarelix (Plenaxis depot®) ; aldesleucina (Prokine®) ; Aldesleucina (Proleucina®) ; Alemtuzumabb (Campath®) ; alitretinoina (Panretin®) ; alopurinol (Ziloprim®) ; altretamina (Hexalen®) ; amifostina (Ety-ol®) ; anastrozole (Arimidex®) ; trióxido arsénico (Trisenox®) ; asparaginase (Elspar®) ; azacitidina (Vidaza®) ; bevacuzimab (Avastin®) ; cápsulas de bexaroteno (Targretin®) ; gel de bexaroteno (Targretin®) ; bleomicina (Blenoxano®) ; bortezomib (Vel-cade®) ; busulfan intravenosa (Busulfex®) ; busulfan oral (Mileran®) ; calusterona (Metosarb®) ; capecitabina (Xeloda®) ; carboplatina (Paraplatin®) ; carmustina (BCNU®, BiCNU®) ; carmustina (Gliadel®) ; carmustina com Polifeprosan 20 Implant (Gliadel Wafer®) ; celecoxib (Celebrex®) ; cetuximab (Erbitux®) ; clorambucil (Leukeran®) ; cisplatina (Platinol®) ; cladribina (Leustatin®, 2-CdA®) ; clofarabina (Clolar®) ; ciclofosfamida (Citoxan®, Neosar®) ; ciclofosfamida (Citoxan Injection®) ; ciclofosfamida (Citoxan Tablet®) ; citarabina (Citosar-U®) ; citarabina lipossomal (DepoCit®) ; dacarbazina (DTIC-Dome®) ; dactinomicina, actinomicina D (Cosmegen®) ; Darbepoetina alfa (Aranesp®) ; daunorubicina lipossomal (DanuoXome®) ; daunorubicina, daunomicina (Daunorubicin®) ; daunorubicina, daunomicina (Cerubidina®) ; Denileucina diftitox (Ontak®) ; dexrazoxano (Zinacard®) ; docetaxel (Taxotere®) ; doxorubicina (Adriamicina PFS®) ; doxorubicina (Adriamicina®, Rubex®) ; doxorubicina (Adriamycin PFS Injection®) ; doxorubicina lipossomal (Doxil®) ; propionato de dromostanolona (Dromostanolone®) ; propionato de dromostanolona (Masterona Injection®) ; Solução B de Elliott (Elliott' s B Solution®) ; epirubicina (Ellence®) ; Epoetina alfa (epogen®) ; erlotinib (Tarceva®) ; estramustina (Emcit®) ; 45 ΕΡ2336120Β1 fosfato de etoposido (Etopophos®) ; etoposido, VP-16 (Vepesid®) ; exemestano (Aromasin®) ; Filgrastim (Neupogen®) ; floxuridina (intra-arterial) (FUDR®) ; fludarabina (Fludara®) ; fluorouracil, 5-FU (Adrucil®) ; fulvestrant (Faslodex®) ; gefitinib (Iressa®) ; gemcitabina (Gemzar®) ; gemtuzumab ozogamicina (Milotarg®) ; acetato de goserelina (Zoladex Implante®) ; acetato de goserelina (Zoladex®) ; acetato de histrelina (Histrelin implant®) ; hidroxiureia (hydra®) ; Ibritumomab Tiuxetano (Zevalin®) ; idarubicina (Idamicina®) ; ifosfamida (IFEX®); mesilato de imatinib (Gleevec®) ; interferão alfa 2a (Roferon A®) ; Interferão alfa-2b (Intron A®); irinotecano (Camptosar®) ; lenalidomida (Revlimid®) ; letrozole (Femara®) ; leucovorina (Wellcovorin®, Leucovorin®) ; Acetato de Leuprolida (El-igard®) ; levamisole (Ergamisol®) ; lomustina, CCNU (CeeBU®) ; mecloretamina, mostarda de azoto (Mustargen®) ; acetato de megestrol (Megace®) ; melfalan, L-PAM (Alqueran®) ; mercaptopurina, 6-MP (Purinatol®) ; mesna (Mesnex®) ; mesna (Mesnex tabs®) ; metotrexato (Metotrexate®) ; metoxsaleno (Uvadex®) ; mitomicina C (Mutamicina®) ; mitotano (Lyso-dren®) ; mitoxantrona (Novantrone®) ; fenpropionato de nandrolona (Durabolin-50®) ; nelarabina (Arranon®) ; Nofetumomab (Verluma®) ; Oprelvequina (Neumega®) ; oxaliplatina (Eloxatin®) ; paclitaxel (Paxene®) ; paclitaxel (Taxol®) ; partículas ligadas a proteína de paclitaxel (Abraxane®) ; palifermina (Kepivance®) ; pamidronato (Aredia®) ; pegademase (Adagen (Pegademase Bovine)®); pegaspargase (Oncaspar®) ; Pegfilgrastim (Neulasta®) ; pemetrexed dissódio (Alimta®) ; pentostatina (Nipent®) ; pipobroman (Vercite®) ; plicamicina, mitramicina (Mithracin®) ; porfímero de sódio (Photofrin®) ; procarbazina (Matulane®) ; quinacrina (Atabrine®) ;

Rasburicase (Elitek®) ; Rituximab (Rituxan®) ; sargramostim (Leucinae®) ; Sargramostim (Prokine®) ; sorafenib (Nexavar®) ; estreptozocina (Zanosar®); maleato de sunitinib (Sutent®); talco (Sclerosol®) ; tamoxifeno (Nolvadex®) ; teniposido, VM- 46 ΕΡ2336120Β1 26 (Vumon®) ; testolactona (Teslac®) ; tioguanina, 6-TG (Tioguanine®) ; tiotepa (Tioplex®) ; topotecano (Hycamtin®) ; toremifene (Fareston®) ; Tositumomab (Bexxar®) ;

Tositumomab/I-131 tositumomab (Bexxar®) ; Trastuzumab (Herceptin®) ; tretinoína, ATRA (Vesanoid®) ; mostarda de Uracilo (Uracil Mustard Capsules®) ; valrubicin (Valstar®) ; vinblastina (Velban®) ; vincristina (Oncovin®) ; vinorelbina (Navelbine®) ; vorinostat (Zolinza®) ; zoledronato (Zometa®) ; nilotinib (Tasigna®) e dasatinib (Sprycel®) . A invenção também abrange combinações com AINE's gue são inibidores de COX-2 selectivos. Para propósitos desta memória descritiva AINE's que são inibidores selectivos de COX-2 são definidos como aqueles que possuem um especificidade para inibir COX-2 sobre COX-1 de pelo menos 100 vezes como foi medido pela razão de CI50 para COX-2 sobre CI50 para COX-1 avaliada pelos ensaios celulares ou microssomais. Tais compostos incluem, mas não são limitados a aqueles divulgados em Pat. U.S. 5.474.995, Pat. U.S. 5.861.419, Pat. U.S. 6.001.843, Pat. U.S. 6.020.343, Pat. U.S. 5.409.944, Pat. U.S. 5.436.265, Pat. U.S. 5.536.752,

Pat. U.S. 5.550.142, Pat. U.S. 5.604.260, U.S. 5.698.584,

Pat. U.S. 5.710.140, documento WO 94/15932, Pat. U.S. 5.344.991, Pat. U.S. 5.134.142, Pat. U.S. 5.380.738, Pat. U.S. 5.393.790, Pat. U.S. 5.466.823, Pat. U.S. 5.633.272, e Pat. U.S. 5.932.598, todos dos quais são incorporados no presente documento por referência.

Os inibidores de COX-2 que são particularmente úteis no presente método de tratamento são 5-cloro-3-(4-metilsulfonil)fenil-2-(2-metil-5-piridinil)piridina; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Os compostos que foram descritos como inibidores especificos de COX-2 e são portanto úteis na presente invenção incluem, mas não são limitados a: parecoxib, CELEBREX® e BEXTRA® ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos. 47 ΕΡ2336120Β1

Outros exemplos de inibidores da angiogénese incluem, mas não são limitados a, endostatina, ucraina, ranpirnase, IM862, 5-metoxi-4-[2-metil-3-(3-metil-2-butenil)oxiranil]-1-oxaspiro[2,5]oct-6-il(cloroacetil)carbamato, acetildinanalina, 5-amino-l-[[3,5-dicloro-4-(4- clorobenzoil)fenil]metil]-1H-1,2,3-triazole-4-carboxamida, CM101, esgualamina, combretastatina, RPI4610, NX31838, fosfato de manopentose sulfatado, 7,7-(carbonilbis [imino-iV-metil-4,2-pirrolocarbonilimino[JV-metil-4,2-pirrol]-carbonilimino]-bis-(1,3-naftaleno disulfonato), e 3—[ (2,4 — dimetilpirrol-5-il)metileno]-2-indolinona (SU5416).

Como foi utilizado anteriormente, "bloqueadores de integrina" referem-se a compostos que selectivamente antagonizam, inibem ou neutralizam a ligação de um ligando fisiológico à integrina ανβ3, a compostos que selectivamente antagonizam, inibem ou neutralizam a ligação de um ligando fisiológico à integrina ανβδ, a compostos que antagonizam, inibem ou neutralizam a ligação de um ligando fisiológico tanto a integrina ανβ3 como a integrina avp5í e a compostos que antagonizam, inibem ou neutralizam a actividade da(s) integrina(s) particular (es) expressa(s) nas células endoteliais capilares. 0 termo também refere-se a antagonistas das integrinas ανβδ, ανβ8 αιβι, α2βι, α5βι, θί6βι e αββ4· 0 termo também refere-se a antagonistas de qualquer combinação de integrinas ανβ3, ανβδ, ανβδ, ανβ8, αιβι, α2βι, β5αι, α6βι e α5β4·

Alguns exemplos específicos de inibidores da tirosina quinase incluem N(trifluorometilfenil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida, 3-[(2,4-dimetilpirrol-5- il)metilidenil)indolin-2-ona, 17-(allilamino)-17- demetoxigeldanamicina, 4- (3-cloro-4-fluorofenilamino)-7-metoxi-6-[3-(4-morfolinil)propoxil]quinazolina, N-(3- etynilfenil)-6,7-bis(2-metoxietoxi)-4-quinazolinamina, BIBX1382, 2,3,9,10,11,12-hexahidro-l0-(hidroximetil)-10- hidroxi-9-metil-9, 12-epoxi-líí-diindolo [l,2,3-fg:3,,2,,l'- 48 ΕΡ2336120Β1 kl]pirrolo[3,4-i] [ 1,6]benzodiazocin-l-ona, SH268, genistein, STI571, CEP2563, 4-(3-clorofenilamino)-5,6-dimet il-7fí-pirrolo [2,3-d] pirimidinametano sulfonato, 4—(3 — bromo-4-hidroxifenil)amino-6,7-dimetoxiquinazolina, 4- (4' -hidroxifenil)amino-6,7-dimetoxiquinazolina, SU6668, STI571A, N-4-clorophe-nil-4-(4-piridilmetil)-1-ftalazinamina, e EMD121974.

Numa forma de realização, as combinações da presente invenção são úteis para o tratamento ou prevenção do aparecimento de necrose induzida por agentes de metilação de N3-adenina selectivos tais como Me0S02 (CH2)-lexitropsina (Me-Lex).

As combinações com compostos diferentes de compostos anti-cancro são também abrangidas nos presentes métodos. Por exemplo, as combinações das combinações reivindicadas presentemente com agonistas de PPAR-γ (isto é, PPAR-gama) e agonistas de PPAR-δ (isto é, PPAR-delta) são úteis no tratamento de certas malignidades. PPAR-γ e PPAR-δ são os receptores activados de proliferador de peroxissoma nuclear γ e δ. Reportou-se a expressão de PPAR-γ em células endoteliais e seu envolvimento na angiogénese na literatura (veja-se J. Cardiovasc. Pharmacol. (1998) 31:909-913; J. Biol. Chem. (1999) 274:9116-9121; Invest. Oftalmol Vis. Sei. (2000) 41:2309-2317). Mais recentemente, os agonistas PPAR-γ demonstraram que inibem a resposta angiogénica a VEGF in vitro; tanto maleato de rosiglitazona e troglitazona inibem o desenvolvimento de neovascularização da retina em ratinhos. (Arch. Oftamol. (2001) 119:709-717). Os exemplos de agonistas de PPAR-γ e agonistas de PPAR-γ/α incluem, mas não são limitados a, tiazolidinadionas (tais como DRF2725, CS-011, troglitazona, rosiglitazona, e pioglitazona), fenofibrato, genfibrozila, clofibrato, GW2570, SB219994, AR-H039242, JTT-501, MCC-555, GW2331, GW409544, NN2344, KRP297, NP0110, DRF4158, NN622, GI262570, PNU182716, DRF552926, ácido 2-[ (5,7-dipropil-3- 49 ΕΡ2336120Β1 trifluorometil-1,2-benzisoxazol-6-il)oxi]-2-metilpropiónico (divulgados na USSN 09/782.856), e ácido 2 (í?) —7— (3— (2 — cloro-4-(4-fluorofenoxi) fenoxi)propoxi)-2-etilcromano-2-carboxílico (divulgados em USSN 60/235.708 e 60/244.697).

Outra forma de realização da presente invenção é a utilização das combinações presentemente reivindicadas em combinação com agentes antivirais (tais como análogos de nucleósido que incluem ganciclovir para o tratamento de cancro. Veja-se o documento WO 98/04290.

Outra forma de realização da presente invenção é a utilização das combinações presentemente reivindicadas em combinação com terapêutica génica para o tratamento de cancro. Para uma visão geral de estratégias genéticas para tratar o cancro veja-se Hall et al (Am J Hum Genet (1997) 61:785-789) e Kufe et al (Câncer Medicine, 5a Ed, pp 876-889, BC Decker, Hamilton 2000) . A terapêutica génica pode ser utilizada para distribuir qualquer gene supressor de tumores. Os exemplos de tais genes incluem, mas não são limitados a, p53, que podem ser distribuídos via transferência génica mediada por vírus recombinante (veja-se Pat. U.S. N° 6.069.134, por exemplo), um antagonista uPA/uPAR ("Adenovirus-Mediated Delivery of a uPA/uPAR Antagonist Suppresses Angiogenesis-Dependent Tumor Growth e Dissemination in Mice", Gene Therapy, Agosto (1998) 5(8):1105-13), e interferão gama (J Immunol (2000) 164:217-222) .

As combinações da presente invenção podem também ser administradas em combinação com um inibidor de resistência inerente a múltiplos fármacos (MDR), em particular MDR associadas a níveis altos de expressão de proteínas transportadoras. Tais inibidores de MDR incluem inibidores de p-glicoproteína (P-gp), tais como LY335979, XR9576, OC144-093, R101922, VX853, verapamil e PSC833 (valspodar).

Uma combinação da presente invenção pode ser utilizada em conjunto com agentes anti-eméticos para tratar náusea ou 50 ΕΡ2336120Β1 emese, que incluem emese aguda, retardada, de fase tardia, e antecipatória, que podem resultar desde a utilização de um composto da presente invenção, separado ou com terapêutica por radiação. Para a prevenção ou tratamento de emese, um composto da presente invenção pode ser utilizado em conjunto com outros agentes anti-eméticos, especialmente antagonistas de receptor da neuroquinina-1, antagonistas de receptor de 5HT3, tais como ondansetrona, granisetrona, tropisetrona, e zatisetrona, GABAb receptor agonistas, tais como baclofeno, um corticosteróide tal como Decadrona (dexametasona), Kenalog, Aristocort, Nasalida, Preferid, Benecorteno ou outros tais como aqueles divulgados em Patente U.S. N° 2.789.118, 2.990.401, 3.048.581, 3.126.375, 3.929.768, 3.996.359, 3.928.326 e 3.749.712, um antidopaminérgico, tal como as fenotiazinas (por exemplo, proclorperazina, flufenazina, tioridazina e mesoridazina), metoclopramida ou dronabinol. Numa forma de realização, um agente anti-emese seleccionado de um antagonista de receptor da neuroquinina-1, um antagonista de receptor de 5HT3 e um corticosteróide é administrado como um adjuvante para o tratamento ou prevenção de emese que podem resultar da administração dos presentes compostos.

Os antagonistas de receptor da neuroquinina-1 de utilização em conjunto com as combinações da presente invenção estão completamente descritos, por exemplo, em

Pat. U.S. N° 5.1 62.339, 5.232.929, 5.242.930, 5.373. .003, 5. 387 .595, 5. 459 .270, 5 .494 . 92 6, 5.496.833, 5.637. .699, 5. 719 . 147; Publicação de Patente Europeia N° EP 0 360 390, 0 394 989, 0 428 434, 0 429 366 , o 430 771, 0 436 334, 0 443 132, 0 482 : 53 9, 0 498 069 , o 499 313, 0 512 901, 0 512 902, i 0 514 273 , 0 514 274, , 0 514 275, 0 514 276, 0 515 681, 0 517 589, 0 520 555, 0 522 808 , o 528 495, 0 532 45 >6, 0 533 2 80, 0 536 ; 817, 0 545 478 , o 558 156, 0 577 394, 0 585 913, 0 590 152, 0 599 538, 0 610 793, 0 634 402, 0 686 629, 0 693 489, 0 694 535, 0 6 9 9 655 , o 699 674, 0 707 0C 16, 0 51 ΕΡ2336120Β1 708 101, 0 709 375, 0 709 37 6, , 0 714 891, 0 723 959, 0 733 632 e 0 776 893; Publicação de : Patente Internacional PCT N° WO 90/05525, 90/ 05729, 91/09844, ! 91/18899, 92/01688, 92/06079, 92/12151, 92/15585, 92/17449, 92/20661, 92/20676, 92/21677, 92/22569, 93/00330, 93/00331, 93/01159, 93/01165, 93/01169, 93/01170, 93/06099, 93/09116, 93/10073, 93/14084, 93/14113, 93/18023, 93/19064, 93/21155, 93/21181, 93/23380, 93/24465, 94/00440, 94/01402, 94/02461, 94/02595, 94/03429, 94/03445, 94/04494, 94/04496, 94/05625, 94/07843, 94/08997, 94/10165, 94/10167, 94/10168, 94/10170, 94/11368, 94/13639, 94/13663, 94/14767, 94/15903, 94/19320, 94/19323, 94/20500, 94/26735, 94/26740, 94/29309, 95/02595, 95/04040, 95/04042, 95/06645, 95/07886, 95/07908, 95/08549, 95/11880, 95/14017, 95/15311, 95/16679, 95/17382, 95/18124, 95/18129, 95/19344, 95/20575, 95/21819, 95/22525, 95/23798, 95/26338, 95/28418, 95/30674, 95/30687, 95/33744, 96/05181, 96/05193, 96/05203, 96/06094, 96/07649, 96/10562, 96/16939, 96/18643, 96/20197, 96/21661, 96/29304, 96/29317, 96/29326, 96/29328, 96/31214, 96/32385, 96/37489, 97/01553, 97/01554, 97/03066, 97/08144, 97/14671, 97/17362, 97/18206, 97/19084, 97/19942 e 97/21702; e em Publicação de Patente Britânica N° 2 266 529, 2 268 931, 2 269 170, 2 269 590, 2 271 774, 2 292 144, 2 293 168, 2 293 169, e 2 302 689. A preparação de tais compostos está completamente descrita nas patentes e publicações mencionadas anteriormente, que são incorporadas no presente documento por referência.

Numa forma de realização, o antagonista de receptor da neuroquinina-1 para utilização em conjunto com as combinações da presente invenção é seleccionado de: 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)etoxi)-3-(S)-(4-fluorofenil)-4-(3-(5-oxo-lΗ, 4H-1,2,4- triazolo)metil)morfolina, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que é descrito na Pat. U.S. N° 5.719.147.

Uma combinação da presente invenção pode também ser 52 ΕΡ2336120Β1 administrada com um agente útil no tratamento de anemia. Tal agente de tratamento da anemia é, por exemplo, um activador continuo do receptor da eritropoiese (tal como epoetina alfa).

Uma combinação da presente invenção pode também ser administrada com um agente útil no tratamento de neutropenia. Tal agente de tratamento da neutropenia é, por exemplo, um factor de crescimento hematopoiético que regula a produção e função de neutrófilos tais como um factor estimulante de colónias de granulócitos humanos, (G-CSF). Os exemplos de um G-CSF incluem filgrastim.

Uma combinação da presente invenção pode também ser administrada com um fármaco de estimulação imunológico, tal como levamisole, isoprinosina e Zadaxina.

Uma combinação da presente invenção pode também ser útil para tratar ou prevenir cancro, incluindo cancro ósseo, em combinação com bisfosfonatos (que se entende que incluam bisfosfonatos, difosfonatos, ácidos bisfosfónicos e ácidos difosfónicos). Os exemplos de bisfosfonatos incluem, mas não são limitados a: etidronato (Didronel) , pamidronato (Aredia), alendronato (Fosamax), risedronato (Actonel), zoledronato (Zometa), ibandronato (Boniva), incadronato ou cimadronato, clodronato, EB-1053, minodronato, neridronato, piridronato e tiludronato que incluem qualquer e todos os sais farmaceuticamente aceitáveis, derivados, hidratos e misturas dos mesmos.

Assim, o âmbito da presente invenção abrange as combinações para utilização em combinação com radiação ionizante e/ou em combinação com um segundo composto seleccionado de: inibidores de HDAC, um modulador de receptor de estrogénio, um modulador de receptor de androgénio, modulador de receptor retinóide, um agente citotóxico/citostático, um agente anti-proliferativo, um inibidor de prenil-proteina transferase, um inibidor de HMG-CoA reductase, um inibidor de angiogénese, um agonista 53 ΕΡ2336120Β1 de PPAR-γ, um agonista de PPAR-δ, um agente antiviral, um inibidor de resistência inerente a múltiplos fármacos, um agente anti-emético, um agente útil no tratamento de anemia, um agente útil no tratamento de neutropenia, um fármaco de estimulação imunológico, um inibidor de proliferação celular e sinalização de sobrevivência, um agente que interfere com um ponto de controlo do ciclo celular, um agente indutor da apoptose e um bisfosfonato. 0 termo "administração" e variantes do mesmo (por exemplo, "administering" um composto) em referência a um composto da invenção significa introduzir o composto ou um pró-fármaco do composto no sistema do animal em necessidade de tratamento. Quando um composto da invenção ou pró-fármaco do mesmo é proporcionado em combinação com um ou mais outros agentes activos (por exemplo, um agente citotóxico, etc.), entende-se que a "administração" e suas variantes incluam a introdução concorrente e sequencial do composto ou pró-fármaco do mesmo e outros agentes.

Como é utilizado no presente documento, o termo "composição" é destinado a abranger um produto que compreende os ingredientes especificados nas quantidades especificadas, bem como qualquer produto que resulte, directamente ou indirectamente, da combinação dos ingredientes especificados nas quantidades especificadas. 0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz" como é utilizado no presente documento significa que quantidade de composto activo ou agente farmacêutico que promove a resposta biológica ou médica num tecido, sistema, animal ou humano que está a ser pesquisado por um investigador, veterinário, médico doutor ou outros médicos. 0 termo "tratamento" refere-se ao tratamento de um mamífero afligido com uma condição patológica e refere-se a um efeito que alivia a condição por meio da destruição das células cancerosas, mas também a um efeito que resulta na inibição do progresso da condição, e inclui uma redução na 54 ΕΡ2336120Β1 taxa de progresso, uma pausa na taxa de progresso, melhora da condição, e cura da condição. 0 tratamento como uma medida profiláctica (isto é, profilaxia) é também incluída. 0 termo "farmaceuticamente aceitável" como é utilizado no presente documento pertence a compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem que estão, dentro do âmbito do critério do parecer do médico, adequados para utilização em contacto com os tecidos de um indivíduo (por exemplo, ser humano) sem excessiva toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação, proporcional a uma razão de benefício/risco razoável. Cada transportador, excipiente, etc. precisa também ser "aceitável" no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação. 0 termo "adjuvante" refere-se à utilização de compostos em conjunto com meios terapêuticos conhecidos. Tais meios incluem regimes citotóxicos de fármacos e/ou radiação ionizante como é utilizado no tratamento de tipos de cancro diferentes. Em particular, os compostos activos são conhecidos por potencializar as acções de um número de tratamentos de quimioterapia do cancro, que incluem a classe de topoisomerase de venenos (por exemplo, topotecano, irinotecano, rubitecano), a maioria dos agentes alquilantes conhecidos (por exemplo, DTIC, temozolamida) e fármacos à base de platina (por exemplo, carboplatina, cisplatina) utilizados no tratamento do cancro.

As abreviações utilizadas na descrição da química e nos exemplos que seguem são:

AcCl (cloreto de acetilo) ; (BzO)2 (peróxido de benzoilo); Cbz-Cl (benzilcloroformiato); DCM (diclorometano); DIPEA (di-iso-propiletil-amina); DMF (dimetilformamida) ; DMSO (dimetil-sulfóxido) ; eq. (equivalente); ES (electrospray); EtOAc (acetato de etilo); EtOH (etanol); crivos mol. (crivos moleculares); HATU 55 ΕΡ2336120Β1 [hexafluoro-fosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-il)-

Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametilurónio] ; MeCN (acetonitrilo) ; MeOH

(metanol) ; EM (espectrometria de massas) ; MO (microondas) ; NBS (Af-bro-mosuccinimida); NMMO (N-metilmorfolina-W-óxido); RMN (ressonância magnética nuclear) ; Pcol (pressão de coluna); iPrOH (isopropanol); TA (temperatura ambiente); sat. aq. (saturado aquoso); Si02 (sílica gel); e THF (tetrahidrofurano). t-BuOH (terc-butanol); KOAc (acetato de potássio); MO microondas; IST ISOLUTE® SPE coluna SCX (Tecnologia sorvente internacional ISOLUTE® Resina de permuta catiónica de coluna de extracção em fase sólida); SFC (cromatografia fluida supercrítica); TBTU tetrafluoroborato de O-(ΙΗ-benzotriazol-l-il) -N, N, Ν', N' - tetrametilurónio; e Tcol (temperatura da coluna). CDC13 (clorofórmio deuterado); TLC (cromatografia de camada fina) e TFA (ácido trifluoroacético).

Os compostos de fórmula I podem ser preparados fazendo reagir um composto de fórmula IA com amónia:

(IA) em que R1 e R2 são como definidos anteriormente e Rx é alquilCi-6, tal como metilo. A reacção é geralmente levada a cabo utilizando uma solução aquosa de NH3 num solvente tal como THF a aproximadamente 70°C, num recipiente de reacção vedado (com cuidado) . Alternativamente, uma base tal como NaOH ou KOH pode ser adicionada para hidrolisar o éster ao ácido carboxílico correspondente (Rx é hidrogénio), seguido pela adição de NH3 na presença de agentes de acoplamento tais como HATU ou TBTU e DIPEA num solvente tal como DMF, a reacção sendo levada a cabo a aproximadamente temperatura 56 ΕΡ2336120Β1 ambiente. Alternativamente, o ácido carboxilico pode ser activado para formar um anidrido misto, por exemplo, utilizando B0C2O, e então feito reagir com bicarbonato de amónio, geralmente num solvente tal como piridina. Alternativamente, o éster pode ser convertido a compostos de fórmula IA utilizando amónia num solvente tal como MeOH a aproximadamente 120°C, por exemplo, num MO. O átomo de azoto no anel de piperidina nos compostos de fórmula IA pode ser protegido durante, a síntese anterior, por exemplo, por Boc.

Os compostos de fórmula IA podem ser preparados fazendo reagir um composto de fórmula IB com um azida:

CO,R X

(IB) em que R1, R2 e Rx são como definidos anteriormente. Uma azida tal como NaN3 pode ser utilizada, geralmente num solvente tal como DMF a de aproximadamente 90°C a 140"C. Um aditivo tal como 2,6 lutidina pode também ser utilizado. A reacção pode ser levada a cabo sob uma atmosfera de azoto.

Os compostos de fórmula IB podem ser preparados pela condensação de um composto de fórmula IC com um composto de fórmula ID:

(IC) (ID) em que R1, R2 e Rx são como definidos anteriormente e L1 é 57 ΕΡ2336120Β1 um grupo abandonante tal como nitro ou halogéneo, por exemplo, flúor. Os métodos incluem condensação na presença de um agente desidratante tal como MgS04 ou crivos moleculares ou aquecimento num solvente de álcool tal como etanol a refluxo. A reacção pode ser levada a cabo sob uma atmosfera de azoto.

Os compostos de fórmula IC podem ser preparados pela oxidação de um composto de fórmula IE com um agente oxidante tal como NMMO:

(IE) em que R1, Rx e L1 são como definidos anteriormente e L2 é um grupo abandonante tal como halogéneo, por exemplo, bromo, geralmente num solvente tal como MeCN a aproximadamente temperatura ambiente. A reacção pode ser levada a cabo sob uma atmosfera de azoto.

Os compostos de fórmula IE em que L2 é bromo podem ser preparados pela oxidação de um composto de fórmula SE com um agente de bromação tal como NBS na presença de um iniciador de radical tal como peróxido de benzoílo:

em que R1, Rx e L1 são como definidos anteriormente, geralmente num solvente tal como CC14 a refluxo. A reacção pode ser levada a cabo sob uma atmosfera de azoto.

Os compostos de fórmula SE em que L1 é flúor podem ser preparados por meio de diazonitisação de um composto de 58 x ΕΡ2336120Β1 fórmula IG: rn r

-NH.

R

(IG) em que R1 e Rx são como definidos anteriormente, seguido pela decomposição do sal diazónio intermediário. Por exemplo, a diazonitisação pode ser levada a cabo utilizando tetrafluoroborato nitroso num solvente tal como DCM a aproximadamente 0°C. 0 sal tetrafluoroborato de diazónio correspondente pode então ser isolado e subsequentemente decomposto a temperaturas elevadas ao correspondente derivado fluorobenzeno (Cuidado), tal como por aquecimento até 160°C num solvente tal como diclorobenzeno.

Os compostos de fórmula SE em que L1 é nitro podem ser preparados por meio de nitração de um composto de fórmula IH:

O. .OH

(IH) em que R1 é como definido anteriormente, seguido por esterificação. A reacção de nitração pode ser levada a cabo na presença de um nitrato tal como nitrato de potássio e um ácido tal como ácido sulfúrico a aproximadamente temperatura ambiente. A etapa de esterificação pode ser levada a cabo sob condições padrão, tais como fazendo reagir com um alquil haleto de fórmula Rx-X em que X é um halogéneo tal como iodo, na presença de uma base tal como carbonato de césio e num solvente tal como DMF a 59 ΕΡ2336120Β1 aproximadamente temperatura ambiente. Um álcool de fórmula Rx-OH pode também ser utilizado junto com um catalisador ácido, tal como HC1 gerado in situ a partir de AcCl/MeOH, a refluxo. 0 composto desejado de fórmula SE pode então ser obtido por meio de hidrogenação do composto nitro à anilina correspondente utilizando hidrogénio e um catalisador tal como paládio em carbono, tipicamente num solvente alcoólico tal como MeOH.

Alternativamente, os compostos de fórmula I podem ser preparados pela reducção de um composto de fórmula IJ:

(U) em que R1 e R2 são como definidos anteriormente. A redução pode ser levada a cabo numa reacção de Fowler utilizando um cloreto de acilo tal como CBz-Cl e um agente redutor tal como NaBH4. A hidrogenação sobre paládio em carbono completa a reacção e retira o grupo protector de CBz.

Os compostos de fórmula IJ podem ser preparados por meio de acoplamento cruzado de um composto de fórmula IK com ácido 3-piridinilborónico de fórmula IL:

em que R1, R2 e L2 são como definidos anteriormente. A reacção é geralmente levadas a cabo sob condições de acoplamento de Suzuki tais como utilizando catalisadores tais como Pd2(dba)3 e tri (terc-butil)fosfina junto com uma 60 ΕΡ2336120Β1 base tal como carbonato de sódio e solventes tais como DMF e água a aproximadamente 90°C.

Os compostos de fórmula IK podem ser preparados por meio de condensação de um composto de fórmula IM com um composto de fórmula IN:

CONtL

(IM) R2

em que R1, R2 e L2 são como definidos anteriormente e L3 é um grupo abandonante tal como halogéneo, por exemplo, flúor, geralmente num solvente tal como DMF a aproximadamente 180 "C num MO. Uma base tal como K2C03 pode também ser adicionada.

Os compostos de fórmula IM podem ser preparados fazendo reagir um composto de fórmula IO:

em que R1 e Rx são como definidos anteriormente, com uma base tal como KOH ou NaOH a aproximadamente temperatura ambiente para hidrolisar o éster ao ácido carboxilico correspondente (Rx é hidrogénio), seguido pela adição de Nh3 na presença de agentes de acoplamento tais como HATU, DIPEA e TBTU num solvente tal como DMF, a reacção sendo levada a cabo a aproximadamente temperatura ambiente.

Os compostos de fórmula IO podem ser preparados a partir do composto da fórmula IG por meio de acetilação do grupo anilina com reagentes tais como cloreto de acetilo num solvente tal como 1,2-DCE a aproximadamente 55°C. A 61 ΕΡ2336120Β1 ciclização ao indazole desejado pode então ser efectuada por meio de tratamento com nitrito de sódio em ácido, por exemplo, ácido clorídrico concentrado, geralmente na presença de um co-solvente tal como tolueno e água a aproximadamente 0°C.

Onde a síntese de intermediários e os materiais de partida não são descritos, estes compostos são comercialmente disponíveis ou podem ser feitos a partir de compostos comercialmente disponíveis por meio de métodos padrão ou por extensão da síntese anteriormente, esquemas e Exemplos no presente documento.

Os compostos de fórmula I podem ser convertidos a outros compostos de fórmula I por meio de métodos conhecidos ou por meio de métodos descritos na síntese anterior, esquemas e Exemplos no presente documento.

Durante qualquer das sequências sintéticas descritas no presente documento pode ser necessário e/ou desejável proteger grupos sensíveis ou reactivos em qualquer das moléculas de interesse. Este pode ser conseguido por meio de grupos protectores convencionais, tais como aqueles descritos em Protecting Groups in Organic Synthesis, 3a Edição, Greene, T. W. e Wuts, P. G. M.; Wiley Interscience, 1999 e Kocienski, P. J. Protecting Groups, Thieme, 1994. Os grupos protectores podem ser retirados numa fase subsequente conveniente utilizando métodos conhecidos da técnica. Por exemplo, quando o grupo protector Boc (terc-butoxicarbonil) ou benzilcarbonilo está presente, pode ser retirado pela adição de solventes tais como TFA, DCM e/ou MeCN a aproximadamente temperatura ambiente. 0 composto pode também ser hidrogenado utilizando métodos padrão, tais como tratamento com um catalisador tal como Pd/C, num solvente tal como metanol sob uma atmosfera de hidrogénio. EtOAc na presença de HC1 e 1,4-dioxano pode também ser adicionado para retirar o grupo protector Boc ou benzilcarbonilo, a aproximadamente temperatura ambiente. 62 ΕΡ2336120Β1

Os compostos desta invenção foram preparados de acordo com os seguintes esquemas. Todas as variáveis dentro das fórmulas são como definidas anteriormente.

Quando os compostos da presente invenção têm centros quirais, os enantiómeros podem ser separados das misturas racémicas por meio de métodos de separação padrão tais como utilizando SFC, HPLC quiral ou resolução com ácidos quirais. A separação pode ser levada a cabo em qualquer etapa do processo para fazer os compostos de fórmula I. Assim, a separação pode ser levada a cabo na etapa final, ou alternativamente os intermediários podem ser separados e então enantiómeros particulares utilizados em reacções subsequentes para produzir os produtos desejados.

Esquema 1

Um procedimento para sintetizar os derivados de aqueles compostos desta invenção é mostrado no esquema 1, pelo qual os 2íí-indazoles substituídos são preparados utilizando uma via sintética similar a aquela descrita no documento WO 2005/066136. Seguindo conversão inicial do derivado ácido 2-nitro-3-metilbenzóico no correspondente éster, a bromação radical do grupo metilo utilizando reagentes como N-bromosuccinimida e peróxido de benzoílo proporciona o derivado brometo de benzilo chave. Oxidação deste brometo benzílico ao correspondente benzaldeído pode ser conseguida, por exemplo, utilizando iV-metilmorfolina-iV-óxido e crivos moleculares. Seguindo a condensação do aldeído com uma amina, fechamento do anel pode ser conseguido por meio do tratamento do intermediário chave com azida de sódio a temperatura elevada para introduzir o átomo de azoto final e a resultante extrusão de azoto para prover o anel indazole. Uma base tal como lutidina pode também ser adicionada a esta reacção. A conversão final do éster à amida primária proporciona os derivados desejados. 63 ΕΡ2336120Β1

Isto pode ser conseguido pelo aquecimento do éster numa solução de amónia ou por meio de conversão ao ácido carboxilico correspondente e então acoplamento de amida. ΕΡ2336120Β1 R1 co2h NQj esterificação C02R* ^γ-NOj CH3 por ex. AcCI, R*OH refluxo R1 í/^CH3 bromação por ex.NBS, (BzO)j CCI4, Δ

rk = alquilC^g oxidaçao por ex.NMMO, crivos mol. CO->R'

Esquema 1

i) NaN3. DMF. 90°C ii) formação de amida NHa. THFou MeOH,

70PC Tubo vedado NaOHou KOH. NH3, HATU ou TBTU, DIPEA, DMF, RT

Esquema 2

Uma variação do esquema 1 é mostrada a seguir no esquema 2 e permite a introdução de substituintes sobre os núcleos de indazole. Quando os derivados de ácido nitrobenzóico requeridos não estão comercialmente disponíveis podem ser preparados através da nitração dos derivados de ácido benzóico correspondentes, por exemplo utilizando nitrato de potássio em ácido sulfúrico concentrado. Manipulações sintéticas como descrito anteriormente permitem a formação da anilina correspondente que pode ser ciclizada ao indazole em primeiro lugar pela acetilação do indazole e ciclização com nitrito de sódio em ácido HC1 concentrado a 0°C. Alternativamente, a anilina 64 ΕΡ2336120Β1 pode ser diazonitizada com tetrafluoroborato nitroso e o sal tetrafluoroborato de diazónio correspondente decomposto a temperaturas elevadas ao derivado dilfluorobenzeno correspondente por meio de uma reacção de Schiemann (Cuidado). Seguindo a sequência sintética como foi descrita no esquema 1 permite oxidação do grupo metil benzilico ao correspondente aldeído e a elaboração dos derivados de indazole desejados por meio de acoplamento com uma (hetero)anilida e ciclização com azida de sódio. ΕΡ2336120Β1

reducção H2, Pd/C R1 co2r>

CHO

ço2rx F

i) N0BF4i DCM ii) clorobenzeno co2rx CH3 Δ . NH-> ciclização

porex. j)AcCI, 55°C

ii) NaNQj, conc HCI, CPC

Esquema 3

Um procedimento alternativo envolve funcionalização do indazole a um estágio posterior como mostrado no esquema 3. Aqui o éster indazole é em primeiro lugar convertido à carboxamida correspondente e então submetido a substituição aromática nucleofílica do brometo fluoro(hetero)aromático apropriado. Isto permite a preparação de um derivado de brometo que pode ser acoplado de forma cruzada sob condições de acoplamento de Suzuki, por exemplo utilizando 65 ΕΡ2336120Β1 tri (terc-butil)fosfina e Pd2(dba)3 como catalisadores na presença de uma base, tal como carbonato de sódio. A conversão á fracção piperidina desejada é então conseguida por uma reacção de Fowler utilizando um cloreto de acilo, tal como CBz-Cl e um agente redutor tal como NaBH4. A reacção de hidrogenação final pode proporcionar os derivados de piperidina correspondente. ΕΡ2336120Β1 R1 CO3R*

reaccão de SuAr formação de amida por ex,. NH3, Δ OU KOH, depóísTBTU, NH3

, MO, 180°C Acoplamento de Suzuki

R2 % // -Br

Base Pd2(dba)3 PfBufeA R1 R!

i) ROCOG.pore.x.CbzCI CONH2 NaBH4, -65°Caté ΤΑ N) Hidrogenação ^ por ex. Hj, Pd/C

Ensaio PARP-1 SPA

Os compostos exemplificados descritos no presente documento foram testados neste ensaio e têm um valor de CI50 de menos de 5 μΜ, particularmente menos de 50 nM.

Reagentes de trabalho

Tampão de ensaio: 100 mM de Tris pH 8, 4 mM de MgCl2, 4 mM de Espermina, 200 mM de KC1, 0,04% de Nonidet P-40. Mistura de Enzima: Tampão de ensaio (12,5 ul) , 100 mM de DTT (0,5 ul), PARP-1 (5 nM, Trevigen 4668-500-01), H20 (até 35 ul). 66 ΕΡ2336120Β1

Mistura de Nicotinamida-adeninas dinucleótido (NAD)/ ADN: [3H-NAD] (250 uCi/ml, 0,4 ul, Perkin-Elmer NET-443H), NAD (1,5 mM, 0,05 ul, SIGMA N-1511), NAD biotinilada (250 uM, 0,03 ul, Trevigen 4670-500-01), Timo de bezerro activado (1 mg/ml, 0,05 ul, Amersham Biosciences 27-4575), H20 (até 10 ul) .

Mistura de desenvolvimento: pérolas de Estreptavidina SPA (5 mg/ml, Amersham Biosciences RPNQ 0007) dissolvidas em 500 mM de EDTA.

Desenho experimental A reacção é realizada em microplaca de 96 poços com um volume final de 50 uL/poço. Adicionar 5ul de DMSO a 5%/solução do composto, adicionas a mistura de enzima (35 ul) , iniciar a reacção adicionando mistura de NAD/ADN (10 uL) e incubar durante 2 h a TA. Parar a reacção adicionando mistura de desenvolvimento (25 ul) e incubar durante 15 min a TA. Medir utilizando um instrumento Packard TOP COUNT.

Ensaio de proliferação em células HeLa silenciadas para BRCA-1.

Abreviações: IMDM (Meios de Dulbecco modificados por Iscove); RPMI (meios do Roswell Park Memorial Institute); MOI (multiplicidade de infecção); GFP (proteína fluorescente verde); PBS (Solução salina tamponada com fosfato); FCS (soro fetal de bezerro) ; e DMEM (Meio de Eagle modificado por Dulbecco).

Os compostos da presente invenção foram também testados num ensaio anti-proliferativo em células HeLa BRCAlwt e BRCAl-(shRNA) de par combinado. O ensaio mostra que inibidores de PARP são capazes de mostrar selectividade 67 ΕΡ2336120Β1 com inibição de crescimento das células deficientes em BRCA. Os compostos mostraram CC50 inferiores a 5 μΜ em células deficientes em BRCAI e uma selectividade dez vezes superior em comparação com as células BRCA proficientes. 0 ensaio é baseado na capacidade de células vivas para converter um corante redox (resazurina) num produto final fluorescente (resofurina). A quantidade de resofurina produzida é directamente proporcional ao número de células. Linhas de células:

HeLa shBRCAl-GFP - Estas são células HeLa transduzidas a um MOI de 100 com um Lentivirus que contêm um shRNA contra BRCA-1 e uma cassete de expressão para GFP. O silenciamento BRCA-1 é mais de 80% como avaliado por análise de Taqman e as células expressam de maneira estável GFP.

HeLa THM-GFP - Estas são células HeLa transduzidas a um MOI de 100 com um vector de controlo que não expressa nenhum shRNA.

Protocolo - Semear 300 célula/poço em placa de visualização de 96 poços negra em 90 μΐ de meio de cultura*: — Incubar durante 4 horas a 37°C, 5% de CO2 - Adicionar 10 ul/poço de 10X composto (5% de DMSO em H20) — Incubar durante 168 horas a 37°C, 5% de CO2 - Adicionar 10 μΐ de solução Celltiter Blue (Promega, G8081) pré-diluída 1:1 em PBSIx - Incubar a mistura durante 45' a 37°C, 5% de CO2 — Incubar durante 15' a TA na escuridão — Ler a placa no fluorimetro ex: 550 nm; em: 590 nm

*Meio de cultura: DMEM (GIBCO, 41966-029), 10% de FCS (GIBCO, 10106-169), 0,1 mg/ml de Penicilina-Estreptomicina (GIBCO, 15140-114), 2 mM de L-Glutamina (GIBCO, 3042190) 68 ΕΡ2336120Β1

Ensaio de Proliferação em linhas de células naturalmente deficientes em BRCA.

Também demonstrou-se que os compostos da presente invenção inibem a proliferação de linhas de células naturalmente deficientes em BRCA-1 (MDA-MB-436) e BRCA-2 (CAPAN-1) com CC50's inferiores a 5 micromolar.

Ensaio de Proliferação Células são semeadas numa placa de 96 poços a 700 células/poço em 100 ul do meio apropriado/poço. * No dia seguinte, diluições seriadas do composto são adicionadas num volume final de 200 ml/poço. Cada diluição é testada em triplicado. Seis dias mais tarde, a viabilidade celular é estimada utilizando o ensaio de viabilidade celular CellTiter-Blue de acordo com as instruções do fabricante (Promega). As placas são lidas no leitor de placas Fusion Alpha (Packard Bioscience).

Para linhas de células pouco proliferantes (isto é, CAPAN-1), a proliferação é testada 14 dias após adicionar os compostos e mudar o meio uma vez ao dia 7 (170 μΐ de meio por poço são aspirados e substituídos com 170 μΐ de meio fresco que contêm os compostos). * Meio de cultura: MDA-MB-436: RPMI (GIBCO), 10% de FBS (5% de C02) CAPAN-1: IMDM (GIBCO), 20% FBS (5% de C02)

Os compostos testados num modelo oncológico in vivo mostraram um nível de actividade significativo.

EXEMPLO PREPARATIVO EXEMPLO A 2-Fenil-2ff-indazol-7-carboxamida (A6)

Etapa 1: 3-metil-2-nitrobenzoato de metilo (Al) A uma suspensão de ácido 3-metil-2-nitro-benzóico (1,0 69 ΕΡ2336120Β1 eq.) em MeOH (0,4 M) a 0'C foi adicionado gota a gota AcCl (3,0 eq.). A mistura de reacção foi agitada durante 20 h a refluxo. O solvente foi reduzido a vácuo e o resíduo foi dissolvido em EtOAc e lavado diversas vezes com solução de NaHC03 sat. aq., salmoura e seco (Na2S04) . A evaporação do solvente deu (Al) como um sólido branco que foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional. ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13, 300 K) δ 7,86 (1H, d, J = 7,5 Hz), 7,53-7,42 (2H, m) , 3,89 (3H, s) , 2,36 (3H, s). EM (ES) C9H9N04 requer: 195, achado: 218 (M+Na)+.

Etapa 2: 3-(bromometil)-2-nitrobenzoato de metilo (A2)

Uma mistura de (Al) (1,0 eq.), (BzO)2 (0,06 eq.) e NBS (1,18 eq.) em CC14 (0,2 M com relação a Al) foi aquecida a refluxo sob atmosfera N2 durante 12 h. A mistura foi arrefecida até TA, diluída com DCM, concentrada sob pressão reduzida ao mesmo tempo em que é carregada a seco sobre Si02. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em coluna flash em Si02 utilizando 10:90 EtOAc/Éter de petróleo para proporcionar o desejado (A2) como um sólido branco. ΧΗ RMN (400 MHz, CDCI3, 300 K) δ 7,93 (1H, d, J = 7,7 Hz), 7,72 (1H, d, J = 7,7 Hz), 7,57 (1H, t, J = 7,7 Hz), 4,43 (2H, s) , 3,88 (3H, s) . EM (ES) C9H8BrN04 requer: 273: 275, achado: 242:244 (M-MeO)-'- 227:229 (M-N02)+.

Etapa 3: 3-formil-2-nitrobenzoato de metilo (A3) A uma mistura de (A2) (1,0 eq.) e crivos mol. de 4 Â (15 g) em MeCN (0,2 M) a TA foi adicionado NMMO (2,0 eq.) e a mistura de reacção foi agitada durante 1,5 h sob atmosfera de N2. Então, a mistura foi diluída com EtOAc, filtrada e o filtrado foi lavado com H20, HC1 1 N, salmoura e seco (Na2S04) . A evaporação do solvente deu (A3) como um sólido branco que foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional. ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13, 300 K) δ 9,96 (1H, s), 8,26 (1H, d, J= 7,9 Hz), 8,18 (1H, d, J = 7,9 70 ΕΡ2336120Β1

Hz), 7,77 (1H, t, J = 7,9 Hz), 3,93 (3H, s) . EM (ES) C9H7N05 requer: 209, achado: 208 (M-H)“.

Etapa 4: 2-nitro-3-[(fenilimino)metil]benzoato de metilo (A4)

Uma mistura de (A3) (1,0 eq.) e anilina (1,05 eq.) em

EtOH (0,2 M) foi agitada a refluxo sob atmosfera de N2 durante 2 h até que a TLC revelou finalização da reacção (Hexano/EtOAc = 75:25). A evaporação do solvente deu (A4) como um sólido branco que foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional. ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13, 300 K) δ 8,51 (1H, d, J = 7,3 Hz), 8,41 (1H, s), 8,11 (1H, d, J = 7,8 Hz), 7,67 (1H, t, J = 7,8 Hz), 7,43 (2H, t, J = 7,8

Hz), 7,31 (1H, t, J = 7,3 Hz), 7,16 (2H, d, J = 7,8 Hz), 3, 94 (3H, s) .

Etapa 5: 2-fenil-2H-indazole-7-carboxilato de metilo (A5)

Uma mistura de (A4) (1,0 eq.) e NaN3 (1,05 eq.) em DMF seco (0,3 M) foi agitada a 90°C durante a noite sob atmosfera de N2. O produto bruto foi reduzido a vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em coluna flash em sílica utilizando um gradiente de EtOAc/Éter de petróleo desde 10:90 até 40:60 para proporcionar o desejado (A5) como um óleo castanho. ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13, 300 K) δ 8,50 (1H, s), 8,12 (1H, d, J = 7,0 Hz), 7, 96-7, 90 (3H, m) , 7,49 (2H, t, J = 7,6 Hz), 7,38 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,15 (1H, t, J = 7,4 Hz), 4,03 (3H, s) . EM (ES) Ci5H12N202 requer: 252, achado: 253 (M+H)x

Etapa 6: 2-Fenil-2ff-indazole-7-carboxamida (A6) 0 éster (A5) foi aquecido numa mistura de THF e 32% de solução de NH3 aq. a 70°C durante a noite num tubo vedado. Os solventes foram reduzidos a vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em coluna flash em sílica utilizando um gradiente de EtOAc/Éter de petróleo 71 ΕΡ2336120Β1 desde 30:70 até 50:50 para proporcionar o desejado (A6) como um sólido branco. 1 H RMN (400 MHz, DMSO, 300 K) δ 9, 33 (1H, s), 8,56 (1H, bs), 8, 16 (2H, d, J = 7,9 Hz) , 8,08 -8,00 (2H, m), 7,88 (1H, bs), 7, 63 (2H, t, J = 7,7 Hz) , 7,50 (1H, C+ > > Hz), 7,27 (1H, t, J = 7,9 Hz) . EM (ES) Cl4 H11N3O requer: 237, achado: 238 (M+H)+. EXEMPLOS REPRESENTATIVOS EXEMPLO 1

Cloreto_de_3-{4-[7- (aminocarbonil) -2g-indazol-2- il]fenil}piperidinio (B4)

Etapa_1: 3- [4- ({ - [3- (metoxicarbonil) -2- nitrofenil]metileno}amino) fenil]piperidina-l-carboxilato de terc-Butilo (Bl) (Bl) foi preparado seguindo o procedimento geral reportado para o Exemplo Preparativo A etapa 4 utilizando A3 e 3-(4-aminofenil)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo até que a TLC revelou s finalização da reacção (Éter de petróleo: EtOAc =4:1) e foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional.

Etapa_2 : 2-{4-[1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-3- il] fenil}-2íf-indazole-7-carboxilato de metilo (B2) (B2) foi preparado seguindo o procedimento geral reportado para o Exemplo Preparativo A etapa 5 e o produto bruto foi purificado por meio de cromatografia em coluna flash em sílica utilizando um gradiente de 20-40% de EtOAc/Éter de petróleo para proporcionar o desejado (B2) como um sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, 300 K) δ 8, 51 ( 1H, s) , 8,13 (1H, d, J = 7,1 Hz) , 7,95 (1H, d, J = 8, 3 Hz ) , 7, 91 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,39 (2H, d, J = 8,4 Hz ) , 7 ,18 (1H, t, J = 7,2 Hz), 4 ,30-4,10 (2H, m) , 4 , 00 (3H, S) t 2, 85- 2,70 (3H, m) , 2,11-2,03 (1H, m) , 1,83-1, 75 (1H, m) t 1, 73- 1,53 (2H, m sobreposto a sinal de H20) , 1- r 4 8 (9H, s) . EM (ES) C25H29N3O4 requer: 435, achado: 436 (M+H)x 72 ΕΡ2336120Β1

Etapa_3 : 3-14- [7- (aminocarbonil) -2H-indazol-2- il]fenilpiperidina-l-carboxilato de terc-Butilo (B3) (B2) foi aquecido em NH3 7 N em MeOH (0,1 M) num tubo vedado durante 2 dias a 60°C. Os solventes foram reduzidos a vácuo e o produto bruto produto foi purificado por meio de trituração com Et20 para dar o desejado (B3) como um sólido amarelo. ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13, 300 K) δ 9,04 (1H, S. 1.), 8,51 (1H, s), 8,31 (1H, d, J = 6,8 Hz), 7,91 (1H, d, J = 8,3 Hz), 7,84 (2H, d, J = 8,2 Hz), 7,42 (2H, d, J = 8,2 Hz), 7,31-7,22 (1H, m sobreposto a sinal de CDC13) , 5,95 (1H, S. 1.), 4,40-4,05 (2H, m) , 2, 90-2, 70 (3H, m) , 2,15-2,00 (1H, m) , 1,85-1, 75 (1H, m) , 1,75-1,50 (2H, m sobreposto a sinal H20) , 1,48 (9H, s) . EM (ES) C24H28N403 requer: 420, achado: 421 (M+H)+.

Etapa 4: Cloreto de 3-14-[7-(aminocarbonil)-2H-indazol-2-il]fenilpiperidínio (B4) A uma solução agitada de (B3) (1,0 eq) em EtOAc (0,2 M) foi adicionado HC1 4 N/solução de 1,4-dioxano (10,0 eq) e a mistura de reacção foi agitada a TA durante 3h.

Solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o produto bruto produto purificado por meio de trituração com Et20 para proporcionar o desejado (B4) como um sólido amarelo. RMN (400 MHz, DMSO-d6 300 K) δ 9,32 (1H, s), 9,12 (1H,

S. 1.), 8,87 (1H, S. 1.), 8,55 (1H, S. 1.), 8,13 (2H, d, J = 8,6 Hz), 8,06 (1H, J = 7,0 Hz), 8,02 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,89 (1H, S. 1.), 7,55 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,27 (1H, dd, J = 8,4, 7,0 Hz), 3,43-3,27 (2H, m), 3,17-3,03 (2H, m), 3,00-2,85 (1H, m) , 2,00-1,70 (4H, m) . EM (ES) Ci9H21C1N40 requer: 320, achado: 321 (M+H)+. 73 ΕΡ2336120Β1 EXEMPLO 2 2-{4-[(3R)-Piperidin-3-il]fenil}-2H-indazole-7-carboxamida (Cl) e 2-{4-[(3S)-Piperidin-3-il]fenil}-2H-inda-zole-7-carboxamida (C2)

Exemplo 1, B4 foi separado por SFC quiral (coluna: Quiralpak AS-H, 1 x 25 mm, fluxo: 10 ml/min, Tcoi: 35 °C, Pcoi · 100 bar, modificador: 55% ^PrOH + Et2NH 4%)), utilizando C02 como eluente supercritico, proporcionando ambos os enantiómeros puros. O primeiro enantiómero eluido (Cl), tempo de retenção (SFC): 4,80 min, foi obtido como um pó branco. ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO- -d6, 300 K) δ 9,28 (s, 1H) , 8,57 (S. i—1 i—1 8, 06 (d, 2H, J = 7, 2 Hz ), 8, 04 (d, 2H, J = 8,4 Hz) , 7,88 (S. 1-, 1H) , 7, 49 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,27 (dd, 1H, J = 8,4, 7,2 Hz) , 3, 08- -2,94 (m , 2H) , 2, 77-2, 67 (m, 1H) , 2,64-2,52 (m, \—1 1, 98- -1, 90 (m, 1H) , 1,75-1,47 (m, 4H) . EM (ES) C19H 2oN40 requer: 320, achado: 321 (M+H)+. A base livre foi convertida a (3R)-Cloreto de 3-{4-[7-(aminocarbonil)-2H-indazol-2-il]fenil}piperidinio e a rotação óptica medida: [a] 20D = +133,3 (c 0,15 , MeOH) . O segundo enantiómero eluido (C2), tempo de retenção (SFC): 6,51 min, foi obtido como um pó branco. XH RMN (400 MHz, DMSO- -d6, 300 K) δ 9,28 (s, 1H), 8,57 (S. 1., 1H), 8,06 (d, 2H, J = 7, 2 Hz) , 8, 04 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,88 (S. 1., 1H) , 7,49 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,27 (dd, 1H, J = 8,4, 7,2

Hz), 3,08-2, 94 (m, 2H) , 2,77-2, 67 (m, 1H) , 2, 64-2,52 (m, 1H) , 1, 98-1, 90 (m, 1H) , 1,75-1,47 (m, 4H) . EM (ES) C19H20N4O requer: 320, achado: 321 (M+H)+. A base livre foi convertida a cloreto de (3S)-3-{4-[7-(aminocarbonil)-2H-indazol-2-il]fenil}piperidínio e a rotação óptica medida: [a] 20D = -137,9 (c 0,145 , MeOH). 74 ΕΡ2336120Β1 EXEMPLO 3

Trifluoroacetato de 3-{4-[7-(aminocarbonil)-5-fluoro-2H-indazol-2-il]fenil}piperidínio (D4)

Etapa 1: Metilo 5-fluoro-lH-indazole-7-carboxilato (Dl) A uma solução de Exemplo 4, E3 (1,0 eq.) em 1,2-dicloroetano (0,1 M) foi adicionado AcCl (5 eq.) e aquecida a 55°C durante 2 h. Depois disso o solvente foi retirado sob pressão reduzida. 0 sólido branco foi dissolvido em tolueno/água (5/1, 0,1 M) . A solução foi arrefecida até 0°C e HC1 (10 eq., 37%) foi adicionado. Então lentamente e em porções NaN02 (10 eq.) foi adicionado e a mistura foi agitada durante 3 h a 0°C. A fase orgânica foi lavada com água (3x) , seca em MgSCq e o solvente foi retirado sob pressão reduzida. A solução amarela em tolueno (0,1 M) foi então aquecida durante 2 h a 90°C. A evaporação de tolueno proporcionou o produto desejado como um sólido vermelho. XH RMN (400 MHz, DMSO, 300 K) δ 13,37 (1H, s) , 8,23 (1H, s) , 7,63 (1H, dd, J = 8,6 Hz, J = 2,5 Hz), 7,48 (1H, dd, J = 8,6 Hz, J = 2,5 Hz), 3,66 (3H, s) . EM (ES+) C9H7FN2O2 requer: 194, achado: 195 (M+H)+.

Etapa 2: 5-Fluoro-lff-indazole-7-carboxamida (D2) (Dl) foi dissolvido em dioxano/água (1/1, 0,1 M) e KOH (1,5 eq.) foi adicionado. Após agitação durante 12 h a TA os solventes foram retirados sob pressão reduzida. O sólido branco foi utilizado sem purificação para o acoplamento subsequente. O ácido carboxilico foi dissolvido em DMF (0,1 M) e TBTU (1,5 eq.) foi adicionado a 0°C. Após 15 min DIPEA (2,0 eq.) e amónia (3,0 eq., 0,5 M em dioxano) foram adicionados e a mistura foi agitada durante 36 h a TA. EtOAc foi adicionado e a fase orgânica foi lavada com solução de NaHC03 sat. aq. (3 x) e salmoura (2 x). A fase orgânica foi seca e evaporada sob pressão reduzida. O produto bruto foi 75 ΕΡ2336120Β1 purificado por meio de cromatografia flash utilizando 1-20% MeOH/DCM para proporcionar (D2) como um sólido branco. EM (ES+) C8H6FN30 requer: 179, achado: 180 (M+H)^

Etapa_3 : 2-(4-Bromofenil)-5-fluoro-2ff-indazole-7- carboxamida (D3) A uma solução de D2 (1,0 eq) em DMF (0,2 M) foram adicionados K2C03 (1,3 eq) e 4-bromofluorobenzeno (10,0 eq) e a mistura de reacção foi aquecida sob condições de MO a 180°C durante 20 min. A mistura de reacção foi arrefecida até TA e diluída com EtOAc. A fase orgânica foi lavada com salmoura; seca (Na2S04) . A evaporação do solvente deu (D3) que foi purificado por meio de cromatografia em sílica gel eluindo com 50-70% de EtOAc/Éter de petróleo para obter o composto do título como um pó amarelo. XH RMN (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) δ 9,34 (1H, s), 8,50 (1H, S. 1.), 8,17 (2H, d, J = 9,0 Hz), 8,03 (1H, S. 1.), 7, 90-7,80 (4H, m) . EM (ES+) Ci4H9BrFN30 requer: 334/336, achado: 335/337 (M+H)x

Etapa 4: 5-Fluoro-2-(4-piridin-3-ilfenil)-2H-indazole-7- carboxamida (D4)

Uma mistura de (D3) (1,0 eq) e ácido piridina-3- borónico (1,3 eq) em DMF (1,0 M) junto com solução de

Na2C03 2 N (2,0 eq) foi desgaseifiçada com um corrente de Ar durante 30 min. tBu3PH+ BF4(0,05 eq) e Pd2 (dba) 3 (0,05 eq) foram adicionados e a mistura de reacção foi aquecida a 90°C durante 48 h. A mistura foi arrefecida até TA, DCM foi adicionado e a fase orgânica foi lavada com solução de

NaHC03 sat. aq., salmoura, seca (Na2S04) . A solução foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica gel eluindo com 50-90% EtOAc/Éter de petróleo então 10% de MeOH/DCM para obter o composto do título como um pó amarelo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, 300 K) δ 9,40 (1H, s) , 9,01 (1H, d, J = 1,6 Hz), 8,63 (1H, dd, J = 4,8, 1,6 Hz), 8,57 (1H, S. 1.), 8,32 (2H, 76 ΕΡ2336120Β1 d, J = 8,8 Hz), 8,20 (1H, d, J = 7,8 Hz), 8,10 (1H, S. 1.), 8,01 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,88-7,82 (2H, m), 7,54 (1H, dd, J = 7,8, 4,8 Hz). EM (ES) Ci9Hi3FN40 requer: 332, achado: 333 (M+H+) .

Etapa 5: 3—{4—[7—(aminocarbonil)-5-fluoro-2H-indazol-2- il]fenil}piperidina-l-carboxilato de benzilo (D5) A uma solução agitada de (D4) em MeOH seco (0,2 M) , NaBH4 (1,2 eq) foi adicionado e então Cbz-Cl (1,2 eq) gota a gota a -65°C. A reacção foi permitida que alcançasse TA O/N, e então extinta com H20. MeOH foi concentrado sob pressão reduzida e EtOAc foi adicionado. A fase orgânica foi lavada com solução de NaHC03 sat. aq., seco (Na2S04) . A evaporação do solvente deu (D5) que foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional. EM (ES) C27H25FN403 requer: 472, achado: 473 (M+H+) .

Etapa 6: Trifluoroacetato de 3-{4-[7-(aminocarbonil)-5-fluoro-2H-indazol-2-il]feniljpiperidinio (D6) A uma solução de (D5) (1,0 eq) em MeOH (0,2 M) foram adicionados Pd/C 10% (0,05 eq.) e HC1 (1,0 eq) e a mistura de reacção foi agitada sob atmosfera de H2 (1 atm) durante 48 h. Então, a mistura foi filtrada através de Celite e solvente foi retirado sob vácuo proporcionando (D6) que foi purificado por meio de RP-HPLC de fase reversa (coluna: C18) , utilizando H20 (0,1% de TFA) e MeCN (0,1% de TFA) como eluentes, as fracções desejadas foram liofilizadas para proporcionar o composto do titulo (D6) como um pó branco. XH RMN (400 MHz, CD3CN, 300 K) δ 9,28 (1H, s), 8,89 (1H, S. 1.), 8, 60-8,50 (2H, m) , 8,13 (2H, d, J = 8,6 Hz), 8,09 (1H, S. 1.), 7,90-7,70 (2H, m) , 7,54 (2H, d, J = 8,6

Hz), 3, 40-3, 30 (2H, m) , 3, 20-2, 80 (3H, m) , 2,00, 1.90 (2H, m) , 1, 80-1,70 (2H, m) , EM (ES) C9H9FN40 requer: 338, achado: 339 (M+H+) . 77 ΕΡ2336120Β1 EXEMPLO 4

Trifluoroacetato de 5-fluoro-2-(3-fluoro-4-piperidin-3-ilfenil)-2H-indazole-7-carboxamida (E6)

Etapa 1: ácido 5-Fluoro-3-metil-2-nitrobenzóico (El) A uma solução de ácido 3-fluoro-5-metilbenzóico (1,0 eq.) em H2S04 conc. foi adicionado lentamente KN03 (1,1 eq.) a 0°C. A mistura foi agitada a TA durante lhe então lentamente deitada em água gelada. Após a agitação até o gelo ter derretido completamente, a precipitação branca foi filtrada, lavada com água fria e seca sob pressão reduzida. O sólido branco foi utilizado sem purificação adicional para a etapa seguinte. ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO, 300 K) δ 14,08 (1H, S. 1.), 7,65 (2H, m) , 2,30 (3H, s) .

Etapa 2: 5-fluoro-3-metil-2-nitrobenzoato de metilo (E2) A uma solução de (El) e carbonato de césio (1,5 eq.) em DMF (0,25 M) a TA foi adicionado iodeto de metilo (1,0 eq.). Após a mistura ser agitada durante 18 h, salmoura foi adicionada e a mistura foi extraída com EtOAc. A fase orgânica foi seca (Na2SC>4) e concentrada sob pressão reduzida. 0 sólido amarelo foi utilizado na etapa seguinte sem purificação. 1H RMN (400 MHz, DMSO, 300 K) δ 7,63 (2H, m), 3,83 (3H, s), 2,29 (3H, s).

Etapa 3: 2-amino-5-fluoro-3-metilbenzoato de metilo (E3)

Uma mistura de (E2) (1,0 eq.) e Pd/C (10% p/p) em MeOH (0,25 M) foi agitada durante 3 d a TA sob atmosfera de H2 (1 atm). A mistura foi filtrada através de Celite® e então o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O sólido branco foi utilizado sem purificação adicional na etapa subsequente. 1H RMN (400 MHz, DMSO, 300 K) δ 7,29 (1H, dd, J = 9,5 Hz, J = 3,0 Hz), 7,12 (1H, dd, J = 9,5 Hz, J = 3,0 Hz), 6,36 (2H, S. 1.), 3,78 (3H, s), 2,11 (3H, s). 78 ΕΡ2336120Β1

Etapa 4: 2,5-difluoro-3-metilbenzoato de metilo (E4) A uma solução de (E3) (1,0 eq.) em DCM seco (0,4 M) a 0°C foi adicionado tetrafluoroborato nitroso (1,3 eq.) em porções. Após lha 0°C diclorobenzeno seco (120 eq.) foi adicionado e a reacção foi lentamente aquecida até 160°C enquanto DCM foi retirado por destilação. Após 3 h, a mistura foi arrefecida até TA, EtOAc foi adicionado e a fase orgânica foi lavada com salmoura (2x). Após secagem em MgSCq, ss solventes foram retirados sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia flash utilizando 1-10% de EtOAc/éter de petróleo para proporcionar (E4) como um óleo amarelo. 1H RMN (400 MHz, CDCI3, 300 K) δ 7,42 (1H, m) , 7,06 (1H, m) , 3,92 (3H, s) , 2,30 (3H, d, J = 2,3 Hz).

Etapa 5: 2,5-difluoro-3-formilbenzoato de metilo (E5) (E5) foi preparados a partir de E4 seguindo o procedimento geral reportado no Exemplo Preparativo A etapas 2 e 3. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia flash 1-20% de EtOAc/éter de petróleo para proporcionar um sólido branco. ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO, 300 K) δ 10,19 (1H, d, J = 2,4 Hz), 7,98 (1H, m) , 7,86 (1H, m) , 3,89 (3H, s) . EM (ES+) CgH^Cq requer: 200, achado: 201 (M+H)+.

Etapa 6: Trifluoroacetato de 5-fluoro-2-(3-fluoro-4- piperidin-3-ilfenil)-2H-indazole-7-carboxamida (E6) (E5) foi convertido no correspondente indazole utilizando 3-(4-amino-2-fluorofenil)piperidina-1- carboxilato de terc-butilo seguindo o procedimento geral reportado no Exemplo Preparativo A etapas 4 e 5. O 2-{4-[1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-3-il]-3- fluorofenil}-5-fluoro-2H-indazole-7-carboxilato de metilo resultante foi ainda convertido na carboxamida correspondente por meio de tratamento com KOH (1,3 eq.) em 79 ΕΡ2336120Β1 dioxano/água (0,1 M) durante 12 h a TA. Os solventes foram retirados sob pressão reduzida. O ácido carboxilico foi dissolvido em DMF (0,1 M) e TBTU (1,5 eq.) foi adicionado. Após 15 min DIPEA (2,0 eq.) e amónia (3,0 eq., 0,5 M em THF) foram adicionados e a solução foi agitada durante 36 h. A mistura foi diluída com EtOAc e então a fase orgânica foi lavada com solução de NaHC03 sat. aq. e salmoura. Após evaporação do solvente o resíduo foi utilizado na etapa seguinte sem purificação.

Para desprotecção o produto bruto foi dissolvido em TFA/DCM (0,1 M) e agitado durante 3 h a TA. A evaporação do solvente deu um resíduo que foi purificado por meio de HPLC de fase reversa (coluna: C18) para proporcionar o composto do título (E6) . 2H RMN (400 MHz, DMSO, 300 K) δ 9,34 (1H, s), 8,90 (1H, m) , 8,61 (1H, m) , 8,49 (1H, s) , 8,18 (1H, dd, J = 11,6 Hz, 2,0 Hz), 8,05 (2H, m) , 7,81 1 (2H, m) , 7,63 (1H, m) , 3,34 (3H, m) , 3,13 (1H, m) , 2,94 (1H, m) , 1,95-1,76 (4H, m) . EM (ES+) Ci9Hi8F2N40 requer: 356, achado: 357 (M+H)+. EXEMPLO 5 4-metilbenzenosulfonato de (3S)-3-{4-[7-(aminocarbonil)-2H-indazol-2-il]fenil}piperidinio (F4)

Etapa_1: (3S)-3-[4-({ (IE)-[3-(metoxicarbonil)-2- nitrofenil]metileno}amino)fenil]piperidina-l-carboxilato de terc-butil (Fl) (Fl) foi preparado a partir de A3 e (3S)-3-(4-aminofenil)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (preparadas por meio da resolução de 3-(4-aminofenil)-piperidina com 2 equivalentes de ácido L-Dibenzoilo tartárico em MeOH e subsequente Boc-protecção) como foram descritos em Exemplo 1, BI.

Etapa 2: ácido 2—{4—[(3S)-1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-3-il]fenil}-2H-indazole-7-carboxílico (F2) (Fl) (1 eq) e az ida de sódio (1 eq) foram suspensos em 80 ΕΡ2336120Β1 DMF (0,25 M), tornados inertes, e foi adicionada 2,6-lutidina (1,0 eq). A mistura foi aquecida até uma temperatura interna de 110°C durante 20 horas. A solução castanha resultante foi arrefecida até 20°C e THF e 25% em peso de solução de LiCl aquosa foi adicionado. As fases foram separadas, e a fase orgânica foi lavada três vezes adicionais com 25% em peso solução de LiCl aquosa. NaOH 2,0 M (10 eq) foi adicionado à solução orgânica anterior e a mistura foi aquecida até 35 °C durante 20 horas antes de arrefecimento até 20°C e as fases foram separadas. A camada orgânica foi lavada com uma mistura de 2,0 M de ácido HC1 e salmoura e as camadas foram separadas, a camada orgânica foi lavada adicionalmente com salmoura e concentrada para dar (F2) que não foi purificado adicionalmente.

Etapa_3 : (3S) —3—{4—[7—(aminocarbonil)-2ff-indazol-2- il]fenil}piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (F3) F2 foi dissolvido em DCM (0,35 M) e carbonato de di terc-butilo (1,3 eq) e piridina (1,0 eq) adicionados a TA. Após 30 minutos, bicarbonato de amónio (1,3 eq) foi adicionado e agitação continuou durante 20 horas. 1 M de HC1 (5 mL/g) foi adicionado e as fases foram separadas, a camada orgânica foi lavada duas vezes com água e concentrada até um volume baixo. O composto bruto (F3) foi filtrado através de uma almofada de silica e então cristalizado em metil terc-butio éter.

Etapa 4: 4-metilbenzenosulfonato de (3S)-3-14-[7- (Aminocarbonil)-2H-indazol-2-il]fenilpiperidinio (F4)

F3 foi dissolvido em THF (0,15 M) e água foi adicionada (5% em comparação com THF) . Ácido para-Tolueno sulfónico monohidrato (2,2 eq) foi adicionado e a mistura foi aquecida até 66 °C e agitada durante a noite. Após arrefecimento o sal sólido desejado foi isolado por meio de filtração e confirmado que era um monohidrato (F4). 1H RMN 81 ΕΡ2336120Β1

(400 MHz, DMSO, 300 K) δ 8,58 (1H, s) , 8 ,14 1 :2H, d, 1,2, 7,2, 16, 8 Hz) , 7, 93 16, 8 Hz) , 7,27 (1H, dd, J 8 Hz) , 3, 48 (3H , m) , 3, 10 s) , 1 ,89 (2H, m) i , 1, 75 (2H 9,34 J = (1H, = 6,8 (2H, , m) . (1H, s); 8,8 Hz), s), 7,52 , 8,0 Hz m) , 2,90 9,20 (1H, s. 1.), 8,05 (2H, ddd, J = (4H, dd, J = 8,8, , 7,13 (2H, d, J = (1H, m); 2,30 (3H,

Os seguintes exemplos foram preparados de acordo com os métodos dos exemplos anteriores:

Exemplo Nome PM M+H+ Procedimento do Exemplo 6 trifluoroacetato de 3—4—[7— (aminocarbonil)-2H-indazol-2-iljfenil} piperidínio 320 321 1 7 5-Fluoro-2-(4-piperidin-3-ilfenil)-2H-indazole-7-carboxamida 338 339 3 8 cloreto de (3S)—3—{4 — [7 — (Aminocarbonil)-2H-indazol-2-iljfenil} piperidínio 320 321 2 9 cloreto de (3R)—3—{4—[7 — (Aminocarbonil)-2H-indazol-2-iljfenil} piperidínio 320 321 2 10 (R)-5-Fluoro-2-(4-piperidin-3-ilfenil)-2H-indazole-7-carboxamida 338 339 2 11 (S)-5-Fluoro-2-(4-piperidin-3-ilfenil)-2H-indazole-7-carboxamida 338 339 2 12 (R)-5-Fluoro-2-{3-fluoro-4-piperidin-3-ilfenil} - 2H-indazole-7-carboxamida 356 357 2 13 (S)-5-Fluoro-2-{3-fluoro-4-piperidin-3-ilfenil} - 2H-indazole-7-carboxamida 356 357 2 82 ΕΡ2336120Β1

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição US 5032617 A [0005] US 5215738 A [0005] US 5041653 A [0005] WO 9118591 A [0015] WO 199959973 A [0019] WO 200185687 A [0019] WO 2007113596 ; a [0019] WO 199704771 A [0019] WO 200026192 A [0019] WO 200032579 A [0019] WO 200064878 A [0019] WO 200068206 A [0019] WO 200121615 A [0019] WO 2002068407 ' A [0019] • WO 2003106430 A [0019] • WO 2004096793 A [0019] • WO 2007041357 A [0019] • WO 200029384 A [0019] • EP 0879820 A [0019] • WO 2005082368 A [0052] • WO 2006021801 A [0070] • EP 699754 A [0077] • EP 705903 A [0077] • US 5652260 A [0082] 83 ΕΡ2336120Β1 us 5589483 A [0082] wo 0050032 A [0118] us 6284781 B [0127] us 6288237 B [0127] wo 0130768 A [0130] wo 0198278 A [0130] wo 02056880 A [0130] wo 03050064 A [0130] wo 03050122 A [0130] wo 03049527 A [0130] wo 03049679 A [0130] wo 03049678 A [0130] wo 03039460 A [0130] wo 03079973 A [0130] wo 03099211 A [0130] wo 2004039774 A [0130] wo 03105855 A [0130] wo 03106417 A [0130] wo 2004087050 A [0130] wo 2004058700 A [0130] wo 2004058148 A [0130] wo 2004037171 A [0130] us 2004132830 A [0130] us 20041327 19 A [0130] us 4231938 A [0134] us 4294926 A [0134] us 4319039 A [0134] us 4444784 A [0134] us 4820850 A [0134] us 4916239 A [0134] us 4346227 A [0134] us 4537859 A [0134] us 4410629 A [0134] us 5030447 A [0134] us 5180589 A [0134] 84 ΕΡ2336120Β1 us 5354772 A [0134] us 4911165 A [0134] us 4929437 A [0134] us 5189164 A [0134] us 5118853 A [0134] us 5290946 A [0134] us 5356896 A [0134] us 5273995 A [0134] us 4681893 A [0134] us 5489691 A [0134] us 5342952 A [0134] us 4782084 A [0134] us 4885314 A [0134] wo 9630343 A [0136] wo 9718813 A [0136] wo 9721701 A [0136] wo 9723478 A [0136] wo 9738665 A [0136] wo 9828980 A [0136] wo 9829119 A [0136] wo 9532987 A [0136] us 5420245 A [0136] us 5523430 A [0136] us 5532359 A [0136] us 5510510 A [0136] us 5589485 A [0136] us 5602098 A [0136] EP 0618221 A [0136] EP 0675112 A [0136] EP 0604181 A [0136] EP 0696593 A [0136] wo 9419357 A [0136] wo 9508542 A [0136] wo 9511917 A [0136] wo 9512612 A [0136] 85 ΕΡ2336120Β1 wo 9512572 A [0136] wo 9510514 A [0136] us 5661152 A [0136] wo 9510515 A [0136] wo 9510516 A [0136] wo 9524612 A [0136] wo 9534535 A [0136] wo 9525086 A [0136] wo 9605529 A [0136] wo 9606138 A [0136] wo 9606193 A [0136] wo 9616443 A [0136] wo 9621701 A [0136] wo 9621456 A [0136] wo 9622278 A [0136] wo 9624611 A [0136] wo 9624612 A [0136] wo 9605168 A [0136] wo 9605169 A [0136] wo 9600736 A [0136] us 5571792 A [0136] wo 9617861 A [0136] wo 9633159 A [0136] wo 9634850 A [0136] wo 9634851 A [0136] wo 9630017 A [0136] wo 9630018 A [0136] wo 9630362 A [0136] wo 9630363 A [0136] wo 9631111 A [0136] wo 9631477 A [0136] wo 9631478 A [0136] wo 9631501 A [0136] wo 9700252 A [0136] wo 9703047 A [0136] 86 ΕΡ2336120Β1 • WO 9703050 A [0136] • WO 9704785 A [0136] • WO 9702920 A [0136] • WO 9717070 A [0136] • WO 9726246 A [0136] • WO 9730053 A [0136] • WO 9744350 A [0136] • WO 9802436 A [0136] • WO 0044777 A [0137] • WO 0061186 A [0137] • WO 03013526 A [0138] • US 60349925 B [0138] • WO 03059951 A [0140] • WO 03086404 A [0140] • WO 03086403 A [0140] • WO 03086394 A [0140] • WO 03086279 A [0140] • WO 02083675 A [0140] • WO 02083139 A [0140] WO 0208314C ) A [0140] WO 02083138 5 A [0140] US 5474995 A [0144] US 5861419 A [0144] US 6001843 A [0144] US 6020343 A [0144] US 5409944 A [0144] US 5436265 A [0144] US 5536752 A [0144] US 5550142 A [0144] US 5604260 A [0144] US 5698584 A [0144] US 5710140 A [0144] WO 9415932 A [0144] US 5344991 A [0144] US 5134142 A [0144] 87 ΕΡ2336120Β1

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Lisboa, 24 de Setembro de 2014 96

Claims (15)

1. ΕΡ2336120Β1 REIVINDICAÇÕES 1 . Uma combinação compreendendo um composto de fórmula I:

   (I) em que: R1 é hidrogénio ou flúor; e R2 é hidrogénio ou flúor; ou um sal, estereoisómero ou tautómero farmaceuticamente aceitável do mesmo, e temozolamida.
2. 2. Uma combinação de acordo com a reivindicação 1 em que dito composto é: 2- (4-piperidin-3-ilfenil)-2H-indazol-7-carboxamida; 2-{4-[(3R)-piperidin-3-il]fenil}-2H-indazol-7-carboxamida; 2-{4-[ (3S)-piperidin-3-il]fenil}-2H-indazol-7-carboxamida; ou um sal, estereoisómero ou tautómero farmaceuticamente aceitável do mesmo.
3. 3. Uma combinação de acordo com a reivindicação 1 ou 2 em que dito composto é: 2-(4-piperidin-3-ilfenil)-2H-indazole-7-carboxamida; ou um sal ou tautómero farmaceuticamente aceitável do mesmo.
4. 4. Uma combinação de acordo com a reivindicação 1 ou 2 em que dito composto é: 2-{4-[(3R)-piperidin-3-il]fenil}-2H-indazol-7-carboxamida; 1 ΕΡ2336120Β1 ou um sal ou tautómero farmaceuticamente aceitável do mesmo.
5. 5. Uma combinação de acordo com a reivindicação 1 ou 2 em que dito composto é: 2-{4-[(3 S)-piperidin-3-il]fenil}-2H-indazole-7-carboxamida; ou um sal ou tautómero farmaceuticamente aceitável do mesmo.
6. 6. Uma composição farmacêutica compreendendo uma combinação de acordo com qualquer reivindicação prévia em associação com um transportador farmaceuticamente aceitável.
7. 7. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5 para utilização em terapêutica.
8. 8. A utilização de uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5 para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de condições que podem ser melhoradas pela inibição de poli(ADP-ribose) polimerase (PARP).
9. 9. A utilização de uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5 para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de cancro, doenças inflamatórias, lesões de reperfusão, condições isquémicas, acidente vascular cerebral, insuficiência renal, doenças cardiovasculares, doenças vasculares que não sejam doenças cardiovasculares, diabetes, doenças neurodeqenerativas, infecção retroviral, dano na retina ou senescência da pele e dano na pele induzido por UV. 2 ΕΡ2336120Β1
10. 10. A utilização de uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5 para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de cancro.
11. 11. A utilização de acordo com a reivindicação 10 em que o cancro é um cancro que é deficiente em actividade de reparação de DSB no ADN dependente de Recombinação Homóloga (HR) .
12. 12. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5 para utilização no tratamento ou prevenção de condições que podem ser melhoradas pela inibição de poli(ADP-ribose) polimerase (PARP).
13. 13. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5 para utilização no tratamento ou prevenção de cancro, doenças inflamatórias, lesões de reperfusão, condições isquémicas, acidente vascular cerebral, insuficiência renal, doenças cardiovasculares, doenças vasculares que não sejam doenças cardiovasculares, diabetes, doenças neurodegenerativas, infecção retroviral, dano na retina ou senescência da pele e dano na pele induzido por UV.
14. 14. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5 para utilização no tratamento ou prevenção de cancro.
15. 15. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5 para utilização no tratamento ou prevenção de cancro que é deficiente em actividade de reparação de DSB no ADN dependente de Recombinação Homóloga (HR) . Lisboa, 24 de Setembro de 2014 3