PT2252611E - (di-hidro)pirrolo[2,1-a]isoquinolinas - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "(DI-HIDRO)PIRROLO[2,1-A]ISOQUINOLINAS" A presente invenção refere-se a derivados de 5,6-di-hidropirrolo[2,1-a]isoquinolina e pirrolo[2,l- a]isoquinolina, a composições farmacêuticas que compreendem os mesmos, e à utilização dos ditos compostos para o fabrico de medicamentos para o tratamento da infertilidade.

As gonadotropinas servem importantes funções numa variedade de funções corporais, incluindo o metabolismo, a regulação da temperatura e o processo reprodutivo. As gonadotropinas agem sobre tipos específicos de células gonadais para iniciar a diferenciação ovárica e testicular e a esteroidogénese. A gonadotropina pituitária FSH (hormona estimulante do folículo), por exemplo, tem um papel fundamental na estimulação do desenvolvimento e a maduração dos folículos, ao passo que a LH (hormona luteinizante) induz a ovulação [Sharp, R.M. Clin

Endocrinol. 33, 787- 807 (1990); Dorrington e Armstrong,

Recent Prog. Horm. Res. 35, 301-342 (1979)]. Actualmente, a FSH aplica-se clinicamente para a estimulação ovárica, isto é, a hiperestimulação ovárica para a fertilização in vitro (FIV) e a indução da ovulação em mulheres anovulatórias inférteis [Insler, V., Int. J. Fertility 33, 85-97 (1988), Navot e Rosenwaks, J. Vitro Fert. Embryo Transfer 5, 3-13 (1988)], bem como para o hipogonadismo masculino e a infertilidade masculina. A gonadotropina FSH é libertada desde a pituitária anterior sob a influência da hormona libertadora de gonadotropinas e os estrogénios, e desde a placenta durante a gravidez. Na fêmea, a FSH age sobre os ovários promovendo o desenvolvimento dos folículos, e é a hormona principal que regula a secreção de estrogénios. No macho, a FSH é responsável pela integridade dos túbulos seminíferos e age 2 sobre as células de Sertoli para apoiar a gametogénese. A FSH purificada é utilizada clinicamente para tratar a infertilidade nas mulheres, e para alguns tipos de falha da espermatogénese nos machos. As gonadotropinas destinadas a propósitos terapêuticos podem ser isoladas de fontes de urina humana e são de baixa pureza [Morse et al, Amer. J, Reprodut. Immunol. and Microbiology 17, 143 (1988)]. Alternativamente, podem ser preparadas como gonadotropinas recombinantes. A FSH recombinante humana está disponível comercialmente e está a ser utilizada na reprodução assistida [Olijve et al. Mol. Hum. Reprod. 2, 371-381 (1996); Devroey et al. Lancet 339, 1170-1171 (1992)].

As acções da hormona FSH são mediadas por um receptor específico da membrana que é um membro da grande família de receptores acoplados a proteínas G. Estos receptores consistem num polipéptido único com sete domínios transmembrana, e são capazes de interactuar com a proteína Gs, o que leva à activação da adenilato ciclase. O receptor de FSH (FSHR) é um alvo altamente especifico no processo de crescimento dos foliculos ováricos e expressa-se exclusivamente no ovário. Os agonistas de FSHR de baixo peso molecular podem ser utilizados para os mesmos propósitos clínicos que a FSH nativa, isto é, para o tratamento da infertilidade e para a hiperestimulação ovárica que precede à fertilização in vitro.

Certos derivados de tetrahidroquinolina foram divulgados recentemente no pedido internacional WO 2003/004028 (AKZO NOBEL N.V.) como substâncias moduladoras de FSHR que possuem propriedades agonistas ou antagonistas.

Os miméticos de FSH de baixo peso molecular com propriedades agonistas foram divulgados nos pedidos internacionais WO 2000/08015 (Applied Research Systems ARS Holding N.V.); WO 2004/031182 (Applied Research Systems ARS Holding N.V.); WO 2002/09706 (Affymax Research Institute); 3 WO 2005/087765 (Arena Pharmaceuticals, Inc.) ; WO 2006/117368 (AKZO NOBEL N.V.); WO 2006/117370 (AKZO NOBEL N.v.); WO 2006/117371 (AKZO NOBEL N.V.) e WO 2006/117023 (AKZO NOBEL N.V.).

Claramente existe uma necessidade de miméticos de hormonas de baixo peso molecular que activem selectivamente o receptor de FSH.

Com esse objectivo, a presente invenção proporciona derivados de 5,6-di-hidropirrolo[2,1-a]isoquinolina e pirrolo[2,1-a]isoquinolina.

Certos derivados de 5,6-di-hidropirrolo [2,1-a]isoquinolinas, bem como seus análogos não saturados pirrolo[2, 1-a]isoquinolinas, são conhecidos na literatura.

As lamelarinas, uma família de alcaloides de pirrol poliaromáticos, algumas das quais contêm o esqueleto de 5, 6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolina ou pirrolo [2,1-a]isoquinolina (vejam-se as estruturas A e B), são revisadas em C. Bailly, Curr. Med. Chem. Anti-Cancer Agents, 4, 363-387 (2004) e Fan, H. et al. , Chem. Rev., 108, 264-287 (2008). Alguns destes compostos exibem actividades citotóxicas potentes contra células tumorais in vitro.

Os análogos de Lamelarina D de cadena aberta, descritos em D. Pia et al., J. Med. Chem., 49, 3257 (2006), contêm a fórmula geral (C) e exibem citotoxicidade no intervalo micromolar baixo.

5,6-Di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolinas e pirrolo[2,1-a]isoquinolinas da fórmula (D) e da fórmula (E) 4 são descritas nos documentos WO 2006/089815; WO 2006/075012; WO 2005/002579; WO 2005/003129; WO 2005/003130; WO 2003/051877; WO 2003/014115; WO 2003/014116; WO 2003/014117 e WO 2002/48144. Informa-se que estes compostos inibem a fosfodiesterase 10A (PDE10A). R6 = H, formilo, amino ou alquilo (substituído) R3 = H, formilo, alquilo (substituído), alcoxicarbonilo, alquil carbonilo ou amina A presente invenção proporciona compostos relacionados de acordo com a fórmula geral I ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

R7

Fórmula I Nesta fórmula, R1 a R10 têm as seguintes definições: A ligação na posição C5-C6 (linha tracejada na Fórmula I) pode ser saturada ou não saturada. R1 é halogéneo, ciano, alquilo(Cl-6), alcenilo(C2-6), alcinilo(C2-6), cicloalquilo(C3-6), cicloalcenilo(C5-6), ou fenilo ou heteroarilo(Cl-5), estando cada uma das ditas fracções fenilo e heteroarilo opcionalmente substituída independentemente substituintes seleccionados de R13. com um ou mais 5 R2 é H, ciano R2 é H, ciano, halogéneo, alquilo(Cl-4) 4)alquilo(Cl-4), hidroxialquilo(Cl-4), alcoxi(Cl-formilo, alquilcarbonilo(Cl-4), C=N-OH, C=N-OCH3 . R3 é R15, R16-amino ou R3 é alquilo(Cl-6), cicloalquilo(C3-6) , (di) [alquil(Cl-4)]aminoalquilo(Cl-4) ou R e heterocicloalquil(C2-6)alquilo(Cl-4), cuja fracçao heterocicloalquilo(C2-6) pode estar opcionalmente substituída com alquilcarbonilo(Cl-4) ou cicloalquilcarbonilo(C3-6), ou R e um grupo seleccionado de

0

N-R11 6

ou

R7 é H, halogéneo ou metilo. R8 é H, halogéneo, alquilo(Cl-4), alcoxi(Cl-4), alcoxi(Cl-4)alquilo(Cl-4) ou hidroxi. R9 é H, formilo, halogéneo, hidroxi, amino, ciano, nitro, alcinilo(C2-6), cicloalcoxi(C3-6), heterocicloalcoxi(C2-6), heteroaril-oxi(C2-5), (di)[alquil(Cl-4)]aminocarboxi, alquilcarbonilo(Cl-6), alcoxicarbonilo(Cl-4), (di)[alquil(Cl-4)]aminocarbonilo, heterocicloalquilcarbonilo(C2-6) , (di) [alquil(Cl- 4)]amino, heterocicloalquilcarbonilamino(C2-6), heteroarilcarbonilamino(C2-5), (di)[alquil(Cl- 4)]aminocarbonilamino, alcoxicarbonilamino(Cl-4), (di)[alquil(Cl-4)]aminosulfonilamino, alquilsulfonilamino(Cl-4) , l-imidazolidinil-2-ona, 3-oxazolidinil-2-ona ou l-pirrolidinil-2-ona, ou R9 é alquilo(Cl-6), alcoxi(Cl-6), alcenilo(C2-6), alquilcarbonilamino(Cl-6), heterocicloalquilo(C2-6) ou heteroarilaminocarbonilo(C2-5), estando cada um dos ditos alquilo, alcoxi, alcenilo, heterocicloalquilo e heteroarilo opcionalmente substituído independentemente 7 com um ou mais substituintes seleccionados de R14, ou R9 é heteroarilo(Cl-5) , fenilo ou fenoxi, estando cada um dos ditos heteroarilo, fenilo e fenoxi opcionalmente substituído independentemente com um ou mais substituintes seleccionados de R13. R10 é H, metoxi, halogéneo ou metilo. R a R como foi mencionado num dos outros grupos R, definem-se a seguir: R11 é H, alquilo(Cl-6) ou alcenilo(C3-4). R12 é alquilcarbonilo(Cl-4) ou cicloalquilcarbonilo(C3-6), ambos opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes seleccionados de R13. R13 é hidroxi, amino, halogéneo, nitro, trifluorometilo, ciano, alquilo(Cl-4) , alcoxi(Cl-4), tioalquilo(Cl-4) ou (di) [alquil (Cl-4) ] amino. Em cada uma das ocorrências de R13, cada definição para um determinado grupo pode ser escolhida independentemente. R14 é hidroxi, amino, halogéneo, azido, ciano, alquilo(Cl-4), alcoxi(Cl-4), tioalquilo(Cl-4), (di)[alquil(Cl-4)]amino, cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C2-6), alquilcarbonilamino(Cl-4), (di)[alquil(Cl-4)]aminocarbonilamino, alquilsulfonilamino(Cl-4), alcoxicarbonilamino(Cl-4), alquilcarbonilo(Cl-4), alcoxicarbonilo(Cl-4), alquilsulfoxi(Cl-4), heterocicloalcoxi(C2-6), (di)[alquil(Cl-4)]aminocarbonilo, alquilsulfonilo(Cl-4), cicloalquilcarbonilamino(C3-6) e [alquil(Cl- 4)] [alquilcarbonil(Cl-4)]amino. R15 e R16 em R3 são seleccionados independentemente de H ou alquilo(Cl-6) , cicloalquilo(C3-6) , heterocicloalquilo(C2-6) ou (di)[alquil(Cl-4)]amino, todos opcionalmente substituídos com hidroxi, alquilo(Cl-4), alcoxi(Cl-4), alquilcarbonilo(Cl-4), alcoxicarbonilo(Cl-4), cicloalquilcarbonilo(C3-6), (di)[alquil(Cl-4)]amino, (di)[alquil(Cl- (di)[alcoxi(Cl-4)alquil(Cl- 4)]aminocarbonilo ou 4)]amino.

Alternativamente, R15, R15-amino em R3 podem estar unidos para formar um anel heterocicloalquilo(C3-8), em que dito anel pode estar opcionalmente substituído com R18.

Ainda alternativamente, R15, R16-amino em R3 também podem estar unidos para formar um anel heterocicloalquilo(C4-8) ou um anel heterocicloalcenilo(C4-6), ambos de cujos anéis contêm um azoto e cada um dos ditos anéis está opcionalmente substituído independentemente com um ou mais substituintes

seleccionados de R 17 17 IR R e R como foi mencionado num dos outros grupos R, definem-se a seguir: R17 é hidroxi, amino, alcoxi(Cl-4), alquilcarbonilamino(Cl-4), 4)]aminocarbonilamino, alcoxicarbonilamino(Cl-4), cicloalquilcarbonilamino(C3-6) , 4)] [alquilcarbonil(Cl-4)]amino, ou R17 é fenilo e heteroarilo(C2-5) , ambos opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes seleccionados de R1 18 halogéneo, alquilo(Cl-4), (di)[alquil(Cl-4)]amino, (di)[alquil(Cl-alquilsulfonilamino(Cl-4), alquilsulfoxi(Cl-4), [alquil(Cl- ,13 cicloalquilo(C3-6), (di)[alquil(Cl-alquilsulfonilo(Cl-4), heteroarilo(C2-5), alquilcarbonilo(Cl-4), R10 é alquilo (Cl-4) , cicloalquenilcarbonilo(C4-6), 4)]aminocarbonilo, (di)[alquil(Cl-4)]aminosulfonilo, heterocicloalquilsulfonilo(C2-6) , fenilcarbonilo, cicloalquilcarbonilo(C3-6), heteroarilcarbonilo(C2-5), fenilo, fenilsulfonilo, heteroarilsulfonilo(C2-5) e heterocicloalquilcarbonilo(C2-6), cujas fracções (ciclo)alquilo e (hetero)arilo podem estar substituídas com um ou mais substituintes seleccionados de R13.

Os derivados de 5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- a]isoquinolina e pirrolo[2,1-a]isoquinolina de acordo com a 9 presente invenção são activadores potentes do receptor de FSH, e podem ser utilizados para os mesmos propósitos clínicos que a FSH nativa uma vez que se comportam como agonistas, com a vantagem de que podem ser preparados sinteticamente, podem exibir propriedades de estabilidade alteradas e podem ser administrados de forma diferente.

Assim, os agonistas do receptor de FSH da presente invenção podem ser utilizados para o tratamento de distúrbios da fertilidade, por exemplo estimulação ovárica controlada e procedimentos de FIV. 0 termo alquilo(Cl-4) , como é utilizado na definição, significa um grupo alquilo ramificado ou não ramificado que tem 1-4 átomos de carbono, e que é metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo e terc-butilo. 0 termo alquilo(Cl-6) significa um grupo alquilo ramificado ou não ramificado que tem 1-6 átomos de carbono, por exemplo metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, terc-butilo, n-pentilo e n-hexilo. Os grupos alquilo(Cl-5) são preferidos, sendo os grupos alquilo(Cl-4) os mais preferidos. 0 termo alquilcarbonilo(Cl-4) significa um grupo alquilcarbonilo, cujo grupo alquilo contém 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo alquilsulfonilo(Cl-4) significa um grupo alquilsulfonilo, cujo grupo alquilo contém 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo tioalquilo(Cl-4) significa um grupo tioalquilo, cujo grupo alquilo contém 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. mesmo 0 termo alquilsulfoxi(Cl-4) significa um grupo alquilsulfoxi, cujo grupo alquilo contém 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 10 O termo alquilsulfonilamino(Cl-4) significa um grupo alquilsulfonilamino, cujo grupo alquilo contém 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. O termo alquilcarbonilamino(Cl-6) significa um grupo alquilcarbonilamino, cujo grupo alquilo contém 1-6 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. O termo alcenilo(C2-6) significa um grupo alcenilo ramificado ou não ramificado que tem 2-6 átomos de carbono, tal como etenilo, 2-butenilo e n-pentenilo. O termo alcinilo(C2-6) significa um grupo alcinilo ramificado ou não ramificado que tem 2-6 átomos de carbono, tal como etinilo, propinilo e n-pentinilo. O termo cicloalquilo(C3-6) significa um grupo cicloalquilo que tem 3-6 átomos de carbono, tal como ciclopropilo, etilciclopropilo, ciclobutilo, metilciclobutilo, ciclopentilo e ciclohexilo. 0 termo cicloalquilcarbonilo(C3-6) significa um grupo cicloalquilcarbonilo, cujo grupo cicloalquilo contém 3-6 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo cicloalcenilo(C5-6) significa um grupo cicloalcenilo que tem 5-6 átomos de carbono, e que é ciclopentenilo, metilciclopentilo e ciclohexenilo. 0 termo cicloalquenilcarbonilo(C5-6) significa um grupo cicloalquenilcarbonilo, cujo grupo cicloalcenilo contém 5-6 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente.

0 termo heterocicloalquilo(C2-6) significa um grupo heterocicloalquilo que tem 2-6 átomos de carbono, preferivelmente 3-5 átomos de carbono, incluindo 1-3 heteroátomos seleccionados entre N, O e/ou S, e que pode estar unido através de um azoto se for factível, ou um átomo de carbono. Os heteroátomos preferidos são N ou O. O 11 número preferido de heteroátomos é um ou dois. Os mais preferidos são piperidin-l-ilo, morfolin-4-ilo, pirrolidin-1-ilo e piperazin-l-ilo. 0 termo heterocicloalquilo(C4-8) em R3 significa um grupo heterocicloalquilo que tem 4-8 átomos de carbono, preferivelmente 4-5 átomos de carbono, incluindo um azoto, e que está unido através de um azoto. Os mais preferidos são piperidin-l-ilo e pirrolidin-l-ilo. 0 termo heterocicloalquilo(C3-8) em R3 significa um grupo heterocicloalquilo que tem 3-8 átomos de carbono, preferivelmente 4-5 átomos de carbono, incluindo 2-3 heteroátomos seleccionados entre N, 0 e/ou S, e que pode estar unido através de um azoto se for factível, ou um átomo de carbono. Os heteroátomos preferidos são N ou 0. 0 número preferido de heteroátomos é dois, tal como N,N ou N,0. Mais preferido é [1,4]diazacicloheptanilo. 0 termo heterocicloalcoxi(C2-6) significa um grupo heterocicloalquilo que contém 2-6 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente, unido através de um átomo de carbono a um átomo de oxigénio exocíclico. 0 termo heterocicloalquil(C2-6)alquilo(Cl-4) significa um grupo heterocicloalquilalquilo, cujo grupo heterocicloalquilo contém 2-6 átomos de carbono, preferivelmente 3-5 átomos de carbono, com o mesmo significado como foi definido anteriormente, e cujo grupo alquilo contém 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo heterocicloalquilcarbonilo(C2-6) significa um grupo heterocicloalquilcarbonilo, cujo grupo heterocicloalquilo contém 2-6 átomos de carbono, preferivelmente 3-5 átomos de carbono, com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo heterocicloalquilsulfonilo(C2-6) significa um grupo heterocicloalquilsulfonilo, cujo grupo 12 heterocicloalquilo contém 2-6 átomos de carbono, preferivelmente 3-5 átomos de carbono, com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo heterocicloalquilcarbonilamino(C2-6) significa um grupo heterocicloalquilcarbonilamino, cujo grupo heterocicloalquilo contém 2-6 átomos de carbono, preferivelmente 3-5 átomos de carbono, com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo heterocicloalcenilo(C4-6) significa um grupo heterocicloalcenilo que tem 4-6 átomos de carbono, preferivelmente 3-5 átomos de carbono, e incluindo 1-3 heteroátomos seleccionados entre N, 0 e/ou S, e que pode estar unido através de um azoto se for factivel, ou um átomo de carbono. Os heteroátomos preferidos são N ou 0. 0 número preferido de heteroátomos é um ou dois. 0 termo heteroarilo(Cl-5) significa um grupo aromático que tem 1-5 átomos de carbono e 1-4 heteroátomos seleccionados entre N, 0 e S, como imidazolilo, tiadiazolilo, piridinilo, tienilo, tetrazolilo, oxazolilo, imidazolilo, pirazolilo ou furilo. 0 número preferido de heteroátomos é um ou dois. Os grupos heteroarilo preferidos são tienilo, oxazolilo, imidazolilo, pirazolilo, pirimidinilo, pirazinilo, furilo e piridinilo. Os mais preferidos são tienilo, furilo e piridinilo. 0 grupo heteroarilo(Cl-5) pode estar unido através de um átomo de carbono ou um azoto, se for factivel. 0 termo heteroarilo(C2-5) significa um grupo aromático que tem 2-5 átomos de carbono e 1-3 heteroátomos seleccionados entre N, 0 e S, como imidazolilo, tiadiazolilo, piridinilo, tienilo ou furilo. Os grupos heteroarilo preferidos são tienilo, pirimidinilo, pirazinilo, furilo e piridinilo. 0 grupo heteroarilo(C2-5) pode estar unido através de um átomo de carbono ou um azoto, se for factivel. 13 0 termo heteroarilcarbonilo(C2-5) significa um grupo heteroarilcarbonilo, cujo grupo heteroarilo contém 2-5 átomos de carbono com o mesmo significado e preferências como foi definido anteriormente. 0 termo heteroarilaminocarbonilo(C2-5) significa um grupo heteroarilaminocarbonilo, cujo grupo heteroarilo contém 2-5 átomos de carbono com o mesmo significado e preferências como foi definido anteriormente. 0 termo heteroarilsulfonilo(C2-5) significa um grupo heteroarilsulfonilo, cujo grupo heteroarilo contém 2-5 átomos de carbono com o mesmo significado e preferências como foi definido anteriormente. 0 termo heteroaril-oxi(C2-5) significa um grupo heteroaril-oxi, cujo grupo heteroarilo contém 2-5 átomos de carbono com o mesmo significado e preferências como foi definido anteriormente, unido através de um átomo de carbono a um átomo de oxigénio exociclico. 0 termo alcoxi(Cl-4) significa um grupo alcoxi que tem 1-4 átomos de carbono, tendo a fracção alquilo o mesmo significado como foi definido anteriormente. Os grupos alcoxi(Cl-3) são preferidos. 0 termo alcoxicarbonilo(Cl-4) significa um grupo alcoxicarbonilo, cujo grupo alcoxi contém 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. Os grupos alcoxicarbonilo(Cl-2) são preferidos. 0 termo alcoxi(Cl-4)alquilo(Cl-4) significa um grupo alcoxialquilo, cujo grupo alcoxi contém 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente, que está unido a um grupo alquilo que contém 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo alcoxicarbonilamino(Cl-4) significa um grupo alcoxicarbonilamino, cujo grupo alcoxi contém 1-4 átomos de 14 carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo hidroxialquilo(Cl-4), como é utilizado no presente documento, significa um grupo hidroxialquilo, cujo grupo alquilo contém 14 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo (di) [alquil(Cl-4)]amino, como é utilizado no presente documento, significa um grupo amino, monossubstituído ou dissubstituido com grupo(s) alquilo, cada um contendo 1-4 átomos de carbono e com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo (di) [alquil(Cl-4)]aminocarbonilo significa um grupo (di)alquilaminocarbonilo, cujo(s) grupo(s) alquilo contém/contêm cada um 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo (di) [alquil(Cl-4)]aminosulfonilo significa um grupo (di)alquilaminosulfonilo, cujo(s) grupo(s) alquilo contém/contêm cada um 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo (di) [alquil(Cl-4)]aminocarbonil-oxi significa um grupo (di)alquilaminocarbonil-oxi, cujo(s) grupo(s) alquilo contém/contêm cada um 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo (di)[alquil(Cl-4)]aminocarbonilamino significa um grupo (di)alquilaminocarbonilamino, cujo(s) grupo(s) alquilo contém/contêm cada um 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo (di)alquilamino(Cl-4)alquilo(Cl-4), como é utilizado no presente documento, significa um grupo (di)alquilamino, cujo(s) grupo(s) alquilo contém/contêm cada um 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente, conectado através do grupo amino a um grupo alquilo que contém 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 15 0 termo (di)[alquil(Cl-4)]aminosulfonilamino significa um grupo (di)alquilaminosulfonilamino, cujo(s) grupo(s) alquilo contém/contêm cada um 1-4 átomos de carbono com o mesmo significado como foi definido anteriormente. 0 termo halogéneo significa flúor, cloro, bromo ou iodo. 0 termo "substituído" significa que um ou mais hidrogénios no átomo designado estão substituídos com uma selecção do grupo indicado, com a condição de que a valência normal do átomo designado sob as circunstâncias existentes não seja excedida, e que a substituição tenha como resultado um composto estável. Combinações de substituintes e/ou variáveis são permitidas somente se estas combinações produzam compostos estáveis. "Composto estável" ou "estrutura estável" significa um composto que é suficientemente robusto para sobreviver ao isolamento até um grau de pureza útil a partir de uma mistura de reacção, e à formulação como um agente terapêutico eficaz. 0 termo "opcionalmente substituído" significa a substituição opcional com os grupos, radicais ou fracções especificados.

Nas definições anteriores com grupos multifuncionais, o ponto de união está no último grupo. 0 termo "sal farmaceuticamente aceitável" representa aqueles sais que são, dentro do alcance do critério médico, adequados para a utilização em contacto com os tecidos de seres humanos e animais inferiores sem toxicidade, irritação, resposta alérgica ou similares excessivas, e que são compatíveis com uma razão benefício/risco razoável. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica. Os mesmos podem ser obtidos durante o isolamento e purificação final dos compostos da invenção, ou separadamente fazendo reagir a função base livre com um ácido mineral adequado tal como ácido clorídrico, ácido fosfórico ou ácido sulfúrico, ou com um ácido orgânico, por 16 exemplo, ácido ascórbico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido láctico, ácido maleico, ácido malónico, ácido fumárico, ácido glicólico, ácido succínico, ácido propiónico, ácido acético, ácido metanossulfónico e similares. A função ácido pode ser feita reagir com uma base orgânica ou mineral, como hidróxido de sódio, hidróxido de potássio ou hidróxido de lítio.

Num aspecto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I em que a ligação C5-C6 é saturada. A invenção também se refere a compostos de fórmula I em que R1 é heteroarilo(Cl-5), opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de R .

Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I em que R2 é H, ciano, halogéneo, alcoxi(Cl-4)alquilo(Cl-4) ou hidroxialquilo(Cl-4) .

Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I em que R2 é H.

Outro aspecto refere-se a compostos em que R3 é -amino ou

O

Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos em que R é R15, R16-amino.

Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I em que R7 é H. A invenção também se refere a compostos em que R8 é alcoxi(Cl-4) ou hidroxi.

Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I em que R9 é halogéneo, ciano, nitro, alcinilo(C2-6), cicloalcoxi(C3-6), heterocicloalcoxi(C2-5), heteroaril-oxi(C2-5), (di)[alquil(Cl-4)]aminocarbonilo, heterocicloalquilcarbonilo(C2-6) ou (di)[alquil(Cl-4)lamino. R9 também poderia ser alquilo(Cl-6), alcoxi(Cl-6), alcenilo(C2-6), alquilcarbonilamino(Cl-6) ou 17 heteroarilaminocarbonilo(C2-5). Todos estes últimos grupos podem estar opcionalmente substituídos independentemente com um ou mais substituintes seleccionados de R14. Alternativamente, R9 pode ser heteroarilo(Cl-5) ou fenoxi, opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de R .

Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I em que R9 é halogéneo, ciano, nitro, alcinilo(C2-6) ou (di) [alquil(Cl-4)]amino, ou R9 é alquilo(Cl-6) , alcoxi(Cl-6), alcenilo(C2-6) ou alquilcarbonilamino(Cl-6), cada um dos ditos grupos opcionalmente substituído independentemente com um ou mais substituintes seleccionados de R14, ou R9 é heteroarilo(Cl-5), opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de R13.

Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I em que R9 é alcinilo (C2-6) , ou em que R9 é alquilo(Cl-6) , alcoxi(Cl-6), alcenilo(C2-6) ou alquilcarbonilamino(Cl-6) , cada um dos ditos grupos opcionalmente substituído independentemente com um ou mais substituintes seleccionados de R14, ou em que R9 é heteroarilo(Cl-5) opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de R13.

Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I em que R10 é H.

Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I em que R1 é heteroarilo(Cl-5) , opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de R13, R2 é H, R3 é R15, R16-amino, R7 é H, R8 é alcoxi (Cl-4) e R10 é H.

Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I em que R14 é heterocicloalquilo(C2-6) , hidroxi, alcoxi(Cl-4) ou (di)[alquil(Cl-4)]amino. 18

Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I em que R15 e R16 podem ser seleccionados independentemente de alquilo(Cl-6).

Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I em que R3 é 1,4-diazacicloheptan-l-ilo, opcionalmente substituído com alquilcarbonilo(Cl-4) ou cicloalquilcarbonilo(C3-6).

Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I em que R15 é metilo e R16 é terc-butilo.

Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I em que R3 é 2,2-dimetilpirrolidino-l-ilo. A invenção também se refere a aqueles compostos nos quais todas as definições específicas para R1 a R18, nos diversos aspectos da invenção como foi definido anteriormente no presente documento, aparecem em qualquer combinação dentro da definição do composto de (di-hidro)pirrolo[2,1-a]isoquinolina de fórmula I.

Todos os compostos da invenção têm uma EC5o de menos de 10 μΜ.

Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos de Fórmula (1) que têm uma EC50 de menos de 100 nM. Em outro aspecto, a invenção refere-se a compostos de fórmula I que têm uma EC5o de 10 nM ou menos. A invenção também se refere aos compostos descritos nos exemplos 1-4, 7c, 7d, 8, 10, 11, 12a, 12b, 14a, 14d, 16, 20, 21, 36, 39-43, 51, 55, 58b, 58c, 59, 61-62, 64, 65d, 65f, 69, 70d, 81-84, 85b, 91a, 91d, 92-94, 96-98, 100, 101, 104, 111a, 111b, 121a, 121b, 122 e 123.

Em outro aspecto, a invenção refere-se aos compostos descritos nos Exemplos 1, 2, 7d, 14a, 58b, 91d, 100 e 123. 0 termo EC50 significa a concentração do composto de teste que causa uma estimulação semi-máxima (50 %), em comparação com o efeito máximo que pode conseguir o composto. Os valores podem ser determinados, por exemplo, numa linha celular transfectada com um gene do receptor de 19 FSH e cotransfectada com um promotor/elemento que responde a cAMP que dirige a expressão de um gene repórter. Os valores podem ser determinados utilizando um programa de software tal como MathlQ (versão 2.0, ID Business Solutions Limited).

Excluído da invenção está o composto 3-acetil-pirrolo[2,1-a]isoquinolina-l-carbonitrilo. A exclusão refere-se aos ensinamentos em Database CA, N° de acesso 1994:655585.

Os métodos adequados para preparar compostos de 5,6-di-hidropirrolo[2,1-a]isoquinolina e pirrolo[2,l- a]isoquinolina são delineados a seguir.

As 5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolinas são conhecidas na literatura. As propostas químicas para análogos específicos envolvem a síntese total partindo de ésteres de pirrol, seguida por reacções consecutivas de bromação/arilação mediada por organometais. Outros procedimentos sintéticos baseiam-se em química de tipo Pictet-Spengler, que leva a 1-metilen- tetrahidroisoquinolinas substituídas, seguido por condensação de tipo Michael aos derivados de di-hidro-pirroloisoquinolina requeridos, ou envolvem reacções de cicloadição 1,3-dipolar. Um relatório descreve a síntese de várias di-hidro-pirroloisoquinolinas por meio de cicloadição de acetilenos a N-óxidos de 3,4- di- hidroisoquinolinas, seguida por reordenação térmica das A4-isoxazolinas formadas como intermediários, para dar como o composto mais relacionado (veja-se a seguir) éster etílico do ácido l-fenil-8,9-dimetoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,Ια] isoquinolino-3-carboxílico.

Para literatura relevante, vejam-se: M. Alvarez et al., Tetrahedron Lett., 46, 2041 (2005); M. Alvarez et al, J. Org. Chem., 70, 8231 (2005); S. Handy, J. Org. Chem., 69, 2362 (2004); M. Vennemann et al. (Altana Pharma A.G), documento WO 05/003130; Niewoehner et al. (Bayer AG), 20 documento WO 02/48144; Banwell et al., documento WO 99/67250; W. Anderson et al. , J. Med. Chem., 27, 1321 (1984); S. Eguchi et al., Tetrahedron 52,12049 (1996).

Na presente memória descritiva, descreve-se compostos até agora desconhecidos de fórmula geral I e, mais especificamente, 5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonamidas, 1-(5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-alquil-l-onas, cicloalquil-(5,6-di-hidro-pirrolo[2,1— a]iso-quinolin-3-il)-metanonas e 2-amino-l-(5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-il)-etanonas relacionadas, e também seus análogos não saturados pirrolo[2,l-a]isoquinolino-3-carbonamidas, 1-(pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-alquil-l-onas, cicloalquil-(pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-metanonas e 2-amino-l-(pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il) - etanonas (Fórmula I com R3 = alquilo ou cicloalquilo, I-a e I-b).

As novas 5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolinas especificamente substituídas alvo, foram tornadas acessíveis por meio de reacções de cicloadição 1,3-dipolar de acetilenos com intermediários de muchnona reactivos derivados de ácidos tetrahidroisoquinolino-l-carboxílicos (III). Os fundamentos desta química foram descritos por R. Huisgen et ai., Chem. Ber., 103, 2611 (1970), e exemplificam-se adicionalmente em F. Hershenson, J. Org. Chem., 40,740 (1975).

Para o presente propósito (ou seja, a introdução de um grupo carbonilo em C-3), esta metodologia foi modificada efectuando as reacções de cicloadição 1,3-dipolar com oxalatos (IV), dando directamente os ésteres 3-carboxílicos 21 requeridos (V), como precursores por exemplo para as amidas (I-a). Os ácidos tetrahidroisoquinolino-l-carboxilicos intermediários de fórmula geral III (necessários para a preparação dos oxalatos IV) foram sintetizados num fechamento do tipo Bishler-Napieralski, a partir de fenetilaminas apropriadamente substituídas (II) com ácido glioxílico, de acordo com um procedimento publicado (S. Bajusz et al., documento WO 93/12091).

Para a síntese de compostos específicos (I-a) e (I-b) (veja-se a seguir), utilizou-se a proposta geral indicada anteriormente, utilizando intermediários funcionalizados "feitos à medida". Isto significa que, dependendo dos substituintes R1-R10 requeridos (em que a numeração de R refere-se a numeração do átomo no esqueleto), os substituintes requeridos são colocados no lugar no começo da síntese (isto é, RI = RI', R2 = R2', etc.), ou são introduzidos em qualquer etapa que se considere conveniente no decurso da síntese dos produtos de fórmula geral I. Nesse caso, são introduzidos primeiro funcionalidades alternativas adequadas, indicadas como Rl'-RIO', que permitem a sua conversão nos R1-R10 desejados numa ou mais manipulações adicionais, em que R1-R10 têm o mesmo significado como foi definido anteriormente. 22

Os substituintes no anel aromático (R7-R10) frequentemente podem ser introduzidos já nas fenetilaminas precursoras (II), levando-os inalterados através de todo o processo sintético posterior. As fenetilaminas apropriadas da estrutura geral (II) estão disponíveis comercialmente, ou preparam-se facilmente por meio de clorometilação de benzenos apropriadamente substituídos, seguido por conversão em derivados de cianometilo e redução da funcionalidade nitrilo, dando as fenetilaminas requeridas. As fenetilaminas (II) também são acessíveis através da reacção de Henry de aldeídos aromáticos adequadamente substituídos com nitroalcanos, seguido por redução por meio de reactivos hidretos (LiAlH4, boranos, etc.), de acordo com procedimentos bem documentados na literatura. Alternativamente, os R7-R10 requeridos podem ser introduzidos por meio de grupos funcionais latentes (como foi mencionado anteriormente) , para serem manipulados posteriormente no procedimento sintético (veja-se a seguir) . A conversão subsequente das ditas fenetilaminas (II) nos ácidos 1,2,3,4- tetrahidroisoquinolina carboxílicos intermediários (III) foi conseguida eficientemente num procedimento em três etapas, convertendo primeiro as fenetilaminas (II) em derivados carbamatos (VII) e a reacção subsequente com ácido glioxílico (levando a VIII), seguido por a desprotecção do grupo protector de carbamato. Um grupo aloxicarbonilo (Alloc) (veja-se Vll-a—»VIII-a—»III) foi utilizado preferivelmente no presente documento, devido a sua facilidade de retirada. Os métodos de protecção com Alloc e retirada são bem conhecidos para os peritos na especialidade. Nos casos em que a desprotecção final sob condições redutoras era prejudicial, grupos protectores de carbamato alternativos como 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc) foram eficazes também. 23

Uma proposta alternativa para gerar o sistema de tetrahidroisoquinolina presente nos compostos de fórmula geral III, compreende a reacção das fenetilaminas (II) com cloreto de etiloxalilo para obter as oxalamidas (IX), que podem sofrer ciclação às di-hidroisoquinolinas (X) depois do tratamento com ácidos fortes sob condições desidratantes, por exemplo, ácido metanossulfónico e pentóxido de fósforo. Posteriormente, os derivados de fórmula geral X podem ser reduzidos às tetrahidroisoquinolinas (XI) correspondentes, por exemplo, por meio de redução com cianoborohidreto de sódio sob condições ácidas. A saponificação das tetrahidroquinolinas (XI) sob condições padrão bem conhecidas para os peritos na especialidade, pode proporcionar os derivados de fórmula geral III.

Com a finalidade de diversificar os substituintes R7-R10 na fracção fenilo dos derivados de fórmula geral I (ou V) , átomos de halogéneo (preferivelmente bromo e iodo) podem servir como funcionalidades emascaradas (R7'-R10')f para serem convertidas em etapas posteriores da síntese em diversos substituintes alvo (R7-R10), por exemplo, por meio de litiação seguida por reacção com reagentes electrofílicos para dar carboxilatos, carboxaldeídos (que servem como precursores para olefinas por meio da reacção de Wittig subsequente, ou para aminas por meio de aminação redutora) ou grupos hidroximetilo (e éteres e ésteres derivados) .

Alternativamente, aril halogéneos (R7'-R10') podem ser utilizados como substratos reactivos para reacções organometálicas bem conhecidas, como os protocolos de Ullmann, Suzuki, Stille, Sonogashira, Heck e Buchwald, para criar novas ligações carbono-carbono simples, duplas e triplas, ligações carbono azoto (derivados de anilinas) e nitrilos. Por sua vez, estes podem servir como substratos para uma funcionalização posterior, como mono- e di-hidroxilação (a partir de alcenos), ou conversão em triazoles (a partir de acetilenos; "química click") e em tetrazoles (a partir de nitrilos). 0 desmascaramento de grupos OH fenólicos, por exemplo, por meio de clivagem selectiva de isopropoxi éteres (R7'-R10') com reagentes electrofílicos como BCI3, seguido pela conversão em ésteres de sulfonato reactivos (por exemplo triflatos), permite a ligação de estruturas heterocíclicas através de ácidos heteroaril borónicos ou derivados de organoestanho, de maneira análoga aos protocolos mencionados anteriormente partindo de grupos arilo halogenados. A conversão dos aril halogéneos (R7'-R10') em ácidos borónicos (por meio de litiação ou boração mediada por metais de transição), seguida por oxidação, proporciona um meio para introduzir funcionalidades oxigenadas 25 alternativas, bem conhecido para os peritos na especialidade. As funções fenólicas que surgem dos alcoxi éteres desprotegidos também podem ser utilizados para a formação de éteres de arilo-arilo e arilo-heteroarilo, através do acoplamento mediado por Cu com ácidos borónicos e haletos de (hetero)arilo. 0 significado e a aplicação destas reacções são explicados extensamente em algumas fontes de literatura seleccionadas que são esboçadas a seguir.

Para referências recentes, vejam-se por exemplo: A. Suzuki, Chem. Comm., 4759 (2005); Bach et al., Tetrahedron, 61, 2245 (2005); R. Rossi et al, Synthesis, 2419 (2004).

Triflatos fenólicos (R7'-R10') podem ser utilizados (de maneira similar à descrita para os brometos de arilo, veja-se acima) para a introdução de funcionalidades amina e amida (R7-R10) no anel benzeno, por acoplamento mediado por paládio de quaisquer carbamatos, carbonamidas, iminas e sililamidas, em processos conhecidos como reacções de aminação de Buchwald-Hartwig. Alternativamente, grupos nitro introduzidos numa etapa precoce da síntese (R7'-R10') permitem a preparação de moléculas alvo da estrutura geral I que incluem funcionalidades amina e amida. A montagem do esqueleto de 5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolina por meio da reacção de cicloadição 1,3-dipolar (IV—>Vj requer acetilenos (VI) como reagentes. Esta etapa oferece a possibilidade de introduzir os substituintes desejados em C-l e C-2. 26

Geralmente, estas reacções podem ser levadas a cabo com boa regiosselectividade, em que o substituinte mais voluminoso tem uma preferência pela posição 1 do esqueleto final, se Rl'/R2' forem suficientemente diferentes. Consequentemente, uma série de produtos da estrutura geral V são acessíveis com RI' = (hetero)arilo (como 2-tienilo, 3-tienilo, 3-piridilo, etc.) e R2' = H. Se R2' = H, a reacção subsequente com reagentes electrofílicos, como N-clorosuccinimida (NCS) ou isocianato de clorosulfonilo, permite introduzir substituintes Cl ou CN na posição C-2 do esqueleto (V, R2' = CN ou Cl). A utilização de acetileno sililado (Vl-a) proporciona 5, 6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolinas sililadas em C-l (V, RI' = trimetilsililo), que depois do tratamento com ácido e a bromação, dão os 1-bromo derivados (V, RI' = Br).

Isto permite a síntese de uma variedade de análogos 1- substituídos de fórmula geral V, que nao são acessíveis utilizando a cicloadição 1,3- -dipolar descrita anteriormente; por exemplo devido a deficiente disponibilidade de acetilenos (VI) apropriados ou a incompatibilidade de alguns substratos com as condiçoes da reacção, por exemplo, na preparação das di-hidro- pirroloisoquinolinas V com RI' = = ciano, etinilo ou etenilo.

De uma maneira similar à descrita para o processamento dos substituintes R7'-R10' a R7-R10 (veja-se acima), o tratamento das l-bromo-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- 27 a]isoquinolinas com derivados de (hetero)aril boro ou (hetero)aril estanho, proporciona 5,6-di-hidropirroIo[2,1-a]isoquinolinas 1-(hetero)ariladas (como derivados de 1-oxazolilo, 1-tiazolilo e 1-piridilo).

Substituintes heterocíclicos em RI que são difíceis de obter pelos métodos descritos acima, também podem ser introduzidos por construção do heterociclo desejado a partir de uma funcionalidade adequada em C-l. Por exemplo, 1-ciano- 5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolinas (V, RI' = CN) , obtidas por substituição com cianeto dos 1-brometos correspondentes (V, RI ' = Br) , podem ser utilizados como uma porta de entrada, por exemplo, a l-tetrazolil-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolinas por condensação com sililazidas. De maneira similar, l-etinil-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolinas (V, RI' = etinilo) podem ser convertidas em l-triazolo-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolinas por reacção com trimetilsilil azida. 1-Acetil-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolinas (V-b), obtidas por reacção de IV com acetilenos (Vl-b), podem ser modificadas posteriormente para dar, por exemplo, 1-tiadiazolo-pirrolo[2,1-a]isoquinolinas (V, RI'= 5-tiadiazolilo) por reacção com cloreto de tionilo e hidrazona.

Se forem utilizados acetilenos equipados com uma funcionalidade aldeído protegida (por exemplo, VI-c), obtêm-se as 5,6-di-hidro-pirrolo[2,1 isoquinolinas (V-c) correspondentes, que podem ser processadas posteriormente a derivados da estrutura geral I, que levam substituintes em 28 C-2 como grupos oxima, aldeído, aminoalquilo, alcenilo, alquilo(alcoxi, hidroxi) e alcinilo. A conversão do éster carboxilato em C-3 das 5,6-di-hidro-pirrolo [ 2, 1-oí] isoquinolinas (V) nas amidas correspondentes I-a, pode ser alcançada por um procedimento padrão em duas etapas, bem conhecido para os peritos na especialidade, que compreende a saponificação por exemplo com NaOH aquoso num solvente adequado tal como dioxano ou THF para obter os ácidos 3-carboxílicos respectivos, seguido pela reacção com a amina desejada na presença de um agente de acoplamento de péptidos (disponível comercialmente), como DCC, TBTU, HATU, EEDC, etc. Alternativamente, os etil ésteres de estrutura geral V podem ser convertidos directamente nas amidas (I- a) correspondentes, por meio de derivados metálicos das aminas (reacção conhecida na literatura como a reacção de Bodroux), mas também podem ser aplicados variantes; veja-se por exemplo, Bassett et al, J, Chem. Soc., 1188 (1954); Singh et al. , Tetrahedron Lett. , 321 (1971)). A etapa na qual se realizam as transformações de éster a amida em C-3 não necessariamente é a última etapa da síntese, mas que pode ser qualquer momento que se considere prático durante as transformações esboçadas.

Alternativamente, a funcionalidade amida em C-3 nos compostos de fórmula geral I-a pode ser introduzida já na etapa do intermediário tetrahidroisoquinolina. Por exemplo, a reacção de compostos de fórmula geral (XI) com derivados de ácido oxálico mono-amidados apropriadamente funcionalizados (XIII), sob condições padrão de acoplamento de péptidos bem conhecidas para os peritos na especialidade (veja-se acima), seguida pela saponificação da fracção éster etílico restante, pode proporcionar oxalamidas da estrutura geral XII. As amidas de ácido oxálico requeridas de fórmula geral XIII podem ser obtidas por reacção das aminas apropriadas com cloreto de etil oxalilo, seguida 29 pela saponificação do éster etílico sob condições padrão. A cicloadição 1,3-dipolar subsequente das oxalamidas (XII) na presença de acetilenos adequadamente funcionalizados de fórmula geral VI, como foi descrito anteriormente, pode dar acesso aos derivados desejados de fórmula geral I-a.

A construção de uma ligação dupla adicional entre C-5 e C-6 (veja-se a conversão de 5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolinas nos seus análogos aromáticos pirrolo[2,l-a]isoquinolinas) pode ser alcançada geralmente por meio de reagentes que efectuam a desidrogenação/aromatização e são conhecidos dos peritos na especialidade. 2,3-Dicloro- 5,6-diciano-1,4-benzoquinona (DDQ) foi utilizada preferivelmente para esse propósito.

Com a finalidade de sintetizar as 3-aminometilcetonas de estrutura geral I-b, de facto homólogos de C-l das amidas I-a mencionadas anteriormente, a proposta geral utilizada foi bastante similar. 0 esqueleto de 5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolina presente nos compostos de fórmula geral XV (neste caso R3 = H em lugar de um carboxilato), é acessível por reacção de ácidos tetrahidroisoquinolino-l-carboxílicos substituídos com N-formilo (XIV) com anidrido acético e acetilenos 30 apropriadamente protegidos de fórmula geral VI. Para a introdução da funcionalidade requerida em C-3, foi conseguida primeiro uma acilação de tipo Friedel-Crafts com derivados de ácidos carboxilicos apropriadamente funcionalizados, levando a compostos de fórmula geral (XVI) (X = grupo reactivo, como halogéneo) ou a compostos de fórmula geral XVII (R3 = alquilo ou cicloalquilo). Os exemplos destas reacções em pirroles estão extensamente documentados na literatura; vejam-se por exemplo M. Kakushima, et al. , J. Org. Chem., 48, 3214 (1983); R.M. Silverstein, et al. , J. Org. Chem., 20, 668 (1955). As reacções subsequentes das etanonas XVI com aminas adequadas podem proporcionar derivados de estrutura geral I-b. 30

Os compostos da invenção podem formar hidratos ou solvatos. É conhecido para os peritos na especialidade que os compostos carregados formam fracções hidratadas quando são liofilizados com água, ou formam fracções solvatadas quando são concentrados numa solução com um solvente orgânico apropriado. Os compostos desta invenção incluem os pró-fármacos, hidratos ou solvatos dos compostos mencionados.

Uma discussão sobre os pró-fármacos é proporcionada em T. Higuchi e V. Stella, "Pro-drugs as Novel Delivery Systems" (1987) Vol. 14 de A.C.S. Symposium Series, e em "Bioreversible Carriers in Drug Design" (1987) Edward B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association and Pergamon Press. 0 termo "pró-fármaco" significa um composto (por exemplo, um precursor de um fármaco) que é transformado in vivo para proporcionar um composto de 31 fórmula I ou um sal, hidrato ou solvato farmaceuticamente aceitável do composto. A transformação pode ocorrer por diversos mecanismos (por exemplo, por processos metabólicos ou químicos), por exemplo, por meio de hidrólise no sangue. Uma discussão sobre a utilização de pró-fármacos é proporcionada em T. Higuchi e W. Stella, "Pro-drugs as Novel Delivery Systems", Vol. 14 de A.C.S. Symposium Series, e em "Bioreversible Carriers in Drug Design", ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association e Pergamon Press, 1987.

Um ou mais compostos da invenção podem existir em formas não solvatadas e também em formas solvatadas com solventes farmaceuticamente aceitáveis, tais como água, etanol e similares, e pretende-se que a invenção abranja ambas formas solvatadas e não solvatadas. "Solvato" significa uma associação física de um composto desta invenção com uma ou mais moléculas de solvente. Esta associação física envolve graus variáveis de ligações iónicas e covalentes, incluindo ligações de hidrogénio. Em certos casos, o solvato será capaz de ser isolado, por exemplo, quando uma ou mais moléculas de solvente se incorporam no retículo cristalino do sólido cristalino. "Solvato" inclui tanto os solvatos em fase de solução como os isoláveis. Os exemplos não limitativos de solvatos adequados incluem etanolatos, metanolatos e similares. "Hidrato" é um solvato em que a molécula de solvente é H20.

Os compostos de fórmula I podem formar sais que também estão dentro do âmbito desta invenção. Entende-se que a referência a um composto de fórmula I na presente memória inclua a referência a seus sais, a não ser que de outro modo indicado. 0 termo "sal(is)", como é utilizado no presente documento, indica sais ácidos formados com ácidos inorgânicos e/ou orgânicos, e também sais básicos formados com bases inorgânicas e/ou orgânicas. Além disso, quando um composto de fórmula I contém tanto uma fracção básica, tal 32 como, mas não limitada a piridina ou imidazol, como uma fracção ácida, tal como, mas não limitada a um ácido carboxilico, podem ser formados zwitteriões ("sais internos") e são incluídos dentro do termo "sal (is)" como é utilizado no presente documento. Os sais farmaceuticamente aceitáveis (isto é, não tóxicos, fisiologicamente aceitáveis) são preferidos, embora outros sais também sejam úteis. Os sais dos compostos da fórmula (I) podem ser formados, por exemplo, fazendo reagir um composto de fórmula I com uma quantidade de ácido ou base, tal como uma quantidade equivalente, num meio tal como um no qual o sal precipita ou num meio aquoso seguido por liofilização.

Os compostos de fórmula I podem conter centros assimétricos ou quirais e, portanto, existem em diferentes formas estereoisoméricas. Pretende-se que todas as formas estereoisoméricas dos compostos de fórmula I, e também suas misturas incluindo misturas racémicas, formem parte da presente invenção. Além disso, a presente invenção abrange todos os isómeros geométricos e de posição. Por exemplo, se um composto de fórmula I inclui uma ligação dupla ou um anel fusionado, ambas formas cis e trans, e também misturas, estão incluídas dentro do âmbito da invenção.

As misturas diastereoméricas podem ser separadas em seus diastereómeros individuais com base nas suas diferenças físico-químicas, por métodos bem conhecidos para os peritos na especialidade, por exemplo, por cromatografia e/ou cristalização fraccionada. Os enantiómeros podem ser separados convertendo a mistura enantiomérica numa mistura diastereomérica por reacção com um composto opticamente activo apropriado (por exemplo um auxiliar quiral, tal como um álcool quiral ou cloreto de ácido de Mosher), separando os diastereómeros e convertendo (por exemplo, hidrolisando) os diastereómeros individuais aos enantiómeros puros correspondentes. Também, alguns dos compostos de fórmula I podem ser atropisómeros (por exemplo, biarilos 33 substituídos) e são considerados parte desta invenção. Os enantiómeros também podem ser separados por meio da utilização de uma coluna de HPLC quiral.

Também é possível que os compostos de fórmula I possam existir em diferentes formas tautoméricas, e todas estas formas estão incluídas dentro do âmbito da invenção. Também, por exemplo, todas as formas de ceto-enol e imina-enamina dos compostos estão incluídas na invenção.

Todos os estereoisómeros (por exemplo, isómeros geométricos, isómeros ópticos e similares) dos presentes compostos (incluindo aqueles dos sais, solvatos, ésteres e pró-fármacos dos compostos, e também os sais, solvatos e ésteres dos pró-fármacos), tais como aqueles que podem existir devido a carbonos assimétricos em diversos substituintes, incluindo formas enantioméricas (que podem existir inclusive na ausência de carbonos assimétricos), formas rotaméricas, atropisómeros e formas diastereoméricas, estão contemplados dentro do âmbito desta invenção, ao igual que os isómeros de posição. Os estereoisómeros individuais dos compostos da invenção podem ser, por exemplo, substancialmente livres de outros isómeros, ou podem estar misturados, por exemplo, como racematos ou com todos os outros estereoisómeros ou com outros estereoisómeros seleccionados. Os centros quirais da presente invenção podem ter a configuração S ou R, como é definido em Recomendações de 1974 de IUPAC. A utilização dos termos "sal", "solvato", "éster", "pró-fármaco" e similares está destinada a ser aplicada igualmente ao sal, solvato, éster e pró-fármaco de enantiómeros, estereoisómeros, rotâmeros, tautómeros, isómeros de posição, racematos ou pró-fármacos dos compostos inventivos.

Descobriu-se que os compostos de (di-hidro)pirrolo[2,1-a]isoquinolina da invenção estimulam o receptor de FSH. Os métodos para determinar a união ao 34 receptor, e também os ensaios in vitro e in vivo para determinar a actividade biológica das gonadotropinas, são bem conhecidos. Em geral, o receptor expressado é incubado com o composto que será analisado, e mede-se a união, ou a estimulação ou inibição de uma resposta funcional.

Para medir uma resposta funcional, o ADN isolado que codifica o gene do receptor de FSH, preferivelmente o receptor humano, é expresso em células hospedeiras adequadas. Esta célula poderia ser a célula de ovário de hamster chinês, mas outras células também são adequadas. Preferivelmente, as células são de origem de mamífero (Jia et al., Mol. Endocrin., 5, 759-776, (1991)).

Os métodos para construir linhas celulares que expressam o receptor de FSH recombinante são bem conhecidos na técnica (Sambrook et al., "Molecular Cloning: a Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor). A expressão do receptor é obtida pela expressão do ADN que codifica a proteína desejada. As técnicas para mutagénese dirigida ao local, ligação de sequências adicionais, PCR e construção de sistemas de expressão adequados são todas, hoje em dia, bem conhecidas na especialidade. Porções, ou o total, do ADN que codifica a proteína desejada podem ser construídas sinteticamente utilizando técnicas padrão de fase sólida, preferivelmente incluindo locais de restrição para facilitar a ligação. Elementos de controlo adequados para a transcrição e tradução da sequência de codificação incluída, podem ser proporcionados às sequências de codificação do ADN. Como é bem conhecido, actualmente existem sistemas de expressão disponíveis que são compatíveis com uma ampla variedade de hospedeiros, incluindo hospedeiros procarióticos tais como bactérias e hospedeiros eucarióticos tais como levedura, células vegetais, células de insectos, células de mamíferos, células de aves e similares. 35

Em seguida, as células que expressam o receptor são incubadas com o composto de teste para observar a união do composto de teste, ou a estimulação de uma resposta funcional.

Alternativamente, as membranas celulares isoladas que contêm o receptor expressado, podem ser utilizadas para medir a união do composto de teste.

Para a medição da união, podem ser utilizados compostos radioactivos ou fluorescentes. Estes compostos também são parte da invenção.

Como alternativa, também podem ser levados a cabo ensaios de união por competição.

Outro ensaio envolve rastrear para compostos agonistas do receptor de FSH, determinando a estimulação da acumulação de cAMP mediada pelo receptor. Assim, este método envolve a expressão do receptor numa célula hospedeira, e a exposição da célula ao composto de teste. Em seguida, mede-se a quantidade de cAMP. 0 nivel de cAMP estará aumentado pelo efeito estimulante do composto de teste ao unir-se ao receptor.

Para a medição da actividade intrínseca, FSH recombinante humana pode ser utilizado como composto de referência.

Além da medição directa, por exemplo, dos níveis de cAMP na célula exposta, podem ser utilizadas linhas celulares que além da transfecção do ADN que codifica o receptor de FSH, também são transfectadas com um segundo ADN que codifica um gene repórter, cuja expressão responde ao nível de cAMP. Estes genes repórteres poderiam ser induzíveis por cAMP ou poderiam ser construídos de maneira tal que estejam conectados com novos elementos que respondem a cAMP. Em geral, a expressão dos genes repórteres poderia ser controlada por qualquer elemento de resposta que reaja ante níveis que mudam de cAMP. Genes repórteres adequados são, por exemplo, LacZ, fosfatase 36 alcalina, luciferase de pirilampo e proteína com fluorescência verde. Os princípios destes ensaios de transactivação são bem conhecidos na técnica e estão descritos por exemplo em Stratowa, Ch., Himmler, A. e Czernilofsky, A.P., Curr. Opin. Biotechnol., 6: 574-581 (1995) .

Para investigar se o agonista do receptor de FSH de baixo peso molecular tem um efeito directo sobre o ovário, ratos imaturos podem ser tratadas por via oral duas vezes ao dia durante 3 dias, com o aumento do peso do ovário como parâmetro final (determinado no quarto dia) . Pela co-administração de uma quantidade fixa de hCG para maximizar a produção de andrógenos (também nos animais com placebo), este teste é muito selectivo para a actividade de FSH do composto testado. Se estivesse presente alguma actividade de LH, esta seria anulada pela actividade de hCG. Este teste é uma adaptação do ensaio de Steelman Pohley utilizado para a libertação de FSH recombinante (Steelman e Pohley, 1953) . 0 efeito dos agonistas do receptor de FSH de baixo peso molecular sobre o crescimento folicular pode ser investigado adicionalmente num modelo que utiliza ratos cíclicos tratados com antagonistas de GnRH. A estimulação ovárica pode ser determinada pelo peso aumentado do ovário e o número de óvulos ovulados (depois da indução da ovulação por hCG). Também podem ser determinados biomarcadores clinicamente relevantes como estradiol e Inibina B. Neste modelo, a estimulação com (agonistas de) FSH levará a uma superovulação (mais de 15 óvulos).

Para investigar a qualidade dos oócitos, os animais também podem ser acasalados depois da indução da ovulação, e pode ser determinada a fertilidade. A presente invenção também se refere a uma composição farmacêutica que compreende um derivado de (di-hidro) pirrolo [2,1-oí] isoquinolina ou sais f armaceuticamente 37 aceitáveis do mesmo que têm a fórmula geral (I), misturado com auxiliares farmaceuticamente aceitáveis e opcionalmente outros agentes terapêuticos. Os auxiliares devem ser "aceitáveis" no sentido de ser compatíveis com os outros ingredientes da composição e não ser prejudiciais para os indivíduos receptores da mesma.

As composições incluem, por exemplo, aquelas adequadas para administração oral, sublingual, subcutânea, intravenosa, intramuscular, nasal, local ou rectal e similares, todas em formas de dosagem unitária para administração.

Para a administração oral, o ingrediente activo pode ser presentado em forma de unidades separadas tais como comprimidos, cápsulas, pós, granulados, soluções, suspensões e similares.

Para a administração parentérica, a composição farmacêutica da invenção pode ser apresentada em contentores de dose unitárias ou de dose múltiplas, por exemplo, líquidos para injecção em quantidades predeterminadas, por exemplo, em frascos selados e ampolas, e também pode ser armacenada num estado seco por congelação (liofilizado) que requer somente a adição de um portador líquido estéril, por exemplo, água, antes da utilização.

Misturado com auxiliares farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, os descritos na referência padrão Gennaro A.R. et al, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20a. Edição, Lippincott Williams & Wilkins, 2000, veja-se especialmente a Parte 5: Pharmaceutical Manufacturing) , o agente activo pode ser comprimido para formar unidades de dosagem sólidas, tal como pílulas e comprimidos, ou pode ser processado para formar cápsulas ou supositórios. Por meio de líquidos farmaceuticamente aceitáveis, o agente activo pode ser aplicado como uma composição fluida, por exemplo, como uma preparação injectável, na forma de uma 38 solução, suspensão ou emulsão, ou como um spray, por exemplo, um spray nasal.

Para fabricar unidades de dosagem sólidas, contempla-se a utilização de aditivos convencionais tais como cargas, corantes, aglutinantes poliméricos e similares. Em geral, pode ser utilizado qualquer aditivo farmaceuticamente aceitável que não interfira com a função dos compostos activos. Os portadores adequados com os quais o agente activo da invenção pode ser administrado na forma de uma composição sólida incluem lactose, amido, derivados de celulose e similares, ou misturas dos mesmos, utilizados em quantidades adequadas. Para a administração parentérica, podem ser utilizadas suspensões aquosas, soluções salinas isotónicas e soluções injectáveis estéreis, que contêm agentes dispersantes e/ou agentes humectantes farmaceuticamente aceitáveis, tais como propilenoglicol ou butilenoglicol. A invenção também inclui uma composição farmacêutica, como a descrita anteriormente, em combinação com material de empacotamento adequado para dita composição, o dito material de empacotamento incluindo instruções para a utilização da composição como foi descrito anteriormente. A dose exacta e o regime de administração do ingrediente activo, ou de uma composição farmacêutica do mesmo, podem variar com o composto particular, a via de administração, e a idade e condição do sujeito individual a quem será administrado o medicamento. serem

Em geral, a administração parentérica requer dosagens mais baixas que outros métodos de administração que são mais dependentes da absorção. No entanto, uma dosagem adequada para seres humanos pode ser de 0,05-25 mg por kg de peso corporal. A dose desejada pode ser apresentada como uma dose ou como subdoses múltiplas administradas a intervalos apropriados ao longo do dia, ou no caso de indivíduos receptores fêmeas, como doses para 39 administradas a intervalos diários apropriados ao longo do ciclo menstrual. A dosagem e também o regime de administração podem diferir entre um sujeito receptor fêmea e um macho.

Os compostos de acordo com a invenção podem ser utilizados em terapêutica. Podem ser utilizados para os mesmos propósitos clínicos que a FSH nativa.

Outro aspecto da invenção reside na utilização de compostos de (di-hidro)pirrolo[2,1 -crjisoquinolina que têm a fórmula geral (I), para o fabrico de um medicamento para ser utilizado no tratamento de distúrbios que respondem às vias mediadas pelo receptor de FSH, preferivelmente para o tratamento de distúrbios da fertilidade. Assim, aos pacientes que o necessitam, podem ser administradas quantidades adequadas dos compostos de acordo com a invenção.

Em outro aspecto, a invenção reside na utilização de compostos de (di-hidro)pirrolo[2,1-a]isoquinolina que têm a fórmula geral (I), para o fabrico de um medicamento para ser utilizado no tratamento da infertilidade. Em particular, os compostos podem ser utilizados para induzir a ovulação (10) ou em protocolos de estimulação ovárica controlada (EOC). A invenção é ilustrada pelos seguintes exemplos. Exemplos

Comentários gerais:

Nos Exemplos são utilizadas as seguintes abreviaturas: DIPEA = N,N- diisopropiletilamina, TFA = ácido trifluoroacético, HATU = hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il)-N,N,N',N'-tetrametilurónio, Fmoc = 9-fluorenilmetoxicarbonilo, Fmoc-Cl = cloreto de 9-fluorenilmetoxicarbonilo, Alloc = alil-oxicarbonilo, DMF = N,N- dimetilformamida, DME = 1,2-dimetoxietano, THF = tetrahidrofurano, Boc = t- butoxicarbonilo, NMP = N-metilpirrolidona, TBTU = tetrafluoroborato de 0- 40 benzotriazol- 1-il-N,N,N,N'-tetrabutilurónio, BOP = hexafluorofosfato de (benzotriazol-1- il-oxi)tris(dimetilamino)fosfónio, HOBt = 1-hidroxibenzotriazol hidrato, DMAP = 4-(dimetilamino)piridina. A não ser que de outro modo indicado, todos os produtos finais dos Exemplos que seguem foram liofilizados a partir de misturas de água/1,4-dioxano, água/terc-butanol ou água/ acetonitrilo. Se o composto foi preparado como um sal de TFA, o ácido foi adicionado numa quantidade apropriada à mistura de solventes antes da liofilização.

Os nomes dos produtos finais descritos nos Exemplos foram gerados utilizando o programa Beilstein Autonom (versão: 2.02.304).

Os seguintes métodos de HPLC analítica foram utilizados para determinar os tempos de retenção: Método 1: Coluna: Luna C-18(2) de 5 um 150x4,6 mm; fluxo: 1 ml/min; detecção: 210 nm; temperatura da coluna: 40 °C; solvente A: CH3CN/H20 = 1/9 (v/v); solvente B: CH3CN; solvente C: ácido trifluoroacético aquoso 0,1 M; gradiente: solvente A/B/C = de 65/30/5 a 10/85/5 (v/v/v) em 30,00 minutos, depois constante durante 10,00 minutos adicionais a A/B/C = 10/85/5 (v/v/v). Método 2: Idêntico ao método 1, excepto pelo gradiente utilizado: Gradiente: solvente A/B/C = de 75/20/5 a 15/80/5 (v/v/v) em 30,00 minutos, depois constante durante 10,00 minutos adicionais a A/B/C = 15/80/5 (v/v/v). Método 3: Idêntico ao método 1, excepto pelo gradiente utilizado: Gradiente: solvente A/B/C = de 35/60/5 a 10/85/5 (v/v/v) em 30,00 minutos, depois constante durante 10,00 minutos adicionais a A/B/C = 10/85/5 (v/v/v). Método 4: Idêntico ao método 1, excepto pelo gradiente utilizado: Gradiente: solvente A/B/C = de 95/0/5 a 15/80/5 (v/v/v) em 30,00 minutos, depois constante durante 10,00 minutos adicionais a A/B/C = 15/80/5 (v/v/v). 41 Método 5: Idêntico ao método 1, excepto pelo gradiente utilizado: Gradiente: solvente A/B/C = de 75/25/0 a 0/100/0 (v/v/v) em 30,00 minutos, depois constante durante 10,00 minutos adicionais a A/B/C = 0/100/0 (v/v/v). Método 6: Idêntico ao método 1, excepto pelo gradiente utilizado: Gradiente: solvente A/B/C = de 60/40/0 a 0/100/0 (v/v/v) em 30,00 minutos, depois constante durante 10,00 minutos adicionais a A/B/C = 0/100/0 (v/v/v). Método 7: Coluna: Luna C-18(2) de 3 μπι 100 x 2 mm (Phenomenex); fluxo: 0,25 ml/min; detecção: 210 nm; temperatura da coluna: 40 °C; solvente A: CH3CN/H20 = 1/9 (v/v) ; solvente B: CH3CN; gradiente: solvente A/B = de 65/35 a 10/90 (v/v) em 30,00 minutos, em 2,00 minutos até A/B = 0/100 (v/v), depois constante durante 8,00 minutos adicionais a A/B = 0/100 (v/v), depois em 1,00 minuto até A/B = 65/35 (v/v) e finalmente constante durante 15,00 minutos adicionais a A/B = 65/35 (v/v). Método 8: Idêntico ao método 7, excepto pelo gradiente utilizado: Gradiente: solvente A/B = de 40/60 a 0/100 (v/v) em 30,00 minutos, em 2,00 minutos até A/B = 0/100 (v/v), depois constante durante 8,00 minutos adicionais a A/B = 0/100 (v/v), depois em 1,00 minuto até A/B = 40/60 (v/v) e finalmente constante durante 15,00 minutos adicionais a A/B = 40/60 (v/v). Método 9: Idêntico ao método 7, excepto pelo gradiente utilizado: Gradiente: solvente A/B = de 100/0 a 50/50 (v/v) em 30,00 minutos, em 2,00 minutos até A/B = 0/100 (v/v), depois constante durante 8,00 minutos adicionais a A/B = 0/100 (v/v), depois em 1,00 minuto até A/B = 100/0 (v/v) e finalmente constante durante 15,00 minutos adicionais a A/B - 100/0 (v/v). Método 10: Coluna: Luna C-18(2) de 3 μπι 100 x 2 mm (Phenomenex); fluxo: 0,25 ml/min; detecção: 210 nm; temperatura da coluna: 40 °C; solvente A: CH3CN/H20/TFA = 1/9/0,0035 (v/v); solvente B: CH3CN/TFA = 1/0,0035 (v/v); 42 gradiente: solvente A/B = de 65/35 a 10/90 (v/v) em 30,00 minutos, em 2,00 minutos até A/B = 0/100 (v/v), depois constante durante 8,00 minutos adicionais a A/B = 0/100 (v/v), depois em 1,00 minuto até A/B = 65/35 (v/v) e finalmente constante durante 15,00 minutos adicionais a A/B = 65/35 (v/v). Método 11: Idêntico ao método 10, excepto pelo gradiente utilizado: Gradiente: Solvente A/B = de 40/60 a 0/100 (v/v) em 30,00 minutos, em 2,00 minutos até A/B = 0/100 (v/v), depois constante durante 8,00 minutos adicionais a A/B = 0/100 (v/v), depois em 1,00 minuto até A/B = 40/60 (v/v) e finalmente constante durante 15,00 minutos adicionais a A/B = 40/60 (v/v). Método 12: Idêntico ao método 10, excepto pelo gradiente utilizado: Gradiente: Solvente A/B = de 100/0 a 50/50 (v/v) em 30, 00 minutos, em 2,00 minutos até A/B = 0/100 (v/v), depois constante durante 8,00 minutos adicionais a A/B = 0/100 (v/v), depois em 1,00 minuto até A/B = 100/0 (v/v) e finalmente constante durante 15,00 minutos adicionais a A/B = 100/0 (v/v). Método 13: UPLC/MS (Acquity Ultra Performance LC; Waters) : Coluna: Acquity UPLC BEH C18 2, 1x100 mm 1,7 μΐ; fluxo: 0,65 ml/min; detecção: 210 nm; MS: 100 - 1,000 AMU; temperatura da coluna: 40 °C; solvente A: CH3CN/H20 = 1/9 (v/v); solvente B: CH3CN; gradiente: solvente A/B = de 60/40 a 20/80 (v/v) em 3,0 minutos, em 0,2 minuto até A/B = 0/100 (v/v), depois por 0,49 minuto A/B = 0/100 (v/v), depois em 0,1 minuto até A/B = 60/40 (v/v) e finalmente A/B = 60/40 (v/v) por 1,3 minuto.

Os seguintes sistemas de HPLC preparativa foram utilizados para a purificação:

Sistema 1: Coluna Luna C18(2) de 5 μιη 150 x 21,2 mm com misturas de água/acetonitrilo, opcionalmente na presença de TFA aquoso a 0,1 %, utilizando o gradiente indicado; 43

Fluxo: 20 ml/min; Detecção: 210 nm; Tempo de corrida: 30 minutos.

Sistema 2: Coluna Luna Cl8(2) de 10 pm 250 x 50,00 mm com misturas de água/acetonitrilo, opcionalmente na presença de TFA aquoso a 0,1 %, utilizando o gradiente indicado; Fluxo: 50 ml/min; Detecção: 210 nm; Tempo de corrida: 60 minutos.

As reacções de microondas foram levadas a cabo num forno de microondas Biotage (modelo: Initiator) com auto-amostrador. A cromatografia em camada fina (TLC) foi conseguida em placas de TLC de Merck (5x10 cm) sílica gel 60 F254 . 1 44

1 44 o· ί J f 0 A a . O'·'·'·-'" /\ 1θ A 1b A °γν^ο HO-'1''''''

3 O TÍ } s ll „ A o ...,-ί-'-χ,.-NH 3 A 0' OH 0 A ΑτΑ A-sA^N

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Exemplo 1 (9-1sopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-[4-(tetrahidro-furano-2-carbonil)-[ 1,4]diazepan-l-il]-metanona (a). 4-Isopropoxi-3-metoxibenzaldeído

Uma mistura de 4-hidroxi-3-metoxibenzaldeído (100 g) , carbonato de potássio (182 g) e 2-bromopropano (81 ml) em DMF (500 ml) foi agitada a 65 °C durante 2 horas. A mistura 0/Υΐ ο ΙΑ V" S-/ (ο Α 1 k ΑΤΑ Α^Α-^.ν. if QA Α Α 4:. ί 9 $ Ν' t \ 0 A 'N-^N. ΆJ v 1j A,f *ί. 0 1 o% ’ V™í 0 1, R* & R* 2 R·-· Ji, s % o 6. R* 5 H- * o\J 4. A,-OH ' T CF, ν,.·'-·- X j*. «Η.. 45 de reacção foi deitada em água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e solução salina. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 124 g. XH RMN (CDC13) : δ 1,40 (s, 6H), 3,95 (s, 3 H), 4,7 (m, 1H), 6,98 (d, 1H), 7,43 (m, 2H), 9,85 (s, 1H) . (b) . l-Isopropoxi-2-metoxi-4-((E)-2-nitrovinil)-benzeno

Uma mistura do produto do Exemplo la (16,1 g) , nitrometano (120 ml) e acetato de amónio (6,1 g) foi

agitada a 70 °C durante 18 horas (Precaução: a reacção pode ser alcançada a temperatura mais alta, mas isto não é recomendável porque pode ocorrer uma explosão). O precipitado foi filtrado a temperatura ambiente. O

precipitado foi lavado com água e etanol frio. O precipitado foi recolhido em diclorometano e lavado com salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 13,54 g. 1E RMN (CDC13) : δ 1,40 (s, 6H) , 3,9 (s, 3H) , 4,65 (m, 1H) , 6,9 (d, 1H) , 7,0 (d, 1H) , 7,15 (dd, 1H), 7,52 (d, 1H), 7,95 (d, 1H). (c) . 2-(4-Isopropoxi-3-metoxifenil)-etilamina 0 produto do exemplo lb (20 g) foi dissolvido em THF (80 ml) e adicionado gota a gota a uma mistura de hidreto de lítio e alumínio (12,8 g) em éter seco (70 ml) e THF seco (70 ml). Após completada a adição, a mistura de reacção foi aquecida a refluxo por 2 horas. A mistura de reacção foi extinta por adição de água (15 ml) em THF (50 ml) . Em seguida, adicionou-se uma solução aquosa de NaOH (30 ml, 2 N) e H20 (4 ml) . A mistura resultante foi filtrada e o filtrado foi concentrado a vácuo. 0 resíduo foi recolhido em acetato de etilo e lavado com uma solução aquosa de HC1 (2 N) . NaOH sólido foi adicionado à camada aquosa até pH=10. A camada aquosa foi extraída com acetato 46 de etilo. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 13,8 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 210,1. (d) . Éster_alí lico_do_ácido_[ 2 - ( 4-isopropoxi-3- metoxifenil)-etil]-cerâmico

Cloroformiato de alilo (25 ml) em diclorometano (100 ml) foi adicionado a uma mistura do produto do exemplo lc (44,9 g) e DIPEA (75 ml) em diclorometano (400 ml) a 0 °C. Depois de agitar a temperatura ambiente durante uma hora, a mistura de reacção foi lavada com uma solução aquosa de HC1 (2 M) , água, uma solução aquosa saturada de NaHCCb e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [3/2 (v/v)] como eluente. Rendimento: 9,7 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 294, 1. (e) . Éster 2-alílico do ácido 7-isopropoxi-6-metoxi-3,4-di-hidro-ltf-isoquinolina-l, 2- dicarboxílico Ácido sulfúrico (120 ml) foi adicionado a uma solução do produto do exemplo ld (45,6 g) , ácido glioxílico (21,5 g) e ácido acético (350 ml) a 0 °C. Depois de agitar a temperatura ambiente durante uma hora, a mistura de reacção foi deitada em água e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em silica gel, com diclorometano/metanol [95/5 (v/v)] como eluente. Rendimento: 43,5 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 350,2. (f) . Ácido_7-isopropoxi-6-metoxi-l, 2,3,4- tetrahidroisoquinolino-l-carboxílico

Uma mistura do produto do exemplo le (43,5 g), dimedona (26,2 g) e Pd(PPh3)4 (500 mg) foi agitada em THF a refluxo durante uma hora. Éter (300 ml) e água (20 ml) foram adicionados à mistura de reacção a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi arrefecida a 0 °C e o 47 precipitado foi filtrado e seco a vácuo (50 °C) .

Rendimento: 27 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 266,2. (g) . Ácido_2-etoxioxalil-7-isopropoxi-6-metoxi-l,2,3,4- tetrahidroisoguinolino-1- carboxílico

Cloreto de etiloxalilo (1,85 ml) foi adicionado a uma suspensão do produto do exemplo lf (2,2 g) em THF a refluxo (200 ml). Depois de agitar a refluxo durante 30 minutos, a mistura de reacção foi concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com metanol/diclorometano [1/9 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 2,75 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 366,2. (h) . Éster etílico do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do exemplo lg (601 mg), anidrido acético (5 ml) e 2-etiniltiofeno (178 mg) em THF (5 ml) foi agitada a 140 °C, utilizando irradiação por microondas durante 15 minutos. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com água, uma solução aquosa saturada de NaHC03 e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) e concentrada a vácuo. O resíduo foi suspenso em etanol e o precipitado foi filtrado e seco a vácuo (50 °C) .

Rendimento: 1,34 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 412,2. (i) . Ácido_9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di- hidro-pirrolo [2,1-a]isoguinolino-3- carboxílico KOH (1,2 g) foi adicionado a uma suspensão do produto do exemplo lh (2,8 g) em Et0H/H20 1/1 (v/v) (80 ml). A mistura de reacção foi agitada a 78 °C durante uma hora. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e extraída com uma solução aquosa de NaOH (2 N) . A camada aquosa foi acidificada com uma solução aquosa de HC1 (2 N) e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 2,6 g. LC/MS-ESI: [M+H]+= 384,2. 48 (j) . Éster terc-butílico do ácido 4-(9-isopropoxi-8-metoxi-1 -tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2, 1-ot] isoquinolino-3-carbonil)-[1,4]diazepano-l-carboxílico

Uma mistura do produto do exemplo li (1 grama), HATU (1,47 grama) e 1,4-diazepano-l-carboxilato de terc-butilo (564 μΐ) em diclorometano (100 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante uma hora. A mistura de reacção foi diluida com diclorometano e lavada com uma solução aquosa de HC1 (1 N) . A camada orgânica foi seca (MgSCg) , filtrada e concentrada a vácuo. O residuo foi purificado por cromatografia em silica gel, com heptano/acetato de etilo [2/3 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 1,4 g. LC/MS-ESI: [M+H]+= 566,2. (k) [1,4]Diazepan-l-il-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-g]isoquinolino-3-il)-metanona TFA (3 ml) foi adicionado a uma solução do produto do exemplo lj (1,4 g) em diclorometano (10 ml). Depois de agitar a temperatura ambiente durante 18 horas, a mistura de reacção foi diluida com diclorometano e lavada com uma solução aquosa de NaOH (2 N) . A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 1,3 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 466,2. (l) (9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo [2, 1-ot] isoquinolino-3-il) - [4- (tetrahidrofurano-2- carbonil)-[1,4]diazepan-l-il]-metanona

Uma mistura do produto do exemplo lk (100 mg), ácido 2- tetrahidrofurano- carboxilico (31 μΐ) , HATU (160 mg) e DIPEA (110 μΐ) em diclorometano (2 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo e o residuo foi purificado por HPLC preparativa (0—>90 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 120 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 564,2; HPLC analítica: Rt =18,71 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 0,9 nM.

Exemplo 2 49 1-[4-(9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo[2, 1-a]isoquinolino-3-_carbonil)-[1, 4]diazepan-l- il]-2-metilsulfanil-etanona A formação de amida do produto do exemplo lk (100 mg) com ácido (tiometil)acético (33 mg) foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 11. Rendimento: 50 mg. LC/MS -ESI: [M+H]+ = 554,2; HPLC analítica: Rt = 20,36 minutos (método 2) ; hFSHRago (CHO luc) EC5q - 0,5 nM,

Exemplo 3 (9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-g]isoquinolino-3-il)-[4-(tiofeno-2-sulfonil)-[1,4]diazepan-l-il]-metanona

Uma mistura do produto do exemplo lk (60 mg), trietilamina (54 μΐ) e cloreto de 2-tiofenosulfonilo (29 mg) em diclorometano (2 ml), foi agitada durante uma hora a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com H20 e uma solução aquosa de HC1 (IN) . A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (0—>90 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 35 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 612,2; HPLC

analítica: R, = 26,14 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 4,6 nM.

Exemplo 4 3.3.3- Trifluoro-2-hidroxi-l-[4-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno—2—il—5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carbonil)-[1,4]diazepan-l-il]-propan-l-ona

Uma mistura do produto do exemplo lk (50 mg), ácido 3.3.3- trif luoroláctico (32 mg), DIPEA (90 μΐ) e BOP (114 mg) em diclorometano (2,5 ml), foi agitada durante 18 horas a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (10—>90 % de acetonitrilo; sistema 1). 50

Rendimento: 17 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 592,3; HPLC

analítica: R, = 21,77 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 1,3 nM.

Exemplo 5 3-Amino-l-[4-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di- hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolina- 3-carbonil)- [1,4]diazepan-l-il]-propan-1 -ona (a). éster terc-butílico do ácido {3-[4-(9-isopropoxi-8- metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,Ια] isoguinolino-3-carbonil)-[1,4]diazepan-l-il]-3-oxopropil}-carbâmico O acoplamento do produto do exemplo lk (100 mg) com ácido 3-terc- butoxicarbonilaminopropiónico (60 mg) foi conseguido de acordo com o método descrito no Exemplo 11.

Rendimento: 53 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 637,2; HPLC: Rt = 21,63 minutos (método 2). (b). 3-Amino-l -[4-(9-isopropoxi-8-metoxi-l -tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-[1,4]diazepan-l-il]-propan-l-ona

Uma mistura do produto do Exemplo 5a (40 mg) e TFA (100 μΐ) em diclorometano foi agitada durante 2 horas a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (0—>90 % de acetonitrilo, 0,1 % de TFA; sistema 1)

Rendimento: 34 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 537,2; HPLC: Rt = 9,97 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 1,400 nM.

Exemplo 6 1-[4-(9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [ 2, 1-ot] isoquinolino-3- carbonil) - [ 1, 4 ] diazepan-1 il]-2-metilaminoetanona (a) Éster terc-butílico do ácido {2-[ 4-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-[1,4]diazepan-l-il]-2-oxoetil}-metilcarbâmico 51 0 acoplamento do produto do exemplo lk (100 mg) com N-íer- butoxicarbonil-sarcosina (64 mg) foi conseguido de acordo com o método descrito no Exemplo 11.

Rendimento: 64 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 637,2; HPLC analítica: R, = 23,69 minutos (método 2). (b) 1-[4-(9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di- hidro-pirrolo [2,1-g] isoquinolino-3-_carbonil) - [1,4]diazepan-l-il]-2-metilaminoetanona A desprotecção de Boc do produto do Exemplo 6a (40 mg) foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 5b.

HPLC (CHO

Rendimento: 32,7 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 537,2; analítica: Rt = 10,11 minutos (método 2); hFSHRago luc) ECso = 264, 0 nM. θΛ^ H'CI (. NH 7b \—/

\_^n~Boc

Exemplo 7 3-(4-Ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepano-1-carbonil)-9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il- 5,6-di-hidro-pirrolo[2, 1-a]isoquinolina-2-carbonitrilo e (4-Ciclobutanocarbonil- [1.4] diazepan-l-il)-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-g]isoquinolino-3-il)-metanona (a) . Éster terc-butílico do ácido 4-ciclobutanocarbonil- [1.4] diazepano-l-carboxílico

Cloreto de ciclobutanocarbonilo (3,7 ml) e tríetilamina (14 ml) foram adicionados a uma solução de éster terc-butílico do ácido [ 1,4]diazepano-l-carboxílico 52 (4,9 ml) em diclorometano (175 ml). Depois de agitar durante uma hora a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi lavada com água, uma solução aquosa de HC1 (1 N) , água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 7 g. LC/MS-ESI: [M+H]+- 283,4. (b) . Ciclobutil-[1,4]diazepan-l-ilmetanona, cloridrato

Uma mistura do produto do Exemplo 7a (7 g) e uma solução de HC1 (33 ml, 4 N em dioxano) em diclorometano (166 ml) foi agitada durante 4 horas a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo. 0 resíduo foi tratado com éter dietílico e o precipitado foi filtrado e seco a vácuo (50 °C).

Rendimento: 4,76 g (como sal de HCI). (c) . (4-Ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepan-l-il)-(9- isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-_5, 6-di-hidro- pirrolo [2, 1—oí] isoquinolino-3-il) -metanona

Uma mistura do produto do exemplo li (250 mg), ciclobutil-[1,4]diazepan- 1-il-metanona, cloridrato (214 mg), HATU (373 mg) e DIPEA (0,25 ml) em DMF (3 ml), foi agitada durante 18 horas a 50 °C. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com diclorometano/metanol [100/0 —> 95/5 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 355 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 548,1; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 1,7 nM. (d) . 3-(4-Ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepano-l-carbonil)-9- isopropoxi-8-metoxi-l-_tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo[2,1-g]isoguinolina-2-carbonitrilo A -78 °C, isocianato de clorosulfonilo (0,112 ml) foi adicionado a uma solução do produto do Exemplo 7c (350 mg) em THF (3 ml). Depois de agitar durante uma hora a -78 °C, foi adicionado DMF (3 ml) . Depois de agitar durante 2,5 53 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi deitada em água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (40 % —>60 % de acetonitrilo; sistema 2).

Rendimento: 74 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 573,5; HPLC analítica: R, = 14,18 minutos (método 10); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 0,3 nM.

Exemplo 8 [4-(1-Bromo-ciclobutanocarbonil)-[1,4]diazepan-l-il]- (9- isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-_5, 6-di-hidro- pirrolo [2, 1-ot] isoquinolino-3-il) -metanona (a) . Acido 1-bromo-ciclobutanocarboxílico

Uma mistura de éster etílico do ácido 1-bromo-ciclobutanocarboxí lico (1,0 ml) numa solução aquosa de NaOH (10 ml, 2 N) foi agitada vigorosamente durante 3 horas a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi lavada com éter dietilico. A camada aquosa foi acidificada com uma solução aquosa de HC1 (2 N) e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgSCh) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 952 mg. (b) . [4-(1-Bromo-ciclobutanocarbonil)-[1,4]diazepan-l-il]- (9-isopropoxi-8-metoxi-l-_tiofeno-2-il-5, 6-di-hidro- pirrolo [2,1-oí] isoquinolino-3-il) -metanona

Uma mistura de BOP (580 mg), DIPEA (540 μΐ) e o produto do Exemplo 8a (280 μΐ) em diclorometano (3 ml), foi adicionada a uma solução do produto do exemplo lk (330 mg) 54 em diclorometano (12 ml). Depois de agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, a mistura de reacção foi deitada numa solução aquosa de ácido cítrico (a 5 %) e extraida com diclorometano. A camada orgânica foi seca (MgSCh) i filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com diclorometano/acetona [1/0 —> 9/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 329 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 626,3/628,3 (1:1); HPLC analítica: R, = 26,32 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 6,8 nM.

Exemplo 9 (9-Isopropoxi-8-metoxi-l_-tiofeno-2-il-5, 6-di-hidro- pirrolo[2,l-cx] isoguinolino-3-il- [ 4 - (1-metil- sulfanilciclobutanocarbonil)-[1,4]diazepan-l-il]-metanona

Uma mistura do produto do Exemplo 8b (42 mg) e tiometóxido de sódio (35 mg) em etanol (5 ml) foi agitada durante 4 horas a 40 °C, 2 dias a temperatura ambiente e finalmente 2 horas a 50 °C. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo, recolhida numa solução aquosa de NaOH (0,5 N) e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgSCh) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com diclorometano/acetona [1/0 —> 9/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 20 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 594,3; HPLC analítica: R, = 26,36 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 16,4 nM. 55

Exemplo 10 [4-(1-Hidroxi-ciclobutanocarbonil)~[l,4]diazepan-l-il]-(9- isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-_5,6-di-hidro- pirrolo [2, 1-ot] isoguinolino-3-il) -metanona (a) . Ácido 1-hidroxi-ciclobutanocarboxílico n-Butil lítio (14 ml, 1,6 M em heptano) foi adicionado a 0 °C a uma solução de diisopropilamina em THF (30 ml) . Depois de 30 minutos, a mistura de reacção foi arrefecida a -20 °C e foi adicionado ácido ciclobutanocarboxilico (960 ni) em THF (10 ml). Depois de agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos, passou-se oxigénio através durante uma hora e a mistura de reacção foi agitada durante 18 horas sob uma atmosfera de oxigénio. A mistura de reacção foi deitada em água e lavada com acetato de etilo. A camada aquosa foi acidificada com uma solução aquosa de HC1 (2 N) e extraída com acetato de etilo (2x). A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 690 mg. (b) . Éster_terc-butílico_do_ácido_4- (1-hidroxi- ciclobutanocarbonil)-[1,4]diazepano-1- carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 10a (340 mg), 1,4- diazepano-1- carboxilato de terc-butilo (694 ni), DIPEA (2,4 ml) e BOP (1,9 g) em diclorometano (15 ml), foi agitada durante 18 horas a temperatura ambiente. A mistura 56 de reacção foi deitada numa solução aquosa de ácido cítrico (a 5 %) e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com tolueno/acetona [1/0 —> 7/3 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 732 mg. (c) . [1,4]Diazepan-l-il-(1-hidroxiciclobutil)-metanona, cloridrato

Uma mistura de uma solução de HC1 (2 ml, 2,0 M em éter) e o produto do Exemplo 10b (420 mg) em diclorometano (18 ml), foi agitada durante 4 horas a temperatura ambiente e concentrada a vácuo.

Rendimento: 330 mg. (d) ._[ 4-(1-Hidroxi-ciclobutanocarbonil)-[1,4]diazepan-l- il ] - (9-isopropoxi-8-metoxi-l-_tiofeno-2-il-5, 6-di-hidro- pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-il)-metanona

Uma mistura do produto do Exemplo 10c (330 mg), DIPEA (830 μΐ), BOP (530 mg) e o produto do exemplo lk (383 mg) em diclorometano (15 ml), foi agitada durante 18 horas a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi deitada numa solução aquosa de ácido cítrico (a 5 %) e extraída com diclorometano (2x). A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com diclorometano/acetona [1/0 —> 1/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 538 mg. LC-MS: [M+H]+ = 564,4; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 1,4 nM.

Exemplo 11 (9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di- hidropirrolo [ 2,1-ot] isoquinolino-3-il) - [ 4 - (1-_metoxi- ciclobutanocarbonil)-[1 ,4]diazepan-1 -il]-metanona

Uma mistura do produto do exemplo lOd (82 mg), hidreto de sódio (14 mg, dispersão a 60 % em óleo) e iodometano (70 μΐ) em DMF (3 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante uma hora. A mistura de reacção foi deitada numa 57 solução aquosa saturada de NH4C1 e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgSCq) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com diclorometano/acetona [1/0 —>9/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 46 mg. LC-MS: [M+H]+ = 578,4; HPLC analítica: 24,57 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 5,4 nM.

Exemplo 12 1- [ 4-(2-Cloro-9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5, 6-di- hidro-pirrolo [2, 1-ot] isoquinolino-3-_carbonil) - [ 1,4]diazepan-l-il]-etanona e Éster etílico do ácido 2- acetil-9-etoxi-8-metoxi-l-_tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico (a) . Éster etílico do ácido 2-acetil-9-etoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-g]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo li (160 mg), N-acetil homopiperazina (89 mg), DIPEA (370 μΐ) e HATU (192 mg) em diclorometano (5 ml), foi agitada a 40 °C durante uma hora. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com uma solução aquosa de HC1 (0,2 M), água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [10/0 —» 8/2 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 230 mg; hFSHRago (CHO luc) EC50 =5,2 nM. (b) . 1 -[4-(2-Cloro-9-isopropoxi-8-metoxi-l -tiofeno-2-il- 5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-[ 1,4]diazepan-l-il]-etanona 58

Uma mistura do produto do Exemplo 12a (230 mg) e N- clorosuccinimida (64 mg) em DMF (3 ml) foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 120 °C durante 5 minutos. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com acetato de etilo [0 —> 10 % de isopropilamina (v/v) ] como eluente.

Rendimento: 150 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 542,2; HPLC analítica: Rt = 10,98 (método 7); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 1,9 nM.

Exemplo 13 1-(9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,l-í7]isoquinolino-3-carbonil)-[1,4]diazepan-5-ona BOP (111 mg), 2,3,6,7-tetrahidro-(1H)-1,4-diazepin-5 (4H)-ona (50 mg) e DIPEA (0,2 ml) foram adicionados a uma solução do produto do Exemplo li (80 mg) em diclorometano (4 ml). Depois de agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com uma solução aquosa de HC1 (0,5 N) e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (10 % —» 90 % de acetonitrilo; sistema 1) . 59

Rendimento: 38 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 480,2; HPLC

analítica: R, = 15,51 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 106,0 nM.

Exemplo 14 4-Butil-1-[9-(2-hidroxi-2-metilpropoxi)-8-metoxi-l-tiofeno-2-Í1-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-g]isoquinolino-3-carbonil]- [1.4] diazepan-5-ona,_4-Butil-1-(9-isopropoxi-8-metoxi-l- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-g]isoquinolino-3-carbonil)-[1,4]diazepan-5-ona e Éster etílico do ácido[3-(4-butil-5-oxo-[1,4]diazepano-l-carbonil)-8-metoxi-l- tiof eno-2-il-5, 6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-9-il-oxi]-acético (a) . 4-Butil-l -(9-isopropoxi-8-metoxi-l -tiofeno-2-il-5,6- di-hidro-pirrolo [2,1_-_a] isoquinolino-3-carbonil) - [1.4] diazepan-5-ona

Hidreto de sódio (160 mg, dispersão a 60 % em óleo) foi adicionado a uma solução do produto do Exemplo 13 (767 mg) em DMF (24 ml) . Depois de agitar durante 5 minutos a temperatura ambiente, foi adicionado 1-iodobutano (1,46 ml) e a agitação foi continuada durante 18 horas a 60 °C. A mistura de reacção foi deitada numa solução aquosa saturada de NH4C1 e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com diclorometano/metanol [100/0 90/0 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 1,26 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 536,4; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 0,8 nM. (b) . 4-Butil-l-(9-hidroxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di- hidro-pirrolo [2, 1-g] isoquinolino-3-_carbonil) - [1.4] diazepan-5-ona A 0 °C, tricloroborano (3,2 ml) foi adicionado gota a gota a uma solução do produto do Exemplo 14a (857 mg) em diclorometano (10 ml). Depois de agitar durante 18 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi extinta com 60 água e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com diclorometano/metanol [100/0 —> 90/0 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 318 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 494,3. (c) . Éster_etílico_do_ácido_[3 - ( 4-butil-5-oxo- [1,4]diazepano-l-carbonil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-9-il-oxi]-acético

Uma mistura do produto do Exemplo 14b (100 mg),

carbonato de césio (198 mg) e bromoacetato de etilo (27 μΐ) em DMF (6 ml), foi agitada durante 2 horas a 90 °C. A mistura de reacção foi deitada em água e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (0 % —> 100 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 43 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 580,3; HPLC analítica: R, = 11,76 minutos (método 10); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 11 nM. (d) . 4-Butil-l -[ 9-(2-hidroxi-2-metilpropoxi)-8-metoxi-l-tiof eno-2-il-5, 6-di-hidro-pirrolo [2, 1-ot] isoquinolino-3-carbonil]-[1,4]diazepan-5-ona A 0 °C, cloreto de met ilmagnésio (61 ni) foi adicionado gota a gota a uma solução do produto do Exemplo 14c (36 mg) em THF (2 ml). A mistura de reacção foi agitada durante 2 horas a temperatura ambiente. Depois da diluição com acetato de etilo, a mistura de reacção foi tratada com uma solução aquosa saturada de NH4C1. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 residuo foi purificado por HPLC preparativa (0 % —> 100 % de acetonitrilo; sistema 1) .

Rendimento: 15,8 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 566,3; HPLC analítica: Rt = 9,15 minutos (método 10); hFSHRago (CHO luc) EC5q = 1,5 nM. 61

Exemplo 15

(2,5-Di-hidropirrol-l-il)-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-Í1-5,6-di-hidro-pirrolo [2, 1-ot] isoguinolino-3-il) -metanona HATU (74,5 g) , 2,5-di-hidro-lfí-pirrol (30 μΐ) e DIPEA (0,114 ml) foram adicionados a uma solução do produto do exemplo li (50 mg) em DMF (2 ml) . Depois de agitar durante 18 horas a 50 °C, a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com uma solução aquosa saturada de NH4C1, água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (20 % —» 100 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 16,5 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 435,3; HPLC

analítica: R, = 20,78 minutos (método 1); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 249,0 nM.

Exemplo 16 1- [5-(9-1sopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-Í1-5,6-di-hidro-pirrolo [ 2,1-ot] isoquinolino-3- carbonil) - [ 1,5 ] diazocan-1 il]-etanona (a) . [ 1,5]Diazocan-l-il-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2- il-5, 6-dlhidro-pirrolo [2, 1-ot] isoquinolino-3-il) -metanona 62 1,5-Diazaciclooctano foi preparado de acordo com métodos de macrociclação bem documentados descritos na literatura, com base nos protocolos de Richman e Atkins: J.E. Richman, T.J. Atkins, J. Am. Chem. Soc. 96, 2268, (1974); R.C. Hoye, J.E. Richman, G.A. Dantas, M.F.

Lightbourne, L. Scott Shinneman, J. Org. Chem. 66, 2722 (2001) ; G. Ewin, J.O. Hill., J. Chem. Res (M), 3501 (1985); J.A. Halfen, H.L. Moore, D.C. Fox, Inorg. Chem. 41,3935 (2002) .

Uma mistura do produto do exemplo li (170 mg) e [ 1,5]diazocano.HBr (140 mg), N-etilmorfolina (200 μΐ) e HATU (250 mg) em DMF (2 ml), foi agitada durante 16 horas a temperatura ambiente. A reacção foi diluída com água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com diclorometano/metanol [8/1 1/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 75 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 480,5; TLC Rf = 0,45 (diclorometano/metanol 8/2) . (b). 1-[5-(9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di- hidro-pirrolo [2, 1-ot] isoguinolino-3-_carbonil) - [ 1,5]diazocan-1 -il]-etanona A uma solução do produto do Exemplo 16a (75 mg) em piridina (0,3 ml) foi adicionado anidrido acético (75 mg) e DMAP (10 mg), e a mistura foi agitada durante uma hora a 60 °C. A mistura de reacção foi diluída com água, acidificada até pH 4 com uma solução aquosa de HC1 (2 N) e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com diclorometano/acetona [9/1 1/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 50 mg. P.f. 153-155 °C; LC/MS-ESI: [M+Hf = 522,5; TLC Rf = 0,35 (diclorometano/acetona 8/2); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 5,0 nM.

Exemplo 17 63 (9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,l-g]isoguinolino-3-il)-[5-(tolueno- 4-sulfonil)-perhidro-1,5-diazocin-l -il]-metanona. A uma mistura de bromidrato de 1-(tolueno-4-sulfonil)-perhidro-1,5-diazocina (60 mg) e o produto do exemplo li (50 mg) em DMF (1,5 ml), foi adicionada N-etilmorfolina (50 ni) e TBTU (100 mg) . A reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 16 horas e deitada numa solução aquosa de NH4C1 (a 5 %) . A mistura foi extraída com acetato de etilo e a camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado em sílica gel com diclorometano/acetato de etilo como eluente, para proporcionar um sólido alvo.

Rendimento: 45 mg. TLC Rf = 0,6 0 (diclorometano/acetato de etilo 1/1) LC/MS-ESI: [M+H]+ = 634,5. ΧΗ RMN (DMSO-d6) 6,40 (s, 1H, H2-pirrol), 6,85, 6,72 (2xs, 2H, H7 e H 107,40, 7,64 (2x dd, 4, tosilo), 2,38 (s, 3, CH3-tosilo), 4,13 (t, 2, H5), 2,95 (t, 2, H6), 3,75 (s, 3, CH30) , 1, 08 (d, 6, iPr) ; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 914,0 nM.

Exemplo 18 3-(9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2, 1-ot] isoguinolino-3-carbonil) -1,2,3,4,5,6-hexahidro-1,5-metanopirido[1,2-a][l,5]diazocin-8-ona

Uma mistura do produto do exemplo li (125 mg) e citisina racémica (80 mg), N-etilmorf olina (50 μΐ) e TBTU (200 mg) em DMF (2 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura de reacção foi diluída com água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com diclorometano/acetona como eluente.

Rendimento: 130 mg. P.f. 260 °C; Tlc: TLC RE = 0,50 (diclorometano/ acetona 1/1). LC/MS-ESI: [M+H]+ = 556 . 64 1H RMN (DMS0-d6) sinais de um anel de piridona a 6,16 (dl, 1H), 6,25 (dd, 1H), 7,35 (dd, 1H); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 3 7,3 nM.

Exemplo 19 3-(9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo[2,1-út]isoquinolino-3-carbonil) -_decahidro-1,5- metanopirido[1,2-a][1,5]diazocin-8-ona A citisina foi hidrogenada de acordo com um procedimento descrito; M.J. Johansson, L. Schwartz, S. Mamedjcouh, N. Kann, Tetrahedron Asymmetry, 15, 3531 (2004). P.f. 98-102 °C.

Uma mistura do produto do exemplo li (125 mg) e 85 mg de tetrahidrocitisina (85 mg), N-etilmorfolina (50 μΐ) e TBTU (225 mg) em DMF (2 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura de reacção foi diluida com água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel com diclorometano/acetona, seguido por trituração em éter dietilico.

Rendimento: 130 mg. P.f. 207-208 °C; TLC Rf = 0,64 (diclorometano/acetona 1/1); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 560; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 29, 4 nM. 65

20; R =

21: R= -'S'-#* 22;R= [/

Exemplo 20 (a). Éster terc-butílico do ácido 7-(9-isopropoxi-8-metoxi-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-ot]isoquinolino-3-carbonil)-3,7-diazabiciclo[3.3.1]nonano-3-carboxílico.

Uma mistura do produto do exemplo li (150 mg) e éster terc-butilico do ácido 3,7-diazabiciclo[3.3.1]nonano-3-carboxilico (177 mg) [preparado de acordo com O. Huttenloch, E. Laxman, H. Waldmann, Chem. Eur. J., 8(20), 4767 (2002)] em diclorometano (2 ml), foi tratada com TBTU (188 mg) e diisopropilamina (350 μΐ). A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 16 horas. A reacção foi trabalhada por adição de uma solução aquosa de NH4C1 (a 5 %) e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com tolueno/acetona como eluente.

Rendimento: 153 mg. 1H RMN (CDCI3) δ 1,18 (d, 6H, isopropoxi), 1,4 (sl, 9H, terc-Bu) , 6,45 (s, 1H, H-2, pirrol), 6,69 (s, 1H, H7-Ar), 6,93 (s, 1H, H-9 Ar), 7,04, 7,27 (m, 3H, tienilo). TLC Rf = 0,62 (tolueno/acetona 3/2). LC/MS-ESI: [M+H]+ = 592. 66 (b) . Cloridrato de 3,7-diazabicicloI[3.3.1]nona-3-il)-(9-iisopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1-a]isoquinolino-3-il)-metanona. A uma solução do produto do Exemplo 20b (150 mg) em diclorometano (10 ml), adicionou-se uma solução de HC1 (3 ml, 2,0 M em éter) . A mistura foi agitada durante 4 horas e concentrada a vácuo.

Rendimento: 110 mg (bruto). TLC Rf= 0,23 (diclorometano/metanol 9/1). (c) . 1-[7-(9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di- hidro-pirrolo [2, 1-a] isoguinolino-3-_carbonil) -3,7- diazabiciclo[3.3.1]nona-3-il]-etanona

Uma solução do produto bruto do Exemplo 20b (66 mg) em diclorometano (2 ml) foi tratada com diisopropilamina (100 μΐ) e cloreto de acetilo (12 μΐ) . A reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 2 horas, diluída com uma solução aquosa de ácido citrico (a 10 %) e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado com HPLC preparativa (0 —» 100 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 29 mg. TLC Rf = 0,70

(diclorometano/metanol 9/1); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 534. 1H RMN (CDCI3) δ 1,18 (m, 6H, isopropilo) , 2,18 (s, 3H, acetilo), 3,85 (s, 3H, MeO) , 3,0 (t, 2H, C6H2), 4,04 (t, 2H, C5H2), 6,33 (s, 1H, pirrol H) , 6,69 (3, 1H, Ar H7) , 6,92 (s, 1H, Ar Hl 0) ; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 8,2 nM.

Exemplo 21 1-[7-(9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo [2, 1-a] isoguinolino-3-_carbonil) -3,7- diazabiciclo[3.3.1]nona-3-il]-2-metilsulfanil-etanona A reacção do produto do Exemplo 20b (55 mg) com cloreto de metilsulfanilacetilo foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 20c. 67

Rendimento: 36 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ — 580. H RMN (CDC13) δ 1,18 (m, 6, isopropilo), 2,16 (s, 3, SCH3) , 3,85 (s, 3, MeO), 3,0 (t, 2, C(6)H2), 4,04 (t, 2, C(5)H2), 6,35 (s, 1, pirrol H) , 6,70 (3, 1H, Ar H7), 6,92 (s, 1, Ar H10) ; ) ; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 77,8 nM.

Exemplo 22 (7-Ciclobutanocarbonil-3,7-diazabiciclo[3.3.1]nona-3-il)- (9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-_il-5,6-di-hidro- pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-metanona O acoplamento do produto do Exemplo 20b (55 mg) com cloreto de ciclobutanocarbonilo foi conseguido de acordo com o método descrito no Exemplo 20c.

Rendimento: 20 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 574. hFSHRago (CHO luc) EC50 = 8,9 nM.

1

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H

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, . Η O À JnJL, J*. J*

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Exemplo 23 (2-Acetil-octahidrociclopenta[c]pirrol-5(endo)-il)-amida do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-l- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]iSOguinolino-3-carboxílico (a). Éster terc-butílico do ácido (3aS,5R,6aR)-5- aminohexahidrocj dopenta [c] pirrol-2- carboxílico

Para a síntese de carboxamidas derivadas de octahidro-ciclopenta[c]pírrol-5- ilamina, foi preparado éster terc-butílico do ácido 5-oxohexahidrociclopenta[c]pirrol-2- 68 carboxílico, utilizando procedimentos bem documentados (reacção de Pauson-Khand), partindo de alil-propargilamina; veja-se: S.W. Brown, P.L. Pauson, J. Chem. Soc. Perkin Trans I 1205 (1990); D.P. Becker, D.L. Flynn, Tetrahedron Lett., 34(10) 2087 (1993); D.P. Decker, D.L. Flynn, Tetrahedron, 49(23), 5047 (1993); E. Li, T. Marks, J. Am. Chem. Soc., 120, 1757 (1998) . Em seguida, a função ceto foi convertida numa endoamina por meio de um procedimento de aminação redutora bem conhecido, através da bencilimina derivada, seguido por redução com Na(0Ac)3BH e desbencilação catalítica (catalisador de Pearlmans). (b) . Éster terc-butílico do ácido 5-(endo)[ (9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- a]isoquinolino-3-carbonil)-amino]-hexahidrociclopenta[c]pirrol-2- carboxílico. A uma mistura do produto do exemplo li (220 mg) e o produto do Exemplo 23a (145 mg) em DMF (1,5 ml), foi adicionado N-et ilmorf olina (100 μΐ) e TBTU (200 mg). A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 2 horas. Adicionou-se água (5 ml), seguido por filtração e secagem do precipitado. A trituração com heptano/éter diisopropílico deu o produto.

Rendimento: 260 mg. P.f. 199-200 °C; TLC Rf= 0,35 (heptano/acetato de etilo 1/1). (c) . (Octahidrociclopenta[c]pirrol-5(endo)-il)-amida do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-l- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico, cloridrato A uma solução do produto do Exemplo 23b (250 mg) em diclorometano (10 ml), adicionou-se uma solução de HC1 (4 ml, 2M em éter) . A reacção foi agitada durante 2 horas e concentrada a vácuo. O resíduo foi tratado com éter para dar um sólido alvo.

Rendimento: 210 mg. P.f. 140-142 °C. 69 (d) . (2-Acetiloctahidrociclopenta[c]pirrol-5(endo)-il) -amida do ácido 9-isopropoxi-8- metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2, 1-ot] isoquinolino-3-carboxílico

Uma solução do produto do Exemplo 23c (210 mg) em acetato de etilo (10 ml) foi tratada com uma solução aquosa saturada de NaHC03 para libertar a amina do seu sal de HC1. A solução orgânica foi concentrada a vácuo. O resíduo foi recolhido em piridina (2 ml) e tratado com anidrido acético (150 μΐ) e DMAP (5 mg). A mistura de reacção foi agitada a 66 °C durante 10 minutos. A reacção foi deitada em água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgSCq) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo restante foi tratado com éter.

Rendimento: 170 mg. P.f. 207-208 °C; LC/MS-ESI: [M+H]+ = 534,5; TLC Rf = 0,45 (diclorometano/acetona 1/1); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 787, 0 nM.

Exemplo 24 (2-Acetiloctahidrociclopenta[c]pirrol-5(endo)-il) -metilamida do ácido 9-isopropoxi-8- metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-g]isoquinolino-3-carboxílico

Uma solução do produto do Exemplo 23d (50 mg) em DMF seca (1 ml) foi tratada com hidreto de sódio (17 mg, dispersão a 60 % em óleo) e agitada durante 15 minutos a 65 °C. Em seguida a mistura foi arrefecida a temperatura ambiente e foi adicionado iodeto de metilo (35 μΐ) . Depois de 30 minutos, a metilação foi completada. A reacção foi deitada em água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel com diclorometano/acetona como eluente, para proporcionar um sólido alvo amorfo.

Rendimento: 170 mg. TLC Rf= 0,45 (diclorometano/acetona 1/1); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 548,5; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 191,0 nM. 70

Exemplo 25 N-[2-(9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo [2,1-a] isoquinolino-3-_carbonil) - octahidrociclopenta[c]pirrol-5-endo-il]-acetamida (a) . 5-Endo-N-(octahidrociclopenta[c]pirrol-5-il)-acetamida 0 produto do Exemplo 23a (100 mg) foi acetilado com anidrido acético em piridina, e desprotegido com HC1 em diclorometano para proporcionar um sal cloridrato higroscópico.

Rendimento: 105 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+= 169,3. (b) . N-[2-(9-1sopropoxi-8-metoxi-1-tiofeno-2-i1-5,6 —di — hidropirrolo [2,1-a] isoquinolino-3-_carbonil) - octahidrociclopenta[c]pirrol-5-endo-il]-acetamida

Uma mistura do produto do Exemplo li (153 mg) e o produto do Exemplo 25a (75 mg) em DMF seca (2 ml), foi tratada com N-et ilmorf olina (200 ni) e TBTU (160 mg). A reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 16 horas, deitada em água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel com diclorometano/acetona.

Rendimento: 130 mg. P.f. 106-112 °C; LC/MS-ESI: [M+H]+ = 534,5; TLC Rf= 0,52 (diclorometano/acetona 1/1); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 45,4 nM.

Exemplo 2 6 71 Ν- [2-(9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo [2, 1-a] isoguinolino-3-__carbonil) - octahidrociclopenta [c]pirrol-5-il] -iV-metilacetamida A metilação do produto do Exemplo 25b (50 mg) foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 24.

Rendimento: 35 mg. TLC Rf= 0,58 (diclorometano/acetona 1/1); LC/MS-ESI: [M+H]+= 548,3; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 173,0 nM.

Exemplo 27 (2-Etilpirrolidin-l-il)-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-g] isoguinolino-3-il)-metanona Uma mistura do produto do exemplo li (168 mg), 2-et ilpirrolidina (130 mg), N-etilmorf olina (170 μΐ) e TBTU (260 mg), foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A reacção foi deitada em água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (20 % —> 100 % de acetonitrilo; sistema 2).

Rendimento: 150 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 465,3; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 16,2 nM.

Exemplo 28 [2-(3-Fluorofenil)-pirrolidin-l-il]-(9-isopropoxi-8-metoxi-1 -tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-g]isoquinolino-3-il)-metanona

Este produto foi preparado a partir do produto do exemplo li (168 mg) e 2- (3-fluorofenil)-pirrolidina, de maneira similar à descrita para o Exemplo 27.

Rendimento: 187 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 531,3; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 752,0 nM. 72

Exemplo 29 (9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-g]isoquinolino-3-il)-(2-piridin-3-il-pirrolidin-l-il)-metanona

Este produto foi preparado a partir do produto do exemplo li (168 mg) e 3- pirrolidin-2-ilpiridina, de maneira similar à descrita para o Exemplo 27. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (20 % —> 100 % de acetonitrilo; sistema 2).

Rendimento: 174 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 514,3; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 624, 0 nM.

Exemplo 30 (2-Hidroxi-l, 1-dimetil-etil) -metilamida_do_ácido_9- isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Este produto foi preparado a partir do produto do exemplo li (60 mg) e 2- metil-2-metilaminopropan-l-ol [preparado de acordo com S.G. Kuznetsov, A.V. Eltsov, J. Gene. Chem. USSR, 32, 502 (1962)], de maneira similar à descrita para o Exemplo 27.

Rendimento: 14 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 469,5; P.f. 150-152 °C; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 1,0 nM.

NRR'· ,Ν^ NRR·· ^Nn 31a 32a 31b 32b

Exemplo 31 _Trimetilhidrazida do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-l- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoguinolino-3-carboxílico 73 (a) . N',N'-dimetilhidrazida do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo li (75 mg), DIPEA (0,171 ml), HATU (112 mg) e 1, 1-dimetilhidrazina (19,5 μΐ) em diclorometano (2 ml), foi agitada durante uma hora a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com uma solução aquosa saturada de NaHC03 e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica, com heptano/acetato de etilo [7/3 1/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 75 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 426,1. (b) . Trimetilhidrazida do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Iodeto de metilo (11 μΐ) foi adicionado a uma solução do produto do Exemplo 31a (72 mg) e KOH (10 mg) em acetona (5 ml) . Depois de agitar durante uma hora a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com uma solução aquosa saturada de NaHC03 e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (10 —» 90 % de acetonitrilo, 0,1 % de TFA; sistema 1).

Rendimento: 42 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 440,1; HPLC

analítica: Rt = 17,61 minutos (método 4); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 241, 0 nM.

Exemplo 32

Metil-pirrolidin-l-il-amida do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico (a). Pirrolidin-l-il-amida do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico 74 A formação de hidrazida do produto do exemplo li (75 mg) com pirrolidin-1 -ilamina, cloridrato (31 mg) foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 31a.

Rendimento: 94 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 452,1. (b). Metilpirrolidin-l-il-amida do ácido 9-isopropoxj-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a] isoguinolino-3-carboxílico A metilação do produto do Exemplo 32a (94 mg) foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 31b.

Rendimento: 51 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 466,1; HPLC analítica: R, = 18,92 minutos (método 4); hFSHRago (CHO luc) EC5q = 55,2 nM. (RJ H HN ir* Btt Ό' R,, <R)l·o 1 ϋ M"7-A Λ·

^ 33a

33d 34d R- "0a· RI = tllllo 0Λ. R1 c melijo ((R)-l-Ciclobutanocarbonilpiperidin-3-il)-etilamida_do ácido_9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo [2, 1-a] isoguinolino-3-carboxílico_e_( (R) -1_-

Ciclobutanocarbonilpiperidin-3-il) -amida do_ácido_9- isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico (a) . Éster_terc-butílico_do__ácido_( (R) -Ι οί clobutanocarbonilpiperidin-3-il)-carbâmico A acilação de éster terc-butílico do ácido (R)-piperidin-3-il-carbâmico (300 mg) com cloreto de ciclobutilcarbonilo (0,342 ml) foi conseguida de acordo com 75 o método descrito para o Exemplo 20c. O resíduo foi concentrado a vácuo e utilizado na etapa seguinte sem purificação.

Rendimento: 423 mg. (b) .((R)-3-Aminopiperidin-l-il)-ciclobutilmetanona A desprotecção do produto do Exemplo 33a (423 mg) foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo 7b.

Rendimento: 327 mg (como sal de HC1). (c) .((R)-l-Ciclobutanocarbonilpiperidin-3-il)-amida do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-l- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico A formação de amida do produto do Exemplo 33b (214 mg) com o produto do Exemplo li (250 mg), foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo 13. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica, com tolueno/acetona [100/0 —» 6/4 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 316 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 548,5; HPLC analítica: Rt = 25,16 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 252 nM. (d) .((R)-l-Ciclobutanocarbonilpiperidin-3-il)-etilamida do ácido 9-isopropoxi-8- metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Iodeto de etilo (80 μΐ) e hidreto de sódio (12,6 mg, dispersão a 60 % em óleo) foram adicionados a uma solução do produto do Exemplo 33c (69 mg) em DMF (1 ml), Depois de agitar durante 3 horas a 50 °C, a mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com água. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (10 % —» 100 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 26,4 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 576,5; HPLC

analítica: R, = 26,46 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 279 nM.

Exemplo 34 76 ( (R) -l-Acetilpiperidin-3-il) -metilamida_do_ácido_9- isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo [2,1-a] isoguinolino-3-carboxílico_e_( (R) -1-

Acetilpiperidin-3-il)-amida do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico (a) . Éster terc-Butil do ácido ((R)-l-acetilpiperidin-3-il)-carbâmico A acilação de éster terc-butilico do ácido ((R)-l -acetilpiperidin-3-il)- carbâmico (300 mg) com cloreto de acetilo (0,214 ml), foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo 20c. 0 resíduo foi concentrado a vácuo e utilizado na etapa seguinte sem purificação. Rendimento: 348 mg. (b) . 1 -((R)-3-Aminopiperidin-l -il)-etanona A desprotecção do produto do Exemplo 34a (348 mg) foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo 7b.

Rendimento: 256 mg (como sal de HC1). (c) . ( (R) -l-Acetilpiperidin-3-il) -amida_do_ácido_9- isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico A formação de amida do produto do Exemplo 34b (175 mg) com o produto do exemplo li (250 mg), foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo 13. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica, com

tolueno/acetona [100/0 —> 4/6 (v/v)] como eluente. O produto foi purificado por HPLC preparativa (10 % —» 90 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 32 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 508,3; HPLC analítica: Rt = 18,32 minutos (método 1); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 251 nM. (d) . ((R)-1-Acetilpiperidin-3-il)-metilamida do ácido 9- isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico 77 A alquilação do produto do Exemplo 34c (50 mg) com iodeto de metilo (62,3 μΐ) foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo 33d.

Rendimento: 36,6 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 522,5; HPLC analítica: Rt = 18,45 minutos (método 1); hFSHRago (CHO luc) EC5o - 496, 0 nM.

Exemplo 35 (9-Isopropoxi-8-metoxi-l-piridin-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-[4- (piridina-2-carbonil)-[1,4]diazepan-l-il]-metanona, ácido trifluoroacético (a) . Éster etílico do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-l-piridin-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do exemplo lf (800 mg) e cloreto de etiloxalilo (0,4 ml) em THF (5 ml) foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 100 °C durante 5 minutos. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo. Uma mistura do resíduo e 2-etinilpiridina (340 μΐ) em anidrido acético (5 ml) foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 140 °C durante 15 minutos. A temperatura ambiente, a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e extraída com uma solução aquosa saturada de NaHC03 e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado 78 por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1:1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 960 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 407,5. (b) . Ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-l-piridin-2-il-5,6-di- hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3- carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 35a (850 mg) e KOH sólido (500 mg) em etanol (15 ml) e água (15 ml) foi agitada a 80 °C durante uma hora. A temperatura ambiente, a mistura de reacção foi neutralizada com uma solução aquosa de HC1 (1,0 M) até pH = 6-7 e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 673 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 379,3. (c) . Éster terc-butílico do ácido 4-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-piridin-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-[1,4]diazepano-1-carboxílico A uma solução do produto do Exemplo 35b (473 mg), DIPEA (1,0 ml) e éster terc-butílico do ácido [ 1,4]diazepano-l-carboxílico (370 μΐ) em diclorometano (5 ml), foi adicionado HATU (950 mg). Depois de agitar a temperatura ambiente durante 18 horas, a mistura de reacção foi lavada com uma solução aquosa saturada de NaHC03 e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (0 —» 75 % de acetonitrilo; 0,1 % de TFA; sistema 2).

Rendimento: 768 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 561,5. (d) . [1,4]Diazepan-l-il-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-piridin-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-metanona A temperatura ambiente, TFA (1 ml) foi adicionado gota a gota a uma solução do produto do Exemplo 35c (768 mg) em diclorometano (9 ml). Depois de agitar a temperatura ambiente durante 18 horas, a mistura de reacção foi concentrada a vácuo.

Rendimento: 630 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 461,3. 79 (e). (9-Isopropoxi-8-metoxi-l-piridin-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-il)-[4- (piridina-2-carbonil)-[1,4]diazepan-l-il]-metanona, ácido trifluoroacético

Uma mistura do produto do Exemplo 35d (105 mg), DIPEA (200 μΐ), ácido piridina-2-carboxilico (57 mg) e HATU (350 mg) em diclorometano (5 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi lavada com uma solução aquosa saturada de NaHCCb e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 residuo foi purificado por HPLC preparativa (0 75 % de acetonitrilo; 0,1 % de TFA; sistema 1).

Rendimento: 96 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 566,5; HPLC analítica Rt = 15,08 minutos (método 4); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 244, 0 nM.

Exemplo 36 _terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-hidroxi-etoxi)-8- metoxi-l-tiofeno-2-ilpirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico 2,3-Dicloro-5,6-diciano-l,4-benzoquinona (197 mg) foi adicionada a uma solução do produto do Exemplo 65d (376 mg) em tolueno (10 ml). Depois de agitar durante 7 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com solução salina. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (10 —> 100 % de acetonitrilo; sistema 2).

Rendimento: 200 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 453,2; HPLC analítica: R, = 15,79 minutos (método 11); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 2,5 nM. 80

Exemplo 37 _terc-Butil-metil-amida do ácido l-ciano-9-isopropoxi- 8-metoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-3-carboxílico e terc-Butil-metil-amida do ácido l-bromo-9-isopropoxi-8-metoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico (a). Éster etílico do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do exemplo lg (6,5 g) e trimetilsililacetileno (3,3 ml) em anidrido acético (15 ml), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas durante 15 minutos a 140 °C. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo. 0 residuo foi purificado por cromatografia em silica gel, com heptano/acetato de etilo [1/0 —> 3/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 1,8 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 330,1. (b) . Éster etílico do ácido l-bromo-9-isopropoxi-8-metoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico N-bromosuccinimida (980 mg) foi adicionada a uma solução do produto do Exemplo 37a (1,8 g) em DMF (20 ml) .

Depois de agitar durante 3 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [4/1 —> 1/4 (v/v)] como eluente. 81

Rendimento: 1,65 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 408,1/410,1 (1:1) . (c) . terc-Butil-metil-amida do ácido l-bromo-9-isopropoxi-8-metoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma solução aquosa de NaOH (8 ml, 2N) foi adicionada a uma solução do produto do Exemplo 37b (1,6 g) em etanol (50 ml). Depois de agitar durante 4 horas a 70 °C, a mistura de reacção foi concentrada a um pequeno volume, diluída com acetato de etilo e lavada com uma solução aquosa de HC1 (2N) e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. Este resíduo foi dissolvido em DMF (10 ml) e foi adicionado HATU (2,1 g) , N-metil-N-terc-butilamina (3,4 ml) e DIPEA (3,1 ml). Depois de agitar durante 18 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi deitada numa solução aquosa saturada de NH4C1, e os sólidos foram recolhidos por filtração e lavados com água. Os sólidos foram recolhidos em acetato de etilo, secos (MgS04) , filtrados e concentrados a vácuo.

Rendimento: 1,76 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 409,1/412,1 (1:1); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 234, 0 nM. (d) . terc-Butilmetilamida do ácido l-ciano-9-isopropoxi-8-metoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3- carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 37c (485 mg), iodeto de cobre(I) (21 mg), sim-dimetiletilenodiamina (236 μΐ) e cianeto de cobre(I) (197 mg) em NMP (10 ml), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas durante 20 minutos a 200 °C. A mistura de reacção foi diluída com água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado/NH4Cl aquoso saturado (1:1), seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1/0 —» 1/1 (v/v)] como eluente. 82

Rendimento: 326 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 330,1; HPLC analítica: Rt = 15,88 minutos (método 7); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 67, 1 nM.

Exemplo 38 _terc-Butil-metil-amida do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi- 1-(lH-tetrazol-5-il)-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1 — a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 37d (22,5 mg) e azidotributilestanho (20 μΐ) em xileno (200 μΐ) foi agitada a 110 °C durante 44 horas. A mistura de reacção foi purificada por cromatografia directamente sobre sílica, com heptano/acetato de etilo [1/0 —» 6/4 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 9,6 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 439,3; HPLC analítica: Rt= 11,49 minutos (método 10); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 1,640, 0 nM.

42. R = H 43. R"Mb

Exemplo 39 83 terc-Butil-metil-amida do ácido 2-formil-9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2, 1-a] isoquinolino-3-carboxílico (a) . 2-(3,3-Dietoxiprop-l -inil)-tiofeno A uma solução de dietilacetal de propargilaldeído (405 mg) em diisopropilamina (8 ml), foi adicionado 2- iodotiofeno (1,2 g) e acetato de cobre(II) mono-hidratado (66,4 mg). A suspensão foi lavada a jacto com uma corrente de N2. Foi adicionado Pd(PPh3)4 (75 mg), e a mistura de reacção foi lavada a jacto com azoto novamente. A suspensão foi agitada durante uma hora a 55 °C. Formou-se um precipitado e foi necessário diluir a mistura de reacção com diisopropilamina (6 ml) para manter a agitação. A mistura de reacção foi filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1/0 —> 17/3 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 680 mg. (b) . Éster etílico do ácido 2-formil-9-isopropoxi-8-metoxi-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3- carboxílico

Uma mistura do produto do exemplo lg (300 mg) e o produto do Exemplo 39a (350 mg) em anidrido acético (6,5 ml), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas durante 12 minutos a 140 °C. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1/0 —> 3/2 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 283 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 440,2. (c) . Ácido 2-formil-9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico (sal de sódio)

Uma solução aquosa de NaOH (5 ml, 2 N) foi adicionada a uma solução do produto do Exemplo 39b (220 mg) em etanol (10 ml) . Depois de agitar durante 2 horas a 60 °C, a mistura de reacção foi concentrada a vácuo. 84

Rendimento: 216 mg. (d). terc-Butil-metil-amida do ácido 2-formil-9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico HATU (103 mg), N-met il-N- terc-but ilamina (125 μΐ) e DIPEA (182 μΐ) foram adicionados a uma solução do produto do Exemplo 39c (86 mg) em NMP (5 ml) . Depois de agitar durante 3 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi deitada em água e extraída com acetato de etilo (2x) . As camadas orgânicas foram combinadas, secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo.

Rendimento: 45 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 481,2; HPLC

analítica: Rt = 16,90 minutos (método 7); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 2,7 nM.

Exemplo 40 _terc-Butil-metil-amida do ácido 2-hidroximetil-9- isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Borohidreto de sódio (3,6 mg) foi adicionado a uma solução do produto do Exemplo 39d (38 mg) em metanol (5 ml). Depois de agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, adicionou-se uma quantidade adicional de borohidreto de sódio (3,6 mg) e a reacção foi agitada durante 18 horas a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo e purificada por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1/0 —> 1/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 27 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 482,3; HPLC

analítica: R, = 14,77 minutos (método 7); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 8,8 nM.

Exemplo 41 terc-Butilmetilamida do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-2- metoximetil-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico 85

Uma mistura do produto do Exemplo 40 (20 mg), hidreto de sódio (3,3 mg, dispersão a 60 % em óleo) e iodometano (13 μΐ) em THF (2,5 ml), foi agitada durante 18 horas a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi deitada em água e extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas foram combinadas, secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1/0 —> 1/1 (v/v) ] como eluente.

Rendimento: 12 mg. LC-MS: [M+H]+ = 497,3; HPLC analítica: 20,40 minutos (método 7); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 2,8 nM.

Exemplo 42 terc-Butil-metil-amida do ácido 2-(hidroxiiminometil)-9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 39d (74 mg) e hidroxilamina cloridrato (21,5 mg) em piridina (1,5 ml) foi agitada durante 18 horas a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com água e salmoura. As camadas orgânicas foram combinadas, secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1/0 —> 3/7 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 40 mg. MS: [M+H]+ = 496,3; HPLC analítica 15,33 minutos (método 7); hFSHRago (CHO luc) EC50 =1,2 nM. Exemplo 43 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-2-(metoxiiminometil)-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico A formação de metoxima do produto do Exemplo 39d (76 mg) com cloridrato de o-metilhidroxilamina (26,4 mg), foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 42. 86 86 [M+H]+ = 452,1; HPLC hFSHRago (CHO luc) EC50

Rendimento: 60 mg. MS-ESI: analítica 22,60 minutos (método 7); = 4,3 nM.

I

1f 0

0

Exemplo 44 2-(4-Ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepan-l-il)-1-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-il)-etanona (a) . Ácido_2-formil-7-isopropoxi-6-metoxi-l, 2,3,4- tetrahidroisoquinolino-l-carboxílico

Anidrido acético (8,9 ml) foi adicionado gota a gota a uma solução arrefecida do produto do exemplo lf (5 g) dissolvido em ácido fórmico (35,5 ml) a 5 °C. A mistura de reacção foi diluída com água gelada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com diclorometano/metanol [95/5 (v/v)] como eluente. Rendimento: 2,28 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 294,3. (b) . 9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolina

Uma mistura do produto do Exemplo 44a (400 mg) e 2-

etiniltiofeno (134 μΐ) em tetrahidrofurano/anidrido acético = 1:1 (v/v) (10 ml), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 140 °C durante 15 minutos. A 87 mistura de reacção foi neutralizada com uma solução aquosa saturada de NaHCC>3 e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [7/3 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 209 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+= 340,2. (c) . 2-Bromo-l-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5, 6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-etanona

Brometo de bromoacetilo (902 μΐ) foi adicionado gota a gota a uma mistura com agitação do produto do Exemplo 44b (1,17 g) em dioxano (50 ml). Depois de uma hora, a mistura de reacção foi extinta com uma solução aquosa saturada de NaHC03, e lavada com água e salmoura. As camadas orgânicas foram combinadas, secas (Na2S04) , filtradas e concentradas a vácuo.

Rendimento: 209 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 460,0/462,0. (d) . 2-(4-Ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepan-l-il)-1-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-etanona

Uma mistura do produto do Exemplo 44c (105 mg), DIPEA (200 μΐ) e o produto do Exemplo 7b (125 mg) em THF (4 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi lavada com água e salmoura. As camadas orgânicas foram combinadas, secas (Na2S04) , filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (10 -» 100 % de acetonitrilo, 0,1 % de TFA; sistema 1).

Rendimento: 15 mg (como sal de TFA). LC/MS-ESI: [M+H]+ = 562,3; HPLC analítica: R, = 13,47 (Método 2); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 1120,0 nM.

45

Exemplo 45 1-(9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6,6a,10a-tetrahidro-pirrolo[2,1-(3]isoguinolino-3-il)-3,3-dimetilbutan-l-ona

Uma mistura do produto do Exemplo 44b (100 mg), cloreto de 3,3- dimetilbutirilo (102 μΐ) e AICI3 (quantidade catalítica) em dioxano (4 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 64 horas. A mistura de reacção foi deitada em água gelada e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e solução salina e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (30—> 100 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 56 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 438,1; HPLC analítica: Rt = 27,07 (Método 3); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 65,1 nM.

Exemplo 4 6

Ciclopentil-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il- 5,6,6a,lOa-tetrahidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)- metanona

Uma mistura do produto do Exemplo 44b (100 mg), cloreto de ciclopentanocarbonilo (90 μΐ) e A1C13 (40 mg) em dioxano (4 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi deitada em água gelada e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura. As camadas orgânicas foram combinadas, secas (Na2S04) , filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (30 —»100 % de acetonitrilo; sistema 1). 89

Rendimento: 29 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 436,1; HPLC analítica: Rt = 26,71 (Método 3); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 78,2 nM.

Exemplo 47 2-Pimetilamino-1-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-propan-l-ona (a) . 2-Bromo-l -(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1 - a] isoquinolino-3-il)-propan-l-ona

Brometo de 2-bromopropionilo (0,625 ml) foi adicionado gota a gota a uma solução do produto do Exemplo 44b (500 mg) em dioxano (20 ml). Depois de agitar durante 18 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi deitada em água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgSCh) r filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 700 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 474/476. (b) . 2-Dimetilamino-1-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-il)-propan-1-ona

Uma mistura do produto do Exemplo 47a (50 mg) e dimetilamina (0,133 ml, a 40 % em peso em água) foi agitada durante uma hora a 60 °C. A mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com uma solução aquosa saturada de NaHC03. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (10 % —> 90 % de acetonitrilo, 0,1 % de TF A; sistema 1). 90

Rendimento: 20 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 439,1; hFSHRago (CHO luc) EC5o = 149,0 nM.

Exemplo 48 1- (9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-il)-2- morfolin-4-il-propan-l-ona A substituição do bromo no produto do Exemplo 47a (68 mg) com morfolina (38 μΐ) foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 47b.

Rendimento: 32 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 481,3; HPLC analítica: Rt = 18,64 (método 4); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 89,4 nM.

Exemplo 4 9 2- (4-Acetil-[1,4]diazepan-l-il)-1-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-propan-l-ona A substituição do bromo no produto do Exemplo 47a (75 mg) com 1- [ 1,4]diazepan-l-il-etanona (0,106 ml) foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 47b.

Rendimento: 28 mg. MS-ESI: [M+H]+= 536,5; HPLC analítica: Rt = 18,37 (método 4); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 200,0 nM.

Exemplo 50 1-Ciclopentil-9-isopropoxi-8-metoxi-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-terc-butilamida O produto do exemplo lg (270 mg) e etinilciclopentano (100 mg) foram submetidos a condições similares às descritas no Exemplo 1, para proporcionar o ácido 1-ciclopentil-9-isopropoxi-8-metoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1— a]isoquinolino-3-carboxílico. 0 ácido (18 mg) foi tratado com t-butilamina sob condições padrão de acoplamento de 91 amida com HATU como foi descrito no Exemplo lj. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [0 —» 100 % de isopropilamina (v/v)] como eluente.

Rendimento: 19 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 425; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 220, 0 nM.

Exemplo 51 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-isopropilamino-8-metoxi-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico (a). Éster etílico do ácido 9-hidroxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]Isoguinolino-3-carboxílico

Tricloreto de boro (100 ml) foi adicionado gota a gota a uma solução do produto do exemplo lh (51,2 g) em diclorometano (400 ml) a 0 °C. A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura de reacção foi deitada em água e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgSCh) e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [30 —» 50 % (v/v)] como eluente.

Rendimento: 44,3 g. 92 (b) . Éster etílico do ácido 8-metoxi-l-tiofeno-2-il-9-trifluorometanosulfonil-oxi-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1-a] isoguinolino-3 -carboxílico

Anidrido trifluorometanossulfónico (982 μΐ) foi adicionado gota a gota a uma solução do produto do Exemplo 51a (716 mg) em piridina (5 ml) a 0 °C. A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi diluida com acetato de etilo e lavada com uma solução aquosa de HC1 (1 N) . A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 875 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 502,1. (c) . Ester etílico do ácido 9-isopropilamino-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 51b (100 mg), isopropilamina (42 μΐ) , tris(dibencilidenacetona)dipaládio(0) (5 mg), fosfato de potássio tribásico (130 mg) e 2-(di- t-butilfosfino)bifenilo (10 mg), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 150 °C durante uma hora. A mistura de reacção foi filtrada e o filtrado foi concentrado a vácuo. O resíduo foi submetido a cromatografia em sílica gel com heptano/acetato de etilo [1/1 (v/v)].

Rendimento: 73 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+= 411,1. (d) . Ácido 9-isopropilamino-8-metoxi-l -tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1 - a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 51c (73 mg) e KOH (excesso) em metanol/água [1/1 (2 ml)] foi agitada a refluxo durante uma hora. A mistura de reacção foi deitada em água, acidificada com solução aquosa de ácido cítrico (1M) e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 93

Rendimento: 58 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 383,2. (e) . terc-Butil-metil-amida do ácido 9-isopropilamino-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 5 Id (58 mg), DIPEA (79 μΐ) , HATU (86 mg) e N-metil-N-terc-butilamina (187 μΐ) em diclorometano (3 ml), foi agitada a 40 °C durante 18 horas. A mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com água. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (0 —» 90 % de acetonitrilo; sistema D ·

Rendimento: 29,7 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 452,3; HPLC analítica: Rt = 6,99 minutos (método 10); hFSHRago (CHO luc) EC5q - 4,2 nM.

Exemplo 52 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-hidroxi-8-metoxi-l tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoguinolino-3-carboxílico

Cloreto de etilmagnésio (50,8 ml, 2M em THF) foi adicionado a uma solução de N-metil-N-terc-butilamina (13,4 ml) em THF seco (250 ml). A mistura de reacção foi agitada 94 a 65 °C durante uma hora. Uma solução do produto do Exemplo 51a (7,5 g) em THF seco (100 ml) foi adicionada gota a gota à mistura de reacção. A mistura de reacção foi aquecida a refluxo durante uma hora. A mistura de reacção foi extinta com uma solução aquosa saturada de NH4C1 e extraida com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi cristalizado em éter.

Rendimento: 6,2 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 411,2; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 356,0 nM.

Exemplo 53 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(4-acetilpiperazin-l-il)- 8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5, 6-di-hidro-_pirrolo [2,1- a]isoquinolino-3-carboxílico (a) . 3-(terc-Butilmetilcarbamoil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-9-il éster do ácido trif1uorometanossulfónico A síntese de 3-(terc-butilmetilcarbamoil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo[2,1-a]isoquinolino-9-il éster do ácido trifluorometanossulfónico 53a foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 51b, partindo do composto 52 (6,2 g).

Rendimento: 7,45 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 543,1. (b) . terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(4-acetilpiperazin-1-il)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2, 1- a]isoquinolino-3-carboxílico A reacção do produto do Exemplo 53a (100 mg) com 1- acetilpiperazina (60 mg) foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 51 c.

Rendimento: 22 mg. MS-ESI [M+H]+ = 521,5; HPLC analítica: R, = 8,71 minutos (método 10); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 678,0 nM.

Exemplo 54 95 terc-Butil-metil-amida_do_ácido_8-metoxi-9- ( 4- metilpiperazin-l-il)-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico A substituição da fracção triflato no produto do Exemplo 53a (100 mg) com 1-metilpiperazina (46 mg), foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 51c.

Rendimento: 38 mg. MS-ESI [M+H]+ = 493,5; HPLC

analítica: R, - 27,45 minutos (método 12); hFSHRago (CHO luc) ECSo = 455, 0 nM.

Exemplo 55 terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-(ltf-pirazol-4-il)-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma solução do produto do Exemplo 53a (25,5 mg) em DME (2 ml) foi agitada introduzindo azoto. Foi adicionado Pd(PPh3)4 (0,5 mg) e a solução foi agitada introduzindo azoto novamente. Em seguida, foi adicionado K2C03 (25,5 mg), pinacol éster do ácido lH-pirazol-4-borónico (26,8 mg) e água (200 μΐ) . A mistura de reacção foi agitada a 90 °C durante 18 horas. A mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com água. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (0 —> 90 % de acetonitrilo, 0,1 % de TFA; sistema 1).

Rendimento: 10 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 561,2; HPLC analítica: Rt = 36,38 minutos (método 12); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 1,1 nM.

Exemplo 56 terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-morfolin-4-il-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico A substituição do produto do Exemplo 53a (274 mg) com morfolina (110 μΐ) foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 51c. 96

Rendimento: 65 mg. LC/MS-ESI [M+H]+= 480,3; HPLC

analítica: R, = 12,89 minutos (método 10); hFSHRago (CHO luc) EC5q = 15,7 nM.

Exemplo 57 terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-morfolin-4-il-l-piridin-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico, ácido trifluoroacético (a) . Éster etílico do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-l-piridin-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico A síntese do éster etílico do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-l-piridin-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1— a]isoquinolino-3-carboxílico (57a) foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo 35a, partindo do composto lf (1,5 g) e 3-etinilpiridina.

Rendimento: 2,08 g. MS-ESI: [M+H]+ = 407,4. (b) . Éster etílico do ácido 9-hidroxi-8-metoxi-l-piridin-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-3-carboxílico A síntese do éster etílico do ácido 9-hidroxi-8-metoxi-l-piridin-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1— a]isoquinolino-3-carboxílico (57b) foi conseguida de acordo 97 com o método descrito para o Exemplo 51a, partindo do composto 57a (634 mg).

Rendimento: 613 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 365,2. (c) . Éster etílico do ácido 8-metoxi-l-piridin-3-il-9- trifluorometanosulfonil-oxi-5,6-di-hidro-_pirrolo[2,1- a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 57b (220 mg), CS2CO3 (787 mg) e 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N- [(trifluorometil)sulfonil]metanossulfonamida (647 mg) em DMF (10 ml), foi agitada a 80 °C durante 2 horas. A temperatura ambiente, a mistura de reacção foi deitada em água e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1:1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 140 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 497,1. (d) . Éster etílico do ácido 8-metoxi-9-morfolin-4-il-l-piridin-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 57c (140 mg), morfolina (61 μΐ), 2- (di-t-butilfosfino)bifenilo (quantidade catalítica), fosfato de potássio tribásico (180 mg) e tris(dibencilidenacetona)dipaládio(0 ) (quantidade catalítica) em DME (1 ml), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 150 °C durante uma hora. A temperatura ambiente, a mistura de reacção foi filtrada e o resíduo foi lavado com diclorometano. 0 filtrado foi concentrado a vácuo e purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1:3 —> 0:1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 101 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+= 434,4. (e) . Ácido 8-metoxi-9-morfolin-4-il-l-piridin-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoguinolina- 3-carboxílico 98

Uma mistura do produto do Exemplo 57d (101 mg) e KOH sólido em etanol (3 ml) e água (3 ml), foi agitada a 78 °C durante uma hora. A temperatura ambiente, a mistura de reacção foi acidificada com uma solução aquosa de ácido cítrico (0,5 M) até pH = 5-6, e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 92 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+= 406,1. (f) . terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-morfolin-4-il-l-piridin-3-iI-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico, ácido trifiuoroacético HATU (129 mg) foi adicionado a uma solução do produto do Exemplo 57e (92 mg), DIPEA (198 μΐ) e N-metil-N-terc- butilamina (54 μΐ) em diclorometano (5 ml) . Depois de agitar a temperatura ambiente durante 24 horas, a mistura de reacção foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 residuo foi purificado por HPLC preparativa (0 —> 100 % de acetonitrilo; 0,1 % de TFA; sistema 1).

Rendimento: 46 mg. HPLC analítica: Rt = 17,90 minutos (método 12); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 276 nM.

Exemplo 58 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-isobutil-8-metoxi-l- tiofeno-2-il-5,6-di-hidropirrolo[2,1-a]-isoguinolino-3-carboxílico e te-rc-Butilmetilamida do ácido 8-metoxi-9-(2-metilpropenil)-1-_tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico 99 (a) . 2, 4,6-Tris-(2-metilpropenil)-ciclotriboroxanopiridina

Brometo de 2-metil-l-propenilmagnésio em THF (536 ml, 0,5 M) foi adicionado gota a gota a uma solução de borato de trimetilo (54 ml) em THF (320 ml) a - 70 °C. A mistura de reacção foi agitada a -70 °C durante 30 minutos. Uma solução aquosa de HC1 (2 N) foi adicionada à mistura de reacção, e a mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante uma hora. 0 pH foi ajustado a 4 com uma solução aquosa de HC1 (2 N) . A mistura de reacção foi extraída com éter e lavada com solução salina. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em piridina (80 ml) e agitado durante a noite a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo e a piridina residual foi retirada por co-evaporação com tolueno. O resíduo foi seco a temperatura ambiente a vácuo (3 mm) durante uma hora.

Rendimento: 27,5 g. (b) . terc-Butil-metil-amida do ácido_8-metoxi-9- (2- metilpropenil)-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- ã]isoquinolino-3-carboxílico

Uma solução do produto do Exemplo 53a (5,39 g) em DME (150 ml) foi agitada introduzindo azoto durante 2 minutos. Foi adicionado Pd(PPh3)4 (585 mg) e a solução foi agitada introduzindo azoto (g) novamente durante 2 minutos, seguido pela adição do produto do Exemplo 58a (4,98 g), K2CO3 (2 g) e água (30 ml) . A reacção foi agitada a 90 °C sob azoto durante a noite. A mistura de reacção foi deitada em água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel com heptano/acetato de etilo [0 —> 50 % (v/v)].

Rendimento: 3 g. LC/MS-ESI [M+H]+: 449,2; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 0,7 nM. 100 (c). terc-Butil-metil-amida do ácido 9-isobutil-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Paládio a 10 % em carbono (20 mg) foi adicionado a uma solução do produto do Exemplo 58b (40 mg) em acetato de etilo (4 ml) e metanol (4 ml) . A mistura de reacção foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio a temperatura ambiente durante 8 horas. A mistura de reacção foi filtrada e lavada com acetato de etilo, e o filtrado foi concentrado a vácuo.

Rendimento: 37 mg. LC/MS-ESI [M+H]+: 451,2; HPLC analítica: R, = 31,03 minutos (método 10); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 4,3 nM.

Exemplo 59 terc-Butilmetilamida do ácido 8-metoxi-9-(2-metilpropenil)-l-tiazol-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico (a). 2-Trimetilsilaniletiniltiazol A 50 °C, 2-bromotiazol (3 ml, destilado recentemente) foi adicionado a uma solução de Pd(PPh3)4 (462 mg), Cu(0Ac)2 (429 mg) e etiniltrimetilsilano (10,5 ml) em diisopropilamina (200 ml, agitada introduzindo azoto). 101

Depois de agitar durante 2 horas a 50 °C, a mistura de reacção foi filtrada sobre decalite e lavada com acetato de etilo. O filtrado foi concentrado a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com tolueno/acetato de etilo [9/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 1,1 g. LC/MS-ESI: [M+H]+= 182,1. (b) . 2-Etiniltiazol

Uma solução aquosa de KOH (0,5 ml, 0,1 N) foi adicionada a uma solução do produto do Exemplo 59a (1,1 g) em metanol (5 ml) . Depois de agitar durante 3 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi concentrada a um pequeno volume. O resíduo foi diluído com diclorometano e lavado com água. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 650 mg. (c) . Éster etílico do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiazol-2-Í1-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 59b (650 mg) e o produto do exemplo lg (1,46 g) em anidrido acético (10 ml), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas durante 15 minutos a 140 °C. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica, com heptano/acetato de etilo [9/1 —> 7/3 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 580 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 413,1. (d) . Éster etílico do ácido 9-hidroxi-8-metoxi-l-tiazol-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico A 0 °C, tricloreto de boro (2,52 ml) foi adicionado gota a gota a uma solução do produto do Exemplo 59c (520 mg) em diclorometano (12 ml). Depois de agitar durante 30 minutos a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 478 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 371,2. 102 (e) . Éster etílico do ácido 8-metoxi-l-tiazol-2-il-9- trifluorometanosulfonil-oxi-5,6-di-hidro-_pirrolo[2,1- a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura de 1, 1, 1-trif luoro-iV-fenil-N- [(trifluorometil)sulfonil]-metano-sulfonamida (901 mg),

Cs2C03 (822 mg) e o produto do Exemplo 59d (467 mg) em DMF (25 ml), foi agitada durante 2 horas a 80 °C. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica, com heptano/acetato de etilo [7/3 —> 3/2 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 601 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 503,2. (f) . Éster etílico do ácido 8-metoxi-9-(2-metilpropenil)-1-tiazol-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura de Pd(PPh3)4 (11 mg), K2C03 (60 mg), o produto do Exemplo 58a (194 mg) e o produto do Exemplo 59e (200 mg) em DME (3 ml, agitada introduzindo azoto) foi agitada durante 18 horas a 90 °C. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica, com heptano/acetato de etilo [7/3 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 127 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 409,2. (g) . Ácido 8-metoxi-9-(2-metilpropenil)-l-tiazol-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma solução aquosa de NaOH (4 ml, IN) foi adicionada a uma solução do produto do Exemplo 59f (127 mg) em etanol (8 ml). Depois de agitar durante 2 horas a 60 °C, a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com uma solução aquosa de ácido cítrico (2 M) , água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vacuo. 103

Rendimento: 117 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 381,3. (h). terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-(2- metilpropenil)-1-tiazol-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a] isoguinolino-3-carboxílico HATU (175 mg), N-met il-N-terc-but ilamina (55 μΐ) e DIPEA (0,286 ml) foram adicionados a uma solução do produto do Exemplo 59g (117 mg) em DMF (5 ml). Depois de agitar durante 18 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com água, uma solução aquosa de HC1 (2 N), água, uma solução aquosa saturada de NaHCCg e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (10 % —» 90 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 63 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 450,3; HPLC analítica: Rt = 20,41 minutos (método 10); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 2,6 nM.

Exemplo 60 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-isobutil-8-metoxi-l-tiazol-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 59h (55 mg) e paládio em carbono activado (6 mg) foi agitada durante 18 horas sob uma atmosfera de hidrogénio num aparelho Parr. A mistura de reacção foi filtrada sobre decalite e lavada com acetato de etilo. 0 filtrado foi concentrado a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (10 % —> 90 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 50 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 452,3; HPLC

analítica: Rt = 22,92 minutos (método 5); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 19,0 nM. 104

Exemplo 61 terc-Butil-metil-amida do ácido 8-hidroxi-9-isobutil-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico (a). Éster etílico do ácido 8-metoxi-9-(2-metilpropenil)-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma solução do produto do Exemplo 51b (0,7 g) em DME (20 ml) foi agitada introduzindo azoto durante 5 minutos. Foi adicionado Pd(PPh3)4 (82 mg). A solução foi agitada introduzindo azoto novamente durante 1 minuto, seguido pela adição do produto do Exemplo 58a (0,7 g) , K2CO3 (0,3 g) e água (4 ml). A reacção foi agitada a 90 °C durante 2 horas. Em seguida, adicionou-se uma quantidade adicional do produto do Exemplo 58a (200 mg) . A mistura de reacção foi agitada durante 18 horas a 85 °C. A mistura de reacção foi deitada em água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel com heptano/acetato de etilo [0 —> 40 % (v/v)).

Rendimento: 519 mg. LC/MS-ESI [M+H]+= 408,2. (b) . Éster etílico do ácido 8-metoxi-9-(2-metilpropenil)-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Paládio a 10 % em carbono (25 mg) foi adicionado a uma solução do produto do Exemplo 61a (155 mg) em acetato de 105 etilo (4 ml) e metanol (4 ml) . A mistura de reacção foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio (pressão de 3,2 bar [320 kPa]) a temperatura ambiente durante 48 horas. A mistura de reacção foi filtrada e lavada com acetato de etilo, e o filtrado foi concentrado a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel com heptano/acetato de etilo [0 —>40 % (v/v)].

Rendimento: 102 mg. (c) . Éster etílico do ácido 8-hidroxi-9-isobutil-l-tiofeno-2-Í1-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Tribrometo de boro (118 μΐ) foi adicionado a -20 °C a uma solução do produto do Exemplo 61b (100 mg) em diclorometano (3 ml). A mistura foi agitada durante 3 horas a -20 °C. A mistura de reacção foi aquecida até temperatura ambiente, extinta com metanol e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel com heptano/acetato de etilo [0 —» 50 % (v/v)].

Rendimento: 48 mg. (d) . terc-Butil-metil-amida do ácido 8-hidroxi-9-isobutil-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Cloreto de etilmagnésio (419 μΐ, a 25 % em peso em THF) foi adicionado lentamente a uma solução de N-metil-N-terc-butilamina (146 μΐ) em THF (5 ml) . Depois de agitar durante uma hora a 75 °C, foi adicionado gota a gota o produto do Exemplo 61c (48 mg) dissolvido em THF (2 ml) . Depois de submeter a mesma a refluxo durante uma hora, a mistura de reacção arrefecida foi deitada numa solução aquosa saturada de NH4C1 e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (20 % —> 100 % de acetonitrilo; sistema 1). -> 100 106

Rendimento: 32 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 437,2; HPLC

analítica: Rt = 23,06 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 5,2 nM.

Exemplo 62 N- [3-(2,2-Dimetil-pirrolidina-l-carbonil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-9-il]-isobutiramida (a) . Ester etílico do ácido 9-isobutirilamino-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 51b (1 g) , isobutiramida (347 mg), Cs2C03 (1,9 g) , 4,5- bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (196 mg) e Pd2(dba)3 (310 mg) em dioxano (15 ml, agitado introduzindo azoto) foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas durante uma hora a 150 °C. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgSCq) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [100/0 -» 7/3 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 460 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 439,2. (b) . Ácido 9-isobutirilamino-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico KOH (588 mg) foi adicionado a uma solução do produto do Exemplo 62a (460 mg) em etanol/água (24 ml, 2/1 (v/v)).

Depois de agitar durante 1,5 hora a 80 °C, a mistura de

reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com uma solução aquosa de ácido cítrico (a 10 %) e salmoura. A 107 camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vacuo

Rendimento: 462 mg. (c) . N- [3-(2,2-Dimetil-pirrolidina-l-carbonil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-9-il]-isobutiramida HATU (66 mg), 2,2-dimet ilpirrolidina (50 mg) e DIPEA (0,120 ml) foram adicionados a uma solução do produto do Exemplo 62b (30 mg) em diclorometano (3 ml) . Depois de agitar durante 18 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com uma solução aquosa de ácido cítrico (a 10 %) e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (0 —> 100 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 17 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 492,3; HPLC analítica: Rt = 17,90 minutos (método 10); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 3,7 nM.

Exemplo 63 Éster etílico do ácido [3-(terc-butilmetilcarbamoil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-9-il-oxi]-acético

Uma mistura do produto do Exemplo 52 (250 mg), éster etílico do ácido bromoacético (81 μΐ) e CS2CO3 (595 mg) em DMF (10 ml), foi agitada a 90 °C durante uma hora. Deixou-se arrefecer a mistura de reacção até temperatura ambiente, e em seguida foi deitada em água e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com uma solução 108 aquosa de HC1 (0,5 M) e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 270 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 497,1; LC/MS Rt - 4,60 minutos; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 252,0 nM.

Exemplo 64 terc-But il-met il-amida_do_ácido_8-metoxi-9- metilcarbamoilmetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico (a) ._Ácido_[3 - (terc-butilmetilcarbamoil) -8-metoxi-l- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-9-il-oxi]-acético

Uma mistura do produto do Exemplo 63 (150 mg) e KOH

sólido (51 mg) em etanol (5 ml) e água (5 ml) foi agitada a 78 °C durante uma hora. A temperatura ambiente, a mistura de reacção foi acidificada com uma solução aquosa de HC1 (1,0 M) até pH = 1-2, e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 119 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+= 469,0. (b) ._terc-But il-met il-amida_do_ácido_8-metoxi-9- metilcarbamoilmetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 64a (50 mg), DIPEA (93 μΐ) , HATU (61 mg) e cloridrato de metilamina (5,3 mg) em diclorometano (3 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi diluída com diclorometano, lavada com uma solução aquosa de HC1 (0,5 M) e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (20 —» 100 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 28 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 482,5; HPLC

analítica: Rt = 11,73 minutos (método 7); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 3,1 nM. 109

es 67 ea

Exemplo 65 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-azidoetoxi)-8-metoxi-l -tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico, terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-[2-(tetrahidropirano-2-il-oxi)-etoxi]-1-tiofeno-2-il-5, 6- di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico,_terc-

But ilmet il-amida do ácido 9-(2-hidroxi-etoxi)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico e éster 2-[3-(terc-Butilmetilcarbamoil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-9-il-oxi]-etílico do ácido metanossulfónico (a) ._Éster_etílico_do_ácido_8-metoxi-9- [2- (tetrahidropirano-2-il-oxi)-etoxi]-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 51a (600 mg), CS2CO3 (1,32 g) e 2-(2- bromoetoxi)-tetrahidropirano (294 μΐ) em DMF (15 ml) foi agitada a 100 °C durante 4 horas. A temperatura ambiente, a mistura de reacção foi deitada em água e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por 110 cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1:1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 731 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 498,3. (b) . Ácido_8-metoxi-9-[2-(tetrahidropirano-2-il-oxi)- etoxi]-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 65a (731 mg) e KOH sólido (250 mg) em etanol (10 ml) e água (10 ml) foi agitada a 78 °C durante 2 horas. A temperatura ambiente, a mistura de reacção foi acidificada com uma solução aquosa de ácido cítrico (2 M) até pH = 5-6, e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 682 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 468,1. (c) . terc-Butil-metil-amida do_ácido_8-metoxi-9- [2- (tetrahidropirano-2-il-oxi)-etoxi]-1- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 65b (682 mg), DIPEA (1,27 ml), N- metil-N-terc-butilamina (348 μΐ) e HATU (827 mg) em diclorometano (10 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi lavada com uma solução aquosa saturada de NaHC03 e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1:1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 726 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 539,5; hFSHRago (CHO luc) EC5o = 102,0 nM. (d) . terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-hidroxi-etoxi)-8- metoxi-l-tiof eno-2-il-5, 6-di-hidro-_pirrolo [2,1- a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma solução aquosa de HC1 (2 ml, 5 M) foi adicionada gota a gota a uma mistura do produto do Exemplo 65c (716 mg) em metanol (50 ml) . Depois de agitar a temperatura ambiente durante uma hora, a mistura de reacção foi deitada numa solução aquosa saturada de NaHCCq e extraída com 111 diclorometano. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1:2 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 414 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 455,0; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 1,3 nM. (e) . Éster_2-[3-(terc-Butilmetilcarbamoil)-8-metoxi-l- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-9-il-oxi]-etílico do ácido metanossulfónico

Cloreto de metanosulfonilo (85 μΐ) foi adicionado gota a gota a uma mistura do produto do Exemplo 65d (414 mg) e trietilamina (380 μΐ) em diclorometano (25 ml).

Depois de agitar a temperatura ambiente durante uma hora, a mistura de reacção foi lavada com uma solução aquosa saturada de NaHCCh e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1:2 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 465 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 533,0; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 15 nM. (f) . terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-azidoetoxi)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidropirrolo-[2,1- a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 65e (250 mg) e azida de sódio (92 mg) em DMF (15 ml), foi agitada a 90 °C durante uma hora. A temperatura ambiente, a mistura de reacção foi deitada em água e extraída duas vezes com diclorometano. A camada orgânica foi lavada duas vezes com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1:1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 210 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 480,0; HPLC analítica: Rt = 24,73 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 7,1 nM.

Exemplo 66 112 _Éster_metí lico_do_ácido_{ 2- [3- (terc- butilmetilcarbamoil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1-a]isoquinolino-9-il-oxi]-etil}-carbâmico (a) . terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-aminoetoxi)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1- a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 65f (210 mg), trifenilfosfina unida a polímero (290 mg; carga 3 mmoles/g de resina) e água (1 ml) em THF (5 ml) e diclorometano (5 ml), foi aquecida a refluxo durante 18 horas. A mistura de reacção foi filtrada e o resíduo foi lavado com diclorometano e metanol. 0 filtrado foi concentrado a vácuo, dissolvido em diclorometano, lavado com salmoura, seco (MgS04) , filtrado e concentrado a vácuo.

Rendimento: 197 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 454,1. (b) . Éster_meti lico_do_ácido_{ 2- [3- (terc- butilmetilcarbamoil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,l-a]isoquinolino-9-il-oxi]-etil}-carbâmico

Cloroformiato de metilo (15 μΐ) foi adicionado gota a gota a uma mistura do produto do Exemplo 66a (66 mg) e DIPEA (76 μΐ) em diclorometano (5 ml) . Depois de agitar a temperatura ambiente durante 18 horas, a mistura de reacção foi diluída com diclorometano, lavada com uma solução aquosa de HC1 (0,5 M) e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (20 —> 100 % de acetonitrilo; sistema 1) .

Rendimento: 42 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 512,5; HPLC

analítica: Rt = 15,50 minutos (método 7); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 31,3 nM.

Exemplo 67 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-acetilaminoetoxi)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Cloreto de acetilo (13 μΐ) foi adicionado gota a gota a uma mistura do produto do Exemplo 66a (66 mg) e DIPEA (76 113 μΐ) em diclorometano (5 ml). Depois de agitar a temperatura ambiente durante 18 horas, a mistura de reacção foi diluida com diclorometano, lavada com uma solução aquosa de HC1 (0,5 M) e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (20 —> 100 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 49 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 496,3; HPLC

analítica: Rt = 10,67 minutos (método 7); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 36,5 nM.

Exemplo 68 te-rc-Butil-metil-amida_do_ácido_9- (2- metanosulfonilaminoetoxi)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Cloreto de metanosulfonilo (15 nO foi adicionado gota a gota a uma mistura do produto do Exemplo 66a (66 mg) e DIPEA (76 μΐ) em diclorometano (5 ml) . Depois de agitar a temperatura ambiente durante 18 horas, a mistura de reacção foi diluída com diclorometano, lavada com uma solução aquosa de HC1 (0,5 M) e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (20 —> 100 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 49 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 532,5; HPLC

analítica: R, = 13,94 minutos (método 7); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 16,0 nM.

exemplo 51a

Exemplo 69 terc-But il-met il-amida_do_ácido_8-metoxi-9- (tetrahidropirano-2-il-oxi)-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico 114 (a) . Éster etílico do ácido 8-metoxi-9-(tetrahidropirano-2- il-oxi) —1—tiofeno —2 —il —5,6-di-hidro-_pirrolo [2,1- a]isoquinolino-3-carboxílico A 0 °C, 2,3-di-hidropirano (50 μΐ) e p- toluenosulfonato de piridínio (quantidade catalítica) foram adicionados a uma solução do produto do Exemplo 51a (100 mg) em diclorometano (5 ml), e a mistura de reacção foi agitada a 40 °C durante 18 horas. A mistura de reacção foi diluída com diclorometano, lavada com uma solução aquosa saturada de NaHCCg e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1:1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 100 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 454,0. (b) . Ácido_8-metoxi-9- (tetrahidropirano-2-il-oxi) -1- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 69a (100 mg) e KOH sólido (37 mg) em etanol (4 ml) e água (4 ml), foi agitada a 78 °C durante 2 horas. A temperatura ambiente, a mistura de reacção foi acidificada até pH = 5 e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 100 mg. MS-ESI: [M+H]+= 426,3. (c) . terc-Butil-metil-amida_do_ácido_8-metoxi-9- (tetrahidropirano-2-il-oxi)-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico com

Uma mistura do produto do Exemplo 69b (100 mg), DIPEA (205 μΐ) , N- metil-N-terc-butilamina (56 μΐ) e HATU (134 mg) em diclorometano (5 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi lavada com uma solução aquosa saturada de NaHC03 e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, heptano/acetato de etilo [1:1 (v/v)] como eluente. 115

Rendimento: 85 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 495,5; HPLC analítica Rt: 23,59 minutos (método 7); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 6,9 nM. 115

Exemplo 7 0 terc-Butilmetilamida do ácido 9-(3-aminopropoxi)-8-metoxi- 1- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico, terc-Butilmetilamida do ácido 8-metoxi-9- [3-(tetrahidropirano-2-il-oxi)-propoxi]-1-tiofeno-2-il-5,6-di- hidro-pirrolo [2,1-a] isoquinolino-3-carboxílico,_terc-

Butilmetil-amida do ácido 9-(3-hidroxi-propoxi)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoguinolino-3- carboxílico,_éster_3- [3- (terc-Butilmetilcarbamoil) -8- metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- a] isoguinolino-9-il-oxi] -propílico_do_ácido metanossulfónico e terc-Butilmetilamida do ácido 9-(3- azidopropoxi) - 8-metoxi-1-tiofeno-2-il-_5, 6-di-hidro- pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico (a) Éster etílico do ácido 8-metoxi-9-[3-(tetrahidropirano- 2- il-oxi)-propoxi]-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 51a (1,31 g), K2CO3 (12,3 g) e 2-(l- bromo-3-propoxi)-tetrahidropirano (1,21 ml) em DMF (45 ml), foi agitada durante 2 horas a 60 °C e 116 18 horas a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi deitada em água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) r filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 1,83 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 512,1. (b) . Ácido_8-metoxi-9-[3-(tetrahidropirano-2-il-oxi)- propoxi]-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1- a]isoguinolino-3-carboxílico KOH (1 g) foi adicionado a uma solução do produto do Exemplo 70a (1,83 g) em etanol/água (60 ml, 1/1 (v/v) ) . Depois de agitar durante uma hora a 80 °C, a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com uma solução aquosa de ácido cítrico (a 10 %) e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 1,63 g. (c) . terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-[3-(tetrahidropirano-2-il-oxi)-propoxi]-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico HATU (1,93 g) , iV-metil-iV-terc-butilamina (2,02 ml) e DIPEA (2,79 ml) foram adicionados a uma solução do produto do Exemplo 70b (1,63 g) em DMF (20 ml) . Depois de agitar durante 2 horas a 50 °C, a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi separada, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1/0 —> 6/4 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 1,9 g. MS-ESI: [M+H]+ = 553,1; hFSHRago (CHO luc) EC5o = 155,0 nM. (d) . terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(3-hidroxi-propoxi)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 70c (1,83 g) e ácido p- toluenosulfónico monoidrato (942 mg) em metanol (30 ml), 117 foi agitada durante uma hora a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo, e lavada com uma solução aquosa saturada de NaHC03 e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [100/0 —>0/100 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 1,28 g. MS-ESI: [M+H]+ = 469,2; hFSHRago (CHO luc) EC5o = 1,3 nM. (e) . Éster_3-[3-(terc-butilmetilcarbamoil)-8-metoxi-l- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoguinolino-9-il-oxi]-propílico do ácido metanossulfónico

Cloreto de mesilo (0,99 ml) e trietilamina (0,443 ml) foram adicionados a uma solução do produto do Exemplo 70d (500 mg) em diclorometano (25 ml). Depois de agitar durante uma hora a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [100/0 —> 1/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 503 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 547,1. (f) . terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(3-azidopropoxi)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- a] isoguinolino-3-carboxílico

Azida de sódio (179 mg) foi adicionada a uma solução do produto do Exemplo 70e (503 mg) em DMF (25 ml) . Depois de agitar durante 2 horas a 90 °C, a mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 494,1; hFSHRago

Rendimento: 452 mg. MS-ESI: [M+H]+ = (CHO luc) EC50 = 10,9 nM. 118 (g). terc-Butilmetilamida do ácido 9-(3-aminopropoxi)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a] isoguinolino-3-carboxílico Água (3 ml) e trif enilf osf ina unida a polímero (613 mg; carga 3 mmoles/g de resina) foram adicionadas a uma solução do produto do Exemplo 70f (454 mg) em THF/diclorometano (30 ml, 1/1 (v/v)). Depois de agitar durante 18 horas a 40 °C, a mistura de reacção foi filtrada. 0 filtrado foi concentrado a vácuo.

Rendimento: 442 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 468,2; hFSHRago (CHO luc) EC50 =111,0 nM.

Exemplo 71 terc-Butil-metil-amida_do_ácido_8-metoxi-9 - (2- metilsulfaniletoxi)-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 65e (124 mg) e metilsulfureto de sódio (32 mg) em DMF (5 ml) foi agitada a 50 °C durante uma hora. A mistura de reacção foi deitada em água e extraída duas vezes com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1:2 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 97 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 485,2; HPLC analítica Rt = 22,30 minutos (método 7); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 26,3 nM.

Exemplo 72 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-metanosulfoniletoxi)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico 119

Uma mistura do produto do Exemplo 71 (30 mg) e ácido 3-cloroperbenzóico (45,8 mg) em diclorometano (3 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante uma hora. A mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (20 —» 100 % de acetonitrilo; sistema 1) .

Rendimento: 12 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 517,5; HPLC

analítica: Rt = 15,23 minutos (método 7); hFSHRago (CHO luc) = 16,9 nM.

EC50 I

u

Exemplo 7 3 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-dimetilaminoetoxi)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico, ácido trifluoroacético

Uma mistura do produto do Exemplo 52 (50 mg), Cs2C03 (120 mg) e (2- cloro-etil)-dimetilamina (20 mg) em DMF (5 ml), foi agitada a 100 °C durante 2 horas. Deixou-se que a mistura de reacção chegasse a temperatura ambiente e diluiu-se com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (0 —» 100 % de acetonitrilo; 0,1 % de TFA; sistema 1).

Rendimento: 42 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 482,5; HPLC

analítica: Rt = 11,98 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 118 nM. 120

Exemplo 7 4 N-terc-Butil—8—metoxi—9—(3-metoxifenoxi)-N-metil-1- (tiofeno-2-il)-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a] isoguinolino-3 - carboxamida (a) . 8-Metoxi-9-(3-metoxifenoxi)-1-(tiofeno-2-il)-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoguinolina- 3-carboxilato de etilo

Uma mistura do produto do Exemplo 51a (150 mg), ácido 3- metoxifenilborónico (140 mg), diclorometano (2,5 ml), Cu(OAc)2 (80 mg), piridina (250 Hl) e crivos moleculares de 4À (2 g), foi agitada a temperatura ambiente durante 24 horas. A mistura de reacção foi diluída com água, uma solução aquosa saturada de NH4CI e acetato de etilo. A mistura de reacção foi agitada durante 10 minutos, filtrada através de Hyflo e extraída com acetato de etilo. A solução orgânica foi concentrada a vácuo. O resíduo foi filtrado através de uma coluna curta de sílica, utilizando heptano/acetato de etilo como eluente.

Rendimento: 16 0 mg. TLC Rf - 0,55 (heptano/acetato de etilo 1/1); ΧΗ RMN (DMS0-d6) 3,70 (s, 3, OCH3) , 3,78 (s, 3, OCH3), 3,10 (t, 2, C(6)H2), 4,55 (t, 2, C(5)H2), 6,85 (s, 1, H(3)); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 476. (b) . Ácido_8-metoxi-9-(3-metoxifenoxi)-1-(tiofeno-2-il)- 5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 74a (160 mg), dioxano (2 ml), água (2 ml) e KOH (100 mg), foi aquecida a 121 100 °C durante 90 minutos. A mistura de reacção foi concentrada até um pequeno volume a vácuo, e acidificada com ácido cítrico aquoso (1 M) até pH 3-4. O produto que precipitou como um material alvo cristalino, foi seco a vácuo (50 °C).

Rendimento: 120 mg. P.f.: 172-174 °C (descomp.); TLC

Rf= 0,15 (heptano/acetato de etilo 1/1); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 448. (c) ._N-terc-Butil-8-metoxi-9-(3-metoxifenoxi)-N-metil-1- (tiofeno-2-il)-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxamida

Uma mistura do produto do Exemplo 74b (120 mg), N- etilmorfolina (120 μΐ), iV-metil-iV-terc-butilamina (120 μΐ) , DMF (1 ml), HOBt (20 mg) e TBTU (160 mg), foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. Adicionou-se uma solução aquosa saturada de NH4C1. A mistura de reacção foi agitada durante 10 minutos e extraida com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo como eluente.

Rendimento: 75 mg. P.f.: 176-177 °C; TLC Rf = 0,53 (heptano/acetona 1/1); LC/MS- ESI: [M+H]+ = 517; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 203, 0 nM.

Exemplo 75 terc-Butilmetilamida do ácido 9-(3-fluorofenoxi)-8-metoxi-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico (a)_9-(3-Fluorofenoxi)-8-metoxi-l-(tiofeno-2-il)-5,6-di- hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3- carboxilato de etilo

Este produto foi preparado de maneira similar à descrita para o Exemplo 74a, partindo do produto do Exemplo 51a. P.f.: 139-140 °C; TLC Rf = 0,60 (hept./acetato de etilo 1/1); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 446 . 122 (b) Ácido_9-(3-fluorofenoxi)-8-metoxi-l-(tiofeno-2-il)- 5, 6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Este produto foi preparado a partir do produto do Exemplo 75a (130 mg), de maneira similar à descrita para o Exemplo 74b.

Rendimento: 100 mg. P.f.: 179-183 °C (descarb.); TLC

Rf = 0,15 (heptano/acetato de etilo 1/1); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 436. (c) terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(3-fluorofenoxi)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- a]isoquinolino-3-carboxílico.

Este produto foi preparado a partir do produto do Exemplo 75b (200 mg), de maneira similar à descrita para o Exemplo 74c.

Rendimento: 120 mg. P.f.: 158- -159 °C; ΧΗ RMN (DMS0-d6) δ 6, 38 (s, 1H, H2), 6,96 (s, 1H, H7) , 7,18 (s, 1H, Hl 0), 7,38 (dd, 1H, tiofeno) , 6,98 (dd, 1H, tiofeno), 6,92 (m, 1H, tiofeno), 7,30, 6,85, 6,62 (m , 4H , 4F-Phe), 3,75 (s, 3H, OCH3), 4,18 (t, 2H, H6), 3,05 (m, 5H, H6 + NMe), 1,41 (s, 9H, terc-butilo] ); LC/MS-ESI: [M+H] + = 505,5; hFSHRago (CHO luc) EC50= 16,3 nM.

Exemplo 7 6 iV-te-rc-butil-8-metoxi-N-metil-9- (pirimidin-2-il-oxi) -1-(tiofeno-2-il)-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxamida (a). 8-Metoxi-9-(pirimidin-2-il-oxi)-1-(tiofeno-2-il)-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolina-3-carboxilato de etilo Uma mistura do produto do Exemplo 51a (100 mg), 2- bromopirimidina (50 mg), CS2CO3 (300 mg) e Cu em pó (9 mg) em DMF (2 ml), foi aquecida utilizando irradiação por microondas a 140 °C durante 25 minutos. A mistura de reacção foi diluída com uma solução aquosa saturada de NH4CI e extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi passado através de 123 uma almofada de sílica pequena (diclorometano/acetato de etilo) e foi triturado com éter diisopropílico para proporcionar cristais brancos.

Rendimento: 145 mg. TLC Rf = 0,20 (heptano/acetato de etilo 1/1) TLC Rf material de partida = 0,40; P.f.: 163-164 °C; LC/MS-ESI: [M+H]+ = 448. (b) . Ácido_8-metoxi-9-(pirimidin-2-il-oxi)-1-(tiofeno-2- il)-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]iso- quinolina-3-carboxílico

Este produto foi preparado a partir do produto do

Exemplo 76a (140 mg), de maneira similar à descrita para o Exemplo 74b.

Rendimento: 95 mg. TLC Rf= 0,30 (diclorometano/acetona 1/1 v/v); P.f.: 227 °C. (c) N— terc—butil —8—metoxi—Λ7—metil —9— (pirimidin-2-il-oxi) -1-(tiofeno-2-il)-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxamida

Este produto foi preparado a partir do produto do

Exemplo 76b (90 mg), de maneira similar à descrita para o

Exemplo 74c.

Rendimento: 65 mg. P.f.: 164-165 °C; TLC Rf = 0,45 (heptano/acetona 1/1); LC/MS- ESI: [M+H]+ = 489,3; hFSHRago (CHO luc) EC5o = 18,9 nM.

Exemplo 77 1-[4-(9-Ciclopropilmetoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidropirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-perhidro-1,4-diazepin-l-il]-etanona (a) 1-[4-(9-Hidroxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-perhidro-1,4-diazepin-l-il]-etanona. 124 A uma solução do produto do Exemplo 12a (315 mg) em diclorometano (20 ml), foi adicionado a -10 °C uma solução de tricloreto de boro (5 ml, 1M em diclorometano) . A reacção foi completada depois de 15 minutos e foi extinta por adição de água. A camada orgânica foi separada, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi triturado com acetona/éter.

Rendimento: 284 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+= 366. (b). 1-[4-(9-Ciclopropilmetoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carbonil)-perhidro-1,4-diazepin-l-il]-etanona

Uma mistura do produto do Exemplo 77a (36 mg) , K2C03 (70 mg) e brometo de ciclopropilmetilo (30 mg) em DMF (1 ml), foi agitada e aquecida utilizando um reactor de irradiação de microondas durante 5 minutos a 220 °C. A mistura de reacção foi arrefecida, diluída com água e extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (20 —>100 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 15 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 520; hFSHRago (CHO luc) EC5o = 57,6 nM.

Exemplo 7 8 1-{4-[8-Metoxi-9-(tetrahidrofurano-2-ilmetoxi)-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carbonil]-perhidro-l,4-diazepin-l-il}-etanona

Este produto foi preparado a partir do produto do Exemplo 77a (15 mg), de maneira similar à descrita para o

Exemplo 77b.

Rendimento: 2,2 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 550; hFSHRago (CHO luc) EC5o = 96,2 nM.

Exemplo 7 9 1- [ 4-(9-Ciclopentil-oxi-8-metoxl-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-perhidro-1,4-diazepin-l-il]-etanona 125

Este produto foi preparado a partir do produto do

Exemplo 77a (15 mg), de maneira similar à descrita para o

Exemplo 77b.

Rendimento: 4,4 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 534; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 14,2 nM.

Exemplo 80 1—{4—[8-Metoxi-9-(3-metilbutoxi)-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil]-perhidro-1,4-diazepin-l-il}-etanona

Este produto foi preparado a partir do produto do

Exemplo 77a (215 mg), de maneira similar à descrita para o

Exemplo 77b.

Rendimento: 60 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 536; hFSHRago (CHO luc) EC5o =101,0 nM.

Exemplo 81 (2-Hidroxi-l, 1-dimetil-etil) -metilamida do_ácido_9- isobutil-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico (a). Ácido 9-isobutil-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Este produto foi preparado de maneira similar à descrita para o Exemplo li, partindo do produto do Exemplo 61b (3,19 g).

Rendimento: 3,2 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 382,2. (b) . (2-Hidroxi-l,1 -dimetil-etil)-metilamida do ácido 9- isobutil-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma pasta do produto do Exemplo 81a (215 mg) em diclorometano (2 ml) foi tratada com solução de cloreto de oxalilo (400 2 M em diclorometano). Adicionou-se uma gota de DMF. A mistura foi agitada a temperatura ambiente 126 durante uma hora. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo e redissolvida em diclorometano (2 ml). Esta solução foi tratada com 2-metil-2-metilaminopropan-l-ol (175 mg; preparado de maneira similar à descrita por S.G. Kuznetsov, A.V. Eltsov, J. Gene. Chem. USSR, 32, 502 (1962)) e agitada durante uma hora a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi deitada numa solução aquosa de NaHCCh (a 5 %) e foi extraida com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgSCq) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 residuo foi triturado com heptano/acetato de etilo para proporcionar um material cristalino.

Rendimento: 80 mg. P.f. 114-116 °C; LC/MS-ESI: [M+H]+ = 476,5; hFSHRago (CHO luc) EC50= 6,0 nM.

Exemplo 82 (9-Bromo-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6,6a,lOa-tetrahidro-pirrolo[2,l-a]isoquinolino-3-il)-(4-ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepan-l-il)-metanona (a). 3-Metoxi-4-nitrobenzaldeído

Uma mistura de 3-hidroxi-4-nitrobenzaldeído (51,3 g) , iodometano (38,3 ml) e K2CO3 (85 g) em DMF (250 ml) foi agitada a 60 °C durante uma hora. A mistura de reacção foi arrefecida a temperatura ambiente e deitada em água (600 127 ml) . Os sólidos foram recolhidos por filtração e secos a vácuo (50 °C).

Rendimento: 49,7 g. (b) . 4-Amino-3-metoxibenzaldeído

Foi adicionado ferro (112 g) a uma mistura do produto do Exemplo 82a (49,7 g) e cloreto de amónio (103 g) em etanol (500 ml) e água (500 ml) . Depois de agitar com um agitador mecânico a 78 °C durante 2 horas, a mistura de reacção foi arrefecida a temperatura ambiente e extraída com éter dietílico (3 x 500 ml) . As camadas orgânicas combinadas foram concentradas a vácuo e foi adicionado água (400 ml) ao resíduo. Os sólidos foram recolhidos por filtração e secos a vácuo (50 °C).

Rendimento: 38,3 g. (c) . 4-Bromo-3-metoxibenzaldeído

Uma solução do produto do Exemplo 82b (38,3 g) em acetonitrilo (600 ml) foi adicionada gota a gota a uma mistura de nitrito de n-butilo (43,1 ml) e brometo de cobre(I) (63,6 g) em acetonitrilo ( 1,300 ml). Depois de agitar durante 18 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com uma solução aquosa de HC1 (1 N) . A camada orgânica foi separada, lavada com solução salina, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel com heptano/acetato de etilo [1:1 (v/v)].

Rendimento: 27,4 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 215,1 / 217,0. (d) . 1 -Bromo-2-metoxi-4-((E)-2-nitrovinil)-benzeno

Uma mistura do produto do Exemplo 82c (27,4 g),

acetato de amónio (10,8 g) e nitrometano (35 ml) em ácido acético (125 ml), foi agitada a 80 °C durante 18 horas. A mistura de reacção foi arrefecida a temperatura ambiente e deitada em água (1 litro). Os sólidos foram recolhidos por filtração e dissolvidos em diclorometano (2 litros). A 128 camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 29,8 g. (e) . 2-(4-Bromo-3-metoxifenil)-etilamina A 0 °C e sob uma atmosfera de azoto, uma solução de complexo de borano-THF (262 ml, 1 M) foi adicionada gota a gota a uma solução do produto do Exemplo 82d (15 g) em THF (250 ml). Depois da adição, o banho de gelo foi retirado. Foi adicionado borohidreto de sódio (0,11 g) (ocorreu uma reacção exotérmica leve). Depois de agitar durante 18 horas a 65 °C sob uma atmosfera de azoto, a mistura de reacção foi arrefecida a temperatura ambiente e deitada numa solução aquosa de HC1 (250 ml, 2 M) . Depois de agitar durante 1,5 hora a 70 °C, a mistura de reacção foi arrefecida a temperatura ambiente e extraída duas vezes com éter dietílico. A camada aquosa foi basifiçada com NaOH sólido até pH = 10 e extraída três vezes com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo.

Rendimento: 13,5 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 230,1/232,1. (f) . Éster 9H-fluoren-9-il-metílico do ácido [2-(4-bromo-3-metoxifenil)-etil]-carbâmico

Uma solução de cloroformiato de 9-fluorenilmetilo (29,2 g) em diclorometano (100 ml) foi adicionada gota a gota a uma solução do produto do Exemplo 82e (22,4 g) e DIPEA (51 ml) em diclorometano (300 ml) . Depois de agitar durante 18 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi lavada com uma solução aquosa de HC1 (1 M) e água, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi recolhido em éter dietílico e os sólidos foram recolhidos por filtração e secos a vácuo (50 °C).

Rendimento: 35,1 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 454,1. (g) . Éster 2-(9H-fluoren-9-il-metílico) do ácido 7-bromo-6-metoxi-3,4-di-hidro-lJi-isoguinolino-l, 2-dicarboxílico 129 A 0 °C, ácido sulfúrico concentrado (140 ml) foi adicionado gota a gota a uma solução do produto do Exemplo 82f (35,1 g) e ácido glioxilico hidrato (8,57 g) em ácido acético (700 ml) . Depois de agitar durante uma hora a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi deitada sobre gelo moido e extraída duas vezes com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa de HC1 (0,2 M) e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. Os solventes residuais foram retirados por co-evaporação (duas vezes) com tolueno.

Rendimento: 39,8 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 508,1/510,1. (h) . Ácido 7-bromo-6-metoxi-l,2,3,4-tetrahidroisoquinolino-1-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 82g (37,8 g) e piperidina (36,7 ml) em DMF (350 ml) foi agitada a temperatura ambiente durante 15 minutos. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo e o resíduo foi recolhido em THF (200 ml) e éter dietílico (200 ml). Os sólidos foram recolhidos por filtração e secos a vácuo (50 °C).

Rendimento: 18,5 g. (i) . Éster etílico do ácido 9-bromo-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6,6a,1Oa-tetrahidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 82h (3 g) e cloreto de etiloxalilo (1,4 ml) em THF (25 ml) foi agitada a 65 °C durante 30 minutos, e a mistura de reacção foi concentrada a vácuo. Uma mistura do resíduo e 2-etiniltiofeno (1,24 ml) em anidrido acético (10 ml) foi aquecida utilizando irradiação por microondas a 140 °C durante 15 minutos. A mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com água, solução aquosa saturada de NaHCCh e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [2/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 3,82 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 432,0/434,0. 130 ( j ) ._Ácido 9-bromo-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6,6a,10a- tetrahidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 82i (200 mg) e KOH sólido (100 mg) em etanol (4 ml) e água (1 ml) foi agitada a 80 °C durante uma hora. A temperatura ambiente, a mistura de reacção foi acidificada com uma solução aquosa de HC1 (6 M) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 180 mg. (k) ._(9-Bromo-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5, 6,6a, 10a- tetrahidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-il)- (4-ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepan-l-il)-metanona

Uma mistura do produto do Exemplo 82j (50 mg), DIPEA (150 μΐ) , BOP (137 mg) e ciclobutil- [ 1, 4] diazepan-1-ilmetanona (55 mg), foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi extraída com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (30 —> 90 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 42 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 568,1/570,1; HPLC analítica Rt - 23,89 minutos; hFSHRago (CHO luc) EC5o = 5,8 nM.

Exemplo 83 terc-Butilmetilamida do ácido 9-ciano-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]- isoguinolino-3-carboxílico (a) . Éster etílico do ácido 9-ciano-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 80i (48 mg), cianeto de cobre(I) (20 mg) e iodeto de cobre(I) (2,1 mg) em NMP (1 ml), foi aquecida utilizando irradiação de microondas a 180 131 °C durante 15 minutos. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1:1 (v/v) ] como eluente.

Rendimento: 41 mg. MS-ESI: [M+H]+= 379,3. (b) . Ácido_9-ciano-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 83a (41 mg) e KOH sólido (18 mg) em etanol (2 ml) e água (2 ml) foi agitada a 80 °C durante 4 horas. A temperatura ambiente, a mistura de reacção foi acidificada com uma solução aquosa de ácido cítrico (2 M) e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 43 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 351,1. (c) . terc-Butilmetilamida do ácido 9-ciano-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-3-carboxílico HATU (70 mg) foi adicionado a uma solução do produto do Exemplo 83b (43 mg), DIPEA (107 μΐ) e N-metil-N-terc- butilamina (29 μΐ) em diclorometano (5 ml). Depois de agitar a temperatura ambiente durante 18 horas, a mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com uma solução aquosa de HC1 (0,5 M) e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1:1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 26 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 420,2; HPLC

analítica: Rt = 19,52 minutos (método 7); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 4,3 nM.

HCI

132

Exemplo 84

Ester_etílico_do_ácido_3- ( 4-ciclobutanocarbonil- [1.4] diazepano-l-carbonil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5, 6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-9-carboxílico (a) . 9-Éster etílico do ácido 8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3,9-dicarboxílico A -70 °C, n-butil lítio (1,26 ml, 1,6 M em heptano) foi adicionado gota a gota a uma solução do produto do Exemplo 8 0 j (370 mg) em THF (15 ml). Depois de agitar durante 30 minutos a -70 °C, a mistura de reacção foi tratada com cloroformiato de etilo (0,4 ml). A temperatura ambiente, a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com água. A camada orgânica foi seca (MgSCb) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 100 mg. (b) . Éster etílico do ácido 3-(4-ciclobutanocarbonil- [1.4] diazepano-l-carbonil)-8-metoxi-l- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-9-carboxílico A formação de amida do produto do Exemplo 7b (50 mg) com o produto do Exemplo 84a (50 mg), foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo 13.

Rendimento: 52 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 548,2; HPLC analítica: Rt = 17,3 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 2,9 nM.

Exemplo 85 terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-prop-l-inil-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico e terc-Butil-metil-amida do ácido 9-bromo-8-metoxi-l-tiofeno-2-_il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico. 133 (a) . terc-Butil-metil-amida do ácido 9-bromo-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Cloreto de etilmagnésio (6,6 ml, a 25 % em peso em THF) dissolvido em THF (6 ml) foi adicionado lentamente a uma solução de N-metil-W-terc-butilamina (2,3 ml) em THF (6 ml) . Depois de agitar durante uma hora a 75 °C, foi adicionado gota a gota o produto do Exemplo 82i (1,1 g) dissolvido em THF (3 ml). Depois de agitar durante uma hora mais a 75 °C, a mistura de reacção foi deitada numa solução aquosa saturada de NH4C1 e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgSCq) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido numa quantidade mínima de etanol, seguido pela adição de uma pequena quantidade de água. Depois de arrefecer num banho de gelo, o precipitado foi filtrado.

Rendimento: 667 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 473/475; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 11,3 nM. (b) . terc-Butilmetilamida do ácido 8-metoxi-9-prop-l-inil-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 85a (50 mg), Pd(PPh3)4 (12,2 mg) e tributil(1-propinil)estanho (104 mg) em tolueno (1 ml, agitado introduzindo azoto), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas durante 20 minutos a 150 o o > mistura de reacção foi filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (10 90 % de acetonitrilo; sistema 1). Rendimento : 10 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 433,2; HPLC analítica: Rt = = 24,47 minutos (método 5); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 2,7 nM. 134

Exemplo 86 terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-(morfolina-4-carbonil)-1-tiofeno-2-il-5,6,6a,lOa-tetrahidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico (a) . Éster metílico do ácido 3-(terc-butilmetilcarbamoil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- a]isoquinolino-9-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 53a (1 g) , trietilamina {0,771 ml) e 1,3-di(fenilfosfino)propano (184 mg) em 10 ml de DMF e 10 ml de metanol, foi lavada a jacto com CO (g) durante 10 minutos. Em seguida foi adicionado acetato de paládio(II) (103 mg). A mistura de reacção foi agitada a 70 °C sob uma atmosfera de CO (g) durante 72 horas. A mistura de reacção foi diluida com acetato de etilo e lavada com solução salina. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel com heptano/acetato de etilo [0 —> 50 % de acetato de etilo] . Rendimento: 476 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 453,2. (b) . Ácido 3-(terc-butilmetilcarbamoil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-Í1-5,6,6a,lOa-tetrahidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-9-carboxílico O produto do Exemplo 86a (500 mg) foi suspenso em metanol (10 ml) e água (10 ml). Foi adicionado KOH (620 mg) e a mistura de reacção foi aquecida a refluxo durante 2 horas. A mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com uma solução aquosa de ácido cítrico (2 N) . A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vacuo. 135

Rendimento: 485 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 439,2. (c). terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-(morfolina-4-carbonil)-1-tiofeno-2-il-5,6,6a,1Oa-tetrahidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 86b (60 mg), HATU (86 mg), DIPEA (70 μΐ) e morfolina (36 μΐ) em diclorometano (5 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura de reacção foi lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O residuo foi purificado por HPLC preparativa (20 —> 100 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 41 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 508,2; HPLC analítica: Rt = 1,95 min (método 13); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 6 9,4 nM.

Exemplo 87 3-(terc-Butilmetilamida) 9-[(2-hidroxietil)-amida] do ácido 8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6,6a,lOa-tetrahidro-pirrolo[2, 1-a]isoquinolino-3,9-dicarboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 86b (60 mg), HATU (186 mg), DIPEA (70 μΐ) e etanolamina (25 μΐ) em diclorometano (5 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura de reacção foi lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (20 —>100 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 30 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 482,2; HPLC analítica: Rt = 1,55 (método 13); hFSHRago (CHO luc) EC50 =

Exemplo 88 136 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-oxopirrolidin-l-il)-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 85a (25 mg), 9,9- dimetil-4,5- bis(difenilfosfino)-xanteno (6 mg), tris(dibencilidenacetona)dipaládio(0) (5 mg), Cs2C03 (20 mg) e 2-pirrolidinona (24 mg) em dioxano/NMP [0,5 ml, 9/1 (v/v)] foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 150 °C durante 5 minutos. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [2/8 7/3 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 1 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ - 448; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 310,0 nM.

Exemplo 89 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-oxooxazolidin-3-il)-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Este produto foi preparado de maneira similar à descrita para o Exemplo 88, partindo do produto do Exemplo 85a (25 mg).

Rendimento: 5 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 450; hFSHRago (CHO luc) EC5o = 245, 0 nM.

Exemplo 90 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-oxoimidazolidin-l-il)-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Este produto foi preparado de maneira similar à descrita para o Exemplo 88, partindo do produto do Exemplo 85a (25 mg). 449; hFSHRago

Rendimento: 5 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = (CHO luc) EC50 = 218,0 nM. 137

Exemplo 91 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(3-hidroxi-propil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico e terc-Butilmetilamida do ácido_9-formil-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo [2,1 -a]isoquinolino-3-carboxílico (a). terc-Butil-metil-amida do ácido 9-formil-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico A uma suspensão do produto do Exemplo 85a (1,27 g) numa mistura de éter dietílico (12 ml) e THF (3 ml), foi adicionado a -60 °C uma solução de n-butil lítio (2 ml, 1,6 M em heptano). A mistura foi agitada durante 30 minutos a -60 °C e depois tratada com DMF (300 μΐ) . O equipamento de arrefecimento foi retirado e a agitação foi continuada durante 30 minutos a temperatura ambiente. A reacção foi extinta por adição de água e extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas foram combinadas, secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia através de uma coluna curta de sílica (heptano/acetato de etilo como eluente). 0 produto foi triturado com heptano/éter diisopropílico.

Rendimento: 650 mg. P.f. 193-194 °C; TLC Rf = 0,35 (heptano/acetato de etilo 1/1); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 423,3; hFSHRago (CHO luc) EC50 - 6 nM. 138 (b) . Éster_etílico_do_ácido_(E) -3- [3- (terc- butilmetilcarbamoil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a] isoguinolino-9-il]-acrílico

Uma solução de fosfonoacetato de trietilo (200 μΐ) em THF (2 ml) foi tratada com hidreto de sódio (60 mg, dispersão a 60 % em óleo) . Depois de agitar durante 20 minutos, foi adicionado o produto do Exemplo 91a (400 mg) em pequenas porções. A reacção completou-se depois de 30 minutos. A mistura de reacção foi diluída com água e extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas foram combinadas, secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia através de uma coluna curta de sílica, e triturado com heptano para dar um material alvo cristalino.

Rendimento: 350 mg. P.f. 163-164 °C; TLC Rf = 0,28 (heptano/acetato de etilo 1/1); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 493,5. (c) . Éster_etílico_do_ácido_3- [3- (terc- butilmetilcarbamoil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-9-il]-propiónico

Uma solução do produto do Exemplo 91b (350 mg) em etanol e acetato de etilo [20 ml, 1/2 (v /v)] foi hidrogenada a uma pressão de 2 bar [200 kPa] , na presença de Pd a 10 %/C (200 mg). Depois de 48 horas, a hidrogenação lenta estava quase completa. O produto da reacção foi purificado por cromatografia através de uma coluna curta de sílica, e triturado com heptano para proporcionar um material alvo cristalino.

Rendimento: 170 mg. P.f. 127-128 °C. TLC Rf = 0,50 (heptano/acetato de etilo 1/1); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 495,5. (d) . terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(3-hidroxi-propil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma solução do produto do Exemplo 91c (60 mg) em THF (2 ml) foi tratada com LiAlH4 (6 mg) . Depois de agitar durante 60 minutos, a redução completou-se. A reacção foi 139 diluída com uma solução aquosa saturada de Na2S04 e extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas foram combinadas, secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia (heptano/acetato de etilo 1/1) através de uma coluna de sílica, seguido por tratamento com acetato de etilo/éter dietílico para proporcionar um sólido alvo.

Rendimento: 45 mg. P.f. 163-164 °C. TLC Rf = 0,30 (heptano/acetato de etilo 1/1); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 453,5; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 0,4 nM.

Exemplo 92 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(3-hidroxi-3-metil-butil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo[2,1- a] isoquinolino-3-carboxílico

Uma solução do produto do Exemplo 91c (85 mg) em THF (2 ml) foi tratada com cloreto de metilmagnésio (200 μΐ, solução 2 M em THF) a temperatura ambiente. Depois de agitar durante uma hora, a reacção completou-se. Adicionou-se uma solução aquosa saturada de NH4C1 e a mistura foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas foram combinadas, secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia através de uma coluna curta de sílica, seguido por cristalização em éter para proporcionar um sólido alvo.

Rendimento: 70 mg. P.f. 153-154 °C. TLC Rf = 0,24 (heptano/acetato de etilo 1/1); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 481,5; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 6,0 nM.

Exemplo 93 terc-Butilmetilamida do ácido 9-(2,2-difluoro-vinil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidropirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico A uma solução de LDA, preparada a partir de diisopropilamina (50 μΐ) e n- butil lítio (200 μΐ, 1,6 M em heptano) em THF seco (2 ml), foi adicionado a -70 °C uma solução de óxido de difluorometildifenilfosfina (75 mg; 140 preparada a partir de dibromodifluorometano e trifenilfosfina) em THF (0,5 ml). A mistura foi agitada a -70 °C durante 20 minutos e depois adicionou-se uma solução do produto do Exemplo 91a (125 mg) em 0,5 ml de THF seco. A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 10 minutos e aquecida a 80 °C durante 30 minutos. Adicionou-se água e a mistura foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas foram combinadas, secas (MgS04), filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica (heptano/acetato de etilo 2/1). O produto isolado foi triturado com heptano frio.

Rendimento: 55 mg. P.f. 111-112 °C. TLC Rf = 0,47 (heptano/acetato de etilo 1/1), material de partida de TLC Rf = 0,30; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 3,0 nM. 141

Exemplo 94 terc-Butilmetilamida do ácido 8-metoxi-9-nitro-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-3-carboxílico (a). Éster etílico do ácido N-[2-(3-metoxifenil)-etil]-oxalámico

Uma solução de cloreto de etiloxalilo (1,5 ml) em diclorometano (5 ml) foi adicionada gota a gota a uma solução de 3-metoxifenetilamina (2,0 ml) e DIPEA (4,8 ml) em diclorometano (40 ml) a 0 °C. A mistura de reacção foi agitada durante uma hora, e lavada com uma solução aquosa de ácido cítrico (2 M) , água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgSCU) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [6/4 (v/v)] como eluente. 142

Rendimento: 2,76 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 252,2. (b) . Éster_etílico_do_ácido_6-metoxi-3,4-di- hidroisoguinolina-l-carboxílico 0 produto do Exemplo 94a (10 g) dissolvido em diclorometano (20 ml) foi adicionado a uma solução de pentóxido de fósforo (10 g) em ácido metanossulfónico (40 ml) a 80 °C. Depois de agitar durante 2 horas a 80 °C, a mistura de reacção foi deitada sobre NaHC03 sólido, diluída com água gelada e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 9,3 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 234,2. (c) . Éster etílico do ácido 6-metoxi-7-nitro-3,4-di-hidroisoguinolina-l-carboxílico

Nitrato de potássio (3,59 g) foi adicionado a uma solução com agitação do produto do Exemplo 94b (9,2 g) em ácido sulfúrico (50 ml) a 0 °C. Depois de agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi deitada em água gelada, neutralizada com NaHCCh e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [2/8 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 6,04 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 279,1. (d) . Éster etílico do ácido 6-metoxi-7-nitro-l, 2,3,4-tetrahidroisoquinolino-l-carboxílico

Cianoborohidreto de sódio (10,64 g) foi adicionado em porções a uma solução com agitação do produto do Exemplo 94c (6,04 g) em ácido acético (100 ml), num período de 15 minutos. Depois de agitar durante uma hora, a mistura de reacção foi deitada em água gelada, basificada com Na2C03, extraída com acetato de etilo e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [2/8 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 3,6 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 281,1. 143 (e) . Éster etílico do ácido N-terc-butil-iV-metiloxalámico

Metil-terc-butilamina (13,2 ml) foi adicionada gota a gota a uma solução de cloreto de metiloxalilo (9,2 ml) e piridina (10,5 ml) em diclorometano (140 ml) a 0 °C. Depois de agitar durante uma hora, a mistura de reacção foi lavada com uma solução aquosa de HC1 (2 M) e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 17,3 g. (f) . Ácido N-terc-butil-N-metiloxalámico

Hidróxido de potássio (6,2 g) dissolvido em metanol (100 ml) foi adicionado gota a gota a uma solução do produto do Exemplo 94e (17,3 g) em metanol (120 ml) a 0 °C. A mistura de reacção foi aquecida até temperatura ambiente e concentrada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em água (50 ml) , acidificado com solução de ácido sulfúrico (a 10 %) até pH = 4, filtrado e seco sob vácuo.

Rendimento: 7 g. (g) . Éster etílico do ácido 2-(terc-butilmetilaminooxalil)-6-metoxi-7-nitro-l,2,3,4-tetrahidro-isoguinolina-l-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 94d (3,2 g) , o produto do Exemplo 9 4f (2,0 g), TBTU (5,5 g) e DIPEA (9,94 ml) em diclorometano (150 ml) foi agitada a temperatura ambiente durante uma hora. A mistura de reacção foi lavada com água e salmoura, seca (MgSCg) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [3/7 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 3,79 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 422,2. (h) . Ácido 2-(terc-butilmetilaminooxalil)-6-metoxi-7-nitro-1, 2,3,4-tetrahidroisoquinolino-l-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 94 g (3,78 g) e hidróxido de potássio (1,0 g) em tetrahidrofurano (100 ml) e água (50 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante uma hora. A mistura de reacção foi acidificada com uma 144 solução aquosa de HC1 (a 10 %) e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 3,11 g. LC/MS-ESI: [M+H]+= 394,2. (i). terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-nitro-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 94h (2,62 g) e 2- etiniltiofeno (0,779 ml) em anidrido acético (15 ml), foi aquecida utilizando irradiação por microondas a 140 °C durante 15 minutos. A mistura de reacção foi deitada em água gelada, basificada com NaHC03 e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [2/8 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 2,51 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 440,1; HPLC analítica: Rt = 19,67 (Método 12); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 3,0 nM.

Exemplo 95 terc-Butil-metil-amida do ácido 9-amino-8-metoxi-l-tiofeno-2-Í1-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-3-carboxílico Ácido acético (0,39 ml) foi adicionado em porções a uma solução do produto do Exemplo 94 (300 mg) em THF (10 ml) a 0 °C, seguido pela adição em porções de zinco (893 mg). Depois de agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi filtrada sobre decalite. 0 filtrado foi concentrado a vácuo e dissolvido em acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com solução saturada de NaHCCq e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (0 —» 100 % de acetonitrilo; sistema D · 145

Rendimento: 159 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 410,2; HPLC

analítica: Rt = 26,18 minutos (Método 12); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 4 4, 8 nM.

98

Exemplo 96 terc-Butilmetilamida_do_ácido_9- (2-dimetilamino- acetilamino)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6,6a, lOa-tetrahidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico (a) . terc-Butilmetilamida do ácido 9-(2-bromoacetilamino)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6,6a,lOa-tetrahidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Brometo de bromoacetilo (0,137 ml) foi adicionado a uma solução com agitação do produto do Exemplo 95 (500 mg) e DIPEA (0,425 ml) em diclorometano (20 ml), num período de 6 horas. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo.

Rendimento: 648 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 530,1/ 532,1. (b) . terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-dimetilamino-acetilamino)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6,6a,1Oa-tetrahidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 96a (100 mg), DIPEA (0,165 ml) e ácido N,N- dimetilamina clorídrico (66 mg) em THF (4 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada 146 a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (0 —» 80 % de acetonitrilo, 0,1 % de TFA; sistema 1).

Rendimento: 33 mg (como sal de TFA). LC/MS-ESI: [M+H]+ = 495,2; HPLC analítica: Rt = 24,61 (Método 12); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 2,8 nM.

Exemplo 97 terc-Butil-metil-amida do_ácido_9- (2-azetidin-l-il- acetilamino)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 96a (100 mg), DIPEA (0,165 ml) e azetidina (37 mg) em THF (4 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04), filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (0 —» 80 % de acetonitrilo, 0,1 % de TFA; sistema 1).

Rendimento: 11 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 507,3; HPLC analítica: R, = 25,06 (Método 12); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 4,0 nM.

Exemplo 98 terc-Butilmetilamida_do_ácido_8-metoxi-9- (2- metoxiacetilamino)-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 95 (30 mg), trietilamina (10,2 μΐ) e cloreto de metoxiacetilo (6,7 (ι1) foi agitada a temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com água. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (0 —> 90 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 16 mg. MS-ESI [M+H]+ = 482,5; HPLC analítica: Rt = 35,92 minutos (método 12); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 1,4 nM. 147

Exemplo 99 Éster etílico do ácido [3-(2,2-dimetil-pirrolidina-1-carbonil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-9-il]-carbâmico (a) . Éster etílico do ácido (2,2-dimetilpirrolidino-l-il)~ oxoacético

Cloreto de metiloxalilo (5 ml) foi adicionado gota a gota a uma solução de 2,2-dimetilpirrolidina (8,11 g) e piridina (5,7 ml) em diclorometano (50 ml) a 0 °C. Depois de agitar durante uma hora, a mistura de reacção foi lavada com uma solução aquosa de HC1 (2 N) e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. Rendimento: 6,62 g. (b) . Ácido (2,2-dimetilpirrolidino-l-il)-oxoacético KOH (2,20 g) dissolvido em metanol (100 ml) foi adicionado gota a gota a uma solução do produto do Exemplo 99a (6,62 g) em metanol (120 ml) a 0 °C. A mistura de 148 reacção foi aquecida até temperatura ambiente e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em água (30 ml), acidificado com uma solução aquosa de H2S04 (a 10 %) até pH = 4, filtrado e seco sob vácuo.

Rendimento: 3,35 g. (c) Éster etílico do ácido 2-[2-(2,2-dimetilpirrolidino-1-il)-2-oxoacetil]-6-metoxi-7-nitro-l, 2,3,4-tetrahidroisoquinolino-l-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 94d (3,0 g) , o produto do Exemplo 99b (2,2 g), TBTU (5,16 g) e DIPEA (9,3 ml) em diclorometano (150 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante uma hora. A mistura de reacção foi lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [10/0 —>0/10 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 4,37 g. LC/MS-ESI: [M+H]+= 434,2. (d) . Ácido 2-[2-(2,2-dimetilpirrolidino-l-il)-2-oxoacetil]-6-metoxi-7-nitro-l,2,3,4-tetrahidro-pirrolo[2,1- a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 99c (4,37 g) e hidróxido de potássio (1,13 g) em THF (100 ml) e água (50 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante uma hora. A mistura de reacção foi acidificada com uma solução aquosa de HC1 (2 N) e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 3,18 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 406,2. (e) , (2,2-Dimetilpirrolidino-l-il)-(8-metoxi-9-nitro-l- tiofeno—2—il—5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-il)-metanona

Uma mistura do produto do Exemplo 99d (3,18 g) e 2- etiniltiofeno (1,82 ml) em anidrido acético (15 ml) foi aquecida utilizando irradiação por microondas a 140 °C durante 15 minutos. A mistura de reacção foi deitada em 149 água gelada, neutralizada com NaHC03 e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04), filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi cristalizado em éter dietílico.

Rendimento: 2,28 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 452,2. (f) . (9-Amino-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-(2,2-dimetil-pirrolidin-1-il)-metanona

Zinco (29,0 g) foi adicionado em porções a uma solução do produto do Exemplo 99e (10,0 g) em THF (500 ml) e ácido acético (12,7 ml) a 0 °C. Depois de agitar durante 18 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi filtrada sobre decalite. 0 filtrado foi lavado com solução aquosa saturada de NaHCCh e salmoura. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 10,36 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 422,18. (g) . Éster etílico do ácido [3-(2,2-dimetil-pirrolidina-l-carbonil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-9-il]-carbâmico

Uma solução do produto do Exemplo 99f (50 mg), DIPEA (0,041 ml) e cloroformiato de etilo (0,011 ml) em diclorometano (2 ml), foi agitada a 20 °C durante 2 horas. A mistura de reacção foi lavada com água e solução salina e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (10 —> 100 % de acetonitrilo; sistema 1) .

Rendimento: 38 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 494,1; HPLC analítica: Rt = 15,28 (Método 10); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 22 nM.

Exemplo 100 N-[3-(2,2-Dimetil-pirrolidina-l-carbonil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-9-il]-metanossulfonamida

Uma solução do produto do Exemplo 99f (50 mg), DIPEA (0,041 ml) e cloreto de metanosulfonilo (0,011 ml) em 150 diclorometano (2 ml), foi agitada a 20 °C durante 2 horas. A mistura de reacção foi lavada com água e solução salina e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (0 —> 80 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 25 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+= 500,1; HPLC analítica: Rt = 21,15 minutos (Método 10); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 1,0 nM.

Exemplo 101 N-[3-(2,2-Dimetil-pirrolidina-l-carbonil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-9-il]-2-morfolin-4-il-acetamida (a) . 2-Bromo-N-[3-(2,2-dimetil-pirrolidina-l-carbonil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- a]isoguinolino-9-il]-acetamida

Brometo de bromoacetilo (0,155 ml) foi adicionado a uma solução com agitação do produto do Exemplo 99f (500 mg) e DIPEA (0,413 ml) em diclorometano (20 ml), num período de 6 horas. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo.

Rendimento: 643 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 542,0/544,0. (b) . N-[3-(2,2-Dimetil-pirrolidina-l-carbonil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-9-il]-2-morfolin-4-il-acetamida

Uma mistura do produto do Exemplo 101a (100 mg), DIPEA (0,165 ml) e morfolina (62 mg) em THF (4 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (0 80 % de ACN, 0,1 % de TFA; sistema 1). 151

Rendimento: 95 mg (como sal de TFA). LC/MS-ESI: [M+H]+ = 549,2; HPLC analítica: Rt = 27,19 minutos (Método 12); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 2,0 nM.

Exemplo 102 terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-[(piridina-3-carbonil)-amino]-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,l-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 95 (50 mg), ácido piridina-3- carboxílico (30 mg), TBTU (150 mg), DIPEA (300 μΐ) e HOBt (20 mg) em piridina (1 ml), foi agitada durante uma hora a temperatura ambiente. A mistura foi diluída com água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia (heptano/acetona 1/1 v/v) e triturado utilizando éter dietílico.

Rendimento: 30 mg. P.f. 223-224 °C. TLC Rf= 0,25 (heptano/acetona 1/1); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 515,3; hFSHRago (CHO luc) EC5o = 13,0 nM.

Exemplo 103 terc-But il-met il-amida_do_ácido_9- dimetilaminosulfonilamino-1-tiofeno-2-i1-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico (a). terc-Butil-metil-amida do ácido 9-amino-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma solução de terc-butilmetilamida do ácido 9-bromo-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico (500 mg), LiHMDS (1,25 ml, solução a 20 % em 152 THF) , (terc-Bu)3P (3 mg) e Pd2(dba)3 (10 mg) em tolueno (20 ml), foi lavada a jacto com azoto e depois aquecida a 100 °C durante 16 horas. A mistura de reacção foi arrefecida e lavada com solução de NaOH (10 ml, 2 N) e água. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica (heptano/acetato de etilo).

Rendimento: 153 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+= 380. (b) . terc-Butil-metil-amida_do_ácido_9- dimetilaminosulfonilamino-1-tiofeno-2-i1-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma solução do produto do Exemplo 103a (36 mg), trietilamina (20 mg), e cloreto de dimetilsulfamoílo (15 mg) em diclorometano (1 ml), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 140 °C durante 5 minutos. A reacção foi diluída com diclorometano, e lavada com uma solução aquosa de HC1 (2 N) e uma solução aquosa de NaHCCg (a 10 %) . A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado passando o mesmo através de uma coluna curta de sílica, utilizando tolueno/EtOAc (2/1 v/v) como eluente.

Rendimento: 13 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 487; hFSHRago (CHO luc) EC50 - 756,0 nM.

Exemplo 104 (8,9-Dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-il)-[4-(1-metil-ciclobutanocarbonil)-[1,4]diazepan-l-il]-metanona (a). Ácido 8,9-dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico 153 A síntese do ácido 8,9-dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico, partindo de 2-(3,4-dimetoxifenil)-etilamina, foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo li.

Rendimento: 3,16 g. MS-ESI: [M+H]+ = 356,0. (b) . Ácido 1-metilciclobutanocarboxílico A 0 °C, M-butil lítio (13,75 ml, 1,6 M em heptano) foi adicionado gota a gota a uma solução de diisopropilamina (3,08 ml) em THF (30 ml). Depois de agitar durante 30 minutos a 0 °C, a mistura de reacção foi arrefecida a -20 °C, seguido pela adição gota a gota de ácido ciclobutanocarboxílico (0,956 ml) dissolvido em THF (10 ml, seco), para proporcionar uma solução aniónica de aproximadamente 0,25 Μ. A 0 °C, iodeto de metilo (1,0 ml) foi adicionado gota a gota à solução aniónica preparada recentemente (20 ml, 0,25 M) . Depois de agitar durante 18 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi extinta com uma solução aquosa saturada de NH4C1, e concentrada a vácuo até um pequeno volume, O resíduo foi dissolvido numa solução aquosa de NaOH (a 5 %) e extraída com éter dietílico. A camada aquosa foi acidificada e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 470 mg. (c) . éster_terc-butílico_do_ácido_4- (1- metilciclobutanocarbonil)-[1,4]diazepano-l-carboxílico HATU (1,71 g), éster terc-butílico do ácido [1,4]diazepano-l-carboxílico (0,813 ml) e DIPEA (3,58 ml) foram adicionados a uma solução do produto do Exemplo 104b (470 mg) em diclorometano (20 ml). Depois de agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi deitada numa solução aquosa de ácido cítrico (a 10 %) e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com uma solução aquosa saturada de NaHC03, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado 154 por cromatografia em sílica, com tolueno/acetona [100/0 —» 3/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 591 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+= 297,4. (d) . [1,4]Diazepan-l-il-(1-metilciclobutil)-metanona, cloridrato

Uma solução de HC1 (4 ml, 4 N em dioxano) foi adicionada a uma solução do produto do Exemplo 104c (580 mg) em diclorometano (25 ml) . Depois de agitar durante 4 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi concentrada a vácuo.

Rendimento: 473 mg (como sal de HC1). (e) . (8,9-Dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- a]isoguinolino-3-il)-[4-(1-metil-ciclobutanocarbonil)- [1,4]diazepan-l-il]-metanona A formação de amida do produto do Exemplo 104d (85 mg) com o produto do Exemplo 104a (64 mg) foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo 104c. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (20 % 100 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 60,4 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 534,3; HPLC analítica: R, = 18,67 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 3,0 nM. 155

Exemplo 105 [(S)-1-(8,9-Dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-piperidin-3-il]-amida do ácido ciclobutanocarboxílico (a). Éster terc-butílico do ácido [(S)-1-(8,9-dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-piperidin-3-il]-carbâmico A formação de amida de éster terc-butílico do ácido (S)-piperidin-3-il-carbâmico (168 mg) com o produto do Exemplo 104a (200 mg), foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo 104c. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica, com heptano/acetato de etilo [1/1 —> 0/100 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 345 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 538,4. 156 (b) . ((S)-3-Aminopiperidin-l-il)-(8, 9-dimetoxi-l-tiofeno-2- il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-metanona A desprotecção do produto do Exemplo 105a (302 mg) foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 104d.

Rendimento: 245 mg (como sal de HC1). LC/MS-ESI: [M+H]+ = 438,2. (c) . [ ( S)-1-(8,9-Dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro- pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-piperidin-3-il]-amida do ácido ciclobutanocarboxílico

Uma mistura de BOP (280 mg), DIPEA (0,276 ml), ácido ciclobutanocarboxilico (45,7 μΐ) e o produto do Exemplo 105b (150 mg) em diclorometano (2 ml), foi agitada durante 5 horas a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (10 —> 90 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 89 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 520,4; HPLC

analítica: R, = 20,88 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) ECso = 1730,0 nM.

Exemplo 106 3-[(R)-1-(8,9-Dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-pirrolidin-3-il]-1, 1 -dimetilureia (a) , éster terc-butílico do ácido [(R)-1-(8,9-Dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carbonil)-pirrolidin-3-il]-carbâmico A formação de amida de éster terc-butilico do ácido (R)-pirrolidin-3- il-carbâmico (428 mg) com o produto do Exemplo 104a (400 mg), foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo 104c.

Rendimento: 720 mg. (b) . ((R)-3-Aminopirrolidin-l-il)-(8,9-dimetoxi-l-tiofeno- 2-Ϊ1-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-il)-metanona 157 A desprotecção do produto do Exemplo 106a (715 mg) foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 104d.

Rendimento: 494 mg (como sal de HC1). LC/MS-ESI: [M+H]+ = 424,2. (c). 3-[(R)-l-(8,9-Dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-pirrolidin-3-il]-1,1-dimetilureia A acilação do produto do Exemplo 106b (50 mg) com cloreto de N,N- dimetilcarbamoilo (48 mg) foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 107c. O residuo foi purificado por cromatografia em sílica, com diclorometano/metanol [100/0 95/5 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 37,4 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 495,2; HPLC analítica: Rt = 12,25 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 755, 0 nM.

Exemplo 107 N- [(R)-1-(8,9-Dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)- piperidin-3-il]-N- metilacetamida (a) . Éster terc-butílico do ácido [(R)-1-(8,9-dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-3-carbonil)-piperidin-3-il]-carbâmico A formação de amida de éster terc-butílico do ácido (R)-piperidin-3-il-carbâmico (168 mg) com o produto do Exemplo 104a (200 mg), foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo 104c. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica, com heptano/(acetato de etilo/metanol 95/5) [1/1 —> 0/1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 303 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 538,4. (b) . ((R)-3-Aminopiperidin-l-il)-(8,9-dimetoxi-l-tiofeno-2- il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-il)-metanona A desprotecção do produto do Exemplo 107a (300 mg) foi conseguida de acordo com o método descrito no Exemplo 104d. 158

Rendimento: 265 mg (como sal de HC1). LC/MS-ESI: [M+H]+ = 438,2 . (c) . N- [(R)-1-(8,9-Dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carbonil)-piperidin-3-il]-acetamida

Cloreto de acetilo (29,9 μΐ) e trietilamina (116 μΐ) foram adicionados a uma solução do produto do Exemplo 107b (132 mg) em diclorometano (2 ml). Depois de agitar durante 18 horas a temperatura ambiente, a mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (10 % —> 90 % de acetonitrilo; sistema 1) .

Rendimento: 92 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 480,4; HPLC analítica: R, = 16,18 minutos (método 2). (d) . iV- [ (R) -1- ( 8,9-Dimetoxi-l-t iof eno-2-il-5, 6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carbonil)-piperidin-3-il]-N-metilacetamida

Iodeto de metilo (62,3 μΐ) e hidreto de sódio (7,3 mg, dispersão a 60 % em óleo) foram adicionados a uma solução do produto do Exemplo 107c (35 mg) em DMF (1 ml). Depois de agitar durante 3 horas a 50 °C, adicionaram-se umas poucas gotas de água e a mistura de reacção foi concentrada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e lavado com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (10 —> 90 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 25,6 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 494,4; HPLC analítica: Rt = 18,51 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC5q = 30,9 nM. 159

Exemplo 108 (l-Bromo-8,9-dimetoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-il)-(4-ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepan- 1-il) -metanona_e_(l-Bromo-8,9-dimetoxi-5, 6-di-hidro- pirrolo[2,l-a]isoquinolino-3-il)-(4-ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepan-l-il)-metanona (a) . Éster etílico do ácido l-bromo-8,9-dimetoxi-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico Ácido 2-etoxioxalil-6,7-dimetoxi-l,2,3,4- tetrahidroisoquinolino-l-carboxílico foi preparado em forma análoga ao Exemplo lg. Uma mistura de ácido 2- etoxioxalil-6,7-dimetoxi-l,2,3,4-tetrahidroisoquinolino-l-carboxilico (3,4 g) , trimetilsililacetileno (2 g) e anidrido acético (10 ml) em THF (10 ml), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 150 °C durante 5 minutos. A mistura de reacção foi deitada em água e neutralizada com carbonato de sódio. A mistura foi extraída com acetato de etilo e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgSCq) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 residuo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [10/0 —> 6/4 (v/v)] como eluente. 160 A uma mistura do produto isolado em DMF (20 ml), foi adicionado NBS (1,9 g). A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 5 minutos. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e uma solução aquosa de HC1 (0,2 M) , e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi recristalizado em metanol.

Rendimento: 2,6 g. MS-ESI: [M+H]+ = 380/382. HPLC analítica Rt = 2,47 (método 10). (b) . (l-Bromo-8,9-dimetoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2, 1- oti]isoguinolino-3-il)-( 4-ciclobutano-carbonil- [1,4]diazepan-l-il)-metanona

Uma mistura do produto do Exemplo 108a (2,6 g) e solução aquosa de hidróxido de lítio (3M)/dioxano [2:1 (v/v), 15 ml] foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 150 °C durante 5 minutos. A mistura de reacção foi acidificada até pH = 5 com uma solução aquosa de HC1 (6 M). 0 produto foi filtrado e isolado.

Rendimento: 2,3 g; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 99,2 nM. (c) . Etilisopropilamida do ácido 2-acetil-9-etoxi-8-metoxi-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 108b (1,06 g), DIPEA (2,6 ml) e HATU (1,37 g) em diclorometano (10 ml) foi agitada a temperatura ambiente durante 30 minutos. Foi adicionado o produto do Exemplo 7b e a mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura de reacção foi diluida com acetato de etilo e lavada com uma solução aquosa de HC1 (0,2 M) , água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com acetato de etilo [0 —> 10 % de isopropilamina (v/v)] como eluente. 161

Rendimento: 1,4 g. LCMS-ESI: [M+H]+ = 517/519. HPLC analítica Rt = 2,92 minutos (método 10); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 100 nM.

Exemplo 109 (4-Benzoil-[1,4]diazepan-l-il)-(l-etinil-8,9-dimetoxi-5, 6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino- 3-il)-metanona (a) , éster terc-butílico do ácido 4-(l-bromo-8,9-dimetoxi- 5.6- di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-[1,4]diazepano-l-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 108b (1,0 g) , HATU (1,61 g) , trietilamina (0,8 ml) e 1,4-diazepano-l-carboxilato de terc-butilo (1,1 ml) em diclorometano (30 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura de reacção foi lavada com solução aquosa de ácido cítrico (a 3 %) . A camada orgânica foi lavada com água, seca (Na2S04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com diclorometano/metanol [0 —> 10 % (v/v)] como eluente. Rendimento: 1,39 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 536,0. (b) . (l-Bromo-8,9-dimetoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-il)-[1,4]diazepan-l-il-metanona, cloridrato HC1 (6,3 ml, 4 N em dioxano) foi adicionado a uma solução do produto do Exemplo 109a (1,34 g) em dioxano (50 ml). A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi diluída com éter dietílico e os sólidos foram recolhidos por filtração.

Rendimento: 972 mg. (c) . (4-Benzoil-[1,4]diazepan-l-il)-(l-bromo-8,9-dimetoxi- 5.6- di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-3-il)-metanona

Uma mistura do produto do Exemplo 109b (972 mg), DIPEA (740 μΐ) e cloreto de benzoílo (338 μΐ) em diclorometano (50 ml), foi agitada durante uma hora a temperatura ambiente. Em seguida, a mistura de reacção foi lavada com 162 uma solução aquosa de HC1 (2 N) , água e salmoura. A camada orgânica foi seca (Na2S04) e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com diclorometano/metanol [0 —>5 % (v/v)] como eluente.

Rendimento: 1,08 g. LC/MS-ESI: [M+H]+= 536,0. (d).(4-Benzoil-[1,4]diazepan-l-il)-(l-etinil-8,9-dimetoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]- isoguinolino-3-il)-metanona A uma solução do produto do Exemplo 109c (61 mg) em

tolueno (3 ml), foi adicionado estanano de tributiletinilo (67 μΐ) . A mistura de reacção foi agitada introduzindo azoto durante 5 minutos, foi adicionado Pd(PPh3)4 (9 mg) e a solução foi agitada durante 30 minutos a 100 °C. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com diclorometano/metanol [0 —> 5 % (v/v)] como eluente. As fracções mais puras foram recolhidas, concentradas e purificadas adicionalmente por HPLC preparativa (20 % —> 70 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 15 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+= 484,3; HPLC

analítica: Rt = 14,36 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 76,2 nM.

Exemplo 110 terc-Butilmetilamida do ácido 1 -ciclohexen-l-il-8,9-dimetoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoguinolino-3-carboxílico (a). Éster etílico do ácido l-ciclohex-l-enil-8,9-dimetoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura de ácido 2-etoxioxalil-6,7-dimetoxi-1,2,3,4- tetrahidroisoquinolino-l-carboxílico (5 g) , preparado de maneira análoga ao Exemplo lg, 1- 163 etinilciclohexeno (14 mmoles) e anidrido acético (5 ml) em THF (15 ml), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 120 °C durante 15 minutos. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e solução aquosa de hidróxido de sódio (1 N), e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1/9 —» 6/4 (v/v)] como eluente. O composto foi isolado como um sólido alvo.

Rendimento: 1,8 g. MS-ESI: [M+H]+= 440. (b) . Ácido 1 -ciclohexen-l-il-8,9-dimetoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3- carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 110a (935 mg) em solução aquosa de LiOH (2 M)/dioxano [1:1 (v/v), 40 mi] foi aquecida a refluxo durante uma hora. A mistura de reacção foi arrefecida a temperatura ambiente e acidificada até pH = 5. 0 produto foi filtrado e isolado como um sólido castanho.

Rendimento: 680 mg. (c) . terc-Butilmetilamida do ácido l-ciclohexen-l-il-8,9-dimetoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 110b (25 mg), N-met il-N-terc- butilamina, HATU (40 mg) e Dl PE A (61 μΐ) em diclorometano (1 ml), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 100 °C durante 5 minutos. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com água e uma solução aquosa de ácido cítrico (a 3 %) . A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [0 6/4 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 9 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 423; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 76,5 nM. 164

Exemplo 111 (4-Ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepan-l-il)-(8,9-dimetoxi-l-tiofeno-2-ilpirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-metanona e (4-Ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepan-l-il)-(8,9-dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)- metanona (a) ._( 4-Ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepan-l-il)-(8,9- dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- a]isoquinolino-3-il)-metanona A formação de amida do produto do Exemplo 7b (30 mg) com o produto do Exemplo 104a (70 mg) foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo 7c. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (10 —» 90 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 40 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 520,4; HPLC

analítica: Rt = 20,15 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 2,9 nM. (b) ._(4-Ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepan-l-il)-(8,9- dimetoxi-l-tiofeno-2-ilpirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-il)-metanona A oxidação do produto do Exemplo 11 a (15 mg) foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo 36. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica, com acetato de etilo como eluente.

Rendimento: 12,7 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+= 518,2; HPLC analítica: Rt = 2,64 minutos (método 2); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 4,9 nM. 165

Exemplo 112

Etilisopropilamida do ácido 2-acetil-9-etoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5, 6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico (a) . Éster etílico do ácido 2-acetil-9-etoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico Ácido 7-etoxi-2-etoxioxaliI-6-metoxi-l,2,3,4- tetrahidroisoquinolino-1- carboxilico foi preparado de maneira análoga ao Exemplo lg. Uma mistura de ácido 7-etoxi-2-etoxioxalil-6-metoxi-l,2,3,4- tetrahidroisoquinolino-l-carboxílico(5 g), 4-tiofeno-2-ilbut-3-in-2-ona (14 mmoles) e anidrido acético (5 ml) em THF (15 ml), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 120 °C durante 15 minutos. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e solução aquosa de NaOH (1 N) , e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgSCg) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 residuo foi purificado por cromatografia em sílica gel com heptano/acetato de etilo [1/9 —> 6/4 (v/v)] como eluente, para proporcionar um sólido alvo.

Rendimento: 1,8 g. MS-ESI: [M+H]+= 440. (b) . Ácido 2-acetil-9-etoxí-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3- carboxilico

Uma mistura do produto do Exemplo 112a (840 mg) e uma solução aquosa de LiOH (2M)/dioxano [1:1 (v/v), 4 mi] foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 150 °C durante 5 minutos. A mistura de reacção foi acidificada até pH =5. O produto foi filtrado e isolado como um sólido alvo.

Rendimento: 776 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 354. 166 (c). Etilisopropilamida do ácido 2-acetil-9-etoxi-8-metoxi-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidropirrolo-[2,1-a] isoquinolino-3 -carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 112b (20 mg), N-etilisopropilamina (12 fil), CIP (20 mg) e DIPEA (42 μΐ) em diclorometano (1 ml), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 100 °C durante 5 minutos. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (0 —» 90 % de acetonitrilo; sistema 1) . O TFA foi retirado lavando o produto com uma solução aquosa de bicarbonato de sódio.

Rendimento: 9 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 481; HPLC* Rt = 3,36 minutos (método 1); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 200 0 nM.

Exemplo 113 terc-Butilmetilamida do ácido 9-difluorometoxi_0 , . „ ---Í-Jjç-met oxi-1- tiazol-2-il-5, 6-di-hidropirrolo [2, 1-a] isoquinoljjao carboxílico (a). 4-Difluorometoxi-3-metoxibenzaldeído

Uma mistura de 4-hidroxi-3-metoxibenzald»<^ tíldo (6 g) , CS2CO3 (25,7 g) e 2- cloro-2,2-difluoroacetato . . , . u metilo (5

uma hora. A ml) em DMF (50 ml), foi agitada a 90 °C durante 167 temperatura ambiente, a mistura de reacção foi deitada em água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada duas vezes com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1:1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 2,1 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 203,1. (b) .1-Difluorometoxi-2-metoxi-4-((E)-2-nitrovinil)-benzeno

Uma mistura do produto do Exemplo 113a (2,1 g) e acetato de amónio (0,76 g) em nitrometano (15 ml) foi agitada a 100 °C durante uma hora. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo e o resíduo foi dissolvido em diclorometano. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [2:1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 1,36 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 246,0. (c) . 2-(4-Difluorometoxi-3-metoxifenil)-etilamina A 0 °C, uma solução do produto do Exemplo 113b (1,36 g) em THF seco (5 ml) foi adicionada gota a gota a uma mistura de hidreto de lítio e alumínio em THF seco (10 ml) e éter dietílico (10 ml). Depois de agitar a 65 °C durante 2 horas, deixou-se que a mistura de reacção chegasse a temperatura ambiente e extinguiu-se com 5 ml de água em THF (12 ml). Adicionou-se uma solução aquosa de NaOH (2,5 ml, 2 M) e água (1,3 ml). A mistura foi filtrada sobre decalite. O filtrado foi concentrado a vácuo e dissolvido em acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada duas vezes com uma solução aquosa de HC1 (1 M). A camada aquosa foi basifiçada com uma solução aquosa de NaOH (2 M) até pH = 10, e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 760 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 218,3. (d) . Éster alílico do ácido [2-(4-difluorometoxi-3-metoxifenil)-etil]-carbâmico 168 A 0 °C, uma solução de cloroformiato de alilo (450 μΐ) em diclorometano (5 ml) foi adicionada gota a gota a uma solução do produto do Exemplo 113c (760 mg) e DIPEA (0,9 ml) em diclorometano (25 ml) . Depois de agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, a mistura de reacção foi lavada com uma solução aquosa de HC1 (1 M), uma solução aquosa saturada de NaHC03 e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [2:1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 669 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 302,3. (e) . 2-Éster alílico do ácido 7-difluorometoxi-6-metoxi-3,4-di-hidro-lH-isoguinolina-l,2- dicarboxílico A 0 °C, ácido sulfúrico concentrado (2,5 ml) foi adicionado gota a gota a uma mistura do produto do Exemplo 113d (670 mg) e ácido glioxílico monoidrato (307 mg) em ácido acético (8 ml). Depois de agitar a temperatura ambiente durante uma hora, a mistura de reacção foi deitada sobre água gelada e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1:4 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 613 mg. (f) . Acido 7-difluorometoxi-6-metoxi-l, 2,3,4- tetrahidroisoquinolino-l-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 113e (610 mg), dimedona (359 mg) e Pd(PPh3)4 (1,97 g) em THF (5 ml) e água (0,5 ml), foi agitada a 65 °C durante uma hora. A mistura de reacção tornou-se turva. A temperatura ambiente, foi adicionado éter dietilico (5 ml) e a mistura foi arrefecida num banho de gelo. Os sólidos foram recolhidos por filtração e secos a vácuo (50 °C) durante 18 horas.

Rendimento: 350 mg. 169 (q) . Éster etílico do ácido 9-difluorometoxi-8-metoxi-l-tiazol-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 113f (85 mg) e cloreto de etiloxalilo (38 μΐ) em THF (2 ml) foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 100 °C durante 5 minutos. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo. Uma mistura do resíduo e 2-etinil-tiazol (102 mg) em anidrido acético (3 ml) foi aquecida utilizando irradiação por microondas a 140 °C durante 15 minutos. A mistura de reacção foi diluída com diclorometano e lavada com uma solução aquosa saturada de NaHCCb e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [2:1 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 48 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 421,1. (h) , Ácido 9-difluorometoxi-8-metoxi-l-tiazol-2-il-5, 6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxilico

Uma mistura do produto do Exemplo 113g (48 mg) e KOH sólido (19 mg) em etanol (2 ml) e água (2 ml) foi agitada a 80 °C durante uma hora. A temperatura ambiente, a mistura de reacção foi acidificada com uma solução aquosa de ácido cítrico (1,0 M) . A camada aquosa foi extraída com diclorometano e a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 37 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 392,9. (i) . terc-Butilmetilamida do ácido 9-difluorometoxi-8-metoxi-l-tiazol-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1— a] isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 113h (37 mg), DIPEA (82 μΐ) , terc- butil-metilamina (23 μΐ) e HATU (54 mg) em diclorometano (3 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi lavada com uma solução aquosa de HC1 (0,1 N) e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo 170 foi purificado por HPLC preparativa (20 —> 100 % de acetonitrilo; sistema 1).

Rendimento: 28 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 462,3; HPLC

analítica: Rt = 17,31 minutos (método 7); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 39,6 nM.

Exemplo 114

Etilisopropilamida do ácido 8,9-dimetoxi-7-metil-l-tiofeno-2-Í1-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-3-carboxílico (a) . Etilisopropilamida do ácido 7-bromo-8,9-dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico A etilisopropilamida do ácido 7-bromo-8,9-dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico foi preparada de maneira similar ao Exemplo 1, a partir de 2-(2-bromo-3,4-dimetoxifenil)-etilamina. A preparação de 2-(2- bromo-3,4-dimetoxifenil)-etilamina pode ser encontrada na literatura: J. Weinstock, et ai., J. Med. Chem., 29, 2315 (1986); J.E. Toth, P.R. Hamann e P.L. Fuchs, J. Org. Chem., 53, 4694(1988). 1H RMN (CDC13) 1,28 (9H, 3 x CH3), 3,15 (t, 2H, H—6) , 4,20 (t, 2H, H-5), 4,65 (m, 1H, CH-isopropilo) , 6,40 (s, 1H, H2-pirrol), 6,97 (s, 1H, H9), 3,48 (s, 3H, 0CH3) , 3,84 (s, 3H, 0CH3); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 504. (b) . Etilisopropilamida do ácido 8,9-dimetoxi-7-metil-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico 171 A uma solução do produto do Exemplo 114a (50 mg) em THF seco (2 ml), foi adicionado a -70 °C uma solução de n-butil litio (70 μΐ, 1,6 M em heptano) . A mistura foi agitada durante 30 minutos. Foi adicionado iodeto de metilo (100 μΐ) . A mistura foi agitada por 30 minutos a -70 °C e durante uma hora a temperatura ambiente. A mistura foi deitada em água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca (MgSCh) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado passando o mesmo através de uma coluna curta de sílica, utilizando heptano/acetato de etilo (1/1 v/v) como eluente.

Rendimento: 25 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 439; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 321, 0 nM.

F

115

Exemplo 115

Etilisopropilamida do ácido 7-fluoro-8,9-dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoguinolino-3-carboxílico

Este produto foi preparado de maneira similar à descrita anteriormente no Exemplo 1, partindo de 2-(2-fluoro-3,4-dimetoxifenil)-etilamina (D.L. Ladd e J.

Weinstock, J. Org. Chem., 46,203 (1981). LC/MS-ESI: [M+H]+ = 442; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 937, 0 nM.

Exemplo 116 172

Etilisopropilamida do ácido 10-fluoro-8,9-dimetoxi-l-tiofeno-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoguinolino-3-carboxílico (a) . 2-(3-Fluoro-4,5-dimetoxifenil)-etilamina

Este produto pode ser preparado a partir de 3-fluoro-5-hidroxi-4-metoxi- benzaldeído disponível comercialmente, de acordo com procedimentos de rotina: K.L. Kirk, D.

Cantacuzene, B. Collins, G.T. Chen, E. Nimit, C.R.

Creveling, J. Med. Chem., 25, 680, (1982); J. Dixon, F.

Ince, A.C. Tinker, pedido de patente europeia 0 142 283 (1984). Alternativamente, a partir de 2-alil-oxi-l-fluoro-3-metoxibenzeno, como se descreve em M.T. Clark, D.D. Miller, Tetrahedron Lett., 26,4299 (1985). (b) . Éster_etílico_do_ácido_[2 - (3-fluoro-4, 5- dimetoxifenil)-etil]-carbâmico A uma solução de 2-(3-fluoro-4,5-dimetoxifenil)- etilamina (576 mg) e trietilamina (0,8 ml) em diclorometano (20 ml), foi adicionado gota a gota a 0 °C cloroformiato de etilo (300 μΐ) . A mistura foi agitada durante uma hora, deitada em água gelada, neutralizada com NaHCCb e extraída com diclorometano. As camadas orgânicas foram separadas, secas (MgSCq) , filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo foi passado através de uma coluna curta de sílica (heptano/acetato de etilo como eluente) .

Rendimento: 210 mg. 1H RMN (CDCI3) : δ 6,54 (2, m,

ArH's), 4,65 (s, 1, NH), 4,1 e 2,75 (t, 2, -CH2-) , 3,4 (m, 2, -CH2-) , 1,2 (t, 3, etilo), 4,1 (q, 2, etilo), 3,86 e 3,90 (2xs, 6, 0CH3) . (c) . Ácido_8-fluoro-6, 7-dimetoxi-l, 2,3,4- tetrahidroisoquinolino-l-carboxílico

Ao produto do Exemplo 116b (210 mg) em ácido acético (3 ml), foi adicionado ácido glioxílico monoidrato (80 mg). A 0 °C, foi adicionado gota a gota ácido sulfúrico (1 ml). Depois de agitar durante 30 minutos, a mistura foi diluída com água e extraída com diclorometano. As camadas orgânicas 173 combinadas foram secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo. 0 residuo foi tratado com uma solução aquosa de LiOH (3 ml, 3 M), utilizando irradiação por microondas a 190 °C durante 5 minutos para hidrolisar o carbamato. O pH da reacção foi ajustado a 5,5 e a mistura foi seca por congelação.

Rendimento: 520 mg. (d) . Éster etílico do ácido 10-fluoro-8,9-dimetoxi-l-tiofeno-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 116c (500 mg) e cloreto de etiloxalilo (250 mg) em THF (3 ml), foi agitada utilizando irradiação por microondas a 100 °C durante 5 minutos para formar o N-oxalato. Em seguida foi adicionado anidrido acético (1 ml) e 3- etiniltiofeno (220 mg) . A mistura foi aquecida a 140 °C utilizando irradiação por microondas durante 5 minutos. A mistura foi deitada em água, agitada durante 15 minutos, extraída com acetato de etilo e lavada até a neutralidade com solução de NaHCCb. As camadas orgânicas combinadas foram secas (MgSCU) , filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (heptano/acetato de etilo).

Rendimento: 60 mg, (e) . Etilisopropilamida do ácido 10-fluoro-8,9-dimetoxi-l-tiofeno-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico 0 produto do Exemplo 116d foi saponificado com LiOH em dioxano-água (1:1 v/v), e acoplado com etildiisopropilamina utilizando o método descrito no Exemplo 105c.

Rendimento: 9 mg. 1H RMN (CDCI3) 8 6,43 (s, 1H, pirrol H) , 6,65 (s 1, 1H, H7-Ar), 3,78 (s, 3H, 0CH3) , 3,90 (s, 3H, OCHj), 2,98 (t, 2H, H-6), 4,20 (t, 2H, H5), 1,25 (9H, isopropil e etil CH3) , 4,70 (m, 1H, isopropil CH), 3,45 (m, 2H, NCH2) ; LC/MS-ESI: [M+H]+ = 442; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 318,0 nM. 174

117b

Exemplo 117

Etilisopropilamida do ácido 8-bromo-9-metoxi-l-tiofeno-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoguinolino-3-carboxílico (a) . Éster etílico do ácido [2-(3-bromo-4-metoxifenil)-etil]-carbâmico A uma solução de 3-metoxi-4-bromofenetilamina (2,3 g) e trietilamina (2,7 ml) em diclorometano (20 ml), foi adicionado gota a gota a 0 °C cloroformiato de etilo (1,5 ml). Depois de agitar durante 3 horas, a mistura de reacção foi lavada com água e NaHCCg a 10 %. A camada orgânica foi seca (MgSCg) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, utilizando heptano/acetato de etilo (1/1 v/v) como eluente.

Rendimento: 2,9 g. TLC Rf = 0,35 (heptano/acetato de etilo 1/1); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 302/304. (b) . Éster 2- etílico do ácido 6-bromo-7-metoxi-3,4-di-hidro-lH-isoguinolina-l,2- dicarboxílico

Uma solução do produto do Exemplo 117a (2,7 g) e ácido glioxílico (1,1 g) em ácido acético (12 ml) foi tratada com ácido sulfúrico (4 ml) a 5-10 °C. A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 16 horas e deitada em água gelada. A mistura foi extraída com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas (MgS04) , filtradas e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (diclorometano/ metanol como eluente). 175

Rendimento: 2,9 g. TLC Rf = 0,31 (diclorometano/metanol 9/1); LC/MS-ESI: [M+H]+ = 358/360. (c) . Ácido 6-bromo-7-metoxi-l,2,3,4-tetrahidroisoquinolino-1 -carboxilico

Uma mistura do produto do Exemplo 117b (2,9 g) em água (12 ml) foi tratada com LiOH (1,2 g) e aquecida durante 5 minutos utilizando irradiação por microondas a 200 °C. A mistura foi arrefecida e acidificada até pH 5. O produto foi filtrado e os sólidos restantes foram secos a vácuo.

Rendimento: 1,29 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 286/288. (d) . Éster etílico do ácido 8-bromo-9-metoxi-l-tiofeno-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a] isoguinolino-3-carboxílico A uma suspensão do produto do Exemplo 117c (645 mg) em THF (4 ml), foi adicionado gota a gota cloreto de etiloxalilo (250 μΐ). Em seguida, a mistura foi aquecida a 100 °C utilizando irradiação por microondas durante 5 minutos. A mistura foi arrefecida. Foi adicionado anidrido acético (2 ml) e 3-tienilacetileno (220 μΐ). A mistura foi agitada e aquecida novamente utilizando irradiação por microondas durante 5 minutos a 140 °C. A mistura de reacção foi arrefecida, diluída com 40 ml de diclorometano e lavada sucessivamente com solução de NaOH (2 M) e água. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel (heptano/acetato de etilo como eluente).

Rendimento: 900 mg. (e) . Ácido_8-bromo-9-metoxi-l-tiofeno-3-il-5,6-di-hidro- pirrolo [2,1-a] isoquinolino-3-carboxílico

Uma suspensão do produto do Exemplo 117e (900 mg) em dioxano (5 ml) foi tratada com solução de LiOH (2 ml, 3 M), e aquecida utilizando irradiação por microondas durante 5 minutos a 180 °C. A mistura foi arrefecida e acidificada até pH 4 com HC1 2N. O precipitado foi seco.

Rendimento: 850 mg. 176 (f) . Etilisopropilamida do ácido 8-bromo-9-metoxi-l- tiofeno-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-3-carboxílico A uma suspensão do produto do Exemplo 117c (850 mg) em diclorometano (8 ml), foi adicionado hexafluorofosfato de 2-cloro-l,3-dimetilimidazolina (877 mg), N-etil-N-isopropilamina (1,5 ml) e DIPEA (0,5 ml) . A mistura foi aquecida utilizando irradiação por microondas a 100 °C durante 5 minutos. Em seguida, a mistura foi concentrada e purificada por cromatografia sobre sílica gel (heptano /acetato de etilo como eluente).

Rendimento: 375 mg. *11 RMN (CDCI3): δ 7,13, 7,27, 7,38 (3 m, tienil-H), 7,35 (s, Cl- H), 6,87 (s, C10-), 6,36 (s, C2-H), 4,65 (m, 1, isopropilo) , 4,21 (t, 2, H5), 2,98 (t, 2, H6), 3,44 (q, 2, etilo), 3,51 (s, 3, metoxi) , 0,88 (t, 3, etilo), 1,26 (m, 6, isopropilo); hFSHRago (CHO luc)

Exemplo 118 terc-Butil-metil-amida do ácido 1-(2,4-difluorofenil)-8,9-dimetoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoguinolino-3- carboxílico (a). Éster etílico do ácido 1-(2,4-difluorofenil)-8,9-dimetoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-3- carboxílico

Uma mistura de ácido 2-etoxioxalil-6,7-dimetoxi-1,2,3,4- tetrahidroisoquinolino-l-carboxílico (1 g), 1- etinil-2,4-difluorobenzeno (450 mg) e anidrido acético (1 ml) em THF (3 ml), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 120 °C durante 15 minutos. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e uma solução aquosa de hidróxido de sódio (1 N), e lavada com 177 água e salmoura. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [1/0 —» 6/4 (v/v) ] como eluente. 0 composto foi isolado como um sólido alvo.

Rendimento: 980 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 414. (b) . Ácido_1_- (2, 4-difluorofenil) -8,9-dimetoxi-5,6-di- hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3- carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 118a (980 mg) e uma solução aquosa de LiOH (3 M)/dioxano [1:1 (v/v), 6 mi], foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 150 °C durante 5 minutos. A mistura de reacção foi arrefecida a temperatura ambiente. Adicionou-se uma solução aquosa de cloreto de amónio (10 ml, 4N). 0 precipitado foi filtrado e lavado com água. O produto foi isolado como um sólido alvo.

Rendimento: 881 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 386. (c) . terc-Butil-metil-amida do ácido 1-(2,4-difluorofenil)-8,9-dimetoxi-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 118b (25 mg), N- metil-N-terc- butilamina, HATU (37 mg) e DIPEA (57 μΐ) em diclorometano (1 ml), foi agitada e aquecida utilizando irradiação por microondas a 110 °C durante 5 minutos. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e lavada com água e uma solução aquosa de ácido cítrico (a 3 %) . A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [0 —» 6/4 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 14 mg. MS-ESI: [M+H]+ = 455; HPLC analítica: R, = 2,56 minutos (método 1); hFSHRago (CHO luc) EC5o = 48,3 nM. 178

Exemplo 119 [(Isobutilmetilcarbamoil)-metil]-metilamida do ácido 8,9-dimetoxi-l-tiofeno-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico e Éster etílico do ácido [(8,9-dimetoxi-l-tiofeno-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-metilamíno]-acético (a) . Éster etílico do ácido 8,9-dimetoxi-l-tiofeno-3-il- 5.6- di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico A síntese de éster etílico do ácido 8,9-dimetoxi-l -tiofeno-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico (119a) foi conseguida de acordo com o método descrito para o Exemplo lh, partindo de ácido 2- etoxioxalil-6,7-dimetoxi-l,2,3,4- tetrahidroisoquinolino-1-carboxílico.

Rendimento: 14,95 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 384,0. (b) . Ácido 8,9-dimetoxi-l-tiofeno-3-il-5,6-di-hidro- pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3- carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 119a (4,45 g) e uma solução de LiOH em dioxano (88 ml, 2 M) foi aquecida a refluxo durante 2 horas. A mistura de reacção foi arrefecida a temperatura ambiente e acidificada com uma solução aquosa de HC1 (2 N) até pH = 6. Os sólidos foram recolhidos por filtração e secos a vácuo.

Rendimento: 4 g. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 356,1. (c) . Éster etilico do ácido [(8,9-dimetoxi-l-tiofeno-3-il- 5.6- di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-metilamíno]-acético 179

Uma mistura do produto do Exemplo 119b (500 mg), trietilamina (1,98 ml), CIP (1,96 g) e éster etílico de sarcosina cloridrato (866 mg) em diclorometano (100 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi concentrada a vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com diclorometano/metanol [98/2 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 430 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 455,1; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 42 nM. (d) . Ácido [(8,9-dimetoxi-l -tiofeno-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3- carbonil)-metilamino]-acético

Uma mistura do produto do Exemplo 119c (430 mg) e uma solução aquosa de LiOH (4,8 ml, 2 M) em dioxano (4,8 ml) foi agitada a temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura de reacção foi acidificada com uma solução aquosa de HC1 (2 N) até pH =6, e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 360 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 427,1. (e) . [(Isobutilmetilcarbamoil)-metil]-metilamida do ácido 8,9-dimetoxi-l-tiofeno-3-il-_5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- a]isoquinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 119d (15 mg), HATU (15 mg), DIPEA (12 pl) e iV-metil-iV-isobutilamina (4 mg) em diclorometano (1 ml), foi agitada durante 48 horas e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em acetato de etilo, lavado com água e salmoura, seco (MgS04) , filtrado e concentrado a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com heptano/acetato de etilo [40 —> 100 % de acetato de etilo] como eluente.

Rendimento: 7,6 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 496,1; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 1,080 nM. 180 ι ο

120a

Exemplo 120 terc-Butilmetilamida do ácido 8,10-dimetoxi-l-tiofeno-3-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico

Este produto foi preparado como foi descrito anteriormente nos Exemplos la-lg, partindo de 3,5-dimetoxifenetilamina. TLC Rf = 0,34 (CH2Cl2-acetona 8/2); ΧΗ RMN (CDC13) δ 3, 83, 3,22 (2xs, 6H, 0CH3) , 6,4 (d, 1H, 2H-pirrol), 6,28, 6,44 (2xbd, 2H, H7 e H9), 6, 84, 7, 02, 7,20 (3xm, 3H, H3,H4,H5- tiofeno) , 2,98 (m, 2H, H6), 4,20 (m, 2H, H5) ; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 699, 0 nM.

Exemplo 121 terc-Butilmetilamida do ácido 8-metoxi-9-metoximetil-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico e terc-Butil-metil-amida do ácido 9-hidroximetil-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxiIico (a). terc-Butilmetilamida do ácido 9-hidroximetil-8-metoxi-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico A uma solução do produto do Exemplo 91a (450 mg) numa mistura de THF e metanol [10 ml, 1/1 (v/v)], foi adicionado NaBH4 (80 mg) em porções. Depois de agitar durante uma hora, a mistura foi diluida com água e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 181 resíduo foi triturado com éter diisopropílico para proporcionar um material alvo cristalino.

Rendimento: 290 mg. P.f. 146-150 °C. TLC Rf = 0,30 (heptano/acetato de etilo 1/1). LC/MS-ESI: [M+H]+ = 425,2.

ΧΗ RMN (CDC13) 5 4, 47 (s, 2H, CH20H) , 7,33 e 6,45 (2xs, 2H H7 e H10), 6,75 (s, 1H, H2 pirrol); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 10 nM. (b) . terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-metoximetil-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1— a]isoquinolino-3-carboxilico A uma solução do produto do Exemplo 121a (156 mg) em DMF (3 ml), foi adicionado NaH (50 mg; dispersão a 60 % em óleo) . A mistura foi agitada durante 15 minutos, seguido pela adição de iodeto de metilo (200 μΐ) . A reacção foi agitada durante 2 horas mais e deitada em água. A mistura foi extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado em sílica gel, com heptano/acetato de etilo como eluente. O produto foi cristalizado em éter dietílico/heptano.

Rendimento: 75 mg. P.f. 128-130 °C. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 439,2. XH RMN (CDC13) δ 3,22 e 3,85 (2xs, 6H, 2x OCH3) , 3,17 (s, 3H, NCH3), 6,73 (s, 1H, H2 pirrol), 6,45 e 7,40 (2xs, 2H, H7 e H10); hFSHRago (CHO luc) EC50 =1,6 nM.

122c

Exemplo 122 182 1-[3-(2,2-Dimetilpirrolidina-l-carbonil)-8-metoxi-l- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a] isoguinolino-9-ί 1]-etanona (a) . Éster etílico do ácido 9-acetil-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 82i (115 mg) e 1- etoxiviniltri-n- butilestanho (288 mg) em tolueno (4 ml), foi desoxigenada fazendo passar através azoto gasoso durante 2 minutos. Foi adicionado cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) (7,5 mg), e a suspensão foi desoxigenada novamente e agitada durante 6 horas a 110 °C. Foi adicionado acetato de etilo (4 ml) e uma solução aquosa de HC1 (1 N). A mistura foi agitada vigorosamente durante 5 minutos. As camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 residuo foi purificado por cromatografia em silica gel, com heptano/acetato de etilo [9/1 —> 6/4 (v/v) ] como eluente.

Rendimento: 95 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 396,1. (b) . Ácido 9-acetil-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoguinolino-3-carboxílico

Uma solução aquosa de NaOH (1 ml, 2N) foi adicionada a uma solução do produto do Exemplo 122a (90 mg) em etanol (10 ml) . Depois de agitar durante 6 horas a 60 °C, a mistura de reacção foi deitada numa solução aquosa de ácido cítrico (a 10 %) e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo.

Rendimento: 84 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 368,2. (c) . 1-[3-(2,2-Dimetil-pirrolidina-l-carbonil)-8-metoxi-l- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-9-il]-etanona TBTU (110 mg) foi adicionado a uma solução do produto do Exemplo 122b (84 mg), DIPEA (200 μΐ) e 2,2- dimetilpirrolidina cloridrato (62 μΐ) em NMP (5 ml). Depois de agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, a mistura 183 de reacção foi deitada numa solução aquosa saturada de NH4C1 e extraida com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. 0 residuo foi purificado por cromatografia em silica gel, com heptano/acetato de etilo [1/0 —» 6/4 (v/v)] como eluente.

Rendimento: 76 mg. LC/MS-ESI: [M+H]+ = 449,2; HPLC analítica: Rt = 20,08 minutos (método 7); hFSHRago (CHO luc) EC50 = 2,0 nM.

Exemplo 123 3-(terc-butil-metil-amida) 9-[ 1,3,4]tiadiazol-2-ilamida do ácido_8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1- a]isoquinolino-3,9-dicarboxílico (a). Ácido 3-(terc-butilmetilcarbamoil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-Í1-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoguinolino-9-carboxílico Uma solução do produto do Exemplo 91a (220 mg) numa mistura de t- butanol (15 ml), dioxano (2 ml) e 2-metil-2-buteno (0,5 ml), foi tratada com uma solução de NaC102 (200 mg) e Nal^PCq (350 mg) em água (2 ml) . Depois de agitar durante uma hora, a reacção completou-se. Foi adicionado água (30 ml), seguida por tiosulfato de sódio saturado (2 ml) e NaH2P04 (0,5 g) . 0 produto foi extraído com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas, secas e concentradas a vácuo. O resíduo foi tratado com éter diisopropílico para proporcionar um sólido laranja claro.

Rendimento: 200 mg. P.f.: 215-217 °C (acetato de etilo); Rf 0,42 (tolueno/acetona 1/1); RMN (DMSO-d6) δ 12,4 (sl, 1, COOH) , 7,78 (s, 1, H10), 7,12 (s, 1, H7), 6,4 (s, 1, pirrol H3), 3,83 (s, 3, 0CH3), 3,04 (s, 3, NCH3) ; MS-ESI: [M+l]+ 439,1. 184 (b) ._3- (terc-butil-metil-amida)_9-[1,3,4] tiadiazol-2- ilamida do ácido 8-metoxi-l-tiofeno-2- il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoguinolino-3,$-dicarboxílico

Uma mistura do produto do Exemplo 123a (45 mg), 2-aminotiadiazol (25 mg), N-etilmorf olina (40 ni) , TBTU (40 mg) e DMF (1 ml), foi agitada a temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura foi deitada sobre solução aquosa a 5 % de NH4C1 e extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel, com tolueno/acetona como eluente. O resíduo foi triturado com éter, para proporcionar cristais brancos.

Rendimento: 26 mg. P.f.: 149-152 °C; MS-ESI: [M+H]+ 522,14; RMN (DMSO-d6) δ 12,1 (s, 1, NH) , 9,20 (s, 1, tiadiazol) , 7,83 (s, 1, H10), 7,25 (s, 1, H7) , 6,42 (s, 1, H3-pirrol), 3,97 (s, 3, OCH3), 3,07 (s, 3, NCH3) ; Rf (tolueno/acetona 1/1) 0,34; hFSHRago (CHO luc) EC50 = 1 nM.

Exemplo 124

Actividade agonista dos compostos no receptor de FSH humano expressado em células CHO A actividade agonista dos compostos no receptor de FSH humano foi determinada em células de ovário de hamster chinês (CHO), transfectadas estavelmente com o receptor de FSH humano e cotransfectadas com um promotor/elemento que responde a cAMP (CRE) que dirige a expressão de um gene repórter de luciferase de pirilampo. A união dos compostos ao receptor de FSH acoplado a proteína Gs terá como resultado um aumento de cAMP, que por sua vez induzirá uma transactivação aumentada do repórter de luciferase. As células (7,500 células/poço de uma placa de 384 poços) foram incubadas em meio modificado F12 mínimo essencial de Dulbecco (Invitrogen), suplementado com 1 Hg/ml de insulina de bovino, 5 ng/ml de apo-transferrina humana, 80 U/ml de penicilina G e 80 pg/ml de estreptomicina, com os compostos 185 de teste (concentração entre 0,0316 nM e 10,0 μΜ) , em duplicata numa atmosfera humidificada (95 %) com 5-7 % de C02 e a 37 °C. A concentração final de DMSO foi de 1 %. Depois de 4 horas de incubação, deixou-se que as placas se ajustassem à temperatura ambiente durante uma hora. Em seguida foi adicionado aos poços solução Luclite (PerkinElmer), e as células foram deixadas lisar por pelo menos uma hora a temperatura ambiente. Posteriormente, a actividade de luciferase foi medida num contador de luminescência. O sinal é expresso como contagens por segundo (cps) . A EC50 (concentração do composto de teste que causa uma estimulação semi- máxima (50 %) de luciferase, em comparação com o efeito máximo que pode conseguir o composto) e os valores de eficácia (efeito máximo do composto de teste como percentagem do efeito máximo de FSH humana recombinante) dos compostos foram determinados utilizando o programa de software MathlQ (versão 2.0, ID Business Solutions Limited). Os dados de EC50 indicam-se nos exemplos de sintese. 186

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante ou cuidado na sua elaboração, ou IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição WO 2003004028 A [0006] WO 200008015 J A [0007] WO 2004031182 A [0007] WO 200209706 - A [0007] WO 2005087765 A [0007] WO 2006117368 A [0007] WO 2006117370 A [0007] WO 2006117371 A [0007] WO 2006117023 A [0007] WO 2006089815 A [0013] WO 2006075012 A [0013] WO 2005002579 A [0013] WO 2005003129 A [0013] WO 2005003130 A [0013] WO 2003051877 A [0013] WO 2003014115 A [0013] WO 2003014116 A [0013] WO 2003014117 A [0013] WO 200248144 A [0013] WO 05003130 A [0093] • WO 0248144 A [0093] • WO 9967250 A, Banwell [0093] • WO 9312091 A, S. Bajusz [0096] • EP 0142283 A, J. Dixon, F. Ince, A.C. Tinker [0722] 187

Literatura não relacionada com patentes referida na descrição • Sharp, R.M. Clin Endocrinol., 1990, vol. 33, 787-807 [0002] • Dorrington ; Armstrong. Recent Prog. Horm. Res., 1979, vol. 35, 301-342 [0002] • Insler, V. Int. J. Fertility, 1988, vol. 33, 85-97 [0002] • Navot ; Rosenwaks. J. Vitro Fert. Embryo Transfer, 1988, vol. 5, 3-13 [0002] • Morse et al. Amer. J. Reproduct. Immunol. And Mícrobiology, 1988, vol. 17, 143 [0003] • Olijve et al. Mol. Hum. Reprod., 1996, vol. 2, 371-381 [0003] • Devroey et al. Lancet, 1992, vol. 339, 1170-1171 [0003] • c. Bailly. Curr. Med. Chem. Anti~Cancer Agents, 2004, vol. 4, 363-387 [0011] • Fan , H. et al. Chem. Rev., 2008, vol. 108, 264-287 [0011] • D. Pia et al. J. Med. Chem., 2006, vol. 49, 3257 [0012] • Database. 1994:655585 [0090] • M. Alvarez et al. Tetrahedron Lett., 2005, vol. 46, 2041 [0093] • M. Alvarez et al. J. Org. Chem., 2005, vol. 70, 8231 [0093] • S. Handy. J. Org. Chem., 2004, vol. 69, 2362 [0093] • W. Anderson et al. J. Med. Chem., 1984, vol. 27, 1321 [0093] • S. [0093] Eguchi et al. Tetrahedron, 1996, vol. 52, 12049 • R. Huisgen et al. Chem. Ber., 1970, vol. 103, 2611 [0095] 188 • F. Hershenson. J. Org. Chem.r 1975, vol. 40, 740 [0095] • A. Suzuki. Chem. Comm., 2005, 4759 [0104] • Bach et al. Tetrahedron, 2005, vol. 61, 2245 [0104] • R. Rossi et al. Synthesis, 2004, 2419 [0104] • Bassett et al. J. Chem. Soc., 1954, 1188 [0111] • Singh et al. Tetrahedron Lett., 1971, 321 [0111] • M. Kakushima et al. J. Org. Chem., 1983, vol. 48, 3214 [0114] • R.M. Silverstein et al. J. Org. Chem., 1955, vol. 20, 668 [0114] • T. Higuchi ; V. Stella. Pro-drugs as Novel Delivery

Systems. A.C.S. Symposium Series, 1987, vol. 14 [0116] • Bioreversible Carriers in Drug Design. American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987 [0116] • T. Higuchi ; W. Stella. Pro-drugs as Novel Delivery

Systems. A.C.S. Symposium Series, vol. 14 [0116] • Jia et al. Mol .Endocrin., 1991, vol. 5, 759-776 [0124] • Sambrook et al. Molecular Cloning: a Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press [0125] • Stratowa, Ch. ; Himmler, A. ; Czernilofsky, A.P. Curr.

Opin. Biotechnol., 1995, vol. 6, 574-581 [0132] • Gennaro, A.R. et al. Remington: The Science and Practice of Pharmacy. Lippincott Williams & Wilkins, 2000 [0140] • J. E. Richman ; T. J. Atkins . J. Am. Chem. Soc., 1974, vol. 96, 2268 [0234] • R.C. Hoye ; J.E. Richman f G.A. Dantas ; M.F. Lightbourne ; L. Scott Shinneman. J. Org. Chem. , 2001, vol. 66, 2722 [0234] • G. Ewin ; J.O. Hill. J. Chem. Res (M), 1985, 3501 [0234] • J.A. Halfen ; H.L. Moore ; D.C. Fox. Inorg. Chem., 2002, vol. 41, 3935 [0234] 189 • M.J. Johansson ; L. Schwartz ; S. Mamedjkouh ; N.

Kann. Tetrahedron Asymmetry, 2004, vol. 15, 3531 [0244] • O. Huttenloch ; E. Laxman ; H. Waldmann. Chem. Eur. J., 2002, vol. 8 (20), 4767 [0247] • S.W. Brown ; P.L. Pauson. J. Chem. Soc. Perkin Trans I, 1990, 1205 [0257] • D.P. Becker ; D.L. Flynn. Tetrahedron Lett., 1993, vol. 34 (10), 2087 [0257] • D.P. Decker ; D.L. Flynn. Tetrahedron, 1993, vol. 49 (23), 5047 [0257] • Y. Li ; T. Marks. J. Am. Chem. Soc., 1998, vol. 12 0, 1757 [0257] • S.G. Kuznetsov ; A.V. Eltsov. J. Gen. Chem. USSR, 1962, vol. 32, 502 [0279] [0520] • J. Weinstock et al. J. Med. Chem., 1986, vol. 29, 2315 [0716] • J.E. Toth ; P.R. Hamann ; P.L. Fuchs. J. Org. Chem., 1988, vol. 53, 4694 [0716] • D.L. Ladd ; J. Weinstock. J. Org. Chem., 1981, vol. 46, 203 [0720] • K.L. Kirk ; D. Cantacuzene ; B. Collins ; G.T. Chen ; Y. Nimit ; C.R. Creveling. J. Med. Chem., 1982, vol. 25, 680 [0722] • M.T. Clark ; D. D. Miller. Tetrahedron Lett., 19 85, vol. 26, 4299 [0722]

Claims (9)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de acordo com a fórmula geral (I): R.9 m

R3 Ri R2 Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que a ligação C5-C6 pode ser saturada ou não saturada, R1 é halogéneo, ciano, alquilo(Cl-6), alcenilo(C2-6), alcinilo(C2-6), cicloalquilo(C3-6), cicloalcenilo(C5-6), ou fenilo ou heteroarilo(Cl-5), estando cada uma das ditas fracções fenilo e heteroarilo opcionalmente substituída independentemente com um ou mais substituintes seleccionados de R ; R2 é H, ciano, halogéneo, alquilo(Cl-4) , alcoxi(Cl-4)alquilo(Cl-4), hidroxialquilo(Cl-4), formilo, alquilcarbonilo (Cl-4 ) , C=N-OH, C=N-0CH3,· R3 é R15, R16-amino, ou R3 é alquilo(Cl-6), cicloalquilo(C3-6), (di)[alquil(Cl-4)]aminoalquilo(Cl-4) , ou R3 é heterocicloalquil(C2-6)alquilo(Cl-4) , cuja fracção heterocicloalquilo(C2-6) pode estar opcionalmente substituída com alquilcarbonilo(Cl-4) ou cicloalquilcarbonilo(C3-6), ou R3 é um grupo seleccionado de

O 3 2Ν, R11

* y Ν

Η

Η LΝ. Ο

Ν Ο . ? R7 é Η, halogéneo ou metilo; R8 é H, halogéneo, alquilo(Cl-4), alcoxi(Cl-4) , alcoxi(Cl-4)alquilo(Cl-4) ou hidroxi; R9 é H, formilo, halogéneo, hidroxi, amino, ciano, nitro, alcinilo(C2-6), cicloalcoxi(C3-6), heterocicloalcoxi(C2-5), 3 heteroaril-oxi(C2-5), (di)[alquil(Cl-4)]aminocarboxi, alquilcarbonilo(Cl-6), alcoxicarbonilo(Cl-4), (di)[alquil(Cl-4)]aminocarbonilo, heterocicloalquilcarbonilo(C2-6), (di)[alquil(Cl-4)]amino, heterocicloalquilcarbonilamino(C2-6), (di)[alquil(Cl- 4)]aminocarbonilamino, alcoxicarbonilamino(Cl-4), (di)[alquil(Cl-4)]aminosulfonilamino, alquilsulfonilamino(Cl-4), l-imidazolidinil-2-ona, 3- oxazolidinil-2-ona ou l-pirrolidinil-2-ona, ou R9 é alquilo(Cl-6), alcoxi(Cl-6), alcenilo(C2-6), alquilcarbonilamino(Cl-6) , heterocicloalquilo(C2-6) ou heteroarilaminocarbonilo(C2-5), estando cada um dos ditos alquilo, alcoxi, alcenilo, heterocicloalquilo e heteroarilo opcionalmente substituído independentemente com um ou mais substituintes seleccionados de R14, ou R9 é heteroarilo(Cl-5), fenilo ou fenoxi, todos opcionalmente substituídos independentemente com um ou mais subst ituintes seleccionados de R13; R10 é H, metoxi, halogéneo ou metilo; R 11 é H, alquilo(Cl-6) ou alcenilo(C3-4); ,12 R^ é alquilcarbonilo(Cl-4) ou cicloalquilcarbonilo(C3-6), ambos opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes seleccionados de R13; R13 é hidroxi, amino, halogéneo, nitro, trifluorometilo, ciano, alquilo(Cl-4), alcoxi(Cl-4), tioalquilo(Cl-4) ou (di)[alquil(Cl-4)]amino; R14 é hidroxi, amino, halogéneo, azida, ciano, alquilo(Cl-4), alcoxi(Cl-4), tioalquilo(Cl-4), (di)[alquil(Cl-4)Jamino, cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C2-6), alquilcarbonilamino(Cl-4), (di)[alquil(Cl-4)]aminocarbonilamino, alquilsulfonilamino(Cl-4), alcoxicarbonilamino(Cl-4), alquilcarbonilo(Cl-4), alcoxicarbonilo(Cl-4), alquilsulfoxi(Cl-4), heterocicloalcoxi(C2-6), (di)[alquil(Cl-4)]aminocarbonilo, 4 alquilsulfonilo(Cl-4), cicloalquilcarbonilamino(C3-6) e [alquil(Cl-4)][alquilcarbonil(Cl-4)]amino; R 15 R 16 em R 15 R16-amino sao seleccionados independentemente de H ou alquilo(Cl-6 ) , cicloalquilo(C3-6), heterocicloalquilo(C2-6) ou (di)[alquil(Cl-4)]amino, todos opcionalmente substituídos com hidroxi, alquilo(Cl-4), alcoxi(Cl-4) , alquilcarbonilo(Cl-4) , alcoxicarbonilo(Cl-4), cicloalquilcarbonilo(C3-6), (di)[alquil(Cl-4)]amino, (di)[alquil(Cl-4)]aminocarbonilo ou (di)[alcoxi(Cl-4)alquil(Cl-4)]amino, ou R15, R16-amino estão unidos num anel heterocicloalquilo(C3-8), opcionalmente substituído com R18, ou R15, R16-amino estão unidos num anel heterocicloalquilo(C4-8) ou um anel heterocicloalcenilo(C4-6), em que ambos contêm um azoto e estão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes seleccionados de R17; R17 é hidroxi, amino, halogéneo, alquilo(Cl-4), alcoxi(Cl-4), (di)[alquil(Cl-4)]amino, alquilcarbonilamino(Cl-4), (di)[alquil(Cl-4)]aminocarbonilamino, alquilsulfonilamino(Cl-4), alcoxicarbonilamino(Cl-4), alquilsulfoxi(Cl-4), cicloalquilcarbonilamino(C3-6), [alquil(Cl-4)][alquilcarbonil(Cl-4)]amino, ou R17 é fenilo e heteroarilo(C2-5), ambos opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes seleccionados de R13; e R18 é alquilo(Cl-4), cicloalquilo(C3-6), cicloalquenilcarbonilo(C4-6), (di)[alquil(Cl- 4)]aminocarbonilo, alquilsulfonilo(Cl-4), (di)[alquil(Cl-4)]aminosulfonilo, heterocicloalquilsulfonilo(C2-6), heteroarilo(C2-5), fenilcarbonilo, alquilcarbonilo(Cl-4), cicloalquilcarbonilo(C3-6), heteroarilcarbonilo(C2-5), cujas fenilo, fenilsulfonilo, heteroarilsulfonilo(C2-5) e heterocicloalquilcarbonilo(C2-6), cujas fracções 5 (ciclo)alquilo e (hetero)arilo podem estar substituídas com um ou mais substituintes seleccionados de R13, com a condição de que o composto não seja 3-acetil-pirrolo [2, 1-oí] isoquinolina-l-carbonitrilo . 2. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, em que a ligação C5-C6 é saturada. 3. 0 composto de acordo com as reivindicações 1 ou 2, em que R1 é heteroarilo(Cl-5) , opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de R13. 4. 0 composto de acordo com as reivindicações 1-3, em que R2 é H, ciano, halogéneo, alcoxi(Cl-4)alquilo(Cl-4) ou hidroxialquilo(Cl-4). 5. 0 composto de acordo com a reivindicação 4, em que R2 é H. 6. 0 composto de acordo com as reivindicações 1-5, em que R3 é R15, R16-amino ou

3 7. 0 composto de acordo com a reivindicação 6, em que R é R15, R16-amino. 8. 0 composto de acordo com as reivindicações 1-7, em que R7 é H. 9. 0 composto de acordo com as reivindicações 1-8, em que R8 é alcoxi(Cl-4) ou hidroxi.

10. O composto de acordo com as reivindicações 1-9, em que R9 é halogéneo, ciano, nitro, alcinilo(C2-6), cicloalcoxi(C3-6), heterocicloalcoxi(C2-5), heteroaril- 6 oxi(C2-5), (di)[alquil(Cl-4)]aminocarbonilo, heterocicloalquilcarbonilo(C2-6) ou (di)[alquil(Cl- 4) ]amino, ou R9 é alquilo(Cl-6), alcoxi(Cl-6), alcenilo(C2-6), alquilcarbonilamino(Cl-6) ou heteroarilaminocarbonilo(C2- 5) , cada um dos ditos grupos alquilo, alcoxi, alcenilo ou heteroarilo opcionalmente substituído independentemente com um ou mais substituintes seleccionados de R14, ou R9 é heteroarilo(Cl-5) ou fenoxi, ambos opcionalmente substituídos independentemente com um ou mais substituintes seleccionados de R13. 11. 0 composto de acordo com a reivindicação 10, em que R9 é halogéneo, ciano, nitro, alcinilo(C2-6) ou (di) [alquil(Cl-4)]amino, ou R9 é alquilo(Cl-6), alcoxi(Cl-6), alcenilo(C2-6) ou alquilcarbonilamino(Cl-6), os ditos grupos alquilo, alcoxi ou alcenilo opcionalmente substituídos independentemente com um ou mais substituintes seleccionados de R14, ou R9 é heteroarilo(Cl-5), opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de R13.

12. O composto de acordo com a reivindicação 11, em que R9 é alcinilo(C2-6), ou R9 é alquilo(Cl-6), alcoxi(Cl-6), alcenilo(C2-6) ou alquilcarbonilamino(Cl-6), os ditos grupos alquilo, alcoxi ou alcenilo opcionalmente substituídos independentemente com um ou mais substituintes seleccionados de R14, ou R9 é heteroarilo(Cl-5), opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de R13.

13. O composto de acordo com a reivindicação 12, em que R9 é alquilo(Cl-6). 7 14. 0 composto de acordo com as reivindicações 1-13, em que R10 é H. 15. 0 composto de acordo com as reivindicações 10-13, em que R1 é heteroarilo(Cl-5), opcionalmente substituído com um ou mais substituintes seleccionados de R13, R2 é H, R3 é R15, R16-amino, R7 é H, R8 é alcoxi(Cl-4) e R10 é H.

16. O composto de acordo com as reivindicações 1-15, em que R14 é heterocicloalquilo(C2-6), hidroxi, alcoxi(Cl-4) ou (di)[alquil(Cl-4)]amino. 17. 0 composto de acordo com as reivindicações 1-16, em que R15 e R16 podem ser seleccionados independentemente de alquilo(C1 — 6) . 18. 0 composto de acordo com a reivindicação 17, em que R15 é metilo e R16 é terc-butilo.

19. O composto de acordo com as reivindicações 1-16, em que R3 é 1,4-diazacicloheptan-l-ilo, opcionalmente substituído com alquilcarbonilo(Cl-4) ou cicloalquilcarbonilo(C3-6). 20. 0 composto de acordo com as reivindicações 1-16, em que R e 2,2-dimetilpirrolidino-l-ilo .

21. O composto de acordo com a reivindicação 1 seleccionado do grupo de: (9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2, 1-oí] isoquinolino-3-il) - [4- (tetrahidro-furano-2- carbonil)-[1,4]diazepan-l-il]-metanona; 8 1- [4-(9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2, 1-oí] isoquinolino-3-carbonil) - [ 1, 4] diazepan-l-il] 2- metilsulfanil-etanona; (9-1sopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-Í1-5,6-di-hidro-pirrolo [2, 1-oí] isoquinolino-3-il) - [4 - (tiofeno-2-sulfonil)-[l,4]diazepan-l-il]-metanona; 3,3,3-Trifluoro-2-hidroxi-l-[4-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-[1,4]diazepan-l-il]-propan-l-ona; (4-Ciclobutanocarbonil-[l,4]diazepan-l-il)-(9-isopropoxi-8 metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,Ια] isoquinolino-3-il)-metanona; (d). 3-(4-Ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepano-l-carbonil)-9 isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolina-2-carbonitrilo; [4-(1-Bromo-ciclobutanocarbonil)-[1,4]diazepan-l-il)-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-il)-metanona; [4-(1-Hidroxi-ciclobutanocarbonil)-[1,4]diazepan-l-il]-( isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il 5,6-di-hidro pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-metanona; (9-1sopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-Í1-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-il)-[4-(1-metoxi-ciclobutanocarbonil)-[1,4]diazepan-l-il]-metanona; Ester etílico do ácido 2-acetil-9-etoxi-8-metoxi-l-tiofeno 2-Í1-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico 1- [4-(2-Cloro-9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-[1,4]diazepan 1- il]-etanona; 4- Butil-l-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-[1,4]diazepan 5- ona; 4-Butil-1-[9-(2-hidroxi-2-metilpropoxi)-8-metoxi-l-tiofeno 2- Í1-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil]-[1,4]diazepan-5-ona; 9 1-[5-(9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[ 2,1-oí]isoquinolino-3-carbonil)-[ 1,5]diazocan-l-il]-etanona; Éster terc-butílico do ácido 7-(9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-3,7-diazabiciclo[3.3.1]nonano-3-carboxílico; 1-[7-(9-Isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carbonil)-3,7-diazabiciclo[3.3.1]nona-3-il]-2-metilsulfanil-etanona; terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-hidroxi-etoxi)-8-metoxi-l-tiofeno-2-ilpirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxilico; terc-Butil-metil-amida do ácido 2-formil-9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1-a]isoquinolino-3-carboxilico; terc-Butil-metil-amida do ácido 2-hidroximetil-9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-2-metoximetil-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 2-(hidroxiiminometil)-9-isopropoxi-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico ; terc-Butil-metil-amida do ácido 9-isopropoxi-8-metoxi-2-(metoxiiminometil)-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1— a]isoquinolino-3-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 9-isopropilamino-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-(lH-pirazol-4-il)-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxilico; 10 terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-( metilpropenil)-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,Ια] isoquinolino-3-carboxílico ; terc-Butil-metil-amida do ácido 9-isobutil-8-metoxi- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-( metilpropenil)-1-tiazol-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 8-hidroxi-9-isobutil-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico; N- [3-(2,2-Dimetil-pirrolidina-l-carbonil)-8-metoxi-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]- isoquinolino- il]-isobutiramida; terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi- metilcarbamoilmetoxi-1-tiofeno-2-i1-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico ; terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-hidroxi-etoxi)-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico ; terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-azidoetoxi)-8-metox 1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi- (tetrahidropirano-2-il-oxi)-1-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(3-hidroxi-propoxi)-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico; (2-Hidroxi-l,1-dimetil-etil)-metilamida do ácido isobutil-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1 a]isoquinolino-3-carboxílico ; 11 (9-Bromo-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6,6a,lOa-tetrahidro-pirrolo[2,l-a]isoquinolino-3-il)-(4-ciclobutanocarbonil- [1.4] diazepan-l-il)-metanona; te-TC-Butil-metil-amida do ácido 9-ciano-8-metoxi-l-tiofeno 2-Í1-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico Éster etílico do ácido 3-(4-ciclobutanocarbonil [1.4] diazepano-l-carbonil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-i1-5, 6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-9-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-prop-l-inil-l tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 9-formil-8-metoxi-l tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(3-hidroxi-propil)-8 metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1— a]isoquinolino-3-carboxilico; terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(3-hidroxi-3-metil butil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2,2-difluoro-vinil)-8 metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo-[2,1— a]isoquinolino-3-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-nitro-l-tiofeno 2-Í1-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-3-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-dimetilamino acetilamino)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il- 5,6,6a, 10a tetrahidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 9-(2-azetidin-l-il acetilamino)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo [2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico; terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-(2-metoxi acetilamino)-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1— a]isoquinolino-3-carboxílico; 12 Ν-[3-(2,2-Dimetil-pirrolidina-l-carbonil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]- isoquinolino-9- il]-metanossulfonamida; N-[3-(2,2-Dimetil-pirrolidina-l-carbonil)-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]-isoquinolino-9-il]-2-morfolin-4-il-acetamida; ( 8,9-Dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-[4-(1- metil-ciclobutanocarbonil)- [1,4]diazepan-l-il]-metanona; ( 4-Ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepan-l-il)-(8,9-dimetoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-metanona; (4-Ciclobutanocarbonil-[1,4]diazepan-l-il)-(8,9-dimetoxi-l-tiofeno-2-ilpirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-il)-metanona; terc-Butil-metil-amida do ácido 9-hidroximetil-8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxilico; terc-Butil-metil-amida do ácido 8-metoxi-9-metoximetil-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a]isoquinolino-3-carboxílico; 1 -[3-(2, 2-Dimetil-pirrolidina-l-carbonil)-8-metoxi-l- tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1-a] isoquinolino-9-il]-etanona; e 3-(terc-butil-metil-amida) 9-[1,3,4]tiadiazol-2-il-amida do ácido 8-metoxi-l-tiofeno-2-il-5,6-di-hidro-pirrolo[2,1— a]isoquinolino-3,9-dicarboxilico.

22. Uma composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula I de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 21 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. 23. 0 composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, para utilização na terapêutica. 13 24. 0 composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para utilização no tratamento de distúrbios da fertilidade.

25. Utilização de um composto de fórmula I de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 21 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o fabrico de um medicamento para o tratamento de distúrbios da fertilidade.