PT1912991E - Derivados de xantina como agonistas selectivos de hm74a - Google Patents

Description

ΡΕ1912991 1

DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE XANTINA COMO AGONISTAS SELECTIVOS DE HM74A" O presente invento refere-se a compostos que são derivados de xantina, processos para a produção dos referidos derivados, formulações farmacêuticas contendo estes composts e utilização dos compostos em terapia, por exemplo, no tratamento de doenças em que a subactivação do receptor HM74A contribui para a doença ou em que a activação do receptor será benéfica. A dislipidemia é um termo geral utilizado para descrever indivíduos com perfis de lipoproteínas aberrantes. Clinicamente, as principais classes de compostos utilizados para o tratamento de doentes com dislipidemia e, por isso, em risco de doença cardiovascular são as estatinas, fibratos, resinas que se associam aos ácidos biliares e ácido nicotinico. 0 ácido nicotinico (Niacina, uma vitamina B) tem sido utilizado clinicamente desde há 40 anos em doentes com várias formas de dislipidemia. O modo principal de acção do ácido nicotinico é através da inibição de uma hormono-sensivo-triglicérido-lipase (HSL), que resulta num abaixamento dos ácidos gordos não esterifiados (NEFA) no plasma o que, por seu turno, altera o metabolismo hepático das gorduras para reduzir a produção de LDL e VLDL (lipoproteínas de baixa e muito baixa densidade). Os niveis de reduzidos de VLDL são considerados 2 ΡΕ1912991 como baixando a actividade da proteína de transferência do éster de colesterol (CETP) para resultar em maiores níveis de HDL (lipoproteína de alda densidade) que podem ser a causa dos benefícios cardiovasculares observados. Deste modo, o ácido nicotínico produz uma alteração muito desejável nos perfis das proteínas; níveis reduzidos de VLDL e LDL ao mesmo tempo que aumenta o hdl. O ácido nicotínico tem também demonstrado ter benefícios de modificação das doenças, reduzindo a progressão e o aumento da regressão das lesões ateroscleróticas e reduzindo o número de eventos cardiovasculares, em várias experiências. A inibição observada de HSL pelo tratamento com ácido nicotínico é mediada por uma diminuição do monofosfato de adenosina cíclico celular (cAMP) provocada pela inibição mediada pela proteína G da adenilil ciclase. Recentemente, os receptores HM74 e HM74A associados à proteína G foram identificados como receptores para o ácido nicotínico (pedido de patente PCT WO02/84298; Wise et al. J Biol Chem., 2003, 278 (11), 9869-9874). A sequência de ADN do HM74A humano pode ser encontrada no Genbank; número de acesso AY148884. Mais dois artigos suportam esta descoberta, (Tunaru et.al. Nature Medicine, 2003, 9(3), 352-255 e Soga et al. Biochem Biophys Res Commun., 2003, 303(1) 364-369), contudo a nomenclatura difere ligeiramente. No artigo de Tunaru o que apelidam de HM74 humano é aqui chamado como HM74A e no artigo de Soga HM74b é idêntico a HM74A. As células transfectadas para exprimirem HM74A e/ou HM74 ganham a capacidade de fazer surgir respostas mediadas pela proteína GiG a seguir à exposição ao ácido nicotínico. 3 ΡΕ1912991

Em ratos sem o homólogo de HM74A (m-PUMA-G)o ácido nicotínico falha na redução dos níveis de NEFA no plasma.

Certos derivados de xantina têm sido sintetizados e descritos na arte precedente. Por exemplo, o documento EP0389282 descreve derivados de xantina como mediadores potenciais de doenças cerebrovasculares. Uma gama de derivados de xantina foi identificada como sendo antagonista do receptor de adenosina por Jacobsen et al. em j. Med. Chem. 1993, 36, 2639-2644. 0 documento WO 03/004496 descreve derivados de xantina como inibidores selectivos do enzima DPP-IV. O documento WO 2005/016870 descreve derivados de ácido antranílico para utilização no tratamento de doenças em que a subactivação do receptor HM74A contribui para a doença. É agora apresentado um grupo de derivados de xantina que são agonistas selectivos do receptor HM74A de ácido nicotínico e que são, deste modo, de benefício potencial no tratamento, profilaxia e supressão das doenças em que a subactivação deste receptor contribui para a doença ou em que a activação do receptor será benéfica.

Sumário do Invento O presente invento proporciona derivados de xantina que são utilizados em terapia, por exemplo, no tratamento de doenças em que a subactivação do receptor HM74A contribui para a doença ou em que a activação do 4 ΡΕ1912991 receptor será benéfica. Por exemplo, no tratamento de doenças do metabolismo lipidico incluindo a dislipidemia ou a hiperlipoproteinemia, tais como a dislipidemia diabética e a dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hipercoles-teremia, doença cardiovascular incluindo aterosclerose, arteriosclerose, e hipertrigliceridemia. Deste modo, os compostos podem também encontrar aplicação como agentes terapêuticos para doenças das artérias coronárias, trombose, angina, insuficência renal crónica, doença vascular periférica e derrame cerebral, assim como indicações cardiovasculares associadas à diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia, anorexia nervosa, obesidade. Os compostos podem também encontrar uso no tratamento de doenças e condições inflamatórias, como mostrado ainda mais abaixo.

Descrição Detalhada do Invento

De acordo com um aspecto deste invento é proporcionado um composto de fórmula (I) que é a 3-butil-3-cloro-1— (3—{5—[ (4—f luorofenil)metil]-2H-tetrazol-2-il}propil) -3,7-lH-purina-2,6-diona

ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 5 ΡΕ1912991

Acredita-se que o(s) composto(s) possa(m) ser utilizado(s) no tratamento de doenças em que a subactivação do receptor HM74A contribui para a doença ou em que a activação do receptor será benéfica. Por exemplo, no tratamento de doenças do metabolismo dos lipidos incluindo dislipidemia e hiperlipoproteinemia, tais como a disli-pidemia diabética e a dislipidemia mista, insuficiência cardiaca, hipercolesteremia, doença cardiovascular incluindo aterosclerose, arteriosclerose, e hipertrigliceridemia. Deste modo, os compostos podem também encontrar aplicação como agentes terapêuticos para doenças das artérias coronárias, trombose, angina, insuficência renal crónica, doença vascular periférica e derrame cerebral, assim como indicações cardiovasculares associadas à diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia, anorexia nervosa, obesidade. Assim, os compostos do presente invento podem encontrar uso como agonistas ou agonistas parciais de HM74A. Os compostos podem também encontrar uso no tratamento de doenças ou condições inflamatórias, tal como apresentado ainda mais abaixo.

Para além disso, algumas das formas cristalinas dos compostos de fórmula (I) podem existir como polimorfos, que são incluídos no presente invento. Uma forma pode ter uma vantagem sobre outra forma, por exemplo, uma forma pode ter uma estabilidade melhorada em relação a outra forma. 6 ΡΕ1912991

Deve ser entendido que o presente invento inclui qualquer combinação de formas de realização particulares e cobre todas as combinações de substituintes particulares aqui acima descritos.

Através da presente descrição e das reivindicações em anexo as palavras "compreendem" e "incluem" e variações como "compreende", "compreendendo", "inclui" e "incluindo" são interpretadas inclusivamente. Ou seja, estas palavras pretendem considerar a possível inclusão de outros elementos ou números não especificamente citados quando o contexto o permite.

Tal como aqui utilizado, o termo "farmaceuti-camente aceitável" utilizado em relação a um ingrediente (ingrediente activo, diluente, excipiente ou suporte) que pode ser incluído numa formulação farmacêutica para administração a um doente, refere-se ao facto desse ingrediente ser aceitável no sentido de ser completamente compatível com quaisquer outros ingredientes presentes na formulação farmacêutica e não sendo prejudicial para quem o recebe.

Tal como aqui utilizado, o termo "solvato" refere-se a um complexo de estequiometria variável formado por um soluto (neste invento, um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável) e um solvente. Tais solventes para os fins do presente invento não devem interferir com a actividade biológica do soluto. 0 solvente 7 ΡΕ1912991 utilizado pode ser um solvente farmaceuticamente aceitável. Exemplos de solventes farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem água, etanol e ácido acético. Um exemplo de um solvente que pode ser utilizado é água caso em que o solvato pode ser referido como hidrato do soluto em questão.

Será tido em consideração que, para utilização farmacêutica o "sal ou solvato" referido atrás será um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável. Contudo, outros sais ou solvatos podem encontrar uso, por exemplo, na preparação de um composto de fórmula (I) ou na preparação de um sal ou solvato deste farmaceuticamente aceitável.

Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os descritos por Berge, Bighley e Monkhouse, J. Pharm. Sei., 1977, 66, 1-19. Sais farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem sais de metais alcalinos formados a partir da adição de bases de metais alcalinos, tais como hidróxidos de metais alcalinos. Exemplos de sais de metais alcalinos adequados incluem sais de sódio e sais de potássio. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem sais de metais alcalino-terrosos, tais como sais de cálcio e sais de magnésio, sais de amónio; ou sais com bases orgânicas tais como etanolamina, trietanolamina, etilenodiamina, trietilamina, colina e meglumina; ou sais com aminoácidos tais com arginina, lisina e histidina. Ésteres podem ser activos por si próprios e/ou ΡΕ1912991 hidrolisáveis sob condições in vivo no corpo humano. Grupos éster hidrolisáveis in vivo farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem os que se cindem rapidamente no corpo humano para dar origem ao ácido original e o seu sal. Pode ser formado um éster num grupo de ácido carboxilico ίο (0) OH), através de métodos bem conhecidos na arte envolvendo a reacção com o álcool correspondente. Por exemplo, os ésteres podem ser ésteres alquilicos Ci_6, e.g. ésteres metilicos, ésteres etílicos e semelhantes.

Tal como aqui utilizado, o termo "compostos do invento" significa os compostos de acordo com a Fórmula (I) e os sais farmaceuticamente aceitáveis deste. 0 termo "um composto do invento" significa qualquer um dos compostos do invento tal como definidos acima.

Os compostos de fórmula (I) são de potencial benefício terapêutico no tratamento e melhoria dos sintomas de muitas doenças do metabolismo dos lípidos incluindo a dislipidemia e hiperlipoprotreinemia, tal como a dislipi-demia diabética e a dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hipercolesteremia, doença cardiovascular incluindo aterosclerose, arteriosclerose, e hipertrigliceridemia, diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia anorexia nervosa, obesidade. Deste modo os compostos podem também ter aplicação como agentes terapêuticos para doenças das artérias coronárias, trombose, angina, insuficiência renal crónica, doença vascular periférica e derrame cerebral. 9 ΡΕ1912991

Foi relatado que os receptores HM74 e HM74A estão envolvidos na inflamação (documento WO02084298). A inflamação representa um grupo de respostas vascular, celular e neurológica ao trauma. A inflamação pode ser caracterizada como movimento de células inflamatórias tais como monócitos, neutrófilos e granulócitos nos tecidos. Isto está usualmente associado a uma reduzida função de barreira endotelial e a edema nos tecidos. A inflamação no que se refere a doença é tipicamente referida como inflamação crónica. Tal inflamação crónica pode manifestar-se por si própria através dos sintomas de doença. 0 objectivo da terapia anti-inflamatória é, por isso, o de reduzir esta inflamação crónica e o de permitir que progrida o processo fisiológico de curar e reparar os tecidos.

Exemplos de doenças ou condições inflamatórias para as quais os compostos do presente invento podem demonstrar utilidade incluem as das articulações (e.g. artrite reumatóide, osteoartrite, insuficiência de prótese articular), ou do tracto gastrointestinal (e.g. colite ulcerosa, doença de Crohn e outras doenças inflamatórias dos intestinos e gastrointestinais, gastrite e inflamação mucosal que resultem de infecção, a enteropatia provocada pelos fármacos anti-inflamatórios não esteróides), dos pulmões (e.g. sindroma de insuficiência respiratória do adulto, asma, fibrose quistica ou doença pulmonar obstructiva crónica), do coração (e.g. miocardite), dos tecidos nervosos (e.g. esclerose múltipla), do pâncreas 10 ΡΕ1912991 (e.g. inflamação associada à diabetes mellitus e complicações desta), dos rins (e.g. glomerulonefrite), da pele (e.g. dermatite, psoriase, eczema, urticária, queimaduras), do olho (e.g. glaucoma) assim como de órgãos transplantados (e.g. rejeição) e doenças multi-órgãos (e.g. lúpus eritematoso sistémico, sépsis) e sequelas inflamatórias de infecções virais e bacterianas e condições inflamatórias associadas a aterosclerose e a seguir a episódios hipóxicos ou isquémicos (com ou sem reperfusão), por exemplo no cérebro ou em doença isquémica do coração.

Os compostos deste invento são úteis no tratamento e prevenção da inflamação, diabetes e doenças ou condições cardiovasculares incluindo aterosclerose, arte-rioesclerose, hipertrigliceridemia e dislipidemia. O ácido nicotinico tem um significativo perfil de efeitos secundários, possivelmente porque é doseado num nivel elevado (quantidades de gramas diariamente). O efeito secundário mais comum é um intenso enrubescimento cutâneo. Em certas formas de concretização do presente invento, os compostos podem apresentar reduzidos efeitos secundários em comparação com o ácido nicotinico. Ο HM74A foi identificado como um receptor de alta afinidade para o ácido nicotinico enquanto ο HM74 é um receptor de menor afinidade. Os compostos do presente invento apresentam uma maior afinidade em relação ao HM74A do que em relação ao HM74 e por isso podem encontrar uso como agonistas selectivos ou parciais do HM74A. ΡΕ1912991 0 potencial dos compostos de fórmula (I) para activar ο HM74A pode ser demonstrado, por exemplo, utilizando os seguintes ensaios de célula inteira in vitro:

Testes in vitro

Para transfecções transientes, células HEK293T (células HEK293 expressando estavelmente o antigénio T grande SV40) foram mantidas em DMEM contendo 10% de soro bovino fetal e glutamina 2 mM. As células foram aplicadas em placas de cultura de 90 mm e deixadas a desenvolver até uma confluência de 60-80% (18-24 h) antes da transfecção. HM74A humano (número de acesso do GenBank™ Ayl48884) foi subclonado num vector de expressão de mamífero (pcDNA3; Invitrogen) e transfectado utilizando o reagente Lipo-fectamine™. Para a transfecção, 9 pg de ADN foi misturado com 30 μΐ de Lipofectamine em 0,6 ml de Opti-MEM (Life Technologies Inc.) e foi incubado à temperatura ambiente durante 30 min antes da adição de 1,6 ml de Opti-MEM. As células foram expostas à mistura de Lipofectamine/ADN durante 5h e foi então adicionado 6 ml de soro bovino fetal a 20% (v/v) em DMEM. As células foram recolhidas 48 h após transfecção. O tratamento com toxina da tosse convulsa foi realizada por suplementação num meio a 50 ng.ml-1 durante 16h. Todos os estudos de transfecção transiente envolveram co-transfecção do receptor em conjunto com a proteína Gi/0G,

GoiCX. 12 ΡΕ1912991

Para gerar linhas de células estáveis o método anterior foi utilizado para transfectar células CH0-K1 colocadas em seis placas de desenvolvimento até 30% de confluência. Estas células foram mantidas num meio F12 de DMEM-Ham (disponível na Invitrogen) contendo 10% de soro bovino fetal e glutamina 2 mM. 48h após a transfecção do meio ter sido suplementado com 400 μρ/πιΐ Geneticin (G418, Gibco) para selecção das células resistente a antibióticos. As linhas de células CHO-Kl clonais expressando estavelmente HM74A foram confirmadas medições de ligação a [35S]GTPyS, seguindo-se a adição de ácido nicotinico.

Preparação de membrana P2 - fracções de plasma em partículas P2 contendo membranas foram preparadas a partir de pastas de células congeladas a -80°C após recolha. Todos os procedimentos foram realizados a 4°C. Peletes de células foram ressuspensos em 1 ml de Tris-HCl 10 mM e EDTA 0,1 mM, pH 7,5 (tampão A) e por homogeneização durante 20 s com um Ultra Turrax seguido por passagem (5 vezes) através de uma agulha de calibre 25. Lisados de células foram centrifu-gados a 1000 g durante 10 min numa microcentrífuga para formar peletes dos núcleos e células não rompidas e fracções de partículas P2 foram recuperadas por microcentri-fugação a 16000 g durante 30 min. Fracções de partículas P2 foram ressuspensas no tampão A e armazenadas a -80°C até requerido.

Ligaçao a [35S]GTPrS - foram realizados ensaios à temperatura ambiente em placas com 384 poços com base nos 13 ΡΕ1912991 métodos descritos previamente (Wielan, T. e Jakobs, K.H. (1994) Methods Enzymol. 237, 3-13). Resumidamente, a diluição dos compostos padrão ou de teste foi preparada e adicionada a uma placa de 384 poços num volume de 10 μΐ. Membranas (HM74A ou HM74) foram diluídas num tampão de ensaio (HEPES 20 mM, NaCl 100 mM, MgCl2 10 mM, pH 7,4) suplementado com saponina (60 pg/ml), partículas Leadseeker WGA (Amersham; 250 μρ/ρορο) e GDP 10 μιη, de forma a que o volume adicionado de 20 μΐ a cada poço contenha 5 μρ de membranas. [35S]GTPYS (1170Ci/mmol, Amersham) foi diluído (1:1500) em tampão de ensaio e adicionou-se 20 μΐ a cada poço. A seguir à adição do radioligando, as placas foram vedadas, agitadas por pulsos e incubadas durante 4 horas à temperatura ambiente. No final do período de incubação as placas foram lidas num equipamento Leadseeker (VIEWLUX PLUS; Perkin-Elmer) para determinar os níveis de ligação específica.

Os ensaios foram afinados reduzindo o volume de teste final a 10 μΐ. Para este ensaio de 10 μΐ foi utilizado um protocolo revisto. Este envolveu a utilização de apenas 100 nl de composto padrão ou de teste por poço de uma placa de 384 poços e 1,5 μρ de membranas e 100 μρ de partículas Leadseeker WGA. Para o protocolo de baixo volume, membranas, partículas e [35S]GTPYS foram misturados em conjunto e então 10 μΐ desta mistura foi dispensada a cada poço. A incubação e leitura da placa foram idênticas para os ensaios de 10 μΐ e de 50 μΐ. 14 ΡΕ1912991

Todos os compostos exemplificados foram testados em um ou mais ensaios de ligação de [35S]GTPtS descritos atrás (i.e. os ensaios de 10 μΐ e 50 μΐ).

Os dados foram analisados por ajuste da curva realizada utilizando uma Equação Logística de Quatro Parâmetros utilizando o programa informático XC50 (máximo de 2 pontos eliminados de qualquer curva). A ligação específica é expressa como pEC5o e como % de eficácia em comparação com a resposta máxima da ligação a ácido nico-tínico.

Testes in vivo

Os compostos do invento podem ser testados em ratazanas Spague-Dawley (200-250 g) que estiveram em jejum durante pelo menos 12 horas antes do estudo. Os compostos são doseados intravenosamente quer a 1 quer a 3 mg/kg (5 ml/kg) ou através de alimentação oral com doses variando de 1-30 mg/kg (10 ml/kg). Amostras de sangue (0,3 ml retiradas da veia da cauda) podem ser recolhidas pré-dose e três vezes pós-dose (tempos variando de 15 minutos a 6 horas pós-dose). Cada amostra de sangue é transferida para um tubo de heparina (Becton Dickinson Microtainer, PST LH) e centrifugou-se (10000 g durante 5 minutos) para produzir uma amostra de plasma. As amostras de plasma foram avaliadas em relação aos níveis de ácidos gordos não esterifiçados (NEFA) utilizando um estojo ("kit") comercialmente disponível (Randox). A inibição dos níveis de 15 ΡΕ1912991 NEFA no plasma, em relação aos níveis pré-dose, é utilizada como substituto para a actividade agonista de HM74A.

De modo a determinar se os compostos do invento apresentam a resposta de enrubescimento associada ao ácido nicotinico, estes podem ser doseados a cobaias conscientes. Cobaias machos Dunkin Hartley (300-600 g; n=10-20 por grupo) são jejuados durante, pelo menos, 12 horas, mas não em excesso de 24 horas antes da experimentação. Amostras de sangue pré-estudo (0,5 ml) são recolhidas de cada animal através de punção cardíaca sob anestesia (isoflurano a 3,5% com adicional 02 (1 1/min)). Medições de temperatura nas orelhas foram realizadas colocando a orelha esquerda de cada aninal sobre uma sonda de temperatura de infravermelhos. As medições são realizadas a intervalos de um minuto, desde 5 minutos pré-dose a 30 minutos pós-dose. As medições de temperatura são realizadas a intervalos de 15 minutos até 2 horas após dose. Os animais receberam os compostos de teste através da alimentação oral (5 ml/kg). Amostras de sangue (0,5 ml) são tomadas por punção cardíaca sob anestesia terminal. As amostras de sangue são recolhidas em animais individuais para proporcinar dados a 0,5, 1, 2, 3 e 4 horas após dose. Todas as amostras de sangue são colocadas num rolo de sangue durante 5 minutos e então armazenadas em gelo até ao final do estudo. A seguir à centrifugação (12000 g durante 5 min) o plasma é transferido para tubos frescos e armazenado a -20°C até serem analisadas as concentrações de NEFA. 16 ΡΕ1912991

Alguns compostos de acordo com a Fórmula (I) foram sintetizados (ver exemplos de sintéticos abaixo) e testados nos ensaios de ligação de [35S]GTPyS discutidos acima.

Os compostos exemplificados têm um pECso de 4,3 (+/- 0,3 unidades log) ou superior e uma eficácia de 30% ou mais (em relação a ácido nicotínico) nos ensaios de ligação de [35S]GTPyS discutidos acima, em que estes foram testados.

Purificação geral e métodos analíticos: LC/MS (CL/EM): Método HPLC analítica foi realizada com uma coluna Supelcosil™ ABZ+PLUS (supelco) (3 μιη, 3,3 cm x 4,6 mm Dl) eluindo com 0,1% de HCO2H e acetato de amónio 0,1 M em água (solvente A) e MeCN a 95% e 5% de água (contendo 0,5% de HC02H) (solvente B), utilizando o seguinte gradiente de eluição 0-0,7 min 0%B, 0,7-4,2 min 0 100%B, 4,2-4,6 minutos 100%B, 4,6-4,8 minutos 100 0%N com um caudal de 3 ml/min. Foi realizada detecção UV com sistema de díodos na gama de 215 a 330 nm. O espectro de massa (MS) foi registado num espectrómetro de massa Waters ZQ utilizando modos de ionização positiva por electropulverização [(ES+ve para originar iões moleculares MH+ e M(NH4)+] ou ionização negativa por electropulverização [(ES-ve para originar o ião molecular (M-H)-]. Apenas o ião mãe dos principais isótopos foi referido. 17 ΡΕ1912991

Os espectros de 1H RMN foram registados utilizando um espectrómetro Bruker DPX 400 MHz utilizando tetrametilsilano como padrão. TM x

Cromatografia Biotage refere-se a purificação realizada utilizando sistemas de purificação quer o Flash 40i quer o Flash 150i, vendido pela Biotage ab, utilizando cartuchos pré-cheios com KPSil (sílica).

Sistema Companion™ refere-se ao sistema de purificação da Teledyne Isco Combiflash Companion™. Este é um sistema de purificação de gradiente controlado com sistema de detecção UV com comprimento de onda variável integral com a capacidade de recolha automática da fracção por limite de UV.

Autopreparação accionada por massa (MDAP) refere-se a métodos em que o material foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho utilizando quer uma coluna Supelcosil™ ABZ + 5 pm (10 cm x 20 mm d.i.) quer uma coluna Supelcosil™ ABZ + 10 pm (15 cm x 30 mm d.i.) com um gradiente adequado de solvente A: 0,1% de HC02H em água e solvente B: 95% de MeCN, 5% de água (contendo 0,5% de Η002Η) . O injector/sistema de recolha Waters 2767 foi accionado por um Espectrómetro de Massa MicroMass ZQ ao detectar a massa de interesse (utilizando o programa informático Micromass MassLynx). 18 ΡΕ1912991 HPLC preparativa (Autoprep HPLC ou Autoprep) refere-se a métodos em que o material foi purificado por cromatografia liquida de alto desempenho numa coluna Supelcosil™ ABZ + 5 μπι (10 cm x 21,2 mm d.i.) com um um gradiente adequado de solvente A: 0,1% de HCO2H em água e MeCN (com 0,5% de HCO2H) . O sistema de recolha de fracções Gilson 233 foi accionado por detecção de UV. SPE (extracção em fase sólida) refere-se à utilização de cartuchos de polietileno que são pré-cheios com sorvente para purificação. O sorvente contido nestes cartuchos será especificado. Exemplos utilizados são detalhados abaixo: C18 SPE refere-se à utilização de cartuchos pré-cheios com sorvente de silica funcionalizada com C18 de 40 μΜ (vendido pela Varian Inc.). O composto foi carregado, tipicamente em 50:50 DMSO/MeOH, num cartucho previamente condicionado com MeCN e equilibrado com MeCN 5% em água. O produto foi eluído com um gradiente adequado de 0,1% de HC02H em água e MeCN (0,5% de HC02H). SPE ou coluna de aminopropilo refere-se à utilização de cartuchos pré-cheios com silica funcionalizada com aminopropilo de 40 pm - 120 μπι (vendida pela Varian Inc.). O produto em bruto é tipicamente carregado em misturas de DCM/MeOH num cartucho previamente condicionado com MeOH. Os componentes neutrais foram eluídos com MeOH e/ou DCM (3 ou 4 volumes de coluna) e os componentes 19 ΡΕ1912991 acídicos usualmente eluídos com um eluente contendo uma proporção de AcOH (2-20%) . SPE de Cartuchos Oasis™/Oasis™ refere-se a cartuchos SPE cheios com um sorvente polimérico produzido pela Waters Corporation. Estes estão tipicamente condicionados com 3 volumes de coluna de MeOH e equilibrados com água antes da amostra ser carregada. Sais e produtos inorgânicos são eluidos com a água e o produto é tipicamente eluido com MeOH ou MeCN.

GreenHouse™ refere-se a uma plataforma sintetiz-adora de 24 reacções em paralelo disponível na RDT Ltd, Reino Unido.

Tal como indicado acima, os compostos de Fórmula (I) podem encontrar uso em medicina humana ou veterinária, por exemplo como activadores de HM74A, na gestão da dislipidemia e hiperlipoproteinemia.

Deste modo, é propocionado como outra forma de concretização do presente invento, pelo menos, um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para utilização em medicina humana ou veterinária, por exemplo no tratamento de doenças do metabolismo dos lípidos incluindo dislipidemia e hiperlipoproteinemia, tal como a dislipidemia diabética e a dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hipercolesteremia, doença cardiovascular incluindo aterosclerose, arteriosclerose, e hipertrigli- 20 ΡΕ1912991 ceridemia, diabetes mellitus do tipo II, diabetes tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia, anorexia nervosa e obesidade. Assim, os compostos são também proporcionados para utilização no tratamento de doenças das artérias coronárias, trombose, angina, insuficiência renal, doenças vascular periférica e derrame cerebral. É proporcionado como outra forma de concretização do presente invento, pelo menos um composto de fórmula (I) ou um seu sal f armaceuticamente aceitável, para uso no fabrico de um medicamento para o tratamento de doenças do metabolismo dos lipidos incluindo dislipidemia e hiperli-poproteinemia, tal como a dislipidemia diabética e a dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hipercoles-teremia, doença cardiovascular incluindo aterosclerose, arteriosclerose, e hipertrigliceridemia, diabetes mellitus do tipo II, diabetes tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemina, anorexia nervosa e obesidade. Assim, os compostos são também proporcionados para utilização no tratamento de doenças das artérias coronárias, trombose, angina, insuficiência renal, doenças vascular periférica e derrame cerebral.

Será tido em consideração gue as referências aqui efectuadas a tratamento se estendam à profilaxia, prevenção ou recorrência e supressão de sintomas assim como ao tratamento das condições estabelecidas.

Numa forma de concretização do invento, é propor- 21 ΡΕ1912991 cionado, pelo menos um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso no tratamento de doenças do metabolismo dos lipidos incluindo dislipidemia e hiperlipoproteinemia. Por exemplo, é proporcionado o uso de pelo menos um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, no tratamento da dislipidemia diabética, dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hipercolesteremia, diabetes mellitus do tipo li, diabetes tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemina, anorexia nervosa, obesidade, doenças das artérias coronárias, trombose, angina, insuficiência renal crónica, derrame cerebral e doença cardiovascular incluindo aterosclerose, arteriosclerose e hipertrigliceridemia.

De entender-se que esta forma de concretização do presente invento inclui qualquer combinação de formas de concretização particulares e cobre todas as combinações de substituintes particulares aqui descritos acima para os compostos de Fórmula (I).

Adicionalmente, o presente invento proporciona o uso de pelo menos um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, no fabrico de um medicamento para o tratamento de doenças ou condições inflamatórias das articulações (e.g. artrite reumatóide, osteoartrite, insuficiência de prótese articular), ou do tracto gastrointestinal (e.g. colite ulcerosa, doença de Crohn e outras doenças inflamatórias dos intestinos e gastrointestinais, gastrite e inflamação mucosal que resultem de infecção, a 22 ΡΕ1912991 enteropatia provocada pelos fármacos anti-inflamatórios não esteróides), dos pulmões (e.g. síndroma de insuficiência respiratória do adulto, asma, fibrose quística ou doença pulmonar obstructiva crónica), do coração (e.g. miocar-dite), dos tecidos nervosos (e.g. esclerose múltipla), do pâncreas (e.g. inflamação associada à diabetes mellitus e complicações desta), dos rins (e.g. glomerulonefrite), da pele (e.g. dermatite, psoríase, eczema, urticária, queimaduras), do olho (e.g. glaucoma) assim como de órgãos transplantados (e.g. rejeição) e doenças multi-órgãos (e.g. lúpus eritematoso sistémico, sépsis) e sequelas inflamatórias de infecções virais e bacterianas e condições inflamatórias associadas a aterosclerose e a seguir a episódios hipóxicos ou isquémicos (com ou sem reperfusão), por exemplo no cérebro ou em doença isquémica do coração.

Novamente, deve entender-se que esta forma de concretização do presente invento inclui qualquer combinação de formas de concretização particulares e cobre todas as combinações de substituintes particulares aqui descritos acima para os compostos de Fórmula (I). A quantidade de composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável que é requerida para conseguir o desejado efeito biológico dependerá, com certeza, de um certo número de factores, por exemplo, o modo de administração e a exacta condição clínica do receptor. Em geral, a dose diária estará na gama de 0,1 mg - 1 g/kg, tipicamente 0,1 - 100 mg/kg. Uma dose intravenosa ΡΕ1912991 pocíe, por exemplo, estar na gama de 0,01 mg a 0,1 g/kg, tipicamente 0,01 mg a 10 mg/kg que pode convenientemente ser administrada como uma infusão de 0,1 μg a 1 mg, por minuto. Fluidos de infusão adequados para este fim podem conter, por exemplo, 0,1 μρ a 1 mg por mililitro. Doses unitárias podem conter, por exemplo de 0,1 μρ a 1 g de um composto do invento. Deste modo, ampolas para injecção podem conter, por exemplo, de 0,1 μg a 0,1 g e formulações de dose unitária oralmente administráveis, tais como comprimidos ou cápsulas, podem conter, por exemplo, de 0,1 mg a 1 g, por exemplo 5 mg a 50 mg.

Um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável pode ser empregue como composto de per se no tratamento de uma doença em que a subactivação do receptor HM74A contribui para a doença ou em que a activação do receptor será benéfica, sendo um exemplo disto quando um composto do presente invento é apresentado com um suporte aceitável na forma de uma formulação farmacêutica. O suporte deve, é certo, ser aceitável no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não deve ser prejudicial para o receptor. O suporte pode ser um sólido ou um liquido, ou ambos, e pode ser formulado com o composto do invento como formulação de dose unitária, por exemplo, um comprimido que pode conter de 0,05% a 95% em peso do composto do invento.

As formulações incluem as que são adequadas para administração oral, rectal, tópica, bucal (e.g. sublingual) 24 ΡΕ1912991 e parentérica (e.g. subcutânea, intramuscular, intradérmica ou intravenosa). É também proporcionado de acordo com o invento um processo para a preparação de uma tal composição farmacêutica que compreende a mistura dos ingredientes.

Formulações adequadas para administração oral podem estar presentes em unidades discretas, tais como cápsulas, cachets, losangos ou comprimidos, contendo cada um uma quantidade pré-determinada de um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável; como pós ou grânulos; como uma solução ou suspensão num liquido aquoso ou não aquoso; ou como uma emulsão de óleo em água ou água em óleo. Em geral, as formulações são preparadas misturando uniformemente e intimamente o compostos de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, com um suporte líquido ou sólido finamente dividido, ou ambos e então, se necessário, dá-se forma ao produto. Por exemplo, um comprimido pode ser preparado comprimindo ou moldando um pó ou grânulos do composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Os comprimidos prensados podem ser preparados comprimindo, num equipamento adequado, o composto em forma de pó solto, tal como um pó ou grânulos opcionalmente misturados com um ligante, lubrificante, diluente inerte e/ou agente(s) de activação de superfí-cie/dispersão. Os comprimidos moldados podem ser feitos moldando, num equipamento adequado, o composto em pó humedecido com um diluente inerte liquido. 25 ΡΕ1912991

Os comprimidos ou cápsulas para administração oral podem conter excipientes convencionais tais como agentes ligantes, por exemplo, xarope, goma arábica, gelatina, sorbitol, goma de tragacanto, mucilagem de amido ou pilivinilpirrolidona; cargas, por exemplo, lactose, celulose microcristalina, açúcar, amido de milho, fosfato de potássio ou sorbitol; lubrificantes, por exemplo, estarato de magnésio, ácido esteárico, talco, polietileno-glicol ou sílica; desitegrantes, por exemplo, amido de batata, croscarmelose de sódio ou amido-glicolato de sódio; ou agentes de molhabilidade, tais como o laurilsulfato de sódio. Os comprimidos podem ser revestidos de acordo com métodos bem conhecidos na arte. As preparações líquidas orais podem estar na forma de, por exemplo, suspensões, aquosas ou oleosas, soluções, emulsões, xaropes ou elixires ou podem estar presentes sob a forma de um produto seco para reconstituição com água ou outro veículo adequado antes de utilização. Tais preparações líquidas podem conter aditivos adicionais, tais como agentes de suspensão, por exemplo, xarope de sorbitol, metilcelulose, xarope de glucose/açúcar, gelatina, hidroximetilcelulose, hidroxipro-pilmetilcelulose, carboximetilcelulose, estearato de alumínio em gel ou gorduras alimentares hidrogenadas; agentes de emulsificação, por exemplo, lecitina, mono-oleato de sorbitan ou goma arábica; veículos não aquosos (que podem incluir óleos alimentares), por exemplo óleo de amêndoas, óleo de coco fraccionado, ésteres oleosos, propilenoglicol ou álcool etílico; ou conservantes, por 26 ΡΕ1912991 exemplo, p-hidroxibenzoatos de metilo ou propilo ou ácido sórbico. As preparações podem também conter sais tampão, agentes de sabor, de cor e/ou adoçantes (e.g. manitol) como adequado.

As formulações adequadas para administração bucal (sublingual) incluem losangos compreendendo um composto do invento numa base com sabores, usualmente sacarose e goma arábica e de tragacanto, e pastilhas compreendendo o composto do invento numa base inerte, tal como gelatina e glicerina ou sacarose e goma arábica.

As formulações do presente invento adequadas para administração parentérica compreendem convenientemente preparações aquosas estéreis de um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável podendo a formulação ser isotónica com o sangue do receptor pretendido. Estas preparações podem ser administradas intravenosamente, embora a administração possa também ser efectuada por via de injecção subcutânea, intramuscular ou intradérmica. Tais preparações podem convenientemente ser preparadas misturando o composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável com água e tornando a solução estéril e isotónica com o sangue. Composições injectáveis de acordo com o invento conterão geralmente de 0,1 a 5% p/p do composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Deste modo, as formulações do presente invento 27 ΡΕ1912991 adequadas para administração parentérica compreendendo um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável podem ser formuladas para administração parentérica por injecção de bolus ou infusão continua e podem estar presente em forma de dose unitária, por exemplo como ampolas, frascos, infusões de pequeno volume ou seringas pré-cheias ou em recipientes multi-dose, com um conservante adicionado. As composições podem tomar formas tais como soluções, suspensões ou emulsões em veiculos aquosos ou não aquosos e podem conter agentes de formulação tais como antioxidantes, tampões, agentes antimicrobianos e/ou agentes de ajuste da toxicidade. Exemplos de formulações adequadas para administração oral incluem formulações compreendendo um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável em 10% de DMSO e 90% de hidrogenocarbonato de sódio em solução salina estéril. Exemplos de formulações adequadas para administração intravenosa incluem formulações compreendendo um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável em 5% ou 10% de DMSO e 95% ou 90% de hidrogenocarbonato de sódio em água estéril. Alternativamente, o agente terapeuticamente activo pode estar em forma de pó para reconstituição com um veiculo adequado, e.g. água estéril isenta de pirogénio, antes de utilização. A apresentação sólida seca pode ser preparada enchendo com um pó assepticamente estéril em recipientes estéreis individuais ou enchendo com uma solução assepticamente estéril cada recipiente e secagem por congelação. 28 ΡΕ1912991

As formulações adequadas para administração rectal podem ser apresentadas como supositórios de dose unitária. Estas podem ser preparadas misturando um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável com um ou mais suportes sólidos convencionais, por exemplo, manteiga de cacau ou glicéridos e então dando forma à mistura resultante.

Formulações adequadas para aplicação tópica na pele podem tomar a forma de um unguento, creme, loção, pasta, gel, pulverização, aerossol ou óleo. Suportes que podem ser utilizados incluem vaselina, lanolina, polietile-noglicóis, álcoois e combinações de dois ou mais destes. 0 composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável está geralmente presente numa concentração de 0,1 a 15% p/p da composição, por exemplo, de 0,5 a 2%.

Por administração tópica tal como aqui utilizada, inclui-se a administração por insuflação e inalação. Exemplos de vários tipos de preparação para administração tópica incluem unguentos, cremes, loções, pós, pessários, pulverizações, aerossóis, cápsulas ou cartuchos para utilização num inalador ou insuflador ou gotas (e.g. gotas para os olhos ou para o nariz).

Unguentos e cremes podem, por exemplo, ser formulados com qualquer base aquosa ou oleosa, com a adição agentes de espessamento e/ou gelificação adequados e/ou solventes. Tais bases podem, deste modo, por exemplo, 29 ΡΕ1912991 incluir água e/ou um óleo tal como parafina liquida ou óleo vegetal, tal como óleo de amendoim ou um solvente tal como polietilenoglicol. Os agentes de espessamento que podem ser utilizados incluem parafina mole, estearato de aluminio, álcool cetoestearílico, polietilenoglicóis, cera microcris-talina e cera de abelha.

As loções podem ser formuladas com uma base aquosa ou oleosa e conterão geralmente um ou mais agentes de emulsificação, agentes de estabilização, agentes de dispersão, agentes de suspensão e agentes de espessamento. Pós para aplicação externa podem ser formados com o auxílio de base em pó adequada, por exemplo, talco, lactose ou amido. As gotas podem ser formuladas com uma base aquosa ou não aquosa compreendendo também um ou mais agentes de dispersão, agentes de solubilização ou agentes de suspensão.

As composições de pulverização podem ser formuladas, por exemplo, como soluções ou suspensões aquosas ou como aerossóis administrados a partir de recipientes pressurizados, com a utilização de um propulsor adequado, e.g. diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetra-fluoroetano, 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano, 1,1,1,2-tetrafluoroetano, dióxido de carbono ou outro gás adequado. Cápsulas e cartuchos para utilização num inalador ou insuflador de, por exemplo, gelatina, podem ser formu- 30 ΡΕ1912991 lados contendo uma mistura em pó de um composto do invento e uma base em pó adequada tal como a lactose ou amido.

As composições farmacêuticas de acordo com o invento podem ser também utilizadas em combinação com outros agentes terapêuticos, por exemplo, em combinação com outras classes de fármacos dislipidémicos (e.g. estatinas, fibratos, resinas que se associam aos ácidos biliares ou ácido nicotinico).

Os compostos do presente invento podem ser utilizados em combinação com um ou mais outros agentes terapêuticos, por exemplo, em combinação com outras classes de fármacos dislipidémicos e.g. inibidores da redutase da 3-hidroxi-3-metilglutaril-coenzima A (estatinas) ou fibratos ou resinas que se associam aos ácidos biliares ou ácido nicotinico. O invento proporciona, deste modo, numa outra forma de concretização, a utilização de uma tal combinação no tratamento de doenças em que a subactivação do receptor HM74A contribui para a doença ou em que a activação do receptor será benéfica e a utilização de, pelo menos, composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável no fabrico de um medicamento para a terapia de combinação de doenças do metabolismo dos lípidos incluindo dislipidemia e hiperlipoproteinemia, tais como a dislipi-demia diabética e a dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hipercolesteremia, doença cardiovascular incluindo aterosclerose, arteriosclerose, e hipertrigliceridemia, diabetes mellitus tipo II, diabetes tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia, anorexia nervosa e obesidade. 31 ΡΕ1912991

Quando os compostos do presente invento são utilizados em combinação com outros agentes terapeuticamente activos, os compostos podem ser administrados quer em conjunto quer separadamente, sequencialmente ou simultaneamente através de qualquer via conveniente.

As combinações referidas acima podem ser convenientemente apresentadas para utilização na forma de uma formulação farmacêutica e, deste modo, formulações farmacêuticas compreendendo uma combinação tal como definida acima optimamente em conjunto com um suporte ou excipiente farmaceuticamente aceitável compreende uma outra forma de concretização do invento. Os componentes individuais de tais combinações podem ser administrados quer em conjunto quer separadamente, sequencialmente quer simultaneamente em formulações farmacêuticas separadas ou combinadas.

Quando combinados na mesma formulação será tido em consideração que os dois componentes devam ser estáveis e compatíveis um com o outro e os outros componentes da formulação possam ser formulados para administração. Quando formulados separadamente estes podem proporcionar qualquer formulação conveniente, convenientemente de modo como é conhecido para tais componentes na arte.

Quando em combinação com um segundo agente terapêutico activo contra a mesma doença, a dose de cada componente pode diferir da de quando o componente é utilizado 32 ΡΕ1912991 só. Doses apropriadas serão prontamente consideradas pelos especialistas na matéria. 0 invento proporciona assim, numa outra forma de concretização, uma combinação compreendendo, pelo menos, um composto de fórmula (I) ou sal farmaceuticamente aceitável deste em conjunto com outro agente terapeuticamente activo. A combinação referida acima pode ser apresentada convenientemente para utilização na forma de uma formulação farmacêutica e, deste modo, formulações farmacêuticas compreendendo uma combinação tal como definida atrás em conjunto com um suporte farmaceuticamente aceitável deste representam ainda mais uma forma de concretização do invento. 0 composto do presente invento e sais farmaceuticamente aceitáveis deste podem ser preparados através da metodologia aqui descrita a seguir, constituindo uma outra forma de concretização deste invento. 0 composto do presente invento tem os seguintes substituintes, R1 representa

33 ΡΕ1912991 R2 representa n-butilo; e R3 representa cloro.

Consequentemente, será tido em consideração que os correspondentes grupos R nos processos seguintes representem também estes substituintes.

Numa forma de concretização o presente invento proporciona um método para a preparação de composto(s) de fórmula (I) a partir do(s) composto(s) de fórmula (II):

(H> em que PG = grupo protector, compreendendo o método: (i) alquilação em NI de uma xantina protegida em N7; (ii) alquilação em N3 de uma xantina protegida em N7; (iii) halogenação em C8; e (iv) desprotecção de N7; em qualquer ordem desde que a desprotecção seja realizada após a alquilação. ΡΕ1912991 34

Processo 1:

Processo de acordo com o invento para a preparação de composto(s) de fórmula (I) em que R3 representa Cl.

AfiOH. H,0 m

OH

KM,, base C»)

i) Alquilação de guanina com brometo de alilo ii) Diazotização com nitrito de sódio seguido de hidrólise para formar a xantina iii) Cloração iv) Alquilação em N3 (Exemplos de bases adequadas incluem Na2C03, Cs2C03, K2C03) v) Alquilação em Nl (Exemplos de bases adequadas incluem Na2C03, Cs2C03, K2C03) vi) Remoção catalisada por paládio do grupo alilo em que L representa um grupo de saída, por exemplo halogéneo. ΡΕ1912991 35

Processo 2:

Processo de acordo com o invento para preparar composto(s) de fórmula (I) em que R3 representa Cl.

/ í}aniiáfkta tte mesSto, feese çeptençte NH, bsse /íã)

em que L representa um grupo de saída, por exemplo halogéneo, ()d representa -(CH2)2-, e R representa

Processo 3:

Um processo de acordo com o invento para preparar intermediários em que R3 é CN, que pode ser útil para a preparação de composto(s) de fórmula (I).

Este compreende os passos (i) e (ii) do Processo 1 seguidos de: 36 ΡΕ1912991

«η KjCOi

In JTBffcdííS»

i'«) «5 W-NMj,HCí FlrtWn*

GMF

iii) Alquilação em N3 iv) Alquilação em Nl

v) Formação de um aldeído em C8 por litiação com LiHMDS e terminação com DMF vi) Conversão do aldeído em nitrilo vii) Remoção catalisada por paládio do grupo alilo em que L representa um grupo de saída.

Processo 4:

Um processo de acordo com o invento para preparar composto(s) de fórmula (I) em que R3 é Cl que compreende os passos (i) a (iv) do processo 3 seguidos de:

mertWffia.

H ti 37 ΡΕ1912991

i) Halogenação em C8 utilizando NCS ou NBS ii) Remoção catalisada por paládio do grupo alilo

em que L representa um grupo de saída.

Processo 6:

Um processo de acordo com o invento para preparar composto(s) de fórmula (I) em que R3 é Cl que compreende os passos (i) a (iv) do Processo 1 (em que R2 do processo 1 é especificamente SEM ou MEM) seguido de:

1! feaso srtíjfianrss ís#

vi) Clivagem do grupo protector de MEM ou SEM vii) Alquilação de N3 seguido de remoção catalisada por paládio do grupo alilo em que L representa um grupo de saída. 38 ΡΕ1912991

Processo 7:

Um processo de acordo com o invento para preparar composto(s) de fórmula (I) que compreende os passos (i) a (iv) do Processo 3 seguidos de:

v) Remoção catalisada por paládio do grupo alilo

vi) Halogenação em C8 utilizando NCS, NBS ou NIS

Processo 8:

Um processo de acordo com o invento para preparar composto(s) de fórmula (I) em que R3 é Cl que compreende:

39 ΡΕ1912991 i) Formação de pirimidinodiona

ii) Alquilação em NI iii) Nitrosação iv) Redução utilizando Na2S204 ou agente redutor semelhante v) Formação de xantina

vi) Halogenação em C8 utilizando NCS em que L representa um grupo de saída.

Processo 9:

Um processo de acordo com o invento para preparar composto(s) de fórmula (I) em que R3 é Cl que compreende:

em que L representa um grupo de saída.

Como passo adicional aos processos gerais descritos acima, e em particular par utilização na preparação dos exemplos abaixo, há várias maneiras de purificar os compostos resultantes, um ou mais dos quais podem ser 40 ΡΕ1912991 utilizados no presente invento, por exemplo, a utilização da MDAP, por recristalização a partir de um ou mais solventes adequados, tais como acetato de etilo, etanol absoluto, acetonitrilo ou metanol, ou por utilização de coluna de purificação tal como os cartuchos Sílica Redisep e subsequente eluição com um solvente adequado, tal como diclorometano contendo acetato de etilo.

Quando desejado ou necessário, como passo final em qualquer um dos processo de síntese anteriores, um composto resultante de fórmula (I) pode ser convertido numa forma de sal ou vice-versa ou convertendo um sal noutra forma de sal farmaceuticamente aceitável. Estes processos serão conhecidos por um especialista na matéria.

ABREVIATURAS

AcOH Acido acético atm Atmosfera br Largo (RMN) CDI Carbonildiimidazole d Dupleto DBAD Azodicarboxilato de di-t-butilo DCM Diclorometano DIPEA Di-isopropiletilamina DMSO Sulfóxido de dimetilo DMF N,N-dimetilformamida EtOAc Acetato de etilo EtOH Etanol ΡΕ1912991 41 h Hora(s) IPA Álcool isopropilico m Multipleto (RMN) MD AP Autopreparação accionada por massa MeCN Acetonitrilo MeOH Metanol min minuto(s) NCS N-clorosuccinimida NBS N-bromosuccinimida NIS N-iodosuccinimida q quarteto (RMN) rt temperatura ambiente RT tempo de retenção S Singuleto (RMN) SPE Cartucho de extracção em fase sólida t Tripleto (RMN) TFA Ácido trifluoroacético THF Tetra-hidrofurano DMEM Meio de Eagle Modificado da Dubelcco HEPES Ácido 4-(2-hidroxietil)piperazino-1-etanosulfónico LiHMDS Hexametildisililamida de litio Δ Calor SEM 2-(Trimetilsilil)etoximetilo MEM 2-Metoxietoximetilo Boc t-Butoxicarbonilo THP Tetra-hidropirano

Os seguintes exemplos não limitativos ilustram o presente invento: 42 ΡΕ1912991

Exemplos de Sínteses

Deve notar-se que a atribuição da estequiometria (Z) apresentada para os compostos exemplificados abaixo não foi confirmada por dados experimentais. Os especialistas na matéria também reconhecerão que pode haver uma intercon-versão entre os isómeros E & z. (Dondoni, Alessandro; Lunazzi, Lodovico; Giorgianni, Patrizia; Macciantelli, Dante. Carbon-nitrogen rotational barrier as a stereo-chemical probe of benzamidoximes. Journal of Organic Chemistry (1975), 40(20), 2979-80).

Exemplo de Referência 1: 8-Cloro-l-(3—{5—f (4-fluorofenil)metill-2H-tetrazol-2-il}propil) -3- (4,4,4-trifluorobutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona a) 8-Cloro-l - (3—{5—[ (4—f luorofenil)metil]-2H-te- trazol-2-il}propil)-3-(4, 4,4-trifluorobutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

5-[(4-Fluorofenil)metil]-lH-tetrazole (75 mg, 0,4 mmol) foi tratado com carbonato de potássio (100 mg, 0,7 mmol) e DMF (3 ml) . A mistura foi tratada com uma solução de metanossulfonato de 3-[8-cloro-2,6-dioxo-7-(2-propen-l- 43 ΡΕ1912991 il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purin-l-il]propilo (100 mg, 0,2 mmol) em DMF (0,5 ml). A mistura foi agitada e aquecida a 60°C durante 3 horas e então arrefecida e evaporada. O resíduo foi repartido entre clorofórmio (4 ml) e água (2 cm3) . 1 cm3 de solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (3 ml) foi adicionada a cada. A mistura foi separada e a fase orgânica foi evaporada. O resíduo foi dissolvido em THF anidro (3 ml) e a mistura foi desgaseifiçada por aplicação sucessiva cuidadosa de vácuo e pressão de azoto à mistura. A mistura foi tratada com tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (10 mg, 0, 008 mmol) e morfolina (0,2 ml, 2,3 mmol) e então agitada numa atmosfera de azoto durante 2 h. A mistura foi evaporada e repartida entre clorofórmio (4 ml) e solução aquosa saturada de cloreto de amónio (3 ml). A mistura foi separada e a fase aquosa foi re-extractada com clorofórmio. A fase orgânica foi separada e o resíduo dissolvido em MeOH (3 ml) . A solução foi adicionada no topo de uma SPE de 2g de aminopropilo e lavada com MeOH (15 ml). O produto desejado foi eluído com o cartucho com uma solução de 3% v/v de AcOH em MeOH (20 ml) . As fracções contendo produto foram combinadas e evaporadas e o resíduo foi sujeito a purificação por cromatografia rápida em coluna (gradiente de eluição de 10:1 de ciclo-hexano/EtOAc a EtOAc). As fracções contendo produto foram combinadas e evaporadas para originar o produto sob a forma de um óleo sem cor. Trituração com um mínimo de éter dietílico faz com que o produto solidifique e este é bem seco para originar o composto do título sob a forma de um sólido branco (18,7 44 ΡΕ1912991 mg, 18%). LC/MS: m/z 515 [MH]+, RT 3,31 min. XH RMN (CDC13) δ : 2,06 (m, 2H), 2,21 (m, 2H), 2,45 (m, 2H), 4,17 (m, 4H), 4,24 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 4,70 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 6,96 (m, 2H), 7,25 (m, 2H). b) Metanossulfonato de 3-[8-cloro-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purin-l-il]propilo

Uma solução de 8-cloro-l-(3-hidroxipropil)-7-(2-propen-l-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-3,7-di-hidro-lH-purin-2,6-diona (0,82 g, 2,1 mmol) em DCM (20 ml) foi tratada com trietilamina (0,42 ml, 3,1 mmol) e anidrido metanossulfónico (0,40 g, 2,3 mmol). Após lha mistura foi tratada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (20 ml) . A mistura foi separada e a fase orgânica seca (MgS04), filtrada e evaporada para originar o composto do título (0,91 g), que foi utilizada sem mais purificação. LC/MS: m/z 473 [MH]+, RT 3,17 min. 45 ΡΕ1912991 c) 8-cloro-l-(3-hidroxipropil)-7-(2-propen-l-il) -3-(4,4,4-trifluorobutil)-3,7-di-hidro-lH-purin-2,6-diona

F

Uma solução de 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3 (4,4,4-trifluorobutil)-3,7-di-hidro-lH-purin-2,6-diona (1,0 g, 3,0 mmol) em DMF (15 ml) foi tratada com carbonato de césio (1,16 g, 3,6 mmol) e 3-bromo-l-propanol (0,3 ml, 3,3 mmol) . A mistura foi aquecida a 60°C durante 4 h e então arrefecida e evaporada. O resíduo foi repartido entre EtOAc (50 ml) e água (50 ml). A fase orgânica foi seca (MgS04), filtrada e evaporada. O produto foi purificado por cromatografia rápida utilizando um gradiente de eluição de ciclo-hexano a EtOAc. As fracções contendo produto foram combinadas e evaporadas para originar o composto do titulo sob a forma de um óleo sem cor (0,82 g, 75%). LC/MS: m/z 395 [MH]+, RT 2,90 min. d) 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3-(4,4,4-trifluo-robutil)-3,7-di-hidro-lH-purin-2,6-diona -46 - ΡΕ1912991

Uma solução de 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-3,7-di-hidro-lH-purin-2,6-diona (2,0 g, 8,8 mmol) em DMF (20 ml) foi tratada com carbonato de sódio (1,15 g, 10,8 mml) e 4-bromo-l,1,1-trifluorobutano (1,86 g, 9,7 mmol). A mistura foi agitada a 50°C durante 18 h e então arrefecida e evaporada. O residuo foi repartido entre EtOAc (100 ml) e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (50 ml) . A fase orgânica foi seca (MgS04), filtrada e evaporada. O resíduo foi triturado numa mistura de éter dietilico e ciclo-hexano e então o produto foi removido por filtração e seco para originar o composto do título sob a forma de um sólido branco (1,18 g, 40%). LC/MS: m/z 337 [MH]+, RT 2,83 min. e) 5-[ (4-Fluorofenil)metil]-lH-tetrazole

Uma mistura de cloreto de trietilamónio (4,14 g, 30 mmol) e azida de sódio (1,95 g, 30 mmol) foi tratada com 47 ΡΕ1912991 uma solução de (4-fluorofenil)acetonitrilo (1,35 g, 10 mmol) em tolueno (14 ml) e a mistura foi agitada e aquecida a 100°C durante 5 h. A mistura arrefecida foi tratada com água (10 ml) e a mistura separada. A fase aquosa foi agitada e tratada gota a gota com ácido clorídrico concentrado até precipitar a partir da solução. O produto precipitado foi removido por filtração, lavado com água e seco para originar o composto do título sob a forma de um sólido branco (1,27 g, 72%). LC/MS: m/z 179 [MH]+, RT 2,24 min.

Os compostos na Tabela 1 foram preparados utilizando um método análogo ao do Exemplo de Referência 1: 8-Cloro-1- (3—{5—[ (4-fluorofenil) me til]-2H-tetrazol-2-il}pro-pil)-3-(4,4, 4-trifluorobutil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona com o apropriado metanossulfonato e tetrazole. MD AP foi empregue para purificar ainda mais aqueles compostos insuficientemente puros a seguir à cromatografia em fase normal.

Intermediários de metanossulfonatos e os seus álcoois precursores foram preparados de acordo com os procedimentos seguintes:

Metanossulfonato de 3-[8-cloro-2,6-dioxo-7-(2- propen-l-il)-3-propil-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purin-l-il]propilo 48 ΡΕ1912991

Uma solução de 8-cloro-l-(3-hidroxipropil)-7-(2-propen-l-il)-3-propil-3,7-di-hidro-lH-purin-2,6-diona (1,99 g, 6,1 mmol) em DCM (50 ml) foi tratada com trietilamina (1,2 ml, 8,6 mmol) e anidrido metanossulfónico (1,2 g, 6,9 mmol). Após 1,5 h, a mistura foi tratada com água (50 ml). A mistura foi separada e a fase aquosa foi extractada com DCM (25 ml), as fases orgânicas combinadas foram secas (MgSCM, filtradas e evaporadas para originar o composto do titulo sob a forma de um óleo amarelo (2,38 g), que foi utilizado sem mais purificação. LC/MS: m/z 405 [MH]+, RT 2,93 min.

Metanossulfonato de 3-[3-butil-8-cloro-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purin-l-il]propilo

Preparado de acordo com o método utilizado para o metanossulfonato de 3-[8-cloro-2,6-dioxo-7-(2-propen-l-il)- 49 ΡΕ1912991 3-propil-2,3,6,7-tetra-hidro-lH-purin-l-il]propilo para originar o composto do titulo sob a forma de um óleo amarelo (2,44 g). LC/MS: m/z 419 [MH]+, RT 3,14 min. 8-Cloro-l-(3-hidroxipropil)-7-(2-propen-l-il)-3-propil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

Uma solução de 8-cloro-7-(2-propen-l-il)-3-propil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona (3,0 g, 11,1 mmol) em DMF (20 ml) foi tratada com carbonato de césio (3,7 g, 11,4 mmol) e 3-bromo-l-propanol (1,6 g, 11,5 mmol). A mistura foi aquecida a 60°C durante 4 h e então arrefecida e evaporada. O residuo foi repartido entre EtOAc (60 ml) e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (50 ml). A fase aquosa foi extractada com EtOAc (60 ml), as fases orgânicas combinadas foram secas (MgS04), filtradas e evaporadas. O produto foi purificado utilizando o sistema Companion™ e um gradiente de eluição de ciclo-hexano até EtOAc. As fracções contendo produto foram combinadas e evaporadas para originar o composto do titulo sob a forma de um óleo sem cor (2,6 g) . 50 ΡΕ1912991 LC/MS: m/z 327 [MH]\ RT 2,62 min. 3-Butil-8-cloro-l-(3-hidroxipropil)-7-(2-propen-1-il)-3-propil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

Preparada de acordo com o método utilizado para a 8-cloro-l-(3-hidroxipropil)-7-(2-propen-l-il)-3-propil-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona para originar o composto do titulo sob a forma de um óleo sem cor (2,3 g). LC/MS: m/z 341 [MH]+, RT 2,85 min.

Tabela 1 # Estrutura Nome Rendimento LC/MS: 2 f 3-Butil-8-cloro-l-(3-{5-[ (4- 31,6 mg (34%) m/z 461 H —A J f luorofenil) metil]-2H- [MH]+, RT htx / i*~"0 tetrazol-2-il}propil)-3,7-di- 3,31 min / hidro-lH-purino-2,6-diona

Detalhes de RMN para os exemplos seleccionados da

Tabela 1: 51 ΡΕ1912991

Exemplo 2: 3-Butil-8-cloro-l-(3—{5—[ (4-fluorofe-nil) metil]-2H-tetrazol-2-il}propil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona :Η RMN (CDC13) δ: 0,99 (t, 3H, J = 7 Hz), 1,43 (m, 2H), 1,77 (m, 2H), 2,48 (m, 2H), 4,12 (t, 2H, J = 7,5 Hz), 4,30 (s, 2H), 4,27 (t, 2H, J = 7 Hz), 4,72 (t, 2H, J = 7,5 Hz), 6,98 (m, 2H), 7,27 (m, 2H), 13,35 (br s, 1H).

Os materiais de partida anteriores podem ser adquiridos comercialmente e/ou produzidos de acordo com processos que estão disponíveis na literatura.

Lisboa, 10 de Janeiro de 2011

Claims (14)

1. ΡΕ1912991 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto que é a 3-butil-8-cloro-l-(3—{5— [(4—fluorofenil)metil]-2H-tetrazol-2-il}propil)-3,7-di-hidro-lH-purino-2,6-diona

   ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
2. 2. Um composto de acordo com a reivindicação 1 que é a 3-butil-8-cloro-l-(3—{5—[ (4-fluorofenil)metil]-2H-tetrazol-2-il}propil)-3, 7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona
3. 3. Um composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2 para utilização em medicina humana ou veterinária.
4. 4. Um composto de acordo com a reivindicação 1 2 ΡΕ1912991 ou 2 para utilização no tratamento de uma condição em que a subactivação do receptor HM74A contribui para a condição ou em que a activação do receptor será benéfica.
5. 5. Um composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2 para utilização no tratamento da dislipidemia diabética, dislipidemia mista ou hiperlipoproteinemia.
6. 6. Um composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2 para utilização no tratamento da diabetes mellitus tipo II.
7. 7. Um composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2 para utilização no tratamento da dislipidemia diabética, dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hipercolesteremia, doença cardiovascular, aterosclerose, arteriosclerose, hipertrigliceridemia, diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia, anorexia nervosa, obesidade, doenças das artérias coronárias, trombose, angina, insuficência renal crónica, doenças vascular periférica ou derrame cerebral.
8. 8. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2 no fabrico de um medicamento para o tratamento de uma condição em que a subactivação do receptor HM74A contribui para a condição ou em que a activação do receptor será benéfica. 3 ΡΕ1912991
9. 9. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2 no fabrico de um medicamento para o tratamento da dislipidemia diabética, dislipidemia mista ou hiperlipoproteinemia.
10. 10. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2 no fabrico de um medicamento para o tratamento da diabetes mellitus.
11. 11. Utilização de um composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2 no fabrico de um medicamento para o tratamento da dislipidemia diabética, dislipidemia mista, insuficiência cardíaca, hipercolesteremia, doença cardiovascular, aterosclerose, arteriosclerose, hipertrigliceri-demia, diabetes mellitus do tipo II, diabetes do tipo I, resistência à insulina, hiperlipidemia, anorexia nervosa, obesidade, doenças das artérias coronárias, trombose, angina, insuficência renal crónica, doença vascular periférica ou derrame cerebral.
12. 12. Uma formulação farmacêutica compreendendo um composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2 e pelo menos um diluente, excipiente ou suporte farmaceuticamente aceitável.
13. 13. Uma combinação para administração em conjunto ou separadamente, sequencialmente ou simultaneamente em formulações farmacêuticas separadas ou combinadas, com- 4 ΡΕ1912991 preendendo a referida combinação um composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2 em conjunto com, pelo menos, um agente terapeuticamente activo.
14. 14. Uma formulação farmacêutica compreendendo: (i) Um composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2; (ii) um ou mais agentes terapeuticamente activos selec-cionados de estatina, fibratos, resinas que se associam aos ácidos biliares e ácido nicotínico; e (iii) um ou mais diluente, excipiente ou suporte far-maceuticamente aceitável. Lisboa, 10 de Janeiro de 2011 ΡΕ1912991 1/3 Figura 1 Intensidade(contagem)

    Figura 1: Dados de XRPD da forma 1 substancialmente cristalina da 3-butil-8-cloro-l-{5-[5- (2-piridinil) -1,2,4-oxadiazol-3-il]butil}-3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona. ΡΕ1912991 2/3 Figura 2 Intensidade(contagem)

    Figura 2: Dados de XRPD da forma 2 substancialmente cristalina da 3-butil-8-cloro-l-{5-[5- (2-piridinil) -1,2,4-oxadiazol-3-il]butil}-3,7-di-hidro-lH-purino-2, 6-diona. ΡΕ1912991 3/3 Figura 3 Intensidade(contagem)

    Figura 3: Sobreposição dos dados de XRPD para a forma 1 (em baixo), forma 2 (em cima) (os dados foram deslocados para maior clareza) 1 ΡΕ1912991 REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição » WD02S42S&A ♦ WD2QG5SÍS873A * EP 0389282 A *· Vv'0 920842:56 A ♦ WG 03004498 A Literatura que não é de patentes citada na Descrição » W««. J 8& Cte-s 2083. v£8 273 i \ n. 3689-9874 * 2883. ;vo*. 9 (35,062^68 * Soga , Rss Ornam* 2003. voi, 303^?V88Í.SS9 * fcrgaH Bí#sísy ; Stài&fcous*, Jv fham; S®. 1977, vol. SS. -t-í§ * WMa»8, t,; Jsfeofesv KJi Mòthoãz •934. voí 237. 8-i3 * c·; Orç®f%? Shsnístfy, 1976. voi. 48 i20>, 2973-30