ES2354723T3 - Derivados de xantina como agonistas selectivos de hm74a. - Google Patents

Abstract

Un compuesto que es 3-butil-8-cloro-1-(3-{5-[(4-fluorofenil)metil]-2H-tetrazol-2-il}propil)-3,7-dihidro-1Hpurina-2,6-diona **Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

La presente invención se refiere a compuestos que son derivados de xantina, a procesos para la fabricación de dichos derivados, a formulaciones farmacéuticas que contienen dichos compuestos y al uso de los compuestos en terapia, por ejemplo en el tratamiento de enfermedades en las que la sub-activación del receptor HM74A contribuye a la enfermedad o donde la activación del receptor es beneficiosa. 5

Dislipidemia es un término general usado para describir individuos con perfiles aberrantes de lipoproteínas. Clínicamente, las principales clases de compuestos usados para el tratamiento de pacientes con dislipidemia, y por tanto con riesgo de enfermedad cardiovascular, son las estatinas, los fibratos, las resinas de unión a ácido biliar y el ácido nicotínico. El ácido nicotínico (Niacina, una vitamina B) ha sido usado clínicamente durante 40 años en pacientes con distintas formas de dislipidemia. El principal modo 10 de actuación del ácido nicotínico es a través de la inhibición de triglicérido lipasa sensible a hormona (HSL), que produce una disminución de ácidos grasos no esterificados (NEFA, del inglés "non-esterified fatty acids") en plasma, lo que a su vez altera el metabolismo hepático de las grasas para reducir la producción de LDL y VLDL (lipoproteínas de baja y muy baja densidad). Se cree que unos niveles reducidos de VLDL disminuyen la actividad de la proteína de transferencia de éster de colesterol (CETP, 15 del inglés "cholesterol ester transfer protein") para dar como resultado un aumento de los niveles de HDL (lipoproteína de alta densidad) que puede ser la causa de los beneficios cardiovasculares observados. Por tanto, el ácido nicotínico produce una alteración muy deseable de los perfiles de lipoproteína; reduciendo los niveles de VLDL y LDL y aumentando a la vez los de HDL. También se ha demostrado que el ácido nicotínico presenta beneficios modificadores de la enfermedad, reduciendo la progresión y aumentando la 20 regresión de lesiones ateroscleróticas, y reduciendo el número de eventos cardiovasculares en varios ensayos.

La inhibición de HSL observada para el tratamiento con ácido nicotínico está mediada por una disminución en el monofosfato de adenosina cíclico celular (cAMP) provocado por la inhibición mediada por proteína G de la adenilil ciclasa. Recientemente se han identificado los receptores HM74 y HM74A 25 acoplados a proteína G como receptores para ácido nicotínico (solicitud de patente PCT WO 02/84298; Wise y col. J. Biol. Chem., 2003, 278 (11), 9869-9874). La secuencia de ADN del HM74A humano puede encontrarse en el Genbank; número de acceso AY148884. Otros dos artículos confirman este descubrimiento (Tunaru y col. Nature Medicine, 2003, 9(3), 352-255 y Soga y col. Biochem. Biophys. Res. Commun., 2003, 303 (1) 364-369), aunque la nomenclatura difiere ligeramente. En el artículo de Tunaru, a 30 lo que ellos denominan HM74 humano nosotros lo denominamos HM74A, y en el artículo de Soga el HM74b es idéntico al HM74A. Las células transfectadas para expresar HM74A y/o HM74 adquieren la capacidad de activar respuestas mediadas por la proteína G Gi tras una exposición a ácido nicotínico. En ratones que carecen del homólogo de HM74A (m-PUMA-G) el ácido nicotínico no puede reducir los niveles en plasma de NEFA. 35

En la técnica anterior se han sintetizado y descrito determinados derivados de xantina. Por ejemplo, el documento EP0389282 describe derivados de xantina como mediadores potenciales de trastornos cerebrovasculares. Jacobson y col. identificaron una gama de derivados de xantina como antagonistas de receptor de adenosina en J. Med. Chem., 1993, 36, 2639-2644.

El documento WO 03/004496 describe derivados de xantina como inhibidores selectivos de la 40 enzima DPP-IV. El documento WO 2005/016870 describe derivados de ácido antranílico para uso en el tratamiento de enfermedades en las que la sub-activación del receptor HM74A contribuye a la enfermedad.

Nosotros presentamos ahora un grupo de derivados de xantina que son agonistas selectivos del receptor de ácido nicotínico HM74A, y que por tanto presentan un potencial beneficio en el tratamiento, la 45 profilaxis y la supresión de enfermedades en las que la sub-activación de dicho receptor contribuye a la enfermedad o en las la activación del receptor es beneficiosa.

Compendio de la Invención

La presente invención proporciona derivados de xantina que son de uso en terapia, por ejemplo, en el tratamiento de enfermedades en las que la sub-activación del receptor HM74A contribuye a la 50 enfermedad o en las que la activación del receptor es beneficiosa. Por ejemplo, en el tratamiento de enfermedades del metabolismo de lípidos, incluyendo la dislipidemia o hiperlipoproteinemia, tal como la dislipidemia diabética y la dislipidemia mixta, la insuficiencia cardiaca, la hipercolesteremia, enfermedades cardiovasculares que incluyen la aterosclerosis, la arteriosclerosis y la hipertrigliceridemia. Como tal, los compuestos también pueden ser favorables como agentes terapéuticos para la enfermedad de las arterias 55 coronarias, la trombosis, la angina de pecho, la insuficiencia renal crónica, la enfermedad vascular periférica y la apoplejía, así como las indicaciones cardiovasculares asociadas a la diabetes mellitus de tipo II, la diabetes de tipo I, a la resistencia a la insulina, a la hiperlipidemia, la anorexia nerviosa y la

obesidad. Los compuestos también pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades o afecciones inflamatorias, tal como se establece a continuación.

Descripción Detallada de la Invención

De acuerdo con un aspecto de esta invención, proporcionamos un compuesto de fórmula (I) que es 3-butil-8-cloro-1-(3-{5-[(4-fluorofenil)metil]-2H-tetrazol-2-il}propil)-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona 5

(I) obesidad. Los compuestos también pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades o afecciones inflamatorias, tal como se establece a continuación.

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Se cree que el(los) compuesto(s) es(son) de utilidad en el tratamiento de enfermedades en las que la sub-activación de receptor HM74A contribuye a la enfermedad o en las que la activación del receptor es beneficiosa. Por ejemplo, en el tratamiento de enfermedades del metabolismo de lípidos, incluyendo la 10 dislipidemia y la hiperlipoproteinemia, tal como la dislipidemia diabética y la dislipidemia mixta, la insuficiencia cardiaca, la hipercolesteremia, enfermedades cardiovasculares que incluyen la aterosclerosis, la arteriosclerosis y la hipertrigliceridemia. Como tal, los compuestos también pueden ser favorables como agentes terapéuticos para la enfermedad de las arterias coronarias, la trombosis, la angina de pecho, la insuficiencia renal crónica, la enfermedad vascular periférica y la apoplejía, así como 15 las indicaciones cardiovasculares asociadas a la diabetes mellitus de tipo II, la diabetes de tipo I, a la resistencia a la insulina, a la hiperlipidemia, la anorexia nerviosa y la obesidad. Como tal, los compuestos de la presente invención pueden tener utilidad como agonistas o agonistas parciales de HM74A. Los compuestos también pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades o afecciones inflamatorias, tal como se establece a continuación. 20

Además, algunas de las formas cristalinas de los compuestos de la fórmula (I) pueden existir como polimorfos, los cuales están incluidos en la presente invención. Una forma puede presentar una ventaja sobre otra forma, por ejemplo una forma puede tener una estabilidad mejorada respecto a otra forma.

Debe entenderse que la presente invención incluye cualquier combinación de realizaciones particulares, y que cubre todas las combinaciones de sustituyentes particulares descritos en la presente 25 memoria.

A lo largo de la presente especificación y de las reivindicaciones anexas las palabras "comprender" e "incluir", y variaciones tales "comprende", "que comprende", "incluye" y "que incluye" deben interpretarse como inclusivas. Es decir, dichas palabras pretenden transmitir la posible inclusión de otros elementos o integrantes no mencionados específicamente, donde lo permita el contexto. 30

Tal como se usa en la presente memoria, el término “farmacéuticamente aceptable” usado en relación con un ingrediente (ingrediente activo, diluyente, excipiente o vehículo) que se puede incluir en una formulación farmacéutica para la administración a un paciente, se refiere a que ese ingrediente es aceptable en el sentido de que es compatible con cualquier otro ingrediente presente en la formulación farmacéutica, y no es perjudicial para el receptor del mismo. 35

Tal como se usa en la presente memoria, el término "solvato" se refiere a un complejo de estequiometría variable formado por un soluto (en esta invención, un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo) y un disolvente. Dichos disolventes, para los fines de la presente invención, no pueden interferir con la actividad biológica del soluto. El disolvente usado puede ser un disolvente farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos de disolventes farmacéuticamente aceptables 40 adecuados incluyen agua, etanol y ácido acético. Un ejemplo de un disolvente que puede usarse es el agua, en cuyo caso el solvato puede referirse a un hidrato del soluto en cuestión.

Se apreciará que, para uso farmacéutico, la "sal o solvato" referida/o anteriormente será una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable. Sin embargo, otras sales o solvatos pueden encontrar uso, por ejemplo, en la preparación de un compuesto de fórmula (I) o en la preparación de una sal o un solvato 45 farmacéuticamente aceptable del mismo.

Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las descritas por Berge, Bighley y Monkhouse, J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19. Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas incluyen sales de metal alcalino formadas a partir de la adición de bases de metal alcalino tales como hidróxidos de metal alcalino. Los ejemplos de sales de metales alcalinos adecuadas incluyen sales de sodio y sales de potasio. Otras sales farmacéuticamente aceptables adecuadas incluyen sales de metales alcalinotérreos tales como 5 sales de calcio y sales de magnesio, sales de amonio; o sales con bases orgánicas tales como etanolamina, trietanolamina, etilendiamina, trietilamina, colina y meglumina; o sales con aminoácidos tales como arginina, lisina e histidina.

Los ésteres pueden ser activos por sí mismos y/o pueden hidrolizarse bajo condiciones in vivo en el cuerpo humano. Los grupos éster hidrolizables in vivo farmacéuticamente aceptables adecuados 10 incluyen aquellos que se degradan con facilidad en el cuerpo humano para dejar el ácido de origen o su sal. Se puede formar un éster en un grupo de ácido carboxílico (-C(O)OH) mediante métodos bien conocidos en la técnica, que implican la reacción con el correspondiente alcohol. Por ejemplo, los ésteres pueden ser ésteres de alquilo C1-6, por ejemplo ésteres de metilo, ésteres de etilo, y similares.

Tal como se usa en esta memoria, la expresión "compuestos de la invención" se refiere a los 15 compuestos de acuerdo con la fórmula (I) y a las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. La expresión "un compuesto de la invención" significa uno cualquiera de los compuestos de la invención tal como se definieron con anterioridad.

Los compuestos de la fórmula (I) presentan beneficios terapéuticos potenciales en el tratamiento y alivio de síntomas de múltiples enfermedades del metabolismo de lípidos, que incluyen la dislipidemia y la 20 hiperlipoproteinemia, tal como la dislipidemia diabética y la dislipidemia mixta, la insuficiencia cardíaca, la hipercolesteremia, enfermedades cardiovasculares que incluyen la aterosclerosis, la arteriosclerosis, y la hipertrigliceridemia, la diabetes melllitus de tipo II, la diabetes de tipo I, la resistencia a la insulina, la hiperlipidemia, la anorexia nerviosa, la obesidad. Como tal, los compuestos también pueden encontrar utilidad como agentes terapéuticos para la enfermedad de arterias coronarias, la trombosis, la angina de 25 pecho, la insuficiencia renal crónica, la enfermedad vascular periférica y la apoplejía.

Se ha publicado que los receptores HM74 y HM74A están implicados en la inflamación (WO 02084298). La inflamación representa un grupo de respuestas vasculares, celulares y neurológicas frente a un trauma. La inflamación puede caracterizarse como el movimiento de células inflamatorias tales como monocitos, neutrófilos y granulocitos en los tejidos. Habitualmente esto está asociado a una reducción de 30 la función de la barrera endotelial y a edemas dentro de los tejidos. La inflamación relativa a enfermedad normalmente se denomina inflamación crónica. Dicha inflamación crónica puede manifestarse a través de síntomas de enfermedad. El objetivo de la terapia antiinflamatoria es, por lo tanto, reducir dicha inflamación crónica y permitir que se produzca el proceso fisiológico de curación y de reparación de tejidos. 35

Los ejemplos de enfermedades o afecciones inflamatorias en las que los compuestos de la presente invención pueden mostrar utilidad incluyen las de las articulaciones, por ejemplo la artritis (por ejemplo, artritis reumatoide, osteoartritis, fallo de articulación prostética), o del tracto gastrointestinal (por ejemplo, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, y otras enfermedades gastrointestinales, gastritis e inflamación de la mucosa como resultado de la infección, la enteropatía provocada por fármacos 40 antiinflamatorios no esteroideos), del pulmón (por ejemplo, síndrome de insuficiencia respiratoria en adultos, asma, fibrosis quística, o enfermedad pulmonar obstructiva crónica), del corazón (por ejemplo, miocarditis), del sistema nervioso (por ejemplo, esclerosis múltiple), del páncreas (por ejemplo, inflamación asociada a diabetes mellitus y complicaciones de la misma), del riñón (por ejemplo, glomerulonefritis), de la piel (por ejemplo, dermatitis, soriasis, eczema, urticaria, lesión por quemadura), 45 del ojo (por ejemplo, glaucoma), así como de órganos trasplantados (por ejemplo, rechazo) y enfermedades multiorgánicas (por ejemplo, eritematosis de lupus sistémico, sepsis) y secuelas inflamatorias de infecciones víricas o bacterianas, y afecciones inflamatorias asociadas a aterosclerosis y después de episodios hipóxicos o isquémicos (con o sin reperfusión), por ejemplo en el cerebro o en enfermedad cardíaca isquémica. 50

Los compuestos de esta invención son útiles en el tratamiento y prevención de la inflamación, la diabetes y las afecciones o enfermedades cardiovasculares que incluyen la aterosclerosis, la arteriosclerosis, la hipertrigliceridemia, y la dislipidemia mixta.

El ácido nicotínico tiene un perfil de efectos secundarios significativo, posiblemente debido a que se administra a altos niveles de dosis (cantidades de gramos al día). El efecto secundario más común es 55 un enrojecimiento cutáneo intenso. En determinadas realizaciones de la presente invención, los compuestos pueden presentar efectos secundarios reducidos en comparación con el ácido nicotínico. Se ha identificado al HM74A como un receptor de alta afinidad por el ácido nicotínico, mientras que el HM74 es un receptor de menor afinidad. Los compuestos de la presente invención muestran una mayor afinidad

por el HM74A que por el HM74, y por tanto pueden encontrar utilidad como agonistas selectivos de HM74A o como agonistas parciales.

El potencial de los compuestos de fórmula (I) para activar HM74A se puede demostrar, por ejemplo, usando los siguientes ensayos in vitro con células enteras:

Ensayos in vitro 5

Para las transfecciones temporales, se mantuvieron células HEK293T (células HEK293 que expresan de forma estable el antígeno T grande de SV40) en DMEM que un 10% de suero fetal de ternero y glutamina 2 mM. Las células se sembraron en discos de cultivo de 90 mm y se cultivaron hasta un 60-80% de confluencia (18-24h) antes de la transfección. Se subclonó HM74A humano (GenBank número de acceso AY148884) en un vector de expresión de mamífero (pcDNA3; Invitrogen) y se 10 transfectó usando reactivo LipofectamineTM. Para la transfección, se mezclaron 9g de ADN con 30 L de Lipofectamine en 0,6 mL de Opti-MEM (Life Technologies Inc.) y la mezcla se incubó a temperatura ambiente durante 30 minutos antes de la adición de 1,6 mL de Opti-MEM. Las células se expusieron a la mezcla de Lipofectamine/ADN durante 5 horas y después se añadieron 6 mL de suero fetal de ternero al 20% (v/v) en DMEM. Las células se recogieron 48 horas después de la transfección. Se llevó a cabo un 15 tratamiento con toxina pertussis mediante suplementación en medio a 50 ng·mL-1 durante 16 h. Todos los estudios de transfección temporal implicaron la co-transfección del receptor junto con la proteína G Gi/o, Go1.

Para la generación líneas celulares estables, se usó el método anterior para transfectar células CHO-K1 sembradas en seis discos de pocillos cultivados hasta un 30% de confluencia. Dichas células se 20 mantuvieron en medio DMEM-Ham’s F-12 (disponible en Invitrogen) que contenía un 10% de suero fetal de ternero y glutamina 2 mM. 48 horas después de la transfección, se suplementó el medio con 400g/mL de Geneticin (G418, Gibco) para la selección de células resistentes a antibiótico. Las líneas celulares de CHO-K1 clonales que expresaban de forma estable HM74A fueron confirmadas mediante medidas de unión de [35S]-GTPS, seguidas de la adición de ácido nicotínico. 25

Preparación de membrana P2 - Las fracciones de partículas P2 que contenían membrana de plasma fueron preparadas a partir de pastas de células congeladas a -80C tras la recolección. Todos los procedimientos se llevaron a cabo a 4C. Las partículas de células fueron resuspendidas en 1 mL de Tris-HCl 10 mM y EDTA 0,1 mM, pH 7,5 (tampón A) y mediante homogeneización durante 20 s con un Ultra Turrax seguido de un pasaje (5 veces) a través de aguja de 25. Los lisatos celulares fueron 30 centrifugados a 1.000 g durante 10 minutos en una microcentrífuga para formar una pastilla de núcleos y células no rotas, y las fracciones de partículas P2 fueron recuperadas mediante microcentrifugación a 16.000 g durante 30 minutos. Las fracciones de partículas P2 fueron resuspendidas en tampón A y almacenadas a -80C hasta el momento de su utilización.

Unión [35S]-GTPS - los ensayos se llevaron a cabo a temperatura ambiente en formato de 384 35 pocillos en base a métodos descritos previamente (Wieland, T. y Jakobs, K.H. (1994) Methods Enzymol. 237, 3-13). Brevemente, se prepararon diluciones de compuestos patrones o de ensayo y se añadieron a una placa de 384 pocillos en un volumen de 10 L. Las membranas (HM74A o HM74) fueron diluidas en tampón de ensayo (HEPES 20 mM, NaCl 100 mM, MgCl2 10 mM, pH 7,4) suplementado con saponina (60 g/mL), partículas de WGA Leadseeker (Amersham; 250 g/pocillo) y GDP 10 M, de tal modo que el 40 volumen añadido de 20 L en cada pocillo contiene 5 g de membranas. Se diluyó [35S]-GTPS (1170 Ci/mmol, Amersham) en tampón de ensayo (1:1500) y se añadieron 20 L a cada pocillo. Después de la adición del radioligando, las placas fueron selladas, sometidas a giro por pulsos e incubadas durante 4 horas a temperatura ambiente. Al final del periodo de incubación, se utilizó una máquina Leadseeker para leer las placas (VIEWLUX PLUS; Perkin-Elmer) y determinar los niveles de unión específica. 45

Estos ensayos fueron refinados reduciendo el volumen final de ensayo a 10 L. Para este ensayo de 10 L se usó un protocolo revisado. Esto implicó el uso de sólo 100 nL de compuesto patrón o de ensayo por pocillo de una placa de 384 pocillos, y 1,5 g de membrana y 100 g de partículas WGA Leadseeker. Para el protocolo de bajo volumen, la membrana, las partículas y el [35S]-GTPS fueron mezclados y a continuación se dispensaron 10 mL de dicha mezcla a cada pocillo. La incubación y la 50 lectura de placa fueron idénticas en los ensayos de 10 mL y de 50 mL.

Todos los compuestos mostrados como ejemplos fueron evaluados en uno o en ambos ensayos de unión [35S]-GTPS descritos anteriormente (es decir, los ensayos de 10 L y 50 L).

Los datos fueron analizados mediante ajuste a una curva, llevado a cabo usando una ecuación Logística de Cuatro Parámetros usando el paquete de software XC50 (borrando un máximo de 2 puntos 55 de cada una de las curvas). La unión específica se expresó como pEC50 y como % de eficacia en comparación con la respuesta máxima de unión de ácido nicotínico.

Ensayos in vivo

Los compuestos de la invención pueden ser evaluados en ratas Spague-Dawley macho (200-250 g) que han estado en ayuno durante al menos 12 horas antes del estudio. Los compuestos se dosifican intravenosamente a 1 ó 3 mg/kg (5 mL/kg) o mediante administración oral con dosis que oscilan entre 1 y 30 mg/kg (10 mL/kg). Se pueden extraer muestras sanguíneas (0,3 mL de la vena de la cola) antes de la 5 dosis y tres veces después de la dosis (a tiempos que oscilan entre los 15 minutos y las 6 horas después de la dosis). Cada muestra sanguínea es transferida a un tubo de heparina (Becton Dickinson Microtainer, PST LH) y centrifugada (10.000 g durante 5 minutos) para producir una muestra de plasma. Las muestras de plasma son evaluadas para determinar los niveles de ácidos grasos no esterificados (NEFA) usando un kit disponible comercialmente (Randox). La inhibición de los niveles de NEFA en plasma, respecto a 10 los niveles de predosis, se usa como un sucedáneo de actividad de agonista de HM74A.

A fin de determinar si los compuestos de la invención exhiben la respuesta de enrojecimiento asociada al ácido nicotínico, se pueden dosificar a cobayas conscientes. Se somete a cobayas macho Dunkin Hartley (300-600 g; n = 10-20 por grupo) a ayuno durante al menos 12 horas, pero sin sobrepasar las 24 horas antes del experimento. Se tomas muestras de sangre pre-estudio (0,5 mL) de cada animal 15 mediante punción cardiaca bajo anestesia de recuperación (isoflurano al 3,5% con O2 adicional (1 L/min)). Se realizan mediciones de la temperatura del oído colocando la oreja izquierda de cada animal sobre una sonda de temperatura de infrarrojos. Se toman medidas a intervalos de un minuto desde 5 minutos antes de la dosis y hasta 30 minutos después de la dosis. A continuación se toman medidas de temperatura a intervalos de 15 minutos hasta las 2 horas después de la dosis. Los animales reciben los compuestos de 20 ensayo mediante administración oral (5 mL/kg). Se toman muestras de sangre (0,5 mL) mediante punción cardiaca bajo anestesia terminal. Se toman muestras de sangre de animales individuales para obtener datos a 0,5; 1; 2; 3 y 4 horas después de la dosis. Todas las muestras sanguíneas se colocan sobre un agitador de sangre durante 5 minutos y a continuación se almacenan sobre hielo hasta el final del estudio. Tras centrifugación (12.000 g durante 5 minutos) el plasma es transferido a tubos frescos y almacenado a 25 -20ºC hasta la determinación de concentraciones de NEFA.

Se han sintetizado algunos compuestos de acuerdo con la Fórmula (I) (véanse los ejemplos sintéticos más adelante) y se han evaluado en los ensayos de unión [35S]-GTPS discutidos anteriormente.

Los compuestos de los ejemplos tienen un pEC50 de 4,3 (+/- 0,3 en unidades logarítmicas) o 30 superior, y una eficacia del 30% o superior (respecto al ácido nicotínico) en los ensayos de unión de [35S]-GTPS descritos anteriormente, en los que han sido evaluados.

Métodos analíticos y de purificación generales:

Método CL/EM:

Se llevó a cabo HPLC analítica con una columna SupelcosilTM ABZ+PLUS (Supelco) (3 μm, 3,3cm 35 x 4,6mm DI) eluyendo con HCO2H al 0,1% y acetato de amonio 0,01 M en agua (disolvente A), y 95% de MeCN y 5% de agua (que contiene un 0,5% de HCO2H) (disolvente B), usando el siguiente gradiente de elución 0-0,7minutos 0% de B; 0,7-4,2min 0→100% de B; 4,2-4,6 minutos 100% de B; 4,6-4,8 minutos 100→0% de B con un caudal de 3 mL/minuto. Se llevó a cabo una detección UV de conjunto de diodos en el intervalo de 215 a 330 nm. Los espectros de masas (EM) se registraron en un espectrómetro de masas 40 Waters ZQ usando los modos de ionización positiva por electropulverización [(ES+ve para producir los iones moleculares MH+ y M(NH4)+] o de ionización negativa por electropulverización [(ES-ve para producir el ión molecular (M-H)-]. Sólo se contabilizó el ion original de los principales isótopos.

Los espectros de RMN de 1H se registraron usando un espectrómetro Bruker DPX 400MHz usando tetrametilsilano como patrón. 45

La cromatografía Biotage™ se refiere a la purificación llevada a cabo usando los sistemas de purificación Flash 40i o Flash 150i, vendidos por Biotage AB, y cartuchos preempaquetados con KPSil (sílice).

El sistema CompanionTM se refiere al sistema de purificación Teledyne Isco Combiflash CompanionTM. Se trata de un sistema de purificación de gradiente controlado con detección integral de 50 longitud de onda variable de UV, con capacidad para activar la recolección automatizada de una fracción mediante un umbral de UV.

Autopreparación dirigida por masa (MDAP, del inglés "mass directed autoprep") se refiere a métodos en los que el material se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución usando una columna SupelcosilTM ABZ+ de 5μm (10cm x 20mm d.i.) o una columna SupelcosilTM ABZ+ de 10μm 55

(15cm x 30mm d.i.) con un gradiente adecuado de disolvente A: HCO2H al 0,1% en agua y disolvente B: 95% de MeCN, 5% de agua (que contiene un 0,5% de HCO2H). El inyector/colector Waters 2767 se activó mediante un Espectrómetro de Masas MicroMass ZQ al detectar la masa de interés (usando el software Micromass MassLynx).

HPLC preparativa (abreviado Autoprep HPLC o Autoprep) se refiere a métodos en los que el 5 material se purificó mediante cromatografía de líquidos de alta resolución en una columna SupelcosilTM ABZ+ de 5μm (10cm x 21,2mm d.i.) con un gradiente adecuado del 0,1% de HCO2H en agua y MeCN (con un 0,5% de HCO2H). El recolector de fracciones Gilson 233 estaba accionado por detección de UV.

SPE (extracción en fase sólida) se refiere al uso de cartuchos de polietileno que están preempaquetados con un adsorbente usado para la purificación. El adsorbente contenido en dichos 10 cartuchos se especificará. Los ejemplos usados se detallan a continuación:

C18 SPE se refiere al uso de cartucho preempaquetados con adsorbente de sílice funcionalizada con C18 40µM (vendida por Varian Inc.). Se cargó el compuesto, normalmente en DMSO / MeOH al 50:50, sobre un cartucho acondicionado previamente con MeCN y equilibrado con MeCN al 5% en agua. El producto fue eluido con un gradiente adecuado de HCO2H al 0,1% en agua y MeCN (0,5% de HCO2H). 15

SPE o columna de aminopropilo se refiere al uso de cartuchos preempaquetados con sílice funcionalizada con aminopropilo de 40 µm-120 µm (vendida por Varian Inc.). Normalmente se carga el producto sin purificar en mezclas de DCM / MeOH sobre un cartucho previamente acondicionado con MeOH. Los componentes neutros fueron eluidos con MeOH y/o DCM (3 ó 4 volúmenes de columna) y los componentes ácidos normalmente eluyeron con un eluyente que contenía una proporción de AcOH (2-20 20%).

Cartuchos OasisTM / SPEs OasisTM se refiere a cartuchos de SPE empaquetados con un adsorbente polimérico fabricado por Waters Corporation. Habitualmente son acondicionados con 3 volúmenes de columna de MeOH y equilibrados con agua antes de cargar la muestra. Las sales y los compuestos inorgánicos son eluidos con agua y el producto eluye normalmente con MeOH o MeCN. 25

GreenHouseTM se refiere a una plataforma de sintetizador en paralelo de 24 reacciones disponible en RDT Ltd, R.U.

Tal como se ha indicado anteriormente, los compuestos de fórmula (I) pueden encontrar utilidad en medicina humana o veterinaria, por ejemplo como activadores de HM74A, en el tratamiento de la dislipidemia y la hiperlipoproteinemia. 30

Por tanto, se proporciona como otra realización de la presente invención al menos un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente del mismo, para uso en medicina humana o veterinaria, por ejemplo en el tratamiento de trastornos del metabolismo de lípidos, que incluyen dislipidemia e hiperlipoproteinemia, tal como dislipidemia diabética y dislipidemia mixta, insuficiencia cardíaca, hipercolesteremia, enfermedad cardiovascular que incluye aterosclerosis, arteriosclerosis e 35 hipertrigliceridemia, diabetes mellitus tipo II, diabetes tipo I, resistencia a insulina, hiperlipidemia, anorexia nerviosa y obesidad. Como tal, los compuestos también se proporcionan para uso en el tratamiento de enfermedades arteriales coronarias, trombosis, angina de pecho, insuficiencia renal crónica, enfermedad vascular periférica y apoplejía.

Por tanto, se proporciona como una realización adicional de la presente invención al menos un 40 compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente del mismo, para uso en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de trastornos del metabolismo de lípidos, que incluyen dislipidemia e hiperlipoproteinemia, tal como dislipidemia diabética y dislipidemia mixta, insuficiencia cardíaca, hipercolesteremia, enfermedad cardiovascular que incluye aterosclerosis, arteriosclerosis e hipertrigliceridemia, diabetes mellitus tipo II, diabetes tipo I, resistencia a insulina, hiperlipidemia, anorexia 45 nerviosa y obesidad. Como tal, los compuestos también se proporcionan para uso en el tratamiento de enfermedades arteriales coronarias, trombosis, angina de pecho, insuficiencia renal crónica, enfermedad vascular periférica y apoplejía.

Cabe destacar que las referencias al tratamiento se extienden en la presente memoria a la profilaxis, la prevención de recurrencia y la supresión de síntomas, así como al tratamiento de afecciones 50 establecidas.

En una realización de la invención, se proporciona al menos un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en el tratamiento de trastornos del metabolismo de lípidos que incluyen la dislipidemia y la hiperlipoproteinemia. Por ejemplo, se proporciona el uso de al menos un compuesto de fórmula (I) o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en el 55

tratamiento de dislipidemia diabética, dislipidemia mixta, insuficiencia cardiaca, hipercolesteremia, diabetes mellitus tipo II, diabetes tipo I, resistencia a insulina, hiperlipidemia, anorexia nerviosa, obesidad, enfermedad arterial coronaria, trombosis, angina de pecho, insuficiencia renal crónica, apoplejía y enfermedad cardiovascular que incluye aterosclerosis, arteriosclerosis e hipertrigliceridemia.

Debe entenderse que esta realización incluye cualquier combinación de realizaciones particulares 5 y que cubre todas las combinaciones de sustituyentes particulares descritos en la presente memoria anteriormente para compuestos de Fórmula (I).

Adicionalmente, la presente invención proporciona el uso de al menos un compuesto de fórmula (I), o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades o condiciones inflamatorias de las articulaciones, por ejemplo, la artritis (por 10 ejemplo, artritis reumatoide, osteoartritis, fallo de articulación prostética), o del tracto gastrointestinal (por ejemplo, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, y otras enfermedades gastrointestinales, gastritis e inflamación de la mucosa como resultado de la infección, la enteropatía provocada por fármacos antiinflamatorios no esteroideos), del pulmón (por ejemplo, síndrome de insuficiencia respiratoria en adultos, asma, fibrosis quística, o enfermedad pulmonar obstructiva crónica), del corazón (por ejemplo, 15 miocarditis), del sistema nervioso (por ejemplo, esclerosis múltiple), del páncreas (por ejemplo, inflamación asociada a diabetes mellitus y complicaciones de la misma), del riñón (por ejemplo, glomerulonefritis), de la piel (por ejemplo, dermatitis, soriasis, eczema, urticaria, lesión por quemadura), del ojo (por ejemplo, glaucoma), así como de órganos trasplantados (por ejemplo, rechazo) y enfermedades multiorgánicas (por ejemplo, eritematosis de lupus sistémico, sepsis) y secuelas 20 inflamatorias de infecciones víricas o bacterianas, y afecciones inflamatorias asociadas a aterosclerosis y después de episodios hipóxicos o isquémicos (con o sin reperfusión), por ejemplo en el cerebro o en enfermedad cardíaca isquémica.

Nuevamente, debe entenderse que esta realización incluye cualquier combinación de realizaciones particulares y que cubre todas las combinaciones de sustituyentes particulares descritos en la presente 25 memoria anteriormente para compuestos de Fórmula (I).

La cantidad de un compuesto de fórmula (I) o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo que es requerida para alcanzar el efecto biológico deseado dependerá, por supuesto, de una serie de factores, por ejemplo, del modo de administración y de la afección clínica precisa del receptor. En general, la dosis diaria estará en el intervalo de 0,1 mg - 1 g/kg, habitualmente 0,1 - 100 mg/kg. Una dosis 30 intravenosa puede, por ejemplo, estar en el intervalo de 0,01 mg a 0,1 g/kg, habitualmente 0,01 mg a 10 mg/kg, que puede administrarse de forma conveniente como una infusión de 0,1 g a 1 mg, por minuto. Los fluidos de infusión adecuados para este propósito pueden contener, por ejemplo, entre 0,01 g y 0,1 mg, por mililitro. Las dosis unitarias pueden contener, por ejemplo, entre 0,01 g y 1 g de un compuesto de la invención. Por tanto, las ampollas para inyección pueden contener, por ejemplo, entre 0,01 g y 0,1 35 g, y las formulaciones de dosis unitaria administrables oralmente pueden contener, por ejemplo, entre 0,1 mg y 1 g, por ejemplo, entre 5 mg y 50 mg.

Un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, puede emplearse como compuesto per se en el tratamiento de una enfermedad en la que sub-activación del receptor HM74A contribuye a la enfermedad o en la que la activación del receptor sea beneficiosa, siendo un 40 ejemplo de esto cuando un compuesto de la presente invención se presenta con un vehículo aceptable en forma de formulación farmacéutica. El vehículo debe ser, por supuesto, aceptable en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no debe ser nocivo para el receptor. El vehículo puede ser un sólido o un líquido, o ambos, y puede formularse con el compuesto de la invención como una formulación de dosis unitaria, por ejemplo, un comprimido, que puede contener entre 0,05% y 95% en 45 peso del compuesto de la invención.

Las formulaciones incluyen aquellas adecuadas para administración oral, rectal, tópica, bucal (por ejemplo, sublingual) y parenteral (por ejemplo, subcutánea, intramuscular, intradermal o intravenosa).

De acuerdo con la invención, también se proporciona un procedimiento para la preparación de dicha composición farmacéutica, que comprende mezclar los ingredientes. 50

Las formulaciones adecuadas para la administración oral pueden presentarse en unidades discretas, tales como cápsulas, sobres, pastillas o comprimidos, que contienen una cantidad predeterminada de un compuesto de fórmula (I) o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; como polvo o gránulos; como disolución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o como una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite. En general, las formulaciones se preparan mezclando 55 uniformemente o íntimamente el compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, con un vehículo líquido o sólido finamente dividido, o con ambos, y a continuación dándole forma al producto, si es necesario. Por ejemplo, se puede preparar un comprimido mediante compresión o

moldeando polvo o gránulos del compuesto de fórmula (I), o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Los comprimidos se pueden preparar prensando en una máquina adecuada el compuesto en forma suelta, tal como en polvo o gránulos, opcionalmente mezclado con un aglomerante, lubricante, diluyente inerte y/o agente(s) tensioactivo(s)/dispersante(s). Los comprimidos moldeados se pueden fabricar moldeando el compuesto 5 en polvo, humedecido con un diluyente líquido inerte, en una máquina adecuada.

Los comprimidos y las cápsulas para administración oral pueden contener excipientes convencionales tales como agentes aglomerantes, por ejemplo, jarabe, goma arábiga, gelatina, sorbitol, tragacanto, mucílago de almidón o polivinilpirrolidona; cargas, por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina, azúcar, almidón de maíz, fosfato de calcio o sorbitol; lubricantes, por ejemplo, estearato de 10 magnesio, ácido esteárico, talco, polietilenglicol o sílice; disgregantes, por ejemplo, almidón de patata, croscarmelosa sódica o sal sódica de glicolato de almidón; o agentes humectantes tales como laurilsulfato de sodio. Los comprimidos pueden revestirse según métodos bien conocidos en la técnica. Las preparaciones líquidas orales pueden estar, por ejemplo, en forma de suspensiones, disoluciones, emulsiones, jarabes o elixires acuosos u oleosos, o se pueden presentar como un producto seco para 15 reconstituirlo con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Dichas preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes de suspensión, por ejemplo, jarabe de sorbitol, metilcelulosa, jarabe de glucosa/ azúcar, gelatina, hidroximetilcelulosa, hidroxipropilmetil celulosa, carboximetilcelulosa, gel de estearato de aluminio o grasas comestibles hidrogenadas; agentes emulsionantes, por ejemplo, lecitina, monooleato de sorbitán o goma arábiga; vehículos no acuosos (que 20 pueden incluir aceites comestibles), por ejemplo, aceite de almendras, aceite de coco fraccionado, ésteres oleosos, propilenglicol o alcohol etílico; o conservantes, por ejemplo, p-hidroxibenzoatos de metilo o de propilo o ácido sórbico. Las preparaciones también pueden contener sales tamponadoras, y agentes aromatizantes, colorantes y/o edulcorantes (por ejemplo, manitol) en los casos apropiados.

Las formulaciones adecuadas para administración bucal (sublingual) incluyen píldoras que 25 comprenden un compuesto de la invención en una base aromatizada, normalmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto, y pastillas que comprenden el compuesto de la invención en una base inerte tal como gelatina y glicerina o sacarosa y goma arábiga.

Las formulaciones de la presente invención adecuadas para administración parenteral comprenden de forma conveniente preparaciones acuosas estériles de un compuesto de la fórmula (I), o de una sal 30 farmacéuticamente aceptable del mismo, pudiendo ser la formulación isotónica con la sangre del receptor. Estas preparaciones podrían administrarse intravenosamente, aunque la administración también se puede efectuar por medio de inyección subcutánea, intramuscular o intradermal. Dichas preparaciones pueden prepararse de forma conveniente mezclando el compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, con agua y haciendo que la disolución resultante sea estéril e isotónica con la 35 sangre. Las composiciones inyectables de acuerdo con la invención generalmente contendrán entre un 0,1% y un 5% p/p del compuesto de fórmula (I), o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Por tanto, las formulaciones de la presente invención adecuadas para administración parenteral que comprenden un compuesto de la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, pueden formularse para administración parenteral mediante inyección de bolo o infusión continua, y 40 pueden presentarse en forma de dosis unitaria, por ejemplo como ampollas, viales, infusiones de pequeño volumen o jeringas pre-rellenadas, o en recipientes multi-dosis con un conservante añadido. Las composiciones pueden tener formas tales como disoluciones, suspensiones o emulsiones en vehículos acuosos o no acuosos y pueden contener agentes de formulación tales como antioxidantes, tampones, agentes antimicrobianos y/o agentes para ajustar la tonicidad. Los ejemplos de formulaciones adecuadas 45 para administración oral incluyen formulaciones que comprenden un compuesto de la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en DMSO al 10% e hidrogenocarbonato sódico al 90% en disolución salina estéril. Los ejemplos de formulaciones adecuadas para administración intravenosa incluyen formulaciones que comprenden un compuesto de la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en DMSO al 5% o al 10% e hidrogenocarbonato sódico al 95% o al 90% en agua 50 estéril. Alternativamente, el agente terapéuticamente activo puede estar en forma de polvo para reconstituirlo con un vehículo adecuado, por ejemplo agua estéril apirogénica, antes de su uso. La presentación sólida seca se puede preparar cargando un polvo estéril asépticamente en envases estériles individuales o cargando una disolución estéril asépticamente en cada envase y liofilizando.

Las formulaciones adecuadas para administración rectal pueden presentarse como supositorios de 55 dosis unitaria. Éstos pueden prepararse mezclando un compuesto de la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, con uno o más vehículos sólidos convencionales, por ejemplo, manteca de cacao o glicéridos, y a continuación dando forma a la mezcla resultante.

Las formulaciones adecuadas para aplicación tópica a la piel pueden adoptar la forma de un ungüento, crema, loción, pasta, gel, spray, aerosol o aceite. Los vehículos que pueden usarse incluyen vaselina, lanolina, polietilenglicoles, alcoholes y combinaciones de dos o más de los anteriores. El compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, generalmente está presente en una concentración de entre 0,1 y 15% p/p de la composición, por ejemplo entre 0,5 y 2%. 5

Bajo la denominación administración tópica como se emplea en esta memoria, los autores de la invención incluyen administración por insuflación e inhalación. Ejemplos de varios tipos de preparaciones para administración tópica incluyen pomadas, cremas, lociones, polvos, pesarios, sprays, aerosoles, cápsulas o cartuchos para uso en un inhalador o insuflador o gotas (p.ej. gotas oftálmicas o nasales).

Las pomadas y cremas pueden formularse, por ejemplo, con una base acuosa u oleosa con 10 adición de agentes espesantes y/o gelificantes y/o disolventes adecuados. Así, por ejemplo, tales bases incluyen agua y/o un aceite tal como parafina líquida o un aceite vegetal tal como aceite de cacahuete o aceite de ricino o un disolvente tal como polietilenglicol. Los agentes espesantes que se pueden usar incluyen parafina blanda, estearato de aluminio, alcohol cetoestearílico, polietilenglicoles, cera microcristalina y cera de abejas. 15

Las lociones se pueden formular con una base acuosa u oleosa y, en general, también contendrán uno o más agentes emulsionantes, agentes estabilizantes, agentes dispersantes, agentes de suspensión o agentes espesantes.

Los polvos para aplicación externa se pueden formar con ayuda de cualquier base en polvo adecuada, por ejemplo, talco, lactosa o almidón. Las gotas se pueden formular con una base acuosa o no 20 acuosa que también comprende uno o más agentes dispersantes, agentes solubilizantes o agentes de suspensión.

Las composiciones en spray se pueden formular, por ejemplo, como soluciones o suspensiones acuosas o como aerosoles suministrados desde envases presurizados, con el uso de un propelente adecuado, p.ej., diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, 1,1,1,2,3,3,3-25 heptafluoropropano, 1,1,1,2-tetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado.

Las cápsulas y los cartuchos para uso en un inhalador o insuflador de, por ejemplo, gelatina, se pueden formular para que contengan una mezcla en polvo de un compuesto de la invención y una base en polvo adecuada tal como lactosa o almidón.

Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención también pueden usarse en 30 combinación con otros agentes terapéuticos, por ejemplo en combinación con otras clases de fármacos dislipidémicos (por ejemplo, estatinas, fibratos, resinas de unión de ácido biliar o ácido nicotínico).

Los compuestos de la presente invención también pueden usarse en combinación con uno o más agentes adicionales terapéuticamente activos, por ejemplo en combinación con otras clases de fármacos dislipidémicos, por ejemplo inhibidores de 3-hidroxi-3-metilglutaril-coenzima A reductasa (estatinas) o 35 fibratos o resinas de unión de ácido biliar o ácido nicotínico. Por tanto, la invención proporciona, en una realización adicional, el uso de dicha combinación en el tratamiento de enfermedades en las que la sub-activación del receptor HM74A contribuye a la enfermedad o en las que la activación del receptor es beneficiosa, y el uso de al menos un compuesto de la fórmula (I), o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para la terapia de combinación de trastornos 40 del metabolismo de lípidos que incluyen dislipidemia e hiperlipoproteinemia, tales como dislipidemia diabética y dislipidemia mixta, insuficiencia cardíaca, hipercolesteremia, enfermedad cardiovascular que incluye aterosclerosis, arteriosclerosis e hipertrigliceridemia, diabetes mellitus tipo II, diabetes tipo I, resistencia a insulina, hiperlipidemia, anorexia nerviosa y obesidad.

Cuando los compuestos de la presente invención se usan en combinación con otros agentes 45 terapéuticamente activos, los compuestos se pueden administrar juntos o separados, secuencialmente o simultáneamente, empleando cualquier ruta conveniente.

Las combinaciones mencionadas anteriormente pueden presentarse convenientemente para el uso en forma de una formulación farmacéutica, y de esta manera las formulaciones farmacéuticas que comprenden una combinación tal como se ha definido antes de forma óptima junto con un vehículo o 50 excipiente farmacéuticamente aceptable constituyen una realización adicional de la invención. Los componentes individuales de tales formulaciones se pueden administrar ya sea de forma conjunta o separada, secuencial o simultánea, en formulaciones farmacéuticas separadas o combinadas.

Debe apreciarse que, cuando se combinan en la misma formulación, los dos componentes deben ser estables y compatibles uno con el otro y con los otros componentes de la formulación, y pueden 55

formularse para su administración. Cuando se formulan por separado, se pueden proporcionar en cualquier formulación conveniente, convenientemente de manera conocida en la técnica para tales compuestos.

Cuando un compuesto se usa en combinación con un segundo agente terapéutico activo contra la misma enfermedad, la dosis de cada componente puede diferir de la que se usa cuando el compuesto se 5 administra solo. Los expertos en la técnica apreciarán fácilmente las dosis apropiadas.

De esta manera, la invención proporciona, en una realización adicional, una combinación que comprende al menos un compuesto de la fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con otro agente terapéuticamente activo.

La combinación mencionada anteriormente se puede presentar convenientemente para su uso en 10 forma de una formulación farmacéutica, y de este modo las formulaciones farmacéuticas que comprenden una combinación como se ha definido anteriormente, junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable para el mismo, representan una realización adicional de la invención.

El compuesto de la presente invención, y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo, pueden prepararse mediante la metodología descrita anteriormente, lo que constituye una realización 15 adicional de esta invención.

El compuesto de la presente invención tiene los siguientes sustituyentes, R1 representa

NNNNF

R2 representa n-butilo; y

R3 representa cloro. 20

Por consiguiente, se apreciará que los correspondientes grupos R en los siguientes procesos también representan dichos sustituyentes.

En una realización, la presente invención proporciona un método para la preparación de compuesto(s) de la fórmula (I) a partir de compuesto(s) de la fórmula (II):

(II) 25 NNOOHHNNPG1378

en donde GP = grupo protector, método que comprende:

(i) alquilación en N1 de una xantina protegida en N7;

(ii) alquilación en N3 de una xantina protegida en N7;

(iii) halogenación en C8; y

(iv) desprotección de N7; 30

en cualquier orden siempre que la desprotección se lleve a cabo después de la alquilación.

Proceso 1:

Un proceso de acuerdo con la invención para preparar compuesto(s) de la fórmula (I) en los que R3 representa Cl.

i) Alquilación de guanina con bromuro de alilo

ii) Diazotización con nitrito sódico seguido de hidrólisis para formar la xantina 5

iii) Cloración

iv) Alquilación en N3 (Los ejemplos de bases adecuadas incluyen Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3)

v) Alquilación en N1 (Los ejemplos de bases adecuadas incluyen Na2CO3, Cs2CO3, K2CO3)

vi) Eliminación del grupo alilo catalizada por paladio

en donde L representa un grupo saliente, por ejemplo un halógeno. 10

Proceso 2:

Un proceso de acuerdo con la invención para preparar el(los) compuesto(s) de fórmula (I) en el que:

R3 representa Cl.

15

en donde L representa un grupo saliente, por ejemplo halógeno, ()d representa -(CH2)2-, y R representa . CH2F

Proceso 3:

Un proceso de acuerdo con la invención para preparar intermedios en los que R3 es CN, que 5 puede ser útil para la preparación de el(los) compuesto(s) de la fórmula (I). Este comprende las etapas (i) e (ii) del Proceso 1 seguidas de:

iii) Alquilación en N3

iv) Alquilación en N1 10

v) Formación de aldehído en C8 mediante litiación con LiHMDS y apagado con DMF

vi) Conversión del aldehído a nitrilo

vii) Eliminación del grupo alilo catalizada por paladio

donde L representa un grupo saliente.

Proceso 4:

Un proceso de acuerdo con la invención para preparar el(los) compuesto(s) de la fórmula (I) en el 5 que R3 es Cl y que comprende las etapas (i) a (iv) del Proceso 3 seguidas de:

i) Halogenación en C8 usando NCS ó NBS

ii) Eliminación del grupo alilo catalizada por paladio

Proceso 5: 10

Un proceso de acuerdo con la invención para preparar el(los) compuesto(s) de la fórmula (I) en los que R3 es Cl y que comprende:

i) Alquilación en N3

ii) Alquilación en N1 15

iii) Desbenzilación

iv) Cloración en C8

donde L representa un grupo saliente

Proceso 6:

Un proceso de acuerdo con la invención para preparar el(los) compuesto(s) de la fórmula (I) en los 20 que R3 es Cl y que comprende las etapas (i) a (v) del Proceso 1 (en donde R2 del proceso 1 es específicamente SEM o MEM) seguidas de:

vi) Ruptura del grupo protector MEM o SEM

vii) Alquilación de N3 seguida de eliminación del grupo alilo catalizada por paladio

donde L representa un grupo saliente

Proceso 7: 5

Un proceso de acuerdo con la invención para preparar el(los) compuesto(s) de la fórmula (I) que comprende las etapas (i) a (iv) del Proceso 3 seguidas de:

v) Eliminación del grupo alilo catalizada por paladio

vi) Halogenación en C8 usando NCS, NBS o NIS 10

Proceso 8:

Un proceso de acuerdo con la invención para preparar el(los) compuesto(s) de la fórmula (I) en los que R3 es Cl y que comprende:

i) Formación de pirimidinadiona

ii) Alquilación en N1

iii) Nitrosación

iv) Reducción usando Na2S2O4 o un agente reductor similar

v) Formación de xantina 5

vi) Halogenación en C8 usando NCS

donde L representa un grupo saliente

Proceso 9:

Un proceso de acuerdo con la invención para preparar el(los) compuesto(s) de la fórmula (I) en los que R3 es Cl y que comprende: 10

R1NHOONNOOONH2NHNNNOOR1ONNNNOOR1OR2NNNHNOOR1R2NNNHNOOR1R2Cl+tBuOKK2CO3 / DMFNCS / DMFR2-LPd(OH)2/H2 1 atm

donde L representa un grupo saliente.

Como etapa adicional a los procesos generales descritos anteriormente, y en particular para uso en la preparación de los ejemplos presentados más adelante, existen varias formas de purificar los compuestos resultantes, una o más de las cuales pueden ser de utilidad en la presente invención, por 15 ejemplo el uso de MDAP, mediante recristalización en uno o más disolventes adecuados tales como acetato de etilo, etanol absoluto, acetonitrilo o metanol, o mediante el uso de una columna de purificación tal como los cartuchos Silica RedisepTM y posteriormente eluyendo con un disolvente adecuado tal como diclorometano que contiene acetato de metilo.

Si se desea o es necesario, como etapa final en cualquiera de los anteriores procesos sintéticos, 20 se puede convertir el compuesto de fórmula (I) resultante en una forma de sal o viceversa, o convertir una forma de sal en otra forma de sal farmacéuticamente aceptable. Estos procesos son conocidos por el especialista en la técnica.

ABREVIATURAS

AcOH Ácido acético 25

atm Atmósfera

br Ancho (RMN)

CDI Carbonildiimidazol

d Doblete (RMN)

DBAD Di-t-butilazodicarboxilato 30

DCM Diclorometano

DIPEA Diisopropiletilamina

DMSO Dimetilsulfóxido

DMF N,N-Dimetilformamida

EtOAc acetato de etilo

EtOH Etanol

h Hora(s)

IPA alcohol isopropílico

m Multiplete (RMN) 5

MDAP Autopreparación dirigida a masas

MeCN Acetonitrilo

MeOH Metanol

min Minuto(s)

NCS N-clorosuccinimida 10

NBS N-bromosuccinimida

NIS N-yodosuccinimida

q Cuartete (RMN)

TA Temperatura ambiente

TR Tiempo de retención 15

s Singlete (RMN)

SPE Cartucho de extracción en fase sólida

t Triplete (RMN)

TFA Ácido trifluoroacético

THF Tetrahidrofurano 20

DMEM Medio Eagle Modificado de Dulbecco

HEPES Ácido 4-(2-hidroxietil)piperazina-1-etanosulfónico

LiHMDS Hexametildisililamida de litio

Calor

SEM 2-(trimetilsilil)etoximetilo 25

MEM 2-metoxietoximetilo

Boc t-butoxicarbonilo

THP tetrahidropirano

Los siguientes ejemplos no limitativos ilustran la presente invención:

Ejemplos sintéticos 30

Cabe destacar que la asignación de (Z)-estereoquímica realizada para los compuestos mostrados a continuación no ha sido confirmada mediante datos experimentales. El especialista en la técnica también reconocerá que puede haber una interconversión entre isómeros E y Z. (Dondoni, Alessandro; Lunazzi, Lodovico; Giorgianni, Patrizia; Macciantelli, Dante. Carbon-nitrogen rotational barrier as a stereochemical probe of benzamidoximes. Journal of Organic Chemistry (1975), 40(20), 2979-80). 35

Ejemplo de referencia 1: 8-Cloro-1-(3-{5-[(4-fluorofenil)metil]-2H-tetrazol-2-il}propil)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona

a) 8-Cloro-1-(3-{5- [(4-fluorofenil)metil] -2H-tetrazol-2-il} propil)-3- (4,4,4-trifluorobutil) -3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona

40 NNNNHClOONNNNFFFF

Se trató 5-[(4-fluorofenil)metil]-1H-tetrazol (75 mg, 0,4mmol) con carbonato potásico (100 mg, 0,7 mmol) y DMF (3 mL). La mezcla se trató con una disolución de 3-[8-cloro-2,6-dioxo-7-(2-propen-1-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2,3,6,7-tetrahidro-1H-purin-1-il]propil metanosulfonato (100 mg, 0,2 mmol) en DMF (0,5 mL). La mezcla se agitó y se calentó a 60ºC 3 horas y después se enfrió y se evaporó. El residuo se repartió entre cloroformo (4 mL) y agua (2 cm3). Se añadió 1 cm3 de bicarbonato sódico acuoso saturado 5 (3 mL) a cada una de las fracciones. La mezcla se separó y la fase orgánica se evaporó. El residuo se disolvió en THF anhidro (3 mL) y la mezcla se desgasificó mediante la aplicación sucesiva con precaución de vacío y presión de nitrógeno a la mezcla. La mezcla se trató con tetrakis(trifenilfosfina) paladio (0) (10 mg, 0,008 mmol) y morfolina (0,2 mL, 2,3 mmol) y entonces se agitó en una atmósfera de nitrógeno durante 2 h. La mezcla se evaporó y se repartió entre cloroformo (4 mL) y cloruro amónico acuoso 10 saturado (3 mL). La mezcla se separó y la fase acuosa se volvió a extraer con cloroformo. Se evaporó la fase orgánica y se disolvió el residuo en MeOH (3 mL). Se añadió la disolución a la parte superior de un cartucho de SPE de 2 g de aminopropilo y se lavó con MeOH (15 mL). El producto deseado fue eluido del cartucho con una disolución al 3% v/v de AcOH en MeOH (20 mL). Las fracciones que contienen producto fueron combinadas y evaporadas, y se sometió al residuo a purificación mediante cromatografía en 15 columna flash (gradiente de elución de 10:1 ciclohexano/EtOAc a EtOAc). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se evaporaron para dar lugar al producto en forma de aceite incoloro. La trituración en la cantidad mínima de éter dietílico provocó la solidificación del producto y éste fue secado intensamente para dar lugar al compuesto del título en forma de sólido blanco (18,7 mg, 18%).

CL/EM: m/z 515 [MH]+, TR 3,31min. 20

RMN de 1H (CDCl3) d: 2,06 (m, 2H); 2,21 (m, 2H); 2,45 (m, 2H); 4,17 (m, 4H); 4,24 (t, 2H, J = 7,0 Hz); 4,70 (t, 2H, J = 7,2 Hz); 6,96 (m, 2H); 7,25 (m, 2H).

b) 3-[8-Cloro-2,6-dioxo-7-(2-propen-1-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-2,3,6,7-tetrahidro-1H-purin-1-il]propil metanosulfonato

25 NNNNClOOFFFOSOO

Se trató una disolución de 8-cloro-1-(3-hidroxipropil)-7-(2-propen-1-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona (0,82 g, 2,1 mmol) en DCM (20 mL) con trietilamina (0,42 mL, 3,1 mmol) y anhídrido metanosulfónico (0,40 g, 2,3 mmol). Después de 1 hora, la mezcla se trató con bicarbonato sódico acuoso saturado (20 mL). La mezcla se separó y la fase orgánica fue secada (MgSO4), filtrada y evaporada para dar lugar al compuesto del título (0,91 g), que se utilizó sin ninguna purificación adicional. 30

CL/EM: m/z 473 [MH]+, TR 3,17 min.

c) 8-Cloro-1-(3-hidroxipropil) -7- (2-propen-1-il) -3- (4,4,4-trifluorobutil) -3,7-dihidro-1H- purina-2,6-diona

NNNNClOOFFFOH

Se trató una disolución de 8-cloro-7-(2-propen-1-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona (1,0 g, 3,0 mmol) en DMF (15 mL) con carbonato de cesio (1,16 g, 3,6 mmol) y 3-bromo-1-propanol 35 (0,3 mL, 3,3 mmol). La mezcla se calentó a 60ºC durante 4 h y entonces se enfrió y se evaporó. El residuo

se repartió entre EtOAc (50 mL) y agua (50 mL). La fase orgánica se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó. El producto se purificó mediante cromatografía flash usando un gradiente de elución de ciclohexano a EtOAc. Las fracciones que contenían producto se combinaron y se evaporaron para producir el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (0,82 g, 75%).

CL/EM: m/z 395 [MH]+, TR 2,90 min. 5

d) 8-Cloro-7-(2-propen-1-il)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona

NHNNNClOOFFF

Se trató una disolución de 8-cloro-7-(2-propen-1-il)-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona (2,0 g, 8,8 mmol) en DMF (20 mL) con carbonato sódico (1,15 g, 10,8 mmol) y 4-bromo-1,1,1-trifluorobutano (1,86 g, 9,7 mmol). La mezcla se agitó a 50ºC durante 18 h y entonces se enfrió y se evaporó. El residuo se 10 repartió entre EtOAc (100 mL) y bicarbonato sódico acuoso saturado (50 mL). La fase orgánica se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó. El residuo se trituró en una mezcla de dietil éter y ciclohexano y a continuación se extrajo el producto mediante filtración y se secó para dar lugar al compuesto del título en forma de sólido blanco (1,18 g, 40%).

CL/EM: m/z 337 [MH]+, TR 2,83 min. 15

e) 5-[(4-Fluorofenil)metil]-1H-tetrazol

NHNNNF

Se trató una mezcla de cloruro de trietilamonio (4,14 g, 30 mmol) y azide sódico (1,95 g, 30 mmol) con una disolución de (4-fluorofenil) acetonitrilo (1,35 g, 10 mmol) en tolueno (14 mL) y la mezcla se agitó y se calentó a 100ºC durante 5 h. La mezcla enfriada se trató con agua (10 mL) y la mezcla se separó. La 20 fase acuosa se agitó y se trató gota a gota con ácido clorhídrico concentrado hasta que el producto hubo precipitado a partir de la disolución. El producto precipitado resultante se extrajo por filtración, se lavó con agua y se secó para producir el compuesto del título en forma de un sólido blanco (1,27 g, 72%).

CL/EM: m/z 179 [MH]+, TR 2,24 min.

Los compuestos de la Tabla 1 se prepararon usando un método análogo al del Ejemplo de 25 Referencia 1: 8-cloro-1-(3-{5-[(4-fluorofenil)metil]-2H-tetrazol-2-il} propil)-3-(4,4,4-trifluorobutil)-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona, con el metanosulfonato y el tetrazol apropiados. Se empleó MDAP para purificar adicionalmente los compuestos que no fueran suficientemente puros después de la cromatografía de fase normal.

Los intermedios de metanosulfonato y sus alcoholes precursores se prepararon de acuerdo con los 30 siguientes procedimientos:

Metanosulfonato de 3-[8-cloro-2,6-dioxo-7-(2-propen-1-il)-3-propil-2,3,6,7-tetrahidro-1H-purin-1-il] propilo

NNNNClOOOSOO

Se trató una disolución de 8-cloro-1-(3-hidroxipropil)-7-(2-propen-1-il)-3-propil-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona (1,99 g, 6,1 mmol) en DCM (50 mL) con trietilamina (1,2 mL, 8,6 mmol) y anhídrido metanosulfónico (1,2 g, 6,9 mmol). Después de 1,5 h, la mezcla se trató con agua (50 mL). La mezcla se separó y la fase acuosa se extrajo con DCM (25 mL), las fases orgánicas combinadas se secaron 5 (MgSO4), se filtraron y se evaporaron para producir el compuesto del título en forma de aceite amarillo pálido (2,38 g), que se usó sin ninguna purificación adicional.

CL/EM: m/z 405 [MH]+, TR 2,93 min.

Metanosulfonato de 3-[3-butil-8-cloro-2,6-dioxo-7-(2-propen-1-il)-2,3,6,7-tetrahidro-1H-purin-1-il]propilo

10 NNNNClOOOSOO

Preparado de acuerdo con el método usado para el metanosulfonato de 3-[8-cloro-2,6-dioxo-7-(2-propen-1-il)-3-propil-2,3,6,7-tetrahidro-1H-purin-1-il] propilo para dar lugar al compuesto del título en forma de aceite amarillo pálido (2,44 g).

CL/EM: m/z 419 [MH]+, TR 3,14 min.

8-Cloro-1-(3-hidroxipropil)-7-(2-propen-1-il)-3-propil-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona 15

NNNNClOOOH

Se trató una disolución de 8-cloro-7-(2-propen-1-il)-3-propil-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona (3,0 g, 11,1 mmol) en DMF (20 mL) con carbonato de cesio (3,7 g, 11,4 mmol) y 3-bromo-1-propanol (1,6 g, 11,5 mmol). La mezcla se calentó a 60ºC durante 4 h y entonces se enfrió y se evaporó. El residuo se repartió entre EtOAc (60 mL) y bicarbonato sódico acuoso saturado (50 mL). La fase acuosa se extrajo con EtOAc 20 (60 mL), las fases orgánicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron y se evaporaron. El producto se purificó usando el sistema CompanionTM y un gradiente de elución de ciclohexano a EtOAc. Las fracciones que contenían producto se combinaron y se evaporaron para producir el compuesto del título en forma de un aceite incoloro (2,6 g).

CL/EM: m/z 327 [MH]+, TR 2,62 min. 25

3-Butil-8-cloro-1-(3-hidroxipropil)-7-(2-propen-1-il)-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona

NNNNClOOOH

Preparado de acuerdo con el método usado para la 8-cloro-1-(3-hidroxipropil)-7-(2-propen-1-il)-3-propil-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona para dar lugar al compuesto del título en forma de aceite incoloro (2,3 g).

CL/EM: m/z 341 [MH]+, TR 2,85 min. 5

Tabla 1

Nº

Estructura Nombre Rendimiento CL/EM

2

NNNNClOOOH 3-butil-8-cloro-1-(3-{5-[(4-fluorofenil)metil]-2H-tetrazol-2-il}propil)-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona 31,6 mg (34%) m/z 461 [MH]+ TR 3,31 min

Detalles de RMN para los ejemplos seleccionados de la Tabla 1:

Ejemplo 2: 3-Butil-8-cloro-1-(3-{5-[(4-fluorofenil)metil]-2H-tetrazol-2-il}propil)-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona 10

RMN de 1H (CDCl3) : 0,99 (t, 3H, J = 7 Hz); 1,43 (m, 2H); 1,77 (m, 2H); 2,48 (m, 2H); 4,12 (t, 2H, J = 7,5 Hz); 4,20 (s, 2H); 4,27 (t, 2H , J = 7 Hz); 4,72 (t, 2H, J = 7,5 Hz); 6,98 (m, 2H); 7,27 (m, 2H); 13,35 (br s, 1H).

Los materiales de partida anteriores pueden adquirirse comercialmente y/o prepararse de acuerdo a procedimientos disponibles en la bibliografía. 15

Claims (15)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto que es 3-butil-8-cloro-1-(3-{5-[(4-fluorofenil)metil]-2H-tetrazol-2-il}propil)-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona

2. 1. Un compuesto que es 3-butil-8-cloro-1-(3-{5-[(4-fluorofenil)metil]-2H-tetrazol-2-il}propil)-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona

   o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 5

3. 2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que es 3-butil-8-cloro-1-(3-{5-[(4-fluorofenil)metil]-2H-tetrazol-2-il}propil)-3,7-dihidro-1H-purina-2,6-diona

4. 3. Un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, para uso en medicina humana o veterinaria.

5. 4. Un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, para uso en el tratamiento de una afección en 10 la que la sub-activación del receptor HM74A contribuye a la afección o en la que la activación del receptor sea beneficiosa.

6. 5. Un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, para uso en el tratamiento de la dislipidemia diabética, la dislipidemia mixta o la hiperlipoproteinemia.

7. 6. Un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1ó 2, para uso en el tratamiento de la diabetes 15 mellitus tipo II.

8. 7. Un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, para uso en el tratamiento de la dislipidemia diabética, la dislipidemia mixta, la insuficiencia cardíaca, la hipercolesteremia, la enfermedad cardiovascular, la aterosclerosis, la arteriosclerosis, la hipertrigliceridemia, la diabetes mellitus tipo II, la diabetes tipo I, la resistencia a la insulina, la hiperlipidemia, la anorexia nerviosa, la obesidad, la 20 enfermedad de arterias coronarias, la trombosis, la angina de pecho, la insuficiencia renal crónica, la enfermedad vascular periférica o la apoplejía.

9. 8. El uso de un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una afección en la que la sub-activación del receptor HM74A contribuye a la afección o en la que la activación del receptor sea beneficiosa. 25

10. 9. El uso de un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la dislipidemia diabética, la dislipidemia mixta o la hiperlipoproteinemia.

11. 10. El uso de un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la diabetes mellitus tipo II. 30

12. 11. El uso de un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la dislipidemia diabética, la dislipidemia mixta, la insuficiencia cardíaca, la hipercolesteremia, la enfermedad cardiovascular, la aterosclerosis, la arteriosclerosis, la hipertrigliceridemia, la diabetes mellitus tipo II, la diabetes tipo I, la resistencia a la insulina, la

    hiperlipidemia, la anorexia nerviosa, la obesidad, la enfermedad de arterias coronarias, la trombosis, la angina de pecho, la insuficiencia renal crónica o la apoplejía.

13. 12. Una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2 y al menos un diluyente, excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

14. 13. Una combinación para la administración conjunta o separada, secuencial o simultánea en 5 formulaciones farmacéuticas separadas o combinadas, comprendiendo dicha combinación un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2 junto con al menos un agente terapéuticamente activo.

15. 14. Una formulación farmacéutica que comprende:

    un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2;

    uno o más agentes terapéuticamente activos seleccionados entre estatinas, fibratos, resinas de unión de 10 ácido biliar y ácido nicotínico; y

    uno o más diluyentes, excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables.