PT1468093E - Fermentação de açúcares pentose - Google Patents

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Hubertus Johannes Marie O Camp
Harry Ramanoedj Harhangi
Christiaan Van Der Drift
Jacobus Thomas Pronk
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Description

DESCRIÇÃO
FERMENTAÇÃO DE AÇÚCARES PENTOSE
Campo da invenção A presente invenção refere-se a células hospedeiras transformadas com uma sequência de ácidos nucleicos que codifica uma xilose isomerase eucariótica. A xilose isomerase está expressa na célula hospedeira para conferir a capacidade de isomerizar a xilose em xilulose. A célula hospedeira é utilizada num processo para a produção de etanol e outros produtos de fermentação através da fermentação de um meio com pentose. A presente invenção refere-se também a sequências de ácidos nucleicos que codificam as xiloses isomerases eucarióticas.
Antecedentes da invenção
Nestas últimas décadas o consumo a grande escala dos combustíveis fósseis tradicionais (combustíveis à base petróleo) tem contribuído para os grandes níveis de contaminação. Além de que, a percepção de que as reservas mundiais de petróleo não são ilimitadas, combinada com a crescente consciência ambiental, têm impulsionado iniciativas novas para investigar a viabilidade dos combustíveis alternativos tais como o etanol, o qual poderia significar uma redução entre 60 e 90% na produção de CO2 · Ainda que o etanol derivado da biomassa possa ser produzido através da fermentação dos açúcares da hexose, os quais são obtidos de muitas fontes diferentes, no entanto, na actualidade os substratos para a produção a Nível Industrial ou o álcool combustível são açúcar de cana e amido de milho. O inconveniente destes substratos é o seu custo elevado.
Aumentar a produção do etanol requer a capacidade de utilizar matérias-primas de custo inferior. Actualmente, só a biomassa 1/39 lenhocelulósica oriunda das plantas está disponível como matéria-prima em quantidades suficientes como para substituir as culturas utilizadas na produção de etanol. Os açúcares fermentáveis de materiais lenhocelulósicos mais importantes são a glicose e a xilose, constituindo respectivamente cerca de 40% e de 25% de lenhocelulose. No entanto, a maioria das leveduras capazes da fermentação alcoólica, como o Saccharomyces cerevisiae, não podem utilizar a xilose como fonte de carbono. Adicionalmente, não há nenhum organismo conhecido que possa fermentar a xilose em etanol, com um alto rendimento assim como uma alta produtividade de etanol. Para permitir a produção comercial de etanol a partir do hidrolisado de lenhocelulose, será necessário um organismo que possua estas duas propriedades. Assim um objecto da presente invenção é o de prover uma levedura que seja capaz de fermentações alcoólicas e de utilizar a xilose como fonte de carbono. A D-xilose é metabolizável por numerosos microrganismos como as bactérias entéricas, algumas leveduras e fungos. Na maioria das xiloses que utilizam bactérias, a xilose é directamente isomerizada em D-xilulose por xilose (glicose) isomerase (XI). Os fungos filamentosos e as leveduras, no entanto, não são capazes desta isomerização numa só fase e primeiro reduzem a xilose em xilitol pela acção da xilose redutase (XR), depois da qual o xilitol é convertido em xilulose por xilitol desidrogenase (XDH). A primeira fase requer NAD(P)H como um cofactor, enquanto que a segunda fase requer NAD+. A xilulose que é produzida entra subsequentemente na via de fosfato pentose (PPP) depois de ela ter sido fosforilada pela xilulose quinase (XK). A fermentação anaeróbica de xilose em etanol não é possível nos organismos com uma xilose redutase (XR) estritamente dependente de NADPH. Isto ocorre porque o xilitol desidrogenase (XDH) é estritamente dependente de NAD+, dando como resultado um desequilíbrio de redox (isto é, depleção NAD+) . Para resolver o desequilíbrio de redox em condições anaeróbicas, o 2/39 organismo produz subprodutos como o glicerol e o xilitol. De forma similar, a produção aeróbica de β-lactamas em xilose está também influenciada negativamente em comparação com a produção de β-lactama em glicose. Uma causa provável destes baixos rendimentos é novamente uma demanda relativamente alta de reduzir equivalentes em forma de NADPH nesta via, em comparação com a utilização de glicose (W.M. van Gulik et al. Biotechnol.
Bioeng. Vol. 68, No. 6, June 20, 2000).
Durante anos muitas tentativas foram feitas para introduzir o metabolismo da xilose em S. cerevisiae e leveduras similares, como o revisto por Zaldivar et al. (2001, Appl. Microbiol.
Biotechnol. 56: 17-34). Uma abordagem refere-se à expressão dos genes que codificam uma xilose (aldose) redutase e um xilitol desidrogenase, por exemplo o XYL1 e o XYL2 de Pichia stipitis, em S. cerevisiae (US 5,866,382; WO 95/13362; e WO 97/42307). Ainda que esta abordagem permita o crescimento de S. cerevisiae em xilose, geralmente ela tem uma baixa produtividade e/ou rendimento de etanol, assim como uma alta produção de xilitol, principalmente como resultado do desequilíbrio de redox entre XR e XDH. A expressão de uma XI em S. cerevisiae ou numa levedura análoga ou nos fungos filamentosos evitaria o desequilíbrio de redox e a consequente produção e excreção de xilitol. Os genes de xilose isomerase de várias bactérias foram inseridos em S. cerevisiae, no entanto, a expressão das Xis procarióticas mesofílicas em S. cerevisiae não conduziram a uma XI activa (Amore & Hollenberg, 1989, Nucleic Acids Res. 17: 7515; Amore et al., 1989, Appl. Microbiol. Biotechnol. 30: 351-357; Chan et al., 1986,
Biotechnol. Lett 8: 231-234; Chan et al., 1989, Appl. Microbiol. Biotechnol. 31: 524-528; Ho et al., 1983, Fed. Proc. Fed. Am. Soc. Exp. Biol. 42: 2167; Hollenberg, 1987, EBC-Symposium on
Brewer's Yeast, Helsinki (Finland) , 24-25 Nov 1986; Sarthy et al., 1987, Appl. Environ. Microbiol. 53: 1996-2000; Ueng et al., 3/39 1985, Biotechnol. Lett. 7: 153-158). No entanto, duas Xis de bactérias termofílicas expressas em S. cerevisiae mostraram uma actividade específica de 1 μιηοΐ por minuto por mg”1 a 85 °C (Bao et al., 1999, Weishengwu-Xuebao 39: 49-54; Walfridson et al., 1996, Appl. Environ. Microbiol. 61: 4184-4190). No entanto, a uma temperatura fisiológica para S. cerevisiae (20-35 °C) falta somente uma pequena percentagem desta actividade, a qual não é suficiente para conseguir uma fermentação alcoólica de xilose eficaz. Portanto, continua a haver uma necessidade de ácidos nucleicos que codifiquem uma XI, a qual possa ser expressa em leveduras para prover actividade suficiente XI em condições fisiológicas para permitir a utilização da xilose como fonte de carbono.
Descrição da invenção
Definições
Xilose isomerase
Na presente invenção a enzima "xilose isomerase" (EC 5.3.1.5) é definida como uma enzima que cataliza a isomerização directa de D-xilose em D-xilulose e vice-versa. A enzima é também conhecida como uma D-xilose cetoisomerase. Algumas xiloses isomerases são também capazes de catalizar a conversão entre D-glicose e D-frutose e consequentemente às vezes estas são referidas como glicose isomerase. As xiloses isomerases requerem o magnésio como cofactor. As xiloses isomerases da invenção podem ser ainda definidas pela sua sequência de aminoácidos como o descrito mais abaixo na presente invenção. Igualmente as xiloses isomerases podem ser definidas pelas sequências de nucleotídeos que codificam a enzima, assim como por sequências de nucleotídeos que hibridam numa sequência de nucleotídeos de referência que codifica uma xilose isomerase como o descrito mais abaixo na presente invenção. 4/39
Uma unidade (U) de actividade de xilose isomerase é definida na presente invenção como a quantidade de enzimas que produz 1 nmol de xilulose por minuto, numa mistura reactiva que contém 50 mM de tampão de fosfato (pH 7.0), 10 mM de xilose e 10 mM de MgCl2, a 37 °C. A xilulose formada foi determinada pelo método de
Dische & Borenfreund (1951, J. Biol. Chem. 192: 583-587) ou por HPLC como o descrito nos exemplos.
Identidade e similitude da sequência A identidade da sequência é na presente invenção definida como uma relação entre duas ou mais sequências de aminoácidos (polipeptideos ou proteínas) ou duas ou mais sequências de ácidos nucleicos (polinucleotídeos), como o determinado pela comparação das sequências. Na técnica, "identidade" significa também o grau de relação sequencial entre as sequências de aminoácidos ou de ácidos nucleicos, conforme o caso, como o determinado pela correspondência da série de caracteres destas sequências. A "similitude" entre duas sequências de aminoácidos é determinada comparando a sequência de aminoácidos e os seus aminoácidos substitutos conservados de um polipeptídeo com a sequência de um segundo polipeptídeo. A "identidade" e a "similitude" podem ser facilmente calculadas com os métodos conhecidos, incluindo, mas não limitados aos descritos em (Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M., & Griffin, H. G., eds. Humana Press, New Jersey, 1994;
Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heine, G., Academic Press, 1987; and Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; and Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988) . 5/39
Os métodos preferidos para determinar a identidade são desenhados para dar a maior correspondência entre as sequências testadas. Os métodos para determinar a identidade e a similitude estão codificados em programas informáticos de acesso livre. Os métodos dos programas informáticos preferidos para determinar a identidade e similitude entre duas sequências incluem por exemplo o pacote de programas GCG (Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research 12 (1): 387 (1984), BestFit, BLASTP, BLASTN, e FASTA (Altschul, S. F. et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990). O programa BLAST X está disponível com acesso livre em NCBI e outras fontes (BLAST Manual, Altschul, S., et al., NCBI NLM NIH Bethesda, MD 20894; Altschul, S., et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990). Para determinar a identidade pode também ser utilizado o algoritmo conhecido de Smith Waterman.
Os parâmetros preferidos para a comparação da sequência polipeptidica incluem o seguinte: Algoritmo: Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443-453 (1970); Matriz de comparação: BLOSSUM62 de Hentikoff & Hentikoff, Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 89: 10915-10919 (1992); Penalização de espaço: 12; e Penalização do comprimento de espaço: 4. Um programa útil com estes parâmetros está disponivel com livre acesso como o programa "Ogap" do Genetics Computer Group, com sede em Madison, WI. Os parâmetros acima mencionados são os parâmetros por defeito para as comparações de aminoácidos (sem penalização para espaços terminais).
Os parâmetros preferidos para a comparação dos ácidos nucleicos incluem o seguinte: Algoritmo: Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443-453 (1970); Matriz de comparação: correspondências=+l0; não correspondência =0; Penalização de espaço: 50; Penalização de comprimento de espaço: 3. Estão disponíveis no programa Gap do Genetics Computer Group, com sede em Madison, WI. Os parâmetros dados supra são os parâmetros por defeito para as comparações de ácidos nucleicos. Opcionalmente, no processo para 6/39 determinar o grau de similitude dos aminoácidos, o técnico especializado pode também considerar as denominadas substituições "conservativas", de aminoácidos como será evidente ao técnico especializado. As substituições conservativas dos aminoácidos referem-se à permutabilidade dos residuos que têm cadeias laterais similares, Por exemplo, um grupo de aminoácidos com cadeias laterais alifáticas é: glicina, alanina, valina, leucina, e isoleucina; um grupo de aminoácidos com cadeias laterais hidróxilo-alifáticas é: serina e treonina; um grupo de aminoácidos com cadeias laterais que têm amido é: asparagina e glutamina; um grupo de aminoácidos com cadeias aromáticas laterais é: fenilalanina, tirosina, e triptofano; um grupo de aminoácidos com cadeias laterais básicas é: lisina, arginina, e histidina; e um grupo de aminoácidos com cadeias laterais com enxofre é: cisteina e metionina. Os grupos preferidos de substituição conservativa de aminoácidos são: valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina, lisina-arginina, alanina-valina, e asparagina-glutamina. As variantes substitutivas da sequência dos aminoácidos descritas na presente invenção são aquelas em que pelo menos um resíduo das sequências descritas tinham sido removidas e um resíduo diferente foi inserido no seu lugar. Preferencialmente, a mudança do aminoácido é conservativa. As substituições conservativas preferidas para cada um dos aminoácidos, naturais na sua origem são as seguintes: Ala por ser; Arg por lys; Asn por gin ou his; Asp por glu; Cys por ser ou ala; Gin por asn; Glu por asp; Gly por pro; His por asn ou gin; Ile por leu ou vai; leu por ile ou vai; Lys por arg; gin ou glu; Met por leu ou ile; Phe por met, leu ou tyr; Ser por thr; Thr por ser; Trp por ser; Trp por tyr; Tyr por trp ou phe; e, Vai por ile ou leu.
Hibridação das sequências dos ácidos nucleicos
As sequências nucleotídicas que codificam xiloses isomerases ou xilulose quinases da invenção podem também ser definidas pela 7/39 sua capacidade de hibridar com as sequências nucleotidicas da SEQ ID NO. 2 ou da SEQ ID NO. 4, respectivamente, em condições de hibridação moderadas, ou preferencialmente rigorosas. Na presente invenção, condições de hibridação rigorosas são definidas como condições que permitem hibridar uma sequência de ácidos nucleicos de pelo menos 25, preferencialmente cerca de 50 nucleotideos, 75 ou 100 e mais preferencialmente cerca de 200 ou mais nucleotideos a uma temperatura de aproximadamente 65 °C numa solução que contém aproximadamente 1 M de sal, preferencialmente 6 x SSC ou qualquer outra solução que tenha uma força iónica idêntica, e lavar a 65°C numa solução que contenha aproximadamente 0.1 M de sal, ou menos, preferencialmente 0.2 x SSC ou qualquer outra solução que tenha uma força iónica idêntica. Preferencialmente, a hibridação é realizada durante a noite, isto é, pelo menos durante 10 horas, e a lavagem é preferencialmente realizada durante pelo menos uma hora com pelo menos duas mudanças da solução de lavagem. Estas condições normalmente permitirão a hibridação especifica das sequências que têm aproximadamente uma identidade de sequência de 90% ou mais.
Na presente invenção condições moderadas são definidas como aquelas que permitem hibridar sequências de ácidos nucleicos com pelo menos 50 nucleotideos, preferencialmente cerca de 200 ou mais nucleotideos, a uma temperatura de aproximadamente 45 °C numa solução que aproximadamente contenha 1 M de sal, preferencialmente 6 x SSC ou qualquer outra solução que tenha uma força iónica idêntica, e lavar à temperatura ambiente numa solução que aproximadamente contenha 1 M de sal, preferencialmente 6 x SSC ou qualquer outra solução que tenha uma força iónica idêntica. Preferencialmente, a hibridação é executada durante a noite, isto é, durante pelo menos 10 horas, e a lavagem é preferencialmente realizada durante pelo menos uma hora com pelo menos duas mudanças da solução de lavagem. Estas condições normalmente permitem a hibridação especifica das 8/39 sequências que têm uma identidade de sequência de 50%. O técnico especializado será capaz de modificar estas condições de hibridação para identificar especificamente sequências em que a identidade varie entre 50% e 90%.
Ligada funcionalmente
Como é utilizado na presente invenção, a expressão "ligada funcionalmente" refere-se a uma ligação de elementos polinucleótidos numa relação funcional. Um ácido nucleico está "ligado funcionalmente" quando está colocado numa relação funcional com outra sequência de ácidos nucleicos. Por exemplo, um promotor ou um intensificador está ligado funcionalmente a uma sequência de codificação se ele afecta a transcrição da sequência de codificação. Ligadas funcionalmente significa que as sequências de ADN a ser ligadas são normalmente contíguas e, onde é necessário juntar duas regiões de codificação de proteínas contíguas e na grelha de leitura.
Promotor
Como é utilizado na presente invenção, o termo "promotor" refere-se a um fragmento de ácido nucleico que funciona para controlar a transcrição de um ou mais genes, situados a montante em relação à direcção da transcrição do sítio de iniciação de transcrição dos genes, e é identificado estruturalmente pela presença de um sítio de ligação para a ADN dependente de ARN-polimerase, sítios de iniciação de transcrição e qualquer outra sequência de ADN, incluindo, mas não limitado aos sítios de ligação dos factores de transcrição, sítios de ligação de proteínas repressoras e activadoras, e qualquer outra sequência de nucleotídeos conhecidas dos técnicos especializados que aja directa ou indirectamente com o fim de regular a quantidade de transcrição desde o promotor. Um promotor "constitutivo" é um promotor que é activo na maioria das condições ambientais e de 9/39 desenvolvimento. Um promotor "induzível" é um promotor activo numa regulação ambiental ou de desenvolvimento.
Descrição detalhada da invenção
Num primeiro aspecto a presente invenção refere-se a uma célula hospedeira transformada que tem a capacidade de isomerizar a xilose em xilulose. A capacidade de isomerizar a xilose em xilulose é conferida à célula hospedeira pela transformação da célula hospedeira com um constructo de ácidos nucleicos que compreende a xilose isomerase que codifica uma sequência de nucleotideos. A capacidade da célula hospedeira transformada para isomerizar a xilose em xilulose é a isomerização directa da xilose em xilulose. Isto significa que a xilose isomerizada em xilulose numa única reacção catalizada por uma xilose isomerase é diferente da conversão em duas fases de xilose em xilulose via xilitol intermediário como catalizado por xilose redutase e xilitol desidrogenase, respectivamente. A sequência de nucleotideos codifica a xilose isomerase que está preferencialmente expressa em forma activa na célula hospedeira transformada. Assim, a expressão da sequência de nucleotideos na célula hospedeira produz uma xilose isomerase com uma actividade especifica de pelo menos 10 U de actividade de xilose isomerase por mg de proteína a 25 °C, preferencialmente pelo menos 20, 25, 30, 50, 100, 200 ou 300 U por mg a 25 °C. A actividade específica da xilose isomerase expressa na célula hospedeira transformada é definida na presente invenção como a quantidade de unidades de actividade de xilose isomerase por mg de proteína de lisado livre de células da célula hospedeira, por exemplo um lisado livre de células de levedura. A determinação da actividade da xilose isomerase, a quantidade de proteína e a preparação do lisado livre de células são descritos no exemplo 1. Alternativamente, a actividade específica pode ser determinada como o indicado no exemplo 4. Consequentemente, a 10/39 expressão da sequência de nucleotídeos na célula hospedeira produz uma xilose isomerase com uma actividade especifica de pelo menos 50 U de actividade de xilose isomerase por mg de proteina a 30 °C, preferencialmente de pelo menos 100, 200, 500, ou 750 U por mg a 30 °C.
Preferencialmente, a expressão da sequência de nucleotideos na célula hospedeira produz uma xilose isomerase com um Km por xilose, que é menor do que 50, 40, 30 ou 25 mM, mais preferivelmente, o Km para a xilose é aproximadamente de 20 mM ou menos.
Uma sequência de nucleotideos que codifica a xilose isomerase pode ser seleccionada do grupo constituído por: sequências de nucleotideos que codificam uma xilose isomerase que compreende uma sequência de aminoácidos com uma identidade de sequência de pelo menos 70, 80, 90, 95, 97, 98 ou 99% com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1, como o determinado com a utilização de um algoritmo Needleman & Wunsch. A sequência de nucleotideos preferivelmente codifica uma xilose isomerase eucariótica, isto é, uma xilose isomerase com uma sequência de aminoácidos idêntica à de uma xilose isomerase que se encontra de forma natural num organismo eucariótico. A expressão de uma xilose isomerase eucariótica aumenta a probabilidade de que a xilose isomerase esteja expressa de forma activa numa célula hospedeira eucariótica como uma levedura, contrariamente às xiloses isomerases mesofilicas procarióticas. Mais preferencialmente, a sequência nucleotidica codifica uma xilose isomerase de plantas ou uma xilose isomerase fúngica (por exemplo de Basidiomycete) . No entanto mais preferencialmente a sequência nucleotidica codifica uma xilose isomerase de um fungo anaeróbico, para aumentar mais a probabilidade de expressão na forma enzimaticamente activa numa célula hospedeira eucariótica, em particular numa levedura. As mais preferidas são as 11/39 sequências de nucleotídeos que codificam uma xilose isomerase de um fungo anaeróbico que pertence às famílias Neocallimastix, Caecomyces, Píromyces, Orpinomyces, ou Rumínomyces.
Uma célula hospedeira para a transformação com uma sequência de nucleotídeos que codificam uma xilose isomerase é preferivelmente um hóspede capaz de transportar de forma activa ou passiva xilose dentro da célula. A célula hospedeira contém preferivelmente glicólise activa, a via da pentose fosfato, e preferencialmente contém actividade quinase xilulose de forma a que a xilulose isomerizada da xilose possa ser metabolizada em piruvato. 0 hóspede contém também preferencialmente enzimas para a conversão do piruvato num produto de fermentação desejado como o etanol, o etileno ou o ácido láctico. Uma célula hospedeira preferida é uma célula hospedeira que de forma natural é capaz da fermentação alcoólica, preferivelmente, da fermentação alcoólica anaeróbica. Preferencialmente, a célula hospedeira tem ainda uma alta tolerância ao etanol e aos ácidos orgânicos, como o ácido láctico, o ácido acético ou o ácido fórmico e os produtos da degradação do açúcar tais como o furfural e o hidroximetilfurfural. Quaisquer destas características ou actividades da célula hospedeira podem encontrar-se de forma natural na célula hospedeira ou podem ser introduzidas ou modificadas por modificação genética. Uma célula hospedeira adequada é um microrganismo como uma bactéria ou um fungo, no entanto, a mais adequada como células hospedeiras são as leveduras ou os fungos filamentosos.
Na presente invenção as leveduras são definidas como microrganismos eucarióticos e incluem todas as espécies da subdivisão Eumicotina (Alexopoulos, C. J., 1962, em: Introductory Mycology, John Wiley & Sons, Inc., New York) que predominantemente crescem na forma unicelular. As leveduras podem ainda crescer ou por enxerto de um talo unicelular ou por fissão do organismo. As leveduras preferidas como células 12/39 hospedeiras pertencem aos géneros Saccharomyces, Kluyveromyces, Candida, Pichia, Schizosacaromyces, Hansenula, Kloeckera, Schwanniomyces, e Yarrowia. Preferencialmente, a levedura é capaz de uma fermentação anaeróbica, e mais preferencialmente de uma fermentação alcoólica anaeróbica.
Na presente invenção os fungos filamentosos são definidos como microrganismos eucarióticos que incluem todas as formas filamentosas da subdivisão Eumicotina. Estes fungos estão caracterizados por um micélio vegetativo composto por quitina, celulose, e outros polissacarideos complexos. Os fungos filamentosos da presente invenção são morfológica, fisiológica, e geneticamente diferentes das leveduras. 0 crescimento vegetativo por fungos filamentosos é produzido por prolongamento hifal e o catabolismo de carbono na maioria dos fungos filamentosos é obrigatoriamente aeróbico. Os fungos filamentosos preferidos como células hospedeiras pertencem aos géneros Aspergillus, Trichoderma, Humicola, Acremonium, Fusarium, e Penicillium.
Ao longo dos anos foi sugerido a introdução de vários organismos para a produção de bioetanol proveniente da colheita de açúcares. No entanto, na prática, os processos da produção do bioetanol mais importantes continuam a utilizar as leveduras do género Saccharomyces como produtoras de etanol. Isto é devido às muitas caracteristicas atractivas das espécies Saccharomyces para processos industriais, isto é tolerância elevada ao ácido, ao etanol e à osmolaridade; capacidade de crescimento anaeróbico, e naturalmente a sua elevada capacidade de fermentação alcoólica. As espécies de levedura preferidas como células hospedeiras incluem S. cerevisiae, S. bulderi, S. barnetti, S. exíguus, S. uvarum, S. diastaticus, K. lactis, K. marxianus, e K. fragilis. 13/39 A célula hospedeira é transformada com o constructo de ácidos nucleicos como os abaixo definidos, e ela pode compreender uma única cópia, mas preferencialmente múltiplas cópias, do constructo de ácidos nucleicos. 0 constructo de ácidos nucleicos pode ser mantido de forma epissomal e compreender assim uma sequência de replicação autónoma, tal como uma sequência ARS. Os constructos adequados dos ácidos nucleicos epissomais podem por exemplo estar baseados dos plasmídeos na levedura 2μ ou pKDl (Fleer et al., 1991, Biotechnology 9: 968-975).
Preferencialmente, no entanto, o constructo de ácidos nucleicos está integrado numa ou mais cópias do genoma da célula hospedeira. A integração no genoma da célula hospedeira pode ser aleatória pela recombinação ilegítima, mas preferencialmente o constructo dos ácidos nucleicos está integrado no genoma da célula hospedeira por meio da recombinação homóloga, como é conhecido na técnica de genética molecular fúngica (ver por
exemplo WO 90/14423, EP-A-0 481 008, EP-A-0 635 574 e US 6, 265, 186) .
Numa célula hospedeira transformada preferida de acordo com a invenção, o constructo de ácidos nucleicos confere à célula hospedeira a capacidade de aumentar a xilose como fonte de carbono, preferencialmente como fonte de carbono única, e em condições anaeróbicas, pelo que preferivelmente o hospedeiro transformado não produz essencialmente xilitol, por exemplo o xilitol produzido é inferior ao limite de detecção ou por exemplo é menor do que 5, 2, ou um 1% do carbono consumido numa base molar. A célula hospedeira transformada tem a capacidade de aumentar a xilose como única fonte de carbono a uma velocidade de pelo menos 0.01, 0.02, 0.05, 0.1 ou 0.2 h_1. A célula hospedeira transformada da invenção expressa assim uma xilose isomerase com um nivel de actividade especifico como a acima definida. 14/39
Uma célula hospedeira pode compreender modificações genéticas adicionais que resultam numa ou mais das caracteristicas seleccionadas do grupo constituído por (a) aumento do transporte de xilose à célula hospedeira; (b) actividade de xilulose quinase aumentada; (c) fluxo aumentado da via das pentoses fosfato; (d) sensibilidade diminuída para a repressão catabólica; (e) tolerância aumentada ao etanol, à osmolaridade ou aos ácidos orgânicos; e, (f) produção reduzida de subprodutos.
Entender-se-á por subprodutos outras moléculas que contêm carbono diferentes do que as do produto de fermentação desejada e incluem por exemplo xilitol, glicerol e/ou ácido acético. Estas modificações genéticas podem ser introduzidas mediante mutagénese convencional, rastreio e/ou selecção da mutação desejada. De forma alternativa, as modificações genéticas podem consistir numa sobrexpressão de genes endógenos e/ou uma expressão dos genes heterólogos e/ou a inactivação dos genes endógenos. Preferencialmente, os genes são escolhidos de genes que codificam uma hexose ou são transportadores de pentose; uma xilulosequinase tal como os genes de xilulose quinase de S. cerevisae (XKS1 Deng & Ho, 1990, Appl. Biochem. Biotechnol. 24-25: 193-199) ou Piromyces (xylB, isto é SEQ ID NO. 4); uma enzima da via de pentose fosfato tal como uma transaldolase (TAL1) ou uma transcetolase (TKL1) (ver por exemplo Meinander et al., 1995, Pharmacol.Toxicol. Suppl. 2: 45) enzimas glicolíticas, enzimas etanologénicas tais como as de álcool desidrogenase. Os genes endógenos preferidos para a inactivação 15/39 incluem um gene de hexose quinase, por exemplo o gene de S. cerevisae HXK2 (ver Diderich et al., 2001, Appl. Environ. Microbiol. 67: 1587-1593); os genes de S. cerevisae MIG1 ou MIG2; genes de aldose redutase (não específicos) tais como o gene de S. cerevisae GRE3 (Traff et al., 2001, Appl. Environm. Microbiol. 67: 5668-5674); genes para enzimas envolvidas no metabolismo do glicerol tais como os genes de S. cerevisae glicerolfosfato desidrogenase 1 e/ou 2; ou homólogos (hibridizantes) dos genes noutras espécies hospedeiras. Outras modificações preferidas das células hospedeiras para a fermentação da xilose são analisadas em Zaldivar et al. (2001, supra) .
Noutro aspecto a invenção refere-se a uma célula hospedeira transformada para a produção de produtos de fermentação, exceptuando o etanol. Em principio estes produtos de fermentação não etanólica incluem qualquer produto químico de maior ou menor volume que seja produzível por um microrganismo eucariótico tal como uma levedura ou um fungo filamentoso. Estes produtos de fermentação incluem por exemplo ácido láctico, ácido acético, ácido succínico, aminoácidos, 1,3-propano-diol, etileno, glicerol, antibióticos β-lactámicos e cefalosporinas. A transformação das células hospedeiras com os constructos de ácidos nucleicos da invenção e a modificação genética adicional das células hospedeiras, preferencialmente leveduras, como o acima descrito, podem ser executadas por métodos conhecidos na técnica. Estes métodos são por exemplo conhecidos dos manuais standdards, como Sambrook & Russel (2001) "Molecular Cloning: A laboratory manual (3rd edition), Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, ou F. Ausubel et al, eds., "Current protocols in molecular biology", Green Publishing and Wiley Interscience, New York (1987). Por exemplo dos Pedidos de
Patente EP-A-0 635 574, WO 98/46772, WO 99/60102 e WO 00/37671 16/39 são conhecidos métodos para a transformação e modificação genética das células hospedeiras fúngicas.
Noutro aspecto a invenção refere-se a um constructo de ácidos nucleicos que compreende uma sequência nucleotidica, codificando uma xilose isomerase como a acima definido, a qual é utilizada para a transformação de uma célula hospedeira, como o acima definido. Preferencialmente, no constructo de ácidos nucleicos, a sequência de nucleotideos que codifica a xilose isomerase está ligada funcionalmente a um promotor para o controlo e para a iniciação da transcrição da sequência nucleotidica numa célula hospedeira como o definido abaixo. Preferencialmente, o promotor é capaz de causar suficiente expressão de xilose isomerase na célula hospedeira para conferir à célula hospedeira a capacidade de isomerizar a xilose em xilulose. Preferencialmente, o promotor causa uma actividade de xilose isomerase especifica na célula hospedeira como o acima definido. Entre os promotores utilizados nos constructos de ácidos nucleicos da invenção incluem-se dois promotores naturais, o constitutivo e o induzivel assim como os promotores criados geneticamente. Um promotor preferido para ser utilizado na presente invenção será adicionalmente insensível à repressão catabólica (glicose) e/ou preferencialmente não requererá xilose para a indução. Os promotores que têm estas caracteristicas estão muito mais disponíveis e são muito mais conhecidos dos técnicos especializados. Exemplos adequados de promotores deste tipo incluem por exemplo os promotores de levedura de genes glicoliticos, como a fosfofructoquinase de levedura (PPK), triose fosfato isomerase (TPI), gliceraldeido-3-fosfato- desidrogenase (GPD, TDH3 ou GAPDH), piruvato-quinase (PYK), fosfoglicerato-quinase (PGK); Mais pormenores sobre este tipo de promotores encontram-se em WO 93/03159. Outros promotores utilizados são os promotores dos genes que codificam as proteínas ribossómicas, o promotor do gene da lactase (LAC4), os promotores do álcool-desidrogenase (ADH1, ADH4, e outros), e o 17/39 promotor da enolase (ENO). Outros promotores, tanto constitutivos como induziveis assim como potenciadores ou sequências activadoras a montante, serão conhecidas pelos técnicos especializados. Se desejável os promotores utilizados nos constructos dos ácidos nucleicos da presente invenção podem ser modificados, para influenciar as suas caracteristicas de controlo. Preferencialmente, o promotor utilizado no constructo de ácidos nucleicos para a expressão da xilose isomerase é um homólogo à célula hospedeira na qual a xilose isomerase é expressa.
Preferencialmente, no constructo de ácidos nucleicos, a extremidade 3' da sequência de ácidos nucleotideos que codifica a xilose isomerase está ligada funcionalmente a uma sequência terminadora de transcrição. Preferencialmente, a sequência terminadora é funcional numa célula hospedeira escolhida, tais como por exemplo as espécies de levedura escolhidas. Em qualquer caso a escolha do terminador não é decisivo, pode por exemplo ser de qualquer gene de levedura, ainda que às vezes os terminadores possam funcionar com genes eucaróticos que não são de nenhuma levedura. Além disso, preferencialmente, a sequência terminadora de transcrição compreende um sinal de poliadenilação.
Opcionalmente, no constructo de ácidos nucleicos pode estar presente um marcador seleccionável. Como utilizado na presente invenção, o termo "marcador" refere-se a um gene que codifica uma caracteristica ou um fenótipo que permite a selecção ou o rastreio de uma célula hospedeira que contenha o marcador. 0 gene marcador pode ser um gene de resistência antibiótica através do qual o antibiótico apropriado possa ser utilizado para seleccionar células transformadas de entre as células não transformadas. Exemplos de marcadores de resistência antibiótica adequados incluem, por exemplo, di-hidrofolato-redutase,
higromicina-B-fosfotransferase, 3'-0-fosfotransferase II 18/39 (resistência à canamicina, neomicina e G418). Apesar de que os marcadores de resistência antibiótica possam ser mais convenientes para a transformação das células hospedeiras poliplóides, preferencialmente, no entanto, são utilizados marcadores de resistência não antibiótica, assim como marcadores auxotróficos (URA3, TRP1, LEU2) ou o gene de S. pombe TPI (descrito por Russell P R, 1985, gene 40: 125-130). Numa forma preferida de realizar a invenção as células hospedeiras transformadas com os constructos de ácidos nucleicos são livres de genes marcadores. No Pedido de Patente europeia EP-A-0 635 574 são descritos métodos para construir células hospedeiras microbianas livres de genes marcadores recombinantes, baseados na utilização de marcadores bidireccionais tais como o gene A. nidulans amdS (acetamidase) ou os genes de levedura URA3 e LYS2. De forma alternativa, um marcador rastreável tal como a proteina verde fluorescente, lacZ, luciferase, cloranfenicol acetiltransferase, ou beta-glucuronidase, pode ser incorporado nos constructos de ácidos nucleicos da invenção para permitir o rastreio das células transformadas.
Alguns outros elementos opcionais que podem estar presentes nos constructos dos ácidos nucleicos da invenção incluem, mas não se limitam a, uma ou mais sequências lideres, intensificadoras, factores de integração, e/ou genes indicadores, sequências de intrões, centrómeros, telómeros e/ou sequências de fixação matricial (MAR). Os constructos de ácidos nucleicos da invenção podem compreender ainda uma sequência para a replicação autónoma, como uma sequência ARS. Os constructos dos ácidos nucleicos epissómicos adequados podem por exemplo estar baseados nos plasmideos na levedura 2μ ou pKDl (Fleer et al., 1991, Biotechnology 9: 968-975). De forma alternativa, o constructo dos ácidos nucleicos pode compreender sequências para a integração, preferencialmente por recombinação homóloga. Assim estas sequências podem ser sequências homólogas ao sitios alvo para a integração no genoma da célula hospedeira. Os constructos 19/39 dos ácidos nucleicos da invenção podem ser providos de um modo conhecido per se, que geralmente envolve técnicas como as de restrição e de ligação sequências de ácidos nucleicos/ácido nucleico, as quais estão referidas nos manuais standards, como Sambrook & Russel (2001) "Molecular Cloning: A Laboratory Manual(3rd edition) , Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, ou F. Ausubel et al, eds., "Current protocols in molecular biology", Green Publishing and Wiley Interscience, New York (1987).
Noutro aspecto, a descrição refere-se a uma molécula de ácido nucleico que compreende uma sequência de nucleotideos, que codifica uma xilose isomerase. A molécula de ácido nucleico é preferencialmente seleccionado do grupo constituído por: (a) moléculas de ácido nucleico que codificam um polipeptideo, as quais compreendem uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos uma identidade de sequência de 50, 53, 54, 55, 60, 70, 80, 90, 95, 97, 98, ou 99% com a sequência de aminoácidos SEQ ID NO. 1; (b) moléculas de ácido nucleico que compreendem uma sequência de nucleotideos, a qual tem pelo menos uma identidade de sequência de 50, 56, 57, 58, 60, 70, 80, 90, 95, 97, 98, ou 99% com a sequência de nucleotideos SEQ ID NO. 2; (c) moléculas de ácido nucleico cuja cadeia complementar híbrida uma sequência de moléculas de ácido nucleico de (a) ou (b); (d) moléculas de ácido nucleico cuja sequência difere da sequência de uma molécula de ácido nucleico de (c) devido à degeneração do código genético.
De forma alternativa, uma molécula de ácido nucleico de (a) pode codificar um polipeptideo que compreenda uma sequência de 20/39 aminoácidos, que pelo menos tenha uma similitude de sequência de 67, 68, 69, 70, 80, 90, 95, 97, 98, ou 99% com a sequência de aminoácidos SEQ ID NO. 1. Uma molécula de ácido nucleico de (c) preferencialmente híbrida em condições moderadas, e mais preferencialmente em condições rigorosas, como foi já acima definido. Preferencialmente, a molécula de ácido nucleico provém de uma célula eucariota, mais preferencialmente de um microrganismo eucariótico como um fungo, e mais preferencialmente de um fungo anaeróbico, como por exemplo algum dos fungos anaeróbicos acima descritos.
Ainda outro aspecto da descrição refere-se a uma molécula de ácido nucleico que compreende uma sequência de nucleotídeos, a qual codifica uma xilulose quinase, preferencialmente uma D-xilulose quinase. Uma D-xilulose quinase (EC 2.7.1.17; também referida como uma D-xiluloquinase) na presente invenção é definida como uma enzima que cataliza a conversão de D-xilulose em xilulose-5-fosfato. A molécula de ácido nucleico é preferencialmente seleccionada do grupo constituído por: (a) moléculas de ácido nucleico que codificam um polipeptídeo, o qual compreende uma sequência de aminoácidos que pelo menos tem uma identidade de sequência de 45, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 95, 97, 98, ou 99% com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO. 3; (b) moléculas de ácido nucleico que compreendem uma sequência de nucleotídeos, que pelo menos tem uma identidade de sequência de 30, 37, 38, 39, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 97, 98, ou 99% com a sequência de nucleotídeos da SEQ ID NO. 4; (c) moléculas de ácido nucleico cuja cadeia complementar híbrida uma sequência de molécula de ácido nucleico de (a) ou (b); e, 21/39 (d) moléculas de ácido nucleico cuja sequência difere da sequência de uma molécula de ácido nucleico de (c) devido à degeneração do código genético.
De forma alternativa, uma molécula de ácido nucleico de (a) pode codificar um polipeptideo que compreende uma sequência de aminoácidos, a qual pelo menos tem uma similitude de sequência de 64, 65, 66, 70, 80, 90, 95, 97, 98, ou 99% com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO. 3. Uma molécula de ácido nucleico de (c) híbrida preferencialmente em condições moderadas, e mais preferencialmente sobre em rigorosas, como o acima definido. Preferencialmente, a molécula de ácido nucleico provém de uma célula eucariota, mais preferencialmente de um microrganismo eucariótico tal como um fungo, e da forma mais preferível de um fungo anaeróbico, tal como por exemplo os fungos anaeróbicos descritos anteriormente.
Noutro aspecto a invenção refere-se a processos de fermentação onde as células hospedeiras transformadas da invenção são utilizadas para a fermentação da fonte de carbono que compreende uma fonte de xilose, tal como xilose. Além de uma fonte de xilose, a fonte de carbono no meio de fermentação pode compreender também uma fonte de glicose. A fonte de xilose ou glicose pode ser a xilose ou glicose como tais ou pode ser qualquer oligómero ou polímero de hidratos de carbono que compreenda xilose ou unidades de glicose, como por exemplo lenhocelulose, xilanos, celulose, amido e outros. Para a libertação de unidades de xilose ou de glicose desde estes hidratos de carbono podem ser adicionados carbo-hidrases apropriadas (tais como xilanases, glucanases, amilases e outros) ao meio de fermentação, ou esta pode ser produzida pela célula hospedeira transformada. Neste caso, a célula hospedeira transformada pode ser criada geneticamente para produzir e excretar estas carbo-hidrases. Num processo desejado, a célula hospedeira transformada fermenta a xilose e a glicose, 22/39 preferencialmente ao mesmo tempo, neste caso é preferencialmente utilizada uma célula hospedeira transformada insensível à repressão de glicose para prevenir o crescimento diáuxico. Além da fonte de xilose (e glicose) como fonte de carbono, o meio de fermentação compreenderá também o ingrediente apropriado requerido para o crescimento da célula hospedeira transformada. As composições de meios de fermentação para o crescimento de microrganismos tais como leveduras são bem conhecidas na técnica. 0 processo de fermentação é um processo para a produção de um produto de fermentação como o etanol, o ácido láctico, o ácido acético, o ácido succínico, os aminoácidos, o 1,3-propano-diol, o etileno, o glicerol, antibióticos β-lactámicos tais como Penicilina G ou Penicilina V e seus derivados fermentativos, e cefalosporinas. 0 processo de fermentação pode ser um processo de fermentação aeróbico ou anaeróbico. Um processo de fermentação anaeróbico é definido na presente invenção como um processo de fermentação que se dá na ausência de oxigénio ou onde substancialmente o oxigénio não é consumido, por exemplo, menos do que 5 mmol/L/h, e em que as moléculas orgânicas servem como doadoras de electrões assim como de aceitadoras de electrões. Na ausência de oxigénio, o NADH produzido na glicólise e na formação da biomassa não pode ser oxidada por fosforilação oxidativa. Para resolver este problema muitos microrganismos utilizam o piruvato ou um dos seus derivados, como o aceitador de electrões e de hidrogénio, regenerando deste modo o NAD+. Assim, num processo de fermentação anaeróbica desejada o piruvato é utilizado como um electrão (e aceitador de hidrogénio) e é reduzido pelos produtos de fermentação como o etanol, o ácido láctico, o 1,3-propanodiol, o etileno, o ácido acético ou o ácido succínico. 0 processo de fermentação é preferencialmente realizado a uma temperatura óptima para a célula hospedeira transformada. Assim, 23/39 para a maioria das leveduras ou das células hospedeiras fúngicas, o processo de fermentação é executado a uma temperatura inferior a 38 °C. Para leveduras ou células hospedeiras filamentosas fúngicas, o processo de fermentação é preferencialmente executado a uma temperatura inferior a 35, 33, 30 ou 28 °C e a uma temperatura superior a 20, 22, ou 25 °C.
Um processo preferido é um processo para a produção de etanol, cujo processo compreende as fases de: (a) fermentação de um meio gue contém uma fonte de xilose com uma célula hospedeira transformada, como o acima definido pela gual a célula hospedeira fermenta a xilose em etanol; e, opcionalmente, (b) recuperação do etanol. O meio de fermentação também pode compreender uma fonte de glicose, que é também fermentada por etanol. Preferencialmente, no processo a produtividade do etanol volumétrico é de pelo menos 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 5.0 ou 10.0 g de etanol por litro por hora. Preferencialmente, o rendimento de etanol em xilose e/ou glicose no processo é de pelo menos 50, 60, 70, 90, 95 ou 98%. O rendimento de etanol é definido na presente invenção como uma percentagem do rendimento teórico, o qual para glicose e xilose é de 0.51 g de etanol por g de glicose ou xilose.
Noutro aspecto, a invenção refere-se a um processo para produzir um produto de fermentação seleccionado do grupo constituído por o ácido láctico, o ácido acético, o ácido succínico, os aminoácidos, o 1,3-propano-diol, o etileno, o glicerol, antibióticos β-lactámicos e cefalosporinas. Preferencialmente, o processo compreende as fases de: 24/39 (a) fermentação de um meio que contém uma fonte de xilose com uma célula hospedeira transformada, tal e como foi acima definido na presente invenção, pela qual a célula hospedeira fermenta xilose no produto de fermentação, e, opcionalmente, (b) recuperação do produto de fermentação. Num processo desejado, o meio também contém uma fonte de glicose.
Descrição das figuras
Figura 1. Curvas de crescimento do transformante de 5. cerevisiae num meio que contém 25 mM de galactose e 100 mM de xilose como fonte de carbono. O transformante pYes contém um vector de expressão de levedura sem inserção. Os transformantes 14.3, 16.2.1 e 16.2.2 são transformados com o vector pYes, que contém a sequência codificante de xilose isomerase espécie Piromyces E2 .
Exemplos
Exemplo 1
Clonação de xilanase isomerase de Piromyces e ADNcs de xilulose guinase
Organismo e condições de crescimento O fungo anaeróbico espécie Piromyces E2 (ATCC 76762), isolado das fezes de um elefante índio, cresceu de forma anaeróbica em N2/CO2 (80 %/20 %) a 39 °C num meio M2 suplementado com várias fontes de carbono (24) . As fontes de carbono utilizadas foram Avicel (celulose microcristalina tipo pH 105, Serva, Germany), frutose ou xilose (todas 0,5%, p/v) . Assim que o crescimento parou, o que foi decidido pela produção de hidrogénio, as células foram colhidas por centrifugação (15,000 x g, 4 °C, 15 25/39 minutos) ou por filtração sobre gaze de nylon (com um tamanho de poro de 30 μΜ).
Preparação do extracto livre de célula
As células micóticas foram lavadas com água desionizada para remover os componentes do meio. Os extractos livres da célula foram preparados mediante congelamento das células em nitrogénio liquido e trituração posterior num almofariz com pérolas de vidro (de 0.10-0.11 mm de diâmetro). Um tampão de Tris/HCl (100 mM, pH 7.0) foi adicionado ao pó (1:1, p/v) e depois de descongelar durante 15 minutos, a suspensão foi centrifugada (18, 000 x g, 4 °C, 15 minutos) . O sobrenadante transparente foi utilizado como uma fonte de enzimas intracelulares.
Ensaios enzimáticos A actividade de xilose isomerase foi analisada a 37 °C numa mistura reactiva que continha 50 mM de tampão de fosfato (pH 7.0), 10 mM de xilose, 10 mM de MgCl2 e uma quantidade adequada de extracto livre de célula. A quantidade de xilulose formada foi determinada com o método de cisteína-carbazol (9). As actividades da xilulose quinase e da xilose redutase foram analisadas como o descrito por Witteveem et al. (28). Uma unidade de actividade é definida como a quantidade de enzimas que produzem 1 nmol de xilulose por minuto nas condições do ensaio. A xilulose formada foi determinada pelo método de Dische e Borenfreund (Dische & Borenfreund, 1951, J. Biol. Chem. 192, 583-587) ou por HPLC, utilizando uma coluna BioRad HPX-87N accionada a 80 °C e eluida a 0.6 ml/min, utilizando 0.01 M de Na2HP04, como elueno. A xilose e a xilulose foram detectadas com um detector de índice de Refracção a uma temperatura interna de 60 °C. 26/39 A actividade específica está expressa em unidades por mg de proteína. A proteína foi determinada com o reagente de proteínas Bio-Rad (Laboratórios Bio-Rad, Richmond, CA, USA) com γ-globulina bovina como Standard.
Seguenciação aleatória de uma biblioteca de ADNc de espécie Piromyces E2
Foi utilizada a biblioteca de ADNc construída no vector lambda ZAPII como o descrito previamente (2) . Uma parte alíquota desta biblioteca foi convertida em clones de PBluescript SK mediante excisão da massa com ExAssist helper phage (Stratagene, La Jolla, CA, USA) . Os clones seleccionados aleatoriamente foram sequenciados com o iniciador invertido M13 para obter sequências das partes 5'. Os ADNcs incompletos foram utilizados para sintetizar sondas, as quais foram utilizadas para voltar a rastrear a biblioteca. Para obter sequências de comprimento máximo foram gerados subclones em pUC18. A sequenciação foi realizada com o sequenciador automatizado ABI prism 310 e com o kit de sequenciação de ADN de reacção preparada para o ciclo de sequenciação do terminador de dRhodamine (Perkin-Elmer Applied Biosystems).
Resultados
Os clones seleccionados de uma biblioteca de ADNc do fungo anaeróbico espécie Piromyces E2 foram ordenados aleatoriamente, e daí resultaram dois clones (pH97 e pAK44) cujas sequências mostraram uma elevada homologia com a xilose isomerase e os genes D-xiluloquinase, respectivamente. Os clones foram analisados detalhadamente. O clone pH97 não continha uma ORF completo e consequentemente a biblioteca de ADNc foi rastreada de novo com uma sonda desenhada na base dos dados da sequência do clone pH97. Isto resultou num 27/39 clone pR3 com uma inserção de 1669 pares de bases. Pode ser identificado uma ORF que codifica uma proteína de 437 aminoácidos com uma alta similitude com as xiloses isomerases. Ainda que a região não codificante 5' compreenda só 4 pares de bases, o presumido princípio de resíduo de metionina foi bem adaptado num alinhamento de sequências conhecidas de xilose isomerase. A região não codificante 3' teve 351 pares de bases de comprimento e um alto teor de AT, o que é típico para os fungos anaeróbicos. A ORF contida nos aminoácidos mostrou-se como um factor importante para a interacção com o substrato (tríade catalítica His 102, Asp 105, Asp 340 e Lys 235) e a união de magnésio (Glu 232) (14, 26). Além disso estavam presentes os dois modelos de assinatura (resíduos 185-194 e 230-237) desenvolvidos para a xilose isomerase (20). A xilose isomerase (XylA) de espécies Píromyces E2 mostra homologia mais elevada com as enzimas de Haemophilus ínfluenza (52 % de identidade, 68 % de similitude) e Ho r de um vulgare (4 9 % de identidade, 67 % de similitude). 0 polipeptídeo deduzido da sequência de ADNc corresponde a uma massa molecular de 49,395 Da e tem um pl calculado de 5,2. O segundo clone, pAK44, teve uma inserção de 2041 pares de bases e continha uma ORF completa que codificava uma proteína de 494 aminoácidos com um peso molecular de 53.158 Da e um pl de 5.0. A primeira metionina foi processada mediante uma região não codificante de 111 pares de bases 5', enquanto que a região não codificante 3' compreendia 445 pares de bases. As duas regiões são ricas em AT. As buscas BLAST e FASTA revelaram uma alta similitude com xiluloquinases. As duas regiões de consenso de fosfato definidas por Rodriguez-Pena et al. (22) foram encontradas nas posições 6-23 e 254-270, como o mostrado num alinhamento parcial. Além disso foram identificadas as assinaturas para esta família de hidratos de carbono quinase como o descrito na base de dados Prosite (131-145 e 351-372). A xiluloquinase (XylB) da espécie Píromyces E2 mostrou homologia 28/39 mais elevada com a proteína XylB de Haemophilus influenza (46 de identidade, 64 % de similitude).
Exemplo 2
Construção de vectores de expressão de leveduras
Expressão de xilose isomerase da espécie Piromyces E2 em Saccharomyces cerevisae
Foi utilizada um ADNc da espécie Piromyces E2 numa reacção PCR com polimerase pfu (Stratagene). Os iniciadores foram desenhados utilizando as sequências das extremidades 5' e 3' do gene de xilose isomerase e também continham um Sfi I e um sítio de restrição Xbal. 0 produto de PCR foi clonado no vector pPICZa (Invitrogen, Carlsbad, CA, Usa) . Para obter o gene de xilose isomerase, o vector pPICZa foi digerido com EcoRI e Xbal. 0 produto de digestão foi ligado no vector pYes2 (Invitrogen). 0 plasmídeo pYes2 com o gene de xilose isomerase foi transformado em Saccharomyces cerevisiae (stam BJ1991, doado por de Beth Jones, UvA) . 0 genótipo desta cepa é: mata, leu2, trpl, ura 3-251; prbl-1122 e pep4-3. Os transformantes foram colocados nas placas SC (0.67% de meio YNB + 0.05% de L-leu + 0.05% de L-Trp + 2% de glicose + 2% de agarose). As células não transformadas não podem crescer nestas placas.
Indução
As células de Saccharomyces cerevisiae transformadas cresceram num meio de glicose a 25 °C durante 72 h (a rafinose pode ser utilizada como meio alternativo à glicose). As células foram colhidas e ressuspendidas num meio SC com galactose em vez de glicose. Depois de 8 horas de indução as células foram colhidas e lisadas utilizando pérolas de vidro (com um diâmetro de 0.10-0.11 mm) e um "tampão de suspensão" (50mM de tampão de fosfato + 29/39 5% glicerol + inibidor de protease). Depois da lise a mistura foi centrifugada (18,000 x g, 4 °C, 15 minutos). O sobrenadante transparente foi utilizado para determinar a actividade da xilose isomerase com a utilização do método acima descrito (exemplo 1) . Foi medida uma actividade de 10 U por mg de proteina a 37 °C.
Exemplo 3
Crescimento das estirpes de levedura transformadas em xilose
Composição do meio
As estirpes de Saccharomyces cerevisíae cresceram num meio SC com a seguinte composição: 0.67% (p/v) de base nitrogenada de levedura; 0.01% (p/v) de L-triptofano; 0.01% (p/v) de L-leucina ou ainda de glicose, galactose ou xilose, ou uma combinação destes substratos (ver abaixo) . Para as placas de agar o meio foi complementado com um 2% (p/v) de agar bactereológico.
Experiência do crescimento A estirpe de Saccharomyces cerevisíae BJ1991 (genótipo: mata, leu2, trpl, ura 3-251; prbl-1122, pep4-3) transformada com pYes2 sem inserção e três transformantes seleccionados (16.2.1, 16.2.2 e 14.3) que continham pYes2 com o gene xilose isomerase espécie Piromyces E2 cresceram em placas de agar SC com 10 mM de glicose como fonte de carbono. Quando as colónias eram visiveis, foram utilizadas colónias individuais para inocular o meio de SVC liquido com 100 mM de xilose e 25 mM de galactose como fontes de carbono. O crescimento foi monotorizado medindo o aumento em densidade óptica a 600 nm num espectrofotómetro LKB Ultrospec K.
Resultados 30/39
Na figura 1 estão compilados os resultados das experiências. A cultura com a estirpe BJ1991 transformada com pYes2 sem inserção mostra um aumento em OD6oo em 80 horas. Após o qual uma redução gradual é observada. Esta é devido à agregação das células de levedura, a qual muitas vezes é observada no final do crescimento. As culturas com os três transformantes não pararam de crescer depois das 80 horas e mostraram um crescimento adicional durante pelo menos 150 horas.
Exemplo 4
Construção de um vector de expressão de levedura novo e melhorado para a expressão constitutiva da xilose isomerase da espécie Píromyces E2 em Saccharomyces cerevisiae.
Foi utilizado o vector pPICZa, que continha a espécie Píromyces E2 que codifica o gene da xilose isomerase como molde para a PCR com ADN polimerase VentR (New England Biolabs). Os iniciadores foram desenhados utilizando as sequências 5' e 3' do gene que codifica a xilose isomerase e incluíam um sítio EcoRI e Spel. Adicionalmente, os iniciadores estavam desenhados para remover o sítio Xbal encontrado no constructo pPICZa, substituindo-o por um codão de paragem (TAA). O produto final foi desenhado para restaurar a grelha de leitura aberta original, sem os aminoácidos adicionados (marcadores his e c-Myc) encontrados no constructo pPICZa. O produto PCR foi cortado com EcoRI e Spel. O produto final foi clonado num vector derivado de pYES2 (Invitrogen). Neste vector o promotor GAL1 encontrado em pYES2 foi substituído pelo promotor TPI1 para assegurar a expressão constitutiva da xilose isomerase, eliminando assim a necessidade de galactose no meio. O promotor TPIl foi clonado da forma modificada do plasmídeo pYX012 (sistemas R&D) . O promotor foi cortado como um fragmento de Nhel-EcoRI. Tanto o promotor TPIl como o produto de PCR do gene que codifica a xilose isomerase foram ligados no corte pYES2 com Spel e Xbal. Este plasmídeo foi 31/39 utilizado para transformar a estirpe de Saccharomyces cerevisiae CEN.PK113-5D (doado por Peter Kõtter, Frankfurt) . 0 genótipo da estirpe é: mata ura3-52. Os transformantes foram seleccionados em placas de meio mineral (Verduyn et al. : Effect of benzoic acid on metabolic fluxes in yeasts: a continuous-culture study on the regulation of respiration and alcoholic fermentation. (1992) Yeast 8(7):501-17) com 2% de glicose como fonte de carbono. As células não transformadas não puderam crescer nestas placas. Os transformantes cresceram em misturas de glicose/xilose em culturas quimiostáticas com limite de carbono. Os transformantes que cresceram nestas condições exibiram actividade de xilose isomerase elevada (800 unidades por mg a 30 °C) , de acordo com um ensaio enzimático especifico como o desenvolvido por Kersters-Hildersson et al. (Kinetic characterization of D-xylose isomerases by enzymatic assays using D-sorbitol dehydrogenase. Enz. Microb. Technol. 9 (1987) 145-148). A actividade in vitro da xilose isomerase nos extractos livres da célula da estirpe de S. cerevisiae transformada era dependente dos catiões bivalentes (Mg2+ ou Co2 + ) e foi medido um valor relativamente baixo de Km para a xilose de aproximadamente 20 mM. 32/39
LISTA DE SEQUÊNCIAS <110> Royal Nedalco B.V. <120> Fermentação de açúcares pentose <130> xilose isomerase de Piromyces <140> BO 44829 <141> 2001-12-31 <160> 4 <170> Patentln Ver. 2.1
<210> 1 <211> 437 <212> PRT <213> Espécie Piromyces <4 0 0> 1 33/39
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Lisboa, 39/39

Claims (17)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Uma célula hospedeira eucariótica transformada com um constructo de ácidos nucleicos que compreende uma sequência de nucleotídeos, a qual por seu lado codifica uma xilose isomerase que compreende uma sequência de aminoácidos com uma identidade de sequência de pelo menos 7 0 % com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO. 1, como a determinada com a utilização do algoritmo de Needleman & Wunsch, caracterizado por o constructo dos ácidos nucleicos na transformação da célula hospedeira conferir à célula hospedeira a capacidade de crescer em xilose como fonte de carbono.
  2. 2. Uma célula hospedeira transformada de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a célula hospedeira ser uma levedura, preferencialmente uma levedura pertencente a uma dos géneros: Saccharomyces, Kluyveromyces, Candida, Pichia, Schizosacaromyces, Hansenula, Kloeckera, Schwanniomyces e Yarrowía.
  3. 3. Uma célula hospedeira transformada de acordo com a reivindicação 2, caracterizada por a levedura pertencer a uma das espécies: S. cerevisiae, S. bulderi, S. barnetti, S. exiguus, S. uvarum, S diastaticus, K. lactis, K. marxianus, e K. fragilis.
  4. 4. Uma célula hospedeira transformada de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por a célula hospedeira ser um fungo filamentoso, preferencialmente um fungo filamentoso pertencente a um dos géneros: e Aspergillus, Trichoderma, Humicola, Acremonium, Fusarium, Penicillium.
  5. 5. Uma célula hospedeira transformada de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por a sequência de nucleotídeos que codifica uma xilose isomerase estar ligada 1/6 funcionalmente a um promotor que causa a expressão suficiente da xilose isomerase na célula hospedeira para conferir à célula hospedeira a capacidade de isomerizar a xilose em xilulose.
  6. 6. Uma célula hospedeira transformada de acordo com a reivindicação 5, caracterizada por o promotor ser insensível à repressão catabólica na célula hospedeira.
  7. 7. Uma célula hospedeira transformada de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por a célula hospedeira compreender uma modificação genética que resulta numa caracteristica seleccionada do grupo que constituído por: (a) aumento do transporte de xilose à célula hospedeira; (b) actividade de xilulose quinase aumentada; (c) fluxo aumentado da via das pentoses fosfato; (d) sensibilidade diminuída para a repressão catabólica; (e) tolerância aumentada ao etanol, à osmolaridade ou aos ácidos orgânicos; e, (f) produção reduzida de subprodutos.
  8. 8. Uma célula hospedeira transformada de acordo com a reivindicação 7, caracterizada por a modificação genética consistir na sobrexpressão de um gene endógeno, na expressão de um gene heterólogo, ou combinação deste, e o gene endógeno ou heterólogo, ser seleccionado do grupo constituído por um gene que codifica: uma hexose ou um transportador de pentose, uma xilulose quinase; uma enzima da via de fosfatos pentose, uma enzima glicolítica, e uma enzima etanologénica. 2/6
  9. 9. Uma célula hospedeira transformada de acordo com a reivindicação 7, caracterizada por a modificação genética consistir na inactivação de um gene endógeno, em que o gene é selecionado do grupo que composto por um gene de hexose quinase, os genes Saccharomyces MIG1 e MIG2 e os seus homólogos híbridos.
  10. 10. Uma célula hospedeira transformada de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada por a célula hospedeira expressar uma ou mais enzimas que conferem à célula hospedeira a capacidade para produzir ácido láctico, ácido acético, ácido succínico, aminoácidos, 1,3-propano-diol, etileno, glicerol, antibióticos β-lactámicos e cefalosporinas.
  11. 11. Uma Célula hospedeira transformada de acordo com a reivindicação 10, caracterizada por a célula hospedeira conter uma modificação genética que resulta numa diminuição de actividade do álcool-desidrogenase.
  12. 12. Processo para produzir etanol, caracterizado por este compreender as fases de: (a) fermentação de um meio que contém uma fonte de xilose com uma célula hospedeira transformada como a definida em qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, e a célula hospedeira fermentar a xilose em etanol, e opcionalmente, (b) a recuperação do etanol.
  13. 13. Processo de acordo com a reivindicação 12, caracterizado por o meio conter também uma fonte de glicose.
  14. 14. Processo de acordo com as reivindicações 12 ou 13, caracterizado por a produtividade de etanol volumétrico ser de pelo menos 0.5 g de etanol por litro e hora. 3/6
  15. 15. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações de 12 a 14, caracterizado por o rendimento do etanol ser pelo menos 50 % do rendimento teórico de 0.51 g de etanol por g de glicose ou xilose.
  16. 16. Processo para produzir um produto de fermentação seleccionado do grupo constituído por ácido láctico, ácido acético, ácido succínico, aminoácidos, 1,3-propanodiol, etileno, glicerol, antibióticos b-lactámicos e cefalosporinas, caracterizado por o processo compreender as fases de: (a) a fermentação de um meio que contém uma fonte de xilose com uma célula hospedeira transformada como a definida nas reivindicações 10 ou 11, em que a célula hospedeira fermenta xilose em produto de fermentação, e opcionalmente, (b) a recuperação do produto de fermentação.
  17. 17. Processo de acordo com a reivindicação 16, caracterizado por o meio conter também uma fonte de glicose. Lisboa, 4/6 REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo titular tem como único objectivo ajudar o leitor e não forma parte do documento de patente europeia. Ainda que na sua elaboração foi tido o máximo cuidado, não se podem excluir erros ou omissões e a este respeito a EPO declina qualquer responsabilidade. Documentos de Pedidos de Patente citados na descrição • us 5866382 A [0005] • US 6265186 B [0026] • wo 9513362 A [0005] • wo 9846772 A [0030] • wo 9742307 A [0005] • wo 9960102 A [0030] • wo 9014423 A [0026] • wo 0037671 A [0030] • EP 0481008 A [0026] • wo 9303159 A [0031] • EP 0635574 A [0026] [0030] [0033] Literatura citada na descrição que não é Pedido de Patente • W.M. VAN GULIK et al. Biotechnol. Bioeng, 20 June 2000, vol. 68 (6 [0004] • ZALDIVAR et al. Appl. Microbiol. Biotechnol., 2001, vol. 56, 17-34 [0005] • AMORE; HOLLENBERG. Nucleic Acids Res., 1989, vol . 17, 7515 [0006] • AMORE et al. Appl. Microbiol. Biotechnol. , 1989, vol. 30, 351-357 [0006] • CHAN et al. Biotechnol. Lett, 1986, vol. 8 , 231 -234 [0006] • CHAN et al. Appl. Mi crobiol. Biotechnol. , 1989, vol. 31, 524-528 [0006] • HO et al. Fed. Proc. Fed. Am. Soc. Exp. Bi ol. , 1983, vol . 42, 2167 • DEVEREUX, J. et al. Nucleic Acids Research, 1984, vol. 12, (1), 387 [0010] • ALTSCHUL, S. F. et al. J. Mol. Biol., 1990, vol. 215, 403-410 [0010] •ALTSCHUL, S. et al. J. Mol. Biol., 1990, vol. 215, 403-410 [0010] •NEEDLEMAN; WUNSCH. J. Mol. Biol., 1970, vol. 48, 443-453 [0011] [0012] •HENTIKOFF; HENTIKOFF. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1992, vol. 89, 10915-10919 [0011] •ALEXOPOULOS, C. J. Introductory Mycology. John Wiley & Sons, Inc, 1962. [0023] •FLEER et al. Biotechnology, 1991, 5/6 [0006] • HOLLENBERG. EBC~Symposium on Brewer's Yeast, 1986, [0006] • SARTHY et al. Appl. Environ. Microbiol., 1987, vol. 53, 1996- 2000 [0006] • UENG et al. Biotechnol. Lett., 1985, vol. 7, 153-158 [0006] • BAO et al. Weishengwu-Xuebao, 1999, vol. 39, 49-54 [0006] • WALFRIDSON et al. Appl. Environ. Microbiol., 1996, vol. 61, 4184- 4190 [0006] • DISCHE; BORENFREUND. J. Biol. Chem., 1951, vol. 192, 583-587 [0008] • Computational Molecular Biology. Oxford University Press, 1988 [0009] • Biocomputing: Informatics and Genome Projects. Academic Press, 1993 [0009] • Computer Analysis of Sequence Data, Part I. Humana Press, 1994 [0009] • Sequence Analysis in Molecular Biology. Academic Press, 1987 [0009] • Sequence Analysis Primer, Gribskov. Stockton Press, 1991 [0009] • CARILLO, H.; LIPMAN, D. SIAM J. Applied Math., 1988, vol. 48, 1073 [0009] vol. 9, 968-975 [0026] [0034] •DENG; HO Appl. Biochem. Biotechnol., 1990, vol. 24-25, 193-199 [0028] • MEINANDER et al. Pharmacol. Toxicol., 1995, vol. 2, 45 [0028] •DIDERICH et al. Appl Environ. Microbiol. , 2001, vol . 67, 1587- 1593 [0028] • TRAFF et al. Appl. Environm. Microbiol. , 2001, vol . 67, 5668- 5674 [0028] •SAMBROOK; RUSSEL. Molecular Cloning: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001 [0030] [0034] • Current protocols in molecular biology. Green Publishing and Wiley Interscience, 1987 [0030] [0034] • RUSSELL P R. Gene, 1985, vol. 40, 125-130 [0033] •VERDUYN et al. Effect of benzoic acid on metabolic fluxes in yeasts: a continuous-culture study on the regulation of respiration and alcoholic fermentation Yeast, 1992, vol. 8, (7), 501-17 [0058] • KERSTERS-HILDERSSON et al. Kinetic characterization of D-xylose isomerases by enzymatic assays using D-sorbitol dehydrogenase Enz. Microb. Technol., 1987, vol. 9, 145-148 [0058] 6/6
PT03731853T 2002-01-23 2003-01-23 Fermentação de açúcares pentose PT1468093E (pt)

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Families Citing this family (289)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR0306740A (pt) * 2002-01-23 2004-12-28 Royal Nedalco B V Célula hospedeira transformada com um construto de ácido nucléico, molécula de ácido nucleico isolada, e, processos para a produção de etanol, e de um produto de fermentação
EP2534961A1 (en) 2003-03-10 2012-12-19 POET Research, Inc. Method for producing ethanol using raw starch
US20050233030A1 (en) 2004-03-10 2005-10-20 Broin And Associates, Inc. Methods and systems for producing ethanol using raw starch and fractionation
CN1922198B (zh) 2003-05-02 2012-07-11 卡吉尔公司 基因修饰酵母物种和使用基因修饰酵母的发酵方法
RU2006144096A (ru) * 2004-05-13 2008-06-20 Новозаймз Норт Америка, Инк. Способ производства ферментационного продукта
CN101914462B (zh) * 2004-07-16 2013-04-24 Dsm知识产权资产有限公司 发酵木糖的真核细胞的代谢工程
US20150328347A1 (en) 2005-03-24 2015-11-19 Xyleco, Inc. Fibrous materials and composites
US7708214B2 (en) 2005-08-24 2010-05-04 Xyleco, Inc. Fibrous materials and composites
EP1885842A4 (en) 2005-06-02 2009-06-10 Cargill Inc GENETICALLY MODIFIED YEAST OF ISSATCHENKIAORIENTALIS SPECIES AND CLOSELY BINDED SPECIES AND PROCESSES OF FERMENTATION USING THE SAME
PT103331A (pt) * 2005-08-05 2007-02-28 Fundacao Da Faculdade De Cienc Expressão dum transportador activo de xilose em saccharomyces cerevisiae modificada geneticamente
US7919289B2 (en) 2005-10-10 2011-04-05 Poet Research, Inc. Methods and systems for producing ethanol using raw starch and selecting plant material
US7357527B2 (en) * 2006-03-03 2008-04-15 Thomas A Meyers Solar sign light
JP5507045B2 (ja) 2006-12-15 2014-05-28 石原産業株式会社 アントラニルアミド系化合物の製造方法
DE102006060381B4 (de) * 2006-12-20 2010-04-08 Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main Neuer spezifischer Arabinose-Transporter aus der Hefe Pichia stipitis und dessen Verwendungen
CN101765661B (zh) 2007-06-01 2014-08-06 索拉兹米公司 在微生物中生产油
US20100304454A1 (en) * 2007-07-19 2010-12-02 Royal Nedalco B.V. Novel arabinose-fermenting eukaryotic cells
EP2062967A1 (en) 2007-11-21 2009-05-27 Technical University of Denmark Genetically engineered aspergillus
EP2128262A1 (en) * 2008-05-28 2009-12-02 Università Degli Studi Di Milano - Bicocca Improved yeast strains for organic acid production
DE102008031350B4 (de) 2008-07-02 2011-02-10 Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main Prokaryotische Xylose-Isomerase zur Konstruktion Xylose-vergärender Hefen
GB0812318D0 (en) 2008-07-04 2008-08-13 Terranol As Microorganism
US8440449B2 (en) 2008-09-30 2013-05-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Transformed Saccharomyces cerevisiae engineered for xylose utilization
JP6109475B2 (ja) 2008-11-28 2017-04-05 テラヴィア ホールディングス， インコーポレイテッド 従属栄養微生物における、用途に応じた油の生産
CA2745760A1 (en) 2008-12-04 2010-06-10 Novozymes A/S Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
GB0822937D0 (en) * 2008-12-16 2009-01-21 Terranol As Microorganism
EP2379732A2 (en) 2008-12-19 2011-10-26 Novozymes Inc. Methods for increasing enzymatic hydrolysis of cellulosic material in the presence of a peroxidase
CN102325889A (zh) 2008-12-19 2012-01-18 诺维信股份有限公司 增加纤维素材料水解的方法
EP2379712B1 (en) 2008-12-19 2017-02-22 Novozymes Inc. Methods for increasing hydrolysis of cellulosic material in the presence of cellobiose dehydrogenase
CN102307987B (zh) 2008-12-24 2016-11-16 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 木糖异构酶基因及其在戊糖发酵中的用途
US8604277B2 (en) 2009-01-28 2013-12-10 Novozymes, Inc. Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same
WO2010088463A2 (en) 2009-01-30 2010-08-05 Novozymes, Inc. Polypeptides having expansin activity and polynucleotides encoding same
US9068206B1 (en) 2009-03-03 2015-06-30 Poet Research, Inc. System for treatment of biomass to facilitate the production of ethanol
US8450094B1 (en) 2009-03-03 2013-05-28 Poet Research, Inc. System for management of yeast to facilitate the production of ethanol
MX2011009269A (es) 2009-03-03 2011-09-26 Poet Res Inc Fermentacion de biomasa para la produccion de etanol.
JP5608999B2 (ja) * 2009-04-08 2014-10-22 株式会社豊田中央研究所 キシロースを利用して有用物質を生産する方法
CA2763031A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 Novozymes, Inc. Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material
US8278507B2 (en) 2009-06-02 2012-10-02 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same
EP2451957B1 (en) 2009-07-07 2017-11-15 Novozymes Inc. Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
EP2451960A2 (en) 2009-07-09 2012-05-16 Verdezyne, Inc. Engineered microorganisms with enhanced fermentation activity
DK2478096T3 (en) 2009-09-17 2017-08-28 Novozymes Inc POLYPEPTIDES WITH CELLULOLYTIC IMPROVING ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM
EP2478095A1 (en) 2009-09-18 2012-07-25 Novozymes Inc. Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same
WO2011041405A1 (en) 2009-09-29 2011-04-07 Novozymes, Inc. Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same
BR112012006873A2 (pt) 2009-10-23 2015-09-08 Novozymes Inc variante isolada, polinucleotideo isolado, metodo para produzir uma variante, planta transgenica, parte de planta ou celula d eplanta, e, metodos para degradar ou converter um materialcelulósico, para produzir um produto de fermentação, e, para fermentar um material celulósico.
WO2011059740A1 (en) 2009-10-29 2011-05-19 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same
EP2496692B1 (en) 2009-11-06 2016-03-16 Novozymes, Inc. Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same
WO2011057086A1 (en) 2009-11-06 2011-05-12 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same
CA2780179A1 (en) 2009-11-06 2011-05-12 Novozymes, Inc. Compositions for saccharification of cellulosic material
WO2011059314A1 (en) * 2009-11-12 2011-05-19 Stichting Voor De Technische Wetenschappen Pentose transporters and uses thereof
WO2011078262A1 (ja) 2009-12-22 2011-06-30 株式会社豊田中央研究所 キシロースイソメラーゼ及びその利用
WO2011090730A1 (en) 2009-12-28 2011-07-28 Martek Biosciences Corporation Recombinant thraustochytrids that grow on xylose, and compositions, methods of making, and uses thereof
BR112012018764A2 (pt) 2009-12-30 2015-09-15 Iogen Energy Corp cepas de levedura modificadas exibindo co-fermentação melhorada de xilose e glicose em hidrolisados de lignocelulose
US8759049B2 (en) 2010-02-25 2014-06-24 Iogen Energy Corporation Method for the production of a fermentation product from a sugar hydrolysate
MX2012012171A (es) * 2010-04-21 2013-02-27 Dsm Ip Assets Bv Proceso para la produccion de celulas que tienen la capacidad de convertir arabinosa.
WO2011149353A1 (en) 2010-05-27 2011-12-01 C5 Yeast Company B.V. Yeast strains engineered to produce ethanol from acetic acid and glycerol
CA3039432A1 (en) 2010-05-28 2011-12-01 Corbion Biotech, Inc. Tailored oils produced from recombinant heterotrophic microorganisms
CA2798937A1 (en) 2010-05-28 2011-12-01 Codexis, Inc. Pentose fermentation by a recombinant microorganism
BR112012031362A2 (pt) 2010-06-03 2015-10-13 Mascoma Corp levedura expressando enzimas sacarolíticas para bioprocessamento consolidado usando amido e celulose
CA2802865A1 (en) 2010-06-17 2011-12-22 Neelakantam V. Narendranath Fermentation of biomass
DK2588604T3 (en) 2010-06-30 2016-09-26 Novozymes Inc Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding them
DK2591119T4 (da) 2010-07-07 2022-12-12 Novozymes North America Inc Fermenteringsproces
EP2603594B1 (en) 2010-08-12 2018-04-25 Novozymes, Inc. Compositions comprising a polypeptide having cellulolytic enhancing activity and a bicyclic compound and uses thereof
WO2012024046A2 (en) * 2010-08-20 2012-02-23 Codexis, Inc. Pentose fermentation by a recombinant microorganism
ES2623288T3 (es) 2010-08-20 2017-07-10 Codexis, Inc. Uso de proteínas de la familia de glicólido hidrolasa 61 en el procesamiento de celulosa
WO2012030844A1 (en) 2010-08-30 2012-03-08 Novozymes A/S Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
EP3470514A1 (en) 2010-08-30 2019-04-17 Novozymes A/S Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
EP2611901B1 (en) 2010-08-30 2016-05-11 Novozymes A/S Polypeptides having beta-glucosidase activity, beta-xylosidase activity, or beta-glucosidase and beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same
US8624082B2 (en) 2010-08-30 2014-01-07 Novozymes A/S Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same
WO2012030811A1 (en) 2010-08-30 2012-03-08 Novozymes A/S Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same
US20130212746A1 (en) 2010-08-30 2013-08-15 Novoyzmes A/S Polypeptides Having Hemicellulolytic Activity And Polynucleotides Encoding Same
US8709770B2 (en) 2010-08-31 2014-04-29 Iogen Energy Corporation Process for improving the hydrolysis of cellulose in high consistency systems using one or more unmixed and mixed hydrolysis reactors
CN102399804A (zh) * 2010-09-15 2012-04-04 中国农业科学院作物科学研究所 木糖异构酶基因的功能及其应用
ES2594528T3 (es) 2010-09-30 2016-12-20 Novozymes, Inc. Variantes de polipéptidos con actividad de mejora celulolítica y polinucleótidos que las codifican
MX2013003237A (es) 2010-09-30 2013-05-30 Novozymes Inc Variantes de polipeptidos que tienen actividad potenciadora celulolitica y polinucleotidos que codifican a los mismos.
BR112013004256A2 (pt) 2010-10-01 2016-08-02 Novozymes Inc variante de beta-glicosidase,polinucleotídeo isolado, célula hospedeira recombinante, métodos para produzir uma variante, para degradar um material celulósico, para produzir um produto de fermentação, e para fermentar um material celulósico, e, formulação de caldo total ou composição de cultura de células.
PL2627765T3 (pl) * 2010-10-13 2017-10-31 Dsm Ip Assets Bv Komórka drożdżowa fermentująca pentozę i glukozę
US20130260423A1 (en) 2010-10-26 2013-10-03 Novozymes North America, Inc. Methods of Saccharifying Sugar Cane Trash
BR112013010008B1 (pt) 2010-11-02 2020-09-08 Novozymes, Inc. Métodos para degradar e para fermentar um material celulósico, e para produzir um produto de fermentação
SG190154A1 (en) 2010-11-03 2013-06-28 Solazyme Inc Microbial oils with lowered pour points, dielectric fluids produced therefrom, and related methods
US9212354B2 (en) 2010-11-04 2015-12-15 Novozymes Inc. Polypeptides having cellobiohydrolase activitiy and polynucleotides encoding same
CN103180451B (zh) * 2010-11-11 2014-12-31 丰田自动车株式会社 使用重组酵母的乙醇的制造方法
DK2638153T3 (en) 2010-11-12 2017-10-16 Novozymes Inc POLYPEPTIDES WITH ENDOGLUCANASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM
DK2640833T3 (en) 2010-11-18 2016-11-28 Novozymes Inc Chimeric polypeptides having cellulolytic enhancing ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES ENCODING THEM
PL2663645T3 (pl) 2010-11-18 2015-05-29 Dsm Ip Assets Bv Szczepy drożdży zmodyfikowane do wytwarzania etanolu z glicerolu
US8927235B2 (en) 2010-12-06 2015-01-06 Novozymes A/S Methods of hydrolyzing oligomers in hemicellulosic liquor
CN103502460A (zh) 2011-01-21 2014-01-08 波特研究公司 用于改善发酵工艺的系统和方法
EP2668268B1 (en) 2011-01-26 2017-05-31 Novozymes A/S Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same
WO2012103350A1 (en) 2011-01-26 2012-08-02 Novozymes A/S Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same
WO2012103288A1 (en) 2011-01-26 2012-08-02 Novozymes A/S Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same
CN103517985B (zh) 2011-01-26 2016-12-07 诺维信公司 具有纤维二糖水解酶活性的多肽及编码该多肽的多核苷酸
WO2012103322A1 (en) 2011-01-26 2012-08-02 Novozymes A/S Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
CN103459605B (zh) 2011-01-31 2016-08-24 诺维信北美公司 用于酶法精制经预处理的纤维素材料以供糖化的工艺
US9249436B2 (en) 2011-02-02 2016-02-02 Solazyme, Inc. Tailored oils produced from recombinant oleaginous microorganisms
CN102643845A (zh) * 2011-02-21 2012-08-22 中国农业科学院作物科学研究所 大麦木糖异构酶基因的功能及其应用
CN102174549B (zh) * 2011-02-22 2012-10-10 山东大学 一种编码木糖异构酶的核酸分子及其编码的木糖异构酶
CN103384678B (zh) 2011-02-23 2017-01-18 诺维信股份有限公司 具有纤维素水解增强活性的多肽及其编码多核苷酸
EP3339442B1 (en) 2011-03-09 2022-05-11 Novozymes A/S Methods of increasing the cellulolytic enhancing activity of a polypeptide
US9409958B2 (en) 2011-03-10 2016-08-09 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
WO2012125027A1 (en) 2011-03-14 2012-09-20 Dsm Ip Assets B.V. Yeast strains that ferment uronic acids
DK2689011T3 (en) 2011-03-25 2018-01-22 Novozymes As PROCEDURE FOR DEGRADATION OR CONVERSION OF CELLULOSE-SUBSTANCING MATERIAL
JP5813977B2 (ja) 2011-03-30 2015-11-17 トヨタ自動車株式会社 Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属の変異体酵母及びこれを用いたエタノールの製造方法
US20140080182A1 (en) 2011-03-31 2014-03-20 Novozymes, Inc. Cellulose Binding Domain Variants and Polynucleotides Encoding Same
US9410136B2 (en) 2011-03-31 2016-08-09 Novozymes, Inc. Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material
US9926547B2 (en) 2011-04-28 2018-03-27 Novozymes, Inc. Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
US9624518B2 (en) 2011-04-29 2017-04-18 Novozymes, Inc. Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material
KR20140033378A (ko) 2011-05-06 2014-03-18 솔라짐, 인코포레이티드 자일로오스를 대사시키는 유전자 조작된 미생물
EP2710132A1 (en) 2011-05-19 2014-03-26 Novozymes, Inc. Methods for enhancing the degradation of cellulosic material with chitin binding proteins
WO2012159009A1 (en) 2011-05-19 2012-11-22 Novozymes, Inc. Methods for enhancing the degradation of cellulosic material with chitin binding proteins
BR112013032945B1 (pt) 2011-06-21 2021-06-22 Katholieke Universiteit Leuven K.U. Leuven R&D Uso de um alelo de apj1 inativado e método de triagem de levedura resistente ao etanol
EP2546336A1 (en) 2011-07-11 2013-01-16 DSM IP Assets B.V. Yeast strains that consume uronic acids and produce fermentation products such as ethanol
DK2734633T3 (da) 2011-07-22 2019-06-11 Novozymes North America Inc Fremgangsmåder til forbehandling af celluloseholdigt materiale og forbedring af hydrolyse deraf
DK2739728T3 (en) 2011-08-04 2017-10-16 Novozymes As Polypeptides with endoglucanase activity and polynucleotides encoding them
CN108823184B (zh) 2011-08-04 2022-04-05 诺维信公司 具有木聚糖酶活性的多肽及其编码多核苷酸
WO2013028701A1 (en) 2011-08-22 2013-02-28 Codexis, Inc. Gh61 glycoside hydrolase protein variants and cofactors that enhance gh61 activity
CN103890169A (zh) 2011-08-24 2014-06-25 诺维信股份有限公司 烟曲霉纤维素分解酶组合物及其用途
WO2013028928A1 (en) 2011-08-24 2013-02-28 Novozymes, Inc. Cellulolytic enzyme compositions and uses thereof
WO2013039776A1 (en) 2011-09-13 2013-03-21 Novozymes North America, Inc. Methods of hydrolyzing and fermenting cellulosic material
WO2013043910A1 (en) 2011-09-20 2013-03-28 Novozymes A/S Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
DK2748313T3 (en) 2011-09-23 2016-07-25 Novozymes As Methods for hydrolysis of acetylated cellulosic material
CN103930438A (zh) 2011-09-30 2014-07-16 诺维信股份有限公司 具有β-葡糖苷酶活性的嵌合多肽和对其进行编码的多核苷酸
US10308921B2 (en) 2011-10-31 2019-06-04 Novozymes, Inc. Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
EP2780449B1 (en) 2011-11-18 2018-04-11 Novozymes, Inc. Polypeptides having beta-glucosidase activity, beta-xylosidase activity, or beta-glucosidase and beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same
BR112014012165A2 (pt) 2011-11-21 2020-06-23 Novozymes, Inc. Variante de um polipeptídeo gh61, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira recombinante, método para produção de uma variante de um polipeptídeo gh61, processos para degradação ou conversão de um material celulósico, para produção de um produto de fermentação, e para fermentação de um material celulósico, composição enzimática, formulação de caldo completo, ou composição de cultura celular, composição detergente, e método de limpeza ou lavagem de uma superfície dura ou roupa.
DK2782998T3 (en) 2011-11-22 2018-04-16 Novozymes Inc POLYPEPTIDES WITH BETA-XYLOSIDASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM
DK2785732T3 (en) 2011-12-01 2017-06-19 Novozymes Inc POLYPEPTIDES WITH BETA-XYLOSIDASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM
EP2791330B1 (en) 2011-12-16 2017-07-26 Novozymes, Inc. Polypeptides having laccase activity and polynucleotides encoding same
BR112014014697A2 (pt) 2011-12-19 2020-10-27 Novozymes, Inc. polipeptídeo isolado, composição, polinucleotídeo isolado, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão, célula hospedeira recombinante, métodos para produzir um polipeptídeo e uma proteína, para gerar oxigênio molecular, e para remover peróxido de hidrogênio do tecido, processos para degradar ou converter um material celulósico, e para produzir um produto de fermentação, e, formulação de caldo integral ou composição de cultura de células
CA2878019A1 (en) 2011-12-20 2013-06-27 Novozymes, Inc. Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same
WO2013096652A1 (en) 2011-12-21 2013-06-27 Novozymes, Inc. Methods for determining the degradation of a biomass material
CN104203005A (zh) 2012-01-23 2014-12-10 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 二萜的生产
EP2626423A1 (en) * 2012-02-07 2013-08-14 Clariant Produkte (Deutschland) GmbH Pentose-fermenting microorganism
CA2862703A1 (en) 2012-03-26 2013-10-03 Novozymes North America, Inc. Methods of preconditioning cellulosic material
EP2859110B1 (en) 2012-03-30 2022-10-26 Novozymes North America, Inc. Processes of producing fermentation products
KR20150001830A (ko) 2012-04-18 2015-01-06 솔라짐, 인코포레이티드 맞춤 오일
US9719114B2 (en) 2012-04-18 2017-08-01 Terravia Holdings, Inc. Tailored oils
NL2008682C2 (en) 2012-04-23 2013-10-31 Stichting Energie Wet biomass treatment.
CN104245929A (zh) 2012-04-23 2014-12-24 诺维信公司 具有α-葡糖醛酸糖苷酶活性的多肽以及编码其的多核苷酸
DK2841570T3 (en) 2012-04-23 2018-03-12 Novozymes As POLYPEPTIDES WITH GLUCURONYL STERASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES CODING THEM
WO2013163590A2 (en) 2012-04-27 2013-10-31 Novozymes, Inc. Gh61 polypeptide variants and polynucleotides encoding same
EP2877576B1 (en) 2012-07-24 2019-06-05 BP Corporation North America Inc. Xylose isomerases and their uses
WO2014035458A1 (en) 2012-08-29 2014-03-06 Mascoma Corporation Expression of enzymes in yeast for lignocellulose derived oligomer cbp
US8748152B1 (en) 2012-09-14 2014-06-10 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Prevotella ruminicola xylose isomerase and co-expression with xylulokinase in yeast for xylose fermentation
EP2898068A2 (en) 2012-09-19 2015-07-29 Novozymes, Inc. Methods for enhancing the degradation or conversion of cellulosic material
DK2903412T3 (da) 2012-10-08 2019-12-16 Novozymes As Polypeptider med cellulolyseforbedrende aktivitet og polynukleotider, som koder for dem
AR093025A1 (es) 2012-10-16 2015-05-13 Dsm Ip Assets Bv Celulas con conversion mejorada de pentosas
US20150275194A1 (en) 2012-10-24 2015-10-01 Novozymes A/S Polypeptides Having Cellulolytic Enhancing Activity And Polynucleotides Encoding Same
US20150252319A1 (en) 2012-11-07 2015-09-10 Dsm Ip Assets B.V. pH CONTROLLED YEAST PROPAGATION
US9765373B2 (en) 2012-12-14 2017-09-19 Novozymes A/S Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same
WO2014099798A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Novozymes A/S Polypeptides having cellulolytic enhancinc activity and polynucleotides encoding same
US20140178954A1 (en) 2012-12-20 2014-06-26 E I Du Pont De Nemours And Company Expression of xylose isomerase activity in yeast
WO2014126471A1 (en) 2013-02-15 2014-08-21 Stichting Energieonderzoek Centrum Nederland Process for the treatment of lignocellulosic biomass
NL2011164C2 (en) 2013-07-15 2015-01-21 Stichting Energie Improved process for the organosolv treatment of lignocellulosic biomass.
CN105074001A (zh) 2013-02-21 2015-11-18 诺维信公司 糖化和发酵纤维素材料的方法
NZ743055A (en) * 2013-03-08 2020-03-27 Xyleco Inc Equipment protecting enclosures
EP2964760B1 (en) 2013-03-08 2021-05-12 Novozymes A/S Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same
US8669076B1 (en) 2013-03-11 2014-03-11 E I Du Pont De Nemours And Company Cow rumen xylose isomerases active in yeast cells
US9187743B2 (en) 2013-03-11 2015-11-17 E I Du Pont De Nemours And Company Bacterial xylose isomerases active in yeast cells
US9340767B2 (en) 2013-03-13 2016-05-17 Poet Research, Inc. Propagating an organism and related methods and compositions
US9034631B2 (en) 2013-03-14 2015-05-19 Poet Research, Inc. Systems and methods for yeast propagation
JP6027559B2 (ja) 2013-03-28 2016-11-16 株式会社豊田中央研究所 キシロースイソメラーゼ活性を有するタンパク質及びその利用
CA2909503A1 (en) 2013-04-15 2014-10-23 Katholieke Universiteit Leuven, K.U.Leuven R&D Yeast alleles involved in maximal alcohol accumulation capacity and tolerance to high alcohol levels
CA2910239A1 (en) 2013-05-10 2014-11-13 Novozymes A/S Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same
DK3004366T3 (da) 2013-05-31 2019-05-20 Dsm Ip Assets Bv Mikroorganismer til diterpenproduktion
JP5845210B2 (ja) 2013-06-13 2016-01-20 トヨタ自動車株式会社 組換え酵母、及びそれを用いたエタノールの製造方法
CA2914900A1 (en) 2013-07-15 2015-01-22 Dsm Ip Assets B.V. Recombinant microorganism and process for the production of steviol glycosides
WO2015007639A1 (en) 2013-07-17 2015-01-22 Novozymes A/S Pullulanase chimeras and polynucleotides encoding same
CN108064226A (zh) 2013-07-31 2018-05-22 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 甜菊糖苷的回收
WO2015035029A1 (en) 2013-09-04 2015-03-12 Novozymes A/S Processes for increasing enzymatic hydrolysis of cellulosic material
US10053715B2 (en) 2013-10-04 2018-08-21 Corbion Biotech, Inc. Tailored oils
JP6210487B2 (ja) * 2013-10-11 2017-10-11 国立大学法人山口大学 キシロース資化能を有するエタノール生産酵母を生産する方法
US9938552B2 (en) 2013-11-01 2018-04-10 Novozymes A/S Methods of saccharifying and fermenting a cellulosic material
WO2015081139A1 (en) 2013-11-26 2015-06-04 Novozymes A/S Enzyme compositions and uses thereof
KR20150065213A (ko) 2013-12-04 2015-06-15 삼성전자주식회사 감소된 에탄올 생산능을 갖는 효모 세포 및 이의 용도
EP3511418B1 (en) 2014-01-07 2020-07-15 Novozymes A/S Corollospora maritima mannanase and its use
HUE056192T2 (hu) 2014-01-22 2022-01-28 Novozymes As Pullulanázvariánsok és azokat kódoló polinukleotidok
CN106232826A (zh) 2014-04-17 2016-12-14 国际壳牌研究有限公司 生产发酵产品的方法
US20180030482A1 (en) 2014-04-18 2018-02-01 Moralco B.V. Use of acetaldehyde in the fermentative production of ethanol
JP6443944B2 (ja) 2014-04-28 2018-12-26 国立大学法人山口大学 キシロース資化能及びエタノール生産能を有する酵母
CN115975994A (zh) 2014-06-06 2023-04-18 诺维信公司 酶组合物及其用途
US10190086B2 (en) 2014-06-24 2019-01-29 Poet Research, Inc. Methods of pitching yeast for fermentation, and related methods of fermentation and systems
ES2764273T3 (es) 2014-07-10 2020-06-02 Corbion Biotech Inc Nuevos genes de cetoacil ACP sintasa y uso de los mismos
US10202622B2 (en) 2014-07-22 2019-02-12 Iogen Corporation Process for producing fuel using two fermentations
US10619173B2 (en) 2014-07-22 2020-04-14 Iogen Corporation Process for using biogenic carbon dioxide derived from non-fossil organic material
EP3191597A1 (en) 2014-08-21 2017-07-19 Novozymes A/S Process for saccharifying cellulosic material under oxygen addition
BR112017004251A2 (pt) 2014-09-05 2017-12-12 Novozymes As variantes de módulos de ligação a carboidrato e polinucleotídeos que os codificam
CN107109346B (zh) 2014-09-23 2021-07-20 诺维信公司 用于生产乙醇的方法和发酵生物
EP3209788B1 (en) 2014-10-23 2019-06-05 Novozymes A/S Glucoamylase variants and polynucleotides encoding same
BR102014027233A2 (pt) * 2014-10-30 2016-05-24 Biocelere Agroindustrial Ltda cassete de expressão, micro-organismo geneticamente modificado para expressão de xilose isomerase, processo para produção de biocombustíveis e/ou bioquímicos e biocombustível e/ou bioquímicos produzidos
JP6303984B2 (ja) 2014-10-31 2018-04-04 トヨタ自動車株式会社 連続培養によるエタノールの製造方法及び連続培養装置
WO2016087327A1 (en) 2014-12-01 2016-06-09 Novozymes A/S Polypeptides having pullulanase activity comprising the x25, x45 and cbm41 domains
US11434509B2 (en) 2014-12-08 2022-09-06 Iogen Corporation Process for using biogenic carbon dioxide derived from non-fossil organic material
WO2016120298A1 (en) 2015-01-28 2016-08-04 Dsm Ip Assets B.V. Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars
DK3640336T3 (da) 2015-01-28 2022-06-27 Dsm Ip Assets Bv Fremgangsmåde til enzymatisk hydrolyse af lignocellulosemateriale og fermentering af sukre
CA2973302C (en) 2015-01-28 2022-10-25 Dsm Ip Assets B.V. Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars
NL1041192B1 (en) 2015-02-16 2017-01-05 Stichting Energieonderzoek Centrum Nederland Separation of lignin from organosolv liquors.
WO2016138167A2 (en) 2015-02-24 2016-09-01 Novozymes A/S Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same
BR112017018461A2 (pt) 2015-03-12 2018-04-17 Novozymes As processos para hidrólise multiestágio, para produção de um produto de fermentação, e, para aumento de rendimento de açúcar de hidrólise.
BR112017019331A2 (pt) 2015-03-12 2018-06-05 Beta Renewables Spa processos para sacarificação de múltiplos estágios de um material lignocelulósico e para melhorar um rendimento de glicose ou xilose de sacarificação de um material lignocelulósico em um reator de tanque continuamente agitado
TN2017000318A1 (en) 2015-03-12 2019-01-16 Beta Renewable Spa Multi-stage enzymatic hydrolysis of lignocellulosic biomass
WO2016145528A1 (en) 2015-03-16 2016-09-22 Iogen Corporation Lignocellulosic conversion process comprising sulfur dioxide and/or sulfurous acid pretreatment
BR112017017895A2 (pt) 2015-03-16 2018-04-10 Iogen Corp processo para produzir um produto de fermentação e para produzir um álcool a partir de uma matéria prima lignocelulósica.
CA2979931A1 (en) 2015-03-16 2016-09-22 Dsm Ip Assets B.V. Udp-glycosyltransferases
WO2016145531A1 (en) 2015-03-16 2016-09-22 Iogen Corporation Sulfur dioxide and/or sulfurous acid pretreatment with sulfur dioxide recovery
EP3274448B1 (en) 2015-03-23 2021-08-11 DSM IP Assets B.V. Udp-glycosyltransferases from solanum lycopersicum
CA2980090A1 (en) 2015-04-03 2016-10-06 Dsm Ip Assets B.V. Steviol glycosides
WO2016169892A1 (en) 2015-04-20 2016-10-27 Dsm Ip Assets B.V. Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars
WO2016169893A1 (en) 2015-04-20 2016-10-27 Dsm Ip Assets B.V. Whole fermentation broth
CN107532135A (zh) 2015-04-21 2018-01-02 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 萜类化合物的微生物生产
CN116676293A (zh) 2015-05-27 2023-09-01 国投生物科技投资有限公司 具有纤维二糖水解酶活性的多肽以及对其进行编码的多核苷酸
WO2016201184A1 (en) * 2015-06-11 2016-12-15 Ebio, Llc Efficient production of biofuels from cells carrying a metabolic-bypass gene cassette
WO2016205127A1 (en) 2015-06-18 2016-12-22 Novozymes A/S Polypeptides having trehalase activity and the use thereof in process of producing fermentation products
WO2016207144A1 (en) 2015-06-22 2016-12-29 Dsm Ip Assets B.V. Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars
MY192153A (en) 2015-07-10 2022-08-02 Dsm Ip Assets Bv Steviol glycoside composition
MX2018000502A (es) * 2015-07-13 2018-09-07 Mara Renewables Corp Mejora del metabolismo de microalga de xilosa.
WO2017019491A1 (en) 2015-07-24 2017-02-02 Novozymes Inc. Polypeptides having beta-xylosidase activity and polynucleotides encoding same
BR112018001041A2 (pt) 2015-07-24 2018-09-11 Novozymes Inc polipeptídeo isolado, composição, formulação de caldo inteiro ou composição de cultura de células, célula hospedeira recombinante, métodos para produção de um polipeptídeo e para produção de uma proteína, planta, parte de planta ou célula de planta transgênica, e, processos para degradação de um material celulósico ou hemicelulósico, para produção de um produto de fermentação e para fermentação de um material celulósico ou hemicelulósico.
BR112018002284A2 (pt) 2015-08-05 2018-12-11 Cargill Inc método de fermentação para produzir um bioproduto, levedura crabtree negativa geneticamente engenheirada e método para reduzir a produção de glicerol por uma levedura engenheirada
CA2993744A1 (en) 2015-08-13 2017-02-16 Dsm Ip Assets B.V. Steviol glycoside transport
CN108350044B (zh) 2015-09-22 2022-05-24 诺维信公司 具有纤维二糖水解酶活性的多肽以及对其进行编码的多核苷酸
US10513715B2 (en) 2015-09-24 2019-12-24 Iogen Corporation Wet oxidation of biomass
BR112018006724A2 (pt) 2015-10-05 2018-10-09 Dsm Ip Assets Bv ácido caurenoico hidroxilases
WO2017070219A1 (en) 2015-10-20 2017-04-27 Novozymes A/S Lytic polysaccharide monooxygenase (lpmo) variants and polynucleotides encoding same
CA3002682C (en) 2015-11-25 2022-06-21 Iogen Energy Corporation System and method for cooling pretreated biomass
US10662455B2 (en) 2015-12-18 2020-05-26 Iogen Corporation Sulfur dioxide and/or sulfurous acid pretreatment
BR112018016366A2 (pt) 2016-02-10 2018-12-18 Iogen Corp processos para hidrolisar biomassa lignocelulósica e para pré-tratamento de biomassa lignocelulósica.
CN109415712A (zh) 2016-03-02 2019-03-01 诺维信公司 纤维二糖水解酶变体和编码它们的多核苷酸
US11965189B2 (en) 2016-03-24 2024-04-23 Novozymes A/S Cellobiohydrolase variants and polynucleotides encoding same
CN109415716A (zh) 2016-04-08 2019-03-01 纳幕尔杜邦公司 用于酵母的阿拉伯糖异构酶
WO2017205535A1 (en) 2016-05-27 2017-11-30 Novozymes, Inc. Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
EP3469090A1 (en) 2016-06-09 2019-04-17 DSM IP Assets B.V. Seed train for large scale enzyme production
JP6447583B2 (ja) 2016-06-24 2019-01-09 トヨタ自動車株式会社 組換え酵母、及びそれを用いたエタノールの製造方法
US11891645B2 (en) 2016-07-21 2024-02-06 Novozymes A/S Serine protease variants and polynucleotides encoding same
CN109642225A (zh) 2016-07-21 2019-04-16 诺维信公司 丝氨酸蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸
WO2018019948A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Dsm Ip Assets B.V. Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and uses thereof
WO2018026868A1 (en) 2016-08-01 2018-02-08 Novozymes, Inc. Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
CN109563117A (zh) 2016-08-09 2019-04-02 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 甜菊醇糖苷的结晶
EP3497109A1 (en) 2016-08-09 2019-06-19 DSM IP Assets B.V. Crystallization of steviol glycosides
WO2018073107A1 (en) 2016-10-19 2018-04-26 Dsm Ip Assets B.V. Eukaryotic cell comprising xylose isomerase
AU2017350309A1 (en) 2016-10-27 2019-05-02 Dsm Ip Assets B.V. Geranylgeranyl pyrophosphate synthases
WO2018085370A1 (en) 2016-11-02 2018-05-11 Novozymes A/S Processes for reducing production of primeverose during enzymatic saccharification of lignocellulosic material
CA3040380A1 (en) 2016-11-04 2018-05-11 Inbicon A/S Method for preparing fermentable sugars from lignocellulosic biomass
BR112019010355B1 (pt) 2016-11-24 2024-03-05 Dsm Ip Assets B.V. Composição de enzimas
CA3043435A1 (en) 2016-11-24 2018-05-31 Dsm Ip Assets B.V. Enzyme compositions with improved hydrolysis performance
CN110177873A (zh) 2016-11-29 2019-08-27 诺维信公司 α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸
EP3551759A1 (en) 2016-12-06 2019-10-16 Novozymes A/S Improved processes for production of ethanol from xylose-containing cellulosic substrates using engineered yeast strains
WO2018104238A1 (en) 2016-12-08 2018-06-14 Dsm Ip Assets B.V. Kaurenoic acid hydroxylases
BR112019012949A2 (pt) 2016-12-21 2019-11-26 Globalyeast N V isomerases de xilose que conferem capacidade de fermentação eficiente de xilose em levedura
WO2018114995A1 (en) 2016-12-22 2018-06-28 Dsm Ip Assets B.V. Fermentation process for producing steviol glycosides
WO2018185071A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Dsm Ip Assets B.V. Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars
US11091753B2 (en) 2017-05-31 2021-08-17 Novozymes A/S Xylose fermenting yeast strains and processes thereof for ethanol production
AU2018275794A1 (en) 2017-06-02 2019-12-05 Novozymes A/S Improved yeast for ethanol production
EP4155400A1 (en) 2017-06-27 2023-03-29 DSM IP Assets B.V. Udp-glycosyltransferases
EP4015524A1 (en) 2017-06-28 2022-06-22 Novozymes A/S Polypeptides having trehalase activity and polynucleotides encoding same
CN111094562A (zh) 2017-08-08 2020-05-01 诺维信公司 具有海藻糖酶活性的多肽及其在产生发酵产物的方法中的用途
CN111148841A (zh) 2017-08-30 2020-05-12 诺维信公司 M35家族的内切蛋白酶和s53家族的外切蛋白酶在淀粉发酵中的组合使用
BR112020005439A2 (pt) 2017-10-09 2020-09-24 Dsm Ip Assets B.V. processo para hidrólise enzimática de material lignocelulósico e fermentação de açúcares
EP3704259A1 (en) 2017-10-30 2020-09-09 DSM IP Assets B.V. Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars
WO2019086370A1 (en) 2017-10-30 2019-05-09 Dsm Ip Assets B.V. Process for enzymatic hydrolysis of lignocellulosic material and fermentation of sugars
WO2019090413A1 (en) 2017-11-09 2019-05-16 Iogen Corporation Low temperature sulfur dioxide pretreatment
WO2019090414A1 (en) 2017-11-09 2019-05-16 Iogen Corporation Low temperature pretreatment with sulfur dioxide
BR112020007140A2 (pt) 2017-11-14 2020-09-29 Dsm Ip Assets B.V. polipeptídeos com especificidade de transporte de arabinose melhorada
US11371012B2 (en) 2017-11-16 2022-06-28 Poet Research, Inc. Methods for propagating microorganisms for fermentation and related methods and systems
BR112020011904A2 (pt) 2017-12-14 2020-11-24 Poet Research, Inc. métodos & sistemas para propagar micro-organismos em composições de vinhaça
CN113286871A (zh) 2018-01-29 2021-08-20 诺维信公司 用于乙醇生产的氮利用提高的微生物
US11198847B2 (en) 2018-02-01 2021-12-14 Dsm Ip Assets B.V. Yeast cell capable of simultaneously fermenting hexose and pentose sugars
KR20200135469A (ko) 2018-03-27 2020-12-02 바스프 에스이 자일로스 대사 효모
WO2019185681A1 (en) 2018-03-28 2019-10-03 Dsm Ip Assets B.V. Enzyme composition
EP3775189A1 (en) 2018-03-28 2021-02-17 DSM IP Assets B.V. Enzyme composition
WO2019191828A1 (en) 2018-04-06 2019-10-10 Iogen Corporation Pretreatment with lignosulfonic acid
WO2019211230A1 (en) 2018-04-30 2019-11-07 Dsm Ip Assets B.V. Steviol glycoside transport
WO2019219804A1 (en) 2018-05-17 2019-11-21 Dsm Ip Assets B.V. Process for producing a polypeptide
LT3802843T (lt) 2018-05-30 2023-04-25 Versalis S.P.A. Cukrų gamybos iš angliavandenių medžiagos būdas
CN112601818A (zh) 2018-07-25 2021-04-02 诺维信公司 用于生产乙醇的表达酶的酵母
WO2020058249A1 (en) 2018-09-18 2020-03-26 Dsm Ip Assets B.V. Process for enzymatic hydrolysis of carbohydrate material and fermentation of sugars
WO2020058253A1 (en) 2018-09-18 2020-03-26 Dsm Ip Assets B.V. Process for enzymatic hydrolysis of carbohydrate material and fermentation of sugars
WO2020058248A1 (en) 2018-09-18 2020-03-26 Dsm Ip Assets B.V. Process for enzymatic hydrolysis of carbohydrate material and fermentation of sugars
JP7078900B2 (ja) 2018-10-05 2022-06-01 トヨタ自動車株式会社 形質転換酵母及びこれを用いたエタノールの製造方法
US11807889B2 (en) 2018-10-08 2023-11-07 Novozymes A/S Yeast expressing a heterologous phospholipase for ethanol production
BR112021011384A2 (pt) 2018-12-12 2022-05-17 Novozymes As Polipeptídeo isolado, composição de enzimas, formulação de caldo inteiro ou composição de cultura de células, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira recombinante, método de produção de um polipeptídeo, planta, parte da planta ou célula da planta transgênica, e, processos para degradação de um material celulósico ou hemicelulósico, para produção de um produto de fermentação e de fermentação de um material celulósico ou hemicelulósico
EP3938525A1 (en) 2019-03-12 2022-01-19 DSM IP Assets B.V. Process for producing a fermentation broth
WO2021021458A1 (en) 2019-07-26 2021-02-04 Novozymes A/S Microorganisms with improved nitrogen transport for ethanol production
BR112021026477A2 (pt) 2019-08-06 2022-02-08 Novozymes As Célula hospedeira recombinante, métodos de produção de um produto de fermentação a partir de um material contendo amido ou contendo celulose, de produção do polipeptídeo maduro, de produção de um derivado de uma célula hospedeira recombinante e de produção de etanol, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão, composição, e, uso de uma célula hospedeira recombinante
US20220340943A1 (en) 2019-09-10 2022-10-27 Dsm Ip Assets B.V. Enzyme composition
AU2020402990A1 (en) 2019-12-10 2022-06-09 Novozymes A/S Microorganism for improved pentose fermentation
MX2023002490A (es) 2020-09-04 2023-03-09 Novozymes As Organismo fermentador mejorado para la produccion de etanol.
WO2022084482A1 (en) 2020-10-22 2022-04-28 Dsm Ip Assets B.V. Microorganisms for diterpene production
US20240182936A1 (en) 2021-04-06 2024-06-06 Dsm Ip Assets B.V. Enzyme composition
CA3213845A1 (en) 2021-04-06 2022-10-13 Dsm Ip Assets B.V. Enzyme composition
BR112023020357A2 (pt) 2021-04-06 2023-11-21 Dsm Ip Assets Bv Composição de enzima
WO2022214460A1 (en) 2021-04-08 2022-10-13 Dsm Ip Assets B.V. Process for the preparation of a sugar product and a fermentation product
WO2022261003A1 (en) 2021-06-07 2022-12-15 Novozymes A/S Engineered microorganism for improved ethanol fermentation

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5643758A (en) * 1987-03-10 1997-07-01 New England Biolabs, Inc. Production and purification of a protein fused to a binding protein
US5190877A (en) * 1987-09-03 1993-03-02 Gist-Brocades N.V. Saccharomyces strains for maltose fermentation
ATE238425T1 (de) 1993-07-23 2003-05-15 Dsm Nv Selektionmarker-genfreie rekombinante stämme: verfahren zur ihrer herstellung und die verwendung dieser stämme
GB9502413D0 (en) * 1995-02-08 1995-03-29 Primalco Ltd Xylose isomerase
US5935837A (en) * 1997-07-28 1999-08-10 Novo Nordisk A/S DNA constructs and methods of producing xylose isomerase
SE9901298D0 (sv) 1999-04-09 1999-04-09 Forskarpatent I Syd Ab Xylose isomerase with improved kinetic properties
BR0306740A (pt) * 2002-01-23 2004-12-28 Royal Nedalco B V Célula hospedeira transformada com um construto de ácido nucléico, molécula de ácido nucleico isolada, e, processos para a produção de etanol, e de um produto de fermentação
CN1922198B (zh) 2003-05-02 2012-07-11 卡吉尔公司 基因修饰酵母物种和使用基因修饰酵母的发酵方法
CN101914462B (zh) 2004-07-16 2013-04-24 Dsm知识产权资产有限公司 发酵木糖的真核细胞的代谢工程
AU2009221104B2 (en) 2008-03-07 2014-07-31 Dsm Ip Assets B.V. A pentose sugar fermenting cell
CN102307987B (zh) 2008-12-24 2016-11-16 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 木糖异构酶基因及其在戊糖发酵中的用途
CN102174549B (zh) 2011-02-22 2012-10-10 山东大学 一种编码木糖异构酶的核酸分子及其编码的木糖异构酶
CN103131720A (zh) 2011-11-23 2013-06-05 中国农业科学院作物科学研究所 一种真菌木糖异构酶基因及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20120064607A1 (en) 2012-03-15
JP6046941B2 (ja) 2016-12-21
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DE60325457D1 (de) 2009-02-05
US8367396B2 (en) 2013-02-05
WO2003062430A1 (en) 2003-07-31
US7622284B2 (en) 2009-11-24
JP2015070856A (ja) 2015-04-16
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DK1468093T3 (da) 2009-02-16
JP4334352B2 (ja) 2009-09-30
ES2319757T3 (es) 2009-05-12
JP2012231794A (ja) 2012-11-29
US20130084617A1 (en) 2013-04-04
SI1468093T1 (sl) 2009-04-30
SI1468093T2 (en) 2018-04-30
EP1468093B1 (en) 2008-12-24
CN1703514A (zh) 2005-11-30
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JP5113800B2 (ja) 2013-01-09
US20080014620A1 (en) 2008-01-17
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ES2319757T5 (es) 2018-05-22
CA2474033A1 (en) 2003-07-31
CY1108905T1 (el) 2013-09-04
US8058040B2 (en) 2011-11-15
BR0306740A (pt) 2004-12-28
US20100035306A1 (en) 2010-02-11
ATE418616T2 (de) 2009-01-15
US20150031076A1 (en) 2015-01-29
JP2005514951A (ja) 2005-05-26
US9023629B2 (en) 2015-05-05
DK1468093T4 (en) 2018-04-09

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