PT1423105E

PT1423105E - Combinações de dmxaa e outros agentes anticancerosos

Info

Publication number: PT1423105E
Application number: PT02758562T
Authority: PT
Inventors: William Robert Wilson; Bronwyn Gae Siim
Original assignee: Cancer Rec Tech Ltd
Priority date: 2001-09-03
Filing date: 2002-09-03
Publication date: 2009-03-09
Also published as: MXPA04002004A; EP2236134A1; US7868040B2; DK1423105T3; EP1759694A3; ZA200401078B; EP1759694A2; WO2003020259A2; CN101607087A; NZ554093A; EA010857B1; CA2458459A1; US7868039B2; CN1994287A; US7863322B2; DE60230159D1; NZ531045A; EP1423105B1; NO20040591L; WO2003020259A3

Description

ΕΡ 1 423 105/ΡΤ

DESCRIÇÃO "Combinações de DMXAA e outros agentes anticancerosos" 0 presente invento refere-se a combinações sinérgicas do composto ácido 5,6-dimetilxantenona-4-acético (DMXAA) e um composto seleccionado entre gencitabina, 5-fluorouracilo, doxorrubicina e irinotecano. Quando o composto é seleccionado entre 5-fluorouracilo ou doxorrubicina, o DMXAA é utilizado ou está presente ou o DMXAA e o composto são utilizados ou estão presentes na ausência de um anticorpo. Mais particularmente, o invento refere-se a tais combinações para o tratamento de cancro e composições farmacêuticas contendo tais combinações. 0 ácido 5,6-dimetilxantenona-4-acético (DMXAA) é representado pela seguinte fórmula:

Recentemente completaram-se ensaios clínicos de fase I de DMXAA com MRI (imagem por ressonância magnética) dinâmica que mostram que este induz uma redução significativa do fluxo sanguíneo para o tumor a doses bem toleradas. DMXAA é assim um dos primeiros agentes antivasculares para os quais foi documentada actividade (inibição irreversível de fluxo sanguíneo para o tumor) em tumores humanos. Estas revelações estão de acordo com estudos pré-clínicos utilizando tumores ou xenoenxertos de tumores humanos que evidenciaram que a sua actividade antivascular produzia inibição prolongada de fluxo sanguíneo para o tumor levando a regiões extensas de necrose hemorrágica. Contudo, em tais estudos os tumores tornam a crescer rapidamente a partir das células sobreviventes na periferia bem perfundida. A inibição transitória do crescimento de tumor observado na maioria dos modelos pré-clínicos é consistente com a ausência de regressão de tumor observada em estudos clínicos de fase I e sugere que é 2 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ improvável que ο DMXAA tenha utilidade clinica como agente único. A gencitabina (Gemzar®) (HC1) é um antimetabolito análogo a nucleótidos que apresenta actividade antitumoral.

Gencitabina HC1 é monocloridrato de 2'-desoxi-2', 2'- difluorocitidina (isómero b). 0 5-fluorouracilo (Adrucil®) é um antimetabolito antineoplásico injectável. 0 seu nome químico é 5-fluoro-2,4(1H,3H)-pirimidinadiona. A doxorrubicina HC1 (Adriamycin®) é um antibiótico de antraciclina citotóxico isolado de Streptomyces peucetius var. caesius. Tem o nome químico cloridrato de (8S,10S)—10—[(3— amino-2,3,6,-tridesoxi-a-L-lixo-hexopiranosil)oxi]-8-glicolil-7,8,9,10-tetra-hidro-6,8,ll-tri-hidroxi-l-metoxi-5,12-naftacenodiona. O irinotecano (Campto®, Camptosar®) é um inibidor de topoisomerase I. É um derivado semi-sintético de camptotecina. O nome químico é monocloridrato de (S)-4,ll-dietil-3,4,12,14-tetra-hidro-4-hidroxi-3,14-dioxo-lfí-pirano [3 ', 4 ' : 6, 7] indolizinol [1,2-b]quinolin-9-il-[1,4'-bipiperidino]-1'-carboxilato tri-hidratado.

Foi agora surpreendentemente verificado que por combinação, quer concomitante quer sequencial, de DMXAA com um composto seleccionado entre gencitabina e irinotecano ou, na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, obtém-se potenciação da actividade antitumoral.

Assim, num primeiro aspecto, o presente invento proporciona composições para o tratamento do cancro, que inclui administração a um mamífero, incluindo um ser humano, com necessidade de tal tratamento, de uma quantidade eficaz de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, e administração concomitante ou sequencial de uma quantidade eficaz de um composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano; ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina. 3 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ

Noutro aspecto, ο presente invento proporciona a utilização de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis para o fabrico de um medicamento para administração concomitante ou sequencial com um composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano; ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, para o tratamento de cancro.

Num aspecto adicional, o presente invento proporciona a utilização de um composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, para o fabrico de um medicamento para administração concomitante ou sequencial de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis para o tratamento de cancro.

Ainda num aspecto adicional, o presente invento proporciona uma combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e um composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina.

De acordo com ainda outro aspecto do presente invento, proporciona-se um kit incluindo uma associação para administração independente de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e um composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina.

Noutra concretização do presente invento o DMXAA utiliza-se ou está presente ou o DMXAA e o composto seleccionado entre gencitabina e irinotecano, utilizam-se ou estão presentes na ausência de um anticorpo.

Descrição sucinta dos esquemas

Figura 1. Ilustra atraso de crescimento de tumores MDAH-Mca-4 após tratamento de ratinhos com fármaco quimioterapêutico sozinho (i.p.) (0) ou co-administração de fármaco com DMXAA (80 pmol/kg) (·). Os valores são médias ± dpm para grupos de 6-8 ratinhos ignorando mortes (d) ou curas (c) , cujos números se apresentam entre parênteses. * e ** 4 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ indicam ρ<0,05 e <0,01 respectivamente para significância do atraso de crescimento relativamente ao controlo correspondente (±DMXAA).

Figura 2 de referência. Painel esguerdo: concentrações plasmáticas de platina livre após administração de carboplatina sozinha (316 pmol/kg) (·) ou co-administrada com DMXAA (80 ymol/kg) (O). Painel direito: concentrações tumorais de platina total após administração de carboplatina sozinha (316 pmol/kg) (·) ou co-administrada com DMXAA (80 pmol/kg) (O). O DMXAA ou seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e o composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, podem ser administrados concomitante ou seguencialmente. De preferência, o DMXAA ou seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e o composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, são administrados concomitantemente.

De preferência o DMXAA ou seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e o composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, estão presentes numa razão potenciadora. A expressão "razão potenciadora" é aqui utilizada para indicar que o DMXAA - ou seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e o composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, estão presentes numa razão tal que a actividade antitumoral da combinação é maior do que para DMXAA sozinho ou o composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, sozinhos ou da actividade aditiva que seria previsível para as combinações com base nas actividades das componentes individuais. Assim as componentes individuais actuam de forma sinérgica na combinação desde que estejam presentes numa razão potenciadora. 5 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ

Uma razão potenciadora, para DMXAA e antimetabolitos, por exemplo, que pode ser utilizada com sucesso para tratar cancro situa-se na gama de 1:100 até 1:2 de DMXAA: gencitabina ou 5-fluorouracilo. Adequadamente, a razão potenciadora situa-se na gama de 1:75 a 1:5. Uma razão potenciadora adicional situa-se na gama de 1:50 a 1:10. Uma razão potenciadora preferida situa-se na gama de 1:30 a 1:15, com maior preferência na gama de 1:25 a 1:20 de DMXAA:gencitabina ou 5-fluorouracilo.

Uma razão potenciadora, para DMXAA e doxorrubicina, que pode ser utilizada com sucesso para tratar cancro, situa-se na gama de 50:1 a 1:1 de DMXAA: doxorrubicina. Adequadamente, a razão potenciadora situa-se na gama de 25:1 a 1:1. Uma razão potenciadora adicional situa-se na gama de 16:1 a 2:1. Uma razão potenciadora preferida situa-se na gama de 8:1 a 2:1, com maior preferência na gama de 6:1 a 4:1 de DMXAA:doxorrubicina.

De preferência o sal farmaceuticamente aceitável de DMXAA é um sal de sódio.

Numa concretização o composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, é gencitabina.

Numa concretização o composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, é 5-fluorouracilo.

Numa concretização o composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, é doxorrubicina.

Numa concretização o composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, é irinotecano. A quantidade necessária de uma combinação de DMXAA ou seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e um composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, para ser eficaz como um agente anticanceroso variará com 6 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ certeza e em última instância ficará ao critério do médico assistente. Os factores a considerar incluem a via de administração e natureza da formulação, o peso corporal, idade e condição geral do mamífero e a natureza e gravidade da doença a tratar.

Uma dose eficaz adequada de DMXAA ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para administração, concomitante ou sequencial, com um composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, ao homem para tratamento de cancro situa-se, por exemplo, na gama de 500 a 4900 mg/m2. Por exemplo, de 600 a 4900 mg/m2, adequadamente de 600-3100 mg/m2, mais adequadamente de 1000-2500 mg/m2 e em particular de 1100-1500 mg/m2. Alternativamente, a quantidade de DMXAA ou um seu sal farmaceuticamente aceitável pode, por exemplo, ser desde 2500 a 4000 mg/m2, adequadamente de 1200 a 3500 mg/m2, mais adequadamente de 2000 a 3000 mg/mz, ainda mais adequadamente de 1200 a 2500 mg/m2, em particular de 2500 a 3500 mg/m2 e mais particularmente de 2250 a 2750 mg/m2. De preferência o DMXAA ou seu sal farmaceuticamente aceitável é administrado por via I.V. uma vez por semana ou de 3 em 3 semanas.

Uma dose eficaz adequada de gencitabina ou 5-fluorouracilo para administração, concomitante ou sequencial, com DMXAA ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, ao homem para tratamento de cancro situa-se, por exemplo, na gama de 400 a 2000 mg/m2. Por exemplo, de 500 a 1500 mg/m2, adequadamente de 600 a 1200 mg/m2, mais adequadamente de 600 a 1000 mg/m2, em particular de 800 a 1200 mg/m2, mais particularmente de 800 a 1000 mg/m2, de preferência de 750 a 980 mg/m2, com maior preferência de 750 a 965 mg/m2.

Uma dose eficaz adequada de gencitabina ou 5-fluorouracilo para administração, concomitante ou sequencial, com DMXAA ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, ao homem para tratamento de cancro situa-se, por exemplo, na gama de 2 a 20 mg/kg. Por exemplo, de 2 a 15 mg/kg, adequadamente de 2 a 8 mg/kg, mais adequadamente de 6 a 12 mg/kg, particularmente de 4 a 10 mg/kg e de preferência de 4 a 6 mg/kg. 7 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ

De preferência a gencitabina é administrada por via I.V. uma vez por semana e preferentemente o 5-fluorouracilo é administrado em dias alternados durante um período de cerca de 2 semanas.

Uma dose eficaz adequada de doxorrubicina para administração, concomitante ou sequencial, com DMXAA ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, ao homem para tratamento de cancro situa-se, por exemplo, na gama de 5 a 100 mg/m2. Por exemplo, de 10 a 8 0 mg/m2, adequadamente de 2 0 a 6 0 mg/m2, mais adequadamente de 40 a 75 mg/m2, em particular de 20 a 50 mg/m2, mais particularmente de 15 a 35 mg/m2 e de preferência de 40 a 60 mg/m2.

De preferência, a doxorrubicina é administrada por via I.V. de 3 em 3 semanas a de 4 em 4 semanas. O DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e o composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5- fluorouracilo e doxorrubicina, podem ser administrados sob qualquer forma adequada. Contudo, para utilização de acordo com o presente invento a combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e um composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, é de preferência apresentada como uma formulação farmacêutica.

As formulações farmacêuticas incluem os ingredientes activos (ou seja, a combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e um composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina), conjuntamente com um ou mais seus transportadores farmaceuticamente aceitáveis e opcionalmente outros ingredientes terapêuticos e/ou profilácticos. 0(s) transportador(es) devem ser aceitáveis no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes da fórmula e não devem ser prejudiciais para o seu recebedor.

Assim, o presente invento proporciona uma formulação farmacêutica incluindo uma combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e um composto 8 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, em associação com um ou mais seus transportadores farmaceuticamente aceitáveis. 0 presente invento proporciona adicionalmente um processo para a preparação de uma formulação farmacêutica processo este que inclui associar uma combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e um composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, com um ou mais seus transportadores farmaceuticamente aceitáveis.

As formulações farmacêuticas incluem as adequadas para administração oral, tópica (incluindo dérmica, bucal e sublingual), rectal e parentérica (incluindo subcutânea, intradérmica, intramuscular e intravenosa) assim como administração por tubo nasogástrico. A formulação pode, quando adequado, ser convenientemente apresentada em unidades de dosagem discretas e pode ser preparada por qualquer dos métodos bem conhecidos na arte farmacêutica. Todos os métodos incluem as etapas de pôr em associação os ingredientes activos com o(s) transportador(es) farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo transportadores liquidos ou transportadores sólidos finamente divididos ou ambos e seguidamente, caso necessário, enformar o produto na formulação pretendida.

De preferência, as formulações farmacêuticas são adaptadas para administração parentérica, com maior preferência administração intravenosa. Por exemplo os compostos podem ser administrados intravenosamente utilizando formulações para cada composto já conhecidas na arte.

Formulações farmacêuticas adequadas para administração oral em que o transportador é um sólido são mais preferentemente apresentadas como formulações de dose unitária tais como bolus, cápsulas ou comprimidos contendo cada uma quantidade predeterminada dos ingredientes activos. Pode fazer-se um comprimido por compressão ou moldagem opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Podem preparar-se comprimidos por compressão num máquina adequada dos compostos activos numa forma de fluido livre tal como um 9 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ pó ou grânulos misturados opcionalmente com um ligante, lubrificante, diluente inerte, agente lubrificante, agente tensioactivo ou agente dispersante. Pode fazer-se comprimidos moldados por moldagem de um diluente de líquido inerte. Os comprimidos podem ser opcionalmente revestidos e caso não sejam revestidos podem ser opcionalmente riscados. As cápsulas podem ser preparadas por enchimento com os ingredientes activos, quer sozinhos quer em mistura com um ou mais ingredientes acessórios, de invólucros de cápsulas seguido de selagem do modo habitual. As hóstias são análogos de cápsulas em que os ingredientes activos são fechados conjuntamente com um ou mais ingredientes acessórios num envelope de papel de arroz. A combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e um composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo e doxorrubicina, pode também ser formulada como grânulos dispersáveis, que podem por exemplo ser suspensos em água antes da administração ou espalhados na comida. Os grânulos podem ser empacotados por exemplo numa saqueta. As formulações adequadas para administração oral em que o transportador é um líquido podem ser apresentadas como uma solução ou uma suspensão num líquido aquoso ou num líquido não aquoso ou como uma emulsão líquida de óleo em água.

Formulações para administração oral incluem formas de dosagem com libertação controlada, por exemplo comprimidos em que os ingredientes activos são formulados numa matriz apropriada de libertação controlada ou são revestidos com um filme de libertação controlada adequado. Tais formulações podem ser particularmente convenientes para utilização profiláctica.

Os ingredientes activos podem também ser formulados como uma solução ou suspensão adequada para administração através de um tubo nasogástrico.

Formulações farmacêuticas adequadas para administração rectal em que o transportador é um sólido são mais preferentemente apresentadas como supositórios em dose unitária. Transportadores adequados incluem manteiga de cacau e outros materiais habitualmente utilizados na arte. Os supositórios podem ser convenientemente formados por mistura 10 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ da combinação activa com o(s) transportador(es) amaciados ou derretidos seguido de arrefecimento e formação em moldes.

As formulações farmacêuticas adequadas para administração parentérica incluem soluções ou suspensões estéreis da combinação activa em veículos aquosos ou oleaginosos. Podem adaptar-se preparações injectáveis para injecção de bolus ou infusão contínua. Tais preparações são convenientemente apresentadas em recipientes de dose unitária ou multi-doses que são selados após introdução da formulação até que seja necessária para utilização. Alternativamente, os ingredientes activos podem estar na forma de pós que são reconstituídos com um veículo adequado tal como água estéril isenta de pirogénios, antes de utilização.

As formulações farmacêuticas podem, por exemplo, estar na forma de formulações de lipossomas. A combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e o composto seleccionado entre (a) gencitabina e irinotecano, ou (b) na ausência de um anticorpo, 5-flurouracilo e doxorrubicina pode também ser formulada como uma preparação em depósito de libertação prolongada, que pode ser administrada por injecção intramuscular ou por implante, por exemplo subcutâneo ou intramuscular. As preparações de depósito podem incluir, por exemplo, materiais poliméricos ou hidrófobos adequados ou resinas de permuta iónica. Tais formulações de libertação prolongada são particularmente convenientes para utilizações profiláticas.

Entenda-se que além dos ingredientes transportadores anteriormente mencionados, as formulações farmacêuticas para as diferentes vias de administração anteriormente descritas podem incluir, tal como adequado, um ou mais ingredientes transportadores adicionais tais como diluentes, tampões, aromatizantes, ligantes, agentes tensioactivos, espessantes, lubrificantes, conservantes (incluindo antioxidantes) e semelhantes e substâncias incluídas com o objectivo de tornar a formulação isotónica com o sangue do recebedor pretendido. 11 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ

Pode preparar-se DMXAA de acordo com os métodos descritos em Journal of Medicinal Chemistry 34(1): 217-22, Janeiro de 1991.

Gencitabina, 5-fluorouracilo, doxorrubicina e irinotecano, são compostos bem conhecidos e podem ser preparados por métodos conhecidos dos peritos na arte.

Os cancros que podem ser tratados de acordo com o presente invento incluem, entre outros, tumores sólidos, por exemplo, cancros de células não pequenas pulmonares, cancro de células pulmonares pequenas, cancro de mama, cancro do pâncreas, cancro dos ovários, cancro colorrectal, cancro da próstata e cancro gástrico. 0 presente invento será agora ilustrado através dos seguintes exemplos.

EXEMPLOS

Exemplo 1:

Materiais e métodos

Compostos: Preparou-se uma solução-mãe de DMXAA, sintetizada no Auckland Câncer Society Research Centre, em solução tampão salina de fosfato, protegida da luz e armazenada congelada. Dissolveu-se cisplatina (Sigma Chemical Co., St Louis, MO) em solução salina a 0,9%. Diluiram-se soluções-mãe de carboplatina e 5-fluorouracilo (Bristol Myers Squibb, Sermonita, Itália) e ciclofosfamida (Mead Johnson Oncology Products, Princeton, NJ) com água estéril. Diluíram-se doxorrubicina (Farmitalia Cario Erba Pty Ltd, Clayton North, Austrália) , etoposido e vincristina (Bristol-Myers Squibb, Sermonita, Itália) utilizando solução salina a 0,9%. Administraram-se todos os compostos a ratinhos por injecção i.p. a 0,01 ml/g peso corporal.

Animais e tumores: Cresceram-se tumores de carcinoma de mama murino MDAH-Mca-4 a partir de soluções-mãe armazenadas em azoto líquido à sexta geração de transplante. Cresceram-se tumores (com oito gerações de transplante à altura da 12 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ utilização) a partir de 20 μΐ de suspensão de células (7 mg de células empacotadas), inocularam-se i.m. (intramuscularmente) no músculo gastrocnémio direito de ratinhos C3H/HeN fêmea (22-25 g à altura do tratamento). O tratamento aleatório dos ratinhos começou quando o diâmetro tumor + perna atingiu ΙΟΙ 1 mm (0,5-0,7 g de tumor).

Toxicidade para o hospedeiro e actividade antitumoral: Trataram-se ratinhos com fármacos quimioterapêuticos a uma gama de dosagens com incrementos de 1,33 vezes até à MTD (dose máxima tolerada, tal como estimada em experiências piloto ou a partir da literatura) esperada. Avaliou-se a toxicidade como letalidade e perda de peso corporal medida quarto dias após o tratamento. Quaisquer animais que ficassem moribundos eram mortos e tratados nas análises como mortes relacionadas com fármaco. O diâmetro da perna contendo o tumor foi medida 3 vezes por semana após o tratamento. Avaliou-se a actividade antitumoral a partir do atraso no crescimento do tumor definido como a diferença entre o tempo necessário para atingir um ponto final de 13 mm (tumor de 1,5 g) entre os grupos tratados e de controlo. Classificaram-se as respostas como curas caso os animais se encontrassem isentos de tumor evidente 120 dias após o tratamento. A significância estatística da inibição do crescimento do tumor foi testada por ANOVA utilizando SAS para Windows com o teste de Dunnett para avaliar valores de p para diferenças entre grupos de tratamento. Em experiências com números de curas significativos (isentos de tumor durante > 120 dias após o tratamento), testou-se a significância estatística por análise de variância não paramétrica de Kruskal-Wallis utilizando SAS para Windows e a diferença entre grupos de tratamento e de controlo pelo teste de Dunn utilizando Sigmastat v2.0. O declive e o erro padrão das curvas dose-resposta foram determinados por regressão linear utilizando Sigmastat e o DMF (factor de modificação de dose) foi calculado como declive com DMXAA/declive sem DMXAA.

Inibição de fluxo sanguíneo para o tumor: Avaliou-se o fluxo sanguíneo para o tumor utilizando o marcador de perfusão fluorescente Hoechst 33342 (8 mg/ml em solução salina), que foi administrado i.v. a diferentes intervalos de tempo após tratamento com fármaco. Sacrificaram-se os ratinhos após 2 min 13 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ e prepararam-se secções congeladas (14 μιη) a partir das regiões distai, central e proximal de cada tumor. Examinaram-se secções com um microscópio de epifluorescência Nikon a uma ampliação de lOx utilizando um filtro bloqueador UV-1A (excitação 365 nm, filtro de barreira 400 mm e espelho dicróico 400 nm). Utilizou-se uma rede com 81 quadrados (100 x 100 pm) para marcação de pontos de coloração. Pontuou-se a área completa para cada secção para evitar desequilíbrio entre as regiões periférica e central (que estavam menos bem perfundidas). Excluiu-se o tecido normal mas incluíram-se as áreas necróticas. As diferenças entre grupos foram tratadas relativamente a significância utilizando o teste t de Student (Sigma Stat, versão 2.0; Jandel Scientific Limited).

Farmacocinética: Injectaram-se ratinhos C3H/HeN fêmea apresentando tumores MDAH-Mca-4 (0,5-0,7 g) i.p. com carboplatina (316 pmol/kg), DMXAA (80 pmol/kg) ou receberam simultaneamente carboplatina e DMXAA às mesmas doses. Recolheu-se sangue a vários pontos temporais a partir dos seios retro-orbitais de ratinhos anestesiados para tubos heparinizados e separou-se o plasma por centrifugação. Dissecaram-se rapidamente os tumores e congelaram-se a -80°C. Utilizaram-se grupos de 2-5 ratinhos para cada ponto temporal.

Análise de platina por ICP-MS (espectrometria de massa acoplada a plasma indutivo): Determinaram-se concentrações de platina no plasma e tumores utilizando o seguinte método de ICP-MS anteriormente publicado. Pesaram-se os tumores, colocaram-se em tubos com tampa de rosca de 15 ml contendo 1 ml de ácido nítrico a 70% (Riedel-de-Haen, Seelze, Alemanha) e deixaram-se repousar durante a noite à temperatura ambiente. No dia seguinte digeriram-se os tumores durante 2 h a 90 °C numa frigideira eléctrica cheia de areia posicionada numa campânula extractora de fumos. Após arrefecer, os tecidos de tumor solubilizados foram colocados em balões volumétricos de 10 ml e perfez-se o volume utilizando água Milli-Q e seguidamente introduziu-se no ICP-MS. Preparou-se plasma para análise por precipitação com metanol da proteína plasmática. Adicionou-se plasma a um volume igual de metanol gelado, misturou-se e deixou-se repousar a -20°C durante 18 h. Centrifugou-se a amostra e diluiu-se uma alíquota de 14 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ sobrenadante (1:40) em ácido nítrico a 0,1% antes de se introduzir no ICP-MS. O sistema ICP-MS incluía um ICP-MS Hewlett Packard HP 4500 com um cone de amostragem de níquel, nebulizador Babington (sulco em v) e uma câmara de nebulização Scott de passagem dupla mantida a 2°C. Leu-se a platina a 195 uma com um tempo de retenção de 100 ms e um tempo de replicação de 6000 ms. As curvas de calibração foram lineares (r2>0,98) ao longo de uma gama vasta (0,5 a 5000 ng/ml). A variabilidade intra-ensaio e inter-ensaios e a recuperação situaram-se dentro de limites aceitáveis. Os limites de quantificação foram 12,5 pg de platina por ml de plasma e 10 ng de platina por g de tecido de tumor.

Análise de HPLC de DMXAA: Determinaram-se as concentrações de DMXAA no plasma como se segue. Trataram-se alíquotas de plasma (50 μΐ) com 1 ml de acetonitrilo :metanol (3:1 v/v) gelado, centrifugou-se e evaporaram-se os sobrenadantes resultantes utilizando um concentrador de solvente Speed-Vac (Savant Instruments, NY). Dissolveram-se os resíduos em 200 μΐ de tampão de acetato de amónio (pH 5) 10 mM e analisaram-se 25 μΐ por HPLC utilizando um sistema BP1100 com detector de sistema de díodos (278 nm) e detector de fluorescência. A coluna utilizada foi uma coluna de 3,2 mm x 150 mm C8 5 pm (Alltima Associates Inc., Deerfield, IL) e um caudal de 0,7 ml/min com uma fase móvel de acetonitrilo a 16% (v/v) em tampão de acetato de amónio (pH 5) 10 mM. O tempo de retenção para DMXAA foi 7,3 min. Um padrão interno com plasma de controlo demonstrou linearidade do ensaio na gama de 0,1-100 μΜ (r2 = 0, 999 ) . A precisão e exactidão intra-ensaio e inter-ensaios deram coeficientes de variação <7% e uma recuperação média de 70%. O limite inferior de sensibilidade de detecção por fluorescência (razão sinal:ruído de 3) foi 0,1 μΜ.

Modelação farmacocinética: A modelação dos dados farmacocinéticos foi efectuada utilizando ModelMaker versão 4.0 (Cherwell Scientific Limited, The Magdalen Centre, Oxford Science Park, Oxford 0X4 4GA, Reino Unido). Utilizaram-se os seguintes parâmetros f armacocinéticos: Kabs, a constante de velocidade de primeira ordem para absorção ao compartimento 15 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ central; Cl, depuração corporal total; Clinterv depuração inter-compartimentos; Vd, volume aparente de distribuição do compartimento central; Vd2, volume aparente de distribuição do segundo compartimento; Km, constante de Michaelis-Menten; Vmáx, velocidade máxima teórica; AUC, área sob a curva concentração-tempo. Para todos os compostos assumiu-se que toda a dose administrada atingiria o compartimento central (ou seja 100% de biodisponibilidade). Ensaiaram-se diferenças entre grupos de tratamento utilizando um teste F comparando as curvas completas e se esta diferença fosse significativa (ou seja pd0,05) testaram-se as estimativas de cada parâmetro individual do modelo para ambos os grupos utilizando um teste t com 2 caudas. Ajustaram-se as concentrações de platina livre e platina total no plasma e no tumor com um modelo aberto de 1 compartimento assumindo uma farmacocinética linear. Ajustaram-se as concentrações plasmáticas de DMXAA utilizando um modelo aberto de 1 compartimento com cinética de eliminação saturável (Michaelis-Menten).

Resultados

Actividade de DMXAA + fármacos quimioterapêuticos contra tumor MDAH-Mca-4. Avaliou-se a actividade antitumoral e toxicidade para o hospedeiro de combinações DMXAA/fármaco citotóxico variando a dose de fármaco quimioterapêutico até ao limite de toxicidade, com co-administração de uma dose fixa de DMXAA (80 ymol/kg, cerca de 80% de MTD) e avaliando o subsequente atraso no crescimento de tumor, tal como ilustrado na figura 1. Dos sete fármacos investigados, quatro (doxorrubicina, 5-fluorouracilo e os fármacos de referência ciclofosfamida e cisplatina) apresentaram actividade considerável contra este tumor, tal como indicado por relações dose-resposta com declives significativos por regressão linear e atrasos de crescimento altamente significativos de cerca de 10 dias das suas MTD (que se encontram registadas na tabela 1). Os outros três compostos de referência (carboplatina, etoposido e vincristina) foram essencialmente inactivos e nenhum dos grupos de tratamento individuais apresentou actividade significativa (embora a carboplatina tenha apresentado respostas a dose levemente positivas por regressão linear). 16 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ DMXAA sozinho apresentou actividade considerável como agente simples a 80 pmol/kg, proporcionando regressões temporárias e atraso médio no crescimento de tumores na gama de 3,5-8,3 dias (globalmente média de 6,6±0,6 dias). A co-administração de DMXAA a esta dose aumentou a toxicidade de doxorrubicina para o hospedeiro e a MTD para o fármaco quimioterapêutico diminuiu um nível de dose (1:33 vezes) na combinação (tabela 1). Para os outros compostos, a co-administração de DMXAA não alterou a MTD formal, embora tenha sido evidente alguma toxicidade adicional, tal como indicada pela maior perda de peso corporal na combinação.

Contrariamente a este pequeno efeito na toxicidade para o hospedeiro, a co-administração de DMXAA produziu um elevado aumento do atraso no crescimento de tumor (tabela 1). A contribuição de DMXAA foi avaliada por determinação do declive de cada curva dose-resposta por regressão linear e a DMF para DMXAA foi calculada como a razão dos declives com e sem DMXAA. Por este critério a grandeza da sinergia diminuiu pela ordem vincristina > (carboplatina, cisplatina, ciclofosfamida, etoposido, doxorrubicina) > 5-fluorouracilo. Para cada um destes compostos, excepto o último, a DMF foi significativamente maior do que a unidade. Como critério alternativo, o atraso máximo no crescimento de tumor atingível com a MTD da combinação indicou novamente sinergia para todos os compostos com atrasos de crescimento na gama de 15-30 dias.

Farmacocinética de DMXAA e carboplatina (como referência); Efectuaram-se estudos para deduzir se está subjacente uma interacção farmacocinética na interacção terapêutica sinérgica entre DMXAA e carboplatina. O estudo foi efectuado em ratinhos C3H com tumores MDAH-Mca-4 do mesmo tamanho utilizado nos estudos terapêuticos. Após administração de carboplatina (316 pmol/Kg, i.p.) a depuração de Pt do plasma (medida, após desproteinação, por ICP-MS) foi bifásica e não foi afectada por co-administração de DMXAA (figura 2). A Pt total no tumor também apresentou cinética bifásica que não foi afectada por co-administração de DMXAA. A ausência de efeito de DMXAA foi confirmada por modelação do plasma com a farmacocinética do tumor como um modelo aberto de 2 compartimentos com farmacocinética linear, que proporcionou os parâmetros de 17 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ modelo da tabela 2 e indicou que não há um efeito significativo de DMXAA.

Este estudo ensaia a hipótese que os agentes antivasculares tais como DMXAA têm o potencial para combinar sinergicamente com agentes citotóxicos convencionais no tratamento de tumores sólidos. 0 tumor mamário de passagem precoce MDAH-Mca-4, utilizado para este estudo comparativo, foi moderadamente refractário à maioria dos fármacos citotóxicos ensaiados (utilizando doses únicas de fármaco) mas apresentou respostas significativas a doxorrubicina, 5-fluorouracilo e aos fármacos de referência ciclofosfamida e cisplatina. DMXAA sozinho apresentou actividade consistente como um agente único, de grandeza semelhante à destes quatro agentes, mas nem os fármacos quimioterapêuticos, nem DMXAA proporcionaram regressões prolongadas ou curas.

Contudo, a co-administração de DMXAA com os fármacos citotóxicos causou um elevado aumento da resposta (figura 1). Esta interacção pode ser classificada como sinérgica (super-aditiva) com base no maior declive da curva dose-resposta do fármaco citotóxico com adição de DMXAA. A interacção, quantificada como DMF (razão dos declives obtidos por regressão linear com e sem DMXAA), foi significativamente superior à unidade para todos os fármacos, excepto 5-fluorouracilo. É notável que a interacção com DMXAA tenha resultado em actividade substancial com vários compostos que não apresentaram qualquer actividade como agente único. 18 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ

Tabela 1 Efeito de DMXAA na toxicidade para o hospedeiro e actividade antitumoral de fármacos quimioterapêuticos contra tumores MDAH-Mca-4. Os fármacos foram co-administrados com DMXAA por injecção i.p. Fármaco quimiotera pêutico DMXAA (pmol/ kg) MT D (μπιοΐ/kg) % de alteração de peso corporal aos 4 dias Declive da dose/resposta (dias^mol/kg) DMF 5-fluorouracilo - 1780 -8,5±0,8 0,0051±0,0001a 0,5+0,2 80 1780 -14,1±1,5 0,0027±0,001 Carboplatina - 316 -5,6±1,5 0,009410,0035 3,412,3 80 316 -8,5±1,4 0,03210,010 Cisplatina - 42, 1 -9,5±1,4 0,19+0,06 1,811,2 (referência) 80 42, 1 -14,4±2,3 0,3510,12 Ciclofosfamida - >1335 -0,8±1,3 0,0062+0,0001 2,710,3 (referência) 80 >1335 -9,2±1,4 0,0167+0,0013 Etoposido - >75 -2,0±1,7 0,030+0,0010 4,7+2,9 (referência) 80 75 (ld) -6,5±3,3 0,14+0,04 Vincristina - 1,0 -7,0±1,2 -0,011,3 >7C (referência) 80 1,0 -10,0±1,4 14,1+5,4 Doxorrubicina - 23,7 -3,9±0,6 0,42+0,10 2,5+1,1 80 17, 8 -5,5±1,2 1,04+0,23 a erro padrão do declive c Estimado utilizando estimativa de erro superior do declive para o fármaco quimioterapêutico sozinho.

Tabela de referência 2. Parâmetros farmacocinéticos para carboplatina (316 μιηοΐ/kg) e DMXAA (80 pmol/kg) no plasma e tumor de ratinhos fêmea C3H/HeN com tumores MDAH-Mca-4 (aproximadamente 0,7 g). Os números entre parêntesis são %CV.

Parâmetro Plasma Tumor Carboplatina DMXAA Carboplatina Kabs (h_1) 12,6 (266) 9,3 (39) 14,0 (286) Km - 220 (9,2) - Vmáx (μΜ 1Γ1) - 63 (6,1) - 1 t7» M 1 Λ 1-1 1-1 o 1,9 (41) - 0,28 (31) Clinter (1 h"1 kg_1 ) 0,41(99) - 2,3 (24) Vd 1 kg-1 1,0 (49) 0,17 (1,2) 2,7 (19) Vd (1 kg-1) (co-admin.) Vd2 d kg'1) 7,4 (227) - 11,3 (1163) AUC (μΜ.h)a 112b 3628° 416b AUC (μΜ.h)a (co-admin.) 118b,c 3136° 475b'c a AUC foi calculada utilizando a regra dos trapézios linear b 0-24 horas c Co-administração com DMXAA d 0-8 horas e 0-30 horas 19 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ

Exemplo 2

Materiais e métodos

Estabeleceram-se xenoenxertos de tumor humano (PSN1) por injecção subcutânea de 5xl06 células no flanco direito de ratinhos nus MF1 fêmeas. PSN1 é um carcinoma pancreático. Deixaram-se os tumores crescer até um diâmetro de 6-8 mm antes de tratamento (um volume de aproximadamente 0,15 cm3).

Estabeleceram-se grupos de tratamento aleatórios de modo que os volumes médios em cada grupo no dia de tratamento não foram estatisticamente diferentes. Diluiram-se soluções-mãe de DMXAA e gencitabina (Eli Lilly & Company, Indiana) em solução salina e injectaram-se intravenosamente em ratinhos nus com tumor através de uma veia lateral da cauda. Para terapia de combinação, os dois fármacos foram administrados por injecções sequenciais nas duas veias laterais da cauda. Os ratinhos de controlo não foram tratados.

Mediram-se os tumores em três dimensões ortogonais, duas a três vezes por semana, e expressou-se o volume como o volume de tumor relativamente ao volume no dia de tratamento. Os tumores foram medidos até terem pelo menos triplicado em volume. 0 ponto final foi o tempo em que o volume de tumor triplicou.

Resultados

As tabelas, apresentadas seguidamente mostram, na coluna com o cabeçalho "Mediana", os tempos para triplicar o volume de tumor medianos para xenoenxertos de tumor pancreático PSN1 tratados com gencitabina com ou sem DMXAA. A coluna com o cabeçalho "Tratado - Controlo" apresenta o tempo de triplicação de tratados menos do controlo, ou seja a vantagem do fármaco ou da combinação de fármacos relativamente a tumores não tratados.

Os dados de gencitabina foram analisados como tempos de duplicação e de triplicação de volume. Em ambos os casos a combinação dos dois fármacos é sinérgica, sendo o tratado menos controlo para a combinação superior à soma de cada fármaco administrado sozinho. 20 ΕΡ 1 423 105/ΡΤ

Tempos de triplicaçao de volume de PSN1 (dias) Gencitabina mais DMXAA

Tratamento Mediana Tratado-controlo Controlo 4, 9 20 mg/kg de DMXAA 6,0 1,1 240 mg/kg de gencitabina 13,9 9,0 240 mg/kg de gencitabina + 20 mg/kg de DMXAA >17 >12

Tempos de duplicação de volume de PSN1 (dias) Gencitabina mais DMXAA

Tratamento Mediana Tratado-controlo Controlo 3,2 20 mg/kg de DMXAA 3,6 0,4 240 mg/kg de gencitabina 9, 7 7,5 240 mg/kg de gencitabina + 20 mg/kg de DMXAA 15, 4 12,2

Lisboa, 2009-02-27

Claims

ΕΡ 1 423 105/ΡΤ 1/7 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de ácido 5,6-dimetilxantenona-4-acético (DMXAA) ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis para o fabrico de um medicamento, para administração quer concomitante, quer sequencial, com um composto seleccionado entre: a) irinotecano; b) gencitabina; c) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo; e d) na ausência de um anticorpo, doxorrubicina, para o tratamento de cancro.
2. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a utilização é de DMXAA ou de um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis para o fabrico de um medicamento, para administração quer concomitante, quer sequencial, com gencitabina, para o tratamento de cancro.
3. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a utilização é de DMXAA ou de um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, para o fabrico de um medicamento, para administração quer concomitante, quer sequencial, com irinotecano, para o tratamento de cancro.
4. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a utilização é de DMXAA ou de um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, para o fabrico de um medicamento, para administração quer concomitante, quer sequencial, na ausência de um anticorpo, com 5-fluorouracilo, para o tratamento de cancro.
5. Utilização de acordo com a reivindicação 1, em que a utilização é de DMXAA ou de um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis para o fabrico de um medicamento, para administração quer concomitante, quer sequencial, na ausência de um anticorpo, com doxorrubicina, para o tratamento de cancro.
6. Utilização de um composto seleccionado entre: ΕΡ 1 423 105/ΡΤ 2/7 a) irinotecano; b) gencitabina; c) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo; e d) na ausência de um anticorpo, doxorrubicina, para o fabrico de um medicamento, para administração quer concomitante, quer sequencial, com DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, para o tratamento de cancro.
7. Utilização de acordo com a reivindicação 6, em que a utilização é de gencitabina para o fabrico de um medicamento, para administração quer concomitante, quer sequencial, com DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, para o tratamento de cancro.
8. Utilização de acordo com a reivindicação 6, em que a utilização é de irinotecano para o fabrico de um medicamento, para administração quer concomitante, quer sequencial, com DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, para o tratamento de cancro.
9. Utilização de acordo com a reivindicação 6, em que a utilização é de 5-fluorouracilo na ausência de um anticorpo para o fabrico de um medicamento, para administração quer concomitante, quer sequencial, com DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, para o tratamento de cancro.
10. Utilização de acordo com a reivindicação 6, em que a utilização é de doxorrubicina na ausência de um anticorpo para o fabrico de um medicamento, para administração quer concomitante, quer sequencial, com DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, para o tratamento de cancro.
11. DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis para utilização no tratamento de cancro, por administração de DMXAA quer concomitante, quer sequencial, com um composto seleccionado entre: a) irinotecano; ΕΡ 1 423 105/ΡΤ 3/7 b) gencitabina; c) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo; e d) na ausência de um anticorpo, doxorrubicina.
12. DMXAA para utilização de acordo com a reivindicação 11, em que a utilização é no tratamento de cancro, por administração de DMXAA quer concomitante, quer sequencial, com gencitabina.
13. DMXAA para utilização de acordo com a reivindicação 11, em que a utilização é no tratamento de cancro, por administração de DMXAA quer concomitante, quer sequencial, com irinotecano.
14. DMXAA para utilização de acordo com a reivindicação 11, em que a utilização é no tratamento de cancro, por administração de DMXAA quer concomitante, quer sequencial, na ausência de um anticorpo, com 5-fluorouracilo.
15. DMXAA para utilização de acordo com a reivindicação 11, em que a utilização é no tratamento de cancro, por administração de DMXAA quer concomitante, quer sequencial, na ausência de um anticorpo, com doxorrubicina.
16. Composto seleccionado entre: a) irinotecano; b) gencitabina; c) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo; e d) na ausência de um anticorpo, doxorrubicina, para utilização no tratamento de cancro, por administração do composto quer concomitante, quer sequencial, com DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis.
17. Gencitabina para utilização de reivindicação 16. acordo com
18 . Irinotecano reivindicação 16. para utilização de acordo com a ΕΡ 1 423 105/ΡΤ 4/7 19. 5-Fluorouracilo na ausência de um anticorpo para utilização de acordo com a reivindicação 16.
20. Doxorrubicina na ausência de um anticorpo para utilização de acordo com a reivindicação 16.
21. Utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10 ou composto para utilização de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 20, em que o DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, e o composto, estão presentes numa razão potenciadora.
22. Combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e um composto seleccionado entre: a) irinotecano; b) gencitabina; c) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo; e d) na ausência de um anticorpo, doxorrubicina.
23. Combinação de acordo com a reivindicação 22, em que a combinação é de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, e gencitabina.
24. Combinação de acordo com a reivindicação 22, em que a combinação é de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, e irinotecano.
25. Combinação de acordo com a reivindicação 22, em que a combinação é de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e, na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo.
26. Combinação de acordo com a reivindicação 22, em que a combinação é de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e, na ausência de um anticorpo, doxorrubicina.
27. Combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 26, em que o DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, e o composto, estão presentes numa razão potenciadora. ΕΡ 1 423 105/ΡΤ 5/7
28. Formulação farmacêutica incluindo uma combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e um composto seleccionado entre: a) irinotecano; b) gencitabina; c) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo; e d) na ausência de um anticorpo, doxorrubicina, em associação com um ou mais seus transportadores farmaceuticamente aceitáveis.
29. Formulação farmacêutica de acordo com a reivindicação 28, em que a formulação inclui uma combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, e gencitabina, em associação com um ou mais seus transportadores farmaceuticamente aceitáveis.
30. Formulação farmacêutica de acordo com a reivindicação 28, em que a formulação inclui uma combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e irinotecano, em associação com um ou mais seus transportadores farmaceuticamente aceitáveis.
31. Formulação farmacêutica de acordo com a reivindicação 28, em que a formulação inclui uma combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e, na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo, em associação com um ou mais seus transportadores farmaceuticamente aceitáveis.
32. Formulação farmacêutica de acordo com a reivindicação 28, em que a formulação inclui uma combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster f armaceut icamente aceitáveis e, na ausência de um anticorpo, doxorrubicina, em associação com um ou mais seus transportadores farmaceuticamente aceitáveis.
33. Formulação farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 28 a 32, em que a formulação é adaptada para administração intravenosa.
34. Formulação farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 28 a 33, em que o DMXAA ou um seu sal ou éster ΕΡ 1 423 105/ΡΤ 6/7 farmaceuticamente aceitáveis, e o composto, estão presentes numa razão potenciadora.
35. Processo para a preparação de uma formulação farmacêutica, processo este que inclui associar uma combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, e um composto seleccionado entre: a) irinotecano; b) gencitabina; c) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo; d) na ausência de um anticorpo, doxorrubicina, com um ou mais seus transportadores farmaceuticamente aceitáveis.
36. Processo de acordo com a reivindicação 35, em que o processo inclui associar uma combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e qencitabina.
37. Processo de acordo com a reivindicação 35, em que o processo inclui associar uma combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e irinotecano.
38. Processo de acordo com a reivindicação 35, em que o processo inclui associar uma combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e, na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo.
39. Processo de acordo com a reivindicação 35, em que o processo inclui associar uma combinação de DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e, na ausência de um anticorpo, doxorrubicina.
40. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 39, em que o DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis, e o composto, estão presentes numa razão potenciadora.
41. Kit incluindo em associação para administração independente DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e um composto seleccionado entre: ΕΡ 1 423 105/ΡΤ 7/7 a) irinotecano; b) gencitabina; c) na ausência de um anticorpo, 5-fluorouracilo; e d) na ausência de um anticorpo, doxorrubicina.
42. Kit de acordo com a reivindicação 41, em que o kit inclui em associaçao para administração independente DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e gencitabina. 43. Kit de acordo com a reivindicação 41, em que o kit inclui em associação para administração independente DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e irinotecano. 4 4. Kit de acordo com a reivindicação 1—1 em que o kit inclui em associaçao para administração independente DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e, na ausência de um anticorpo, . 5-fluorouracilo. 45. Kit de acordo com a reivindicação 41, em que 0 kit inclui em associação para administração independente DMXAA ou um seu sal ou éster farmaceuticamente aceitáveis e, na ausência de um anticorpo, doxorrubicina.
46. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações 41 a 45, em que o DMXAA ou um seu sal ou éster f armaceut icamente aceitáveis, e o composto, estão presentes numa razão potenciadora. Lisboa, 2009-02-27