PT1322634E

PT1322634E - Derivados de n-fenil-2-pirimidina-amina

Info

Publication number: PT1322634E
Application number: PT01984640T
Authority: PT
Inventors: Giorgio Caravatti; Paul William Manley; Werner Breitenstein; Hans Michael Buerger; Juerg Zimmermann; Margaret Amelia Cudd
Original assignee: Novartis Ag; Novartis Pharma Gmbh
Priority date: 2000-09-13
Filing date: 2001-09-11
Publication date: 2010-02-22
Also published as: CA2416274A1; CN100406452C; ES2336891T3; BR0113838A; EP1322634B1; DE60140814D1; US7081532B2; AU2002218167A1; CA2687476A1; CN1525967A; US20070265292A1; EP1322634A1; US7329661B2; US20060223818A1; US20040102453A1; GB0022438D0; HK1057752A1; JP2004509111A; US7312216B2; WO2002022597A1

Description

ΡΕ1322634 1 DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE N-FENIL-2-PIRIMIDINA-AMINA" A invenção refere-se a derivados de N-fenil-2-pirimidina-amina, a processos para a sua preparação, a medicamentos que contêm esses compostos, e ao uso dos mesmos na preparação de composições farmacêuticas para o tratamento terapêutico de animais de sangue quente, incluindo seres humanos.

A invenção refere-se a derivados de N-fenil-2-pirimidina-amina de fórmula I

‘5 <*). em que

Ri é piridilo ligado a um átomo de carbono do anel, R2 e R3 são ambos hidrogénio, R4 é alquilo inferior, R5 e Rô são ambos hidrogénio, R7 é um radical de fórmula II, 2 ΡΕ1322634 -N(Rg)-C(=X)-(Y)n-Rio (II), onde R$ é hidrogénio, X é oxo, n é 0 e

Rio é fenilo o qual é a) substituído por alquilo inferior que é substituído por mono- ou di-alquilamino inferior, ou b) substituído por um radical não substituído ou substituído por alquilo inferior seleccionado do grupo constituído por pirrolidinil-alquilo inferior, piperidil-alquilo inferior e morfolinil-alquilo inferior, ou c) substituído por piperazinil-alquilo inferior o qual é opcionalmente substituído no anel piperazina por alquilo inferior C3-C7, e Rs é hidrogénio, em que o termo "inferior" denota radicais contendo até 7 átomos de carbono, inclusive, ou a um sal de tal composto contendo pelo menos um grupo formador de sal.

Piridilo Ri ligado a um átomo de carbono do anel é 2-, 4- ou preferencialmente 3-piridilo não substituído, por exemplo 3-piridilo.

Quando X for oxo o grupo C=X é um radical C=0. n é 0, isto é 0 grupo Y não está presente. O termo "inferior" no âmbito deste texto denota 3 ΡΕ1322634 radicais contendo até 7 átomos de carbono, inclusive, preferencialmente até 4, inclusive.

Um radical seleccionado da lista supracitada a) ou b) está preferencialmente ligado a fenilo Rio na posição 3 ou 4 do anel fenilo.

Grupos formadores de sal num composto de fórmula I são grupos ou radicais que têm propriedades básicas ou ácidas. Compostos que têm pelo menos um grupo básico ou pelo menos um radical básico, por exemplo um grupo amino livre, um radical pirazinilo ou um radical piridilo, podem formar sais de adição de ácido, por exemplo com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido sulfúrico ou um ácido fosfórico, ou com ácidos carboxilicos ou sulfó-nicos orgânicos apropriados, por exemplo ácidos mono- ou di-carboxilicos alifáticos, tais como ácido trifluoro-acético, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido succinico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido hidroximaleico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico ou ácido oxálico, ou aminoácidos como arginina ou lisina, ácidos carboxilicos aromáticos tais como ácido benzóico, ácido 2-fenoxi-benzóico, ácido 2-acetoxi-ben-zóico, ácido salicílico, ácido 4-amino salicílico, ácidos carboxilicos aromático-alifáticos tais como ácido mandélico ou ácido cinâmico, ácidos carboxilicos heteroaromáticos tais como ácido nicotínico ou ácido isonicotínico, ácidos sulfónicos alifáticos tais como ácido metano-, etano- ou 2-hidroxietano-sulfónico, ou ácidos sulfónicos aromáticos, 4 ΡΕ1322634 por exemplo ácido benzeno-, p-tolueno- ou naftaleno-2-sulfónico. Quando estão presentes vários grupos básicos podem-se formar sais de adição de mono- ou poli-ácido.

Para fins de isolamento ou purificação, bem como no caso de compostos que são usados como intermediários, é também possível usar sais farmaceuticamente inaceitáveis. Porém, só sais farmaceuticamente aceitáveis, não tóxicos, são usados para fins terapêuticos, e esses sais são por isso preferidos.

Devido à relação estreita entre os novos compostos na forma livre e na forma dos seus sais, incluindo os sais que podem ser usados como intermediários, por exemplo na purificação dos novos compostos ou para a sua identificação, qualquer referência aqui anteriormente feita ou que venha a ser feita aos compostos livres deverá ser entendida como incluindo os sais correspondentes, onde apropriado e oportuno.

Um composto de fórmula I possui valiosas propriedades farmacológicas e pode, por exemplo, ser usado como um agente anti-tumor, como um agente para tratar ateros-clerose, como um agente para tratar restenose, para a prevenção de desordens induzidas por transplantação tais como bronquiolite obliterante, e/ou para a prevenção da invasão de células de animais de sangue quente por certas bactérias, tal como Porphyromonas gingivalis. 5 ΡΕ1322634 A fosforilação de proteínas é desde há muito conhecida como um passo essencial na diferenciação e divisão celular. A fosforilação é catalisada por proteína cinases subdivididas em serina/treonina e tirosina-cinases. As tirosina-cinases incluem tirosina-cinase do receptor PDGF (Platelet-derived Groth Factor - Factor de Crescimento derivado das Plaquetas). 0 PDGF é um factor de crescimento que ocorre muito frequentemente, o qual desempenha um papel importante no crescimento normal e também na proliferação celular patológica, como é visto em carcinogéneses e em doenças das células do músculo liso dos vasos sanguíneos, por exemplo em aterosclerose e trombose. A inibição da actividade in vitro da tirosina-cinase do receptor estimulado por PDGF é medida em imuno complexos do receptor PDGF de células A431, conforme descrito por E. Andrejauskas-Buchdunger e U. Regenass em Câncer Research 502,5353-5358 (1992) . Um composto de fórmula I inibe a fosforilação do receptor acelular dependente de PDGF. A inibição da tirosina-cinase do receptor PDGF é medida num ensaio de microtitulação ELISA (ver Trinks et al., J. Med. Chem. 37, 1015-27 (1994). Um composto de fórmula I inibe a actividade da tirosina-cinase do receptor PDGF a uma IC5o (concentração à qual a actividade é inibida em 50% comparativamente à do controlo) entre 1 nM e 1 μΜ, especialmente entre 3 nM e 300 nM. 6 ΡΕ1322634 A inibição da tirosina-cinase do receptor PDGF torna um composto de fórmula I também adequado ao tratamento de doenças relacionadas com tumor, tais como gliomas, sarcomas, tumores da próstata e tumores do cólon, peito e ovários.

Um composto de fórmula I inibe também processos celulares que envolvem o denominado factor de células estaminais (SCF - stem-cell factor, também conhecido como o ligando c-kit ou factor estaminal), tal como a autofos-forilação do receptor SCF (kit) e a activação estimulada por SCF de cinase MAPK (proteína cinase activada por agente mitogénico).

Um composto de fórmula I inibe assim também a autofosforilação do receptor SCF (e c-kit, um proto-oncongene). As células M07e são uma linhagem de células humanas de leucemia promegacariocítica que dependem do SCF para proliferação. Elas são obtidas a partir de Grover Bagby, Oregon Health Sciences University, E.U.A. As células são cultivadas em meio RPMI 1649 suplementado com 10 FBS e 2,5 ng/ml de GC-CMF. O GM-SCF e o SCF estão comercialmente disponíveis. As células M07e isentas de soro são preparadas e incubadas durante 90 min a 37 °C com a substância de teste antes de serem estimuladas com SCF recombinante durante 10 min a 37 °C. Analisam-se quantidades idênticas de lisados celulares por Western blot utilizando-se anticorpos antifosfotirosina (Buchdunger et al., Proc. Natl. Acad. Sei (E.U.A.) 92, 2558-62 (1995)). As proteínas 7 ΡΕ1322634 imunodecoradas são detectadas através do sistema ECL Western blotting da Amersham (Amersham, Reino Unido). Um composto de fórmula I inibe a autofosforilação do receptor SCF na gama micromolar.

Com base nas propriedades descritas, um composto de fórmula I pode não ser só usado como uma substância inibidora de tumor, por exemplo de cancro do pulmão de pequenas células, mas também como um agente para o tratamento de desordens proliferativas não malignas, tais como aterosclerose, trombose, psoriase, esclerodermia e fibrose, bem como para a protecção de células estaminais, por exemplo para se combater o efeito hemotóxico de agentes quimioterapêuticos, tais como 5-fluoruracil, e na asma. Pode ser especialmente usado para o tratamento de doenças que respondem a uma inibição da cinase do receptor PDGF.

Além disso, um composto de fórmula I obsta ao desenvolvimento de resistência multi-droga na terapia do cancro com outros agentes quimioterapêuticos ou anula a resistência pré-existente a outros agentes quimioterapêuticos. Também, e independentemente do efeito anteriormente descrito, um composto de fórmula I pode ser usado vantajosamente em combinação com outros agentes anti-tumorais.

Também a cinase abl, especialmente a cinase v-abl, é inibida por um composto de fórmula I. A inibição da tirosina-cinase v-abl é determinada pelos métodos de N. Lydon et al., Oncogene Research 5, 161-173 (1990) e J.F. ΡΕ1322634

Geissler et al., Câncer Research 52, 4492-8 (1992). Naqueles métodos, a [Vai5]-angiotensina II e ο [γ~32Ρ]-ΑΤΡ são usados como substratos.

Por analogia, um composto de fórmula I inibe também a cinase BCR-abl (ver Nature Medicine 2, 561-566 (1996) ) e é assim adequado para o tratamento de cancro BCR-abl-positivo e de doenças relacionadas com tumores, tais como leucemias (especialmente leucemia mielóide crónica e leucemia linfoblástica aguda, onde se encontram mecanismos de acção especialmente apoptóticos), e apresenta também efeitos no subgrupo das células estaminais leucémicas, bem como potencial para a purificação destas células ín vitro após remoção das ditas células (por exemplo, remoção de medula óssea) e reimplantação das células depois de terem sido limpas das células cancerígenas (por exemplo, reimplantação de células de medula óssea purificadas).

Além disso, um composto de fórmula I apresenta efeitos úteis no tratamento de desordens que surgem como resultado de transplantação, por exemplo, transplante alo-génico, especialmente rejeição de tecido, tal como e em especial bronquiolite obliterante (OB - obliterative bronchiolitis), ou seja uma rejeição crónica de transplantes pulmonares alogénicos. Em contraste aos pacientes sem OB, os que têm OB mostram frequentemente uma concentração de PDGF elevada em fluidos de lavagem broncoalveolar. Se um composto de fórmula I for administrado em ratos com transplantes alogénicos da traqueia, por exemplo numa dose 9 ΡΕ1322634 de 50 mg/kg i.p., pode ser demonstrado após remoção de 10 transplantes por grupo após 10 e 30 dias para análise morfométrica de possíveis lesões epiteliais e oclusão das vias aéreas, e investigação das vias imuno-histoquímicas de acção que, embora um composto de fórmula I não tenha efeito significativo em necrose epitelial ou infiltração através de células inflamatórias, reduz nitidamente a fibropro-liferação e a oclusão do lúmen quando comparado com controlos. São possíveis efeitos sinérgicos com outras substâncias imunomoduladoras ou anti-inflamatórias, por exemplo quando usados em combinação com ciclosporina A (CsA), rapamicina ou ascomicina, ou imunossupressores análogos dos mesmos, por exemplo ciclosporina G, FK-506 ou compostos comparáveis; corticosteróides; ciclofosfamida; azatioprina; metotrexato; brequinar; leflunomida; mizoribina; ácido micofenólico; micofenolato de mofetil; 15-desoxispergua-lina; anticorpos imunossupressores, especialmente anticorpos monoclonais para receptores de leucócitos, por exemplo MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD25, CD28, B7, CD45, CD58 ou seus ligandos; ou outros compostos imunomoduladores, tais como CTLA41g. Se combinar-se CsA (1 mg/kg s.c.), por exemplo, com um composto de fórmula I (50 mg/kg), pode observar-se sinergismo.

Um composto de fórmula I é também eficaz em doenças associadas a migração e proliferação de células do músculo liso vascular (onde o PDGF e o receptor de PDGF desempenham também frequentemente um papel), tais como restenose e aterosclerose. Estes efeitos e as suas 10 ΡΕ1322634 consequências para a proliferação ou migração in vitro e in vivo de células do músculo liso vasculares podem ser demonstrados por administração de um composto de fórmula I e também por investigação do seu efeito no espessamento da intima vascular após a lesão mecânica in vivo.

Um composto de fórmula I é usado em HC1 0,1 N ou DMSO numa concentração de 10 mM para estudos in vitro. A solução mãe é adicionalmente diluída com meio de cultura celular e usada em concentrações de 10 a 0,1 μΜ para as experiências. Para a administração in vivo, um composto de fórmula I é dissolvido por exemplo em DMSO a uma concentração de 200 mg/ml e em seguida é diluído numa proporção 1:20 com Tween a 1% em solução salina a 0,9%. Após sonicação, obtém-se uma solução límpida. As soluções mãe são preparadas cada dia antes da administração. (O composto de fórmula I pode também ser simplesmente dissolvido em água desionizada para administração oral ou em solução salina a 0,9% para administração parentérica). A administração é efectuada 24 horas antes da operação. Um composto de fórmula I é administrado em ratos numa dose de 50 mg/kg i.p. por dia durante todo o período de observação. É dada a mesma formulação aos ratos de controlo mas sem a presença de um composto de fórmula I. É também possível administração oral.

Culturas primárias de células do músculo liso da aorta são isoladas da aorta de rato DA com 9 a 11 dias de idade (AG-B4, RTla) usando-se uma modificação do método 11 ΡΕ1322634 descrito por Thyberg et al. (ver Differentiation 25, 156-67 (1983)) . A aorta é aberta por intermédio de uma incisão longitudinal e o endotélio cuidadosamente removido. A túnica adventícia e a média são separadas, e a túnica média é digerida com colagenase 0,1% e DNAse em salina fisiológica tamponada com fosfato durante 30 min a 37 °C. As células são centrifugadas, suspensas em meio de cultura, e depois deixadas crescer em frascos de plástico. As células primárias são usadas para as experiências após as passagens 2 a 6. As subculturas são mantidas em DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Médium), suplementadas com soro fetal de vitelo a 10%, glutamina 2 mmol/ml, estreptomicina 100 mmol/ml e penicilina 100 IU/ml. Para fins de identificação, as células são deixadas crescer em coberturas de lamelas de vidro e coradas imuno-histo-quimicamente usando-se um anticorpo anti-a-actina obtido de células do músculo liso (ver abaixo). A migração de células do músculo liso é quantificada in vitro usando-se um sistema de cultura celular Transwell (Costar, Cambridge, MA) cujos compartimentos superior e inferior são separados por uma membrana de policarbonato com tamanho de poros de 8 ym. As células (100 yl numa concentração de 1 milhão de células/ml) são expostas no compartimento superior. Após 2 horas, adiciona-se PDGF-BB ou PDGF-AA 60 ng/ml (Upstate Biotechnology Inc., Lake Placid, Nova Iorque) ao compartimento inferior, suplementado com soro fetal de vitelo 0,5% e albumina de soro bovino 0,1%, e adiciona-se o composto de teste de 12 ΡΕ1322634 fórmula I em concentrações de 3, 1, 0,3, 0,1, 0,03, 0,01, e 0,003 μΜ. Para se medir a migração dependente de fibronectina, as câmaras Transwell são cobertas com fibronectina numa concentração de 10 yg/ml durante 24 h a 4 °C (fibronectina celular humana, Upstate Biotechnology Inc.). Após 24 horas de migração, os filtros são removidos, fixados em metanol, e corados com hematoxilina e eosina de Mayer. As células migradas no lado inferior da membrana de filtração são determinadas por contagem dos campos seccionais especificados nos filtros com a ajuda de um microscópio óptico com uma ampliação de 400x. A inibição da migração é quantificada em termos da percentagem de células versus controlo. Para excluir-se a possibilidade de um efeito tóxico, a viabilidade das células é testada por incorporação de 3H-timidina em DMEM, suplementada com soro fetal de vitelo a 10%. Observa-se uma inibição de migração induzida por PDGF-AA e especialmente por PDGF-BB com um composto de fórmula I.

Animais experimentais: desnuda-se a aorta e a artéria carótida de ratos Wistar machos (comprados no Laboratory Animal Center da Universidade de Helsínquia, Finlândia). Os ratos são anestesiados com hidrato de cloral a 240 mg/kg i.p. e administra-se Buprenorfina (Temgesic, Reckitt & Coleman, Hull, Reino Unido) para alívio de dor perioperatória e pós-operatória. É dado a todos os animais cuidado humano de acordo com os "Principies of Laboratory Animal Care" e o "Guide for the Care and Use of Laboratory Animais" do NIH (Publicação NIH 13 ΡΕ1322634 86-23, revisto em 1985) . Usaram-se ratos que pesavam 200-300 g para o procedimento de desnudamento. A artéria carótida comum esquerda é desnudada do endotélio através da passagem intraluminar de um cateter para embolectomia 2F (Baxter Healthcare Corporation, Santa Ana, CA, 27) . Para remover-se o endotélio, o cateter é passado pelo lúmen três vezes, insuflado com 0,2 ml de ar. A carótida externa é ligada após remoção do cateter e a ferida fechada. As alterações histológicas são avaliadas por referência às secções de carótida média 4 dias após o desnudamento. A aorta torácica é desnudada do endotélio usando-se um cateter para embolectomia arterial 2F Fogarty. O cateter é inserido na aorta torácica pela artéria ilíaca esquerda, insuflado com 0,2 ml de ar, e passado pelo lúmen cinco vezes para se remover o endotélio. A artéria ilíaca é então ligada. Para a avaliação das alterações histológicas são seleccionadas três vezes (3, 7 e 14 dias).

Para se quantificarem as células de proliferação, usam-se 3 procedimentos diferentes para se marcarem as células com bromodesoxiuridina (BrdU) após o desnudamento da carótida do rato. Neste modelo, a proliferação celular começa 24 h após o desnudamento; as células na íntima aparecem pela primeira vez após 72-96 horas. Para se quantificar a proliferação das células do músculo liso antes do aparecimento das células na íntima, é administrado i.v. 0,1 ml de reagente de marcação BrdU (ZYMED, São Francisco, CA) durante o período pós-operatório de 0 a 72 h pós-desnudamento (no total 0,1 ml 6 vezes). Para se 14 ΡΕ1322634 quantificar a proliferação durante a onda de migração inicial, deu-se aos ratos 3 x 0,1 ml de reagente de marcação BrdU em intervalos de 8 horas durante um período de 72-96 horas após a operação. Para se quantificar a proliferação no final da onda de migração inicial, deu-se a um terceiro grupo de ratos uma dose pulsada de 0,3 ml de BrdU três horas antes do sacrifício.

As amostras histológicas são fixadas em solução de paraformaldeído a 3% durante 4 h para inclusão em parafina. As alterações morfológicas são avaliadas a partir de secções de parafina coradas com o hematoxilina-eosina de Mayer. As contagens das células em diferentes secções dos vasos são feitas a uma ampliação de 400x. Para se identificarem as células na cultura e as células que aparecem na neo-íntima no período de quatro dias após a lesão de desnudamento, a coloração imuno-histoquímica das amostras fixadas com acetona é efectuada usando-se um anticorpo anti-a-actina obtido de células do músculo liso (Bio-Makor, Rehovot, Israel). As células primárias do músculo liso são identificadas em lamelas de microscópio fixadas com acetona usando-se o mesmo método de coloração. As secções são incubadas com o anticorpo primário (diluição 1:2000), lavadas e incubadas consecutivamente com coelho-antirato-Ig e cabra-anticoelho-Ig conjugados com peroxi-dase, seguindo-se tratamento com solução de substrato com o cromogéneo 3-amino-9-etilcarbazol e peróxido de hidrogénio. As manchas de BrdU são preparadas a partir de secções de parafina usando-se um anticorpo primário de rato (Bu20a, 15 ΡΕ1322634

Dako, A/S, Dinamarca) e o equipamento Vectastain Elite ABC-Kit (Vector Laboratoires, Burliname, CA) . As secções são desparafinadas e tratadas por microondas a 500 W (2 x 5 min em tampão de citrato 0,1 M, pH 6), seguindo-se tratamento com formamida a 95% em citrato trissódico 0,15 M durante 45 min a 70 °C. As diluições de anticorpo são preparadas de acordo com as especificações do fabricante. As secções são contra-coradas com hematoxilina e eosina de Mayer, e as células positivas contadas separadamente na intima, média e adventícia.

Na carótida de animais tratados, encontrou-se uma diminuição significativa na contagem de células para as células do músculo liso. A adventícia e a média mostraram uma redução significativa na contagem celular. Como resultado de um composto de fórmula I, observou-se uma ligeira diminuição no número absoluto de células marcadas com BrdU na íntima, média e adventícia durante os primeiros dois períodos de marcação (0-72 e 72-96 h), e após 93-96 h observou-se uma diminuição no número de células marcadas em todos os compartimentos. Encontraram-se igualmente diminuições no número de células do músculo liso nos animais desnudados da aorta.

De acordo com estas descobertas, um composto de fórmula I pode portanto inibir a proliferação, e especialmente a migração, de células do músculo liso vascular.

Um composto de fórmula I é também capaz de inibir 16 ΡΕ1322634 a angiogénese. Isto pode ser demonstrado da seguinte forma: uma câmara contendo ágar-ágar (0,8%) e heparina (2 U/ml) com ou sem factor de crescimento (VEGF 3 yg/ml, PDGF 1 yg/ml ou bFGF 0,3 yg/ml) é implantada subcutaneamente em ratos normais (C57 BL/6). Um composto de fórmula I é administrado oralmente numa dose apresentando boa actividade anti-tumor num modelo de xenotransplante de rato desnudado. A dosagem começa um dia antes da implantação das câmaras. As câmaras são removidas após 5 dias. A eficácia angio-génica é quantificada medindo-se o tecido vascularizado que cresceu em redor do implante e o teor em sangue deste tecido (sangue externo). O sangue é determinado medindo-se a hemoglobina. Embora os vasos não cresçam no ágar-ágar, o ágar-ágar torna-se intensamente vermelho se estiver presente um efeito anti-angiogénico. Se um composto inibir o aumento em sangue que é induzido pelo factor de crescimento, isto é visto como uma indicação de que o composto em questão está a bloquear o efeito angiogénico do factor de crescimento em questão. A inibição do peso mas não do volume de sangue sugere um efeito na proliferação de fibroblastos. Uma supressão da resposta do controlo sugere uma inibição da cicatrização da ferida. A uma dose oral de 50 mg/kg, uma vez por dia, um composto de fórmula I inibe o efeito angiogénico de todos os factores de crescimento (VEGF, PDFG, bFGF).

De forma interessante, a N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]-4-piperazin-l-ilmetil-benzamida representa o metabolito N-desmetil de N-[4-metil- 17 ΡΕ1322634 3-(4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]-4-(4-metil-piperazin-l-ilmetil)-benzamida (STI571). 0 STI571 é descrito na EP 0 564 409 e, na forma do sal de sulfonato de metano, na WO 99/03854. O metabolito N-desmetil de STI571 é um metabolito activo que está presente no plasma humano em concentrações de 30 a 50% do STI571 e o tempo de meia-vida é um pouco mais longo do que o do STI571. Além disso, o metabolito N-desmetil apresenta menos inibição do que certas enzimas do citocromo P450 (ver parágrafo seguinte), quando comparado com o STI571. Os citocromos P450 são as principais enzimas de metabolização xenobióticas hepáticas e menos inibição dos citocromos P450 reduz o potencial de um composto para interacções clinicas droga-droga. Entre os compostos de fórmula I, é assim dada preferência acima de todos ao metabolito N-desmetil de STI571, nomeadamente à N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]-4-piperazin-l-ilmetil-benzamida.

Para se avaliar o efeito dos compostos de fórmula I em citocromos P450 (CYPs), por exemplo, a inibição de enzimas é habitualmente avaliada realizando-se estudos de inibição in vitro usando-se enzimas de expressão de cDNA ou microssomas de fígado humano (Parkinson, A., Toxicol. Pathol. 24_, 45-57 [1996]). Podem ser usados ensaios específicos de substrato marcador de droga de acordo com Tucker et al., Clin. Pharmacol. Ther. 70, 103-114 (2001) para se determinar a concentração de inibição de 50% (IC50) de um composto de fórmula I para as enzimas principais P450 de metabolização de droga tais como, por exemplo, CYP1A2, 18 ΡΕ1322634 CYP2A6, CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP2E1, CYP3A4/5 e CP4A9/11.

As constantes de inibição Ki ou os valores de IC50 derivados por estes ensaios in vitro proporcionam uma medida da capacidade de inibição do composto testado de acordo com a razão da concentração de droga no plasma face à constante de inibição respectiva Ki, onde uma razão >1,0 resulta num risco elevado, 1,0-0,1 num risco médio, e < 0,1 num baixo risco de interacção metabólica da droga. Com base nisto, a N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]-4-piperazin-l-ilmetil-benzamida possui um risco muito inferior de interacções droga-droga com as 2 enzimas P450 mais importantes, CYP2D6 e CYP3A4/5, em metabolismo de droga humano (ver documento de orientação da U.S. Food and Drug Administration) quando comparada com o STI571.

Os compostos de fórmula I e os sais de tais compostos que têm pelo menos um grupo formador de sal são preparados em conformidade com processos conhecidos per se. O processo de acordo com a invenção é caracterizado por: i) um composto de fórmula III

P), 19 ΡΕ1322634

em que Rn e Rn são cada um independentemente do outro alquilo inferior e Ri, R2 e R3 são conforme acima definido, grupos funcionais presentes num composto de fórmula III, com a excepção dos grupos que participam na reacção, estando se necessário na forma protegida, ou um sal de tal composto, é feito reagir com um composto de fórmula IV

em que os substituintes são conforme acima definido, grupos funcionais presentes num composto de fórmula IV, com a excepção do grupo guanidino que participa na reacção, estando se necessário na forma protegida, ou com um sal de tal composto, e quaisquer grupos protectores presentes são removidos, ou ii) um composto de fórmula V

(V), 20 ΡΕ1322634

em que Ri6 é um radical de fórmula -N(Rg)-H, onde R9 é conforme acima definido, e os restantes radicais R13, R14, Ris e R17 hidrogénio; e os restantes substituintes são conforme acima definido, grupos funcionais presentes num composto de fórmula V, com a excepção do grupo amino que participa na reacção, estando se necessário na forma protegida, é feito reagir com um composto de fórmula VI HO-C(=X)-(Y)n-R10 (VI), em que os substituintes e símbolos são conforme acima definido, grupos funcionais presentes num composto de fórmula VI, com a excepção do grupo HO-C(=X) que participa na reacção, estando se necessário na forma protegida, ou com um derivado reactivo de um composto de fórmula VI, e quaisquer grupos protectores presentes são removidos, e, se desejado, um composto de fórmula I obtenível por qualquer um dos processos i) ou ii) é convertido no seu sal, ou um sal obtenível de um composto de fórmula I é convertido no composto livre. O procedimento para as variantes supracitadas do processo é explicado em detalhe abaixo:

Notas gerais:

Os produtos finais de fórmula I podem conter 21 ΡΕ1322634 substituintes que podem também ser usados como grupos protectores em materiais de partida para a preparação de outros produtos finais de fórmula I. Assim, dentro do âmbito deste texto, só um grupo facilmente removível que não seja um constituinte do produto final particular desejado de fórmula I é designado de "grupo protector", a menos que o contexto indique de outro modo.

Grupos protectores, e a forma como são introduzidos e removidos, são descritos, por exemplo, em "Pro-tective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press,

Londres, Nova Iorque 1973, e em "Methoden der organischen Chemie", Houben-Weyl, 4a edição, Vol. 15/1, Georg-Thieme-Verlag, Estugarda 1974 e em Theodora W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, Nova Iorque 1981. Uma característica dos grupos protectores é que eles podem ser facilmente removidos, isto é, sem a ocorrência de reacções secundárias indesejadas, por exemplo por solvólise, redução, fotólise ou alternativamente sob condições fisiológicas.

Processo i):

De preferência Rn e R12 são cada um metilo.

Grupos funcionais livres num composto de fórmula IV que são vantajosamente protegidos por grupos protectores 22 ΡΕ1322634 facilmente removíveis são especialmente grupos amino, mas também grupos hidroxi e carboxi.

Um sal de um composto de fórmula IV é preferencialmente um sal de adição de ácido, por exemplo um nitrato ou um dos sais de adição de ácido mencionados para os produtos finais de fórmula I. A reacção é levada a cabo num solvente ou agente de dispersão apropriado, por exemplo um álcool apropriado, tal como 2-metoxi-etanol, ou um alcanol inferior apropriado, por exemplo isopropanol, a uma temperatura desde a temperatura ambiente (aprox. 20 °C) até 150 °C, por exemplo sob refluxo. Especialmente quando o composto de fórmula IV é usado na forma de um sal, aquele sal é convertido no composto livre, preferencialmente in situ, por adição de uma base apropriada, tal como um hidróxido de metal alcalino, por exemplo hidróxido de sódio.

O material de partida de fórmula III é obtido fazendo reagir um composto de fórmula IX n

em que os substituintes são conforme acima definido, com um composto de fórmula X 11 ΡΕ1322634 23

OR

25 R R24° /

N \ (X). R, R12 em que R24 e R25 são cada um alquilo inferior e os restantes substituintes são conforme acima definido, de forma análoga à descrita no Pedido de Patente Europeia com N° de Publicação 233461. Representantes típicos de um composto de fórmula X são N,N-dimetilformamida-dimetilacetal e N,N-dimetilacetamida-dimetilacetal. A reacção é levada a cabo com aquecimento dos reagentes de fórmulas IX e X durante várias horas, por exemplo de 4 a 24 horas, a uma temperatura de aproximadamente 50 °C a 150 °C, na ausência ou, se necessário, na presença, de um solvente. O material de partida de fórmula III é alternativamente obtido fazendo reagir um composto de fórmula IX com um éster de fórmula R3-C (=0)-0-CH2-CH3 onde R3 é como acima definido, e fazendo reagir o produto resultante com uma amina de fórmula H-N(Rn)-Ri2 onde os substituintes são conforme acima definido.

O material de partida de fórmula IV é obtido na forma de um sal de adição de ácido fazendo reagir um composto de fórmula XI ΡΕ1322634 24

(Xi), em que os substituintes são conforme acima definido, com cianamida (NC-NH2) . A reacção é levada a cabo num solvente ou agente de dispersão apropriado, por exemplo um álcool apropriado, por exemplo um alcanol inferior apropriado como etanol, na presença de quantidades equimolares do ácido formador de sal a uma temperatura desde a temperatura ambiente até 150 °C, por exemplo sob refluxo.

Processo ii):

Grupos funcionais livres num composto de fórmula V ou VI que são vantajosamente protegidos por grupos protectores facilmente removíveis são especialmente grupos amino.

Um derivado reactivo de um composto de fórmula VI em que X é oxo é especialmente um éster reactivo (activado), um anidrido reactivo ou uma amida cíclica reactiva. O mesmo é verdade para os derivados em que X tem um das outras definições dadas acima. 25 ΡΕ1322634 Ésteres reactivos (activados) de um ácido de fórmula VI são especialmente ésteres insaturados no átomo de carbono de ligação do radical de esterificação, por exemplo do tipo éster de vinilo, tais como ésteres de vinilo (obteníveis, por exemplo, por transesterificação de um éster correspondente com acetato de vinilo; método do éster de vinilo activado), ésteres de carbamoilvinilo (obteníveis, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com um reagente de isoxazólio; 1,2-oxazólio ou método de Woodward), ou ésteres de 1-alcoxi inferior-vinilo (obteníveis, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com um alcoxi inferior-acetileno; método do etoxiacetileno), ou ésteres do tipo amidino, tais como ésteres de amidino N,N'-disubstituídos (obteníveis, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com uma carbodiimida Ν,Ν'-disubstituída apropriada, por exemplo Ν,Ν'-diciclo-hexilcarbodiimida; método da carbodiimida), ou ésteres de amidino Ν,Ν-disubstituídos (obteníveis, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com uma cianamida Ν,Ν-disubstituída; método da cianamida), ésteres arílicos apropriados, especialmente ésteres fenílicos adequadamente substituídos por substituintes atractores de electrões (obteníveis, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com um fenol adequadamente substituído, por exemplo 4-nitrofenol, 4-metilsulfonil-fenol, 2,4,5-tri-clorofenol, 2,3,4,5,6-pentacloro-fenol ou 4-fenildiazo-fenol, na presença de um agente de condensação, tal como 26 ΡΕ1322634 Ν,Ν'-diciclo-hexilcarbodiimida; método dos ésteres arílicos activados), ésteres cianometilicos (obteníveis, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com cloroace-tonitrilo na presença de uma base; método dos ésteres cianometilicos), tio-ésteres, especialmente não substituídos ou substituídos, por exemplo nitro-substituídos, feniltio ésteres (obteníveis, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com tiofenóis não substituídos ou substituídos, por exemplo nitro-substituídos, inter alia pelo método do anidrido ou da carbodiimida; método dos ésteres de tiol activados), amino ou amido ésteres (obteníveis, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com um composto N-hidroxi-amino ou N-hidroxi-amido, por exemplo N-hidroxi-succinimida, N-hidroxi-piperidina, N-hidroxi-ftalimida ou 1-hidroxi-benzotriazol, por exemplo pelo método do anidrido ou da carbodiimida; método dos ésteres N-hidroxi activados), ou ésteres silílicos (os quais são obteníveis, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com um agente sililante, por exemplo hexametildisilazano, e reagem facilmente com grupos hidroxi mas não com grupos amino).

Anidridos de um ácido de fórmula VI podem ser simétricos ou preferencialmente anidridos mistos daquele ácido, por exemplo anidridos com ácidos inorgânicos tais como halogenetos ácidos, especialmente cloretos ácidos (obteníveis, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com cloreto de tionilo, pentacloreto de fósforo ou 27 ΡΕ1322634 cloreto de oxalilo; método do cloreto ácido), azidas (obteníveis, por exemplo, a partir de um éster ácido correspondente via hidrazida correspondente e tratamento do mesmo com ácido nitroso; método da azida), anidridos com semiderivados de ácido carbónico, tais como ésteres correspondentes, por exemplo semiésteres de alquilo inferior de ácido carbónico (obteníveis, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com ésteres de alquilo inferior de ácido halofórmico, tal como clorofórmico, ou com uma 1-alcoxi inferior-carbonil-2-alcoxi inferior-1,2-di-hidro-quinolina, por exemplo 1-alcoxi inferior-carbonil-2-etoxi-1,2-di-hidroquinolina; método dos anidridos ácidos 0-alquilcarbónicos mistos), ou anidridos com ácido fosfórico di-halogenado, especialmente diclorado (obtenível, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com oxi-cloreto de fósforo; método do oxicloreto de fósforo), ou anidridos com ácidos orgânicos, tais como anidridos mistos com ácidos carboxílicos orgânicos (obteníveis, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com um haleto de ácido alcano inferior- ou fenilalcano-carboxílico não substituído ou substituído, por exemplo cloreto de ácido fenilacético, cloreto de ácido piválico ou cloreto de ácido trifluoroactético; método dos anidridos de ácidos carboxílicos mistos) ou com ácidos sulfónicos orgânicos (obteníveis, por exemplo, por tratamento de um sal, tal como um sal de metal alcalino, do ácido correspondente, com um haleto de ácido sulfónico orgânico apropriado, tal como um de alcano inferior ou de arilo, por exemplo cloreto de ácido metano- ou p-tolueno-sulfónico; método dos anidridos 28 ΡΕ1322634 de ácidos sulfónicos mistos), e anidridos simétricos (obteníveis, por exemplo, por condensação do ácido correspondente na presença de uma carbodiimida ou de 1-dietilaminopropino; métodos dos anidridos simétricos).

Amidas cíclicas apropriadas são especialmente amidas com diazaciclos de cinco membros de carácter aromático, tais como amidas com imidazóis, por exemplo imi-dazol (obtenível, por exemplo, por tratamento do ácido correspondente com N,N'-carbonildiimidazol; método da imidazolida), ou pirazóis, por exemplo 3,5-dimetil-pirazol (obtenível, por exemplo, por intermédio da hidrazida ácida por tratamento com acetilacetona; método da pirazolida).

Derivados de ácidos de fórmula VI que podem ser usados como agentes de acilação podem também ser formados in situ. Por exemplo, ésteres de amidino N,N'-disubsti-tuídos podem ser formados in situ fazendo reagir uma mistura do material de partida de fórmula V e o ácido usado como agente de acilação na presença de uma carbodiimida N,N-disubstituída apropriada, por exemplo N,N'-diciclo-hexilcarbodiimida. Além disso, os amino ou amido ésteres dos ácidos usados como agentes de acilação podem ser formados na presença do material de partida de fórmula V a ser acilado, fazendo reagir uma mistura dos correspondentes materiais de partida ácido e amino na presença de uma carbodiimida N,N'-disubstituída, por exemplo N,N'-diciclo-hexil-carbodiimida, e de uma N-hidroxi-amina ou N-hidroxi-amida, por exemplo N-hidroxisuccinimida, quando apropriado 29 ΡΕ1322634 na presença de uma base adequada, por exemplo 4-dime-tilamino-piridina. A reacção é preferencialmente levada a cabo fazendo reagir um derivado de ácido carboxilico reactivo de um composto de fórmula VI com um composto de fórmula V em que o grupo amino que participa na reacção está na forma livre. A reacção pode ser levada a cabo de uma forma conhecida per se, estando as condições reaccionais especialmente dependentes de se, e como, o grupo carboxi do agente de acilação foi activado, normalmente na presença de um solvente ou diluente apropriado ou de uma mistura destes e, se necessário, na presença de um agente de condensação, o qual, por exemplo quando o grupo carboxi que participa na reacção está na forma de um anidrido, pode também ser um agente de ligação a ácido, com arrefecimento ou aquecimento, por exemplo numa gama de temperatura desde aproxima-damente -30 °C até aproximadamente +150 °C, especialmente de cerca de 0 °C a +100 °C, preferencialmente desde a temperatura ambiente (aprox. +20 °C) até +70 °C, num vaso reaccional aberto ou fechado e/ou na atmosfera de um gás inerte, por exemplo azoto. Agentes de condensação usuais são, por exemplo, carbodiimidas, por exemplo N,N'-dietil-, N,N'dipropil-, N,N'-diciclo-hexil- ou N-etil-N'-(3-dime-tilaminopropil)-carbodiimida, compostos de carbonilo apropriados, por exemplo carbonildiimidazol, ou compostos de 1,2-oxazólio, por exemplo 3'-sulfonato de 2-etil-5-fenil- 30 ΡΕ1322634 1,2-oxazólio e perclorato de 2-terc-butil-5-metil-isoxa-zólio, ou um composto acilamino apropriado, por exemplo 2-etoxi-l-etoxicarbonil-1,2-di-hidroquinolina. Agentes de condensação de ligação a ácido usuais são, por exemplo, carbonatos ou hidrogenocarbonatos de metal alcalino, por exemplo carbonato ou hidrogenocarbonato de sódio ou potássio (habitualmente juntamente com um sulfato), ou bases orgânicas, tais como, habitualmente, piridina ou tri-alquilaminas inferiores estericamente impedidas, por exemplo N, N-diisopropil-N-etil-amina.

Numa variante preferida do processo ii) um composto de fórmula V é reagido com um composto de fórmula VI num solvente apropriado, tal como por exemplo N,N-dimetilformamida, na presença de anidrido propilfosfónico (Fluka, Buchs, Suiça) e trietilamina, preferencialmente à temperatura ambiente.

Sais de adição de ácido de compostos de fórmula I são obtidos de modo usual, por exemplo por tratamento com um ácido ou com um reagente de permuta aniónica apropriado.

Os sais de adição de ácido podem ser convertidos nos compostos livres de modo usual, por exemplo por tratamento com um agente básico apropriado.

Podem-se separar misturas de isómeros nos isómeros individuais de um modo conhecidos per se, por exemplo por cristalização fraccionada, cromatografia, etc. 31 ΡΕ1322634

Os processos acima descritos, incluindo os processos para a remoção dos grupos protectores e os passos adicionais do processo, são, salvo indicação em contrário, levados a cabo de uma forma conhecida per se, por exemplo na presença ou ausência de solventes e diluentes preferencialmente inertes, se necessário na presença de agentes de condensação ou catalisadores, a temperatura reduzida ou elevada, por exemplo numa gama de temperatura desde aproximadamente -20 °C até aproximadamente 150 °C, especialmente desde aproximadamente 0 °C até aproximadamente +70 °C, preferencialmente desde aproximadamente +10 °C até aproximadamente +50 °C, e mais especialmente à temperatura ambiente, num vaso apropriado e se necessário numa atmosfera de gás inerte, por exemplo numa atmosfera de azoto.

Naquelas passos do processo, e levando em linha de conta todos os substituintes na molécula, se necessário, por exemplo quando estão presentes radicais facilmente hidrolisáveis, deverão ser usadas condições reaccionais especialmente moderadas, tais como tempos de reacção curtos, agentes moderadamente ácidos ou básicos a concentrações baixas, quantidades dadas pelas razões estequiométricas, e seleccionados catalisadores, solventes, e condições de temperatura e/ou pressão apropriados. A invenção refere-se também aquelas formas do processo nas quais um composto obtenível como intermediário 32 ΡΕ1322634 em qualquer fase do processo é usado como material de partida e os restantes passos são levados a cabo ou o processo é interrompido em qualquer fase ou em que um material de partida é formado nas condições reaccionais ou é usado na forma de um derivado reactivo ou sal. É preferível começar com materiais de partida os quais, em conformidade com o processo, resultam nos compostos acima descritos como sendo especialmente valiosos.

De preferência, os compostos de fórmula I são preparados de acordo com os processos e passos processuais definidos nos Exemplos. A presente invenção refere-se também a novos materiais de partida e/ou intermediários e a processos para a sua preparação. Os materiais de partida usados e as condições reaccionais escolhidas são preferencialmente aqueles que resultam nos compostos descritos neste Pedido como sendo especialmente preferidos. A invenção refere-se além disso ao uso de um composto de fórmula I para a preparação de composições farmacêuticas para uso no tratamento de seres humanos ou animais, especialmente para o tratamento de tumores, tais como gliomas, tumores ovarianos, tumores da próstata, tumores do cólon, e tumores do pulmão, tais como, e em especial, carcinoma do pulmão de pequenas células, e tumores do peito ou outros tumores ginecológicos. 33 ΡΕ1322634

Dependendo da espécie, idade, condição individual, modo de administração e do quadro clinico em questão, doses eficazes, por exemplo doses diárias de cerca de 1-2500 mg, preferencialmente 1-1000 mg, especialmente 5-500 mg, são administradas a animais de sangue quente, incluindo seres humanos, de cerca de 70 kg de massa corporal. A invenção refere-se também a preparações farmacêuticas que contêm uma quantidade eficaz, especialmente uma quantidade eficaz para a prevenção ou tratamento de um das ditas doenças, de um composto de fórmula I juntamente com portadores farmaceuticamente aceitáveis que são apropriados para administração tópica, entérica, por exemplo oral ou rectal, ou parentérica, e podem ser inorgânicos ou orgânicos e sólidos ou líquidos. Para administração oral são especialmente usados comprimidos ou cápsulas de gelatina contendo a substância activa juntamente com diluentes, por exemplo lactose, dextrose, sacarose, manitol, sorbitol, celulose e/ou glicerina, e/ou lubrificantes, por exemplo sílica, talco, ácido esteárico ou sais dos mesmo, tipicamente estearato de magnésio ou cálcio, e/ou polietileno glicol. Os comprimidos podem igualmente conter ligantes, por exemplo silicato de alumínio e magnésio, amidos, tipicamente amido de milho, trigo ou arroz, gelatina, metilcelulose, carboximetil-celulose de sódio e/ou polivinilpirrolidona, e, se desejado, desintegrantes, por exemplo amidos, ágar-ágar, ácido algínico, ou um sal do mesmo, tipicamente alginato de sódio, e/ou misturas efervescentes, ou adsorbentes, agentes 34 ΡΕ1322634 de coloração, aromatizantes, e agentes adoçantes. Os compostos farmacologicamente activos da presente invenção podem adicionalmente ser usados na forma de preparações para administração parentérica ou de soluções de infusão. Tais soluções são preferencialmente soluções aquosas isotónicas ou suspensões, estas possivelmente sendo preparadas antes do uso, por exemplo no caso de preparações liofilizadas contendo a substância activa só ou juntamente com um portador, por exemplo manitol. As substâncias farmacêuticas podem ser esterilizadas e/ou podem conter excipientes, por exemplo agentes conservantes, estabilizadores, molhantes e/ou emulsionantes, solubilizantes, sais para regulação da pressão osmótica, e/ou tampões. As presentes preparações farmacêuticas que, se desejado, podem conter mais substâncias farmacologicamente activas, tais como antibióticos, são preparadas de uma forma conhecida per se, por exemplo por intermédio de processos convencionais de mistura, granulação, revestimento, dissolução ou liofilização, e contêm desde cerca de 1% até 100%, especialmente desde cerca de 1% até cerca de 20%, da substância ou substâncias activa (s).

Os seguintes Exemplos ilustram a invenção. Os valores de Rf são determinados em placas de camada fina de gel de sílica (Merck, Darmstadt, Alemanha). A razão entre os eluentes nas misturas de eluentes usados é dada em proporções em volume (v/v), e as temperaturas são dadas em graus Celsius. ΡΕ1322634 35

Abreviaturas : conc. N°. Ex. min p.f. tR % p/p concentrado(a) número do exemplo minuto(s) ponto de fusão tempo de retenção percentagem em peso

Exemplo de Referência 1: Trata-se uma suspensão de 466 mg (1 mmol) de cloridrato de 4-clorometil-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]-benzamida em 25 ml de etanol seco com 381 μΐ (3 mmol) de N-etilpiperazina e depois aquece-se sob refluxo durante 16 horas. A solução amarela é arrefecida até à temperatura ambiente e decantada de uma pequena quantidade de um resíduo insolúvel castanho que se forma na parede do balão. 0 solvente é evaporado e o residuo retomado numa solução de ácido cítrico (10% p/p) e lavado com diclorometano. A camada aquosa é tornada básica por adição de solução de bicarbonato de sódio e carbonato de sódio e extraída três vezes com 150 ml de diclorometano contendo 2 ml de etanol. Os extractos orgânicos combinados são lavados com solução de cloreto de sódio conc., secos sobre sulfato de sódio, e evaporados. O resíduo foi agitado com 3 ml de acetato de etilo e o produto cristalino filtrado e lavado com uma pequena quantidade de acetato de etilo para obter-se 4-(4-etil-piperazin-l-ilmetil)-N-[4-metil-3- (4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]-benzamida; p.f. 209,5-210,5 °C; tR (HPLC)1’ 6,62 min. ΡΕ1322634 36

Exemplos 2-8: Os compostos são sintetizadas de análoga ao Exemplo 1:

Ex. N°. Composto 2 4-Dietilaminometil-N-[4-metil-3- (4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]-benzamida 3 4-Dimetilaminometil-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil] benzamida 4 N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]-4-pirrolidin-l-ilmetil-benzamida 5 N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]-4-morfolin-4-ilmetil-benzamida 6 4-(cis-3,5-Dimetil-piperazin-l-ilme- p.f. t] [°C] 148-151 127-131 166-170 219-221 135,5- til)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il- 138, 5 pirimidin-2-ilamino)-fenil]-benzamida 7 N-[4-Metil-3-(4-piridin-3-il- 197-199 pirimidin-2-ilamino)-fenil]-4-piperidin-l-ilmetil-benzamida 8 N-[4-Metil-3-(4-piridin-3-il- 209-210 pirimidin-2-ilamino)-fenil]-4-(4-propil-piperazin-l-ilmetil)-benzamida forma HPLC1* [min] 7,23 6.84 7,09 6.84 6,50 6, 66 7,43 37 ΡΕ1322634

Exemplo 9: Suspendem-se 25,8 g (300 mmol) de piperazina numa mistura de 25 ml de etanol e 25 ml de água. Após se ter formado uma solução quase límpida, adicionam-se gradualmente 12,9 g (30 mmol) de 4-clorometil-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]-benzamida. A solução amarela é fervida sob refluxo durante 14 horas, arrefecidas até à temperatura ambiente e filtrada através de Celite. Adicionam-se 100 ml de água à solução, evapora-se o etanol sob vácuo e adicionam-se 30 ml de NaOH 1 N, levando à cristalização do produto. Secagem a 50 mbar e 60 °C origina N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]-4-piperazin-l-ilmetil-benzamida; Rf = 0,15 (cloreto de metileno:acetato de etilo:metanol:solução aquosa conc. de hidróxido de amónio = 60:10:30:2); tR (HPLC)2) 14,6 min.

Exemplo 10: Dissolvem-se 4,8 g (10 mmol) de N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]-4-piperazin-l-ilmetil-benzamida em 20 ml de etanol sob aquecimento e adicionam-se 0,99 g de ácido metanossulfónico. Após adição de acetato de etilo o produto cristaliza. Secagem a 50 mbar e 60 °C origina metanossulfonato de N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]-4-piperazin-l-ilmetil-benzamida; Rf = 0,17 (cloreto de metileno:acetato de etilo:metanol:solução aquosa conc. de hidróxido de amónio = 60:10:30:2); tR (HPLC)2) 14,6 min; p.f. 242-245 °C. 38 ΡΕ1322634

Condições analíticas do HPLC: 1) Sistema de HPLC: Kontron 420 System; coluna: CC 250/4,6 nucleosil 100-5 C18; caudal: 1 ml/min.

Eluentes: A: água (+0,1% ácido trifluoroacético) B: acetonitrilo (+0,1% ácido trifluoroacético) Gradiente: 20% -» 0% A em B em 13 min e 100% B durante 5 min. 2) Sistema de HPLC: Coluna: 150 x 3,9 mm, empacotada com Symmetry C18 5μ (Waters), pré-equilibrada com eluente a) ; caudal 1,2 ml/min, detecção UV a 267 nm.

Eluentes: a): reagente de par iónico e metanol (420 ml + 580 ml) b): reagente de par iónico e metanol (40 ml + 960 ml)

Reagente de par iónico: 7,5 g de ácido 1-octanossulfónico dissolvido em cerca de 800 ml de H2O, valor de pH ajustado a 2,5 com ácido fosfórico e diluído com água a 1000 ml. Gradiente: 0% b) em a) durante 20 min, seguido por 0% -» 30% b) em a) em 10 min e 30% b) em a) durante 5 min.

Exemplo 11:

Comprimidos contendo 100 mg de um composto de fórmula I, por exemplo um dos compostos de fórmula I 39 ΡΕ1322634 descritos nos Exemplos 1-10, são normalmente preparados com a seguinte composição:

Composição:

Ingrediente activo 100 mg Lactose cristalina 240 mg Avicel 80 mg PVPPXL 20 mg Aerosil 2 mg Estearato de magnésio 5 mg 447 mg

Preparação: A substância activa é misturada com materiais portadores e comprimida numa máquina de fabrico de comprimidos (Korsch EKO, diâmetro de punção 10 mm).

Avicel é celulose microcristalina (FMC, Filadélfia, E.U.A.). PVPPXL é polivinilpirrolidona reticulada (BASF, Alemanha). Aerosil é sílica (Degussa, Alemanha).

Exemplo 12: Cápsulas contendo 100 mg de um composto de fórmula I, por exemplo um dos compostos de fórmula I descritos nos Exemplos 1-10, são normalmente preparadas com a seguinte composição: 40 ΡΕ1322634

Composição :

Ingrediente activo 100 mg

Avicel 200 mg PVPPXL 15 mg Aerosil 2 mg

Estearato de magnésio 1,5 mg 318,5 mg

Preparação: As cápsulas são preparadas misturando-se os componentes e enchendo-se a mistura em cápsulas de gelatina dura, tamanho 1.

Lisboa, 12 de Fevereiro de 2010 1 ΡΕ1322634

REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito.

Documentos de patentes citadas na Descrição * EP 0584429 A * EP 233481Â * 9983354 Â

Literatura que não é de patentes citada na Descrição ♦ E,·· U» vai. 52,525-2-5358 » Tfisfcs sis»; J. Meà Chs1SS4;; mi: 57, «51537 '* Bttehdttfsge? et ai Prsc tísti. Acsd. S& iUSAi. * tí, L>río-n et si, .’>ícogfí-f Reseerth ΙΑ'ί-Ο mi 5 ie.fcí73". 4432-8 V teij.T Ate'í.'ffg. 33S6, MV2, 56Í-568 Dtebu&inmyt, 19E3.vsíl25,: Í5S-87 * Bsí» «ts 0¾¾ and Use sí ^rteafe;

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Claims

ΡΕ1322634 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um derivado de N-fenil-2-pirimidina-amina de fórmula I

em que Ri é piridilo ligado a um átomo de carbono do anel, R2 e R3 são ambos hidrogénio, R4 é alquilo inferior, R5 e R6 são ambos hidrogénio, R7 é um radical de fórmula II, -N(R9)-C(=X)-(Y)n-Rio (II), onde R9 é hidrogénio, X é oxo, n é 0 e Rio é fenilo o qual é a) substituído por alquilo inferior que é substituído por mono- ou di-alquilamino inferior, ou b) substituído por um radical não substituído ou substituído por alquilo inferior seleccionado do grupo constituído por pirrolidinil-alquilo inferior, piperi- 2 ΡΕ1322634 dil-alquilo inferior e morfolinil-alquilo inferior, ou c) substituído por piperazinil-alquilo inferior o qual é opcionalmente substituído no anel piperazina por alquilo inferior C3-C7, e Rs é hidrogénio, em que o termo "inferior" denota radicais contendo até 7 átomos de carbono, inclusive, ou um sal de tal composto contendo pelo menos um grupo formador de sal.
2. Um composto de fórmula I de acordo com a reivindicação 1 o qual é N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]-4-piperazin-l-ilmetil-benza-mida, e sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.
3. Uma composição farmacêutica contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula I de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2 ou um sal farmaceuticamente aceitável de tal composto.
4. Uso de um composto de fórmula I de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2 ou um sal farmaceuticamente aceitável de tal composto para a preparação de composições farmacêuticas para o tratamento de uma doença proliferativa. Lisboa, 12 de Fevereiro de 2010