PT1322597E - Processo e intermediários - Google Patents

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PT1322597E
PT1322597E PT01975197T PT01975197T PT1322597E PT 1322597 E PT1322597 E PT 1322597E PT 01975197 T PT01975197 T PT 01975197T PT 01975197 T PT01975197 T PT 01975197T PT 1322597 E PT1322597 E PT 1322597E
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Ann M Eldridge
Johann Hiebl
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Glaxosmithkline Llc
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Description

DESCRIÇÃO "PROCESSO E INTERMEDIÁRIOS"
Campo da Invenção A presente invenção refere-se a um processo para produzir derivados de N-metil-L-alanina e a novos intermediários de processo.
Antecedentes da Invenção
Os processos para a preparação de derivados de N-metil-L-alanina a partir de intermediários de ácido ditioalcanóico e de N-metil-L-alanina foram descritos na Patente U.S. N° 5208020. Os compostos são úteis para ligar maitansinóides citotóxicos a agentes de ligação celular, tal como anticorpos. Os complexos de anticorpo/maitansinóide são úteis como profármacos activados por tumor.
Por exemplo, foi divulgada a síntese em multi-passos de N-metil-N-(3-metilditio-propanoil)-L-alanina. Em primeiro lugar, o ácido 3-metilditiopropanóico foi preparado através da adição de metanotiossulfonato de metilo em etanol a uma solução de ácido 3-mercaptopropanóico em água. Após extracção, lavagem e concentração, o ácido 3-metilditiopropanóico foi isolado por destilação. Foram adicionados isobutilcloroformato e trietilamina ao ácido 3-metilditiopropanóico em THF para formar o anidrido misto correspondente como intermediário. 1
Subsequentemente, foi adicionada uma mistura da N-metil-L-alanina e trietilamina em água. Após extracção, concentração e cromatografia, foi obtido um rendimento de 34% de N-metil-N-(3-metilditio-propanoil)-L-alanina.
Uma importante desvantagem dos processos da técnica anterior é a necessidade de dois passos de cromatografia para remover produtos secundários dos produtos de reacção desejados. Além disso, a utilização de isobutilcloroformato no esquema reaccional permite a racemização que conduz a um produto final contendo o D-enantiómero indesejado. Assim, existe uma necessidade na técnica para métodos melhorados para preparar derivados de N-metil-L-alanina com uma pureza óptica >95% de excesso enantiomérico (ee), em que os intermediários são mais estáveis, resultando em produtos secundários menos indesejados.
Sumário da Invenção
Um aspecto da invenção sao processos para a preparaçao de derivados de N-metil-L-alanina.
Outro aspecto da invenção são novos intermediários úteis para a preparação de derivados de N-metil-L-alanina.
Ainda outro aspecto da invenção são a preparação de complexos de agente de ligação celular/maitansinóide a partir dos derivados de N-metil-L-alanina ou novos intermediários produzidos através dos processos da invenção. 2
Descrição Detalhada da Invenção
Pela expressão "reagente de acoplamento", como aqui utilizada e nas reivindicações, entende-se um ou mais compostos que são capazes de formar um derivado activado de ácido metilditiopropiónico ou dos seus homólogos que são estáveis a hidrólise sob as condições reaccionais empregues e produz um composto de Fórmula I com uma pureza óptica >95% ee quando feito reagir com N-metil-L-alanina. A presente invenção proporciona um processo para a
preparação de compostos de Fórmula I
(U em que L é -CH-M-(CHJ,-
OU
em que
Ri é H, metilo ou etilo; CB2CH3 M é uma ligaçao directa, CH2, “C*” ou 3 a é 0 ou um número inteiro de 1 a 9, quando M for uma ligação directa, desde que, quando M for um ou mais átomos de carbono, a é 0 ou um número inteiro de 1 a 8 ; d é um número inteiro de 3 a 8; e Z é H ou SR2, em que R2 é alquilo linear, alquilo ramificado, alquilo ciclico, arilo, arilo substituído ou heterocíclico. A presente invenção também proporciona novos intermediários que são úteis no processo da invenção. A presente invenção também proporciona a preparação de complexos de anticorpo/maitansinóide através do processo da invenção.
0 processo da invenção compreende os passos de reagir um sal de um ácido mercaptoalcanóico de Fórmula II o li
HO LSH (II) e
em que L é como acima definido; tiolsulfonatos de Fórmula III 060,80 4 (III) em que Q é H, alquilo linear, alquilo ramificado, alquilo cíclico, arilo, arilo substituído ou heterocíclico,
numa reacção de formação de bissulfureto, em que o sal de sódio de um composto de Fórmula II em água é adicionado lentamente a um composto de Fórmula III em tetra-hidrofurano, a uma gama de temperatura de cerca de -15 °C a cerca de -5 °C para formar intermediários de Fórmula IV
HO
LSSQ (IV) em que L e Q são como acima definidos; e
fazer reagir um composto de Fórmula IV numa reacção de esterificação com um reagente de acoplamento, tal como aquele de Fórmula V
(v> em que R3 é H ou sal substituído de urónio de Fórmula
\A χ·
Jf Λ em que X é PF6 ou BF4 , R7 e Rj são independentemente alquilo linear, alquilo ramificado, cicloalquilo ou (CH2)e, em que e é um 5 número inteiro de 3 a 8 com a condição de que quando R7 for (CH2)e, Re é uma ligação directa, ou um sal substituído do fosfónio de Fórmula /«t» x-
L -
I
N n/ em que X é PF6 ou BF4 , R9 e Rio sao independentemente alquilo linear, alquilo ramificado, cicloalquilo ou heterocíclico; e R4 e R5 são independentemente H, alquilo linear, alquilo ramificado, alquilo cíclico, arilo, arilo substituído ou heterocíclico, ou R4 e R5 conjuntamente formam uma ligação.
Se R3 for H, a reacçao é realizada na presença de um reagente de carbodiimida de Fórmula VI
R 11 N:
=N-R 12 (VI) em que R11 e R12 são independentemente alquilo linear, alquilo ramificado, alquilo cíclico, arilo, arilo substituído ou heterocíclico, ou Rn é etilo e Rn é dimetilaminopropilo de modo que o reagente de carbodiimida de Fórmula (VI) seja cloridrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (EDCI.HC1). De um modo preferido, o reagente de carbodiimida de Fórmula VI é cloridrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (EDCI-HC1) em que Rn é etilo e R42 é dimetilaminopropilo ou 6 1,3-diciclo-hexilcarbodiimida (DCC) em que Rll e R12 são ciclo-hexilo. É particularmente preferido EDCI.HC1.
Alternativamente, se R3 for um sal de urónio ou fosfónio, a reacção é realizada na presença de uma base, de um modo preferido, trietilamina ou diisopropiletilamina.
Estas reacções formam compostos de Fórmula VII
(VII) em que R4, R5, L e Q são como acima definidos.
A invenção proporciona um composto de Fórmula VII
(VII) em que R4 e R5 são independentemente H, alquilo linear, alquilo ramificado, alquilo cíclico, arilo, arilo substituído ou heterocíclico, ou R4 e R5 conjuntamente formam uma ligação, L é
P -CH M (CH,), 7 ou —(<
em que
Ri é H, metilo ou etilo; CH3 CH2CH3 M é CH2, ‘CH· ou a é 0 ou um número inteiro de 1 a 8; d é um número inteiro de 3 a 8; e Q é H, alquilo linear, alquilo ramificado, alquilo cíclico, pirrolilo, furilo ou tiofeno.
Os compostos de Fórmula VII são ésteres activados e são novos intermediários do processo da invenção e são estáveis a hidrólise sob as condições reaccionais empregues e permitem acoplamento sem racemização com N-metil-alanina.
De um modo preferido, os compostos são cristalinos.
Os compostos de Fórmula VII são subsequentemente feitos reagir com N-metil-L-alanina (Fórmula VIII)
(VIII) 8 para formar um composto de Fórmula I.
Além disso, a presente invenção também inclui um processo para a preparação de compostos de Fórmula I compreendendo fazer reagir um composto de Fórmula VII com N-metil-L-alanina para formar um composto de Fórmula I e compostos de Fórmula I preparados pelo processo.
Os exemplos de alquilos lineares incluem metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo e hexilo. Os exemplos de alquilos ramificados incluem isopropilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, isopentilo e 1-etil-propilo. Os exemplos de alquilos cíclicos incluem ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo e ciclo-hexilo.
Os exemplos de arilos incluem fenilo e naftilo. Os exemplos de arilos substituídos incluem arilos substituídos com alquilo, halogéneo (tais como, cloro, bromo e iodo), nitro, amino, ácido sulfónico, ácido carboxílico, hidroxilo e alcoxilo.
Os heteroátomos são seleccionados de 0, N e S. Exemplos de heterocíclicos incluem pirrolilo, piridilo, furilo e tiofeno.
Os compostos de Fórmula II e os seus sais podem ser preparados por métodos conhecidos, a partir de materiais iniciais prontamente disponíveis, tal como descrito na Patente U.S. N° 5208020.
Os compostos de Fórmula III, tais como metanotiolsulfonato de metilo e benzenotiolsulfonato de S-fenilo podem ser adquiridos em empresas fornecedoras de produtos químicos, tal como Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, WI) ou preparados a partir 9 de materiais iniciais prontamente disponíveis através de métodos conhecidos de oxidação de bissulfureto, tais como descritos em Xia et ai., Synth. Commun. 27, 1301-1308 (1997) e Pinnick et al., J. Org. Chem. 45, 930-932 (1980), desde que Q não inclua quaisquer unidades que tornem inoperante o processo da invenção.
Os compostos exemplificativos de Fórmula V são: N-hidroxissuccinimida (Va); tetrafluoroborato de O-(N-succinimidil)-1,1,3,3- bis(tetrametileno)urónio ou o seu correspondente de hexafluorofosfato (Vb); tetrafluoroborato de O-(N-succinimidil)-1,1,3,3-tetrametil- urónio ou o seu correspondente de hexafluorofosfato (Vc);
Os compostos de Fórmula V podem ser adquiridos em empresas fornecedoras de produtos químicos, tal como Fluka Chemical Corp. (Milwaukee, WI) ou preparados por métodos conhecidos a partir de materiais iniciais prontamente disponíveis. Por exemplo, os compostos de Fórmula V podem ser preparados através do método de Knorr et al. em Tetrahedron Lett. 30, 1927-1930 (1989).
Os compostos de Fórmula VI podem ser adquiridos em empresas fornecedoras de produtos químicos, tal Aldrich Chemical Co. (St. Louis, MO) ou preparados por métodos conhecidos a partir de materiais iniciais prontamente disponíveis. O composto de Fórmula VII (N-metil-L-alanina) pode ser adquirido à BACHEM Bioscience Inc. (King of Prussia, PA). 10 A reacção para converter compostos de Fórmula II em compostos de Fórmula IV é realizada por adição de uma solução aquosa de um sal de um composto de Fórmula II a um composto de Fórmula III num solvente orgânico polar imiscível em água, de um modo preferido, a uma gama de temperatura de menos de -5 °C. De um modo muito preferido, uma solução aquosa do sal de sódio de um composto de Fórmula II é adicionado lentamente a uma solução do composto de Fórmula III em tetra-hidrofurano a uma gama de temperatura de cerca de -15 °C a cerca de -5 °C. Uma gama de temperatura particularmente preferida é cerca de -10 °C a cerca de -5 °C.
De um modo preferido, a reacção para converter compostos de Fórmula IV nos ésteres activados de Fórmula VII, quando R3 da Fórmula V for H, é realizada na presença de um reaqente de carbodiimida a uma gama de temperatura de cerca de 0 °C a cerca de 20 °C, de um modo preferido, cerca de 0 °C a cerca de 12 °C, num solvente, tal como cloreto de metileno. Quando R3 da Fórmula V for um sal de urónio ou fosfónio, a reacção é realizada na presença de uma base, de um modo preferido, trietilamina ou diisopropiletilamina.
De um modo preferido, a reacção para converter compostos de Fórmula VII em compostos de Fórmula I é realizada à temperatura ambiente num solvente polar, tal como etanol aquoso/trietilamina.
Os reagentes, condições e intermediários utilizados na presente invenção proporcionam rendimentos elevados dos compostos desejados de Fórmula I, tornando o processo apropriado para utilização à escala industrial. Além disso, o processo da invenção tem outras vantagens relativamente aos processos divulgados na Pat. U.S. N° 5208020. Especificamente, o processo 11 reivindicado converte compostos de Fórmula II em compostos de Fórmula IV sem a formação de produtos secundários indesejados de dissulfuretos simétricos de ácido tiopropriónico ou os seus homólogos. Consequentemente, não é necessário um passo de isolamento para compostos de Fórmula IV e pode ser utilizado um processo de um único vaso reaccional para converter compostos de Fórmula II em novos intermediários de Fórmula VII, os quais podem ser isolados. Alternativamente, o intermediário de Fórmula VII não é isolado e pode ser utilizado um processo de um único vaso reaccional para converter compostos de Fórmula II em compostos de Fórmula I.
Além disso, o processo reivindicado produz os ésteres activados de Fórmula VII que são cristalinos e estáveis à hidrólise. Consequentemente, os compostos de Fórmula I produzidos através da reacção da N-metil-L-alanina com os compostos de Fórmula VII são substancialmente L-isómero opticamente puro.
De um modo muito preferido, o processo da presente invenção é utilizado para preparar um composto de Fórmula Ia que é N-metil-N-(3-metilditiopropanoil)-L-alanina
O
(Ia) 12 0 processo preferido é mostrado esquematicamente abaixo. llia
MeS02SMe
HO
NaHCOg
THF/HzO
EDCI.HCI (Via) CH2CI/THF
O
Vila
VIII
HO
N-Metil-L-Alanina - — >
la
EtOH, TEA , H20 O processo da invenção pode ser utilizado para fazer complexos de agente de ligação celular/maitansanóide que são úteis como profármacos activados por tumor. Os compostos de Fórmula VII podem ser convertidos num complexo de agente de ligação celular/maitansinóide. Além disso, os compostos de Fórmula I produzidos através do processo da invenção são utilizados como descrito na Patente U.S. N° 5208020, para produzir derivados de maitansanóide contendo N-metil-L-alanina. Estes derivados são depois conjugados a agentes de ligação celular, de um modo preferido, anticorpos, através de vários ligantes. De um modo preferido, a ligação é uma ligação persulfureto. 13
Um complexo de agente de ligação celular/maitansinóide exemplificativo pode ser preparado através de um processo compreendendo os seguintes passos: (1) esterificar maitansinol com um composto de Fórmula I preparado através do processo da invenção para formar um éster de maitansinóide contendo dissulfureto; (2) reduzir o éster de maitansinóide contendo dissulfureto preparado através do passo (1) a um maitansinóide contendo t i o 1 ; (3) introduzir grupos ditiopiridilo num agente de ligação celular; e (4) ligar o maitansinóide contendo tiol produzido através do passo (2) ao agente de ligação celular ditiopiridilo do passo (3) através de uma ligação persulfureto. A presente invenção será agora descrita com referência ao seguinte exemplo especifico, não limitante.
EXEMPLO
Preparação de N-metil-N-(3-metilditiopropanoil)-L-alanina (Ia)
Todo os reagentes aqui utilizados foram proporcionados como primeiramente descrito abaixo. 14
Passo 1: Preparação de ácido metilditiopropiónico (IVa)
Um balão de 3 litros de fundo redondo com três tubuladuras equipado com um agitador e um termómetro aéreos foi carregado com ácido 3-mercaptopropiónico (416,6 g, 3,93 moles, 1 equiv., Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO) e água (pureza de HPLC, 1,36 L, 1,36 kg, Burdick & Jackson, Muskegon, MI). Foi adicionado bicarbonato de sódio sólido (362,5 g, 4,31 moles, 1,1 equiv., Mallinckrodt, Fillipsburg, NJ) a uma taxa para controlar a espuma da gasificação do dióxido de carbono. A adição foi endotérmica e demorou 1 hora, diminuindo a temperatura de 20 °C a 10 °C. Um balão de 12 L de fundo redondo com três tubuladuras, equipado com um agitador aéreo, um funil de adição de 2 L, um termómetro e uma entrada de azoto foi carregado com metanotiolsulfonato de metilo (540,0 g, 441,5 mL, 4,28 moles, 1,09 equiv., Aldrich Chemical Co. ) e tetra-hidrofurano (3,25 L, 2,89 kg, Burdick & Jackson) e a solução arrefecida com um banho de etilenoglicol/gelo seco a -8 a -10 °C e colocada sob uma atmosfera de azoto. A solução aquosa preparada de mercaptopropionato de sódio foi transferida para o funil de adição e adicionada à mistura de reacção a uma taxa para manter a temperatura de reacção menor ou igual a -5 °C.
Nesta escala, a adição demorou 2 horas e a gama de temperatura foi -10 a -5 °C. A agitação foi mantida à mesma gama de temperatura e após 15 minutos um ensaio de controlo do processo em HPLC mostrou o desaparecimento do ácido 3-mercaptopropiónico. Após agitar durante 40 minutos, foi adicionado ácido clorídrico aquoso (3 N, 500 mL, EM Science, Gibbstown, NJ) à mistura de reacção até o pH registar 3,0 a 3,5 através de tiras de indicador ColorpHast (gama de pH de 0 a 6). A mistura de reacção foi transferida para um funil de decantação de 6 L, deixada a separar durante 10 minutos e a fase orgânica superior isolada. A fase aquosa foi retornada ao balão de reacção de 12 L e foi 15 adicionado cloreto de metileno (1,6 L, 2,18 kg, J.T. Baker, Phillipsburg, NJ). Após agitar durante 10 minutos, as fases foram transferidas para um funil de decantação de 6 L e a camada orgânica inferior foi separada. As fases orgânicas foram combinadas e transferidas para um balão de 12 L com três tubuladuras equipado com um agitador aéreo. Foi adicionado sulfato de magnésio (1,33 kg) e após agitar durante 0,5 hora, a mistura foi filtrada através de um funil de Buchner. O residuo sólido foi lavado com cloreto de metileno (1,6 L, 2,18 kg) . Um ensaio do Karl-Fisher do filtrado e lavagens combinados mostrou 0,35% de água. O filtrado foi armazenado de um dia para o outro a 15 °C. Um perfil de impurezas do processo por HPLC do filtrado mostrou 97% de ácido metilditiopropiónico por percentagem de área, sem a presença de persulfureto simétrico do ácido 3-mercaptopropiónico.
Passo 2: Preparação de succinimidil-3-metilditiopropionato (Vila) O filtrado de ácido metilditiopropiónico foi transferido para um balão de 22 L de fundo redondo com três tubuladuras e arrefecido a 0 °C com um banho de gelo-sal. Foi adicionado cloridrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (1,28 kg, 6,68 moles, 1,7 equiv., Aldrich Chemical Co.) durante 40 minutos através de um funil de pó e foi observada uma subida de temperatura até 10 °C. Foi adicionada N-hidroxissuccinimida (525 g, 4,56 moles, 1,16 equiv., Aldrich Chemical Co. ) durante 8 minutos através de um funil e foi observado uma subida de temperatura de 2 °C. Após agitar durante 1 hora a 8 a 10 °C, um ensaio do processo por HPLC mostrou uma conversão de 66,7% em succinimidil-3-metilditiopropionato por percentagem de área; após 2 horas, o ensaio mostrou uma conversão de 98,4%. A reacção 16 foi parada após 2,5 horas e a mistura de reacção foi concentrada sob pressão de aspiração de água. 0 xarope resultante foi transferido para um balão de 22 L limpo de fundo redondo com três tubuladuras e foi adicionada água (8,3 L, 8,3 kg, Burdick & Jackson) enquanto a mistura foi agitada vigorosamente. Após agitar durante 0,5 hora à temperatura ambiente, o sólido branco que se formou foi filtrado utilizando um funil de vidro sinterizado. O bolo húmido de 1201 g foi lavado com água (2,1 L, 2, 1 kg, Burdick & Jackson) e seco durante 94 horas a 20 a 25 °C a aproximadamente 2 torr até peso constante numa estufa de vácuo GMP. A secagem produziu 927 g do produto succinimidil-3-metilditiopropionato (rendimento bruto de 94,7%) como um sólido branco com um perfil de impurezas por HPLC que mostra 94,6% por percentagem de área e um espectro de RMN que foi igual à referência de trabalho.
Análise de C, Η, N: Calculado: C 38,54; H 4,45; N 5,62; S 25,67
Encontrado: C 38,20; H 4,48; N 5,58; S 25,44 RMN de 13C (75 MHz, CDC13): δ 169, 0, 167, 1, 31,5, 31,1, 25,6, 23,2
Passo 3: Preparação de N-metil-N-(3-metilditiopropanol)-L-alanina (Ia)
Um balão de 22 L de fundo redondo com três tubuladuras equipado com um agitador aéreo, um funil de adição de 2 L, um termómetro e uma entrada de azoto foi carregado com succinimidil-3-metilditiopropionato (920 g, 3,69 moles, 1 equiv.) e etanol (absoluto, 11,0 L, 8,69 kg, Aaper, Shelbiville, KY) . Foram adicionados N-metil-L-alanina (496, 8 g, 4,82 moles, 1,3 equiv., BACHEM Bioscience Corp., King of Prussia, PA) e água (1,1 L, 1,1 kg, Burdick & Jackson) à temperatura ambiente. A suspensão branca resultante foi colocada 17 sob azoto e foi depois adicionada trietilamina (1,0 L, 0,73 kg, 7,21 moles, 1,96 equiv., Aldrich Chemical Co. ) a uma taxa tal que a temperatura não excedeu 27 °C. A adição de trietilamina nesta escala demorou 4,25 horas. Um ensaio de controlo do processo por HPLC após 1,75 horas da adição de trietilamina mostrou uma conversão em N-metil-N-(3-metilditiopropanoil)-L-alanina de 80,8%. Ensaios subsequentes após 3 horas de adição mostraram uma conversão de 96,1% e uma conversão de 99% após 4,25 horas. A mistura de reacção foi concentrada durante 16 horas utilizando uma bomba de diafragma a 35 a 40 °C. HPLC do concentrado mostrou um pico atrasado que se assumiu ser o éster etílico do produto. Foi adicionado acetato de etilo (7,0 L, 6,3 kg, J.T. Baker) e a mistura arrefecida com um banho de gelo a 15 °C. Foi adicionada água (3,0 L, 3,0 kg, Burdick & Jackson) e foi assinalada uma exotérmica a 2 °C. O pH, medido com papel indicador ColorpHast, foi ajustado 6,5 para 3 utilizando ácido clorídrico aquoso (3 N, 1,4 L, EM Science). A totalidade da mistura de reacção foi transferida para um funil de decantação de 12 L e a fase orgânica superior isolada. A fase aquosa foi retornada ao balão de reacção e extraída duas vezes com acetato de etilo (2 x 3,0 L, 5,52 kg total, J.T. Baker). As fases orgânicas combinadas foram lavadas duas vezes com água (2 x 2,0 L, 4,0 kg total, um Burdick & Jackson) e transferidas para um balão de 22 L de fundo redondo com três tubuladuras equipado com um agitador e um termómetro aéreos. A solução foi arrefecida com um banho do gelo até 15 °C e foi adicionado sulfato de magnésio (1,25 kg, Mallinckrodt) e foi assinalada uma exotérmica a 10 °C. Após agitar durante 30 minutos, a mistura foi filtrada com um funil de vidro sinterizado de 2 L e o resíduo lavado com acetato de etilo (1,0 L, 0,92 kg, J.T.
Baker) . O filtrado foi concentrado in vacuo a 30 a 35 °C sob pressão de aspiração de água. O concentrado foi suspenso em hexano (3,1 L, 2,04 kg, J.T. Baker), agitado durante 2 horas e 18 filtrado através de um funil de Buchner. Os sólidos foram lavados com hexano (1,0 L, 0,70 kg, J.T. Baker) e secos até peso numa estufa de vácuo GMP a 25 °C durante 26 horas para produzir N-metil-N-(3-metilditio-propanoil)-L-alanina como um sólido branco, 585, 5 g (rendimento não corrigido de 66,9%) . Um ensaio de HPLC quiral do produto mostrou 99,75% de L-isómero e um perfil de impurezas mostrou 99,13% de N-metil-N-(3-metilditiopropanoil)-L-alanina.
Análise de C, Η, N: Calculado: C 40,49; H 6,37; N 5,90; S 26,97
Encontrado: C 40,60; H 6,20; N 5,73; S 26,81 A presente invenção pode ser concretizada noutras formas especificas sem se afastar do espirito ou dos seus atributos essenciais e, desta forma, deve ser feita referência às reivindicações anexadas, mais do que à descrição anterior, como indicador do âmbito da invenção.
Lisboa, 25 de Maio de 2012 19

Claims (9)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Processo para a preparaçao de compostos de Fórmula I
    (U em que L é -CH-M-(CHJ,- ou J em que Ri é H, metilo ou etilo; ch3 ch2ch3 I I M é uma ligaçao directa, CH2, a é 0 ou um número inteiro de ou —CK— ; 1 a 9, quando M for uma ligação directa desde que quando M for um ou mais átomos de carbono, a é 0 ou um número inteiro de 1 a 8; d é um número inteiro de 3 a 8; e Z é H ou SR2, em que R2 é alquilo linear, alquilo ramificado, alquilo cíclico, arilo, arilo substituído ou heterocíclico; 1 que compreende os passos de: (1) fazer reagir um sal de um ácido mercaptoalcanóico de Fórmula II o HO
    (XI) em que L é como acima definido; e tiolsulfonatos de Fórmula III qso2sq (ΙΠ) em que Q é H, alquilo linear, alquilo ramificado, alquilo cíclico, arilo, arilo substituído ou heterocíclico, numa reacção de formação de persulfureto, em que o sal de sódio de um composto de Fórmula II em água é adicionado lentamente a um composto de Fórmula III em tetra-hidrofurano a uma gama de temperatura de cerca de -15 °C a cerca de -5 °C, para formar intermediários de Fórmula IV HO
    LSSQ (IV) em que L e Q são como acima definidos; e (2) fazer reagir um composto de Fórmula IV numa reacção de esterificação com um reagente de acoplamento de Fórmula V 2 r4 ο
    (V) em que R3 é H ou sal substituído de urónio de Fórmula R, R„ 7v / 8 N* X- -c N em que X- é PF6~ ou BF4~, R7 e Rs são independentemente alquilo, cicloalquilo ou (CH2)e/· em que e é um número inteiro de 3 a 8 com a condição com a condição de que quando R7 for (CH2) er Rs é uma ligação directa, ou um sal substituído de fosfónio de Fórmula X- -P—N. I N ,/ V em que X- é PF6~ ou BF4~, R9 e R4o são independentemente alquilo linear, alquilo ramificado, cicloalquilo ou heterocíclico; e 3 R-4 e R5 são independentemente H, alquilo linear, alquilo ramificado, alquilo ciclico, arilo, arilo substituído ou heterocíclico, ou R4 e R5 conjuntamente formam uma ligação, desde que, quando R3 for H, a reacção é realizada na presença de um reagente de carbodiimida de Fórmula VI Rn-N=C=N-R12 (VI) em que Rn e R12 são independentemente alquilo linear, alquilo ramificado, alquilo cíclico, arilo, arilo substituído ou heterocíclico, ou Rn é etilo e Rn é dimetilaminopropilo de modo que o reagente de carbodiimida de Fórmula (VI) seja cloridrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (EDCI.HC1), e ainda, desde que, se R3 for um sal de urónio ou fosfónio, a reacção é realizada na presença de uma base, para formar compostos de Fórmula VII
    em que R4, R5, L e Q sao como acima definidos; e (3) reagir compostos de Fórmula VII com N-metil-L-alanina (Fórmula VIII) 4 ο (νΐϊΐ) para formar um composto de Fórmula I. Processo da reivindicação 1, em que o composto de Fórmula II tem a estrutura HO
    (Ha); o composto de Fórmula III tem a estrutura (Hla); Η,ΟβΟ,βΟΗ, o composto de Fórmula IV tem a estrutura HO
    ,S. (IVa)j o composto de Fórmula V tem a estrutura
    <Va) ; o composto de Fórmula VI tem a estrutura CH. CH, NCH2CH2CH2-N = :N—CH2CH3 (Via); o composto de Fórmula VII tem a estrutura
    (Vila); e o composto de Fórmula I tem a estrutura = 0 0 ^ (Ia). 3 . Processo da reivindicação 1, em que o reagente carbodiimida de Fórmula VI é cloridrato de de ou de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (EDCI·HC1) dimetilaminopropilo ou 1,3-diciclo-hexilcarbodiimida (DCC)
  2. 4. Processo da reivindicação 3, em que o reagente carbodiimida de Fórmula VI é EDCI-HC1.
  3. 5. Composto de Fórmula VII
    6 em que , alquilo linear, alquilo arilo, arilo substituído conjuntamente formam uma R4 e R5 são independentemente H ramificado, alquilo cíclico, ou heterocíclico, ou R4 e R5 ligação L é CH-M-(CH2)a- ou r\ J— em que Ri é H, metilo ou etilo; CH3 CH2CH3 M é CH2, ou a é 0 ou um número inteiro de 1 a 8; d é um número inteiro de 3 a 8; e Q é H, alquilo linear, alquilo ramificado, alquilo cíclico, pirrolilo, furilo ou tiofeno.
  4. 6. Composto da reivindicação 5 que tem a estrutura
    N'<A-^s's' (Vila). 7
  5. 7. Processo para a preparação de compostos de Fórmula I que têm a estrutura divulgada na reivindicação 1 compreendendo fazer reagir um composto de Fórmula VII que tem a estrutura divulgada na reivindicação 1 com N-metil-L-alanina, para formar um composto de Fórmula I.
  6. 8. Processo para a preparação de um complexo de agente de ligação celular/maitansinóide compreendendo os seguintes passos: (1) preparar um composto de Fórmula I através do processo da reivindicação 1 ou reivindicação 7 e esterificar maitansinol com o composto de Fórmula I assim preparado, para formar um éster de maitansinóide contendo dissulfureto; (2) reduzir o éster de maitansinóide contendo dissulfureto preparado através do passo (1) num maitansinóide contendo t i o 1 ; (3) introduzir grupos ditiopiridilo num agente de ligação celular; e (4) ligar o maitansinóide contendo tiol produzido através do passo (2) no agente de ligação celular de ditiopiridilo do passo (3) através de uma ligação persulfureto.
  7. 9. Processo da reivindicação 8, em que o agente de ligação celular é um anticorpo.
  8. 10. Processo para a preparação de um complexo de agente de ligação celular/maitansinóide compreendendo preparar um composto de Fórmula I através do processo da reivindicação 7, utilizando o referido composto de Fórmula I 8 para produzir N-metil-L-alanina contendo derivados de maitansinóide através da condensação de maitansinol com o composto recém preparado de Fórmula I e conjugar o referido derivado a um agente de ligação celular.
  9. 11. Processo da reivindicação 10, em que o agente de ligação celular é um anticorpo. Lisboa, 25 de Maio de 2012 9
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