PT1300411E

PT1300411E - Novos dissacaráridos

Info

Publication number: PT1300411E
Application number: PT01947467T
Authority: PT
Inventors: Pahi Francisco Javier Vila; Francesc Flores Salgado; Ramon Ruhi Roura; Narcis Arnau Pastor; Ricardo Lucas Rodriguez; Manuel Martin Lomas
Original assignee: Bioiberica
Priority date: 2000-07-13
Filing date: 2001-07-05
Publication date: 2006-12-29
Also published as: US6680304B2; DE60122156D1; EP1300411B1; ES2167251A1; AU2001269139A1; DE60122156T2; EP1300411A1; WO2002008239A1; ATE335752T1; ES2267788T3; DK1300411T3; ES2167251B1; US20030181400A1; CA2415752C; CA2415752A1

Description

DESCRIÇÃO

NOVOS DISSACARÁRIDOS COM ACÇÃO ΑΝΤΙ-ARTRÍTICA A presente invenção tem por objecto novos dissacáridos, os seus solvatados e sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico e as composições farmacêuticas que os contêm. A presente invenção também tem por objecto um processo de preparação dos novos dissacáridos, bem como a sua utilização terapêutica.

ESTADO DA TÉCNICA EM RELAÇÃO À PRESENTE INVENÇÃO A artrose (osteoartrite) é a doença reumática mais vulgar das articulações, que afecta a maior parte das pessoas com mais de 65 anos, caracterizada por uma degradação gradual do tecido cartilaginoso, conjuntamente com a presença de inflamação e de dor. O termo artrose descreve uma doença em que a cartilagem articular do tipo hialino é destruída.

Até agora, a terapia tem-se centrado em aliviar os sintomas, uma vez que não se descobriu ainda nenhum agente que consiga uma redução comprovada da progressão dos danos na cartilagem, embora haja alguma evidência clínica para o sulfato de condroitina e para o ácido hialurónico.

As substâncias que actuam sobre os sintomas incluem: as substâncias de acção rápida, tal como os analgésicos, os fármacos anti-inflamatórios não esteróides (FAINES) (referido em inglês como NSAIDS) e corticóides e as substâncias que têm o efeito de diminuir os sintomas, os Fármacos Sintomáticos de Acção Lenta para o Tratamento da Osteoartrite (FSALTO) conhecidas, em inglês, como SYSADOA 1 (de "symptomatic slow aeting drug for osteoarthritis"} (M. G. Lequesne, Rev. Rhum., (Ed. Ing,), 61, 69-73 (1994), que incluem o ácido hialurónico, o sulfato de condroitina e o sulfato de glicosamina.

Estes fármacos que exercem um efeito sintomático de acção lenta têm uma vantagem adicional que é de serem mais seguros que os FAINE (E. Maheu, European Journal of Rheumatology and Inflammation, 15, 17-24, (1995) e têm efeitos mais prolongados que persistem mais tempo, mesmo durante alguns meses após o fim do tratamento.

Ensaios clínicos que se realizaram recentemente com o ácido hialurónico (V. Listrai e outros, Osteoarthritis Cart., 5, 153-160 (1997) e com o sulfato de condroitina (G. Verbruggen e outros, Osteoarthritis Cart., 6 (Suplemento A), 37-38 (1998)) deram pela primeira vez provas da possibilidade destes dois componentes, para além de actuarem como FSALTO, poderem também influenciar e retardar o decurso da doença artrósica (agentes protectores da cartilagem). O ácido hialurónico é um glicosaminoglícano não sulfatado, de origem natural com uma estrutura polimérica composta por díssacáridos de W-acetilglicosamina e de ácido glucurónico. 0 ácido hialurónico é extraído doe órgãos e/ou dos tecidos dos mamíferos. Um dos problemas conhecidos deste ácido reside no facto de o seu peso molecular poder variar, dependendo da forma como ele foi obtido, o que em conjunto com o facto de o ácido poder ter origens diferentes, significa que há vários ácidos hialurónicos que podem ter ou não os mesmos efeitos clínicos. 2

Os dissacáridos da presente invenção estão relacionados sob o ponto de vista estrutural com os dímeros presentes na estrutura polimérica do ácido hialurónico, na medida em que são dissacáridos com ligações β- (1—>3) entre o ácido glucorónico e a glicosamina, mas os dissacáridos da presente invenção contêm sempre um grupo sulfato na posição C-4 e/ou na posição C-6 do anel da glicosamina.

Pode-se considerar que alguns dos compostos descritos na bibliografia estão relacionados sob o ponto de vista estrutural com os compostos da presente invenção. J. R. Couchman e outros (patente de invenção europeia n° 211610) descrevem dissacáridos esterifiçados que diferem dos compostos da presente invenção na natureza da origem do grupo alquilo do grupo éster (-COOR'). Estes compostos diferem também dos da presente invenção porque eles são úteis para estimular o crescimento do cabelo e para o tratamento da calvície.

Os dissacáridos que estão repetidos na estrutura do sulfato de condroitina, os derivados com grupos sulfato quer na posição 4 quer na posição 6 da W-acetil-galactosamina, estão disponíveis comercialmente e são obtidos pela degradação dos polímeros naturais ou por síntese química (J. C. Jacquinet, Carbohydrate Research, 199, 153-181 (1990), J. C. Jacquinet, Carbohydrate Research, 314, 283-288 (1998)), mas diferem dos dis sacáridos da presente invenção porque contêm galacto-samina em vez de glicosamina. As actividades biológicas destes dissacáridos não foram descritas até à data.

Hartung e outros (patente de invenção WO N° 9309766) descrevem um processo para tratamento de situações 3 o símbolo R1 representa um radical escolhido no grupo constituído por: átomos de hidrogénio, grupos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, de cadeia linear ou ramificada, grupos fenil-alquilo com menos do que dez átomos de carbono e -COCH3; o símbolo R2 representa um radical escolhido no grupo constituído por: átomos de hidrogénio, -COCH3 e grupos de fórmula geral S03M; o símbolo R3 representa um radical escolhido no grupo constituído por: átomos de hidrogénio, grupos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, de cadeia linear ou ramificada, fenil-alquilo com menos do que dez átomos de carbono, -COCH3 e -COPh, em que o símbolo Ph representa um grupo fenilo; o símbolo G selecciona-se entre um grupo de fórmula geral -COGR4 ou -COOM, em que o símbolo R4 se selecciona no grupo constituído por átomos de hidrogénio, grupos alquilo de 1 a 2 átomos de carbono e aril-alquilo com menos do que dezasseis átomos de carbono; o símbolo A selecciona-se no grupo constituído· por: átomos de hidrogénio, grupos -SO3H, -SO3M e -COCH3; e o símbolo B selecciona-se no· grupo constituído por: átomos de hidrogénio, grupos -S03H, -S03M e -COCH3; onde os símbolos R ou B representam necessariamente quer -SO3H quer -SO3M e em que o símbolo M representa um catião orgânico ou metálico.. A presente invenção também inclui os solvatados e os sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico· dos compostos de fórmula geral (I).

Os compostos de fórmula geral II) têm um carbono anomérico na sua estrutura. A presente invenção inclui as formas anoméricas α e fi e as suas misturas. 5

Num enquadramento preferido, os compostos de fórmula geral (I) são aqueles em que o símbolo· G na fórmula geral representa ou um grupo de fórmula geral -COOR4 ou -COOM, em que o símbolo R4 representa um radical escolhido no grupo constituído por átomos de hidrogénio, grupos alquilo de 1 a 2 átomos de carbono ou grupos aril-alquilo com menos do· que dezasseis átomos de carbono e o símbolo M representa um catião metálico.

Os compostos mais preferidos são aqueles de fórmula geral {I) na qual o símbolo R1 representa 1 átomo de hidrogénio, o símbolo representa -COCH3 e o símbolo R3 representa 1 átomo de hidrogénio. São igualmente preferidos os compostos de fórmula geral (I) na qual o símbolo R1 representa o grupo metilo, o símbolo· R2 representa ~COCH3 e o símbolo RJ representa 1 átomo de hidrogénio.

Os compostos ainda mais preferidos são os de fórmula geral (I) na qual o símbolo A representa um átomo de hidrogénio e o símbolo B representa -S03M ou na qual o símbolo A representa -S03M e o símbolo B representa um

átomo de hidrogénio ou na qual os símbolos A e B representam -S03M e o símbolo M representa uma catião metálico.

Especialmente preferidos são os compostos de fórmula geral (I) na qual o símbolo M representa o catião sódio.

Os enquadramentos. particularmente· e especialeente preferidos da presente invenção são aqueles em que os compostos de fórmula geral |I) são· os seguintes; sal di-sódico de n»etil-2-acetamido-2-desoxi-3-0-(ácido β-D-glicopirano—silurónicoU-6-O-sulfo-a-D-glicopiranósido· 6 sal di-sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0- (ácido β-D-glicopirano-silurónico)-4-O-sulfo-a-D—glicopiranósido sal tri-sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-£>-(ácido β-D-glicopirano-silurónico)-4,6-di-O-sulfo-a-D- glicopiranósido· sai di-sódico de 2-acetamido-2-desoxi-3~0-(ácido β-D- glicopirano-silurónico)-6—O-sulfo-a-D-glicopiranose sal di-sódico de 2-acetai»ido-2-desoxi-3-0- (ácido· β-D- glicopirano-silurónico)-4- O- sulfο-α-D-glicopiranose sal tri-sódico de 2-acetamido-2-desoxi-3-0- (ácido β-D- glicopirano—siluronico) —6, 4 -di - 0-s u 1 f o-a-D-g1 icop i rano se 0» outro enquadramento da presente invenção tem por obgecto um processo· destinado à preparação de um composto de fórmula geral (I).

De acordo· coe a presente invenção,, obtêm-se. os compostos de fórmula geral (I) por um processo caracterizado pelo facto·· de se fazer reagir «w> monossacárido de fórmula geral (II)

na qual o símbolo· R5 representa um grupo reactivo que pode estabelecer uma ligação p-fl—>-3) com o grupo hidroxilo 7 livre do monossacárido de fórmula geral (III), o símbolo R6 representa um grupo que pode ser equivalente ao grupo representado pelo símbolo R4 na fórmula geral (I) ou pode ser um grupo de protecção dos grupos carboxilo que podem ser eliminados mais tarde, os símbolos P1, P2 e P3 representam grupos de protecção dos grupos hidroxilo que podem ser eliminados mais tarde ou podem representar grupos equivalentes ao grupo representado pelo símbolo R3 na fórmula geral (I), com um monossacárido de fórmula geral (III)

na qual o símbolo R7 pode representar um grupo equivalente ao grupo representado pelo símbolo R3 na fórmula geral (I) ou pode representar um grupo que pode coincidir ou não com o grupo representado pelo símbolo R1 e mais tarde ser eliminado para que o símbolo R1 representa um átomo de H na fórmula geral (I), o símbolo R8 pode representar um grupo equivalente ao grupo representado pelo símbolo R2 na fórmula geral (I) ou pode representar um grupo de protecção dos grupos amino, os símbolos P4 e P5 podem representar grupos de protecção.' que em conjunto constituem um grupo cíclico de protecção, quer o símbolo P4 quer o símbolo P5 podem representar o grupo acetilo e nesse caso o símbolo P4 representará um grupo equivalente ao grupo representado pelo símbolo B na fórmula geral (I) ou o símbolo P5 representará um grupo equivalente ao grupo representado pelo símbolo Ά na fórmula geral (I), para formar um dissacárido intermédio de fórmula geral (IV): 8

(IV)

Quando o grupo reactivo representado pelo símbolo R5 na fórmula geral (I) é o Br, então a reacção entre os monossacáridos de fórmula geral (II) e (III) pode realizar-se, por exemplo, num dissolvente orgânico apropriado, preferencialmente em diclorometano, a uma temperatura apropriada, preferencialmente à temperatura ambiente e na presença de um catalizador, tal como, por exemplo, o triflato de prata e pode também estar presente um receptor de protões.

Quando o grupo reactivo representado pelo símbolo R5 na fórmula geral (II) é -0-C(=NH)-CC13, a reacção de condensação- entre o α-imidato (II) e o álcool (III) pode realizar-se na presença do triflato de trimetilsililo, no seio de um dissolvente orgânico apropriado, por exemplo, diclorometano e, de preferência, à temperatura ambiente.

Preferencialmente, os símbolos P1, P2 e PJ representam grupos pivaloílo, benzoílo, acetilo ou benzilo.

Os símbolos P4 e Ps representam, preferencialmente, um grupo cíclico de protecção, tal conto o benzilídeno, que resulta da reacção dos grupos hidroxilo nas posições 4 e 6 do anel de glicosamina com o benzaldeído. 9 O símbolo R6 repesenta, preferencialmente, um grupo metilo. O símbolo R7 representa, preferencialmente, um grupo metilo ou benzilo. 0 símbolo R8 representa, preferencialmente, um grupo acetilo-, tricloroacetilo ou benziloxi-carbonilo (BOC) . 0 dissacárido intermédio·, de fórmula geral (IV), é desprotegido selectivamente. Por exemplo, se os grupos hidroxilo das posições 4 e 6 do· anel da glicosamina estão protegidos sob a forma de acetal, os dissacáridos de fórmula geral (IV) pode» ser tratados, por exemplo, com etanotiol/diclorometano na presença de ácido tolueno-sulfónico, obtendo-se- o dissacárido- intermédio de fórmula geral (V)

na qual os símbolos P1, P2, P3, R6, R7 e R8 representam os grupos descritos anteriormente.

Podem introduzir-se, de fo-rma progressiva, os grupos funcionais desejados, a partir do dissacárido intermédio de fórmula geral (V).

Por exemplo, para a O-sul fonação na posição C-4 do anel da glicosamina, pode-se proteger o álcool primário na posição C—6, por exemplo, com um grupo acetilo (nesse caso m artropáticas dolorosas em seres humanos e em cavalos, por meio da administração de uma quantidade eficaz de uma composição contendo pelo menos um sal de sulfato de condroitina por via parentérica, intramuscular ou transdérmica. Do mesmo modo, Nocelli e outros (patente de invenção europeia N® 704216) descrevem uma composição farmacêutica, semelhante a um gel, contendo sais de sulfato de condroitina para o tratamento· da artrose, por administração por via oral. Os derivados de condroitina, descritos por Hartung e outros e por Nocelli e outros, diferem dos compostos da presente invenção peço facto de eles se referirem a uma estrutura polimérica que contém uma parte de galactosamina em vez de uma parte de glicosamina. É evidente, por isso, que a obtenção de novos compostos para o tratamento da artrose e dos seus sintomas, tais como a inflamação e a dor, é ainda um problema em terapia.

DESCRIÇÃO DA PRESENTE INVENÇÃO A presente invenção tem por objecto novos dissacaráridos de fórmula geral (I):

na qual: 4 (I) o símbolo R1 representa um radical escolhido no grupo constituído por: átomos de hidrogénio, grupos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, de cadeia linear ou ramificada, grupos fenil-alquilo com menos do que dez átomos de carbono e -COCH3; o símbolo R2 representa um radical escolhido no grupo constituído por: átomos de hidrogénio, -COCH3 e grupos de fórmula geral SO3M; o símbolo R3 representa um radical escolhido no grupo constituído por: átomos de hidrogénio, grupos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, de cadeia linear ou ramificada, fenil-alquilo com menos do que dez átomos de carbono, -COCH3 e -COPh, em que o símbolo Ph representa um grupo fenilo; o símbolo G selecciona-se entre um grupo de fórmula geral -COOR4 ou -COOM, em que o símbolo R4 se selecciona no grupo constituído por átomos de hidrogénio, grupos alquilo de 1 a 2 átomos de carbono e aril-alquilo com menos do que dezasseis átomos de carbono; o símbolo A selecciona-se no grupo constituído por: átomos de hidrogénio, grupos -SO3H, -SO3M e -COCH3; e o símbolo B selecciona-se no grupo constituído por: átomos de hidrogénio, grupos -S03H, -S03M e -COCH3; onde os símbolos A ou B representam necessariamente quer -SO3H quer -SO3M e em que o símbolo M representa um catião orgânico ou metálico. A presente invenção também inclui os solvatados e os sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico dos compostos de fórmula geral (I).

Os compostos de fórmula geral (I) têm um carbono anomérico na sua estrutura. A presente invenção inclui as formas anoméricas α e β e as suas misturas. 5

Num enquadramento preferido, os compostos de fórmula geral (I) são aqueles em que o símbolo G na fórmula geral representa ou um grupo de fórmula geral -COOR4 ou -COOM, em que o símbolo R4 representa um radical escolhido no grupo constituído por átomos de hidrogénio, grupos alquilo de 1 a 2 átomos de carbono ou grupos aril-alquilo com menos do que dezasseis átomos de carbono e o símbolo M representa um catião metálico.

Os compostos mais preferidos são aqueles de fórmula geral (I) na qual o símbolo R1 representa 1 átomo de hidrogénio, o símbolo R2 representa -COCH3 e o símbolo R3 representa 1 átomo de hidrogénio. São igualmente preferidos os compostos de fórmula geral (I) na qual o símbolo R1 representa o grupo metilo, o símbolo R2 representa -COCH3 e o símbolo R3 representa 1 átomo de hidrogénio.

Os compostos ainda mais preferidos são os de fórmula geral (I) na qual o símbolo A representa um átomo de

hidrogénio e o símbolo B representa -S03M ou na qual o símbolo A representa ^S03M e o símbolo B representa um átomo de hidrogénio ou na qual os símbolos A e B representam -S03M e o símbolo M representa uma catião metálico.

Os enquadramentos particularmente e especialmente preferidos da presente invenção são aqueles em que os compostos de fórmula geral (I) são os seguintes: sal di-sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0~(ácido β-Ό-glicopirano-silurónico)-6-O-sulfo-a-D-glicopiranósido 6 sal di-sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0-(ácido β-D-glicopirano-silurónico)-4-0-sulfo-a-D-glicopiranósido sal tri-sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0-(ácido β-D-glicopirano-silurónico)-4,6-di-0-sulfo-a-D-glicopiranósido sal di-sódico de 2-acetamido-2-desoxi-3-0-(ácido β-Ό- glicopirano-silurónico)-6-0-sulfo-a-D-glicopiranose sal di-sódico de 2-acetamido-2-desoxi-3-0-(ácido β-D- glicopirano-silurónico)-4-0-sulfo-a-D-glicopiranose sal tri-sódico de 2-acetamido-2-desoxi-3-0-(ácido β-D- glicopirano-silurónico)-6,4-di-O-sulfo-a-D-glicopiranose

Um outro enquadramento da presente invenção tem por objecto um processo destinado à preparação de um composto de fórmula geral (I) .

De acordo com a presente invenção, obtêm-se os compostos de fórmula geral (I) por um processo caracterizado pelo facto de se fazer reagir um monossacárido de fórmula geral (II)

na qual o simbolo R5 representa um grupo reactivo que pode estabelecer uma ligação β- (1—>3) com o grupo hidroxilo 7 livre do monossacárido de fórmula geral (III), o símbolo R6 representa um grupo que pode ser equivalente ao grupo representado pelo símbolo R4 na fórmula geral (I) ou pode ser um grupo de protecção dos grupos carboxilo que podem ser eliminados mais tarde, os símbolos P1, P2 e P3 representam grupos de protecção dos grupos hidroxilo que podem ser eliminados mais tarde ou podem representar grupos equivalentes ao grupo representado pelo símbolo R3 na fórmula geral (I) , com um monossacárido de fórmula geral (III)

na qual o símbolo R' pode representar um grupo equivalente ao grupo representado pelo símbolo R3 na fórmula geral (I) ou pode representar um grupo que pode coincidir ou não com o grupo representado pelo símbolo R1 e mais tarde ser eliminado para que o símbolo R1 representa um átomo de H na fórmula geral (I), o símbolo R8 pode representar um grupo equivalente ao grupo representado pelo símbolo R2 na fórmula geral (I) ou pode representar um grupo de protecção dos grupos amino, os símbolos P4 e P5 podem representar grupos de protecção que em conjunto constituem um grupo cíclico de protecção, quer o símbolo P4 quer o símbolo P5 podem representar o grupo acetilo e nesse caso o símbolo P4 representará um grupo equivalente ao grupo representado pelo símbolo B na fórmula geral (I) ou o símbolo P5 representará um grupo equivalente ao grupo representado pelo símbolo A na fórmula geral (I) , para formar um dissacárido intermédio de fórmula geral (IV): 8 ρ3<

(Η, Otf) (IV)

Quando ο grupo reactivo representado pelo símbolo R5 na fórmula geral (I) é o Br, então a reacção entre os monossacáridos de fórmula geral (II) e (III) pode realizar-se, por exemplo, num dissolvente orgânico apropriado, preferencialmente em diclorometano, a uma temperatura apropriada, preferencialmente à temperatura ambiente e na presença de um catalizador, tal como, por exemplo, o triflato de prata e pode também estar presente um receptor de protões.

Quando o grupo reactivo representado pelo símbolo R5 na fórmula geral (II) é -0-C(=NH)-CCI3, a reacção de condensação entre o α-imidato (II) e o álcool (III) pode realizar-se na presença do triflato de trimetilsililo, no seio de um dissolvente orgânico apropriado, por exemplo, diclorometano e, de preferência, à temperatura ambiente.

Preferencialmente, os símbolos P1, P2 e P3 representam grupos pivaloílo, benzoílo, acetilo ou benzilo.

Os símbolos P4 e P5 representam, preferencíalmente, um grupo cíclico de protecção, tal como o benzilideno, que resulta da reacção dos grupos hidroxilo nas posições 4 e 6 do anel de glicosamina com o benzaldeído. 9 0 símbolo R6 repesenta, preferencialmente, um grupo metilo. 0 símbolo R' representa, preferencialmente, um grupo metilo ou benzilo. 0 símbolo R8 representa, preferencialmente, um grupo acetilo, tricloroacetilo ou benziloxi-carbonilo (BOC). 0 dissacárido intermédio, de fórmula geral (IV), é desprotegido selectivamente. Por exemplo, se os grupos hidroxilo das posições 4 e 6 do anel da glicosamina estão protegidos sob a forma de acetal, os dissacáridos de fórmula geral (IV) podem ser tratados, por exemplo, com etanotiol/diclorometano na presença de ácido tolueno-sulfónico, obtendo-se o dissacárido intermédio de fórmula geral (V)

(V) na qual os símbolos P1, P2, P3, R6, R7 e R8 representam os grupos descritos anteriormente.

Podem introduzir-se, de forma progressiva, os grupos funcionais desejados, a partir do dissacárido intermédio de fórmula geral (V).

Por exemplo, para a O-sulfonaçâo na posição C-4 do anel da glicosamina, pode-se proteger o álcool primário na posição C-6, por exemplo, com um grupo acetilo (nesse caso 10 obter-se-á o grupo de fórmula geral CH2OP5, no qual o símbolo P5 representará um grupo acetilo), adicionando anidrido acético, no seio de um dissolvente apropriado, tal como piridina, a uma temperatura abaixo de 0 °C ou com um grupo benzoílo, utilizando, por exemplo, cianeto de benzoílo, no seio de piridina e em seguida pode-se fazer reagir o grupo hidroxilo livre na posição C-4 com, por exemplo, o complexo de trióxido de trimetilamina e enxofre (S03-NMe3) (Me = metilo) no seio de, por exemplo, N,N-dimetilformamida e a uma temperatura adequada, preferencialmente entre 40 e 60 °C.

Para que se realize a O-sulfonação do grupo hidroxilo na posição C-6 do dissacárido intermédio, de fórmula geral (V), este é tratado com, por exemplo, o complexo de trióxido de trimetilamina e enxofre (SCd-NMes) no seio de, por exemplo, N,N-dimetilformamida, obtendo-se uma maioria de derivados de sulfato na posição C-6, em conjunto com uma menor quantidade de derivados dissulfatados. Ajustando as condições da reacção é possível aumentar a proporção de derivados de dissulfatados) (nas posições C-4 e C-6 do anel de glicosamina).

Logo que os grupos sulfato tenham sido introduzidos na posição C-4 e/ou na posição C-6 do anel da glicosamina, se os grupos representados pelos símbolos P1, P2, P3, R6, R7 e R8 não forem equivalentes aos grupos relevantes da fórmula geral (I) , aplicar-se-á uma desprotecção selectiva para obter os compostos da fórmula geral (I) e quando necessário, depois da desprotecção, faz-se então reagir o grupo ou os grupos para se obterem os compostos de fórmula geral (I) . 11

Por exemplo, para se obter o composto de fórmula geral (I), na qual o símbolo R2 representa o grupo S03M, depois de o grupo sulfato ter sido introduzido na posição C-4 ou na posição C-6 ou nas posições C-4 e C-6, se o símbolo R8 representar, por exemplo, o grupo benzil-oxi-carbonilo (BOC), realizar-se-á a hidrogenólise e o grupo amino obtido irá reagir mais tarde, com um valor de pH básico com, por exemplo, o complexo de trióxido de enxofre-trimetilamina.

Para se obter um composto de fórmula geral (I) , na qual o símbolo R1 represente um átomo de hidrogénio, é possível começar com outro composto de fórmula geral (I), na qual o símbolo R1 representa um grupo benzilo e depois retira-se o grupo benzilo por hidrogenólise, utilizando por exemplo, Pd-C (catalisador de platina em carvão) na presença de um dissolvente apropriado tal como metanol aquoso.

Para ilustrar o que foi descrito anteriormente, os esquemas 1 e 2 mostram as sequências sintéticas para se obter alguns dos compostos de fórmula geral (I). 12

Esquema 1

o- / c6h5ch \

•ch2 M θ'*—f c OCH3 NHAc (Hia)

(Va) (IVa)

(la) 13

Esquema 2 r°\ COOCH3 ch2oh

m

Além disso, para ilustrar também o processo descrito, o esquema 3 mostra a sequência sintética para se obter alguns compostos de fórmula geral (I) na qual o símbolo R1 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo benzilo. 14

Esquema 3 COOCH3 ?H2°H y—<3 j

Jcv ^ OPiv NH OCH2Ph NHAc

(Vd) <Vld)

(lg):B=S03Na

(Id)

(ii): B=S03Na

0 monossacárido inicial de fórmula geral (II) pode ser obtido a partir do composto comercial D-glucorona-3,6-lactona de fórmula geral (IX), por meio de uma sequência de reacções que são bem conhecidas na química dos hidratos de carbono. 15

Para ilustrar esta sequência, o esquema 4 mostra como se obtém o composto de fórmula geral (lia) (fórmula geral II na qual o símbolo R5 representa o grupo -0-C(=NH)-CCI3, os símbolos P1, P2 e P3 representam um grupo pivaloílo e o símbolo R6 representa um grupo metilo) cuja síntese está descrita nos exemplos.

Esquema 4

Pode-se obter o monossacárido inicial de fórmula geral (III) a partir do hidrocloreto de D-glicosamina de fórmula geral (XII) por meio de uma série de reacções de protecção selectiva do ião hidroxilo.

Para ilustrar esta sequência sintética o esquema 5 mostra como se obtém o composto de fórmula geral (Illa) (composto de fórmula geral III na qual os símbolos P4 e P5 representam o benzilideno, o símbolo R' representa o grupo metilo e o símbolo R8 representa o grupo acetilo) cuja síntese está descrita nos exemplos. 16

Se o símbolo R' representar um grupo benzilo, o grupo hidroxilo anomérico no composto (XlIIa) pode ser benzilado com o álcool benzílico, na presença de ácido clorídrico gasoso e a uma temperatura situada, por exemplo, entre 50 e 80 °C.

Esquema 5 CH2OH /-o, k/

-*· í OK y (H. OH) hcN NHAc (XlIIa) o—CH2 cN-f OCH3 NHAc (llta) (XtVa)

Um outro objectivo da presente invenção é a utilização dos seus produtos na terapia de seres humanos por meio da aplicação na prevenção ou no tratamento de artrose (osteoartrite) e de doenças inflamatórias, tais como artrite inflamatória, artrite reumatóide, artrite psoriática, febre reumática, reumatismo palindrómico, síndroma de Reiter, lupus eritomatoso e espondilite an-quilosante.

Podem também utilizar-se os compostos da presente invenção para o controlo da coagulação do sangue. 17 A presente invenção tem também por objecto um processo de preparação de um fármaco que é eficaz na prevenção ou no tratamento da artrose, de doenças inflamatórias e na coagulação do sangue, em que o referido processo inclui a mistura de um veiculo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico com uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico de um dos composto de fórmula geral (I).

Para a utilização terapêutica dos compostos da presente invenção, eles formulam-se sob a forma de composições farmacêuticos apropriadas para, utilizando as técnicas e os excipientes convencionais conforme o que está descrito no Remington's Pharmaceutical Handbook, Mack Pub. N.I., EUA.

As novas composições farmacêuticas da presente invenção podem ser administradas aos pacientes em doses apropriadas. Pode-se realizar a administração das composições de diferentes maneiras, por exemplo, por via oral, intravenosa, intraperitoneal, intra-articular, subcutânea, intramuscular, tópica, intradérmica ou intranasal. As composições farmacêuticas da presente invenção incluem uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico de um dos compostos da presente invenção. A referida quantidade depende de um grande número de factores tais como, por exemplo, a condição física do paciente, a idade, o sexo, o composto em particular, os meios de administração e outros factores bem conhecidos. Também se deve entender que se pode administrar o ingrediente activo numa dose única ou em doses múltiplas para providenciar os efeitos terapêuticos desejados. Se for necessário, podem-se utilizar outros agentes terapêuticos conjuntamente com os providenciados pela presente invenção. 18

Os compostos da presente invenção são administrados ao paciente preferencialmente no seio de um veiculo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. Estes veículos são bem conhecidos e estão normalmente sob a forma sólida ou líquida. As preparações farmacêuticas na fórmula sólida que podem ser preparadas a partir da presente invenção incluem, pós, granulados, comprimidos, grânulos dispersáveis, cápsulas, adesivos, supositórios e outras formas farmacêuticas sólidas. As preparações sob a forma líquida incluem soluções, suspensões, emulsões e micro-esferas. Também se consideram as preparações sob a forma sólida que se podem converter em preparações sob a forma líquida, imediatamente antes da utilização, para administração por via oral, parentérica ou intra-articular. As referidas formas líquidas incluem soluções, suspensões e emulsões.

Uma das vantagens da presente invenção em ralação aos glicoaminoglicanos, tal como o ácido hialurónico, reside no facto de que, como os compostos da presente invenção são produtos sintéticos, não haver limite de produção.

DESCRIÇÃO DETALHADA DOS ENQUADRAMENTOS PREFERIDOS

Os exemplos que se seguem não são exclusivos e ilustram a preparação dos compostos da presente invenção.

Exemplo 1: Sal di-sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3~0-(ácido β-D-glicopirano-silurónico)-6-0-sulfo-a-D-glicopira-nósido (Ib) l.A: 1,2,3,4-tetra-C>-pivaloil^-D-glicopiranosiIuronato de metilo (Xa) 19

Adiciona-se D-glucorona-3, 6-lactona (60g, 288 rnmole) a uma solução de hidróxido de sódio 0,01 M no seio de metanol (400 mL) e agita-se a mistura durante 1 h à temperatura ambiente. Concentra-se então a solução amarela e dissolve-se o resíduo no seio de uma mistura de piridina (500 mL) e clorofórmio (100 mL) e arrefece-se até à temperatura de 0 °C. Adiciona-se lentamente cloreto de pivaloílo (284 mL, 2,30 rnmole) enquanto se agita, continuando a agitação durante 6 dias à temperatura ambiente. A mistura é extraída no seio de CH2CI2 (3 x 200 mL) e secam-se os extractos orgânicos com MgS04 e concentra-se em vácuo. Purifica-se este material impuro por cromatografia em coluna por eluição com hexano/AcOEt (acetato de etilo) na proporção de 12:1, obtendo-se 102,5 g do produto (rendimento de 65%). RMN do XH (500 MHz, CDCL3) δ ppm: 5, 736 (d, 1H, J12 = 8 Hz, H-l), 5,403 (t, 1H, J34 = J45 = 9,5 Hz, H-3), 5,249 (m, 2H, H-2, H-4) , 4,16 (d, 1H, J45 = 10 Hz, H-5) , 3,70 (s, 3H, COO Me), 1,16; 1,11; 1,10 (3s, 36H, 4-OPiv) l.B: 2,3, 4-tri-O-pivaloil-D-glicopiranosiluronato de metilo (Xla)

Dissolve-se uma solução de 1,2,3,4-tetra-0-pivaloil-p-D-glicopiranosiluronato de metilo (40 g, 73,44 rnmole) e de acetato de hidrazina (13,53 g, 146,9 rnmole) no seio de DMF anidro (120 mL) e agita-se durante 2 h à temperatura ambiente. Dilui-se a mistura no seio de acetato de etilo (100 mL) e lava-se com água (3 x 100 mL) , secam-se os extractos orgânicos com MgS04 e concentram-se em vácuo. Purifica-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna por eluição com hexano/AcOEt na proporção de 3:1, obtendo-se 25,5 g do produto (rendimento de 75%) e 20 % do produto inicial. 20 1H-RMN (500 MHz , CDCL3) 1 δ ppm: β- 5,40 (t, 1H, J3. 3-J23 - 9, 5 Hz, H- 3), 5 ,23 (t, 1H, J45 = J34 10 Hz, H- -4) , 4, 93(dd, 1H, J12 = 8 Hz, J23 = 9,5 Hz, , H-2 ) , 4,75(d, 1H, J12 = 8 H !z) , 1—1 (d, 1H, J34 = = 10 Hz, H- 5) , α -5, 48 (d, 1H, J12 = 3,5 Hz, H- 1), 5, 19(t, 1H, J45 — J43 - 10 Hz, H-4), 4, 85 (dd , 1H, J 12 = 3, 5 Hz, J23 = lOz, H- •2) , 4,56 (d, , 1H, J54 = 10 Hz, H- 5), 3,61 (s, 6H, 2C0QMe), 1,0 e 1,3 (3s, 40H, 6-OPiv) . 1.C: 2,3, 4-tri-O-pivaloil-D-qlicopiranosil-tricloroaceto- imidato)uronato de metilo (lia)

Adiciona-se 1,8-diaza-biciclo[5.4.0]undec-7-eno (0,5 mL) a uma solução de 2,3,4-tri-O-pivaloil-D-glicopiranosil-uronato de metilo (22 g, 47,76 mmole) em CH2C12 seco (40 mL) e em tricloro-acetonitrilo (72 mL, 716,45 mmole) e agita-se a mistura durante 30 minutos à temperatura ambiente e depois concentra-se em vácuo. Purifica-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna de gel de sílica e eluiu-se com hexano/AcOEt na proporção de 5:1 com 1% de NEt3 (trietilamina) , obtendo-se 22,5 g do composto (rendimento de 87%). 1H-RMN (500 MHz, CDCL3) δ ppm: 8,69(s, 1H, NH), 6,58(d, 1H, J12 = 3,5 Hz, H-l) , 5,63 (t, 1H, J32 = J34= 10 Hz, H-3) , 5,24 (t, 1H, J43 = J45 = 10 Hz, H-4) , 5,12 (dd, 1H, J21 = 3,5 Hz, J23 = 10 Hz, H-2) , 4,42 (d, 1H, J45 = 10 Hz, H-5) , 3, 62 (s, 3H, COOMe), 1,12; 1,11; 1,07(3s, 27H, 3-OPiv). 1D: JJ-acetilglicosamina (XlIIa)

Adiciona-se hidrocloreto de D-glicosamina (100 g, 0,46 mol) a uma solução de MeONA/MeOH 0,6 M e agita-se durante 5 minutos. Adiciona-se depois anidrido acético (48 mL) e, passados 30 minutos, aparece um precipitado branco que se 21 filtra e lava com etanol frio. 0 licor recristaliza no seio de álcool absoluto, obtendo-se 79,3 g do composto (quantitativo). RMN do XH (300 MHz, D20} δ ppm: 5,06 (d, 1H, J12 = 3,44 Hz, H-l), 3,76-3,53 (m, 5H, H-2, H-3, H-4, H-6, H-6'), 3,27(m, 1H, H-5), 1,90 (s, 3H, CH3CONH~). l.E: Metil-2-acetamido-2-desoxi-a-D-glicopinarósido (XlVa)

Adiciona-se uma quantidade catalítica da resina Amberlite IR-120 H+ a uma solução de N-acetilglicosamina (50 g, 0,22 mraole) no seio de MeOH (50 mL) e aquece-se a mistura durante 2 dias. Filtra-se a mistura, concentra-se e purifica-se por cromatografia em coluna de gel de sílica utilizando para eluição CH2Cl2/MeOH na proporção de 5:1, obtendo-se 10 g do α-anómero metil-2-acetamido-2-desoxi-a-D-glicopinarósido (25 %), e 40 g do anómero β que é depois isomerizado para dar o anómero α do metil-2-acetamido-2-desoxi-a-D-glicopinarósido, nas mesmas condições de reacção (rendimento de 70 %). RMN do XH (300 MHz, CD3OD) δ ppm: 4,64 (d, 1H, J12 = 3,5 Hz, H-l) , 3,89 (dd, 1H, J2i = 3,5 Hz, J23 = 8,8 Hz, H-2) , 3,81 (dd, 1H, Je5 = 2,5 Hz, J66 = 12 Hz, H-6), 3, 67 (dd, 1H, J6's = 5 Hz, J66' = 12 Hz, H-6'), 3, 62 (dd, 1H, J34 - 10,5 Hz, J32 = 8,5 Hz, H-3), 3,36 (s, 3H, MeO), 3,29(m, 1H, H-4), 1,96(s, 3H, CH3CONH-) . 1F: Metil-2-acetamido-4,6-benzilideno-2-desoxi-a-D-glicopi-ranósido

Adiciona-se ácido p-tolueno-sulfónico em quantidades catalíticas e PhCH(OMe)2 (1,014 mL, 5,61 mmole) a uma 22 solução de metil-2-acetamido-2-desoxi-o:-D-glicopinarósido (0,88 g, 3,7 4 mmole) no seio de DMF anidro (10 mL) e aquece-se a mistura durante 12 horas a uma temperatura de 55 °C. Depois neutraliza-se a mistura com uma solução saturada de NaHCC>3, dilui-se com CH2C12 e lava-se com água (2 x 50 mL) . Secam-se os extractos orgânicos com MgS04 e concentra-se em vácuo. Purifica-se o material impuro resultante por cromatografia em coluna de gel de silica utilizando para eluição CH2Cl2/MeOH na proporção de 25:1 para se obter 1,079 g do composto (rendimento de 90 %). RMN do XH (500 MHz, CDC13) δ ppm: 7,5-7,3 (m, 5H, Fe) , 5, 83 (d, 1H, Jnh,2 =8,5 Hz, NH-) , 5,55 (s, 1H, Hipso) , 4,70 (d, 1H, Ji2 = 3,5 Hz, H-l) , 4,27 (dd, 1H, J65 = 3,5 Hz, J66, = 12 Hz, H-6) , 4,21 (ddd, 1H, J2i = 3,5 Hz, J2,m =8,5 Hz, J23 = 9 Hz H-2) , 3,89 (ddd, 1H, J3,0H = 3,5 Hz, J34 = J32= 9

Hz, H-3) , 3,76 (m, 2H, H-5, H-6'), 3,57 (t, 1H, J43 = J45 = 10

Hz, H-4) , 3,40 (s, 3H, Me O), 2, 97 (d, 1H, J3,0H = 3,5 Hz, OH), 2,06(s, 3H, CH3CONH-). 1G: Metil-2-acetamido-4,6-benzilídeno-2-desoxi-3-t>- (2, 3, 4- tri-O-pivaloíl-p-D-qlicopiranosiluronato de metilo)-ot-D- glicopiranósído (IVa)

Adiciona-se trifluormetanossulfonato de trimetilsililo a uma mistura de (tricloro-aceto-imidato de 2,3,4-tri-O-pivaloil-D-glicopiranosil)uronato de metilo (10 g, 16,54 mmole) e metil-2-acetamido-4,6-benzilideno-2-desoxi-a-D-glicopiranósido (4,1 g, 12,73 mmole) dissolvidos no seio de CH2C12 anidro (80 mL) , à temperatura ambiente e agita-se a mistura durante 1 hora. Neutraliza-se a reacção adicionando uma solução saturada de NaHC03 e dilui-se com CH2C12 e lava-se a fase orgânica com água (3 x 100 mL) . Secam-se os extractos orgânicos com MgS04 e concentram-se em vácuo. 23

Purifica-se o material impuro obtido por cromatografia em coluna de gel de silica utilizando para eluição tolueno/acetona na proporção de 5:1, obtendo-se 7,8 g de metil-2-acetamido-4,6-benzilideno-2-desoxi-3-0-(2,3,4-tri-O-pivaloil-p-D-glicopiranosiluronato de metilo)-a-D-glico-piranósido (rendimento de 80 %) e 1,4 g (14 %) do metil-2-acetamido-4,6-benzilideno-2-desoxi-a-D-glicopiranósido recuperado. RMN do XH (500 MHz, CDCI3) δ ppm: 7 ,5-7 , 3 (m, 5H, Fe) 5, 59 (d, 1H, JnH,2 : - 7Hz, NH- ) , 5,55(s, 1H, Hipso) , 5,22 (t 1H :, J34 - J32 = 9, 5 Hz, H-3) , 5, 1(t, 1H, J43 — J45 = 9,5 Hz H- 4) , 4 ,97 (t , 1H, J21 = 8 Hz, H- 2), 4,88(d, 1H, J12 - 3 Hz H- 1' ) , 00 [d, 1H, J12 = 8 Hz, H-l) , 4,22(m, 1H, . H-5') 4, 11 (m, 1H, H-2' ) , 3, 92 (t, 1H, J34 = J32 - 9 Hz, H-3' ) 3, 82 (t, 1H, d34 — J32 — 9 Hz, H-4 '), 3,76 i (m, 2H, H-5 , H-6'5 3, 70 (m, 1H, H-6' ) , 3, 64 (s, 3H, COO Me) , 3 , 32(s, 3H,0 Me) 2, 00 (s, 3H, MeCONH -), i, 4-1,1 (3s , 27H,3- OPiv) . 1H: meti1-2-acetamido-2-desoxi-3-0-(2,3,4-tri-Q-pivaloil-ft-D-glicopirano-siluronato de metilo)-a-D-glicopiranósido (Va)

Adiciona-se lentamente EtSH (etanotiol) (48 pL, 0,65 mmole) a uma solução de metil-2-acetamido-4,6-benzilideno-2-desoxi-3-0-(2,3,4-tri-0-pivaloil-p-D-glicopiranosilurona-to de metilo)-a-D-glicopiranósído (100 mg, 0,13 mmole) no seio de H2CI2 (2 m.L) anidro que contém uma quantidade catalítica de ácido p-toluenossulfónico e agita-se a mistura, à temperatura ambiente, durante 5 horas. Neutraliza-se depois a reacção adicionando uma solução saturada de NaHCOs, dilui-se com CH2CI2 (25 mL) e lava-se a fase orgânica com H2O (2 x 25 mL) . Secam-se os extractos orgânicos com MgS04 e concentram-se em vácuo. Purifica-se o 24 material impuro obtido por cromatografia em coluna de gel de sílica utilizando para eluição CH2Cl2/MeOH na proporção de 25:1, obtendo-se 78,4 g do composto (rendimento de 89%). RMN do XH (500 MHz, CDC13) δ ppm: 5, 89 (d, 1H, JNH,2 = 7Hz, NH), 5,34 (t, 1H, J34 = J32 = 9,5 Hz, H-3) , 5,27 (t, 1H, J43 = J45 = 9,5 Hz, H~4) , 4,88 (t, 1H, J2i = 5 Hz, H-2), 4,80 (d, 1H, J12 = 6 Hz, H-l) , 4,68 (d, 1H, J12 = 3,5 Hz, H-l' ) , 4,16 (d, 1H, J54 = 9,5 Hz, H-5) , 4,07 (m, 1H, H-2) , 3,86 (dd, 1H, J65 = 6 Hz, Jζβ' = 12 Hz, H-6' ) , 3,77 (dd, 1H, J6,5 = 5

Hz, J6-6 = 12 Hz, H-6), 3,71 (s, 3H, COO Me), 3, 70 (m, 1H, H- 3' ) , 3,57 (t, 1H, H-4'), 3,56(m, 1H, H-3'), 3,31(s, 3H, O Me), 2,00 (s, 3H, MeCONH-) , 1,4-1,0 (3s, 27H,3-OPiv) . II: Sal di-sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0-(2,3,4-tri-O-pivaloil-p-D-glicopiranosiluronato de metilo)-4,6-dissulfo-g-D-glicopiranósido (VIIc)

Sal sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-Q-(2,3,4-tri-O-pivaloil-ft-D-glicopiranosiluronato de metilo)-6-sulfo-g-D-glicopiranósido (Vllb)

Agita-se, durante 2 dias, uma solução de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0- (2,3,4-tri-0-pivaloil-p-D-glicopira-nosíluronato de metilo)-a-D-glicopiranósído (75 mg, 0,11 mmole) no seio de DMF anidro (2 mL) na presença do complexo de S03~NMe3 (200 mg, 1,437 mole), a uma temperatura de 55 °C, numa atmosfera de argon. Arrefece-se a mistura e adiciona-se MeOH (1 mL) e H20 (1 mL) . Passa-se a solução através de uma coluna Sephadex LH-20 utilizando corno eluentes CH2Cl2/MeOH na proporção de 1:1. Concentram-se as fracções obtidas que contêm os dois díssacárídos e passam-se através de uma de gel de sílica utilizando para eluição AcOEt/MeOH na proporção de 5:1 para separar o produto mono-sulfatado do di-sulfatado. Passaram-se as duas fracções 25 resultantes por uma coluna DOWEX-50 X4 (Na+) utilizando para eluição MeOH/H20 na proporção de 9:1 para se obter o sal sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0-(2,3, 4-tri-0-pivaloil-fS-D-glicopiranosiluronato de metilo) -6-sulfo-a-D-glicopiranósido (62,4 mg, rendimento de 68 %) e o sal di-sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0-(2,3,4-tri-0-pivaloil-β-D-glicopiranosiluronato de metilo)-4,6-dissulfo-oc-D-glicopiranósido (13 mg , 15% de rendimento).

Espectro RMN do OH (500 MHz, CDC13) do sal sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0-(2,3,4-tri-O-pívaloíΙ-β-D-glícopí-ranosiluronato de metilo)-6-sulfo-a-D-glicopiranósido (VI Ib) δ ppm: 5, 35 (t, 1H, J34 = J32 = 9,5 Hz, H-3) , 5,17(t, 1H, J43 = J4s = 9 Hz, H-4) , 5,00 (m, 2H,H-2, H-l) , 4,61 (d, 1H, J12 = 6Hz, H-l' ) , 4,34 (dd, 1H, J65 = 2 Hz, J66, = 10, 5

Hz, H-6' ) , 4,27 (d, 1H, J54 = 10 Hz, H-5) , 4,10 (dd, 1H, J65 = 6 Hz, J66' = 11 Hz, H—6' ) , 3, 94 (m, 2H, H-2' , H-3'), 3,79 (m, 1H, H-5'), 3,74(s, 3H, COO Me), 3,41(m, 2H, H-2, H-4'), 3,38 (s, 3H,OMe), 1,97 (s, 3H, MeCONH-), 1,2-1,0(3s, 27H, 3- 0Piv) .

Espectro de RMN do XH (500 MHz, CDC13) do sal di-sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0- (2,3,4-tri-0-pivaloil-p--D-glicopiranosiluronato de metilo)-4,6-dissulfo-a-D-glicopi- ranósido (VIIc) δ ppm: 7,80(d, j—I JnH,2 = 9 Hz, NH) 5,38(t, 1H, J34 = J32 = 9 Hz, H-3), , 5,22(t, 1H, J4 3 = J45 = 10 Hz, H-4) , 5, 11(d, 1H, J12 = 7,5 Hz, H-l) , 5, 01 (dd, 1H, J21 - 8 Hz, J23 = 9,5 Hz, H-2), 4, 68 (d, , 1H, J12 = 3 Hz, H- 1'), 4, 57 (d , 1H , J45 = J43 = 9,5 Hz, H-4 '), 4 ,28 ( m, 2H, H-6, H-5) , 4,14 (m, 3H, H-3, H-5, H-6 4,10 (m, 1H , H-2'), 3,73(s, 3H, COO Me), 3,41( s, 3H,OMe ). 2 , 05 (s , 3H , MeCONH-), 1,2-1,0 (3s, 27H, , 3-0Piv) . 26 1J: Sal di-sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0-(ácido β-D-glicopiranosilurónico)-6-O-sulfo-a-D-glicopiranósido (Ib)

Adiciona-se 1,5 mL de uma solução de hidróxido de sódio 3M a uma solução de sal sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0-(2,3,4-tri-O-pivaloil-0-D-glicopiranosilurona-to de metilo)-6-sulfo-a-D-glicopiranósido (60 mg, 0,07 mmole) em 2 mL de uma mistura de Me0H/H20 na proporção de 5:1 e agita-se , à temperatura ambiente, durante 2 dias. Depois neutraliza-se a mistura com ácido acético levando o valor do pH para 8 e concentra-se em vácuo e purifica-se o material impuro resultante por cromatografia em coluna Sephadex G-10 tendo como eluentes EbO/EtOH na proporção de 9:1, obtendo-se 40 mg (rendimento quantitativo) do composto que se apresenta como um sólido branco com um ponto de fusão de 250 °C com decomposição. IV (KBr) : 3429, 2915, 1627, 1553, 1422, 1381, 1232, 1106, 1061 , 950 , 820 cm 1 • RMN do ΧΗ (500 MHz , D20) δ ppm: 4 ,76(d, 1H, J12 = 3,5 Hz H-l' >, 4, 52 (d, 1H, J12 = 8 Hz, H- -D, 4, 37(dd, 1H, J56 = Hz, Jo6' = = 11,5Hz, H-6) , 4, 29(dd, 1H, 06' 5 = 5,5 ) Hz, Jg6' 11,5 Hz, H-6'), 4,15(dd, 1H r Jll ~ 3, 5 Hz, t J23 = 10,5 Hz, H 2' ) , 3, 94 (m, 2H , H- -5' , H- 3f ), 3,73 (m, 1H, H-4) , 3,63 (t, 1H J43 = = J45 = 9,5 Hz, H-4' ) 3, 53(m, 2H, H- -3, H-5; ) , 3,45 (s 3H, MeO) , 3, 37 (dd, 1H, J2: L = 8 Hz, J23 = 9,5 Hz, H-2) 1,94 (s, 3H, CH3C0NH-) .

Exemplo 2: sal trí-sódíco de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0- (ácido β-D-glicopiranosilurónico) -4,6-di-O-sulfo-cx-D-gli-copíranósido 27

Adiciona-se 1,5 mL de uma solução de hidróxido de sódio 3M a uma solução de sal di-sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0-(2,3,4-tri-0-pivaloil-p-D-glicopira-nosiluronato de metilo)-4,6-di-sulfo-a-D-glicopiranósido (13 mg, 0,01 romole) em 2 mL de uma mistura de Me0H/H20 na proporção de 5:1 e agita-se, à temperatura ambiente, durante 2 dias. Depois neutraliza-se a mistura com ácido acético levando o valor do pH para 8, concentra-se em vácuo e purifica-se o material impuro resultante por croma-tografia em coluna Sephadex G-10 tendo como eluentes H20/EtOH na proporção de 9:1, obtendo-se 8,5 mg (rendimento de 92 %) do composto sob a forma de um sólido branco com um ponto de fusão de 249-250 °C com decomposição . IV (KBr): 3436, 2918, 1632, 1555, 1429, 1381, 1257, 1109, 1060, 950, 811 cm-1. RMN do XH (300 MHz, D20) δ ppm: 4,80 (m, 2H, H-l, H-l' ) , 4,19 (t, 1H, J43 = J45 = 9 Hz, H-4' ) , 3,98 (t, 1H, J34 = J32 = 9,3 Hz, H-3'), 3,75(m, 3H, H-6, H-6', H-5'), 3,57(m, 1H, H-5), 3,42(m, 2H, H-4, H-3), 3,31(s, 4H, H-2, MeO), 2,95(dd, 1H, J2i = 3, 6 Hz, J23 = 10,2 Hz, H-2'), 1,83 (s, 3H, C%C0NH~) .

Exemplo 3: Sal di-sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-Q-(ácido β-D-glicopiranosilurónico)-6-Q-sulfo-a-D-glicopira-nósido (Ia) 3A: Metil-2-acetamido-6-0-acetil-2-desoxi-3-0-(2,3,4-tri-O pivaloil-p-D-qlicopiranosiluronato de metilo)-a-D-glicopi-ranósido (Via)

Adiciona-se 0,016 mL de anidrido acético (0,162 mmole) a uma solução de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0- (2,3,4-tri- 28 O-pivaloil-p-D-glicopiranosiluronato de metilo)-a-D-glico-piranósido (100 mg, 0,147 mmole) no seio de piridina (2 mL) , à temperatura de -10 °C e deixa-se repousar a essa temperatura durante 2 dias. Adiciona-se depois CH2CI2 e lava-se a fase orgânica com H20 (2 x 25 mL) . Secam-se os extractos orgânicos com MgS04 e concentram-se em vácuo. Purifica-se o material impuro obtido por cromatografia em coluna de gel de silica utilizando para eluição Cf^Cla/MeOH na proporção de 40:1, obtendo-se 73 g do composto (rendimento de 70 %), mais 14, 6 g do produto inicial (rendimento de 15 %) . RMN do ΧΗ i (500 MHz, CDCI3) δ PPm : 6,16 (d, 1H, ^νη,ζ = 8,5 Hz, NH), 5, 23 (t , 1H, J34 - J32 = 9 Hz, H-3), 5, 12 (t, 1H, J43 = J45 = 9 Hz, H-4) , . 4,84 (t, 1H, J21 — J23 — 8 Hz , H-2), 4,75(d, 1H, J12 = 6 , 5 Hz, H-l) , 4,56 (d, 1H, J12 — 3,5 Hz, H- 1'), 4, 39(dd, 1H, J6'5 = 1,5 Hz, J6. , 6 = 11, 5 Hz, H- 6), 4,12(dd, 1H, ^65 = 5,5 Hz, J$'6 — 12 Hz, H- -6', H- 6), 4,076(d, 1H, J54= 10 Hz, H-5) , 3,92(d, 1H, H -5 f ) 3, 62 (t, 1H, J32 — J34 — 8,5 Hz, H- 3' ) , 3,57 (s, 1H, OH) , 3 ,58 (s r 3H, COOMe) , 3,38 (t , 1H , J45 = : J43 = 10 Hz, , H- 4' ) , 3 ,31 (s r 3H, OMe) , 1 ,95(s, 3H, AfeCONH -), : 1,85(s, 3H, MeCC *) , 1, 4- 1,0 (3s, 27H, 3-OPiv) . 3B: Metil-2-acetamido-6-0-acetil-3-0-(2,3,4-tri-Q-pivaloil-β-D-glicopiranosiluronato de metilo)-4-O-sulfo-a-D-glico-piranósido

Agita-se uma solução de metil-2-acetamido-6-0-acetil-2-desoxi-3-0-(2,3,4-tri-0-pivaloil-p-D-glicopiranoiluronato de metilo)-α-D-glicopiranósido (1 g, 1,39 mmole) no seio de DMF anidro (15 mL), durante 24 horas, na presença do complexo de S03-NMe3 (1,93 g, 13,90 mmole), a uma temperatura de 55 °C, em atmosfera de argon. Arrefece-se a mistura e adiciona-se MeOH (10 mL) e H20 (5 mL). Passa-se a 29 solução através de uma coluna Sephadex LH-20 utilizando como eluentes CH2Cl2/MeOH na proporção de 1:1. Purifica-se a mistura reaccional contendo os três produtos por cromatografia em coluna de gel de silica utilizando para eluição CH2Cl2/MeOH na proporção de 15:1, obtendo-se as seguintes fracções: a) o produto inicial com sais de amónio, b) o produto intermédio Rf sem grupos sulfato e com dois grupos acetilo e c) o produto Rf inferior que corresponde ao produto do titulo (500 mg). 3C: Sal di-sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-Q-(ácido β-D-glicopiranosilurónico)-4-O-sulfo-a-D-glicopiranósido (Ia)

Seguindo os mesmos procedimentos já descritos para os compostos Ib e um Ic, submete-se o composto de metil-2-acetamido-6-0-acetil-3-0-(2,3,4-tri-0-pivaloil-p-D-glicopi-rano-siluronato de metilo)-4-0-sulfo-a-D-glicopiranósido a uma hidrólise básica que dá origem ao composto do titulo sob a forma de um sólido branco com um ponto de fusão de 203 °C com decomposição. IV (KBr): 3430, 2958, 1622, 1553, 1484, 1413, 1361, 1112, 1049, 904, 803 cnf1. RMN do x H ( 500 MHz , d20) δ ppm: 4,74(m, cu J12 = 3,5 Hz, J12 = 8 Hz, H- 1, H-l' ), 4, 24 (t, 1H, J43 = J45 = 9 Hz, H- 4) , 4, 02 (t, 1H , J43 - J32 = 9 Hz, H-3) , 3, 89 (m, 1H, H- 6), 3, 80 (m, 2H, H- 5', H-6' ) , 3 , 65 (m, 1H, H· -5), 3,48(m, 2H, H -4, H- 3) , 3, 34 ( s, 4H, H-2, Me0) , 2,99(dd, 1H, J21 = 3,5 Hz, J23 = 10 Hz, H- 2' ) , 1, 87 (s, 3H , MeCONH).

Lisboa, 25 de Outubro de 2006 30

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Dissacárido com propriedades anti-artrósicas representado pela fórmula geral (I),

Caracterizado pelo facto de: o símbolo R1 se seleccionar no grupo que consiste em átomos de hidrogénio, grupos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono de cadeia linear ou ramificada, fenil-alquilo com menos do que dez átomos de carbono e -COCH3; o símbolo R2 se seleccionar no grupo que consiste em: átomos de hidrogénio, grupos -COCH3 e grupos de fórmula geral SO3M; o símbolo RJ se seleccionar no grupo que consiste em: átomos de hidrogénio, grupos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, de cadeia linear ou ramificada, fenil-alquilo com menos do que dez átomos de carbono, -COCH3 e -COPh, em que o símbolo Ph representa um grupo fenilo; o símbolo G se seleccionar entre grupos de fórmula geral -COOR4 ou -COOM, em que o símbolo R4 representa se selecciona no grupo que consiste em átomos de hidrogénio, grupos alquilo de 1 a 2 átomos de carbono, aril-alquilo com menos do que dezasseis átomos de carbono; o símbolo A se seleccionar no grupo que consiste em: átomos de hidrogénio, grupos -SO3H, -SO3M e -COCH3; e o símbolo B se seleccionar no grupo que consiste em: átomos de hidrogénio, grupos -S03H, -S03M e -COCH3; onde cada um dos símbolos A ou B representa necessariamente ou -S03H ou -SO3M e em que o símbolo M representa um catião orgânico ou 1 metálico; um seu solvatado ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
2. Dissacárido, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de o símbolo G representar um grupo de fórmula geral -COOR4 ou -COOM, em que o símbolo R4 representa um grupo alquilo de 1 a 2 átomos de carbono ou arilalquilo com menos do que dezasseis átomos de carbono e o símbolo M representa um catião metálico.
3. Dissacárido, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo facto de o símbolo R1 representar um átomo de hidrogénio, o símbolo R2 representar um grupo -COCH3 e o símbolo R3 representar um átomo de hidrogénio.
4. Dissacárido, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo facto de o símbolo R1 representar um grupo metilo, o símbolo R2 representar um grupo -COCH3 e o símbolo R3 representar um átomo de hidrogénio.
5. Dissacárido, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, caracterizado pelo facto de o símbolo A representar um átomo de hidrogénio e de o símbolo B representar um grupo de fórmula geral -S03M e de o símbolo M representar um catião metálico.
6. Dissacárido, de acordo a reivindicação 3 ou 4, caracterizado pelo facto de o símbolo A representar um grupo de fórmula geral -S03M e o símbolo B representar um átomo de hidrogénio e de o símbolo M representar um catião metálico.
7. Dissacárido, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, caracterizado pelo facto de os símbolos A e B representarem 2 um grupo de fórmula geral -SO3M e de o símbolo M representar um catião metálico.
8. Dissacárido, de acordo com as reivindicações anteriores, caracterizado pelo facto de o símbolo M representar um catião de sódio.
9. Dissacárido, de acordo com a fórmula geral I da reivindicação 1, caracterizado pelo facto de ser escolhido no seguinte grupo: sal di-sódíco de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0-(ácido β-D- glicopiranosilurónico)-6-0-sulfo-a-D-glicopiranósido; sal di-sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-0-(ácido β-D- glicopiranosilurónico)-4-0-sulfo-a-D-glicopiranósido; sal tri-sódico de metil-2-acetamido-2-desoxi-3-C>-(ácido β- D-glicopiranosilurónico) -4,6-di-O-sulfo-oí-D-glicopiranósi- do; sal di-sódico de 2-acetamido-2-desoxi-3-0-(ácido β-D- glicopiranosilurónico)-6-0-sulfo-a-D-glicopiranose; sal di-sódico de 2-acetamido-2-desoxi-3-0-(ácido β-D- glicopiranosilurónico)-4-0-sulfo-D-glicopiranose; sal tri-sódico de 2-acetamido-2-desoxi-3-0-(ácido β-D- glicopiranosilurónico)-4,6-di-O-sulfo-a-D-glicopiranose.
10. Processo de preparação de um dissacárido de fórmula geral (I), de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de a) um monossacárido de fórmula geral (II)

3 na qual o símbolo R5 representa um grupo reactivo que pode estabelecer uma união β-(1-»3) com o grupo hidroxilo livre do monossacárido de fórmula geral (III), o símbolo R6 pode ser equivalente ao grupo representado pelo símbolo R4 na fórmula geral (I) ou pode ser um grupo de protecção dos grupos carboxilo que podem ser eliminados mais tarde, os símbolos P1, P2 e P3 representam grupos de protecção dos grupos hidroxilo que podem ser eliminados mais tarde ou podem ser equivalentes aos grupos representados pelo símbolo R3 na fórmula geral (I), se fazer reagir com um monossacárido de fórmula geral (III)

(H. OF?) na qual o símbolo R7 pode representar um grupo equivalente ao grupo representado pelo símbolo R3 na fórmula geral (I) ou pode ser um grupo que pode coincidir ou não com o grupo representado pelo símbolo R1 e mais tarde ser eliminado de modo a que o símbolo R1 represente um átomo de H na fórmula geral (I) , o símbolo R8 pode representar um grupo equivalente ao grupo representado pelo símbolo R2 na fórmula geral (I) ou pode representar um grupo de protecção dos grupos amino, os símbolos P4 e P5 podem representar grupos de protecção que em conjunto constituem um grupo cíclico de protecção, tanto o símbolo P4 como o símbolo P5 podem representar um grupo acetilo e nesse caso o símbolo P4 será equivalente ao grupo representado pelo símbolo B ou o símbolo P5 será equivalente ao grupo representado pelo 4 símbolo A, para formar um dissacárido intermédio de fórmula geral (IV):

b) o dissacárido de fórmula geral (IV) ser desprotegido selectivamente para se obter o dissacárido intermédio de fórmula geral (V):

(H, OR) na qual os símbolos P1, P2, P3, R6, R7 e R8 representam os grupos descritos anteriormente; c) o grupo ou os grupos sulfato serem introduzido no anel de glicosamina e para a O-sulfonação na posição C-4 do anel da glicosamina, pode-se proteger o álcool primário na posição 6, por exemplo com um grupo acetilo (nesse caso obtém-se o grupo de fórmula geral CH2OP5, no qual o símbolo P5 representa um grupo acetilo), e a O-sulfonação do grupo hidroxilo livre na posição C-4 terá lugar, em que, se a 0-sulfonação do grupo hidroxilo tem lugar na posição C-6 do anel da glicosamina, é neceesário começar com o dissacárido intermédio de fórmula geral (V) , podendo-se obter assim os 5 derivados di-sulfatados (nas posições C-4 e C-6) ajustando as condições da reacção. d) uma vez introduzidos os grupos sulfatos nas posições C-4 e/ou C-6, se os símbolos P1, P2, P3, P4 e P5, R6, R7 e R8 não forem equivalentes aos grupos relevantes da fórmula geral (I) , aplicar-se a desprotecção total ou selectiva para se obter um dissacárido representado pela fórmula geral (I) e, quando necessário, depois da desprotecção, fazer-se reagir o grupo ou os grupos para se obter um dissacárido representado pela fórmula geral (I).
11. Utilização de um dissacárido, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo facto de se destinar à preparação de um fármaco para o tratamento de artrose.
12. Utilização de um dissacárido, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo facto de se destinar â preparação de um fármaco para o tratamento de doenças inflamatórias.
13. Utilização de um dissacárido, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo facto de se destinar â preparação de um fármaco para o controlo da coagulação do sangue.
14. Processo de preparação de um fármaco eficaz na prevenção ou no tratamento de artrose, doenças inflamatórias e coagulação do sangue, caracterizado pelo facto de incluir a mistura de um veículo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico e de uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico de um dissacárido de fórmula geral (I). 6
15. Composição farmacêutica caracterizada pelo facto de compreender um disssacárido representado pela fórmula geral (I) de acordo com a reivindicação 1 e um veiculo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. Lisboa, 25 de Outubro de 2006 7