PT904299E - Polissacarideos sinteticos processo para a sua preparacao e composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO

"POLISSACARÍDEOS SINTÉTICOS, PROCESSO PARA A SUA PREPARAÇÃO E COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTÊM" 0 presente invento diz respeito a novos polissacarídeos de síntese possuindo as actividades farmacológicas da heparina mas aplicadas de maneira selectiva. A heparina pertence à família dos glicosaminoglicanos (GAG), que são polissacarídeos sulfatados naturais heterógeneos.

As preparações de heparina são misturas de cadeias que compreendem um número de unidades monossacarídicas que vão desde 10 até 100 e mais. Nesta heterogeneidade de tamanho ajusta-se uma heterogeneidade de estrutura; no nível da natureza dos monossacarídeos constitutivos, mas igualmente no nível dos substituintes que eles contêm (L. Rodén in: The Biochemestry of Glycoproteins and Glycosaminoglicans, Ed by lennarz W.J., Plenum Press, 1980, New York and Lnodon, 267-371).

Cada família de GAG natural possui em geral um leque de actividades farmacológicas. Todas elas são reunidas nas preparações que se podem obter a partir de produtos naturais. Assim, por exemplo, as heparinas e os heparanos sulfato possuem uma actividade antitrombótica que está ligada à acção simultânea sobre numerosos factores de crescimento, sendo o mais notório o factor de crescimento básico das fíbroblastos (bFGF, basic fibroblast growth -2-

factor).

Esta acção manifesta-se por um efeito sobre a proliferação das células de músculo liso e sobre a angiogenése. A heparina exerce por outro lado efeitos sobre a autoimunidade, a inflamação e a formação de metástases tumorais. A heparina cataliza nomeadamente a inibição de duas enzimas que intervêm na interrupção da coagulação do sangue a saber, o factor Xa e o factor 11a (ou trombina). As preparações de heparinas de baixo peso molecular (HBPM), contêm séries formadas de 4 a 30 monossacarídeos e têm a propriedade de agir mais selectivamente sobre o factor Xa que sobre a trombina.

Alguns oligossacarídeo de síntese nomeadamente os descritos no EP 84999 possuem a propriedade de inibir selectivamente, via antitrombina III, o factor Xa sem qualquer actividade sobre a trombina. A patente US 5,378,829 descreve os derivados glicossamino-glicanoides sulfatados do tipo heparina ou heparano sulfato possuindo uma actividade antitrombótica e inibidora da proliferação das células de músculo liso. Este documento descreve apenas os oligossacarídeos que possuem no máximo 7 unidades monossacarídicas.

Durante os anos anteriores, a tendência no domínio dos GAGS era a de procurar nomeadamente oligossacarídeos de massa molécular a mais fraca possível, mas foi observado em seguida que várias das actividades biológicas mencionadas anterioimente são sustentadas por fragmentos que têm pelo menos 8 unidades sacarídicas. Por exemplo, a actividade inibidora da trombina necessitaria dos fragmentos contendo pelo menos entre 14 e 20 unidades -3-

Uuj sacarídicas enquanto que para a activação do bFGF pelo menos 12 unidades sacarídicas seriam necessárias (M. Maccarana et ah, J. Biol. Chem., 1992, 267, 10337-10341).

Uma síntese de polissacarídeos deste tamanho apresenta grandes dificuldades e, de facto, nunca foi concretizada.

No objectivo de reencontrar actividade em produtos de grande tamanho, foi proposto juntar dois oligossacarídeos de tamanho pequeno por uma entidade não intervindo na actividade biológica. A EP 649854 descreve que tais derivados possuem uma actividade antitrombótica. De forma análoga , a WO 95 05182 descreve os conjugados activos na regulação do bFGF.

Estes produtos apresentam de facto uma actividade selectiva sobre os diferentes factores da coagulação e das propriedades inibidoras dos factores de crescimento traduzindo-se por uma inibição da proliferação celular.

Foi presentemente descoberto que os fargmentos de GAGs (glicosaminoglicanos) contêm 8 ou mais unidades sacarídicas e, podendo ser sintetisadas de forma relativamente simples, possuem actividades biológicas que são não apenas selectivas mas também quantitativamente elevadas.

Mais particularmente, foi descoberta a possibilidade de modular quantitativamente a actividade dos referidos polissacarídeos de acordo com o tamanho das cadeias e a distribuição dos substituintes funcionais.

Assim, por exemplo, foi descoberto de forma surpreendente que os decassacarídeos sulfatados e alquilados podem ser potentes antitrombóticos ou inibidores selectivos do bFGF de acordo com a disposição dos grupos alquilados -4- e dos grupos sulfatados no encadeamento decassarídicos e que é igualmente possível obter inibidores selectivos do factor Xa por exemplo com um tetradecassacarídeo ou produtos que possuam uma actividade do tipo heparina, a saber uma actividade tanto sobre o factor Xa como na trombina, por exemplo com um hexadecassacarídeo.

De uma forma mais geral, foi descoberto que pela realização de sequências dissacarídicas formadas por um ácido urónico e por uma hexose de maneira a constituir os polissacarídeos de 8 a 24 unidades monossacarídicas nas quais os grupos hidróxilos são todos substituídos por grupos alquilos ou por grupos sulfatos, é possível modular com precisão as actividades do tipo GAGs para obter produtos muito activos e selectivos.

Assim, segundo um dos seus aspectos, o presente invento diz respeito a um novo polissacarídeo de síntese contendo de 8 a 24 unidades monossacarídicas formado por um encadeamento de dissacarídeos constituídos por um ácido urónico e por uma hexose, sendo o referido polissacarídeo caracterizado pelo facto de todos os seus grupos hidróxilos serem eterificados com um grupo (Ci-C6)alquilo ou esterificados sob a forma de grupo sulfo, sendo cada dissacarídeo pelo menos monoeterifícado; bem com os seus sais, nomeadamente os sais farmaceuticamente aceitáveis.

De preferência, o invento está relacionado com um polissacarídeo tal como definido acima, caracterizado pelo facto de que todos os seus grupos hidróxilo são eterificados por um grupo metilo ou esterificados sob a forma de um grupo sulfo, sendo cada dissacarídeo pelo menos monoeterifícado e aos seus sais, nomeadamente os sais farmaceuticamente aceitáveis.

Os produtos vantajosos são alquilados, de preferência metilados, -5- tu, ^ 7 sobre os hidróxilos na posição 2 e 3 de ácido urónico, sendo o referido ácido urónico de preferência ácido glucorónico ou ácido idurónico e trisulfatados numa hexose, sendo esta de preferência glicose. Um outro grupo de produtos preferidos é constituído por polissacarídeos que são alquilados, de preferência metilados, nos hidróxilos na posição 3 do ácido urónico, sendo este de preferência ácido glucorónico ou ácido idurónico e alquilados, de preferência metilados, no hidróxilo na posição 3 da glicose.

Os produtos do presente invento são portanto de preferência constituídos por sequências regulares de dissacarídeos repetidos por sua vez formados por ácido glucorónico e por glicose ou por ácido idurónico e glicose representados pela seguinte fórmula:

DB1 DB2 DB3 (I) na qual - o traço ondulado designa quer uma ligação acima ou abaixo do plano do ciclo piranósico; -Ri, Ré, Rn e R]é representam um (Ci-C6)alquilo; -R2, R3j R4, R5, R7, R«, R9, Rio, Ri2, R13, R)4, R15 e Rn representam um (Ci-C6)alquilo ou um grupo S03'; -m, n e p são tais que a soma de m+n+p é superior ou igual a 4 e inferior ou igual a 12, podendo um ou dois dos três representar zero, ou um dos seus sais, -6- [/uη nomeadamente sais farmaceuticamente aceitáveis.

Notar-se-á que, de maneira geral na presente descrição, um traço ondulado designa ou uma ligação abaixo ou acima do plano do ciclo piranósico.

Na fórmula geral (I) e na presente descrição as estruturas (a) ou (b) seguintes representam uma estrutura de glicose na configuração 4Cj. As estruturas (c) ou (d) seguintes representam uma estrutura de ácido urónico que é ou ácido L-idurónico (aqui representado na sua configuração 'C4) ou ácido D-glucorónico (aqui representado na sua configuração 4Ci).

Nestas estruturas (a), (b), (c) e (d) os substituintes Rx têm as definições atribuídas para Ri a R7 em (I).

Desta forma, as estruturas (a) e (b) têm a mesma representação de uma estrutura de glicose na configuração 4Ci-

As estruturas (c) e (d) representam uma estrutura de ácido urónico que é ou ácido L-idurónico (aqui representado na sua confuguração 1C4) ou ácido D-glucorónico (aqui representado na sua configuração 4Ci). Ί

Ο \ Rx <c) (d)

Por se tratar de ácido L-idurónico (c) e (d) têm as seguintes configurações:

\ Rx o

Por se tratarem de ácido D-glucorónico (c) e (d) têm as seguintes configurações:

Na presente descrição, optou-se por representar as configurações *C4 pelo ácido L-idurónico, 4Ci pelo ácido D-glucorónico, embora seja notório que a configuração em solução das unidades monossacaridas é flutuante. -8- ΐΜη ^

Os dissacarídeos DB1, DB2 e DB3 representam dissacarídcos idênticos ou diferentes.

Os compostos preferidos segundo o invento são os de fórmula (I) nos quais n e p são iguais a zero e m representa 4 a 10 e os seus sais, nomeadamente sais farmaceuticamente aceitáveis.

Igualmente vantajosos são os compostos de fórmula (I) nos quais n e p são iguais a zero, m representa 4 a 10; pelo menos um dos substituintes R12, Ri3, Rh, e R15 representa um grupo sulfato; sendo Rj, Rj6 e R]7 tal como definidos para (I) assim como os seus sais, nomeadamente sais farmaceuticamente aceitáveis.

Igualmente vantajosos são os compostos de fórmula (I) nos quais n e p são iguais a zero, m representa 4 a 10; pelo menos dois dos substituintes Rn, Ri3, Rj4 e R15 representam um grupo sulfato; sendo Rt, R16 e Rn tal como definidos para (I) assim como os seus sais, nomeadamente sais farmaceuticamente aceitáveis.

Igualmente vantajosos são os compsotos de fómula (I) nos quais n e p são iguais a zero , m representa 4 a 10; pelo menos três dos substituintes R]2, Rn, R14 e Rj5 representam um grupo sulfato; sendo Rj, R16 e R17 tal como 'definidos para (I), assim como os seus sais, nomeadamente sais farmaceuticamente aceitáveis.

Igualmente vantajosos são os compostos de fórmula (I) nos quais n e p são iguais a zero, m representa 4 a 10, os grupos Ri2, Ri3, R14 e Ri5 representam todos um grupo sulfato; sendo Ri, R16 e Rn tal como definidos para (I) e os seus sais, nomeadamente sais farmaceuticamente aceitáveis. 9-

Outros compostos vantajosos são os sais constituídos por um anião e um catião, sendo que o anião corresponde à fórmula (1.1):

na qual m representa 4 a 10; Rt, R15, RI6 e R17 são tais como definidos para (I); sendo cada ácido urónico ou um ácido idurónico ou glucorónico, e sendo o catião um catião monovalente farmaceuticamente aceitável, assim como os seus sais correspondentes.

Os sais constituídos por um anião e por um catião nos quais o anião corresponde à fórmula (1.2):

na qual m representa 4 a 10; RI; R1S) R16 e Rn são tais como definidos para (I), sendo cada ácido urónico ou um ácido idurónico ou glucorónico e onde [αμ/ -10- o catião é um catiao monovalente farmaceulicamenle aceitável, assim como os seus ácidos correspondentes, são igualmete vantajosos.

Nas fórmulas (I), (1.1), (1.2) seguintes, os grupos alquilo eterificados são preferencialmete metilos.

Os sais constituídos por um anião e um catião, onde o anião têm a fórmula (1.3):

na qual m representa 2 ou 3, sendo Ri, R^, R13, R14, R15, Ri6 e Rn tais como definidos para (I), sendo cada ácido urónico ou um ácido idurónico ou glucorónico e onde o catião é um catião monovalente farmaceuticamente aceitável, assim como os seus ácidos correspondentes, são particularmente vantajosos.

Destes compostos (1.3), preferem-se particularmente aqueles para os quais Ri representa um metilo, R13 na posição 3 da glicose representa um metilo, Rn na posição 2 e Ru na posição 6 da glicose representam um S03' e R16 na posição 3 da unidade idurónica ou glucorónica representa um metilo, sendo m igual a 2 ou 3.

Os sais preferidos do invento são aqueles dc onde o catião c - 11 -

escolhido entre os catiões dos metais alcalinos c mais preferidos ainda aqueles nos quais o catião é Na+ ou K+.

Os polissacarídeos seguintes são particularmente preferidos: 1) Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]9-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio. 2) Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]4-2,3,6“tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio. 3) Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]5-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio. 4) Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-a-L-idopiranosil- urónico)-( 1 -4)- [0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-( 1 -4)-0-(ácido 2,3-di- 0-metil-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]6-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio. 5) Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]7-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio. - 12- l/Uuj 6) Metil Q-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-ot.-L-idopiraiiosil-urónico)-( 1 -4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-( 1 -4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]8-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio. 7) Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-p-D-glucopiranosil-urónico)-( 1 -4)- [0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-( 1 -4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-P-D-glucopiranosilurómco)-(l-4)]4-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D- glucopiranosido, sal de sódio. 8) Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-P-D-glucopiranosil-urónico)-( 1 -4)- [0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-( 1 -4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-P-D-glucopiranosilurónico)-( 1 -4)]3-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio. 9) Metil 0-(ácido 3-0-metil-2,4-di-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]4-3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-α-D-glucopiranosido, sal de sódio. 10) Metil 0-(ácido 3-0-metil-2,4-di-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-( 1 -4)- [0-(3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-( 1 -4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]3-3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-α-D-glucopiranosido, sal de sódio. 11) Metil 0-(ácido 3-0-metil-2,4-di-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-( 1-4)-[0-(3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-( 1-4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]5-3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-α-D-glucopiranosido, sal de sódio. -13- Ι/ΪΛη 12) Metil O-(ácid0 3-0-metil-2,4-di-0-sulfo-p-D-glucopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-p-D-glucopiranosilurónico ácido)-(l-4)]4-3-0-metil-2,6-di-O-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio. 13) Metil 0-(ácido 3-0-metil-2,4-di-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]2-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-cx-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)-3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio. 14) Metil 0-(ácido 3-0-metil-2,4-di-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-( 1 -4)-[0-(3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-( 1 -4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]3-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)-3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio. O presente invento diz respeito igualmete a um processo para a preparação dos compostos de fórmula (I) caracterizado por: (a) se acoplar de acordo com os métodos clássicos da química dos açúcares um monossacarídeo que fornece a ligação glicosídica a um monossacerídeo aceitador da ligação glicosídica para obter, após as modificações químicas bem conhecidas pelos técnicos, um sintão sacarídico intermediário do tipo dissacarídeo completamente protegido de fórmula (A): 1-. - 14-

na qual os substituintes T7, T2, T3, T4, T5, T6, T7eZ idênticos ou diferentes são escolhidos entre os grupos protectores utilizados na química dos açúcares como grupo protector permanente, semi-permanente ou temporário, (b) se modificar quimicamente o dissacarídeo de fórmula (A) acinma de forma a obter um sintão sacarídico intermediário do tipo dissacarídeo dador da ligação glicosídica de fórmula (B):

na qual T2 a T7 e Z são tais como definidos anteriormente para (A) e X representa um grupo activador de carbono anomérico, como um imidato, um tioglicósideo, um pentenil glicósideo, um xantato, um fosfito, um halogeneto ou qualquer outro grupo conhecido para activar o carbono anomérico, seguidamente (c) se modificar quimicamente o dissacarídeo de fórmula (A) anterior de forma a obter um sintão sacarídico intermediário do tipo dissacarídeo - 15-aceitador da ligação glicosídica de fórmula (c):

na qual Tj a T7 são tais como definidos anteriormente para (A), eliminando selectivamente o grupo protector Z de acordo com métodos bem conhecidos pelos técnicos, seguidamente (d) se acoplar um dissacarídeo dador da ligação glicosídica de fórmula (B) obtido anteriormente e um dissacarídeo aceitador da ligação glicosídica de fórmula (C) obtido anteriormente de forma a obter um tetrassacarídeo completamente protegido de fórmula (D):

na qual Ti a T7 e Z são tais como definidos anteriormente para (A) e T8, T9, Tio, Tn, T12 e T13 são tais como definidos para T2 a T7, seguidamente,

l/U - 16- (e) se modificar em seguida quimicamente o tetrassacarídeo dc fórmula (D) de forma a obter um sintão sacaridico intermediário do tipo tetrassacarídeo fornecedor da ligação glicosídica de fórmula (E):

na qual X tem a mesma definição que para (B) e T2 a T13 são tais como definidos para (D), seguidamente, (f) se deproteger em seguida selectivamente o tetrassacarídeo de fórmula (D) de forma a obter um tetrassacarídeo aceitador da ligação glicosídica de fórmula (F):

na qual Ti a T13 são tais como definidos para (D), seguidamente, (g) se acplar o tetrassacarídeo aceitador da ligação glicosídica de fórmula (F) e um dissacarídeo dador da ligação glicosídica de fórmula (B) tal como aqueles obtidos anteriormente para formar um sintão sacaridico - 17- - 17- 7

Um intermediário de tipo hexassacarídeo completamente protegido de fórmula (G):

na qual Ti a Tn são tais como definidos anteriormente para (D) e Tj4 a Tj9 são tais como definidos para T2 a T7 para (B), ou se acoplar o tetrassacarídeo aceitador da ligação glicosídica de fórmula (F) e um tetrassacarídeo dador da ligação glicosídica de fórmula (E) de forma a obter um octassacarídeo completamente protegido de fórmula (H):

na qual T] a T9 e Z são tais como definidos anteriormente e T2o a T25 são tais como definidos para T2 a T7 para (B), seguidamente,

(h) se modificar quimicamente o hexassacarídeo de fórmula (G) ou o octassacarídeo de fórmula (H) obtidos anteriormente de forma a obter um sintão sacarídico intermediário de tipo hexassacarídeo aceitador de ligação glicosídica de fórmula (G) na qual Z representa o hidrogénio ou um octassacarídeo aceitador de ligação glicosídica de fórmula (H) na qual Z -18-representa ο hidrogénio, (i) se repetirem as etapas de desprotecção e de acoplamento anteriores até à obtenção do oligossacarídeo completamente protegido que possui a estrutura pretendida, sendo os sintão sacarídicos intermediários dadores de glicosilo e aceitador de glicosilo escolhidos em função da estrutura final para obter então o precursor protegido do polissacarídeo final pretendido de fórmula (I), no qual a natureza dos grupos protectores Ti determina a posição dos grupos sulfatos e alquilos sobre o produto final, e (j) se proceder à desprotecção das funções álcool que devem ser sulfatados, e ácido carboxílicos, eliminando os grupos pretectores Ti que protegiam estas funções nas etapas de elaboração da estrutura e, por fim, (k) se proceder à sulfatação para obter os compsotos (I), ou um dos seus sais. O processo acima descrito é o preferido do invento. No entanto, os compostos de fórmula (I) podem ser preparados através de outros métodos conhecidos da química dos açúcares descritos por exemplo em Monosaccharides, Their chemistry and their roles in natural products, P.M. Collins et R.J. Ferrier, J. Wiley & sons, 1995 e em G.J. Boons, Tetrahedron, 1996, 52,1095-1121. Λ

Como variante, os compostos de fórmula (I) podem ser preparados de acordo com o processo descrito em M. Dreef, XVIIe Symposium sur les carbohydrates, Ottawa, 1-22 juillet 1994, Abstract D 2.5.

Por grupos semi-permanentes entende-se os grupos elimináveis em primeiro lugar após as reacções de glicosilação quando a estrutura glucídica -19- l/MJ *7*^ comporta o número de motivos pretendidos, sem que desapareçam ou se alterem os outros grupos presentes, permitindo assim a introdução de grupos funcionais desejados nas posições que ocupam.

Os grupos permanentes são grupos capazes de manter a protecção dos radicais -OH durante a introdução dos grupos funcionais na posição dos grupos semi-permanentes.

Estes grupos são escolhidos entre os que são compatíveis com os grupos funcionais introduzidos após a eliminação dos grupos semi-permanentes. Trata-se, além disso, de grupos inertes face às reacções efectuadas para a colocação destes grupos funcionais e que são elimináveis sem que os grupos funcionais sejam alterados.

Segundo o invento os grupos permanentes são os grupos alquilo em

CrC6.

Como exemplo de um grupo semi-permanente e/ou temporário pode-se citar os grupos benzilo e acetato.

Os substituintes na posição 3 das porções urónicas do composto alvo podem já estar presentes nos sintão de partida da fórmula (A), assim como o substituinte Rj.

No processo acima descrito, os substituintes Tj, T6, T12, Ti8 e T24 têm a mesma definição que Rb R$, Rn e R16 na fómula (I), o que significa que representam um (Ci-Cé)alquilo.

Os grupos protectores utilizados no processo de preparações dos

Um -20- ' compostos (I) são os utilizados correntemente na química dos açúcares por exemplo em Protective Groups in Organic Synthesis, TW Greene, John Wiley & sons, New York, 1981.

Os grupos protectores são vantajosamente escolhidos por exemplo entre os grupos acetilos, halogenometilos, benzoilos, levulinilos, benzilos, benzilos substituídos, tritilos eventualmente substituídos, tetrahidropiranilos, alilos, pentenilos, tert-butildimetilsililos (tBDMS) ou trimetilsililetilos (...).

Os gmpos activadores são aqueles classicamente utilizados na química dos açúcares segundo, por exemplo GJ. Boons, Tetrahedron, 1996, 52, 1095-1121. Estes grupos activadores são escolhidos por exemplo entre os imidatos, os tioglicosídos, os pentenilglicósidos, os xantatos, os fosfitos ou os halogenetos. O processo descrito em cima permite obter compostos do invento sob a forma de sais. Para obter os ácidos correspondentes, os compostos do invento sob a forma de sais, são postos em contacto com uma resina de permuta de catiões sob forma ácida.

Os compostos do invento sob a forma de ácido podem ser em seguida neutralizados por uma base para obter um sal desejado.

Para a preparação dos sais dos compostos de fórmula (I), pode-se utilizar qualquer base mineral ou orgânica, fornecendo com os compostos de fórmula (I), sais farmaceuticamente aceitáveis.

Utiliza-se preferêncialmente como base o hidróxido de sódio, de potássio, de cálcio ou de magnésio. Os sais de sódio e de cálcio dos compostos -21 - Ουη de fórmula (I) são os preferidos.

Na etapa (a) do processo, os grupos protectores utilizados são aqueles habitualmente utilizados pelo técnico em química dos açúcares por exemplo segundo EP 084999 ou ainda segundo Protective Groups in Organic Synthesis, TW Greene, J Wiley & sons, 1995.

Os grupos protectores Z, protegendo a posição 4 da extremidade terminal não redutora, protegendo a posição 1 da unidade terminal redutora, são elimináveis de forma selectiva para permitir a fimcionalização das posições correspondentes do dissacarídeo nas etapas seguintes da síntese. A natureza dos outros grupos protectores T2 a Tg é escolhida tendo em conta as funções álcool que devem ser sulfatadas no produto final. Uma posição portadora de um grupo alquilo no produto final é protegida por esse grupo desde o início da síntese, enquanto que uma posição que deve ser sulfatada é protegida por um grupo protector temporário como o aralquilo (benzilo ou benzilo substituído), ésteres (acetatos, benzoatos). A posição e a natureza dos substituintes Ti determinam então no produto final o perfil de sulfatação do fragmento dissacarídico proveniente de (A). Pode-se obter uma grande variedade de dissacarídeos do mesmo tipo dos da fórmula (A). A preparação dos dissacarídeos de fórmula (A) é realizada essencialmente como descrito no pedido de patente EP 90201006 ou então na publicação C.C.A. van Boeckel et M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1993, 32 1671-1690 ou então segundo G.J. Boons Tetrahedron, referido anteriormente.

De acordo com a etapa (b), pode-se, enquanto Tj represente um alquilo, utilizar uma reacção de acetólise num anidrido acético, que serve então de solvente e de reactivo, na presença de um ácido forte como o ácido sulfiírico ou o ácido trifluoroacético para libertar selectivamente o grupo protector da -22-

Umi posição anomérica. Quando Tj representa um éster pode-se eliminar de forma selectiva este éster utilizando por exemplo a benzilamina e um solvente aprótico como o éter dietílico ou o diclorometano, ou então a N-metilmorfolina no tetrahidrofurano. Quando Ti é um grupo alilo pode-se isomerizá-lo em vinilo e proceder em seguida a uma hidrólise ácida suave de éter vinílico por exemplo na presença de cloreto de mercúrico numa solução acetónica. Através destes métodos obtém-se um composto hidroxilado que é em seguida transformado no composto (B) por exemplo através de uma reacção com o tricloroacetonitrilo na presença de uma base para obter neste caso um composto (B) no qual X representa um imidato. No caso onde X representa um triglicosído, ou um pentenilo glicosído, o grupo T ] no composto (A) pode ser igual a X.

De acordo com a etapa (c) pode-se obter um dissacarídeo aceitador de ligação glicosídica eliminando selectivamente o grupo Z segundo um processo bem conhecido dependendo da natureza de Z, introduzindo, por exemplo (1) acetato de hidrazina ou hidrato de hidrazina, em piridina ou tolueno, caso Z seja um grupo levulínico ou então (2) tioureia em etanol, caso Z seja um grupo tricloroacetilo.

De acordo com a etapa (d) acopla-se um dissacarídeo dador de ligação glicosídica de fórmula (B) anteriormente obtida e um dissacarídeo aceitador de ligação glicosídica de fórmula (C) obtida anteriormente de forma a obter um tetrassacarídeo· completamente protegido de fórmula (D), utilizando-se para tal um activador conhecido do dador de glicosílo X, por exemplo o triflato de trimetilsililo ou TMS ou o triflato de ter/butildimetilsililo ou TBDMS ou ainda o trifluoreto de boro em éter dietílico por exemplo, quando se tarta de um imidato, ou então o sistema N-iodossuccinimida ou NIS, ácido triflíco quando se trata de um tioglicosido ou qualquer outro sistema conhecido para activar X segundo as referências anteriormente citadas. Os solventes utilizados para a

L -23- reacção são de forma preferida o diclorometano, o dicloroetano, o clorofórmio, o clorobenzeno, o éter dietílico, o tolueno, o benzeno; opera-se nas condições anidras e geralmente a baixa temperatura, entre -70° e 0°C. Pode-se também operar à temperatura ambiente.

Para a etapa (e), procede-se essencialmente tal como descrito na etapa (b) a partir dos tetrassacarídeos obtidos segundo a etapa (d).

Para a etapa (f) procede-se como descrito em (c) para desproteger selectivamente os tetrassacarídeos obtidos segundo a etapa (d), e obtêm-se os tetrassacarídeos de fórmula (F).

Para a etapa (g) procede-se como descrito na etapa (d), vantajosamente separam-se os produtos da reacção de fórmula (G) através de uma cromatografia por permeação em gel.

Para a etapa (h) procede-se essencialmente como descrito na etapa (b) a partir dos hexassacarídeos ou dos octassacarídeos de fórmula (H) obtidos segundo a etapa (g).

Repetem-se as etapas de desprotecção e de acoplamento precedentes até à obtenção do oligossacarídeo completamente protegido " possuindo a estrutura desejada, os sintões sacarídicos intermediários dadores de glocosilo e aceitadores de glicosilo sendo escolhidos em função da estrutura final para obter assim o precursor protegido do polissacarídeo final pretendido de fórmula (I), no qual a natureza dos grupos protectores Ti determina a posição dos grupos sulfatos e alquilos sobre o produto final (I).

Elimina-se em seguida segundo a etapa (j), por saponificação com -24-

hidróxido de sódio ou hidróxido de lítio e/ou por hidrogenação catalítica por exemplo, na presença de paládio em carvão, os grupos protectores das funções álcool que devem ser sulfatadas.

Segundo a etapa (k) procede-se à sulfatação com a ajuda de um agente sulfatante, como um complexo S03-amino, por exemplo, o complexo S03-piridina, ou com a ajuda de um ácido clorosulfónico num solvente aprótico como a dimetilformamida de preferência a uma temperatura compreendida entre 0o e 100°C para obter os compostos (I) que são eventualmente purificados por cromatografia por permeação em gel utilizando água ou uma solução de cloreto de sódio como eluente.

Os compostos (I) assim obtidos podem ser eventualmente salificados.

Os compostos da fórmula (I) anteriormente referida compreendem igualmente aqueles nos quais um ou mais átomos de hidrogénio ou de carbono foram substituídos pelo seu isótopo radioactivo, por exemplo, o trítio ou o carbono-14. Esses compostos marcados são úteis nos trabalhos de pesquisa, de metabolismo ou de farmacocinética, nos ensaios bioquímicos enquanto ligandos.

Os compostos segundo o invento foram objecto de estudos bioquímicos e farmacológicos que demonstraram possuírem propriedades muito interessantes.

Os compostos do presente invento que se ligam à AT ΙΠ (KD < 200nM) ou à heparina co-factor (HC Π) com uma afinidade igual ou superior à da heparina, possuem as propriedades anticoagulantes da heparina.

-25-

Eles inibem assim vários factores da coagulaçSo, como o factor Xa (titulo > 10μ anti-Xa/mg) ou a trombina (CI50 < 10μg/ml) e são por isso excelentes agentes antitrombóticos nos modelos de trombose venosa e de trombose arterial. A afinidade dos compostos de fórmula (I) para o AT ΙΠ, foi determinada por espectrofluorometria, em condições descritas por D. Atha et al. em Biochemistry, 1987, 26, 6454-6461. Os resultados dos ensaios demonstraram que os compostos do invento possuem uma grande afinidade com o AT III (KD compreendido entre 0,1 μΜ e 1 nM). A actividade anti-factor Xa (anti-Xa) dos produtos do invento foi avaliada com pH 8,4, segundo o método descrito por Teien A. N. E Lie M., em Thrombosis Research, 1977, 10, 399-410, e ficou demonstrado que os compostos do invento possuem uma actividade anti Xa igual ou superior à dos heparinoides de síntese já conhecidos, nomeadamente é superior a 50 μ anti-Xa/mg.

Tal como mencionado anteriormente, na interrupção de coagulação o factor Xa activa a protrombina, que proteolisa o fibrinogénio solúvel com a libertação da fibrina insolúvel, constituinte principal do coágulo sanguíneo. A inibição do factor Xa constitui então um meio privilegiado para obter uma actividade anticoagulante e antitrombótica. 4 > A actividade antitrombótica global dos produtos de fórmula (I) foi avaliada por via intravenosa ou subcutânea no rato, por um modelo de estase venosa e indução pela tromboplastina, de acordo com o método descrito por J. Reyers et al. em Thrombosis Research, 1980, 18, 669-674. A DE50 dos compostos do invento é pelo menos da mesma ordem ou inferior à dos outros heparinoides de síntese já conhecidos (DE50 compreendidos entre 5 e 500pg/kg).

-26-

Os compostos do invento apresentam assim um especificidade de acção c uma actividade anticoagulante e antitrombótica particularmente interessantes.

Os compostos do presente invento que são capazes de modular, nomeadamente de inibir a actividade dos factores de crescimento particularmente do bFGF premitem inibir a proliferação das células de músculos liso vasculares em cultura (CML) com um efeito inibidor ligeiramente superior ao da heparina, sobre o crescimento das células de músculos lisos. A acção dos compostos do invento sobre a actividade do bFGF foi avaliada por fixação do FGF iodado às CML humanas em cultura. A inibição da proliferação das CML foi avaliada in vitro nas culturas de CML aórticas humanas. (R. Ross, J. Cell. Biol., 1971,172-186).

Os compostos do presente invento que possuem igualmente propriedades antivirais, hipolipidémicas, propriedades antiradicais livres por libertação do superóxido desmutase, propriedades antimetastásicas, antiangiogénicas, anti-inflamatórias, podem igualmente actuar sobre o crescimento e a diferenciação das células neuronais em cultura. São portanto utilizáveis em todas as patologias onde intervenham perturbações destes mecanismos biológicos. A>

Alguns compostos do invento exercem também uma acção protectora e regeneradora sobre as fibras nervosas.

Pela sua actividade bioquímica e farmacêutica selectiva, os compostos do presente invento são medicamentos muito interessantes. A sua toxicidade é perfeitamente compatível com esta utilização. Eles são também muito estáveis, sendo portanto particularmente apropriados para constituir o princípio activo de especialidades farmacêuticas.

Pela sua actividade sobre os factores de coagulação, os compostos do invento podem ser utilizados em várias patologias relacionadas com a coagulação e em particular nas perturbações do sistema cardiovascular e cérebrovascular. Possuem mais particularmente uma forte afinidade com a antitrombina III bem como uma importante actividade anti-factor Xa e antitrombina. A inibição destes factores da coagulação constitui portanto um meio privilegiado para obter uma actividade anticoagulante e antitrombótica.

Podem ser utilizados em várias patologias consecutivas a uma modificação da hemostasia do sistema de coagulação aparecendo em particular aquando das perturbações do sistema cardiovascular e cérebrovascular como as perturbações tromboembólicas associadas à arteroesclerose e aos diabetes, como a angina instável, o ataque cerebral, a restenóse após angioplastia, a endarterectomia, a colocação de próteses endovasculares, ou as perturbações associadas à re-trombose após trombólise, ao enfarto, à demência de origem isquémica, às doenças arteriais periféricas, à hemodiálise, às fibrilações auriculares ou ainda na utilização de próteses vasculares de derivações aorto-coronárias. Estes produtos podem, por outro lado, ser utilizados para o tratamento ou prevenção de patologias trombo-embólicas de origem venosa como as embolias pulmunares. Podem ser utilizados para prevenir ou tratar as complicações trombóticas que apareçam no seguimento de intervenções cirúrgicas ou conjuntamente com outras patologias como o cancro, infecções bacteriológicas ou virais. No caso da sua utlização aquando da colocação de próteses, os compostos do presente invento podem recobrir as próteses tomando-as deste modo hemocompatíveis. Podem, particularmente, ser fixados às próteses intravasculares (sondas). Neste caso, podem eventualmente ser modificados quimicamente por introdução na extremidade não redutora ou redutora de um braço apropriado, de acordo com o descrito em EP 649 854. A utilização na restenose após angioplastia é favorecida pelas propriedades inibidoras de alguns factores de crescimento, tais como o bFGF.

Os compostos do presente invento podem igualmente ser utilizados como auxiliares na realização de uma endarterectomia realizada com balões porosos.

Os resultados obtidos em diferentes estudos farmacocinéticos efectuados com produtos do invento, demonstraram que estes são muito bem absorvidos pelo tracto gastro-intestinal e que a sua meia-vida é longa. Este facto permite encarar, nas suas utilizações em terapêutica, a possibilidade de uma administração única diária.

Estes estudos demonstraram também que as composições farmacêuticas preparadas com os produtos de fórmula (I), objecto do presente invento, são absorvidas pelo tracto digestivo, sem que as quantidades administradas sejam proibitivas por uma utilização em terapêutica humana. Os compostos do invento são então úteis para a preparação das composições farmacêuticas, administráveis tanto por via parenteral, como por via oral.

Os compostos do invento são muito estáveis e, portanto, particularmente apropriados para constituir o princípio activo de medicamentos.

De acordo com outro dos seus aspectos, o presente invento tem por objectivo uma composição farmacêutica contendo, enquanto princípio activo, um polissacarídeo de síntese contendo de 8 a 24 unidades monossacarídicas formado

-29-por uma cadeia de dissacarídeos constituídos por um ácido urónico e um hexosc, sendo o referido polissacarídeo caracterizado pelo facto de todos os seus grupos hidróxilos serem eterificados com um grupo (Ci-C6)alquilo ou esterificados sob a forma de um grupo sulfo, sendo cada dissacarídeo pelo menos monoeterificado; ou um dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis. O referido polissacarídeo de síntese, princípio activo das composições do presente invento é de preferência alquilado por um grupo metilo. O invento diz respeito, de preferência, às composições farmacêuticas que contêm como princípio activo um composto de fórmula (I), (1.1), (1.2), (1.3) ou um dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis, eventualmente em associação com um ou mais excipientes inertes ou apropriados.

Em cada unidade de dosagem o princípio activo está presente nas quantidades adaptadas às doses diárias pretendidas. Geralmente, cada unidade de dosagem é convenientemente ajustada de acordo com a dosagem e o tipo de administração previsto, por exemplo, comprimidos, cápsulas e similares, saquetas, ampolas, xaropes e similares, gotas, emplastros transdérmicos ou transmucosais de forma a que uma tal unidade de dosagem contenha de 0,1 a 100 mg de princípio activo, de preferência 0,5 a 50 mg.

Os compostos segundo o invento podem também ser utilizados em associação com um outro princípio activo útil para a terapêutica desejada tais como os antitrombóticos, os anticoagulantes, os anti-agregantes plaquetários tal como por exemplo o dipiridamolo, a aspirina, a ticlopidina, o clopidogel ou os antagonistas do complexo da glicoproteína Ilb/IIIa.

As composições farmacêuticas são formuladas para a -30- -30-

(yOtyi'· administração a mamíferos, incluindo o Homem, para o tratamento das doenças acima referidas.

As composições farmacêuticas assim obtidas são apresentadas vantajosamente sob diversas formas, tal como por exemplo, soluções injectáveis ou bebíveis, drageias, comprimidos ou cápsulas. As soluções injectáveis são as formas farmacêuticas preferidas. As composições farmacêuticas do presente invento são úteis nomeadamente para o tratamento a título preventivo ou curativo, das perturbações da parede vascular, tais como a arteroesclerose, os estados de hipercoagulabilidade obeservados, por exemplo, após operações cirúrgicas de desenvolvimento de tumores ou de desregulamentos da coagulação, induzidos por activadores bacterianos, virais,ou enzimáticos. A posologia pode variar muito, em função da idade, do peso e do estado de saúde do doente, da natureza e do grau da doença, bem como da via de administração. Esta posologia inclui a administração de uma ou mais doses de cerca de 0,1 mg a 100 mg por dia, de preferência entre 0,5 e 50 mg por dia, por via intramuscular ou subcutênea, em administrações discontínuas ou a intervalos regulares. O presente invento tem igualmete por objectivo as composições farmacêuticas que contêm, a título de princípio activo, um dos compostos anteriormente referidos eventualmente associado a outro princípio activo. As composições são efectuadas de forma a poderem ser administradas por via digestiva ou parenteral.

Nas composições farmacêuticas do presente invento, para administração oral, sublingual, subcutânea, intramuscular, intravenosa, transdérmica, transmucosal, local ou rectal, o ingrediente activo pode ser administrado sob formas unitárias de administração, misturado com suportes farmacêuticos clássicos, em animais e em seres humanos. As formas unitárias de -31 - <~2Α^'τ administração apropriadas incluem as formas por via oral tais como os comprimidos, as cápsulas, os pós, os grânulos e as soluções ou suspensões orais, as formas de administração sublingual e bocal, as formas de administração subcutânea, intramuscular, intravenosa, intranasal ou intraocular e as formas de administração rectal.

Quando se prepara uma composição sólida sob a forma de comprimidos, mistura-se o ingrediente activo principal com um veículo farmacêutico tal como a gelatina, o amido, a lactose, o estearato de magnésio, o talco, a goma arábica ou análogos. Pode-se envolver os comprimidos com sacarose ou outras matérias apropriadas ou ainda tratá-los de forma a terem uma actividade prolongada ou retardada e a libertarem de maneira contínua uma quantidade prédeterminada de princípio activo.

Obtém-se uma preparação em cápsulas, misturando o ingrediente activo com um diluente e deitando a mistura em cápsulas moles ou duras.

Uma preparação sob a forma de xarope ou elixir pode conter o ingrediente activo conjuntamente com um edulcorante, de preferência acalórico, tendo como antiséptico metilparabeno e propilparabeno, assim como um agente para dar gosto e um corante apropriado.

Os pós ou os grânulos solúveis· em água podem conter o ingrediente activo misturado com agentes de dispersão ou agentes humectantes, ou agentes de suspensão, como a polivinilpirrolidona, assim como com edulcorantes ou correctores de gosto.

Para uma administração rectal, recorre-se aos supositórios preparados com ligantes que fundem à temperatura rectal, como por exemplo a manteiga de cacau ou polietilenoglicois.

Para uma administração parenteral, intranasal ou intraocular, utilizam-se suspensões aquosas, soluções salinas isotónicas ou soluções estéreis e injectáveis que contêm agentes de dispersão e/ou agentes humectantes farmacologicamente compatíveis, como por exemplo o propilenoglicol ou o butilenoglicol.

Para uma administração transmucosal, o princípio activo pode ser formulado na presença de um promotor tal como um sal biliar, de um polímero hidrófilo como por exemplo o hidroxipropilcelulose, o hidroxipropilmetilcelulose, o hidroxietilcelulose, o etilcelulose, a carboximetilcelulose, o dextrano, a polivinilpirrolidona, as pectinas, os amidos, a gelatina, a caseína, os ácidos acrílicos, os ésteres acrílicos e seus copolímeros, os polímeros de óxido de polietileno, os poliéteres ou suas misturas. O princípio activo pode igualmente ser formulado sob a forma de microcápsulas, eventualmente com um ou vários suportes ou aditivos. O princípio activo pode igualmente ser apresentado sob a forma de complexo com uma ciclodextrina, por exemplo α β ou γ ciclodextrina, 2-hidroxipropil-P-ciclodextrina ou metil-P-ciclodextrina. O princípio activo pode igualmente ser libertado por um pequeno balão que o contenha ou o por um extensor endovascular introduzido em vasos sanguíneos. A eficácia farmacológica do princípio activo não é assim afectada. A administração por via subcutânea é a via preferida. -33-

Os MÉTODOS as PREPARAÇÕES e os ESQUEMAS seguintes ilustram a síntese dos diferentes intermediários úteis para a obtenção dos polissacarídeos de acordo com o invento.

Os EXEMPLOS seguintes ilustram igualmente o invento sem no entanto o limitar.

Para uma melhor compreensão do processo segundo o invento, a obtenção dos compostos (I) pode ser esquematizada como se segue: ESQUEMA 1 15 O-# 15 O# 15.0# 25 # 15 O# 25 0#0# 16 O· 25 O-#0# o#-o-#o# 25 0#-0# 8 Q# -- 0-#0-# « 17 0-#-0-# --'-

o#-o-#o# 1S «040^04'-- 17 0#-0# -- o#{o#&># 26 27 <>*{0-«]pV-- o^{o#fc># Φ u 0^j0#jj0· 28 φ 35 29 0-#{θ#1ρ-#~ -^ Oφ 36 .2»0#|0-#)£># - 0#fc>Hft># 30 φ 37 29θ-·ί>^># -- Ο#{θ#}£>-· Φ 3« -- Ο“#{θ#}ρ-# 32 =£> 33 -34- -34- 7 Ι/ίΑη

Estratégia empregue para a síntese de oligoméros do dissacarídeo metil 4-0-(2,3-di-0-metil-a-L-iodopiranosiluronato)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D- gluco-piranosido. Ao condensar os imidatos (coluna da esquerda, triângulo branco na extremidade reductora) e os aceitadores de glicosilo (coluna central, triângulo preto na extremidade não reductora) obtém-se os oligossacarídeos completamente protegidos da coluna da direita. Estes últimos são em seguida desprotegidos e funcionalizados para dar os compostos do EXEMPLO 1 e do QUADRO I.

Todos os compostos descritos em seguida são homogéneos em cromatografia sobre camada fina (CCM) e possuem propriedades espectrais de acordo com a sua estrutura. Os pontos de fusão são determinados nos tubos capilares com a ajuda de um aparelho Mettler, e não são corrigidos. Os poderes rotatórios são medidos com a ajuda de um polarímetro Perkin-Elmer 241 a 22 ± 3°C. A pureza dos compostos é verificada por CCM sobre Silica Gel 60® F254 (E.Merck) com detecção por carbonização na presença de ácido sulfurico. Salvo menção particular, as cromatografias em coluna são realizadas em Silica Gel 60®, 40-63 ou 63-200 pm (E. Merck). Os espectros de *H RMN são registados em aparelhos Bruker AC 200, AM 250, AC 300 ou AM 500 em soluções dos produtos em CDCI3 ou D20. Antes da análise em D20 as amostras são passadas através de uma coluna de resina de permuta de iões Chelex® (Bio-Rad) e depois liofilizadas três vezes em D20. Os deslocamentos químicos são relativos ao TMS externo quando os espectros são registados em D20. As análises de espectrometria de massa são efectuadas num instrumento ZAB-2E (Fisons). As análises elementares são efectuadas num analisador Fisons.

As seguintes abreviações são utilizadas: -35- Ι/ίΛη TBDMS: terí-butildimetilsililo; Lev: levulinilo; Bn: benzilu, Bz: benzoilo; MCA: cloroacetílo; CCM: cromatografia sobre camada fina; Olm: tricloroacétimidilo; LSEMS: é a sigla inglesa de Liquid Secondary Ion Mass Spectometry-, ESIMS: é a sigla inglesa de Electron Spray Ionisation Mass Spectometry; TMS: trimetilsililo; TSP: trimetilsililo tetradeutério propionato de sódio; Tf: triflato; MS: peneira molecular.

Dowex®, Sephadex®, Chelex®, Gel 60®, são marcas registadas.

Nos MÉTODOS, nas PREPARAÇÕES e nos EXEMPLOS descritos em seguida, os modos operatórios gerais relativos à clivagem dos ésteres levulínicos, o acoplamento catalítico dos imidatos, a desprotecção e a sulfatação dos oligo e dos polissacarídeos por hidrogenólise dos ésteres ou dos éteres benzílicos, a saponificação dos ésteres ou ainda as sulfatações podem ser realizados aplicando métodos gerais em seguida aos intermediários apropriados. MÉTODOS GERAIS MÉTODO 1 .Corte do grupo Lev.

Uma solução de hidrato de hidrazina (1 M em 3:2 piridina/ácido acético) é acrescentada (5 ml/mmole) a uma solução arrefecida (0°C) em piridina (5 ml/mmóle) do composto a tratar. Após 15-30 minutos (CCM) a solução é concentrada. O resíduo é dissolvido em acetato de etilo, lavado com água, uma solução a 10% de hidrogenosulfato de potássio, uma solução a 2% de hidrogenocarbonato de sódio, em água, seco e concentrado. -36- l/ΐΛη MÉTODO 2 Acoplamento aos imidatos catatízado pelo trtflato de tert-butildimetilsililo. O triflato de terí-butildimetilsililo (0,5 mol/mol de imidato) é acrescentado gota a gota, sob árgon, a uma solução agitada e arrefecida (-20°C) de álcool aceitador e de imidato dador, no tolueno (35 ml/mmol), na presença de peneira molecular 4 A em pó. Após 15-30 minutos (CCM), introduz-se sob agitação hidrogenocarbonato de sódio sólido. Após 5 minutos é acrescentado tolueno, a solução é filtrada, lavada com uma solução a 2% de hidrogenocarbonato de sódio, em água, seca (sulfato de sódio) e concentrada. MÉTODO 3 Acoplamento aos imidatos catalizado pelo triflato de trimetilsililo O triflato de trimetilsililo (0,04 M em tolueno; 0,06 mol/mol de imidato) é acrescentado gota a gota sob árgon, a uma solução agitada e arrefecida (-20°C) de álcool aceitador e de imidato dador, em tolueno (15 ml/mmol), na presença de peneira 4 A em pó. Após 15-20 minutos (CCM), introduz-se sob agitação hidrogenocarbonato de sódio sólido. Após 5 minutos é acrescentado o tolueno, a solução é filtrada , lavada com uma solução a 2% de hidrogenocarbonato de sódio, em água, seca (sulfato de magnésio) e concentrada. MÉTODO 4 Desprotecção e sulfatação dos oligo- e polissacarídeos.

H

Hidrogenólise dos éteres benzílicos e ésteres benzílicos. Uma solução do composto (5mg/ml), em dimetilformamida ou metanol, é agitada durante 2-6 horas (controlo CCM) sob uma atmosfera de hidrogénio (5 bar) na presença de catalizador Pd/C a 10% (2 x massa do composto). Após filtração o produto é levado directamente à etapa seguinte. -37- Ι/ίΛη

Saponificação dos ésteres. Uma solução aquosa de hidróxido de sódio 5 M é acrescentada (numa quantidade tal que a concentração de hidróxido de sódio seja de 0,5 M no final da adição) a uma solução de éster em metanol (150 ml/mmol). Após 2-5 horas (CCM) é introduzida água e em seguida a resina Dowex® 50 H+ até ao pH 1-2. Após filtração e concentração o resíduo é passado por uma coluna de gel Sephadex® G-25 (1,6 x 115 cm) eluída com água. O composto completamente desprotegido é então obtido após liofilização. Nesta altura verifica-se por !H RMN que todos os grupos protectores foram retirados. Se necessário, o produto é novamente submetido à hidrogenação e/ou à saponificação.

Sulfatação. O complexo piridina/trióxido de enxofre (5 mmol/mmol função hidróxilo) é acrescentado a uma solução em dimetilformamida (10 mg/ml) do composto a sulfatar. Após um dia a 55°C a solução é posta no cimo de uma coluna de Sephadex® G-25 (1,6 x 115 cm) eluída por um cloreto de sódio 0,2 M. As fracções que contêm o produto são concentradas e dessalinizadas utilizando a mesma coluna eluída pela água. O composto final é obtido após liofilização. -38-

ESQUEMA 2 Síntese do dissacarideo

3

PREPARAÇÃO 1

Metil 4-0-(2-0-benzoil-4,6-isopropilideno-3-0-metil-a-L-ido-piranosil)-2,3,6-tri-0-benzil-a-D-glucopiranosido (3).

Uma solução de ácido triflíco em tolueno (0,15 M, 0,27 ml) é acrescentada, sob agitação sob árgon, a uma solução arrefecida (-20°C) de etil 2-0-benzoil-4,6-isopropilideno-3-0-metil-l-tio-a-L-idopiranosido 2 (Jaurand, G. Et al, BioMed. Chem. Lett. 1992, 2, 897-900). (1,1 g, 2,87 mmol), de 1 (Garegg P.J., Hultberg H., Carbohydr. Res. 93, 1981 C10-C11) (1,34 g 2,87 mmol), e de N-iodossuccinimida (1,61 g, 7,2 mmol), em tolueno (40 ml) contendo peneiras moleculares 4 A em pó. A mesma quantidade de ácido é acrescentada após 25 e 50 minutos. Após 1,5 h, o bicarbonato de sódio sólido (20 mg) é introduzido, e , 15 minutos mais tarde, a solução é filtrada, diluída com diclorometano, lavada -39-

com uma solução de tiossulfato de sódio, água, seca (sulfato de sódio) c evaporada. O produto bruto assim obtido (2,49 g) é utilizado directamente para a preparação de 4.

Após cromatografia em coluna, (3:1 ciclohexano/acetato de etilo) obtém-se o composto 3 puro. CCM, RF = 0,36, 3:1 ciclohexano/acetato de etilo; [a]D + 31 (c=l, diclorometano). ESI SM, modo positivo: m/z + NaCl, 345 (M+Na)+; + KF, 361 (M+K)+. ]H RMN (CDCI3) δ 7, 17-7,35 (m, 20H, 4Ph), 5,10 (d, 1H, Η-Γ), 4,60 (d, 1H, J = 3,0 Hz, H-l), 3,37 (s, 3H, OMe), 1,95; 2,04; 2,09 (3s, 9H, 3Ac), 1,24; 1,33 (2s, 6H, :C(CH3)2).

Anal. Calculado para C45H52012 (784,86) : C, 68,86; H, 6,68. Encontrado: C, 68,61; H, 6,77. PREPARAÇÃO 2

Metil 2,3,6-tri-0-benzil-4-0-(4,6-isopropilideno-3-0-metil-a-L-idopiranosil)-a-D-glucopiranosido (4).

Uma solução 2M de metilato de sódio (2,2 ml, 4,4 mmol) é acrescentada a uma solução do composto 3 (2,34 g) numa mistura 1:1 metanol/diclorometano (13 ml). Após 2,5 horas à temperatura ambiente a mistura é neutralizada com resina Dowex® 50 (H+), filtrada e concentrada para produzir 4 (1,74 g; 86% em relação a 1 e 2) após cromatografia em coluna (3:1 e depois ( 2:1 ciclohexano/acetato de etilo); [a]D +23 (c=l, diclorometano). ESI SM, modo positivo: m/z + NaCl, 703 (M+Na)+; + KF, 719 (M+K)+. ‘H RMN (CDCI3) δ 7, 31-7,21 (m, 15H, 3Ph), 4,94 (d, 1H, H-l'), 4,60 (d, 1H, J = 3,6 Hz, H-l), 3,44; 3,36 (2s, 6H, OMe); 3,06 (dd, 1H,7= 3,6 Hz, ./= 12,2 Hz, H-6 ), 1,31; 1,28 (2s, 6H, :C(CH3)2).

Anal. Calculado para C38H480n (680,76): C, 67,04; H, 7,11.

Encntrado: C,67,05; H,7,16. PREPARAÇÃO 3

Metil 2,3,6-tri-0-benzil-4-0-(4,6-isopropilideno-2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosil)-a-D-glucopiranosido (5).

Iodeto de metilo (3,2 ml, 50,8 mmol) é acrescentado, a 0°C, a uma solução de 4 (26,6 g, 39,1 mmol) e de hidieto de sódio (1,48 g, 58,7 mmol) em dimetilformamida (60 ml). Uma nova adição de iodeto de metilo (1,6 ml, 25,4 mmol) e de hidreto de sódio (0,74 g, 29,3 mmol) é realizada após 5 horas à temperatura ambiente. Após 1 noite, é introduzido metanol (10 ml) gota a gota, e após 1,5 horas a mistura reaccional é concentrada. O produto é extraído com acetato de etilo (1,5 1). A solução é lavada com água, seca (sulfato de sódio) e concentrada. O composto bruto 5, assim obtido (32,1 g), é utilizado como tal na etapa seguinte. CCM, RF= 0,55, 3:2 ciclohexano-acetato de etilo. -41 -ESQUEMA 3

nu· OBn OM» BnOOC P"· 0 OBiy

HO . 7 OBn° OM·

15 Síntese dos dissacarídeos de base para a preparação de oligómeros do metil 4-0-(2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glucopiranosido. PREPARAÇÃO 4

Metil 2,3,6-tri-0-benzil-4-0-(2,3-Di-0-metil-a-L-idopiranosil)-a-D-glucopiranosido (6).

Uma solução aquosa de ácido trifluoroacético (70%, 43 ml) é acrescentada gota a gota durante 10 minutos a uma solução do composto bruto anterior (32,1 g) em diclorometano (215 ml). Após 25 minutos à temperatura ambiente a solução é diluída com diclorometano (11), lavada com uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio, com água e seca (sulfato de sódio). O composto bruto 6 obtido após concentração (27,5 g) é utilizado como tal na etapa seguinte. CCM, RF = 0,29, 2:3 ciclohexano-acetato de etilo. PREPARAÇÃO 5

Metil 2,3,6-tri-0-benzil-4-0-(6-0-te/f-butildimetilsilil-4-0-levulinil-2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosil)-a-D-glucopiranosido (10).

Uma solução de 6 (1,7 g) de trietilamina (0,54 ml, 3,8 mmol), de 4-dimetilaminopiridina (38 mg, 0,3 mmol) e de cloreto de terí-butildimetilsililo (0,54 g, 3,6 mmol), em cloreto de metileno (6ml), é aquecida a 50°C durante 3 horas para produzir 9 que não é isolado. Após arrefecimento à temperatura ambiente, são acrescentados o anidrido levulínico (0,771 g, 3,6 mmol), a trietilamina (0,50 ml, 3,6 mmol) e a 4-dimetilaminopiridina (59 mg, 0,48 mmol). Após 4 horas a mistura é diluída com cloreto de metileno, e lavada sucessivamente com uma solução aquosa de hidrogenosulfato de potássio, água, uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio, água , seca -43- Ι/ίΛ,η (sulfato de sódio) e concentrada para produzir 10 (2,45 g) que é utilizado como tal na etapa seguinte. TLC, RF 0,5,12:1 ciclohexano/acetato de etilo. PREPARAÇÃO 6

Metil 2,3,6-tri-0-benzil-4-0-levulinil-2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato)-a-D-glucopiranosido (12).

Uma solução de trióxido de crómio (0,64 g, 6,4 mmol) em ácido sulfurico aquoso (3,5 M, 2,7 ml) é acrescentada lentamente a uma solução arrefecida (0°C) de 10 (2,45 g) em acetona (18 ml). Após 5 horas é introduzido o cloreto de metileno, e em seguida a mistura é deitada em água gelada, agitada vigorosamente, lavada com água até um pH neutro e seca (sulfato de sódio). A concentração produz 11 (2,45 g), s em forma de xarope. TCL, RF 0,56, 12:1 cloreto de metileno/metanol. Este produto é seguidamente dissolvido em dimetilformamida (19 ml) e tratado uma noite à temperatura ambiente com brometo de benzilo (2,9 ml, 12 mmol). O metanol (1,5 ml) é acrescentado e o produto é extraído com éter, lavado com água , seco e concentrado. Após cromatografia em coluna (2:1 e depois, 3:2 ciclohexano/acetato de etilo) obtém-se 12 (1,07 g). TCL RF 0,53, 5:1 cloreto de metileno-acetato de etilo. PRAPARAÇÃO 7

Metil 2,3,6-tri-0-benzil-4-0-(benzil 2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosiluronato)-a-D-glucopiranosido (8). O dissacarídeo 12 (0,65 g, 0,76 mmol) tratado segundo o método geral 1 produz 8 (0,52 g, 91%) após cromatogarfia em coluna (2:1 e depois 3:1 ciclohexano/acetato de etilo). [a]o +34 (c= 0,97, cloreto de metileno). -44-

PREPARAÇÃO 8 l,3,6-trÍ-0-Acetil-2-0-benzil-4-0-(4-0-levuliiiil-2,3-di-0-metil-α-L-idopiranosiluronato de benzilo)-D-glucopiranose (13). É acrescentado ácido trifluoroacético (28 ml, 0,364 mol) a uma

solução de 12 (7,8 g, 9,1 mmol) em anidrido acético (194 ml, 2,06 mol) e ácido acético (7,8 ml, 0,136 mol). Após aquecimento a 60°C durante 4 horas, a solução é arrefecida a 0°C e é introduzida água (30 ml) gota a gota), seguida de trietilamina (69 ml). Após evaporação o resíduo, é dissolvido em diclorometano, lavado com uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio, água, seco (sulfato de sódio), e concentrado. Uma cromatografia em coluna (5:1 diclorometano/acetato de etilo) resulta numa mistura (α/β=8/2) dos anómeros de 13 (4,7 g, 67%). CCM, Rp 0,35; 3:2 ciclohexano-acetona. 'H RMN (CDCI3) δ 7,37-7,20 (m 10H, 2Ph), 6,30 (d, J= 3,6 Hz, H-la), 5,62 (d, J= 7,6 Hz, Η-1β), 5,04 (t, 1H, H-4), 3,45; 3,41 (2s, 6H, 2 OMe), 2,6-2,3 (m, 4H, 0(C:0)CH2CH2(C:0)CH3), 2,15; 2,12; 2,06; 1,94; 1,88 (5s, 12H, 3 Ac e 0(C:0)CH2CH2(C:0)CH3).

PREPARAÇÃO 9 3,6-di-0-Acetil-2-0-benzil-4-0-(4-0-levuliiiil-2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-D-glucopiranose (14).

Uma solução de etanolamina (1,3 ml, 21,6 mmol) e de 13 (4,25 g, 5,28 mmol) em tetrahidrofurano (80 ml) é deixada 1 noite a 4°C. É então acrescentado etanolamina (0,65 ml, 10,8 mmol), e em seguida a mistura é deixada à temperatura ambiente durante 3 horas. Após arrefecimento a 0°C, acrescenta-se ácido clorhídrico 1M até ao pH ácido, e depois diclorometano (150 ml)). A solução é lavada com água, sendo depois seca e concentrada. Uma cromatografia sobre coluna (2:1 e depois 1:1 diclorometano/acetato de etilo) -45- Ι/ίΛη rcsulta cm 14 (3g, 74%). CCM, Rp 0,21, 1:1 tolueno-acctato de ctilo. [<x]D 1 3 (c= 1, diclorometano). LSIMS, modo positivo: m/z tioglicerol + NaCl, 769 (M+Na)+; tioglicerol + KF, 785 (M+K)+. *H RMN (CDCI3) δ 7,36-7,25 (m, 10H, 2Ph), 5,21 (d, J= 3,5 Hz, H-la), 4,98 (d, 1H J=3,4 Hz, Η-Γ), 4,79 (d, J=8 Hz, Η-1β), 3,45; 3,42 (2s, 6H, 2 OMe), 2,56-2,23 (m, 4H, 0(C:0)CH2CH2(C:0)CH3, 2,33; 2,12; 1,94; 1,88 (4s, 9H, 2Ac, a e β 0(C:0)CH2CH2(C:0)CH3).

Anal. Calculado para C37H460i6 (746,72): C, 59,51; H, 6,21. Encontrado: C, 58,87, H,6,13. PREPARAÇÃO 10 3,6-di-0-acetil-2-0-benzil-4-0-(4-0-levulinil-2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-D-glucopiranose tricloroacetimidato(15).

Uma mistura de tricloroacetonitrilo (0,7 ml; 6,92 mmol), de 14 (1,03 g; 1,38 mmol), e de carbonato de potássio (191 mg; 2,21 mmol), em cloreto de metileno (26 ml) é agitado durante 1,5 horas à temperatura ambiente. A solução é então filtrada e concentrada. Uma cromatografia em coluna (4:1 tolueno/acetona) produz 15 (1,16 g; 94%). CCM, Rp 0,31 e 0,48, 2:3 ciclohexano-acetato de etilo. LSIMS, modo positivo: m/z tioglicerol + LiCl 896 (M+Li)+; tioglicerol + NaCl, 912 (M+Na)+; tioglicerol + KF, 928 (M+K)+. ]H RMN (CDCI3) δ 8,67 (s, ΝΗ-β), 8,60 (s, NH-cx), 7,37-7,22 (m, 10H, 2Ph); 6,44 (d, J= 3,6 Hz, H-la), 5,83 (d, J= 7,3 Hz, Η-1β), 3,47; 3,44; 3,42; 3,40 (4s,,6H, 20Me), 2,7-2,2 (m, 4H, 0(C:0)CH2CH2(C:0)CH3), 2,15; 2,08; 1,94; 1,88 (4s, 9H, a e β Ac, e 0(C:0)CH2CH2(C:0)CH3). -46- ΐΜη ESQUEMA 4 8+15 CH2CI2; MS; TMSOTf

NHjNH2 . pyridine-AcOH *

Síntese do hexassacarídeo 18. A preparação de oligómeros de tamanho superior é efectuada segundo a mesma estratégia (clivagem do grupo Lev para obter um aceitador de glicosilo, acoplamento com um di-, tetra-, ou hexassacarídeo imidato -como indicado no esquema 1- e finalmente, desprotecção e sulfatação). 0 grupo Lev de 18 é selectivamente eliminado para se obter o hexassacarídeo aceitador 19 (ESQUEMA 1). -47-

PREPARAÇÃO 11

Metil 0-(4-0-levulinil-2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiliuronato de benziIo)-(l-4)-0-(3,6-di-0-acetil-2-0-benzil-a-D-glucopiraiiosil)-(l-4)-0-(2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)-2,3,6-tri-0-benziI-a-D-glucopiranosido (16).

Uma mistura de 8 (2,90 g, 3,83 mmol) e 15 (4,16 g, 4,67 mmol) é tratada segundo o método 2. Uma cromatografia em coluna (1:1 ciclohexano/acetato de etilo) resulta em 16 puro (3,2 g; 54%). CCM, RF 0,52, 2:3 ciclohexano/acetato de etilo. *H RMN (CDCI3) δ 7,21-7,36 (m, 30H, 6Ph), 5,27 (d, 1H, H-l, unidade não redutora), 5,14 (d, 1H, H-l unidade “central next to non reducing”), 4,90 (d, 1H, H-l, unidade “central next to reducing”), 4,56 (d, 1H, H-l unidade redutora), 3,43; 3,39; 3,35; 3,25 (5s, 15H, 5 OMe), 2,25-2,60 (m, 4H, 0(C:0)CH2CH2(C:0)CH3), 2,12; 2,00; 1,91 (3s, 9H, 2Ac e 0(C: 0)CH2CH2(C:0)CH3). PREPARAÇÃO 12

Metil 0-(2,3-di-0-metiI-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(1-4)-0-(3,6-di-0-acetil-2-0-benzil-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)-2,3,6-tri-0-benzil-a-D-glucopiranosido (17). O composto 16 (1 g; 0,672 mmol) é tratado de acordo com o método 1 para dar quantitativamente 17 após cromatografia em coluna (1:1 ciclohexano/acetona). -48-

Umj PREPARAÇÃO 13

Metil 0-(4-0-levulinil-2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)-[0-(3,6-di-0-acetil-2-0-benzil-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosiIuronato de benziIo)-(l-4)]2-2,3,6-tri-0-benzil-a-D-glucopiranosido (18).

Uma mistura del5 (386 mg, 434 pmol) el7 (500 mg; 360pmol) é tratada segundo o método 2. Uma cromatografía em coluna (Sephadex® LH 20, 195 x 3,7 cm; 1:1 diclorometano/etanol) produz o hexassacarídeo 18 (495 mg; 64%). CCM, RF 0,36, 10:1 diclorometano/acetona. *H RMN (CDCI3) δ: 5,23; 5,12; 5,10; 4,92; 4,89; 4,56 ppm. PREPARAÇÃO 14

Metil 0-(2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiIuronato de benzilo)-(l-4)-[0-(3,6-di-0-acetil-2-0-benzil-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)] 2-2,3,6-tri-0-benzil-a-D-glucopiranosido (19). O composto 18 (485 mg; 229 pmol) é tratado segundo o método 1. Uma cromatografía em coluna (10:1 diclorometano/acetona) produz 19 (392 mg; 85%). CCM, Rp 0,38,10:1 diclorometano/acetona.

-49- ESQUEMA 5

PREPARAÇÃO 15

Metil 2,3,6-tri-0-benzil-4-0-(4-0-cloroacetil-2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo^a-D-glucopiranosido (20).

Uma mistura de 8 (326 mg, 0,43 mmol), de anidrido cloroacético (103 g, 0,6 mmol), de 4-dimetilaminopiridina (5,3 mg, 42 μιηοΐ), e de trietilamina (90 μΐ, 64 μιηοΐ) em diclorometano (96 ml) é agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. É então acrescentado metanol (0,5 ml), e a solução é diluída com diclorometano, lavada com água, seca (sulfato de sódio) e concentrada. Uma croinatogiaíia em coluna (2;3 e depois 1:2 ciclohexano/ctcr) resulta em 20 puro (242 mg, 67%). CCM, RF 0,35, 1:2 ciclohexano/éter. 'H RMN (CDCI3) δ 7,36-7,19 (m, 20H, 4Ph), 5,20 (d, 1H, H-l), 4,56 (d, 1H, H-l), 3,70 e 3,36 (sistema AB, J= 15,3 Hz, CIC//2(C:0)0), 3,49, 3,35; 3,26 (3s, 3 OCH3). PREPARAÇÃO 16 1.3.6- tri-0-acetil-2-0-benzil-4-0-(4-0-cloroacetil-2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-a,P-D-glucopiranose (21).

Uma solução de ácido trifluoroacético (183μ1, 2,4 mmol) é acrescentada a uma solução de 20 (50 mg, 0,06 mmol) em anidrido acético (1,28 ml, 13,5 mmol) e ácido acético (52 μΐ, 0,9 mol). Após aquecimento a 60°C durante 4 horas, a solução é arrefecida a 0°C e neutralizada com trietilamina. Após evaporação, uma cromatografia em coluna do resíduo (1:2 e depois 2:5 ciclohexano/éter) produz uma mistura (α/β = 8/2) dos anómeros de 21 (28 mg, 60%). CCM, Rf 0,31, 2:5 ciclohaxano/éter. *H RMN (CDCI3) δ 7,20-7,35 (m, 10H, 2Ph), 6,30 (d, J= 3,6 Hz, H-lcc), 5,63 (d, J= 8,1 Hz, Η-1β), 3,39 e 3,46 (2s, 2 OCH3). PREPARAÇÃO 17 1.3.6- tri-0-acetil-2-0-benzil-4-0-(2,3-di-0-metil-a-L- idopiranosiluronato de benzilo)-a$-D-glucopiranose (22). 5 É acrescentada tioureia (678 mg; 8,9 mmol) a uma solução de 21 (1,71 g; 2,23 mmol) numa mistura de piridina (108 ml) e de etanol (22 ml), sendo essa mistura aquecida a 110°C durante 30 minutos. Após arrefecimento e evaporação o resíduo é dissolvido em diclorometano. A solução é lavada com a ajuda de uma solução saturada aquosa de hidrogenocarbonato de sódio, e depois

-52- l/Uvj PREPARAÇÃO 18 0-(4-0~levulinil-2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)-0-(3,6-di-0-acetil-2-0-benzil-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)-l,3,6-tri-0-acetil-2-0-benzil-a,p-D-glucopiranose (23).

Uma mistura de 15 (1,5 g, 1,7 mmol) e 22 (1,18 g; 1,7 mmol) é tratada segundo o método 3 (substituindo o tolueno por diclorometano). Uma cromatografia por permeação em gel numa coluna de LH-20, equilibrada em diclorometano /etanol 1:1, produz 23 puro (1,75 g; 73%). [a]o + 19 (c= 0,9, diclorometano). LSIMS, modo positivo: m/tioglicerol + NaCl, 1441 (M+Na)+; tioglicerol + KF, 1457 (M+K)+. RMN (CDCI3) δ: 6,27; 5,45; 5,10; 4,96; 4,90 ppm.

Anal. Calculada para C7iH8603o (1419,46): C, 60,08; H, 6,11. Encontrado: C, 60,06; H, 6,40. PREPARAÇÃO 19 0-(4-0-levulinil-2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)-0-(3,6-di-0-acetil-2-0-benzil-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosiluronato de benziIo)-(l-4)-3,6-di-0-acetil-2-0-benzil-a,p-D-glucopíranose (24). É acrescentado etanolamina (80 μΐ; 1,31 mmol) a uma solução do tetrassacarídeo 23 (465 mg; 327 pmol) em tetrahidrofiirano (5 ml), sendo em seguida a solução deixada uma noite a 4°C. Após neutralização por ácido clorídrico (1M; 2 ml), é acrescentado diclorometano (20 ml), e em seguida a solução é lavada, seca (sulfato de sódio) e concentrada. Uma cromatografia em coluna (3:1 tolueno/acetona) resulta em 24 (326 mg; 79%). CCM, Rp 0,33, 3:1 tolueno/acetona. LSIMS, modo positivo: m/z tioglicerol + NaCl, 1399 (M+Na)+; -53- tioglicerol + KF, 1415 (M+K)'. 'H RMN (CDCI3) δ: 5,18; 5,10; 4,96; 4,93; 4,75 PREPARAÇÃO 20 0-(4-0-levulinil-2,3-di-0-metll-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)-0-(3,6-di-0-acetil-2-0-benzil-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzi!o)-(l-4)-3,6-di-0-acetil-2-0-benzil-a,P-D-glucopiranose tricloroacetimidato (25).

Uma mistura de tricloroacetonitrilo (151 μΐ; 1,5 mmol), do tetrassacarídeo 24 (343 mg; 249 μΜ), e de carbonato de potássio (62 mg; 448 μτηοΐ) em diclorometano (2 ml) é agitada uma noite à temperatura ambiente . É acrescentado diclorometano, e após filtração a solução é concentrada. Uma cromatografia em coluna (3:1 tolueno/acetona) produz 25 (346 mg; 91%). CCM, Rf 0,42; 0,63, 2:1 diclorometano/acetato de etilo. 'H RMN (CDCI3) δ: 8,67 (s, NH-b), 8,59 (s, NH-a), 7,40-7,20 (m, 10H, 2Ph), 6,40 (d, J= 3,5 Hz, H-loc), 5,90 (d, J= 7,5 Hz, Η-1β), 3,45; 3,44; 3,42;

3,40 2,12 0(C 3,39; 3,37; (6s, 12H, 4 OMe), 2,7-2,2 (m, 4H, 0(C:0)CH2CH2(C:0)CH3), 2,08; 2,07; 2,04; 2,02; 1,91; 1,89 (7s, 15H, 4Ac, e 0)CH2CH2(C:0)CH3). NH-a e NH-b designam os sinais obtidos para cada um dos isómeros sin e anti. PREPARAÇÃO 21

Metil 0-(4-0-levulinil-2,3-di-0-metil-a-L-idopirano-siluronato de benzilo)-(l-4)-[0-(3,6-di-0-acetil-2-0-benziI-a-D-gIucopiranosil)-(l-4)-0-(2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l -4)]3-2,3,6-tri-0-benzil-a-D-glucopiranosido (26). A partir de 17 e 25. Uma mistura de 17 e 25 (459 mg, 0,3 mmol) é -54- //U/ή tratada segundo o método 3. Uma cromatografia em coluna (Sephailex® LH 20, 195 x 3,7 cm; 1:1 diclorometano/etanol), seguida de uma cromatografia em coluna de gel de sílica (3:2 ciclohexano-acetona) produz 26 puro (420 mg; 59%). [a]D +20 (c= 0,20, diclorometano). LSIMS, modo positivo: m/z tioglicerol + NaCl, 2771 (M+Na)+; tioglicerol + KF, 2787 (M+K)+. *H RMN (CDCI3) δ: 5,26; 5,14; 5,10; 4,93; 4,92; 4,90; 4,56 PREPARAÇÃO 22 26 a partir de 15 el9. Uma mistura de 15 (332 mg, 373 pmol) e 19 (377 mg; 186 pmol) é tratada segundo o método 2. Uma cromatografia em coluna (Sephadex® LH 20, 195 x 3,7 cm; 1:1 diclorometano/etanol) resulta no octassacarídeo 26 puro (460 mg; 90%). PREPARAÇÃO 23

Metil 0-(2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)-[0-(3,6-di-0-acetil-2-0-benzíl-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)]3-2,3,6-tri-0-benziI-a-D-glucopiranosido (27). O composto 26 (275 mg; 100 μτηοΐ) é tratado segundo o método 1 para produzir 27 (265 mg; 96%); [a]D +27 (c= 0,56, diclorometano). LSIMS, modo positivo: m/z tioglicerol + NaCl, 2673 (M+Na)+; tioglicerol + KF, 2689 (M1 K)+. lK RMN (CDCI3) δ: 5,26; 5,15; 5,10; 5,08; 4,89; 4,88; 4,55 -55-

PREPARAÇÃO 24

Metil 0-(4-0-levulmil-2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)-[0-(3,6-di-0-acetil-2-0-benzil-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosiluronato de beuzilo)-(l-4)]s-2,3,6-tri-0-benzil-a-D-glucopiranosido (28).

Uma mistura de 27 (97,3 mg; 36 μπιοί) e de 25 (83,8 mg, 55 μιηοΐ) é tratada segundo o método 3. Uma cromatografia em coluna (ciclohexano-acetona 2:1, depois 7:4 e depois 3:2) produz 28 puro (102 mg; 69%). [a] D +22 (c= 0,51, diclorometano). CCM, RF 0,18,3:2 ciclohexano-acetona. *H RMN (CDCI3) δ: 5,26; 5,14; 5,10; 5,08; 4,93; 4,92; 4,90; 4,56 PREPARAÇÃO 25

Metil 0-(2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)-[0-(3,6-di-0-acetiI-2-0-benziI-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(2,3-dI-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benziIo)-(l-4)]5-2,3,6-tri-0-benzil-arD-glucopiranosido (29). O composto 28 (216 mg; 54 pmol) é tratado segundo o método 1 para produzir 29 (199 mg; 95%). CCM, RF 0,56, 1:1 ciclohexano-acetona; RF 0,55, 2:1 tolueno-acetona. LSIMS, modo positivo: m/z tioglicerol +NaCl, 3934 (M+Na)+, tioglicerol +KF, 3950 (M+K)+. -56- Ι/Αη PREPARAÇÃO 26

Metil 0-(4-0-levulinil-2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)-[0-(3,6-di-0-acetil-2-0-benzil-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(2,3-di-O-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)] 7-2,3,6-tri-0- benzil-a-D-glucopiranosido (30).

Uma mistura de 25 (33 mg, 21,4 μιηοΐ) e de 29 (52,4 mg; 13,3 pmol) é tratada segundo o método 2. Uma cromatografía em coluna (7:4 ciclohexano-acetona) produz 30 puro (43,8 mg; 62%). [a]D + 19 (c=0,5, diclorometano). CCM, RF 0,36, 3:2 ciclohexano-acetona. LSIMS, modo positivo:m/z tioglicerol + KF, 5310 (M+K)+. *H RMN (CDCI3) δ dos protões anómeros principais: 5,26; 5,14; 5,10; 5,08; 4,92; 4,90; 4,56 PREPARAÃO 27

Metil 0-(2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)-[0-(3,6-di-0-acetil-2-0-benzil-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)]7-2,3,6-tri-0-benzil-a-D-glucopiranosido (31). O hexassacarídeo 30 (100 mg; 19 pmol) é tratado segundo o método 1, para produzir 31 utilizado directamente na etapa seguinte. [a]D +20 (c=0,38, diclorometano). GCM, RF 0,31,4:3 ciclohexano-acetona. LSIMS, modo positivo: m/z tioglicerol + NaCl, 5196 (M+Na)+; tioglicerol + KF, 5212 (M+K)+. PREPARAÇÃO 28

Metil 0-(4-0-levulinil-2,3-di-0-metiI-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(1-4)-[0-(3,6-di-0-acetil-2-0-benzil-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(2,3-di-O-metíl-a-L-idopiranosiluronato de benzilo)-(l-4)]9-2,3,6-tri-0- -57-

benzil-a-D-glucopiranosido (32).

Uma mistura de 25 (31 mg; 21,7 μπιοί) e de 31 (94,5 mg, 18,3 μηιοί) é tratada segundo o método 3 para produzir 32 após várias cromatografias em coluna (29,2 mg; 25%). [a]D +22 (c=0,33, diclorometano). CCM, RF 0,26, 4:3 ciclohexano-acetona. 'H RMN (CDCI3) δ dos protões anómeros principais: 5,26; 5,14; 5,10; 5,09; 4,92; 4,91; 4,90; 4,56 ppm. EXEMPLO 1

Metil 0-(ácido 2,3-dí-0-metil-4-0-suIfo-a-L-idopiranosil-urónico-(l-4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]9-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-gluco-piranosídeo, sal de sódio (33).

O composto 32 é tratado segundo o método 4 para produzir 33 (60% nas 3 etapas). ,[ot]D +27 (c= 0,4, D20); ESIMS, modo negativo: massa experimental = 7077,3 ± 3,2 u.m.a. 'H RMN (D20) δ principais protões anoméricos : δ 5,41; 5,40; 5,15; 5,09; 5,07; 5,06 ppm.

Procedendo de acordo com o EXEMPLO 1 e com o ESQUEMA 1 anteriores, preparam-se os compostos 34 a 38 (EXEMPLO 2 a 6) descritos no bu^ <~2Λ^ώ>τ^ -58- QUADRO 1 que se segue.

QUADROI

Número do exemplo m [a]D Massa experimental 2 composto 34 5 +30 3605 3 composto 35 6 +29 4297 4 composto 36 7 +27 4993 5 composto 37 8 +34 5688 6 composto 38 9 +27 6381 EXEMPLO 7

Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-P-D-glucopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-P-D-glucopiranosilurónico)-(l-4)l4-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D- 'Λ**! -59-glucopiranosídeo, sal de sódio (39).

O dissacarídeo dador de glicosilo COOMe o (>*%. OBn OC(NH)CCI, MeO OAc e o dissacarídeo aceitador de glicosilo

são preparados segundo os métodos descritos em Westerduin et al., BioOrg. Med. Chem., 2, 1994, 1267, e em seguida combinados tal como descrito na preparação de 34. O dissacarídeo resultante é tratado segundo o método 4 para produzir 39.

[a]D + 45 (c= 1, H20). *H RMN (D20) δ dos protões anoméricos principais: 5,53; 5,18; 4,65;4,63 ppm.

-60-

Procedendo de acordo com o EXEMPLO 7 e com o ESQUEMA 1 anteriores, prepara-se o composto 40 (EXEMPLO 8) descrito no QUADRO II seguinte.

QUADRO II

Número do exemplo M Md ’h rmn (d2o) δ (ppm) dos protões anoméricos principais 8 composto 40 4 +45 5,53; 5,13; 4,62; 4,60 EXEMPLO 9

Metil 0-(ácido 3-0-metil-2,4-di-0-sulfo-a-L- idopiranosiIurónico)-(l-4)-[0-(3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopiranosihirónico)-(l-4)]4-3-0-metll-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio (41). -61 - l/l/uuj

(CCM, RF 0,54, 1:1 ciclohexano/EtOAc) é tratado tal como descrito para 12 para produzir o imidato dador de glicosilo

BnOOC__OMe MeO

0Bn OC(NH)CCl, OLsv OBz OAc e o aceitador

[‘H RMN (CDCI3) δ 8,00-7,15 (m, 20H, 4Ph), 5,15 (d, 1H, H-l), 4,57 (d, 1H, H-l), 3,48; 3,47; 3,32 (3s, 3 OCH3)l. -62- [/U#j

Estes três sintões são então combinados tal como descrito para a preparação de 34. O dissacarídeo resultante é então tratado segundo o método 4 para produzir 41.

[a]D + 17 (c= 1, H20). 'Η RMN (D20) δ dos protões anoméricos principais: 5,36; 5,34; 5,13; 5,11; 5,09; 5,05 ppm.

Procedendo de acordo com o EXEMPLO 9 e com o ESQUEMA 1 anteriores, preparam-se os compostos 42 e 43 (EXEMPLO 10 e 11) descritos no QUADRO III seguinte. QUADRO ΠΙ

Número do exemplo *· M *H RMN (D20) δ (ppm) [600 MHz] dos protões anoméricos principais 10 composto 41 4 5,20; 5,17; 5,12; 5,03; 4,90 11 composto 42 6 5,20; 4,99; 4,95; 4,90 -63- EXEMPLO 12

Metil 0-(ácido 3-0-metil-2,4-di-0-sulfo-P-D- glucopiranosilurónico)-(l-4)-[0-(3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-p-D- glucopiranosilurónico)-(l-4)]4-3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio (44).

Os sintões dissacarídicos

LevO MeO

ΜβΟ COOBn o. O OAc

OAc OBn OCINHICCl,

são preparados e em seguida combinados tal como descrito para 34. O decassacarídeo obtido tratado de acordo com o método 4 produz 44: -64- lyU-η [a]D +25 (c= 0,2, Η20). 'Η RMN (D20) δ dos protões anoméricos principais: 5,47; 5,07; 4,74; 4,71; 4,70 ppm. EXEMPLO 13

Metil 0-(ácido 3-0-metil-2,4-di-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(3-0-metil-2,6-di-0-siilfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idoopiranosilurónico)-(l-4)]2-0-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopirano-silurónico)-(l-4)-3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio (45).

OM· O dador de glicosilo 15 e o aceitador de glicosilo

BnOOC ΟΜκ ιι<λ

combinados segundo o método 3 produzem o tetrassacarídeo

/

Após uma clivagem do grupo Lev (método 1) e reacção repetida com o dissacarídeo dador de glicose que se segue, de acordo com o princípio descrito no esquema 1,

obtém-se o precursor completamente protegido de 45 que é tartado de acordo com o método 4 para produzir 45. 'H RMN (D20) δ (ppm) [600 MHz] dos protões anoméricos principais: 5,35; 5,33; 5,22; 5,21; 5,18; 5,15;4,98.

Procedendo de acordo com o EXEMPLO 13 e com o ESQUEMA 1 anteriores, a partir dos precursores oligossacarídicos completamente protegidos prepara-se o composto 46 (EXEMPLO 14) descrito no QUADRO IV seguinte. 4 * -66-

QUADRO IV

Número do exemplo M ’H RMN (D20) δ (ppm) [600MHz] dos protões anoméricos principais 14 composto 46 3 5,34; 5,32; 5,27; 5,22; 5,14; 4,98

Lisboa, 26 de Novembro de 2001 Çu^CíA****^ LUIS SILVA CARVALHO '

Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA ViCTOR CORDON, 14 1200 LISBOA

Claims (24)

1. -1 - l/U/ή REIVINDICAÇÕES 1. Polissacarídeo de síntese contendo entre 8 e 24 unidades monossacarídicas formadas por uma cadeia de dissacarídeos constituídos por um ácido urónico e por um hexose, sendo o referido polissacarídeo caracterizado pelo facto de todos os seus grupos hidróxilos serem eterificados com um grupo (Ci-C6)aIquilo ou esterificados sob a forma de um grupo sulfo, sendo cada dissacarídeo pelo menos monoeterificado; bem como o seus sais.
2. 2. Sal constituído por um anião e por um catião, tendo o anião a fórmula:

   na qual - o traço ondulado designa ou uma ligação por baixo ou por cima do plano do ciclo piranósico; - Ri, Re, Rn e Rié representam um (Ci-C6)alquilo; - R2, R3, R4, R5, R7, Re, Rç, Rio, R12, R13, Ri4, Ris e Rn representam um (Ci-C6)aIquilo ou um gmpo SO3"; - m, n e p são tais que a soma m+n+p é superior ou igual a 4 e inferior ou igual a 12, podendo um ou dois dos três representar zero; -2- sendo o catião monovalente farmaceuticamente aceitável, tal como o ácido correspondente.
3. 3. Sal de acordo com a reivindicação 2 no qual o catião é escolhido entre os catiões dos metais alcalinos, em particular o sódio e o potássio.
4. 4. Sal de acordo com uma das reivindicações 2 ou 3 no qual os alquilos são metilos, bem como o ácido correspondente.
5. 5. Sal de acordo com uma das reivindicações 2 ou 3 no qual n e p são iguais a zero, bem como o ácido correspondente.
6. 6. Sal de acordo com uma das reivindicações 2 ou 3 no qual n e p são iguais a zero e m representa 4 a 10, bem como o ácido correspondente.
7. 7. Sal de acordo com uma das reivindicações 2 ou 3 no qual n e p são iguais a zero, m representa 4 a 10; pelo menos um dos substituíntes R12, Rj3, R14 e R15 representa um grupo sulfato; sendo Rls R16 e R17 tais como definidos para (I), bem como o ácido correspondente.
8. 8. Sal de acordo com uma das reivindicações 2 ou 3 no qual n e p são iguais a zero, m representa 4 a 10; pelo menos dois dos substituíntes Ri2, R13, Ri4 e R15 representam um grupo sulfato; sendo Rb R16 e R17 tais como definidos para (I), bem como o ácido correspondente.
9. 9. Sal de acordo com uma das reivindicações 2 ou 3 no qual n e p são iguais a zero, m representa 4 a 10; pelo menos três dos substituíntes R12, R13, Ri4 e Rj5 representam um grupo sulfato; sendo Rb Ri6 e R17 tais como

   -3- deíinidos para (I), bem como o ácido correspondente.
10. 10. Sal de acordo com a reivindicação 2 ou 3 no qual o anião tem por fórmula 1.1):

    na qual m representa 4 a 10; Rj, R15, Riô e Rn são tais como definidos para (I), sendo cada ácido urónico ou um ácido idurónico ou glucurónico, bem como o ácido correspondente.
11. 11. Sal de acordo com uma das reivindicações 2 ou 3 no qual o anião tem por fórmula (1.2):

    (1.2) na qual m representa 4 a 10; Ri, R15, R^ e Rn são tais como definidos para (I), sendo cada ácido urónico ou um ácido idurónico ou glucurónico, bem como o -4- -4-

    ácido correspondente.
12. 12. Sal de acordo com as reivindicações 2 ou 3, no qual o anião tem por fórmula (1.3):

    na qual m representa 2 ou 3,sendo Ri, Rn, Rn, Ri4, Rn, Ri6 e Rn tais como definidos para (I), sendo cada ácido urónico ou um ácido idurónico ou glucurónico, bem como o ácido correspondente.
13. 13. Sal de acordo com a reivindicação 12 no qual Ri representa um metilo, Ri3 um posição 3 da glicose representa um metilo, Rn em posição 2 e R14 em posição 6 da glicose representam um S03' e Ri6 em posição 3 da unidade idurónica ou glucurónica representa um metilo, sendo m igual a 2 òu 3.
14. 14. Polissacarídeo escolhido entre: Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]9-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio; Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-a-L-idopiranosil- -5- ίΜη ^ urónico)-( 1 -4)-[0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-gl ucupiraiiosil)-( 1 -4)-0-(ácido 2,3-di- 0-metil-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]4-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio; Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]5-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio; Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosilurónico)-( 1 -4)]6-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio; Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosilurónico)-( 1 -4)]7-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio; Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]8-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio; Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulfo-p-D-gluco-piranosilurónico)-(l-4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-P-D-glucopiranosilurónico)-(l-4)]4-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio; -6- l/ΐΛη Metil 0-(ácido 2,3-di-0-metil-4-0-sulíb-P-D-gluco-piranosilurónico)-(l-4)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 2,3-di-0-metil-P-D-glucopiranosilurónico)-(l-4)]3-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio; Metil 0-(ácido 3-0-metil-2,4-di-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-( 1 -4)- [0-(3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-( 1 -4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]4-3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-α-D-glucopiranosido, sal de sódio; Metil 0-(ácido 3-0-metil-2,4-di-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-( 1 -4)- [0-(3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-( 1 -4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]3-3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-α-D-glucopiranosido, sal de sódio; Metil 0-(ácido 3-0-metil-2,4-di-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]5-3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-α-D-glucopiranosido, sal de sódio; Metil 0-(ácido 3-0-metil-2,4-di-0-sulfo-P-D-glucopiranosilurónico)-(l-4)-[0-(3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-P-D-glucopiranosilurónico)-(l-4)]4-3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio; Metil 0-(ácido 3-0-metil-2,4-di-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-(l-4)-[0-(3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]2-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopiranosilurónico)-(l- -7- 4)-3-0-metil-2,6-di-U-suJfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio; e Metil 0-(ácido 3-0-metil-2,4-di-0-sulfo-a-L-idopiranosil-urónico)-( 1 -4)-[0-(3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-( 1 -4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)]3-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopiranosil)-(l-4)-0-(ácido 3-0-metil-2-0-sulfo-a-L-idopiranosilurónico)-(l-4)-3-0-metil-2,6-di-0-sulfo-a-D-glucopiranosido, sal de sódio.
15. 15. Processo de preparação dos compostos de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por: (a) se acoplar de acordo com os métodos clássicos da química dos açúcares um monossacarídeo dador de ligação glicosídica a um monossacarídeo aceitador de ligação glicosídica para obter um sintão sacarídico intermediário de tipo dissacarídeo completamente protegido de fórmula (A):

    na qual os substituintes Τι, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8 e Z idênticos ou diferentes são escolhidos entre os grupos protectores utilizados em química dos açúcares como grupo protector permanente, semi-permanente ou temporário; (b) se modificar quimicamente o dissacarídeo de fórmula (A) referido anteriormente de forma a obter um sintão intermediário de tipo -8- dissacarídeo dador de ligaçao glicosídica de fórmula (B):

    na qual T2 a T7 e Z são tais como definidos anteriormente para (A) e X representa um grupo activador de carbono anomérico; em seguida (c) se modificar quimicamente o dissacarídeo de fórmula (A) referido anteriormente de forma a obter um sintão intermediário do tipo dissacarídeo aceitador de ligação glicosídica de fórmula (C):

    na qual Ti a T7 são tais como definidos anteriormente para (A), eliminando selectivamente o grupo protector Z segundo os métodos clássicos da química dos açúcares, e em seguida (d) se acoplar um dissacarídeo dador de ligação glicosídica de fórmula (B) obtido anteriormente e um dissacarídeo aceitador de ligação -9-glicosídica de fórmula (C) obtido anteriormente de forma a obter um tetrassacarídeo completamente protegido de fórmula (D):

    na qual a T7 e Z são tais como definidos anteriormente para (A) e T8, T9, T10, Tu, T12, e T13 são tais como definidos para T2 a T7) em seguida, (e) se modificar quimicamente o sintão sacarídico intermediário do tipo tetrassacarídeo de fórmula (D) de forma a obter um sintão sacarídico intermediário do tipo tetrassacarídeo dador de ligação glicosídica de fórmula (E):

    na qual X tem a mesma definição que para (B) e T2 a T13 são tais como definidos para (D) seguidamente, -10- (f) se desproteger em seguida seleclivamenle o tetrassacarídco de fórmula (D) de forma a obter um tetrassacarídeo aceitador de ligação glicosídica de fórmula (F):

    na qual Ti a T)3 são tais como definidos para (D), em seguida, (g) se acoplar o tetrassacarídeo aceitador de ligação glicosídica de fórmula (F) e um dissacarídeo dador de ligação glicosídica de fórmula (B) tais como aqueles obtidos anteriormente para formar um sintão intermediário do tipo hexassacarídeo completamente protegido de fórmula (G):

    na qual Ti a T13 são tais como definidos anteriormente para (D) e T14 a T19 são tais como definidos para T2 a T7 para (B); ou então se acoplar o tetrassacarídeo aceitador de ligação glicosídica de fórmula

    C€^L·.. - 11 - (F) e um tetrassacarídeo dador de ligação glicosídica de fórmula (E) de forma a obter um octassacarídeo completamente protegido de fórmula (H):

    na qual Tj a T19 e Z são tais como definidos anteriormente e T20 a T25 são tais como definidos para T2 a T7, seguidamente, (h) se modificar quimicamente o hexassacarídeo de fórmula (G) ou 0 octassacarídeo de fórmula (H) obtidos anteriormente de forma a obter um sintão intermediário do tipo hexassacarídeo aceitador de ligação glicosídica de fórmula (G) no qual Z representa hidrogénio ou então um octassacarídeo aceitador de ligação glicosídica de fórmula (H) no qual Z representa hidrogénio, (i) se repetir as etapas de desprotecção e de acoplamento precedentes até se obter um oligossacarídeo completamente protegido possuidor da estrutura pretendida, os sintões intermediários sacarídicos dadores de glicosilo e aceitador de glicosilo, sendo escolhidos em função da estrutura final para obter assim 0 precursor protegido do polissacarídeo final pretendido de fórmula (I), no s qual a natureza dos substituintes determina a posição dos grupos sulfatos e alquilos sobre o produto final (I) e, (j) se proceder à desprotecção das funções alcoól que devem ser sulfatadas, eliminando os substituintes Ti a T25 que protegiam as funções durante as etapas dc elaboração da estrutura e, finalmente - 12- U<*j (k) se proceder à sulfatação para obter os compostos (I), ou um dos seus sais.
16. 16. Composições farmacêuticas contendo como princípio activo um polissacarídeo ou um sal de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, sob forma de sal com uma base farmaceuticamente aceitável ou sob a forma ácida, em associação ou em mistura com um excipiente inerte, não tóxico, farmaceuticamente aceitável.
17. 17. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 16, sob a forma de unidades de dosagem, na qual o princípio activo é misturado com pelo menos um excipiente farmacêutico.
18. 18. Composição de acordo com a reivindicação 17 na qual cada unidade de dosagem contém de 0,1 a 100 mg de princípio activo.
19. 19. Composição de acordo com a reivindicação 18 na qual cada unidade de dosagem contém de 0,5 a 50 mg de princípio activo.
20. 20. Composição farmacêutica contendo um polissacarídeo ou sal de acordo com as reivindicações 1 a 14 em associação com um outro princípio activo antitrombótico, anticoagulante, anti-agregante de plaquetas ou antagonista do complexo da glicoprotçína Ilb/IIIa.
21. 21. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 20 caracterizada pelo facto de o princípio activo associado ser dipiridamole, aspirina, ticlopidina ou clopidogrel.
22. 22. Utilização dos polissacarídeos e sais segundo as -13-reivindicações 1 a 14 para a preparação de um medicamento útil cm patologias dependentes de um mal funcionamento da coagulação.
23. 23. Utilização dos polissacarídeo e sais segundo as reivindicações 1 a 14 para a preparação de um medicamento útil para a inibição dos factores de crescimento traduzindo-se por uma inibição da proliferação celular.
24. 24. Utilização dos polissacarídeo e sais segundo as reivindicações 1 a 14 para a preparação de um medicamento apresentando as propriedades antivirais, hipolipidémicas, antiradicais livres, antimetastásicas, antiangiogénicas, anti-inflamatórias. Lisboa, 26 de Novembro de 2001 3\/ΔΙ MO f LUIS SILVA TARVALHO Agente Oficial da Frc .. tade Industrial RUA ViCTOR C >N, 14 1200 LISBOA