CA2258146C - Polysaccharides synthetiques, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant - Google Patents

Abstract

L'invention concerne des polysaccharides de synthèse contenant de 8 à 24 unités monosaccharidiques formées par un enchaînement de disaccharides constitués d'un acide uronique et d'un hexose, lesdits polysaccharides étant caractérisés en ce que tous leurs groupes hydroxyles sont éthérifiés avec un groupe (C1-C6)alkyle ou estérifiés sous la forme de groupe sulfo, chaque disaccharide étant au moins monoéthérifé; ainsi que leurs sels de formule (I). Les polysaccharides de synthèse de la présente invention présentent l'avantage de posséder les activités pharmacologiques de l'héparine, mais exercées de façon sélective. (voir formule I)

Description

POLYSACCHARIDES SYNTHETIQUES, PROCEDE POUR LEUR PREFARATION ET COMPOSITIONS
PHARMACEU-TIQUES LES CONTENANT
La présente invention concerne de nouveaux polysaccharides de synthèse possédant tes activités pharmacologiques de l'héparine mais exercées de façon sélective.
L'héparine appartient à la famille des giycosaminoglycanes (GAG), qui sont des poiysaccharides sulfatés naturels hétérogènes.
Les préparations d'héparine sont des mélanges de chaines comprenant un nombre d'unités monosaccharidiques allant de 10 jusqu'à 100 et plus. A
cette hétérogénéité de taille s'ajoute une hétérogénéité de structure, su niveau de la nature des monosaccharides constitutifs, mais également au niveau des substituants qu'ils portent (L. Rodén in : The Biochemistry of Gfycoproteins and Glycosaminoglycans, Ed by Lennarz W.J., Plenum Press, 1980, New York and London, 267-371 }.
Chaque famille de GAG naturel possède en général un éventail d'activités pharmacologiques. Toutes sont réunies dans les préparations que t5 l'on peut obtenir à partir de produits naturels. Ainsi, par exempte, tes héparines et tes héparanes sutfate possèdent une activité antithrombotique qui est fiée à l'action simultanée sur plusieurs facteurs de fa coagulation.
lls exercent également une action sur de nombreux facteurs de croissance, te plus notoire étant le facteur de croissance basique des fibroblastes (bFGF, 2o basic fibrobiast growth factor).
Cette action se manifeste par un effet sur ia prolifération des cellules musculaires lisses et sur fangiogénèse. L'héparine exerce en autre des effets sur l'autoimmunité, l'inflammation et ia formation de métastases tumorales.
L'héparine catalyse notamment l'inhibition de deux enzymes qui 25 interviennent dans la cascade de la coagulation du sang à savoir, le facteur Xa et le facteur lia (ou thrombine). Les préparations d'héparines de bas poids moléculaire (HBPM), contiennent des chaines formées de 4 à 30 monosaccharides et ont la propriété d'agir plus sélectivement sur fe facteur Xa que sur ia thrombine.
3o Certains oligosaccharides de synthèse notamment ceux décrits dans EP 84999 ont ia propriété d'inhiber sélectivement, via l'antithrombine I11, fe facteur Xa sans aucune activité sur ta thrombine.
Le brevet US 5,378,829 décrit des dérivés glycosaminoglycanoides sulfatés du type héparine ou héparane sulfate ayant une activité
35 antithrombotique et inhibitrice de ia prolifération des cellules musculaires

2 lisses. Ce document ne décrit cependant que des oligosaccharides ayant au maximum 7 unités monosaccharidiques.
Au cours des années précédentes, la tendance dans le domaine des GAGS était de rechercher notamment des oligosaccharides de masse moléculaire la plus faible possible, mais il a été par la suite observé que plusieurs des activités biologiques sus-mentionnées sont soutenues par des fragments ayant au moins 8 unités saccharidiques. Par exemple, l'activité
inhibitrice de la thrombine nécessiterait des fragments contenant au moins entre 14 et 20 unités saccharidiques tandis que pour l'activation du bFGF au 1o moins 12 unités saccharidiques seraient nécessaires (M. Maccarana et al., J.
Biol. Chem., 1993, 268, 23998-23905 ; J.E. Turnbull et a/., J. Biol. Chem., 1992, 267, 10337-10341 ).
Une synthèse de polysaccharides de cette taille présente de grandes difficultés et, en fait, elle n'a jamais été réalisée.
Dans le but de retrouver l'activité de produits de longue taule, il a été
proposé de relier deux oligosaccharides de petite taule par une entité n' intervenant pas dans l' activité biologique. EP 649854 décrit de tels dérivés possédant une activité antithrombotique. De façon analogue, WO 95 05182 2o décrit des conjugués actifs sur fa régulation du bFGF.
Ces produits présentent en effet une activité sélective sur les différents facteurs de fa coagulation et des propriétés inhibitrices des facteurs de croissance se traduisant par une inhibition de la prolifération cellulaire.
(l a maintenant été trouvé que des fragments de GAGs (glycosaminoglycanes) contenant 8 ou plus unités saccharidiques et pouvant être synthétisés de façon relativement simple possèdent des activités biologiques qui sont non seulement sélectives mais aussi quantativement élevées.
Plus particulièrement, il a été trouvé qu'il est possible de moduler 3o quantitativement l'activité desdits polysaccharides selon la longueur des chaines et fa distribution des substituants fonctionnels.
Ainsi, par exemple, il a été trouvé de façon surprenante que des ' décasaccharides sulfatés et aikyiés peuvent être des puissants antithrombotiques ou des inhibiteurs sélectifs du bFGF selon la disposition ' des groupes alkyles et des groupes sulfates dans l'enchainement décaccharidiques et qu'if est également possible d'obtenir des inhibiteurs

3 sélectifs du facteur Xa par exemple avec un tétradécasaccharide ou des produits ayant une activité du type héparine, à savoir une activité aussi bien - sur le facteur Xa que sur la thrombine, par exemple avec un hexadécasaccharide.
s De façon plus générale, il a été trouvé que par réalisation de séquences disaccharidiques formées par un acide uronique et par un hexose de façon à
constituer des polysaccharides de 8 à 24 unités monosaccharidiques dont les groupes hydroxyfes sont tous substitués par des groupes alkyles ou par des groupes sulfates il est possible de moduler avec précision les activités du t o type GAGs pour obtenir des produits très actifs et sélectifs.
Ainsi, selon un de ses aspects, la présente invention concerne un nouveau polysaccharide de synthèse contenant de 8 à 24 unités monosaccharidiques formé par un enchaînement de disaccharides constitués d'un acide uronique et d'un hexose, ledit poiysaccharide étant caractérisé en ~ 5 ce que tous ses groupes hydroxyles sont éthérifiés avec un groupe (C~-Cg)alkyle ou estérifiés sous la forme de groupe suifo, chaque disaccharide étant au moins monoéthérifié ; ainsi que ses sels, notamment pharmaceutiquement acceptables.
De préférence, l' invention se rapporte à un polysaccharide tel que défini 2o ci-dessus, caractérisé en ce que tous ses groupes hydroxyfe sont éthérifiés par un groupe méthyle ou estérifiés sous la forme de groupe suffo, chaque disaccharide étant au moins monoëthérifié; et à ses sels, notamment pharmaceutiquement acceptables.
Des produits avantageux sont alkylés, de préférence méthyfés, sur les 25 hydroxyles en position 2 et 3 de l'acide uronique, ledit acide uronique étant de préférence l'acide glucuronique ou l'acide iduronique et trisulfatés sur l'hexose, ledit hexose étant de préférence le glucose. Un autre groupe de produits préférés est constitué des polysaccharides qui sont alkyiés, de préférence méthylés, sur les hydroxyles en position 3 de l'acide uronique ledit so acide étant de préférence l'acide glucuronique ou l'acide iduronique et alkyiés, de préférence méthylés, sur f'hydroxyie en position 3 du glucose.
~ Les produits de ia présente invention sont donc de préférence constitués de séquences régulières de disaccharides répétés à leur tour formés d'acide glucuronique et de glucose ou d'acide iduronique et de glucose représentés 35 par la formule suivante

4 r I
R,\ /R,s R,Z R,o~O Rc~ Re ~ s I-OOC O O O \O O O O -0OC~ Ö O O ~p O-R, R ' O O O -00C '0_R O Or ~O O , O
,i ~ i I O " ~ %
ô i j R,s R s Rs R~ n \R Rs S
I m {I}
dans laquelle - le trait ondulé désigne soit une liaison en dessous soit en dessus du plan du cycle pyranosique ;
- R1, Rg, R11 et R1g représentent un (C1-Cg)alkyle ;
- R2' R3~ R4. R5~ R7~ R8~ Rg~ Rlp, R12, R13, Rlq., R15 et R17 représentent un (C1-Cg)alkyle ou un groupe S03- ;
- m, n et p sont tels que la somme m + n + p est supérieure ou égale à 4 et inférieure ou égaie à 12, un ou deux des trois pouvant représenter zéro, ou un de leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables.
On notera que de façon générale dans la présente description, un trait ondulé désigne soit une liaison en dessous soit en dessus du plan du cycle 2o pyranosique.
Dans la formule générale (I) et dans la présente description, les structures (a) ou (b) ci-dessous représentent un squelette de glucose dans fa conformation 4C1. Les structures (c) ou (d) ci-dessous représentent un squelette d'acide uronique qui est soit de Pacide L-iduronique (représenté ici dans sa conformation 1 C4) soit de l'acide D-glucuronique (représenté ici dans sa conformation 4C1 ).
Sur ces structures (a), (b), (c) et (d) les substituants RX ont les définitions attribuées pour R1 à R17 dans (i).
Ainsi, les structures (a) et (b) sont la même représentation d'un squelette 3a de glucose dans la conformation 4C1.

Rx Rx R~ \O O
p O O O
Ö O O / O

5 ~ O \Rx Rx Rx (a) (b) Les structures (c) et (d) représentent un squelette d'acide uronique qui est soit de l'acide L-iduronique (représenté ici dans sa conformation ~ C4) soit de l'acide D-glucuronique (représenté ici dans sa conformation 4C~ ).
Rx Rx \ ~' O
-OOC O O O
75 ~O O~\
O -OOC ~ O
O-Rx O
Rx (c) (d) 2o Lorsqu'il s'agit d'acide L-iduronique {c) et (d) sont les conformères suivants:
R\ Rx O
-OOC O O O
25 'O O \
O -OOC ~O _ Rx O
O
Rx Lorsqu'il s'agit d'acide D-giucuronique (c) et (d) sont fes conformères 30 suivants:
COO- O O Rx O ô R~
O O O
O /
35 Rx Rx COO- O O

6 Dans la présente description, il a été choisi de représenter les conformations 1 C4 pour l'acide-L-iduronique, 4C1 pour !'acide D-glucuronique, mais il est notoire que fa conformation en solution des unitës monosaccharides est fluctuante.
Les disaccharides DB1, DB2 et DB3 représentent des disaccharides identiques ou différents.
Des composés préférés selon l'invention sont ceux de formule (I) dans lesquels n et p sont égaux à zéro et m représente 4 à 10 et leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables.
Egalement avantageux sont les composés de formule {I) dans lesquels n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à 10 ; un au moins des substituants R12, R13~ R14 et R15 représente un groupe sulfate ; R1, R1 g et R17 étant tels que définis pour (I) ainsi que leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables.
t5 Egalement avantageux sont tes composés de formule (I) dans lesquels n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à 10 ; deux au moins des substituants R12~ R13, R14 et R15 représentent un groupe sulfate ; R1, R1g et R17 étant tels que définis pour (I) ainsi que leurs sets, notamment pharmaceutiquement acceptables.
2o Egaiement avantageux sont les composés de formule {I) dans lesquels n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à 10 ; trois au moins des substituants R12, R13, R14 et R15 représentent un groupe sulfate ; R1, R1g et R17 étant tels que définis pour (I), ainsi que leurs sels notamment pharmaceutiquement acceptables.
25 Egalement avantageux sont les composés de formule (I) dans lesquels n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à 10 ; les groupes R12, R13, R14 et R15 représentent tous un groupe sulfate ; R1, R1g et R17 étant tels que définis pour (I) et leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables.
D'autres composés avantageux sont les sels constitués d'un anion et d'un 3o cation, l'anion répondant à fa formule (I.1 )

7 R,s~ so3- so3_ y -ooc o 0 ô ô oR, 'o R,~ 0 0 O /O
S03- m R, s (L1 ) dans laquelle m représente 4 à 10 ; R1, R15, R16 et R17 sont tels que définis pour {I), chaque acide uronique étant soit un acide iduronique soit glucuronique, et, le cation étant un cation monovalent pharmaceutiquement acceptable, ainsi que leurs acides correspondants.
Les sels constitués d'un anion et d'un cation où l'anion répond à la ~5 formule (L2) R~g~ /CH3 S03 -00C O O O ~ OR, 'O
20 Rte O O ~ O
O /
soi m R, s (L2) 25 dans la uelle m re résente 4 à 10 ; R , R R et R sont tels ue q p 1 15. 16 17 q définis pour (I), chaque acide uronique étant soit un acide iduronique soit gfucuronique et où le cation est un cation monovalent pharmaceutiquement acceptable, ainsi que leurs acides correspondants, sont également avantageux.
3o Dans les formules I , (I.1 ( ) ), {L2) ci-dessus, les groupes aikyle éthérifiants sont de préférence des méthyles.
Les sels constitués d'un anion et d'un cation, où l'anion a pour formule (i.3) :7 a R"~ ~Rn Fit ~~ Sa'- ,/ SO'~ M~\ Me U. O. ~ I v O O O \cJ G ~\ O ~40c: 'O O O Ö OR, Ci R ~~_ o Y ~ o .ooc . a . o o,~ a o ~a I o o, r ~ ~o R.~ _~ m M~ ~ so,- sa~' ~\ so,.
soi.
(I 3}
dans laquelle m représente 2 ou 3, R1, R~ 2, R~ 3, R14, R~ ~, R~g et R~ 7 ëtant tels que définis pour (f, <.haque acide uronique atant sait un acide iduronique soit glucuronique et c>ù fe cation est un cation monovalent pharmaceutiquement acceptable, ainsi que leurs acides correspondants, sont particulièrement avantageux.
Parmi ces composés (L3}, on préfère tout particulièrement ceux pour lesquels R~ représente un méthyle, R~g en position 3 du glucose représente un méthyi'e, R~ 2 en position 2 et R1 ~ en position 6 du glucose représentent un S03- et R~g en position 3 da l'unité iduronique au giucuronique représente un méthyte, m étant égal à 2 ou 3.
2c Les sels préférés de I"invention sont ceux dont le cation est choisi parmi 2s les cations des métaux alcalins et plus préférablement encore ceux dont le cation est Na+ ou K+.
Particulièrement préférés sont les polysaccharides suivants 1 ) Méthyl 0-(àcide 2, 3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-a-L-idopyranosyiuronique)-(1-~i)-(0-(2,3,â-tri-0-sulto-cx-0-glucopyranasyi)-(1-4~-O=(acidts 2.3-di-0-méthyl-cc-L-idopyranosyluron~ques-( 1-4 ~Jg-~, 3.6-tri-0-suffo-a~D-gluc.opyranoside, sel de sfJ~~ium 2) Méthyi O-(acide 2,3~~di-O-méthyl-~l-0-suifo-a-L-idopyranosyluronique)-(»)_(O-(2,3 g..tri-0-sulfo-~x-f~-glucopyranasyl~-(1-~~)-0-(aride ~!,3-di-O-méthyl-cc-L-idopyranosylurnrnq~~e ) -( t -.~ ),;~-~, 3, ~~tri-0-su Ifc-a.-Ia-glucopyranoside, sel de soc7~um WO 97!47659 PCT/FR.97/01048 3~ Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyi-4-O-sulfo-cc-L-idopyranosyluronique)-{1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-a,-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O-méthyl-a.-L-idopyranosyluronique)-( 1-4)]5-2, 3,6-tri-O-sulfo-a-D-glucopyranoside, sei de sodium.
4} Méthyi O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-a,-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-{acide 2,3-di-O-méthyl-a.-L-idopyranosyluronique)-( 1-4)]6-2,3,6-tri-O-sulfo-a.-D-glucopyranoside, sel de sodium.
1o 5) Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyi-4-O-sulfo-cc-L-idopyranosyiuronique)-(1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-{acide 2,3-di-O-méthyi-a,-L-idopyranosyluronique)-{ 1-4)]7-2,3,6-tri-O-sulfo-oc-D-glucopyranoside, sei de sodium.
6) Méthyl O-(acide 2,3-d's-O-méthyl-4-O-sûlfo-a.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-a.-D-glucopyranosyl)-(1-4}-O-(acide 2,3-di-O-méthyl-a.-L-idopyranosyluronique)-{ 1-4)]g-2, 3, 6-tri-O-sulfo-a.-D-glucopyranoside, sel de sodium.
7) Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-[3-D-giucopyranosyluronique}-( 1-4)-[O-(2, 3,6-tri-O-sulfo-a.-D-gfucopyranosyl)-( 1-4)-O-(acide 2,3-di-O-méthyl-(3-D-glucopyranosyluronique)-(1-4)]4-2,3,6-tri-O-sulfo-a.-D-giucopyranoside, sef de sodium.

8) Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-ø-D-glucopyranosyiuronique)-( 1-4)-[O-(2, 3,6-tri-O-sulfo-a.-D-glucopyranosyl )-{
1-4)-O-(acide 2,3-di-O-méthyl-(3-D-glucopyranosyiuronique)-(1-4)]3-2,3,6-tri-O-sulfo-a,-D-glucopyranoside, sel de sodium.

9) Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-a.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-suifo-a.-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-a,-L-idopyranosyluronique)-( 1-4)]4-3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-glucopyranoside, se! de sodium.

10) Méthyi O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-a-L-idopyranosyluronique)-( 1-4}-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-cc-D-glucopyranosyi)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-suifo-a,-L-idopyranosyluronique)-( 1-4)]3-3-O-méthyi-2,6-di-O-suifo-a-D-5 glucopyranoside, sel de sodium.

11 ) Méthyi O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-suifo-a.-L-idopyranosyfuronique)-{ 1-4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-cc-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-a.-L-o idopyranosyluronique)-(1-4)]5-3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-oc-D-glucopyranoside, sel de sodium.

12) Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-(3-D-gfucopyranosyl uron i que)-( 1-4)-[ O-(3-O-méthyl-2, 6-di-O-suifo-a-D-gl ucopyranosyf )-( 1-4)-O
~5 (acide 3-O-méthyl-2-O-suifo-(3-D-glucopyranosyluronic acid)-(1-4)]4-3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-cc-D-giucopyranoside, sel de sodium.

13) Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-cc-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-cc-D-2o glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-suifo-cc-L-idopyranosyluronique)-( 1-4)]2-O-{2,3,6-tri-O-suifo-a-D-glucopyranosyl)-( 1-4}-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-a-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-oc-D-glucopyranoside, sel de sodium.
25 14) Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-suifo-oc-L-idopyranosyluronique)-( 1-4)-[O-(3-O-méthyt-2,6-di-O-sulfo-a.-D-glucopyranosyi)-(i-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-suifo-cc-L-idopyranosyluronique)-(1-4)jg-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-oc-D-glucopyranosyi)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-cc-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-3-O-méthyl-ao 2,6-di-O-sulfo-oc-D-glucopyranoside, sel de sodium.
La présente invention concerne également un procédé pour la préparation des composés de formule (I) caractérisé en~ce que 35 (a) on couple selon les méthodes ciassiques_de la chimie des sucres un monosaccharide donneur de liaison glycosidique â un monosaccharide WO 97/47659 PCT/FR97/Oi048 accepteur de liaison glycosidique pour obtenir après les modifications chimiques bien connues de l'homme du métier un synthon saccharidique intermédiaire de type disaccharide complètement protégé de formule (A) T T T
T700C p ~ Tg O
~O
Z-O O
O
O
\ T Ta ~p s (A) dans laquelle les substituants T1, T2, T3, T~, T5, Tg, T7, et Z identiques ou différents sont choisis parmi les groupes protecteurs utilisés en chimie des t 5 sucres comme groupe protecteur permanent, semi-permanent ou temporaire, (b) on modifie chimiquement le disaccharide de formule (A) ci-dessus de façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B) T3 Tz O.~-Ts ~ \
T~OOC O ~ O
.o ~X
z-o 0 O
O
\ T Ta s (B) dans laquelle T2 à T7 et Z sont tels que définis ci-dessus pour (A) et X
représente un groupe activateur du carbone anomérique, te! qu'un imidate, un thioglycoside, un pentényl glycoside, un xanthate, un phosphite, un halogénure ou tout autre groupement bien connu pour activer le carbone anomérique, puis (c) on modifia chimiquement le disaccharide de formule (A) ci-dessus de façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type disaccharide accepteur de liaison gfycosidique de formule (C) Ta TZ T~
T~OOC O' Te O ~ O O
~O
HO O
O
O~T Ta p s (C) dans laquelle T1 à T7 sont tels que définis ci-dessus pour (A), en éliminant sélectivement le groupe protecteur Z selon des méthodes bien connue de l'homme de l'art, puis (d) on couple un disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B) obtenu ci-dessus et un disaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (C) obtenu ci-dessus de façon à obtenir un tétrasaccharide 2o complètement protégé de formule (D) T~»~ T'° \O Tg~ T3 TZ T~

O .O
25 T~a00C ~ O O O\ ~ O ~ O O
Ttz T9 T$ O W
Ts Ta (D) dans laquelle T1 à T7 et Z sont tels que définis ci-dessus pour (A) et Tg, so T9~ T10~ T11 ~ T12 et T13 sont tels que définis pour T2 à T7 puis, (e) on modifie ensuite chimiquement le tétrasaccharide de formule (D) de façon à obtenir un synthon saccharidique intèrmédiaire de type tétrasaccharide donneur de liaison gfycosidique de formule (E) Tao < T~t~O ~O Ts~ Ts TZ
Z ~ O O T~OOC O

o~ .o ~X
T~sOOC / O O O\ ~ O ~ O O
T~z T9 T8 O\T T/

(E) dans lequel X a la même définition que pour (B) et T2 à T~ g sont tels que définis pour (D) puis, (f) on déprotège ensuite sélectivement le tétrasaccharide de formule (D) de façon à obtenir un tétrasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (F) Tao T»~O ~O Tg~ /Ts T\
O O T~OOC O O O O O
O .O
T~sOOC ~ O O O\ ~ O ~ O O
T~z Ts Ts O \
Ts Te (F) dans laquelle T~ à T~ 3 sont tels que définis précédemment pour (D) puis, (g) on couple le tétrasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (F) et un disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B) tel que ceux obtenus ci-dessus pour former un synthon saccharidique intermédiaire de type hexasaccharide complètement protégé de formule (G) T,o T,s T,s T,s Tu ~ O \ O Ts Tz Tz T~
\ ~ ~ ~ / \ I
T,o00C O O O O O O T~OOC O O p O O
O O
Z-o/L~~~ ooc o 0 0 0 0 0 o "
O\T Tâ T,z \Ty T~ O~T T/O
s a (G) , dans laquelle T~ à Tq g sont tels que définis précédemment pour {D) et T~ 4 à T~ g sont tels que définis pour T2 à T7 pour (B), ou bien on couple le tétrasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (F) et un tétrasaccharide donneur de liaison glycosidique de formule

14 (E) de façon à obtenir un octasaccharide complètement protégé de formule (H):
Tzs, Tes Tua T" T,o Ts zi0 o T â T,eOOC ô 0 ôtes ~o o \o \ o o T~ooC~o 0 ô T3 To ôt ~ ~~ 0 Tz300C\nvv~o ~~.~o 0 0 o ~ Tu00C / o ~o 24 Tz~ Tzo ~T~~ Tes T~2 \T9 Ts ~Ts Ta (H) dans laquelle T1 à T1 g et Z sont tels que définis précédemment et T2p à
T25 sont tels que définis pour T2 à T7 pour {B) puis, (h) on modifie chimiquement l'hexasaccharide de formule (G) ou l'octasaccharide de formule (H) obtenus ci-dessus de façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type hexasaccharide accepteur de ~ s Liaison glycosidique de formule (G) dans lequel Z représente l'hydrogène ou bien un octasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (H) dans lequel Z représente l'hydrogène, (i) on répète les étapes de déprotection et de couplage précédentes 2o jusqu'à l'obtention de l'oligosaccharide complètement protégé possédant la structure désirée, les synthons saccharidiques intermédiaires donneurs de glycosyle et accepteur de glycosyle étant choisis en fonction de la structure finale pour obtenir ainsi le précurseur protégé du poiysaccharide final désiré
de formule (I), dans feque! ia nature des groupes protecteurs Ti détermine la 2s position des groupes sulfates et alkyies sur le produit final (I), et Q) on procède à la déprotection des fonctions alcools qui doivent être sulfatées, et acide carboxyliques, en éliminant les groupes protecteurs Ti qui protégeaient ces fonctions au cours des étapes d'élaboration du squelette, 3o puis, finalement (k) on procède à la sulfatation pour obtenir les composés {I), ou un de leurs sels.
3s Le procédé décrit ci-dessus est ie procédé préféré de l'invention.
Toutefois, les composés de formule (I) peuvent ëtre préparés par d'autres méthodes connues de la chimie des sucres décrites par exemple dans Monosaccharides, Their chemistry and their rotes in natural products, P.M.
' Collins et R.J. Ferrier, J. Wiley & sons, 1995 et dans G.J. Boons, Tetrahedron, 1996, 52, 1095-1121.
5 En variante, les composés de formule (l) peuvent être préparés selon le procédé décrit dans M. Dreef, XVlle Symposium sur les carbohydrates, Ottawa, 1-22 juillet 1994, Abstract D 2.5.
Par groupements servi-permanents, on entend les groupements éiiminabies en premier lieu après les réactions de giycosyiation lorsque le squelette glucidique comporte le nombre de motifs désirés, sans enlèvement ou altération des autres groupes présents, permettant alors l'introduction de groupements fonctionnels souhaités aux positions qu'ils occupent.
Les groupements permanents sont des groupements capables de maintenir la protection des radicaux -OH durant l'introduction de groupements ~5 fonctionnels à la place des groupements servi-permanents.
Ces groupements sont choisis parmi ceux compatibles avec les groupes fonctionnels introduits après élimination des groupes servi-permanents. II
s'agit, en outre, de groupements inertes vis-à-vis des réactions effectuées pour la mise en place de ces groupes fonctionnels et qui sont éliminables 2o sans que ces groupements fonctionnels ne soient altérés.
Selon l'invention, les groupes permanents sont les groupes alkyfe en C1-C6.
Comme exemple de groupe servi-permanent etlou temporaire on peut citer les groupes benzyle et acétate.
Les substituants en position 3 des motifs uroniques du composé cible peuvent être déjà présents dans les synthons de départ de formule (A), ainsi que le substituant R1.
Dans le procédé ci-dessus, les substituants T1, T6, T12, T1 g et T24 ont la même définition que R1, R6, R11 et R16 dans la formule (I) c'est à dire so qu'ils représentent un (C1-C6)alkyle.
Les groupes protecteurs utilisés dans le procédé de préparations des - composés (I) sont ceux couramment utilisés dans la chimie des sucres par exemple dans Protective Groups in Organic Synthesis, TW Greene, John ' Wiley & sons, New-York, 1981.
s5 Les groupes protecteurs sont avantageusement choisis par exemple parmi les groupes acétyles, halogénométhyies, benzoylas, fevuiinyles, benzyles, benzyles substitués, trityles éventuellement substitués, tétrahydropyranyies, allyles, pentenyles, tert-butyldiméthylsüyles (tBDMS) ou triméthylsilyléthyles (...). ' Les groupes activateurs sont ceux classiquement utilisés en chimie des s sucres selon par exemple G.J.Boons, Tetrahedron, 1996, 52, 1095-1121. Ces ' groupes activateurs sont choisis par exemple parmi les imidates, les thioglycosides, les pentényiglycosides, les xanthates, les phosphites ou les halogénures.
Le procédé décrit ci-dessus permet d'obtenir les composés de l'invention ~ o sous forme de sets. Pour obtenir les acides correspondants, les composés de l'invention sous forme de sels, sont mis en contact avec une résine échangeuse de cations sous forme acide.
Les composés de l'invention sous forme d'acides peuvent ëtre ensuite neutralisés par une base pour obtenir un sel souhaité.
t5 Pour la préparation des sels des composés de formule (I), on peut utiliser toute base minérale ou organique, donnant avec les composés de formule (I), des sels pharmaceutiquement acceptables.
On utilise de manière préférentielle comme base l'hydroxyde de sodium, de potassium, de calcium ou de magnésium. Les sels de sodium et de 2o calcium des composés de formule (I), sont les sels préférés.
Dans l'étape (a) du procédé, les groupes protecteurs utilisés sont ceux habituellement utilisés par l'homme du métier en chimie des sucres par exemple selon EP 084999 ou encore selon Protective Groups in Organic 25 Synthesis, TW Greene, J.Wiley 8~ sons, 1995.
Les groupes protecteurs Z, protégeant ia position 4 de l'extrémité
terminale non-réductrice, et T1, protégeant la position 1 de l'unité terminale réductrice, sont éüminables de façon sélective pour permettre la fonctionalisation des positions correspondantes du disaccharide au cours des so étapes suivantes de la synthèse. La nature des autres groupements protecteurs T2 à Tg est choisie en tenant compte des fonctions alcool devant être sulfatées dans le produit final. Une position porteuse d'un groupe alkyle dans le produit final est protégée par ce groupe dès le départ de la synthèse, alors qu'une position devant être sulfatée est protégée par un groupement 35 protecteur temporaire tels que aralkyie (benzyle ou benzyie substitué), esters (acétates, benzoates). La position et la nature des substituants Ti déterminent donc dans le produit final le profil de sulfatation du fragment disaccharidique issu de (A). On peut obtenir une grande variété de disaccharides du type de ceux de formule (A). La préparation des disaccharides de formule (A) est réalisée essentiellement comme décrit dans la demande EP 0 454 220 ou encore dans la publication C.A.A. van Boeckel et M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed.
Engl., 1993, 32, 1671-1690 ou encore selon G.J. Boons tetrahedron, cité précédemment.
Selon l'étape (b), on peut lorsque T1 représente un alkyle, utilisar une réaction d'acétotyse dans l'anhydride acétique, qui sert alors de solvant et de réactif, en présence d'un acide fort tel que l'acide sulfurique ou l'acide trifluoroacétique pour libérer sélectivement le groupement protecteur de la position anornériq~re. Lorsque T1 représente un ester on peut éliminer de façon sélective cet ester en utilisant par exemple la benzylamine et un solvant aprotique tel que (éther diéthyüque ou le dichiorométhane, ou bien encore la N-méthylmorpholine dans (e tétrahydrafurane. Lorsque T1 est un groupe allyle on peut l'isômériser en vinyle et procéder ensuite à une hydrolyse acide douce de l'éther vinylique par exemple en présence de chlorure mercurique dans une solution acétonique. Par les méthodes ci-dessus on obtient un 2 o composé hydroxylé qui est ensuite transformé en composé (B) par exemple au moyen d'une réaction avec le trichloroacétonitrile en présence d'une base pour obtenir dans ce cas un composé (B) dans lequel X représente un imidate. Dans le cas où X représente un thioglycoside, ou un pentényle gfycoside, le groupeTl dans le composé (A) peut être égal à X.
Selon l'étape (c), on peut obtenir un disaccharide accepteur de liaison glycosidique en éliminant sélectivement le groupement Z selon un procédé
bien connu dépendant de la nature de Z, mettant par exemple en oeuvre (1) l'acétate d'hydrazine ou l'hydrate d'hydra~ine, dans la pyridine ou le toluène, dans le cas où Z est un groupe lévulinique ou bien (2) la thiourée dans l'éthanoi dans le cas où Z est un groupe trichloroacétyle.

1 c~
Selon l'étape (d) on couple un disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (f3) obtenu ci-dessus et un disaccharide accepteur de liaison giycosidique de formule (C) obtenu ci-dessus de façon à obtenir un tétrasaccharide complètement protégé de formule (D), on utilise pour cela un ,, WO 97/47659 PCT/FR9?/01048 i8 activateur connu du donneur de gfycosyle X par exemple le triflate de triméthylsilyle ou TMS ou le triflate de terfbutyldiméthylsifyle ou TBDMS ou encore fe trifluorure de bore dans l'éther diéthylique par exemple lorsqu'il s'agit d'un imidate, ou bien le système N-iodosuccinimide ou NIS, acide triflique lorsqu'il s'agit d'un thiogfycoside ou tout autre système connu pour activer X selon les références précédemment citées. Les solvants utilisés pour la réaction sont de façon préférée le dichlorométhane, le dichioroéthane, le chloroforme, 1e chiorobenzène, l'éther diéthylique, le toluène, le benzène ;
on opère dans des conditions anhydre, et généralement à basse température o entre -70 et 0°C. On peut également opérer à température ambiante.
Pour l'étape (e) on procède essentiellement comme décrit dans l'étape (b) à partir des tétrasaccharides obtenus selon l'étape (d).
Z5 Pour l'étape {f) on procède comme décrit en (c) pour déprotéger sélectivement les tétrasaccharides obtenus selon l'étape (d), et on obtient les tétrasaccharides de formule (F).
Pour l'étape (g) on procède comme décrit dans l'étape (d), 2o avantageusement on sépare les produits de la réaction de formule (G) au moyen d'une chromatographie par perméation sur gel.
Pour l'étape (h) on procède essentiellement comme décrit dans l'étape (b) à partir des hexasaccharides ou des octasaccharides de formule (H) obtenus 25 selon l'étape {g).
On répète les étapes de déprotection et de couplage précédentes jusqu'à
l'obtention de l'oligosaccharide complètement protégé possédant la structure désirée, les synthons saccharidiqûes intermédiaires donneurs de gfycosyfe et 3o accepteur de glycosyle étant choisis en fonction de la structure finale pour obtenir ainsi le précurseur protégé du polysaccharide final désiré de formule (I), dans lequel la nature des groupes protecteurs Ti. détermine la position des groupes sulfates et alkyfes sur le produit final {I).
35 On élimine ensuite selon l'étape (j), par saponification avec de l'hydroxyde de sodium ou de l'hydroxyde de lithium et/ou par hydrogénation catalytique par exemple en présence de palladium sur charbon, les groupements protecteurs des fonctions alcools qui doivent ëtre sulfatées.
Selon l'étape (k) on procède à la sulfatation à l'aide d'un agent sulfatant ' S te! qu' un complexe S03-amine, par exemple le complexe S03- pyridine, ou à
!'aide d'acide chlorosulfonique dans un solvant aprotique tel que le diméthylformamide de préférence à une température comprise entre 0°C et 100°C pour obtenir les composés (I) qui sont éventuellement purifiés par chromatographie par perméation sur gel en utilisant l'eau ou une solution de ~ o chlorure de sodium comme éluant.
Les composés {I) ainsi obtenus peuvent être éventuellement salifiés.
Les composés de la formule (I) ci-dessus comprennent également ceux dans lesquels un ou plusieurs atomes d'hydrogène ou de carbone ont été
remplacés par Peur isotope radioactif par exemple le tritium ou le carbone-14.
~5 De tels composés marqués sont utiles dans les travaux de recherche, de métabolisme ou de pharmacocinétique, dans les essais biochimiques en tant que ligands.
Les composés selon l'invention ont fait l'objet d' études biochimiques et pharmacologiques qui ont montré qu'ils possèdent des propriétés très 20 interessantes.
Les composés de la présente invention qui se fient à l'AT I11 {Kp <_ 200nM) ou à l'héparine co-facteur (HC II) avec une affinité égale ou supérieure à celle de l'héparine, possèdent les propriétés anticoagulantes de l' héparine.
25 Lls inhibent de ce fait plusieurs facteurs de la coagulation tel que le facteur Xa (titre >_ 10u anti-Xalmg) ou la thrombine (C150 <_ 10 ~.glml) et sont à
ce titre d'excellents agents antithrombotiques dans les modèles de thrombose veineuse et de thrombose artérielle.
L'affinité des composés de formule {I) pour l'AT 111, a été déterminée par 3o spectrofluorométrie, dans les conditions décrites par D. Atha et al. dans Biochemistry, 1987, 26, 6454-6461. Les résultats des essais ont démontré
' que les composés de l'invention possèdent une très grande affinité pour l'AT III (Kp compris entre 0.1 pM et 1 nM).
L'activité anti-facteur Xa (anti-Xa) des produits de l'invention a été
35 évaluée à pH 8,4, selon la méthode décrite par Teien A.N. et Lie M., dans Thrombosis Research, 1977, 70, 399-410, et il a été démontré que des WO 97/47659 PCT/F'R97/01048 composés de l'invention possèdent une activité anti-Xa égaie ou supérieure à
celte des héparino'ides de synthèse déjà connus, notamment est supérieure à
50 u anti-Xalmg.
Comme cela a été mentionné précédemment, dans la cascade de 5 coagulation le facteur Xa active fa prothrombine en thrombine, qui protéolyse ' le fibrinogène soluble avec libération de la fibrine insoluble, constituant principal du caillot sanguin. L'inhibition du facteur Xa constitue donc un moyen privilégié pour obtenir une activité anticoagulante et antithrombotique.
L'activité antithrombotique globale des produits de formule (I) a été
~ o évaluée par voie intraveineuse ou sous cutanée chez le rat, par un modèle de stase veineuse et induction par la thrombopiastine, selon fa méthode décrite par J. Reyers et al. dans Thrombosis Research, 1980, 78, 669-674. La DEsp des composés de l'invention est au moins du même ordre ou inférieure à
relie des autres héparinoïdes de synthèse déjà connus (DEsc comprises ~5 entre 5 et 500Ng/i<g). Les composés de l'invention présentent donc une spécificité d'action et une activité anticoagulante et antithrombotique particulièrement intéressantes.
Les composés de la présente invention qui sont capables de moduler, notamment d'inhiber l'activité des facteurs de croissance en particulier du 2o bFGF permettent d'inhiber la prolifération des cellules musculaires fisses vasculaires en culture (CML) avec un effet inhibiteur légèrement supérieur à
celui de fhéparine, sur la croissance des cellules musculaires lisses.
L' action des composés de l' invention sur l' activité du bFGF a été
évaluée par fixation du FGF iodé aux CML humaines en culture.
2s L'inhibition de la prolifération des CML a été évaluée in vitro sur des cultures de CML aortiques humaines (R. Ross, J. Cell. Biol., 1971, 172-186).
Les composés de la présente invention qui possèdent égaiement des propriétés antivirales, hypoüpidémiantes, des propriétés antiradicaux libres par libération de la superoxyde dismutase, des propriétés antimétastasiques, 3o antiangiogéniques, anti-inflammatoires, peuvent également agir sur la croissance et la différenciation des ceifules neuronaies en culture. Ils sont de _ ce fait utilisables dans toutes les pathologies où des_ perturbations de ces mécanismes biologiques interviennent.
Certains composés de l' invention exercent aussi une action protectrice et 3s régénératrice sur les fibres nerveuses.

Grâce à leur activité biochimique et pharmaceutique sélective, les composés de la présente invention sont des médicaments très interessants.
Leur toxicité est partaitement compatible avec cette utilisation. Ils sont ëgaiement très stables et sont donc particulièrement appropriés pour constituer le principe actif de spécialités pharmaceutiques.
Pour Peur activité sur les facteurs de la coagulation, les composés de l'invention peuvent être utilisés dans diverses pathologies liées à la coagulation et en particulier dans les troubles du système cardiovascufaire et cérébrovasculaire. Ils possèdent plus particulièrement une forte affinité pour l'antithrombine III ainsi qu' une importante activité anti-facteur Xa et antithrombine. L'inhibition de ces facteurs de la coagulation constitue donc un moyen privilègié pour obtenir une activité anticoagulante et antithrombotique.
lls peuvent être utilisés dans diverses pathologies consécutives à une modification de f' hémostasie du système de la coagulation apparaissant en ~5 particulier lors des troubles du système cardiovasculaire et cérébrovascufaire comme les troubles thromboemboliques associés à l'arthérosciérose et au diabète tels l'angine instable, l'attaque cérébrale, la resténose après angioplastie, l'endartérectomie, la pose de prothèses endovascuiaires; ou les troubles thromboemboliques associés à la rethrombose après thrombolyse, à
20 l'infarctus, à la démence d'origine ischémique, aux maladies artérielles périphériques, à l'hémodialyse, aux fibrillations auriculaires ou encore lors de l'utilisation de prothèses vasculaires de pontages aorto-coronariens. Ces produits peuvent par ailleurs être utilisés pour le traitement ou la prévention de pathologies thrombo-emboliques d' origine veineuse telles les embolies 25 pulmonaires. Ils peuvent être utillisés ou pour prévenir ou pour traiter les complications thrombotiques apparaissant fors d'interventions chirurgicales ou conjointement à d'autres pathologies telles que cancer, infections bactériennes ou virales. Dans le cas de leur utilisation lors de la pose de prothèses, les composés de la présente invention peuvent recouvrir des so prothèses et les rendre ainsi hémocompatibles. En particulier, ils peuvent ëtre fixés à des prothèses intravasculaires (stents). Dans ce cas, ils peuvent éventuellement être modifiés chimiquement par introduction à l'extrémité non réductrice ou réductrice d'un bras approprié, comme décrit selon EP 649 854.
- L' utilisation dans la resténose après angioplastie est favorisée par les s5 propriétés inhibitrices de certains facteurs de croissance, tels que le bFGF.

WO 97/47659 PCT/FR97l01048 Les composés de fa présente invention peuvent égaiement être utilisés comme adjuvant lors d' endartérectomie réalisée avec des ballonets poreux.
Les résultats obtenus lors de différentes études pharmacocinétiques effectuées avec les produits de !'invention, ont démontré qu'ils sont très bien absorbés par le tractus gastro-intestinal et que Peur demi-vie est longue.
Cela permet d'envisager lors de leurs utilisations en thérapeutique, la possibilité
d'une administration unique journalière.
Ces études ont aussi démontré que les compositions pharmaceutiques préparées avec les produits de formule (I), objet de la présente invention, sont absorbés par le tractus digestif, sans que les quantités administrées ne soient prohibitives pour une utilisation en thérapeutique humaine. Les composés de l'invention sont donc utiles pour la préparation des compositions pharmaceutiques, administrables aussi bien par voie parentérale, que par voie orale.
~5 Les composés de l'invention sont trés stables et sont donc ainsi particulièrement appropriés pour constituer le principe actif de médicaments.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention a pour objet une composition pharmaceutique contenant, en tant que principe actif, un polysaccharide de synthése contenant de 8 à 24 unités monosaccharidiques 2o formé par un enchainement de disaccharides constitués d'un acide uronique et d' un hexose, ledit polysaccharide étant caractërisé en ce que tous ses groupes hydroxyles sont éthérifiés avec un groupe (C1-Cg)alkyle ou estérifiés sous la forme de groupe sulfo, chaque dissaccharide étant au moins monoéthérifié; ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables. Ledit 25 polysaccharide de synthèse, principe actif des compositions de la présente invention est de préférence alkylé par un groupe méthyle.
L'invention concerne de prëférence, des compositions pharmaceutiques contenant comme principe actif, un composé de formule (I), (L1), (L2), (L3) ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, éventuellement en 3o association avec un ou plusieurs excipients inertes et appropriés.
Dans chaque unité de dosage le principe actif est présent dans les quantités adaptées aux doses journalières envisagées. En générai, chaque unité de dosage est convenablement ajustée selon le dosage et le type d' administration prévu, par exemple comprimés, gélules et similaires, sachets, s5 ampoules, sirops et similaires, gouttes, patch transdermique ou transmucosal de façon à ce qu'une telle unité de dosage contienne de 0, . à 100 mg de principe actif, de préférence 0,5 à 50 mg.
Les composés selon l'invention peuvent également ëtre utilisés en association avec un autre principe actif utile pour la thérapeutique souhaitée tels que par exemple des antithrombotiques, des anticcaguiants, des antiagrégants plaquettaires tels que par exemple le dipyridarnoie, l'aspiriné, fa ticlopidine, le clopidogrel ou des antagonistes du complexe de la glycoproteine IIbIIIIa.
Les compositions pharmaceutiques sont formulées pour l'administration aux mammifères, y compris l'homme, pour le traitement des maladies susdites.
Les compositions pharmaceutiques ainsi obtenues sont présentées avantageusement sous des formes diverses, telles que par exemple, des solutions injectables ou buvables, dragées, comprimés ou gélules. Les ~5 solutions injectables sont les fom~es pharmaceutiques préférées. Les compositions pharmaceutiques de la présente invention sont notamment utile:c pour le traitement à titre préventif ou curatif, des troubles de la paroi vasculaire, tels que l'athérosclérose, les états d'hypercoagulabüité observés par exemple à fa suite d'opérations chirurgicales de développement tumoraux 20 ou de dérèglements de la coagulation. induits par des activateurs bactériens, viraux, ou enzymatiques. La posologie peut largement varier en fonction de l'âge, du poids et de l'état de santé du patient. de la nature et de la sévérité
de l'affection, ainsi que de la voie d'administration. Cette posologie comprend l'administration d'une ou plusieurs doses d'environ 0,1 mg à 100 mg par jour, 25 de préférence d'environ 0,5 à 50 mg par jour, par vois intramusculaire ou sous cutanée; en administrations discontinues ou à intervalles réguliers.
La présente invention a donc également pour objet les compositions pharmaceutiques qui contiennent à titre de principe actif un des composés ci-dessus éventuellement en association avec un autre principe actif. Ces so compositions sont réalisées de façon à pouvoir âtre administrées par la voie digestive ou parentérale.
Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intra-veineuse, transdermique, transmucosale, locale ou rectale, l'ingrëdient actif 35 peut lare administré sous formes unitaires d'administration, en mélange avec des supports pharmaceutiques classiques> aux animaux et aux âtres * (marque de commerce) humains. Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale et buccale, les formes d'administration sous-cutanée, s intramusculaire, intraveineuse, intranasaie ou intraoculaire et les formes d'administration rectale.
Lorsque l'on prépare une composition solide sous forme de comprimés, on mélange l'ingrédient actif principal avec un véhicule pharmaceutique tel que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le taie, la gomme arabique ou analogues. On peut enrober les comprimés de saccha-rose ou d'autres matières appropriées ou encore on peut les traiter de telle sorte qu'ils aient une activité prolongés ou retardée et qu'ils libèrent d'une façon continue une quantité prédéterminée de principe actif.
On obtient une préparation en gélules en mélangeant l'ingrédient actif avec un diluant et en versant le mélange obtenu dans des gélules molles ou dures.
Une préparation sous forme de sirop ou d'élixir peut contenir l'ingrédient actif conjointement avec un édulcorant, acaforique de préférence, du méthyi paraben et du propyiparaben comme antiseptique, ainsi qu'un agent donnant 2o du goût et un colorant approprié.
Les poudres ou les granules dispersibles dans l'eau peuvent contenir l'ingrédient actif en mélange avec des agents de dispersion ou des agents mouillants, ou des agents de mise en suspension, comme la poiyvinylpyrrofi-done, de mëme qu'avec des édulcorants ou des correcteurs du goût.
2s Pour une administration rectale, on recourt à des suppositoires qui sont préparés avec des liants fondant à la température rectale, par exempte du beurre de cacao ou des polyéthylèneglycols.
Pour une administration parentérale, intranasaie ou intraocuiaire, on uti lise des suspensions aqueuses, , des solutions salines isotoniques ou des so solutions stériles et injectables qui contiennent des agents de dispersion et/ou des agents mouillants pharmacoiogiquement compatibles, par exemple le propylèneglycol ou le butylèneglycol.
Pour une administration transmucosale le principe âctif peut être formulé
en présence d'un promoteur tel qu'un se! biliaire, d'un polymère hydrophile tel ' que par exempte I'hydroxypropylcellulose, l'hydroxypropyfméthylcelfulose, l'hydroxyéthylcelfulose, 1'éthylcellulose, la carboxyméthylcelfulose, le dextran, la polyvinylpyrrolidone, les pectines, les amidons, la gefatine, la caséine, les acides acryliques, les esters acryliques et leurs copolymères, les polymères ou copolymères de vinyle, les alcools vinyliques, les alcoxypolymères, les polymères d'oxyde de polyéthylène, les polyéthers ou leur mélange.
s Le principe actif peut être formulé également sous forme de microcapsu-les, éventuellement avec un ou plusieurs supports ou additifs.
Le principe actif peut être également présenté sous forme de complexe avec une cyclodextrine, par exemple a, j3 ou y cyciodextrine, 2-hydroxypropyl-j3-cyclodextrine ou méthyl-~3-cyclodextrine.
Le principe actif peut également être libéré par un baionnet le contenant ou par un extenseur endovasculaire introduit dans les vaisseaux sanguins.
L' efficacité pharmacologique du principe actif n'est ainsi pas affectée.
L'administration par voie sous-cutanée est fa voie préférée.
Les MÉTHODES, les PRÉPARATIONS et les SCHÉMAS suivants ~ 5 illustrent la synthèse des différents intermédiaires utiles à l'obtention des poiysaccharides selon l'invention.
. Les EXEMPLES ci-après illustrent également l'invention sans toutefois 1â
limiter.
Pour une meilleure compréhension du procédé selon l'invention, 2a l'obtention des composés (I) peut être schématisé comme suit SCHÉMA 9 ~ s ~ a p-..~
~- o--,~-a

15 ~ '! 9 = "'- 26 ~ 27 z _ ~ 34 ~-~-~ 27 ~-15 Q'~" a 28 ~ 35 15 ~ 29 (~-~ a 5 c% 36 a 20 , 30 ~ 37 29 , a 0' ~ ~ 38 25 31~ _ 32 ~ 33 s Stratégie employée pour la synthèse d'oligomères du disaccharide méthyl 4-O-(2, 3-di-Q-méthyl-a L-idopyranosyluronate)-2, 3, 6-tri-O-sulfo-a-D-gluco-pyranoside. En condensant les imidates (colonne de gauche, triangle blanc à
l'extrémité réductrice) et les accepteurs de glycosyle (colonne du centre, triangle noir è l'extrémité non-réductrice) on obtient les oligosaccharides complètement protégés de la colonne de droite. Ces derniers sont ensuite déprotégés et fonctionnalisés pour livrer les composés de l'EXEMPLE 9 et du TABLEAU I.
Tous !es composés décrits ci-dessous sont homogènes en chromatographie sur couche mince (CCM) et ont des propriétés spectrales en 2~
accord avec leur structure. Les points de fusion sont déterminés dans des tubes capillaires à l'aide d'un appareil Mettle~' et ne sont pas corrigés. Les pouvoirs rotatoires sont mesurés à l'aide d'un polarimètre F'erkin-Elmer 241 à
~2 ~ 3 °C. La pureté des composés est vérifiée par CCM sur Silica Gei 60~
s f=254 (E. Merck) avec détection par carbonisation en présence d'acide sulfurique. Sauf mention particulière tes chromatographie sur colonne sont réalisées sur Silica Gei 60'x, 40-63 or 63-200 pm (E. Merck). Les spectres de ~ H RMN sont enregistrës sur des appareils Bruker AC 200, AM 250, AC 300 ou AM500, sur des solutions des produits dans CDCI;; ou D20. Avant n o analyse dans D20 les échantillons sont passés au travers d'une colonne de résine échangeuse d'ions Chelex~ (Bio-Rad) puis lyophilisés trois fois dans D20. Les déplacements chimiques sont relatifs au TMS externe quand les spectres sont enregistrës dans CDCf3, et au TSP externe quand les spectres sont enregistrés dans D20. Les analyses de spectrometrie de masse sont is effectuées sur un instrument 2AS-2E (Fisons). Les analyses élémentaires sont effectuées sur un analyseur Fisons Les abréviations suivantes sont utilisées TBDMS : teri butyldiméthyisilyie; Lev : levulinyle; 8n : benzyle; Bz :
benzoyle;
2o MCA : chloroacétyle; CCM : chromatographie sur couche mince; Olm trichloroacétimidyle; LSIMS : est le sigle anglais de Vqurd Secondary Ion Mass Spectrometry, .ESIMS : est le sigle anglais de Electro~ Spray Ionisation Mass Spectrometry, TMS :: triméthylsilyle; TSP : trimëthylsilyie tétradeuterio propiônate de sodium; Tf : triflate; MS : tarais moléculaire.
2s Dowex~, Sephadex~, Chelex~, Gel 60U sont des marques déposées.
Dans les METHOOES, les PREPARATIONS et dans les EXEMPLES
décrits ci-après, des modes opératoires généraux concernant le cuvage des esters levufiniques, le couplage catalytique des imidates. la déprotection et la 3o sulfatation des oligo et des polysaccharides par hydrogénolyse des esters ou des éthers benzyüques, la saponification des esters ou encore les sulfatations peuvent êtres rëalisés en appliquant les méthodes générales ci-après aux intermédiaires appropriés.
* (marques de comme~we) 3~~

WO 97!47659 PCT/FR97J01048 MÉTHODES GÉNÉRALES
MÉTHODE 1. Coupure du groupe Lev.
Une solution d'hydrate d'hydrazine (1 M dans 3:2 pyridine/acide acétique) est ajoutée (5 milmmole) à une solution refroidie (0 °C) dans la pyridine (5 m!lmmole) du composé à traiter. Après 15-30 minutes (CCM} la solution est concentrée. Le résidu est dissous dans l'acétate d'éthyle, lavé avec de l'eau, une solution à 10% d'hydrogénosulfate de potassium, une solution à 2%
d'hydrogénocarbonate de sodium, à l'eau, séché (sulfate de sodium), et concentré.
MÉTHODE 2. Couplage aux imidates catalysé par le triflate de tert-butyldiméthylsilyle.
Du triflate de tert butyldiméthylsilyle (0,5 moflmoi d'imidate) est ajouté
1 s goutte à goutte, sous argon, à une solution agitée et refroidie (-20 °C) de l'alcool accepteur et de l'imidate donneur, dans le toluène (35 ml/mmol), en présence de tamis moléculaire 4 ~ en poudre. Après 15-30 minutes (CCM), on introduit sous agitation de l'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après 5 minutes du toluène est ajouté, ia solution est filtrée, lavée avec une solution 2o à 2% d'hydrogénocarbonate de sodium, à l'eau, séchée (sulfate de sodium), et concentrée.
MÉTHODE 3. Couplage aux imidates catalysé par le triflate de triméthylsilyle Du triflate de triméthyfsilyle (0,04 M dans le toluène; 0,06 motlmol 25 d'imidate) est ajouté goutte à goutte, sous argon, à une solution agitée et refroidie (-20 °C) de l'alcool accepteur et de l'imidate donneur, dans le toluène (15 ml/mmol), en présence de tamis moléculaire 4 ~. en poudre.
Après 15-30 minutes (CCM), on introduit sous agitation de i'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après 6 minutes du toluène est 3o ajouté, la solution est filtrée, lavée avec une solution à 2%
d'hydrogénocarbanate de sodium, à l'eau, séchée (sulfate de magésium}, et .
concentrée MÉTHODE 4. Déprotection et sulfatation des oligo- et polysaccharides.
s5 Hydrogénolyse des benzyl éthers et benzyf esters. Une solution du composé (5 mg/ml), dans le diméthylformamide ou le méthanol, est agitée WO 97/47659 PCT/I'R97I01048 pendant 2-6 heures (contrôle CCM) sous une atmosphère d'hydrogène (5 bar) en présence de catalyseur PdIC 10% (2 x masse du composé). Après filtration le produit est engagé directement dans l'étape suivante.
Saponification des esters. Une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium s 5 M est ajoutée (en quantité telle que La concentration d'hydroxyde de sodium soit de 0,5 M en fin d'addition) à une solution d'un ester dans le méthanol (150 ml/mmol). Après 2-5 heures (CCM) de l'eau est introduite suivie par de la résine Dowex~ 50 H+ jusqu'à pH 1-2. Après filtration et concentration ie résidu est passé au travers d'une colonne de gel Sephadex~
G-25 (1,6 x 115 cm) éluée par l'eau. Le composé complètement déprotégé
est alors obtenu après lyophilisation. A ce stade on vérifie par 1 H RMN que tous les groupes protecteurs ont été enlevés. Si cela est nécessaire le produit est de nouveau soumis à l'hydrogénation et/ou la saponification.
Sulfatation. Du complexe pyridine/trioxyde de soufre (5 mmol/mmol 1s fonction hydroxyle) est ajouté à une solution dans le diméthylformamide (10 mg/ml) du composé à sulfater. Après un jour à 55 °C la solution est déposée au sommet d'une cotonne de Sephadex~ G-25 (1,6 x 115 cm) éluée par du chlorure de sodium 0,2 M. Les fractions contenant le produit sont concentrées et dessalées en utilisant ia même colonne éluée par l'eau. Le composé final 2o est obtenu après lyophilisation.

WO 97/47659 PC~'/FR97/01048 SCHÉMA 2 Synthèse du disaccharide 5 s OMe SEt OBn ~O HO OBn OMe O
OBZ OBnO

OBn OMe O OBn OMe OMe OBn OBn OMe O
O ~ O ~.--- O
O OBnO O OBnO
HO OBz ~ 4 3 OMe OBn OB~ OMe O
O ~O
O OBnO
orme Méthyl 4-O-{2-O-benzoyl-4,8-isoprapylidène-3-O-méthy!-a-~.-ido-pyranosyl)-2,3,6-tri-O-benzyl-a-o-glucopyranoside (3).
Une solution d'acide triflique dans le toluène (0,15 M, 0,27 ml) est ajoutée, sous agitation sous argon, à une solution refroidie (-20 °C}
d'éthyl 2-O-benzoyl-4.,6-O-isopropylidène-3-O-méthyl-1-thio-a-L-idopyranoside 2 (Jaurand,G. et aL, BioMed. Chem. Lett. 1992, 2, 897-900). (1,1 g, 2,87 mmol), de 1 (Garegg P.J., Hultberg H., Carbohydr. Res. 93, 1981 C10-C11 ) (1,34 g, 2,87 mmol), et de N-iodosuccinimide (1,61 g, 7,2 mmol), dans ie 3o toluène (40 ml) contenant des tamis moléculaires 4 â en poudre. La même quantité d'acide est ajoutée après 25 et 50 minutes. Après 1,5 h, du bicarbonate de sodium soude (20 mg) est introduit, et, 1.5 minutes plus tard la solution est filtrée, diluée avec du dichlorométhane, lavée avec une solution de thiosulfate de sodium, de l'eau, séchée (sulfate de sodium) et évaporée.
s5 Le produit brut ainsi obtenu (2,49 g) est utilisé directement pour la préparation de 4.

Après chromatographie sur colonne (3:1 cyciohexanelacétate d'éthyle) on obtient le composé 3 pur. CCM, RF = 0,36, 3:1 cyclohexanelacétate d'éthyle;
. [a]p + 31 (c = 1, dichlorométhane). ESI SM, mode positif: m/z + NaCI, 345 (M+Na)+; + KF, 361 (M+K)+. 1H RMN (CDC13) 8 7,17-7,35 (m, 20H, 4Ph), 5,10 (d, 1 H, H-1'), 4,60 (d, 1 H, J = 3,0 Hz, H-1 ), 3,37 (s, 3H, OMe), 1,95;
2,04;
2,09 {3s, 9H, 3Ac), 1,24; 1,33 (2s, 6H, :C(CH3)2}.
Anal. Calculé pour C45H52O12 (784,86) : C, 68,86; H, 6,68. Trouvé : C, 68,61; H, 6,77.
~ o PREPARAT10N 2 Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyi-4-O-(4,6-isopropyüdène-3-O-méthy!-a-~-idopyranosyl)-a-v-glucopyranoside (4).
Une solution 2 M de méthylate de sodium (2,2 ml, 4,4 mmol) est ajoutée à
une solution du composé 3 (2,34 g) dans un mélange 1:1 ~5 méthanol/dichlorométhane {13 ml). Après 2,5 heures à température ambiante ~le mélange est neutralisé avec de la résine Dowex~ 50 (H+}, filtré et concentré, pour donner 4 (1,74 g; 86% par rapport à 9 et 2) après chromatographie sur colonne (3:1 puis 2:1 cyciohexane/acétate d'éthyle); [a, ]p + 23 (c = 1, dichlorométhane). ES! SM, mode positif: m/z + NaCI, 703 20 (M+Na)+; + KF, 719 (M+K)+. 1 H RMN (CDC13} b 7,31-7,21 (m, 15H, 3Ph), 4,94 (d, 1 H, H-1'), 4,60 (d, 1 H, J = 3,6 Hz, H-1 ), 3,44; 3,36 (2s, 6H, OMe); 3,06 (dd, 1 H, J =
3,6 Hz, J = 12,2 Hz, H-6'), 1,31; 1,28 (2s, 6H, :C(CH3)2).
Anal. Calculé pour C38H48O11 (680,76) : C, 67,04; H, 7,11. Trouvé : C, 25 67,05; H, 7,16.
PREPARATtON 3 Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyt-4-O-(4,6-isopropylidène-2,3-di-O-méthyt-a-L-idopyranosylj-a-D-glucopyranoside (5).
3o De l'iodure de méthyle {3,2 ml, 50,8 mmof) est ajouté, à 0 °C, à
une solution de 4 (26,6 g, 39,1 mmol) et d'hydrure de sodium (1,48 g, 58,7 mmol) dans ie diméthyiformamide {60 ml). Une nouvelle addition d'iodure de méthyle (1,6 ml, 25,4 mmol) et d'hydrure de sodium (0,74 g, 29,3 mmol) est réalisée après 5 heures à température ambiante. Après 1 nuit, du méthanol (10 ml} est 35 introduit goutte à goutte, .et après 1,5 heure le mélange réactionnel est concentré. Le produit est extrait avec de l'acétate d'éthyle (1,5 I). La solution W~ 97/47659 PCT/TR97/(D1048 est lavée avec de l'eau, séchée {sulfate de sodium) et concentrée. Le composé brut 5, ainsi obtenu {32,1 g), est utilisé tel quel dans l'étape suivante. CCM, RF = 0,55, 3:2 cyclohexane-acétate d'éthyle.

WO 97/47659 PCTlFR97/01048 HO OMe OBn OBn OMe O
~ .o HO OBnO
OMe ' S
OTBDMS OMe OBn OBn O\~GC~OMe -00G OMe O OBn OMe ~~O
HO OBnO 9 7 HO OBnO
OMe OMe OTBDMS OMe OBn O OBn OMe BnOOC OMe O OBn OBn OMe O
oLev ' OBnO O
HO~G-i~ OBn OMe 1 ~ $ OMe -OOC OMe O OBn OBn OMe O
OLev ' OBnO
oMe 11 SnOOC OMe O OBn OBn OMe O
OLev ' OBnO
oMe 12 oAc OAc BnOOC OMe O OBn BnOOC OMe O OBn O OH
~O OAc 1' OLev ' O
OLev O OMe OAc oMe oac 13 14 OAc BnOOC OMe O OBn o o1m OLev ' O
OMe OAc Synti~ëse des disaccharides de base pour la préparation d'oligomères du méfhyl 4-O-(2, 3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyluronate)-2, 3, 6-tri-O-sulfo-a-D-glucopyranoside.
s PRÉPARATION 4 Méthyi 2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(2,3-di-O-méthyi-a-~-idopyranosyl)-a-D-giucopyranoside (6).
Une solution aqueuse d'acide trifluoroacétique (70%, 43 ml) est ajoutée goutte à goutte pendant 10 minutes à une solution du composé brut ci-dessus o {32,1 g) dans du dichlorométhane (215 ml). Après 25 minutes à température ambiante ia solution est diluée avec du dichlorométhane (11), lavée avec une s solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, avec de l'eau et séchée (sulfate de sodium). Le composé brut 6 obtenu après concentration {27,5 g) est utilisé tel quel dans !'étape suivante. CCM, RF = 0,29, 2:3 cyclohexane-acétate d'éthyle.
PRÉPARATION 5 Méthyl 2,3,ô-tri-O-benzyi-4-O-(6-O-tert-butyldiméthylsüyi-4-O-lévuünyl-2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyi)-a-D-glucopyranoside (10).
2o Une solution de 6 (1,7 g), de triéthylamine (0,54 ml, 3,8 mmol), de 4-diméthylaminopyridine (38 mg, 0,3 mmof) et de chlorure de tert butyfdiméthyisüyie {0,54 g, 3,6 mmoi), dans le chlorure de méthylène (6 ml), est chauffiés à 50° C pendant 3 heures pour donner 9 qui n'es pas isolé.
Après refroidissement à température ambiante, de l'anhydride lévuünique 2~ (0,771 g, 3,6 mmol), de ia triéthylamine (0,50 ml, 3,6 mmoi) et de la 4-diméthylaminopyridine (59 mg, 0,48 mmol) sont ajoutés. Après 4 heures le mélange est dilué avec du chlorure de méthylène, et lavé successivement avec une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de potassium, de l'eau, une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, de l'eau, séché
ao (sulfate de sodium), et concentré pour donner 10 (2,45 g) qui est utilisé
tel quel dans l'étape suivante. TLC, RF 0,5, 12:1 cyclohexane/acétate d'éthyle.

. Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(benzyl 4-O-levulinyl-2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyiuronate)-a-v-glucopyranoside (12).
s Une solution de trioxyde de chrome (0,64 g, 6,4 mmol) dans l'acide sulfurique aqueux (3,5 M, 2,7 ml) est ajoutée lentement à une solution refroidie (0° C) de 10 (2,45 g) dans l'acétone (18 m!). Après 5 heures du chlorure de méthylène est introduit, puis le mélange est versé dans de l'eau galcée, agité vigoureusement, lavé à l'eau jusqu'à un pH neutre et séché
~o (sulfate de sodium). La concentration donne 11 (2,45 g), sous forme de sirop.
TLC, RF 0,56, 12:1 chlorure de méthylènelméthanol. Ce produit est ensuite dissous dans le diméthylformamide (19 ml) et traité une nuit à température ambiante avec du bromure de benzyie (2,9 ml, 12 mmol). Du méthanol (1,5 ml) est ajouté et !e produit est extrait avec de l'éther, lavé à Peau, séché
et t s concentré. Après chromatographie sur colonne (2:1 puis 3:2 cyclohexane/acétate d'éthyle) on obtient 12 (1,07 g). TLC, RF 0,53, 5:1 chlorure de méthylène-acétate d'éthyle.

2o Méthyl2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(benzyl 2,3-di-O-méthyf-a-~-idopyranosyl-uronate)-a-v-glucopyranoside (8).
Le disaccharide 12 (0,65 g, 0,76 mmol) traité selon la méthode générale 1 donne 8 (0,52 g, 91 %) après chromatographie sur colonne (2:1 puis 3:1 cyclohexanelacétate d'éthyle). [a]p +34 (c = 0,97, chlorure de méthylène}.
2s PRÉPARATION 8 1,3,6-tri-O-Acétyl-2-O-benzyl-4-O-(4-O-lévulinyl-2,3-di-O-méthyt-a-~-idopyranosyluronate de benzyle)-v-glucopyranose (13).
De l'acide trifluoroacétique (28 ml, 0,364 mol) est ajouté à une solution de 30 12 (7,8 g, 9,1 mmol) dans de Panhydride acétique (194 ml, 2,06 mol) et de l'acide acétique (7,8 ml, 0,136 mol). Après chauffage à 60 °C pendant 4 heures !a solution est refroidie à 0 °C et de !'eau (30 ml} est introduite goutte à goutte, suivie de triéthylamine (69 ml). Après evaporation le résidu est dissous dans dichlorométhane, lavé avec une solution saturée 35 d'hydrogénocarbonate de. sodium, de !'eau, séché (sulfate de sodium), et concentré. Une chromatographie sur cotonne (5:1 dichlorométhanelacétate WO 97!47659 PCT/FR97I01048 d'éthyle) donne un mélange (a!(3=8/2) des anomères de 13 (4,7 g, 67%).
CCM, RF 0,35; 3:2 cyciohexane-acétone. 1 H RMN (CDC13) 8 7,37-7,20 (m, ,10H, 2Ph), 6,30 (d, J = 3,6 Hz, H-1a), 5,62 (d, J = 7,6 Hz, H-1[3), 5,04 (t, 1 H, H-4'), 3,45; 3,41 (2s, 6H, 2 OMe), 2,6-2,3 (m, 4H, O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3), 2,15; 2,12; 2,06; 1,94; 1,88 (5s, 12H, 3 Ac et O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3).
PRÉPARATION 9 3,6-di-O-Acétyl-2-O-benzyt-4-O-(4-O-lévulinyi-2,3-di-O-méthyi-a-~-ido o pyranosyturonate de benzyie)-v-glucopyranose (14).
Une solution d'éthanofamine (1,3 ml, 21,6 mmol) et de 13 (4,25 g, 5,28 mmol) dans ie tétrahydrofurane (80 ml) est abandonnée une nuit à 4 °C.
De féthanolamine (0,65 mi, 10,8 mmol) est alors ajoutée, puis ie mélange est laissé à température ambiante pendant 3 h. Après refroidissement à 0 °C, on ~5 ajoute de l'acide chlorhydrique 1 M jusqu'à pH acide, puis du dichiorométhane (150 mi). La solution est cavée avec de l'eau, séchée, et concentrée. Une chromatographie sur colonne (2:1 puis 1:1 dichlorométhane/acétate d'éthyle) donne 14 (3 g, 74%). CCM, R~ 0,21, 1:1 toluène-acétate d'éthyle. [ajp +3 (c = 1, dichiorométhane). LSIMS, mode 2o positif: m/z thioglycérol + NaCi, 769 (M+Na)+; thiogfycéroi + KF, 785 (M+K)+.
1 H RMN (CDC13) 8 7,36-7,25 (m, 10H, 2Ph), 5,21 (d, J = 3,5 Hz, H-1a), 4,98 (d, 1 H, J = 3,4 Hz, H-1'), 4,79 {d, J = 8 Hz, H-1 a), 3,45; 3,42 (2s, 6H, 2 OMe), 2,56-2,23 (m, 4H, O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3), 2,23; 2,12; 1,94; 1,88 (4s, 9H, 2 Ac, a et a O{C:O)CH2CH2(C:O)CH3).
25 Ana(. Calculé pour C37H4gO16 (746,72): C, 59,51; H, 6,21. Trouvé: C, 58, 87, H, 6,13.
PRÉPARATION 10 3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyi-4-O-( ,4-O-lévulinyi-2,3-di-O-méthyl-a-L-idopy-3o ranosyiuronate de benzyle)-v-glucopyranose trichloroacétimidate (15).
Un mélange de trichloroacetonitrüe {0,7 ml; 6,92 mmol), de 14 {1,03 g;
1,38 mmoi), et de carbonate de potassium (191 mg; 2,21 mmol), dans ie chlorure de méthylène (26 ml) est agité pendant 1,5 heure à température ambiante. La solution est alors filtrée et concentrée. Une chromatographie sur 35 colonne (4:1 toluène/acétone) donne 15 (1.16 g; 94%). CCM, RF 0,31 et 0,48, 2:3 cyclohexane-acétate d'éthyle. LSiMS, mode positif: m/z thioglycérol +

WO 97147659 PC'd'/FK97/01048 LiCI, 896 (M+Li)+; thiogfycérol + NaCI, 912 (M+Na)+; thiogiycéroi + KP, 928 (M+K)+. 1 H RMN (CDC13) b 8,67 (s, NH-j3), 8,60 {s, NH-oc), 7,37-7,22 (m, - 10H, 2Ph); 6,44 (d, J = 3,6 Hz, H-1a), 5,83 (d, J = 7,3 Hz, H-1(3), 3,47;
3,44;
.3,42; 3,40 (4s, 6H, 2 OMe), 2,7-2,2 (m, 4H, O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3), 2,15;
2,08; 1,94; 1,88 (4s, 9H, a et (3 Ac, et O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3).
SCHÉMA 4 8+15 CH2C12; MS; TMSOTf OMe OAc OLev O BnOOC OMe O OBn OBn OMe O O
O
BnOOC OMe OAc OBn O~~G-~ OBnO
OMe NH2NH2 , pyridine-AcOH
OMe OAc HO O BnOOC OMe O OBn OBn OMe O O
BnOOC \OMe OOAc OBn O~~G--~ OBnO
OMe 17 + 15 . CH2C12; MS; TMSOTf OMe OAc BnOOC OMe ~ c0 OBn O O BnOOC OMe O OBn OBn OMe O O 'O
OLev ' OAc O v O OBn O O
BnOOC OMe /~/-~ OBn OMe OAc OMe Synthèse de l'hexasaccharide 98. La préparation d'oligomëres de taille 3o supérieure est effectuée selon la même stratégie (coupure du groupe Lev pour obtenir un accepteur de glycosyle, couplage avec un di-, tetra-, ou hexasaccharide imidate -comme indiqué sur le schéma 9- et finalement, déprotection et sulfatafion). Le groupe Lev de 98 est ~ sélectivement éliminé
pour donner l'hexasaccharide accepteur 19 (SCHÉMA 7).

WO 97/47659 ~CT/FR97/OI048 PRÉPARATION 11 Méthyi 0-(4-O-lévuünyi-2,3-di-O-méthyi-a-L-idopyranosyiuronate de benzyte)-(1-4)-O-(3,6-di-O-acétyt-2-O-benzyl-a-D-giucopyranosyi)-(1-4)-O-(2,3-di-D-méthyl-a-L-idopyranosyfuronate de benzyie)-(1-4)-2,3,6-tri-O-benzyl-a.-D-glucopyranoside (16).
Un mélange de 8 (2,90 g, 3,83 mmoi) et 15 (4,16 g, 4,67 mmol) est traitë
selon la méthode 2. Une chromatographie sur colonne (1:1 cyciohexane/acétate d'éthyle) donne 16 pur ( 3,2 g; 54%). CCM, RF 0,52, 2:3 cyclohexane/acétate d'éthyle. 1H RMN (CDC13) 8 7,21-7,36 {m, 30H, 6Ph), 0 5,27 (d, 1 H, H-1, unité non réductrice), 5,14 (d, 1 H, H-1 unité "central next to non reducing"), 4,90 (d, 1 H, H-1, unité "central next to reducing"), 4,56 (d, 1 H, H-1 unité réductrice), 3,43; 3,39; 3,35; 3,25 (5s, 15H, 5 OMe), 2,25-2,60 (m, 4H, O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3), 2,12; 2,00; 1,91 (3s, 9H, 2Ac et O(C:O}CH2CH2(C:O)CH3).
~s PRÉPARATION 12 Méthyl O-(2,3-di-O-méthyl-cs-L-idopyranosyiuronate de benzyte)-(1-4)-O-{3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-a-D-giucopyranosyl)-(1-4)-O-(2,3-di-O-méthyi-a-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-2,3,ô-iri-O-benzyi-2o a-D-giucopyranoside (17).
Le composé 16 (1 g; 0,672 mmol) est traité selon fa méthode 1 pour donner quantitativement 17 après chromatographie sur colonne (1:1 cyclohexanelacétone).
25 PRÉPARATION 13 Mëthyi O-(4-O-lévuünyl-2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyluronate de benzyie)-(1-4)-[O-(3,6-di-O-acéiyi-2-O-benzy!-a-D-giucopyranosyi)-(1-4)-O-{2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyiuronate de benzyie)-(1-4)j2-2,3,8-tri-O-benzyl-a-D-giucopyranoside (18).
3a Un mélange de 15 (386 mg, 434 Nmol) et 97 (500 mg; 360 ~rmoi} est traité
selon la méthode 2. Une chromatographie sur colonne (Sephadex~ 1_H 20, 195 x 3,7 cm; 1:1 dichlorométhane/éthanof) donne l'hexasaccharide 18 ( 495 mg; 64%). CCM, RF 0,36, 10:1 dichlorométhane/acétone.
1H RMN (CDC13) 8: 5,23; 5,12; 5,10; 4,92; 4,89; 4,56 ppm.

WO 97/47659 PCTlFR97/01048 Méthyl O-(2,3-di-O-méthyl-a.-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-[O-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyi-a-D-glucopyranosyi)-(1-4)-O-(2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyluronate de benzyie)-(1-4)]Z-2,3,6-tri-O-benzyi-a-D-giucopyranoside (19).
Le composé 18 (485 mg; 229 ~rmol) est traité selon la méthode 1. Une chromatographie sur colonne (10:1 dichlorométhane/acétone) donne 19 (392 mg; 85%). CCM, RF 0,38, 10:1 dichlorométhanelacétone.
1o SCHEMA 5 Synthèse du disaccharide accepteur 22 BnOOC OMe O OBn OBn OMe ~O
OMCA OBnO
OMe OAc BnOOC OMe O OBn O ~ OAc OMCA O
OMe OAc OAc BnOOC OMe O OBn ~ O ~ OAc Ii0 O
OMe OAc WO 97!47659 PCT/FR97/OI048 PRÉPARATION 15 Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(4-O-chloroacéty!-2,3-di-O-méthy!-cc-L-idopyranosyluronate de benzyie)-a-D-glucopyranoside (20).
Un mélange de 8 (326 mg, 0,43 mmol), d'anhydride chloroacétique (103 5 g, 0,6 mmol), de 4-diméthylaminopyridine (5,3 mg, 42 pmol), et de triéthylamine (90 p!, 64 pmol) dans le dichlorométhane (96 ml) est agités à
température ambiante pendant 30 minutes. Du méthanol (0,5 ml) est alors ajouté, la solution est diluée avec du dichlorométhane, lavée à l'eau, séchée (sulfate de sodium), et concentrée. Une chromatographie sur colonne (2:3 o puis 1:2 cycfohexane/éther) donne 20 pur (242 mg, 67%). CCM, RF 0,35, 1:2 cyclohexaneléther. 1 H RMN {CDC13) s 7,36-7,19 (m, 20H, 4Ph), 5,20 {d, 1 H, H-i'), 4,56 (d, 1 H, H-1 ), 3,70 et 3,36 (système AB, J - 15,3 Hz, ClCH2(C:O)O), 3,49, 3,35; 3,26 (3s, 3 OCH3).
~ 5 PRÉPARATION 16 1,3,6-tri-O-acétyl-2-O-benzyl-4-O-(4-O-chloroacétyl-2,3-di-O-méthy!-a-~-idopyranosyiuronate de benzyle)-a,~i-o-glucopyranose (21 ).
Une solution d'acide trifluoroacétique (183 girl, 2,4 mmol) est ajoutée à une solution de 20 (50 rng, 0,06 mmol) dans l'anhydride acétique (1,28 ml, 13,5 2o mmol) et l'acide acétique (52 Nl, 0,9 moi). Après chauffage à 60 °C
pendant 4 heures la solution est refroidie à 0 °C et neutralisée avec de la triéthylamine.
Après évaporation, une chromatographie sur colonne du résidu (1:2 puis 2:5 cyciohexaneléther) donne un mélange (a1~3 = 8/2) des anomères de 21 (28 mg, 60%). CCM, RF 0,37, 2:5 cyclohexane/éther. 1 H RMN (CDC13) b 7,20-25 7,35 (m, 1 OH, 2Ph), 6,30 (d, J = 3,6 Hz, H-1 cc), 5,63 (d, J = 8,1 Hz, H-1 (3), 3,39 et 3,46 (2s, 2 OCH3) PRÉPARATION 17.
1,3,6-tri-O-acéty!-2-O-benzyl-4-O-(2,3-di-O-méthyi-a-L-idopyranosyiu-3o ronate de benzyle)-o~,(i-D-glucopyranose (22).
De la thiourée (678 mg; 8,9 mmoi) est ajoutée à une solution de 21 (1,71 g; 2,23 mmol) dans un mélange de pyridine {708 mi) et d'éthanol (22 ml), et le ' mélange est chauffé à 110 °C pendant 30 minutes. Après refroidissement et évaporation le résidu est dissous dans du dichlorométhane. La solution est ' 35 lavée à l'aide d'une solution saturée aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium, puis une solution à 5% d'hydrogénosulfate de potassium, séchée (sulfate de sodium), et concentrée. Une chromatographie sur colonne (1:1, puis 1:2 cyclohexane/acétate d'éthyle) donne 22 pur (1,17 g; 76%). CCM, RF
0,34, 3:1 dichlorométhaneléther. 1 H RMN (CDCl3) b 7,36-7,20 (m, 10H, 2Ph), 6,30 (d, J = 3,6 Hz, H-1a), 5,65 (d, J = 8 Hz, H-1 (3), 4,90 (1 H, H-1'), 3,41 et 3,40 (2s, 2 OCH3) SCHElVIA 6 Synthèse du tétrasaccharide imidate 25 ~0 15+22 CH2C12; MS; TMSOTf OMe OAc OLev O BnOOC OMe O OAc OBn O ~ O OAc BnOOC pMe OOAc OBn O OAcO
OMe NH2NH2 , pyridine-AcOH
OMe OAc OLev O BnOOC OMe O OAc OBn O ~O OH
BnOOC 'OMe OOAc OBn O ~ OAcO
orme 24 CC13CN, K2C03 , CH2Ct2 OMe OLev OAcO OMe OAc BnOOC O Otan O ~ O Ofm BnOOC pMe OOAc OBn O OAcO
orne 25 WO 97/47659 PCT/F'it97/01048 O-(4-O-lévuünyl-2,3-di-O-méthyi-a-L-idopyranosyturonate de benzyle)-( 1-4)-O-{3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-a-~-gl ucopyranosyl )-( 1-4)-O-(2,3-di-O-~méthyl-a.-L-idopyranosyiuronate de benzyle)-(1-4)-1,3,6-tri-O-acétyl-2-O-benzyl-a,(3-o-glucopyranose (23).
Un mélange de 15 (1,5 g, 1,7 mmol) et 22 (1,18 g; 1,7 mmol) est traité
selon la méthode 3 (en remplaçant ie toluène par du dichiorométhane). Une chromatographie par perméation sur gel sur une colonne de LH-20, equüibrée dans dichlorométhaneléthanol 1:1, donne 23 pur (1,75 g; 73%).
o [ocJp +19 (c = 0,9, dichforométhane). LSIMS, mode positif: mlthioglycérol +
NaCI, 1441 (M+Na)+; thioglycérol + KF, 1457 (M+K)+.
1H RMN (CDCi3) 8: 6,27; 5,45; 5,10; 4,96; 4,90 ppm.
Anal. Calc pour C71H86030 (1419,46): C, 60,08; H, 6,11. Trouvé: C, 60, 06; H, 6, 40.
PREPARATtON 19 O-(4-O-lévuünyi-2,3-di-O-méthyi-a-L-idopyranosyluronate de benzyie)-(1-4)-O-( 3, 6-di-O-acéty!-2-O-benzyl-a-D-glucopyranosyl )-( 1-4)-O-(2, 3-di-O-mëthyl-a-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-3,6-di-O-acétyl-2-O-2o benzyl-a,[3-D-giucopyranose (24).
De l'éthanolamine (80 NI; 1,31 mmoi) est ajoutée à une solution du tétrasaccharide 23 (465 mg; 327 Nmol) dans ie tétrahydrofurane (5 mi), puis la solution est laissé la nuit à 4 °C. Après neutralisation par l'acide chlorhydrique (1 M; 2 ml), du dichlorométhane (20 ml) est ajouté, puis la solution est lavée à l'eau, séchée (sulfate de sodium), et concentrée. Une chromatographie sur cotonne (3:1 tofuènelacétone) donne 24 (326 mg; 79%).
CCM, RF 0,33, 3:1 toluènelacétone. LSIMS, mode positif: mlz thioglycérol +
NaCI, 1399 (M+Na)~; thioglycérol + KF, 1415 (M+K)+.
1 H RMN (CDC13) 8: 5,18; 5,10; 4,96; 4,93; 4,75 O-(4-O-lévulinyi-2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyluronate de benzyle)-( 1-4)-O-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-a-D-glucopyranosyi )-( 1-4)-O-(2,3-di-O-méthyl-oc-L-idopyranosyluronate de benzyle)-{1-4)-3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-a,[i-D-glucopyranose trichloroacétimidate (25).

WO 97/47659 PCTlFR97/01048 Un mélange de trichloroacétonitrile (151 p1; 1,5 mmol), du tétrasaccharide 24 (343 mg; 249 NM), et de carbonate de potassium (62 mg; 448 Nmol) dans - le dichlorométhane (2 ml) est agités une nuit à température ambiante. Du dichlorométhane est ajouté, et après filtration fa solution est concentrée.
Une s chromatographie sur colonne (3:1 toluène/acétone) donne 25 {346 mg; 91 CCM, RF 0,42; 0,63, 2:1 dichiorométhanelacétate d'éthyle.
1 H RMN (CDC13) 8: 8,67 (s, NH-b), 8,59 (s, NH-a), 7,40-7,20 (m, 1 OH, 2Ph),6,40 (d, J = 3,5 Hz, H-1a), 5,90 (d, J = 7,5 Hz, H-1(3), 3,45; 3,44;
3,42;
3,40; 3,39; 3,37 (6s, 12H, 4 OMe), 2,7-2,2 (m, 4H, O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3), 2,12; 2,08; 2,07; 2,04; 2,02; 1,91; 1,89 {7s, 15H, 4 Ac, et O{C:O)CH2CH2(C:O)CH3). NH-a et NH-b désignent les signaux obtenus pour chacun des isomères syn et anti.
PRÉPARATION 21 ~5 Méthyl0-(4-O-lévulinyi-2,3-di-O-méthyl-a-i_-idopyrano-syluronate de ~benzyle)-( 1-4)-[O-(3,6-di-O-acétyi-2-O-benzyl-a.-D-g lucopyranosyt )-( 1-4)-O-(2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyiuronate de benzyle)-(1-4)33-2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-giucopyranoside (26).
A partir de 17 et 25. - Un mélange de 17 et 25 (459 mg, 0,3 mmoi) est 2o traité selon la méthode 3. Une chromatographie sur colonne (Sephadex~ LH
20, 195 x 3,7 cm; 1:1 dichiorométhaneléthanol), suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (3:2 cyciohexane-acétone) donne 26 pur ( 420 mg; 59%}. [a.]p +20 (c = 0,20, dichlorométhane}. LSIMS, mode positif: mlz thioglycéroi + NaCI, 2771 (M+Na)+; thioglycérol + KF, 2787 25 (M+K)+, 1H RMN (CDCi3) 8: 5,26; 5,14; 5,10; 4,93; 4,92; 4,90; 4,56 PRÉPARATION 22 26 à partir de 15 et 19. - Un mélange de 15 (332 mg, 373 Nmol) et 19 30 (377 mg; 186 Nmoi) est traité selon la méthode 2. Une chromatographie sur colonne (Sephadex~ LH 20, 195 x 3,7 cm; 1:1 dichlorométhane/éthanol) donne l'octasaccharide 26 pur ( 460 mg; 90%).

WO 97!47659 PCT/FR97/01048 PRÉPARATION 23 Méthyl O-(2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyiuronate de benzyle)-(1-4)-[O-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyi-a-D-gl ucopyranosyl )-( 1-4)-O-(2,3-di-O-méthyl-cc-L-idopyranosyluronate de benzyfe)-(1-4)~g-2,3,6-tri-O-benzyl-s a-D-glucopyranoside (27).
Le composé 26 (275 mg; 100 Nmol} est traité selon la méthode 1 pour donner 27 (265 mg; 96°J°); [ocjp +27 (c = 0,56, dichlorométhane). LSIMS, mode positif: m/z thiogfycérol + NaCI, 2673 (M+Na)+; thioglycéro! + KF, 2689 (M+K)+.
0 1 H RMN (CDCIg) s: 5,26; 5,15; 5,10; 5,08; 4,89; 4,88; 4,55 PREPARATlON 24 Méthyl O-(4-O-lévuünyl-2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyiuronate de benzyle)-( 1-4)-[O-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-a-D-giucopyranosyi )-( 1-4)-0-35 (2,3-di-O-méthyi-a-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)j5-2,3,6-tri-O-benzy!-a-D-glucopyranoside (28).
Un mélange de 27 (97,3 mg; 36 Nmol) et de 25 (83,8 mg, 55 Nmol) est traité selon la méthode 3. Une chromatographie sur colonne (cyclohexane acétone 2:1, puis 7:4, puis 3:2) donne 28 pur ( 102 mg; 69%). [a]p + 22 (c =
20 0,51, dichlorométhane). CCM, RF 0,18, 3:2 cyciohexane-acétone.
1H RMN (CDC13) b: 5,26; 5,14; 5,10; 5,08; 4,93; 4,92; 4,90; 4,56 PRÉPARATION 25 Méthyi O-(2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyfuronate de benzyle)-(1-4)-[O-25 (3,6-di-O-acéiyl-2-O-benzyl-a-D-glucopyranosyi)-(1-4)-O-(2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)~5-2,3,6-tri-O-benzyi-a-D-giucopyranoside (29).
Le composé 28 (216 mg; 54 Nmof) est traité selon !a méthode 1 pour donner 29 (199 mg; 95%). CCM, RF 0,56, 1:1 cyclohexane-acétone; RF 0,55, ao 2:1 toluène-acétone. LSIMS, mode positif: m!z thioglycérol + NaCI, 3934 (M+Na)+; thioglycérot + KF, 3950 (M+K)+.

Méthyl0-(4-O-lévuiinyl-2,3-di-O-méthyi-a.-L-idopyranosyturonate de _ benzyle)-(1-4)-[O-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyf-a-D-glucopyranosyi)-(1-4) O-(2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyluronate de benzyie)-(1-4)j7-2,3,6 5 tri-O-benzyl-a-D-glucopyranoside (30).
Un mélange de 25 (33 mg, 21,4 pmol) et de 29 (52,4 mg; 13,3 Nmol) est traité selon la méthode 2. Une chromatographie sur colonne (7:4 cyclohexane-acétone) donne 30 pur ( 43,8 mg; 62%). [a]p +19 {c = 0,5, dichlorométhane). CCM, RF 0,36, 3:2 cyclohexane-acétone. LSIMS, mode ~o positif: m/z thioglycérol + KF, 5310 (M+K)+.
1 H RMN (CDC13) 8 des protons anomères principaux : 5,26; 5,14; 5,10;
5, 08; 4, 92; 4, 90; 4, 56 ~5 Méthyf O-(2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyiuronate de benzyle)-(1-4)-[O-(3,6-dï-O-acétyl-2-O-benzyl-a-D-gf ucopyranosyl )-( 1-4)-O-(2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)j7-2,3,6-tri-O-benzyi-a-D-gfucopyranoside (31 ).
L'hexadécasaccharide 30 (100 mg; 19 pmol) est traité selon la méthode 1 2o pour donner 31 utilisé directement dans l'ëtape suivante. [a]p +20 {c =
0,38, dichlorométhane). CCM, RF 0,31, 4:3 cyclohexane-acétone. LSIMS, mode positif: m/z thioglycérol + NaCI, 5196 (M+Na)+; thiogiycérof + KF, 5212 (M+K)+.

Méthyf O-(4-O-lévufinyf-2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosy(uronate de benzyfe)-( 1-4)-[O-( 3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-a-D-gtucopyranosyl )-( 1-4)-O-(2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyluronate de benzyfe)-(1-4)jg-2,3,6-tri-O-benzyl-a.-D-glucopyranoside (32).
3o Un mélange de 25 (31 mg; 21,7 Nmol) et de 31 (94,5 mg, 18,3 pmoi) est traité selon la méthode 3 pour donner 32 après plusieurs chromatographies sur colonne ( 29,2 mg; 25%). [a]p +22 (c = 0,33, dichlorométhane). CCM, RF
0,26, 4:3 cyclohexane-acétone. 1 H RMN (CDC13) b des protons anomères principaux : 5,26; 5,14; 5,10; 5,09; 4,92; 4,91; 4,90; 4,56 ppm.

WO 97/47659 PCT/Fït97/0104$

Méthyi O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-a-L-idopyranosyiuronique-(1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-a,-D-glucopyranosyi)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O- -méthyi-a-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]g-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-gluco-pyranoside, sel de sodium (33).
S03 s03_ -OOC OMe O p ~ OMe 'o O
OMe /
so; 10 ~ 5 Le composé 32 est traité selon la méthode 4 pour donner 33 (60% sur les trois étapes). [a]p +27 (c = 0,4, D20) ; ESIMS, mode négatif: masse expérimentale = 7077,3 ~ 3,2 u.m.a.
1 H RMN (D20) S principaux protons anomériques : 8 5,41; 5,40; 5,15;
5, 09; 5, 07; 5, 06 ppm.

En procédant selon l'EXEMPLE 1 et selon le SCHEMA 1 ci-dessus on prépare fes composés 34 à 38 (EXEMPLE 2 à 6) décrits dans le TABLEAU f ci-après.

TABLEAU!
SOs- SOz -OOC OMe O p ~ OMe ~O
_OsS O O
O
OMe S03 m (I.1 ) Numro m ~a~D Masse d'exemple exprimentale 2 5 + 30 3605 compos 34 3 6 + 29 4297 compos 35 4 7 + 27 4993 compos 36 5 8 + 34 5688 2o compos 37 fi 9 + 27 6381 compos 38 WO 97!47659 PCT/FR97I01048 Méthyi O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-~-D-giucopyranosyi-uronique)-( 1-4)-[O-(2, 3,6-tri-O-suifo-a-D-glucopyranosyi )-( 1-4)-O-{acide 2,3-di-O-méthyl-(3-D-glucopyranosyiuronique)-{1-4)~4-2,3,6-tri-O-suifo-a-D-giucopyranoside, sel de sodium {39).
/S03- \ 5_ COO- O O O O OMe -03S O OMe O O
Me0 /

Le disaccharidique donneur de glycosyle COOMe O p c0 OBn OC(NH)CC13 LevO OMe Me0 OAc et le disaccharide accepteur de giycosyle COOMe O Ö ~O OBn OMe HO ~~~~~;/~~ e Me0 OBn sont préparés selon les méthodes décrites dans Westerduin et al., l3ioOrg. Med. Chem., 2 , 1994, 1267, puis combinés comme décrit lors de !a préparation de 34. Le décasaccharide résultant est traité selon fa méthode 4 pour donner 39.
[a.]p + 45 (c = 1, H20). 1 H RMN (D20) S des protons anomériques principaux : 5,53; 5,18; 4,65; 4,63 ppm.
En procédant selon l'EXEMPLE 7 et selon le SCHÉMA 1 ci-dessus, on , Prépare le composé 40 (EXEMPLE 8) décrit dans le TABLEAU II ci-après.

TABLEAU (I
~~JoS
COO- O O O O OMe ' S
-0sS O OMe O O
Me0 soi m (L'! ) Numro m [a]p ~ H RMN (D20) b d'exemple (ppm) des protons anomriques principaux 8 4 + 45 5,53; 5,13; 4,62; 4,60 ~ compos 40 s Méthyl O-(acide 3-O-méthyi-2,4-di-O-sulfo-a-L-idopyrano ~syl u roni que j-( 1-4j-[O-(3-O-méthyi-2,6-di-O-sulfo-ac-D-gtuco s pyranosyij-(1-4j-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-suifo -a-L-idopyranosyiuroniquej-( 1-4j]4-3-O-méthyl-2,6-di-O-suifo-a-D-glucopyranoside, sel de sodium (41 ).
Me Sp3-10 -OOC OMe O p Ö OMe ~O

O

Le synthon disaccharidique BnOOC OMe Me0 .O O OBn OMe OLev OBn O/
OBz (CCM, RF 0,54, 1:1 cyclohexanelEtOAc) est traité comme décrit pour 12 pour donner l'imidate donneur de glycosyie BnOOC OMe Me0 . 0 0 oBn o~tNH)cce3 OLev OBz OAc O
et l'accepteur BnOOC OMe Me0 O OBn OMe HO OBz OBn O/

[~H RMN {CDC13) 8 8,00-7,15 (m, 20H, 4Ph), 5,15 (d, 1H, H-1'), 4,57 (d, 1 H, H-1 ), 3,48; 3,47; 3,32 (3s, 3 OCH3)j.
' _ Ces trois synthons sont alors combinés comme il est décrit pour la préparation de 34. Le décasaccharide résultant est alors traité selon la ' s méthode 4 pour donner 41.
[ajp + 17 (c = 1, H20). 1 H RMN (D20) b des protons anomériques principaux : 5,36; 5,34; 5,13; 5,11; 5,09; 5,05 ppm.
En procédant selon l'EXEMPLE 9 et selon le SCHEMA 1 ci-dessus on to prépare les composés 42 et 43 (EXEMPLE 10 et 11 ) décrits dans le TABLEAU 111 ci-après.
TABLEAU III
15 Me SOs -OOC OMe O p ~ OMe ~O
-0zS O O
O

SO~
(L2) Numro m 1 H RMN (D20) b (ppm) de l'exemple [600 MHzj des protons anomriques principaux 10 4 5,20; 5,17; 5,12, 5,03;

compos 42 4, 90 11 6 5,20; 4,99; 4,95;
4,90 compos 43 WO 97/47659 PCTlTR97/01048 Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-(i-D-glucopyranosy6uronique)-(1-4)-[O-(3-O-méthyl-Z,fi-di-O-sulfo-a-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-mëthyl-2-O-sulfo-(3-D-glucopyranosyluronique)-(1-4)j4-3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-glucopyranoside, sel de sodium (44).

COO- O p e0 Ö OMe -03S O ~ ~ O O O
Me0 ~
soi soi 5 Les synthons disaccharidiques COOBn O OMeO OBn OC(NH)CC13 LevO OAc Ö
Me0 OAc et COOBn O p e0 OBn OMe ~
HO ~~~~;~/~~c Me0 OAc sont préparés puis combinés comme décrit pour 34. Le décasaccharide obtenu traité selon fa méthode 4 donne 44:
[ajp + 25 (c = 0,2, H20). 1 H RMN (D20) & des protons anomériques principaux : 5,47; 5,07; 4,74; 4,71; 4,70 ppm.

Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-oc-L-idopyranosyduronique)-(1-4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-su(fo-oc-D-gtucopyranosyl}-{1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-oc-L-i dopyranosyi uro nique)-( 1-4)] 2-O-(2,3,6-tri-O-sutfo-oc -D-glucopyranosyi)-{1-4)-O-{acide 3-O-méthyl-2-O-sutfo-a-L-ido-pyranosyluronique}-{1-4}-3-D-méthyl-2,6-di-O-sutfo-oc-D-gtucopyrano-side, se! de sodium (45}.
_ ~~ \ô
OMe M~ ~ O 50' pp0 O O O O//r'~~ OMe OM\~OMe ~O '~~C~~ ~ ~~''~O
-0,5-O O ~ ~ O
~O ~ OMe O ~ O ~ O
SO - ~ SO . O /
SO - ' SO; ~ ~ SO
a $. S0; s Le donneur de gtycosyle 15 et l'accepteur de giycosyle BnOOC OMe Me0 O
O OBn OMe HO
OBz OBn O
combinés selon la méthode 3 donnent le tétrasaccharide OMe OAc OLev O BnOOC OMe O OMe OBn OMe O \ ~ O
BnOOC OMe OOAc OBn O Y OBnO
OBz Après coupure du groupe Lev (méthode '1 ) et réaction répétée avec le disaccharide donneur de giycosyle suivant, selon le principe décrit dans le 3o schéma 1, BnOOC OMe Me0 O
~O OBn OC(NH)CCtz OLev OBz OAc O

on obtient le précurseur complètement protégé de 45 qui est traité selon la méthode 4 pour donner 45.
1 H RMH (D20) b (ppm) [600 MHzJ des protons anomériques principaux : ' 5,35; 5,33; 5,30; 5,22; 5,21; 5,18; 5,15; 4,98.
En procédant selon l'EXEMPLE 13 et selon le SCHÉMA 1 ci-dessus â
partir des précurseurs oligosaccharidiques complètement protégés on prépare le composé 46 (EXEMPLE 14) décrits dans le TABLEAU 1V ci-après.
TABLEAU IV
s~~ oiso' s~' so;
OMe O M~ O O O -OOC OMe .pp0 O ~'/ O Me0 ~ OMe O ~O
.p~g p/~~ O O '~ Rome O o ~ o/~G~ O O
S0~ ~ \SO~- SO~ ~ ~ - $p3 1 ' m (L3) Numro de m 1 H RMH (D20) 8 l'exempte (ppm) [600 MHzJ des protons anomriques principaux 14 3 5,34; 5,32; 5,27; 5,22;

compos 48 5,14; 4,98 OsO; coo-oso;
O o ~~O ° î_ ° (I) OR ORZ " 0 COO- Rl O ~ OSO~ O\ Rz 1~1--~-~/O
ÖR OR
OSOj ~ OR
_ iI
OR
O C00" OR
O ' O
O
oR= (II) RIO OSOj ORz 0,' R

OR
OS~j OR n OSO

OR
O
(III) R~° OR
OR
OR
° (IV) OR ORi ~O
OR

Claims (25)

REVENDICATIONS

1. Polysaccharide de synthèse contenant de 8 à 24 unités monosaccharidiques formé par un enchainement de disaccharides constitués d'un acide uronique et d'un hexose, ledit polysaccharide étant caractérisé en ce que tous ses groupes hydroxyles sont éthérifiés avec un groupe (C1-C6)alkyle ou estérifiés sous la forme de groupe sulfo, chaque disaccharide étant au moins monoéthérifié ; ainsi que ses sels.

2. Sel constitué d'un anion et d'un cation, l'anion ayant pour formule :

dans laquelle - le trait ondulé désigne soit une liaison en dessous soit en dessus du plan du cycle pyranosique;
- R1, R6, R11 et R16 représentent un (C1-C6)alkyle ;
- R2, R3, R4, R5, R7, R8, R9, R10, R12, R13, R14, R15 et R17 représentent un (C1-C6)alkyle ou un groupe SO3-;
- m, n et p sont tels que la somme m + n + p est supérieure ou égale à 4 et inférieure ou égale à 12, un ou deux des trois pouvant représenter zéro;
le cation étant un cation monovalent pharmaceutiquement acceptable, ainsi que l'acide correspondant.

3. Sel selon la revendication 2 dans lequel le cation est choisi parmi les cations des métaux alcalins.

4. Sel selon la revendication 3, dans lequel les métaux alcalins sont le sodium ou le potassium.

5. Sel selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, dans lequel les alkyles sont des méthyles, ainsi que l'acide correspondant.

6. Sel selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, dans lequel n et p sont égaux à zéro, ainsi que l'acide correspondant.

7. Sel selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, dans lequel n et p sont égaux à zéro et m représente 4 à 10, ainsi que l'acide correspondant.

8. Sel selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, dans lequel n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à
10; un au moins des substituants R12, R13, R14 et R15 représente un groupe sulfate; R1, R16 et R17 étant tels que définis pour (I), ainsi que l'acide correspondant.

9. Sel selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, dans lequel n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à
10; deux au moins des substituants R12, R13, R14 et R15 représentent un groupe sulfate; R1, R16 et R17 étant tels que définis pour (I), ainsi que l'acide correspondant,

10. Sel selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, dans lequel n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à
10; trois au moins des substituants R12, R13, R14 et R15 représentent un groupe sulfate; R1, R16 et R17 étant tels que définis pour (I), ainsi que l'acide correspondant.

11. Sel selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, dont l'anion a pour formule (I.1):
dans laquelle m représente 4 à 10; R1, R15, R16 et R17 sont tels que définis pour (I), chaque acide uronique étant soit un acide iduronique soit glucuronique, ainsi que l'acide correspondant.

12. Sel selon l'une quelconque des revendications 2 à 4 dont l'anion a pour formule (I.2):
dans laquelle m représente 4 à 10; R1, R15, R16 et R17 sont tels que définis pour (I), chaque acide atonique étant soit un acide iduronique soit glucuronique, ainsi que l'acide correspondant.

13. Sel selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, dont l'anion a pour formule (I.3):

dans laquelle m représente 2 ou 3, R2, R12, R13, R14, R15, R16 et R17 étant tels que définis pour (I), chaque acide uronique étant soit un acide iduronique soit glucuronique, ainsi que l'acide correspondant.

14. Sel selon la revendication 13, dans lequel R1 représente un méthyle, R13 en position 3 du glucose représente un méthyle, R12 en position 2 et R14 en position 6 du glucose représentant un SO3- et R16 en position 3 de l'unité iduronique ou glucuronique représente un méthyle, m étant égal à 2 ou 3.

15. Polysaccharide choisi parmi:

Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-(O-(2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O-méthyl-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]9 -2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyra-noside, sel de sodium;

Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O-méthyl-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]4 -2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyra-noside, sel de sodium;
Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O-méthyl-.alpha.-idopyranosyluronique)-(1-4)]5 -2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyra-noside, sel de sodium;
Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O-méthyl-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]6 -2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyra-noside, sel de sodium;
Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O-méthyl-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]7 -2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyra-noside, sel de sodium;
Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2.3-di-O-méthyl-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]8 -2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyra-noside, sel de sodium;
Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-.beta.-D-glucopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O-méthyl-.beta.-D-glucopyranosyluronique)-(1-4)]4 -2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranoside, sel de sodium;
Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-.beta.-D-glucopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O-méthyl-.beta.-D-glucopyranosyluronique)-(1-4)]3 -2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranoside, sel de sodium;

Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-a-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]4-3-D-méthyl-2,6-di-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranoside, sel de sodium;
Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]3-3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-.alpha.-O-glucopyranoside, sel de sodium;
Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O
méthyl-2-O-sulfo-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]5-3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-.alpha.-O-glucopyranoside, sel de sodium;
Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-.beta.-D-glucopyranosyluranique)-(1-4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-.beta.-D-glucopyranosyluronique)-(1-4)]4-3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranoside, sel de sodium;
Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-.alpha.-L-idopyranosyturonique)-(1-4)]2-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.
-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-.alpha.-L-idopyrano-syluronique)-(1-4)-3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranoside, sel de sodium; et Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulto-.alpha.-L-idopyranosyluranique)-(1-4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-.alpha.-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]3-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-.alpha.
-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-.alpha.-L-idopyrano-syluronique)-(1-4)-3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-.alpha.-D-glucopyranoside, sel de sodium.

16. Procédé de préparation du composé de formule (I) selon la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce que:

(a) on couple selon les méthodes classiques de la chimie des sucres un monosaccharide donneur de liaison glycosidique à un monosaccharide accepteur de liaison glycosidique pour obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type disaccharide complètement protégé de formule (A):

dans laquelle les substituants T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7 et z identiques ou différents sont choisis parmi les groupes protecteurs utilisés en chimie des sucres comme groupe protecteur permanent, semi-permanent ou temporaire, (b) on modifie chimiquement le disaccharide de formule (A) ci-dessus de façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B):

dans laquelle T2 à T7 et Z sont sels que définis ci-dessus pour (A) et X
représente un groupe activateur du carbone anomérique, puis (c) on modifie chimiquement le disaccharide de formule (A) ci-dessus de façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type disaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (C):

dans laquelle, T1 à T7 sont tels que définis ci-dessus pour (A), en éliminant sélectivement le groupe protecteur Z selon des méthodes classiques de la chimie des sucres, puis (d) on couple un disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B) obtenu ci-dessus et un disaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (C) obtenu ci-dessus de façon à obtenir un tétrasaccharide complètement protégé de formule (D) dans laquelle T1 à T7 et Z sont tels que définis ci-dessus pour (A) et T8, T9, T10, T11, T12 et T13 sont tels que définis pour T2 à T7 puis, (e) on modifie ensuite chimiquement le synthon saccharidique intermédiaire de type tétrasaccharide de formule (D) de façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type tétrasaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (E) dans lequel X a la même définition que pour (B) et T2 à T13 sont tels que définis pour (D) puis, (f) on déprotège ensuite sélectivement le tétrasaccharide de formule (D) de façon à obtenir un tétrasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (F):

dans laquelle T1 à T13 sont tels que définis précédemment pour (D) puis, (g) on couple le tétrasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (F) et un disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B) tel que ceux obtenus ci-dessus pour former un synthon intermédiaire de type hexasaccharide complètement protégé de formule (G):

dans laquelle T1 à T13 sont tels que définis précédemment pour (D) et T14 à T19 sont tels que définis pour T2 à T7 pour (B);
ou bien on couple le tétrasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (F) et un tétrasaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (E) de façon à obtenir un octasaccharide complètement protégé
de formule (H):

dans laquelle T1 à T19 et Z sont tels que définis précédemment et T20 à
T25 sont tels que définis pour T2 à T7 pour (B) puis, (h) on modifie chimiquement l'hexasaccharide de formule (G) ou l'octasaccharide de formule (H) obtenus ci-dessus de façon à obtenir un synthon intermédiaire de type hexasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (G) dans lequel Z représente l'hydrogène ou bien un octesaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (H) dans lequel Z représente l'hydrogène, (i) on répète les étapes de déprotection et de couplage précédentes jusqu'à l'obtention de l'oligosaccharide complètement protégé possédant la structure désirée, les synthons intermédiaires saccharidiques donneurs de glycosyle et accepteurs de glycosyle étant choisis en fonction de la structure finale pour obtenir ainsi le précurseur protégé du polysaccharide final désiré de formule (I), dans lequel la nature des substituants protecteurs détermine la position des groupes sulfates et alkyles sur le produit final (I), et (j) on procède à la déprotection des fonctions alcools qui doivent être sulfatées, en éliminant tous ou certains des substituants T1 à T25 qui protégeaient les fonctions au cours des étapes d'élaboration du squelette, puis, finalement (k) on procède à la sulfatation pour obtenir le composé de formule (I), ou un de ses sels.

17. Composition pharmaceutique destinée aux mammifères contenant comme principe actif un polysaccharide ou sel selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, sous forme de sel avec une base pharmaceutiquement acceptable ou sous forme acide, en association ou en mélange avec un excipient inerte, non toxique, pharmaceutiquement acceptable.

18. Composition pharmaceutique selon la revendication 17, sous forme d'unités de dosage, dans laquelle le principe actif est mélangé à au moins un excipient pharmaceutique.

19. Composition selon la revendication 18, dans laquelle chaque unité de dosage contient de 0,1 à 100 mg de principe actif.

20. Composition selon la revendication 19, dans laquelle chaque unité de dosage contient de 0,5 à 50 mg de principe actif.

21. Composition pharmaceutique destinée aux mammifères contenant comme principe actif un polysaccharide ou sel selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, en association avec un autre principe actif antithrombotique, anticoagulant, antiagrégant plaquettaire ou antagoniste du complexe de la glyco-protéine IIb/IIIa.

22. Composition pharmaceutique selon la revendication 21, caractérisée en ce que le principe actif associé est le dipyridamole, l'aspirine*, la ticlopidine ou le clorpidogrel.

23. Utilisation des polysaccharide et sel définis selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, pour la préparation d'un médicament destiné aux mammifères utile dans les pathologies nécessitant un anticoagulant ou un antithrombotique.

24. Utilisation des polysaccharide et sel définis selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, pour la préparation d'un médicament destiné aux mammifères utile pour l'inhibition des facteurs de croissance se traduisant par une inhibition de la prolifération cellulaire des cellules musculaires lisses.

25. Utilisation des polysaccharide et sel définis selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, pour la préparation d'un médicament destiné aux mammifères, présentant des propriétés antivirales, hypolipi-démiantes, antiradicaux libres, antimétastasiques, antiangiogéniques, anti-inflammatoires.