FR2749849A1 - Polysaccharides synthetiques, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant - Google Patents

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Abstract

L'invention concerne des polysaccharides de synthèse contenant de 8 à 24 unités monosaccharidiques formées par un enchaînement de disaccharides constitués d'un acide uronique et d'un hexose, ledit polysaccharide étant caractérisé en ce que tous ses groupes hydroxyles sont éthérifiés avec un groupe (C1 -C6 )alkyle ou estérifiés sous la forme de groupe sulfo, chaque disaccharide étant au moins monoéthérifié; ainsi que leurs sels.

Description

La présente invention concerne de nouveaux polysaccharides de synthèse possédant les activités pharmacologiques de I'héparine mais exercées de façon sélective.
L'héparine appartient à la famille des glycosaminoglycanes (GAG), qui sont des polysaccharides sulfatés naturels hétérogènes.
Les préparations d'héparine sont des mélanges de chaînes comprenant un nombre d'unités monosaccharidiques allant de 10 jusqu'à 100 et plus. A cette hétérogénéité de taille s'ajoute une hétérogénéité de structure, au niveau de la nature des monosaccharides constitutifs, mais également au niveau des substituants qu'ils portent (L. Rodén in: The Biochemistry of
Glycoproteins and Glycosaminoglycans, Ed by Lennarz W.J., Plenum Press, 1980, New York and London, 267-371).
Chaque famille de GAG naturel possède en général un éventail d'activités pharmacologiques. Toutes sont réunies dans les préparations que l'on peut obtenir à partir de produits naturels. Ainsi, par exemple, les héparines et les héparanes sulfate possèdent une activité antithrombotique qui est liée à l'action simultanée sur plusieurs facteurs de la coagulation. Ils exercent également une action sur de nombreux facteurs de croissance, le plus notoire étant le facteur de croissance basique des fibroblastes (bFGF, basic fibroblast growth factor).
Cette action se manifeste par un effet sur la prolifération des cellules musculaires lisses et sur l'angiogénèse. L'héparine exerce en outre des effets sur l'autoimmunité, l'inflammation et la formation de métastases tumorales.
L'héparine catalyse notamment l'inhibition de deux enzymes qui interviennent dans la cascade de la coagulation du sang à savoir, le facteur
Xa et le facteur lla (ou thrombine). Les préparations d'héparines de bas poids moléculaire (HBPM), contiennent des chaînes formées de 4 à 30 monosaccharides et ont la propriété d'agir plus sélectivement sur le facteur
Xa que sur la thrombine.
Certains oligosaccharides de synthèse notamment ceux décrits dans
EP 84999 ont la propriété d'inhiber sélectivement, via l'antithrombine III, le facteur Xa sans aucune activité sur la thrombine.
Le brevet US 5,378,829 décrit des dérivés glycosaminoglycanoïdes sulfatés du type héparine ou héparane sulfate ayant une activité antithrombotique et inhibitrice de la prolifération des cellules musculaires lisses. Ce document ne décrit cependant que des oligosaccharides ayant au maximum 7 unités monosaccharidiques.
Au cours des années précédentes, la tendance dans le domaine des
GAGS était de rechercher notamment des oligosaccharides de masse moléculaire la plus faible possible, mais il a été par la suite observé que plusieurs des activités biologiques sus-mentionnées sont soutenues par des fragments ayant au moins 8 unités saccharidiques. Par exemple, I'activité inhibitrice de la thrombine nécessiterait des fragments contenant au moins entre 14 et 20 unités saccharidiques tandis que pour l'activation du bFGF au moins 12 unités saccharidiques seraient nécessaires (M. Maccarana et al., J.
Biol. Chem., 1993, 268, 23998-23905 ; J.E. Turnbull et al., J. Biol. Chem., 1992, 267, 10337-10341).
Une synthèse de polysaccharides de cette taille présente de grandes difficultés et, en fait, elle n'a jamais été réalisée.
Dans le but de retrouver l'activité de produits de longue taille, il a été proposé de relier deux oligosaccharides de petite taille par une entité n' intervenant pas dans I' activité biologique. EP 649854 décrit de tels dérivés possédant une activité antithrombotique. De façon analogue, WO 95 05182 décrit des conjugués actifs sur la régulation du bFGF.
Ces produits présentent en effet une activité sélective sur les différents facteurs de la coagulation et des propriétés inhibitrices des facteurs de croissance se traduisant par une inhibition de la prolifération cellulaire.
II a maintenant été trouvé que des fragments de GAGs (glycosaminoglycanes) contenant 8 ou plus unités saccharidiques et pouvant être synthétisés de façon relativement simple possèdent des activités biologiques qui sont non seulement sélectives mais aussi quantativement élevées.
Plus particulièrement, il a été trouvé qu'il est possible de moduler quantitativement l'activité desdits polysaccharides selon la longueur des chaines et la distribution des substituants fonctionnels.
Ainsi, par exemple, il a été trouvé de façon surprenante que des décasaccharides sulfatés et alkylés peuvent être des puissants antithrombotiques ou des inhibiteurs sélectifs du bFGF selon la disposition des groupes alkyles et des groupes sulfates dans l'enchainement décaccharidiques et qu'il est également possible d'obtenir des inhibiteurs sélectifs du facteur Xa par exemple avec un tétradécasaccharide ou des produits ayant une activité du type héparine, à savoir une activité aussi bien sur le facteur Xa que sur la thrombine, par exemple avec un hexadécasaccharide.
De façon plus générale, il a été trouvé que par réalisation de séquences disaccharidiques formées par un acide uronique et par un hexose de façon à constituer des polysaccharides de 8 à 24 unités monosaccharidiques dont les groupes hydroxyles sont tous substitués par des groupes alkyles ou par des groupes sulfates il est possible de moduler avec précision les activités du type GAGs pour obtenir des produits très actifs et sélectifs.
Ainsi, selon un de ses aspects, la présente invention concerne un nouveau polysaccharide de synthèse contenant de 8 à 24 unités monosaccharidiques formé par un enchaînement de disaccharides constitués d'un acide uronique et d'un hexose, ledit polysaccharide étant caractérisé en ce que tous ses groupes hydroxyles sont éthérifiés avec un groupe (C1 -C6)alkyle ou estérifiés sous la forme de groupe sulfo, chaque disaccharide étant au moins monoéthérifié ; ainsi que ses sels, notamment pharmaceutiquement acceptables.
De préférence, l'invention se rapporte à un polysaccharide tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que tous ses groupes hydroxyle sont éthérifiés par un groupe méthyle ou estérifiés sous la forme de groupe sulfo, chaque disaccharide étant au moins monoéthérifié; et à ses sels, notamment pharmaceutiquement acceptables.
Des produits avantageux sont alkylés, de préférence méthylés, sur les hydroxyles en position 2 et 3 de l'acide uronique, ledit acide uronique étant de préférence l'acide glucuronique ou l'acide iduronique et trisulfatés sur hexose, ledit hexose étant de préférence le glucose. Un autre groupe de produits préférés est constitué des polysaccharides qui sont alkylés, de préférence méthylés, sur les hydroxyles en position 3 de l'acide uronique ledit acide étant de préférence l'acide glucuronique ou l'acide iduronique et alkylés, de préférence méthylés, sur l'hydroxyle en position 3 du glucose.
Les produits de la présente invention sont donc de préférence constitués de séquences régulières de disaccharides répétés à leur tour formés d'acide glucuronique et de glucose ou d'acide iduronique et de glucose représentés par la formule suivante:
Figure img00040001
dans laquelle
- le trait ondulé désigne soit une liaison en dessous soit en dessus du plan du cycle pyranosique;
- R1, R6, R11 et R16 représentent un (C1-C6)alkyle;
- R2, R3, R4, R5, R7, Rg, Rg, R10, R12 R13, R14, R15 et R17 représentent un (C1-C6)alkyle ou un groupe SOU';
- m, n et p sont tels que la somme m + n + p est supérieure ou égale à 4 et inférieure ou égale à 12, un ou deux des trois pouvant représenter zéro, ou un de leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables.
On notera que de façon générale dans la présente description, un trait ondulé désigne soit une liaison en dessous soit en dessus du plan du cycle pyranosique.
Dans la formule générale (I) et dans la présente description, les structures (a) ou (b) ci-dessous représentent un squelette de glucose dans la conformation 4C1. Les structures (c) ou (d) ci-dessous représentent un squelette d'acide uronique qui est soit de l'acide L-iduronique (représenté ici dans sa conformation 1coq) soit de l'acide D-glucuronique (représenté ici dans sa conformation 4C1).
Sur ces structures (a), (b), (c) et (d) les substituants Rx ont les définitions attribuées pour R1 à R17 dans (I).
Ainsi, les structures (a) et (b) sont la même représentation d'un squelette de glucose dans la conformation 4C1.
Figure img00050001
Les structures (c) et (d) représentent un squelette d'acide uronique qui est soit de l'acide L-iduronique (représenté ici dans sa conformation 1 C4) soit de l'acide D-glucuronique (représenté ici dans sa conformation 4C1).
Figure img00050002
Lorsqu'il s'agit d'acide L-iduronique (c) et (d) sont les conformères suivants:
Figure img00050003
Lorsqu'il s'agit d'acide D-glucuronique (c) et (d) sont les conformères suivants:
Figure img00050004
Dans la présente description, il a été choisi de représenter les conformations 1 C4 pour l'acide-L-iduronique, 4C1 pour l'acide Dglucuronique, mais il est notoire que la conformation en solution des unités monosaccharides est fluctuante.
Les disaccharides DB1, DB2 et DB3 représentent des disaccharides identiques ou différents.
Des composés préférés selon l'invention sont ceux de formule (I) dans lesquels n et p sont égaux à zéro et m représente 4 à 10 et leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables.
Egalement avantageux sont les composés de formule (I) dans lesquels n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à 10 ; un au moins des substituants
R12, R13, R14 et R15 représente un groupe sulfate ; R1, R16 et R17 étant tels que définis pour (I) ainsi que leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables.
Egalement avantageux sont les composés de formule (I) dans lesquels n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à 10; deux au moins des substituants
R12, R13, R14 et R15 représentent un groupe sulfate; R1, R16 et R17 étant tels que définis pour (I) ainsi que leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables.
Egalement avantageux sont les composés de formule (I) dans lesquels n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à 10; trois au moins des substituants
R12, R13, R14 et R15 représentent un groupe sulfate; R1, R16 et R17 étant tels que définis pour (I), ainsi que leurs sels notamment pharmaceutiquement acceptables.
Egalement avantageux sont les composés de formule (I) dans lesquels n et p sont égaux à zéro, m représente 4 à 10 ; les groupes R12, R13, R14 et Rî s représentent tous un groupe sulfate ; R1, R1 6 et R1 7 étant tels que définis pour (I) et leurs sels, notamment pharmaceutiquement acceptables.
D'autres composés avantageux sont les sels constitués d'un anion et d'un cation, l'anion répondant à la formule (1.1):
Figure img00070001
dans laquelle m représente 4 à 10 ; R1, R15, R16 et R17 sont tels que définis pour (I), chaque acide uronique étant soit un acide iduronique soit glucuronique, et, le cation étant un cation monovalent pharmaceutiquement acceptable, ainsi que leurs acides correspondants.
Les sels constitués d'un anion et d'un cation où l'an ion répond à la formule (I.2):
Figure img00070002
dans laquelle m représente 4 à 10 ; R1, R15, R16 et R17 sont tels que définis pour (I), chaque acide uronique étant soit un acide iduronique soit glucuronique et où le cation est un cation monovalent pharmaceutiquement acceptable, ainsi que leurs acides correspondants, sont également avantageux.
Dans les formules (I), (I.1), (I.2) ci-dessus, les groupes alkyle éthérifiants sont de préférence des méthyles.
Les sels constitués d'un anion et d'un cation, où l'anion a pour formule (I.3)
Figure img00080001
dans laquelle m représente 2 ou 3, R1, R12 R13, R14, R15, R16 et R17 étant tels que définis pour (I), chaque acide uronique étant soit un acide iduronique soit glucuronique et où le cation est un cation monovalent pharmaceutiquement acceptable, ainsi que leurs acides correspondants, sont particulièrement avantageux.
Parmi ces composés (I.3), on préfère tout particulièrement ceux pour lesquels R1 représente un méthyle, R13 en position 3 du glucose représente un méthyle, R12 en position 2 et R14 en position 6 du glucose représentent un 803 et R16 en position 3 de l'unité iduronique ou glucuronique représente un méthyle, m étant égal à-2 ou 3.
Les sels préférés de l'invention sont ceux dont le cation est choisi parmi les cations des métaux alcalins et plus préférablement encore ceux dont le cation est Na+ ou K+.
Particulièrement préférés sont les polysaccharides suivants:
1) Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-α-L-idopyranosyluronique)- (1 -4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1 4)-O-(acîde 2,3-di-O méthyl-α-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]g-2,3,6-tri-O-sulfo-α-D- glucopyranoside, sel de sodium.
2) Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl4-O-sulfo < -L-idopyranosyluronique)- (1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]4-2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D- glucopyranoside, sel de sodium.
3) Méthyl O-(acide 2,3-di-0-méthyl4-0-sulfo ac-L-idopyranosyluronique)- (1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]5-2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D- glucopyranoside, sel de sodium.
4) Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-&alpha;-L-idopyranosyluronique)- (1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]6-2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D- glucopyranoside, sel de sodium.
5) Méthyl O-(acide 2,3-di-0-méthyl4-0-sulfo < -L-idopyranosyluronique)- (14)-[0-(2,3,6-tri-0-sulfosc-D-glucopyranosyl)-(1-4)-0-(acide 2,3-di-0 méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]7-2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D- glucopyranoside, sel de sodium.
6) Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-&alpha;-L-idopyranosyluronique)- (1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]8-2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D- glucopyranoside, sel de sodium.
7) Méthyl Oxacide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-ss-D- glucopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-
O-(acide 2,3-di-O-méthyl-ss-D-glucopyranosyluronique)-(1-4)]4-2,3,6-tri-O sulfo--D-glucopyranoside, sel de sodium.
8) Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-ss-D- glucopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-
O-(acide 2,3-di-O-méthyl-ss-D-glucopyranosyluronique)-(1-4)]3-2,3,6-tri-O sulfo-cr-D-glucopyranoside, sel de sodium.
9) Méthyl O-(acide 3-0-méthyl-2,4-di-0-sulfo < -L-idopyranosyluronique)- (1-4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O méthyl-2-O-sulfo-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]4-3-O-méthyl-2,6-di-O- sulflo-&alpha;-D-glucopyranoside, sel de sodium.
10) Méthyl O-(acide 3-0-méthyl-2,4-di-0-sulfo-a-L- idopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-Dglucopyranosyl)-(l -4)-O-(acide 3-O-méthyi-2-O-sulfo-a-L- idopyranosyluronique)-( 1 -4)J3-3-O-méthyl-2, 6-di-O-sulfo-D- glucopyranoside, sel de sodium.
11) Méthyl O-(acide 3-0-méthyl-2,4-di-0-sulfo-a-L- idopyranosyluronique)-(1 -4)-[0-(3-0-méthyl-2,6-di-O-sulfo-a-Dglucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-&alpha;-L- idopyranosyluronique)-(1 -4)15-3-0-méthyl-2,6-di-O-sulfo-a-D- glucopyranoside, sel de sodium.
12) Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-slufo-ss-D-glucopyranosyl- uronique)-(1 -4)-[0-(3-0-méthyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-g lucopyranosyl)-(l -4)-0 (acide 3-O-méthyl-2-O-su Ifo-P-D-g lucopyranosyluronic acid)-(14)]4-3-0- méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranoside sel de sodium.
13) Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-&alpha;-L- idopyranosyluronique)-(1-4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D- glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-&alpha;-L- idopyranosyluronique)-(1 -4)]2-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-
O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-3-O-méthyl- 2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranoside, sel de sodium.
14) Méthyl O-(acide 3-0-méthyl-2,4-di-0-sulfo-a-L- idopyranosyluronique)-(1 -4)-[0-(3-0-méthyl-2,6-di-O-sulfo-a-Dglucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-&alpha;-L- idopyranosyluronique)-(1 -4)]3-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-
O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-3-O-méthyl- 2,6-di-O-sulfoix-D-glucopyranoside, sel de sodium.
La présente invention concerne également un procédé pour la préparation des composés de formule (I) caractérisé en ce que:
(a) on couple selon les méthodes classiques de la chimie des sucres un monosaccharide donneur de liaison glycosidique à un monosaccharide accepteur de liaison glycosidique pour obtenir après les modifications chimiques bien connues de l'homme du métier un synthon saccharidique intermédiaire de type disaccharide complètement protégé de formule (A)
Figure img00110001
dans laquelle les substituants T1, T2, T3, T4, Tg, T6, T7, et Z identiques ou différents sont choisis parmi les groupes protecteurs utilisés en chimie des sucres comme groupe protecteur permanent, semi-permanent ou temporaire,
(b) on modifie chimiquement le disaccharide de formule (A) ci-dessus de façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B):
Figure img00110002
dans laquelle T2 à T7 et Z sont tels que définis ci-dessus pour (A) et X représente un groupe activateur du carbone anomérique, tel qu'un imidate, un thioglycoside, un pentényl glycoside, un xanthate, un phosphite, un halogénure ou tout autre groupement bien connu pour activer le carbone anomérique, puis
(c) on modifie chimiquement le disaccharide de formule (A) ci-dessus de façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type disaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (C):
Figure img00120001
dans laquelle T1 à T7 sont tels que définis ci-dessus pour (A), en éliminant sélectivement le groupe protecteur Z selon des méthodes bien connue de l'homme de l'art, puis
(d) on couple un disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B) obtenu ci-dessus et un disaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (C) obtenu ci-dessus de façon à obtenir un tétrasaccharide complètement protégé de formule (D):
Figure img00120002
dans laquelle Ti à T7 et Z sont tels que définis ci-dessus pour (A) et Tg, Tg, T10, T11, T1 2 et T1 3 sont tels que définis pour T2 à T7 puis,
(e) on modifie ensuite chimiquement le tétrasaccharide de formule (D) de façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type tétrasaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (E):
Figure img00130001
dans lequel X a la même définition que pour (B) et T2 à T13 sont tels que définis pour (D) puis,
(f) on déprotège ensuite sélectivement le tétrasaccharide de formule (D) de façon à obtenir un tétrasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (F):
Figure img00130002

dans laquelle T1 à T13 sont tels que définis précédemment pour (D) puis,
(g) on couple le tétrasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (F) et un disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B) tel que ceux obtenus ci-dessus pour former un synthon saccharidique intermédiaire de type hexasaccharide complètement protégé de formule (G):
Figure img00130003
dans laquelle T1 à T13 sont tels que définis précédemment pour (D) et
T14 à T19 sont tels que définis pour T2 à T7 pour (B),
ou bien on couple le tétrasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (F) et un tétrasaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (E) de façon à obtenir un octasaccharide complètement protégé de formule (H):
Figure img00140001
dans laquelle T1 à T19 et Z sont tels que définis précédemment et T20 à
T25 sont tels que définis pour T2 à T7 pour (B) puis,
(h) on modifie chimiquement l'hexasaccharide de formule (G) ou l'octasaccharide de formule (H) obtenus ci-dessus de façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type hexasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (G) dans lequel Z représente l'hydrogène ou bien un octasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (H) dans lequel Z représente l'hydrogène,
(i) on répète les étapes de déprotection et de couplage précédentes jusqu'à l'obtention de l'oîigosaccharide complètement protégé possédant la structure désirée, les synthons saccharidiques intermédiaires donneurs de glycosyle et accepteur de glycosyle étant choisis en fonction de la structure finale pour obtenir ainsi le précurseur protégé du polysaccharide final désiré de formule (I), dans lequel la nature des groupes protecteurs Ti détermine la position des groupes sulfates et alkyles sur le produit final (I), et
t) on procède à la déprotection des fonctions alcools qui doivent être sulfatées, et acide carboxyliques, en éliminant les groupes protecteurs Ti qui protégeaient ces fonctions au cours des étapes d'élaboration du squelette, puis, finalement
(k) on procède à la sulfatation pour obtenir les composés (I), ou un de leurs sels.
Le procédé décrit ci-dessus est le procédé préféré de l'invention.
Toutefois, les composés de formule (I) peuvent être préparés par d'autres méthodes connues de la chimie des sucres décrites par exemple dans
Monosaccharides, Their chemistry and their roles in natural products, P.M.
Collins et R.J. Ferrer, J. Wiley & sons, 1995 et dans G.J. Boons,
Tetrahedron, 1996, 52, 1095-1121.
En variante, les composés de formule (l) peuvent être préparés selon le procédé décrit dans M. Dreef, XVlle Symposium sur les carbohydrates,
Ottawa, 1-22 juillet 1994, Abstract D 2.5.
Par groupements semi-permanents, on entend les groupements éliminables en premier lieu après les réactions de glycosylation lorsque le squelette glucidique comporte le nombre de motifs désirés, sans enlèvement ou altération des autres groupes présents, permettant alors l'introduction de groupements fonctionnels souhaités aux positions qu'ils occupent.
Les groupements permanents sont des groupements capables de maintenir la protection des radicaux -OH durant l'introduction de groupements fonctionnels à la place des groupements semi-permanents.
Ces groupements sont choisis parmi ceux compatibles avec les groupes fonctionnels introduits après élimination des groupes semi-permanents. Il s'agit, en outre, de groupements inertes vis-à-vis des réactions effectuées pour la mise en place de ces groupes fonctionnels et qui sont éliminables sans que ces groupements fonctionnels ne soient altérés.
Selon l'invention, les groupes permanents sont les groupes alkyle en C1 - C6.
Comme exemple de groupe semi-permanent et/ou temporaire on peut citer les groupes benzyle et acétate.
Les substituants en position 3 des motifs uroniques du composé cible peuvent être déjà présents dans les synthons de départ de formule (A), ainsi que le substituant R1.
Dans le procédé ci-dessus, les substituants T1, T6, T12, T18 et T24 ont la même définition que R1, R6, R11 et R16 dans la formule (I) c'est à dire qu'ils représentent un (C1-Cg)alkyle.
Les groupes protecteurs utilisés dans le procédé de préparations des composés (I) sont ceux couramment utilisés dans la chimie des sucres par exemple dans Protective Groups in Organic Synthesis, TW Greene, John
Wiley & sons, New-York, 1981.
Les groupes protecteurs sont avantageusement choisis par exemple parmi les groupes acétyles, halogénométhyles, benzoyles, levulinyles, benzyles, benzyles substitués, trityles éventuellement substitués, tétrahydropyranyles, allyles, pentenyles, tert-butyidiméthylsilyles (tBDMS) ou triméthylsilyléthyles (...).
Les groupes activateurs sont ceux classiquement utilisés en chimie des sucres selon par exemple G.J.Boons, Tetrahedron, 1996, 52, 1095-1121. Ces groupes activateurs sont choisis par exemple parmi les imidates, les thioglycosides, les penténylglycosides, les xanthates, les phosphites ou les halogénures.
Le procédé décrit ci-dessus permet d'obtenir les composés de l'invention sous forme de sels. Pour obtenir les acides correspondants, les composés de l'invention sous forme de sels, sont mis en contact avec une résine échangeuse de cations sous forme acide.
Les composés de l'invention sous forme d'acides peuvent être ensuite neutralisés par une base pour obtenir un sel souhaité.
Pour la préparation des sels des composés de formule (I), on peut utiliser toute base minérale ou organique, donnant avec les composés de formule (I), des sels pharmaceutiquement acceptables.
On utilise de manière préférentielle comme base l'hydroxyde de sodium, de potassium, de calcium ou de magnésium. Les sels de sodium et de calcium des composés de formule (I), sont les sels préférés.
Dans l'étape (a) du procédé, les groupes protecteurs utilisés sont ceux habituellement utilisés par l'homme du métier en chimie des sucres par exemple selon EP 084999 ou encore selon Protective Groups in Organic
Synthesis, TW Greene, J.Wiley & sons, 1995.
Les groupes protecteurs Z, protégeant la position 4 de l'extrémité terminale non-réductrice, et T1, protégeant la position 1 de l'unité terminale réductrice, sont éliminables de façon sélective pour permettre la fonctionalisation des positions correspondantes du disaccharide au cours des étapes suivantes de la synthèse. La nature des autres groupements protecteurs T2 à T8 est choisie en tenant compte des fonctions alcool devant être sulfatées dans le produit final. Une position porteuse d'un groupe alkyle dans le produit final est protégée par ce groupe dès le départ de la synthèse, alors qu'une position devant être sulfatée est protégée par un groupement protecteur temporaire tels que aralkyle (benzyle ou benzyle substitué), esters (acétates, benzoates). La position et la nature des substituants Ti déterminent donc dans le produit final le profil de sulfatation du fragment disaccharidique issu de (A). On peut obtenir une grande variété de disaccharides du type de ceux de formule (A). La préparation des disaccharides de formule (A) est réalisée essentiellement comme décrit dans la demande EP 90201006 ou encore dans la publication C.A.A. van Boeckel et M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1993, 32, 1671-1690 ou encore selon G.J. Boons Tetrahedron, cité précédemment.
Selon l'étape (b), on peut lorsque T1 représente un alkyle, utiliser une réaction d'acétolyse dans l'anhydride acétique, qui sert alors de solvant et de réactif, en présence d'un acide fort tel que l'acide sulfurique ou l'acide trifluoroacétique pour libérer sélectivement le groupement protecteur de la position anomérique. Lorsque T1 représente un ester on peut éliminer de façon sélective cet ester en utilisant par exemple la benzylamine et un solvant aprotique tel que l'éther diéthylique ou le dichlorométhane, ou bien encore la
N-méthylmorpholine dans le tétrahydrofurane. Lorsque T1 est un groupe allyle on peut l'isomériser en vinyle et procéder ensuite à une hydrolyse acide douce de l'éther vinylique par exemple en présence de chlorure mercurique dans une solution acétonique. Par les méthodes ci-dessus on obtient un composé hydroxylé qui est ensuite transformé en composé (B) par exemple activateur connu du donneur de glycosyle X par exemple le triflate de triméthylsilyle ou TMS ou le triflate de teftbutyldiméthylsilyle ou TBDMS ou encore le trifluorure de bore dans l'éther diéthylique par exemple lorsqu'il s'agit d'un imidate, ou bien le système N-iodosuccinimide ou NIS, acide triflique lorsqu'il s'agit d'un thioglycoside ou tout autre système connu pour activer X selon les références précédemment citées. Les solvants utilisés pour la réaction sont de façon préférée le dichlorométhane, le dichloroéthane, le chloroforme, le chlorobenzène, l'éther diéthylique, le toluène1 le benzène on opère dans des conditions anhydre, et généralement à basse température entre -70 et 0 C. On peut également opérer à température ambiante.
Pour l'étape (e) on procède essentiellement comme décrit dans l'étape (b) à partir des tétrasaccharides obtenus selon l'étape (d).
Pour l'étape (f) on procède comme décrit en (c) pour déprotéger sélectivement les tétrasaccharides obtenus selon l'étape (d), et on obtient les tétrasaccharides de formule (F).
Pour l'étape (g) on procède comme décrit dans l'étape (d), avantageusement on sépare les produits de la réaction de formule (G) au moyen d'une chromatographie par perméation sur gel.
Pour l'étape (h) on procède essentiellement comme décrit dans l'étape (b) à partir des hexasaccharides ou des octasaccharides de formule (H) obtenus selon l'étape (g).
On répète les étapes de déprotection et de couplage précédentes jusqu'à l'obtention de l'oligosaccharide complètement protégé possédant la structure désirée, les synthons saccharidiques intermédiaires donneurs de glycosyle et accepteur de glycosyle étant choisis en fonction de la structure finale pour obtenir ainsi le précurseur protégé du polysaccharide final désiré de formule (I), dans lequel la nature des groupes protecteurs Ti détermine la position des groupes sulfates et alkyles sur le produit final (I).
On élimine ensuite selon l'étape (j), par saponification avec de l'hydroxyde de sodium ou de l'hydroxyde de lithium et/ou par hydrogénation catalytique par exemple en présence de palladium sur charbon, les groupements protecteurs des fonctions alcools qui doivent être sulfatées.
Selon l'étape (k) on procède à la sulfatation à l'aide d'un agent sulfatant tel qu' un complexe SO3-amine, par exemple le complexe S03- pyridine, ou à l'aide d'acide chlorosulfonique dans un solvant aprotique tel que le diméthylformamide de préférence à une température comprise entre 0 C et 100 C pour obtenir les composés (I) qui sont éventuellement purifiés par chromatographie par perméation sur gel en utilisant l'eau ou une solution de chlorure de sodium comme éluant.
Les composés (I) ainsi obtenus peuvent être éventuellement salifiés.
Les composés de la formule (I) ci-dessus comprennent également ceux dans lesquels un ou plusieurs atomes d'hydrogène ou de carbone ont été remplacés par leur isotope radioactif par exemple le tritium ou le carbone-14.
De tels composés marqués sont utiles dans les travaux de recherche, de métabolisme ou de pharmacocinétique, dans les essais biochimiques en tant que ligands.
Les composés selon l'invention ont fait l'objet d' études biochimiques et pharmacologiques qui ont montré qu'ils possèdent des propriétés très interessantes.
Les composés de la présente invention qui se lient à l'AT III (KD < 200nM) ou à l'héparine co-facteur (HC ll) avec une affinité égale ou supérieure à celle de l'héparine, possèdent les propriétés anticoagulantes de l'héparine.
Ils inhibent de ce fait plusieurs facteurs de la coagulation tel que le facteur Xa (titre 2 10u anti-Xa/mg) ou la thrombine (Cl50 < 10 llg/ml) et sont à ce titre d'excellents agents antithrombotiques dans les modèles de thrombose veineuse et de thrombose artérielle.
L'affinité des composés de formule (I) pour l'AT III, a été déterminée par spectrofluorométrie, dans les conditions décrites par D. Atha et al. dans
Biochemistry, 1987, 26, 6454-6461. Les résultats des essais ont démontré que les composés de l'invention possèdent une très grande affinité pour l'AT III (KD compris entre 0.1p7M et 1 nM).
L'activité anti-facteur Xa (anti-Xa) des produits de l'invention a été évaluée à pH 8,4, selon la méthode décrite par Teien A.N. et Lie M., dans
Thrombosis Research, 1977, 10, 399-410, et il a été démontré que des composés de l'invention possèdent une activité anti-Xa égale ou supérieure à celle des héparinoïdes de synthèse déjà connus, notamment est supérieure à 50 u anti-Xa/mg.
Comme cela a été mentionné précédemment, dans la cascade de coagulation le facteur Xa active la prothrombine en thrombine, qui protéolyse le fibrinogène soluble avec libération de la fibrine insoluble, constituant principal du caillot sanguin. L'inhibition du facteur Xa constitue donc un moyen privilégié pour obtenir une activité anticoagulante et antithrombotique.
L'activité antithrombotique globale des produits de formule (I) a été évaluée par voie intraveineuse ou sous cutanée chez le rat, par un modèle de stase veineuse et induction par la thromboplastine, selon la méthode décrite par J. Reyers et al. dans Thrombosis Research, 1980,18, 669-674. La DE50 des composés de l'invention est au moins du même ordre ou inférieure à celle des autres héparinoïdes de synthèse déjà connus (DE50 comprises entre 5 et 5001lg/kg). Les composés de l'invention présentent donc une spécificité d'action et une activité anticoagulante et antithrombotique particulièrement intéressantes.
Les composés de la présente invention qui sont capables de moduler, notamment d'inhiber l'activité des facteurs de croissance en particulier du bFGF permettent d'inhiber la prolifération des cellules musculaires lisses vasculaires en culture (CML) avec un effet inhibiteur légèrement supérieur à celui de l'héparine, sur la croissance des cellules musculaires lisses.
L' action des composés de I' invention sur I' activité du bFGF a été évaluée par fixation du FGF iodé aux CML humaines en culture.
L'inhibition de la prolifération des CML a été évaluée in vitro sur des cultures de CML aortiques humaines (R. Ross, J. Cell. Biol., 1971,172-186).
Les composés de la présente invention qui possèdent également des propriétés antivirales, hypolipidémiantes, des propriétés antiradicaux libres par libération de la superoxyde dismutase, des propriétés antimétastasiques, antiangiogéniques, anti-inflammatoires, peuvent également agir sur la croissance et la différenciation des cellules neuronales en culture. Ils sont de ce fait utilisables dans toutes les pathologies où des perturbations de ces mécanismes biologiques interviennent.
Certains composés de l'invention exercent aussi une action protectrice et régénératrice sur les fibres nerveuses.
Grâce à leur activité biochimique et pharmaceutique sélective, les composés de la présente invention sont des médicaments très interessants.
Leur toxicité est parfaitement compatible avec cette utilisation. Ils sont également très stables et sont donc particulièrement appropriés pour constituer le principe actif de spécialités pharmaceutiques.
Pour leur activité sur les facteurs de la coagulation, les composés de l'invention peuvent être utilisés dans diverses pathologies liées à la coagulation et en particulier dans les troubles du système cardiovasculaire et cérébrovasculaire. Ils possèdent plus particulièrement une forte affinité pour l'antithrombine III ainsi qu' une importante activité anti-facteur Xa et antithrombine. L'inhibition de ces facteurs de la coagulation constitue donc un moyen privilègié pour obtenir une activité anticoagulante et antithrombotique.
lls peuvent être utilisés dans diverses pathologies consécutives à une modification de I' hémostasie du système de la coagulation apparaissant en particulier lors des troubles du système cardiovasculaire et cérébrovasculaire comme les troubles thromboemboliques associés à l'arthérosclérose et au diabète tels l'angine instable, l'attaque cérébrale, la resténose après angioplastie, l'endartérectomie, la pose de prothèses endovasculaires; ou les troubles thromboemboliques associés à la rethrombose après thrombolyse, à l'infarctus, à la démence d'origine ischémique, aux maladies artérielles périphériques, à l'hémodialyse, aux fibrillations auriculaires ou encore lors de l'utilisation de prothèses vasculaires de pontages aorto-coronariens. Ces produits peuvent par ailleurs être utilisés pour le traitement ou la prévention de pathologies thrombo-emboliques d' origine veineuse telles les emb.olies pulmonaires. Ils peuvent être utillisés ou pour prévenir ou pour traiter les complications thrombotiques apparaissant lors d'interventions chirurgicales ou conjointement à d'autres pathologies telles que cancer, infections bactériennes ou virales. Dans le cas de leur utilisation lors de la pose de prothèses, les composés de la présente invention peuvent recouvrir des prothèses et les rendre ainsi hémocompatibles. En particulier, ils peuvent être fixés à des prothèses intravasculaires (stents). Dans ce cas, ils peuvent éventuellement être modifiés chimiquement par introduction à l'extrémité non réductrice ou réductrice d'un bras approprié, comme décrit selon EP 649 854.
L' utilisation dans la resténose après angioplastie est favorisée par les propriétés inhibitrices de certains facteurs de croissance, tels que le bFGF.
Les composés de la présente invention peuvent également être utilisés comme adjuvant lors d' endartérectomie réalisée avec des ballonets poreux.
Les résultats obtenus lors de différentes études pharmacocinétiques effectuées avec les produits de l'invention, ont démontré qu'ils sont très bien absorbés par le tractus gastro-intestinal et que leur demi-vie est longue. Cela permet d'envisager lors de leurs utilisations en thérapeutique, la possibilité d'une administration unique journalière.
Ces études ont aussi démontré que les compositions pharmaceutiques préparées avec les produits de formule (I), objet de la présente invention, sont absorbés par le tractus digestif, sans que les quantités administrées ne soient prohibitives pour une utilisation en thérapeutique humaine. Les composés de l'invention sont donc utiles pour la préparation des compositions pharmaceutiques, administrables aussi bien par voie parentérale, que par voie orale.
Les composés de l'invention sont très stables et sont donc ainsi particulièrement appropriés pour constituer le principe actif de médicaments.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention a pour objet une composition pharmaceutique contenant, en tant que principe actif, un polysaccharide de synthèse contenant de 8 à 24 unités monosaccharidiques formé par un enchainement de disaccharides constitués d'un acide uronique et d' un hexose, ledit polysaccharide étant caractérisé en ce que tous ses groupes hydroxyles sont éthérifiés avec un groupe (C1 -C6)alkyle ou estérifiés sous la forme de groupe sulfo, chaque dissaccharide étant au moins monoéthérifié; ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables. Ledit polysaccharide de synthèse, principe actif des compositions de la présente invention est de préférence alkylé par un groupe méthyle.
L'invention concerne de préférence, des compositions pharmaceutiques contenant comme principe actif, un composé de formule (I), (I.1), (I.2), (I.3) ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, éventuellement en association avec un ou plusieurs excipients inertes et appropriés.
Dans chaque unité de dosage le principe actif est présent dans les quantités adaptées aux doses journalières envisagées. En général, chaque unité de dosage est convenablement ajustée selon le dosage et le type d' administration prévu, par exemple comprimés, gélules et similaires, sachets, ampoules, sirops et similaires, gouttes, patch transdermique ou transmucosal de façon à ce qu'une telle unité de dosage contienne de 0,1 à 100 mg de principe actif, de préférence 0,5 à 50 mg.
Les composés selon l'invention peuvent également être utilisés en association avec un autre principe actif utile pour la thérapeutique souhaitée tels que par exemple des antithrombotiques, des anticoagulants, des antiagrégants plaquettaires tels que par exemple le dipyridamole, l'aspirine, la ticlopidine, le clopidogrel ou des antagonistes du complexe de la glycoproteine IIbEIa.
Les compositions pharmaceutiques sont formulées pour l'administration aux mammifères, y compris l'homme, pour le traitement des maladies susdites.
Les compositions pharmaceutiques ainsi obtenues sont présentées avantageusement sous des formes diverses, telles que par exemple, des solutions injectables ou buvables, dragées, comprimés ou gélules. Les solutions injectables sont les formes pharmaceutiques préférées. Les compositions pharmaceutiques de la présente invention sont notamment utiles pour le traitement à titre préventif ou curatif, des troubles de la paroi vasculaire, tels que l'athérosclérose, les états d'hypercoagulabilité observés par exemple à la suite d'opérations chirurgicales de développement tumoraux ou de dérèglements de la coagulation, induits par des activateurs bactériens, viraux, ou enzymatiques. La posologie peut largement varier en fonction de l'âge, du poids et de l'état de santé du patient, de la nature et de la sévérité de l'affection, ainsi que de la voie d'administration. Cette posologie comprend l'administration d'une ou plusieurs doses d'environ 0,1 mg à 100 mg par jour, de préférence d'environ 0,5 à 50 mg par jour, par voie intramusculaire ou sous cutanée, en administrations discontinues ou à intervalles réguliers.
La présente invention a donc également pour objet les compositions pharmaceutiques qui contiennent à titre de principe actif un des composés cidessus éventuellement en association avec un autre principe actif. Ces compositions sont réalisées de façon à pouvoir être administrées par la voie digestive ou parentérale.
Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, transdermique, transmucosale, locale ou rectale, l'ingrédient actif peut être administré sous formes unitaires d'administration, en mélange avec des supports pharmaceutiques classiques, aux animaux et aux êtres humains. Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale et buccale, les formes d'administration sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, intranasale ou intraoculaire et les formes d'administration rectale.
Lorsque l'on prépare une composition solide sous forme de comprimés, on mélange l'ingrédient actif principal avec un véhicule pharmaceutique tel que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le talc, la gomme arabique ou analogues. On peut enrober les comprimés de saccharose ou d'autres matières appropriées ou encore on peut les traiter de telle sorte qu'ils aient une activité prolongée ou retardée et qu'ils libèrent d'une façon continue une quantité prédéterminée de principe actif.
On obtient une préparation en gélules en mélangeant l'ingrédient actif avec un diluant et en versant le mélange obtenu dans des gélules molles ou dures.
Une préparation sous forme de sirop ou d'élixir peut contenir l'ingrédient actif conjointement avec un édulcorant, acalorique de préférence, du méthylparaben et du propylparaben comme antiseptique, ainsi qu'un agent donnant du goût et un colorant approprié.
Les poudres ou les granules dispersibles dans l'eau peuvent contenir l'ingrédient actif en mélange avec des agents de dispersion ou des agents mouillants, ou des agents de mise en suspension, comme la polyvinylpyrrolidone, de même qu'avec des édulcorants ou des correcteurs du goût.
Pour une administration rectale, on recourt à des suppositoires qui sont préparés avec des liants fondant à la température rectale, par exemple du beurre de cacao ou des polyéthylèneglycols.
Pour une administration parentérale, intranasale ou intraoculaire, on utilise des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutions stériles et injectables qui contiennent des agents de dispersion et/ou des agents mouillants pharmacologiquement compatibles, par exemple le propylèneglycol ou le butylèneglycol.
Pour une administration transmucosale le principe actif peut être formulé en présence d'un promoteur tel qu'un sel biliaire, d'un polymère hydrophile tel que par exemple l'hydroxypropylcellulose, l'hydroxypropylméthylcellulose, l'hydroxyéthylcel lulose, l'éthylcel lulose, la carboxyméthylcellulose, le dextran, la polyvinylpyrrolidone, les pectines, les amidons, la gelatine, la caséine, les acides acryliques, les esters acryliques et leurs copolymères, les polymères ou copolymères de vinyle, les alcools vinyliques, les alcoxypolymères, les polymères d'oxyde de polyéthylène, les polyéthers ou leur mélange.
Le principe actif peut être formulé également sous forme de microcapsules, éventuellement avec un ou plusieurs supports ou additifs.
Le principe actif peut être également présenté sous forme de complexe avec une cyclodextrine, par exemple a, ss ou y cyclodextrine, 2-hydroxypropyl ss-cyclodextrine ou méthyl-ss-cyclodextrine.
Le principe actif peut également être libéré par un balonnet le contenant ou par un extenseur endovasculaire introduit dans les vaisseaux sanguins.
L' efficacité pharmacologique du principe actif n'est ainsi pas affectée.
L'administration par voie sous-cutanée est la voie préférée.
Les METHODES, les PREPARATIONS et les SCHEMAS suivants illustrent la synthèse des différents intermédiaires utiles à l'obtention des polysaccharides selon l'invention.
Les EXEMPLES ci-après illustrent également l'invention sans toutefois la limiter.
Pour une meilleure compréhension du procédé selon l'invention, l'obtention des composés (I) peut être schématisé comme suit:
SCHEMA 1
Figure img00260001
Stratégie employée pour la synthèse dioligomères du disaccharide méthyl 4-0-(2, 3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyluronate)-2 3, 6-tri-O-sulfo-a-D-gluco- pyranoside. En condensant les imidates (colonne de gauche, triangle blanc à l'extrémité réductrice) et les accepteurs de glycosyle (colonne du centre, triangle noir à l'extrémité non-réductrice) on obtient les oligosaccharides complètement protégés de la colonne de droite. Ces derniers sont ensuite déprotégés et fonctionnalisés pour livrer les composés de l'EXEMPLE 1 et du
TABLEAU I.
Tous les composés décrits ci-dessous sont homogènes en chromatographie sur couche mince (CCM) et ont des propriétés spectrales en accord avec leur structure. Les points de fusion sont déterminés dans des tubes capillaires à l'aide d'un appareil Mettler, et ne sont pas corrigés. Les pouvoirs rotatoires sont mesurés à l'aide d'un polarimètre Perkin-Elmer 241 à 22 + 3 C. La pureté des composés est vérifiée par CCM sur Silica Gel 608
F254 (E. Merck) avec détection par carbonisation en présence d'acide sulfurique. Sauf mention particulière les chromatographie sur colonne sont réalisées sur Silica Gel 60t), 40-63 or 63-200 pm (E. Merck). Les spectres de 1H RMN sont enregistrés sur des appareils Bruker AC 200, AM 250, AC 300 ou AM500, sur des solutions des produits dans CDCl3 ou D2O. Avant analyse dans D2O les échantillons sont passés au travers d'une colonne de résine échangeuse d'ions Chelex(E) (Bio-Rad) puis lyophilisés trois fois dans
D2O. Les déplacements chimiques sont relatifs au TMS externe quand les spectres sont enregistrés dans CDCl3, et au TSP externe quand les spectres sont enregistrés dans D2O. Les analyses de spectrometrie de masse sont effectuées sur un instrument ZAB-2E (Fisons). Les analyses élémentaires sont effectuées sur un analyseur Fisons.
Les abréviations suivantes sont utilisées:
TBDMS: tert-butyidiméthylsilyle; Lev: levulinyle; Bn: benzyle; Bz: benzoyle;
MCA : chloroacétyle; CCM : chromatographie sur couche mince; Olm trichloroacétimidyle; LSIMS : est le sigle anglais de Liquid Secondary lon
Mass Spectrometry; .ESIMS: est le sigle anglais de Elecfron Spray lonisation
Mass Spectrometîy; TMS : triméthylsilyle; TSP : triméthylsilyle tétradeuterio propionate de sodium; Tf: triflate; MS: tamis moléculaire.
Dowex(g), Sephadextl3, ChelexB, Gel 60( sont des marques déposées.
Dans les METHODES, les PREPARATIONS et dans les EXEMPLES décrits ci-après, des modes opératoires généraux concernant le clivage des esters levuliniques, le couplage catalytique des imidates, la déprotection et la sulfatation des oligo et des polysaccharides par hydrogénolyse des esters ou des éthers benzyliques, la saponification des esters ou encore les sulfatations peuvent êtres réalisés en appliquant les méthodes générales ciaprès aux intermédiaires appropriés.
METHODES GENERALES
METHODE 1. Coupure du groupe Lev.
Une solution d'hydrate d'hydrazine (1 M dans 3:2 pyridinelacide acétique) est ajoutée (5 ml/mmole) à une solution refroidie (0 "C) dans la pyridine (5 ml/mmole) du composé à traiter. Après 15-30 minutes (CCM) la solution est concentrée. Le résidu est dissous dans l'acétate d'éthyle, lavé avec de l'eau, une solution à 10% d'hydrogénosulfate de potassium, une solution à 2% d'hydrogénocarbonate de sodium, à l'eau, séché (sulfate de sodium), et concentré.
METHODE 2. Couplage aux imidates catalysé par le triflate de tert b utyldim é thylsllyle.
Du triflate de teff-butyidiméthylsilyle (0,5 mol/mol d'imidate) est ajouté goutte à goutte, sous argon, à une solution agitée et refroidie (-20 "C) de l'alcool accepteur et de l'imidate donneur, dans le toluène (35 ml/mmol), en présence de tamis moléculaire 4 Â en poudre. Après 15-30 minutes (CCM), on introduit sous agitation de l'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après 5 minutes du toluène est ajouté, la solution est filtrée, lavée avec une solution à 2% d'hydrogénocarbonate de sodium, à l'eau, séchée (sulfate de sodium), et concentrée.
METHODE 3. Couplage aux imidates catalysé par le triflate de triméthylsilyle
Du triflate de triméthylsilyle (0,04 M dans le toluène; 0,06 mol/mol d'imidate) est ajouté goutte à goutte, sous argon1 à une solution agitée et refroidie (-20 "C) de l'alcool accepteur et de l'imidate donneur, dans le toluène (15 ml/mmol), en présence de tamis moléculaire 4 Â en poudre.
Après 15-30 minutes (CCM), on introduit sous agitation de l'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après 5 minutes du toluène est ajouté, la solution est filtrée, lavée avec une solution à 2% d'hydrogénocarbonate de sodium, à l'eau, séchée (sulfate de magésium), et concentrée
METHODE 4. Dé protection et sulfatation des oligo- et polysaccharides.
Hydrogénolyse des benzyl éthers et benzyl esters. Une solution du composé (5 mg/ml), dans le diméthylformamide ou le méthanol, est agitée pendant 2-6 heures (contrôle CCM) sous une atmosphère d'hydrogène (5 bar) en présence de catalyseur Pd/C 10% (2 x masse du composé). Après filtration le produit est engagé directement dans l'étape suivante.
Saponification des esters. Une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium
5 M est ajoutée (en quantité telle que la concentration d'hydroxyde de sodium soit de 0,5 M en fin d'addition) à une solution d'un ester dans le méthanol (150 ml/mmol). Après 2-5 heures (CCM) de l'eau est introduite suivie par de la résine DowexB 50 H+ jusqu'à pH 1-2. Après filtration et concentration le résidu est passé au travers d'une colonne de gel SephadexB
G-25 (1,6 x 115 cm) éluée par l'eau, Le composé complètement déprotégé est alors obtenu après Iyophilisation. A ce stade on vérifie par 1H RMN que tous les groupes protecteurs ont été enlevés. Si cela est nécessaire le produit est de nouveau soumis à l'hydrogénation etlou la saponification.
Sulfatation. Du complexe pyridine/trioxyde de soufre (5 mmol/mmol fonction hydroxyle) est ajouté à une solution dans le diméthylformamide (10 mg/ml) du composé à sulfater. Après un jour à 55 C la solution est déposée au sommet d'une colonne de SephadexB G-25 (1,6 x 115 cm) éluée par du chlorure de sodium 0,2 M. Les fractions contenant le produit sont concentrées et dessalées en utilisant la même colonne éluée par l'eau. Le composé final est obtenu après lyophilisation.
SCHEMA 2
Synthèse du disaccharide 5
Figure img00300001
PREPARATION 1
Méthyl 4-O-(2-O-benzoyl -4,6-isopropylidène-3-O-méthyî-a-L-ido- pyranosyl )-2,3,6-tri -O-benzyl-a-D-gI ucopyranosi de (3).
Une solution d'acide triflique dans le toluène (0,15 M, 0,27 ml) est ajoutée, sous agitation sous argon, à une solution refroidie (-20 "C) d'éthyl 2 O-benzoyl-4,6-O-isopropylidène-3-O-méthyl-1-thio-&alpha;-L-idopyranoside 2 tJaurand,G. et al., BioMed. Chem. Lett. 1992, 2, 897-900). (1,1 g, 2,87 mmol), de 1 (Garegg P.J., Hultberg H., Carbohydr. Res. 93, 1981 C10-C11) (1,34 g, 2,87 mmol), et de N-iodosuccinimide (1,61 g, 7,2 mmol), dans le toluène (40 ml) contenant des tamis moléculaires 4 A en poudre. La même quantité d'acide est ajoutée après 25 et 50 minutes. Après 1,5 h, du bicarbonate de sodium solide (20 mg) est introduit, et, 15 minutes plus tard la solution est filtrée, diluée avec du dichlorométhane, lavée avec une solution de thiosulfate de sodium, de l'eau, séchée (sulfate de sodium) et évaporée.
Le produit brut ainsi obtenu (2,49 g) est utilisé directement pour la préparation de 4.
Après chromatographie sur colonne (3: 1 cyclohexanelacétate d'éthyle) on obtient le composé 3 pur. CCM, RF = 0,36, 3:1 cyclohexanelacétate d'éthyle; [ C]D + 31 (c = 1, dichlorométhane). ESI SM, mode positif: mîz + NaCI, 345 (M+Na)+; + KF, 361 (M+K)+. 1H RMN (CDC13) 6 7,17-7,35 (m, 20H, 4Ph), 5,10 (d, 1H, H-1'), 4,60 (d, 1H, J = 3,0 Hz, H-1), 3,37 (s, 3H, OMe), 1,95; 2,04; 2,09 (3s, 9H, 3Ac), 1,24; 1,33 (2s, 6H, :C(CH3)2).
Anal. Calculé pour C45H52012 (784,86): C, 68,86; H, 6,68. Trouvé : C, 68,61; H, 6,77.
PREPARATION 2
Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(4,6-isopropylidène-3-O-méthyl-&alpha;-L- idopyranosyl)-a-D-glucopyranoside (4).
Une solution 2 M de méthylate de sodium (2,2 ml, 4,4 mmol) est ajoutée à une solution du composé 3 (2,34 g) dans un mélange 1:1 méthanolldichlorométhane (13 ml). Après 2,5 heures à température ambiante le mélange est neutralisé avec de la résine Dowex# 50 (H+), filtré et concentré, pour donner 4 (1,74 g; 86% par rapport à 1 et 2) après chromatographie sur colonne (3:1 puis 2:1 cyclohexane/acétate d'éthyle); [oc ]D + 23 (c = 1, dichlorométhane). ESI SM, mode positif: m/z + NaCI, 703 (M+Na)+; + KF, 719 (M+K)+. 1H RMN (CDCl3) 6 7,31-7,21 (m, 15H, 3Ph), 4,94 (d, 1H, H-i'),
4,60 (d, 1H, J = 3,6 Hz, H-1), 3,44; 3,36 (2s, 6H, OMe); 3,06 (dd, 1H, J = 3,6
Hz, J= 12,2Hz, H-6'), 1,31; 1,28 (2s, 6H, :C(CH3)2).
Anal. Calculé pour C38H48011 (680,76): C, 67,04; H, 7,11. Trouvé : C, 67,05; H, 7,16.
PREPARATION 3
Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(4,6-isopropylidène-2,3-di-O-méthyl-&alpha;- L-idopyranosyl)-&alpha;-D-glucopyranoside (5).
De l'iodure de méthyle (3,2 ml, 50,8 mmol) est ajouté, à 0 C. à une solution de 4 (26,6 g, est lavée avec de l'eau, séchée (sulfate de sodium) et concentrée. Le composé brut 5, ainsi obtenu (32,1 g), est utilisé tel quel dans l'étape suivante. CCM, RF = 0,55, 3:2 cyclohexane-acétate d'éthyle.
SCHEMA 3
Figure img00330001
Synthèse des disaccharides de base pour la préparation droligomères du méthyl 4-0-(2, 3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate)-2, 3, 6-tri-O-suffo-a-D- glucopyranoside.
PREPARATION 4
Méthyl 2,3J6-tri-O-benzyl-4-0-(2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyranosyl)-a-D- glucopyranoside (6).
Une solution aqueuse d'acide trifluoroacétique (70%, 43 ml) est ajoutée goutte à goutte pendant 10 minutes à une solution du composé brut ci-dessus (32,1 g) dans du dichlorométhane (215 ml). Après 25 minutes à température ambiante la solution est diluée avec du dichlorométhane (11), lavée avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, avec de l'eau et séchée (sulfate de sodium). Le composé brut 6 obtenu après concentration (27,5 g) est utilisé tel quel dans l'étape suivante. CCM, RF = 0,29, 2:3 cyclohexane-acétate d'éthyle.
PREPARATION 5
Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyl-4-0-(6-O-tert-butyidiméthylsilyl-4-O- Iévuîinyl-2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyrnnosyl)- < i-D-glucopyranoside (10).
Une solution de 6 (1,7 g), de triéthylamine (0,54 ml, 3,8 mmol), de 4diméthylaminopyridine (38 mg, 0,3 mmol) et de chlorure de tertbutyldiméthylsilyle (0,54 g, 3,6 mmol), dans le chlorure de méthylène (6 ml), est chauffée à 50 C pendant 3 heures pour donner 9 qui n'es pas isolé.
Après refroidissement à température ambiante, de l'anhydride lévulinique (0,771 g, 3,6 mmol), de la triéthylamine (0,50 ml, 3,6 mmol) et de la 4diméthylaminopyridine (59 mg, 0,48 mmol) sont ajoutés. Après 4 heures le mélange est dilué avec du chlorure de méthylène, et lavé successivement avec une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de potassium, de l'eau, une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, de l'eau, séché (sulfate de sodium), et concentré pour donner 10 (2,45 g) qui est utilisé tel quel dans l'étape suivante. TLC, RF 0,5,12:1 cyclohexane/acétate méthyle.
PREPARATION 6
Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyl -4-O-(benzyl 4-0-levulinyl-2,3-di -O-méthyl-a L-idopyranosyluronate)-a-D-glucopyranosi (12).
Une solution de trioxyde de chrome (0,64 g, 6,4 mmol) dans l'acide sulfurique aqueux (3,5 M, 2,7 ml) est ajoutée lentement à une solution refroidie (0" C) de 10 (2,45 g) dans l'acétone (18 ml). Après 5 heures du chlorure de méthylène est introduit, puis le mélange est versé dans de l'eau galcée, agité vigoureusement, lavé à l'eau jusqu'à un pH neutre et séché (sulfate de sodium). La concentration donne 11 (2,45 g), sous forme de sirop.
TLC, RF 0,56, 12:1 chlorure de méthylène/méthanol. Ce produit est ensuite dissous dans le diméthylformamide (19 ml) et traité une nuit à température ambiante avec du bromure de benzyle (2,9 ml, 12 mmol). Du méthanol (1,5 ml) est ajouté et le produit est extrait avec de l'éther, lavé à l'eau, séché et concentré. Après chromatographie sur colonne (2:1 puis 3:2 cyclohexane/acétate d'éthyle) on obtient 12 (1,07 g). TLC, RF 0,53, 5:1 chlorure de méthylène-acétate d'éthyle.
PREPARATION 7
Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyl -4-O-(benzyl 2,3-di-0-méthyl-a-L-idopyranosyl uronate)-a-D-glucopyranoside (8).
Le disaccharide 12 (0,65 g, 0,76 mmol) traité selon la méthode générale 1 donne 8 (0,52 g, 91 %) après chromatographie sur colonne (2:1 puis 3:1 cyclohexanelacétate d'éthyle). [ c]D +34 (c = 0,97, chlorure de méthylène).
PREPARATION 8 1,3,6-tri-O-Acétyl-2-O-benzyl-4-O-(4-O-lévulinyl-2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L- idopyranosyluronate de benzyle)-D-glucopyranose (13).
De l'acide trifluoroacétique (28 ml, 0,364 mol) est ajouté à une solution de 12 (7,8 g, 9,1 mmol) dans de l'anhydride acétique (194 ml, 2,06 mol) et de l'acide acétique (7,8 ml, 0,136 mol). Après chauffage à 60 C pendant 4 heures la solution est refroidie à O C et de l'eau (30 ml) est introduite goutte à goutte, suivie de triéthylamine (69 ml). Après evaporation le résidu est dissous dans dichlorométhane, lavé avec une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, de l'eau, séché (sulfate de sodium), et concentré. Une chromatographie sur colonne (5:1 dichlorométhane/acétate d'éthyle) donne un mélange (&alpha;/ss=8/2) des anomères de 13 (4,7 g, 67%).
CCM, RF 0,35; 3:2 cyclohexane-acétone. 1H RMN (CDCl3) 6 7,37-7,20 (m, 10H, 2Ph), 6,30 (d, J = 3,6 Hz, H-la), 5,62 (d, J = 7,6 Hz, H-1ss), 5,04 (t, 1H, H-4'), 3,45; 3,41 (2s, 6H, 2 OMe), 2,6-2,3 (m, 4H,
O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3), 2,15; 2,12; 2,06; 1,94; 1,88 (5s, 12H, 3 Ac et
O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3).
PREPARATION 9 3,6-di-O-Acétyl-2-O-benzyl-4-O-(4-O-lévulinyl-2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-ido pyranosyluronate de benzyle)-D-glucopyranose (14).
Une solution d'éthanolamine (1,3 ml, 21,6 mmol) et de 13 (4,25 g, 5,28 mmol) dans le tétrahydrofurane (80 ml) est abandonnée une nuit à 4 "C. De l'éthanolamine (0,65 ml, 10,8 mmol) est alors ajoutée, puis le mélange est laissé à température ambiante pendant 3 h. Après refroidissement à 0 "C, on ajoute de l'acide chlorhydrique 1 M jusqu'à pH acide, puis du dichlorométhane (150 ml). La solution est lavée avec de l'eau, séchée, et concentrée. Une chromatographie sur colonne (2:1 puis 1:1 dichlorométhane/acétate d'éthyle) donne 14 (3 g, 74%). CCM, RF 0,21, 1:1 toluène-acétate d'éthyle. [a]D +3 (c = 1, dichlorométhane). LSlMS, mode positif: m/z thioglycérol + NaCI, 769 (M+Na)+; thioglycérol + KF, 785 (M+K)+.
1H RMN (CDCl3) 7,36-7,25 (m, 10H, 2Ph), 5,21 (d, J = 3,5 Hz, H-la), 4,98 (d, 1H, J = 3,4 Hz, H-l'), 4,79 (d, J = 8 Hz, H-1ss), 3,45; 3,42 (2s, 6H, 2 OMe), 2,56-2,23 (m, 4H, O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3), 2,23; 2,12; 1,94; 1,88 (4s, 9H, 2 Ac, a et ss O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3).
Anal. Calculé pour C37H46016 (746,72): C, 59,51; H, 6,21. Trouvé: C, 58,87, H, 6,13.
PREPARATION 10 3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-4-O-(4-O-lévulinyl-2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopy- ranosyluronate de benzyle)-D-glucopyranose trichloroacétimidate (15).
Un mélange de trichioroacetonitrile (0,7 ml; 6,92 mmol), de 14 (1,03 g; 1,38 mmol), et de carbonate de potassium (191 mg; 2,21 mmol), dans le chlorure de méthylène (26 ml) est agité pendant 1,5 heure à température ambiante. La solution est alors filtrée et concentrée. Une chromatographie sur colonne (4:1 toluène/acétone) donne 15 (1.16 g; 94%). CCM, RF 0,31 et 0,48, 2:3 cyclohexane-acétate d'éthyle. LSIMS, mode positif: m/z thioglycérol +
LiCI, 896 (M+Li)+; thioglycérol + NaCI, 912 (M+Na)+; thioglycérol + KF, 928 (M+K)+. 1H RMN (CDC13) 6 8,67 (s, NH-ss), 8,60 (s, NH-a), 7,37-7,22 (m, 10H, 2Ph); 6,44 (d, J = 3,6 Hz, H-la), 5,83 (d, J = 7,3 Hz, H-1ss), 3,47; 3,44; 3,42; 3,40 (4s, 6H, 2 OMe), 2,7-2,2 (m, 4H, O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3), 2,15; 2,08; 1,94; 1,88 (4s, 9H, a et ss Ac, et O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3).
SCHEMA 4
Figure img00370001
<tb> <SEP> 8 <SEP> + <SEP> 15
<tb> <SEP> CH2CI2; <SEP> MS; <SEP> TMSOTf
<tb> <SEP> v
<tb> <SEP> OMe <SEP> OAc <SEP> OS <SEP> n
<tb> <SEP> 0mazez <SEP> pMe <SEP> oen <SEP> O)Bn/OMe
<tb> <SEP> BnOoc <SEP> OAc <SEP> OBn0
<tb> <SEP> NH2NH2, <SEP> pyridine-AcOH <SEP> 16
<tb> <SEP> H <SEP> OMs <SEP> OAc <SEP> 05nOMe
<tb> <SEP> "9-0 <
<tb> <SEP> BnOOc <SEP> OMs <SEP> s <SEP> <
<tb> <SEP> OMe <SEP> i7
<tb> <SEP> OMe <SEP> 7
<tb> <SEP> + <SEP> 15 <SEP> CH2CI2; <SEP> MS; <SEP> TMSOTf
<tb> <SEP> v
<tb> BnOw <SEP> A < O <SEP> 4 <SEP> XoOCn <SEP> O <SEP> vOMe
<tb> <SEP> OMe <SEP> OAc <SEP> OMe
<tb>
Synthèse de l'hexasaoehaflde 18. La préparation d'ollgomères de taille supérieure est effectuée selon la même stratégie (coupure du groupe Lev pour obtenir un accepteur de glycosyle, couplage avec un di-, tefra-, ou hexasaccharide imidate -comme indiqué sur le schéma I- et finalement, déprotection et sulfatation). Le groupe Lev de 18 est sélectivement éliminé pour donner l'hexasaccharide accepteur 19 (SCHEMA 1).
PREPARATION 11
Méthyl 0-(4-O-lévulinyl-2,3-di-O-méthyl -a-L -idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-O-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O- (2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-2,3,6-tri-O benzylsc-D-glucopyranoside (16).
Un mélange de 8 (2,90 g, 3,83 mmol) et 15 (4,16 g, 4,67 mmol) est traité selon la méthode 2. Une chromatographie sur colonne (1:1 cyclohexane/acétate d'éthyle) donne 16 pur ( 3,2 g; 54%). CCM, RF 0,52, 2:3 cyclohexane/acétate méthyle. 1H RMN (CDCl3) 6. 7,21-7,36 (m, 30H, 6Ph), 5,27 (d, 1H, H-1, unité non réductrice), 5,14 (d, 1H, H-1 unité "central next to non reducing"), 4,90 (d, 1H, H-1, unité "central next to reducing"), 4,56 (d, 1H,
H-1 unité réductrice), 3,43; 3,39; 3,35; 3,25 (5s, 15H, 5 OMe), 2,25-2,60 (m, 4H, O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3), 2,12; 2,00; 1,91 (3s, 9H, 2Ac et
O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3).
PREPARATION 12
Méthyl O-(2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-O (3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-&alpha;-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(2,3-di-O- méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-2,3,6-tri-O-benzyla-D-glucopyranoside (17).
Le composé 16 (1 g; 0,672 mmol) est traité selon la méthode 1 pour donner quantitativement 17 après chromatographie sur colonne (1:1 cyclohexane/acétone).
PREPARATION 13
Méthyl 0-(4-O-lévulinyl -2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de b enzyle)-( 1 -4)-10-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyle-D-glucopyranosyl)-(1 4) O-(2,3-di-O-méthyl-cc-L-idopyranosyl uronate de benzyle)-( 1 -4)l2-2,3,6-tri- O-benzyle-D-glucopyranoside (18).
Un mélange de 15 (386 mg, 434 mol) et 17 (500 mg; 360 pmol) est traité selon la méthode 2. Une chromatographie sur colonne (Sephadex# LH 20, 195 x 3,7 cm; 1:1 dichlorométhane/éthanol) donne l'hexasaccharide 18 (495 mg; 64%). CCM, RF 0,36, 10:1 dichlorométhane/acétone.
1H RMN (CDCl3) 6: 5,23; 5,12; 5,10; 4,92; 4,89; 4,56 ppm.
PREPARATION 14
Méthyl O-(2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-( I -4)-[O- (3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(2,3-di-O- méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)]2-2,3,6-tri-O benzyl-&alpha;-D-glucopyranoside (19).
Le composé 18 (485 mg; 229 pmol) est traité selon la méthode 1. Une chromatographie sur colonne (10:1 dichlorométhanelacétone) donne 19 (392 mg; 85%). CCM, RF 0,38,10:1 dichlorométhane/acétone.
SCHEMA 5
Synthèse du disaccharide accepteur 22
Figure img00390001
PREPARATION 15
Méthyl 2,3,6-tri-O-benzyl-4-O-(4-O-chloroacétyl-2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L- idopyranosyluronate de benzyle)-a-D-glucopyranoside (20).
Un mélange de 8 (326 mg, 0,43 mmol), d'anhydride chloroacétique (103 g, 0,6 mmol), de 4-diméthylaminopyridine (5,3 mg, 42 pmol), et de triéthylamine (90 p1, 64 pmol) dans le dichlorométhane (96 ml) est agitée à température ambiante pendant 30 minutes, Du méthanol (0,5 ml) est alors ajouté, la solution est diluée avec du dichlorométhane, lavée à l'eau, séchée (sulfate de sodium), et concentrée. Une chromatographie sur colonne (2:3 puis 1:2 cyclohexane/éther) donne 20 pur (242 mg, 67%). CCM, RF 0,35, 1:2 cyclohexaneléther. 1H RMN (CDC13) 6 7,36-7,19 (m, 20H, 4Ph), 5,20 (d, 1H,
H-1'), 4,56 (d, 1 H, H-1), 3,70 et 3,36 (système AB, J = 15,3 Hz,
CICH2(C:O)O), 3,49, 3,35; 3,26 (3s, 3 OCH3).
PREPARATION 16 1,3-6-tri-O-acétyl-2-O-benzyl-4-O-(4-O-chloroacétyl-2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L- idopyranosyl uronate de benzyle)-&alpha;,ss-D-glucopyranose (21).
Une solution d'acide trifluoroacétique (183 pI, 2,4 mmol) est ajoutée à une solution de 20 (50 mg, 0,06 mmol) dans l'anhydride acétique (1,28 ml, 13,5 mmol) et l'acide acétique (52 pi, 0,9 mol). Après chauffage à 60 C pendant 4 heures la solution est refroidie à O C et neutralisée avec de la triéthylamine.
Après évaporation, une chromatographie sur colonne du résidu (1:2 puis 2:5 cyclohexaneléther) donne un mélange (alP = 8/2) des anomères de 21 (28 mg, 60%). CCM, RF 0,31, 2:5 cyclohexane/éther. 1H RMN (CDCl3) 6 7,207,35 (m, 10H, 2Ph), 6,30 (d, J = 3,6 Hz, H-la), 5,63 (d, J = 8,1 Hz, H-1ss), 3,39 et 3,46 (2s, 2 OCH3)
PREPARATION 17 1,3,6-tri-O-acétyl-2-O-benzyl-4-O-(2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopyranosylu- ronate de benzyle)-a,I3-D-glucopyrnnose (22).
De la thiourée (678 mg; 8,9 mmol) est ajoutée à une solution de 21 (1,71 g; 2,23 mmol) dans un mélange de pyridine (108 ml) et d'éthanol (22 ml), et le mélange est chauffé à 110 C pendant 30 minutes. Après refroidissement et évaporation le résidu est dissous dans du dichlorométhane. La solution est lavée à l'aide d'une solution saturée aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium, puis une solution à 5% d'hydrogénosulfate de potassium, séchée (sulfate de sodium), et concentrée. Une chromatographie sur colonne (1:1, puis 1:2 cyclohexane/acétate d'éthySe) donne 22 pur (1,17 g; 76%). CCM, RF 0,34, 3:1 dichlorométhane/éther. 1H RMN (CDCl3)# 7,36-7,20 (m, 10H, 2Ph), 6,30 (d, J = 3,6 Hz, H-la), 5,65 (d, J = 8 Hz, H-1ss), 4,90 (1H, H-1'), 3,41 et 3,40 (2s, 2 OCH3)
SCHEMA 6
Synthèse du tétrasaccharide imidate 25
Figure img00410001
<tb> <SEP> 15 <SEP> + <SEP> 22
<tb> <SEP> CH2CI2; <SEP> MS; <SEP> TMSOTf
<tb> <SEP> v
<tb> <SEP> OMe <SEP> OAc
<tb> <SEP> OLevX9,f <SEP> g <SEP> BnOOC <SEP> OMe <SEP> O <SEP> OAc
<tb> <SEP> \ < } JX <SEP> < /H <SEP> Z <SEP> 07/ <SEP> \4OAC
<tb> BnOOC <SEP> OMe0 <SEP> OAc <SEP> OBn <SEP> O <SEP> OMe <SEP> OAc <SEP> 23
<tb> <SEP> OMe
<tb> <SEP> OMe <SEP> 23
<tb> <SEP> NH2NH2, <SEP> pyridine-AcOH
<tb> <SEP> OMe <SEP> OAC
<tb> <SEP> OLev0,d <SEP> /O <SEP> BnOOC/h <SEP> OMe <SEP> O <SEP> OAc
<tb> <SEP> aS <SEP> O7/ <SEP> \4OH
<tb> BnOO(y: <SEP> ÉÉn <SEP> O <SEP> Y <SEP> ROACO
<tb> <SEP> OAc
<tb> <SEP> OMe <SEP> 24
<tb> <SEP> CC13CN, <SEP> K2C03, <SEP> CH2Cl2
<tb> <SEP> OMe <SEP> OAC
<tb> <SEP> ooje0 <SEP> OAc0 <SEP> Bno1 MeO <SEP> Bn <SEP> OIm
<tb> BnOOC <SEP> OMe <SEP> OAC <SEP> O <SEP> B <SEP> n <SEP> OAc0
<tb> <SEP> OMe <SEP> 25
<tb>
PREPARATION 18 0-(4-0-lévulinyl-2,3-di-0-méthyl-a-L-idopyranosyluronate de benzyle) (1-4)-O-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(2,3-di-O- méthyl-a-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1 -4)-I ,3,6-tri-O-acétyl-2-O- benzyl-&alpha;,ss-D-glucopyranose (23),
Un mélange de 15 (1,5 g, 1,7 mmol) et 22 (1,18 g; 1,7 mmol) est traité selon la méthode 3 (en remplaçant le toluène par du dichlorométhane). Une chromatographie par perméation sur gel sur une colonne de LH-20, equilibrée dans dichlorométhaneléthanol 1:1, donne 23 pur (1,75 g; 73%).
[a]D +19 (c = 0,9, dichlorométhane). LSIMS, mode positif: m/thioglycérol +
NaCI, 1441 (M+Na)+; thioglycérol + KF, 1457 (M+K)+.
1H RMN (CDCl3) 6: 6,27; 5,45; 5,10; 4,96; 4,90 ppm.
Anal. Calc pour C71H86030 (1419,46): C, 60,08; H, 6,11. Trouvé: C, 60,06; H, 6,40.
PREPARATION 19 0-(4-0-lévulinyl-2,3-di-0-méthyl-a-L-idopyranosyluronate de benzyle) (1-4)-O-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(2,3-di-O- méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-3,6-di-O-acétyl-2-O benzyl-a"ss-D-glucopyranose (24).
De l'éthanolamine (80 l; 1,31 mmol) est ajoutée à une solution du tétrasaccharide 23 (465 mg; 327 mol) dans le tétrahydrofurane (5 ml), puis la solution est laissé la nuit a 4 C. Après neutralisation par l'acide chlorhydrique (1M; 2 ml), du dichlorométhane (20 ml) est ajouté, puis la solution est lavée à l'eau, séchée (sulfate de sodium), et concentrée. Une chromatographie sur colonne (3:1 toluènelacétone) donne 24 (326 mg; 79%).
CCM, RF 0,33, 3:1 toluènelacétone. LSIMS, mode positif: m/z thioglycérol +
NaCI, 1399 (M+Na)+; thioglycérol + KF, 1415 (M+K)+.
1H RMN (CDCl3) 6: 5,18; 5,10; 4,96; 4,93; 4,75
PREPARATION 20 O-(4-O-lévulinyl-2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle) (1-4)-O-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(2,3-di-O- méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-3,6-di-O-acétyl-2-O benzyl-&alpha;,ss-D-glucopyranose trichloroacétimidate (25).
Un mélange de trichloroacétonitrile (151 Xul; 1,5 mmol), du tétrasaccharide 24 (343 mg; 249 pM), et de carbonate de potassium (62 mg; 448 pmol) dans le dichlorométhane (2 ml) est agitée une nuit à température ambiante. Du dichlorométhane est ajouté, et après filtration la solution est concentrée. Une chromatographie sur colonne (3:1 toluène/acétone) donne 25 (346 mg; 91%).
CCM, RF 0,42; 0,63, 2:1 dichlorométhanelacétate d'éthyle.
1H RMN (CDCl3) 6: 8,67 (s, NH-b), 8,59 (s, NH-a), 7,40-7,20 (m, 10H, 2Ph),6,40 (d, J = 3,5 Hz, H-1a), 5,90 (d, J = 7,5 Hz, H-1ss), 3,45; 3,44; 3,42; 3,40; 3,39; 3,37 (6s, 12H, 4 OMe), 2,7-2,2 (m, 4H,
O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3), 2,12; 2,08; 2,07; 2,04; 2,02; 1,91; 1,89 (7s, 15H, 4 Ac, et O(C:O)CH2CH2(C:O)CH3). NH-a et NH-b désignent les signaux obtenus pour chacun des isomères syn et anti.
PREPARATION 21
Méthyl 0-(4-O-lévulinyl-2,3-di-O-méthyl-a-L-idopyrano-syluronate de benzyle)-(1 -4)-l0-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-a-D-glucopyranosyl)-(1 -4) O-(2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)]3-2,3,6-tri
O-benzyl-a-D-glucopyranoside (26).
* A partir de 17 et 25. - Un mélange de 17 et 25 (459 mg, 0,3 mmol) est traité selon la méthode 3. Une chromatographie sur colonne (SephadexB LH 20, 195 x 3,7 cm; 1:1 dichlorométhane/éthanol), suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (3:2 cyclohexane-acétone) donne 26 pur ( 420 mg; 59%). [a]D +20 (c = 0,20, dichlorométhane). LSIMS, mode positif: m/z thioglycérol + NaCI, 2771 (M+Na)+; thioglycérol + KF, 2787 (M+K)+.
1H RMN (CDC13) 6: 5,26; 5,14; 5,10; 4,93; 4,92; 4,90; 4,56
PREPARATION 22
26 à partir de 15 et 19. - Un mélange de 15 (332 mg, 373 pmol) et 19 (377 mg; 186 pmol) est traité selon la méthode 2. Une chromatographie sur colonne (Sephadex# LH 20, 195 x 3,7 cm; 1:1 dichlorométhane/éthanol) donne l'octasaccharide 26 pur ( 460 mg; 90%).
PREPARATION 23
Méthyl O-(2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-[O (3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(2,3-di-O- méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)]3-2,3,6-tri-O-benzyl a-D-glucopyranoside (27).
Le composé 26 (275 mg; 100 mol) est traité selon la méthode 1 pour donner 27 (265 mg; 96%); [a]D +27 (c = 0,56, dichlorométhane). LSIMS, mode positif: m/z thioglycérol + NaCI, 2673 (M+Na)+; thioglycérol + KF, 2689 (M+K)+.
1H RMN (CDCI3) 6: 5,26; 5,15; 5,10; 5,08; 4,89; 4,88; 4,55
PREPARATION 24
Méthyl O-(4-O-lévulinyl-2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-[O-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O- (2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)]5-2,3,6-tri-O benzyl-a-D-glucopyranoside (28).
Un mélange de 27 (97,3 mg; 36 mol) et de 25 (83,8 mg, 55 mol) est traité selon la méthode 3. Une chromatographie sur colonne (cyclohexaneacétone 2:1, puis 7:4, puis 3:2) donne 28 pur ( 102 mg; 69%). [a]D + 22 (c = 0,51, dichlorométhane). CCM, RF 0,18, 3:2 cyclohexane-acétone.
1H RMN (CDCl3) 6: 5,26; 5,14; 5,10; 5,08; 4,93; 4,92; 4,90; 4,56
PREPARATION 25
Méthyl O-(2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)-[O (3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(2,3-di-O- méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)]5-2,3,6-tri-O-benzyl < i-D-glucopyranoside (29).
Le composé 28 (216 mg; 54 mol) est traité selon la méthode 1 pour donner (199 mg; 95%). CCM, RF 0,56,1:1 cyclohexane-acétone; RF 0,55, 2:1 toluène-acétone. LSIMS, mode positif: m/z thioglycérol + NaCI, 3934 (M+Na)+; thioglycérol + KF, 3950 (M+K)+.
PREPARATION 26
Méthyl 0-(4-0-lévuIinyl-2,3-di-O-méthyl -&alpha;-L -id opyranosyl uronate de benzyle)-(1-4)-[O-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)- O-(2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)]7-2,3,6 tri-O-benzyle-D-glucopyranoside (30).
Un mélange de 25 (33 mg, 21,4 pmol) et de 29 (52,4 mg; 13,3 pmol) est traité selon la méthode 2. Une chromatographie sur colonne (7:4 cyclohexane-acétone) donne 30 pur ( 43,8 mg; 62%). [a]D +19 (c = 0,5, dichlorométhane). CCM, RF b,36, 3:2 cyclohexane-acétone. LSIMS, mode positif: m/z thioglycérol + KF, 5310 (M+K)+.
1H RMN (CDCl3) 6 des protons anomères principaux : 5,26; 5,14; 5,10; 5,08; 4,92; 4,90; 4,56
PREPARATION 27
Méthyl O-(2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1 -4)-[O- (3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(2,3-di-O- méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1-4)]7-2,3,6-tri-O-benzyla-D-glucopyranoside (31).
L'hexadécasaccharide 30 (100 mg; 19 pmol) est traité selon la méthode 1 pour donner 31 utilisé directement dans l'étape suivante. [a]D +20 (c = 0,38, dichlorométhane). CCM, RF 0,31, 4:3 cyclohexane-acétone. LSIMS, mode positif: m/z thioglycérol + NaCI, 5196 (M+Na)+; thioglycérol + KF, 5212 (M+K)+.
PREPARATION 28
Méthyl 0-(4-0-lévulinyl -2,3-dl-O-méthyl a-L-idopyranosyl uronate de benzyle)-(1-4)-[O-(3,6-di-O-acétyl-2-O-benzyl-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)- O-(2,3-di-O-méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronate de benzyle)-(1 -4)lg-2,3,6-tri O-benzyle-D-glucopyranoside (32).
Un mélange de 25 (31 mg; 21,7 pmol) et de 31 (94,5 mg, 18,3 mol) est traité selon la méthode 3 pour donner 32 après plusieurs chromatographies sur colonne ( 29,2 mg; 25%). [a]D +22 (c = 0,33, dichlorométhane). CCM, RF 0,26, 4:3 cyclohexane-acétone. 1H RMN (CDC 13) 6 des protons anomères principaux: 5,26; 5,14; 5,10; 5,09; 4,92; 4,91; 4,90; 4,56 ppm.
EXEMPLE 1
Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-a-L-idopyranosyluronique- (1-4)-l0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O- méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]g-2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D-gluco- pyranoside, sel de sodium (33).
Figure img00460001
Le composé 32 est traité selon la méthode 4 pour donner 33 (60% sur les trois étapes). [a]D +27 (c = 0,4, D2O) ESIMS, mode négatif: masse expérimentale = 7077,3 + 3,2 u.m.a.
1H RMN (D2O) 6 principaux protons anomériques : 6 5,41; 5,40; 5,15; 5,09; 5,07; 5,06 ppm.
En procédant selon l'EXEMPLE 1 et selon le SCHEMA 1 ci-dessus on prépare les composés 34 à 38 (EXEMPLE 2 à 6) décrits dans le TABLEAU I ci-après.
TABLEAU I
Figure img00470001
Figure img00470002
<tb> <SEP> Numéro <SEP> m <SEP> Masse
<tb> <SEP> d'exemple <SEP> expérimentale
<tb> <SEP> 2 <SEP> 5 <SEP> + <SEP> 30 <SEP> 3605
<tb> composé <SEP> 34
<tb> <SEP> 3 <SEP> 6 <SEP> + <SEP> 29 <SEP> 4297
<tb> composé <SEP> 35
<tb> <SEP> 4 <SEP> 7 <SEP> + <SEP> 27 <SEP> 4993
<tb> composé <SEP> 36
<tb> <SEP> 5 <SEP> 8 <SEP> + <SEP> 34 <SEP> 5688
<tb> composé <SEP> 37
<tb> <SEP> 6 <SEP> 9 <SEP> + <SEP> 27 <SEP> 6381
<tb> composé <SEP> 38
<tb>
EXEMPLE 7
Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-ss-D-glucopyranosyl uronique)-(1 -4)-10-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-O-(acide 2,3-di-O-méthyl-ss-D-glucopyranosyluronique)-(1-4)]4-2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-
D-glucopyranoside, sel de sodium (39).
Figure img00480001
Le disaccharidique donneur de glycosyle
Figure img00480002

et le disaccharide accepteur de glycosyle
Figure img00480003
sont préparés selon les méthodes décrites dans Westerduin et a/.,
BioOrg. Med. Chem., 2,1994,1267, puis combinés comme décrit lors de la préparation de 34. Le décasaccharide résultant est traité selon la méthode 4 pour donner 39.
[a]D + 45 (c = 1, H2 O). 1H RMN (D20) 8 des protons anomériques principaux: 5,53; 5,18; 4,65; 4,63 ppm.
En procédant selon l'EXEMPLE 7 et selon le SCHEMA 1 ci-dessus, on prépare le composé 40 (EXEMPLE 8) décrit dans le TABLEAU II ci-après.
TABLEAU II
Figure img00490001
Figure img00490002
<tb> <SEP> Numéro <SEP> m <SEP> [a]D <SEP> 1H <SEP> RMN <SEP> (D2O) <SEP> # <SEP>
<tb> <SEP> d'exemple <SEP> (ppm) <SEP> des <SEP> protons
<tb> <SEP> anomériques <SEP> principaux
<tb> <SEP> 8 <SEP> 4 <SEP> + <SEP> 45 <SEP> 5,53; <SEP> 5,13; <SEP> 4,62; <SEP> 4,60
<tb> composé <SEP> 40
<tb>
EXEMPLE 9
Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-&alpha;-L-idopyrano- syluronique)-(1-4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D-gluco- pyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo -&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]4-3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D- glucopyranoside, sel de sodium (41).
Figure img00500001
Le synthon disaccharidique
Figure img00500002
(CCM, RF 0,54, 1:1 cyclohexane/EtOAc) est traité comme décrit pour 12 pour donner i'imidate donneur de glycosyle
Figure img00500003

et l'accepteur
Figure img00500004
[1H RMN (CDCl3) 6 8,00-7,15 (m, 20H, 4Ph), 5,15 (d, 1H, H-1'), 4,57 (d, 1H, H-1), 3,48; 3,47; 3,32 (3s, 30CH3)].
Ces trois synthons sont alors combinés comme il est décrit pour la préparation de 34. Le décasaccharide résultant est alors traité selon la méthode 4 pour donner 41.
[a]D + 17 (c = 1, H2O), 1H RMN (D2O) 6 des protons anomériques principaux: 5,36; 5,34; 5,13; 5,11; 5,09; 5,05 ppm.
En procédant selon l'EXEMPLE 9 et selon le SCHEMA 1 ci-dessus on prépare les composés 42 et 43 (EXEMPLE 10 et 11) décrits dans le
TABLEAU III ci-après.
TABLEAU III
Figure img00510001
Figure img00510002
<tb> <SEP> Numéro <SEP> m <SEP> 1H <SEP> RMN <SEP> (D20) <SEP> # <SEP> (ppm)
<tb> de <SEP> l'exemple <SEP> [600 <SEP> MHz] <SEP> des <SEP> protons
<tb> <SEP> anomériques <SEP> principaux
<tb> <SEP> 10 <SEP> 4 <SEP> 5,20; <SEP> 5,17; <SEP> 5,12, <SEP> 5,03; <SEP>
<tb> composé <SEP> 42 <SEP> 4,90
<tb> <SEP> 11 <SEP> 6 <SEP> 5,20; <SEP> 4,99; <SEP> 4,95; <SEP> 4,90
<tb> composé <SEP> 43
<tb>
EXEMPLE 12
Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-ss-D glucopyranosyluronique)-(1 -4)-[0-(3-0-méthyl-2,6-di-O-sulfo-a-D- glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-ss-D glucopyranosyluronique)-(1-4)]4-3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D- glucopyranoside, sel de sodium (44).
Figure img00520001
Les synthons disaccharidiques
Figure img00520002
sont préparés puis combinés comme décrit pour 34. Le décasaccharide obtenu traité selon la méthode 4 donne 44:
[a]D + 25 (c = 0,2, H20). 1H RMN (D20) 6 des protons anomériques principaux: 5,47; 5,07; 4,74; 4,71; 4,70 ppm.
EXEMPLE 13
Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo < -L-idopyranosyluronique) 4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O méthyl-2-O-sulfo-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]2-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;- -D-glucopyranosyl)-(1 -4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo ac-L-ido- pyranosyluronique)-(1-4)-3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyrano- side, sel de sodium (45).
Figure img00530001
Le donneur de glycosyle 15 et l'accepteur de glycosyle
Figure img00530002

combinés selon la méthode 3 donnent le tétrasaccharide
Figure img00530003
Après coupure du groupe Lev (méthode 1) et réaction répétée avec le disaccharide donneur de glycosyle suivant, selon le principe décrit dans le schéma 1,
Figure img00530004
on obtient le précurseur complètement protégé de 45 qui est traité selon la méthode 4 pour donner 45.
1H RMH (D2O) 6 (ppm) [600 MHz] des protons anomériques principaux: 5,35; 5,33; 5,30; 5,22; 5,21; 5,18; 5,15; 4,98.
En procédant selon l'EXEMPLE 13 et selon le SCHEMA 1 ci-dessus à partir des précurseurs oligosaccharidiques complètement protégés on prépare le composé 46 (EXEMPLE 14) décrits dans le TABLEAU IV ci-après.
TABLEAU IV
Figure img00540001
Figure img00540002
<tb> Numéro <SEP> de <SEP> m <SEP> 1H <SEP> RMH <SEP> (D20) <SEP> 6
<tb> I'exemple <SEP> (ppm) <SEP> [600 <SEP> MHz] <SEP> des
<tb> <SEP> protons <SEP> anomériques
<tb> <SEP> principaux
<tb> 14 <SEP> 3 <SEP> 5,34; <SEP> 5,32; <SEP> 5127; <SEP> 5,22;
<tb> composé <SEP> 46 <SEP> | <SEP> 5,14; <SEP> 4,98
<tb>

Claims (24)

  1. chaque disaccharide étant au moins monoéthérifié; ainsi que ses sels.
    un groupe (C1-C6)alkyle ou estérifiés sous la forme de groupe sulfo,
    caractérisé en ce que tous ses groupes hydroxyles sont éthérifiés avec
    constitués d'un acide uronique et d'un hexose, ledit polysaccharide étant
    monosaccharidiques formée par un enchaînement de disaccharides
    REVENDICATIONS 1. Polysaccharide de synthèse contenant de 8 à 24 unités
  2. 2. Sel constitué d'un anion et d'un cation, 'anion ayant pour formule:
    Figure img00550001
    ainsi que l'acide correspondant.
    le cation étant un cation monovalent pharmaceutiquement acceptable,
    zéro;
    et inférieure ou égale à 12, un ou deux des trois pouvant représenter
    - m, n et p sont tels que la somme m + n + p est supérieure ou égale à 4
    représentent un (C1-C6)alkyle ou un groupe SO3-;
    - R2, R3, R4, R5, R7, Rg, Rg, R10, R12 R13, R14, R15 et R17
    - R1, R6, R11 et R16 représentent un (C1-C6)alkyle;
    plan du cycle pyranosique;
    - le trait ondulé désigne soit une liaison en dessous soit en dessus du
    dans laquelle
  3. 3. Sel selon la revendication 2 dans lequel le cation est choisi parmi les
    cations des métaux alcalins, en particulier le sodium et le potassium.
  4. 4. Sel selon l'une des revendications 2 ou 3 dans lequel les alkyles sont des
    méthyles, ainsi que l'acide correspondant.
  5. 5. Sel selon l'une des revendications 2 ou 3 dans lequel n et p sont égaux à
    zéro, ainsi que l'acide correspondant.
  6. 6. Sel selon l'une des revendications 2 ou 3 dans lequel n et p sont égaux à
    zéro et m représente 4 à 10, ainsi que l'acide correspondant.
  7. 7. Sel selon i'une des revendications 2 ou 3 dans lequel n et p sont égaux à
    zéro, m représente 4 à 10; un au moins des substituants R12, R13, R14
    et R15 représente un groupe sulfate ; R1, R16 et R17 étant tels que
    définis pour (I), ainsi que l'acide correspondant.
  8. 8. Sel selon l'une des revendications 2 ou 3 dans lequel n et p sont égaux à
    zéro, m représente 4 à 10 ; deux au moins des substituants R12, R13,
    R14 et R15 représentent un groupe sulfate ; R1, R16 et R17 étant tels
    que définis pour (I), ainsi que l'acide correspondant.
  9. 9. Sel selon l'une des revendications 2 ou 3, dans lequel n et p sont égaux à
    zéro, m représente 4 à 10 ; trois au moins des substituants R12, R13,
    R14 et R15 représentent un groupe sulfate ; R1, R16 et R17 étant tels
    que définis pour (I), ainsi que l'acide correspondant.
  10. 10. Sel selon la revendication 2 ou 3 dont l'an ion a pour formule (I.1):
    Figure img00560001
    dans laquelle m représente 4 à 10 ; R1, R15, R16 et R17 sont tels que définis pour (I), chaque acide uronique étant soit un acide iduronique soit glucuronique, ainsi que l'acide correspondant.
  11. 11. Sel selon l'une des revendications 2 ou 3 dont l'anion a pour formule (1.2):
    Figure img00570001
    soit glucuronique, ainsi que l'acide correspondant.
    que définis pour (I), chaque acide uronique étant soit un acide iduronique
    dans laquelle m représente 4 à 10 ; R1, R1s, R16 et R17 sont tels
  12. 12. Sel selon les revendications 2 ou 3 dont l'anion a pour formule (1.3):
    Figure img00570002
    acide iduronique soit glucuronique, ainsi que l'acide correspondant.
    R17 étant tels que définis pour (I), chaque acide uronique étant soit un
    dans laquelle m représente 2 ou 3, R1, R12, R13, R14, R15, R16 et
  13. 13. Sel selon la revendication 12 dans lequel R1 représente un méthyle, R13
    en position 3 du glucose représente un méthyle, R12 en position 2 et R14
    en position 6 du glucose représentent un S03- et R16 en position 3 de
    l'unité iduronique ou glucuronique représente un méthyle, m étant égal à
    2 ou 3.
  14. 14. Polysaccharide choisi parmi:
    Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-a-L-idopyranosyluronique)-(1
    4)-[0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]9-2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyra-
    noside, sel de sodium;
    Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-a-L-idopyranosyluronique)-(1 -
    4)-[0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2, 3-di-O-
    méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]4-2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyra-
    noside1 sel de sodium;
    Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-a-L-idopyranosyluronique)-(1-
    4)-[0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-O-(acide 2, 3-di-O- méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]5-2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyra-
    noside, sel de sodium;
    Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-a-L-idopyranosyluronique)-(1-
    4)-[0-(2, 3,6-tri-O-sulfo-a-D-glucopyranosyl)-(l -4)-O-(acide 2, 3-di-O- méthyl-a-L-idopyranosyluronique)-(1 1-4)16-2, 3,6-tri-O-sulfo-oc-D-glucopyra-
    noside, sel de sodium;
    Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl4-O-sulfo-a-L-idopyranosyluronique)-(1 -
    4)-[0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-O-(acide 2,3-di-O méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]7-2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyra-
    noside, sel de sodium;
    Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-
    4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O méthyl-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]8-2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyra-
    noside, sel de sodium;
    Méthyl O-(acide 2,3-di-O-methyl-4-O-sulfo-ss-D-glucopyranosyluronique)-
    (1-4)-[O-(2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 2,3-di-O méthyl-P-D-glucopyranosyluronique)-(l -4)]4-2, 3,6Àri-O-sulfo-a-D-
    glucopyranoside, sel de sodium;
    Méthyl O-(acide 2,3-di-O-méthyl-4-O-sulfo-ss-D-glucopyranosyluronique)- (1 -4)-[0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-O-(acide 2,3-di-O méthyl-P-D-glucopyranosyluronique)-(l -4)]3-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D- glucopyranoside, sel de sodium;
    Méthyl O-(acide 3-0-méthyl-2, 4-di-O-sulfoix-L-idopyranosyluronique)-( 1- 4-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O méthyl-2-O-sulfo-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]4-3-O-méthyl-2,6-di-O- sulfo-a-D-glucopyranoside, sel de sodium;
    Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1- 4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O méthyl-2-O-sulfo-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]3-3-O-méthyl-2,6-di-O- sulfo-a-D-glucopyranoside, sel de sodium;
    Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-a-L-idopyranosyluronique)-(1- 4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O méthyl-2-O-sulfo-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]5-3-O-méthyl-2,6-di-O- sulfo-a-D-glucopyranoside, sel de sodium;
    Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-ss-D-glucopyranosyluronique) (1 -4)-[0-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-a-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-O- (acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-P-D-glucopyrnnosylurnnique)-( I 4)]4-3-O- méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranoside, sel de sodium;
    Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2,4-di-O-sulfo-a-L-idopyranosyluronique)-(1- 4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O méthyl-2-O-sulfo-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]2-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;- -D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-&alpha;-L-idopyrano- syluronique)-(1-4)-3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranoside, sel de sodium; et
    Méthyl O-(acide 3-O-méthyl-2, 4-di-O-sulfo-a-L-idopyranosyluronique)-( I - 4)-[O-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo-&alpha;-D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O méthyl-2-O-sulfo-&alpha;-L-idopyranosyluronique)-(1-4)]3-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-&alpha;- -D-glucopyranosyl)-(1-4)-O-(acide 3-O-méthyl-2-O-sulfo-&alpha;-L-idopyrano-
    syluronique)-(14)-3-O-méthyl-2,6-di-O-sulfo < -D-glucopyranoside, sel de
    sodium.
  15. 15. Procédé de préparation des composés de formule (I) selon la re
    vendication 2, caractérisé en ce que (a) on couple selon les méthodes classiques de la chimie des sucres un
    monosaccharide donneur de liaison glycosidique à un monosaccharide
    accepteur de liaison glycosidique pour obtenir un synthon saccharidique
    intermédiaire de type disaccharide complètement protégé de formule (A):
    Figure img00600001
    Figure img00610001
    disaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (C):
    façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type
    dans laquelle T2 à T7 et Z sont tels que définis ci-dessus pour (A) et X représente un groupe activateur du carbone anomérique, puis (c) on modifie chimiquement le disaccharide de formule (A) ci-dessus de
    Figure img00600002
    disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B):
    façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type
    permanent ou temporaire, (b) on modifie chimiquement le disaccharide de formule (A) cidessus de
    utilisés en chimie des sucres comme groupe protecteur permanent, semi
    identiques ou différents sont choisis parmi les groupes protecteurs
    dans laquelle les substituants T1, T2, T3, T4, Tg, T6, T7, T8 et Z
    Figure img00610002
    complètement protégé de formule (D):
    formule (C) obtenu ci-dessus de façon à obtenir un tétrasaccharide
    obtenu ci-dessus et un disaccharide accepteur de liaison glycosidique de
    classiques de la chimie des sucres, puis (d) on couple un disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B)
    éliminant sélectivement le groupe protecteur Z selon des méthodes
    dans laquelle T1 à T7 sont tels que définis ci-dessus pour (A), en
    Figure img00620001
    de type tétrasaccharide de formule (D) de façon à obtenir un synthon saccharidique intermédiaire de type tétrasaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (E):
    Tg, T10, T1 i, T12 et T13 sont tels que définis pour T2 à T7 puis, (e) on modifie ensuite chimiquement le synthon saccharidique intermédiaire
    dans laquelle T1 à T7 et Z sont tels que définis ci-dessus pour (A) et Tg,
    Figure img00620002
    formule (F):
    façon à obtenir un tétrasacchaiide accepteur de liaison glycosidique de
    que définis pour (D) puis, (f) on déprotège ensuite sélectivement le tétrasaccharide de formule (D) de
    dans lequel X a la même définition que pour (B) et T2 à T13 sont tels
    Figure img00630002
    dans laquelle T1 à T13 sont tels que définis précédemment pour (D) et T1 4 à T1 g sont tels que définis pour T2 à T7 pour (B); ou bien on couple le tétrasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (F) et un tétrasaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (E) de façon à obtenir un octasaccharide complètement protégé de formule (H):
    Figure img00630001
    hexasaccharide complètement protégé de formule (G):
    que ceux obtenus ci-dessus pour former un synthon intermédiaire de type
    (F) et un disaccharide donneur de liaison glycosidique de formule (B) tel
    dans laquelle T1 à T1 3 sont tels que définis précédemment pour (D) puis, (g) on couple le tétrasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule
    sels.
    fonctions au cours des étapes d'élaboration du squelette, puis, finalement (k) on procède à la sulfatation pour obtenir les composés (I), ou un de leurs
    sulfatées, en éliminant les substituants T1 à T25 qui protégeaient les
    alkyles sur le produit final (I), et (j) on procède à la déprotection des fonctions alcools qui doivent être
    substituants protecteurs détermine la position des groupes sulfates et
    polysaccharide final désiré de formule (I), dans lequel la nature des
    structure finale pour obtenir ainsi le précurseur protégé du
    de glycosyle et accepteur de glycosyle étant choisis en fonction de la
    structure désirée, les synthons intermédiaires saccharidiques donneurs
    l'obtention de l'oligosaccharide complètement protégé possédant la
    lequel Z représente l'hydrogène, (i) on répète les étapes de déprotection et de couplage précédentes jusqu'à
    un octasaccharide accepteur de liaison glycosidique de formule (H) dans
    glycosidique de formule (G) dans lequel Z représente l'hydrogène ou bien
    synthon intermédiaire de type hexasaccharide accepteur de liaison
    l'octasaccharide de formule (H) obtenus ci-dessus de façon à obtenir un
    T25 sont tels que définis pour T2 à T7 pour (B) puis, (h) on modifie chimiquement l'hexasaccharide de formule (G) ou
    dans laquelle T1 à T1 g et Z sont tels que définis précédemment et T20 à
  16. 16. Compositions pharmaceutiques contenant comme principe actif un
    polysaccharide ou sel selon l'une quelconque des revendications 1 à 14,
    sous forme de sel avec une base pharmaceutiquement acceptable ou
    sous forme acide, en association ou en mélange avec un excipient inerte,
    non toxique, pharmaceutiquement acceptable.
  17. 17. Composition pharmaceutique selon la revendication 16, sous forme
    d'unités de dosage, dans laquelle le principe actif est mélangé à au moins
    un excipient pharmaceutique.
  18. 18. Composition selon la revendication 17 dans laquelle chaque unité de
    dosage contient de 0,1 à 100 mg de principe actif.
  19. 19. Composition selon la revendication 18 dans laquelle chaque unité de
    dosage contient de 0,5 à 50 mg de principe actif.
  20. 20. Composition pharmaceutique contenant un polysaccharide ou sel selon
    les revendications 1 à 14 en association avec un autre principe actif
    antithrombotique, anticoagulant, antiagrégant plaquettaire ou antagoniste
    du complexe de la glycoproteine IIbEIa.
  21. 21. Composition pharmaceutique selon la revendication 20 caractérisé en ce
    que le principe actif associé est le dipyridamole, I'aspirine, la ticlopidine
    ou le ciopidogrel.
  22. 22. Utilisation des polysaccharide et sel selon les revendications 1 à 14 pour
    la préparation d'un médicament utile dans les pathologies dépendantes
    d'un dysfonctionnement de la coagulation.
  23. 23. Utilisation des polysaccharide et sel selon les revendications 1 à 14 pour
    la préparation d'un médicament utile pour l'inhibition des facteurs de
    croissance se traduisant par une inhibition de la prolifération cellulaire.
  24. 24. Utilisation des polysaccharide et sel selon les revendications 1 à 14 pour
    la préparation d'un médicament présentant des propriétés antivirales,
    hypol ipidémiantes, anti radicaux libres, antimétastasiques,
    antiangiogéniques, anti-inflammatoires.
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