ES2200494T3 - Pentasacaridos, sus procedimientos de preparacion y composiciones farmaceuticas que los contienen. - Google Patents

Pentasacaridos, sus procedimientos de preparacion y composiciones farmaceuticas que los contienen.

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ES2200494T3 ES99900525T ES99900525T ES2200494T3 ES 2200494 T3 ES2200494 T3 ES 2200494T3 ES 99900525 T ES99900525 T ES 99900525T ES 99900525 T ES99900525 T ES 99900525T ES 2200494 T3 ES2200494 T3 ES 2200494T3
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Abstract

Pentasacárido bajo forma ácida y sus sales farmacéuticamente aceptables, cuya forma iónica tiene como fórmula **(Fórmula)** en la que: - R representa el hidrógeno, un grupo -SO3-, (C1-C3)alquilo o (C1-C3)acilo; - T representa el hidrógeno o un grupo etilo;

Description

Pentasacáridos, sus procedimientos de preparación y composiciones farmacéuticas que los contienen.
La presente invención se refiere a unos pentasacáridos, a sus procedimientos de preparación y a las composiciones farmacéuticas que los contienen.
La heparina es un polisacárido de la familia de los glicosaminoglicanos, conocida por sus propiedades anticoagulantes. Es ya sabido (I. Björk y U. Lindahi, Molecular and Celular Biochemistry, 1982, Dr. W. Junk Publishers +Países Bajos) que la coagulación sanguínea constituye un fenómeno fisiológico complejo. Determinados estímulos, tales como la activación de contacto y el factor relativo a los tejidos orgánicos, determinan la activación sucesiva de una serie de factores de la coagulación presentes en el plasma sanguíneo. Sea cual sea la naturaleza del estímulo., las etapas finales con idénticas, el factor X activado (Xa) activa el factor II (igualmente denominado protrombina), el cual bajo la forma activada (factor IIa, igualmente denominado trombina) provoca la proteolisis parcial del fibrinógeno soluble con liberación de la fibrina insoluble, uno de los principales elementos constitutivos del coágulo sanguíneo.
En las condiciones fisiológicas normales la actividad de los factores de coagulación se halla regulada por proteínas tales como la antitrombina III (AT III) y el cofactor II de la heparina (HC II) que están igualmente presentes en el plasma. La AT III ejerce una actividad inhibidora sobre un cierto número de factores de coagulación y especialmente sobre los factores Xa y IIa.
La inhibición del factor Xa o del factor IIa constituye, pues, el medio privilegiado para obtener una actividad anticoagulante y antitrombótica dado que estos dos factores intervienen en las dos últimas etapas de la coagulación, las cuales son independientes del estímulo que ha determinado el inicio del proceso.
Un pentasacárido tal como el descrito por P. Sinaÿ y otros, Carbohydrato Research 1984, 132 C5, representa la secuencia mínima de la heparina, requerida para el enlace con AT II. Este compuesto ha podido obtenerse, hace aproximadamente una quincena de años, por síntesis química total.
Después de ello, han sido descritos en la literatura un cierto número de oligosacáridos de síntesis, obtenidos por síntesis química total y dotados de actividades antitrombóticas y anticoagulantes.
En la patente EP 0 084 999 se describen unos derivados constituidos por unidades monosacarídicas ácidos urónicos (glucurónico e idurónico) y glucosamina que poseen unas propiedades antitrombóticas interesantes. Aparte de los sustitutivos constituidos por grupos hidroxi, estos compuestos contienen grupos N-sulfato, grupos N-acetilo y, en determinados casos, los grupos anoméricos hidroxi son sustituidos por grupos metoxi.
En la solicitud de EP 0 165 134 se describen también unos oligosacáridos de síntesis que presentan actividades antitrombóticas. Estos compuestos constituidos por unidades monosacarídicas ácidos urónicos y glucosamina y comportando en la posición 3 de la glucosamina un grupo O-sulfato, aparecen asimismo descritos en la solicitud EP 0 301 618. Estos compuestos poseen unas potentes propiedades antitrombóticas y anticoagulantes. La patente EP 0 454 220 describe unos derivados de ácidos urónicos y de glucosa poseyendo como sustitutivos grupos O-alquilo u O-sulfato. Estos derivados compuestos se hallan asimismo dotados de propiedades antitrombóticas y anticoagulantes. Aparecen también descritos en la patente EP 0 529 175 unos derivados glucosaminoglicanoides sulfatados en los que los grupos funcionales N-sulfato, N-acetato o hidroxi han sido reemplazados por grupos alcoxi, ariloxi u O-sulfatos. Estos compuestos presentan propiedades antitrombóticas interesantes. Estos últimos compuestos son también inhibidores de la proliferación de células musculares lisas.
En Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1993, 32, 3, 434-436 aparecen descritos unos oligosacáridos y especialmente pentasacáridos, análogos a la secuencia mínima de la heparina requerida para el enlace a AT II. Estos compuestos contienen unidades ácidas glucorónicas o glucosa cuyas funciones hidroxi han sido sustituidas por grupos O-sulfato u O-metilo. Se han realizado después numerosos estudios sobre pentasacáridos y se ha indicado en la literatura que la conformación de la unidad ácido L-idurónico G desempeña un importante papel para la actividad de los productos. Se han descrito varios estados conformacionales para la unidad G (^{4}C_{1}, ^{1}C_{4}, ^{2}S_{0}) y se ha sugerido que esta flexibilidad conformacional resulta esencial para la actividad biológica de los productos que contienen ácido L-iudorínico (B. Casu, M. Petitou, A. Provasoli y P. Sinay, Conformational flexibility: a new concept for explaining binding and biological properties of iduronic acid-containing glycosaminoglycans, Trends Biochem. Sci. 1988, 13, 221-225). El documento Chem. Eur. J. 1996, 2, 8, 1007-1013 divulga unos pentasacáridos en los que la uni-L-idurónica G se halla en una conformación forzada ^{1}C_{4} denominada "bloqueada" por un puente alquileno entre el hidroxilo en posición 3 y el carbono en posición 5 resultando en una unidad 3-O-5-C-alquileno-2-O(R)-\alpha-L-idopiranururonato. De acuerdo con este documento, los compuestos o la unidad L-idurónica G se halla en una conformación forzosa ^{1}C_{4} poseyendo una muy débil actividad anti-factor Xa y en consecuencia ninguna afinidad para la AT III. Ello poner de manifiesto que la flexibilidad conformacional de la unidad G resulta esencial para la actividad biológica.
Se ha descubierto ahora, de manera sorprendente, que sustituyendo uno de los grupos O-alquilo por un puente alquileno, y bloqueando consecuentemente la conformación del ácido L-idurónico, se obtiene unos oligosacáridos dotados de propiedades biológicas interesantes aunque desprovistos de flexibilidad conformacional. En efecto, los compuestos objeto de la presente invención se distinguen de los otros heparinoides de síntesis descritos en la literatura por sus estructuras originales y por sus propiedades biológicas potentes e inesperadas. Los compuestos objeto de la invención son pentasacáridos en los que la unidad L-iudorónica G se halla en la conformación ^{2}S_{0} denominada "bloqueada" y en los que la unidad ácida D-glucurónica E posee eventualmente en posición 5 un grupo etilo. Estos compuestos poseen una muy grande actividad anti-factor Xa, y una gran afinidad para el AT III.
La presente invención tiene más particularmente por objeto un pentasacárido bajo forma ácida y sus sales farmacéuticamente aceptables, con uno o varios cationes farmacéuticamente aceptables, cuya forma aniónica tiene como fórmula (I)
1
en la que:
- R represente el hidrógeno, un grupo -SO_{3}, (C_{1}-C_{3})alquilo o (C_{2}-C_{3})acilo;
- T representa el hidrógeno, o un grupo etilo;
- n representa 1 ó 2.
La invención engloba los pentasacáridos bajo forma ácida, o bajo forma de sal farmacéuticamente aceptable. En la forma ácida, las funciones -COO- y -SO_{3}- se hallan respectivamente bajo forma -COOH y -SO_{3}H.
Se entienden por sales farmacéuticamente aceptables de los pentasacáridos objeto de la invención, los pentasacáridos en los que una o varias de las funciones -COO- y/o -SO_{3}- se hallan unidas de manera iónica a un catión metálico farmacéuticamente aceptable.
Las sales preferidas de acuerdo con la invención son aquéllas en las que el catión ha sido elegido entre los cationes de metales alcalinos y aún más preferentemente, aquéllas en las que el catión es Na^{+} o K^{-}.
La presente invención tiene igualmente por objeto un procedimiento para la preparación de los pentasacáridos según la invención, caracterizado porque se prepara un precursor de la unidad G que se acopla sobre un precursor de la unidad H para obtener un precursor de GH, obteniéndose finalmente el pentasacárido ya sea acoplando un predecesor de GH sobre un precursor de DEF, ya sea acoplando un precursor de GH sobre un precursor de EF y después adición de D.
Es posible utilizar cualquier precursor de G, de H, de EF o de DEF. Ello significa que, según estos procedimientos, resulta posible preparar toda una familia de pentasacáridos que presenten en común la unidad G de configuración bloqueada.
El procedimiento que se ha indicado es el procedimiento preferido de acuerdo con la invención. Sin embargo, los pentasacáridos objeto de la invención pueden prepararse siguiendo otros métodos conocidos por la química de los azúcares, y, especialmente, haciendo reaccionar un monosacárido que comporte grupos protectores tales como los descritos por T.W. Green en Protective Groups in Organic Synthesis (Wiley, N.Y. 1981) sobre los radicales hidroxi y eventualmente sobre los radicales carboxi si dispone de los mismos, con otro monosacárido protegido, para formar un disacárido sobre el que seguidamente se hace reaccionar otro monosacárido protegido, para formar un trisacárido protegido, a partir del cual es posible obtener un tetrasacárido protegido y después un pentasacárido protegido.
Los pentasacáridos protegidos son seguidamente desprotegidos y eventualmente sulfatados o primero parcialmente desprotegidos, después sulfatados y seguidamente desprotegidos, para obtener los compuestos objeto de la invención.
Estos procedimientos son ya conocidos en la química de los glúcidos, y han sido particularmente descritos por G. Jaurand y otros en Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 1992, 2, 9, 897-900, por J. Basten y otros en Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 1992, 2, 9, 905-910 y por M. Petitou y C.A.A. van Boeckel en "Chemical syntesis of heparin fragment and analogues", 203-210 Progress in the chemistry of organic natural products, Ed. Springer Verlag Wien - N.Y. 1992.
El procedimiento que se ha descrito permite obtener los compuestos objeto de la invención bajo la forma de sales. Para obtener los ácidos correspondientes, los compuestos según la invención bajo la forma de sales deben ser puestos en contacto con una resina intercambiadora de cationes bajo forma ácida.
Los compuestos objeto de la invención bajo forma de ácidos pueden ser seguidamente neutralizados por una base para obtener la sal que se desee.
A este efecto, es posible utilizar cualquier base mineral u orgánica que pueda conducir a sales farmacéuticamente aceptables.
Se utiliza de manera preferente el hidróxido de sodio, de potasio, de calcio o de magnesio. Las sales de sodio y de calcio de los pentasacáridos objeto de la invención constituyen la sales preferidas.
Los compuestos objeto de la presente invención presentan propiedades farmacológicas y bioquímicas interesantes. Estos compuestos poseen más en particular una gran actividad anti-factor Xa y una gran afinidad para el AT III.
Tal como se ha mencionado ya anteriormente, el factor Xa en la cascada de la coagulación activa la protorrombina en trombina, que proteoliza el fibrogeno soluble con liberación de la fibrina insoluble, constituyen te principal del coágulo sanguíneo.
La inhibición del factor Xa constituye, pues, un medio privilegiado para obtener una actividad anticoagulante y antitrombótica. La actividad anti-factor Xa de los productos objeto de la invención a sido evaluada a un pH 7, de acuerdo con el método descrito por Teien A.N. y Lie M. en Therombosis Research 1977, 10, 399-410, y ha podido demostrarse que los productos objeto de la invención poseen una actividad anti-Xa igual o superior a la de los hiparinoides de síntesis ya conocidos.
La afinidad de los pentasacáridos objeto de la invención, cuyo anión obedece a la fórmula (I), por el AT III, ha sido determinada por espectrofluorometría en las condiciones descritas por D. Atha y otros en Biochemistry 1987, 26, 6454-6461. El resultado de las pruebas ha puesto de manifiesto que los compuestos objeto de la invención poseían una muy grande afinidad para el AT III.
Por otra parte, la actividad antitrombótica global de estos compuestos se ha evaluado en las ratas por un modelo de estasis venosa e inducción por la tromboplastina, según el método descrito por J. Reyers y otros en Therombosis Research 1980, 18, 669-674.
La DE_{50} de los compuestos objeto de la invención es como mínimo del mismo orden o inferior a la de las otras heparinas de síntesis ya conocidas. Los compuestos de la invención presentan, pues, una especificidad de acción y una actividad anticoagulante y antitrombótica interesantes.
Los compuestos de la invención resultan útiles para la preparación de composiciones farmacéuticas administrables por vía parenteral.
Los compuestos objeto de la invención son muy poco tóxicos; su toxicidad resulta perfectamente compatible con su utilización como medicamentos.
Los compuestos según la invención son muy estables, por lo que resultan particularmente apropiados para constituir el principio activo de medicamentos.
La invención se extiende también a las composiciones farmacéuticas que contengan como principio activo un compuesto según la invención o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, eventualmente en asociación con uno o varios excipientes inertes y apropiados.
En cada unidad de dosificación, el principio activo debe estar presente en las cantidades apropiadas a las dosis diarias que se hayan previsto. Cada unidad de dosificación contiene entre 0,1 y 100 mg de principio activo, preferentemente entre 0,5 y 50 mg.
Los compuestos que constituyen objeto de la invención pueden igualmente utilizarse en asociación con uno o varios otros principios activos útiles para la terapéutica que se desee, tales como, por ejemplo, antitrombóticos, anticoagulantes, antiagregantes plaquetarios, tales como, por ejemplo, dipiridamol, aspirina, ticlopidina, clopidogrel o antagonistas del complejo de la glicoproteína IIb/IIIa.
Las composiciones farmacéuticas se formulan en vistas a su administración a los mamíferos, incluyendo el hombre, para el tratamiento de las enfermedades indicadas.
Las composiciones farmacéuticas obtenidas de esta manera se presentarán ventajosamente bajo diferentes formas, tales como, por ejemplo, soluciones inyectables o bebibles, grageas, comprimidos o gélulas. Las soluciones inyectables constituyen las formas farmacéuticas preferidas. Las composiciones farmacéuticas objeto de la presente invención resultan especialmente útiles para el tratamiento a título preventivo o curativo de las perturbaciones de la pared vascular, tales como la arterioresclerosis, los estados de hipercoagubilidad observados, por ejemplo, como consecuencia de operaciones quirúrgicas de desarrollos tumorales o de desarreglos de la coagulación, inducidos por activadores bacterianos, virales o enzimáticos.
De una manera más general, los pentasacáridos objeto de la invención pueden utilizarse para el tratamiento de patologías que dependan de un disfuncionamiento de la coagulación.
La posología puede variar ampliamente en función de la edad, del peso y del estado de salud del paciente, de la naturaleza y de la severidad de la afección, así como de la vía de administración. Esta posología comprende la administración de una o varias dosis de aproximadamente entre 0,5 y 1000 mg cada día, preferentemente de entre 1 y 100 mg cada día, o, mejor aún, de entre 0,5 y 50 mg cada día, por ejemplo, del orden de 20 mg cada día, por vía intramuscular o por vía subcutánea, en administraciones discontinuas o a intervalos regulares, o de una dosis diaria del orden de entre 200 y 1000 mg cada día, por vía oral.
Como es lógico, estas dosis pueden ser ajustadas para cada paciente, en función de los resultados observados y de los análisis de sangre previamente llevados a cabo.
La administración por vía subcutánea constituye la vía preferente.
La presente invención tiene pues generalmente por objeto las composiciones farmacéuticas que contienen a título de principio activo uno de los compuestos antes citados eventualmente asociado a otro principio activo. Estas composiciones se realizan en vistas a poder ser administradas por la vía digestiva o parenteral.
En las composiciones farmacéuticas objeto de la presente invención destinadas a la administración oral, sublingual, subcutánea, intramuscular, intravenosa, transdérmica, transmucosa, local o rectal, el ingrediente activo puede ser administrado bajo formas unitarias de administración, mezclado con soportes farmacéuticos de tipo clásico, a los animales y a los seres humanos. Las formas unitarias de administración apropiadas comprenden las formas por vía oral tales como los comprimidos, las gélulas, los polvos, los granulados y las soluciones y suspensiones orales, las formas de administración sublingual o bucal, las formas de administración subcutánea, intramuscular, intravenosa, intranasal o intraocular y las formas de administración rectal.
Cuando se prepara una composición sólida en forma de comprimidos, se mezcla el ingrediente activo principal con un vehículo farmacéutico tal como gelatina, almidón, lactosa, estearato de magnesio, talco, goma arábica o análogos. Pueden envolverse los comprimidos con sacarosa u otras materias apropiadas o incluso se les puede tratar de tal manera que tengan una actividad prolongada o retrasada y que liberen de una forma continua una cantidad predeterminada de principio activo.
Se obtiene una preparación en forma de gélulas mezclando el ingrediente activo con un diluyente y vertiendo la mezcla obtenida en gélulas blandas o duras.
Los polvos y los granulados dispersables en agua pueden contener el ingrediente activo mezclado con agentes de dispersión o agentes mojantes, o con agentes de puesta en suspensión, como la polivinilpirrolidona, al igual que con edulcorantes o correctores de gusto.
En vistas a una administración rectal, se recurre a supositorios que se preparan con unos ligantes que fundan a la temperatura rectal, por ejemplo, manteca de cacao o polietilenoglicoles.
Para una administración parenteral, intranasal o intraocular, se utilizan suspensiones acuosas, soluciones salinas isotónicas o soluciones estériles e inyectables que contienen agentes de dispersión y/o agentes mojantes farmacológicamente compatibles, por ejemplo, propilenoglicol o butilenoglicol.
En vistas a una administración transmucosa, el principio activo puede formularse en presencia de un promotor tal como una sal biliar, de un polímero hidrófilo tal como, por ejemplo, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, los almidones, la gelatina, la caseína, los ácidos acrílicos, los esteres acrílicos y sus copolímeros, los polímeros o copolímeros de vinilo, los alcoholes venílicos, los alcoxipolimeros, los polímeros de óxido de polietileno, los poliéteres o su mezcla.
El principio activo puede igualmente ser formulado bajo la forma de microcápsulas, eventualmente con uno o varios soportes o aditivos.
El principio activo puede igualmente presentarse bajo forma de complejo con una ciclodextrina, por ejemplo \alpha, \beta o \gamma (ciclodextrina, 2-hidroxipropil-\beta-ciclodextrina o metil-\beta-ciclodextrina).
El principio activo puede igualmente ser liberado por un pequeño globo que lo contenga o por un extensor endovascular introducido en los vasos sanguíneos. De esta manera la eficacia farmacológica del principio activo no se ve afectada.
La administración por vía subcutánea constituye la vía preferente.
Los métodos, las preparaciones y los esquemas que siguen ilustran la síntesis de diferentes intermediarios que resultan útiles para la obtención de los pentasacáridos objeto de la invención.
Se utilizan las siguientes abreviaturas: TBDMS: tert-butidimetilsililo; Lev: levulinilo; Bn: bencilo; Bz: benzoilo; CCM: cromatografía sobre capa delgada; Olm: tricloroacetimida; LSIMS: es la sigla inglesa de "Liquid Secondary Lon Mass Spectrometry"; ESIMS: es la sigla inglesa de "Electron Spray Ionisation Mass Spectrometry"; TMS: trimetilsililo; TSP: trimetilsililo tetradeuterio propionato de sodio; Tf: triflato; MS: tamiz molecular; All: alilo; PMB: p-metoxibencilo; SE: trimetilsililotilo; Dowex®, Sephadex®, Chelex®, Totopear® son marcas registradas.
En los métodos, las preparaciones y los ejemplos que se describen a continuación, las formas operatorias generales relativas al acoplamiento catalítico de los imidatos, el clivaje de los esteres levulínicos, el acoplamiento catalítico de los tioglicósidos, la saponificación, la metilación y la desprotección selectiva del grupo p-metoxibencilo, la desprotección y la sulfatación de los oligo y de los polisacáridos por hidrogenolisis de los esteres o de esteres bencílicos, la saponificación de los esteres o incluso las sulfataciones, pueden llevarse acabo aplicando los métodos generales que se indican a continuación a los intermediarios apropiados.
Los compuestos de la presente invención son sintetizados según las diferentes preparaciones que se indican a continuación.
Preparación 1
6-O-Tert-butildimetilsilil-1,2-O-isopropilideno-3-O-metil-\alpha -D-glucofuranosa (2)
Se recupera el diol 1 (10 g, 42,7 mols) en diclorometano anhidro (100 m1) y se añade cloruro de tert-butildimetilsililo (7,1 g, 47,3 mols) e imidazol (5,8 g, 85,3 mmols). Se agita la mezcla reaccional a la temperatura ambiente. Después de 2 horas, se diluye la mezcla en diclorometano y se lava con agua. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, se concentra y se purifica el residuo por cromatografía sobre una columna de gel de sílice (acetato de etilo/ciclohexano 1/9 v/v) con objeto de obtener el producto deseado 2 (11,9 g, 80%) bajo la forma de un jarabe.
[\alpha]_{D} - 34ºC (c 1,9, CHCl_{3}).
Preparación 2
6-O-Tert-burildimetilsilil-1,2-O-isopropilideno-3-O-metil-5-C-vinil-\alpha -D-glucofuranosa (4)
A -78ºC se añaden al diclorometano anhidro (40 ml) cloruro de oxalilo (3,2 ml, 36,8 mmols) y dimetilsulfóxido (5,2 ml, 73,4 mmols) y se agita durante 30 minutos. Seguidamente, se añade el compuesto 2 (6,4 g, 18,4 mmols) y se agita la mezcla durante otra hora. Y después se añade trietilamina (15,3 ml, 110,0 mmols) y, después de 30 minutos, se diluye la mezcla reaccional en diclorometano. Un tratamiento clásico permite obtener el compuesto 5-ulosa (3) que es directamente utilizado para la siguiente reacción. Se recupera la cetona 3 bruta en un tetrahidrofurano anhidro (100 ml) y se añade una solución 1M de bromuro de vinil magnesio en tetrahidrofurano (28 ml, 27,6 mmols) a 0ºC. Después de 1 hora, se diluye la mezcla reaccional no con cloruro de amonio y se lava con agua.
Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, se concentra y se purifica el residuo por cromatografía sobre una columna de gel de sílice (acetato de tilo/ciclohexano 1/9 v/v) con objeto de obtener el compuesto que interesa 4 (70%, 4,8 g) bajo la forma de un jarabe.
[\alpha]_{D} = -40ºC (c 1,3, CHCl_{3})
Anal. Calculado: C, 57,72, H, 9,15, Hallado: C, 57,77, H, 9,23.
Preparación 3
1,2,4,6-Tetra-O-acetil-3-O-metil-5-C-vinil-\beta-D-glucopiranosa (6)
Se recupera el compuesto 4 (3,5 g, 9.4 mmols) en agua (50 ml); se añade resina IR-120 (1 g) y se calienta a 80ºC durante 6 horas. Se filtra la resina y se concentra el filtrado. Se acetila el producto bruto 5 utilizando anhídrido acético (12 ml) y piridina (13 ml). Se destruye el exceso de anhídrido con metanol y se concentran los disolventes. Se extrae el residuo con agua y diclorometano. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, se concentra y, después de purificación por cromatografía sobre una columna de gel de sílice (acetato de etilo/ciclohexano 3/2 v/v), se obtiene el compuesto tetra-acetato 6 bajo la forma de un sólido (75%, 2,7 g) Pf 50ºC.
[\alpha]_{D} - 84ºC (c 1,6, CHCl_{3})
Anal. Calculado: C, 52,47, H, 6,19. Hallado: C, 52,51, H, 6,19.
CI-MS: 406 (M + NH_{4}), 389 (M + 1).
Preparación 4
Metil 2,3,6-tri-O-bencil-4-O-(2,4,6-tri-O-acetil-3-O-metil-5-C-vinil-\beta -D-glucopiranosil)-\beta-D-glucopiranosido (8)
Se disuelven en diclorometano anhidro (50 ml) el compuesto 6 (1,6 g, 4,1 mmols) y el compuesto 7 (2,1 g, 4,5 mmols) P.J. Garegg y H. Hultberg, Carbonhydr. Res. 1981, 93, C10, y se añade un tamiz molecular (4,0 g). Se agita la mezcla reaccional a la temperatura ambiente durante una hora y se añade después TMSOTf (0,95 ml, 5,2 mmols) a -78ºC. Seguidamente se permite que la mezcla reaccional recupere lentamente la temperatura ambiente. Después de 2 horas, se neutraliza la mezcla reaccional con trietilamina y se filtra sobre Celite; se lava el filtrado con agua. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, se concentra el residuo y se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (acetato de etilo/ciclohexano 4/1 v/v) para obtener el compuesto apetecido 8 (2,77 g, 85%) bajo la forma de un sólido. Pf 47ºC.
[\alpha]_{D} - 36ºC (c 0,6, CHCl_{3}).
Anal. Calculado: C, 65,14, H, 6,61.
Hallado: C, 65,09, H, 6,70.
Preparación 5
Metil 2,3,6-O-tri-O-bencil-4-O-(4,6-O-isopropilideno-3-O-metil-5-C-vinil -\beta-D-glucopiranosil)-\alpha-D-glucopiranodido (10)
Se solubiliza el compuesto 8 (2,7 g, 3,4 mmols) en metanol (40 ml). Se añade sodio (catalítico) a 0ºC y se agita a la temperatura ambiente durante 3 horas. Se concentra el disolvente y se recupera el residuo 9 en acetato anhidro (40 ml) y se añaden 2,2-dimetoxipropano (2 ml) y ácido p-tolueno sulfónico (catalítico). Se agita la mezcla reaccional a la temperatura ambiente durante una noche. Se evapora el disolvente, se recupera el residuo en cloroformo y se lava con agua. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, se concentra y se purifica el residuo por cromatografía sobre columna de sílice (acetato de etilo/ciclohexano 1/1 v/v) para obtener el derivado 4', 6' iropropilideno -O-10 (1,7 g, 70%) bajo la forma de un sólido. Pf 55ºC.
[\alpha]_{D} + 13ºC (c 0,8, CHCl_{3}).
Anal. Calculado: C, 67,97, H, 7,13.
Hallado: C, 67,87, H, 7,16.
CI-MS: 707 (M + 1), 724 (M + NH_{4}).
Preparación 6
Metil 2,3,6-tri-O-bencil-4-O-(4,6-O-isopropilideno-3-O-metil-5-C-vinil -\beta-D-manopiranosil)-\alpha-D-glucopiranosido (12)
Se agitan cloruro de oxalilo (0,35 ml, 4,0 mmols) y DMSO anhidro (0,57 ml, 8,0 mmols) en diclorometano anhidro (10 ml) a -78ºC durante 30 minutos. Se añade a la solución el compuesto 10 (1,4 g, 2,0 mmols) y se agita durante otros 45 minutos. Se neutraliza la mezcla reaccional mediante la adición de trietilamina anhidro (1,7 ml, 12,0 mmols) y se diluye después con diclorometano. Después de lavarla con agua, se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, se concentra y se utiliza directamente el residuo 11 para la siguiente reacción, sin purificación. Se recupera la cetona 11 en tetrahidrofurano anhidro (15 mi) y se añade una solución 1N de super hidruro en tetrahidrofurano (4 ml, 4,0 mmols) a -78ºC. Se agita la mezcla reaccional a la temperatura ambiente durante 1 hora y se añade seguidamente hidróxido de sodio al 5% (2 ml) y peróxido de hidrógeno (1 ml). Se evapora el disolvente y se recupera el residuo con acetato de etilo y se lava con agua. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, se concentra y se purifica el residuo por cromatografía (acetato de etilo/ciclohexano 2/1 v/v) para obtener el compuesto 12 (1,0 g, 70%).
[\alpha]_{D} - 11ºC (c 0,5, CHCl_{3})
CI-MS: 724 (M + 18), 707 (M + 1).
Preparación 7
Metil 2,3,6-tri-O-bencil-4-O-(2-O-acetil-3-O-metil-5-C-vinil-\beta-D -manopiranosil)-\alpha-D-glucopiranosido (14)
Se disuelve el compuesto 12 (940 mg, 1,3 mmols) en piridina (3 ml) y se añade anhídrido acético (0,3 ml). Se agita la mezcla reaccional a la temperatura ambiente durante 3 horas. Se concentra el exceso de piridina y de anhídrido acético y se utiliza directamente el residuo 13 para la desprotección de isopropilideno utilizando ácido acético al 80% (5 ml) a 60ºC durante 2 horas. Se evapora el exceso de ácido acético y se purifica el residuo por cromatografía sobre una columna de gel de sílice (acetato de etilo/ciclohexano 4/1 v/v) para obtener el diol 14 (660 mg, 70%) bajo forma sólida. Pf. 53ºC.
[\alpha]_{D} - 10ºC (c 0,8, CHCl_{3}).
CI-MS: 709 (M + 1), 726 (M + 18).
Preparación 8
Metil 2,3,6-tri-O-bencil-4-O-(2-O-acetil-3-O-metil-6-O-tosil-5-C-vinil -\beta-D-menopiranosil)-\alpha-D-glucopiranosa (15)
Se disuelve el compuesto 14 (600 mg, 0,9 mmols) en piridina (3 mi) y se añade cloruro de tosilo (240 mg, 1,3 mmols). Se agita la mezcla reaccional a la temperatura ambiente durante 3 horas. Se evapora el disolvente, se diluye el residuo con cloroformo y se lava con agua. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, se concentra y se purifica el residuo por cromatografía sobre una columna de gel de sílice (acetato de etilo/ciclohexano 1/1 v/v) para obtener el compuesto tosilado 15 (297 mg, 80%) bajo la forma de un jarabe.
[\alpha]_{D} - 26ºC (c 0,8, CHCl_{3}).
Preparación 9
Metil 2,3,6-tri-O-bencil-4-O-(2,6-anhidro-3-O-metil-5-C-vinil -\beta-D-manopiranosil)-\alpha-D-glucopiranosido (16)
Se recupera en etanol el compuesto 15 (550 mg, 0,6 mmols) y se añade seguidamente una solución 0,1N de hidróxido de sodio etanólico (5 ml). Se calienta la mezcla reaccional a 70ºC durante 3 horas y después se neutraliza con una resina IR-120 (forma H^{+}) y se filtra sobre Celite. Después de concentración, se purifica el residuo por cromatografía sobre una columna de gel de sílice (acetato de etilo/ciclohexano 1/1 v/v) para obtener el compuesto 16 (292 mg, 70%) bajo la forma de un jarabe.
[\alpha]_{D} + 13ºC (c 0,5, CHCl_{3})
CI-MS: 666 (M + 18).
Preparación 10
Metil 2,3,6-tri-O-bencil-4-O-(bencil-3-O-metil-2-O-5-C-metilideno -\alpha-L-idopiraneurato)-\alpha-D-glucopiranosido (17)
Se disuelve el compuesto 16 (260 mg, 0,4 mmols) en diclorometano (20 ml), se agita la solución a 78ºC y después se hace borbotear ozono durante 30 segundos. El color de la solución se convierte en amarillo pálido. Se añade a la solución dimetilsulfuro y después se lava la mezcla reaccional con agua. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, se concentra y se pasa directamente a la reacción siguiente sin purificación suplementaria. Se recupera el aldehído bruto con tert-butanol (16 ml) se añaden 2-Metil-2-buteno (5 ml) y agua (16 ml). Seguidamente se añaden sucesivamente a la mezcla NaH_{2}PO_{4} (700 mg) y NaClO_{2} (700 mg). Se agita vigorosamente la suspensión a la temperatura ambiente durante una noche, se diluye con agua y se extrae con acetato de etilo. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, se concentra y después se pasa directamente a la siguiente reacción. Se recupera el ácido bruto en dimetilsulforfamida (25 ml) y se añade yoduro de tetrabutilamonio (0,7 g, 2,0 mmols), bicarbonato de potasio (0,25 g, 2,5 mmols) y bromuro de bencilo (0,250 ml, 2,1 mmols). Se agita la mezcla reaccional a la temperatura ambiente durante 5 horas. Se extrae la mezcla reaccional con agua y éter dietílico. Se seca la fase etérea sobre sulfato de magnesio, se concentra y se purifica el residuo por cromatografía sobre una columna de gel sílice (acetatato de etilo/ciclohexano 2/1 v/v) para obtener el derivado 17 (236 mg, 80%) bajo la forma de un jarabe. Cl-MS: 774 (M + 18).
Preparación 11
Metil O-(6-O-acetil-2,3,4-tri-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(bencil-2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopirano-siluronato) -(1\rightarrow4)-O-(3,6-di-O-acetil-2-O-bencil-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(2,6-anhidro-5-C-benciloxicarbonil-3-O-metil-\beta -D-menopiranosil)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-bencil-\alpha -D-glucopiranosido (19)
Se agita bajo atmósfera inerte el imidato 18 (Van der Haijden y otros, abstr. g^{th} Eur. Carnohydr. Symp. Utrecht, July 6-11, 1997, A74, p.154) (81 mg, 78,2 \mumols) el aceptador 18 (65 mg, 86,0 \mumols) y un fin tamiz molecular (70 mg, 4 À) en una mezcla dicloroetano/éter dietílico, 1/2 (v/v) (2,4 ml).
Se agita la mezcla reaccional durante 30 minutos, y después se añade NaHCO_{3} hasta la neutralización. Después de filtración y concentración, se purifica el residuo sobre una columna de gel de sílice (acetato de etilo/ciclohexano 1/1 v/v) para obtener el compuesto 19 (86 mg, 67%).
[\alpha]_{D} + 66ºC (c, 1,0, CH_{2}CH_{2}).
^{1}HRMN presentado en el Cuadro 1 que figura más adelante.
Preparación 12
Metil O-(2,3,4-tri-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil-(1\rightarrow4) -O-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico)-(1\rightarrow4) -O-(\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(2,6-anhidro-5-C-carboxi -3-O-metil-\beta-D-menopiranosil)-(1\rightarrow4)-\alpha -D-glucopiranosido (20)
Según M. PETITOU y C.A.A. van BOECKEL, Progress in the Chemistry of Organic Natural Products, Eds. W, Herz y otros, Wein, Springer-Verlag, New York, 1992, 143-210.
Se agita bajo atmósfera de hidrógeno (3,5 MPa), durante 12 horas, a 40ºC, una solución del compuesto 19 (49 mg, 30,0 \mumols) en ácido acético (3 ml) en presencia de paladio sobre carbón al 5% (73 mg, 35 b). Se filtra sobre celite, se concentra y se codestila con agua (4 x 5 ml). Se disuelve el residuo en una solución acuosa de NaOH 1 M (3 ml) y se calienta a 55ºC durante 3 horas. Se enfría y se hace pasar la solución a través de una columna Sephadex® 625 F (170 ml) eluída con agua. Se pasan sobre una columna de resina Dowex H^{+} las fracciones que contienen el compuesto 20. Se concentra para aislar el compuesto 20 (25 mg, 86%).
[\alpha]_{D} + 105ºC (c, 1,0, H_{2}O)
^{1}HRMN presentado en el Cuadro 1 que se inserta a continuación.
CUADRO 1
Compuesto Unidad H-1 H-2 H-3 H-4 H-5 H-6 H-6' J_{1-2}(Hz)
19(CDCl_{3}) D 5,50 3,11 3,37 3,03 3,43 4,28 4,22 3,7
E 4,14 2,93 3,31 3,92 3,83 - - -9
F 4,98 3,45 5,41 3,63 3,94 4,58 4,19 3,6
G 5,18 3,83 3,12 4,12 - 4,10 3,98 -1
H 4,58 3,51 4,01 3,78 3,80 3,83 3,61 3,6
20(D_{2}O) D 5,50 3,33 3,49 3,30 3,50 3,74 3,74 3,9
E 4,62 3,26 3,58 3,90 4,04 - - -7,9
F 5,13 3,58 3,76 3,61 3,70 a 3,90 4,1
G 5,23 4,35 3,71 4,20 - 4,25 4,10 -1
H 4,82 3,64 3,84 3,73 3,70 a 3,90 3,7
Preparación 13
Metil O-(4,6-O-isopropilideno-2,3-di-O-metil-5-C-vinil-\beta-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-bencil-\alpha-D-glucopiranosido (22)
A 0ºC, se le añade hidruro de sodio (0,31 g, 13,0 mmols) a una solución de metil O-(4,6-O-isopropilideno-3-O-medil-5-C-vinil-\beta-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-bencil-\alpha-D-glucopiranosido (10) (6,11 g, 8,65 mmols) de yoduro de metilo (0,80 ml, 13,0 mmols) en N,N-dimetilformamida (9,00 ml). Se mantiene bajo agitación durante 2 horas (CCM), se adiciona metanol, y se vierte la mezcla reaccional en agua. Se extrae con acetato de etilo, se lava con agua, se seca y se concentra. Se purifica sobre columna de sílice (ciclohexano/éter dietílico 3/2 v/v) para obtener 22 (5,92 g, 88%). CCM R_{1} 0,28 (ciclohexano/éter dietílico 3/2 v/v).
\newpage
Preparación 14
Metil O-(4,6-O-isopropilideno-2,3-di-O-metil-5-C-etil-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-bencil-\alpha-D-glucopiranosido (23)
Se añade óxido de platino (160 mg) a una solución de 22 (5,80 g, 8,04 mmols) en acetato de etilo (400 ml). Se introduce hidrógeno. Se mantiene bajo agitación durante 40 minutos (CCM), se filtra, se evapora para obtener 23 CCM R_{1} 0,60 (tolueno/acetato de etilo 4/1 v/v).
Preparación 15
Metil O-(2,3-di-O-metil-5-C-etil-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4) -2,3,6-tri-O-bencil-\alpha-D-glucopiranosido (24)
Se disuelve el compuesto bruto 23 en ácido acético al 70% (60 ml) y se agita durante 2 horas a 80ºC. Se concentra la mezcla bajo vacío y se coevapora con tolueno para dar 24, CCM R_{1} 0,52 (diclorometano/metanol 4/1 v/v).
Preparación 16
Metil O-(bencil 2,3-di-O-metil-5-C-etil-\beta-D-glucopiranosiluronato) -(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-bencil-\alpha-D-clucopiranosido (25)
A una solución del compuesto 24 (5,75 g) en tetrahidrofurano (28 ml) se le añaden 2,2,6,6-tetrametil-1-piperidiniloxi (17,5 mg), una solución de hidrogenocarbonato de sodio (17,5 ml), bromuro de potasio (87 mg) y cloruro de tetrabutilamonio (115,5 mg). Se enfría la mezcla a 0ºC y se añade durante 15 minutos una mezcla de una solución saturada de cloruro de sodio (17 ml), una solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio (8,70 ml) e hipoclorito de sodio (1,3 M, 20 ml). Después de agitación durante 1 hora, se diluye la mezcla con agua y se extrae (3 veces) con diclorometano. Se lava la fase orgánica con una solución acuosa de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se evapora a sequedad para obtener el derivado ácido bruto.
Bajo atmósfera de nitrógeno, se disuelve el derivado ácido en N,N-dimetilformamida (107 ml). Se añade hidrogenocarbonato de potasio (4,10 g) y bromuro de bencilo (9,70 ml) y se agita la mezcla durante 16 horas. Se añade acetato de etilo y agua y después se concentra la fase orgánica, después de extracción. Una purificación por cromatografía sobre columna de gel de sílice permite obtener 3,81 g del compuesto 25 (6p% de rendimiento a partir del compuesto 23).
[\alpha]_{D} + 24(c=0,15, diclorometano)
Preparación 17
Metil O-(bencil 5-C-etii-4-O-levulinil-2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosiluronato)-(1\rightarrow4)-2,4,6-tri-O-bencil-\alpha-D-glucopiranosida (26)
Se disuelve el compuesto 25 (3,51 g, 4,46 mmols) en dioxano anhidro (45 ml). Se añade ácido levulínico (1,00 g, 8,93 mmols), clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodimida (1,70 g, 8,93 mmols) y 4-dimetilaminopiridina (0,11 g, 8,93 mmols). Se mantiene bajo agitación durante 16 horas, se extrae con acetato de etilo, se lava sucesivamente con una solución acuosa al 5% de hidrogenosulfato de potasio, al agua, con una solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio, al agua, se seca y se concentra.
Se purifica sobre columna de gel de sílica (ciclohexano/acetato de etilo 2/1 v/v) para obtener 26 puro (3,64 g, 85%).
[\alpha]_{D} + 26 (c = 0,9, diclorometano).
Preparación 18
O-(Bencil 5-C-etil-4-0-levulinil-2,3-di-O-metil-\beta -D-glucopiranosiluronato)-(1\rightarrow4)-1,3,6-tri-O-acetil -2-O-bencil-D-glucopiranosa (27)
Se disuelve el compuesto 26 (3,35 g, 3,7 mmols) en anhídrido acético (22 ml). Se enfría a, -20ºC se añaden 22 ml de una solución fría de ácido sulfúrico en anhídrido acético (1 ml de ácido sulfúrico en 10 ml de anhídrido acético).
Se diluye con acetato de etilo, se lava con una solución acuosa saturada de hidrogenocarbonato de sodio, al agua, se seca y se concentra. Se purifica sobre columna de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 1/1 v/v) para obtener 27 (2,20 g, 65,5%). CCM R_{1} 0,24 (ciclohexano/acetato de etilo 1/1 v/v)
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Preparación 19
O-(Bencil 5-C-etil-4-O-levulinil-2,3-di-O-metil-\beta -D-glucopiranosiluronato)-(1\rightarrow4)-3,6-di-O-acetil-2-O -bencil-D-glucopiranosa (27)
Se añade bencilamina (11 ml, 101,4 mmols) a una solución del compuesto 27 (2,18 g, 2,67 mmols) en tetrahidrofurano (50 ml). Se mantiene bajo agitación durante 4 horas. Se extrae con acetato de etilo, se lava con una solución acuosa 1M de ácido clorhídrico (102 ml), al agua, se seca y se concentra. Se purifica sobre columna de sílice (tolueno/acetato de etilo 1/1 v/v) para obtener una mezcla (\alpha/\beta = 50/50) del compuesto 28 (1,33 g, 65%). CCM R_{1} 0,22 (tolueno/acetato de etilo 1/1 v/v).
Preparación 20
O-(Bencil 5-C-etil-4-O-levulinil-2,3-di-O-metil-\beta -D-glucopiranosiluronato)-(1\rightarrow4)-3,6-di-O-acetil-2-O-bencil -D-glucopiranosiltricloroacetimdato (29)
Se disuelve el compuesto 28 (1,32 g, 1,71 mmols) en diclorometano (34 ml) y se añade, bajo argón, tricloroacetonitrilo (0,87 ml, 8,50 mmols) y carbonato de cesio (0,90 g, 2,73 mmols). Se mantiene bajo agitación durante 2 horas (CCM) y se filtra. Se purifica sobre columna de sílice (ciclohexano/acetato de etilo 3/2 v/v) para obtener una mezcla (\alpha/\beta = 85/15) de imidato 29 (1,20 g, 77%). CCM R_{1} 0,36 (ciclohexano/acetato de etilo 1/2 v/v).
Preparación 21
Metil O-(bencil 5-C-etil-4-O-levulinil-2,13-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosiluronato)-(1\rightarrow4)-O-(3,6-di-O-acetil-2-O- bencil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(2, 6-anhidro-5-C-benciloxicarbonil-3-O-metil-\beta-D-manopiranosil)-1\rightarrow4)-2, 3,6-tri-O-bencil-\alpha-D-glucopiranosida (30)
Se añade una solución de triflato de tert-butildimetilsililo en diclorometano (1M, 0,19 ml), bajo argón, a -20ºC, a una solución de imidato 29 (1,19 g, 1,29 mmols) y de metil 2,3,6-tri-O-bencil-4-(bencil 3-O-metil-2-O-5-C-metilideno-\alpha-L-idopiranuronato)-\alpha-D-glucopiranosida 17 (1,02 g, 1,35 mmols) en tolueno (40 ml) en presencia de tamiz molecular 4 À (1,93 g). Después de 30 minutos (CCM), se añade de nuevo una solución de triflato de tert-butildimetilsililo en diclorometano (1M, 0,19 ml). Después de 30 minutos (CCM) se añade hidrogenocarbonato de sodio sólido. Se filtra la solución, se lava con agua, se seca y se evapora a sequedad. Se purifica sobre columna de cromatografía Sephadex® LH20 y después sobre columna de sílice (tolueno/acetato de etilo 2/1 v/v) para obtener el transacárido 30-\alpha puro (1,14 g, 58%).
[\alpha]_{D} + 47 (c = 0,21, diclorometano).
Preparación 22
Metil O-(bencil 5-C-etil-2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosiluronato) -(1\rightarrow4)-O-(3,6-di-O-acetil-2-O-bencil-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(2,6-anhidro-5-C-benciloxicarbonil-3-O-metil-\beta -D-menopiranosil)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-bencil-a-D-glucopiranosida (31)
Se disuelve el compuesto 30 (1,13 g, 0,75 mmols) en una mezcla etanol/tolueno 2/1 (v/v) (150 ml) y se añade acetato de hidracina (0,35 g, 3,73 mmols). Se mantiene en agitación durante 1 hora (CCM) y se concentra. Se purifica sobre columna de sílice (tolueno/acetato de etilo 3/2 v/v) para obtener 31 (0,816 g, 83%).
[\alpha]_{D} + 35 (c = 1,01, diclorometano).
Preparación 23
Metil O-(6-O-acetil-2,3,4-tri-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(bencil 5-C-etil-2,3-di-O-metil-\beta-D-gluco- piranosiluronato)-(1\rightarrow4)-O-(3,6-di-O-acetil-2-O-bencil -\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(2,6-anhidro-5-C-benciloxi- carbonil-3-O-metil-\beta-D-menopiranosil)-(1\rightarrow4) -2,3,6-tri-O-bencil-\alpha-D-glucopiranosida (33)
Se trata el tricloroacetimidato de 6-0-acetil-2,3,4-tri-O-metil-D-glucopiranosa 32 (34,7 mg, 0,245 mmols) (P. Westesduin y otros, BioOrg. Med. Chem., 1994, 2, 1267) y el aceptador de glicosilo 31 (80 mg, 0,056 mmols) según la Preparación 21. Se purifica el compuesto sobre una columna de sílice (disopropil éter/acetato de etilo 3/2 v/v) para obtener el derivado 33 (54,6 mg, 58%)
[\alpha]_{D} + 55 (c = 1, diclorometano).
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Preparación 24
Metil O-(6-O-acetil-2,3,4-tri-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil) -(l\rightarrow4)-O-(ácido 5-C-etil-2,3-di-O-metil-\beta -D-glucopirano-silurónico)-(1\rightarrow4)-O-(3,6-di-O-acetil-\alpha -D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(2,6-anhidro-5-C-carboxi-3-O-metil -\beta-D-manopiranosil)-(1\rightarrow4)-\alpha-D-glucopiranosida (34)
Se agita una solución del compuesto 33 (40 mg, 0,024 mmols) en ácido acético (2 ml) bajo atmósfera de hidrógeno, en presencia de paladio sobre carbón 10% (80 mg), durante 16 horas y se filtra. Se concentra el filtrado para obtener el compuesto 34.
Preparación 25
Metil O-(2,3,4-tri-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4) -O-(ácido 5-C-etil-2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico) -(1\rightarrow4)-O-(\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4) -O-(2,6-anhidro-5-C-carboxi-3-O-metil-\beta-D-manopiranosil) -(1\rightarrow4)-\alpha-D-glucopiranosida (35)
Se añade una solución acuosa de hidróxido de sodio 5M (216 \mul) a una solución del compuesto bruto 34 en metanol (866 \mul). Después de 25 horas se introduce agua y se pasa la mezcla reaccional a través de una columna de gel Sephadex® G-25 (2 x 38 cm) eluída con agua. Se concentra, se pasa a través de una columna Dowex® 50 H^{+}(2 ml) y se liofiliza. En este estado se verifica por ^{1}H RMN que todos los grupos protectores han quedado eliminados.
Ejemplo 1 Metil O-(2,3,4-tri-O-metil-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico) -(1\rightarrow4)-O-(2,3,4-tri-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(2,6-anhidro-5-C-carboxi-3-O-metil-\beta-D-manopira-nosil)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfo-\alpha -D-glucopiranosida, sal de sodio (21).
Según C.A.A. van BOECKEL y M. PETITOU, Angew. Chem. Int. Ed. Eng1., 1993, 32, 1671-1690.
Se calienta a 55ºC, al abrigo de la luz, durante 18 horas y 30 minutos, una solución del compuesto 20 (20 mg, 20,7 \mumols) y del complejo trietilamina/trióxido de azufre (164 mg, 0,90 \mumols) en dimetilformamida (2 ml). Se enfría la mezcla reaccional a la temperatura ambiente y después se diluye con una solución acuosa de ClNa 0,2 M. Se deposita entonces la solución en la cúspide de una columna de Sephadex® G25F (170 ml) eluida con una solución acuosa de NaCl 0,2 M.
Se concentran las fracciones que contienen el pentasacárido y se desala utilizando la misma columna eluida por el agua. Después de liofilización, se obtiene el compuesto 21 (30,5 g, 85%).
[\alpha]_{D} + 49ºC (c, 0,63, H_{2}O)
^{1}HRMN presentado en el Cuadro 2 que se inserta a continuación
CUADRO 2
Compuesto Unidad H-1 H-2 H-3 H-4 H-5 H-6 H-6' J_{1-2}(Hz)
21(D_{2}O) D 5,46 3,32 3,55 3,34 3,87 4,28 4,12 3,9
E 4,66 3,26 3,53 3,89 3,83 - - 7,9
F 5,50 4,36 4,81 4,00 4,17 4,49 4,41 3,7
G 5,49 4,41 3,73 4,17 - 4,24 4,09 -1
H 5,16 4,36 4,52 4,01 4,08 4,41 4,30 3,7
Ejemplo 2 Metil O-(2,3,4-tri-O-metil-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(ácido 5-C-etil-2,3-di-O-metil-\beta-D-gluco-pirano-silurónico-(\rightarrow)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-\alpha-D -glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(2,6-anhidro-5-C-carboxi-3-O-metil-\beta-D-ma-nopiranosil-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosida, sal de sodio (36)
Se añade un complejo dietilamina/trióxido de azufre (91 mg) a una solución en dimetilformamida (1,3 ml) del compuesto bruto 35. Después de 20 horas a 55ºC, se deposita la solución en la extremidad de una columna de Sephadex® G-25 (2 x 38 cm) eluida con cloruro de sodio 0,2 M. Se concentran las fracciones que contienen el producto y se desala utilizando la misma columna eluída con agua. El compuesto 36 se obtiene después de liofilización (21,9 mg, 52% a partir del compuesto 33).
^{1}HRMN presentado en el Cuadro 3 que figura a continuación.
CUADRO 3
H-1(J_{1-2}Hz) H-2 H-3 H-4 H-5 H-6 H-6' otros
D 5,43(3,9) 3,28 3,53 3,30 4,02 4,27 4,14
E 4,68(8,1) 3,27 3,60 3,98 - - - 2,04/1,80:CH_{2}CH_{3}09,4:CH_{2}CH_{3}
F 5,50(3,7) 4,35 4,50 3,84 4,07 4,61 4,30
G 5,47(1,1) 4,39 3,72 4,16 - 4,23 4,08
H 5,16(3,7) 4,36 4,81 4,00 4,17 4,50 4,39
Procediendo como en los ejemplos 1 y 2 precedentes, se preparan los compuestos 37 a 40 de los ejemplos 3 a 6 siguientes. Los espectros RMN^{1}H obtenidos para estos compuestos están de acuerdo con las configuraciones indicadas a continuación.
Ejemplo 3 Metil O-(2,3,4-tri-O-metil-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico) -(1\rightarrow4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(2,6-anhidro-5-C-carboxi-3-O-metil-\beta-D -manopira-nosil)-(1\rightarrow4)-2-O-sulfo-3,6-di-O-metil-\alpha-D -glucopiranosida, sal de sodio (37)
[\alpha]_{D} + 51º (c 0,48, agua).
2
Ejemplo 4 Metil O-(2,3,4-tri-O-metil-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico) -(1\rightarrow4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(2,6-anhidro-5-C-carboxi-3-O-metil-\beta-D -manopira-nosil)-(1\rightarrow4)-2,3-di-O-sulfo-6-O-metil-\alpha-D -glucopiranosida, sal de sodio (38)
[\alpha]_{D} + 57º (c 0,28, agua).
3 
\newpage
Ejemplo 5 Metil O-(2,3,4-tri-O-metil-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico) -(1\rightarrow4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(2,6-anhidro-5-C-carboxi-3-O-metil-\beta -D-manopira-nosil)-(1\rightarrow4)-2,6-di-O-sulfo-3-O-metil-\alpha-D -glucopiranosida, sal de sodio (39)
[\alpha]_{D} + 53º (c 0,3, agua).
4
Ejemplo 6 Metil O-(2,3,4-tri-O-metal-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico) -(1\rightarrow4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(2,7-anhidro-5-C-carboxi-6-deoxi-3 O-metil-\beta -D-menoheptomiranosil)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfo-\alpha-D -glucopiranosida, sal de sodio (40)
[\alpha]_{D} 49º (c 0,25, agua).
5

Claims (8)

1. Pentasacárido bajo forma ácida y sus sales farmacéuticamente aceptables, cuya forma iónica tiene como fórmula
6
en la que:
- R representa el hidrógeno, un grupo -SO_{3}-, (C_{1}-C_{3})alquilo o (C_{1}-C_{3})acilo;
- T representa el hidrógeno o un grupo etilo;
- n representa 1 ó 2.
2. Pentasacárido según la reivindicación 1 bajo la forma de sal de sodio o de potasio.
3. Pentasacárido según una cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 2, elegido entre:
-
Metil-O-(2,3,4-tri-O-metil-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico) -(1\rightarrow4)-O-(2,3,4-tri-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(2,6-anhidro-5-C-carboxi-3-O-metil-\beta-D -mano-piranosil)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosida, sal de sodio;
-
Metil-O-(2,3,4-tri-O-metil-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(ácido 5-C-etil-2,3-di-O-metil-\beta-D-gluco -piranosilurónico)-(1\rightarrow4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(2,6-anhidro-5-C-carboxi -3-O-metil -\beta-D-manopiranosil)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfo-\alpha-D -glucopiranosida, sal de sodio;
-
Metil O-(2,3,4-tri-O-metil-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(ácido 2,3-di-0-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico) -(1\rightarrow4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(2,6-anhidro-5-C-carboxi-3-O-metil-\beta-D -mano-piranosil)-(1\rightarrow4)-2-O-sulfo-3,6-di-O-metil-\alpha-D -glucopiranosida, sal de sodio;
-
Metil O-(2,3,4-tri-O-metil-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico) -(1\rightarrow4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(2,6-anhidro-5-C-carboxi-3-O-metil-\beta-D -mano-piranosil)-(1\rightarrow4)-2,3-di-O-sulfo-6-O-metil-\alpha-D -glucopiranosida, sal de sodio;
-
Metil O-(2,3,4-tri-O-metil-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico) -(1\rightarrow4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(2,6-anhidro-5-C-carboxi-3-O-metil-\beta-D -mano-piranosil)-(1\rightarrow4)-2,6-di-O-sulfo-3-O-metil-\alpha-D -glucopiranosida, sal de sodio;
-
Metil O-(2,3,4-tri-O-metil-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil) -(1\rightarrow4)-O-(2,7-anhidro-5-C-carboxi-6-deoxi-3-O- metil -\beta-D-manoheptopiranosil)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfo-\alpha -D-glucopiranosida, sal de sodio.
4. Composiciones farmacéuticas conteniendo como principio activo un pentasacárido según una cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 3 bajo forma de sal con una base farmacéuticamente aceptable o bajo forma de ácido, en asociación o mezclado con un excipiente inerte, no tóxico, farmacéuticamente aceptable.
5. Composición farmacéutica según la reivindicación 4, bajo la forma de unidades de dosificación, en la que el principio activo se halla mezclado con al menos un excipiente farmacéutico.
6. Composición según la reivindicación 5 en la que cada una de las unidades de dosificación contiene entre 0,1 y 100 mg de principio activo.
\newpage
7. Composición según la reivindicación 6 en la que cada una de las unidades de dosificación contiene entre 0,5 y 50 mg de principio activo.
8. Utilización del polisacárido según las reivindicaciones 1 a 3 para la preparación de un medicamento útil frente a las patologías que dependen de un disfuncionamiento de la coagulación.
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