PT1290028E - Um gene que codifica um homólogo de glicoproteína p humana de resistência a múltiplos fármacos, situado no cromossoma 7p15-21 e suas utilizações - Google Patents

Um gene que codifica um homólogo de glicoproteína p humana de resistência a múltiplos fármacos, situado no cromossoma 7p15-21 e suas utilizações Download PDF

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Description

1
DESCRIÇÃO "UM GENE QUE CODIFICA UM HOMÓLOGO DE GLICOPROTEÍNA P HUMANA DE RESISTÊNCIA A MÚLTIPLOS FÁRMACOS, SITUADO NO CROMOSSOMA 7P15-21 E SUAS UTILIZAÇÕES"
Campo da Invenção A invenção refere-se a sequências genéticas que codificam proteínas que apresentam particularidades estruturais e funcionais características de membros da família da glicoproteína P associadas a resistência de cancros a múltiplos fármacos, funções imunorreguladoras e funções únicas em células estaminais pluripotentes humanas e outras células progenitoras de tecido. A invenção abrange proteínas consideravelmente puras, tratamentos terapêuticos e utilizações em diagnóstico relacionadas com estas proteínas.
Antecedentes da Invenção A glicoproteína P, uma bomba de efluxo de fármacos dependente de adenosina trifosfato (ATP), está sobre-expressa em células tumorais resistentes a múltiplos fármacos (MDR). Ela reduz a concentração intracelular de xenobióticos citotóxicos, diminuindo deste modo a eficácia de muitos regímenes quimioterapêuticos contra o cancro. A glicoproteína P pertence à superfamília ABC (cassete de ligação a ATP) de transportadores activos e é codificada por uma família de múltiplos genes em eucariotas superiores. Os membros da família da glicoproteína P de mamíferos podem ser divididos em três classes. As glicoproteínas P de classe I e classe II conferem 2 resistência a múltiplos fármacos enquanto as proteínas de classe III não.
Nos humanos, a glicoproteína P é codificada por dois genes ligados ("MDR1" e "MDR3") no cromossoma 7q21.1. 0 MDR3 funciona como uma translocase de lípidos e mutações neste gene estão associadas a colestase intra-hepática familiar. 0 MDRl confere resistência a fármaco em determinadas células cancerosas. Além de estar sobre-expressa em células cancerosas, a glicoproteína P de MDRl é expressa de modo disseminado em tecidos humanos, predominantemente secretores e absortivos, normais onde actua em vários processos fisiológicos incluindo diferenciação celular, proliferação celular e sobrevivência celular. Nestes tipos de células normais, a glicoproteína P actua na libertação ou captação transmembranar de xenobióticos e determinados fármacos terapêuticos, moléculas de péptido pequeno, determinados compostos esteróides e fosfolípidos. A glicoproteína P também é expressa por populações de células linfóides da medula óssea humana e de sangue periférico. Especificamente, foi demonstrado que a glicoproteína P é expressa na membrana de células estaminais pluripotentes, monócitos, células dendríticas, linfócitos T CD4+ e CD8+, células assassinas naturais e linfócitos B. Nas células imunes, a glicoproteína P actua no transporte de citocinas e outras moléculas pequenas, as quais são críticas para que ocorram as respostas fisiológicas imunes. 0 bloqueio específico da glicoproteína P pode suprimir a resposta imunológica a aloantigénios e antigénios nominais. No entanto, existe um grau de redundância para a função da glicoproteína P nestes tipos 3 de células, que aponta para a existência de outras moléculas relacionadas, até agora não identificadas.
As células estaminais pluripotentes e outras células progenitoras de tecido também possuem uma actividade tipo glicoproteína P única, caracterizada pela menor acumulação intracelular de corantes fluorescentes, o que permite o isolamento específico deste tipo de células para utilizações terapêuticas. No entanto, julga-se que esta função não seja mediada pela glicoproteína P MDRl, mas antes por um membro relacionado com a família da glicoproteína P, até agora não identificado.
Apesar do papel irrefutável da glicoproteína P MDRl na resistência de cancros a múltiplos fármacos, tentativas para melhorar a quimioterapia inibindo esta proteína tem sido conseguida apenas com um sucesso limitado. Assim, pode inferir-se que existem proteínas homólogas que, como a MDRl, são capazes de tornar as células resistentes aos agentes terapêuticos. Além disso, pode deduzir-se que as proteínas homólogas de MDRl desempenham funções tipo glicoproteína P em tecidos fisiológicos humanos, em particular em células do sistema imunitário, células estaminais pluripotentes e células progenitoras de tecido, onde há redundância da função da glicoproteína P MDRl ou onde se sabe que a glicoproteína P MDRl não promove a actividade associada a glicoproteína P observada.
Sumário da Invenção A invenção refere-se a um novo membro da família de genes da glicoproteína P humana localizado no cromossoma 7pl5-2, que codifica proteínas as quais conferem o fenótipo 4 resistente a múltiplos fármacos em células tumorais e/ou servem funções fisiológicas criticas em tecidos humanos normais.
Um exame da estrutura do novo gene indica que ele codifica duas metades homólogas semi-autónomas, cada uma com os seus próprios domínios transmembranares e de ligação a ATP. Através da expressão diferencial de genes e excisão-união alternativa e/ou modificações pós-transcrição e pós-tradução, o novo gene de glicoproteína P pode codificar várias glicoproteínas P distintas: A proteína de SEQ ID N0:1 (aminoácidos 1-659) é codificada por 14 exões (SEQ ID NO:9) de ADN genómico humano do clone AC005060 no cromossoma 7pl5-21 e é constituída por 5 domínios transmembranares e um domínio de ligação a ATP. A proteína de SEQ ID NO:2 (aminoácidos 1-812) é codificada por 19 exões (SEQ ID NO: 10) de ADN genómico humano dos clones contíguos AC002486 e AC005060 (AC002486 é o clone sequenciado à esquerda do clone AC005060) no cromossoma 7pl5-21 e é constituída por 5 domínios transmembranares e dois domínios de ligação a ATP, dos quais o primeiro está localizado no lado N-terminal do domínio transmembranar #1, e o segundo no lado C-terminal do domínio transmembranar #5 da proteína, do lado oposto da membrana do plasma. A proteína de SEQ ID NO:2 também pode ser expressa como um resultado de trans-excisão-união do ARNm (SEQ ID NO: 9) que codifica a proteína de SEQ ID NO:l e do ARNm (SEQ ID NO:11) que codifica a proteína de SEQ ID NO:3 descrita a seguir. Além disso, a proteína de SEQ ID NO:2 pode ser expressa como o resultado de processamento pós-tradução das proteínas de SEQ ID NO:l e NO: 3. 5 A proteína de SEQ ID NO:3 (aminoácidos 1-131) é codificada por 6 exões (SEQ ID NO: 11) de ADN genómico humano do clone AC002486 no cromossoma 7pl5-21 e é constituída por um domínio de ligação a ATP e sem domínios transmembranares. A proteína de SEQ ID NO:4 (aminoácidos 1-1058) é codificada por 20 exões (SEQ ID NO: 12) de ADN genómico humano dos clones contíguos AC002486 e AC005060 no cromossoma 7pl5-21 e é constituída por 8 domínios transmembranares e dois domínios de ligação a ATP, dos quais o primeiro está localizado entre os domínios transmembranares #3 e #4, e o segundo no lado C-terminal dos domínios transmembranares #8, do lado oposto da membrana do plasma. A proteína de SEQ ID NO:5 (aminoácidos 1-1222) é codificada por 23 exões (SEQ ID NO: 13) de ADN genómico humano dos clones contíguos AC002486 e AC005060 no cromossoma 7pl5-21 e é constituída por 12 domínios transmembranares e dois domínios de ligação a ATP, dos quais o primeiro está localizado entre os domínios transmembranares #7 e #8, e o segundo no lado C-terminal do domínio transmembranar # 12, do lado oposto da membrana do plasma. A proteína de SEQ ID NO:6 (aminoácidos 1-1195) é codificada por 24 exões (SEQ ID NO: 14) de ADN genómico humano dos clones contíguos AC002486 e AC005060 no cromossoma 7pl5-21 e é constituída por 11 domínios transmembranares e dois domínios de ligação a ATP, dos quais o primeiro está localizado entre os domínios transmembranares #6 e #7, e o segundo no lado C-terminal do domínio transmembranar #11, do lado oposto da membrana do plasma. 6 A proteína de SEQ ID NO:7 (aminoácidos 1-541) é codificada por 10 exões (SEQ ID NO:15) de ADN genómico humano do clone AC002486 no cromossoma 7pl5-21 e é constituída por 7 domínios transmembranares e um domínio de ligação a ATP no lado C-terminal do domínio transmembranar #7. A proteína de SEQ ID NO: 8 (aminoácidos 1-514) é codificada por 11 exões (SEQ ID NO:16) de ADN genómico humano do clone AC002486 no cromossoma 7pl5-21 e é constituída por 6 domínios transmembranares e um domínio de ligação a ATP no lado C-terminal do domínio transmembranar #6. A resistência de cancros a múltiplos fármacos pode resultar da expressão de qualquer uma das proteínas de SEQ ID NO:l, NO: 2, NO: 3, NO:4, NO:5, NO:6 NO:7 e NO:8. As proteínas codificadas pelo gene 7pl5-21 da glicoproteína P da presente invenção podem ser utilizadas como marcadores para identificar células que é provável que apresentem resistência a múltiplos fármacos e podem servir como alvos na concepção de novas terapias para doentes com cancro. A glicoproteína P do 7pl5-21 confere quimiorresistência a múltiplos agentes quimioterapêuticos, incluindo cisplatina, através da mediação do efluxo celular do fármaco. Por isso, o bloqueio específico desta função de efluxo, por exemplo por meio da inibição específica de anticorpo monoclonal, pode aumentar a acumulação intracelular de fármaco e, em consequência, a toxicidade do fármaco e a morte de células tumorais. Além disso, uma vez que a glicoproteína P do 7pl5-21 está funcional na proliferação celular de tumores, o crescimento tumoral pode ser inibido terapeuticamente pela administração de anticorpos monoclonais específicos de bloqueio, mesmo na ausência de agentes quimioterapêuticos 7 simultâneos. De entre as proteínas codificadas pelo gene 7pl5-21 da glicoproteína P, as proteínas de SEQ ID N0:1, N0:2, N0:3, N0:4, NO:5 e N0:6 são distintas das proteínas de SEQ ID NO: 7 e NO: 8 pelo facto de serem expressas selectivamente em determinadas células cancerosas mas não em tecidos não cancerosos, normais. Além disso, as proteínas de SEQ ID N0:1, N0:2, N0:3, N0:4, N0:5 e N0:6 são expressas preferencialmente naqueles cancros que exibem os graus mais elevados de quimiorresistência a fármacos quimioterapêuticos, como por exemplo o melanoma maligno humano. Devido à sua expressão selectiva em determinados cancros mas não nos tecidos normais, as proteínas de SEQ ID NO:1, NO:2, NO:3, NO:4, NO:5 e NO:6 podem ser terapeuticamente visadas não só através da inibição do efluxo do fármaco citotóxico ou inibição da proliferação do tumor por anticorpos monoclonais específicos, mas também por meios adicionais, incluindo a morte celular específica de tumores mediada por anticorpos monoclonais específicos conjugados com toxinas celulares, ou pela administração terapêutica a doentes afectados de preparações de vacina específicas para antigénios de tumores.
As proteínas de SEQ ID NO: 7 e NO: 8 codificadas pelo gene 7pl5-21 também podem ser expressas em determinados tecidos humanos normais, não cancerosos. Assim, a invenção proporciona utilizações adicionais no que se refere à função destas proteínas seleccionadas em tecidos fisiológicos. Entre os tecidos normais, as proteínas de SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO:8 são preferencialmente expressas em níveis elevados em células estaminais pluripotentes e outras células progenitoras de tecido, onde actuam no transporte transmembranar de xenobióticos e outras moléculas pequenas. Assim, a invenção proporciona meios para detectar especificamente e enriquecer estas células estaminais e células progenitoras de misturas e preparações de células nas quais elas estão contidas, por detecção das células com anticorpos monoclonais específicos marcados.
As proteínas de SEQ ID NO:7 e NO:8 também são expressas em certa medida na maioria dos outros tecidos humanos normais, incluindo nas células do sistema imunitário tais como células T, monócitos e células apresentadoras de antigénio diferenciadas, onde elas funcionam no efluxo de citocinas e na captação de moléculas pequenas incluindo péptidos e antigénio, desempenhando desse modo um papel crítico para a integridade das respostas imunológicas normais. Quando estas funções são inibidas, por exemplo por bloqueio com anticorpos monoclonais específicos, a resposta imunológica normal pode ser modulada, o que pode ser utilizado na prevenção e/ou terapia da rejeição de aloenxerto no transplante clínico de órgãos, e também em várias doenças autoimunes como artrite reumatóide e esclerose múltipla. Além disso, quando expressa em células imunitárias humanas e noutros tecidos humanos como o endotélio da barreira hematoencefálica e os epitélios do aparelho gastrointestinal e do rim, o bloqueio da proteína pode ser ainda utilizado terapeuticamente para alterar selectivamente a captação e secreção, e desse modo a distribuição farmacológica, farmacocinética e eficácia terapêutica dos fármacos terapêuticos administrados exogenamente que são substratos das referidas proteínas. São aqui divulgadas proteínas substancialmente puras consistindo essencialmente da sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID N0:6, SEQ ID NO: 7 ou SEQ ID N0:8. O termo 9 "consistindo essencialmente de" tem a intenção de incluir proteínas possuindo exactamente as mesmas sequências de aminoácido, assim como proteínas com sequências insubstancialmente diferentes, como evidenciado por possuírem as mesmas propriedades funcionais básicas. Uma isoforma "substancialmente purificada" é aquela que foi separada de outros componentes biológicos concomitantes e compreenderá tipicamente pelo menos 85% de uma amostra, sendo preferidas percentagens maiores. Estão disponíveis muitos meios para avaliar a pureza de uma proteína numa amostra, incluindo análise por electroforese em gel de poliacrilamida, cromatografia e centrifugação analítica. Um método preferido para avaliar a pureza é por transferência de Western utilizando um anticorpo dirigido contra epítopos da glicoproteína P do 7pl5-21 de SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID NO:7 ou SEQ ID NO:8. Também são divulgados "péptidos MDR" os quais são aqui definidos como consistindo de um elemento de sequência de SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID N0:7 ou SEQ ID NO:8. de pelo menos 10 e preferencialmente pelo menos 15 ou 20 resíduos. Estes podem ser utilizados na produção de anticorpos. É estipulado que um péptido MDR não pode ter uma sequência que seja a mesma que qualquer conjunto de 10 a 15 resíduos contíguos na sequência LSGGQKQRIAIARAL (SEQ ID NO:17). Estas proteínas e péptidos MDR também podem ser administrados terapeuticamente a doentes com cancro afectados por tumores que expressam glicoproteína P do 7pl5-21, como uma vacina para o tumor para desencadear uma resposta imunológica endógena dirigida contra estes tumores, para resultar em morte celular específica para tumores. 10 É aqui divulgado um anticorpo preparado por um processo compreendendo o passo de administração, a um hospedeiro animal, de uma proteína codificada pela SEQ ID NO:l, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID ΝΟ:β, SEQ ID NO:7 ou SEQ ID NO:8, ou um péptido MDR como descrito acima. A proteína ou péptido deveria ser administrado ao animal a uma dosagem suficiente para induzir a formação de anticorpo. Os anticorpos podem ser monoclonais ou policlonais. No último caso, os anticorpos são preferencialmente produzidos injectando uma preparação farmaceuticamente aceitável num ratinho, seguida da fusão de células de baço de ratinho com células de mieloma utilizando técnicas conhecidas na arte. Os anticorpos obtidos deveriam ligar-se selectivamente às proteínas de SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 ou SEQ ID NO: 8. Neste contexto, inibição selectiva significa que um anticorpo tem pelo menos uma afinidade 100 vezes maior para uma ou mais destas proteínas do que para qualquer outra proteína normalmente encontrada em células humanas. É aqui divulgado um polinucleótido substancialmente puro consistindo essencialmente de uma sequência de nucleótidos que codifica as proteínas de SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 ou SEQ ID NO: 8, ou um péptido MDR. Preferencialmente, o polinucleótido consiste essencialmente da sequência de nucleótidos de SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:ll, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 ou SEQ ID NO:16. A invenção inclui vectores de expressão compreendendo um elemento de codificação distinto que consiste destes polinucleótidos; e células hospedeiras transformadas com tais vectores. Um "elemento de 11 codificação distinto" refere-se à porção de um vector de expressão responsável por determinar a sequência de aminoácidos de uma proteína expressa. A invenção compreende todos esses elementos que produzem proteínas correspondentes às sequências de aminoácidos mostradas nas SEQ ID N0:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 ou SEQ ID N0:8, bem como outras proteínas possuindo essencialmente a mesma estrutura e função. É divulgada uma proteína recombinante feita por células hospedeiras transformadas por um vector de expressão como discutido acima. A proteína recombinante pode ser isolada utilizando técnicas correntes, incluindo cromatografia de afinidade com anticorpos contra epítopos de glicoproteína P do 7pl5-21. Preferencialmente, o polinucleótido utilizado nos vectores para expressão, como uma glicoproteína P recombinante, consiste essencialmente da sequência de nucleótidos de SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 ou SEQ ID NO:16. Podem ser utilizados como inibidores oligonucleótidos antimensageiros complementares a SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO:ll, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 ou SEQ ID NO:16 e com pelo menos 15 nucleótidos de comprimento. Estes podem ser administrados a doentes submetidos a quimioterapia contra o cancro para aumentar a eficácia de fármacos citotóxicos. A transfecção in vivo de células é conhecida há muitos anos e pode ser efectuada utilizando vectores virais (ver por exemplo, U.S. 6,020,191); lipossomas (ver por exemplo, Nicolau, Meth. Enzymol 149:157-176 (1987)); ADN complexado com agentes que facilitam a captação celular (ver por exemplo, U.S. 5,264,618; WO 98/14431); ou ainda injectando 12 simplesmente ADN nu (ver por exemplo, U.S. 5,693, 622). Qualquer um destes procedimentos pode ser utilizado para administrar os oligonucleótidos antimensageiros da presente invenção.
Também é divulgado um método para determinar se uma célula cancerosa responderá a terapias que têm como objectivo a inversão da resistência a múltiplos fármacos medindo a expressão dos genes que codificam as proteínas de SEQ ID NO: 1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 ou SEQ ID NO: 8. Este método pode ser utilizado para detectar a existência do fenótipo resistente a múltiplos fármacos em células cancerosas ou para seguir o desenvolvimento de resistência a múltiplos fármacos ao longo do tempo, monitorizando alterações na expressão do gene em células cultivadas. É ainda proporcionado um método para determinar se um composto de ensaio inibe a resistência a múltiplos fármacos em células ocasionada por um gene que codifica proteínas de SEQ ID NO:1, SEQ ID N0:2, SEQ ID N0:3, SEQ ID N0:4, SEQ ID N0:5, SEQ ID N0:6, SEQ ID NO:7 ou SEQ ID NO:8. Este método compreende a expressão de um gene que codifica um ou mais destes polipéptidos em células que, de outro modo, não são resistentes a múltiplos fármacos e a exposição destas células a um ou mais fármacos citotóxicos na presença de um composto de ensaio. A sobrevivência celular é medida após exposição e os resultados obtidos são comparados com aqueles de incubações realizadas essencialmente do mesmo modo mas na ausência do composto de ensaio. Concluiu-se que o composto de ensaio inibe a resistência a múltiplos fármacos se a sobrevivência celular for diminuída numa extensão significativa em incubações realizadas na presença 13 do composto de ensaio relativamente à observada na sua ausência.
Descrição Detalhada da Invenção A invenção refere-se a um novo membro da família da glicoproteína P de proteínas relacionadas com resistência a fármacos, a sequências genéticas que codificam esta proteína, a métodos para determinar se uma célula cancerosa responderá a terapias que têm como objectivo a inversão de resistência a fármacos mediada pela glicoproteína P e a um método de pré-selecção de compostos de ensaios quanto à sua capacidade para inibir a resistência a múltiplos fármacos. 0 novo gene de glicoproteína P pode codificar as proteínas de SEQ ID NO:1.
Entender-se-á que são divulgadas não só sequências idênticas às mostradas mas também sequências que são essencialmente iguais como evidenciado pela conservação das mesmas características estruturais e funcionais básicas. Por exemplo, podem ser utilizadas técnicas como a mutagénese de um locus específico para introduzir variações na estrutura de uma proteína. São divulgadas variações na glicoproteína P introduzidas por este ou por outros métodos semelhantes desde que a proteína resultante conserve as suas propriedades biológicas básicas, particularmente em relação à indução de resistência a múltiplos fármacos em células de mamíferos.
As sequências de ADN que codificam as proteínas da invenção podem ser obtidas de qualquer tecido ou fonte celular no qual são expressas. Por exemplo, linhas de células cultivadas podem ser manipuladas para expressar o gene de 14 glicoproteína P utilizando técnicas recombinantes ou por exposição continua a agentes quimioterapêuticos. Alternativamente, as sequências podem ser isoladas de células primárias obtidas de tumores.
Estão disponíveis muitos métodos para isolar sequências de ADN e podem ser adaptados para o isolamento do gene da glicoproteína P do cromossoma 7pl5-21 (doravante "cromossoma 7p") (ver , por exemplo, Sambrook et al., Molecular Cloninq: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Press (1989)). Por exemplo, um método consiste em rastrear uma biblioteca de ADNc que foi preparada por transcrição inversa de ARNm isolado de tecidos ou células que expressam o gene. A biblioteca pode ser preparada, por exemplo, de melanócito ou de tecido de testículo humano e as sondas para rastreio podem ser sintetizadas com base nas sequências mostradas na Listagem de Sequências. As sondas têm preferencialmente pelo menos 14 nucleótidos de comprimento e são seleccionadas, de modo óptimo, de uma região que se julgue que seja única ao gene de glicoproteína P do cromossoma 7 p.
Como uma alternativa, a amplificação de uma sequência desejada pode ser conseguida pela reacção em cadeia da polimerase ("PCR") de ARN transcrito inversamente. Os iniciadores para PCR podem ser construídos utilizando as sequências mostradas na SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 10, SEQ id NO: 11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 ou SEQ ID NO:16, e a confirmação da presença de ADNc da glicoproteína P do cromossoma 7p pode ser conseguida pela sequenciação de produtos de amplificação. 15 A expressão de proteína recombinante pode ser induzida numa célula hospedeira transformando-a com um vector de expressão apropriado. 0 vector deveria conter sinais de transcrição e tradução reconhecíveis pelo hospedeiro em conjunto com a sequência estrutural desejada, preferencialmente na forma de cadeia dupla, numa ligação operável. Por exemplo, a sequência de ADN da glicoproteína P deveria ser posicionada de modo a que as sequências reguladoras presentes no vector controlem a síntese de ARNm e produzam a proteína possuindo a sequência desejada.
Preferencialmente, o ácido nucleico que codifica a glicoproteína P da invenção é expresso em células eucariotas, especialmente células de mamíferos. Tais células são capazes de promover as modificações pós-tradução necessárias para garantir que a proteína recombinante é estrutural e funcionalmente semelhante à proteína isolada, por exemplo, de células tumorais resistentes a múltiplos fármacos. Exemplos de células de mamíferos que se sabe que proporcionam modificação pós-tradução apropriada de proteínas clonadas incluem, inter alia, células NIH-3T3, células CHO, células HeLA, células LM(tk-) e semelhantes. São preferencialmente utilizados promotores eucariotas que se sabe que controlam a expressão de genes recombinantes para conduzir a transcrição de ADN da glicoproteína P do cromossoma 7p e podem incluir aqueles do gene de metalotioneína I de ratinho, o promotor tk do vírus de Herpes, o promotor precoce de CMV e o promotor precoce de SV40. A transcrição também pode ser orientada por promotores procariotas, como aqueles capazes de reconhecer a polimerase T4, os promotores PR e PL de bacteriófago lambda, e os promotores trp, recA, choque térmico e lacZ de E. coli. 16
Os vectores de expressão podem ser introduzidos nas células hospedeiras por métodos como a precipitação com fosfato de cálcio, microinjecção, electroporação ou transferência virai e as células que expressam a sequência da proteína recombinante podem ser seleccionadas por técnicas conhecidas na arte. A confirmação da expressão pode ser obtida através de amplificação por PCR das sequências de glicoproteína P utilizando iniciadores seleccionados das sequências mostradas na SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 ou SEQ ID NO:16. A proteína recombinante pode ser purificada utilizando técnicas correntes bem conhecidas na arte. Tais técnicas podem incluir filtração, precipitação, cromatografia e métodos electroforéticos. A pureza pode ser avaliada realizando electroforese em gel de poliacrilamida e visualizando as proteínas utilizando metodologias de revelação corrente. Também se pode efectuar a transferência de Western utilizando um anticorpo contra a glicoproteína P do cromossoma 7p. A invenção refere-se também a anticorpos gerados contra a glicoproteína P do cromossoma 7p. O processo de produção de tais anticorpos pode envolver a injecção da própria glicoproteína P do 7p num animal apropriado ou a injecção de péptidos antigénicos curtos feitos para corresponder a diferentes regiões da proteína. Estes péptidos deveriam ter pelo menos 5 aminoácidos de comprimentos e deveriam ser, preferencialmente, seleccionados de regiões que se julga que sejam únicas à glicoproteína P do 7p. Os métodos para gerar e detectar anticorpos são bem conhecidos na arte, e 17 são ensinados por referências como: Harlow, et al., Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, NY (1988); Klein, Immunoloqy: The Science of Self-Nonself Discrimination, (1982); Kennett et al., Monoclonal Antibodies and Hybridomas: A New Dimension in Bioloqical Analyses, (1980); e Campbell, "Monoclonal Antibody Technology", in Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, (1984) . O termo "anticorpo", como aqui utilizado, tem a intenção de incluir moléculas intactas, assim como fragmentos que conservem a sua capacidade para ligar o antigénio, como os fragmentos Fab e F(ab')2· O termo "anticorpo" também é aqui definido como se referindo a anticorpos monoclonais e anticorpos policlonais. Os anticorpos policlonais são derivados dos soros de animais imunizados com um antigénio da glicoproteina P do cromossoma 7p. Os anticorpos monoclonais contra a proteína podem ser preparados utilizando tecnologia de hibridoma, como ensinado por referências como: Kohler, et al., Nature 256:495 (1975); e Hammerling, et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, Elsevier, N.Y., pp. 563-681 (1981). De uma maneira geral, esta tecnologia envolve a imunização de um animal imunocompetente, tipicamente um ratinho, com glicoproteina P do cromossoma 7p intacta ou com um fragmento derivado daquele. Os esplenócitos são então extraídos do animal imunizado e são fundidos com células de mieloma adequadas, como células SP2O. Depois disso, as células de hibridoma resultantes são selectivamente mantidas em meio HAT e depois clonadas por diluição restringida (Wands, et al., Gastroenterology 80:225-232 (1981)). As células obtidas através desta selecção são depois avaliadas para identificar clones que segregam 18 anticorpos capazes de ligar a glicoproteina P do cromossoma 7p ·
Os anticorpos ou fragmentos de anticorpos da invenção podem ser utilizados para detectar a presença de glicoproteina P do cromossoma 7p em qualquer um de uma variedade de imunoensaios. Por exemplo, os anticorpos podem ser utilizados em radioimunoensaios ou em ensaios imunométricos, também conhecidos como ensaios "dois sitios" ou "sanduíche" (ver Chard, "An Introduction to Radioimmune Assay and related Techniques," in: Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, North Holland Publishing Co., NY (1978)). Num ensaio imunométrico típico, uma quantidade de anticorpo não marcado é ligada a um suporte sólido que é insolúvel no fluido a ser testado, como sangue, linfa, extractos celulares e semelhantes. Após a ligação inicial de antigénio ao anticorpo imobilizado, é adicionada uma quantidade do segundo anticorpo marcado de modo detectável (o qual pode ser o mesmo ou não ser o mesmo que o primeiro) para permitir a detecção e/ou quantificação de antigénio ligado (ver, por exemplo Radioimmune Assay Method, Kirkham, et al., Ed. pp. 199-206, E&S Livingstone, Edinburgh (1970)). Na técnica são conhecidas muitas variantes destes tipos de ensaios e podem ser utilizadas para a detecção de glicoproteina P de 7p.
Os anticorpos contra a glicoproteina P do cromossoma 7p também podem ser utilizados em procedimentos de purificação (ver, em termos gerais, Dean et al., Affinity Chromatoqraphy, A Practical Approach, IRL Press (1986)). Tipicamente, o anticorpo é imobilizado numa matriz cromatográfica tal como Sepharose, 4B. A matriz é depois empacotada numa coluna e a preparação contendo a 19 glicoproteína P do cromossoma 7p é feita passar através daquela em condições que promovem a ligação, por exemplo, condições de baixo teor de sal. A coluna é então lavada, a proteina é eluida utilizando tampão que promove a dissociação do anticorpo, por exemplo, tampão possuindo um pH ou concentração de sal alterado. A proteina eluida pode ser transferida para um tampão, por exemplo via diálise, e subsequentemente conservada ou utilizada directamente. Os anticorpos também podem ser utilizados na transferência de Western para a detecção de glicoproteína P do cromossoma 7p numa amostra. Para estes tipos de ensaio, pode utilizar-se anticorpo que foi especificamente desenvolvido para reagir com a glicoproteína P do cromossoma 7p ou que reage com um epítopo da proteína. A detecção da glicoproteína P do cromossoma 7p pode ser utilizada para determinar se as células tumorais são resistentes a múltiplos fármacos. Analogamente, a detecção de alterações na expressão de glicoproteína P pode ser útil para prever o desenvolvimento de resistência a múltiplos fármacos em células. 0 ADNc desta glicoproteína P pode ser útil na concepção de iniciadores para PCR de diagnóstico, concepção de sondas para transferência de Northern de diagnóstico, ensaios de protecção de RNase e para a concepção de oligonucleótidos antimensageiros complementares ao ADNc previsto para utilização em estratégias de abordagem selectiva de genes para a inversão da resistência a múltiplos fármacos. São idealizadas utilizações de diagnóstico e terapêuticas in vitro e ín vivo para sequências de nucleótidos antimensageiros relativamente à glicoproteína P do cromossoma 7p. 20 A sequência primária de aminoácidos e a estrutura proteica da glicoproteina P do cromossoma 7p podem ser utilizadas na produção de anticorpos monoclonais (mAbs) que podem ser utilizados no diagnóstico e terapia de cancro resistente a múltiplos fármacos. Por exemplo, péptidos sintéticos semelhantes às sequências de aminoácidos nativas de domínios extracelulares particulares como determinado por previsão de tipologia de membrana podem ser úteis para desenvolver mAbs inibidores orientados contra epítopos extracelulares da glicoproteina P do cromossoma 7p. Além disso, sequências sintéticas peptídicas de 10-20meros derivadas da sequência de aminoácidos primária não incluídas nas sequências de ansa extracelulares supramencionadas podem ser úteis no desenvolvimento de anticorpos monoclonais de diagnóstico específicos. Podem ser utilizados mAbs específicos em análise de diagnóstico por FACS, transferência de Western e imuno-histoquímica. Tais mAbs também podem ser usados em utilizações de diagnóstico in vivo, onde podem ser empregues mAbs conjugados com etiquetas para avaliar a carga tumoral, localização do tumor ou massa tumoral residual após quimioterapia ou terapia cirúrgica de tumores que expressam glicoproteina P do 7pl5-21.
Também podem ser utilizados mAbs específicos para fins terapêuticos em doentes com cancro. Em particular, eles podem ser administrados para inverter a resistência de cancros a múltiplos fármacos em doentes administrados com agentes quimioterapêuticos que são substratos para efluxo pela glicoproteina P do 7p, por exemplo, cisplatina. Além disso, mAbs específicos podem ser terapeuticamente utilizados em doentes com cancro para provocar a morte celular específica de tumores, quer administrados numa 21 forma não conjugada, resultando em morte tumoral mediada imunologicamente, quer numa forma conjugada com uma toxina celular (por exemplo conjugado com iodo radioactivo ou com toxinas químicas), resultando na morte celular directa e específica de tumores.
Também podem ser utilizados mAbs específicos para fins terapêuticos diferentes da resistência de cancros a múltiplos fármacos. Com base na função imunorreguladora prevista da glicoproteína P do 7p, estes mAbs podem ser administrados a doentes para prevenir e/ou tratar a rejeição do transplante de órgãos e também várias doenças autoimunes como artrite reumatóide e esclerose múltipla. Além disso, uma vez que as glicoproteínas P funcionam na captação, excreção e distribuição específica em relação ao tecido de uma diversidade de compostos farmacológicos e químicos, e têm sido implicadas em mecanismos de biodisponibilidade oral, função da barreira hematoencefálica e em mecanismos de excreção renal, hepática e biliar de vários fármacos, os mAbs específicos podem ser administrados terapeuticamente para alterar a farmacocinética e disponibilidade daqueles fármacos terapêuticos os quais são substratos da função de transporte mediada pela glicoproteína P do 7p.
As composições e métodos da presente invenção podem ter um número de utilizações além das descritas acima. Por exemplo, sabe-se que as células estaminais pluripotentes e células progenitoras de tecido como as células estaminais hematopoiéticas, células neuroprogenitoras e células progenitoras de músculo possuem actividades de efluxo tipo glicoproteína P para moléculas pequenas e corantes fluorescentes. A glicoproteína P do cromossoma 7p pode 22 desempenhar um papel no transporte de tais substratos, e podem assim servir como um marcador para o isolamento de tais células estaminais e células progenitoras via, por exemplo, análise de FACS. Além disso, uma vez que a glicoproteina P MDRl parece estar envolvida na diferenciação celular, proliferação celular, sobrevivência celular e determinadas respostas imunológicas, é esperado que a glicoproteina P do cromossoma 7p, devido à sua homologia com a glicoproteina P MDR 1, também desempenhe um papel em tais funções fisiológicas. Assim, o gene da glicoproteina P do cromossoma 7p e as sequências proteicas podem ser úteis na modulação das rupturas fisiopatológicas destas funções relacionadas com o MDR.
Exemplos
Uma vez que está presentemente a ser produzida informação nova de sequências genómicas a um ritmo elevado através do projecto do genoma humano, bases de dados contendo essa informação genómica contêm potencialmente sequências de membros da familia de glicoproteina P não identificados até à data. Os membros da familia da glicoproteina P mamífera partilham sequências de aminoácidos e epítopos de proteína característicos, e assumem conformações semelhantes. Assim, foi realizada uma pesquisa com base em homologia de proteína numa tentativa para identificar novos genes que codificam glicoproteina P. Foram utilizadas ferramentas bioinformáticas de análise de genes e análise de proteínas para caracterizar melhor a sequência de ácidos nucleicos e prever a estrutura proteica de genes candidatos identificados. Especificamente, foi utilizada a aplicação tblastn do National Center for Biotechnology Information (NCBI) para comparar as sequências de aminoácidos 23 conservadas derivadas da estrutura conhecida da glicoproteina P MDRl humana com a base de dados não redundante de sequências de nucleótidos de homo sapiens da NCBI traduzida dinamicamente em todas as grelhas de leitura. A sequência assinatura comum aos membros da família de transportadores ABC, uma sequência de aminoácidos 15mero LSGGQKQRIAIARAL (SEQ ID N0:17), foi utilizada para identificar sequências de ADN genómico humano que codificam estruturas de proteínas homólogas. Também foram utilizadas sequências de aminoácidos hexaméricas conhecidas de três epítopos de ligação ao anticorpo monoclonal (mAb) específico contra a glicoproteina P.
Os clones de ADN genómico humano identificados do modo descrito acima foram examinados quanto à contaminação por vectores utilizando o programa VecScreen. Além disso, estes clones foram submetidos a mapeamento sistemático de homologia utilizando sequências de aminoácidos 20-meros contíguas sobrepostas derivadas da estrutura da proteína MDRl humana e o programa de pesquisa tblastn. As sequências de ADN genómico candidatas que codificam sequências homólogas de aminoácidos foram comparadas em relação às sequências da grelha de leitura aberta (ORF) em cada clone de ADN utilizando o programa ORF Finder de NCBI (Altschul, et al.f Nucleic Acids Res. 25:3389-402 (1997)). As ORFs genómicas contendo sequências de ADN homólogas foram então analisadas utilizando o pacote de software NetGene2 para prever sítios intrão de excisão-união nos genes candidatos (Brunak et al., J. Mol. Biol. 220:49-65 (1991)).
Uma sequência de ADNc foi gerada por transcrição linear conceptual de estruturas previstas de exão de ADN 24 adjacentes. Utilizando esta abordagem foram identificados dois clones genómicos humanos adjacentes sobrepostos, CTA-367017 (AC002486, 79611 pares de bases de comprimento) e CTB-86D3 (AC005060, 120169 pares de bases de comprimento, sequenciados à direita) como fazendo parte de uma ilha desancorada de orientação desconhecida no cromossoma 7pl5-21. Constatou-se que estes clones de sobreposição continham uma sequência genética que codificava um novo membro da familia da glicoproteina P humana.
Para determinar se a estrutura prevista do gene era expressa em tecidos humanos, a sequência de ADNc gerada foi comparada com a base de dados não redundante de etiquetas de sequências humanas expressas (EST) dbest da NCBI como descrito por Altschul et al, e foram identificadas várias ESTs complementares a exões previstos do clone genómico AC002486. Foram então concebidos iniciadores da reacção em cadeia da polimerase (PCR) com base na informação de sequência disponível na base de dados no National Center for Biotechnology Information (NCBI) e na análise bioinformática como descrito acima. Utilizando estes iniciadores oligonucleotidicos específicos para o gene e a técnica de PCR em ARN mensageiro total (ARNm) transcrito inversamente isolado de várias linhas de células humanas e tecidos humanos normais, incluindo a linha de células de melanoma humano G3361, a linha de células de cancro da mama MCF-7, a linha de células de carcinoma de células escamosas SCC25, a linha de células de leucemia U937 e células mononucleares de sangue periférico normal (PBMC), foram amplificadas as sequências de ADNc derivadas do novo gene 7pl5-21 da glicoproteina P e os produtos de PCR foram subsequentemente sequenciados utilizando o método didesoxilo de terminação de cadeia em ambas as cadeias. 25 A estrutura intrão-exão de vários produtos genéticos codificados pelo gene 7pl5-21 da glicoproteina P foi determinada por comparação dos clones previstos e sequenciados de ADNc com informação da sequência genómica do locus do gene 7pl5-21 da glicoproteina P (clones AC002486 e AC005060), como se mostra nas SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:ll, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 e SEQ ID NO:16. As estruturas proteicas codificadas pelo novo gene 7pl5-21 foram depois geradas por tradução conceptual de aminoácidos das sequências oligonucleotidicas previstas de SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 e SEQ ID NO:16, como se mostra nas SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO: 8. Estas sequências de aminoácidos foram então comparadas com a sequência peptídica não redundante de NCBI em relação à homologia de sequência utilizando o programa blastp da NCBI. As sequências de aminoácidos previstas de SEQ ID NO:l, SEQ ID NO: 2, SEQ. ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 e SEQ ID NO:8. também foram classificadas utilizando o Sistema Internacional de Classificação de Familia de Proteínas PIR (Barker, et al., Nucleic Acids Res. 2_8:41-4 (2000); Huang et al., Nucleic Acids Res. 28:273-6 (2000)). As caracteristicas funcionais potenciais das proteínas previstas foram determinadas por análise comparativa da composição primária de aminoácidos e utilizando o pacote de software TMHMM1.0 para prever a formação de hélices transmembranares em proteínas mamíferas (Sonnhammer et al., Ismb 6:175-82 (1998)). 26 0 novo gene 7pl5-21 da glicoproteína P pode codificar várias isoformas distintas da glicoproteína P as quais apresentam 68% de homologia de sequência com os MDRl e MDR3 humanos. Um grau semelhante de homologia foi encontrado com as isoformas de ratimho e hamster destes genes humanos. A análise da sequência primária de aminoácidos sugere que a glicoproteína P do cromossoma 7pl5-21 pode expressar o epítopo C32 e o epítopo de ligação ao mAB anti-glicoproteína P, mas não o epítopo C219 conservado em todas as outras isoformas conhecidas de glicoproteína P (Georges, et al., Proc. Natl Acad Sei USA _8_7:152 — 6 (1990)). A previsão estrutural revelou que o gene 7pl5-21 da glicoproteína P codifica isoformas de glicoproteína P que apresentam semelhanças estruturais mas também diferenças distintivas em comparação com membros conhecidos da família da glicoproteína P, como descrito por Georges et al. Por exemplo, a proteína de SEQ ID NO:2 contém dois domínios de ligação a ATP que estão localizados em lados opostos da membrana do plasma, proporcionando um domínio extracelular de ligação a ATP único que se prevê que ligue ATP extracelular. Com base nestas diferenças distintivas, prevê-se que a glicoproteína P do 7pl5-21 esteja não só envolvida no efluxo de moléculas pequenas, mas que algumas das suas isoformas também são funcionais na captação dependente de energia de moléculas pequenas. O sistema de classificação pir confirmou que a glicoproteína P do cromossoma 7pl5-21 descoberta era um membro da família de proteínas de resistência a múltiplos fármacos e da família de superfamílias de homologia da cassete de ligação a ATP.
A análise por PCR utilizando iniciadores específicos para o gene demonstrou que o ADNc que codifica as proteínas de SEQ 27 ID NO: 1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5 e SEQ ID NO: 6, o qual em cada caso envolve exões codificados no clone genómico AC005060, era preferencialmente expresso em células de melanoma humano mas não na maioria dos outros cancros testados, ao contrário dos ADNcs que codificam as proteínas de SEQ ID NO: 7 e SEQ ID NO:8, os quais se constatou que eram expressos na maioria dos cancros examinados e também em tecidos fisiológicos humanos. Isto realça que um subconjunto de produtos do gene da glicoproteina P do 7pl5-21 pode ser selectivamente visado em determinados cancros que apresentam graus particularmente elevados de quimiorresistência, como o melanoma humano.
Para avaliar a expressão e função da glicoproteina P do 7pl5-21 e o efeito da modulação especifica na função de transporte e quimiorresistência, gerou-se anticorpos policlonais contra os péptidos MDR CGTSLILNGEPGYTI (SEQ ID NO:18) e RFGAYLIQAGRMTPEGC (SEQ ID N0:19), correspondendo a epitopos distintos da ansa extracelular da glicoproteina P do 7pl5-21, injectando ratinhos com estes péptidos antigénicos conjugados com a substância veiculo KLH. Para avaliar a expressão superficial da glicoproteina P do 7pl5-21 em células tumorais humanas foi realizada imunorrevelação indirecta da superfície e citometria de fluxo monocromática de células colhidas de fresco. Para avaliar os efeitos da inibição da gp-P do 7pl5-21 no efluxo de corante fluorescente mediado por gp-P, células tumorais foram incubadas com Ab policlonal anti-glicoproteína P do 7pl5-21 seguido da adição de calceína-AM e medições subsequentes em série da fluorescência celular por citometria de fluxo. 28
Estes estudos demonstraram que a glicoproteína P é expressa em células tumorais, e que o epítopo RFGAYLIQAGRMTPEGC (SEQ ID NO: 19) contido nas proteínas de SEQ ID N0:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5 e SEQ ID ΝΟ:β, é preferencialmente expresso em melanoma humano em níveis elevados, enquanto o epítopo CGTSLILNGEPGYTI (SEQ ID NO:18), também contido na SEQ ID NO:7 e SEQ ID NO:8, também é expresso noutros tipos de cancro e em células humanas normais. Os anticorpos contra o epítopo CGTSLILNGEPGYTI (SEQ ID NO:18) inibiram tanto a captação de corante como também o efluxo de corante em função do tipo de célula, indicando uma função dupla dos vários produtos do gene da glicoproteína P do 7pl5-21 nestes processos distintos. Estes anticorpos também aumentam a citotoxicidade celular da cisplatina em ensaios de morte celular específica em melanoma e também em cancro da mama entre outros, indicativo da sua utilidade terapêutica potencial no tratamento de doentes com cancro.
Sabe-se que determinados tipos de cancro exibem rearranjo cromossómico na região 7pl5-21 e tais mutações podem estar associadas com o aparecimento do fenótipo MDR. Isto levanta a possibilidade de que o rearranjo de genes nestes cancros resulta potencialmente de formação de epissoma e cromossoma minúsculo duplo (DM) durante o processo de amplificação de gene da glicoproteína P do 7pl5-21 sob stresses mutagénicos como a quimioterapia. Sabe-se que as células que expressam resistência a múltiplos fármacos mediada por MDRl sofrem esses tipos de rearranjos cromossómicos e formação de cromossoma DM (Scehoenlein et al., Mol. Biol. Cell 3:507-20 (1992); Mickley et al., J. Clin. Invest. 99:1947-57 (1997); Knutsen et al., Genes Chromosomes Câncer 23:44-54 (1998)). Assim, os produtos do gene da glicoproteína P do cromossoma 29
7pl5-21 de SEQ ID N0:1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO:5 e SEQ ID NO:6 podem estar selectivamente sobre-expressos em determinadas células cancerosas, contribuindo desse modo para a resistência adquirida ao fármaco dessas células cancerosas enquanto permanecem silenciosos em células normais. Este padrão de expressão diferencial pode ser utilizado na detecção e inversão da resistência a múltiplos fármacos de células mamíferas tumorigénicas.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> The Brigham and Women's Hospital, Inc. <120> Um Gene que Codifica um Homólogo de Glicoproteina P Humana de Resistência a Múltiplos Fármacos, situado no Cromossoma 7pl5-21 e Suas Utilizações <130> 81994/268611 <160> 19
<170> Patentln versão 3.0 <210> 1 <211> 659 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 30
Met Leu Ala Glu Lys Gly Ala His Ala Glu Leu Met Ala Lys Arg Gly 1 5 10 15 Leu Tyr Tyr Ser Leu Vai Met Ser Gin Asp Ile Lys Lys Ala Asp Glu 20 25 30 Gin Met Glu Ser Met Thr Tyr Ser Thr Glu Arg Lys Thr Asn Ser Leu 35 40 45 Pro Leu His Ser Vai Lys Ser Ile Lys Ser Asp Phe Ile Asp Lys Ala 50 55 60 Glu Glu Ser Thr Gin Ser Lys Glu Ile Ser Leu Pro Glu Vai Ser Leu 65 70 75 80 Leu Lys Ile Leu Lys Leu Asn Lys Pro Glu Trp Pro Phe Vai Vai Leu 85 90 95 Gly Thr Leu Ala Ser Vai Leu Asn Gly Thr Vai His Pro Vai Phe Ser Ί Λ Λ 1UU 105 1 1 Λ 11U Ile Ile Phe Ala Lys Ile Ile Thr Met Phe Gly Asn Asn Asp Lys Thr 115 120 125 Thr Leu Lys His Asp Ala Glu Ile Tyr Ser Met Ile Phe Vai Ile Leu 130 135 140 Gly Vai Ile Cys Phe Vai Ser Tyr Phe Met Gin Gly Leu Phe Tyr Gly 145 150 155 160 31
Arg Ala Gly Glu Ile Leu Thr Met 165 Ala Met Leu Tyr Gin Asp Ile Ala 180 Thr Gly Gly Leu Thr Thr Ile Leu 195 200 Gly Ala Thr Gly Ser Arg Ile Gly 210 215 Met Gly Leu Ser Vai Ile Ile Ser 225 230 Phe Leu Ile Leu Ser Ile Ala Pro 245 Glu Thr Ala Ala Met Thr Gly Phe 260 Lys His Ala Gly Lys Ile Ala Thr 275 280 Ile Vai Ser Leu Thr Arg Glu Lys 290 295 Met Leu Gin Thr Gin His Arg Asn 305 310 Gly Ser Cys Tyr Ala Phe Ser His 325 Ala Gly Phe Arg Phe Gly Ala Tyr 340 Pro Glu Gly Met Phe Ile Vai Phe 355 360 Ala Ile Gly Lys Thr Leu Vai Leu 370 375 Ser Gly Ala Ala His Leu Phe Ala 385 390 Asp Ser Arg Ser Gin Glu Gly Lys 405 Leu Glu Phe Arg Glu Vai Ser Phe 420 Phe Ile Leu Arg Gly Leu Ser Leu 435 440 Ala Phe Vai Gly Ser Ser Gly cys 450 455 Leu Gin Arg Leu Tyr Asp Pro Vai 465 470 Vai Asp Ala Lys Glu Leu Asn Vai 485
Arg Leu Arg His Leu Ala Phe Lys 170 175 Trp Phe Asp Glu Lys Glu Asn Ser 185 190 Ala Ile Asp Ile Ala Gin Ile Gin 205 Vai Leu Thr Gin Asn Ala Thr Asn 220 Phe Ile Tyr Gly Trp Glu Met Thr 235 240 Val Leu Ala Val Thr Gly Met Ile 250 255 Ala Asn Lys Asp Lys Gin Glu Leu 265 270 Glu Ala Leu Glu Asn Ile Arg Thr 285 Ala Phe Glu Gin Met Tyr Glu Glu 300 Thr Ser Lys Lys Ala Gin ile Ile 315 320 Ala Phe Ile Tyr Phe Ala Tyr Ala 330 335 Leu Ile Gin Ala Gly Arg Met Thr 345 350 Thr Ala Ile Ala Tyr Gly Ala Met 365 Ala Pro Glu Tyr Ser Lys Ala Lys 380 Leu Leu Glu Lys Lys Pro Asn Ile 395 400 Lys Pro Asp Thr Cys Glu Gly Asn 410 415 Phe Tyr Pro Cys Arg Pro Asp Val 425 430 Ser Ile Glu Arg Gly Lys Thr Val 445 Gly Lys Ser Thr Ser Val Gin Leu 460 Gin Gly Gin Val Leu Phe Asp Gly 475 4 B0 Gin Trp Leu Arg Ser Gin Ile Ala 490 495 32
Ile Vai Pro Gin Glu Pro Vai Leu Phe Asn Cys Ser Ile Ala Glu Asn 500 505 510 Ile Ala Tyr Gly Asp Asn Ser Arg Val Val Pro Leu Asp Glu Ile Lys 515 520 525 Glu Ala Ala Asn Ala Ala Asn Ile His Ser Phe Ile Glu Gly Leu Pro 530 535 540 Glu Lys Tyr Asn Thr Gin Vai Gly Leu Lys Gly Ala Gin Leu Ser Gly 545 550 555 560 Gly Gin Lys Gin Arg Leu Ala Ile Ala Arg Ala Leu Leu Gin Lys Pro 565 570 575 Lys Ile Leu Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Asn Asp Ser 580 585 590 Glu Lys Vai Vai Gin His Ala Leu Asp Lys Ala Arg Thr Gly Arg Thr 595 600 605 Cys Leu Vai Vai Thr His Arg Leu Ser Ala Ile Gin Asn Ala Asp Leu 610 615 620 Ile Vai Vai Leu His Asn Gly Lys Ile Lys Glu Gin Gly Thr His Gin 625 630 635 640 Glu Leu Leu Arg Asn Arg Asp Ile Tyr Phe Lys Leu Val Asn Ala Gin 645 650 655 Ser Vai Gin
< 210 > 2 <211> 812 <212> PRT <213> Homo sapiens < 4 0 0 > 2
Met Vai Asp Glu Asn Asp Ile Arg Ala Leu Asn Vai Arg His Tyr Arg 15 10 15
Asp His Ile Gly Vai Vai Ser Gin Glu Pro Vai Leu Phe Gly Thr Thr 20 25 30
Ile Ser Asn Asn Ile Lys Tyr Gly Arg Asp Asp Vai Thr Asp Glu Glu 35 40 45
Met Glu Arg Ala Ala Arg Glu Ala Asn Ala Tyr Asp Phe Ile Met Glu 50 55 60
Phe Pro Asn Lys Phe Asn Thr Leu Vai Gly Glu Lys Gly Ala Gin Met 65 70 75 80
Ser Gly Gly Gin Lys Gin Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Leu Vai Arg 85 90 95 33
Asn Pro Lys Ile Leu Ile Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Ser 100 105 110 Glu Ser Lys Ser Ala Vai Gin Ala Ala Leu Glu Lys Ala Ser Lys Gly 115 120 125 Arg Thr Thr Ile Vai Vai Ala His Arg Leu Ser Thr Ile Arg Ser Ala 130 135 140 Asp Leu Ile Vai Thr Leu Lys Asp Gly Met Leu Ala Glu Lys Gly Ala 145 150 155 160 His Ala Glu Leu Met Ala Lys Arg Gly Leu Tyr Tyr Ser Leu Vai Met 165 170 175 Ser Gin Asp Ile Lys Lys Ala Asp Glu Gin Met Glu Ser Met Thr Tyr 180 185 190 Ser Thr Glu Arg Lys Thr Asn Ser Leu Pro Leu His Ser Vai Lys Ser 195 200 205 Ile Lys Ser Asp Phe Ile Asp Lys Ala Glu Glu Ser Thr Gin Ser Lys 210 215 220 Glu Ile Ser Leu Pro Glu Vai Ser Leu Leu Lys Ile Leu Lys Leu Asn 225 230 235 240 Lys Pro Glu Trp Pro Phe Vai Vai Leu Gly Thr Leu Ala Ser Vai Leu 245 250 255 Asn Gly Thr Vai His Pro Vai Phe Ser Ile Ile Phe Ala Lys Ile Ile 260 265 270 Thr Met Phe Gly Asn Asn Asp Lys Thr Thr Leu Lys His Asp Ala Glu 275 280 285 Ile Tyr Ser Met Ile Phe Vai Ile Leu Gly Vai Ile Cys Phe Vai Ser 290 295 300 Tyr Phe Met Gin Gly Leu Phe Tyr Gly Arg Ala Gly Glu Ile Leu Thr 305 310 315 320 Met Arg Leu Arg His Leu Ala Phe Lys Ala Met Leu Tyr Gin Asp Ile 325 330 335 Ala Trp Phe Asp Glu Lys Glu Asn Ser Thr Gly Gly Leu Thr Thr Ile 340 345 350 Leu Ala Ile Asp Ile Ala Gin Ile Gin Gly Ala Thr Gly Ser Arg Ile 355 360 365 Gly Vai Leu Thr Gin Asn Ala Thr Asn Met Gly Leu Ser Vai Ile Ile 370 375 380 Ser Phe Ile Tyr Gly Trp Glu Met Thr Phe Leu Ile Leu Ser Ile Ala 385 390 395 400 Pro Vai Leu Ala Vai Thr Gly Met Ile Glu Thr Ala Ala Met Thr Gly 405 410 415 Phe Ala Asn Lys Asp Lys Gin Glu Leu Lys His Ala Gly Lys Ile Ala 420 425 430 34
Thr Glu Ala Leu Glu Asn Ile Arg Thr Ile Vai Ser Leu Thr Arg Glu 435 440 445 Lys Ala Phe Glu Gin Met Tyr Glu Glu Met Leu Gin Thr Gin His Arg 450 455 460 Asn Thr Ser Lys Lys Ala Gin Ile Ile Gly Ser Cys Tyr Ala Phe Ser 465 470 475 480 His Ala Phe Ile Tyr Phe Ala Tyr Ala Ala Gly Phe Arg Phe Gly Ala 485 490 495 Tyr Leu Ile Gin Ala Gly Arg Met Thr Pro Glu Gly Met Phe Ile Val 500 505 510 Phe Thr Ala Ile Ala Tyr Gly Ala Met Ala Ile Gly Lys Thr Leu Val 515 520 525 Leu Ala Pro Glu Tyr Ser Lys Ala Lys Ser Gly Ala Ala His Leu Phe 530 535 540 Ala Leu Leu Glu Lys Lys Pro Asn Ile Asp Ser Arg Ser Gin Glu Gly 545 550 555 560 Lys Lys Pro Asp Thr Cys Glu Gly Asn Leu Glu Phe Arg Glu Val Ser 565 570 575 Phe Phe Tyr Pro Cys Arg Pro Asp Vai Phe Ile Leu Arg Gly Leu Ser 580 585 590 Leu Ser Ile Glu Arg Gly Lys Thr Vai Ala Phe Vai Gly Ser Ser Gly 595 600 605 Cys Gly Lys Ser Thr Ser Vai Gin Leu Leu Gin Arg Leu Tyr Asp Pro 610 615 620 Vai Gin Gly Gin Vai Leu Phe Asp Gly Vai Asp Ala Lys Glu Leu Asn 625 630 635 640 Vai Gin Trp Leu Arg Ser Gin Ile Ala Ile Vai Pro Gin Glu Pro Val 645 650 655 Leu Phe Asn Cys Ser Ile Ala Glu Asn Ile Ala Tyr Gly Asp Asn Ser 660 665 670 Arg Vai Vai Pro Leu Asp Glu Ile Lys Glu Ala Ala Asn Ala Ala Asn 675 680 685 Ile His Ser Phe Ile Glu Gly Leu Pro Glu Lys Tyr Asn Thr Gin Val 690 695 700 Gly Leu Lys Gly Ala Gin Leu Ser Gly Gly Gin Lys Gin Arg Leu Ala 705 710 715 720 Ile Ala Arg Ala Leu Leu Gin Lys Pro Lys 11 e Leu Leu Leu Asp Glu 725 730 735 Ala Thr Ser Ala Leu Asp Asn Asp Ser Glu Lys Vai Val Gin His Ala 740 745 750 Leu Asp Lys Ala Arg Thr Gly Arg Thr Cys Leu Val Val Thr His Arg 755 760 765 35
Leu Ser Ala Ile Gin Asn Ala Asp Leu Ile Vai Vai Leu His Asn Gly 770 775 780
Lys Ile Lys Glu Gin Gly Thr His Gin Glu Leu Leu Arg Asn Arg Asp 765 790 795 800
Ile Tyr Phe Lys Leu Vai Asn Ala Gin Ser Vai Gin 805 810 <210> 3 <211> 131
<212> PRT <213> Homo sapiens < 4 0 0 > 3
Met Vai Asp Glu Asn Asp Ile Arg Ala Leu Asn Vai Arg His Tyr Arg 1 5 10 15 Asp His Ile Gly Vai Vai Ser Gin Glu Pro Vai Leu Phe Gly Thr Thr 20 25 30 Ile Ser Asn Asn Ile Lys Tyr Gly Arg Asp Asp Vai Thr Asp Glu Glu 35 40 45 Met Glu Arg Ala Ala Arg Glu Ala Asn Ala Tyr Asp Phe Ile Met Glu 50 55 60 Phe Pro Asn Lys Phe Asn Thr Leu Vai Gly Glu Lys Gly Ala Gin Met 65 70 75 80 Ser Gly Gly Gin Lys Gin Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Leu Vai Arg 85 90 95 Asn Pro Lys Ile Leu Ile Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Ser 100 105 110 Glu Ser Lys Ser Ala Vai Gin Ala Ala Leu Glu Lys Asp Thr Pro Arg 115 120 125
Tyr Ser Phe 130 <210> 4 <211> 1058 <212> PRT Λ OO LO V Homo sapiens <220> <221> Nota <222> (66) . . (66) 36 <223> Xaa na posição 66 representa qualquer L-aminoácido <400> 4
Met Vai Ile Ser Leu Thr Ser Lys Glu Leu Ser Ala Tyr Ser Lys Ala 1 5 10 15 Gly Ala Vai Ala Glu Glu Vai Leu Ser Ser Ile Arg Thr Vai Ile Ala 20 25 30 Phe Arg Ala Gin Glu Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Leu Leu Asn Ile 35 40 45 Thr Arg Tyr Ala Trp Phe Tyr Phe Pro Gin Trp Leu Leu Ser Cys Vai 50 55 60 Leu Xaa Phe Vai Arg Tyr Thr Gin Asn Leu Lys Asp Ala Lys Asp Phe 65 70 75 80 Gly Ile Lys Arg Thr Ile Ala Ser Lys Vai Ser Leu Gly Ala Vai Tyr 85 90 95 Phe Phe Met Asn Gly Thr Tyr Gly Leu Ala Phe Trp Tyr Gly Thr Ser 100 105 110 Leu Ile Leu Asn Gly Glu Pro Gly Tyr Thr Ile Gly Thr Vai Leu Ala 115 120 125 Vai Phe Phe Ser Vai Ile His Ser Ser Tyr Cys Ile Gly Ala Ala Vai 130 135 140 Pro His Phe Glu Thr Phe Ala Ile Ala Arg Gly Ala Ala Phe His Ile 145 150 155 160 Phe Gin Vai Ile Asp Lys Lys Pro Ser Ile Asp Asn Phe Ser Thr Ala 165 170 175 Gly Tyr Lys Pro Glu Ser Ile Glu Gly Thr Vai Glu Phe Lys Asn Val 180 185 190 Ser Phe Asn Tyr Pro Ser Arg Pro Ser Ile Lys Ile Leu Lys Gly Leu 195 200 205 Asn Leu Arg Ile Lys Ser Gly Glu Thr Vai Ala Leu Vai Gly Leu Asn 210 215 220 Gly Ser Gly Lys Ser Thr Vai Vai Gin Leu Leu Gin Arg Leu Tyr Asp 225 230 235 240 Pro Asp Asp Gly Phe Ile Met Vai Asp Glu Asn Asp Ile Arg Ala Leu 245 250 255 Asn Vai Arg His Tyr Arg Asp His Ile Gly Vai Vai Ser Gin Glu Pro 260 265 270 Vai Leu Phe Gly Thr Thr Ile Ser Asn Asn Ile Lys Tyr Gly Arg Asp 275 280 285 Asp Vai Thr Asp Glu Glu Met Glu Arg Ala Ala Arg Glu Ala Asn Ala 290 295 300 37
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Ala Gin Ser Vai Gin 1055 <210> 5 <211> 1222 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> Nota <222> (230).. (230) <223> Xaa na posição 230 representa qualquer L-aminoácido <400> 5
Met Ile Leu Gly Ile Leu Ala Ser Leu Vai Asn Gly Ala Cys Leu Pro 1 5 10 15 Leu Met Pro Leu Vai Leu Gly Glu Met Ser Asp Asn Leu Ile Ser Gly 20 25 30 Cys Leu Vai Gin Thr Asn Thr Tyr Ser Phe Phe Arg Leu Thr Leu Tyr 35 40 45 Tyr Vai Gly Ile Gly Vai Ala Ala Leu Ile Phe Gly Tyr Ile Gin lie 50 55 60 Ser Leu Trp Ile Ile Thr Ala Ala Arg Gin Thr Lys Arg Ile Arg Lys 65 70 75 80 Gin Phe Phe His Ser Vai Leu Ala Gin Asp Ile Gly Trp Phe Asp Ser 85 90 95 Cys Asp Ile Gly Glu Leu Asn Thr Arg Met Thr Asp Ile Asp Lys Ile 100 105 110 Ser Asp Gly Ile Gly Asp Lys Ile Ala Leu Leu Phe Gin Asn Met Ser 115 120 125 40
Thr Phe Ser Ile Gly Leu Ala Val Gly Leu Val Lys Gly Trp Lys Leu 130 135 140 Thr Leu Vai Thr Leu Ser Thr Ser Pro Leu Ile Met Ala Ser Ala Ala 145 150 155 160 Ala Cys Ser Arg Met Vai ile Ser Leu Thr Ser Lys Glu Leu Ser Ala 165 170 175 Tyr Ser Lys Ala Gly Ala Val Ala Glu Glu Val Leu Ser ser Ile Arg 180 185 190 Thr Vai Ile Ala Phe Arg Ala Gin Glu Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe 195 200 205 Leu Leu Asn Ile Thr Arg Tyr Ala Trp Phe Tyr Phe Pro Gin Trp Leu 210 215 220 Leu Ser Cys Vai Leu Xaa Phe Val Arg Tyr Thr Gin Asn Leu Lys Asp 225 230 235 240 Ala Lys Asp Phe Gly Ile Lys Arg Thr Ile Ala Ser Lys Val Ser Leu 245 250 255 Gly Ala Vai Tyr Phe Phe Met Asn Gly Thr Tyr Gly Leu Ala Phe Trp 260 265 270 Tyr Gly Thr Ser Leu Ile Leu Asn Gly Glu Pro Gly Tyr Thr Ile Gly 275 280 285 Thr Vai Leu Ala Vai Phe Phe Ser Val Ile His Ser Ser Tyr Cys Ile 290 295 300 Gly Ala Ala Vai Pro His Phe Glu Thr Phe Ala Ile Ala Arg Gly Ala 305 310 315 320 Ala Phe His Ile Phe Gin Val Ile Asp Lys Lys Pro Ser Ile Asp Asn 325 330 335 Phe Ser Thr Ala Gly Tyr Lys Pro Glu Ser Ile Glu Gly Thr Val Glu 340 345 350 Phe Lys Asn Vai Ser Phe Asn Tyr Pro Ser Arg Pro Ser Ile Lys Ile 355 360 365 Leu Lys Gly Leu Asn Leu Arg Ile Lys Ser Gly Glu Thr Val Ala Leu 370 375 380 Vai Gly Leu Asn Gly Ser Gly Lys Ser Thr Val Val Gin Leu Leu Gin 385 390 395 400 Arg Leu Tyr Asp Pro Asp Asp Gly Phe Ile Met Val Asp Glu Asn Asp 405 410 415 Ile Arg Ala Leu Asn Vai Arg His Tyr Arg Asp His Ile Gly Val Val 420 425 430 Ser Gin Glu Pro Vai Leu Phe Gly Thr Thr Ile Ser Asn Asn Ile Lys 435 440 445 Tyr Gly Arg Asp Asp Vai Thr Asp Glu Glu Met Glu Arg Ala Ala Arg 450 455 460 41
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Pro Asp Vai Phe Ile Leu Arg Gly Leu Ser Leu Ser Ile Glu Arg Gly 995 1000 1005
Lys Thr 1010 Vai Ala Phe Vai Gly 1015 ser Ser Gly Cys Gly 1020 Lys Ser Thr Ser Vai 1025 Gin Leu Leu Gin Arg 1030 Leu Tyr Asp Pro Vai 1035 Gin Gly Gin Vai Leu 1040 Phe Asp Gly Vai Asp 1045 Ala Lys Glu Leu Asn 1050 Vai Gin Trp Leu Arg 1055 Ser Gin Ile Ala Ile 1060 Vai Pro Gin Glu Pro 1065 Vai Leu Phe Asn Cys 1070 Ser Ile Ala Glu Asn 1075 Ile Ala Tyr Gly Asp 1080 Asn Ser Arg Vai Vai 1085 Pro Leu Asp Glu Ile 1090 Lys Glu Ala Ala Asn 1095 Ala Ala Asn Ile His 1100 Ser Phe Ile Glu Gly 1105 Leu Pro Glu Lys Tyr 1110 Asn Thr Gin Vai Gly 1115 Leu Lys Gly Ala Gin 1120 Leu Ser Gly Gly Gin 1125 Lys Gin Arg 43
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< 210 > 6 <211> 1195 < 212 > PRT <213> Homo sapiens < 4 0 0 > 6
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Ala Cys Ser Arg Met Vai Ile Ser Leu Thr Ser Lys Glu Leu Ser Ala 165 170 175 Tyr Ser Lys Ala Gly Ala Vai Ala Glu Glu Vai Leu Ser Ser Ile Arg 180 185 190 Thr Vai Ile Ala Phe Arg Ala Gin Glu Lys Glu Leu Gin Arg Tyr Thr 195 200 205 Gin Asn Leu Lys Asp Ala Lys Asp Phe Gly Ile Lys Arg Thr Ile Ala 210 215 220 Ser Lys Vai Ser Leu Gly Ala Vai Tyr Phe Phe Met Asn Gly Thr Tyr 225 230 235 240 Gly Leu Ala Phe Trp Tyr Gly Thr Ser Leu Ile Leu Asn Gly Glu Pro 245 250 255 Gly Tyr Thr Ile Gly Thr Vai Leu Ala Vai Phe Phe Ser Vai Ile His 260 265 270 Ser Ser Tyr Cys Ile Gly Ala Ala Vai Pro His Phe Glu Thr Phe Ala 275 280 285 Ile Ala Arg Gly Ala Ala Phe His Ile Phe Gin Vai Ile Asp Lys Lys 290 295 300 Pro Ser Ile Asp Asn Phe Ser Thr Ala Gly Tyr Lys Pro Glu Ser Ile 305 310 315 320 Glu Gly Thr Vai Glu Phe Lys Asn Vai Ser Phe Asn Tyr Pro Ser Arg 325 330 335 Pro Ser Ile Lys Ile Leu Lys Gly Leu Asn Leu Arg ile Lys Ser Gly 340 345 350 Glu Thr Vai Ala Leu Vai Gly Leu Asn Gly Ser Gly Lys Ser Thr Vai 355 360 365 Vai Gin Leu Leu Gin Arg Leu Tyr Asp Pro Asp Asp Gly Phe Ile Met 370 375 380 Vai Asp Glu Asn Asp Ile Arg Ala Leu Asn Vai Arg His Tyr Arg Asp 385 390 395 400 His Ile Gly Vai Vai Ser Gin Glu Pro Vai Leu Phe Gly Thr Thr Ile 405 410 415 Ser Asn Asn Ile Lys Tyr Gly Arg Asp Asp Vai Thr Asp Glu Glu Met 420 425 430 Glu Arg Ala Ala Arg Glu Ala Asn Ala Tyr Asp Phe Ile Met Glu Phe 435 440 445 Pro Asn Lys Phe Asn Thr Leu Vai Gly Glu Lys Gly Ala Gin Met Ser 450 455 460 Gly Gly Gin Lys Gin Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Leu Vai Arg Asn 465 470 475 480 Pro Lys Ile Leu Ile Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Ser Glu 485 490 495 45
Ser Lys Ser Ala Vai Gin Ala Ala Leu Glu Lys Ala Ser Lys Gly Arg 500 505 510 Thr Thr Ile Vai Vai Ala His Arg Leu Ser Thr Ile Arg Ser Ala Asp 515 520 525 Leu Ile Vai Thr Leu Lys Asp Gly Met Leu Ala Glu Lys Gly Ala His 530 535 540 Ala Glu Leu Met Ala Lys Arg Gly Leu Tyr Tyr Ser Leu Vai Met Ser 545 550 555 560 Gin Asp Ile Lys Lys Ala Asp Glu Gin Met Glu Ser Met Thr Tyr Ser 5S5 570 575
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Gly Lys Ser Thr Ser Vai Gin Leu Leu Gin Arg Leu Tyr Asp Pro Vai 995 1000 1005
Gin Gly· 1010 Gin Vai Leu Phe Asp 1015 Gly Vai Asp Ala Lys 1020 Glu Leu Asn Vai Gin 1025 Trp Leu Arg Ser Gin 1030 Ile Ala Ile Vai Pro 1035 Gin Glu Pro Vai Leu 1040 Phe Asn Cys Ser Ile 1045 Ala Glu Asn Ile Ala 1050 Tyr Gly Asp Asn Ser 1055 Arg Vai Vai Pro Leu 1060 Asp Glu Ile Lys Glu 1065 Ala Ala Asn Ala Ala 1070 Asn Ile His Ser Phe 1075 Ile Glu Gly Leu Pro 1080 Glu Lys Tyr Asn Thr 1085 Gin Vai Gly Leu Lys 1090 Gly Ala Gin Leu Ser 1095 Gly Gly Gin Lys Gin 1100 Arg Leu Ala Ile Ala 1105 Arg Ala Leu Leu Gin 1110 Lys Pro Lys Ile Leu 1115 Leu Leu Asp Glu Ala 1120 Thr Ser Ala Leu Asp 1125 Asn Asp Ser Glu Lys 1130 Vai Vai Gin His Ala 1135 Leu Asp Lys Ala Arg 1140 Thr Gly Arg
Thr Cys Leu Vai Vai Thr His Arg Leu Ser Ala Ile Gin Asn Ala 1145 1150 1155 47
Asp Leu Ile Val Vai Leu His Asn Gly Lys Ile Lys Glu Gin Gly 1160 1165 1170
Thr His Gin Glu Leu Leu Arg Asn Arg Asp Ile Tyr Phe Lys Leu 1175 1180 1185
Val Asn Ala Gin Ser Val Gin 1190 1195 <210> 7 <211> 541 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> Nota <222> (230)..(230) <223> Xaa na posição 230 representa qualquer L-aminoácido < 4 0 0 > 7
Met Ile Leu Gly Ile Leu Ala Ser Leu Val Asn Gly Ala Cys Leu Pro 1 5 10 15 Leu Met Pro Leu Val Leu Gly Glu Met Ser Asp Asn Leu Ile Ser Gly 20 25 30 Cys Leu Val Gin Thr Asn Thr Tyr Ser Phe Phe Arg Leu Thr Leu Tyr 35 40 45 Tyr Val Gly Ile Gly Val Ala Ala Leu Ile Phe Gly Tyr Ile Gin Ile 50 55 60 Ser Leu Trp Ile Ile Thr Ala Ala Arg Gin Thr Lys Arg Ile Arg Lys 65 70 75 80 Gin Phe Phe His Ser Val Leu Ala Gin Asp Ile Gly Trp Phe Asp Ser 85 90 95 Cys Asp Ile Gly Glu Leu Asn Thr Arg Met Thr Asp Ile Asp Lys Ile 100 105 110 Ser Asp Gly Ile Gly Asp Lys Ile Ala Leu Leu Phe Gin Asn Met Ser 115 120 125 Thr Phe Ser Ile Gly Leu Ala Val Gly Leu Val Lys Gly Trp Lys Leu 130 135 140 Thr Leu Val Thr Leu Ser Thr Ser Pro Leu Ile Met Ala Ser Ala Ala 145 150 155 160 Ala Cys Ser Arg Met Val Ile Ser Leu Thr Ser Lys Glu Leu Ser Ala 165 170 175 48
Tyr Ser Lys Ala Gly Ala Vai Ala Glu Glu Vai Leu Ser Ser Ile Arg 180 185 190 Thr Vai Ile Ala Phe Arg Ala Gin Glu Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe 195 200 205 Leu Leu Asn Ile Thr Arg Tyr Ala Trp Phe Tyr Phe Pro Gin Trp Leu 210 215 220 Leu Ser Cys Vai Leu Xaa Phe Vai Arg Tyr Thr Gin Asn Leu Lys Asp 225 230 235 240 Ala Lys Asp Phe Gly Ile Lys Arg Thr Ile Ala Ser Lys Vai Ser Leu 245 250 255 Gly Ala Vai Tyr Phe Phe Met Asn Gly Thr Tyr Gly Leu Ala Phe Trp 260 265 270 Tyr Gly Thr Ser Leu Ile Leu Asn Gly Glu Pro Gly Tyr Thr Ile Gly 275 280 285 Thr Vai Leu Ala Vai Phe Phe Ser Vai Ile His Ser Ser Tyr Cys Ile 290 295 300 Gly Ala Ala Vai Pro His Phe Glu Thr Phe Ala Ile Ala Arg Gly Ala 305 310 315 320 Ala Phe Hls Ile Phe Gin Vai Ile Asp Lys Lys Pro Ser Ile Asp Asn 325 330 335 Phe Ser Thr Ala Gly Tyr Lys Pro Glu Ser Ile Glu Gly Thr Vai Glu 340 345 350 Phe Lys Asn Vai Ser Phe Asn Tyr Pro Ser Arg Pro Ser Ile Lys Ile 355 360 365 Leu Lys Gly Leu Asn Leu Arg Ile Lys Ser Gly Glu Thr Vai Ala Leu 370 375 380 Vai Gly Leu Asn Gly Ser Gly Lys Ser Thr Vai Vai Gin Leu Leu Gin 385 390 395 400 Arg Leu Tyr Asp Pro Asp Asp Gly Phe Ile Met Vai Asp Glu Asn Asp 405 410 415 Ile Arg Ala Leu Asn Vai Arg His Tyr Arg Asp His Ile Gly Vai Vai 420 425 430 Ser Gin Glu Pro Vai Leu Phe Gly Thr Thr Ile Ser Asn Asn Ile Lys 435 440 445 Tyr Gly Arg Asp Asp Vai Thr Asp Glu Glu Met Glu Arg Ala Ala Arg 450 455 460 Glu Ala Asn Ala Tyr Asp Phe Ile Met Glu Phe Pro Asn Lys Phe Asn 465 470 475 480 Thr Leu Vai Gly Glu Lys Gly Ala Gin Met Ser Gly Gly Gin Lys Gin 485 490 495 Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Leu Vai Arg Asn Pro Lys Ile Leu Ile 500 505 510 49 49 Ser Lys Ser Ala Vai 525 Ser Phe 540
Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Ser Glu 515 520
Gin Ala Ala Leu Glu Lys Asp Thr Pro Arg Tyr 530 535 <210> 8 <211> 514 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8
Met Ile Leu Gly Ile Leu Ala Ser Leu Val Asn Gly Ala Cys Leu Pro 1 5 10 15 Leu Met Pro Leu Val Leu Gly Glu Met Ser Asp Asn Leu Ile Ser Gly 20 25 30 Cys Leu Val Gin Thr Asn Thr Tyr Ser Phe Phe Arg Leu Thr Leu Tyr 35 40 45 Tyr Val Gly Ile Gly Val Ala Ala Leu Ile Phe Gly Tyr Ile Gin Ile 50 55 60 Ser Leu Trp Ile Ile Thr Ala Ala Arg Gin Thr Lys Arg Ile Arg Lys 65 70 75 80 Gin Phe Phe His Ser Val Leu Ala Gin Asp Ile Gly Trp Phe Asp Ser 85 90 95 Cys Asp Ile Gly Glu Leu Asn Thr Arg Met Thr Asp Ile Asp Lys Ile 100 105 110 Ser Asp Gly Ile Gly Asp Lys Ile Ala Leu Leu Phe Gin Asn Met Ser 115 120 125 Thr Phe Ser Ile Gly Leu Ala Val Gly Leu Val Lys Gly Trp Lys Leu 130 135 140 Thr Leu Val Thr Leu Ser Thr Ser Pro Leu Ile Met Ala Ser Ala Ala 145 150 155 160 Ala Cys Ser Arg Met Val Ile Ser Leu Thr Ser Lys Glu Leu Ser Ala 165 170 175 Tyr Ser Lys Ala Gly Ala Val Ala Glu Glu Val Leu Ser Ser Ile Arg 180 185 190 Thr Val Ile Ala Phe Arg Ala Gin Glu Lys Glu Leu Gin. Arg Tyr Thr 195 200 205 Gin Asn Leu Lys Asp Ala Lys Asp Phe Gly Ile Lys Arg Thr Ile Ala 210 215 220 Ser Lys Val Ser Leu Gly Ala Val Tyr Phe Phe Met Asn Gly Thr Tyr 225 230 235 240 50
Gly Leu Ala Phe Trp Tyr Gly Thr Ser Leu Ile Leu Asn Gly Glu Pro 245 250 255 Gly Tyr Thr Ile Gly Thr Vai Leu Ala Vai Phe Phe Ser Vai Ile His 260 265 270 Ser Ser Tyr Cys Ile Gly Ala Ala Vai Pro His Phe Glu Thr Phe Ala 275 280 285 Ile Ala Arg Gly Ala Ala Phe His Ile Phe Gin Vai Ile Asp Lys Lys 290 295 300 Pro Ser Ile Asp Asn Phe Ser Thr Ala Gly Tyr Lys Pro Glu Ser Ile 305 310 315 320 Glu Gly Thr Vai Glu Phe Lys Asn Vai Ser Phe Asn Tyr Pro Ser Arg 325 330 335 pro Ser Ile Lys Ile Leu Lys Gly Leu Asn Leu Arg Ile Lys Ser Gly 340 345 350 Glu Thr Vai Ala Leu Vai Gly Leu Asn Gly Ser Gly Lys Ser Thr Vai 355 360 365 Vai Gin Leu Leu Gin Arg Leu Tyr Asp Pro Asp Asp Gly Phe Ile Met 370 375 380 Vai Asp Glu Asn Asp Ile Arg Ala Leu Asn Vai Arg His Tyr Arg Asp 335 390 395 400 His Ile Gly Vai Vai Ser Gin Glu Pro Vai Leu Phe Gly Thr Thr Ile 405 410 415 Ser Asn Asn Ile Lys Tyr Gly Arg Asp Asp Vai Thr Asp Glu Glu Met 420 425 430 Glu Arg Ala Ala Arg Glu Ala Asn Ala Tyr Asp Phe Ile Met Glu Phe 435 440 445 Pro Asn Lys Phe Asn Thr Leu Vai Gly Glu Lys Gly Ala Gin Met Ser 450 455 460 Gly Gly Gin Lys Gin Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Leu Vai Arg Asn 465 470 475 480 Pro Lys Ile Leu Ile Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala Leu Asp Ser Glu 485 490 495 Ser Lys Ser Ala Vai Gin Ala Ala Leu Glu Lys Asp Thr Pro Arg Tyr 500 505 510
Ser Phe
<210> 9 <211> 2066 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 51 cgagcaaagg tcggactaca atcgtggtag cacaccgact ttctactatt cgaagtgcag 60 atttgattgt gaccctaaag gatggaatgc tggcggagaa aggagcacat gctgaactaa 120 tggcaaaacg aggtctatat tattcacttg tgatgtcaca ggatattaaa aaagetgatg 180 aacagatgga gtcaatgaca tattctactg aaagaaagac caactcactt cctctgcact 240 ctgtgaagag catcaagtca gacttcattg acaaggctga ggaatccacc caatctaaag 300 agataagtct tcctgaagtc tctctattaa aaattttaaa gttaaacaag cctgaatggc 360 cttttgtggt tctggggaca ttggcttctg ttctaaatgg aactgttcat ccagtatttt 420 ccatcatctt tgcaaaaatt ataaccatgt ttggaaataa tgataaaacc acattaaagc 480 atgatgcaga aatttattcc atgatattcg tcattttggg tgttatttgc tttgtcagtt 540 atttcatgca gggattattt tacggcagag caggggaaat tttaacgatg agattaagac 600 acttggcctt caaagccatg ttatatcagg atattgcctg gtttgatgaa aaggaaaaca 660 gcacaggagg cttgacaaca atattagcca tagatatagc acaaattcaa ggagcaacag 720 gttccaggat tggcgtctta acacaaaatg caactaacat gggactttca gttatcattt 780 cctttatata tggatgggag atgacattcc tgattctgag tattgctcca gtacttgccg 840 tgacaggaat gattgaaacc gcagcaatga ctggatttgc caacaaagat aagcaagaac 900 ttaagcatgc tggaaagata gcaactgaag ctttggagaa tatacgtact atagtgtcat 960 taacaaggga aaaagccttc gagcaaatgt atgaagagat gcttcagact caacacagaa 1020 atacctcgaa gaaagcacag attattggaa gctgttatgc attcagccat gcctttatat 1080 attttgccta tgcagcaggg tttcgatttg gagcctattt aattcaagct ggacgaatga 1140 ccccagaggg catgttcata gtttttactg caattgcata tggagctatg gccatcggaa 1200 aaacgctcgt tttggctcct gaatattcca aagccaaatc gggggctgcg catctgtttg 1260 ccttgttgga aaagaaacca aatatagaca gccgcagtca agaagggaaa aagccagaca 1320 catgtgaagg gaatttagag tttcgagaag tctctttctt ctatccatgt cgcccagatg 1380 ttttcatcct ccgtggctta tccctcagta ttgagcgagg aaagacagta gcatttgtgg 1440 ggagcagcgg ctgtgggàaa agcacttctg ttcaacttct gcagagactt tatgaccccg 1500 tgcaaggaca agtgctgttt gatggtgtgg atgcaaaaga attgaatgta cagtggctcc 1560 gttcccaaat agcaatcgtt cctcaagagc ctgtgctctt caactgcagc attgctgaga 1620 acatcgccta tggtgacaac agccgtgtgg tgccattaga tgagatcaaa gaagccgcaa 1680 atgcagcaaa tatccattct tttattgaag gtctccctga gaaatacaac acacaagttg 1740 gactgaaagg agcacagctt tctggcggcc agaaacaaag actagctatt gcaagggctc 1800 ttctccaaaa acccaaaatt ttattgttgg atgaggccac ttcagccctc gataatgaca 1860 52 gtgagaaggt ggttcagcat gcccttgata aagccaggac gggaaggaca tgcctagtgg 1920 tcactcacag gctctctgca attcagaacg cagatttgat agtggttctg cacaatggaa 1980 agataaagga acaaggaact catcaagagc tcctgagaaa tcgagacata tattttaagt 2040 tagtgaatgc acagtcagtg cagtga 2066 <210> 10 <211> 2856 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 10 cctaattcct ctaatatctc tctgtgagcc taaaccaata attatatatt acattctatt 60 gtctttctta tataactgca gaaagataaa tatcactttg tttgttcctg taggttttct 120 ttagtgtaat ccatagcagt tattgcattg gagcagcagt ccctcattat tgataagaaa 180 cccagtatag ataacttttc cacagctgga tataaacctg aatccataga aggaactgtg 240 gaatttaaaa atgtttcttt caattatcca tcaagaccat ctatcaagat tctgaaaggt 300 ctgaatctca gaattaagtc tggagagaca gtcgccttgg tcggtctcaa tggcagtggg 360 aagagtacgg tagtccagct tctgcagagg ttatatgatc cggatgatgg ctttatcatg 420 gtggatgaga atgacatcag agctttaaat gtgcggcatt atcgagacca tattggagtg 480 gttagtcaag agcctgtttt gttcgggacc accatcagta acaatatcaa gtatggacga 540 gatgatgtga ctgatgaaga gatggagaga gcagcaaggg aagcaaatgc gtatgatttt 600 atcatggagt ttcctaataa atttaataca ttggtagggg aaaaaggagc tcaaatgagt 660 ggagggcaga aacagaggat cgcaattgct cgtgccttag ttcgaaaccc caagattctg 720 attttagatg aggctacgtc tgccctggat tcagaaagca agtcagctgt tcaagctgca 780 ctggagaagg cgagcaaagg tcggactaca atcgtggtag cacaccgact ttctactatt 840 cgaagtgcag atttgattgt gaccctaaag gatggaatgc tggcggagaa aggagcacat 900 gctgaactaa tggcaaaacg aggtctatat tattcacttg tgatgtcaca ggatattaaa 960 aaagctgatg aacagatgga gtcaatgaca tattctactg aaagaaagac caactcactt 1020 cctctgcact ctgtgaagag catcaagtca gacttcattg acaaggctga ggaatccacc 1080 caatctaaag agataagtct tcctgaagtc tctctattaa aaattttaaa gttaaacaag 1140 cctgaatggc cttttgtggt tctggggaca ttggcttctg ttctaaatgg aactgttcat 1200 ccagtatttt ccatcatctt tgcaaaaatt ataaccatgt ttggaaataa tgataaaácc 1260 acattaaagc atgatgcaga aatttattcc atgatattcg tcattttggg tgttatttgc 1320 53 tttgtcagtt atttcatgca gggattattt tacggcagag caggggaaat tttaacgatg 1380 agattaagac acttggcctt caaagccatg ttatatcagg atattgcctg gtttgatgaa 1440 aaggaaaaca gcacaggagg cttgacaaca atattagcca tagatatagc acaaattcaa 1500 ggagcaacag gttccaggat tggcgtctta acacaaaatg caactaacat gggactttca 1560 gttatcattt cctttatata tggatgggag atgacattcc tgattctgag tattgctcca 1620 gtacttgccg tgacaggaat gattgaaacc gcagcaatga ctggatttgc caacaaagat 1680 aagcaagaac ttaagcatgc tggaaagata gcaactgaag ctttggagaa tatacgtact 1740 atagtgtcat taacaaggga aaaagccttc gagcaaatgt atgaagagat gcttcagact 1800 caacacagaa atacctcgaa gaaagcacag attattggaa gctgttatgc attcagccat 1860 gcctttatat attttgccta tgcagcaggg tttcgatttg gagcctattt aattcaagct 1920 ggacgaatga ccccagaggg catgttcata gtttttactg caattgcata tggagctatg 1980 gccatcggaa aaacgctcgt tttggctcct gaatattcca aagccaaatc gggggctgcg 2040 catctgtttg ccttgttgga aaagaaacca aatatagaca gccgcagtca agaagggaaa 2100 aagccagaca catgtgaagg gaatttagag tttcgagaag tctctttctt ctatccatgt 2160 cgcccagatg ttttcatcct ccgtggctta tccctcagta ttgagcgagg aaagacagta 2220 gcatttgtgg ggagcagcgg ctgtgggaaa agcacttctg ttcaacttct gcagagactt 2280 tatgaccccg tgcaaggaca agtgctgttt gatggtgtgg atgcaaaaga attgaatgta 2340 cagtggctcc gttcccaaat agcaatcgtt cctcaagagc ctgtgctctt caactgcagc 2400 attgctgaga acatcgccta tggtgacaac agccgtgtgg tgccattaga tgagatcaaa 2460 gaagccgcaa atgcagcaaa tatccattct tttattgaag gtctccctga gaaatacaac 2520 acacaagttg gactgaaagg agcacagctt tctggcggcc agaaacaaag actagctatt 2580 gcaagggctc ttctccaaaa acccaaaatt ttattgttgg atgaggccac ttcagccctc 2640 gataatgaca gtgagaaggt ggttcagcat gcccttgata aagccaggac gggaaggaca 2700 tgcctagtgg tcactcacag gctctctgca attcagaacg cagatttgat agtggttctg 2760 cacaatggaa agataaagga acaaggaact catcaagagc tcctgagaaa tcgagacata 2820 tattttaagt tagtgaatgc acagtcagtg cagtga 2856
< 210 > 11 <211> 1175 <212> ADN <213> Homo sapiens < 4 0 0 > 11 54 cctaattcct ctaatatctc tctgtgagcc taaaccaata attatatatt acattctatt 60 gtctttctta tataactgca gaaagataaa tatcactttg tttgttcctg taggttttct 120 ttagtgtaat ccatagcagt tattgcattg gagcagcagt ccctcattat tgataagaaa 180 cccagtatag ataacttttc cacagctgga tataaacctg aatccataga aggaactgtg 240 gaatttaaaa atgtttcttt caattatcca tcaagaccat ctatcaagat tctgaaaggt 300 ctgaatctca gaattaagtc tggagagaca gtcgccttgg tcggtctcaa tggcagtggg 360 aagagtacgg tagtccagct tctgcagagg ttatatgatc cggatgatgg ctttatcatg 420 gtggatgaga atgacatcag agctttaaat gtgcggcatt atcgagacca tattggagtg 480 gttagtcaag agcctgtttt gttcgggacc accatcagta acaatatcaa gtatggacga 540 gatgatgtga ctgatgaaga gatggagaga gcagcaaggg aagcaaatgc gtatgatttt 600 atcatggagt ttcctaataa atttaataca ttggtagggg aaaaaggagc tcaaatgagt 660 ggagggcaga aacagaggat cgcaattgct cgtgccttag ttcgaaaccc caagattctg 720 attttagatg aggctacgtc tgccctggat tcagaaagca agtcagctgt tcaagctgca 780 ctggagaagg atacccccag gtattcattt tgacctaatt tcacctcaag tggagaatcg 840 ctgaccttga accagcgccc ttcgacagct ctggcccctc aaacctcacc ctgacctcct 900 gctgcctatg agctactgca catacctcaa ggccatatgc agttgtggcc ctgcaccaaa 960 ttacactgaa tctaggaggg gagttggcag tggcggtatg aaaaaccatt gaacagtttt 1020 ctcgatggcc tgactccctt ataaaccaga gccttcagac cccttacaag gcttaatggc 1080 acattttact ttgcatttgc ttggaagtga gttaagcgtt tttttttctc taagaaaatc 1140 gcaggcttct ttttttaaaa tgctgacttt atgga 1175
< 210 > 12 <211> 3177 < 212 > ADN <213> Homo sapiens <220> <221> Nota <222> (198)..(198) <223> n na posição 198 representa qualquer nucleótido (A, T, C ou G) 55 < 4 Ο Ο > 12 atggtcatct cattgaccag taaggaatta agtgcctatt ccaaagctgg ggctgtggca 60 gaagaagtct tgtcatcaat ccgaacagtc atagccttta gggcccagga gaaagaactt 120 caaaggtctt tccttttaaa tataacaaga tatgcttggt tttattttcc ccagtggcta 180 ctaagttgtg ttctgttntt tgtaaggtat acacagaatc tcaaagatgc aaaggatttt 240 ggcataaaaa ggactatagc ttcaaaagtg tctcttggtg ctgtgtactt ctttatgaat 300 ggaacctatg gacttgcttt ttggtatgga acctccttga ttcttaatgg agaacctgga 360 tataccatcg ggactgttct tgctgttttc tttagtgtaa tccatagcag ttattgcatt 420 ggagcagcag tccctcactt tgaaaccttc gcaatagccc gaggagctgc ctttcatatt 480 ttccaggtta ttgataagaa acccagtata gataactttt ccacagctgg atataaacct 540 gaatccatag aaggaactgt ggaatttaaa aatgtttctt tcaattatcc atcaagacca 600 tctatcaaga ttctgaaagg tctgaatctc agaattaagt ctggagagac agtcgccttg 660 gtcggtctca atggcagtgg gaagagtacg gtagtccagc ttctgcagag gttatatgat 720 ccyyatgaty gctttatcat ggtggatgag aatgacatca gagctttaaa tgtgcggcat 780 tatcgagacc atattggagt ggttagtcaa gagcctgttt tgttcgggac caccatcagt 840 aacaatatca agtatggacg agatgatgtg actgatgaag agatggagag agcagcaagg 900 gaagcaaatg cgtatgattt tatcatggag tttcctaata aatttaatac attggtaggg 960 gaaaaaggag ctcaaatgag tggagggcag aaacagagga tcgcaattgc tcgtgcctta 1020 gttcgaaacc ccaagattct gattttagat gaggctacgt ctgccctgga ttcagaaagc 1080 aagtcagctg ttcaagctgc actggagaag gcgagcaaag gtcggactac aatcgtggta 1140 gcacaccgac tttctactat tcgaagtgca gatttgattg tgaccctaaa ggatggaatg 1200 ctggcggaga aaggagcaca tgctgaacta atggcaaaac gaggtctata ttattcactt 1260 gtgatgtcac aggatattaa aaaagctgat gaacagatgg agtcaatgac atattctact 1320 gaaagaaaga ccaactcact tcctctgcac tctgtgaaga gcatcaagtc agacttcatt 1380 gacaaggctg aggaatccac ccaatctaaa gagataagtc ttcctgaagt ctctctatta 1440 aaaattttaa agttaaacaa goctgaatgg ccttttgtgg ttctggggac attggcttct 1500 gttctaaatg gaactgttca tccagtattt tccatcatct ttgcaaaaat tataaccatg 1560 tttggaaata atgataaaac cacattaaag catgatgcag aaatttattc catgatattc 1620 gtcattttgg gtgttatttg ctttgtcagt tatttcatgc agggattatt ttacggcaga 1680 gcaggggaaa ttttaacgat gagattaaga cacttggcct tcaaagccat gttatatcag 1740 gatattgcct ggtttgatga aaaggaaaac agcacaggag gcttgacaac aatattagcc 1800 atagatatag cacaaattca aggagcaaca ggttccagga ttggcgtctt aacacaaaat 1860 56 gcaactaaca tgggactttc agttatcatt tcctttatat atggatggga gatgacattc 1920 ctgattctga gtattgctcc agtacttgcc gtgacaggaa tgattgaaac cgcagcaatg 1980 actggatttg ccaacaaaga taagcaagaa cttaagcatg ctggaaagat agcaactgaa 2040 gctttggaga atatacgtac tatagtgtca ttaacaaggg aaaaagcctt cgagcaaatg 2100 tatgaagaga tgcttcagac tcaacacaga aatacctcga agaaagcaca gattattgga 2160 agctgttatg cattcagcca tgcctttata tattttgcct atgcagcagg gtttcgattt 2220 ggagcctatt taattcaagc tggacgaatg accccagagg gcatgttcat agtttttact 2280 gcaattgcat atggagctat ggccatcgga aaaacgctcg ttttggctcc tgaatattcc 2340 aaagccaaat cgggggctgc gcatctgttt gccttgttgg aaaagaaacc aaatatagac 2400 agccgcagtc aagaagggaa aaagccagac acatgtgaag ggaatttaga gtttcgagaa 2460 gtctctttct tctatccatg tcgcccagat gttttcatcc tccgtggctt atccctcagt 2520 attgagcgag gaaagacagt agcatttgtg gggagcagcg gctgtgggaa aagcacttct 2580 gttcaacttc tgcagagact ttatgacccc gtgçaaggae aagtgctgtt tgatggtgtg 2640 gatgcaaaag aattgaatgt acagtggctc cgttcccaaa tagcaatcgt tcctcaagag 2700 cctgtgctct tcaactgcag cattgctgag aacatcgcct atggtgacaa cagccgtgtg 2760 gtgccattag atgagatcaa agaagccgca aatgcagcaa atatccattc ttttattgaa 2820 ggtctccctg agaaatacaa cacacaagtt ggactgaaag gagcacagct ttctggcggc 2880 cagaaacaaa gactagctat tgcaagggct cttctccaaa aacccaaaat tttattgttg 2940 gatgaggcca cttcagccct cgataatgac agtgagaagg tggttcagca tgcccttgat 3000 aaagccagga cgggaaggac atgcctagtg gtcactcaca ggctctctgc aattcagaac 3060 gcagatttga tagtggttct gcacaatgga aagataaagg aacaaggaac tcatcaagag 3120 ctcctgagaa atcgagacat atattttaag ttagtgaatg cacagtcagt gcagtga 3177 < 210 > 13 <211> 3702 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> Nota <222> (723)..(723) <223> η na posição 723 representa qualquer nucleótido (A, T, C ou G) <400> 13 57 ttccgctttg ctgatggact ggacatcaca ctcatgatcc tgggtatact ggcatcactg 60 gtcaatggag cctgccttcc tttaatgcca ctggttttag gagaaatgag tgataacctt 120 attagtggat gtctagtcca aactaacaca tactctttct tcaggttgac cctgtattat 180 gttggaatag gtgttgctgc cttgattttt ggttacatac agatttnctt gtggattata 240 actgcagcac gacagaccaa gaggattcga aaacagtttt ttcattcagt tttggcacag 300 gacatcggct ggtttgatag ctgtgacatc ggtgaactta acactcgcat gacagacatt 360 gacaaaatca gtgatggtat tggagataag attgctctgt tgtttcaaaa catgtctact 420 ttttcgattg gcctggcagt tggtttggtg aagggctgga aactcaccct agtgactcta 480 tccacgtctc ctcttataat ggcttcagcg gcagcatgtt ctaggatggt catctcattg 540 accagtaagg aattaagtgc ctattccaaa gctggggctg tggcagaaga agtcttgtca 600 tcaatccgaa cagtcatagc ctttagggcc caggagaaag aacttcaaag gtctttcctt 660 ttaaatataa caagatatgc ttggttttat tttccccagt ggctactaag ttgtgttctg 720 ttntttgtaa ggtatacaca gaatctcaaa gatgcaaagg attttggcat aaaaaggact 780 atagcttcaa aagtgtctct tggtgctgtg tacttcttta tgaatggaac ctatggactt 840 gctttttggt atggaacctc cttgattctt aatggagaac ctggatatac catcgggact 900 gttcttgctg ttttctttag tgtaatccat agcagttatt gcattggagc agcagtccct 960 cactttgaaa ccttcgcaat agcccgagga gctgcctttc atattttcca ggttattgat 1020 aagaaaccca gtatagataa cttttccaca gctggatata aacctgaatc catagaagga 1080 actgtggaat ttaaaaatgt ttctttcaat tatccatcaa gaccatctat caagan-^t-g 1140 aaaggtctga atctcagaat taagtctgga gagacagtcg ccttggtcgg tctcaatggc 1200 agtgggaaga gtacggtagt ccagcttctg cagaggttat atgatccgga tgatggcttt 1260 atcatggtgg atgagaatga catcagagct ttaaatgtgc ggcattatcg agaccatatt 1320 ggagtggtta gtcaagagcc tgttttgttc gggaccacca tcagtaacaa tatcaagtat 1380 ggacgagatg atgtgactga tgaagagatg gagagagcag caagggaagc aaatgcgtat 1440 gattttatca tggagtttcc taataaattt aatacattgg taggggaaaa aggagctcaa 1500 atgagtggag ggcagaaaca gaggatcgca attgctcgtg ccttagttcg aaaccccaag 1560 attctgattt tagatgaggc tacgtctgcc ctggattcag aaagcaagtc agctgttcaa 1620 gctgcactgg agaaggcgag caaaggtcgg actacaatcg tggtagcaca ccgactttct 16B0 actattcgaa gtgcagattt gattgtgacc ctaaaggatg gaatgctggc ggagaaagga 1740 gcacatgctg aactaatggc aaaacgaggt ctatattatt cacttgtgat gtcacaggat 1800 attaaaaaag ctgatgaaca gatggagtca atgacatatt ctactgaaag aaagaccaac 1860 58 tcacttcctc tgcactctgt gaagagcatc tccacccaat ctaaagagat aagtcttcct aacaagcctg aatggccttt tgtggttctg gttcatccag tattttccat catctttgca aaaaccacat taaagcatga tgcagaaatt atttgctttg tcagttattt catgcaggga acgatgagat taagacactt ggccttcaaa gatgaaaagg aaaacagcac aggaggcttg attcaaggag caacaggttc caggattggc ctttcagtta tcatttcctt tatatatgga gctccagtac ttgccgtgac aggaatgatt aaagataagc aagaacttaa gcatgctgga cgtactatag tgtcattaac aagggaaaaa cagactcaac acagaaatac ctcgaagaaa agccatgcct ttatatattt tgcctatgca caagctggac gaatgacccc agagggcatg gctatggcca tcggaaaaac gctcgttttg gctgcgcatc tgtttgcctt gttggaaaag gggaaaaagc cagacacatg tgaagggaat ccatgtcgcc cagatgtttt catcctccgt acagtagcat ttgtggggag cagcggctgt agactttatg accccgtgca aggacaagtg aatgtacagt ggctccgttc ccaaatagca tgcagcattg ctgagaacat cgcctatggt atcaaagaag ccgcaaatgc agcaaatatc tacaacacac aagttggact gaaaggagca gctattgcaa gggctcttct ccaaaaaccc gccctcgata atgacagtga gaaggtggtt aggacatgcc tagtggtcac tcacaggctc gttctgcaca atggaaagat aaaggaacaa gacatatatt ttaagttagt gaatgcacag aagtcagact tcattgacaa ggctgaggaa gaagtctctc tattaaaaat tttaaagtta gggacattgg cttctgttct aaatggaact aaaattataa ccatgtttgg aaataatgat tattccatga tattcgtcat tttgggtgtt ttattttacg gcagagcagg ggaaatttta gccatgttat atcaggatat tgcctggttt acaacaatat tagccataga tatagcacaa gtcttaacac aaaatgcaac taacatggga tgggagatga cattcctgat tctgagtatt gaaaccgcag caatgactgg atttgccaac aagatagcaa ctgaagcttt ggagaatata gccttcgagc aaatgtatga agagatgctt gcacagatta ttggaagctg ttatgcattc gcagggtttc gatttggagc ctatttaatt ttcatagttt ttactgcaat tgcatatgga gctcctgaat attccaaagc caaatcgggg aaaccaaata tagacagccg cagtcaagaa ttagagtttc gagaagtctc tttcttctat ggcttatccc tcagtattga gcgaggaaag gggaaaagca cttctgttca acttctgcag ctgtttgatg gtgtggatgc aaaagaattg atcgttcctc aagagcctgt gctcttcaac gacaacagcc gtgtggtgcc attagatgag cattctttta ttgaaggtct ccctgagaaa cagctttctg gcggccagaa acaaagacta aaaattttat tgttggatga ggccacttca cagcatgccc ttgataaagc caggacggga tctgcaattc agaacgeaga tttgatagtg ggaactcatc aagagctcct gagaaatcga tcagtgcagt ga 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3600 3660 3702 59
< 210 > 14 <211> 3621 <212> ADN <213> Homo sapiens < 4 0 0 > 14 ttccgctttg ctgatggact ggacatcaca ctcatgatcc tgggtatact ggcatcactg 60 gtcaatggag cctgccttcc tttaatgcca ctggttttag gagaaatgag tgataacctt 120 attagtggat gtctagtcca aactaacaca tactctttct tcaggttgac cctgtattat 180 gttggaatag gtgttgctgc cttgattttt ggttacatac agatttcctt gtggattata 240 actgcagcac gacagaccaa gaggattcga aaacagtttt ttcattcagt tttggcacag 300 gacatcggct ggtttgatag ctgtgacatc ggtgaactta acactcgcat gacagacatt 360 gacaaaatca gtgatggtat tggagataag attgctctgt tgtttcaaaa catgtctact 420 ttttcgattg gcctggcagt tggtttggtg aagggctgga aactcaccct agtgactcta 480 tccacgtctc ctcttataat ggcttcagcg gcagcatgtt ctaggatggt catctcattg 540 accagtaagg aattaagtgc ctattccaaa gctggggctg tggcagaaga agtcttgtca 600 tcaatccgaa cagtcatagc ctttagggcc caggagaaag aacttcaaag gtatacacag 660 aatctcaaag atgcaaagga ttttggcata aaaaggacta tagcttcaaa agtgtctctt 720 ggtgctgtgt acttctttat gaatggaacc tatggacttg ctttttggta tggaacctcc 7B0 ttgattctta atggagaacc tggatatacc atcgggactg ttcttgctgt tttctttagt 840 gtaatccata gcagttattg cattggagca gcagtccctc actttgaaac cttcgcaata 900 gcccgaggag ctgcctttca tattttccag gttattgata agaaacccag tatagataac 960 ttttccacag ctggatataa acctgaatcc atagaaggaa ctgtggaatt taaaaatgtt 1020 tctttcaatt atccatcaag accatctatc aagattctga aaggtctgaa tctcagaatt 1080 aagtctggag agacagtcgc cttggtcggt ctcaatggca gtgggaagag tacggtagtc 1140 cagcttctgc agaggttata tgatccggat gatggcttta tcatggtgga tgagaatgac 1200 atcagagctt taaatgtgcg gcattatcga gaccatattg gagtggttag tcaagagcct 1260 gttttgttcg ggaccaccat cagtaacaat atcaagtatg gacgagatga tgtgactgat 1320 gaagagatgg agagagcagc aagggaagca aatgcgtatg attttatcat ggagtttcct 1380 aataaattta atacattggt a9999a-aaaa ggagctcaaa tgagtggagg gcagaaacag 1440 aggatcgcaa ttgctcgtgc cttagttcga aaccccaaga ttctgatttt agatgaggct 1500 acgtctgccc tggattcaga aagcaagtca gctgttcaag ctgcactgga gaaggcgagc 1560 60 60 3420 aaaggtcgga ctacaatcgt ggtagcacac cgactttcta ctattcgaag tgcagatttg 1620 attgtgaccc taaaggatgg aatgctggcg gagaaaggag cacatgctga actaatggca 1680 aaacgaggtc tatattattc acttgtgatg tcacaggata ttaaaaaagc tgatgaacag 1740 atggagtcaa tgacatattc tactgaaaga aagaccaact cacttcctct gcactctgtg 1800 aagagcatca agtcagactt cattgacaag gctgaggaat ccacccaatc taaagagata 1B60 agtcttcctg aagtctctct attaaaaatt ttaaagttaa acaagcctga atggcctttt 1920 gtggttctgg ggacattggc ttctgttcta aatggaactg ttcatccagt attttccatc 1980 atctttgcaa aaattataac catgtttgga aataatgata aaaccacatt aaagcatgat 2040 gcagaaattt attccatgat attcgtcatt ttgggtgtta tttgctttgt cagttatttc 2100 atgcagggat tattttacgg cagagcaggg gaaattttaa cgatgagatt aagacacttg 2160 gccttcaaag ccatgttata tcaggatatt gcctggtttg atgaaaagga aaacagcaca 2220 ggaggcttga caacaatatt agccatagat atagcacaaa ttcaaggagc aacaggttcc 2280 aggattggcg tcttaacaca aaatgcaact aacatgggac tttcagttat catttccttt 2340 atatatggat gggagatgac attcctgatt ctgagtattg ctccagtact tgccgtgaca 2400 ggaatgattg aaaccgcagc aatgactgga tttgccaaca aagataagca agaacttaag 2460 catgctggaa agatagcaac tgaagctttg gagaatatac gtactatagt gtcattaaca 2520 agggaaaaag ccttcgagca aatgtatgaa gagatgcttc agactcaaca cagaaatacc 2580 tcgaagaaag cacagattat tggaagctgt tatgcattca gccatgcctt tatatatttt 2640 gnctatgcag cagggtttcg atttggagcc tatttaattc aagctggacg aatgacccca 2700 gagggcatgt tcatagtttt tactgcaatt gcatatggag ctatggccat cggaaaaacg 2760 ctcgttttgg ctcctgaata ttccaaagcc aaatcggggg ctgcgcatct gtttgccttg 2820 ttggaaaaga aaccaaatat agacagccgc agtcaagaag ggaaaaagcc agacacatgt 2880 gaagggaatt tagagtttcg agaagtctct ttcttctatc catgtcgccc agatgttttc 2940 atcctccgtg gcttatccct cagtattgag cgaggaaaga cagtagcatt tgtggggagc 3000 agcggctgtg ggaaaagcac ttctgttcaa cttctgcaga gactttatga ccccgtgcaa 3060 ggacaagtgc tgtttgatgg tgtggatgca aaagaattga atgtacagtg gctccgttcc 3120 caaatagcaa tcgttcctca agagcctgtg ctcttcaact gcagcattgc tgagaacatc 3180 gcctatggtg acaacagccg tgtggtgcca ttagatgaga tcaaagaagc cgcaaatgca 3240 gcaaatatcc attcttttat tgaaggtctc cctgagaaat acaacacaca agttggactg 3300 aaaggagcac agctttctgg cggccagaaa caaagactag ctattgcaag ggctcttctc 3360 caaaaaccca aaattttatt gttggatgag gccacttcag ccctcgataa tgacagtgag 61 61 3480 3540 3600 3621 aaggtggttc agcatgccct tgataaagcc aggacgggaa ggacatgcct agtggtcact cacaggctct ctgcaattca gaacgcagat ttgatagtgg ttctgcacaa tggaaagata aaggaacaag gaactcatca agagctcctg agaaatcgag acatatattt taagttagtg aatgcacagt cagtgcagtg a <210> 15 <211> 2021 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> Nota <222> (723).. (723) <223> n na posição 723 representa qualquer nucleótido (A, T, C OU G) <400> 15 ttccgctttg ctgatggact ggacatcaca ctcatgatcc tgggtatact ggcatcactg 50 gtcaatggag cctgccttcc tttaatgcca ctggttttag gagaaatgag tgataacctt 120 attagtggat gtctagtcca aactaacaca tactctttct tcaggttgac cctgtattat 180 gttggaatag gtgttgctgc cttgattttt ggttacatac agatttcctt gtggattata 240 actgcagcac gacagaccaa gaggattcga aaacagtttt ttcattcagt tttggcacag 300 gacatcggct ggtttgatag ctgtgacatc ggtgaactta acactcgcat gacagacatt 360 gacaaaatca gtgatggtat tggagataag attgctctgt tgtttcaaaa catgtctact 420 ttttcgattg gcctggcagt tggtttggtg aagggctgga aactcaccct agtgactcta 480 tccacgtctc ctcttataat ggcttcagcg gcagcatgtt ctaggatggt catctcattg 540 accagtaagg aattaagtgc ctattccaaa gctggggctg tggcagaaga agtcttgtca 600 tcaatccgaa cagtcatagc ctttagggcc caggagaaag aacttcaaag gtctttcctt 660 ttaaatataa caagatatgc ttggttttat tttccccagt ggctactaag ttgtgttctg 720 ttntttgtaa ggtatacaca gaatctcaaa gatgcaaagg attttggcat aaaaaggact 780 atagcttcaa aagtgtctct tggtgctgtg tacttcttta tgaatggaac ctatggactt 840 gctttttggt atggaacctc cttgattctt aatggagaac ctggatatac catcgggact 900 gttcttgctg ttttctttag tgtaatccat agcagttatt gcattggagc agcagtccct 960 cactttgaaa ccttcgcaat agcccgagga gctgcctttc atattttcca ggttattgat 1020 aagaaaccca gtatagataa cttttccaca gctggatata aacctgaatc catagaagga 1080 62 62 actgtggaat ttaaaaatgt ttctttcaat tatccatcaa gaccatctat caagattctg 1140 aaaggtctga atctcagaat taagtctgga gagacagtcg ccttggtcgg tctcaatggc 1200 agtgggaaga gtacggtagt ccagcttctg cagaggttat atgatccgga tgatggcttt 1260 atcatggtgg atgagaatga catcagagct ttaaatgtgc ggcattatcg agaccatatt 1320 ggagtggtta gtcaagagcc tgttttgttc gggaccacca tcagtaacaa tatcaagtat 1380 ggacgagatg atgtgactga tgaagagatg gagagagcag caagggaagc aaatgcgtat 1440 gattttatca tggagtttcc taataaattt aatacattgg taggggaaaa aggagctcaa 1500 atgagtggag ggcagaaaca gaggatcgca attgctcgtg ccttagttcg aaaccccaag 1560 attctgattt tagatgaggc tacgtctgcc ctggattcag aaagcaagtc agctgttcaa 1620 gctgcactgg agaaggatac ccccaggtat tcattttgac ctaatttcac ctcaagtgga 1680 gaatcgctga ccttgaacca gcgcccttcg acagctctgg cccctcaaac ctcaccctga 1740 cctcctgctg cctatgagct actgcacata cctcaaggcc atatgcagtt gtggccctgc 1800 accaaattac actgaatcta ggaggggagt tggcagtggc ggtatgaaaa accattgaac 1860 agttttctcg atggcctgac tcccttataa accagagcct tcagacccct tacaaggctt 1920 aatggcacat tttactttgc atttgcttgg aagtgagtta agcgtttttt tttctctaag 1980 aaaatcgcag gcttcttttt ttaaaatgct gactttatgg a 2021 < 210 > 16 <211> 1940 <212> ADN <213> Homo sapiens < 4 0 0 > 16 ttccgctttg ctgatggact ggacatcaca ctcatgatcc tgggtatact ggcatcactg 60 gtcaatggag cctgccttcc tttaatgcca ctggttttag gagaaatgag tgataacctt 120 attagtggat gtctagtcca aactaacaca tactctttct tcaggttgac cctgtattat 180 gttggaatag gtgttgctgc cttgattttt ggttacatac agatttcctt gtggattata 240 actgcagcac gacagaccaa gaggattcga aaacagtttt ttcattcagt tttggcacag 300 gacatcggct ggtttgatag ctgtgacatc ggtgaactta acactcgcat gacagacatt 360 gacaaaatca gtgatggtat tggagataag attgctctgt tgtttcaaaa catgtctact 420 ttttcgattg gcctggcagt tggtttggtg aagggctgga aactcaccct agtgactcta 480 tccacgtctc ctcttataat ggcttcagcg gcagcatgtt ctaggatggt catctcattg 540 600 accagtaagg aattaagtgc ctattccaaa gctggggctg tggcagaaga agtcttgtca 63 tcaatccgaa cagtcatagc ctttagggcc caggagaaag aacttcaaag gtatacacag 660 aatctcaaag atgcaaagga ttttggcata aaaaggacta tagcttcaaa agtgtctctt 720 ggtgctgtgt acttctttat gaatggaacc tatggacttg ctttttggta tggaacctcc 780 ttgattctta atggagaacc tggatatacc atcgggactg ttcttgctgt tttctttagt 840 gtaatccata gcagttattg cattggagca gcagtccctc actttgaaac cttcgcaata 900 gcccgaggag ctgcctttca tattttccag gttattgata agaaacccag tatagataac 960 ttttccacag ctggatataa acctgaatcc atagaaggaa ctgtggaatt taaaaatgtt 1020 tctttcaatt atccatcaag accatctatc aagattctga aaggtctgaa tctcagaatt 1080 aagtctggag agacagtcgc cttggtcggt ctcaatggca gtgggaagag tacggtagtc 1140 cagcttctgc agaggttata tgatccggat gatggcttta tcatggtgga tgagaatgac 1200 atcagagctt taaatgtgcg gcattatcga gaccatattg gagtggttag tcaagagcct 1260 gttttgttcg ggaccaccat cagtaacaat atcaagtatg gacgagatga tgtgactgat 1320 gaagagatgg agagagcagc aagggaagca aatgcgtatg attttatcat ggagtttcct 1380 aataaattta atacattggt aggggaaaaa ggagctcaaa tgagtggagg gcagaaacag 1440 aggatcgcaa ttgctcgtgc cttagttcga aaccccaaga ttctgatttt agatgaggct 1500 acgtctgccc tggattcaga aagcaagtca gctgttcaag ctgcactgga gaaggatacc 1560 cccaggtatt cattttgacc taatttcacc tcaagtggag aatcgctgac cttgaaccag 1620 cgcccttcga cagctctggc ccctcaaacc tcaccctgac ctcctgctgc ctatgagcta 1680 ctgcacatac ctcaaggcca tatgcagttg tggccctgca ccaaattaca ctgaatctag 1740 gaggggagtt ggcagtggcg gtatgaaaaa ccattgaaca gttttctcga tggcctgact 1800 cccttataaa ccagagcctt cagacccctt acaaggctta atggcacatt ttactttgca 1860 tttgcttgga agtgagttaa gcgttttttt ttctctaaga aaatcgcagg cttctttttt 1920 taaaatgctg actttatgga 1940
< 210 > 17 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens < 4 0 0 > 17
Leu Ser Gly Gly Gin Lys Gin Arg lie Ala Ile Ala Arg Ala Leu 15 10 15 6 4
< 210 > 18 <211> 15 <212> PRT <213> péptido sintético <400> 18
Cys Gly Thr Ser Leu Ile Leu Asn Gly Glu Pro Gly Tyr Thr Ile 1 <210> 19 <211> 17 <212> PRT 5 10 15 <213> péptido <400> 19 sintético
Arg Phe Gly Ala Tyr Leu Ile Gin Ala Gly Arg Met Thr Pro Glu Gly 15 10 15
Cys
Lisboa, 8 de Março de 2010

Claims (16)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Proteína, consistindo de SEQ ID NO: 1.
2. Processo de preparação de um anticorpo, compreendendo o passo de administração de uma proteína da reivindicação 1 a um animal não humano capaz de produzir o referido anticorpo.
3. Anticorpo que se liga preferencialmente a uma proteína da reivindicação 1.
4. Polinucleótido substancialmente puro que codifica uma proteína da reivindicação 1.
5. Vector de expressão de uma glicoproteína P, compreendendo um elemento de codificação distinto consistindo do polinucleótido da reivindicação 4.
6. Célula hospedeira transformada com o vector da reivindicação 5.
7. Glicoproteína P recombinante consistindo da SEQ ID N0:1 produzida pela célula hospedeira da reivindicação 6 .
8. Polinucleótido da reivindicação 4, em que o referido polinucleótido consiste da sequência de nucleótidos de SEQ ID NO: 9.
9. Oligonucleótido que actua como um inibidor antimensageiro da expressão da glicoproteína P, o qual 2 tem pelo menos 15 nucleótidos de comprimento e consiste de uma sequência complementar a pelo menos 15 nucleótidos contíguos na SEQ ID NO: 9.
10. Vector de expressão de proteína, compreendendo um elemento de codificação distinto consistindo do polinucleótido da reivindicação 8.
11. Célula hospedeira transformada com o vector da reivindicação 10.
12. Método para determinar se uma célula cancerosa responderá a uma terapia que visa inverter a resistência a múltiplos fármacos, compreendendo o passo de medição da expressão de um gene que codifica uma proteína possuindo a SEQ ID NO: 1.
13. Método da reivindicação 12, em que a referida expressão é determinada utilizando amplificação por PCR de ARNm transcrito inversamente.
14. Método da reivindicação 12, em que a referida expressão é determinada utilizando o anticorpo da reivindicação 3.
15. Método para determinar se um composto de ensaio inibe a resistência a múltiplos fármacos provocada por um gene que codifica uma proteína de SEQ ID NO: 1, compreendendo o referido método: (a) expressar o referido gene em células que, de outro modo, não são resistentes a múltiplos fármacos; 3 (b) expor as referidas células a um ou mais agentes citotóxicos na presença do referido composto de ensaio; (c) medir a sobrevivência celular após exposição das referidas células ao referido um ou mais agentes citotóxicos e comparando os resultados obtidos com os de células incubadas essencialmente do mesmo modo com o referido um ou mais agentes citotóxicos mas na ausência do referido composto de ensaio; e (d) concluir que o referido composto de ensaio inibe a resistência a múltiplos fármacos se a sobrevivência celular diminuir numa extensão significativa por incubação das células na presença do referido composto de ensaio relativamente à sobrevivência celular em incubações realizadas na ausência do referido composto de ensaio.
16. Método da reivindicação 15, em que o referido gene tem a SEQ ID NO: 9. Lisboa, 8 de Março de 2010
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PT101853653T PT2298799T (pt) 2000-06-05 2001-06-05 Um gene que codifica um homólogo de glicoproteína p humana de resistência a múltiplos fármacos no cromossoma 7p15-21 e suas utilizações
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PT101853653T PT2298799T (pt) 2000-06-05 2001-06-05 Um gene que codifica um homólogo de glicoproteína p humana de resistência a múltiplos fármacos no cromossoma 7p15-21 e suas utilizações
PT101519726T PT2230253E (pt) 2000-06-05 2001-06-05 Anticorpos contra um homólogo da glicoproteína p de mdr no cromossoma 7p15-21 e suas utilizações

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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE60140868D1 (de) * 2000-06-05 2010-02-04 Brigham & Womens Hospital Für ein homologes des humanen, für mehrfachresistenz verantwortlichen, p-glykoproteins auf chromosom 7p15-21 kodierendes gen sowie verwendungen dafür
WO2003025174A2 (en) * 2001-09-06 2003-03-27 Bayer Healthcare Ag Regulation of human mrp1-like protein
EP2035549B1 (en) 2006-05-31 2014-07-09 Children's Medical Center Corporation Abcb5 positive mesenchymal stem cells as immunomodulators
EP2644205B1 (en) 2007-04-12 2018-06-13 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Targeting ABCB5 for cancer therapy
US11542328B2 (en) 2008-11-14 2023-01-03 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Therapeutic and diagnostic methods relating to cancer stem cells
EP2356446A4 (en) 2008-11-14 2014-03-19 Brigham & Womens Hospital DIAGNOSTIC AND THERAPEUTIC METHODS RELATING TO CANCER STEM CELLS
CA2901931C (en) 2013-02-19 2023-03-07 Children's Medical Center Corporation Abcb5(+) stem cells for treating ocular disease
JP6600299B2 (ja) 2013-05-10 2019-10-30 ザ チルドレンズ メディカル センター コーポレーション 創傷治癒および組織工学
CA3030603A1 (en) * 2016-07-14 2018-01-18 University Of Southern California Methods and composition for producing and using immune cells and stem cells for cell-based therapies
CN116096753A (zh) * 2020-04-30 2023-05-09 儿童医学中心公司 对abcb5具有特异性的抗体及其用途

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0174810B1 (en) * 1984-09-10 1993-07-21 HSC Research Development Corporation Multidrug resistance in mammalian cell lines and isolation of determinant glycoprotein dna
US4837306A (en) * 1985-02-25 1989-06-06 The Ontario Cancer Institute Method for selecting hybridomas producing antibodies specific to the P-glycoprotein cell suface antigen and a cDNA clone encoding the C-terminal portion of the antigen
US5693622A (en) 1989-03-21 1997-12-02 Vical Incorporated Expression of exogenous polynucleotide sequences cardiac muscle of a mammal
US5399483A (en) 1989-03-30 1995-03-21 Suntory Limited Expression of MDR-related gene in yeast cell
US5264618A (en) 1990-04-19 1993-11-23 Vical, Inc. Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
US5434075A (en) * 1992-03-20 1995-07-18 Board Of Trustees Of The University Of Illinois Monoclonal antibody to a human MDR1 multidrug resistance gene product, and uses
IT1257893B (it) * 1992-06-17 1996-02-16 Ist Superiore Sanita Anticorpi monoclonali che riconoscono un epitopo della p-glicoproteina umana.
WO1994009363A1 (en) * 1992-10-14 1994-04-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Cancer diagnosis and therapy
CA2239227C (en) 1996-10-01 2007-10-30 Kenji Matsuno Nitrogen-containing heterocyclic compounds
US6020191A (en) 1997-04-14 2000-02-01 Genzyme Corporation Adenoviral vectors capable of facilitating increased persistence of transgene expression
US6008002A (en) * 1997-09-29 1999-12-28 Bodey; Bela Immunomagnetic detection and isolation of cancer cells
ES2255248T3 (es) * 1998-02-05 2006-06-16 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Derivados de antigenos asociados a tumor de la familia mage, y secuencias de acidos nucleicos que los codifican, usados para la preparacion de proteinas de fusion y de composiciones para vacunas.
DE69922933T2 (de) 1998-03-13 2005-12-29 Osiris Therapeutics, Inc. Anwendungen für humane nicht autologe, mesenchymale stammzellen
EP1220911B1 (en) * 1999-09-28 2006-11-29 Becton Dickinson and Company P-glycoproteins and uses thereof
WO2001057252A2 (en) * 2000-02-04 2001-08-09 Aeomica, Inc. Methods and apparatus for high-throughput detection and characterization of alternatively spliced genes
DE60140868D1 (de) 2000-06-05 2010-02-04 Brigham & Womens Hospital Für ein homologes des humanen, für mehrfachresistenz verantwortlichen, p-glykoproteins auf chromosom 7p15-21 kodierendes gen sowie verwendungen dafür
AU2001271422B2 (en) 2000-06-22 2005-12-22 Genentech, Inc. Agonist anti-trk-C monoclonal antibodies
CA2427010A1 (en) * 2000-10-27 2002-05-23 Incyte Genomics, Inc. Transporters and ion channels
AU2004295680A1 (en) * 2003-11-24 2005-06-16 The Rockefeller University A method for isolating a self-renewing, multipotent slow-cycling cell
US20050186672A1 (en) 2004-01-27 2005-08-25 Reliance Life Sciences Pvt. Ltd. Tissue system with undifferentiated stem cells derived from corneal limbus
CA2998412C (en) 2004-11-12 2024-01-02 Cambridge University Technical Services Ltd. Methods and means related to cancer stem cells
WO2006103685A2 (en) 2005-03-28 2006-10-05 Vision Research Foundation A method for cultivating cells derived from corneal limbal tissue and cells deived from corneal limbal tissue
AU2006259583A1 (en) 2005-06-13 2006-12-28 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for treating and diagnosing cancer
EP2035549B1 (en) 2006-05-31 2014-07-09 Children's Medical Center Corporation Abcb5 positive mesenchymal stem cells as immunomodulators
WO2008030616A2 (en) * 2006-09-07 2008-03-13 Stemline Therapeutics, Inc. Monitoring cancer stem cells
EP2644205B1 (en) * 2007-04-12 2018-06-13 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Targeting ABCB5 for cancer therapy
EP2356446A4 (en) 2008-11-14 2014-03-19 Brigham & Womens Hospital DIAGNOSTIC AND THERAPEUTIC METHODS RELATING TO CANCER STEM CELLS
CA2901931C (en) 2013-02-19 2023-03-07 Children's Medical Center Corporation Abcb5(+) stem cells for treating ocular disease
JP6600299B2 (ja) 2013-05-10 2019-10-30 ザ チルドレンズ メディカル センター コーポレーション 創傷治癒および組織工学

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Publication number Publication date
US7465554B2 (en) 2008-12-16
HK1257165A1 (zh) 2019-10-18
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