PL207530B1 - Związek, kompozycja farmaceutyczna, kombinacja i ich zastosowanie - Google Patents

Związek, kompozycja farmaceutyczna, kombinacja i ich zastosowanie

Info

Publication number
PL207530B1
PL207530B1 PL368412A PL36841202A PL207530B1 PL 207530 B1 PL207530 B1 PL 207530B1 PL 368412 A PL368412 A PL 368412A PL 36841202 A PL36841202 A PL 36841202A PL 207530 B1 PL207530 B1 PL 207530B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
cancer
tumor
use according
compound
compounds
Prior art date
Application number
PL368412A
Other languages
English (en)
Other versions
PL368412A1 (pl
Inventor
Lucio Merlini
Sabrina Dallavalle
Sergio Penco
Giuseppe Giannini
Claudio Pisano
Loredana Vesci
Original Assignee
Sigma Tau Ind Farmaceuti
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=11455702&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL207530(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Sigma Tau Ind Farmaceuti filed Critical Sigma Tau Ind Farmaceuti
Publication of PL368412A1 publication Critical patent/PL368412A1/pl
Publication of PL207530B1 publication Critical patent/PL207530B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/44—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles
    • C07D209/48—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles with oxygen atoms in positions 1 and 3, e.g. phthalimide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C229/34—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton containing six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/42—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups
    • C07C59/54—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups containing six-membered aromatic rings and other rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/40—Unsaturated compounds
    • C07C59/58—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups
    • C07C59/72—Unsaturated compounds containing ether groups, groups, groups, or groups containing six-membered aromatic rings and other rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C62/00—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of rings other than six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C62/30—Unsaturated compounds
    • C07C62/32—Unsaturated compounds containing hydroxy or O-metal groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
    • C07C69/732—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids of unsaturated hydroxy carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
    • C07C69/734—Ethers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
    • C07D317/44—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D317/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • C07D317/48—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring
    • C07D317/50—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to atoms of the carbocyclic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic System
    • C07F7/02—Silicon compounds
    • C07F7/08—Compounds having one or more C—Si linkages
    • C07F7/18—Compounds having one or more C—Si linkages as well as one or more C—O—Si linkages
    • C07F7/1804—Compounds having Si-O-C linkages
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/12—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
    • C07C2601/14—The ring being saturated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
    • C07C2603/56—Ring systems containing bridged rings
    • C07C2603/58—Ring systems containing bridged rings containing three rings
    • C07C2603/70—Ring systems containing bridged rings containing three rings containing only six-membered rings
    • C07C2603/74—Adamantanes

Description

Opis wynalazku
Niniejszy wynalazek dotyczy związków będących pochodnymi retinoidowymi, obdarzonymi aktywnością przeciwangiogenną, przeciwnowotworową i proapoptyczną, o wzorze ogólnym (I):
gdzie:
R oznacza alkil, cykloalkil, fenyl, fenyl podstawiony, adamantyl, gdzie przynajmniej jedna grupa CH może być podstawiona C-halogenem lub C-alkilem i jedna z grup CH2 może być podstawiona O, S, CH-halogenem, CH-arylem, CH-aryloalkilem, grupą CH-aminową;
RI oznacza ORIII, OCORIII, CORIV;
RI - D oznacza O-(CH2)n-O; gdzie n=1-3;
D oznacza H, OH, O-alkil, (CH2)n-NH2, (CH2)n-NH-alkil, (CH2)n-0H, gdzie n=1-4;
RII oznacza tetrazol, SO3H, NHSO3H, CHO, COOH, COO-alkil, CONHOH, CONH-aryl, CONHC6H4OH, CH2OR'; PO3H2; CO-(CH2)n-aryl, gdzie n=0-4;
RIII oznacza H, alkil, aryl, aryloalkil, SO3H, α lub β D- i L-glukozyl;
RIV oznacza H, OH, ORIII,
[A] oznacza [C(RV, RVI)-C(RVI', RVIII)]n, [C(RIX)=C(RX)]n, [C=C]n, gdzie n= 0-3;
RV, RVI, RVII, RVIII oznacza H, alkil, halogen, OH, ORIII, NO2, NH2, aryl, -O-, -CH2-, CX2- (gdzie X jest halogenem), -CH(RIII)-;
RIX, RX oznacza H, OH, halogen, alkil, aryl, CN, NO2, COORIII.
Witamina A i jej biologicznie aktywne pochodne, retinal i kwas retinoidowy, odgrywają kluczową rolę w procesie widzenia, są niezbędne w układzie rozrodczym, działają jako czynniki morfogenne podczas wzrostu embrionu i regulują wzrost oraz różnicowanie szerokiego zakresu typów komórek stanowiących podstawę dla wzrostu organizmu [M.Sporn, A.Roberts, D. Goodman, The Retinoids, Raven Press, New York 1994]. Biologiczne działanie kwasu retinoidowego i jego pochodnych zachodzi poprzez oddziaływanie z receptorami jądrowymi należącymi do dwóch rodzin: pierwsza, zwana RAR (receptory kwasu retinoidowego), druga zwana RXR (receptory retinoidowe X) [P.Chambon, FASEB J., 1996, 10, 940-54]. Każda z rodzin podzielona jest na trzy podtypy (α,β,γ), kodowane przez trzy różne geny.
Kwas retinoidowy całkowicie w konfiguracji trans (ATRA) wiąże się z RAR i RXR, natomiast 9-cis RA ulega wiązaniu jedynie z XR.
Retinoidy, czy to naturalne, czy też syntetyczne analogi witaminy A, wywierają duży wpływ na proliferację komórek, różnicowanie i apoptozę: właściwości te są szeroko wykorzystywane w kontrolowaniu przebiegu patologii rakowych i dermatologicznych oraz patologii związanych ze zmianami angiogenezy.
Proces rozwoju naczyń u dorosłego człowieka jest zazwyczaj nieaktywny, lecz przejawia normalne funkcje, na przykład, w trakcie gojenia się ran lub odnawiania śluzówki macicy podczas cyklu miesiączkowego u kobiet.
Odpowiedź związana z rozwojem naczyń jest fizjologicznie stymulowana, w sytuacji, gdy funkcje naczyniowe ulegają redukcji i przy niedostatecznej perfuzji tkanki.
PL 207 530 B1
Ogólnie, można stwierdzić, że w warunkach fizjologicznych, proces rozwoju naczyń stanowi pozytywną reakcję sprzężenia w odpowiedzi na niedostateczną perfuzję lub niedostateczne zaopatrzenie w tlen i składniki odżywcze. Występuje on, na przykład, w sytuacji zamknięcia tętnicy, przyrostu masy tkanki (na przykład, podczas procesu unaczynienia, jaki towarzyszy powstawaniu tkanki mięśnia) i w przypadku wzmożonej pracy związanej ze zwiększonym zapotrzebowaniem tlenu i składników odżywczych.
Podczas miejscowego niedokrwienia, na skutek częściowego lub całkowitego zamknięcia tętnicy, rozwój naczyń obocznych jest niezbędny w celu utrzymania perfuzji.
Wiadomo, że na wzrost podstawowych nowotworów wpływa dobre unaczynienie tkanki nowotworowej. Odpowiednie zaopatrzenie w tlen i składniki odżywcze przyspiesza wzrost nowotworu.
Wykazano, że zasięg rozwoju naczyń może stanowić nadzwyczaj negatywny czynnik w prognozowaniu nowotworów (van Hinsbergh VW, Collen A., Koolwijk P., Ann.Oncol., 10 Suppl., 4:60-3, 1999; Buolamwini J.K.; Curr., Opin., Chem., Biol., 3(4):500-9, 1999 Aug.).
Wiadomo również w dziedzinie nowotworów, że podstawowym etapem w biologii komórki nowotworowej jest nabycie zdolności do powstawania przerzutów.
Komórki rakowe, które tworzą przerzuty tracą przyczepność z otaczającymi je strukturami, przenikają do krwi oraz naczyń limfatycznych i kolonizują inne, odległe tkanki, gdzie ulegają namnożeniu.
Powstanie przerzutu stanowi również krytyczny etap w klinicznym przebiegu choroby i jest główną przyczyną śmierci wywołanej obecnością nowotworu. Proces ten jest ściśle związany z obecnością tkanki naczyniowej w obszarze objętym przez nowotwór i przyległych do niego miejscach, która znacznie ułatwia mechanizm powstawania przerzutów.
Przemieszczanie się komórek nowotworowych poprzez otaczające je struktury możliwe jest dzięki osiągnięciu przez nie naczyń krwionośnych dochodzących do obszaru nowotworu, istniejących wcześniej lub powstałych w wyniku rozwoju nowych naczyń, i tym sposobem dostaniu się do strumienia krwi (Ray J.M., Stetler-Stevenson WG.; Eur.Respir.J., 7(11):2062-72, 1994; Stetler-Stevenson W.G., Liotta L.A., Kleiner D.E. Jr; FASEB J., 7(15):1434-41, 1993, Dec).
Istnienie łącznika między naczyniami limfatycznymi a krwionośnymi w obszarze naczyniowym nowotworu umożliwia komórkom rakowym przemieszczanie się w obu układach naczyniowych.
Ostatnie badania wykazały bezpośrednią zależność pomiędzy rozwojem naczyń a zapaleniem stawów (Koch A.E.; Arthritis and Reumatism 41:951-962, 1998). W szczególności, wykazano, że powstawanie nowych naczyń w tkance chrzęstnej stawu odgrywa kluczową rolę w powstawaniu łuszczki w stawie i rozwoju zapalenia stawu. Normalna tkanka chrzęstna nie posiada naczyń krwionośnych, natomiast płyn maziówkowy, pobrany od pacjentów cierpiących na zapalenie stawów, zawiera czynnik stymulujący rozwój naczyń, produkowany przez komórki śródbłonka (EASF).
Obecność tego czynnika związana jest z unaczynieniem i degradacją tkanki chrzęstnej.
Również inne choroby związane są z nienormalnym rozwojem naczyń.
Odkryto, że w przypadku retynopatii cukrzycowej [Histol.Histopathol., 1999, Oct.; 14(4): 1287-94], łuszczycy [Br J Dermatol., 1999, Dec; 141(6): 1054-60], przewlekłego zapalenia i stwardnienia tętnic [Planta Med., 1998, Dec; 64(8):686-95], czynnikiem sprzyjającym chorobie jest powstawanie nowych naczyń w zaatakowanej tkance.
Kontrola procesu rozwoju nowych naczyń jest, zatem, jednym z podstawowych elementów kontroli i leczenia tych chorób.
Znane są retinoidy użyteczne w leczeniu raka lub posiadające aktywność przeciwangiogenną.
Związek należący do ostatniej generacji retinoidów, Cd 437 (Cancer Research, 2002; 62(8),
2430-6; Blood, 2000; 95, 2672-82; Leukemia, 1999, 13, 739-49; Cancer Letters, 1999, 137, 217-2) działa wybiórczo wobec RARy, inhibituje wzrost komórek i indukuje apoptozę w linii komórkowej raka piersi, czerniaka i raka szyjki macicy, włączając komórki oporne na ATRA, posiadające mechanizm niezależnego wiązania receptora (WO9703682; J.Med.Chem.1995, 38, 4993-5006). Zarówno CD437, jaki inne pochodne, takie jak pochodne cis-TTNPB (tetrametylo-tetrahydro-naftalenylo-propenylo benzoesanu), działają jako nowe czynniki indukujące apoptozę.
W skrócie, dla pewnych retinoidów, uzyskanych w wyniku syntezy, takich jak TAC-101
[Clin.Cancer Res 1999,5,2304-10] lub pochodnych, takich jak RE-80, AM-580 lub Am-80 [Eur. J.Pharmacol.1993,249,113-6] wykazano właściwości przeciwangiogenne.
Pomimo postępu poczynionego w ostatnich latach, badania farmaceutyczne skupione na odkryciu nowych leków, odpowiednich do leczenia chorób nowotworowych i chorób charakteryzujących
PL 207 530 B1 się nienormalnym rozwojem naczyń, są wciąż uważane przez wielu specjalistów w dziedzinie medycyny, jako jedno z najbardziej obiecujących zagadnień.
W istocie, do dzisiaj istnieje silna potrzeba wykrycia nowych związków, zdolnych do zablokowania lub interferowania z chorobami nowotworowymi i chorobami wywołanymi nieprawidłową angiogenezą. Jak wspomniano wyżej, choroby te obejmują nowotwory, przerzuty nowotworów, przewlekłe odczyny zapalne, zapalenie stawów, retynopatię cukrzycową, łuszczycę, chroniczne zapalenie i miażdżycę tętnic.
Odkryto zaskakujący fakt, że związki o wzorze ogólnym (I) obdarzone są aktywnością przeciwnowotworową, proapoptyczną i przeciwangiogenną.
Związki według wynalazku, o wzorze ogólnym (I) nigdy wcześniej nie były opisane.
Związki o wzorze ogólnym (I) stanowią przedmiot niniejszego wynalazku.
Celem niniejszego wynalazku są związki o wzorze ogólnym (I) i ich zastosowanie w dziedzinie medycyny.
Innym celem niniejszego wynalazku są związki o wzorze ogólnym (I) i proces ich otrzymywania.
Kolejnym przedmiotem niniejszego wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna zawierająca jako składnik aktywny związek o wzorze (I) i przynajmniej jedną dopuszczalną farmaceutycznie zaróbkę i/lub rozcieńczalnik.
Innym przedmiotem niniejszego wynalazku jest zastosowanie związku o wzorze (I) do otrzymywania leku do leczenia patologii związanych ze zmienioną angiogenezą, przy czym patologia wybrana jest z grupy obejmującej patologię zapalenia stawów, nowotwory, przerzuty, retynopatię cukrzycową, łuszczycę, choroby przewlekłego odczynu zapalnego i miażdżycę tętnic.
Korzystnie, wspomniane zastosowanie charakteryzuje się tym, że patologia jest retynopatią cukrzycową.
Korzystnie, wspomniane zastosowanie charakteryzuje się tym, że patologia jest łuszczycą.
Korzystnie, wspomniane zastosowanie charakteryzuje się tym, że patologia jest przewlekłym zapaleniem.
Korzystnie, wspomniane zastosowanie charakteryzuje się tym, że patologia jest miażdżycą tętnic.
Korzystnie, wspomniane zastosowanie charakteryzuje się tym, że otrzymywany lek służy do leczenia patologii zapalenia stawów.
Innym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie związku (I) do otrzymania leku o aktywności przeciwnowotworowej.
Cel niniejszego wynalazku związany jest z zastosowaniem związku o wzorze (I) do otrzymywania leku do leczenia nowotworów, przy czym jego aktywność przeciwnowotworowa ma charakter cytotoksyczny i/lub naturę apoptotyczną i/lub naturę antyangiogenną; przy czym nowotwór wybrany jest z grupy obejmującej mięsaka, raka, rakowiaka, raka kości, raka neurowewnątrzwydzielniczego, białaczkę limfatyczną, białaczkę szpikową przewlekłą, białaczkę monocytową, białaczkę megakariocytową, ostrą białaczkę szpikową przewlekłą lub chorobę Hodgkin'a.
Korzystnie, wspomniane zastosowanie charakteryzuje się tym, że aktywność przeciwnowotworowa ma charakter cytotoksyczny.
Korzystnie, wspomniane zastosowanie charakteryzuje się tym, że aktywność przeciwnowotworowa ma charakter apoptotyczny.
Korzystnie, wspomniane zastosowanie charakteryzuje się tym, że aktywność przeciwnowotworowa ma charakter przeciwangiogenny.
Kolejnym przedmiotem niniejszego wynalazku jest zastosowanie związku o wzorze (I) do wytwarzania leku użytecznego w zapobieganiu i leczeniu przerzutów nowotworowych.
Korzystnie, wspomniane zastosowania charakteryzują się tym, że nowotwór wybrany jest z grupy obejmującej: mięsaka, raka, rakowiaka, raka kości, raka neurowewnątrzwydzielniczego, białaczkę limfatyczną, białaczkę szpikową przewlekłą, białaczkę monocytową, białaczkę megakariocytową lub chorobę Hodgkin'a.
Korzystnie, wspomniane zastosowanie charakteryzuje się tym, że nowotwór jest ostrą białaczką promielocytową (granulocytową).
Innym przedmiotem niniejszego wynalazku jest kombinacja charakteryzująca się tym, że obejmuje jeden lub więcej związków o wzorze (I) z jednym lub więcej ze znanych leków przeciwnowotworowych.
PL 207 530 B1
Korzystnie, wspomniana kombinacja charakteryzuje się tym, że lek przeciwnowotworowy wybrany jest z grupy obejmującej: czynniki alkilujące, inhibitory topoizomerazy, czynniki przeciwtubulinowe, związki interkalujące, antymetabolity, produkty naturalne, takie jak alkaloidy vinca, epipodofilotoksyny, antybiotyki, enzymy, taksany, związki cytoróżnicujące, inhibitory kinazy fosfotyrozynowej, takie jak Iressa lub Glivec, TRAIL (ligand indukujący apoptozę związaną z czynnikiem nekrozy nowotworu), receptory agonistów DR4 lub DR5 (miejsca TRAIL), związki do przeciwnowotworowej terapii immunologicznej, szczepionki przeciwnowotworowe lub interferon α,β,γ.
Kolejnym przedmiotem niniejszego wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna, charakteryzująca się tym, że zawiera powyższą kombinację i jedną lub więcej dopuszczalnych farmaceutycznie zaróbek lub nośników.
Innym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie powyższej kombinacji do otrzymywania leku do leczenia nowotworu.
Korzystnie, wspomniane zastosowanie charakteryzuje się tym, że związek o wzorze (I) obecny jest jako współadiuwant leku przeciwnowotworowego.
Jak wspomniano powyżej, dobre unaczynienie tkanki nowotworowej ułatwia wzrost wielu pierwotnych nowotworów a zasięg neoangiogenezy może być silnie niekorzystnym czynnikiem w prognozowaniu nowotworów. W istocie, dostarczanie w obszarze nowotworu odpowiedniej ilości tlenu i substancji odżywczych ułatwia jego szybki wzrost.
Wiadomo dobrze, że podawanie dostępnych lekarzom związków przeciwrakowych podczas leczenia nowotworów, wciąż nie jest w stanie uchronić wielu pacjentów od śmierci wywołanej tymi chorobami. Wiadomo dobrze również, że większość onkologicznych pacjentów nie jest traktowana pojedynczym lekiem przeciwrakowym, ale kombinacją kilku czynników przeciwrakowych. Potrzeba łącznego podawania leków przeciwrakowych wynika z faktu, że, w pewnych przypadkach, poprzez działanie na różnych poziomach metabolicznych, uzyskuje się pełną remisję raka, natomiast u innych osób, przedłużenie życia pacjenta i/lub polepszenie jakości życia leczonych pacjentów.
Do dzisiaj, istnieje wciąż silne zapotrzebowanie na nowe związki do zastosowania w kombinacji wraz ze znanymi związkami przeciwrakowymi.
Opisywany związek według wynalazku może być zastosowany w kombinacji z jednym lub więcej lekami przeciwrakowymi.
Innym celem opisywanego tu wynalazku jest kombinacja jednego lub więcej związków o wzorze (I) wraz z jednym lub więcej ze znanych leków przeciwrakowych, przy czym lek przeciwrakowy wybrany jest z grupy obejmującej czynniki alkilujące, inhibitory topoizomerazy, czynniki przeciwtubulinowe, związki interkalujące, antymetabolity, produkty naturalne, takie jak alkaloidy vinca, epipodofilotoksyny, antybiotyki, enzymy, taksany, związki cytoróżnicujące, inhibitory kinazy fosfotyrozynowej, takie jak Iressa lub Glivec, TRAIL (ligand indukujący apoptozę związaną z czynnikiem nekrozy nowotworu), agonistów receptorów DR4 lub DR5 (miejsca TRAIL), związki do immunologicznej terapii przeciwrakowej, szczepionki przeciwrakowe lub interferon α, β, γ.
Kolejnym celem niniejszego wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna obejmująca kombinację jednego lub więcej związków o wzorze (I) wraz z jednym lub więcej ze znanych leków przeciwrakowych i jedną lub więcej dopuszczalnych farmaceutycznie zaróbek lub podłóż.
Kolejnym celem opisanego tu wynalazku jest zastosowanie jednego lub więcej związków o wzorze (I) wraz z jednym lub więcej ze znanych leków przeciwrakowych, w celu otrzymania leku do leczenia nowotworu.
Innym celem niniejszego wynalazku jest zastosowanie jednego lub więcej związków o wzorze (I) wraz z jednym lub więcej ze znanych leków przeciwrakowych, w celu otrzymania leku do leczenia nowotworu, znamiennego tym, że związek o wzorze (I) obecny jest jako współadiuwant leku przeciwnowotworowego.
Wynalazek zobrazowano poniższymi przykładami.
Ogólna procedura syntezy
Związki o wzorze (I) otrzymywano w wyniku reakcji związku o wzorze (II)
PL 207 530 B1
gdzie R, RI i D zostały określone we wzorze (I) a X oznacza halogen, z kwasem 4-formyloborawym w reakcji Miyaura-Suzuki (Chem.Rev.1995, 95, 2457-83), daj ą cej w rezultacie aldehyd o wzorze (III).
szych reakcji przebiegających według dobrze znanych, opisanych w literaturze procedur [np., reakcje Wittig'a (Org.Reactions, vol.14), Wadsworth-Horner-Emmons (Org.Reactions, vol. 25), Knoevenagel (Org.eactions, vol. 15), Henry (Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, vol. 10/1, str. 250), Darzens (Org. Reactions, vol. 5), itp.], mających na celu uzyskanie związków o wzorze ogólnym (I), gdzie [A] oznacza C(RV, RVI)=C(RVII, RVIII) i RV, RVI, RVII, RVIII reprezentują H, alkil, halogen, OH, ORIII,
NO2, NH2, aryl, -O- lub gdzie [A] oznacza CC.
Alternatywnie, związki o wzorze ogólnym (I) mogą być otrzymywane ze związków o wzorze ogólnym (II) w wyniku reakcji według Miyaura-Suzuki (Chem. Rev. 1995, 95, 2457-83) z kwasem borawym o wzorze ogólnym (IV), gdzie A i RII zostały uprzednio opisane.
PL 207 530 B1
lub CC, mogą zostać otrzymane wychodząc od związków o wzorze ogólnym (V), gdzie R, RI i D zostały uprzednio opisane, X oznacza halogen, poprzez zastosowanie znanych metod, na przykład w wyniku reakcji opisanej przez Heck'a (Org.Reactions, vol. 27) z alkenami lub alkinami podstawionymi w obecności metalu lub katalizatora metaloorganicznego.
Alternatywnie, związki o wzorze ogólnym (I), gdzie [A] reprezentuje C(RV, RVI)=C(RVII, RVIII) lub CC mogą zostać otrzymane rozpoczynając syntezę od związków o wzorze ogólnym (I), gdzie R i D są H a RI został uprzednio opisany, poprzez reakcje alkilacji z alkoholami, np., adamantan-1-olem, 1-metylo-1-cykloheksanolem, trzeciorzędowym tert-butanolem, itp., w obecności kwasu siarkowego lub innych kwasów jako katalizatorów, np., zgodnie z opisem Charpentier i wsp. (J.Med.Chem. 1995, 38, 4993-5006). Stosując analogiczne reakcje, możliwe jest otrzymanie odpowiednich związków alkoholowych o wzorze ogólnym (I), wychodząc od związków o wzorze ogólnym (I), gdzie D jest H a R, RI zostały uprzednio opisane.
Związki o wzorze ogólnym (I), gdzie [A] reprezentuje C(RV, H)-C(H, RVIII) a RV, RIII oznacza -CH2-, mogą zostać uzyskane ze związków o wzorze ogólnym (I), gdzie [A] określa C(RV, RVI)=C(RVII, RVIII) poprzez reakcje cyklizacji znane w literaturze, np., reakcja opisana przez Simmons-Smith i analogiczne, opisane na przykład w J.Am.Chem.Soc.1959, 81, 4256 lub w J.Am.Chem.Soc. 1981, 103, 5813 lub, w wyniku reakcji z diazooctanem etylu, ze związków o wzorze ogólnym (I), gdzie A jest CH=CH2 a RII jest H. Związki o wzorze ogólnym (I), gdzie [A] reprezentuje C(RV, H)-C(H, RVIII) a RV, RVIII oznacza _O, mogą być otrzymane ze związków o wzorze ogólnym (I), gdzie [A] określa C(RV, RVI)=C(RVII, RVIII), w wyniku znanych w literaturze reakcji epoksydacji, na przykład z dioksiranu lub analogów, zgodnie z opisem według Yang i wsp., w J.Org.Chem., 1995, 60, 3887-9.
Związki o wzorze ogólnym (I), gdzie [A] reprezentuje C-C, mogą zostać uzyskane ze związków o wzorze ogólnym (I), gdzie [A] oznacza C(RV, RVI)=C(RV, RVI) lub CC w wyniku znanych reakcji redukcji podwójnego i potrójnego wiązania, na przykład katalitycznego uwodornienia.
Związki o wzorze ogólnym (I), gdzie RII reprezentuje CONHOH, mogą być otrzymane poczynając od związków o wzorze ogólnym (I), gdzie RII oznacza COOH, w wyniku znanych w literaturze pro8
PL 207 530 B1 cedur syntezy kwasów hydroksyaminowych, na przykład w wyniku reakcji z O-benzylohydroksyaminą i czynnikami kondensującymi [De Luca i wsp., J.Org.Chem., 2001, 66, 2534], po której następuje katalityczne uwodornienie lub jako produkt reakcji z O-trimetylosililohydroksyloaminą, po której następuje desililacja.
Związki o wzorze ogólnym (I), gdzie RII reprezentuje CONHaryl mogą zostać otrzymane ze związków o wzorze ogólnym (I), gdzie RII oznacza COOH, w wyniku znanych w literaturze procedur syntezy amidów, np., reakcji dla amidów kwasu retinoidowego według Sangmam i wsp., (Synth. Commun., 1998, 28, 2945-58).
Związki o wzorze ogólnym (I), gdzie RII reprezentuje CH2OH mogą być uzyskane w wyniku reakcji związków o wzorze ogólnym (I), gdzie RII oznacza COOH, lub z ich estrów lub pochodnych, w wyniku znanych w literaturze procedur syntezy alkoholi, na przykł ad, reakcji redukcji z LiAlR4.
P r z y k ł a d 1
Otrzymywanie 4-(3-(1-adamantylo)-4-tert-butylodimetylosililoksyfenylo)-benzaldehydu Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 1.
1.56 g (3.70 mmol) 4-tert-butylodimetylosililoksy-3-(1-adamantylo)-bromobenzenu [Charpentier i wsp., J.Med.Chem., 1995, 38, 4993-5006] rozpuszczono w 7.5 ml toluenu, dodano 3.7 ml 2M wodnego roztworu Na2CO3, 0.128 g (0.11 mmol) tetrakisotrifenylofosfino-palladu oraz roztwór 610 mg (4.07 mmol) kwasu 4-formylobenzenoborowego w 1.73 ml etanolu. Tak otrzymany roztwór ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez 2 godziny, w strumieniu azotu. Roztwór oziębiano, dodawano octan etylu i przemywano nasyconym roztworem NaCl.
Rozdzielano fazy, odfiltrowywano fazę organiczną, suszono na Na2SO4, ponownie filtrowano, odparowywano rozpuszczalnik, a pozostałość poddawano szybkiej chromatografii preparatywnej w ż elu krzemionkowym (Merck), stosując jako eluent mieszaninę heksan:octan etylu 3:1.
Otrzymano 1.09 g tytułowego związku.
M.P. 158°C.
1H-NMR (CDCI3) δ: 0.37 (6H, s, -Si(CH3)2); 1.05 (9H, s, -t-Bu); 1.78 (6H, s, 6Ad.); 2.09 (3H, s, 3Ad.); 2.15 (6H, s, 6Ad.); 6.88 (1H, d, 1Ar, J = 8.54 Hz); 7.35 1H, dd, 1Ar, J = 2.24 Hz, J = 8.54 Hz); 7.51 (1H, d, 1Ar, J = 2.24 Hz), 7.70 (2H, d, 2Ar, J = 8.14 Hz); 7.90 (2H, d, 2Ar, J = 8.14 Hz); 10.01 (1H, s, -CHO).
P r z y k ł a d 2
Otrzymywanie E-4-(3-(1-adamantylo)-4-tert-butylodimetylosililoksyfenylo)-cynamonianu metylu
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 2.
PL 207 530 B1
386 mg (0.864 mmol) 4-(1-tert-butylodimetylosililoksy-2-(1-adamantylo)-fenylo)-benzaldehydu rozpuszczono w 4.5 ml chloroformu, dodano 298 mg (0.864 mmol) trifenylofosforanylidenooctanu i tak otrzymany roztwór ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez 3 godziny. Roztwór oziębiano, odparowywano rozpuszczalnik, a następnie poddawano szybkiej chromatografii preparatywnej w żelu krzemionkowym (Merck), stosując jako eluent heksan:CH2Cl2 1:1. Otrzymano 350 mg tytułowego związku. M.P. 148°C.
1H-NMR (CDCI3) δ: 0.36 (6H, s, -Si(CH3)2); 1.05 (9H, s, -t-Bu); 1.77 (6H, s, 6Ad.); 2.08 (3H, s, 3Ad.); 2.15 (6H, s, 6Ad.); 3.80 (3H, s, -OCH3); 6.44 (1H, d, -CH=, J=16.07 Hz); 6.86 (1H, d, 1Ar, J = 8.54 Hz), 7.30 (1H, dd, 1Ar, J = 2.24 Hz, J = 8.54 Hz); 7.47 (1H, d, 1Ar, J = 2.24 Hz); 7.50-7.70 (4H, m, 4Ar); 7.71 (1H, d, CH=, J = 16.07 Hz).
P r z y k ł a d 3
Otrzymywanie E-4-(3-(1-adamantylo)-4-hydroksyfenylo)-cynamonianu metylu
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 3.
Mieszaninę 1g (2.6 mmol) 2-(1-adamantylo)-4-(4-bromofenylo)-fenolu, 358 mg (4.16 mmol) akrylanu metylu, 5.8 mg (0.02 mmol) octanu palladu i 30 mg (0.1 mmol) tri-(o-tolilo)-fosfiny w 1.2 ml trietyloaminy ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez 4 godziny. Odparowywano trietyloaminę, dodawano 2N HCl i octan etylu, rozdzielano fazy organiczne, przemywano wodą, suszono na Na2SO4 a rozpuszczalnik odparowywano. Otrzymano 640 mg produktu.
M.P. > 240°C.
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.75 (6H); 2.1 (9H), 3.72 (s, 3H, OCH3), 6.63 (d, 1H, J = 16 Hz), 6.85 (dd, 1H, J = 8.8, 1.8 Hz), 7.3-7.4 (2H arom.), 7.55-7.85 (5H), 9.55 (s, 1H, OH).
P r z y k ł a d 4
Otrzymywanie kwasu E-4-(3-(1-adamantylo)-4-hydroksyfenylo)-cynamonowego (ST 1926)
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 4.
mg (1 mmol) LiOH^H2O rozpuszczono w 8.2 ml mieszaniny THF (tetrahydrofuranu):H2O w stosunku 1:1, dodano 100 mg (0.2 mmol) E-4-(3-(1-adamantylo)-4-terto-butylodimetylosililoksyfenylo)-cynamonianu metylu i tak uzyskany roztwór przechowywano mieszając w temperaturze pokojowej przez 3 godziny. Odparowywano THF, zakwaszano 2N HCl, ekstrahowano octanem etylu i suszono na Na2SO4. Filtrowano i odparowywano, a następnie poddawano szybkiej chromatografii preparatywnej w żelu krzemionkowym (Merck), stosując jako eluent mieszaninę heksan:octan etylu, w stosunku 2:3, następnie 1:1. Otrzymano 55 mg produktu.
PL 207 530 B1
M.P. > 240°C. Rf = 0.50 (żel krzemionkowy Merck 60F254, EtOAc) 1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.74 (6H, s, 6Ad.); 2.04 (3H, s, 3Ad.); 2.12 (6H, s, 6Ad.), 6.51 (1H, d,
-CH=, J = 16.18 Hz), 6.85 (1H, d, 1Ar, J = 8.82 Hz); 7.30-7.40 (2H, m, 2Ar); 7.55-7.63 (3H, m, 2Ar + CH=); 7.70 (2H, d, 2Ar, J = 8.09 Hz); 9.54 (1H, s, -OH); 12.34 (1H, brs,-COOH).
MS (m/z): 374 (M+, 100).
P r z y k ł a d 5
Otrzymywanie 4-(3-(1-adamantylo)-4-metoksyfenylo)-propiolanu metylu
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 5.
301 mg (1.26 mmol) 4-bromofenylopropiolanu metylu rozpuszczono w 2.5 ml toluenu, 1.34 ml wodnego roztworu 2M Na2CO3, następnie dodano 43.7 mg Pd-tetrakistrifenylofosfiny i ostatecznie, 398 mg (1.39 mmol) kwasu 3-(1-adamantylo)-4-metoksyfenyloborawego, mieszaninę ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez 3 godziny. Surowy produkt rozpuszczano w eterze etylowym, fazę organiczną przemywano nasyconym roztworem NaCl, suszono na Na2SO4 i odparowywano do sucha otrzymując 570 mg surowego produktu. W wyniku szybkiej chromatografii preparatywnej w żelu krzemionkowym (Merck) przy użyciu jako eluenta mieszaniny heksan:octan etylu 2:1, otrzymano 15 mg czystego produktu.
M.P. 175°C.
1H-NMR (CDCI3) δ: 3.86 (s, 3H, OCH3); 3.90 (s, 3H, OCH3); 6.96 (d, 1H, J = 8.5), 7.43 (dd, 1H, J = 2.2, 8.5), 7.47 (d, 1H, J = 2.2); 7.55-7.70 (4H arom.).
P r z y k ł a d 6
Otrzymywanie kwasu 4-(3-(1-adamantylo)-4-metoksyfenylo)-propiolowego (ST 1879)
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 6.
mg (0.0374 mmol) E-4-(3-(1-adamantylo)-4-metoksyfenylo)-propiolanu metylu rozpuszczono w 2.14 ml 0.7 N NaOH w metanolu i mieszaninę ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez 1 godzinę. Odparowywano metanol, rozpuszczano w wodzie, zakwaszano 6H HCl i ekstrahowano eterem etylowym. Po wysuszeniu na Na2SO4 i odparowaniu rozpuszczalnika, pozostałość przemywano heksanem, otrzymując po filtracji 10 mg produktu.
PL 207 530 B1
M.P. 156°C. Rf = 0.41 (żel krzemionkowy Merck 60F254, EtOAc/MeOH 2/1) 1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.70 (s, 6H); 2.10 (s, 9H); 3.85 (s, 3H, OCH3), 7.05 (d, 1H, J = 8.4, H-6I),
7.40 (d, 1H, J = 2, H-2I); 7.45-7.60 (3H arom.); 7.65 (2H arom.).
P r z y k ł a d 7
Otrzymywanie alkoholu E-4-(3-(1-adamantylo)-4-metoksyfenylo)-cynamonowego
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 7
375 μ! 1M roztworu LiAlH4 w tetrahydrofuranie (0.365 mmol) dodano do 5 ml bezwodnego tetrahydrofuranu. Oziębiono na lodzie i dodano 151 mg (0.375 mmol) E-4-(3-(1-adamantylo)-4metoksyfenylo)-cynamonianu (patrz. Przykład 19), mieszano przez godzinę w zimnie, a następnie przez noc w temperaturze pokojowej. Po schłodzeniu na lodzie, dodano 5 ml wodnego roztworu 10% NH4CI, odparowano tetrahydrofuran, a następnie dodano octanu etylu. Oddzielano fazę organiczną i suszono na Na2SO4. W wyniku odparowania rozpuszczalnika otrzymano 126 mg surowego produktu, który poddano chromatografii w żelu krzemionkowym (Merck), stosując jako eluent mieszaninę chlorek metylenu: heksan 3:1, następnie heksan:octan etylu 28:72, i uzyskując 11 mg produktu.
M.P. 148°C.
1H-NMR (CDCI3) δ: 1.75 (s, 6H); 2.15 (9H), 3.90 (s, 3H, OH3), 4.38 (dd, 2H, J = 6, 1.6), 6.41 (dt, 1H, J = 6, 16, = CHCH2OH), 6.67 (dd, 1H, J = 1.6, 16, aryloCH=), 6.96 (d, 1H, J = 8.3, H-6I), 7.42 (dd, 1H, J = 2.2, 8.3, H-5I), 7.45 (m, 2H, H-2 i H-6), 7.48 (d, 1H, J = 2.2, H-3I), 7.55 (m, 2H, H-3 i H-5).
MS m/z 374 (M+).
P r z y k ł a d 8
Otrzymywanie E-4-(4-hydroksyfenylo)-cynamonianu metylu
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 8.
Mieszaninę 2g (8.03 mmol) 4-(4-bromofenylo)-fenolu, 1.1 g (12.8 mmol) akrylanu metylu, 18 mg (0.08 mmol) octanu palladu i 94 mg (0.31 mmol) tri-(o-tolilo)-fosfiny w 3.7 ml trietyloaminy ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez 6 godzin. Dodano ponownie 6 g octanu palladu i 30 mg tri-(o-tolilo)-fosfiny i ogrzewano przez godzinę, po czym dodano kolejne 30 mg octanu palladu i 94 mg tri-(o-tolilo)-fosfiny i ogrzewano przez 3.5 godziny. Następnie, reakcję zakwaszano 6M HCl, dodawano octan
PL 207 530 B1 etylu i mieszano aż do rozpuszczenia osadu, rozdzielano fazy, fazę organiczną suszono na Na2SO4 a rozpuszczalnik odparowywano. Surowy produkt (934 mg) oczyszczano, rozpuszczano w mieszaninie heksan/eter etylowy i filtrowano otrzymując 1.7 g tytułowego produktu.
M.P. 233-235°C.
1H-NMR (CDCI3) δ: 3.70 (s, 3H, OCH3); 6.13 (d, 1H, CH=, J=16), 6.82 (d, 2H, H-3I i H-5I), 7.48 (d, 2H, H-2I i H-6I), 7.6-7.75 (5H).
P r z y k ł a d 9
Otrzymywanie E-4-{3-(1-metylocykloheksylo)-4-hydroksyfenylo)-cynamonianu metylu
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 9.
150 mg (0.6 mmol) metylo-E-4-(4-hydroksyfenylo)-cynamonianu i 68.5 mg 1-metylo-1-cykloheksanolu rozpuszczano w 1.2 ml CH2CI2, traktowano 0.032 ml stężonego H2SO4 i mieszaninę ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez 1 dzień. Dodawano wodę i neutralizowano mieszaninę nasyconym roztworem dwuwęglanu sodu. Kilkukrotnie ekstrahowano fazę wodną octanem etylu, suszono na Na2SO4, filtrowano i odparowywano. Pozostały surowy produkt poddawano szybkiej chromatografii preparatywnej w żelu krzemionkowym (Merck), stosując jako eluent mieszaninę heksan:octan etylu 9:1. Otrzymano 20 mg produktu.
1H-NMR (aceton-d6) δ: 1.43 (3H, s, -CH3); 1.4-1.9 (8H, m, cykloheks.); 2.3-2.45 (2H, m, cykloheks.); 3.80 (3H, s, -OCH3), 6.60 (1H, d, CH=, J = 16.18 Hz); 7.0 (1H, d, 1Ar, J = 8.2 Hz); 7.44 (1H, dd, 1Ar, J = 8.2 Hz, 2.2 Hz); 7.65 (1H, d, 1Ar, J=2.2 Hz); 7.7-7.85 (5H, m, 4Ar + CH=); 8.65 (1H, s,-OH).
P r z y k ł a d 10
Otrzymywanie 2-(1-adamantylo)-4-bromo-6-N-ftalimidometylo)-fenolu
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 10.
Do roztworu 500 mg (1.63 mmol) 2-adamantylo-4-bromofenolu w 7 ml dichlorometanu dodano 289 mg (1.63 mmol) N-hydroksymetyloftalimidu i dwie krople stężonego H2SO4. Mieszaninę ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez trzy godziny, rozcieńczano wodą i ekstrahowano dichlorometanem.
PL 207 530 B1
Odparowanie rozcieńczalnika i chromatografia w żelu krzemionkowym z eluentem heksan:octan etylu 80:20 pozwoliła na uzyskanie 348 mg (46%) produktu.
M.P. 253°C.
1H-NMR (CDCI3) δ: 1.78 (6H, s, 6Ad.); 2.09 (3H, s, 3Ad.9; 2.12 (6H, s, 6Ad.); 4.76 (2H, s, -CH2-), 7.28 (1H, d, 1Ar, J = 2.94 Hz); 7.45 (1H, d, 1Ar, J = 2.94 Hz); 7.76 (2H, dd, 2Ar, J = 2.94 Hz, J = 5.52 Hz); 7.88 (2H, dd, 2Ar, J=2.94 Hz, J=5.52 Hz); 8.13 (1H, s, -OH).
P r z y k ł a d 11
Otrzymywanie E-4-(3-(1-adamantylo)-5-(N-ftalimidometylo)-4-hydroksyfenylo)-cynamonianu metylu
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 11.
100 mg 2-(1-adamantylo)-4-bromo-6-N-ftalimidometylo)-fenolu zawieszono w 1.6 ml dioksanu i w strumieniu azotu; dodano 59.7 mg boro-(bispinakonianu), 63 mg bezwodnego octanu potasu, 5 mg dichloro-(difenylofosfinoferroceno)-palladu oraz 103 mg 4-bromocynamonianu metylu. Mieszaninę ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez 2 godziny, zawieszano ponownie w octanie etylu, zakwaszano 1 ml 2M HCl, fazę organiczną przemywano nasyconym roztworem NaCl, suszono na Na2SO4, odparowywano rozpuszczalnik i poddawano chromatografii w żelu krzemionkowym stosując mieszaninę heksan:octan etylu 65:35. Otrzymano 32 mg (27%) produktu.
M.P. 216°C 1H-NMR (CDCI3) δ: 1.78 (6H, s, 6Ad.); 2.09 (3H, s, 3Ad.); 2.12 (6H, s, 6Ad.); 3.83 (3H, s, -OCH3), 4.90 (2H, s, -CH2-); 6.44 (1H, d, CH=, J= 16.18 Hz); 7.45-7.90 (11H, m, 10Ar + CH=); 8.22(1H, s,-OH).
MS (m/z): 547 (M+, 100); 400 (30); 160 (30).
P r z y k ł a d 12
Otrzymywanie kwasu E-4-(3-(1-adamantylo)-5-(N-ftalimidometylo)-4-hydroksyfenylo)-cynamonowego
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 12.
PL 207 530 B1
mg E-4-(3-(1-adamantylo)-5-(N-ftalimidometylo)-4-hydroksyfenylo)-cynamonianu metylu dodano do 1 ml 3:1 mieszaniny kwasu octowego i 37% kwasu chlorowodorowego i mieszaninę ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez 30 godzin. Odparowywano kwas octowy, a następnie dodano wodę, stałą pozostałość filtrowano i przemywano wodą. Otrzymano 24 mg produktu.
M.P. 216°C.
1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.73 (6H, s, 6Ad.); 2.04 (3H, s, 3Ad.); 2.12 (6H, s, 6Ad.); 4.81 (2H, s, -CH2-), 6.45 (1H, d, -CH=, J = 16.18 Hz); 7.07 (1H, d, 1Ar, J = 1.84 Hz); 7.30 (1H, d, 1Ar, J = 1.84 Hz); 7.46 (2H, dd, 2Ar, J=8.82 Hz, J=1.84 Hz); 7.53 (1H, d, -CH=, J = 16.18 Hz); 7.64 (2H, dd, 2 Ar, J = 8.82 Hz, J= 1.84 Hz); 7.78-7.94 (4H, m, 4Ar); 8.60 (1H, s, -OH); 12.5 (1H, brs, COOH).
MS (m/z): 533 (M+, 100); 386 (40); 160 (60) 130 (50).
P r z y k ł a d 13
Otrzymywanie kwasu E-4-(3-(1-adamantylo)-5-(aminometylo)-4-hydroksyfenylo)-cynamonowego
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 13.
mg kwasu E-4-(3-(1-adamantylo)-5-(N-ftalimidometylo)-4-hydroksyfenylo)-cynamonowego zawieszono w 0.15 ml metanolu, dodawano 0.013 ml wodzianu hydrazyny i ogrzewano mieszaninę przez 5 godzin w 50°C. Rozpuszczalnik odparowywano, zawieszano ponownie w wodzie, zakwaszano 2M HCl i osad filtrowano pod próżnią. Surowy produkt suszono, traktowano tetrahydrofuranem by rozpuścić ftalilohydrazyd i filtrowano.
M.P.195°C
PL 207 530 B1 1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.73 (6H, s, 6Ad.); 2.04 (3H, s, 3Ad.); 2.12 (6H, s, 6Ad.); 4.00 (2H, s, -CH2-), 6.45 (1H, d, -CH=, J = 16.18 Hz); 7.07-8.00 (5H, m, 5Ar).
P r z y k ł a d 14
Otrzymywanie 4-(7-adamantano-1-ylo-benzo-(1,3)-dioksolo-5-ylo)-benzaldehydu
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 14.
0.875 g (2.61 mmol) 4-adamantano-1-ylo-6-bromo-benzo(1,3)-dioksolu rozpuszczano w 5.2 ml toluenu i 2.6 ml 2M wodnego roztworu Na2CO3, 0.090 g (0.08 mmol) tetrakiso-trifenylofosfino-palladu i dodawano roztwór 0.430 g (2.87 mmol) kwasu 4-formylobenzenoborawego w 1.2 ml etanolu. Mieszaninę ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez 7 godzin w strumieniu azotu. Po schłodzeniu, rozpuszczano w octanie etylu i przemywano nasyconym roztworem NaCl. Fazę organiczną suszono na Na2SO4, filtrowano i odparowywano rozpuszczalnik. W wyniku szybkiej chromatografii preparatywnej w żelu krzemionkowym (Merk), przy zastosowaniu jako eluenta mieszaniny heksan:octan etylu 9:1, otrzymano 0.66 g produktu (70%).
1H-NMR (CDCI3) δ: 1.80 (6H, s, 6Ad.); 2.09 (3H, s, 3Ad.); 2.12 (6H, s, 6Ad.); 6.02 (2H, s, -CH2-), 7.01 (1H, d, 1Ar, J = 1.86 Hz); 7.04 (1H, d, 1Ar, J = 1.86 Hz); 7.68 (2H, d, 2Ar, J = 8.19 Hz); 7.92 (2H, d, 2Ar, J = 8.19 Hz); 10.02 (1H, s, -CHO).
P r z y k ł a d 15
Otrzymywanie E-4-(7-adamantano-1-ylo-benzo-(1,3)-dioksolo-5-ylo)-cynamonianu metylu
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 15.
Roztwór 300 mg 4-(7-adamantano-1-ylo-benzo-(1,3)-dioksylo-5-ylo)-benzaldehydu w 4.5 ml CHCI3 traktowano pod azotem 278 mg trifenylofosforanyloidenoctanu metylu i ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez 5 godzin, a następnie, po 3 godzinach, dodano ylidu (20%). Po upływie wspomnianego czasu, odparowano rozpuszczalnik a pozostałość analizowano chromatograficznie w żelu krzemionkowym stosując jako eluent heksan:dichlorometan 45:55. Otrzymano 298 mg produktu.
PL 207 530 B1
M.P. 205°C.
1H NMR (CDCI3) δ: 1.72 (6H, s, 6Ad.); 2.06 (3H, s, 3Ad.); 2.12 (6H, s, 6Ad.); 3.80 (3H, s, -OCH3); 5.97 (2H, s, -CH2-); 6.44 (1H, d, -CH=, J=16 Hz); 6.95 (1H, d, 1Ar, J = 1.86 Hz); 6.98 (1H, d, 1Ar, J = 1.86 Hz); 7.52-7.58 (4H, m, 4Ar); 7.71 (1H, d, -CH=, J = 16 Hz).
P r z y k ł a d 16
Otrzymywanie kwasu E-4-(7-adamantano-1-ylo-benzo(1,3)-dioksolo-5-ylo)-cynamonowego
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 16.
200 mg (0.48) E-4-(7-adamantano-1-ylo-benzo(1,3)-dioksolo-5-ylo)-cynamonianu metylu zawieszono w roztworze LiOH^H2O w 25 ml THF/ H2O 3:2 i przechowywano mieszając przez noc w temperaturze pokojowej. TNF odparowano, zawiesinę karboksylanu przemyto heksanem, następnie zakwaszono 2N HCl i schłodzono na lodzie. Po filtracji, otrzymano 150 mg (78%) produktu.
M.P.>300°C. Rf = 0.59 (żel krzemionkowy Merk 60 F254, EtOAc/heksan 9/1) 1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.72 (6H, s, 6Ad.); 2.01 (3H, s, 3Ad.); 2.12 (6H, s, 6Ad.); 6.01 (2H, s, -CH2-), 6.52 (1H, d, -CH=, J = 16.18 Hz); 6.99 (1H, d, 1Ar, J = 1.84 Hz); 7.14 (1H, d, 1Ar, J = 1.84 Hz); 7.60 (1H, d, -CH=, J = 16.18 Hz); 7.62 (2H, dd, 2Ar, J = 8.46 Hz, 1.84 Hz); 7.68 (2H, dd, 2Ar, J = 8.46 Hz, 1.84 Hz).
P r z y k ł a d 17
Otrzymywanie metylo-2-[4-(3-(1-adamantylo)-4-hydroksyfenylo)]-cyklopropanokarboksylanu Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 17.
0.5 mg dwuwodzianu tetraoctanu rodu i 36 μ diazooctanu etylu dodano do roztworu 150 mg (3-adamantano-1-ylo-4'-winylobifenylo-4-oksy)-tert-butylodimetylosilanu, otrzymanego z odpowiedniego aldehydu w wyniku reakcji Wittiga, w 2 ml dichlorometanu. Reakcję pozostawiono na 5 dni w temperaturze pokojowej, z dodatkiem w sumie 5 mg katalizatora i 10 μ diazooctanu etylu. Katalizator odfiltrowano przez celit, suszono na siarczanie sodu, odparowano, poddano chromatografii w żelu krzemionkowym z mieszaniną 65:35 heksan:octan etylu.
Otrzymano 43 mg mieszaniny dwóch diastereoizomerów cis i trans.
1H NMR (CDCI3) δ: 0.45 (6H, s, 1-Si(CH3); 0.95 (3H, t, -CH3, J=7 Hz); 1.1 (9H, s, tBu); 1.25 (3H, t, -CH3, J = 7 Hz); 1.35-1.55 (1H, m, 1-CH2); 1.55-1.74 (1H, m, 1-CH2); 1.79 (6H, s, 6Ad.); 1.95 (1H, m, -CH-COOEt) 2.07 (3H, s, 3Ad.); 2.12 (6H, s, 6Ad.); 2.48-2.65 (1H, m, -CH-Ar); 3.85 (2H, q, -OCH2, J = 7 Hz); 4.18 (2H, q, -OCH2, J = 7 Hz); 6.82 15 (1H, dd, 1Ar, J = 1.84 Hz, 8.46 Hz); 7.15 (1H, d, 1Ar, J = 8.46 Hz); 7.25 (2H, dd, 2Ar, J = 8.0 Hz, 1.84 Hz); 7.45-7.50 (3H, m, 3Ar).
PL 207 530 B1
P r z y k ł a d 18
Otrzymywanie kwasów cis i trans 2-[4-(3-(1-adamantylo)-4-hydroksyfenylo)]-cyklopropanokarboksylowych
Tytułowe związki otrzymywane były według następującego schematu syntezy 18.
113 mg KF na drobno pokruszonym AI2O3 (40%) dodano do roztworu 2-[4-(3-(1-adamantylo)-4-hydroksyfenylo)]-cyklopropanokarboksylanu metylu (110 mg) w 4.4 ml dimetoksyetanu i mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 dni. Po filtracji, rozpuszczalnik odparowywano a surowy produkt dodawano do roztworu 63 mg LiOH^H2O w 12.4 ml 50% tetrahydrofuranu w wodzie. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez trzy dni, odparowywano rozpuszczalnik, ekstrahowano eterem etylowym, zakwaszano 2M HCl i ekstrahowano octanem etylu. Po odparowaniu, produkt (58 mg) analizowano chromatograficznie w żelu krzemionkowym z mieszaniną heksan:octanem etylu 40:60. Otrzymano 6 mg kwasu trans-2-[4-(3-(1-adamantylo)-4-hydroksyfenylo)]-cyklopropanokarboksylowego o M.p. 190°C, 10 mg mieszaniny diastereoizomerów i 20 mg kwasu cis-2-[4-(3-(1-adamantylo)-4-hydroksyfenylo)]-cyklopropanokarboksylowego o M.p. 204°C.
Rf = 0.23 cis; 0.44 trans (żel krzemionkowy Merck 60 F254, EtOAc/heksan 6/4) 1H NMR (MeOD) δ Trans: 1.45 - 1.50 (1H, m, 1 -CH2); 1.60-1.65 (1H, m, 1 -CH2); 1.95-2.0 (7H, m, -CH-COOEt + 6Ad); 2.2 (3H, s, 3Ad.); 2.35 (6H, s, 6Ad.); 2.50-2.58 (1H, m, -CH-Ar); 6.84 (1H, d, 1Ar, J = 8.46 Hz); 7.24 (2H, dd, 2Ar, J = 7.35 Hz, J =1.84 Hz); 7.31 (1H, dd, 1Ar, J= 8.46 Hz, 2.57 Hz); 7.42 (1H, d, 1Ar, J = 2.57 Hz); 7.52 (2H, dd, 2Ar, J = 7.35 Hz, J = 1.84 Hz).
1H NMR (MeOD) δ Cis: 1.40 - 1.50 (1H, m, 1 -CH2); 1.70-1.75 (1H, m, 1 - CH2); 1.95-2.0 (6H, s, 6Ad); 2.10-2.15 (4H, m, 3Ad+-CH-COOH); 2.30 (6H, s, 6Ad.); 2.70-2.78 (1H, m, -CH-Ar); 6.83 (1H, d, 1Ar, J = 8.46 Hz); 7.30 (1H, dd, 1Ar, J = 8.46 Hz, 2.57 Hz); 7.38 (2H, dd, 2Ar, J= 7.30 Hz, J=1.84 Hz); 7.42 (1H, d, 1Ar, J = 2.57 Hz); 7.49 (2H, dd, 2Ar,J = 7.30 Hz, J = 1.84 Hz).
MS (m/z): 388 (M+, 100); 135 (50).
P r z y k ł a d 19
Otrzymywanie E-4-(3-(1-adamantylo)-4-metoksyfenylo)-cynamonianu
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 19.
Do zawiesiny NaH (60% w oleju mineralnym, 66 mg, 2.74 mmol) w 3.3 ml DMF, pod azotem, dodano 969 mg (2.49 mmol) E-4-(3-(1-adamantylo)-4-hydroksycynamonianu metylu. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez godzinę, a następnie wkroplono 186 μ (2.99 mmol) CH3I.
Reakcję pozostawiono na noc w temperaturze pokojowej, po dodaniu 80 ml zimnej wody ekstrahowano fazę wodną CH2CI2 (4x60 ml). Warstwy organiczne przemyto wodą, wysuszono na Na2SO4 i odparowano rozpuszczalnik. Otrzymano 972 mg produktu (97%).
PL 207 530 B1 1H-NMR (CDCI3) δ: 1.75 (6H); 2.1 (9H); 3.75 (s, 3H, OCH3), 3.80 (s, 3H, -COOCH3); 6.40 (d, 1H, CH=, J = 16 Hz); 6.90 (d, 1H, 1 Ar, J = 8.8 Hz); 7.35 (dd, 1H, 1Ar, J = 8.8, 1.8 Hz); 7.42 (d, 1H, 1Ar, J = 1.8 Hz); 7.48-7.53 (m, 4H, 4 Ar); 7.65 (d, 1H, CH=, J= 16 Hz).
P r z y k ł a d 20
Otrzymywanie kwasu E-4-(3-(1-adamantylo)-4-metoksyfenylo)-cynamonowego (ST 1898)
Tytułowy związek otrzymywany był według następującego schematu syntezy 20
455 mg (10.8 mmol) LiOH^H2O rozpuszczano w 90 ml THF:H2O 1:1; dodano 873 mg (2.17 mmol) E-4-(3-(1-adamantylo)-4-metoksyfenylo)-cynamonianu metylu i tak otrzymany roztwór przechowywano mieszając w temperaturze pokojowej przez 2 dni. THF odparowano, zakwaszono 2N HCl i filtrowano biały osad. Fazę stałą przemywano AcOEt i Et2O. W wyniku, uzyskano 792 mg (94%) tytułowego związku.
Rf = 0.28 (żel krzemionkowy Merck 60 F254, EtOAc/heksan9/1) 1HNMR (DMSO-d6) δ: 1.74 (6H, s, 6Ad.); 2.04 (3H, s, 3Ad.); 2.12 (6H, s, 6Ad.); 3.75 (3H, s, -OCH3); 6.50 (1H, d, -CH=, J = 16 Hz); 6.98 (1H, d, 1Ar, J = 8.8 Hz); 7.40-7.70 (7H, m, 6Ar + CH=); 12.3 (1H, brs, -COOH).
Cytotoksyczność ST1926 względem linii komórek rakowych
W testach cytotoksyczności zastosowano dwie linie komórek ostrej przewlekłej białaczki promielocytowej (APL).
1. Linia komórkowa NB4, przenosząca translokację chromosomową t(15; 17), generującą białko fuzyjne PML/RARa. Wspomniana linia komórkowa jest niezmiernie wrażliwa na różnicujące działanie farmaceutycznych dawek ATRA (10-7-10-6 M);
2. Linia komórkowa HL60, która odpowiada na ATRA mniej czule w stosunku do linii komórkowej NB4. Linia ta nie przenosi wspomnianej powyżej translokacji chromosomalnej.
Powyższe linie komórkowe przechowywano w RPMI 1640, zawierającym 10% cielęcej surowicy płodowej (FCS) i 1% glutaminy.
Zastosowano różne linie komórkowe pochodzące z różnych nowotworów litych.
1. Ludzki rak prostaty PC3 i DU145. Linie te przechowywane były w podłożu RPMI 1640, zawierającym 10% cielęcej surowicy płodowej (FCS), 1% pirogronianu sodu i 1% glutaminy;
2. Ludzki gruczolakorak okrężnicy LoVo. Linia ta była utrzymywana w podłożu HAM F-12, zawierającym 10% cielęcej surowicy płodowej (FCS) i 1% glutaminy.
3. Ludzki rak jajników, taki jak linie A2780 i A2780/Dx, odpowiednio, wrażliwe i oporne na leki (doksorubicynę, taksol, etopozyd, winkrystynę); linie IGROV-1 i IGROV-1/Pt, odpowiednio wrażliwe i oporne na chemoterapię opartą na platynie, przechowywane były w podłożu RPMI 1640, zawierającym 10% cielęcej surowicy płodowej (FCS), 1% pirogronianu sodu i 1 % glutaminy;
4. Ludzki czerniak MeWo i MeS, glejak GBM, raki niemałokomórkowe płuc A431, NCI-H460, kostniakomięsaki SAOS i U2OS przechowywane były w podłożu RPMI 1640, zawierającym 10% cielęcej surowicy płodowej (FCS), 1% pirogronianu sodu i 1% glutaminy.
Testy cytotoksyczności wykonano stosując komórki NB4 lub HL-60 w zawiesinie (10000/studzienkę). Komórki zaszczepiano w objętości 250 μl na 96-studzienkowej płytce i inkubowano przez 24 godziny w 37°C. Następnego dnia, dodawano badany związek ST1926 [(2E)-3-[3'-(1-adamantylo)-4'-hydroksylo-[1,1'-bifenylo]-4-ylo]-2-propenian/kwas propenowy] w wzrastających stężeniach i komórki inkubowano przez dalsze 24 godziny w 37°C, przy nawilżeniu, w atmosferze zawierającej 5% CO2. Trzeciego dnia, usuwano podłoże poprzez wirowanie płytki przy 1600xg przez 10 min i dekantowano supernatant. Dodawano 250 μl PBS, następnie płytki ponownie wirowano przy 1600xg przez 10 minut i dekantowano płyn znad osadu. Dodawano 200 μ/studzienkę podłoża RPMI 1640, zawierającego 10% FCS, i inkubowano płytki w 37°C przez kolejne 48 godzin. Piątego dnia, płytki ponownie wirowano przy 1600xg przez 10 minut, a podłoże usuwano poprzez odwrócenie płytek, dodano 200 μl PBS i 50 μl zimnego, 80% TCA. Płytki pozostawiano następnie do inkubacji na lodzie przez
PL 207 530 B1 przynamniej 1 godzinę. TCA usuwano poprzez odwrócenie; płytki trójkrotnie przemywano poprzez zanurzenie w wodzie destylowanej i suszono, najpierw na papierze, potem w strumieniu gorącego powietrza. Do wszystkich studzienek dodawano 200 μl 0.4% sulforodaminy B w 1% kwasie octowym. Płytki inkubowano w temperaturze pokojowej przez kolejnych 30 minut. Sulforodaminę B usuwano poprzez odwrócenie; płytki trójkrotnie przemywano poprzez zanurzenie w 1% kwasie octowym, a następnie suszono, najpierw na papierze absorpcyjnym, potem w strumieniu gorącego powietrza. Do wszystkich studzienek dodawano 20 μl 10 mM zasady Tris i płytki wytrząsano przez przynajmniej 20 minut. Określano gęstość optyczną stosując spektrofotometr Multiskan przy długości fali 540 nm.
W przypadku komórek przylegających, zastosowano taką samą procedurę, z tym, że trzeciego dnia płytki przemyto, odwrócono, następnie dodano trzykrotnie PBS i nie wirowano przy 1600xg, i 5 dnia, supernatant usuwano poprzez odwrócenie płytek.
Przeżywalność komórek określano na podstawie 24-godzinnej inkubacji z ST1926, 48 godzin po usunięciu związku. W wyniku 24-godzinnej inkubacji z produktem odnotowano inhibicję proliferacji komórek w sposób zależny od stężenia. W Tabeli 1 przedstawiono wartości IC50 (stężenie produktu, które inhibituje przeżywalność komórkową do 50%), wyliczone dla każdej z badanych linii komórkowych. Dla ST1926 wobec linii komórek ludzkiej przewlekłej białaczki promielocytowej NB4 (IC50=0.022 μM) wykazano cytotoksyczność większą około 10 razy od wartości wyliczonych dla innych linii komórek nowotworowych.
T a b e l a 1
Cytotoksyczność komórkowa ST1926
Linia komórkowa IC50 (μΜ)
Białaczka promielocytowa
NB4 0.02
HL-60 0.20
Rak prostaty
PC3 0.21
DU145 0.10
Rak okrężnicy
LoVo 0.24
Rak jajników
A2780 0.10
A2780/Dx 0.20
IGROV-1 0.23
IGROV-1/Pt 0.33
Czerniak
MeWo 0.23
MeS 2.21 0.23
Glejak
GBM 0.18
Rak płuc
A431 0.25
NCI-H460 0.19
Kostniakomięsak
SAOS 0.25
U2OS 0.26
PL 207 530 B1
P r z y k ł a d 9
Ocena wpływu ST1926 na cykl komórek nowotworowych
W celu oceny wpływu związku według wynalazku na róż ne fazy cyklu komórkowego, przeprowadzono analizę cytofluorometryczną analizy cyklu komórkowego.
Zastosowano komórki HL60 lub NB4 zaszczepiono na płytkach, przy gęstości 150.000 komórek/ml podłoża RPMI 1640, zawierającego 10% FCS, do którego dodawano badany związek (ST 1926), solubilizowany w 0.1% DMSO, w stężeniu między 0.01 a 0.1 μM, w obecności lub braku podoptymalnych dawek ATRA (5-10 nM dla NB4 i 0.5 μM 10 dla HL60). Płytki przechowywano w ciemności, w inkubatorze przez 3 dni nie zmieniając podłoża hodowlanego.
Trzeciego dnia eksperymentu pobrano próbki 500.000 komórek, odwirowano przy 180xg przez 5 minut, dwukrotnie przemyto w PBS wolnym od wapnia i magnezu. Komórki (1x106/ml środka utrwalającego) utrwalano przez przynajmniej godzinę w mieszaninie utrwalającej zawierającej aceton/metanol 1:4 obj./obj., przechowywano w -20°C i w 50% PBS wolnym od wapnia i magnezu; następnie komórki wirowano, przemyto w PBS wolnym od wapnia i magnezu, ponownie wirowano i przemywano. Osad komórkowy inkubowano przez 30 minut w ciemności, w temperaturze pokojowej wraz z 200 μl jodanu propidium (100 μg/ml) i 200 μl RNA-zy (150KU/mg).
Próby filtrowano przez filtry nylonowe (o średnicy 60-80 μm) i analizowano stosując cytofluorymetr FACScan (Becton Dickinson), przy 20000 zdarzeń/próbę, długości fali wzbudzenia 480 nm i fali emisji 620 nm. Analizę procentową faz cyklu komórkowego wykonano stosując specjalistyczny pakiet programów komputerowych, Modfit wersja 2.0 (Becton Dickinson).
W celu analizy cyklu komórkowego komórek raka prostaty PC3, komórki zaszczepiano na płytkach, przy gęstości 500000 komórek/ml, w podłożu RPMI. Po 24-godzinnym potraktowaniu związkiem ST1926, komórki analizowano według powyższego opisu.
P r z y k ł a d 9/1
Ocena wpływu ST1926 na cykl komórkowy komórek ludzkiej białaczki promielocytowej
NB4
Analiza wpływu działania ST1926 (przez 3 dni) na cykl komórkowy NB4 wykazała, że związek według wynalazku w stężeniu 0.08 i 0.1 μΜ indukuje zahamowanie wzrostu w fazie S duplikacji cyklu i apoptozę. Otrzymane wyniki przedstawiono w Tabeli 2.
T a b e l a 2
Wpływ ST1926 na cykl komórek NB4
Podany związek G0/G1 S G2+M Apoptoza
Kontrola 53.4 35.5 11.1 26.6
ST1926 0.01 μΜ 48.4 38.8 12.8 19.9
ST 1926 0.02 μΜ 48.2 39.4 12.4 28.4
ST 1926 0.04 μΜ 51.3 35.7 13.0 33.9
ST1926 0.08 μΜ 41.4 53.6 5.0 45.0
ST1926 0.1 μΜ 50.6 46.1 3.3 53.6
P r z y k ł a d 9/2
Ocena wpływu ST1926 na cykl komórkowy komórek ludzkiej białaczki promielocytowej
HL-60
Analiza wpływu działania przez trzy dni ST 1926 na cykl komórkowy komórek HL-60 wykazała, że przy stężeniu 0.5 i 1 μΜ, cykl komórkowy nie jest mierzalny, jednak, wykazano dla badanego związku silny efekt proapoptyczny. Otrzymane wyniki przedstawiono w Tabeli 3.
T a b e l a 3
Wpływ ST1926 na cykl komórkowy komórek ludzkiej białaczki promielocytowej HL-60
Podany związek G0/G1 S G2+M Apoptoza
1 2 3 4 5
Kontrola 57.9 30.9 11.2 10.5
ST1926 0.0025 μΜ 54.9 33.4 11.7 8
PL 207 530 B1 cd. tabeli
1 2 3 4 5
ST1926 0.005 μΜ 53.4 34.4 12.2 14.0
ST1926 0.01 μΜ 52.0 35.4 12.6 12.5
ST1926 0.05 μΜ 45.0 42.0 13.0 13.0
ST 1926 0.1 μΜ 39.9 46.8 13.3 27.5
ST1926 0.5 μΜ n.p. n.p. n.p. 82
ST 1926 1 μΜ n.p. n.p. n.p. 86.5
P r z y k ł a d 9/3
Wpływ ST1926 na cykl komórkowy komórek raka prostaty PC3
Analiza wpływu 24-godzinnego traktowania ST1926 na cykl komórkowy komórek PC3 wykazała, że już natychmiast pod koniec tego okresu, badane związki indukują apoptozę w najwyższym badanym stężeniu (0.4 μΜ); po 24 godzinach hodowli komórek, komórki narastały w fazie S, natomiast, gdy zastosowano stężenie 0.4 μΜ, indukowana była apoptoza. Otrzymane wyniki przedstawiono w Tabeli 4.
T a b e l a 4
Wpływ ST1926 na cykl komórkowy komórek ludzkiego raka prostaty PC3
Podany związek G0/G1 S G2+M Apoptoza
24 godz. po podaniu i 0 godz. hodowli
Kontrola 54.8 24.6 20.6 8
ST1926 0.02 μΜ 54.0 24.2 21.8 9
ST1926 0.05 μΜ 55.8 23.6 20.6 11
ST1926 0.1 μΜ 52.0 35.4 28.0 10
ST1926 0.2 μΜ n.v. n.v. n.v. 13.5
ST1926 0.4 μΜ n.v. n.v. n.v. 25
24 godz. leczenia i 24 godziny hodowli
Kontrola 49.9 31.8 22.3 10.5
ST1926 0.02 μΜ 44.6 30.4 25.0 13
ST1926 0.05 μΜ 44.9 29.5 25.6 15
ST1926 0.1 μΜ 45.8 25.8 28.4 10
ST1926 0.2 μΜ 31.8 43.2 25.0 13
ST1926 0.4 μΜ n.p. n.p. n.p. 26
Aktywność cytotoksyczna in vitro ST1926 w połączeniu z TRAIL (ligandem indukującym apoptozę związaną z czynnikiem nekrozy nowotworu)
Limfocyty razem z komórkami Naturalnymi Kilerami są odpowiedzialne za produkcję TRAIL (liganda indukującego apoptozę związaną z czynnikiem nekrozy nowotworu), członka rodziny cytokin TNF (Czynnika Nekrozy Nowotworu). Wspomniane białko membranowe indukuje apoptozę w szerokim zakresie transformowanych komórek i inaczej, niż pozostali członkowie tej rodziny, nie wydaje się być cytotoksyczne wobec normalnych komórek in vitro. TRAIL indukuje apoptozę poprzez oddziaływanie z dwoma receptorami śmierci DR4 i DR5, obejmującymi dwie domeny śmierci. Zatem, uważa się TRAIL za wybiórczy względem nowotworu, za cytokinę indukującą apoptozę i obiecującego nowego kandydata do zapobiegania rakowi i jego leczenia (Neoplasia, 6: 535-546, 2001).
Badania cytotoksyczności ST1926 w połączeniu z TRAIL przeprowadzono na dwóch różnych liniach komórek rakowych, takich jak linia Μ109 komórek mysiego raka płuc i A2780/Dx wielooporne22
PL 207 530 B1 go ludzkiego raka jajników. Komórki utrzymywano w podłożu RPMI 1640 zawierającym 10% FCS, 1% pirogronianu sodu i 1% glutaminę.
Komórki zaszczepiano w objętości 250 μl w 96-studzienkowej płytce i inkubowano przez 24 godziny w 37°C. Następnego dnia, dodawano wzrastające stężenia testowanego związku ST1926 [(2E)3-[3'-(1-adamantylo)-4'-hydroksy-[1,1'-bifenylo]-4-ylo]-2-propenian/kwas propenowy] lub TRAIL i inkubowano komórki przez kolejne 72 godziny w 37°C, w wilgotnej atmosferze, zawierającej 5% CO2. Piątego dnia, usuwano supernatant poprzez odwrócenie płytek. Dodawano 200 μl PBS i 50 μl zimnego, 80% TCA. Następnie płytki pozostawiano do inkubacji na lodzie, przez przynajmniej 1 godzinę. TCA usuwano przez odwrócenie; płytki przemywano trzykrotnie poprzez zanurzenie w wodzie destylowanej i suszono, najpierw na papierze, potem w strumieniu gorącego powietrza. Do wszystkich studzienek dodano 200 μl 0.4% sulforodaminy B w 1% kwasie octowym. Płytki inkubowano w temperaturze pokojowej przez dalszych 30 minut. Sulforodaminę B usuwano przez odwrócenie, płytki przemywano trzykrotnie poprzez zanurzenie w 1% kwasie octowym, a następnie suszono, najpierw na papierze, potem w strumieniu gorącego powietrza. Do wszystkich studzienek dodano 200 μl 10 mM zasady Tris i mieszano płytki przez przynajmniej 20 minut. Określano gęstość optyczną stosując spektrofotometr Multiskan przy długości fali 540 nm.
Oddziaływanie pomiędzy ST1926 a TRAIL określano stosując analizę według Drewinko i wsp. (Cancer Biochem.Biophys.l: 187-195, 1976).
Analizę przeprowadzono w następujący sposób:
(SFaxSFb/Sfa+SFb)/100, gdzie SFa jest frakcją komórek przeżywających przy ST1926 a SFb jest frakcją przeżywalności przy TRAIL.
Wykazano następujący wpływ dla badanych wartości: wartość A > 1 synergizm > 1 antagonizm = 1 brak wpływu
W obu liniach komórkowych, wykazano dla ST1926 aktywność synergistyczną z TRAIL (figura 1 i 2).
Aktywność przeciwnowotworowa ST1926 w mysim modelu raka płuc M109 i 3LL
Komórki mysiego gruczolakoraka płuc Madison 109 (M109) utrzymywano poprzez s.c. pasaże fragmentów nowotworu. W dniu zaszczepienia, wstrzykiwano zawiesinę komórkową i.m. w tylną lewą kończynę 20 g samca myszy BALB/c przy gęstości 3x105 komórek/myszę. Mysi nowotwór płuc Lewis 3LL był rutynowo utrzymywany poprzez i.m. pasaże (co 10-14 dni) 1x105 komórek/mysz w myszach C57BL/6J. Do celu eksperymentów analizy aktywności przeciwrakowej, nowotwory wycinano z myszy dawców i po desegregacji mechanicznej i trawieniu enzymatycznym, oceniano przeżywalność komórek rakowych na podstawie testu wykluczającego barwnika błękitu tryptofanowego. Następnie, wstrzykiwano 1x105 komórek/100 μl/mysz i.m. w prawy tylni mięsień nogi myszy C57BL/6J.
Pomiaru wielkości nowotworu dokonywano dwa razy w tygodniu, od dnia, w którym masa stała się mierzalna, stosując cyfrowy miernik (Vernier Caliper). Masę nowotworu oceniano na podstawie wielkości dwóch głównych wymiarów (długości i szerokości), wyrażonych w mm, stosując wzór (długość x szerokość2)/2, to znaczy, określając objętość nowotworu w mm3. Dla każdej grupy eksperymentalnej obliczano procent inhibicji objętości nowotworu (TVI%), w odniesieniu do kontroli, tzn., (100-(T/C%). TVI oceniano 2 dni po ostatnim podaniu ST1926.
Mierzono również średni czas przeżywalności (MST) a wzrost średniej czasu życia wyrażono jako ILS% (wydłużenie czasu życia), obliczony jako (MSTT/MSTC) x 100 - 100.
Porównanie między wartościami TVI a czasem przeżywalności, uzyskanymi dla każdej grupy wykonano stosując nieparametryczny test Mann Whitney dla niesparowanych danych, przy użyciu programu Instat z GraphPad inc.
Roztwór ST1926 otrzymywano natychmiast przed użyciem i solubilizowano w kremofor:etanol 1:1, a następnie rozcieńczano 1:4 w buforowanym roztworze soli fizjologicznej. Zwierzęta otrzymywały objętość 10 ml/kg. Schemat podawania ST1926 w różnych dawkach obejmował 5 kolejnych dni (qdx5), poczynając od 1 dnia po zaszczepieniu komórkami rakowymi, powtarzano trzy cykle.
Myszy (8 na każdą grupę) ważono przed każdym podaniem badanego związku, tak by można było podać im prawidłową ilość substancji, bazując na ostatnich odchyleniach wagi obserwowanych podczas trwania pobierania leku, jak również, by móc zarejestrować maksymalną utratę wagi odnotowaną podczas przeprowadzonego doświadczenia (maks. BWL%).
Wyniki przedstawiono w Tabeli 5. Wykazano dla ST1926 wzrost przeżywalności u zwierząt z mysimi nowotworami płuc M109, w dawkach 10 mg/kg, p.o. i 15 mg/kg, i.p., według protokołu traktowania qdx5x3w oraz zmniejszenie masy nowotworu.
PL 207 530 B1
Ponadto, ST1926, w dawce 10 mg/kg, p.o., powodował wydłużenie czasu życia myszy z rakiem 3LL i zmniejszenie objętości nowotworu o 65%.
T a b e l a 5
Aktywność przeciwrakowa ST1926 (qdx5x3w) względem mysiego raka płuc M109
Podawany związek Dawka (mg/kg) BWL% Maks. MST (zakres dni) ILS% TVI%
M109
Kontrola / 9 22 (13-34) / /
ST1926 10, i.p. 9 *28 (25-35) 27 18
ST1926 15, i.p. 10 **36 (30-42) 64 *46
ST1926 10, p.o. 10 **35 (27-42) 59 *49
3LL
Kontrola / 3 21 (15-33) / /
ST1926 10, p.o. 7 *32 (24-42) 52 ***65
*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001 vs. kontrola (Mann-Whitney).
Aktywność przeciwrakowa ST1926 w modelach ludzkiego raka jajników A2780 i A2780/Dx i ludzkiego niemałokomórkowego raka płuc NCI-H460
Komórki ludzkiego raka jajników A2780, A2780/Dx i NCI-H460 utrzymywano w podłożu RPMI1640, zawierającym 10% FCS, 2mM glutaminy, 50 μg/ml gentamycyny, w 37°C, w nawilżonym powietrzu, w atmosferze zawierającej 5% CO2. Komórki traktowano trypsyną, namnażano w pełnym podłożu, odwirowywano przy w przybliżeniu 1100 obr./min. przez 10 minut a osad zawieszano ponownie w podłożu 199 Hank'sa; operację tą przeprowadzono dwa razy. Komórki zawieszane były ponownie w podłożu 199 Hank'sa, na poziomie gęstości 20x106/ml i 0.1 ml (równy 2x106 komórek/mysz) wstrzykiwano s.c. w prawy bok 6-ścio tygodniowych samic myszy CD1 nu/nu.
Roztwór ST1926 przygotowywano tuż przed użyciem i solubilizowano w mieszaninie kremofor:etanol 1:1, a następnie rozcieńczano 1:4 w buforowanym roztworze solanki. Podawano badanym zwierzętom w objętości 10 ml/kg. Protokół leczenia dla ST1926 dla różnych dawek obejmował 5 kolejnych dni (qdx5), rozpoczynając dzień po inokulacji komórkami nowotworowymi, powtarzano 3 cykle.
Pomiary wielkości nowotworu przeprowadzano stosując cyfrowy miernik (Vernier Caliper), dwa razy w tygodniu, od momentu, gdy masa była mierzalna. Masę nowotworu oceniano na podstawie wielkości dwóch głównych wymiarów (długości i szerokości), wyrażonych w mm, stosując wzór (długość x szerokość2)/2, to jest, oceniając objętość nowotworu w mm3. Dla każdej grupy eksperymentalnej, obliczano procent inhibicji objętości nowotworu (TVI%), w odniesieniu do kontroli, mianowicie (100-(T/C%). TVI oceniano 2 dni po końcowym podaniu ST1926.
Dokonywano pomiarów zmian rakowych u myszy, do momentu, gdy nowotwory grupy kontrolnej osiągnęły masę 2 g. Następnie myszy uśmiercano poprzez skręcenie karku.
Porównania między wartościami TVI uzyskanymi dla każdej grupy dokonano stosując test nieparametryczny Mann Whitney dla niesparowanych danych, przy użyciu programu Instat software z GraphPad inc.
Myszy ważono przed każdym podawaniem, tak by podać prawidłową ilość substancji w oparciu o możliwe zmiany wagi obserwowane podczas podawania leku i również w celu zapisania maksymalnej straty wagi podczas podawania związku (BWL% maks.).
Wyniki przedstawiono w Tabeli 6. Również w tym przypadku, ST1926 inhibitował masę nowotworu u myszy z ludzkim gruczolakorakiem jajników A2780, wieloopomym A2780/Dx i ludzkim niemałokomórkowym rakiem płuc NCI-H460 w zakresie dawek od 15 do 5 mg/kg, p.o., podawanych zgodnie z procedurą protokołu qdx5x3w.
PL 207 530 B1
T a b e l a 6
Aktywność przeciwrakowa ST1926 (qdx5x3w) względem ludzkiego raka jajników A2780, A2780/Dx i niemałokomórkowego raka płuc NCI-H460
Podany związek Dawka (mg/kg) BWL% Maks. Letalność TVI%±SE
A2780
Kontrola / 0 0/8 /
ST1926 5, p.o. 3 0/8 *34±8
ST1926 10, p.o. 5 0/8 *39±5
A2780/Dx
Kontrola / 0 0/8 /
ST1926 10, p.o. 0 0/8 *34±3
ST1926 15, p.o. 6 0/8 *54±9
NCI-H460
Kontrola
ST1926 15, p.o. 4 0/8 *40±2
*P<0.05 vs. kontrola
Wykazano, że ST1926 jest skuteczny w dawce 15 mg/kg, p.o. według odpowiedniego schematu qdx4x3w, z lub bez Taxol (15 mg/kg, i.p. według schematu q7dx3) w przypadku NCI-H460 niemałokomórkowego raka płuc (tabela 7).
T a b e l a 7
Aktywność przeciwrakowa ST1926 (qdx4x3w) względem niemałokomórkowego raka płuc NCI-H460 z lub bez Taksolu (q7dx3)
Podany związek Dawka (mg/kg) BWL% Maks. Letalność TVI%±SE
Kontrola / 3 / /
ST1926 15,p.o. 14 0/8 **38±8
Taksol 15, i.p. 4 0/8 0
1926 + Taksol 15, p.o. 15, i.p. 16 0/8 **°56±6
** P<0.01 vs kontrola; °P<0.05 vs ST1926 (Mann-Whitney).
Stwierdzono dla ST1926 znaczną aktywność przeciwnowotworową, gdy podawany był w dawce 15 mg/kg, p.o., według schematu qdx3x3w (tabela 8).
T a b e l a 8
Aktywność przeciwrakowa ST1926 (qdx3x3w) względem raka niemałokomórkowego płuc NCI-H460
Podany związek Dawka (mg/kg) BWL% maks. Letalność TVI%±SE
Kontrola / 3 / /
ST1926 15, p.o. 4 0/8 *52±7
*P< 0.05 vs kontrola (Mann-Włiitney)
Cytotoksyczność ST1879 względem linii komórkowej śródbłonka nadnerczy wołu (BMEC)
Zastosowano komórki śródbłonka linii BMEC, uprzednio otrzymanej ze świeżych nadnerczy wołowych w następujący sposób. Nadnercza usuwano zwierzętom natychmiast po uśmierceniu i przechowywano na lodzie aż do momentu dostarczenia do laboratorium. W warunkach sterylnych (pod laminarem Bio-Hazard), nadnercza przemywano w roztworze betadyny przez 5 minut a następnie przemywano 2 litrami sterylnego PBS. Następnie, nadnercza krojono na fragmenty około 2 mm za pomocą
PL 207 530 B1 sterylnych, jednorazowych skalpeli i przenoszono do probówek polistyrenowych typu Falkon, zawierających PBS (30 ml na nadnercze). Po odwirowaniu przy 600 obr/min. w schłodzonej do 4°C wirówce, dekantowano supernatant. Osad zawieszano ponownie w równej objętości (w stosunku do objętości precypitatu) kolagenazy A (Boehringer Mannheim) na poziomie 0.12% i inkubowano w 37°C przez 2 godziny przy jednoczesnym wytrząsaniu. Następnie, po filtracji przez filtry (Sigma), najpierw przez filtr 200, a następnie 100, supernatant dodawano do roztworu 15% DMEM FBS w celu inhibicji działania kolagenazy A. Roztwór wirowano przy 1000 obr./min. w temp. pokojowej i wytrącony osad zawieszano ponownie w podłożu DMEM zawierającym 20% FBS, 50 μg/ml heparyny (Sigma), 0.5% v/v gentamycyny (Sigma), 1% v/v L-glutaminy oraz zaszczepiano na żelatynowanych płytkach Petriego z 1% żelatyną (żelatyna wieprzowa Sigma). Po osiągnięciu odpowiedniej kofluencji, komórki poddawano charakterystyce z markerami śródbłonkowymi, takimi jak czynnik VIII.
Testy cytotoksyczności przeprowadzono z użyciem komórek BMEC. Komórki zaszczepiano w objętości 200 μl na 96-studzienkowej płytce i inkubowano przez 24 godziny w 37°C. Następnego dnia, dodawano badany związek ST1879, w malejących stężeniach od 200 μM do 1.56 μM. Komórki inkubowano przez kolejne 24 godziny w 37°C, w atmosferze wilgotności zawierającej 5% CO2. Trzeciego dnia, podłoże usuwano poprzez odwrócenie płytek i 3-go dnia płytki przemywano, odwracano i dodawano 300 μl PBS 4 razy. Po przemyciu, zgodnie z wcześniejszym opisem, dodano podłoże 200 μl/studzienkę na płytki z żelatyną. Piątego dnia, podłoże usuwano poprzez odwrócenie płytek i komórki traktowano przez godzinę roztworem zimnego 15% TCA. Studzienki przemywano trzykrotnie wodą poprzez zanurzenie płytki, a następnie usuwano wodę poprzez ich odwrócenie. Do każdej studzienki dodano 200 μl 0.4% sulforodaminy B w 1% kwasie octowym. Płytki inkubowano w temperaturze pokojowej przez kolejnych 30 minut. Usuwano sulforodaminę B poprzez odwrócenie, płytki przemywano trzykrotnie przez zanurzenie w 1% kwasie octowym, następnie suszono najpierw na papierze absorpcyjnym, a następnie w strumieniu gorącego powietrza. Do każdej studzienki dodawano 200 μl 10 mM zasady Tris i płytki pozostawiano do wytrząsania na co najmniej 20 minut. Określano gęstość optyczną stosując spektrofotometr Multiskan przy długości fali 540 nm.
Przeżywalność komórek określano poprzez inkubację z ST1879 przez 24 godziny i 48 godziny po usunięciu związku. Inkubacja z produktem przez 24 godziny była w stanie inhibitować proliferację komórkową w sposób zależny od stężenia. W Tabeli 5 zamieszczono obliczone wartości IC50 (stężenie produktu inhibitującego 50% przeżywalności komórkowej). Wykazano, że ST1879 posiada słabą cytotoksyczność, równą 150 μM i w kolejnym etapie, w badaniach wpływu ST1879 na migrację komórek śródbłonka, określono nietoksyczne stężenie równe 25 μM (patrz, tabela 9).
T a b e l a 9
Cytotoksycznść komórkowa ST1879 wobec komórek śródbłonka
Linia komórkowa IC50±SD (μΜ) ICo
BMEC 105 ± 14 25 μM
Chemotaksja komórek śródbłonka BMEC
W celu oceny wpływu ST1879 na chemotaksję komórek śródbłonka, zastosowano komorę Boyden, składającą się z komory o dwóch ścianach, jednej powyżej drugiej, rozdzielonych filtrem poliwęglanowym o zdefiniowanych rozmiarach por o 8 μm. W niższej ścianie wprowadzono czynnik chemoatrakcyjny 1% FBS w DMEM, do górnej ściany, wprowadzano wołowe komórki śródbłonka nerek (BMEC), zawieszane w DMEM, zawierającym 1% wolnej od kwasów tłuszczowych albuminy surowicy świni. Zdolność ST 1879 do inhibitowania migracji komórkowej poprzez filtr poliwęglanowy w kierunku czynnika chemoatraktanta, oceniano poprzez zliczanie liczby komórek obecnych w niższej części filtra. Procent migracji przedstawiono w tabeli 8, wartości obliczono według wzoru: (potraktowane-kontrolne/kontrolne)x100. Wykazano dla ST1926 inhibicję chemotaksji komórek BMEC względem FCS stymulanta chemoatraktanta, w stężeniu równym 50 i 25 μM (tabela 10).
PL 207 530 B1
T a b e l a 10
Inhibicja migracji komórek BMEC indukowana przez ST1879
Linia komórkowa % inhibicji migracji
50 μΜ 25 μΜ
BMEC 91% (6.1 komórek ± 2.4 vs 72.1 ± 7.4 komórek w kontroli) 42.7% (41.3 komórek ± 10.2 vs 72.1 ± 7.4 komórek w kontroli)
Wpływ ST1879 na różnicowanie komórek HUVEC w żelu matrycowym
Analiza różnicowania komórek śródbłonka w żelu matrycowym, jest powszechnie stosowaną analizą do oceny aktywności przeciwangiogennej produktu. Żel matrycowy jest odtworzonym ekstraktem podstawowym błony z nowotworów, zawierającym głównie lamininę i kolagen IV, na którym komórki śródbłonka nadbudowują trójwymiarowe, podobne do kapilarnych struktury. Intensywność sieci jest mierzalna pod mikroskopem zliczającym „węzły zdefiniowane jako punkty wewnętrznego podziału, z którego rozchodzą się więcej niż dwie struktury tubularne lub przy pomocy systemu komputerowego obrazu, umożliwiającego obliczenie procentu powierzchni zajętej przez struktury kapilarne.
Żel matrycowy w 4°C (Becton-Dickinson) umieszczano na 24-studzienkowej płytce i pozostawiano do zżelowania w 37°C w inkubatorze przez 30 minut. Komórki ludzkiego śródbłonka ludzkiej pępowiny HUVEC (Clonetics) zawieszano ponownie w 500 μl podłoża hodowlanego w obecności lub braku ST1879 w stężeniu nietoksycznym 25 μΜ i umieszczano na żelu matrycowym. Po 5 godzinach inkubacji, komórki utrwalano roztworem 4% paraformaldehydu w PBS. Wyniki określano na podstawie zliczenia pod mikroskopowym licznikiem węzłów/pole dla trzech niezależnych pól i wyrażano procentowo w odniesieniu do kontroli pozytywnej.
Wykazano dla ST1879, w stężeniu 25 μΜ, 61% inhibicji różnicowania komórek śródbłonka na żelu matrycowym (tabela 11).
T a b e l a 11
Inhibicja różnicowania komórek HUVEC indukowana przez ST1879
Linia komórkowa % inhibicji różnicowania na żelu matrycowym
HUVEC ST 1879 (25)μΜ) = 61% (8.2 węzła vs 21.2 węzła w kontroli)
Cytotoksyczność komórkowa ST1879 i ST1898 wobec ludzkich linii komórek rakowych
W teście cytotoksyczności, przeprowadzonym na RPMI 1640 zawierającym 10% cielęcej surowicy płodowej (FCS) i 1% glutaminy zastosowano ludzką linię ostrej białaczki promielocytowej NB4.
Użyto dodatkowo dwie linie komórek rakowych:
1. Ludzkiego raka prostaty PC3. Linia ta utrzymywana była w podłożu RPMI 1640 zawierającym 10% FCS, 1% pirogronianu sodu i 1% glutaminy.
2. Ludzkiego gruczolakoraka okrężnicy LoVo. Linia ta była utrzymywana w podłożu HAM F-12, zawierającym 10% FCS i 1% glutaminy.
Testy cytotoksyczności wykonano stosując 10000 NB4 komórek/studzienkę. Komórki zaszczepiano w objętości 250 μl na 96-studzienkowej płytce i inkubowano przez 24 godziny w 37°C. Następnego dnia dodawano testowego składnika ST1879 w wzrastających stężeniach i inkubowano komórki przez kolejne 24 godziny w 37°C w atmosferze wilgoci zawierającej 5% CO2. Trzeciego dnia, podłoże usuwano poprzez wirowanie płytek przy 1600xg przez 10 minut i dekantowano supernatant. Dodawano 250 μl PBS, następnie ponownie wirowano płytki przy 1600xg przez 10 minut i dekantowano supernatant. Dodawano 200 μl/studzienkę podłoża RPMI 1640 zawierającego 10% FCS, a następnie inkubowano płytki w 37°C przez dalsze 48 godziny. Piątego dnia, płytki wirowano ponownie przy 1600xg przez 10 minut, podłoże usuwano przez odwrócenie płytek, dodawano 200 μl PBS i 50 μl 80% zimnego TCA. Płytki pozostawiano do inkubacji na lodzie przez przynajmniej godzinę. TCA usuwano poprzez odwrócenie; płytki przemywano trzy razy poprzez zanurzenie w wodzie destylowanej i suszono, najpierw papierem, następnie w strumieniu gorącego powietrza. Do każdej studzienki dodawano 200 μl 0.4% sulforodaminy B w 1% kwasie octowym. Płytki inkubowano w temperaturze pokojowej przez kolejnych 30 minut. Usuwano sulforodaminę poprzez odwrócenie, płytki przemywano poprzez zanurzenie 3 razy w 1% kwasie octowym, następnie suszono, najpierw papierem, następnie w struPL 207 530 B1 mieniu gorącego powietrza. Do każdej studzienki dodano 200 μl 10 mM Tris zasady i wytrząsano pytki przez przynajmniej 20 minut. Gęstość optyczną mierzono stosując spektrofotometr Multiskan przy długości fali 540 nm.
Dla linii komórek przylegających PC3 i LoVo, zastosowano taką samą procedurę, przy czym w 3 dniu płytki przemywano poprzez odwrócenie i dodawano PBS trzy razy, i płytek nie wirowano przy 1600xg. Również 5-go dnia, supernatant usuwano poprzez odwrócenie płytek.
Przeżywalność komórek określano poprzez 24-godzinną inkubację z ST1879 lub ST1898, i po 48 godzinach od usunięcia związku. Inkubacja wraz z produktem przez 48 godzin była wystarczająca, aby zahamować proliferację komórkową w sposób zależny od stężenia. W Tabeli 10 przedstawiono wartości IC50 (stężenie produktu, które inhibituje 50% przeżywalności komórek), wyliczone dla każdej z badanych linii komórkowych. Dla ST1879 wykazano większą cytotoksyczność względem komórek LoVo (IC50 = 5.2 μM) w stosunku do wyliczonej dla linii raka prostaty PC3 (IC50=13.6 μM) i dla linii ludzkiej białaczki promielocytowej NB4 (58.5 μM). Dla ST1898 wykazano również wyższą aktywność wobec raka okrężnicy LoVo (patrz, tabela 12).
T a b e l a 12
Cytotoksyczność komórkowa ST1879 i ST1898
Badany związek Linia komórkowa IC50±SD (μΜ)
ST1879 NB4 58.5 ± 3.2
ST1879 PC3 13.6 ± 2.1
ST1879 LoVo 5.2 ± 0.9
ST1898 NB4 8.8 ± 0.6
ST1898 PC3 1.7 ± 0.2
ST1898 LoVo 0.38 ± 0.02
Proróżnicujący wpływ ST1879 i ST1898 na komórki NB4
Komórki NB4 o gęstości 150000 kom/ml umieszczano w podłożu RPMI 1640, zawierającym 10% surowicy płodowej. Komórki poddawano następnie działaniu malejącego stężenia ST1879 lub ST1898, poczynając od 0.4 μM do 0.01 μM i pozostawiano w inkubatorze na trzy dni, bez zmiany podłoża. W celu zmierzenia efektu różnicującego, z każdej próbki pobierano 5000000 komórek, odwirowywano i zawieszano ponownie w 1 ml podłoża RPMI 1640, zawierającego 10% surowicy, 1 mg/ml tetrazolu nitroblue (NBT) i 100 ng PMA (forborylomirystylu octanu). Komórki, zawieszone ponownie, jak wyżej, inkubowano w 37°C przez 60 minut. Po zakończeniu inkubacji, komórki były odwirowywane i osad zawieszano ponownie w 1 ml PBS, zawierającego 10% Tritonu x 100. Próby sonifikowano aż do uzyskania lizy, a następnie odczytywano przy użyciu spektrofotometru przy długości fali 540 nm. Próby zawierające zróżnicowane komórki przybierały kolor purpurowy, natomiast próby kontrolne i/lub te z niezróżnicowanymi komórkami pozostawały białe lub znacznie mniej intensywnie zabarwione. Działanie proróżnicujące ST1879 lub ST1898 oceniano pod względem AC50 (stężenie aktywujące dla 50% różnicowania komórkowego), zgodnie z poniższym opisem. Wykazano dla ST1898 dobre proróżnicujące właściwości, mierzalne wartością AC50, równą 19 nM (patrz, tabela 13).
T a b e l a 13
Proróżnicujący wpływ ST1879 i ST1898 na komórki NB4
Produkt AC50 (nM±SD)
ST1879 55 ± 9
ST1898 19 ± 0.8
Aktywność angiostatyczna ST1879, ST1926 i ST1898 w modelu błonowym kosmówki omoczniowej kurcząt (CAM)
Błona kosmówki omoczniowej kurcząt jest bardzo unaczynioną błoną, w której naczynia pojawiają się w 4-tym dniu rozwoju, a rozwój układu tętniczo-żyłowego przebiega do 8 dnia rozwoju, aktywna proliferacja aż do 11 dnia.
PL 207 530 B1
Celem badań było prześledzenie rozwoju naczyń w CAM w warunkach podstawowych i w obecności induktora bFGF procesu proliferacji naczyń (podstawowego Czynnika Wzrostu Fibroblastów). W badaniach tych wykorzystano jaja z embrionami kurcząt w początkowym etapie rozwoju. Trzeciego dnia rozwoju, dokonano operacyjnego otwarcia skorupki w celu uwidocznienia naczyń CAM. Podawanie rozpoczęto 9-tego dnia rozwoju, zastosowano fragment sterylnej żelatyny (GELFOAM Pharmacia-Upjohn) wielkości około 1 mm3, na powierzchni CAM, gdzie przez 3 kolejne dni podawano bFGF (50 ng/embrion) lub badane produkty.
Ocenę wpływu cząsteczki na proliferację naczyń przeprowadzono poprzez porównanie naczyń w momencie rozpoczęcia podawania (t=0) z danymi z późniejszego okresu (12-ty dzień).
Wyniki przedstawiono poniżej w tabeli 14. Dla trzech produktów wykazano aktywność angiostatyczną w modelu błony kosmówki omoczniowej kurcząt, w stężeniach pomiędzy 0.25 a 0.5 μg/embrion (tabela 14).
T a b e l a 14
Aktywność angiostatyczna ST1879, ST1926, ST1898
Podawany związek Stężenie n 9-ty dzień (TO) 12-ty dzień (72 godzin) Δ naczyń
bFGF 0.05 7 5 ± 1 19 ± 1 15±1
bFGF ± 1879 0.05 ± 0.5 6 4 ± 1 8 ± 1 4± 1 (-73%)
bFGF 0.05 6 3 ± 1 22 ± 2 19 ± 1
bFGF ± 1926 0.05 ± 0.25 8 3 ± 1 12 ± 2 9 ± 2 (-53%)
bFGF 0.05 4 3 ± 1 28 ± 2 24 ± 1
bFGF ± 1898 0.05 ± 0.25 6 3 ± 1 10 ± 1 7±1 (-71%)
Wyniki są średnią ± SE dla liczby naczyń na określoną powierzchnię w modelu.

Claims (20)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Związek o wzorze (I):
    gdzie:
    R oznacza cykloalkil, adamantyl, gdzie przynajmniej jedna grupa CH może być podstawiona C-halogenem lub C-alkilem i jedna z grup CH2 może być podstawiona O, S, CH-halogenem, CHarylem, CH-aryloalkilem, grupą CH-aminową;
    RI oznacza ORIII, OCORIII, CORIV;
    RI - D oznacza O-(CH2)n-O; gdzie n=1-3;
    D oznacza H, OH, O-alkil, (CH2)n-NH2, (CH2)n-NH-alkil, (CH2)n-OH, gdzie n=1-4;
    RII oznacza tetrazol, SO3H, NHSO3H, CHO, COOH, COO-alkil, CONHOH, CONH-aryl, CONH-C6H4OH, CH2ORIII; PO3H2; CO-(CH2)n-aryl, gdzie n=0-4;
    PL 207 530 B1
    RIII oznacza H, alkil, aryl. aryloalkil, SO3H, α lub β D- i L-glukozyl;
    RIV oznacza H, OH, ORIII;
    [A] oznacza [C(RV, RVI)-C(RV, RVIII)]n, [C(RIX)=C((RX)]n, [C=C]n, gdzie n=0-3;
    RV, RVI, RVII, RVIII oznacza H, alkil, halogen, OH, ORIII, NO2, NH2, aryl, -O-, -CH2-, CX2- (gdzie X jest halogenem), -CH(RIII)-;
    RIX, RX oznacza H, OH, halogen, alkil, aryl, CN, NO2, COORIII.
  2. 2. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że obejmuje związek o wzorze (I) jako związek aktywny oraz przynajmniej jedną farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę oraz/albo rozcieńczalnik.
  3. 3. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 1 do otrzymania leku do leczenia patologii związanych ze zmienioną angiogenezą, zwłaszcza patologii wybranych z grupy obejmującej patologie zapalenia stawów, nowotwory, przerzuty nowotworów, retynopatię cukrzycową, łuszczycę, przewlekłe zapalenie i miażdżycę tętnic.
  4. 4. Zastosowanie według zastrz. 3, znamienne tym, że patologia jest retynopatią cukrzycową.
  5. 5. Zastosowanie według zastrz. 3, znamienne tym, że patologia jest łuszczycą.
  6. 6. Zastosowanie według zastrz. 3, znamienne tym, że patologia jest przewlekłym zapaleniem.
  7. 7. Zastosowanie według zastrz. 3, znamienne tym, że patologia jest miażdżycą tętnic.
  8. 8. Zastosowanie według zastrz. 3, znamienne tym, że otrzymywany lek służy do leczenia patologii zapalenia stawów.
  9. 9. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 1 do otrzymania leku o aktywności przeciwnowotworowej.
  10. 10. Zastosowanie według zastrz. 9, znamienne tym, że aktywność przeciwnowotworowa ma charakter cytotoksyczny.
  11. 11. Zastosowanie według zastrz. 9, znamienne tym, że aktywność przeciwnowotworowa ma charakter apoptotyczny.
  12. 12. Zastosowanie według zastrz. 9, znamienne tym, że aktywność przeciwnowotworowa ma charakter przeciwangiogenny.
  13. 13. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 1, do wytwarzania leku do zapobiegania i leczenia przerzutów nowotworowych.
  14. 14. Zastosowanie według zastrz. od 9 do 13, znamienne tym, że nowotwór wybrany jest z grupy obejmującej: mięsaka, rakowiaka, raka kości, raka neurowewnątrzwydzielniczego, białaczkę limfatyczną, białaczkę szpikową przewlekłą, białaczkę monocytową, białaczkę megakariocytową lub chorobę Hodgkin'a.
  15. 15. Zastosowanie według zastrz. 14, znamienne tym, że nowotwór jest ostrą białaczką promielocytową (granulocytową).
  16. 16. Kombinacja, znamienna tym, że obejmuje jeden lub więcej związków określonych w zastrz. 1 z jednym lub więcej ze znanych leków przeciwnowotworowych.
  17. 17. Kombinacja według zastrz. 16, znamienna tym, że lek przeciwnowotworowy wybrany jest z grupy obejmującej: czynniki alkilujące, inhibitory topoizomerazy, czynniki przeciwtubulinowe, związki interkalujące, antymetabolity, produkty naturalne, takie jak alkaloidy vinca, epipodofilotoksyny, antybiotyki, enzymy, taksany, związki cytoróżnicujące, inhibitory kinazy fosfotyrozynowej, takie jak Iressa lub Glivec, TRAIL (ligand indukujący apoptozę związaną z czynnikiem nekrozy nowotworu), receptory agonistów DR4 lub DR5 (miejsca TRAIL), związki do przeciwnowotworowej terapii immunologicznej, szczepionki przeciwnowotworowe lub interferon α,β,γ.
  18. 18. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera kombinację określoną w zastrz. 16 i jedną lub więcej dopuszczalnych farmaceutycznie zaróbek lub nośników.
  19. 19. Zastosowanie kombinacji określonej w zastrz. 16 do otrzymywania leku do leczenia nowotworu.
  20. 20. Zastosowanie według zastrz. 19, znamienne tym, że związek o wzorze (I) obecny jest jako współadiuwant leku przeciwnowotworowego.
PL368412A 2001-07-31 2002-07-18 Związek, kompozycja farmaceutyczna, kombinacja i ich zastosowanie PL207530B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT2001RM000464A ITRM20010464A1 (it) 2001-07-31 2001-07-31 Derivati retinoidi ad attivita' antiangiogenica, antitumorale e pro-apoptotica.

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL368412A1 PL368412A1 (pl) 2005-03-21
PL207530B1 true PL207530B1 (pl) 2010-12-31

Family

ID=11455702

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL368412A PL207530B1 (pl) 2001-07-31 2002-07-18 Związek, kompozycja farmaceutyczna, kombinacja i ich zastosowanie

Country Status (20)

Country Link
US (2) US8101793B2 (pl)
EP (1) EP1412317B1 (pl)
JP (1) JP4463550B2 (pl)
KR (1) KR100888466B1 (pl)
CN (1) CN1279014C (pl)
AT (1) ATE492526T1 (pl)
AU (1) AU2002326144B2 (pl)
BR (1) BR0211521A (pl)
CA (1) CA2454532C (pl)
CY (1) CY1114535T1 (pl)
DE (1) DE60238683D1 (pl)
DK (1) DK1412317T3 (pl)
ES (1) ES2358097T3 (pl)
HK (1) HK1068868A1 (pl)
HU (1) HU229308B1 (pl)
IT (1) ITRM20010464A1 (pl)
MX (1) MXPA04000877A (pl)
PL (1) PL207530B1 (pl)
PT (1) PT1412317E (pl)
WO (1) WO2003011808A1 (pl)

Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030228309A1 (en) * 2000-11-08 2003-12-11 Theodora Salcedo Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors
US20060062786A1 (en) * 2000-11-08 2006-03-23 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors
US20090226429A1 (en) * 2001-05-25 2009-09-10 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies That Immunospecifically Bind to TRAIL Receptors
US7348003B2 (en) 2001-05-25 2008-03-25 Human Genome Sciences, Inc. Methods of treating cancer using antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors
US7361341B2 (en) * 2001-05-25 2008-04-22 Human Genome Sciences, Inc. Methods of treating cancer using antibodies that immunospecifically bind to trail receptors
US20050214209A1 (en) * 2001-05-25 2005-09-29 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors
US20050129616A1 (en) * 2001-05-25 2005-06-16 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors
ITRM20010464A1 (it) * 2001-07-31 2003-01-31 Sigma Tau Ind Farmaceuti Derivati retinoidi ad attivita' antiangiogenica, antitumorale e pro-apoptotica.
EP1456165A1 (en) * 2001-11-30 2004-09-15 The Burnham Institute Induction of apoptosis in cancer cells
CA2471140A1 (en) * 2001-12-20 2003-07-03 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to trail receptors
ATE542804T1 (de) 2005-02-22 2012-02-15 Ranbaxy Lab Ltd 5-phenyl-pentansäurederivate als matrixmetalloproteinase-inhibitoren zur behandlung von asthma und anderen erkrankungen
FR2884248B1 (fr) * 2005-04-08 2007-05-18 Galderma Res & Dev Nouveau procede de preparation de l'acide 6-[3-(1-adamantyl)-4-methoxyphenyl]-2-naphtoique
JP5155148B2 (ja) 2005-04-08 2013-02-27 ガルデルマ・リサーチ・アンド・デヴェロップメント ６−［３−（１−アダマンチル）−４−メトキシフェニル］−２−ナフトエ酸の合成方法
ITRM20050248A1 (it) 2005-05-20 2006-11-21 Sigma Tau Ind Farmaceuti Uso acido adamantil metossidifenil propenoico per il trattamento di patologie cutanee.
EP1896399B1 (en) 2005-06-28 2010-11-17 SIGMA-TAU Industrie Farmaceutiche Riunite S.p.A. Biphenyl and naphthyl-phenyl hydroxamic acid derivatives
CN101316584A (zh) * 2005-09-27 2008-12-03 北海道公立大学法人札幌医科大学 用于预防及治疗由血管通透性亢进引起的眼病的医药
WO2007071605A1 (en) * 2005-12-19 2007-06-28 Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A. The use of st1898 for the treatment of restenosis
WO2007148804A1 (ja) * 2006-06-23 2007-12-27 Rohto Pharmaceutical Co., Ltd. ヒアルロン酸産生促進能を有する組成物
WO2008077772A2 (en) * 2006-12-22 2008-07-03 Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite Spa Combination of a retinoid and a platinum anticancer agent
WO2010000784A1 (en) * 2008-07-03 2010-01-07 Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A. Treatment of restenosis
TW201031402A (en) * 2008-12-24 2010-09-01 Sigma Tau Ind Farmaceuti New retinoid derivatives endowed with cytotoxic and/or antiangiogenic properties
WO2010096264A2 (en) 2009-02-03 2010-08-26 Children's Medical Center Corporation Methods for enhancing hematopoietic stem/progenitor cell engraftment
WO2010091052A2 (en) 2009-02-03 2010-08-12 Children's Medical Center Corporation Methods for enhancing hematopoietic stem/progenitor cell engraftment
WO2010106135A1 (en) 2009-03-20 2010-09-23 Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S.P.A. Combined use for the treatment of ovarian carcinoma
CN102892755A (zh) 2009-12-23 2013-01-23 韦恩州立大学 治疗性化合物
AU2012311640B2 (en) * 2011-09-19 2017-04-13 Alfasigma S.P.A. New thio derivatives bearing lactams as potent HDAC inhibitors and their uses as medicaments
JP5757602B2 (ja) * 2012-05-11 2015-07-29 国立大学法人金沢大学 不斉選択性の切り替えが可能なクロマトグラフィー用充填剤
CN104496839B (zh) * 2014-12-03 2016-04-20 广东东阳光药业有限公司 取代环丁烷类神经氨酸酶抑制剂及其使用方法和用途
WO2017053778A1 (en) 2015-09-25 2017-03-30 Fuchs Helen Burgwyn Antibacterial and antifungal compounds
EP3301085A1 (en) * 2016-09-29 2018-04-04 Biogem S.Ca.R.L. Retinoid derivatives with antitumor activity
US11389414B2 (en) 2017-04-27 2022-07-19 Vanderbilt University Methods for treating atherosclerosis with gamma-ketoaldehyde scavengers
US11278025B2 (en) 2017-05-17 2022-03-22 The General Hospital Corporation Antibiotic compounds
WO2019018185A1 (en) 2017-07-15 2019-01-24 Arisan Therapeutics Inc. ENANTIOMERICALLY PURE ADAMATANE DERIVATIVES FOR THE TREATMENT OF FILOVIRUS INFECTIONS
IT201900003343A1 (it) * 2019-03-07 2020-09-07 Special Product’S Line S P A Derivati fenolici per uso come antimicrobici, antibatterici, battericidi
CN111956806B (zh) * 2020-09-03 2023-04-07 四川大学 一种药物载体、胶束、药剂及其制备方法和应用
IT202000029882A1 (it) * 2020-12-04 2022-06-04 Special Product’S Line S P A Derivati fenolici per uso come antimicrobici, antibatterici, battericidi
IT202000029906A1 (it) * 2020-12-04 2022-06-04 Special Product’S Line S P A Derivati fenolici per uso come antimicrobici, antibatterici, battericidi.
WO2022229017A1 (en) 2021-04-27 2022-11-03 Biogem S.C.A R.L. Adamantyl retinoid derivative with anticancer activity

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2676052B1 (fr) * 1991-05-02 1994-04-29 Cird Galderma Nouveaux composes polycycliques aromatiques et leur utilisation en medecine humaine ou veterinaire et en cosmetique.
WO1998001132A1 (en) * 1996-07-08 1998-01-15 Centre International De Recherches Dermatologiques Galderma Apoptosis inducing adamantyl derivatives and their usage as anti-cancer agents
ITRM20010464A1 (it) * 2001-07-31 2003-01-31 Sigma Tau Ind Farmaceuti Derivati retinoidi ad attivita' antiangiogenica, antitumorale e pro-apoptotica.
EP1456165A1 (en) * 2001-11-30 2004-09-15 The Burnham Institute Induction of apoptosis in cancer cells

Also Published As

Publication number Publication date
HUP0401604A3 (en) 2006-01-30
US8101793B2 (en) 2012-01-24
CN1279014C (zh) 2006-10-11
PL368412A1 (pl) 2005-03-21
DK1412317T3 (da) 2011-03-28
ITRM20010464A0 (it) 2001-07-31
WO2003011808A1 (en) 2003-02-13
AU2002326144B2 (en) 2008-04-10
ES2358097T3 (es) 2011-05-05
PT1412317E (pt) 2011-03-21
CA2454532A1 (en) 2003-02-13
KR100888466B1 (ko) 2009-03-12
MXPA04000877A (es) 2004-06-03
US7449495B2 (en) 2008-11-11
EP1412317B1 (en) 2010-12-22
ITRM20010464A1 (it) 2003-01-31
HU229308B1 (en) 2013-10-28
DE60238683D1 (de) 2011-02-03
CA2454532C (en) 2011-01-25
KR20040028968A (ko) 2004-04-03
HUP0401604A2 (hu) 2004-12-28
EP1412317A1 (en) 2004-04-28
JP2004536879A (ja) 2004-12-09
HK1068868A1 (en) 2005-05-06
US20080021088A1 (en) 2008-01-24
ATE492526T1 (de) 2011-01-15
CN1537094A (zh) 2004-10-13
JP4463550B2 (ja) 2010-05-19
CY1114535T1 (el) 2016-10-05
US20040235757A1 (en) 2004-11-25
BR0211521A (pt) 2004-09-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL207530B1 (pl) Związek, kompozycja farmaceutyczna, kombinacja i ich zastosowanie
AU2002326144A1 (en) Retinoid derivatives with antiangiogenic, antitumoral and proapoptotic activities
US5837725A (en) Bridged bicyclic aromatic compounds and their use in modulating gene expression of retinoid receptors
US5736576A (en) Method of treating malignant tumors with thyroxine analogues having no significant hormonal activity
KR100411483B1 (ko) 신규한트리에노산레티노이드화합물및방법
EP2172222A2 (en) Novel BLT2-mediated disease, BLT2-binding agent and compound
JP4001913B2 (ja) 新規なトリエンレチノイド化合物および方法
KR20050042044A (ko) 골 이상의 치료를 위한 치료제로서의 알칸 디올 유도체
JP4589337B2 (ja) ビタミン受容体調節剤
RU2166499C2 (ru) Ретиноиды
AU762492B2 (en) Retinoid antagonists and use thereof
JPH06192073A (ja) 細胞分化誘導剤
JPH10338658A (ja) レチノイド作用調節剤
JP2006507344A (ja) ビタミンｄレセプターモジュレーター
MX2007007439A (es) Moduladores del receptor de la vitamina d.
EP1836177A2 (en) Vitamin d receptor modulators
JP5042015B2 (ja) 骨状態を治療するための治療薬としてのアリールアルキルスルホンアミド類
JP2007512326A (ja) ビタミンｄ受容体調節物質としてのフェニルフラン化合物
KR20020032618A (ko) 히드록삼산 유도체 화합물, 그 제조 방법 및 그 화합물을유효 성분으로 하는 의약
AU2012262174B2 (en) (22E)-2-methylene-26,27-cyclo-22-dehydro-1alpha-hydroxy-19-norvitamin D3 derivatives
JPH0441134B2 (pl)
CN1134405C (zh) 具有类维生素a样活性的5,6-二氢萘基衍生物

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20140718