CN102892755A - 治疗性化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了本文所述的式I的化合物或其盐。本发明也提供了包含式I化合物的药物组合物、制备式I化合物的方法、可用于制备式I化合物的中间体以及使用式I化合物诱导细胞凋亡或治疗癌症的治疗方法。

Description

治疗性化合物
本文所述的发明得到国立卫生研究院授予的授权号RO1 CA109370的政府支持和退伍军人服务部的政府支持。美国政府具有本发明的某些权利。
相关申请的交叉引用
本专利申请要求2009年12月23日提交的美国申请系列号61/289,977的优先权权益，该申请通过引用并入本文。
背景技术
基于最近的分子观察结果，在急性髓性白血病(AML)的分类和预后中已经取得了众多进展。尽管最初使用法美英分类描述了AML的固有的异种性质(heterogenous nature)，独特的染色体易位、基因扩增和突变以及它们对治疗的预后和应答的影响的发现，已经导致新的且临床上更相关的分类系统。尽管具有这些进展，AML治疗的主要依据仍然是化学疗法。靶向疗法已经在选择性AML亚型的治疗中起作用。用药理学浓度的反式-视黄酸(tRA)治疗急性早幼粒细胞性白血病(APL)，导致90％的患者实现了完全减轻。APL细胞对高浓度的tRA的这种急剧应答，是由于独特的t(15：17)相互易位的存在，该存在导致早幼粒细胞性白血病(PML)-视黄酸细胞核受体(RAR)α融合产物的产生，甚至在有生理浓度的tRA存在下，所述α融合产物表现出增加的与辅阻遏物的结合，并诱导在早幼粒细胞阶段的成熟停止。这些细胞向微摩尔浓度的tRA的暴露，会导致PML-RAR从辅阻遏物解离，从而增强辅激活因子对它的结合，随后开始基因转录。不幸的是，tRA效力限于APL，在其它AML亚型中没有表现出活性。此外，随着tRA诱导它自身的分解代谢，维持疗法可能随着时间而失效。包括fms相关的酪氨酸激酶受体(FLT-3)和法呢基转移酶抑制剂在内的新靶向剂，被评价为AML治疗的潜在治疗模态。
金刚烷基取代的类视色素相关的(ARR)分子是一类独特的化合物，已经发现它们会在大量肿瘤类型中诱导细胞凋亡，其中的许多肿瘤类型表现出对经典的类视色素(诸如tRA)的抗性。不清楚ARR在细胞死亡的诱导中所利用的机理。6-[3-(1-金刚烷基)-4-羟苯基]-2-萘羧酸(CD437/AHPN)尽管在最初被确定为视黄酸受体(RAR)β和γ的选择性活化剂，已经在众多研究中发现其会在多种恶性细胞类型中抑制细胞生长和诱导细胞凋亡，其中使用独立于RAR和类视色素X受体(RXR)的机理。另外，4-[3-(1-金刚烷基)-4-羟苯基]-3-氯肉桂酸(3-Cl-AHPC)(其结合RAR，但是不活化RAR或RXR)是AML细胞的细胞凋亡的有效体外诱导物。最近的报道提示，新颖的细胞核受体即小细胞核异源二聚体配偶体(SHP，NR0B2)参与ARR对细胞凋亡的诱导。
尽管存在上面引用的报道，目前需要可用于诱导细胞凋亡和/或用于治疗癌症、尤其是用于治疗白血病的额外化学试剂。也需要这样的细胞凋亡诱导物和抗癌试剂：它们具有增强的活性，或具有提高的药理学性质，诸如增加的溶解度或更好的生物利用度。也需要这样的细胞凋亡诱导物和/或抗癌试剂：它们具有更低的毒性，或具有增强的治疗窗。
发明内容
本发明提供了用作细胞凋亡诱导物和/或天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活化剂和/或抗癌试剂的化合物。另外，本发明的代表性化合物表现出与报道的化合物相比增加的溶解度。因此，提供了本发明的化合物，它是式I的化合物：
Figure BDA00002047084200021
其中：
Z1是CR4，Z2是CR5，Z3是CR6，且Z4是N；或Z1是N，Z2是CR5，Z3是CR6，且Z4是N；或Z1是CR4，Z2是N，Z3是CR6，且Z4是N；或Z1是CR4，Z2是CR5，Z3是N，且Z4是N；或Z1是CR4，Z2是N，Z3是CR6，且Z4是CR7；或Z1是CR4，Z2是N，Z3是N，且Z4是CR7；
R1是金刚烷基、降金刚烷基(nor-adamantyl)、二环辛基或(C2-C10)炔基，其中R1的任意金刚烷基、降金刚烷基、二环辛基或(C2-C10)炔基可以任选地被一个或多个(例如1、2或3个)基团取代，所述基团选自：-OH、氧代(＝O)、＝CH2和-NH2；
R2是-OH、-OC(＝O)Ra、-OC(＝O)NRbRc或-OC(＝O)ORa，且R3是H、卤代、-CN、-NO2、(C1-C6)烷基、-OH、(C1-C3)烷氧基、-NRdRe、-CO2Rf、-C(＝O)Rf、-NRf(C＝O)Rg、-C(＝O)NRdRe，其中R3的任意烷基或烷氧基可以任选地被一个或多个(例如1、2、3、4或5个)基团取代，所述基团选自：卤代、氧代、羟基、-NRz1Rz2和(C1-C3)烷氧基；或R2和R3与它们连接的原子一起形成亚烷基二氧环，其中所述亚烷基二氧环任选地被一个或多个(例如1、2或3个)(C1-C6)烷基取代；
R3a是H、卤代、-OH、-(C1-C6)烷基或(C1-C3)烷氧基；
A是-CRh＝CRh-或-NRiCRjRk-；
R4是H、卤代、-CN、-NO2、-N3、-OH、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、-NRmRn、-NRo(C＝O)Rp或-CO2Ro-，其中R4的任意烷基或烷氧基可以任选地被一个或多个(例如1、2、3、4或5个)基团取代，所述基团选自：卤代、氧代、羟基、-CN、-NRz1Rz2、-C(＝O)NRz1Rz2和(C1-C3)烷氧基；
R5是H或F；
R6是H或F；
R7是H、卤代、-CN、-NO2、-N3、-OH、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、-NRmRn、-NRo(C＝O)Rp或-CO2Ro，其中R4的任意烷基或烷氧基可以任选地被一个或多个(例如1、2、3、4或5个)基团取代，所述基团选自：卤代、氧代、羟基、-CN、-NRz1Rz2、-C(＝O)NRz1Rz2和(C1-C3)烷氧基；
R8是H、(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；
每个Ra独立地是(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；
Rb和Rc各自独立地选自H或(C1-C6)烷基；或Rb和Rc与它们连接的氮一起形成吡咯烷子基(pyrrolidino)、哌啶子基(piperidino)、哌嗪子基(piperazino)、氮杂环丁烷子基(azetidino)、吗啉代或硫代吗啉代；
Rd和Re各自独立地是H或(C1-C6)烷基；或Rd和Re与它们连接的氮一起形成吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基、氮杂环丁烷子基、吗啉代或硫代吗啉代；
每个Rf独立地是H、(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；
每个Rg独立地是(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；
每个Rh独立地是H或F；
每个Ri独立地是H或(C1-C6)烷基；
Rj和Rk各自独立地是H或(C1-C6)烷基
Rm和Rn各自独立地是H或(C1-C6)烷基；或Rm和Rn与它们连接的氮一起形成吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基、氮杂环丁烷子基、吗啉代或硫代吗啉代；
每个Ro独立地是H、(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；
每个Rp独立地是(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；和
Rz1和Rz2各自独立地选自H或(C1-C6)烷基；或Rz1和Rz2与它们连接的氮一起形成吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基、氮杂环丁烷子基、吗啉代或硫代吗啉代；
或其盐。
本发明也提供了一种药物组合物，其包含式I化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的稀释剂或载体。
本发明也提供了一种用于诱导细胞的细胞死亡或细胞凋亡的方法，所述方法包括：使所述细胞在体外或在体内接触有效量的式I化合物或其盐。
本发明也提供了一种用于在需要这种治疗的哺乳动物(例如人)中诱导细胞凋亡或细胞死亡的方法，所述方法包括：给所述哺乳动物施用有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。
本发明也提供了一种用于活化细胞中的一种或多种天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(例如天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3或天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9)的方法，所述方法包括：使所述细胞在体外或在体内接触有效量的式I化合物或其盐。
本发明也提供了一种用于在需要这种治疗的哺乳动物(例如人)中活化一种或多种天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(例如天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3或天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9)的方法，所述方法包括：给所述哺乳动物施用有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。
本发明也提供了一种用于抑制癌(例如肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌或白血病，包括急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病或慢性髓性白血病)细胞生长的方法，所述方法包括：使所述癌细胞在体外或在体内接触有效量的式I化合物或其盐。
本发明也提供了一种用于在哺乳动物(例如人)中治疗癌症(例如肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌或白血病(例如急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病或慢性髓性白血病)的方法，所述方法包括：给所述哺乳动物施用有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。
本发明也提供了一种用于调节SHP或诱导胰腺癌干细胞的细胞死亡或细胞凋亡的方法，所述方法包括：使所述细胞在体外或在体内接触有效量的式I化合物或其盐。
本发明也提供了一种用于在需要这种治疗的哺乳动物(例如人)中调节SHP或诱导胰腺癌干细胞的细胞死亡或细胞凋亡的方法，所述方法包括：给所述哺乳动物施用有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。
本发明也提供了用于医学治疗(例如用于诱导细胞凋亡，诱导细胞死亡，活化一种或多种天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶诸如天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3或天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9，或治疗癌症诸如肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌或白血病，包括急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病或慢性髓性白血病)的式I化合物或其药学上可接受的盐。
本发明也提供了式I化合物或其药学上可接受的盐用于生产药剂的用途，所述药剂可用于诱导细胞凋亡，诱导细胞死亡，活化一种或多种天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(例如天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3或天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9)，或用于治疗哺乳动物(例如人)中的癌症(例如肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌或白血病，包括急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病或慢性髓性白血病)。
本发明也提供了式I化合物或其药学上可接受的盐用于生产药剂的用途，所述药剂可用于在哺乳动物(例如人)中调节SHP或诱导胰腺癌干细胞的细胞死亡或细胞凋亡。
本发明也提供了用于预防性地或治疗性地治疗哺乳动物(例如人)中的癌症(例如肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌或白血病，包括急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病或慢性髓性白血病)的式I化合物或其药学上可接受的盐。
本发明也提供了本文公开的方法和新颖的中间体，它们可用于制备式I化合物或其盐。有些式I化合物可用于制备其它式I化合物。
附图说明
图1解释了3-Cl-AHPC和化合物16的结构。
图2解释了3-Cl-AHPC和化合物16对FFMA-AML和TF(v-SRC)细胞中的细胞凋亡诱导。以1×104细胞/ml，接种细胞，培养24h，然后暴露于1μM化合物16或3-Cl-AHPC：A)在不同的化合物浓度96h，和B)递增的暴露时间。C)3-Cl-AHPC、全反式-视黄酸、9-顺式-视黄酸和TTNPB在FFMA-AML和TF(v-SRC)细胞中的细胞凋亡诱导。如在一般生化和药理学材料和方法中所述，使用吖啶橙和溴化乙锭染色，测定凋亡细胞的百分比，以测定核碎裂。误差棒代表3个单独测定的平均值±标准差(SD)。
图3解释了使用膜联蛋白V-FITC结合以及碘化丙啶(PI)染色评估的细胞凋亡和细胞死亡的诱导。将FFMA-AML和TF(vSRC)细胞暴露于1μM3-Cl-AHPC或化合物16。A)分别在24和48h ARR暴露以后，FFMA-AML和TF(vSRC)细胞中的细胞凋亡。该图显示了荧光强度等级相对于细胞数目的分布。左下象限代表活细胞(膜联蛋白V-FITC和PI阴性的)；右下象限代表早期凋亡细胞(膜联蛋白V-FITC阳性的，但是PI阴性的)；右上象限代表晚期凋亡细胞(膜联蛋白V-FITC和PI阳性的)。B)早期凋亡的膜联蛋白V-阳性的细胞在指定的时间时的百分比。误差棒代表3个单独测定的平均值±标准差(SD)。*、**和***是与对照细胞相比显著不同的(p值分别＜0.05、＜0.01和＜0.001，通过t检验测得)。
图4解释了3-Cl-AHPC和化合物16-介导的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3活化和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3裂解。A)在暴露于1μM3-Cl-AHPC和化合物16不同时间以后，在FFMA-AML和TF(vSRC)细胞中的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3的活化。B)天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(17kDa)片段和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3蛋白水平(用作加载对照的α-微管蛋白)的产生。柱代表3个独立实验的平均值。误差棒指示标准差。*，显著不同于对照细胞中的活化(p值＜0.01，通过t检验测得)。
图5解释了化合物16-介导的FFMA-AML和TF(v-SRC)细胞中的XIAP、c-IAP1和phospho-Bad表达的抑制，且伴有PARP裂解的诱导。A)通过蛋白印迹评估的暴露于化合物16以后的XIAP、c-IAP和phospho-Bad蛋白表达。B)-D)使用激光光密度测定法定量的蛋白表达水平。将XIAP、c-IAP1和phospho-Bad的表达水平标准化为各自的α-微管蛋白水平，并与它们在对照品中的相对水平(为其给出1的武断值)相对比。
图6解释了NOD-SCID小鼠中的FFMA-AML细胞增殖的3-Cl-AHPC和化合物16抑制和它们的存活的延长。A)通过尾静脉，给16只NOD-SCID小鼠(它们已经随机地分成2组，每组8只)注射1×106FFMA-AML细胞。24h以后，开始静脉内注射媒介物或3-Cl-AHPC(30mg/kg)，每天2次，持续4天。B)除了腹膜间地(interperitoneally)施用3-Cl-AHPC以外，进行相同的研究。C)将24只NOD-SCID小鼠随机地分成3组，每组8只。给每只小鼠注射1×106 FFMA-AML细胞；在注射后24h，开始使用媒介物或化合物16的治疗，它们以7.5mg/kg或5.0mg/kg的剂量通过尾静脉静脉内地施用，每天2次，持续5天。监测小鼠的毒性和存活。
图7解释了在SCID小鼠中的化合物16抑制的TF(v-SRC)增殖和生长。将NOD SCID小鼠随机地分成2组，每组8只。给每只小鼠注射1×107TF(v-SRC)细胞，且在24h以后，在星期一、星期三和星期五用化合物16(20mg/kg)或媒介物静脉内地治疗小鼠，持续5周。监测小鼠的毒性和存活。A)用化合物16治疗的TF(vSRC)接种的小鼠的存活，和B)化合物-16治疗的SCID小鼠的体重减轻的缺失。C)化合物16抑制SCID小鼠中可触知的TF(v-SRC)生长。在维持SCID小鼠中，皮下地培养TF(v-SRC)细胞。收获肿瘤，并使用套管针，将大约20mg肿瘤皮下地注射进SCID小鼠的每个胁腹。然后使肿瘤达到100mg的大小。将小鼠随机地分成3组，每组8只小鼠。在星期一、星期三和星期五，在距离肿瘤的远处部位，用20mg/kg的化合物16静脉内地或皮下地治疗各组，进行12次注射(4周)。用媒介物静脉内地治疗对照小鼠。
图8解释了与3-Cl-AHPC相比，化合物16的重复给药对小鼠的体重的影响。
具体实施方式
除非另外说明，采用下述定义：卤代是氟代、氯代、溴代或碘代。烷基、烷氧基、烯基、炔基等表示直链和支链基团；但是涉及到单个基团如“丙基”时，仅包括直链基团，而支链异构体如“异丙基”会特别指出。
芳基表示苯基或具有约9-10个环原子的邻位稠合的二环碳环基团，其中至少一个环是芳族的。芳基的实例包括苯基、茚基和萘基。
杂芳基包括含有5或6个环原子的单环芳族环基团，所述环原子由碳和1-4个杂原子组成，每个杂原子选自非过氧化物氧、硫和N(X)，其中X不存在，或者是H、O、(C1-C4)烷基、苯基或苄基。杂芳基还包括约8-10个环原子的邻位稠合的二环基团，其含有1-4个杂原子，每个杂原子选自非过氧化物氧、硫和N(X)，条件是，所述二环的至少一个环是芳族的，且条件是，所述芳族环包含至少一个杂原子。杂芳基的实例包括：呋喃基、咪唑基、三唑基、三嗪基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、吡咯基、吡嗪基、四唑基、吡啶基、噻吩基、嘧啶基、吲哚基、异喹啉基、四氢异喹啉、苯并呋喃、苯并咪唑、四氢喹啉基和喹啉基。
术语“亚烷基二氧环”是指这样的环：其与芳基(例如苯基)的2个邻近的碳原子稠合，使得所述环是5或6原子，且其中所述环具有2个氧原子。所述亚烷基二氧环的2个氧原子各自与芳基的邻近碳原子相连，且所述2个氧原子彼此被甲基或乙基隔开。
本领域技术人员将意识到，具有手性中心的本发明化合物可以以光学活性的和外消旋的形式存在并分离。某些化合物可能表现出多态性。应当理解，本发明包括本发明化合物的任何外消旋的、光学活性的、多形的或立体异构的形式或它们的混合物，这些物质具有本文所描述的有用的特性，本领域众所周知如何制备光学活性形式(例如，通过重结晶技术拆分外消旋形式，通过从光学活性的原料合成，通过手性合成，或通过使用手性固定相进行色谱分离)。
下面列出的基团、取代基和范围的具体值仅仅用于例证；它们不排除其它定义的值或在所述基团和取代基的定义范围内的其它值。下面列出的具体值是式I化合物以及式IIa、IIb、IIc、IId、IIe和IIf的化合物的具体值。
一组具体的式I化合物是式IIa的化合物：
Figure BDA00002047084200091
或其盐。
一组具体的式I化合物是式IIb的化合物：
Figure BDA00002047084200092
或其盐。
一组具体的式I化合物是式IIc的化合物：
Figure BDA00002047084200093
或其盐。
一组具体的式I化合物是式IId的化合物：
Figure BDA00002047084200094
或其盐。
一组具体的式I化合物是式IIe的化合物：
Figure BDA00002047084200095
或其盐。
一组具体的式I化合物是式IIf的化合物：
或其盐。
具体地，(C1-C6)烷基可以是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异-丁基、仲丁基、戊基、3-戊基或己基；(C1-C10)烷基可以是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异-丁基、仲丁基、戊基、3-戊基、己基、庚基、辛基、壬基或癸基；(C3-C6)环烷基可以是环丙基、环丁基、环戊基或环己基；(C1-C6)烷氧基可以是甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异-丁氧基、仲丁氧基、戊氧基、3-戊氧基或己氧基；(C2-C10)炔基可以是乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基、5-己炔基、1-庚炔基、1-辛炔基或1-壬基。
一组具体的式I化合物是式I的化合物：
Figure BDA00002047084200102
其中：
Z1是CR4，Z2是CR5，Z3是CR6，且Z4是N；或Z1是N，Z2是CR5，Z3是CR6，且Z4是N；或Z1是CR4，Z2是N，Z3是CR6，且Z4是N；或Z1是CR4，Z2是CR5，Z3是N，且Z4是N；或Z1是CR4，Z2是N，Z3是CR6，且Z4是CR7；或Z1是CR4，Z2是N，Z3是N，且Z4是CR7；
R1是金刚烷基、降金刚烷基、二环辛基或(C2-C10)炔基；
R2是-OH、-OC(＝O)Ra、-OC(＝O)NRbRc或-OC(＝O)ORa；
R3是H、卤代、-CN、-NO2、(C1-C6)烷基、-OH、(C1-C3)烷氧基、-NRdRe、-CO2Rf、-C(＝O)Rf、-NRf(C＝O)Rg、-C(＝O)NRdRe，其中R3的任意烷基或烷氧基可以任选地被一个或多个(例如1、2、3、4或5个)基团取代，所述基团选自：卤代、氧代、羟基、-NRz1Rz2和(C1-C3)烷氧基；
A是-CRh＝CRh-或-NRiCRjRk-；
R4是H、卤代、-CN、-NO2、-N3、-OH、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、-NRmRn、-NRo(C＝O)Rp或-CO2Ro，其中R4的任意烷基或烷氧基可以任选地被一个或多个(例如1、2、3、4或5个)基团取代，所述基团选自：卤代、氧代、羟基、-CN、-NRz1Rz2、-C(＝O)NRz1Rz2和(C1-C3)烷氧基；
R5是H或F；
R6是H或F；
R7是H、卤代、-CN、-NO2、-N3、-OH、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、-NRmRn、-NRo(C＝O)Rp或-CO2Ro，其中R4的任意烷基或烷氧基可以任选地被一个或多个(例如1、2、3、4或5个)基团取代，所述基团选自：卤代、氧代、羟基、-CN、-NRz1Rz2、-C(＝O)NRz1Rz2和(C1-C3)烷氧基；
R8是H、(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；
每个Ra独立地是(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；
Rb和Rc各自独立地选自H或(C1-C6)烷基；或Rb和Rc与它们连接的氮一起形成吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基、氮杂环丁烷子基、吗啉代或硫代吗啉代；
Rd和Re各自独立地是H或(C1-C6)烷基；或Rd和Re与它们连接的氮一起形成吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基、氮杂环丁烷子基、吗啉代或硫代吗啉代；
每个Rf独立地是H、(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；
每个Rg独立地是(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；
每个Rh独立地是H或F；
每个Ri独立地是H或(C1-C6)烷基；
Rj和Rk各自独立地是H或(C1-C6)烷基
Rm和Rn各自独立地是H或(C1-C6)烷基；或Rm和Rn与它们连接的氮一起形成吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基、氮杂环丁烷子基、吗啉代或硫代吗啉代；
每个Ro独立地是H、(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；
每个Rp独立地是(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；和
Rz1和Rz2各自独立地选自H或(C1-C6)烷基；或Rz1和Rz2与它们连接的氮一起形成吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基、氮杂环丁烷子基、吗啉代或硫代吗啉代；
或其盐。
一组具体的式I化合物是这样的化合物：其中Z1是CR4，Z2是CR5，Z3是CR6，且Z4是N。
另一组具体的式I化合物是这样的化合物：其中Z1是N，Z2是CR5，Z3是CR6，且Z4是N。
另一组具体的式I化合物是这样的化合物：其中Z1是CR4，Z2是N，Z3是CR6，且Z4是N。
另一组具体的式I化合物是这样的化合物：其中Z1是CR4，Z2是CR5，Z3是N，且Z4是N。
另一组具体的式I化合物是这样的化合物：其中Z1是CR4，Z2是N，Z3是CR6，且Z4是CR7。
另一组具体的式I化合物是这样的化合物：其中Z1是CR4，Z2是N，Z3是N，且Z4是CR7。
另一组具体的式I化合物是这样的化合物：其中R5和R6是H。
R5的一个具体值是H。
R6的一个具体值是H。
R4的一个具体值是H或卤代。
R4的另一个具体值是Cl。
R4的另一个具体值是H。
R7的一个具体值是H或卤代。
R7的另一个具体值是H。
R1的一个具体值是金刚烷基、环辛基或降金刚烷基。
R1的另一个具体值是金刚烷基，其中R1的任意金刚烷基可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自-OH和氧代(＝O)。
R1的另一个具体值是：
Figure BDA00002047084200131
R1的另一个具体值是金刚烷基。
R2的一个具体值是-OH。
R2的另一个具体值是-OC(＝O)Ra。
Ra的一个具体值是(C1-C6)烷基。
Ra的另一个具体值是CH3。
R3的一个具体值是H。
R3的另一个具体值是H或(C1-C3)烷氧基。
R3a的一个具体值是H、-(C1-C6)烷基或(C1-C3)烷氧基。
R3a的另一个具体值是H。
一组具体的式I化合物是这样的化合物：其中R2和R3与它们连接的原子一起形成亚烷基二氧环，其中所述亚烷基二氧环任选地被一个或多个(C1-C6)烷基取代。
另一组具体的式I化合物是这样的化合物：其中R2和R3与它们连接的原子一起形成亚甲基二氧环。
A的一个具体值是-CRh＝CRh-。
Rh的一个具体值是H。
R8的一个具体值是H或(C1-C6)烷基。
R8的另一个具体值是H。
本发明的一种具体化合物是下述化合物
Figure BDA00002047084200141
或其盐。
本发明的另一种具体化合物是下述化合物
或其盐。
本发明的一种具体化合物是下述化合物
Figure BDA00002047084200151
或其盐。
提供了用于制备式I化合物的方法，作为本发明的其它实施方案，并通过下述规程来例证，在所述规程中，一般基团的含义如上所述，除非另外限定。
如在一般方案1中所示，制备本发明的代表性化合物。该方法也可以用于制备这样的化合物：其中R3和/或R3a不是氢。
方案1.用于制备本发明化合物的方法。
Figure BDA00002047084200161
(a)R1OH，CH3SO3H或H2SO4，CH2Cl2，加热。(b)R2”Cl或R2”Br，K2CO3，丙酮，加热。(c)n-BuLi，THF，低温；(MeO)3B或(i-PrO)3B；H3O+。(d)X3＝I，Br，或Cl：H2C＝CHCO2R8，Pd(OAc)2，DMF，(i-Pr)2EtN，(2-MePh)3P，加热；或
X3＝CHO：(R8O2CCH)(Ph)3P，MePh，加热；或X3＝CHO：[(EtO)2P(O)CH2CO2R8，NaH，THF]。(e)4，Pd(PPh3)4，Na2CO3水溶液，DME，加热。(f)BBr3，CH2Cl2，低温；H2O。(g)NaOH水溶液，MeOH，加热；H3O+；或LiOH·H2O，THF/MeOH/H2O；H3O+。(h)(RaCO)2O或RaCOCl或RbRcNC(＝O)Cl，或RaOC(＝O)Cl，4-(Me2N)-吡啶，THF。
通过在方案1中描绘的下述步骤，可以制备本发明的其它化合物。例如，通过使用式1的取代的苯酚(例如式1a的苯酚)，可以制备这样的化合物：其中R3不是氢。
Figure BDA00002047084200171
如下制备式I化合物(其中R8是H)：皂化对应的酯11，以提供式I化合物(其中R8是H)。可以如下制备式I化合物(其中R2是-OC(＝O)CH3)：酰化对应的苯酚12，以提供式I化合物(其中R2是-OC(＝O)CH3)。该方法也可以用于制备这样的化合物：其中R3和/或R3a不是氢。
Figure BDA00002047084200172
可用于制备式I化合物的中间体包括式13、14、15、14a和15a的化合物。
Figure BDA00002047084200173
在化合物是足够碱性的或酸性的情况下，式I化合物的盐可以用作用于分离或纯化式I化合物的中间体。另外，式I化合物作为药学上可接受的酸或碱盐的施用，可以是适当的。药学上可接受的盐的实例是：与酸形成的有机酸加成盐，所述酸形成生理上可接受的阴离子，例如，甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、α-酮戊二酸盐和α-甘油磷酸酯。也可以形成合适的无机盐，包括盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐和碳酸盐。
使用本领域众所周知的标准规程，例如通过使足够碱性的化合物(如胺)与合适的提供阴离子的酸反应，可以得到盐，包括药学上可接受的盐。也可以制备羧酸的碱金属(例如，钠、钾或锂)或碱土金属(例如钙)盐。
可以将式I的化合物配制为药用组合物，并可以以多种适合于所选择的给药途径(即，口服地或肠胃外地、通过静脉内的、肌肉内的、局部的或皮下的途径)的形式施用给哺乳动物宿主，诸如人患者。
因此，本发明的化合物可与药学上可接受的媒介物(如惰性稀释剂或可同化的食用载体)相组合地全身地施用，例如口服。可将它们包封于硬壳或软壳明胶胶囊中，可将它们压成片剂，或可直接掺入患者的日常饮食的食物中。对于口服治疗给药，可将所述活性化合物与一种或多种赋形剂混合，并以可摄取的片剂、经颊含片、锭剂、胶囊、酏剂、混悬液、糖浆剂、糯米纸囊剂等形式应用。这样的组合物和制剂应该含有至少0.1％的活性化合物。当然，所述组合物和制剂的百分比可以变化，且可以方便地在给定单位剂型重量的约2至约60％之间。活性化合物在这样的治疗上有用的组合物中的量，为获得有效剂量水平的量。
所述片剂、锭剂、丸剂、胶囊等也可含有下述物质：粘合剂如黄芪胶、阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂如磷酸二钙；崩解剂如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等；润滑剂如硬脂酸镁；以及甜味剂如蔗糖、果糖、乳糖或阿斯巴甜，或者可加入调味剂如薄荷、冬青油或樱桃调味剂。当所述单位剂型是胶囊时，除了含有上述类型的物质之外，它还可以含有液体载体如植物油或聚乙二醇。可存在多种其它材料，作为包衣层或以其它方式修饰固体单位剂型的物理形式。例如，可用明胶、蜡、虫胶或糖等包裹片剂、丸剂或胶囊。糖浆或酏剂可含有所述活性化合物、作为甜味剂的蔗糖或果糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、颜料和调味料如樱桃或橙味剂。当然，用于制备任意单位剂型的任何材料应该是药学上可接受的，并在所应用的量是基本上无毒的。此外，可将所述活性化合物掺入持续释放制剂和装置中。
通过输注或注射，也可静脉内地或腹膜内地施用所述活性化合物。可在水中制备所述活性化合物或其盐的溶液，所述水任选地与无毒的表面活性剂混合。也可在甘油、液体聚乙二醇、三醋汀及其混合物中和在油中制备分散物。在普通的储存和应用条件下，这些制剂含有防腐剂，以防止微生物的生长。
适于注射或输注的药用剂型可包括：含有所述活性成分的无菌水溶液、分散物或无菌粉剂，它们适用于无菌注射液或不溶性溶液或分散物(任选地包封在脂质体中)的临时配制制剂。在所有情况下，最后的剂型在生产和储存条件下应该是无菌的、流动的和稳定的。所述液体载体或媒介物可以是溶剂或液体分散介质，包括，例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、无毒的甘油酯及其合适的混合物。例如，通过形成脂质体，在分散物的情况下通过维持所需的粒度，或通过使用表面活性剂，可以维持适当的流动性。通过不同的抗细菌剂和抗真菌剂，例如，对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等，可以防止微生物的活性。在许多情况下，优选地包括等渗剂，例如，糖、缓冲剂或氯化钠。通过在组合物中使用延长吸收的试剂(例如，单硬脂酸铝和明胶)，可以延长可注射组合物的吸收。
通过将需要量的活性化合物与需要的上面列举的各种其它成分一起掺入适当的溶剂中，随后过滤除菌，可制备无菌注射液。在将无菌粉剂用于制备无菌注射液的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，这些技术产生活性成分与任意其它需要的成分(所述成分存在于以前过滤除菌的溶液中)的粉末。
对于局部给药，本发明的化合物可以以纯的形式施用，即当它们是液体时。然而，一般希望将所述化合物作为组合物或制剂(与皮肤病学上可接受的载体组合，所述载体可能是固体或液体)施用于皮肤。
有用的固体载体包括精细粉碎的固体如滑石、粘土、微晶纤维素、硅石、氧化铝等。有用的液体载体包括水、醇或二醇或水-醇/二醇的混合物，其中可以任选地在无毒的表面活性剂的帮助下，以有效的水平溶解或分散本发明的化合物。可加入佐剂如芳香剂和其它的抗微生物剂，以优化适于指定用途的性能。得到的液体组合物可以从吸收垫施用，用于浸渗绷带和其它敷料，或者使用泵型或气雾剂喷雾器喷洒在受累区域上。
增稠剂(诸如合成的聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和酯、脂肪醇、改性纤维素或改性矿物质)也可以与液体载体一起使用，以形成可涂抹的糊剂、凝胶剂、软膏剂、肥皂等，用于直接施用于使用者的皮肤。
可以用来将式I化合物递送给皮肤的有用的皮肤病学组合物的实例是本领域已知的；例如，参见Jacquet等人(美国专利号4,608,392)、Geria(美国专利号4,992,478)、Smith等人(美国专利号4,559,157)和Wortzman(美国专利号4,820,508)。
通过对比式I化合物的体外活性和在动物模型中的体内活性，可以确定式I化合物的有用剂量。将在小鼠和其它动物中的有效剂量外推至人类的方法，是本领域已知的；例如，参见美国专利号4,938,949。
用于治疗所需的所述化合物或其活性盐或衍生物的量，不但随选择的具体盐而变化，而且随给药途径、被治疗的病症的性质以及患者的年龄和状况而变化，最终由主治医师或临床医师确定。
但是，一般而言，合适的剂量是在约0.5至约100mg/kg的范围内，例如，约10至约75mg/kg体重/天，诸如3至约50mg/kg受体体重/天，优选地在6-90mg/kg/天的范围内，最优选地在15-70mg/kg/天的范围内。
所述化合物方便地配制在单位剂型中；例如，含有5-1000mg，方便地含有10-750mg，最方便地含有50-500mg活性成分/单位剂型。在一个实施方案中，本发明提供了一种组合物，其包含配制在这样的单位剂型中的本发明的化合物。
所需剂量可以方便地作为单次剂量呈现，或者作为以适当间隔施用的分份剂量呈现，例如，作为每天2次、3次、4次或更多次的亚剂量。所述亚剂量本身可以进一步细分成例如若干离散的宽松间隔的给药；诸如从吹入器多次吸入，或通过将多滴应用于眼中。
本发明的化合物也可以与其它治疗剂联合施用，例如，可用于治疗癌症的其它药剂。这样的药剂包括、但不限于：烷化剂、抗代谢药、抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、皮质类固醇、抗血管生成剂、植物生物碱和激素试剂。实例包括、但不限于：厄洛替尼(特罗凯
Figure BDA00002047084200211
Genentech/OSI Pharm.)，硼替佐米(Millennium Pharm.)，氟维司群(
Figure BDA00002047084200213
AstraZeneca)，舒尼替尼(
Figure BDA00002047084200214
Pfizer)，来曲唑(Novartis)，甲磺酸伊马替尼(
Figure BDA00002047084200216
Novartis)，奥沙利铂(
Figure BDA00002047084200217
Sanofi)，5-FU(5-氟尿嘧啶)，雷帕霉素(西罗莫司，雷帕鸣
Figure BDA00002047084200218
Wyeth)，拉帕替尼(
Figure BDA00002047084200219
GSK572016，Glaxo Smith Kline)，索拉非尼(
Figure BDA000020470842002110
Bayer)，伊立替康(Pfizer)，吉非替尼(易瑞沙
Figure BDA000020470842002112
AstraZeneca)，
Figure BDA000020470842002113
(泰素(紫杉醇；Bristol-Myers SquibbOncology，Princeton，N.J.)，泰索帝((doxetaxel)，-Poulenc Rorer，Antony，France)，健择
Figure BDA000020470842002117
(gemcitabine)，诺维本(vinorelbine)；卡培他滨(希罗达
Figure BDA000020470842002119
)，他莫昔芬(包括
Figure BDA000020470842002120
枸橼酸他莫昔芬)，(枸橼酸托瑞米芬)，
Figure BDA000020470842002122
(醋酸甲地孕酮)，阿诺新
Figure BDA000020470842002123
(依西美坦；Pfizer)，
Figure BDA000020470842002124
(伏氯唑)，
Figure BDA000020470842002125
(来曲唑；Novartis)，和瑞宁得
Figure BDA000020470842002126
(阿那曲唑；AstraZeneca)；
Figure BDA000020470842002127
勒托替康
Figure BDA000020470842002128
阿巴瑞克
Figure BDA000020470842002129
贝伐单抗(阿瓦斯丁
Figure BDA000020470842002130
Genentech)，西妥昔单抗(爱必妥
Figure BDA000020470842002131
Imclone)，帕尼单抗(Amgen)，利妥昔单抗(
Figure BDA000020470842002133
Genentech/Biogen Idec)，帕妥珠单抗(2C4，Genentech)，曲妥单抗(赫赛汀
Figure BDA000020470842002135
Genentech)和吉姆单抗奥佐米星(麦罗塔Wyeth)。
因此，在一个实施方案中，本发明也提供了一种组合物，其包含：式I化合物或其药学上可接受的盐、至少一种其它治疗剂和药学上可接受的稀释剂或载体。本发明也提供了一种试剂盒，其包含：式I化合物或其药学上可接受的盐、至少一种其它治疗剂、包装材料以及关于将式I化合物或其药学上可接受的盐和其它治疗剂或药剂施用给哺乳动物的说明书。
一般生化和药理学材料和方法。
材料：RPMI培养基、胎牛血清(FBS)和Trizol试剂购自Invitrogen(GrandIsland，NY)。抗-XIAP、抗-c-IAP和抗-SHP抗体购自Santa CruzBiotechnology(Santa Cruz，CA)。抗-天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶原-3和有活性的切割的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3抗体购自CellSignaling(Bellerica，MA)，微管蛋白购自Oncogene Research Products(Boston，MA)。
急性髓性白血病细胞。从诊断出AML的患者得到FFMA-AML细胞，所述AML由表1所述的免疫表型分型来指示。该患者可耐受由与道诺霉素一起施用的胞嘧啶阿糖胞苷以及高剂量胞嘧啶阿糖胞苷组成的化学疗法方案。使用韦恩州立大学制度评审委员会(Wayne State University InstitutionalReview Board)批准的方案，从所述患者得到外周血样品，并使用聚蔗糖-泛影葡胺，分离出白细胞胚细胞。随后，在我们以前已经报道的补充了10％热灭活的胎牛血清(FBS)和生长因子白介素3(IL-3)、粒细胞-集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和干细胞因子(SCF)的RPMI 1640中，培养分离的白血病细胞(占所述细胞的＞99％)，然后将所述细胞维持在10％FBS和庆大霉素中(Zhang Y.等人，Blood，2003；192：3743-3752)。以前已经描述了TF(v-SRC)白血病细胞(Black J.H.等人，Leukemia.2003；17：155-159)。在补充了10％热灭活的FBS的RPMI 1640中，培养TF(v-SRC)细胞。
细胞凋亡：如下测定细胞的细胞凋亡：(1)如以前所述的用于评估具有核碎裂和染色质凝聚的细胞的吖啶橙和溴化乙锭-染色(Farhana L.等人，Cancer Res.2006；65：4909-4917)，和(2)评估膜联蛋白V-FITC结合的流式细胞术以及碘化丙啶染色(膜联蛋白V-FITC细胞凋亡检测试剂盒1，BDBiosciences，San Diego，CA)。在FACS Calibur流式细胞计(BD)上获取数据，并用CellQuest软件进行分析。
体内研究：分别从Jackson Laboratories(Bar Harbor，Maine)和TaconicFarms(Germantown，New York)得到非肥胖糖尿病-严重的联合免疫缺陷(NOD-SCID)和ICR-SCID小鼠。A)FFMA-AML和TF(v-SRC)全身模型：给NOD-SCID和ICR-SCID小鼠(4-5周龄)静脉内地注射FFMA-AML或TF(v-SRC)细胞。次日开始用媒介物、3-Cl-AHPC或化合物16(实施例1的化合物)进行治疗。在诸如腹泻、脱水、体重减轻、腹水、瘫痪或全身无力等征状已经出现以后，将小鼠安乐死。B)TF(v-SRC)皮下小鼠模型。使用套管针，给ICR-SCID小鼠皮下地两侧接种TF(v-SRC)肿瘤碎片。将如以前所述(Zhang Y.等人，Blood.2002；100：2917-2925)测得具有相同肿瘤重量的动物分成3个实验组：1)对照(媒介物治疗)，2)用化合物16皮下地治疗，和3)用化合物16静脉内地治疗。如下计算携带FFMA-AML和TF(v-SRC)的小鼠的宿主生存期的增加百分比(％ILS)：将3-Cl-AHPC或化合物16治疗的携带AML的小鼠的死亡中位天数减去媒介物治疗的携带AML的小鼠的死亡中位天数，除以媒介物治疗的携带AML的小鼠的死亡中位天数。为了测定3-Cl-AHPC和化合物16的效力，使用时序检验，对比了3-Cl-AHPC或化合物16治疗的(T)或媒介物(C)组的存活分布。将存活表征为，在异种移植开始之后24h直到观察到的事件(安乐死或死亡)，动物的生存期的持续时间。认为小于5％的p-值(p＜0.05)是统计上显著的。
蛋白印迹和RT-PCR：如以前所述，进行蛋白印迹、RNA制备和RT-PCR(Farhana，L.等人，Molecular Cancer Therapeutics，2009；8：1625-1635)。
shRNA SHP击倒：如以前所述，制备shRNA SHP逆转录病毒表达载体(Farhana L.等人，Cancer Res 2007；67：318-325)。用逆转录病毒shRNA-SHP质粒瞬时转染FFMA-AML和TF(vSRC)细胞系48或72h。在用shRNA SHP逆转录病毒表达载体感染FFMA-AML和TF(vSRC)细胞72h以后，使用蛋白印迹来评估SHP蛋白表达。从MBL International Corporation(Woburn MA)和Santa Cruz Biotechnology(Santa Cruz，CA)得到抗-SHP抗体。在用shRNASHP表达载体感染以后48h，评估SHP击倒对3-Cl-AHPC和化合物16诱导的细胞的细胞凋亡的影响。使用膜联蛋白V-FITC细胞凋亡检测试剂盒，测定细胞凋亡。
使用下述的实验A，测定本发明的化合物的作为细胞凋亡诱导物和急性髓性白血病(AML)细胞生长抑制剂的能力。
实验A.AML KG-1人骨髓细胞系的细胞生长抑制和细胞凋亡诱导。
用于测量细胞生长抑制和细胞凋亡诱导的方法，遵循文献规程(Dawson，M.I.，等人，J.Med.Chem.，2007，50，2622-2639)。下面的表I显示了本发明的代表性化合物实现的AML KG-1人骨髓细胞系的细胞生长抑制和细胞凋亡诱导。
表I.AML KG-1细胞系的生长抑制和细胞凋亡诱导
Figure BDA00002047084200241
Figure BDA00002047084200251
nd＝未测定。
使用下述的实验B，可以测定本发明的化合物的作为细胞凋亡诱导物的能力。
实验B.FFMA-AML和TF(v-SRC)细胞的细胞凋亡的诱导。
通过评估表现出核碎裂和染色质凝聚的细胞的数目，检查3-Cl-AHPC和化合物16的诱导FFMA-AML和TF(v-SRC)细胞的细胞凋亡的能力(图2A和B)。在有和没有递增浓度的3-Cl-AHPC或化合物16存在下，培养细胞不同的时间段。随着时间增加和化合物浓度递增，3-Cl-AHPC-和化合物16-介导的FFMA-AML和TF(v-SRC)细胞的细胞凋亡逐渐增加。当将TF(v-SRC)细胞暴露于所述化合物时，与FFMA-AML细胞相比，TF(v-SRC)细胞表现出增加的对3-Cl-AHPC和化合物16的抗性，具有0.75μM的ED50(图2A和B)。在类似的条件下，FFMA-AML细胞表现出对于化合物16和3-Cl-AHPC分别为0.32μM和0.37μM的ED50值。以前的研究已经证实，在有全反式-视黄酸(tRA)、9-顺式-RA和RAR选择性的类视色素TTNPB存在下(通过它们的结合PML-RAR融合蛋白的能力)，急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞发生细胞凋亡(Weise K等人，Cell.1994；76：345-354)。因此，我们测试了FFMA-AML和TF(v-SRC)细胞对tRA、9-顺式-RA和TTNPB的细胞凋亡诱导的敏感性(图2C)。将tRA、9-顺式-RA或TTNPB加给FFMA-AML细胞，会导致大约10％-20％的细胞表现出细胞凋亡(超过使用媒介物所观察到的结果)，而3-Cl-AHPC的加入导致80％的细胞表现出细胞凋亡(图2C)。TF(v-SRC)细胞非常耐受那些化合物(9-顺式-RA、tRA或TTNPB)诱导的细胞凋亡，所述化合物的生物学效应是通过RAR和/或RXR来介导，因为在暴露以后没有观察到细胞凋亡的真实增加(图2C)。
为了进一步证明在FFMA-AML和TF(v-SRC)细胞中的3-Cl-AHPC和化合物16-介导的细胞凋亡，将细胞暴露于1μM 3-Cl-AHPC或化合物16不同的时间，然后使用流式细胞术来评估膜联蛋白V-FITC结合。在膜联蛋白V-FITC阳性的细胞中存在随时间的逐渐增加(图3)。以前的研究证实，(CD437/AHPN)和3-Cl-AHPC会通过天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶依赖性的过程在多种恶性细胞中诱导细胞凋亡(Mologni L等人，Blood，1999；93：1045-106，Farhana，L.等人，Molecular Cancer Therapeutics，2009；8：1625-1635)。如在来自处理过的AML细胞的裂解物中的催化活性的17-kDa切割的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3蛋白(图4A)和增加的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3活性(图4B)的产生所指示的，3-Cl-AHPC和化合物16会诱导天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3活化。
使用下述的实验C，测定本发明的化合物的作为细胞凋亡诱导物的能力。
实验C.抗细胞凋亡蛋白X-连接的细胞凋亡蛋白抑制剂(XIAP)、细胞凋亡1的细胞抑制剂(c-IAP1)和phospho-Bad的表达的抑制。
以前的研究已经证实，乳腺癌和前列腺癌细胞向3-Cl-AHPC的暴露，会导致抗细胞凋亡蛋白XIAP和c-IAP1的表达减少(Farhana L.等人，CancerRes.2006；65：4909-4917)。蛋白c-IAP1、c-IAP2和XIAP结合天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶，导致天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活性的抑制(JinH-S.等人，Cancer Res.2009；69：1782-1701)。另外，c-IAP1和c-IAP2具有E3-连接酶活性，并在NFκB活化中起重要作用(Jin H-S.等人，2009)。Bcl-2家族成员Bad会增强细胞凋亡，并通过磷酸化成磷酸化的Bad而被灭活(Eisenmann K.M.等人，Cancer Res.2003；63：8330-8337)。为了评估在AML细胞的细胞凋亡诱导过程中化合物16对抗细胞凋亡蛋白表达的调节，在将AML细胞暴露于化合物16以后，评估了XIAP、c-IAP1和phospho-Bad的表达以及修复DNA损伤的聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的裂解。FFMA-AML和TF(v-SRC)细胞在体外向化合物16的暴露，导致抗细胞凋亡蛋白XIAP和c-IAP-1和phospho-Bad的表达减少了70％-80％。另外，在c-IAP1、XIAP和phospho-Bad水平下降以后，观察到PARP的裂解，以进一步证实化合物16对AML细胞中的细胞凋亡的诱导(图5)。
使用下述的实验D，测定本发明的代表性化合物的抑制小鼠中的FFMA-AML细胞生长的能力。
实验D.NOD-SCID小鼠中的FFMA-AML生长的3-Cl-AHPC和化合物16抑制。
测定了3-Cl-AHPC和化合物16的抑制NOD-SCID小鼠中的FFMA-AML细胞生长的能力。将NOD-SCID小鼠随机地分成2组，每组8只小鼠，通过尾静脉给每只小鼠注射100万细胞。所述小鼠然后接受静脉内地施用的媒介物或3-Cl-AHPC(30mg/kg)，每天2次，持续4天。3-Cl-AHPC对NOD-SCID小鼠的治疗，导致与仅媒介物治疗的小鼠相比存活时间的显著(p值0.0001)增加(25％)(图6A)。当使用相同剂量的3-Cl-AHPC和治疗计划通过腹膜内途径施用3-Cl-AHPC时，得到类似的结果(图6B)。3-Cl-AHPC对小鼠的治疗与毒性有关，所述毒性包括体重减轻和减少的体育活动。通过尾静脉给NOD-SCID小鼠注射FFMA-AML细胞并在24h后用化合物16进行治疗(以5.0mg/kg或7.5mg/kg的剂量，每天给药2次，持续4天)，导致与在仅用媒介物治疗的小鼠中观察到的结果相比存活的显著(p＝0.0002)增加(ILS26％)(图6C)。化合物16治疗被非常好地耐受，在小鼠中没有观察到毒性。因此，本发明的化合物可以用作具有减少的毒性特性的治疗剂，用于治疗包括AML在内的癌症。
使用下述的实验E，测定了本发明的代表性化合物的抑制小鼠中的TF(v-SRC)细胞生长的能力。
实验E.SCID小鼠中的TF(v-SRC)细胞生长的化合物16抑制。
测定了化合物16的抑制SCID小鼠中的TF(v-SRC)细胞生长的能力。给SCID小鼠注射100万TF(v-SRC)细胞。隔日用化合物16(20mg/kg)或媒介物静脉内地治疗小鼠，共15剂。化合物16的治疗导致存活时间的显著增加，在87％的受治疗小鼠中没有白血病迹象(图7A)。通过流式细胞术，证实SCID小鼠中的TF(v-SRC)生长。从仅用媒介物治疗的小鼠得到的淋巴结或肿瘤样品样本的流式细胞术分析，揭示在淋巴结和肿瘤样本中表达CD45、CD13、CD34、CD33、CD36和CD40的TF(v-SRC)细胞的存在(表2)。在化合物16治疗的细胞中，没有鉴别出恶性细胞。
Figure BDA00002047084200281
与媒介物治疗的小鼠相比，化合物16治疗的小鼠没有表现出体重减轻的任何迹象(图7B)。另外，化合物16治疗的小鼠没有表现出腹泻、脱水、毛不整洁或减少的体育活动的任何迹象。
使用下述的实验F，测定了本发明的代表性化合物的抑制肿瘤生长的能力。
实验F.使用化合物16抑制可触知的TF(v-SRC)肿瘤的生长。
在化合物16抑制TF(v-SRC)肿瘤生长实验的过程中，检查了化合物16对c-IAP1、Ki67、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3、phospho-p65、DR4和DR5水平的调节。使用套管针，将TF(v-SRC)细胞皮下地接种进SCID小鼠中，并允许形成可触知的肿瘤。当可触知的肿瘤达到100mg的大小时，所述小鼠接受媒介物或化合物16(图7C)。在离可触知的肿瘤的远处部位，隔日皮下地或静脉内地施用剂量为20mg/kg的化合物16，共4剂。对照小鼠静脉内地接受媒介物。静脉内地或皮下地施用的化合物16治疗，导致TF(v-SRC)生长减少了55％(图7C)。
使用下述的实验G，测定本发明的代表性化合物的具有增强的治疗窗的能力。
实验G.化合物16相对于3-Cl-AHPC的重复给药对小鼠的体重的影响。
用递增剂量的化合物16或3-Cl-AHPC治疗小鼠，以确立这些化合物之间的毒性(MTD)差异，这通过体重减轻来测量(图8)。给2组小鼠(每组由2只雌性ICR-SCIDS小鼠组成)静脉内地注射化合物16或3-Cl-AHPC，每天1天，持续7天。从20mg/kg的每种化合物的初次静脉内注射开始，每个后续剂量增加25％。在7天中的每一天，测量体重，在最终剂量后48小时，测定最终的体重。在用3-Cl-AHPC治疗的小鼠组中的一只，在最后一次注射后48小时死亡。在死亡后2小时，记录该小鼠的最终体重。
使用下述的实验H，测定本发明的代表性化合物的溶解度。
实验H.水性溶解度的测定。
使用0.245、0.163、0.049和0.025mM 3-Cl-AHPC和0.380、0.178、0.053和0.027mM化合物18和16(它们从化合物在Me2SO中的1.0％(wt/vol)溶液制备)，产生在紫外λmax(对于3-Cl-AHPC、化合物18和16，分别是330、350和345nm)处的标准曲线。使用校正曲线来证实应答的线性。使用在更高的温度饱和、在22℃过夜温育并离心去除不溶物以后得到的溶液，通过紫外吸光度，测量在22℃在蒸馏水(pH 5)和磷酸盐缓冲盐水(PBS，pH 7.2)中的最大溶解度。
Figure BDA00002047084200301
因而，与有关的化合物(诸如3-Cl-AHPC)相比，本发明的代表性化合物(诸如化合物18和16)表现出显著增加的溶解度。
使用下述的实验I，测定了本发明的代表性化合物的诱导细胞凋亡和抑制胰腺细胞生长的能力。
实验I.化合物16和3-Cl-AHPC诱导的胰腺细胞的细胞凋亡和生长抑制。
用1μM 3-Cl-AHPC和化合物16处理胰腺癌细胞系(从美国典型培养物保藏中心(ATCC，Rockville，MD)得到的COLO357、PANC-1、Capan-2、AsPc-1细胞和MiaPaCa-2细胞)不同的时间。使用膜联蛋白V-FITC结合以及碘化丙啶(PI)染色(膜联蛋白V-FITC细胞凋亡检测试剂盒1，BD Biosciences，SanDiego，CA)，通过流式细胞术，分析细胞的细胞凋亡。在FACS Calibur流式细胞计(BD)上，进行数据获取，并用CellQuest软件(BD Biosciences)进行分析。通过3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基溴化四氮唑(MTT)试验，测定3-Cl-AHPC和化合物16介导的细胞生长抑制。以4×104细胞/孔的密度，将细胞接种在96-孔平板上，在200μl培养基的体积中。将在DMSO中的1μMAHP3和3-Cl-AHPC(终浓度0.1％)加给细胞不同的时间。将25μl/孔的MTT(5mg/ml)加给培养基，并温育4h。抛弃培养基以后，用200μl DMSO溶解MTT沉淀物，并在BioTeK Synergy HT(BioTeK Instrument Inc.，Vermont)上在吸光度570nm读出平板。一式四份地进行所有实验，以测定平均值和标准差。用吖啶橙/溴化乙锭染色，对球状体进行染色，并立即显影，用荧光显微镜(OLYMPUS CKX41)拍摄照片。对于DAPI染色，用DAPI染色剂在37℃温育球状体30分钟。然后，使球状体显影，并用荧光显微镜拍摄照片。
COLO357、PANC-1、Capan-2、AsPc-1细胞和MiaPaCa-2细胞向1μM的化合物16或3-Cl-AHPC的暴露，导致显著的生长抑制和细胞凋亡诱导。在48h时在80％的COLO357细胞中，在48h时在50％的PANC-1和Capan-2细胞中，观察到细胞凋亡的诱导。在72h时还在AsPc-1和MiaPaCa-2细胞中观察到细胞凋亡。
使用下述的实验J，测定本发明的代表性化合物的诱导细胞凋亡和抑制胰腺癌干细胞生长的能力。
实验J.化合物16和3-Cl-AHPC诱导的胰腺癌干细胞(从PANC-1、Capan-2和MiaPaCa-2细胞得到)的细胞凋亡和生长抑制。
CD44+/CD24+细胞的分离：将细胞培养至70-80％汇合，然后胰蛋白酶化，并用分选缓冲液(1×PBS，5％FCS)洗涤。用100μl分选缓冲液重新悬浮所述细胞，并用15-20μl抗-CD24-FITC、抗-CD44-PE第一抗体在冰上温育30min。洗涤细胞，并重新悬浮于500μl分选缓冲液中，使用FACSAria系统(BDImmunocytochemistry Systems，Franklin lakes，NJ)进行分选。
球状体形成：将分选的CD44+/CD24+细胞悬浮于含有DMEM/F12(1∶1)的无血清干细胞培养基中，所述培养基中补充了B27(Life Technologies，Gaithersburg，MD)、20ng/ml EGF(Biomol International，Plymouth，PA))、20ng/ml成纤维细胞生长因子(Biomol International，Plymouth，PA)和100μg/ml庆大霉素。将大约150-200个细胞接种到超低附着96-孔板(Corning Inc，Lowell，MA)的每个孔中。在细胞接种平板以后第二天，或在球状体形成7天以后，加入3-Cl-AHPC和化合物16。将球状体拍摄照片，并使用Olympus显微镜(OLYMPUS CKX41)和具有DP2-BSW软件(Olympus soft imagingsolutions GmbH，德国)的Olympus显微镜数字照相机进行测量。
蛋白印迹：用含有25mM Tris-Cl缓冲液(pH 8.0)、150mM NaCl、0.2％nonidet P-40、10％甘油10mM NaF、8mMβ-甘油磷酸酯、0.2mM Na3VO4、1mM DTT和10μl/ml蛋白酶抑制剂混合液(Sigma Aldrich，St.Louise，MO)的裂解缓冲液，提取细胞，并如我们以前所述，进行蛋白印迹。
免疫荧光：用在1％Triton X-100中的4％低聚甲醛固定大约150个球状体，在PBS中洗涤，在甲醇(25％、50％、75％95％和100％)中脱水，然后在递减百分比的甲醇中再水合，并在PBS中洗涤。在4℃在3％正常山羊血清(Vector Lab，Burlingame，CA)中温育球状体24h，在含有0.5％吐温20的磷酸盐缓冲盐水(PBST)中洗涤。然后，用第一抗体抗-CD44和抗-CD24在4℃温育球状体48h，在PBST中洗涤，并用抗-小鼠IgG-TRITC缀合物(对于CD44)和抗-兔IgG-FITC缀合物(对于CD24+)温育24h。在8室载玻片中固定球状体，并分析荧光染色。用DAPI在37℃温育在96孔超低附着平板中培养的球状体30分钟，以评估DAPI染色。
球状体块制备和原位球状体细胞死亡检测：在1000rpm离心DMSO(媒介物)和3-Cl-AHPC处理过的球状体5分钟，在PBS中洗涤，将22％牛血清白蛋白加入球状体沉淀物中，将95％乙醇放在球状体沉淀物上，并允许沉淀物硬化30分钟。加入中性的缓冲福尔马林(10％)，以固定所述细胞沉淀物至少2h，然后将所述球状体放在标记的塑料组织包埋盒中过夜，所述盒含有10％中性的缓冲福尔马林。在Sakura Tissue-Tek处理器中加工球状体过夜，在分级的乙醇中脱水，在二甲苯中清洗，并用石蜡浸润。将所述球状体放在4μm包埋模具中，用于最后的石蜡包埋。
根据生产商的说明书，使用原位细胞死亡检测试剂盒POD(Roche-Applied-Science，Mannheim，德国)，进行TUNEL试验。将包埋球状体的石蜡脱石蜡，并再水合，然后用蛋白水解酶K溶液(10-20μg/ml)温育组织切片30min。然后在PBS中冲洗组织2次，并与50μl的TUNEL反应混合物在黑暗的控湿室中在室温反应60min。在PBS中再次冲洗切片，并用50μl的Converter-POD(Roche-Applied-Science)温育30min，随后用3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)温育。然后用苏木素对切片复染色。不使用末端脱氧核苷酸转移酶，以相同的方式处理对应的切片，作为阴性对照。
shRNA质粒：人GIPZ慢病毒shRNAmir表达载体GFP-标记的-pGIPZ-shRNA-IGF-1R购自Open Biosystems(Thermo Scientific，Huntsville，AL)。使用lipofectamine 2000，将shRNA-IGF-1R表达载体稳定地转染进PANC-1和Capan-2细胞系中。用嘌呤霉素选择稳定的细胞系。使用乱序的序列shRNA-载体作为对照。与来自一组8个受测克隆的其它克隆相比，pGIPZ-shRNA表达载体克隆ID V2LSH-20147、V2LSH-13 1072、V3LSH-377850、V3LSH-377852、V3LSH-377849更有效地抑制PANC-1细胞中的IGF-1R表达。
统计分析：使用VassarStats网络统计软件(Richard Lowry，Poughkeepsie，NY，USA)，进行所有统计。进行单向方差分析(ANOVA)，以检测球状体对照组、3-Cl AHPC处理过的球状体组和AHP3处理过的球状体组之间的任何差异。如果ANOVA的结果是显著的(**P＜0.01，相对于对照)，通过事后检验(Tukey氏HSD规程)，进行组之间的逐对对比。将显著性水平设定在**P＜0.01(相对于对照)和*P＜0.05(相对于对照)。
化合物16或3-Cl-AHPC向这些CD24+/CD44+细胞的添加，会抑制它们的形成球状体的能力。此外，化合物16或3-Cl-AHPC向胰腺癌干细胞球状体的添加，会导致它们的解裂和构成球状体的细胞的细胞凋亡的诱导。化合物16和3-Cl-AHPC对球状体形成的抑制以及球状体形成细胞的细胞凋亡的诱导(通过DNA片段化和阳性的TUNEL染色来证实)，发生在可实现的生理浓度，低至500nM的化合物16或3-Cl-AHP3的暴露会导致球状体的解裂和细胞凋亡的诱导。
下述的非限制性实施例现在将例证本发明。
实施例
实施例1.合成化合物16：(E)-3-[2-(3-(1-金刚烷基)-4-羟苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸。向(E)-3-[2-(3-(1-金刚烷基)-4-羟基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯(1.8g，4.4mmol)在甲醇(45mL)中的溶液中，加入5M氢氧化钠水溶液(4.44mL，22.2mmol)。将该混合物在82℃在氩下加热1小时，冷却，用稀盐酸猝灭，并在乙酸乙酯(380mL)中萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。对浓缩的残余物进行色谱分离(1∶2∶0至4∶0∶1的乙酸乙酯/己烷/甲醇)，洗涤(己烷，二氯甲烷和氯仿)浓缩得到的黄色固体(Rf 0.43，1∶1∶04的乙酸乙酯/己烷/甲醇)，得到1.52g(91％)化合物16，为黄色粉末，熔点290-292℃(分解)。IR 3315，2847，1673，1435，1265cm-1；1H NMR(CD3OD)δ1.86(bs，6H，AdCH2)，2.10(bs，3H，AdCH)，2.25(m，6H，AdCH2)，6.72(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，6.84(d，J＝8.1Hz，1H，5′-ArH)，7.64(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，8.12(dd，J＝8.1Hz，1.8Hz，1H，6′-ArH)，8.34(d，J＝2.1Hz，1H，2′-ArH)，8.98ppm(s，2H，4-PyrH，6-PyrH)。C23H24N2O3[M+H]+的HRMS计算值377.1860，实测值377.1875。
如下制备中间体(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′-羟基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯。
a)(E)-3-(2-氯-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯。将5-溴-2-氯嘧啶(4.03g，20.8mmol)、丙烯酸乙酯(9.06mL，83.3mmol)、二醋酸钯(187mg，0.830mmol)和三(邻甲苯基)膦(762mg，2.50mmol)在二甲基甲酰胺(22mL)和二异丙基乙胺(11mL)中的溶液回流加热3.5h，然后冷却至室温，并用盐水稀释。用乙酸乙酯萃取该悬浮液。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(硅胶，11％的乙酸乙酯/己烷)，得到3.26g(73％)(E)-3-(2-氯-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯，为黄色固体，熔点125-127℃。IR 2905，1698，1542，1405，1160cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.38(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，4.32(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，6.60(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.61(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，8.79(s，2H，4-PyrH，6-PyrH)。C9H9ClN2O2[M+H]+的HRMS计算值213.0425，实测值213.0428。
b)(E)-3-[2-(3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯。在氩下，向3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基硼酸(Zhang Y.等人，Blood，2002；100：2917-2925，Dawson M.I.等人，J.Med.Chem.，2004；47：3518-3536)(3.62g，10.0mmol)和(2E)-3-(2-氯-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯(1.76g，8.30mmol)在二甲氧基乙烷(50mL)中的溶液中，加入四(三苯基膦)-钯(1.15g，1.00mmol)和2MNa2CO3水溶液(10mL)。将该反应混合物回流加热18h，冷却至室温，用乙酸乙酯稀释，洗涤(水和盐水)，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(9％至14％的乙酸乙酯/己烷)，得到3.98g(96％)(E)-3-[2-(3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯，为黄色固体，熔点164-167℃。IR 2903，1710，1432，1225cm-1；1H NMR δ(CDCl3)1.40(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.77(bs，6H，AdCH2)，2.11(bs，3H，AdCH)，2.26(bs，6H，AdCH2)，4.33(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，5.24(s，2H，CH2)，6.59(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.08(d，J＝8.7Hz，1H，5-ArH)，7.35-7.58(m，5H，C6H5)，7.65(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，8.33(dd，J＝8.7Hz，2.1Hz，1H，6-ArH)，8.47(d，J＝2.1Hz，1H，2-ArH)，8.91ppm(s，2H，4-PyrH，6-PyrH)。C32H34N2O3[M+H]+的HRMS计算值495.2642，实测值495.2636。
c)(E)-3-[2-(3-(1-金刚烷基)-4-羟苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯。将(E)-3-[2-(3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯(2.30g，4.65mmol)、1.0M三溴化硼(16mmol)在二氯甲烷(16mL)和二氯甲烷(40mL)中的溶液在-78℃在氩下搅拌2h，用水和饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，并萃取进乙酸乙酯中。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(16％至20％的乙酸乙酯/己烷)，得到1.8g(95％)(E)-3-[2-(3-(1-金刚烷基)-4-羟苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯，为淡黄色固体，熔点226-228℃。IR 3345，2856，1715，1456cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.39(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.83(bs，6H，AdCH2)，2.13(bs，3H，AdCH)，2.24(bs，6H，AdCH2)，4.33(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，5.38(bs，1H，OH)，6.59(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，6.79(d，J＝8.1Hz，1H，5-ArH)，7.65(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，8.22(dd，J＝8.1Hz，2.1Hz，1H，6-ArH)，8.44(d，J＝2.1Hz，1H，2-ArH)，8.90ppm(s，2H，4-ArH，6-PyrH)。C25H28N2O3[M+H]+的HRMS计算值405.2173，实测值405.2191。
实施例2.合成化合物17：2-[3-(1-金刚烷基)-4-羟苯基]-5-(羧甲基氨基)嘧啶。向乙基2-[3-(1-金刚烷基)-4-羟苯基]-5-(乙酯基甲氨基)-嘧啶(41.6mg，0.100mmol)在3∶2∶1的THF/CH3OH/H2O(2.4mL)中的溶液中，加入LiOH·H2O(21mg，0.49mmol)。将该混合物在室温搅拌5h。减压去除溶剂以后，将残余物悬浮于2N HCl(10mL)中，以调节pH至1，然后用EtOAc(60mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(20％的EtOAc/己烷)，得到38mg(98％)化合物17，为淡褐色固体，熔点235℃(分解)。IR 3420，2902，1691，1215cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ1.73(bs，6H，AdCH2)，2.04(bs，3H，AdCH)，2.10(m，6H，AdCH2)，4.15(bs，1H，NH)，4.43(s，2H，NHCH2CO)，6.85(d，J＝8.4Hz，1H，5′-ArH)，7.91(d，J＝8.4Hz，1H，6′-ArH)，8.12(s，1H，2′-ArH)，8.40(s，2H，4-ArH，6-ArH)，9.93ppm(s，1H，OH)。C22H25N3O3[M+H]+的HRMS计算值380.1974，实测值380.1975。
如下制备中间体乙基2-[3-(1-金刚烷基)-4-羟苯基]-5-(乙酯基甲氨基)-嘧啶。
a)2-[3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基]-5-硝基嘧啶。向3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基硼酸(1)(833g，2.3mmol)和2-氯-5-硝基嘧啶(2)(320mg，2.00mmol)在脱气的甲苯(15mL)中的溶液中，加入四(三苯基膦)钯(347mg，0.300mmol)、NaHCO3(336mg，4.00mmol)和脱气的H2O(3mL)。将该混合物回流加热(90℃油浴)24h，冷却至室温，并用EtOAc(180mL)萃取。洗涤(H2O和盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(3％的EtOAc/己烷)，得到165mg(19％)2-[3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基]-5-硝基嘧啶，为黄色固体，熔点206℃(分解)。IR 2902，1405，1179cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.76(bs，6H，AdCH2)，2.09(bs，3H，AdCH)，2.22(m，6H，AdCH2)，5.24(s，2H，C6H5CH2)，7.07(d，J＝8.7Hz，1H，5′-ArH)，7.34-7.53(m，5H，C6H5)，8.40(dd，J＝8.7Hz，2.4Hz，1H，6′-ArH)，8.51(d，J＝2.4Hz，1H，2′-ArH)，9.46ppm(s，2H，4-ArH，6-ArH)。C27H27N3O3[M+H]+的HRMS计算值442.2125，实测值442.2137。
b)5-氨基-2-[3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基]嘧啶。将2-[3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基]-5-硝基嘧啶(163mg，0.37mmol)和SnCl2·2H2O(418mg，1.85mmol)在无水EtOH(1.7mL)中的溶液在90℃加热(油浴)3.3h，冷却至室温，并用H2O(2mL)稀释。通过加入2N NaOH(1.6mL)和5％NaHCO3(3mL)来调节pH至7-8以后，将得到的混合物搅拌40min，并用EtOAc(3×30mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(25％的EtOAc/己烷)，得到53mg(35％)5-氨基-2-[3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基苯基]嘧啶，为浅紫色固体，熔点216-219℃。IR 3424，2900，1182cm-1；1HNMR(CDCl3)1.76(bs，6H，AdCH2)，2.08(bs，3H，AdCH)，2.24(m，6H，AdCH2)，3.74(bs，2H，NH2)，5.21(s，2H，C6H5CH2)，7.04(d，J＝8.7Hz，1H，5′-ArH)，7.34-7.56(m，5H，C6H5)，8.13(dd，J＝8.7Hz，2.4Hz，1H，6′-ArH)，8.28(d，J＝2.4Hz，1H，2′-ArH)，8.43ppm(s，2H，4-ArH，6-ArH)。C27H29N3O[M+H]+的HRMS计算值412.2389，实测值412.2391。
c)2-[3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基]-5-(乙酯基甲氨基)嘧啶。向5-氨基-2-[3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基]嘧啶(49mg，0.12mmol)和K2CO3(69mg，0.50mmol)在丙酮(5mL)中的悬浮液中，加入溴代乙酸乙酯(53μL，0.48mmol)。将该混合物在氩下回流加热19h，并冷却至室温。减压去除丙酮以后，用水(8mL)稀释残余物，并用EtOAc(60mL)萃取。洗涤(H2O和盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(14％的EtOAc/己烷)，得到53mg(89％)2-[3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基]-5-(乙酯基甲氨基)嘧啶，为淡褐色固体，熔点153-156℃。IR 3455，2901，1710，1179cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.33(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.75(bs，6H，AdCH2)，2.07(bs，3H，AdCH)，2.24(m，6H，AdCH2)，4.31(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，4.60(m，1H，NH)，4.73(s，2H，NHCH2CO)，5.20(s，2H，C6H5CH2)，7.03(d，J＝8.4Hz，1H，5′-ArH)，7.32-7.55(m，5H，C6H5)，8.17(dd，J＝8.4Hz，2.1Hz，1H，6′-ArH)，8.32(d，J＝2.1Hz，1H，2′-ArH)，8.46ppm(s，2H，4-ArH，6-ArH)。C31H35N3O3[M+H]+的HRMS计算值498.2757，实测值498.2762。
d)2-[3-(1-金刚烷基)-4-羟苯基]-5-(乙酯基甲氨基)嘧啶。将乙基2-[3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基]-5-(乙酯基甲氨基)嘧啶(51mg，0.10mmol)、1.0MBBr3(0.56mmol)在CH2Cl2(0.6mL)和CH2Cl2(1.4mL)中的溶液在氩下在-78℃搅拌2h，用H2O(10mL)猝灭，并用EtOAc(100mL)萃取。洗涤(水和盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(1∶4的EtOAc/己烷)，得到41.6mg(99％)2-[3-(1-金刚烷基)-4-羟苯基]-5-(乙酯基甲氨基)嘧啶，为淡褐色固体，熔点190℃(分解)。IR 3432，2904，1708，1211cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.32(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.79(bs，6H，AdCH2)，2.09(bs，3H，AdCH)，2.21(m，6H，AdCH2)，4.30(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，4.60(m，1H，NH)，4.72(s，2H，NHCH2CO)，5.85(s，1H，OH)，6.71(d，J＝8.4Hz，1H，5′-ArH)，8.03(dd，J＝8.4Hz，2.1Hz，1H，6′-ArH)，8.27(d，J＝2.1Hz，1H，2′-ArH)，8.45ppm(s，2H，4-ArH，6-ArH)。C24H29N3O3[M+H]+的HRMS计算值408.2287，实测值408.2291。
实施例3.合成化合物18：(E)-3-{6-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-3-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯。将(E)-3-{6-[3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基苯基]-3-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯(2.49g，5.04mmol)、1.0M BBr3(25mmol)在CH2Cl2(25mL)和CH2Cl2(45mL)中的溶液在氩下在-78℃搅拌2h，然后用水(60mL)和饱和NaHCO3猝灭，直到pH 7-8，并用EtOAc(800mL)萃取。洗涤(水和盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(14％至33％的EtOAc/己烷)，得到2.0g(98％)化合物18，为黄色固体，熔点215-217℃。IR3406，2899，1707，1478，1589，1250cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.39(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.83(bs，6H，AdCH2)，2.14(bs，3H，AdCH)，2.22(bs，6H，AdCH2)，4.32(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，5.50(br s，1H，OH)，6.53(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，6.78(d，J＝8.1Hz，1H，5′-ArH)，7.70-7.76(m，3H，5-ArH，6′-ArH，CH＝CHCO)，7.89(dd，J＝8.4Hz，2.4Hz，1H，4-ArH)，7.98(d，J＝2.1Hz，1H，2′-ArH)，8.79ppm(d，J＝2.4Hz，1H，2-ArH)。C26H29NO3[M+H]+的HRMS计算值404.2220，实测值404.2219。
如下制备中间体(E)-3-{6-[3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基苯基]-3-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯。
a)(E)-3-(6-溴-3-吡啶基)-2-丙烯酸乙酯。将6-溴-3-吡啶甲醛(3.06g，15.63mmol)和(乙酯基亚甲基)三苯基正膦(6.60g，17.97mmol)在甲苯(45ml)中的溶液回流加热过夜，然后冷却至室温。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(16％的EtOAc/己烷)，得到3.9g(97％)(E)-3-(6-溴-3-吡啶基)-2-丙烯酸乙酯，为淡黄色固体。从己烷重结晶，得到3.5g(87％)纯的E-异构体，为白色固体，熔点79-80℃。作为对比，通过文献方法(van den Heuvel，M.，等人，J.Org.Chem.，2004，69，250-262)制备的物质具有83.6-84.1℃的熔点。IR2979，1709，1462，1179cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.36(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，4.31(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，6.53(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.55(d，J＝8.1Hz，1H，5-ArH)，7.68(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.72(dd，J＝2.1Hz，8.1Hz，1H，4-ArH)，8.52ppm(d，J＝2.1Hz，1H，2-ArH)。
b)(E)-3-{6-[3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基苯基]-3-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯。向3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基硼酸(3.62g，10mmol)和(E)-3-(6-溴-3-吡啶基)-2-丙烯酸乙酯(2.12g，8.3mmol)在脱气的DME(50mL)中的溶液中，加入四(三苯基膦)钯(1.15g，1.0mmol)和2M Na2CO3水溶液(10mL)。将该混合物回流加热(92℃油浴)20h，然后冷却至室温，用EtOAc(300mL)稀释，洗涤(H2O和盐水)，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(12％至25％的EtOAc/己烷)，得到4g(97％)(E)-3-{6-[3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基苯基]-3-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯，为淡黄色固体，熔点60-63℃。IR 2901，1710，1234，1176cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.39(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.77(bs，6H，AdCH2)，2.10(bs，3H，AdCH)，2.25(bs，6H，AdCH2)，4.32(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，5.22(s，2H，ArCH2)，6.53(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.07(d，J＝8.7Hz，1H，5′-ArH)，7.28-7.57(m，5H，ArH)，7.72(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H，5-ArH)，7.85(dd，J＝8.4Hz，2.4Hz，1H，6′-ArH)，7.90(dd，J＝8.7Hz，2.7Hz，1H，4-ArH)，8.03(d，J＝2.4Hz，1H，2′-ArH)，8.81ppm(d，J＝2.7Hz，1H，2-ArH)。C33H35NO3[M+H]+的HRMS计算值494.2690，实测值494.2687。
实施例4.合成化合物19：(E)-3-{6-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-3-吡啶基}-2-丙酸。向(E)-3-{6-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-3-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯(1.92g，4.75mmol)在MeOH中的溶液中，加入5M NaOH(4.76mL，23.8mmol)。将该混合物在86℃在氩下加热1.5h，然后冷却至室温，用2N HCl(20mL)稀释，并用EtOAc(60mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。洗涤(己烷、CH2Cl2和CHCl3)浓缩得到的残余物，干燥得到1.69g(94％)化合物19，为黄色固体，熔点316℃(分解)。IR 3363，2900，1648，1589，1412cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ1.77(bs，6H，AdCH2)，2.08(bs，3H，AdCH)，2.15(bs，6H，AdCH2)，6.68(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，6.88(d，J＝8.4Hz，1H，5′-ArH)，7.64(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.80(dd，J＝8.4Hz，2.4Hz，1H，6′-ArH)，7.88(d，J＝8.4Hz，1H，5-ArH)，7.98(d，J＝2.4Hz，1H，2′-ArH)，8.16(dd，J＝8.4Hz，2.1Hz，1H，4-ArH)，8.85(d，J＝2.1Hz，1H，2-ArH)，9.78(s，1H，OH)，12.31ppm(bs，1H，CO2H)。C24H25NO3[M+H]+的HRMS计算值376.1907，实测值376.1916。
实施例5.合成化合物20：(E)-3-{6-[4′-乙酰氧基-3′-(1-金刚烷基)苯基]-3-吡啶基}-2-丙酸。向(E)-3-{6-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-3-吡啶基}-2-丙酸(50mg，0.13mmol)在THF中的溶液中，加入Ac2O(25μL，0.27mmol)和DMAP(33mg，0.27mmol)。将该混合物在氩下搅拌27h，用H2O(10mL)猝灭，并用EtOAc(40，30mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(1∶1∶0至10∶5∶1的EtOAc/己烷/MeOH)，得到47mg(84％)化合物20，为淡黄色固体，熔点＞260℃(分解)。IR 2900，1754，1690，1204cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ1.77(bs，6H，AdCH2)，2.03(bs，6H，AdCH2)，2.10(bs，3H，AdCH)，2.38(s，3H，CH3CO)，6.74(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.18(d，J＝8.4Hz，1H，5′-ArH)，7.67(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.98(d，J＝8.4Hz，1H，6′-ArH)，8.03(d，J＝8.7Hz，1H，5-ArH)，8.16(s，1H，2′-ArH)，8.25(d，J＝8.7Hz，1H，4-ArH)，8.93(d，1H，2-ArH)，12.43ppm(bs，1H，CO2H)。C26H27NO4[M+H]+的HRMS计算值418.2013，实测值418.2016。
实施例6.合成化合物21：(E)-3-{3-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-6-哒嗪基}-2-丙酸。向(E)-3-{3-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-6-哒嗪基}-2-丙烯酸乙酯(6)(28mg，0.07mmol)在MeOH(1.05mL)中的溶液中，加入5M NaOH(70μL，0.70mmol)。将该溶液在氩下加热(82℃油浴)50min，冷却至室温，用2N HCl(8mL)猝灭，并用EtOAc(60mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。研磨(己烷和CHCl3)浓缩得到的残余物，得到23mg(88％)化合物21，为黄色固体，熔点181℃(分解)。IR 3373，2900，1693，1543cm-1；1H NMR(MeOH-d4)δ1.87(bs，6H，AdCH2)，2.12(bs，3H，AdCH)，2.27(m，6H，AdCH2)，6.91(d，J＝8.4Hz，1H，5′-ArH)，6.98(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.80(dd，J＝8.4Hz，2.1Hz，1H，6′-ArH)，7.88(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，8.00(d，J＝2.1Hz，1H，2′-ArH)，8.03(d，J＝9.0Hz，1H，5-ArH)，8.11ppm(d，J＝9.0Hz，1H，4-ArH)。C23H24N2O3[M+H]+的HRMS计算值377.1860，实测值377.1873。
如下制备中间体(E)-3-{3-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-6-哒嗪基}-2-丙烯酸乙酯。
a)3-氯-6-碘哒嗪。遵循报道的规程(Goodman，A.J.等人，Tetrahedron，1999，55，15067-15070)。将3，6-二氯哒嗪(2)(5,000g，33.56mmol)、NaI(6.75g，45.0mmol)和HI(55％至58％，25mL)的悬浮液在氩下在44℃(油浴)搅拌23h，冷却至室温，并用浓NaOH猝灭至pH12，然后搅拌10min，并用CH2Cl2萃取。洗涤(H2O)萃取物，并干燥。减压去除溶剂，得到7.96g(98％)3-氯-6-碘哒嗪，为淡黄色固体，熔点114-116℃(文献：110-112℃)。1H NMR(CDCl3)δ7.23(d，J＝8.7Hz，1H，4-ArH)，7.84ppm(d，J＝8.7Hz，1H，5-ArH。
b)(E)-3-(3-氯-6-哒嗪基)-2-丙烯酸乙酯。将3-氯-6-碘哒嗪(2.4g，10mmol)、丙烯酸乙酯(4.4mL，40mmol)、乙酸钯(II)(90mg，0.40mmol)和三(邻甲苯基)膦(366mg，1.20mmol)在DMF(10mL)和二异丙基乙基胺(5mL)中的悬浮液在加热(111℃油浴)下搅拌3.5h，冷却至室温，用H2O(50mL)稀释，并用EtOAc(300mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(14％至20％的EtOAc/己烷)，得到174mg(8％)(E)-3-(3-氯-6-哒嗪基)-2-丙烯酸乙酯，为褐色固体，熔点106-110℃。IR 2928，1715，1186cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.38(t，J＝7.5Hz，3H，CH2CH3)，4.33(q，J＝7.5Hz，2H，CH2CH3)，7.98(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.57(d，J＝8.4Hz，1H，4-ArH)，7.63(d，J＝8.4Hz，1H，5-ArH)，7.86ppm(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)。C9H9ClN2O2[M+H]+的HRMS计算值213.0425，实测值213.0431。
c)(E)-3-{3-[3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基苯基]-6-哒嗪基}-2-丙烯酸乙酯。向3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基硼酸(337mg，0.931mmol)和(E)-3-(3-氯-6-哒嗪基)-2-丙烯酸乙酯(165mg，0.776mmol)在脱气的DME(5mL)中的溶液中，加入四(三苯基膦)钯(115mg，0.100mmol)和2M Na2CO3水溶液(1mL)。将该反应混合物回流加热(90℃油浴)20h，冷却至室温，并用EtOAc(300mL)稀释。洗涤(H2O和盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(14％至20％的EtOAc/己烷)，得到59mg(15％)(E)-3-{3-[3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基苯基]-6-哒嗪基}-2-丙烯酸乙酯，为黄色固体，熔点134-136℃。IR 2912，1710，1578，1230cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.39(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.77(bs，6H，AdCH2)，2.09(bs，3H，AdCH)，2.24(bs，6H，AdCH2)，4.34(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，5.24(s，2H，ArCH2)，7.02(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.11(d，J＝9.0Hz，1H，5-ArH)，7.34-7.51(m，3H，ArH)，7.52-7.57(m，2H，ArH)，7.65(d，J＝8.7Hz，1H，5′-ArH)，7.86(d，J＝9.0Hz，1H，4-ArH)，7.92(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.96(dd，J＝8.7Hz，2.1Hz，1H，6′-ArH)，8.15ppm(d，J＝2.1Hz，1H，2′-ArH)。C32H34N2O3[M+H]+的HRMS计算值495.2642，实测值495.2630。
d)(E)-3-{3-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-6-哒嗪基}-2-丙烯酸乙酯。将(E)-3-{3-[3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基苯基]-6-哒嗪基}-2-丙烯酸乙酯(53mg，0.11mmol)、1.0M BBr3(0.43mmol)在CH2Cl2(0.43mL)和CH2Cl2(2mL)中的溶液在氩下在-78℃搅拌2h，用H2O(10mL)和饱和NaHCO3猝灭至pH7-8，并用EtOAc(80mL)萃取。洗涤(水和盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(14％至33％的EtOAc/己烷)，得到36mg(84％)(E)-3-{3-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-6-哒嗪基}-2-丙烯酸乙酯，为黄色固体，熔点246-248℃。IR 3360，2907，1714，1568，1227cm-1；1H NMR(丙酮-d6)δ1.36(t，J＝7.5Hz，3H，OCH2CH3)，1.86(bs，6H，AdCH2)，2.13(bs，3H，AdCH)，2.30(bs，6H，AdCH2)，4.30(q，J＝7.5Hz，2H，OCH2CH3)，7.03(d，J＝8.4Hz，1H，5′-ArH)，7.06(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.91(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.96(dd，J＝8.4Hz，2.1Hz，1H，6′-ArH)，8.06(d，J＝9.0Hz，1H，5-ArH)，8.17(d，J＝9.0Hz，1H，4-ArH)，8.20(d，J＝2.1Hz，1H，2′-ArH)，8.96ppm(s，1H，OH)。C25H28N2O3[M+H]+的HRMS计算值405.2173，实测值405.2174。
实施例7.合成化合物22：(E)-3-{2-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-3-氯-5-吡啶基}-1-丙烯酸。向在0℃的(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基)-3-氯-5-吡啶基]-2-丙烯酸乙酯(32mg，0.073mmol)在3∶2∶1的THF/MeOH/H2O(1.2mL)中的溶液中，加入LiOH·H2O(18.4mg，0.44mmol)。将该混合物在氩下在0℃搅拌5h，然后用2N HCl猝灭，直到pH3-4，并用EtOAc(40、20mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。洗涤(己烷、CHCl3和CH2Cl2)浓缩得到的残余物，得到26mg(87％)化合物22，为黄色固体，熔点186-188℃。IR 3377，2901，1688，1412cm-1；1H NMR(MeOH-d4)δ1.85(bs，6H，AdCH2)，2.09(bs，3H，AdCH)，2.24(bs，6H，AdCH2)，6.69(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，6.84(d，J＝8.4Hz，1H，5′-ArH)，7.46(dd，J＝8.4，2.1Hz，1H，6′-ArH)，7.58(d，J＝2.1Hz，1H，2′-ArH)，7.69(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，8.26(s，1H，4-PyH)，8.70ppm(s，1H，2-PyH)。C24H24ClNO3[M+H]+的HRMS计算值410.1517，实测值410.1515。
如下制备中间体(E)-3-{2-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-3-氯-5-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯。
a)(E)-3-(5，6-二氯-2-吡啶基)-2-丙烯酸乙酯。使用报道的方法(Ognyanov，V.I.等人，J.Med.Chem.，2006，49，3719-3742)，合成2，3-二氯-5-甲酰基吡啶。将5，6-二氯-3-吡啶甲醇(1.42g，8.00mmol)和MnO2(13.9g，160mmol)在1∶1的CH2Cl2/己烷(8mL)中的混合物搅拌1h，然后用50％EtOAc/己烷(20mL)稀释，并过滤(50％EtOAc/己烷洗涤)。蒸发滤液，并在真空中干燥残余物，用于下一步骤。
将粗的2，3-二氯-5-甲酰基吡啶和(乙酯基亚甲基)三苯基正膦(2.14g，5.83mmol)在甲苯(12mL)中的溶液回流加热过夜，然后冷却至室温。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(9％至10％的EtOAc/己烷)，得到323mg(从5，6-二氯-3-吡啶甲醇开始，16％)的(E)-3-(5，6-二氯-2-吡啶基)-2-丙烯酸乙酯，为白色固体，熔点102-103℃。IR 2914，1702，1428，1193cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.37(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，4.31(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，6.53(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.62(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.94(d，J＝1.8Hz，1H，4-ArH)，8.44ppm(d，J＝1.8Hz，1H，2-ArH)。C10H9Cl2NO2[M+H]+的HRMS计算值246.0083，实测值246.0086。
b)(E)-3-{2-[3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基苯基]-3-氯-5-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯。向3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基硼酸(204mg，0.570mmol)和(E)-3-(5，6-二氯-2-吡啶基)-2-丙烯酸乙酯4(123mg，0.500mmol)在脱气的DME(6mL)中的溶液中，加入1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯钯(II)·CH2Cl2复合物(25mg，0.03mmol)和Cs2CO3(652mg，2.00mmol)。将该反应混合物在75℃搅拌17h，然后在90℃搅拌15h，然后冷却至室温，用H2O(30mL)稀释，并用EtOAc(100、50mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(9％至11％的EtOAc/己烷)，得到85mg(32％)(E)-3-{2-[3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基苯基]-3-氯-5-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯，为粘稠的淡黄色油。IR 2903，1711，1233，1176cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.39(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.76(bs，6H，AdCH2)，2.08(bs，3H，AdCH)，2.23(bs，6H，AdCH2)，4.33(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，5.22(s，2H，ArCH2)，6.57(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.05(d，J＝8.4Hz，1H，5′-ArH)，7.28-7.57(m，5H，C6H5)，7.65(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.66(d，J＝8.4Hz，1H，6′-ArH)，7.77(s，1H，2′-ArH)，7.95(s，1H，4-PyH)，8.71ppm(s，1H，2-PyH)。C33H34ClNO3[M+H]+的HRMS计算值528.2300，实测值528.2299。
c)(E)-3-{2-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-3-氯-5-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯。将(E)-3-{2-[3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基]-3-氯-5-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯(72mg，0.14mmol)、1.0M三溴化硼(0.55mmol)在CH2Cl2(0.6mL)和CH2Cl2(2mL)中的溶液在氩下在-78℃搅拌2h。用水(8mL)和饱和NaHCO3(8mL)猝灭所述反应混合物，并用EtOAc(70mL和40mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(13％至25％的EtOAc/己烷)，得到36mg(61％)(E)-3-{2-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-3-氯-5-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯，为黄色固体，熔点260-261℃。IR 3373，2905，1712，1411，1183cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.39(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.82(bs，6H，AdCH2)，2.12(bs，3H，AdCH)，2.20(bs，6H，AdCH2)，4.33(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，5.21(s，1H，OH)，6.57(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，6.77(d，J＝8.4Hz，1H，5′-ArH)，7.58(dd，J＝1.5，8.4Hz，1H，6′-ArH)，7.67(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.71(d，J＝1.5，1H，2′-PyH)，7.96(s，1H，4-PyH)，8.71ppm(s，1H，2-PyH)。C26H28ClNO3[M+H]+的HRMS计算值438.2830，实测值438.1826。
实施例8.合成化合物23：(E)-3-{2-[3-(1-金刚烷基)-4-羟苯基]-5-吡嗪基}-2-丙烯酸。向(E)-3-[2-(3-(1-金刚烷基)-4-羟基)-5-吡嗪基]-2-丙烯酸乙酯(7)(310mg，0.77mmol)在MeOH(9mL)中的溶液中，加入5M水溶液NaOH(0.77mL，3.83mmol)。将该混合物在氩下在81℃加热1h，冷却至室温，用2N HCl(22mL)猝灭，然后用EtOAc(100mL、50mL和20mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。洗涤(己烷和CH2Cl2)浓缩得到的黄色固体，得到254mg(88％)化合物23，为黄色粉末，熔点296℃(分解)。1H NMR(CD3OD和CDCl3)δ1.65(bs，6H，AdCH2)，1.95(bs，3H，AdCH)，2.06(bs，6H，AdCH2)，6.72(d，J＝8.5Hz，1H，5-ArH)，6.78(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.55(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.57(dd，J＝8.5Hz，2.4Hz，1H，6-ArH)，7.77(d，J＝2.4Hz，1H，2-ArH)，8.49(s，1H，3-PyrH)，8.82ppm(s，1H，6-PyrH)。C23H24N2O3[M+H]+的HRMS计算值377.1860，实测值377.1859。
如下制备中间体(E)-3-{2-[3-(1-金刚烷基)-4-羟基]-5-吡嗪基}-2-丙烯酸乙酯。
a)5-溴-吡嗪-2-甲醛。向在-78℃的5-氰基-2-溴吡嗪(1.02g，5.54mmol)在无水甲苯(15mL)中的溶液中，加入在CH2Cl2(8.3mL)中的1M二异丁基氢化铝(8.32mmol)。将该反应混合物在-78℃搅拌15min，温热至室温，搅拌26h，然后用MeOH(4mL)稀释，并在室温搅拌30min，然后加入10％H2SO4(55mL)。将得到的溶液搅拌1.75h，并用EtOAc(100mL，50mL)萃取。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(11％至14％的EtOAc/己烷)，得到289mg(28％)5-溴-吡嗪-2-甲醛，为橙色固体，熔点56-58℃。IR 2960，1654，1546，1111cm-1；1H NMR(CDCl3)δ8.83(d，J＝1.24Hz，1H，6-PyrH)，8.91(d，J＝1.24Hz，1H，3-PyrH)，10.13ppm(s，1H，CHO)C5H3BrN2O[M+H]+的HRMS计算值186.9501，实测值186.9496。
b)(E)-3-(5-溴-2-吡嗪基)-2-丙烯酸乙酯。方法A：将5-溴-吡嗪-2-甲醛(284mg，1.52mmol)和(乙酯基亚甲基)三苯基正膦(668mg，1.82mmol)在甲苯(5mL)中的溶液回流加热18h，然后冷却至室温。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(11％至14％的EtOAc/己烷)，得到369mg(94％)3-(5-溴-2-吡嗪基)-2-丙烯酸乙酯的E和Z混合物，为淡黄色固体。结晶(己烷)，得到243mg(62％)纯的E-异构体，为米色固体(cream solid)，熔点70-71℃。IR 2940，1707，1457，1103cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.33(t，J＝7.3Hz，3H，OCH2CH3)，4.28(q，J＝7.3Hz，2H，OCH2CH3)，6.99(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.62(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，8.40(d，J＝1.24Hz，1H，6-PyrH)，8.68ppm(d，J＝1.24Hz，1H，3-PyrH)。C9H9BrN2O2[M+H]+的HRMS计算值256.9920，实测值256.9915。
(E)-3-(5-溴-2-吡嗪基)-2-丙烯酸乙酯。方法B：将2，5-二溴吡嗪(238.0mg，1.0mmol)、丙烯酸乙酯(174.0μL，1.6mmol)、乙酸钯(II)(3.4mg，0.015mmol)和三(邻甲苯基)膦(36.5mg，0.12mmol)在DMF(1.4mL)和二异丙基乙胺(0.7mL)中的溶液回流加热(115℃油浴)4.4h，冷却至室温，然后用H2O猝灭。用EtOAc(300mL)萃取所述悬浮液。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(11％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到22mg(8.5％)(E)-3-(5-溴-2-吡嗪基)-2-丙烯酸乙酯，为米色固体。
c)(E)-3-{2-[3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基]-5-吡嗪基}-2-丙烯酸乙酯。向3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基硼酸(474mg，1.31mmol)和(E)-3-(5-溴-2-吡嗪基)-2-丙烯酸乙酯(278mg，1.08mmol)在DME(11mL，经过脱气)中的溶液中，加入四(三苯基膦)钯(151mg，0.13mmol)和脱气的2M Na2CO3(2.3mL)。将该反应混合物回流加热(90℃油浴)19.5h，冷却至室温，然后用EtOAc(155mL)稀释。洗涤(H2O和盐水)有机层，并干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(10％至25％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到488mg(91％)(E)-3-{2-[3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基]-5-吡嗪基}-2-丙烯酸乙酯，为黄色固体，熔点145-148℃。IR 2899，1710，1238cm-1；1H NMRδ(CDCl3)1.35(t，J＝7.3Hz，3H，OCH2CH3)，1.73(bs，6H，AdCH2)，2.06(bs，3H，AdCH)，2.20(bs，6H，AdCH2)，4.29(q，J＝7.3Hz，2H，OCH2CH3)，5.19(s，2H，CH2)，6.98(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.04(d，J＝8.5Hz，1H，5-ArH)，7.28-7.52(m，5H，C6H5)，7.72(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.84(dd，J＝8.5Hz，2.4Hz，1H，6-ArH)，8.02(d，J＝2.4Hz，1H，2-ArH)，8.63(d，J＝1.24Hz，1H，3-PyrH)，8.99ppm(d，J＝1.24Hz，1H，6-PyrH)。C32H34N2O3[M+H]+的HRMS计算值495.2642，实测值495.2659。
d)(E)-3-{2-[3-(1-金刚烷基)-4-羟苯基]-5-吡嗪基}-2-丙烯酸乙酯。将(E)-3-{2-[3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基]-5-吡嗪基}-2-丙烯酸乙酯(477mg，0.96mmol)、1.0M三溴化硼(3.86mmol)在CH2Cl2(3.86mL)和CH2Cl2(13mL)中的溶液在氩下在-78℃搅拌2h，用水(50mL)猝灭，并用EtOAc(100mL、50mL和30mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(20％至33％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到367mg(94％)(E)-3-{2-[3-(1-金刚烷基)-4-羟苯基]-5-吡嗪基}-2-丙烯酸乙酯，为黄色固体，熔点212-215℃。IR 3352，2843，1686cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.35(t，J＝7.3Hz，3H，OCH2CH3)，1.79(bs，6H，AdCH2)，2.10(bs，3H，AdCH)，2.18(bs，6H，AdCH2)，4.29(q，J＝7.3Hz，2H，OCH2CH3)，5.32(s，1H，OH)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H，5-ArH)，6.97(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.71(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.75(dd，J＝8.5Hz，2.4Hz，1H，6-ArH)，7.98(d，J＝2.4Hz，1H，2-ArH)，8.62(d，J＝1.2Hz，1H，3-PyrH)，8.97ppm(d，J＝1.2Hz，1H，6-PyrH)。C25H28N2O3[M+H]+的HRMS计算值405.2173，实测值405.2181。
实施例9.合成化合物24：(E)-3-{5-[3′-(1-金刚烷基)-4′羟苯基]-2-吡啶基}-2-丙酸。向(E)-3-{5-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-2-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯(130g，0.32mmol)在MeOH(4.5mL)中的溶液中，加入5M NaOH(0.32mL，1.61mmol)。将该混合物在80℃在氩下加热1.67h，然后冷却至室温，用2NHCl(20mL)稀释，并浓缩至干燥。将残余物溶解在MeOH中，并过滤。浓缩滤液，得到黄色固体，洗涤(己烷和CH2Cl2)所述固体，干燥得到121mg(100％)化合物24，为黄色固体，熔点＞260℃(分解)。1H NMR(CD3OD)δ1.84(bs，6H，AdCH2)，2.09(bs，3H，AdCH)，2.23(bs，6H，AdCH2)，6.92(d，J＝8.5Hz，1H，5′-ArH)，7.06(d，J＝16.5Hz，1H，CH＝CHCO)，7.53(dd，J＝2.4Hz，8.5Hz，1H，6′-ArH)，7.57(d，J＝2.4Hz，1H，2′-ArH)，7.77(d，J＝16.5Hz，1H，CH＝CHCO)，8.32(d，J＝8.5Hz，1H，3-ArH)，8.70(dd，J＝1.8Hz，8.5Hz，1H，4-ArH)，9.0ppm(d，J＝1.8Hz，1H，6-ArH)。C24H25NO3[M+H]+的HRMS计算值376.1907，实测值376.1908。
如下制备中间体(E)-3-{5-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-2-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯。
a)(E)-3-(5-溴-2-吡啶基)-2-丙烯酸乙酯。将5-溴-2-甲酰基吡啶(1.07g，5.58mmol)和(乙酯基亚甲基)-三苯基正膦(2.46g，6.70mmol)在甲苯(13mL)中的溶液回流加热17h，然后冷却至室温。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(10％至14％的EtOAc/己烷)，得到1.42g(99％)化合物2，为淡黄色固体。结晶(己烷)，得到1.28g(89％)纯的E-异构体，为白色固体，熔点78-80℃。1H NMR(CDCl3)δ1.34(t，J＝7.3Hz，3H，OCH2CH3)，4.27(q，J＝7.3Hz，2H，OCH2CH3)，6.91(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.31(d，J＝8.5Hz，1H，3-ArH)，7.62(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.84(dd，J＝2.4Hz，8.5Hz，1H，4-ArH)，8.69ppm(d，J＝2.4Hz，1H，6-ArH)。C10H10BrNO2[M+H]+的HRMS计算值255.9968，实测值255.9967。
b)(E)-3-{5-[3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基苯基]-2-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯。向3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基苯基硼酸(235mg，0.65mmol)和(E)-3-(5-溴-2-吡啶基)-2-丙烯酸乙酯(2)(128mg，0.5mmol)在脱气的DME(4mL)中的溶液中，加入四(三苯基膦)钯(58mg，0.05mmol)和2M Na2CO3(0.8mL)。将该混合物回流加热(92℃油浴)24.5h，然后冷却至室温，用EtOAc(130mL)稀释，洗涤(H2O和盐水)，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(16.7％至33.3％的EtOAc/己烷)，得到246mg(99％)(E)-3-{5-[3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基苯基]-2-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯，为淡黄色固体，熔点49-52℃。1H NMR(CDCl3)δ1.34(t，J＝7.0Hz，3H，OCH2CH3)，1.75(bs，6H，AdCH2)，2.07(bs，3H，AdCH)，2.20(bs，6H，AdCH2)，4.29(q，J＝7.0Hz，2H，OCH2CH3)，5.18(s，2H，ArCH2)，6.91(d，J＝15.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.07(d，J＝8.5Hz，1H，5′-ArH)，7.28-7.53(m，8H，C5H5，2′，6′-ArH，3-ArH)，7.73(d，J＝15.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.86(dd，J＝2.4Hz，8.5Hz，1H，4-ArH)，8.86ppm(d，J＝2.4Hz，1H，6-ArH)。C33H35NO3[M+H]+的HRMS计算值494.2690，实测值494.2687。
c)(E)-3-{5-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-2-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯。将(E)-3-{5-[3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基苯基]-2-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯(225mg，0.46mmol)、1.0M三溴化硼(1.82mmol)在CH2Cl2(1.8mL)和CH2Cl2(4.5mL)中的溶液在氩下在-78℃搅拌2h，然后用水(30mL)猝灭，并用EtOAc(120mL)萃取。洗涤(水和盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，对残余物进行色谱分离(14％至50％的EtOAc/己烷)，得到168mg(91％)(E)-3-{5-[3′-(1-金刚烷基)-4′-羟苯基]-2-吡啶基}-2-丙烯酸乙酯，为黄色固体，熔点197-199℃。1H NMR(CDCl3)δ1.35(t，J＝7.3Hz，3H，OCH2CH3)，1.80(bs，6H，AdCH2)，2.11(bs，3H，AdCH)，2.18(bs，6H，AdCH2)，4.29(q，J＝7.3Hz，2H，OCH2CH3)，5.31(br s，1H，OH)，6.77(d，J＝8.5Hz，1H，5′-ArH)，6.91(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.32(dd，J＝2.4Hz，8.5Hz，1H，6′-ArH)，7.46(d，J＝2.4Hz，1H，2′-ArH)，7.48(d，J＝7.90，1H，3-ArH)，7.73(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.86(dd，J＝2.4Hz，7.90Hz，1H，4-ArH)，8.85ppm(d，J＝2.4Hz，1H，6-ArH)。C26H29NO3[M+H]+的HRMS计算值404.2220，实测值404.2223。
实施例10.合成化合物25：(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-2′-甲基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸。向(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-2′-甲基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯(175mg，0.42mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中，加入5M NaOH水溶液(0.42mL，2.09mmol)。将该混合物在82℃在氩下加热50min，冷却至室温，用2N HCl(20mL)猝灭，并用EtOAc(90mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。用CH2Cl2和己烷洗涤浓缩的残余物，将黄色固体结晶(MeOH)，得到162mg(99％)(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-2′-甲基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸，为黄色粉末，熔点256-259℃。IR 3302，2904，2850，1714，1444，1402，1233cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ1.71(bs，6H，AdCH2)，2.02(bs，3H，AdCH)，2.06(m，6H，AdCH2)，2.47(s，3H，CH3)，6.67(s，1H，3′-ArH)，6.76(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.59(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.88(s，1H，6′-ArH)，9.12(s，2H，4，6-ArH)，9.72ppm(s，1H，OH)。
如下制备中间体(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-2′-甲基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯。
(a)(E)-3-(2-氯-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯。将5-溴-2-氯嘧啶(4.03g，20.8mmol)、丙烯酸乙酯(9.06mL，83.3mmol)、乙酸钯(II)(187mg，0.830mmol)和三(邻甲苯基)膦(762mg，2.50mmol)在DMF(22mL)和二异丙基乙胺(11mL)中的溶液回流加热(115℃油浴)3.5h，冷却至室温，并用盐水稀释。用EtOAc(300mL)萃取所述悬浮液。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(11％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到3.26g(73％)(E)-3-(2-氯-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯，为黄色固体，熔点125°-127℃。IR 2905，1698，1542，1405，1160cm-1；1HNMR(CDCI3)δ1.38(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，4.32(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，6.60(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.61(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，8.79(s，2H，4-ArH，6-ArH)。C9H9ClN2O2[M+H]+的HRMS计算值213.0425，实测值213.0428。
(b)2-(1-金刚烷基)-4-溴-5-甲基苯酚。将4-溴-3-甲基苯酚(4.68g，25mmol)、1-金刚烷醇(3.81g，25mmol)和MeSO3H(1.2mL)在CH2Cl2(18mL)中的混合物在54℃(油浴)搅拌和加热28.8h。用CHCl3(150mL)稀释得到的溶液，用H2O、5％NaHCO3和盐水洗涤，并干燥。用热的己烷洗涤浓缩得到的残余物，得到6.77g(85％)2-(1-金刚烷基)-4-溴-5-甲基苯酚，为白色固体，熔点155-156℃。IR 3541，2905，2845，1147cm-1；1H NMR δ(CDCl3)1.77(bs，6H，AdCH2)，2.07(bs，9H，AdCH和AdCH2)，2.28(s，3H，CH3)，4.67(s，1H，OH)，6.54(s，1H，6-ArH)，7.30(s，1H，3-ArH)。
(c)5-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-2-甲基苯基溴。向2-(1-金刚烷基)-4-溴-5-甲基苯酚(6.53g，20.34mmol)在丙酮(65mL)中的溶液中，加入苄基溴(3.48g，20.34mmol)，随后加入K2CO3(3.51g，25.43mmol)。将该混合物在氩下搅拌和回流加热24h。减压去除丙酮，然后加入2N HCl (80mL)。用EtOAc(300mL)萃取所述混合物，用H2O和盐水洗涤有机层，并干燥。去除溶剂以后，通过在硅胶上的色谱法(使用己烷)纯化残余物，得到7.68g(80％)5-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-2-甲基苯基溴，为白色固体，熔点138-139℃。IR 2903，2848，1163cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.71(bs，6H，AdCH2)，2.02(bs，3H，AdCH)，2.08(bs，6H，AdCH2)，2.33(s，3H，CH3)，5.07(s，2H，C6H5CH2)，6.80(s，1H，3-ArH)，7.33(s，1H，6-ArH)，7.3-7.5ppm(m，5H，C6H5)。
(d)5-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-2-甲基苯基硼酸。在氩下，向在-78℃(干冰/丙酮浴)的5-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-2-甲基苯基溴(2.66g，6.47mmol)在THF(10mL)中的溶液中，一次性加入在己烷(7.3mL)中的1.6M n-BuLi(11.64mmol)。将该混合物在-78℃搅拌15min。加入硼酸三异丙酯(4.5mL，19.40mmol)，将得到的溶液在-78℃搅拌20min，然后在搅拌下温热至室温过夜。用1N HCl(40mL)猝灭所述反应混合物，然后用EtOAc(100和60mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机萃取物，并干燥。减压去除溶剂，并用己烷洗涤残余物，得到1.47g(60％)5-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-2-甲基苯基硼酸，为白色固体，熔点243-247℃。IR 3226，2903，2848，1328cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.74(bs，6H，AdCH2)，2.05(bs，3H，AdCH)，2.20(bs，6H，AdCH2)，2.82(s，3H，CH3)，5.19(s，2H，C6H5CH2)，6.85(s，1H，3-ArH)，7.31-7.54(m，5H，C6H5)，8.19ppm(s，1H，6-ArH)。
e)(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基-2′-甲基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯。向5-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-2-甲基-苯基硼酸(403mg，1.07mmol)和(E)-3-(2-氯-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯(189mg，0.89mmol)在二甲氧基乙烷(5mL，经过脱气)中的溶液中，加入四(三苯基膦)钯(124mg，0.10mmol)和脱气的2M Na2CO3(1mL)。将该反应混合物回流加热(90℃油浴)20h，冷却至室温，并用EtOAc(130mL)稀释。洗涤(H2O和盐水)有机萃取物，然后干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(12.5％至14.3％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到310mg(68％)(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基-2′-甲基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯，为米色固体，熔点168-170℃。IR 2903，2848，1712，1434，1227cm-1；1H NMR δ(CDCI3)1.37(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.73(bs，6H，AdCH2)，2.04(bs，3H，AdCH)，2.18(bs，6H，AdCH2)，2.61(s，3H，CH3)，4.31(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，5.19(s，2H，C6H5CH2)，6.58(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，6.86(s，1H，3′-ArH)，7.32-7.55(m，5H，C6H5)，7.65(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.95(s，1H，6′-ArH)，8.92ppm(s，2H，4，6-ArH)。
(f)(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-2′-甲基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯。将(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基-2′-甲基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯(303mg，0.60mmol)和1.0M三溴化硼(2.40mmol)在CH2Cl2(3.4mL)在CH2Cl2(6.0mL)中的溶液在氩下在-78℃搅拌2h，用水(20mL)和饱和NaHCO3(10mL)猝灭，并用EtOAc(130mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(12.5％至20％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到233mg(93％)(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-2′-甲基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯，为黄色固体，熔点220-223℃。IR 3325，2904，2849，1711，1439，1230cm-1；1H NMRδ(CDCI3)1.36(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.78(bs，6H，AdCH2)，2.09(bs，3H，AdCH)，2.16(bs，6H，AdCH2)，2.54(s，3H，CH3)，4.30(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，5.14(s，1H，OH)，6.56(s，1H，3′-ArH)，6.58(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.64(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.91(s，1H，6′-ArH)，8.91ppm(s，2H，4，6-ArH)。
实施例11.合成化合物26：(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-2′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸。向(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-2′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯(50mg，0.12mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中，加入5M NaOH水溶液(0.12mL，0.58mmol)。将该反应混合物在82℃在氩下加热50min，冷却至室温，并用2N HCl(20mL)猝灭。用蒸馏水洗涤收集的黄色固体3次，用Et2O洗涤2次，用CH2Cl2(2×)洗涤2次，然后结晶(MeOH)，得到45mg(96％)(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-2′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸，为黄色粉末，熔点283-286℃(分解)。IR 3352，2903，2850，1707，1563，1285cm-1；1H NMRδ(CDCI3+CD3OD)1.63(bs，6H，AdCH2)，1.94(bs，3H，AdCH)，1.97(bs，6H，AdCH2)，4.00(s，3H，OCH3)，6.45(s，1H，3′-ArH)，6.63(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.51(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，8.25(s，1H，6′-ArH)，9.17ppm(s，2H，4，6-ArH)。
如下制备中间体(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-2′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯。
(a)3-(1-金刚烷基)-4-溴-5-甲氧基苯酚和2-(1-金刚烷基)-4-溴-5-甲氧基苯酚。将4-溴-3-甲氧基苯酚(6.33g，31.18mmol)、1-金刚烷醇(4.75g，31.18mmol)和MeSO3H(1.3mL)在CH2Cl2(22mL)中的混合物在54℃(油浴)搅拌加热29h。用H2O(30mL)猝灭得到的溶液，并用EtOAc(140mL)萃取。用H2O、5％NaHCO3和盐水洗涤萃取物，并干燥。在硅胶(0％至15％的EtOAc/己烷)上纯化浓缩得到的残余物，得到5.77g(55％)3-(1-金刚烷基)-4-溴-5-甲氧基苯酚(为白色固体，熔点151-153℃)和2.71g(26％)2-(1-金刚烷基)-4-溴-5-甲氧基苯酚(为白色固体，熔点182-185℃)。3-(1-金刚烷基)-4-溴-5-甲氧基苯酚：IR 3515，2902，2848，1312，1216cm-1；1H NMRδ(CDCl3)1.75(bs，6H，AdCH2)，2.04(bs，9H，AdCH和AdCH2)，3.79(s，3H，OCH3)，5.29(s，1H，OH)，6.57(s，1H，6-ArH)，7.19ppm(s，1H，2-ArH)。2-(1-金刚烷基)-4-溴-5-甲氧基苯酚：IR3513，2902，2848，1389，1207cm-1；1H NMRδ(CDCl3)1.77(bs，6H，AdCH2)，2.06(bs，9H，AdCH和AdCH2)，3.83(s，3H，OCH3)，4.83(s，1H，OH)，6.29(s，1H，6-ArH)，7.31ppm(s，1H，3-ArH)。
b)5-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-2-甲氧基苯基溴。向搅拌的2-(1-金刚烷基)-4-溴-5-甲氧基苯酚(2.59g，7.68mmol)在丙酮(26mL)中的溶液中，加入苄基溴(1.31g，7.68mmol)，随后加入K2CO3(1.33g，9.60mmol)。将该混合物在氩下搅拌和回流加热17.25h。减压去除丙酮，然后加入1N HCl(40mL)。用EtOAc(100mL)萃取所述混合物，用H2O和盐水洗涤有机层，并干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(0％至4％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到2.50g(76％)5-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-2-甲氧基苯基溴，为白色固体，熔点124-126℃。IR 2902，2847，1498，1161cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.71(bs，6H，AdCH2)，2.02(bs，3H，AdCH)，2.08(bs，6H，AdCH2)，3.82(s，3H，OCH3)，5.12(s，2H，C6H5CH2)，6.53(s，1H，3-ArH)，7.34(s，1H，6-ArH)，7.31-7.50ppm(m，5H，C6H5)。
(c)5-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-2-甲氧基苯基硼酸。在氩下，向在-78℃(干冰/丙酮浴)的5-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-2-甲氧基苯基溴(1.86g，4.35mmol)在THF(8mL)中的溶液中，一次性加入在己烷(4.4mL)中的1.6M n-BuLi(6.96mmol)。将所述混合物在-78℃搅拌15min。加入硼酸三异丙酯(3.00mL，13.0mmol)，并将得到的溶液在-78℃搅拌20min，然后在搅拌下温热至室温过夜。用1N HCl(40mL)猝灭所述混合物，然后用EtOAc(100和40mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机萃取物，并干燥。减压去除溶剂，并用己烷洗涤残余物，得到1.47g(79％)(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基-2′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯，为浅灰色固体，熔点150-152℃。IR 3389，2902，2849，1400，1260cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.71(bs，6H，AdCH2)，2.03(bs，3H，AdCH)，2.13(bs，6H，AdCH2)，3.85(s，3H，OCH3)，5.17(s，2H，C6H5CH2)，6.51(s，1H，3-ArH)，7.32-7.52(m，5H，C6H5)，7.68ppm(s，1H，6-ArH)。
(d)(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基-2′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯。向5-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-2-甲氧基苯基硼酸(471mg，1.20mmol)和(E)-3-(2-氯-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯(213mg，1.00mmol)在DME(6mL，经过脱气)中的溶液中，加入四(三苯基膦)钯(138mg，0.12mmol)和脱气的2MNa2CO3(1.2mL)。将该反应混合物回流加热(90℃油浴)26h，冷却至室温，用1N HCl(40mL)猝灭，并用EtOAc(190mL)萃取。洗涤(H2O和盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(20％至33％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到368mg(70％)(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基-2′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯，为浅黄色固体，熔点72-74℃。IR 2903，2849，1712，1435，1181cm-1；1H NMRδ(CDCI3)1.36(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.72(bs，6H，AdCH2)，2.04(bs，3H，AdCH)，2.17(bs，6H，AdCH2)，3.85(s，3H，OCH3)，4.31(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，5.22(s，2H，C6H5CH2)，6.57(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，6.62(s，1H，3′-ArH)，7.32-7.54(m，5H，C6H5)，7.63(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.84(s，1H，6′-ArH)，8.93ppm(s，2H，4，6-ArH)。
(e)(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-2′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯。将(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基-2′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯(140mg，0.27mmol)、1.0M三溴化硼(1.07mmol)在CH2Cl2(1.1mL)和CH2Cl2(3.0mL)中的溶液在氩下在-78℃搅拌2h，用水(25mL)和饱和NaHCO3(15mL)猝灭，并用EtOAc(130mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(25％至50％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到75mg(65％)(E)-3-[2-(5′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-2′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯，为黄色固体，熔点239-241℃。IR 3231，2904，2850，1712，1437，1181cm-1；1H NMR δ(CDCI3)1.36(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.79(bs，6H，AdCH2)，2.10(bs，3H，AdCH)，2.17(bs，6H，AdCH2)，3.36(s，3H，OCH3)，4.30(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，6.11(s，1H，3′-ArH)，6.57(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.61(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.81(s，1H，6′-ArH)，8.29(bs，1H，OH)，8.93ppm(s，2H，4，6-ArH)。
实施例12.合成化合物27：(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′，5′-亚甲基二氧苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸。向(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′，5′-亚甲基二氧苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯(138mg，0.32mmol)在THF/MeOH/H2O(3∶2∶1，6.2mL)中的溶液中，加入5M NaOH水溶液(0.32mL，1.60mmol)。将该混合物在80℃在氩下加热1h，冷却至室温，用1N HCl(30mL)猝灭，并用EtOAc(170mL)萃取。减压去除溶剂以后，用己烷、然后用CH2Cl2洗涤残余物，并干燥，得到128mg(99％)(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′，5′-亚甲基二氧苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸，为黄色粉末，熔点347°-350℃(分解)。IR 3435，2900，2849，1669，1418，1130cm-1；1H NMRδ(DMSO-d6)1.73(bs，6H，AdCH2)，2.02(bs，6H，AdCH2)，2.05(bs，3H，AdCH)，6.09(s，2H，CH2)，6.78(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.57(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.72(d，J＝1.8Hz，1H，6′-ArH)，7.99(d，J＝1.8Hz，1H，6′-ArH)，9.13ppm(s，2H，4，6-ArH)。
如下制备中间体(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′，5′-亚甲基二氧苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯。
(a)4-(1-金刚烷基)-6-溴苯并[1，3]间二氧杂环戊烯。将4-溴-1，2-亚甲基二氧苯(2.00g，9.95mmol)、1-金刚烷醇(1.52g，9.95mmol)和MeSO3H(5mL)的混合物搅拌1h。用H2O(40mL)猝灭得到的溶液，并用EtOAc(110mL)萃取。用0.5N NaOH、饱和NaHCO3和盐水洗涤萃取物，并干燥。在硅胶(己烷)上纯化浓缩得到的残余物，得到2.86g(86％)4-(1-金刚烷基)-6-溴苯并[1，3]间二氧杂环戊烯，为白色固体，熔点135-136℃。IR 2901，2843，1435，1189cm-1；1H NMRδ(CDCl3)1.76(bs，6H，AdCH2)，1.98(bs，6H，AdCH2)，2.06(bs，3H，AdCH)，5.93(s，2H，CH2)，6.84(s，1H，7-ArH)，6.86ppm(s，1H，5-ArH)。
(b)3-(1-金刚烷基)-4，5-亚甲基二氧苯基硼酸。在氩下向在-78℃(干冰/丙酮浴)的4-(1-金刚烷基)-6-溴苯并[1，3]间二氧杂环戊烯(2.10g，6.26mmol)在THF(11mL)中的溶液中，一次性加入在己烷(6.26mL)中的1.6M n-BuLi(10.0mmol)。将该混合物在-78℃搅拌15min。加入硼酸三异丙酯(4.30mL，18.8mmol)，将得到的溶液在-78℃搅拌另外20min，然后在搅拌下温热至室温过夜。用1N HCl(40mL)猝灭所述混合物，然后用EtOAc(100和40mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机萃取物，并干燥。减压去除溶剂，用己烷洗涤残余物，并干燥，得到1.23g(65％)3-(1-金刚烷基)-4，5-亚甲基二氧苯基硼酸，为米色固体，熔点258-261℃。IR 3231，2903，2849，1343，1164cm-1；1H NMRδ(CDCl3)1.81(bs，6H，AdCH2)，2.13(bs，9H，AdCH2和AdCH)，6.02(s，2H，CH2)，7.48(s，1H，6-ArH)，7.75ppm(s，1H，2-ArH)。
(c)(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′，5′-亚甲基二氧苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯。向3-(1-金刚烷基)-4，5-亚甲基二氧苯基硼酸(288mg，0.96mmol)和(E)-3-(2-氯-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯(170mg，O.80mmol)在二甲氧基乙烷(6mL，经过脱气)中的溶液中，加入四(三苯基膦)钯(111mg，0.10mmol)和脱气的2M Na2CO3(1.2mL)。将该反应混合物回流加热(90℃油浴)17.3h，冷却至室温，用1N HCl(40mL)猝灭，并用EtOAc(135mL)萃取。洗涤(H2O和盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(17％至33％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到283mg(82％)(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′，5′-亚甲基二氧苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯，为浅黄色固体，熔点204-206℃。IR 2900，2849，1702，1422，1187cm-1；1H NMRδ(CDCI3)1.36(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.80(bs，6H，AdCH2)，2.11(bs，9H，AdCH和AdCH2)，4.30(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，6.03(s，2H，CH2)，6.56(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.62(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.82(d，J＝1.8Hz，1H，6′-ArH)，7.84(d，J＝1.8Hz，1H，6′-ArH)，8.86ppm(s，2H，4，6-ArH)。
实施例13.合成化合物28：(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-5′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸。向(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-5′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯(105mg，0.24mmol)在MeOH(3mL)中的溶液中，加入5M NaOH水溶液(0.24mL，1.21mmol)。将该混合物在81℃在氩下加热50min，冷却至室温，用1N HCl(20mL)猝灭，并用EtOAc(120mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，结晶(MeOH)残余物，得到90mg(92％)(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-5′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸，为黄色粉末，熔点290-293℃(分解)。IR 3503，2903，2850，1695，1579，1420，1217cm-1；1H NMRδ(DMSO-d6)1.74(bs，6H，AdCH2)，2.05(bs，3H，AdCH)，2.12(bs，6H，AdCH2)，3.88(s，3H，OCH3)，6.77(d，J＝16.5Hz，1H，CH＝CHCO)，7.59(d，J＝16.5Hz，1H，CH＝CHCO)，7.86(d，J＝1.8Hz，1H，6′-ArH)，8.01(d，J＝1.8Hz，1H，2′-ArH)，9.07(s，1H，OH)，9.11ppm(s，2H，4，6-ArH)。
如下制备中间体(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-5′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯。
(a)2-(1-金刚烷基)-4-溴-6-甲氧基苯酚。将4-溴-2-甲氧基苯酚(2.00g，9.85mmol)、1-金刚烷醇(1.50g，9.85mmol)和MeSO3H(0.8mL)在CH2Cl2(8mL)中的混合物在54℃(油浴)加热搅拌18.3h。用H2O(30mL)猝灭得到的溶液，并用EtOAc(120mL)萃取。用5％NaHCO3和盐水洗涤萃取物，并干燥。在硅胶(4％的EtOAc/己烷)上纯化浓缩得到的残余物，得到2.5g(76％)2-(1-金刚烷基)-4-溴-6-甲氧基苯酚，为白色固体，熔点157-159℃。IR 3510，2903，2850，1413，1217cm-1；1H NMRδ(CDCl3)1.76(bs，6H，AdCH2)，2.07(bs，9H，AdCH和AdCH2)，3.87(s，3H，OCH3)，5.90(s，1H，OH)，6.86(d，J＝2.4Hz，1H，5-ArH)，6.95ppm(d，J＝2.4Hz，1H，3-ArH)。
(b)3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-5-甲氧基苯基溴。向2-(1-金刚烷基)-4-溴-6-甲氧基苯酚(3.30g，79.78mmol)在丙酮(32mL)中的溶液中，加入苄基溴(1.72g，10.07mmol)，随后加入K2CO3(1.69g，12.2mmol)。将该混合物在氩下在回流温度搅拌和加热20.75h。减压去除丙酮，并加入2N HCl(30mL)。用EtOAc(150mL)萃取所述混合物，用盐水洗涤有机层，并干燥。减压去除溶剂以后，结晶(MeOH)残余物，得到3.99g(95％)3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-5-甲氧基苯基溴，为白色固体，熔点89-91℃。IR 2901，2847，1444，1201cm-1；1HNMR(CDCl3)δ1.67(m，6H，AdCH2)，2.00(bs，3H，AdCH)，2.05(bs，6H，AdCH2)，3.85(s，3H，OCH3)，5.07(s，2H，C6H5CH2)，6.96(d，J＝2.3Hz，1H，6-ArH)，7.01(d，J＝2.3Hz，1H，2-ArH)，7.30-7.52ppm(m，5H，C6H5)。
(c)3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-5-甲氧基苯基硼酸。在氩下向在-78℃(干冰/丙酮浴)的3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-5-甲氧基苯基溴(2.85g，6.67mmol)在THF(12mL)中的溶液中，一次性加入在己烷(6.67mL)中的1.6M n-BuLi(10.7mmol)。将该混合物在-78℃搅拌15min。接着加入硼酸三异丙酯(4.60mL，20.0mmol)，将得到的溶液在-78℃搅拌20min，然后在搅拌下温热至室温过夜。用1N HCl(40mL)猝灭所述混合物，然后用EtOAc(100和60mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机萃取物，并干燥。减压去除溶剂，用己烷洗涤残余物，并干燥，得到2.3g(88％)3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-5-甲氧基苯基硼酸，为米色固体，熔点148-151℃。IR 3219，2903，2848，1410，1340，1201cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.72(bs，6H，AdCH2)，2.03(bs，3H，AdCH)，2.17(m，6H，AdCH2)，3.99(s，3H，OCH3)，5.21(s，2H，C6H5CH2)，7.31-7.58(m，5H，C6H5)，7.68(d，J＝1.4Hz，1H，6-ArH)，7.92ppm(d，J＝1.4Hz，1H，2-ArH)。
(d)(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基-5′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯。向3-(1-金刚烷基)-4-苄氧基-5-甲氧基-苯基硼酸(471mg，1.20mmol)和(E)-3-(2-氯-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯(213mg，1.00mmol)在二甲氧基乙烷(7.5mL，经过脱气)中的溶液中，加入四(三苯基膦)钯(138mg，0.12mmol)和脱气的2M Na2CO3(1.5mL)。将该反应混合物回流加热(90℃油浴)28.5h，冷却至室温，用1N HCl(40mL)猝灭，并用EtOAc(110mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(16％至28％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到427mg(81％)(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基-5′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯，为米色固体，熔点181-183℃。IR 2903，2849，1711，1425，1178cm-1；1H NMRδ(CDCI3)1.36(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.71(m，6H，AdCH2)，2.04(m，3H，AdCH)，2.17(bs，6H，AdCH2)，4.00(s，3H，OCH3)，4.30(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，5.20(s，2H，C6H5CH2)，6.58(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，7.32-7.56(m，5H，C6H5)，7.63(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CHCO)，8.00(d，J＝1.8Hz，1H，6′-ArH)，8.15(d，J＝1.8Hz，1H，2′-ArH)，8.90ppm(s，2H，4，6-ArH)。
(e)(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-5′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯。将(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′-苄氧基-5′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯(180mg，0.34mmol)、1.0M三溴化硼(1.37mmol)在CH2Cl2(1.4mL)和CH2Cl2(5.0mL)中的溶液在氩下在-78℃搅拌2h，用水(20mL)和饱和NaHCO3(10mL)猝灭，并用EtOAc(100mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(20％至25％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到117mg(78％)(E)-3-[2-(3′-(1-金刚烷基)-4′-羟基-5′-甲氧基苯基)-5-嘧啶基]-2-丙烯酸乙酯，为黄色固体，熔点173-175℃。IR 3495，2903，2848，1710，1419，1182cm-1；1H NMRδ(CDCI3)1.36(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.80(m，6H，AdCH2)，2.11(m，3H，AdCH)，2.21(bs，6H，AdCH2)，4.02(s，3H，OCH3)，4.30(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，6.37(s，1H，OH)，6.55(d，J＝16.5Hz，1H，CH＝CHCO)，7.63(d，J＝16.5Hz，1H，CH＝CHCO)，7.91(d，J＝1.8Hz，1H，6′-ArH)，8.12(d，J＝1.8Hz，1H，2′-ArH)，8.86ppm(s，2H，4，6-ArH)。
实施例14.合成化合物29和化合物30：(E)-3-(2-{3′-[1-(4-氧代金刚烷基)]-4′-羟苯基}-5-嘧啶基)-2-丙烯酸(化合物29)和(E)-3-(2-{3′-[1-(4，4-二羟基金刚烷基)]-4′-羟苯基}-5-嘧啶基)-2-丙烯酸(化合物30)。向(E)-3-(2-{3′-[1-(4-氧代金刚烷基)]-4′-羟苯基}-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯(70mg，0.17mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中，加入5M NaOH水溶液(0.17mL，0.84mmol)。将该混合物在82℃在氩下加热50min，冷却至室温，用2N HCl(20mL)猝灭，并用EtOAc(120mL)萃取。合并在低温浓缩萃取物以后得到的残余物和从H2O层收集的固体，并结晶(MeOH)，得到47mg(71％)(E)-3-(2-{3′-[1-(4-氧代金刚烷基)]-4′-羟苯基}-5-嘧啶基)-2-丙烯酸(化合物29)和(E)-3-(2-{3′-[1-(4，4-二羟基金刚烷基)]-4′-羟苯基}-5-嘧啶基)-2-丙烯酸(化合物30)的混合物，为黄色粉末。IR 3400，2933，2859，1709，1418，1209cm-1；1H NMRδ(CDCI3+CD3OD)1.49-2.49(m，13H，AdCH和AdCH2)，6.40(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，6.65或6.68(d，J＝7.9Hz或8.5Hz，1H，5′-ArH)，7.43(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.90或7.93(dd，J＝1.8Hz，7.9Hz或1.8Hz，8.5Hz，1H，6′-ArH)，8.12(d，J＝1.8Hz，1H，2′-ArH)，8.68ppm(s，2H，4，6-ArH)。(化合物29)：C23H22N2O4的LC/MS计算值m/z 391，实测值391。(化合物30)：C23H24N2O5的LC/MS计算值m/z 408，实测值408。
如下制备中间体(E)-3-(2-{3′-[1-(4-氧代金刚烷基)]-4′-羟苯基}-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯。
(a)5-(5′-溴-2′-羟苯基)-2-金刚烷酮。将4-溴苯酚(3.11g，17.98mmol)、5-羟基-2-金刚烷酮(2.49g，14.98mmol)和MeSO3H(7mL)的混合物在80℃(油浴)搅拌加热5h。用H2O(40mL)猝灭得到的混合物，并过滤。用H2O、5％NaHCO3和CH2Cl2洗涤沉淀物几次，并干燥，得到3.76g(79％)5-(5′-溴-2′-羟苯基)-2-金刚烷酮，为白色固体，熔点287-289℃。1H NMRδ(DMSO-d6)1.82-2.45(m，13H，AdCH和AdCH2)，6.71(d，J＝8.5Hz，1H，3′-ArH)，7.10(d，J＝2.4Hz，1H，4′-ArH)，7.16(dd，J＝2.4Hz，8.5Hz，1H，6′-ArH)，9.78(s，1H，OH)。
(b)5-(2′-苄氧基-5′-溴苯基)-2-金刚烷酮。向5-(5′-溴-2′-羟苯基)-2-金刚烷酮(4.57g，14.20mmol)在丙酮(42mL)中的溶液中，加入苄基溴(2.67g，15.6mmol)，随后加入K2CO3(2.65g，19.2mmol)。将该混合物在氩下回流搅拌25.7h。去除丙酮，并加入2N HCl(60mL)。用EtOAc(250mL)萃取得到的混合物，用盐水洗涤有机层，并干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(14％至20％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到5.48g(94％)5-(2′-苄氧基-5′-溴苯基)-2-金刚烷酮，为白色固体，熔点163-165℃。1H NMR(DMSO-d6)δ1.79-2.42(m，13H，AdCH和AdCH2)，5.12(s，2H，C6H5CH2)，7.03(d，J＝8.5Hz，1H，3′-ArH)，7.21(d，J＝2.4Hz，1H，4′-ArH)，7.29-7.44ppm(m，6H，6′-ArH，C6H5)。
(c)4-苄氧基-3-[1-(4-氧代金刚烷基)]苯基溴的缩酮。使用Dean-Stark装置，将5-(2′-苄氧基-5′-溴苯基)-2-金刚烷酮(5.47g，13.30mmol)、乙二醇(0.96mL，17.30mmol)和对甲苯磺酸一水合物(140mg)在苯(55mL)中的混合物在回流温度(110℃油浴)搅拌24.25h，冷却至室温，并用EtOAc(150mL)稀释。洗涤(1N NaOH和盐水)溶液，并干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(12％至14％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到5.77g(95％)4-苄氧基-3-[1-(4-氧代金刚烷基)]苯基溴的乙二醇缩酮，为白色固体，熔点90-91℃1H NMR(CDCl3)δ1.54-2.35(m，13H，AdCH和AdCH2)，3.91(m，4H，CH2CH2)，5.07(s，2H，C6H5CH2)，6.78(d，J＝8.5Hz，1H，3′-ArH)，7.23(dd，J＝2.4Hz，8.5Hz，1H，6′-ArH)，7.31(d，J＝2.4Hz，1H，4′-ArH)，7.30-7.48ppm(m，5H，C6H5)。
(d)4-苄氧基-3-[1-(4-氧代金刚烷基)]苯基硼酸的缩酮。在氩下向在-78℃(干冰/丙酮浴)的4-苄氧基-3-[1-(4-氧代金刚烷基)]苯基溴的缩酮(5)(2.00g，4.39mmol)在THF(6.5mL)中的溶液中，一次性加入在己烷(4.7mL)中的1.6M n-BuLi(7.5mmol)。将所述混合物在-78℃搅拌15min。加入硼酸三异丙酯(3.04mL，13.20mmol)，将得到的溶液在-78℃搅拌20min，然后在搅拌下温热至室温过夜。用3N HCl(40mL)猝灭所述混合物，然后用EtOAc(100和70mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机萃取物，并干燥。减压去除溶剂，洗涤(苯和己烷)残余物，并干燥，得到1.3g(71％)4-苄氧基-3-[1-(4-氧代金刚烷基)]苯基硼酸的乙二醇缩酮，为白色固体，熔点161-165℃。1H NMR(CDCl3)δ1.61-2.49(m，13H，AdCH和AdCH2)，3.93(m，4H，CH2CH2)，5.21(s，2H，C6H5CH2)，7.05(d，J＝8.0Hz，1H，5-ArH)，7.31-7.55ppm(m，5H，C6H5)，8.02(dd，J＝1.2Hz，8.0Hz，1H，6-ArH)，8.16(d，J＝1.2Hz，1H，2-ArH)。
(e)(E)-3-(2-{4′-苄氧基-3′-[1-(4-氧代金刚烷基)]苯基}-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯的缩酮。向4-苄氧基-3-[1-(4-氧代金刚烷基)]苯基硼酸的乙二醇缩酮(202mg，0.48mmol)和(E)-3-(2-氯-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯(85mg，0.40mmol)在二甲氧基乙烷(4mL，经过脱气)中的溶液中，加入四(三苯基膦)钯(55mg，0.05mmol)和脱气的2M Na2CO3(0.8mL)。将该反应混合物回流加热(90℃油浴)20h，冷却至室温，用H2O(25mL)猝灭，并用EtOAc(210mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(16％至25％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到148mg(67％)(E)-3-(2-{4′-苄氧基-3′-[1-(4-氧代金刚烷基)]苯基}-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯的缩酮，为米色固体，熔点60-63℃。IR 2906，2860，1711，1434，1222cm-1；1H NMRδ(CDCI3)1.36(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.62-2.48(m，13H，AdCH和AdCH2)，3.93(m，4H，CH2CH2)，4.30(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，5.21(s，2H，C6H5CH2)，6.56(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，7.05(d，J＝8.5Hz，1H，5′-ArH)，7.32-7.55ppm(m，5H，C6H5)，7.63(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，8.30(d，J＝8.5Hz，1H，6′-ArH)，8.45(s，1H，2′-ArH)，8.86ppm(s，2H，4，6-ArH)。
(f)(E)-3-(2-{3′-[1-(4-氧代金刚烷基)]-4′-羟苯基}-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯。将(E)-3-(2-{4′-苄氧基-3′-[1-(4-氧代金刚烷基)]苯基}-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯的缩酮(60mg，0.11mmol)、1.0M三溴化硼(0.43mmol)在CH2Cl2(0.43mL)和CH2Cl2(2.0mL)中的溶液在氩下在-78℃搅拌2h，用水(25mL)猝灭，并用EtOAc(90mL)萃取。洗涤(盐水)萃取物，并干燥。减压去除溶剂以后，在硅胶(16％至33％的EtOAc/己烷)上纯化残余物，得到36mg(88％)(E)-3-(2-{3′-[1-(4-氧代金刚烷基)]-4′-羟苯基}-5-嘧啶基)-2-丙烯酸乙酯，为米色固体，熔点231-234℃。IR 3312，2927，2858，1717，1443，1185cm-1；1H NMRδ(CDCI3)1.36(t，J＝7.2Hz，3H，OCH2CH3)，1.99-2.70(m，13H，AdCH和AdCH2)，4.31(q，J＝7.2Hz，2H，OCH2CH3)，6.28(s，1H，OH)，6.56(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，6.80(d，J＝8.5Hz，1H，5′-ArH)，7.63(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CHCO)，8.22(dd，J＝1.8Hz，8.5Hz，1H，6′-ArH)，8.38(d，J＝1.8Hz，1H，2′-ArH)，8.87ppm(s，2H，4，6-ArH)。
实施例15.
下面举例说明用于人类的治疗性或预防性用途的、含有式I化合物(‘化合物X’)的代表性药物剂型。
Figure BDA00002047084200611
Figure BDA00002047084200612
Figure BDA00002047084200613
Figure BDA00002047084200614
Figure BDA00002047084200622
Figure BDA00002047084200623
通过药学领域熟知的常规规程，可以获得上述制剂。
所有出版物、专利和专利文件均通过引用结合到本文中，好象单独地通过引用结合到本文中。参照不同的具体的且优选的实施方案和技术，已经描述了本发明。但是，应当理解，可以做出许多改变和修改，并保持在本发明的精神和范围内。

Claims (61)

1.式I化合物或其盐：
Figure FDA00002047084100011
其中：
Z1是CR4，Z2是CR5，Z3是CR6，且Z4是N；或Z1是N，Z2是CR5，Z3是CR6，且Z4是N；或Z1是CR4，Z2是N，Z3是CR6，且Z4是N；或Z1是CR4，Z2是CR5，Z3是N，且Z4是N；或Z1是CR4，Z2是N，Z3是CR6，且Z4是CR7；或Z1是CR4，Z2是N，Z3是N，且Z4是CR7；
R1是金刚烷基、降金刚烷基、二环辛基或(C2-C10)炔基，其中R1的任意金刚烷基、降金刚烷基、二环辛基或(C2-C10)炔基可以任选地被一个或多个基团取代，所述一个或多个基团选自-OH、氧代(＝O)、＝CH2和-NH2；
R2是-OH、-OC(＝O)Ra、-OC(＝O)NRbRc或-OC(＝O)ORa，且R3是H、卤代、-CN、-NO2、(C1-C6)烷基、-OH、(C1-C3)烷氧基、-NRdRe、-CO2Rf、-C(＝O)Rf、-NRf(C＝O)Rg、-C(＝O)NRdRe，其中R3的任意烷基或烷氧基可以任选地被一个或多个基团取代，所述一个或多个基团选自卤代、氧代、羟基、-NRz1Rz2和(C1-C3)烷氧基；或R2和R3与它们连接的原子一起形成亚烷基二氧环，其中亚烷基二氧环任选地被一个或多个(C1-C6)烷基取代；
R3a是H、卤代、-OH、-(C1-C6)烷基或(C1-C3)烷氧基；
A是-CRh＝CRh-或-NRiCRjRk-；
R4是H、卤代、-CN、-NO2、-N3、-OH、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、-NRmRn、-NRo(C＝O)Rp或-CO2Ro，其中R4的任意烷基或烷氧基可以任选地被一个或多个基团取代，所述一个或多个基团选自卤代、氧代、羟基、-CN、-NRz1Rz2、-C(＝O)NRz1Rz2和(C1-C3)烷氧基；
R5是H或F；
R6是H或F；
R7是H、卤代、-CN、-NO2、-N3、-OH、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、-NRmRn、-NRo(C＝O)Rp或-CO2Ro，其中R4的任意烷基或烷氧基可以任选地被一个或多个基团取代，所述一个或多个基团选自卤代、氧代、羟基、-CN、-NRz1Rz2、-C(＝O)NRz1Rz2和(C1-C3)烷氧基；
R8是H、(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；
每个Ra独立地是(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；
Rb和Rc各自独立地选自H或(C1-C6)烷基；或Rb和Rc与它们连接的氮一起形成吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基、氮杂环丁烷子基、吗啉代或硫代吗啉代；
Rd和Re各自独立地是H或(C1-C6)烷基；或Rd和Re与它们连接的氮一起形成吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基、氮杂环丁烷子基、吗啉代或硫代吗啉代；
每个Rf独立地是H、(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；
每个Rg独立地是(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；
每个Rh独立地是H或F；
每个Ri独立地是H或(C1-C6)烷基；
Rj和Rk各自独立地是H或(C1-C6)烷基；
Rm和Rn各自独立地是H或(C1-C6)烷基；或Rm和Rn与它们连接的氮一起形成吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基、氮杂环丁烷子基、吗啉代或硫代吗啉代；
每个Ro独立地是H、(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；
每个Rp独立地是(C1-C6)烷基、芳基(C1-C6)烷基或芳基；且
Rz1和Rz2各自独立地选自H或(C1-C6)烷基；或Rz1和Rz2与它们连接的氮一起形成吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基、氮杂环丁烷子基、吗啉代或硫代吗啉代。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中Z1是N，Z2是CR5，Z3是CR6，且Z4是N。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中Z1是CR4，Z2是CR5，Z3是CR6，且Z4是N。
4.根据权利要求1或权利要求3所述的化合物，其中R4是H或卤代。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中R5是H。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中R6是H。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中Z1是CR4，Z2是N，Z3是CR6，且Z4是N。
8.根据权利要求7所述的化合物，其中R4是H或卤代。
9.根据权利要求7或权利要求8所述的化合物，其中R6是H。
10.根据权利要求1所述的化合物，其中Z1是CR4，Z2是CR5，Z3是N，且Z4是N。
11.根据权利要求10所述的化合物，其中R4是H或卤代。
12.根据权利要求10或权利要求11所述的化合物，其中R5是H。
13.根据权利要求1所述的化合物，其中Z1是CR4，Z2是N，Z3是CR6，且Z4是CR7。
14.根据权利要求13所述的化合物，其中R4是H或卤代。
15.根据权利要求13或权利要求14所述的化合物，其中R7是H或卤代。
16.根据权利要求13-15中任一项所述的化合物，其中R6是H。
17.根据权利要求1所述的化合物，其中Z1是CR4，Z2是N，Z3是N，且Z4是CR7。
18.根据权利要求17所述的化合物，其中R4是H或卤代。
19.根据权利要求17或权利要求18所述的化合物，其中R7是H或卤代。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的化合物，其中R1是金刚烷基，其中R1的任意金刚烷基可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自-OH和氧代(＝O)。
21.根据权利要求1-19中任一项所述的化合物，其中R1是金刚烷基、二环辛基或降金刚烷基。
22.根据权利要求1-19中任一项所述的化合物，其中R1是金刚烷基。
23.根据权利要求1-19中任一项所述的化合物，其中R1是：
Figure FDA00002047084100041
24.根据权利要求1-23中任一项所述的化合物，其中R2是-OH或-OC(＝O)Ra。
25.根据权利要求1-23中任一项所述的化合物，其中Ra是(C1-C6)烷基。
26.根据权利要求1-23中任一项所述的化合物，其中Ra是CH3。
27.根据权利要求1-23中任一项所述的化合物，其中R2是-OH。
28.根据权利要求1-27中任一项所述的化合物，其中R3是H或(C1-C3)烷氧基。
29.根据权利要求1-27中任一项所述的化合物，其中R3是H。
30.根据权利要求1-29中任一项所述的化合物，其中R3a是H、-(C1-C6)烷基或(C1-C3)烷氧基。
31.根据权利要求1-29中任一项所述的化合物，其中R3a是H。
32.根据权利要求1-27中任一项所述的化合物，其中R2和R3与它们连接的原子一起形成亚烷基二氧环，其中所述亚烷基二氧环任选地被一个或多个(C1-C6)烷基取代。
33.根据权利要求1-27中任一项所述的化合物，其中R2和R3与它们连接的原子一起形成亚甲基二氧环。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的化合物，其中A是-CRh＝CRh-。
35.根据权利要求1-33中任一项所述的化合物，其中Rh是H。
36.根据权利要求1-33中任一项所述的化合物，其中R8是H或(C1-C6)烷基。
37.根据权利要求1-33中任一项所述的化合物，其中R8是H。
38.化合物
Figure FDA00002047084100051
或其盐。
39.一种组合物，其包含在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的稀释剂或载体。
40.一种用于诱导细胞的细胞死亡或细胞凋亡的方法，所述方法包括：使所述细胞在体外或在体内接触有效量的在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或其盐。
41.一种用于在需要这种治疗的哺乳动物中诱导细胞凋亡或细胞死亡的方法，所述方法包括：给所述哺乳动物施用有效量的在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或其药学上可接受的盐。
42.一种用于活化细胞中的一种或多种天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶的方法，所述方法包括：使所述细胞在体外或在体内接触有效量的在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或其盐。
43.一种用于在需要这种治疗的哺乳动物中活化一种或多种天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶的方法，所述方法包括：给所述哺乳动物施用有效量的在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或其药学上可接受的盐。
44.根据权利要求42或权利要求43所述的方法，其中所述一种或多种天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶包括天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3或天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9。
45.一种用于抑制癌细胞生长的方法，所述方法包括：使所述癌细胞在体外或在体内接触有效量的在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或其盐。
46.一种用于治疗哺乳动物的癌症的方法，所述方法包括：给所述哺乳动物施用有效量的在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或药学上可接受的盐。
47.根据权利要求45或权利要求46所述的方法，其中所述癌症是肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌或白血病。
48.根据权利要求45或权利要求46所述的方法，其中所述癌症是白血病。
49.根据权利要求47或权利要求48所述的方法，其中所述白血病是急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病或慢性髓性白血病。
50.一种在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于医学治疗。
51.在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或其药学上可接受的盐用于生产药剂的用途，所述药剂可用于治疗哺乳动物的癌症。
52.一种在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于预防性地或治疗性地治疗哺乳动物的癌症。
53.根据权利要求51或权利要求52所述的用途，其中所述癌症是肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌或白血病。
54.根据权利要求51或权利要求52所述的用途，其中所述癌症是白血病。
55.根据权利要求53或权利要求54所述的用途，其中所述白血病是急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病或慢性髓性白血病。
56.一种用于调节细胞的SHP的方法，所述方法包括：使所述细胞在体外或在体内接触有效量的在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或其盐。
57.一种用于在需要这种治疗的哺乳动物中调节SHP的方法，所述方法包括：给所述哺乳动物施用有效量的在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或其药学上可接受的盐。
58.在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或其药学上可接受的盐用于生产药剂的用途，所述药剂可用于调节哺乳动物的SHP。
59.一种用于诱导胰腺癌干细胞的细胞死亡或细胞凋亡的方法，所述方法包括：使所述细胞在体外或在体内接触有效量的在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或其盐。
60.一种用于在需要这种治疗的哺乳动物中诱导胰腺癌干细胞的细胞死亡或细胞凋亡的方法，所述方法包括：给所述哺乳动物施用有效量的在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或其药学上可接受的盐。
61.在权利要求1-38中的任一项中所述的化合物或其药学上可接受的盐用于生产药剂的用途，所述药剂可用于在哺乳动物中诱导胰腺癌干细胞的细胞死亡或细胞凋亡。
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