PL204231B1 - Zastosowanie mutanta chemokiny CC, kompozycja farmaceutyczna do leczenia stwardnienia rozsianego, skrócona i zmutowana ludzka RANTES i sposób jej wytwarzania, cząsteczka DNA i zawierający ją wektor ekspresyjny oraz komórka gospodarza - Google Patents
Zastosowanie mutanta chemokiny CC, kompozycja farmaceutyczna do leczenia stwardnienia rozsianego, skrócona i zmutowana ludzka RANTES i sposób jej wytwarzania, cząsteczka DNA i zawierający ją wektor ekspresyjny oraz komórka gospodarzaInfo
- Publication number
- PL204231B1 PL204231B1 PL362350A PL36235001A PL204231B1 PL 204231 B1 PL204231 B1 PL 204231B1 PL 362350 A PL362350 A PL 362350A PL 36235001 A PL36235001 A PL 36235001A PL 204231 B1 PL204231 B1 PL 204231B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- ala
- cheese
- rantes
- mutant
- pro
- Prior art date
Links
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 title claims abstract description 22
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 title abstract description 30
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 title abstract description 30
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 claims abstract description 108
- 102000001327 Chemokine CCL5 Human genes 0.000 claims abstract description 108
- 102000001902 CC Chemokines Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108010040471 CC Chemokines Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 15
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 7
- 101000797762 Homo sapiens C-C motif chemokine 5 Proteins 0.000 claims description 7
- 102000045341 human CCL5 Human genes 0.000 claims description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 6
- 102100031092 C-C motif chemokine 3 Human genes 0.000 claims description 5
- 101710155856 C-C motif chemokine 3 Proteins 0.000 claims description 5
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 5
- 101710155855 C-C motif chemokine 4 Proteins 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 claims description 2
- 102100031102 C-C motif chemokine 4 Human genes 0.000 claims 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 21
- 230000035772 mutation Effects 0.000 abstract description 9
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 abstract description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 abstract description 6
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 117
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 38
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 37
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 36
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 30
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 20
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 20
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 17
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 16
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 14
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 14
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 14
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 12
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 12
- QJUDRFBUWAGUSG-SRVKXCTJSA-N Cys-Cys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)N QJUDRFBUWAGUSG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 11
- QMKFDEUJGYNFMC-AVGNSLFASA-N Leu-Pro-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O QMKFDEUJGYNFMC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 11
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 11
- YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 10
- CWSIBTLMMQLPPZ-FXQIFTODSA-N Val-Cys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C(C)C)N CWSIBTLMMQLPPZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 10
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 10
- IIKJNQWOQIWWMR-CIUDSAMLSA-N Leu-Cys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N IIKJNQWOQIWWMR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 9
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- PLTGTJAZQRGMPP-FXQIFTODSA-N Asn-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CC(N)=O PLTGTJAZQRGMPP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 8
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 8
- 108010010430 asparagine-proline-alanine Proteins 0.000 description 8
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 8
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 8
- UCIYCBSJBQGDGM-LPEHRKFASA-N Ala-Arg-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N UCIYCBSJBQGDGM-LPEHRKFASA-N 0.000 description 7
- YUOXLJYVSZYPBJ-CIUDSAMLSA-N Asn-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YUOXLJYVSZYPBJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 7
- RSMZEHCMIOKNMW-GSSVUCPTSA-N Asp-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RSMZEHCMIOKNMW-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 7
- VLIJYPMATZSOLL-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Cys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)CN VLIJYPMATZSOLL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 7
- 108010023347 Met- RANTES Proteins 0.000 description 7
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 7
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 7
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 7
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 7
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 7
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 7
- OEVCHROQUIVQFZ-YTLHQDLWSA-N Ala-Thr-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OEVCHROQUIVQFZ-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 6
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N Phe-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)O MHNBYYFXWDUGBW-RPTUDFQQSA-N 0.000 description 6
- OIDKVWTWGDWMHY-RYUDHWBXSA-N Pro-Tyr Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=C(O)C=C1 OIDKVWTWGDWMHY-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 6
- 108010079317 prolyl-tyrosine Proteins 0.000 description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100031172 C-C chemokine receptor type 1 Human genes 0.000 description 5
- 101710149814 C-C chemokine receptor type 1 Proteins 0.000 description 5
- 102220573491 C-C motif chemokine 7_K45A_mutation Human genes 0.000 description 5
- YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N Glu-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 5
- PMSDOVISAARGAV-FHWLQOOXSA-N Glu-Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 PMSDOVISAARGAV-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 5
- DNEJSAIMVANNPA-DCAQKATOSA-N Lys-Asn-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O DNEJSAIMVANNPA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 5
- PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N Lys-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 5
- 101710151805 Mitochondrial intermediate peptidase 1 Proteins 0.000 description 5
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102220546973 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase E_R47A_mutation Human genes 0.000 description 5
- 102220497244 Serine-tRNA ligase, cytoplasmic_R44A_mutation Human genes 0.000 description 5
- KKHRWGYHBZORMQ-NHCYSSNCSA-N Val-Arg-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N KKHRWGYHBZORMQ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 5
- MNSSBIHFEUUXNW-RCWTZXSCSA-N Val-Thr-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N MNSSBIHFEUUXNW-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 5
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 5
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 5
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 5
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 5
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 5
- 230000028550 monocyte chemotaxis Effects 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 102220470190 Aryl hydrocarbon receptor repressor_R59A_mutation Human genes 0.000 description 4
- NTQDELBZOMWXRS-IWGUZYHVSA-N Asp-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O NTQDELBZOMWXRS-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 4
- 102100035875 C-C chemokine receptor type 5 Human genes 0.000 description 4
- 101710149870 C-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 description 4
- 102220541210 Cullin-4B_K56A_mutation Human genes 0.000 description 4
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 4
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 4
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 4
- QBGPXOGXCVKULO-BQBZGAKWSA-N Lys-Cys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O QBGPXOGXCVKULO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- BEGQVWUZFXLNHZ-IHPCNDPISA-N Lys-Lys-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 BEGQVWUZFXLNHZ-IHPCNDPISA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CMHTUJQZQXFNTQ-OEAJRASXSA-N Phe-Leu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N)O CMHTUJQZQXFNTQ-OEAJRASXSA-N 0.000 description 4
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 4
- 102220495911 Serine-tRNA ligase, cytoplasmic_K55A_mutation Human genes 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- MFEVVAXTBZELLL-GGVZMXCHSA-N Tyr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MFEVVAXTBZELLL-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 4
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 208000010726 hind limb paralysis Diseases 0.000 description 4
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 4
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 4
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 229940071127 thioglycolate Drugs 0.000 description 4
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M thioglycolate(1-) Chemical compound [O-]C(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 3
- GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N Asn-Pro Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- DWOGMPWRQQWPPF-GUBZILKMSA-N Asp-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DWOGMPWRQQWPPF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- WTHGNAAQXISJHP-AVGNSLFASA-N Met-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WTHGNAAQXISJHP-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 description 3
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 3
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N Thr-Pro-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 3
- YQMILNREHKTFBS-IHRRRGAJSA-N Val-Phe-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N YQMILNREHKTFBS-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- RTJPAGFXOWEBAI-SRVKXCTJSA-N Val-Val-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N RTJPAGFXOWEBAI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N ac1ldcw0 Chemical compound Cl.C1CN(C)CCN1C1=C(F)C=C2C(=O)C(C(O)=O)=CN3CCSC1=C32 LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002559 chemokine receptor antagonist Substances 0.000 description 3
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 3
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 3
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 208000012997 experimental autoimmune encephalomyelitis Diseases 0.000 description 3
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 3
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000002821 scintillation proximity assay Methods 0.000 description 3
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 3
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XCVRVWZTXPCYJT-BIIVOSGPSA-N Ala-Asn-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N XCVRVWZTXPCYJT-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 2
- KUDREHRZRIVKHS-UWJYBYFXSA-N Ala-Asp-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KUDREHRZRIVKHS-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 2
- OMSMPWHEGLNQOD-UWVGGRQHSA-N Asn-Phe Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OMSMPWHEGLNQOD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 2
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100021984 C-C motif chemokine 4-like Human genes 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- QFMCHXSGIZPBKG-ZLUOBGJFSA-N Cys-Ala-Asp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N QFMCHXSGIZPBKG-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- HMWBPUDETPKSSS-DCAQKATOSA-N Cys-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CS)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O HMWBPUDETPKSSS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- QYPKJXSMLMREKF-BPUTZDHNSA-N Glu-Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N QYPKJXSMLMREKF-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 2
- ODUQLUADRKMHOZ-JYJNAYRXSA-N Lys-Glu-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O ODUQLUADRKMHOZ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- VVURYEVJJTXWNE-ULQDDVLXSA-N Lys-Tyr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VVURYEVJJTXWNE-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- NOFBJKKOPKJDCO-KKXDTOCCSA-N Phe-Ala-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O NOFBJKKOPKJDCO-KKXDTOCCSA-N 0.000 description 2
- BFYHIHGIHGROAT-HTUGSXCWSA-N Phe-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BFYHIHGIHGROAT-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 2
- MWQXFDIQXIXPMS-UNQGMJICSA-N Phe-Val-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N)O MWQXFDIQXIXPMS-UNQGMJICSA-N 0.000 description 2
- WFLWKEUBTSOFMP-FXQIFTODSA-N Pro-Cys-Cys Chemical compound OC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 WFLWKEUBTSOFMP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- VOZIBWWZSBIXQN-SRVKXCTJSA-N Pro-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1)C(O)=O VOZIBWWZSBIXQN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000009809 T cell chemotaxis Effects 0.000 description 2
- IGROJMCBGRFRGI-YTLHQDLWSA-N Thr-Ala-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IGROJMCBGRFRGI-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 2
- NAXBBCLCEOTAIG-RHYQMDGZSA-N Thr-Arg-Lys Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O NAXBBCLCEOTAIG-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N Thr-Lys-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MBLJBGZWLHTJBH-SZMVWBNQSA-N Trp-Val-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 MBLJBGZWLHTJBH-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 2
- LRHBBGDMBLFYGL-FHWLQOOXSA-N Tyr-Phe-Glu Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 LRHBBGDMBLFYGL-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WPSXZFTVLIAPCN-WDSKDSINSA-N Val-Cys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O WPSXZFTVLIAPCN-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- CEKSLIVSNNGOKH-KZVJFYERSA-N Val-Thr-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O CEKSLIVSNNGOKH-KZVJFYERSA-N 0.000 description 2
- XNLUVJPMPAZHCY-JYJNAYRXSA-N Val-Val-Phe Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 XNLUVJPMPAZHCY-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 108010054812 diprotin A Proteins 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 208000010713 partial hind limb paralysis Diseases 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 2
- 238000001525 receptor binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- JNTMAZFVYNDPLB-PEDHHIEDSA-N (2S,3S)-2-[[[(2S)-1-[(2S,3S)-2-amino-3-methyl-1-oxopentyl]-2-pyrrolidinyl]-oxomethyl]amino]-3-methylpentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JNTMAZFVYNDPLB-PEDHHIEDSA-N 0.000 description 1
- XVZCXCTYGHPNEM-IHRRRGAJSA-N (2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- -1 1309 Proteins 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AAQGRPOPTAUUBM-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AAQGRPOPTAUUBM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- DKJPOZOEBONHFS-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O DKJPOZOEBONHFS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- KQFRUSHJPKXBMB-BHDSKKPTSA-N Ala-Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 KQFRUSHJPKXBMB-BHDSKKPTSA-N 0.000 description 1
- LWUWMHIOBPTZBA-DCAQKATOSA-N Ala-Arg-Lys Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O LWUWMHIOBPTZBA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- YAXNATKKPOWVCP-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asn-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YAXNATKKPOWVCP-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- XEXJJJRVTFGWIC-FXQIFTODSA-N Ala-Asn-Arg Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N XEXJJJRVTFGWIC-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WQVYAWIMAWTGMW-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N WQVYAWIMAWTGMW-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- BTYTYHBSJKQBQA-GCJQMDKQSA-N Ala-Asp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O BTYTYHBSJKQBQA-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- RCQRKPUXJAGEEC-ZLUOBGJFSA-N Ala-Cys-Cys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O RCQRKPUXJAGEEC-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- HHRAXZAYZFFRAM-CIUDSAMLSA-N Ala-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HHRAXZAYZFFRAM-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- CHFFHQUVXHEGBY-GARJFASQSA-N Ala-Lys-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N CHFFHQUVXHEGBY-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N Ala-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)N HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 101000716807 Arabidopsis thaliana Protein SCO1 homolog 1, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- ZTKHZAXGTFXUDD-VEVYYDQMSA-N Arg-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O ZTKHZAXGTFXUDD-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- HKRXJBBCQBAGIM-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Ser Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)CN=C(N)N HKRXJBBCQBAGIM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- AHPWQERCDZTTNB-FXQIFTODSA-N Arg-Cys-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)CN=C(N)N AHPWQERCDZTTNB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- BBYTXXRNSFUOOX-IHRRRGAJSA-N Arg-Cys-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O BBYTXXRNSFUOOX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- GOWZVQXTHUCNSQ-NHCYSSNCSA-N Arg-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GOWZVQXTHUCNSQ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- YBIAYFFIVAZXPK-AVGNSLFASA-N Arg-His-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O YBIAYFFIVAZXPK-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- HJDNZFIYILEIKR-OSUNSFLBSA-N Arg-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HJDNZFIYILEIKR-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N Arg-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- FIQKRDXFTANIEJ-ULQDDVLXSA-N Arg-Phe-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N FIQKRDXFTANIEJ-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- IGFJVXOATGZTHD-UHFFFAOYSA-N Arg-Phe-His Natural products NC(CCNC(=N)N)C(=O)NC(Cc1ccccc1)C(=O)NC(Cc2c[nH]cn2)C(=O)O IGFJVXOATGZTHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCSHHTFOZULVLN-SZMVWBNQSA-N Arg-Trp-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)=CNC2=C1 ZCSHHTFOZULVLN-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DQTIWTULBGLJBL-DCAQKATOSA-N Asn-Arg-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N DQTIWTULBGLJBL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- TWXZVVXRRRRSLT-IMJSIDKUSA-N Asn-Cys Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O TWXZVVXRRRRSLT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- GNKVBRYFXYWXAB-WDSKDSINSA-N Asn-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O GNKVBRYFXYWXAB-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- MQLZLIYPFDIDMZ-HAFWLYHUSA-N Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O MQLZLIYPFDIDMZ-HAFWLYHUSA-N 0.000 description 1
- YVXRYLVELQYAEQ-SRVKXCTJSA-N Asn-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N YVXRYLVELQYAEQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- JLNFZLNDHONLND-GARJFASQSA-N Asn-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N JLNFZLNDHONLND-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- FBODFHMLALOPHP-GUBZILKMSA-N Asn-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FBODFHMLALOPHP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- UYCPJVYQYARFGB-YDHLFZDLSA-N Asn-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O UYCPJVYQYARFGB-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- JNCRAQVYJZGIOW-QSFUFRPTSA-N Asn-Val-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JNCRAQVYJZGIOW-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- FKBFDTRILNZGAI-IMJSIDKUSA-N Asp-Cys Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O FKBFDTRILNZGAI-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- WXASLRQUSYWVNE-FXQIFTODSA-N Asp-Cys-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N WXASLRQUSYWVNE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- ZXRQJQCXPSMNMR-XIRDDKMYSA-N Asp-Lys-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N ZXRQJQCXPSMNMR-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- BKOIIURTQAJHAT-GUBZILKMSA-N Asp-Pro-Pro Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 BKOIIURTQAJHAT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- KNOGLZBISUBTFW-QRTARXTBSA-N Asp-Trp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O KNOGLZBISUBTFW-QRTARXTBSA-N 0.000 description 1
- NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N Asp-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 102100021277 Beta-secretase 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710150190 Beta-secretase 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100023701 C-C motif chemokine 18 Human genes 0.000 description 1
- 102100036850 C-C motif chemokine 23 Human genes 0.000 description 1
- 102100032366 C-C motif chemokine 7 Human genes 0.000 description 1
- 101710155834 C-C motif chemokine 7 Proteins 0.000 description 1
- 102100034871 C-C motif chemokine 8 Human genes 0.000 description 1
- 101710155833 C-C motif chemokine 8 Proteins 0.000 description 1
- 108700012434 CCL3 Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010082155 Chemokine CCL18 Proteins 0.000 description 1
- 102000000013 Chemokine CCL3 Human genes 0.000 description 1
- 108010055165 Chemokine CCL4 Proteins 0.000 description 1
- 102000001326 Chemokine CCL4 Human genes 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N Cys-Cys Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- RRJOQIBQVZDVCW-SRVKXCTJSA-N Cys-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CS)N RRJOQIBQVZDVCW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- JIVJQYNNAYFXDG-LKXGYXEUSA-N Cys-Thr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JIVJQYNNAYFXDG-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 206010012305 Demyelination Diseases 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000034347 Faecal incontinence Diseases 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- UTKICHUQEQBDGC-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N UTKICHUQEQBDGC-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- NCWOMXABNYEPLY-NRPADANISA-N Glu-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NCWOMXABNYEPLY-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- PABVKUJVLNMOJP-WHFBIAKZSA-N Glu-Cys Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PABVKUJVLNMOJP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- HRBYTAIBKPNZKQ-AVGNSLFASA-N Glu-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O HRBYTAIBKPNZKQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- JSIQVRIXMINMTA-ZDLURKLDSA-N Glu-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JSIQVRIXMINMTA-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- HBMRTXJZQDVRFT-DZKIICNBSA-N Glu-Tyr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HBMRTXJZQDVRFT-DZKIICNBSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 1
- UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N Gly-Arg-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- JNGHLWWFPGIJER-STQMWFEESA-N Gly-Pro-Tyr Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 JNGHLWWFPGIJER-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- LNCFUHAPNTYMJB-IUCAKERBSA-N His-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CN=CN1 LNCFUHAPNTYMJB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 101000713081 Homo sapiens C-C motif chemokine 23 Proteins 0.000 description 1
- 101001076715 Homo sapiens RNA-binding protein 39 Proteins 0.000 description 1
- WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- LRAUKBMYHHNADU-DKIMLUQUSA-N Ile-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)CC1=CC=CC=C1 LRAUKBMYHHNADU-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N L-Prolyl-L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- FJUKMPUELVROGK-IHRRRGAJSA-N Leu-Arg-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N FJUKMPUELVROGK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- CLVUXCBGKUECIT-HJGDQZAQSA-N Leu-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CLVUXCBGKUECIT-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- PIHFVNPEAHFNLN-KKUMJFAQSA-N Leu-Cys-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N PIHFVNPEAHFNLN-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N Leu-Gly-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N Leu-Leu-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DAYQSYGBCUKVKT-VOAKCMCISA-N Leu-Thr-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O DAYQSYGBCUKVKT-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- YRWCPXOFBKTCFY-NUTKFTJISA-N Lys-Ala-Trp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N YRWCPXOFBKTCFY-NUTKFTJISA-N 0.000 description 1
- ALSRJRIWBNENFY-DCAQKATOSA-N Lys-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ALSRJRIWBNENFY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- GAOJCVKPIGHTGO-UWVGGRQHSA-N Lys-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O GAOJCVKPIGHTGO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- SJNZALDHDUYDBU-IHRRRGAJSA-N Lys-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O SJNZALDHDUYDBU-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- YEIYAQQKADPIBJ-GARJFASQSA-N Lys-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O YEIYAQQKADPIBJ-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- ZXEUFAVXODIPHC-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Asn Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ZXEUFAVXODIPHC-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ULUQBUKAPDUKOC-GVXVVHGQSA-N Lys-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ULUQBUKAPDUKOC-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- OWRUUFUVXFREBD-KKUMJFAQSA-N Lys-His-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OWRUUFUVXFREBD-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- JYXBNQOKPRQNQS-YTFOTSKYSA-N Lys-Ile-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JYXBNQOKPRQNQS-YTFOTSKYSA-N 0.000 description 1
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- NJNRBRKHOWSGMN-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NJNRBRKHOWSGMN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- MUXNCRWTWBMNHX-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MUXNCRWTWBMNHX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- YUAXTFMFMOIMAM-QWRGUYRKSA-N Lys-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O YUAXTFMFMOIMAM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N Lys-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N Lys-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- QVTDVTONTRSQMF-WDCWCFNPSA-N Lys-Thr-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QVTDVTONTRSQMF-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- XGZDDOKIHSYHTO-SZMVWBNQSA-N Lys-Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 XGZDDOKIHSYHTO-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- MYTOTTSMVMWVJN-STQMWFEESA-N Lys-Tyr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MYTOTTSMVMWVJN-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- FPQMQEOVSKMVMA-ACRUOGEOSA-N Lys-Tyr-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O FPQMQEOVSKMVMA-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- DRRXXZBXDMLGFC-IHRRRGAJSA-N Lys-Val-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN DRRXXZBXDMLGFC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- WEDDFMCSUNNZJR-WDSKDSINSA-N Met-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WEDDFMCSUNNZJR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108010087066 N2-tryptophyllysine Proteins 0.000 description 1
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- KNPVDQMEHSCAGX-UWVGGRQHSA-N Phe-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 KNPVDQMEHSCAGX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- FINLZXKJWTYYLC-ACRUOGEOSA-N Phe-His-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FINLZXKJWTYYLC-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- DOXQMJCSSYZSNM-BZSNNMDCSA-N Phe-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DOXQMJCSSYZSNM-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- OOLOTUZJUBOMAX-GUBZILKMSA-N Pro-Ala-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OOLOTUZJUBOMAX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N Pro-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LNLNHXIQPGKRJQ-SRVKXCTJSA-N Pro-Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 LNLNHXIQPGKRJQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- SMCHPSMKAFIERP-FXQIFTODSA-N Pro-Asn-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 SMCHPSMKAFIERP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- MTHRMUXESFIAMS-DCAQKATOSA-N Pro-Asn-Lys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O MTHRMUXESFIAMS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ZCXQTRXYZOSGJR-FXQIFTODSA-N Pro-Asp-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZCXQTRXYZOSGJR-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HXNYBZQLBWIADP-WDSKDSINSA-N Pro-Cys Chemical compound OC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HXNYBZQLBWIADP-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- LHALYDBUDCWMDY-CIUDSAMLSA-N Pro-Glu-Ala Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1)C(O)=O LHALYDBUDCWMDY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZTVCLZLGHZXLOT-ULQDDVLXSA-N Pro-Glu-Trp Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)O ZTVCLZLGHZXLOT-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- KLSOMAFWRISSNI-OSUNSFLBSA-N Pro-Ile-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 KLSOMAFWRISSNI-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- YXHYJEPDKSYPSQ-AVGNSLFASA-N Pro-Leu-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 YXHYJEPDKSYPSQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- MCWHYUWXVNRXFV-RWMBFGLXSA-N Pro-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 MCWHYUWXVNRXFV-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 1
- XQPHBAKJJJZOBX-SRVKXCTJSA-N Pro-Lys-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XQPHBAKJJJZOBX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WOIFYRZPIORBRY-AVGNSLFASA-N Pro-Lys-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WOIFYRZPIORBRY-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- KIDXAAQVMNLJFQ-KZVJFYERSA-N Pro-Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](NC(=O)[C@@H]1CCCN1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KIDXAAQVMNLJFQ-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- VEUACYMXJKXALX-IHRRRGAJSA-N Pro-Tyr-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VEUACYMXJKXALX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 102100023361 SAP domain-containing ribonucleoprotein Human genes 0.000 description 1
- KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N Ser-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- OQSQCUWQOIHECT-YJRXYDGGSA-N Ser-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OQSQCUWQOIHECT-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N Thr-Ala-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- ZUXQFMVPAYGPFJ-JXUBOQSCSA-N Thr-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN ZUXQFMVPAYGPFJ-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- JMZKMSTYXHFYAK-VEVYYDQMSA-N Thr-Arg-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)O JMZKMSTYXHFYAK-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- UQTNIFUCMBFWEJ-IWGUZYHVSA-N Thr-Asn Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O UQTNIFUCMBFWEJ-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 1
- DGOJNGCGEYOBKN-BWBBJGPYSA-N Thr-Cys-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O DGOJNGCGEYOBKN-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N Thr-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- GVMXJJAJLIEASL-ZJDVBMNYSA-N Thr-Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GVMXJJAJLIEASL-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- GRIUMVXCJDKVPI-IZPVPAKOSA-N Thr-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O GRIUMVXCJDKVPI-IZPVPAKOSA-N 0.000 description 1
- CKHWEVXPLJBEOZ-VQVTYTSYSA-N Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O CKHWEVXPLJBEOZ-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- XGFYGMKZKFRGAI-RCWTZXSCSA-N Thr-Val-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N XGFYGMKZKFRGAI-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- PEEAINPHPNDNGE-JQWIXIFHSA-N Trp-Asp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 PEEAINPHPNDNGE-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N Trp-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- GFZQWWDXJVGEMW-ULQDDVLXSA-N Tyr-Arg-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O GFZQWWDXJVGEMW-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- KOVXHANYYYMBRF-IRIUXVKKSA-N Tyr-Glu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N)O KOVXHANYYYMBRF-IRIUXVKKSA-N 0.000 description 1
- JQOMHZMWQHXALX-FHWLQOOXSA-N Tyr-Tyr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JQOMHZMWQHXALX-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- YFOCMOVJBQDBCE-NRPADANISA-N Val-Ala-Glu Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N YFOCMOVJBQDBCE-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- PVPAOIGJYHVWBT-KKHAAJSZSA-N Val-Asn-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O PVPAOIGJYHVWBT-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 1
- COSLEEOIYRPTHD-YDHLFZDLSA-N Val-Asp-Tyr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 COSLEEOIYRPTHD-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- IRLYZKKNBFPQBW-XGEHTFHBSA-N Val-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O IRLYZKKNBFPQBW-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- KZKMBGXCNLPYKD-YEPSODPASA-N Val-Gly-Thr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KZKMBGXCNLPYKD-YEPSODPASA-N 0.000 description 1
- JVYIGCARISMLMV-HOCLYGCPSA-N Val-Gly-Trp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N JVYIGCARISMLMV-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 1
- QIVPZSWBBHRNBA-JYJNAYRXSA-N Val-Pro-Phe Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O QIVPZSWBBHRNBA-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- PGQUDQYHWICSAB-NAKRPEOUSA-N Val-Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C(C)C)N PGQUDQYHWICSAB-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- BGTDGENDNWGMDQ-KJEVXHAQSA-N Val-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O BGTDGENDNWGMDQ-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- AEFJNECXZCODJM-UWVGGRQHSA-N Val-Val-Gly Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC([O-])=O AEFJNECXZCODJM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000010399 Wasting Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N benzamidine Chemical compound NC(=N)C1=CC=CC=C1 PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002059 diagnostic imaging Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000009112 empiric therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 230000007396 fibrous gliosis Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010020688 glycylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 210000004884 grey matter Anatomy 0.000 description 1
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000006594 latent virus infection Effects 0.000 description 1
- 108010090333 leucyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 1
- 208000027905 limb weakness Diseases 0.000 description 1
- 231100000861 limb weakness Toxicity 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- AEUKDPKXTPNBNY-XEYRWQBLSA-N mcp 2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 AEUKDPKXTPNBNY-XEYRWQBLSA-N 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000001259 mesencephalon Anatomy 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000001328 optic nerve Anatomy 0.000 description 1
- YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N oxidized gamma-L-glutamyl-L-cysteinylglycine Natural products OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CSSCC(C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CCC(N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 210000004197 pelvis Anatomy 0.000 description 1
- 210000002975 pon Anatomy 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 108010025826 prolyl-leucyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000005987 sulfurization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/521—Chemokines
- C07K14/523—Beta-chemokines, e.g. RANTES, I-309/TCA-3, MIP-1alpha, MIP-1beta/ACT-2/LD78/SCIF, MCP-1/MCAF, MCP-2, MCP-3, LDCF-1, LDCF-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie mutanta chemokiny CC, kompozycja farmaceutyczna do leczenia stwardnienia rozsianego, skrócona i zmutowana ludzka RANTES i sposób jej wytwarzania, cząsteczka DNA i zawierający ją wektor ekspresyjny oraz komórka gospodarza. Niniejszy wynalazek dotyczy w ogólności mutantów chemokin CC, które zawierają przynajmniej dwie mutacje w pętli 40-tych (ang. 40's loop) i które w odniesieniu do cząsteczki typu dzikiego mają obniżoną aktywność wiązania GAG. Stwierdzono, że takie zmutowane chemokiny są skuteczne w leczeniu stwardnienia rozsianego (MS) oraz innych chorób demielinizacyjnych.
Chemokiny tworzą rodzinę małych cytokin pro-zapalnych o właściwościach chemotaktycznych i aktywuj ą cych wobec leukocytów. W zależ noś ci od poł o ż enia pierwszych konserwatywnych cystein, rodzina chemokin może być podzielona na chemokiny C-C, C-X-C i C-X3-C (Baggiolini M. i wsp., Adv. Immunol. 1994, 55: 97-179; Baggiolini M. i wsp., Annu. Rev. Immunol. 1997, 15: 675-705; Taub D. i wsp., Cytokine Growth Factor Rev. 1996, 7 (4) : 355-76).
Wiele cytokin C-X-C, takich jak interleukina 8 (IL-8), wykazuje właściwości chemotaktyczne wobec neutrofili, natomiast chemokiny C-C są aktywne wobec różnych leukocytów, w tym również monocytów, limfocytów, eozynofili, bazofili, i komórek NK i komórek dendrytycznych.
NH2-końcowa domena chemokin jest zaangażowana w wiązanie receptora i obróbka końca NH2 możne albo aktywować chemokiny albo doprowadzić do całkowitej utraty ich aktywności.
N-końcowe warianty syntetycznych chemokin C-C zostały zbadane pod względem ich aktywności jako inhibitorów lub antagonistów naturalnie występujących form. MCP-1, MCP-3 i RANTES nie zawierające 8 do 9 aminokwasów na końcu NH2 są nieaktywne wobec monocytów i są użyteczne jako antagoniści receptora (Gong J.H. i wsp., J. Exp. Med. 1995, 181 (2): 631-40 oraz Gong J.H. i wsp., J. Biol . Chem. 1996, 271 (18): 10521-7).
Wydłużenie RANTES o jedną metioninę powoduje prawie całkowitą dezaktywację cząsteczki i Met-RANTES zachowuje się jak antagonista wł a ś ciwej czą steczki (Proudfoot A.E. i wsp., J. Biol. Chem. 2 luty 1996; 271 (5): 2599-603).
WO 99/16877 odnosi się do RANTES skróconych od końca aminowego, gdzie brakuje N-końcowych aminokwasów odpowiadających pozycjom aminokwasowym 1, 1-2, 1-3 lub 1-4 naturalnie występującej RANTES i posiadających aktywność antagonisty chemokin, jak również sekwencji cDNA je kodujących, ich zastosowania terapeutycznego i/lub diagnostyki chorób, w których potrzebna jest aktywność antagonistyczna wobec działania chemokin. RANTES (3-68) jest szczególnie korzystnym skróconym antagonistą chemokin.
Nawet jeśli chemotaktyczna aktywność RANTES i ogólnie chemokin CC była badana głównie w odniesieniu do specyficznych receptorów błony komórkowej, RANTES moż e oddziaływać również z glikozaminoglikanami (GAG), silnie zróż nicowanymi, rozgałęzionymi resztami cukrowymi dodawanymi po translacji do szeregu białek, ogólnie zwanych proteoglikanami (PG). Takie białka są obecne na błonie komórkowej, w macierzy zewnątrzkomórkowej i w krwiobiegu, gdzie mogą występować również wyizolowane GAG.
Oddziaływanie z GAG jest wspólną cechą wielu rozpuszczalnych cząsteczek przekaźnikowych (interleukin, czynników wzrostowych). PG lub wolne GAG mogą tworzyć kompleksy z rozpuszczalnymi cząsteczkami, prawdopodobnie w celu ochrony tej cząsteczki przed proteolizą w środowisku zewnątrzkomórkowym. Zaproponowano również, że GAG mogą wspomagać właściwą prezentację cząsteczek sygnalizacji komórkowej ich specyficznym receptorom i w rezultacie także modulację aktywacji komórki docelowej.
W przypadku chemokin koncentracja w stałe gradienty w miejscu zapalenia, a w konsekwencji oddziaływanie z receptorami komórkowymi oraz ich stan aktywacji wydaje się być modulowany przez różne formy GAG (Hoogewerf A.J. i wsp., Biochemistry 1997,36 (44): 13570-8). Zatem zaproponowano, że modulacja takich oddziaływań może stwarzać możliwości terapeutyczne w chorobach zapalnych (Schwarz M.K. i Wells T.N., Curr. Opin. Chem. Biol. 1999, 3 (4): 407-17) i w zakażeniu HIV (Burns J.M. i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96 (25): 14499-504).
Wymagania strukturalne i efekty funkcjonalne oddziaływań GAG - RANTES były badane w różnych modelach. RANTES wiąże GAG na ludzkich komórkach śródbłonka żyły pępowinowej (HUVEC, ang. human umbilical vein endothelial cell) w stężeniach mikromolarnych z powinowactwem i specyficznością większą niż inne chemokiny, takie jak MCP-1, IL-8 lub MIP-1 alfa. Wydaje się, że takie oddziaływanie nie jest po prostu elektrostatycznym, ale jest zależne od innych czynników, jak długość
PL 204 231 B1 i N- i O-siarkowanie cząsteczek GAG (Kuschert G.S. i wsp., Biochemistry 1999, 38 (39): 12959-68). Linie komórkowe nieposiadające GAG nadal mogą wiązać chemokiny, ale obecność powierzchniowych GAG znacznie zwiększa ich aktywność wobec receptorów, gdy są one w niskich stężeniach (Ali S. i wsp., J. Biol. Chem. 2000, 275 (16): 11721-7). Inne doświadczenia wykazały, że GAG, a zwłaszcza siarczan heparyny, ułatwiają oddziaływanie RANTES z powierzchnią komórkową makrofagów i w następstwie hamowanie zakażenia HIV, wynik zgodny z powszechnie znaną opornością tych komórek, słabo wyrażających siarczan heparyny, na przeciwwirusowe działanie RANTES (Oravecz T. i wsp., J. Immunol. 1997, 159 (9): 4587-4592).
Rozpuszczalne GAG współzawodniczą z GAG błony komórkowej i mogą one działać jako specyficzne inhibitory aktywacji powierzchniowej indukowanej przez RANTES (Appay V., i wsp., Int. Immunol. 2000, 12 (8): 1173-82), lub jako supresor zakażenia HIV (Burns J.M., i wsp.; Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96 (25): 14499-14504).
Pewne badania struktura-funkcja próbowały określić domenę RANTES odpowiedzialną za oddziaływanie z GAG, ze względu na to, że tradycyjna sekwencja konsensusowa (BBXB, w której B oznacza resztę zasadową, a X może być dowolną resztą) jest zbyt ogólna. Mapowanie epitopów zostało przeprowadzone z zastosowaniem przeciwciała monoklonalnego, wytworzonego przeciwko zrekombinowanej ludzkiej RANTES, zdolnego do hamowania zarówno efektów antywirusowych, jak i uwalniania wapnia wewną trzkomórkowego pod wpł ywem RANTES (Burns J.M. i wsp., J. Exp. Med. 1998, 188 (10): 1917-27). To podejście pozwoliło określić pozycje 55-66 jako niezbędne dla obu tych aktywności, jak i oddziaływania z GAG, przemawiając za tym, że oddziaływanie z GAG może mieć dodatkową lub różną funkcję niż ta, w której biorą udział klasyczne receptory, podobnie jak to sugerowano w badaniu wariantów RANTES posiadających zmienione własności agregacyjne (Appay V. i wsp., J. Biol. Chem. 1999, 274 (39): 27505-12).
Region 55-66, który reprezentuje alfa-helikalny, C-końcowy segment, jest homologiczny do domeny wiążącej GAG innych chemokin, takich jak IL-8 (Witt D.P. i Lander A.D., Curr. Biol. 1994,4 (5): 394-400), i zawiera miejsce kationowe zawierające lizynę i argininę (KKWVR). Taki region wiążący jest różny od miejsca wiążącego dla receptora komórkowego, który znajduje się na N-końcu (Pakianathan D.R. i wsp., Biochemistry 1997,36 (32): 96428), i zawiera pewne reszty zaangażowane w agregację monomerów RANTES, nawet jeśli takie mutacje osłabiające agregację wydają się nie mieć wpływu na oddziaływanie z GAG (Czapiewski L.G. i wsp., J. Biol. Chem. 1999, 274 (23): 16077-84; WO 98/13495).
RANTES zawiera jeszcze jedno miejsce kationowe (RKNR) w pozycjach 44-47, które jest konserwowane w domenach wiążących GAG innych chemokin, takich jak MlP-Ια (Koopmann W. i Krangel M.S., J. Biol. Chem. 1997, 272 (15): 10103-9) i MIP-1e (Koopmann W. i wsp., J. Immunol.1999, 163 (4): 2120-7).
Warianty ludzkiej RANTES zawierające pojedyncze mutacje w tych miejscach kationowych zostały opisane jako antagoniści i RANTES posiadający potencjalne zastosowania terapeutyczne w leczeniu zakażenia HIV i zapaleń lub chorób alergicznych (WO 99/33989).
Zostało również ujawnione, że wyłącznie potrójny mutant RANTES, w którym trzy reszty w pozycjach 44, 45 i 47 zostały zastąpione alaniną, stracił zdolność wiązania GAG (A. Proudfoot i wsp., Chemokine Gordon Conference, sesja I, 24 lipca 2000, przekaz ustny).
Obecnie stwierdzono, że chemokiny CC, zawierające przynajmniej dwie mutacje w miejscu kationowym tak zwanej „pętli 40-tych są skuteczne w leczeniu stwardnienia rozsianego i/lub chorób demielizacyjnych. To miejsce reprezentuje konserwatywny motyw wiążący GAG w chemokinach CC (takich jak RANTES, MIP-1 alfa, MIP-1 beta, MIP-3, MIP-4, HCC1, 1309, MCP-2). Wszystkie te mutanty chemokin mają obniżoną aktywność wiązania GAG w porównaniu z odpowiadającymi im cząsteczkami typu dzikiego.
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie mutanta chemokiny CC, wybranego z grupy składającej się z mutanta RANTES o SEK NR ID: 3, mutanta RANTES o SEK NR ID: 2, mutanta MIP-1-alfa o SEK NR ID: 4 oraz mutanta MIP-1-beta o SEK NR ID: 5 do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do leczenia stwardnienia rozsianego.
Wynalazek dostarcza również kompozycji farmaceutycznej do leczenia stwardnienia rozsianego zawierającej składnik aktywny oraz farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę, która jako składnik aktywny zawiera mutanta chemokiny CC wybranego z grupy składającej się z mutanta RANTES o SEK NR ID: 3, mutanta RANTES o SEK NR ID:2, mutanta MIP-1-alfa o SEK NR ID: 4 oraz mutanta MIP-1-beta o SEK NR ID: 5.
PL 204 231 B1
Przedmiotem wynalazku jest także skrócona i zmutowana ludzka RANTES o sekwencji aminokwasowej SEK NR ID: 2 oraz cząsteczka DNA zawierająca sekwencję DNA kodującą tą skróconą i zmutowaną chemokinę .
Wynalazek dotyczy również wektora ekspresyjnego zawierającego cząsteczkę DNA według wynalazku oraz komórki gospodarza zawierającej taki wektor ekspresyjny.
Ponadto przedmiotem wynalazku jest rekombinacyjny sposób wytwarzania polipeptydu według wynalazku obejmujący hodowanie w odpowiedniej pożywce komórek gospodarza według wynalazku.
Obszar, tak zwana pętla 40-tych, w którym, zgodnie z rozwiązaniami według wynalazku, powinny być obecne przynajmniej dwie mutacje jest wskazany dla szeregu chemokin CC na fig. 1. W szczególności, potrójny mutant RANTES, w którym trzy zasadowe reszty w pozycjach 44, 45 i 47 zostały zastąpione alaniną, okazał się aktywny w modelach zwierzęcych w leczeniu stwardnienia rozsianego. Ten potrójny mutant RANTES wykazał zależny od dawki efekt w mysim modelu EAE i porównywalną skuteczność jak leczenie odniesienia zrekombinowanym IFN-beta. Analogiczne wyniki zostały otrzymane ze skróconym potrójnym mutantem RANTES, w którym trzy reszty w pozycjach 44, 45 i 47 zostały zastąpione alaniną, i który nie zawiera pierwszych dwóch aminokwasów na N-końcu. Ten skrócony mutant RANTES jest przedstawiony jako SEK Nr ID: 3.
Podobne dowody doświadczalne zastały również uzyskane w odniesieniu do potrójnych mutantów MlP-1 α i MIP-1 β, które są już znane i które są niniejszym określone jako potrójny mutant MIP-1a R18A-R46A-R48A (Koopmann W. i Krangel M.S., J. Biol. Chem. 1997, 272 (15): 10103-9) i potrójny mutant 40-tych MIP-Ιβ K45A-R46A-K48A (Laurence J.S., Biochemistry 2001,40: 4990-4999).
Określenie „obniżona aktywność wiązania GAG oznacza, że mutanty znajdujące zastosowanie w rozwiązaniach według wynalazku mają mniejszą zdolność wiązania GAG, tzn. niższy procent każdego z tych mutantów wiąże GAG (takich jak siarczan heparyny) w porównaniu z odpowiadającą cząsteczką typu dzikiego.
Pożądane właściwości wykazują mutanty ludzkiej RANTES, w których trzy zasadowe aminokwasy w pozycjach 44, 45 i 47 cząsteczki typu dzikiego zostały podstawione innymi aminokwasami. Takie reszty mogą być podstawione małymi, alifatycznymi, niepolarnymi lub słabo polarnymi resztami, takimi jak na przykład Ala, Ser, Thr, Pro i Gly, z których alanina jest najkorzystniejszą.
Mutanty RANTES, które okazały się szczególnie skuteczne w leczeniu MS, to te, które mają sekwencje aminokwasowe odpowiednio przedstawione w SEK NR ID: 2 i SEK NR ID: 3.
Kolejnym przedmiotem niniejszego wynalazku jest zastosowanie mutantów chemokin, jak określono powyżej, do wytwarzania kompozycji farmaceutycznych do leczenia stwardnienia rozsianego i/lub innych chorób związanych z zanikiem mieliny.
Stwardnienie rozsiane (multiple sclerosis, MS) jest powoli postępującą chorobą ośrodkowego układu nerwowego (CNS) odznaczającą się rozproszonymi obszarami zaniku mieliny w mózgu i rdzeniu kręgowym, wywołującą liczne i różnorodne objawy i oznaki neurologiczne, zazwyczaj z remisjami i zaostrzeniami (zob. The Merck Manual, wyd. szesnaste).
Przyczyna jest nieznana, ale podejrzewa się zaburzenie immunologiczne, z pewnymi danymi obecnie wskazującymi na specyficzny mechanizm. Proponowane przyczyny zawierają zakażenie powolnym lub utajonym wirusem i rozkład mieliny przez enzymy. Poziom IgG jest zazwyczaj zwiększony w płynie mózgowo-rdzeniowym (CSF), a podniesiony poziom jest związany z różnymi wirusami, łącznie z wirusem odry. Znaczenie tych spostrzeżeń i opisanych związków z allotypami HLA i zmienioną liczbą komórek T jest niejasne zwłaszcza, że dane są w pewnym stopniu sprzeczne. Zwiększone występowanie w pewnych rodzinach sugeruje podatność genetyczną; kobiety są w pewnym stopniu częściej dotknięte niż mężczyźni. Czynniki środowiskowe wydają się być istotne. Chociaż wiek wystąpienia objawów ogólnie wynosi od 20 do 40 lat, MS zostało powiązane z obszarem geograficznym, gdzie zostało spędzonych 15 pierwszych lat życia pacjenta. Przesiedlenie po osiągnięciu 15 lat nie zmienia ryzyka.
Obszary lub wyspy demielinizacji z uszkodzeniem komórek glejowych skąpowypustkowych oraz zapaleniem otaczających naczyń są rozproszone w CNS, przede wszystkim w substancji białej, zwłaszcza w kolumnach bocznych i tylnych (zwłaszcza w obszarze szyjnym i grzbietowym), w nerwach wzrokowych i w obszarach okołokomorowych. Wiązki w śródmózgowiu, moście i móżdżku są również dotknięte, i substancja szara zarówno w mózgu jak i w rdzeniu może być dotknięta.
Ciała komórek i aksony są zazwyczaj zachowane, szczególnie w przypadku wczesnych uszkodzeń. Później mogą być niszczone aksony, zwłaszcza w długich wiązkach, a włóknista glejoza nadaje wiązkom ich „stwardniały wygląd. Zarówno wczesne jak i późne ubytki mogą być wykrywane równoPL 204 231 B1 cześnie. Chemiczne zmiany w lipidowych i białkowych składnikach mieliny zostały wykazane w, jak i wokół obszarów jej zaniku.
Choroba odznacza się różnymi zgłaszanymi objawami i wykryciem zaburzenia funkcjonowania CNS, z remisjami i stale nawracającymi zaostrzeniami.
Obrazowanie rezonansem magnetycznym (ang. magnetic resonance imaging, MRI) jest najbardziej czułą techniką obrazowania diagnostycznego; może ona wykazać wiele obszarów zaniku mieliny. Ubytki mogą być również widoczne w skanowaniu CT ze wzmocnieniem kontrastu.
Postępy w leczeniu stwardnienia rozsianego (MS) następowały powoli, częściowo ze względu na niepełne rozumienie patogenezy schorzenia. W terapii empirycznej główne trudności obejmują bardzo zmienny przebieg MS, długotrwały charakter najistotniejszych wskaźników skuteczności oraz brak obiektywnych wyznaczników skutków leczenia, szczególnie w krótkim czasie.
Chociaż patogeneza MS pozostaje niejasna, choroba ta jest nadal badana w odniesieniu do jej przebiegu i pochodzenia. Obiektywne wskaźniki skuteczności oparte na obrazowaniu rezonansem magnetycznym (MRI) zostały opracowane i znajomość wielu prób klinicznych zakończonych niepowodzeniem doprowadziły do ulepszonych metod badań i lepszej interpretacji wyników.
Rozwiązania wynalazku jest umożliwiają leczenie MS przez podawanie skutecznej ilości mutantów chemokin razem z farmaceutycznie dopuszczonym nośnikiem.
„Skuteczna ilość odnosi się do ilości aktywnych składników, która jest wystarczająca, aby wpłynąć na przebieg i ciężkość choroby, prowadząc do zmniejszenia lub remisji takiej patologii. Skuteczna ilość będzie zależała od drogi podawania i stanu pacjenta.
Przedmiotem niniejszego wynalazku są farmaceutyczne kompozycje zawierające mutanty chemokin, w obecności jednego lub więcej farmaceutycznie dopuszczalnych nośników do leczenia MS i/lub innych chorób związanych z zanikiem mieliny.
„Farmaceutycznie dopuszczalny ma obejmować jakikolwiek nośnik, który nie wpływa na skuteczność biologicznej aktywności aktywnego składnika i nie jest toksyczny dla gospodarza, któremu jest podawany. Na przykład, przy podawaniu pozajelitowym, powyższe aktywne składniki mogą być formułowane w postaci dawki jednostkowej do zastrzyków w nośnikach takich jak sól fizjologiczna, roztwór dekstrozy, albuminy osocza i roztwór Ringera.
Poza farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem, kompozycje według wynalazku mogą zawierać również niewielkie ilości dodatków, takich jak stabilizatory, zaróbki, bufory i składniki konserwujące.
Podawanie takiego aktywnego składnika może odbywać się dożylnie, domięśniowo lub podskórne. Możliwe są również inne drogi podania, które mogą wytwarzać pożądany poziom odpowiednich składników we krwi.
Optymalna dawka aktywnego składnika może być odpowiednio dobrana w zależności od drogi podawania, stanu pacjenta i jego charakterystyki (płeć, wiek, waga ciała, zdrowie, wielkość), rozległości objawów, równoczesnego leczenia, częstości leczenia i pożądanego efektu. Ustalenie i modyfikowanie określonych zakresów dawkowania znajdują się w zakresie możliwości osób biegłych w dziedzinie.
Zazwyczaj dzienne dawkowanie aktywnego składnika może wynosić około 0,01 do 100 miligramów na kilogram masy ciała. Powszechnie 1 do 40 miligramów na kilogram dziennie w dawkach podzielonych lub w postaci do powolnego uwalniania jest skuteczne, aby otrzymać pożądane rezultaty. Drugie lub kolejne podawania mogą być prowadzone w dawkach, które są takie same, mniejsze lub większe niż pierwotne lub poprzednie dawki podawane pacjentowi.
Niniejszy wynalazek został opisany w odniesieniu do specyficznych postaci wykonania, ale zawartość opisu zawiera wszystkie modyfikacje i podstawienia, które mogą być wprowadzone przez specjalistę w dziedzinie bez wykraczania poza znaczenie i cel zastrzeżeń.
Wynalazek będzie teraz opisany w odniesieniu do następujących Przykładów, które nie powinny być rozumiane w żaden sposób jako ograniczające niniejszy wynalazek. Przykłady będą się odnosić do rysunków określonych poniżej.
Opis rysunków
Figura 1: przedstawia zestawienie pewnych przykładowych chemokin CC, zestawionych na poziomie pętli 40-tych. Ten segment białka i miejsce kationowe, które odpowiadają motywowi wiążącemu GAG, są zaznaczone ramką.
Figura 2: przedstawia mapę plazmidu użytego do klonowania RANTES typu dzikiego i jego mutantów zgodnie z przykładami.
PL 204 231 B1
Figura 3: przedstawia wyniki testu wiązania współzawodniczącego [125I] -RANTES i mutantów w te ś cie heparynowym i teś cie zł o ż a heparynowego.
Figura 4: przedstawia test równowagowego wiązania współzawodniczącego RANTES i potrójnego mutanta 40-tych RANTES.
Figura 5: przedstawia indukcję monocytów i chemotaksję komórek T pod wpływem RANTES i potrójnych mutantów 40-tych i 50-tych RANTES.
Figura 6: przedstawia hamowanie nacieku dootrzewnowego komórek pod wpływem potrójnego mutanta 40-tych RANTES.
Figura 7: przedstawia hamowanie nacieku dootrzewnowego komórek indukowanego przez RANTES pod wpływem skróconego potrójnego mutanta 40-tych RANTES (3-68) wytwarzanego w Pichia pastoris.
Figura 8: przedstawia hamowanie nacieku dootrzewnowego komórek indukowanego przez
MIP-1 β pod wpływem potrójnego mutanta 40-tych MIP-Ιβ (K45AR46AK48A).
Figura 9: przedstawia hamowanie nacieku dootrzewnowego komórek indukowanego przez MlP-1 α pod wpływem potrójnego mutanta 40-tych MIP-1a(R18A-R46A-R48A).
Figura 10: przedstawia hamowanie nacieku dootrzewnowego komórek indukowanego przez tioglikolan pod wpływem potrójnego mutanta 40-tych RANTES.
Figura 11: przedstawia hamowanie wystąpienia doświadczalnego autoimmunizacyjnego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego pod wpływem wszystkich potrójnych mutantów 40-tych RANTES wynalazku.
Przykłady
Materiały i metody
a) Wytwarzanie mutantów RANTES niewiążących heparyny
Mutageneza RANTES została uzyskana techniką odwrotnej reakcji łańcuchowej polimerazy. Mutacje punktowe zostały wprowadzone do jednego z dwóch starterów zastosowanych do hybrydyzacji z kodującą sekwencją ludzkiej RANTES (GenBank No. NM_002985) w odwrotnej orientacji. W celu poprawy wydajności przyłączania starterów (zwłaszcza, gdy do starterów zostało wprowadzonych wiele mutacji), DNA zostało alkalicznie zdenaturowane. Zdenaturowane DNA zostało rozcieńczone do stężenia około 10 pg/reakcja, aby uniknąć włączania niezmutowanego DNA do reakcji transformacji.
Numerowanie aminokwasów podane w przykładach i w opisie dotyczy dojrzałego białka, tzn. rozpoczynającego się od Ser, która jest aminokwasem w pozycji 24 zgodnie z listą sekwencji. Zatem, aby otrzymać idealne odwzorowanie numeracji aminokwasów w zapisie sekwencji i w przykładach, należy dodać 23 do numerów pojawiających się w przykładach lub w opisie.
Poniżej przedstawione zostały sekwencje starterów stosowanych do mutagenezy, w których podkreślono zmutowane zasady:
R44A (sensowny)
5' -TTTGTCACCGCAAAGAACCGCCAAG-3' : P1
R44A (anty-sensowny)
5' -GACGACTGCTGGGTTGGAGCACTTG-3' : P2
K45A (sensowny)
5'-TTTGTCACCCGAGCGAACCGCCAAG-3': P3
K45A (anty-sensowny)
5'-GACGACTGCTGGGTTGGAGCACTTG-3': P4
R47A (sensowny)
5' -CGAAAGAACGCCCAAGTGTGTGCCA-3' : P5
R47A (anty-sensowny)
5'-GGTGACAAAGACGACTGCTGGGTTG-3' : P6
R44A-K45A-R47A (potrójny mutant 40-tych, sensowny)
5' -TTTGTCACCGCAGCGAACGCCCAAGTGTGTGCCAAC-3' : P7
R44A-K45A-R47A (potrójny mutant 40-tych, anty-sensowny)
5' -GACGACTGCTGGGTTGGAGCACTTGCC-3' : P8
K55A (sensowny)
5'-GCCAACCCAGAGGCGAAATGGGTTCGG-3': P9
K55A (anty-sensowny)
5'-ACACACTTGGCGGTTCTTTCGGGTGAC-3': P10
K56A (sensowny)
PL 204 231 B1
5'-AACCCAGAGAAGGCATGGGTTCGGGAG-3': P11
K56A (anty-sensowny)
5'-GGCACACACTTGGCGGTTCTTTCGGGT-3': P12
R59A (sensowny)
5'-AAGAAATGGGTTGCGGAGTACATCAAC-3': P13
R59A (anty-sensowny)
5'-CTCTGGGTTGGCACACACTTGGCG- 3' : P14
K55A-K56A-R59A (potrójny mutant 50-tych, sensowny)
5'-GCCAACCCAGAGGCGGCATGGGTTGCGGAGTACATC-3': P15
K55A-K56A-R59A (potrójny mutant 50-tych, anty-sensowny)
5'-ACACACTTGGCGGTTCTTTCGGGTGACAAAGAC-3': P16
Amplifikacja była prowadzona w termocyklerze DNA (Perkin-Elmer-Cetus 480) przez 35 cykli z zastosowaniem polimerazy DNA pfutrbo® (Stratagene). DNA ligowano i transformowano do wydolnych komórek E. coli Top 10 F' (Invitrogen). Sekwencję mutantów sprawdzano przez o sekwencjonowanie DNA.
b) Ekspresja i oczyszczanie RANTES typu dzikiego (WT) i mutantów RANTES w E. coli
Fragmenty DNA otrzymane w PCR jak wyjaśniono powyżej zostały sklonowane w plazmidzie pET24d (fig. 2) tworząc serię wektorów. WT lub zmutowana sekwencja kodująca RANTES jest sklonowana 3' do promotora T7, pomiędzy miejscami Xbal i NheI/XhoI. Plazmid zawiera dwa geny znacznikowe (Km i lad)i aktywne miejsce inicjacji replikacji (Ori f1).
Otrzymane wektory zostały użyte do transformacji szczepu o BL21(DE3) E. coli, który umożliwia silną ekspresję białka z zastosowaniem systemu pT7/LacI. Ekspresja białka była indukowana przez dodanie 1 mM izopropylo-e-D-tiogalaktopiranozydu (IPTG) do hodowli. Komórki były zbierane i zawieszane w buforze lizującym (50 mM Tris-HCl pH 8, 10 mM MgCI2, 5 mM 5 Benzamidyna/HCI, 1 mM DTT, 0,1 mM fluorek fenylometylosulfonylowy (PMSF), 20 mg/L DNaza). Komórki rozbijano poddając trzykrotnemu działaniu prasy francuskiej. Zawiesina była następnie wirowana przy 10000 x g przez 30 min. w 4°C. Osad ciał inkluzyjnych zawierający WT RANTES lub jeden z mutantów RANTES był rozpuszczany w 0,1 M Tris/HCI, pH 8,0, zawierającym 6M chlorowodorek guanidyny i 1 mM DTT i mieszany przez 30 min. w 60°C. Roztwór dializowano trzykrotnie wobec 1% kwasu octowego. Nierozpuszczalny materiał był usuwany przez wirowanie przy 10000 x g przez 30 min. Nadsącz zawierający WT RANTES lub jeden z mutantów RANTES był liofilizowany.
Liofilizowany proszek był rozpuszczany w 0,1 M Tris/HCI, pH 8,0, zawierającym 6M chlorowodorek guanidyny i 1 mM DTT do końcowego stężenia około 1 mg/ml. Białka były renaturowane przez rozcieńczanie po kropli do 10-krotnej objętości roztworu guanidyny 20 mM Tris/HCI pH 8,0 zawierającym 0,01 mM utlenionego glutationu i 0,1 mM zredukowanego glutationu. Roztwór był mieszany przez noc w 4°C. Nierozpuszczalny materiał był usuwany przez wirowanie przy 10000 x g przez 30 min. pH doprowadzano do 4,5 kwasem octowym i przewodnictwo doprowadzano do 20 mS przez rozcieńczanie wodą. Roztwór nanoszono na kolumnę HiLoad S 26/10 uprzednio zrównoważoną 20 mM octanem sodowym, pH 4,5 i białko było wymywane liniowym gradientem 0-2 M NaCl w tym samym buforze. Frakcje zawierające WT RANTES lub jeden z mutantów RANTES były łączone, dializowane trzykrotnie wobec kwasu octowego i liofilizowane.
Liofilizowane białka były rozpuszczane w 50 mM buforze Tris/HCI, pH 8,0. Sekwencja liderowa MKKKWPR pochodząca z procedury klonowania była odcinana z WT RANTES lub jednego ze zmutowanych białek RANTES przez inkubację z endoproteinazą Arg-C (1:600 enzym : substrat, wag/wag) przez noc w 37°C. Cięte białka były oddzielane od niestrawionych białek przez chromatografię kationowymienną na kolumnie HiLoad S 26/10 uprzednio zrównoważonej 20 mM octanem sodu, pH 4,5 zawierającym 6M mocznik, a białka były wymywane liniowym gradientem 0-2 M NaCl w tym samym buforze. Odcięte frakcje były łączone i dializowane dwukrotnie wobec 1% kwasu octowego i na koniec wobec 0,1% kwasu trifluorooctowego, a następnie liofilizowane (Edgerton M.D. i wsp., str. str. 33-40, i Proudfoot A.E. i wsp., str. 75-87, w Chemokine Protocols, Methods in Molecular Biology 2000, t. 138, Humana Press).
Autentyczność WT i zmutowanych białek RANTES była sprawdzana przez spektrometrię mas. W analogicznej procedurze został wytworzony kolejny mutant, który zawierał Met jako dodatek na końcu NH2 jak również pojedyncze lub potrójne mutanty 40-tych RANTES i pojedyncze lub potrójne mutanty 50-tych.
PL 204 231 B1
c) Ekspresja i oczyszczanie RANTES typu dzikiego (WT) i mutantów RANTES w Pichia pastoris
Dojrzały potrójny mutant 40-tych RANTES (R44A-K45A-R4 7A) został wytworzony z zastosowaniem mutagenezy megastarterowej opartej na PCR (Datta A.K., Nucleic Acid Research 1995, 23 (21): 4530-4531). Został sklonowany do wektora ekspresyjnego Pichia pastoris pPIC9K w tej samej ramce, co peptyd sygnałowy Mat alfa pre-pro S. cerevisiae.
Po potwierdzeniu sekwencji, plazmid został przeniesiony do szczepu GS115(his4) Pichia pastoris przez elektroporację. Klony His+ zostały przebadane pod względem ekspresji mutanta RANTES. Badania ekspresji w małej skali zostały przeprowadzone z zastosowaniem standartowych procedur jak opisano w Pichia Expression Kit firmy Invitrogen (Life Technologies). W skrócie, hodowla zastała przeniesiona do wzbogaconej pożywki zawierającej glicerol jako źródło węgla, po czym została odwirowana i zawieszona w pożywce zawierającej metanol jako źródło węgla, aby indukować ekspresję zmutowanego białka RANTES. Wydzielanie mutanta RANTES do pożywki wykrywano w SDS-PAGE barwionych Coomassie Blue.
Klon wydzielający duże ilości mutanta RANTES (ok. 500-750 mg/l) został użyty do produkcji na większą skalę w dużych kolbach hodowlanych. Sfermentowana pożywka została odwirowana przy 5000 rpm i nadsącz został użyty do oczyszczania.
Białko zostało oczyszczone z nadsączu w pojedynczym etapie chromatograficznym na kolumnie Heparyna-Sepharose, zrównoważonej 0,1 M Tris-HCl i wypłukane liniowym gradientem 0-2 M NaCl w tym samym buforze używając 20 objętości kolumny. Autentyczność białka była sprawdzana przy użyciu spektrometrii mas i stwierdzono, że w takich systemach mutant RANTES (R44A-K45AR47A) tak wytwarzany jest również skrócony na N-końcu w porównaniu z cząsteczką typu dzikiego tzn. brak mu pierwszych 2 aminokwasów. Tak otrzymany mutant został w związku z tym opisany jako potrójny mutant RANTES (3-68) 40-tych (R44A, K45A, R47A) i jego sekwencją aminokwasową jest ta z SEK NR ID: 3.
d) Oznaczanie wiązania heparyny
Chromatografia na złożu heparyna-Sepharose była prowadzona z zastosowaniem 50 μg białek RANTES typu dzikiego lub zmutowanych, które były nakładane na kolumnę heparyna-Sepharose zrównoważoną 25 mM Tris/HCI, pH 8,0 i 50 mM NaCl i wymywane liniowym gradientem 0-2 M NaCl w 25 mM Tris/HCI, pH 8,0.
Chromatografia na złożu heparyna-Sepharose była prowadzona z zastosowaniem 50 μg białek RANTES typu dzikiego lub zmutowanych, które były nakładane na kolumnę jonowymienną MonoS zrównoważoną 50 mM octanem sodu, pH 4.5. Białko było wymywane liniowym gradientem 0-2 M NaCl.
Test wiązania współzawodniczącego był prowadzony z zastosowaniem RANTES typu dzikiego, potrójnego mutanta 50-tych RANTES i potrójnego mutanta 40-tych RANTES (SEK NR ID: 2 - również opisany niniejszym jako „R44A-K45A-R4 7A RANTES), które zostały wyznakowane radioaktywnie 125I Amersham do aktywności specyficznej 2200 mCi/mol. Płytki titracyjne zawierające 96 studzienek zostały zwilżone buforem wiążącym (50 mM HEPES, pH 7,2 zawierający 1 mM CaCl2, 5 mM MgCl2, 0,15 M NaCl i 0,5% BSA). Seryjne rozcieńczenia heparyny w buforze wiążącym zostały sporządzone w zakresie obejmującym stężenia od 20 mg/ml do 1 μg/ml. Oznaczenie przeprowadzono w całkowitej objętości 100 μl przez dodanie 25 μl rozcieńczeń heparyny, 25 μl 0,4 nM [125I]-chemokiny, 25 μl złoża heparyny (0,2 μg/ml w wodzie) i 25 μl buforu wiążącego do każdej studzienki. Oznaczenie prowadzono w trzech powtórzeniach. Płytki inkubowano w temperaturze pokojowej ze wstrząsaniem przez 4 godziny. Płytki titracyjne płukano 3 razy 200 μl buforu płuczącego z zastosowaniem pompy próżniowej, aby usunąć niezwiązaną wyznakowaną chemokinę. Następnie dodawano 50 μl scyntylatora do każdej studzienki i liczono radioaktywność (1 min./studzienka). Wyniki analizowano z zastosowaniem oprogramowania GraFit.
e) Test równowagowego kompetycyjnego wiązania receptora
Testy prowadzono na błonach z transfekowanych CHO wyrażających CCR1 lub CCR5 z zastosowaniem testu bliskości scyntylacji (ang. scintillation proximity assay (SPA)) używając [125I]-MlP-1a jako znacznika. Związki współzawodniczące przygotowano przez seryjne rozcieńczenia nieznanowanych chemokin w buforze wiążącym, aby zawierały się w zakresie 10-6-10-12 M. Używany bufor wiążący zawierał 50 mM HEPES, pH 7,2 zawierający 1 mM CaCl2, 5 mM MgCl2, 0,15 M NaCl i 0,5% BSA. Złoża SPA z kiełków pszenicy (Amersham) zawieszano w PBS do stężenia 50 mg/ml i rozcieńczano w buforze wiążącym do 10 mg/ml, a końcowe stężenie w oznaczeniu wynosiło 0,25 mg/studzienkę. Błony uzyskiwane z komórek CHO produkujących CCR1 lub CCR5 przechowywano
PL 204 231 B1 w -80°C i rozcieńczano w buforze wiążącym do 80 μg/ml. Przed oznaczeniem mieszano równe objętości podstawowych roztworów błon i złoża w celu obniżenia tła. Końcowe stężenie błon wynosiło 2 μg/ml, a [125I]-MlP-1a 0,1 nM. Płytki inkubowano w temperaturze pokojowej ze wstrząsaniem przez 4 godziny. Radioaktywność mierzono i analizowano wyniki, tak jak opisano dla oznaczenia wiązania heparyny.
f) Oznaczanie chemotaksji
Chemotaksja monocytów była prowadzona z zastosowaniem oznaczenia w mikrokomorze Boydena. Monocyty oczyszczano z kożuszka z wykorzystaniem następującej procedury izolacji: 100 ml roztworu kożuszka rozcieńczano 100 ml PBS, nawarstwiano na Ficoll i wirowano przy 600 x g przez 20 min. w temperaturze pokojowej. Komórki tworzące granicę faz zbierano, płukano dwukrotnie PBS i zawieszano w stężeniu 40 100 x 106/ml w podłożu RPMI 1640 zawierającym 5% inaktywowaną surowicę płodową cielęcą (FCS), 2 mM glutaminę i 25 mM HEPES, pH 7,2. Były one dalej oczyszczane od frakcji limfocytów przez dodanie 106 erytrocytów owcy/ml, rozetkowanych przez noc w 4° C i rozdzielane przez drugie wirowanie w gradiencie Ficollu przy 900 x g przez 20 min w temperaturze pokojowej. Monocyty znajdowały się na granicy faz pomiędzy Ficollem i buforem, a komórki T znajdowały się w osadzie. Monocyty płukano PBS i zawieszano do 2,5 x 106/ml w podłożu RPMI 1640. Czystość mierzono w rozproszeniu czołowym i bocznym świtała w analizie FACS i wynosiła ona 40-80% w zależności od dawcy. Chemokiny rozcieńczano do objętości końcowej 30 , w zakresie stężeń 10-6 - 10-12 M w podłożu RPMI i umieszczano w niższych studzienkach. Filtr o średnicy porów 5 μm (Neuroprobe) dla monocytów i 8 μm dla komórek T umieszczano ponad niższymi studzienkami zwracając uwagę, aby nie powstały pęcherze powietrza i system uszczelniano. Pięćdziesiąt mikrolitrów zawiesiny komórkowej (2,5 x 106 komórek/ml) w podłożu RPMI umieszczano w górnych studzienkach. Komorę inkubowano przez 30 min. dla monocytów i 1,5 godz. dla komórek T w 37°C w O2. Następnie komórki odrzucano, oczyszczano górną powierzchnię membrany z komórek i płukano membranę w PBS. Membranę utrwalano przez zanurzenie w MeOH przez minutę, suszono w powietrzu i barwiono roztworami Fields A i B. Migrujące komórki liczono przez wybranie losowych pól dla każdej studzienki w obiektywie 20x w standardowym mikroskopie współpracującym z oprogramowaniem analizy obrazu IBAS. Dane analizowano używając oprogramowania GraFit.
g) Oznaczanie dootrzewnowego nacieku komórkowego
W pierwszym oznaczeniu, naciek komórkowy był indukowany przez dootrzewnowe wstrzyknięcie 10 μg chemokiny rozcieńczonej w 0,2 ml jałowej soli fizjologicznej (NaCl wolnej od LPS) samicom myszy BALB/c w wieku 8 do 12 tygodni. Mutanty chemokin (10 μg chemokiny rozcieńczonej w 0,2 ml jałowej soli fizjologicznej) podawano 30 min. przed podaniem agonisty. Szesnaście godzin później, myszy zabijano przez rozpylenie CO2. Płukanie otrzewnowe prowadzono przez 3 płukania 5 ml PBS i łączono popłuczyny. Komórki odwirowywano przy 600 x g przez 10 min, zawieszano w końcowej objętości 1 ml i zliczano wszystkie wywołane leukocyty w hemacytometrze.
W drugim oznaczeniu, naciek komórkowy był indukowany przez dootrzewnowe wstrzyknięcie 200 μl 3% roztworu tioglikolanu w wodzie destylowanej samicom myszy BALB/c w wieku 8 do 12 tygodni (Dzień 1). Mutant chemokiny (10 μg chemokiny rozcieńczonej w 0,2 ml jałowej soli fizjologicznej) podawano 30 min przed podaniem tioglikolanu. Mutant chemokiny był następnie podawany codziennie przez 3 dni (Dzień 2, 3 i 4). Myszy zabijano Dnia 5 przez rozpylenie CO2. Płukanie otrzewnowe prowadzono przez 3 płukania 5 ml PBS i łączono popłuczyny. Komórki odwirowywano przy 600 x g przez 10 min., zawieszano w końcowej objętości 1 ml i zliczano wszystkie wywołane leukocyty w hemacytometrze.
h) Doświadczalne autoimmunizacyjne zapalenie mózgu i rdzenia kręgowego(EAE)
Procedura immunizacji
8-tygodniowe samice myszy C57 BL/6NCrlBR ważące 18-22 gramy były immunizowane (dzień=0) przez podskórne wstrzyknięcie w kark 0,1 ml emulsji zawierającej 200 μg peptydu MOG35-55 (Neosystem, Strasbourg, Francja) w kompletnym adiuwancie Freunda (CFA z Mycobacterium butyricum, Difco, Detroit, Stany Zjednoczone) zawierającym 0,25 mg Mycobacterium tuberculosis. Przed wstrzyknięciem podskórnym zwierzęta otrzymywały 200 μl dożylny zastrzyk 300 ng toksyny krztuścowej (List Biological Lab., Campbell, CA, Stany Zjednoczone) rozpuszczonej w PBS w żyłę ogonową. Dnia 2 zwierzęta otrzymywały drugi dootrzewnowy zastrzyk 300 ng toksyny krztuścowej.
Skutki procedury rozpoczynały się w przybliżeniu 8-10 dnia jako pojawianie się postępującego paraliżu, początkowo ogona i stopniowo rozszerzającego się do kończyn przednich.
PL 204 231 B1
Schemat prowadzenia badania
Badanie obejmowało grupy po 10 zwierząt każda. Wszystkie grupy były immunizowane peptydem MOG35-55 w CFA i toksyną krztuścową według protokołu immunizacji.
Grupa 1: Grupa kontroli dodatniej, której podawano dootrzewnowo sam nośnik (PBS).
Grupa 2: Grupa kontroli dodatniej, której podawano podskórnie sam nośnik (PBS).
Grupa 3: podawano dootrzewnowo 10 μg/mysz potrójnego mutanta 40-tych RANTES.
Grupa 4: podawano dootrzewnowo 1 μg/mysz potrójnego mutanta 40-tych RANTES.
Grupa 5: podawano dootrzewnowo 10 μg/mysz potrójnego mutanta 40-tych Met-RANTES.
Grupa 6: podawano dootrzewnowo 1 μg/mysz potrójnego mutanta 40-tych Met-RANTES
Grupa 7: podawano podskórnie 10000 U/mysz mysiego rekombinowanego interferonu beta (m-IFN-β)
Grupa 8: podawano podskórnie 20000 U/mysz m-IFN-β.
No ś nik
Do rozcieńczania wszystkich potrójnych mutantów 40-tych RANTES, wszystkich potrójnych mutantów 40-tych Met-RANTES i m-IFN-β do odpowiedniego stężenia używano PBS.
Droga podania
Potrójny mutant 40-tych RANTES, potrójny mutant 40-tych Met-RANTES i m-IFN-β były podawane codziennie dootrzewnowo w objętości podania wynoszącej 200 μl/mysz. Grupom 1,2 podawano 200 μl/mysz PBS.
Czas leczenia
Leczenie rozpoczynano dla każdego zwierzęcia w 4 dniu eksperymentu (w przybliżeniu 3-5 dni przez zwykłym wystąpieniem choroby) i kontynuowano przez 14 kolejnych dni (zwierzęta zabijano w 18 dniu eksperymentu).
Obserwacje kliniczne
Od dnia 5 zwierzęta były indywidualnie badane pod względem obecności paraliżu z wykorzystaniem następującej oceny klinicznej:
= brak objawów choroby
0,5 = częściowy paraliż ogona = paraliż ogona
1.5 = paraliż ogona + częściowy jednostronny paraliż kończyny tylnej = paraliż ogona + osłabienie kończyn tylnych lub częściowy paraliż kończyn tylnych
2.5 = paraliż ogona + częściowy paraliż kończyn tylnych (obniżona miednica) = paraliż ogona + całkowity paraliż kończyn tylnych
3.5 = paraliż ogona + całkowity paraliż kończyn tylnych + nietrzymanie odchodów = paraliż ogona + paraliż kończyn tylnych + osłabienie lub częściowy paraliż kończyn przednich = umierające lub martwe.
Wyniki
a) Oznaczanie wiązania heparyny
Oczyszczone białka RANTES zmutowane w jednej lub trzech pozycjach były analizowane przez chromatografię heparynową i stężenia NaCl konieczne do ich wymycia były porównywane z profilem elucyjnym RANTES WT. Ponieważ oddziaływanie z heparyną jest elektrostatyczne, mutanty poddano również chromatografii kationowymiennej na kolumnie MonoS. Powoduje to spadek stężenia NaCl koniecznego do ich wymycia, ponieważ mutageneza doprowadziła do usunięcia reszt zasadowych. Różnica w stężeniu NaCl otrzymana w chromatografii kationowymiennej zostaje odjęta od tej otrzymanej w chromatografii heparynowej. Jeżeli wartość ta jest dodatnia, zostaje zidentyfikowane specyficzne oddziaływanie z heparyną (Tabela 1).
Bezpośredni pomiar wiązania z heparyną został przeprowadzony z potrójnymi mutantami RANTES 40- i 50-tych w oznaczeniu wiązania współzawodniczącego. RANTES WT i mutanty były jodowane (Amersham) i wszystkie miały tę samą radioaktywność specyficzną 2200 mCi/mol. Jednakże, w przybliżeniu tylko 20% potrójnego mutanta 40-tych wiązało się ze złożem koralików heparynowych, z najwyższym cmp wynoszącym 4000 w porównaniu z 22000 cpm w przypadku RANTES WT i mutanta 50-tych (fig. 3). Pokazuje to, że te reszty w pętli 40-tych, które zostały zmutowane, przyczyniają się do większości zdolności wiązania heparyny przez RANTES. Z drugiej strony, to również pokazuje, że przypuszczalny motyw wiążący GAG w pętli 50-tych nie jest „prawdziwym miejscem wiążącym GAG.
b) Test równowagowego kompetycyjnego wiązania receptora
PL 204 231 B1
Zdolność potrójnych mutantów RANTES 40- i 50-tych do współzawodniczenia z [125I] MIP-1a w wiązaniu do rekombinowanego CCR1 i CCR5 na błonach otrzymanych ze stabilnych transfektantów CHO. Nie stwierdzono znaczącej różnicy w żadnym z pojedynczych mutantów dla obu receptorów (wyniki nieprzedstawione). Żaden z potrójnych mutantów nie wykazywał różnicy w wiązaniu do CCR5 w porównaniu do białka RANTES WT. Jednakże, dla CCR1 potrójny mutant 40-tych miał 100-krotnie obniżone powinowactwo, podczas gdy potrójny mutant 50-tych wykazywał tylko mały (3-krotny) spadek powinowactwa (fig. 4).
c) Oznaczanie chemotaksji
Wszystkie potrójne mutanty 40- i 50-tych były zdolne do indukowania chemotaksji monocytów z aktywnością porównywalną z RANTES WT, z wyjątkiem potrójnego mutanta 40-tych RANTES, który był zdolny do indukowania chemotaksji przy 1 μM. Jednakże, potrójne mutanty 40- i 50-tych były równie skuteczne w indukcji chemotaksji komórek T (fig. 5). Wyniki otrzymane w oznaczeniach chemotaksji monocytów dobrze odpowiadają tym otrzymanym w oznaczeniach wiązania receptora.
Wyniki otrzymane w oznaczeniach chemotaksji monocytów dobrze odpowiadają tym otrzymanym w oznaczeniach wiązania receptora. Utrata aktywności potrójnego mutanta 40-tych RANTES w chemotaksji monocytów odpowiada utracie powinowactwa wobec CCR1.
d) Oznaczanie dootrzewnowego nacieku komórkowego
Potrójny mutant 40-tych RANTES nie był zdolny do indukcji dootrzewnowego nacieku komórkowego w dawce (10 μg/mysz), przy której RANTES powodował znaczny naciek (fig. 6).
Ponadto, jeżeli podawano 10 μg mutanta 30 min przed podaniem RANTES, naciek komórkowy indukowany przez RANTES był zahamowany. Tak więc zahamowanie wiązania GAG wytworzyło inhibitor indukowanego przez chemokiny nacieku komórkowego in vivo.
Analogiczne wyniki są przedstawione na fig. 7 dla skróconego (3-68) potrójnego mutanta 40-tych RANTES (wytwarzanym w Pichia pastoris), na fig. 8 dla potrójnego mutanta 40-tych MIP-1e (K45AR46A-K48A) i na fig. 9 dla potrójnego mutanta 40-tych MlP-1a (R18A-R46A-R48A). Naciek komórkowy stymulowany przez tioglikolan został zahamowany również przez potrójnego mutanta 40-tych RANTES, jak pokazano na fig. 10.
e) Doświadczalne autoimmunizacyjne zapalenie mózgu i rdzenia kręgowego(EAE)
Potrójny mutant 40-tych RANTES wykazał efekt zależny od dawki w mysim modelu EAE. Białko w dawce zarówno 1 μg i 10 μg/mysz podawane codziennie dootrzewnowo od dnia 10 po pierwotnej immunizacji MOG, wykazało podobną skuteczność jak leczenie odniesienia rekombinowanym m-IFN-β (fig. 11). Wystąpienie choroby było znacząco opóźnione i ciężkość choroby (oceniona jako obszar pod krzywą) była również znacznie zmniejszona. Co więcej, średnia maksymalnej punktacji klinicznej osiąganej w czasie eksperymentów była również znacząco zredukowana. Inny mutant (potrójny mutant 40-tych Met-RANTES) nie wykazał żadnego pozytywnego wpływu w tym samym doświadczeniu.
Nasze wyniki pokazują widoczne korzystne działanie w leczeniu potrójnym mutantem 40-tych RANTES, który zmniejsza kliniczne objawy chronicznego EAE u myszy po immunizacji MOG. Zatem potrójny mutant RANTES wykazał korzystny efekt terapeutyczny i może być stosowany do leczenia chronicznych chorób związanych z zanikiem mieliny, takich jak MS.
T a b e l a 1
Molarność NaCl do wymywania z kolumn heparynowych i Mono-S (wymiana kationowa)
Mutacja RANTES | Heparyna | MonoS | ΔNaCl Hep's | ΔNaClMono s | ΔΔNaCl |
brak (WT) | 0,80 | 0,91 | |||
R44A | 0,61 | 0,82 | 0,19 | 0,09 | 0,10 |
K45A | 0,65 | 0,97 | 0,15 | 0,04 | 0,11 |
R47A | 0,65 | 0,84 | 0,15 | 0,07 | 0,08 |
R44A-K45A-R47A | 0,47 | 0,70 | 0,33 | 0,21 | 0,11 |
K55A | 0,70 | 0,86 | 0,10 | 0,05 | -0,05 |
K56A | 0,90 | 0,94 | -0,10 | 0,07 | -0,17 |
R59A | 0,79 | 0,85 | 0,01 | 0,06 | -0,05 |
K55A-K56A-R59A | 0,70 | 0,75 | 0,10 | 0,16 | -0,06 |
PL 204 231 B1
W zamieszczonej poniżej Tabeli 2 wyjaśniono znaczenia sekwencji przedstawionych w liście sekwencji i w tekście
T a b e l a 2
SEK NR ID: | Opis sekwencji |
1 | RANTES TYPU DZIKIEGO (WT) |
2 | POTRÓJNY MUTANT RANTES W 40-tych |
3 | POTRÓJNY MUTANT RANTES (3-68) W 40-tych |
4 | POTRÓJNY MUTANT MIP-1-alfa (R18A-R46A-R48A) |
5 | POTRÓJNY MUTANT MIP-1-beta (K45A-R46A-K48A) |
6 | POTRÓJNY MUTANT W 50-tych RANTES |
7 | POTRÓJNY MUTANT W 40-tych Met-RANTES |
8 | MUTANT RANTES R44A |
9 | MUTANT RANTES K45A |
10 | MUTANT RANTES R47A |
11 | MUTANT RANTES K55A |
12 | MUTANT RANTES K56A |
13 | MUTANT RANTES R59A |
14 | Starter P1 |
15 | Starter P2 |
16 | Starter P3 |
17 | Starter P4 |
18 | Starter P5 |
19 | Starter P6 |
20 | Starter P7 |
21 | Starter P8 |
22 | Starter P9 |
23 | Starter P10 |
24 | Starter P11 |
25 | Starter P12 |
26 | Starter P13 |
27 | Starter P14 |
28 | Starter P15 |
29 | Starter P16 |
30 | WT-1309 |
31 | WT-MIP-1-alfa |
32 | WT-MIP-1-beta |
33 | WT-MIP-4 |
34 | WT-MIP-5 |
35 | WT-HCC1 |
36 | WT-136512 |
37 | WT-MCP-2 |
PL 204 231 B1
Lista sekwencji <110> APPLIED RESEARCH SYSTEMS ARS HOLDING N.V.
<120> MUTANTY CHEMOKIN W LECZENIU STWARDNIENIA ROZSIANEGO <130> WO465 <160> 37 <170> Patentln wersja 3.0 <210> 1 <211> 91 <212> BIAŁKO <213> Escherichia coli <220>
<221> sygnał <222> (1)...(23) <400> 1
Met | Lys | Val | Ser | Ala | Ala | Ala | Leu | Ala | Val | Ile | Leu | Ile | Ala | Thr | Ala |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Leu | Cys | Ala | Pro | Ala | Ser | Ala | Ser | Pro | Tyr | Ser | Ser | Asp | Thr | Thr | Pro |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Cys | Cys | Phe | Ala | Tyr | Ile | Ala | Arg | Pro | Leu | Pro | Arg | Ala | His | Ile | Lys |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Glu | Tyr | Phe | Tyr | Thr | Ser | Gly | Lys | Cys | Ser | Asn | Pro | Ala | Val | Val | Phe |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Val | Thr | Arg | Lys | Asn | Arg | Gin | Val | Cys | Ala | Asn | Pro | Glu | Lys | Lys | Trp |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Val | Arg | Glu | Tyr | Ile | Asn | Ser | Leu | Glu | Met | Ser | |||||
85 | 90 |
<210> 2 <211> 66 <212> BIAŁKO <213> Pichia pastoris <400> 2
Tyr | Ser | Ser | Asp | Thr | Thr | Pro | Cys | Cys | Phe | Ala | Tyr | Ile | Ala | Arg | Pro |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Leu | Pro | Arg | Ala | His | Ile | Lys | Glu | Tyr | Phe | Tyr | Thr | Ser | Gly | Lys | Cys |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Ser | Asn | Pro | Ala | Val | Val | Phe | Val | Thr | Ala | Ala | Asn | Ala | Gin | Val | Cys |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Ala | Asn | Pro | Glu | Lys | Lys | Trp | Val | Arg | Glu | Tyr | Ile | Asn | Ser | Leu | Glu |
65 | 70 | 75 | 80 |
Met Ser 65
PL 204 231 B1 <210> 3
--1> 91 <212> BIAŁKO <213> Escherichia coli <220>
<221> sygnał <222> (1)...(23) <400> 3
Met | Lys | Val | Ser | Ala | Ala | Ala | Leu |
1 | 5 | ||||||
Leu | Cys | Ala | Pro 20 | Ala | Ser | Ala | Ser |
Cys | Cys | Phe 35 | Ala | Tyr | Ile | Ala | Arg 40 |
Glu | Tyr 50 | Phe | Tyr | Thr | Ser | Gly 55 | Lys |
Val 65 | Thr | Ala | Ala | Asn | Ala 70 | Gin | Val |
Val | Arg | Glu | Tyr | Ile 85 | Asn | Ser | Leu |
Ala | Val 10 | Ile | Leu | Ile | Ala | Thr 15 | Ala |
Pro 25 | Tyr | Ser | Ser | Asp | Thr 30 | Thr | Pro |
Pro | Leu | Pro | Arg | Ala 45 | His | Ile | Lys |
Cys | Ser | Asn | Pro 60 | Ala | Val | Val | Phe |
Cys Glu | Ala Met 90 | Asn 75 Ser | Pro | Glu | Lys | Lys | Trp 80 |
<210> 4 <211> 70 <212> BIAŁKO <213> Escherichia coli <400> 4
Ala | Ser | Leu | Ala | Ala | ASp | Thr | Pro | Thr | Ala | Cys | Cys | Phe | Ser | Tyr | Thr |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ser | Ala | Gin | Ile | Pro | Gin | Asn | Phe | Ile | Ala | Asp | Tyr | Phe | Glu | Thr | Ser |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Ser | Gin | cys | Ser | Lys | Pro | Gly | Val | Ile | Phe | Leu | Thr | Lys | Ala | Ser | Ala |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Gin | Val | Cys | Ala | Asp | Pro | Ser | Glu | Glu | Trp | Val | Gin | Lys | Tyr | Val | Ser |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asp | Leu | Glu | Leu | Ser | Ala |
70 <210> 5 <211> 69 <212> BIAŁKO <213> Escherichia coli <400> 5
Ala | Pro | Met | Gly | Ser | Asp | Pro | Pro | Thr | Ala | Cys | Cys | Phe | Ser | Tyr | Thr |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ala | Arg | Lys | Leu | Pro | Arg | Asn | Phe | Val | Val | Asp | Tyr | Tyr | Glu | Thr | Ser |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Ser | Leu | cys | Ser | Gin | Pro | Ala | Val | Val | Phe | Gin | Thr | Ala | Ala | Ser | Ala |
PL 204 231 B1
35 | 40 | 45 | ||||||||||
Gin Val Cys Ala | Asp | Pro | Ser | Glu | Ser | Trp | Val | Gin | Glu | Tyr | Val | Tyr |
50 | 55 | 60 | ||||||||||
Asp Leu Glu Leu 65 | Asn | |||||||||||
<210> 6 <211> 91 <212> BIAŁKO | ||||||||||||
<213> Escherichia coli | ||||||||||||
<220> | ||||||||||||
<221> sygnał <222> (1)...(23) | ||||||||||||
<400> 6 Met Lys Val Ser | Ala | Ala | Ala | Leu | Ala | Val | Ile | Leu | Ile | Ala | Thr | Ala |
1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||
Leu Cys Ala Pro | Ala | Ser | Ala | Ser | Pro | Tyr | Ser | Ser | Asp | Thr | Thr | Pro |
20 | 25 | 30 | ||||||||||
Cys Cys Phe Ala | Tyr | Ile | Ala | Arg | Pro | Leu | Pro | Arg | Ala | His | Ile | Lys |
35 | 40 | 45 | ||||||||||
Glu Tyr Phe Tyr | Thr | Ser | Gly | Lys | Cys | Ser | Asn | Pro | Ala | Val | Val | Phe |
50 | 55 | 60 | ||||||||||
Val Thr Arg Lys | Asn | Arg | Gin | Val | Cys | Ala | Asn | Pro | Glu | Ala | Ala | Trp |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||
Val Ala Glu Tyr | Ile | Asn | Ser | Leu | Glu | Met | Ser |
90 <210> 7 <211> 92 <212> BIAŁKO <213> Escherichia coli
<400> 7 | |||||||||||||||
Met | Lys | Val | Ser | Ala | Ala | Ala | Leu | Ala | Val | Ile | Leu | Ile | Ala | Thr | Ala |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Leu | Cys | Ala | Pro | Ala | Ser | Ala | Met | Ser | Pro | Tyr | Ser | Ser | Asp | Thr | Thr |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Pro | Cys | Cys | Phe | Ala | Tyr | Ile | Ala | Arg | Pro | Leu | Pro | Arg | Ala | His | Ile |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Lys | Glu | Tyr | Phe | Tyr | Thr | Ser | Gly | Lys | Cys | Ser | Asn | Pro | Ala | Val | Val |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Phe | Val· | Thr | Ala | Ala | Asn | Ala | Gin | Val | Cys | Ala | Asn | Pro | Glu | Lys | Lys |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Trp | Val | Arg | Glu | Tyr | Ile | Asn | Ser | Leu | Glu | Met | Ser |
90 <210> 8 <211> 91
PL 204 231 B1 <212> BIAŁKO <213> Escherichia coli <220>
<221> sygnał <222> (1)...(23) <400> 8
Met | Lys | Val | Ser | Ala | Ala | Ala | Leu | Ala | Val | Ile | Leu | Ile | Ala | Thr | Ala |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Leu | Cys | Ala | Pro | Ala | Ser | Ala | Ser | Pro | Tyr | Ser | Ser | Asp | Thr | Thr | Pro |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Cys | Cys | Phe | Ala | Tyr | Ile | Ala | Arg | Pro | Leu | Pro | Arg | Ala | His | Ile | Lys |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Glu | Tyr | Phe | Tyr | Thr | Ser | Gly | Lys | Cys | Ser | Asn | Pro | Ala | Val | Val | Phe |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Val | Thr | Ala | Lys | Asn | Arg | Gin | Val | Cys | Ala | Asn | Pro | Glu | Lys | Lys | Trp |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Val | Arg | Glu | Tyr | Ile | Asn | Ser | Leu | Glu | Met | Ser |
90 <210> 9 <2ll> 91 <212> BIAŁKO <213> Escherichia coli
<220> <221> sygnał <222> (1)...(23) | ||||||||||||
<400> 9 Met Lys Val Ser | Ala | Ala | Ala | Leu | Ala | Val | Ile | Leu | Ile | Ala | Thr | Ala |
1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||
Leu Cys Ala Pro | Ala | Ser | Ala | Ser | Pro | Tyr | Ser | Ser | Asp | Thr | Thr | Pro |
20 | 25 | 30 | ||||||||||
Cys Cys Phe Ala | Tyr | Ile | Ala | Arg | Pro | Leu | Pro | Arg | Ala | His | Ile | Lys |
35 | 40 | 45 | ||||||||||
Glu Tyr Phe Tyr | Thr | Ser | Gly | Lys | Cys | Ser | Asn | Pro | Ala | Val | Val | Phe |
50 | 55 | 60 | ||||||||||
Val Thr Arg Ala | Asn | Arg | Gin | Val | Cys | Ala | Asn | Pro | Glu | Lys | Lys | Trp |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||
Val Arg Glu Tyr | Ile | Asn | Ser | Leu | Glu | Met | Ser | |||||
85 | 90 | |||||||||||
<210> 10 <211> 91 <212> BIAŁKO | ||||||||||||
<213> Escherichia coli | ||||||||||||
<400> 10 Met Lys Val Ser | Ala | Ala | Ala | Leu | Ala | Val | Ile | Leu | Ile | Ala | Thr | Ala |
PL 204 231 B1
5
Leu | Cys | Ala | Pro 20 | Ala | Ser | Ala | Ser |
Cys | Cys | Phe 35 | Ala | Tyr | Ile | Ala | Arg 40 |
Glu | Tyr 50 | Phe | Tyr | Thr | Ser | Gly 55 | Lys |
Val 65 | Thr | Arg | Lys | Asn | Ala 70 | Gin | Val |
Val | Arg | Glu | Tyr | Ile 85 | Asn | Ser | Leu |
Pro | 10 Tyr | Ser | Ser | Asp | Thr | 15 Thr | Pro |
25 Pro | Leu | Pro | Arg | Ala | 30 His | Ile | Lys |
Cys | Ser | Asn | Pro | 45 Ala | Val | Val | Phe |
Cys | Ala | Asn | 60 Pro | Glu | Lys | Lys | Trp |
Glu | Met 90 | 75 Ser | 80 |
<210> | 11 |
<211> | 91 |
<212> | BIAŁKO |
<213> | Escherichia coli |
<220> | |
<221> | sygnał |
<222> | (1)...(23) |
<400> | 11 |
Met | Lys | Val | Ser | Ala | Ala | Ala | Leu |
1 | 5 | ||||||
Leu | Cys | Ala | Pro 20 | Ala | Ser | Ala | Ser |
Cys | Cys | Phe 35 | Ala | Tyr | Ile | Ala | Arg 40 |
Glu | Tyr 50 | Phe | Tyr | Thr | Ser | Gly 55 | Lys |
Val 65 | Thr | Arg | Lys | Asn | Arg 70 | Gin | Val |
Val | Arg | Glu | Tyr | Ile 85 | Asn | Ser | Leu |
Ala | Val 10 | Ile | Leu | Ile | Ala | Thr 15 | Ala |
Pro 25 | Tyr | Ser | Ser | Asp | Thr 30 | Thr | Pro |
Pro | Leu | Pro | Arg | Ala 45 | His | Ile | Lys |
Cys | Ser | Asn | Pro 60 | Ala | Val | Val | Phe |
Cys Glu | Ala Met 90 | Asn 75 Ser | Pro | Glu | Ala | Lys | Trp 80 |
<210> 12 <211> 91 <212> BIAŁKO <213> Escherichia coli <220>
<221> sygnał <222> (1)...(23) <400> 12
Met 1 | Lys | Val | Ser | Ala 5 | Ala | Ala | Leu |
Leu | Cys | Ala | Pro 20 | Ala | Ser | Ala | Ser |
Cys | Cys | Phe 35 | Ala | Tyr | Ile | Ala | Arg 40 |
Ala | Val 10 | Ile | Leu | Ile | Ala | Thr 15 | Ala |
Pro 25 | Tyr | Ser | Ser | Asp | Thr 30 | Thr | Pro |
Pro | Leu | Pro | Arg | Ala 45 | His | Ile | Lys |
PL 204 231 B1
Glu Tyr 50 | Phe | Tyr | Thr | Ser | Gly 55 | Lys | Cys | Ser | Asn Pro Ala 60 | Val | Val | Phe | |||
Val | Thr | Arg | Lys | Asn | Arg | Gin | Val | Cys | Ala | Asn | Pro | Glu | Lys | Ala | Trp |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Val | Arg | Glu | Tyr | Ile | Asn | Ser | Leu | Glu | Met | Ser |
90
<210> | 13 |
<211> | 91 |
<212> | BIAŁKO |
<213> | Escherichia coli |
<220> | |
<221> | sygnał |
<222> | (1)...(23) |
<400> | 13 |
Met | Lys | Val | Ser | Ala | Ala | Ala | Leu | Ala | Val | Ile | Leu | Ile | Ala | Thr | Ala |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Leu | Cys | Ala | Pro | Ala | Ser | Ala | Ser | Pro | Tyr | Ser | Ser | Asp | Thr | Thr | Pro |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Cys | Cys | Phe | Ala | Tyr | Ile | Ala | Arg | Pro | Leu | Pro | Arg | Ala | His | Ile | Lys |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Glu | Tyr | Phe | Tyr | Thr | Ser | Gly | Lys | Cys | Ser | Asn | Pro | Ala | Val | Val | Phe |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Val | Thr | Arg | Lys | Asn | Arg | Gin | Val | Cys | Ala | Asn | Pro | Glu | Lys | Lys | Trp |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Val | Arg | Glu | Tyr | Ile | Asn | Ser | Leu | Glu | Met | Ser | |||||
85 | 90 |
<210> 14 <211> 25 <212> DNA <213> Escherichia coli <400> 14 tttgtcaccg caaagaaccg ccaag <210> 15 <211> 25 <212> DNA <213> Escherichia coli <400> 15 gacgactgct gggttggagc acttg <210> 16 <211> 25 <212> DNA <213> Escherichia coli
PL 204 231 B1
<400> 22 gccaacccag aggcgaaatg ggttcgg
PL 204 231 B1
<210> 29 <211> 33 <212> DNA
PL 204 231 B1 <213> Escherichia coli <400> 29 acacacttgg cggttctttc gggtgacaaa gac <210> 30 <211> 74 <212> białko <213> Escherichia coli <400> 30
Ser | Lys | Ser | Met | Gin | Val | Pro | Phe | Ser | Arg | Cys | Cys | Phe | Ser | Phe | Ala |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Glu | Gin | Glu | Ile | Pro | Leu | Arg | Ala | Ile | Leu | Cys | Tyr | Arg | Asn | Thr | Ser |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Ser | Ile | Cys | Ser | Asn | Glu | Gly | Leu | Ile | Phe | Lys | Leu | Lys | Arg | Gly | Lys |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Glu | Ala | Cys | Ala | Leu | Asp | Thr | Val | Gly | Trp | Val | Gin | Arg | His | Arg | Lys |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Met | Leu | Arg | His | Cys | Pro | Ser | Lys | Arg | Lys | ||||||
65 | 70 |
<210> 31 <211> 70 <212> białko <213> Escherichia coli <400> 31
Ala Ser Leu Ala Ala Asp | Thr | Pro | Thr | Ala | Cys | Cys | Phe | Ser | Tyr | Thr | |||||
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ser | Arg | Gin | Ile | Pro | Gin | Asn | Phe | Ile | Ala | Asp | Tyr | Phe | Glu | Thr | Ser |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Ser | Gin | Cys | Ser | Lys | Pro | Gly | Val | Ile | Phe | Leu | Thr | Lys | Arg | Ser | Arg |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Gin | Val | Cys | Ala | Asp | Pro | Ser | Glu | Glu | Trp | Val | Gin | Lys | Tyr | Val | Ser |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Asp | Leu | Glu | Leu | Ser | Ala | ||||||||||
65 | 70 |
<210> 32 <211> 68 <212> białko <213> Escherichia coli <400> 32
Ser | Phe | His | Phe | Ala | Ala | Asp | Cys | Cys | Thr | Ser | Tyr | Ile | Ser | Gin | Ser |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Ile | Pro | Cys | Ser | Leu | Met | Lys | Ser | Tyr | Phe | Glu | Thr | Ser | Ser | Glu | Cys |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Ser | Lys | Pro | Gly | Val | Ile | Phe | Leu | Thr | Lys | Lys | Gly | Arg | Gin | Val | Cys |
35 | 40 | 45 |
PL 204 231 B1
Ala Lys Pro Ser Gly Pro Gly Val 50 55
Pro Tyr Ser Ile <210> 33 <211> 68 <212> białko <213> Escherichia coli <400> 33
Gin Asp Cys Met Lys Lys Leu Lys 60
Gin | Val | Gly | Thr | Asn | Lys | Glu | Leu |
1 | 5 | ||||||
Gin | Ile | Pro | Gin | Lys | Phe | Ile | Val |
20 | |||||||
Cys | Pro | Lys | Leu | Gly | Val | Ile | Leu |
35 | 40 | ||||||
Cys | Ala | Asp | Pro | Asn | Lys | Lys | Trp |
50 | 55 | ||||||
Lys | Leu | Asn | Ala |
Cys | Cys 10 | Leu | Val | Tyr | Thr | Ser 15 | Trp |
Asp 25 | Tyr | Ser | Glu | Thr | Ser 30 | Pro | Gin |
Leu | Thr | Lys | Arg | Gly 45 | Arg | Gin | Ile |
Val | Gin | Lys | Tyr 60 | Ile | Ser | Asp | Leu |
<210> 34 <211> 76 <212> białko <213> Escherichia coli <400> 34
Asp 1 | Arg | Phe | His | Ala 5 | Thr | Ser | Ala |
Arg | Ser | Ile | Pro 20 | Cys | Ser | Leu | Leu |
Glu | Cys | Ser 35 | Lys | Pro | Gly | Val | Ile 40 |
Phe | Cys 50 | Ala | Asn | Pro | Ser | Asp 55 | Lys |
Leu 65 | Lys | Leu | Asp | Thr | Arg 70 | Ile | Lys |
Asp | Cys 10 | Cys | Ile | Ser | Tyr | Thr 15 | Pro |
Glu 25 | Ser | Tyr | Phe | Glu | Thr 30 | Asn | Ser |
Phe | Leu | Thr | Lys | Lys 45 | Gly | Arg | Arg |
Gin Thr | Val Arg | Gin Lys 75 | Val 60 Asn | Cys | Met | Arg | Met |
<210> 35 <211> 74 <212> białko <213> Escherichia coli <400> 35
Thr 1 | Lys | Thr | Glu | Ser 5 | Ser | Ser | Arg |
Cys | Phe | Thr | Tyr 20 | Thr | Thr | Tyr | Lys |
Tyr | Tyr | Glu 35 | Thr | Asn | Ser | Gin | Cys 40 |
Gly Pro Tyr 10 | His | Pro | Ser | Glu 15 | Cys | ||
Ile | Pro | Arg | Gin | Arg | Ile | Met | Asp |
25 | 30 | ||||||
Ser | Lys | Pro | Gly | Ile | Val | Phe | Ile |
45 |
PL 204 231 B1
Thr Lys Arg | Gly | His | Ser | Val | Cys | Thr | Asn | Pro | Ser | Asp | Lys | Trp | Val |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Gin Asp Tyr | Ile | Lys | Asp | Met | Lys | Glu | Asn | ||||||
65 | 70 | ||||||||||||
<210> 36 | |||||||||||||
<211> 96 | |||||||||||||
<212> białko | |||||||||||||
<213> Escherichia coli | |||||||||||||
<400> 36 | |||||||||||||
Pro Lys Val | Pro | Glu | Trp | Val | Asn | Thr | Pro | Ser | Thr | Cys | Cys | Leu | Lys |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
Tyr Tyr Glu | Lys | Val | Leu | Pro | Arg | Arg | Leu | Val | Val | Gly | Tyr | Arg | Lys |
20 | 25 | 30 | |||||||||||
Ala Leu Asn | Cys | His | Leu | Pro | Ala | Ile | Ile | Phe | Val | Thr | Lys | Arg | Asn |
35 | 40 | 45 | |||||||||||
Arg Glu Val | Cys | Thr | Asn | Pro | Asn | Asp | Asp | Trp | Val | Gin | Glu | Tyr | Ile |
50 | 55 | 60 | |||||||||||
Lys Asp Pro | Asn | Leu | Pro | Leu | Leu | Pro | Thr | Arg | Asn | Leu | Ser | Thr | Val |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
Lys Ile Ile | Thr | Ala | Lys | Asn | Gly | Gin | Pro | Gin | Leu | Leu | Asn | Ser | Gin |
85 | 90 |
<210> 37 <211> 76 <212> białko <213> Escherichia coli <400> 37
Gin Pro Asp Ser Val Ser Ile Pro Ile Thr Cys Cys Phe Asn Val Ile
5 10 15
Asn Arg Lys Ile Pro Ile Gin Arg Leu Glu Ser Tyr Thr Arg Ile Thr
25 30
Asn Ile Gin Cys Pro Lys Glu Ala Val Ile Phe Lys Thr Lys Arg Gly
40 45
Lys Glu Val Cys Ala Asp Pro Lys Glu Arg Trp Val Arg Asp Ser Met
55 60
Lys His Leu Asp Gin Ile Phe Gin Asn Leu Lys Pro 65 70 75
Claims (7)
1. Zastosowanie mutanta chemokiny CC, wybranego z grupy składającej się z mutanta RANTES o SEK NR ID: 3, mutanta RANTES o SEK NR ID: 2, mutanta MIP-1-alfa o SEK NR ID: 4 oraz mutanta MIP-1-beta o SEK NR ID: 5 do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do leczenia stwardnienia rozsianego.
2. Kompozycja farmaceutyczna do leczenia stwardnienia rozsianego zawierająca składnik aktywny oraz farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę, znamienna tym, że jako składnik aktywny zawiera mutanta chemokiny CC wybranego z grupy z grupy składającej się z mutanta RANTES o SEK NR ID: 3, mutanta RANTES o SEK NR ID:2, mutanta MIP-1-alfa o SEK NR ID: 4 oraz mutanta MIP-1-beta o SEK NR ID: 5.
3. Skrócona i zmutowana ludzka RANTES o sekwencji aminokwasowej SEK NR ID: 2.
4. Cząsteczka DNA zawierająca sekwencję DNA kodującą skróconą i zmutowaną RANTES określoną w zastrz. 3.
5. Wektor ekspresyjny zawierający cząsteczkę DNA określoną w zastrz. 4.
6. Komórka gospodarza zawierająca wektor ekspresyjny określony w zastrz. 5.
7. Rekombinacyjny sposób wytwarzania polipeptydu określonego w zastrz. 3, znamienny tym, że obejmuje hodowanie w odpowiedniej pożywce komórek określonych w zastrz. 6.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP00121665 | 2000-10-04 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL362350A1 PL362350A1 (pl) | 2004-10-18 |
PL204231B1 true PL204231B1 (pl) | 2009-12-31 |
Family
ID=8170011
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL362350A PL204231B1 (pl) | 2000-10-04 | 2001-10-03 | Zastosowanie mutanta chemokiny CC, kompozycja farmaceutyczna do leczenia stwardnienia rozsianego, skrócona i zmutowana ludzka RANTES i sposób jej wytwarzania, cząsteczka DNA i zawierający ją wektor ekspresyjny oraz komórka gospodarza |
Country Status (31)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7402303B2 (pl) |
EP (1) | EP1326628B1 (pl) |
JP (1) | JP3908165B2 (pl) |
KR (1) | KR100837898B1 (pl) |
CN (1) | CN1285381C (pl) |
AR (1) | AR030854A1 (pl) |
AT (1) | ATE265222T1 (pl) |
AU (2) | AU2002215919B2 (pl) |
BG (1) | BG66137B1 (pl) |
BR (1) | BR0114407A (pl) |
CA (1) | CA2423616C (pl) |
CZ (1) | CZ303409B6 (pl) |
DE (1) | DE60103078T2 (pl) |
DK (1) | DK1326628T3 (pl) |
EA (1) | EA006137B1 (pl) |
EE (1) | EE05174B1 (pl) |
ES (1) | ES2217199T3 (pl) |
HK (1) | HK1062811A1 (pl) |
HR (1) | HRP20030215B1 (pl) |
HU (1) | HUP0302194A3 (pl) |
IL (2) | IL155178A0 (pl) |
MX (1) | MXPA03003008A (pl) |
NO (1) | NO330278B1 (pl) |
PL (1) | PL204231B1 (pl) |
PT (1) | PT1326628E (pl) |
RS (1) | RS50738B (pl) |
SI (1) | SI1326628T1 (pl) |
SK (1) | SK287523B6 (pl) |
UA (1) | UA77950C2 (pl) |
WO (1) | WO2002028419A2 (pl) |
ZA (1) | ZA200302315B (pl) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2002358144B2 (en) | 2001-12-17 | 2008-10-02 | Laboratoires Serono Sa | Chemokine mutants acting as chemokine antagonists |
AU2003240758B2 (en) | 2002-04-04 | 2008-03-13 | Laboratoires Serono Sa | Chemokines mutants having improved oral bioavailability |
EP1575608B1 (en) * | 2002-12-23 | 2008-05-07 | Laboratoires Serono SA | Use of cc-chemokine ccl5/rantes mutants against liver diseases |
AU2004283910A1 (en) * | 2003-10-22 | 2005-05-06 | Laboratoires Serono Sa | Novel CXCL8 antagonists |
AT412785B (de) * | 2003-12-04 | 2005-07-25 | Kungl Andreas J Dr | Gag-bindungsproteine |
DE60304435T2 (de) * | 2004-01-19 | 2006-08-24 | Ares Trading S.A. | Verfahren zur Reinigung von in Bakterien exprimierten Proteinen |
GB0412400D0 (en) * | 2004-06-03 | 2004-07-07 | Univ Newcastle | Treatment of inflammatory conditions |
EP1760110B1 (en) * | 2005-09-03 | 2011-11-02 | Samsung SDI Co., Ltd. | Polybenzoxazine-based compound, electrolyte membrane including the same, and fuel cell employing the electrolyte membrane |
GB0614755D0 (en) | 2006-07-25 | 2006-09-06 | Univ Geneve | Cytokine derivatives |
EP2185719B1 (en) | 2007-08-02 | 2013-11-13 | NovImmune SA | Anti-rantes antibodies and methods of use thereof |
KR101784177B1 (ko) * | 2010-02-08 | 2017-10-11 | 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 | Rantes를 암호화하는 핵산 분자, 그리고 이를 포함하는 조성물 및 이의 사용 방법 |
CA3101052A1 (en) | 2018-05-28 | 2019-12-05 | ORION Biotechnology Switzerland Sarl | Methods of inhibiting cerebral inflammation |
WO2022093857A1 (en) * | 2020-10-26 | 2022-05-05 | City Of Hope | Oncolytic virus compositions and methods for the treatment of cancer |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5739103A (en) * | 1993-11-12 | 1998-04-14 | Dana-Farber Cancer Institute | Chemokine N-terminal deletion mutations |
WO1998006751A1 (en) | 1996-08-16 | 1998-02-19 | Research Corporation Technologies, Inc. | Mcp-3, rantes and mip-1alpha receptor antagonists |
EP0906954A1 (en) * | 1997-09-29 | 1999-04-07 | Applied Research Systems ARS Holding N.V. | Amino-terminal truncated c-c chemokines as chemokine antagonist |
ATE308616T1 (de) * | 1997-12-23 | 2005-11-15 | San Raffaele Centro Fond | Rantes mutanten und deren therapeutische verwendungen |
CA2361256A1 (en) * | 1999-01-29 | 2000-08-03 | James B. Rottman | Method of treating demyelinating inflammatory disease using ccr1 antagonists |
-
2001
- 2001-03-10 UA UA2003044038A patent/UA77950C2/uk unknown
- 2001-10-03 AU AU2002215919A patent/AU2002215919B2/en not_active Ceased
- 2001-10-03 WO PCT/EP2001/011428 patent/WO2002028419A2/en active IP Right Grant
- 2001-10-03 KR KR1020037004599A patent/KR100837898B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-10-03 CZ CZ20030947A patent/CZ303409B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-10-03 CN CNB018199178A patent/CN1285381C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-10-03 CA CA2423616A patent/CA2423616C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-10-03 PT PT01986265T patent/PT1326628E/pt unknown
- 2001-10-03 ZA ZA200302315A patent/ZA200302315B/en unknown
- 2001-10-03 DE DE60103078T patent/DE60103078T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-10-03 MX MXPA03003008A patent/MXPA03003008A/es active IP Right Grant
- 2001-10-03 HU HU0302194A patent/HUP0302194A3/hu unknown
- 2001-10-03 BR BR0114407-3A patent/BR0114407A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-10-03 AT AT01986265T patent/ATE265222T1/de active
- 2001-10-03 SK SK406-2003A patent/SK287523B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-10-03 IL IL15517801A patent/IL155178A0/xx unknown
- 2001-10-03 RS YUP-257/03A patent/RS50738B/sr unknown
- 2001-10-03 DK DK01986265T patent/DK1326628T3/da active
- 2001-10-03 PL PL362350A patent/PL204231B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2001-10-03 EE EEP200300139A patent/EE05174B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-10-03 US US10/398,457 patent/US7402303B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-10-03 EP EP01986265A patent/EP1326628B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-10-03 EA EA200300439A patent/EA006137B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-10-03 ES ES01986265T patent/ES2217199T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-10-03 JP JP2002532243A patent/JP3908165B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-10-03 AU AU1591902A patent/AU1591902A/xx active Pending
- 2001-10-03 SI SI200130130T patent/SI1326628T1/xx unknown
- 2001-10-04 AR ARP010104684A patent/AR030854A1/es unknown
-
2003
- 2003-03-20 HR HR20030215A patent/HRP20030215B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2003-03-28 BG BG107685A patent/BG66137B1/bg unknown
- 2003-04-01 IL IL155178A patent/IL155178A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-04-03 NO NO20031525A patent/NO330278B1/no not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-08-02 HK HK04105657A patent/HK1062811A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU708558B2 (en) | Human chemokine beta-9 | |
PL204231B1 (pl) | Zastosowanie mutanta chemokiny CC, kompozycja farmaceutyczna do leczenia stwardnienia rozsianego, skrócona i zmutowana ludzka RANTES i sposób jej wytwarzania, cząsteczka DNA i zawierający ją wektor ekspresyjny oraz komórka gospodarza | |
MXPA97001330A (en) | Chemistry beta-9 hum | |
EP1673103A1 (en) | Therapeutic uses of chemokine variants | |
WO2003084993A1 (en) | Novel antagonists of mcp proteins | |
AU2003255505B2 (en) | Antagonists of CXR3-binding CXC chemokines | |
AU2002215919A1 (en) | Chemokine mutants in the treatment of multiple sclerosis | |
EP1458756A1 (en) | Chemokine mutants acting as chemokine antagonists | |
AU711573B2 (en) | Short forms of chemokine beta-8 | |
US20030138400A1 (en) | Short forms of chemokine beta-8 | |
CA2233367A1 (en) | Short forms of chemokine .beta.-8 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20131003 |