PL199989B1 - 2-amino-N-[(1R)-2-[(3R)-3-benzylo-3-(N,N',N' -trimetylohydrazynokarbonylo)piperydyn-1-ylo]-1-(1H-indol-3-ilometylo)-2-oksoetylo]-2-metylopropionoamid, zawierająca go kompozycja farmaceutyczna oraz zastosowanie - Google Patents

2-amino-N-[(1R)-2-[(3R)-3-benzylo-3-(N,N',N' -trimetylohydrazynokarbonylo)piperydyn-1-ylo]-1-(1H-indol-3-ilometylo)-2-oksoetylo]-2-metylopropionoamid, zawierająca go kompozycja farmaceutyczna oraz zastosowanie

Info

Publication number
PL199989B1
PL199989B1 PL356993A PL35699300A PL199989B1 PL 199989 B1 PL199989 B1 PL 199989B1 PL 356993 A PL356993 A PL 356993A PL 35699300 A PL35699300 A PL 35699300A PL 199989 B1 PL199989 B1 PL 199989B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
compound
growth hormone
pharmaceutically acceptable
solution
treatment
Prior art date
Application number
PL356993A
Other languages
English (en)
Other versions
PL356993A1 (pl
Inventor
Michael Ankersen
Original Assignee
Novo Nordisk As
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novo Nordisk As filed Critical Novo Nordisk As
Publication of PL356993A1 publication Critical patent/PL356993A1/pl
Publication of PL199989B1 publication Critical patent/PL199989B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Abstract

Przedmiotem wynalazku jest nowy, diastereoizomeryczny zwi azek 2-amino-N-[(1R)-2-[(3R)- -3-benzylo-3-(N,N',N'-trimetylohydrazynokarbonylo)piperydyn-1-ylo]-1-(1H-indol-3-ilometylo)-2-okso- etylo]-2-metylopropionoamid, jego farmaceutycznie dopuszczalna sól, kompozycja farmaceutyczna go zawieraj aca oraz jego zastosowanie do leczenia zaburze n wywo lanych przez niedobór hormonu wzrostu. PL PL PL PL PL PL PL PL

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest nowy związek 2-amino-N-[(1R)-2-[(3R)-3-benzylo-3-(N,N',N'-trimetylohydrazynokarbonylo)piperydyn-1-ylo]-1-(1 H-indol-3-ilometylo)-2-oksoetylo]-2-metylopropionoamid, jego farmaceutycznie dopuszczalne sole, zawierające go kompozycje farmaceutyczne oraz jego zastosowanie w leczeniu zaburzeń wywołanych przez niedobór hormonu wzrostu.
Hormon wzrostu jest hormonem stymulującym wzrost wszystkich tkanek zdolnych do wzrostu. Ponadto wiadomo, że hormon wzrostu oddziałuje na wiele procesów metabolicznych, np. stymuluje syntezę białka i mobilizuje wolne kwasy tłuszczowe i zamienia metabolizm energetyczny z węglowodanowego na metabolizm kwasów tłuszczowych. Niedobór hormonu wzrostu może prowadzić do wielu groźnych zaburzeń, np. karłowatości.
Hormon wzrostu jest uwalniany z przysadki mózgowej. Uwalnianie pozostaje pod ścisłą, bezpośrednią lub pośrednią, kontrolą wielu hormonów i neuroprzekaźników. Uwalnianie hormonu wzrostu może stymulować peptyd uwalniający hormon wzrostu (GHRH) i hamować somatostatynę. W obu przypadkach hormony uwalniane są z podwzgórza, lecz w ich działaniu pośredniczą głównie specyficzne receptory umieszczone w przysadce mózgowej. Opisano także inne związki stymulujące uwalnianie hormonu wzrostu z przysadki mózgowej. Na przykład arginina, 1-3,4-dihydroksyfenyloalanina (1-Dopa), glukagon, wazopresyna, PACAP (peptyd aktywujący przysadkową cyklazę adenylanową), agoniści receptora muskarynowego i syntetyczny heksapeptyd, GHRP (peptyd uwalniający hormon wzrostu) uwalniają endogenny hormon wzrostu albo bezpośrednio działając na przysadkę mózgową lub stymulując uwalnianie GHRH i/lub somatostatyny z podwzgórza.
W zaburzeniach lub stanach, gdy pożądane jest zwiększenie poziomu hormonu wzrostu, białkowe własności hormonu wzrostu sprawiają, że inne podawanie niż pozajelitowe nie jest możliwe. Ponadto inne bezpośrednio działające naturalne substancje wydzielające, np. GHRH i PACAP, są dłuższymi polipeptydami, dla których korzystnym podawaniem jest podawanie pozajelitowe.
Zastosowanie niektórych związków w celu zwiększenia poziomów hormonu wzrostu u ssaków ujawniono już wcześniej, np. w EP 18072, EP 83864, zgłoszeniach WO 8302272, WO 8907110, WO 8901711, WO 8910933, WO 8809780, WO 9118016, WO 9201711, WO 9304081, WO 9413696, WO 9517423, WO 9514666, WO 9615148, WO 9622997, WO 9635713, WO 9700894, WO 9722620, WO 9723508, WO 9740023 i WO 9810653.
Budowa związków uwalniających hormon wzrostu jest istotna ze względu na moc uwalniania hormonu wzrostu, jak również z uwagi na biodostępność. Zatem celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie nowego związku o właściwościach uwalniania hormonu wzrostu. Ponadto, celem wynalazku jest zapewnienie nowego związku uwalniającego hormon wzrostu (substancja uwalniająca hormon wzrostu), który jest specyficzny i/lub selektywny i w ogóle lub zasadniczo nie wykazuje znaczących efektów ubocznych, takich jak np. uwalnianie LH, FSH, TSH, ACTH, wazopresyny, oksytocyny, kortyzolu i/lub prolaktyny. Celem jest także związek o dobrej biodostępności po podaniu doustnym.
Zgodnie z niniejszym wynalazkiem dostarczono nowy związek, który działa bezpośrednio na komórki przysadki mózgowej w normalnych warunkach doświadczalnych in vitro w celu uwalniania z nich hormonu wzrostu.
Związek uwalniający hormon wzrostu może być stosowany in vitro, jako unikatowe narzędzia badawcze między innymi w celu poznania sposobu regulacji sekrecji hormonu wzrostu na poziomie przysadki mózgowej.
Ponadto, związek uwalniający hormon wzrostu według niniejszego wynalazku można także podawać in vivo w celu zwiększenia endogennego uwalniania hormonu wzrostu.
Zgodnie z tym, przedmiotem niniejszego wynalazku jest związek, który można otrzymać z zastosowaniem procedury opisanej w przykładzie 1 lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól.
Zatem, przedmiotem wynalazku jest związek, którym jest 2-amino-N-[(1R)-2-[(3R)-3-benzylo-3-(N,N',N'-trimetylohydrazynokarbonylo)piperydyn-1-ylo--1-(1H-indol-3-ilometylo)-2-oksoetylo--2-metylopropionoamid
PL 199 989 B1 lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól.
Przedmiotem wynalazku jest również kompozycja farmaceutyczna, charakteryzująca się tym, że zawiera jako aktywny składnik związek określony powyżej lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól razem z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem lub rozcieńczalnikiem.
Przedmiot wynalazku stanowi także kompozycja farmaceutyczna określona powyżej do stymulacji uwalniania hormonu wzrostu z przysadki mózgowej.
Wynalazek dotyczy również kompozycji farmaceutycznej określonej powyżej do podawania zwierzętom do zwiększenia tempa i zakresu ich wzrostu, zwiększenia produkcji mleka i wełny lub do leczenia schorzeń.
Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie związku jak określono powyżej lub kompozycji farmaceutycznej jak określono powyżej do wytwarzania leku.
W korzystnej postaci realizacji wynalazek dotyczy również zastosowania do wytwarzania leku do stymulacji uwalniania hormonu wzrostu z przysadki mózgowej ssaka.
Budowę związku według wynalazku otrzymywanego według przykładu 1 można zweryfikować np. metodą dyfrakcyjnej analizy rentgenowskiej (np. jak opisano w Remington: The Science and Practice of Pharmacy, wydanie 19 (1995), szczególnie str. 160 i 561-562).
Wynalazek obejmuje dowolną możliwą kombinację dwóch lub więcej opisanych tu rozwiązań.
Stosowana tu procedura preparatywna opiera się na sprzęganiu peptydów, dobrze znanym w tej dziedzinie, i nie powinna być w żadnej mierze interpretowana jako ograniczająca wynalazek w jakikolwiek sposób.
Zgodnie z tą procedurą, przed sprzęganiem reszt aminokwasowych lub peptydowych, odpowiednią grupę zabezpieczającą, taką jak tert-butyloksykarbonyl (Boc), można usunąć metodami dobrze znanymi fachowcom w tej dziedzinie. Można także nie stosować grup zabezpieczających. Odpowiednie aminokwasy można zabezpieczać i odbezpieczać metodami znanymi w tej dziedzinie i opisanymi przez np. T. W. Green (Protective Groups in Organic Synthesis, wydanie 2, John Wiley and Sons, New York 1991).
Szczegółowo opisano tę procedurę w przykładzie 1.
W wyniku rozdzielenia mieszaniny racemicznej estru 1-tert-butylowego kwasu 3-benzylopiperydyno-1,3-dikarboksylowego w celu otrzymania enancjomerów, związek końcowy otrzymany tą metodą jest diastereoizomerem 2-amino-N-[(1R)-2-[(3R)-3-benzylo-3-(N,N',N'-trimetylohydrazynokarbonylo)-pi perydyn-1 -ylo]-1 -(1 H-indol-3-ilometylo)-2-oksoetylo]-2-metylopropionoamidu a nie mieszaniną dwóch diastereoizomerów.
Związek według niniejszego wynalazku wykazuje ulepszoną odporność na degradację proteolityczną przez enzymy, ponieważ nie jest związkiem naturalnym, a w szczególności z uwagi na to, że naturalne wiązania amidowe są zastąpione nie występującymi naturalnie mimetykami wiązania amidowego. Można oczekiwać, że zwiększona odporność na degradację proteolityczną związku według wynalazku, w porównaniu ze znanymi peptydami uwalniającymi hormony, zwiększy jego biodostępność w porównaniu z dotychczas opisywanymi w literaturze peptydami.
Związek według niniejszego wynalazku może ewentualnie występować w formie farmaceutycznie dopuszczalnych soli, takich jak farmaceutycznie dopuszczalne sole addycyjne z kwasowymi formami związków według niniejszego wynalazku. Obejmują one sole wytworzone przez poddanie związku reakcji z kwasem nieorganicznym lub organicznym, takim jak kwas chlorowodorowy, bromowodorowy, siarkowy, octowy, fosforowy, mlekowy, maleinowy, migdałowy, ftalowy, cytrynowy, glutarowy, glukonowy, metanosulfonowy, salicylowy, bursztynowy, winowy, toluenosulfonowy, trifluorooctowy, amidosulfonowy, fumarowy i/lub wodą.
Związek według wynalazku można podawać w postaci farmaceutycznie dopuszczalnej soli addycyjnej z kwasem lub, tam gdzie to jest odpowiednie, jako sól metalu alkalicznego lub metalu ziem alkalicznych lub sól amonową niższego alkilu. Przyjmuje się, że sole w takich postaciach wykazują w przybliżeniu aktywności takiego samego rzędu jak wolna zasada.
PL 199 989 B1
Zgodnie z innym aspektem wynalazku, kompozycja farmaceutyczna zawiera jako aktywny składnik związek według niniejszego wynalazku lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól razem z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem lub rozcieńczalnikiem.
Kompozycje farmaceutyczne zawierające związek według niniejszego wynalazku można otrzymać typowymi technikami, np. opisanymi w Remington's Pharmaceutical Sciences, 1985 lub w Remington: The Science and Practice of Pharmacy, wydanie 19 (1995). Kompozycje mogą mieć typową postać, np. kapsułek, tabletek, aerozoli, roztworów, zawiesin lub do podawania miejscowego.
Farmaceutycznym nośnikiem lub rozcieńczalnikiem może być typowy nośnik w postaci stałej lub ciekłej. Przykładami nośników stałych są laktoza, kaolin, sacharoza, cyklodekstryna, talk, żelatyna, agar, pektyna, guma arabska, stearynian magnezu, kwas stearynowy lub etery niższego alkilu i celulozy. Przykładami ciekłych nośników są syrop, olej arachidowy, oliwa z oliwek, fosfolipidy, kwasy tłuszczowe, aminy kwasów tłuszczowych, polioksyetylen lub woda.
Podobnie, nośnik lub rozcieńczalnik może obejmować dowolną substancję o przedłużonym uwalnianiu znaną w tej dziedzinie, taką jak monostearynian glicerylu lub distearynian glicerylu, sam lub zmieszany z woskiem.
Jeśli stały nośnik stosuje się do podawania doustnego, to preparat może być tabletkowany, umieszczony w twardej żelatynowej kapsułce w postaci proszku lub peletek lub może występować w postaci kołaczyka lub pastylki do ssania. Ilość stałego nośnika będzie się zmieniać w szerokim zakresie, lecz zazwyczaj mieści się w zakresie od około 25 mg do około 1 g. Jeśli stosuje się ciekły nośnik, preparat może występować w postaci syropu, emulsji, miękkiej kapsułki żelatynowej lub sterylnej cieczy do wstrzykiwania, takiej jak wodna lub niewodna ciekła zawiesina lub roztwór.
Typowa tabletka, którą można wytworzyć typowymi technikami tabletkowania może zawierać:
Rdzeń:
Związek aktywny (w formie wolnej lub jako sól) 10 mg
Koloidalny ditlenek krzemu (Aerosil) 1,5 mg
Mikrokrystaliczna celuloza (Avicel) 7 Omg
Zmodyfikowana guma celulozowa (Ac-Di-Sol) 7,5 mg
Stearynian magnezu
Otoczka:
HPMC około 9 mg *Mywacett 9-47 T około ,,5 mg *Acylowany monogliceryd stosowany jako plastyfikator warstwy powlekającej.
Do podawania donosowo, preparat może zawierać związek według niniejszego wynalazku rozpuszczony lub zawieszony w ciekłym nośniku, w szczególności nośniku wodnym, do zastosowania jako aerozol. Nośnik może zawierać dodatki takie jak środki rozpuszczające, np. glikol propylenowy, surfaktanty, czynniki zwiększające absorpcję takie jak lecytyna (fosfatydylocholina) lub cyklodekstryna, lub środki konserwujące takie jak parabeny.
Na ogół, związki według niniejszego wynalazku występują w jednostkowej postaci dawkowania zawierającej 57-277 mg aktywnego składnika razem z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem.
Dawkowanie związków według wynalazku wynosi odpowiednio 7,71-577 mg/dzień, np. od około 5 do około 57 mg, jak np. około 17 mg na dawkę podawaną pacjentowi, np. człowiekowi, jako lek.
W kolejnym aspekcie przedmiotowego wynalazku, kompozycja farmaceutyczna w jednostkowej postaci dawkowania zawiera jako składnik aktywny od około 17 do około 277 mg związku według wynalazku lub jego farmaceutycznie dopuszczalnej soli.
Wykazano, że związek według niniejszego wynalazku ma zdolność do uwalniania endogennego hormonu wzrostu in vivo. Związek można więc stosować w leczeniu stanów, które wymagają zwiększonego stężenia hormonu wzrostu w osoczu, takich jak niedobór hormonu wzrostu u ludzi lub u pacjentów w podeszłym wieku lub u zwierząt gospodarskich.
Zatem w szczególnym aspekcie przedmiotowego wynalazku, kompozycja farmaceutyczna zawierająca, jako aktywny składnik, związek według niniejszego wynalazku lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól razem z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem lub rozcieńczalnikiem, stymuluje uwalnianie hormonu wzrostu z przysadki mózgowej.
Dla fachowców w tej dziedzinie zrozumiałe jest, że aktualne i potencjalne zastosowania hormonu wzrostu u ludzi są różnorodne. Zatem, związek według niniejszego wynalazku można podawać w celach stymulacji uwalniania hormonu wzrostu z przysadki mózgowej i dawałby wówczas podobne efekty lub zastosowania jak sam hormon wzrostu. Związki według niniejszego wynalazku są przydatne
PL 199 989 B1 w celu: stymulacji uwalniania hormonu wzrostu u osób w podeszłym wieku, zapobiegania katabolicznym efektom ubocznym glukokortykoidów, zapobiegania i leczenia osteoporozy, leczenia zespołu przewlekłego zmęczenia (CFS), leczenia zespołu ostrego zmęczenia i utraty masy mięśniowej w wyniku dowolnego zabiegu operacyjnego, stymulacji układu immunologicznego, przyśpieszenia gojenia ran, przyśpieszenia zrastania się kości, przyśpieszenia gojenia się skomplikowanych złamań, np. zapoczątkowania osteogenezy, leczenia wyniszczenia organizmu w efekcie złamania kości, leczenia opóźnienia wzrostu, leczenia opóźnienia wzrostu wywołanego uszkodzeniem nerek lub ich niewydolnością, leczenia kardiomiopatii, leczenia wyniszczenia organizmu wywołanego przewlekłą chorobą wątroby, leczenia małopłytkowości, leczenia opóźnienia wzrostu wywołanego chorobą Crohna, leczenia zespołu jelita krótkiego, leczenia wyniszczenia organizmu w połączeniu z przewlekłą obturacyjną chorobą płuc (COPD), leczenia powikłań związanych z transplantacją, leczenia wywołanego przyczynami fizjologicznymi niskiego wzrostu, obejmującego niedobór hormonu wzrostu u dzieci i niski wzrost związany z chorobami przewlekłymi, leczenia otyłości i opóźnienia wzrostu związanego z otyłością, leczenia anoreksji, leczenia opóźnienia wzrostu związanego z zespołem Pradera-Willi'ego i zespołem Turnera; zwiększenia tempa wzrostu pacjenta z częściowym zespołem niewrażliwości na hormon wzrostu, przyśpieszenia powrotu do zdrowia i skrócenia czasu hospitalizacji pacjentów z oparzeniami; leczenia opóźnienia wzrostu wewnątrzmacicznego, dysplazji szkieletowej, nadmiernego wydzielania hormonów kory nadnercza i zespołu Cushinga; indukcji pulsacyjnego uwalniania hormonu wzrostu; zastąpienie hormonu wzrostu u pacjentów w stresie, leczenia osteochondrodysplazji, zespołu Noonana, schizofrenii, depresji, choroby Alzheimera, opóźnionego gojenia ran i urazów psychicznych, leczenia katabolizmu wywołanego zaburzeniem czynności płuc i wentylacji; leczenia niewydolności serca lub pokrewnego zaburzenia czynności naczyniowych, leczenia upośledzonego funkcjonowania serca, leczenia lub zapobiegania zawałom mięśnia sercowego, obniżenia ciśnienia krwi, zabezpieczenia przed zaburzeniem czynności serca lub zapobiegania przypadkom reperfuzji; leczenia dorosłych z przewlekłymi dializami; zmniejszenia katabolizmu białek w odpowiedzi na większe zabiegi operacyjne, zmniejszenia wyniszczenia organizmu i utraty białka wywołanymi przewlekłymi chorobami takimi jak rak lub AIDS; leczenia hiperinsulinemii obejmującej przerost wysepek trzustki, zastosowania jako środek wspomagający indukcję jajeczkowania; stymulacji rozwoju grasicy i zapobiegania wywołanego wiekiem obniżenia funkcjonowania grasicy, leczenia pacjentów o obniżonej odporności; leczenia sarkopenii, leczenia wyniszczenia organizmu wywołanego przez AIDS; zwiększenia siły mięśni, ruchliwości, utrzymania grubości skóry, homeostazy metabolicznej i homeostazy nerek u wątłych osób w podeszłym wieku, stymulacji osteoblastów, przebudowy kości i wzrostu chrząstki; regulacji przyjmowania pokarmu; stymulacji układu immunologicznego u zwierząt domowych i leczenia zaburzeń starzenia u zwierząt domowych, przyśpieszenia wzrostu u zwierząt gospodarskich i stymulacji porostu wełny u owiec, zwiększenia produkcji mleka u zwierząt gospodarskich, leczenia zespołu metabolicznego (zespołu X), leczenia odporności na insulinę, obejmującej NIDDM u ssaków np. ludzi, leczenia odporności serca na insulinę, polepszenia jakości snu i poprawienia względnego niedoboru hormonu wzrostu osób w podeszłym wieku z uwagi na wydłużenie fazy snu REM i zmniejszenie czasu wejścia w fazę REM, leczenia hipotermii, leczenia słabowitości związanej ze starzeniem, leczenia zastoinowej niewydolności krążenia, leczenia złamania biodra, leczenia niedoboru immunologicznego u pacjentów z obniżonym stosunkiem komórkowym T4/T8, leczenia atrofii mięśniowej, leczenia uszkodzeń kostnomięśniowych u osób w podeszłym wieku, wzmożenia aktywności kinazy białkowej B (PKB), poprawy ogólnego funkcjonowania płuc, leczenia zaburzeń snu, leczenia opóźnienia wzrostu w połączeniu z astmą, leczenia opóźnienia wzrostu w połączeniu z młodzieńczym reumatycznym zapaleniem stawów i leczenia opóźnienia wzrostu w połączeniu z zwłóknieniem torbielowatym.
Dla powyższych wskazań, dawkowanie będzie się zmieniać zależnie od sposobu podawania i pożądanego trybu leczenia. Jednakże, na ogół pacjentom i zwierzętom podaje się dawki pomiędzy 0,0001 i 100 mg/kg masy ciała dziennie, uzyskując skuteczne uwalnianie endogennego hormonu wzrostu. Ponadto związek według niniejszego wynalazku, gdy jest podawany w powyższych poziomach dawkowania, nie wywołuje lub zasadniczo nie wywołuje żadnych efektów ubocznych, takich jak np. uwalnianie LH, FSH, TSH, ACTH, wazopresyny, oksytocyny, kortyzolu i/lub prolaktyny. Zazwyczaj, postacie dawkowania odpowiednie do podawania doustnego, donosowego, wziewnego lub przezskórnego zawierają od około 0,0001 mg do około 100 mg, korzystnie od około 0,001 mg do około 50 mg związków według wynalazku wraz z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem lub rozcieńczalnikiem.
PL 199 989 B1
Ewentualnie, kompozycja farmaceutyczna według wynalazku może zawierać związek według wynalazku połączony z jednym lub więcej związkami wykazującymi odmienną aktywność, np. antybiotykiem lub inną farmakologicznie aktywną substancją.
Droga podawania może być dowolną drogą, która zapewnia skuteczny transport aktywnego związku do odpowiedniego lub pożądanego miejsca działania, np. podawanie doustnie, donosowo, wziewnie, przezskórnie lub pozajelitowo, przy czym korzystna jest droga doustna.
Oprócz farmaceutycznego zastosowania związku według niniejszego wynalazku lub jego farmaceutycznie dopuszczalnej soli może być on przydatny jako narzędzie w eksperymentach in vitro mających na celu zbadanie regulacji uwalniania hormonu wzrostu.
Związek według niniejszego wynalazku może także być przydatny w eksperymentach in vivo oceniających zdolność uwalniania hormonu wzrostu przez przysadkę mózgową. Np. próbki osocza pobrane przed i po podaniu związku ludziom można badać na obecność hormonu wzrostu. Porównanie obecności hormonu wzrostu w każdej próbce osocza bezpośrednio określałoby zdolność przysadki mózgowej pacjenta do uwalniania hormonu wzrostu.
Związek według wynalazku lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól można podawać zwierzętom o znaczeniu rynkowym, w celu zwiększenia ich wartości, masy i wielkości oraz zwiększenia produkcji mleka.
Kolejnym zastosowaniem związku według wynalazku lub jego farmaceutycznie dopuszcalnej soli jest jego użycie w połączeniu z innymi substancjami wydzielającymi takimi jak GHRP (2 lub 6), GHRH i jego analogami, hormonem wzrostu i jego analogami lub somatomedynami obejmującymi IGF-1 i IGF-2.
Metody farmakologiczne
Związek według niniejszego wynalazku można oszacować in vitro pod względem jego efektywności i siły uwalniania hormonu wzrostu w pierwotnych hodowlach komórek przysadek mózgowych szczura i takie oszacowanie można przeprowadzić w sposób opisany poniżej.
Metoda izolacji komórek przysadki mózgowej szczura jest modyfikacją metody O. Sartor'a i in., Endocrinology 116, 1985, str. 952-957. Samce albinotycznych szczurów Sprague-Dawley (250 +/- 25 g) zakupiono od Mollegaard, Lille Skensved, Dania. Szczury umieszczono w klatkach grupowych (cztery zwierzęta/klatkę) i umieszczono w pomieszczeniach o 12-godzinnym cyklu świetlnym. Temperatura w pomieszczeniu wynosiła od 19-24°C, wilgotność 30-60%.
Szczury dekapitowano i izolowano przysadki. Usunięto płaty neuropośredniczące i pozostałą tkankę umieszczono bezpośrednio w oziębionym lodem buforze do izolacji (podłoże Geya (Gibco 04104030) uzupełnione 0,25% D-glukozy, 2% endogennych aminokwasów (Gibco 043-01140) i 1% albuminy surowicy bydlęcej (BSA) (Sigma A-4503)). Tkankę pocięto na małe fragmenty i przeniesiono do buforu do izolacji uzupełnionego 3,8 mg/ml trypsyny (Worthington nr 3707 TRL-3) i 330 mg/ml DNA-zy (Sigma D-4527). Mieszaninę tę inkubowano przy 70 obrotach/minutę przez 35 minut w temperaturze 37°C w atmosferze 95/5% O2/CO2. Tkankę przemyto następnie powyższym buforem trzy razy. Stosując standardową pipetę Pasteur'a tkankę podzielono na pojedyncze komórki. Po zawieszeniu, komórki przesączono przez filtr nylonowy (160 mm) w celu usunięcia niestrawionej tkanki. Zawiesinę komórkową przemyto 3 razy buforem do izolacji uzupełnionym inhibitorem trypsyną (0,75 mg/ml, Worthington nr 2829) i na koniec ponownie zawieszono w środowisku do hodowli; DMEM (Gibco 041-01965) uzupełnionym 25 mM HEPES (Sigma H-3375), 4 mM glutaminy (Gibco 043-05030H), 0,075% roztworu wodorowęglanu sodu (Sigma S-8875), 0,1% aminokwasu endogennego, 2,5% płodowej surowicy cielęcej (FCS, Gibco 011-06290), 3% surowicy końskiej (Gibco 034-06050), 10% świeżej surowicy szczurzej, 1 nM T3 (Sigma T-2752) i 40 mg/l deksametazonu (Sigma D-4902) pH 7,3, do gęstości 2 x 105 komórek/ml. Komórki wysiano na płytki do mikromiareczkowania (Nunc, Denmark), 200 ml/studzienkę i hodowano przez 3 dni w temperaturze 37°C i 8% CO2.
Testowanie związku
Po hodowli, komórki przemyto dwukrotnie buforem do stymulacji (zrównoważony roztwór soli Hanka (Gibco 041-04020) uzupełniony 1% BSA (Sigma A-4503), 0,25% D-glukozy (Sigma G-5250) i 25 mM HEPES (Sigma H-3375) pH 7,3) i inkubowano wstępnie przez 1 godzinę w temperaturze 37°C.
Bufor wymieniono na 90 ml buforu do stymulacji (37°C). Dodano dziesięć ml roztworu związku testowego i płytki inkubowano przez 15 minut w temperaturze 37°C i atmosferze 5% CO2. Pożywkę zdekantowano i zanalizowano na zawartość GH układzie testowym rGH SPA.
Związek badano w dawkach w zakresie od 10 pM do 100 mM. Zależność dawka-odpowiedź skonstruowano, stosując równanie Hilla (Fig P, Biosoft). Efektywność (maksymalna ilość uwolnionego
PL 199 989 B1
GH, Emax) wyrażono w % Emax GHRP-6. Moc związku (EC50) określono jako stężenie indukujące połowę maksymalnej stymulacji uwalniania GH.
Związki według niniejszego wynalazku można oszacować pod względem trwałości metabolicznej z zastosowaniem opisanej poniżej procedury:
Związek rozpuszcza się w stężeniu 1 mg/ml w wodzie. 25 ml tego roztworu dodaje się do 175 ml roztworu odpowiedniego enzymu (aż do uzyskania stosunku (wagowego) enzym:substrat w przybliżeniu 1:5). Roztwór pozostawia się w temperaturze 37°C przez noc. 10 ml różnych roztworów degradujących analizuje się w odniesieniu do próbki zerowej, stosując spektrometrię masową z elektrorozpylaniem i nastrzykiwaniem w przepływie (ESMS) z wybranym monitoringiem jonowym jonu cząsteczkowego. Jeśli sygnał obniża się bardziej niż 20% w porównaniu z próbką zerową, resztę roztworu analizuje się metodą HPLC i spektrometrii masowej w celu zidentyfikowania zakresu i dokładnego miejsca (miejsc) degradacji.
Kilka peptydów wzorcowych (ACTH 4-10, angiotensyna 1-14 i glukagon) włączono w testy trwałości w celu zweryfikowania zdolności różnych roztworów do degradacji peptydów.
Peptydy wzorcowe (angiotensyna 1-14, ACTH 4-10 i glukagon) zakupiono od Sigma, MO, USA.
Wszystkie enzymy (trypsyna, chymotrypsyna, elastaza, aminopeptydaza M i karboksypeptydaza Y i B) zakupiono od Boehririger Mannheim GmbH (Mannheim, Niemcy)
Mieszanina enzymów trzustkowych: trypsyna, chymotrypsyna i elastaza w 100 mM wodorowęglanu amonu pH 8,0 (wszystkie stężenia 0,025 mg/ml).
Mieszanina karboksypeptydaz: karboksypeptydaza Y i B w 50 mM octanu amonu pH 4,5 (wszystkie stężenia 0,025 mg/ml).
Roztwór aminopeptydazy M: aminopeptydaza M (0,025 mg/ml) w 100 mM wodorowęglanu amonu pH 8,0.
Analizę metodą spektroskopii masowej przeprowadzono stosując dwa różne spektrometry masowe. Spektrometr masowy z potrójnym kwadrupolem Sciex API III LC-MS (Sciex Instruments, Thornhill, Ontario) zaopatrzony w elektrorozpylające źródło jonów i urządzenie do desorpcji osocza o czasie przelotu 20 o nazwie Bio-Ion (Bio-Ion Nordic AB, Uppsala, Szwecja) .
Ocenę ilościową związku (przed i po degradacji) przeprowadzono na urządzeniu API III przy zastosowaniu monitoringu pojedynczych jonów poszczególnych jonów cząsteczkowych przeciwnie do przepływu analitu. Przepływ cieczy (MeOH:woda 1:1) o prędkości 100 ml/minutę kontrolowano jednostką ABI 140B HPLC (Perkin-Elmer Applied Biosystems Divisions, Foster City, CA). Parametry urządzenia ustalono względem standardowych warunków pracy i przeprowadzono monitoring SIM, stosując jon cząsteczkowy o największej intensywności (w większości przypadków odpowiadało to podwójnie naładowanemu jonowi cząsteczkowemu).
Identyfikacja produktów degradacji wiązała się ponadto z zastosowaniem spektrometrii masowej z desorpcją osocza (PDMS) z nakładaniem próbki na pokryte nitrocelulozą tarcze i przy standardowych ustawieniach urządzenia. Dokładność w ten sposób określonych mas jest na ogół większa niż 0,1%.
Rozdzielanie i izolację produktów degradacji wykonano przy zastosowaniu kolumny HPLC w odwróconym układzie faz HY-TACH C-18 4,6x105 mm (Hewlett-Packard Company, Palo Alto, CA) ze standardowym gradientem rozdzielającym acetonitryl : TFA. Zastosowano układ HPLC HP1090M (Hewlett-Packard Company, Palo Alto, CA).
Pochodna peptydowa Mcz/jon SIM (ajm) Mieszanina karboksypeptydaz Mieszanina enzymów pankreatycznych
Wzorce
ACTH4-10 1124,5/562,8 + -
Glukagon 3483/871,8 - -
Insulina (B23-29) 859,1/430,6
Angiotensyna 1-14 1760,1/881,0 - -
GHRP-2 817,4/409,6 - -
GHRP-6 872,6/437,4 - -
+: Trwały (poniżej 20% zmniejszenia sygnału SIM po 24 godzinach w roztworze degradującym) -: Nietrwały (więcej niż 20% zmniejszenia sygnału SIM po 24 godzinach w roztworze degradującym)
PL 199 989 B1
Metody farmakokinetyczne
Związek według niniejszego wynalazku można oszacować pod względem jego doustnej biodostępności i takie oszacowanie można przeprowadzić w sposób opisany poniżej.
Farmakokinetykę związku można zbadać na głodzonych psach rasy Beagle.
Dożylne i doustne podawanie związku testowego w 5% roztworze glukozy rozdzielono jednym tygodniem wymywania.
Próbki krwi zebrano bezpośrednio przed podaniem leku (czas zero) i następnie 0,08, 0,25, 0,50, 0,75, 1,0, 1,5, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0 i 6,0 godzin po podaniu.
Próbki osocza przechowywano zamrożone (<-18°C) do czasu analizy.
Do oceny ilościowej związku w osoczu zastosowano metodę HPLC z ekstrakcją fazy stałej i detekcją UV.
Związek według niniejszego wynalazku wykazywał dostępność po podaniu doustnym około 50%.
Parametry farmakokinetyczne związków obliczono przy zastosowaniu metod nieprzedziałowych stosując oprogramowanie farmakokinetyczne PC WinNonlin, wersja 1,1 (Scientific Consulting Inc., Apex, NC, USA).
Każdą nową cechę lub kombinację cech tu opisanych uważa się za zasadniczą dla tego wynalazku.
P r z y k ł a d y
Sposób wytwarzania związku według niniejszego wynalazku i preparatów zawierających ten związek ilustrują następujące przykłady.
Budowę związków potwierdzano metodą wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej (HPLC), jądrowego rezonansu magnetycznego (NMR, Bruker400 MHz) lub chromatografii cieczowej-spektrometrii masowej (LC-MS). Przesunięcia NMR (d) podano w częściach na milion (ppm) i podano tylko wybrane piki, mp oznacza temperaturę topnienia i podano ją w °C. Chromatografię kolumnową prowadzono stosując technikę opisaną przez W. C. Still i in. J. Org. Chem. 1978, 43, 2923-2925 na żelu krzemionkowym 60 Merck (artykuł nr 9385). Związki użyte jako substancje wyjściowe są znane lub są związkami, które można łatwo otrzymać znanymi metodami. Zastosowanym roztworem metanol/amoniak jest 10% roztwór amoniaku w metanolu.
Analiza HPLC:
Metoda A1:
Analizę RP przeprowadzono stosując detekcję UV przy 214, 254, 276 i 301 nm w kolumnie wypełnionej krzemionką (218TP54 4,6 mm x 250 mm 5m C-18, The Separations Group, Hesperia) eluując z szybkością 1 ml/minutę w temperaturze 42°C. Kolumnę zrównoważono 5% acetonitrylem w buforze składającym się z 0,1 M siarczanu amonowego, którego pH uregulowano do 2,5 stosując 4M kwas siarkowy; po iniekcji próbkę eluowano gradientem 5% do 60% acetonitrylu w tym samym buforze w czasie 50 minut.
Metoda B1:
Analizę RP przeprowadzono stosując detekcje UV przy 214, 254, 276 i 301 nm w kolumnie wypełnionej krzemionką (218TP54 4,6 mm x 250 mm 5m C-18, The Separations Group, Hesperia) eluując z szybkością 1 ml/minutę w temperaturze 42°C. Kolumnę zrównoważono 5% (acetonitryl + 0,1% TFA) w roztworze wodnym TFA w wodzie (0,1%). Po iniekcji próbkę eluowano gradientem 5% do 60% (acetonitryl + 0,1% TFA) w tym samym buforze wodnym w czasie 50 minut.
Metoda h8:
Analizę RP przeprowadzono stosując detekcję UV przy 214 i 254 nm w kolumnie wypełnionej krzemionką 218TP54 4,6 mm x 150 mm C-18, eluując z szybkością 1 ml/minutę w temperaturze 42°C. Kolumnę zrównoważono 5% acetonitrylu, 85% wody i 10% roztworu 0,5% kwasu trifluorooctowego w wodzie i eluowano liniowym gradientem od 5% acetonitrylu, 85% wody i 10% roztworu 0,5% kwasu trifluorooctowego do 90% acetonitrylu i 10% roztworu 0,5% kwasu trifluorooctowego przez 15 minut.
Chiralna HPLC:
Chiralną HPLC przeprowadzono stosując detekcję UV przy 225 i 254 nm w kolumnie Chiracel OJ 4,6 mm x 250 mm zaopatrzonej w kolumnę wstępną Chiracel OJ 4,6 mm x 80 mm (obie z Daicel Chemical Industries, LTD), eluując z szybkością 0,7 ml/minutę w temperaturze pokojowej. Próbkę eluowano izokratycznym eluentem heptan (92): iPrOH (8): TFA(0,1).
PL 199 989 B1
Analiza LC-MS
Analizy LC-MS przeprowadzono w urządzeniu PE Sciex API 100 LC/MS System stosując kolumnę symetryczną Waters® 3 mm x 150 mm 3,5 m C-18 i dodatnią jonizację przy szybkości przepływu 20 ml/minutę. Kolumnę eluowano liniowym gradientem 5-90% acetonitrylu, 85-0% wody i 10% kwasu trifluorooctowego (0,1%)/wody przez 15 minut z szybkością przepływu 1 ml/minutę.
Skróty:
TLC: chromatografia cienkowarstwowa
DMSO: dimetylosulfotlenek min: minuty h: godziny
Boc: tert-butyloksykarbonyl
DMF: dimetyloformamid
THF: tetrahydoofuran
EDAC: chlorowodorek N-etylo-N'-dimetyloaminopropylokarbodiimidu
HOAt: 1-hydroksy-7-azabenzotriazol
DIEA: diizopropyloetyloamina
TFA: kwas trifluorooctowy
Jednostki składowe
N-metylenowane aminokwasy stosowane w poniższych Przykładach otrzymano zgodnie z opisem podanym w Can. J. Chem. 1977, 55, 906.
N',N'-dimetylohydrazyd kwasu mrówkowego
Mieszaninę 50 ml mrówczanu metylu i 50 ml 1,1-dimetylohydrazyny mieszano przez 3 dni w temperaturze pokojowej, zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując kryształy, które mieszano w mieszaninie EtOH (5): heptan (95), schłodzono w chłodziarce przez noc i przesączono: 50,7 g (575 mmoli) (wydajność: 88%)
Dichlorowodorek N ,N,N'-trimetylohydrazyny
Trójszyjną kolbę okrągłodenną o objętości 2 l zaopatrzoną w mieszadło magnetyczne i wkraplacz napełniono 20,4 g LiAlH4, opróżniono z powietrza i przepłukano azotem. Wkraplacz zaopatrzono następnie w bełkotkę doprowadzającą azot i dodano powoli 250 ml suchego tetrahydrofuranu (reakcja egzotermiczna). Szarą zawiesinę mieszano energicznie i w ciągu 1 godziny dodano kroplami roztwór 40,0 g N',N'-dimetylohydrazydu kwasu mrówkowego w 250 ml suchego tetrahydrofuranu i mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Przebieg reakcji monitorowano metodą TLC (CH2Cl2 (100): MeOH (10): NH3 (1)).
Inną trójszyjną okrągłodenną kolbę o objętości 2 l zaopatrzoną w skraplacz z suchym lodem napełniono 350 ml 4,8 M HCl/CH3OH i umieszczono w łaźni z suchym lodem (temperatura -70°C). Następnie przyłączono ją poprzez skraplacz vigreux do kolby reakcyjnej i kolbę reakcyjną umieszczono w łaźni olejowej. Mieszaninę 200 ml tetrahydrofuranu i 200 ml MeOH dodano ostrożnie do mieszaniny reakcyjnej. Destylację produktu i rozpuszczalnika przeprowadzono przez powolne ogrzewanie do temperatury 130°C, uzyskując ostatecznie krystaliczny dichlorowodorek trimetylohydrazyny (w temperaturze -70°C). Łaźnię z suchym lodem usunięto i pozostawiono do osiągnięcia temperatury pokojowej. W wyniku zatężania pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskano rzadki, bezbarwny olej, który osuszano przez noc stosując pompę wysokopróżniową: 45,2 g (309 mmoli) (wydajność: 68%). Bardzo higroskopijny produkt utrzymywano w atmosferze azotu.
Inne substancje wyjściowe można zakupić od firmy Aldrich.
P r z y k ł a d 1
Sposób otrzymywania 2-amino-N-[(1R)-2-[(3R)-3-benzylo-3-(N,N',N'-trimetylohydrazynokarbonylo)pi perydyn-1-ylo]-1 -(1 H-indolo-3-ylometylo)-2-oksoetylo]-2-metylopropionoamidu
PL 199 989 B1
Etap a
Ester 3-etylowy estru 1-tert-butylowego kwasu piperydyno-1, 3-dikarboksylowego
CHj O
Jednoszyjną okrągłodenną kolbę (1 l) zaopatrzoną w mieszadło magnetyczne i wkraplacz napełniono peletkami NaOH (15,6 g), tetrahydrofuranem (400 ml) i piperydyno-3-karboksylanem etylu (50 ml, 324 mmoli). Do mieszanego roztworu reakcyjnego dodano kroplami w temperaturze pokojowej roztwór BOC2O (84,9 g, 389 mmoli) rozpuszczonego w tetrahydrofuranie (150 ml) (1 godzina, wytrącenie białego ciała stałego, rozpuszczenie peletek NaOH, reakcja egzotermiczna). Roztwór reakcyjny mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Mieszaninę dodano do EtOAc (500 ml) i H2O (2000 ml) i warstwę wodną ekstrahowano ponownie EtOAc (2 X 500 ml). Połączone warstwy organiczne przemyto solanką (100 ml), osuszono nad MgSO4, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując ester 3-etylowy estru 1-tert-butylowego kwasu piperydyno-1,3-dikarboksylowego (82,5 g) w postaci rzadkiego żółtego oleju.
1H NMR (300 MHZ, CDCh): δ 1,25(t, 3H, CH3); 1,45(s, 9H, 3xCH3); 2,05(m, 1H); 2,45(m, 1H); 2,85(m, 1H); 3,95 (d (szeroki), 1H); 4,15(q, 2H, CH2)
Etap b
Ester 3-etylowy estru 1-tert-butylowego kwasu 3-benzylopiperydyno-1,3-dikarboksylowego (mieszanina racemiczna)
Trójszyjną, okrągłodenną kolbę (2 l) zaopatrzoną w mieszadło magnetyczne, termometr, bełkotkę dostarczającą azot i wkraplacz opróżniono z powietrza, przepłukano azotem, napełniono bezwodnym tetrahydrofuranem (500 ml) i ochłodzono do temperatury -70°C. Następnie dodano diizopropyloamidek litu (164 ml 2,0 M roztworu w tetrahydrofuranie, 327 mmoli). Do mieszanego roztworu w temperaturze -70°C, w ciągu 45 minut, dodano kroplami roztwór estru 3-etylowego estru 1-tert-butylowego kwasu piperydyno-1,3-dikarboksylowego (80 g, 311 mmoli) w bezwodnym tetrahydrofuranie (50 ml) (temperatura pomiędzy -70°C i -60°C, klarowny czerwony roztwór). Roztwór reakcyjny mieszano przez 20 minut, po czym w ciągu 40 minut dodano kroplami roztwór bromku benzylu (37 ml, 311 mmoli) w bezwodnym tetrahydrofuranie (250 ml) (temperatura pomiędzy -70°C i -60°C). Roztwór reakcyjny mieszano przez 1 godzinę w temperaturze -70°C i następnie pozostawiono przez noc w temperaturze pokojowej (roztwór jasnopomarańczowy). Mieszaninę reakcyjną zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem do około 300 ml, przeniesiono do rozdzielacza, rozcieńczono CH2O2 (900 ml) i przemyto H2O (900 ml). Z uwagi na słabe rozdzielanie, warstwę wodną ekstrahowano ponownie CH2Cl2 (200 ml), połączone warstwy organiczne przemyto wodnym roztworem NaHSO4 (200 ml, 10%), wodnym roztworem NaHCO3 (200 ml, roztwór nasycony), H2O (200 ml), solanką (100 ml), osuszono nad MgSO4, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując olej, który rozpuszczono w mieszaninie EtOAc (1): heptan (10) i pozostawiono na noc. Otrzymane ciało stałe usunięto przez filtrację, przemyto heptanem i osuszono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując mieszaninę racemiczną estru
3-etylowego estru 1-tert-butylowego kwasu 3-benzylopiperydyno-1,3-dikarboksylowego (81,4 g).
HPLC (h8): Rt = 15,79 minuty.
LC-MS: Rt = 7,67 minuty (m+1) = 348,0.
Etap c
Ester 1-tert-butylowy kwasu 3-benzylopiperydyno-1,3-dikarboksylowego (mieszanina racemiczna)
Ester 3-etylowy estru 1-tert-butylowego kwasu 3-benzylopiperydyno-1,3-dikarboksylowego (81 g, 233 mmole) rozpuszczono w EtOH (400 ml) i NaOH (400 ml, 16% roztwór wodny) w jednoszyjPL 199 989 B1 nej, okrągłodennej kolbie (1 l) zaopatrzonej w skraplacz i mieszadło magnetyczne. Mieszaninę ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 10 godzin w atmosferze azotu i ochłodzono do temperatury pokojowej, zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem do około 600 ml (wytrącanie ciała stałego), rozcieńczono H2O (400 ml), ochłodzono w łaźni lodowej i energicznie mieszając zakwaszono 4M H2SO4 do pH = 3 (temperatura końcowa: 28°C). Mieszaninę ekstrahowano EtOAc (2 x 700 ml) i połączone warstwy organiczne przemyto solanką (200 ml), osuszono nad MgSO4, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując olej, który rozpuszczono w mieszaninie EtOAc (1): heptan (10) i pozostawiono na noc. Otrzymane kryształy usunięto przez filtrację, przemyto heptanem i osuszono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując mieszaninę racemiczną estru 1-tertbutylowego kwasu 3-benzylopiperydyno-1,3-dikarboksylowego (66,0 g).
HPLC(h8): Rt = 12,85 minuty.
LC-mS: Rt = 5,97 minuty (m+1) = 320,0.
Chiralna HPLC (Chiracel OJ, heptan (92): iPrOH (8): TFA (0,1)): Rt = 8,29 minuty 46,5%.
Rt = 13,69 minuty 53,5%.
Etap d
Ester 1-tert-butylowy kwasu (3R)-3-benzylopiperydyno-1,3-dikarboksylowego (Rozdzielanie estru 1-tert-butylowego kwasu 3-benzylopiperydyno-1,3-dikarboksylowego)
Ester 1-tert-butylowy kwasu 3-benzylopiperydyno-1,3-dikarboksylowego (76 g, 238 mmoli) rozpuszczono w EtOAc (3,0 l) w kolbie jednoszyjnej (5 l) zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne. Następnie dodano H2O (30 ml), R(+)-1-fenetyloaminę (18,2 ml, 143 mmoli) i Et3N (13,2 ml, 95 mmoli) i roztwór reakcyjny mieszano przez noc w temperaturze pokojowej, uzyskując ostatecznie wytrącanie się białych kryształów (41,9 g), które usunięto przez filtrację, przemyto EtOAc i osuszono pod zmniejszonym ciśnieniem. Osad rozpuszczono w mieszaninie wodnego roztworu NaHSO4 (300 ml, 10%) i EtOAc (600 ml), warstwy oddzielono i warstwę wodną ekstrahowano ponownie EtOAc (100 ml). Połączone warstwy organiczne przemyto solanką (100 ml), osuszono nad MgSO4 i przesączono. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując bezbarwny olej, który rozpuszczono w mieszaninie EtOAc (1): heptan (10) i pozostawiono na noc. Uzyskane kryształy usunięto przez filtrację, przemyto heptanem i osuszono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując jeden związek, ester 1-tert-butylowy kwasu (3R)-3-benzylopiperydyno-1,3-dikarboksylowego (27,8 g).
Chiralna HPLC (Chiracel OJ, heptan (92): iPrOH (8): TFA (0,1)): Rt = 7,96 minuty, nadmiar enancjomeryczny 95,8%.
Etap e
Ester tert-butylowy kwasu (3R)-3-benzylo-S-(N,N',N'-trimetylohydrazynokarbonylo)piperydyno1-karboksylowego
Dichlorowodorek trimetylohydrazyny (15,3 g, 104 mmole) zawieszono w tetrahydrofuranie (250 ml) w jednoszyjnej, okrągłodennej kolbie (1 l) zaopatrzonej w duże mieszadło magnetyczne i wkraplacz/bełkotkę dostarczające azot. Kolbę umieszczono następnie w łaźni wodnej (temperatura: 10-20°C), dodano heksafluorofosforan bromo-tris-pirolidynofosfoniowy (40,4 g, 86,7 mmola) i energicznie mieszając dodano kroplami diizopropyloetyloaminę (59 ml, 347 mmole). Roztwór reakcyjny (z silnym wytrącaniem) mieszano przez 5 minut i powoli dodano roztwór produktu uzyskanego według etapu d, (27,7 g, 86,7 mmola) w tetrahydrofuranie (250 ml), w ciągu 1,5 godziny. Roztwór reakcyjny mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono EtOAc (1000 ml), przemyto H2O (500 ml), wodnym roztworem NaHSO4, (200 ml, 10%), wodnym roztworem NaHCO3 (200 ml, roztwór nasycony), solanką (200 ml), osuszono nad MgSO4, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując rzadki, pomarańczowy olej. Mieszaninę rozpuszczono w EtOAc (300 ml), dodano do SiO2 (150 g) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem do suchego proszku, który nałożono na filtr wypełniony SiO2 (150 g),
PL 199 989 B1 przemyto heptanem (1 l) i pożądany związek uwolniono z zastosowaniem EtOAc (2,5 l). Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymano produkt (49 g) w postaci pomarańczowego oleju.
HPLC (h8): Rt = 14,33 minuty.
Etap f
Trimetylohydrazyd kwasu (3R)-3-benzylopiperydyno-3-karboksylowego
HN,
Produkt uzyskany według etapu e, ester tert-butylowy kwasu (3R)-3-benzylo-3-(N,N',N'-trimetylohydrazynokarbonylo)piperydyno-1-karboksylowego, (56,7 g, 100,9 mmola) rozpuszczono w EtOAc (500 ml) (klarowny, bezbarwny roztwór) w jednoszyjnej kolbie okrągłodennej (2 l) zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne. Kolbę następnie umieszczono w łaźni wodnej (temperatura: 10-20°C) i przez roztwór przepuszczano przez 5 minut gazowy HCl (wytrącanie pyłu). Po wymieszaniu przez 1 godzinę (wytrącanie dużej ilości białych kryształów), roztwór przepłukano N2 w celu usunięcia nadmiaru HCl. Osad usunięto metodą delikatnej filtracji, przemyto EtOAc (2 x 100 ml) i osuszono przez noc pod zmniejszonym ciśnieniem w temperaturze 40°C, uzyskując produkt, trimetylohydrazyd kwasu (3R)-3-benzylopiperydyno-3-karboksylowego, (37,0 g).
HPLC (h8): Rt = 7,84 minuty.
Etap g
Ester tert-butylowy kwasu [(1R)-2-[(3R)-3-benzylo-3-(N,N',N'-trimetylohydrazynokarbonylo)piperydyn-1-ylo]-1-((1H-indol-3-ilo)metylo)-2-oksoetylo]karbamidowego
Boc-D-Trp-OH (32,3 g, 106 mmoli) rozpuszczono w dimetyloacetamidzie (250 ml) w jednoszyjnej kolbie okrągłodennej (500 ml) zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne i bełkotkę dostarczającą azot. Roztwór ochłodzono do temperatury 0-5°C i dodano 1-hydroksy-7-azabenzotriazol (14,4 g, 106 mmoli), chlorowodorek 1-etylo-3-(3-dimetyloaminopropylo)karbodiimidu (20,3 g, 106 mmoli), N-metylomorfolinę (11,6 ml, 106 mmoli). Po wymieszaniu przez 20 minut w temperaturze 0-5°C dodano produkt uzyskany według etapu f (37,0 g, 106 mmoli) i N-metylomorfolinę (24,4 ml, 223 mmole). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Mieszaninę następnie dodano do EtOAc (750 ml) i przemyto wodnym roztworem NaHSO4 (300 ml, 10%). Warstwy pozostawiono do rozdzielenia i warstwę wodną ekstrahowano ponownie EtOAc (500 ml). Połączone warstwy organiczne przemyto H2O (100 ml), wodnym roztworem NaHCO3 (300 ml, roztwór nasycony), H2O (100 ml), solanką (300 ml), osuszono nad MgSO4, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując produkt (56,7 g) w postaci pomarańczowego oleju.
HPLC (h8): Rt = 14,61 minuty.
LC-MS: Rt = 7,35 minuty (m+1) = 562,6.
Etap h
Trimetylohydrazyd kwasu 1-[(2R)-2-amino-3-(1H-indol-3-ilo)propionylo]-(3R)-3-benzylopiperydyno-3-karboksylowego
Produkt uzyskany według etapu g (56,7 g, 100,9 mmola) rozpuszczono w EtOAc (500 ml) (klarowny, bezbarwny roztwór) w jednoszyjnej, okrągłodennej kolbie (2 l) zaopatrzonej w mieszadło maPL 199 989 B1 gnetyczne. Kolbę następnie umieszczono w łaźni wodnej (temperatura: 10-20°C) i przez roztwór, przez 10 minut przepuszczano gazowy HCl (silnie wytrącanie oleju). Mieszaninę przepłukano N2 w celu usunięcia nadmiaru HCl i następnie rozdzielono na warstwę oleju i EtOAc. Warstwę EtOAc odrzucono. Olej rozpuszczono w H2O (500 ml), CH2Cl2 (1000 ml) i dodawano stały Na2CO3 do pH > 7. Warstwy oddzielono i warstwę organiczną przemyto H2O (100 ml), solanką (100 ml), osuszono nad MgSOą, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując produkt (27 g) w postaci pomarańczowej pianki.
HPLC (h8): Rt=10,03 minuty.
Etap i
Ester tert-butylowy kwasu {1-[(1R)-2-[(3R)-3-benzylo-3-(N,N',N'-trimetylohydrazynokarbonylo)piperydyn-1-ylo]-1-(1H-indol-3-ilometylo)-2-oksoetylokarbamoilo]-1-metyloetylo}-karbaminowego
Boc-Aib-OH (11,9 g, 58,4 mmola) rozpuszczono w dimetyloacetamidzie (125 ml) w jednoszyjnej kolbie okrągłodennej (500 ml) zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne i bełkotkę dostarczającą azot. Do mieszanego roztworu dodano w temperaturze pokojowej 1-hydroksy-7-azabenzotriazol (7,95 g, 58,4 mmol), chlorowodorek 1-etylo-3-(3-dimetyloaminopropylo)karbodiimidu (11,2 g, 58,4 mmola) i diizopropyloetyloaminę (13,0 ml, 75,8 mmola). Po 20 minutach dodano (żółty osad po wytrąceniu) roztwór produktu uzyskanego według etapu h (27,0 g, 58,4 mmola) w dimetyloacetamidzie (125 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 3 godziny. Mieszaninę dodano do EtOAc (750 ml) i przemyto wodnym roztworem NaHSO4 (300 ml, 10%). Warstwy pozostawiono do rozdzielenia i warstwę wodną ekstrahowano ponownie EtOAc (500 ml). Połączone warstwy organiczne przemyto H2O (100 ml), wodnym roztworem NaHCO3 (300 ml, roztwór nasycony), H2O (100 ml), solanką (300 ml), osuszono nad MgSO4, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem do około 500 ml. Następnie dodano SiO2 (150 g) i usunięto pozostały EtOAc pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując suchy proszek, który nałożono na filtr wypełniony SiO2 (150 g), przemyto heptanem (1 l) i pożądany związek uwolniono z zastosowaniem EtOAc (2,5 l). Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymano produkt (33,9 g) w postaci pomarańczowej pianki.
HPLC (h8): Rt = 14,05 minuty.
Etap j
Fumaran 2-amino-N-[(1R)-2-[(3R)-3-benzylo-3-(N,N',N'-trimetylohydrazynokarbonylo)piperydyn-1-ylo]-1-(1H-indol-3-ilometylo)-2-oksoetylo]-2-metylopro>pionoamidu
Produkt uzyskany według etapu i (23,8 g, 36,8 mmola) rozpuszczono w EtOAc (800 ml) (klarowny, żółty roztwór) w jednoszyjnej kolbie okrągłodennej (1 l) zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne. Kolbę umieszczono następnie w łaźni wodnej (temperatura: 10-20°C) i przez roztwór przez 5 minut przepuszczono gazowy HCl (wytrącanie pyłu). Po wymieszaniu przez 1 godzinę (wytrącanie dużej ilości żółtego proszku), roztwór przepłukano N2 w celu usunięcia nadmiaru HCl. Osad usunięto przez delikatną filtrację i osuszono pod zmniejszonym ciśnieniem w temperaturze 40°C przez noc.
Osad niekrystaliczny rozpuszczono w H2O (500 ml) i przemyto EtOAc (100 ml). Następnie dodano CH2Cl2 (1000 ml) i stały Na2CO3 aż do uzyskania pH > 7. Dwie warstwy oddzielono i warstwę wodną ekstrahowano ponownie CH2Cl2 (200 ml). Połączone warstwy organiczne przemyto solanką (100 ml), osuszono nad MgSO4 i przesączono. Rozpuszczalnik odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość ponownie rozpuszczono w EtOAc (500 ml) w jednoszyjnej kolbie okrągłodennej (1 l) zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne.
PL 199 989 B1
Powoli dodano (5 minut) zawiesinę kwasu fumarowego (3,67 g) w izopropanolu (20 ml) i EtOAc (50 ml), co dało w rezultacie wytrącenie białej, krystalicznej soli. Po 1 godzinie osad wydzielono przez filtrację i osuszano przez noc pod silnie zmniejszonym ciśnieniem w temperaturze 40°C uzyskując fumaran związku, 2-amino-N-[(1R)-2-[(3R)-3-benzylo-3-(N,N',N'-trimetylohydrazynokarbonylo)piperydyn-1-ylo]-1-(1H-indol-3-ilometylo)-2-oksoetylo]-2-metylopropionoamidu (13,9 g) w postaci białego proszku.
HPLC(A1): Rt = 33,61 minuty.
HPLC(B1): Rt = 34,62 minuty.
LC-MS: Rt = 5,09 minuty (m+1) = 547,4.

Claims (6)

1. 2-amino-N-[(1R)-2-[(3R)-3-benzylo-3-(N,N',N'-trimetylohydrazynokarbonylo)piperydyn-1-ylo]-1-(1 H-indol-3-ilometylo)-2-oksoetylo]-2-metylopropionoamid lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól.
2. Kompozzyja farmaceutyycna, zznmieenn tym, że zawiera jako aktywny ssładnik związek określony w zastrz. 1, lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól razem z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem lub rozcieńczalnikiem.
3. Komaozzηja farmakeutyycna wnc:dug zaktra. 2, ód βίζη^^ί uwmlniania hormazn wnzaztu z przysadki mózgowej.
4. Kompozzyja farmakeutyycna wnelług ζ^^ς. 2 albo 3, dd poZnwnkia zwierzatom dd zwięęk szenia tempa i zakresu ich wzrostu, zwiększenia produkcji mleka i wełny, lub do leczenia schorzeń.
5. Zaktozownkie dwiązno u ja dZteklozaw znasz. f, I ub dompozzyji farmakeutyycnarj ja dZoar ślono w zastrz. 2, do wytwarzania leku.
6. Zaktozowakie wed^u za^ra. 5, dd \/wywnraakia lekk dd stymplakji uwalniania hh^rr^c^r^u wzrostu z przysadki mózgowej ssaka.
PL356993A 1999-11-10 2000-11-10 2-amino-N-[(1R)-2-[(3R)-3-benzylo-3-(N,N',N' -trimetylohydrazynokarbonylo)piperydyn-1-ylo]-1-(1H-indol-3-ilometylo)-2-oksoetylo]-2-metylopropionoamid, zawierająca go kompozycja farmaceutyczna oraz zastosowanie PL199989B1 (pl)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA199901618 1999-11-10
US16710199P 1999-11-23 1999-11-23
PCT/DK2000/000624 WO2001034593A1 (en) 1999-11-10 2000-11-10 Compound with growth hormone releasing properties

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL356993A1 PL356993A1 (pl) 2004-07-12
PL199989B1 true PL199989B1 (pl) 2008-11-28

Family

ID=26065963

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL356993A PL199989B1 (pl) 1999-11-10 2000-11-10 2-amino-N-[(1R)-2-[(3R)-3-benzylo-3-(N,N',N' -trimetylohydrazynokarbonylo)piperydyn-1-ylo]-1-(1H-indol-3-ilometylo)-2-oksoetylo]-2-metylopropionoamid, zawierająca go kompozycja farmaceutyczna oraz zastosowanie

Country Status (23)

Country Link
US (1) US6576648B2 (pl)
EP (1) EP1230236B1 (pl)
JP (2) JP2003527338A (pl)
KR (1) KR100907637B1 (pl)
CN (1) CN1198818C (pl)
AT (1) ATE280168T1 (pl)
AU (1) AU782260B2 (pl)
BR (1) BR0015407A (pl)
CA (1) CA2387095C (pl)
CZ (1) CZ301078B6 (pl)
DE (1) DE60015173T2 (pl)
DK (1) DK1230236T3 (pl)
ES (1) ES2231279T3 (pl)
HU (1) HU229445B1 (pl)
IL (1) IL149049A0 (pl)
MX (1) MXPA02004656A (pl)
NO (1) NO323910B1 (pl)
PL (1) PL199989B1 (pl)
PT (1) PT1230236E (pl)
RU (1) RU2272034C2 (pl)
UA (1) UA73530C2 (pl)
WO (1) WO2001034593A1 (pl)
ZA (1) ZA200202757B (pl)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1735055A1 (en) * 2004-03-30 2006-12-27 Sapphire Therapeutics, Inc. Method of reducing c-reactive protein using growth hormone secretagogues
US20130281701A1 (en) * 2004-06-29 2013-10-24 Helsinn Therapeutics (U.S.), Inc. Crystal forms of anamorelin
EP2298760B1 (en) * 2004-06-29 2015-08-05 Helsinn Healthcare S.A. Crystal forms of (3R)-1-(2-methylalanyl-D-tryptophyl)-3-(phenylmethyl)-3-piperidinecarboxylic acid 1,2,2-trimethylhydrazide
AU2005272074B2 (en) * 2004-06-29 2011-11-24 Albany Molecular Research, Inc. Crystal forms of (3r)-1-(2-methylalanyl-d-tryptophyl)-3-(phenylmethyl)-3-piperidinecarboxylic acid 1,2,2-trimethylhydrazide
US8039456B2 (en) 2004-08-12 2011-10-18 Helsinn Therapeutics (U.S.), Inc. Method of stimulating the motility of the gastrointestinal system using ipamorelin
ES2388501T3 (es) 2004-08-12 2012-10-16 Helsinn Healthcare S.A. Uso de secretagogos de la hormona de crecimiento para estimular la motilidad del sistema gastrointestinal
CN101595107A (zh) * 2006-06-30 2009-12-02 先灵公司 能提高p53活性的有取代哌啶及其用途
MX2009008561A (es) * 2007-02-13 2010-01-15 Helsinn Therapeutics Us Inc Metodo para tratar trastornos proliferativos celulares utilizando secretagogos.
TWI429436B (zh) * 2007-04-10 2014-03-11 Helsinn Therapeutics Us Inc 使用生長激素促泌素治療或預防嘔吐之方法
US8664267B2 (en) * 2007-04-12 2014-03-04 Academic Pharmaceuticals Incorporated Parenteral solution containing amiodarone in NNDMA (N,N,-Dimethylacetamide)
KR101553725B1 (ko) 2008-02-08 2015-09-16 제리아 신야쿠 고교 가부시키 가이샤 3,8-디아미노테트라하이드로퀴놀린 유도체
UA105657C2 (uk) * 2009-02-27 2014-06-10 Хелсінн Терапьютікс (Ю.Ес.), Інк. Поліпшені способи лікування мігрені на основі анамореліну
JO3353B1 (ar) * 2012-04-20 2019-03-13 Ono Pharmaceutical Co شكل صلب معزول من أحادي هيدروكلوريد أناموريلين بنسبة مولارية منخفضة من الكلوريد: أناموريلين ومحتوى منخفض من مذيب عضوي متبقي
CN104853778A (zh) 2012-10-24 2015-08-19 第一三共株式会社 用于肌萎缩性侧索硬化的治疗剂
CN107001323A (zh) * 2015-10-20 2017-08-01 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种阿拉莫林的结晶形式及其制备方法
CN106187865A (zh) * 2016-07-08 2016-12-07 武汉工程大学 (r)‑1‑叔丁氧羰基‑3‑苄基‑3‑甲酸哌啶的合成及手性拆分方法
CN108129357B (zh) * 2016-12-01 2021-12-21 上海医药工业研究院 阿拉莫林中间体的制备方法
CN108239141A (zh) * 2016-12-23 2018-07-03 江苏先声药业有限公司 一种阿拉莫林的制备方法
KR20220054244A (ko) 2019-08-30 2022-05-02 헬신 헬스케어 에스아 개선된 안정성을 갖는 아나모렐린 정제의 제조 방법
CN114805305B (zh) * 2022-04-20 2024-04-26 成都诺和晟泰生物科技有限公司 一种化合物及其应用

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4839344A (en) 1987-06-12 1989-06-13 Eastman Kodak Company Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity
EP0400051B1 (en) 1988-01-28 1995-05-10 Polygen Holding Corporation Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity
AU633003B2 (en) 1988-05-11 1993-01-21 Polygen Holding Corporation Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity
IT1240643B (it) 1990-05-11 1993-12-17 Mediolanum Farmaceutici Spa Peptidi biologicamente attivi contenenti in catena 2-alchiltriptofano
IL98910A0 (en) 1990-07-24 1992-07-15 Polygen Holding Corp Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity and pharmaceutical compositions containing them
US5663146A (en) 1991-08-22 1997-09-02 Administrators Of The Tulane Educational Fund Polypeptide analogues having growth hormone releasing activity
CN1174504A (zh) * 1993-11-09 1998-02-25 麦克公司 促进生长激素释放的哌啶、吡咯烷和六氢－1h－吖庚因
US5492916A (en) 1993-12-23 1996-02-20 Merck & Co., Inc. Di- and tri-substituted piperidines, pyrrolidines and hexahydro-1H-azepines promote release of growth hormone
CA2176140A1 (en) 1993-11-24 1995-06-01 Meng Hsin Chen Indolyl group containing compounds and the use thereof to promote the release of growth hormone(s)
US5721250A (en) 1993-12-23 1998-02-24 Merck & Co. Inc. Di-and tri-substituted piperidines, pyrrolidines and hexahydro-1H-azepines promote release of growth hormone
DE69734215T2 (de) * 1996-07-22 2006-06-29 Novo Nordisk A/S Verbindungen mit Wachstumshormon-freisetzenden Eigenschaften
JP4382279B2 (ja) * 1998-01-16 2009-12-09 サファイア セラピューティクス，インコーポレイティド 成長ホルモン放出特性を有する化合物
PT1077941E (pt) * 1998-05-11 2010-07-01 Novo Nordisk As Compostos com propriedades de libertaã†o da hormona de crescimento
US6303620B1 (en) * 1998-05-11 2001-10-16 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US20010020012A1 (en) * 2000-02-01 2001-09-06 Andersen Maibritt Bansholm Use of compounds for the regulation of food intake

Also Published As

Publication number Publication date
RU2272034C2 (ru) 2006-03-20
CA2387095A1 (en) 2001-05-17
KR20020059694A (ko) 2002-07-13
KR100907637B1 (ko) 2009-07-14
PT1230236E (pt) 2005-03-31
AU782260B2 (en) 2005-07-14
ES2231279T3 (es) 2005-05-16
ATE280168T1 (de) 2004-11-15
PL356993A1 (pl) 2004-07-12
NO20022200D0 (no) 2002-05-08
BR0015407A (pt) 2002-07-02
HUP0203844A2 (hu) 2003-03-28
US6576648B2 (en) 2003-06-10
DE60015173D1 (de) 2004-11-25
HU229445B1 (en) 2013-12-30
CA2387095C (en) 2011-01-11
ZA200202757B (en) 2003-02-26
UA73530C2 (uk) 2005-08-15
WO2001034593A1 (en) 2001-05-17
JP2003527338A (ja) 2003-09-16
HUP0203844A3 (en) 2004-07-28
CZ301078B6 (cs) 2009-10-29
EP1230236A1 (en) 2002-08-14
JP5053960B2 (ja) 2012-10-24
IL149049A0 (en) 2002-11-10
CZ20021587A3 (cs) 2002-09-11
DK1230236T3 (da) 2005-02-21
NO20022200L (no) 2002-05-08
NO323910B1 (no) 2007-07-16
MXPA02004656A (es) 2002-09-02
DE60015173T2 (de) 2005-12-08
JP2009062369A (ja) 2009-03-26
CN1198818C (zh) 2005-04-27
AU1269401A (en) 2001-06-06
CN1420878A (zh) 2003-05-28
EP1230236B1 (en) 2004-10-20
US20010041720A1 (en) 2001-11-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5053960B2 (ja) 成長ホルモン放出特性を有する化合物
EP0869974B1 (en) Compounds with growth hormone releasing properties
ES2331102T3 (es) Compuestos con propiedades de liberacion de la hormona del crecimiento.
JP2003527338A5 (pl)
CZ291982B6 (cs) Diamidový derivát uvolňující růstový hormon, jeho použití, farmaceutické prostředky ho obsahující a způsob stimulace uvolňování růstového hormonu
CA2334315C (en) Compounds with growth hormone releasing properties
US6566337B1 (en) Compounds with growth hormone releasing properties
EP1127071B1 (en) Compounds with growth hormone releasing properties
ES2361606T3 (es) Composiciones con propiedades de liberación de hormonas del crecimiento.
IL149049A (en) 2 - amino - n - [(1r) - 2 - [(3r) - 3 benzyl - 3 - (benzyl - 3 - (n&#39;, n&#39;, n - trimethylhydrazinocarbonyl) piperidin - 1 - yl] - 1 - (1h - indol - 3 - ylmethyl) - 2 oxoethyl] - 2 - methylpropionamide, pharmaceutical composition comprising it and its use for the manufacturing of medicaments for releasing growth hormone