PL195642B1 - Sposób przetwarzania wodnego roztworu aktywowanego białka C - Google Patents
Sposób przetwarzania wodnego roztworu aktywowanego białka CInfo
- Publication number
- PL195642B1 PL195642B1 PL98336420A PL33642098A PL195642B1 PL 195642 B1 PL195642 B1 PL 195642B1 PL 98336420 A PL98336420 A PL 98336420A PL 33642098 A PL33642098 A PL 33642098A PL 195642 B1 PL195642 B1 PL 195642B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- protein
- activated protein
- processing
- apc
- activated
- Prior art date
Links
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 title claims abstract description 70
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 claims abstract description 68
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 claims abstract description 68
- 102100036546 Salivary acidic proline-rich phosphoprotein 1/2 Human genes 0.000 claims abstract 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 50
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 25
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 24
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 16
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 15
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 13
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 13
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 10
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 10
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 9
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 claims description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- BVHLGVCQOALMSV-JEDNCBNOSA-N L-lysine hydrochloride Chemical compound Cl.NCCCC[C@H](N)C(O)=O BVHLGVCQOALMSV-JEDNCBNOSA-N 0.000 claims description 3
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 3
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960005337 lysine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 7
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 61
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 32
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 23
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 12
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 101500025568 Homo sapiens Saposin-D Proteins 0.000 description 11
- 229940100689 human protein c Drugs 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 230000007281 self degradation Effects 0.000 description 10
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 8
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 8
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 4
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 4
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 4
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000006652 catabolic pathway Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 4
- PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N tris acetate Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 3
- 101710117545 C protein Proteins 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 3
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 3
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 3
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 3
- 230000003024 amidolytic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 3
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 3
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 3
- 239000012538 diafiltration buffer Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 2
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 238000010977 unit operation Methods 0.000 description 2
- 238000011100 viral filtration Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YBHYYFYQHRADCQ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound NCC(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O YBHYYFYQHRADCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003178 Arterial thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 206010051055 Deep vein thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010043647 Thrombotic Stroke Diseases 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 208000019664 bone resorption disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000021523 carboxylation Effects 0.000 description 1
- 238000006473 carboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000003241 endoproteolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 230000003089 estrolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N gamma-carboxy-L-glutamic acid Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC(C(O)=O)C(O)=O UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000011017 operating method Methods 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960002635 potassium citrate Drugs 0.000 description 1
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000011082 potassium citrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000019 pro-fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 1
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 1
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
- A61K38/4866—Protein C (3.4.21.69)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6464—Protein C (3.4.21.69)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21069—Protein C activated (3.4.21.69)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
1. Sposób przetwarzania wodnego roztworu aktywowanego bialka C, znamienny tym, ze prze- twarzanie prowadzi sie przy stezeniu soli pomiedzy 150 mM i 1000 mM i pH 5,5 do 6,3, a przetwarza- nie wybiera sie z grupy skladajacej sie z: a. operacji wzbogacania lub zatezenia bialka, lub b. operacji oczyszczania bialka, lub c. liofilizacji wodnego roztworu z wytworzeniem kompozycji farmaceutycznej, lub d. chromatografii lub filtracji, lub e. przechowywania PL PL PL PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób przetwarzania wodnego roztworu aktywowanego białka C. Podczas przetwarzania według wynalazku obniża się autodegradacja aktywowanego białka.
Białko C jest proteazą serynową i naturalnie występującym środkiem przeciwkrzepliwym, który odgrywa rolę w regulacji homeostazy poprzez inaktywację czynników Va i VIIIa w kaskadzie krzepnięcia krwi. Ludzkie białko C powstaje in vivo przede wszystkim w wątrobie w postaci pojedynczego polipeptydu o długości 461 aminokwasów. Ta prekursorowa cząsteczka podlega wielu modyfikacjom posttranslacyjnym, obejmującym 1) odszczepianie sekwencji sygnałowej o długości 42 aminokwasów; 2) proteolityczne usuwanie z jednego łańcucha zymogenu reszty lizyny w pozycji 156 i reszty argininy w pozycji 157 z utworzeniem cząsteczki o postaci dwułańcuchowej (tj. łańcucha lekkiego o długości 155 reszt aminokwasowych połączonego mostkiem dwu-siarczkowym z zawierającym proteazę serynową łańcuchem ciężkim o długości 262 reszt aminokwasowych); 3) zależną od witaminy K karboksylację dziewięciu reszt kwasu glutaminowego zgrupowanych w pierwszych 42 aminokwasach łańcucha lekkiego, w wyniku czego powstaje 9 reszt kwasu gamma-karboksyglutaminowego; oraz 4) przyłączanie węglowodanów w czterech miejscach (jednym w łańcuchu lekkim i trzech w łańcuchu ciężkim). Łańcuch ciężki zawiera dobrze poznaną triadę Asp 257, His 211 i Ser 360 proteaz serynowych. Ostatecznie, dwułańcuchowy zymogen w krążeniu aktywowany jest in vivo przez trombinę na fosfolipidowej powierzchni w obecności jonu wapniowego. Aktywacja zachodzi w wyniku usunięcia dodekapeptydu z końca N łańcucha ciężkiego, prowadząc do powstawania aktywowanego białka C (aPC), posiadającego aktywność enzymatyczną. Wraz z innymi białkami, aktywowane białko C działa, jako być może najważniejszy, czynnik hamujący prowadzące do zakrzepicy krzepnięcie krwi.
Niestety, aPC może ulegać autodegradacji, co prowadzi do zmniejszania jego funkcjonalności jako środka przeciwkrzepliwego. Znanym szlakiem degradacji aktywowanego białka C jest proteolityczne rozszczepienie przy reszcie lizyny w pozycji 308 łańcucha ciężkiego, z utworzeniem fragmentu o długości 111 aminokwasów. Ten produkt degradacji znany jest jako fragment EAK.
Uprzednie próby obniżania autodegradacji skupiały się na minimalizacji tworzenia fragmentu EAK. Co najbardziej godne uwagi, Prouty i in., europejski opis patentowy numer 0 662 513, 12 lipca 1995 r., ujawniają minimalizację autodegradacji aPC przez kontrolowanie pH na poziomie od około 6,3 do 7,0; inkubowanie aPC w 3 M moczniku lub wystawianie aPC na działanie skrajnych stężeń soli, które określono na powyżej 0,4 M lub poniżej 0,05 M.
Chociaż opis patentowy JP 1226900 dostarcza sposobu skutecznej izolacji i oczyszczania białka różni się od tego sposobu, jaki przedstawiono w niniejszym wynalazku i nie dotyczy aktywowanego białka C. W opisie JP 1226900 nie ma pouczenia ani sugestii dotyczącej sposobu przetwarzania aktywowanego białka C ani też jakiegokolwiek pouczenia na temat metody liofilizacji wodnego roztworu aktywowanego białka C. W szczególności nie jest oczywiste w świetle opisu JP 1226900, że stabilność aktywowanego białka C podczas liofilizacji byłaby zwiększona przez wybór pH w zakresie 5,5 do 6,3, i siły jonowej w zakresie 150 mM i 1000 mM.
Natomiast roztwory aktywowanego białka C ujawnione w opisie patentowym EP 726076 zawierają, co najmniej jeden aminokwas, i albo jeden lub kombinację albuminy i niejonowego środka powierzchniowo czynnego jako stabilizatory. Opis patentowy EP 726076 nie sugeruje pominięcia tych stabilizatorów w roztworach aktywowanego białka C. Niniejszy wynalazek korzystnie nie wymaga takich stabilizatorów. W opisie EP 726076 nie wymienia się pH w rozważaniach stabilizacji aktywowanego białka C, i dlatego opis ten nie motywuje fachowca do tego by brał pod uwagę pH, nie mówiąc już o wprowadzeniu specyficznego zakresu pH według niniejszego wynalazku.
Opis patentowy JP 8301786 skupia się na aktywowanym białku C jako środku zapobiegającym i leczniczym w chorobie resorpcji kości i nie zawiera pouczenia na temat zmniejszenia autodegradacji produktu, aktywowanego białka C. Opis JP 8301786 nie porusza identyfikacji autodegradacji produktu, nie mówiąc już o stabilizowaniu roztworów według niniejszego wynalazku. W ujawnieniu sposobu wytwarzania aktywowanego białka C pochodzącego z ludzkiej plazmy, opis JP 8301786 zapewnia wytwarzanie aktywowane białko C wysuszonego przez liofilizację w roztworach zawierających fosforan sodu i chlorek sodu i albo stabilizowaną żelatynę (Przykład 1) albo albuminę i mannitol (Przykład 2). Nigdzie JP 8301786 nie sugeruje wytwarzania aktywowanego białka C bez stabilizatorów jak w niniejszym wynalazku. Co więcej JP 8301786 nie omawia pH z uwagi na stabilność aktywowanego białka C.
Jak uprzednio wskazano JP 1226900 dotyczy białka C, a nie aktywowanego białka C. EP 726076 i JP 8301786 każdy obejmuje dodatkowe zaróbki nie objęte niniejszym wynalazkiem.
PL 195 642 B1
Autorzy zgłoszenia odkryli drugi ważny szlak degradacji - autodegradację końca N łańcucha lekkiego, której wynikiem jest rozszczepianie po obu stronach reszty histydyny w pozycji 10. Ten szlak degradacji prowadzi do powstawania dwóch nieaktywnych produktów. W wyniku odszczepienia pierwszych dziewięciu N-końcowych reszt łańcucha lekkiego powstaje dez(1-9)aktywowane białko C, a w wyniku odszczepienia pierwszych dziesięciu reszt łańcucha lekkiego, dez(1-10)aktywowane białko C. Wynikiem tego szlaku degradacji, o którym nie donoszono uprzednio, jest utrata aktywności przeciwkrzepliwej z powodu usunięcia posiadających zasadnicze znaczenie reszt GLA w pozycjach 6 i 7. Dlatego też, minimalizacja poziomu produktów degradacji, dez(1-9)- i dez(1-10)aktywowanego białka C jest ważna dla uzyskania preparatu farmaceutycznego aktywowanego białka C o silnym działaniu i wysokiej czystości. Warianty te były uprzednio nieznanymi produktami degradacji i są niezwykle trudne, jeśli nie niemożliwe, do usunięcia konwencjonalnymi technikami oczyszczania. Warunki prowadzące do minimalizacji ich tworzenia były uprzednio nieznane.
Identyfikacja tego ważnego szlaku autodegradacji aktywowanego białka C przez autorów zgłoszenia umożliwiła odkrycie warunków przetwarzania i nadawania postaci farmaceutycznej pozwalających na zwiększenie czystości i siły działania aktywowanego białka C. Autorzy zgłoszenia wykazali, że w niskim pH (np. niższym niż 6,3), szlak autodegradacji prowadzący do powstawania dez(1-9)aPC lub dez(1-10)aPC dominuje nad szlakiem autodegradacji 308-309, jednakże stosowanie podwyższonych stężeń chlorku sodowego (wyższych niż 150 mM) w pH niższym niż 6,3 zasadniczo obniża zasięg reakcji autodegradacji, w wyniku której powstają dez(1-9)aPC i/lub dez(1-10)aPC.
Zgodnie z tym, niniejszy wynalazek zapewnia sposób przetwarzania aktywowanego białka C przy sile jonowej wyższej niż 150 mM i w pH od około 5,5 do poniżej 6,3. W warunkach tych tworzenie dez(1-9)aPC i dez(1-10)aPC jest znacząco obniżone. Dlatego też, niniejszy wynalazek zapewnia ulepszony sposób przetwarzania wodnego roztworu aktywowanego białka C bez niepożądanej degradacji.
Opis rysunków
Figura 1 przedstawia pierwszorzędową strukturę aktywowanego ludzkiego białka C dla ułatwienia zilustrowania opisywanego w niniejszym opisie szlaku autodegradacji. Przyjęta tu numeracja reszt oparta jest na numeracji sekwencji ludzkiego aktywowanego białka C. Specjalista w tej dziedzinie będzie wiedział, że inne rodzaje aktywowanego białka C mogą nieznacznie różnić się sekwencją, czego wynikiem stają się przesunięcia w zdefiniowanej tu numeracji.
Zgodnie z wynalazkiem sposób przetwarzania wodnego roztworu aktywowanego białka C, charakteryzuje się tym, że przetwarzanie prowadzi się przy stężeniu soli pomiędzy 150 mM i 1000 mM i pH 5,5 do 6,3, a przetwarzanie wybiera się z grupy składającej się z:
a. operacji wzbogacania lub zatężenia białka, lub
b. operacji oczyszczania białka, lub
c. liofilizacji wodnego roztworu z wytworzeniem kompozycji farmaceutycznej, lub
d. chromatografii lub filtracji, lub
e. przechowywania
W korzystnym wykonaniu wynalazku przetwarzanie prowadzi się w nieobecności środka denaturującego, histydyny, chlorowodorku lizyny lub albuminy.
W innym wykonaniu wynalazku przetwarzanie prowadzi się korzystnie przy pH od 5,6 do 6,2, korzystniej przy pH od 5,9 do 6,1.
W kolejnym wykonaniu wynalazku pH buforuje się cytrynianem sodowym, a jako sól korzystnie stosuje się chlorek sodu.
W sposobie według wynalazku aktywowanym białkiem C jest korzystnie ludzkie zrekombinowane aktywowane białko C.
W sposobie według wynalazku przetwarzanie stanowi korzystnie operacja oczyszczania białka, a zwłaszcza przechowywanie.
W dalszym wykonaniu wynalazku przetwarzanie stanowi liofilizacja wodnego roztworu aktywowanego białka C z wytworzeniem kompozycji farmaceutycznej. Przy czym wodny roztwór aktywowanego białka C korzystnie ponadto zawiera wypełniacz wybrany z grupy obejmującej trehalozę, rafinozę, i sacharozę i ich mieszaniny.
Operacja oczyszczania aktywowanego białka C następuje przez rozdział chromatograficzny, obejmujący eluowanie aktywowanego białka C podczas rozdziału chromatograficznego z zastosowaniem eluowania roztworem wodnym posiadającym siłę jonową wyższą niż 150 mM i pHod5,5do poniżej 6,3.
PL 195 642 B1
Operacja zatężania roztworu aktywowanego białka C następuje przez sączenie, obejmujące nakładanie aktywowanego białka C na membranę filtrującą w postaci wodnego roztworu posiadającego siłę jonową wyższą niż 150 mM ipH od 5,5 do poniżej 6,3.
Preparaty farmaceutyczne aktywowanego białka C otrzymane sposobem według wynalazku zawierają mniej niż 10% wagowych dez(1-9)aPC i/lub dez(1-10)aPC.
Wszystkie stosowane w tym ujawnieniu skróty nazw aminokwasów są skrótami przyjętymi przez United States Patent and Trademark Office, jak wymieniono w 37 C.F.R. § 1.822 (B)2.
Do celów niniejszego wynalazku, jak opisano i zastrzeżono w niniejszym opisie, następujące terminy posiadają podane poniżej znaczenia.
aPC lub aktywowane białko - odnosi się do białka C, niezależnie od tego, czy jest białkiem zrekombinowanym, czy pochodzącym z osocza. aPC obejmuje, a korzystnie jest, ludzkim białkiem C, chociaż aPC może również obejmować inne rodzaje lub pochodne posiadające aktywności proteolityczną, amidolityczną, estrolityczną lub biologiczną (przeciwkrzepliwą bądź profibrynolityczną) białka C. Przykłady pochodnych białka C opisali Gerlitz i in., opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki numer 5 453 373 oraz Foster i in., opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki numer 5 516 650, których ujawnienia w całości włączono do niniejszego opisu poprzez odnośniki literaturowe.
APTT - aktywowany częściowy czas tromboplastynowy.
Wodny - obejmuje układy różnych rozpuszczalników, jak również stosowanie jako rozpuszczalnika tylko wody. Korzystnie, wodny oznacza tylko wodę jako rozpuszczalnik.
Rozdział chromatograficzny - obejmuje techniki chromatograficzne znane i stosowane w tej dziedzinie, włącznie z chromatografią sączenia molekularnego, anionową, kationową, oddziaływań hydrofobowych, z odwróconymi fazami i podobnymi.
Filtracja z przepływem krzyżowym - odnosi się do rozdziału poprzez styczny przepływ przez membranę filtracyjną, gdzie produkt jest albo zatrzymywany przez membranę (jak przy zatężaniu lub diafiltracji), albo przechodzi przez membranę (jak w filtracji wirusowej).
PC - zyraogen białka C.
Przetwarzanie - odnosi się do jednostkowych operacji użytecznych w wytwarzaniu aktywowanego białka C, takich jak chromatografia kolumnowa, filtracja (styczne, z przepływem krzyżowym, z objętością martwą), liofilizacja, pompowanie lub przechowywanie.
r-aPC - zrekombinowane białko C wytworzone przez aktywację PC in vitro lub przez bezpośrednie wydzielanie aktywowanej postaci białka C przez komórki prokariotyczne, komórki eukariotyczne lub zwierzęta transgeniczne, włącznie z, na przykład, wydzielaniem z komórek 293 nerki ludzkiej w postaci zymogenu, następnie oczyszczanego i aktywowanego technikami dobrze znanymi specjalistom w tej dziedzinie i przedstawionymi w Yan, opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki numer 4 981 952 oraz Cottingham, światowy opis patentowy numer WO 97/20043.
Niniejszy wynalazek dotyczy ulepszonego sposobu przetwarzania aktywowanego białka C. Wynalazek szczególnie dotyczy przetwarzania aktywowanego białka C przez operacje wzbogacania lub zatężanie białka, z jednoczesnym obniżaniem autodegradacji. Wynalazek charakteryzuje się stosowaniem takiego przetwarzania, a szczególnie takich operacji modyfikacji, wzbogacania i oczyszczania, prowadzonych z zastosowaniem wodnego roztworu białka w opisanych w niniejszym opisie warunkach.
Kombinacja zastrzeganych w niniejszym opisie warunków minimalizuje tworzenie dez(1-9)aPC i dez(1-10)aPC. Dez(1-9)aPC i dez(1-10)aPC są niezwykle trudne do usunięcia znanymi metodami oczyszczania, tak że pożądane jest minimalizowanie ich tworzenia podczas wytwarzania preparatów farmaceutycznych aPC. Aktywowane białko C przygotowane w zastrzeganych warunkach jest zasadniczo wolne od wariantów dez(1-9)aPC i dez(1-10)aPC. Ogólnie, preparaty farmaceutyczne aPC przygotowanego w tych warunkach są zasadniczo wolne od dez(1-9)aPC i dez(1-10)aPC, generalnie zawierają mniej niż 10% wagowych, korzystnie mniej niż 8%, korzystniej mniej niż 5%, a najkorzystniej mniej niż 3% tych wariantów, osobno lub łącznie. Liofilizowane preparaty farmaceutyczne przygotowane z zastosowaniem aPC przygotowanego jak opisano i zastrzeżono w niniejszym opisie wykazują ulepszoną stabilność w stanie roztworu (przed liofilizacją) i stabilność w ciągu od 24 do 48 godzin po rekonstytucji. Obserwuje się nie więcej niż 5% utraty siły działania w ciągu do pięciu dni w temperaturze od 2 do 8°C, do 50 godzin w temperaturze 15°C oraz do 40 godzin w temperaturze 25°C. Przed dokonaniem niniejszego wynalazku taka stabilność była uprzednio nieosiągalna.
Dokładnie kontrolując pH, siłę jonową i korzystnie temperaturę, można obniżyć autodegradację aktywowanego białka C w roztworach wodnych podczas przetwarzania i w postaciach farmaceutyczPL 195 642 B1 nych do niemożliwych uprzednio do uzyskania poziomów - szczególnie w nieobecności mocznika i innych czynników denaturujących, histydyny, chlorowodorku lizyny lub albuminy.
W szeroko rozumianym praktycznym stosowaniu niniejszego wynalazku, uważa się, że przetwarzanie białka C obejmuje szeroki zakres operacji jednostkowych, operacji rozdziałów fizycznych i oczyszczania, włącznie ze stosowaniem chromatografii i filtracji z przepływem krzyżowym, takich jak mających na celu oczyszczanie składu preparatu białkowego, zatężanie roztworu lub wymianę rozpuszczalnika, jak również ewentualnie działanie środkami chemicznymi i enzymami. Rozważane w niniejszym wynalazku przetwarzanie białka obejmuje szczególnie oczyszczanie standardowymi metodami chromatograficznymi, takimi jak chromatografia jonowymienna, chromatografia oddziaływań hydrofobowych i podobne, oraz zatężanie białka przez ultrafiltrację i podobne. Przetwarzanie białka obejmuje również w zamierzeniu utrzymywanie roztworu białka w zbiornikach i podobne przygotowania do takich etapów oczyszczania i zatężania. W celu zmniejszenia niestabilności, wszystkie przetwarzania roztworu aktywowanego białka C, włącznie z różnymi etapami oczyszczania białka i zatężania białka, prowadzi się w warunkach opisanych w niniejszym opisie. Takie etapy przetwarzania mają na celu ostateczne wyizolowanie białka, zazwyczaj w postaci zliofilizowanego proszku, do tworzenia preparatu farmaceutycznego.
pH przetwarzanego wodnego roztworu wynosi od około 5,5 do poniżej 6,3. Korzystniej, od 5,7 do poniżej 6,3. Jeszcze korzystniej, pH pomiędzy około 5,6 a około 6,2. Nawet bardziej korzystne jest pH pomiędzy około 5,6 a około 6,2. Jeszcze bardziej korzystne jest pH pomiędzy około 5,9 a około 6,1. Najkorzystniejsze pH wynosi około 6,0. Reprezentatywne układy buforowe do utrzymywania skutecznej kontroli pH obejmują Tris-octan, cytrynian sodowy, cytrynian potasowy, cytrynian-glicynę oraz fosforan sodowy. Korzystniejsze układy buforowe obejmują cytrynian sodowy i fosforan sodowy. Najkorzystniejszym buforem jest cytrynian sodowy. Korzystne stężenie molowe układu buforowego wynosi od 10 mM do 50 mM. Najkorzystniejszym stężeniem molowym jest stężenie od 20 do 40 mM. Specjalista w tej dziedzinie będzie wiedział, że dostępnych jest wiele innych układów buforowych, które również można stosować do utrzymywania pH w zastrzeganym zakresie.
Siła jonowa przetwarzanych roztworów jest drugim elementem o krytycznym znaczeniu według niniejszego wynalazku. Siła jonowa generalnie jest wynikiem dodawania farmaceutycznie dopuszczalnych soli - korzystnie chlorku sodowego lub chlorku potasowego. Siła jonowa jest korzystnie wyższa lub równa 150 mM, będąc wynikiem wyższego niż 150 mM stężenia soli w buforowanym roztworze. Korzystnie, stężenie soli jest nie wyższe niż 1000 mM, dla ułatwienia dalszego przetwarzania, stężenie soli wynosi od około 200 mM do około 1000 mM. Stężenia wyższe niż 50 mM i niższe niż 400 mM uprzednio uważano za niedopuszczalne.
Dodatkowym warunkiem zapewniającym minimalną autodegradację jest temperatura. Korzystnie, temperatura podczas przetwarzania roztworu wynosi pomiędzy 0°C a 10°C, korzystniej od 2°C do 8°C; poza tymi temperaturami występuje znaczna autodegradacja aktywowanego białka C. Jednakże, przekroczenie 10°C w ciągu krótkiego okresu może być tolerowane bez narażania na szwank integralności aktywowanego białka C.
Stężenie aktywowanego białka C nie ma krytycznego znaczenia dla niniejszego wynalazku. Co istotne, zdolność do przetwarzania białka o wyższych stężeniach jest znacząco wzmacniana w opisywanych w niniejszym opisie warunkach. Korzystne stężenie białka wynosi od około 1 mg/ml do około 50 mg/ml, korzystniej od 1do 30 mg/ml, jeszcze korzystniej od 1do 20 mg/ml, a najkorzystniej od 1do 10 mg/ml, chociaż wyższe i niższe stężenia uważa się za możliwe do stosowania.
Aktywowane białko C przygotowane w opisywany w niniejszym opisie sposób użyteczne jest w leczeniu szerokiego zakresu nabytych stanów chorobowych obejmujących wewnątrznaczyniowe krzepnięcie krwi, włącznie z udarem zakrzepowym, zakrzepicą żył głębokich, zatorem tętnicy płucnej, zakrzepicą tętnic obwodowych, czopami zatorowymi powstającymi w sercu i tętnicach obwodowych, ostrym zawałem serca, rozsianym wewnątrznaczyniowym krzepnięciem krwi oraz ostrymi zamknięciami naczyń pre- lub postkapilarnych, w tym zakrzepicą transplantacyjną lub siatkówki.
Aktywowanemu białku C najlepiej nadaje się postać farmaceutyczną w stanie zliofilizowanym ze środkiem wypełniającym. Środek wypełniający najlepiej wybiera się w taki sposób, aby poprawiał on stabilność cząsteczki w stanie stałym. Przykładami takich zaróbek są sacharoza, trehaloza i rafinoza. Specjalista w tej dziedzinie będzie wiedział, że dostępnych jest wiele innych środków wypełniających, które również można stosować z aktywowanym białkiem C. Stężenie środka wypełniającego w postaci farmaceutycznej jest zmienną o krytycznym znaczeniu dla procesu liofilizacji. Korzystnym środkiem wypełniającym jest sacharoza o stężeniu w roztworze przeznaczonym do liofilizacji wynoszącym od 15
PL 195 642 B1 do 30 mg/ml. W postaci farmaceutycznej aPC o stężeniu 2,5 mg/ml najkorzystniejsze stężenie sacharozy w roztworze przeznaczonym do liofilizacji wynosi 15 mg/ml. W postaci farmaceutycznej aPC o stężeniu 5,0 mg/ml najkorzystniejszym stężeniem sacharozy w roztworze przeznaczonym do liofilizacji jest 30 mg/ml.
Poniższe przykłady przedstawiono w celu zilustrowania i wyjaśnienia wynalazku. Nie należy uważać, że przykłady te ograniczają zakres wynalazku. O ile nie stwierdzono inaczej, wszystkie odwołania do części i procentów dotyczą części i procentów wagowych, a wszystkie temperatury wyrażono w stopniach Celsjusza.
Preparatyka 1
Przygotowywanie ludzkiego białka C
Zrekombinowane ludzkie białko C (zymogen) wytworzono w komórkach 293 nerki ludzkiej technikami dobrze znanymi specjalistom w tej dziedzinie, takimi jak te wymienione w Yan, opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki numer 4 981 952, którego ujawnienia w całości włączono do niniejszego opisu poprzez odnośnik literaturowy. Gen kodujący ludzkie białko C ujawniono i zastrzeżono w Bang i in., opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki numer 4 775 624, którego ujawnienia w całości włączono do niniejszego opisu poprzez odnośnik literaturowy. Plazmidem zastosowanym do ekspresji ludzkiego białka C w komórkach 293 był plazmid pLPC, który ujawniono w Bang i in., opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki numer 4 992 373, którego ujawnienia w całości włączono do niniejszego opisu poprzez odnośnik literaturowy. Konstruowanie plazmidu pLCP opisano również w publikacji europejskiego opisu patentowego numer 0 445 939 oraz w Grinell i in., 1987, Bio/Technology 5: 1189-1192, których ujawnienia w całości również włączono do niniejszego opisu poprzez odnośniki literaturowe. Krótko, plazmidem stransfekowano komórki 293, następnie zidentyfikowano stabilne transformanty, założono subhodowle i prowadzono je w podłożach wolnych od surowicy. Po fermentacji otrzymywano podłoże wolneodkomórekprzezmikrofiltrację.
Zymogen ludzkiego białka C wydzielano z płynu hodowlanego przez adaptację techniki Yana, opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki numer 4 981 952, którego ujawnienia w całości włączono do niniejszego opisu poprzez odnośnik literaturowy. Przed adsorpcją na żywicy anionowymiennej (Fast-Flow Q, Pharmacia), sklarowane podłoże doprowadzano do 4 mM EDTA. Po przemyciu 4 objętościami kolumny roztworu zawierającego 20 mM Tris, 200mM NaCl, pH 7,4, oraz 2 objętościami kolumny roztworu zawierającego 20 mM Tris, 150 mM NaCl, pH 7,4, związany zrekombinowany zymogen ludzkiego białka C eluowano roztworem zawierającym 20 mM Tris, 150 mM NaCl, 10 mM CaCl2, pH 7,4. Eluowane białko wykazywało czystość powyżej 95%, jak stwierdzono przez elektroforezę w żelu poliakryloamidowym w obecności SDS.
Dalsze oczyszczanie białka przeprowadzono przez doprowadzanie roztworu białka do 3 M stężenia NaCl, a następnie adsorpcję na żywicy oddziaływań hydrofobowych (Toyopearl Phenyl 650M, TosoHaas), zrównoważonej roztworem zawierającym 20 mM Tris, 3 M NaCl, 10 mM CaCl2, pH 7,4. Po przemyciu 2 objętościami kolumny buforu do równoważenia bez CaCl2, zrekombinowany zymogen ludzkiego białka C eluowano roztworem zawierającym 20 mM Tris, pH 7,4. Wyeluowane białko przygotowywano do aktywacji przez usunięcie pozostającego wapnia. Zymogen przepuszczano przez kolumnę powinowactwa do metali (Chelex-100, BioRad) w celu usunięcia wapnia i ponownie wiązano z wymieniaczem anionowym (Fast Flow Q, Pharmacia). Obie te kolumny łączono w szereg i równoważono roztworem zawierającym 20 mM Tris, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, pH 7,4. Po nałożeniu białka kolumnę Chelex-100, przed jej odłączeniem z szeregu, przemywano jedną objętością kolumny tego samego buforu. Kolumnę anionowymienną przemywano 3 objętościami kolumny buforu do równoważenia przed elucją białka roztworem zawierającym 0,4 M NaCl, 20 mM Tris-octan, pH 6,5. Stężenie zrekombinowanego ludzkiego białka C mierzono przez pomiar ekstynkcji UV przy długości fali 280 nm, E0,1%= 1,81.
Preparatyka 2
Aktywacja zrekombinowanego ludzkiego białka C
Trombinę bydlęcą sprzęgnięto z Activated CH-Sepharose 4B w temperaturze 4°C. Reakcję sprzęgania przeprowadzono z żywicą uprzednio upakowaną w kolumnie, stosując około 5000 jednostek trombiny/ml żywicy. Roztwór trombiny krążył przez kolumnę w ciągu około 3 godzin przed dodaniem 2-aminoetanolu (MEA) do stężenia 0,6 ml/litr krążącego roztworu. Zawierający MEA roztwór krążył w ciągu dodatkowych 12-14 godzin dla zapewnienia całkowitego zablokowania nieprzereagowanych grup aminowych żywicy. Po blokowaniu, żywicę ze sprzęgniętą trombiną przemywano 10 objętościami kolumny roztworu zawierającego 1 M NaCl, 20 mM Tris, pH 6,5, w celu całości niePL 195 642 B1 specyficznie związanego białka, a następnie stosowano w reakcjach aktywacji po zrównoważeniu buforem do aktywacji.
Oczyszczone rHPC doprowadzano do 5 mM stężenia EDTA (w celu cheletacji jakiegokolwiek pozostającego wapnia) i rozcieńczano do stężenia 2 mg/ml roztworem zawierającym 20 mM Tris, pH 7,4, lub 20 mM Tris-octan, pH 6,5. Materiał ten przepuszczano przez kolumnę z trombiną, zrównoważoną w temperaturze 37°C roztworem zawierającym 50 mM NaCl i albo 20 mM Tris, pH 7,4, albo 20 mM Tris-octan, pH 6,5. Szybkość przepływu doprowadzano do wartości umożliwiającej czas kontaktu pomiędzy rHPC i żywicą z trombiną wynoszący około 20 minut. Zbierano wyciek i natychmiast oznaczano pod kątem aktywności amidolitycznej. Jeśli materiał nie posiadał aktywności właściwej (amidolitycznej) porównywalnej ze znanym wzorcem standardem aPC, poddawano go dalszemu przepuszczaniu przez kolumnę z trombiną dla uzyskania pełnej aktywacji rHPC. Następnie materiał rozcieńczano 1:1 powyższym 20 mM buforem.
Przeciwkrzepliwą aktywność aktywowanego białka C określa się przez pomiar wydłużania czasu krzepnięcia w oznaczeniu krzepnięcia, aktywowanego częściowego czasu tromboplastynowego (APTT). Krzywą wzorcową przygotowuje się w buforze do rozcieńczeń (1 mg/ml BSA czystości do oznaczeń radioimmunologicznych, 20 mM Tris, pH 7,4, 150 mM NaCl, 0,02% NaN3) dla zakresu stężeń białka C 125-1000 ng/ml, gdzie próbki przygotowuje się w kilku rozcieńczeniach w tym zakresie stężeń. Do każdej kuwety na próbkę dodaje się 50 ml zimnego osocza końskiego i 50 ml rekonstytuowanego odczynnika do oznaczania aktywowanego częściowego czasu tromboplastynowego (APTT Reagent, Sigma) i inkubuje w temperaturze 37°C w ciągu 5 minut. Po inkubacji do każdej kuwety dodaje się 50 ml odpowiednich próbek lub wzorców. Dla oznaczania podstawowego czasu krzepnięcia stosuje się bufor do rozcieńczeń w miejsce próbki lub wzorca. Stoper fibrometru (CoA Screener Hemostasis Analyzer, American Labor) uruchamia się natychmiast po dodaniu do każdej próbki lub wzorca 50 ml 30 mM CaCl2 o temperaturze 37°C. Stężenie aktywowanego białka C w próbkach oblicza się z równania regresji liniowej krzywej wzorcowej. Czasy krzepnięcia są średnią z co najmniej trzech powtórzeń, włącznie z próbkami krzywej wzorcowej. Stężenia białka dla zrekombinowanego 0,1% aktywowanego białka C mierzono przez pomiar ekstynkcji UV przy długości fali 280 nM, E0,1% = 1,85.
P r zyk ł a d 1
Chromatograficzny rozdział aPC
Roztwór zawierający aPC o przewodności około 14 mMho i pH 5,7 nakładano na kolumnę o wymiarach 9,5 cm x 9 cm (wysokość x średnica) z żywicą kationowymienną S-Sepharose Fast Flow, połączoną w szereg z kolumną o wymiarach 25 cm x 14 cm (wysokość x średnica) z żywicą anionowymienną Q Sepharose Fast Flow. Obie kolumny uprzednio równoważono 20 mM cytrynianem sodowym, pH 6,0, 150 mM NaCl. Nakładana na kolumnę ilość białka wynosiła 10 gramów aPC na litr żywicy anionowymiennej. Kolumnę przemywano >2 objętościami kolumn buforu do równoważenia i jednoetapowo eluowano 20 mM cytrynianem sodowym, pH 6,0, 400 mM NaCl. Wszystkie operacje prowadzono w temperaturze 2-8°C i przy liniowej szybkości przepływu wynoszącej 60 cm/godzinę.
Chociaż aPC posiadało wysoką aktywność (639 jednostek/mg w oznaczeniu APTT) i było znacznie zatężone podczas chromatografii (>20 g/litr w piku) oraz po połączeniu w całość (10 g/litr), produkt pozostawał stabilny. Obserwacje te potwierdzono przez spektrometrię masową zredukowanych i niezredukowanych produktów trawienia łańcucha lekkiego trypsyną, która wskazała na brak wykrywalnych (<2%) lizoform zawierających endoproteolityczne rozszczepienie 308-309 lub obecności dez(1-9)aPCi dez(1-10)aPC (<5%).
P rz y k ła d 2 Filtracja wirusowa
Aktywowane białko C (4 mg/ml) w buforze zawierającym 20 mM Tris, 150 mM NaCl i 20 mM EDTA sączy się stosując filtrację z przepływem stycznym (membrana Millipore Virusolve™ 180). Przepuszczanie aPC przez sączek ułatwia się stosując bufor do diafiltracji. Buforem do diafiltracji jest 20 mM cytrynian sodowy i 150 mM NaCl. Sączono roztwór (10 litrów) aPC o stężeniu 4 mg/ml w buforze zawierającym 20 mM Tris, 150 mM NaCl i 20 mM EDTA. Jako bufor do diafiltracji stosowano bufor zawierający cytrynian sodowy i chlorek sodowy, uzyskując objętość końcową roztworu aPC wynoszącą 21,5 litrów.
P rz y k ła d 3 Liofilizacja
Roztwór przygotowuje się w fiolce przez dodanie odpowiednich ilości sacharozy, chlorku sodowego i cytrynianu sodowego do wstępnie określonej objętości r-aPC, uzyskując stężenia 2,5 mg/ml
PL 195 642 B1 aPC, 15 mg/ml sacharozy, 325 mM chlorek sodowy i 20 mM cytrynian sodowy o pH 6,0. Roztwór liofilizuje się stosując konwencjonalny liofilizator, uzyskując fiolki z liofilizowanym aPC, odpowiednim do rekonstytucji i podawania pacjentowi. Liofilizowane postacie farmaceutyczne zawierają mniej niż 10% dez(1-9)apC i dez(1-10)aPC.
P r zyk ł a d 4
Liofilizacja
Roztwór przygotowuje się w fiolce przez dodanie odpowiednich ilości sacharozy, chlorku sodowego i cytrynianu sodowego do wstępnie określonej objętości r-aPC, uzyskując stężenia 5 mg/ml aPC, 30 mg/ml sacharozy, 650 mM chlorek sodowy i 40 mM cytrynian sodowy o pH 6,0. Roztwór liofilizuje się stosując konwencjonalny liofilizator, uzyskując fiolki z liofilizywanym aPC, odpowiednim do rekonstytucji i podawania pacjentowi. Liofilizowane postacie farmaceutyczne zawierają mniej niż 10% dez(1-9)apC i dez(1-10)aPC.
W powyższym opisie opisano zasady, korzystne rozwiązania i sposoby działania według niniejszego wynalazku. Jednakże, wynalazku, który w zamiarze ma tu podlegać ochronie, nie należy interpretować jako ograniczonego do poszczególnych ujawnionych postaci, ponieważ należy je traktować jako raczej ilustrujące, a nie ograniczające. Specjaliści w tej dziedzinie mogą dokonywać modyfikacji i zmian, bez odchodzenia od ducha wynalazku.
Claims (11)
1. Sposób przetwarzania wodnego roztworu aktywowanego białka C, znamienny tym, że przetwarzanie prowadzi się przy stężeniu soli pomiędzy 150 mM i 1000 mM i pH 5,5 do 6,3, a przetwarzanie wybiera się z grupy składającej się z:
a. operacji wzbogacania lub zatężenia białka, lub
b. operacji oczyszczania białka,lub
c. liofilizacji wodnegoroztworuz wytworzeniem kompozycji farmaceutycznej, lub
d. chromatografii lubfiltracji,lub
e. przechowywania
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że przetwarzanie prowadzi w nieobecności środka denaturującego, histydyny, chlorowodorku lizyny lub albuminy.
3.Sposóbwedługzastrz. 1, znamienny tym, że pHwynosi od5,6do6,2.
4.Sposóbwedługzastrz. 3, znamienny tym, że pHwynosi od5,9do6,1.
5. Sposób według zastrz. 1, albo 2, albo 3, albo 4, znamienny tym, że pH buforuje się cytrynianem sodowym.
6. Sposób według zastrz. 1, albo 2, albo 3, albo 4, znamienny tym, że jako sól stosuje się chloreksodu.
7. Sposóbwedług zastrz. 1, albo 2, albo 3, albo4, znamienny tym, że aktywowanym białkiem C jest ludzkiezrekombinowaneaktywowanebiałkoC.
8. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że przetwarzanie stanowi operacja oczyszczania białka.
9. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że przetwarzanie stanowi przechowywanie.
10. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że przetwarzanie stanowi liofilizacja wodnego roztworuaktywowanegobiałkaC z wytworzeniem kompozycji farmaceutycznej.
11. Sposób według zastrz. 10, znamienny tym, że wodny roztwór aktywowanego białka C ponadto zawiera wypełniacz wybrany z grupy obejmującej trehalozę, rafinozę, i sacharozę i ich mieszaniny.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US4525597P | 1997-04-28 | 1997-04-28 | |
| PCT/US1998/008384 WO1998048822A1 (en) | 1997-04-28 | 1998-04-24 | Improved methods for processing activated protein c |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL336420A1 PL336420A1 (en) | 2000-06-19 |
| PL195642B1 true PL195642B1 (pl) | 2007-10-31 |
Family
ID=21936854
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL98336889A PL195090B1 (pl) | 1997-04-28 | 1998-04-24 | Stabilny liofilizowany preparat aktywowanego białka C i jego stosowanie |
| PL98336420A PL195642B1 (pl) | 1997-04-28 | 1998-04-24 | Sposób przetwarzania wodnego roztworu aktywowanego białka C |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL98336889A PL195090B1 (pl) | 1997-04-28 | 1998-04-24 | Stabilny liofilizowany preparat aktywowanego białka C i jego stosowanie |
Country Status (34)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US6159468A (pl) |
| EP (2) | EP0875252B1 (pl) |
| JP (2) | JP4383546B2 (pl) |
| KR (2) | KR100450856B1 (pl) |
| CN (2) | CN1227025C (pl) |
| AR (2) | AR015598A1 (pl) |
| AT (1) | ATE285788T1 (pl) |
| AU (2) | AU740753C (pl) |
| BR (2) | BR9809292A (pl) |
| CA (2) | CA2288143C (pl) |
| CO (2) | CO4940438A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ298429B6 (pl) |
| DE (1) | DE69828330T2 (pl) |
| DK (1) | DK0875252T3 (pl) |
| EA (2) | EA002149B1 (pl) |
| EG (1) | EG23685A (pl) |
| ES (1) | ES2234072T3 (pl) |
| HU (2) | HU224826B1 (pl) |
| ID (2) | ID23172A (pl) |
| IL (2) | IL132502A0 (pl) |
| IN (2) | IN183798B (pl) |
| MY (2) | MY120984A (pl) |
| NO (2) | NO995134L (pl) |
| NZ (2) | NZ337828A (pl) |
| PE (2) | PE84799A1 (pl) |
| PL (2) | PL195090B1 (pl) |
| PT (1) | PT875252E (pl) |
| SI (1) | SI0875252T1 (pl) |
| SV (2) | SV1998000050A (pl) |
| TR (2) | TR199902631T2 (pl) |
| TW (2) | TWI242443B (pl) |
| UA (2) | UA55448C2 (pl) |
| WO (2) | WO1998048822A1 (pl) |
| ZA (2) | ZA983496B (pl) |
Families Citing this family (61)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ID23172A (id) | 1997-04-28 | 2000-03-23 | Lilly Co Eli | Metode yang diperbaiki untuk pengolahan protein c teraktivasi |
| US6630137B1 (en) * | 1997-04-28 | 2003-10-07 | Eli Lilly And Company | Activated protein C formulations |
| HUP0001237A3 (en) * | 1997-10-20 | 2002-01-28 | Lilly Co Eli | Methods for treating vascular disorders |
| US6815533B1 (en) | 1998-07-31 | 2004-11-09 | Eli Lilly And Company | Cryogranulation of activated protein C |
| BR9915317A (pt) * | 1998-11-13 | 2001-08-07 | Lilly Co Eli | Método de tratar trombocitopenia induzida por heparina |
| JP2002530353A (ja) * | 1998-11-20 | 2002-09-17 | イーライ・リリー・アンド・カンパニー | ウイルス性出血熱の処置法 |
| DE69905489T2 (de) * | 1998-11-23 | 2003-09-11 | Eli Lilly And Co., Indianapolis | Protein c zur behandlung von sichelzellanämie und thalassämie |
| CN1329503A (zh) * | 1998-12-10 | 2002-01-02 | 伊莱利利公司 | 治疗血小板减少性紫癜和溶血性尿毒综合征的方法 |
| US6758938B1 (en) * | 1999-08-31 | 2004-07-06 | Micron Technology, Inc. | Delivery of dissolved ozone |
| US7204981B2 (en) * | 2000-03-28 | 2007-04-17 | Eli Lilly And Company | Methods of treating diseases with activated protein C |
| WO2001089558A2 (en) * | 2000-05-24 | 2001-11-29 | Eli Lilly And Company | Formulations and use of activated protein c and protein c zymogen for treating hypercoagulable states |
| ATE400030T1 (de) | 2001-02-19 | 2008-07-15 | Merck Patent Gmbh | Methode zur identifizierung von t-zellepitopen und deren anwendung zur herstellung von molekülen mit reduzierter immunogenität |
| US7101982B2 (en) * | 2001-03-30 | 2006-09-05 | Immunex Corporation | Control of ph transitions during chromatography |
| US20030055003A1 (en) * | 2001-07-19 | 2003-03-20 | David Bar-Or | Use of copper chelators to inhibit the inactivation of protein C |
| US20030073636A1 (en) * | 2001-09-19 | 2003-04-17 | Oklahoma Medical Research Foundation | Method of treating diabetes |
| WO2003024398A2 (en) | 2001-09-19 | 2003-03-27 | Oklahoma Medical Research Foundation | Treatment of sepsis with tafi |
| DE10149030A1 (de) * | 2001-10-05 | 2003-04-10 | Viscum Ag | Stabile galenische gefriergetrocknete Arzneimittelzubereitung von rViscumin |
| BR0213292A (pt) | 2001-10-15 | 2006-05-23 | Chiron Corp | tratamento de pneumonia severa por administração de inibidor da via de fator tecidual (tfpi) |
| ES2325653T3 (es) | 2001-12-21 | 2009-09-11 | Novo Nordisk Health Care Ag | Composicion liquida de polipeptidos del factor vii. |
| EP1485121A4 (en) * | 2002-03-08 | 2007-11-07 | Lilly Co Eli | ACTIVE C PROTEIN FORMULATIONS |
| BRPI0311959B8 (pt) | 2002-06-21 | 2021-05-25 | Novo Nordisk Healthcare Ag | composição, métodos para preparar um polipeptídeo estável do fator vii, e para tratar uma síndrome responsiva do fator vii, e, uso do polipeptídeo do fator vii |
| NZ562480A (en) * | 2002-10-29 | 2009-08-28 | Alza Corp | Stabilized, solid-state polypeptide particles |
| US20070142272A1 (en) * | 2003-01-24 | 2007-06-21 | Zlokovic Berislav V | Neuroprotective activity of activated protein c independent of its anticoagulant activity |
| US7897734B2 (en) | 2003-03-26 | 2011-03-01 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Method for the production of proteins |
| ES2382157T3 (es) * | 2003-06-25 | 2012-06-05 | Novo Nordisk Health Care Ag | Composición líquida de polipépttidos del factor VII |
| BRPI0508992A (pt) * | 2004-03-17 | 2007-09-04 | Chiron Corp | tratamento de pneumonia severa pela administração de tfpi |
| EP1773371A4 (en) * | 2004-07-23 | 2009-12-30 | Univ Rochester | ACTIVATED PROTEIN C INHIBITS SIDE EFFECTS OF PLASMINOGEN ACTIVATOR IN THE BRAIN |
| US20090148458A1 (en) * | 2005-06-23 | 2009-06-11 | The University Of British Columbia | Coagulation factor iii polymorphisms associated with prediction of subject outcome and response to therapy |
| US9175283B2 (en) * | 2006-05-31 | 2015-11-03 | Genzyme Corporation | Use polysaccharides for promotion of enzymatic activity |
| US20100041600A1 (en) * | 2006-06-09 | 2010-02-18 | Russel James A | Interferon gamma polymorphisms as indicators of subject outcome in critically ill subjects |
| EA019345B1 (ru) * | 2007-03-05 | 2014-03-31 | Кадила Хелзкэр Лимитед | Композиции, содержащие конъюгаты пэг-интерферон-альфа и рафинозу в качестве криопротектора |
| MX2009010361A (es) | 2007-03-29 | 2009-10-16 | Abbott Lab | Anticuerpos il-12 anti-humanos cristalinos. |
| SG186607A1 (en) * | 2007-11-30 | 2013-01-30 | Abbott Lab | Protein formulations and methods of making same |
| US8883146B2 (en) | 2007-11-30 | 2014-11-11 | Abbvie Inc. | Protein formulations and methods of making same |
| US20110171200A1 (en) * | 2008-01-15 | 2011-07-14 | Walley Keith R | Protein c rs2069915 as a response predictor to survival and administration of activated protein c or protein c-like compound |
| WO2010062896A1 (en) * | 2008-11-28 | 2010-06-03 | Abbott Laboratories | Stable antibody compositions and methods for stabilizing same |
| WO2012068519A2 (en) | 2010-11-19 | 2012-05-24 | Sirius Genomics Inc. | Markers associated with response to activated protein c administration, and uses thereof |
| US9062106B2 (en) | 2011-04-27 | 2015-06-23 | Abbvie Inc. | Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins |
| WO2013151727A1 (en) | 2012-04-03 | 2013-10-10 | Smith Medical Asd, Inc. | Heparin-bulking agent compositions and methods thereof |
| US9067990B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-06-30 | Abbvie, Inc. | Protein purification using displacement chromatography |
| WO2013158273A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Abbvie Inc. | Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution |
| US9334319B2 (en) | 2012-04-20 | 2016-05-10 | Abbvie Inc. | Low acidic species compositions |
| US9249182B2 (en) | 2012-05-24 | 2016-02-02 | Abbvie, Inc. | Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography |
| WO2014005183A1 (en) | 2012-07-04 | 2014-01-09 | The University Of Sydney | Treatment of inflammatory skin disorders |
| US9512214B2 (en) | 2012-09-02 | 2016-12-06 | Abbvie, Inc. | Methods to control protein heterogeneity |
| BR112015004467A2 (pt) | 2012-09-02 | 2017-03-21 | Abbvie Inc | método para controlar a heterogeneidade de proteínas |
| AU2013381687A1 (en) | 2013-03-12 | 2015-09-24 | Abbvie Inc. | Human antibodies that bind human TNF-alpha and methods of preparing the same |
| US9017687B1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-28 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography |
| US9499614B2 (en) | 2013-03-14 | 2016-11-22 | Abbvie Inc. | Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosaccharides |
| WO2014159579A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Abbvie Inc. | MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE |
| US9598667B2 (en) | 2013-10-04 | 2017-03-21 | Abbvie Inc. | Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins |
| US9085618B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-07-21 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same |
| US8946395B1 (en) | 2013-10-18 | 2015-02-03 | Abbvie Inc. | Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography |
| US9181337B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-11-10 | Abbvie, Inc. | Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same |
| US20150139988A1 (en) | 2013-11-15 | 2015-05-21 | Abbvie, Inc. | Glycoengineered binding protein compositions |
| DK3137102T3 (da) | 2014-04-16 | 2021-10-11 | Zz Biotech Llc | Apc til anvendelse til behandling af unormal kutan ardannelse |
| CN106488773B (zh) | 2014-04-16 | 2020-02-11 | Zz生物技术有限责任公司 | Apc类似物用于创伤愈合的用途 |
| US11058750B2 (en) | 2015-12-03 | 2021-07-13 | Mor Research Applications Ltd. | Compositions and methods for treatment of ocular diseases |
| HRP20212027T1 (hr) | 2016-06-01 | 2022-04-01 | Servier IP UK Limited | Formulacije polialkilen oksidne asparaginaze i postupci njihove priprave i uporabe |
| CN108159399B (zh) * | 2017-12-29 | 2020-07-24 | 华中科技大学同济医学院附属同济医院 | 一种凝血蛋白酶aPC在防治糖尿病心肌病药物中的应用 |
| WO2023119230A1 (en) | 2021-12-22 | 2023-06-29 | L'oreal | Coagulation pathway and nicotinamide-adenine dinucleotide pathway modulating compositions and methods of their use |
Family Cites Families (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4775624A (en) * | 1985-02-08 | 1988-10-04 | Eli Lilly And Company | Vectors and compounds for expression of human protein C |
| US4849403A (en) * | 1985-05-29 | 1989-07-18 | Pentapharm Ag | Protein C activator, methods of preparation and use thereof |
| US5516650A (en) | 1985-06-27 | 1996-05-14 | Zymogenetics, Inc. | Production of activated protein C |
| AT399095B (de) * | 1986-03-27 | 1995-03-27 | Vukovich Thomas Dr | Verfahren zur auftrennung von proteinen mittels gradientenelution und vorrichtung zur durchführung des verfahrens |
| US5175087A (en) * | 1987-07-06 | 1992-12-29 | Biopool International, Inc. | Method of performing tissue plasminogen activator assay |
| CA1329760C (en) * | 1987-10-29 | 1994-05-24 | Ted C. K. Lee | Plasma and recombinant protein formulations in high ionic strength media |
| US4877608A (en) * | 1987-11-09 | 1989-10-31 | Rorer Pharmaceutical Corporation | Pharmaceutical plasma protein formulations in low ionic strength media |
| US4992373A (en) * | 1987-12-04 | 1991-02-12 | Eli Lilly And Company | Vectors and compounds for direct expression of activated human protein C |
| JP2739050B2 (ja) * | 1988-01-28 | 1998-04-08 | ヘキスト薬品工業株式会社 | 抗血液凝固剤 |
| JPH01226900A (ja) * | 1988-03-08 | 1989-09-11 | Green Cross Corp:The | プロテインｃの精製方法 |
| DE3823519A1 (de) * | 1988-07-12 | 1990-01-18 | Basf Ag | Verfahren zur reinigung von aktiviertem protein c |
| US4981952A (en) * | 1988-10-04 | 1991-01-01 | Eli Lilly And Company | Method for the purification of vitamin K-dependent proteins |
| US5093117A (en) * | 1989-01-24 | 1992-03-03 | Baxter International Inc. | Compositions and method for the treatment or prophylaxis of sepsis or septic shock |
| JPH05506354A (ja) * | 1990-02-09 | 1993-09-22 | ザイモジェネティクス，インコーポレイティド | 端が切り取られた軽鎖を有する活性プロテインｃ |
| IL97312A (en) * | 1990-02-23 | 1999-01-26 | Lilly Co Eli | A method of generating a polypeptide in an eukaryotic vector AND recombinant surrogate cell containing an enhanced transcriptional control unit based on the primary late adenovirus coefficient |
| US5040862A (en) | 1990-05-07 | 1991-08-20 | Corning Incorporated | Method of trimming optical power |
| AT402262B (de) * | 1991-06-20 | 1997-03-25 | Immuno Ag | Arzneimittel enthaltend aktiviertes protein c |
| US5413732A (en) * | 1991-08-19 | 1995-05-09 | Abaxis, Inc. | Reagent compositions for analytical testing |
| MY110664A (en) | 1992-05-21 | 1999-01-30 | Lilly Co Eli | Protein c derivatives |
| DE4234295A1 (de) * | 1992-10-12 | 1994-04-14 | Thomae Gmbh Dr K | Carbonsäurederivate, diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel und Verfahren zu ihrer Herstellung |
| US5395923A (en) * | 1993-02-23 | 1995-03-07 | Haemacure-Biotech, Inc. | Process for the obtention of a biological adhesive made of concentrated coagulation factors by "salting-out" |
| JP2886061B2 (ja) * | 1993-10-29 | 1999-04-26 | 財団法人化学及血清療法研究所 | プロテインｃもしくは活性化プロテインｃの安定化方法及び安定化組成物 |
| JP3043558B2 (ja) * | 1993-10-29 | 2000-05-22 | 財団法人化学及血清療法研究所 | ヒト活性化プロテインｃ調製物及びその製法 |
| JPH07165605A (ja) * | 1993-12-16 | 1995-06-27 | Teijin Ltd | 活性化プロテインｃバイアル |
| NZ270271A (en) * | 1994-01-05 | 1996-07-26 | Lilly Co Eli | Minimizing protein c degradation |
| JPH08301786A (ja) * | 1995-05-11 | 1996-11-19 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | 吸収性骨疾患予防・治療剤 |
| WO1997020043A1 (en) | 1995-11-30 | 1997-06-05 | Zymogenetics, Inc. | Protein c production in transgenic animals |
| ID23172A (id) * | 1997-04-28 | 2000-03-23 | Lilly Co Eli | Metode yang diperbaiki untuk pengolahan protein c teraktivasi |
| HUP0001237A3 (en) | 1997-10-20 | 2002-01-28 | Lilly Co Eli | Methods for treating vascular disorders |
-
1998
- 1998-04-24 ID IDW991254A patent/ID23172A/id unknown
- 1998-04-24 WO PCT/US1998/008384 patent/WO1998048822A1/en not_active Ceased
- 1998-04-24 CZ CZ0381099A patent/CZ298429B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-04-24 CN CNB988063824A patent/CN1227025C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-24 CO CO98022605A patent/CO4940438A1/es unknown
- 1998-04-24 TR TR1999/02631T patent/TR199902631T2/xx unknown
- 1998-04-24 HU HU0100284A patent/HU224826B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-04-24 AR ARP980101909A patent/AR015598A1/es active IP Right Grant
- 1998-04-24 JP JP54721998A patent/JP4383546B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-24 PL PL98336889A patent/PL195090B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-04-24 ZA ZA9803496A patent/ZA983496B/xx unknown
- 1998-04-24 AU AU71618/98A patent/AU740753C/en not_active Ceased
- 1998-04-24 ZA ZA9803497A patent/ZA983497B/xx unknown
- 1998-04-24 HU HU0003401A patent/HUP0003401A3/hu unknown
- 1998-04-24 KR KR10-1999-7009933A patent/KR100450856B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-24 IL IL13250298A patent/IL132502A0/xx unknown
- 1998-04-24 UA UA99105884A patent/UA55448C2/uk unknown
- 1998-04-24 PE PE1998000311A patent/PE84799A1/es not_active Application Discontinuation
- 1998-04-24 CA CA2288143A patent/CA2288143C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-24 NZ NZ337828A patent/NZ337828A/en unknown
- 1998-04-24 AR ARP980101908A patent/AR012010A1/es active IP Right Grant
- 1998-04-24 KR KR1019997009835A patent/KR100564189B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-24 IL IL13232598A patent/IL132325A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-04-24 US US09/065,975 patent/US6159468A/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-24 BR BR9809292-8A patent/BR9809292A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-04-24 EA EA199900980A patent/EA002149B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-04-24 ID IDW991133A patent/ID22933A/id unknown
- 1998-04-24 WO PCT/US1998/008386 patent/WO1998048818A1/en not_active Ceased
- 1998-04-24 AU AU72589/98A patent/AU743531B2/en not_active Ceased
- 1998-04-24 PL PL98336420A patent/PL195642B1/pl unknown
- 1998-04-24 EA EA199900979A patent/EA004881B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-04-24 TR TR1999/02529T patent/TR199902529T2/xx unknown
- 1998-04-24 BR BRPI9809304-5A patent/BR9809304B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-04-24 CA CA002287267A patent/CA2287267C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-24 UA UA99105788A patent/UA73071C2/uk unknown
- 1998-04-24 NZ NZ500346A patent/NZ500346A/en unknown
- 1998-04-24 CO CO98022609A patent/CO4950523A1/es unknown
- 1998-04-24 CN CNB988045672A patent/CN1235638C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-24 JP JP54722198A patent/JP4383547B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-24 US US09/065,872 patent/US6162629A/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-24 PE PE1998000309A patent/PE86299A1/es not_active Application Discontinuation
- 1998-04-26 EG EG45198A patent/EG23685A/xx active
- 1998-04-27 MY MYPI98001899A patent/MY120984A/en unknown
- 1998-04-27 IN IN751CA1998 patent/IN183798B/en unknown
- 1998-04-27 IN IN752CA1998 patent/IN187157B/en unknown
- 1998-04-27 SV SV1998000050A patent/SV1998000050A/es not_active Application Discontinuation
- 1998-04-27 MY MYPI98001900A patent/MY118591A/en unknown
- 1998-04-27 SV SV1998000051A patent/SV1998000051A/es not_active Application Discontinuation
- 1998-04-28 TW TW087106558A patent/TWI242443B/zh not_active IP Right Cessation
- 1998-04-28 AT AT98303311T patent/ATE285788T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-04-28 DE DE69828330T patent/DE69828330T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-28 ES ES98303311T patent/ES2234072T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-28 EP EP98303311A patent/EP0875252B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-28 TW TW087106549A patent/TW585871B/zh not_active IP Right Cessation
- 1998-04-28 SI SI9830752T patent/SI0875252T1/xx unknown
- 1998-04-28 DK DK98303311T patent/DK0875252T3/da active
- 1998-04-28 PT PT98303311T patent/PT875252E/pt unknown
- 1998-04-28 EP EP98303312A patent/EP0875563A3/en not_active Withdrawn
-
1999
- 1999-10-21 NO NO995134A patent/NO995134L/no not_active Application Discontinuation
- 1999-10-25 NO NO995198A patent/NO995198L/no not_active Application Discontinuation
-
2000
- 2000-09-14 US US09/662,232 patent/US6395270B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-21 US US09/667,570 patent/US6436397B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL195642B1 (pl) | Sposób przetwarzania wodnego roztworu aktywowanego białka C | |
| US6630137B1 (en) | Activated protein C formulations | |
| FI115635B (fi) | Menetelmiä proteiini C:n hajoamisen estämiseksi | |
| EP1557463A1 (en) | Improved methods for processing activated protein C | |
| AU769144B2 (en) | Improved methods for processing activated protein C | |
| US20040038288A1 (en) | Human protein C Polypeptide | |
| CZ373799A3 (cs) | Zlepšené způsoby zpracování aktivovaného proteinu C | |
| HK1016472B (en) | Activated protein c formulations | |
| EP1561469A1 (en) | Activated Protein C Formulations |