EA019345B1 - Композиции, содержащие конъюгаты пэг-интерферон-альфа и рафинозу в качестве криопротектора - Google Patents

Композиции, содержащие конъюгаты пэг-интерферон-альфа и рафинозу в качестве криопротектора Download PDF

Info

Publication number
EA019345B1
EA019345B1 EA200970831A EA200970831A EA019345B1 EA 019345 B1 EA019345 B1 EA 019345B1 EA 200970831 A EA200970831 A EA 200970831A EA 200970831 A EA200970831 A EA 200970831A EA 019345 B1 EA019345 B1 EA 019345B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
interferon
alpha
peg
cryoprotectant
composition according
Prior art date
Application number
EA200970831A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200970831A1 (ru
Inventor
Санджай Бандиопадхиай
Санджив Кумар Мендиратта
Венкатесан Натараджан
Панкадж Раманбхай Пател
Original Assignee
Кадила Хелзкэр Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Кадила Хелзкэр Лимитед filed Critical Кадила Хелзкэр Лимитед
Publication of EA200970831A1 publication Critical patent/EA200970831A1/ru
Publication of EA019345B1 publication Critical patent/EA019345B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/212—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Изобретение относится к новым лиофилизированным и стабилизированным составам конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа и способам для их получения. Новые составы конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа, о которых сообщают авторы изобретения, подразумевают более короткий цикл лиофилизации и являются более конкурентоспособными.

Description

Настоящее изобретение относится к новым лиофилизированным и стабилизированным составам конъюгатов ПЭГ -интерферон-альфа и способам для их получения.
Предпосылки изобретения
Основным недостатком терапевтического применения большинства биологических препаратов является то, что их вводят парентеральным путем, например внутривенно (в.в.), подкожно (п.к), внутримышечно (в.м.) и т.д., это значит, что их доставка пациенту связана с болью и дискомфортом. Кроме того, из-за их, обычно очень короткого, времени полужизни биологические препараты требуют частых введений пациенту для поддержания терапевтического уровня лекарственного средства в крови. Большинство типов инъекций, которые не могут быть введены самостоятельно, требуют частых походов в клинику, способствуя увеличению дискомфорта пациента. Существуют многочисленные примеры таких биологических лекарственных средств, которые требуют частого введения. Интерферон-альфа-2а (ГоГсгоп. Коейе) и интерферон-альфа-2Ь (Ιηίτοη А, 8сйегшд АС), две рекомбинантные формы интерферона-альфа человека, используемые для лечения хронических гепатитов В и С, обладают временем полужизни менее чем 12 ч в сыворотке (МсНи!сЫ8Оп, е1 а1., Епд1. 1. Мей. 1998, 339, 1485-1492; С1ие, е1 а1., Сйп. Рйагтасо1. Тйег. 2000, 68, 556-567) и, таким образом, требуют по крайней мере 3-разового введения лекарственного средства в неделю. Многократные инъекции интерферона-бета-1Ь (Ве1а8егоп) также требуются для лечения больных рассеянным склерозом (РС). Рекомендованную дозу вводят подкожным путем через день. Другим примером лекарственного средства, где требуются многократные инъекции, является филграстим (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, или ГКСФ), где инъекции делают каждый день на протяжении лечения из двух недель.
Одним из очень результативных и хорошо переносимых способов преодоления описанных выше недостатков частых инъекций высокими дозами для поддержания пороговых значений лекарственного средства в организме является увеличение ίη у1уо времени полужизни терапевтического белка посредством конъюгирования его с полимером, предпочтительно полиэтиленгликолем (ПЭГ). Полагают, что молекулы ПЭГ с их длинными цепями создают защитный экран вокруг молекул пегилированного лекарственного средства в водном растворе и, таким образом, способствуют снижению иммуногенности белковых лекарственных средств, также одновременно защищая их от действия протеаз. В дополнение к этому молекулы ПЭГ, из-за их большого гидродинамического объема, способны снижать коэффициент почечного клиренса лекарственного средства, в то время как увеличивается время полужизни белкового лекарственного средства в циркуляции. О конъюгировании белков с ПЭГ сообщали с 1970-х гг. Обычно молекулы ПЭГ присоединяют к белку сначала активированием молекулы ПЭГ и затем вступлением ее в реакцию с боковыми цепями остатков лизина и/или Ν-концевыми аминогруппами на белке. Наиболее часто используемым ПЭГ является монофункциональный ПЭГ, так как это вещество устойчиво к образованию перекрестных связей и агрегации. Один такой пример раскрыт Όανίδ е1 а1. в патенте США № 4179337. Конъюгаты ПЭГ-белок формировали посредством взаимодействия биологически активного соединения с избыточной молярной концентрацией сильно активированного полимера, обладающего концевым соединительным радикалом независимо от места присоединения полимера к белку, и приведением к физиологически активной неиммуногенной водорастворимой композиции полипептида. О пегилировании интерферонов сообщали в патентах США № 4766106 и № 4917888, которые описывают, в частности, интерферон-бета, конъюгированный с активированными полимерами, включая мПЭГ-2,4,6-трихлор-8триазин, мПЭГ-№сукцинимидил глутарат или мПЭГ-№сукцинимидил сукцинат. Одно из таких описаний изобретения в патенте США № 5951974 описывает конъюгирование интерферона с полимером, практически не обладающим антигенными свойствами, в сайте гистидина. Другое такое описание изобретения в патенте США № 5981709 описывает конъюгат полимера интерферона-альфа с относительно продолжительным временем полужизни в циркуляции ίη у1уо.
Некоторые коммерчески доступные пегилированные терапевтические белки включают А^АСЕN (пегилированная бычья аденозин дезаминаза), который используют для лечения тяжелого синдрома комбинированного иммунодефицита, сцепленного с Х-хромосомой; РЕСА8У8 (пегилированный интерферон-альфа-2а), который используют при лечении гепатита С; РЕС-1п1гоп (пегилированный интерферональфа-2Ь) для хронического гепатита С; Онсахраг (пегилированная Ь-аспарагиназа) для лечения острого лимфобластного лейкоза у больных с гиперчувствительностью к природной немодифицированной форме Ь-аспарагиназы и №и1айа (пегилированный рекомбинантный метионил гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека) для химиотерапии злокачественной опухоли, вызывающей нейтропению.
Вирус гепатита С (НСУ) является одной из основных причин заболеваний печени в мире. Во всем мире поражены приблизительно 200 миллионов человек. Было показано, что интерферон в сочетании с рибавирином эффективен для снижения вирусной нагрузки больных с хроническим гепатитом С, однако необходимо принимать его три раза в неделю. ПЭГ-интерферон-альфа-2Ь представляет собой ковалентный конъюгат рекомбинантного интерферона-альфа-2Ь с монометокси ПЭГ в молярном отношении 1: 1 (С1ие Р. е1 а1., С1ш Рйагтасо1 Тйег. 2000; 68; 556-567). Среднее значение полупериода поглощения ПЭГинтерферон-альфа-2Ь в 5 раз выше, чем у непегилированного интерферона-альфа-2Ь. Среднее значение
- 1 019345 полупериода элиминации у больных с инфекцией гепатита С составляет 40 ч. Другой продукт представляет собой ПЭГ -интерферон-альфа-2а, который имеет молекулу 40 кДа с разветвленной цепью с каждой ветвью ПЭГ со средней молекулярной массой 20 кДа. Две монометокси цепи ПЭГ присоединяют через гидролитически устойчивые уретановые связи к линкерной молекуле лизина, одну к альфа-аминогруппе лизина и другую к ε-аминогруппе лизина. Среднее значение полупериода поглощения ПЭГ интерферона-альфа-2а в 10 раз выше, чем у непегилированного интерферона-альфа-2а. Среднее значение полупериода элиминации у больных с инфекцией гепатита С составляет 60 ч. Оба этих улучшенных продукта необходимо вводить в режиме только раз в неделю.
Несмотря на то что некоторые конъюгаты белковых полимеров устойчивы в жидкой форме, другие - нет. Например, в отличие от случая с ПЭГ-интерфероном-альфа-2а, где пегилирование приводит к образованию устойчивых уретановых связей, которые, главным образом, стабильны в водной среде, продукт ПЭГ-интерферон-альфа-2Ь, который содержит ПЭГ, главным образом, присоединенный к остатку гистидина (ΗΪ8 34), является чрезвычайно неустойчивым в жидкой форме. С такими конъюгатами белковых полимеров необходимо использовать способы, такие как лиофилизация/сублимационная сушка - процессы, в результате которых вода испаряется из композиции после ее замораживания, которые могут обеспечить стабильную форму биологического средства в течение необходимого периода времени. Таким образом, для получения стабильного препарата ПЭГ-интерферон-альфа-2Ь необходимо тщательно лиофилизировать препарат с подходящими криопротектором(ами) или лиопротектором(ами) и стабилизаторами, которые стабилизируют конъюгаты пегилированного интерферона-альфа для предотвращения депегилирования в течение и после лиофилизации - явление, обычно связанное с продуктом ПЭГинтерферон-альфа-2Ь. Кроме того, помимо криопротектора и стабилизаторов, лиофилизированный препарат также содержит наполнители для увеличения количества твердого вещества в виале.
Один конкретный способ, которым была решена проблема нестабильности уретановой связи в 34 остатке Ηίδ в случае ПЭГ-интерферон-альфа-2Ь, является способ использования состава, который был раскрыт в патенте США № 6180096, где конъюгаты ПЭГ-ИФН-альфа-2Ь лиофилизировали в присутствии буфера, криопротекторов, стабилизатора и растворителя, из которых один такой состав содержит дисахарид сахарозы в качестве криопротектора вместе с одноосновным дигидратом фосфата натрия и безводным двухосновным фосфатом натрия в качестве буфера, с полисорбатом 80 в качестве стабилизатора и водой в качестве растворителя. Пока описанный выше состав коммерчески успешен при лечении гепатита С, он, несмотря на это, связан с несколькими проблемами, некоторые из которых тщательно прорабатывались той же компанией в другой патентной заявке, \¥О 2006/020720, которая располагает удлиненными циклами лиофилизации, приводящими к повышению стоимости производства и к более высокому содержание влаги, связанными с промышленно производимым составом, в качестве некоторых из причин для раскрытия и сообщения о новом препарате в \УО 2006/020720. В \УО 2006/020720 авторы изобретения раскрывают другой лиофилизированный препарат ПЭГ-ИФН-альфа-2Ь, где криопротектор содержит по меньшей мере 60% трегалозы, буферные компоненты, состоящие из одноосновного дигидрата фосфата натрия и безводного двухосновного фосфата натрия, и где препарат дополнительно содержит полисорбат 80 в качестве стабилизатора и воду в качестве растворителя и, таким образом, способен преодолеть описанные выше проблемы промышленно производимого состава. Необходимость в дополнительных препаратах для защиты конъюгатов ПЭГ-ИФН-альфа-2Ь не может быть подчеркнута лучше, чем факт, что правопреемниками патента США № 6180096 (промышленно производимый состав) и заявителями \УО 2006/020720 является одна и та же компания, 8е11сппд Сотротайои, которая продолжает развивать и раскрывать более лиофилизированные препараты для ПЭГ-ИФН-альфа-2Ь.
Целью необходимости в дополнительных препаратах ПЭГ -ИФН-альфа-2Ь к уже существующим является не только защита конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа в течение и после лиофилизации, но также достижение долгосрочного хранения при лиофилизации в подходящем контейнере. Способ получения таких составов должен быть легко осуществимым и более экономически целесообразным, чем те, которые используют для настоящего состава. Настоящий промышленно производимый состав ПЭГ-ИФНальфа-2Ь, полученный на основе сахарозы (как описано в патенте США № 6180096), обладает более длинным циклом лиофилизации, как описано в РСТ/Ц8/2005/028441. Препарат, описанный в настоящем изобретении, использует цикл лиофилизации, где длительность процесса снижена по меньшей мере до 48 ч относительно некоторых из других известных составов. Это, в свою очередь, будет значительно способствовать снижению стоимости производства этого лекарственного средства.
Настоящее изобретение относится к новым лиофилизированным и стабилизированным составам конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа и способам для получения этих составов.
- 2 019345
Варианты осуществления изобретения
В одном из вариантов осуществления по данному изобретению предоставлены новые лиофилизированные составы конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа.
В другом варианте осуществления изобретения предоставлен способ получения новых составов конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа.
Описание изобретения
Настоящее изобретение относится к новым лиофилизированным и стабилизированным составам конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа и способу(ам) для их получения. Составы включают разработку рецептуры конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа с подходящим буфером(ами), подходящим криопротектором(ами), подходящим стабилизатором(ами) и растворителем, необязательно с другими подходящими эксципиентами, которые впоследствии подвергнут лиофилизации.
Принято во внимание, что настоящее изобретение не ограничено концентрацией компонентов в новых составах, как раскрыто в описании.
Конъюгаты ПЭГ-интерферон-альфа по настоящему изобретению представляют собой молекулы интерферона-альфа или их варианты, ковалентно присоединенные к одной или нескольким молекуле(лам) ПЭГ. Подходящими молекулами ПЭГ могут быть хорошо известные и используемые при получении пегилированных биологических продуктов для терапевтического использования. Конъюгаты ПЭГинтерферон-альфа по настоящему изобретению могут состоять из интерферона-альфа-2а, интерферонаальфа-2Ь или интерферона-альфа-2с и их подходящих вариантов, наиболее предпочтительно конъюгата ПЭГ-интерферон-альфа-2Ь.
Полимерами являются молекулы, содержащие ковалентно присоединенные повторяющиеся химические единицы. Часто соответствующая молекулярная масса полимера обозначается цифрой, следующей за названием повторяющейся химической единицы. Например, ПЭГ12Ооо или полиэтиленгликоль (12000) относится к полимеру полиэтиленгликоля со средней молекулярной массой приблизительно 12000 Да.
В результате конъюгирование полимеров с белками может приводить к образованию отдельной молекулы полимера, конъюгированной с белком, или множеству таких конъюгаций с отдельным белком. Степень конъюгирования и участок пегилирования в основном зависят от условий реакции и соотношения ПЭГ/белок. В предпочтительном варианте осуществления конъюгата ПЭГ-интерферон-альфа в составах по настоящему изобретению преимущественно содержится отдельный интерферон-альфа-2Ь, конъюгированный с отдельной молекулой ПЭГ. Во все еще предпочтительном варианте осуществления конъюгат ПЭГ-интерферон-альфа в препаратах по настоящему изобретению содержит отдельный интерферон-альфа-2Ь, конъюгированный с отдельной молекулой ПЭГ12000. В особенно предпочтительном варианте осуществления молекула интерферона-альфа-2Ь присоединена к молекуле ПЭГ12000 с помощью уретановой связи. Некоторые способы для получения конъюгатов ПЭГ-ИФН являются известными в данной области, и такие способы и продукты, полученные такими способами, считают включенными в рамки настоящего изобретения. Примеры такого способа(ов) для получения данного конъюгата белокполимер можно найти в патенте США № 5612460 (2а11р§ку) и патенте США № 5711944 (СйЬей с1 а1.). Без ограничения рамок настоящего изобретения, при применении такого конъюгата белок-полимер в растворе состава по настоящему изобретению предпочтительная концентрация конъюгата ПЭГинтерферон-альфа составляет от 0,03 до 2,0 мг интерферона-альфа в мл. Когда отдельная молекула интерферона-альфа присоединена к отдельной молекуле ПЭГ12000, полученные в результате конъюгирования конъюгаты ПЭГ-интерферон-альфа могут быть в форме отдельного или смеси различных позиционных изомеров.
Для сохранения конъюгата ПЭГ-интерферон-альфа в наиболее стабильной и активной форме можно использовать лиофилизацию. Лиофилизация представляет собой процесс сублимационной сушки композиции, при котором замороженную водную смесь обрабатывают для удаления воды. Обычно процесс предусматривает сублимацию воды из водных растворов, обычно в условиях вакуума. После лиофилизации конъюгат(ы) ПЭГ-интерферон-альфа можно хранить в течение продолжительного периода времени.
Конъюгаты ПЭГ-интерферон-альфа, однако, подвержены разрушению в течение и после лиофилизации (патент США № 6180096). Таким образом, существует необходимость создания конъюгатов ПЭГинтерферон-альфа подходящим образом, чтобы защитить их от деградации в течение и после лиофилизации. Кроме того, также целесообразно, если такие препараты обеспечат физическую прочность препарату.
Настоящее изобретение защищает конъюгаты ПЭГ-интерферон-альфа от разрушения посредством включения их в составы, которые предотвращают разрушение в течение и после лиофилизации. Пока настоящее изобретение не ограничено конкретным препаратом, в препаратах, которые ожидаются здесь, применяют подходящий буфер(ы), подходящий стабилизатор(ы), подходящий криопротектор(ы) и/или лиопротектор(ы), наполнитель(и) и растворитель(и) по отдельности или в подходящем сочетании, необязательно с другими подходящими эксципиентами в дополнение к конъюгату ПЭГ-интерферон-альфа. Различные возможные сочетания выбранной группы буферов, стабилизаторов и криопротекторов, как
- 3 019345 описано ниже, можно использовать для получения новых составов по настоящему изобретению.
Буферы являются подходящими для поддержания рН препарата. Буферные системы, которые можно использовать, состоят из фосфата, сукцината, гистидина, глицината и т.п., или один или в подходящем сочетании, которое обеспечивает желаемый диапазон рН. Предпочтительный диапазон рН составляет между 4,5-7,1, предпочтительно 6,5-7,1 и наиболее предпочтительно 6,8. Предпочтительная молярная концентрация буфера представлена в диапазоне от 0,001 до 0,5 М. Предпочтительные буферы можно выбрать из фосфата натрия, сукцината натрия, сукцината калия, хлорида гистидина, глицината натрия или их подходящих сочетаний. Также можно использовать другие буферные системы, которые поддерживают желаемый диапазон рН.
Термин криопротекторы, как правило, включает соединения, которые обеспечивают белку стабильность при стрессе, вызванном замораживанием; однако термин также включает соединения, которые обеспечивают стабильность, например, для сыпучей лекарственной формы в течение хранения при стрессе, вызванном не замораживанием. Примеры криопротекторов включают различные полиолы и сахариды, например сахарозу, лактозу, трегалозу, рафинозу и маннит или их подходящие сочетания.
Термин криопротектор включает соединения, которые обеспечивают белку стабильность в течение удаления воды из системы в течение процесса высушивания, предположительно поддерживая подходящую конформацию белка через водородное связывание. Криопротекторы также могут обладать эффектами лиопротектора; таким образом, термины криопротектор и лиопротектор используют взаимозаменяемо здесь и далее в настоящем документе. Стабилизирующее соединение применяют в процессе получения для предотвращения адсорбции конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа к поверхностям стекла и нержавеющей стали оборудования для получения и хранения состава. Подходящими стабилизирующими соединениями, которые можно использовать, являются додецилсульфат натрия (8Ό8). полисорбаты (например, полисорбат 20, 40 или 80, отдельно или в сочетании). Примеры могут быть из класса производных поли(окси-1,2-этандиил). Одним из таких предпочтительных стабилизирующих соединений является полиоксиэтилен 20 сорбитан моноолеат, полисорбат 80 (Т\\ееп 80) в предпочтительной концентрации от 0,01 до 1 мг/мл.
Настоящее изобретение не ограничено каким-либо конкретным количеством криопротектора. Криопротектор можно использовать отдельно или в подходящих сочетаниях. В одном из вариантов осуществления криопротекторы присутствуют в количестве от 0,05 до 90%, предпочтительно от 0,05 до 50% и наиболее предпочтительно в количестве от 0,15 до 20% исходя из общего веса раствора ПЭГинтерферон.
Подходящим растворителем для настоящего состава является вода, предпочтительно растворителем может быть вода для инъекций.
Другие подходящие эксципиенты могут быть необязательно добавлены в препарат. Такие эксципиенты включают глицин в подходящей концентрации, что способствует стабилизации состава.
Новые составы конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа получают с использованием подходящих сочетаний буфера, стабилизатора, криопротектора(ов) и/или лиопротектора(ов) и растворителя, необязательно с другими эксципиентами, и лиофилизируют подходящим образом и хранят в качестве сухого порошка для растворения перед применением.
Препараты, полученные таким образом, содержат эффективное количество биологически активных конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа и применяют при лечении некоторых заболеваний, таких как гепатит В и С и злокачественные опухоли и т.д. Их предпочтительно применяют в качестве инъецируемых водных растворов.
Следующие неограничивающие примеры поясняют описанные фармацевтические композиции по настоящему изобретению и способы осуществления изобретения для получения стабильных фармацевтических лекарственных форм конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа. Понятно, что примеры являются наглядными, и другие такие подходящие модификации/добавки и т.д. сами по себе, хорошо известные специалистам в данной области, предназначены быть включенными в рамки настоящего изобретения.
Примеры
Различные составы конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа-2Ь растворяют в подходящем буфере, полученных в присутствии подходящего криопротектора(ов) и стабилизатора(в) из тех, которые описаны в описании, и впоследствии лиофилизируют. После лиофилизации образцы хранят при 5±3°С и в разные промежутки времени образцы растворяют водой для анализа. Растворенные образцы анализировали на видимую прозрачность, противовирусную активность ίη νίΐτο и уровень свободного интерферона. При противовирусном анализе ίη νίίτο свежий составленный и не составленный конъюгат ПЭГ-интерферональфа проявлял специфическую активность в диапазоне от 0,1 х108 до 0,8х108 МЕ на 1 мг белка интерферона.
Пример 1.
Конъюгат ПЭГ-интерферон-альфа, полученный в соответствии со способами, известными в данной области, составляли, как описано в табл. 1.
- 4 019345
Таблица 1 Компоненты состава конъюгата ПЭГ -интерферон-альфа, подвергнутого лиофилизации
Компоненты Концентрации
ПЭГ12ооо_интерферон альфа-2Ь 0,2 мг/мл*
Сукцинат натрия, рН 6,8 10 мМ
Рафиноза 42,85 мг/мл
Полисорбат 80 0,1 мг/мл
Очищенная вода в достаточном кол-ве
* Из расчета веса белка
Лиофилизацию осуществляли, помещая указанный выше раствор в стеклянные контейнеры с последующим установкой стеклянных контейнеров в лиофилизатор при атмосферном давлении и температуре. Образцы постепенно замораживали контролируемым способом при атмосферном давлении, понижая температуру до -55°С на протяжении 11,5 ч. Впоследствии, замороженные образцы подвергали первичному высушиванию пошаговым способом в течение 23 ч, одновременно повышая температуру от -55 до 0°С и снижая давление от атмосферного до 50 мторр. После циклов первичного высушивания осуществляли циклы вторичного высушивания в течение по меньшей мере 16 ч, понижая давление от 50 до 20 мторр. После окончания циклов лиофилизации стеклянные контейнеры, содержащие лиофилизированные осадки, вынимали при атмосферном давлении и температуре.
После лиофилизации виалы собирали и хранили при 5±3°С до их использования при дальнейшем анализе. Образцы растворяли водой для анализа в различные периоды времени, как указано в табл. 2. Восстановленные растворы проверяли на визуальную прозрачность. Стабильность конъюгата ПЭГинтерферон-альфа оценивали по его противовирусной активности ίη νίΐτο и уровню свободного интерферона (степень депегилирования), присутствующего в восстановленном растворе, как показано в табл. 2.
Таблица 2
Стабильность составленного конъюгата ПЭГ-интерферон-альфа после лиофилизации
Время (месяцы) Хранение температура (± 3°С) Активность (МЕ/мг) % свободного ИФН Видимая прозрачность
исходное 0,38x10е 2,8 СЗ
3 0,27x10’ 2,8 СЗ
6 5 0,41x10’ 3, 6 СЗ
9 0,45x10’ 4,8 СЗ
СЗ - прозрачный раствор
Пример 2.
Конъюгат ПЭГ-интерферон-альфа, полученный в соответствии со способами, известными в данной области, составляли как описано в табл. 3.
Таблица 3
Компоненты состава конъюгата ПЭГ-интерферон-альфа, подвергнутого лиофилизации
Компоненты Концентрации
ПЭГиооо-интерферон альфа-2Ь 0,2 мг/мл*
Сукцинат натрия, рН 6,8 10 мМ
Лактоза 28,5 мг/мл
Рафиноза 42,85 мг/мл
Глицин 1, 05 мг/мл
Полисорбат 80 0,1 мг/мл
Очищенная вода в достаточном кол-ве
* Из расчета веса белка
Лиофилизацию осуществляли таким же образом, как описано в примере 1.
После лиофилизации виалы собирали и хранили при 5±3°С, до их использования при дальнейшем анализе. Образцы растворяли водой для анализа в различные периоды времени, как указано в табл. 4.
- 5 019345
Восстановленные растворы проверяли на визуальную прозрачность. Стабильность конъюгата ПЭГинтерферон-альфа оценивали по его противовирусной активности ίη νίίτο и уровню свободного интерферона (степень депегилирования), присутствующего в восстановленном растворе, как показано в табл. 4.
Таблица 4
Стабильность составленного конъюгата ПЭГ-интерферон-альфа после лиофилизации
Время (месяцы) Хранение температура < ±3°С) Активность (МЕ/мг) свободного ИФН Видимая прозрачность
исходное 0,38x10® 2, 94 СЗ
3 0,18x10® 2,19 СЗ
6 5 0,46x10® 3,22 С5
9 0,16x10® 4,0 СЗ
СЗ - прозрачный раствор
Пример 3.
Конъюгат ПЭГ-интерферон-альфа, полученный в соответствии со способами, известными в данной области, составляли как описано в табл. 5.
Таблица 5
Компоненты состава конъюгата ПЭГ-интерферон-альфа, подвергнутого лиофилизации
Компоненты Концентрации
ПЭГ12ооо_интерферон альфа-2Ь 0,2 мг/мл*
Сукцинат натрия, рН 6,8
Лактоза
Рафиноза
Глицин
Полисорбат 80
Очищенная вола мМ
71.43 мг/мл
21.43 мг/мл
1,05 мг/мл
0, 1 мг/мл в достаточном кол-ве * Из расчета веса белка
Лиофилизацию осуществляли таким же образом, как описано в примере 1.
После лиофилизации виалы собирали и хранили при 5±3°С, до их использования при дальнейшем анализе. Образцы растворяли водой для анализа в различные периоды времени, как указано в табл. 6. Восстановленные растворы проверяли на визуальную прозрачность. Стабильность конъюгата ПЭГинтерферон-альфа оценивали по его противовирусной активности ίη νίίτο и уровню свободного интерферона (степень депегилирования), присутствующего в восстановленном растворе, как показано в табл. 6.
Таблица 6
Стабильность составленного конъюгата ПЭГ-интерферон-альфа после лиофилизации
Время (месяцы) Хранение температура (±3°С) Активность (МЕ/мг) % свободного ИФН Видимая прозрачность
исходное 0,38x10® 2, 8 С5
3 0,14x10® 2,56 СЗ
6 5 0,42x10® 2,53 СЗ
9 0,16x10® 3, 52 СЗ
СЗ - прозрачный раствор
Пример 4.
Конъюгат ПЭГ-интерферон-альфа, полученный в соответствии со способами, известными в данной области, составляли, как описано в табл. 7.
- 6 019345
Таблица 7
Компоненты состава конъюгата ПЭГ -интерферон-альфа, подвергнутого лиофилизации
Компоненты Концентрации
ПЭГ12ооо_интерферон альфа-2Ь 0,2 мг/мл*
Сукцинат натрия, рН 6,8 10 мМ
Рафиноза 57,14 мг/мл
Трегалоза 22,85 мг/мл
Глицин 7,14 мг/мл
Полисорбат 80 0,1 мг/мл
Очищенная вода б достаточном кол-ве
* Из расчета веса белка
Лиофилизацию осуществляли таким же образом, как описано в примере 1.
После лиофилизации виалы собирали и хранили при 5±3°С, до их использования при дальнейшем анализе. Образцы растворяли водой для анализа в различные периоды времени, как указано в табл. 8. Восстановленные растворы проверяли на визуальную прозрачность. Стабильность конъюгата ПЭГинтерферон-альфа оценивали по его противовирусной активности ίη νίίτο и уровню свободного интерферона (степень депегилирования), присутствующего в восстановленном растворе, как показано в табл. 8.
Таблица 8
Стабильность составленного конъюгата ПЭГ-интерферон-альфа после лиофилизации
Время (месяцы) Хранение температура (±3’0 Активность (МЕ/мг) % свободного ИФН Видимая прозрачность
исходное 0,38x10е 2,85 сз
3 0,21x10’ 2,47 С5
6 5 ηά 4,07 сз
9 0,16x10® 6, 19 сз
псЗ - не определено; С5 - прозрачный раствор
Содержание свободного ИФН во всех указанных выше примерах определяли высокоэффективной гель-хроматографией.
Новые лиофилизированные препараты конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа, описанные в настоящем изобретении, обладают следующими преимуществами.
1. Обладают эксплуатационной простотой.
2. Стабилизируют конъюгаты ПЭГ-ИФН.
3. Обеспечивают хорошую физическую прочность лиофилизированному препарату.
4. Сокращают циклы лиофилизации, таким образом значительно снижая стоимость и продолжительность процесса.

Claims (15)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Состав ПЭГ-интерферона-альфа, содержащий конъюгат(ы) ПЭГ-интерферона-альфа, стабилизатор, растворитель, сукцинат натрия в качестве буфера и рафинозу в качестве криопротектора, в котором концентрация конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа составляет от 0,03 до 2,0 мг интерферона-альфа на 1 мл, рН состава составляет 4,0-7,0, а концентрация криопротектора составляет 10-100 мг/мл.
  2. 2. Состав по п.1, где стабилизатор выбран из додецилсульфата натрия или подходящих полисорбатов.
  3. 3. Состав по п.2, где полисорбат выбран из полисорбата 20, 40 или 80.
  4. 4. Состав по любому из предыдущих пунктов, где криопротектор дополнительно содержит лактозу или трегалозу.
  5. 5. Состав по любому из предыдущих пунктов, где указанный стабилизатор присутствует в концентрации, выбранной из 0,01-1,0 мг/мл.
  6. 6. Состав по любому из предыдущих пунктов, где концентрация буфера составляет от 0,001 до 0,5 М.
  7. 7. Состав по любому из предыдущих пунктов, где указанным растворителем является вода.
  8. 8. Состав по любому из предыдущих пунктов, где композиция дополнительно содержит глицин.
  9. 9. Состав по п.8, где концентрация глицина составляет 0,1-100 мг/мл.
  10. 10. Состав по любому из предыдущих пунктов, где указанные молекулы интерферона-альфа выбраны из группы, состоящей из интерферона-альфа-2а, интерферона-альфа-2Ь, интерферона-альфа-2с или их подходящих вариантов.
  11. 11. Состав по п.10, где указанные молекулы интерферона-альфа представляют собой интерферональфа-2Ь.
  12. 12. Состав по любому из предыдущих пунктов в форме лиофилизированного порошка, который получен лиофилизацией состава по любому из предыдущих пунктов.
  13. 13. Состав по любому из предыдущих пунктов, содержащий ПЭГ-интерферон-альфа-2Ь, рафинозу в качестве криопротектора, Т\\ееп 80 в качестве стабилизатора, сукцинат натрия в качестве буфера и воду в качестве растворителя.
  14. 14. Лиофилизированный состав по п.13, где криопротектор дополнительно содержит лактозу или трегалозу.
  15. 15. Способ получения лиофилизированного состава конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа по любому из предыдущих пунктов, включающий смешивание конъюгатов ПЭГ-интерферон-альфа с буфером - сукцинатом натрия, стабилизатором, растворителем, рафинозой в качестве криопротектора и затем лиофилизацию смеси с получением лиофилизированного порошка.
EA200970831A 2007-03-05 2008-02-29 Композиции, содержащие конъюгаты пэг-интерферон-альфа и рафинозу в качестве криопротектора EA019345B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IN412MU2007 2007-03-05
PCT/IN2008/000114 WO2008107908A1 (en) 2007-03-05 2008-02-29 Compositions comprising peg- interferon alpha conjugates and raffinose as cryoprotectant

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200970831A1 EA200970831A1 (ru) 2010-02-26
EA019345B1 true EA019345B1 (ru) 2014-03-31

Family

ID=39592752

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200970831A EA019345B1 (ru) 2007-03-05 2008-02-29 Композиции, содержащие конъюгаты пэг-интерферон-альфа и рафинозу в качестве криопротектора

Country Status (8)

Country Link
EP (1) EP2117514B1 (ru)
JP (1) JP5179521B2 (ru)
AT (1) ATE512660T1 (ru)
BR (1) BRPI0808259A2 (ru)
EA (1) EA019345B1 (ru)
ES (1) ES2365832T3 (ru)
WO (1) WO2008107908A1 (ru)
ZA (1) ZA200905690B (ru)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AP2005003238A0 (en) 2002-08-26 2005-03-31 Pfizer Prod Inc Novel benzoimidazole derivatives useful as antiproliferative agents.
WO2010064258A2 (en) * 2008-12-01 2010-06-10 Intas Biopharmaceuticals Limited Pharmaceutical formulations of interferon conjugates
US20100196272A1 (en) * 2009-01-30 2010-08-05 Neoprobe Corporation Compositions for radiolabeling diethylenetriaminepentaacetic acid (dtpa)-dextran
US20140017318A1 (en) * 2012-07-10 2014-01-16 Kevin O'Connell Method to produce a medicinal product comprising a biologically active protein and the resulting product
JP2015535238A (ja) * 2012-10-26 2015-12-10 ルピン・リミテッドＬｕｐｉｎ Ｌｉｍｉｔｅｄ ペグインターフェロンα−２ｂの安定な医薬組成物
AR097762A1 (es) 2013-09-27 2016-04-13 Intervet Int Bv Formulaciones secas de vacunas que son estables a temperatura ambiente
AR099470A1 (es) 2014-02-17 2016-07-27 Intervet Int Bv Vacunas de virus de aves de corral líquidas
TWI670085B (zh) 2014-02-19 2019-09-01 荷蘭商英特威國際公司 液體穩定之豬病毒疫苗

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6180096B1 (en) * 1998-03-26 2001-01-30 Schering Corporation Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
US20050031576A1 (en) * 2002-12-31 2005-02-10 Mcmanus Samuel P. Polymeric reagents comprising a ketone or a related functional group

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4242863A1 (de) * 1992-12-18 1994-06-23 Boehringer Mannheim Gmbh Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von G-CSF
CA2190502A1 (en) * 1994-05-18 1995-11-23 Robert M. Platz Methods and compositions for the dry powder formulation of interferons
KR100564189B1 (ko) * 1997-04-28 2006-03-27 일라이 릴리 앤드 캄파니 활성화 프로틴ｃ의 가공을 위한 개선된 방법
PT2193809E (pt) * 1999-02-22 2015-08-24 Baxter Int Formulações de fator viii livres de albumina
AU2001262939A1 (en) * 2000-05-24 2001-12-03 Eli Lilly And Company Formulations and use of activated protein c and protein c zymogen for treating hypercoagulable states
US20090214472A1 (en) * 2004-03-01 2009-08-27 Enzon Pharmaceuticals Inc. Interferon-beta polymer conjugates
JP4971160B2 (ja) 2004-08-12 2012-07-11 シェーリング コーポレイション 安定するｐｅｇ化インターフェロン処方物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6180096B1 (en) * 1998-03-26 2001-01-30 Schering Corporation Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
US20050031576A1 (en) * 2002-12-31 2005-02-10 Mcmanus Samuel P. Polymeric reagents comprising a ketone or a related functional group

Also Published As

Publication number Publication date
JP5179521B2 (ja) 2013-04-10
ES2365832T3 (es) 2011-10-11
JP2010520270A (ja) 2010-06-10
BRPI0808259A2 (pt) 2014-07-08
ZA200905690B (en) 2010-05-26
WO2008107908A1 (en) 2008-09-12
EA200970831A1 (ru) 2010-02-26
ATE512660T1 (de) 2011-07-15
EP2117514A1 (en) 2009-11-18
EP2117514B1 (en) 2011-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2097068B1 (en) Formulations of peg-interferon alpha conjugates
EA019345B1 (ru) Композиции, содержащие конъюгаты пэг-интерферон-альфа и рафинозу в качестве криопротектора
US6250469B1 (en) Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
US8841252B2 (en) Pharmaceutical formulation
EP1066059B1 (en) Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
US9138403B2 (en) PEG-interferon-beta formulations
EP1034007A1 (en) A ONE DOSE SYRINGE, COMPRISING A FREEZE-DRIED PROTEIN COMPOSITION, FOR ADMINISTERING OF A VOLUME LESS THAN 0.5 ml
US5888495A (en) Method of producing storage stable M-CSF lyophilizates

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU