PL194389B1 - Sposób wytwarzania 14α-hydroksy-1-dehydrotestosteronu - Google Patents

Abstract

1. Sposób wytwarzania 14a-hydroksy-1-de- hydrotestosteronu, o wzorze 2, z 1-dehydrotesto- steronu, o wzorze 1, na drodze mikrobiologicz- nej, znamienny tym, ze substrat poddaje sie biotransformacji kultura grzyba z gatunku Bo- trytis cinerea. PL PL PL

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania 14a-hydroksy-1-dehydrotestosteronu, o wzorze 2 przedstawionym na rysunku. Związek ten jest biologicznie czynny i może znaleźć zastosowanie w przemyśle farmaceutycznym.

Znana jest metoda otrzymywania 14a-hydroksypochodnej 1-de hydro testosteron u podczas transformacji enzymatycznej przez 14a-hydroksylazę z mikrosomalnej frakcji grzyba z gatunku Mucor piriformis (K. M. Madyastha, T. Joseph, J. Steroid Biochem. Molec. Biol., 1993, vol. 45, s. 563), z wydajnością nie przekraczającą 45%. W metodzie tej jako substratu użyto 1-dehydrotestosteronu.

Wynalazek dotyczy mikrobiologicznego sposobu wytwarzania 14a-hydroksy-1-dehydrotestosteronu, o wzorze 2, z 1-dehydrotestosteronu o wzorze 1.

Istota wynalazku polega na tym, że substrat, o wzorze 1, poddaje się biotransformacji kulturą grzyba z gatunku Botrytis cinerea.

Korzystnie jest gdy reakcję prowadzi się wodną kulturą szczepu, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 283-310 K.

Postępując zgodnie z wynalazkiem, w wyniku działania układu enzymatycznego zawartego w żywych, całych komórkach kultury Botrytis cinerea, następuje wprowadzenie grupy hydroksylowej w 14a pozycję szkieletu steroidowego.

Uzyskany w ten sposób produkt wydziela się z wodnej kultury mikroorganizmu, znanym sposobem, przez ekstrakcję chloroformem.

Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymanie 14a-hydroksy-1-dehydrotestosteronu, jako głównego produktu reakcji, z wydajnością 52-60%, nieoczekiwanie znacznie wyższą niż w znanej opisanej wyżej metodzie.

Ponadto, zastosowanie jako reagenta całych komórek drobnoustrojów, znacznie upraszcza proces biotransformacji, gdyż pomija się etap wyodrębniania i podczyszczania pożądanych enzymów.

Wynalazek jest bliżej objaśniony w dwóch przykładach wykonania.

P r z y k ł a d 1

Do kolby o pojemności 2 dm , w której znajduje się 300 cm sterylnej pożywki zawierającej 9 g glukozy i 6 g proszku ziemniaczanego, wprowadza się grzyb z gatunku Botrytis cinerea. Po dwóch dniach wzrostu grzyba w temperaturze 300 K i przy ciągłym wstrząsaniu, dodaje się 100 mg 1-dehydro-testosteronu, o wzorze 1, rozpuszczonego w 3 cm³ acetonu. Transformację prowadzi się przy ciągłym wstrząsaniu przez 5 dób. Następnie, uzyskany roztwór transformacyjny ekstrahuje się trzykrotnie chloroformem, osusza siarczanem magnezu i odparowuje rozpuszczalnik. Otrzymuje się 115 mg surowego produktu, który oczyszcza się chromatograficznie używając jako eluentu mieszaniny heksanaceton, w stosunku 2:1.

Na tej drodze otrzymuje się 52 mg 14a-hydroksy-1-dehydrotestosteronu (wydajność 52%).

P r z y k ł a d 2

Postępuje się analogicznie jak w przykładzie 1, z tym że namnażanie kultury grzyba prowadzi się w temperaturze 293 K. Otrzymuje się 120 mg surowego produktu, z którego po oczyszczeniu chromatograficznym, uzyskuje się 60 mg 14a-hydroksy-1-dehydrotestosteronu (wydajność 60%).

Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi:

¹H NMR (CDCls) d: 0,94 (3H, s, C-18H); 1,27 (3H, s, C-19H); 4.30 (1H, t, J=8,8 Hz, C-17H); 6,06 (1H, s, C-4H); 6,22 (1H, dd, J=1,7 Hz,J=10,2 Hz; C-2H); 7,05 (1H, d,J=10,1Hz, C-1H).

Claims (3)

1. Sposób wytwarzania 14a-hydroksy-1-dehydrotestosteronu, o wzorze 2, z 1-dehydrotestosteronu, o wzorze 1, na drodze mikrobiologicznej, znamienny tym, że substrat poddaje się biotransformacji kulturą grzyba z gatunku Botrytis cinerea.

2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że reakcję prowadzi się wodną kulturą grzyba przy ciągłym mieszaniu.

3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że reakcję prowadzi się w temperaturze 283-310 K.