PL193300B1 - Zastosowanie octanu glatirameru oraz kompozycja farmaceutyczna - Google Patents
Zastosowanie octanu glatirameru oraz kompozycja farmaceutycznaInfo
- Publication number
- PL193300B1 PL193300B1 PL334566A PL33456698A PL193300B1 PL 193300 B1 PL193300 B1 PL 193300B1 PL 334566 A PL334566 A PL 334566A PL 33456698 A PL33456698 A PL 33456698A PL 193300 B1 PL193300 B1 PL 193300B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- copolymer
- eae
- cells
- day
- fed
- Prior art date
Links
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 title 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 claims abstract description 17
- 108010072051 Glatiramer Acetate Proteins 0.000 claims abstract description 14
- FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N acetic acid;(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-aminopentanedioic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound CC(O)=O.C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229960003776 glatiramer acetate Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 13
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 229920003145 methacrylic acid copolymer Polymers 0.000 claims description 8
- 229940117841 methacrylic acid copolymer Drugs 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 229920003136 Eudragit® L polymer Polymers 0.000 claims description 6
- 229920003137 Eudragit® S polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 44
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 37
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 31
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 21
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 15
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 14
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 13
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 13
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 description 12
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 230000035611 feeding Effects 0.000 description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 9
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 8
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 8
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 8
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 7
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 6
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 5
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 5
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 5
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 4
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 4
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 4
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 3
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 3
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000020192 tolerance induction in gut-associated lymphoid tissue Effects 0.000 description 3
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 101001018362 Bos taurus Myelin basic protein Proteins 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 2
- 206010037714 Quadriplegia Diseases 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 159000000021 acetate salts Chemical class 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 206010012373 Depressed level of consciousness Diseases 0.000 description 1
- 206010013642 Drooling Diseases 0.000 description 1
- 229920003138 Eudragit® L 30 D-55 Polymers 0.000 description 1
- 229920003134 Eudragit® polymer Polymers 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010021703 Indifference Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- 229930195714 L-glutamate Natural products 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010005298 Oligodendrocyte-Myelin Glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102100026746 Oligodendrocyte-myelin glycoprotein Human genes 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241001282135 Poromitra oscitans Species 0.000 description 1
- 102000016202 Proteolipids Human genes 0.000 description 1
- 108010010974 Proteolipids Proteins 0.000 description 1
- 208000007400 Relapsing-Remitting Multiple Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 208000008630 Sialorrhea Diseases 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 101001018322 Sus scrofa Myelin basic protein Proteins 0.000 description 1
- 206010043169 Tearfulness Diseases 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 206010048232 Yawning Diseases 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 229940038717 copaxone Drugs 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 238000003568 cytokine secretion assay Methods 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 230000002888 effect on disease Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- GDCRSXZBSIRSFR-UHFFFAOYSA-N ethyl prop-2-enoate;2-methylprop-2-enoic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O.CCOC(=O)C=C GDCRSXZBSIRSFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 229940049906 glutamate Drugs 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 208000010726 hind limb paralysis Diseases 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 229910000042 hydrogen bromide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 238000010984 neurological examination Methods 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 238000009522 phase III clinical trial Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 210000001747 pupil Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 210000004911 serous fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/02—Peptides of undefined number of amino acids; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Neurology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Treatments Of Macromolecular Shaped Articles (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
1. Zastosowanie octanu glatirameru do wytwarzania leku w postaci sta lej, do po lykania, po- wleczonego pow loczk a dojelitow a, przeznaczonego do leczenia stwardnienia rozsianego. 3. Kompozycja farmaceutyczna do zastosowania w leczeniu stwardnienia rozsianego, zna- mienna tym, ze obejmuje octan glatirameru w postaci sta lej w ilo sci od 0,1 do 1000 mg, i jest powle- czona pow loczk a dojelitow a. PL PL PL
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie octanu glatirameru oraz kompozycja farmaceutyczna do zastosowania w leczeniu stwardnienia rozsianego.
Kopolimer-1 jest znany również jako octan glatirameru i sprzedawany pod nazwą handlową Copaxone® obejmuje sole octanowe polipeptydów zawierających kwas L-glutaminowy, L-alaninę, L-tyrozynę i L-lizynę. Odpowiedni średni udział molowy aminokwasów jest odpowiednio 0,141, 0,427, 0,095 i średni ciężar cząsteczkowy kopolimeru-1 jest w zakresie pomiędzy 4700 i 11000 daltonów. Wykazano, że kopolimer-1 nie jest autoantygenem, hamuje doświadczalne, alergiczne zapalenie mózgu i opon mózgowych (EAE) wywoływane przez różnorodne encefalitogeny obejmujące wszystkie antygeny mielinowe u różnych gatunków, takie jak podstawowe białko mieliny (MBP) (Sela M i in., Bull Inst Pasteur (1990) 88 303-314), białko proteolipidowe (PLP) (Teitelbaum D i in., J Neuroimmunol (1996) 64 209-217) i glikoproteina mieliny oligodendrocytu (MOG) (Ben-Nun A i in., J. Neurol (1996) 243 (Suppl 1) S14-S22). EAE jest przyjętym modelem stwardnienia rozsianego.
Wykazano, że kopolimer-1 jest aktywny po wstrzyknięciu podskórnym, dootrzewnowym, dożylnym albo domięśniowym (D. Teitelbaum i in., Eur. J. Immunol. (1971) 1:242-248; D. Teitelbaum i in., Eur. J. Immunol. (1973) 3:273-279).
W badaniach klinicznych III fazy wykazano, że codzienne podskórne wstrzyknięcia kopolimeru-1 zwalniają postęp kalectwa i częstość nawrotów w stwardnieniu rozsianym w postaci zwalniającej (KP Johnson, Neurology (1995) 1:65-70). Obecne leczenie kopolimerem-1 jest ograniczone do jego codziennego podawania podskórnego.
Obecnie, wszystkie swoiste, uznane rodzaje leczenia stwardnienia rozsianego obejmują wstrzyknięcia aktywnej substancji dokonywane przez pacjenta. Często obserwowane miejscowe objawy uboczne obejmują podrażnienia, nadwrażliwość, zapalenie, ból, a nawet martwicę (w przypadkach leczenia przynajmniej jednym interferonem β 1-B) i niski poziom prawidłowej współpracy pacjenta. Tak więc, pożądane są alternatywne sposoby leczenia.
W opisie patentowym WO 95/31990 ujawnione są kompozycje do podawania doustnego lub donosowego zawierające jako substancję czynną octan glatirameru oraz zastosowanie octanu glatirameru w postaci doustnej lub donosowej do leczenia stwardnienia rozsianego.
Zgłoszenie patentowe EP 359,783 ujawnia leczenie chorób autoimmunologicznych doustnym podawaniem autoantygenów. Ujawnia doustne podawanie MBP w leczeniu stwardnienia rozsianego. Doustne podawanie autoantygenu określa się jako „doustną tolerancję”.
Wszystkie międzynarodowe zgłoszenia patentowe PCT nr WO 91/12816, WO 91/08760 i WO 92/06704 ujawniają leczenie innych chorób autoimmunologicznych wykorzystujące sposób „doustnej tolerancji” z różnymi autoantygenami. Zawartość tych zgłoszeń patentowych i wszystkich odnośników do literatury podanych powyżej jest tu w całości włączona przez odnośniki.
Na figurach 1 i 2 pokazano wpływ kopolimeru-1 na odpowiedź odpornościową na podstawowe białko mieliny świnki morskiej (GPBP) u szczurów (Figura 1) i u myszy (Figura 2) oceniany przez proliferację komórek śledziony.
Na figurach 3 i 4 pokazano wpływ kopolimeru-1 na uwalnianie cytokin.
Na figurze 5 pokazano zahamowanie EAE u myszy przez doustne podawanie kopolimeru-1.
Myszy (SJL/JxBALB/c)F1 karmiono PBS (), 0,1 mg kopolimeru-1 (□), 0,25 mg kopolimeru-1 (▲), albo
0,5 mg kopolimeru-1 (Δ). Każdą dawkę podawano siedem razy dziennie w dniach -7; -5; -3; 0; 2; 4 i 6. EAE wywoływano dnia 0 przez wstrzyknięcie MSCH.
Na figurze 6 przedstawiono proliferację i wydzielanie cytokin przez linię limfocytów T pochodzącą ze śledzion szczurów karmionych kopolimerem-1. Komórki hodowano w pożywce z kopolimerem-1 (50 μg/ml) albo konkawaliną A (Con A) (5 μg/ml). Mierzono odpowiedzi proliferacyjną i wydzielania cytokin na te antygeny.
Na figurze 7 pokazano zahamowanie EAE przez limfocyty T pochodzące ze śledzion szczurów karmionych kopolimerem-1. Komórki (20x105/na szczura) wstrzykiwano dootrzewnowo 3 dni po stymulacji kopolimerem-1, po której następowało wywołanie EAE.
Na figurze 8 przedstawiono zahamowanie EAE przez limfocyty T pochodzące ze śledzion myszy karmionych kopolimerem-1. Komórki (15x106/na mysz) wstrzykiwano dootrzewnowo 3 dni po stymulacji kopolimerem-1, po której następowało wywołanie EAE.
Na figurze 9 pokazano wyniki kliniczne w stosunku do dni podawania kopolimeru-1 po indukcji EAE u trzech małp Rhesus.
PL 193 300 B1
Na figurze 10 przedstawiono wyniki kliniczne w stosunku do dni podawania kopolimeru-1 po indukcji EAE u sześciu małp Rhesus w badaniu porównującym farmaceutyczne postaci dawkowania dojelitowego w porównaniu do postaci bez powłoki dojelitowej. Wartości przy zerze (0) rozdzielono na osi Y w celu lepszego pokazania wyników.
Niniejszy wynalazek dotyczy zastosowania octanu glatirameru do wytwarzania leku w postaci stałej, do połykania, powleczonego powłoczką dojelitową, przeznaczonego do leczenia stwardnienia rozsianego. Korzystnie lek obejmuje od 0,1 do 1000 mg octanu glatirameru.
Wynalazek również dotyczy kompozycji farmaceutycznej do zastosowania w leczeniu stwardnienia rozsianego, która obejmuje octan glatirameru w postaci stałej w ilości od 0,1 do 1000 mg, i jest powleczona powłoczką dojelitową, która korzystnie obejmuje Eudragit S, korzystniej Eudragit L, bardziej korzystnie Eudragit L jest L30D55.
W korzystnym wykonaniu wynalazku kompozycja farmaceutyczna wedł ug wynalazku ma posta ć kapsułki pokrytej powłoczką dojelitową, która korzystniej obejmuje kopolimer kwasu metakrylowego, typ B, lub także korzystnie kopolimer kwasu metakrylowego, typ A.
W innym korzystnym wykonaniu wynalazku kompozycji farmaceutycznej wedł ug wynalazku powłoczka dojelitowa obejmująca kopolimer kwasu metakrylowego wytworzona jest z dyspersji kopolimeru kwasu metakrylowego.
Kopolimer-1 (octan glatirameru) obejmuje sole octanowe polipeptydów zawierających kwas L-glutaminowy, L-alaninę, L-tyrozynę i L-lizynę. Średni udział molowy aminokwasów jest odpowiednio 0,141, 0,427, 0,095 i średni ciężar cząsteczkowy kopolimeru-1 jest w zakresie pomiędzy 4700 i 11000 daltonów.
Niniejszy wynalazek opiera się na obserwacji, że na przykład, doustne podawanie kopolimeru-1 jest skuteczne w hamowaniu EAE i przez to posiada wartość terapeutyczną w leczeniu stwardnienia rozsianego.
Doprowadzano do skontaktowania kopolimeru-1 z tymi tkankami limfatycznymi błony śluzowej, co do których uważa się, że są pierwotnym źródłem uwrażliwienia układu odpornościowego. Te wyścielające błony śluzowe można znaleźć (aczkolwiek niekoniecznie wyłącznie) w zatokach, tchawicy, drogach oskrzelowych (gdzie są znane jako BALT albo tkanka limfatyczna związana z oskrzelami) i w przewodzie pokarmowym (znane jako GALT albo tkanka limfatyczna związana z przewodem pokarmowym). Tak więc, zrozumiałe jest, że podawanie kopolimeru-1 obejmuje sposoby w których to jest on wprowadzany do organizmu drogą pokarmową i wziewną. Na przykład, kopolimer-1 można podawać przez usta w trakcie jedzenia, przez sondę żołądkową, przez inhalację do dróg oskrzelowych albo przez inhalację donosową.
W moż liwym przykł adowym wykonaniu niniejszego wynalazku kopolimer-1 podaje się doustnie w iloś ci od 0,1 do 1000 mg na dzień , moż e być on podawany w pojedynczej dawce albo w dawkach wielokrotnych. Specjalista rozumie, że dawka skuteczna terapeutycznie jest na ogół pochodną wieku pacjenta, jego płci i stanu zdrowia, jak również zależy od innych jednocześnie stosowanych terapii. Określenie optymalnej, terapeutycznie skutecznej dawki pozostaje w zakresie możliwości specjalisty w dziedzinie.
Jeśli kopolimer-1 jest podawany doustnie, to można go zmieszać z innymi substancjami pokarmowymi w postać stałą, półstałą, w postać zawiesiny albo emulsji i można go zmieszać z farmakologicznie dopuszczalnymi nośnikami, w tym z wodą, czynnikami zawieszającymi, czynnikami emulgującymi, czynnikami nasilającymi smak i podobnymi. W wykonaniu wynalazku, kompozycja doustna jest pokryta powłoczką dojelitową. Zastosowanie powłok dojelitowych jest dobrze znane w stanie techniki. Na przykład, K. Lehman, Acrylic Coatings in Controlled Release Tablet Manufacturer, Manufacturing Chemist and Aerosol Mews., str. 39 (czerwiec 19730 i K. Lehman, Programmed Drug Release From Oral Program Forms; Pharma Int., vol ISS 1971 str. 34-41, opisują takie powłoki dojelitowe jak Eudragit S i Eudragit L, Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd ed., jak również wskazują zastosowania Eudragit S i Eudragit L. Eudragit, który może być stosowany w niniejszym wynalazku to L30D55.
Kopolimer-1 można wytworzyć sposobami znanymi w stanie techniki, na przykład, sposobem ujawnionym w Patencie U.S. nr 3849550, w którym to bezwodniki N-karboksylowe tyrozyny, alaniny, γ-benzyloglutaminianu i ε-N-trifluoroacetylolizyny są poddane polimeryzacji w temperaturze pokojowej do bezwodnego dioksanu z dietyloaminą jako wyzwalaczem. Odblokowanie grup γ-karboksylowych glutaminianu jest wywoływane bromowodorem w lodowym kwasie octowym, po czym następuje usunięcie grup trifluoroacetylowych z reszt lizynowych przez 1 M piperydynę.
PL 193 300 B1
Jak to opisano w zgłoszeniu PCT/WO95/31980, kopolimer-1 o zgodnym średnim ciężarze cząsteczkowym około 7±2 kilodaltonów może być korzystnie wytworzony sposobem obejmującym poddanie reakcji zabezpieczonego kopolimeru-1 z bromowodorkiem w celu uzyskania trifluoroacetylkopolimeru-1, traktowanie trifluoroacetylkopolimeru-1 wodnym roztworem piperydyny w celu uzyskania kopolimeru-1 i oczyszczanie kopolimeru-1 w celu uzyskania właściwego średniego ciężaru cząsteczkowego.
Niniejszy wynalazek zostanie dalej zilustrowany poniższymi przykładami. Jednakże, nie należy ich uważać za ograniczenie niniejszego wynalazku. O ile inaczej nie zaznaczono wszystkie części, procenty i podobne podano wagowo.
P r z y k ł a d 1
Antygeny - Kopolimer-1 przygotowany według sposobu opisanego w PCT/WO95/31990, uzyskano od Teva Pharmaceutical Industries Ltd., Izrael. GPBP przygotowano z rdzenia kręgowego świnki morskiej przez ekstrakcję kwaśną i precypitację siarczanem amonu tak jak to opisał Hirshfeld H i in., Febs Lett (1970).
Zwierzęta - Samice myszy (PL/JxSJL/J)F1 (8-10 tygodniowe) uzyskano od Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME). Samice szczurów Lewis (8-10 tygodniowe) uzyskano od Harlan-Olac (Bicester, GB).
Wywołanie i ocena EAE - Myszy nastrzyknięto 200 μg GPBP emulgowanego w identycznej objętości kompletnego adiuwantu Freunda (CFA) zawierającego 4 mg/ml Mycobacterium tuberculosis (H37Ra) (Difco Lab., Detroit, Mich.). Emulsję o ogólnej objętości 0,1 ml wstrzyknięto we wszystkie cztery poduszki łapy. Bezpośrednio po i 24 godz. później wstrzyknięto dożylnie toksynę krztuścową (250 ng/mysz) (Sigma).
Szczury uczulano 25 μg GPBP emulgowanego 1:1 w CFA zawierającym 4 mg/ml H37Ra. Emulsję o ogólnej objętości 0,1 ml wstrzyknięto w dwie poduszki tylnych łap.
Zwierzęta badano codziennie od 10 dnia po indukcji w celu stwierdzenia objawów choroby. EAE oceniano w sposób następujący: 0-brak objawów chorobowych, 1-opadanie ogona, 2-porażenie kończyn tylnych, 3-porażenie czterokończynowe, 4-stan agonalny, 5-śmierć.
Wywołanie tolerancji doustnej - Myszy karmiono 250 μg GPBP albo kopolimeru-1 rozpuszczonego w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS) w dniach -7, -5, -3, 0, 2, 4 i 6 przez sondowanie żołądka stalową igłą do karmienia o szerokości 18 (Thomas). EAE wywoływano w dniu 0.
Szczury karmiono 1 mg GPBP albo kopolimeru-1 rozpuszczonego w PBS sterylną sondą do karmienia (Uno Plast, Denmark). Szczury karmiono 5 razy (do całkowitej dawki 5 mg) w odstępach 2-3 dniowych przed wywołaniem choroby. EAE wywoływano dwa dni po ostatnim karmieniu. Myszy i szczury kontrolne karmiono pozornie PBS.
Test proliferacji - Odpowiedź proliferacyjną komórek śledziony badano 10-11 dni po wywołaniu w sposób opisany powyżej EAE. Od trzech zwierząt z każdej grupy trzykrotnie pobierano i hodowano komórki (5x105 komórek mysich i 2x105 komórek szczurzych) na płytkach do mikromiareczkowania z różnymi stężeniami antygenu (GPBP) w ostatecznej objętości 0,2 ml. Płytki do mikromiareczkowania zawierały pożywkę hodowlaną RPMI 1640 (uzyskane od Sigma Biochemicals, St. Louis, Missouri) uzupełnioną 1% surowicą autologiczną. Po 72 godz. inkubacji, komórki poddawano impulsom 1 μ Ci {3H}-tymidyny przez 18 godz. i następnie zbierano na bibuły filtrujące i mierzono poziom radioaktywności.
Test wydzielania cytokin - 10-11 dni po wywołaniu EAE usuwano śledzionę i zbierano komórki od trzech myszy z każdej grupy. W dwóch powtórzeniach hodowano komórki (5x105/ml) w 24 studzienkowych płytkach w RPMI 1640 uzupełnionej 10% FCS (płodowa surowica cielęca) w obecności i przy braku antygenu (GPBP 100 Fg/ml). Supernatanty zbierano po 24-40 godz. hodowli. Przeprowadzano ilościowy test ELISA w kierunku IL-2, IFN-γ, IL4, IL6 i IL-10 wykorzystując sprzężone mAb swoiste w stosunku do odpowiednich cytokin (Pharminden, La Jolla, CA) zgodnie z instrukcją producenta.
Wyniki:
Skuteczność doustnego podawania kopolimeru-1 w zapobieganiu objawom klinicznym EAE u szczurów Lewis porównywano ze skutecznością GPBP, podczas badania w warunkach, o których wcześniej donoszono, że wywołują zahamowanie objawów przez doustne GPBP (PJ Higgins & HL Weiner, J. Immunol (1988) 140:440-445). Wyniki podsumowane w poniższej Tabeli 1 wskazują na to, że kopolimer-1 jest bardziej skuteczny niż GPBP i znacząco zmniejsza zarówno występowanie (54% zmniejszenie) jak i nasilenie (57% zmniejszenie) objawów EAE w porównaniu ze szczurami karmionymi PBS, służącymi jako kontrola.
PL 193 300 B1
T a b e l a 1. Zahamowanie EAE u szczurów przez doustne podawanie kopolimeru-1.
| Antygen podawany z pokarmem | Częstość występowania | Średni maksymalny wynik±SD | Średni początek wystąpienia (dni) |
| PBS (kontrola) | 27/28 (96%) | 1,8±0,5 | 11,9 |
| GPBP | 10/17 (59%) (p=0,0026) | 0,9±0,5 | 11,4 |
| Kopolimer-1 | 13/28 (46%) (p=0,00005) | 0,78±0,45 | 12,6 |
Każda figura odpowiada łącznym wynikom w 3-5 niezależnych doświadczeniach, wartość p odpowiada znaczącej statystycznie różnicy w porównaniu z grupą kontrolną (test dokładności Fischera). Średni maksymalny wynik wyliczano dla całej grupy.
Wpływ karmienia antygenem na odpowiedź odpornościową wobec GPBP - Na myszach i szczurach badano wpływ doustnego podawania kopolimeru-1 i GPBP na odpowiedź odpornościową na chorobę wywoływaną przez antygen-GPBP. Wyniki są podsumowane na Figurze 1, która pokazuje zmniejszenie proliferacji komórek przez każdy z doustnie podawanych związków (kopolimer-1 albo GPBP) w zawiesinie szczurzych komórek śledziony pobudzanych przez GPBP (Figura 2 pokazuje podobne wyniki na myszach). Jak można zobaczyć doustne podawanie kopolimeru-1 powoduje prawie całkowite zahamowanie odpowiedzi proliferacyjnej na GPBP u tych dwóch gatunków. U obu gatunków, kopolimer-1 jest bardziej skuteczny niż GPBP w hamowaniu odpowiedzi na GPBP.
Poziomy cytokin mierzono w supernatantach hodowli komórek śledziony pochodzących od myszy (Figura 3 i 4). Myszy kontrolne karmione PBS wydzielały IL-2, IFN-γ i IL-6 (nie pokazane) w odpowiedzi na GPBP. U myszy karmionych kopolimerem-1 albo GPBP ilość cytokin prozapalnych Th1 IL-2 i IFN-γ produkowanych w odpowiedzi na stymulację GPBP była niższa niż w grupach kontrolnych, kopolimer-1 bardziej skutecznie hamuje cytokiny, IL-4 i IL-10 nie wykrywano w żadnej z grup leczonych.
Wyniki wskazują, na to że kopolimer-1 skutecznie hamuje EAE nawet po podaniu doustnym. Klinicznie ochronny wpływ doustnego podawania kopolimeru-1 jest związany z regulacją ujemną odpowiedzi odpornościowych limfocytów T na GPBP, takich jak proliferacja i uwalnianie cytokin prozapalnych (IL-2 i INF-γ).
P r z y k ł a d 2
Dodatkowe badania nad zahamowaniem postępu EAE przez doustne podawanie kopolimeru-1 przeprowadzono na szczurach i myszach. W badaniach tych ustalono optymalną dawkę leczniczą dla tych gatunków. W celu zrozumienia mechanizmu leżącego u podstaw zahamowania postępu EAE przez doustne podawanie kopolimeru-1, swoiste wobec kopolimeru-1 linie limfocytów T wyizolowano od zwierząt karmionych kopolimerem-1. Badano reaktywność in vitro linii komórkowych i ich wpływ in vivo na wywołanie choroby.
Materiały i metody
Izolacja swoistych wobec kopolimeru-1 linii limfocytów T - szczury Lewis pięciokrotnie karmiono 1 mg kopolimeru-1 (SJL/J X BALB/c)F, myszy karmiono siedmiokrotnie 250 μg kopolimeru-1, w odstępach 2-3 dniowych. Cztery do dwunastu dni po ostatnim karmieniu zwierzęta zabijano i usuwano im śledziony.
Pobierano komórki śledziony trzech zwierząt (50 x 106/płytkę) i inkubowano je przez 4 dni z kopolimerem-1 (500 μg) w pożywce zawierającej 1% autologiczną surowicę. Co 14-21 dni komórki (4-6 x 106/płytkę) ponownie stymulowano przez 3 dniową ekspozycję na kopolimer-1 (500 μg) obecny w mysich syngenicznych tymocytach napromieniowanych dawką 3000 radów (100 x 106/płytkę) albo mysich splenocytach (50 x 106/płytkę). Po stymulacji przeprowadzano namnażanie w 10% supernatancie zwykłych mysich komórek śledziony aktywowanych Con A, jako czynnikiem wzrostu limfocytów T (TCGF).
Test proliferacji - Linie limfocytów T (1 x 104 komórek) hodowano z napromieniowanymi (3000R) tymocytami (szczurzymi -1 x 106) albo splenocytami (mysimi 5 x 105) i ze wskazanymi antygenami (10 μg kopolimeru-1 μg Con A) w końcowej objętości 0,2 ml na płytkach do mikromiareczkowania. Na zakończenie 48 godzinnych inkubacji, hodowle poddawano pulsom 3H-tymidyny i zbierano w 6-12 godzin później.
PL 193 300 B1
Test cytokinowy - Linie szczurzych limfocytów T (0,5 x 106/ml) inkubowano z napromieniowanymi tymocytami (10 x 106) z, lub przy braku wskazanego antygenu (50 μg kopolimeru-1; 5 μg Con A). Komórki hodowano przez 24 godziny w 1640 RPMI uzupełnionej 10% FCS w celu przeprowadzenia pomiarów IL-2, TNF-α, IL-4 i IL-10 i w pożywce pozbawionej surowicy - DCCM-1 (Biological Industries, Kibbutz Beit Haemek, Izrael) w celu przeprowadzenia pomiarów po 72 godz. TGF-β.
Poziomy cytokin w supernatantach mierzono ilościowym testem ELISA wykorzystując pary przeciwciał monoklonalnych swoistych wobec odpowiednich cytokin.
Wywoływanie EAE - Myszy (SJL/J X BALB/c)F nastrzykiwano we wszystkie cztery poduszeczki łapy 2 mg homogenatem mysiego rdzenia kręgowego (MSCH) emulgowanego w stosunku 1:1 z CFA zawierającym 1 mg/ml H37Ra (Difco Lab., Detroit Mich.). Toksynę krztuścową (250 ng/mysz, Sigma) podawano dwukrotnie dożylnie, raz bezpośrednio po i ponownie po 48 godzinach.
Wyniki:
1. Badanie reakcji na dawkę szczurów i myszy
Szczury karmiono pięciokrotnie 0,5, 1, albo 2 mg kopolimeru-1 według ustanowionego protokołu (patrz powyżej, Materiały i metody) i następnie poddawano je prowokacji w celu wywołania EAE. Wyniki podsumowano w Tabeli 2 i wskazują one na to, że najbardziej skuteczną dawką była dawka 1 mg kopolimeru-1 - dawki kopolimeru-1 0,5 mg i 2 mg mniej skutecznie hamowały EAE.
Myszy (SJL/J X BALB/c)F siedmiokrotnie karmiono przez sondę żołądkową kopolimerem-1 w dawce 0,1, 0,25 albo 0,5 mg w dniach -7; -5; -3; 0; 2; 4 i 6. EAE wywoływano dnia 0 przez wstrzyknięcie MSCH. Wyniki podsumowane na Figurze 5 wskazują na to, że doustne podawanie kopolimeru-1 może hamować wystąpienie choroby u myszy i najskuteczniejszą dawką jest dawka 0,1 mg kopolimeru-1. 0,25 mg kopolimeru-1 jest mniej skuteczne, a dawka 0,5 mg jest zupełnie nieaktywna. Tak więc, wyniki zarówno u szczurów, jak i u myszy wskazują, że doustny kopolimer-1 posiada krzywą odpowiedzi dawki optymalnej i zwiększanie ponad optymalną dawkę doustną powoduje brak skuteczności hamowania EAE.
2. Badania nad swoistymi wobec kopolimeru-1 liniami limfocytów T przeprowadzone ze zwierzętami karmionymi kopolimerem-1
Linie swoistych wobec kopolimeru-1 limfocytów T supresorowych wyizolowano ze śledzion szczurów i myszy, które uczyniono niewrażliwymi na EAE przez karmienie kopolimerem-1. Proliferację i odpowiedź wydzielniczą cytokin w takiej linii izolowanej od szczurów pokazano na Figurze 6. Taka linia komórkowa proliferuje w odpowiedzi na kopolimer-1 i wydziela IL-2, pewne ilości IL-10 i TGF-β, a nie wydziela ani TNF-α, ani IL-4. Taki profil cytokinowy odpowiada limfocytom typu Th3, które wykazano, że można indukować doustnym MPB (Chen i in., Science 265, 1237, 1994).
Badano zdolność linii swoistych wobec kopolimeru-1 do zapobiegania EAE in vivo. Linie komórkowe wstrzykiwano 3 dni po stymulacji in vivo kopolimerem-1 (20 x 106 komórek/szczura wstrzykiwano ip i 15 x 106 komórek/mysz wstrzykiwano iv). Zwierzęta poddawano prowokacji w celu wywołania EAE bezpośrednio po podaniu komórek. Wyniki pokazane na Figurze 7 i 8 wskazują na to, że chorobę istotnie zahamowano u zwierząt poddanych prowokacji. Tak więc, zarówno mysie jak i szczurze linie limfocytów T swoiste wobec kopolimeru-1 przekazują nabyty brak wrażliwości na EAE wywołany przez doustne podawanie kopolimeru-1. Komórki te aktywnie ujemnie regulują patologiczną odpowiedź odpornościową in vivo.
T a b e l a 2: Badanie reakcji na doustną dawkę kopolimeru-1 u szczurów
| Antygen doustny | Występowanie | Średnie wyniki±SD | Średni początek wystąpienia | Zahamowanie* (%) |
| PBS (kontrola) | 10/11 | 1,32±0,64 | 13,1 | |
| kopolimer-1 (0,5 mg) | 9/11 | 0,95±0,57 | 13,5 | 28 |
| kopolimer-1 (1 mg) | 7/11 | 0,64±0,50 | 15,1 | 51 |
| kopolimer-1 (2 mg) | 8/11 | 0, 910,70 | 13,1 | 31 |
* wyliczony przez wynik uś redniony
PL 193 300 B1
Ilość każdego występowania odpowiada łącznym wynikom 2 odrębnych doświadczeń. Średni maksymalny wynik kliniczny został obliczony dla całej grupy.
P r z y k ł a d 3
Badano wpływ doustnego podawania kopolimeru-1 na wywołanie EAE u małp Rhesus.
Materia ły
Kopolimer-1 pokryty powłoką dojelitową, twardą kapsułką żelatynową obejmującą dwa poziomy dawkowania: 1 mg kopolimeru-1 i 20 mg kopolimeru-1 dostarczył Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Każdy poziom dawkowania formułowano wykorzystując mannitol i pokrywając Eudragit L30D55. Placebo albo kapsułki kontrolne obejmowały kapsułki zawierające 5 mg cukru. Bydlęce MBP uzyskano od Life Technologies, Grand Island, Nowy Jork. Materiał ten odpowiada wysoce oczyszczonemu preparatowi dającemu pojedynczy pasek przy 18,5 Kd w SDS-PAGE i barwieniu Silver.
Protokół karmienia
Trzy małpy Rhesus traktowano w sposób następujący: jedna małpa służyła jako kontrola i była karmiona kapsułkami placebo (zawierającymi jedynie 5 mg glukozy). Drugą i trzecią małpę karmiono kapsułkami zawierającymi kopolimer-1 w dawce odpowiednio 1 mg/karmienie i 20 mg/karmienie. Zwierzęta karmiono każdego dnia do całkowitej ilości 10 karmień: 5 razy przed wywołaniem choroby (immunizacja dnia 0) i następnie 5 razy po immunizacji.
Wywołanie choroby
Chorobę wywołano dnia 0 przez śródskórne wstrzyknięcie bydlęcego MBP i 3 mg H37Ra M. tubeculosis w FCA do poduszek tylnej łapy, całkowita wstrzyknięta objętość wahała się pomiędzy 0,1 a 0,15 ml na poduszkę łapy. Zwierzęta obserwowano następnie w kierunku objawów klinicznych EAE, różnorodnych surowiczych i pobranych z płynu mózgowo-rdzeniowego markerów immunologicznych i wykonywano rezonans elektromagnetyczny rdzenia kręgowego i czaszki.
Wyniki kliniczne
Skalę ocen objawów klinicznych podawano w sposób następujący: 0-prawidłowe badanie neurologiczne; 1-utrata wagi, jadłowstręt, ziewanie, powolna odpowiedź na bodźce, rozdrażnienie, letarg; 2-łagodne objawy neurologiczne, obojętność, ślinienie się, niezborność łap, drżenie, wzmożona płaczliwość i niezborność spojrzenia; 3-umiarkowane objawy neurologiczne, ślepota (źrenice nie reagujące na światło), niemożność wykonywania ruchów, słabość łap, albo porażenie; 4-ciężkie objawy neurologiczne, stan przedśpiączkowy, śpiączka, porażanie czterokończynowe; 5-śmierć.
Proliferacja limfocytów wywoływana przez antygen
Próbki heparynizowanej krwi rozcieńczano 1:1 zbuforowanym roztworem soli fizjologicznej Hanks (BSS) zawierającym inaktywowaną termicznie płodową surowicę cielącą (FCS) i nawarstwiono na gradient hypaque-ficol. Wirowanie (2000 rpm przez 20 minut w temperaturze pokojowej) pozwoliło na odzyskanie rozcieńczonej surowicy i oddzielenie limfocytów w interfazie. Odzyskane limfocyty przemywano trzykrotnie w Hanks BSS-5% FCS i ponownie zawieszano w kompletnej pożywce RPMI 1640 zawierającej pożywkę RPMI 1640, 10% FCS i 1% następujących odczynników: aminokwasy nie niezbędne, pirogronian sodowy, L-glutaminian, 2-merkaptoetanol i penicylina/streptomycyna. Odzyskane limfocyty liczono i ponownie zawieszano w ostatecznym stężeniu 2 x 106/ml. Hodowle zawierające 100 mikrolitrów zawiesiny komórkowej i 100 mikrolitrów MBP (20 mikrogramów/studzienkę), 100 mikrolitrów kopolimeru-1 (10 mikrogramów/studzienkę) albo 100 mikrolitrów Con A (1 mikrogram/studzienkę) umieszczono w okrągłodennych 96-cio studzienkowych płytkach do mikromiareczkowania. Hodowle utrzymywano w 37°C w 5% CO2 przez 6 dni. Piątego dnia hodowli każdą studzienkę poddano pulsowi 1 μ Ci 3H-tymidyny przez 16 do 18 godzin. Szóstego dnia hodowle zbierano urządzeniem do automatycznego zbierania komórek i liczono stosując metody scyntylacji w fazie ciekłej. Wskaźniki stymulacji określano w sposób następujący:
doświadczalne cpm - podstawowe cpm wskaźnik stymulacji =------— podstawowe cpm
Wyniki kliniczne
Żadne zwierzę nie wykazywało objawów klinicznych przez 24 godz. Zwierzę 18374 leczone placebo rozwinęło objawy chorobowe 25 dnia, i ze względu na ciężkie objawy EAE (ocena 4+ w skali 5 stopniowej) zostało zabite 28 dnia. Zwierzę 18498 leczone wysoką dawką 20 mg kopolimeru-1 nie wykazywało żadnych objawów klinicznych przez 60-cio dniowy okres obserwacji. Zwierzę 18497 leczone niską dawką kopolimeru-1 zaczęło wykazywać minimalne objawy 25 dnia, jednakże w porównaniu ze zwierzęciem 18374 leczonym placebo, '497 wykazywało znacznie wolniejsze nasilanie obja8
PL 193 300 B1 wów klinicznych, określanych na poziomie od 2 do 3+ w dniach od 28 do 33. Od tego czasu zwierzę '497 było karmione kapsułkami 20 mg 5 razy w kolejne dni, przez całkowity okres 10 dni. Można zobaczyć na Figurze 9, że w ciągu trzech dni skala objawów klinicznych obserwowanych u zwierzęcia spadła do 0 i utrzymywała się u tych dwu zwierząt '497 i '498 karmionych kopolimerem-1, aż do momentu ich zabicia w celu pobrania materiałów histologicznych w 60 dniu.
Cytometria przepływowa
Stosowano przyrząd do cytometrii przepływowej Epics C w celu zanalizowania pobranych od każdej z małp zarówno limfocytów z krwi obwodowej (PBL), jak i z płynu mózgowo rdzeniowego (CSF). Krwinki czerwone poddawano lizie i pozostałe limfocyty (WBC) przemywano i barwiono stosując standardowe metody i odpowiednie odczynniki. Poniższe Tabele 3 i 4 pokazują dane barwienia WBC z PBL i CSF trzech zwierząt biorących udział w tym doświadczeniu.
Ilość komórek barwiących się CD4+ była trochę większa u zwierząt 18497 i 18498 karmionych kopolimerem-1, niż u zwierzęcia kontrolnego 18374. Ilość limfocytów CD4+, które są również CD45RA- wydaje się większa u zarówno zwierzęcia kontrolnego 19374, jak i zwierzęcia 18497 karmionego niską dawką kopolimeru-1 w tym czasie gdy oba zwierzęta wykazywały objawy kliniczne (dni +27 do +34) i pozostawały na dość stałym poziomie u zwierzęcia 18498 karmionego wysoką dawką kopolimeru-1. Liczba limfocytów T barwiących się CD8+CD45RA+ zmniejszyła się znacznie u zwierzęcia kontrolnego 19374 i u zwierzęcia 18497 karmionego niską dawką kopolimeru-1, a nieznacznie wzrosła u zwierzęcia 18498 karmionego wysoką dawką kopolimeru-1 (wskazując na produkcję nowych limfocytów CD4+).
Liczba komórek znalezionych w CSF zwierzęcia kontrolnego 19374 obniżała się stale od dnia +20 do dnia +28, gdy zwierzę zmarło. Analiza wykazała, że większość limfocytów CD4+ była CD45RA-. Liczba komórek zebranych z CSF zwierzęcia 18497 była zbyt niska by je policzyć, czy też zabarwić. Liczba komórek zebranych z CSF zwierzęcia 18498 była zbyt niska by je policzyć, czy też zabarwić za wyjątkiem dnia +27. Zebrane komórki CD4+ były przede wszystkim CD45RA+.
T a b e l a 3: Analiza PBL uzyskanych z małp Rhesus immunizowanych MBP
| Małpa | Dzień badania | CD4+ | CD8+ | odsetek CD4+:CD8+ | CD4+ CD45RA+ | CD8+ CD45RA+ |
| 19374 | (-1) | 24 | 47 | 0,51 | 15 | 45 |
| (kontrola) | (+6) | 24 | 42 | 0,57 | 15 | 40 |
| (+13) | 23 | 40 | 0,58 | 12 | 38 | |
| +20 | 22 | 45 | 0,49 | 10 | 45 | |
| +27 | 24 | 27 | 0,89 | 10 | 23 | |
| +28 | 24 | 24 | 1,00 | 10 | 21 | |
| 18497 (dawka 1 mg kopolimer-1/dawkę) | -1 | 35 | 36 | 0,97 | 21 | 33 |
| +6 | 39 | 31 | 1,26 | 24 | 29 | |
| + 13 | 37 | 34 | 1,09 | 16 | 29 | |
| +20 | 41 | 32 | 1,28 | 18 | 25 | |
| +27 | 35 | 27 | 1,30 | 12 | 18 | |
| +34 | ND | ND | ND | ND | ND | |
| 18498 | -1 | 37 | 40 | 0,93 | 23 | 32 |
| (dawka 20 mg kopolimer-1/ dawkę) | +6 | 37 | 42 | 0,88 | 23 | 32 |
| + 13 | 41 | 46 | 0,89 | 24 | 37 | |
| +20 | 27 | 57 | 0,47 | 12 | 41 | |
| +27 | 37 | 52 | 0,71 | 22 | 41 | |
| +34 | ND | ND | ND | ND | ND |
ND = nie określono
PL 193 300 B1
T a b e l a 4: Analiza CSF uzyskanych z małp Rhesus immunizowanych MBP.
| Małpa | Dzień badania | Komórki pl | CD4+ | CD8+ | odsetek CD4+:CD8+ | CD4+ CD45RA+ | CD8+ CD45RA+ |
| 19374 | 0 | ND | za mało komórek | ||||
| (+14) | 28 | , , | |||||
| +20 | 100 | 61 | 18 | 2,18 | 2 | 4 | |
| +28 | 294 | 35 | 35 | 0,94 | 4 | 8 | |
| 18497 | 0 | za mało komórek | |||||
| + 14 | , , | ||||||
| +20 | , , | ||||||
| +27 | , , | ||||||
| +34 | , , | ||||||
| 18498 | 0 | za mało komórek | 37 | 40 | 0,93 | 23 | 32 |
| + 14 | , , | ||||||
| +20 | , , | ||||||
| + 27 | 29,7 | 47 | ND | 8 | ND | ||
| + 34 | za mało komórek | ||||||
| +41 |
ND = nie określono
Analiza induktora czynnika hamującego swoiste wobec antygenu limfocyty T (Tcsfi)
Analiza swoistego wobec MBP Tsfi w surowicy trzech małp w tym Przykładzie przedstawiono w poniższych Tabelach 5 i 6. Żadne ze zwierząt nie produkowało swoistego wobec MBP Tsfi aż do +13 dnia po wywołaniu EAE przez MBP. Zwierzę kontrolne 18374 nie produkowało Tsfi aż do dnia +20 i poziom tej produkcji był tuż powyżej poziomu podstawowego. Zwierzęta karmione kopolimerem-1 18487 i 18498 zgodnie produkowały znaczące poziomy Tsfi od dnia +13 aż do dnia +41 na krótko przed zakończeniem.
Tabela 6 pokazuje, że próbki surowicy nie zawierające Tsfi nie reagowały z przeciwciałem anty-TGF-β. Surowica, która wykazywała wiązanie MBP z przeciwciałem 3C9 (anty-Tsfi) również reagowała z przeciwciałem anty-TGF-β. Rekombinowany ludzki TGF-β reagował z przeciwciałem anty-TGF-β, a nie z przeciwciałem 3C9.
T a b e l a 5: Badanie czynnika induktora hamującego swoiste wobec MBP limfocyty T (Tcsfi)
| Zwierzę # | -13 | -1 | +6 | + 13 | +20 | +27 | +34 | +41 |
| 18374 | brak | brak | ND | ND | 0,17 | 0,21 | zmarło | |
| 18497 | brak | brak | brak | 0,60 | 0,61 | 0,56 | 0,66 | 0,76 |
| 18498 | brak | brak | brak | 0,32 | 0,32 | 0,42 | 0,40 | 0,40 |
a. dane odpowiadają OD przy 405 nm próbek surowicy przy rozcieńczeniu 1:20 ND = nie określone
PL 193 300 B1
T a b e l a 6: Związek pomiędzy swoistym wobec MBP Tsfi i TGF-β w surowicy małpy Rhesus leczonej kopolimerem-1
| Zwierzę # | Dzień badania | anty-Tsfi (3C9 Ab)a | Anty-TGFeb |
| 18374 | -1 | brak | brak |
| +27 | 0,21 | brak | |
| 18497 | +6 | brak | brak |
| + 13 | 0,60 | 0,71 | |
| +27 | 0,56 | 0,65 | |
| +41 | 0,76 | 0,85 | |
| 18498 | +6 | brak | brak |
| + 13 | 0,32 | 0,35 | |
| +27 | 0,42 | 0,47 | |
| +41 | 0,40 | 0,45 | |
| rekombinowany ludzki TGF-ec | 0,72 |
a. dane odpowiadają OD przy 405 nm materiału wiążącego MBP (2,5 μg białka) i reagującego z przeciwciałem przeciw ludzkiemu Tsfi (3C9)
b. dane odpowiadają OD przy 405 nm materiału wiążącego MBP i reagującego z przeciwciałem przeciw ludzkiemu TGF-β
c. dane odpowiadają studzienkom pokrytym 100 ng rekombinowanego ludzkiego TGF
P r z y k ł a d 4
Sześć małp leczono i następnie przeprowadzono badania zasadniczo zgodne z protokołem Przykładu 3 opisanym powyżej.
Zwierzę kontrolne 18746 karmione placebo otrzymywało kapsułki zawierające glukozę. Zwierzę 18586 otrzymywało 1 mg kopolimeru-1 w popękanej otoczce dojelitowej. Zwierzę 18639 otrzymywało 20 mg kopolimeru-1 w popękanej otoczce dojelitowej. Zwierzę 18724 otrzymywało 1 mg kopolimeru-1 w nienaruszonej otoczce dojelitowej. Zwierzę 18810 otrzymywało 10 mg kopolimeru-1 w nienaruszonej otoczce dojelitowej. Zwierzę 18962 otrzymywało 20 mg kopolimeru-1 w nienaruszonej otoczce dojelitowej.
Schemat karmienia, wywoływania choroby i następowej obserwacji był taki sam jak w powyżej opisanym przykładzie 3.
Wyniki
Jak widać w odniesieniu do Figury 10 zwierzę kontrolne 18746 rozwinęło chorobę o ostrym przebiegu począwszy od dnia +21 i zmarło w dniu +23 od początku objawów klinicznych. Zwierzęta 18586 i 18639 leczone kopolimerem-1 w popękanej powłoczce jelitowej, które to powłoczki otwierały się w żołądku (w przypadku obu dawek) nie zostały zabezpieczone przed chorobą i ginęły w ciągu 2-3 dni od pojawienia się objawów chorobowych. Wszystkie małpy karmione kopolimerem-1 w kapsułkach o powłoczkach dojelitowych były całkowicie zabezpieczone przed chorobą i nie rozwijały się u nich objawy EAE aż do 60 dnia, w którym były zabijane w celu pobrania próbek do badań histologicznych.
Claims (10)
1. Zastosowanie octanu glatirameru do wytwarzania leku w postaci stałej, do połykania, powleczonego powłoczką dojelitową, przeznaczonego do leczenia stwardnienia rozsianego.
2. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że lek obejmuje od 0,1 do 1000 mg octanu glatirameru.
3. Kompozycja farmaceutyczna do zastosowania w leczeniu stwardnienia rozsianego, znamienna tym, że obejmuje octan glatirameru w postaci stałej w ilości od 0,1 do 1000 mg, i jest powleczona powłoczką dojelitową.
PL 193 300 B1
4. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 3, znamienna tym, że powłoczka dojelitowa obejmuje Eudragit S.
5. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 3, znamienna tym, że powłoczka dojelitowa obejmuje Eudragit L.
6. Kompozycja farmaceutyczna wedł ug zastrz. 5, znamienna tym, ż e Eudragit L jest L30D55.
7. Kompozycja farmaceutyczna wed ług zastrz. 3, znamienna tym, że ma postać kapsułki pokrytej powłoczką dojelitową.
8. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 3, znamienna tym, że powłoczka dojelitowa obejmuje kopolimer kwasu metakrylowego, typ B.
9. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 3, znamienna tym, że powłoczka dojelitowa obejmuje kopolimer kwasu metakrylowego, typ A.
10 Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 9, znamienna tym, że powłoczka dojelitowa obejmująca kopolimer kwasu metakrylowego wytworzona jest z dyspersji kopolimeru kwasu metakrylowego.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL11998997A IL119989A0 (en) | 1997-01-10 | 1997-01-10 | Pharmaceutical compositions for oral treatment of multiple sclerosis |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL334566A1 PL334566A1 (en) | 2000-03-13 |
| PL193300B1 true PL193300B1 (pl) | 2007-01-31 |
Family
ID=11069682
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL334566A PL193300B1 (pl) | 1997-01-10 | 1998-01-12 | Zastosowanie octanu glatirameru oraz kompozycja farmaceutyczna |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0975351B1 (pl) |
| JP (1) | JP4216342B2 (pl) |
| KR (1) | KR20000070058A (pl) |
| CN (1) | CN100528222C (pl) |
| AT (1) | ATE356608T1 (pl) |
| AU (1) | AU737287B2 (pl) |
| BR (1) | BRPI9807076B8 (pl) |
| CA (1) | CA2277365C (pl) |
| CZ (1) | CZ297983B6 (pl) |
| DE (1) | DE69837324T2 (pl) |
| EA (1) | EA003128B1 (pl) |
| HK (1) | HK1025737A1 (pl) |
| HU (1) | HU226612B1 (pl) |
| IL (2) | IL119989A0 (pl) |
| NZ (1) | NZ336690A (pl) |
| PL (1) | PL193300B1 (pl) |
| SK (1) | SK284029B6 (pl) |
| WO (1) | WO1998030227A1 (pl) |
| ZA (1) | ZA98214B (pl) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL141021A0 (en) | 1998-07-23 | 2002-02-10 | Yeda Res & Dev | Treatment of autoimmune conditions with copolymer 1 and related copolymers |
| AU766498B2 (en) * | 1998-07-23 | 2003-10-16 | President And Fellows Of Harvard College, The | Synthetic peptides and methods of use for autoimmune disease therapies |
| ES2527760T3 (es) | 1998-07-23 | 2015-01-29 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Tratamiento de enfermedad de Crohn con copolímero 1 y polipéptidos |
| US6800287B2 (en) | 1998-09-25 | 2004-10-05 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Copolymer 1 related polypeptides for use as molecular weight markers and for therapeutic use |
| US6872739B1 (en) * | 1999-06-04 | 2005-03-29 | Vereniging Voor Christelijk Wetenshappelikjk Onderwijs | Use of riluzole for the treatment of multiple sclerosis |
| DE60017733T2 (de) * | 1999-06-04 | 2006-01-12 | Vereniging Voor Christelijk Wetenschappelijk Onderwijs | Verwendung von riluzol zur behandlung multipler sklerose |
| US7022663B2 (en) | 2000-02-18 | 2006-04-04 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Oral, nasal and pulmonary dosage formulations of copolymer 1 |
| CN1221281C (zh) * | 2000-02-18 | 2005-10-05 | 耶达研究与开发有限公司 | 共聚物1的口服、鼻部和肺部用剂型 |
| AU7528001A (en) * | 2000-06-05 | 2001-12-17 | Teva Pharma | The use of glatiramer acetate (copolymer 1) in the treatment of central nervous system disorders |
| US20020077278A1 (en) | 2000-06-05 | 2002-06-20 | Yong V. Wee | Use of glatiramer acetate (copolymer 1) in the treatment of central nervous system disorders |
| WO2002076503A1 (en) | 2000-06-20 | 2002-10-03 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Treatment of central nervous system diseases by antibodies against glatiramer acetate |
| CA2469393C (en) | 2001-12-04 | 2010-05-25 | Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. | Processes for the measurement of the potency of glatiramer acetate |
| MXPA04008267A (es) | 2002-02-25 | 2004-11-10 | Elan Pharm Inc | Administracion de agentes para el tratamiento de la inflamacion. |
| MXPA05007843A (es) * | 2003-01-24 | 2005-10-18 | Elan Pharm Inc | Composicion y tratamiento de enfermedades desmielinizantes y paralisis por administracion de agentes de remielinizantes. |
| US7560100B2 (en) | 2004-09-09 | 2009-07-14 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Mixtures of polypeptides, compositions containing and processes for preparing same, for treating neurodegenerative diseases |
| DK2949335T3 (en) | 2009-08-20 | 2017-07-31 | Yeda Res & Dev | LOW FREQUENT GLATIRAMER ACETATE THERAPY |
| USRE49251E1 (en) | 2010-01-04 | 2022-10-18 | Mapi Pharma Ltd. | Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof |
| US8759302B2 (en) | 2010-03-16 | 2014-06-24 | Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. | Methods of treating a subject afflicted with an autoimmune disease using predictive biomarkers of clinical response to glatiramer acetate therapy in multiple sclerosis |
| US8709433B2 (en) | 2010-10-11 | 2014-04-29 | Teva Pharmaceutical Industries Ltd. | Cytokine biomarkers as predictive biomarkers of clinical response for Glatiramer acetate |
| TW201326399A (zh) | 2011-10-10 | 2013-07-01 | Teva Pharma | 用於預測對格拉替雷（ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ）醋酸鹽之臨床反應之單核苷酸多型性之判定 |
| EP2906719A4 (en) | 2012-10-10 | 2016-11-09 | Teva Pharma | PREDICTIVE BIOMARKER FOR CLINICAL REACTION FOR GLATIRAMERACETATE |
| UY35790A (es) | 2013-10-21 | 2015-05-29 | Teva Pharma | Marcadores genéticos que predicen la respuesta al acetato de glatiramer |
| CN105884866B (zh) * | 2015-01-26 | 2021-04-20 | 漳州未名博欣生物医药有限公司 | 格拉替雷的化学合成方法 |
| US9155775B1 (en) | 2015-01-28 | 2015-10-13 | Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. | Process for manufacturing glatiramer acetate product |
| CN112649537B (zh) * | 2015-04-28 | 2024-03-29 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 多肽混合物高效液相色谱分析方法 |
| US11167003B2 (en) | 2017-03-26 | 2021-11-09 | Mapi Pharma Ltd. | Methods for suppressing or alleviating primary or secondary progressive multiple sclerosis (PPMS or SPMS) using sustained release glatiramer depot systems |
| EP3645029B1 (en) | 2017-06-26 | 2023-01-18 | Institut Pasteur | Treatments to eliminate hiv reservoirs and reduce viral load |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5800808A (en) * | 1994-05-24 | 1998-09-01 | Veda Research And Development Co., Ltd. | Copolymer-1 improvements in compositions of copolymers |
| US5719296A (en) * | 1995-10-30 | 1998-02-17 | Merck & Co., Inc. | Pseudopeptide lactam inhibitors of peptide binding to MHC class II proteins |
-
1997
- 1997-01-10 IL IL11998997A patent/IL119989A0/xx unknown
-
1998
- 1998-01-12 JP JP53110898A patent/JP4216342B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-12 HU HU0001917A patent/HU226612B1/hu unknown
- 1998-01-12 ZA ZA9800214A patent/ZA98214B/xx unknown
- 1998-01-12 CZ CZ0243799A patent/CZ297983B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 CN CNB988031221A patent/CN100528222C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-12 NZ NZ336690A patent/NZ336690A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 PL PL334566A patent/PL193300B1/pl unknown
- 1998-01-12 AT AT98901745T patent/ATE356608T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 KR KR1019997006278A patent/KR20000070058A/ko active Search and Examination
- 1998-01-12 WO PCT/US1998/000375 patent/WO1998030227A1/en active IP Right Grant
- 1998-01-12 EA EA199900621A patent/EA003128B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 DE DE69837324T patent/DE69837324T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-12 BR BRPI9807076A patent/BRPI9807076B8/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 AU AU58195/98A patent/AU737287B2/en not_active Expired
- 1998-01-12 EP EP98901745A patent/EP0975351B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-12 SK SK931-99A patent/SK284029B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 CA CA2277365A patent/CA2277365C/en not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-07-06 IL IL130820A patent/IL130820A/en not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-08-01 HK HK00104810A patent/HK1025737A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA98214B (en) | 1999-08-11 |
| EP0975351B1 (en) | 2007-03-14 |
| DE69837324D1 (de) | 2007-04-26 |
| ATE356608T1 (de) | 2007-04-15 |
| JP4216342B2 (ja) | 2009-01-28 |
| JP2001511121A (ja) | 2001-08-07 |
| IL130820A (en) | 2007-03-08 |
| PL334566A1 (en) | 2000-03-13 |
| SK93199A3 (en) | 2000-11-07 |
| HU226612B1 (en) | 2009-04-28 |
| IL119989A0 (en) | 1997-04-15 |
| NZ336690A (en) | 2001-05-25 |
| WO1998030227A1 (en) | 1998-07-16 |
| EP0975351A4 (en) | 2002-05-15 |
| KR20000070058A (ko) | 2000-11-25 |
| CZ243799A3 (cs) | 2000-06-14 |
| BR9807076B1 (pt) | 2013-10-29 |
| AU5819598A (en) | 1998-08-03 |
| CN1249690A (zh) | 2000-04-05 |
| EA003128B1 (ru) | 2003-02-27 |
| CZ297983B6 (cs) | 2007-05-16 |
| HUP0001917A3 (en) | 2001-12-28 |
| HUP0001917A2 (hu) | 2000-10-28 |
| CA2277365C (en) | 2011-04-12 |
| AU737287B2 (en) | 2001-08-16 |
| CN100528222C (zh) | 2009-08-19 |
| DE69837324T2 (de) | 2007-11-29 |
| EA199900621A1 (ru) | 2000-02-28 |
| BRPI9807076B8 (pt) | 2021-05-25 |
| SK284029B6 (sk) | 2004-08-03 |
| HK1025737A1 (en) | 2000-11-24 |
| BR9807076A (pt) | 2000-05-02 |
| CA2277365A1 (en) | 1998-07-16 |
| EP0975351A1 (en) | 2000-02-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6214791B1 (en) | Treatment of multiple sclerosis through ingestion or inhalation of copolymer-1 | |
| PL193300B1 (pl) | Zastosowanie octanu glatirameru oraz kompozycja farmaceutyczna | |
| WO1998030227A9 (en) | Treatment of multiple sclerosis through ingestion or inhalation of copolymer-1 | |
| JP3712260B2 (ja) | 自己免疫疾患のバイスタンダー抑制 | |
| AU742970B2 (en) | Method of suppressing beta-amyloid-related changes in Alzheimer's disease | |
| JP2548056B2 (ja) | Ｉ型糖尿病に係る自己免疫疾患の抑制および予防用製剤 | |
| Ridge et al. | Suppression of experimental allergic encephalomyelitis by mitoxantrone | |
| EP0359783B2 (en) | Treatment of autoimmune diseases by oral administration of autoantigens | |
| EP1592384B1 (en) | Cop 1 for treatment of inflammatory bowel diseases | |
| WO2005014041A2 (en) | Use of an amyloid beta dna vaccine for the treatment and/or prevention of amyloid diseases | |
| JP2527749B2 (ja) | 移植拒否反応抑制または自己免疫疾患治療用薬学的組成物 | |
| EP2301569B1 (en) | Vaccine and method for treatment of neurodegenerative diseases | |
| JP2002515853A (ja) | 低投与量の▲ｉｉ▼型コラーゲンによる慢性関節リウマチの治療 | |
| KR0159046B1 (ko) | 포유류의 자기면역 포도막망막염의 치료 또는 예방방법 | |
| US20040156860A1 (en) | T-cell vaccination for the treatment of multiple sclerosis | |
| KR100435040B1 (ko) | 티세포매개성질환들의치료를위한제제들및방법들 | |
| Sela | Immunomodulatory vaccines against autoimmune diseases | |
| MXPA99006457A (en) | Treatment of multiple sclerosisthrough ingestion or inhalation of copolymer-1 | |
| EP4353234A1 (en) | Use of pyrrolopyrimidine compound | |
| US6068844A (en) | Increased resistance to stroke by developing immunologic tolerance to myelin or components thereof | |
| US20010038840A1 (en) | Method for the treatment of fibrosis | |
| AU781126B2 (en) | Method of suppressing beta-amyloid-related changes in Alzheimer's disease | |
| Sakai et al. | Suppressive effects of a novel compound on interphotoreceptor retinoid-binding protein-induced experimental autoimmune uveoretinitis in rats |