HU226612B1 - Use of glatiramer acetate for production of pharmaceutical composition to the treatment of multiple sclerosis - Google Patents
Use of glatiramer acetate for production of pharmaceutical composition to the treatment of multiple sclerosis Download PDFInfo
- Publication number
- HU226612B1 HU226612B1 HU0001917A HUP0001917A HU226612B1 HU 226612 B1 HU226612 B1 HU 226612B1 HU 0001917 A HU0001917 A HU 0001917A HU P0001917 A HUP0001917 A HU P0001917A HU 226612 B1 HU226612 B1 HU 226612B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- copolymer
- cells
- eae
- animals
- days
- Prior art date
Links
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 15
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 title claims description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 11
- 108010072051 Glatiramer Acetate Proteins 0.000 title claims description 5
- FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N acetic acid;(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-aminopentanedioic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound CC(O)=O.C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N 0.000 title claims description 4
- 229960003776 glatiramer acetate Drugs 0.000 title claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 229920003136 Eudragit® L polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 4
- 229920003137 Eudragit® S polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 claims description 3
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 46
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 44
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 35
- 101710119334 Ceramide transfer protein Proteins 0.000 description 23
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 23
- 102100034166 Vasculin Human genes 0.000 description 23
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 21
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 16
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 13
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 description 12
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 11
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 11
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 8
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 8
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 7
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 7
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 6
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 6
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 6
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 6
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 5
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 4
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 4
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 4
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 4
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 4
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 4
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 3
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 3
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 230000020192 tolerance induction in gut-associated lymphoid tissue Effects 0.000 description 3
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 101001018362 Bos taurus Myelin basic protein Proteins 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 102000002233 Myelin-Oligodendrocyte Glycoprotein Human genes 0.000 description 2
- 108010000123 Myelin-Oligodendrocyte Glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 159000000021 acetate salts Chemical class 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 2
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910000042 hydrogen bromide Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ATCFYQUZTYQTJN-AXDSSHIGSA-N (2s)-2-amino-4-benzylpentanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ATCFYQUZTYQTJN-AXDSSHIGSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010001541 Akinesia Diseases 0.000 description 1
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 206010009696 Clumsiness Diseases 0.000 description 1
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 206010012373 Depressed level of consciousness Diseases 0.000 description 1
- 206010013642 Drooling Diseases 0.000 description 1
- 239000004097 EU approved flavor enhancer Substances 0.000 description 1
- 229920003138 Eudragit® L 30 D-55 Polymers 0.000 description 1
- 229920003134 Eudragit® polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000000729 Fisher's exact test Methods 0.000 description 1
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000878602 Homo sapiens Immunoglobulin alpha Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102100038005 Immunoglobulin alpha Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 206010021703 Indifference Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010005714 Interferon beta-1b Proteins 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 108700028031 Myelin Basic Proteins 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241001282135 Poromitra oscitans Species 0.000 description 1
- 102000016202 Proteolipids Human genes 0.000 description 1
- 108010010974 Proteolipids Proteins 0.000 description 1
- 101000874172 Rattus norvegicus Succinate dehydrogenase [ubiquinone] iron-sulfur subunit, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 208000008630 Sialorrhea Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 206010048232 Yawning Diseases 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010079872 activity regulated cytoskeletal-associated protein Proteins 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 230000000599 auto-anti-genic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 229940038717 copaxone Drugs 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- GDCRSXZBSIRSFR-UHFFFAOYSA-N ethyl prop-2-enoate;2-methylprop-2-enoic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O.CCOC(=O)C=C GDCRSXZBSIRSFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000019264 food flavour enhancer Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229960003161 interferon beta-1b Drugs 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 238000009522 phase III clinical trial Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 210000001747 pupil Anatomy 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000002512 suppressor factor Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/02—Peptides of undefined number of amino acids; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Neurology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Treatments Of Macromolecular Shaped Articles (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Description
A találmány sclerosis multiplex kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmény előállítására vonatkozik az alábbiakban meghatározott kopolimer-1 felhasználásával. A találmány tárgyát képezi a kopolimer-1-et tartalmazó, sclerosis multiplex kezelésére alkalmas gyógyászati készítmény is, amely orális bevételre szánt alakban van.
A kopolimer-1, amely glatiramer-acetátként is ismert, és Copaxone® kereskedelmi néven van forgalomban, L-glutaminsavat, L-alanint, L-tirozint és L-lizint tartalmazó polipeptidek acetátsóiból áll. Az aminosavak átlagos móltörtje rendre 0,141; 0,427; 0,095 és 0,338, és a kopolimer-1 átlagos molekulatömege 4700 és 11 000 dalton közötti. Ez nem autoantigén, amit azzal szemléltettek, hogy különböző fajokban visszaszorítja a kísérletes allergiás agyvelő- és gerincvelő-gyulladást (encephalomyelitist, EAE-t), amelyet különféle encephalitogénekkel, többek között egér-gerincagyhomogenizátummal (MSCH) lehet indukálni, amely anyag az összes mielin antigént, így a mielin alapfehérjét (MBP-t) [Sela M. et al., Bull. Inst. Pasteur (1990) 88:303-314], proteolipid fehérjét (PLP) [Teitelbaum D. et al., J. Neuroimmunol. (1996) 64:209-217] és mielin oligodendrocita glikoproteint (MOG) [BenNun A. et al., J. Neurol. (1996) 243 (Suppl. 1) S14-S22] magában foglalja. Az EAE a sclerosis multiplex elfogadott modellje.
A kopolimer-1-ről kimutatták, hogy szubkután, intraperitoneálisan, intravénásán vagy intramuszkulárisan injektálva hatásos [D. Teitelbaum et al., Eur. J. Immunoi. (1971) 1:242-248; D. Teitelbaum et al., Eur. J. Immunoi. (1973) 3:273-279],
A klinikai vizsgálatok III fázisában azt találták, hogy a kopolimer-1 napi szubkután injekciója lelassította a gátoltság előrehaladását, és csökkentette a visszaesés sebességét az elkeserítően visszatérő sclerosis multiplexbe [K. P. Johnson, Neurology (1995) 1:65-70]. A kopolimer-1 terápia jelenleg a napi szubkután adagolásra van korlátozva.
Jelenleg minden speciálisan elismert sclerosis multiplex kezelés esetében a beteg a hatóanyagot tartalmazó injekciót magának adja be. Gyakran figyeltek meg az injekció helyén problémákat, többek között irritációt, hiperérzékenységet, gyulladást, fájdalmat és még nekrózist is (a legalább egy interforn β 1-B kezelés esetében), valamint a betegek alacsony szintű együttműködését. Ezért kívánatos az adagolásnak egy alternatív módja.
Az EP 359 783 számú európai szabadalmi leírásban ismertetettek szerint autoimmun betegségek kezelésére autoantigéneket orálisan adagolnak. Leírják az MBP orális adagolását sclerosis multiplex kezelésére. Egy autoantigén orális adagolását „orális toleranciá”nak nevezték el.
A WO 91/12816, a WO 91/08760 és a WO 92/06704 számú nemzetközi közzétételi iratokban más autoimmun betegségek kezelését írják le az „orális tolerancia” módszerrel, különféle autoantigének alkalmazásával. Azonban ezen irodalmi helyek egyikén sem ismertetik a sclerosis multiplex kezelését a nem autoantigén kopolimer-1 orális adagolásával.
Ezért a találmány egyik tárgya a sclerosis multiplex kezelésére alkalmas, kopolimer-1-et tartalmazó gyógyszerkészítmény, amelyet bevétel útján adagolunk.
Az 1. és 2. ábra a kopolimer-1-nek a tengerimalac mielin alapfehérjére adott immunválaszára gyakorolt hatását patkányokban (1. ábra) és egerekben (2. ábra) mutatja, amint azt lépsejt-proliferáció segítségével meghatároztuk.
A 3. és 4. ábra a kopolimer-1-nek a citokinfelszabadulásra gyakorolt hatását mutatja.
Az 5. ábrán az EAE visszaszorítása látható egerekben, orálisan dagolt kopolimer-1-gyel. (SJL/JxBALB/c)F-| egereknek PBS-t (tele négyzet), 0,1 mg kopolimer-1-et (üres négyzet), 0,24 mg kopolimer-1-et (tele háromszög) vagy 0,5 mg kopolimer-1-et (üres háromszög) adagoltunk. Mindegyik dózist hét alkalommal, a -7., -5., -3., 0., 2., 4. és 6. napon adtuk be. Az EAE-t a 0. napon MSCH injekcióval váltottuk ki.
A 6. ábra a proliferációt és a kopolimer-1-gyei táplált patkányok lépéből származó T-sejtvonal általi citokinkiválasztást mutatja. A sejteket 50 pg/ml kopolimer-1 -et vagy 5 pg/ml konkavalin A-t (Con A) tartalmazó táptalajon tenyésztettük. A proliferációt és ezekre az antigénekre adott citokinkiválasztási válaszokat mértük.
A 7. ábra az EAE-nek a kopolimer-1-gyei táplált patkányok lépéből származó T-sejtvonallal való gátlását mutatja. Egy-egy patkányba 20x10® sejtet injektáltunk intraperitoneálisan három nappal a kopolimer-1-gyei történő stimulálás után, majd az EAE kiváltása következett.
A 8. ábra az EAE-nek a kopolimer-1-gyei táplált egerek lépéből származó T-sejtvonal általi gátlását mutatja. Egy-egy egérnek 15*10® sejtet injektáltunk intravénásán 3 nappal a kopolimer-1-gyei történő stimulálás után, majd az EAE kiváltása következett.
A 9. ábra a klinikai értékelésnél adott pontokat mutatja a kopolimer-1-es napok függvényében három rhesusmajomban az EAE-betegség kiváltása után.
A 10. ábra a klinikai értékelésnél adott pontokat mutatja a kopolimer-1-es kezelés napjainak függvényében hat rhesusmajomban, egy olyan kísérletben, ahol az enterális bevonatú és a bevonat nélküli gyógyászati dózisformákat hasonlítottuk össze. A (0) értékeket elválasztottuk az Y tengelyen, hogy az eredmény jobban látható legyen.
A fentieknek megfelelően a találmány tárgyát képezi a kopolimer-1 alkalmazása is, a sclerosis multiplex kezelésére használható gyógyászati készítmény előállítására. A gyógyszert bevétel útján adagoljuk.
HU 226 612 Β1
A találmány szerinti, bevétellel adagolható, a sclerosis multiplex kezelésére alkalmas gyógyászati készítmény gyógyászatilag elfogadható hordozót és a kopolimer-1 terápiásán hatásos mennyiségét tartalmazza.
Amint az előzőekben említettük, a kopolimer-1 az L-glutaminsavat, L-alanint, L-tirozint és L-lizint tartalmazó polipeptidek acetátsóiból áll. Az aminosavak átlagos móltörtjei rendre 0,141, 0,427, 0,095 és 0,338, és a kopolimer-1 átlagos molekulatömege 4700 és 11 000 dalton közötti.
A találmány azon a megfigyelésen alapul, hogy a kopolimer-1 orális adagolása hatásosan visszaszorítja az EAE-t, és ezért terápiás értékkel bír a sclerosis multiplex kezelése szempontjából.
Feltételezésünk szerint a kopolimer-1 a nyálkahártya-bevonatban azokkal a limfoid szövetekkel kerül érintkezésbe, amelyekről úgy tartják, hogy az immunrendszer érzékenyítésének elsődleges forrásai. Ezek a nyálkahártya-bevonatok az üregekben, a légcsőben, a hörgőjáratokban (ahol azok BALT-ként vagy hörgőhöz kapcsolódó limfoid szövetekként ismertek) és a gasztrointesztinális bevonatokban (amelyek GALT-ként vagy bélhez kapcsolódó limfoid szövetekként ismertek) vannak. Ily módon a kopolimer-1 adagolása olyan módszereket foglal magában, ahol a kopolimer-1-et a testbe bevétel útján juttatjuk. Például a kopolimer-1 szájon át történő bevétellel, gyomorszondán át vihető be a szervezetbe.
A találmány egyik megvalósítási módjában a kopolimer-1-et orálisan 0,1 és 1000 mg/nap közötti mennyiségben adagoljuk, ez a mennyiség egyszeres vagy többszörös dózisok formájában adható be. A szakember számára érthető, hogy a terápiásán hatásos dózis a beteg korának, nemének és fizikai állapotának, valamint más párhuzamosan végzett kezeléseknek a függvénye. Az optimális terápiásán hatásos dózis meghatározása a szakember feladata.
A kopolimer-1 az orális adagolás során más élelmiszerformákkal keverhető, és szilárd, félszilárd, szuszpenzió vagy emulzió formájában fogyasztható; gyógyászatilag elfogadható hordozókkal, többek között vízzel, szuszpendálószerekkel, emulgeálószerekkel, ízfokozókkal és hasonlókkal keverhető. Az egyik megvalósítási módnak megfelelően az orális készítmény enterális bevonattal van ellátva. Az enterális bevonatok alkalmazása a szakterületen jól ismert. Például K. Lehman, Acrylic Coatings in Controlled Release Tablet Manufacturer, Manufacturing Chemist and Aerosol News p. 39 (June 1973) és K. Lehman, Programmed Drug Release From Órai Program Forms; Pharma Int. vol. ISS 3, 1971, p. 34-41 irodalmi helyeken olyan enterális bevonatokat ismertetnek, mint az Eudragit S és az Eudragit L. A Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd ed., szintén ismerteti az Eudragit S és Eudragit L alkalmazásait. Egy Eudragit, amely a jelen találmányban használható, az L30D55.
A kopolimer-1 a szakterületen ismert eljárásokkal, például a 3 849 550 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban ismertetett módon előállítható, ahol a tirozin, alanin, γ-benzil-glutamát és e-N-(trifluor-acetilj-lizin N-karboxianhidridjeit környezeti hőmérsékleten vízmentes dioxánban dietil-amin mint iniciátor jelenlétében polimerizálják. A glutaminsav γ-karboxilcsoportját jégecetben hidrogén-bromiddal eltávolítják, majd a lizinmaradékokról 1 M piperidinnel a trifluor-acetil-csoportokat lehasítják.
Amint azt a PCT/WO95/31990 számú nemzetközi közzétételi iratban ismertetik, a kívánt körülbelül 7±2 kilodalton átlagos molekulatömegű kopolimer-1-et előnyösen úgy lehet előállítani, hogy a védett kopolimer1-et hidrogén-bromiddal reagáltatják, így a trifluoracetil-kopolimer-1-et kapják, és a trifluor-acetilkopolimer-1-et vizes piperidinoldattal kezelik, amikor is a kopolimer-1 képződik, amelyet ezt követően tisztítanak, így a kívánt átlagos molekulatömegű kopolimer1-et kapják.
A találmányt a továbbiakban példák segítségével írjuk le. Amennyiben másképpen nem határozzuk meg, minden rész, százalék és hasonló tömegre viszonyítva értendő.
1. példa
Antigének - A kopolimer-1-et, amelyet a PCT/WO95/31990 számú nemzetközi közzétételi iratban ismertetett módon állítottak elő, a Teva Pharmaceutical Industries Ltd. cégtől (Izrael) kaptuk. A GPBP-t tengerimalac-gerincagyból állítottuk elő savas extrakcióval, majd ammónium-szulfátos kicsapással, ahogy azt Hirshfeld H. és munkatársai a Febs. Lett. (1970) irodalmi helyen leírták.
Állatok - (PL/JxSJL/J)F1 8-10 hetes nőstény egereket a Jackson Laboratoriestól (Bar Harbor, ME) kaptunk. A 8-12 hetes nőstény Lewis patkányok a HarlanOlac cégtől (Bicester, G. B.) származtak.
EAE kiváltása és vizsgálata - Az egerekbe 200 gg GPBP-t azonos térfogatú, 4 mg/ml Mycobacterium tuberculosist (H37Ra) tartalmazó teljes Freund-adjuvánsban (CFA) emulgeálva (Difco Láb, Detroit, Mich.) injektáltunk. Az emulzió összesen 0,1 ml térfogatát a négy talpba injektáltuk. Közvetlen ezután és 24 órával később 250 ng/egér pertussis toxint (Sigma) adtunk be intravénás injekció formájában.
A patkányokat 25 gg GPBP-vel immunizáltuk, amely azonos térfogatú, 4 mg/ml H37Ra-t tartalmazó CFA-ban volt emulgeálva. Az emulziót összesen 0,1 ml térfogatban a két hátsó talpba injektáltuk.
Az állatokon a kiváltást követő 10. naptól kezdve naponta vizsgáltuk a betegség tüneteinek megjelenését. Az EAE-t a következő skála szerint értékeltük: 0 nincs betegség, 1 - ernyedt farok, 2 - hátsó láb paralízise, 3 - mind a négy láb paralízise, 4 - haldokló állapot, 5 - halál.
Orális tolerancia indukálása - Az egereknek 250 gg GPBP-t vagy kopolimer-1-et adtunk foszfáttal puffereit sóoldatban (PBS) oldva a -7., -5., -3., 0., 2., 4. és 6. napon gyomorszondával egy 18-as méretű rozsdamentes acél táplálócső segítségével (Thomas). Az EAE-t a 0. napon indukáltuk.
A patkányoknak 1 mg GPBP-t vagy kopolimer-1-et adtunk PBS-ben oldva, gyomorszonda segítségével,
HU 226 612 Β1 amelyhez steril táplálócsövet használtunk (Unó Plast, Denmark). A patkányokat 5 alkalommal tápláltuk (az összdózis 5 mg) a betegség kiváltása előtt 2-3 napos időközönként. Az EAE-t két nappal az utolsó táplálás után indukáltuk. A kontrollegereket és -patkányokat hasonló módon PBS-sel tápláltuk.
A proliferáció vizsgálata - A lépsejtek proliferációs válaszát a fenti módon végzett EAE-indukálást követően 10-11 nappal vizsgáltuk. Minden csoportból 3 állattól gyűjtöttünk sejteket, és azokat háromszoros ismétlésben (5*105 egérsejtet és 2*105 patkánysejtet) mikrotiterlemezeken különböző antigénkoncentrációk (GPBP) jelenlétében 0,2 ml végtérfogatban tenyésztettük. A mikrotiterlemezek a Sigma Biochemicals (St. Louis, Missouri) cégtől beszerezhető RPMI 1640 táptalajt tartalmaztak, amely 1 % autológ szérummal volt kiegészítve. 72 órán át végzett inkubálás után a sejteket 1 pCi {3H}-timidinnel 18 órán át rázattuk, majd szűrőpapírokra gyűjtöttük, és a radioaktivitást számláltuk.
Citokinkiválasztási vizsgálat - Minden csoportból 3 egérből a lépet az EAE kiváltását követő 10-11 nap eltelte után eltávolítottuk és egyesítettük. A sejteket (5*106/ml) kétszeres ismétlésben 24 mérőhelyes lemezen 10% FCS-sel (fetális marhaszérummal) kiegészített RPMI 1640 táptalajban antigén (GPBP 100 Fg/ml) jelenlétében vagy távollétében tenyésztettük. A felülúszókat 24-40 órás tenyésztés után összegyűjtöttük. Az IL—2, IFN-γ, IL—4, IL—6 és IL—10 meghatározását kvantitatív ELISA eljárással végeztük, amelyhez a megfelelő citokinokra specifikus páros mABS-t (Pharmingen, La Jolla, CA) használtuk a gyártó útmutatásai szerint.
Eredmények
Az orálisan adagolt kopolimer-1 hatékonyságát az EAE klinikai fellépésének megelőzésében Lewis patkányokban a GPBP hatékonyságához hasonlítottuk, amikor a GPBP-vel indukált orális szuppresszió korábban leírt körülményei között vizsgáltuk [P. J. Higgins & H. L. Weiner, J. Immunoi. (1988) 140,440-445], Az eredményeket az 1. táblázatban foglaltuk össze, amely azt mutatja, hogy a kopolimer-1 hatásosabb volt a GPBPnél, és szignifikánsan csökkentette mind az EAE fellépését (54% gátlás), mind a súlyosságát (57%-os gátlás) a PBS-sel táplált, kontrollként szolgáló patkányokhoz viszonyítva.
1. táblázat
Az EAE visszaszorítása patkányokban orálisan adagolt kopolimer-1-gyei
| Beadott antigén | Előfordulás | A maximális pontok átlagatstandard hiba | A fellépés napjának középértéke |
| PBS (kontroll) | 27/28 (96%) | 1,8±0,5 | 11,9 |
| GPBP | 10/17 (95%) (p=0,0026) | 0,9±0,5 | 11,4 |
| Beadott antigén | Előfordulás | A maximális pontok átlaga±standard hiba | A fellépés napjának középértéke |
| Kopolimer-1 | 13/28 (46%) (p=0,00005) | 0,78±0,45 | 12,6 |
Minden számadat 3-5 független kísérlet kumulatív eredménye. A p érték a kontrollcsoporttól való eltérés statisztikus szignifikanciáját jelenti (Fisher exakt teszt). A maximális pontszám középértékét az adott csoportra számítottuk.
Az antigén betáplálásának hatása a GPBP-re adott immunválaszra - A kopolimer-1 és GPBP orális adagolásának a betegséget kiváltó antigén-GPBP-re adott immunválaszokra gyakorolt hatását egerekben és patkányokban vizsgáltuk. Az eredményeket az 1. ábrán foglaltuk össze, amely azt mutatja, hogy mindegyik orálisan adagolt vegyület (a kopolimer-1 vagy GPBP) esetében csökkent a proliferáció a GPBP-vel stimulált patkány-lépsejtszuszpenzióban (a 2. ábra hasonló eredményeket mutat egerekre vonatkozóan). Amint látható, a kopolimer-1 orális adagolása a GPBP-re adott proliferatív válaszok szinte teljes gátlását eredményezte ebben a két fajban. Mind a két fajban a kopolimer-1 a GPBP-nél hatékonyabb volt a GPBP-re adott válasz gátlása tekintetében.
A citokinszinteket egérből származó lépsejttenyészetek felülúszóiban mértük (3. és 4. ábra). A kontrollegerek, amelyeket PBS-sel tápláltunk, a GPBP-re válaszul IL-2-t, IFN-y-t és IL-6-ot (nem látszik) választottak ki. A kopolimer-1-gyei vagy GPBP-vel táplált egerekben a Th1 gyulladás előtti citokinek, az IL—2 és IFN-γ mennyisége, amely a GPBP-vel való stimulálásra válaszul termelődött, kisebb volt, mint a kontrollcsoportokban, mivel a kopolimer-1 hatékonyabb szuppresszáns. IL—4-et és IL-10-et egyik kezelt csoportban sem mutattunk ki.
Az eredmények azt szemléltetik, hogy a kopolimer-1 orálisan adagolva hatékonyan szorítja vissza az EAE-t. Az orálisan adagolt kopolimer-1 klinikailag védő hatása a GPBP-re adott T-sejt-immunválaszok leszabáiyozásával kapcsolatos, mint a proliferáció és a gyulladásos citokinek (IL—2 és IFN-γ) felszabadulása.
2. példa
Az EAE orálisan adagolt kopolimer-1 által történő visszaszorításával kapcsolatban további vizsgálatokat végeztünk patkányokban és egerekben. Ezek a vizsgálatok az egyes fajok kezelésére alkalmas optimális dózist állapították meg. Hogy megértsük az EAE kopolimer-1 által történő orális szuppressziójának a háttérmechanizmusát, egy kopolimer-1 specifikus T-sejtvonalat izoláltunk kopolimer-1-gyei táplált állatok lépéből. A sejtvonalak in vitro reaktivitását és a betegség indukálására kifejtett in vivő hatását vizsgáltuk.
Anyagok és módszerek
Kopolimer-1 specifikus sejtvonalak elkülönítése Lewis patkányoknak öt alkalommal 1 mg kopolimer4
HU 226 612 Β1
1-et és (SJL/J*BKLB/c)F.| egereknek 7 alkalommal 250 gg kopolimer-1-et adtunk 2-3 napos időközönként. Az utolsó beadást követően 4-12 nappal az állatokat megöltük, és a lépüket eltávolítottuk.
állat lépsejtjeit egyesítettük és 50*10®/lemez mennyiségben 500 gg kopolimer-1-gyel inkubáltuk 1% autológ szérumot tartalmazó táptalajon, 4 napon át. Minden 14-21 napban a sejteket újra stimuláltuk 3 napon át genetikailag azonos besugárzott (3000 rád) patkánytimocitákon (100*106/lemez) vagy egérsplenocitákon (50* 10®/lemez) levő kopolimer-1-gyel (500 gg). A stimulálás után a sejteket Con A-val aktivált normális egérlépsejtek 10%-os felülúszójában mint T-sejt növekedési faktor jelenlétében (TCGF) szaporítottuk.
Proliferációs vizsgálat - T-sejtvonalakat (1 *104 sejt) besugárzott (3000R) timocitákkal (rat - 1 *106) vagy splenocitákkal (egér - 5*105) és a megadott antigénekkel (10 gg kopolimer-1; 1 gg Con A) tenyésztettük mikrotiterlemezeken, 0,2 ml végtérfogatban. A 48 órás inkubálás után a tenyészeteket 3H-timidinnel rázattuk, és 6-12 órával később összegyűjtöttük.
Citokinvizsgálat - (0,5*106/ml) patkány T-sejtvonalakat besugárzott timocitákkal (10*10®) a feltüntetett antigénnel (50 gg kopolimer-1, 5 gg Con A) vagy anélkül inkubáltunk. A sejteket 24 órán át RPM11640 táptalajon, amely az IL-2, TNF-α, IL-4 és IL-10 mérésekhez 10% FCS-sel volt kiegészítve, és szérummentes táptalajon - DCCM-1 (Biological Industries, Kibbutz Beit Haemek, Izrael) 72 órán át tenyésztettük a TGF-β mérésekhez.
A citokinszintek mérését a felülúszókban kvantitatív ELISA eljárással végeztük, amelyhez a megfelelő citokinekre nézve specifikus monoklonális antitestpárokat használtunk.
EAE kiváltása - (SJL/xBALB/c)F1 egereknek mind a négy talpába 2 mg egér-gerincagyhomogenizátumot (MSCH) injektáltunk, amely 1 mg/ml H37Ra-t (Difco Láb Detroit, Mich) tartalmazó CFA-ban 1:1 arányban volt emulgeálva. Pertussis toxint (250 ng/egér, Sigma) két alkalommal injektáltunk intravénásán, egyszer közvetlenül utána, majd 48 órával később.
Eredmények
1. Dózis-válasz vizsgálat patkányokban és egerekben
A patkányoknak 5 alkalommal 0,5 mg vagy 2 mg kopolimer-1-et adtunk a kialakított előiratnak megfelelően (lásd fentebb az Anyagok és módszerek szakaszt), és azután EAE-t indukáltunk. Az eredményeket a 2. táblázatban foglaltuk össze, és ezek azt jelzik, hogy a leghatásosabb dózis az 1 mg kopolimer-1; a 0,5 mg és a 2 mg kopolimer-1 kevésbé volt hatásos az EAE visszaszorítása tekintetében.
(SJL/JxBALB/cJF! egereknek 7 alkalommal 0,1, 0,25 vagy 0,5 mg kopolimer-1-et adtunk a -7., -5., -3., 0., 2., 4. és 6. napon gyomorszondával. Az EAE-t a 0. napon MSCH injektálásával indukáltuk. Az eredményeket az 5. ábrán foglaltuk össze, amely azt mutatja, hogy a kopolimer-1 orális adagolása egerekben képes visszaszorítani a betegséget, és a leghatásosabb dózis a 0,1 mg kopolimer-1. A 0,25 mg kopolimer-1 kevésbé volt hatásos, és a 0,5 mg-os dózis teljesen hatástalan volt. Ily módon az eredmények mind a patkányokban, mind az egerekben azt mutatják, hogy az orális kopolimer-1-nek van egy optimális dózis-válasz görbéje, és a hatásos orális dózist meghaladó dózis nem hatékony az EAE visszaszorításában.
2. Vizsgálatok kopolimer-1 specifikus
Ts-vonalakkal, amelyek kopolimer-1-gyei táplált állatokban alakultak ki
Kopolimer-1-re specifikus T szuppresszor sejtvonalakat különítettünk el olyan patkányok és egerek (épéből, amelyeket kopolimer-1-gyei történő táplálással EAE-re nem reagálóvá tettünk. A patkányokból elkülönített ilyen vonal proliferációját és citokinkiválasztó válaszát a 6. ábra mutatja. Ez a vonal a kopolimer-1-re válaszul proliferálódott és IL-2-t, valamennyi IL-10-et és ΤΩΡβ-ί választott ki, de TNFa-t vagy IL-4-et nem. Ez a citokinprofil kompatibilis a Th3 típusú sejtekkel, amelyekről kimnutatták, hogy orális MBP-vel indukálhatok (Chen et al., Science 265, 1237,1994).
A kopolimer-1 specifikus vonalaknak az EAE-t megelőző képességét in vivő vizsgáltuk. Sejtvonalakat injektáltunk kopolimer-1-gyel történő in vivő stimulálás után 3 nappal (20*10® sejt/patkány ip. injektálva és 15*10® sejt/egér ív. injektálva). Az állatokban a sejtátvitel után azonnal EAE-t indukáltunk. Az eredmények a 7. és 8. ábrán láthatók, és azt mutatják, hogy a betegséget jelentősen gátolta a recipiens állatokban. Így mind a patkány, mind az egér kopolimer-1 T-sejtvonalak adaptívan átvitték a kopolimer-1 orális adagolásával indukált EAE-re való nem reagálást. Ezek a sejtek in vivő aktívan leszabályozták a patológiás immunválaszt.
2. táblázat
Orális kopolimer-1 dózis-válasz vizsgálata patkányokban
| Betáplált antigén | Előfordulás | A pontok középértéketstandard hiba | A fellépés középértéke | Visszaszorítás (%) |
| PBS (kontroll) | 10/11 | 1,32±1,64 | 13,1 | |
| Kopolimer-1 (0,5 mg) | 9/11 | 0,95±0,57 | 13,5 | 28 |
| Kopolimer-1 (1 mg) | 7/11 | 0,64±0,50 | 15,1 | 51 |
| Kopolimer-1 (2 mg) | 8/11 | 0,91 ±0,70 | 13,1 | 31 |
* Az értékelő pontok középértékével számolva
HU 226 612 Β1
Mindegyik előfordulási szám 2 külön kísérlet kumulatív eredménye. A maximális klinikai pontérték középértékét az egész csoportra számítottuk.
3. példa
A kopolimer-1 orális adagolásának az EAE indukálására gyakorolt hatását rhesusmajmokban vizsgáltuk.
Anyagok
A kopolimer-1-et a Teva Pharmaceutical Industries Ltd. cégtől kaptuk enterális bevonatú keményzselatinkapszula formájában, amely két dózist tartalmazott: 1 mg kopolimer-1 és 20 mg kopolimer-1. Mindegyik dózisszintet mannittal formulálták és Eudragit L30D55-tel vonták be. A placebo- és kontrollkapszulák 5 mg cukrot tartalmaztak.
Marha-MBP-t szereztünk be a Life Technologies, Grand Island, New York cégtől. Ez az anyag nagymértékben tisztított készítmény, amely egyetlen sávot ad 18,5 Kd-nál SDS-PAGE eljárást és Silver festést követően.
Adagolási előirat rhesusmajmot a következőképpen kezeltünk: egy majom szolgált kontrollként, ez placebokapszulákat kapott (amelyek csak 5 mg glükózt tartalmaztak). A második és a harmadik majom kopolimer-1-et tartalmazó kapszulákat kapott 1 mg/beadás és 20 mg/beadás dózisokban. Az állatok minden másnap kaptak kopolimer1-et összesen 10 alkalommal: 5 alkalommal a betegség indukálása előtt (immunizálás a 0. napon) és 5 alkalommal az immunizálás után.
A betegség kiváltása
A betegséget a 0. napon váltottuk ki 8 mg marhaMBP és 3 mg H37Ra M. tuberculosis FCA-ban a hátsó talpakba való intradermális injektálásával. Az összes injektált térfogat talpanként 0,1 és 0,15 ml között volt. Az állatokat az EAE fellépése szempontjából, különféle szérum és CSF immunológiai marker és gerincagy és koponya MRI-k segítségével figyeltük.
Klinikai értékelés
A tüneteket az alábbiak szerint értékeltük: 0, normális neurológiai viselkedés; 1, tömegvesztés, anorexia, ásítás, az ingerekre adott lassú válaszok, irritálhatóság vagy letargia; 2 enyhe neurológiai jelek, közömbösség, nyáladzás, ügyetlenség a lábak használatában, remegés, megváltozott hang és zavaros tekintet; 3, közepes neurológiai jelek, vakság (a pupillák nem reagálnak a fényre), akinézia, a láb gyengesége vagy bénulása; 4, súlyos neurológiai jelek, szemikóma, kóma, négy végtag bénulása; 5, halál.
Antigénnel indukált limfocita proliferáció
A heparinnal kezelt vérmintákat 1:1 arányban Hanks-féle kiegyenlített sóoldattal (BSS) hígítottuk, amely 5% hővel inaktivált fötális marhaszérumot (FCS) tartalmazott, és egy hipaque-ficol gradiensbe rétegeztük. A 2000 fordulatszám mellett 20 percig és szobahőmérsékleten végzett centrifugálással kinyertük a hígított plazmát, és a limfociták a fázishatáron gyűltek össze. Az elválasztott limfocitákat három alkalommal Hanks-féle BSS-5% FCS-oldatban mostuk, majd RPMI 1640 teljes táptalajban szuszpendáltuk, amely RPMI 1640 táptalajt, 10% FCS-t foglalt magában, és 1 %-ban a következő reagenseket tartalmazta: nem esszenciális aminosavak, nátrium-piruvát, L-glutamin, 2-merkaptoetanol és penicillin/sztreptomicin. A kinyert limfocitákat megszámoltuk és 2*106/ml végső koncentrációban szuszpendáltuk. A tenyészetek 100 pl sejtszuszpenziót és 100 μΙ MBP-t (20 μg/ÜΓeg), 100 μΙ kopolimer1-et (10 μg/üreg) vagy 100 μΙ Con A-t (1 μg/üreg) tartalmaztak kerek fenekű 96 mérőhelyes lemezekben. A tenyészeteket 37 °C-on 5% CO2 jelenlétében 6 napig tartottuk. A tenyésztés 5. napján mindegyik üreget 1 pCi 3H-timidinnel 16-18 órán át rázattuk. A 6. napon a tenyészeteket automata sejtgyűjtővel összegyűjtöttük, és folyadékszcintillációs eljárással megszámoltuk. A stimulációs indexeket az alábbiak szerint határoztuk meg:
kísérleti cpm - háttér cpm stimulációs index=háttér cpm
Klinikai eredmények
Egy állat sem mutatott klinikai tüneteket 24 napon át. A placebóval kezelt állatban (18374) a betegség a 25. napon kifejlődött, és az EAE súlyos volta miatt (a pontszám 4+ az 5 pontos skálán) az állatot meg kellett ölni a 28. napon. A nagy dózis kopolimer-1-gyei kezelt állat (18498), amely 20 mg kopolimer-1-et kapott, semmilyen szignifikáns klinikai tünetet nem mutatott a 60 napos megfigyelési időszak alatt. A kis kopolimer-1 dózissal kezelt állatnál (18497) a 25. napon minimális tünetek léptek fel, azonban a placebóval kezelt (18374) állattal ellentétben a 18497 állat esetében sokkal lassabban súlyosbodtak a klinikai tünetek, és 2-3+nál megálltak a 28. és 33. nap között. Ebben az időpontban a 18497 állat 20 mg-os kapszulát kapott 5 alkalommal, minden második nap, 10 napon át. Amint az a 9. ábrán látható, 3 nap alatt az állatnál jelentkező klinikai jelek 0-ra estek vissza, és így maradtak, amíg a két kopolimer-1-gyei táplált állatot, a 18497-est és a 18498-ast a 60. napon a szövettani vizsgálatok miatt meg kellett ölni.
Citometria
Az Epics C áramlásos citométert használtuk a perifériás vér limfociták (PBL) és a gerincfolyadék (CSF) vizsgálatára, amelyet a majmokból gyűjtöttünk. A vörösvérsejteket lizáltuk, és a megmaradó fehérvérsejteket (WBC) mostuk, majd standard eljárással, a megfelelő reagensekkel festettük. A 3. és 4. táblázat mutatja a PBL és CSF fehérvérsejtek festési adatait a három állatra vonatkozóan.
A megfestődött CD4+ sejtek száma valamivel nagyobb volt a kopolimer-1-gyei táplált 18497 és 18498 állatban, mint a kontroll 18374 állatban. Az olyan CD4+ sejtek száma, amelyek CD45RA-k is, növekedni
HU 226 612 Β1 látszik mind a kontrollállatban, mind a kis dózis kopolimer-1-gyel táplált 18497 állatban azon idő táján, amikor mindkét állat klinikai tüneteket mutatott [(+27)-(+34) nap között], de meglehetősen állandó maradt a nagy dózis kopolimer-1-gyel táplált 18498 állatban. 5 A CD89+CD45RA+ festődő sejtek száma folyamatosan csökkent a kontroll 18374 állatban és a kis dózis kopolimer-1-gyel táplált 18497 állatban, de valamelyest növekedett a nagy dózis kopolimer-1-gyel táplált 18498 állatban (új CD4+ sejtek termelődését mutatva). 10
A 18374 kontrollállat gerincfolyadékában talált sejtek száma folyamatosan növekedett a 20+ naptól a 28+ napig, amikor az állat kimúlt. Az analízis azt mutatta, hogy a CD4+ sejtek legtöbbje CD45RA- volt. A 18497 állat gerincfolyadékából gyűjtött sejtek száma túl kevés volt ahhoz, hogy megszámoljuk vagy megfessük. A 18498 állatból gyűjtött sejtek száma túl kevés volt ahhoz, hogy megszámoljuk vagy megfessük, kivéve a +27. napot. Az összegyűjtött CD4+ sejtek főként CD45Ra-sejtek voltak.
3. táblázat
MBP-vel immunizált rhesusmajmokból kapott PBL analízise
| Majom | A vizsgálat napja | CD4+ | CD8+ | Ráció | CD4+ CD45RA+ | CD8+ CD45RA+ |
| 18374 (kontroll) | (-1) | 24 | 47 | 0,51 | 15 | 45 |
| (+6) | 24 | 42 | 0,57 | 15 | 40 | |
| (+13) | 23 | 40 | 0,58 | 12 | 38 | |
| +20 | 22 | 45 | 0,49 | 10 | 45 | |
| +27 | 24 | 27 | 0,89 | 10 | 23 | |
| +28 | 24 | 24 | 1,0 | 10 | 21 | |
| 18497 (1 mg kopolimer-1 /dózis) | -1 | 35 | 36 | 0,97 | 21 | 33 |
| +6 | 39 | 31 | 1,26 | 24 | 29 | |
| +13 | 37 | 34 | 1,09 | 16 | 29 | |
| +20 | 41 | 32 | 1,28 | 18 | 25 | |
| +27 | 35 | 27 | 1,3 | 12 | 18 | |
| +34 | ND | ND | ND | ND | ND | |
| 18498 (20 mg kopolimer-1/dózis) | -1 | 37 | 40 | 0,93 | 23 | 32 |
| +6 | 37 | 42 | 0,88 | 23 | 32 | |
| +13 | 41 | 46 | 0,89 | 24 | 37 | |
| +20 | 27 | 57 | 0,47 | 12 | 41 | |
| +27 | 37 | 52 | 0,71 | 22 | 41 | |
| +34 | ND | ND | ND | ND | ND |
ND=nem határoztuk meg
4. táblázat
MBP-vel immunizált rhesusmajmokból kapott CSF analízise
| A vizsgálat napja | Cells μΙ | CD4+ | CD8+ | CD4+:CD8+ arány | CD4+ CD45RA+ | CD8+ CD45RA+ | |
| 18374 | 0 | ND | túl kevés sejt | ||||
| +14 | 28 | túl kevés sejt | |||||
| +20 | 100 | 61 | 18 | 2,18 | 2 | 4 | |
| +28 | 294 | 35 | 35 | 0,94 | 4 | 8 | |
| 18497 | 0 | túl kevés sejt | |||||
| +14 | túl kevés sejt | ||||||
| +20 | túl kevés sejt | ||||||
| +27 | túl kevés sejt | ||||||
| +34 | túl kevés sejt |
HU 226 612 Β1
4. táblázat (folytatás)
| A vizsgálat napja | Cells pl | CD4+ | CD8+ | CD4+:CD8+ arány | CD4+ CD45RA+ | CD8+ CD45RA+ | |
| 18498 | 0 | túl kevés sejt | |||||
| +14 | túl kevés sejt | ||||||
| +20 | túl kevés sejt | ||||||
| +27 | 29,7 | 47 | ND | 8 | ND | ||
| +34 | túl kevés sejt | ||||||
| +41 |
ND=nem határoztuk meg
Antigénspecifikus T-sejt szuppresszor faktor indukátor (Tcsfi) analízise
A három majom plazmájában levő MBP-specifikus Tsfi sejtek analízisének eredménye az 5. és 6. táblázatban látható. Az állatok egyike sem termelt MBP- 20 specifikus Tsfi-t az MBP-vel történő EAE-indukálás utáni +13. napig. A kontroll 18374 állat egyáltalán nem termelt Tsfi-t a +20. napig, és a termelés szintje ezt követően éppen hogy csak meghaladta a háttérértéket.
A kopolimer-1-gyei táplált 18497 és 18498 állatok folyamatosan, szignifikáns szinten termeltek Tsfi-t a +13. naptól a +41. napig, röviddel a vég előttig.
A 6. táblázat azokat a plazmamintákat mutatja, amelyek nem tartalmaztak Tsfi-t, nem reagáltak az antiTGF-β antitesttel. A plazma, amely MBP-kötődést mutatott a 3C9 antitesttel (anti-Tsfi), az anti-TGF-β antitesttel is reagált. A rekombináns humán TGF-β reagált az antiTGF-β antitesttel, de nem reagált a 3C9 antitesttel.
5. táblázat
MBP-specifikus T visszaszorító indukáló faktor3 vizsgálata
| Az állat száma | -13 | -1 | +6 | +13 | +20 | +27 | +34 | +41 |
| 18374 | nincs | nincs | ND | ND | 0,17 | 0,21 | kimúlt | |
| 18497 | nincs | nincs | nincs | 0,60 | 0,61 | 0,56 | 0,66 | 0,76 |
| 18498 | nincs | nincs | nincs | 0,32 | 0,32 | 0,42 | 0,40 | 0,40 |
a) Az adatok az 1:20 hígítású plazma 405 nm-en mutatott OD értékeit jelentik ND= nem határoztuk meg
6. táblázat
Az MBP-specifikus Tsfi és a TGF-β közötti kapcsolat kopolimer-1-gyei kezelt rhesusmajmok plazmájában
| Az állat száma | A vizsgálat napja | anti-Tsfi (3C9 Ab)a | anti-TGF-betab |
| 18374 | -1 | nincs | nincs |
| +27 | 0,21 | nincs | |
| 18497 | +6 | nincs | nincs |
| +13 | 0,60 | 0,71 | |
| +27 | 0,56 | 0,65 | |
| +41 | 0,76 | 0,85 | |
| 18498 | +6 | nincs | nincs |
| +13 | 0,32 | 0,35 | |
| +27 | 0,42 | 0,47 | |
| +41 | 0,40 | 0,45 | |
| r humán TGF-betac | - | 0,72 |
a) Annak az anyagnak az OD405 értéke, amely az MBP-hez kötődött (2,5 pg fehérje), és reagál az antihumán Tsfi (3C9) antitesttel.
b) Annak az anyagnak az OD405 értéke, amely az MBP-hez kötődött, és reagált az anti-humán TGF-β antitesttel.
c> Azt az üreget képviseli, amely 100 ng rekombináns humán TGF-p-val volt bevonva.
HU 226 612 Β1
4. példa
Hat majmot kezeltünk, és azután az analízist lényegében a 3. példában ismertetett előirat szerint végeztük.
A kontroll, placebóval táplált 18476 állat glükóztartalmú kapszulákat kapott. A 18586 állat 1 mg kopolimer-1-et kapott törött enterális bevonatú kapszulákban. A 18639 állat 20 mg kopolimer-1-et kapott törött enterális bevonatú kapszulákban. A 18724 állat 1 mg kopolimer-1-et kapott érintetlen enterális bevonatú kapszulákban. A 18810 állat 10 mg kopolimer-1-et kapott érintetlen enterális bevonatú kapszulákban. A 189962 állat 20 mg kopolimer1-et kapott érintetlen enterális bevonatú kapszulákban.
A táplálás menete, a betegség indukálása és követése lényegében a 3. példában leírt módon történt.
Eredmények
Amint azt a 10. ábrán láthatjuk, a 18746 kontrolimajomban a +21. naptól kezdődően akut betegség fejlődött ki, és az állat a betegség következtében a +23. napon elpusztult. A 18586 és 18639 állatok, amelyek a törött enterális bevonatú kapszulákat kapták, amely kapszulák a gyomorban kinyíltak (mindkét dózisban), nem volt védve a betegséggel szemben, és 2-3 napos betegség után elpusztult. Azok a majmok, amelyek a kopolimer-1-et ép enterális bevonatú kapszulákban kapták, teljesen védettek voltak a betegséggel szemben, és nem fejlődött ki az EAE a 60. napig, amikor a szövettani vizsgálatok miatt felboncolásra kerültek.
Claims (8)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. 0,1-1000 mg/nap szilárd alakban levő glatiramer-acetát alkalmazása enterális bevonattal ellátott, orálisan adagolható készítmény előállítására, a sclerosis multiplex kezelésére.
- 2. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az enterális bevonattal ellátott készítmény egy enterális bevonattal ellátott kapszula.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a mennyiség 1 mg, 10 mg vagy 20 mg.
- 4. Gyógyszerkészítmény, amely 0,1-1000 mg glatiramer-acetátot tartalmaz szilárd alakban, enterális bevonattal ellátott készítmény formájában.
- 5. A 4. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amelyben az enterális bevonattal ellátott készítmény egy enterális bevonattal ellátott kapszula.
- 6. A 4. vagy 5. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amelyben az enterális bevonat Eudragit S-t tartalmaz.
- 7. A 4. vagy 5. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amelyben az enterális bevonat Eudragit L-t tartalmaz.
- 8. A 7. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amelyben az Eudragit L L30D55.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL11998997A IL119989A0 (en) | 1997-01-10 | 1997-01-10 | Pharmaceutical compositions for oral treatment of multiple sclerosis |
| PCT/US1998/000375 WO1998030227A1 (en) | 1997-01-10 | 1998-01-12 | Treatment of multiple sclerosis through ingestion or inhalation of copolymer-1 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0001917A2 HUP0001917A2 (hu) | 2000-10-28 |
| HUP0001917A3 HUP0001917A3 (en) | 2001-12-28 |
| HU226612B1 true HU226612B1 (en) | 2009-04-28 |
Family
ID=11069682
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0001917A HU226612B1 (en) | 1997-01-10 | 1998-01-12 | Use of glatiramer acetate for production of pharmaceutical composition to the treatment of multiple sclerosis |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0975351B1 (hu) |
| JP (1) | JP4216342B2 (hu) |
| KR (1) | KR20000070058A (hu) |
| CN (1) | CN100528222C (hu) |
| AT (1) | ATE356608T1 (hu) |
| AU (1) | AU737287B2 (hu) |
| BR (1) | BRPI9807076B8 (hu) |
| CA (1) | CA2277365C (hu) |
| CZ (1) | CZ297983B6 (hu) |
| DE (1) | DE69837324T2 (hu) |
| EA (1) | EA003128B1 (hu) |
| HK (1) | HK1025737A1 (hu) |
| HU (1) | HU226612B1 (hu) |
| IL (2) | IL119989A0 (hu) |
| NZ (1) | NZ336690A (hu) |
| PL (1) | PL193300B1 (hu) |
| SK (1) | SK284029B6 (hu) |
| WO (1) | WO1998030227A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA98214B (hu) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL141021A0 (en) | 1998-07-23 | 2002-02-10 | Yeda Res & Dev | Treatment of autoimmune conditions with copolymer 1 and related copolymers |
| AU766498B2 (en) * | 1998-07-23 | 2003-10-16 | President And Fellows Of Harvard College, The | Synthetic peptides and methods of use for autoimmune disease therapies |
| ES2527760T3 (es) | 1998-07-23 | 2015-01-29 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Tratamiento de enfermedad de Crohn con copolímero 1 y polipéptidos |
| US6800287B2 (en) | 1998-09-25 | 2004-10-05 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Copolymer 1 related polypeptides for use as molecular weight markers and for therapeutic use |
| US6872739B1 (en) * | 1999-06-04 | 2005-03-29 | Vereniging Voor Christelijk Wetenshappelikjk Onderwijs | Use of riluzole for the treatment of multiple sclerosis |
| DE60017733T2 (de) * | 1999-06-04 | 2006-01-12 | Vereniging Voor Christelijk Wetenschappelijk Onderwijs | Verwendung von riluzol zur behandlung multipler sklerose |
| US7022663B2 (en) | 2000-02-18 | 2006-04-04 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Oral, nasal and pulmonary dosage formulations of copolymer 1 |
| CN1221281C (zh) * | 2000-02-18 | 2005-10-05 | 耶达研究与开发有限公司 | 共聚物1的口服、鼻部和肺部用剂型 |
| AU7528001A (en) * | 2000-06-05 | 2001-12-17 | Teva Pharma | The use of glatiramer acetate (copolymer 1) in the treatment of central nervous system disorders |
| US20020077278A1 (en) | 2000-06-05 | 2002-06-20 | Yong V. Wee | Use of glatiramer acetate (copolymer 1) in the treatment of central nervous system disorders |
| WO2002076503A1 (en) | 2000-06-20 | 2002-10-03 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Treatment of central nervous system diseases by antibodies against glatiramer acetate |
| CA2469393C (en) | 2001-12-04 | 2010-05-25 | Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. | Processes for the measurement of the potency of glatiramer acetate |
| MXPA04008267A (es) | 2002-02-25 | 2004-11-10 | Elan Pharm Inc | Administracion de agentes para el tratamiento de la inflamacion. |
| MXPA05007843A (es) * | 2003-01-24 | 2005-10-18 | Elan Pharm Inc | Composicion y tratamiento de enfermedades desmielinizantes y paralisis por administracion de agentes de remielinizantes. |
| US7560100B2 (en) | 2004-09-09 | 2009-07-14 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Mixtures of polypeptides, compositions containing and processes for preparing same, for treating neurodegenerative diseases |
| DK2949335T3 (en) | 2009-08-20 | 2017-07-31 | Yeda Res & Dev | LOW FREQUENT GLATIRAMER ACETATE THERAPY |
| USRE49251E1 (en) | 2010-01-04 | 2022-10-18 | Mapi Pharma Ltd. | Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof |
| US8759302B2 (en) | 2010-03-16 | 2014-06-24 | Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. | Methods of treating a subject afflicted with an autoimmune disease using predictive biomarkers of clinical response to glatiramer acetate therapy in multiple sclerosis |
| US8709433B2 (en) | 2010-10-11 | 2014-04-29 | Teva Pharmaceutical Industries Ltd. | Cytokine biomarkers as predictive biomarkers of clinical response for Glatiramer acetate |
| TW201326399A (zh) | 2011-10-10 | 2013-07-01 | Teva Pharma | 用於預測對格拉替雷（ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ）醋酸鹽之臨床反應之單核苷酸多型性之判定 |
| EP2906719A4 (en) | 2012-10-10 | 2016-11-09 | Teva Pharma | PREDICTIVE BIOMARKER FOR CLINICAL REACTION FOR GLATIRAMERACETATE |
| UY35790A (es) | 2013-10-21 | 2015-05-29 | Teva Pharma | Marcadores genéticos que predicen la respuesta al acetato de glatiramer |
| CN105884866B (zh) * | 2015-01-26 | 2021-04-20 | 漳州未名博欣生物医药有限公司 | 格拉替雷的化学合成方法 |
| US9155775B1 (en) | 2015-01-28 | 2015-10-13 | Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. | Process for manufacturing glatiramer acetate product |
| CN112649537B (zh) * | 2015-04-28 | 2024-03-29 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 多肽混合物高效液相色谱分析方法 |
| US11167003B2 (en) | 2017-03-26 | 2021-11-09 | Mapi Pharma Ltd. | Methods for suppressing or alleviating primary or secondary progressive multiple sclerosis (PPMS or SPMS) using sustained release glatiramer depot systems |
| EP3645029B1 (en) | 2017-06-26 | 2023-01-18 | Institut Pasteur | Treatments to eliminate hiv reservoirs and reduce viral load |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5800808A (en) * | 1994-05-24 | 1998-09-01 | Veda Research And Development Co., Ltd. | Copolymer-1 improvements in compositions of copolymers |
| US5719296A (en) * | 1995-10-30 | 1998-02-17 | Merck & Co., Inc. | Pseudopeptide lactam inhibitors of peptide binding to MHC class II proteins |
-
1997
- 1997-01-10 IL IL11998997A patent/IL119989A0/xx unknown
-
1998
- 1998-01-12 JP JP53110898A patent/JP4216342B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-12 HU HU0001917A patent/HU226612B1/hu unknown
- 1998-01-12 ZA ZA9800214A patent/ZA98214B/xx unknown
- 1998-01-12 CZ CZ0243799A patent/CZ297983B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 CN CNB988031221A patent/CN100528222C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-12 NZ NZ336690A patent/NZ336690A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 PL PL334566A patent/PL193300B1/pl unknown
- 1998-01-12 AT AT98901745T patent/ATE356608T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 KR KR1019997006278A patent/KR20000070058A/ko active Search and Examination
- 1998-01-12 WO PCT/US1998/000375 patent/WO1998030227A1/en active IP Right Grant
- 1998-01-12 EA EA199900621A patent/EA003128B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 DE DE69837324T patent/DE69837324T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-12 BR BRPI9807076A patent/BRPI9807076B8/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 AU AU58195/98A patent/AU737287B2/en not_active Expired
- 1998-01-12 EP EP98901745A patent/EP0975351B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-01-12 SK SK931-99A patent/SK284029B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-01-12 CA CA2277365A patent/CA2277365C/en not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-07-06 IL IL130820A patent/IL130820A/en not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-08-01 HK HK00104810A patent/HK1025737A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA98214B (en) | 1999-08-11 |
| EP0975351B1 (en) | 2007-03-14 |
| DE69837324D1 (de) | 2007-04-26 |
| ATE356608T1 (de) | 2007-04-15 |
| JP4216342B2 (ja) | 2009-01-28 |
| JP2001511121A (ja) | 2001-08-07 |
| IL130820A (en) | 2007-03-08 |
| PL334566A1 (en) | 2000-03-13 |
| SK93199A3 (en) | 2000-11-07 |
| IL119989A0 (en) | 1997-04-15 |
| NZ336690A (en) | 2001-05-25 |
| WO1998030227A1 (en) | 1998-07-16 |
| EP0975351A4 (en) | 2002-05-15 |
| KR20000070058A (ko) | 2000-11-25 |
| CZ243799A3 (cs) | 2000-06-14 |
| BR9807076B1 (pt) | 2013-10-29 |
| AU5819598A (en) | 1998-08-03 |
| CN1249690A (zh) | 2000-04-05 |
| EA003128B1 (ru) | 2003-02-27 |
| CZ297983B6 (cs) | 2007-05-16 |
| HUP0001917A3 (en) | 2001-12-28 |
| PL193300B1 (pl) | 2007-01-31 |
| HUP0001917A2 (hu) | 2000-10-28 |
| CA2277365C (en) | 2011-04-12 |
| AU737287B2 (en) | 2001-08-16 |
| CN100528222C (zh) | 2009-08-19 |
| DE69837324T2 (de) | 2007-11-29 |
| EA199900621A1 (ru) | 2000-02-28 |
| BRPI9807076B8 (pt) | 2021-05-25 |
| SK284029B6 (sk) | 2004-08-03 |
| HK1025737A1 (en) | 2000-11-24 |
| BR9807076A (pt) | 2000-05-02 |
| CA2277365A1 (en) | 1998-07-16 |
| EP0975351A1 (en) | 2000-02-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU226612B1 (en) | Use of glatiramer acetate for production of pharmaceutical composition to the treatment of multiple sclerosis | |
| WO1998030227A9 (en) | Treatment of multiple sclerosis through ingestion or inhalation of copolymer-1 | |
| JP3712260B2 (ja) | 自己免疫疾患のバイスタンダー抑制 | |
| AU651097B2 (en) | Enhancement of the down-regulation of autoimmune diseases by oral administration of autoantigens | |
| US8008258B2 (en) | Cop 1 for treatment of inflammatory bowel diseases | |
| US20140134196A1 (en) | Vaccine and method for treatment of neurodegenerative diseases | |
| JPH11503735A (ja) | Ｇｖｈｄ防止用合成ペプチドコポリマーからなる医薬組成物 | |
| US20130035390A1 (en) | Treatment of multiple sclerosis | |
| JP2002515853A (ja) | 低投与量の▲ｉｉ▼型コラーゲンによる慢性関節リウマチの治療 | |
| EP2046366B1 (en) | Copolymer-1 for treatment of age-related macular degeneration | |
| AU2003250892A1 (en) | Use of alanyl-aminopeptidase inhibitors and pharmaceutical compositions containing said inhibitors | |
| US20030096736A1 (en) | Lactoferrin for age related disorders in humans | |
| KR0159046B1 (ko) | 포유류의 자기면역 포도막망막염의 치료 또는 예방방법 | |
| MXPA99006457A (en) | Treatment of multiple sclerosisthrough ingestion or inhalation of copolymer-1 |