NO844422L - Nye polypeptider med alfa-amylasehemmende virkning, fremgangsmaate til deres fremstilling, deres anvendelse og farmasoeytiske preparater - Google Patents
Nye polypeptider med alfa-amylasehemmende virkning, fremgangsmaate til deres fremstilling, deres anvendelse og farmasoeytiske preparaterInfo
- Publication number
- NO844422L NO844422L NO844422A NO844422A NO844422L NO 844422 L NO844422 L NO 844422L NO 844422 A NO844422 A NO 844422A NO 844422 A NO844422 A NO 844422A NO 844422 L NO844422 L NO 844422L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- polypeptide
- amylase
- amino acids
- cyclic
- formula
- Prior art date
Links
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 title claims description 7
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 5
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 title description 5
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 title description 5
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 title description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 39
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 31
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 28
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 claims abstract description 12
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 39
- 239000003392 amylase inhibitor Substances 0.000 claims description 13
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 13
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 13
- 241000186984 Kitasatospora aureofaciens Species 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 7
- 101710171801 Alpha-amylase inhibitor Proteins 0.000 claims description 5
- 241000187176 Streptomyces violaceoruber Species 0.000 claims description 4
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 claims description 4
- 206010018429 Glucose tolerance impaired Diseases 0.000 claims description 3
- 208000001280 Prediabetic State Diseases 0.000 claims description 3
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 claims description 3
- 208000002925 dental caries Diseases 0.000 claims description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 3
- 201000009104 prediabetes syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 108010037401 tendamistate Proteins 0.000 claims description 3
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 2
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 29
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 9
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 9
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 9
- 229940122816 Amylase inhibitor Drugs 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 6
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 3
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- -1 malt extract Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- PQMRRAQXKWFYQN-UHFFFAOYSA-N 1-phenyl-2-sulfanylideneimidazolidin-4-one Chemical compound S=C1NC(=O)CN1C1=CC=CC=C1 PQMRRAQXKWFYQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3,4-dinitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C([N+]([O-])=O)=C1O WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710111679 Alpha-amylase inhibitor AI-3688 Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 101000610640 Homo sapiens U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Proteins 0.000 description 1
- 206010060378 Hyperinsulinaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 101001110823 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-A Proteins 0.000 description 1
- 101000712176 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-B Proteins 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- NSOXQYCFHDMMGV-UHFFFAOYSA-N Tetrakis(2-hydroxypropyl)ethylenediamine Chemical compound CC(O)CN(CC(C)O)CCN(CC(C)O)CC(C)O NSOXQYCFHDMMGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100040374 U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Human genes 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 241000231697 Zelus means Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 102000016679 alpha-Glucosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N dithioerythritol Chemical compound SC[C@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000035879 hyperinsulinaemia Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000011909 oxidative ring-opening Methods 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 1
- 238000003385 ring cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007142 ring opening reaction Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- CXVGEDCSTKKODG-UHFFFAOYSA-N sulisobenzone Chemical compound C1=C(S(O)(=O)=O)C(OC)=CC(O)=C1C(=O)C1=CC=CC=C1 CXVGEDCSTKKODG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 229950001790 tendamistat Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/36—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Actinomyces; from Streptomyces (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/26—Containing cys-cys disulfide bridge between nonadjacent cysteine residues
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Oppfinnelsen vedrører nye biologisk aktive cykliske polypeptider. De har o-amylasehemmende egenskaper og kan derfor anvendes i.human- og veterinærmedisin, i den medisinske diagno-stikk samt i stivelsens bioteknologi.
Polypeptidene ifølge oppfinnelsen erkarakterisert vedat de består av 10-200 aminosyrer og har følgende formel I
hvori
Z. betyr Gin, Asn eller Met
S betyr Ser eller Thr
Y betyr Phe, Tyr eller Asn
AS betyr en polypeptidkjede av 5-25 naturlige aminosyrer som på sin side kan være substituert ved ytterligere naturlige aminosyrer eller peptidkjeder,
idet det er unntatt a-amylaseinaktivatoren tendamistat (HOE 467), samt den fra kulturfiltratet av Streptomyces violaceoruber ATCC 31209 fremstilte -amylaseinhibitor.
Oppfinnelsen vedrører spesielt cykliske polypeptider med formel I, hvori Z betyr Gin, S betyr Ser, Y betyr Tyr og AS betyr en polypeptidkjede av 12 aminosyrer, substituert med 2 peptidkjeder.
Av polypeptidene ifølge oppfinnelsen er peptidet med formel Ia
som i det følgende også betegnes som Ai-3688, samt følgende strukturvarianter foretrukket: 1-desalanin-derivatet AI-3688a (aminosyren 1 er ikke Ala, men Thr),
peptidet AI-3688 b som adskiller seg fra AI-3688 ved at den 14. aminosyren Gin ble utvekslet med Glu,
peptidet AI-3688 c som adskiller seg fra AI-3688 ved at 34. aminosyren Gin ble utvekslet med Glu,
peptidet AI-3688 d som adskiller seg fra AI-3688 a ved at
13. aminosyren Gin ble utvekslet mot Glu (dette peptid er 1-desalanin-derivatet av AI-3688 b).
peptidet AI-3688 e som adskiller seg fra AI-3688 a ved at den 33. aminosyren Gin ble utvekslet med Glu (dette peptid er 1-desalamin-derivatet av AI 3688 c),
peptidet AI-3688 f som adskiller seg fra AI-3688 ved at så vel den 14. som også den 34. aminosyren Gin ble utvekslet med Glu, og
peptidet AI-3688 g som er 1-desalanin-derivatet av AI-3688 f.
Ved disse peptider betyr Z Gin, S betyr Ser, Y betyr Tyr og AS en polypeptidkjede av 12 aminosyrer, som der disubstituert med 2 peptidkjeder av 8 eller 7 resp. 11 aminosyrer. Pep-tidene har 3 6 resp. 35 aminosyrer. Den aminoterminale ende av aminosyresekvensen befinner seg ved alanin (1) resp.
Thr. Ved peptiden AI-3688 består det mellom Cys (9) og Cys (25) en disulfidbro. Disulfidbroene befinner seg ved variantene på tilsvarende steder.
I det ovennevnte og følgende omtales de i inhibitoren inne-holdte aminosyrer ved symboler slik de anvendes i boken av L. Stryer "Biochemistry", W.H. Freeman&Company, San Fran-cisco, 1972, side 14 og følgende.
Videre vedrører oppfinnelsen en fremgangsmåte til fremstilling av de cykliske polypeptider med formel I, farmasøytiske preparater inneholdende en forbindelse med formel I, anvend-elsen som legemiddel, diagnostikum og reagens.
Spesielt vedrører oppfinnelsen en fremgangsmåte til fremstilling av polypeptidet AI-3688 samt av variantene AI-3688 a-g, farmasøytiske preparater inneholdende AI-3688 eller en variant og deres anvendelse som legemiddel, diagnostikum og reagens.
Fremgangsmåten til fremstilling av polypeptidene med formel I erkarakterisert vedat streptomycetes som frembringer et polypeptid med formel I kultiveres i et fermenteringsmedium i submersfremgangsmåten, polypeptidet isoleres på i og for seg kjent måte fra mycelet eller kulfurfiltratet og renses. Av Streptomycetene er Streptomyces aureofaciens spesielt egnet.
AI-3688 og strukturvariantene AI-3688 a-g fremstilles fortrinnsvis av mycelet og kulturfiltratet av Streptomyces aureofaciens FH 1656. Denne stamme er deponert ved den tyske samling av mikroorganismer (DSM) under registreringsnummer DSM 2790. Det kan imidlertid anvendes også variantene og mu-tantene av denne stamme ved fremstilling av AI-3688 og strukturvariantene .
De taksonomiske egenskaper av Streptomyces aureofaciens DSM 2790 tilsvarer omtalen av Streptomyces aureofaciens ifølge Bergley's Manual of Determinative Bacteriology, 8. opplag, forlag Williams&Wilkins Corp. Baltimore, 1974. Forskjellen til de omtalte stammer består i stoffskifteproduktet. Cykliske peptider som stoffskifteprodukter av Streptomyces aureofaciens-stammer er hittil ikke blitt omtalt. Følgelig er stammen ny. Oppfinnelsen vedrører derfor også Streptomyces aureofaciens DSM 2790.
Ved fremstillingen av AI-3688 går man hensiktsmessig fram
som følger:
Streptomyces aureofaciens DSM 2790 dyrkes i et vandig nær-ingsmedium under submerse og fortrinnsvis aerobe betingelser, inntil man får en tilstrekkelig konsentrasjon av AI-3688. Næringsmediumet inneholder på den ene side karbonkilder,
som eksempelvis kullhydrater, på den annen side nitrogen-kilder,hvortil det regnes egnede nitrogenforbindelser, som f.eks. pr.oteinholdige materialer. Spesielt karbonleverende forbindelser er glukose, sakkarose, glycerol, maltekstrakt, stivelse, olje, fett og lignende. Foretrukkede nitrogen-leverende stoffer er eksempelvis maissvellevann, gjærekstrak-ter, soyamel, fiskemel, magermelkpulver, fordøyet kasein eller kjøttekstrakt. Det kan også anvendes såkalte "synte-tiske" næringsoppløsninger. Det kan videre være nyttig å til-sette sporelementer som f.eks. zink, magnesium, jern, kobolt og mangan til fermenteringsmediumet.
Fermenteringen som fører til dannelse av AI-3688, kan gjennom-føres i et vidt temperaturområde. Eksempelvis gjennomføres den ved temperaturer mellom 10 og 40°C, fortrinnsvis mellom omtrent 25 og 35°C. Mediets pH-verdi holder man likeledes ved verdier som er beforderlige på veksten av mikroorgan-ismene, eksempelvis ved verdier mellom 4,0 og 9,0, foretrinns-vis mellom 5,0 og 8,0. I avhengiget av næringsmedier som f.eks. det kvalitative og kvantitative sammensetning og fer-menteringsbetingelser som f.eks. luftingsgrad, temperatur eller pH-verdi, foregår dannelsen av AI-3688 i kulturoppløs-ningen vanligvis etter ca. 2-10 dager.
AI-3688 befinner seg så vel i mycelet som også i fermenter-ingens kulturfiltrat.Hovedmengden av AI-3688 er vanligvis'å finne i kulturfiltratet. Derfor adskilles fortrinnsvis den vandige fase fra mycelet, eksempelvis ved filtrering eller sentrifugering og AI-3688 isoleres fra de respektive faser ved i og for seg kjente fremgangsmåter og renses. Hertil egner det seg et stort antall fremgangsmåter som eksempelvis kromatografi på ioneutvekslere, molekylærsikter eller adsorp-sjonsharpikser, krystallisering, oppløsningsmiddel- resp. saltutfellinger, ultrafiltrering, Craig-fordeling o.l.
En foretrukket fremgangsmåte til fremstilling av AI-3688 består i at man adsorberer inhibitoren fra kulturfiltratet på en egnet harpiks som f.eks. på polystyrenbasis, adskiller den oppladede harpiks og isolerer inhibitoren AI-3688 ved eluering med egnede pufferoppløsninger, som f.eks. fosfat- eller bikar-bonatpufferoppløsning eller med eventuelt vannholdige organ-iske oppløsningsmidler som f.eks. metanol, etanol, aceton fortrinnsvis imidlertid med vandig isopropanol. De inhibitor-holdige eluater konsentrer man ved ultrafiltrering på kjent måte, idet det samtidig foretas en avsalting. Den ionefattige vandige oppløsning av AI-3688 oppdeles deretter på en ioneut-vekslersøyle kromatografisk på i og for seg kjent måte. Fortrinnsvis anvender man DEAE-cellulose eller DEAE-modifisert cellulose (f.eks. DEAE-"Sephadex") som ioneutveksler, brukbar er imidlertid også et stort antall andre handelsvanlige kat-ioner og anionutvekslere. Siste trinn av isoleringen er an-vendelsen av en molekylarsikt (f.eks. "Biogel" P-6 eller "Sephadex"). De resulterende vandige oppløsninger av det rene material tørkes deretter f.eks. ved hjelp av lyofiliser-ing. Den spesifikke aktivitet utgjør 1,5 x 10 4 a-amylase-inhibitorenheter pr. mg faststoff.
Den rene inhibitor AI-3688 er et fargeløst polypeptid, hvis aminosyreanalyse viser nærvær av de fleste naturlige aminosyrer. Den har ovennevnte formel Ia.
Det kan, spesielt ved lengere fermentering, forekomme at inhibitoren AI-3688 ikke er enhetlig. I dette tilfellet kan det gjennomføres en oppdeling i de enkelte komponenter ved hjelp av HPLC-teknikk, fortrinnsvis ved hjelp av HPLC på Reversed Phase RP 18 bærere med en vann-acetonitril-blanding (95:5) som elueringsmiddel. De således fremstilte komponenter har de angitte strukturer AI-3688 a, b, c, d, e, f resp. g. Strukturvariantene er virksomme på samme måte som AI-3688.
Det er for AI-3688 og AI-3688 a-g karakteriserende at de mangler de naturlige aminosyrer met, Ile, Leu, Lys og His.
Det ultrafiolette lys absorberes i vann av AI-3688 med X- s.
1%
maks. = 275 nm, E , =21. Det isoelektriske punkt utgjør
lemc^Jbestemt ved isoelektrisk fokusering 4,2,. Inhibitoren AI-3688 er lett oppløselig i vann og vandige pufferoppløsninger, bare i nærheten av det isoelektriske punkt avtar oppløselig-heten.
Ved den ovennevnte aminosyresammensetning og naturllig ved strukturen adskiller AI-3688 seg samt AI-3688 a-g fra alle kjente a-amylaseinhibitorer, og således foreligger her nye stoffer.
Den kjemiske struktur - som gjengitt i formel I a,
viser aminosyresekvensen av AI-3688 samt dessuten nærværet av en ring, som dannes av 17 aminosyrer ved sammenknytning av Cys (stilling 9) med Cys (stilling 25). Ifølge P.Y.
Chou og G.D. Fasmann (Advances in Enzymology, bind 47,
side 45-148, utgitt av John Wiley&Son, 1978) muliggjør primærstrukturen på grunn av den rommelige egenart av de enkelte deltagende aminosyrer og deres sammenknytning,
dvs. deres sekvens og deres ringdannelse, tilbakeslutninger til peptidenes sekundærstruktur. Det ble med inhibitoren AS-3688 gjennomført en Chou/Fasman-analyse. Derved er det overraskende funnet at delsekvensen av ringen: -Gln-Ser-Trp-Arg-Tyr- på eksponerte steder, dvs. rommelig fremragende for biokjemiske reaksjoner innbygges på egnet
måte.i molekylet og til sist er ansvarlig for virkningen. Det er videre blitt funnet at ved åpningen av ringen som inneholder .17 aminosyrer, f.eks. ved oppløsning av svovel-svovelbindingen av cystinet bevirkes en endring av den rommelige struktur, hvorved ovennevnte avgjørende delsekvens derved ikke mer rommelig fremtrer, og den enzymhemmende virkning går tapt. Ved ringåpning dannede kjemiske derivater av a—amylaseinhibitoren AI-3688 er biologisk og biokjemisk in-aktive (sammenlign eksempel 4). Karakteristisk for a-amylaseinaktivatoren ifølge oppfinnelsen og vesentlig for deres hemmevirkning er at det foreligger en stor, av 10-30 fortrinnsvis av 17 aminosyrer bestående ring, og i denne ring er det inneholdt aminosyresekvensen -Z-S-Trp-Arg-Y-, spesielt -Gln-ser-Trp-Arg-Tyr-. Sammensetningen av delsekvensen som polypeptidene ifølge oppfinnelsen har påvirker styrken av den enzymhemmende virkning lite. Heller ikke er naturen av ring-dannelsen av det cykliske peptid vesentlig: hverken den kjemiske bindingstype av cykliseringen eller måten, dvs. om fremstilt biologisk eller syntetisk, er betydningsfull for virkningen, det vesentlige er nærværet av et ringsystem som inneholder den angitte aminosyredelsekvens.
Undersøkelser med den i det tyske Offenlegungsschrift
27 16 050 omtalte fra Streptomyces violaceoruber ATCC 31209 isolerte a-^amylaseinaktivator viser at den angitte delsekvens samt nærvær av et ringsystem er ansvarlig for hemmevirkningen Undersøkelsen ble gjennomført som følger.
Bestemmelse av delsekvensen av a-amylaseinhibitoren fremstilt fra Streptomyces violaceoruber ATCC 31209: Sekvenseringen av den reduktive eller oksydative ringåpning lineærisertea—amylaseaktivatoren foregikk med Beckmann-"Sequenator" i
0,2 molart puffersystem ("Quadrol") automatisk med aminosyre-fenyltiohydantoin (PTH) metoden. Mellom stoffets to cystein-rester ble det bl.a. funnet følgende delsekvenser:
-Tyr-Phe-Gln-Ser-Trp-Arg-Tyr-Thr-Asp-Val-His-.
Egenskapene av inhibitorene ifølge oppfinnelsen er med hensyn til anvendelse som terapeutikum interessant mot diabetes og prediabetes samt adipositas og understøttelse av diett. på grunn av deres egenskaper er de også verdifulle som reagens for diagnostiske formål.
Stivelsesholdige nærings- og nytelsesmidler fører hos dyr og mennesker til en økning av blodsukkeret og derved også til en øket insulinsekresjon av pankreas. Hyperglykemi kommer i stand ved oppspalting av stivelsen i fordøyelseskanalen under innvirkning av amylase og maltase til glukose.
Hos diabetikere er hyperglykemi spesielt utpreget og langvarig.
Den alimentære hyperglykemi samt hypeinsulinemi ved stivelses-opptak lar seg nedsette ved amylaseinhibitoren ifølge oppfinnelsen spesielt ved hjelp av AI-3688. Denne virkning er dosisavhengig. Amylaseinhibitoren ifølge oppfinnelsen lar seg derfor anvende som terapeutikum ved diabetes, prediabetes og adipositas samt til understøttelse av dietten. For dette formål lønner det seg en administrering, spesielt til mål-tidene. Doseringen som skal rette seg etter pasientens vekt samt individuelle behov, utgjør ca. 10-500 mg pr. dose, som hensiktsmessig tas til hvert måltid. Doseringen kan imidlertid i begrunnede enkelttilfeller også ligge høyere eller lavere.
Amylaseinhibitoren ifølge oppfinnelsen egner seg spesielt til oral administrering. Den kan anvendes som rent stoff, men også i form av en farmasøytisk tilberedning under anvendelse av vanlige hjelpe- og bærestoffer. Også en kombinert anvendelse med andre legemidler som blodsukkersenkende eller lipid-senkende stoffer kan være av fordel. Da høyeremolekylære peptider som sådanne heller ikke nevneverdig resorberes fra fordøyelseskanalen, er det av stoffene ifølge oppfinnelsen ikke å vente noen toksikologisk betenkelige bivirkninger. På grunn av den ikke sedvanlige aminosyresammensetning er også eventuelle proteolytiske spaltprodukter å anse som fysiolo- gisk ufarlige. Følgelig kunne det ved oral inngivning også høye doser av amylaseinhibitor AI-3688 på forsøksdyrene ikke sees"påfallende symptomer. For undersøkelse av farmakolo-giske virkninger av amylaseinhibitoren fikk fastende hann-Wistar-rotter med en vekt mellom 200 og 250 g hemmstoffet AI-3688 ifølge oppfinnelsen administrert oralt samtidig med 2 g stivelse pr. kg kroppsvekt. Ved bestemmelse av blod-sukkerkonsentrasjonen i blodprøver som ble tåtet før, under og etter applikasjonen av a>amylaseinhibitoren, ble prepar-atets virkning bevist.
Ved siden av blodsukkerregulering kan man anvende polypeptidene ifølge oppfinnelsen også til hemming av spyttamylasen. Dette enzym bevirker fordøying av stivelses i munnen, og det således dannede sukker befordrer kariesangrep på tennene. Forbindelsen ifølge oppfinnelsen kan derfor anvendes til å hindre eller nedsestte dannelsen av karies.
Videre kan de anvendes som biokjemiske reagenser samt som diagnostiske midler.
AmYi<§§>eprøyer
En amylaseinhibitorenhet (AIE) er definert som den inhibitor-mengde som under prøvebetingelsene formår å hemme to amylase-enheter (AE) til 50%. En amylaseenhet er etter interna-sjonal overenskomst den enzymmengde som i løpet av 1 minutt spalter 1 \ x ekvivalent glukosidiske bindinger i stivelsen.
De uval spaltede glukosidiske bindinger bestemmes som^val reduserende sukker fotometrisk med dintrosalizylsyre. Angiv-elsene er beregnet som^mol maltose, som fastslås ved hjelp av en maltose-vurderingslinje.
Prøvene gjennomføres som følger:
a-amylase fra svinepankreas og oppløsningene som skal under-søkes forinkuberes sammen i 1,0 ml 20 mM fosfatpuffer,
pH 6,9, + 10 mM NaCl 10-20 min. ved 37°C. Den enzymatiske
startes ved tilsetning av 1,0 ml oppløselig stivelse (0,25%
i den angitte puffer) ifølge Zulkowski. Etter nøyaktig 10 minutter stoppes reaksjon med 2,0 ml dinitrosalizylsyre-fargereagens (ifølge Boehringer Mannheim: Biochemica-Informa-tion II) og oppvarmes til fargefremkalling i 5 minutter i kokende vannbad. Etter avkjøling måles ekstinksjonen ved 546 nm mot reagensblindverdi. Den 50%-ige hemming bestemmes sammenlignet til uhemmet enzymreaksjon ved anvendelse av forskjellige inhibitormengder grafisk ved hjelp av sannsyn-lighet sopp f øring .
Eksemp_el_l
Til fremstilling av AI-3688 foregikk podningsvirkningen (dyrking av mikroorganismer) som vanlig i mikrobiologisk praksis, fra en frysetørket permanentform av organismen Streptomyces aureofaciens FH 1656, DSM 2790, over enkelt-kolonipassasjer og skråsmårør. Den for fermenteringen nødvendige masseproduksjon av sporer ble likeledes gjennom-ført på fast næringsbunn i Roux-flasker.
Med sporeavsvømmingen av Roux-flaske i 100 ml sterilt vann ble det podet et vegetativt fermenterings-fortrinn i en Fernbach-flaske (arbeidsvolum 1,2 1).
<32Y2§>^<§£>^<2D£§li2>2<:>Etter 48 timers forkultur (se ovenfor) ble 200 1 hovedfermenteringsmedium inokulert med 1,2 1 podningsstoff fra Fernbach-flasken.
Medium:
Inkubasjonen foregikk ved 28°C under omrøring med en omkretshastighet på 5 m/sek. og 0,1 vvm luftningsgrad i 5 dager. pH-verdien falt under fermenteringen og ble styrt med natriumhydroksyd på 5,5-6,0. Etter 5 dager ble det høstet, utbyttet utgjorde 60 mg AI-3688 pr. liter kulturoppløsning.
Eksermoel_2
180 1 fermenteringsoppløsning ifølge eksempel 1 ble ved hjelp av en sentrifuge befridd for cellemasse og den klare flytende fase innstilt på pH 4,9. Deretter påførte man opp-løsningen på en søyle som inneholdt 15 1 polystyren-adsorp-sjonsharpiks ("Diaion" HP-20), ettervasket med 30 1 vann og eluert med vann, som var tilsatt økende mengde isopropanol. Blandingen som inneholdt 25% isopropanol oppløste inhibitoren AI-3688 fra søylen. Disse aktive eluater (25 1) ble konsen-trert ved ultrafiltrering og under vanntilsetning samt ytterligere ultrafiltrering avsaltet så lenge inntil retenatet ikke mer inneholdt påvisbare salter. Det resulterende konsen-trat (1,5 1) adskilte man på DEAE-modifisert cellulose (DEAE-"Sephadex"), som var blitt ekvilibrert med 1/15 m fosfatpuffer, pH 5,6. Ved anlegg av en ekstra koksaltgradient ble a-amylaseaktiviteten eluert. De tilsvarende fraksjoner ble avsaltet. Man konsentrerte i ultrafiltreringsceller ("Amicon"), som var ekvilibrert med 1/15 m fosfatpuffer,
pH 5,6. Ved anlegg av en ekstra koksaltgradient ble a -amylasehemmeaktiviteten eluert. De tilsvarende fraksjoner ble avsaltet. Man konsentrerte igjen i ultrafiltreringsceller ("Amicon"). Sluttrensingen foregikk på polyacrylamid-gel ("Biogel P-6") med rent vann som elueringsmiddel. De AI-366-holdige fraksjoner av denne søyle ble samlet og frysetørket. Det fremkom 1,2 g av et fargeløst pulver med 1,5 x IO<4>a - amylaseinhibitorenheter pr. mg.
Eksempel_3
Fremstillingen av et flerekomponentholdig AI-3688-inhibitor-kompleks foregikk som angitt i eksempel 1, imidlertid ble den der angitte fermenteringstid utvidet fra 5 til 8 dager. Opp-arbeidelsen av fermenteringsoppløsningen foregikk ifølge eksempel 2, idet imidlertid det resulterende fargeløse stoff (0,9 g) ikke var kjemisk enhetlig. 100 mg av dette pulver oppløses i 1 ml vann/acetonitril )5:5 v/v) og påføres på en stålsøyle (med indre mål 3,2 x 25 cm<2>), som var fylt med "reversed phase-Kieselgel RP18". Elueringen foregikk med oppløsningsmiddelblandingen vann-acetonitril (95:5) som med trifluoreddiksyre var inntilt på pH 2,1. Ved et ved hjelp av stempelpumper frembragt arbeidstrykk på 70 bar, innstiller det seg en gjennomstrømningshastighet på 8 ml pr. minutt. Søyleutstrømningen kontrollerte man ved bestemmelse av ultra-fiolettadsorpsjonen ved 276 nm. Etter 41-43 minutter ble det vasket flere absorberende forbindelser fra søylen som alle adskilt samlet ble undersøkt på a-amylasehemmende virkning, inndampet i vakuum og deretter frysetørket. De enkelte fraksjoner ble med en Beckman-sekvenser 890 C undersøkt på enhet-lighet og aminosyresekvensen bestemt.
Herved viste analysen av
topp 1 en aminosyresekvens, hvis struktur tilsvarte formel Ia,
idet imidlertid aminosyren 34 (Glu) var utvekslet mot Gin (= AI-3688 c)
topp 2 en aminosyresekvens, hvis struktur tilsvarte formel Ia
(= AI 3688)
topp 3 en aminosyresekvens som omtalt i formel Ia, imidlertid
var aminosyre 14 (Gin) erstattet med Glu (= AL-3688 b)
topp 4 l-Des-Ala-AI-3688 (=AI-3688 a)
topp 5 en blanding av to l-Des-Ala-AI-3688-forbindelser, i en var aminosyren 33 (Glu) erstattet med Gin, (= AI-3688 e) i den andre aminosyren 13 (Gin) med Glu (= AI-3688 d).
Den spesifikke a-amylasehemmeaktiviteten av alle forbind-
4
eiser utgjorde (1,5 + 0,1) x 10 AIE pr. mg.
Eksemgel_4_
(Ringspalting, påvisning av det virksomme prinsipp).
10 mg AI-3688 ifølge eksempel 2 ble oppløst i 5 ml fosfatpuffer, pH 7,0. En liten prøve ble uttatt til prøven og deretter blandet med 10 mg ditioerytrit. Etter 18 timers standtid ved værelsestemperatur ble reaksjonsoppløsningen undersøkt sammenlignet med utgangsoppløsningen på a-amylasehemmende virkning. Mens utgangsstoffet med 1,5 x 10 4 AIE pr. mg var fullt aktivt, var virkningen av reaksjonsoppløs-ningen under påvisningsgrensen.
Claims (11)
1- Cykliske polypeptider, karakterisert ved at de består av
10-200 aminosyrer og har følgende formel I
hvori
Z betyr Gin, Asn eller Met
S betyr Ser eller Thr
Y betyr Phe, Tyr eller Asn
AS betyr en polypeptidkjede av 5-25 naturlig aminosyrer, som på sin side kan være substituert med ytterligere naturlige aminosyrer eller peptidkjeder,
unntatt a-amylaseinaktivatorenT endamistat (HOE 467) samt den fra kulturfirtratet fra Streptomyces violaceoruber ATCC 31209 fremstilte a-amylaseinhibitor.
2. Cykliske polypeptider ifølge krav 1, karakterisert ved at i formel I betyr Z Gin, S betyr Ser, Y betyr Tyr og AS betyr en polypeptidkjede av 12 aminosyrer, som er substituert med 2 peptidkjeder.
3. Cyklisk polypeptid ifølge krav 1, karakterisert ved at det har formel Ia
4. Fremgangsmåte til fremstilling av et cyklisk polypeptid ifølge krav 1,
karakterisert ved at det kultiveres en Streptomycetes som frembringer polypeptidet i et fermen-tas j onsmedium i submersfremgangsmåten, polypeptidet isoleres fra mycelet eller kulturfiltratet på i og for seg kjent måte og renses.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 4,
karakterisert ved at Streptomyces aureofaciens DSM 2790 kultiveres og fra kulturfiltratet isoleres polypeptidet AI-3688 og renses.
6. Farmasøytisk preparat,
karakterisert ved at et innhold av polypeptid ifølge krav 1.
7. Farmasøytisk preparat,
karakterisert ved at det inneholder polypeptid ifølge krav 3.
8. Anvendelse av polypeptid ifølge krav 1 til hemming av Q^amylasen.
9. Anvendelse av polypeptider ifølge krav 1 til behandling av diabetes, prediabetes og adipositas.
10. Anvendelse av polypeptider ifølge krav 1 som diagnostikum, reagens eller profylaktikum mot karies.
11. Streptomyces aureofaciens DSM 2790.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3402021 | 1984-01-21 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO844422L true NO844422L (no) | 1985-07-22 |
Family
ID=6225535
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO844422A NO844422L (no) | 1984-01-21 | 1984-11-06 | Nye polypeptider med alfa-amylasehemmende virkning, fremgangsmaate til deres fremstilling, deres anvendelse og farmasoeytiske preparater |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4623714A (no) |
| EP (1) | EP0151246B1 (no) |
| JP (1) | JPS60152500A (no) |
| KR (1) | KR850005454A (no) |
| AT (1) | ATE56728T1 (no) |
| AU (1) | AU580973B2 (no) |
| CA (1) | CA1230841A (no) |
| DE (1) | DE3483260D1 (no) |
| DK (1) | DK520784A (no) |
| ES (1) | ES539678A0 (no) |
| FI (1) | FI844289L (no) |
| GR (1) | GR80840B (no) |
| HU (1) | HU192495B (no) |
| IL (1) | IL73472A0 (no) |
| NO (1) | NO844422L (no) |
| PT (1) | PT79840B (no) |
| ZA (1) | ZA848651B (no) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3508384A1 (de) * | 1985-03-08 | 1986-11-06 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Hemmung humaner speichel- und pankreasamylase durch monoklonale antikoerper |
| CA2128044C (en) * | 1993-08-05 | 2007-02-20 | Klaus-Dieter Bremer | Pharmaceutical compositions comprising a glucosidase and/or amylase inhibitor, and a lipase inhibitor |
| WO2005051298A2 (en) | 2003-11-19 | 2005-06-09 | Metabasis Therapeutics, Inc. | Novel phosphorus-containing thyromimetics |
| US7262318B2 (en) * | 2004-03-10 | 2007-08-28 | Pfizer, Inc. | Substituted heteroaryl- and phenylsulfamoyl compounds |
| US20050288340A1 (en) * | 2004-06-29 | 2005-12-29 | Pfizer Inc | Substituted heteroaryl- and phenylsulfamoyl compounds |
| AP2007003979A0 (en) * | 2004-11-23 | 2007-06-30 | Warner Lambert Co | 7-(2h-pyrazol-3-yl)-3,5-dihyroxy-heptanoic acid derivatives as hmg co-a reductase inhibitors for thetreatment of lipidemia |
| US7741317B2 (en) | 2005-10-21 | 2010-06-22 | Bristol-Myers Squibb Company | LXR modulators |
| US7888376B2 (en) | 2005-11-23 | 2011-02-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Heterocyclic CETP inhibitors |
| JP5498168B2 (ja) | 2006-12-01 | 2014-05-21 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー | アテローム性動脈硬化および循環器疾患の治療のためのｃｅｔｐ阻害剤としてのｎ−（（３−ベンジル）−２，２−（ビス−フェニル）−プロパン−１−アミン誘導体 |
| US8969514B2 (en) | 2007-06-04 | 2015-03-03 | Synergy Pharmaceuticals, Inc. | Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of hypercholesterolemia, atherosclerosis, coronary heart disease, gallstone, obesity and other cardiovascular diseases |
| MX354786B (es) | 2007-06-04 | 2018-03-21 | Synergy Pharmaceuticals Inc | Agonistas de guanilato ciclasa utiles para el tratamiento de trastornos gastrointestinales, inflamacion, cancer y otros trastornos. |
| CA2726917C (en) | 2008-06-04 | 2018-06-26 | Synergy Pharmaceuticals Inc. | Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of gastrointestinal disorders, inflammation, cancer and other disorders |
| WO2010009319A2 (en) | 2008-07-16 | 2010-01-21 | Synergy Pharmaceuticals Inc. | Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of gastrointestinal, inflammation, cancer and other disorders |
| US20120046364A1 (en) | 2009-02-10 | 2012-02-23 | Metabasis Therapeutics, Inc. | Novel Sulfonic Acid-Containing Thyromimetics, and Methods for Their Use |
| JP2013528172A (ja) | 2010-05-21 | 2013-07-08 | ファイザー・インク | ２−フェニルベンゾイルアミド |
| US20130156720A1 (en) | 2010-08-27 | 2013-06-20 | Ironwood Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating or preventing metabolic syndrome and related diseases and disorders |
| US9616097B2 (en) | 2010-09-15 | 2017-04-11 | Synergy Pharmaceuticals, Inc. | Formulations of guanylate cyclase C agonists and methods of use |
| JP2014513923A (ja) | 2011-03-04 | 2014-06-19 | ファイザー・インク | Ｅｄｎ３様ペプチドおよびその使用 |
| US20150050371A1 (en) | 2012-03-09 | 2015-02-19 | Biotropics Malaysia Berhad | Extract Formulations of Rhodamnia Cinerea And Uses Thereof |
| EP2970384A1 (en) | 2013-03-15 | 2016-01-20 | Synergy Pharmaceuticals Inc. | Agonists of guanylate cyclase and their uses |
| WO2014151200A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Synergy Pharmaceuticals Inc. | Compositions useful for the treatment of gastrointestinal disorders |
| EP2986599A1 (en) | 2013-04-17 | 2016-02-24 | Pfizer Inc. | N-piperidin-3-ylbenzamide derivatives for treating cardiovascular diseases |
| JP6606491B2 (ja) | 2013-06-05 | 2019-11-13 | シナジー ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | グアニル酸シクラーゼｃの超高純度アゴニスト、その作成および使用方法 |
| DK3186242T3 (da) | 2014-08-29 | 2021-12-20 | Tes Pharma S R L | Alfa-amino-beta-carboxymuconsyre-semialdehyd-decarboxylasehæmmere |
| WO2016055901A1 (en) | 2014-10-08 | 2016-04-14 | Pfizer Inc. | Substituted amide compounds |
| AR109950A1 (es) | 2016-10-14 | 2019-02-06 | Tes Pharma S R L | INHIBIDORES DE LA ÁCIDO a-AMINO-b-CARBOXIMUCÓNICO SEMIALDEHÍDO DESCARBOXILASA |
| KR20210111248A (ko) | 2018-11-20 | 2021-09-10 | 테스 파마 에스.알.엘. | α-아미노-β-카르복시뮤콘산 세미알데하이드 데카르복실라제의 저해제 |
| BR112021013807A2 (pt) | 2019-01-18 | 2021-11-30 | Astrazeneca Ab | Inibidores de pcsk9 e seus métodos de uso |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2701890C2 (de) * | 1977-01-19 | 1983-08-04 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Peptielischer Glycosidhydrolase-Inhibitor aus einem Streptomyceten und seine Verwendung |
| DE2716050A1 (de) * | 1977-04-09 | 1978-10-19 | Hoechst Ag | Alpha-amylase-inhibitor aus einem streptomyceten und verfahren zu seiner gewinnung |
| ES8207217A1 (es) * | 1980-10-09 | 1982-09-01 | Hoechst Ag | Procedimiento para la preparacion de un inactivador de alfa-amilasa |
-
1984
- 1984-11-01 DK DK520784A patent/DK520784A/da not_active Application Discontinuation
- 1984-11-01 FI FI844289A patent/FI844289L/fi not_active Application Discontinuation
- 1984-11-05 GR GR80840A patent/GR80840B/el unknown
- 1984-11-06 NO NO844422A patent/NO844422L/no unknown
- 1984-11-06 HU HU844121A patent/HU192495B/hu not_active IP Right Cessation
- 1984-11-06 US US06/668,839 patent/US4623714A/en not_active Expired - Fee Related
- 1984-11-06 CA CA000467147A patent/CA1230841A/en not_active Expired
- 1984-11-06 ZA ZA848651A patent/ZA848651B/xx unknown
- 1984-11-07 AU AU35190/84A patent/AU580973B2/en not_active Ceased
- 1984-11-09 IL IL73472A patent/IL73472A0/xx unknown
- 1984-11-09 KR KR1019840007236A patent/KR850005454A/ko not_active Application Discontinuation
- 1984-11-20 JP JP59243562A patent/JPS60152500A/ja active Pending
- 1984-11-22 AT AT84114064T patent/ATE56728T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-11-22 EP EP84114064A patent/EP0151246B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-11-22 DE DE8484114064T patent/DE3483260D1/de not_active Expired - Fee Related
-
1985
- 1985-01-18 PT PT79840A patent/PT79840B/pt unknown
- 1985-01-18 ES ES539678A patent/ES539678A0/es active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI844289L (fi) | 1985-07-22 |
| EP0151246A3 (en) | 1987-05-27 |
| IL73472A0 (en) | 1985-02-28 |
| AU580973B2 (en) | 1989-02-09 |
| HUT37657A (en) | 1986-01-23 |
| GR80840B (en) | 1985-02-26 |
| KR850005454A (ko) | 1985-08-26 |
| DE3483260D1 (de) | 1990-10-25 |
| HU192495B (en) | 1987-06-29 |
| DK520784D0 (da) | 1984-11-01 |
| ES8602112A1 (es) | 1985-11-16 |
| JPS60152500A (ja) | 1985-08-10 |
| ES539678A0 (es) | 1985-11-16 |
| AU3519084A (en) | 1985-07-25 |
| FI844289A0 (fi) | 1984-11-01 |
| EP0151246A2 (de) | 1985-08-14 |
| ATE56728T1 (de) | 1990-10-15 |
| PT79840B (en) | 1986-11-14 |
| PT79840A (en) | 1985-02-01 |
| US4623714A (en) | 1986-11-18 |
| DK520784A (da) | 1985-07-22 |
| EP0151246B1 (de) | 1990-09-19 |
| ZA848651B (en) | 1985-06-26 |
| CA1230841A (en) | 1987-12-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO844422L (no) | Nye polypeptider med alfa-amylasehemmende virkning, fremgangsmaate til deres fremstilling, deres anvendelse og farmasoeytiske preparater | |
| Takeda | Thermostable direct hemolysin of Vibrio parahaemolyticus | |
| KR100610389B1 (ko) | 조눌린의 펩타이드 길항제와 그 사용 방법 | |
| NO813407L (no) | Alfa-amylaseinaktivator, fremgangsmaater til dets fremstilling, middel paa basis av denne inaktivator, samt dens anvendelse | |
| NO180379B (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av et vesentlig renset insulinderivat | |
| AU5792996A (en) | Oral dosage composition for intestinal delivery and method of use of the same | |
| CA2257240A1 (en) | Fragments of leptin (ob protein) | |
| US5912323A (en) | Zonula occludens toxin receptors | |
| US20110144001A1 (en) | Highly bridged peptides from actinomadura namibiensis | |
| US4019960A (en) | Process for the production of a saccharase inhibitor | |
| DK172818B1 (da) | Antibiotisk polypeptid, fremgangsmåde til dets fremstilling samt dets anvendelse | |
| EP0084826B1 (en) | Antibiotic compound | |
| NO853461L (no) | Nye alfa-glukosidaseinhibitor, fremgangsmaate til dens fremstilling, dens anvendelse og farmasoeytiske preparater. | |
| US3937817A (en) | Pharmaceutical compositions containing a saccharase inhibitor | |
| DK148798B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af 1-desoxynojirimycin ud fra organismer af slaegten bacillus, samt en kultur af en bacillus-stamme til anvendelse herved | |
| KR100997073B1 (ko) | 멤노 펩타이드, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 약제학적 조성물 | |
| NO853460L (no) | Nye pseudooligosakkarider med alfa-glukosidasehemmende virkning, fremgangsmaate til deres fremstilling og deres anvendelse samt farmasoeytiske preparater. | |
| JPS61134398A (ja) | 新生理活性物質プリパスタチン及びその製造法 | |
| US4990500A (en) | Oxirane pseudooligosaccharides, a process for their preparation, their use and pharmaceutical preparations | |
| EP0468504A1 (en) | A novel antibiotic, balhimycin, a process for its production and its use as pharmaceutical | |
| WO2000052043A1 (fr) | Polypeptide exerçant une action contre le virus de l'immunodeficience humaine, gene codant pour ce polypeptide, et procede de production de ce polypeptide | |
| KR970010137B1 (ko) | 항종양 항생제 케다르시딘(kedarcidin) | |
| NO781267L (no) | Alfa-amylase-inhibitor fra en streptomycet og fremgangsmaate til deres utvinning | |
| DD280553A5 (de) | Verfahren zur herstellung des antibiotikums kedarcidin |