JPS61134398A - 新生理活性物質プリパスタチン及びその製造法 - Google Patents
新生理活性物質プリパスタチン及びその製造法Info
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- JPS61134398A JPS61134398A JP59256475A JP25647584A JPS61134398A JP S61134398 A JPS61134398 A JP S61134398A JP 59256475 A JP59256475 A JP 59256475A JP 25647584 A JP25647584 A JP 25647584A JP S61134398 A JPS61134398 A JP S61134398A
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- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
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- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N1/205—Bacterial isolates
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- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はホスホリパーゼん、Ｃ及びＤに対して酵素阻害
活性を示す新生理活性物質プリパスタチンに関し、これ
は免疫抑制剤、１型アレルギー抑制剤などと１．て期待
される。
活性を示す新生理活性物質プリパスタチンに関し、これ
は免疫抑制剤、１型アレルギー抑制剤などと１．て期待
される。
アシル基を有するペプチドの１例は例えば特開昭５９−
９５２５２に開示されている。
９５２５２に開示されている。
また免疫抑制剤としては従来副腎皮質ステロイド剤や細
胞毒性免疫抑制剤が、またアレルギー抑制剤としては抗
ヒスタミン剤が使用されている。
胞毒性免疫抑制剤が、またアレルギー抑制剤としては抗
ヒスタミン剤が使用されている。
従来の免疫抑制剤はそのいずれも造血ｌｌ＃Ｉ器などに
対する毒性が強く毒性の低い免疫抑制剤が求められてい
た。また、人体の免疫系は複雑を極めているので新しい
作用機作の免疫抑制剤の要望も強い。またＩ型アレルギ
ーに対する満足すべき薬剤はなく新しい薬の開発が望ま
れている。
対する毒性が強く毒性の低い免疫抑制剤が求められてい
た。また、人体の免疫系は複雑を極めているので新しい
作用機作の免疫抑制剤の要望も強い。またＩ型アレルギ
ーに対する満足すべき薬剤はなく新しい薬の開発が望ま
れている。
〔問題点を浬１決するための手段〕
本発明は、毒性が低く、新しい作用機作の免疫抑制剤及
びアレルギー抑、制剤として期待される下記式 （式中ルは一〇＋１Ｈ２７または−Ｃ１４Ｈｎ 、 ＆
はＡｌａ又はＶａｌを示し、Ｑｌｕ、 Ｏｒｎ、 Ｔｙ
ｒ、 Ｔｈｒ、 Ｐｒｏ、 Ｑｌｎ。
びアレルギー抑、制剤として期待される下記式 （式中ルは一〇＋１Ｈ２７または−Ｃ１４Ｈｎ 、 ＆
はＡｌａ又はＶａｌを示し、Ｑｌｕ、 Ｏｒｎ、 Ｔｙ
ｒ、 Ｔｈｒ、 Ｐｒｏ、 Ｑｌｎ。
工１ｅ、 Ａｌａ又はＶａｌはそれぞれグルタミン酸、
オルニチン、チロシン、トレオニン、プロリン、クルク
ミン、インロイシン、アラニン、またはバリンの各アミ
ノ酸を示す。）で表わされる新生理活性物質プリパスタ
チン（Ｐｌｉｐａｓｔａｔｉｎ）又はその塩及びその製
造法に関するものである。
オルニチン、チロシン、トレオニン、プロリン、クルク
ミン、インロイシン、アラニン、またはバリンの各アミ
ノ酸を示す。）で表わされる新生理活性物質プリパスタ
チン（Ｐｌｉｐａｓｔａｔｉｎ）又はその塩及びその製
造法に関するものである。
本発明における新生理活性物質プリパスタチンには下記
の４つの化合物があり、上記一般式（Ｉ）において亀が
Ａｌａを示す場合の化合物をＡ群、几２がＶａｔを示す
化合物を８群とする。
の４つの化合物があり、上記一般式（Ｉ）において亀が
Ａｌａを示す場合の化合物をＡ群、几２がＶａｔを示す
化合物を８群とする。
（１） プリパスタチンＡ１
（２） プリパスタチンＡ２
（３） プリパスタチンＢ１
（４） プリパスタチンＢ２
本発明におけるプリパスタチンの製造はバチルス属に属
するプリパスタチン生産菌を培養してプリパスタチンを
培養液中に生産、蓄積させ次いで培養液よりプリパスタ
チンを単離することにより行われる。
するプリパスタチン生産菌を培養してプリパスタチンを
培養液中に生産、蓄積させ次いで培養液よりプリパスタ
チンを単離することにより行われる。
本発明におけるプリパスタチン生産菌とは少なくとも前
記一般式（Ｉ）で示される化合物の１種以上を生産する
菌を意味する。このような菌株の１例としては、本発明
者らによって微生物化学研究所（東京部品用区）内で採
取した土壌より分離された細菌バチルス・セレウスＢＭ
Ｇ３０２− ｆＦ ６７ （Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒ
ｅｕｓ ）株がアル。本菌株は工業技術院微生物工業技
術研究所に昭和５９年９月１２日に、微工研菌寄第７８
−１３号（ＦＥＲＭ、Ｐ−７８４３）として寄託された
。
記一般式（Ｉ）で示される化合物の１種以上を生産する
菌を意味する。このような菌株の１例としては、本発明
者らによって微生物化学研究所（東京部品用区）内で採
取した土壌より分離された細菌バチルス・セレウスＢＭ
Ｇ３０２− ｆＦ ６７ （Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒ
ｅｕｓ ）株がアル。本菌株は工業技術院微生物工業技
術研究所に昭和５９年９月１２日に、微工研菌寄第７８
−１３号（ＦＥＲＭ、Ｐ−７８４３）として寄託された
。
以下にこの菌株の歯学的性状について記述する。
ＢＭＧ３０２− ｆＦ ６７株の菌学的性状１、形態
（１） 細胞は桿菌、大きさは１． ＯＸ ２．６ミ
クロン位である。
クロン位である。
（２） 細胞の多形性は特に認められない。
（３） 周鞭毛を有し、運動性を示す。
（４） 胞子を有する。その形は卵円形、大きさは０
．６Ｘ２．Ｏミクｏ７位、位置は中立（Ｃｅｎｔｒａｌ
）で耐熱性を有する。菌体の膨隆は認められない。
．６Ｘ２．Ｏミクｏ７位、位置は中立（Ｃｅｎｔｒａｌ
）で耐熱性を有する。菌体の膨隆は認められない。
（５） グラム染色は陽性である。
（６）非抗酸性である。
２、各種培地における生育状態（肉汁ゼラチン穿刺培養
以外は３０℃培養） （１）肉汁寒天平板培養 コロニーは光沢のない不透明なはｙ円形を呈し、辺縁は
不規則で根梯（ｒｏｏｔ −１ｉｋｅ）を示す。培養３
日目頃になるとコロニーの表面にしわができるが、拡散
性色素は認められない。
以外は３０℃培養） （１）肉汁寒天平板培養 コロニーは光沢のない不透明なはｙ円形を呈し、辺縁は
不規則で根梯（ｒｏｏｔ −１ｉｋｅ）を示す。培養３
日目頃になるとコロニーの表面にしわができるが、拡散
性色素は認められない。
（２）肉汁寒天斜面培養
培地表面に拡がって増殖し、不透明で光沢がなく、５す
黄茶を示す。生育は、培養３日目頃よりしわをつくり、
表面はつやけしの状態を呈する。拡散性色素は認められ
ない。
黄茶を示す。生育は、培養３日目頃よりしわをつくり、
表面はつやけしの状態を呈する。拡散性色素は認められ
ない。
（３） 肉汁液体培養
培養１８目で培地表面を菌膜がおおい、５８目には試験
管底部に菌体が沈殿してくる。
管底部に菌体が沈殿してくる。
（４） 肉汁ゼラチン穿刺培養
２０℃培養、３０℃培養とも培養１８目で表面に菌膜を
形成し、ゼラチンの液化が始まる。その型は層状で、培
養７日目には液化はほぼ完了した。
形成し、ゼラチンの液化が始まる。その型は層状で、培
養７日目には液化はほぼ完了した。
（５） リドマス・ミルク
ＢＣＰ ミルク培地で、培養２日目にペプトン化が始ま
り、７日目にはほぼ完了した。反応はアルカリ性で、凝
固は認められなかった。
り、７日目にはほぼ完了した。反応はアルカリ性で、凝
固は認められなかった。
３、生理的性質（特に記さない限り、培養温度は全て３
０℃。） （１）硝酸塩の還元：陽性 （２）脱窒反応（駒形らの方法によった）：陽性（３）
ＭＲテ ス ト：陰性 （４１ＶＰ テ ス ト：陽性 （５） インドールの生成：陰性 （６） 硫化水素の生成：陰性 （７）デンプンの加水分解：陽性 （８） クエン酸の利用（Ｋｏｓｅｒの培地及びＣｈ
ｒｉｓｔｅ−ｎｓｅｎの培地によった）：陽性 （９） 無機窒素源の利用（硝酸カリウム、硫酸アン
モニウムとも）：陽性 （１０）色素の生成（キングＡおよびキングＢ培地栄研
）：わずかに黄色色素を生成 （１１）ウレアーゼ（尿素培地、栄研）：陰性（１２）
オキシダーゼ：陰性 （１３）カ タラーゼ：陽性 （１４）生育の範囲＝１０６Ｃ〜３７℃の範囲で生育し
、５０℃では生育を認めない。この菌株の最適温度は、
２７℃〜３７℃である。
０℃。） （１）硝酸塩の還元：陽性 （２）脱窒反応（駒形らの方法によった）：陽性（３）
ＭＲテ ス ト：陰性 （４１ＶＰ テ ス ト：陽性 （５） インドールの生成：陰性 （６） 硫化水素の生成：陰性 （７）デンプンの加水分解：陽性 （８） クエン酸の利用（Ｋｏｓｅｒの培地及びＣｈ
ｒｉｓｔｅ−ｎｓｅｎの培地によった）：陽性 （９） 無機窒素源の利用（硝酸カリウム、硫酸アン
モニウムとも）：陽性 （１０）色素の生成（キングＡおよびキングＢ培地栄研
）：わずかに黄色色素を生成 （１１）ウレアーゼ（尿素培地、栄研）：陰性（１２）
オキシダーゼ：陰性 （１３）カ タラーゼ：陽性 （１４）生育の範囲＝１０６Ｃ〜３７℃の範囲で生育し
、５０℃では生育を認めない。この菌株の最適温度は、
２７℃〜３７℃である。
またｐ）１５．０〜９．０の範囲で生育を認め、最適ｐ
）ｌは、６．０〜８．０である。
）ｌは、６．０〜８．０である。
（１５）酸素に対する態度：通性嫌気性（１６）Ｏ−Ｆ
テスト（Ｈｕｇｈ−Ｌｅｉｆｓｏｎ法によツタ）：発酵
型（ただしガスの生成は陰性） （１７）糖類からの酸及びガスの生成（Ｈｕｇｈ（、ｅ
ｉｆｓｏｎの培地を使用） 糖類からの酸の生成、糖類からのガスの生成：すべて陰
性 （１８） ７％ＮａＣｌを含む培地での生育：陽性以
上の性状を要約すると、８ＭＧ３０２−ｆＦ６７株は通
性嫌気性のグラム陽性有芽胞桿菌で、周鞭毛を有し、運
動性を示す。芽胞は卵円形で位置は中立（Ｃｅｎｔｒａ
ｌ ）耐熱性である。菌体の膨隆は認められず、非抗酸
性である。
テスト（Ｈｕｇｈ−Ｌｅｉｆｓｏｎ法によツタ）：発酵
型（ただしガスの生成は陰性） （１７）糖類からの酸及びガスの生成（Ｈｕｇｈ（、ｅ
ｉｆｓｏｎの培地を使用） 糖類からの酸の生成、糖類からのガスの生成：すべて陰
性 （１８） ７％ＮａＣｌを含む培地での生育：陽性以
上の性状を要約すると、８ＭＧ３０２−ｆＦ６７株は通
性嫌気性のグラム陽性有芽胞桿菌で、周鞭毛を有し、運
動性を示す。芽胞は卵円形で位置は中立（Ｃｅｎｔｒａ
ｌ ）耐熱性である。菌体の膨隆は認められず、非抗酸
性である。
寒天培地では、不透明で辺縁の不規則なコロニーを形成
し、培地表面に拡がって増殖する。
し、培地表面に拡がって増殖する。
ゼラチンを液化し、ミルクをペプトン化する。
硝酸塩を還元し、脱窒反応陽性、ＭＲテスト陰性、ｖＰ
テスト陽性である。インドール笈び硫化水素を生成しな
い。デンプ／を分解し、クエン酸を利用する。ウレアー
ゼ反応陰性、オキシダーゼ反応陰性、カタラーゼ反応陽
性である。
テスト陽性である。インドール笈び硫化水素を生成しな
い。デンプ／を分解し、クエン酸を利用する。ウレアー
ゼ反応陰性、オキシダーゼ反応陰性、カタラーゼ反応陽
性である。
１０℃〜３７℃の範囲で生育を認め、最適温度は２７℃
〜３７℃である。またｐ）１５．０〜９．０の範囲で生
育し、最適ｐＨは６．０〜８．０である。グルコースを
醗酵的に分解し酸を生成する。Ｄ −グルコース、Ｄ−
７ラクトース及ヒシエークロースから南酸を生成するが
、それはＢＴＢ指示薬で反応し、ＢＣＰ指示薬では陰性
を示す程度である。なお、ガスは生成しない。一方し−
アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−マンノース、Ｄ−
ガラクトース、マルトース、ラクトース、トレハロース
、Ｄ−ソルビトール、イノシトール、Ｄ−マンニトール
、グリセロース、スターチからは酸及びガスの生成を認
めない。さらに７％ＮａＣ１を含む培地で生育する。
〜３７℃である。またｐ）１５．０〜９．０の範囲で生
育し、最適ｐＨは６．０〜８．０である。グルコースを
醗酵的に分解し酸を生成する。Ｄ −グルコース、Ｄ−
７ラクトース及ヒシエークロースから南酸を生成するが
、それはＢＴＢ指示薬で反応し、ＢＣＰ指示薬では陰性
を示す程度である。なお、ガスは生成しない。一方し−
アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−マンノース、Ｄ−
ガラクトース、マルトース、ラクトース、トレハロース
、Ｄ−ソルビトール、イノシトール、Ｄ−マンニトール
、グリセロース、スターチからは酸及びガスの生成を認
めない。さらに７％ＮａＣ１を含む培地で生育する。
これらの性状をＢｅｒｇｅｙｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ
Ｉ）ｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｊｏＪｏｇ
ｙ ８ ｔｈ ｅｄｉｔｊｏｎ （Ｒ−Ｅ−Ｂｕｒｈａ
ｎａｎ ＆ Ｎ、 Ｂ。
Ｉ）ｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｊｏＪｏｇ
ｙ ８ ｔｈ ｅｄｉｔｊｏｎ （Ｒ−Ｅ−Ｂｕｒｈａ
ｎａｎ ＆ Ｎ、 Ｂ。
Ｇｉｂｂｏｎｓ Ｔｈｅ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆Ｗｉｌ
ｋｉｎｓ Ｃｏｍｐａｎｙ、 ＢａＨｉｍｏｒｅ。
ｋｉｎｓ Ｃｏｍｐａｎｙ、 ＢａＨｉｍｏｒｅ。
１９７４）で検索すると８ＭＧ３０２−ＪＦ ６７株は
Ｂａｃｉｌｌｕｓ属に属すると考えられる。更に肴を検
索すると芽胞形成時の菌体の膨隆が認められず運動性を
有し、グルコースからアセトインを生成し、Ｌ−アラビ
ノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−マンニトールから酸を生
成しない種すなわちＢ、 ｃｅｒｅｕｓ、 Ｂ、 ｔｈ
ｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ、 Ｂ−ｃｏａｇｕｌａｎｓ等
が近緑のものと思われる。この５ちＢ、 ｔｈｕｒｉｎ
ｇｉｅｎｓｉｓは昆虫の病原菌である（前記のＢｅｒｇ
ｅｙ’ｓ Ｍｅｎｕａｌ ｐ ５３６参照）ことから８
ＭＧ３０２−ｆＰ６７株と区別される。８ＭＧ３０２−
ｆＦ ６７株の性状とＢ、 ｃｅｒｅｕｓ及びＢ、
ｃｏａｇｕｌａｎｓの文献上の記載を比較すると次表の
ようになる。（前記Ｂｅｒｇｅゾｓ Ｍａｎｕａｌ及び
Ｃｏｗａｎ ＆ ５ｔｅｅｌ著、坂崎利−訳「医学細菌
同定の手引き」く第２版〉近代出版１９７参照）表から
明らかなように８ＭＧ３０２−ｆＦ６７株は、５０℃で
生育しない、ゼラチンの加水分解陽性及び７％ＮａＣ１
添加培地における発育陽性の点でＢ−ｃｏａｇｕｌａｎ
ｓよりＢ−ｃｅｒｅｕｓに類似している。
Ｂａｃｉｌｌｕｓ属に属すると考えられる。更に肴を検
索すると芽胞形成時の菌体の膨隆が認められず運動性を
有し、グルコースからアセトインを生成し、Ｌ−アラビ
ノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−マンニトールから酸を生
成しない種すなわちＢ、 ｃｅｒｅｕｓ、 Ｂ、 ｔｈ
ｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ、 Ｂ−ｃｏａｇｕｌａｎｓ等
が近緑のものと思われる。この５ちＢ、 ｔｈｕｒｉｎ
ｇｉｅｎｓｉｓは昆虫の病原菌である（前記のＢｅｒｇ
ｅｙ’ｓ Ｍｅｎｕａｌ ｐ ５３６参照）ことから８
ＭＧ３０２−ｆＰ６７株と区別される。８ＭＧ３０２−
ｆＦ ６７株の性状とＢ、 ｃｅｒｅｕｓ及びＢ、
ｃｏａｇｕｌａｎｓの文献上の記載を比較すると次表の
ようになる。（前記Ｂｅｒｇｅゾｓ Ｍａｎｕａｌ及び
Ｃｏｗａｎ ＆ ５ｔｅｅｌ著、坂崎利−訳「医学細菌
同定の手引き」く第２版〉近代出版１９７参照）表から
明らかなように８ＭＧ３０２−ｆＦ６７株は、５０℃で
生育しない、ゼラチンの加水分解陽性及び７％ＮａＣ１
添加培地における発育陽性の点でＢ−ｃｏａｇｕｌａｎ
ｓよりＢ−ｃｅｒｅｕｓに類似している。
又、その他の諸点でもＢ、ｃｏａｇｕｌａｎｓとは明り
ように区別される。従って８ＭＧ３０２− ｆＦ ６７
株をバチルス・セレウス（ｌ３ａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒ
ｅｕｓ） ＢＭＧ ３０２− ｆＦ ６７と同定した。
ように区別される。従って８ＭＧ３０２− ｆＦ ６７
株をバチルス・セレウス（ｌ３ａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒ
ｅｕｓ） ＢＭＧ ３０２− ｆＦ ６７と同定した。
次に本発明の方法を具体的に説明する。
本発明により、プリパスタチンを製造するには、先ず前
記菌株を細菌が利用し得る栄養物を含有する培地で好気
的に培養する。栄養源としては、従来から細菌の培養に
利用されている公知のものが使用でき１例えば炭素源と
しては、グリセリン、グルコース、ラクトース、シュク
ロース、デンプン、マルトース糖蜜などの炭水化物、脂
肪などを単独または組み合せて用いることができる。無
機および有機窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、尿素。
記菌株を細菌が利用し得る栄養物を含有する培地で好気
的に培養する。栄養源としては、従来から細菌の培養に
利用されている公知のものが使用でき１例えば炭素源と
しては、グリセリン、グルコース、ラクトース、シュク
ロース、デンプン、マルトース糖蜜などの炭水化物、脂
肪などを単独または組み合せて用いることができる。無
機および有機窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、尿素。
硝酸アンモニウム、硝酸ソーダ、ペプトン、肉エキス、
酵母エキス、乾燥酵母、コーン拳スチープ・リカー、大
豆粉、綿実油カス、オートミール、カザミノ酸、バクト
ソイトン、ソルブル・ベジタブル・プロティンなどを単
独または組み合せて用いることができる。その他必要に
応じて食塩、硫酸マグネシウム、硫酸鋼、硫酸鉄、硫酸
炬鉛、塩化マンガン、炭酸カルシウム、燐酸塩などの無
機塩を加えることができるほか本国の生育やプリパスタ
チンの生産を促進する有機物、例えばアミノ酸類や無機
物を適当に添加することができる。
酵母エキス、乾燥酵母、コーン拳スチープ・リカー、大
豆粉、綿実油カス、オートミール、カザミノ酸、バクト
ソイトン、ソルブル・ベジタブル・プロティンなどを単
独または組み合せて用いることができる。その他必要に
応じて食塩、硫酸マグネシウム、硫酸鋼、硫酸鉄、硫酸
炬鉛、塩化マンガン、炭酸カルシウム、燐酸塩などの無
機塩を加えることができるほか本国の生育やプリパスタ
チンの生産を促進する有機物、例えばアミノ酸類や無機
物を適当に添加することができる。
培養法としては、液体培養、特に深部攪拌培養法が最も
適している。培養温度は２５℃〜３０℃、 ｐ１４は中
性附近で培養を行５ことが望ましい、液体培養では通常
１日ないし２日間培養を行うと生理活性物質プリパスタ
チンが培養液中に生成蓄積される。培養液中の生成量が
最大に達したとき培養を停止し、菌体を戸別し、得られ
る培養ろ液中より目的物を精製単離する。
適している。培養温度は２５℃〜３０℃、 ｐ１４は中
性附近で培養を行５ことが望ましい、液体培養では通常
１日ないし２日間培養を行うと生理活性物質プリパスタ
チンが培養液中に生成蓄積される。培養液中の生成量が
最大に達したとき培養を停止し、菌体を戸別し、得られ
る培養ろ液中より目的物を精製単離する。
プリパスメチンの培養工程ならび精製工程中での追跡は
、次の方法による抗ホスホリパーゼＤ活性の測定に基づ
いて行った。
、次の方法による抗ホスホリパーゼＤ活性の測定に基づ
いて行った。
抗ホスホリパーゼＤ活性の測定は、奥山ら（Ａ、Ｑｋｕ
ｙａｍａ、 Ｔ、Ｎ１５ｈｉｋｉｏｒｉ、 ’ｌ’、Ａ
ｏｙａｇｉ ａｎｄ ＨｏＵｍｅｚａ−ｗａ、 Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ４
．４１７．１９８２ ）記載の方法で行なった。即ち、
２００ ｍＭジパルミトイル−ホスファチジルコリン（
ＤＰＣ）とコリン−メチ／Ｉ／ −１４Ｃ−ＤＰＣ（４
Ｘ １０’ ｄｐｍ）を１ ｍＭ塩化カルシウムを含む
５０ｍＭトＩＪスー塩酸緩衝液（ｐＨ５，７）３９０μ
監に超音波処理でけん濁させ、検体を含む溶液１０μｍ
を加えた混合溶液に市販のホスホリパーゼＤ（キャベツ
由来）溶液１００μｍを加え３７℃で２０分間反応した
のちクロロホルム：メタノール：濃塩酸（２： １ ：
０、０２ ｖ／ｖ）混液１，５Ｍを加えて反応を停止す
る。
ｙａｍａ、 Ｔ、Ｎ１５ｈｉｋｉｏｒｉ、 ’ｌ’、Ａ
ｏｙａｇｉ ａｎｄ ＨｏＵｍｅｚａ−ｗａ、 Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ４
．４１７．１９８２ ）記載の方法で行なった。即ち、
２００ ｍＭジパルミトイル−ホスファチジルコリン（
ＤＰＣ）とコリン−メチ／Ｉ／ −１４Ｃ−ＤＰＣ（４
Ｘ １０’ ｄｐｍ）を１ ｍＭ塩化カルシウムを含む
５０ｍＭトＩＪスー塩酸緩衝液（ｐＨ５，７）３９０μ
監に超音波処理でけん濁させ、検体を含む溶液１０μｍ
を加えた混合溶液に市販のホスホリパーゼＤ（キャベツ
由来）溶液１００μｍを加え３７℃で２０分間反応した
のちクロロホルム：メタノール：濃塩酸（２： １ ：
０、０２ ｖ／ｖ）混液１，５Ｍを加えて反応を停止す
る。
その後、０．１Ｍの塩化カリウムを含む５０％メタノー
ル１．０Ｍを加えて攪拌し、遠心により上層と下層に分
離する。この上層より酵素によって遊離したコリンの放
射活性（ａ）を測定した。同時に検体を含まない緩衝液
のみを用いた盲検の放射活性（Ｉ））を測定し、ホスホ
リパーゼＤ阻害率を１： （ｂ−ａ）／ｂ） ｘ １０
０により計算した。
ル１．０Ｍを加えて攪拌し、遠心により上層と下層に分
離する。この上層より酵素によって遊離したコリンの放
射活性（ａ）を測定した。同時に検体を含まない緩衝液
のみを用いた盲検の放射活性（Ｉ））を測定し、ホスホ
リパーゼＤ阻害率を１： （ｂ−ａ）／ｂ） ｘ １０
０により計算した。
５０％阻害率を示す検体の濃度をＩＣ，の値とした。
培養ろ液より精製、単離には、一般に微生物代謝産物を
その培養ろ液より単離するために用いられる分離精震法
が利用される。
その培養ろ液より単離するために用いられる分離精震法
が利用される。
プリパスタチンは水、メタノール、エタノール、ｎ−７
’ロバノールに溶けるが、アセトンをはじめとする一般
有機溶媒には不溶ないし麹溶性の物質で、その精製はい
わゆる水溶性酸性物質の精製に用いられる方法により行
なわれる。
’ロバノールに溶けるが、アセトンをはじめとする一般
有機溶媒には不溶ないし麹溶性の物質で、その精製はい
わゆる水溶性酸性物質の精製に用いられる方法により行
なわれる。
すなわち活性炭末、および多孔性樹脂による吸、■
脱着法、シリカゲル、シラナイズドシリカケル、＋、７
アデｙ、−＋りＬｌ（−２０７７’）カ５１−り０ ？
）クラフィーなどの方法を適当に組み合せて用いるこ
とができる。
アデｙ、−＋りＬｌ（−２０７７’）カ５１−り０ ？
）クラフィーなどの方法を適当に組み合せて用いるこ
とができる。
例エバ、バチルス拳セレウスＢＭＧ３０２− ｆＦｌｉ
６□。培養Ｆ液をア、バウィ、■ＸＡＤ−７１処理して
、目的物質を吸着させ、水洗後８０％メタノールにて溶
出し、目酷物質を含む茶褐色を呈する粗粉床を得る。こ
れは本発明のプリパスタチンのＡ群及びＢ群の４種の化
合物を含む。
６□。培養Ｆ液をア、バウィ、■ＸＡＤ−７１処理して
、目的物質を吸着させ、水洗後８０％メタノールにて溶
出し、目酷物質を含む茶褐色を呈する粗粉床を得る。こ
れは本発明のプリパスタチンのＡ群及びＢ群の４種の化
合物を含む。
各化合物の単離は以下のようにして行われる。
上記で得られた粗粉床のｎ−プロパツール溶液を、予め
ｎ−プロパノールで平衡化したシリカゲルのカラムに通
し、水の濃度を段階的に上げることにより溶出し、後記
するブリパスタチンＡ群（Ａ１およびん）とＢ群（Ｂｔ
およびＢ２）とを相互に分離することができる。得られ
たブリパスタチンＡ群は、予め１％の酢酸カリウムと３
％酢酸を含む水溶液：メタノール（４：６）混液で平衡
化したシラナイズド・シリカゲルのカラムに通し、同じ
混液で溶出し、活性区分を■ 集めセファデックス ＬＨ−２０で脱塩後、濃縮凍結乾
燥する。次にこの粉末を、予め２％酢酸カリウムと６％
酢酸を含む水溶液ニアセトニトリル（１：１）混液で平
衡したヌクレオシル−５０１ｓのカラムを用いた高速液
体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって、プリパス
タチンＡｔとＡ２とを相互に分離することができる。即
ち、ＨＰＬＣにより得られた各活性区分から、その中に
含有する酢酸カリウムをセフアブラス！ＬＨ−２０で除
いた後、それぞれの活性区分を濃縮凍結乾燥することに
よりプリパスタチンＡ１又はＡ２の白色粉末をカリウム
塩として得た。
ｎ−プロパノールで平衡化したシリカゲルのカラムに通
し、水の濃度を段階的に上げることにより溶出し、後記
するブリパスタチンＡ群（Ａ１およびん）とＢ群（Ｂｔ
およびＢ２）とを相互に分離することができる。得られ
たブリパスタチンＡ群は、予め１％の酢酸カリウムと３
％酢酸を含む水溶液：メタノール（４：６）混液で平衡
化したシラナイズド・シリカゲルのカラムに通し、同じ
混液で溶出し、活性区分を■ 集めセファデックス ＬＨ−２０で脱塩後、濃縮凍結乾
燥する。次にこの粉末を、予め２％酢酸カリウムと６％
酢酸を含む水溶液ニアセトニトリル（１：１）混液で平
衡したヌクレオシル−５０１ｓのカラムを用いた高速液
体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって、プリパス
タチンＡｔとＡ２とを相互に分離することができる。即
ち、ＨＰＬＣにより得られた各活性区分から、その中に
含有する酢酸カリウムをセフアブラス！ＬＨ−２０で除
いた後、それぞれの活性区分を濃縮凍結乾燥することに
よりプリパスタチンＡ１又はＡ２の白色粉末をカリウム
塩として得た。
一方、上記のシリカゲルのカラムによって得られたプリ
パスタチン８群（ＢｔおよびＢ２を含む）は、予め・１
０％メタノール溶液で平衡化したシ、■ ラナイズド・シリカケルのカラムに通し、同じ■ 溶液で溶出し活性区分を集めセファデックスＬＨ−２０
で分画後、濃縮凍結乾燥する。次にこの粉末を、上記Ａ
群で用いたＨＰＬＣによって７” ＋７ バスタチンＢ
１とＢ２とを相互に分離せしめ、■ 活性区分を同様゛にセファデックス ＬＨ−２０に通し
た後、濃縮凍結乾燥することによって、プリパスタチン
Ｂ、又はＢ２の白色粉末をカリウム塩として得た。
パスタチン８群（ＢｔおよびＢ２を含む）は、予め・１
０％メタノール溶液で平衡化したシ、■ ラナイズド・シリカケルのカラムに通し、同じ■ 溶液で溶出し活性区分を集めセファデックスＬＨ−２０
で分画後、濃縮凍結乾燥する。次にこの粉末を、上記Ａ
群で用いたＨＰＬＣによって７” ＋７ バスタチンＢ
１とＢ２とを相互に分離せしめ、■ 活性区分を同様゛にセファデックス ＬＨ−２０に通し
た後、濃縮凍結乾燥することによって、プリパスタチン
Ｂ、又はＢ２の白色粉末をカリウム塩として得た。
このようにして得られた本発明の各化合物はアルカリで
ケン化した化合物の質量分析スペクトルに表われた分子
イオンのフラグメントより構成アミノ酸の配列順序は、
Ｎ末端よりＱｌｕ。
ケン化した化合物の質量分析スペクトルに表われた分子
イオンのフラグメントより構成アミノ酸の配列順序は、
Ｎ末端よりＱｌｕ。
Ｏｒｎ、 Ｔｙｒ、 Ｔｈｒ、 Ｇｌｕ、 Ａｌａ （
又はＶａｌ ）、 Ｐｒｏ、 Ｑｌｎ、 Ｔｙｒ。
又はＶａｌ ）、 Ｐｒｏ、 Ｑｌｎ、 Ｔｙｒ。
１１ａであることが認められた。又、赤外吸収スペクト
ルに表わされたラクトン環の存在はβ−水酸化脂肪酸と
Ｃ末端アミノ酸のＩｌｅとが結合していることが晴素分
解、ＮＭＲスペクトル回折により認められ、本発明物質
の全構造は、前記のものであることが認められた。
ルに表わされたラクトン環の存在はβ−水酸化脂肪酸と
Ｃ末端アミノ酸のＩｌｅとが結合していることが晴素分
解、ＮＭＲスペクトル回折により認められ、本発明物質
の全構造は、前記のものであることが認められた。
次に本発明化合物の理化学的性質を第１表に示す。（但
し特別断わらない限りに塩の形で測定されたものである
。） 急性毒性 本発明化合物の毒性は比較的弱く、例えばマウスに対す
る急性毒性試験では、プリパスタチンＢ、のＬＤｓ。は
腹腔内投与で２５０〜５００〜／ ｋＰを示した。
し特別断わらない限りに塩の形で測定されたものである
。） 急性毒性 本発明化合物の毒性は比較的弱く、例えばマウスに対す
る急性毒性試験では、プリパスタチンＢ、のＬＤｓ。は
腹腔内投与で２５０〜５００〜／ ｋＰを示した。
このよ５に本発明のプリパスタチンは単独で免疫効果を
抑制することが認められる。従って本発明化合物は免疫
抑制剤としての有用性が期待できるものである。
抑制することが認められる。従って本発明化合物は免疫
抑制剤としての有用性が期待できるものである。
本発明の化合物を免疫抑制剤として使用する場合には、
通常アルカリ金属塩その他の非毒性塩の形で使用され、
従来の医薬における製剤化及び投与方法を適用すればよ
く５例えば注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、座薬などゐ
製剤とすることができ、投与方法としては注射、経口、
直腸投与などの方法をとることができる。
通常アルカリ金属塩その他の非毒性塩の形で使用され、
従来の医薬における製剤化及び投与方法を適用すればよ
く５例えば注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、座薬などゐ
製剤とすることができ、投与方法としては注射、経口、
直腸投与などの方法をとることができる。
製剤化に際しては本発明化合物に悪影響を及ぼさない限
り、医薬用に用いられる担体、その他の助剤などが使用
される。製剤中における有効成分含量は製剤形態等によ
り異なるが通常０．０１％（ｗ／ｗ以下同じ）〜１ｏｏ
％好ましくは０．１〜７０％である。
り、医薬用に用いられる担体、その他の助剤などが使用
される。製剤中における有効成分含量は製剤形態等によ
り異なるが通常０．０１％（ｗ／ｗ以下同じ）〜１ｏｏ
％好ましくは０．１〜７０％である。
製剤化の際には本発明の化合物に悪影射を与えない限り
、医薬用に用いられる種々の補助剤。
、医薬用に用いられる種々の補助剤。
すなわち、担体やその他の助剤１例えば安定剤、防腐剤
、無痛化剤等が必要に応じて使用されつる。注射剤の、
調剤化を具体的に説明すると、本発明の化合物とマンニ
トールを蒸留水に溶解し、注射用小びんに分注するか、
またはそのまま凍結乾燥し、投与に際して生理的食塩水
または蒸留水で溶解して注射液とすることができる。
、無痛化剤等が必要に応じて使用されつる。注射剤の、
調剤化を具体的に説明すると、本発明の化合物とマンニ
トールを蒸留水に溶解し、注射用小びんに分注するか、
またはそのまま凍結乾燥し、投与に際して生理的食塩水
または蒸留水で溶解して注射液とすることができる。
本発明化合物の投与量は症状等により異なるが、成人１
人１日当り０．０１〜２０００ｍｇ、好ましくは０．１
〜Ｉ ０００■である。
人１日当り０．０１〜２０００ｍｇ、好ましくは０．１
〜Ｉ ０００■である。
次に製剤例を示す。
注射剤
プリパスタチンＢ１のカリウム塩３０重量部に対し精製
水９７０部を加え溶解後ミ＋）ボアフィルターＧＳタイ
プを用いて除菌濾過する。このろ液’ｌ ｍｌをｌＱｍ
のバイアル瓶にとり凍結乾燥し、凍結乾燥注射剤を得た
。
水９７０部を加え溶解後ミ＋）ボアフィルターＧＳタイ
プを用いて除菌濾過する。このろ液’ｌ ｍｌをｌＱｍ
のバイアル瓶にとり凍結乾燥し、凍結乾燥注射剤を得た
。
顆粒剤
７’ ＩＪパスクチンＡ□のカリウム塩５０重１部。
乳糖６００部、結晶セルロース３３０部及びヒドロキシ
プロピルセルロース２０部をよく混和し、ロール型圧縮
機（ローラーコン・くクタジを用いて圧縮し、破砕して
１６メツシユと６０メツシユの間に入るよう篩過し、顆
粒とした。
プロピルセルロース２０部をよく混和し、ロール型圧縮
機（ローラーコン・くクタジを用いて圧縮し、破砕して
１６メツシユと６０メツシユの間に入るよう篩過し、顆
粒とした。
次に本発明の新生理活性物ブリノくスタチンの生理活性
について説明する。
について説明する。
（１） ホスホリパーゼ阻害活性
ホスホリパーゼ阻害活性の測定は、前記と同様に奥山記
載の方法によって行った。
載の方法によって行った。
その結果を第２表に示す。
第２表 ホスホリパーゼ阻害活性
（２）免疫抑制効果
本発明のプリバスタチンについてその薬理作用を検討し
た。その結果、本物質が細胞性免疫に対する抑制効果を
有していることが見出された。
た。その結果、本物質が細胞性免疫に対する抑制効果を
有していることが見出された。
本発明のプリバスタチンＡ、、 Ｂｔ両物質の細胞性免
疫抑制効果について試験例を挙げて説明する。
疫抑制効果について試験例を挙げて説明する。
試験例１゜
本例は正常マウスにおける細胞性免疫に及ぼす効果を示
す。
す。
細胞性免疫に及ぼすプリパスタチンＡ１及びＢ１の作用
を、羊赤血球（ＳＲＢＣ）’を抗原としてマウス足前に
接種して得られる（遅延製過敏症）（Ｄ、 Ｔ、 Ｈ，
）を指標（参考文献Ｊ、 Ｅｘｐ−Ｍｅｄ・１３９゜１
５２９〜１５３９．１９７４）として検討した。
を、羊赤血球（ＳＲＢＣ）’を抗原としてマウス足前に
接種して得られる（遅延製過敏症）（Ｄ、 Ｔ、 Ｈ，
）を指標（参考文献Ｊ、 Ｅｘｐ−Ｍｅｄ・１３９゜１
５２９〜１５３９．１９７４）として検討した。
即ち、ＳＲ，ＢＣ５Ｘ １０’を生理食塩水に浮遊させ
た懸濁液をＣＤＦ、（雌性８週令）マウスの静脈内に接
種し、これと同時に、プリノくスタチンＡ１又はＢｌの
５ ｍｑ ／ ｋｙ又は０．５ ｍｇ ／ ｋｇを含有
する水溶液を１回腹腔内に投与した。投与４日後、他の
一方の足前に、５ＲＢＣＩＯ’個を生理食塩水に浮遊さ
れた懸濁液を皮下投与して二次感作させた。その２４時
間後、その足前にみられる腫脹度（足前の厚さの増加）
をキャリノ＜スで測定した。供試化合物を投与しないで
５ＲＢＣ及び生理食塩水の皮下注射を受けた対照動物の
足跪腫脹度を１００％と評価し、これと処理した供試動
物の足ｖ庶腫脹度を比較することにより供試化合物の細
胞性免疫抑制効果を判定した。試験結果を次表に示す。
た懸濁液をＣＤＦ、（雌性８週令）マウスの静脈内に接
種し、これと同時に、プリノくスタチンＡ１又はＢｌの
５ ｍｑ ／ ｋｙ又は０．５ ｍｇ ／ ｋｇを含有
する水溶液を１回腹腔内に投与した。投与４日後、他の
一方の足前に、５ＲＢＣＩＯ’個を生理食塩水に浮遊さ
れた懸濁液を皮下投与して二次感作させた。その２４時
間後、その足前にみられる腫脹度（足前の厚さの増加）
をキャリノ＜スで測定した。供試化合物を投与しないで
５ＲＢＣ及び生理食塩水の皮下注射を受けた対照動物の
足跪腫脹度を１００％と評価し、これと処理した供試動
物の足ｖ庶腫脹度を比較することにより供試化合物の細
胞性免疫抑制効果を判定した。試験結果を次表に示す。
第 ３ 表
試験例２゜
本例はリンパ球幼若化反応に対するプリパスタチンの抑
制効果を示す。
制効果を示す。
リンパ球幼若化反応は、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡと
略）と大腸菌の０５５ ： Ｂｓのリポ多糖（ＬＰＳ）
の刺激下にある各ＴとＢ細胞のＤＮＡ合成を〔３Ｈ〕−
チ゛ミジンの取り込みを指標として検討した。（参考文
献、免疫実験操作法［）ｐ２２６７−２２７６．日本免
疫学金線） ’ｌ’ ＩＪンパ球幼若化反応において、Ｔ細胞は、Ｂ
ＡＬＢ ／ ｃマウス（１９９週令の肺細胞をナイロン
カラムを通して吸着性細胞を除去し、プラスチックシャ
ーレ内で１時間培養することによって粘着細胞を除いて
得た。’ｌ’ リンパ球の培養には２０％牛脂児血清、
２５ ｍＭのＨｅｐｅｓ、 １００μｇ／ｍｌのストレ
ストマイシン及び１００単位／ｍｌのペニシリンＧを添
加したＲＰＭ１１６４０培地を用い、培養はファルコン
マイクロテストプレートのウェルの中で行なった。ウェ
ルの中にはＩ Ｘ １０’の１９７７球、５７ｊｇ／コ
のＣｏｎＡ及びアシルペプチドＢＭＧ３０２ ｆＦ
６７ＡＩ又はＢ！をこの順に加え最後に当培地で全量を
０．２ ｍとした。これを７２時間培養した。培養終了
の８時間前に〔３Ｈ〕チミジンを加えてパルスした。一
方Ｂリンパ球幼若比反応において、Ｔ細胞の代わりに肺
細胞を用い、ＣｏｎＡの代わりにＬＰ８を１００μｇ
／ ｍｌ添加した。これら以外の条件は前記と同一であ
る。
略）と大腸菌の０５５ ： Ｂｓのリポ多糖（ＬＰＳ）
の刺激下にある各ＴとＢ細胞のＤＮＡ合成を〔３Ｈ〕−
チ゛ミジンの取り込みを指標として検討した。（参考文
献、免疫実験操作法［）ｐ２２６７−２２７６．日本免
疫学金線） ’ｌ’ ＩＪンパ球幼若化反応において、Ｔ細胞は、Ｂ
ＡＬＢ ／ ｃマウス（１９９週令の肺細胞をナイロン
カラムを通して吸着性細胞を除去し、プラスチックシャ
ーレ内で１時間培養することによって粘着細胞を除いて
得た。’ｌ’ リンパ球の培養には２０％牛脂児血清、
２５ ｍＭのＨｅｐｅｓ、 １００μｇ／ｍｌのストレ
ストマイシン及び１００単位／ｍｌのペニシリンＧを添
加したＲＰＭ１１６４０培地を用い、培養はファルコン
マイクロテストプレートのウェルの中で行なった。ウェ
ルの中にはＩ Ｘ １０’の１９７７球、５７ｊｇ／コ
のＣｏｎＡ及びアシルペプチドＢＭＧ３０２ ｆＦ
６７ＡＩ又はＢ！をこの順に加え最後に当培地で全量を
０．２ ｍとした。これを７２時間培養した。培養終了
の８時間前に〔３Ｈ〕チミジンを加えてパルスした。一
方Ｂリンパ球幼若比反応において、Ｔ細胞の代わりに肺
細胞を用い、ＣｏｎＡの代わりにＬＰ８を１００μｇ
／ ｍｌ添加した。これら以外の条件は前記と同一であ
る。
プリパスタチンＡＩはＣｏｎＡ刺激Ｔリンパ球内及びＬ
ＰＳ刺激Ｂリンパ球内の（３Ｈ〕チミジンの取り込みを
１００μｇ／ｍｌの濃度で各々５２％、１５％抑制させ
た。また、プリパスタチンＢ１はＣｏｎＡ刺激Ｔリンパ
球及びＬＰＳ刺激Ｂリンパ球幼若化反応を各々５４％、
２０％抑制させた。
ＰＳ刺激Ｂリンパ球内の（３Ｈ〕チミジンの取り込みを
１００μｇ／ｍｌの濃度で各々５２％、１５％抑制させ
た。また、プリパスタチンＢ１はＣｏｎＡ刺激Ｔリンパ
球及びＬＰＳ刺激Ｂリンパ球幼若化反応を各々５４％、
２０％抑制させた。
以上の結果より、プリパスタチンは正常動物の細胞性免
疫能を抑制する物質であると認められる。
疫能を抑制する物質であると認められる。
（３）ＰＣＡ反応抑制効果
本発明のプリパスタチンについてそのＩｎ作用を検討し
た。その結果本物質がＰＣＡ（Ｐａ５ｓｉｖｅ ｃｕｔ
ａｎｅｏｕｓ ａｎａｐｈｙｌａｘｉｅ）反応に対する
抑制効果を有していることが見出された。
た。その結果本物質がＰＣＡ（Ｐａ５ｓｉｖｅ ｃｕｔ
ａｎｅｏｕｓ ａｎａｐｈｙｌａｘｉｅ）反応に対する
抑制効果を有していることが見出された。
本発明のプリパスタチンＡ１のＰＣＡ反Ｅ抑制効果につ
いて試験例を挙げて説明する。
いて試験例を挙げて説明する。
試験例１゜
本例はＰＣＡ反応に対するブリパスタチンへ１の抑制効
果を示す。以下の実験は常法に従って行った。（参考文
献、 Ｊ、Ｉｍｍｕｒ＋ｏｌｏｇｙ・１ｏ６゜１００２
〜１０１１．１９７１）すなわち、エラグアルブミンを
抗原として用いてラットを感作し抗血清を得た。この抗
エッグアルブミン血清５０μｍをＳ−Ｄ系ラット（雄、
８週令）の背部に皮肉注射１−て受身的に感作を行った
。４８時間後、ラット毎にエラグアルブミン（２，５Ｉ
ｎ９）とエバンスブルー（２，５雫）とを含有する生理
的食塩水を静脈内注射してチャレンジを行い、６０分後
、感作部位にみもれるエバンスブルー漏出による背色色
素班出現の有無を判定した。
果を示す。以下の実験は常法に従って行った。（参考文
献、 Ｊ、Ｉｍｍｕｒ＋ｏｌｏｇｙ・１ｏ６゜１００２
〜１０１１．１９７１）すなわち、エラグアルブミンを
抗原として用いてラットを感作し抗血清を得た。この抗
エッグアルブミン血清５０μｍをＳ−Ｄ系ラット（雄、
８週令）の背部に皮肉注射１−て受身的に感作を行った
。４８時間後、ラット毎にエラグアルブミン（２，５Ｉ
ｎ９）とエバンスブルー（２，５雫）とを含有する生理
的食塩水を静脈内注射してチャレンジを行い、６０分後
、感作部位にみもれるエバンスブルー漏出による背色色
素班出現の有無を判定した。
被検薬（１５０μｌ）はチャレンジの５分前に感作部位
に皮肉投与した。対照薬としてＤＳＣＧ（ｄｉｓｏｄｉ
ｕｍ ｃｒｏｍｏｇｌｙｃａｔｅ ）を用いた。試験結
果を次表に示す。
に皮肉投与した。対照薬としてＤＳＣＧ（ｄｉｓｏｄｉ
ｕｍ ｃｒｏｍｏｇｌｙｃａｔｅ ）を用いた。試験結
果を次表に示す。
第 ４ 表
＊５例中の例数、４体Ｐ：危険率
第４表に示す様に、プリパスタチンＡ１は５９０１Ｍ１
，５９μＭの局所皮肉投与により、ＤＳＣＧと同程度の
ＰＣＡ反応抑制作用が認められた。
，５９μＭの局所皮肉投与により、ＤＳＣＧと同程度の
ＰＣＡ反応抑制作用が認められた。
この結果から１本物質は喘息、花粉症及びアトピー性皮
膚炎などの１型アレルギーに対して抑制効果を示す物質
であると認められた。
膚炎などの１型アレルギーに対して抑制効果を示す物質
であると認められた。
本発明のプリパスタチンは上記試験例から明らかなよう
に、細胞免疫抑制効果を持ち゛、かつ毒性も低く、従来
の免疫抑制剤とは作用機作の異なる免疫抑制剤として、
またＰＣＡ反応抑制作用を持つことから、抗アレルギー
剤として期待されるものである。
に、細胞免疫抑制効果を持ち゛、かつ毒性も低く、従来
の免疫抑制剤とは作用機作の異なる免疫抑制剤として、
またＰＣＡ反応抑制作用を持つことから、抗アレルギー
剤として期待されるものである。
以下、本発明の実施例を示すが、これは単なる一例示で
あってなんら本発明を限定するものでなく、種々の変法
が可能である。
あってなんら本発明を限定するものでなく、種々の変法
が可能である。
実施例１゜
５００＃ＩＡ！容三角フラスコにグリセリン２．５％、
牛肉エキス（極東社製）０．５％、ポリペプトン０．５
％、酵母エキス（オリエンタル社、ｍ＋り１．０％、塩
化ナトリウム０．２％、硫酸マグネシウム・７水塩０．
０５％、リン酸第２カリウム０．０５％、炭酸カルシウ
ム０．３２％、消泡剤としてシリコンＫＭ−７０（信越
化学社製）二大豆油（開法）（１：ｌ）の混液０．０５
％、ｐＩ−１７，４，１２０℃、２０分間オートクレー
ブ滅菌した培地１２０ｍＪを分注しこれにプリパスタチ
ン生産菌（微工研菌寄第７８ ｌｌ ３号）１白金耳を
接種し、２７℃、１８０回転／分の回転式振盪機にて１
日間培養した。この前培養液１庇を前記培地１２０Ｍを
分注滅菌した５００属の三角フラスコへ移植し、前記同
条件下で１日間振盪培養した。培養液はｐＨ７，４で菌
体を戸別し、Ｆ液１８４を得た。このろ液のホスフォリ
パーゼＤ阻害活性（ＩＣｓｏ）は３２ μ１７’ｒｎｌ
テアった。このろ液をアンバーライトＸＡＤ−７（２ｎ
）を充填したカラムに通し、酵素阻害物質を吸着させ、
水洗（８石）後、８０％メタノニル（４りで溶出した。
牛肉エキス（極東社製）０．５％、ポリペプトン０．５
％、酵母エキス（オリエンタル社、ｍ＋り１．０％、塩
化ナトリウム０．２％、硫酸マグネシウム・７水塩０．
０５％、リン酸第２カリウム０．０５％、炭酸カルシウ
ム０．３２％、消泡剤としてシリコンＫＭ−７０（信越
化学社製）二大豆油（開法）（１：ｌ）の混液０．０５
％、ｐＩ−１７，４，１２０℃、２０分間オートクレー
ブ滅菌した培地１２０ｍＪを分注しこれにプリパスタチ
ン生産菌（微工研菌寄第７８ ｌｌ ３号）１白金耳を
接種し、２７℃、１８０回転／分の回転式振盪機にて１
日間培養した。この前培養液１庇を前記培地１２０Ｍを
分注滅菌した５００属の三角フラスコへ移植し、前記同
条件下で１日間振盪培養した。培養液はｐＨ７，４で菌
体を戸別し、Ｆ液１８４を得た。このろ液のホスフォリ
パーゼＤ阻害活性（ＩＣｓｏ）は３２ μ１７’ｒｎｌ
テアった。このろ液をアンバーライトＸＡＤ−７（２ｎ
）を充填したカラムに通し、酵素阻害物質を吸着させ、
水洗（８石）後、８０％メタノニル（４りで溶出した。
活性区分を集め、減圧下で濃縮乾燥することにより茶褐
色の粗粉末２４．６９ （Ｉ Ｃｓｏ ＝１８μｇ／ゴ
）を得た。
色の粗粉末２４．６９ （Ｉ Ｃｓｏ ＝１８μｇ／ゴ
）を得た。
次にこのｎ−プロパツール溶液を、予めｎ−プロパツー
ルで充填したシリカゲル（１２）のカラムへ通し、順次
ｎ−グプロノール（３００ｍ）、９０％ｎ−プロパツー
ル水溶液（２り、８０％ｎ−プロパツール水溶液（２，
５ｎ）で溶出し、活性区分を集め、減圧下で濃縮乾燥す
る。９０％グロプロール溶出区分より本物質Ｂ群（＆及
びＢ２）を含む黄褐色粉末２．１５？（ＩＣｓｏ１５μ
ｇ／ｄ）そして８０％プロパツール溶出区分より本物質
Ａ群（Ａ４及びＡ２ ）を含む黄褐色粉末２．０ Ｐ（
ＩＣ５ｏ ９．５μｇ／ｒａｔ ）をそれぞれ得た。得
られた本物質Ａ群の黄褐色粉末を予めメタノール：酢酸
緩衝液（１％酢酸カリウム、３％酢酸、Ｉ）Ｈ５）＝（
６： ４ ）の溶液で充填したシラナイズドシリカゲル
（４００ａｌりのカラムへ通し、前記の溶液で溶出した
。得られた活性区分を集め濃縮乾燥後少量の８０％メタ
ノールに溶かし、セファデックスＬＨ−２０のカラム（
８０％メタノール溶出）によって過剰の酢酸カリウムを
除く脱塩操作により活性区分を集め、減圧下で濃縮乾燥
し、淡黄色の粉末９９４＃（ＩＣ５Ｏ９，５μｇ／ｒｕ
ｌ）を得た。次にこの粉末を予めアセトニトリル：酢酸
緩衝液（２％酢酸カリウム、６％酢酸、 ｐｉ−１４）
＝ （１： １ ）の溶液で平衡化した高速液体クロ
マトグラフィ（）ＩＰＬｃ）用カラム（センシュー科学
社製、マクレオジル５ Ｃ＋ａ ２０ダ×３００ｍ／ｍ
、流速８ｍ１ｒ／ｍ１ｎ）へ通し、前記平衡液で溶出し
た。得られた活性区分Ａｌ及びＡ２を集め、それぞれ濃
縮乾燥後、先のシラナイズドシリカの溶出液で行った脱
塩操作と同じ方法により脱塩することにより無色粉床プ
リ゛パスタチンＡｔ ５４２ 睨（ＩＣｓ。
ルで充填したシリカゲル（１２）のカラムへ通し、順次
ｎ−グプロノール（３００ｍ）、９０％ｎ−プロパツー
ル水溶液（２り、８０％ｎ−プロパツール水溶液（２，
５ｎ）で溶出し、活性区分を集め、減圧下で濃縮乾燥す
る。９０％グロプロール溶出区分より本物質Ｂ群（＆及
びＢ２）を含む黄褐色粉末２．１５？（ＩＣｓｏ１５μ
ｇ／ｄ）そして８０％プロパツール溶出区分より本物質
Ａ群（Ａ４及びＡ２ ）を含む黄褐色粉末２．０ Ｐ（
ＩＣ５ｏ ９．５μｇ／ｒａｔ ）をそれぞれ得た。得
られた本物質Ａ群の黄褐色粉末を予めメタノール：酢酸
緩衝液（１％酢酸カリウム、３％酢酸、Ｉ）Ｈ５）＝（
６： ４ ）の溶液で充填したシラナイズドシリカゲル
（４００ａｌりのカラムへ通し、前記の溶液で溶出した
。得られた活性区分を集め濃縮乾燥後少量の８０％メタ
ノールに溶かし、セファデックスＬＨ−２０のカラム（
８０％メタノール溶出）によって過剰の酢酸カリウムを
除く脱塩操作により活性区分を集め、減圧下で濃縮乾燥
し、淡黄色の粉末９９４＃（ＩＣ５Ｏ９，５μｇ／ｒｕ
ｌ）を得た。次にこの粉末を予めアセトニトリル：酢酸
緩衝液（２％酢酸カリウム、６％酢酸、 ｐｉ−１４）
＝ （１： １ ）の溶液で平衡化した高速液体クロ
マトグラフィ（）ＩＰＬｃ）用カラム（センシュー科学
社製、マクレオジル５ Ｃ＋ａ ２０ダ×３００ｍ／ｍ
、流速８ｍ１ｒ／ｍ１ｎ）へ通し、前記平衡液で溶出し
た。得られた活性区分Ａｌ及びＡ２を集め、それぞれ濃
縮乾燥後、先のシラナイズドシリカの溶出液で行った脱
塩操作と同じ方法により脱塩することにより無色粉床プ
リ゛パスタチンＡｔ ５４２ 睨（ＩＣｓ。
＝２．１μｇ ／ ｍｅ ）及び無色粉末プリパスタチ
ンＡ２１５２１１７１１ （Ｉ Ｃｓｏ ＝ ３． Ｊ
ＩＪ μｇ ／ Ｉｌｌ ） ヲ得り。
ンＡ２１５２１１７１１ （Ｉ Ｃｓｏ ＝ ３． Ｊ
ＩＪ μｇ ／ Ｉｌｌ ） ヲ得り。
一方、先のシリカゲルの９０％ｎ−プロパツール溶出区
分より得られた本物質Ｂ群（Ｂｔ及びＢｚ）を含む黄褐
色粉末を予め４０％メタノールで充填したシラナイズド
シリカゲル（２００−）のカラムへ通し、４０％メタノ
ール（１，５Ａ）、６０％メタノール（１，５−６）で
溶出した。得られた活性区分を集め濃縮乾燥後、少量の
８０％メタノールに溶かし、セファデックスＬＨ−２０
のカラムに通し、８０％メタノール溶液で溶出した。得
られた活性区分を集め濃縮乾燥し、淡黄色の粉末５４５
η（ＩＣｓｏ＝８μｇ／ｄ）を得た。次にこの粉末を予
めアセトニトリル・酢酸緩衝液（２％酢酸カリウム、６
％酢酸ｐＨ４）＝（６５：３５）の溶液で平衡化したＨ
ＰＬＣ用カラム（ヌクレオシル５Ｃ＋ｓ２０Ｏｘ３ｏｏ
ｍ−’ｍ、流速８ｍｌ ／ ｍ１ｎ） ヘ通し、前記平
衡液で溶出した。得られた活性区分Ｂ１及びＢ２を集め
それぞれ濃縮乾燥後、セファデックスＬＩ４−２０のカ
ラムから８０％メタノールで溶出し脱塩することにより
、無色粉末プリパスタチンＢ１１５１１１ｐ（Ｉ Ｃｓ
ｏ ＝ ２．８８ｇ ／ ｍｌ ）及ヒ無色粉末７”
’） ハ、＜ ｐ −ｙ−ンＢ２８９ ｍｅ （Ｉ Ｃ
ｓｏ ＝ ３．３ Ａｇ ／ Ｒｅ ）を得た。
分より得られた本物質Ｂ群（Ｂｔ及びＢｚ）を含む黄褐
色粉末を予め４０％メタノールで充填したシラナイズド
シリカゲル（２００−）のカラムへ通し、４０％メタノ
ール（１，５Ａ）、６０％メタノール（１，５−６）で
溶出した。得られた活性区分を集め濃縮乾燥後、少量の
８０％メタノールに溶かし、セファデックスＬＨ−２０
のカラムに通し、８０％メタノール溶液で溶出した。得
られた活性区分を集め濃縮乾燥し、淡黄色の粉末５４５
η（ＩＣｓｏ＝８μｇ／ｄ）を得た。次にこの粉末を予
めアセトニトリル・酢酸緩衝液（２％酢酸カリウム、６
％酢酸ｐＨ４）＝（６５：３５）の溶液で平衡化したＨ
ＰＬＣ用カラム（ヌクレオシル５Ｃ＋ｓ２０Ｏｘ３ｏｏ
ｍ−’ｍ、流速８ｍｌ ／ ｍ１ｎ） ヘ通し、前記平
衡液で溶出した。得られた活性区分Ｂ１及びＢ２を集め
それぞれ濃縮乾燥後、セファデックスＬＩ４−２０のカ
ラムから８０％メタノールで溶出し脱塩することにより
、無色粉末プリパスタチンＢ１１５１１１ｐ（Ｉ Ｃｓ
ｏ ＝ ２．８８ｇ ／ ｍｌ ）及ヒ無色粉末７”
’） ハ、＜ ｐ −ｙ−ンＢ２８９ ｍｅ （Ｉ Ｃ
ｓｏ ＝ ３．３ Ａｇ ／ Ｒｅ ）を得た。
゛ 参考例１゜
本発明物質の構成脂肪酸の構造を決定するために次の化
学実装及び機器分析を行った。
学実装及び機器分析を行った。
本物質Ａ１又はＢ１を３０％塩酸メタノール中で５０°
Ｃ１約２日間メタツリシスを行い濃縮乾固後の残金をジ
エチルエーテルで抽出し、その抽出物をシリカゲルの薄
層クロマ） （ＴＬＣと略）（溶媒系クロロホルムニメ
タノール＝５０：１）で分離し、ＮＭＲ及びＭＳの器機
分析の結果、本物質Ａ１及びＢｌの構成脂肪酸はβ−水
酸化ヘキテデカノイル酸（β−水酸化パルミチン酸）で
あることを認めプこ。
Ｃ１約２日間メタツリシスを行い濃縮乾固後の残金をジ
エチルエーテルで抽出し、その抽出物をシリカゲルの薄
層クロマ） （ＴＬＣと略）（溶媒系クロロホルムニメ
タノール＝５０：１）で分離し、ＮＭＲ及びＭＳの器機
分析の結果、本物質Ａ１及びＢｌの構成脂肪酸はβ−水
酸化ヘキテデカノイル酸（β−水酸化パルミチン酸）で
あることを認めプこ。
又、本物質Ｍ及びＢ２の構成脂肪酸についても前記と同
様な方法で、β−水酸化アンチインヘキサデカノイル酸
（β−水酸化アンチイソパルミチン酸）であることを認
めた。
様な方法で、β−水酸化アンチインヘキサデカノイル酸
（β−水酸化アンチイソパルミチン酸）であることを認
めた。
参考例２゜
本発明のラクトン環を形成しているβ−水酸化脂肪酸と
Ｃ末端イソロイシンを決定するため次の酵素及び化学的
分析実験を行った。
Ｃ末端イソロイシンを決定するため次の酵素及び化学的
分析実験を行った。
阻害剤をカルボキシペプチダーゼＹで２種の方法により
消化を行い遊離されるアミノ酸の検出を検討した。カル
ボキシペプチダーゼＹは遊離のＣ末端アミノ酸を順次切
断するという性質を有している。
消化を行い遊離されるアミノ酸の検出を検討した。カル
ボキシペプチダーゼＹは遊離のＣ末端アミノ酸を順次切
断するという性質を有している。
（１）前処理なしで直接酵素消化する。
（２） アルカリで阻害例のラクトン環を開環した後
酵素消化する。
酵素消化する。
上記２種の酵素消化の後、遊離アミノ酸は各々（１）
遊離アミノ酸は検出されない。
遊離アミノ酸は検出されない。
（２１Ｉｃｅ、 Ｔｙｒ、 Ｑｌｎの順に遊離してくる
。
。
この結果より、Ｃ末端アミノ酸はＩ４ｅでありＣ末端で
ラクトンを形成していることが証明された。
ラクトンを形成していることが証明された。
このＣ末端１１ｅとラクトン環を形成しつる官能基は、
脂肪酸の水酸基そして２個のＴｙｒの水酸基及びＴｈｒ
の水酸基であるが、阻害剤をピリジン溶液中、無水酢酸
でアセチル化を行うと、後者のＴｙｒ ２個及びＴｈｒ
の水酸基がアセチル化されることが、そのアセチル誘導
体のＮＭＲ，スペクトル及びＭＳスペクトルによって判
明した。この結果よりＣ末端のＩｌｅは脂肪酸のβ−水
酸基とラクトンを形成していることが証明された。
脂肪酸の水酸基そして２個のＴｙｒの水酸基及びＴｈｒ
の水酸基であるが、阻害剤をピリジン溶液中、無水酢酸
でアセチル化を行うと、後者のＴｙｒ ２個及びＴｈｒ
の水酸基がアセチル化されることが、そのアセチル誘導
体のＮＭＲ，スペクトル及びＭＳスペクトルによって判
明した。この結果よりＣ末端のＩｌｅは脂肪酸のβ−水
酸基とラクトンを形成していることが証明された。
第１図はジメチルスルホキサイド−４中、５０℃で測定
した本物質Ａ！の核磁気共鳴スペクトルを示す。第２図
は本物質Ａ２を、第３図は本物質Ｂ、 ｔａｘ、第４図
は本物質Ｂ２をそれぞれ第１図と同条件で測定した核磁
気共鳴スペクトルを示す。
した本物質Ａ！の核磁気共鳴スペクトルを示す。第２図
は本物質Ａ２を、第３図は本物質Ｂ、 ｔａｘ、第４図
は本物質Ｂ２をそれぞれ第１図と同条件で測定した核磁
気共鳴スペクトルを示す。
Claims (2)
- （１）次の一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒ＿１は−Ｃ＿１＿３Ｈ＿２＿７または−Ｃ＿１
＿４Ｈ＿２＿９、Ｒ＿２はＡｌａ又はＶａｌを示す。）
で表わされる新生理活性物質プリパスタチン又はその塩
。 - （２）バチルス属に属するプリパスタチン生産菌を培養
してプリパスタチンを培養液中に生産、蓄積させ、次い
で培養液よりプリパスタチンを単離することを特徴とす
るプリパスタチンの製造法。
Priority Applications (13)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59256475A JPS61134398A (ja) | 1984-12-06 | 1984-12-06 | 新生理活性物質プリパスタチン及びその製造法 |
| AU50307/85A AU583553B2 (en) | 1984-12-06 | 1985-11-25 | Plipastatin and method for preparation thereof |
| DE8585114935T DE3582791D1 (de) | 1984-12-06 | 1985-11-26 | Immunosuppressive verbindungen, deren mikrobiologische verfahren zur herstellung und deren verwendung als arzneimittel. |
| EP85114935A EP0192828B1 (en) | 1984-12-06 | 1985-11-26 | Novel, immunosuppressive compounds, a microbiological method for their preparation and their use as medicaments |
| AT85114935T ATE63318T1 (de) | 1984-12-06 | 1985-11-26 | Immunosuppressive verbindungen, deren mikrobiologische verfahren zur herstellung und deren verwendung als arzneimittel. |
| US06/801,809 US4742155A (en) | 1984-12-06 | 1985-11-26 | Plipastatin and method for preparation thereof |
| GR852894A GR852894B (ja) | 1984-12-06 | 1985-12-02 | |
| ES549565A ES8701197A1 (es) | 1984-12-06 | 1985-12-04 | Un procedimiento para preparar plipastatina |
| KR1019850009104A KR920006881B1 (ko) | 1984-12-06 | 1985-12-04 | 프리파스타틴(plipastatin)의 제조방법 |
| HU854644A HU193838B (en) | 1984-12-06 | 1985-12-04 | Microbial process for producing new, physiologically active compounds |
| PT81615A PT81615B (pt) | 1984-12-06 | 1985-12-05 | Processo microbiologico para a preparacao de compostos imunossupressivos e de composicoes farmaceuticas que os contem |
| ZA859315A ZA859315B (en) | 1984-12-06 | 1985-12-05 | Novel,immunosuppressive compounds,a microbiological method for their preparation and their use as medicaments |
| DK564785A DK564785A (da) | 1984-12-06 | 1985-12-05 | Plipastatin, dets fremstilling og anvendelse, samt en ved fremstillingen anvendelig mikroorganisme |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59256475A JPS61134398A (ja) | 1984-12-06 | 1984-12-06 | 新生理活性物質プリパスタチン及びその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61134398A true JPS61134398A (ja) | 1986-06-21 |
Family
ID=17293148
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59256475A Pending JPS61134398A (ja) | 1984-12-06 | 1984-12-06 | 新生理活性物質プリパスタチン及びその製造法 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4742155A (ja) |
| EP (1) | EP0192828B1 (ja) |
| JP (1) | JPS61134398A (ja) |
| KR (1) | KR920006881B1 (ja) |
| AT (1) | ATE63318T1 (ja) |
| AU (1) | AU583553B2 (ja) |
| DE (1) | DE3582791D1 (ja) |
| DK (1) | DK564785A (ja) |
| ES (1) | ES8701197A1 (ja) |
| GR (1) | GR852894B (ja) |
| HU (1) | HU193838B (ja) |
| PT (1) | PT81615B (ja) |
| ZA (1) | ZA859315B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0333177A2 (en) * | 1988-03-18 | 1989-09-20 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | FR-900493 substance, a process for its production and a pharmaceutical composition containing the same |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5436140A (en) * | 1988-02-02 | 1995-07-25 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Process for producing WS-9326A and WS-9326B |
| US5217952A (en) * | 1988-02-02 | 1993-06-08 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Peptides WS-9326a and WS-9326b, derivatives thereof and uses thereof |
| IN167138B (ja) * | 1988-08-17 | 1990-09-01 | Hoechst India | |
| US5517015A (en) * | 1990-11-19 | 1996-05-14 | Dallas Semiconductor Corporation | Communication module |
| DE69229173T2 (de) * | 1991-07-04 | 1999-09-16 | Garvan Inst Med Res | Pla2 hemmende verbindungen |
| JP3471815B2 (ja) * | 1997-05-09 | 2003-12-02 | アグラクエスト，インコーポレイテッド | 植物疾病およびコーンルートワームを制御するためのＢａｃｉｌｌｕｓの新規な株 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4201771A (en) * | 1979-03-12 | 1980-05-06 | Merck & Co., Inc. | Antibiotic A43F |
-
1984
- 1984-12-06 JP JP59256475A patent/JPS61134398A/ja active Pending
-
1985
- 1985-11-25 AU AU50307/85A patent/AU583553B2/en not_active Ceased
- 1985-11-26 AT AT85114935T patent/ATE63318T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-11-26 DE DE8585114935T patent/DE3582791D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-11-26 EP EP85114935A patent/EP0192828B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-11-26 US US06/801,809 patent/US4742155A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-12-02 GR GR852894A patent/GR852894B/el unknown
- 1985-12-04 KR KR1019850009104A patent/KR920006881B1/ko active IP Right Grant
- 1985-12-04 ES ES549565A patent/ES8701197A1/es not_active Expired
- 1985-12-04 HU HU854644A patent/HU193838B/hu unknown
- 1985-12-05 ZA ZA859315A patent/ZA859315B/xx unknown
- 1985-12-05 DK DK564785A patent/DK564785A/da not_active Application Discontinuation
- 1985-12-05 PT PT81615A patent/PT81615B/pt not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0333177A2 (en) * | 1988-03-18 | 1989-09-20 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | FR-900493 substance, a process for its production and a pharmaceutical composition containing the same |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4742155A (en) | 1988-05-03 |
| ATE63318T1 (de) | 1991-05-15 |
| EP0192828A3 (en) | 1988-06-01 |
| PT81615B (pt) | 1988-02-17 |
| KR920006881B1 (ko) | 1992-08-21 |
| ES8701197A1 (es) | 1986-11-16 |
| EP0192828B1 (en) | 1991-05-08 |
| GR852894B (ja) | 1986-04-01 |
| HUT40707A (en) | 1987-01-28 |
| PT81615A (en) | 1986-01-01 |
| KR860005027A (ko) | 1986-07-16 |
| EP0192828A2 (en) | 1986-09-03 |
| ES549565A0 (es) | 1986-11-16 |
| DK564785A (da) | 1986-06-07 |
| HU193838B (en) | 1987-12-28 |
| AU583553B2 (en) | 1989-05-04 |
| AU5030785A (en) | 1986-06-12 |
| DE3582791D1 (de) | 1991-06-13 |
| DK564785D0 (da) | 1985-12-05 |
| ZA859315B (en) | 1986-10-29 |
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