KR970009151B1 - Ws-9326a, ws-9326b 화합물 및 그들의 유도체 - Google Patents

Ws-9326a, ws-9326b 화합물 및 그들의 유도체

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KR970009151B1
KR970009151B1 KR1019890001240A KR890001240A KR970009151B1 KR 970009151 B1 KR970009151 B1 KR 970009151B1 KR 1019890001240 A KR1019890001240 A KR 1019890001240A KR 890001240 A KR890001240 A KR 890001240A KR 970009151 B1 KR970009151 B1 KR 970009151B1
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니시카와 모도아끼
에자키 마사미
키오토 수미오
오쿠하라 마사쿠니
다카세 시게히로
오카다 사도시
시게마쭈 노부하루
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후지사와 야꾸힌 고오교오 가부시기가이샤
후지사와 도모 키치로
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Abstract

내용 없음.

Description

WS-9326A, WS-9326B 화합물 및 그들의 유도체
제1도는 KBr중에서 본 발명의 화합물 WS-9326A의 적외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
제2도는 CD3OD 중에서 본 발명의 화합물 WS-9326A 의13C 핵자기 공명스펙트럼을 나타낸다.
제3도 CD3OD중에서 본 발명의 화합물 WS-9326A의1H 핵자기 공명 스펙트럼을 나타낸다.
제4도 CD3Cl3-CD3OH 중에서 본 발명의 화합물 트라이세틸-WS-9326A의13C 핵자기 공명 스펙트럼을 나타낸다.
제5도 CDCl3-CD3OH(10:1)중에서 본 발명의 화합물 트리아세틸-WS-9326A의1H 핵자기 공명 스펙트럼을 나타낸다.
제6도는 CD3OD 중에서 WS-9326A의13C 핵자기 공명 스펙트럼을 나타낸다.
제7도는 CD3OD 중에서 WS-9326B의1H 핵자기 공명 스펙트럼을 나타낸다.
제8도는 CDCl3-CD3OD(5:1)중에서 모노아세틸-WS-9326A의1H 핵자기 공명 스펙트럼을 나타낸다.
제9도는 CDCl3-CD3OD(5:1)중에서 디아세틸-WS-9326A의1H 핵자기 공명스펙트럼을 나타낸다.
본 발명은 신규의 WS-9326A, WS-9326B 및 그들의 유도체와 약리학적 활성을 갖는 그것의 약학적 허용 염에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 신규의 WS-9326A, WS-9326B, 그것의 유도체 및 물질 P 길항작용, 뉴로키닌 A(물질 K)길항작용등과 간은 약리학적 활성을 갖는 그것의 약학적 허용 염 및 그들의 제조 방법과 그들을 함유하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
따라서, 본 발명의 목적은 천식등의 치료 및 예방에 유용한 WS-9326A, WS-9326B, 그것의 유도체 및 그것의 약학적 허용 염을 제공하는 것이다.
또 다른 본 발명의 목적은 WS-9326A, WS-9326B, 그것의 유도체 및 그것의 약학적 허용 염을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 활성 성분으로서 WS-9326A, WS-9326B, 그것의 유도체 또는 약학적 허용 염을 함유하는 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 천식등의 치료, 예방을 위한 WS-9326A, WS-9326B, 그것의 유도체 및 약학적 허용 염의 사용 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 WS-9326A 와 WS-9326B는 영양 배지중에서 스트렙토마이세스비오라세오니거(Streptomyces violaceoniger) 9326과 같은 스트렙토마이세스 속에 속하는 WS-9326A 및/또는 WS-9326B-생산 균주를 발효 배양함으로써 제조될 수 있다.
WS-9326A와 WS-9326B의 제조에 사용된 미생물의 세부적 사항들은 하기에서 설명될 것이다.
미생물
WS-9326A와 WS-9326B의 제조에 사용될 수 있는 미생물은 스트렙토마이세스 속에 속하는 WS-9326A 및/또는 WS-9326B-생산 균주로서, 이중에서 스트렙토마이세스 비오라세오니거 9326은 일본의 나가노 현, 수와 시에서 채집된 토양 샘플로부터 새로이 분리된바 있다.
새로이 분리된 스트렙토마이세스 비오라세오니거 9326의 동결 건조 샘플은 통상 산업성 공업 기술원 미생물 공업 기술 연구소(일본국 이바라키켄 305, 쓰쿠바시, 히가시 1쪼메 1-3소재)(Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology)에 FERM BP-1667호로 기탁되어 있다(기탁일 : 1988년 1월 20일).
신규의 WS-9326A와 WS-9326B의 제조는 하기에서 예시의 목적으로 제공되는 특정 군주의 사용에만 국한되는 것은 아니다. 본 발명은 자연 돌연변이주뿐만 아니라 X-선 조사, 자외선 조사, N-메틸-N′-니트로-N-니트로소구아니딘, 2-아미노퓨린등으로 처리하는 것과 같은 통상의 방법에 의해 상기 미생물로부터 만들어질 수 있는 인위적인 돌연변이주를 포함하는 WS-9326A와 WS-9326B를 생산해 낼 수 있는 임의의 돌연변이주의 사용도 또한 포함한다.
스트렙토마이세스 비오라세오니거 9326은 하기의 형태학적, 배양적, 생물학적 및 생리학적 특성을 갖는다.
[1] 형태학적 특성 : 셔링(Shirling)과 고트리브(Gottlieb)에 의해 설명된 방법(Shirling, E.B. and D. Gottlieb : Methods for characterization of Streptomyces species. International Journal of Systematic Bacteriology, 16, 313-240, 1966)을 분류학적 연구에 사용하였다.
형태학적 관찰은 오트밀 한천, 효모-맥아즙 한천 및 무기 염-전분 한천상에서 14일간 30℃에서 증식시킨 배양물을 사용하여 광학 현미경 및 전자현미경으로 시행하였다.
영양 균사가 분절됨이 없이 잘 발달되었다. 기생(氣生)균사가 단축적으로 분지하였고, 각 쇄마다 10개 내지 30개의 포자를 지닌 나선형 쇄의 포자를 형성하였다. 포자는 평활한 표면을 지니며 0.6-0.8×0.8-1.3μm의 크기의 타원형이었다. 각질상의 과립, 포자낭 및 유주자는 관찰되지 않았다.
[2] 배양학적 특성 : 배양학적 특성들은 상술한 바와 같은 셔링과 고트리브 및 왁스만(Waksman)에 의해 설명된 10가지 배지상에서 관찰되었다(Waksman, S. A. : The actinomycetes, Vol. 2 : Classification, identification and description of genera and species. The Williams and Wilkins Co., Baltimore, 1961).
항온 배양은 30℃에서 21일간 실시했다. 이 연구에서 사용된 색상명은 Methuen Handbook of Colour(Kornerup, A, and J.H. Wanscher :Methuen Handbook of Colour, Methuen, London, 1978)로 부터 선택되었다. 그 결과를 표 1에 수록하였다.
Figure kpo00001
약자 : G=생장, A=기생 균자, R=배면 색상, S=가용성 색소
기생균사는 회색 내지 갈회색이었다. 일부의 콜로니는 흑색의 습기 있는 것이 되었고 대부분의 한천 배지상에서 흡습성을 나타냈다. 생육시 배면은 황갈색, 갈색 및 암갈색이었다. 배면 균사 색소는 pH에 민감하지 않았다. 멜라노이드 색소 및 다른 가용성 색소는 생성되지 않았다.
세포벽 분석은 베커등(Becker, B., M. P. Lechevalier, R. E. Gordon and H. A. Lechevalier : Rapid differentiation between Nocardia and Streptomyces by paper chromatography of whole cell hydrolysates : Appl. Microbiol., 12, 421-423, 1964)와 야마구찌(Yamaguchi, T. : Comparison of the cell composition of morphologically distinct actinomycetes : J. Bacteriol., 89, 444-453, 1965)의 방법으로 실시되었다. 균주 9326의 전체세포 가수분해물의 분석에서 LL-디아마노피멜산의 존재가 나타났다. 따라서, 이 균주의 세포벽은 타잎 I의 것으로 여겨진다.
[3] 생물학적 및 생리학적 특성 : 생리학적 특성과 탄소원의 이용성이 가각각 표 2와 3에 수록되어 있다. 탄소원의 이용성은 프리담과 고트리브의 방법에 따라서 시험되었다(Pridham, T. G. and D. Gottlieb : The utilization of carbon compounds by some Actinomycetales as an aid for species determination : J. Bacteriol., 56, 107-114, 1948).
Figure kpo00002
Figure kpo00003
균주 9326의 형태학적 및 화학적 특성은 그 미생물이 스트렙토마이세스속에 분명이 속한다는 것을 규명한다. 균주 9326을 버게이 편람 제8판(Buchanan, R. E. and N. E. Gibbons : Bergey's manual of determinative bacteriology, eight edition. The Williams and Wilkins Co., Baltimore, 1974)에 서술된 스트렙토마이세스 종, 셔링의 ISP 보고서 [(Shirling, E. B. and D. Gottlieb : Cooperative description of type culture of Streptomyces. 2. Species descriptions from first study. Intern. J. Syst. Bacteriol. 18 : 69-189, 1968), (Shirling, E.B. and D. Gottlieb : Cooperative description of type culture of Streptomyces. 3. Additional species descriptions from first and second studies, Intern. J. Syst. Bacteriol. 18 : 279-392, 1968) and (Shirling, E. B. and D. Gottlieb : Cooperative description of type culture of Streptomyces. 4. Species Idescriptions from the second, third and fourth studies. Intern. J. Syst. Bacteriol. 19 : 391-512, 1969)]에 서술된 스트렙토마이세스 종, 문헌[*Approved lists of bacterial names*(Skerman, V.B.D.; V.McGowan P.H.A. Sneath and M.J. Sackin : Numerical classification of Streptomyces and related genera. J. Gen. Microbiol. 129 : 1743-1813, 1983) and (Dietz, A. : Criteria for characterization of Hygroscopicus strains. In*Actinomycetes; The Boundary Microorganisms*pp 183-191 Edited by T. Arai, 1976)]에 서술된 종들과 비교하였다.
결과적으로, 균주 9326은 스트렙토마이세스 비오라세오니거(S. violaceoniger)와 매우 유사함이 밝혀졌다. 그러므로, 균주 9326은 스트렙토마이세스 비오라세오니거로 동정되었고 스트렙토마이세스비오라세오니거 9326으로 표시되었다.
WS-9326A 와 WS-9326B의 제조
본 발명의 신규한 WS-9326A와 WS-9326B는 스트렙토마이세스 속에 속하는 WS-9326A 및/또는 WS-9326B-생산균주(예, 스트렙토마이세스 비오라세오니거 9326, FERM BP-1667)를 영양 배지중에서 배양시킴으로써 얻을 수 있다.
일반적으로, WS-9326A와 WS-9326B는 바람직하게는 호기성 조건(예, 진탕 배양, 심부 배양등)하에 동화성 탄소원 및 질소원이 함유된 수성 영양 배지중에서 WS-9326A 및/또는 WS-9326B-생산 균주를 배양함으로써 제조될 수 있다.
영양 배지중의 바람직한 탄소원은 글루코즈, 크실로즈, 갈락토즈, 글리세린, 전분, 덱스트린등과 같은 탄수화물이다.
포함될 수 있는 다른 탄소원은 말토즈, 람노즈, 라피노즈, 아라비노즈, 만노즈, 살리신, 숙신산 나트륨 등이다.
바람직한 질소워는 효모 추출물, 펩톤, 글루텐 가루, 목화씨가루, 콩가루, 옥수수 침출액, 건조 효모, 맥아, 깃털 가루, 땅콩가루등 뿐만 아니라, 암모늄 염(예, 질산 암모늄, 황산 암모늄, 인산 암모늄 등). 요소, 아미노산등과 같은 무기 및 유기 질소 화합물이다.
함께 사용되는 것이 유리하지만, 탄소와 질소원은 그들의 순수한 형태로 사용될 필요가 없는데, 왜냐하면 미량의 생장 인자 및 상당한 양의 무기 영양소가 함유된 덜 순수한 물질이 또한 사용하기에 접합하기 때문이다. 필요할때는, 탄산 나트륨 또는 탄산 칼슘, 인산 나트륨 또는 인산 칼륨, 염화나트륨 또는 염화 칼륨, 요오드화 나트륨 또는 요오드화 칼륨, 마그네슘 염, 구리염, 코발트염 등과 같은 무기염이 그 배지에 첨가될 수 있다. 필요하다면, 특히, 배양 배지가 심하게 발포될 때에는 액체 파라핀, 지방유, 식물유, 광유 또는 실리콘 등과 같은 소포제가 첨가될수 있다.
WS-9326A와 WS-9326B의 대량 생산 조건으로서는, 호기성 심부 배양 조건이 바람직하다. 소량 생산에 있어서는 플라스크 또는 병내에서의 진탕 또는 표면배양이 사용된다. 또한, 큰 탱크내에서 증식시킬 때에는, WS-9326A와 WS-9326B의 생산 과정중에 증식 유도기를 회피하기 위하여 생산 탱크내에 미생물의 증식형을 접종시키는 것이 바람직하다. 따라서, 먼저 비교적 소량의 배양배지를 그 매생물의 포자 또는 균사체로 접종시킴으로써 미생물의 증식형접종물을 만들고, 무균적으로 그 배양된 증식형 접종물을 큰 탱크로 옮기는 것이 바람직하다. 증식형 접종물이 생산되어지는 배지는 WS-9326A와 WS-9326B의 생산에 사용되는 배지와 거의 같거나 또는 다르다.
배양 혼합물의 교반 및 통기는 여러 방법으로 실시될 수 있다. 교반은 프로펠러 또는 유사한 기계적 교반 장치에 의해서, 또는 발효조를 회전시키거나 또는 진탕시킴으로써, 또는 여러가지 펌프 장치에 의해 또는 배지에 멸균 공기를 통과시킴으로써 이루어진 수 있다. 통기는 그 발표 혼합물에 평균 공기를 통과시킴으로써 실시될 수 있다.
발효는 일반적으로 약 20℃ 내지 40℃의 온도에서, 바람직하게는 25-35℃에서 약 50 내지 150시간동안 실시될 수 있는데, 발효 조건 및 규모에 따라서 달라질 수 있다.
생산된 WS-9326A와 WS-9326B는 다른 공지된 생물학적 활성 물질의 회수에 흔히 사용되는 통상의 방법에 의해 배양 배지로부터 회수될 수 있다. 생성된 WS-9326A와 WS-9326B는 배양 여과물과 균사등에서 발견되므로, 따라서, WS-9326A와 WS-9326B는 배양액을 여과하거나 원심 분리함으로써 얻어진 여과물과 균사로부터 분리 정제될 수 있고, 즉, 감압하의 농축, 동결건조, 통상적인 용매로의 추출, pH 조절, 통상적인 수지(예, 음이온 또는 양이온 교환수지, 비-이온성 흡착 수지등)로써의 처리, 통상적인 흡착제(예, 활성목탄, 규산, 실리카겔 셀루로즈, 알루이만 등)로의 처리, 결종화, 재결정화등과 같은 통상의 방법에 의한다.
전술한 방법에 의해 생산된 WS-9326A는 다음의 물리 화학적 특성을 갖는자.
(1) 형태 및 색상 : 무색 분말
(2) 발생 반응 : 양성 : 황산 세륨 반응, 요오드 증기 반응, 염화 제2철-페리시안화 칼륨 반응
음성 : 닌히드린 반응, 몰리쉬(molish)반응, 염화 제2철 반응, 에리히(Ehrlich) 반응, 파울리(Pauli)반응
(3) 용해도 : 가용성 : 메탄올, 에탄올
소량 가용성 : 아세톤, 에틸 아세테이트
불용성 : 물, 클로로프름
(4) 융점 : 187-190℃
(5) 고유 광회전도 : [α]D 23=-84°(C=1.0, MeOH)
(6) 자외선 흡수스펙트럼 :
Figure kpo00004
=280nm(ε=34,700)
(7) 적외선 흡수 스펙트럼 :
Figure kpo00005
=3300, 3050, 2950, 2920, 2860, 1730, 1650, 1610, 1560, 1540, 1530, 1510, 1440, 1380, 1340, 1280, 1240, 1170, 1110, 11080, 1060, 1040, 970, 920, 880, 860, 830cm-1
이것의 도표는 제1도에 도시되어 있다.
(8) 원소 분석 : 실측치 : C 60.18, H 6.61, N 10.32
C54H68N8O13·2H2O의 이론치 : C 60.43, H 6.76, N 10.44
(9) 박막 크로마토그래프 :
Figure kpo00006
(10) 분자식 : C54H68N8O13
(11) 분자량 : FAB-MS : m/z 1037(M+H)+
(12) 물질 성질 : 산성 물질
(13)13C 핵자기 공명 스펙트럼 : (100MHz, CD3OD)δ
175.69(s), 174.70(s), 173.73(s), 173.38(s), 172.89(s), 171,04(s), 170.45(s), 167.79(s), 167.15(s), 159.20(s), 140.05(d), 139.12(s), 138.71(s), 135.27(d), 134.85(s), 132.11(d), 132.03(s), 131.69(d)×2, 130.70(d), 129,90(d), 129.61(d)×2, 129.22(d)×2, 128.55(d), 128.04(d), 127.99(d), 127.38(d), 126.09(s), 123.70(d), 115.63(d)×2. 73.46(d), 71.34(d), 62.80(t), 59.53(d), 56.91(d), 56,76(d), 55.55(d), 53.64(d), 52.10(d), 39.85(t), 37.18(t), 37.09(t), 34.58(q), 31.37(t), 24.56(d), 23,63(t), 22.71(q), 22.52(q), 21.17(q), 17.19(q), 14.13(q)
이것의 도표는 제2도에 도시되어 있다.
(14)1H 핵자기 공명 스펙트럼 : (400MHz, CD3OD)δ
7.80(1H,d,J=8Hz), 7.67(1H,d,J=16Hz), 7.45-7.14(9H,m), 7.06(2H,d,J=8Hz), 6.83(1H,s), 6.65(2H,d,J=8Hz), 6.59(1H,d,J=12Hz), 5.88(1H,dt,J=12 및 7Hz), 5.55(1H,m), 5.35(1H, 넓은 시그널), 5.10(1H,dd,J=3 및 9.5Hz), 4.68(1H,d,J=10Hz), 4.55(1H,t,J=6Hz), 4.48(1H,dd,J=3 및 12Hz), 3.92(2H,d,J=6Hz), 3.70(1H,t,J=7.5Hz). 3.62(1H,m), 3.46(1H,dd,J=3 및 14Hz), 2.94(1H,dd,J=3 및 16Hz), 2.89(3H,s), 2.74(1H,dd,J=9.5 및 16Hz), 2.69(1H,dd,J=12 및 14Hz), 2.14(2H,m), 1.5-1.4(2H,m), 1.20(3H,d,J=6Hz), 1.08(3H,d,J=6Hz), 1.0-0.8(2H,m), 0.91(3H,t,J=7Hz), 0.6(1H,m), 0.53(3H,d,J=6Hz), 0.51(3H,d,J=6Hz)
이것의 도표는 제3도에 도시되어 있다.
(15)아미노산 분석 : WS-9326A(5mg)을 밀봉 튜브내에서 20시간 동안 110℃하에 염산(2㎖)로 가수분해시킨다. 그 혼합물을 증발 건조시켜 가수분해 생성물을 얻고 히타찌 835 자동 아미노산 분석기상에서 분석한다.
아미노산 분석 결과 : Thr(2), Leu(1), Phe(1), Asp(1), Swe(1), 메틸아민(1)과 암모니아(1).
WS-9326A에 있어서, 제2도와 3도에 나타낸13C 및1H 핵자기 공명 스펙트럼은 WS-9326A가 CD3OD 용액중에서 2가지 이상의 안정한 형태로 존재하며 상기(13)과 (14)에 설명된 화학적 이동은 WS-9326A의 주요 형태이성질체의 의한 것임을 나타낸다.
전술한 공정에 의해 생산된 WS-9326B는 다음과 같은 물리 화학적 특성을 갖는다.
(1) 형태 및 색상 : 무색 무정형 분말
(2) 발색 반응 : 양성 : 황산 세륨 반응, 요오드 증기 반응
음성 : 닌히드린 반응
(3) 용해도 : 가용성 : 메탄올
소량 가용성 : 에탄올
불용성 : 물, 아세톤, 에틸라세테이트, 클로로프름
(4) 융점 : 165-170℃(분해)
(5) 고유 광회전도 : [α]D 23=-64°(C=1.0, MeOH)
(6) 자외선 흡수스펙트럼 :
Figure kpo00007
=283nm(ε=27,000)
(7) 분자식 : C54H70N8O13
(8) 원소 분석 : 실측치 : C59.97, H 6.87, N10.29
C54H70N8O13·2H2O의 이론치 : C 60.32, H 6.94, N 10.42
(9) 분자량 : FAB-MS : m/z 1061.6(M+Na)+
(10) 박막 크로마토그래프 :
Figure kpo00008
(11) 적외선 흡수 스펙트럼 :
Figure kpo00009
=3300, 3050, 2950, 1735, 1660, 1530, 1510, 1450, 1400, 1380, 1340, 1260, 1220, 1080, 980, 920cm-1
(12)13C 핵자기 공명 스펙트럼 : (100MHz, CD3OD)δ
174.99(s), 174.54(s), 173.60(s), 173.41(s), 172.30(s), 171.27(s), 170.74(s), 170.19(s), 168.69(s), 157.59(s), 140.53(d), 139.35(s), 139.18(s), 135.76(d), 134.17(s), 131.15(d)×2, 132.93(d), 130.35(d), 129.88(d)×2, 129.39(d)×2, 128.70(d), 128.58(s), 128.13(d), 127.64(d), 127,53(d), 121.99(d), 116.45(d)×2, 72.76(d), 70.82(d), 62.73(t), 62.67(d), 59.35(d), 56.33(d)×2, 56.19(d), 53.36(d), 52.24(d), 40.24(t), 37.55(t), 37.08(t), 33.69(t), 31.57(t), 29.93(q), 24.61(d), 23.70(q), 23.59(t), 22.16(q), 21.36(q), 17.12(q), 14.23(q)
이것의 도표는 제6도에 도시하였다.
(13)1H 핵자기 공명 스펙트럼 : (400MHz, CD3OD)δ
7.86(1H,d,J=16Hz), 7.80(1H,br d, J=8Hz), 7.12-7.42(11H,m), 6.77(2H.d.J=8.5Hz), 6.61(1H,d,J=11.5Hz), 5.88(1H,dt,J=7.5 및 11.5Hz), 5.08(1H,dd,J=3.6 및 10Hz), 5.04(1H,q,J=6.5Hz), 4.66(1H,dd,J=3.5 및 13Hz), 4.65(1H,d.J=11.5Hz), 4.56(1H,dd,J=2.5 및 7Hz), 4.48(1H,dd,J=4.5 및 11Hz), 4.46(1H,s), 3.88(2H,m), 3.64(2H,m),3.51(1H,dd,J=3.5 및 14Hz), 3.17(1H,dd,J=4.5 및 14Hz), 3.01(1H,dd,J=11 및 14Hz), 2.94(1H,dd,J=3.5 및 16Hz), 2.71(3H,s), 2.71(1H,dd,J=10 및 16Hz), 2.64(1H,dd,J=13 및 14Hz), 2.04(2H,m), 1.43(2H,m), 1.28(2H,m), 1.20(3H,d,J=6Hz), 0.95(3H,d,J=6.5Hz), 0.87(3H,t,J=7.5Hz), 0.53(1H,m), 0.52(6H,d,J=10.5Hz)
이것의 도표는 제7도에 도시되어 있다.
WS-9326B에 있어서, 제6도와 제7도에 나타낸13C와1H핵자기 공명스펙트럼은 CD3OD용액중에 2가지 이상의 안정한 형태로 존재하며 상기(12)와 (13)에 설명된 화학적 이동은 WS-9326B의 주요 형태 이성질체에 의한 것임을 나타낸다.
적합한 WS-9326A의 유도체는 1개 내지 3개의 아실기 등으로 치환된 WS-9326A를 포함할 수 있다.
적합한 WS-9326B의 유도체는 1개 내지 3개의 아실기 등으로 치환된 WS-9326B를 포함할 수 있다.
적합한 아실은 저급 알카노일(예를들면, 포르밀, 아세틸, 프로피오닐, 등)등과 같은 통상적인 것을 포함할 수 있다.
WS-9326A, WS-9326B 혹은 그것의 염을 아실화 제(들)와 반응시켜서 1개 내지 3개의 아실기로 치환된 WS-9326A, 1개 내지 3개의 아실기로 치환된 WS-9326B, 혹은 그것의 염을 제조할 수 있다.
이하에서 언급된 실시예 2,4 혹은 5등에서 설명한 방법과 같은 통상적인 방법으로 이 반응을 수행할 수 있다.
WS-9326A 혹은 WS-9326B의 유도체의 바람직한 구체예는 1개의 아세틸기로 치환된 WS-9326A(모노아세틸-WS-9326A로 하기에 언급됨), 2개의 아세틸기로 치환된 WS-9326A(디아세틸-WS-9326A로 하기에 언급됨), 혹은 3개의 아세틸기로 치환된 WS-9326A(트리아세틸-WS-9326A로 하기에 언급됨)이다.
WS-9326A, WS-9326B 및 그 유도체의 적절한 약학적 허용 염은 통상적인 비독성 염이다.
WS-9326A, WS-9326B 및 그것의 유도체의 생물학적 특성
WS-9326A, WS-9326B, 그 유도체 및 그것의 약학적 허용 염은 물질 P길항작용, 뉴로키닌 A(물질 K)길항작용 등과 같은 약리학적 활성을 가지므로 천식등의 치료 및 예방에 유용하다.
그러한 약리학적 활성을 보여주는 예로서 하기에 몇가지 약리학적 시험자료를 설명하였다.
(1) 방사성 리간드 결합 분석법
(a) 미정제 생체막 제조
뇌
암컷 위스터(Wister) 래트(200g)를 사용하였고, 모든 시약은 시그마 케미칼 컴패니(Sigma Chemical Company)에서 구입하였다. 전체 뇌(4g)를 소편으로 얇게 썰어 8부피량의 빙냉 배지(I)[50mM Tris-HCI pH 7.5, 5mM MnCl2, 0.02% BSA, 2μg/mℓ 키모스타틴(chymostatin), 4μg/mℓ 류펩틴(leupeptin) 및 40μg/mℓ 바시트라신(bacitracin)에서 초미 분산기(Ultra-Disperser)(야마토 모델 LK-21)로 규질화하였다. 균질물은 -20℃에서 보관하거나 결합 실험에 즉시 사용하였다.
폐
수컷 횐색 하틀리(Hartley)계 기니피그(600g)를 침수시켰다. 기관과 폐를 꺼내어 사용할 때 까지 -80℃에서 저장하였다. 이러한 조직(150g)을 해동한 다음 500mℓ 완충액(0.25M 수크로즈, 50mM Tris-HCI pH 7.5, 0.1mM EDTA)내에서 소형 혼합기(Matsuden MJ-761)로 균질화하였다. 균질화 작동사이의 냉각간격을 10초로 하고 균질화 작동 시간을 최대 범위 10초로 설정한 초미 분산기(야마토 모델 LK-21)로 상기 조직을 균질화하였다(총 균질화 시간 : 60초). 균질물을 원심분리(10분간, 900×g)하여 조직 괴를 제거하고 상충액을 14000×g에서 20분간 원심분리하여 미정제 생체막 분획으로서 언급되는 펠렛을 스득하였다. 이 벨렛을 배지(I)에 재현탁시키고, 태플론 균질기로 균질화한 뒤, 14000×g에서 20분간 원심분리하였다. 수득되는 펠렛을 -20℃에 보관하였다.
(b) 제조된 생체막에 결합하는3H-물질 P3H-물질 P(l nM, New England Nuclear)를 배지(I)중의 생체막 제조물 50μ1와 함께 총 부피 250μ1가 되게 하여 4℃에서 30분간 항온보존시킨다. 배양기간 말기에 내용물을 세포수거기(브란델 M-24S)를 사용하여 와트만(whatmann) GF/B 유리섬유 여과기(사용전에 0.1% 폴리에틸렌이민으로 3시간 동안 예비처리됨)로 급속 여과시켰다. 총 3㎖의 세척 완충액(50mM Tris-HCI pH 7.5)으로 0℃에서 상기 여과기를 10회 세척했다. 팩카드 신틸레이션(packard sintillation) 계수기(팩카드 TRI-CARB 4530)로 3㎖의 아쿠아졸(Aquazol)-2내에서 방사능을 측정하였다.
Figure kpo00010
(2) 기니피그 기관에 대한 WS-9326A 효과
성숙한 수컷 흰색 하틀리계 기니피그(600g)로부터 기관의 나선 스트립을 표준 기법에 따라서 준비하고, 30㎖ 재킷 유리 조직 배양조에 놓는다. 기관의 장력은 폴리그래프(바이오피지오그래프 180 시스템, San-Ei 인스트루먼트)에 연결된 힘 치환 변환기로 균등히 측정하였다. 기관 스트립(2mm 너비 및 50mm 길이)을 500mg의 휴지 장력(resting tension)하에서 하기 조성의 가온된(37℃)산화(95% O2: 5% CO2) 티로드(Tyrode)용액을 함유한 30㎖기관(Organ)조 내에 매달아 놓았다 : NaCl 137mM(8g/L), KCI 2.7mM(0.2g/L), CaCl2·2H2O 1.8mM(0.264g/L), MgCl2·6H2O 1.02mM(0.208 g/L), NaHCO311.9mM(1g/L), NaH2PO4·2H2O 0.42mM(0.066g/L) 및 글루코즈 5.5mM(1g/L). 상기 조직을 90분간 평형화시킨 다음, WS-9326A를 여러가지 기관지 수축제(물질 P 10-8M 및 뉴로키닌 A 10-9M)에 대해서 시험하였다. San-Ei 렉티그래프(Rectigraph)-8S 기록기(San-Ei 인스트루먼트)로 장력을 기록하였다.
Figure kpo00011
(3) 뉴로키닌 A 및 캡사이신에 의해 유도된 기관지 수축에 대한 WS-9326A의 효과.
300-500g 무게의 수컷 하틀리계 기니-피그를 펜토바비탈(Sodium pentobarbital)(10mg/복막내 투여된 동물)로 고정시겼다. 뉴로키닌 A(혹은 캡사이신)및 약물을 투여하기 위해 경정맥에 캐뉼러(Cannular)를 삽입하였다. 인위적으로 통기 시키기 위해 카테테르(Catheter)를 또한 기관에 삽입하였다. 상기 동물은 소형 호흡 펌프(하바드 B-34, 5㎖/박동, 60박동/분)로 호흡하였다. 콘제트-뢰슬러 과도일출 기법(Konzett-R
Figure kpo00012
ssler overflow technique)의 변법으로 폐 팽항에 대한 저항성을 측정하였다.
이하에 예시된 대로 작동제(agonist) 및 길항약물(0.1% 메틸셀룰로즈-식염수로 제조)을 정맥주사로 투여하였다.
Figure kpo00013
↑ : 작동제(뉴로키닌 A 혹은 캡사이신)
↑ : 길항제(WS-9326A)
Figure kpo00014
Figure kpo00015
(4) 기니-피그에서 뉴로키닌 A 유도성 기관지 수축에 대한 WS-9326A의 기관내 투여 효과.
WS-9326A 흡입에 따른 기관지 수축에 대한 효과를 시험하기 위해, WS-9326A를 DMSO에 용해하고 기관내 투여하였다. 방법은 상술한 바와 거의 같다.
표 8에서 나타나는 바와 같이 WS-9326A는 매우 효능이 높았다.
Figure kpo00016
*: DMSO에 용해된 WS-9326A
**: 1nmol/kg 정맥주사
(5) 급성 독성
시험 화합물의 등급으로 분류된 투여량을 5마리 ddY 마우스(생우 5주, 수컷)의 내복막에 일회 주입함으로써 ddY 마우스에 대한 WS-9326A의 급성독성을 측정하였다. WS-9326A의 LD50치는 250mg/kg 이상 내지 500mg/kg 미만이었다(500mg/kgLD50250mg/kg).
본 발명의 약학적 조성물은 활성 성분으로서, WS-9326A, WS-9326B, 그 유도체, 또는 그것의 약학적 허용염과 함께, 외측, 소 장내, 또는 비경구투여에 적합한 유기 또는 무기 담체 혹은 부형제를 함유하는 고체, 반고체, 또는 액체 형태와 같은 약학적 세제의 형태로 사용될 수 있다. 상기 활성성분은, 예를들어 통상 비독성이고, 정제, 환약, 캡슐, 용액, 유제, 현탁제 및 사용하기에 적합한 임의의 다른 형태를 위한 약학적 허용성 담체와 혼합될 수 있다. 사용될 수 있는 담체는 물, 글루코즈, 락토즈, 아카시아 고무, 젤라틴, 만니톨, 전분풀, 마그네슘 트리실리케이트, 활석, 옥수수전분, 케라틴, 교질성 실리카, 감자전분, 요소 및 고체, 반고체 또는 액체 형태의 제제를 제조하는데 사용하기에 적합한 다른 담체, 및 추가로 보조제, 안정화제, 증점제, 착색제, 및 향료를 사용할 수 있다. 활성 대상 화합물은 질병의 과정, 또는 상태에 바람직한 효과를 생성하기에 충분한 양으로 약학적 조성물에 포함된다.
WS-9326A, WS-9326B, 그 유도체 혹은 그것의 약학적 허용염의 치료적 유효량은 다양하고, 치료받는 각 환자의 연령 및 상태에 또한 의존적이며, 질병을 치료하는데 일반적으로 제공되는 일일 투여량은 활성 성분 약 0.01-1,000mg, 바람직하게는 0.1-500mg, 더욱 바람직하게는 0.5-100mg이고, 일반적으로 투여되는 평균 일회 투여량은 약 0.5mg, 1mg, 5mg, 10mg, 50mg, 100mg, 250mg 및 500mg이다.
실시예 1
발효
가용성 전분(1%), 수크로즈(1%), 글루코즈(1%), 면 종자 분말(1%), 펩톤(0.5%), 대두 가루(0.5%) 및 탄산 칼슘(0.2%)를 함유하는 수성 종자배지(160㎖)(6N 수산화 나트륨으로 pH를 7.0으로 조정함)를 500㎖ 엘렌메이어 플라스크 20개에 각각 붓고 120℃에서 30분간 살균하였다.
스트렙토마이세스 비오라세오니거(Srewptomyces violaceoniger) No. 9326사면 배양물의 한 백금이량을 상기 배지 각각에 접종하고 30℃에서 3일간 회전식 진탕기(220rpm, 5.1cm 작동거리)상에서 배양시켰다. 수득된 종자 배양물을 200리터 스텐레스 스틸 자아(jar)-발효조내에 함유된 글리세린(3%), 대두가루(0.5%), 분쇄대구 분말(1.5%), 탄산칼슘(0.2%), 및 요오드화 나트륨(Nal)(0.001%)을 함유한 살균된 발효 배지 160리터에 접종하였다. 160리터/분의 통기 및 200rpm의 교반으로 30℃에서 3일간 발효하였다. 히타찌모델 655 펌프를 사용하는 고 성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatograohy(HPLC))를 사용하여 발효액주의 WS-9326A의 양을 정량하였다. R-ODS-5(YMC-적재컬럼)로 채워진 강철 컬럼(4.6mm 내경, 250mm길이)을 1.0㎖/분의 유속으로 사용하였다.
사용된 이동상은 메탄올 및 물(8:2)의 혼합물이었다. HPLC 분석용 샘플을 하기와 같이 제조하였다. 동부피의 아세톤을 강력히 교반중인 배양액에 첨가하고, 1시간 동안 방치한 후 원심분리하였다. 상층액 5μ1를 히타찌 모델 655샘플 주입기에 주입하였다.
분리 및 정제
동부피의 아세톤을 교반중인 배양액(150L)에 첨가했다. 그 혼합물을 신온에서 1시간 방치한 다음 여과하였다. 여과물을 감압하에서 80리터로 농축시겼고, 1N 염산으로 pH 7.0로 조정한 다음, 에틸 아세테이트 80리터로 추출하였다. 상기 추출물을 감압하에서 농축 건조하고 실리카 겔(Kieselgel 60, 70-230메쉬, Merck, 3L)의 컬럼에 적용했다. 컬럼은 n-핵산(10L), n-핵산-에틸 아세테이트[1:1] (10L), 에틸아세테이트(20L)로 세척하였고, 활성물질은 아세톤(6L)과 함께 컬럼에서 용출되었다. 활성 분획물을 감압하에서 건조시키고, 실리카 겔(Kieselgel 60, 70-230 메쉬, Merck, 1.2L)상의 컬럼 크로마토그래피에 넣었다. 컬럼은 클로로프름-메탄올[20:1](5L)로 세척하였고, 목적 물질은 클로로프름-메탄올[10:1]의 용액(6L)과 함께 용출되었다. 상기 분획물을 감압하에서 건조시켜 분말로 만들었다. 분말을 소량의 메탄올에 용해시키고, NS 겔(Nihon Seimitsu, 500㎖)의 컬럼에 적용했다. 목적물질은 메탄올-물[8:2](2L)로 용출되었고, 감압하에서 300㎖로 농축한 다음, 에틸 아세테이트 500㎖로 추출하였다. 수출물을 감압하에서 농축건조시켜 분말(5g)을 수득했다. 분말(5g)을 메탄올(500mg/㎖) 10㎖에 용해하고 D-ODS-5로 채워진 강철 컬럼(20mm 내경, 250mm 길이 ; YMC-충전된 컬럼)을 사용하는 HPLC에 적용하여 9.9㎖/분 유속의 메탄올 및 물[8:2]의 혼합물로 용출시켰다. 수득된 활성분획물을 감압하에서 농축한 다음 에틸아세테이트로 추출하였다. 추출물을 감압하에서 농축건조하여 WS-9326A의 순수 백색 분말(150mg)을 생성하였다.
실시예 2
아세트산 무수물(1.5㎖) 및 4-디메틸아미노피리딘(1mg)을 WS-9326A(300mg)를 함유한 피리딘(4.5㎖)용액에 넣고, 이 반응 혼합물을 실온에서 밤새방치하였다. 반응 혼합물을 증발 건조하여 정제용 TLC(클로로포름-메탄올(10:1)로 정제된 오일을 생성하였다.
수득된 생성물을 디에틸에테르로 분쇄하여 트리아세틸-WS-9326A(392mg)를 무색분말로 수득하였다. 트리아세틸-WS-9326A의 물리 및 화학적 성질은 하기와 같다.
(1) 형태 및 색상 : 무색분말
(2) 발생 반응 : 양성 : 황산 세륨 반응, 황산 반응, 요오드증기 반응
음성 : 닌히드린 반응
(3)용해도 : 가용성 : 메탄올, 디메틸설폭시드
소량 가용성 : 클로로포름, 디에틸에테르
불용성 : n-핵산
(4) 융점 : 141-143℃
(5) 고유 광회전도 : [α]D 23=-122°(C=1.0, MeOH)
(6) 자외선 흡수스펙트럼 :
Figure kpo00017
=283nm(ε=32,000)
(7) 분자식 : C60H74B8O16
(8) 원소분석 : 실측치 : C 60.19, H 6.42, N 9.27
C60H74N8O16·2H2O의 이론치 : C 60.09, H 6.56, N 9.34
(9) 분자량 : FAB-MS : m/z 1163.6(M+H)+
(10) 박막 크로마토그래피 :
Figure kpo00018
(11) 적외선 흡수 스펙트럼 :
Figure kpo00019
=3300, 3050, 2950, 2920, 2860, 1730, 1650, 1610, 1560, 1540, 1530, 1510, 1440, 1380, 1340, 1280, 1240, 1170, 1110, 11080, 1060, 1040, 970, 920, 880, 860, 830cm-1
(12) 물질 성질 : 산성 물질
(13)13C 핵자기 공명 스펙트럼 : (100MHz, CDCl3-CD3OH(10:1))δ
174.20(s), 173.23(s), 173.06(s), 173.32(s), 171.02(s), 171.84(s), 169.79(s), 169.59(s), 169.55(s), 168.52(s), 167.03(s), 166.36(s), 151.02(s), 140.74(d), 138.82(s), 138.74(s), 137.12(s), 135.23(d), 133.75(s), 131.31(s), 130.20(d), 129.96(d)×2, 129.34(d), 129.21(d)×2, 128.56(d)×2, 127.24(d), 126.95(d), 126.74(d), 126.63(d), 126.50(d), 122.10(d)×2, 121.29(d), 70.99(d), 69.22(d), 63.73(t), 58.13(d), 56.10(d), 53.22(d), 52.66(d), 52.18(d), 49.93(d), 39.75(t), 39.39(q), 39.06(t), 35.57(t), 30.65(t). 24.26(d), 23.15(q), 22.79(t), 21.42(q), 21.21(q), 20.99(q), 20.83(q), 17.05(q), 16.18(q), 13.82(q)
이것의 도표는 제2도에 도시되어 있다.
(14)1H 핵자기 공명 스펙트럼 : (400MJz, CDCl3-CD3OH(10:1))δ
8.25(1H,d,J=8Hz), 8.02(1H,d,J=8Hz), 7.88(1H,d,J=16Hz), 7.86(1H,d,J=8Hz), 7.70(1H,d,J=6Hz), 7.61(1H,d,J=8Hz), 7.45(1H,d,J=7Hz), 7.32-7.15(6H,m), 7.03(2H,d,J=8Hz), 7.00-6.94(3H,m), 6.88-6.79(4H,m), 6.70(1H,s), 6.49(1H,d,J=12Hz), 5.79(1H,dt,J=12 및 7.5Hz), 5.54(1H,넓은 s), 5.50-5.45(2H,m), 4.93(1H,m), 4.75(1H,m), 4.65-4.56(2H,m), 4.46(1H,dd,J=6 및 11Hz), 4.31(1H,t,J=6Hz), 4.22(1H,m), 4.18(1H,dd,J=8 및 11Hz), 3.56(3H,s), 2.90(1H,dd,J=6 및 16Hz), 2.85-2.80(2H,m), 2.56(1H,dd,J=4 및 16Hz), 2.26(3H,s), 2.00(3H,s), 1.96-1.89(2H,m), 1.85(3H,s), 1.58(1H,m), 1.35(3H,d,J=6Hz), 1,32-1.20(3H,m), 1.07(3H,d,J=6Hz), 0.84(1H,m), 0.72(3H,d,J=6Hz), 0.71(3H,t,J=7.5Hz), 0.65(3H,d,J=6Hz)
이것의 도표는 제5도에 도시되어 있다.
실시예 3
발효
가용성 전분(1%), 수크로즈(1%), 글루코즈(1%), 면종자 분말(1%), 펩톤(0.5%), 대두가루(0.5%) 및 탄산 칼슘(0.2%)를 함유하는 수성 종자 배지(160㎖)를 500㎖ 엘렌메이어 플라스크 10개에 각각 분주하고 120℃에서 30분간 살균하였다.
스트렙토마이세스 비오라세오니거(Streptomyces violaceoniger)No.9326을 상기 각 배지에 접종하고 30℃에서 3일간 회전식 진탕기(220rpm, 5.1cm 작동거리)상에서 배양하였다.
수득된 종자 배양물을 미리 120℃에서 30분간 살균한 500리터 스테린레스 강철 자아(jar)발효조내의 가용성 전분(1%), 수크로즈(1%), 글루코즈(1%), 면종자 분말(1%), 펩톤(0.5%), 대두가루(0.5%) 탄산칼슘(0.2%), 아데카놀(Adekanol) LG-109(소포제, 상표명 : Asahi Denka Co.)(0.07%), 및 실리콘 KM-70(소포제, 상표명 : Shin-etsu Chemical Co.)(0.05%)를 함유하는 수성 종자 배지(160ℓ)에 접종하였다. 160리터/분의 통기 및 200rpm의 교반하에 30℃에서 하루동안 발효 배양시켰다. 수득되는 종자 배양물을 미리 120℃에서 30분간 살균한 4,000리터용 스테인레스 강철 자아 발효조내의 글리세린(3.0%), 대두가루(1.0%), 닭고기 뼈가루(1.0%), 탄산칼슘(0.2%), 요오드화 나트륨(0.001%), 아데카놀(Adekanol) LG-109(0.07%), 및 실리콘 KM-70(0.05%)을 함유하는 멸균된 생산 배지에 접종한 뒤, 30℃에서 4일간 3,000리터/분의 통기 및 100rpm의 교반하에 배양하였다. 발효의 과정을 히타찌 모델 655 펌프를 사용하는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)로 모니터하였다. 역상 실리카겔 YMC-충전 컬럼 R-ODS-5(상표명, Yamamura Chemical Institute)로 채워진 강철 컬럼을 1.0㎖/분 유속으로 사용하였다.
사용된 전개용매는 45% 아세토니트릴 수용액이었다. HPLC 분석용 샘플을 다음과 같이 제조하였다 : 동 부피의 아세톤을 강력하게 교반중인 발효액에 첨가하고, 그 혼합물을 1시간 동안 방치한 다음, 원심 분리하였다. 상충액 5μ1를 히타찌 모델 655 HPLC의 주입기에 주입하였다.
분리 및 정제
수득한 상기 배양액을 규조토(Perlite Topko #34, 상표명, Showa Chemical Industry Co., Ltd.) (15kg)를 사용하여 여과하였다. 에틸아세테이트(1600ℓ)로 균사괴를 추출하고, 그 추출물을 여과하였다. 사이 여과물(1400ℓ)을 활성 탄소(Sirasagi KL, 상표명, Takeda Pharmaceutical Co., Ltd.)(200ℓ)의 컬럼에 적용했다. 컬럼을 에틸 아세테이트(120ℓ)로 세척한 다음, 에틸아세테이트-메탄올[5:1]로 용출시켰다. 활성 분획물(50ℓ에서 부터 1030ℓ까지의 분획물)을 혼합하고 감압하에서 45ℓ로 농축시켰다. 겨과적으로 산출되는 용매를 교반하면서, 여기에 n-핵산(1201ℓ)을 첨가했다. 상기 혼합물을 실온에서 1시간 동안 방치한 다음실리카(Silika) #600(Chuo Silica Co., Ltd.)(3kg)을 사용하여 여과시켰다. 수득된 덩어리를 n-핵산(15ℓ)로 세척하고 목적물질을 메탄올(20ℓ)로 용출시켰다.
그 용출물을 감압하에서 농축 건조시켰다. 잔류물(500g)을 메탄올=아세트산-디클로로메탄[1:1:](4ℓ)에 용해시켜 실리카 겔(Kieselgel 60, 70-230메쉬, 70ℓ)의 컬럼에 적용했다.
상기 컬럼을 메탄올-아세트산-디클로로메탄[1:1:2](0.5ℓ) 및 디클로로메탄(25ℓ)로 전개시켰다. 목적물질을 디클로로메탄-메탄올[10:1] 및 디클로로메탄-메탄올[8:1]로 용출시켰다. 활성 분획물을 합하고 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 메탄올(1ℓ)에 용해하였다. 수득되는 용액을 교반하면서, 여기에 아세토니트릴(9ℓ)을 첨가하였다. 그 혼합물을 실온에서 한 시간동안 방치한 후 수득되는 침전물을 여과하여 수거했다. 이 첨전단계를 3회 반복하였다. 수득된 침전물을 아세토니트릴(1ℓ)로 세척하고 건조시켜 WS-9326A의 백색 분말(190g)을 수득하였다. 상기 침전단계에서 수득된 여과물을 합하여 감압하에서 농축 건조시켰다. 잔류물(11.7g)을 80% 수성 메탄올에 용해시키고 수득되는 용액을 활성 탄소(300㎖)의 컬럼을 통해 통과시켰다. 상기 컬럼은 80% 수성 메탄올(1ℓ)로 세척하였고 메탄올(6ℓ)로 용출을 실시했다. 활성 분획물을 합하여 감압하에서 농축 건조시켰다. 잔류물(3.4g)을 메탄올(12㎖)에 용해시켰다. 수득되는 용액을 50% 수성 아세토니트릴로 평형화시킨 역상 실리카겔(YMC 충전된 컬럼 R-354 S-15/30(ODS), ψ50×ℓ 300mm×2; 제조업체, Yamamura Chemical Institute)에 적용했다. 상기 컬럼을 워터스(Waters) HPLC(System 500)을 사용하여 50% 수성 아세토니트릴로 전개시켰다. WS-9326B를 함유하는 용출물(3ℓ에서부터 3.5ℓ까지의 분획물)을 합하여 농축건조하여 WS-9326B의 백색 분말(790mg)을 수득하였다.
실시예 4
아세트산 무수물(0.01㎖)을 WS-9326A(100mg)를 함유하는 피리딘(1㎖)용액에 넣고, 그 혼합물을 실온에서 발생 방치하였다. 상기 혼합물을 증발 건조시켜 정제용 TLC(클로로포름-메탄올(9:1)로 정제된 오일을 생성하였다. 수득된 생성물을 디에틸 에테르로 분쇄하여 모노 아세틸-WS-9EWYA(55mg)를 무색분말로 수득하였다. 상기 모노아세틸-WS-9326A의 몰리 및 화학적 성질은 다음과 같다.
(1) 형태 및 색상 : 무색 분말
(2) 분자식 : C56H70N8O14
(3) 분자량 : FAB-MS : m/z 1079.4(M+H)+
(4) 박막 크로마토그래피 :
Figure kpo00020
(5) 자외선 흡수스펙트럼 :
Figure kpo00021
= 3300, 2920, 1730, 1650, 1500, 1360, 1190, 1170, 910cm-1
(6) 물질의 성질 : 중성 물질
(7)1H 핵자기 공명 스펙트럼 : (400MHz, CDCl3-CD3OD(5:1))
이것의 도표는 제8도에 도시되어 있다.
실시예 5
아세트산 무수물(0.03㎖)을 WS-8326A(100mg)를 함유하는 피리딘(1m1)용액에 첨가하고, 그 혼합물을 실온에서 밤새 방치하였다. 이 혼합물을 증발건조시켜 정제용 TLC(클로로프름-메탄올(9:1)로 정제된 오일을 산출한 뒤 디에틸-WS-9326A(72mg)를 무색 분말로서 수득하였다. 디아세틸-WS-9326A의 물리 화학적 성질은 다음과 같다.
(1)형태 및 색상 : 무색 분말
(2) 분자식 : C58H72N8O15
(3) 분자량 : FAB-MS : m/z 1121.4(M+H)+
(4) 박막 크로마토그래피 :
Figure kpo00022
(5) 자외선 흡수스펙트럼 :
Figure kpo00023
= 3300, 3020, 2950, 1730, 1650, 1520, 1500, 1360, 1200, 1170, 1100, 1040, 980. 910cm-1
(6) 물질의 성질 : 중성 물질
(7)1H 핵자기 공명 스펙트럼 : (400MHz, CDCl3-CD3OD(5:1))
이것의 도표는 제8도에 도시되어 있다.

Claims (8)

  1. 하기 물리·화학적 특성을 갖는 WS-9326A 화합물, WS-9326B 화합물, 1개 내지 3개의 아실기(들)로 치환된 WS-9326A 화합물과 1개 내지 3개의 아실기(들)로 치환된 WS-9326B 화합물 중에서 선택된 화합물, 및 그것의 약학적 허용염 :
    (ⅰ) WS-9326A 화합물의 물리·화학적 특성 :
    (1) 형태 및 색상 : 무색 분말
    (2) 발생 반응 : 양성 : 황산 세륨 반응, 요오드 증기 반응, 염화 제2철-페리시안화 칼륨 반응
    음성 : 닌히드린 반응, 몰리쉬 반응, 염화 제2철 반응, 에리히 반응, 파울리반응
    (3) 용해도 : 가용성 : 메탄올, 에탄올
    소량 가용성 : 아세톤, 에틸 아세테이트
    불용성 : 물, 클로로프름
    (4) 융점 : 187-190℃
    (5) 고유 광회전도 : [α]D 23=-84°(C=1.0, MeOH)
    (6) 자외선 흡수스펙트럼 :
    Figure kpo00024
    =280nm(ε=34,700)
    (7) 적외선 흡수 스펙트럼 :=3300, 3050, 2950, 2920, 2860, 1730, 1650, 1610, 1560, 1540, 1530, 1510, 1440, 1380, 1340, 1280, 1240, 1170, 1110, 1080, 1060, 1040, 970, 920, 880, 860, 830cm-1
    (8) 원소 분석 : 실측치 : C 60.18, H 6.61, N 10.32
    C54H68N8O13·2H2O의 이론치 : C 60.43, H 6.76, N 10.44
    (9) 박막 크로마토그래프 :
    Figure kpo00026
    (10) 분자식 : C54H68N8O13
    (11) 분자량 : FAB-MS : m/z 1037(M+H)+
    (12) 물질 성질 : 산성 물질
    (13)13C 핵자기 공명 스펙트럼 : (100MHz, CD3OD)δ
    175.69(s), 174.70(s), 173.73(s), 173.38(s), 172.89(s), 171,04(s), 170.45(s), 167.79(s), 167.15(s), 159.20(s), 140.05(d), 139.12(s), 138.71(s), 135.27(d), 134.85(s), 132.11(d), 132.03(s), 131.69(d)×2, 130.70(d), 129,90(d), 129.61(d)×2, 129.22(d)×2, 128.55(d), 128.04(d), 127.99(d), 127.38(d), 126.09(s), 123.70(d), 115.63(d)×2. 73.46(d), 71.34(d), 62.80(t), 59.53(d), 56.91(d), 56,76(d), 55.55(d), 53.64(d), 52.10(d), 39.85(t), 37.18(t), 37.09(t), 34.58(q), 31.37(t), 24.56(d), 23,63(t), 22.71(q), 22.52(q), 21.17(q), 17.19(q), 14.13(q)
    (14)1H 핵자기 공명 스펙트럼 : (400MHz, CD3OD)δ
    7.80(1H,d,J=8Hz), 7.67(1H,d,J=16Hz), 7.45-7.14(9H,m), 7.06(2H,d,J=8Hz), 6.83(1H,s), 6.65(2H,d,J=8Hz), 6.59(1H,d,J=12Hz), 5.88(1H,dt,J=12 및 7Hz), 5.55(1H,m), 5.35(1H, 넓은 시그널), 5.10(1H,dd,J=3 및 9.5Hz), 4.68(1H,d,J=10Hz), 4.55(1H,t,J=6Hz), 4.48(1H,dd,J=3 및 12Hz), 3.92(2H,d,J=6Hz), 3.70(1H,t,J=7.5Hz). 3.62(1H,m), 3.46(1H,dd,J=3 및 14Hz), 2.94(1H,dd,J=3 및 16Hz), 2.89(3H,s), 2.74(1H,dd,J=9.5 및 16Hz), 2.69(1H,dd,J=12 및 14Hz), 2.14(2H,m), 1.5-1.4(2H,m), 1.20(3H,d,J=6Hz), 1.08(3H,d,J=6Hz), 1.0-0.8(2H,m), 0.91(3H,t,J=7Hz), 0.6(1H,m), 0.53(3H,d,J=6Hz), 0.51(3H,d,J=6Hz)
    (ⅱ) WS-9326B화합물의 물리·화학적 특성 :
    (1) 형태 및 색상 : 무색 분말
    (2) 발색 반응 : 양성 : 황산 세륨 반응, 요오드 증기 반응
    음성 : 닌히드린 반응
    (3) 용해도 : 가용성 : 메탄올
    소량 가용성 : 에탄올
    불용성 : 물, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로프름
    (4) 융점 : 165-170℃(분해)
    (5) 고유 광회전도 : [α]D 23=-64°(C=1.0, MeOH)
    (6) 자외선 흡수스펙트럼 :
    Figure kpo00027
    =283nm(ε=27,000)
    (7) 분자식 : C54H70N8O13
    (8) 원소 분석 : 실측치 : C59.97, H 6.87, N10.29
    C54H70N8O13·2H2O의 이론치 : C 60.32, H 6.94, N 10.42
    (9) 분자량 : FAB-MS : m/z 1061.6(M+Na)+
    (10) 박막 크로마토그래프 :
    Figure kpo00028
    (11) 적외선 흡수 스펙트럼 :
    Figure kpo00029
    =3300, 3050, 2950, 2950, 1735, 1660, 1530, 1510, 1450, 1400, 1380, 1340, 1260, 1220, 1080, 980, 920cm-1
    (12)13C 핵자기 공명 스펙트럼 : (100MHz, CD3OD)δ
    174.99(s), 174.54(s), 173.60(s), 173.41(s), 172.30(s), 171.27(s), 170.74(s), 170.19(s), 168.69(s), 157.59(s), 140.53(d), 139.35(s), 139.18(s), 135.76(d), 134.17(s), 131.15(d)×2, 130.93(d), 130.35(d), 129.88(d)×2, 129.39(d)×2, 128.70(d), 128.58(d)×2, 128.70(d), 128.58(s), 128.13(d), 127.64(d), 127,53(d), 121.99(d), 116.45(d)×2, 72.76(d), 70.82(d), 62.73(t), 62.67(d), 59.35(d), 56.33(d)×2, 56.19(d), 53.36(d), 52.24(d), 40.24(t), 37.55(t), 37.08(t), 33.69(t), 31.57(t), 29.93(q), 24.61(d), 23.70(q), 23.59(t), 22.16(q), 21.36(q), 17.12(q), 14.23(q)
    (13)1H 핵자기 공명 스펙트럼 : (400MHz, CD3OD)δ
    7.86(1H,d,J=16Hz), 7.80(1H,넓은 d, J=8Hz), 7.12-7.42(11H,m), 6.77(2H.d.J=8.5Hz), 6.61(1H,d,J=11.5Hz), 5.88(1H,dt,J=7.5 및 11.5Hz), 5.08(1H,dd,J=3.5 및 10Hz), 5.04(1H,q,J=6.5Hz), 4.66(1H,dd,J=3.5 및 13Hz), 4.65(1H,d.J=11.5Hz), 4.56(1H,dd,J=2.5 및 7Hz), 4.48(1H,dd,J=4.5 및 11Hz), 4.46(1H,s), 3.88(2H,m), 3.64(2H,m), 3.51(1H,dd,J=3.5 및 14Hz), 3.17(1H,dd,J=4.5 및 14Hz), 3.01(1H,dd,J=11 및 14Hz), 2.94(1H,dd,J=3.5 및 16Hz), 2.71(3H,s), 2.71(1H,dd,J=10 및 16Hz), 2.64(1H,dd,J=13 및 14Hz), 2.04(2H,m), 1.43(2H,m), 1.28(2H,m), 1.20(3H,d,J=6Hz), 0.95(3H,d,J=6.5Hz), 0.87(3H,t,J=7.5Hz), 0.53(1H,m), 0.52(6H,d,J=10.5Hz)
  2. 제1항에 있어서, WS-9326A 화합물 또는 그것의 약학적 허용염.
  3. 제1항에 있어서, WS-9326B 화합물 또는 그것의 약학적 허용염.
  4. 제1항에 있어서, 1개 내지 3개의 아실기(들)로 치환된 WS-9326A 화합물 또는 그것의 약학적 허용염.
  5. 제4항에 있어서, 아실기가 저급 알카노일인 화합물.
  6. 제5항에 있어서, 다음의 물리·화학적 특성을 갖는 트리아세틸-WS-9326A 화합물 :
    (1) 형태 및 색상 : 무색분말
    (2) 발생 반응 : 양성 : 황산 세륨 반응, 황산 반응, 요오드증기 반응
    음성 : 닌히드린 반응
    (3)용해도 : 가용성 : 메탄올, 디메틸설폭시드
    소량 가용성 : 클로로포름, 디에틸에테르
    불용성 : n-핵산
    (4) 융점 : 141-143℃
    (5) 고유 광회전도 : [α]D 23=-122°(C=1.0, MeOH)
    (6) 자외선 흡수스펙트럼 :
    Figure kpo00030
    =283nm(ε=32,000)
    (7) 분자식 : C60H74B8O16
    (8) 원소분석 : 실측치 : C 60.19, H 6.42, N 9.27
    C60H74N8O16·2H2O의 이론치 : C 60.09, H 6.56, N 9.34
    (9) 분자량 : FAB-MS : m/z 1163.6(M+H)+
    (10) 박막 크로마토그래피 :
    Figure kpo00031
    (11) 적외선 흡수 스펙트럼 :
    Figure kpo00032
    =3350, 3020, 2950, 2920, 2850, 1730, 1650, 1520, 1440, 1360, 1230, 1200, 1160, 1110, 1060, 1040, 910cm-1
    (12) 물질 성질 : 중성 물질
    (13)13C 핵자기 공명 스펙트럼 : (100MHz, CDCl3-CD3OH(10:1))δ
    174.20(s), 173.23(s), 173.06(s), 171.32(s), 171.02(s), 171.84(s), 169.79(s), 169.59(s), 169.55(s), 168.52(s), 167.03(s), 166.36(s), 151.02(s), 140.74(d), 138.82(s), 138.74(s), 137.12(s), 135.23(d), 133.75(s), 131.31(s), 130.20(d), 129.96(d)×2, 129.34(d), 129.21(d)×2, 128.56(d)×2, 127.24(d), 126.95(d), 126.74(d), 126.63(d), 126.50(d), 122.10(d)×2, 121.29(d), 70.99(d), 69.22(d), 63.73(t), 58.13(d), 56.10(d), 53.22(d), 52.66(d), 52.18(d), 49.93(d), 39.75(t), 39.39(q), 39.06(t), 35.57(t), 30.65(t). 24.26(d), 23.15(q), 22.79(t), 21.42(q), 21.21(q), 20.99(q), 20.83(q), 17.05(q), 16.18(q), 13.82(q)
    (14)1H 핵자기 공명 스펙트럼 : (400MJz, CDCl3-CD3OH(10:1))δ
    8.25(1H,d,J=8Hz), 8.02(1H,d,J=8Hz), 7.88(1H,d,J=16Hz), 7.86(1H,d,J=8Hz), 7.70(1H,d,J=6Hz), 7.61(1H,d,J=8Hz), 7.45(1H,d,J=7Hz), 7.32-7.15(6H,m), 7.03(2H,d,J=8Hz), 7.00-6.94(3H,m), 6.88-6.79(4H,m), 6.70(1H,s), 6.49(1H,d,J=12Hz), 5.79(1H,dt,J=12 및 7.5Hz), 5.54(1H,넓은 s), 5.50-5.45(2H,m), 4.93(1H,m), 4.75(1H,m), 4.65-4.56(2H,m), 4.46(1H,dd,J=6 및 11Hz), 4.31(1H,t,J=6Hz), 4.22(1H,m), 4.18(1H,dd,J=8 및 11Hz), 3.56(3H,s), 2.90(1H,dd,J=6 및 16Hz), 2.85-2.80(2H,m), 2.56(1H,dd,J=4 및 16Hz), 2.26(3H,s), 2.00(3H,s), 1.96-1.89(2H,m), 1.85(3H,s), 1.58(1H,m), 1.35(3H,d,J=6Hz), 1,32-1.20(3H,m), 1.07(3H,d,J=6Hz), 0.84(1H,m), 0.72(3H,d,J=6Hz), 0.71(3H,t,J=7.5Hz), 0.65(3H,d,J=6Hz)
  7. (1) WS-9326A 및/또는 WS-9326B 화합물을 생산하는 스트렙토마이세스 비오라세오니거(Streptomyces violaceoniger)를 영양 배지중에서 배양하는 단계 ; 및 (2) 수득되는 배양액으로부터 WS-9326B 화합물 중에서 선택된 화합물 또는 그것의 염을 회수하는 단계를 포함하는, WS-9326A 및 WS-9326B 화합물 중에서 선택된 화합물 또는 그것의 염을 제조하는 방법.
  8. 스트렙토마이세스 비오라세오니거(Streptomyces violaceoniger) 9326 (FERM BP-1667).
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