NO318078B1 - Adenosin-A3-reseptormodulatorer,deres anvendelse for fremstilling av preparater for a bestemme naervaer av tumorceller med hoy konsentrasjon av adenosin-A3-reseptor - Google Patents

Adenosin-A3-reseptormodulatorer,deres anvendelse for fremstilling av preparater for a bestemme naervaer av tumorceller med hoy konsentrasjon av adenosin-A3-reseptor Download PDF

Info

Publication number
NO318078B1
NO318078B1 NO20005508A NO20005508A NO318078B1 NO 318078 B1 NO318078 B1 NO 318078B1 NO 20005508 A NO20005508 A NO 20005508A NO 20005508 A NO20005508 A NO 20005508A NO 318078 B1 NO318078 B1 NO 318078B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
compound
alkyl
amino
furyl
pyrimidine
Prior art date
Application number
NO20005508A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20005508L (no
NO20005508D0 (no
Inventor
Pier Giovanni Baraldi
Pier Andrea Borea
Original Assignee
King Pharmaceuticals Res & Dev
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by King Pharmaceuticals Res & Dev filed Critical King Pharmaceuticals Res & Dev
Publication of NO20005508D0 publication Critical patent/NO20005508D0/no
Publication of NO20005508L publication Critical patent/NO20005508L/no
Publication of NO318078B1 publication Critical patent/NO318078B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D487/14—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D513/14—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/041—Heterocyclic compounds
    • A61K51/044—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins
    • A61K51/0459—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins having six-membered rings with two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, e.g. piperazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/0491—Sugars, nucleosides, nucleotides, oligonucleotides, nucleic acids, e.g. DNA, RNA, nucleic acid aptamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/02—Non-specific cardiovascular stimulants, e.g. drugs for syncope, antihypotensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/05—Isotopically modified compounds, e.g. labelled
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/72—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for hormones
    • G01N2333/726—G protein coupled receptor, e.g. TSHR-thyrotropin-receptor, LH/hCG receptor, FSH
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse angår spesielle pyrazol-triazol-pyrimidin-, triazol-triazol-pyrimidin- og imidazol-rriazol-pyrirnidmderivater og deres anvendelse innen medisin som modulatorer for adenosin-A3-reseptorer.
OPPFINNELSENS BAKGRUNN
Tre hovedklasser av adenosinreseptorer, klassifisert som Aj, A2 og A3, er blitt karakterisert farmakologisk. Ai-reseptorer kobles til inhibisjonen av adenylat syklase gjennom Gi-proteiner og er også blitt vist å være koblet til andre "second messenger"-systemer, inkludert inhibisjon eller stimulering av fosfoinositol omsetning og aktivering av ionekanaler. A2-reseptorer er ytterligere oppdelt i to undergrupper, A2a og A2B, der adenosinagonister aktiverer adenylat syklase med henholdsvis høy og lav affinitet. A3-reseptorsekvensen ble først identifisert ved et rotte testes-cDNA-bibliotek, og denne sekvens, senere klonet ved homologi til andre G-proteinkoblede reseptorer fra et rotte hjerne-cDNA-bibliotek, ble vist å tilsvare en ny, funksjonell adenosinreseptor.
Funnet av A3-reseptoren åpner nye, terapeutiske utsikter innen purinområdet. Spesielt medierer A3-reseptoren prosesser som inflammasjon, hypotensjon og mastcelledegranulering. Denne reseptor spiller åpenbart også en rolle i sentralnervesys-temet. Den selektive A3-agonist IB-MECA induserer adferdsdepresjon og beskytter mot cerebral iskemi ved kronisk administrering. Selektive A3-agonister ved høye konsentrasjoner ble også funnet å indusere apoptose i de humane leukemiceller HL-60. Disse og andre funn har gjort A3-reseptoren til et lovende terapeutisk mål. Det letes etter selektive antagonister for A3-reseptoren som potensielle anti-inflammatoriske eller mulige anti-iskemiske midler i hjernen. Nylig er A3-antagonister underutvikling som anti-astmatiske, anti-depressive, anti-arytmi, nyrebeskyttende, anti-parkinson og kogni-tivøkende medikamenter.
Det er derfor et formål ifølge foreliggende oppfinnelse å frembringe forbindelser og fremgangsmåter for fremstilling og anvendelse av disse, som er agonister, partielle agonister og/eller antagonister til adenosin-A3-reseptoren.
OPPSUMMERING AV OPPFINNELSEN
Forbindelser nyttige som potente, dog selektive modulatorer av adenosin-A3-reseptoren, med aktivitet som antagonister til denne reseptor, og fremgangsmåter for fremstilling og anvendelse av disse, beskrives.
Oppfinnelsen vedrører forbindelser som er kjennetegnet ved følgende formel:
der:
A er imidazol, pyrazol eller triazol;
Rer-C(X)-N(R,)2;
R<1> er hydrogen, CpQ-alkyl, fenyl-CrQ-alkyl eller fenyl eventuelt substituert med CpCe-alkoksy eller halogen;
R<2> er Ci-C6-alkyl eller fenyl-CrC4-alkyl;
R<3> er foran;
XerO;
og farmasøytisk akseptable salter av disse.
Fortrinnsvis er R<1> hydrogen; Ci_6-alkyl; C^-alkenyl, C2-ralkynyl, C3.7-sykloalkyl; C|.5-alkyl substituert med en eller flere halogenatomer, hydroksygrupper, CM-alkoksy, C3.7-sykloalkyl eller grupper med formel -NR^, -C(0)NR,2; aryl, substituert aryl der substitusjonen er utvalgt fra gruppen bestående av C^-alkoksy, Ci. 4-alkyl, nitro, amino, cyano, Ci_4-haloalkyl, CM-haloalkoksy, karboksy, karboksy-amido; C7.10-aralkyl der arylenheten kan være substituert med en eller flere av substituentene antydet ovenfor for arylgruppen; en gruppe med formel -(CH2)m-Het, der Het er en 5-6-leddet aromatisk eller ikke-aromatisk heterosyklisk ring inneholdende en eller flere heteroatomer utvalgt fra gruppen bestående av N, O og S og m er et helt tall fra 1 til 5.
Fortrinnsvis er Ci-6-alkylgruppene metyl, etyl, propyl, butyl og isopentyl. Eksempler på C3.7-sykIoalkylgrupper omfatter syklopropyl, syklopentyl og syklo-heksyl. Eksempler på Ci_5-alkylgrupper substituert med C3-7-sykloalkylgrupper omfatter sykloheksylmetyl, syklopentylmetyl og 2-syklopentyletyI. Eksempler på substituerte Ci.s-alkylgrupper omfatter 2-hydroksyetyl, 2-metoksyetyl, trifluormetyl, 2-fluoretyl, 2-kloretyl, 3-aminopropyl, 2-(4metyl-l-piperazin)etyl, 2-(4-morfoli-nyl)etyl, 2-aminokarbonyletyl, 2-dimetylaminoetyl, 3-dimetylaminopropyl. Aryl er fortrinnsvis fenyl, eventuelt substituert med Cl, F, metoksy, nitro, cyano, metyl, trifluormetyl, difluormetoksy grupper. Eksempler på 5-6-leddete heterosykliske ringgrupper inneholdende N, O og/eller S omfatter piperazinyl, morfoUnyl, tiazolyl, pyrazolyl, pyridyl, furyl, tienyl, pyrrolyl, triazolyl og tetrazolyl. Eksempler på C7.10-aralkylgrupper omfatter benzyl eller fenetyl eventuelt substituert med en eller flere substituenter utvalgt fra Cl, F, metoksy, nitro, cyano, metyl, trifluormetyl og diflour-metoksy. R! er fortrinnsvis hydrogen, Ci.8-alkyl, aryl eller C7.10-aralkyl, eventuelt substituert, fortrinnsvis med halogenatomer. Fortrinnsvis, X er O, R2 er C2-3- alkyl eller substituert alkyl og R3 er furan.
Særlig foretrukne forbindelser er de der R er en fenetylgruppe der fenylringen er substituert med en eller flere substituenter utvalgt fra gruppen bestående av klor, fluoratomer, metoksy, nitro, cyan, metyl, trifluormetyl og difluormetoksygrupper.
Betydninger av A kan representeres ved de følgende strukturformer:
Oppfinnelsen vedrører også anvendelse av forbindelsene til fremstilling av et preparat til behandling av hypertensjon, inflammasjon, allergiske reaksjoner, mastcelledegranulering, tumorer og hjertehypoksi, og beskyttelse mot cerebral iskemi, hvor en effektiv mengde av forbindelsen administreres til en pasient som har behov for slik behandling.
Også omfattet av oppfinnelsen er anvendelse av forbindelsene til fremstilling av et preparat for å bestemme nærvær av tumorceller med høy konsentrasjon av adenosin-A3-reseptorer i en pasient, hvor det omfattes å: a) administrere til pasienten en forbindelse, ifølge oppfinnelsen, som inneholder en markør som kan påvises etter binding av forbindelsen til tumorceller, b) tillate forbindelsen å bli bundet til tumorcellene;
c) påvise markøren.
Oppfinnelsen tilveiebringer også en fremgangsmåte for å bestemme nærvær av
tumorceller med høy konsentrasjon av adenosin-A3-reseptorer i en celleprøve, som er kjennetegnet ved at den omfatter å:
a) preparere en suspensjon av celler i et cellekulturmedium,
b) administrere til cellene en forbindelse, ifølge oppfinnelsen, som inneholder en
markør som kan påvises etter binding av forbindelsen til tumorceller,
c) tillate forbindelsen å bli bundet til tumorcellene;
d) påvise markøren.
Oppfinnelsen tilkjennegir i tillegg en anvendelse av en forbindelse ifølge oppfinnelsen til fremstilling av et preparat for å bestemme tilstedeværelse av gjenværende tumorceller etter kirurgisk fjerning av en tumor, hvor det omfattes å: a) administrere til pasienten før, etter eller under den kirurgiske fjerning av en tumor, en forbindelse, ifølge oppfinnelsen, som inneholder en markør som kan påvises
etter binding av forbindelsen til gjenværende tumorceller,
b) tillate forbindelsen å bli bundet til de gjenværende tumorceller;
c) påvise markøren.
Diagnostiske anvendelser, f. eks. å bestemme tilstedeværelse av en eller flere av
de ovenfor beskrevne medisinske tilstander, eller i en screeningsanalyse å avgjøre effek-tiviteten til andre forbindelser gjeldende binding til A3-Ado-reseptoren (dvs. gjennom kompetitiv inhibisjon bestemt ved ulike bindingsforsøk), som beskrevet i Jacobson and Jarvis, red., Wiley, New York, 1997, s. 101-128; Mathot et al., Brit. LPharmacol.. 116: 1957-1964 (1995); van der Wenden et al., J. Med. Chem.. 38:4000-4006 (1995); og van Calenbergh, J. Med. Chem.. 40: 3765-3772 (1997).
KORT BESKRIVELSE AV FIGURENE
Figur 1 er en kurve som viser metningen av [<l25>I]AB-MECA-binding (fmol/mg protein-binding) til humane A3-reseptorer uttrykt i HEK 293-celler versus den molare konsentrasjon av [ I]AB-MECA-binding . Figur 2 er en kurve som viser metningen av [ 195I]AB-MECA-binding (fmol/mg protein-binding) til humane A3-reseptorer uttrykt i JURKAT-cellelinjen versus den molare konsentrasjonen av [ 195I]AB-MECA. Som vist i figuren var den påviste tetthet av A3-reseptorer ca. 300 fmol/mg protein i JURKAT-cellemembraner ved [<125>I]AB-MECA. Figur 3 og 4 er kurver som viser metningen av bindingen av en tritsiert analog av forbindelsen 47 - 5-[[(4-Metoksyfenyl)amino]karbonyl]amino-8-propyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]l,2,4-triazol[l ,5-c]pyrimidin (forbindelse 102) (fmol/mg protein) til A3-reseptorer uttrykt i JURKAT-cellelinjen versus den molare konsentrasjonen av forbindelse 102. Data i disse figurer viser tilstedeværelse av adenosin-A3-reseptorer i humane tumorcellelinjer i høy tetthet. For eksempel ble ca. 1300 fmol/mg-protein påvist i JURKAT-celler og 650 fmol/mg-protein ble påvist i HL60-celler. Følgelig er forbindelse 102 et mye mer følsomt verktøy for å påvise adenosin-A3-reseptorer enn [ 125I] AB-MECA. Disse funn har lettet påvisning av A3-reseptorer i mange humane tumorer.
DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN
Foreliggende søknad beskriver forbindelser nyttige som potente, dog selektive modulatorer av adenosinreseptorer med aktivitet som A3-agonister, og i noen tilfeller A3-antagonister, og fremgangsmåter for fremstilling og anvendelse av disse.
Forbindelsene kan anvendes i en fremgangsmåte for å modulere adenosin-A3-reseptorer hos et pattedyr, inkludert menneske. Fremgangsmåtene omfatter administrering av en effektiv mengde av en forbindelse med Formel I tilstrekkelig for å modulere adenosin-A3-reseptorer hos pattedyret.
Forbindelsene kan anvendes i en farmasøytisk formulering som omfatter en forbindelse med Formel I og en eller flere eksipienter. Ulike kjemiske intermediater kan anvendes for å fremstille forbindelsene.
Definisjoner
Slik det anvendes her i dokumentet, er en forbindelse en agonist av en adenosin-A|-reseptor dersom den er i stand til fullstendig å inhibere adenylatsyklase (A3) og er i stand ti• l å fortrenge [ 125 I]-AB-MECA i • et kompetitivt bindingsforsøk.
Slik det anvendes her i dokumentet, er en forbindelse en partiell agonist av en adenosin-A3-reseptor dersom den er i stand til partsielt å inhibere adenylatsyklase (A3) og er i stand til å fortrenge [ 125I]-AB-MECA i et kompetitivt bindingsforsøk.
Slik det anvendes her i dokumentet, er en forbindelse en antagonist av en adenosin-A3-reseptor dersom den er i stand til å forebygge inhibisjonen forårsaket av en agonist og er i stand til å forflytte [<l25>I]-AB-MECA i et kompetitivt bindingsforsøk.
Slik det anvendes her i dokumentet, er en forbindelse selektiv for A3-resep-toren dersom forholdet A1-/A3- og A2-/A3- aktiviteten er større enn ca. 50, fortrinnsvis mellom 50 og 100, og helst større enn 100.
Slik det anvendes her i dokumentet, betyr betegnelsen "alkyl" en monovalent, rettkjedet, forgrenet eller syklisk alkylgruppe, fortrinnsvis med 1 til 20 karbonatomer, helst 1 til 10 karbonatomer ("lavere alkyl") og helst 1 til 6 karbonatomer. Denne betegnelsen eksemplifiseres ved grupper slik som metyl, etyl, n-propyl, iso-propyl, - butyl, isø-butyl, w-hexyl og liknende. Betegnelsene "alkylen" og "lavere alkylen" henviser til divalente radikaler av det tilsvarende alkan. Videre slik det anvendes her i dokumentet, har andre enheter navn avledet fra alkaner, slik som alkoksyl, alkanoyl, alkenyl, sykloalkenyl etc når de er modifisert av "lavere", har karbonkjeder på 10 eller færre karbonatomer. I disse tilfeller, der minimumsantallet av karboner er større enn en, f. eks. alkenyl (minimum to karboner) og sykloalkyl (minimum tre karboner), skal det forstås at "lavere" betyr minst det minste antall karboner.
Slik det anvendes her i dokumentet, henviser betegnelsen "substituert alkyl" til en alkylgruppe, fortrinnsvis av fra 1 til 10 karbonatomer ("substituert lavere alkyl"), med fra 1 til 5 substituenter, og fortrinnsvis 1 til 3 substituenter, utvalgt fra gruppen bestående av alkoksy, substituert alkoksy, sykloalkyl, substituert sykloalkyl, substituert sykloalkenyl, acyl, acylamino, acyloksy, amino, substituert amino aminoacyl, aminoacyloksy, oksyacylamino, cyano, halogen, hydroksyl, keto, tioketo, karboksyl, karboksylalkyl, tiol, tioalkoksy, substituert tioalkoksy, aryl, aryloksy heteroaryl, heteroaryloksy, heterosyklisk, hydroksyamino, alkoksyamino, nitro, -SO-alkyl, -SO-substituert alkyl, -SO-aryl, -SO-heteroaryl, -SO-alkyl, -SOrSubstituert alkyl, -S02-aryl, -SCVheteroaryl, mono- og di-alkylamino, mono- og di-(substituert alkyl)amino, mono- og di-arylamino, mono- og di-heteroarylamino, mono- og di-heterosyklisk amino, og usymmetriske di-substituerte aminer med ulike substituenter utvalgt fra alkyl, aryl, heteroaryl og heterosykliske. Slik det anvendes her i dokumentet, har andre enheter med forstavelsen "substituert" til hensikt å omfatte en eller flere av substituentene opplistet ovenfor.
Slik det anvendes her i dokumentet, refererer "alkaryl" til en alkylgruppe med en arylsubstituent. Bindingen er gjennom alkylgruppen. "Aralkyl" refererer til en aryl gruppe med en alkylsubstituent, der bindingen er gjennom arylgruppen.
Slik det anvendes her i dokumentet, refererer betegnelsen "alkoksy" til gruppen "alkyl-O-", der alkyl er som definert ovenfor. Fortrinnsvis omfatter alkoksygruppene eksempelvis metoksy, etoksy, «-propoksy, iso-propoksy, «-butoksy, tert-butoksy, .sec-butoksy, «-pentoksy, /i-heksoksy, 1,2-dimetylbutoksy og liknende.
Slik det anvendes her i dokumentet refererer betegnelsen "alkenyl" til alkenylgrupper, fortrinnsvis med fra 2 til 10 karbonatomer og helst 2 til 6 karbonatomer og med minst 1 og fortrinnsvis fra 1 til 2 seter med umettet alkenyl. Foretrukne alkenylgrupper omfatter etenyl (-CH=CH2), n-propenyl (-CH2CH=CH2), iso-propenyl (-C(CH3)=CH2), og liknende.
Slik det anvendes her i dokumentet, refererer betegnelsen "alkynyl" til alkenylgrupper, fortrinnsvis med fra 2 til 10 karbonatomer og helst fra 2 til 6 karbonatomer og med minst 1 og fortrinnsvis fra 1 til 2 seter med umettet alkenyl.
Slik det anvendes her i dokumentet, refererer betegnelsen "acyl" til gruppene alkyl-C(O)-, substituert alkyl-C(O)-, sykloalkyl-C(O)-, substituert sykloalkyl-C(O)-, aryl-C(O)-, heteroaryl-C(0)- og heterosyklisk-C(0)-, der alky, substituert alkyl, sykloalkyl, substituert sykloalkyl, aryl, heteroaryl og heterosyklisk er som definert her i dokumentet.
Slik det anvendes her i dokumentet, refererer betegnelsen "acylamino" til gruppen -C(0)NRR, der hver R er uavhengig hydrogen, alkyl, substituert alkyl, aryl, heteroaryl eller heterosyklisk der alkyl, substituert alkyl, aryl, heteroaryl og heterosyklisk er som definert her i dokumentet.
Slik det anvendes her i dokumentet, refererer betegnelsen "aryl" til en umettet aromatisk karbosyklisk gruppe med fra 6 til 14 karbonatomer med en enkelt ring (f. eks. fenyl) eller flere kondenserte (fuserte) ringer (f. eks. naftyl eller antryl). Foretrukne aryller omfatter fenyl, naftyl og liknende. Dersom ikke annet er begrenset ved definisjonen av arylsubstituenten, kan slike arylgrupper eventuelt være substituert med fra 1 til 5 substituenter og fortrinnsvis fra 1 til 3 substituenter utvalgt fra gruppen bestående av hydroksy, acyl, alkyl.alkoksy, alkenyl, alkynyl, substituert alkyl, substituert alkoksy, substituert alkenyl, substituert alkynyl, amino, substituert amino, aminoacyl, acyloksy, acylamino, alkaryl, aryl, aryloksy, azido, karboksyl, karboksylalkyl, cyano, halo, nitro, heteroaryl, heteroaryloksy, heterosyklisk, heterosyklooksy, aminoacyloksy, oksyacylamino, tioalkoksy, substituert tioalkoksy, tioaryloksy, tioheteroaryloksy, -SO-alkyl, -SO-substituert alkyl, -SO-aryl, -SO-heteroaryl, -S02-alkyl, -S02-substituert alkyl, -S02-aryl, -S02-heteroaryl og trihalometyl. Foretrukne substituenter omfatter alkyl, alkoksy, halo, cyano, nitro, trihalometyl og tioalkoksy.
Slik det anvendes her i dokumentet, refererer betegnelsen "sykloalkyl" til sykliske alkylgrupper med fra 3 til 12 karbonatomer med en enkel, syklisk ring eller flere kondenserte ringer. Slike sykloalkylgrupper omfatter eksempelvis enkle ringstrukturer, slik som syklopropyl, syklobutyl, syklopentyl, syklooktyl og liknende, eller flere ringstrukturer slik som adamantyl og liknende.
Slik det anvendes her i dokumentet, refererer betegnelsen "halo" eller "halogen" til fluor, klor, brom og jod, og fortrinnsvis enten fluor eller klor.
Slik det anvendes her i dokumentet, refererer betegnelsen "heteroaryl" til en aromatisk karbosyklisk gruppe med fra 1 til 15 karbonatomer og 1 til 4 heteroatomer utvalgt fra gruppen, bestående av oksygen, nitrogen og svovel innenfor minst en ring (dersom det er flere enn en ring).
Dersom ikke annet er begrenset ved definisjonen av heteroarylsubstituenten, kan slike heteroarylgrupper eventuelt være substituert med fra 1 til 5 substituenter og fortrinnsvis 1 til 3 substituenter utvalgt fra gruppen bestående av hydroksy, acyl, alkyl, alkoksy, alkenyl, alkynyl, substituert alkyl, substituert alkoksy, substituert alkenyl, substituert alkynyl, amino, substituert amino, aminoacyl, acyloksy, acylamino, alkaryl, aryl, aryloksy, azido, karboksyl, karboksylalkyl, cyano, halo, nitro, heteroaryl, heteroaryloksy, heterosyklisk, heterosyklooksy, aminoacyloksy, oksyacylamino, tioalkoksy, substituert tioalkoksy, tioaryloksy, tioheteroaryloksy, -SO-alkyl, -SO-substituert alkyl, -SO-aryl, -SO-heteroaryl, -S02-alkyl, -S02-substituert alkyl, -S02-aryl, -S02-heteroaryl og trihalometyl. Foretrukne substituenter omfatter alkyl, alkoksy, halo, cyano, nitro, trihalometyl og tioalkoksy. Slike heteroarylgrupper kan ha en enkel ring (f. eks. pyridyl eller furyl) eller flere kondenserte ringer (f. eks. indolizinyl eller benzotienyl).
"Heterosykel" eller "heterosyklisk" henviser til en monovalent, mettet eller umettet gruppe med en enkel ring eller flere kondenserte ringer med fra 1 til 15 karbonatomer og fra 1 til 4 heteroatomer utvalgt blant nitrogen, svovel og oksygen i ringen.
Dersom ikke annet begrenses ved definisjonen av den heterosykliske substituent, kan slike heterosykliske grupper eventuelt være substituert med 1 til 5 substituenter utvalgt blant alkyl, substituert alkyl, alkoksy, substituert alkoksy, aryl, aryloksy, halo, nitro, heteroaryl, tiol, tioalkoksy, substituert tioalkoksy, tioaryloksy, trihalometyl og liknende. Slike heterosykliske grupper kan ha en enkel ring eller flere kondenserte ringer.
Med hensyn til de ovennevnte grupper som inneholder en eller flere substituenter, forstås det selvfølgelig at slike grupper ikke inneholder noen substitusjon eller substitusjonsmønster som er sterisk upraktisk og/eller syntetisk ugjennomførbart.
Slik det anvendes her i dokumentet, refererer betegnelsen "karboksylsyrederivater" og "sulfonsyrederivater" til -C(X)R,, -C(X)-N(R,)2, - C(X)OR,, -C(X)SRi, -SOnRi, -SOnOR,, -SO„SR, eller SOn-N(Ri)2, der X er O, S eller NR<1>, der R<1> er hydrogen, alkyl, substituert alkyl eller aryl, og aktiverte derivater av disse, slik som anhydrider, estere og halider slik som klorider, bromider og jodider, som kan anvendes for å koble karboksylsyre- og sulfonsyrederivatene til det 5'-aminet ved standard koblingskjemi.
"Farmasøytisk akseptable salter" refererer til farmasøytisk akseptable salter av en forbindelse med Formel IA, IB eller IC, der saltene er avledet fra et utvalg av organiske og uorganiske mot-ioner velkjent innen teknikken og omfatter eksempelvis natrium, kalium, kalsium, magnesium, ammonium, tetraalkylammonium og liknende; og når molekylet inneholder en basisk funksjonalitet, kan salter av organiske eller uorganiske syrer, slik som saltsyre, hydrobromid, tartrat, mesylat, acetat, maleat, oksalat og liknende anvendes som farmasøytisk akseptabelt salt.
Betegnelsen "beskyttende gruppe" eller "blokkerende gruppe" refererer til en hver gruppe som når den bindes til en eller flere hydroksyl-, amino-, eller karboksylgrupper i forbindelsen (inkludert intermediater av disse slik som aminolactamer, aminolactoner etc.) forhindrer at reaksjoner oppstår ved disse grupper og der den beskyttende gruppe kan fjernes ved konvensjonelle kjemiske eller enzymatiske trinn for å gjenopprette hydroksyl-, amino- eller karboksylgruppen. Foretrukne aminoblokkeirngsgrupper som kan fjernes omfatter konvensjonelle substituenter, slik som t-butyloksykarbonyl (t-BOC), benzyloksykarbonyl (CBZ), og liknende, som kan fjernes ved konvensjonelle betingelser kompatible med produktets egenskaper.
Følgende forkortelser er anvendt i dokumentet:
[,<25>I]AB-MECA, ['"^^-(^amino-S-jodbenzy^adenosin-STsI-metyluronamid; (R)-PIA, (R)-N6-(fenylisopropyl)adenosin; DMSO, dimetylsulfoksid; I-AB-MECA, N6-(4 -amino-3-jodbenzyl)adenosin-5'-N-metyluronamid;
IB-MECA, N<6->(3-jodbenzyl)adenosin-5'-N-metyluronamid;
Ki, likevektsinhibisjonskonstant;
NECA, 5'-N-etylkarboksyamid adenosin;
THF, tetrahydrofura;
Tris, tris(hydrooksymetyl)aminometan
Tilberedning av forbindelse
Fagpersoner innen organisk kjemi vil forstå at reaktive og skjøre funksjonelle grupper ofte må beskyttes foran en spesiell reaksjon, en rekkefølge av reaksjoner og der etter gjenopprettes til sin opprinnelige form etter den siste reaksjonen er avsluttet. Vanlige grupper beskyttes ved å konvertere dem til et relativt stabilt derivat. For eksempel kan en hydroksylgruppe konverteres til en etergruppe og en amingruppe konverteres til et amid eller karbamid. Fremgangsmåter for å beskytte og av-beskytte, også kjent som "blokkering" og "de-blokkering" er velkjente og bredt anvendt innen teknikken, se f. eks. T. Green, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley, New York (1981) eller Protective Groups in Organic Chemistry, red.F. W. McOmie, Plenum Press, London (1973).
Forbindelsene fremstilles fortrinnsvis ved å reagere en forbindelse med Formel II nedenfor med et egnet karboksylsyre- eller sulfonsyrederivat ved hjelp av kjent kjemi.
Forbindelser med Formel II kan fremstilles ved å bruke de følgende skjemaer Skjema I og Skjema II, der R<3> er furan.
Reagenser: A) trietylortoformat; B) 2-furonsyrehydrazid, 2-metoksyetanol; C) PhOPh, 260 °C; D) 10 % HC1, under refluks; E) cyanamid, pTsOH, N-metylpyrrolidon
Reagenser: F) furonsyrehydrazid, difenyleter; E) cyanamid, pTsOH, N-metylpyrrolidon.
Forbindelsene med Formel II kan fremstilles ved enten en indirekte rute beskrevet i Skjema I eller en direkte rute beskrevet i Skjema II. Egnede utgangsmaterialer for begge skjemaer er de heterosykliske orto-aminonitriler med Formel III, vanligvis fremstilt ifølge de syntetiske fremgangsmåter kjent i litteraturen, og beskrevet i boken av E. C. Taylor og A. McKillop (voli serien Advances in Organic Chemistry, red.erscience, 1970).
Orto-aminonitriler III transformeres til de tilsvarende imidater med Formel IV ved reaksjon med et etylortoformat overskudd ved refluks temperatur i 8 til 10 timer. Etter evaporering av etylortoformat fører reaksjonen til den i alt vesentlig rene tilsvarende imidat IV i et høyt utbytte slik det er vist ved IR- og 'H NMR analyser av de urensede reaksjonprodukter.
Imidatene med Formel IV utsettes der etter for en sekvens av to reaksjoner som gjør det mulig å oppnå den trisykliske struktur med Formel VI i et høyt utbytte.
Reaksjonsrekkefølgen omfatter: a) reaksjon med 2-furonsyrehydrazid i en 2-metoksyetanoUøsning ved reflukstemperatur i 8 -10 timer, for å frembringe intermediatforbindelsene med Formel V; b) termisk syklisering av de sistnevnte til de tilsvarende forbindelser med Formel VI ved å varme opp i difenyleter ved en temperatur på 260 °C i 0,5 til 1 time.
De trisykliske forbindelser VI hydrolyseres der etter med HC1 ved refluks i 1 til 3 timer for å danne triazoler VII, som til slutt sykliseres til de ønskede forbindelser II med cyanamid i N-metyl pyrrolidon ved refluks og i nærvær av para-toluensulfonsyre (Skjema I).
I noen tilfeller kan triazoler VII oppnås direkte ved å oppvarme i difenyleterorto-aminonitril III med 2-furonsyrehydrazid. Triazoler VII sykliseres der etter som beskrevet ovenfor i Skjema II. I de følgende skjemaer III, IV og V beskrives syntesen av forbindelser med Formel II, der A er en triazolring, i større detalj. Reagenser: A) furonsyrehydrazid, PhOPh, 260 °C, B) NH2CN, pTsOH, N-metylpyrrolidon.
i
Reagenser: A) furonsyrehydrazid, PhOPh, 260 °C, B) NH2CN, pTsOH, N-metylpyrrolidon.
Til slutt reageres de 5-amin inneholdende forbindelser II med karboksylsyrer, sulfonsyrer, aktiverte karboksylsyrer, aktiverte sulfonsyrer, tiokarboksylsyrer, aktiverte tiokarboksylsyrer og liknende for å danne de ønskede forbindelser. Aktiverte karboksylsyrer omfatter syrehalider, estere, anhydrider og andre derivater kjent for å reagere med aminer og danne amider. Aktiverte sulfonsyrer omfatter sulfonylhalider slik som sulfonylklorider.
Det er ikke alltid nødvendig å anvende aktiverte karboksylsyre- og sulfonsyrederivater. Syrene selv kan kobles til aminene ved standard koblingskjemi, f. eks. ved disykloheksyldiimid (DCI) og andre rutinemessig anvendte koblingsreagenser. Egnede koblingsbetingelser for å danne amidbindinger er velkjente for fagpersoner innen peptidsyntese.
Generelt kan den ovennevnte kjemi anvendes for å fremstille 8-(Ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyra2»l[4,3-e]-l,2,4-triazol[l,5c]pyrimidiner når 3-cyano-2-aminopyrazoler anvendes som utgangsmaterialer. 3-cyano-2-aminopyrazoler kan reagere med et alkylhalid (RX) i et polart aprotisk løsningsmiddel slik som dimetylformamid (DMF) for å frembringe en R-gruppe på en av ringnitrogenene. Den resulterende forbindelse kan bearbeides ved refluks med trietylortoformat for å frembringe en iminetylester, som kan reageres med furinhydrazid, fortrinnsvis ved en "Dean-Stark" - felle for azeotropisk eliminering av vann fremstilt i reaksjonen, for å frembringe 8-(Ar)alkyl-2-(2-furyi)-pyrazol[4,3-e]-l,2,4-tirazol[l,5c]pyrimidiner. Produktene kan renses ved kromatografi, f. eks. i (EtOAc/heksan 1:1), for bruk i etterfølgende kjemi.
Produktet fra denne reaksjon kan reageres med en egnet syre, slik som HC1, ved refluks etterfulgt av reaksjon ved cyanamid i et løsningsmiddel slik som N-metylpyrrolidon med katalytisk para-toluen sulfonsyre ved forhøyede temperaturer for å frembringe 5-amino-8-(Ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]-1,2,4-triazol[ 1,5c]pyrimidiner.
Disse amin-substituerte forbindelsene kan reagere med passende isocyanater og danne urea forbindelser, aktiverte karboksylsyrer slik som syrehalider for å frembringe amider, aktiverte sulfonsyrer slik som sulfonsyrehalider for å danne sulfonamider, eller andre reaktive karboksylsyre- eller sulfonsyrederivater for å danne andre ønskede forbindelser.
Triazol-triazol-pyrimidin forbindelser kan fremstilles ved tilsvarende kjemi, men ved å starte med et egnet funksjonalisert azid, og reagere azidet med H2NC(0)CH2CN for å danne den initielle heterosykliske ring, etterfulgt av reaksjon av amidgruppen med et dehydratiseirngsmiddel slik som POCl3 for å danne et nitril. Det dannede cyano-aminotriazol kan reageres på samme måte, slik som 3-cyano-2-aminopyrazoler er diskutert ovenfor, for å fremstille triazol-triazol-pyrimidiner.
Syntese av radiomerkede analoger
Forbindelsene kan merkes med enhver egnet radioaktiv markør. Eksempel på egnede radiomarkører omfatter <3>H og <14>C, men enhver hovedsakelig ikke-toksisk radiomarkør, vanlig anvendt i farmakokinetiske studier, kan anvendes. Metoder for inkorporering av radioaktiv merking i organiske forbindelser er velkjente for fagpersoner innen teknikken.
Når forbindelsene er 5-[[substituert fenyl)amino]karbonyl]amino-8-(ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] 1,2,4-triazol[l ,5-c]pyrimidin-forbindelser eller 5-amino-8-(ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]-1,2,4-triazolf 1,5c]pyrimidin-forbindelser, er inkorporering av en tritium markør ganske rett frem.
I en utførelsesform er et egnet utgangsmateriale en forbindelse der (ar)alkylgruppen ved 8-posisjon omfatter en dobbelbinding. Dobbeltbindingen kan reagere med tritium i nærvær av en egnet katalysator, f. eks. palladium på kull eller andre kjente hydrogeneringskatalysatorer.
For eksempel kan 5-[[(4-metoksyfenyl)ammo]karbonyl]amino-8-(l,2-ditritiopropyl)-2-(2-faryl)-pyrazol[4,3-e]l,2,4-tf (forbindelse 102) fremstilles ved å tilsette tritium over dobbelbindingen av 5-[[(4-metoksyfenyl)amino]karbonyl]amino-8-1 -propenyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] 1,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (forbindelse 101). Forbindelse 102 diskuteres nedenfor med hensyn på ulike bindingsaffinitets-studier på JURKAT-cancerceller.
Alternativt kan tritiummarkøren være til stede på forbindelsene anvendt for å reagere med 5-aminogruppen for å danne amider, urea eller andre grupper ved 5-posisjonen. For eksempel kan isocyanater, anvendt for å fremstille de 5-aminokarbonylaminoforbindelsene beskrevet her i dokumentet, omfatte en tritium- eller annen radiomarkør, og kan derfor enkelt inkorporeres i sluttproduktet.
I en annen utførelsesform kan radiomarkøren inkorporeres i molekylet mens ringsystemet settes sammen. Som diskutert ovenfor med hensyn til syntesen av forbindelsene med Formel II, hydrolyseres ulike trisykliske forbindelser med Formel VI med HC1 for å gi triazoler med Formel VII, som sykliseres til cyanamid ved refluks i nærvær av para-toulensulfonsyre, som vist i Skjema I. Det er forholdsvis enkelt å inkorporere en <14>C-markør på dette trinn i syntesen ved ,<4>C-merket cyanamid.
Joderte forbindelser kan f. eks. fremstilles ved å inkorporere radioaktivt jod i den aromatiske forbindelse anvendt for å reagere med 5-amingruppen. Inkorporering av jod i aromatiske ringer er velkjent for fagpersoner innen teknikken. Det er enkelt å inkorporere et jod-atom i de aromatiske forbindelsene anvendt for å reagere med 5-amingruppen for å fremstille forbindelsene beskrevet her i dokumentet.
Følgelig kan, ved ikke å bruke annet enn kjent teknikk, egnede radiomerkede analoger enkelt bli fremstilt.
Syntese av fluorescensmerkede analoger
Som for de radiomerkede forbindelser er syntese av fluorescensmerkede forbindelser relativt enkelt. Fortrinnsvis er den fluorescerende gruppe tilstede i R2-posisjonen, selv om substitusjonen ved R3-posisjonen også er mulig. I en utførelsesform omfatter den fluorescerende gruppe en furanring som kan testes ved R3-posisjonen. Alternativt kan andre aromatiske ringer anvendes. Fluorescensmarkører er velkjent for fagpersoner innen teknikken, og kan enkelt festes til forbindelsene beskrevet her i dokumentet ved hjelp av kjent kjemi.
Fremgangsmåte for anvendelse av forbindelsene
Fremgangsmåtene kan anvendes for alle indikasjoner der agonister og antagonister av A3-reseptoren, inkludert: behandling av hypertensjon;
behandling av inflammatoriske forstyrrelser slik som reumatoid artritt og
psoriasis;
behandling av allergiske forstyrrelser slik som høysnue og allergisk rhinitt mastcelledegranulering;
antitumormedikamenter;
behandling av hjertehypoksi;
beskyttelse mot cerebral iskemi;
som beskrevet f. eks. i Jacobson, TIPS mai 1998, s. 185-191, der innholdet er inkorporert her i dokumentet ved referanse.
En foretrukket anvendelse for disse forbindelser er for påvirkning og/eller behandling av cancer. Som diskutert nedenfor er det vist at tumorceller uttrykker A3-reseptoren. Det antas at A3-reseptoren beskytter cellene fra iskemisk skade når de ikke mottar en tilfredsstillende blodforsyning. Flere kommersielt tilgjengelige medikamenter, så vel som medikamenter under utvikling, rettes mot inhibering av VEGF-ekspresjon, som avsnører blodforsyning til tumorcellene. Imidlertid kan agonisme av adenosin-A3-reseptoren medføre en beskyttende effekt, forebygge tumorcelledød, mens cellene ikke mottar en adekvat blodforsyning. Ved å administrere antagonister for disse reseptorer sammen med anti-VEGF eller andre anti-angiogeneseforbindelser, kan tumorcellene bli avskåret fra ny blodforsyning, så vel som å miste beskyttelsen mot iskemisk skade som agonisme av A3-reseptorene frembringer.
Forbindelsene kan administreres til en pasient via enhver medisinsk akseptabel måte. Egnede måter for administrering omfatter oral, rektal, topisk eller parenteral
(inkludert subkutan, intramuskulær og intravenøs) administrering, selv om oral eller parenteral administrering foretrekkes.
Mengden av forbindelser nødvendig for å være effektiv som en modulator av en adenosinreseptor vil selvfølgelig variere med det enkelte pattedyr som behandles, endelig avhengig av skjønnet som utøves av legen eller veterinæren. Faktorene som vurderes omfatter tilstanden som skal behandles, administrasjonsmåten, egenskapene til formuleringen, pattedyrets kroppsvekt, overflateareal, alder og generell tilstand, og den ferdige forbindelse som skal administreres. Imidlertid er en passende effektiv dose i området fra ca. 0,1 ug/kg til ca. 10 mg/kg kroppsvekt pr dag, fortrinnsvis i området fra ca. 1 mg/kg til ca. 3 mg/kg pr dag.
Den totale daglige dose kan gis som en enkelt dose, flere doser, f. eks. 2 til 6 ganger pr dag, eller ved intravenøs infusjon av en valgt varighet. Doser over eller under området referert ovenfor er innenfor rammen av foreliggende oppfinnelse å kan administreres til den enkelte pasient dersom det er ønskelig og nødvendig. For eksempel vil doseornrådet for ett 75 kilos pattedyr være ca. 75 mg til ca. 220 mg pr dag, og en typisk dose vil være ca. 150 mg pr dag. Dersom flere adskilte doser antydes, kan behandlingen typisk være 50 mg av en forbindelse gitt 3 ganger pr dag.
I en annen utførelsesform kan de radioaktivt merkede forbindelser administreres til en pasient i den hensikt å utføre en analyse for å bestemme tilstedeværelse eller fravær av ondartede tumorceller som uttrykker A3-reseptorer. Forbindelsene beskrevet her i dokumentet, må ha en relativ høy affinitet for A3-reseptorsubtypen, administreres fortrinnsvis til en pasient, og etter forbindelsene bindes til A3-reseptorene tilstede på tumorcellene kan lokaliseringen av forbindelsene bestemmes ved å bestemme lokaliseringen av den radioaktive forbindelse. Innretninger for å bestemme lokaliseringen og tettheten av radiomerkede forbindelser er velkjent for fagpersoner innen teknikken.
Anvendelse av radiomarkører og/eller fluorescensmerkede forbindelser under kirurgi for fjerning av cancervev kan være fordelaktige. Ofte trenger kirurger å sikre fullstendig fjerning av cancervev. De radioaktive eller fluorescensmerkede forbindelsene kan administreres til en pasient enten før eller under kirurgien, og vil bindes til cancercellene som er tilstede hos pasienten. Tidspunktet for administrering vil variere avhengig av mange faktorer, som opptak av den særskilte forbindelse i de særskilte tumorceller, og lokalisering av tumoren i kroppen. Kirurgen har følgelig et enkelt analyseverktøy for å bestemme tilstedeværelse av resterende cancerceller etter fjerning av tumoren. Tilstedeværelse av gjenværende tumorceller kan bestemmes ved å måle fluorescens eller radioaktivitet på operasjonsstedet, ved bruk av analytiske innretninger velkjent for fagpersoner innen teknikken.
Påvirkninger av cancerceller in vitro kan utføres ved administrering av forbindelsene til en suspensjon av celler i cellekulturmedium, tillate forbindelsen å binde adenosin-A3-reseptorene på cancercellene, og påvise markøren.
Formuleringer
Forbindelsene beskrevet ovenfor administreres fortrinnsvis i en formulering omfattende en aktiv forbindelse, dvs. en forbindelse med Formel I, sammen med en akseptabel bærer for administrasjonsmåten. Egnede farmasøytisk akseptable bærere er velkjent for fagpersoner innen teknikken.
Preparatene kan eventuelt omfatte terapeutiske aktive ingredienser slik som antivirusmedikamenter, antitumormedikamenter, antibakterielle medikamenter, anti-inflammatoriske medikamenter, analgesimedikamenter og immunsupressive medikamenter. Bæreren må være farmasøytisk akseptabel i betydningen å være kompatibel med andre ingredienser i formuleringen og ikke skadelig for mottakeren av formuleringen.
Formuleringene kan omfatte bærere egnet for oral, rektal, topisk eller parenteral (inkludert subkutan, intramuskulær og intravenøs) administrering. Foretrukne bærere er de som er egnet for oral eller parenteral administrering.
Formuleringer egnet for parenteral administrering omfatter gjerne sterile, vanndige preparater av den aktive forbindelse som fortrinnsvis er isoton med blodet til mottakeren. Følgelig kan slike formuleringer gjeme inneholde destillert vann, 5 % dextrose i destillert vann eller saltvann. Nyttige formuleringer omfatter også konsentrerte løsninger eller faste stoffer inneholdende forbindelsen med Formel (I), som ved et passende løsningsmiddel gir en løsning egnet for parenteral administrering.
For parenteral administrering kan forbindelsen inkorporeres i en inert bærer i adskilte enheter slik som kapsler, pulverkapsler, tabletter eller pastiller, der hver inneholder en forutbestemt mengde av den aktive forbindelse, slik som pulver eller granulat; eller en suspensjon eller løsning i en vandig væske eller ikke-vanndig væske, dvs. en sirup, en eliksir, en emulsjon eller en drikk. Egnede bærere kan være stivelse eller sukkere og omfatter smørcmidler, smaksstoffer, bindemidler og andre materialer med tilsvarende egenskap.
En tablett kan lages ved sammenpressing eller støping, evt. med en eller flere hjelpestoffer. Sammenpressede tabletter kan fremstilles ved sammenpressing i en egnet maskin av den aktive forbindelse i en frittflytende form, f. eks. et pulver eller et granulat, evt. blandet med hjelpestoffer, som f. eks. bindemidler, smøremidler, inerte fortynningsmidler, overflateaktive stoffer eller dispergeringsmidler. Støpte tabletter kan lages ved å støpe i en egnet maskin, en blanding av det pulveriserte aktive stoff med en egnet bærer.
En sirup eller suspensjon kan lages ved å tilsette den aktive forbindelse til en konsentrert vandig løsning av et sukker, f. eks. sukrose, der det også kan tilsettes et hvilket som helst hjelpestoff. Slike hjelpestoffer kan omfatte smaksstoffer, et stoff som retarderer krystallisering av sukker eller et stoff som øker løsligheten av enhver annen ingrediens, f. eks. en polyol som glyserol eller sorbitol.
Forbindelsene kan også administreres lokalt ved topisk applisering av en løsning, salve, krem, gel, lotion eller polymert materiale (f. eks. en "PluronicTMl,,BASF), som kan tilberedes ved konvensjonelle fremgangsmåter kjent innen det farmasøytiske område. I tillegg til løsningen, salven, kremen, gelen, lotion eller polymerbasen og den aktive ingrediens, kan slike topiske formuleringer også inneholde konserveringsmidler, parfymer og ytterligere aktive farmasøytiske stoffer.
Formuleringer for rektal administrering kan foreligge som en stikkpille med en konvensjonell bærer, f. eks. kakaosmør eller "Witepsol S55" (handelsnavn for Dynamite Nobel Chemical, Germany), som en stikkpillebase.
Alternativt kan forbindelsen administreres i liposomer eller mikrosfærer (eller mikropartikler). Fremgangsmåte for å fremstille liposomer og mikrosfærer for administrering til en pasient er velkjent for fagpersoner innen teknikken. U.S. patent nr. 4789734, der innholdet er inkorporert ved referanse, beskriver fremgangsmåter for innkapsling av biologisk materiale i liposomer. I hovedsak oppløses materialet i en vandig løsning, i passende fosforlipider og lipider tilsettes, sammen med surfaktanter om nødvendig, og materialer dialyseres eller sonikeres etter behov. En oppsummering av kjente fremgangsmåter gis av G. Gregoriadis, kapitel 14, "Liposomes," Drug Carriers in Biology and Medicine. s. 287 - 341 (Academic Press, 1979). Mikrosfærer dannet av polymerer eller proteiner er velkjent for fagpersoner innen teknikken, og kan bli tilpasset passasje gjennom gastrointestinalkanalen direkte inn i blodstrømmen. Alternativt kan forbindelsen inkorporeres og mikrosfærene, eller sammensetning av mikrosfærer, implantert for langsom frigivelse over en tidsperiode varierende fra dager til måneder. Se f. eks. U.S. patent nr. 4 906 474,4 925 673 og 3 625 214, der innholdet er inkorporert her i dokumentet ved referanse.
Foretrukne mikropartikler er de som fremstilles fra biodegraderbare polymerer, slik som polyglykolid, polylaktat og copolymerer av disse. Fagpersoner innen teknikken kan enkelt bestemme et passende bærersystem, avhengig av ulike faktorer, omfattende den ønskede hastighet på medikamentfrigivelsen og den ønskede dose.
Formuleringene kan konvensjonelt foreligge i en enhetsdoseform og kan fremstilles ved enhver fremgangsmåte kjent innen farmasien. Alle fremgangsmåter omfatter det trinn å bringe den aktive forbindelse sammen med en bærer som består av en eller flere hjelpestoffer. Generelt fremstilles formuleringene ved enhetlig og inngående å bringe den aktive forbindelse sammen med en flytende bærer og en fint oppdelt fast bærer og deretter, om nødvendig, utforme produktet til en ønsket enhetsdoseform.
I tillegg til de ovennevnte ingredienser kan formuleringene ytterligere omfatte en eller flere valgfrie hjelpestoffer, benyttet innen teknikken for farmasøytisk formulering, f. eks. fortynningsmidler, buffere, smaksstoffer, bindemidler, overflateaktive substanser, fortykningsmidler, smøremidler, suspensjonsmidler, konserveirngsmidler (omfattende antioksidanter) og liknende.
Bestemmelse av aktivitetsnivået i forbindelsene
Aktiviteten til forbindelsene kan enkelt bestemmes ved hjelp av intet annet enn rutineekspeirmentering ved hjelp av enhver av de følgende analyser.
Rotte Ai- og Ata- adenosinreseptorbindingsanalvse
Membran preparering:
Hann Wistar rotter (200-250 g) kan halshugges og hele hjernen (minus hjernestamme, striatum og cerebellum) dissekeres på is. Hjernevevet kan ødelegges i en Polytron (innstilling 5) i 20 volum 50 raM Tris HC1, pH 7,4. Homogenatet kan deretter sentrifugeres ved 48 000 g i 10 minutter og pelleten resuspenderes i Tris-HCl inneholdende 2 IU/ml adenosin deaminase, type VI (Sigma Qiemical Company, St. Louis, Mo., USA). Etter 30 minutters inkubering ved 37 °C kan membranene sentrifugeres og pelleten lagres ved minus 70 °C. Striatalt vev kan homogeniseres med en Polytron i 25 volum 50 nM Tris-HCl-bufifer inneholdende 10 mM MgCl2, pH 7,4. Homogenatet kan deretter sentrifugeres ved 48 000 g i 10 minutter ved 4 °C og resuspenderes i Tris-HCl-buffer inneholdende 2 IU/ml adenosin deaminase. Etter 30 minutters inkubering ved 37 °C kan membranene sentrifugeres og pelleten lagres ved minus 70 °C.
Radioligand bindingsanalyse:
Binding av [<3>H]-DPCPX (l,3-dipropyl-8-syklopentylxantin) til rottehjernemembraner kan utføres i hovedsak ifølge fremgangsmåten tidligere beskrevet av Bruns et al., Proe. Nati. Acad. Sei. 77, 5547-5551 1980. Deplasseringseksperimenter kan utføres i 0,25 ml buffer inneholdende 1 nM [<3>H]-DPCPX, 100 ul fortynnede membraner fra rottehjerne (100 ug protein/analyse) og minst 6-8 ulike konsentrasjoner av testforbindelsene. Ikke-spesifikk binding kan bestemmes i nærvær av 10 uM CHA (N^sykloheksyladenosin) og denne er alltid £ 10% av totalbindingen. Inkubasjonstidene er typisk 120 minutter ved 25 °C.
Binding av [<3>H]-SCH 58261 (5-amino-7-(2-fenyletyl)-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]-l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin) til rotte striatal membraner (100 ug protein/analyse) kan utføres ifølge fremgangsmåtene beskrevet i Zocchi et al., J. Pharm, and Exper. Ther. 276: 398-404 (1996). Ved kompetitive studier, bør minst 6-8 forskjellige konsentrasjoner av testforbindelsene anvendes. Ikke-spesifikk binding kan bestemmes i nærvær av 50 uM NECA (5'-(N-etylkarboksamido)adenosin). Inkubasjonstiden er typisk 60 minutter ved 25 °C.
Bundet og fri radioaktivitet kan separeres ved å filtrere prøveblandingen gjennom Whatman GF/B glassfiberfiltre ved en Brandel-cellehøster (Gaithersburg, MD, USA). Inkubasjonsblandingen kan fortynnes med 3 ml iskald inkuberingsbuffer, vakuumfiltreres raskt og filteret kan vaskes tre ganger med 3 ml inkuberingsbuffer. Den filterbundne radioaktivitet kan måles, f. eks. ved væskescintillasjonspektrometri. Proteinkonsentrasjonen kan bestemmes f. eks. ifølge en Bio-Rad-metode (Bradford, Anal. Biochem. 72:248 (1976)) med bovint albumin som referansestandard.
Bindingsanalvse for humanklonet A^- adenosinreseptor
Reseptorbindingsanalyser:
Bindingsanalyser kan utføres ifølge fremgangsmåter beskrevet i Salvatore et al., Proe. Nati. Acad. Sei. 90:10365-10369 (1993). I metningsstudier kan en aliquot av membraner (8 mg protein/ml) fra HEK-293-celler transfektert med human rekombinant A3-adenosinreseptor (Research Biochemical International, Natick, MA, USA) inkuberes med 10-12 ulike konsentrasjoner av [<125>I]AB-MECA varierende fra 0,1 til 5 nM. Kompetitive forsøk kan utføres i duplikater i et sluttvolum på 100 ul i reagensrøret inneholdende 0,3 nM [125I]AB-<M>ECA, 50 mM Tris HC1 buffer, 10 mM MgCl2, pH 7,4 og 20 ul fortynnede membraner (12,4 mg protein/ml) og minst 6-8 forskjellige konsentrasjoner av de undersøkte ligander.
Inkubasjonstiden var 60 minutter ved 37 °C, ifølge resultatene fra tidligere tidsforløpsforsøk. Bundet og fri radioaktivitet ble separert ved å filtrere forsøksblandingen gjennom Whatman GF/B-glassfiberfiltre ved en Brandel-cellehøster. Ikke-spesifikk binding ble bestemt som binding i nærvær av 50 uM R-PIA og var ca. 30 % av totalbindingen. Inkubasjonsblandingen ble fortynnet med 3ml iskald inkuberingsbuffer, vakuumfiltrert raskt og filteret ble vasket tre ganger med 3 ml inkuberingsbuffer. Den filterbundne radioaktivitet ble tellet i en Beckman gamma 5500B y-teller. Proteinkonsentrasjonen kan bestemmes ifølge en Bio-Rad-metode (3) med bovint albumin som referansestandard.
Dataanalyser
Inhibitorisk bindingskonstant Ki} verdiene kan beregnes fra IC50 ifølge Cheng & Prusoff-ligningen (Cheng and Prusoff, Biochem. Pharmacol. 22:3099.3108 (1973), K; = IC5o/(l+[C<*>]/KD<*>), der [C<*>] er konsentrasjonen av radioliganden og KD<*> er dens dissosiasjonskonstant.
Et veid ikke-lineært minste kvadratkurve tilpasningsprogram "LIGAND"
(Munson and Robard, Anal. Biochem. 107:220-239 (1990)) kan anvendes for datamaskinanalyser av metnings- og inhibisjonsforsøk. Dataene uttrykkes typisk som geometrisk gjennomsnitt, med 95 % eller 99 % konfidensgrenser i parentes.
EKSEMPLER
De følgende eksempler illustrerer aspekter ved denne oppfinnelse. Symbolene og konvensjonene anvendt i disse eksempler har til hensikt å være konsistente med de som anvendes i samtidig, internasjonal kjemisk litteratur, f. eks. the Journal of the American Chemical Society (" J. Am. Chem. Soc") og Tetrahedron.
Eksempel 1: Fremstilling av 8-(Ar)alkyl-2(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]l,2,4-trlazoI[l,5-c]pyrimidiner (forbindelsene 18-25)
8-(Ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]I,2,4-triazol[ 1,5-c]p<y>rimidiner ble fremstilt ifølge den syntetiske strategi vist idet følgende Skjema VI.
Skjema VI: Generelle prosedyrer for fremstilling av 8-(ar)alkyI-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e)l,2,4-triazoI[l,5-c]pyrimidin (18-25)
Reagenser: a) NaH, DMF, RX; b) HC(OEt)3, refluks; c) 2-furinhydrazid, MeO(CH2)2OH; d) Ph20,260 °C, flash kromatografi
Ved fremstillingen av forbindelsene 18-25, ble en løsning av 1 (10 mmol) i 40 ml DMF nedkjølt til 0 °C, behandlet med NaH (60 % i olje, 12 mmol) i flere porsjoner over 10 minutter. Etter 45 minutter ble det riktige (ar)alkylhalid (12 mmol) tilsatt og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 25 °C og omrørt i 3-5 timer (TLC: EtOAc 1:1). Reaksjonen ble stoppet ved tilsetting av H20 (80 ml), og det vanndige laget ble ekstrahert med EtOAc (5 x 25 ml). De organiske lag ble slått sammen, tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert ved redusert trykk, for å få det alkylerte pyrazol (2-9) som en useparerbar blanding av N 1 - og N *J-isomerer (forhold ca. 1:4). Denne blanding av N i - og N * y-substituerte-4-cyano-5-aminopyrazoler (2-9) ble deretter oppløst i trietylotroformat (60 ml) og løsningen ble tilbakeløpt under nitrogen i 8 timer. Løsningsmiddelet ble fjernet ved vakuum og den gjenværende oljeaktige blanding bestående av imidater (10-17) ble oppløst i 2-metoksyetanol (50 ml), og 2-furonsyrehydrazid (13 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble tilbakeløpt i 5 til 10 rimer, deretter, etter avkjøling, ble løsningsmiddelet fjernet under redusert trykk og den mørke oljeaktige rest ble syklisert videre til en annen rensing i difenyleter (50 ml) ved 260 °C ved en Dean-Stark for azeotropisk fjerning av vann produsert i reaksjonen. Etter 1,5 time ble blandingen helt over i heksan (300 ml) og nedkjølt. Presipitatet ble filtrert ifra og renset ved kromatografi (EtOAc/heksan 1:1). På denne måten ble hovedproduktet (N<8->alkylert) (18-25) oppnådd i et godt totalutbytte..
Ifølge denne generelle fremgangsmåte er de følgende forbindelser blitt fremstilt:
8-metyl-2-(2-fuiyl)-pyrazol[43-e] l,2,4-triazol|l,5-c|pyrimidin (18)
utbytte 45 %; gult fast stoff, sm.p. 155-156 °C (EtOAc-lett petroleum);
IR (KBr): 1615,1510 cm"<1>; 1H NMR (DMSO d^) 8 4,1 (s, 1H); 6,32 (m, 1H);
7,25 (m, 1H); 8,06 (m, 1H); 8,86 (s, 1H); 9,38 (s, 1H).
8-etyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (19)
utbytte 50 %; blekt gult fast stoff, sm.p. 188-189 °C (EtOAc-lett petroleum);
IR (KBr): 1620,1500 cm<1>; 1H NMR (DMSO d*) 8 1,67 (t, 2H, J=7); 4,53 (q, 2H, J=7); 6,59 (m, 1H); 7,23 (m, 1H); 7,64 (s, 1H); 8,34 (s, 1H); 9,10 (s. 1H).
8-propyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (20)
utbytte 60 %; gult fast stoff, sm.p. 189-190 °C (EtOAc-lett petroleum); IR (KBr): 1600, 1505 cm"<1>; 1H NMR (DMSO d^ 5 0,98 (t, 2H, J=7); 2,03-2,10 (m, 2H); 4,41 (q, 2H, J=7); 6,60 (m, 1H); 7,24 (m, 1H); 7,64 (s, 1H); 8,32 (s, 1H); 9,10 (s, 1H).
8-butyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (21)
utbytte 50 %; blekt gult fast stoff, sm.p. 245-247 °C (EtOAc-lett petroleum);
IR (KBr): 1610,1500 cm<1>; 1H NMR (DMSO ds) 8 0,9 (m, 3H); 1,3 (m, 2H);
1,9 (m, 2H); 4,5 (t, 2H, J=7,2); 6,2 (m, 1H); 7,3 (m, 1H); 8,0 (m. 1H); 8,9 (s, 1H); 9,4 (s, 1H).
8-isopentyl-2-(2-furyl)-pyrazoI[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (22)
utbytte 54 %; blekt gult fast stoff, sm.p. 235-237 °C (EtOAc-lett petroleum);
IR (KBr): 1635,1510,1450 cm-'; 1H NMR (DMSO dg) 5 1,0 (d, 6H, J=6,2); 1,5-1,9 (m, 3H); 4,6 (t, 2H, J=7,4); 6,6 (m, 1H); 7,3 (m, 1H); 7,7 (m, 1H); 8,8 (s. 1H); 9,1 (s, 1H).
8-(2-isopentenyl)-2-(2-furyI)-pyrazol[4^-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (23) utbytte 48 %; gult fast stoff, sm.p. 210-212 °C (EtOAc-lett petroleum);
IR (KBr): 1625, 1500,1430 cm"<1>; 1H NMR (DMSO d^) 8 1,79 (s, 3H); 1,87 (s, 3H); 5,05 (d, 2H, J=6); 5,55-5,63 (m, 1H); 6,60 (m, 1H); 7,24 (m, 1H); 7,64 (s. 1H); 8,34 (s, 1H); 9,10 (s, 1H).
8-(2-fenyletyl)-2-(2-furyl)-pyrazol[4J3-e] l,2y4-triazol[l,5-c]pyrimidin (24)
utbytte 56 %; sm.p. 268-270 °C (EtOAc-lett petroleum);
IR (KBr): 1660, 1510,1450 cm'<1>; 1H NMR (DMSO d*) 8 3,32 (t, 2H, J=6,7); 4,72 (t, 2H, J=6,7); 6,73 (s, 1H); 7,23 (m, 5H); 7,95 (s, 1H); 8,8 (s, 1H); 9,41 (s, 1H); Anal.
(C18H14N60) C, H,N.
8-(3-fenylpropyl)-2-(2-furyl)-pyrazol|4^-el l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (25) utbytte 63 %; gult fast stoff sm.p. 165-166 °C (EtOAc-lett petroleum);
IR (KBr): 1630,1500,1440 cm"'; 1H NMR (DMSO de) 8 2,34-2,48 (m, 2H); 2,67 (t, 3H, J=7,5); 4,43 (t, 2H, J=7,5); 6,61 (m, 1H); 7,16-7,32 (m, 6H); 7,64 (d, 1H, J=2); 8,29 (s, 1H); 9,02 (s, 1H).
Eksempel 2: Fremstilling av 5-Amino-8-(ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidiner (forbindelsene 33-40)
5-amino-8-(ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] 1,2,4-triazol[l ,5-c]pyrimidiner kan fremstilles ifølge den syntetiske strategi vist i det følgende Skjema VII
Skjema VII: Generelle fremgangsmåter for fremstilling av 5-ammo-8-(ar)alkyl-2-(2-furyi)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (33-40) Reagenser: a) HC1, refluks; b) NH2CN, l-metyl-2-pyrrolidon, pTsOH, 140 °C
Ved fremstilling av forbindelsene 33-40, ble en løsning av blandingen av triazolo-pyrimidin (18-25) (10 mmol) i vanlig 10 % HC1 (50 ml) tilbakestrømmet i 3 timer. Løsningen ble deretter avkjølt og nøytralisert med en mettet løsning av NaHC03 ved 0 °C. Forbindelsene (26-33) ble ekstrahert med EtOAc (3 x 20 ml), de organiske lagene ble tørket med Na2S04 og fordampet under vakuum. Det oppnådde urensede amin (26-33) ble oppløst i N-metylpyrrolidon (40 ml), cyanamid (60 mmol) og paratoulensulfonsyre (15 mmol) ble tilsatt og blandingen ble varmet i 4 timer il60 °C. Deretter ble cyanamid (60 mmol) igjen tilsatt og løsningen ble oppvarmet over natten. Løsningen ble deretter fortynnet med EtOAc (80 ml) og presipitatet (overskudd av cyanamid) ble filtrert fra; filtratet ble konsentrert under redusert trykk og vasket med vann (3 x 30 ml). Det organiske lag ble tørket (Na2S04) og fordampet under vakuum. Resten ble renset ved kromatografi (EtOAc/lett petroleum 2:1) for å få det ønskede produkt (34-41) som et fast stoff.
Ved å følge denne generelle fremgangsmåte er de følgende forbindelser fremstilt: 5-amino-8-metyl-2-(2-furyl)-pyrazoll4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (34) utbytte: 53 %; gult fast stoff sm.p. 167-168 °C (EtOAc-lett petroleum); IR (KBr): 3500-2950,1680,1645,1610,1560,1455 cm<1>; 1H NMR (DMSO (tø 8 : 4,12 (s, 3H); 6,70 (m, 1H); 6,99 (bs, 2H); 7,18 (m, 1H); 7,81 (s, 1H); 8,42 (s, 1H). 5-amino-8-etyl-2-(2-furyl)-pyrazoI[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (35) utbytte: 65 %; gult fast stoff sm.p.249-250 °C (EtOAc-lett petroleum); IR (KBr): 3430-2950,1680,1655,1620,1550,1450 cm"<1>; <1>H NMR (DMSO de) 5 : 1,46 (t, 2H, J=7); 4,30 (d, 2H,J=7); 6,72 (m, 1H); 7,18 (m, 1H); 7,93 (bs, 2H); 7,93 (s, 1H); 8,62 (s, 1H). 5-amino-8-propyl-2-(2-furyi)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (36) utbytte: 57 %; blekt gult fast stoff sm.p.209-210 °C (EtOAc-lett petroleum); IR (KBr): 3400-2900,1660,1645,1610,1545,1430 cm1; !H NMR (DMSO de) 8 : 0,83 (t, 2H, J=7); 1,81-1,91 (m, 2H); 4,22 (d, 2H, J=7); 6,71 (m, 1H); 7,19 (m, 1H); 7,63 (bs, 2H); 7,93 (s, 1H); 8,61 (5,1H). 5-amino-8-butyl-2-(2-furyi)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[ l,5-c]pyrimidin (37) utbytte: 47 %; hvitt fast fast stoff sm.p.200-203 °C (EtOAc-lett petroleum); IR (KBr): 3500-2900,1685,1640,1620,1550,1450 cm<1;><!>H NMR (DMSO de) 8 : 0,9 (t, 3H); 1,2 (m, 2H); 1,8 (m, 2H); 4,2 (t, 2H); 6,7 (m, 1H); 7,2 (m, 2H); 7,6 (s, 1H); 8,0 (s, 1H); 8,6 (s, 1H). 5-amino-8-isopentyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (38) utbytte: 60 %; gråhvitt fast fast stoff sm.p.212-213 °C (EtOAc-lett petroleum); IR (KBr): 3500-2850,1670,1650,1615,1560,1455 cm"<1>; 1H NMR (CDC1 de) 8 : 0,96 (d, 6H, J=6,4); 1,59 (m, 1H); 1,86 (m, 2H); 4,32 (t, 2H, J=6,4); 6,58 (m, 1H); 6,72 (bs, 2H); 7,21 (d, 1H, J=4,2); 7,63 (d, 1H, J=l,2); 8,10 (s, 1H). 5-amino-8-(2-isopentenyl)-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (39) utbytte: 58 %; blekt gult fast stoff sm.p. 178-179 °C (EtOAc-lett petroleum); IR (KBr): 3520-2950,1665,1640,1610,1555,1450 cm<1>; 1H NMR (CDCL3) 8: 1,74 (s, 3H); 1,77 (s, 3H); 4,87 (d, 2H, J=7); 5,43-5,46 (m, 1H); 6,72 (m, 1H); 7,18 (m, 1H); 7,62 (bs, 2H); 7,93 (s, 1H); 8,55 (s, 1H). 5-amino-8-(2-fenyletyl)-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (40) utbytte: 45 %; hvitt fast stoff sm.p. 183-185 °C (EtOAc-lett petroleum); IR (KBr): 3500-2900, 1670,1645,1620,1530, 1455 cm<1>; 'H NMR (DMSO de) 8: 3,21 (t, 2H, J=6,4); 4,53 (t, 2H, J=6,4); 6,7 (s, 1H); 7,1-7,4 (m, 6H); 7,65 (bs, 2H); 7,93 (s, 1H); 8,45 (s, 1H). 5-amino-8-(3-fenylpropyl)-2-(2-furyl)-pyrazol[4^3-el l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (41) utbytte: 57 %; gult fast stoff sm.p. 168-170 °C (EtOAc-lett petroleum); IR (KBr): 3510-2950,1665,1640, 1615,1520,1455 cm<1>; 1H NMR (DMSO ds) 5: 2,14-2,21 (m, 2H); 2,54 (t, 2H, J=7); 4,29 (t, 2H, J=6,4); 6,71 (s, 1H); 7,14-7,32 (m, 6H); 7,64 (bs, 2H); 7,93 (s,lH); 8,64 (s, 1H). Eksempel 3: Fremstilling av 5-[[(substitert fenyl)amino]karbonyI]amino-8-(ar)alkyI-2-(2-furyI)-pyrazol[4r3-e] 1,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (forbindelsene 42-57) 5-[[(substitert fenyl)ammo]karbonyl}aminc-8-(ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]l,2,4-tirazol[l,5-c]pyrimidiner kan fremstilles ifølge syntesestrategien vist i det følgende Skjema VIII.
Skjema VIII: Generelle fremgangsmåter for fremstilling av 5-[[(substituertfenyI)amino]karbonyl]amino-8-(ar)alkyI-2-(2-furyl)-pyrazoI[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-clpyrimidin (42-57)
Ved fremstilling av forbindelsene 42-57 ble den passende aminoforbindelse (34-41) (10 mmol) oppløst i destillert THF (15 ml) og det passende isocyanat (13 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble tilbakestrømmet under argon i 18 timer. Deretter ble løsningsmiddelet fjernet under redusert trykk og resten ble renset ved flash-kromatografi (EtOAc-lettpetroleum 4-6) for å oppnå de ønskede forbindelsene 42-57.
Ved å følge denne generelle fremgangsmåte er de følgende forbindelser blitt fremstilt: 5-[[(3-klorfenyl)amino]karbonyl]amino-8-metyl-2-<2-furyl)-pyrazoI[4,3-e] 1,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (42)
utbytte: 98 %; blekt gult fast stoff sm.p. 142-145 °C (Et2-lett petroleum); I (KBr): 3210-2930,1660, 1630, 1610, 1500 cm1; <!>H NMR (CDC13 5 : 4,21 (s, 3H); 6,60 (m, 1H); 7,11 (d, 1H, J=8); 7,13-7,28 (m, 2H); 7,55 (d, 1H, J=8); 7,65 (s, 1H); 7,78 (d, 1H, J=2); 8,22 (s, 1H); 8,61 (bs, 1H); 11,24 (bs, 1H).
5-[[(4-metoksyfenyl)amino]karbonyl]amino-8-metyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (43)
utbytte: 99 %; gult fast stoff sm.p. 193-195 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3200-2900, 1664,1625, 1600, 1500 cm"<1>; 1H NMR (CDC13) 8 : 3,81 (s, 3H); 4,20 (s, 3H); 6,61 (m, 1H); 6,85 (d, 2H, J=9); 7,26 (m, 1H); 7,55 (d, 2H, J=9); 7,65 (s, 1H); 8,21 (s, 1H); 8,59 (bs, 1H); 10,96 (bs, 1H).
5-[[(3-klorfenyl)amino]karbonyI]amino-8-etyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] 1,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (44)
utbytte: 98 %; blekt gult fast stoff sm.p. 204-205 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3220-2930,1660, 1620, 1600, 1500 cm"'; *H NMR (CDC13) 8: 1,71 (t, 3H, J=7); 4,50 (q, 2H, J=7); 6,67 (m, 1H); 7,20 (d, 1H, J=8); 7,31 (m, 1H); 7,61 (d, 1H, J=8); 7,70 (s, 1H); 8,30 (s, 1H); 8,67 (bs, 1H); 11,30 (bs, 1H).
5-[[(4-metoksyfenyl)amino]karbonyl]amino-8-etyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4^-e] 1,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (45)
utbytte: 99 %; blekt gult fast stoff sm.p. 200-201 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3250-2950,1665, 1620, 1610, 1520 cm"1; !H NMR (CDC13) 8: 1,71 (t, 3H, J=7); 3,85 (s, 3H); 4,49 (s, 3H); 6,65 (m, 1H); 6,88 (d, 2H, J=9); 7,26 (m, 1H); 7,58 (d, 2H, J=9); 7,69 (s, 1H); 8,28 (s, 1H); 8,63 (bs, 1H); 10,99 (bs, 1H).
5-[[(3-klorfenyl)amino]karbonyl]amino-8-propyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] 1,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (46)
utbytte: 95 %; hvitt fast stoff sm.p. 138-139 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3210-2920, 1655, 1615, 1600, 1510 cm<1>; 'H NMR (CDC13) 8: 1,71 (t, 3H, J=7); 2,04 (m, 2H); 4,36 (q, 2H, J=7); 6,62 (m, 1H); 7,12 (d, 1H, J=8); 7,27 (m, 1H); 7,56 (d, 1H, J=8); 7,66 (s, 1H); 7,80 (s, 1H); 8,24 (s, 1H); 8,62 (bs, 1H); 11,08 (bs, 1H).
5-[I(4-metoksyfenyl)amino]karbonyl]amino-8-propyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (47)
utbytte: 98 %; blekt gult fast stoff sm.p. 146-148 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3230-2950,1660, 1620,1600, 1530 cm"'; <*>H NMR (CDC13) 8: 0,98 (t, 3H, J-7); 2,04-2,08 (m, 2H); 3,82 (s, 3H); 4,35 (t, 2H, J=7); 6,61 (m, 1H); 6,89 (d, 2H, J=9); 7,25 (m, 1H); 7,56 (d, 2H, J=9); 7,65 (s, 1H); 8,23 (s, 1H); 8,59 (bs, 1H); 10,95 (bs, 1H).
5-l[(3-klorfenyl)amino]karbonyl]amino-8-butyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] 1,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (48)
utbytte: 97 %; hvitt fast stoff sm.p. 210-212 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3240-2970,1650, 1610, 1510 cm'<1>; 'H NMR (CDC13) 8: 1,00 (t, 3H, J=7); 1,39-1,41 (m, 2H); 1,99-2,03 (m, 2H); 4,41 (q, 2H, J=7); 6,63 (m, 1H); 7,14 (d, 1H, J=8); 7,29 (m, 1H); 7,56 (d, 1H, J=8); 7,67 (s, 1H); 7,80 (s, 1H); 8,25 (s, 1H); 8,63 (bs, 1H); 11,26 (bs, 1H).
5-[[(4-metoksyfenyl)amino]karbonyl]amino-8-butyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-cIpyrimidin(49)
utbytte: 96 %; hvitt fast stoff sm.p. 197-198 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3250-2960,1665,1610, 1600,1520 cm<1>; 'HNMR(CDC13) 6: 0,98 (t, 3H, J=7); 1,38-1,42 (m, 2H); 2,02-2,05 (m, 2H); 3,82 (s, 3H); 4,39 (t, 2H, J=7); 6,63 (m, 1H); 6,92 (d, 2H, J=9); 7,25 (m, 1H); 7,57 (d, 2H, J=9); 7,67 (s, 1H); 8,23 (s, 1H); 8,60 (bs, 1H); 10,95 (bs, 1H).
5-[[(3-klorfenyl)amino]karbonyl]amino-8-isopentyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] I, 2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (50)
utbytte: 97 %; blekt gult fast stoff sm.p. 199-200 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3230-2950,1655,1600,1510 cm"<1>; <*>H NMR (CDC13) 8: 1,01 (d, 6H, J=7,5); 1,49-1,51 (m, 1H); 1,88-2,03 (m, 2H); 4,42 (t, 2H, J=7); 6,62 (m, 1H); 7,13 (d, 1H, J=8); 7,34 (m, 1H); 7,57 (d, 1H, J=8); 7,67 (s, 1H); 7,80 (s, 1H); 8,24 (s, 1H); 8,63 (bs, 1H); II, 25(bs, 1H).
5-[[(4-metoksyfenyl)amino] karbonyl] amino-8-isopentyI-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (51)
utbytte: 98 %; hvitt fast stoff sm.p. 192-193 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3230-2970, 1660, 1615, 1600, 1500 cm<1>; 'H NMR (CDC13) 8: 0,99 (d, 6H, J=7,5); 1,58-1,22 (m, 1H); 1,87-1,97 (m, 2H); 3,82 (s, 3H); 4,40 (t, 2H, J=7); 6,62 (m, 1H); 6,91 (d, 2H, J=9); 7,23 (m, 1H); 7,58 (d, 2H, J=9); 7,66 (s, 1H); 8,23 (s, 1H); 8,59 (bs, 1H); 10,94 (bs, 1H).
5-[[(3-klorfenyl)amino]karbonyI]amino-8-(2-isopentyl)-2-(2-furyI)-pyrazoI[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (52)
utbytte: 99 %; hvitt fast stoff sm.p. 204-205 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3245-2960, 1650,1600,1510 cm<1>; 'H NMR (CDC13) 8: 1,84 (s, 3H); 1,88 (s, 3H); 5,01 (d, 2H, J=8); 5,57 (m, 1H); 6,62 (m, 1H); 7,12 (d, 1H, J=8); 7,29 (m, 1H); 7,56 (d, 1H, J=8); 7,66 (s, 1H); 7,80 (s, 1H); 8,26 (s, 1H); 8,60 (bs, 1H); 11,26 (bs, 1H).
5-[[(4-metoksyfenyl)amino]karbonyl]amino-8-(2-isopentyl)-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazoI[l,5-c]pyrimidin (53)
utbytte: 96 %; blekt gult fast stoff sm.p. 198-199 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3235-2950,1665, 1620, 1600, 1510 cm1; <]>H NMR (CDC13) 8: 1,83 (s, 3H); 1,87 (s, 3H); 3,81 (s, 3H); 4,97 (d, 2H, J=7); 5,57 (m, 1H); 6,61 (m, 1H); 6,93 (d, 2H, J=9); 7,24 (m, 1H); 7,54 (d, 2H, J=9); 7,66 (s, 1H); 8,25 (s, 1H); 8,58 (bs, 1H); 10,96 (bs, 1H).
5-[[(3-klorfenyI)amino]karbonyI]amino-8-(2-fenyletyl)-2-(2-furyl)-pyrazol[4^-e] l,2,4-triazoI[l,5-c]pyrimidin (54)
utbytte: 98 %; hvitt fast stoff sm.p. 186-187 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3250-2970,1660,1610,1515 cm-1; !H NMR (CDC13) 5: 3,33 (t, 2H, J=7); 4,62 (t, 2H, J=7); 6,60 (m, 1H); 7,19-7,35 (m, 7H); 7,57 (d, 1H, J-8); 7,61 (s, 1H); 7,81 (s, 1H); 7,89 (s, 1H); 8,63 (bs, 1H); 11,27 (bs, 1H).
5-[[(4-metoksyfenyl)amino]karbonyl]amino-8-(2-fenyleryI)-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (55)
utbytte: 99 %; hvitt fast stoff sm.p. 180-181 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3245-2960, 1660, 1615, 1600,1500 cm<1>; 'H NMR (CDC13) 8: 3,42 (t, 2H, J=7); 3,82 (s, 3H); 4,60 (t, 2H, J=7); 6,60 (m, 1H); 6,93 (d, 2H, J=9); 7,09 (m, 2H); 7,20-7,28 (m, 4H); 7,56 (d, 2H, J=8); 7,60 (s, 1H); 7,89 (s, 1H); 8,59 (bs, 1H); 10,96 (bs, 1H).
5-[[(3-kIorfenyl)aminoIkarbonyl]amino-8-(3-fenylpropyl)-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (56)
utbytte: 99 %; blekt gult fast stoff sm.p. 183-184 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3245-2960, 1665, 1610, 1515 cm<1>; lK NMR (CDC13) 8: 2,46 (m, 2H); 2,73 (t, 2H, 3=7) ; 4,43 (t, 2H, J=7); 6,66 (m, 1H); 7,19-7,40 (m, 8H); 7,59 (d, 1H, J=8); 7,64 (s, 1H); 7,85 (m, 1H); 8,25 (s, 1H); 8,67 (bs, 1H); 11,30 (bs, 1H).
5-[[(4-metoksyfenyl)aminolkarbonyIJamino-8-(3-fenylpropyl)-2-(2-furyl)-pyrazoI[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (57)
utbytte: 98 %; hvitt fast stoff sm.p. 174-175 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3240-2950, 1665, 1615,1600, 1510 cm<1>; 'H NMR (CDC13) 8: 2,46 (m, 2H); 2,73 (t, 2H, J=7); 4,42 (t, 2H, J=7); 6,67 (m, 1H); 6,96 (d, 2H, J=9); 7,22-7,41 (m, 6H); 7,60 (d, 2H, J=8); 7,64 (s, 1H); 8,25 (s, 1H); 8,65 (bs, 1H); 11,16 (bs, 1H).
Eksempel 4: Fremstilling av 5-[(benzyl)karbonyl]amino-8-(ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyrazoI[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-cJpyrimidin (forbindelsene 58-59)
5-[(benzyl)karbonyl]amino-8-(ar)alkyl-2-(2-fiiryl)-pyrazol[4,3-e] 1,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidiner kan fremstilles ifølge syntesestrategien i det følgende Skjema
IX.
Skjema IX: Generelle fremgangsmåter for fremstilling av 5-[(benzyl)karbonyllamino-8-(ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (58-59)
Ved fremstilling av forbindelsene 58-59 ble den hensiktsmessige aminoforbindelse (38 eller 41) (10 mmol) oppløst i friskt destillert THF (15 ml), og hensiktsmessig syrehalid (13 mmol) og trietylamin (13 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble tilbakeløpt under argon i 18 timer. Løsningsmiddelet ble deretter fjernet under redusert trykk og resten ble oppløst i >^^
EtOAc (30 ml) og vasket to ganger med vann (15 ml). Den organiske fase ble tørket på Na2S04 og konsentrert under redusert trykk. Resten ble renset ved flash kromatografi (EtOAc-lett petroleum 4:6) for å oppnå de ønskede forbindelser 48,58. Ved å følge denne generelle fremgangsmåte ble de følgende forbindelser fremstilt: 5-[(benzyl)karbonyl]amino-8-isopentyI-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (58)
utbytte: 85 %; blekt gult fast stoff sm.p. 144-145 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3255-2930, 1673, 1620,1610,1520 cm<1>; <l>H NMR (CDC13) 5: 0,98 (d, 6H, J=7,5); 1,60 (m, 1H); 1,91 (m, 1H); 4,40 (t, 2H, J=7); 4,53 (s, 2H); 6,60 (m, 1H); 7,18 (m, 1H); 7,26-7,39 (m, 5H); 7,64 (s, 1H); 8,22 (s, 1H); 9,11 (bs, 1H).
5-[(benzyl)karbonyl]amino-8-(3-fenylpropyl)-2-(2-furyl)-pyrazoI[453-e] 1,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin (59)
utbytte: 95 %; blekt gult fast stoff sm.p. 116-117 °C (Et20-lett petroleum); IR (KBr): 3250-2900, 1675, 1625,1600, 1500 cm<1>; <l>H NMR (CDC13) 8: 2,39 (m, 2H); 2,67 (t, 2H, J=7); 4,37 (t, 2H, J=7); 4,53 (s, 2H); 6,61 (m, 1H); 7,16-7,43 (m, 1H); 7,65 (s, 1H); 7,64 (s, 1H); 8,19 (s, 1H); 9,12 (bs, 1H).
Eksempel 5: Fremstilling av l-substituert-4-cyano-5-aminopyrazoler
Ifølge fremgangsmåtene beskrevet i J. Org. Chem. 1956,21,1240; J. Am. Chem. Soc. 1956, 78,784 og referansene sitert i disse, ble de følgende forbindelser fremstilt, ved å starte fra de kommersielt tilgjengelige etoksy-metylen malondinitril og Nl-substituerte hydraziner, som også i hovedsak er kommersielt tilgjengelige:
1 -metyl-4-cyano-5-arninopyrazol
1 -n-butyl-4-cyano-5-aminopyrazol
1 -isopentyl-4-cyano- 5 - ami nop yrazol
l-(2-syklopentyl)etyl-4-cyano-5-aminopyrazol
1 -hydroksyetyl-4-cyano-5-aminopyrazol
1 -fenyl-4-cyano-5-aminopyrazol
1 -tert-buryl-4-cyano-5-aminopyrazol
1 -fenyletyl-4-cyano-5-aminopyrazol
1 -(2-klorfenyl)-4-cyano-5-aminopyrazol
Disse forbindelser kan anvendes som mellomprodukter for å fremstille pyrazol-triazol-pyrimidinforbindelser som beskrevet her i dokumentet.
Eksempel 6: Fremstilling av l-substituert-4-cyano-3-aminopyrazoler
Ved å starte fra 4-cyano-5-aminopyrazol, fremstilt ifølge fremgangsmåten rapportert i Chem. Pharm. Bull. 1970, 18, 2353 eller i J. Heterocyclic Chem. 1979,16, 1113, kan l-substituert-4-cyano-3-aminopyrazoler fremstilles ved direkte alkylering med det tilsvarende alkylhalid i dimetylformamid ved 80 °C i 1 til 2 timer i nærvær av vannfritt kaliumkarbonat. Fra reaksjonsblandingen inneholdende de to NI- og N2-alkylerte isomere i et forhold på ca. 1:2, kan N2-isomeren isoleres ved en enkel krystallisering eller kolonnekromatografi på silicagel ved å eluere med acetylacetat og petroleum-eter blanding. Ved å anvende disse fremgangsmåter ble de følgende forbindelser fremstilt:
l-metyl-4-cyano-3-aminopyrazol
1 -buyl-4-cyano-3-aminopyrazol
1 -benzyl-4-cyano-3-aminopyrazol
1 -isopentyl-4-cyano-3-aminopyrazoI
1 -fenyletyl-4-cyano-3-aminopyrazol
Disse forbindelser kan anvendes som mellomprodukter for å fremstille pyrazol-triazol-pyrimidinforbindelsene beskrevet her i dokumentet.
Eksempel 7: Fremstilling av fenyIctyl-4-cyano-3-aminopyrazoler
a) En suspensjon av vannfritt kaliumkarbonat (30 mmol) i DMF (50 ml) tilsettes med 3-amino-4-cyanopyrazol (20 mmol), oppvarmes til 80 °C i 30 minutter. Suspensjonen tilsettes fenetylbromid (25 mmol) og oppvarmes til 80 °C i 2 timer. Etter nedkjøling til romtemperatur fordampes blandingen til tørrhet under vakuum og den dannede rest tas opp med destillert vann (100 ml) og ekstraheres med erylacetat (3 x 50 ml). Det kombinerte organiske ekstraktet tørkes over vannfritt natriumsulfat og fordampes til tørrhet under vakuum. Den resulterende rest består av 1:3-blanding av 1-fenyletyl-4-cyano-5-aminopyrazol (20 %) og av l-fenyletyl-4-cyano-3-aminopyrazol (60 %) som kan anvendes som sådan i eksempel 9 eller kromatograferes på silicagelkolonner eluert med en etylacetat/heksan blanding for å gi l-fenyletyl-4-cyano-5-aminopyrazol sm.p. 172-173 °C; (20 %); 'H-NMR (DMSO-de): 3,04 (t, 2H); 4,12 (t, 2H); 5,85 (sb, 2H); 7,21-7,30 (m, 5H); 7,41 (s, 11H); 1-p<1->fenyletyl-4-cyano-3-aminopyrazol sm.p. 98-100 °C (60 %); 'H NMR (CDC13): 3,07 (t, 2H); 4,10 (t, 2H); 4,23 (sb, 2H); 7,17 (s, 1H); 7,00-7,28 (m, 5H).
b) En løsning av l-P-fenyletyl-4-cyano-5-aminopyrazol (20 mmol) i trietylortoformat (40 ml) ble tilbakeløpskjørt under nitrogen i 8 timer. Overskuddet av
ortoformat ble fordampet til tørrhet under vakuum og den resterende gule olje oppløses i etyleter og filtrert på silicagel for å gi den tilsvarende iminoeter (87 % utbytte). Resten oppnådd etter ortoformatfordamping er praktisk talt rent og anvendes direkte i det følgende trinn. En løsning av iminoeter (20 mmol) og 2-furonsyrehydrazid (2,5 g, 22 mmol) i 2-metoksyetanol (50 ml) ble tilbakeløpskjørt i 5 til 10 timer. Etter avkjølingen fordampes løsningen til tørrhet for å gi en oljeaktig rest som utsettes for termisk syklisering i difenyleter (50 ml) ved et Dean-Stark-apparat for azeotropisk å fjerne vannet dannet under reaksjonen. Etter 1,5 time kontrolleres reaksjonen i TLC (etylacetat:petroleumseter 2:1), og når utgangsforbindelsen er fullstendig fraværende kjøles blandingen og tilsettes heksan. Det resulterende presipitat filtreres og krystalliseres for å gi
T-CP-fmylety^CruryO-pyrazol^^-e] l52,4-tirazol[l,5c]-pyrimidin sm.p. 174-175 °C (20 %) <*>H NMR (DMSO-d6): 3,23 (t, 2H); 4,74 (t, 2H); 6,75 (s, 1H); 7,14-7,17 (m, 5H); 7,28 (s, 1H); 7,98 (s, 1H); 8,53 (s, 1E); 9,56 (s, 1H).
På tilsvarende måte, ved å starte fra
1 -p-fenyletyl-4-cyano-3-aminopyrazol, ble 8-(P-fenyletyl)-2(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l,5-c]-pyrimidin fremstilt: Sm.p. 268-270 °C (600A) 'H NMR (DMSO-dk): 3,32 (t, 2H); 4,72 (t, 2H); 6,73 (s, 1H); 7,23 (m, 5H); 7,95 (s, 1H); 8,8 (s, 1H); 9,41 (s, 1H). c) En suspensjon av produktet fra trinn b) (10 mmol) i 10 % HC1 (5,0 ml) ble tilbakeløpskjørt under omrøring i 3 timer. Etter avkjøling ble løsningen gjort basisk med konsentrert ammoniumhydroksyd ved 0 °C og det resulterende presipitat filtreres eller ekstraheres med etylacetat (3 x 100 ml), tørkes og fordampes til tørrhet under vakuum for å gi den tilsvarende l-(p-fenyletyl)-4-[3(2-furyl)-l,2,4-triazol-5-yl]-5-armnop sm.p. 175-176°C; <!>H NMR (DMSO-de): 3,15 (t, 2H); 4,48 (t, 2H); 5,78 (s, 1H); 6.37 (s, 1H); 6,68 (s, 1H); 7,1 (s, 1H); 7,27-7,28 (m, 5H); 7,82 (s, 1H); 14,51 (sb, 2H): på tilsvarende måte oppnås l-(p-fenyletyl)-4-[3(2-mr<y>l)-l,2,4-triazol-5-yl]-3-amino<p>yrazol (sm.p. 205-206 °C); 'H NMR (DMSO-de): 3,12 (t, 2H); 4,46 (t, 2H); 5,75 (s, 1H); 14,41 (sb, 2H).
d) Cyanamid (60 mmol) tilsettes en suspensjon av aminet fra trinn c) (10 mol i N-metylpyrrolidon (40 ml) etterfulgt av p-toluensulfonsyre (15 mmol). Blandingen
oppvarmes til 160 °C under omrøring. Etter 4 timer tilsettes en annen porsjon av cyanamid (60 mmol) og oppvarmingen fortsetter over natten. Blandingen behandles deretter med varmt vann (200 ml) og presipitatet filtreres, vaskes med vann og krystalliseres fra etanol for å gi den tilsvarende
5-amino-7-(p-fenyletyl)-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]-l,2,4-triazol[l,5-c]pyirmicHn sm.p. 225-226 °C. 'H NMR (DMSO-d6): 3,21 (t, 2H); 4,51 (t, 2H); 6.65 (s, 1H); 7,1-7,44 (m, 5H, atom og 1H); 7,78 (s, 1H); 7,89 (sb, 2H); 8,07 (s, 1H).
På tilsvarende måte ble 5-amino-8-(P-fenyletyl)-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]-l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin sm.p. 212-213 °C. 'H NMR (DMSO-de): 3,21 (t, 2H); 4,53 (t, 2H); 6.7 (s, 1H); 7,1-7,4 (m, 5H, atom og 1H); 7,65 (sb, 2H); 7,93 (s, 1H); 8,45 (s, 1H) fremstilt.
Eksempel 8: Fremstilling av 4-cyano-5-amino-l,2,3-triazoIer
En suspensjon av kaliumkarbonat (0,23 mol) i DMSO (70 ml) tilsettes deretter med cyanoacetamid (70 mmol) og p-fluorobenzylazid (54,5 mmol). Den resulterende løsning omrøres ved romtemperatur i 1 time og helles deretter over i et stort volum vann (1,5 1). Det adskilte faste stoff filtreres, vaskes med vann og tørkes i ovnen ved 70 °C for å gi l-(p-fluorobenzyl)-4-karboksamido-5-amino-l,2,3-triazol (961 % utbytte). Sm.p. 198-199 °C; <*>H NMR (DSMO-ds): 7,5-7,1 (m, 6H); 6,4 (s, 2H); 5,4 (s, 2H). En amidsuspensjon (0,005 mol), omrørt og nedkjølt til 0 °C i DMF (5 ml), tilsettes fosforoksyklorid (0,01 mol). Den resulterende løsning omrøres i 5 minutter ved 0 °C, 10 minutter ved 25 °C og 15 minutter ved 8 °C. Etter nedkjøling til romtemperatur tilsettes 5 ml NHC1 og blandingen må tilbakeløpskjøles i 5 minutter. l-(p-fluorobenzyl)-4-cyano-5-amino-l,2,3-triazol separeres fra den nedkjølte løsningen (90 % utbytte). Sm.p. 185-186 °C; <J>H NMR (DSMO-de): 7,3-7,0 (m, 6H); 5,5 (s, 2H); IR (KBr): 3400, 3220, 2220, 1655cm''.
Analogt ble de følgende forbindelser fremstilt:
1- eller 2-benzyl-4-cyano-5-amino-l,2,3-triazol
1- eller 2-(o-flourobenzyl)-4-cyano-5-arnino-l,2,3-triazol 1- eller 2-(p-fluorobenzyl)-4-cyano-5-amino-1,2,3-triazol
1- eller 2-butyl-4-cyano-5-amino-l,2,3-triazol
1- eller 2-isopentyl-4-cyano-5-amino-l,2,3-triazol
1- eller 2-(2-metoksyetyl)-4-cyano-5-amino-l,2,3-triazol l-2-heptyl-4-cyano-5-amino-1,2,3-triazol
1- eller 2-oktyl-4-cyano-5-amino-l,2,3-triazol
Disse forbindelser kan anvendes som mellomprodukter for å fremstille triazol-triazol-pyrimidinforbindelser som beskrevet her i dokumentet.
Eksempel 9: Fremstilling av etoksymetylenaminoheterosykler
Fremstillingen av etoksymetylenaminoheterosykler med Formel IV utføres ved å tilbakeløpskjøle de respektive ortoaminonitril med etylortoformat. Som eksempel gjengis fremstilling av 4-cyano-5-(etoksymetylenamino)-l-butylpyrazol. En løsning av 4-cyano-5-amino-l-butylpyrazol (20 mmol) i trietylortoformat (40 ml) oppvarmes ved tilbakeløpstemperaturen under nitrogenatmosfære i 8 timer. Overskuddet av ortoformat fordampes til tørrhet under vakuum og den resterende gule olje oppløses i etyleter og elueres gjennom silicagel for å gi den rene forbindelsen (87 % utbytte). I mange tilfeller er den opptatte rest etter fordamping av ortoformatet hovedsakelig rent og anvendes slik i det følgende trinn. IR (nujol): 3140,2240,1640 cm"<1>; 'H NMR (CDC13): 8,4 (s, 1H); 7,9 (s, 1H); 4,5 (t, 2H); 4,3 (q, 2H); 1,8 (m, 2H); 1,5 (m, 2H); 1,4 (t, 3H); 0,9 (t, M).
Eksempel 10: Syklisering av etoksymetylenaminoheterosykler
En løsning av etoksymetylenaminoheterosykelen (20 mmol) og 2-furonsyrehydrazid (2,5 g, 22 mmol) i 2-metoksyetanol (50 ml) tilbakeløpskjøles i 5 til
10 timer. Etter nedkjøling fordampes løsningen til tørrhet for å oppnå en restolje som utsettes for termisk syklisering i difenyleter (50 ml) ved bruk av en rundbunnet flaske tilpasset et Dean-Stark-apparat, for azeotropisk å fjerne vannet dannet under reaksjonen. Etter forskjellige tidspunkt (3 til 5 t) kontrolleres reaksjonen ved TLC (2:1 etylacetat:petroleumseter) og når hele startproduktet er forsvunnet nedkjøles blandingen og heksan tilsettes. Det resulterende presipitat filtreres og krystalliseres fra et egnet løsningsmiddel. I noen tilfeller separeres en viskøs olje fra løsningen, som så dekanteres og ekstraheres. Oljeresten kromatograferes deretter på silicagel, elueres med etylacetat/petroleumseter-blandinger, for å frembringe den trisykliske forbindelse
VI.
Som eksempel gjengis de analytiske og spektroskopiske karakteriseringer av noen av forbindelsene fremstilt ved disse fremgangsmåter: 7- butyl-2(2-furyI)-pyrazol-[4,3-e] 1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin. 'H NMR (DMSO-dfi): 9,6 (s, 1H); 8,6 (s, 1H); 8,0 (m, 1H); 7,4 (m, 1H); 6,7 (m, 1H); 4,5 (t, 2H); 1,9 (m, 2H); 1,3 (m, 2H); 0,9 (t, 3H).
8- butyl-2(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin. 'H NMR (DMSO-de): 9,4(s, 1H); 8,9 (s, 1H); 8,0 (m, 1H); 7,3 (m, 1H); 6,2 (m, 1H); 4,5 (t, 2H); 1,9 (m, 2H); 1.; (m, 2H); 0,9 (m, 3H). 12D-NMR (NOESY)-spektrum, viser N-CH2-signalet resonans ved 4,5 kryss-topper med C9-H signalet med resonans ved 8,9.
7- isopentyl-2(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin. 'HNMR (CDCL3): 9,1 (s, 1H); 8,8 (s, 1H); 7,7 (m, 1H); 7,3 (m, 1H); 6,6 (m, 1H); 4,6 (t, 2H); 1,18-1,7 (m,3H); 1,0 (d, 6H).
8- isopentyl-2(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin. 9,1 (s, 1H); 8,8 (s, 1H); 7,7 (m, 1H); 7,3 (m, 1H); 6,6 (m, 1H); 4,6 (t, 2H); 1,9-1,5 (m, 3H); 1,0 (d, 6H).
Ved å følge denne fremgangsmåte ble de følgende forbindelser fremstilt: 7- metyl-2(2-furyl)-pyrazoI [4,3-e] 1,2,4-triazol[l ,5c]pyrimidin 8- metyl-2(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] 1,2,4-triazol [ 1,5c]pyrimidin 7-(2-klorfenyl-2(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin 7-fenyletyl-2(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-triazol[l ,5-c]pyrimidin 7-tert-butyl-2(2-furyl)-pyrazol [4,3-e] l,2,4-triazol[l ,5-c]pyrimidin 7- (2-syklopentyl)etyl-2(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] 1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin 8- benzyl-2(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] 1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin 7-benzyl-2(2-furyl)-1,2,3 triazol[5,4-e] 1,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin 7-(2-fluorobenzyl)-2(2-furyl)-1,2,3-triazol[5,4e] 1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin 7-(4-fluorobenzyI)-2(2-furyl)-1,2,3-triazol[5,4e] 1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin 7-butyl-2(2-furyI)-1,2,3-triazol [5,4-e] 1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin 7-isopentyl-2(2-furyl)-1,2,3-triazol[5,4-e] 1,2,4-triazol[l ,5-c]pyrimidin 7-(2-metoksy)etyl-2(2-furyl)-1,2,3-triazol[5,4e] 1,2,4-triazol[l ,5-c]pyrimidin 7-heptyl-2(2-furyl)-1,2,3-triazol [5,4-e] 1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin 7- oktyl-2(2-furyl)-1,2,3-triazol [5,4-e] l,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin 8- benzyl-2(2-furyI)-1,2,3-triazol[5,4-e] 1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin 8-(2-fluorobenzyl)-2(2-furyI)-l ,2,3-triazol[5,4e] l,2,4-triazol[l ,5-c]pyrimidin 8-(4-fluorobenzyl-2(2-furyl)-1,2,3-triazol[5,4e] 1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin 8-butyl-2(2-furyl)-l,2,3-triazol[5,4-e] l,2,4-triazol[l ,5-c]pyrimidin 8-isopentyl-2(2-furyl)-1,2,3 -triazol[5,4-e] 1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin 8-heksyl-2(2-furyl)-l ,2,3-triazol [5,4-e] 1,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin 8-heptyl-2(2-furyl)-1,2,3-triazol [5,4-e] 1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin 8- oktyl-2(2-fiiryl)-l,2,3-triazol[5,4-e] l,2,4-triazol[l ,5-c]pyrimidin 9- benzyl-2(2-furyI)-1,2,3-triazol[4,5-e] 1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin 9-(2-fluorobenzyl)-2(2-furyl)-1,2,3-triazol[4,5e] 1,2,4-triazol[l ,5-c]pyrimidin 9-(4-fluorobenzyl)-2(2-furyl)-1,2,3-triazol[4,5e] 1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin
Disse forbindelser kan anvendes som mellomprodukter for å fremstille triazol-triazol-pyrimidiner og pyrazol-triazol-pyrimidiner som beskrevet her i dokumentet.
Eksempel 11: Fremstilling av 5-amino-7-[aralkyl]-2-(2-fuiyl)-pyrazol[4,3-e]-l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidiner
En suspensjon av aminer med Formel VII (10 mmol) i N-metylpyrrolidon (40 ml) tilsettes med cyanamid (60 mmol) etterfulgt av p-toluensulfonsyre (15 mmol). Blandingen varmes til 160 °C med magnetisk omrøring. Etter 4 timer ble annen porsjon av cyanamid (60 mmol) tilsatt og oppvarmingen fortsatte over natten. Blandingen behandles deretter med varmt vann (200 ml) og det bunnfelte, faste stoffet filtreres, vaskes med vann og krystalliseres fra etanol. Dersom ingen bunnfelling finner sted ekstraheres løsningen med etylacetat (4 x 100 ml), ekstraktet vaskes med saltoppløsning (2 x 50 ml), tørkes og fordampes til tørrhet under vakuum. Resten kromatograferes deretter på en silicagelkolonne som elueres med etylacetat.
I det følgende gjengis de analytiske og spektroskopiske data til noen forbindelser fremstilt ved denne fremgangsmåte: 5-amino-7-butyl-2-(2-furyl)--pyrazol[4,3-e]-1,2,4-triazoI[ 1,5-c]pyrimidin; sm.p. 157-158 °C; <l>H NMR (DMSO-d6) 8,1 (s, 1H); 8,0 (s, 2H); 7,9 (m, 1H); 7,2 (m, 1H); 6,7 (m, 1H); 4,2 (t, 2H); 1,9 (m, 2H); 1,5 (m, 2H); 0,9 (t, 3H).
5-aimno-8-butyl-2-(2-ruryl)-pyrazol[4)3-e]-l>2,4-triazol[l,5 sm.p. 183-185 °C; 'H NMR (DMSO-d6) 8,6 (s, 1H); 8,0 (s, 1H); 7,6 (s, 2H); 7,2 (m, 1H); 6,7 (m, 1H); 4,2 (t, 2H); 1,8 (m, 2H); 1,2 (m, 2H); 0,9 (t, 3H).
5-amino-7-benzyl-2-(2-furyl)-triazol[5,4-e]-1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin; sm.p. 295-297 °C; <*>H NMR (DMSO-d6) 8,5 (s, 2H); 8,0 (s, 1H); 7,3 (m, 6H); 6,7 (m, 1H); 5,7 (s, 2H).
5-amino-7-c-fluoro-benzyl-2-(2-mryl)-l,2,3-triazol[5,4-e]-l,2,4-tria^^ c]pyrimidin; sm.p. 310-312 °C; <]>H NMR (DMSO -de): 8,5 (s, 2H); 8,0 (s, 1H); 7,3 (m, 5H); 6,8 (s, 1H); 5,75 (s, 2H).
5-amino-7-metyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]-l,2,4-triazol-[l,5-c]pyrimidin; sm.p. 210-213 °C
5-aminc-7-tert-butyl-2-(2-fuiyl)-pyrazol[4,3-e]-l^,4-tirazol-[l,5-c]pyrim^ sm.p. 238-240 °C
5-amino-2-(2-foiyl)-pyrazol[4,3-e]-l,2,4-triazol[l,5-c]pyrii^ sm.p. 248-250
°C
5-ajmno-7-(2-hydroksyety])-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]-1,2,4-triazol-[ 1,5-c]pyrimidin; sm.p. 258-260 °C
5-anuno-7-fenyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]-1,2,4-triazol-[ 1,5-c]p<y>rimidin; sm.p. 295-297 °C
5-amino-7-isopentyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]-1,2,4-triazol-[ 1,5-e]pyrimidin; sm.p. 208-210 °C
5-ammo-8-isopentyl-2-(2-furyl)-pyra^ sm.p. 200-203 °C
5-amino-7-fenetyl-2-(2-fiiryI)-pyrazol[4,3-e]-1,2,4-triazol-[l ,5-c]pyrimidin; sm.p. 225 °C
5-amino-7-benzyloksyetyl-2-(2-ruryl)-pyrazol[4,3-e]-1,2,4-triazol-[ 1,5-c]pyrimidin.
5-amino-7-[p-(4-isobutylfenetyl)]-2-(2-mryl)-pyrazol[4,3-^ c]pyrimidin; sm.p. 207-210 °C.
Disse forbindelser kan reageres med et egnet syre- eller sulfonsyrederivat for å oppnå forbindelsene med formel I diskutert her i dokumentet.
Eksempel 12: Fremstilling av substituert-4-karboksamido-5-amino-l,2,3-triazoler
p-fluorobenzylazid (15,1 g, 0,1 mol) og cyanacetamid (10,8 g, 0,13 mol) tilsettes i denne rekkefølge til en suspensjon av pulverisert kaliumkarbonat (57,5 g, 0,42 mol) i dimetylsulfoksid (150 ml). Blandingen omrøres ved romtemperatur i 1 time. Blandingen helles over i 3 liter og det faste stoffet som separeres filtreres og vaskes grundig med vann for å gi 22,47 g (96 %) av 1 -p-fluorbenzyl-4-karboksamid-5-amino-1,2,3-triazol. sm.p. 198-199 °C; 'H NMR (DMSO-ds): 7,5-7,1 (m, 6H); 6,4 (s, 2H); 5,4 (s, 2H).
Analogt oppnås
2- fluor-6-klorbenzyl-4-karboksamid-5-amino-l,2,3-triazol; sm.p. 230-231 °C;
'H NMR (DMSO-dfi): 5,40 (s, 2H); 6,52 (sb, 2H); 7,12-7,45 (m, 5H).
3- fluorbenzyl-4-karboksamid-5-amino-l ,2,3-triazol; sm.p. 211-211 °C; 'H-NMR (DMSO-de): 5,46 (s, 2H); 6,47 (sb, 2H); 7,00-7,52 (m, 6H).
2-fluorbenzyl-4-karboksamid-5-amino-l,2,3-triazol; sm.p. 195-197 °C.
1- (P-fenyletyl)-4-karboksamid-5-amino-l,2,3-triazol; sm.p 181-183 °C; <*>H NMR (DMSO-dfi): 3,04 (t, 2H); 4,35 (t, 2H); 6,30 (sb, 2H); 7,20-7,47 (m, 7H).
Eksempel 13: Fremstilling av substituert-4-cyano-5-amino-l,2,3-triazoler
En suspensjon av l-p-fluorbenzyl-4-cyano-5-amino-l,2,3-triazol (23,4 g, 0,1 mol) i DMF (100 10 ml), omrøres magnetisk ved 0 °C, tilsettes med 20,8 ml (0,2 mol) POCI3. Løsningen omrøres i 5 timer ved 0 °C, 101 med romtemperatur og til slutt 151 ved 80 °C. Etter nedkjøling tilsettes IN HC1 (100 ml) og den resulterende løsning tilbakeløpskjøles i 5 t, ved nedkjøling presipiteres
1,5 p-fluorbenzyl-4-cyano-5-amino-l,2,3-triazol (18,54 g, 90 %); sm.p. 185-186 °C; <!>H NMR (DMSO-d6): 7,3-7,0 (m, 6H); 5,5 (s, 2H); IR (KBr): 3400,3220, 2220,1655 cm<1>.
Analogt oppnås de følgende forbindelser: 2- fluor-6-klorbenzyl-4-cyano-5-amino-l,2,3-triazol; sm.p. 181-185 °C; <l>H NMR (DMSO-d^): 5,40 (s, 2H); 7,26-7,50 (m, 5H). 3-fluorbenzyl-4-cyano-5-amino-l ,2,3-triazol; sm.p. 195-197 °C; <!>HNMR (DMSO-de): 5,44 (s, 2H); 7,00-7,43 (m, 6H). 2-fluorbenzyl-4-cyano-5-amino-l,2,3-triazol; sm.p. 195.197 °C. l-(P-fenyletyl)-4-cyano-5-amino-l,2,3-triazol; sm.p. 149-150 °C; <!>HNMR (DMSO-dfi): 3,04 (t, 2H); 4,36 (t, 2H); 7,03 (sb, 2H); 7,23-7,28 (m, 5H).
Eksempel 14: Fremstilling av substituert-4[3(2-furyl)-l,2,4-triazol-5-yl]-5-amino-1,2,3-triazoler
En suspensjon av l-p-fluorbenzyl-4-cyano-5-amino-l,2,3-triazol (20 mmol) og 2-furonsyrehydrazid (22 mmol) i difenyleter (30 ml) omrøres og varmes til refluks (260 °C) med et Dean-Stark-apparat frem til utgangsforbindelsen forsvinner (TLC, 1 til 2t). Etter nedkjøling fortynnes blandingen med petroleumseter og det resulterende presipitat blir enten filtrert eller separert ved dekantering og kromatograferes på en silicagelkolonne eluert med 2:1 etylacetat og petroleumseter. 1 -p-fluorbenzyl-4[3(2-furyl)-l,2,4-triazol-5-yl]-5-amino-1,2,3-triazol; sm.p. 266-268 °C; <!>H NMR (DMSO-d6): 14,5 (s, 1H); 7,8 (s, 1H); 7,4-7,1 (m, 5H); 6,6 (s, 2H); 6,5 (s, 2H); 5,5 (s, 2H). Analogt oppnås 1 -(P-fenyletyl)-4[3(2-furyl)-1,2,4-triazol-5-yl]-5-amino-1,2,3-triazol (50 %); sm.p. 200-202 °C; 'H NMR (DMSO-de): 3,07 (t, 2H); 4,16 (t, 2H); 5,50 (sb, 2H); 6,61 (s, 1H); 6,95 (s, 1H); 7,2-7,4 (m, 5H); 7,78 (s, 1H); 13,8 (sb, 1H).
Eksempel 15: Fremstilling av 5-amino-7-substituert-2-(2-furyl)-l,2,3-triazol[5,4-e]l,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidiner
En suspensjon av l-p-fluorbenzyI-4[3(2-furyl)l,2,4-triazol-5-yl-5-amino-1,2,3-triazol (0,325 g, 1 mmol) i N-metylpyrrolidon (4 ml) tilsettes med cyanamid (6 mmol) etterfulgt av p-toluensulfonsyre (1,5 mmol). Blandingen oppvarmes til 160 °C med magnetisk omrøring. Etter 4 timer tilsettes en annen porsjon av cyanamid (6 mmol) og oppvarmingen fortsetter over natten. Blandingen behandles deretter med varmt vann(20 ml) og det faste bunnfall filtreres, vaskes med vann og krystalliseres fra etanol. Dersom ingen presipitering finner sted, ekstraheres løsningen med etylacetat (4 x 10 ml), ekstraktet vaskes med saltløsning (2x5 ml), tørkes og fordampes til tørrhet under vakuum. Resten kromatograferes deretter på en silicagelkolonne eluert med etylacetat for å gi 105 mg (30 % utbytte) av
5-amino-7-p-fluor-benzyl-2-(2-furyl)-1,2,3-triazol[5,4-e] 1 ,2,4-triazol[l ,5-c]pyrimidin; sm.p. 266-268 °C; ,H NMR (DMSO-ds): 8,5 (sb, 2H); 7,95 (s, 1H); 7,4-7,1 (m, 6H); 6,7 (s, 1H); 5,7 (s, 2H).
Analogt oppnås:
5-amno-7-o-fluorberizyl-2-(2-furyl)-1,2,3-triazol[5,4-e] 1,2,4-triazol[l ,5-c]pyrimidin; sm.p. 310 °C.
5-amino-7-benzyl-2-(2-furyl)-1,2,3-tirazol[5,4-e] 1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin; sm.p. 295-297 °C.
5-amino-7-(2-fluor-6-klorberizyl)-2-(2-ruryl)-1,2,3-triazol[5,4-e] 1,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin; sm.p. 218-220 °C; ,H NMR (DMSO-dfi): 8,51 (sb', 2H); 7,98 (s, 1H); 7,55-7,28 (m, 4H); 6,77 (m, 1H); 5,73 (s, 2H).
5-amino-7-(m-fluorbeiizyl)-2-(2-furyl)-1,2,3 -triazol[5,4-e] 1,2,4-triazol[ 1,5-c]pyrimidin; sm.p. 280-283 °C;; ,H NMR (DMSO-de): 8,45 (bs, 2H); 7,98 (s, 1H); 7,4-7,1 (m, 5H); 6,76 (s, 1H); 5,75 (s, 2H).
5-amino-7-(3-fenyletyl)-2-(2-furyl)-1,2,3 triazol[5,4-e] 1,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin; sm.p. 269-271 °C; <]>H NMR (DMSO-de): 8,04 (sb, 2H); 7,98 (s, 1H); 7,3-7,15 (m, 6H); 6,8 (s, 1H); 4,71 (t, 2H); 3,31 (t, 2H).
Eksempel 16: Ytterligere forbindelser
Ved hjelp av den ovenfor beskrevne kjemi fremstilles de følgende tilleggsvise forbindelser:
Eksempel 17: Evaluering av den biologiske aktivitet til forbindelsene
Flere forbindelser beskrevet ovenfor er blitt testet for deres affinitet for rotte Ap og A2A- og humane A3-reseptorer ved bruk av følgende analyser.
Rotte Aj- og ArA- adenosinreseptorbindingsanalyse
Hann Wistar rotter (200-250 g) ble halshugget og hele hjernen og striatum ble dissekert på is. Vevene ble ødelagt i en polytron homogenisator med en innstilling på 5 i 30 sekunder i 25 volum 50 mM Tris HC1, pH 7,4 inneholdende lOmM MgCl2. Homogenatet ble sentrifugert ved 48000 i 10 minutter, og pelleten ble resuspendert i den samme buffer inneholdende 2 IU/ml adenosin deaminase. Etter 30 minutters inkubering ved 37 °C ble membranene sentrifugert og pelleten lagret ved -80 °C. Før nedfrysing ble en aliquot av homogenatet tatt av for proteinanalyse med bovint albumin som referansestandard. Bindingsanalysene ble utført på henholdsvis rottehjerne- og striatummembraner i nærvær av lOmM MgCl2 ved 25 °C. Alle bufferløsninger ble justert til å holde en konstant pH på 7,4.
Deplasseringseksperimenter ble utført i 500 ul Tris-HCl buffer inneholdende 1 nM av den selektive adenosin-Apreseptorligand [<3>H]CHA (N<6->sykloheksyladenosin) og membraner fra rottehjerne (150-200 ug protein/analyse).
Deplasseringseksperimenter ble utført i 500 (il Tris-HCl buffer inneholdende 10 mM MgCl2, 0,2 nM av den selektive adenosin-A2A-reseptorliganden [3H]SCH58261 (5-amino-7-(2-fenyletyI)-2(2-furyl)-pyrazol[4,3-e]-l,2,4-tirazol[l,5-c]pyrimidin) og membraner fra rottestriatum (80-100 (ag protein/analyse). For å bestemme IC5o-verdiene (der IC50 er inhibitorkonsentrasjonen som deplasserer 50 % av den merkede ligand) ble testforbindelsene tilsatt i triplikatet til bindingsanalyseprøvene ved minst seks ulike konsentrasjoner. Separasjon av bundet fra fri radioligand ble utført ved rask filtrering gjennom Whatman GF/B-filtre som ble vasket tre ganger med iskald buffer. Filterbundet radioaktivitet ble målt ved scintillasjons-spektrometri etter tilsetting av 5 ml Aquassure. Ikke-spesifikk binding ble definert som binding i nærvær av 10 uM R-PIA (N<6->(fenylisopropyl)adenosin) og 10 uM NECA (5'-(N-etylkarbokamid)adenosin), og var alltid 10 % av totalbindingen. Inkubasjonstidene varierte fra 150 minutter ved 0 °C til 75 minutter ved 30 °C ifølge resultatene fra tidligere tidsforløpseksperimenter. Ki-verdier ble beregnet fra Cheng-Prusoff-ligningen. Alle bindingsdata ble analysert ved ikke-lineær regresjonskurvetilpasningsdataprogrammet LIGAND.
Bindingsanalvser for human klonet A^- adenosinreseptor
En aliquot av membraner (8 jig protein/ml) fra HEK-293-celler transfektert med den humane rekombinante A3-adenosinreseptorer, ble anvendt for bindingsanalyser. Figur 1 viser en typisk metning av [,25I]AB-MECA (N6-(4 -amino-3-iodobenzyl)-5'-(N-metylkarbamoyl)adenosin) til HEK-293-celler. Inhibisjonseksperimentet ble utført i duplikat i et sluttvolum på 100 (il i reagensrøret inneholdende 0,3 nM [,<25>I]AB-MECA, 50 nM Tris-HCl buffer, 10 nM MGC12, pH 7,4, 20 ul fortynnede membraner (12,4 mg protein/ml), og minst 6-8 forskjellige konsentrasjoner av typiske adenosinreseptorantagonister. Ikke-spesifikke binding ble definert i nærvær av 50 uM R-PIA og var ca. 30 % av totalbinding. Inkubasjonstiden var 60 minutter ved 37 °C, ifølge resultater fra tidligere tidsforløpseksperimenter. Bundet og fri radioaktivitet ble separert ved filtrering av analyseblandingen gjennom Whatman GF/B glassfiberfiltre ved en Brandel-cellehøster.
Resultater og diskusjon
Forbindelsene 34-59 ble undersøkt i radioligand bindingsanalyser for affinitet til rottehjerne Ai-, A2A- og humane A3-reseptorer, og resultatene er oppsummert i Tabell 1.
Dataene viser at forbindelser som mangler store (forbindelsene 38,40 og 41) grupper ved N<5->posisjonen viser større affinitet for A2A-adenosinreseptorer med lav selektivitet versus Ai og lav affinitet for human adenosin A3-reseptorsubtype, og at forbindelser med en substituert fenylkarbamoylkjede ved N5-posisjonen har affinitet i nanomolar område for hA3-reseptorsubtype med forskjellige grader av selektivitet versus Ar og A2A-reseptorsubtype. I særdeleshet har 4-metoksyfenylkarbamoyl-enheten (forbindelsene 51, 55 og 57) høyere affinitet, omtrent tre størrelsesordener, enn 3-klorfenylkarbamoyIenheten (forbindelsene 50, 54 og 56).
Introduksjonen, i N -posisjonen, av kjeder med forskjellige steriske egenskaper muliggjør utforming av derivater med høy potens ved den humane A3-adenosinreseptoren og bedre selektivitet versus Ar og AM-reseptorsubtypene.
Figur 1 viser en metningskurve for [ I]AB-MECA overfor adenosin-A3-reseptoren og lineariteten i Scatchard-kurven i det innfelte er indikativt, under våre eksperimentelle betingelser, i nærvær av en enkelt klasse av bindingssteder med KD-verdi på 0,9 ± 0,01 nM og Bmax-verdi på 62 ± 1 fmol/mg protein (n=3).
Dataene viser at kortkjede (C|.3)-substiruenter ved 8-posisjonen av 5-[[substituert fenyl)amino]karbonyl]amino-8-(ar) alkyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] 1,2,4-triazol[l,5-c]pyrimidin-forbindelsene beskrevet her i dokumentet, i særdeleshet metyl-, etyl- og propylgrupper foretrekkes fremfor større kjeder slik som pentyl- og heksylgrupper. I særdeleshet viste forbindelsene 45 og 47, de 8-metyl-, 8-etyl- og 8-propyl, 5-(4-metoksyfenyl)-substituerte forbindelser den høyeste affinitet og selektivitet, og faktisk antas de å ha den høyeste affinitet og selektivitet for den humane adenosin A3-reseptorsubtype (h A3) av en hvilken som helst forbindelse som noen gang er syntetisert.
Metyl-, etyl- og propylkjedene kan substitueres med fenyl eller substituerte fenylgrupper og fortsatt vise ganske høy affinitet og selektivitet for A3-reseptorsubtypen, men affiniteten reduseres med en faktor mellom 10 og 100. Imidlertid viste forbindelsen med en p-fenyletylkjede ved N<8> og 4-MeO-fenylkarbamoylkjede ved N<5->posisjonen (forbindelse 55) en relativt tilfredstillende verdi med hensyn til affinitet og selektivitet (K,hA3 = 1,47 nM, rA(/hA3 = 872, rA2A</>hA3 = 951).
Selv med ganske store fentylgrupper tilstede i forbindelsene 50 og 51 viste forbindelsene en relativt høy affinitet for A3-reseptorsubtypen (hhv. 81,10 og 29,57 nm), selv om selektiviteten reduseres med en faktor på ca. 10 til 100.
Tidligere studier viser at affiniteten til 5-amino-8-(ar)alkyl-2-(2-furyl)-pyrazol[4,3-e] l,2,4-tria2ol[l,5-c]pyrimidin-forbindelsene for adenosin-A2-reseptorsubtypen tenderer til å øke med størrelsen av gruppen i posisjon 8. Det synes som om den motsatte tendens er tilfelle for affiniteten til forbindelsene beskrevet her i dokumentet for A3-reseptorsubtypen. Ci_3-substituenter synes å representere de ideelle steriske og lipofile egenskaper for interaksjon med A3-reseptorsubstypen.
Eksempel 18: Bindingsforsøk med en radiomerket forbindelse
En serie bindingsforsøk ble utført på ulike tumorcellelinjer ved bruk av 0,5 nM [,<25>I]-ABMECA, med uspesifikk binding bestemt i nærvær av 50 uM R-PIA eller 200 uM NECA, på cellemembraner til cellelinjene. Spesifikk binding ble bestemt ved å subtraktere uspesifikk binding fra totalbinding. Cellelinjene var HL 60, NB4, SKN-MC, SKN-Be2C, SKN-SH og JURKAT cellelinjer. Resultatene av bindingsforsøkene er vist nedenfor i tabell 2.
Jurkat-cellelinjer synes å gi de beste resultater av de undersøkte cellelinjer. Et metningseksperiment ble utført på Jurkat-cellelinjer ved 37 °C, med en 1 times inkubasjonsperiode, ved bruk av [<125>I]-ABMECA (0,125-1,5 nM), der uspesifikk binding ble målt ved RPIA (50 uM). Kd (nM) var 4, og B,^ (fmol/mg protein) var 290. Resultatene vises også i Figur 2.
En annen analyse ble utført for å bestemme om Arreseptoren var tilstede. Et deplasseirngsforsøk ble utført ved 0 °C i 150 minutter på Jurkat-celler ved bruk av [<3>H] DPCPX, en spesifikk Aj-antagonist (0,5 nM), der ikke-spesifikk binding ble bestemt ved R-PIA (50 uM). Totalbindingen var 13208, ikke-spesifikk binding var 2997, og den spesifikke bindingen var 10211 (77 %). Følgelig ble det observert en betydelig Ar binding.
De følgende forsøk beskriver for første gang karakteriseringen av A3-reseptorer i noen humane tumorcellelinjer slik som HL60, en promyelocytisk human leukemi og Jurkat, en human T-celle leukemi, ved hjelp av nye selektive antagonister (forbindelse 102) beskrevet her i dokumentet. I disse studier ble membraner (0,5 mg protein/ml) fra Jurkat- og HL60-celler inkubert med 10-12 ulike konsentrasjoner av forbindelse 102 varierende fra 0,2 til 15 nM og 0,1 til 10 nM for Jurkat- og HL60-celler. Figur 3 viser en metningskurve på forbindelse 102 sin binding til adenosin-A3-reseptorer i Jurkat-cellemembraner og lineæriteten i Scatchard-plottet i det innfelte, antyder nærvær av en enkelt klasse av bindingssteder med en Kj-verdi på 1,9 ± 0,2 nM og Bmax-verdi på 1,30 ± 0,03 pmol/mg protein (n = 3). Figur 4 visér en metningskurve på forbindelse 102 sin binding til adenosin-A3-reseptorer i HL60-membraner og lineæriteten i Scatchard-plottet i det innfelte, antyder nærvær av en enkelt klasse av bindingssteder med en Kj-verdi på 1,2 ± 0,1 nM og Bmax-verdi på 626 ± 42 fmol/mg protein (n = 3).
Disse resultatene viser at mange cellelinjer inneholder relativt store antall av adenosinreseptorer. Fordi forbindelse 102 er kjent for å binde A3-reseptorer med en høy affinitet og selektivitet, er det sannsynlig at det er en relativt stor tilstedeværelse av A3-reseptorer i tumorceller.
Eksempel 19. Farmasøytiske formuleringer
(A) Transdermalt system - til 1000 plastere
(B) Orale tabletter - til 1000 tabletter
Den aktive forbindelsen og stivelsen er granulert med vann og tørket.
Magnesiumstearat tilsettes det tørrede granulat og blandingen blandes grundig. Den blandede blanding sammenpresses til tabletter.
(C) Injeksjon - til 1000 ampuller av 1 ml
Den aktive forbindelsen og bufferstoffene oppløses i propylenglykol ved ca. 50 °C. Vann for injeksjon tilsettes deretter ved omrøring og den resulterende løsning filtreres, fylles på ampuller, forsegles og steriliseres ved autoklavering. (D) Kontinuerlig injeksjon - til 1000 ml
Fagpersoner innen teknikken vil forstå eller være istand til å forstå uten annet
enn mtmeeksperimentering, mange ekvivalenter til de spesielle utførelsesformer ifølge oppfinnelsen som her er beskrevet. Slike ekvivalenter har til hensikt å være omfattet av de følgende krav.

Claims (14)

1. Forbindelse, karakterisert ved den følgende formel: der A er imidazol, pyrazol eller triazol; Rer-C(X)-N(R,)2; R<1> er hydrogen, CrC6-alkyl, fenyl-Ci-C4-alkyl eller fenyl eventuelt substituert med Ci-Cfi-alkoksy eller halogen; R<2> er CrC6-alkyl eller fenyl-C,-C4-alkyl; R<3> er furan; XerO; og farmasøytisk akseptable salter av disse.
2. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at R<1> er valgt blant hydrogen og Ci-Cg-alkyl.
3. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at R2 er Ci-C6-alkyl.
4. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at A er en triazolring.
5. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at A er en pyrazolring.
6. Anvendelse av en forbindelse ifølge krav 1 til fremstilling av et preparat til behandling av hypertensjon, inflammasjon, allergiske reaksjoner, mastcelledegranulering, tumorer og hjertehypoksi, og beskyttelse mot cerebral iskemi, hvor en effektiv mengde av forbindelsen administreres til en pasient som har behov for slik behandling.
7. Anvendelse ifølge krav 6, hvor R<1> er valgt blant hydrogen og C|-C6-alkyl.
8. Anvendelse ifølge krav 6, hvor R er Ci-Ce-alkyl.
9. Anvendelse ifølge krav 6, hvor A er en pyrazolring.
10. Anvendelse ifølge krav 6, hvor A er en triazolring.
11. Anvendelse ifølge krav 6, hvor forstyrrelsen som skal behandles er valgt blant hjertehypoksi og cerebral iskemi.
12. Anvendelse av en forbindelse ifølge krav 1 til fremstilling av et preparat for å bestemme nærvær av tumorceller med høy konsentrasjon av adenosin-A3-reseptorer i en pasient, hvor det omfattes å: a) administrere til pasienten en forbindelse, ifølge krav 1, som inneholder en markør som kan påvises etter binding av forbindelsen til tumorceller, b) tillate forbindelsen å bli bundet til tumorcellene; c) påvise markøren.
13. Fremgangsmåte for å bestemme nærvær av tumorceller med høy konsentrasjon av adenosin-A3-reseptorer i en celleprøve, karakterisert ved at den omfatter å: a) preparere en suspensjon av celler i et cellekulturmedium, b) administrere til cellene en forbindelse, ifølge krav 1, som inneholder en markør som kan påvises etter binding av forbindelsen til tumorceller, c) tillate forbindelsen å bli bundet til tumorcellene; d) å påvise markøren.
14. Anvendelse av en forbindelse ifølge krav 1 til fremstilling av et preparat for å bestemme tilstedeværelse av gjenværende tumorceller etter kirurgisk fjerning av en tumor, hvor det omfattes å: a) administrere til pasienten før, etter eller under den kirurgiske fjerning av en tumor, en forbindelse, ifølge krav 1, som inneholder en markør som kan påvises etter binding av forbindelsen til gjenværende tumorceller, b) tillate forbindelsen å bli bundet til de gjenværende tumorceller; c) påvise markøren.
NO20005508A 1998-09-16 2000-11-01 Adenosin-A3-reseptormodulatorer,deres anvendelse for fremstilling av preparater for a bestemme naervaer av tumorceller med hoy konsentrasjon av adenosin-A3-reseptor NO318078B1 (no)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/154,435 US6448253B1 (en) 1998-09-16 1998-09-16 Adenosine A3 receptor modulators
US09/379,300 US6407236B1 (en) 1998-09-16 1999-08-23 Adenosine A3 receptor modulators
PCT/US1999/021103 WO2000015231A1 (en) 1998-09-16 1999-09-15 Adenosine a3 receptor modulators

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO20005508D0 NO20005508D0 (no) 2000-11-01
NO20005508L NO20005508L (no) 2001-03-15
NO318078B1 true NO318078B1 (no) 2005-01-31

Family

ID=22551355

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20005508A NO318078B1 (no) 1998-09-16 2000-11-01 Adenosin-A3-reseptormodulatorer,deres anvendelse for fremstilling av preparater for a bestemme naervaer av tumorceller med hoy konsentrasjon av adenosin-A3-reseptor

Country Status (28)

Country Link
US (2) US6448253B1 (no)
JP (1) JP2002524519A (no)
KR (1) KR100448555B1 (no)
CN (1) CN1154494C (no)
AT (2) AT414240B (no)
AU (1) AU749211B2 (no)
BR (1) BR9913766A (no)
CA (1) CA2332007C (no)
CH (1) CH692132A5 (no)
DE (1) DE19983530T1 (no)
DK (1) DK200100432A (no)
ES (1) ES2204262B1 (no)
FI (1) FI116624B (no)
GB (1) GB2353527B (no)
HK (1) HK1035671A1 (no)
HU (1) HUP0102589A3 (no)
ID (1) ID28100A (no)
IL (1) IL156851A (no)
LU (1) LU90687B1 (no)
NO (1) NO318078B1 (no)
NZ (1) NZ509149A (no)
RO (1) RO121030B1 (no)
RU (1) RU2250904C2 (no)
SE (1) SE522578C2 (no)
TR (1) TR200003461T2 (no)
WO (1) WO2000015231A1 (no)
YU (1) YU83600A (no)
ZA (1) ZA200101626B (no)

Families Citing this family (51)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6921825B2 (en) * 1998-09-16 2005-07-26 King Pharmaceuticuals Research & Development, Inc. Adenosine A3 receptor modulators
IL133680A0 (en) 1999-09-10 2001-04-30 Can Fite Technologies Ltd Pharmaceutical compositions comprising an adenosine receptor agonist or antagonist
EP1364953A4 (en) * 2001-02-05 2004-06-09 Otsuka Pharma Co Ltd TRIAZOLOQUINAZOLINE AND PYRAZOLOTRIAZOLOPYRIMIDINE DERIVATIVES, PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS, AGENTS WITH A ADENOSINE A3 RECEPTOR, AGENTS FOR REDUCING EYE TENSION, PREPARATIONS FOR PREVENTING AND TREATING GLAUCULAR AND METHODS
MXPA04005209A (es) * 2001-11-30 2004-08-19 Schering Corp Antagonistas del receptor de adenosina a2a.
HUP0105407A3 (en) * 2001-12-21 2004-04-28 Sanofi Aventis Triazolo[1,5-a]quinolin derivatives, process for their preparation, pharmaceutical compositions thereof and intermediates
JP2005527635A (ja) * 2002-05-30 2005-09-15 キング・ファーマシューティカルズ・リサーチ・アンド・デベロプメント・インコーポレイティッド 三環ピラゾロトリアゾロピリミジン環構造を有する薬学的に活性な化合物及び使用方法
US20060100168A1 (en) * 2002-09-30 2006-05-11 The Trustee Of Boston University Method of treating cancer using adenosine and its analogs
US20040167212A1 (en) * 2002-10-07 2004-08-26 Bednarski Mark D. X-nitro compounds, pharmaceutical compositions thereof and uses thereof
ATE371191T1 (de) * 2002-10-22 2007-09-15 Can Fite Biopharma Ltd Die verwendung von dem a3 adenosin rezeptor als marker eines krankheitszustandes
HUP0203976A3 (en) * 2002-11-15 2004-08-30 Sanofi Aventis Adenozine a3 receptors, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US8236874B2 (en) * 2003-06-11 2012-08-07 3M Innovative Properties Company Compositions and method for improving the processing of polymer composites
US7402625B2 (en) * 2003-06-11 2008-07-22 3M Innovative Properties Company Compositions and method for improving the processing of polymer composites
EP1678182B1 (en) * 2003-10-28 2007-02-07 Schering Corporation Process for preparing substituted 5-amino-pyrazolo- [4,3-e]-1,2,4-triazolo [1,5-c]pyrimidines
JP2007514758A (ja) * 2003-12-19 2007-06-07 シェーリング　コーポレイション 医薬組成物
WO2005113828A1 (en) * 2004-05-14 2005-12-01 King Pharmaceuticals Research & Development, Inc. Methods of diagnosing and prognosticating solid tumors and melanoma
WO2007040565A2 (en) * 2004-11-22 2007-04-12 King Pharmaceuticals Research & Development, Inc. Enhancing treatment of cancer and hif-1 mediated disoders with adenosine a3 receptor antagonists
CA2585581A1 (en) * 2004-11-22 2006-05-26 King Pharmaceuticals Research & Development Inc. Enhancing treatment of hif-1 mediated disorders with adenosine a3 receptor agonists
US20070135380A1 (en) 2005-08-12 2007-06-14 Radiorx, Inc. O-nitro compounds, pharmaceutical compositions thereof and uses thereof
US7507842B2 (en) * 2005-08-12 2009-03-24 Radiorx, Inc. Cyclic nitro compounds, pharmaceutical compositions thereof and uses thereof
US20090088403A1 (en) * 2007-05-07 2009-04-02 Randy Blakely A3 adenosine receptors as targets for the modulation of central serotonergic signaling
JP2011528363A (ja) * 2008-07-16 2011-11-17 キング・ファーマシューティカルズ・リサーチ・アンド・デベロプメント・インコーポレイティッド アテローム性動脈硬化症の治療
TWI404931B (zh) * 2009-02-20 2013-08-11 Nat Synchrotron Radiation Res Ct 癌化生物樣本之檢測方法及其使用之檢驗試劑
WO2011010306A1 (en) 2009-07-21 2011-01-27 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. A3 adenosine receptor ligands for modulation of pigmentation
CA2991896A1 (en) * 2009-12-01 2011-06-09 Abbvie Inc. Novel tricyclic compounds as protein kinase inhibitors
US8471041B2 (en) * 2010-02-09 2013-06-25 Alliant Techsystems Inc. Methods of synthesizing and isolating N-(bromoacetyl)-3,3-dinitroazetidine and a composition including the same
US8664247B2 (en) 2011-08-26 2014-03-04 Radiorx, Inc. Acyclic organonitro compounds for use in treating cancer
WO2013052164A1 (en) 2011-10-07 2013-04-11 Radiorx, Inc. Organonitro thioether compounds and medical uses thereof
WO2013052803A2 (en) 2011-10-07 2013-04-11 Radiorx, Inc. Methods and compositions comprising a nitrite-reductase promoter for treatment of medical disorders and preservation of blood products
US9227979B2 (en) * 2012-01-25 2016-01-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Fluorescent antagonists of the A3 adenosine receptor
ES2578363B1 (es) 2015-01-22 2017-01-31 Palobiofarma, S.L. Moduladores de los receptores A3 de adenosina
WO2016202935A1 (en) * 2015-06-19 2016-12-22 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Glucose transport inhibitors
US11365198B2 (en) 2015-10-16 2022-06-21 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-N-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US11524964B2 (en) 2015-10-16 2022-12-13 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-n-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US10550126B2 (en) 2015-10-16 2020-02-04 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-A]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-N-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US11512092B2 (en) 2015-10-16 2022-11-29 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-n-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
SG10201913987UA (en) 2015-10-16 2020-03-30 Abbvie Inc PROCESSES FOR THE PREPARATION OF (3S,4R)-3-ETHYL-4-(3H-IMIDAZO[1,2-a]PYRROLO[2,3-e]-PYRAZIN-8-YL)-N-(2,2,2-TRIFLUOROETHYL)PYRROLIDINE-1-CARBOXAMIDE AND SOLID STATE FORMS THEREOF
US11780848B2 (en) 2015-10-16 2023-10-10 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-n-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1- carboxamide and solid state forms thereof
US10342778B1 (en) 2015-10-20 2019-07-09 Epicentrx, Inc. Treatment of brain metastases using organonitro compound combination therapy
US9987270B1 (en) 2015-10-29 2018-06-05 Epicentrix, Inc. Treatment of gliomas using organonitro compound combination therapy
CA3011103A1 (en) 2016-01-11 2017-07-20 Epicentrx, Inc. Compositions and methods for intravenous administration of 2-bromo-1-(3,3-dinitroazetidin-1-yl)ethanone
CN110352190A (zh) 2016-10-14 2019-10-18 埃皮辛特瑞柯斯公司 用于医疗用途的磺氧基烷基有机硝基和相关化合物和药物组合物
ES2676535B1 (es) 2017-01-20 2019-04-29 Palobiofarma Sl Moduladores de los receptores a3 de adenosina
US11564922B2 (en) 2017-03-09 2023-01-31 Abbvie Inc. Methods of treating crohn's disease and ulcerative colitis
WO2018165581A1 (en) 2017-03-09 2018-09-13 Abbvie Inc. Methods of treating crohn's disease and ulcerative colitis
HUE059990T2 (hu) 2017-03-30 2023-01-28 iTeos Belgium SA 2-Oxo-tiazol-származékok A2A inhibitorként és a rákos megbetegedések kezelésében alkalmazható vegyületekként
EP3648740A1 (en) 2017-07-07 2020-05-13 EpicentRx, Inc. Compositions for parenteral administration of therapeutic agents
WO2019164593A2 (en) 2018-01-08 2019-08-29 Epicentrx, Inc. Methods and compositions utilizing rrx-001 combination therapy for radioprotection
CN108864114B (zh) * 2018-06-04 2020-11-06 应世生物科技(南京)有限公司 选择性a2a受体拮抗剂
US11376255B2 (en) 2018-09-11 2022-07-05 iTeos Belgium SA Thiocarbamate derivatives as A2A inhibitors, pharmaceutical composition thereof and combinations with anticancer agents
CN111205291B (zh) * 2018-11-22 2022-08-23 上海科技大学 三唑并环类化合物、其制备方法、中间体和应用
CN111004245B (zh) * 2019-12-11 2022-01-07 徐州医科大学 吡唑-嘧啶并咪唑类化合物、制备方法及其应用

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3625214A (en) 1970-05-18 1971-12-07 Alza Corp Drug-delivery device
US4906474A (en) 1983-03-22 1990-03-06 Massachusetts Institute Of Technology Bioerodible polyanhydrides for controlled drug delivery
US4789734A (en) 1985-08-06 1988-12-06 La Jolla Cancer Research Foundation Vitronectin specific cell receptor derived from mammalian mesenchymal tissue
JP2876058B2 (ja) 1986-08-18 1999-03-31 エミスフィア・テクノロジーズ・インコーポレイテッド 薬物送達システム
WO1988002370A1 (en) * 1986-09-30 1988-04-07 Ciba-Geigy Ag 2-substituted-e-fused-[1,2,4]triazolo[1,5-c]pyrimidines pharmaceutical compositions and uses thereof
IT1264901B1 (it) 1993-06-29 1996-10-17 Schering Plough S P A Analoghi eterociclici di 1,2,4-triazolo(15-c)pirimidine ad attivita' antagonista per il recettore a2 dell'adenosina
US5688774A (en) 1993-07-13 1997-11-18 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services A3 adenosine receptor agonists
DE69428977T2 (de) * 1993-07-27 2002-07-11 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Arzneimittel gegen Parkinsonsche Krankheit
IT1275420B (it) 1995-06-02 1997-08-05 Schering Plough S P A Metodo per misurare l'affinita' di legame al recettore a2a dell'adenosina di componenti di interesse farmacologico mediante l'uso del ligando triziato (3h)-sch 58261
IT1277392B1 (it) 1995-07-28 1997-11-10 Schering Plough S P A Analoghi eterociclici di 1,2,4-triazolo(1,5-c]pirimidine ad attivita' antagonista per il recettore a2a dell'adenosina
ATE548351T1 (de) * 1996-01-29 2012-03-15 Us Of America Represented By The Secretary Dept Of Health And Human Services Dihydropyridin-pyridin-, benzopyranon- und triazolochinazolin-derivate, deren herstellung und verwendung als adenosinrezeptor-antagonisten
US6326390B1 (en) * 1998-08-25 2001-12-04 King Pharmaceuticals Reseach And Development, Inc. Use of adenosine A3 receptor antagonists to inhibit tumor growth

Also Published As

Publication number Publication date
ID28100A (id) 2001-05-03
JP2002524519A (ja) 2002-08-06
WO2000015231A1 (en) 2000-03-23
AT503591A2 (de) 2007-11-15
GB2353527A (en) 2001-02-28
WO2000015231A8 (en) 2000-06-15
ES2204262A1 (es) 2004-04-16
ES2204262B1 (es) 2005-03-01
KR20010089154A (ko) 2001-09-29
GB0027879D0 (en) 2000-12-27
NO20005508L (no) 2001-03-15
RU2250904C2 (ru) 2005-04-27
WO2000015231A9 (en) 2000-08-17
TR200003461T2 (tr) 2001-06-21
HK1035671A1 (en) 2001-12-07
BR9913766A (pt) 2001-06-05
US6448253B1 (en) 2002-09-10
SE0003984D0 (sv) 2000-11-01
CH692132A5 (de) 2002-02-28
HUP0102589A2 (hu) 2001-11-28
IL156851A (en) 2006-08-20
US6407236B1 (en) 2002-06-18
FI116624B (fi) 2006-01-13
ATA904399A (de) 2006-01-15
DE19983530T1 (de) 2001-11-08
AU749211B2 (en) 2002-06-20
LU90687B1 (en) 2000-12-19
CN1303289A (zh) 2001-07-11
CA2332007C (en) 2007-08-07
HUP0102589A3 (en) 2002-01-28
ZA200101626B (en) 2001-12-13
DK200100432A (da) 2001-03-14
CN1154494C (zh) 2004-06-23
SE0003984L (sv) 2000-12-22
CA2332007A1 (en) 2000-03-23
SE522578C2 (sv) 2004-02-17
AU6248299A (en) 2000-04-03
YU83600A (sh) 2003-12-31
NO20005508D0 (no) 2000-11-01
FI20002367A (fi) 2001-01-19
KR100448555B1 (ko) 2004-09-13
NZ509149A (en) 2003-08-29
AT414240B (de) 2006-10-15
GB2353527B (en) 2004-02-25
RO121030B1 (ro) 2006-11-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO318078B1 (no) Adenosin-A3-reseptormodulatorer,deres anvendelse for fremstilling av preparater for a bestemme naervaer av tumorceller med hoy konsentrasjon av adenosin-A3-reseptor
US7271171B2 (en) Adenosine A3 receptor modulators
JP5894148B2 (ja) 有機化合物
Gatta et al. Synthesis of imidazo [1, 2-c] pyrazolo [4, 3-e] pyrimidines, pyrazolo [4, 3-e] 1, 2, 4-triazolo [1, 5-c] pyrimidines and 1, 2, 4-triazolo [5, 1-i] purines: new potent adenosine A2 receptor antagonists
JP2023509260A (ja) Ｃｄｋ２阻害剤としてのイミダゾリルピリミジニルアミン化合物
KR20090042227A (ko) 유기 화합물
Weyler et al. Improving potency, selectivity, and water solubility of adenosine A1 receptor antagonists: xanthines modified at position 3 and related pyrimido [1, 2, 3‐cd] purinediones
KR20120068941A (ko) Ａｋｔ 억제제
Kirrane et al. Indole RSK inhibitors. Part 2: optimization of cell potency and kinase selectivity
MXPA00012385A (en) Adenosine a3
KR20050015956A (ko) 아데노신 에이3 수용체 조절제
CZ20004240A3 (cs) Modulátory adenosinového receptorů A3
TW202342465A (zh) 作為trpa1抑制劑之n3經取代脲嘧啶化合物
CN114835688A (zh) 一种取代的4-芳基咪唑-2-酮衍生物及其制备方法和医药用途