NO316762B1 - Fremgangsmate for industriell fremstilling av et preparat som inneholder rekonstituerte lipoproteinpartikler med hoy tetthet (rHDL) fra apolipoprotein A-I og fosfatidylcholin - Google Patents
Fremgangsmate for industriell fremstilling av et preparat som inneholder rekonstituerte lipoproteinpartikler med hoy tetthet (rHDL) fra apolipoprotein A-I og fosfatidylcholin Download PDFInfo
- Publication number
- NO316762B1 NO316762B1 NO19945101A NO945101A NO316762B1 NO 316762 B1 NO316762 B1 NO 316762B1 NO 19945101 A NO19945101 A NO 19945101A NO 945101 A NO945101 A NO 945101A NO 316762 B1 NO316762 B1 NO 316762B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- apolipoprotein
- detergent
- phosphatidylcholine
- solution
- lipid
- Prior art date
Links
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 108010059886 Apolipoprotein A-I Proteins 0.000 title claims description 63
- 102000005666 Apolipoprotein A-I Human genes 0.000 title claims description 63
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 51
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 35
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 title claims description 35
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 title claims description 19
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 title claims description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 51
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 47
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 47
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 36
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 33
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 28
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 43
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 28
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 16
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical group [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 claims description 15
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 14
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 14
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 14
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 13
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 12
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims description 9
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 9
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 9
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 claims description 7
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 claims description 6
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 6
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 4
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 claims description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 3
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 claims description 2
- 150000001840 cholesterol esters Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 2
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 claims description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims 1
- 229940042880 natural phospholipid Drugs 0.000 claims 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims 1
- 239000008348 synthetic phosphatidyl choline Substances 0.000 claims 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 abstract 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 32
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 10
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229940099352 cholate Drugs 0.000 description 8
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 8
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 3
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000054727 Serum Amyloid A Human genes 0.000 description 2
- 108700028909 Serum Amyloid A Proteins 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 108010062497 VLDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 2
- 230000005796 circulatory shock Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 2
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 101150037123 APOE gene Proteins 0.000 description 1
- 102000011767 Acute-Phase Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010062271 Acute-Phase Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 108010004103 Chylomicrons Proteins 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 101100216294 Danio rerio apoeb gene Proteins 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011993 High Performance Size Exclusion Chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010028554 LDL Cholesterol Proteins 0.000 description 1
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 1
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O NAD(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010080283 Pre-beta High-Density Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000012436 analytical size exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 102000034238 globular proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005896 globular proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012263 liquid product Substances 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical class N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
- C07K1/08—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using activating agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/775—Apolipopeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1275—Lipoproteins; Chylomicrons; Artificial HDL, LDL, VLDL, protein-free species thereof; Precursors thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Heating, Cooling, Or Curing Plastics Or The Like In General (AREA)
Abstract
Rekonstituerte lipoproteiner med høy tetthet (rHDL) fremstilles fra apolipoprotein og lipider ved at en vandig apolipoproteinløsning med en konsentrasjon på 1-40 g protein/l blandes med en vandig lipid-detergentløsning som kan være fri for organiske løsningsmidler,. hvorved det molare forhold mellom lipid og detergent er 1:0,5-1:4 og vektforholdet mellom apolipoprotein og lipid er 1:1,5-1:5, den erholdte apolipoprotein-lipid-detergentblanding inkuberes deretter ved en temperatur i området faseomdannelsestemperaturen + 10 ° C for lipider i vann, og detergenten atskilles i det minste delvis. rHDL er nyttig for forskjellige profylaktiske og terapeutiske behandlinger av sykdommer som har sammenheng med lipider og lipidlignende stoffer. Fremgangsmåten er spesielt egnet for teknisk og industriell fremstilling.
Description
Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for industriell fremstilling av et preparat som inneholder rekonstituerte lipoproteinpartikler med høy tetthet (rHDL) fra apolipoprotein A-I og fosfatidylcholin.
rHDL har egenskapene ved at de binder og transporterer lipider og lipidlignende stoffer i organismen og kan påvirke deres aktiviteter. rHDL er således nyttige ved. forskjellige profylaktiske og terapeutiske behandlinger av sykdommer som har sammenheng med lipider og lipidlignende stoffer.
Lipoproteinene i menneskeblod kan utøve en rekke forskjellige funksjoner. En godt undersøkt og kjent funksjon av lipoproteiner er transport av lipider. Lipoproteiner har evne til å oppta vannuoppløselige lipider, transportere dem i et vandig miljø og bringe dem til deres målområde. I lengre tid er de enkelte klasser av lipoproteiner nærmere undersøkt i sammenheng med forstyrrelser av lipidstoffskiftet. I de fleste vestlige land kan det ved hjelp av epidemiologiske studier påvises en positiv korrelasjon mellom hjerte-karsykdommer og høyt plasmakolesterol eller høyt LDL-kolesterol (Low Density Lipoprotein-kolesterol), og en negativ korrelasjon med høyt HDL eller høyt HDL-kolesterol. Selv om den foreligger en hel rekke medikamenter på markedet som oppviser en lipidreduseren-de virkning, er det tenkelig at det i visse situasjoner er tilrådelig med en substitusjon av egnede lipoproteiner. I slike tilfeller kommer først og fremst de "gode" lipoproteiner som HDL på tale, eller HDL-lignende partikler, slik som rekonstituert HDL (rHDL) fra isolerte apolipoproteiner og egnede lipider.
Blant lipidene som tilføres gjennom kosten kan også lipider eller lipidlignende stoffer transporteres eller bindes av lipoproteinene. Bestanddeler av døde celler kan f.eks. bindes til lipoproteiner og tilføres en ny funksjon. Imidlertid kan også lipidlignende stoffer bindes til lipoproteiner, som f.eks. lipopolysakkarid (LPS). Lipopolysakkarider eller endotoksiner er bestanddeler av gram-negative bakterie-membraner. Dersom tilstrekkelig store mengder av endotoksin kommer inn i kretsløpet kan dette føre til septisk sjokk eller sågar død. Som følge av bindingen av LPS til lipoproteiner kan funksjonen eller aktiviteten av LPS moduleres. Aktiviteten av LPS kan betydelig påvirkes in vivo og in vi tro ved tilsetning av lipoproteiner eller lipoproteinlignende partikler. Det kan således vises at tilsetning av rekonstituert HDL in vivo kan hemme dannelsen av tumornekrosefaktor (TNF), en viktig formid-ler av sepsis. Ved tilsetning av HDL eller rHDL in vivo kan derfor symptomene for sjokk reduseres betydelig.
Blant vekselvirkninger mellom lipoproteiner eller rekonstituerte lipoproteiner og lipider eller lipidlignende stoffer beskrives også vekselvirkninger av lipoproteiner med proteiner: - Lipoproteiner kan inngå i vekselvirkninger med enkelte komponenter av komplementsystemet og dermed påvirke deres aktivitet; - det er likeledes kjent komponenter av koagulasjons-systemet som kan finnes i lipoproteinfraksjonen, dvs. assosiert med bestemte lipoproteiner; - akuttfaseproteiner som serumamyloid A (SAA) er funnet i HDL-fraksjonen; - adsorpsjonen av visse proteiner på overflatene kan dessuten påvirkes gjennom forbehandling med lipoproteiner.
Lipoproteiner kan imidlertid også ved spesifikk eller uspesifikk binding til celler påvirke deres aktivitet: - Aktiviterbarheten av blodplater kan reduseres gjennom binding av HDL eller stimuleres gjennom tilsetning av LDL; - monocytter og makrofager har likeledes reseptorer for lipoproteiner; binding eller opptak av lipoproteiner kan føre til endringer av aktiviteten av disse celler; - aktiviteten av ytterligere celler i immunsystemet, slik som neutrofiler, kan likeledes modifiseres eller moduleres gjennom binding av lipoproteiner; - celleveksten av tumorceller, f.eks. glyoblastoma-celler, kan dessuten også påvirkes gjennom lipoproteiner.
I litteraturen finnes ytterligere rapporter som beskriver vekselvirkninger mellom lipoproteiner og patogener, f.eks. tilskrives lipoproteiner en antimikrobiell aktivitet. Det er vist at virus kan inaktiveres ved hjelp av lipoproteiner, eller parasitter, f.eks. trypanosomer, kan påvirkes, henholdsvis hemmes.
Disse eksempler viser mangfoldige muligheter for anvendelse av lipoproteiner eller rHDL til profylaktisk og tera-peutisk anvendelse.
Lipoproteinene deles i fire hovedklasser: Chylo-mikronene, hvilke er partikler som hovedsakelig består av triglyserider og vanligvis kun opptrer i plasma i større mengder etter fettholdige måltider: VLDL, Very Low Density Lipoproteins: LDL, Low Density Lipoproteins: og HDL, High Density Lipoproteins. Nomenklaturen er avledet fra isoleringen av lipoproteinene ved hjelp av ultrasentrifugering. Med denne metode isoleres lipoproteinene på klassisk måte og vis i en tetthetsgradient. Denne metode er kun anvendelig i laboratoriemålestokk fordi den tidsmessig og apparaturmessig er meget krevende. I beste fall kan det med denne metode ut-vinnes noen hundre mg lipoproteiner eller apolipoproteiner i løpet av noen dager. Andre metoder for isolering av apolipoproteiner eller lipoproteiner er likeledes kjent i lengre tid; de baserer seg ofte på utfelling av divalente kationer og/eller f.eks. polyetylenglykol eller dekstran. En ytterligere mulighet for å isolere apolipoproteiner er felling ved hjelp av alkoholfraksjonering, f.eks. som beskrevet i patent nr. EP 0 32 9 605 Bl. Ved hjelp av denne siste fremgangsmåte er det mulig å isolere og stille til rådighet for terapeutiske anvendelser større mengder av apolipoprotein A-I (apoA-I) eller fraksjoner som er anriket med apoA-I. Med således isolert apoA-I eller proteinfraksjoner anriket med apoA-I er det gjennomført en rekke forsøk, både på dyr og mennesker. Ved hjelp av disse forsøk kan på den ene side sikkerheten av disse produkter vises med hensyn til virus, men også at apoA-I i den anvendte form ikke fører til noen betydelige bivirkninger for mennesker eller dyr. Med forsøk in vi tro kan det selvsagt ikke finnes noen av de ønskede aktiviteter som f.eks. kolesterol-transport eller virkning av apoA-I på celler som nøytrofiler, makrofager, monocytter eller blodplater. Ved forsøk in vivo ble det hos dyr mennesker observert meget korte halverings-tider for apoA-I i plasma. På grunn av molekylvekten av fritt apoA-I (28 000 dalton) er det mulig at apoA-I utskilles gjennom nyrene. I urinen fra kaniner kunne faktisk apoA-I påvises. Disse resultater betyr at således tilført apoA-I ikke fordeles i den ønskede lipoproteinfraksjon i større mengder. På grunn av dets korte halveringstid in vivo kan apoA-I dessuten kun utøve sin virkning i en meget kort tid. En egnet administrer-ingsform er derfor å innføre apoA-I i et lipoprotein eller en lipoproteinlignende partikkel.
Metoder for fremstilling av rekonstituerte lipoproteiner er beskrevet i litteraturen, spesielt for apolipoproteiner A-I, A-II, A-IV, apoC og apoE (A. Jonas, Methods in Enzymology 128, 553-582 (1986)). Det vanligste lipidet som anvendes for rekonstitusjon er fosfatidylcholin, ekstrahert enten fra egg eller soyabønner, andre fosfolipider kan også anvendes og likeledes lipider som triglyserider eller kolesterol. For rekonstitusjon oppløses lipidene først i et organisk løsningsmiddel som deretter avdampes under nitrogen. Ved denne fremgangsmåte blir lipidet festet til en glassvegg i form av en tynn film. Deretter tilsettes og blandes apolipo-proteinet og en detergent, vanligvis natriumcholat. Det til-satte natriumcholat bevirker en dispersjon av lipidet. Etter en egnet inkubasjonstid dialyseres blandingen mot store mengder buffer under et lengre tidsrom; ved dette fjernes på den ene side mesteparten av natriumcholatet og samtidig blir lipider og apolipoproteiner spontant sammensatt til lipoproteiner eller såkalte rekonstituerte lipoproteiner. Som alternativer til dialyse står hydrofobe adsorpsjonsmidler til rådighet som spesifikt kan adsorbere detergenter (Bio-Beads SM-2, Bio Rad; Amberlite XAD-2, Rohm & Haas) (E.A. Bonomo, J.B. Swaney, J. Lipid Res. 29, 380-384 (1988)), eller atskil-lelse av detergenten ved hjelp av gelkromatografi. Lipoproteiner kan også fremstilles uten detergenter, f.eks. ved inkubasjon av en vandig suspensjon av et egnet lipid med apolipoproteiner, tilsetning av lipid oppløst i et organisk løs-ningsmiddel til apolipoproteinene, med eller uten ytterligere oppvarming av blandingen, eller ved behandling av en apoA-I-lipidblanding med ultralyd. Med disse metoder kan det med ut-gangspunkt i f.eks. apoA-I og fosfatidylcholin erholdes skiveformede partikler som tilsvarer nascerende lipoproteiner. I tilslutning til inkubasjonen atskilles vanligvis ubundet apo-lioprotein og fritt lipid ved hjelp av sentrifugering eller gelkromatografi, for å isolere de homogene, rekonstituerte lipoproteinpartikler.
US-A-5 128 318 beskriver en fremgangsmåte for fremstilling av rekonstituert HDL, hvori fosfatidylcholin bringes i løsning ved hjelp av et organisk løsningsmiddel.
De ovenfor beskrevne metoder for fremstilling av rekonstituert lipoproteiner er kun egnede for fremstilling av mindre mengder fra noen milligram til høyst noen gram i laboratorieskala: - Høye fortynninger av løsningene til mellomprodukter umuliggjør bearbeidelsen av blandingen innen det nødvendige tidsrom; - infrastrukturen for de store volumer er vanligvis ikke eksisterende; - de anvendte organiske løsningsmidler er kun be-tinget miljøforenlige; - sluttproduktet er ikke lagringsdyktig; - konsentrasjonen av sluttproduktet er for liten, volumene som skal innføres i pasienten er for store; - produktet må vanligvis renses ytterligere, f.eks.
ved hjelp av gelkromatografi, for å atskille ubundet lipid eller ubundet protein fra rHDL-partiklene.
A. Hubsch et al., Circulatory Shock 40, 14-23 (1993) beskriver videre en fremgangsmåte for fremstilling av rekonstituerte lipoproteiner, hvori det anvendes et forhold mellom apolipoprotein og lipid på 1:200. Dette resulterer i at det erholdte produkt oppviser en betraktelig andel av fritt lipid, hvilket har ugunstig innflytelse på den terapeutiske anvendelighet av produktet.
For den terapeutiske eller profylaktiske anvendelse av rHDL på mennesker er det nødvendig med mengder rHDL pr. dose i størrelsesordenen gram for å oppnå signifikante økninger av apoA-I- eller HDL-speil i plasma. En industriell produksjon av rHDL for kliniske anvendelser i kilomålestokk . eller enda høyere målestokk er ikke mulig med de ovenfor beskrevne metoder.
Oppgaven for foreliggende oppfinnelse er således å tilveiebringe en fremgangsmåte for fremstilling av rHDL som ikke har de ovenfor anførte utilstrekkeligheter og hvor produktet spesielt ikke inneholder noen store andeler av fritt lipid eller fritt apoA-I. Et mål for foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe en fremgangsmåte som kan gjennomføres uten tilsetning av organiske løsningsmidler. Det er funnet at rekonstituerte lipoproteiner, spesielt rekonstituert HDL (rHDL), kan fremstilles fra apolipoproteiner og lipider ved hjelp av enkle, raske og industrielt anvendelige fremgangsmåter.
Foreliggende oppfinnelse angår således en fremgangsmåte for industriell fremstilling av et preparat som inneholder rekonstituerte lipoproteinpartikler med høy tetthet (rHDL) fra apolipoprotein A-I og fosfatidylcholin, kjennetegnet ved at en apolipoprotein-A-I-fosfatidylcholin-detergentblanding fremstilles ved blanding (a) av en vandig apolipoprotein-A-I-løsning med en konsentrasjon på 1-40 g protein/l med (b) en vandig fosfatidylcholin-detergentløsning, uten anvendelse av organiske løsningsmidler, hvorved det molare forhold mellom fosfatidylcholin og detergent er i området fra 1:0,5 til 1:4,0 og vektforholdet mellom apolipoprotein-A-I og fosfatidylcholin er i området fra 1:1,5 til til 1:5,0, den erholdte apolipoprotein A-I-fosfatidyl-cholindetergentblanding inkuberes deretter ved en temperatur som er i området for faseomdannelsestemperaturen ± 10 °C for fosfatidylcholin i vann, detergenten atskilles gjennom utelukkelse etter størrelse eller adsorpsjon til et adsorbsjonsmiddel til det punkt der apolipoprotein-A-I-fosfatidylcholinpartikler dannes med en diameter fra 5-50 nm og en masse fra 50 000 til 1 000 000 Dalton, uten ytterligere rensingstrinn erholdes et preparat som inneholder de rekonstituerte lipoproteinpartikler med høy tetthet (rHDL) fra apolipoprotein-A-I og fosfatidylcholin, hvorved mer enn 95 % av apolipoprotein-A-I er anvendt og også mer enn 90 % eller den totale fosfatidylcholin er bundet og hvorved et proteininnhold på 20 ± 2 g/l og en temperatur på 20 °C + 2 °C oppviser en turbiditet lavere enn 40 NTU.
Foreliggende oppfinnelse angår også en fremgangsmåte for industriell fremstilling av et stabilt lyofilisat som angitt ovenfor der det erholdte produkt stabiliseres ved lyofilisering i nærvær av en stabilisator utgått fra gruppen karbohydrater, f.eks. sakkarose eller mannitol.
De anvendte apolipoproteiner er f,eks. rekombinante apolipoproteiner, apolipoproteiner fra en" anriket fraksjon av apolipoprotein A-I fra humant plasma, fragmenter av apolipoproteiner eller naturlige, syntetiske eller rekombinante polypeptider med amfipatiske egenskaper. Fragmentene av apolipoproteiner kan erholdes gjennom kjemisk eller enzymatisk fragmentering av naturlige eller syntetiske apolipoproteiner. Som eksempel på en kjemisk fragmentering kan nevnes behandling med cyanogenbromid. Som eksempel på enzymatisk spaltning kan an-føres behandling med trypsin eller chymotrypsin.
Den anvendte lipid-detergentløsning ifølge foreliggende oppfinnelse inneholder som lipid som f.eks. fosfolipid som kan stamme fra soyabønner eller egg, kolesterol, kolesterolester, fettsyrer eller triglyserider. Detergentene er fortrinnsvis gallesyrer eller salter derav, f.eks. cholsyre-natriumsalt eller natriumdeoksycholsyre. For oppløsning av lipidene fordres derved ingen organiske løsningsmidler.
Den anvendte temperaturverdi i foreliggende beskrivelse på 20 ± 2 °C omfatter alle verdier som ligger i området 18 til 22 °C. Proteininnholdet på 20 ± 2 g/l omfatter alle konsentrasjoner i området fra 18 g/l til 22 g/l. Angivelsen "faseomdannelsestemperatur ± 10 °C" omfatter alle temperatur-verdier som ligger i området fra 10 °C lavere enn faseomdannelsestemperaturen for det tilsvarende lipid i vandig miljø til 10 °C høyere enn denne stoffspesifikke verdi. Disse verdier ligger mellom -5 °C og 50 °C.
Foretrukne utgangsmaterialer er lipoproteiner som stammer fra humant plasma som er virusinaktivert ved hjelp av egnede metoder, som f.eks. pasteurisering. De dannede denaturerte proteiner (aggregater) ved hjelp av denne fremgangsmåte renatureres deretter gjennom en inkubasjon ved svakt alkalisk pH og svakt forhøyet temperatur i nærvær av en chaotrop komponent som f.eks. urea eller guanidin-hydroklorid, slik at etter ombufring av proteinene i 10 mM NaCl foreligger
> 70 % av apoA-I i monomer form (bestemmelse ved hjelp av analytisk størrelseseksklusjonskromatografi: 40 ug apoA-I appliseres på en TSK G3000SW Ultropac søyle (LKB), i 10 mM natriumfosfat, 0,02 % natriumazid, pH 7,4, med en gjennom-strømningshastighet på 0,4 ml/minutt; måling av eluatet ved 280 nm).
I ytterligere fremgangsmåter blandes lipoproteiner i høy konsentrasjon med en løsning av lipider (fosfolipider som fosfatidylcholin, kolesterol, triglyserid etc.) i en løsning av gallesyrer eller deres salter (f.eks. cholat, deoksycholat, urosodeoksycholat), hvorved tilsetning av organiske løsnings-midler kan utelates. I motsetning til arbeider beskrevet av Hubsch et al. (Circulatory Shock 40, 14-23 (1993)), velges forholdet mellom apolipoprotein og lipid slik at sluttproduktet verken inneholder større mengder av fritt lipid eller fritt apolipoprotein, slik at en ytterligere rensing av rHDL kan utelates. Spesielt reduseres forholdet apoA-I:PC som ligger vesentlig under 1:200 (M:M; vektforhold ca. 1:5,5), nemlig til et forhold i området 1:50 til 1:180, og fortrinnsvis 1:100 til 1:150 (molforhold; tilsvarer et vektforhold på 1:2,8 til 1:4,2 for apoA-I og PC fra soya). Dette, kombinert med en diafiltreringsmetode, fører til et produkt med et mindre innhold av frie lipider (kvantifisert ved hjelp av stør-relseseksklusjonskromatografi; gelfiltrering ved hjelp av superose 6; se nedenfor), og samtidig en betydelig lavere konsentrasjon av gallesyrer i sluttproduktet; høye gallesyrekonsen-trasjoner og høyt innhold fritt PC kan begge føre til beska-digelse av celler in vitro og in vivo og må derfor nøye kont-rolleres. Cholatkonsentrasjonen bli på den ene side optimali-sert med hensyn til forholdet apoA-I:PC og hvis nødvendig samtidig avstemt med hensyn til ytterligere lipidtilsetninger, spesielt kolesterol. Også her bestemmes den optimale konsentrasjon gjennom en så liten andel av frie lipider og fritt apoA-I i sluttproduktet som mulig; for et rHDL-preparat med et apoA-I:PC forhold på 1:150 foreligger et molart forhold av Na-Cholat på 1:200 (dvs. apoA-I:PC:Na-cholat = 1:150:200 (M:M:M), under den etterfølgende beskrevne inkubasjon). Etter en inkubasjon i 4-16 timer ved 0-2 °C (for PC fra soya) reduseres konsentrasjonen av gallesyrer ved hjelp av diafiltrering med en ultrafiltreringsmembran med porestørrelser for globulære proteiner mellom 1000 og 100 000 dalton, fortrinnsvis under 30 000 dalton. Den nødvendige buffer oppviser en lav ionestyrke på under 100 mmol/1, fortrinnsvis under 10 mmol/1, ved en pH høyere enn 6, fortrinnsvis 7,5-9, og et sukkerinnhold på f.eks. 1 % sakkarose; under disse betingelser er 1 til maksimalt 2 liter buffer pr. gram til tilsatt protein tilstrekkelig for på den ene side å oppnå den endelige lave detergentkonsentrasjon og på den annen side den ønskede partikkelstørrelsesfordeling; disse buffervolumer er mange ganger lavere (10-200 x) enn i tidligere beskrevne metoder. Hvis nødvendig innstilles detergentkonsentrasjonen til en ønsket konsentrasjon ved hjelp av et ytterligere adsorpsjons-trinn med amberlite. Ved hjelp av den ovennevnte diafiltrer-ingsteknologi justeres produktet til en høy konsentrasjon på 10-50 g protein/l og bearbeides deretter i nærvær av en stabilisator som sakkarose til et stabilt, lagringsdyktig sluttprodukt (flytende eller lyofilisert). Lyofilisatet løses før anvendelse i vann, hvorved det erholdes en klar eller eventuelt opaliserende løsning som, alt etter lipidinnholdet, har en svakt gulaktig farge. I denne løsning kan de observerte rHDL-partikler etter fremstilling (skiver, plater) påvises i praktisk talt uendret form; ved hjelp av størrelseseksklu-sjonskromatografi påvises en andel av aggregater på mindre enn 10 % (for det meste fritt lipid) og en andel av fritt apolipoprotein på mindre enn 5 %. Den bestemte turbiditet i det flytende sluttprodukt, før eller etter lyofilisering, ligger ved en proteinkonsentrasjon på 20 g/l under 40 NTU (Nepthelometric Turbidity Unit), cholatinnholdet bestemt med en enzymatisk fargetest er mindre enn 0,5 g cholsyre-natriumsalt/g protein (gallesyrebestemmelsen utføres gjennom dannelsen av NADH i nærvær av NAD+ med hjelp av 3-a-hydroksysteroiddehydrogenase; det dannede NADH reagerer med nitratetrazoliumblått under den katalytiske virkning av diaforase til et blått formazanderivat som bestemmes fotometrisk).
Det lyofiliserte rHDL foreligger ved betraktning i elektronmikroskop etter oppløsning i et egnet volum løsnings-middel, fortrinnsvis vann, som skiveformede partikler analoge med nascerende HDL, med en diameter på 5-50 nm, vanligvis 8-20 nm, og en tykkelse på 2-6 nm. Med analysemetoder for bestemmelse av partikkelstørrelser og deres relative fordeling, f.eks. ved gelfiltrering (størrelseseksklusjonskromatografi) i en fysiologisk buffer med en "Superose" 6 HR 10/30 søyle (Pharmacia Biotech), ligger mer enn 80 % av partiklene i molekylvektområdet fra 100 000 til 1 000 000 dalton. For mer enn 80 % av partiklene foreligger likeledes, på grunnlag av en gradientelektroforese, en molekylvektfordeling i området fra 50 000 til 1 000 000 dalton (metode etter A.V. Nichols et al., Methods in Enzymology 128, 417-431 (1986)).
Figuren tjener til bedre forståelse av foreliggende oppfinnelse og som understøttelse av de ovenfor beskrevne ut-førelsesformer; den viser et elueringsdiagram (absorpsjon-elu-eringstid) for gelfiltrering av rHDL-partikler fremstilt ved anvendelse av forskjellige forhold mellom apoA-I og fosfatidylcholin (forhold apolipoprotein:lipid). [Høyytelses-størrelseseksklusjonskromatografi av apoA-I- og rHDL-partikler; separasjon av 200 ug rHDL i 100 ul 0,9 % NaCl på en "Superose" 6HR 10/30 søyle (Pharmacia Biotech) i PBS (10 mM natriumfosfat, 150 mM NaCl, pH 7,4) med en gjennomstrømnings-hastighet på 0,5 ml/minutt]. Absorpsjonen av søyleeluatet ble målt ved 280 nm (L.L. Rudel, CA. Marzetta og F.L. Johnson, Methods in Enzymology 129, 45-57 (1986)); for bestemmelse av innholdet av enkelte fraksjoner i kromatogrammet beregnes flatene under kurven. Ved en elueringskurver for 1:200-produktet fremgår det at frie lipider utvaskes i begynnelsen av elueringen, mens dette ikke er tilfelle for 1:100- og 1:150-produktene. Kurven for det rene apolipoprotein (apoA-I) er likeledes angitt som sammenligning.
De etterfølgende eksempler gir en nærmere beskrivelse av foreliggende oppfinnelse uten at de skal forstås som begrensende for oppfinnelsens definisjon.
Eksempel 1
1 kg apoA-I ble oppløst i 500 1 0,15 mol/l NaCl. Lipidløsningen ble separat fremstilt på følgende måte: fosfatidylcholin fra soyabønneolje ("Phospholipon 90", Nattermann, Koln) ble oppløst i en buffer bestående av 10 mmol/1 tris/HCl, 150 mmol/1 NaCl, 1 mmol/1 EDTA, pH 8,2. 2,8 kg fosfatidylcholin og 2,325 kg cholsyre-natriumsalt ble oppløst i denne buffer til et volum på 100 1. Blandingen ble omrørt i 1-2 timer og, om nødvendig, oppvarmet til ca. 40 °C inntil løs-ningen var klar. Løsningen ble deretter avkjølt til 4 °C og 100 1 av denne lipid-cholatløsning ble blandet med 1 kg apoA-I 1 500 1. Blandingen ble langsomt omrørt over natten ved 2-4 °C. Etter denne inkubasjon ble blandingen sterilfiltrert og diafiltrert ved 4 °C med en Pellicon med PTGC-kassetter, nominell molekylvektgrense (NMWL) = 10 000 dalton; først med 4 volumer 5 mmol/1 natriumhydrogenkarbonat og deretter 2 volumer 10 % sakkarose, hvorved produktvolurnene ble holdt konstant. Konsentrasjonen ble deretter langsomt økt til det ble nådd en proteinkonsentrasjon på 2 0 g/l. Denne løsning ble på nytt sterilfiltrert, fylt på flasker og deretter lyofilisert. Under hele prosessen ble det passet på at spesielt lipidløsningen var beskyttet mot luft, lys og alt for høye temperaturer. Sluttproduktet oppløst i den egnede mengde vann som ga en proteinkonsentrasjon på 20 ± 2 g/l oppviste et molart forhold mellom apoA-I og fosfatidylcholin. På 1:100 (mol:mol), med mindre enn 5 % fritt lipid, uten målbare mengder av fritt protein og med en turbiditet lavere enn 40 NTU.
Eksempel 2
10 kg apoA-I ble blandet i 2000 1 10 mmol/1 NaCl. 1,38 kg kolesterol og 29,9 kg cholsyre-natriumsalt ble omrørt i 200 1 av en buffer inneholdende 10 mmol/1 tris-HCl,
150 mmol/1 koksalt, 1 mmol/1 EDTA, pH 8,0. Temperaturen ble økt til 65 °C og blandingen ble omrørt i 2 timer inntil løs-ningen var klar. Deretter ble løsningen avkjølt til 20 °C og
27,9 kg fosfatidylcholin ble tilsatt. Løsningen ble avkjølt til 4 °C og omrørt i 2 timer. Denne blanding ble tilsatt til proteinløsningen, blandet og deretter sterilfiltrert. Filtratet ble langsomt omrørt over natten (minst 16 timer) ved 4 °C. Deretter fulgte en diafiltrering med 4 volumer 50 mmol/1 NaCl, 1 mmol/1 EDTA, pH 7,5, i 2-4 timer. Blandingen ble deretter videre diafiltrert med ytterligere to volumer 10 % sakkarose. Denne løsning ble deretter konsentrert til en proteinkonsentrasjon på 20 g/l, sterilfiltrert, fylt på glass-flasker og lyofilisert. Flaskene ble lukket under vakuum og oppbevart i mørke ved 4 °C. Med denne fremgangsmåte ble det erholdt rHDL i et molart forhold mellom apoA-I, fosfatidylcholin og kolesterol på 1:100:10.
Eksempel 3
Fremstilling av rHDL med et forhold mellom apoA-I og fosfatidylcholin på 1:150. 3,08 kg natriumcholat ble oppløst i 25 1 av en buffer, 10 mmol/1 tris HCl, 10 mmol/1 NaCl, 1 mmol/1 EDTA, pH 8,0. 4,2 kg fosfatidylcholin ble deretter oppløst i denne blanding i løpet av 2 timer ved romtemperatur. 1 kg apoA-I i 200 1 10 mmol/1 NaCl ble deretter tilsatt og blandingen ble inkubert over natten ved 0-4 °C. Produktet ble deretter diafiltrert ved konstant volum mot 4 volumer 50 mmol/1 NaCl, 1 mmol/1 EDTA, pH 7,5, i løpet av 4 timer. Blandingen ble deretter diafiltrert mot 2 volumer 1 % sakkarose. Til slutt ble blandingen konsentrert til 20 g/l protein. Sakkarosekonsentrasjonen ble økt til 10 % ved tilsetning av fast sakkarose. Løsningen ble sterilfiltrert og lyofilisert.
Eksempel 4
Fremstilling av rHDL med et forhold mellom apoA-I, fosfatidylcholin og kolesterol på 1:100:10. 4,61 kg natriumcholat ble oppløst i 25 1 av en buffer inneholdende 10 mmol/1 tris-HCl, 10 mmol/1 NaCl, 1 mmol/1 EDTA, pH 8,0. 138 g kolesterol ble oppløst i denne buffer-cholatblanding ved 65 °C i løpet av 2 timer. Deretter ble blandingen avkjølt til romtemperatur og 2,8 kg fosfatidylcholin ble oppløst i blandingen i løpet av én time. 1 kg apoA-I i 2 00 1 10 mmol/1 NaCl ble tilsatt. Blandingen ble inkubert som angitt i eksempel 3 og likeledes diafiltrert og konsentrert som angitt ovenfor.
Eksempel 5
Apo-A-I:PC:kolesterol, 1:150:10. 5,38 kg natriumcholat ble oppløst i buffer som angitt i eksempel 3 og 4. 180 g kolesterol ble oppløst i blandingen ved 65 °C i løpet av 2 timer. Deretter ble 4,2 kg PC tilsatt og oppløst i én time ved romtemperatur. Blandingen ble tilsatt til 200 1 apoA-I-løsning, 5 g pr. liter i 10 mmol/1 NaCl, og inkubert over natten ved 4 °C. Diafiltrering og fremstilling av sluttproduktet ble utført som beskrevet ovenfor.
Eksempel 6
Fremstilling av rHDL med lavt natriumcholatinnhold. rHDL ble fremstilt som angitt i eksempler 1-5. Etter diafiltrering og konsentrering ble ett volum rHDL-løsning blandet med Amberlite XAD-2 (2 volumer) og denne blanding ble inkubert i én time ved 4 °C under forsiktig omrøring. Etter inkubasjonen ble rHDL avfiltrert, sterilfiltrert og lyofilisert som beskrevet i eksempler 1-5.
Eksempel 7
400 g apoA-I i 80 ml 10 mmol/1 NaCl ble blandet med en lipidløsning bestående av 1,66 kg fosfatidylcholin, 1,23 kg natriumcholat i en buffer som beskrevet under eksempler 3-6. Blandingen ble inkubert i 16 timer ved 0-2 °C. Deretter ble blandingen diafiltrert med 4 volumer EDTA (0,1 mmol/1) og deretter med 2-4 volumer sakkarose (1 %) og til slutt konsentrert til en proteinkonsentrasjon på 21-25 g/l. rHDL-løsningen ble deretter justert til en sluttkonsentrasjon på 10 % sakkarose og 20 g/l protein. Løsningen ble sterilfiltrert og avtappet i porsjoner på 50 g (lg rHDL i 100 ml flasker) og lyofilisert.
Eksempel 8
Fra 980 kg forutfelling IV (Kistler, P., Nitschmann, H.; Vox Sang. 7, 414-424 (1962)) ble det ved etanolisk utfelling erholdt 11,2 kg apoA-I som bunnfall. Dette ble suspendert i en tredobbelt mengde 4-molar guanidinhydrokloridløsning. pH ble justert til 5,2 og blandingen ble pasteurisert i 10 timer ved 60 °C. Proteinet ble oppløst ved pH 7,5 og 45 °C. Etter en klaringsfiltrering ble det utført en bufferutveksling med en
10 mM koksaltløsning ved hjelp av en gelfiltrering (Sephadex G25, Pharmacia Biotech). Det ble erholdt 160 kg apoA-I-løsning med samlet 1040 g apoA-I. Proteinløsningen ble inkubert med en lipidløsning i 2 til 16 timer ved 0 til 2 °C. Lipidløsningen
ble fremstilt separat ved romtemperatur. Fosfatidylcholin fra soyabønneolje ble oppløst i en buffer bestående av 10 mmol/1 tris-HCl, 10 mmol/1 NaCl, 1 mmol/1 EDTA, pH 8,0. 3203 g natriumcholat og 4460 g fosfatidylcholin ble oppløst i 26 kg av denne buffer. Ved den følgende diafiltrering (NMWL = 10 000 dalton) ble først protein-lipidblandingen konsentrert til et proteininnhold på 7 g/l. Deretter ble blandingen diafiltrert mot en 1 % sakkaroseløsning til det ble oppnådd et cholatinnhold lavere enn 4 g/l. pH ble holdt på minst 7,5.. Deretter ble løsningen konsentrert til 25 g/l protein og stabilisert med sakkarose. Sluttproduktet inneholdt 20 g/l apoA-I og 100 g/l sakkarose. I størrelseseksklusjonskromato-grafien ble det funnet mindre enn 5 % fritt lipid og mindre enn 1 % fritt apoA-I. Protein-lipidblandingen ble sterilfiltrert, avtappet i porsjoner på 50 ml og lyofilisert. Sluttproduktet oppløst i den egnede mengde vann viser ett molart forhold mellom apoA-I og fosfatidylcholin på 1:140 [mol:mol], og et innhold av cholsyre-natriumsalt på 0,25 g/g protein.
Claims (20)
1. Fremgangsmåte for industriell fremstilling av et preparat som inneholder rekonstituerte lipoproteinpartikler med høy tetthet (rHDL) fra apolipoprotein A-I og fosfatidylcholin,
karakterisert ved
at en apolipoprotein-A-I-fosfatidylcholindetergent-
blanding fremstilles ved blanding (a) av en vandig apolipoprotein-A-I-løsning med en konsentrasjon på 1-40 g protein/l med (b) en vandig fosfatidylcholin-detergentløsning, uten anvendelse av organiske
løsningsmidler, hvorved det molare forhold mellom fosfatidylcholin og detergent er i området fra 1:0,5 til 1:4,0 og vektforholdet mellom apolipoprotein-A-I og fosfatidylcholin er i området fra 1:1,5 til til 1:5,0,
den erholdte apolipoprotein A-I-fosfatidylcholin-
detergentblanding inkuberes deretter ved en temperatur som er i området for faseomdannelsestemperaturen ± 10 °C for fosfatidylcholin i vann, detergenten atskilles gjennom utelukkelse etter
størrelse eller adsorpsjon til et adsororbsjonsmiddel til det punkt der apolipoprotein-A-I-fosfatidyl-cholinpartikler dannes med en diameter fra 5-50 nm og en masse fra 50 000 til 1 000 000 Dalton,
uten ytterligere rensingstrinn erholdes et preparat
som inneholder de rekonstituerte lipoproteinpartikler med høy tetthett (rHDL) fra apolipoprotein-A-I og fosfatidylcholin, hvorved mer enn 95 % av apolipoprotein-A-I er anvendt og også mer enn 90 % eller den totale fosfatidylcholin er bundet og hvorved et proteininnhold på 20+2 g/l og en temperatur på 20 °C + 2 °C oppviser en turbiditet lavere enn 40 NTU.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for industriell fremstilling av et stabilt lyofilisatpreparat,
karakterisert ved det erholdte produkt stabiliseres ved lyofilisering i nærvær av en stabilisator utgått fra gruppen karbohydrater.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at den vandige apolipo-proteinløsning i alt vesentlig er fri for organiske løsnings-midler.
4. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 1 til 3, karakterisert ved at atskillelsen av detergenten gjennom utelukkelse etter størrelse utføres ved ultra-filtrering, idet det høyst anvendes 2 liter buffer pr. gram protein.
5. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 1 til 4, karakterisert ved at detergenten bindes til et hydrofobt adsorpsjonsmiddel etter inkubasjon av lipid-apolipoprotein-detergentblandingen, enten ved porsjonsadsorpsjon eller søyleadsorpsjon.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 5, karakterisert ved at det hydrofobe adsorpsjonsmiddel er en uoppløselig tverrbundet polystyren-kopoly-mer.
7. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 1 til 6, karakterisert ved at lipid-detergentløs-ningen inneholder fosfolipider, kolesterol, kolesterolester, fettsyrer og/eller triglyserider.
8. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 1 til 7, karakterisert ved at det som apolipoprotein anvendes en apolipoprotein A-I-anriket fraksjon fra humant plasma som er behandlet gjennom minst ett virusinaktiverings-trinn ved hjelp av inkubasjon i en vandig løsning av et chaotropt stoff og en etterfølgende ombufring i en løsning med en ionestyrke lavere enn 50 mmol/1, hvoretter mer enn 70 % av lipoproteinet foreligger i monomer form.
9. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 1 til 8, karakterisert ved at lipid-detergentløs-ningen i alt vesentlig inneholder fosfolipider som lipid-komponenter.
10. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 1 til 9, karakterisert ved at fosfolipidet er syntetisk fosfatidylcholin.
11. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 1 til 10, karakterisert ved at fosfolipidet er et naturlig fosfolipid, fortrinnsvis et fosfolipid ekstrahert fra soyabønner eller egg.
12. Fremgangsmåte ifølge krav 11, karakterisert ved at fosfolipidet er soya-fosfatidylcholin og at inkubasjonen av apolipoprotein-lipid-detergentblandingen utføres ved en temperatur på 0-15 °C.
13. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 1 til 12, karakterisert ved at den anvendte detergent er utvalgt fra gallesyrer eller et salt derav.
14. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved at detergenten er cholsyre-natriumsalt eller natrium-deoksycholsyre.
15. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 1 til 14, karakterisert ved at apolipoproteinene inneholdt i den vandige apolipoproteinløsning er rekombinante apolipoproteiner, apolipoproteiner fra en anriket fraksjon av apolipoprotein A-I fra humant plasma, fragmenter av apolipoproteiner eller egnede naturlige, syntetiske eller rekombinante polypeptider med amfipatiske egenskaper.
16. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 1 til 15, karakterisert ved at innholdet av detergent reduseres ved hjelp av dialyse eller diafiltrering til en konsentrasjon lavere enn 0,5 g detergent pr. gram protein etter inkubasjonen av lipid-apolipoprotein-detergentbland-ingen.
17. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 1 til 16, karakterisert ved at proteinkonsentrasjonen økes ved hjelp av diafiltrering til 10-50 g/l før eller etter atskillelsen av detergenten.
18. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 1 til 17, karakterisert ved at den vandige apolipo-proteinløsning eller lipid-detergentløsningen bufres ved en pH-verdi i området pH 6 til pH 9.
19. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 1 til 17, karakterisert ved at den vandige apolipo-proteinløsning eller lipid-detergentløsningen bufres ved en pH-verdi i området pH 7,5-8,5.
20. Fremgangsmåte ifølge ett av kravene 2 til 19, karakterisert ved at produktet justeres til en proteinkonsentrasjon på 5-50 g/l og at lyofiliseringen av løsningen for stabilisering av produktet utføres i nærvær av 5-15 % av et disakkarid som sakkarose eller 2-10 av et mono-sakkarid som mannitol.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP93810920 | 1993-12-31 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO945101D0 NO945101D0 (no) | 1994-12-30 |
| NO945101L NO945101L (no) | 1995-07-03 |
| NO316762B1 true NO316762B1 (no) | 2004-05-03 |
Family
ID=8215104
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19945101A NO316762B1 (no) | 1993-12-31 | 1994-12-30 | Fremgangsmate for industriell fremstilling av et preparat som inneholder rekonstituerte lipoproteinpartikler med hoy tetthet (rHDL) fra apolipoprotein A-I og fosfatidylcholin |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5652339A (no) |
| EP (1) | EP0663407B1 (no) |
| JP (1) | JP3553669B2 (no) |
| KR (1) | KR0184027B1 (no) |
| CN (1) | CN1056154C (no) |
| AT (1) | ATE220072T1 (no) |
| CA (1) | CA2138925C (no) |
| CZ (1) | CZ283620B6 (no) |
| DE (1) | DE59410149D1 (no) |
| DK (1) | DK0663407T3 (no) |
| ES (1) | ES2179064T3 (no) |
| FI (1) | FI113052B (no) |
| HU (1) | HU227382B1 (no) |
| NO (1) | NO316762B1 (no) |
| PL (1) | PL185414B1 (no) |
| PT (1) | PT663407E (no) |
| TW (1) | TW434253B (no) |
Families Citing this family (64)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5932536A (en) * | 1994-06-14 | 1999-08-03 | The Rockefeller University | Compositions for neutralization of lipopolysaccharides |
| AUPN030794A0 (en) | 1994-12-22 | 1995-01-27 | Aruba International Pty Ltd | Discontinuous plasma or serum delipidation |
| SE9702776D0 (sv) * | 1997-07-22 | 1997-07-22 | Pharmacia & Upjohn Ab | Method of preparing pharmaceutical compositions |
| US6306433B1 (en) | 1997-08-12 | 2001-10-23 | Pharmacia Ab | Method of preparing pharmaceutical compositions |
| US6287590B1 (en) * | 1997-10-02 | 2001-09-11 | Esperion Therapeutics, Inc. | Peptide/lipid complex formation by co-lyophilization |
| WO2000075189A1 (fr) * | 1999-06-02 | 2000-12-14 | Vessel Research Laboratory Co.,Ltd. | Lipoproteine denaturee stabilisee et procede de production de cette lipoproteine |
| US6514523B1 (en) | 2000-02-14 | 2003-02-04 | Ottawa Heart Institute Research Corporation | Carrier particles for drug delivery and process for preparation |
| AUPQ846900A0 (en) * | 2000-06-29 | 2000-07-27 | Aruba International Pty Ltd | A vaccine |
| US20090017069A1 (en) | 2000-06-29 | 2009-01-15 | Lipid Sciences, Inc. | SARS Vaccine Compositions and Methods of Making and Using Them |
| US7439052B2 (en) * | 2000-06-29 | 2008-10-21 | Lipid Sciences | Method of making modified immunodeficiency virus particles |
| US7407663B2 (en) * | 2000-06-29 | 2008-08-05 | Lipid Sciences, Inc. | Modified immunodeficiency virus particles |
| US7407662B2 (en) * | 2000-06-29 | 2008-08-05 | Lipid Sciences, Inc. | Modified viral particles with immunogenic properties and reduced lipid content |
| DE10035352A1 (de) * | 2000-07-20 | 2002-01-31 | Zlb Bioplasma Ag Bern | Verfahren zur Behandlung von instabiler Angina pectoris |
| ATE510847T1 (de) | 2000-11-20 | 2011-06-15 | Univ Illinois | Membrangerüstproteine |
| US7592008B2 (en) * | 2000-11-20 | 2009-09-22 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois, A Body Corporate And Politic Of The State Of Illinois | Membrane scaffold proteins |
| US20060060520A1 (en) * | 2001-06-25 | 2006-03-23 | Bomberger David C | Systems and methods using a solvent for the removal of lipids from fluids |
| US6991727B2 (en) * | 2001-06-25 | 2006-01-31 | Lipid Sciences, Inc. | Hollow fiber contactor systems for removal of lipids from fluids |
| WO2003000372A2 (en) | 2001-06-25 | 2003-01-03 | Lipid Sciences, Inc. | Systems and methods using multiple solvents for the removal of lipids from fluids |
| CA2451633C (en) * | 2001-06-25 | 2010-11-30 | Lipid Sciences, Inc. | Systems and methods using a solvent for the removal of lipids from fluids |
| EP1409108A4 (en) * | 2001-06-25 | 2007-11-14 | Lipid Sciences Inc | HOLLOW FIBER CONTACTOR SYSTEMS FOR THE REMOVAL OF LIPIDS FROM LIQUIDS |
| JP2005538148A (ja) * | 2002-08-26 | 2005-12-15 | リピド サイエンスィズ インコーポレイテッド | 脱脂タンパク質粒子を使用したアルツハイマー病治療 |
| ES2376875T3 (es) | 2003-02-14 | 2012-03-20 | Children's Hospital & Research Center At Oakland | Vehículo de administración de fármacos lipofílicos y métodos de utilización del mismo |
| EP2319857A3 (en) | 2003-03-04 | 2012-06-27 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Pon polypeptides, polynucleotides encoding same and compositions and methods utilizing same |
| US7393826B2 (en) | 2003-07-03 | 2008-07-01 | Lipid Sciences, Inc. | Methods and apparatus for creating particle derivatives of HDL with reduced lipid content |
| AU2004260632A1 (en) * | 2003-07-03 | 2005-02-10 | Lipid Sciences Inc. | Methods and apparatus for creating particle derivatives of HDL with reduced lipid content |
| US6960803B2 (en) * | 2003-10-23 | 2005-11-01 | Silicon Storage Technology, Inc. | Landing pad for use as a contact to a conductive spacer |
| JP4534511B2 (ja) * | 2004-02-16 | 2010-09-01 | 東ソー株式会社 | リポ蛋白を含んだ凍結乾燥試料 |
| WO2006069371A1 (en) * | 2004-12-22 | 2006-06-29 | Baylor College Of Medicine | A method of plasma lipidation to prevent, inhibit and/or reverse atherosclerosis |
| US7759315B2 (en) * | 2005-03-09 | 2010-07-20 | Csl Behring Ag | Treatment of inflammatory conditions of the intestine |
| US20080227686A1 (en) * | 2006-06-16 | 2008-09-18 | Lipid Sciences, Inc. | Novel Peptides that Promote Lipid Efflux |
| US20080206142A1 (en) * | 2006-06-16 | 2008-08-28 | Lipid Sciences, Inc. | Novel Peptides That Promote Lipid Efflux |
| EP2041174A2 (en) * | 2006-06-16 | 2009-04-01 | Lipid Sciences, Inc. | Novel peptides that promote lipid efflux |
| WO2008039843A2 (en) * | 2006-09-26 | 2008-04-03 | Lipid Sciences, Inc. | Novel peptides that promote lipid efflux |
| EP1964571B1 (en) | 2007-03-01 | 2012-05-02 | CSL Limited | Treatment of endothelial dysfunction in diabetic patients |
| US7956035B2 (en) * | 2007-03-01 | 2011-06-07 | Csl Limited | Treatment of endothelial dysfunction in diabetic patients |
| US20090110739A1 (en) * | 2007-05-15 | 2009-04-30 | University Of North Texas Health Science Center At Forth Worth | Targeted cancer chemotherapy using synthetic nanoparticles |
| US8324366B2 (en) | 2008-04-29 | 2012-12-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for delivering RNAI using lipoproteins |
| US8734853B2 (en) | 2008-11-17 | 2014-05-27 | University Of North Texas Health Science Center At Fort Worth | HDL particles for delivery of nucleic acids |
| EP2669290A1 (en) | 2009-03-02 | 2013-12-04 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Nucleic Acid Chemical Modifications |
| CN101928739B (zh) * | 2009-06-22 | 2014-02-05 | 吉林圣元科技有限责任公司 | 一种重组高密度脂蛋白的制备及其应用 |
| JP2012532919A (ja) | 2009-07-16 | 2012-12-20 | アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル | 治療因子を含むｈｄｌおよび治療における使用 |
| US10894098B2 (en) | 2012-04-09 | 2021-01-19 | Signablok, Inc. | Methods and compositions for targeted imaging |
| US10525152B2 (en) | 2009-10-09 | 2020-01-07 | Signablok, Inc. | Methods and compositions for targeted imaging |
| US9102938B2 (en) | 2010-04-01 | 2015-08-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 2′ and 5′ modified monomers and oligonucleotides |
| US10913767B2 (en) | 2010-04-22 | 2021-02-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs |
| US9725479B2 (en) | 2010-04-22 | 2017-08-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | 5′-end derivatives |
| US20130260460A1 (en) | 2010-04-22 | 2013-10-03 | Isis Pharmaceuticals Inc | Conformationally restricted dinucleotide monomers and oligonucleotides |
| PL3178481T3 (pl) * | 2010-06-30 | 2019-07-31 | Csl Limited | Odtworzona formulacja lipoproteiny o wysokiej gęstości i sposób jej produkcji |
| US20120190609A1 (en) * | 2010-08-30 | 2012-07-26 | Martin Bader | Method for producing a lipid particle, the lipid particle itself and its use |
| EP2611419A2 (en) * | 2010-08-30 | 2013-07-10 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Method for producing a tetranectin-apolipoprotein a-1 lipid particle, the lipid particle itself and its use |
| KR20130117760A (ko) * | 2010-08-30 | 2013-10-28 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 테트라넥틴-아포지단백질 a-i 입자의 제조 방법, 이에 의해 제조된 지질 입자 및 이의 용도 |
| PL2793913T3 (pl) | 2011-12-21 | 2023-11-06 | Csl Limited | Schemat dawkowania dla formulacji apolipoproteiny |
| US9125943B2 (en) * | 2012-11-02 | 2015-09-08 | Csl Limited | Reconstituted HDL formulation |
| EP2745834B1 (en) | 2012-12-18 | 2016-09-28 | Jens Frauenfeld | Salipro particles |
| US10087235B2 (en) * | 2013-08-08 | 2018-10-02 | Csl Limited | Contaminant removal method |
| SI3043814T1 (sl) | 2013-09-13 | 2021-04-30 | Salipro Biotech AB, Greenhouse Labs | Antigen in postopek za proizvodnjo le-tega |
| EP2853259A1 (en) | 2013-09-30 | 2015-04-01 | Université Pierre et Marie Curie (Paris 6) | Reconstituted high density lipoproteins composition and uses thereof |
| TWI576114B (zh) * | 2013-12-27 | 2017-04-01 | 國立交通大學 | 一種脂蛋白ｂ重組脂質球，其製備方法及其用途 |
| JP2018504380A (ja) | 2014-12-18 | 2018-02-15 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． | Ｒｅｖｅｒｓｉｒ（商標）化合物 |
| US9763892B2 (en) | 2015-06-01 | 2017-09-19 | Autotelic Llc | Immediate release phospholipid-coated therapeutic agent nanoparticles and related methods |
| US10821133B2 (en) | 2017-12-28 | 2020-11-03 | Hdl Therapeutics, Inc. | Methods for preserving and administering pre-beta high density lipoprotein extracted from human plasma |
| CN111868232B (zh) | 2017-11-22 | 2024-05-28 | Hdl治疗公司 | 用于对血浆处理系统的流体回路进行灌注的系统和方法 |
| CN110551207B (zh) * | 2019-08-21 | 2023-05-05 | 广州蕊特生物科技有限公司 | 一种脂蛋白纯化方法 |
| WO2021191266A1 (en) | 2020-03-25 | 2021-09-30 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Aerosolization of hdl for the treatment of lung infections |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE456136B (sv) * | 1985-06-17 | 1988-09-12 | Oncholab Ab | Forfarande for framstellning av en med ett lipofilt biologiskt aktivt emne bemengd berare pa basis av rekonstituerat ldl (lagdensitetslipoprotein) |
| FR2609399A1 (fr) * | 1987-01-13 | 1988-07-15 | Ire Celltarg Sa | Procede d'incorporation d'un ou plusieurs principes actifs lipophiles dans des lipoproteines, lipoproteines obtenues et composition pharmaceutique les contenant |
| ATE133423T1 (de) * | 1987-05-20 | 1996-02-15 | Rogosin Inst | Rekonstituierte hdl-teilchen und ihre verwendung |
| US5128318A (en) * | 1987-05-20 | 1992-07-07 | The Rogosin Institute | Reconstituted HDL particles and uses thereof |
| CA1335077C (en) * | 1988-02-08 | 1995-04-04 | Henri Isliker | Process for the manufacture of apolipoproteins from human blood plasma or serum |
| DE69321118T2 (de) * | 1992-06-12 | 1999-06-02 | Innogenetics Nv | Peptide und Proteine, Verfahren zur Ihren Herstellung und die Verwendung als Cholesterol-Annehmer |
-
1994
- 1994-12-21 US US08/361,132 patent/US5652339A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-22 TW TW083112032A patent/TW434253B/zh not_active IP Right Cessation
- 1994-12-22 CA CA002138925A patent/CA2138925C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-12-23 CZ CZ943299A patent/CZ283620B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-12-28 PT PT94810753T patent/PT663407E/pt unknown
- 1994-12-28 AT AT94810753T patent/ATE220072T1/de active
- 1994-12-28 ES ES94810753T patent/ES2179064T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-28 EP EP94810753A patent/EP0663407B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-28 JP JP32873294A patent/JP3553669B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1994-12-28 DK DK94810753T patent/DK0663407T3/da active
- 1994-12-28 DE DE59410149T patent/DE59410149D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-28 KR KR1019940038151A patent/KR0184027B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-12-29 PL PL94306575A patent/PL185414B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1994-12-29 HU HU9403830A patent/HU227382B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-12-30 FI FI946199A patent/FI113052B/fi not_active IP Right Cessation
- 1994-12-30 NO NO19945101A patent/NO316762B1/no not_active IP Right Cessation
- 1994-12-31 CN CN94119129A patent/CN1056154C/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1108662A (zh) | 1995-09-20 |
| HUT70448A (en) | 1995-10-30 |
| CA2138925A1 (en) | 1995-07-01 |
| KR950018039A (ko) | 1995-07-22 |
| DK0663407T3 (da) | 2002-10-28 |
| FI113052B (fi) | 2004-02-27 |
| CZ283620B6 (cs) | 1998-05-13 |
| EP0663407B1 (de) | 2002-07-03 |
| NO945101L (no) | 1995-07-03 |
| HU9403830D0 (en) | 1995-02-28 |
| US5652339A (en) | 1997-07-29 |
| FI946199A0 (fi) | 1994-12-30 |
| CZ329994A3 (en) | 1995-10-18 |
| CN1056154C (zh) | 2000-09-06 |
| PL306575A1 (en) | 1995-07-10 |
| JP3553669B2 (ja) | 2004-08-11 |
| JPH07242699A (ja) | 1995-09-19 |
| KR0184027B1 (ko) | 1999-04-01 |
| FI946199A (fi) | 1995-07-01 |
| HU227382B1 (en) | 2011-05-30 |
| DE59410149D1 (de) | 2002-08-08 |
| TW434253B (en) | 2001-05-16 |
| EP0663407A1 (de) | 1995-07-19 |
| ES2179064T3 (es) | 2003-01-16 |
| ATE220072T1 (de) | 2002-07-15 |
| PT663407E (pt) | 2002-11-29 |
| CA2138925C (en) | 2002-11-05 |
| PL185414B1 (pl) | 2003-05-30 |
| NO945101D0 (no) | 1994-12-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO316762B1 (no) | Fremgangsmate for industriell fremstilling av et preparat som inneholder rekonstituerte lipoproteinpartikler med hoy tetthet (rHDL) fra apolipoprotein A-I og fosfatidylcholin | |
| EP0503991B1 (fr) | Procédé de préparation à l'échelle industrielle d'un concentré de facteur von Willebrand humain standardisé, de très haute pureté, approprié à un usage thérapeutique | |
| US20070166389A1 (en) | Stabilized lyophilized blood platelets | |
| EP0584558B1 (en) | A composition for suppressing infection and growth of human immunodeficiency virus using an iron-binding protein | |
| WO2007066017A2 (fr) | Procede de preparation d'un concentre de facteur h et utilisation de ce concentre de facteur h au titre de medicament | |
| US20050228171A1 (en) | Purification method | |
| AU549584B2 (en) | Heat stabilization of plasma proteins | |
| JP2532535B2 (ja) | 組織タンパクｐｐ４含有医薬 | |
| CZ85493A3 (en) | Mixture of imido ester cross-linked hemoglobin, and process for preparing thereof | |
| EP0011739B1 (en) | Process for obtaining blood coagulation factor xiii derived from human placenta | |
| KR100486472B1 (ko) | 폰빌레브란트인자의치료성단편 | |
| TW202216735A (zh) | 製備包含人血漿來源的免疫球蛋白ｍ之組合物的方法及儲存穩定的液體組合物 | |
| MXPA05008276A (es) | Solucion de albumina y metodo para producirla. | |
| CZ244996A3 (cs) | Způsob výroby přírodního dietetického přípravku | |
| JPH0418029A (ja) | Ｈｉｖ感染細胞を殺傷するリポソーム | |
| JPH0819159B2 (ja) | 殺菌された抗プラスミン溶液の製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |