NO315156B1

NO315156B1 - Nye amidinoderivater og deres anvendelse som trombininhibitorer, farmasöytisk formulering inneholdende slike derivater, deres anvendelse, ogfremgangsmåtefor deres fremstilling

Info

Publication number: NO315156B1
Application number: NO19996313A
Authority: NO
Inventors: Olle Karlsson; Marcel Linschoten; Jan-Erik Nystroem
Original assignee: Astra Ab
Priority date: 1997-06-19
Filing date: 1999-12-17
Publication date: 2003-07-21
Also published as: IS5302A; AU7946198A; IL133490A0; CN1266427A; ATE277902T1; AU737645B2; BR9810177A; EP1012140B1; EP1012140A1; NZ501635A; JP2006321807A; US6576657B2; US20020022612A1; SK167099A3; NO996313L; DE69826693D1; CA2294059A1; EE9900600A; JP3919236B2; CN1205187C

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører nye farmasøytisk nyttige forbindelser, særlig kompetitive inhibitorer av trypsinlignende serinproteaser, spesielt trombin, deres anvendelse som legemidler, farmasøytiske formuleringer som inneholder disse, og fremgangsmåter for deres fremstilling.

Blodkoagulasjon er den viktige prosessen involvert i både hemostase (dvs. forhindring av blodtap fra et ødelagt kar) og trombose (dvs. dannelsen av en blodpropp i et blodkar, som noen ganger fører til karobstruksjon).

Koagulasjon er resultatet av en kompleks serie av enzymatiske omsetninger en av de siste trinn i denne serien av omsetninger er overføringen av proenzymet protrombin til det aktive enzymet trombin.

Trombin er kjent for å spille en sentral rolle ved koagulasjon. De aktiverte blodplater, fører til blodplateaggregasjon, overfører fibrinogen til fibrinmonomerer, som poly-meriseres totalt til fibrinpolymerer, og aktiverer faktor XIII som igjen tverrbinder polymerene for å danne uløselig fibrin. Trombin aktiverer dessuten faktor V og faktor VIII som fører til en "positive feedback" fremstilling av trombin fra protrombin.

Ved å inhibere aggregasjonen av blodplater og dannelsen og tverrbindingen av fibrin vil effektive inhibitorer av trombin forventes å utvise antitrombotisk aktivitet. I tillegg vil antitrombotisk aktivitet forventes å forbedre den virksomme inhiberingen av den positive feedback mekanismen.

Utviklingen av lavmolekylære inhibitorer av trombin er omtalt av Claesson i Blood Goagul. Fibrinol. (1994) 5, 411.

Blomback et al (i J. Clin. Lab. Invest. 24, suppl. 107, 59 (1969)) rapporterer trombininhibitorer basert på den aminosyresekvensen som er beliggende omkring spaltnings-stedet for den fibrinogene Aa-kjeden. Av de omtalte aminosyresekvensene foreslår disse forfattere at tripeptidsekvensen Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, heretter betegnet som P3-P2-Pl-sekvens) vil være den mest virksomme inhibitor.

Trombininhibitorer basert på dipeptidylderivater med et aæ-aminoalkylguanidin i Pl-stillingen er kjent fra US patent nr 4.346.078 og internasjonal patentsøknad WO 93/11152. Lignende, strukturelt beslektede, dipeptidylderivater er også blitt rapportert. For eksempel omtaler internasjonal patentsøknad WO 94/29336 forbindelser med for eksempel aminometylbenzamidiner, cykliske aminoalkylamidiner og cykliske aminoalkylguanidiner i Pl-stillingen; EP-patentsøknad 0 648 780 omtaler forbindelser med for eksempel cykliske aminoalkylguanidiner i Pl-stillingen.

Trombininhibitorer basert på peptidylderivater, som også har cykliske aminoalkylguanidiner (for eksempel enten 3- eller 4-aminometyl-l-amidinopiperidin) i Pl-stillingen er kjente fra EP-patentsøknader 0 468 231, 0 559 046 og 0 641 799.

Trombininhibitorer basert på tripeptidylderivater med argininaldehyd i Pl-stillingen ble først omtalt i EP-patentsøknad 0 185 390.

Mer nylig er det rapportert argininaldehydbaserte peptidylderivater, modifisert i P3-stillingen. For eksempel omtaler internasjonal patentsøknad WO 93/18060 hydroksy-syrer, EP-patentsøknad 0 526 877 des-aminosyrer, og EP-patentsøknad 0 542 525 O-metylmandelsyrer i P3-stillingen.

Inhibitorer av serinprotease (for eksempel trombin) basert på elektrofile ketoner i Pl-stillingen er også kjente. For eksempel omtaler EP-patentsøknad 0 195 212 peptidyl-a-ketoestere og amider, EP-patentsøknad 0 362 002 fluoralkylamidketoner, EP-patentsøknad 0 364 344 a,p,8-triketoforbindelser og EP-patentsøknad 0 530 167 a-alkoksyketonderivater av arginin i Pl-stillingen.

Andre, strukturelt forskjellige inhibitorer av trypsinlignende serinproteaser basert på C-endestående borsyrederivater av arginin og isotiouroniumanaloger av disse er kjent fra EP-patentsøknad 0 293 881.

Mer nylig er omtalt trombininhibitorer basert på peptidylderivater i EP-patentsøknad 0 669 317 og internasjonale patentsøknader WO 95/35309, WO 95/23609 og WO 96/25426.

Det er imidlertid fortsatt et behov for virksomme inhibitorer av trypsinlignende serinproteaser, slik som trombin. Det er spesielt behov for forbindelser som er både oralt biotilgjengelige og selektive ved inhibering av trombin fremfor andre serinproteaser. Forbindelser som utviser kompetiriv inhiberende aktivitet ovenfor trombin vil forventes å være særlig nyttige som antikoagulanter og derfor ved terapeutisk behandling av trombose og beslektede sykdommer.

Ifølge foreliggende oppfinnelse er det tilveiebragt en forbindelse som er kjennetegnet ved at den har formel I

hvor

R<1> representerer ORld eller en cyanosubstituert Cm alkylgruppe;

R<ld> representerer H;

Rx representerer et strukturfragment av formel Ila eller He

hvor

de prikkede linjene representerer dobbeltbindinger;

A og B representerer CH;

D representerer -CH=CH-;

Xi representerer C2-4 alkylen eller -Z-A<3>;

X4 representerer en enkeltbinding;

A3 representerer Ci-3 alkylen;

Z representerer O eller S(0)m;

m representerer 0,1 eller 2;

R<2> representerer én eller flere eventuelle substituenter valgt fra Cm alkyl, Cm alkoksy, halogen eller N(R<27>)R<28>, hvor <R27> og R28 representerer H eller Cm alkyl;

Y representerer CH2 eller (CH2)2;

Ry representerer H eller Cm alkyl;

n representerer 1, 2, 3 eller 4;

B<1> representerer et strukturfragment av formel Uld

X<5>, X6, X<1> og X<*> uavhengig representerer CH;

D<1> og D<2> representerer uavhengig H, OH, OR<a>, OC(0)R, C(0)OR<d> eller C(0)R<e>; hvor Ra representerer benzyl eller C1-7 alkyl;

Rb representerer Cm7 alkyl (hvilken gruppe eventuelt er substituert med amino) eller C3.7 cykloalkyl;

Rd representerer Ci.3 alkylfenyl (hvilken gruppe eventuelt er substituert med Ci^ alkyl eller C1-6 alkoksy) eller C]-]2 alkyl (hvilken gruppe eventuelt er substituert med halogen);

Re representerer Ci-e alkyl (hvilken gruppe eventuelt er substituert med halogen);

eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

Foretrukne og fordelaktig forbindelser av formel I fremgår fra medfølgende krav 2-6.

Forbindelsene av formel I kan utvise tautomeri. Alle tautomere former og blandinger av disse omfattes av oppfinnelsen. Dessuten vil man forstå at i strukturfragmentet av formel II, kan eventuelle dobbeltbindingene, i forbindelse med visse betydninger av substituent D, gjøre at ringen som bærer A, B og D får aromatisk egenskap.

Forbindelsene av formel I kan også inneholde én eller flere asymmetriske karbonatomer og kan derfor utvise optisk- og/eller diastereoisomeri. Alle diastereoisomerer kan atskilles ved anvendelse av vanlige metoder, for eksempel kromatografi eller fraksjonert krystallisasjon. De forskjellige stereoisomerene kan isoleres ved atskillelse av en racemisk eller annen blanding av forbindelsene ved å anvende vanlige metoder, for eksempel fraksjonert krystallisering eller HPLC. Alternativt kan de ønskede optiske isomerene fremstilles ved omsetning av de egnede optisk virksomme utgangsmaterialene under betingelser som ikke vil forårsake racemisering eller epimerisering, eller ved å danne derivater, for eksempel med en homochiral syre etterfulgt av atskillelse av diastereomerderivatene ved hjelp av vanlige metoder (for eksempel HPLC, kromatografi over silika). Alle stereoisomerer omfattes av omfanget av foreliggende oppfinnelse.

Alkylgrupper som R ■I , R ry , R rmrj , R rya og Ry kan representere og alkoksygrupper som R•% kan representere kan, når det er et tilstrekkelig antall karbonatomer, være rette eller forgrenede, mettede eller umettede, cykliske eller acykliske. Alkylengrupper som Xi og A<3> kan representere kan, når det er et tilstrekkelig antall karbonatomer, være rette eller forgrenede, mettede eller umettede.

Halogengrupper som R<2> kan representere, inkluderer fluor, klor, brom og jod.

I strukturfragmentene av formlene Ha og lic angir prikkene det karbonatomet som er bundet til -C(O)- gruppen og til R<1> i en forbindelse av formel I (for å unngå tvil er intet ytterligere H-atom bundet til det således angitte karbonatom).

Bølgelinjene og bindingen i fragmentet av formel Ild betegner fragmentets bindingsposisjon.

Ifølge et ytterligere trekk ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes en forbindelse av formel I som angitt i det foregående med de ytterligere forbehold at: Ry betyr H;

R<28> betyr H.

Ifølge et ytterligere trekk ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes en forbindelse av formel I som angitt i det foregående med de ytterligere forbehold at: Ry betyr Cm alkyl;

R<28> betyr CM alkyl.

Alkylgrupper som Ra, R, Rd og Re kan representere og med hvilke Rd kan være substituert; cykloalkylgrupper som R kan representere; Ci.3 alkyldelen i alkylfenylgrupper som Rd kan representere; og alkoksygrupper med hvilke Rd kan være substituert, kan, når det er et tilstrekkelig antall karbonatomer, være rette eller forgrenede, og kan være mettede eller umettede.

Halogengrupper med hvilke Re kan være substituert inkluderer fluor, klor, brom og jod.

Bølgelinjen på bindingen i fragmentet av formel md betegner fragmentets bindingsposisjon.

Foretrukne forbindelser av formel I inkluderer de hvor D<1> betyr H og D2 betyr OH, OCH3, OC(0)R eller C(0)OR<d> hvor Rb og Rd er som angitt i det foregående.

Forkortelser er angitt ved slutten av denne beskrivelsen.

Foretrukne forbindelser av formel I innbefatter de hvor:

Rx betyr et strukturfragment av formel Ha;

når Rx betyr et strukturfragment av formel Ha, betyr Xi C2- eller C3-alkylen, -OCH2-eller-0(CH2)2-;

Y betyr CH2 eller (CH2)2.

Mer foretrukne forbindelser ifølge oppfinnelsen innbefatter de hvor, når Rx betyr et strukturfragment av formel Ha, så betyr X| C3-alkylen eller-0(CH2)2-.

Når Rx representerer et strukturfragment av formel Ila, og R<2> representerer minst én substituent, så er et foretrukket substitusjonssted ved det karbonatomet som er i posisjon

B.

Når Rx representerer et strukturfragment av formel Ila, og R<2> betyr minst én substituent, så er ringen fortrinnsvis substituert enten ved karbonatomet i -CH=CH-gruppen (stilling D) som er i nabostilling til det stedet hvor ringene møtes, eller, mer foretrukket, ved karbonatomet som er i posisjon B, eller ved begge disse stedene. Når fragmentet Ila for eksempel betyr en tetralin-l-yl-gruppe (dvs. X[ betyr mettet C3-alkylen), så er foretrukne substitusjonsstillinger i 5- eller, særlig, i 7-stilIingen, eller i begge disse stillinger. Tilsvarende, når fragmentet Ila betyr en kroman-4-yl-gruppe (dvs. X[ representerer -0(CH2)2)-, så er foretrukne substitusjonsstillinger i 8- eller, særlig, i 6-stillingen, eller i begge disse stillingene.

Foretrukne forbindelser av formel I er forbindelser hvor fragmentet

er i S-konfigurasjon. Bølgelinjene på bindingene i fragmentet ovenfor betegner fragmentets bindingsposisjon.

Foretrukne forbindelser av formel I omfatter forbindelser i eksemplene som er angitt i det følgende.

Fremstilling

Ifølge oppfinnelsen tilveiebringes også en fremgangsmåte for fremstilling av forbindelser av formel I hvor D<1> og D<2> begge representerer H, og denne fremgangsmåten er kjennetegnet ved:

(i) kobling av en forbindelse av formel IV,

hvor R<1> og Rx er som angitt i det foregående med en forbindelse av formel V, hvor Ry, Y, n og B<1> er som angitt i det foregående; eller (ii) kobling av en forbindelse av formel VI hvor R<1>, Rx og Y er som angitt i det foregående med en forbindelse av formel VII

hvor Ry, n og B<1> er som angitt i det foregående,

for eksempel i nærvær av et koblingsmiddel (for eksempel oksalylklorid i DMF, EDC, DCC, HBTU, HATU eller TBTU), en egnet base (for eksempel pyridin, 2,4,6-trimetylpyridin, DMAP, TEA eller DIPEA) og et egnet organisk løsningsmiddel (for eksempel diklormetan, acetonitril eller DMF).

Forbindelsene av formel IV er kommersielt tilgjengelige, er velkjente i litteraturen eller er tilgjengelig ved anvendelse av kjente og/eller vanlige metoder.

Forbindelser av formel IV hvor R<1> for eksempel betyr OH kan fremstilles ved omsetning av en forbindelse av formel VEI,

hvor Rx er som angitt i det foregående, med:

(b) KCN, for eksempel ved 20°C i nærvær av natriumbisulfitt i vann, etterfulgt av hydrolyse i nærvær av vandig syre (for eksempel HC1), for eksempel ved 20°C i nærvær av et egnet løsningsmiddel (for eksempel alkohol og/eller vann); (c) CHCI3 i nærvær av en vandig base (for eksempel NaOH); (d) TMSCN, for eksempel ved 20°C i nærvær av et egnet organisk løsningsmiddel (for eksempel CH2CI2X etterfulgt av hydrolyse i nærvær av syre (for eksempel HC1 eller H2SO4), for eksempel ved 20°C (for eksempel ifølge, eller analogt, til fremgangsmåten angitt av Bigge et al i J. Med. Chem.

(1993) 36,1977), etterfulgt av alkalisk hydrolyse for å gi den frie syren.

Forbindelser av formel PV hvor R<1> betyr cyanosubstituert Cm alkyl kan fremstilles fra tilsvarende forbindelser av formel IV hvor R<1> betyr H (eller en lavere alkylester av syren), for eksempel omsetning med et egnet alkylhalogenid ved anvendelse av kjente metoder, etterfulgt om nødvendig av hydrolyse for å gi den frie syren.

Forbindelser av formel V kan fremstilles ved omsetning av en forbindelse av formel DC

hvor Y er som angitt i det foregående med en forbindelse av formel VII som angitt i det foregående, for eksempel ved betingelser slik som de som er beskrevet i det foregående for syntese av forbindelser av formel I. Forbindelser av formlene V og VII hvor Ry betyr Cm alkyl kan fremstilles ved omsetning av en tilsvarende forbindelse av formel V eller formel VII, slik det passer, hvori Ry betyr H, med en forbindelse av formel DCa

hvor Hal betyr halogen (for eksempel Cl, Br eller I) og Ry er som angitt i det foregående, for eksempel under kjente betingelser.

Forbindelser av formel VI er lett tilgjengelig ved anvendelse av kjente metoder. For eksempel kan forbindelser av formel VI fremstilles ved omsetning av en forbindelse av formel IV som angitt i det foregående, med en forbindelse av formel DC som angitt i det foregående, for eksempel under betingelser slik som de som er angitt i det foregående for syntese av forbindelser av formel I.

Forbindelser av formel Vm er kommersielt tilgjengelig, er velkjent i litteraturen og kan fremstilles etter kjente metoder. For eksempel kan forbindelser av formel VHI fremstilles som følger:

(a) Forbindelser av formel VIII hvor Rx betyr et strukturfragment av formel Ha, hvor Xi betyr C2.4 alkylen eller -Z-A<3> hvor A3 er som angitt i det foregående, kan fremstilles ved ringslutning av en forbindelse av formel X,

hvor Xia betyr C2-4 alkylen, eller -Z-A - og Z, A og R er som angitt i det foregående, ved å anvende et passende acyleringsmiddel for eksempel ved 100°C i nærvær av polyfosforsyre eller ved å anvende PC15 under tilbakeløp fulgt av AICI3. Forbindelser av formel X hvor X\ a betyr C3-alkylen kan fremstilles etter kjente metoder, for eksempel ved omsetning av ravsyreanhydrid med den tilsvarende fenyllitiumforbindelsen, og selektiv reduksjon av det tilsvarende ketonet, under kjente betingelser. Forbindelser av formel X hvor XJa betyr -Z-A<3-> og A3 betyr C2.3 alkylen kan fremstilles som angitt i det følgende.

b) Forbindelser av formel Vm hvor Rx betyr et strukturfragment av formel Ha hvor Xj betyr C2- 4 alkylen, kan alternativt fremstilles ved ringslutning av en forbindelse av

formel XI

hvor R betyr Ci^ alkyl og XJa og R2 er som angitt i det foregående, for eksempel ved

20°C i nærvær av en passende base (for eksempel et alkalimetallalkoksyd) og et egnet organisk løsningsmiddel (for eksempel lavere alkylalkohol), etterfulgt av hydrolyse og dekarboksylering. Forbindelser av formel XI kan fremstilles ifølge kjente metoder. For

eksempel kan forbindelser av formel XI hvor Xja betyr C3-alkylen, fremstilles ved omsetning av ravsyreanhydrid med en forbindelse av formel XQ

hvor R' betyr Ci.6 alkyl og R og R2 er som angitt i det foregående og, for forbindelser av formel XI hvor Xia betyr C3-alkylen, selektiv reduksjon av det resulterende keton, etterfulgt av funksjonellgruppe-omdannelse av amidet og syren til estergrupper, under kjente betingelser. (c) Forbindelser av formel VIII hvor Rx betyr et strukturfragment av formel Da, hvor Xi betyr -Z-A3- hvor A<3> betyr C2-alkyIen og Z betyr O eller S, kan fremstilles ved ringslutning av en forbindelse av formel Xm, hvor Hal og R<2> er som angitt i det foregående, for eksempel ved 20°C i nærvær av vandig-etanolholdig NaOH. For tilsvarende forbindelser av formel VEI hvor Xi betyr-Z-A<3-> og Z betyr S(0)m hvor m er 1 eller 2, bør den ovennevnte ringslutning etterfølges av at man utfører en oksydasjonsreaksjon på det ringsluttede produkt som omfatter et S-atom, for eksempel ved anvendelse av m-klorperbenzosyre. (d) Forbindelser av formel VEI hvor Rx betyr et strukturfragment av formel Ila, hvor Xi betyr -Z-A - hvor A betyr C2-alkylen, kan fremstilles ved omsetning av en forbindelse av formel XTV,

hvor R<2> og Z er som angitt i det foregående, med enten: -

(1) for forbindelser av formel VEI hvor Xi betyr -Z-A3- hvor A3 betyr C2-alkylen, en forbindelse av formel XV,

hvor R er som angitt i det foregående, for eksempel ved 20°C i nærvær av en egnet base (for eksempel trietylamin eller natriumetoksyd) og et egnet organisk løsningsmiddel (for eksempel etanol eller DMF); eller

(2) en forbindelse av formel XVI

hvor L<1> betyr en avspaltningsgruppe (slik som Cl, Br, I, mesylat eller tosylat), G betyr CH2 og R er som angitt i det foregående, for eksempel ved 20°C i nærvær av en egnet base (for eksempel trietylamin) og et egnet organisk løsningsmiddel (for eksempel THF); etterfulgt av ringslutning under passende betingelser (for eksempel de som er angitt i det foregående). (e) Forbindelser av formel VID hvor Rx betyr et strukturfragment av formlene lic eller Ha, hvor i sistnevnte tilfelle ringen som bærer A, B og D er en karbocyklisk aromatisk ring som angitt i det foregående med hensyn til forbindelser av formel I, kan fremstilles ved ringslutning av en forbindelse av formel XX, hvor Rxa betyr et strukturfragment av formlene XXa eller XXc hvor, i XXa, ringen som bærer Aa, Ba og Da er en karbocyklisk aromatisk ring som angitt i det foregående med hensyn til forbindelser av formel I, og R<2>, X[ og X4 er som angitt i det foregående, i nærvær av polyfosforsyre, for eksempel ved 100°C: Prikkene som er i umiddelbar nærhet til karbonatomene i fragmentene av formlene XXa og XXc betegner tilknytningspunktet av fragmentene til CChH-gruppen av forbindelser av formel XX. Forbindelser av formel XX kan fremstilles ved hydrolyse av en tilsvarende forbindelse av formel XXI,

hvor Rxa og R er som angitt i det foregående (og hvor CO2H i fragmentene i formlene XXa og XXc i RM også kan være erstattet av CO2R), for eksempel under kjente betingelser.

(f) Forbindelser av formel VHI hvor Rx betyr et strukturfragment av formel Ila hvor ringen som bærer A, B og D er en karbocyklisk aromatisk ring er som angitt i det foregående med hensyn til forbindelser av formel I; Xi betyr

-0-CH2, kan fremstilles ved omsetning av en forbindelse av formel XXII,

hvor ringen som bærer Aa, Ba og Da er en karbocyklisk aromatisk ring som angitt i det foregående med hensyn til forbindelser av formel I, og R<2>, Hal og R er som angitt i det foregående, med diazometan, for eksempel ved 20°C i nærvær av et egnet organisk løsningsmiddel (for eksempel dietyleter).

(g) Selektiv oksydasjon av en forbindelse av formel XXX

hvor Rx er som angitt i det foregående, for eksempel i nærvær av et egnet oksydasjonsmiddel (for eksempel CrCb eller KMnCu) og et passende løsningsmiddel (for eksempel vann).

(h) Selektiv oksydasjon av en forbindelse av formel XXXI

hvor Rx er som angitt i det foregående, for eksempel i nærvær av et egnet oksydasjonsmiddel (for eksempel MnOj) i et passende organisk løsningsmiddel (for eksempel CH2CI2).

(i) Hydrolyse av et oksim av formel XXXII,

hvor R* er som angitt i det foregående, for eksempel ved oppvarming i nærvær av syre (for eksempel HC1) og et passende organisk løsningsmiddel. Forbindelser av formel XXXI! kan fremstilles ved omsetning av en tilsvarende forbindelse av formel XXX, som angitt i det foregående, med propylnitritt, for eksempel i nærvær av HC1 i etanol (j) Forbindelser av formel VHI hvor Rx betyr et strukturfragment av formel Ha og X| betyr -CH2-CH=CH-, kan fremstilles ved avspaltning av en forbindelse av formel xxxm,

hvor L<2> betyr en utgående gruppe (for eksempel Br eller SePh) og de prikkede linjene, A, B, D og R<2> er som angitt i det foregående, under passende reaksjonsbetingelser, for eksempel i nærvær av vandig etanolholdig NaOH eller hydrogenperoksyd, og et passende organisk løsningsmiddel (for eksempel THF).

Forbindelser av formel I hvor minst én av D<1> og D<2> er forskjellig fra H, kan også fremstilles direkte fra forbindelser av formel I hvor D<1> og D2 begge representerer H ifølge velkjente metoder.

For eksempel kan forbindelser av formel I hvor D<1> og D<2> betyr C(0)OR<d> fremstilles ved omsetning av en tilsvarende forbindelse av formel I hvor D<1> og D2 begge representerer H, med en forbindelse av formel XXXVa hvor L<3> betyr en utgående gruppe slik som Hal eller p-nitrofenoksy, og Hal og Rd er som angitt i det foregående for eksempel ved 0°C i nærvær av en egnet fase (for eksempel NaOH) og et passende organisk løsningsmiddel (for eksempel THF).

Forbindelser av formel I hvor minst én av D<1> og D<2> er forskjellig fra H, kan også fremstilles direkte fra andre forbindelser av formel I hvor minst én av D<1> og D2 er forskjellig fra H, ifølge velkjente teknikker.

Forbindelser av formel I hvor D<1> og D<2> betyr OH kan fremstilles ved omsetning av en tilsvarende forbindelse av formel I hvor Dl og D<2> (som det passer) betyr COOR<d> og Rd er som angitt i det foregående, med hydroksylamin (eller et hydrohalogenidsalt av dette), for eksempel ved 40°C i nærvær av en egnet (for eksempel TEA) og et passende organisk løsningsmiddel (for eksempel THF).

Forbindelser av formel I hvor D<1> og D<2> betyr OC(0)R og R er som angitt i det foregående, kan fremstilles ved omsetning av en tilsvarende forbindelse av formel I hvor D<1 >og D<2> (som det passer) betyr OH med en forbindelse av formel XXXVIa

hvor L<4> betyr en egnet avspaltningsgruppe slik som OH, Hal eller RC(0)0, og Hal og R er som angitt i det foregående, for eksempel ved eller under værelsestemperatur i nærvær av en egnet base (for eksempel TEA, pyridin eller DMAP) og et passende organisk løsningsmiddel (for eksempel CH2CI2).

Forbindelser av formel I hvor D<1> representerer H og D2 representerer OH eller OR<a> hvor Ra er som angitt i det foregående, kan alternativt fremstilles ved omsetning av en forbindelse av formel XXXVII, hvor Ba betyr fenyl-l,4-en eller cykloheksyl-l,4-en og R<1>, Rx, Y, Ry og n er som angitt i det foregående med en forbindelse av formel XXXVIII,

hvor R<al> betyr H eller Ra og Ra er som tidligere angitt, for eksempel ved mellom 40 og 60°C, i nærvær av en egnet base (for eksempel TEA) og et passende organisk løsningsmiddel (for eksempel THF, CH3CN, DMF eller DMSO). Forbindelser av formel I hvor D<1> og D<2> betyr OH eller OR<*> kan alternativt fremstilles på analog måte ved omsetning av en tilsvarende forbindelse av formel I, hvor D<1> eller D2 (som det passer) betyr C(0)OR<d> og Rd er som angitt i det foregående, med en forbindelse av formel XXXVIII som angitt ovenfor.

Forbindelser av formel XXXVII kan fremstilles etter peptidkoblingsmetoder, for eksempel på analog måte til fremgangsmåten beskrevet i det foregående for forbindelser av formel I. Forbindelser av formler XXXVa, XXXVIa og XXXVIII er kommersielt tilgjengelige, er velkjent i litteraturen eller er tilgjengelig ved anvendelse av kjente metoder.

Forbindelser av formlene VTI, IX, DCa, XII, XIII, XIV, XV, XVI, XXI, XXII, XXX, XXXI og XXXIII er enten kommersielt tilgjengelige, er velkjente i litteraturen, eller er tilgjengelig ved anvendelse av kjente metoder, og omfatter metoder som er de samme som, eller analoge til, de som er angitt ovenfor.

Substituentene på den aromatiske og/eller ikke-aromatiske, karbocykliske ringen(e) i forbindelser av formlene I, IV, V, VI, VII, VHI, X, XL XII, XHI, XIV, XX, XXI, XXH, XXX, XXXI, XXXII og XXIII kan omdannes ved å anvende kjente teknikker. For eksempel kan nitro reduseres til amino, hydroksy kan alkyleres for å gi alkoksy, alkoksy kan hydrolyseres for å gi hydroksy, alkener kan hydrogeneres til alkaner, halogen kan hydrogeneres til H, etc.

Forbindelser av formel I kan isoleres fra sine reaksjonsblandinger ved anvendelse av kjente metoder.

Det vil forstås at ved fremgangsmåten som er angitt ovenfor kan de funksjonelle grupper i mellomproduktene ha behov for å bli beskyttet av beskyttende grupper.

Funksjonelle grupper som det er nødvendig å beskytte omfatter hydroksy, amino og karboksylsyre. Egnede beskyttelsesgrupper for hydroksy omfatter trialkylsilyl eller diarylalkylsilylgrupper (for eksempel t-butyldimetylsilyl, t-butyldifenylsilyl eller trimetylsilyl) og tetrahydropyranol. Egnede beskyttelsesgrupper for karboksylsyre omfatter Ci-6 alkyl eller benzylestere. Egnede beskyttelsesgrupper for amino, amidino og guanidino omfatter t-butyloksykarbonyl, benzyloksykarbonyl og 2-trimetylsilyletoksykarbonyl (Teoc). Amidino og guanidinonitrogenatomer kan også beskyttes med hydroksy eller alkoksygrupper, og kan være enten mono- eller dibeskyttet.

Beskyttelse eller fjernelsen av beskyttelsesgrupper fra funksjonelle grupper kan finne sted før eller etter kobling, eller før eller etter hvilken som helst annen reaksjon i de skjemaene som er angitt ovenfor.

Særlig kan forbindelsene av formel I hvor D og D representerer H, fremstilles ved fremgangsmåter som omfatter koblingen av en N-acylert aminosyre eller en N-beskyttet aminosyre. Når det blir anvendt en N-beskyttet aminosyre kan acylgruppen innføres etter kobling. Fjernelse av beskyttelsesgruppen til nitrogenatomet kan utføres etter vanlige metoder.

Beskyttelsesgruppen kan fjernes ved hjelp av kjente metoder og som beskrevet i det følgende.

Visse beskyttede derivater (som også kan betegnes som "mellomprodukter") av forbindelser av formel I hvor D<1> og D<2> representerer H, som kan fremstilles før et endelig avbeskyttelsestrinn for å fremstille forbindelser av formel I hvor D<1> og D<2 >representerer H, er nye.

Ifølge et ytterligere trekk ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes en forbindelse av formel I som angitt ovenfor med unntagelse av at: R representerer Ci. 17 alkyl;

Rd representerer Ci.3 alkylfenyl (eventuelt substituert med Cj^ alkyl eller C1-6 alkoksy), eller Ci.12 alkyl (som eventuelt er substituert med halogen);

Ra representerer benzyl eller Ci.6 alkyl, og

Re representerer Ci_6 alkyl;

eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

Fagmannen på området vil forstå, at for å oppnå forbindelser av formel I på en alternativ, og, i noen tilfeller, mer egnet måte, kan de forskjellige fremgangsmåtetrinn som er nevnt tidligere utføres i forskjellig rekkefølge, og/eller de forskjellige omsetninger kan utføres i forskjellig rekkefølge i den totale fremgangsmåten (dvs. substituenter kan tilsettes til og/eller kjemiske omdannelser kan utføres på, mellomprodukter som er forskjellig fra de som er nevnt i det foregående i forbindelse med en bestemt reaksjon). Dette kan gjøre unødvendig, eller gjøre nødvendig, behovet for beskyttelsesgrupper. Følgelig vil rekkefølgen og typen av kjemi som er involvert bestemme behovet, og typen, av beskyttelsesgruppe så vel som sekvensen for å utføre syntesen.

Anvendelsen av beskyttelsesgrupper er fullstendig beskrevet i "Protective Groups in Organic Chemistry, utgitt av J.W.F. McOmie, Plenum Press (1973), og "Protective Groups in Organic Synthesis , 2. utgave, T.W. Greene & P.G.M. Wutz, Wiley-Interscience (1991).

De beskyttede derivatene av forbindelser av formel I hvor D<1> og D<2> representerer H (for eksempel forbindelser av formel I hvor minst én av D<1> og D2 er forskjellig fra H) kan omdannes kjemisk til forbindelser av formel I hvor D og D representerer H ved anvendelse av vanlige metoder for å fjerne beskyttelsesgruppen (for eksempel hydrogenering), for eksempel som beskrevet i det følgende.

Det vil også forstås at, selv om det kan være at slike beskyttede derivater av forbindelser av formel I hvor D<1> og D2 representerer H (for eksempel forbindelser av formel I hvor

minst én av D<1> og D<2> er forskjellig fra H) ikke har farmakologisk aktivitet som sådanne, så kan de administreres parenteralt eller oralt og deretter metaboliseres i kroppen slik at de danner forbindelser av formel I hvor D og D representerer H, som er farmakologisk aktive. Slike derivater kan derfor betegnes som "prodrugs". Alle prodrugs av forbindelser av formel I hvor D<1> og D2 representerer H omfattes av foreliggende oppfinnelse.

Beskyttede derivater av forbindelser av formel I hvor D<1> og D2 representerer H, som er spesielt nyttige som prodrugs, inkluderer forbindelser av formel I hvor minst én av D<1 >og D<2> er forskjellige fra H.

Forbindelser av formel I hvor D<1> og D2 representerer H, farmasøytisk akseptable salter, tautomerer og stereoisomerer av disse, samt prodrugs av disse (inkludert forbindelser av formel I hvor minst én av D<1> og D<2> er forskjellig fra H, som er prodrugs av forbindelser av formel I hvor D<1> og D<2> representerer H), betegnes i det følgende som "forbindelser ifølge oppfinnelsen".

Medisinsk og farmasøytisk anvendelse.

Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse er nyttige siden de har farmakologisk aktivitet. De er derfor indikert som legemidler.

Ifølge oppfinnelsen er det også tilveiebrakt forbindelser ifølge hvilke som helst av de medfølgende krav 1-6, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for anvendelse som et legemiddel. Foretrukne og fordelaktige slike anvendelser fremgår fra de medfølgende krav 9- 12.

Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse er særlig kraftige inhibitorer av trombin enten som slike, eller i tilfelle av prodrugs, etter administrering, for eksempel som vist i forsøkene som er beskrevet nedenfor.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen forventes således å være nyttige ved tilstander hvor det er behov for inhibitering av trombin.

Forbindelser ifølge oppfinnelsen er således indikert ved behandlingen og/eller profylaksen av trombose og hyperkoagulasjonsevne i blod og vev hos dyr og omfatter mennesket.

Det er kjent at hyperkoagulasjonsevne kan føre til trombo-emoliske sykdommer. Tilstander som er knyttet til hyperkoagulasjonsevne og trombo-emboliske sykdommer som kan nevnes omfatter arvet eller ervervet aktivert protein C-resistens, slik som faktor V-mutasjon (faktor V Leiden), og arvet eller ervervet mangel på antitrombin HI, protein C, protein S, heparin kofaktor II. Andre kjente tilstander som forbindes med hyperkoagulasjonsevne og trombo-emoblisk sykdom som omfatter sirkulerende antifosfo-lipide antistoffer (Lupus anticuagulant), homocysteinemi, heparin fremkalt trrombo-cytopenia og defekter i fibrinolyse. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er således indikert både ved den terapeutiske og/eller profylaktiske behandlingen av disse tilstander.

Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse er dessuten ytterligere indikert ved behandlingen av tilstander hvor det er et uønsket overskudd av trombin uten tegn på hyperkoagulasjonsevne, for eksempel ved neurodegenerative sykdommer slik som Alzheimers sykdom.

Spesielle sykdomstilstander som kan nevnes omfatter den terapeutisk og/eller profylaktiske behandling av venøs trombose og lungeemboli, arteriell trombose (for eksempel ved myokardialinfarkt, ustabil angina, trombose-basert slag og perifer arteriell trombose) og systemisk embolisme vanligvis fra atrium ved arteriell flimmer eller fra venstre ventrikkel etter transmural myokardialinfarkt.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen forventes dessuten å ha anvendelse ved profylakse av re-okklusjon (for eksempel trombose) etter trombolyse, perkutan trans-luminal angjoplastikk (PTA) og koronar bypass-operasjoner; forebyggelsen av re-trombose etter mikrokirurgi og vaskulær kirurgi generelt.

Ytterligere indikasjoner omfatter den terapeutiske og/eller profylaktiske behandling av disseminert intravaskulær koagulasjon som forårsakes av bakterier, multippel trauma, intoksikasjon eller enhver annen mekanisme; antikoagulerende behandling når blodet er i berøring med fremmede overflater i legemet slik som vaskulære transplantater, vaskulære stenter, vaskulære katetre, mekaniske og biologiske profetiske klaffer eller enhver annen innretning; og antikoagulerende behandling når blodet er i berøring med medisinsk utstyr på utsiden av legemet slik som under kardiovaskulær kirurgi ved anvendelse av en hjerte-lunge-maskin eller i hemodialyse.

I tillegg til dets virkning på koagulasjonsprosessen, er trombin kjent for å aktivere et stort antall celler (slik som neutrofiler, fibroblaster, endotele celler og glattmuskel-celler). Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan derfor være nyttige for den terapeutiske og/eller profylaktiske behandling av ideopatisk, og "adult respiratory distress syndrome", lungefibrose etter behandling med bestråling eller kjemoterapi, septisk sjokk, septicemi, inflammatoriske responser, som omfatter, men som ikke er begrenset til, ødem, akutt eller kronisk aterosklerose, slik som koronar arteriell sykdom, cerebral arteriell sykdom, perifer arteriell sykdom, reperfusjonskade og restenose etter perkutan transluminal angioplastikk (PTA).

Forbindelser ifølge oppfinnelsen om hemmer trypsin og/eller trombin kan også være nyttige ved behandling av pankreatitt.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen vil normalt bli administrert oralt, intravenøst, subkutant, bukkalt, rektalt, dermalt, nasalt, trakealt, bronkialt, ved hjelp av enhver parenteral måte eller ved inhalering, i form av farmasøytiske preparater som omfatter aktiv forbindelse enten som en fri base, eller et farmasøytisk, akseptabelt, ikke-toksisk organisk eller uorganisk syreaddisjonssalt, i en farmasøytisk akseptabel doseform. Avhengig av sykdommen og pasienten som skal behandles og administrasjonsmåten, kan sammensetningen administreres i forskjellige doser.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan også blandes med og/eller administreres sammen med ethvert antitrombotisk middel med en forskjellig virkningsmekanisme, slik som antiblodplatemidler acetylsalicylsyre, ticlopidin, clopidogrel, trombocanreseptor og/eller syntetaseinhibitorer, fibrinogenreseptorantagonister, prostasyklinmimetika og fosfodiesteraseinhibitorer og ADP-reseptor (P2T antagonister).

Forbindelser ifølge oppfinnelsen kan dessuten blandes med og/eller administreres sammen med trombolytika slik som vevsplasminogenaktivator (naturlig, rekombinant eller modifisert), streptokinase, urokinase, prourokinase, anisoylert plasminogen-streptokinaseaktivatorkompleks (APSAC), spyttkjertelplasminogenaktivatorer fra dyr, og lignende, ved behandlingen av trombotiske sykdommer, særlig myokardialinfarkt.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer dessuten en farmasøytisk formulering som er kjennetegnet ved at den omfatter en forbindelse som angitt i hvilket som helst av de medfølgende krav 1-6, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, i blanding med et farmasøytisk akseptabelt hjelpemiddel, fortynningsmiddel eller bærer.

Egnede daglige doser av forbindelser ifølge oppfinnelsen ved terapeutisk behandling av mennesker er ca 0,001-100 mg/kg legemsvekt ved peroral administrering og 0,001-50 mg/kg legemsvekt ved parenteral administrering.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen har den fordel at de kan være virksommere, være mindre toksiske, vare lenger, ha et bredere aktivitetsområde, være kraftigere, gi mindre bivirkninger, være lettere å absorbere enn, eller at de har andre nyttige farmakologiske egenskaper fremfor kjente forbindelser på området.

Biologiske forsøk.

Forsøk A

Bestemmelse av trombinkoagulasionstid ( TT)

Inhibitorløsningen (25 ul) ble inkubert med plasma (25 ul) i 3 minutter. Humant trombin (T 6769; Sigma Chem Co) i bufferløsning, pH 7,4 (25 ul) ble deretter tilsatt og koagulasjonstiden ble målt i en automatisk innretning (KC 10; Amelung).

Koagulasjonstiden i sekunder ble tegnet opp mot inhibitorkonsentrasjonen og IC50 TT ble bestemt ved interpolasjon.

IC50 TT er konsentrasjonen av inhibitor i prøven når koagulasjonstiden for humant plasma blir dobbelt så stor.

Forsøk B

Bestemmelse av trombininhibitering med en kromo<g>en. robotundersøkelse

Trombininhibitorstyrken ble målt med en kromogen substratmetode i en Plato 3300 robotic microplate processor (Rosys AG, CH-8634 Hombrechtikon, Sveits), ved anvendelse av 96-brønn, halvvolum mikrotritrerplater (Costar, Cambridge, MA, USA; Cat No 3690). Stamløsningene av forsøksforbindelsene i DMSO (72 ul), 1 mmol/1 ble fortynnet i serie (1:2 (24 + 49 ul) med DMSO for å oppnå ti forskjellige konsentrasjoner, som ble analysert som prøver ved bestemmelse. 2 ul av forsøksforbindelsen ble fortynnet med 124 ul undersøkelsesbuffer, 12 ul av kromogen substratløsning (S-2366 Chromogenix, Mdlndal, Sverige) i undersøkelsesbuffer og til slutt ble tilsatt 12 ul cc-trombinløsning (Humant a-trombin, Sigma Chemical Co.) begge i undersøkelsesbuffer. Prøvene ble blandet. De resulterende undersøkelseskonsentrasjonene var forsøks-forbindelse 0,00068-13,3 umol/1, S-2366 0,30 mmol/1, a-trombin 0,020 NIHU/mi. Økningen i lineær absorbans i løpet av 40 minutters inkubering ved 37°C ble anvendt for å beregne prosent inhibitering for forsøksforbindelsene, sammenlignet med blindprøver uten inhibitor. ICjo-robotverdiene, som tilsvarer den inhibitorkonsentrasjonen som forårsaker 50 % inhibitering av trombinaktiviteten, ble beregnet fra en log dose mot % inhibiteringskurve.

Forsøk C

Bestemmelse av inhibiteringskonstant Ki for humant trombin

Kj-bestemmelsene ble utført ved å anvende en kromogen substratmetode, utført ved 37°C på en Cobas Bio centrifugal analyser (Roche, Basel, Sveits). Resterende enzym-aktivitet etter inkubering av humant a-trombin med forskjellige konsentrasjoner av forsøksforbindelsen ble bestemt ved tre forskjellige substratkonsentrasjoner, og ble målt som forandringen i optisk absorbans ved 405 nm.

Løsninger av forsøksforbindelsen (100 ul; vanligvis i buffer er saltløsning som inneholder BSA 10 g/l) ble blandet med 200 ul humant a-trombin (Sigma Chemical Co) i undersøkelsesbuffer (0,05 mol/l Tris-HCl pH 7,4, ionestyrke 0,15 justert med NaCl) som inneholder BSA (10 g/l), og analysert som prøver i Cobas Bio. En 60 ul prøve, sammen med 20 ul vann, ble tilsatt til 320 ul av substratet S-2238 (Chromogenix AB, Molndal, Sverige) i bestemmelsesbuffer, og absorbansforandring (AA/min) ble fulgt. Den resulterende konsentrasjonen av S-2238 var 16,24 og 50 umol/1 og av trombin 0,125 NIH U/ml.

Den stabile reaksjonshastigheten ble anvendt for å tegne Dixon grafer, dvs. diagrammer av inhibitorkonsentrasjonen mot l/(AA/min). For reversible, kompetitive inhibitorer dannet datapunktene for de forskjellige substratkonsentrasjonene vanligvis rette linjer som skjærer hverandre ved x = -K,.

Forsøk D

Bestemmelse av aktivert partiell tromboplastintid ( AFTT)

APTT ble bestemt i normal human, citratbehandlet plasma som ble slått sammen med reagenset PTT Automated 5 fremstilt av Stago. Inhibitorene ble tilsatt til plasmaet (10 ul inhibitorløsning til 90 ul plasma) og inkubert med APTT reagens i 3 minutter etterfulgt av tilsetning av 100 ul kalsiumkloridløsning (0,025 M) og APTT ble bestemt i blandingen ved anvendelse av koagulasjonsanalysatoren KC10 (Amelung) etter bruks-anvisningen til produsenten av reagenset. Koagulasjonstiden i sekunder ble tegnet opp mot inhibitorkonsentrasjon i plasma og IC50APTT ble bestemt ved interpolasjon.

IC50APTT ble bestemt som konsentrasjonen av inhibitor i humant plasma som gjør at den aktiverte partielle tromboplastintiden blir dobbelt så stor.

Forsøk E

Bestemmelse av trombintid ex vivo

Inhibitering av trombin etter oral eller parenteral administrering av forbindelser av formel I, hvor D<1> og D2 representerer H og hvor minst én av D<1> og D2 er forskjellig fra H, oppløst i etanol:Solutol™:vann (5:5:90) ble undersøkt hos rotter som var ved bevissthet, som en eller to dager før forsøket ble utstyrt med et kateter for uttak av blod fra halspulsåren. Prøvedagen ble det tatt ut blodprøver ved faste tider etter administrering av forbindelsen i plastglass som inneholder 1 del natriumcitratløsning (0,13 mol per 1) og 9 deler blod. Rørene ble sentrifugert for å oppnå blodplatefattig plasma. Plasmaet ble anvendt for å bestemme trombintid som beskrevet nedenfor.

Citratbehandlet rotteplasma, 100 ul, ble fortynnet med en saltløsning, 0,9 %, 100 ul og plasmakoagulasjonen ble startet ved tilsetning av human trombin (T 6769 Sigma Chem Co, USA) i en bufferløsning, pH 7,4,100 ul. Koagulasjonstiden ble målt i et automatisk apparat (KC 10, Amelung, Tyskland).

Da det ble administrert en forbindelse av formel I hvor minst én av D<1> og D<2> er forskjellig fra H, ble konsentrasjonen av den passende aktive trombininhibitoren av formel I hvor D<1> og D2 representerer H, i rotteplasmaet bestemt ved anvendelse av standardkurver som vedrører trombintiden i blandet citratbehandlet rotteplasma i forhold til kjente konsentrasjoner av den tilsvarende "aktive" trombininhibitor oppløst i saltløsning.

Basert på de bestemte plasmakonsentrasjonene av den aktive trombininhibitoren av formel I hvor D<1> og D2 representerer H, (som antar at trombintidforlengelsen forårsaket av den ovenfor nevnte forbindelsen) hos rotten, ble beregnet av arealet under kurven etter oral og/eller parenteral administrering av det tilsvarende prodrug ifølge formel Ia (AUCpd) ved anvendelse av trapesregelen og ekstrapolasjon av data til uendelig. Biotilgjengeligheten av den aktive trombininhibitoren av formel I hvor D<1> og D<2 >representerer H, etter oral eller parenteral administrering av nevnte prodrug av formel I hvor minst én av D og D er forskjellig fra H, ble beregnet som angitt nedenfor:

[(AUFpd/dose)/(AUCaktiv,parenteral/dose] x 100

hvor AUCaktiv,parenteral betyr AUC oppnådd etter parenteral administrering av den tilsvarende aktive trombininhibitor av formel I hvor D<1> og D2 representerer H, til rotter som var ved bevissthet som omtalt ovenfor.

Forsøk F

Bestemmelse av trombintid i urin ex vivo

Mengden av den aktive trombininhibitor av formel I hvor D 1 og D 7 representerer H, som ble utskilt i urin etter oral eller parenteral administrering av forbindelser ifølge oppfinnelsen, oppløst i etanol: Solutol™:vann (5:5:90), ble estimert ved bestemmelse av trombintid i urin ex vivo (ved å anta at trombintidforlengelsen forårsakes av den ovenfor nevnte forbindelse).

Rotter som var ved bevissthet ble plassert i metabolismebur, som gir mulighet til atskilt uttak av urin og feces, i 24 timer etter oral administrering av forbindelser ifølge oppfinnelsen. Trombintiden ble bestemt ved hjelp av den uttatte urin som angitt nedenfor.

Blandet normal citratbehandlet humant plasma (100 ml) ble inkubert med den

konsentrerte rotteurinen, eller saltløsninger derav, i ett minutt. Plasmakoagulasjonen ble deretter initiert ved administrering av humant trombin (T 6768, Sigma Chem Company) i bufferløsning (pH 7,4; 100 fil). Koagulasjonstiden ble målt i et automatisk apparat (KC 10; Amelung).

Konsentrasjonene av den aktive trombininhibitoren av formel I hvor D<1> og D<2 >representerer H, i rotteurinen ble bestemt ved anvendelse av standardkurver som vedrører trombintiden i blandet normal citratbehandlet humant plasma i forhold til kjente konsentrasjoner av den tidligere nevnte aktive trombininhibitoren oppløst i konsentrert rotteurin (eller saltvannsløsninger derav). Ved å multiplisere den totale rotteurinproduksjonen i løpet av 24 timer med den beregnede gjennomsnittlige konsentrasjonen av den ovenfor nevnte inhibitor i urinen, kan beregnes mengden av den aktive inhibitor som utskilles i urinen (AMOUNTpd).

Biotilgjengeligheten av den aktive trombininhibitoren av formel I hvor Dl og D<2 >representerer H, etter oral eller parenteral administrering av nevnte prodrug ble beregnet som nedenfor:

[(AMOUNTpd/dose)/(AMOUNTaktiv,parenteral/dose] x 100

hvor AMOUNTaktiv,parenteral betyr mengden utskilt i urin etter parenteral administrering av den tilsvarende aktive trombininhibitor av formel I hvor D<1> og D<2 >representerer H, til rotter som er ved bevissthet som omtalt ovenfor.

Oppfinnelsen illustreres ved hjelp av de følgende eksempler. Aminosyrene Pro og Aze er definert som S-isomerene dersom intet annet er angitt. Eksemplene ble oppnådd som diastereoisomerer dersom intet annet er angitt.

EKSEMPLER

Generelle forsøksfremgangsmåter.

Massespektra ble målt på et Finnigan "MAT TSQ 700 triple quadrupole" massespektrometer utstyrt med en "electrospray interface (FAB-MS)" og "VG Platform II" massespektrometer utstyrt med en "electrospray interface (LC-MS)". <l>H NMR- og <13>C NMR-målingene ble utført på BRUKER ACP 300 og Varian UNITY pluss 400, 500 og 600 spektrometere som ble kjørt ved 'H-frekvenser på henholdsvis 300,12, 399,96, 499,82 og 599,94 MHz, og ved ,<3>C-frekvenser på henholdsvis 75,46,100,58, 125,69 og 150,88 MHz. Flashkromatografi ble utført på silikagel (230-400 mesh). Preparativ RPLC ble utført på omvendt fasekolonner (250 nm, 20 eller 50 mm; 5 til 7 um fase Chromasil C8) med strømningshastigheter på 10 til 50 ml/minutt ved anvendelse av en UV-detektor (270 til 280 nm).

Eksempel 1

( S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Pro-Pab (i) l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-ylkarboksylsyre, metylester

Undertittel forbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet av CF. Bigge et al (J. Med. Chem (1993) 36,1977) ved anvendelse av 7-metoksytetralon (1,0 g, 5,67 mmol) og metanol isteden for etanol. Utbytte: 1,22 g (90 %).

'H NMR (300 MHz; CDC13): 8 7,05 (d, 1H), 6,80 (d, IH), 6,65 (s, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 2,85-2,65 (m, 2H), 2,25-1,90 (m, 4H).

(ii) Hydroksy-7-metoksy tetralin-1 -ylkarboksylsyre 1 -hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-karboksylsyre, metylester (1,16 g; 4,9 mmol; fra trinn (i) ovenfor) ble oppløst i THF (10 ml) og litiumhydroksyd (0,41 g; 9,8 mmol) ble tilsatt til den resulterende løsningen, etterfulgt av vann (4 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved værelsestemperatur i 3 timer, THF ble fordampet og den vandige fasen ble vasket med metylenklorid. Reaksjonsblandingen ble surgjrot med HC1 (2 M) og deretter mettet med NaCl(s). Etter ekstraksjon med CH2CI2 ble den organiske fasen tørket og konsentrert. Utbytte: 765 mg (70 %).

LC-MS(m/z)(M-l)'

'H NMR (400 MHz; CDC13): 8 7,07 (d, 1H); 6,82 (dd, 1H); 6,77 (d, 1H); 3,76 (s, 3H); 2,83-2,71 (m, 2H); 2,32-2,21 (m, 1H); 2,12-1,88 (m, 3H)

(iii) (R)- og (S)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Pro-Pab(Z)

En løsning av l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-karboksylsyre (222 mg; 1,0 mmol; fra trinn (ii) ovenfor, H-Pro-Pab(Z) (499 mg; 1,1 mmol; fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284) og TBU (353 mg; 1,1 mmol) i DMF (10 ml) ble avkjølt til 0°C, og ble tilsatt DIPEA (517 mg, 4,0 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved værelsestemperatur i 4 dager og ble deretter tilsatt de samme mengder av H-Pro-Pab(Z), TBTU og DIPEA ved 0°C. Etter 3 dager ble reaksjonsblandingen konsentrert og oppløst i vanmEtOAc (1:1). Den vandige fasen ble ekstrahert med EtOAc og den sammenslåtte organiske fasen ble tørket (Na2S04) og konsentrert. Produktet ble renset ved anvendelse av flashkromatografi (EtPAc:EtOH; 100:0 til 95:5). Ytterligere rensing ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 40:60) atskilte diastereomerene: forbindelse IA (hurtig bevegende diastereomer; 10 mg; 1,7 %) og forbindelse IB (langsomt bevegende diastereomer; 10 mg; 1,7 %). Utbytte: 20 mg (3,4 %).

Forbindelse IA:

'H NMR (400 MHz; CDCI3): 8 7,82 (d, 2H); 7,44 (d, 2H); 7,38-7,29 (m, 4H); 7,05 (d, 2H); 6,80 (dd, 1H); 6,54 (d, 1H); 5,21 (s, 2H); 4,68-4,63 (dd, 1H); 4,45 (m, 2H); 3,71 (s, 3H); 3,12 (m, 1H); 2,83 (m, 1H); 2,68-2,53 (m, 2H); 2,22-2,13 (m, 2H); 2,05-1,84 (m, 7H); 1,59-1,50 (m, 1H).

Forbindelse IB:

'H NMR (400 MHz; CDC13): 8 7,82 (d, 2H); 7,43 (d, 2H); 7,37-7,28 (m, 4H); 7,02 (d, 2H); 6,77 (dd, 1H); 6,57 (d, 1H); 5,20 (s, 2H); 4,58-4,51 (m, 2H); 4,42 (m, 1H), 3,62 (s, 3H); 3,12-3,04 (m, 1H), 2,83 (bd, 1H); 2,68-2,58 (m, 1H); 2,55-2,47 (m, 1H); 2,13-1,79 (m, 7H); 1,76-1,65 (m, 1H).

(iv) (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Pro-Pab

Pd/C (5 %; 10 mg) ble tilsatt til en løsning av (R)- eller (S)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Pro-Pab(Z) (10 mg; 0,017 mmol; forbindelse IA fra trinn (iii) ovenfor) i EtOH (5 ml) og HOAc (1 ul, 0,017 mmol), og blandingen ble hydrert i 3 timer ved værelsestemperatur og lufttrykk. Den resulterende blandingen ble filtrert gjennom celite, løsningen ble konsentrert, ble tilsatt vann og løsningen ble frysetørket, får 10 mg (98 %; renhet 92,2 %) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver.

LS-MS(m/z)451 (M+ 1)+

'H NMR (400 MHz; CDjOD): 5 7,75 (d, 2H); 7,57 (d, 2H); 7,08 (d, 1H); 6,83 (dd, 1H), 6,60 (d, 1H); 4,63-4,40 (m, 3H), 3,69 (s, 3H); 3,43-3,35 (m, 1H); 2,88-2,67 (m, 3H); 2,23-2,11 (m, 2H); 2,20-1,77 (m, 8H); 1,63-1,51 (m, 1H).

Eksempel 2

(R)- eller (S)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Pro-Pab

Tittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel l(iv) ovenfor fra (R)- eller (S)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Pro-Pab(Z) (10 mg; 0,017 mmol; forbindelse IB fra eksempel l(iii) ovenfor). Utbytte: 10 mg (98 % ; renhet 80,4 %).

LC-MS (m/z) 451 (M + l)<+>

<*>H NMR (400 MHz; CD3OD): 5 7,78 (d, 2H); 7,63 (d, 2H); 7,04 (d, 1H); 6,78 (dd, 1H), 6,75 (d, 1H); 4,67-4,48 (m, 3H); 3,68 (s, 3H); 3,30-3,23 (m, 1H), 2,86-2,61 (m, 3H); 2,23-1,71 (m, 11H).

Eksempel 3

(S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksvtetraliii-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc (i) (S>- og (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z)

TBTU (0,584 g; 1,7 mmol) etterfulgt av DIPEA (0,200 g; 1,55 mmol) ble tilsatt til en iskald løsning av l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-karboksylsyre (0,345 g; 1,55 mmol; se eksempel l(ii) ovenfor) i DMF (10 ml). Etter omrøring ved 0°C i 15 minutter ble fremstilt H-Aze-Pab(Z) x 2HC1 (0,750 g, 1,7 mmol; etter fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284) og ble tilsatt DIPEA (0,603 g; 4,65 mol) og blandingen ble omrørt ved RT i 4 dager. DMF ble fordampet, og det resulterende materialet ble fordelt mellom vann og EtOAc. Det organiske sjiktet ble atskilt, vannfasen ble ekstrahert tre ganger med EtOAc, og det sammenslåtte organiske sjikt ble tørket (Na2S04) og konsentrert. Produktet, et hvitt pulver, ble ytterligere renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 46:54) som gir 122 mg (28 %) av en hurtig bevegende fraksjon (forbindelse 3A) og 63 mg (14 %) av en langsomt bevegende fraksjon (forbindelse 3B).

Forbindelse 3A:

LC-MS (m/z) 571 (M+l)+

<]>H NMR (400 MHz; CDC13): (kompleks som skyldes rotamerer): 8 8,22 (t, 0,5H, rotamer); 7,94 (t, 0,5H, rotamer); 7,83 (t, 1H); 7,45-7,3 (m, 9H); 7,4 (t, 1H); 6,80 (m, 1H); 4,93 (m, 1H); 4,55 (rn, 5H); 3,76 (s, 3H); 3,0 (m, 2H); 2,8 (m, 2H); 2,6 (m, 2H); 2,5 (m, 1H); 2,38 (m, 1H); 2,25 (m, 1H); 2,0-1,8 (m, 9H).

(ii) (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel l(iv) fra (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (0,058 g, 0,1 mmol; forbindelse 3A fra trinn (i) ovenfor); HOAc (5,8 ul; 0,1 mmol) og Pd/C (5 %; 50 mg) i EtOH (5 ml). Utbytte: 15 mg (59 %).

LC-MS (m/z) 437 (M + 1)<+>

'H NMR (400 MHz; D20): 8 7,65 (d, 2H); 7,47 (d, 2H); 7,16 (d, 1H); 6,90 (d, 1H), 6,71 (d, 1H), 4,91 (dd, 1H); 4,40 (m, 1H); 4,15 (m, 1H), 3,94 (m, 1H); 3,60 (s, 3H); 2,75 (m, 3H); 2,53 (m, 1H); 2,1 (m, 2H); 2,0-1,75 (m, 7H).

<I3>C-NMR (100 MHz; CDC13) 8 182,5; 178,3; 174,0

Eksempel 4

(R)- eller (S)-l-hydroksy-7-metoksytetraliii-l-yl-C(0)-Aze-Pab (i) 4-(amino, metoksyiminometyl)benzylamin (H-Pab(OMe)

Platinaoksyd (200 mg) ble tilsatt til en løsning av 4-(amino, metoksyiminometyl) benzylazi (10 g; 0,049 mol; fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i WO 94/29336) i 200 ml etanol. Blandingen ble hydrert ved atmosfærisk trykk i 8 timer, filtrert gjennom Hyflo og konsentrert. Råproduktet ble anvendt direkte i det følgende trinn.

<*>H NMR (400 MHz; CD3OD): 5 7,60 (d, 2H); 7,37 (d, 2H); 3,81 (s, 3H); 3,80 (s, 2H).

(ii) Boc-Aze-Pab(OMe)

DIPEA (17,5 ml; 1,05 mmol) ble tilsatt til en iskald løsning av Boc-Aze-OH (9,7 g; 48 mmol) og H-Pab(OMe) (9,4 g; 52 mmol; fra trinn (i) ovenfor) og TBTU (18,5 g; 58 mmol) i DMF (100 ml) og blandingen ble omrørt natten over ved RT. Den resulterende blandingen ble helt ned i vann (50 ml), pH ble justert til ca 9, og blandingen ble ekstrahert tre ganger med EtOAc. De sammenslåtte organiske sjikt ble vasket med NaHC03/aq, vann og saltløsning, tørket (Na2S04) og konsentrert. Råproduktet ble renset ved anvendelse av flashkromatografi (Si-gel, EtOAc). Utbytte: 11,9 g (69 %).

'H NMR (400 MHz; CDC13): 8 7,60 (d, 2H); 7,31 (d, 2H); 4,78 (b, 2H); 4,69 (m, 1H); 4,50 (b, 2H); 3,92 (s+m, 4H); 3,79 (m, 1H); 2,46 (b, 2H); 1,42 (s, 9H).

(iii) H-Aze-Pab(OMe) x 2 HCl

En løsning av Boc-Aze-Pab(OMe) (9,4 g; 26 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) i EtOAc (250 ml) ble mettet med HCl(g). Det ble tilsatt EtOH (abs; 125 ml) til den resulterende emulsjonen og blandingen ble behandlet med ultralyd i 10 minutter. Det ble tilsatt EtOAc inntil løsningen ble uklar, deretter krystalliserte undertittelproduktet. Utbytte: 6,7 g (77 %).

LS-MS (m/z) 263 (M + 1)<+>

'H NMR (400 MHz; CD3OD): 8 7,74 (d, 2H); 7,58 (d, 2H); 5,13 (t, 1H); 4,57 (m, 2H); 4,15 (m, 2H); 3,97 (s+m, 4H); 2,87 (m, 1H), 2,57 (m, 1H)

<13>C-NMR (75 MHz; CDCI3): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 5 168,9; 168,8; 161,9.

(iv) l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(OMe)

H-Aze-Pab(OMe) (=587 g; 1,85 mmol; fra trinn (iii) ovenfor), TBTU (0,594 g; 1,85 mmol) og DIPEA (0,87 g; 6,73 mmol) ble tilsatt, i denne rekkefølgen, til en iskald løsning av l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-karboksylsyre (0,374 g; 1,68 mmol; se eksempel l(ii) ovenfor) i CH3CN. Den resulterende blandingen ble omrørt ved RT i 6 dager. Løsningen ble konsentrert og råmaterialet ble renset ved anvendelse av preparativ HPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 25:75), som gir atskilte diastereomerer, som gir 122 mg (31,2 %) av en hurtig bevegende diastereomer (forbindelse 4A) og 120 mg (30,7 %) av en langsomt bevegende diastereomer (forbindelse 4B).

Forbindelse 4B:

LC-MS (m/z) 466 (M + 1)<+>

<]>H NMR (500 MHz; CDC13): 8 8,08 (t, 1H); 7,63 (d, 2H); 7,35 (d, 2H); 7,02 (d, 1H); 6,80 (dd, 1H); 6,57 (d, 1H); 4,90 (dd, 1H); 4,79 (b, 2H); 4,53 (m, 2H); 3,91 (s, 3H); 3,65 (s+m, 4H); 2,97 (q, 1H); 2,81 (bd, 1H); 2,59 (m, 1H); 2,49 (m, 1H); 2,38 (m, 1H); 2,03-1,85 (m,4H).

(v) (R)- eller (S)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab

Tittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel l(iv) ovenfor fra l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(OMe) (20 mg; 0,043 mmol; forbindelse 4B fra trinn (iv) ovenfor), AcOH (3 mg; 0,05 mol) og Pd/C (10 %; 20 mg) i EtOH (5 ml). Utbytte: 19 mg (89 %).

LS-MS (m/z) 436 (M + 1)<+>

<!>H NMR (400 MHz; D20): 8 7,79 (d, 2H); 7,55 (m, 2H); 7,20 (d, 1H); 6,95 (m, 1H); 6,79 (d, 1H); 4,92 (dd, 1H); 4,58 (m, 2H); 4,18 (m, 2H); 3,77 )s, 3H); 3,63 (m, 2H); 2,8 (m, 3H); 2,6 (m, 2H); 2,1 (m, 4H); 1,9 (m, 2H)

<13>C-NMR (75 MHz; CDCI3): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 177,9; 173,8; 167,6.

Eksempel 5

l-hydroksy-5-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

(b) l-hydroksy-5-metoksytetralin-l-yl-karboksylsyre, metylester

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet av Bigge et al (J. Med. Chem. (1993) 36,1977) fra 5-metoksytetralon (1,0 g; 5,67 mmol); Me3SiCN (0,619 g; 6,24 mmol) og Znl2 (8 mg; kat.). Utbytte 1,11 g (83 %).

'H NMR (500 MHz; CDC13): 6 7,16, (m, 1H); 6,91 (d, 1H), 6,76 (t, 1H), 6,45 (br, 1H), 5,97 (br, 1H); 3,815 (s, 2H); 3,81 (s, 3H); 2,88 (m, 1H); 2,56 (m, 2H); 2,14 (m, 2H); 1,95 (m, 2H).

(c) l-hydroksy-5-metoksytetralin-l -yl-karboksylsyre

Fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel l(ii) ovenfor fra l-hydroksy-5-metoksytetralin-1-yl-karboksylsyre, metylester (1,11 g; 4,7 mmol; fra trinn (i) ovenfor) og LiOH.H30 (0,395 g; 9,4 mmol). Utbytte 460 mg (36 %).

■h NMR (400 MHz; CDC13): 8 7,18 (m, 1H); 6,86 (d, 1H); 6,79 (d, 1H); 3,82 (s, 3H); 2,86 (dt, 1H); 2,58 (m, 1H); 2,20 (m, 1H); 2,10-1,85 (m, 4H)

(d) l-hydroksy-5-metoksytetratin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z)

TBTU (0,528 g; 1,64 mmol) ble tilsatt til en iskald oppløsning av l-hydroksy-5-metoksytetralin-1-yl-karboksylsyre (0,322 g; 1,49 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) i CH3CN (15 ml). Blandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer, og ble tilsatt H-Aze-Pab(Z)x 2HC1 ()0,656 g; 1,49 mmol) og DIPEA (0,599 g; 3,1 mmol). Den resulterende blanding ble omrørt ved RT natten over og løsningen ble konsentrert. Råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 40:60). Utbytte 140 mg (16%).

LC-MS (m/z) 571 (M+l)+

'H NMR (400 MHz; CDC13): 8 7m82 (dd, 2H); 7,43 (d, 2H); 7,33 (t, 2H); 7,27 (m, 3H); 6,73 (m, 2H); 5,20 (s, 2H); 4,89 (m, 1H); 4,60-4,40 (m, 2H); 3,80 (s, 3H); 3,62 (m, 1H); 2,94 (m, 2H); 2,34 (m, 2H); 1,95-1,8 (m, 4H).

<13>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 5 184,2; 179,0; 178,6; 172,3; 171,6; 168,9.

(e) l-hydroksy-5-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel l(iv) fra l-hydroksy-5-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (47 mg; 0,082 mmol; fra trinn (iii) ovenfor), AcOH (5 mg; 0,082 mmmol) og Pd/C (5 %; 20 mg) i EtOH (5 ml). Utbytte 37 mg (100 %).

LC-MS (m/z) 437 (M+l)<+>

<!>H NMR (400 MHz; D20): 8 7,76 (dd, 2H); 7,54 (dd, 2H); 7,27 (m, 1H); 7,01 (t, 1H); 6,90 (dd, 1H); 4,91 (dd, lH); 4,5 (m, 1H); 4,20 (m, 1H); 3,87 (s, 3H), 3,63 (m, 1H); 2,90 (m, 1H); 2,7-2,4 (m, 2H); 2,24 (m, 1H)

<I3>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 181,5; 177,5; 177,2; 173,1; 173,0; 166,7.

Eksempel 6

l-hydroksy-5,7-dimetyltetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

(b) l-hydroksy-5,7-dimetyltetralin-l-yl-karboksylsyre, metylester

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter en fremgangsmåte beskrevet av Bigge et al (J. Med. Chem. (1993) 36,1977) fra 5,7 dimetyltetralon (1,0 g; 5,74 mmol); Me3SiCN (0,626 g; 6,31 mg) og Znl2 (8 mg; kat). Utbytte 1,24 g (92 %).

<!>H NMR (400 MHz; CDC13): 8 6,94 (s, 1H); 6,81 (s, 1H); 3,77 (s, 3H); 2,82 (t, 1H); 2,73 (m, 1H); 2,60 (m, 3H); 2,25 (s, 3H); 2,21 (s, 3H); 2,00 (m, 3H).

(c) l-hydroksy-5,7-dimetyltetralin-l-yl-karboksylsyre

Fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel l(ii) fra l-hydroksy-5,7-dimetyl-tetralin-1-yl-karboksylsyre, metylester (1,24 g; 5,27 mmol; fra trinn (i) ovenfor) og LiOH.H20 (0,443 mg; 10,6 mmol). Utbytte 0,629 g (50 %).

LC-MS (m/z) 437 (M-l)"

'H NMR (400 MHz; CDCI3): 5 6,97 (s, 1H); 6,92 (s, 1H); 2,72 (m, 1H); 2,60 (m, 1H); 2,27 (s, 3H); 2,22 (s, 3H); 2,06 (m, 2H); 1,95 (m, 2H).

(d) l-hydroksy-5,7-dimetvltetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(OMe)

Fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 4(iv) ovenfor fra l-hydroksy-5,7-dimetyltetralin-1-yl-karboksylsyre (0,20 g; 0,91 mmol; fra trinn (ii) ovenfor), H-Aze-Pab(OMe) x 1.5HC1 (0,317 g; 1,0 mmol; se eksempel 5(iii) ovenfor), TBTU (0,321 g; 1,0 mol) og DIPEA (0,469 g; 3,63 mmol). Løsningen ble konsentrert og resten ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 30:70). De fraksjoner som var av interesse ble konsentrert og ble deretter ekstrahert (x3) med EtOAc. Det kombinerte organiske sjiktet ble tørket (Na2S04) og konsentrert. Råproduktet ble oppløst i en liten mengde vann/CHsCN og frysetørket. Utbytte 40 mg (9,5 %).

LC-MS (m/z) 463 (M+l)<+>

TH NMR (400 MHz; CDCI3): (kompleks som skyldes diastereomerer/rotamerer) 5 8,19 (bt, 0,5 H, rotamer); 7,91 (bt, 0,5H, rotamer); 7,61 (dd, 2H); 7,35 (d, 1H); 7,28 (d, 1H), 6,93 (s, 0,5H, rotamer); 6,91 (s, 0,5H, rotamer); 6,80 (s, 0,5H, rotamer); 6,70 (s, 0,5H, rotamer); 4,91 (m, 2H); 4,79 (b, 2H); 4,50 (m, 3H); 3,91 (d, 3H); 3,74 (m, 0,5H, rotamer); 3,61 (m, 0,5H, rotamer); 2,78 (bd, 1H); 2,57 (m, 1H); 2,38 (m, 2H); 2,26 (m, 2H), 2,19 (d, 6H); 1,95 (m, 3H).

<I3>C-NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 179,2; 178,9; 171,6; 171,4.

(e) l-hydroksy-5,7-dinier> ltctralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel l(iv) ovenfor fra l-hydroksy-5,7-dimetyltetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(OMe) (20 mg; 0,043 mmol; fra trinn (iii) ovenfor), HOAc (2,6 mg; 0,043 mmol) og Pd/C (10 %; 10 mg). Utbytte 20 mg (94 %).

LC-MS (m/z) 435 (M+l)<+>

<]>H NMR (400 MHz; D20): 8 7,79 (dd, 1H); 7,70 (d, 1H); 7,53 (m, 2H); 7,07 (d, 1H); 6,92 (s, 1H); 4,91 (m, 1H); 4,17 (m, 1H); 3,76 (m, 0,5H, rotamer); 3,60 (m, 0,5H, rotamer); 2,80 (d, 1H); 2,55 (m, 2H); 2,23 (s, 3H); 2,07 (m, 2H); 1,95 (s, 6H)

<13>C-NMR (100 MHz; D20): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 177,9; 173,3

Eksempel 7

l-hydroksy-7-aminoterralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

(b) l-hydroksy-7-nitrotetraIin-l-yl-karboksylsyre, metylester

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet av Bigge et al (J. Med. Chem. (1993) 36,1977) fra 7-nitrotetralon (2,0 g; 10,5 mmol); Me3SiCN (1,14 g; 11,5 mg) og Znl2 (8 mg; kat). Utbytte 2,87 g (100 %) (over 3 trinn).

'H NMR (400 MHz; CDC13): 8 8,16 (dd, 1H); 8,04 (m, 1H), 7,36 (dd, 1H); 3,73 (s, 3H); 2,92 (m, 2H); 2,30 (m, 1H); 2,00 (m, 3H)

(c) l-hydroksy-7-nitrotetralin-l-yl-karboksylsyre

Undertittelforbindelsen ble fremstilt ved fremgangsmåten beskrevet i eksempel l(ii) ovenfor fra l-hydroksy-7-nitrotetralin-l-yl-karboksylsyre, metylester (2,0 g; 8,3 mmol; fra trinn (i) ovenfor og LiOH.H20 (0,7 g; 16,6 mmol). Utbytte 1,72 g (88 %).

LC-MS (m/z) 236 (M+l)<+>

'H NMR (400 MHz; CDCI3): 8 8,10 (dd, 1H); 8,05 (m, 1H); 7,30 (d, 1H); 2,92 (m, 2H); 2,30 (m, 1H); 2,15-1,85 (m, 3H).

(d) l-hydroksy-7-nitrotetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z)

HATU (0,352 g; 0,93 mmol) og DIPEA (0,200 g; 1,55 mmol) ble tilsatt til en iskald løsning av l-hydroksy-7-nitrotetralin-l-yl-karboksylsyre (0,200 g; 0,84 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) i DMF (5 ml). Etter omrøring ved 0°C i 15 minutter ble tilsatt en løsning av H-Aze-Pab(Z) x 2HC1 (0,408 g; 0,93 mmol) og 2,4,6-trimetylpyridin (0,409 g; 3,37 mmol) i 5 ml DMF ved 0°C, og blandingen ble omrørt ved RT natten over. DMF ble fordampet, og råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 40:60). Produktet ble ytterligere renset ved anvendelse av HPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 46:54), utbytte 2,14 mg (44 %) av undertittelforbindelsen.

LC-MS (m/z) 586 (M+l)+

<l>H NMR (400 MHz; CDCI3): 8 8,1 (m, 2H); 7,77 (d, 1H); 7,71 (d, 1H); 7,40 (d, 2H); 7,32 (t, 2H); 7,27 (m, 2H); 7,18 (d, 1H); 4,88 (m, 1H); 4,54 (m, 0,5H, rotamer); 4,45 (dd, 0.5H, rotamer); 4,34 (m, 1H); 3,94 (m, 0,5H, rotamer); 3,82 (m, 0,5H, rotamer); 3,17 (m, 1H); 2,90 (t, 1H); 2,73 (m, 1H); 2,45-2,20 (m, 2H); 2,05-1,85 (m, 5H).

(e) l-hydroksy-7-aminotetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Tittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel l(iv) ovenfor fra l-hydroksy-7-nitrotetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (0,064 g; 0,11 mmol; fra trinn (iii) ovenfor), HOAc (6,3 ul; 0,11 mmol), og Pd/C 832 mg). Det faste råproduktet ble oppløst i vann, og vannløsningen ble frysetørket, og man får 40 mg (76 %).

LC-MS (m/z) 422 (M+l)<+>

'H NMR (400 MHz; D20): 8 7,75 (m, 2H); 7,53 (dd, 2H); 7,07 (d, 1H); 6,82 (bt, 1H); 6,67 (b, 1H), 4,93 (m, 1H); 4,6-4,4 (m, 2H); 4,29 (m, 0,5H, rotamer); 4,18 (m, 1H); 3,7 (m, 1H); 2,8-2,5 (3H).

<13>C-NMR (100 MHz; CDCI3) (karbonl og/eller amidinkarboner) 8 178,4; 178,1; 173,9; 173,8; 167,5.

Eksempel 8

l-hydroksvtetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

(b) 1-hydroksy tetralin-1-yl-karboksylsyre, metylester

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet av Bigge et al (J. Med. Chem. (1993) 36,1977) fra tetralon (2,0 g; 13,7 mmol), Me3SiCN (1,49 g; 15 mmol) og Znl2 (8 mg; kat). Utbytte 2,5 g (88 %).

(c) 1-hydroksytetralin-l-yl-karboksylsyre

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel l(ii) ovenfor fra 1-hydroksytetralin-l-yl-karboksylsyre, metylester (2,5 g; 12,1 mmol; fra trinn (i) ovenfor) og LiOH.H20 (1,02 g; 24,2 mmol). Utbytte 400 mg (17 %).

'H NMR (400 MHz; CDCI3): 6 7,18 (m, 4H); 2,92 (t, 0,5H, rotamer); 2,78 (m, 2H); 2,61 (t, 0,5H, rotamer); 2,22 (m, 1H); 2,1-1,8 (m, 4H).

(d) l-hydroksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z)

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel S(iii) ovenfor fra 1-hydroksytetralin-l-yl-karboksylsyre (0,284 g; 1,50 mmol; fra trinn (ii) ovenfor), TBTU (0,531 g; 1,65 mmol), H-Aze-Pab(Z) x 2HC1 (0,660 g; 1,50 mmol) og DIPEA (0,602 g; 3,1 mmol). Råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 40:60). Utbytte 70 mg (8,6 %).

LC-MS (m/z) 542 (M+l)<+>

'H NMR (400 MHz; D2O): (kompleks som skyldes diastereomerer/rotamerer) 8 8,15 (t, 0,5H, rotamer); 7,97 (t, 0,5H, rotamer); 7,81 (dd, 2H); 7,43 (dd, 2H); 7,30 (m, 5H); 7,19 (m, 2H); 7,12 (m, 2H); 4,88 (m, 1H); 4,47 (m, 2H); 3,79 (m, 0,5H, rotamer); 2,89 (m, 2H); 2,66 (m, 1H); 2,50 (m, 0,5H, rotamer); 2,35 (m, 1H); 2,19 (m, 0,5H, rotamer); 1,95

(m, 5H)

<13>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner, kompleks som skyldes diastereomerer/rotamerer) 8 177,7; 177,4; 171,1; 170,5; 170,3; 167,7; 164,4.

(e) l-hydroksytetralin-l-vl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Tittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel l(iv) ovenfor fra l-hydroksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (70 mg; 0,13 mmol; fra trinn (iii) ovenfor), AcOH (5 mg; 0,13 mmol) og Pd/C (5 %; 35 mg) i EtOH (5 ml). Utbytte 61 mg (100 %).

LS-MC (m/z) 407 (M+l)<+>

'H NMR (400 MHz; CD3OD: 8 7,74 (dd, 2H); 7,55 (dd, 2H); 7,29 (d, 1H); 7,15 (m, 3H); 4,59 (m, 1H); 4,46 (m, 1H); 4,25 (m, 1H); 4,08 (m, 1H); 3,69 (m, 1H); 2,80 (m, 2H); 2,46 (m, 1H); 2,3-2,15 (m, 2H).

,<3>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 180,1; 178,0; 177,8; 173,2; 168,2

Eksempel 9

7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

(b) 7-metoksy-3,4-dihydronaftaIen-l-yI-karboksylsyre, metylester

En løsning av l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-karboksylsyre, metylester (0,5 g; 2,10 mmol; se eksempel l(i) ovenfor) i toluen (5 ml) ble tilsatt til en løsning under tilbakeløp av p-TsOH (0,6 g; 3,2 mmol) i toluen (10 ml), og den resulterende blandingen ble oppvarmet under tilbakeløp i 45 minutter. Etter avkjøling ble reaksjonsblandingen fortynnet med eter, vasket med vann og NaHC03/aq, tørket med Na2S04 og konsentrert. Utbytte 392 mg (85 %).

<l>H NMR (500 MHz; CDC13): 8 7,46 (d, 1H); 7,19 (t, 1H); 7,06 (d, 1H); 6,75 (dd, 1H); 3,84 (s, 3H); 3,83 (s, 3H); 2,69 (t, 2H); 2,38 (m, 2H).

(c) 7-metoksy-3,4-dihydronaftalen-l-yl-karboksylsyre

Undertittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel l(ii) ovenfor fra 7-metoksy-3,4-dihydronaftalen-l-yl-karboksylsyre, metylester (0,39 g; 1,79 mmol; fra trinn (i) ovenfor) og LiOH.H20 (0,15 g; 3,57 mmol). Utbytte 148 mg (40 %).

LC-MS (m/z) 203 (M+l)<+>

'H NMR (400 MHz; CDC13): 5 7,56 (d, 1H), 7,44 (t, 1H); 7,09 (d, 1H); 6,77 (dd, 1H); 3,82 (s, 3H); 2,72 (t, 2H); 2,44 (m,2 H).

(d) 7-metoksy-3,4-dihydronaftalen-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z)

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 3(i) ovenfor fra 7-metoksy-3,4-dihydronaftalen-l-yl-karboksylsyre (01,45 g; 0,71 mmol; fra trinn (ii) ovenfor), H-Aze-Pab(Z) x 2 HC1 (0,343 g; 0,78 mmol); TBTU (0,251 g; 0,78 mmol) og DIPEA (0,364 g, 2,84 mmol). Råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,l M ammoniumacetat; 54,46). Den resulterende løsning ble konsentrert og det vandige sjiktet ble ekstrahert med EtOAc tre ganger. Det kombinerte organiske sjikt ble tørket (Na2S04) og konsentrert, og man får 121 mg (31 %).

LC-MS (m/z) 553 (M+l)<+>

'H NMR (500 MHz; CDCI3): 8 8,25 (t, 1H); 7,82 (d, 2H); 7,43 (d, 2H); 7,37-7,27 (m, 5H); 7,06 (d, 1H); 6,81 (d, 1H); 6,72 (dd, 1H); 6,35 (t, 1H); 5,20 (s, 2H); 5,03 (dd, 1H); 4,52 (m, 2H); 3,93 (m, 2H); 2,71 (t, 2H), 2,35 (m, 2H).

(e) 7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Tittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel l(iv) ovenfor fra 7-metoksy-3,4-dihydronaftalen-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (88 mg; 0,16 mmol), AcOH (9 mg; 0,16 mmol) og Pd/C (10 %; 44 mg). Utbytte 56 mg (73 %), 60:40 diastereomerblanding.

LC-MS (m/z) 421 (M+l)<+>

'H NMR (500 MHz; D20): 6 7,78 (t, 1H); 7,65 (d, 1H); 7,55 (dd, 1H); 7,49 (d, 1H); 7,42 (d, 2H), 7,36 (d, 2H); 7,16 (m, 1H); 7,05 (d, 1H); 6,84 (dd, 1H); 6,73 (dd, 1H); 6,06 (d, 1H); 5,18 (dd, 1H); 4,96 (m, 1H); 4,12 (m, 2H); 3,92 (m, 2H); 3,82 (d, 1H); 3,62 (m, 3H); 2,7 (m, 6H); 2,4 (m, 2H), 2,05 (m, 2H); 1,9 (m, 1H); 1,2 (m, 2H); 1,5 (m, 1H)

<13>C-NMR (100 MHz; D20): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 182,3; 179,3; 179,1; 178,8; 173,7; 173,4; 173,0; 166,3.

Eksempel 10

(R)- og (S)-7-metoksy-l-metyltetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab

(b) 7-metoksytetralin-l-yl-karboksylsyre, metylester

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåter beskrevet i eksempel l(iv) ovenfor fra 7-metoksy-3,4-dihydronaftalenl-yl-karbokylsyre, metylester (3,3 g; 15 mmol; se eksempel 9(i) ovenfor) og Pd/C (10 %; 0,5 g). Den resulterende blanding ble filtrert gjennom Hyflo og konsentrert. Råproduktet ble renset under anvendelse av flashkromatografi (Si-gel; heptan:EtOAc; 4,1). Utbytte 2,4 g (72 %).

'H NMR (400 MHz; CDCI3): 8 7,04 (d, 1H); 6,77 (dd, 1H); 6,72 (d, 1H); 3,82 (t, 1H); 3,78 (s, 3H); 3,73 (s, 3H); 2,75 (m, 3H); 2,14 (m, 1H); 1,99 (m, 2H); 1,77 (m, 1H).

(c) 7-metoksy-l-metyltetraIin-l-yl-karboksylsyre, metylester

7-metoksytetralin-l -yl-karboksylsyre, metylester (0,4 g; 1,8 mmol; fra trinn (i) ovenfor) og Mel (0,13 ml, 2,0 mmol) ble tilsatt til en slurry av NaH (55 % i olje; 87 mg; 2,0 mmol) i DMF (5 ml) og blandingen ble omrørt ved RT natten over. Den resulterende blanding ble helt ned i vann og vannblandingen ble ekstrahert med EtOAc:toluen tre ganger. De kombinerte organiske sjikt ble vasket med vann, tørket (Na2S04), og konsentrert. Flashkromatografi (Si-gel; heptan:EtOAc; 4:1) ga 0,18 g (42 %) av undertittelforbindelsen.

'H NMR (500 MHz; CDC13): 57,04 (d, 1H); 6,76 (m, 2H), 3,79 (s, 3H); 3,69 (s, 3H); 2,76 (m, 2H); 2,32 (m, 1H); 1,91 (m, 1H); 1,83 (m, 2H); 1,75 (m, 1H); 1,58 (s, 3H).

(d) 7-metoksy-l-metyltetralin-l-yl-karboksylsyre

En blanding av 7-metoksy-l-metyltetralin-1 -yl-karboksylsyre, metyleser (0,67 g; 2,9 mmol) fra trinn (ii) ovenfor) og KOH (4 g) i EtOH:H20 (1,1; 50 ml) ble omrørt natten over. Den resulterende blandingen ble fortynnet med vann og ekstrahert med eter. Det vandige sjiktet ble surgjort (HC1) og ekstrahert tre ganger med eter. De kombinerte organiske sjikt ble vasket med vann, tørket (Na2S04) og konsentrert. Utbytte 0,58 g (81 %).

'H NMR (300 MHz; CDC13): 8 7,02 (d, 1H); 6,85 (d, 1H); 6,75 (dd, 1H); 3,77 (s, 3H); 2,75 (m, 2H); 2,32 (m, 1H), 1,91 (m, 1H); 1,82 (m, 1H); 1,75 (m, 2H); 1,55 (s, 3H)

(e) 7-metoksy-l -metyltetralin-1 -yl-C(0)-Aze-Pab(Z)

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 3(i) ovenfor fra 7-metoksy-l-metyltetralin-1-yl-karboksylsyre (0,14 g; 0,64 mmol; fra trinn (iii) ovenfor), TBTU (0,31 g; 0,97 mmol), H-Aze-Pab(Z) (0,42 g; 0,97 mmol) og DIPEA (0,50 g; 0,67 mmol). Råproduktet ble renset ved anvendelse av flashkromatografi (Si-gel, EtOAc). Utbytte 0,26 mg (72 %).

<J>H NMR (400 MHz; CDC13): 8 8,40 (b, 0,5H, rotamer); 8,27 (b, 0,5H, rotamer); 7,90 (d, 2H); 4,84 (d, 2H); 7,45 (m, 2H); 7,4-7,25 (m, 5H); 7,00 (t, 1H); 6,75 (dd, 0,5H, rotamer); 6,71 (dd, 0,5H, rotamer); 6,62 (d, 0,5H, rotamer); 6,50 (d, 0,5H, rotamer); 5,52 (s, 3H); 4,87 8dd, 1H); 4,65-4,40 (m, 2H); 3,78 (s, 3H); 3,69 (s, 3H); 3,60 (m, 1H);

2,78 (m, 2H); 2,65 (m, 1H); 2,45 (m, 1H); 2,20 (m, 1H); 1,90 (m, 3H); 1,75 (m, 3H); 1,50 (s, 3H).

(f) (R)- og (S)-7-metoksy-l-metyltetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab

Tittelforbindelsene ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel (iv) ovenfor fra 7-metoksy-l -metyltetralin-1-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (0,10 g; 0,18 mmol) fra trinn (iv) ovenfor) og Pd/C (10 %) i EtOH (10 ml). Råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 30:70 til 32,5:67,5) og man får diastereomerer. De enkelte løsningene som inneholder diastereomerene ble konsentrert. Frysetørking av løsningene ga oppfinnelsen som ble oppnådd fra den hurtigste fraksjon (forbindelse 10A; 30 mg; 69 %) og den langsomste fraksjon (forbindelse 10B; 28 mg; 64 %).

Forbindelse 10A (i det følgende betegnet som (R) eller (S)):

LC-MS (m/z) 435 (M+l)<+>

<!>H NMR (400 MHz; D20): 8 7,74 (d, 2H); 7,49 (d, 2H); 7,10 (d, 1H); 6,85 (dd, 1H); 6,66 (d, 1H); 4,53 (q, 1H); 3,85 (m, 1H); 3,77 (s, 3H); 2,98 (m, 1H); 2,70 (m, 2H); 2,28 (m, 1H); 2,03 (m, 2H); 1,95 (s, 3H); 1,88 (m, 1H); 1,72 (m, 1H); 1,44 (s, 3H)

<13>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 180,8; 174,1; 167,6; 158,5

Forbindelser 10B (i det følgende betegnet som (S) eller (R)):

LC-MS (m/z) 435 (M+l)<+>

'H NMR (400 MHz; D2OD: 8 7,75 (d, 2H); 7,50 (d, 1H); 7,06 (d, 1H); 6,80 (bd, 1H); 6,68 (b, 1H); 4,52 (q, 2H); 3,75 (m, 4H); 2,88 (m, 1H); 2,68 (m, 1H); 2,37 (m, 1H); 1,90 (s, 3H); 2,0-1,6 (m, 4H); 1,41 (s, 3H)

<I3>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 180,9; 174,0; 167,5; 158,4.

Eksempel 11

4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x OAc

(b) 4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yI-karboksylsyre, metylester

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet av Bigge et al (J. Med. Chem. (1993) 36, 1977) fra 6-metoksykroman-4-on (1,29 g; 7,23 mmol), Me3SiCN (0,79 g; 8,0 mmol) og Znl2 (20 mg; kat). Utbytte 1,11 g (64 %).

<!>H NMR (500 MHz; CD3OD: 8 6,80 (dd, 1H); 6,73 (d, 1H), 6,72 (s, 1H); 4,28 (m, 1H); 4,14 (dt, 2H); 3,74 (s, 3H); 3,70 (s, 3H); 2,47 (m, 1H); 2,02 (m, 1H).

(c) 4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yl-karboksylsyre

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel l(ii) ovenfor fra 4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yl-karboksylsyre, metylester (1,09 g; 4,58 mmol; fra trinn (i) ovenfor) og LiOH.H20 (0,39 g; 9,2 mmol). Utbytte 0,71 g (69 %).

LC-MS (m/z) 223(M+1)+

'H NMR (300 MHz; CD3OD): 8 6,81 (m, 1H), 6,77 (m, 1H); 6,74 (m, 1H); 4,31 (m, 1H); 4,14 (m, 1H); 3,71 (s, 3H); 2,50 (m, 1H); 2,03 (m, 1H)

(d) 4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Z)

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 3(i) ovenfor fra 4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yl-karboksylsyre (0,104 g; 0,464 mmol; fra trinn (ii) ovenfor), TBTU (0,29 g; 0,90 mmol), DMF (8 ml), DIPEA (80 ul + 320 ul; 0,46 mmol + 1,84 mmol) og H-Aze-Pab(Z) (0,4 g; 0,91 mmol). Råproduktet, 0,27 g av en gul viskøs olje, ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat 40:60), fraksjoner av interesse ble konsentrert og ekstrahert med EtOAc. Utbytte 0,089 g (33 %).

LC-MS (m/z) 573 (M+l)<+>

(e) 4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Tittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel l(iv) ovenfor fra 4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yl-C{0)-Aze-Pab(Z) (0,089 g; 0,155 mmol; fra trinn (iii) ovenfor), AcOH (0,25 ul, 0,44 mmol) og Pd/C (5 %; 0,089 g). Utbytte 55,5 mg (72 %).

LC-MS (m/z) 439 (M+l)<+>

<l>H NMR (300 MHz; CD3OD): (kompleks som skyldes diastereomeri/rotameri) 8 7,7-7,5 (, 2H); 7,5-7,3 (m, 2H); 6,75-6,55 (m, 3H); 4,8 (m, 1H, delvis skjult av HDO); 4,5-3,5 (m, 9H, derav 3,74(s) og 3,69 (s); 2,7-1,7 (m, 7H; derav 1,95, s, 3H).

<13>C-NMR (75 MHz; CDCI3): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 176,4; 173,1; 168,1

Eksempel 12

(S)- og (R)-l-hydroksy-4-metoksyindan-l-yl-C(0)-Aze-Pab

(b) 4-metoksy-l-indanon

CsC03 (7 g; 21,5 mmol) etterfulgt av CH3I (10 g; 70 mmol) ble tilsatt til en løsning av 4-hydroksy-l-indanon (5,0 g; 34 mmol) i THF (30 ml) og blandingen ble omrørt ved RT i 60 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert og konsentrert, og råproduktet ble renset ved anvendelse av flashkromatografi (Si02; metylenklorid), og man får 3,1 g (56 %) av undertittelforbindelsen.

(c) l-hydroksy-4-metoksyindan-l-yl-karboksylsyre, etylester

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet av Bigge et al (J. Med. Chem. (1993) 36, 1977) fra 4-metoksy-l-indanon (2,2 g; 13,5 mmol; fra trinn (i) ovenfor), Me3SiCN (2,0 g; 20 mmol) og Znl2 (200 mg; 0,62 mmol; kat). Utbytte 0,9 g (28 %).

'H NMR (400 MHz; CDCI3): 8 7,21 (t, 1H); 6,85 (d, 1H); 6,79 (d, 1H); 4,20 (m, 2H); 3,85 (s, 3H); 3,07 (m, 3H); 2,97 (m, 1H); 2,67 (m, 1H); 2,27 (m, 1H); 1,20 (t, 3H).

(d) l-hydroksy-4-metoksyindan-l-yl-karboksylsyre

NaOH (19 M; 1,0 ml) ble tilsatt til en løsning av l-hydroksy-4-metoksyindan-l -yl-karboksylsyre etylseter (0,90 g; 3,8 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) i EtOH (20 ml) og løsningen ble omrørt i 30 minutter. Det ble tilsatt saltløsning (40 ml) og blandingen ble vasket med EtOAc, ble forsiktig gjort sur til pH 2 (HC1; 2 M) og den vandige løsningen ble ekstrahert med EtOAc. Det organiske sjiktet ble vasket med saltløsning, tørket (Na2S04) og konsentrert, og man får 0,70 g (88 %) av undertittelforbindelsen.

<]>H NMR (400 MHz; CDC13): 6 7,23 (t, 1H); 6,89 (d, 1H), 6,81 (d, 1H), 3,85 (s, 3H); 3,0 (m, 2H); 2,77 (m, 1H); 2,3 (m, 1H)

(e) l-hydroksy-4-metoksyindan-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z)

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 4(iv) ovenfor fra l-hydroksy-4-metoksyindan-l -yl-karboksylsyre (350 mg; 1,68 mmol; fra trinn (iii) ovenfor), metylenklorid (25 ml), H-Aze-Pab(Z) (750 mg; 1,7 mmol), TBTU (600 mg; 1,8 mmol) og DIPEA (770 mg; 1,8 mmol). Blandingen ble konsentrert, og resten ble renset ved anvendelse av flashkromatografi (Si-gel; aceton:EtOAc), og man får 350 mg (37,5%).

<]>H NMR (400 MHz; CDCI3) (kompleks som skyldes diastereomerer/rotamerer) 8 8,05 (t, 0,5H, rotamer); 7,95 (t, 0.5H, rotamer); 7,82 (dd, 2H); 7,45 (d, 2H); 7,35 (m, 5H); 7,20 (m, 1H), 6,82 (m, 2H); 4,92 (m, 1H); 4,48 (m, 2H); 3,84 (s, 3H), 3,66 (m, 2H); 3,30 (m, 1H); 2,95 (m, 1H); 2,55 (m, 1H); 2,46 (m, 1H); 2,30 (m, 1H).

(f) ( S)- og (R)-l-hydroksy-4-metoksyindan-l-yl-C(0)-Aze-Pab

Ammoniumformat (1,0 g; 16 mmol) og Pd/C (5 %; 200 mg) ble tilsatt til en løsning av l-hydroksy-4-metoksyindan-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (340 mg; 0,61 mmol; fra trinn I(v) ovenfor i MeOH (30 ml). Maursyre (200 mg; 4,4 mmol) ble tilsatt og blandingen ble omrørt i 30 minutter. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom Hyflo og løsningen ble konsentrert. Råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ HPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 15:85). Fraksjonene av interesse ble slått sammen og konsentrert, vannløsningen ble frysetørket, og man får en hurtig bevegende fraksjon (forbindelse 12A; 50 mg; 34 %) og en langsomt bevegende fraksjon (forbindelse 12B; 5 mg; 3,4 %).

Forbindelse 12A (i det følgende betegnet som (R) eller (S)):

LC-MS (m/z) 423 (M+l)<+>

<!>H-NMR (500 MHz; CD3OD): (kompleks som skyldes rotamerisme) 8 7,74 (d, 2H, minor rotamer); 7,70 (d, 2H, major rotamer); 7,60 (d, 2H, minor rotamer); 7,48 (d, 1H, major rotamer); 7,20 (t, 1H),; 6,95 (d, 1H, major rotamer); 6,87 (d, 1H, minor rotamer); 6,84 (d, 1H, major rotamer); 6,83 (d, 1H, minor rotamer); 4,82 (m, 1H); 4,5 (m, 1H); 4,6-4,4 (m, 2H); 4,11 (m, 1H, major rotamer); 4,00 (m, 1H, minor rotamer); 3,82 (s, 3H); 3,0 (m, 1H); 2,9 (m, 1H); 2,65 (m, 1H); 2,5 (m, 1H); 2,3-2,0 (m, 2H)

<I3>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 180,3; 176,4; 173,0; 167,9

Forbindelse 12B (i det følgende betegnet som (S) eller (R)):

LC-MS (m/z) 423 (M+l)<+>

<]>H NMR (400 MHz; CD3OD): (kompleks som skyldes rotamerisme) 8 7,8-7,7 (m, 2H); 7,54 (d, 2H); 7,23 (m, 1H); 6,97 (m, 1H); 6,9-6,8 (m, 1H); 4,80 (m, 1H), 4,6-4,4 (m, 2H); 4,25 (m, 1H); 4,1-3,9 (m, 1H); 3,82 (s, 3H); 3,0-2,85 (m, 2H); 2,8-2,5 (m, 2H); 2,3-2,1 (m, 2H); 1,90 (s, 3H).

Eksempel 13

l-hydroksy-5-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(OH)

En løsning av hydroksylamin x HC1 (39 mg; 0,56 mmol) og TEA (0,26 ml; 1,86 mmol) i THF (10 ml) ble behandlet med ultralyd ved 40°C i 1 time, hvoretter l-hydroksy-5-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (53 mg; 0,93 mmol; se eksempel 5(iii) ovenfor) oppløst i en liten mengde THF ble tilsatt, og blandingen ble omrørt ved 40°C i 3 dager. Blandingen ble konsentrert, og produktet ble renset ved hjelp av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 30:70). Fraksjonene av interesse ble konsentrert og resten ble ftysetørket. Utbytte 29 mg (70 %).

LC-MS (m/z) 453 (M+l)<+>

<]>H NMR (400 MHz; CD3OD): (kompleks som skyldes diastereomerer/rotamerer) 8 7,58 (m,2 H), 7,33 (dd, 2H); 7,16 (m, 1H); 7,86 (m, 2H); 4,78 (dd, 2H); 4,44 (m, 2H), 4,2-4,0 (m, 2H); 3,80 (s, 3H); 3,58 (m, 0,5H, rotamer); 3,47 (m, 0,5H, rotamer); 2,91 (bd, 1H); 2,44 (m, 2H); 2,34 (m, 1H); 2,19 (m, 1H); 2,08 (m, 2H); 1,98 (b, 2H); 1,89 (b, 2H)

<13>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 178,0; 177,8; 172,9; 158,2; 155,3

Eksempel 14

(S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(OH)

Tittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 13 ovenfor fra hydroksylamin x HC1 (48 mg; 0,69 mmol), TEA (0,32 ml; 2,31 mmol) og (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (66 mg; 0,12 mmol; Forbindelse 3A fra eksempel 3(i) ovenfor). Blandingen ble konsentrert, og råproduktet ble renset ved hjelp av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 28:72) og man får 17 mg (31 %). Renhet 94,5 %, diastereomerforhold 87:13

LC-MS (m/z) 453 (M+l)<+>

'H-NMR (400 MHz; CD3OD): 8 5,75 (d, 2H); 7,37 (m, 3H); 7,04 (d, 1H); 6,81 (m, 1H); 4,82 (m, 1H); 4,44 (m, 2H); 4,28 (m, 1H); 4,08 (m, 1H); 3,72 (s, 3H); 3,64 (m, 1H); 2,72 (m, 3H); 2,40 (m, 1H); 2,22 (m, 1H); 2,12 (m, 2H); 1,95 (m, 2H); 1,88 (m, 3H)

<13>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 177,6; 172,6, 159,4.

Eksempel 15

4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(OH)

Tittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 13 ovenfor fra hydroksylamin x HC1 (74 mg; 106 mmol), TEA (0,50 ml; 3,6 mmol) og 4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (92 mg; 0,16 mmol; se eksempel 1 l(iii) ovenfor). Råproduktet ble renset ved hjelp av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 28:72) og man får 55 mg (75 %). Diastereomerfohrold 53:47.

<l>H-NMR (400 MHz; CDCI3); (kompleks som skyldes diastereomeri/rotamieri) 8 7,65-7,5 (m, 2H); 7,4-7,3 (m, 2H); 6,85-6,65 (m, 3H); 4,81 (m, 1H, delvis skjult av HDO); 4,5-3,9 (m, 5H); 3,9-3,6 (m, 4H); 2,8-1,9 (m, 4H)

<13>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 5 176,5; 176,2; 172,8; 155,2.

Eksempel 16

4-hydroksy-6-metoksykromaii-4-yl-C(0)-Aze-Pab(OMe)

Tittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 3(i) ovenfor fra 4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yl-karboksylsyre (95 mg; 0,42 mmol; se eksempel 1 l(ii) ovenfor), TBTU (0,26 g; 0,81 mmol), DMF (5 ml), H-Aze-Pab(Ome) x HC1 (0,256 g; 0,81 mmol; se eksempel 4(iii) ovenfor) og DIPEA 75 + 300 ul; 0,42 + 1,68 mmol). Råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 30:70), og man får 67 mg (37 %).

'H-NMR (400 MHz; CDCI3): (kompleks som skyldes diastereomeri/rotameri) 5 7,65-7,5 (m, 2H); 7,4-7,3 (m, 2H); 6,85-6,7 (m, 3H); 4,80 (m, 1H, skjult av HDO); 4,5-4,0 (m, 5H); 3,81 (s, 3H); 3,75-3,65 (m, 4H); 2,8-1,9 (m, 4H)

<13>C-NMR (100 MHz, CDCI3): (karbonyl og/eller amidinkarboner; kompleks som skyldes diastereomerisme/rotamerisme) 5 177,8; 176,5; 176,1; 172,8; 172,6; 155,2; 155,0.

Eksempel 17

(S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(C(0)OCH2CCl3)

NaOH (aq; 2M; 0,78 ml) og deretter ble tilsatt 2,2,2-trikloretylklorformat (21 ul; 0,155 mmol) til en iskald løsning av (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc (70 mg; 0,14 mmol; se eksempel 3 ovenfor) i THF (3 ml) og blandingen ble omrørt i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet i vann og den resulterende blandingen ble ekstrahert fire ganger med metylenklorid. De sammenslåtte organiske fasene ble vasket med saltløsning, tørket (Na2S04) og fordampet. Utbytte 79,8 mg (92,5 &%).

LC-MS (m/z) 613 (M+l)<+>

'H-NMR (400 MHz; CDCI3) 5 9,42 (b, 1H); 7,98 (t, 1H); 7,83 (d, 2H); 7,30 (b, 1H); 7,29 (d, 2H); 7,06 (d, 1H); 6,84 (dd, 1H); 6,67 (d, 1H); 4,92 (dd, 1H); 4,86 (s, 2H); 4,48

(m, 2H); 4,12 (s, 1H); 3,86 (m, 1H); 3,75 (s, 3H); 3,08 (m, 1H); 2,81 (db, 1H); 2,58 (m, 2H); 2,27 (m, 1H); 1,95 (m, 3H)

<l3>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 5 178,7; 171,5; 170,1; 164,0.

Eksempel 18

(S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(C(0)OCH2CH3)

Tittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 17 ovenfor fra (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc (52 mg; 0,10 mmol; se eksempel 3 ovenfor); NaOH (aq; 2 M; 0,58 ml) og etylklorformat (9,4 ul; 0,089 mmol). Råproduktet ble renset ved hjelp av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat 30:70). Utbytte 29 mg (69 %)

LC-MS (m/z) 509 (M+l)<+>

'H-NMR (400 MHz; CDC13) 8 9,55 (b, 1H); 7,96 (6,1H), 7,85 (d, 2H); 7,34 (d, 2H); 7,06 (d, 1H); 6,83 (dd, 1H); 6,68 (d, 1H); 4,94 (dd, 1H); 4,52 (m, 3H); 4,24 (q, 2H); 3.84 (m, 1H); 3,77 (s, 3H); 3,04 (m, 1H); 2,82 (m, 1H); 2,62 (m, 2H); 2,27 (m, 1H); 2,0-1.85 (m, 5H); 1,37 (t, 3H)

<l3>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 178,9; 171,4; 159,6.

Eksempel 19

7-metoksy-l-allyltetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

(i) 7-metoksy-l-allyltetralin-1-yl-karboksylsyre

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 10(ii) ovenfor fra 7-metoksytetralin-l-yl-karboksylsyre, metylester (0,80 g; 3,6 mmol; se eksempel 10(i) ovenfor), NaOH (55 % i olje; 0,23 mg; 5,4 mmol) og allylbromid (0,65 g, 5,4 mmol), hvoretter råproduktet ble hydrolysert direkte etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 10(iii) ovenfor med KOH (3 g) i EtOH:H20 (40 ml; 1:1). Utbytte 0,39 g (44%).

1 H-NMR (400 MHz; CDCI3) 8 7,00 (d, 1H); 6,93 (d, 1H); 6,72 (dd, 1H); 5,64 (m, 1H); 5,05 (m, 2H); 3,75 (s, 3H); 2,85-2,60 (m, 4H); 2,20 (m, 2H); 1,95-1,70 (m, 3H)

(ii) Boc-Aze-Pab x HCOOH

Undertittelforbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel 12(v) ovenfor fra ammoniumformat (3,0 g; 5,0 mmol), Pd/C (5 %; 1,0 g), Boc-Aze-Pab(Z)

(4,7 g; 10 mmol; se internasjonal patentsøknad WO 94/29336) og maursyre (1,0 g; 22 mol) i 50 ml MeOH. Råproduktet ble suspendert i CH2CI2 (50 ml), filtrert og vasket med mer CH2CI2. Det faste materialet ble tørket og anvendt i det følgende trinn uten ytterligere rensing.

(iii) Boc-Aze-Pab(Teoc)

Teoc-p-nitrofenylkarbonat (3,5 g; 12,3 mmol) ble tilsatt til en løsning av Boc-Aze-Pab x HCOOH (3,7 g; 10 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) i THF (100 ml) hvoretter det ble tilsatt en løsning av K2CO3 (1,8 g; 13 mmol) i vann (20 ml) i løpet av 2 minutter. Den resulterende løsning ble omrørt i 3 dager, konsentrert og resten ble tatt opp i EtOAc (150 ml) og NaOH (aq; 0,5 M; 50 ml). Det organiske sjiktet ble vasket med saltløsning (2 x 50 ml), tørket (na2S04) og konsentrert. Råproduktet ble renset ved anvendelse av flashkromatografi (Si-gel; metylenkloird:aceton; 4:1). Utbytte 4,6 g (96 %).

'H-NMR (500 MHz; CDC13) 8 7,86 (d, 2H), 7,39 (d, 2H); 4,72 (bt, 1H); 4,53 (b, 2H); 3,93 (q, 1H); 3,81 (q, 1H); 2,48 (b, 2H); 1,43 (s, 9H).

(iv) H-Aze-Pab(Teoc) x HC1

En løsning av Boc-Aze-Pab(Teoc) (4,6 g; 9,6 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) i metylenklorid (150 ml) ble mettet med tørr HC1. Løsningen ble holdt ved RT i en lukket kolbe i 10 minutter, hvoretter den ble konsentrert. Utbytte 4,2 g (97 %). 1 H-NMR (400 MHz; CD3OD) S 7,80 (d, 2H); 7,60 (d, 2H); 5,10 (t, 1H); 4,60 (s, 2H); 4,15 (q, 1H); 3,97 (q, 1H); 2,86 (m, 1H); 2,57 (m, 1H).

(v) 7-metoksy-l-allyltetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 3(i)

ovenfor fra 7-metoksy-1 -allyltetralin-1 -yl-karboksylsyre (0,30 g; 1,2 mmol; fra trinn (i) ovenfor), TBTU (0,42 g; 1,3 mmol), H-Aze-Pab(Teoc) (0,60 g; 1,3 mmol; fra trinn (iv) ovenfor) og DIPEA (0,69 g; 5,4 mmol). Råproduktet ble renset ved anvendelse av flashkromatografi (Si-gel; EtOAc). Utbytte 0,41 mg (56 %). 1 H-NMR (500 MHz; CDCb): (kompleks som skyldes diastereomeri/rotameri) 8 8,35 (b, 0,5 H); 8,20 (bt, 0,5H); 7,90 (d, 1H); 7,85 (d, 1H); 7,90 (d, 1H); 7,35 (d, 1H); 7,01 (t, 1H); 6,75 (m, 1H); 6,65 (d, 0,5 H); 6,53 (d, 0,5H); 5,80-5,65 (m, 1H); 5,02 (dd, 1H); 4,96 (m, 1H); 4,87 (dd, 1H); 4,61 (m, 1H); 4,43 (dt, 1H); 4,25 (m, 2H); 3,70 (m+s, 3H); 3,54 (m, 0,5H); 2,95-2,40 (m, 6H); 2,23 (m, 1H); 2,13 (m, 1H); 1,98 (m, 2H); 1,80 (m, 2H); 1,13 (m, 2H); 0,13 (d, 9H).

(vi) 7-metoksy-l-allyItetralin-l-yI-C(0)-Aze-Pab x HOAc

En løsning av B114NF (IM i THF; 0,66 ml) ble tilsatt til en løsning av 7-metoksy-l-a!lyltetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,36 g; 0,60 mmol; fra trinn (v) ovenfor) i THF (40 ml), og løsningen ble omrørt ved 60°C i 24 timer. Råproduktet ble renset ved anvendelse av RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat (50:50)) og frystetørket. Utbytte 0,22 g (71 %).

'H-NMR (400 MHz; CDC13) 8 7,77 (dd, 2H); 7,52 (t, 2H), 7,13 (t, 1H); 6,87 (dt, 1H); 6,77 (dd, 1H); 5,71 (m, 1H); 5,02 (m, 2H); 4,53 (b, 1H); 3,85-3,65 (m, 4H); 3,02 (m, 1H); 2,70 (b, 4H); 2,40-2,20 (m, 1H), 2,05-1,70 (b, 8H; derav 1,92; s).

<13>C-NMR (100 MHz; D20): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 179,1; 173,7; 167,3; 158,5

LC-MS (m/z) 459 (M-1V

Eksempel 20

(S)- eller (R)-l-hydroksy-7-kIortetraIin-l-yl-C(0)-Aze-Pab

(i) 7-amino-l-tetralon

Ammoniumformat (2 g), Pd/C 85 %; 1 g) og maursyre (0,5 g; kat) ble tilsatt i denn rekkefølge til en løsning av 7-nitro-l-tetralon (1,95 g; 10 mmol) i metanol (50 ml) og blandingen ble omrørt i 30 minutter. Løsningen ble filtrert og filtratet konsentrert. Resten ble gjennomfuktet med metylenklorid (50 + 25 ml), og blandingen ble filtrert og konsentrert. Utbytte 1,4 g (88 %).

'H-NMR (400 MHz; CDC13) 5 7,32 (d, 1H); 7,03 (d, 1H); 6,83 (dd, 1H); 3,70 (b, 2H); 2,85 (t, 2H); 2,61 (t, 2H); 2,10 (m, 2H).

(ii) 7-klor-l-tetralon

NaN02 (0,7 g; 10 mmol) oppløst i vann (10 ml) ble tilsatt under omrøring til en iskald løsning av 7-amino-l-tetralon (1,4 g; 8,8 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i kons HC1 (aq) i løpet av 5 minutter. Den resulterende kalde løsningen ble deretter langsomt tilsatt til en iskald løsning av CuCl (1,5 g, 15 mmol) k ons HC1 (aq), hvoretter den resulterende løsning ble omrørt ved RT i 2 timer og ved 60°C i 30 minutter. Slurryen ble avkjølt med is og den resulterende utfellingen ble sugefiltrert, vasket med vann og lufttørket. Utbytte 1,50 g (94%).

'H-NMR (500 MHz; CDC13) 6 8,00 (d, 1H); 7,41 (dd, 1H), 7,20 (d, IH); 2,95 (t, 2H); 2,66 (m, 2H); 2,14 (m, 2H)

(iii) 7-klor-l-hydroksytetralin-l-karboksylsyre, etylester

Fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet av CF. Bigge et al i J. Med. Chem. (1993) 36, 1977 ved anvendelse av 7-klor-l-tetralon (1,5 g; 8,3 mmol; fra trinn (ii) ovenfor), Me3Si-CN (1,0 g; 10 mmol) og Znl2 (0,3 g). Utbytte 0,8 g (36 %).

'H-NMR (600 MHz; CDCI3) 6 7,72 (s, 1H); 7,25 (d, 1H); 7,17 (d, 1H); 7,09 (dd, 1H); 4,35-4,20 (m, 2H), 2,80 (m, 2H); 2,35 (m, 1H); 2,12-1,92 (m, 3H); 1,25 (m, 3H)

(iv) 7-klor-l-hydroksytetralin-l-karboksylsyre

NaOH (10M, 1 ml) ble tilsatt til en løsning av 7-klor-l-hydroksytetralin-l-karboksylsyre, etylester (0,8 g; 3,1 mmol; fra trinn (iii) ovenfor) i DMSO (20 ml), og blandingen ble oppvarmet til 100°C i 3 timer. Den resulterende blanding ble fortynnet med knust is (40 g) og saltløsning (40 ml), og blandingen ble ekstrahert med EtOAc. Det vandige sjiktet ble surgjort til pH 2 med 2M HC1 og ekstrahert med EtOAc (2 x 40 ml). De sammenslåtte organiske sjikt ble tørket (Na2S04) og konsentrert. Utbytte 0,22 mg (30 %).

'H-NMR (500 MHz; CDCI3) 6 7,25 (d, 1H); 7,20 (d, 1H); 7,09 (d, IH); 2,80 (m, 2H); 2,27 (m, 1H); 2,17-2,00 (m, 2H); 1,98 (m, 1H).

(v) 7-klor-l-hydroksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z)

HATU (400 mg; 1,05 mol) ble tilsatt til en løsning av 7-klor-l-hydroksytetralin-l-karboksylsyre (220 mg; ca 1 mmol; fra trinn (iv) ovenfor) i DMF (50 ml) og, etter omrøring i en kort tid, ble dråpevis tilsatt en løsning av H-Aze-Pab(Z) x 2HC1 (450 mg; 1,02 mmol) og 2,4,6-trimetylpyridin (425 mg, 3,5 mmol) i DMF (10 ml). Etter omrøring natten over ble den resulterende blandingen fortynnet med en vandig løsning av NaCl (15 %; 100 ml) og ekstrahert med EtOAc (2 x 50 ml). Det organiske sjiktet ble vasket med saltløsning (20 ml), tørket (Na2SO«) og konsentrert. Resten ble renset ved anvendelse av flashkromatografi (Si-gel; EtOAc). Utbytte 300 mg (52 %).

'H-NMR (400 MHz; CDCI3): (kompleks som skyldes diastereomeri/rotameri) 8 7,89 (d, 1H); 7,82 (d, 1H); 7,42 (d, IH); 7,40-7,30 (m, 6H); 7,18 (m, 1H); 7,06 (d, 1H); 5,20 (s, 2H); 4,93 (m, IH), 4,60-4,40 (m, 3H); 3,83 (m, 0.5H; 3,72 (m, 0,5H); 3,07 (m, IH); 2,7-2,5 (m, 3H); 2,40 (m, IH); 2,03-1,80 (m, 5H)

(vi) 7-klor-l-hydroksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Anisol (65 mg; 0,6 mmol) og trifluormetansulfonsyre (400 mg; 2,6 mmol) ble tilsatt, i denne rekkefølgenden, til en løsning av 7-klor-l-hydroksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Z)

(300 mg; 0,52 mmol; fra trinn (v) ovenfor) i metylenklorid (20 ml) og løsningen ble omrørt ved RT i 10 minutter. Det ble tilsatt vann (20 ml) og den organiske fasen ble adskilt og fjernet, hvoretter den vandige fasen ble justert til pH 4-5 med mettet NaHC03 (aq). Løsningen ble delvis konsentrert og råproduktet renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CN3CN:vann; 10:90 til 90:10). Fraksjonene av interesse ble delvis konsentrert tilsatt noen få dråper HOAc (kons.), og løsningen ble frystetørket. Utbytte 40 mg (15%).

'H-NMR (500 MHz; CD3OD): 8 7.78 (dd, 2H); 7,59 (m, 2H); 7,30 (d, IH); 7,22 (d, IH); 7,15 (d, IH); 4,65-4,35 (m, 3H); 4,20-3,90 (m, IH); 2,85-2,70 (m, IH); 2,55 (m, IH); 2,35-1,95 (m, 9H)

<l3>C-NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 177,0; 172,8; 167,9

Eksempel 21

l-n-propyl-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

En liten mengde Pd/C (10 %) ble tilsatt til en løsning av l-allyl-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc (80 mg; 0,15 mmol; se eksempel 19 ovenfor) i EtOH (5 ml) og blandingen ble hydrert ved omgivelsestemperatur i 2 timer. Blandingen ble filtrert gjennom Celite og den resulterende løsningen ble konsentrert. Frysetørking fra vann ga 68 mg (85 %) av tittelforbindelsen.

'H-NMR (400 MHz; CDC13) 8 7,77 (t, 2H); 7,52 (t, 2H); 7,12 (t, IH); 6,87 (m, IH); 6,75 (d, IH); 4,75 (m, IH; delvis skjult); 4,54 (s, 2H); 3,77 (m, 4H); 3,66 (m, IH), 3,10 (m, IH), 2,70 (b, 2H); 2,30 (m, IH); 2,1-1,6 (m, 10H; derav, 1,91, s, 3H); 1,25 (m, lh); 1,10 (m, IH), 0,83 (q, 3H)

LC-MS (m/z) 463 (M+l)<+>

Eksempel 22

6-klor-4-hydroksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

(i) 6-klor-4-hydroksykroman-4-yI-karboksylsyre, metylester

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet av Bigge et al (J. Med. Chem. (1993) 36,1977ff) fra 6-klorkromanon (2,45 g; 13,4 mmol) Me3SiCN (1,51 g; 15,2 mmol) og Znl2 (40 mg; kat.). Utbytte 0,58 g (18 %).

'H-NMR (300 MHz; CDC13) 5 7,17 (d, IH); 7,08 (d, IH); 6,82 (d, IH); 4,41 (m, IH); 4,37 (m, IH); 2,47 (m, lh); 2,09 (m, IH).

(ii) 6-klor-4-hydroksykroman-4-yl-karboksylsyre

LiOH.H20 (0,19 g; 4,6 mmol) og vann (4 ml) ble tilsatt til en løsning av 6-klor-4-hydroksykroman-4-yl-karboksylsyre, metyleser (0,56 g, 2,3 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i THF (6 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved værelsestemperatur i 3 timer, THF ble fordampet og vannløsningen ble vasket med metylenklorid. Reaksjonsblandingen ble surgjort med HC1 (2 M) og ekstrahert med etylacetat. Det organiske sjikt ble tørket (Na2SOi,) og fordampet, og man får en langsomt krystalliserende olje. Utbytte: 490 mg (93 %).

LC-MS (m/z) 228 (M-1V

(iii) 6-klor-4-hydroksykroman-4-yI-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

En løsning av 6-klor-4-hydroksykroman-4-yl-karboksylsyre (222 mg; 1,00 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) og HATU (370 mg, 0,97 mmol) i DMF (5 ml) ble omrørt ved 0°C i 1,5 h og ble tilsatt en blanding av H-Aze-Pab(Teoc) x HC1 (440 mg; 0,98 mmol; se eksempel 19(iv) ovenfor) og 2,4,6-trimetylpyridin (0,48 g; 3,9 mmol) i DMF (5 ml) ved 0°C. Etter omrøring i 3 h ved 0°C ble reaksjonsblandingen konsentrert, og råproduktet ble renset ved hjelp av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat (55:45)). Fraksjonen av interesse ble delvis konsentrert og ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjikt ble tørket (Na2SC«4) og konsentrer, og man får 350 mg (67 %) av en diastereomerblanding.

'H-NMR (400 MHz; CDC13) 6 7,31 (m, IH); 7,19 (dt, IH); 7,09 (d, 0,5 H); 7,00 (d, 0,5H); 6,88 (dd, IH); 4,93 (m, IH); 4,80 (br, 0.5H); 4,61 (dd, IH); 4,53-4,43 (m, 2H); 4,36 (m, IH); 4,15 (t, IH); 3,89 (m, 0,5H); 3,74 (m, 0,5H); 3,09 (n(m, IH); 2,46-2,28 (m, IH); 2,21 (m, IH); 1,96 (m, IH); 0,06 (s, 9H)

<13>C-NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 6 176,9; 171,5; 171,3; 169,8; 155,4; 155,2

LC-MS (m/z) 588 (M+l)<+>

(iv) 6-klor-4-hydroksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

BU4NF (1,0M i THF; 0,35 ml) ble tilsatt til en løsning av 6-klor-4-hydroksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc) (190 mg; 0,32 mmol; fra trinn (iii) ovenfor) i THF (20 ml) ved 0°C. Løsningen ble omrørt i 2 dager ved 40°C. Løsningen ble konsentrert og råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat (25:75)). Utbytte 115 mg (71 %).

'H-NMR (400 MHz; CD3OD): 8 7,73 (m, 2H); 7,55 (m, 2H); 7,28 (dd, IH); 7,15 (m, IH); 6,79 (m, IH); 4,60 (m, IH); 4,47 (m, 2H); 4,33 (m, IH); 4,15 (m, 2H); 2,8-2,46 (m, IH); 2,38 (m, IH); 2,23 (m, IH); 2,06 (m, IH); 1,90 (s, 3H)

<13>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 175,9; 175,6; 174,4; 173,1; 173,0

LC-MS (m/z) 444 (M+l)<+>

Eksempel 23

4-hydroksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Pd/C (5 %; 25 mg) ble tilsatt til en løsning av 6-klor-4-hydroksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc (14,7 mg; 0,029 mmol; se eksempel 22 ovenfor) i EtOH (5 ml), og blandingen ble hydrert ved omgivelsestemperatur og trykk i en dag. Blandingen ble filtrert gjennom Celite, og råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat (25:75)). Fraksjonene av interesse ble konsentrert. Frysetørking ga 4 mg (30 %) av tittelforbindelsen.

'H-NMR (400 MHz; CD3OD): 8 7,79 (m, 2H); 7,56 (m, 2H); 7,4-7,2 (m, 2H); 7,00 (m, 2H); 4,96 (dd, IH); 4,5-4,3 (m, 2H); 4,20 (m, 2H); 3,88 (m, IH); 2,8-2,4 (m, 2H); 2,27 (m, IH); 2,17 (m, IH); 2,07 (s, 3H)

<13>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarbvoner) 8 173,7; 167,7 LC-MS (m/z) 409 (M+l)<+>

Eksempel 24

6,8-diklor-4-hydroksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

(i) 6,8-diklor-4-hydrokroman-4-yl-karboksylsyre, metylester

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet av Bigge et al (J. Med. Chem. (1993) 36,1977ff) fra 6,8-diklorkromanon (1,36 g; 6,27 mmol), Me3SiCN (0,68 g, 6,9 mmol) og Znl2 (20 mg; kat.) Utbytte 0,52 g (30 %)

1 H-NMR (300 MHz; CDC13): 5 7,30 (s, IH); 7,00 (s, IH); 4,53 (m, IH); 4,33 (m, IH); 3,83 (s, 3H); 2,47 (m, IH); 2,12 (m, IH)

(ii) 6,8-diklor-4-hydroksykroman-4-yl-karboksyIsyre

LiOH.H20 (0,15 g; 3,6 mmol) og vann (2 ml) ble tilsatt til en løsning av 6,8-diklor-4-hydroksykroman-4-yl-karboksylsyre, metylester (0,50 g; 1,8 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i THF (5 ml). Den resulterende blandingen ble omrørt ved værelsestemperatur i 30 minutter, THF ble fordampet og vannfasen ble vasket med metylenklorid. Reaksjonsblandingen ble surgjort med HC1 (2M) og ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjiktet ble tørket (Na2S04) og fordampet, og man får undertittelforbindelsen. Utbytte: 390 mg (83 %).

LC-MS (m/z) 262 (M-l)"

(iii) 6,8-diklor-4-hydroksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 22(iii) ovenfor fra 6,8-diklor-4-hydroksykroman-4-yl-karboksylsyre (100 mg; 0,38 mmol; fra trinn (ii) ovenfor), HATU (160 mg; 0,42 mmol), H-Aze-Pab(Teoc) x HC1 (190 mg; 0,42 mmol; se eksempel 19(iv) ovenfor) og 2,4,6-trimetylpyridin (0,19 g; 1,6 mmol). Råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat (55:45)). Fraksjonene av interesse ble delvis konsentrert og ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjikt ble tørket (Na2S04) og konsentrert, og man får 206 mg (87 %) av en diastereomerblanding.

LC-MS (m/z) 623 (M+l)<+>

(iv) 6,8-diklor-4-hydroksykroman-4-yl-C(0)-Azc-Pab x HOAc

Tittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 19(iv) ovenfor fra 6,8-diklor-4-hydroksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc) (150 mg; 0,24 mmol; fira trinn (iii) ovenfor) og BU4NF (0,10 g; 0,32 mmol). Råmaterialet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat (30:70)). Utbytte 45 mg (35 %).

'H-NMR (400 MHz; CD3OD): 5 7,73 (m, 2H); 7,54 (m, 2H); 7,32 (m, 2H); 7,23 (d, IH); 4,65-4,40 (m, 4H); 4,30 (m, 2H); 4,17-3,97 (m, IH); 2,8-2,5 (m, IH); 2,40 (m, IH); 2,35-2,20 (m, IH); 2,15 (m, 2H); 1,95 (s, 3H)

<13>C-NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 6 175,4; 174,0; 174.3: 173.0: 168.1

LC-MS (m/z) 477 (M+l)<+>

Eksempel 25

6-fluor-4-hydroksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

(i) 6-fluor-4-hydroksykroman-4-yl-karboksylsyre, metylester

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet av Bigge et al (J. Med. Chem. (1993), 36,1977ff) fra 6-fluorkromanon (2,53 g; 15,2 mmol), Me3SiCN (1,66 g; 16,7 mmol) og Znl2 (3 mg; kat). Utbytte 2,51 g (73 %).

'H-NMR (400 MHz; CDC13): 5 6,93 (m, IH); 6,82 (m, 2H); 4,34 (m, IH); 4,23 (dt, IH); 3,81 (s, 3H); 2,47 (m, IH); 2,10 (m, IH).

(ii) 6-fluor-4-hydroksykroman-4-yl-karboksylsyre

En løsning av LiOH.H20 (0,95 g; 22,6 mmol) i vann (30 ml) ble tilsatt til en løsning av 6-fluor-4-hydroksykroman-4-yl-karboksylsyre, metylester (2,47 g; 10,9 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i THF (10 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved værelsestemperatur i 2 dager, THF ble fordampet og vannfasen ble surgjort med HC1 (2M) og ekstrahert med etylacetat. Det organiske sjiktet ble tørket (Na2S04) og fordampet, og man får undertittelforbindelsen. Utbytte: 1,41 g (61 %).

LC-MS (m/z) 211 (M-l)'

(iii) 6-fluor-4-hydroksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Z)

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 22(iii) ovenfor fra 6-fluor-4-hydroksykroman-4-yl-karboksylsyre (250 mg; 1,18 mmol; fra trinn (ii) ovenfor), HATU (500 mg; 1,32 mmol), H-Aze-Pab(Z) x HC1 (570 mg; 1,3 mmol; fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284 og 2,4,6-trimetylpyridin (0,70 g; 5,3 mmol). Råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat, 55:45). Fraksjonene av interesse ble delvis konsentrert og ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjiktet ble tørket (Na2S04) og konsentrert, og man får 290 mg (40 %) av en diastereomer blanding.

FAB-MS (m/z) 561 (M+l)<+>

(iv) 6-fIuor-4-hydroksykroman-4-yI-C(0)-Aze-Pab x HOAc

HOAc (80 ul) og Pd/C (5 %; 93 mg) ble tilsatt til en løsning av 6-fIuor-4-hydroksy-kroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (140 mg; 0,25 mmol; fra trinn (iii) ovenfor) i EtOH (10 ml), og blandingen ble hydrert ved omgivelsestemperatur og trykk i 4 h. Blandingen ble filtrert gjennom Celite. Løsningen ble konsentrert og råmaterialet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat (20:80)). Utbytte 72 mg (59%).

'H-NMR (400 MHz; D20): 5 7,78 (dd, IH); 7,73 (d, IH); 7,55 (m, 2H); 7,18-6,96 (m, 3H); 4,96 (dd, IH); 4,58 (s, IH); 4,50-4,35 (m, 2H); 4,19 (m, 2H); 2,63 (m, IH); 2,45 (m, IH); 2,35-2,12 (m, 2H); 1,98 (s, 3H)

,<3>C-NMR (100 MHz; D20): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 176,1; 175,9; 174,7; 173,7; 167,6

Eksempel 26

4-hydroksy-6-metylkroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

(i) 4-hydroksy-6-metylkroman-4-yl-karboksylsyre, metylester

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskevet av Bigge et al (J. Med. Chem. (1993), 36,1977ff) fra 6-metylkromanon (3,11 g; 19,2 mmol), Me3SiCN (2,1 g; 21,2 mmol) og Znl2 (20 mg; kat.). Utbytte 2,80 g (62 %).

'H-NMR (300 MHz; CDC13): 8 7,0,1 (dd, IH); 6,89 (d, IH); 6,77 (d, IH); 4,37 (dt, IH), 4,32-4,20 (m, 3H); 2,49 (m, 2H); 2,34 (s, 3H); 2,08 (m, lh); 1,24 (t, 3H)

(ii) 4-hydroksy-6-metylkroman-4-yl-karboksylsyre

En løsning av LiOH.H20 (0,78 g; 18,6 mmol) i vann (15 ml) ble tilsatt til en løsning av 4-hydroksy-6-metylkroman-4-yl-karboksylsyre, metylester (2,2 g; 9,3 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i THF (10 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over, THF ble fordampet og vannfasen ble vasket med eter. Den resulterende løsning ble surgjort med HC1 (2M) og ekstrahert med eter. Det organiske sjiktet ble tørket (Na2S04) og fordampet, og man får undertittelforbindelsen. Utbytte 1,21 mg (62 %).

'H-NMR (300 MHz; CD3OD): 8 7,06 (d, IH); 6,98 (d, IH); 6,69 (d, IH); 4,32 (m, IH); 4,17 (m, IH); 2,50 (m, IH); 2,21 (s, 3H); 2,03 (m, IH)

LC-MS (m/z) 207 (M-l)"

(iii) 4-hydroksy-6-metylkroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Z)

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 22(iii) ovenfor fra4-hydroksy-6-metylkroman-4-yl-karboksylsyre (310 mg; 1,49 mmol; fira trinn (ii) ovenfor), HATU (620 mg; 1,63 mmol), H-Aze-Pab(Z), (790 mg; 2,2 mmol; fremstilt etter fremgangsmåten angitt i internasjonal patentsøknad WO 97/02284) og 2,4,6-trimetylpyridin (0,37 g; 3,0 mmol). Råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat (45:55)). Fraksjonene av interesse ble delvis konsentrert og ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjiktet ble tørket (Na2S04) og konsentrert, og man får 675 mg (81 %) av en diastereomerblanding.

LC-MS (m/z) 557 (M+l)<+>

(iv) 4-hydroksy-6-metylkroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

HOAc (80 ul) og Pd/C (5 %, 150 mg) ble tilsatt til en løsning av 4-hydroksy-6-metylkroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (240 mg; 0,43 mmol; fra trinn (iii) ovenfor) oppløst i EtOH (10 ml), og blandingen ble hydrert ved omgivelsestemperatur og trykk natten over. Blandingen ble filtrert gjennom Celite. Frysetørking ga tittelforbindelsen i et utbytte på 159 mg (76 %).

1 H-NMR (500 MHz; CD3OD): 8 7,72 (dd, 2H); 7,53 (dd, 2H); 7,08 (d, IH), 7,00 (d, IH); 6,71 (d, IH); 4,84 (m, delvis skjult); 4,60 (m, IH), 4,46 (m, IH); 4,29 (m, 2H); 4,14 (t, IH); 2,40 (m, 2H); 2,26-2,10 (m, 3H); 2,00 (m, IH); 1,90 (s, 3H)

,<3>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 176,6; 174,5; 173,1; 168,1

LC-MS (m/z) 423 (M+l)<+>

Eksempel 27

8-klor-4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

(i) Etyl 3-(2-klor-4-metoksyfenoksy)propionat

Natrium (0,055 g; 2,4 mmol) og etanol (1,5 ml) ble tilsatt til en smelte av 2-klor-4-metoksyfenol (5,20 g; 32,8 mmol). Når all natrium var oppløst ble tilsatt etylakrylat (4,1 g; 41 mmol) og blandingen ble oppvarmet ved 105°C i 7 dager. Blandingen ble deretter avkjølt til RT og fordelt mellom eter og vann. Blandingen ble surgjort med HC1 (2M; aq) ekstrahert med eter tre ganger. De sammenslåtte organiske sjikt ble vasket med NaOH (2 M; aq), tørket (CaCh) og fordampet. Det urensede produktet (2,7 g) ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat (60:40)). Utbytte 1,90 g (22%)

(ii) 3-(2-klor-4-metoksyfenoksy)propionsyre

En løsning av LiOH.^O (0,67 g; 16 mmol) i vann (20 ml) ble tilsatt til en løsning av etyl-3-(2-klor-4-metoksyfenoksy)propionat (1,90 g; 7,3 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i

THF (10 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved RT natten over, THF ble fordampet og vannfasen ble vasket med eter. Den resulterende løsning ble surgjort med HC1 (2M) og ekstrahert med eter. Det organiske sjiktet ble tørket (Na2S04) og fordampet, og man får 0,90 g (54 %) av undertittelforbindelsen.

LC-MS (m/z) 229 (M-l)"

(iii) 8-klor-6-metoksykroman-4-on

Fosforpentaklorid (1,3 g; 6,2 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av 3-(2-klor-4-metoksy-fenoksy)propionsyre (0,85 g; 2,7 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) i benzen (10 ml). Den resulterende klare løsning ble oppvarmet hurtig til koking og ble deretter avkjølt på et isbad. Aluminiumklorid (1,5 g; 11 mmol) ble tilsatt i porsjoner og, etter at tilsetningen var avsluttet, ble tilsatt isvann. Ekstraksjon med eter, vasking av det organiske sjikt med NaHC03/aq og NaOH (2M; aq), tørking (Na2S04) og konsentrering, gir 0,73 g (93 %) av undertittelforbindelsen.

1 H-NMR (300 MHz; CDC13): 6 7,27 (d, IH); 7,19 (d, 2H); 4,59 (t, 2H); 3,80 (s, 3H); 2,81 (UH)

(iv) 8-klor-4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yl-karbocyklisk amid

Undertittelforbindelsen ble oppnådd ved et forsøk på å fremstille den tilsvarende metylester etter fremgangsmåten beskrevet av Bigge et al (J. Med. Chem. (1993) 36, 1977ff) fra 8-klor-6-metoksykromanon (0,73 g; 3,4 mmol; fra trinn (iii) ovenfor), Me3SiCN (0,94 g; 7,6 mmol) og Znl2 (50 mg; kat.). Råproduktet besto av en mindre mengde av den tilsvarende metylesteren og en større mengde av amidet. Amidet ble renset ved preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 30:70 til 70:30). Utbytte 0,39 g (44 %).

LC_MS (m/z) 256 (M-l)'

(v) 8-klor-4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yl-karboksylsyre

KOH (1,2 g; 21 mmol) og vann (25 ml) ble tilsatt til en løsning av 4-hydroksy-8-klor-6-metoksykroman-4-yl-karboksylsyreamid (0,39 g; 1,5 mmol; fra trinn (iv) ovenfor) i i-PrOH (25 ml). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet under tilbakeløp natten over, i-PrOH ble fordampet og vannløsningen ble vasket med eter. Reaksjonsblandingen ble surgjort med HC1 (2M) og ekstrahert med etylacetat. Det organiske sjikt ble tørket (Na2S04) og fordampet. Utbytte 0,38 mg (97 %).

LC-MS (m/z) 257 (M-1V

(vi) 8-klor-4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 22(iii) ovenfor fra4-metoksy-8-klor-6-metoksykroman-4-yl-karboksylsyre (260 mg; 1,00 mmol; fra trinn (v) ovenfor), HATU (420 mg; 1,1 mmol), H-Aze-Pab(Teoc) x HC1 (490 mg; 1,1 mmol; se eksempel 19(iv) ovenfor og 2,4,6-trimetylpyridin (600 mg; 4,5 mmol). Råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat (55:45)). Fraksjonene av interesse ble delvis konsentrert og ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjikt ble tørket (Na2SOi|) og konsentrert, og man får 340 mg (55 %) av en diastereomerblanding.

LC-MS (m/z) 617 (M+l)+

(vii) 8-klor-4-hydroksy-6-metoksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Tittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 19(vi) ovenfor ved anvendelse av 4-hydroksy-8-klor-6-metoksykroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc) (150 mg; 0,24 mmol; fra trinn (vi) ovenfor) og Bu4NF (1,0M i THF; 0,32 ml). Råmaterialet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat (20:80)). Utbytte 113 mg (87 %).

'H-NMR (400 MHz; CD3OD): 8 7,69 (d, 2H), 7,54 (d, 2H); 6,90 (d, IH); 6,85 (d, IH); 4,57 (m, 3H); 4,48-4,30 (m, 4H); 4,17 (m, 2H); 4,00 (m, IH); 2,8-2,5 (m, 2H); 2,40 (m, 2H); 2,26 (m, IH); 2,15 (m, 2H); 2,06 (d, IH)

LC-MS (m/z) 473 (M-l)-

Eksempel 28

6-klor-4-hydroksy-8-metylkroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

(i) Etyl-3-(4-kIor-2-metylfenoksy)propionat

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 27(i) ovenfor fra 4-klor-2-metylfenol (4,99 g, 35,0 mmol), natrium (0,055 g; 2,4 mmol), etanol (1,5 ml) og etylakrylat (4,1 g; 41 mmol). Råproduktet (1,98 g; 23 %) ble anvendt i neste trinn uten ytterligere rensing.

(ii) 3-(4-kIor-2-metylfeoksy)propionsyre

En løsning av LiOH.HjO (0,50 g; 12 mmol) i vann (10 ml) ble tilsatt til en løsning av etyl-3-(4-klor-2-metylfenoksy)propionat (1,98 g; 8,15 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i THF (20 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved værelsestemperatur natten over, THF ble fordampet og vannfasen ble vasket med eter. Den resulterende løsning ble surgjort med HC1 (2M), hvoretter det falt ut et fast materiale. Produktet ble filtrert og tørket, og man får 0,62 g (35 %) av undertittelforbindelsen.

LC-MS (m/z) 213 (M-l)"

(iii) 6-klor-8-metylkroman-4-on

Fosforpentaklorid (0,95 g, 4,6 mmol) ble tilsatt til en suspensjon av 3-(4-klor-2-metyl-fenoksy)propionsyre (0,59 g; 2,7 mmol; fra trinn (ii) ovenfor i benzen (10 ml). Den resulterende klare løsning ble oppvarmet hurtig til koking og ble deretter avkjølt på et isbad. Aluminiumklorid (1,0 g; 7,5 mmol) ble tilsatt i porsjoner, og, etter at tilsetningen var avsluttet, ble tilsatt isvann. Ekstraksjon med eter, vasking av det organiske sjikt med NaHCCVaq og NaoH (2M; aq), tørking (Na2S04) og konsentrering, ga 0,27 g (50 %) av undertittelforbindelsen.

'H-NMR (500 MHz; CDC13): 8 7,70 (d, IH); 7,29 (d, 2H); 4,56 (t, 2H); 2,79 (t, 2H); 2,22 (s, 3H).

(iv) 6-klor-4-hydroksy-8-metylkroman-4-yl-karboksylsyreamid

Undertittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet i eksempel 27(iv) ovenfor, ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet av Bigge et al (J. Med. Chem. (1993) 36, 1977ff) fra 6-klor-8-metylkromanon (0,27 g; 1,37 mmol; fra trinn (iii) ovenfor), Me3SiCN (0,29 g; 1,52 mmol) og Znl2 (46 mg; kat). Råproduktet besto av en mindre mengde av den tilsvarende metylester og en større mengden av amidet. Amidet ble renset ved preparativ RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat; 30:70 til 70:30). Utbytte 0,17 g (50%).

LC-MS (m/z) 240 (M-l)"

(v) 6-klor-4-hydroksy-8-merylkroman-4-yl-karboksylsyre

KOH (1,25 g; 22,3 mmol) og vann (20 ml) ble tilsatt til en løsning av 4-hydroksy-6-klor-8-metylkroman-4-yl-karboksylsyreamid (0,17 g; 0,69 mmol; fra trinn (iv) ovenfor) i i-PrOH (20 ml). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet under tilbakeløp natten over, i-PrOH ble fordampet og vannløsningen ble vasket med eter. Reaksjonsblandingen ble surgjort med HC1 (2M) og ekstrahert med etylacetat. Det organiske sjikt ble tørket (Na2S04) og fordampet. Utbytte 0,13 g (78 %).

(vi) 6-klor-4-hydroksy-8-metylkroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

En løsning av 6-klor-4-hydroksy-8-metylkroman-4-yl-karboksylsyre (130 mg; 0,54 mmol; fra trinn (v) ovenfor og HATU (220 mg; 0,59 mmol) i DMF (4 ml) ble omrørt ved 0°C i 1,5 h, og ble tilsatt en blandingn av H-Aze-Pab(Teoc) x HC1 (270 mg; 0,59 mmol; se eksempel 19(iv) ovenfor) og 2,4,6-trimetylpyridin (320 ml; 2,4 mmol) i DMF 3 ml) ble tilsatt ved 0°C. Etter omrøring i 3 h ved 0°C ble reaksjonsblandingen konsentrert, og råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat (55:45)). Fraksjonene av interesse ble delvis konsentrert og ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjikt ble tørket (Na2S04) og konsentrert, og man får 79 mg (24 %) av en diastereomerblanding.

LC-MS (m/z) 601 (M-l)"

(vii) 6-klor-4-hydroksy-8-metylkroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

B114NF (1,0 M i THF; 0,20 ml) ble tilsatt til en løsning av 6-klor-4-hydroksy-8-metyl-kroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc) (79 mg; 0,13 mmol; fra trinn (vi) ovenfor) i THF (5 ml) ved 0°C. Løsningen ble omrørt ved 0°C natten over og ble deretter konsentrert. Råmaterialet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat (20:80)). Utbytte 37 mg (54 %).

1 H-NMR (400 MHz; CD3OD): 8 7,72 (m, 2H); 7,54 (m, 2H), 7,15-6,98 (m, 2H); 4,60 (m, IH); 4,5-4,3 (m, 3H); 4,25-4,10 (m, 2H); 4,03 (m, IH); 2,80-2,45 (m, IH); 2,37 (m, IH); 2,26 (m, IH); 2,14 (s, 3H); 2,05 (d, IH); 1,92 (s, 3H)

LC-MS (m/z) 473 (M-l)"

Eksempel 29

(S)-eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(0-C(0)-i-Pr)

2-metylpropionsyreanhydrid (7,3 mg; 46 umol) ble tilsatt til en iskald løsning av (S)-eller (R)-1 -hydroksy-7-metoksytetralin-1 -yI-C(0)-Aze-Pab(OH) (20 mg; 44 umol; se eksempel 14 ovenfor) og Et3N (4,9 mg; 49 umol) i metylenklorid (1 ml) og blandingen ble omrørt ved RT natten over. Blandingen ble fortynnet med en ytterligere mengde metylenklorid, vasket tre ganger med vann og en gang med saltløsning, tørket (Na3S04) og konsentrert. Råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN: 0,1M ammoniumacetat (40:60)) og fraksjonene av interesse ble konsentrert. Fryse-tørking ga 13 mg (56 %) av tittelforbindelsen.

'H-NMR (300 MHz; CDC13): 8 7,90 (m, IH); 7,65 (d, 2H); 7,29 (d, 2H); 7,05 (d, IH); 6,83 (dd, IH); 6,67 (d, IH); 5,13 (b, 2H); 4,93 (dd, IH); 4,48 (m, 3H); 3,84 (m, IH); 3,76 (s, 3H); 3,03 (m, IH); 2,85-2,70 (m, 2H); 2,5-2,7 (m, 2H); 2,25 (m, IH); 2,00-1,93 (m, 4H); 1,29 (d, 6H)

<13>C-NMR (75 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 177,7; 174,3; 170,3 LC-MS (m/z) 523 (M+l)<+>

Eksempel 30

(S)- eller (R)-1-hydroksy-7-met0ksytetralin-l-yl-C(O)-Aze-Pab(O-C(O)-Et)

Propionsyreanhydrid 9,5 mg; 73 umol) ble tilsatt til en iskald løsning av (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(OH) (30 mg; 66 umol; se eksempel 14 ovenfor) og Et3N (7,4 mg; 73 umol) i metylenklorid (1 ml). Blandingen ble omrørt ved RT natten over. Råproduktet ble renset under anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat; 30:70 til 40:60) og fraksjonene av interesse ble konsentrert. Frysetørking ga 19 mg (56 %) av tittelforbindelsen.

'H-NMR (400 MHz; CDC13): 8 7,93 (t, IH); 7,67 (d, 2H); 7,32 (d, 2H); 7,06 (d, IH); 6,83 (dd, IH); 6,68 (d, IH); 5,12 (b, 2H); 4,93 (dd, IH); 4,50 (m, 2H); 3,84 (m, IH); 3,76 (s, 3H); 3,03 (m, IH); 2,67-2,50 (m, 2H); 2,5-2,7 (m, 4H); 2,26 (m, IH); 1,92 (m, 4H); 1,26 (t, 3H)

<13>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 5 178,8; 173,1; 171,4.

LC-MS (m/z) 509 (M+l)<+>

Eksempel 31

(S>- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(0-C(0)-Ch)

Cykloheksankarboksylsyreklorid (7,3 mg; 46 umol) ble tilsatt til en iskald løsning av (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(OH) (30 mg; 66 umol; se eksempel 14 ovenfor) og Et3N (7 mg; 73 umol) i metylenklorid (1 ml). Blandingen ble omrørt ved RT natten over. Blandingen ble fortynnet med en ytterligere mengde av metylenklorid, og blandingen vasket tre ganger med vann og en gang med saltløsning, tørket (Na2SC«4) og konsentrert. Råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat (40:60)) og fraksjonene av interesse ble konsentrert. Frysetørking i 18 mg (50 %) av tittelforbindelsen.

'H-NMR (400 MHz; CDC13): 8 7,91 (t, IH); 7,67 (d, 2H); 7,30 (d, 2H); 7,06 (d, IH); 6,83 (m, IH), 6,67 (d, IH); 5,09 (b, 2H); 4,93 (dd, IH); 4,50 (m, 3H); 3,83 (m, IH); 3,76 (s, 3H); 3,02 (q, IH); 2,68-2,45 (m, 3H); 2,26 (m, IH); 2,1-1,0 (m, 6H), 1,83 (m, 2H); 1,70 (m, IH); 1,59 (m, 2H); 1,32 (m, 3H)

<13>C-NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 178,7; 174,2; 171,4.

LC-MS (m/z) 563 (M+l)<+>

Eksempel 32

(S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(0-allyl)

(i) (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 22(iii) ovenfor fra l-hydroksy-7-metoksytetralin-l -yl-karboksylsyre (0,44 g; 2,0 mmol; se eksempel l(ii) ovenfor), HATU (0,80 g; 2,1 mmol), H-Aze-Pab(Teoc) x HC1 (1,17 g; 2,6 mmol; se eksempel 19(iv) ovenfor) og 2,4,6-trimetylpyridin (1,2 g; 10 mmol). Råproduktet (1,73 g) ble renset ved anvendelse av RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat; 55:34 til 45:55). Fraksjonene av interesse ble delvis konsentrert og ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjikt ble tørket (Na2SC«4) og konsentrert, og man får 0,32 g (28 %) av en diastereomer blanding. Preparativ RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat (46:54)) ga to diastereomerer: Forbindelse 32A (hurtig bevegende diastereomer; 0,16 g; 28 %; og Forbindelse 32B (langsomt bevegende diastereomer; 0,16 g; 28%).

Forbindelse 32A:

'H-NMR (400 MHz; CDCI3): 8 7,96 (t, IH); 7,86 (dd, 2H); 7,36 (dd, 2H); 7,07 (d, IH); 6,87 (dd, IH); 6,68 (d, IH); 4,95 (dd, IH); 4,54 (m, 3H); 4,26 (m, 2H); 3,84 (m, IH); 3,78 (s, 3H); 3,04 (q, IH); 2,83 (d, IH); 2,63 (m, 2H); 2,28 (m, IH); 2,02-1,85 (m, 4H); l,15(dt,2H); 0,08 (s, 9H)

LC-MS (m/z) 581 (M+l)<+>

(ii) (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yUC(0>-Aze-Pab(Teoc)(0-allyl)

O-allylhydroksylamin x HC1 (57 mg; 0,52 mmol) ble tilsatt til en løsning av (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc) (50 mg; 86 umol; Forbindelse 32A fra trinn (i) ovenfor) i THF (3 ml) og blandingen ble omrørt ved 60°C natten over. Løsningen ble konsentrert, og råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat; 55:45 til 60:40). Fraksjonene av interesse ble konsentrert, og den gjenværende blanding ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjikt ble vasket med saltløsning, tørket (Na2S04) og konsentrert, og man får 28 mg (51 %) av undertittelforbindelsen.

'H-NMR (400 MHz; CDC13): 8 7,81 (t, IH); 7,59 (s, IH); 7,48 (d, 2H); 7,30 (d, 2H);

7,06 (d, IH); 6,83 (dd, IH); 6,69 (d, IH); 6,04 (m, IH); 5,35 (m, IH); 5,27 (d, IH); 4,92 (dd, IH); 4,66 (dd, IH); 4,50 (m, IH); 4,16 (m, 2H); 3,81 (m, IH); 3,78 (s, 3H); 2,97 (q, IH); 2,82 (d, IH); 2,60 (m, 2H); 2,26 (m, IH); 2,05-1,85 (m, 4H); 0,98 (m, 2H); 0,03 (s, 9H).

(iii) (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(0-allyl)

Tittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 19(vi) fra (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)(0-allyl) (28 mg; 44 umol; fra trinn (ii) ovenfor) i CH3CN (2 ml) og Bu4NF (1 M i THF; 0,1 ml; 0,1 mmol). Råproduktet (21,3 mg) ble renset ved anvendelse av flashkromatografi (Si-gel; etylacetat), utbytte 10 mg (46 %).

'H-NMR (400 MHz; CDC13): 8 7,88 (t, IH); 7,62 (d, 2H); 7,30 (d, 2H); 7,06 (d, IH); 6.83 (dd, IH); 6,68 (d, IH); 6,09 (m, IH); 5,35 (m, IH); 5,23 (m, IH); 4,93 (dd, IH); 4.84 (s, 3H); 4,68 (m, IH); 4,50 (m, 2H); 3,82 (m, IH); 3,77 (s, 3H); 3,01 (m, IH); 2,82 (d, IH); 2,62 (m, 2H); 2,26 (m, IH); 2,0-1,8 (m, 4H).

,<3>C-NMR(100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 178,8; 171,2; 159,6 LC-MS: (m/z) 493 (M+l)<+>

Eksempel 33

(S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetraUn-l-yl-C(0)-Aze-Pab(0-Bzl)

(i) (S)- eller fR)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)(0-Bzl)

O-benzylhydroksylamin x HC1 (82 mg; 0,52 mmol) ble tilsatt til en løsning av (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc) (50 mg; 86 umol; se eksempel 32(i) ovenfor) i THF (3 ml) og blandingen ble omrørt ved 60°C natten over. Løsningen ble konsentrert, og råproduktet ble renset ved hjelp av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 60:40 til 70:30). Fraksjoner av interesse ble konsentrert, og den resterende blanding ble ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjikt ble vasket med saltløsning, tørket (Na2S04), og konsentrert, og man får 41 mg (70 %) av undertittelforbindelsen.

'H-NMR (400 MHz; CDC13): 5 7,81 (t, IH); 7,60 (s, IH); 7,47 (d, IH); 7,40 (m, 5H); 7,30 (d, 2H); 7,06 (d, IH); 6,83 (dd, IH); 6,69 (d, IH); 5,18 (s, 2H); 4,92 (dd, IH); 4,51 (m, 2H); 4,15 (m, 2H); 3,81 (m, IH); 3,77 (s, 3H); 2,81 (d, IH); 2,60 (m, 2H); 2,25 (m, IH); 2,1-1,8 (m, 4H); 0,96 (m, 2H); 0,02 (s, 9H)

LC-MS (m/z) 687 (M+l)<+>

(ii) (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(0-Bzl)

Tittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 10(vi) ovenfor fra (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

(OBzl) (28 mg; 44 umol; fra trinn (i) ovenfor) og BojNF (IM i THF; 0,1 ml; 0,1 mmol). Råproduktet (21 mg) ble renset ved anvendelse av flashkromatografi (Si-gel; etylacetat). Utbytte: 10 mg (35%).

1 H-NMR (400 MHz; CDC13): 8 7,88 (t, IH); 7,61 (d, 2H); 7,45 (d, 2H); 7,40-7,35 (m, 5H); 7,06 (d, IH); 6,83 (dd, IH); 6,68 (d, IH); 5,15 (s, 2H); 4,92 (dd, IH); 4,85 (b, 2H); 4,50 (b+m, 3H); 3,83 (m, IH); 3,77 (s, 3H); 3,02 (m, IH); 2,82 (d, IH); 2,62 (m, 2H); 2,26 (m, IH); 2,0-1,8 (m, 4H)

<13>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 178,8; 171,3; 159,6.

LC-MS (m/z) 543 (M+l)<+>

Eksempel 34

(S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab (CO-O-metylallyl)

(i) p-ntriofenylmetallylkarbonat

Pyridin (1,21 g; 15 mmol) ble tilsatt til en iskald løsning av metallylalkohol (1,0 g; 14 mmol) og p-nitrofenylklorformat (3,07 g; 15 mmol) i metylenklorid (40 ml), og den resulterende blanding ble omrørt ved RT i 1 time, hvoretter løsningen ble vasket med KHS04 (3x) og saltløsning, tørket (Na2S04), og konsentrert, og man får 2,9 g (88 %) av undertittelforbindelsen.

'H-NMR (400 MHz; CDCI3): 6 8,29 (d, 2H); 7,40 (d, 2H); 5,12 (s, IH); 5,06 (s, IH); 4,70 (s, 2H); 1,85 (s, 3H).

(ii) S- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab (CO-O-metallyl)

NaOH (aq; 2M; 0,35 ml; 0,7 mmol) ble tilsatt til en iskald løsning av (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc (32 mg; 64 umol; se eksempel 3 ovenfor) i THF (3 ml), hvoretter ble tilsatt p-nitrofenylmetallylkarbonat (17 mg; 71 ^irnol; fra trinn (i) ovenfor) og løsningen ble omrørt ved RT i 1 time. Råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat (40:60)). Fraksjonene av interesse ble konsentrert og vannløsningen ble ekstrahert med metylenklorid. Det organiske sjikt ble vasket med saltløsning, tørket (Na2S04), og konsentrert. Produktet ble oppløst i CH3CN/vann og frysetørket og man får 23 mg (67 %) av tittelforbindelsen.

1 H-NMR (400 MHz; CDC13): 8 7,97 (t, IH); 7,83 (d, 2H); 7,33 (d, 2H); 7,06 (d, IH); 6,83 (dd, IH); 6,67 (d, IH); 5,06 (s, 2H); 4,93 (m, 2H); 4,60 (s, 2h); 4,51 (m, 2H); 3,84 (m, IH); 3,76 (s, 3H); 3,05 (m, IH); 2,82 (d, IH); 2,60 (m, 2H); 2,27 (m, IH); 2,0-1,85 (m,4H); 1,83 (s, 3H)

<13>C-NMR (100 MHz; CDC13): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 178,8; 171,4; 159,6.

LC-MS (m/z) 535 (M+l)<+>

Eksempel 35

l-hydroksy-7-aminotetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

(i) l-hydroksy-7-nitrotetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 22(iii) ovenfor fra l-hydroksy-7-nitrotetralin-l-yl-karboksylsyre (200 mg; 0,84 mmol; se eksempel 7(ii) ovenfor), HATU (353 mg; 0,93 mmol), H-Aze-Pab(Teoc) (417 mg; 0,93 mmol; se eksempel 19(iv) ovenfor) og 2,4,6-trimetylpyridin (409 mg; 3,37 mmol). Råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat (50:50)). Fraksjonene av interesse ble konsentrert og frysetørket, og man får 226 mg (45 %) av undertittelforbindelsen.

'H-NMR (400 MHz; CDC13): 6 8,04 (m, 2H); 7,84 (d, 2H); 7,77 (d, IH); 7,29 (m, 2H); 4,93 (m, IH); 4,65-4,50 (m, IH); 4,40 (dd, IH); 3,96 (m, IH); 3,82 (m, 5H); 3,15 (m, IH); 2,95 (m, IH); 2,75 (m, IH); 2,52 (m, IH); 2,44-2,25 (m, IH); 2,1-1,9 (m, 5H); 0,05 (s, 9H)

LC-MS (m/z) 596 (M+l)<+>

(ii) l-hydroksy-7-aminotetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

En blanding av l-hydroksy-7-nitrotetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc) (48 mg; 81 umol) og Pd/C (5 %, 24 mg) fra trinn (i) ovenfor), eddiksyre (5 mg; 81 umol) og Pd/C (5 %; 24 mg) ble hydrert ved omgivelsestemperatur og trykk i 3 h. Den resulterende blandingen ble filtrert gjennom Celite, og konsentrert, og man får 37 mg (85 %) av tittelforbindelsen.

'H-NMR (400 MHz; CDC13): 5 7,86 (dd, 2H); 7,42 (d, IH); 7,33 (d, IH); 6,89 (dd, IH); 6,58 (dd, IH); 6,47 (b, 0,5H); 6,23 (b, 0,5H); 4,91 (m, IH); 4,68-4,52 (m, IH); 4,5-4,4 (m, IH); 4,23 (m, 2H); 3,85 (m, IH); 3,69 (m, IH); 3,2-3,0 (m, IH); 2,74 (d, IH); 2,65-2,45 (m, 2H); 2,4-2,2 (m, IH); 2,0-1,8 (m, 5H); 0,05 (s, 9H)

LC-MS (m/z) 566 (M+l)<+>

(iii) l-hydroksy-7-aminotetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(OH)

En blanding av hydroksylamin x HC1 (29 mg; 41 mmol) og TEA (140 mg; 1,38 mmol) i THF (10 ml) ble behandlet med ultralyd ved 40°C i 1 h. En løsning av l-hydroksy-7-aminotetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc) (140 mg; 1,38 mmol; fra trinn (ii) ovenfor) i THF (5 ml) ble tilsatt og blandingen ble omrørt ved 40°C i 3 dager. Den resulterende blanding ble konsentrert og råproduktet ble renset ved preparativ RPLC (CH3CH:0,1M ammoniumacetat (30:70)). Konsentrasjon og frysetørking av løsningen ga 20 mg (65 %) av tittelforbindelsen.

'H-NMR (400 MHz; CDC13): 8 8,26 (b, 0,5H); 8,03 (b, 0,5H); 7,57 (dd, 2H); 7,39 (d, IH); 7,30 (d, IH); 6,91 (dd, IH); 6,65-6,55 (m, IH); 4,98 (m, 3H); 4,65-4,30 (m+b, 4H); 3,88 (m, 0,5H); 3,69 (m, 0,5H); 3,14 (m, IH); 2,77 (d, IH); 2,65-2,50 (m, 2H); 2,45-2,25 (m, IH); 2,10 (s, 2H); 2,00-1,85 (m, 4H).

<13>C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 178,2; 172,9; 155,2.

LC-MS (m/z) 438 (M+l)+

Eksempel 36

(S)-eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(0-Val)

(i) (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab (O-Val(Boc))

EDC x HC1 (16 mg; 83 umol) ble tilsatt til en iskald løsning av (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(OH) (30 mg; 66 umol; se eksempel 14 ovenfor), Boc-Val-OH (18 mg; 83 umol) og DMAP (24 mg, 0,20 mmol) i DMF (3 ml), og løsningen ble omrørt natten over. Den resulterende blanding ble helt ned i vann (200 ml), og blandingen ble ekstrahert tre ganger med EtOAc. De kombinerte organiskse faser ble vasket med fortynnet sitronsyreløsning og saltløsning, tørket (Na2SOi)) og konsentrert. Råproduktet (41 mg) ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1 M ammoniumacetat (40:60)). Utbytte 13 mg (30 %). 1 H-NMR (500 MHz; CDC13): 8 7,94 (bt, IH); 7,68 (d, 2H); 7,33 (d, 2H); 7,08 (d, IH); 6,85 (dd, IH); 6,69 (d, IH); 5,30 (b, 2H); 5,18 (bd, IH); 4,95 (m, IH); 4,60-4,55 (m, 3H); 4,48 (dd, IH); 4,32 (m, IH); 3,86 (m, IH); 3,79 (s, 3H); 3,05 (m, IH); 2,83 (m, IH); 2,7-2,55 (m, 2H); 2,28 (m, IH); 2,22 (m, IH); 2,05-1,85 (m, 5H); 1,48 (s, 9H); 1,08 (d, 3H); 1,04 (d, 3H)

LC-MS (m/z) 652(M+1)+

(ii) (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-mctoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab

(O-Val)

En iskald løsning av l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-Pab(0-Val(Boc)) (12 mg; 18 umol; fra trinn (i) ovenfor) i EtOAc mettet med HC1 (5 ml) ble omrørt i 80 minutter, hvoretter løsningen ble konsentrert, oppløst i vann og frysetørket natten over, og man får 11 mg (96 %) av tittelforbindelsen.

1 H-NMR (400 MHz; D20): 8 7,66 (d, IH, minor); 7,59 (d, 2H, major); 7,45-7,35 (m, 2H); 7,2-7,1 (m, IH); 6, 95- 6,% 5 (m, lh); 6,75-6,65 (m, IH); 5,25 (m, IH, minor); 4,89 (m, IH, major); 4,6-4,3 (m, 3H); 4,21 (m, IH); 4,14 (m, IH, major); 3,87 (m, IH, major); 3,81 (s, 3H, minor); 3,63 (s, 3H, major); 2,8-1,7 (m, 9H); 1,11 (d, 6H) <13>C-NMR (100 MHz; D20): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 178,3; 173,8; 169,1; 161,4

LC-MS (m/z) 552 (M+l)<+>

Eksempel 37

(S> eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-N(Me>Bzl-4-C(NH2)NH x HOAc

(i) Metyl-4-cyanobenzylidenimin

En løsning av p-cyanobenzaldehyd (13,1 g; 0,1 mol), metylamin (3,1 g; 0,1 mol) og p-TsOH (50 mg; kat) i toluen (150 ml) ble omrørt ved RT natten over, hvoretter den ble vasket med NaHC03/(aq (2x) og saltsyre, tørket (Na2S04) og konsentrert. Utbytte 14,4 g

(100%)

1 H-NMR (300 MHz; CDC13): 8 8,2 (s, IH), 7,78 (d, 2H); 7,68 (d, 2H); 3,54 (s, 3H).

(ii) Metyl-4-cyanobenzylamin

NaBrLi (4,54 g; 0,42 mol) ble tilsatt i porsjoner til en iskald løsning av metyl-4-cyano-benzylidenimin (14,4 g; 0,1 mol; fra trinn (i) ovenfor i EtOH. Løsningen ble omrørt ved RT natten over og den resulterende løsningen ble stoppet med HC1 (2M; aq), vasket med eter (2x), gjort alkalisk med NaOH (2M; aq) til pH 10, og ekstrahert med EtOAc (3x). Den organiske løsningen ble vasket med vann og saltløsning, tørket (Na2S04) og konsentrert. Utbytte 11,4 g (78 %).

'H-NMR (300 MHz; CDC13): 6 7,92 (d, 2H); 7,76 (d, 2H); 4,82 (s+b, 5H); 4,40 (s, 2H).

(iii) Boc-Aze-N(Me)-Bzl-4-CN

EDC x HC1 (14,5 g; 76 mmol) ble tilsatt i porsjoner til en iskald løsning av metyl-4-cyanobenzylamin (11,4 g; 78 mmol), Boc-Aze(OH) (15,4 g; 78 mmol) og DMAP (10,5 g; 82 mmol) i CH3CN (500 ml), hvoretter blandingen ble omrørt ved RT natten over. Den resulterende blanding ble fordelt mellom EtOAc og vann, den vandige fasen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 100 ml), og de sammenslåtte organiske sjikt ble vasket med NaHS04 (2x), vann (2x) og saltløsning (lx), tørket (Na2S04) og konsentrert. Utbytte av urenset produkt var 23,2 g (90 %). En liten mengde (6,17 g; 18,7 mmol) ble renset ved anvendelse av flashkromatografi (Si gel; EtOAc). Utbytte 4,0 g (65 %).

1 H-NMR (400 MHz; CDC13) (kompleks som skyldes rotamerer): 5 7,66 (d, 2H, minor); 7,60 (d, 2H, major); 7,38 (d, 2H, major); 7,31 (d, 2H, minor); 5,01 (dd, IH); 4,9-4,7 (b, IH); 4,6-4,45 (b, IH); 4,07 (m, IH); 3,90 (m, IH); 3,00 (s, 3H, minor); 2,96 (s, 3H, major); 2,46 (m, IH); 1,43 (s, 3H)

(iv) Aze-N(Me)-Bzl-4-CN x HC1

En løsning av Boc-Aze-N(Me)-Bzl-4-CN (4,0 g; 12 mmol; fra trinn (iii) ovenfor) i EtOAc (mettet med HC1; 50 ml) ble omrørt i 15 minutter, hvoretter løsningen ble konsentrert. Utbytte 3,1 g (kvant.).

'H-NMR (400 MHz; D20): 8 7,80 (m, 2H); 7,45 (m, 2H); 5,6-5,45 (m, IH); 4,72 (s, 2H); 4,3-4,1 (m, IH); 4,08-3,95 (m, IH); 2,94 (s, 3H); 2,8-2,55 (m, IH)

(v) (S> eller fR)-l-hydroksy-7-metoks<y>tetralin-l-yl-C(0)-Aze-N(Me)-Bzl-4-CN

En løsning av Aze-N(Me)-Bzl-4-CN x HC1 (0,56 g; 2,1 mmol; fra trinn (iv) ovenfor) og 2,4,6-trimetylpyridin (0,51 g, 4,2 mmol) i DMF (3 ml) ble tilsatt til en iskald løsning av l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-karboksylsyre (0,44 g; 2,0 mmol; se eksempel l(ii) ovenfor) og HATU (0,80 g; 2,1 mmol) i DMF (3 ml), og blandingen ble omrørt ved RT natten over. Den resulterende blanding ble helt ned i vann (0,5 1) ekstrahert med EtOAc (3x). Den organiske løsningen ble vasket med saltløsning, tørket (Na2S04) og fordampet. Råproduktet (1,06 g) ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN:0,1M ammoniumacetat (32,5:67,5)), som gir to diastereoisomerer, en hurtigere diastereoisomer (Forbindelse 37A; utbytte 215 mg (50 %)), og en langsommere diastereoisomer (Forbindelse 37B; utbytte 205 mg (48 %)).

Forbindelse 37 A

1 H-NMR (400 MHz; CDC13) (kompleks som skyldes rotameri): S 7,74 (d, 2H, minor); 7,66 (d, 2H, major); 7,42 (d, 2H, minor); 7,39 (d, 2H, major); 7,07 (m, IH); 6,87-6,81 (m, IH); 6,80 (d, 2H, major); 6,75 (d, 2H, minor); 5,22 (dd, IH, major); 5,02 (dd, 2H, minor); 4,71 (dd, 2H); 4,60 (m, IH); 3,98 (m, IH); 3,81 (s, 3H, major); 3,78 (s, 3H, minor); 3,05-2,05 (m, 4H; derav 3,05, s, 3H, minor og 3,01, s, 3H, major); 2,92-2,82 (m, IH); 2,67 (m, IH); 2,40 (m, IH, minor); 2,25-2,07 (m, 3H); 1,98 (m, 2H)

(v) (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytctralin-l-yl-C(0)-Aze-N(Me)-Bzl-4-C(NH2)N0H

En løsning av (S)- eller (R)-l-hydroksymetoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-N(Me)-Bzl-4-CN (0,18 g; 0,42 mmol; Forbindelse 37A fra trinn (v) ovenfor), hydroksylamin x HC1 (88 mg; 1,3 mmol) og TEA (0,18 ml; 1,3 mmol) i etanol (abs. 3 ml) ble omrørt ved RT i 36 h, hvoretter råproduktet ble renset ved anvendelse av flashkromatografi (metylenklorid: metanol (90:10)). De sammenslåtte fraksjoner av interesse ble konsentrert. Utbytte 0,18 g (91 %).

1 H-NMR (500 MHz; CDCI3) (kompleks som skyldes rotameri): 8 7,67 (d, 2H, minor); 7,60 (d, 2H, major); 7,28 (m, 2H, delvis skjult av CHC13); 7,04 (dd, IH); 6,85-6,72 (m, 2H); 5,65 (b, 2H, major); 5,33 (b, 2H, minor); 5,20 (dd, IH, major); 5,06 (dd, IH, minor); 4,75-4,45 (m, 3H); 3,95 (m, IH); 3,78 (s, 3H, major); 3,75 (s, 3H, minor); 3,00 (s, 3H, minor); 2,94 (d, 3H, major); 2,9-2,75 (m, IH); 2,65 (m, IH); 2,40 (m, 2H, major); 2,10 (m, 3H); 1,95 (m, 2H)

LC-MS (m/z) 467(M+1)+

(vi) (S)- eller (R)-l-bydroksy-l-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-N(Me)-Bzl-4-C(NH2)NH x HOAc

En blanding av (S)- eller (R)-l-hydroksy-7-metoksytetralin-l-yl-C(0)-Aze-N(Me)-Bzl-4-C(NH2)NOH (60 mg; 0,13 mmol; fra trinn (vi) ovenfor, HOAc (15 mg; 0,26 mmol) og Pd/C (10 %; 27 mg) i etanol ble kromatografert i 2 dager, hvoretter blandingen ble filtrert gjennom Celite. Den resulterende løsningen ble konsentrert, og råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC-(CH3CN:0,1 M ammoniumacetat; 10:90 til 20:80). Fraksjonene av interesse ble delvis konsentrert og frysetørket natten over. Utbytte 18 mg (27%).

1 H-NMR (400 MHz; D20) (kompleks som skyldes rotamer): 8 7,83-7,73 (m, IH); 7,68 (d, IH); 7,50 (t, IH); 7,43 (d, IH); 7,17 (d, IH); 6,93 (m, IH); 6,82 (d, IH); 5,40 (dd, IH); 4,85 (d, IH); 4,70 (m, IH); 4,58 (d, IH); 4,4-4,0 (m, 2H); 3,70 (s, 3H); 3,10 (s, 3H); 2,9-2,6 (m, 3H); 2,25-2,05 (m, 4H); 2,0-1,7 (m, 4H)

,<3>C-NMR (100 MHz; D20): (karbonyl og/eller amidinkarboner) (kompleks som skyldes rotameri) 8 178,6; 177,6; 173; 173,1; 167,5; 158,5; 158,4; 158,2 LC-MS (m/z) 451 (M+l)+

Eksempel 38

9-hydroksyfluoren-9-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

(i) 9-hydroksyfluoren-9-yl-C(0)-Aze-Pab(Z)

Undertittelforbindelsen ble fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i eksempel 3(i) ovenfor fra 9-hydroksyfluoren-9-yl-karboksylsyre (230 mg; 1,0 mmol), TBTU (350 mg; 1,1 mmol), H-Aze-Pab(Z) x HC1 (500 mg; 1,25 mmol; fremstilt etter fremgangsmåten beskrevet i internasjonal patentsøknad WO 97/02284) og DIPEA (0.52 g: 4,0 mmol). Råproduktet ble renset ved anvendelse av preparativ RPLC (CH3CN: 0,1 M ammoniumacetat; 50:50). Fraksjonene av interesse ble delvis konsentrert og ble ekstrahert med EtOAc (3x). Det organiske sjikt ble tørket (Na2S04) og konsentrert, og man får 266 mg (46 %) av undertittelforbindelsen.

'H-NMR (400 MHz; CDC13): 6 7,92 (d, 3H); 7,66 (dd, 2H); 7,5-7,2 (m, 1 IH); 5,25 (s, 3H); 4,85 (dd, IH); 4,52 (m, 2H); 2,83 (t, 2H); 2,33 (m, IH); 2,12 (m, IH)

LC-MS (m/z) 575 (M+l)<+>

(ii) 9-hydroksyfluoren-9-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Pd/C (5 %; 100 mg) og HOAc (9 ul) ble tilsatt til en blanding av 9-hydroksyfluoren-9-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (70 mg; 0,12 mmol; fra trinn (i) ovenfor) i EtOH (10 ml). Blandingen ble hydrert ved omgivelsestemperatur og trykk i 6 h. Blandingen ble filtrert gjennom Celite, konsentrert og oppløst i vann, hvoretter den vandige løsningen ble frysetørket. Utbytte 53 mg (88 %).

'H-NMR (400 MHz; D20): 8 7,9-7,65 (m, 4H); 7,60-7,35 (m, 8H); 4,51 (s, IH); 4,05 (m, 2H); 3,25 (t, IH); 2,49 (m, 0,5H, rotamer); 2,28 (m, 0,5H, rotamer); 1,98-1,84 (m, 7H; innenfor dette:-1,95, s, 3H)

<13>C-NMR (100 MHz; D20): (karbonyl og/eller amidinkarboner) 8 173,4; 173,0; 172,6; 167,0

FAB-MS (m/z) 441 (M+l)<+>

Testeksempel I

Tittelforbindelsene i eksempler 1 til 12,19 til 28, 37 og 38 (som alle er forbindelser av formel I hvor D 1 og D *) representerer H) ble analysert som i forsøk A ovenfor og alle ble funnet å ane en IC5oTT-verdi på mindre enn 0,3 um.

Testeksempel II

Tittelforbindelsene i eksempler 13 til 18 og 29 til 36 (som alle er forbindelser av formel I hvor minst én av D<1> og D2 er forskjellig fra H) ble analysert i forsøk A ovenfor og alle ble funnet å ha en ICsoTT-verdi på mer enn 1 um.

Testeksempel III

Tittelforbindelsene i eksempler 13 ti 18 og 29 til 36 (som alle er forbindelser av formel I hvor minst én av D' og D<2> er forskjellig fra H) ble analysert som i forsøk E ovenfor og alle ble funnet å ha oral og/eller parenteral biotilgjengelighet hos rotten som den tilsvarende aktive inhibitor av formel I hvor D<1> og D<2> representerer H.

Forkortelser

Ac = acyl

AcOH = eddiksyre

Aze = azetidin-2-karboksylat

AzeOH = azetidin-2-karboksylsyre

DCC = dicykloheksylkarbodiimid

DIPEA = diisopropyletylamin

DMAP = N,N-dimetylaminopyridin

DMF = dimetylformamid

DMSO = dimetylsulfoksyd

EDC = l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydroklorid Et = etyl

Et20 = dietyleter

EtOAc = etylacetat

EtOH = etanol

h = timer

HATU = 0-(azabenzotriazol-l -yl)-N,N,N\N'-tetrametyluroniumheksafluorfosfat HBTU = p^,N,N\N'-tetrametyl-0-(benzotriazol4-yl)uromumheksafluorfosfat] HCl(g) = hydrogenkloridgass

HOAc = eddiksyre

LC = væskekromatografi

Me = metyl

MeOH = metanol

Pab-H = para-amidinobenzylamino

H-Pab-H = para-ami dinob enzylamin

QF = tetrabutylammoniumfluorid (BU4NF)

RPLC = preparativ omvendt fase høyeeffekt væskekromatografi RT = værelsestemperatur

TBTU= [N,N,N',N'-tetrametyl-0-(benzotriazol-l-yl)uroniumtetrafluorborat] TEA = trietylamin

Toec = 2-(trimetylsilyl)etoksykarbonyl

THF = tetrahydrofuran

TLC = tynnsjiktskromatografi

Val = L-valin

Z = benzyloksykarbonyl

Prefiksene n, s, i og t har deres vanlige betydninger: normal, iso, sekundær og tertiær.

Claims

1. Forbindelse, karakterisert ved at den har formel I hvor R1 representerer OR<ld> eller en cyanosubstituert C1-4 alkylgruppe; R<ld> representerer H; Rx representerer et strukturfragment av formel Ila eller He hvor de prikkede linjene representerer dobbeltbindinger; A og B representerer CH; D representerer -CH=CH-; Xi representerer C2-4 alkylen eller -Z-A<3>; X4 representerer en enkeltbinding; A<3> representerer C1-3 alkylen; Z representerer O eller S(0)m; m representerer 0,1 eller 2; R<2> representerer én eller flere eventuelle substituenter valgt fra C1.4 alkyl, Cm alkoksy, halogen eller N(R<27>)R<28>, hvor R27 og R2<8> representerer H eller CM alkyl; Y representerer CH2 eller (CH2)2; Ry representerer H eller Cm alkyl; n representerer 1, 2, 3 eller 4; B<1> representerer et strukturfragment av formel nid hvor X<5>, X<6>, X<7> og X<8> uavhengig representerer CH; D<1> og D<2> representerer uavhengig H, OH, OR<a>, OC(0)R, C(0)ORd eller C(0)R<e>; hvor Ra representerer benzyl eller C1.7 alkyl; R representerer C1.17 alkyl (hvilken gruppe eventuelt er substituert med amino) eller C3.7 cykloalkyl; Rd representerer C1.3 alkylfenyl (hvilken gruppe eventuelt er substituert med Cj.6 alkyl eller alkoksy) eller C1-12 alkyl (hvilken gruppe eventuelt er substituert med halogen); Re representerer C1-6 alkyl (hvilken gruppe eventuelt er substituert med halogen); eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

2. Forbindelse av formel I ifølge krav 1, karakterisert ved at fragmentet er i S-konfigurasjon.

3. Forbindelse av formel I ifølge krav 1, karakterisert v e d at når Rx representerer et strukturfragment av formel Ila, så representerer X| C<2-> eller C3-alkylen, -OCH2- eller-0(CH2)2-.

4. Forbindelse av formel I ifølge krav 1, karakterisert v e d at når R<2> representerer minst én substituent, så er et substitusjonspunkt på ringen av formel Ha ved karbonatomet som er ved posisjon B.

5. Forbindelse av formel I ifølge krav 1, karakterisert ved at når R<2> representerer minst én substituent, så er ringen av formel Ha substituert enten ved karbonatomet i -CH^CH-gruppen (posisjon D) som er tilstøtende til ringforbindelsespunktet, eller ved det karbonatomet som er ved posisjon B, eller ved begge disse stedene.

6. Forbindelse av formel I ifølge krav 1, karakterisert ved at D<1> representerer H og D<2> representerer OH, OCH3, OC(0)Rb eller C(0)OR<d>, hvor Rb og Rd er som definert i krav 1.

7. Farmasøytisk formulering, karakterisert ved at den omfatter en forbindelse som angitt i hvilket som helst av kravene 1-6, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, i blanding med et farmasøytisk akseptabelt hjelpemiddel, fortynningsmiddel eller bærer.

8. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 6, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for anvendelse som et legemiddel.

9. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 6, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for anvendelse ved behandlingen av en tilstand hvor det er behov for inhibitering av trombin.

10. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 6, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for anvendelse ved behandlingen av trombose.

11. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 6, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav for anvendelse i behandlingen av hyperkoagulabilitet i blod og vev.

12. Forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 6, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for anvendelse som en antikoagulant.

13. Anvendelse av en forbindelse ifølge hvilket som helst av kravene 1 til 6, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som aktiv bestanddel i fremstillingen av et legemiddel for behandlingen av en tilstand hvor det er behov for inhibitering av trombin.

14. Anvendelse ifølge krav 13 hvor tilstanden er trombose.

15. Anvendelse ifølge krav 13 hvor tilstanden er hyperkoagulabilitet i blod og vev.

16. Anvendelse av en forbindelse som angitt i hvilket som helst av kravene 1 til 6, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, som aktiv bestanddel ved fremstillingen av en antikoagulant.

17. Fremgangsmåte for fremstilling av forbindelser av formel L karakterisert ved en koblingsreaksjon som innbefatter: (i) koblingen av en forbindelse av formel IV, hvor R<1> og Rx er som definert i krav 1, med en forbindelse av formel V, hvor Ry, Y, n og B1 er som definert i krav 1; eller (ii) koblingen av en forbindelse av formel VI hvor R<1>, Rx og Y er som definert i krav 1, med en forbindelse av formel VE hvor Ry, n og B1 er som definert i krav 1.