SK167099A3 - New amidino derivatives and their use as thrombin inhibitors - Google Patents

Description

Nové amidínové deriváty a ich použitie v úlohe trombínových inhibítorov

Oblasť techniky

Tento vynález sa týka nových farmaceutický užitočných zlúčenín, konkrétne kompetitívnych inhibítorov trypsínovitých serínových proteáz, najmä trombínu, ich použitia ako liekov, farmaceutických kompozícií ich obsahujúcich a syntetických ciest na ich prípravu.

Východiská

Zrážanie krvi je kľúčovým procesom, ktorý sa zúčastňuje na hemostáze (t.j. zabráneniu straty krvi z poškodenej cievy) a trombóze (t.j. tvorbe krvnej zrazeniny v krvnej cieve, čo niekedy vedie k obštrukcii cievy).

Zrážanie je výsledkom zložitej série enzymatických reakcií. Jedným z posledných krokov v tejto sérii reakcií je konverzia proenzýmu protrombínu na aktívny enzým trombín.

O trombíne je známe, že hrá v zrážaní ústrednú úlohu. Aktivuje krvné doštičky, čo vedie k agregácii krvných doštičiek, premieňa fibrinogén na fibrínové monoméry, ktoré spontánne polymerizujú na fibrínové polyméry, a aktivuje faktor XIII, ktorý zase sieťuje polyméry do nerozpustného fibrínu. Trombín navyše aktivuje faktor V a faktor VIII, čo vedie k “pozitívne spätno-väzbovému” generovaniu τ trombínu z protrombínu.

' Inhibíciou agregácie krvných doštičiek a tvorbou a zosietením fibrínu by účinné inhibítory trombínu mohli vykazovať antitrombotickú účinnosť. Okrem toho sa očakáva, že antitrombotícká aktivita by sa mohla zlepšiť účinnou inhibíciou mechanizmu pozitívnej spätnej väzby.

Doterajší stav techniky

Prvý vývoj nízkomolekulových inhibítorov trombínu opísal Claesson v Blood Coagul. Fibrinol. (1994) 5, 411.

Blombäck a kol. (v J. Clin. Lab. Invest. 24, suppl. 107, 59, (1969)) uviedli trombínové inhibítory na základe aminokyselinovej sekvencie umiestnenej okolo štiepneho miesta pre Aa reťazec fibrinogénu. Z diskutovaných aminokyselinových sekvencii títo autori navrhovali tripeptidovú sekvenciu Phe-Val-Arg (P9-P2-P1, ďalej označovanú ako sekveneia P3-P2-P1) ako najúčinnejší inhibítor.

Trombínové inhibítory na báze dipeptidylových derivátov s α,ω-aminoalkylguanidínom v polohe P1 sú známe z amerického patentu č. 4,346,078 a medzinárodnej patentovej prihlášky WO 93/11152. Publikovali sa aj podobné, štruktúrne príbuzné dipeptidylové deriváty. Medzinárodná patentová prihláška WO 94/29336 napríklad uvádza zlúčeniny napríklad s aminometylbenzamidínmi, cyklickými aminoalkylamidínmi a cyklickými aminoalkylguanidínmi v polohe P1; európska patentová prihláška 0 648 780 uvádza zlúčeniny napríklad s cyklickými aminoalkylguanidínmi v polohe P1.

Trombínové inhibítory na báze peptidylových derivátov, tiež majúce cyklické aminoalkylguanidíny (napr. buď 3- alebo 4-aminometyl-1-amidinopiperidín) v polohe P1, sú známe z európskych patentových prihlášok 0 468 231, 0 559 046 a 0 641 779.

Trombínové inhibítory na báze tripeptidylových derivátov s arginínaldehydom v polohe P1 boli prvýkrát uvedené v európskej patentovej prihláške 0 185 390.

V nedávnejšej dobe boli publikované peptidylové deriváty na báze arginínaldehydu modifikované v polohe P3. Napríklad medzinárodná patentová prihláška WO 93/18060 uvádza hydroxykyseiiny, európska patentová prihláška 0 526 877 deaminokyseliny a európska patentová prihláška 0 542 525 Ometylmandľové kyseliny v polohe P3.

Sú známe aj inhibítory serínových proteáz (napr. trombín) na báze elektrofilných ketónov v polohe P1. Napríklad európska patentová prihláška 0 195 212 uvádza peptidyl a-ketoestery a amidy, európska patentová prihláška 0 362 002 fluóraikylamidketóny, európska patentová prihláška 0 364 344 α,β,δtriketozlúčeniny a európska patentová prihláška 0 530167 a-alkoxyketónové deriváty arginínu v polohe P1.

Iné, štruktúrne odlišné inhibítory trypsínovitých serínových proteáz na báze C-koncových derivátov kyseliny boritej a arginínu a ich izotiouróniové analógy sú známe z európskej patentovej prihlášky 0 293 881.

Nedávno boli publikované trombínové inhibítory na báze peptidylových derivátov v európskej patentovej prihláške 0 669 317 a v medzinárodných patentových prihláškach WO 95/35309, WO 95/23609 a WO 96/25426.

Ostáva tu však potreba účinných inhibítorov trypsínovitých serínových proteáz, ako je trombín. Existuje konkrétna potreba zlúčenín, ktoré sú orálne biologicky dostupné a súčasne selektívne pri inhibícii trombín u oproti iným serínovým proteázam. Zlúčeniny, ktoré vykazujú kompetitívnu inhibičnú aktivitu voči trombínu by mali byť osobitne užitočné ako antikoagulanciá a teda v terapeutickej liečbe trombózy a príbuzných porúch.

Podstata vynálezu

Vynález uvádza zlúčeninu vzorca I,

O^{z x}N-(CH₂)_n-B kde

R¹ predstavuje H, Cm alkyl (voliteľne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi vybranými spomedzi nasledujúcich: kyano, halogén, OH, C(O)OR^1a alebo C(O)N(R^1b)R^1c) alebo OR^1d;

R^1d predstavuje H, C(O)R¹¹, SiR¹²R¹³R¹⁴ alebo Ci-6 alkyl, pričom táto posledná skupina je voliteľne substituovaná alebo ukončená jedným alebo viacerými substituentmi vybranými spomedzi OR¹⁵ alebo (CH₂)_qR¹⁶;

R¹², R¹³ a R¹⁴ nezávisle predstavujú H, fenyl alebo Ci-β alkyl;

R¹⁶ predstavuje alkyl, fenyl, OH, C(O)OR¹⁷ alebo C(O)N(H)R¹⁸; R¹⁸ predstavuje H, C_M alkyl alebo CH₂C(O)OR¹⁹;

R¹⁵ a R¹⁷ nezávisle predstavujú H, Ci.₆ alkyl alebo Ci.₃ alkylfenyl; R^1a, R^1b, R^1c, R¹¹ a R¹⁹ nezávisle predstavujú H alebo alkyl; a q predstavuje 0,1 alebo 2;

R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca Ha, llb alebo lle,

kde prerušované čiary nezávisle predstavujú voliteľné väzby;

A a B nezávisle predstavujú O alebo S, CH alebo CH₂ (ako sa hodí), alebo N alebo N(R²¹) (ako sa hodí);

D predstavuje -CH₂-, O, S, N(R²²), -(CH2)2-, -CH=CH-, -CH2N(R²²)-, -N(R²²)CH2-, -CH=N-, -N=CH-, -CH₂O-, -OCH₂-, -CH₂S- alebo -SCH₂-;

Xi predstavuje C_M alkylén; C₂.₃ alkylén prerušený Z; -C(O)-Z-A¹; -Z-C(O)-A¹-; -CHz-CíOJ-A¹; -Z-C(O)-Z-A²-; -CH2-Z-C(O)-A²-; -Z-CH2-C(O)-A²-; -Z-CH2-S(O)m-A²-; -CH2-Z-S(O)_m-A²-; -C(O)-A³; -Z-A³-; alebo -A³-Z-;

X₂ predstavuje C₂.₃ alkylén, -C(O)-A⁴- alebo -A⁴-C(O)-;

X₃ predstavuje CH alebo N;

X₄ predstavuje jednoduchú väzbu, O, S, C(O), N(R²³), -CH(R²³)-, -CH(R²³)-CH(R²⁴)- alebo -C(R²³)=C(R²⁴)-;

A¹ predstavuje jednoduchú väzbu alebo C1.2 alkylén;

A² predstavuje jednoduchú väzbu alebo -CH₂-;

A³ predstavuje C1.3 alkylén;

A⁴ predstavuje C(O) alebo C1.2 alkylén;

Z pri každom výskyte predstavuje O, S(O)_m alebo N(R²⁵);

m pri každom výskyte predstavuje 0,1 alebo 2;

R² a R⁴ nezávisle predstavujú jeden alebo viacero voliteľných substituentov vybraných spomedzi nasledujúcich: alkyl (pričom táto posledná skupina je voliteľne substituovaná jedným alebo viacerými halogénovými substituentmi), C1.4 alkoxy, metyléndioxy, halogén, hydroxy, kyano, nitro, SO₂NH₂, C(O)OR²⁶ alebo N(R²⁷)R²⁸);

R³ predstavuje voliteľný substituent vybraný spomedzi OH alebo C1-4 alkoxy;

R²¹, R²², R²³, R²⁴, R²⁵, R²⁶, R²⁷ a R²⁸ nezávisle predstavuje H alebo alkyl;

Y predstavuje CH₂, (CH₂)₂, CH=CH, (CH₂)₃, CH₂CH=CH alebo CH=CHCH₂, pričom posledné tri skupiny sú voliteľne substituované nasledujúcimi: C1-4 alkyl, metylén, oxo alebo hydroxy;

R^y predstavuje H alebo C_u alkyl;

n predstavuje 0,1, 2, 3 alebo 4; a

B predstavuje štruktúrny fragment vzorca Hla, lllb alebo Hlc

Hhr nh₂ Hr NH₂ Hhr nh₂

Hla lllb

Hlc kde

X⁵, X⁶, X⁷ a X⁸ nezávisle predstavujú CH, N alebo N-O;

X⁹ a X¹⁰ nezávisle predstavujú jednoduchú väzbu alebo CH₂; a

R³¹ predstavuje voliteľný substituent vybraný spomedzi halogénu a alkylu;

alebo jej farmaceutický prijateľná soľ; za predpokladu, že:

(a) A a B súčasne nepredstavujú O alebo S;

(b) B a D súčasne nepredstavujú O alebo S;

(c) keď R¹ predstavuje OR^1d a Χί prestavuje -C(O)-Z-A¹, -Z-CH2-S(O)m-A²-, -CH2-Z-S(O)_m-A²- alebo -Z-C(O)-Z-A², potom A¹ alebo A² (ako sa hodí) nepredstavujú jednoduchú väzbu; a (d) keď X4 predstavuje -CH(R²³)-, R¹ nepredstavuje OH.

Zlúčeniny vzorca I môžu vykazovať tautomerizmus. Všetky tautomérne formy a ich zmesi sú zahrnuté v rozsahu vynálezu. Ďalej bude odborníkom zrejmé, že v štruktúrnom fragmente vzorca lla môžu voliteľné dvojité väzby v spojení s niektorými identitami substituenta D spôsobiť aromatický charakter kruhu nesúceho A, B a D.

Zlúčeniny vzorca I môžu tiež obsahovať jeden alebo viacero asymetrických uhlíkových atómov a môžu preto vykazovať optickú izomériu a/alebo diastereoizomériu. Všetky diastereoizoméry možno rozdeliť konvenčnými technikami, napr. chromatografiou alebo frakčnou kryštalizáciou. Rôzne stereoizoméry možno izolovať separáciou racemickej alebo inej zmesi zlúčenín pomocou konvenčných techník, napr. frakčnej kryštalizácie alebo HPLC. Alternatívne možno žiadané optické izoméry pripraviť reakciou príslušných opticky aktívnych východiskových látok za podmienok, ktoré nespôsobia racemizáciu alebo epimerizáciu, alebo derivatizáciou, napríklad s homochirálnou kyselinou s následnou separáciou diastereomérnych derivátov konvenčnými prostriedkami (napr. HPLC, chromatografia na oxide kremičitom). Všetky stereoizoméry sú zahrnuté v rozsahu vynálezu.

Alkylové skupiny, ktoré môžu predstavovať R¹, R^1a, R^1b, R^1c, R^1d, R², R⁴, R¹¹, p12 p13 p14 p15 p16 p18 p^9 p21 p22 p23 p24 p25 p26 p27 p28 p31 _ py _

Γ\ i Γ\ ι I» ι Γ\ ι Γ\ ι Γ» | Γ\ j Γ\ ι ΐ\ | Γ\ ι Γ\ ι Γ\ | ι\ y ι\ y Γ\ y Γ\ y Γ\ α ι \ y ο ktorými môže byť Y substituovaný; alkylová časť alkylfenylových skupín, ktoré môžu predstavovať R¹⁵ a R¹⁷; a alkoxyskupiny, ktoré môžu predstavovať R², R³ a R⁴, môžu v prípade dostatočného počtu uhlíkových atómov byť lineárne alebo rozvetvené, nasýtené alebo nenasýtené, cyklické alebo acyklické. Alkylénové skupiny, ktoré Xi, X2, A¹, A³ a A⁴ môžu predstavovať, môžu v prípade dostatočného počtu uhlíkových atómov byť lineárne alebo rozvetvené, nasýtené alebo nenasýtené.

Medzi halogénové skupiny, ktoré môže R³¹ predstavovať, a ktorými môže byť R¹, R² a R⁴ substituované, patri fluór, chlór, bróm a jód.

V štruktúrnych fragmentoch vzorcov Ha, llb a llc čiarky naznačujú uhlíkový atóm, ktorý je viazaný na skupinu -C(O)- a na R¹ v zlúčenine vzorca I (aby sa predišlo pochybnostiam, na takto označený uhlíkový atóm nie je viazaný žiadny ďalší H).

Vlnovkové čiary na väzbe vo fragmentoch vzorcov Hla, lllb a Hlc predstavujú väzobnú polohu fragmentu.

Podľa ďalšieho aspektu vynálezu sa uvádza zlúčenina vzorca I s vyššie uvedeným významom s dodatočnými výhradami, že:

R^y predstavuje H;

R²⁸ predstavuje H;

X₄ nepredstavuje -CH(R²³)-.

Podľa ďalšieho aspektu vynálezu sa uvádza zlúčenina vzorca I s vyššie uvedeným významom s dodatočnými výhradami, že:

R^y predstavuje alkyl;

R²⁸ predstavuje Cu alkyl;

Χ4 predstavuje -CH(R²³)-.

Skratky sú uvedené na konci tejto špecifikácie.

Keď n predstavuje 2 a B predstavuje štruktúrny fragment vzorca lllb, výhodné zlúčeniny vzorca I zahŕňajú tie, kde X⁹ a X¹⁰ súčasne nepredstavujú CH₂.

Výhodné zlúčeniny vzorca I zahŕňajú tie, kde:

R¹ predstavuje OH alebo Ch alkyl (pričom posledná skupina je voliteľne substituovaná kyano alebo OH skupinou);

R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla;

keď R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla, prerušované čiary predstavujú väzby, A a B súčasne predstavujú CH a D predstavuje -CH=CH-;

keď R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla, Xi predstavuje C₂- alebo C₃-alkylén, -OCH₂- alebo -O(CH₂)₂-;

Y predstavuje CH_2l (CH₂)₂ alebo (CH₂)₃;

B predstavuje štruktúrny fragment vzorca Hla, v ktorom X⁵, X⁶, X⁷ a X⁸ súčasne predstavujú CH.

Výhodnejšie zlúčeniny podľa vynálezu zahŕňajú tie, kde R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla, Xi predstavuje C₃-alkylén alebo -O(CH₂)₂-.

Keď R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla a R² predstavuje aspoň jeden substituent, výhodný bod substitúcie je na atóme uhlíka, ktorý je v polohe B.

Keď R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla, prerušované čiary predstavujú väzby, A a B súčasne predstavujú CH a D prestavuje -CH=CH- (t.j. kruh nesúci R² je benzoskupina), a R² predstavuje aspoň jeden substituent, kruh je s výhodou substituovaný buď na uhlíkovom atóme v skupine -CH=CH- (poloha D), ktorá susedí s pripojením kruhu, alebo s väčšou výhodou na uhlíkovom atóme, ktorý je v polohe B, alebo na oboch týchto miestach. Keď napríklad fragment lla predstavuje tetralin-1-ylovú skupinu (t.j. prerušované čiary predstavujú väzby, A a B súčasne predstavujú CH, D predstavuje -CH=CH- a Xi predstavuje nasýtený C₃alkylén), výhodné polohy substitúcie sú v polohe 5 alebo najmä v polohe 7, alebo v oboch týchto polohách. Rovnako keď fragment Ha predstavuje chroman-4-ylovú skupinu (t.j. prerušované čiary predstavujú väzby, A a B súčasne predstavujú CH, D predstavuje -CH=CH- a Xi predstavuje -O(CH₂)2-). výhodné polohy substitúcie sú v polohe 8 alebo najmä v polohe 6, alebo v oboch týchto polohách.

Zlúčeniny vzorca I, v ktorých fragment je v S-konfigurácii, sú výhodné. Vlnovkové čiary na väzbách vo vyššie uvedenom fragmente predstavujú väzobnú polohu fragmentu.

Výhodné zlúčeniny vzorca I zahŕňajú zlúčeniny z nižšie opísaných príkladov.

Príprava

Vynález tiež uvádza postup na výrobu zlúčenín vzorca I, ktorý obsahuje nasledujúce kroky:

(i) spojenie zlúčeniny vzorca IV,

O

IV kde R¹ a R_x majú vyššie uvedený význam, so zlúčeninou vzorca V,

O N-(CH₂)_n-B RZ kde R^y, Y, n a B majú vyššie uvedený význam; alebo (ii) spojenie zlúčeniny vzorca VI,

V

x

Ο ΌΗ

VI kde R¹, R_x a Y majú vyššie uvedený význam, so zlúčeninou vzorca VII,

H(R^y)N-(CH₂)_n-B

VII kde R^y, n a B majú vyššie uvedený význam, napríklad za prítomnosti spájacieho činidla (napr. oxalylchlorid v DMF, EDC, DCC, HBTU, HATU alebo TBTU), vhodnej bázy (napr. pyridín, 2,4,6,-trimetylpyridín, DMAP, TEA alebo DIPEA) a vhodného organického rozpúšťadla (napr. dichlórmetán, acetonitril alebo DMF).

Zlúčeniny vzorca IV sú komerčne dostupné, sú známe z literatúry, alebo sú dostupné pomocou známych a/alebo štandardných techník.

Napríklad zlúčeniny vzorca IV, kde R¹ predstavuje OH, možno pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca VIII,

Rx=O

VIII kde R_x má vyššie uvedený význam, s:

(a) KCN, napríklad pri 20 °C za prítomnosti hydrogensiričitanu sodného vo vode s následnou hydrolýzou za prítomnosti vodného roztoku kyseliny (napr. HCI), napríklad pri 20 °C za prítomnosti vhodného rozpúšťadla (napr. alkohol a/alebo voda);

(b) CHCI_3l za prítomnosti vodného roztoku bázy (napr. NaOH);

(c) TMSCN, napríklad pri 20 °C za prítomnosti vhodného organického rozpúšťadla (napr. CH2CI2), s následnou hydrolýzou za prítomnosti kyseliny (napr. HCI alebo H₂SO4), napríklad pri 20 °C (napr. podľa metódy, ktorú opísal Bigge a kol. v J. Med. Chem. (1993) 36, 1977) alebo analogicky, s následnou alkalickou hydrolýzou na získanie voľnej kyseliny.

Zlúčeniny vzorca IV, v ktorých R¹ predstavuje H, možno pripraviť z príslušných zlúčenín vzorca IV, kde R¹ predstavuje OH (alebo z nižšieho alkylesteru tejto kyseliny), napríklad elimináciou vody, s následnou hydrogenáciou získaného alkénu pomocou techník, ktoré sú známe odborníkom, v prípade potreby s následnou hydrolýzou za vzniku voľnej kyseliny.

Zlúčeniny vzorca IV, v ktorých R¹ predstavuje alkyl, možno pripraviť z príslušných zlúčenín vzorca IV, kde R¹ predstavuje H (alebo z nižšieho alkylesteru tejto kyseliny), napríklad reakciou s vhodným alkylhalogenidom pomocou techník, ktoré sú známe odborníkom, v prípade potreby s následnou hydrolýzou za vzniku voľnej kyseliny.

Zlúčeniny vzorca IV, kde R¹ predstavuje OR^1d a R^1d predstavuje C(O)R¹¹, SiR¹²R¹³R¹⁴ alebo Ci_₆ alkyl, možno pripraviť acyláciou, silyláciou alebo alkyláciou (ako sa hodí) príslušnej zlúčeniny vzorca IV, kde R¹ predstavuje OH (alebo nižšieho alkylesteru tejto kyseliny) za podmienok známych odborníkom, v prípade potreby s následnou hydrolýzou za vzniku voľnej kyseliny.

Zlúčeniny vzorca V možno pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca IX

OH

IX kde Y má vyššie uvedený význam, so zlúčeninou vzorca VII s vyššie uvedeným významom, napríklad za podmienok, ktoré boli opísané vyššie pri syntéze zlúčenín vzorca I.

Zlúčeniny vzorcov V a VII, kde R^y predstavuje Ch alkyl, možno pripraviť reakciou príslušnej zlúčeniny vzorca V alebo vzorca VII, ako sa hodí, kde R^y predstavuje H, so zlúčeninou vzorca IXa,

R^yHal

IXa kde Hal predstavuje halogén (napr. Cl, Br alebo I) a R^y má vyššie uvedený význam, napríklad za podmienok, ktoré sú známe odborníkom.

Zlúčeniny vzorca VI sú ľahko dostupné pomocou známych techník.

Napríklad zlúčeniny vzorca VI možno pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca IV s vyššie uvedeným významom so zlúčeninou vzorca IX s vyššie uvedeným významom, napríklad za podmienok, ktoré boli opísané vyššie pre syntézu zlúčenín vzorca I.

Zlúčeniny vzorca VIII sú komerčne dostupné, sú známe z literatúry, alebo ich možno pripraviť pomocou známych techník. Napríklad zlúčeniny vzorca VIII možno pripraviť nasledovne:

(a) Zlúčeniny vzorca VIII, kde R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca Ha, kde prerušovaná čiara predstavuje väzby, A a B súčasne predstavujú CH a D predstavuje -CH=CH-; Xi predstavuje C₂-4 alkylén, -Z-A³- alebo -C(O)-A³-, kde A³ má vyššie uvedený význam; a R³ chýba, možno pripraviť cyklizáciou zlúčeniny vzorca X,

_χΟΟ₂Η Xia

X kde Xi_a predstavuje C₂.₄ alkylén, -Z-A³- alebo -C(O)-A³-, a Z, A³ a R² majú vyššie uvedený význam, pomocou vhodného acylačného činidla, napríklad pri 100 °C za prítomnosti kyseliny polyfosforečnej alebo pomocou PCI5 za refluxu a potom pôsobením AICI3. Zlúčeniny vzorca X, kde Xia predstavuje C3-alkylén alebo -C(O)-A³-, kde A³ predstavuje C2-alkylén, možno pripraviť podľa známych techník, napríklad reakciou anhydridu kyseliny jantárovej s príslušným fenyllitiom a pre zlúčeniny vzorca X, kde Xi_a predstavuje C₃-alkylén, selektívnou redukciou získaného ketónu za podmienok, ktoré sú dobre známe odborníkom. Zlúčeniny vzorca X, kde X_1a predstavuje -Z-A³- a A³ predstavuje C₂.₃ alkylén, možno pripraviť podľa nižšie uvedeného opisu.

(b) Zlúčeniny vzorca VIII, kde R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca Ha, kde prerušovaná čiara predstavuje väzby, A a B súčasne predstavujú CH a D predstavuje -CH=CH-; X1 predstavuje C₂-4 alkylén alebo -C(O)-A³-, kde A³ má vyššie uvedený význam; a R³ chýba, možno alternatívne pripraviť cyklizáciou zlúčeniny vzorca XI, /^.CO₂R

co₂h

XI kde R predstavuje Ci_₆ alkyl a Xi_a a R² majú vyššie uvedený význam, napríklad pri 20 °C za prítomnosti vhodnej bázy (napr. alkoxidu alkalického kovu) a vhodného organického rozpúšťadla (napr. nižšieho alkylalkoholu) s následnou hydrolýzou a dekarboxyláciou. Zlúčeniny vzorca XI možno pripraviť pomocou známych techník. Napríklad zlúčeniny vzorca XI, kde Xi_a predstavuje C₃-alkylén alebo -C(O)-A³-, kde A³ predstavuje C2-alkylén, možno pripraviť reakciou anhydridu kyseliny jantárovej so zlúčeninou vzorca XII,

Li

CONRR'

XII kde R’ predstavuje Ομ₆ alkyl a R a R² majú vyššie uvedený význam, a pre zlúčeniny vzorca XI, kde Xi_a predstavuje C3-alkylén, selektívnou redukciou získaného ketónu, s následnými transformáciami funkčných skupín amidu a kyseliny na esterické skupiny za podmienok, ktoré sú dobre známe odborníkom.

(c) Zlúčeniny vzorca VIII, kde R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla, kde prerušovaná čiara predstavuje väzby, A a B súčasne predstavujú CH a D predstavuje -CH=CH-; Xi predstavuje -Z-A³-, kde A³ predstavuje C2 alkylén a Z predstavuje O alebo S; a R³ chýba, možno pripraviť cyklizáciou zlúčeniny vzorca XIII,

ZH Hal

R2

XIII kde Hal a R² majú vyššie uvedený význam, napríklad pri 20 °C za prítomnosti vodno-etanolického NaOH. Pre príslušné zlúčeniny vzorca VIII, kde Xi predstavuje -Z-A³- a Z predstavuje S(O)_m, kde m je 1 alebo 2, po tejto vyššie uvedenej cyklizácii by mala nasledovať oxidačná reakcia na cyklizovanom produkte na atóme S, napríklad pomocou kyseliny m-chlórperbenzoovej.

(d) Zlúčeniny vzorca VIII, kde R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lia, kde prerušovaná čiara predstavuje väzby, A a B súčasne predstavujú CH a D predstavuje -CH=CH-; Xi predstavuje -Z-A³-, kde A³ predstavuje C₂-alkylén alebo -Z-C(O)-A¹, kde A¹ predstavuje Ci-alkylén; a R³ chýba, možno pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca XIV,

7^ ZH R2

XIV kde R² a Z majú vyššie uvedený význam, buď:

(1) pre zlúčeniny vzorca VIII, kde Xi predstavuje -Z-A³-, kde A³ predstavuje C2-alkylén, so zlúčeninou vzorca XV,

H₂C=CH-CO₂R XV kde R má vyššie uvedený význam, napríklad pri 20 °C za prítomnosti vhodnej bázy (napr. trietylamínu alebo etoxidu sodného) a vhodného organického rozpúšťadla (napr. etanolu alebo DMF); alebo (2) so zlúčeninou vzorca XVI,

U-G-CHz-COzR XVI kde L¹ prestavuje vhodnú odchádzajúcu skupinu (napríklad Cl, Br, I, mezylátovú alebo tozylátovú), G predstavuje CH₂ alebo C(O) a R má vyššie uvedený význam, napríklad pri 20 °C za prítomnosti vhodnej bázy (napr. trietylamínu) a vhodného organického rozpúšťadla (napr. THF);

• s následnou cyklizáciou za vhodných podmienok (napr. tých, ktoré sú opísané vyššie).

(e) Zlúčeniny vzorca VIII, kde R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca Ha, kde kruh nesúci A, B a D je karbocyklický aromatický alebo heterocyklický aromatický kruh s významom uvedeným vyššie v súvislosti so zlúčeninami vzorca I; Xi predstavuje -CH2-Z-C1-2 alkylén-, kde Z má vyššie uvedený význam; a R³ chýba, možno pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca XVII, βΛ

R^2ZD^a

ZH

XVII kde kruh nesúci A^a, B^a a D^a je karbocyklický aromatický alebo heterocyklický aromatický kruh s významom uvedeným vyššie v súvislosti so zlúčeninami vzorca I, a Z a R² majú vyššie uvedený význam, so zlúčeninou vzorca XVIII,

Ľ-Alk-COzH XVIII kde Alk predstavuje C1.2 alkylén a L¹ má vyššie uvedený význam, napríklad pri 20 °C za prítomnosti vhodnej bázy (napr. metoxidu sodného) a vhodného organického rozpúšťadla (napr. THF).

(f) Zlúčeniny vzorca VIII, kde R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorcov llb, llc alebo Ha, kde v poslednom prípade kruh nesúci A, B a D je karbocyklický aromatický alebo heterocyklický aromatický kruh s významom uvedeným vyššie v súvislosti so zlúčeninami vzorca I; a v prípadoch, kedy R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorcov Ha alebo llb, R³ chýba, možno pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca XX,

R_xa-CO₂H XX kde R_xa predstavuje štruktúrny fragment vzorca XXa, XXb alebo XXc

XXa

XXb

XXc kde v XXa kruh nesúci A^a, B^a a D^a je karbocyklický aromatický alebo heterocyklický aromatický kruh s významom uvedeným vyššie v súvislosti so zlúčeninami vzorca I, a R², R⁴, Xi, X_2l X3 a X₄ majú vyššie uvedený význam, za prítomnosti kyseliny polyfosforečnej, napríklad pri 100 °C. Bodky pri uhlíkových atómoch vo fragmentoch vzorca XXa, XXb a XXc znamenajú bod pripojenia fragmentov na CO2H skupinu zlúčeniny vzorca XX. Zlúčeniny vzorca XX možno pripraviť hydrolýzou príslušnej zlúčeniny vzorca XXI,

R_xa-CO₂R XXI kde R_xa a R majú vyššie uvedený význam (a kde CO₂H vo fragmentoch vzorcov XXa, XXb a XXc v R_xa môže tiež byť nahradené CO₂R), napríklad za reakčných podmienok, ktoré sú dobre známe odborníkom v danej oblasti.

(g) Zlúčeniny vzorca VIII, kde R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla, kde kruh nesúci A, B a D je karbocyklický aromatický alebo heterocyklický aromatický kruh s významom uvedeným vyššie v súvislosti so zlúčeninami vzorca I; X1 predstavuje -O-CH₂-; a R³ chýba, možno pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca XXII, _Aa .C(O)Hal (O)^{R U} XXII kde kruh nesúci A^a, B^a a D^a je karbocyklický aromatický alebo heterocyklický aromatický kruh s významom uvedeným vyššie v súvislosti so zlúčeninami vzorca I, a R², Hal a R majú vyššie uvedený význam, s diazometánom, napríklad pri 20 °C za prítomností vhodného organického rozpúšťadla (napr. dietyléteru).

(h) Zlúčeniny vzorca VIII, kde R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla, kde prerušovaná čiara predstavuje väzby, A a B súčasne predstavujú CH a D predstavuje -CH=CH-; Xi predstavuje -C(O)-O-CH₂-; a R³ chýba, možno pripraviť cyklizáciou zlúčeniny vzorca XXIII,

kde R² a R majú vyššie uvedený význam, napríklad pri -20 °C za prítomnosti kyseliny sírovej a vhodného organického rozpúšťadla (napr. metanolu). Zlúčeniny vzorca XXIII možno pripraviť reakciou príslušného halogenidu kyseliny s diazometánom, napríklad pri 20 °C za prítomnosti vhodného organického rozpúšťadla (napr. dietyléteru).

(i) Zlúčeniny vzorca VIII, kde R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca Ha alebo Ilc, kde Xi zahŕňa N(R²⁵), alebo X4 predstavuje N(R²³), (ako sa hodí), a R²³ a R²⁵ (ako sa hodí) predstavujú C1.4 alkyl, možno pripraviť reakciou príslušnej zlúčeniny vzorca VIII, kde Xi zahŕňa alebo X₄ predstavuje (ako sa hodí) NH, so zlúčeninou vzorca XXV

R^a-Hal XXV kde R^a predstavuje C1.4 alkyl a Hal má vyššie uvedený význam, napríklad za podmienok, ktoré sú známe odborníkom.

(j) Zlúčeniny vzorca VIII, kde R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca Ha, kde prerušovaná čiara predstavuje väzby, A a B súčasne predstavujú CH a D predstavuje -CH=CH-; Xi predstavuje -C(O)-N(H)-CH₂-; a R³ chýba, možno pripraviť katalytickou hydrogenáciou hydroxámovej kyseliny vzorca XXVI,

XXVI kde R² má vyššie uvedený význam, pomocou vhodného katalytického systému (napr. Pd/C) za prítomnosti vhodného organického rozpúšťadla (napr. metanolu). Zlúčeniny vzorca XXVI možno pripraviť cyklizáciou príslušnej zlúčeniny vzorca XXVII,

XXVII kde R² má vyššie uvedený význam, napríklad pri 20 °C za prítomnosti dymivej HCI a chloridu cínatého.

(k) Selektívna oxidácia zlúčeniny vzorca XXX,

H-R_x-H XXX kde R_x má vyššie uvedený význam, napríklad za prítomnosti vhodného oxidačného činidla (napr. CrO₃ alebo KMnO₄) a vo vhodnom rozpúšťadle (napr. voda).

(l) Selektívna oxidácia zlúčeniny vzorca XXXI,

H-R_X-OH XXXI kde R_X má vyššie uvedený význam, napríklad za prítomnosti vhodného oxidačného činidla (napr. MnOz) a vo vhodnom rozpúšťadle (napr. CH2CI2).

(m) Hydrolýza oxímu vzorca XXXII,

R_X=N-OH XXXII kde R_X má vyššie uvedený význam, napríklad zahrievaním za prítomnosti kyseliny (napr. HCI) a vhodného organického rozpúšťadla. Zlúčeniny vzorca XXXII možno pripraviť reakciou príslušnej zlúčeniny vzorca XXX s vyššie uvedeným významom s propylnitritom, napríklad za prítomnosti HCI v etanole.

(n) Zlúčeniny vzorca VIII, kde R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca Ha a X1 predstavuje -CH2-CH=CH-, možno pripraviť elimináciou zlúčeniny vzorca XXXIII,

(3

XXXIII kde L² predstavuje vhodnú odchádzajúcu skupinu (napr. Br alebo SePh) a prerušované čiary, A, B, D, R² a R³ majú vyššie uvedený význam, za vhodných reakčných podmienok, napríklad za prítomnosti vodno-etanolického NaOH alebo peroxidu vodíka, a vhodného organického rozpúšťadla (napr. THF).

(o) Zlúčeniny vzorca VIII, kde R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca llb, X₂ predstavuje -C(O)-A⁴- a A⁴ má vyššie uvedený význam, možno pripraviť cyklizáciou zlúčeniny vzorca XXXIV,

XXXIV kde R^b predstavuje H, Ci^ alkyl alebo Hal a R², R³, A⁴, X3 a Hal majú vyššie uvedený význam, napríklad za prítomnosti kyseliny polyfosforečnej, ako je opísané vyššie, alebo v prípade, kedy R^b predstavuje Hal, za prítomnosti AICI3 v nitrometáne napríklad pri 20 °C.

(p) Zlúčeniny vzorca VIII, kde R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca llb a X₂ predstavuje -A⁴-C(O)- a A⁴ predstavuje Ci.₂ alkylén, možno pripraviť cyklizáciou zlúčeniny vzorca XXXV,

XXXV kde A^4a predstavuje Ci-2 alkylén a Hal, R², R³ a X3 majú vyššie uvedený význam.

Zlúčeniny vzorcov VII, IX, IXa, XII, XIII, XIV, XV, XVI, XVII, XVIII, XXI, XXII, XXV, XXVII, XXX, XXXI, XXXIII, XXIV a XXV sú buď komerčne dostupné, známe z literatúry, alebo sú dostupné pomocou známych techník vrátane techník, ktoré sú rovnaké alebo analogické s tu opísanými.

Substituenty na aromatických a/alebo nearomatických, karbocyklických a/alebo heterocyklických kruhoch v zlúčeninách vzorcov I, IV, V, VI, VII, VIII, X, XI, XII, XIII, XIV, XVII, XX, XXI, XXII, XXIII, XXVI, XXVII, XXX, XXXI, XXXII, XXXIII, XXXIV a XXV možno navzájom prevádzať pomocou techník známych odborníkom v danej oblasti. Napríklad nitro možno redukovať na amino, hydroxy možno alkylovať za vzniku alkoxy, alkoxy možno hydrolyzovať na hydroxy, alkény možno hydrogenovať na alkány, halogén možno hydrogenovať na H, atď.

Zlúčeniny vzorca I možno izolovať z ich reakčných zmesí pomocou konvenčných techník.

Odborníkom z danej oblasti bude zrejmé, že vo vyššie opísaných postupoch funkčné skupiny intermediátov môžu vyžadovať ochranu chrániacimi skupinami.

Medzi funkčné skupiny, ktoré vyžadujú ochranu, patri hydroxy, amino a karboxylová skupina. Medzi vhodné chrániace skupiny pre hydroxyl patria trialkylsilyl alebo diarylalkylsilyl skupiny (napr. ŕ-butyldimetylsilyl, ŕ-butyldifenylsilyl alebo trimetylsilyl) a tetrahydropyranyl. Medzi vhodné chrániace skupiny pre karboxylovú skupinu patria C1.6 alkyl alebo benzylestery. Medzi vhodné chrániace skupiny pre amino, amidino a guanidino patria ŕ-butyloxykarbonyl, benzyloxykarbonyl alebo 2-trimetylsilyletoxykarbonyl (Teoc). Amidínové a guanidínové dusíky možno tiež chrániť hydroxylovými alebo alkoxylovými skupinami a možno ich chrániť mono- alebo di-ochranou.

Chránenie a odstránenie chrániacich skupín z funkčných skupín sa môže uskutočniť pred reakciou spájania alebo po nej, alebo pred alebo po akejkoľvek reakcii vo vyššie uvedených schémach.

Zlúčeniny vzorca I možno konkrétne pripraviť postupmi obsahujúcimi spájanie N-acylovanej aminokyseliny alebo N-chránenej aminokyseliny. Keď sa použije N-chránená aminokyselina, acylovú skupinu možno zaviesť po spájaní. Potom možno uskutočniť odstránenie ochrany z dusíkového atómu pomocou štandardných metód.

Chrániace skupiny možno odstrániť v súlade s technikami, ktoré sú známe odborníkom v danej oblasti a podľa nižšie uvedeného opisu.

Niektoré chránené deriváty (ktoré sa dajú označiť aj ako “intermediáty”) zlúčenín vzorca I, ktoré sa môžu pripraviť pred konečným štádiom odstránenia chrániacej skupiny za vzniku zlúčenín vzorca I, sú nové.

Podľa ďalšieho aspektu vynálezu sa uvádza zlúčenina vzorca la,

O

Cr ^XN—(CH₂)_n—B¹ Ŕy la kde B¹ predstavuje štruktúrny fragment vzorca llld, llle alebo 11If

kde D¹ a D² nezávisle predstavujú H, OH, OR^a, OC(O)R^b, OC(O)OR^c, C(O)OR^d, C(O)R^e; kde

R^a predstavuje fenyl, benzyl, C1.7 alkyl (pričom táto posledná skupina je voliteľne prerušená kyslíkom alebo je voliteľne substituovaná halogénom) alebo -C(R^f)(R⁹)-OC(O)R^b;

R^b predstavuje C1-17 alkyl (pričom táto posledná skupina je voliteľne substituovaná Ci-e alkoxy, C1-6 acyloxy, amino alebo halogénom); C1.6 alkoxy, C3.7 cykloalkyl, fenyl, naftyl alebo C1.3 alkylfenyl (pričom posledných päť skupín je voliteľne substituovaných C^ alkyl alebo halogénom); alebo -[C(R^l)(Rⁱ)]_mOC(O)R^k;

R^c predstavuje Cm7 alkyl, fenyl, 2-naftyl (pričom posledné tri skupiny sú voliteľne substituované C^ alkylom, Si(R^aa)(R^ab)(R^ac) alebo halogénom), -[C(R^m)(Rⁿ)]nOC(O)R^p alebo -CH₂-Ar¹;

R^d predstavuje 2-naftyl, fenyl, C1.3 alkylfenyl (pričom posledné tri skupiny sú voliteľne substituované C1.6 alkylom, Ci^ alkoxylom, nitro, Si(R^ba)(R^bb)(R^bc) alebo halogénom), Cm2 alkylom (pričom posledná skupina je voliteľne substituovaná C1-6 alkoxylom, Ci.6 acyloxylom alebo halogénom), -[C(R^q)(R^r)]pOC(O)R^s alebo -CH₂Ar²;

R^e predstavuje fenyl, benzyl, C1-6 alkyl (pričom posledná skupina je voliteľne prerušená kyslíkom) alebo -[C(R^t)(R^u)]_rOC(O)R^v;

R^aa, R^ab, R^ac, R^ba, R^bb a R^bc nezávisle predstavujú C1-6 alkyl alebo fenyl;

R^f, R⁹, R¹, R^j, R^m, Rⁿ, R^q, R^r, R¹ a R^u nezávisle predstavujú H alebo C1.6 alkyl;

R^h, R^k, R^p, R^s a R^v nezávisle predstavujú C1.17 alkyl (pričom táto druhá skupina je voliteľne substituovaná alkoxy, C1.6 acyloxy alebo halogénom); C1.6 alkoxy, C₃.₇ cykloalkyl, fenyl, náftyl alebo alkylfenyl (pričom posledných päť skupín je voliteľne substituovaných C1-6 alkyl alebo halogénom);

Ar¹ a Ar² nezávisle predstavujú štruktúrny fragment

O

m a r nezávisle predstavujú 3 alebo 4; n a p nezávisle predstavujú 1, 2 alebo 3; a

R¹. Rx, Y, R^y, n, X⁵, X⁶, X⁷, X⁸, X⁹, X¹⁰ a R³¹ majú vyššie uvedený význam; alebo jej farmaceutický prijateľná soľ; za predpokladu, že D¹ a D² súčasne nepredstavujú H.

Alkylové skupiny, ktoré R^a, R^aa, R^ab, R^ac, R^b, R^ba, R^bb, R^bc, R^c, R^d, R^e, R^f, R⁹, R^h, R¹, R^j, R^k, R^m, Rⁿ, R^p, R^q, R^r, R^s, R¹, R^u a R^v môžu predstavovať a ktorými môžu byť R^b, R^c, R^d, R^h, R^k, R^p, R^s a R^v substituované; cykloalkylové skupiny, ktoré R^b, R^h, R^k, R^p, R^s a R^v môžu predstavovať; C1.3 alkylová časť alkylfenylových skupín, ktoré R^b, R^d, R^h, R^k, R^p, R^s a R^v môžu predstavovať; alkoxylové skupiny, ktoré R^b,

R^h, R^k, R^p, R^s a R^v môžu predstavovať; a alkoxylové a acyloxylové skupiny, ktorými môžu byť R^b, R^d, R^h, R^k, R^p, R^s a R^v substituované, môžu v prípade dostatočného počtu atómov uhlíka byť lineárne alebo rozvetvené a môžu byť nasýtené alebo nenasýtené.

Medzi halogénové skupiny, ktorými môžu byť R^a, R^b, R^c, R^d, R^h, R^k, R^p, R^s a R^v substituované, patria fluór, chlór, bróm a jód.

Vlnovkové čiary na väzbe vo fragmentoch vzorcov llld, llle alebo lllf predstavujú väzobnú polohu fragmentu.

Medzi výhodné zlúčeniny vzorca la patria tie, kde D¹ predstavuje H a D² predstavuje OH, OCH3, OC(O)R^b alebo C(O)OR^d, kde R^b a R^d majú vyššie uvedený význam.

Zlúčeniny vzorca la možno pripraviť aj priamo zo zlúčenín vzorca I v súlade s technikami známymi odborníkom v danej oblasti.

Napríklad zlúčeniny vzorca la, kde D¹ alebo D² predstavuje C(O)OR^d, možno pripraviť reakciou príslušnej zlúčeniny vzorca I so zlúčeninou vzorca XXXVa,

L³-C(O)OR^d XXXVa kde L³ predstavuje odchádzajúcu skupinu, napríklad Hal alebo p-nitrofenoxy, a Hal a R^d majú vyššie uvedený význam napríklad pri 0 °C za prítomnosti vhodnej bázy (napr. NaOH) a vhodného organického rozpúšťadla (napr. THF).

Zlúčeniny vzorca la možno pripraviť aj priamo z iných zlúčenín vzorca la v súlade s technikami známymi odborníkom v danej oblastí.

Zlúčeniny vzorca la, kde D¹ alebo D² predstavuje OH, možno pripraviť reakciou príslušnej zlúčeniny vzorca la, kde D¹ alebo D² (ako sa hodí) predstavuje COOR^d a R^d má vyššie uvedený význam, s hydroxylamínom (alebo jeho halogénvodíkovou soľou) napríklad pri 40 °C za prítomnosti vhodnej bázy (napr. TEA) a vhodného organického rozpúšťadla (napr. THF).

Zlúčeniny vzorca la, kde D¹ alebo D² predstavuje OC(O)OR^c, a R^c má vyššie uvedený význam, možno pripraviť reakciou príslušnej zlúčeniny vzorca la, kde D¹ alebo D² (ako sa hodí) predstavuje OH, so zlúčeninou vzorca XXXVI, ľ³C(O)OR^c XXXVI kde L³ a R^c majú vyššie uvedený význam, napríklad pri teplote miestnosti za prítomnosti vhodnej bázy (napr. TEA, pyridín alebo DMAP) a vhodného organického rozpúšťadla.

Zlúčeniny vzorca la, kde D¹ alebo D² predstavuje OC(O)OR^b, a R^b má vyššie uvedený význam, možno pripraviť reakciou príslušnej zlúčeniny vzorca la, kde D¹ alebo D² (ako sa hodí) predstavuje OH, so zlúčeninou vzorca XXXVIa,

R^bC(O)Ľ* XXXVIa kde L⁴ predstavuje vhodnú odchádzajúcu skupinu, napríklad OH, Hal alebo R^bC(O)O, a Hal a R^b majú vyššie uvedený význam, napríklad pri teplote miestnosti alebo pod ňou, za prítomnosti vhodnej bázy (napr. TEA, pyridín alebo DMAP) a vhodného organického rozpúšťadla (napr. CH2CI2).

Zlúčeniny vzorca la, kde B¹ predstavuje štruktúrny fragment vzorca llld (v ktorom X⁵, X⁶, X⁷ a X⁸ súčasne predstavujú CH) alebo IIIf, kde v oboch prípadoch D¹ predstavuje H a D² predstavuje OH alebo OR^a, kde R^a má vyššie uvedený význam, možno alternatívne pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca XXXVII,

O ^R1xR₃A‘N^/XY y

• O^N_(CH₂)n-Ba-CN

XXXVII kde B^a predstavuje fenyl-1,4-én alebo cyclohexyl-1,4-én a R¹, R_x, Y, R^y a n majú vyššie uvedený význam, so zlúčeninou vzorca XXXVIII,

H₂NOR^a1 XXXVIII kde R^a1 predstavuje H alebo R^a a R^a má vyššie uvedený význam, napríklad pri 40 až 60 °C, za prítomnosti vhodnej bázy (napr. TEA) a vhodného organického rozpúšťadla (napr. THF, CH3CN, DMF alebo DMSO). Zlúčeniny vzorca la, kde D¹ alebo D² predstavuje OH alebo OR^a, možno alternatívne pripraviť analogicky reakciou príslušnej zlúčeniny vzorca la, kde D¹ alebo D² (ako sa hodí) predstavujú C(O)OR^d, a R^d má vyššie uvedený význam, so zlúčeninou vzorca XXXVIII s vyššie uvedeným významom.

Zlúčeniny vzorca XXXVII možno pripraviť v súlade s technikami spájania peptidov, napríklad analogicky ako vo vyššie opísaných spôsoboch pre zlúčeniny vzorca I. Zlúčeniny vzorcov XXXVa, XXXVI, XXXVIa a XXXVIII sú komerčne dostupné, sú známe v literatúre, alebo sú dostupné pomocou známych techník.

Podľa ďalšieho aspektu vynálezu sa uvádza zlúčenina vzorca la s vyššie uvedeným významom s výnimkou toho, že:

R^b a R^c nezávisle predstavujú Ci.₁₇ alkyl, fenyl alebo 2-naftyl (z ktorých všetky sú voliteľne substituované C1-6 alkylom alebo halogénom);

R^d predstavuje 2-naftyl, fenyl, C1.3 alkylfenyl (pričom posledné tri skupiny sú voliteľne substituované C1.6 alkylom, alkoxylom, nitro alebo halogénom), CH(R^f)(CH(R⁹))pOC(O)R^h (kde R^f a R⁹ nezávisle predstavujú H alebo Ci.6 alkyl, R^h predstavuje 2-naftyl, fenyl, Ci-e alkoxy alebo C1.8 alkyl (pričom táto posledná skupina je voliteľne substituovaná halogénom, C1.6 alkoxylom alebo Cve acyloxylom), a p predstavuje 0 alebo 1) alebo C1.12 alkyl (pričom táto posledná skupina je voliteľne substituovaná Ci-₆ alkoxylom, Cí-6 acyloxylom alebo halogénom);

R^a a R® nezávisle predstavujú fenyl, benzyl, (CH₂)2OC(O)CH₃ alebo Ci.₆ alkyl, pričom táto posledná skupina je voliteľne prerušená kyslíkom;

alebo jej farmaceutický prijateľná soľ.

Odborníkom z danej oblasti bude zrejmé, že aby sa získali zlúčeniny vzorca I alebo vzorca la alternatívnym a niekedy praktickejším spôsobom, vyššie uvedené kroky postupu možno uskutočniť v inom poradí a/alebo možno jednotlivé reakcie vykonať v inej fáze celkového postupu (t.j. možno pridať substituenty a/alebo uskutočniť chemické transformácie na rôznych intermediátoch voči tým, ktoré sú spomenuté vyššie v spojení s konkrétnou reakciou). Toto môže negovať alebo vyvolať potrebu chrániacich skupín. V súlade s tým poradie a typ príslušnej chémie bude diktovať potrebu a typ chrániacich skupín ako aj poradie uskutočňovania syntézy.

Použitie chrániacich skupín je plne opísané v monografii “Protective Groups in Organic Chemistry, vydavateľ J. W. F. McOmie, Plénum Press (1973), a “Protective Groups in Organic Synthesis”, 2. vydanie, T. W. Greene & P. G. M. Wutz, Wiley-lnterscience (1991).

Chránené deriváty zlúčenín vzorca I (napr. zlúčeniny vzorca la) možno chemicky previesť na zlúčeniny vzorca I pomocou štandardných techník odstraňovania chrániacich skupín (napr. hydrogenácia), napríklad podľa ďalej uvedeného opisu.

Odborníkom bude tiež zrejmé, že hoci také chránené deriváty zlúčenín vzorca I (napr. zlúčeniny vzorca la) nemusia mať farmakologickú aktivitu ako také, možno ich podávať parenterálne alebo orálne a potom metabolizovať v tele za vzniku zlúčenín vzorca I, ktoré sú farmakologicky aktívne. Také deriváty možno preto opísať ako “prekurzory liečiv. Všetky prekurzory zlúčenín vzorca I sú zahrnuté v rozsahu vynálezu.

Medzi chránené deriváty zlúčenín vzorca I, ktoré sú osobitne užitočné ako prekurzory, patria zlúčeniny vzorca la.

Zlúčeniny vzorca I, ich farmaceutický prijateľné soli, tautoméry a stereoizoméry, ako aj ich prekurzory (vrátane zlúčenín vzorca la, ktoré sú prekurzormi zlúčenín vzorca I) sa ďalej spoločne označujú ako zlúčeniny podľa vynálezu”.

Medicínske a farmaceutické použitie

Zlúčeniny podľa vynálezu sú užitočné, pretože majú farmakologickú aktivitu. Sú preto indikované ako farmaceutiká.

Podľa ďalšieho aspektu vynálezu sa teda uvádzajú zlúčeniny podľa vynálezu na použitie ako farmaceutiká.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú konkrétne potentné inhibítory trombínu buď ako také, alebo v prípade prekurzorov po podaní, ako je napríklad ukázané v nižšie opísaných testoch.

Preto sa očakáva, že zlúčeniny podľa vynálezu budú užitočné za podmienok, kedy je potrebná inhibícia trombínu.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú teda indikované v liečbe a/alebo profylaxii trombózy a hyperkoagulácie v krvi a tkanivách zvierat vrátane Človeka.

Je známe, že hyperkoagulácia môže viesť k tromboembolickým chorobám. Medzi stavy spojené s hyperkoaguláciou a tromboembolickými chorobami, ktoré možno spomenúť, patrí zdedená alebo získaná rezistencia voči aktivovanému proteínu C, napríklad mutácia faktora V (faktor V Leiden) a zdedené alebo získané nedostatočnosti v antitrombíne III, proteíne C, proteíne S, heparín kofaktore II. Medzi ďalšie stavy, o ktorých je známe, že sú spojené s hyperkoaguláciou a tromboembolickou chorobou, patria cirkulujúce antifosfolipidové protilátky (Lupus antikoagulancium), homocysteinémia, heparínom indukovaná trombocytopénia a poruchy vo fibrinolýze. Zlúčeniny podľa vynálezu sú teda indikované v terapeutickej a/alebo profylaktickej liečbe týchto stavov.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú ďalej indikované v liečbe stavov, pri ktorých existuje nežiaduci nadbytok trombínu bez príznakov hyperkoagulácie, napríklad pri neurodegeneratívnych chorobách, napríklad pri Alzheimerovej chorobe.

Medzi konkrétne chorobné stavy, ktoré možno spomenúť, patrí terapeutická a/alebo profylaktická liečba venóznej trombózy a pulmonárna embólia, arteriálna trombóza (napr. pri infarkte myokardu, nestabilnej angíne, infarkte v dôsledku trombózy a periférnej arteriálnej trombózy) a systémová embólia obyčajne z predsiene počas arteriálnej fibrilácie alebo z ľavej komory po transmurálnom infarkte myokardu.

Okrem toho sa očakáva, že zlúčeniny podľa vynálezu budú mať využitie pri profylaxii alebo reoklúzii (trombóze) po trombolýze, perkutánnej translumináinej angioplastike (PTA) a operáciách koronárneho bypassu; prevencii retrombózy po mikrochirurgických zákrokoch a vaskulárnych chirurgických zákrokoch vo všeobecnosti.

Medzi ďalšie indikácie patrí terapeutická a/alebo profylaktická liečba rozptýlenej intravaskulámej koagulácie spôsobenej baktériami, viacnásobnými úrazmi, intoxikáciou alebo akýmkoľvek iným mechanizmom; liečba antikoagulanciami, keď je krv v kontakte s cudzími povrchmi v tele, napríklad vaskulárnymi štepmi, vaskulárnymi stentmi, vaskulárnymi katétrami, mechanickými a biologickými prostetickými ventilmi alebo akýmkoľvek iným lekárskym zariadením; a antikoagulačná liečba, keď je krv v kontakte s lekárskymi zariadeniami mimo tela, napríklad počas kardiovaskulárneho chirurgického zákroku s použitím srdcovopľúcneho prístroja alebo pri hemodialýze.

O trombíne je známe, že okrem svojich účinkov na proces koagulácie aktivuje veľký počet buniek (napríklad neutrofily, fibroblasty, endotelové bunky a bunky hladkej svaloviny). Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť užitočné aj na terapeutickú a/alebo profýlaktickú liečbu idiopatického adultného alebo respiračného syndrómu ťažkostí s dýchaním, pulmonárnej fibrózy po liečbe ožarovaním alebo chemoterapiou, septickom šoku, septikémii, zápalových reakcií, medzi ktoré patrí okrem iného edém, akútna alebo chronická ateroskleróza, napríklad koronárna arteriálna choroba, cerebrálna arteriálna choroba, periférna arteriálna choroba, reperfúzne poškodenie a restenóza po perkutánnej transluminálnej angioplastike (PTA).

. Zlúčeniny podľa vynálezu, ktoré inhibujú trypsín a/alebo trombín, môžu byť užitočné aj v liečbe pankreatitídy.

Podľa ďalšieho aspektu predloženého vynálezu sa uvádza spôsob liečby stavu, pri ktorom je potrebná inhibícia trombínu, pričom tento spôsob obsahuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa vynálezu alebo jej farmaceutický prijateľnej soli osobe trpiacej takým stavom alebo vnímavej voči nemu.

Zlúčeniny podľa vynálezu sa budú bežne podávať orálne, intravenózne, subkutánne, bukálne, rektálne, dermálne, nazálne, tracheálne, bronchiálne, akoukoľvek inou parenterálnou cestou alebo inhaláciou, vo forme farmaceutických prípravkov obsahujúcich aktívnu zlúčeninu buď ako voľnú bázu alebo farmaceutický prijateľnú netoxickú alebo anorganickú kyselinovú adičnú soľ, vo farmaceutický prijateľnej liekovej forme. V závislosti od poruchy a pacienta, ktorý sa má liečiť, a ceste podania, kompozície možno podávať v rôznych dávkach.

Zlúčeniny podľa vynálezu možno tiež kombinovať a/alebo podávať súbežne s akýmkoľvek iným antitrombotickým prostriedkom s iným mechanizmom pôsobenia, ako sú napríklad antitrombotické prostriedky kyselina acetylsalicyiová, tiklopidín, klopidogrel, tromboxánový receptor a/alebo inhibítory syntetáz, antagonisti fibrinogénového receptora, prostacyklínové mimetiká a fosfodiesterázové inhibítory a antagonisti ADP receptora (P2T).

Zlúčeniny podľa vynálezu možno ďalej kombinovať a/alebo podávať súbežne s trombolytikami, napríklad tkanivový plazminogénový aktivátor (prírodný, rekombinantný alebo modifikovaný), streptokináza, urokináza, prourokináza, anizoylovaný plazminogén-streptokinázový aktivátorový komplex (APSAC), aktivátory plazminogénu zvieracích slinných žliaz a podobne, pri liečbe trombotických chorôb, najmä infarktu myokardu.

Podľa ďalšieho aspektu vynálezu sa teda poskytuje farmaceutický prípravok obsahujúci zlúčeninu podľa vynálezu v zmesi s farmaceutický prijateľným adjuvans, riedidlom alebo nosičom.

Vhodné denné dávky zlúčenín podľa vynálezu v terapeutickej liečbe ľudí sú okolo 0,001 až 100 mg/kg telesnej hmotnosti pri perorálnom podaní a 0,001 až 50 mg/kg telesnej hmotnosti pri parenterálnom podaní.

Zlúčeniny podľa vynálezu majú výhodu, že môžu byť efektívnejšie, menej toxické, dlhšie pôsobiace, mať širšie spektrum účinnosti, byť potentnejšie, vyvolávať menej vedľajších účinkov, môžu sa ľahšie absorbovať, alebo môžu mať iné užitočné farmakologické vlastnosti v porovnaní so zlúčeninami známymi z doterajšieho stavu techniky.

Biologické testy

Test A

Určenie času zrážania trombínu (TT)

Roztok inhibítora (25 μΙ) sa tri minúty inkuboval plazmou (25 μΙ). Potom sa pridal ľudský trombín (T 6769; Sigma Chem Co) v tlmivom roztoku, pH 7,4 (25 μΙ) a čas zrážania sa meral v automatickom zariadení (KC 10; Amelung).

Čas zrážania v sekundách bol vynesený oproti koncentrácii inhibítora a interpoláciou sa určila IC50TT.

IC50TT je koncentrácia inhibítora v teste, ktorá zdvojnásobuje čas zrážania trombínu pre ľudskú plazmu.

Test B

Určenie trombínovej inhibície chromogénnou, robotickou analýzou

Potencia trombínového inhibítora sa merala metódou chromogénneho substrátu v robotickom mikroplatničkovom procesore Plato 3300 (Rosys AG, CH8634 Hombrechtikon, Švajčiarsko), pomocou 96-jamkových, polobjemových mikrotitračných platničiek (Costar, Cambridge, MA, USA; kat. č. 3690). Zásobné roztoky testovanej látky v DMSO (72 μΙ), 1 mmol/l, sa zriedili sériovo 1 : 3 (24 + 48 μΙ) s DMSO, čím sa získalo desať rôznych koncentrácií, ktoré sa analyzovali ako vzorky v teste. 2 μΙ testovanej vzorky sa zriedili 124 μΙ testovacieho tlmivého roztoku, 12 μΙ roztoku chromogénneho substrátu (S-2366, Chromogenix, Môlndal, Švédsko) v testovacom tlmivom roztoku a nakoniec sa pridalo 12 μΙ roztoku atrombínu, (ľudský a-trombín, Sigma Chemical Co.) oboje v testovacom tlmivom roztoku a vzorky sa premiešali. Konečné testovacie koncentrácie boli: testovaná látka 0,00068 - 13,3 pmol/l, S-2366 0,30 mmol/L, a-trombín 0,020 NIHU/ml. Lineárny prírastok absorbancie počas 40 minútovej inkubácie pri 37 °C sa použil na výpočet percenta inhibície pre testované vzorky v porovnaní so slepou vzorkou bez inhibítora. Robotická hodnota IC₅₀ zodpovedajúca koncentrácii inhibítora, ktorá spôsobila 50 % inhibíciu trombínovej aktivity, sa vypočítala z krivky logaritmu dávky oproti % inhibície.

TestC

Určenie inhibičnej konštanty K, pre ľudský trombín

Určenia Kj sa uskutočnili pomocou metódy chromogénneho substrátu pri 37 °C na centrifúgovom analyzátore Cobas Bio (Roche, Bazilej, Švajčiarsko). Zvyšková enzýmová aktivita po inkubácii ľudského α-trombínu s rôznymi koncentráciami testovanej zlúčeniny sa určila pri troch rôznych koncentráciách substrátu a namerala sa ako zmena optickej absorbancie pri 405 nm.

Roztoky testovanej zlúčeniny (100 μΙ; bežne v tlmivom alebo fyziologickom roztoku obsahujúcom 10 g/l BSA) sa zmiešali s 200 μΙ ľudského α-trombínu (Sigma Chemical Co) v testovacom tlmivom roztoku (0,05 mol/l Tris-HCl pH 7,4, iónová sila 0,15 upravená pomocou NaCi) obsahujúcom BSA (10 g/l) a analyzovali sa ako vzorky v prístroji Cobas Bio. 60 μΙ vzorka spolu s 20 μΙ vody sa pridala do 320 μΙ substrátu S-2238 (Chromogenix AB, Môlndal, Švédsko) v testovacom tlmivom roztoku a sledovala sa zmena absorbancie (ΔΑ/min). Konečné koncentrácie S2238 boli 16, 24 a 50 μιτιοΙ/Ι a pre trombín 0,125 NIH U/ml.

Reakcia ustáleného stavu sa použila na skonštruovanie Dixonových závislostí, t.j. diagramov koncentrácie inhibítora oproti 1/(AA/min). Pre reverzibilné kompetitívne inhibítory dátové body pre rôzne koncentrácie inhibítora väčšinou tvoria priamky, ktoré sa pretínajú pri x = -Kj.

Test D

Určenie aktivovaného čiastočného tromboplastínového času (APTT - Activated Partial Thromboplastin Time)

APTT bol určený v kombinovanej normálnej ľudskej citrátovanej plazme pomocou činidla PTT Automated 5, ktoré vyrába firma Stago. Inhibítory sa pridali do plazmy (10 μΙ roztoku inhibítora na 90 μΙ plazmy) a inkubovali sa s činidlom APTT 3 minúty s následným pridaním 100 μΙ roztoku chloridu vápenatého (0.025M) a APTT sa určilo v zmesi pomocou koagulačného analyzátora KC10 (Amelung) podľa pokynov výrobcu činidla. Čas zrážania v sekundách bol vynesený oproti koncentrácii inhibítora v plazme a interpoláciou sa určila IC50APTT.

IC50APTT je definovaná ako koncentrácia inhibítora v ľudskej plazme, ktorá zdvojnásobila aktivovaný čiastočný tromboplastínový čas.

Test E

Určenie trombínového času ex vivo

Inhibícia trombínu po orálnom alebo parenterálnom podaní zlúčenín vzorcov I a la rozpustených v zmesi etanolu, Solutolu™ a vody (5:5: 90) sa skúmala na potkanoch pri vedomí, ktoré boli deň alebo dva pred experimentom vybavené katétrom na odber vzoriek krvi z krčnej tepny. V deň experimentu sa po podaní zlúčeniny v stanovených časoch odoberali vzorky krvi do plastových skúmaviek obsahujúcich 1 diel roztoku citrátu sodného (0,13 mol/l) a 9 dielov krvi. Skúmavky sa centrifugovali, čím sa získala plazma chudobná na krvné doštičky. Plazma sa použila na určenie trombínového času, ako je opísané nižšie.

Citrátovaná potkania plazma v množstve 100 μί sa zriedila fyziologickým roztokom, 0,9 %, 100 μΙ, a koagulácia plazmy sa naštartovala pridaním ľudského trombínu (T 6769, Sigma Chem Co, USA) v tlmivom roztoku, pH 7,4, 100 μΙ. Čas zrážania sa meral v automatickom zariadení (KC 10, Amelung, Nemecko).

Kde sa podala zlúčenina vzorca la, koncentrácie príslušného aktívneho trombínového inhibítora vzorca I v potkanej plazme sa odhadli použitím štandardných kriviek týkajúcich sa trombínového času v kombinovanej citrátovanej potkanej plazme voči známym koncentráciám príslušného “aktívneho trombínového inhibítora rozpusteného vo fyziologickom roztoku.

Na základe odhadnutých plazmových koncentrácií aktívneho trombínového inhibítora vzorca I (pričom sa predpokladá, že predĺženie trombínového času je spôsobené vyššie uvedenou zlúčeninou) u potkana, sa pomocou lichobežníkového pravidla a extrapoláciou dát na nekonečno vypočítala plocha pod krivkou po orálnom a/alebo parenterálnom podaní príslušného prekurzora vzorca la (AUCpd).

Biologická dostupnosť aktívneho trombínového inhibítora vzorca I po orálnom alebo parenterálnom podaní prekurzora vzorca la sa vypočítala takto:

[(AUCpd/dávka)/(AUCactive,parenteral/dávka] x 100 kde AUCactive.parenteral predstavuje AUC získanú po parenterálnom podaní príslušného aktívneho trombínového inhibítora vzorca í potkanom pri vedomí, ako je opísané vyššie.

Test F

Určenie trombínového času v moči ex vivo

Množstvo aktívneho trombínového inhibítora vzorca I, ktoré sa vylúčilo v moči po orálnom alebo parenterálnom podaní zlúčenín podľa vynálezu rozpustených v zmesi etanolu, Solutolu™ a vody (5:5: 90) sa odhadlo určením trombínového času v močí ex vivo (pričom sa predpokladalo, že predĺženie trombínového času spôsobuje vyššie uvedená zlúčenina).

Potkany pri vedomí sa umiestnili do metabolických klietok s možnosťou osobitného zberu moču a výkalov na 24 hodín po orálnom podaní zlúčenín podľa vynálezu. Trombínový čas sa určil zo zhromaždeného moču podľa nižšie uvedeného opisu.

Kombinovaná normálna citrátovaná ľudská plazma (100 μΙ) sa inkubovala koncentrovaným potkaním močom alebo jeho zriedenými roztokmi vo fyziologickom roztoku počas jednej minúty. Koagulácia plazmy sa potom iniciovala podaním ľudského trombínu (T 6769, Sigma Chem Company) v tlmivom roztoku (pH 7,4; 100 μΙ). Čas zrážania sa meral v automatickom zariadení (KC 10; Amelung).

Koncentrácie aktívneho trombínového inhibítora vzorca I v potkaňom moči boli odhadnuté pomocou štandardných kriviek vzťahu trombínového času v kombinovanej normálnej citrátovanej ľudskej plazme voči známym koncentráciám vyššie uvedeného aktívneho trombínového inhibítora v koncentrovanom potkaňom moči (alebo jeho roztokom vo fyziologickom roztoku). Násobením celkovej produkcie potkanieho moču v priebehu 24 hodinového obdobia odhadovanou strednou koncentráciou vyššie uvedeného aktívneho inhibítora v moči bolo možné vypočítať množstvo aktívneho inhibítora vylúčeného v moči (AMOUNTpd).

Biologická dostupnosť aktívneho trombínového inhibítora vzorca I po orálnom alebo parenterálnom podaní prekurzora sa vypočítala takto:

[(AMOUNTpd/dávka)/(AMOUNTactive,parenteral/dávka] x 100 kde AMOUNTactive.parenteral predstavuje množstvo vylúčené v moči po parenterálnom podaní príslušného trombínového inhibítora vzorca I potkanom pri vedomí podľa vyššie uvedeného opisu.

Vynález je ilustrovaný nasledujúcimi príkladmi. Ak nie je uvedené inak, aminokyseliny Pro a Aze sú definované ako S-izoméry. Ak nie je uvedené inak, zlúčeniny v príkladoch sa získali ako diastereoizoméry.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Všeobecné experimentálne postupy

Hmotnostné spektrá boli zaznamenané na trojitokvadrupólovom hmotnostnom spektrometri Finnigan MAT TSQ 700 vybavenom elektrosprejovým rozhraním (FAB-MS) a na hmotnostnom spektrometri VG Platform II vybavenom elektrosprejovým rozhraním (LC-MS). Merania ¹H NMR a ¹³C NMR sa uskutočnili na spektrometroch BRUKER ACP 300 a Varian UNITY plus 400, 500 a 600 pracujúcich pri frekvenciách ¹H 300,13, 399,96, 499,82 a 599,94 MHz a pri frekvenciách ¹³C 75,46, 100,58, 125,69 a 150,88 MHz. Flash chromatografia sa uskutočňovala na silikagéle (230-400 mesh). Preparatívna RPLC sa uskutočnila na kolónach s reverznou fázou (250 mm, 20 alebo 50 mm; 5 až 7 μΜ fázy Chromasil C8) s prietokmi 10 až 50 ml/min pri použití UV detektora (270 až 280 nm).

Príklad 1 (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Pro-Pab (i) Metylester kyseliny 1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-karboxylovej

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu, ktorý opísal C. F. Bigge a kol. (J. Med. Chem (1993) 36, 1977) s použitím 7-metoxytetralónu (1,0 g; 5,67 mmol) a metanolu namiesto etanolu. Výťažok: 1,22 g (90 %).

¹H-NMR (300 MHz; CDCI₃): δ 7,05 (d, 1H), 6,80 (d, 1H), 6,65 (s, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 2,85-2,65 (m, 2H), 2,25-1,90 (m, 4H) (ii) Kyselina 1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-karboxylová

Metylester kyseliny 1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-karboxylovej (1,16 g; 4,9 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) sa rozpustil v THF (10 ml) a do získaného roztoku sa pridal hydroxid lítny (0,41 g; 9,8 mmol) a potom voda (4 ml). Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 3 hodiny, THF sa odparil a vodná fáza sa premyla dichlórmetánom. Reakčná zmes sa okystila HCI (2M) a potom sa nasýtila NaCI(s). Po extrakcii s CH2CI2 sa organická fáza vysušila a nakoncentrovala. Výťažok: 765 mg (70 %).

LC-MS (m/z) 221 (M -1)' ¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,07 (d, 1H), 6,82 (dd, 1H), 6,77 (d, 1H), 3,76 (s, 3H), 2,83-2,71 (m, 2H), 2,32-2,21 (m, 1H), 2,12-1,88 (m, 3H) (iii) (R)- a (S)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Pro-Pab(Z)

Roztok kyseliny 1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-karboxylovej (222 mg; 1,0 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)), H-Pro-Pab(Z) (499 mg; 1,1 mmol; pripravený podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284) a TBTU (353 mg; 1,1 mmol) v DMF (10 ml) sa ochladil naO’C a pridal sa DIPEA (517 mg, 4,0 mmol). Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 4 dni a potom sa pri 0 ^eC pridali rovnaké množstvá H-Pro-Pab(Z), TBTU a DIPEA. Po 3 dňoch sa reakčná zmes nakoncentrovala a rozpustila v zmesi vody a EtOAc (1:1). Vodná fáza sa extrahovala EtOAc a spojené organické fázy sa vysušili (Na₂SO₄) a nakoncentrovali. Produkt sa vyčistil pomocou flash chromatografie (EtOAc : EtOH; 100 : 0 až 95 : 5). Ďalším čistením pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; 40 : 60) sa oddelili diastereoméry: Zlúčenina 1A (rýchlejšie sa pohybujúci diastereomér; 10 mg; 1,7 %) a zlúčenina 1B (pomalšie sa pohybujúci diastereomér; 10 mg; 1,7 %). Výťažok: 20 mg (3,4 %).

Zlúčenina 1A:

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,82 (d, 2H), 7,44 (d, 2H), 7,38-7,29 (m, 4H), 7,05 (d, 2H), 6,80 (dd, 1H), 6,54 (d, 1 H). 5,21 (s, 2H) 4,68-4,63 (dd, 1H), 4,45 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,12 (m, 1H), 2,83 (m, 1 H). 2,68-2,53 (m, 2H), 2,22-2,13 (m, 2H), 2,05-1,84 (m, 7H), 1,59-1,50 (m, 1H)

Zlúčenina 1B:

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,82 (d, 2H), 7,43 (d, 2H), 7,37-7,28 (m, 4H), 7,02 (d, 2H), 6,77 (dd, 1H), 6,57 (d, 1H), 5,20 (s, 2H) 4,58-4,51 (m, 2H), 4,42 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 3,12-3,04 (m, 1H), 2,83 (bd, 1H), 2,68-2,58 (m, 1H), 2,55-2,47 (m, 1H), 2,13-1,79 (m, 7H), 1,76-1,65 (m, 1H) (iv) (S)- alebo (R)-1 -hydroxy-7-metoxytetralin-1 -yl-C(O)-Pro-Pab

Pd/C (5%; 10 mg) sa pridalo do roztoku (R)- alebo (S)-1-hydroxy-7metoxytetralin-1-yl-C(O)-Pro-Pab(Z) (10 mg; 0,017 mmol; zlúčenina 1A z vyššie uvedeného kroku (iii)) v EtOH (5 ml) a HOAc (1 μΙ, 0,017 mmol) a zmes sa hydrogenovala 3 hodiny pri teplote miestnosti a atmosférickom tlaku. Získaná zmes sa prefiltrovala cez celit, roztok sa nakoncentroval, pridala sa voda a roztok sa vymrazil, čím sa získalo 10 mg (98 %; čistota 92,2 %) titulnej zlúčeniny vo forme bieleho prášku.

LC-MS (m/z) 451 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,75 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,08 (d, 1H), 6,83 (dd, 1H), 6,60 (d, 1H), 4,63-4,40 (m, 3H), 3,69 (s, 3H), 3,43-3,35 (m, 1H), 2,88-2,67 (m, 3H), 2,23-2,11 (m, 2H), 2,20-1,77 (m, 8H), 1,63-1,51 (m, 1H)

Príklad 2 (R)- alebo (S)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Pro-Pab

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 1 (iv) z (R)- alebo (S)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(0)-ProPab(Z) (10 mg; 0,017 mmol; zlúčenina 1B z vyššie uvedeného príkladu 1(iii)). Výťažok: 10 mg (98 %; čistota 80,4 %).

LC-MS (m/z) 451 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; CD₃OD) δ 7,78 (d, 2H), 7,63 (d, 2H), 7,04 (d, 1H), 6,78 (dd, 1H), 6,75 (d, 1H), 4,67-4,48 (m, 3H), 3,68 (s, 3H), 3,30-3,23 (m, 1H), 2,86-2,61 (m, 3H), 2,23-1,71 (m, 11 H)

Príklad 3 (S)- alebo (/?)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc (i) (S)- a (ŕ?)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

TBTU (0,584 g; 1,7 mmol) a potom DIPEA (0,200 g; 1,55 mmol) sa pridali do ľadovo studeného roztoku kyseliny 1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-karboxylovej (0,345 g; 1,55 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 1(ii)) v DMF (10 ml). Po 15 minútach miešania pri 0®C sa pridali H-Aze-Pab(Z) x 2HCI (0,750 g; 1,7 mmol; pripravený podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284) a DIPEA (0,603 g; 4,65 mmol) a zmes sa miešala pri teplote miestnosti 4 dni. DMF sa odparil a získaný materiál sa rozdelil medzi vodu a EtOAc. Organická vrstva sa oddelila, vodná fáza sa extrahovala 3 krát EtOAc a spojené organické vrstvy sa vysušili (Na2SO₄) a nakoncentrovali. Produkt, biely prášok, sa ďalej čistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octanu amónneho; 46 : 54), čím sa získalo 122 mg (28 %) rýchlejšie sa pohybujúcej frakcie (zlúčenina 3A) a 63 mg (14 %) pomalšie sa pohybujúcej frakcie (zlúčenina 3B).

Zlúčenina 3A:

LC-MS (m/z) 571 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; CDCI3): (komplikované v dôsledku existencie rotamérov) δ 8,22 (t, 0,5H, rotamér); 7,94 (t, 0,5H, rotamér); 7,83 (t, 1H); 7,45-7,3 (m, 9H); 7,4 (t, 1H); 6,80 (m, 1H); 4,93 (m, 1H); 4,55 (m, 5H); 3,76 (s, 3H); 3,0 (m, 2H); 2,8 (m, 2H); 2,6 (m, 2H); 2,5 (m, 1H); 2,38 (m, 1H); 2,25 (m, 1H); 2,0-1,8 (m, 9H) (ii) (S)- alebo (/?)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Pripravený podľa spôsobu opísaného v príklade 1(iv) z (S)- alebo (/?)-1hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,058 g; 0,1 mmol; zlúčenina 3A z vyššie uvedeného kroku (i)), HOAc (5,8 μΙ; 0,1 mmol) a Pd/C (5%; 50 mg) v EtOH (5 ml). Výťažok 15 mg (59 %).

LC-MS (m/z) 437 (M + 1 )* ¹H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,65 (d, 2H); 7,47 (d, 2H); 7,16 (d, 1H); 6,90 (d, 1H); 6,71 (d, 1H); 4,91 (dd, 1H); 4,40 (m, 1H); 4,15 (m, 1H); 3,94 (m, 1H); 3,60 (s, 3H); 2,75 (m, 3H); 2,53 (m, 1H); 2,1 (m, 2H); 2,0-1,75 (m, 7H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCfe) δ 182,5; 178,3; 174,0

Príklad 4 (R)- alebo (S)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab (i) 4-(Aminometoxyiminometyl)benzylamín (H-Pab(OMe))

Oxid platiny (200 mg) sa pridal do roztoku 4-(aminometoxyiminometyl)benzylazidu (10 g; 0,049 mol; pripravený podľa spôsobu opísaného vo WO 94/29336) v 200 ml etanolu. Zmes sa hydrogenovala pri atmosférickom tlaku 8 hodín, prefiltrovala sa cez Hyflo a nakoncentrovala. Surový produkt sa použil priamo v nasledujúcom kroku.

¹H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,60 (d, 2H); 7,37 (d, 2H); 3,81 (s, 3H); 3,80 (s, 2H).

(ii) Boc-Aze-Pab(OMe)

DIPEA (17,5 ml; 105 mmol) sa pridal do ľadovo studeného roztoku Boc-AzeOH (9,7 g; 48 mmol) a H-Pab(OMe) (9,4 g; 52 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) a TBTU (18,5 g; 58 mmol) v DMF (100 ml) a zmes sa miešala cez noc pri teplote miestnosti. Výsledná zmes sa vyliala do vody (50 ml), pH sa upravilo na približne 9 a zmes sa extrahovala trikrát EtOAc. Spojená organická vrstva sa premyla NaHCOVaq, vodou a soľankou, vysušila (Na₂SO4) a nakoncentrovala. Surový produkt sa vyčistil flash chromatografiou (silikagél, EtOAc). Výťažok: 11,9 g (69 %).

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,60 (d, 2H); 7,31 (d, 2H); 4,78 (b, 2H); 4,69 (m, 1H); 4,50 (b, 2H); 3,92 (s+m, 4H); 3,79 (m, 1H); 2,46 (b, 2H); 1,42 (s, 9H) (iii) H-Aze-Pab(OMe) x 2HCI

Roztok Boc-Aze-Pab(OMe) (9,4 g; 26 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)) v EtOAc (250 ml) sa nasýtil HCI(g). Do získanej emulzie sa pridal EtOH (abs; 125 ml) a zmes sa vystavila pôsobeniu ultrazvuku na 10 min.

Pridával sa EtOAc, až kým sa roztok nezakalil, po čom čoskoro vykryštalizoval titulný produkt. Výťažok: 6,7 g (77 %).

LC-MS (m/z) 263 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,74 (d, 2H); 7,58 (d, 2H); 5,13 (t, 1H); 4,57 (m, 2H); 4,15 (m, 2H); 3,97 (s+m, 4H); 2,87 (m, 1H); 2,57 (m, 1H) ¹³C-NMR (75 MHz; CDCI₃): (karbonylová a/alebo amidínové uhlíky) δ 168,9; 168,8; 161,9 (iv) 1 -Hydroxy-7-metoxytetralin-1 -yt-C(O)-Aze-Pab(OMe)

H-Aze-Pab(OMe) (0,587 g; 1,85 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)), TBTU (0,594 g; 1,85 mmol) a DIPEA (0,87 g; 6,73 mmol) sa v uvedenom poradí pridali do ľadovo studeného roztoku kyseliny 1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-ylkarboxylovej (0,374 g; 1,68 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 1 (ii)) v CH₃CN. Získaná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 6 dní. Roztok sa nakoncentroval a surový materiál sa vyčistil pomocou preparatívnej HPLC (CH₃CN ; 0,1 M octan amónny; 25 : 75), čím sa oddelili diastereoméry a získalo sa 122 mg (31,2%) rýchlejšie sa pohybujúceho diastereoméru (zlúčenina 4A) a 120 mg (30,7 %) pomalšie sa pohybujúceho diastereoméru (zlúčenina 4B).

Zlúčenina 4B:

LC-MS (m/z) 466 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (500 MHz; CDCI₃): δ 8,08 (t, 1H); 7,63 (d, 2H); 7,35 (d, 2H); 7,02 (d, 1H); 6,80 (dd, 1H); 6,57 (d, 1H); 4,90 (dd, 1H); 4,79 (b, 2H); 4,53 (m, 2H); 3,91 (s, 3H); 3,65 (s+m, 4H); 2,97 (q, 1H); 2,81 (bd, 1H); 2,59 (m, 1H); 2,49 (m, 1H); 2,38 (m, 1H); 2,03-1,85 (m, 4H) (v) (R)- alebo (S)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 1 (iv) z 1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(OMe) (20 mg; 0,043 mmol; zlúčenina 4B z vyššie uvedeného kroku (iv)), AcOH (3 mg; 0,05 mmol) a Pd/C (10 %; 20 mg) v EtOH (5 ml). Výťažok 19 mg (89 %).

LC-MS (m/z) 436 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,79 (d, 2H); 7,55 (m, 2H); 7,20 (d, 1H); 6,95 (m, 1H); 6,79 (d, 1H); 4,92 (dd, 1H); 4,58 (m, 2H); 4,18 (m, 2H); 3,77 (s, 3H); 3,63 (m, 2H); 2,8 (m, 3H); 2,6 (m, 2H); 2,1 (m, 4H); 1,9 (m, 2H) ¹³C-NMR (75 MHz; CDCI₃): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 177,9; 173,8; 167,6

Príklad 5

1-Hydroxy-5-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Metylester kyseliny 1 -hydroxy-5-metoxytetralin-1 -yl-karboxylovej

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu, ktorý opísal Bigge a kol. (J. Med. Chem. (1993) 36, 1977) z 5-metoxytetralónu (1,0 g; 5,67 mmol), Me₃SiCN (0,619 g; 6,24 mmol) a Znl₂ (8 mg; kat.). Výťažok 1,11 g (83 %).

¹H-NMR (500 MHz; CDCI₃): δ 7,16 (m, 1H); 6,91 (d, 1H); 6,76 (t, 1H); 6,45 (br, 1H); 5,97 (br, 1H); 3,815 (s, 2H); 3,81 (s, 3H); 2,88 (m, 1H); 2,56 (m, 2H); 2,14 (m, 2H); 1,95 (m, 2H) (ii) Kyselina 1-hydroxy-5-metoxytetralin-1-yl-karboxylová

Pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 1(ii) zmetylesteru kyseliny 1-hydroxy-5-metoxytetralin-1-yl-karboxylovej (1,11 g; 4,7 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) a LiOH.H₂O (0,395 g; 9,4 mmol). Výťažok 460 mg (36 %).

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,18 (m, 1H); 6,86 (d, 1H); 6,79 (d, 1H); 3,82 (s, 3H); 2,86 (dt, 1H); 2,58 (m, 1H); 2,20 (m, 1H); 2,10-1,85 (m, 4H) (iii) 1 -Hydroxy-5-metoxytetralin-1 -yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

TBTU (0,528 g; 1,64 mmol) sa pridal do ľadovo studeného roztoku kyseliny 1-hydroxy-5-metoxytetralin-1 -yl-karboxylovej (0,332 g; 1,49 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)) v CH₃CN (15 ml). Zmes sa 2 hodiny miešala pri 0’Ca pridal sa H-Aze-Pab(Z) x 2HCI (0,656 g; 1,49 mmol) a DIPEA (0,599 g; 3,1 mmol).

Získaná zmes sa miešala cez noc pri teplote miestnosti a roztok sa nakoncentroval. Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny; 40 :60). Výťažok 140 mg (16 %).

LC-MS (m/z) 571 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,82 (dd, 2H); 7,43 (d, 2H); 7,33 (t, 2H); 7,27 (m, 3H); 6,73 (m, 2H); 5,20 (s, 2H); 4,89 (m, 1H); 4,60-4,40 (m, 2H); 3,80 (s, 3H); 3,62 (m, 1H); 2,94 (m, 2H); 2,34 (m, 2H); 1,95-1,8 (m, 4H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 184,2; 179,0; 178,6; 172,3; 171,6; 168,9 (iv) 1-Hydroxy-5-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Pripravený podľa spôsobu opísaného v príklade 1(iv) z 1-hydroxy-5metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (47 mg; 0,082 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)), AcOH (5 mg; 0,082 mmol) a Pd/C (5 %; 20 mg) v EtOH (5 ml). Výťažok 37 mg (100 %).

LC-MS (m/z) 437 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,76 (dd, 2H); 7,54 (dd, 2H); 7,27 (m, 1H); 7,01 (t, 1H); 6,90 (dd, 1H); 4,91 (dd, 1H); 4,5 (m, 1H); 4,20 (m, 1H); 3,87 (s, 3H); 3,63 (m, 1H); 2,90 (m, 1H); 2,7-2,4 (m, 2H); 2,24 (m, 1H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 181,5; 177,5; 177,2; 173,1; 173,0; 166,7

Príklad 6

1-Hydroxy-5,7-dimetyltetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Metylester kyseliny 1 -hydroxy-5,7-dimetyltetralin-1 -yl-karboxylovej

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa metódy, ktorú opísal Bigge a kol. (J. Med. Chem. (1993) 36, 1977) z 5,7-dimetyltetralónu (1,0 g; 5,74 mmol), MesSiCN (0,626 g; 6,31 mmol) a Znl₂ (8 mg; kat.). Výťažok 1,24 g (92 %).

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 6,94 (s, 1H); 6,81 (s, 1H); 3,77 (s, 3H); 2,82 (t, 1H); 2,73 (m, 1H); 2,60 (m, 3H); 2,25 (s, 3H); 2,21 (s, 3H); 2,00 (m, 3H) (ii) Kyselina 1-hydroxy-5,7-dimetyltetralin-1-yl-karboxylová

Pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 1(ii) z metylesteru kyseliny 1-hydroxy-5,7-dimetyltetralin-1-yl-karboxylovej (1,24 g; 5,27 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) a LiOH.H₂O (0,443 g; 10,6 mmol). Výťažok 0,629 g (50 %).

LC-MS (m/z) 437 (M -1)' ¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 6,97 (s, 1H); 6,92 (s, 1H); 2,72 (m, 1H); 2,60 (m, 1H); 2,27 (s, 3H); 2,22 (s, 3H); 2,06 (m, 2H); 1,95 (m, 2H) (iii) 1-Hydroxy-5,7-dimetyltetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(OMe)

Pripravený podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 4(iv) z kyseliny 1-hydroxy-5,7-dimetyltetralin-1-yl-karboxylovej (0,20 g; 0,91 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)), H-Aze-Pab(OMe) x 1,5 HCI (0,317 g; 1,0 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 4(iii)), TBTU (0,321 g; 1,0 mmol) a DIPEA (0,469 g; 3,63 mmol). Roztok sa nakoncentroval a koncentrát sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny; 30 : 70). Príslušné frakcie sa nakoncentrovali a potom extrahovali (3 x) EtOAc. Spojené organické vrstvy sa vysušili (Na₂SO₄) a nakoncentrovali. Suchý produkt sa rozpustil v malom množstve zmesi vody a CH₃CN a vymrazil sa. Výťažok 40 mg (9,5 %).

LC-MS (m/z) 463 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; CDCI₃): (komplikované v dôsledku existencie diastereomérov a rotamérov) δ 8,19 (bt, 0,5H, rotamér); 7,91 (bt, 0.5H, rotamér); 7,61 (dd, 2H); 7,35 (d, 1H); 7,28 (d, 1H); 6,93 (s, 0,5H, rotamér); 6,91 (s, 0,5H, rotamér); 6,80 (s, 0,5H, rotamér); 6,70 (s, 0,5H, rotamér); 4,91 (m, 2H); 4,79 (b, 2H); 4,50 (m, 3H); 3,91 (d, 3H); 3,74 (m, 0,5H, rotamér); 3,61 (m, 0.5H, rotamér); 2,78 (bd, 1H); 2,57 (m, 1H); 2,38 (m, 2H); 2,26 (m, 2H); 2,19 (d, 6H); 1,95 (m, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI₃): (karbonylová a/alebo amidínové uhlíky) δ 179,2; 178,9; 171,6; 171,4 (iv) 1-Hydroxy-5,7-dimetyltetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Pripravený podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 1 (iv) z 1hydroxy-5,7-dimetyltetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(OMe) (20 mg; 0,043 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)), HOAc (2,6 mg; 0,043 mmol) a Pd/C (10 %; 10 mg). Výťažok 20 mg (94 %).

LC-MS (m/z) 435 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,79 (dd, 1H); 7,70 (d, 1H); 7,53 (m, 2H); 7,07 (d, 1H); 6,92 (s, 1H); 4,91 (m, 1H); 4,17 (m, 1H); 3,76 (m, 0,5H, rotamér); 3,60 (m, 0,5H, rotamér); 2,80 (d, 1H); 2,55 (m, 2H); 2,23 (s, 3H); 2,07 (m, 2H); 1,95 (s, 6H) ¹³C-NMR (100 MHz; D₂O): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 177,9;

173,3

Príklad 7

1-Hydroxy-7-aminotetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Metylester kyseliny 1-hydroxy-7-nitrotetralin-1-yl-karboxylovej

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa metódy, ktorú opísal Bigge a kol. (J. Med. Chem. (1993) 36, 1977) zo 7-nitrotetralónu (2,0 g; 10,5 mmol), MesSiCN (1,14 g; 11,5 mmol) a Znl₂ (8 mg; kat.). Výťažok 2,87 g (100%) (v priebehu 3 krokov).

¹H-NMR (400 MHz; CDCl₃): δ 8,16 (dd, 1H); 8,04 (m, 1 H); 7,36 (dd, 1H); 3,73 (s, 3H); 2,92 (m, 2H); 2,30 (m, 1H); 2,00 (m, 3H) (ii) Kyselina 1-hydroxy-7-nitrotetralin-1-yl-karboxylová

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 1(ii) z metylesteru kyseliny 1-hydroxy-7-nitrotetralin-1-ylkarboxylovej (2,0 g; 8,3 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) a LiOH.H₂O (0,7 g; 16,6 mmol). Výťažok 1,72 g (88 %).

LC-MS (m/z) 236 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 8,10 (dd, 1H); 8,05 (m, 1H); 7,30 (d, 1H); 2,92 (m, 2H); 2,30 (m, 1H); 2,15-1,85 (m, 3H) (iii) 1 -Hydroxy-7-nitrotetralin-1 -yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

HATU (0,352 g; 0,93 mmol) a DIPEA (0,200 g; 1,55 mmol) sa pridali do ľadovo chladného roztoku kyseliny 1-hydroxy-7-nitrotetralin-1-yl-karboxylovej (0,200 g; 0,84 mmol; z vyššie uvedeného príkladu (ii)) v DMF (5 ml). Po 15 minútach miešania pri 0 °C sa pri tej istej teplote pridal roztok H-Aze-Pab(Z) x 2 HCI (0,408 g; 0,93 mmol) a 2,4,6-trimetylpyridínu (0,409 g; 3,37 mmol) v 5 ml DMF a zmes sa miešala cez noc pri teplote miestnosti. DMF sa odparil a surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; 40 : 60). Produkt sa ďalej čistil pomocou HPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; 46 : 54), čím sa získalo 214 mg (44 %) titulnej zlúčeniny.

LC-MS (m/z) 586 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 8,1 (m, 2H); 7,77 (d, 1H); 7,71 (d, 1H); 7,40 (d, 2H); 7,32 (t, 2H); 7,27 (m, 2H); 7,18 (d, 1H); 4,88 (m, 1H); 4,54 (m, 0,5H, rotamér); 4,45 (dd, 0,5H, rotamér); 4,34 (m, 1H); 3,94 (m, 0,5H, rotamér); 3,82 (m, 0,5H, rotamér); 3,17 (m, 1H); 2,90 (t, 1H); 2,73 (m, 1H); 2,45-2,20 (m, 2H); 2,05-1,85 (m, 5H) (iv) 1-Hydroxy-7-aminotetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 1(iv) z 1-hydroxy-7-nitrotetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,064 g; 0,11 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)), HOAc (6,3 μΙ; 0,11 mmol) a Pd/C (32 mg). Tuhý surový produkt sa rozpustil vo vode a vodný roztok sa vymrazil, čím sa získalo 40 mg (76 %).

LC-MS (m/z) 422 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,75 (m, 2H); 7,53 (dd, 2H); 7,07 (d, 1H); 6,82 (bt, 1 H); 6,67 (b, 1H); 4,93 (m, 1H); 4,6-4,4 (m, 2H); 4,29 (m, 0,5H, rotamér); 4,18 (m, 1H); 3,7 (m, 1H); 2,8-2,5 (, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 178,4; 178,1; 173,9; 173,8; 167,5

Príklad 8

1-Hydroxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Metylester kyseliny 1-hydroxytetralin-1-yl-karboxylovej

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa metódy, ktorú opísal Bigge a kol. (J. Med. Chem. (1993) 36, 1977) z tetralónu (2,0 g; 13,7 mmol), Me₃SiCN (1,49 g; 15 mmol) a Znl₂ (8 mg; kat.). Výťažok 2,5 g (88 %).

(ii) Kyselina 1-hydroxytetralin-1-yl-karboxylová

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 1(ii) z metylesteru kyseliny 1-hydroxytetralin-1-yl-karboxylovej (2,5 g; 12,1 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) a LiOH.H₂O (1,02 g; 24,2 mmol). Výťažok 400 mg (17 %).

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,18 (m, 4H); 2,92 (t, 0,5H, rotamér); 2,78 (m, 2H): 2,61 (t, 0,5H, rotamér); 2,22 (m, 1H); 2,1-1,8 (m, 4H) (iii) 1 -Hyd roxytetra I in-1 -y l-C (O)-Aze-Pab(Z)

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 5(iii) z kyseliny 1-hydroxytetralin-1-yl-karboxylovej (0,284 g; 1,50 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)), TBTU (0,531 g; 1,65 mmol), H-AzePab(Z) x 2HCI (0,660 g; 1,50 mmol) a DIPEA (0,602 g; 3,1 mmol). Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; 40 : 60). Výťažok 70 mg (8,6 %).

LC-MS (m/z) 542 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; D₂O): (komplikované v dôsledku existencie diastereomérov a rotamérov) δ 8,15 (t, 0,5H, rotamér); 7,97 (t, 0,5H, rotamér); 7,81 (dd, 2H); 7,43 (dd, 2H); 7,30 (m, 5H); 7,19 (m, 2H); 7,12 (m, 2H); 4,88 (m, 1H); 4,47 (m, 2H); 3,79 (m, 0,5H, rotamér); 2,89 (m, 2H); 2,66 (m, 1H); 2,50 (m, 0,5H, rotamér); 2,35 (m, 1H); 2,19 (m, 0,5H, rotamér); 1,95 (m, 5H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI₃): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky, komplikované v dôsledku existencie diastereomérov a rotamérov) δ 177,7; 177,4; 171,1; 170,5; 170,3; 167,7; 164,4 (iv) 1-Hydroxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 1(iv) z 1-hydroxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (70 mg; 0,13 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)), AcOH (5 mg; 0,13 mmol) a Pd/C (5 %; 35 mg) v EtOH (5 ml). Výťažok 61 mg (100 %).

LC-MS (m/z) 407 (M + 1)⁺ ’H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,74 (dd, 2H); 7,55 (dd, 2H); 7,29 (d, 1H); 7,15 m, 3H); 4,59 (m, 1H); 4,46 (m, 1H); 4,25 (m, 1H); 4,08 (m, 1H); 3,69 (m, 1H); 2,80 (m, 2H); 2,46 (m, 1H); 2,3-2,15 (m, 2H) ¹³C-NMR (100 MHz; CD₃OD): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 180,1; 178,0; 177,8; 173,2; 168,2

Príklad 9

7-Metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Metylester kyseliny 7-metoxy-3,4-dihydronaftalen-1-yl-karboxylovej

Roztok metylesteru kyseliny 1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-karboxylovej (0,5 g; 2,1 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 1 (i)) v toluéne (5 ml) sa pridal do refluxujúceho roztoku p-TsOH (0,6 g; 3,2 mmol) v toluéne (10 ml) a získaná zmes sa refluxovala 45 minút. Po ochladení sa reakčná zmes zriedila éterom, premyla vodou a NaHCO₃/aq, vysušila nad Na₂SO₄ a nakoncentrovala. Výťažok 392 mg (85 %).

¹H-NMR (500 MHz; CDCI₃): δ 7,46 (d, 1H); 7,19 (t, 1H); 7,06 (d, 1H); 6,75 (dd, 1H); 3,84 (s, 3H); 3,83 (s, 3H); 2,69 (t, 2H); 2,38 (m, 2H) (ii) Kyselina 7-metoxy-3,4-dihydronaftalen-1-yl-karboxylová

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 1(ii) z metylesteru kyseliny 7-metoxy-3,4-dihydronaftalen-1-ylkarboxylovej (0,39 g; 1,79 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) a LÍOH.H2O (0,15 g; 3,57 mmol). Výťažok 148 mg (40 %).

LC-MS (m/z) 203 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (500 MHz; CDCI3): δ 7,56 (d, 1H); 7,44 (t, 1H); 7,09 (d, 1H); 6,77 (dd, 1H); 3,82 (s, 3H); 2,72 (t, 2H); 2,44 (m, 2H) (iii) 7-Metoxy-3,4-dihydronaftaIen-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 3(i) z kyseliny 7-metoxy-3,4-dihydronaftalen-1-yl-karboxylovej (0,145 g; 0,71 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)), H-Aze-Pab(Z) x 2HCI (0,343 g; 0,78 mmol), TBTU (0,251 g; 0,78 mmol) a DIPEA (0,364 g; 2,84 mmol). Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny; 54 :46). Získaný roztok sa nakoncentroval a vodná vrstva sa trikrát extrahovala EtOAc. Spojené organické vrstvy sa vysušili (Na₂SO4) a nakoncentrovali, čím sa získalo 121 mg (31 %).

LC-MS (m/z) 553 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (500 MHz; CDCI₃): δ 8,25 (t, 1H); 7,82 (d, 2H); 7,43 (d, 2H); 7,377,27 (m, 5H); 7,06 (d, 1H); 6,81 (d, 1H); 6,72 (dd, 1H); 6,35 (t, 1H); 5,20 (s, 2H); 5,03 (dd, 1H); 4,52 (m, 2H); 3,93 (m, 2H); 2,71 (t, 2H); 2,35 (m, 2H) (iv) 7-Metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 1(iv) z 7-metoxy-3,4-dihydronaftalen-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (88 mg; 0,16 mmol), AcOH (9 mg; 0,16 mmol) a Pd/C (10 %; 44 mg). Výťažok 56 mg (73 %), zmes diastereomérov 60 : 40.

LC-MS (m/z) 421 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (500 MHz; D₂O): δ 7,78 (t, 1H); 7,65 (d, 1H); 7,55 (dd, 1H); 7,49 (d,

1H); 7,42 (d, 2H); 7,36 (d, 2H); 7,16 (m, 1H); 7,05 (d, 1H); 6,84 (dd, 1H); 6,73 (dd,

1H); 6,06 (d, 1H); 5,18 (dd, 1H); 4,96 (m, 1H); 4,12 (m, 2H); 3,92 (m, 2H); 3,82 (d,

1H); 3,62 (m, 3H); 2,7 (m, 6H); 2,4 (m, 2H); 2,05 (m, 2H); 1,9 (m, 1H); 1,2 (m, 2H);

1,5 (m, 1H) ¹³C-NMR (100 MHz; D₂O): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 182,3; 179,3; 179,1; 178,8; 173,7; 173,4; 173,0; 166,3

Príklad 10 (R)- a (S)-7-metoxy-1-metyltetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab (i) Metylester kyseliny 7-metoxytetralin-1-yl-karboxylovej

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 1(iv) z metylesteru kyseliny 7-metoxy-3,4-dihydronaftalen-1-ylkarboxylovej (3,3 g; 15 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 9(i)) a Pd/C (10 %; 0,5 g). Získaná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo a nakoncentrovala. Surový produkt sa vyčistil flash chromatografiou (silikagél, heptán: EtOAc; 4:1). Výťažok 2,4 g (72 %).

’H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,04 (d, 1H); 6,77 (dd, 1H); 6,72 (d, 1H); 3,82 (t, 1H); 3,78 (s, 3H); 3,73 (s, 3H); 2,75 (m, 3H); 2,14 (m, 1H); 1,99 (m, 2H); 1,77 (m, 1H) (ii) Metylester kyseliny 7-metoxy-1 -metyItetraIin-1 -yl-karboxylovej

Metylester kyseliny 7-metoxytetralin-1-yl-karboxylovej (0,4 g; 1,8 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) a Mel (0,13 ml, 2,0 mmol) sa pridali do suspenzie NaH (55 % v oleji; 87 mg; 2,0 mmol) v DMF (5 ml) a zmes sa miešala cez noc pri teplote miestnosti. Získaná zmes sa vyliala do vody a vodná zmes sa trikrát extrahovala zmesou EtOAc a toluénu. Spojené organické vrstvy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a nakoncentrovali. Flash chromatografiou (silikagél; heptán : EtOAc; 4 :1) sa získalo 0,18 g (42 %) titulnej zlúčeniny.

¹H-NMR (500 MHz; CDCI₃): δ 7,04 (d, 1H); 6,76 (m, 2H); 3,79 (s, 3H); 3,69 (s, 3H); 2,76 (m, 2H); 2,32 (m, 1H); 1,91 (m, 1H); 1,83 (m, 2H); 1,75 (m, 1H); 1,58 (s. 3H) (iii) Kyselina 7-metoxy-1-metyltetralin-1-yl-karboxylová

Zmes metylesteru kyseliny 7-metoxy-1-metyltetralin-1-yl-karboxylovej (0,67 g; 2,9 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)) a KOH (4 g) v zmesi EtOH a H₂O (1:1; 50 ml) sa miešala cez noc. Získaná zmes sa zriedila vodou a extrahovala éterom. Vodná vrstva sa okyslila (HCI) a trikrát extrahovala éterom. Spojené organické vrstvy sa premyli vodou, vysušili (Na₂SO₄) a nakoncentrovali. Výťažok 0,58 g (81 %).

¹H-NMR (300 MHz; CDCI₃): δ 7,02 (d, 1H); 6,85 (d, 1H); 6,75 (dd, 1H); 3,77 (s, 3H); 2,75 (m, 2H); 2,32 (m, 1H); 1,91 (m, 1H); 1,82 (m, 1H); 1,75 (m, 2H); 1,55 (s, 3H) (iv) 7-Metoxy-1 -metyltetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 3(i) z kyseliny 7-metoxy-1-metyltetralin-1-yl-karboxylovej (0,14 g; 0,64 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)), TBTU (0,31 g; 0,97 mmol), H-AzePab(Z) (0,42 g; 0,97 mmol) a DIPEA (0,50 g; 0,67 mmol). Surový produkt sa vyčistil flash chromatografiou (silikagél, EtOAc). Výťažok 0,26 mg (72 %).

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 8,40 (b, 0,5H, rotamér); 8,27 (b, 0,5H, rotamér); 7,90 (d, 2H); 4,84 (d, 2H); 7,45 (m, 2H); 7,4-7,25 (m, 5H); 7,00 (t, 1h); 6,75 (dd, 0,5H, rotamér); 6,71 (dd, 0,5H, rotamér); 6,62 (d, 0,5H, rotamér); 6,50 (d, 0.5H, rotamér); 5,22(s, 2H); 4,87 (dd, 1H); 4,65-4,40 (m, 2H); 3,78 (s, 3H); 3,69 (s, 3H); 3,60 (m, 1H); 2,78 (m, 2H); 2,65 (m, 1H); 2,45 (m, 1H); 2,20 (m, 1H); 1,90 (m, 3H); 1,75 (m, 3H); 1,50 (s, 3H) (v) (R)- a (S)-7-metoxy-1-metyltetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab

Titulné zlúčeniny sa pripravili podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 1 (iv) zo 7-metoxy-1-metyltetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (0,10 g; 0,18 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iv)) a Pd/C (10 %) v EtOH (10 ml). Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; 30 : 70 až 32,5; 67,5), čím sa získali dva diastereoméry. Jednotlivé roztoky obsahujúce diastereoméry sa nakoncentrovali. Vymrazením roztokov sa získala zlúčenina z najrýchlejšej frakcie (zlúčenina 10A; 30 mg; 69 %) a z najpomalšej frakcie (zlúčenina 10B; 28 mg; 64 %).

Zlúčenina 10A (ďalej uvádzaná ako (R) alebo (S)):

LC-MS (m/z) 435 (M + 1)⁺ ’H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,74 (d, 2H); 7,49 (d, 2H); 7,10 (d, 1H); 6,85 (dd, 1H); 6,66 (d, 1H); 4,53 (q, 1H); 3,85 (m, 1H); 3,77 (s, 3H); 2,98 (m, 1H); 2,70 (m, 2H); 2,28 (m, 1H); 2,03 (m, 2H); 1,95 (s, 3H); 1,88 (m, 1H); 1,72 (m, 1H); 1,44 (s, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCb): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 180,8; 174,1; 167,6; 158,5

Zlúčenina 10B (ďalej uvádzaná ako (S) alebo (R)):

LC-MS (m/z) 435 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,75 (d, 2H); 7,50 (d, 2H); 7,06 (d, 1H); 6,80 (bd, 1H); 6,68 (b, 1H); 4,52 (q, 2H); 3,75 (m, 4H); 2,88 (m, 1H); 2,68 (m, 2H); 2,37 (m, 1H); 1,90 (s, 3H); 2,0-1,6 (m, 4H); 1,41 (s, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 180,9; 174,0; 167,5; 158,4

Príklad 11

4-Hydroxy-6-metoxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x OAc (i) Metylester kyseliny 4-hydroxy-6-metoxychroman-4-yl-karboxylovej

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa metódy, ktorú opísal Bigge a kol. (J. Med. Chem. (1993) 36, 1977) zo 6-metoxychroman-4-ónu (1,29 g; 7,23 mmol), Me₃SiCN (0,79 g; 8,0 mmol) a Znl₂ (20 mg; kat.). Výťažok 1,11 g (64 %).

¹H-NMR (500 MHz; CD₃OD): δ 6,80 (dd, 1H); 6,73 (d, 1H); 6,72 (s, 1H); 4,28 (m, 1H); 4,14 (dt, 2H); 3,74 (s,3H); 3,70 (s, 3H); 2,47 (m, 1H); 2,02 (m, 1H) (ii) Kyselina 4-hydroxy-6-metoxychroman-4-yl-karboxylová

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 4(ii) z metylesteru kyseliny 4-hydroxy-6-metoxychroman-4-ylkarboxylovej (1,09 g; 4,58 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) a LiOH.H₂O (0,39 g; 9,2 mmol). Výťažok 0,71 g (69 %).

LC-MS (m/z) 223 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (300 MHz; CD₃OD): δ 6,81 (m, 1H); 6,77 (m, 1H); 6,74 (m, 1H); 4,31 (m, 1H); 4,14 (m, 1H); 3,71 (s, 3H); 2,50 (m, 1H); 2,03 (m, 1H) (iii) 4-Hydroxy-6-metoxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 3(i) z kyseliny 4-hydroxy-6-metoxychroman-4-yl-karboxylovej (0,104 g; 0,464 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)), TBTU (0,29 g; 0,90 mmol), DMF (8 ml), DIPEA (80 μΙ + 320 μΙ; 0,46 mmol + 1,84 mmol) a H-Aze-Pab(Z) (0,4 g; 0,91 mmol). Surový produkt, 0,27 g žltého viskózneho oleja, sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny 40: 60), príslušné frakcie sa nakoncentrovali a extrahovali EtOAc. Výťažok 0,089 g (33 %).

LC-MS (m/z) 573 (M + 1)⁺ (iv) 4-Hydroxy-6-metoxychroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 1(iv) z4-hydroxy-6-metoxychroman-1-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (0,089 g; 0,155 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)), AcOH (0,25 μΙ; 0,44 mmol) a Pd/C (5 %; 0,089 g). Výťažok 55,5 mg (72 %).

LC-MS (m/z) 439 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (300 MHz; CD₃OD): (komplikované v dôsledku diastereomérie a rotamérie) δ 7,7-7,5 (m, 2H); 7,5-7,3 (m, 2H); 6,75-6,55 (m, 3H); 4,8 (m, 1H, čiastočne skrytý HDO); 4,5-3,5 (m, 9H, z toho 3,74(s) a 3,69 (s); 2,7-1,7 (m, 7H; z toho 1,95, s, 3H) ¹³C-NMR (75 MHz; CDCI₃): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 176,4; 173,1; 168,1

Príklad 12 (S)- a (R)-1-hydroxy-4-metoxyindan-1-yl-C(O)-Aze-Pab (i) 4-Metoxy-1-indanón

Cs₂CO₃ (7 g; 21,5 mmol) a po ňom CH₃I (10 g; 70 mmol) sa pridali do roztoku 4-hydroxy-1-indanónu (5,0 g; 34 mmol) v THF (30 ml) a zmes sa miešala 60 hodín pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa prefiltrovala a nakoncentrovala a surový produkt sa vyčistil pomocou flash chromatografie (SiO₂; dichlórmetán), čím sa získalo 3,1 g (56 %) titulnej látky.

(ii) Etylester kyseliny 1-hydroxy-4-metoxindan-1-yl-karboxylovej

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa metódy, ktorú opísal Bigge a kol. (J. Med. Chem. (1993) 36, 1977) zo 4-metoxy-1-indanónu (2,2 g; 13,5 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)), Me₃SiCN (2,0 g; 20 mmol) a Znl₂ (200 mg; 0,62 mmol; kat.). Výťažok 0,9 g (28 %).

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,21 (t, 1H); 6,85 (d, 1H); 6,79 (d, 1H); 4,20 (m, 2H); 3,85 (s, 3H); 3,07 (m,3H); 2,97 (m, 1H); 2,67 (m, 1H); 2,27 (m, 1H); 1,20 (t, 3H) (iii) Kyselina 1-hydroxy-4-metoxyindan-1-yl-karboxylová

NaOH (19 M; 1,0 ml) sa pridal do roztoku etylesteru kyseliny 1-hydroxy-4metoxyindan-1-yl-karboxylovej (0,90 g; 3,8 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)) v EtOH (20 ml) a roztok sa miešal 30 minút. Pridala sa soľanka (40 ml) a zmes sa premyla EtOAc, opatrne sa okyslila na pH 2 (HCI; 2 M) a vodný roztok sa extrahoval EtOAc. Organická vrstva sa premyla soľankou, vysušila (Na₂SO4) a nakoncentrovala, čím sa získalo 0,70 g (88 %) titulnej látky.

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,23 (t, 1 H); 6,89 (d, 1H); 6,81 (d, 1H); 3,85 (s, 3H); 3,0 (m, 2H); 2,77 (m, 1H); 2,3 (m, 1H) (iv) 1 -Hydroxy-4-metoxyindan-1 -yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 4(iv) z kyseliny 1-hydroxy-4-metoxyindan-1-yl-karboxylovej (350 mg; 1,68 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)), dichlórmetánu (25 ml), H-AzePab(Z) (750 mg; 1,7 mmol), TBTU (600 mg; 1,8 mmol) a DIPEA (770 mg; 1,8 mmol). Zmes sa nakoncentrovala a zvyšok sa vyčistil pomocou flash chromatografie (silikagél; acetón : EtOAc), čím sa získalo 350 mg (37,5 %).

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃) (komplikované v dôsledku existencie diastereomérov a rotamérov) δ 8,05 (t, 0,5H, rotamér); 7,95 (t, 0,5H, rotamér); 7,82 (dd, 2H); 7,45 (d, 2H); 7,35 (m, 5H); 7,20 (m, 1H); 6,82 (m, 2H); 4,92 (m, 1H); 4,48 (m, 2H); 3,84 (s, 3H); 3,66 (m, 2H); 3,30 (m, 1H); 2,95 (m, 1H); 2,55 (m, 1H); 2,46 (m, 1 H); 2,30 (m, 1H) (v) (S)- a (R)-1-hydroxy-4-metoxyindan-1-yl-C(O)-Aze-Pab

Mravčan amónny (1,0 g; 16 mmol) a Pd/C (5%; 200 mg) sa pridali do roztoku 1-hydroxy-4-metoxyindan-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (340 mg; 0,61 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iv)) v MeOH (30 ml). Pridala sa kyselina mravčia (200 mg; 4,4 mmol) a zmes sa miešala 30 minút. Reakčná zmes sa prefiltrovala cez Hyflo a roztok sa nakoncentroval. Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny; 15 : 85). Príslušné frakcie sa zhromaždili a nakoncentrovali a vodný roztok sa vymrazil, čím sa získala rýchlejšie sa pohybujúca frakcia (zlúčenina 12A; 50 mg; 34 %) a pomalšie sa pohybujúca frakcia (zlúčenina 12B; 5 mg; 3,4 %).

Zlúčenina 12A (ďalej uvádzaná ako (R) alebo (S)):

LC-MS (m/z) 423 (M + 1)⁺ ’H-NMR (400 MHz; CD₃OD): (komplikované v dôsledku rotamérie) δ 7,74 (d, 2H, menej zastúpený rotamér); 7,70 (d, 2H, viac zastúpený rotamér); 7,60 (d, 2H, menej zastúpený rotamér); 7,48 (d, 1H, viac zastúpený rotamér); 7,20 (t, 1H); 6,95 (d, 1H, viac zastúpený rotamér); 6,87 (d, 1H, menej zastúpený rotamér); 6,84 (d, 1H, viac zastúpený rotamér); 6,83 (d, 1H, menej zastúpený rotamér); 4,82 (m, 1H);

4.5 (m, 1H); 4,6-4,4 (m, 2H); 4,11 (m,1H, viac zastúpený rotamér); 4,00 (m, 1H, menej zastúpený rotamér); 3,82 (s, 3H); 3,0 (m, 1H); 2,9 (m, 1H); 2,65 (m, 1H), 2,5 (m, 1H); 2,3-2,0 (m, 2H) ¹³C-NMR (100 MHz; CD₃OD): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 180,3; 176,4; 173,0; 167,9

Zlúčenina 12B (ďalej uvádzaná ako (S) alebo (R)):

LC-MS (m/z) 423 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; CD₃OD): (komplikované v dôsledku rotamérie) δ 7,8-7,7 (m, 2H); 7,54 (d, 2H); 7,23 (m, 1H); 6,97 (m, 1H); 6,9-6,8 (m, 1H); 4,80 (m, 1H); 4,6-4,4 (m, 2H); 4,25 (m, 1H); 4,1-3,9 (m, 1H); 3,82 (s, 3H); 3,0-2,85 (m, 2H); 2,82.5 (m, 2H); 2,3-2,1 (m, 2H); 1,90 (s, 3H)

Príklad 13

1-Hydroxy-5-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(OH)

Roztok hydroxylamínu x HCl (39 mg; 0,56 mmol) a TEA (0,26 ml; 1,86 mmol) v THF (10 ml) sa vystavil pôsobeniu ultrazvuku pri 40 °C na 1 h, po čom sa pridal 1-hydroxy-5-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (53 mg; 0,093 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 5(iii)) rozpustený v malom množstve THF a zmes sa miešala pri 40 °C 3 dni. Zmes sa nakoncentrovala a produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; 30 : 70). Cieľové frakcie sa nakoncentrovali a zvyšok sa vymrazil. Výťažok 29 mg (70 %).

LC-MS (m/z) 453 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; CD₃OD): (komplikované v dôsledku existencie diastereomérov a rotamérov) δ 7,58 (m, 2H); 7,33 (dd, 2H); 7,16 (m, 1H); 7,85 (m, 2H); 4,78 (dd, 2H); 4,44 (m, 2H); 4,2-4,0 (m, 2H); 3,80 (s, 3H); 3,58 (m, 0,5H, rotamér); 3,47 (m, 0,5H, rotamér); 2,91 (bd, 1H); 2,44 (m, 2H); 2,34 (m, 1H); 2,19 (m, 1H); 2,08 (m, 2H); 1,98 (b, 2H); 1,89 (b, 2H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI₃): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 178,0; 177,8; 172,9; 158,4; 158,2; 155,3

Príklad 14 (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(OH)

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 13 z hydroxylamínu x HCI (48 mg; 0,69 mmol), TEA (0,32 ml; 2,31 mmol) a (S)- alebo (ŕ?)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (66 mg; 0,12 mmol; zlúčenina 3A z vyššie uvedeného príkladu 3(i)). Zmes sa nakoncentrovala a surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN: 0,1 M octan amónny; 28:72), čím sa získalo 17 mg (31 %). Čistota

94,5 %, pomer diastereomérov 87 :13.

LC-MS (m/z) 453 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 5,75 (d, 2H); 7,37 (m, 3H); 7,04 (d, 1H); 6,81 (m, 1H); 4,82 (m, 1H); 4,44 (m, 2H); 4,28 (m, 1H); 4,08 (m, 1H); 3,72 (s, 3H); 3,64 (m, 1Ή); 2,72 (m, 3H); 2,40 (m, 1H); 2,22 (m, 1H); 2,12 (m, 2H); 1,95 (m, 2H); 1,88 (m, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 177,6; 172,6; 159,4

Príklad 15

4-Hydroxy-6-metoxychroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(OH)

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 13 z hydroxylamínu x HCI (74 mg; 1,06 mmol), TEA (0,50 ml; 3,6 mmol) a 4-hydroxy-6-metoxychroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Z) (92 mg; 0,16 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 11 (iii)). Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny; 28 : 72), čím sa získalo 55 mg (75 %). Pomer diastereomérov 53 : 47.

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): (komplikované v dôsledku diastereomérie a rotamérie) δ 7,65-7,5 (m, 2H); 7,4-7,3 (m, 2H); 6,85-6,65 (m, 3H); 4,81 (m, 1H, čiastočne skrytý HDO); 4,5-3,9 (m, 5H); 3,9-3,6 (m, 4H); 2,8-1,9 (m, 4H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 176,5; 176,2; 172,8; 155,2 '

Príklad 16

4-Hydroxy-6-metoxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(OMe)

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 3(i) z kyseliny 4-hydroxy-6-metoxychroman-4-yl-karboxylovej (95 mg; 0,42 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 11 (ii)), TBTU (0,26 g; 0,81 mmol), DMF (5 ml), H-Aze-Pab(OMe) x HCI (0,256 g; 0,81 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 4(iii)) a DIPEA (75 + 300 μΙ; 0,42 + 1,68mmol). Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; 30 : 70), čím sa získalo 67 mg (37 %).

^-NMR (400 MHz; CDCI₃): (komplikované v dôsledku diastereomérie a rotamérie) δ 7,65-7,5 (m, 2H); 7,4-7,3 (m, 2H); 6,85-6,7 (m, 3H); 4,80 (m, 1H, skrytý HDO); 4,5-4,0 (m, 5H); 3,81 (s, 3H); 3,75-3,65 (m, 4H); 2,8-1,9 (m, 4H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI₃): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky, komplikované v dôsledku diastereomérie a rotamérie) δ 177,8; 176,5; 176,1; 172,8; 172,6; 155,2; 155,0

Príklad 17 (S)- alebo (/?)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(C(O)OCH₂CCI₃)

NaOH (aq; 2 M; 0,78 ml) a potom 2,2,2-trichlóretyl chlórformát (21 μΙ; 0,155 mmol) sa pridali do ľadovo studeného roztoku (S)- alebo (/?)-1-hydroxy-7metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (70 mg; 0,14 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 3) v THF (3 ml) a zmes sa miešala 3 hodiny. Reakčná zmes sa zriedila vo vode a získaná zmes sa extrahovala 4 krát dichlórmetánom. Spojené organické fázy sa premyli soľankou, vysušili (Na₂SO₄) a odparili. Výťažok 79,8 mg (92,5 %).

LC-MS (m/z) 613 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 9,42 (b, 1 H); 7,98 (t, 1H); 7,83 (d, 2H); 7,30 (b, 1H); 7,29 (d, 2H); 7,06 (d, 1H); 6,84 (dd, 1H); 6,67 (d, 1H); 4,92 (dd, 1 H); 4,86 (s, 2H); 4,48 (m, 2H); 4,12 (s, 1H); 3,86 (m, 1H); 3,75 (s, 3H); 3,08 (m, 1H); 2,81 (db, 1 H); 2,58 (m, 2H); 2,27 (m, 1H); 1,95 (m, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI₃): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 178,7; 171,5; 170,1; 164,0

Príklad 18 (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(C(O)OCH₂CH₃)

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 17 z (S)- alebo (ŕ?)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(0)-AzePab x HOAc (52 mg; 0,10 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 3), NaOH (aq; 2 M; 0,58 ml) a etylchlórformátu (9,4 μΙ; 0,089 mmol). Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; 30 : 70). Výťažok 29 mg (69 %).

LC-MS (m/z) 509 (M + 1)^{+ 1}H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 9,55 (b, 1H); 7,96 (t, 1 H); 7,85 (d, 2H); 7,34 (d, 2H); 7,06 (d, 1H); 6,83 (dd, 1H); 6,68 (d, 1H); 4,94 (dd, 1H); 452 (m, 3H); 4,24 (q, 2H); 3,84 (m. 1H); 3,77 (s, 3H); 3,04 (m, 1H); 2,82 (m, 1H); 2,62 (m, 2H); 2,27 (m, 1 H); 2,0-1,85 (m, 5H); 1,37 (t, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI₃): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 178,9; 171,4; 159,6

Príklad 19

7-Metoxy-1-alyltetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Kyselina 7-metoxy-1-alyltetralin-1-yl-karboxylová

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 10(ii) z metylesteru kyseliny 7-metoxytetralin-1-yl-karboxylovej (0,80 g; 3,6 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 10(i)), NaH (55 % v oleji; 0,23 mg; 5,4 mmol), a alylbromidu (0,65 g, 5,4 mmol), po čom sa surový produkt priamo hydrolyzoval podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 10(iii) s KOH (3 g) v EtOH : H₂O (40 ml; 1:1). Výťažok 0,39 g (44 %).

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,00 (d, 1H); 6,93 (d, 1H); 6,72 (dd, 1H); 5,64 (m, 1H); 5,05 (m, 2H); 3,75 (s, 3H); 2,85-2,60 (m, 4H); 2,20 (m, 2H); 1,95-1,70 (m, 3H) (ii) Boc-Aze-Pab x HCOOH

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 12(v) z mravčanu amónneho (3,0 g; 50 mmol), Pd/C (5 %; 1,0 g), Boc-Aze-Pab(Z) (4,7 g; 10 mmol; pozrite medzinárodnú patentovú prihlášku WO 94/29336) a kyseliny mravčej (1,0 g; 22 mmol) v 50 ml MeOH. Surový produkt sa suspendoval v CH₂CI₂ (50 ml), prefiltroval a premyl ďalším CH₂CI₂. Tuhý produkt sa vysušil a použil v nasledujúcom kroku bez ďalšieho čistenia.

(iii) Boc-Aze-Pab(Teoc)

Teoc-p-nitrofenylkarbonát (3,5 g; 12,3 mmol) sa pridal do roztoku Boc-AzePab x HCOOH (3,7 g; 10 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)) v THF (100 ml), po čom sa v priebehu 2 minút pridal roztok K₂CO₃ (1,8 g; 13 mmol) vo vode (20 ml). Získaný roztok sa miešal 3 dni, nakoncentroval a zvyšok sa rozpustil v EtOAc (150 ml) a NaOH (aq; 0,5 M; 50 ml). Organická vrstva sa premyla soľankou (2 x 50 ml), vysušila (Na₂SO4) a nakoncentrovala. Surový produkt sa vyčistil flash chromatografiou (silikagél, dichlórmetán : acetón; 4:1). Výťažok 4,6 g (96 %).

¹H-NMR (500 MHz; CDCI₃): δ 7,86 (d, 2H); 7,39 (d, 2H); 4,72 (bt, 1H); 4,53 (b, 2H); 3,93 (q, 1H); 3,81 (q, 1H); 2,48 (b, 2H); 1,43 (s, 9H) (iv) H-Aze-Pab(Teoc) x HCl

Roztok Boc-Aze-Pab(Teoc) (4,6 g; 9,6 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)) v dichlórmetáne (150 ml) sa nasýtil suchým HCl. Roztok sa prechovával pri teplote miestnosti v zazátkovanej banke 10 minút, po čom sa nakoncentroval. Výťažok 4,2 g (97 %).

¹H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,80 (d, 2H); 7,60 (d, 2H); 5,10 (t, 1H); 4,60 (s, 2H); 4,15 (q, 1H); 3,97 (q, 1H); 2,86 (m, 1H); 2,57 (m, 1H) (v) 7-Metoxy-1-alyltetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc)

Titulná zlúčenina bola pripravená podlá spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 3(i) z kyseliny 7-metoxy-1-alyltetralin-1-yl-karboxylovej (0,30 g; 1,2 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)), TBTU (0,43 g; 1,3 mmol), H-AzePab(Teoc) (0,60 g; 1,3 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iv)) a DIPEA (0,69 g; 5,4 mmol). Surový produkt sa vyčistil flash chromatografiou (silikagél, EtOAc). Výťažok 0,41 mg (56 %).

¹H-NMR (500 MHz; CDCI3): (komplikované v dôsledku diastereomérie a rotamérie) δ 8,35 (b, 0,5H); 8,20 (bt, 0,5H); 7,90 (d, 1H); 7,85 (d, 1H); 7,90 (d, 1H); 7,35 (d, 1H); 7,01 (t, 1H); 6,75 (m, 1H); 6,65 (d, 0,5H); 6,53 (d, 0,5H); 5,80-5,65 (m, 1H); 5,02 (dd, 1H); 4,96 (m, 1H); 4,87 (dd, 1H); 4,61 (m, 1H); 4,43 (dt, 1H); 4,25 (m, 2H); 3,70 (m+s, 3H); 3,54 (m, 0,5H); 2,95-2,40 (m, 6H); 2,23 (m, 1 H); 2,13 (m, 1H); 1,98 (m, 2H); 1,80 (m, 2H); 1,13 (m, 2H); 0,13 (d, 9H) (vi) 7-Metoxy-1-alyltetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Roztok BU4NF (1 M v THF; 0,66 ml) sa pridal do roztoku 7-metoxy-1alyltetralin-1-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc) (0,36 g; 0,60 mmol; z vyššie uvedeného kroku (v)) v THF (40 ml) a roztok sa miešal pri 60 °C 24 hodín. Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny; 50 : 50) a vymrazil. Výťažok 0,22 g (71 %).

¹H-NMR (500 MHz; CDCI₃): δ 7,77 (dd, 2H); 7,52 (t, 2H); 7,13 (t, 1H); 6,87 (dt, 1H); 6,77 (dd, 1H); 5,71 (m,1H); 5,02 (m, 2H); 4,53 (b, 1H); 3,85-3,65 (m, 4H); 3,02 (m, 1 H); 2,70 (b, 4H); 2,40-2,20 (m, 1 H); 2,05-1,70 (b, 8H; z toho 1,92; s) ¹³C-NMR (100 MHz; D₂O): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 179,1; 173,7; 167,3; 158,5

LC-MS (m/z) 459 (M -1)’

Príklad 20

(S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-chlórtetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab (i) 7-Amino-1-tetralón

Mravčan amónny (2 g), Pd/C (5 %; 1g) a kyselina mravčia (0,5 g; kat.) sa pridali v uvedenom poradí do roztoku 7-nitro-1-tetralónu (1,95 g; 10 mmol) v metanole (50 ml) a zmes sa miešala 30 minút. Roztok sa prefiltroval a filtrát sa nakoncentroval. Zvyšok sa rozpustil v dichlórmetáne (50 + 25 ml) a zmes sa prefiltrovala a nakoncentrovala. Výťažok 1,4 g (88 %).

¹H-NMR (500 MHz; CDCI₃): δ 7,32 (d, 1H); 7,03 (d, 1H); 6,83 (dd, 1H); 3,70 (b, 2H); 2,85 (t, 2H); 2,61 (t, 2H); 2,10 (m, 2H) (ii) 7-Chlór-1-tetralón

NaNO₂ (0,7 g; 10 mmol) rozpustený vo vode (10 ml) sa pridal počas miešania do ľadovo studeného roztoku 7-amino-1-tetralónu (1,4 g; 8,8 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) v koncentrovanej HCI (aq,) v priebehu 5 minút. Získaný studený roztok sa potom pomaly pridal do ľadovo chladného roztoku CuCI (1,5 g, 15 mmol) v koncentrovanej HCI (aq.), po čom sa získaný roztok miešal pri teplote miestnosti 2 hodiny a pri 60 °C 30 minút. Suspenzia sa ochladila ľadom a získaná zrazenina sa odsala, premyla vodou a vysušila vzduchom. Výťažok 1,50 g (94 %).

¹H-NMR (500 MHz; CDCI₃): δ 8,00 (d, 1H); 7,41 (dd, 1H); 7,20 (d, 1H); 2,95 (t, 2H); 2,66 (m, 2H); 2,14 (m, 2H) (iii) Etylester kyseliny 7-chlór-1-hydroxytetralín-1 -karboxylovej

Pripravený podľa spôsobu, ktorý opísal C. F. Bigge a kol. v J. Med. Chem (1993) 36, 1977 z 7-chlór-1-tetralónu (1,5 g; 8,3 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)), Me₃Si-CN (1,0 g; 10 mmol), a Znl₂ (0,3 g). Výťažok 0,8 g (36 %).

¹H-NMR (600 MHz; CDCI₃): δ 7,72 (s, 1H); 7,25 (d, 1H); 7,17 (d, 1H); 7,09 (dd, 1H); 4,35-4,20 (m, 2H); 2,80 (m, 2H); 2,35 (m, 1H); 2,12-1,92 (m, 3H), 1,25 (m, 3H) (iv) Kyselina 7-chlór-1-hydroxytetralín-1 -karboxylová

NaOH (10 M, 1 ml) sa pridal do roztoku etylesteru kyseliny 7-chlór-1hydroxytetralín-1-karboxylovej (0,8 g; 3,1 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)) v DMSO (20 ml) a zmes sa zahrievala na 100 °C 3 hodiny. Získaná zmes sa zriedila rozdrveným ľadom (40 g) a soľankou (40 ml) a extrahovala sa EtOAc. Vodná vrstva sa okyslila na pH 2 pomocou 2 M HCl a extrahovala sa EtOAc (2 x 40 ml). Spojené organické vrstvy sa vysušili (Na₂SO₄) a nakoncentrovali. Výťažok 0,22 mg (30 %).

¹H-NMR (500 MHz; CDCI₃): δ 7,25 (d, 1H); 7,20 (d, 1H); 7,09 (d, 1H); 2,80 (m, 2H); 2,27 (m, 1H); 2,17-2,00 (m, 2H); 1,98 (m, 1H) (v) 7-Chlór-1-hydroxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

HATU (400 mg; 1,05 mmol) sa pridal do roztoku kyseliny 7-chlór-1hydroxytetralín-1-karboxylovej (220 mg; cca 1 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iv)) v DMF (50 ml) a po krátkom miešaní sa po kvapkách pridal roztok H-Aze-Pab(Z) x 2 HCl (450 mg; 1,02 mmol) a 2,4,6-trímetylpyridínu (425 mg, 3,5 mmol) v DMF (10 ml). Po miešaní cez noc sa získaná zmes zriedila vodným roztokom NaCI (15 %; 100 ml) a extrahovala EtOAc (2 x 50 ml). Organická vrstva sa premyla soľankou (20 mi), vysušila (Na₂SO₄) a nakoncentrovala. Zvyšok sa vyčistil flash chromatografiou (silikagél, EtOAc). Výťažok 300 mg (52 %).

’H-NMR (400 MHz; CDCI₃): (komplikované v dôsledku diastereomérie a/alebo rotamérie) δ 7,89 (d, 1H); 7,82 (d, 1H); 7,42 (d, 2H); 7,40-7,30 (m, 6H); 7,18 (m, 1H); 7,06 (d, 1H); 5,20 (s, 2H); 4,93 (m, 1H); 4,60-4,40 (m, 3H); 3,83 (m, 0,5H); 3,72 (m, 0,5H); 3,07 (m, 1H); 2,7-2,5 (m, 3H); 2,40 (m, 1H); 2,03-1,80 (m, 5H) (vi) 7-Chlór-1-hydroxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Anizol (65 mg; 0,6 mmol) a kyselina trifluórmetánsulfónová (400 mg; 2,6 mmol) sa v uvedenom poradí pridali do roztoku 7-chlór-1-hydroxytetralin-1-yl-C(O)Aze-Pab(Z) (300 mg; 0,52 mmol; z vyššie uvedeného kroku (v)) v dichlórmetáne (20 ml) a roztok sa miešal pri teplote miestnosti 10 minút. Pridala sa voda (20 ml) a organická fáza sa oddelila a odstránila, po čom sa pH vodnej fázy upravilo na hodnotu 4-5 pomocou nasýteného NaHCO3 (aq). Roztok sa čiastočne nakoncentroval a surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN:voda; 10:90 až 90:10). Predmetné frakcie sa čiastočne nakoncentrovali, pridalo sa niekoľko kvapiek HOAc (kone.) a roztok sa vymrazil. Výťažok 40 mg (15%).

¹H-NMR (500 MHz; CD₃OD): δ 7,78 (dd, 2H); 7,59 (m, 2H); 7,30 (d, 1h); 7,22 (d, 1H); 7,15 (d, 1H); 4,65-4,35 (m, 3H); 4,20-3,90 (m, 1H); 2,85-2,70 (m, 1 H); 2,55 (m, 1H); 2,35-1,95 (m, 9H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI₃): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 177,0; 172,8; 167,9

Príklad 21

1-n-Propyl-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Malé množstvo Pd/C (10 %) sa pridalo do roztoku 1-alyl-7-metoxytetralin-1yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (80 mg; 0,15 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 19) v EtOH (5 ml) a zmes sa hydrogenovala pri teplote a tlaku prostredia 2 hodiny. Zmes sa prefiltrovala cez celit a získaný roztok sa nakoncentroval. Vymrazením z vody sa získalo 68 mg (85 %) titulnej zlúčeniny.

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,77 (t, 2H); 7,52 (t, 2H); 7,12 (t, 1H); 6,87 (m, 1H); 6,75 (d, 1H); 4,75 (m, 1H; čiastočne skrytý); 4,54 (s, 2H); 3,77 (m, 4H); 3,66 (m, 1H); 3,10 (m, 1H); 2,70 (b, 2H); 2,30 (m, 1H); 2,1-1,6 (m, 10H; z toho 1,91, s, 3H); 1,25 (m, 1H); 1,10 (m, 1H); 0,83 (q, 3H)

LC-MS (m/z) 463 (M + 1)⁺

Príklad 22

6-Chlór-4-hydroxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Metylester kyseliny 6-chlór-4-hydroxychroman-4-yl-karboxylovej

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa metódy, ktorú opísal Bigge a kol. (J. Med. Chem. (1993) 36,1977) zo 6-chlórchromanónu (2,45 g; 13,4 mmol), Me₃SiCN (1,51 g; 15,2 mmol) aZnl₂ (40 mg; kat.).

Výťažok 0,58 g (18 %).

¹H-NMR (300 MHz; CDCI₃): δ 7,17 (d, 1H); 7,08 (d, 1H); 6,82 (d, 1H); 4,41 (m, 1H); 4,37 (m, 1H); 2,47 (m, 1H); 2,09 (m, 1H) (ii) Kyselina 6-chlór-4-hydroxychroman-4-yl-karboxylová

L1OH.H2O (0,19 g; 4,6 mmol) a voda (4 ml) sa pridali do roztoku metylesteru kyseliny 6-chlór-4-hydroxychroman-4-yl-karboxylovej (0,56 g, 2,3 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) v THF (6 ml). Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 3 hodiny, THF sa odparil a vodný roztok sa premyl dichlórmetánom. Reakčná zmes sa okyslila HCI (2 M) a extrahovala sa etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila (Na₂SO₄) a odparila, čím sa získal pomaly kryštalizujúci olej. Výťažok: 490 mg (93 %).

LC-MS (m/z) 228 (M -1)' (iii) 6-Chlór-4-hydroxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc)

Roztok kyseliny 6-chlór-4-hydroxychroman-4-yl-karboxylovej (222 mg; 1,00 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)) a HATU (370 mg, 0,97 mmol) v DMF (5 ml) sa miešal pri 0 °C 1,5 h a pri 0 °C sa pridala zmes H-Aze-Pab(Teoc) x HCI (440 mg; 0,98 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 19(iv)) a 2,4,6-trimetylpyridínu (0,48 g; 3,9 mmol) v DMF (5 ml). Po 3 hodinách miešania pri 0 °C sa reakčná zmes nakoncentrovala a surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN:0,1 M octan amónny (55:45)). Predmetné frakcie sa čiastočne nakoncentrovali a extrahovali dichlórmetánom. Organická vrstva sa vysušila (Na₂SO₄) a nakoncentrovala, čím sa získalo 350 mg (67 %) zmesi diastereomérov.

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,31 (m, 1H); 7,19 (dt, 1H); 7,09 (d, 0,5H); 7,00 (d, 0.5H); 6,88 (dd, 1H); 4,93 (m, 1H); 4,80 (br, 0,5H); 4,61 (dd, 1H); 4,53-4,43 (m, 2H); 4,36 (m, 1H); 4,15 (t, 1H); 3,89 (m, 0,5H); 3,74 (m, 0,5H); 3,09 n(m, 1H); 2,46-2,28 (m, 1H); 2,21 (m, 1H); 1,96 (m, 1H); 0,06 (s, 9H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI₃); (karbonylové a/alebo amidinové uhlíky) δ 176,9; 171,5; 171,3; 169,8; 155,4; 155,2

LC-MS (m/z) 588 (M + 1)⁺ (iv) 6-Chlór-4-hydroxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Bu₄NF (1,0 M v THF; 0,35 ml) sa pridal do roztoku 6-chlór-4hydroxychroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc) (190 mg; 0,32 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)) v THF (20 ml) pri 0 °C. Roztok sa miešal dva dni pri 40 °C. Roztok sa nakoncentroval a surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny (25 : 75)). Výťažok 115 mg (71 %).

¹H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,73 (m, 2H); 7,55 (m, 2H); 7,28 (dd, 1H); 7,15 (m, 1H); 6,79 (m, 1H); 4,60 (m, 1H); 4,47 (m, 2H); 4,33 (m, 1H); 4,15 (m, 2H); 2,8-2,46 (m, 1H); 2,38 (m, 1H); 2,23 (m, 1H); 2,06 (m, 1H); 1,90 (s, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI₃): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 175,9; 175,6; 174,4; 173,1; 173,0

LC-MS (m/z) 444 (M + 1)⁺

Príklad 23

4-Hydroxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Pd/C (5 %; 25 mg) sa pridalo do roztoku 6-chlór-4-hydroxychroman-4-ylC(O)-Aze-Pab x HOAc (14,7 mg; 0,029 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 22) v EtOH (5 ml) a zmes sa hydrogenovala pri teplote a tlaku prostredia jeden deň. Zmes sa prefiltrovala cez ceiit a surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN: 0,1 M octan amónny (25:75)). Predmetné frakcie sa nakoncentrovali. Vymrazením sa získali 4 mg (30 %) titulnej zlúčeniny.

¹H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,79 (m, 2H); 7,56 (m, 2H); 7,4-7,2 (m, 2H); 7,00 (m, 2H); 4,96 (dd, 1H); 4,5-4,3 (m, 2H); 4,20 (m, 2H); 3,88 (m, 1H); 2,8-2,4 (m, 2H); 2,27 (m, 1H); 2,17 (m, 1H); 2,07 (s, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI₃): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 173,7; 167,7

LC-MS (m/z) 409 (M + 1)⁺

Príklad 24

6,8-Dichlór-4-hydroxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Metylester kyseliny 6,8-dichlór-4-hydroxychroman-4-yl-karboxylovej

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa metódy, ktorú opísal Bigge a kol. (J. Med. Chem. (1993) 36, 1977) z 6,8-dichiórchromanónu (1,36 g; 6,27 mmol), Me₃SiCN (0,68 g; 6,9 mmol) a Znl₂ (20 mg; kat.).

Výťažok 0,52 g (30 %).

¹H-NMR (300 MHz; CDCI₃): δ 7,30 (s, 1H); 7,00 (s, 1H); 4,53 (m, 1H); 4,33 (m, 1H); 3,83 (s, 3H); 2,47 (m, 1H); 2,12 (m, 1H) (ii) Kyselina 6,8-dichlór-4-hydroxychroman-4-yl-karboxylová

LiOH.H₂O (0,15 g; 3,6 mmol) a voda (2 ml) sa pridali do roztoku metylesteru kyseliny 6,8-dichlór-4-hydroxychroman-4-yl-karboxylovej (0,50 g, 1,8 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) v THF (5 ml). Výsledná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 30 minút, THF sa odparil a vodná fáza sa premyla dichlórmetánom. Reakčná zmes sa okyslila HCI (2 M) a extrahovala sa dichlórmetánom. Organická vrstva sa vysušila (Na₂SO₄) a odparila, čím sa získala titulná zlúčenina.

Výťažok: 390 mg (83 %).

LC-MS (m/z) 262 (M -1)' (iii) 6,8-Dichlór-4-hydroxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc)

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 22(iii) z kyseliny 6,8-dichlór-4-hydroxychroman-4-ylkarboxylovej (100 mg; 0,38 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)), HATU (160 mg; 0,42 mmol), H-Aze-Pab(Teoc) x HCI, (190 mg; 0,42 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 19(iv)) a 2,4,6-trimetylpyridínu (0,19 g; 1,6 mmol). Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; (55 : 45)). Predmetné frakcie sa čiastočne nakoncentrovali a extrahovali dichlórmetánom. Organická vrstva sa vysušila (Na₂SO₄) a nakoncentrovala, čím sa získalo 206 mg (87 %) zmesi diastereomérov.

LC-MS (m/z) 623 (M + 1)⁺ (iv) 6,8-Dichlór-4-hydroxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 19(vi) zo 6,8-dichlór-4-hydroxychroman-4-yl-C(O)-AzePab(Teoc) (150 mg; 0,24 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)) a Bu₄NF (0,10 g, 0,32 mmol). Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; (30 : 70)). Výťažok 45 mg (35 %).

¹H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,73 (m, 2H); 7,54 (m, 2H); 7,32 (m, 2H); 7,23 (d, 1H); 4,65-4,40 (m, 4H); 4,30 (m, 2H); 4,17-3,97 (m, 1H); 2,8-2,5 (m, 1H); 2,40 (m, 1H); 2,35-2,20 (m, 1H); 2,15 (m, 2H); 1,95 (s, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI₃): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 175,4; 174,0; 174,3; 173,0; 168,1

LC-MS (m/z) 477 (M + 1)⁺

Príklad 25

6-Fluór-4-hydroxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Metylester kyseliny 6-fluór-4-hydroxychroman-4-yl-karboxylovej

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa metódy, ktorú opísal Bigge a kol. (J. Med. Chem. (1993) 36,1977) zo 6-fluórchromanónu (2,53 g; 15,2 mmol), Me₃SiCN (1,66 g; 16,7 mmol) a Znl₂ (3 mg; kat.). Výťažok 2,51 g (73 %).

’H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 6,93 (m, 1H); 6,82 (m, 2H); 4,34 (m, 1H); 4,23 (dt, 1H); 3,81 (s, 3H); 2,47 (m, 1H); 2,10 (m, 1H) (ii) Kyselina 6-fluór-4-hydroxychroman-4-yl-karboxylová

Roztok LiOH.H₂O (0,95 g; 22,6 mmol) vo vode (30 ml) sa pridal do roztoku metylesteru kyseliny 6-fluór-4-hydroxychroman-4-yl-karboxylovej (2,47 g, 10,9 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) v THF (10 ml). Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 2 dni, THF sa odparil a vodná fáza sa okyslila pomocou HCI (2

M) a extrahovala etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila (Na₂SO₄) a odparila, čím sa získala titulná zlúčenina. Výťažok: 1,41 g (61 %).

LC-MS (m/z) 211 (M-1)' (iii) 6-Fluór-4-hydroxychroman-4-yi-C(O)-Aze-Pab(Z)

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 22(iii) z kyseliny 6-fIuór-4-hydroxychroman-4-yl-karboxylovej (250 mg; 1,18 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)), HATU (500 mg; 1,32 mmol), H-Aze-Pab(Z) x HCI, (570 mg; 1,3 mmol; pripravený podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284) a 2,4,6-trimetylpyridínu (0,70 g; 5,3 mmol). Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny; 55 : 45). Predmetné frakcie sa čiastočne nakoncentrovali a extrahovali dichlórmetánom. Organická vrstva sa vysušila (Na₂SO₄) a nakoncentrovala, čím sa získalo 290 mg (40 %) zmesi diastereomérov.

FAB-MS (m/z) 561 (M + 1)⁺ (iv) 6-Fluór-4-hydroxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

HOAc (80 μΙ) a Pd/C (5 %; 93 mg) sa pridali do roztoku 6-fluór-4hydroxychroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (140 mg; 0,25 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)) v EtOH (10 ml) a zmes sa hydrogenovala pri teplote a tlaku prostredia 4 hodiny. Zmes sa prefiltrovala cez celit. Roztok sa nakoncentroval a surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny; (20 : 80)). Výťažok 72 mg (59 %).

¹H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,78 (dd, 1H); 7,73 (d, 1H); 7,55 (m, 2H); 7,186,96 (m, 3H); 4,96 (dd, 1H); 4,58 (s, 1H); 4,50-4,35 (m, 2H); 4,19 (m, 2H); 2,63 (m, 1H); 2,45 (m, 1H); 2,35-2,12 (m, 2H); 1,98 (s, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; D₂O): (karbonylové a/aiebo amidínové uhlíky) δ 176,1; 175,9; 174,7; 173,7; 167,6

Príklad 26

4-Hydroxy-6-metylchroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Metylester kyseliny 4-hydroxy-6-metylchroman-4-yl-karboxylovej

Titulná zlúčenina bola pripravená podľa metódy, ktorú opísal Bigge a kol. (J. Med. Chem. (1993) 36, 1977) zo 6-metylchromanónu (3,11 g; 19,2 mmol), Me₃SiCN (2,1 g; 21,2 mmol) a Znl₂ (20 mg; kat.).

Výťažok 2,80 g (62 %).

¹H-NMR (300 MHz; CDCI₃): δ 7,01 (dd, 1H); 6,89 (d, 1H); 6,77 (d, 1H); 4,37 (dt, 1H); 4,32-4,20 (m, 3H); 2,49 (m, 2H); 2,34 (s, 3H); 2,08 (m, 1H); 1,24 (t, 3H) (ii) Kyselina 4-hydroxy-6-metylchroman-4-yl-karboxylová

Roztok LiOH.H₂O (0,78 g; 18,6 mmol) vo vode (15 ml) sa pridal do roztoku metylesteru kyseliny 4-hydroxy-6-metylchroman-4-yl-karboxylovej (2,2 g, 9,3 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) v THF (10 ml). Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti cez noc, THF sa odparil a vodná fáza sa premyla éterom. Získaný roztok sa okyslil HCI (2 M) a extrahoval sa éterom. Organická vrstva sa vysušila (Na₂SO₄) a odparila, čím sa získala titulná zlúčenina. Výťažok: 1,21 mg (62 %).

¹H-NMR (300 MHz; CD₃OD): δ 7,06 (d, 1H); 6,98 (d, 1H); 6,69 (d, 1H); 4,32 (m, 1H); 4,17 (m, 1H); 2,50 (m, 1H); 2,21 (s, 3H); 2,03 (m, 1H)

LC-MS (m/z) 207 (M -1)' (iii) 4-Hydroxy-6-metylchroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 22(iii) z kyseliny 4-hydroxy-6-metyichroman-4-yl-karboxylovej (310 mg; 1,49 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)), HATU (620 mg; 1,63 mmol), H-Aze-Pab(Z) x HCI, (790 mg; 2,2 mmol; pripravený podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284) a 2,4,6-trimetylpyridínu (0,37 g; 3,0 mmol). Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; (45:55)). Predmetné frakcie sa čiastočne nakoncentrovali a extrahovali dichlórmetánom. Organická vrstva sa vysušila (Na₂SO₄) a nakoncentrovala, čím sa získalo 675 mg (81 %) zmesi diastereomérov.

LC-MS (m/z) 557 (M + 1)⁺ (iv) 4-Hydroxy-6-metyIchroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

HOAc (80 μΙ) a Pd/C (5%; 150 mg) sa pridali do roztoku 4-hydroxy-6metylchroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab(Z) (240 mg; 0,43 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)) rozpusteného v EtOH (10 ml) a zmes sa hydrogenovala pri teplote a tlaku prostredia cez noc. Zmes sa prefiltrovala cez celit. Vymrazením sa získala titulná zlúčenina vo výťažku 159 mg (76 %).

¹H-NMR (500 MHz; CD₃OD): δ 7,72 (dd, 2H); 7,53 (dd, 2H); 7,08 (d, 1H); 7,00 (d, 1H); 6,71 (d, 1H); 4,84 (m, čiastočne skrytý); 4,60 (m, 1H); 4,46 (m, 1H); 4,29 (m, 2H); 4,14 (t, 1H); 2,40 (m, 2H); 2,26-2,10 (m, 3H); 2,00 (m, 1H); 1,90 (s, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; CD₃OD): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 176,6; 174,5; 173,1; 168,1

LC-MS (m/z) 423 (M + 1)⁺

Príklad 27

8-Chlór-4-hydroxy-6-metoxychroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc (i) Etyl 3-(2-chlór-4-metoxyfenoxy)propionát

Sodík (0,055 g; 2,4 mmol) a etanol (1,5 ml) sa pridali do taveniny 2-chlór-4metoxyfenolu (5,20 g; 32,8 mmol). Keď sa všetok sodík rozpustil, pridal sa etylakrylát (4,1 g; 41 mmol) a zmes sa 7 dní zahrievala na 105 °C. Zmes sa potom ochladila na teplotu miestnosti a rozdelila sa medzi éter a vodu. Zmes sa okyslila HCI (2 M; aq.) a extrahovala sa trikrát éterom. Spojené organické vrstvy sa premyli NaOH (2 M; aq), vysušili (CaCI₂) a odparili. Surový produkt (2,7 g) sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; (60 : 40)). Výťažok 1,90 g (22%).

(ii) Kyselina 3-(2-chlór-4-metoxyfenoxy)propiónová

Roztok LiOH.H₂O (0,67 g; 16 mmol) vo vode (20 ml) sa pridal do roztoku etyl 3-(2-chlór-4-metoxyfenoxy)propionátu (1,90 g; 7,3 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) v THF (10 ml). Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti cez noc, THF sa odparil a vodná fáza sa premyla éterom. Získaný roztok sa okyslil HCI (2 M) a extrahoval sa éterom. Organická vrstva sa vysušila (Na₂SO₄) a odparila, čím sa získalo 0,90 g (54 %) titulnej zlúčeniny.

LC-MS (m/z) 229 (M -1)' (iii) 8-Chlór-6-metoxychroman-4-ón

Chlorid fosforečný (1,3 g; 6,2 mmol) sa pridal do suspenzie kyseliny 3-(2chlór-4-metoxyfenoxy)propiónovej (0,85 g; 3,7 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)) v benzéne (10 ml). Získaný priezračný roztok sa rýchlo zahrial do varu a potom sa ochladil v ľadovom kúpeli. Po častiach sa pridal chlorid hlinitý (1,5 g; 11 mmol) a po skončení pridávania sa pridala ľadová voda. Extrakciou éterom, premytím organickej vrstvy NaHCCh/aq. a NaOH (2 M; aq.), vysušením (Na2SO₄) a nakoncentrovaním sa získalo 0,73 g (93 %) titulnej zlúčeniny.

¹H-NMR (300 MHz; CDCI3): δ 7,27 (d, 1H); 7,19 (d, 2H); 4,59 (t, 2H); 3,80 (s, 3H); 2,81 (t, 2H) (iv) Amid kyseliny 8-chlór-4-hydroxy-6-metoxychroman-4-yl-karboxylovej

Titulná zlúčenina sa získala počas pokusu o prípravu príslušného metylesteru podľa spôsobu, ktorý opísal Bigge a kol. (J. Med. Chem. (1993) 36, 1977) z 8-chlór-6-metoxychromanónu (0,73 g; 3,4 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)), Me₃SiCN (0,94 g; 7,6 mmol) a Znl₂ (50 mg; kat.). Surový produkt obsahoval menšie množstvo príslušného metylesteru a väčšie množstvo amidu. Tento amid sa vyčistil preparatívnou RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; 30 : 70 až 70 : 30). Výťažok 0,39 g (44 %).

LC-MS (m/z) 256 (M -1)’ (v) Kyselina 8-chlór-4-hydroxy-6-metoxychroman-4-yl-karboxylová

KOH (1,2 g; 21 mmol) a voda (25 ml) sa pridali do roztoku amidu kyseliny 4hydroxy-8-chlór-6-metoxychroman-4-yl-karboxylovej (0,39 g; 1,5 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iv)) v /-PrOH (25 ml). Reakčná zmes sa refluxovala cez noc, /PrOH sa odparil a vodný roztok sa premyl éterom. Reakčná zmes sa okyslila HCI (2 M) a extrahovala sa etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila (Na2SO₄) a nakoncentrovala. Výťažok: 0,38 mg (97 %).

LC-MS (m/z) 257 (M -1)' (vi) 8-Chlór-4-hydroxy-6-metoxychroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 22(iii) z kyseliny 4-hydroxy-8-chlór-6-metoxychroman-4-ylkarboxylovej (260 mg; 1,00 mmol; z vyššie uvedeného kroku (v)), HATU (420 mg; 1,1 mmol), H-Aze-Pab(Teoc) x HCI, (490 mg; 1,1 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 19(iv)) a 2,4,6-trimetylpyridínu (600 mg; 4,5 mmol). Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny; (55 : 45)). Predmetné frakcie sa čiastočne nakoncentrovali a extrahovali dichlórmetánom. Organická vrstva sa vysušila (Na2SO₄) a nakoncentrovala, čím sa získalo 340 mg (55 %) zmesi diastereomérov.

LC-MS (m/z) 617 (M + 1)⁺ (vii) 8-Chlór-4-hydroxy-6-metoxychroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 19(vi) zo 4-hydroxy-8-chlór-6-metoxychroman-4-yl-C(O)-AzePab(Teoc) (150 mg; 0,24 mmol; z vyššie uvedeného kroku (vi)) a Bu₄NF (1,0 M v THF, 0,32 mmol). Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; (20 : 80)). Výťažok 113 mg (87 %).

¹H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,69 (d, 2H); 7,54 (d, 2H); 6,90 (d, 1H); 6,85 (d, 1H); 4,57 (m, 3H); 4,48-4,30 (m, 4H); 4,17 (m, 2H); 4,00 (m, 1H); 2,8-2,5 (m, 2H); 2,40 (m, 2H); 2,26 (m, 1H); 2,15 (m, 2H); 2,06 (d, 1H)

LC-MS (m/z) 473 (M -1 )’

Príklad 28

6-Chlór-4-hydroxy-8-metylchroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (i) Etyl 3-(4-chlór-2-metylfenoxy)propionát

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 27(i) zo 4-chlór-2-metylfenolu (4,99 g; 35,0 mmol), sodíka (0,055 g; 2,4 mmol), etanolu (1,5 ml) a etylakrylátu (4,1 g; 41 mmol). Surový produkt (1,98 g; 23 %) sa použil v nasledujúcom kroku bez ďalšieho čistenia.

(ii) Kyselina 3-(4-chlór-2-metylfenoxy)propiónová

Roztok LiOH.H₂O (0,50 g; 12 mmol) vo vode (10 ml) sa pridal do roztoku etyl 3-(4-chlór-2-metoxyfenoxy)propionátu (1,98 g; 8,15 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) v THF (20 ml). Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti cez noc, THF sa odparil a vodná fáza sa premyla éterom. Získaný roztok sa okyslil HCI (2 M), po čom vypadla tuhá látka. Produkt sa prefiltroval a vysušil na vzduchu, čím sa získalo 0,62 g (35 %) titulnej zlúčeniny.

LC-MS (m/z) 213 (M -1)' (iii) 6-Chlór-8-metylchroman-4-ón

Chlorid fosforečný (0,95 g; 4,6 mmol) sa pridal do suspenzie kyseliny 3-(4chlór-2-metylfenoxy)propiónovej (0,59 g; 2,7 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)) v benzéne (10 ml). Získaný priezračný roztok sa rýchlo zahrial do varu a potom sa ochladil v ľadovom kúpeli. Po častiach sa pridal chlorid hlinitý (1,0 g; 7,5 mmol) a po skončení pridávania sa pridala ľadová voda. Extrakciou éterom, premytím organickej vrstvy NaHCOVaq. a NaOH (2 M; aq.), vysušením (Na₂SO₄) a nakoncentrovaním sa získalo 0,27 g (50 %) titulnej zlúčeniny.

¹H-NMR (500 MHz; CDCI₃): δ 7,70 (d, 1H); 7,29 (d, 2H); 4,56 (t, 2H); 2,79 (t, 2H); 2,22 (s, 3H) (iv) Amid kyseliny 6-chlór-4-hydroxy-8-metylchroman-4-yl-karboxylovej

Titulná zlúčenina sa pripravila podobne ako vo vyššie uvedenom príklade 27(iv) použitím spôsobu, ktorý opísal Bigge a kol. (J. Med. Chem. (1993) 36, 1977) zo 6-chlór-8-metylchromanónu (0,27 g; 1,37 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)), Me₃SiCN (0,29 g; 1,52 mmol) a Znl₂ (46 mg; kat.). Surový produkt obsahoval menšie množstvo príslušného metylesteru a väčšie množstvo amidu. Tento amid sa vyčistil preparatívnou RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; 30 : 70 až 70 : 30). Výťažok: 0,17 g (50 %).

LC-MS (m/z) 240 (M -1)' (v) Kyselina 6-chlór-4-hydroxy-8-metylchroman-4-yl-karboxylovej

KOH (1,25 g; 22,3 mmol) a voda (20 ml) sa pridali do roztoku amidu kyseliny 4-hydroxy-6-chlór-8-metylchroman-4-yl-karboxylovej (0,17 g; 0,69 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iv)) v /-PrOH (20 ml). Reakčná zmes sa refluxovala cez noc, /PrOH sa odparil a vodný roztok sa premyl éterom. Reakčná zmes sa okyslila HCl (2 M) a extrahovala sa etylacetátom. Organická vrstva sa vysušila (Na₂SO₄) a nakoncentrovala. Výťažok: 0,13 g (78 %).

(vi) 6-Chlór-4-hydroxy-8-metylchroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)

Roztok kyseliny 6-chlór-4-hydroxy-8-metylchroman-4-yl-karboxylovej (130 mg; 0,54 mmol; z vyššie uvedeného kroku (v)) a HATU (220 mg, 0,59 mmol) v DMF (5 ml) sa miešal pri 0 °C 1,5 h a pri 0 °C sa pridala zmes H-Aze-Pab(Teoc) x HCl (270 mg; 0,59 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 19(iv)) a 2,4,6-trimetylpyridínu (320 mg; 2,4 mmol) v DMF (3 ml). Po 3 hodinách miešania pri 0 °C sa reakčná zmes nakoncentrovala a surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN: 0,1 M octan amónny (55:45)). Predmetné frakcie sa čiastočne nakoncentrovali a extrahovali dichlórmetánom. Organická vrstva sa vysušila (Na₂SO₄) a nakoncentrovala, čím sa získalo 79 mg (24 %) zmesi diastereomérov.

LC-MS (m/z) 601 (M -1)’ (vii) 6-Chlór-4-hydroxy-8-metylchroman-4-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Bu₄NF (1,0 M v THF; 0,20 ml) sa pridal do roztoku 6-chlór-4-hydroxy-8metylchroman-4-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc) (79 mg; 0,13 mmol; z vyššie uvedeného kroku (vi)) v THF (5 ml) pri 0 °C. Roztok sa miešal pri 60 °C cez noc a potom sa nakoncentroval. Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny; (20 : 80)). Výťažok 37 mg (54 %).

¹H-NMR (400 MHz; CD₃OD): δ 7,72 (m, 2H); 7,54 (m, 2H); 7,15-6,98 (m, 2H); 4,60 (m, 1H); 4,5-4,3 (m, 3H); 4,25-4,10 (m, 2H); 4,03 (m, 1H); 2,80-2,45 (m, 1H); 2,37 (m, 1H); 2,26 (m, 1H); 2,14 (s, 3H); 2,05 (d, 1H); 1,92 (s, 3H)

LC-MS (m/z) 473 (M -1)'

Príklad 29 (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(O-C(O)-/-Pr)

Anhydrid kyseliny 2-metylpropánovej (7,3 mg; 46 pmol) sa pridal do ľadovo studeného roztoku (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(0)-AzePab(OH) (20 mg; 44 pmol; pozrite vyššie uvedený príklad 14) a Et₃N (4,9 mg; 49 μητιοΙ) v dichlórmetáne (1 ml) a zmes sa miešala pri teplote miestnosti cez noc. Zmes sa zriedila ďalším množstvom dichlórmetánu, premyla sa 3 krát vodou a raz soľankou, vysušila (Na₂SO₄) a nakoncentrovala. Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; 40 : 60) a predmetné frakcie sa nakoncentrovali. Vymrazením sa získalo 13 mg (56 %) titulnej zlúčeniny.

¹H-NMR (300 MHz; CDCI3): δ 7,90 (m, 1H); 7,65 (d, 2H); 7,29 (d, 2H); 7,05 (d, 1H); 6,83 (dd, 1H); 6,67 (d, 1H); 5,13 (b, 2H); 4,93 (dd, 1H); 4,48 (m, 3H); 3,84 (m, 1H); 3,76 (s, 3H); 3,03 (m, 1H); 2,85-2,70 (m, 2H); 2,5-2,7 (m, 2H); 2,25 (m, 1H); 2,00-1,93 (m, 4H); 1,29 (d, 6H) ¹³C-NMR (75 MHz; CDCI3): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 177,7; 174,3; 170,3

LC-MS (m/z) 523 (M + 1)⁺

Príklad 30 (S)- alebo (R)-1 -hydroxy-7-metoxytetralin-1 -yl-C(O)-Aze-Pab(O-C(O)-Et)

Anhydrid kyseliny propánovej (9,5 mg; 73 pmol) sa pridal do ľadovo studeného roztoku (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-AzePab(OH) (30 mg; 66 pmol; pozrite vyššie uvedený príklad 14) a EtsN (7,4 mg; 73 pmol) v dichlórmetáne (1 ml). Zmes sa miešala pri teplote miestnosti cez noc. Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN ; 0,1 M octan amónny; 30 : 70 až 40 : 60) a predmetné frakcie sa nakoncentrovali. Vymrazením sa získalo 19 mg (56 %) titulnej zlúčeniny.

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,93 (t, 1H); 7,67 (d, 2H); 7,32 (d, 2H); 7,06 (d, 1H); 6,83 (dd, 1H); 6,68 (d, 1H); 5,12 (b, 2H); 4,93 (dd, 1H); 4,50 (m, 2H); 3,84 (m, 1H); 3,76 (s, 3H); 3,03 (m, 1H); 2,67-2,50 (m, 2H); 2,5-2,7 (m, 4H); 2,26 (m, 1H); 1,92 (m, 4H); 1,26 (t, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 178,8; 173,1; 171,4

LC-MS (m/z) 509 (M + 1)⁺

Príklad 31 (S)- alebo (f?)-1 -hydroxy-7-metoxytetralin-1 -yl-C(O)-Aze-Pab(O-C(O)-Ch)

Chlorid kyseliny cyklohexánkarboxylovej (7,3 mg; 46 pmol) sa pridal do ľadovo studeného roztoku (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-AzePab(OH) (30 mg; 66 pmol; pozrite vyššie uvedený príklad 14) a Et₃N (7 mg; 73 pmol) v dichlórmetáne (1 ml). Zmes sa miešala pri teplote miestnosti cez noc. Zmes sa zriedila ďalším množstvom dichlórmetánu a premyla sa 3 krát vodou a raz soľankou, vysušila (Na₂SO₄) a nakoncentrovala. Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; 40 : 60) a predmetné frakcie sa nakoncentrovali. Vymrazením sa získalo 18 mg (50 %) titulnej zlúčeniny.

’H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,91 (t, 1H); 7,67 (d, 2H); 7,30 (d, 2H); 7,06 (d, 1H); 6,83 (m, 1H); 6,67 (d, 1H); 5,09 (b, 2H); 4,93 (dd, 1H); 4,50 (m, 3H); 3,83 (m,

1H); 3,76 (s, 3H); 3,02 (q, 1H); 2,68-2,45 (m, 3H); 2,26 (m, 1H); 2,1-1,9 (m, 6H); 1,83 (m, 2H); 1,70 (m, 1H); 1,59 (m, 2H); 1,32 (m, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCb): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 178,7; 174,2; 171,4

LC-MS (m/z) 563 (M + 1)⁺

Príklad 32 (S)- alebo (f?)-1 -hydroxy-7-metoxytetralin-1 -yl-C(O)-Aze-Pab(O-alyl) (i) (S)- alebo (ŕ?)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc)

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 22(iii) z kyseliny 1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-karboxylovej (0,44 g; 2,0 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 1 (ii)), HATU (0,80 g; 2,1 mmol), H-Aze-Pab(Teoc) x HCI, (1,17 g; 2,6 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 19(iv)) a 2,4,6-trimetylpyridínu (1,2 g; 10 mmol). Surový produkt (1,73 g) sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; 55 :45 až 45 : 55). Predmetné frakcie sa čiastočne nakoncentrovali a extrahovali dichlórmetánom. Organická vrstva sa vysušila (Na₂SO₄) a nakoncentrovala, čím sa získalo 0,32 g (28 %) zmesi diastereomérov. Preparatívnou RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny (46 : 54)) sa získali dva diastereoméry: Zlúčenina 32A (rýchlejšie sa pohybujúci diastereomér; 0,16 g; 28 %) a zlúčenina 32B (pomalšie sa pohybujúci diastereomér; 0,16 g; 28 %).

Zlúčenina 32A:

’H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,96 (t, 1H); 7,86 (dd, 2H); 7,36 (dd, 2H); 7,07 (d, 1H); 6,87 (dd, 1H); 6,68 (d, 1H); 4,95 (dd, 1H); 4,54 (m, 3H); 4,26 (m, 2H); 3,84 (m, 1H); 3,78 (s, 3H); 3,04 (q, 1H); 2,83 (d, 1H); 2,63 (m, 2H); 2,28 (m, 1H); 2,021,85 (m, 4H); 1,15 (dt, 2H); 0,08 (s, 9H)

LC-MS (m/z) 581 (M + 1)⁺ (ii) (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-rnetoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc)(O-alyl)

O-Alylhydroxylamín x HCI (57 mg; 0,52 mmol) sa pridal do roztoku (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc) (50 mg; 86 pmol; zlúčenina 32A z vyššie uvedeného kroku (i)) v THF (3 ml) a zmes sa miešala pri 60 °C cez noc. Roztok sa nakoncentroval a surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny; 55 : 45 až 60 : 40). Predmetné frakcie sa nakoncentrovali a zvyšok sa extrahoval dichlórmetánom. Organická vrstva sa premyla soľankou, vysušila (Na2SO₄) a nakoncentrovala, čím sa získalo 28 mg (51 %) titulnej zlúčeniny.

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,81 (t, 1H); 7,59 (s, 1H); 7,48 (d, 2H); 7,30 (d, 2H); 7,06 (d, 1 H); 6,83 (dd, 1H); 6,69 (d, 1H); 6,04 (m, 1H); 5,35 (m, 1 H); 5,27 (d, 1H); 4,92 (dd, 1H); 4,66 (dd, 1H); 4,50 (m, 1H); 4,16 (m, 2H); 3,81 (m, 1H); 3,78 (s, 3H); 2,97 (q, 1H); 2,82 (d, 1H); 2,60 (m, 2H); 2,26 (m, 1H); 2,05-1,85 (m, 4H); 0,98 (m, 2H); 0,03 (s, 9H) (iii) (S)- alebo (/?)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(0)-Aze-Pab(0-alyl)

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného v príklade 19(vi) z (S)- alebo (/?)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(0)-Aze-Pab(Teoc)(0-alyl) (28 mg; 44 pmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)) v CH₃CN (2 ml) a Bu₄NF (1 M v THF; 0,1 ml; 0,1 mmol). Surový produkt (21,3 mg) sa vyčistil pomocou flash chromatografie (silikagél; etylacetát), čím sa získalo 10 mg (46 %).

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,88 (t, 1H); 7,62 (d, 2H); 7,30 (d, 2H); 7,06 (d, 1H); 6,83 (dd, 1 H); 6,68 (d, 1H); 6,09 (m, 1H); 5,35 (m, 1H); 5,23 (m, 1H); 4,93 (dd, 1H); 4,84 (s, 3H); 4,68 (m, 1H); 4,50 (m, 2H); 3,82 (m, 1H); 3,77 (s, 3H); 3,01 (m, 1H); 2,82 (d, 1H); 2,62 (m, 2H); 2,26 (m, 1H); 2,0-1,8 (m, 4H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 178,8; 171,2; 159,6

LC-MS: (m/z) 493 (M + 1)*

Príklad 33 (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(O-Bzl) (i) (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc)(O-Bzl)

O-Benzylhydroxylamín x HCI (82 mg; 0,52 mmol) sa pridal do roztoku (S)alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc) (50 mg; 86 μιτιοΙ; pozrite vyššie uvedený príklad 32(i)) v THF (3 ml) a zmes sa miešala pri 60 °C cez noc. Roztok sa nakoncentroval a surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny; 60 : 40 až 70 : 30). Predmetné frakcie sa nakoncentrovali a zvyšok sa extrahoval dichlórmetánom. Organická vrstva sa premyla soľankou, vysušila (Na₂SO4) a nakoncentrovala, čím sa získalo 41 mg (70 %) titulnej zlúčeniny.

’H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,81 (t, 1H); 7,60 (s, 1H); 7,47 (d, 2H); 7,40 (m, 5H); 7,30 (d, 2H); 7,06 (d, 1H); 6,83 (dd, 1H); 6,69 (d, 1H); 5,18 (s, 2H); 4,92 (dd, 1H); 4,51 (m, 2H); 4,15 (m, 2H); 3,81 (m, 1H); 3,77 (s, 3H); 2,81 (d, 1H); 2,60 (m, 2H); 2,25 (m, 1H); 2,1-1,8 (m, 4H); 0,96 (m, 2H); 0,02 (s, 9H)

LC-MS (m/z) 687 (M + 1)⁺ (ii) (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(O-Bzl)

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 19(vi) z (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1~yl-C(O)Aze-Pab(Teoc)(OBzl) (28 mg; 44 pmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) a BU4NF (1 M v THF; 0,1 ml; 0,1 mmol). Surový produkt (21 mg) sa vyčistil pomocou flash chromatografie (silikagél; etylacetát). Výťažok: 10 mg (35 %).

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,88 (t, 1H); 7,61 (d, 2H); 7,45 (d, 2H); 7,407,35 (m, 5H); 7,06 (d, 1H); 6,83 (dd, 1H); 6,68 (d, 1H); 5,15 (s, 2H); 4,92 (dd, 1H); 4,85 (b, 2H); 4,50 (b+m, 3H); 3,83 (m, 1H); 3,77 (s, 3H); 3,02 (m, 1H); 2,82 (d, 1H); 2,62 (m, 2H); 2,26 (m, 1H); 2,0-1,8 (m, 4H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI₃): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 178,8; 171,3; 159,6

LC-MS (m/z) 543 (M + 1)⁺

Príklad 34 (S)- alebo (R)-1 -hydroxy-7-metoxytetralin-1 -yl-C(O)-Aze-Pab(CO-O-metalyl) (i) p-Nitrofenyl-metalylkarbonát

Pyridín (1,21 g; 15 mmol) sa pridal do ľadovo studeného roztoku metalylalkoholu (1,0 g; 14 mmol) a p-nitrofenylchlórformátu (3,07 g; 15 mmol) v dichlórmetáne (40 ml) a získaná zmes sa hodinu miešala pri teplote miestnosti, po čom sa roztok premyl KHSO₄ (3 x) a soľankou, vysušil (Na₂SO₄) a nakoncentroval, čím sa získalo 2,9 g (88 %) titulnej zlúčeniny.

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 8,29 (d, 2H); 7,40 (d, 2H); 5,12 (s, 1H); 5,06 (s, 1 H); 4,70 (s, 2H); 1,85 (s, 3H) (ii) (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(0)-Aze-Pab(CO-0-metalyl)

NaOH (aq.; 2 M; 0,35 ml; 0,7 mmol) sa pridal do ľadovo studeného roztoku (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc (32 mg; 64 pmol; pozrite vyššie uvedený príklad 3) v THF (3 ml), po čom sa pridal p-nitrofenylmetalylkarbonát (17 mg; 71 μίτιοΙ; z vyššie uvedeného kroku (i)) a roztok sa hodinu miešal pri teplote miestnosti. Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny; (40 : 60)). Predmetné frakcie sa nakoncentrovali a vodný roztok sa extrahoval dichlórmetánom. Organická vrstva sa premyla soľankou, vysušila (Na₂SO₄) a nakoncentrovala. Produkt sa rozpustil v zmesi CH₃CN a vody a vymrazil, čím sa získalo 23 mg (67 %) titulnej zlúčeniny.

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,97 (t, 1H); 7,83 (d, 2H); 7,33 (d, 2H); 7,06 (d, 1H); 6,83 (dd, 1H); 6,67 (d, 1H); 5,06 (s, 2H); 4,93 (m, 2H); 4,60 (s, 2H); 4,51 (m, 2H); 3,84 (m, 1H); 3,76 (s, 3H); 3,05 (m, 1H); 2,82 (d, 1H); 2,60 (m, 2H); 2,27 (m, 1H); 2,0-1,85 (m, 4H); 1,83 (s, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; CDCI3): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 178,8; 171,4; 159,6

LC-MS (m/z) 535 (M + 1)⁺

Príklad 35

1-Hydroxy-7-aminotetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(OH) (i) 1-Hydroxy-7-nitrotetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc)

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 22(iii) z kyseliny 1-hydroxy-7-nitrotetralin-1-yl-karboxylovej (200 mg; 0,84 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 7(ii)), HATU (353 mg; 0,93 mmol), H-Aze-Pab(Teoc) (417 mg; 0,93 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 19(iv)) a 2,4,6-trimetylpyridínu (409 mg; 3,37 mmol). Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; (50 : 50)). Predmetné frakcie sa nakoncentrovali a vymrazili, čím sa získalo 226 mg (45 %) titulnej zlúčeniny.

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 8,04 (m, 2H); 7,84 (d, 2H); 7,77 (d, 1H); 7,29 (m, 2H); 4,93 (m, 1H); 4,65-4,50 (m, 1 H); 4,40 (dd, 1 H); 3,96 (m, 1 H); 3,82 (m, 5H); 3,15 (m, 1H); 2,95 (m, 1H); 2,75 (m, 1H); 2,52 (m, 1H); 2,44-2,25 (m, 1H); 2,1-1,9 (m, 5H); 0,05 (s, 9H)

LC-MS (m/z) 596 (M + 1)⁺ (ii) 1-Hydroxy-7-aminotetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc)

Zmes 1-hydroxy-7-nitrotetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc) (48 mg; 81 j-imol; z vyššie uvedeného kroku (i)), kyseliny octovej (5 mg; 81 gmol) a Pd/C (5 %; 24 mg) sa 3 hodiny hydrogenovala pri teplote a tlaku prostredia. Získaná zmes sa prefiltrovala cez celit a nakoncentrovala, čim sa získalo 37 mg (85 %) titulnej zlúčeniny.

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,86 (dd, 2H); 7,42 (d, 1H); 7,33 (d, 1H); 6,89 (dd, 1H); 6,58 (dd, 1H); 6,47 (b, 0,5H); 6,23 (b, 0,5H); 4,91 (m, 1H); 4,68-4,52 (m, 1H); 4,5-4,4 (m, 1H); 4,23 (m, 2H); 3,85 (m, 1H); 3,69 (m, 1H); 3,2-3,0 (m, 1H); 2,74 (d, 1H); 2,65-2,45 (m, 2H); 2,4-2,2 (m, 1H); 2,0-1,8 (m, 5H); 0,05 (s, 9H)

LC-MS (m/z) 566 (M + 1)⁺ (iii) 1-Hydroxy-7-aminotetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(OH)

Zmes hydroxylamínu x HCI (29 mg; 41 mmol) a TEA (140 mg; 1,38 mmol) v THF (10 ml) sa vystavila pôsobeniu ultrazvuku pri 40 °C na 1 h. Pridal sa roztok 1-hydroxy-7-aminotetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(Teoc) (140 mg; 1,38 mmol; z vyššie uvedeného kroku (ii)) v THF (5 ml) a zmes sa miešala pri 40 °C 3 dni. Získaná zmes sa nakoncentrovala a surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny (30 : 70)). Nakoncentrovaním a vymrazením roztoku sa získalo 20 mg (65 %) titulnej zlúčeniny.

¹H-NMR (400 MHz; CDCI3): δ 8,26 (b, 0,5H); 8,03 (b, 0.5H); 7,57 (dd, 2H);

7,39 (d, 1H); 7,30 (d, 1 H); 6,91 (dd, 1 H); 6,65-6,55 (m, 1H); 4,98 (m, 3H); 4,65-4,30 (m+b, 4H); 3,88 (m, 0.5H); 3,69 (m, 0.5H); 3,14 (m, 1H); 2,77 (d, 1H); 2,65-2,50 (m, 2H); 2,45-2,25 (m, 1 H(; 2,10 (s, 2H); 2,00-1,85 (m, 4H) ¹³C-NMR (100 MHz; CD3OD): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 178,2; 172,9; 155,2

LC-MS (m/z) 438 (M + 1)⁺

Príklad 36 (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(O-Val) (i) (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(O-Val(Boc))

EDC x HCI (16 mg; 83 pmol) sa pridal do ľadovo studeného roztoku (S)alebo (ft)-1-hydroxy-7-methoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(OH) (30 mg; 66 pmol; pozrite vyššie uvedený príklad 14), Boc-Val-OH (18 mg; 83 pmol) a DMAP (24 mg, 0,20 mmol) v DMF (3 ml) a roztok sa miešal cez noc. Získaná zmes sa vyliala do vody (200 ml) a zmes sa extrahovala 3 krát EtOAc. Spojené organické fázy sa premyli zriedeným roztokom kyseliny citrónovej a soľankou, vysušili (Na₂SO₄) a nakoncentrovali. Surový produkt (41 mg) sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny; (40 : 60)). Výťažok 13 mg (30 %).

’H-NMR (500 MHz; CDCI₃): δ 7,94 (bt, 1H); 7,68 (d, 2H); 7,33 (d, 2H); 7,08 (d, 1H); 6,85 (dd, 1H); 6,69 (d, 1H); 5,30 (b, 2H); 5,18 (bd, 1H); 4,95 (m, 1H); 4,6082

4,55 (m, 3H); 4,48 (dd, 1H); 4,32 (m, 1H); 3,86 (m, 1H); 3,79 (s, 3H); 3,05 (m, 1H); 2,83 (m, 1H); 2,7-2,55 (m, 2H); 2,28 (m, 1H); 2,22 (m, 1H); 2,05-1,85 (m, 5H); 1,48 (s, 9H); 1,08 (d, 3H); 1,04 (d, 3H)

LC-MS (m/z) 652 (M + 1)⁺ (ii) (S)- alebo (/?)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-Pab(O-Val)

Ľadovo studený roztok 1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(0)-Aze-Pab(0Val(Boc)) (12 mg; 18 μιτιοΙ; z vyššie uvedeného kroku (i)) v EtOAc nasýtenom HCI (5 ml) sa miešal 80 minút, po čom sa roztok nakoncentroval, rozpustil vo vode a vymrazil cez noc, čím sa získalo 11 mg (96 %) titulnej zlúčeniny.

¹H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,66 (d, 1H, menej zastúpený); 7,59 (d, 2H, viac zastúpený); 7,45-7,35 (m, 2H); 7,2-7,1 (m, 1H); 6,95-6,85 (m, 1H); 6,75-6,65 (m, 1H); 5,25 (m, 1H, menej zastúpený); 4,89 (m, 1H, viac zastúpený); 4,6-4,3 (m, 3H); 4,21 (m, 1H); 4,14 (m, 1H, viac zastúpený); 3,87 (m, 1H, viac zastúpený); 3,81 (s, 3H, menej zastúpený); 3,63 (s, 3H, viac zastúpený); 2,8-1,7 (m, 9H); 1,11 (d, 6H) ¹³C-NMR (100 MHz; D₂O): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 178,3; 173,8; 169,1; 161,4

LC-MS (m/z) 552 (M + 1)⁺

Príklad 37 (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-N(Me)-Bzl-4-C(NH₂)NH x HOAc (i) Metyl-4-kyanobenzylidénimín

Roztok p-kyanobenzaldehydu (13,1 g; 0,1 mol), metylamínu (3,1 g; 0,1 mol) a p-TsOH (50 mg; kat.) v toluéne (150 ml) sa miešal cez noc pri teplote miestnosti, po čom sa premyl NaHCO₃ (aq.) (2x) a soľankou, vysušil (Na₂SO₄) a nakoncentroval. Výťažok 14,4 g (100 %).

¹H-NMR (300 MHz; CDCI₃): δ 8,2 (s, 1H); 7,78 (d, 2H); 7,68 (d, 2H); 3,54 (s,

3H) (ii) 'Metyl-4-kyanobenzylamín

NaBH₄ (4,54 g; 0,42 mol) sa pridal po častiach do ľadovo studeného roztoku metyl-4-kyanobenzylidénimínu (14,4 g; 0,1 mol; z vyššie uvedeného kroku (i)) v EtOH. Roztok sa miešal pri teplote miestnosti cez noc a reakcia sa ukončila pridaním HCI (2 M; aq.), roztok sa premyl éterom (2 x), jeho pH sa upravilo na hodnotu 10 pomocou NaOH (2 M; aq.) a extrahoval sa EtOAc (3 x). Organický roztok sa premyl vodou a soľankou, vysušil (Na₂SO₄) a nakoncentroval. Výťažok 11,4 g (78%).

¹H-NMR (300 MHz; CDCI₃): δ 7,92 (d, 2H); 7,76 (d, 2H); 4,82 (s+b, 5H); 4,40 (s. 2H) (iii) Boc-Aze-N(Me)-Bzl-4-CN

EDO x HCI (14,5 g; 76 mmol) sa pridal po častiach do ľadovo studeného roztoku metyl-4-kyanobenzylamínu (11,4 g; 78 mmol), Boc-Aze(OH) (15,4 g; 78 mmol) a DMAP (10,5 g; 82 mmol) v CH₃CN (500 ml), po čom sa zmes miešala pri teplote miestnosti cez noc. Získaná zmes sa rozdelila medzi EtOAc a vodu, vodná fáza sa extrahovala EtOAc (3 x 100 ml) a spojené organické vrstvy sa premyli NaHSO₄ (2 x), vodou (2 x) a soľankou (1 x), vysušili (Na₂SO₄) a nakoncentrovali. Výťažok surového produktu bol 23,2 g (90 %). Malé množstvo (6,17 g; 18,7 mmol) sa vyčistilo pomocou flash chromatografie (silikagél; EtOAc). Výťažok 4,0 g (65 %).

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃) (zložité v dôsledku existencie rotamérov): δ 7,66 (d, 2H, menej zastúpený); 7,60 (d, 2H, viac zastúpený); 7,38 (d, 2H, viac zastúpený); 7,31 (d, 2H, menej zastúpený); 5,01 (dd, 1H); 4,9-4,7 (b, 1H); 4,6-4,45 (b, 1H); 4,07 (m, 1H); 3,90 (m, 1H); 3,00 (s, 3H, menej zastúpený); 2,96 (s, 3H, viac zastúpený); 2,46 (m, 1H); 1,43 (s, 3H) (iv) Aze-N(Me)-Bzl-4-CN x HCI

Roztok Boc-Aze-N(Me)-Bzl-4-CN (4,0 g; 12 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iii)) v EtOAc (nasýtenom HCI; 50 ml) sa miešal 15 minút a potom sa nakoncentroval. Výťažok 3,1 g (kvantitatívny).

¹H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,80 (m,2H); 7,45 (m, 2H); 5,6-5,45 (m, 1H); 4,72 (s, 2H); 4,3-4,1 (m, 1H); 4,08-3,95 (m, 1H); 2,94 (s, 3H); 2,8-2,55 (m, 1H) (v) (S)- alebo (R)-1 -hydroxy-7-metoxytetralin-1 -yl-C(O)-Aze-N(Me)-Bzl-4-CN

Roztok Aze-N(Me)-Bzl-4-CN x HCI (0,56 g; 2,1 mmol; z vyššie uvedeného kroku (iv)) a 2,4,6-trimetylpyridín (0,51 g, 4,2 mmol) v DMF (3 ml) sa pridal do ľadovo studeného roztoku kyseliny 1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-karboxylovej (0,44 g; 2,0 mmol; pozrite vyššie uvedený príklad 1 (ii)) a HATU (0,80 g; 2,1 mmol) v DMF (3 ml) a zmes sa miešala pri teplote miestnosti cez noc. Získaná zmes sa vyliala do vody (0,5 I) a extrahovala sa EtOAc (3 x). Organický roztok sa premyl soľankou, vysušil (Na₂SO₄) a odparil. Surový produkt (1,06 g) sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny (32,5 : 67,5)), čím sa získali dva diastereoméry, rýchlejší diastereoizomér (zlúčenina 37A; výťažok 215 mg (50 %)) a pomalší diastereoizomér (zlúčenina 37B; výťažok 205 mg (48 %)).

Zlúčenina 37A ¹H-NMR (400 MHz; CDCI3) (zložité v dôsledku rotamérie): δ 7,74 (d, 2H, menej zastúpený); 7,66 (d, 2H, viac zastúpený); 7,42 (d, 2H, menej zastúpený);

7,39 (d, 2H, viac zastúpený); 7,07 (m, 1H); 6,87-6,81 (m, 1H); 6,80 (d, 2H, viac zastúpený); 6,75 (d, 2H, menej zastúpený); 5,22 (dd, 1H, viac zastúpený); 5,02 (dd, 2H, menej zastúpený); 4,71 (dd, 2H); 4,60 (m, 1H); 3,98 (m, 1H); 3,81 (s, 3H, viac zastúpený); 3,78 (s, 3H, menej zastúpený); 3,05-2,05 (m, 4H; z toho 3,05, s, 3H, menej zastúpený and 3,01 , s, 3H, viac zastúpený); 2,92-2,82 (m, 1H); 2,67 (m, 1H); 2,40 (m, 1H, menej zastúpený); 2,25-2,07 (m, 3H); 1,98 (m, 2H) (vi) (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-N(Me)-Bzl-4CN(NH₂)NOH

Roztok (S)- alebo (ft)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-N(Me)-Bzl4-CN (0,18 g; 0,42 mmol; zlúčenina 37A z vyššie uvedeného kroku (v)), hydroxylamín x HCI (88 mg; 1,3 mmol) a TEA (0,18 ml; 1,3 mmol) v etanole (abs., 3 ml) sa miešal pri teplote miestnosti 36 hodín, po čom sa surový produkt vyčistil pomocou flash chromatografie (dichlórmetán : metanol (90 : 10)). Spojené frakcie obsahujúce cieľové produkty sa nakoncentrovali. Výťažok 0,18 g (91 %).

^rH-NMR (400 MHz; CDCI₃) (zložité v dôsledku rotamérie): δ 7,67 (d, 2H, menej zastúpený); 7,60 (d, 2H, viac zastúpený); 7,28 (m, 2H, čiastočne prekrytý CHCI₃); 7,04 (dd, 1H); 6,85-6,72 (m, 2H); 5,65 (b, 2H, viac zastúpený); 5,33 (b, 2H, menej zastúpený); 5,20 (dd, 1H, viac zastúpený); 5,06 (dd, 1H, menej zastúpený); 4,75-4,45 (m, 3H); 3,95 (m, 1H); 3,78 (s, 3H, viac zastúpený); 3,75 (s, 3H, menej zastúpený); 3,00 (s, 3H, menej zastúpený); 2,94 (d, 3H, viac zastúpený); 2,9-2,75 (m, 1H); 2,65 (m, 1H); 2,40 (m, 2H, viac zastúpený); 2,10 (m, 3H); 1,95 (m, 2H)

LC-MS (m/z) 467 (M + 1)* (vii) (S)- alebo (/?)-1-hydroxy-7-metoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-N(Me)-Bzl-4C(NH₂)NH x HOAc

Zmes (S)- alebo (R)-1-hydroxy-7-methoxytetralin-1-yl-C(O)-Aze-N(Me)-Bzl-4C(NH₂)NOH (60 mg; 0,13 mmol; z vyššie uvedeného kroku (vi)), HOAc (15 mg; 0,26 mmol) a Pd/C (10 %; 27 mg) v etanole sa chromatografovala 2 dni, po čom sa zmes prefiltrovala cez celit. Výsledný roztok sa nakoncentroval a surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH₃CN : 0,1 M octan amónny; 10:90 až 20:80). Frakcie obsahujúce cieľové produkty sa čiastočne nakoncentrovali a vymrazili cez noc.

Výťažok 18 mg (27 %).

¹H-NMR (400 MHz; D₂O) (zložité v dôsledku rotamérie): δ 7,83-7,73 (m, 1H); 7,68 (d, 1H); 7,50 (t, 1H); 7,43 (d, 1H); 7,17 (d, 1H); 6,93 (m, 1H); 6,82 (d, 1H);

5,40 (dd, 1H); 4,85 (d, 1H); 4,70 (m, 1H); 4,58 (d, 1H); 4,4-4,0 (m, 2H); 3,70 (s, 3H); 3,10 (s, 3H); 2,9-2,6 (m, 3H); 2,25-2,05 (m, 4H); 2,0-1,7 (m, 4H) ¹³C-NMR (100 MHz; D₂O): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky; komplikované v dôsledku rotamérie) δ 178,6; 177,6; 173,8; 173,3; 173,1; 167,5; 158,5; 158,4; 158,2

LC-MS (m/z) 451 (M + 1)⁺

Príklad 38

9-Hydroxyfluoren-9-yl-C(0)-Aze-Pab x HOAc (i) 9-Hydroxytetralin-9-yl-C(O)-Aze-Pab(Z)

Titulná zlúčenina sa pripravila podľa spôsobu opísaného vo vyššie uvedenom príklade 3(i) z kyseliny 9-hydroxyfluoren-9-yl-karboxylovej (230 mg; 1,0 mmol), TBTU (350 mg; 1,1 mmol), H-Aze-Pab(Z) x HCI (500 mg; 1,25 mmol; pripraveného podľa spôsobu opísaného v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/02284) a DIPEA (0,52 g; 4,0 mmol). Surový produkt sa vyčistil pomocou preparatívnej RPLC (CH3CN : 0,1 M octan amónny; 50 : 50). Frakcie obsahujúce cieľové produkty sa čiastočne nakoncentrovali a extrahovali EtOAc (3 x). Organická vrstva sa vysušila (Na₂SO₄) a nakoncentrovala, čím sa získalo 266 mg (46 %) titulnej zlúčeniny.

¹H-NMR (400 MHz; CDCI₃): δ 7,92 (d, 3H); 7,66 (dd, 2H); 7,5-7,2 (m, 11 H); 5,25 (s, 3H); 4,85 (dd, 1H); 4,52 (m, 2H); 2,83 (t, 2H); 2,33 (m, 1H); 2,12 (m, 1H)

LC-MS (m/z) 575 (M + 1)⁺ (ii) 9-Hydroxyfluoren-9-yl-C(O)-Aze-Pab x HOAc

Pd/C (5 %; 100 mg) a HOAc (9 pL) sa pridali do zmesi 9-hydroxyfluoren-9-ylC(O)-Aze-Pab(Z) (70 mg; 0,12 mmol; z vyššie uvedeného kroku (i)) v EtOH (10 ml). Zmes sa hydrogenovala pri teplote a tlaku prostredia 6 hodín. Zmes sa prefiltrovala cez celit, nakoncentrovala a rozpustila vo vode, po čom sa vodný roztok vymrazil. Výťažok 53 mg (88 %).

¹H-NMR (400 MHz; D₂O): δ 7,9-7,65 (m, 4H); 7,60-7,35 (m, 8H); 4,51 (s, 1H); 4,05 (m, 2H); 3,25 (t, 1H); 2,49 (m, 0,5H, rotamér); 2,28 (m, 0,5H, rotamér); 1,98-1,84 (m, 7H; z toho:-1,95, s, 3H) ¹³C-NMR (100 MHz; D₂O): (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 173,4; 173,0; 172,6; 167,0

FAB-MS (m/z) 441 (M + 1)*

Príklad 39

Titulné zlúčeniny z príkladov 1 až 12, 19 až 28, 37 a 38 (ktoré sú všetky zlúčeninami vzorca I) sa testovali vo vyššie uvedenom teste A a pri všetkých sa zistilo, že vykazujú hodnotu IC50TT nižšiu ako 0,3 μΜ.

Príklad 40

Titulné zlúčeniny z príkladov 13 až 18 a 29 až 36 (ktoré sú všetky zlúčeninami vzorca la) sa testovali vo vyššie uvedenom teste A a pri všetkých sa zistilo, že vykazujú hodnotu IC50TT vyššiu ako 1 μΜ.

Príklad 41

Titulné zlúčeniny príkladov 13 až 18 a 29 až 36 (ktoré sú všetky zlúčeninami vzorca la) sa testovali vo vyššie uvedenom teste E a o všetkých sa zistilo, že vykazujú orálnu a/alebo parenterálnu biologickú dostupnosť u potkanov ako príslušný aktívny inhibítor vzorca I.

Skratky

Ac = acyl

AcOH - kyselina octová

Aze = azetidín-2-karboxylát

AzeOH = kyselina azetidín-2-karboxylová

DCC = dicyklohexylkarbodiimid

DIPEA = diizopropyletylamín

DMAP = Ν,Ν-dimetylaminopyridín

DMF = dimetylformamid

DMSO s dimetylsulfoxid

EDC = 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid hydrochlorid

Et = etyl

Et₂O = dietyléter

EtOAc = etylacetát

EtOH = etanol h = hodiny

HATU = O-íazabenzotriazol-l-ylJ-N.N.N'.N'-tetrametylurónium hexafluórfosfát HBTU = [N.N.N'.N'-tetrametyl-O-íbenzotriazol-l-yIJurónium hexafluórfosfát] HCI(g) = plynný chlorovodík

HOAc = kyselina octová

LC = kvapalinová chromatografia

Me = metyl

MeOH = metanol

Pab-H = para-amidinobenzylamino

H-Pab-H = pa/a-amidinobenzylamín

QF = tetrabutylamóniumfluorid (Bu₄NF)

RPLC = vysokovýkonná kvapalinová chromatografia na reverznej fáze TBTU = [N,N,N',N'-tetrametyl-O-(benzotriazol-1-yl)urónium tetrafluórborát] TEA = trietylamín

Teoc = 2-(trimetylsilyl)etoxykarbonyl

THF = tetrahydrofurán

TLC = tenkovrstvová chromatografia

Val = L-valín

Z = benzyloxykarbonyl

Predpony n, sjat majú svoj zvyčajný význam: normál, izo, sekundárny a terciárny.

PV 1610-88

Claims (24)

1. Zlúčenina vzorca I

O^z N—(CH₂)_n—B Ŕy kde

R¹ predstavuje H, alkyl (voliteľne substituovaný jedným alebo viacerými substituentmi vybranými spomedzi nasledujúcich: kyano, halogén, OH, C(O)OR^1a alebo C(O)N(R^1b)R^1c) alebo OR^1d;

R^1d predstavuje H, C(O)R¹¹, SiR¹²R¹³R¹⁴ alebo Ci-6 alkyl, pričom táto posledná skupina je voliteľne substituovaná alebo ukončená jedným alebo viacerými substituentmi vybranými spomedzi OR¹⁵ alebo (CH2)qR¹⁶;

R¹², R¹³ a R¹⁴ nezávisle predstavujú H, fenyl alebo Ci_6 alkyl;

R¹⁶ predstavuje Ο_μ4 alkyl, fenyl, OH, C(O)OR¹⁷ alebo C(O)N(H)R¹⁸;

R¹⁸ predstavuje H, alkyl alebo CH2C(O)OR¹⁹;

R¹⁵ a R¹⁷ nezávisle predstavujú H, Ci.₆ alkyl alebo Ci.₃ alkylfenyl;

R^1a, R^1b, R^1c, R¹¹ a R¹⁹ nezávisle predstavujú H alebo Ci-₄ alkyl; a q predstavuje 0,1 alebo 2;

R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla, llb alebo llc, kde prerušované čiary nezávisle predstavujú voliteľné dvojité väzby;

A a B nezávisle predstavujú O alebo S, CH alebo CH₂ (ako sa hodí), alebo N alebo N(R²¹) (ako sa hodí);

D predstavuje -CH₂-, O, S, N(R²²), -(CH2)2-, -CH=CH-, -CH2N(R²²)-, -N(R²²)CH2-, -CH=N-, -N=CH-, -CH₂O-, -OCH₂-, -CH₂S- alebo -SCH₂-;

Xi predstavuje C_M alkylén; C₂.₃ alkylén prerušený Z; -C(O)-Z-A¹; -Z-C(O)-A¹-; -CH2-C(O)-A¹; -Z-C(O)-Z-A²-; -CH2-Z-C(O)-A²-; -Z-CH₂-C(O)-A²-;

-Z-CH₂-S(O)_m-A²-; -CH₂-Z-S(O)_m-A²-; -C(O)-A³; -Z-A³-; alebo -A³-Z-;

X₂ predstavuje C₂.₃ alkylén, -C(O)-A⁴- alebo -A⁴-C(O)-;

X₃ predstavuje CH alebo N;

X₄ predstavuje jednoduchú väzbu, O, S, C(O), N(R²³), -CH(R²³)-, -CH(R²³)-CH(R²⁴)- alebo -C(R²³)=C(R²⁴)-;

A¹ predstavuje jednoduchú väzbu alebo Ci.₂ alkylén;

A² predstavuje jednoduchú väzbu alebo -CH₂-;

A³ predstavuje Ci.₃ alkylén;

A⁴ predstavuje C(O) alebo Ci.₂ alkylén;

Z pri každom výskyte predstavuje O, S(O)_m alebo N(R²⁵);

m pri každom výskýte predstavuje 0,1 alebo 2;

R² a R⁴ nezávisle predstavujú jeden alebo viacero voliteľných substituentov vybraných spomedzi nasledujúcich: C^ alkyl (pričom táto posledná skupina je voliteľne substituovaná jedným alebo viacerými halogénovými substituentmi), C1-4 alkoxy, metyléndioxy, halogén, hydroxy, kyano, nitro, SO₂NH₂, C(O)OR²⁶ alebo N(R²⁷)R²⁸);

R³ predstavuje voliteľný substituent vybraný spomedzi OH alebo C1.4 alkoxy;

R²¹, R²², R²³,.R²⁴, R²⁵, R²⁶, R²⁷ a R²⁸ nezávisle predstavuje H alebo Cm alkyl;

Y predstavuje CH_2i (CH₂)_2l CH=CH, (CH₂)₃, CH₂CH=CH alebo CH=CHCH_2i pričom posledné tri skupiny sú voliteľne substituované nasledujúcimi: alkyl, metylén, oxo alebo hydroxy;

R^y predstavuje H alebo Cm alkyl;

n predstavuje 0,1, 2, 3 alebo 4; a »· B predstavuje štruktúrny fragment vzorca Hla alebo Hlc kde

X⁵, X⁶, X⁷ a X⁸ nezávisle predstavujú CH, N alebo N-O;

R³¹ predstavuje voliteľný substituent vybraný spomedzi halogénu a Cm alkylu; alebo jej farmaceutický prijateľná soľ;

za predpokladu, že:

(a) A a B súčasne nepredstavujú O alebo S;

(b) B a D súčasne nepredstavujú O alebo S;

(c) keď R¹ predstavuje OR^1d a X1 prestavuje -C(O)-Z-A¹, -Z-CH2-S(O)m-A²-, -CH2-Z-S(O)_m-A²- alebo -Z-C(O)-Z-A², potom A¹ alebo A² (ako sa hodí) nepredstavujú jednoduchú väzbu; a (d) keď X₄ predstavuje -CH(R²³)-, R¹ nepredstavuje OH.

2. Zlúčenina vzorca I podľa nároku 1, kde R¹ predstavuje OH alebo Ομ₄ alkyl (pričom táto posledná skupina je voliteľne substituovaná kyano alebo OH skupinou).

3. Zlúčenina vzorca I podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla.

4. Zlúčenina vzorca I podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde keď Rx predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla, prerušované čiary predstavujú väzby, A a B súčasne predstavujú CH a D predstavuje -CH=CH-.

5. Zlúčenina vzorca I podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde keď Rx predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla, X predstavuje C₂- alebo C₃alkylén, -O(CH₂)- alebo -O(CH₂)₂-.

6. Zlúčenina vzorca I podľa nároku 5, kde Xi predstavuje C₃-alkylén alebo O(CH₂)₂-.

7. Zlúčenina podľa nároku I podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde Y predstavuje CH_2i (CH₂)₂ alebo (CH₂)₃.

8. Zlúčenina vzorca l podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde keď B predstavuje štruktúrny fragment vzorca llla, X⁵, X⁶, X⁷ a X⁸ súčasne predstavujú CH.

9. Zlúčenina vzorca I podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde keď R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla a R² predstavuje aspoň jeden substituent, bod substitúcie je na atóme uhlíka, ktorý je v polohe B.

10. Zlúčenina vzorca I podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde keď R_x predstavuje štruktúrny fragment vzorca lla, prerušované čiary predstavujú väzby, A a B spolu predstavujú CH, D predstavuje -CH=CH- a R² predstavuje aspoň jeden substituent, kruh je substituovaný buď na atóme uhlíka v skupine -CH=CH- (poloha D), ktorá susedí s pripojením kruhu, alebo na atóme uhlíka, ktorý je v polohe B, alebo na oboch týchto miestach.

11. Zlúčenina vzorca l podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde fragment je v konfigurácii S.

12. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje zlúčeninu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 11 alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ v zmesi s farmaceutický prijateľným adjuvans, riedidlom alebo nosičom.

13. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 11, alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, na použitie ako farmaceutikum.

14. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 11 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ na použitie na liečenie stavu, kde je potrebná inhibícia trombínu.

15. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 11 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ na použitie na liečenie trombózy.

16. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 11, alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, na použitie ako antikoagulancium.

17. Použitie zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 11 alebo jej farmaceutický prijateľnej soli ako účinnej zložky na výrobu liečiva na liečenie stavu, kde je potrebná inhibícia trombínu.

18. Použitie podľa nároku 17 , kde stavom je trombóza.

19. Použitie zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 11 alebo jej farmaceutický prijateľnej soli ako účinnej zložky na výrobu antikoagulancia.

20. Spôsob liečenia stavu, pri ktorom je potrebná inhibícia trombínu, vyznačujúci sa tým, že obsahuje podanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny s významom podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 11 alebo jej farmaceutický prijateľnej soli osobe trpiacej alebo vnímavej na taký stav.

21. Spôsob podľa nároku 20, vyznačujúci sa tým, že stavom je trombóza.

22. Spôsob podľa nároku 20, vyznačujúci sa tým, že stavom je hyperkoagulácia v krvi a tkanivách.

23. Postup na prípravu zlúčenín vzorca I, vyznačujúci sa tým, že obsahuje (a) reakciu spájania obsahujúcu:

(i) spojenie zlúčeniny vzorca IV,

O

IV kde R¹ a R_x majú význam podľa nároku 1, so zlúčeninou vzorca V,

O^z N—(CH₂)_n—B Ŕy kde R^y, Y, n a B majú význam podľa nároku 1; alebo (ii) spojenie zlúčeniny vzorca VI,

O

O OH

VI kde R¹, R_x a Y majú význam podľa nároku 1, so zlúčeninou vzorca VII,

H(R^y)N-(CH₂)_n-B VII kde R^y, n a B majú význam podľa nároku 1;

(b) odstránenie chrániacej skupiny zo zlúčeniny vzorca la s významom podľa nároku 24.

- 24. Zlúčenina vzorca la

O^/xN-(CH₂)_n-Bl

Ŕy la kde B¹ predstavuje štruktúrny fragment vzorca IIld alebo IIIf kde D¹ a D² nezávisle predstavujú H, OH, OR^a, OC(O)R^b, OC(0)OR^c, C(O)OR^d, C(O)R^e; kde

R^a predstavuje fenyl, benzyl, C1-7 alkyl (pričom táto posledná skupina je voliteľne prerušená kyslíkom alebo je voliteľne substituovaná halogénom) alebo -C(R^f)(R⁹)-OC(O)R^h;

R^b predstavuje Cm? alkyl (pričom táto posledná skupina je voliteľne substituovaná alkoxy, Ci.₆ acyloxy, amino alebo halogénom); Cve alkoxy, C3.7 cykloalkyl, fenyl, naftyl alebo C1.3 alkylfenyl (pričom posledných päť skupín je voliteľne substituovaných C1-6 alkyl alebo halogénom); alebo [C(R')(R^,)]mOC(O)R^k;

R^c predstavuje CW7 alkyl, fenyl, 2-naftyl (pričom posledné tri skupiny sú voliteľne substituované Ci.6 alkylom, Si(R^aa)(R^ab)(R^ac) alebo halogénom), -[C(R^m)(Rⁿ)]„OC(O)R^p alebo -CH2-Ar¹;

R^d predstavuje 2-naftyl, fenyl, C1.3 alkylfenyl (pričom posledné tri skupiny sú voliteľne substituované Cv6 alkylom, C^e alkoxylom, nitro, Si(R^ba)(R^bb)(R^bc) alebo halogénom), Cm2 alkylom (pričom posledná skupina je voliteľne substituovaná Cv6 alkoxylom, acyloxylom alebo halogénom), [C(R^q)(R^r)]_pOC(O)R^s alebo -CHz-Ar²;

R^e predstavuje fenyl, benzyl, C1-6 alkyl (pričom posledná skupina je voliteľne prerušená kyslíkom) alebo -[C(R^l)(R^u)]_rOC(O)R^v;

R^aa, R^ab, R^ac, R^ba, R^bb a R^bc nezávisle predstavujú C^e alkyl alebo fenyl;

R^f, R⁹, R¹, R^J, R^m, Rⁿ, R^q, R^r, R¹ a R^u nezávisle predstavujú H alebo Ον₆ alkyl;

R^h, R^k, R^p, R^s a R^v nezávisle predstavujú C1.17 alkyl (pričom táto druhá skupina je voliteľne substituovaná Ci.₆ alkoxy, Ci-6 acyloxy alebo halogénom); Cve alkoxy, C3-7 cykloalkyl, fenyl, naftyl alebo alkylfenyl (pričom posledných päť skupín je voliteľne substituovaných Ci-β alkyl alebo halogénom);

Ar¹ a Ar² nezávisle predstavujú štruktúrny fragment mar nezávisle predstavujú 3 alebo 4;

n a p nezávisle predstavujú 1, 2 alebo 3; a

R¹, R_x, Y, R^y, n, X⁵, X⁶, X⁷, X⁸ a R³¹ majú vyššie uvedený význam;

alebo jej farmaceutický prijateľná soľ;

za predpokladu, že D¹ a D² súčasne nepredstavujú H.

25. Zlúčenina vzorca la podľa nároku 24, kde D¹ predstavuje H a D² predstavuje OH, OCH₃, OC(O)R^b alebo C(O)OR^d, kde R^b a R^d majú význam podľa nároku

24.