NO301168B1 - Fremgangsmåte for fremstilling av et konjugat av et antistoff rettet mot antigen - Google Patents

Fremgangsmåte for fremstilling av et konjugat av et antistoff rettet mot antigen Download PDF

Info

Publication number
NO301168B1
NO301168B1 NO901986A NO901986A NO301168B1 NO 301168 B1 NO301168 B1 NO 301168B1 NO 901986 A NO901986 A NO 901986A NO 901986 A NO901986 A NO 901986A NO 301168 B1 NO301168 B1 NO 301168B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
tnf
cells
antibody
antigen
tumor
Prior art date
Application number
NO901986A
Other languages
English (en)
Other versions
NO901986D0 (no
NO901986L (no
Inventor
Michael G Rosenblum
Clyde William Wellen
Original Assignee
Res Dev Foundation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Res Dev Foundation filed Critical Res Dev Foundation
Publication of NO901986D0 publication Critical patent/NO901986D0/no
Publication of NO901986L publication Critical patent/NO901986L/no
Publication of NO301168B1 publication Critical patent/NO301168B1/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører fremgangsmåte for fremstilling av et konjugat av et antistoff rettet mot ZME-018 celleoverflate assosiert melanoma antigen eller mot 15Å8 brystcancerantigen.
Biologisk respons-modifiserende midler utøver forskjellige virkninger på et antall celletyper. Pattedyrceller utgjør en konstellasjon av lymfokiner og cytokiner for å opprettholde homeostasen på det cellulære nivået. I tillegg kan pattedyrceller i respons til forskjellige stimuli produsere og utskille en vert av proteinprodukter. Ved fysiologiske eller i farmakologiske konsentrasjoner kan biologisk respons-modif iserende midler så som I FN-a, IFN-B, IFN--Y, IL-1 - IL-7, TNF-a og TNF-P alle ha potente cytotoksiske virkninger. Tumor Necrosis Faktor (TNF) er en av et antall biologisk respons-modif iserende midler som har en mengde effekter. Betegnelsen TNF ble utledet fra den opprinnelige observasjonen som viste at TNF forårsaket nekrose av Meth A murin sarkom. Anti-tumor virkningene av TNF er blitt demonstrert i et antall tumorceller i dyr og mennesker in vitro og in vivo. Rekombinant humant TNF er blitt vist å forårsake tumor-nekrose av sarkom, adenocarcinomer og melanomer. TNF har divergente virkninger på cellevekst som forårsaker antivekst-virkninger på noen cellelinjer, ingen effekt (dvs. mindre enn 5% cytostase eller cytotoksisitet) på andre linjer og vekstøkning av andre celler. TNF kan også øke ben-resorpsjon og forsterke pro-koaguleringsmiddel-aktiviteten til endotel-celler. Mekanismene) til disse pleotrofiske effektene er ikke fullstendig klarlagt. IL-1 som er et annet biologisk respons-modif iserende middel har noen felles biologiske egenskaper med TNF, men IL-1 har mange egenskaper som er forskjellige fra de til TNF.
For at et biologisk respons-modifiserende middel utøver en effekt på en celle må det biologiske respons-modifiserende middelet først nå målcellen i en konsentrasjon som er tilstrekkelig for å forårsake den ønskede virkningen.
Ved oppdagelsen av biologisk respons-modifiserende midler og bestemming av mangfoldet av virkninger forårsaket av disse ble det dannet store forventninger om at en helbredning for vanskelig for å behandle sykdommer så som cancer var truende. Dette har derimot ikke vist seg å være tilfelle. En hindring kan være manglende evne til å tilføre en tilstrekkelig mengde av det biologiske respons-modifiserende middelet til målvevet eller celle for å utøve dets virkning. Når medikamenter eller andre cytoaktive midler blir administrert til et individ blir mange, om ikke alle, fortynnet i vertskroppen og blir til en viss grad metabolisert av vertsvevene. I mange tilfeller må de cytoaktive midlene derfor bli administrert i mye høyere mengder enn det som er nødvendig for å oppnå de ønskede effektene for å ta fortynning, absorpsjon og metabolisme av ikke-mål vev i betraktning.
Cancer er en av de fremste årsakene til dødelighet og sykelighet i den vestlige verden. Det eksisterer mange forskjellige cancertyper og hver av disse har egne karakter-trekk. Cancerformene har derimot minst et felles karakter-trekk på grunn av at de forårsaker defekter i den cellulære vekstregulerende prosessen. Brystcancer og cervical-cancer er to av de fremste årsakene til død fra ondartethet i kvinner i den vestlige verden. Melanom er en meget metastatisk sykdom som påvirker begge kjønn og er nesten fullstendig fatal i løpet av fem års diagnostikk. Kirurgisk fjerning av lokali-serte ondartetheter har vist seg å være effektiv bare når sykdommen ikke er blitt spredt utover den primære lesjonen. Når sykdommmen først er blitt spredd må de kirurgiske prosedyrene bli supplementert med andre mer generelle prosedyrer for å fjerne skadede eller ondartede celler. De fleste av de vanligvis anvendte alternative terapeutiske modalitetene så som bestrålning eller kjemoterapi virker ikke bare på tumorcellene og påvirker også vanligvis normale celler til en viss grad til tross for at de har en propor-sjonalt større ødeleggende virkning på ondartede celler. Mange tumorer eller cancerceller uttrykker membran-bundne eller cytoplasmiske antigener eller antigene determinanter som enten blir uttrykt meget svakt eller ikke i det hele tatt av normale celler. Noen tumorceller uttrykker antigener som også finnes i eller på embryoniske celletyper, men som ikke blir uttrykt av normale celler til et modent dyr. Disse unormalt uttrykte antigenene er kjent som tumor-assosierte antigener (TAA). TAA er spesifikk i det at et bestemt antigen kan bli uttrykt av mer enn en tumor og det blir vanligvis uttrykt av alle eller de fleste cellene til de bestemte tumorene som uttrykker det. En tumorcelle kan uttrykke en eller flere TAA. Disse tumor-assosierte antigenene kan bli uttrykt på overflaten av cellen (celleoverflate-antigen), kan bli utskilt av tumorcellen (utskilte antigener) eller kan forbli inne i cellen (intracellulært antigen). Membran-bundne eller celle-overflate antigener antas å spille en viktig rolle i interaksjonen mellom tumorceller og immunsystemet til verten, og cytoplasma antigener er også nyttige for regi-strering av neoplasia på grunn av at disse antigene ofte blir utskilt i store mengder av tumorcellene.
Tilstedeværelsen av disse tumor-assosierte antigenene er blitt anvendt for å påvise, diagnostisere og lokalisere tumorer i dyr og mennesker. I noen tilfeller har tilstedeværelsen av tumor-assosierte antigener muliggjort målrettet føring av spesifikke medikamenter og behandlingsmetoder spesifikke for tumorcellene.
Antistoffer er proteiner som normalt blir produsert av immunsystemet til et dyr i respons til fremmede antigener eller antigene determinanter. Antistoffer bindes til det spesifikke antigenet som de er rettet mot. Monoklonale antistoffer (MoAbs) rettet mot spesifikke antigener eller antigene determinanter kan bli dannet i store mengder. Monoklonale antistoff mot tumor-assosierte antigener eksisterer i tumorer etter systemisk administrasjon til pasienter med cancer. Denne sterke egenskapen er blitt anvendt for å føre medikamenter, toksiner eller radioisotoper direkte til tumorer.
En fremgangsmåte for målrettet føring av kjemoterapeutiske midler til tumorceller og å minske deres virkninger på normale celler har blitt gjort mulig på grunn av utviklingen av antistoffer og, mer foretrukket, MoAbs rettet mot antigener på tumorceller som ikke oppstår på normale celler.
Antistoffer, koblet til medikamenter, har vært anvendt som et leveringssystem hvorved medikamentet blir målrettet ført til en spesifikk tumorcelle-type som antistoffet er rettet mot. Antistoff kan også bli koblet til toksiner og dermed virke som et leveringssystem for å målrettet føre toksinene direkte til spesifikke tumorceller. En spesiell fordel ved anvendelse av et antistoff koblet til et medikament eller toksin som et leveringssystem for å føre medikamentet eller toksinet til den spesifikke tumoren er muligheten av å konsentrere medikamentet eller forbindelsen ved det ønskede stedet. Uten et spesifikt målrettet leveringssystem vil forbindelsen administrert til et individ bli dispergert i hele vertskroppen og konsentrasjonen som når det ønskede målsetet vil derfor være meget fortynnet. Anvendelse av et antistoff målrettet føringssystem vil forårsake at den administrerte forbindelsen koblet eller konjugert til antistoffet blir bundet til, eller bragt i nærhet av, cellene ved det målsøkte stedet. På grunn av at antistoffet konjugert til den administrerte forbindelsen bindes til målcellene i en høyere hastighet enn til andre (dvs. normale celler), blir forbindelsen konsentrert til målstedet.
Binding av cytotoksiske midler til antistoffer for å lage "immuntoksiner" er blitt rapportert. Immuntoksiner av monoklonale antistoffer konjugert til enzymatisk aktive deler (A-kjeder) av toksiner med bakteriell eller planteopprinnelse så som Ricin eller Abrin har vært av spesielle interesse. Nevelle og York, Immunol Rev. (1982) 62:75-91; Ross et al., European J. Biochem. (1980) 104; Vitteta et al., Immunol. Rev. (1982) 62:158-183; Ross et al., Cancer Res. (1982) 42:457-464; Trowbridge og Domingo Nature (Cond.) (1981) 294: 171-173. Immuntoksiner er blitt fremstilt ved konjugering av MoAbs med toksiner eller fragmenter av toksiner avledet fra planter. Gelonin og ricin er blant de mest aktive plate-avledede toksinene for hemming av proteinsyntesen.
Konjugering av gelonin til antistoffer er blitt beskrevet i inngitt US Patentsøknad Serienr. 216.595 og anvendelse av gelonin-konjugerte immuntoksiner er blitt rapport for behandling av flere cancertyper.
Til tross for at antistoffer er blitt anvendt som leverings-systemer for toksiske deler av plantetoksiner og andre cytotoksiske medikamenter, konjugasjon av antistoffer til biologisk respons-modifiserende midler så som tumor-nekrose faktor og anvendelse av slike konjugater som spesifikt leveringssystem til målvev eller celler har ikke før vært mulig.
Foreliggende oppfinnelse vedrører følgelig en fremgangsmåte for fremstilling av et konjugat av et antistoff
rettet mot ZME-018 celleoverflate assosiert melanom antigen eller mot 15A8 brystcancer antigen og biologisk respons-modif iserende TNF-alfa eller TNF-beta, kjennetegnet ved at den omfatter trinnene av kjemisk eller genetisk fusjonering av nevnte antistoff til nevnte TNF.
På grunn av at normale celler, samt tumorceller, har overflate-reseptorer for biologisk respons-modifiserende midler så som TNF, forsterker leveringssystemet for TNF til spesifikke måltumor-celler effektiviteten av behandlingen med TNF. I tillegg er et leveringssystem som selektivt leverer biologisk respons-modifiserende midler til celler hvor de har en ikke-cytotoksisk virkning også tilveiebragt.
Som en konsekvens av konsentrasjonen av forbindelsen ved det målsøkte setet kan dosen av antistoff-konjugert forbindelse som må bli administrert for å oppnå en biologisk respons, celle-dreping, vekstfremmende eller enzym-induksjon være flere størrelsesordener lavere enn det som er nødvendig når ukonjugert forbindelse blir administrert.
En annen fordel ved anvendelse av et antistoff-konjugert leveringssystem for kjemiske eller biologiske forbindelser er forlengingen av forbindelsen i vertssystemet forårsaket av en redusert metabolisme og/eller saktere eliminerings-hastighet av den konjugerte forbindelsen i verten. På grunn av at vertens utsetting for en cytoaktiv forbindelse er forlenget forårsaket av redusert hastighet av metabolisme og/eller eliminasjon, kan lavere doser cytoaktiv forbindelse bli administrert med oppnåelse av samme størrelse på biologiske effekter tidligere bare tilveiebragt med høyere doser. Mekanismene ved metabolisme og eliminering av bioaktive forbindelser er generelt forbindelses-spesifikke og er sjelden helt klarlagte. Hastighet av metabolisme og/eller eliminasjon av nesten alle, eller alle, bioaktive forbindelser er saktere når den bioaktive forbindelsen er koblet til et antistoff.
Den cytotoksisk sammensetningen kan selektivt bindes til og drepe tumorceller. Disse måltumor-cellene kan være av en hvilken som helst tumor som har eller produserer en antigen-markør i mengder som er større enn det som finnes i eller på normale celler. På grunn av at den antigene markøren eller TAA fortrinnsvis er et celleoverf late-antigen kan de også anvendes på tumorceller som produserer et intracellulært antigen i mengder som er større enn det som normalt blir produsert av normale celler. Det er kjent at mange tumorer produserer intracellulære antigener og enten utskiller disse eller frigjør disse antigenene når tumoren blir nekrotisk. Immunkonjugatet fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse er også lokalisert til tumorseter hvori disse intracellulære antigenene oppstår i en høyere konsentrasjon enn i normalt vev.
Det er lett å forstå at immunkonjugatet fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli anvendt for målrettet levering, ikke bare av cytotoksisk biologisk respons-modif iserende midler til valgte målceller, men også selektivt levere en hvilken som helst biologisk effektor til et valgt målsete dersom nevnte målsete inneholder en antigen-markør i en konsentrasjon som er over den som finnes ved andre ikke-målseter.
Humane brystcancer-celler, cervical carcinom-celler, melanom-celler eller andre tumorceller som uttrykker tumor-assosiert antigen kan drepes ved kontakting av cellene med en cytosidal effektiv mengde av immuntoksin-sammensetningen.
Immunkonjugatet fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse kan anvendes for å levere et cytotoksisk immunkonjugat til bryst-tumorceller som uttrykker 15A8 antigenet (antigenet gjenkjent av de monoklonale antistoffene beskrevet og patentkrevet i US Pat. Appln. Ser. nr. 29.373 inngitt 23. mars 1987).
Immunkonjugatet kan bindes til og er cytotoksisk eller cytostatisk overfor melanom-tumorceller. Melanom-celler uttrykker også flere TAA. Wilson et al., 1981 Int. J. Cancer 28:293 har beskrevet to slike malanom-antigener og monoklonale antistoffer laget mot disse. Et av antistoffene (225.28S) diskutert av Wilson gjenkjenner et melanom-menbran antigen. Dette antigenet er identifisert heri med betegnelsen ZME-018.
Immunkonjugatet kan bindes til og er cytotoksisk eller cytostatisk for celler som uttrykker ZME-018 antigenet eller en funksjonell ekvivalent derav. Det kan også omfatte et antistoff som gjenkjenner et cytoplasmisk antigen inkludert, men ikke begrenset til, 465.12 antistoffet til Wilson som reagerer med et melanom-cytoplasmisk antigen.
Proliferative cellesykdommer så som bl.a. cancer, kan behandles ved administrasjon av en cytosidal effektiv dose av et immunkonjugat omfattende et antistoff eller antistoff-del rettet mot et TAA på målcellen konjugert med et biologisk respons-modifiserende middel eller cytoaktiv del derav til et individ som trenger slik behandling.
Forhindring av gjenoppståelsen av tumorer kan oppnås ved administrering av TNF-konjugert til et TAA monoklonalt antistoff til et individ som trenger nevnte behandling.
Gjenoppståelse av tumor-assosierte antigen-bærende tumorer kan forhindres ved administrasjon av cytocidale immunkonjugater omfattende et biologisk respons-modifiserende middel og et antistoff til et individ som trenger slik behandling. Antistoffet er fortrinnsvis et monoklonalt antistoff og det biologiske respons-modifiserende middelet er
TNF.
Figur 1 viser en S-300 gelpermeasjons-kromatograf av ZME—TNF reaksjonsblandingen. Figur 2 demonstrerer den kromatografiske profilen av sammenslåtte fraksjoner fra S-300 kromatografi etter affinitets-kromatografi . Figur 3 demonstrerer sammenligning av binding av ZME-018-TNF konjugatet og fritt TNF til mål-antigen positive A-375 celler og antigen-negative T-24 celler. Figur 4 demonstrerer cytotoksisiteten til ZME-TNF immunkonjugatet og TNF alene på antigen-positive humane melanom-celler (AAB-527). Figur 5 demonstrerer veksthemmingen av ZME-TNF immunkonjugatet på antigen-positive A-375 celler. Figur 6 demonstrerer veksthemmingen av MoAbl5A8-TNF immunkonjugatet på antigen-positive ME-180 celler.
De immunkjemiske derivatene fremstilt ifølge denne oppfinnelsen omfatter konjugater av et antistoff rettet mot et tumor-assosiert antigen og et biologisk respons-modifiserende middel.
Biologiske respons-modifiserende midler som kan bli koblet til antistoffet rettet mot et tumor-assosiert antigen og anvendt i foreliggende oppfinnelse omfatter, men er ikke begrenset til, lymfokiner og cytokiner så som TNF (alfa eller beta), RIF[ ], IL-2, interferoner (a, p eller t ) og IL-6. Disse biologiske respons-modifiserende midlene har forskjellige virkninger på tumorceller. Disse omfatter økt tumorcelle-dreping ved direkte virkning samt øket tumorcelle-dreping ved økte vertsforsvar-medierte prosesser. Konjugasjon av antistoff rettet mot et tumorassosiert antigen til disse biologiske respons-modifiserende midlene vil muliggjøre selektiv lokalisasjon i tumorer og, derfor, forbedrede anti-proliferative virkninger med undertrykking av ikke-spesifIkke virkninger førende til toksisitet av ikke-målceller.
Spesifikk antistoff-levering av cytotoksiner til tumorer vil tilveiebringe beskyttelse av følsomme seter så som lever, nyrer og benmarg fra den ødeleggende virkningen av naturlig forekommende toksiske midler. Anvendelse av antistoffer konjugert til biologiske respons-modifiserende midler som et leveringssystem muliggjør lavere dosering av selve medikamentet på grunn av at alle toksiske delene er konjugert til antistoffene som er konsentrert i tumoren eller annet målsete.
Konjugater av det monoklonale antistoffet kan bli dannet ved anvendelse av forskjellige bifunksjonelle protein-koblende midler. Eksempler på slike reagenser er SPDP, IT, bifunksjonelle derivater av imidoestere så som dimetyl-adipi-midat.HCl, aktive estere så som disuccinimidyl-suberat, aldehyder så som glutaraldehyd, bis-azido-forbindelser så som bis(p-azidobenzoyl) heksandiamin, bis-diazonium-derivater så som bis-(p-diazoniumbenzoyl)-etylendiamin, diisocyanater så som tolylen 2,6-diisocyanat, og bis-aktive fluor-forbindelser så som 1,5-difluor-2,4-dinitrobenzen.
Antistoffer anvendt i immunkonjugatet er fortrinnsvis monoklonale antistoffer, og fortrinnsvis monoklonale antistoffer rettet mot spesifikke patologiske tilstander, inkludert, men ikke begrenset til, cancerformer så som bryst, cervix, melanom osv. Antistoffene anvendt i foreliggende oppfinnelse kan også være rettet mot ikke-cellulære antigener uten opprinnelse i verten så som virus eller virale kappe-antigener. Immunkonjugatet fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse når det omfattes av slike ikke-verts antigener tilveiebringer en selektiv leveringsbeholder for levering av cytotoksiske eller cytostatiske biologiske respons-modifiserende midler til patogent infiserte vertsceller.
Betegnelsen "monoklonalt antistoff" anvendt heri betyr en antistoff-sammensetning med en homogen antistoff-populasjon. Det er ikke hensikten å være begrenset med hensyn på kilden av antistoffet eller hvordan dette blir dannet.
Bryst-carcinomceller uttrykker for eksempel et 22/kD antigen på deres celleoverflate. Antistoff mot dette antigenet er blitt produsert. Hybridomer som utskiller spesifikke monoklonale antistoffer av IgGl, IgG2a og IgG2b isotyper som gjenkjenner en epitope av dette 22/kD antigenet er blitt produsert. Alle isotyper gjenkjenner samme epitopen av antigenet. For ytterligere eksempler for beskriving av denne oppfinnelsen blir denne epitopen betegnet 15A8 epitope. Alle disse antistoffene er dermed funksjonelt ekvivalente. Ved utførelse av denne oppfinnelsen gjenkjenner antistoffer som bindes til forskjellige antigeniske determinanter på samme antigen, dvs. gjenkjenner forskjellige epitoper er også funksjonelt ekvivalente.
Monoklonale antistoffer kan bli dannet ved kjente fremgangsmåter. Fremgangsmåten for tilveiebringing av hybridom-cellekulturer som blant annet produserer 15A8 MoAb er beskrevet i detalj i US Pat. Appln. Ser. nr. 29.373, inngitt 23. mars 1987, som er en CIP av US Pat. Appl. Ser. nr. 678.264, inngitt 5. desember 1984 og i Europeisk Appli-kasjons-publikasjon 0-184-369 (publisert 11. juni 1986). Pattedyr-tumorceller ble injisert inn i BALB/c mus intraperitonealt i tre uker i totalt tre til fire injeksjoner. Miltene ble høstet tre dager etter den siste injeksjonen og en miltcelle-suspensjon ble dannet og fusjonert med 107 PAI mezelom-celler. Hybrid-celler ble selektert på hypoksantin-aminopterin-tymidin (HAT) medium. Ytterligere detaljer angående preparering av hybridomene og karakterisering av disse monoklonale antistoffene er gitt i eksemplene nedenfor. Monoklonale antistoffer preparert mot et hvilket som helst TAA ved en hvilken som helst fremgangsmåte kjent innenfor fagområdet kan bli anvendt i immunkonjugatene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse.
Betegnelsen "tumor-assosiert antigen" omfatter et hvilket som helst antigen som blir funnet i vesentlig høyere konsentrasjoner i eller på tumorceller enn på normale celler. Til tross for at betegnelsen "tumor-assosiert antigen" normalt ikke omfatter virale eller andre ikke-vertscelle antigener, vil det heri være innlysende at immunkonjugatet ifølge foreliggende oppfinnelse også kan målrettet føre BMR til hvilke som helst celler som har en antigen-konsentrasjon betraktelig forskjellig fra normale celler. Denne oppfinnelsen kan derfor også anvendes for å levere biologiske respons-modifiserende midler til viralt infiserte celler, til celler hvori de biologiske respons-modifiserende midlene har en fordelaktig istedenfor en toksisk virkning og lignende og det er ikke nødvendig at målcellen er en tumorcelle. Det er bare nødvendig at målcellen har en spesifikk antigen-determinant som enten er kvalitativt eller kvantitativt forskjellig fra andre ikke-målceller.
Biologiske respons-modifiserende midler så som TNF kan bli tilveiebragt fra serum fra intakte dyr, kultursupernatanter av lymfeceller eller cellelinjer etter at dyrene eller cellene er blitt behandlet med en forbindelse kjent for å stimulere proliferasjonen av immunceller (en inducer) eller ved rekombinant teknologi. Det biologiske respons-modifiserende middelet kan bli tilveiebragt fra en hvilken som helst pattedyr-kilde så som f.eks. mus, kanin, rotte, primat, gris og menneske. Slike proteiner blir fortrinnsvis tilveiebragt fra en human kilde, og er fortrinnsvis rekombinante humane proteiner. Deretter blir serumet, supernatanten eller cella-pastaen høstet og analysert for biologisk aktivitet overfor en måltumor-cellelinje.
Betegnelsen "rekombiant protein" refererer til et protein med sammelignbar biologisk aktivitet i forhold til nativt protein preparert ved rekombinante DNA-teknikker kjent innenfor fagområdet.
Rekombinante DNA-teknikker er kjent innenfor fagområdet. Generelt blir genet kodende for et spesifikt protein som f.eks. interferon eller TNF kuttet ut "fra det native plasmidet og satt inn i en kloningsvektor som blir klonet og deretter inn i en ekspresjonsvektor som blir anvendt for å transformere en vertsorganisme, fortrinnsvis en mikro-organisme og mest foretrukket er E. coli. Vertsorganismen uttrykker det fremmede protein-genet under visse betingelser for å produsere det spesifikke proteinet, så som f.eks. TNF eller interferon. For anvendelse i foreliggende oppfinnelse må det biologiske respons-modifiserende middelet som blir produsert på en rekombinant måte ikke være identisk i struktur eller uttrykke identisk område av biologiske aktiviteter til det native proteinet, dersom det opprett-holder aktiviteten som ønskes levert til det målsøkte setet.
Biologisk aktivitet til biologisk respons-modifiserende middel og immunkonjugert biologisk respons-modifiserende middel kan bli målt ved hjelp av fremgangsmåter beskrevet innenfor fagområdet. Blant annet kan TNF cytotoksisk aktivitet bli målt ved anvendelse av et L-929 fibroblast celleanalyse-system som beskrevet i Eksempel 2 nedenfor.
Antistoff så som f.eks. 15A8G2 eller ZME-018 ble modifisert med SPDP som beskrevet i Eksempel 5 nedenfor og deretter konjugert med iminotiolan modifisert TNF som beskrevet i Eksemplene 3 og 6 nedenfor. TNF-konjugert antistoff ble renset ved kolonne-kromatografi på en Sephadex S-300 kolonne som beskrevet i Eksempel 7 nedenfor.
Toksisiteten til TNF-konjugert antistoff ble bestemt ved L-929 fibroblast-analyse og den anti-proliferative aktiviteten derav ble bestemt ved in vitro forsøk.
Immun-kjemikaliene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli anvendt for å drepe tumorceller in vitro samt in vivo. I kliniske situasjoner hvor benmargs-metastase har oppstått kan tumorceller bli fjernet fra benmargen ekstrakorporalt. Dette er ofte nødvendig når en. tumor er radio-sensitiv og total kroppsbestrålning er en nødvendig behandling. Dersom pasientens egen benmarg blir kvitt alle tumorcellene, kan den bli fjernet fra pasienten før bestrålning, tumorcellene kan bli fjernet ekstrakorporalt og returnert til pasienten for å erstatte benmargs-cellene ødelagt ved bestrålning. Når konjugatene blir anvendt for å drepe humane brystcancer-celler in vitro for eksempel vil de vanligvis bli tilsatt til cellekultur-mediet i en konsentrasjon på minst omrent 10 nM. Formulering og administrasjons-måten for in vitro anvendelse er ikke kritisk. Vandige formuleringer som er kompatible med kulturen eller perfu-sjonsmediet vil normalt bli anvendt. Cytotoksisiteten kan bli registrert ved konvensjonelle teknikker for å bestemme nærvær eller grad av brystcancer-celler som er gjenværende.
Administrasjon av immunkonjugatene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse til et individ som er blitt diagnosti-sert å ha en tumor med en spesifikk antigen-determinant vil muliggjøre målrettet føring og konsentrasjon av det cytotoksiske middelet på det stedet hvor det er nødvendig for å drepe tumorcellene. Ved slik målrettet føring ("targeting") vil de cytotoksiske midlene, ikke-spesifikk tosisitet overfor andre organer, vev og celler bli eliminert eller redusert.
Når immuntoksinene blir anvendt in vivo for terapi blir de administrert til pasienten i terapeutisk effektive mengder (dvs. mengder som eliminerer eller reduserer pasientens tumorbelastning). De blir vanligvis administrert parenteralt, enten intravenøst eller intraperitonealt. Dosen og dose-regimet vil avhenge av cancertypen (primær eller metastatisk) og populasjonen derav, karaktertrekkene til det bestemte immunkonjugatet, f.eks. terapeutisk indeks, pasient og pasientens historie. Mengden immuntoksin administrert er vanligvis i området på omtrent 0,1 til omtrent 10 mg/kg pasientvekt. For parenteral administrasjon vil immunkonjugatene bli formulert i en injiserbar form i enhets-dosering (oppløsning, suspensjon, emulsjon) sammen med en farmasøytisk akseptabel parenteral bærer. Slike bærere er opprinnelig ikke-toksiske og ikke-terapeutiske. Eksempler på slike bærere er vann, saltvann, Ringer's oppløsning, dekstrose-oppløsning og 5# humant serumalbumin. Ikke-vandige bærere så som fikserte oljer og etyloleat kan også bli anvendt. Liposomer kan også bli anvendt som bærere. Bæreren kan inneholde mindre mengder tilsetningsstoffer så som forbindelser som forsterker isotonisiteten og den kjemiske stabiliteten, f.eks. buffere og konserveringsmidler. Immunkonjugatet vil vanligvis bli formulert i slike bærere ved konsentrasjoner på omtrent 0,1 mg/ml til 10 mg/ml.
Immunkonjugatet fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse blir deretter formulert i et ikke-toksisk, inert, farma-søytisk akseptabelt bæremedium, fortrinnsvis ved en pH på omtrent 3 til 8, mer foretrukket er 6-8.
Doseringsnivået til immunkonjugatet vil avhenge av in vivo effektivitetsdata tilveiebragt etter preklinisk testing og vil avhenge hovedsakelig av det bestemte biologiske respons-modif iserende middelet anvendt og om det blir anvendt alene eller i kombinasjon med andre medikamenter eller biologiske respons-modifiserende midler.
Det farmasøytiske preparatet beskrevet ovenfor er egnet for parenteral administrasjon til mennesker eller andre pattedyr i terapeutisk effektive mengder (dvs. mengder som eliminerer eller reduserer pasientens patologiske tilstand) for å tilveiebringe terapi, idet terapitypen er avhengig av det spesifikke biologiske respons-modifiserende middelet konjugert til antistoff leveringssystemet.
Antistoff-konjugerte biologiske respons-modifiserende midler så som TNF kan bli administrert sammen med interferon, fortrinnsvis humant p-interferon (IFN-p). IFN-p refererer til immun-interferon med sammenlignbar biologisk aktivitet som nativt interferon. Interferonet blir fortrinnsvis preparert ved rekombinant teknologi.
Følgende eksempler tilveiebringer en detaljert beskrivelse av preparatet, karakterisering og anvendelse av immunkonjugatet fremstilt ifølge denne oppfinnelsen.
Eksempel 1
Rensing av TNF
TNF kan bli renset ved hjelp av teknikker kjent innenfor fagområdet. Aggarwal et al. beskriver for eksempel rensing av TNF fra forskjellige kilder inkludert flere cellelinjer med monocyttisk opprinnelse. Aggarwal (1986) Methods of Enzym-ology 116:448. er inkorporert heri som referanse.
Denne metoden kan også bli anvendt for å rense TNF fra andre kilder.
TNF blir fortrinnsvis tilveiebragt ved rekombinant teknologi kjent for fagfolk. Et slikt preparat er for eksempel beskrevet i detalj i US Patent nr. 4.677.063 og Europeisk Publikasjon EP 186.214. TNF-preparatet anvendt for å oppnå følgende data angitt i følgende eksempler ble tilveiebragt fra Genentech Corp., South San Francisco, California.
Humant rekombinant DNA avledet materiale ble renset til det var homogent fra ekstrakter av E. coli.
TNF migrerte som et enkelt bånd med en omtrentlig molekylvekt på 18.000 dalton.
Eksempel 2
Analyse av TNF cvtokslsk aktivtet
TNF cytotoksisk aktivitet ble registrert ved anvendelse av følgende analyse på L-929 celler. Førti tusen murine L-929 fibroblaster i MEM medium inneholdende 10% FCS ble satt til hver brønn av en 96 brønnplate og inkubert i 24 timer ved 37 "C (556 C02). Cellene ble deretter behandlet med forskjellige mengder av enten TNF eller TNF-antistoff konjugat i medium inneholdende 0,5 g/ml Actinomycin-D i 24 timer ved 37"C (55é C02). Cellene ble vasket med fosfatbufferet saltvann (pH 7,2) (PBS) og levedyktige celler ble farget med krystallfiolett. Skålene ble avlest ved 590 nm for å bestemme antall levedyktige celler.
TNF med en spesifikk aktivitet ikke under 1 x IO<7> U/mg ble anvendt for konjugasjon med antistoffene. En enhet TNF aktivitet er mengden av TNF-protein som forårsaker 5056 hemming av L-929 celleveksten.
Eksempel 3
Modifikasjon av TNF med imlnotiolan
TNF i fosfatbufferet saltvann ble konsentrert til omtrent 2 milligram/ml i en Centricon 10 mikrokonsentrator. Trietanol-amin-hydroklorid (TEA/HC1), pH 8,0 og EDTA ble tilsatt til en final konsentrasjon på 60 mM TEA/HC1 og 1 mM EDTA pH 8,0. 2—imlnotiolan stokk-oppløsning (20 mM) ble tilsatt til en final konsentrasjon på 1 mM og prøven ble inkubert i 90 minutter ved 4°C under en nitrogen gass-strøm.
Imlnotiolan (IT) i overskudd ble fjernet ved gelfiltrering på en Sephadex G-25 kolonne (1 x 24 cm) pre-ekvilibrert med 5 mM bis-tris/acetatbuffer, pH 5,8 inneholdende 50 mM NaCl og 1 mM EDTA. Fraksjoner ble analysert for proteininnhold i mikrotiter-skåler ved anvendelse av Bradford-fargebindingsanalyse. Førti mikroliter prøve, 100 pl fosfatbufferet saltvann (PBS) og 40 pl fargekonsentrat ble satt til hver brønn. Absorbans ved 600 nm ble avlest på en Dynatech Microelisa autoleser. TNF eluerer ved hulromsvolumet (omtrent fraksjonene 14-20). Disse fraksjonene ble slått sammen og konsentrert ved anvendelse av en Centricon-10 mikrokonsentrator.
Eksempel 4
Preparering og karakterisering av monoklonalt antistoff mot 15A8 brvstcancer- antigen og mot melanom- antigen ZME- 018 Disse monoklonale antistoffene kan bli fremstilt ved fremgangsmåter som er kjente for fagmannen. Prosedyren for tilveiebringing av hybridom-cellekulturer som produserer 15A8 antistoffene er beskrevet i detalj i US Pat. Søkn. Ser. nr. 29.373, inngitt 23. mars 1987, som er en CIP av US Pat. Søkn. Ser. nr. 678.264, inngitt 5. desember 1984 og i Europeisk Application Publication WO-184-369 (publisert 11. juni 1986). Brysttumor-celler (Soule, et al., JNCI, 51:1409-1413 (1973) ATCC Aksesjonsnr. TB-22) ble injisert inn i BALB/c mus intraperitonealt hver tredje uke i totalt tre til fire injeksjoner. Miltene ble høstet tre dager etter siste injeksjon og en miltcelle-suspensjon ble preparert og vasket ved to sentrifugeringer (800 x g) i Dulbecco's modifiserte Eagles medium. Ett hundre og åtte immuniserte musemilt-celler og 107 PAI myelom-celler tilveiebragt fra Dr. Theo Staehlin, Basel, Sveits, J. Stocker, Research Disclosure, 21713, 155-157 (1982) ble resuspendert for fusjon I en 4556 oppløsning (v/v) av polyetylenglykol 1500. Hybridcellene ble selektert på hypoksantin-amenopterin-tymidin (HAT) medium.
Kloner av hybridomen ble dyrket in vitro ifølge kjente vevskultur-teknikker som beskrevet av Cotton, et al., Eur. J. Immunol. 3:136 (1973). Hybridomer som produserer antistoff som reagerer med MCF-7 og/eller MDA-157 celler men ikke human foreskin fibroblast-celler ble ytterligere karakterisert. Antistoffene produsert av 15A8 cellelinjen og hybridom-produserende funksjonelt ekvivalente antistoff reagerte med 15A8 antigen på MCF-7 celler. De reagerte også med 28/31 tilfeldig tilveiebragte humane brystcarcinomer som ble undersøkt, og utviste en svakere reaksjon med normale humane epitelceller fra bryst, proksimal tubulus i nyre, blærehud, spiserør og spyttkjertel, uten celler fra vesentlig ingen andre normale vev, og var ikke-reaktive med 14 av 18 andre ondartede vev som ble undersøkt. 15A8 antistoffet reagerte også med alle fibrocystiske sykdommene, normalt brystepitel, et antall adenocarcinomer. Det reagerte ikke med meso-teliomas. 15A8 antistoffet kryssreagerte også med cervikale, tykktarm og prostat-carcinomer.
Representative hybridom-kulturer hvor celler utskiller antistoff av samme idiotype, dvs. alle gjenkjenner 15A8 epitopen, er blitt deponert til American Type Culture Collection 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852
("ATCC") og er blitt tildelt aksesjonsnummerne HB-8655 (for 15A8), HB-9344 (for 15A8 G2a) og EB-9345 (for 15A8 G2b).
Som anvendt heri med hensyn til eksemplifiserte murine monoklonale anti-human brystcancer-antistoffer betyr betegnelsen "funksjonell ekvivalent" et monoklonalt antistoff som: (1 )/kryssblokkerer et eksemplifisert monoklonalt antistoff; (b)/bindes selektivt til celler som uttrykker 15A8 antigenet så som humane brystcancer-celler; (c)/har en G eller M isotype; (d)/bindes til 15A8 antigenet som bestemt ved immun-presipitasjon eller sandwich-immunoanalyse; og (e)/når konjugert til TNF, har en vevskultur-hemmende dose (TCID) på minst 50* mot minst en av MCF-7, ME-180, BT-20 eller A431 cellelinjene når anvendt i en dose mellom 50 og 100 enheter pr. ml.
Monoklonale antistoffer som bindes til melanom-celler ble preparert på lignende måte. Detaljer angående preparering av monoklonale antistoffer rettet mot celleoverflate og cytoplasma melanoma antigener er beskrevet i detalj i Wilson et al., Int. J. Cancer (1981) 28:293, inkorporert heri som referanse.
Eksempel 5
Modifikas. lon av monoklonalt antistoff 15A8 eller ZME- 018 med
SPDP
N-succinimidyl 3-(2-pyridylditio) (propionat) (SPDP) i dimetylformamid ble preparert som en stokk-oppløsning på 3 mg/ml i tørr dimetylformamid. På grunn av at krystallinsk SPDP kan gjennomgå hydrolyse ble den virkelige konsentrasjonen av kjemisk reaktiv kryssbinder bestemt ved spektro-fotometriske metoder ved analysering av absorbansen ved 260—nm i et dual-beam spektrofotometer. Konsentrasjonen av SPDP-stokken blir beregnet fra følgende ligning:
Et milligram monoklonalt antistoff, MoAb 15A8 eller MoAb ZME-018 i 0,5 ml PBS ble satt til et glassrør. SPDP-stamoppløsningen ble sakte tilsatt i et 5-ganger molart overskudd til røret med konstant blanding. Blandingen ble inkubert i 30 minutter ved romtemperatur med røring hvert 5. minutt i løpet av inkubasjonsperioden.
Ureagert SPDP i overskudd ble fjernet ved gelfiltrerings-kromatografi på en Sephadex G-25 kolonne (1 x 24 cm) pre-ekvilibrert med PBS. Fraksjoner (0,5 ml) ble samlet i løpet av PBS-elueringen og ble analysert for protein-innhold ved Bradford-fargemetode. Antistoff eluerte i hulromsvolumet (omtrent fraksjonene 14-20). Disse fraksjonene ble slått sammen og proteinet ble konsentrert i en Centricon-30 mikrokonsentrator. Resten ble vasket med 100 mM natrium-fosfat-buffer, pH 7,0 inneholdende EDTA (0,5 mM). Antistoff ble konsentrert til et finalt volum på omtrent 0,5-0,75 ml.
Eksempel 6
Kon. lugasjon av SPDP- modlf isert monoklonalt antistoff med imlnotiolan- modifisert TNF
Antistoff 15A8 og antistoff ZME-018 ble konjugert til TNF ved anvendelse av N-succinimidyl-3-(2-pyridylditio) propionat (SPDP) og/eller imlnotiolan (IT) som et koblingsmiddel. Konjugatene ble undersøkt mot Me-180 og AAB-527 celler i en 72 timers vevskultur-analyse. Antistoff-konjugatene utviste akseptabel antiproliferativ aktivitet (TCID 5096 på mindre enn
10 enheter/ml) mot begge disse cellelinjene.
Monoklonalt antistoff 15A8 eller ZME-018 modifisert som beskrevet i Eksempel 4 ble blandet med en lik vekt TNF modifisert som i Eksempel 3. Denne proporsjonen korrespon-derte med et 5 ganger molart overskudd TNF sammenlignet med antistoff. pH til blandingen ble justert til 7,0 ved tilset-ning av 0,05 M/TEA/HC1 buffer pH 8,0 og blandingen ble inkubert i 20 timer ved 4°C under nitrogen. Iodacetamid (0,1M) ble tilsatt til en final konsentrasjon på 2 mM for å blokkere eventuelt gjenværende frie sulfhydryl-grupper og inkubasjonen ble fortsatt i ytterligere en time ved omtrent 25°C. Reaksjonsblandingen ble lagret ved 4°C frem til rensing ved gelfiltrering.
Eksempel 7
Rensing av TNF- monoklonale antistoff- komplekser Ikke-konjugert TNF ble fjernet fra reaksjonsblandingene ifølge Eksempel 6 ved gelfiltrering på en Sephadex S-300 kolonne (2,5 x 50 cm) pre-ekvillbrert med PBS.
Reaksjonsblandingene fra Eksempel 6 inneholdende TNF konjugert til MoAb ZME ble konsentrert til omtrent 1 ml med en Centricon 30 mikrokonsentrator før belastning på Sephadex-kolonnen. Kolonnen ble vasket med PBS. En ml fraksjoner ble samlet og 50 pl aliquoter blir analysert for protein ved Bradford fargebindings-analysen. M. Bradford, Anal. Biochem. 72:248 (1976).
Fritt- og TNF-konjugert antistoff eluerte ved omtrent fraksjonene 17-40, mens ukonjugert TNF eluerte ved omtrent fraksjonene 46-50. Figur 1 demonstrerer elueringsprofilen til S-300 kolonnen. Eluering av fri TNF-standard (i fraksjonene 46-48) er vist med pil. Eluering av ukonjugert ZME antistoff oppstår ved omtrent fraksjon 28. Etter kromatografi av reaksjonsblandingen ble fraksjonene 20-40 slått sammen. PAGE-analyse demonstrerte at disse fraksjonene ikke Inneholdt fritt TNF. Dette elueringsmønsteret ble bekreftet ved elektroforese av 50 pl aliquoter på 5- 20% gradient ikke-reduserende SDS polyakrylamid-geler. Denne analysen bekreftet at det konjugerte materialet inneholdt fra ett til tre molekyler TNF koblet pr. molekyl antistoff og ikke noe fritt
TNF.
Ikke-konjugert antistoff ble fjernet fra TNF-konjugert antistoff ved affinitets-kromatografi ved anvendelse av CNBr sepharose koblet til et murint anti-TNF antistoff. Harpiksen ble helt inn i en liten kolonne (1 x 4 cm) og pre-ekvilibrert med 10 mM fosfatbuffer, pH 7,2 inneholdende 0,1 M NaCl. Etter belasting av S-300 sammenslåtte prøve ble kolonnen vasket med 30 ml av samme buffer for å fullstendig eluere ikke-konjugert antistoff. TNF-konjugert antistoff ble bundet til kolonnen.
Antistoff-TNF komplekset eluerte fra kolonnen som vist i
Figur 2, som viser elueringsprofilen til TNF affinitets-kolonnen. Gjennornstrømnings-toppen inneholder bare fritt antistoff, mens fraksjonene 58-70 inneholder antistoff-TNF konjugat fri for ukonjugert TNF eller antistoff. Sammenslåtte fraksjoner fra S-300 kromatografi ble applisert på en affinitets-kromatografibærer hvor et anti-TNF murint antistoff var bundet. Kolonnen ble vasket grundig med PBS med muliggjøring av at fritt ZME-antistoff (Fraksjon 20 topp) blir eluert fra harpiksen. Eluering av ZME-TNF konjugatet ble utført ved vasking av kolonnen med 0,1 M Na acetatbuffer (pH 4,5) inneholdende 0,15 M NaCl buffer. Som vist i Figur 2 ble det rensede konjugatet eluert som en enkelt proteintopp. PAGE-analyse på en 5-20* akrylamid kontinuerlig gradient ikke-reduserende gel demonstrerte at konjugatet inneholdt ZME bundet til 1, 2 og 3 TNF molekyler. Det var ikke noe påvis-bart fritt TNF eller fritt ZME-018 i sluttproduktet.
Protein-innholdet til eluerte fraksjoner ble bestemt ved Bradford fargebindings-analysen. Protein-inneholdende fraksjoner ble slått sammen og elueringsmønsteret bekreftet ved elektroforese på en 5 til 20* gradient ikke-reduserende polyakrylamid-gel.
L-929 analysen beskrevet i Eksempel 2 ble anvendt for å beregne TNF-aktiviteten til det vesentlig rene TNF-antistoff-komplekset. Både det essensielt rene 15A8-TNF og ZMF-TNF antistoff-konjugatene er aktive i L-929 analysen. En 1:1000 fortynning av den opprinnelige prøven forårsaket omtrent en 50* hemming av L-929 celleveksten. Aktiviteten til det opprinnelige preparatet var 1000 U/ml.
Eksempel 8
Sammenligning av binding av TNF- kon. 1ugert og ukonjugert ZME-018 antistoff til målceller
For å bestemme om forandringer i bindings-karaktertrekkene til ZME til mål A-375 (antigen positive) celler eller T-24 celler (antigen negative) oppstod ved modifikasjon med TNF, ble celler platet med 50.000 celler/brønn i en 96-brønn plastplate og ble lufttørket ved romtemperatur. Forskjellige konsentrasjoner av ZME eller ZME-TNF ble tilsatt, og bundet i 3 timer ved romtemperatur. En standard ELISA-analyse ble utført for deteksjon av murint antistoff.
Evnen som TNF-konjugert og ukonjugert ZME-018 antistoff har til å bindes til målcellene ble vurdert. Femti tusen målceller (A-325) eller ikke-mål humane blære-carcinomceller (T-24 celler) ble tilsatt til hver mikrotiter-platebrønn. Cellene ble tørket på platene over natt ved 37'C. Cellene ble deretter vasket med tre skift kaldt PBS og lufttørket over natt. Celleoverflate antigeniske determinanter forblir antigenisk aktive etter denne behandlingen.
Etter festing av cellene ble platene vasket med vaskebuffer (9,68 Tris, 64,8 natriumklorid, 16 ml Tween 20, 800 mg timerasol 18 1 dobbelt-destillert vann). Antistoff-prøvene ble fortynnet i vaskebuffer inneholdende 1* bovint serumalbumin (v/v) (fortynningsbuffer). Femti pl av forskjellige konsentrasjoner varierende fra 0,002 til 100 pg/ml av enten konjugert eller ukonjugert ZME-018 antistoff ble satt til brønnene. Etter inkubasjon i 1 time ved 4"C ble super-natantene fjernet og brønnene vasket to ganger med vaskebuffer .
Femti mikroliter pr. brønn alkalisk fosfatase-konjugert geite antl-muse IgG tilveiebragt fra Bio-Rad og fortynnet 1:1000 (v/v) (APGAM) i fortynningsbuffer ble satt til hver brønn. Platene ble inkubert i 1 time ved 4°C og brønnene vasket to ganger med vaskebuffer. Etter inkubasjon av platene med 50 pl substrat-oppløsning (80 mM sitratfosfat (pH 5,0), 1 mM ABTS substitutt og 4 pl 30* hydrogenperoksid) i mørket i 30 minutter ved romtemperatur ble 25 pl 4 N svovelsyre satt til hver brønn. Absorbansen ved 492 nm ble bestemt på en Elisa-plateavleser.
Resultatene er vist i Figur 3. ZME-TNF komplekset ble bundet til A-375 målcellene I samme grad som nativt ZME-antistoff. På grunn av at det ikke var noen forskjell i binding av ZME-TNF eller ukonjugert ZME-antistoff til A-135 antigenet Inneholdende målceller endrer den kjemiske konjugasjons-prosedyren ikke affiniteten til antistoffet for dets mål-antlgen. Det var ingen påvisbar binding av hverken ZME eller ZME-TNF kompleks til ikke-mål T-24 blære-carcinomceller.
Eksempel 9
Antlproliferative virkninger av TNF og TNF- 15A8 eller ZME- TNF ant1stoff- kompleks
Antlproliferative virkninger av TNF og 15A8-TNF eller ZME-TNF konjugat ble vurdert ved utsåing av omtrent 5.000 log-fase celler/brønn i 96 brønn mikrotiter-plate i 200 ml hensikts-messig vevskultur-medium. Cellene ble adherert i 24 timer ved 37"C i en 5* CC^-atmosfære i luft. Ikke-målsøkt, antigen-negative T-24 humane blærecarcinom-celler, Me-180 celler antigen-positive for 15A8 og A-375 humane melanom-celler antigen-positive for ZME-018 i log-fasen ble behandlet med forskjellige konsentrasjoner av begge mediene alene (kon-troll), TNF 15A8-TNF konjugat eller ZME-TNF konjugat og Inkubert ved 37 ° C i en 5* C02 atmosfære i luft i 72 timer. Platene ble vasket tre ganger med kaldt PBS. 50 ml metanol ble satt til hver brønn og cellene lysert ved gjentatte sykluser av frysing og tørking. Proteinkonsentrasjonene ble deretter bestemt ved Bradford-fargetest. Alternativt ble celle-antallene i hver brønn vurdert ved anvendelse av krystallfiolett farge. Absorbansen til hver brønn ble bestemt på en ELISA-leser og sammenlignet med kontrollbrønner (uten behandling). Som vist i Figur 4 hadde TNF alene ingen anvendt cytotoksisk eller cytostatisk TNF (50.000 enheter/brønn). Med ZME-TNF konjugatet ble derimot 50* hemming tilveiebragt med bare 10 enheter/ml.
Cellevekst-hemming ble også vurdert ved reduksjon i protein-konsentrasjoner eller celleantall av behandlede celler sammenlignet med saltvannsbehandlede kontroller. Det var ingen hemming av celleveksten ved 15A8-TNF konjugatet eller ZME-TNF T-24 carcinomet på ikke-målsøkt T-24 carcinom-celler.
Det var ingen virkning av 15A8-TNF overfor T-24 ikke-målsøkt cellelinje.
På grunn av at bare celler inneholdende 15A8 antigenet på deres overflate ble drept av TNF 15A8 immuntoksin er dette immuntoksinet en effektiv metode for å målsøke og drepe 15A8 tumor-assosierte antigen-inneholdende celler med minimali-sering eller forhindring av skade på normale ikke-tumor assosierte antigen-bærende celler.
ZME-TNF konjugatet var mer aktivt enn fritt TNF når testet på antigen-positive humane melanom (enten AAB-27 eller A-375) celler i kultur (Figurene 4 og 5). Som vis"t i Fig. 4 hadde TNF alene ingen virkning på veksten av AAB-27 cellene ved doser opp til 50.000 U/ml. 50* hemming ble derimot oppnådd med omtrent 6 U/ml ZME-TNF konjugater som vist i Figur 5. A-375 mål-human melanom-celler ble hemmet av TNF alene ved doser på omtrent 100 U/ml, mens ZME-TNF konjugatet hemmet celler ved en konsentrasjon på omtrent 0,8 U/ml. Me-180 målcellene var 10 ganger mer sensitive overfor 15A8-TNF immuntoksin enn TNF alene (Figur 6).
Figur 6 demonstrerer at ved omtrent 15 U/ml hemmet TNF konjugert 15A8 antistoff 50* av Me-180 cellene, mens en konsentrasjon på 200 U/ml av ukonjugert TNF var nødvendig for å oppnå samme virkning. Det var ingen virkning av hverken TNF eller ZME-TNF konjugert på antigen-negative T-24 celler.
Immunkonjugater av ZME og 15A8 med TNF kan drastisk øke cytotoksisiteten til TNF på antigen-positive celler, mens antigen-negative celler Ikke blir påvirket. I tillegg, i en cellelinje som totalt er motstandsdyktig overfor vekst-hemmende virkninger av TNF alene (Flg. 4) kan cellulær motstand overvinnes ved målrettet føring av antistoff.

Claims (1)

  1. Fremgangsmåte for fremstilling av et konjugat av et antistoff rettet mot ZME-018 celleoverflate assosiert melanom antigen eller mot 15A8 brystcancer antigen og biologisk respons-modif iserende TNF-alfa eller TNF-beta, karakterisert ved at den omfatter trinnene av kjemisk eller genetisk fusjonering av nevnte antistoff til nevnte TNF.
NO901986A 1989-05-05 1990-05-04 Fremgangsmåte for fremstilling av et konjugat av et antistoff rettet mot antigen NO301168B1 (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US34823789A 1989-05-05 1989-05-05

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO901986D0 NO901986D0 (no) 1990-05-04
NO901986L NO901986L (no) 1990-11-06
NO301168B1 true NO301168B1 (no) 1997-09-22

Family

ID=23367161

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO901986A NO301168B1 (no) 1989-05-05 1990-05-04 Fremgangsmåte for fremstilling av et konjugat av et antistoff rettet mot antigen

Country Status (19)

Country Link
EP (1) EP0396387B1 (no)
JP (1) JP3589459B2 (no)
KR (1) KR0181294B1 (no)
CN (1) CN1072505C (no)
AT (1) ATE98873T1 (no)
AU (1) AU645747B2 (no)
CA (1) CA2015060C (no)
DE (1) DE69005352T2 (no)
DK (1) DK0396387T3 (no)
ES (1) ES2060947T3 (no)
FI (1) FI100092B (no)
HK (1) HK1006678A1 (no)
IE (1) IE63847B1 (no)
IL (1) IL94167A (no)
NO (1) NO301168B1 (no)
NZ (1) NZ233413A (no)
PT (1) PT93966B (no)
SA (1) SA90110099B1 (no)
ZA (1) ZA902949B (no)

Families Citing this family (189)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0406857B1 (en) * 1989-07-07 1995-05-24 Takeda Chemical Industries, Ltd. Proteins and production thereof
US5314995A (en) * 1990-01-22 1994-05-24 Oncogen Therapeutic interleukin-2-antibody based fusion proteins
CA2073964A1 (en) * 1990-02-06 1991-08-07 Naoru Hamaguchi Immune complexes
ZA912490B (en) * 1990-04-19 1992-12-30 Res Dev Foundation Antibody conjugates for treatment of neoplastic disease
US5349053A (en) * 1990-06-01 1994-09-20 Protein Design Labs, Inc. Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses
US5273889A (en) * 1990-08-22 1993-12-28 University Of Saskatchewan Gamma-iterferon-leukotoxin gene fusions and uses thereof
US5594107A (en) * 1990-08-22 1997-01-14 University Of Saskatchewan Chimeric protein comprising an RTX-family cytotoxin and interferon-2 or interferon
ES2171392T3 (es) * 1990-08-29 2002-09-16 Ct Hospitalier Regional De Nan Poliligandos de proteina unidos a un nucleo de proteina estable.
EP0556328A4 (en) * 1990-11-09 1994-06-08 Abbott Lab Bridging antibody fusion constructs
EP0574395B1 (en) * 1990-11-09 2002-06-12 GILLIES, Stephen D. Cytokine immunoconjugates
US5650150A (en) * 1990-11-09 1997-07-22 Gillies; Stephen D. Recombinant antibody cytokine fusion proteins
JPH06508821A (ja) * 1991-03-07 1994-10-06 セラジュン　インク ウイルス病治療のための細胞表面受容体を標的とする分子の使用
JP3105629B2 (ja) * 1991-04-23 2000-11-06 サングスタット メディカル コーポレイション 特異的結合ペアのメンバーの細胞活性調節接合体
US5326559A (en) * 1991-05-16 1994-07-05 Miller D Douglas Treatment of accelerated atheosclerosis with interleukin-2 receptor targeted molecules
ATE168014T1 (de) * 1991-11-08 1998-07-15 Somatogen Inc Hämoglobine als arzneimittelabgabesystem
GB9324807D0 (en) * 1993-12-03 1994-01-19 Cancer Res Campaign Tech Tumour antibody
DE69428764T2 (de) * 1993-12-24 2002-06-20 Merck Patent Gmbh Immunokonjugate
GB9415379D0 (en) * 1994-07-29 1994-09-21 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
ES2167391T3 (es) * 1994-09-16 2002-05-16 Merck Patent Gmbh Inmunoconjugados ii.
US7820798B2 (en) 1994-11-07 2010-10-26 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
US7429646B1 (en) 1995-06-05 2008-09-30 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies to human tumor necrosis factor receptor-like 2
US6090382A (en) * 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
US6482927B1 (en) * 1995-11-27 2002-11-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Chimeric proteins comprising the extracellular domain of murine Ob receptor
US6620413B1 (en) 1995-12-27 2003-09-16 Genentech, Inc. OB protein-polymer chimeras
US7074397B1 (en) 1996-01-08 2006-07-11 Genentech, Inc. Method for enhancing proliferation or differentiation of a cell using ob protein
US6541604B1 (en) 1996-01-08 2003-04-01 Genentech, Inc. Leptin receptor having a WSX motif
US20050019325A1 (en) 1996-01-08 2005-01-27 Carter Paul J. WSX receptor agonist antibodies
US7888466B2 (en) 1996-01-11 2011-02-15 Human Genome Sciences, Inc. Human G-protein chemokine receptor HSATU68
HU230515B1 (hu) * 1996-02-09 2016-10-28 Abbvie Biotechnology Ltd Humán TNFalfa-kötő antitestek alkalmazásai
WO1999029732A2 (en) 1997-12-08 1999-06-17 Lexigen Pharmaceuticals Corporation Heterodimeric fusion proteins useful for targeted immune therapy and general immune stimulation
EP1093457B8 (en) 1998-03-19 2011-02-02 Human Genome Sciences, Inc. Cytokine receptor common gamma chain like
AU3501700A (en) 1999-02-26 2000-09-14 Human Genome Sciences, Inc. Human endokine alpha and methods of use
SK782002A3 (en) 1999-07-21 2003-08-05 Lexigen Pharm Corp FC fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens
EP1200479B1 (en) 1999-08-09 2006-02-01 Lexigen Pharmaceuticals Corp. Multiple cytokine-antibody complexes
WO2001058957A2 (en) 2000-02-11 2001-08-16 Lexigen Pharmaceuticals Corp. Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
US20030031675A1 (en) 2000-06-06 2003-02-13 Mikesell Glen E. B7-related nucleic acids and polypeptides useful for immunomodulation
EP2431054A3 (en) 2000-06-15 2013-03-06 Human Genome Sciences, Inc. Human tumor necrosis factor delta and epsilon
ES2609016T3 (es) 2000-06-16 2017-04-18 Human Genome Sciences, Inc. Anticuerpos que se unen inmunoespecíficamente a BLyS
JP2003535908A (ja) * 2000-06-22 2003-12-02 アイデック ファーマスーティカルズ コーポレイション 二重特異性融合タンパク及び標的細胞を殺傷するエフェクター細胞を増強するための使用方法
EP2338512A1 (en) 2000-11-28 2011-06-29 MedImmune, LLC Methods of administering/dosing anti-RSV antibodies for prophylaxis and treatment
CN1564826A (zh) 2001-02-09 2005-01-12 人类基因组科学公司 人类g蛋白趋化因子受体(ccr5)hdgnr10
ZA200305980B (en) 2001-02-12 2007-01-31 Res Dev Foundation Modified proteins, designer toxins, and methods of making thereof
AU2002248571B2 (en) 2001-03-07 2007-01-18 Merck Patent Gmbh Expression technology for proteins containing a hybrid isotype antibody moiety
WO2002079415A2 (en) 2001-03-30 2002-10-10 Lexigen Pharmaceuticals Corp. Reducing the immunogenicity of fusion proteins
DK1385864T3 (da) 2001-04-13 2010-08-16 Human Genome Sciences Inc Anti-VEGF-2-antistoffer
EP1383785B1 (en) 2001-05-03 2011-03-16 Merck Patent GmbH Recombinant tumor specific antibody and use thereof
KR100942393B1 (ko) 2001-05-25 2010-02-17 휴먼 게놈 사이언시즈, 인코포레이티드 Ｔｒａｉｌ 수용체에 면역특이적으로 결합하는 항체
US7101977B2 (en) 2001-07-17 2006-09-05 Research Development Foundation Therapeutic agents comprising pro-apoptotic proteins
US6867189B2 (en) 2001-07-26 2005-03-15 Genset S.A. Use of adipsin/complement factor D in the treatment of metabolic related disorders
AU2002357784B2 (en) 2001-12-04 2008-07-31 Merck Patent Gmbh Immunocytokines with modulated selectivity
CA2481747A1 (en) 2002-04-12 2003-10-23 Medimmune, Inc. Recombinant anti-interleukin-9 antibodies
GB0209896D0 (en) * 2002-04-30 2002-06-05 Molmed Spa Conjugate
AU2003274463B2 (en) 2002-06-10 2009-10-29 University Of Rochester Gene differentially expressed in breast and bladder cancer and encoded polypeptides
US7232888B2 (en) 2002-07-01 2007-06-19 Massachusetts Institute Of Technology Antibodies against tumor surface antigens
KR101086660B1 (ko) 2002-12-17 2011-11-24 메르크 파텐트 게엠베하 Ｇｄ2 에 결합하는 마우스 14.18 항체의 인간화 항체(ｈ14.18) 및 그것의 ｉｌ-2 와의 융합
SI2248899T1 (sl) 2003-03-19 2015-07-31 Biogen Ma Inc. Vezavni protein receptorja Nogo
EP2266628A3 (en) 2003-05-13 2012-01-18 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Method of determining the susceptibility to bone meatastases by EPhA2 expression
PT2805728T (pt) 2003-12-23 2020-04-08 Genentech Inc Novos anticorpos anti-il13 e o uso dos mesmos
PT1699822E (pt) 2003-12-30 2008-07-30 Merck Patent Gmbh Proteínas de fusão de il-7
AU2005203962C1 (en) 2004-01-05 2012-11-08 Antisoma Research Limited Interleukin-12 targeted to oncofoetal fibronectin
EP2474317A1 (en) 2004-06-24 2012-07-11 Biogen Idec MA Inc. Treatment of conditions involving demyelination
US7670595B2 (en) 2004-06-28 2010-03-02 Merck Patent Gmbh Fc-interferon-beta fusion proteins
US20080267981A1 (en) * 2004-06-30 2008-10-30 The Scripps Research Institute Compositions and Methods for Delivery of Antitumor Agents
EP2329714A1 (en) 2004-08-03 2011-06-08 Biogen Idec MA Inc. Influence of TAJ in the neuronal functions
US8165517B2 (en) 2005-01-19 2012-04-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods for identifying inhibitors of vascular injury
KR20080025174A (ko) 2005-06-23 2008-03-19 메디뮨 인코포레이티드 응집 및 단편화 프로파일이 최적화된 항체 제제
WO2007008547A2 (en) 2005-07-08 2007-01-18 Biogen Idec Ma Inc. Sp35 antibodies and uses thereof
US7482124B2 (en) 2005-07-08 2009-01-27 Bristol-Myers Squibb Company Method of identifying a PPARgamma-agonist compound having a decreased likelihood of inducing dose-dependent peripheral edema
MY151064A (en) 2005-11-04 2014-03-31 Genentech Inc Use of complement pathway inhibitors to treat ocular diseases
US20090246189A1 (en) 2005-11-04 2009-10-01 Biogen Idec Ma Inc. And Mclean Hospital Methods for Promoting Neurite Outgrowth and Survival of Dopaminergic Neurons
ZA200804082B (en) 2005-11-07 2010-02-24 Scripps Research Inst Compositions and methods for controlling tissue factor signaling specificity
JP5312039B2 (ja) 2005-12-02 2013-10-09 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 脱髄の関与する状態の処置
CN103215293B (zh) 2006-01-27 2015-10-28 比奥根Ma公司 Nogo受体拮抗剂
JP2009541208A (ja) 2006-04-13 2009-11-26 ノバルティス・バクシーンズ・アンド・ダイアグノスティクス・インコーポレイテッド がんを処置し、診断しもしくは検出する方法
DK2044120T3 (da) 2006-06-07 2019-04-15 Bioalliance Cv Antistoffer, der genkender en kulhydratholdig epitop på cd-43 og cea eksprimeret på cancerceller, og fremgangsmåder til anvendelse deraf
US7572618B2 (en) 2006-06-30 2009-08-11 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotides encoding novel PCSK9 variants
DK2484696T3 (en) 2006-08-28 2017-10-02 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Antagonistic hLIGHT-specific human monoclonal antibodies
US9382327B2 (en) 2006-10-10 2016-07-05 Vaccinex, Inc. Anti-CD20 antibodies and methods of use
US7935791B2 (en) 2006-12-18 2011-05-03 Genentech, Inc. Antagonist anti-Notch3 antibodies and their use in the prevention and treatment of Notch3-related diseases
ES2635317T3 (es) 2007-01-05 2017-10-03 University Of Zurich Anticuerpo anti-beta-amiloide y sus usos
US8128926B2 (en) 2007-01-09 2012-03-06 Biogen Idec Ma Inc. Sp35 antibodies and uses thereof
EP2740744B1 (en) 2007-01-09 2018-03-28 Biogen MA Inc. Sp35 antibodies and uses thereof
NZ578816A (en) 2007-02-02 2012-06-29 Biogen Idec Inc Use of semaphorin 6a for promoting myelination and oligodendrocyte differentiation
JP2010521180A (ja) 2007-03-14 2010-06-24 ノバルティス アーゲー 癌を処置、診断または検出するためのａｐｃｄｄ１阻害剤
EP2599791A1 (en) 2007-04-27 2013-06-05 Genentech, Inc. Potent, stable and non-immunosuppressive anti-CD4 antibodies
US8647622B2 (en) 2007-08-29 2014-02-11 Sanofi Humanized anti-CXCR5 antibodies, derivatives thereof and their use
EP2050764A1 (en) 2007-10-15 2009-04-22 sanofi-aventis Novel polyvalent bispecific antibody format and uses thereof
PT3002298T (pt) 2007-11-21 2019-11-20 Univ Oregon Health & Science Anticorpos monoclonais anti-fator xi e métodos de utilização dos mesmos
CA2706502C (en) 2007-12-18 2018-08-07 Bioalliance C.V. Antibodies recognizing a carbohydrate containing epitope on cd-43 and cea expressed on cancer cells and methods using same
KR101642846B1 (ko) 2007-12-26 2016-07-26 백시넥스 인코포레이티드 항-ｃ35 항체 병용 치료 및 방법
WO2009118300A1 (en) 2008-03-25 2009-10-01 Novartis Forschungsstiftung Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Treating cancer by down-regulating frizzled-4 and/or frizzled-1
MX2010011206A (es) 2008-04-16 2010-11-12 Biogen Idec Inc Metodo para aislar biomacromoleculas usando glicol de polialquileno y metales de transicion.
US8058406B2 (en) 2008-07-09 2011-11-15 Biogen Idec Ma Inc. Composition comprising antibodies to LINGO or fragments thereof
CA2735433C (en) 2008-09-07 2016-02-16 Glyconex Inc. Anti-extended type i glycosphingolipid antibody, derivatives thereof and use
US8734795B2 (en) 2008-10-31 2014-05-27 Biogen Idec Ma Inc. Light targeting molecules and uses thereof
JP5810413B2 (ja) 2008-12-19 2015-11-11 バイオジェン インターナショナル ニューロサイエンス ゲーエムベーハー ヒト抗アルファシヌクレイン自己抗体
JP2012514458A (ja) 2008-12-31 2012-06-28 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 抗リンホトキシン抗体
WO2010100247A1 (en) 2009-03-06 2010-09-10 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Novel therapy for anxiety
US8524869B2 (en) 2009-03-24 2013-09-03 Teva Biopharmaceuticals Usa, Inc. Humanized antibodies against LIGHT and uses thereof
EP2241323A1 (en) 2009-04-14 2010-10-20 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Tenascin-W and brain cancers
MX2011011044A (es) 2009-04-22 2011-11-04 Merck Patent Gmbh Proteinas de fusion de anticuerpos con sitios de enlace de receptor fc neonatal (fcrn) modificados.
DK2427212T3 (en) 2009-05-08 2017-12-04 Vaccinex Inc ANTI-CD100 ANTIBODIES AND PROCEDURES FOR USE THEREOF
JP5762408B2 (ja) 2009-08-13 2015-08-12 クルセル ホランド ベー ヴェー ヒト呼吸器合胞体ウイルス（ｒｓｖ）に対する抗体および使用方法
EP2292266A1 (en) 2009-08-27 2011-03-09 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Treating cancer by modulating copine III
WO2011035205A2 (en) 2009-09-18 2011-03-24 Calmune Corporation Antibodies against candida, collections thereof and methods of use
EP2480573A1 (en) 2009-09-22 2012-08-01 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Treating cancer by modulating mex-3
WO2011045352A2 (en) 2009-10-15 2011-04-21 Novartis Forschungsstiftung Spleen tyrosine kinase and brain cancers
US20120213801A1 (en) 2009-10-30 2012-08-23 Ekaterina Gresko Phosphorylated Twist1 and cancer
EP2496600A1 (en) 2009-11-04 2012-09-12 Fabrus LLC Methods for affinity maturation-based antibody optimization
WO2011107586A1 (en) 2010-03-05 2011-09-09 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research, Smoc1, tenascin-c and brain cancers
WO2011131611A1 (en) 2010-04-19 2011-10-27 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Modulating xrn1
WO2011154485A1 (en) 2010-06-10 2011-12-15 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Treating cancer by modulating mammalian sterile 20-like kinase 3
CN106188284B (zh) 2010-07-09 2020-05-08 扬森疫苗与预防公司 抗人呼吸道合胞病毒(rsv)抗体以及使用方法
EP2609431B1 (en) 2010-08-27 2017-05-10 University of Zurich Method for target and drug validation in inflammatory and/or cardiovascular diseases
WO2012031099A2 (en) 2010-09-02 2012-03-08 Vaccinex, Inc. Anti-cxcl13 antibodies and methods of using the same
WO2012032143A1 (en) 2010-09-10 2012-03-15 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Phosphorylated twist1 and metastasis
US20130295021A1 (en) 2010-10-11 2013-11-07 Feng Chen Human anti-tau antibodies
WO2012065937A1 (en) 2010-11-15 2012-05-24 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Anti-fungal agents
CN103380145B (zh) 2010-12-17 2016-10-12 生物控股有限公司 人类抗-sod1抗体
EP2686014A1 (en) 2011-03-16 2014-01-22 Sanofi Uses of a dual v region antibody-like protein
WO2012168259A1 (en) 2011-06-06 2012-12-13 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Protein tyrosine phosphatase, non-receptor type 11 (ptpn11) and triple-negative breast cancer
US9561274B2 (en) 2011-06-07 2017-02-07 University Of Hawaii Treatment and prevention of cancer with HMGB1 antagonists
US9244074B2 (en) 2011-06-07 2016-01-26 University Of Hawaii Biomarker of asbestos exposure and mesothelioma
MX357193B (es) 2011-06-23 2018-06-29 Univ Zuerich Moleculas de union anti-alfa sinucleina.
EP2753697A1 (en) 2011-09-05 2014-07-16 ETH Zürich Biosynthetic gene cluster for the production of peptide/protein analogues
WO2013039954A1 (en) 2011-09-14 2013-03-21 Sanofi Anti-gitr antibodies
JP2014533247A (ja) 2011-11-01 2014-12-11 バイオノミクス インコーポレイテッド 抗体および癌を治療する方法
WO2013067060A1 (en) 2011-11-01 2013-05-10 Bionomics, Inc. Anti-gpr49 antibodies
US9220774B2 (en) 2011-11-01 2015-12-29 Bionomics Inc. Methods of treating cancer by administering anti-GPR49 antibodies
ES2697674T3 (es) 2011-11-01 2019-01-25 Bionomics Inc Procedimientos para bloquear el crecimiento de células madre cancerosas
US20140314787A1 (en) 2011-11-08 2014-10-23 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute Treatment for neurodegenerative diseases
WO2013068432A1 (en) 2011-11-08 2013-05-16 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Early diagnostic of neurodegenerative diseases
ES2784131T3 (es) 2011-12-05 2020-09-22 X Body Inc Polipéptidos de unión beta del receptor PDGF
EP2800583A1 (en) 2012-01-02 2014-11-12 Novartis AG Cdcp1 and breast cancer
CA2865928C (en) 2012-03-02 2021-02-16 Vaccinex, Inc. Cxcl13 antagonist for the treatment of sjogren's syndrome
US9592289B2 (en) 2012-03-26 2017-03-14 Sanofi Stable IgG4 based binding agent formulations
JP6779012B2 (ja) 2012-03-28 2020-11-04 サノフイＳａｎｏｆｉ ブラジキニンｂ１受容体リガンドに対する抗体
WO2013144240A1 (en) 2012-03-29 2013-10-03 Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Inhibition of interleukin- 8 and/or its receptor cxcrl in the treatment her2/her3 -overexpressing breast cancer
SG11201407209YA (en) 2012-05-07 2014-12-30 Sanofi Sa Methods for preventing biofilm formation
CA2873623C (en) 2012-05-14 2021-11-09 Biogen Idec Ma Inc. Lingo-2 antagonists for treatment of conditions involving motor neurons
WO2013175276A1 (en) 2012-05-23 2013-11-28 Argen-X B.V Il-6 binding molecules
BR112014029274B1 (pt) 2012-05-24 2022-02-15 Mountgate Innotech (Hk) Limited Anticorpo isolado, composição farmacêutica, uso do anticorpo, e, kit para tratar infecção rábica
US20150218238A1 (en) 2012-06-29 2015-08-06 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Resear Treating diseases by modulating a specific isoform of mkl1
US20150184154A1 (en) 2012-07-05 2015-07-02 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Resear New treatment for neurodegenerative diseases
WO2014006115A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Novartis Ag Combination of a phosphoinositide 3-kinase inhibitor and an inhibitor of the il-8/cxcr interaction
KR102134088B1 (ko) 2012-08-24 2020-07-14 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 Ror1 암을 치료하고 전이를 저해하는데 이용을 위한 항체와 백신
MX2015008024A (es) 2012-12-21 2016-08-08 Biogen Int Neuroscience Gmbh Anticuerpos anti-tau humanos.
EP3517545A1 (en) 2012-12-31 2019-07-31 Neurimmune Holding AG Recombinant human antibodies for therapy and prevention of polyomavirus-related diseases
US20160002325A1 (en) 2013-03-08 2016-01-07 Vaccinex, Inc. Anti-cxcl13 antibodies and associated epitope sequences
US9920377B2 (en) 2013-03-15 2018-03-20 Sutter West Bay Hospitals FALZ for use as a target for therapies to treat cancer
JP6824735B2 (ja) 2013-06-06 2021-02-03 ピエール、ファーブル、メディカマン 抗Ｃ１０ｏｒｆ５４抗体およびその使用方法
ES2761587T3 (es) 2013-08-07 2020-05-20 Friedrich Miescher Institute For Biomedical Res Nuevo método de cribado para el tratamiento de la ataxia de Friedreich
TN2016000048A1 (en) 2013-08-13 2017-07-05 Sanofi Sa Antibodies to plasminogen activator inhibitor-1 (pai-1) and uses thereof
TW201722994A (zh) 2013-08-13 2017-07-01 賽諾菲公司 胞漿素原活化素抑制劑-１（ｐａｉ-１）之抗體及其用途
CN105611938A (zh) 2013-10-24 2016-05-25 免疫医疗有限责任公司 稳定的水性抗体配制品
WO2015127351A1 (en) 2014-02-24 2015-08-27 Celgene Corporation Methods of using an activator of cereblon for neural cell expansion and the treatment of central nervous system disorders
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
JP6640181B2 (ja) 2014-03-21 2020-02-05 エックス−ボディ インコーポレイテッド 二重特異性抗原結合ポリペプチド
EP3126397B1 (en) 2014-04-04 2020-01-29 Bionomics, Inc. Humanized antibodies that bind lgr5
WO2015189816A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research New treatment against influenza virus
EP3157535A1 (en) 2014-06-23 2017-04-26 Friedrich Miescher Institute for Biomedical Research Methods for triggering de novo formation of heterochromatin and or epigenetic silencing with small rnas
WO2016001830A1 (en) 2014-07-01 2016-01-07 Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Combination of a brafv600e inhibitor and mertk inhibitor to treat melanoma
WO2016046768A1 (en) 2014-09-24 2016-03-31 Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Lats and breast cancer
BR112017006598A2 (pt) 2014-09-30 2018-04-17 Neurimmune Holding Ag anticorpo de repetições antidipeptídeo derivado de ser humano (dprs)
EP3212510B1 (en) 2014-10-31 2020-12-09 Medlmmune, LLC Manufacturing method of a degassed composition
DK3229838T3 (da) 2014-12-11 2020-10-19 Pf Medicament Anti-C10orf54-antistoffer og anvendelser deraf
MX2017009038A (es) 2015-01-08 2017-10-25 Biogen Ma Inc Antagonistas de proteina 1 de interacción con el receptor de nogo que contiene el dominio de inmunoglobulina y repeticiones ricas en leucina (lingo-1) y usos para el tratamiento de trastornos desmielinizantes.
DE112016001013T5 (de) 2015-03-03 2017-12-21 Kymab Limited Antikörper, verwendungen und verfahren
EP3733701A1 (en) 2015-03-31 2020-11-04 MedImmune Limited A novel il33 form, mutated forms of il33, antibodies, assays and methods of using the same
AU2016323153B2 (en) 2015-09-15 2021-04-22 Board Of Regents, The University Of Texas System T-cell receptor (TCR)-binding antibodies and uses thereof
EP3368566A1 (en) 2015-10-28 2018-09-05 Friedrich Miescher Institute for Biomedical Research Tenascin-w and biliary tract cancers
US10472422B2 (en) 2016-01-08 2019-11-12 Abgenomics International Inc. Tetravalent anti-PSGL-1 antibodies and uses thereof
KR102603010B1 (ko) 2016-03-10 2023-11-16 비엘라 바이오, 인크. Ilt7 결합 분자 및 이의 사용 방법
AU2017239038A1 (en) 2016-03-22 2018-10-04 Bionomics Inc Administration of an anti-LGR5 monoclonal antibody
JP2018035137A (ja) 2016-07-13 2018-03-08 マブイミューン ダイアグノスティックス エイジーＭａｂｉｍｍｕｎｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ａｇ 新規な抗線維芽細胞活性化タンパク質（ｆａｐ）結合薬剤およびその使用
US11779604B2 (en) 2016-11-03 2023-10-10 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods
SG11201909466RA (en) 2017-05-05 2019-11-28 Vaccinex Inc Human anti-semaphorin 4d antibody
CN111587123A (zh) 2017-11-09 2020-08-25 品通治疗有限公司 用于生成和使用人源化构象特异性磷酸化的τ抗体的方法和组合物
JP7165193B2 (ja) 2017-11-27 2022-11-02 パーデュー、ファーマ、リミテッド、パートナーシップ ヒト組織因子を標的とするヒト化抗体
TW202016144A (zh) 2018-06-21 2020-05-01 日商第一三共股份有限公司 包括cd3抗原結合片段之組成物及其用途
JP2022520088A (ja) 2019-02-13 2022-03-28 ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル インコーポレイテッド 抗末梢リンパ節アドレッシン抗体およびその使用
WO2020206063A1 (en) 2019-04-03 2020-10-08 Genzyme Corporation Anti-alpha beta tcr binding polypeptides with reduced fragmentation
KR20220012894A (ko) 2019-05-24 2022-02-04 사노피 전신 경화증의 치료 방법
WO2021202463A1 (en) 2020-03-30 2021-10-07 Danisco Us Inc Anti-rsv antibodies
EP4229081A1 (en) 2020-10-15 2023-08-23 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Antibody specific for sars-cov-2 receptor binding domain and therapeutic methods
WO2022087274A1 (en) 2020-10-21 2022-04-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Antibodies that neutralize type-i interferon (ifn) activity
US20240115721A1 (en) 2021-01-13 2024-04-11 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-dll3 antibody-drug conjugate
CN117425501A (zh) 2021-01-13 2024-01-19 纪念斯隆凯特琳癌症中心 抗体-吡咯并苯二氮䓬衍生物缀合物
CA3209052A1 (en) 2021-02-19 2022-08-25 Rafael Cristian CASELLAS Single domain antibodies that neutralize sars-cov-2

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1564666A (en) * 1978-05-31 1980-04-10 Ng Mun Hon Heterocomplexes of interferon with immunoglobulin and pharmaceutical compositions thereof
GB2148299B (en) * 1983-09-01 1988-01-06 Hybritech Inc Antibody compositions of therapeutic agents having an extended serum half-life
US4703004A (en) * 1984-01-24 1987-10-27 Immunex Corporation Synthesis of protein with an identification peptide
US4590071A (en) * 1984-09-25 1986-05-20 Xoma Corporation Human melanoma specific immunotoxins
DE3585778D1 (de) * 1984-12-05 1992-05-07 Salk Inst For Biological Studi Monoklonaler antikoerper, spezifisch fuer brustkrebszelloberflaechenantigen.
NO881077L (no) * 1987-03-11 1988-09-12 Univ Michigan Kjemo-radio-immuno-konjugater.
DE3879395T2 (de) * 1987-05-29 1993-06-24 Sagami Chem Res Fusionsprotein, enthaltend lymphotoxin.
PH26813A (en) * 1987-09-02 1992-11-05 Ciba Geigy Ag Conjugates of cytokines with immunoglobulins
CA1329119C (en) * 1988-03-29 1994-05-03 Milton David Goldenberg Cytotoxic therapy
IE62463B1 (en) * 1988-07-07 1995-02-08 Res Dev Foundation Immunoconjugates for cancer diagnosis and therapy

Also Published As

Publication number Publication date
IL94167A (en) 1997-02-18
DE69005352T2 (de) 1994-04-14
HK1006678A1 (en) 1999-03-12
DK0396387T3 (da) 1994-02-14
JPH02306923A (ja) 1990-12-20
KR0181294B1 (ko) 1999-03-20
NO901986D0 (no) 1990-05-04
PT93966B (pt) 1996-12-31
JP3589459B2 (ja) 2004-11-17
NZ233413A (en) 1992-05-26
CA2015060C (en) 2008-03-18
KR900017612A (ko) 1990-12-19
ATE98873T1 (de) 1994-01-15
EP0396387B1 (en) 1993-12-22
ES2060947T3 (es) 1994-12-01
AU5379590A (en) 1990-11-08
FI902245A0 (fi) 1990-05-04
EP0396387A2 (en) 1990-11-07
PT93966A (pt) 1991-02-08
NO901986L (no) 1990-11-06
IE901405L (en) 1990-11-05
ZA902949B (en) 1992-02-26
DE69005352D1 (de) 1994-02-03
SA90110099B1 (ar) 2004-02-15
EP0396387A3 (en) 1991-04-03
FI100092B (fi) 1997-09-30
AU645747B2 (en) 1994-01-27
IE63847B1 (en) 1995-06-14
IL94167A0 (en) 1991-01-31
CA2015060A1 (en) 1990-11-05
CN1047035A (zh) 1990-11-21
CN1072505C (zh) 2001-10-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO301168B1 (no) Fremgangsmåte for fremstilling av et konjugat av et antistoff rettet mot antigen
AU636113B2 (en) Immunoconjugates for cancer diagnosis and therapy
US5744580A (en) Immunotoxins comprising ribosome-inactivating proteins
US6750329B1 (en) Antibody delivery system for biological response modifiers
Hirota et al. Suppression of an epidermal growth factor receptor-hyperproducing tumor by an immunotoxin conjugate of gelonin and a monoclonal anti-epidermal growth factor receptor antibody
JP3340127B2 (ja) 異常増殖性疾患措置のための抗体接合体
JP3949158B2 (ja) Ｃｄ３３関連表面抗原に対する免疫毒素

Legal Events

Date Code Title Description
MK1K Patent expired