NO178892B - Antibiotikum betegnet kedarcidinkromofor og fremgangsmåte til fremstilling og anvendelse derav, samt et farmasöytisk preparat omfattende kedarcidinkromofor - Google Patents
Antibiotikum betegnet kedarcidinkromofor og fremgangsmåte til fremstilling og anvendelse derav, samt et farmasöytisk preparat omfattende kedarcidinkromofor Download PDFInfo
- Publication number
- NO178892B NO178892B NO923260A NO923260A NO178892B NO 178892 B NO178892 B NO 178892B NO 923260 A NO923260 A NO 923260A NO 923260 A NO923260 A NO 923260A NO 178892 B NO178892 B NO 178892B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- chromophore
- methanol
- kedarcidin
- exhibits
- kedarcidine
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 12
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 title claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- RSXFZXJOBQZOOM-INBIVCPUSA-N 143591-04-2 Chemical compound O([C@@H]\1COC(=O)C[C@H](C2=CC=C(C(=N2)Cl)O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@](C)(O)C3)[C@]34O[C@H]3C#C/C=C/1C#CC4=C2)NC(=O)C=1C(O)=CC2=CC(OC(C)C)=C(C(=C2C=1)OC)OC)[C@H]1C[C@H](O)[C@H](N(C)C)[C@H](C)O1 RSXFZXJOBQZOOM-INBIVCPUSA-N 0.000 claims description 31
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 15
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 13
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 claims description 12
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229960004217 benzyl alcohol Drugs 0.000 claims description 10
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 10
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims description 10
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 7
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 7
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 claims description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 5
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 4
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 4
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 4
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 2
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 2
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- RSXFZXJOBQZOOM-WXIIGEIKSA-N kedarcidin Chemical compound O([C@@H]\1COC(=O)C[C@H](C2=CC=C(C(=N2)Cl)O[C@@H]2[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@](C)(O)C3)[C@]34O[C@H]3C#C/C=C/1C#CC4=C2)NC(=O)C=1C(O)=CC2=CC(OC(C)C)=C(C(=C2C=1)OC)OC)[C@H]1C[C@H](O)[C@H](N(C)C)[C@H](C)O1 RSXFZXJOBQZOOM-WXIIGEIKSA-N 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 14
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 7
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 7
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 7
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 7
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 101710204212 Neocarzinostatin Proteins 0.000 description 6
- QZGIWPZCWHMVQL-UIYAJPBUSA-N neocarzinostatin chromophore Chemical compound O1[C@H](C)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](NC)[C@H]1O[C@@H]1C/2=C/C#C[C@H]3O[C@@]3([C@@H]3OC(=O)OC3)C#CC\2=C[C@H]1OC(=O)C1=C(O)C=CC2=C(C)C=C(OC)C=C12 QZGIWPZCWHMVQL-UIYAJPBUSA-N 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 229950009268 zinostatin Drugs 0.000 description 6
- VZDYWEUILIUIDF-UHFFFAOYSA-J cerium(4+);disulfate Chemical compound [Ce+4].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O VZDYWEUILIUIDF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 5
- 229910000355 cerium(IV) sulfate Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 239000003972 antineoplastic antibiotic Substances 0.000 description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150077651 VP35 gene Proteins 0.000 description 2
- -1 ammonium molybdate (VI) tetrahydrate Chemical class 0.000 description 2
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 2
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003817 vacuum liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- CWNPOQFCIIFQDM-UHFFFAOYSA-N 3-nitrobenzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 CWNPOQFCIIFQDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000619 316 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 5-methylphenazinium methyl sulfate Chemical compound COS([O-])(=O)=O.C1=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000011765 DBA/2 mouse Methods 0.000 description 1
- 230000008265 DNA repair mechanism Effects 0.000 description 1
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000012766 Growth delay Diseases 0.000 description 1
- 208000008342 Leukemia P388 Diseases 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 241000203615 Streptoalloteichus Species 0.000 description 1
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 1
- 102000007537 Type II DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 1
- 108010046308 Type II DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- OZECDDHOAMNMQI-UHFFFAOYSA-H cerium(3+);trisulfate Chemical compound [Ce+3].[Ce+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O OZECDDHOAMNMQI-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- KKVSNHQGJGJMHA-UHFFFAOYSA-H cerium(3+);trisulfate;hydrate Chemical compound O.[Ce+3].[Ce+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O KKVSNHQGJGJMHA-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- KNANFSXYDCURQS-UHFFFAOYSA-J cerium(4+);disulfate;hydrate Chemical compound O.[Ce+4].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O KNANFSXYDCURQS-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYDMQBQPVICBEU-UHFFFAOYSA-N chlorotetracycline Natural products C1=CC(Cl)=C2C(O)(C)C3CC4C(N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)C4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O CYDMQBQPVICBEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004475 chlortetracycline Drugs 0.000 description 1
- CYDMQBQPVICBEU-XRNKAMNCSA-N chlortetracycline Chemical compound C1=CC(Cl)=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@@]4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O CYDMQBQPVICBEU-XRNKAMNCSA-N 0.000 description 1
- 235000019365 chlortetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- UREBWPXBXRYXRJ-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;methanol Chemical compound OC.CCOC(C)=O UREBWPXBXRYXRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N teniposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@@H](OC[C@H]4O3)C=3SC=CC=3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N 0.000 description 1
- 229960001278 teniposide Drugs 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
Den foreliggende oppfinnelse vedrører et antibiotikum betegnet kedarcidinkromofor.
Oppfinnelsen vedrører også en fremgangsmåte til fremstilling av kedarcidinkromoforet, samt en anvendelse og et farmasøytisk preparat derav.
Det proteiniske antitumorantibiotikum som betegnes kedarcidin er omtalt i US-patentskrift 5.001.112. Dette antibiotikum rapporteres å være et kompleks av et enkelt-kjedet polypeptid og et ikke-proteinisk kromofor. Kedar-cidinantibiotikumet blir fremstilt ved fermentering av L585-6 ATCC-53650-stammen av Streptoalloteikus sp. nov., og isoleringen og rensingen av kedarcidin er beskrevet i eksempel 4 i det forannevnte US-patentskrift. Patent-referansen hverken foreslår eller antyder imidlertid noen prosedyre for å separere kromoforet fra det isolerte kedarcidinantibiotikum, og antyder heller ikke noe om at kedarcidins antitumorvirkning stammer fra det ikke-proteiniske kromofor.
Antitumorbiotikumet som betegnes neocarzinostatin omfatter et 1:1 kompleks av et protein og et ikke-proteinisk kromofor. Litteraturen omtaler at neocarzinostatinets kromofordel kan fraskilles fra neocarzinostatinkomplekset ved ekstraksjon med surgjort metanol og at neocarzinostatinets antitumoregenskaper hovedsakelig ligger i kromoforet. Når det gjelder neocarzinostatin har strukturen til kromoforet blitt bestemt (se f.eks. J. Antibiotics, 1989, 42, 761-768). Når det gjelder kedarcidin er imidlertid ikke metoden hvor det ble ekstrahert med metanol, til-fredsstillende til å oppnå det rensede kromofor.
Et annet proteinisk antitumorantibiotikum som betegnes aureomycin omfatter også en proteinkomponent og et
ikke-proteinisk kromofor. Kromofordelen til dette antibiotikum ble også fraseparert fra antibiotikumet ved ekstraksjon med metanol (se Biochem. Biophys. Res. Commun., 1980, 94, 255-261), og antitumoraktiviteten ble igjen funnet
primært i kromofordelen.
Man kjenner til andre proteiniske antitumorantibiotikum omfattende et ikke-proteinisk kromofor hvor kromoforet ikke kunne frasepareres fra antibiotikumet på til-fredsstillende måte, hverken med prosedyren hvor det ekstraheres med metanol som beskrevet ovenfor, eller med andre konvensjonelle rensemetoder. Generelt er kromoforene til slike proteiniske antibiotika mye mere ustabile enn antibiotikumkomplekset per se selv om de kan fraskilles og isoleres.
Den foreliggende oppfinnelse er kjennetegnet ved den kjemiske struktur
og de følgende trekk:
(a) at det opptrer som et brungult farget, amfort tørrstoff, (b) at det har en molekylvekt på 1029 bestemt ved massespektroskopi,
(c) at det har en molekylformel Ct^HgQ^OigCl,
(d) at det oppviser et infrarødt absorpsjonsspektrum (KBr) hovedsakelig som vist på fig. 1, (e) at det oppviser et ultrafiolett absorpsjonsspektrum når det er oppløst i metanol, hovedsakelig som vist på fig. 1, (f) at når det er oppløst i DMSO-d6 oppviser det et protonmagnetisk resonansspektrum hovedsakelig som vist på fig. 3, (g) at når det er oppløst i DMSO-d6 oppviser det et ^C magnetisk resonansspektrum hovedsakelig som vist på fig. 4, (h) at det ved silikagel-tynnsjiktskromatografi oppviser en Rf-verdi på 0,29 med løsningsmiddelsystemet benzen-metanol (9:2 v/v) og en Rf-verdi på 0,16 med løsning-smiddelsystemet benzen-metanol (9:1 v/v), og (i) at det oppviser en HPLC-oppholdstid på 12 minutter med C^g reversert fase-silikagelkolonne og løs-ningsmiddelsystemet tetrahydrofuran - 0,2M ammoniumacetat (2:3 v/v).
Fremgangsmåte ifølge den foreliggene oppfinnelse til fremstilling av det angitte kedarcidinkromofor er kjennetegnet ved de følgende trinn: (a) at det frembringes en vandig løsning av kedarcidin, (b) at den vandige løsning underkastes ekstraksjon med etylacetat,
(c) at etylacetatekstraktet oppsamles,
(d) etylacetatekstraktet underkastes silikagel-kolonnekromatografi under anvendelse av et elueringsmiddel av benzen-metanol med trinnvis økende metanolinnhold, og (e) fraksjonen som inneholder kedarcidinkromoforet oppsamles.
Kedarcidinkromoforet kan inhibere tumorvekst i en pattedyrvert ved at det til verten administreres en tumorinhiberende mengde av kedarcidinkromofor eller et farma-søytisk preparat derav. Ifølge oppfinnelsen kan således kedarcidinkromoforet anvendes til fremstilling av et preparat til inhibering av tumorvekst i en pattedyrvert.
Den foreliggende oppfinnelse vedrører også et farma-søytisk preparat som omfatter en tumorinhiberende mengde av kedarcidinkromofor og en farmasøytisk akseptabel bærer eller tynner. Fig. 1 viser det infrarøde absorpsjonsspekter til kedarcidinkromofor (KBr pellets). Fig. 2 viser det ultrafiolette absorpsjonsspekter for kedarcidinkromofor når dette er oppløst i metanol. Fig. 3 viser det protonmagnetiske resonansspekter for kedarcidinkromofor i DMS0-d6 (500,13 Mhz). Fig. 4 viser det<XJ>C magnetisk resonansspekter til kedarcidinkromofor i DMSO-d6 (125.76 Mhz).
Kedarcidinkromofor kan frembringes fra antitumor-antibiotikumet kedarcidin isolert som ifølge US-patentskrift 5.001.112, eller fra fermenteringsmediumet som anvendes til å fremstille kedarcidin. Et foretrukket utgangs-materiale er renset kedarcidin som er isolert og renset slik som beskrevet i eksempel 4 ifølge det ovennevnte US-patentskrift. Et annet foretrukket startmateriale frembringes ved å filtrere fermenteringsmediumet hvori det er dyrket en kedarcidinproduserende stamme av Streptoallotei-chus, hvor filtratet underkastes anionbytterkromatografi hvor det som elueringsmiddel anvendes en kationisk buffer i pH-området 7-8 etterfulgt av den samme buffer inneholdende natriumklorid, og oppsamling av fraksjonen eluert med NaCl-bufferen. I eluatet som frembringes ved denne kromatografiske metode er mange av forurensningene fjernet noe som resulterer i høyere utbytter av det ønskede kedarcidinkromofor. Det har vist seg å være hensiktsmessig å lyofilisere dette eluat for lagring før ekstraksjons-trinnet som skal beskrives nedenfor, men det vandige eluat kan like gjerne anvendes direkte. Den filtrerte fermen-teringsbuljong kan også anvendes ved fremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelse uten anionbytterrensetrinnet, men dette krever ytterligere rensetrinn for å frembringe kromoforet og er mye mindre effektivt enn å starte med renset kedarcidin eller med det partielt rensede fermenteringsmedium som har blitt underkastet et anionbytter-trinn.
En vandig løsning av renset eller partielt renset kedarcidin som beskrevet ovenfor, ble deretter underkastet organisk ekstraksjon med etylacetat. Andre organiske løs-ningsmidler såsom surgjort metanol som var anvendt for å frembringe kromofor fra neocarzinostatin, n-butanol, benzen-metanol og kloroform-metanol resulterte i dekompo-nering eller emulsjonsdannelser. Etylacetatekstraktet ble deretter underkastet silikagel-væskekromatografi hvor det som elueringsmiddel ble anvendt et trinnvis gradert benzen inneholdende økende konsentrasjoner av metanol. Fraksjon-ene ble overvåket ved tynnsjiktskromatografi (TLC) og den ønskede fraksjon inneholdende renset kedarcidinkromofor kunne deretter anrikes in vacuo til dannelse av produktet i form av et amorft tørrstoff med brungul farge.
Fysikalske oa kjemiske egenskaper til kedarcidin-kromofor
Kedarcidinkromoforet har de følgende fysikalsk-kjemiske egenskaper: Beskrivelse: Brungult farget amorft tørrstoff Stabilitet: Svært ustabilt. Dekomponeres i løpet
av timer når det er i løsning med benzen, metanol, kloroform og dimetyl-sulfoksid (DMSO).
Molekylformel: C53H60N3°16C1
Molekylvekt: 1029,3628
Massespektrum: Kratos MS50 massespektrum [M+H]<+>1030,.
FAB under anvendelse m-nitro-benzylalkohol
Infrarødt spektrum: Perkin Eimer 1800 Fourier Transform IR spektrometer, Kbr-pellets. Hovedbånd (IR) (cm-1) :
3432, 3076, 2976, 2832, 2188, 1742, 1656, 1622, 1524, 1470, 1450, 1434, 1386, 1354, 1298, 1240, 1192, 1164, 1114, 1080, 1060, 1032, 1010, 980, 936, 902, 862, 824, 798, 680 Ultrafiolett Hewlett Packard 8452A Diodestråle spektrum: spektrofotometer T^^g (MeOH) : 256, 316 nm (log e 4,78, 4,16) Analytisk HPLC: Kolonne: Q-BEX C18 (10|i) nr. 10230
Elueringsmiddel: 4 deler tetrahydrofuran 6 deler 0,2M ammoniumacetat Strømning: 2 ml/min.
Detektor: 254 nm Prøvekonsen-
trasjon: 4p.g/p.l metanol
Oppholdstid: 12 min. Elementæranalyse: Funnet: C, 58,78/H, 5,78; N, 3,56
Kvalitetstest for Cl: positiv
Kvalitetstest for S: negativ<1>H-NMR Brukermodell AM-500 spektrometer Løsningsmiddel: DMSO-d6
Observerte kjemiske skift
(relativt til DMSO-signal 8 2,531): 1,09 (s, 3H) , 1,16 (s br, 6H), 1,34 (s br, 6H), 1,74 (m, 2H), 1,92 (m, 1H), 2,05 (d, 1H, J=14,3), 2,36 (m, 1H), 2,46 (s, 6H) , 2,86 (m, 2H) , 3,21 (m, 1H) , 3,78 (s, 3H) , 3,95 (s, 3H) , 3,95
(m, 1H) , 4,04 (m, 1H), 4,09 (m, 1H) , 4,12 (m, 1H) , 4,27 (m, 1H) , 4,30 (m, 1H) , 4,34 (m, 1H) , 4,53 (s br, 1H) , 4,75 (m, 1H), 4,81 (s br, 1H), 5,11 (s br, 1H) , 5,44 (s br, 1H) , 5,56 (m, 1H) , 6,19 (s, 1H), 6,62 (s, 1H) , 6,97 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,22 (d, 1H, J=8,3), 8,06 (d, 1H, J=8,3),
8,48 (s, 1H) , 9,56 (d, 1H, J=7,4).<13>C-NMR:Brukermodell AM-500 spektrometer Løsningsmiddel: DMSO-d6 Observerte kjemiske skift (relativt til DMSO-signaler 8 39.113, 39.268, 39.447, 39.601, 39.780, 39.935, 40 .113)
Tynnsjiktskromato-
grafi: Rf 0,29 benzen-metanol 9:2
Rf 0,16 benzen-metanol 9:1
Plate: Uniplate silikagel GHLF, 0,25 mm tykkelse (Analtech)
Deteksjon: Kortbølget UV-lys cerisk-sulfat (ceriumsulfat) sprayreagens
Basert på de ovenfor beskrevne fysikalskjemiske egenskaper, antas kedarcidinkromoforets kjemiske struktur å være som følger:
Biologisk aktivitet
Kedarcidinkromoforets antitumoraktivitet ble evaluert ved hjelp av en cytotoksisk prøve in vitro mot en
rekke humane tumorcellelinjer og in vivo mot transplanter-bare murine P388 leukemia og B-16 melanoma. En beskrivelse av de anvendte metoder og de oppnådde resultater er angitt nedenfor.
I. Metoder
A. In vitro cytotoksisk prøve
Cellelinjene som ble anvendt til å evaluere den in vitro cytotoksiske styrke omfattet adenocarcinoma HCT116 medikamentsensitive cellelinjer fra den humane colon, medikamentresistente dattercellelinjer av typen HCT116/VP35 og HCT116/VM46 som har lav Topoisomerase II henholdsvis forhøyede P-170 glycoproteinnivåer<1>, og de carcinoma-A2780-medikamentsensitive og carcinoma-A2780/DDP-medikamentresistente dattercellelinje fra den humane ovaria. A2780/DDP-cellelinjen rapporteres å være resistent som følge av forsterkede DNA-reparasjonsmeka-nismer og forhøyede GSH/GST-nivåer. Cellene ble dyrket i McCoys medium og 10% fetalbovint serum. Når veksten var i logfase ble 4 x 10^ celler per brønn platet ut på mikro-titerplater med 96 brønner og inkubert ved 37°C i 95% 02/5% CO2i 24 timer for å muliggjøre at cellene festet seg. Forbindelser ble tilsatt til toppraden av brønnene, serielt fortynnet (4 ganger fortynninger) og inkubert i ytterligere 72 timer. Antallet levedyktige celler i hver brønn ble deretter kvantifisert som beskrevet tidligere<2>ved å tilsette 0,05 mg/ml sluttkonsentrasjon av tetrazo-liumfarge (XTT) i nærvær av 0,005 mM sluttkonsentrasjon av fenazinmetosulfat. Etter inkubering ved romtemperatur i 3 timer for å muliggjøre fargeutvikling ble optiske densi-tetsverdier målt ved å anvende en Dynatech MR600 plate-leser ved 450 Nm. IC50 verdier (medikamentkonsentrasjon som inhiberer celleveksten med 50%) ble beregnet ved å an vende lineær regresjonsanalyse på de optiske densitetsav-lesningene. Tredoble bestemmelser på separate plater med 96 brønner ble gjennomført for hvert medikament for hver av de cellelinjer som ble testet.
B. Murine in vivo modeller ( Models)
1. P388 murine leukemimodeller
P388-tumoren ble holdt i askitisk form i DBA/2 mus. De eksperimentelle tumormodeller anvendte CDF^-mus implantert intraperitonealt eller intravenøst med 1 x 10^ leu-kemiceller på dag 0 og dosert med medikamentene ifølge den angitte rutine og plan. Musene ble veiet på dag 0 og på dag 5 eller 6. Vekttap på 20% eller mere var en indikator på medikamenttoksisitet. Hver doseringsgruppe besto av 6 mus og med 10 mus i den ubehandlede kontrollgruppe. Doser-ingsplanen var Q1DX/1. Dødeligheten ble sjekket daglig og den midlere levetid for hver gruppe ble bestemt. En økning i levetiden på 25% eller høyere for den gruppe som var behandlet med medikament sammenlignet med den ubehandlede gruppe av kontrollmus var kriteriet for aktiviteten (%T/C
> 125%) . Eksperimentene ble avsluttet på eller ca. ved dag 30.
2. B- 16 murine " solid" tumormodell
B-16 murine melanoma ble holdt som en subkutan voksende tumor i C57BL/6 mus. Eksperimentelle tumormodeller anvendte BDF^-mus implantert med et 25 mg tumor-fragment som ble implantert subkutant via trochar ved dag 0. Kedarcidinkromofor ble administrert iv etter en Q1DX1;1-plan. Musene ble veiet ved dag 0 og dag 9.
II. Resultater
A. In vitro
Som vist i den nedenstående tabell var kedarcidin-kromof oret ekstremt sterkt (sammenlignet med VP-16 (etopo-sid) i sin evne til å inhibere cellevekst.(IC50-verdier uttrykt som nanogram av forbindelse/ml, sluttkonsentra sjon). Kedarcidinkromofor var 285 og 1725 ganger sterkere enn VP-16 på de to VP-16-sensitive cellelinjer. Dessuten var ikke kedarcidinkromofor kryssresistent med VP-16 på HCT116/VP35- eller HCT116/VM46-cellelinjer. Når både VP-16 og kedarcidinkromofor ble evaluert på de A2780-sensitive og A2780/DDP-cellelinjer, var de ca. 6,6 ganger svakere på den resistente cellelinje sammenlignet med den sensitive cellelinje.
B. In vivo
1. P388 murine leukemimodell
Når kedarcidinkromofor ble evaluert mot ip-implantert P388 murine leukemi, produserte det en T/C% på et 175 ved en optimal dose på 1 mg/kg/injeksjon når det ble administrert ip en dag etter tumorimplanteringen. I det samme eksperiment var iv-implanterte P388 tumorceller også sensitive overfor kedarcidinkromoforets antitumorvirkninger. Når kedarcidinkromofor ble administrert iv en dag etter tumorimplantering, produserte det en T/C% på 214 ved en optimal dose på 0,25 mg/kg/inj. To forskjellige prøver av kedarcidin var like effektivite selv om de var noe mindre kraftige sammenlignet med kedarcidinkromofor i dette eksperimentet. Kedarcidinkromoforets antitumorvirkning mot P388 murine leukemi ble bekreftet i eksperiment 8328. Ved ip-implanteringsmodellen, produserte Q1DX1/1 kedarcidin-kromofor som var administrert ip, en T/C% på 185 med en optimal dose på 0,25 mg/kg/inj. Under eksperimentdelen med iv-implantering, produserte kedarcidinkromofor en T/C% på 186 ved en optimal dose på 0,125 mg/kg/inj når det ble administrert iv etter den samme plan. To forskjellige mengder av kedarcidin hadde lik virkning om enn noe mindre kraftig sammenlignet med kedarcidinkromofor ifølge dette eksperiment.
I P388 murine leukemimodeller hadde kedarcidin-kromofor både en kraftig og effektiv virkning, uavhengig av om enten ip, ip-modell eller den iv, ble iv-modell anvendt til å evaluere antitumorakviteten til denne forbin-delse. Kedarcidinkromofor var like virkningsfullt og noe mere kraftig enn kedarcidin ved P388 modellen.
2. B- 16 Murin fast tumormodell
I eksperiment 796 ble kedarcidinkromofor sin antitumoraktivitet evaluert under anvendelse av den B-16 murine melanoma modell. Når tumoren ble implantert subkutant var kedarcidinkromofor aktivt ifølge levetidskriteriet med en T/C% på 164 når det ble administrert iv 1 dag etter tumorimplanteringen ved en optimal dose på 0,062 mg/kg/inj. Under det samme eksperiment produserte kedarcidin en identisk T/C% ved en optimal dosering på 0,75 mg/kg/inj. under anvendelse av den samme metode og plan. Hverken kedarcidinkromofor eller kedarcidin var aktive ifølge kriteriet for tumorvekstforsinkelse.
III. Konklusjoner
Kedarcidinkromofor oppviste signifikant antitumoraktivitet ifølge den ip- eller iv-implanterte P388 murine leukemimodell og i den sc-implanterte B-16 murine melanomamodell ifølge levetidskriteriet. Det var like aktivt som, og noe kraftigere enn, kedarcidin når man sammenlignet direkte under disse eksperimentene.
IV. Litteraturhenvisninger
Long, B.H., Wang, L., Lorico, A., Wang, R.CC, Brattain, M.G. og Casazza, A.M. Mechanisms of Resistance to Etoposide and Teniposide in Acquired Resistant Human Colon and Lung Carcinoma Cell Lines.
Cancer Research 51; Under utgivelse (1991) .
2. Scuderio, D.A., Shoemaker, R.H., Pauli, K.D., Monks, A., Tierney, S., Nofziger, T.H., Currens, M.J., Seniff, D. og Boyd, M.R. Evaluation of a Soluble Tetrazolium/Formazan Assay for Cell Growth and Drug Sensitivity in Culture Using Human and Other Tumor Cell Lines. Cancer Research 48: 4827-4833 (1988).
Testresultatene indikerte at kedarcidinkromofor oppviser kraftig antitumoraktivitet in vitro mot en rekke humane tumorcellelinjer og in vivo antitumoraktivitet mot murine leukemi P388 og Bl6 melanoma.
Oppfinnelsen innbefatter også et farmasøytisk preparat som inneholder en effektiv tumorinhiberende mengde av kedarcidinkromofor i kombinasjon med en farmasøytisk akseptabel bærer eller tynner. Slike preparater kan også inneholde andre aktive antitumormidler og kan fremstilles i enhver farmasøytisk form som egner for den tiltenkte administreringsplan. Eksempler på slike preparater innbefatter faste preparater for oral administrering såsom tab-letter, kapsler, piller, pulvere og granuler, væskeformige preparater for oral administrering såsom løsninger, suspensjoner, syruper og eliksirer og preparater for paren-teral administrering såsom sterile løsninger, suspensjoner eller emulsjoner. De kan også fremstilles i form av sterile faste preparater som kan oppløses i sterilt vann, fysiologisk saltløsning eller et annet sterilt injiserbart medium umiddelbart før det anvendes.
Anvendt som et antitumormiddel kan optimale doser-inger og behandlingsplaner for en gitt pattedyrvert lett-vint utarbeides for en fagmann. Det skal selvsagt forstås at den aktuelle anvendte dosering vil variere i overens-stemmelse med det bestemte preparat som er formulert, administreringsplanen og det bestemte område, vert og lidelse som behandles. Det må tas hensyn til mange fakt-orer som kan modifisere virkningen av medikamentet omfattende alder, vekt, kjønn, diett, administreringstid, administreringsplan, avgivelseshastighet, pasientens til-stand, medikamentkombinasjoner, reaksjonssensitiviteter og hvor alvorlig lidelsen er.
Den foreliggende oppfinnelse skal illustreres ved
hjelp av det etterfølgende eksempel som ikke på noen måte skal betraktes som begrensende på oppfinnelsesomfang. Alle forhold mellom løsningsmidler er basert på volum/volum når ikke annet er angitt.
Eksempel 1
Generelle metoder
Materialer
Kloroform, benzen, etylacetat og metanol var vann-frie løsningsmidler av ACS-kvalitet. Tetrahydrofuran var preservativfritt løsningsmiddel av HPLC-kvalitet. Disse løsningsmidler ble ikke renset på nytt eller redestillert. Vann som ble anvendt under eksperimentene med løsnings-middelseparasjon omfattet tilgjengelig deionisert vann. Vann som ble anvendt under de kromatografiske eksperi-menter omfattet tilgjengelig deionisert vann, som ble passert gjennom et fire kolonners rensesystem for ultra-rent vann av typen Millipore 4 (10 mega ohm MilliQ vann). Ammoniumacetat omfattet et reagens av HPLC-kvalitet. Silikagel for vakuum-væskekromatografi var Merck LiChro-prep Si 60, med partikkelstørrelse 25-40^lm. Seriumsulfat-hydrat og ammoniummolybdat (VI) tetrahydrat var reagenser av ACS-kvalitet.
Analytisk tvnnsiiktskromatografi ( TLC):
Det ble anvendt prebelagte tynnsjiktskromatografi-plater (merkeinndelt (scored) i 10 x 20 cm, 250 (i) av typen Uniplate Silica Gel GHLF. Fraksjoner ble blottet på platene ved å anvendte Microcaps (engangspipetter) av størrelse 2 (il, og platene ble fremkalt i en tank brakt i likevektstilstand med benzen-metanol (9:2 v/v). Komponentene i det resulterende kromatogram ble visualisert ved hjelp av kortbølget UV-lys og/eller sprayreagens av cerisk sulfat.
Sprayreagens av cerisk sulfat:
Sprayreagens i form av cerisk sulfat for tynnsjiktskromatografi ble fremstilt ved å løse opp 6 g serium-sulf athydrat og 28 g ammoniummolybdat (VI) tetrahydrat i 20% vandig svovelsyre (500 ml). Den besprøytede TLC plate ble fremkalt ved oppvarming ved ca 150° i 5-10 minutter.
Analytisk HPLC
De følgende komponenter ble anvendt til å konstruere et analytisk HPLC-system: Leveringssystem for løsnings-middel fra Waters Associates, modell M-45, injektor fra Waters Associates, modell U6K, Guard-Pak Precolumn Module med C18 kolonne fra Waters Associates, C18 (10 |i) kolonne (3,9 mm i.d. x 30 cm, QBX-10230) fra Q-BEX Scientific Inc. Komponentene ble sammenkoplet ved hjelp av 316 rustfrie stålrør (1,6 mm o.d. - 0,23 mm i.d.). Det spesifiserte elueringsmiddel ble pumpet med en strømningshastighet på 2,0 ml/min. Deteksjon ble gjennomført med et Hewlett Packard HP-1040A detektorsystem. Dette system var sammen-satt av en Hewlett Packard HP-1040A diodestråledetektor, en HP-85B datamaskin, en HP-9121 disc-drive og en HP-7470 plotter.
Rensing av kedarcidinkromofor:
Fremstilling av ekstrakt A
Et fermenteringsmedium av kedarcidin ble frembrakt ved å følge den generelle fremgangsmåte ifølge eksemplene 1-3 ifølge US-patentskrift 5.001.112. Rå-fermenteringsmediumet ble underkastet filtrering og anionbytterkromatografi for å frembringe det eluat som er beskrevet i spalte 13, linje 34 i US-patentskrift 5.001.112. Dette eluat som inneholdt partielt renset kedarcidinantibiotikum ble anvendt, etter lyofilisering, som startmateriale i det etter-følgende ekstraksjonstrinn.
Partielt renset lyofilisert kedarcidin (76 g) fremstilt ved lyofilisering av eluatet som er beskrevet ovenfor, ble oppløst i 1100 ml vann. Den vandige løsning ble ekstrahert 4 ganger med en lik volummengde etylacetat ved anendelse av en 6 liters skilletrakt. Etylacetatekstrak-tene ble polert og inndampet til tørrhet under vakuum i en rotasjonsinndamper til dannelse av 0,34 g av residum A.
Vakuum- væskekromatografi av residum A:
En liten Kontes frittet filtertrakt (2,5 cm i.d. x 11 cm) ble pakket trekvart full med 12 g tørr silikagel (Merck LicChroprep 25-40 Jim) . Kolonnen ble brakt i likevektstilstand med 100 ml benzen under anvendelse av tilgjengelig vakuum for å eluere ut løsningsmidlet. Residum A ble oppløst i etylacetat-metanol i forholdet 3:1 (5 ml) og preadsorbert på 3 g silikagel. Prøven ble oppslemmet i benzen, overført til kolonnen og vakuumet ble påtrykket. Under anvendelse av et trinnvis gradert elueringsmiddel ble utvaskingen startet (100 ml for hver) med benzen, 1% metanol i benzen, 2%, 5%, og 7,5% metanol i benzen (3 ganger). Kromatogrammet ble overvåket med TLC under anvendelse av kortbølget UV-lys og cerisk sulfat sprayreagens for visualisering. Den ønskede substans ble eluert med de første 100 ml 7,5% metanol i benzen. Denne fraksjon ble inndampet til tørrhet under vakuum (25°) i en rotasjonsinndamper til dannelse av 0,2 g kedarcidinkromofor.
Claims (4)
1. Antibiotikumet betegnet kedarcidinkromofor,karakterisert vedden kjemiske struktur
og de følgende trekk: (a) at det opptrer som et brungult farget, amfort tørrstoff, (b) at det har en molekylvekt på 1029 bestemt ved massespektroskopi, (c) at det har en molekylformel C53HgQ<N>3<0>1gCl, (d) at det oppviser et infrarødt absorpsjonsspektrum (KBr) hovedsakelig som vist på fig. 1, (e) at det oppviser et ultrafiolett absorpsjonsspektrum når det er oppløst i metanol, hovedsakelig som vist på fig. 1, (f) at når det er oppløst i DMSO-d6 oppviser det et protonmagnetisk resonansspektrum hovedsakelig som vist på fig. 3, (g) at når det er oppløst i DMSO-d6 oppviser det et<13>C magnetisk resonansspektrum hovedsakelig som vist på fig. 4, (h) at det ved silikagel-tynnsjiktskromatografi oppviser en Rf-verdi på 0,29 med løsningsmiddelsystemet benzen-metanol (9:2 v/v) og en Rf-verdi på 0,16 med løsning-smiddelsystemet benzen-metanol (9:1 v/v), og (i) at det oppviser en HPLC-oppholdstid på 12 minutter med C-^ q reversert fase-silikagelkolonne og løs-ningsmiddelsystemet tetrahydrofuran - 0,2M ammoniumacetat (2:3 v/v) .
2. Farmasøytisk preparat,karakterisertved at det omfatter en tumorinhiberende mengde av kedarcidinkromofor ifølge krav 1 og en farmasøytisk akseptabel bærer eller tynner.
3. Fremgangsmåte til fremstilling av kedarcidinkromofor med den kjemiske struktur
karakterisert vedde følgende trinn: (a) at det frembringes en vandig løsning av kedarcidin, (b) at den vandige løsning underkastes ekstraksjon med etylacetat, (c) at etylacetatekstraktet oppsamles, (d) etylacetatekstraktet underkastes silikagel-kolonnekromatografi under anvendelse av et elueringsmiddel av benzen-metanol med trinnvis økende metanolinnhold, og (e) fraksjonen som inneholder kedarcidinkromoforet oppsamles.
4. Anvendelse av kedarcidinkromofor ifølge krav 1 for fremstilling av et preparat til inhibering av tumorvekst i en pattedyrvert.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/763,465 US5143906A (en) | 1991-09-26 | 1991-09-26 | Kedarcidin antitumor chromophore and pharmaceutical composition containing same |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO923260D0 NO923260D0 (no) | 1992-08-20 |
| NO923260L NO923260L (no) | 1993-03-29 |
| NO178892B true NO178892B (no) | 1996-03-18 |
| NO178892C NO178892C (no) | 1996-06-26 |
Family
ID=25067899
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO923260A NO178892C (no) | 1991-09-26 | 1992-08-20 | Antibiotikum betegnet kedarcidinkromofor og fremgangsmåte til fremstilling og anvendelse derav, samt et farmasöytisk preparat omfattende kedarcidinkromofor |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5143906A (no) |
| EP (1) | EP0534137A3 (no) |
| JP (1) | JPH06179623A (no) |
| KR (1) | KR930005632A (no) |
| CN (1) | CN1032235C (no) |
| AU (1) | AU647300B2 (no) |
| CA (1) | CA2075453A1 (no) |
| FI (1) | FI923827A (no) |
| HU (1) | HU211108B (no) |
| IL (1) | IL102942A0 (no) |
| MX (1) | MX9204765A (no) |
| NO (1) | NO178892C (no) |
| NZ (1) | NZ244149A (no) |
| PL (1) | PL168918B1 (no) |
| RU (1) | RU2067117C1 (no) |
| TW (1) | TW215900B (no) |
| ZA (1) | ZA926421B (no) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3706729A (en) * | 1963-11-21 | 1972-12-19 | Andrew David Batcho | Antibiotics and processes for their preparation |
| US5001112A (en) * | 1988-04-12 | 1991-03-19 | Bristol-Myers Company | Antitumor antibiotic kedarcidin |
-
1991
- 1991-09-26 US US07/763,465 patent/US5143906A/en not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-05-13 TW TW081103762A patent/TW215900B/zh active
- 1992-08-05 AU AU20800/92A patent/AU647300B2/en not_active Ceased
- 1992-08-06 CA CA002075453A patent/CA2075453A1/en not_active Abandoned
- 1992-08-17 RU SU925052758A patent/RU2067117C1/ru active
- 1992-08-18 MX MX9204765A patent/MX9204765A/es unknown
- 1992-08-19 HU HU9202712A patent/HU211108B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-08-20 EP EP19920114277 patent/EP0534137A3/en not_active Ceased
- 1992-08-20 NO NO923260A patent/NO178892C/no unknown
- 1992-08-21 JP JP4264030A patent/JPH06179623A/ja active Pending
- 1992-08-25 IL IL102942A patent/IL102942A0/xx unknown
- 1992-08-25 PL PL92295725A patent/PL168918B1/pl unknown
- 1992-08-25 ZA ZA926421A patent/ZA926421B/xx unknown
- 1992-08-26 KR KR1019920015415A patent/KR930005632A/ko not_active Application Discontinuation
- 1992-08-26 CN CN92110256A patent/CN1032235C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1992-08-26 FI FI923827A patent/FI923827A/fi not_active Application Discontinuation
- 1992-08-31 NZ NZ244149A patent/NZ244149A/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1073447A (zh) | 1993-06-23 |
| FI923827A0 (fi) | 1992-08-26 |
| IL102942A0 (en) | 1993-01-31 |
| NZ244149A (en) | 1994-01-26 |
| AU2080092A (en) | 1993-04-01 |
| MX9204765A (es) | 1993-03-01 |
| ZA926421B (en) | 1993-03-01 |
| EP0534137A3 (en) | 1994-07-06 |
| US5143906A (en) | 1992-09-01 |
| NO923260L (no) | 1993-03-29 |
| HU211108B (en) | 1995-10-30 |
| EP0534137A2 (en) | 1993-03-31 |
| PL295725A1 (en) | 1993-04-05 |
| NO923260D0 (no) | 1992-08-20 |
| CA2075453A1 (en) | 1993-03-27 |
| TW215900B (no) | 1993-11-11 |
| PL168918B1 (pl) | 1996-05-31 |
| JPH06179623A (ja) | 1994-06-28 |
| NO178892C (no) | 1996-06-26 |
| HUT62908A (en) | 1993-06-28 |
| FI923827A (fi) | 1993-03-27 |
| AU647300B2 (en) | 1994-03-17 |
| RU2067117C1 (ru) | 1996-09-27 |
| KR930005632A (ko) | 1993-04-20 |
| CN1032235C (zh) | 1996-07-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Inouye et al. | The antibiotics of the pluramycin group (4 H-anthra [1, 2-b] pyran antibiotics) | |
| CA1060003A (en) | N-trifluoroacetyladriamycin-14-alkanoates and therapeutic compositions containing same | |
| JPH03215428A (ja) | Ｂｍｙ―４１９５０抗腫瘍抗生物質 | |
| US4064014A (en) | Antibiotic compounds marcellomycin and musettamycin | |
| PT92263B (pt) | Processo para a preparacao de analogos da serina com actividade antibiotica | |
| FR2555586A1 (fr) | Complexe antibiotique bbm-2478 | |
| Rao et al. | E-73: An antitumor substance. Part I. isolation and characterization1 | |
| RU2032693C1 (ru) | N-алкилпроизводные антибиотиков или их фармацевтически приемлемые соли, обладающие противогрибковой активностью, соединение в качестве промежуточного соединения в синтезе n-алкилпроизводных антибиотиков и способ получения n-алкилпроизводных антибиотика или их фармацевтически приемлемых солей | |
| Berger et al. | Coumarin-glycoside antibiotics | |
| NO178892B (no) | Antibiotikum betegnet kedarcidinkromofor og fremgangsmåte til fremstilling og anvendelse derav, samt et farmasöytisk preparat omfattende kedarcidinkromofor | |
| CN112500348B (zh) | 一类格尔德霉素衍生物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CS207462B1 (en) | method of making the antibiotics | |
| US4360595A (en) | Fermentation process for producing anandimycin | |
| CZ51795A3 (en) | 2-AMINO-4-(HYDROXYMETHYL)-3A,5,6,6A-TETRAHYDRO-4H-CYCLOPENT/d/OXAZOLE- -4,5,6-TRIOL, PROCESS OF ITS PREPARATION AND PRODUCTION MICRO-ORGANISMS | |
| Strauss et al. | Leukaemomycin, an antibiotic with antitumor activity. II. Isolation and identification | |
| US4162938A (en) | Antibiotic compound | |
| EP0874851B1 (en) | Macrocyclic compounds made from carbon suboxide units | |
| CN116354899B (zh) | 一种含恶唑环的杂合聚酮化合物及其制备方法和应用 | |
| EP0452040B1 (en) | Polysaccharide compounds produced by fermentation | |
| CN114262354B (zh) | 一种化合物及其用途 | |
| EP0206138A1 (en) | Anthracycline compounds, a process for their preparation and their use as medicaments | |
| CN113480557A (zh) | 聚酮类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN117384228A (zh) | 一种β-咔啉葡萄糖醛酸苷、制备方法及其应用 | |
| JPS6054690A (ja) | 抗生物質ＬＬ−Ｄ０５１３９β | |
| JPH08245607A (ja) | 非マクロライド系化合物及び抗腫瘍剤 |