NO178374B

NO178374B - Analogifremgangsmåte for fremstilling av nye terapeutisk aktive acetylcholinesteraseinhibitorer

Info

Publication number: NO178374B
Application number: NO902776A
Authority: NO
Inventors: Daniel Schirlin; Jean-Noel Collard; Jean-Marie Hornsperger
Original assignee: Merrell Dow Pharma
Priority date: 1989-06-22
Filing date: 1990-06-21
Publication date: 1995-12-04
Also published as: DE69017543T2; PT94449A; NZ234136A; CA2019231C; EP0403713A1; FI903104A0; ATE119535T1; DK0409676T3; IL94779A; EP0409676B1; IE66155B1; JPH0338591A; HU210569B; NO902776D0; HU903933D0; NO178374C; AU5758490A; ZA904715B; PT94449B; FI97619B

Description

Foreliggende oppfinnelse angår fremstilling av silylerte, aromatiske fluorketoner som kan anvendes ved behandling av sykdommer forbundet med mangler ved cholinerg transmisjon i sentralnervesystemet, f.eks. Alzheimers sykdom og senil demens.

Oppfinnelsen angår således en analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive forbindelser med formelen

og de farmasøytisk akseptable salter derav,

hvori m og/eller n er 0 eller 1, med det forbehold at summen av m og n er mindre enn 2,

Q er

eller

hvor R er H eller Cj_4-alkyl,

X er H eller halogen,

Rlf R2 og R3 er hver C1.4-alkyl,

Y er H eller C1.4-alkyl.

De farmasøytisk akseptable salter av forbindelsene

ifølge formel I innbefatter salter dannet med ikke-toksiske, organiske eller uorganiske syrer som f.eks. saltsyre, hydro-genbromid, sulfonsyre, svovelsyre, fosforsyre, salpetersyre, maleinsyre, fumarsyre, benzosyre, askorbinsyre, panoinsyre, ravsyre, methansulfonsyre, eddiksyre, propionsyre, vin-syre, sitronsyre, melkesyre, maleinsyre, mandelsyre, kanel-syre, palmitinsyre, itakonsyre og benzensulfonsyre.

Analogifremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er kjennetegnet ved at

(a) det dannes et lithionderivat av en forbindelse med formel

hvori m, n, Rx, R2 og R3 er som ovenfor definert og lithion-derivatet omsettes med en syre (som tilsvarer dets lithion-salt), ester eller syreklorid med formel XCF2C02R eller XCF2-C0C1 hvori R er H eller C1.6-alkyl, og X er som ovenfor definert, for fremstilling av en forbindelse med den subgeneriske formel

hvori Rlr R2, R3, X, m og n er som ovenfor definert,

(b) en forbindelse med formel

hvori X, Y, Rlr R2, R3, n og m er som ovenfor angitt, oxyderes, for fremstilling av en forbindelse med subgenerisk formel hvori X, Y, Rlr R2, R3, n og m er som ovenfor angitt, (c) at en forbindelse med formel (2) reduseres for fremstilling av en forbindelse med subgenerisk formel

hvori X, Rlr R2, R3, n og m er som ovenfor angitt,

(d) at en forbindelse av formel

hvori X, Y, R, Rlr R2, R3, n og m er som ovenfor angitt, hydro-lyseres for fremstilling av en forbindelse med subgenerisk formel

hvori X, Y, Rx, R2, R3, n og m er som ovenfor angitt,

(e) at en forbindelse med formel

hvori X, Y, Rlr R2, R3, n og m er som ovenfor angitt, forestres med et acylhalogenid, for fremstilling av en forbindelse med subgenerisk formel

hvori X, Y, R, Rx, R2, R3, n og m er som ovenfor angitt, eventuelt etterfulgt av omdannelse av produktene erholdt i trinnene (a) til (e), til deres farmasøytisk akseptable salter.

De etterfølgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.

Eksempel 1

2, 2, 2- trifluor- 1-( 3- trimethylsilylfenyl)- ethanon

Trinn A:

3- trimethylsilyl- brombenzen

En blanding av 1,3-dibrombenzen (25,0 g, 106,4 mmol) og trimethylsilylklorid (11,6 g, 106,4 mmol) i diethylether (50 ml) ble i løpet av 1,5 time tilsatt dråpevis til magnes-ium (2,59 g, 106,4 mmol) i diethylether (25 ml). Blandingen ble deretter tilbakeløpskjølt i 18 timer, avkjølt til 0°C og behandlet med 4N HCl (75 ml). Det organiske lag ble adskilt, vasket med vann, saltvann, tørket over MgSO^ og konsentrert. 3-trimethylsilyl-brombenzen ble erholdt ved fraksjonert destillering i form av en fargeløs olje (13,4 g, 55% utbytte,

k.p.: 55-62°C (0,8 mmHg).

Trinn B:

2, 2, 2- trifluor- 1-( 3- trimethylsilylfenyl)- ethanon

Til en oppløsning av 3-trimethylsilyl-brombenzen (7,62 g, 33,3 mmol) i diethylether (35 ml) ble det i løpet av 10 minutter ved 0°C tilsatt 1,5M n-butyllithium i hexan (22,2 ml, 33,3 mmol). Blandingen ble tillatt å reagere i 15 minutter ved romtemperatur, avkjølt til -78°C, og ethyltrifluoracetat (14,2 g, 100 mmol) ble tilsatt i løpet av 5 minutter. Deretter ble blandingen tillatt å reagere i 15 minutter ved -78°C, kjølebadet ble fjernet, og når temperaturen var steget til 0°C, ble 3N HCl (35 ml) tilsatt dråpevis. Det organiske lag ble adskilt, vasket med vann, saltvann, tørket over MgS04 og konsentrert. Kromatografi (silicagel, cyclohexan/diethylether: 90/10) etterfulgt av destillering under redusert trykk ga den forventede forbindelse i form av en fargeløs olje (4,32 g, 53% utbytte), k.p. 120°C, Rf: 0,28 (cyclohexan/diethylether: 95/5).

Eksempel 2

1-[( 4- methoxy- 3- trimethylsilyl) fenyl]- 2 , 2 , 2- trifluorethanon

Trinn A:

4- brom- 3- trimethylsilylanisol

Til en oppløsning av 2,4-dibromanisol (13,3 g, 50 mmol) i diethylether (50 ml) ved 0°C ble det i løpet av 20 minutter tilsatt 1,5M butyllithium (33,4 ml), og reaksjonen ble tillatt å foregå i 15 minutter ved 0°C. Deretter ble trimethylsilylklorid (5,43 g, 50 mmol) i diethylether (20 ml) tilsatt i løpet av 10 minutter, og den dannede blanding ble omrørt i 18 timer ved romtemperatur. Ved 0°C ble 3N HCl (50 ml) tilsatt, og det organiske lag ble adskilt, vasket med vann, saltvann, tørket over MgSO^ og konsentrert. 4-brom-3-trimethylsilylanisol ble renset ved kromatografi på silicagel (eluert med cyclohexan) i form av en fargeløs olje.

Trinn B: !-_[ ( 4- methoxy- 3- trimethylsilyl) fenyl] - 2 , 2 , 2- trif luorethanon

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet i trinn B i eksempel 1. Kromatografi på silicagel (cyclohexan/diethylether: 95/5) ga en fargeløs olje (59% utbytte).

Eksempel 3

1-[( 4- hydroxy- 3- trimethylsilyl) fenyl]- 2, 2, 2- trifluorethanon

Trinn A:

4- brom- 3- trimethylsilylfenol

Til en oppløsning av 2,4-dibromfenol (8,0 g, 31,75 mmol) i diethylether (35 ml) ved 0°C ble det i løpet av 50 minutter tilsatt 1,5M butyllithium (42,3 ml), og blandingen ble omrørt i 2,5 time ved romtemperatur. Ved 0°C ble 3N HCl (100 ml) tilsatt, det organiske lag ble adskilt, vasket med vann, saltvann, tørket over MgS04 og konsentrert. Råproduktet ble oppløst i 90% vandig methanol (50 ml) og tilbakeløps-kjølt i 2 timer, deretter ble oppløsningsmidlene fjernet, og tittelforbindelsen ble renset ved kromatografi på silicagel (10% ethylacetat i cyclohexan).

Trinn B: 1-[( 4- hydroxy- 3- trimethylsilyl) fenyl]- 2, 2 , 2- trifluorethanon

Til en oppløsning av 4-brom-3-trimethylsilylfenol (2,54 g, 10 mmol) i diethylether (10 ml) ved 0°C ble det tilsatt 1,5M butyllithium (13,4 ml) i løpet av 10 minutter, og blandingen ble omrørt ved 0°C i 15 minutter. Ved -78°C ble det tilsatt ethyltrifluoracetat (5,68 g, 40 mmol) i diethylether (10 ml), deretter ble blandingens temperatur tillatt å stige til romtemperatur og ble omrørt i 1 time. Ved 0°C ble 3N HCl (20 ml) tilsatt, det organiske lag ble adskilt, vasket med vann og konsentrert. Råproduktet ble oppløst i tetrahydrofuran (20 ml) og omrørt i 1 time med vandig natrium-hydrogencarbonat (10 ml). Blandingen ble ekstrahert med diethylether, og ekstraktet ble vasket med vann, saltvann, tørket over MgS04 og konsentrert. Tittelforbindelsen ble renset ved kromatografi på silicagel (20% ethylacetat i cyclohexan), etterfulgt av rekrystallisering i CC14. Sm.p. 178°C, Rf: 0,50 (cyclohexan/diethylether: 50/50).

Eksempel 4

1-( 3, 5- bis- trimethylsilylfenyl)- 2, 2, 2- trifluorethanon

Trinn A:

3, 5- bis- trimethylsilyl- brombenzen

En blanding av 1,3,5-tribrombenzen (10,0 g, 31,75

mmol) og trimethylsilylklorid (6,90 g, 63,50 mmol) i diethylether (35 ml) ble tilsatt dråpevis i løpet av 1 time til mag-nesium (1,55 g, 63,50 mmol) i diethylether (20 ml). Deretter ble blandingen tilbakeløpskjølt i 18 timer, avkjølt til 0°C og behandlet med 4N HCl (50 ml). Det organiske lag ble adskilt, vasket med vann, saltvann, tørket over MgSO^ og konsentrert. 3,5-bis-trimethylsilyl-brombenzen ble renset ved kromatografi på silicagel (eluert med heptan) i form av en fargeløs olje (5,39 g, 56% utbytte).

Trinn B: 1-( 3, 5- bis- trimethylsilylfenyl)- 2, 2, 2- trifluorethanon

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet i trinn B i eksempel 1, med et utbytte på 35%. K.p. 170°C (26 mmHg).

Eksempel 5

Ethyl- 2, 2- difluor- 3- keto- 3-( 3- trimethylsilyl) fenylpropionat

Trinn A:

3- trimethylsilylbenzylalkohol

Til en oppløsning av 3-brombenzylalkohol (9,35 g, 50 mmol) i diethylether (50 ml) ved 0°C ble det tilsatt dråpevis 1,5M butyllithium (66,7 ml), og blandingen ble omrørt i 30 minutter. Trimethylsilylklorid (11,39 g, 105 mmol) i diethylether (50 ml) ble deretter, tilsatt dråpevis, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 18 timer. Reaksjonsblandingen ble behandlet med isvann (100 ml), og det organiske lag ble ekstrahert, vasket med vann, saltvann, tørket over MgS04 og konsentrert. Råproduktet ble oppløst i 90% vandig methanol (100 ml) og tilbakeløpskjølt i 1 time. Oppløsningsmidlene ble fjernet, og 3-trimethylsilylbenzylalkohol ble renset ved destillering.

Trinn B:

3- trimethylsilylbenzaldehyd

Til en blanding av 3-trimethylsilylbenzylalkohol

(3,60 g, 20 mmol) og pyridiumdikromat (11,2 9 g, 30 mmol) i diklormethan (60 ml) ble det ved 0°C tilsatt 3Å molfilter-pulver (16 g) og vannfri eddiksyre (2 ml). Reaksjonen ble deretter tillatt å foregå i 30 minutter ved romtemperatur, blandingen ble omrørt i 20 minutter med celitt (10 g), filtrert og inndampet under redusert trykk. Bunnfallet ble behandlet med diethylether (50 ml), filtrert gjennom MgS04 og konsentrert. 3-trimethylsilylbenzaldehyd ble renset ved destillering.

Trinn C: Ethyl- 2, 2- difluor- 3- hydroxy- 3-( 3- trimethylsilyl) fenylpropionat En oppløsning av 3-trimethylsilylbenzaldehyd (1,78 g, 10 mmol) og ethylbromdifluoracetat (2,23 g, 11 mmol) i tetrahydrofuran (10 ml) ble tilsatt dråpevis på sink-ull (7,85 g, 12 mmol) i tilbakeløpskjølende tetrahydrofuran (10 ml). Reaksjonen ble deretter tillatt å foregå i 1 time, avkjølt, hydrolysert med en mettet ammoniumkloridoppløsning (20 ml) og fortynnet med diethylether (20 ml). Det organiske lag ble vasket med saltvann, tørket over MgS04 og konsentrert. Tittelforbindelsen ble renset på silicagel (20% ethylacetat i cyclohexan).

Trinn D: Ethyl- 2, 2- dif luor- 3- keto.- 3- ( 3- trimethylsilyl) f enylpropionat

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet i trinn B og renset ved destillering.

Eksempel 6

2, 2- difluor- 3- keto- 3-( 5— nitril- 3- trimethylsilyl) fenyl-propansyre

Trinn A: 3, 5- dibrom- N, N-( 1, 1, 4, 4- tetramethyl- l, 4- disilethylen) anilin

Til en oppløsning av 3,5-dibromanilin (25,10 g, 100 mmol) i tetrahydrofuran (100 ml) ved -30°C ble det tilsatt 1,5M butyllithium (66,67 ml). Deretter ble det ved -78°C tilsatt en oppløsning av 1,1,4,4-tetramethyl-l,4-diklorsil-ethylen (21,50 g, 100 mmol) i tetrahydrofuran (100 ml), og blandingen ble tillatt å oppvarmes ved romtemperatur og om-rørt i 1 time. Blandingen ble helt over i vann (200 ml), fortynnet med diethylether (100 ml), og etherlaget ble adskilt. Det vandige lag ble vasket to ganger med diethylether, og etherekstraktene ble kombinert, tørket over MgSO^, og oppløs-ningsmidlene ble fjernet under redusert trykk. Tittelforbindelsen ble rekrystallisert fra hexan.

Trinn B: 3- brom- 5- trimethylsilyl- H, N-( 1, 1, 4, 4- tetramethyl- l, 4- disilethylen ) anilin

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet i trinn A i eksempel 1, med unntak av hydrolyse som ble utført med en mettet ammoniumkloridoppløsning. Rensning ble oppnådd ved rekrystallisering fra hexan.

Trinn C: 3- trimethylsilyl- 5-[ N, N-( 1, 1, 4, 4- tetramethyl- l, 4- disilethylen)] aminobenzylalkohol

Til en oppløsning av 3-trimethylsilyl-5-[N,N-(1,1,4,4-tetramethyl-1,4-disilethylen)]aminofenyl-magnesiumbromid fremstilt fra 3-brom-5-trimethylsilyl-N,N-(1,1,4,4-tetramethyl-l , 4-disilethylen ) anilin (11,26 g, 30 mmol) og magnes-ium (0,73 g, 30 mmol) i diethylether (60 ml) ble det tilsatt paraformaldehyd (0,99 g, 33 mmol). Blandingen ble tilbake-løpskjølt i 18 timer, avkjølt til 0°C og behandlet med en mettet ammoniumkloridoppløsning (50 ml). Etherlaget ble adskilt, vasket med vann, saltvann, tørket over MgSO^ og konsentrert. Tittelforbindelsen ble rekrystallisert fra diethylether-hexan.

Trinn D: 3- trimethylsilyl- 5-[ N, N-( 1, 1, 4, 4- tetramethyl- l, 4- disilethylen )] aminobenzaldehyd

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet i trinn B i eksempel 5 og rekrystallisert fra diethylether-hexan.

Trinn E: Ethyl- 2, 2- difluor- 3- hydroxy- 3-[ 3- trimethylsilyl- 5-[ N, N-( 1, 1, 4, 4- tetramethyl- l, 4- disiléthylen) 3 amino] fenylpropionat

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet i trinn C i eksempel 5 og rekrystallisert fra diethylether-hexan.

Trinn F: Ethyl- 2, 2- difluor- 3- acetoxy- 3-( 3- trimethylsilyl- 5- amino)-fenylpropionat

Til en oppløsning av ethyl-2,2-difluor-3-hydroxy-3-[ 3-trimethylsily1-5-[N,N-(1,1,4,4-tetramethyl-l,4-disilethylen) ] amino] f enylpropionat (5,51 g, 12 mmol) og triethyl-amin (1,31 g, 13 mmol) i tetrahydrofuran (15 ml) ved 0°C ble det tilsatt acetylklorid (0,94 g, 12 mmol). Deretter ble blandingen omrørt i 1 time ved romtemperatur, avkjølt til 0°C, behandlet langsomt med 10% HCl i ethanol (20 ml) etterfulgt av omrøring i 3 timer ved romtemperatur. Oppløsnings-midlene ble fjernet under redusert trykk, og bunnfallet ble fordelt mellom diethylether og vann. Det sure, vandige lag ble adskilt og gjort basisk og deretter ekstrahert to ganger med diethylether. Det organiske ekstrakt ble tørket over MgSC-4 og konsentrert, og produktet ble renset ved omdannelse til dets hydrokloridsalt.

Trinn G: Ethyl- 2, 2- difluor- 3- acetoxy- 3-( 3- trimethylsilyl- 5- nitri1)-fenylpropionat Til en oppløsning av ethyl-2,2-difluor-3-acetoxy-3-(3-trimethylsilyl-5-amino)fenylpropionat-hydroklorid (3,96 g, 10 mmol) i 0,5N HCl (20 ml) ved 0°C ble det tilsatt en opp-løsning av natriumnitritt (0,69 g, 10 mmol) i vann (5 ml), og temperaturen ble holdt ved 0-5°C ved tilsetning av knust is. Blandingen ble deretter forsiktig nøytralisert ved tilsetning av tørt natriumcarbonat. Den resulterende blanding ble tilsatt dråpevis til en oppløsning av kobbercyanid (0,90 g, 10 mmol) i isvann (10 ml) og toluen (20 ml) under kraftig omrøring og ved en temperatur på 0-5°C. Temperaturen ble deretter opprettholdt ved 0-5°C i 30 minutter, tillatt å stige til romtemperatur, og omrøring ble fortsatt i 3 timer. Toluenlaget ble deretter adskilt, vasket to ganger med vann, saltvann, tørket over MgS04 og konsentrert under redusert trykk. Tittelforbindelsen ble renset på silicagel (30% ethylacetat i cyclohexan).

Trinn H: 2, 2- difluor- 3- hydroxy- 3-( 3- trimethylsilyl- 5- nitril) fenyl-propionsyre

Til en oppløsning av ethyl-2,2-difluor-3-acetoxy-3-(3-trimethylsilyl-5-nitril)fenylpropionat (1,85 g, 5 mmol) i 1,2-dimethoxyethan (8 ml) og vann (2 ml) ble tilsatt lithiumhydroxyd (0,36 g, 15 mmol), og blandingen ble omrørt i 2 timer ved romtemperatur. Oppløsningsmidlet ble deretter fjernet under redusert trykk. Råproduktet ble oppløst i vann (20 ml) og ekstrahert to ganger med diethylether. Det vandige lag ble deretter surgjort med IN HCl og ekstrahert med diklormethan. Det organiske lag ble tørket over MgS04 og konsentrert under redusert trykk. Tittelforbindelsen ble rekrystallisert fra diethylether.

Trinn I: 2, 2- difluor- 3- keto- 3-( 3- trimethylsilyl- 5- nitril) fenylpro-pionsyre

Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet i trinn B i eksempel 5 og rekrystallisert fra diethylether.

Det er nå fastslått at Alzheimers sykdom og andre senil-degenerative sykdommer er kjennetegnet ved et selek-tivt tap i hjernebarken av cholin-acetyltransferase, enzymet som er ansvarlig for biosyntesen av acetylcholin. Det eksis-terer også en god korrelasjon mellom hukommelsessvekkelse eller demens og minskningen i cholinerg transmisjon. Svekk-elsen av cholinerg transmisjon i sentralnervesystemet kan derfor, i det minste delvis, være ansvarlig for symptomato-logien av Alzheimers sykdom og senil demens. Til støtte for disse konklusjoner er slike forbindelser som fysostigmin og l,2,3,4-tetrahydro-9-aminoacridin (THA) som er forbindelser som forhindrer katabolismen av acetylcholin, funnet å ha en plass i behandlingen av Alzheimers sykdom og andre senil-degenerative sykdommer. Det er da også anerkjent at graden av forbedring av kognitive funksjoner er nært beslektet med graden av inhibering av acetylcholinesterase.

Forbindelsene med formel I er farmakologisk aktive midler som er i stand til å inhibere acetylcholinesterase, noe som kan demonstreres i standard biologiske testprose-dyrer in vitro og in vivo. Basert på standard laboratorie-prosedyrer kan det vises at forbindelsene med formel I er kraftige og selektive, kvasi-irreversible inhibitorer av acetylcholinesterase som kan oppvise fordeler i forhold til kjent teknikk, i deres anvendelse ved behandling av Alzheimers sykdom og senil demens. Forbindelsene vil generelt utøve sine acetylcholinesterase-inhiberende egenskaper innen-for doseområdet fra tilnærmet 0,01 mg til 5 mg pr. kg kroppsvekt for de foretrukne forbindelser.

Følgende forbindelser ble undersøkt med hensyn til deres terapeutiske aktivitet: 2,2-difluor-l-[3-(trifluorsilyl)fenyl]-1-ethanon (MDL 75,146),

2,2-difluor-1-[3-(trimethylsilyl)fenyl]-1-ethanol (MDL 74,759),

acetyloxy-2,2-difluor-1-[3-(trimethylsilyl)fenyl]-1-ethanol (MDL 75,129),

2,2,2-trifluor-1-[3-(trimehylsilyl)-5-methylfenyl]-ethanon (MDL 74,037), og

2,2,2-trifluor-1-[3-(trimehylsilyl)fenyl]ethanon (MDL 73,745).

Enzymutprøvninqer:

Silylerte trifluorketoner er vannuløselige forbindelser og ble oppløst i methanol og tilsatt til reaksjonsblandingen på en slik måte at sluttkonsentrasjonen av methanol ikke overskred 1 %.

Acetylcholinesterase ble utført i henhold til den spektrofotometriske metode ifølge Biochem. Pharmacol. 7, 88-93

(1961), ved anvendelse av acetylthiocholin som substrat.

Inhiberinqsforsøk:

Reversibel inhibering ble bestemt under stabile til-stander, og K^-verdien ble bestemt i henhold til Enzymes,

2. utgave, 327-331, Longmans Green, London (1964).

For langsomt bindende inhibitorer ble kon-, koff- og K^-verdier bestemt fra slutthastighetene av reaksjonsforløps-kurvene av produktdannelsen mot tid som beskrevet av Methods Enzymol, 63, 437-448 (1979). Produktdannelse ble bestemt spektrofotometrisk med acetylthiocholinklorid som substrat. Utprøvningene ble startet ved tilsetning av AChE

(0,018 U/test).

For tidsavhengig inhibering ble AChE (1,25 U/test) inkubert med forskjellige konsentrasjoner av inhibitoren i 0,1 M fosfatkaliumbuffer, pH 8, inneholdende 0,2 % BSA. Ved de angitte tider ble 10 ul aliquoter av preinkuberingsmediet trukket ut og tilsatt til 3 ml prøveløsning. tl/2-verdiene ble bestemt fra en Kitz- og Wilson-kurve (Kitz et al., J. Biol.

Chem. 237, 3245-3249 (1962)).

Dissosiasjon av AChE- inhibitorkomplekset

koff ble bestemt ved fortynning av enzym-inhibitorkomplekset etter fullstendig inaktivering av enzymet. Etter 20 minutters preinkubering ved 25 °C med 100 nM av inhibitoren ble det inhiberte enzym fortynnet 400 ganger i 0,1 M fosfat-buffer, pH 8, inneholdende 0,2 % BSA, og ved forskjellige tidspunkter ble enzymatisk aktivitet bestemt i nærvær av acetylthiocholin som substrat. En progressiv gjenvinning av enzymatisk aktivitet ble observert over tid.

For farmakologisk målrettede anvendelser administreres forbindelsene ifølge formel I fortrinnsvis i form av deres farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter. Den effektive dosering av forbindelsene vil selvsagt variere i overensstem-melse med den individuelle styrke av hver anvendt forbindelse, alvorligheten og naturen av sykdommen som behandles og det spesielle subjekt som behandles. Generelt kan effektive resultater oppnås ved administrering av en forbindelse ved en dosering på tilnærmet 0,01 mg til 20 mg pr. kg kroppsvekt pr. dag, administrert systemisk. Terapi bør innledes ved lavere doseringer. Doseringene deretter kan administreres oralt i faste doseringsformer, f.eks. kapsler, tabletter eller pulvere, eller i flytende former, f.eks. løsninger eller suspensjoner. Forbindelsene kan også injiseres paren-

teralt i form av sterile løsninger eller suspensjoner. Faste, orale former kan inneholde konvensjonelle tilsetningsmidler, f.eks.: lactose, sucrose, magnesiumstearat, harpikser og lignende materialer. Flytende, orale former kan inneholde

forskjellige smaksstoffer, fargestoffer, konserveringsmidler, stabiliseringsmidler, bufringsmidler, løsningsmidler eller suspenderingsmidler. Hvis ønskelig, kan additiver slik som fysiologisk saltvann eller glucose, tilsettes for å gjøre løsningene isotoniske.

Claims

Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive forbindelser med formelen

og de farmasøytisk akseptable salter derav, hvori m og/eller n er 0 eller 1, med det forbehold at summen av m og n er mindre enn 2, Q er hvor R er H eller C1.4-alkyl, X er H eller halogen, Rlr R2 og R3 er hver C^-alkyl, Y er H eller C^-alkyl,karakterisert ved at (a) det dannes et lithionderivat av en forbindelse med formel hvori m, n, Rlr R2 og R3 er som ovenfor definert og lithion-derivatet omsettes med en syre (som tilsvarer dets lithion-salt), ester eller syreklorid med formel XCF2C02R eller XCF2-C0C1 hvori R er H eller Cj_6-alkyl, og X er som ovenfor definert, for fremstilling av en forbindelse med den subgeneriske formel hvori Rlr R2, R3, X, m og n er som ovenfor definert, (b) en forbindelse med formel hvori X, Y, Rlr R2, R3, n og m er som ovenfor angitt, oxyderes, for fremstilling av en forbindelse med subgenerisk formel hvori X, Y, Rlf R2, R3, n og m er som ovenfor angitt, (c) at en forbindelse med formel (2) reduseres for fremstilling av en forbindelse med subgenerisk formel hvori X, Rlr R2, R3, n og m er som ovenfor angitt, (d) at en forbindelse av formel hvori X, Y, R, Rlf R2, R3, n og m er som ovenfor angitt, hydro-lyseres for fremstilling av en forbindelse med subgenerisk formel hvori X, Y, Rlr R2, R3, n og m er som ovenfor angitt, (e) at en forbindelse med formel hvori X, Y, Rx, R2, R3, n og m er som ovenfor angitt, forestres med et acylhalogenid, for fremstilling av en forbindelse med subgenerisk formel hvori X, Y, R, Rlr R2, R3, n og m er som ovenfor angitt, eventuelt etterfulgt av omdannelse av produktene erholdt i trinnene (a) til (e), til deres farmasøytisk akseptable salter.