NO169543B - Analogifremgangsmaate ved fremstilling av terapeutisk aktive peptidaseinhibitorer - Google Patents

Analogifremgangsmaate ved fremstilling av terapeutisk aktive peptidaseinhibitorer Download PDF

Info

Publication number
NO169543B
NO169543B NO860371A NO860371A NO169543B NO 169543 B NO169543 B NO 169543B NO 860371 A NO860371 A NO 860371A NO 860371 A NO860371 A NO 860371A NO 169543 B NO169543 B NO 169543B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
mmol
amino
added
amino acid
solution
Prior art date
Application number
NO860371A
Other languages
English (en)
Other versions
NO169543C (no
NO860371L (no
Inventor
Michael Kolb
Michel J Jung
Joseph P Burkhart
Eugene L Giroux
Fritz E Gerhart
Daniel G Schirlin
Bernhard Neises
Original Assignee
Merrell Dow Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merrell Dow Pharma filed Critical Merrell Dow Pharma
Publication of NO860371L publication Critical patent/NO860371L/no
Publication of NO169543B publication Critical patent/NO169543B/no
Publication of NO169543C publication Critical patent/NO169543C/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0227—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the (partial) peptide sequence -Phe-His-NH-(X)2-C(=0)-, e.g. Renin-inhibitors with n = 2 - 6; for n > 6 see C07K5/06 - C07K5/10
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/22—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C279/00—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C279/18—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/30—Indoles; Hydrogenated indoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/42—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0207—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)4-C(=0), e.g. 'isosters', replacing two amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06191—Dipeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
    • C07K5/0823—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp and Pro-amino acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0827—Tripeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)

Abstract

Aktivert, elektrofil, ketonbærende peptidaseinhibitor av formel. hydrater derav, og farmasøytisk akseptable salter derav, hvori R 1 kan være hydrogen, en aminobeskyttende gruppe, en a-aminosyre eller et peptid omfattet av et antall a-aminosyrebyggende blokker, hvor hver av angitte o-aminosyre eller peptid eventuelt bærer en aminobeskyttende gruppe, Rer R-gruppe-sidekjeden av en a-aminosyrebyggende blokk, X er Xeller X, hvori Xer -CF, -CFH, C02R3 eller -CONHR,Rer hydrogen, C_alkyl, fenyl, benzyl, cyclohexyl eller cyclohexyl-methyl, Rer R-gruppe-sidekjeden av en a-amino-syrebyggende blokk, Rer en a-aminosyre- eller peptidbyggende blokk, eller er utelatt, Y er -NHReller -0, utviser terapeutisk aktivitet. Fremstilling av forbindelsene er beskrevet.

Description

Foreliggende oppfinnelse angår fremstilling av proteaseenzyminhibitorer som er anvendbare for et utall fysiologiske anvendelsesområder.
En bred side av oppfinnelsen angår fremstilling av analoger av peptidasesubstrater, hvori amidgruppen inneholdende den klippende amidbinding av substratpeptidet er blitt erstattet med en aktivert elektrofil ketondel slik som fluormethylenketon eller a-ketocarboxylderivater. Disse analoger av peptidasesubstratene tilveiebringer spesifikke enzyminhibitorer for et utall av proteaser, hvis inhibering vil ha anvendbare fysiologiske konsekvenser i et utall av sykdomstilstander.
Ved oppfinnelsens mer spesifikke sider angår denne fremstilling av aktiverte elektrofile ketonderivater av visse peptidasesubstrater som er anvendbare ved inhibering av serin-, thiol-, carboxylsyre- og metalloavhengige protease-enzymer, hvis inhibering vil ha anvendbare fysiologiske konsekvenser i et utall av sykdomstilstander.
Ytterligere mer spesifikt angår oppfinnelsen fremstilling av aktiverte elektrofile ketonderivater av peptidasesubstrater som faller innenfor de etterfølgende generiske grupperinger som er karakterisert i henhold til sammenhengen med deres aktive sete. Slike generiske grupperinger er: I. Serinavhengige enzymer: disse innbefatter slike enzymer som elastase (human leukocytt), cathepsin G, thrombin, plasmin, C-l esterase, C-3-convertase, urokinase, plasminogenaktivator, acrosin, (3-lactamase, D-alanin-D-alanin/carboxypeptidase, chymotrypsin, trypsin og kalli-kreins.
II. Thiolavhengige enzymer: cathepsin B.
III. Carboxylsyreavhengige enzymer: disse innbefatter slike spesifikke enzymer som renin, pepsin og cathepsin. IV. Metalloavhengige enzymer: disse innbefatter angiotensinomdannende enzym, enkefalinase, pseudoraonas elastase og leucin aminopeptidase.
Oppfinnelsen angår en analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive, aktiverte, elektrofile, keton-baerende peptidaseinhibitorer av formelen hydrater derav, og farmasøytisk akseptable salter derav, hvori Rx kan være hydrogen, en aminobeskyttende gruppe valgt fra gruppe K, en a-aminosyre, et dipeptid eller et tripeptid valgt fra Pro, Ala og Phe, hvori hver angitte a-aminosyre eller peptid eventuelt bærer en aminobeskyttende gruppe valgt fra gruppe K,
R2 er sidekjeden av en a-aminosyre valgt fra Ala, Val, Phe,
Lys, Arg eller er -CH2-0(p-)NHC(NH)NH2 hvor 0 betegner
fenyl,
X er -CF3, -CF2R4, C02R3 eller CF2COOR3,
R3 er hydrogen, C^., rettkjedet eller forgrenet alkyl,
R4 er hydrogen eller lavere alkenyl
K: acetyl (Ac), succinyl (Suc), benzoyl (Bz),
t-butyloxycarbonyl (Boe), carbobenzoyl (CBz),
tosyl (Ts), dansyl (DNS), isovaleryl (Iva), methoxysuccinyl (MeOSuc), 1-adamantansulfonyl
(AdS02), 1-adamantanacetyl (AcAc), 2-carboxy-benzoyl (2-CB) og slike andre terminale, aminobeskyttende grupper som er funksjonelt ekvivalente dertil
Med mindre annet er angitt, er de a-aminosyrebyggende blokker av disse peptidasesubstrater fortrinnsvis i deres L-konf iguras jon.
Før ytterligere definering og/eller illustrering av rammen for peptidasesubstratinhibitorene som omfattes av formel I, kan det være hensiktsmessig å angi hovedbegrepene vedrørende peptider. Bortsett fra prolin har f.eks. alle av a-aminosyrene som finnes i proteiner som en fellesnevner, en fri carboxylgruppe og en fri usubstituert aminogruppe på a-carbonatomet (ettersom prolinets a-aminogruppe er substitu-ert, er denne en a-iminosyre, men for enkelhets skyld vil også denne bli angitt som en a-aminogruppe). I tillegg har hver a-aminosyre en karakteristisk "R-gruppe", hvor R-gruppen er sidekjeden, eller resten, bundet til a-carbon-atomet av a-aminosyren. For eksempel er R-gruppesidekjeden for glycin hydrogen, for alanin er den methyl, for valin vil den være isopropyl. (I foreliggende beskrivelse er R2-eller R^delen sidekjede-R-gruppen for hver angitt a-aminosyre.) For de spesifikke R-grupper - eller sidekjeder - av a-aminosyrene henvises det til A.L. Lehninger's bok Biochemistry (se spesielt kapittel 4).
Som et ytterligere hensiktsmessig trekk for definering av rammen av forbindelsene som omfattes av den generelle formel I, så vel som de subgeneriske begreper henhørende til hver av de individuelle enzymer innbefattet innen oppfinnelsen, er forskjellige a-aminosyrer blitt klassifisert i et utall av grupper som bibringer liknende funksjonelle karak-teristika for hver av de spesifikke enzymer som inhiberes av peptidasesubstratene av formel I. Disse grupper er angitt i tabell II, og de vel anerkjente forkortelser for a-amino-syreblokkene er angitt i tabell I.
hvor 0 selvsagt betegner fenyl.
K: acetyl (Ac), succinyl, (Suc), benzoyl (Bz) t-butyloxycarbonyl (Boe), carbobenzoxy (CBZ), tosyl (Ts), dansyl (DNS), isovaleryl (Iva), methoxysuccinyl (MeOSuc), 1-adamantansulfonyl (AdS02), 1-adamantanacetyl (AcAc), 2-carboxy-benzoyl (2-CBZ) og slike andre terminale aminobeskyttende grupper som er funksjonelt ekvivalente dertil.
For å illustrere de forbindelser som er anvendbare som enzyminhibitorer for human leucocyttelastase, og virke som et middel for en bedre forståelse av rammen av forbindelsene omfattet av den generiske formel I (og dets subgeneriske formler for hver av de her beskrevne involverte enzymer), representerer den følgende formel (Ia) den subgeneriske klasse som definerer disse forbindelser innen rammen av inhibitorer for human leucocyttelastase:
hvori
R 2 er sidekjeden av den angitte enzymrettende a-amino-syrebyggende blokk (),
R]_ er som tidligere definert (sammensatt av P2~<p>l~
blokker) og
X er gruppen som gir den elektrofile karakter til dens tilstøtende carbonyl bestående enten av Xi eller X2 som tidligere definert generisk i formel I.
For ytterligere illustrative formål er struktur-formelen for den mest foretrukne human leucocyttelastase-inhibitor
hvor de vertikalt stiplete linjer angir hver gruppe som utgjør det spesifikke arrangement for denne bestemte peptidaseinhibitor. Bortsett fra prolin og 2-indolincarboxylsyre representerer de innsirklede grupper innen de stiplete linjer R-gruppesidekjedene av en a-aminosyrebyggende blokk (se s. 69-71 i den ovenfor angitte Lehninger's bok) eller 1-nafthylmethyl. En ytterligere måte å representere det foregående substrat, er ved formelen hvori R, R2, R4 er sidekjederestene av den bestemte a-aminosyre, hvor den aminosyrebyggende blokk av P2' (P2 merket) er R5, om noen i det hele tatt, av X2 og det terminale P3' er en spesifikk gruppe av Y-radikalet av X2, P5 er den terminale gruppe som enkelte ganger angis generisk som (Pn) og P2-P3~P4 er de gjenværende a-aminosyrebyggende blokker av denne R^-del. En ytterligere og hensiktsmessig metode for enkelt å angi den involverte struktur, er formelen
hvor X består av Px', P2'Y når den representerer
0
II
-CF2CHC-R5Y hvori Pi' bærer -CH3 sidekjede-R-gruppen for R4 R4
og P2' bærer R5 aminosyreblokken som bærer -CH3-sidekjeden og Y er NH2, og P1-P5 er forkortede betegnelser for de angitte P]_-P5-grupper av de ovenfor angitte strukturer II og
III.
Human leukocyttelastase frigis av polymorfonukleære leukocytter ved inflammasjonsseter og er således en bidrag-ende årsak for et utall sykdomstilstander. Peptidasesubstratene av formel (Ia) har således en antiinflammatorisk effekt som er anvendbar ved behandling av gikt, reumatoid arthritis og andre inflammasjonssykdommer, og ved behandling av emfysem. Ved deres sluttelige anvendelse bestemmes lett de enzyminhiberende egenskaper av forbindelsene av formel (Ia) ved biokjemiske standardteknikker som er vel kjent innen faget. Potensielt doseområde for deres sluttelige anvendelse vil selvsagt avhenge av arten og strengheten av sykdomstilstanden som bestemt av legen, og et område på fra 0,01 til 10 mg/kg kroppsvekt/dag vil være anvendbart for de ovenfor angitte sykdomstilstander. De foretrukne forbindelser for dette enzym er: MeOSuc-Ala-Ile-Pro-Val-[CF2-Ala]Ala-NH2,
MeOSuc-Ala-Ile-Pro-Val-CF3,
MeOSuc-Ala-Ile-Pro-Val-C02Me,
MeOSuc-Ala-Ile-Pro-Val-CF.2COOEt,
MeOSuc-Ala-Ile-Pro-Val-CHF2,
MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-C02Me,
MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-[CF2-Ala]Ala-NH2,
MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-CF3,
[aN-(AdS02)]-[%-(2-CBz)]-Lys-Pro-Val-[CF2-Ala]Ala-NH2, [aN-(AdS02)]-[%-(2-CBz) ]-Lys-Pro-Val-OHF2,
[aN-(AdS02) ]-[%-(2-CBz) ]-Lys-Pro-Val-C02Me
MeOSuc-Ala-Ile-Pro-Val-C02]yie,
MeOSuc-Ala-Ile-Pro-Val-C02H.
Analogifremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er kjenne-tegnet ved at en forbindelse av formelen
hvori R2 og X er som ovenfor angitt, underkastes en Swern-oxydasjon, og eventuelt at enhver beskyttende gruppe avbeskyt-tes.
Fremstilling av forbindelsene av formel I kan oppnås under anvendelse av standard kjemiske reaksjoner som er analoge med kjente reaksjoner som er kjent for å være anvendbare for fremstilling av et utall av kjente peptider. Så snart visse nøkkelintermediære a-aminosyrederivater er blitt fremstilt, kan prosedyrene for oppnåelse av sluttproduktene lett utføres under anvendelse av standard teknikker kjent av fagmannen innen peptidkjemiområdet. For dette formål er egnet referansetekst for disse teknikker "The Practice of Peptide Synthesis" av M. Bodanszky og A. Bodanszky (1985), hvori parametrene og teknikkene som påvirker valg, anvendelse og fjerning av beskyttende grupper for individuelle og grupper av aminosyrer, detaljert er angitt, og som også inneholder aktiverings- og koplingsteknikker og andre spesialprosedyrer. Før imidlertid peptidkjemiteknikkene kan anvendes, må visse nøkkelmellomprodukter inneholdende den aktiverte elektrofile ketongruppe først fremstilles. Fremstilling av nøkkeImellomproduktene er beskrevet som følger.
For de forbindelser hvori X^ betegner enten -CF2H eller -CF3, er nøkkelmellomproduktene, som er nødvendige for anvendelsen av standard peptidkoplingsteknikker, forbindelser av formel IIIa-b
hvori X]_' er -CF3 eller -CF2H, og R2 er som tidligere definert for formel I. På liknende måte er angivelsene R]_, R2, R3, R4, R5 og Y som vist i etterfølgende reaksjonsskjema A-D som definert i formel I, med det unntak at enhver subgener-isk eller annen modifikasjon derav (som i X^') er uthevet ved bruk av et merket symbol som en spesifikk betegnelse for et slikt modifisert symbol. Fremstilling og anvendelse av disse forbindelser er angitt i reaksjonsskjema A.
hvori Rg er alkyl, fenyl eller annen ekvivalent gruppe, og Xx' er -CF2H eller -CF3.
Generelt utføres dannelsen av de substituerte azlak-toner (VI) fra de N-beskyttede aminosyrer (V) ved standard reaksjonsbetingelser, hvori aminosyrederivater (V) oppvarmes i nærvær av et syreanhydrid. Det således fremstilte azlakton (VI) omsettes med et di- eller trifluoreddiksyreanhydrid eller syrehalogenid under dannelse av et fluorert mellom-produkt som (med eller uten isolering) behandles med vannfri oxalsyre under dannelse av det N-beskyttede fluorerte keton (VII), hvorpå ketonet reduseres kjemisk til dets alkoholiske amid VIII. Amidet (VIII) splittes under standard sure betingelser under dannelse av dets amidsyresalt [f.eks. dets hydroklorid (IX)]. Etter nøytralisering kan alkoholene (Illa) koples til under anvendelse av standard peptidkjemiteknikker under dannelse av forbindelse (X) som underkastes Swern oxydasjonsprosedyre under dannelse av de ønskede produkter Xla eller Xlb (ketonet eller hydratet). Alternativt kan alkoholene (Illa) oxyderes til ketonene (Illb) som koples til R^ iht. standard peptidkjemiteknikker. Ved anvendelse av denne alternative rute beskyttes først aminogruppen med en Boe-beskyttende gruppe, OH-funksjonen oxyderes til dets keton via Swern oxydasjonsprosedyrer, hvoretter den Boc-beskyttende gruppe fjernes, og de resulterende forbindelser (Illb) koples deretter til R^.
Ved utførelse av de foregående reaksjoner anvendes vel kjente standard teknikker, eksempelvis omdannes azlak-tonene (VI) kjemisk til deres di- eller trifluormethylderi-vater (deres X^'-derivater) (VII) ved oppvarming av azlaktonet og fluoreddiksyreanhydrid eller syrehalogenidreaktan-ter ved temperaturer på fra 30 til 200°C i fra 1 til 24 timer (selv om det under meget milde betingelser kan ta opp-til en uke), fortrinnsvis under anvendelse av molare ekvivalente mengder av reaktantene. I det tilfelle overskuddsmengder av anhydridreaktanten anvendes, må slike overskudd fjernes før neste trinn, og det urene produkt behandles med vannfri oxalsyre. Det fluorerte keton reduseres til dets alkohol under anvendelse av overskuddsmengder av natriumborhydrid eller et hvilket som helst annet egnet reduksjons-middel, f.eks. natriumcyanborhydrid. Etter reduksjonen stanses reaksjonen, og amidet splittes under standard sure betingelser i vann, alkohol eller annet hydroxylisk løs-ningsmiddel. Løsningen gjøres basisk og ekstraheres under dannelse av den tilsvarende alkohol (Illa).
Det er selvsagt innlysende for fagmannen at betingelsene ved de enkelte trinn i reaksjonsskjema A kan ha en inn-virkning på R2~sidekjeden, slik at prosedyrer må tas i bruk for å beskytte de R2~grupper som ikke er forenlige med de forskjellige reaksjonsbetingelser. Eksempelvis er R2-gruppene som hører til gruppe E, generelt forenlige. På liknende måte er R2~sidekjederadikalene fra gruppe F, J og G forenlige. Radikaler av gruppe A trenger beskyttelse. Da arginin kan betraktes som et derivat av ornithin, fremstilles ornithinderivatet først og omdannes deretter til argi-ninsidekjeden, idet ellers guanidinofunksjonen av arginin-gruppen vil måtte bli beskyttet. Gruppe C-radikalene av serin, threonin og cystein må beskyttes, fortrinnsvis med en ether (f.eks. benzylether). Fortrinnsvis beskyttes -0H- og SH-funksjonene av disse grupper før azlaktonet dannes. (X)-mellomproduktet, hvori X]_' er -CF3 og R2 er H, er kjent [Journal of the American Chemical Society, 7£, 143 (1948)], og således kan CF2H-analogene fremstilles under anvendelse av analoge prosedyrer. Carboxylgruppen av gruppe B R2~side-kjedene må også beskyttes. Behovet for valg av beskyttende grupper og reaksjonsbetingelsene for forenlighet, selektiv splitting og andre faktorer som er selvsagt for fagmannen, er vel kjent innen dette kjemifelt.
For de forbindelser hvori X^ betegner CO2R3, CONR3 eller COR5Y, har nøkkeImellomproduktene, som er nødvendige for anvendelse av standard peptidkoplingsteknikkene, formelen
hvor R3' er som tidligere definert for R3, bortsett fra at H er utelatt fra dens definisjon. Fremstillingen og anvendelsen av disse forbindelser kan illustreres ved det etter-følgende reaksjonsskjema. (NB. Den ønskede stereokjemi ved det N-substituerte carbon erholdes med mindre annet er angitt.) hvori A<®> er anionet av den anvendte syre og R3', bortsett fra utelukkelsen av H, e-r som definert for R3, og Pg er en egnet aminobeskyttende gruppe, og i XXV i reaksjon (b) er R^ det samme som
og R5' er forskjellig fra 0.
Forbindelsene XIII er generelt kjente utgangsmateri-aler. Generelt kan slike materialer fremstilles ved omdannelse av den egende L-aminosyre eller dens ester, fortrinnsvis dens methylester, ved standard forestringsprosedyrer
(f.eks. SOCI2 i nærvær av alkohol), esteren N-beskyttes, fortrinnsvis med di-t-butyldicarbonat (Boe). Den således beskyttede R^-aminosyre reduseres kjemisk til den ønskede aldehydiske form (XIII) av den N-beskyttede aminosyre, fortrinnsvis med diisobutylaluminiumhydrid (dibal), hvor alle slike prosedyrer er vel kjente teknikker innen faget. Selvsagt kan andre prosedyrer for oppnåelse av de samme sluttprodukter lett utføres etter vel kjente teknikker innen faget.
Reaksjonstrinnene i reaksjonsskjema B gjør også bruk av vel kjente standard teknikker. Omdannelse av aldehydene (XIII) til tilsvarende cyanohydrin utføres eksempelvis ved omsetning méd et bisulfitt (f.eks. NaHS03) under dannelse av et bisulfittaddisjonsprodukt XIV som behandles med et metal-locyanid (f.eks. KCN) under dannelse av det tilsvarende cyanohydrin (XV). Selvsagt er andre prosedyrer lett til-gjengelige for omdannelse av aldehyd til cyanohydrinderi-vatene (XV). Cyanohydrinene oppvarmes i en blanding av en vandig syre og et vannblandbart løsningsmiddel, slik som ether (fortrinnsvis dioxan), under dannelse av den ønskede hydroxysyre (XVI) som en blanding av dets diastereoisomerer. Disse forbindelser underkastes nøytralisering og rensing ved standard prosedyrer, slik som kromatografiske ionebytter-harpiksteknikker, under dannelse av produkter som forestres under dannelse av de ønskede nøkkelmellomprodukter (XII).
Ved utførelse av B(a) koples aminoestrene (XII) med R]_-gruppen iht. standard peptidkoplingsteknikker, idet det tas forholdsregler for at den beskyttende gruppe anvendt (hvis noen), er selektiv splittbar over CO2R3'-gruppen. Oxydasjon av de koplede produkter oppnås best med Swern-reaksjonen for å omdanne alkoholen til dens ketoform, hvilken, som ovenfor angitt, kan foreligge i likevekt med dens hydrat.
Ved utførelse av B(b) behandles esteren (XVII) med et amin (R3NH2) under dannelse av amidet (XIX) som kan oxyderes via Swern oxydasjonsprosedyrer til dets ketoamid (XX). I dette tilfelle kan andre oxydasjonsbetingelser enn Swern-betingelser også anvendes (f.eks. oxydasjon med pyridinium-
dichromat).
Ved utførelse av B(c) behandles ketoesteren (XVIII) med en base (f.eks. LiOH) under dannelse av dens ketosyre (XXI), bortsett fra i det tilfelle hvor R^ inneholder en methoxysuccinyl endegruppe, i hvilket tilfelle R3' må være selektivt splittbart, f.eks. må R3' være t-butyl eller benzyl som selektivt splittes under syre- eller hydrogeno-lysebetingelser. Ved utførelse av trinn B(d) omdannes keto-syren (XXI) til dets amid ved standard koplingsprosedyrer.
Ved utførelse av B(e) koples syren med R5Y iht. standard prosedyrer, idet det tas forholdsregler for å beskytte og avbeskytte, om nødvendig, i lys av de forskjellige grupper innen definisjonen for R5 og Y. I reaksjon B(f) omdannes esteren (XVII) til et amid, og amidet oxyderes iht. Swern oxydasjonsbetingelser.
Som ovenfor angitt (etter diskusjonen om reaksjons-skjerna A), må betingelsene ved de foregående reaksjoner for oppnåelse av de ønskede mellomprodukter og sluttprodukter i reaksjonsskjema B velges under forholdsregler som sikrer at R2~sidekjederadikalene er forenlige. Selv om gruppe E, F og G generelt er forenlige, vil beskyttelse av enkelte R2-sidekjeder være nødvendig. Eksempelvis må histidin beskyttes, mens tyrosin og tryptofan bør beskyttes for å forbedre de totale utbytter. Igjen må ornithin ha dets terminale 6-aminogruppe beskyttet, og ornithin kan omdannes til arginin. En beskyttende gruppe vil også være nødvendig på en guani-dinogruppe. Alle aminosyrer, f.eks. cystein og threonin, som har reaktive grupper i deres sidekjede, beskyttes fortrinnsvis .
De etterfølgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.
Eksempel 1
N^-( 2- hydroxy- 3, 3- difluor- l- isobutyl- 5- hexenyl)- N2- isovalerylvalinamid
Til en løsning av 0,621 g (3 mmol) 6-amino-4,4-difluor-8-methyl-l-nonen-5-ol (erholdt fra det tilsvarende HCl-salt ved behandling av en vandig løsning med 4N NaOH og ekstrahert med Et20) og 0,603 g (3 mmol) N-isovalerylvalin i 30 ml THF ved 0°C ble tilsatt 0,62 g dicyclohexylcarbo-diimid. Blandingen ble omrørt i 15 timer ved 25°C, ble filtrert, og filtratet ble konsentrert under dannelse av et halvfast materiale som ble oppløst i CH2CI2. Det organiske lag ble vasket med IN HC1 vandig KHCO3 og deretter saltvann, ble tørket (MgSC^) og flashfordampet under dannelse av et fast materiale som ble renset ytterligere ved kromatografi i Si02 (CHC13/Et20 (2:1)). Produktet inneholdende fraksjoner ble kombinert og flashfordampet under dannelse av det ønskede produkt. Rf 0,15 (CHC13/Et20) (2:1)).
Eksempel 2
3- fenacetylamino- 1, 1, 1- trifluor- 2- propanol
Til en blanding av 1,3 g 3-amino-l,1,1-trifluor-2-propanol HC1 og 1,62 g triethylamin i 26 ml THF ved 0°C og under nitrogen ble dråpevis tilsatt en løsning av 1,27 g fenacetylklorid i 5 ml THF. Reaksjonsblandingen fikk oppvarmes til 25°C og ble deretter omrørt i en time. Blandingen ble fortynnet med CH2CI2 og ble vasket med H2O, to ganger med 0,1N HC1 og deretter med saltvann. Etter tørking (MgS04) ble løsningsmidlet flashfordampet, og residuet (1,8 g) ble omkrystallisert fra CH2C12 under dannelse av 1,4 g produkt, sm.p. 96°C.
Eksempel 3
N1-( 2- hydroxy- 3, 3, 3- trifluor- l- isopropyl- propyl)- N2- fenyl-methyloxycarbonyl- prolinamid
Til en blanding av 1,1 g N-fenylmethyloxycarbonyl-prolin TDO-ester (Cf Hollitzer, Seewald og Steglichm Ang. Int., utg. 1976, vol. 15, 444) og 0,42 g 3-amino-l,1,1-trifluor-4-methyl-2-pentanol-hydroklorid i 50 ml CH2CI2 ble dråpevis tilsatt 0,40 g triethylamin. Etter omrøring i 14 timer ved 25°C ble vandig KHSO4 tilsatt, lagene ble fraskilt, og det organiske lag ble vasket med vandig KHSO4, vandig KHCO3, H20 og deretter to ganger med saltvann. Etter tørking (MgSC^) ble løsningsmidlene flashfordampet under dannelse av 0,54 g av et fast residuum som ble omkrystallisert i Et20 under dannelse av 0,24 g av det analytisk rene forventede amid med sm.p. 99°C.
Eksempel 4
3- tert- butyloxycarbonylamino- l, 1, 1- trifluor- 5- methyl- 2-hexanol
En blanding av 0,5 g 3-amino-l,1,1-trifluor-5-methyl-2- hexanol HCl, 0,5 g di-tert-butyldicarbonat og 0,45 g KHCO3 i 1,6 ml H20/dioxan (1:1) ble omrørt ved romtemperatur i 14 timer. Opparbeidelsen i Et20/H20 gav etter vasking av det organiske lag med vandig NaHS04, H2O og saltvann og tørking (MgS04), etterfulgt av fordampning av løsningsmid-lene, 0,55 g av det forventede Boc-derivat, Rf 0,44 (Et20/ pentan (1:1)).
Eksempel 5
3- fenacetylamino- 1, 1, 1- trifluor- 2- propanon
Til en løsning av 0,84 g oxalylklorid i 5 ml CH2Cl2 ved -s-55°C (indre temperatur) ble tilsatt 1,03 g dimethylsulfoxyd i 1 ml CH2C12. Etter 5 min. ved *55°C ble 1,0 g 3-fenacetylamino-1,1,1-trifluor-2-propanol i 5 ml CH2CI2 og 0,2 ml DMSO tilsatt. Blandingen ble omrørt i 15 min. ved -5-55°C, hvoretter triethylamin ble tilsatt for å justere pH til 7,0. Blandingen fikk oppvarmes til 25°C, ble ytterligere fortynnet med CH2CI2 og ble vasket med H2O og deretter med IN HC1. Det organiske lag ble tørket (MgS04), ble flashfordampet under dannelse av amidketonet som ble renset ytterligere ved kromatografi på SiC>2 (CHCl3/Et20 (2:1)), Rf 0,29. Produktet inneholdende fraksjoner ble kombinert, og løsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk under dannelse av det ønskede produkt som en blanding av keton og hydrat. ;Eksempel 6 ;3- tert- butyloxycarbonylamino- l, 1, 1- trifluor- 5- methyl- 2-hexanon ;Produktet ble fremstilt ved prosedyren beskrevet i eksempel 5, med det unntak at 3-tert-butyloxycarbonylamino-1,1,1-trifluor-5-methyl-2-hexanol ble anvendt i stedet for 3-fenacetylamino-1,1,1-trifluor-2-propanol. ;Eksempel 7 ;N^-( 2- 0x0- 3, 3- difluor- l- isobutyl- 5- hexenyl)- N2- isovalerylvalinamid ;Til en løsning av 0,1 ml oxalylklorid i 2,5 ml CH2CI2 avkjølt til +55°C ble tilsatt 0,17 ml DMSO i 2,5 ml CH2C12. Etter omrøring i 5 min. ved -5-55°C ble 0,295 g N' -(2-hydroxy-3,3-difluor-isobutyl-5-hexenyl)-N<2->isovalerylvalinamid i en blanding av 2 ml CH2Cl2 og 0,4 ml DMSO tilsatt. Blandingen ble omrørt i 15 min. ved -5-55°C, hvorpå triethylamin (ca. ;0,5 ml) ble tilsatt for å justere pH på løsningen til 8. Blandingen fikk oppvarmes til romtemperatur og ble deretter fortynnet med CH2C12 og vasket med H2O og deretter med IN HC1. Det organiske lag ble tørket (MgS04) og ble deretter flashfordampet under dannelse av 0,270 g av det forventede keton. Rf 0,3 (CHC13/Et20 (2:1)). ;Eksempel 8 ;5- benzovlamino- 3, 3- difluor- 4- oxo- 6- fenylhexansyre ;En løsning av 1,72 g (5 mmol) 2-benzoylamino-4,4-difluor-7-fenyl-6-hepten-3-on i 200 ml diklormethan ble behandlet med O3 ved -r78°C i 12 min. (ca. 6 mmol O3). 2 ml (0,033 mol) dimethylsulfid ble tilsatt, og løsningen fikk oppvarmes til romtemperatur. Etter fjerning av løsningsmid-lene (20 torr, 30°C og 0,05 torr, 30°C) ble det erholdt en svakt farget olje som inneholdt fritt aldehyd, tilstedevær-ende i en mengde på ca. 70 % iht. H-NMR (CHO mot 2 CH2). ;En løsning av oljen i aceton (7,5 ml) ble behandlet med en Jones-løsning (7,5 ml, IM CrC^/r^SO^) over natten. Det organiske lag ble fraskilt, og den vandige fase ble ekstrahert med AcOEt (4 x 10 ml). De kombinerte organiske lag ble vasket med saltvann, tørket (MgSC^) og flashfordampet under dannelse av 1,7 g av den urene syre. ;Eksempel 9 ;N1-( 2- 0x0- 3, 3- difluor- l- isobutyl- 5- carboxypentyl)- N2- isovalerylvalinamid ;Produktet ble fremstilt fra N'-(2-oxo-3,3-difluor-1-isobutyl-5-hexenyl)-N<2->isovalerylvalinamid ved prosedyren ifølge eksempel 8. ;Eksempel 10 ;6, 6- difluor- 2- fenyl- 4- fenylmethyl- 3- aza- l, 9- dioxaspiro-( 4, 4) non- 2- en- 8- on ;En løsning av 1,37 g (3,8 mmol) uren 5-benzoylamino-3,3-difluor-4-oxo-6-fenylhexansyre i 10 ml THF ble holdt under N<2> og ble avkjølt til 0°C. 0,32 ml (327 mg, 4,1 mmol) pyridin ble langsomt tilsatt. Etter omrøring i 10 min. ved 0°C ble løsningen ytterligere avkjølt til -5-10°C, og 0,35 ml (508 mg, 4 mmol) oxalylklorid ble tilsatt. Gassutvikling fant sted, og blandingen fikk oppvarmes til 0°C, hvoretter ytterligere 0,32 ml (327 mg, 4,1 mmol) pyridin langsomt ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet til 40°C i løpet av 30 min., ved hvilket tidspunkt gassutviklingen hadde stanset. 60 ml AcOEt og 5 ml vann ble tilsatt, fasene ble fraskilt, og det organiske lag ble vasket med 0,1N HC1 vandig NaHCC>3 og vann (hver gang med 2 x 5 ml). Etter tørking (MgSC^) ble løsningsmidlene fjernet (20 torr, 40°C) under dannelse av 1,1 g urent laktonderivat som en gulfarget olje som ble krystallisert ved tilsetning av hexan. Omkrystallisering (AcOEt/hexan, 1:10) gav 830 mg rent laktonderivat som farge-løse nåler med sm.p. 145°C. ;Eksempel 11 ;N-( 5- benzoylamino- 3, 3- difluor- 1, 4- dioxo- 6- fenylhexyl)- S-indolin- 2- carboxylsyre, fenylmethylester ;En blanding av 1,16 g (0,4 mmol)indolin-2-carboxylsyre, fenylmethylester-hydroklorid i Et20 og H20 (ca. 5 ml) ble behandlet med Na2CC<3 (fast) og ble omrørt i 10 min. Det organiske lag ble fraskilt, og det vandige lag ble ekstrahert med Et20 (2 x 10 ml). De kombinerte organiske faser ble tørket (MgS04) og flashfordampet (20 torr, 30°C og deretter 0,05 torr, 30°C). 960 mg av det eneste residuum ble oppløst i 3 ml kloroform. 1 ml (ca. 320 mg, 1,26 mmol) indolincarboxylsyre-fenylmethylester av den ovenfor erholdte løsning ble tilsatt til 365 mg (1,06 mmol) 6,6-difluor-2-fenyl-4-fenylmethyl-3-aza-1,9-dioxaspiro-(4,4)non-2-en-8-on oppløst i 1 ml kloroform. Etter omrøring i 40 timer ved 40°C ble løsningsmid-lene fordampet (20 torr, 30°C) under dannelse av et oljeaktig residuum som ble renset ved kromatografi på silicagel (10 g, 230-400 mesh, elueringsmiddel: pentan/AcOEt (20:3)). De produktholdige fraksjoner ble kombinert, og løsnignsmid-lene ble fjernet under redusert trykk under dannelse av 500 mg av det forventede peptid som en olje. ;Eksempel 12 ;N-( 5- benzoylamino- 3, 3- difluor- 1, 4- dioxo- 6- fenylhexyl)-( S)-indolin- 2- carboxylsyre ;En blanding av 500 mg (0,84 mmol) N-(5-benzoylamino-3,3-dif luor-1,4-dioxo-6-f enylhexyl) -S.-prolin-f enylmethyl-ester og 100 mg Pd/C i i-PrOH (30 ml) ble hydrogenert under atmosfæretrykk i 12 timer ved 25°C. Blandingen ble filtrert, og filtratet ble flashfordampet under dannelse av 350 mg (82 %) av den forventede syre som en fargeløs olje. ;Eksempel 13 ;2, 2- difluor- 4- pentensyreanhydrid ;En suspensjon av sølvoxyd i vann ble fremstilt ved tilsetning av en løsning av 1,76 g (0,044 mol) NaOH i 100 ml vann til en vandig løsning av 7,14 g (0,042 mol) sølvnitrat i 100 ml, supernatantvæsken ble dekantert fra, residuet ble vasket med vann (3 x 100 ml),, og 100 ml vann ble tilsatt. Til den kraftig omrørte suspensjon ble tilsatt en løsning av 5,44 g (0,04 mol) 2,2-difluor-4-pentensyre i 100 ml vann. Etter 10 min. ble blandingen filtrert, og filtratet ble konsentrert (20 torr, 30°C) under dannelse av et fast residuum som ble tørket over fosforpentoxyd (0,05 torr, 50°C, 24 timer) under dannelse av 8,4 g (87 %) sølv 2,2-difluor-4-pentenoat, et hvitt amorft pulver. En suspensjon av 7,3 g (0,03 mol) av sølvsaltet i 50 ml diklormethan ble omrørt under nitrogen, ble avkjølt til 0°C, hvorpå 1,9 g (1,3 ml, 0,015 mol) oxalylklorid ble langsomt tilsatt. Kjølebadet ble fjernet, og reaksjonsblandingen fikk oppvarmes til romtemperatur. Oppvarming til 40°C i 30 min. full-førte reaksjonen. Etter avkjøling til romtemperatur ble supernatantvæsken dekantert og residuet vasket med 2 x 5 ml diklormethan. De organiske lag ble kombinert, og løsnings-midlene ble fjernet ved destillasjon ved atmosfæretrykk. Det således erholdte oljeaktige residuum ble deretter renset ved destillasjon under dannelse av 2,85 g meget hygroskopisk 2,2-difluor-4-pentensyreanhydrid, kp. 78-80°C/20 torr. ;Eksempel 14 ;2- benzoylamino- l- fenyl- 4, 4- difluor- 6- hepten- 3- on ;En blanding av 2,80 g (0,011 mol) 2,2-difluor-4-pentensyreanhydrid og 2,60 g (0,0104 mol) 2-fenyl-4-fenylmethyl-5(4H)-oxazolinon ble omrørt under nitrogen i 20 timer ved 60°C (oljebadtemperatur) under dannelse av en lys rød løsning. Reaksjonsblandingen ble deretter fordampet (0,05 torr, 40°C) under dannelse av en høyviskøs olje, til hvilken det under utelukkelse av fuktighet ble tilsatt 1,0 g (0,011 mol) vannfri oxalsyre, og blandingen ble oppvarmet i 15 min. (110-120°C, oljebadtemperatur). Etter at den kraftige gassutviklingen hadde avtatt, fikk oljen avkjøles til 25°C og ble deretter oppløst i en blanding av 40 ml ethylacetat og 10 ml vann. Det organiske lag ble fraskilt, vasket med vandig natriumbicarbonat (tre ganger), saltvann, ble tørket over magnesiumsulfat og ble flashfordampet (20 torr, 30°C) under dannelse av 2,4 g rødt oljeaktig residuum som ble renset ytterligere ved flashkromatografi på silicagel (50 g, 230-400 mesh, pentan/ethylacetat (3:1)), Rf lik 0,6. De produktholdige fraksjoner ble kombinert og fordampet under dannelse av 2,2 g av et fast materiale som ble omkrystallisert (etheracetat/pentan) under dannelse av 2,04 g 2-benzoylamino-l-fenyl-4,4-difluor-6-hepten-3-on som hvite nåler (59 %), sm.p. 98°C. ;Eksempel 15 ;6- benzoylamino- 4, 4- difluor- 8- methyl- l- noner- 5- on ;Det ovenfor angitte produkt ble fremstilt fra 2-fenyl-4-isobutyl-5-(4H)oxazolinon ved samme prosedyre som foregående eksempel (utbytte 73 % som olje). ;Eksempel 16 ;N- [ 3, 3, 3- trifluor- 2- oxo- l-( fenylmethyl) propyl] benzamid ;2,51 g (0,01 mol) 2-fenyl-4-fenylmethyl-5(4H)oxazoli-non og 2,52 g (0,012 mol) trifluoreddiksyreanhydrid ble omrørt under N<2> i 24 timer ved 35-40°C (oljebadtemperatur). Etter avkjøling til omgivende temperatur ble overskudd av trifluoreddiksyreanhydrid og den dannede syre flashfordampet (0,01 torr, 30-50°C). 1,35 g (0,015 mol) friskt sublimert vannfri oxalsyre (0,01 torr, 80-100°C) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet under omrøring til 110-120°C (oljebadtemperatur). Etter at gassutviklingen var avtatt (10-15 min.), fikk blandingen avkjøles til omgivende temperatur og ble omrørt i ytterligere 1-2 min. med en blanding av ethylacetat og H20 (10/1). Fasene ble fraskilt, og det organiske lag ble vasket med en løsning av NaHCC^ og deretter saltvann ;(hver gang 3 x 20 ml). Tørking (MgSC^) og flashfordampning (20 torr og 0,01 torr/30°C) gav et fast materiale som ble krystallisert fra ethylacetat/hexan under dannelse av 2,02 g (63 %) av den forventede trifluormethylketonrhydratblanding som et hvitt pulver, sm.p. 163 °C. ;Eksempel 17 ;N-[ 3, 3, 3- difluor- 2- oxo- l-( fenylmethyl) propyl] benzamid ;Det ovenfor angitte produkt ble fremstilt med 50 % utbytte ved den foregående prosedyre, med det unntak at difluoreddiksyreanhydrid ble anvendt i stedet for trifluoreddiksyreanhydrid; sm.p. 136°C. ;Eksempel 18 ;N-[ 3, 3, 3- trifluor- 2- oxo-( 4- nitrofenylmethyl) propylJbenzamid ;Det ovenfor angitte produkt ble fremstilt med 55 % utbytte ved den foregående prosedyre (eksempel 16), med det unntak at 2-fenyl-4(4-nitrofenyl)methyl-5(4H)-oxazolinon ble anvendt i stedet for 2-fenyl-4-fenylmethyl-5(4H)oxazolinon: hydratblanding; sm.p. 175°C. ;Eksempel 19 ;N-[ 2-( 4- aminoiminomethyl- aminofenyl)- 1- trifluoracetylethyl]-benzamid, hydroklorid ;En suspensjon av 1,77 g (0,0054 mol) N-benzoyl-(4-guanidino)fenylalanin i 10 ml (1,438 g/0,07 mol) trifluoreddiksyreanhydrid ble omrørt ved 40°C (oljebadtemperatur) i 20 timer. Den klare løsning ble flashfordampet (0,01 torr, 40°C) og ble behandlet med vannfri oxalsyre som beskrevet i syntesen av N-[3,3,3-trifluor-2-oxo-l-(fenylmethyl)propyl]-benzamid under dannelse av 1,2 g (53 %) av den forventede trifluormethylketonrhydratblanding som hvitt pulver; sm.p. 96°C. ;Eksempel 20 ;N-[ 3, 3, 3- trifluor- 2- oxo- l-( 2- methylethyl) propyo3benzamid ;Det ovenfor angitte produkt ble fremstilt med 23 % utbytte ved prosedyren ifølge eksempel 16, med det unntak at 2- fenyl-4-(2-methylethyl)-5-(4H)oxazolinon ble anvendt i stedet for 2-fenyl-4-fenylmethyl-5-(4H)oxazolinon; sm.p. 94°C. ;Eksempel 21 ;N- 3, 3, 3- trifluor- 2- oxo- l[( 4- fenylmethyloxycarboxamid)-butylpropylbenzamid ;Det ovenfor angitte produkt (som en olje) ble fremstilt med 56 % utbytte ved prosedyren ifølge eksempel 16, med det unntak at 2-fenyl-4(4-fenylmethyloxycarboxamido)-butyl-5-(4H)oxazolinon ble anvendt i stedet for 2-fenyl-4-fenylmethyl-5-(4H)oxazolinon. ;Eksempel 22 ;N-( 1- trifluoracetyl- 3- methylbutyl) benzamid ;Det ovenfor angitte produkt (som en olje) ble fremstilt med 33 % utbytte ved prosedyren ifølge eksempel 16, med det unntak at 2-fenyl-4-isobutyl-5-(4H)-oxazolinon ble anvendt i stedet for 2-feny1-4-fenylmethyl-5-(4H)-oxazoli-non. ;Eksempel 23 ;N-( 3, 3, 3- trifluor- 2- oxo- propyl) benzamid ;En løsning av 7,57 g hippurinsyre og 17,4 ml trifluoreddiksyreanhydrid i 60 ml vannfri aceton ble omrørt ved 25°C i 16 timer under N<2> under dannelse av et rødt bunnfall som ble isolert ved filtrering. Tilbakeløpskoking av det røde faste materiale i 50 ml H2O i en time gav en løsning som ble ekstrahert med AcOEt. Det organiske lag ble tørket (MgS04) og ble flashfordampet under dannelse av et urent produkt som ble omkrystallisert fra benzen under dannelse av 4,15 g analytisk rent produkt med sm.p. 105°C (spaltning). ;Eksempel 24 ;3- benzoylamino- l, 1, 1- trifluor- 2- propanol ;En løsning av 10 g (0,263 mol) NaBH4 i 100 ml H20 ble tilsatt til 14,8 g (59,4 mmol) N-(3,3,3-trifluor-2-oxo-propyl)benzamid i 1000 ml H2O. Etter omrøring i 2 timer ved 25°C ble løsningen surgjort med konsentrert HC1 (pH 1), ble gjort basisk ved tilsetning av NaOH pellets (pH 10) og ble ekstrahert med AcOEt (3 x 500 ml). Etter tørking (MgSO^ ble det organiske lag flashfordampet under dannelse av 11 g av et hvitt fast materiale som ble omkrystallisert fra CHCI3 under dannelse av 10,0 g (72 %)• ren trifluormethylalkohol med sm.p. 156°C. ;Eksempel 25 ;6- benzoylamino- 4, 4- difluor- 8- methyl- l- noner- 5- ol ;Det ovenfor angitte produkt ble fremstilt fra 6-benzoylamino-4,4-difluor-8-methyl-l-noner-5-on ved prosedyren beskrevet i eksempel 24, med det unntak at alkoholen ble renset ved kromatografi på silicagel (elueringsmiddel EtOAc/hexan (1/5)); sm.p. 110°C. ;Eksempel 26 ;3- benzoylamino- l, 1, 1- trifluor- 4- methyl- 2- pentanol ;Det ovenfor angitte produkt ble fremstilt fra N-(3,3,3-trifluor-2-oxo-(1-methylethyl)propyl)benzamid ved prosedyren beskrevet i eksempel 24 i et utbytte på 77 %; sm.p. 150°C. ;Eksempel 27 ;3- benzoylamino- l, 1, 1- trifluor- 5- methyl- 2- hexanol ;Det ovenfor angitte produkt ble fremstilt fra N-(l-trifluoracetyl-3-methylbutyl)benzamid ved prosedyren ifølge eksempel 24 i 80 % utbytte. ;Eksempel 28 ;3- amino- l, 1, 1- trifluor- 2- propanol- hydroklorid ;En blanding av 3 g (12,9 mmol) 3-benzoylamino-l,1,1-trifluor-2-propanol i 26 ml H2O, 26 ml konsentrert HC1 og 26 ml ethanol ble kokt under tilbakeløpskjøling i 20 timer og ble deretter konsentrert under redusert trykk. Residuet ble oppløst i vann og ekstrahert med diethylether. Det vandige lag ble deretter konsentrert under dannelse av et fast residuum som ble omkrystallisert fra isopropanol/diethylether under dannelse av 1,37 g av den fluorerte amino-alkohol. ;Eksempel 29 ;3- amino- l, 1, 1- trifluor- 4- methyl- 2- pentanol- hydroklorid ;Det ovenfor angitte produkt ble fremstilt fra 3-benzoylamino-1,1,1-trifluor-4-methyl-2-pentanol i 75 % utbytte ved prosedyren ifølge eksempel 28. Rf 0,37 (AcOEt/ Et3N (20:1)). ;Eksempel 30 ;3- amino- l, 1, 1- trifluor- 5- methyl- 2- hexanol- hydroklorid ;Det ovenfor angitte produkt ble fremstilt fra det tilsvarende 3-benzoylaminoderivat, sm.p. 283°C; Rf 0,78 (EtOH/NH4OH, (70/30)) ved prosedyren ifølge eksempel 28. ;Eksempel 31 ;6- amino- 4, 4- difluor- 8- methyl- l- noner- 5- ol- hydroklorid ;Det ovenfor angitte produkt ble erholdt ved prosedyren ifølge eksempel 28 i 89 % utbytte ut fra det tilsvarende 6-benzoylaminoderivat. ;Eksempel 32 ;4- N- tert- butoxycarbonylamino- 2, 2- difluor- 3- hydroxy- 6-methylheptansyreethylester ;Til en tilbakeløpskokende suspensjon av 0,196 g aktivert zinkull i 3 ml vannfri tetrahydrofuran ble tilsatt en løsning av 0,618 g (3 mmol) ethylbromdifluoracetat i 1 ml vannfri THF. Etter at reaksjonen startet, ble en løsning av 0,5 g (2,32 mmol) N-tert-butoxycarbonylleucinal tilsatt. Blandingen fikk stå ved forsiktig tilbakeløpskoking i en time. Reaksjonsblandingen ble deretter avkjølt, reaksjonen ble stanset ved tilsetning av 10 ml ethylacetat, saltvann og IM KHSO4. Det organiske lag ble tørket over vannfritt MgS04, ble fordampet og renset ved flashkromatografi (silicagel, 10 % EtOAc/cyclohexan), utbytte 0,210 g, Rf 0,65 (EtOAc/cyclo-hexan, 1:1). ;Eksempel 33 ;4- N- tert- butoxycarbonylamino- 2, 2- difluor- 3- hydroxy- 6-methylheptansyre ;En løsning av 0,0285 g (0,68 mmol) LiOH, H20 i 2 ml vann ble tilsatt ved 0°C til en blanding av 0,210 g (0,62 mmol) 4-N-tert-butoxycarbonylamino-2,2-difluor-3-hydroxy-6-methylheptansyre, ethylester i 5 ml 1,2-dimethoxyethan (DME). Temperaturen fikk stige langsomt til romtemperatur. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur over natten. Blandingen ble fortynnet med 10 ml vann og vasket med 10 ml diethylether. Det vandige lag ble surgjort til pH 2 med 0,1N HC1 og ble ekstrahert med 2 x 10 ml diethylether. De kombinerte organiske lag ble vasket med saltvann og ble tørket over vannfritt MgSG-4. Filtrering og fjerning av løsningsmidlet i vakuum gav den forventede syre som ble omkrystallisert fra diethylether/pentan. ;Eksempel 34 ;4- N- tert- butoxycarbonylamino- 2, 2- difluor- 3- hydroxy- N-( 1-isoamylaminocarbonylethyl)- 6- methylheptanamid ;Til en blanding av 0,194 g (1 mmol) alaninisoamyl-amid-hydroklorid i 5 ml methylenklorid (eller DMF) ble tilsatt 0,101 g (1 mmol) triethylamin ved 0°C. 0,311 g 4-N-tert-butoxycarbonylamino-2,2-difluor-3-hydroxy-6-methyl-heptansyre og 0,202 g 1-hydroxybenzotriazol ble tilsatt, etterfulgt av tilsetning av 0,206 g (1 mmol) DCC i 5 ml methylenklorid. Reaksjonsblandingen ble langsomt oppvarmet til romtemperatur og ble omrørt i 12 timer ved denne temperatur. Dicyclohexylurea ble filtrert fra, og filtratet ble fordampet under redusert trykk. Residuet ble oppløst i ethylacetat, ble vasket suksessivt med kald IN HCl, IN NaOH og ble tørket over vannfritt MgSC>4. Amidet ble renset ved kolonnekromatografi (silicagel, EtOAc/cyclohexan; 1:1, Rf 0,22 (EtOAc/cyclohexan, 1:1). ;Eksempel 35 ;4-amino-2, 2- difluor- 3- hydroxy- N-( isoamylaminocarbonylethyl)-6- methylheptanamid- hydroklorid ;0,457 g 4-N-tert-butoxycarbonylamino-2,2-difluor-3-hydroxy-N-(1-isoamylaminocarbonylethyl)-6-methylheptanamid ble oppløst i en løsning av 4N'HC1 i diethylether (5 ml) og ble omrørt ved romtemperatur i 14 timer. Etter fjerning av overskuddsreagens under redusert trykk ble det faste residuum triturert med ether under dannelse av et fast materiale som ble tørket i vakuum i 8 timer. Rf 0,63 (AcOH/butanol/ H20; 2:6:2). ;Eksempel 36 ;4-[( 2- N- isovaleryl- 3- methyl- l- oxobutyl) amino] 2, 2- difluor- 3-hydroxy- N-( 1- isoamylaminocarbonylethyl)- 6- methylheptanamid ;Til en løsning av 0,130 g (0,33 mmol) 4-amino-2,2-di fluor-3-hydroxy-N-(1-i soamylaminocarbonylethy1)-6-methy1-heptanamid HC1 i 10 ml THF ble tilsatt 0,034 g (0,33 mmol) N-methylmorfolin ved romtemperatur. Etter 10 min. ble blandingen avkjølt til 0°C, en løsning av 0,103 g (0,50 mmol) DCC i 1 ml THF ble tilsatt, etterfulgt av tilsetning av 0,100 g (0,50 mmol) N-isovalerylvalin. Omrøringen ble fortsatt i 15 timer mens temperaturen fikk stige til romtemperatur. Bunnfallet ble filtrert fra og filtratet skylt med THF. Løsningsmidlet ble fordampet i vakuum; residuet ble renset ved kromatografi (silica gel, CH3OH/CHCI3 2:98) under dannelse av 0,06 g av det forventede anhydrid. Rf: 0,45 (CH3OH/CHCI3 8:92). ;Eksempel 37 ;4-[( 2- N- isovalerylamino- 3- methyl- l- oxobutyl) amino] 2, 2-difluor- N-( 1- isoamylaminocarbonylethyl)- 6- methyl- 3- oxo-heptanamid ;En løsning av 0,214 g (0,40 mmol) 4-[2-N-isovalerylamino-3-methy1-1-oxobutyl)amino]2,2-difluor-3-hydroxy-N-(1-isoamylaminocarbonylethyl)-6-methylheptanamid i 4 ml CH2CI2 ble tilsatt til en suspensjon av 0,228 g pyridiniumdichromat og 0,336 g 3-Å molekylsil inneholdende 20 ul iseddik. Om-røringen ble fortsatt i 15 timer ved romtemperatur. 0,200 g florisil ble tilsatt, omrøringen ble fortsatt i ytterligere 15 min., og blandingen ble filtrert. Fjerning av løsnings-midlet og kromatografi (silicagel, ethylacetat/aceton 7:3) gav det forventede keton. Rf 0,3 (ethylacetat/kloroform 1:1). ;Eksempel 38 ;4- N- tert- butoxycarbonylamino- 2, 2- difluor- 6- methyl- 3- oxo-heptansyre, ethylester ;Tittelforbindelsen ble fremstilt med 65 % utbytte fra alkoholen beskrevet i eksempel 32 ved å følge den foregående prosedyre. Ketonet ble renset ved kromatografi (silicagel, ethylacetat/cyclohexan 1:9). ;Eksempel 39 ;4-amino-2, 2- difluor- 6- methyl- 3- oxo- heptansyre, ethylester-hydroklorid ;Den BOC-beskyttende gruppe av ketonet ifølge eksempel 38 ble spaltet under anvendelse av samme prosedyre som for amidet beskrevet i eksempel 35. Sm.p.: 127-128°C (spaltning) . ;Eksempel 40 ;Ethyl- 3- keto- 2- methyl- 4, 4, 4- trifluorbutanoat ;7,05 g av en 50 % oljedispersjon av natriumhydrid (0,15 mol) ble vasket tre ganger med 25 ml dimethoxyethan for å fjerne oljen, ble deretter suspendert i 220 ml dimethoxyethan under en argonatmosfære og ble avkjølt på et ;isbad. En løsning av 25,77 g (0,14 mol) ethyl-3-keto-4,4,4-trifluorbutanoat i 25 ml dimethoxyethan ble tilsatt dråpevis fra en dråpetrakt til den omrørte suspensjon. Etter at tilsetningen var fullført, ble kjølebadet fjernet og reaksjonsblandingen ble omrørt i 30 min. etter at hydrogengassutvik-lingen var avtatt. 43,0 ml (0,70 mol) methyljodid ble tilsatt med en sprøyte, og reaksjonsblandingen ble kokt under tilbakeløpskjøling over natten. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og ble helt over i en skilletrakt ;inneholdende en 1:1:1-blanding av mettet ammoniumklorid: saltvann:vann. Lagene ble fraskilt, og den vandige fase ble ekstrahert med 100 ml ether. Den kombinerte organiske fase og etherekstraktet ble vasket med saltvann, ble tørket over magnesiumsulfat og ble filtrert. Løsningsmidlene ble fjernet ved destillasjon ved atmosfæretrykk under anvendelse av en Vigreaux-kolonne under dannelse av ethyl-3-keto-2-methyl-4,4,4-trifluorbutanoat som residuum. Rf: (EtAc/hexan - 20:80). ;Eksempel 41 ;Ethyl- 3- hydroxy- 2- methyl- 4, 4, 4- trifluorbutanoat ;Til en løsning av 20,1 g (0,10 mol) ethyl-3-keto-2-methyl-4,4,4-trifluorbutanoat i 250 ml absolutt ethanol, avkjølt på et isbad, ble det tilsatt 1,0 g (0,25 mol) natriumborhydrid i porsjoner under omrøring. Kjølebadet ble fjernet og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 30 min. 5 ml aceton ble tilsatt for å spalte ethvert gjenværende natriumborhydrid, og løsningsmidlene ble fjernet ved destillasjon ved atmosfæretrykk under anvendelse av en Vigreaux-kolonne. Residuet ble fortynnet med 200 ml methylenklorid og ble helt over i en skilletrakt inneholdende 75 ml av en 1:1:1-blanding av mettet ammoniumklorid: saltvann:vann. Lagene ble fraskilt, og den vandige fase ble ekstrahert med 3 x 25 ml methylenklorid. Den kombinerte organiske fase og methylenkloridekstraktene ble tørket over magnesiumsulfat, ble filtrert og destillert ved atmosfæretrykk for å fjerne løsnignsmidlene. Residuet ble deretter destillert ved redusert trykk (20 mm Hg) under anvendelse av en Vigreaux-kolonne under dannelse av ethyl-3-hydroxy-2-methyl-4,4,4-trifluorbutanoat, kp. 78-84°C, 20 mm Hg. ;Eksempel 42 ;3- hydroxy- 2- methyl- 4, 4, 4- trifluorbutanamid ;En løsning av 11,4 g (51,0 mmol) 3-hydroxy-2-methyl-4,4,4-trifluorbutanoat i 85 ml methanol, avkjølt på et isbad, ble boblet i vannfri ammoniakk i flere minutter. Reak-sjonskolben ble forseglet og ble omrørt ved romtempratur i 6 dager. Blandingen ble konsentrert under anvendelse av en rotasjonsfordamper, og residuet ble destillert ved redusert trykk under anvendelse av en vakuumpumpe for å fjerne alle komponenter med kokepunkt under 25°C ved 0,05 mm Hg under dannelse av 5,8 g (33,9 mmol) trifluorbutanamid som residuum . ;Eksempel 43 ;3- hydroxy- 4, 4, 4- trifluor- 2- butylamin- hydroklorid ;Til 15,4 g 85 % kaliumhydroxydpellets (0,23 mol) oppløst i 45 ml vann, og avkjølt på et isbad, ble tilsatt 2,7 ml (51,4 mmol) brom. Etter flere minutter ble en løs-ning av 8,0 g (46,8 mmol) 3-hydroxy-2-methyl-4,4,4-trifluorbutanamid i 45 ml vann, og på forhånd avkjølt på et isbad, tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved isbadtemperatur i 20 min. og deretter ved romtemperatur i 30 min. Til slutt ble reaksjonsblandingen oppvarmet på et dampbad i 30 min. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og ble helt over i en skilletrakt hvor den ble ekstrahert med 3 x 50 ml methylenklorid. Det vandige lag ble deretter mettet med fast natriumklorid og ble ekstrahert ytterligere med to porsjoner methylenklorid (25 ml). De kombinerte organiske ekstrakter ble tørket over magnesiumsulfat, ble filtrert, og løsningsmidlet ble fjernet ved. omgivende- temperatur på en rotasjonsfordamper. Residuet ble oppløst i 250 ml vannfri ether, og vannfri hydrogenkloridgass ble boblet gjennom reaksjonsblandingen. Et hvitt bunnfall ble dannet, og suspensjonen ble avkjølt på et isbad. Bunnfallet ble filtrert og ble deretter omkrystallisert fra aceton-ether under dannelse av 3-hydroxy-4,4,4-trifluor-2-butylamin-hydroklorid, Rf: 0,25 (NH4OH/CH3OH/CH2CI2 - 2:10:88). ;Eksempel 44 ;L- alaninmethylester- hydroklorid ;Til en suspensjon av 25,0 g (0,28 mol) L-alanin i 125 ml methanol, avkjølt på et is-methanolbad, ble tilsatt 21,0 ml (0,29 mol) thionylklorid dråpevis med en hastighet slik at den indre reaksjonstemperatur ble opprettholdt ved 5°C eller lavere. Etter at tilsetningen var fullført, ble kjølebadet fjernet, og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 45°C i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert for å fjerne en liten mengde av et gult fast materiale, og filtratet ble konsentrert under anvendelse av en rotasjonsfordamper. Til den resulterende olje ble tilsatt 50 ml tetrahydrofuran, og blandingen ble fordampet til tørrhet på en rotasjonsfordamper. Residuet ble anbrakt under høyvakuum under dannelse av et off-hvitt fast materiale. 300 ml ether ble tilsatt til det faste materiale, og suspensjonen ble oppsluttet på et dampbad. Kjøling og filtrering gav L-alaninmethylester-hydroklorid (37,2 g, 0,26 mmol). ;Eksempel 45 ;Boc- L- alaninmethylester ;Til en omrørt suspensjon av 10,0 g (71,6 mmol) L-alaninmethylester-hydroklorid i 220 ml methylenklorid under argonatmosfære ble tilsatt 10,0 ml (71,6 mmol) triethylamin. 15 min. senere ble en løsning av 15,3 g (70,2 mmol) di-tert-butyldicarbonat i 30 ml methylenklorid dråpevis tilsatt. Etter at tilsetningen var fullført, ble reaksjonsblandingen omrørt ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble helt over i en skilletrakt inneholdende 50 ml vann, og lagene ble fraskilt. Det organiske lag ble vasket med 0,5N saltsyre (2 x 50 ml) og 50 ml saltvann. Det organiske lag ble deretter tørket over magnesiumsulfat, ble filtrert, og hovedmengden av løsningsmiddel ble fordampet under anvendelse av en rotasjonsfordamper. De siste spor av løsnings-middel ble fjernet under høyvakuum under dannelse av Boc-L-alaninmethylester (14,27 g, 70,2 mmol). ;Eksempel 46 ;Boc- L- alaninal ;Boc-L-alaninmethylester (5,0 g, 24,6 mmol) ble oppløst i 150 ml tørr toluen under argonatmosfære og ble avkjølt på et tørris-acetonbad. Til den kraftige omrørte løsning ble tilsatt en løsning av diisobutylaluminiumhydrid (1,0M i hexan, 61,5 ml, 61,5 mmol), på forhånd avkjølt på et tørris-aceton-bad via en overføringsnål. Etter 6 min. ble reaksjonen forsiktig stanset med 4 ml methanol, og blandingen ble oppvarmet til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble helt over i en skilletrakt inneholdende 250 ml ether og 200 ml iskald 0,25N saltsyre. Lagene ble fraskilt, og det organiske lag ble vasket med 0,25N saltsyre (3 x 80 ml) og 50 ml saltvann. Det organiske lag ble tørket over magnesiumsulfat, ble filtrert og konsentrert under anvendelse av en rotasjonsfordamper ved omgivende temperatur. Residuet ble kromatografert under anvendelse av hexan-30 % ethylacetat under dannelse av Boc-L-alaninal. Forbindelsen kan også fremstilles ved den teknikk som er beskrevet i Synthesis, 1983, s. 676. ;Eksempel 47 ;( 3S)- 3- amino- 2- hydroxybutansyre ;Til en suspensjon av 2,5 g (14,4 mmol) Boc-L-alaninal i 30 ml iskaldt vann ble tilsatt en iskald løsning av 1,5 g (14,4 mmol) natriumbisulfitt i 10 ml vann. Den resulterende suspensjon ble omrørt ved isbadtemperatur over natten. Til den resulterende løsning ble tilsatt 200 ml ethylacetat og deretter en løsning av 0,9 g (14,4 mmol) kaliumcyanid i 10 ml vann. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 4 timer og ble deretter helt over i en skilletrakt, og lagene ble fraskilt. Det organiske lag ble vasket med 2 x 100 ml vann og 75 ml saltvann, ble deretter tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under anvendelse av en rotasjonsfordamper. Cyanohydrinet ble oppløst i 50 ml dioxan, og 50 ml konsentrert saltsyre ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble kokt under tilbakeløp over natten og ble deretter avkjølt til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble helt over i en skilletrakt inneholdende 100 ml ether, og lagene ble separert. Det vandige lag ble ekstrahert med Ytterligere 100 ml ether og ble deretter fordampet til tørr-het på en rotasjonsfordamper. Det resulterende residuum ble oppløst i 30 ml vann, og pH ble justert til ca. 7 med 2N ammoniumhydroxyd. Denne løsning ble anbrakt på en Biorad AG 50 W-X8 H© harpikskolonne og eluert med 2N ammoniumhydroxyd. Kombinering av egnede fraksjoner og fordampning gav urent ;(3S)-3-amino-2-hydroxybutansyre som deretter ble omkrystallisert fra vann-aceton under dannelse av 1,05 g (8,8 mmol) av det ønskede produkt som et hvitt fast materiale. ;Eksempel 48 ;Methy1-( 3S)- 3- amino- 2- hydroxybutanoat ;I en suspensjon av (3S)-3-amino-2-hydroxybutansyre (1,0 g, 8,4 mmol) i 25 ml methanol ble boblet vannfritt hydrogenkloridgass inntil en løsning oppstod. Deretter ble reaksjonsblandingen avkjølt på et isbad og ble mettet med hydrogenklorid. Kjølebadet ble fjernet, og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 3 1/2 time. Løsnings-midlet ble fjernet på en rotasjonsfordamper ved omgivende temperatur, og det resulterende residuum ble oppløst i 25 ml methanol, ble avkjølt på et isbad og mettet med hydrogenkloridgass. Oppvarming av reaksjonsløsningen til romtemperatur og fjerning av løsningsmidlet på en rotasjonsfordamper gav en olje. Til denne olje ble tilsatt 15 ml triethylamin, etterfulgt av en minimal mengde methanol (ca. 15 ml) som var nødvendig for å oppløse det gummiaktige faste materiale. Løsningen ble avkjølt på et isbad, og 75 ml ether ble tilsatt i porsjoner under omrøring. Det utfelte triethylamin-hydroklorid ble filtrert, og filtratet ble fordampet under dannelse av methyl-(3S)-3-amino-2-hydroxybutanoat. ;Eksempel 49 ;Boc- L- alanyl- L- prolinbenzylester ;Boc-L-alanin (19,5 g, 0,10 mol) ble oppløst i 90 ml tørr tetrahydrofuran under argonatmosfære i en kolbe utstyrt med en omrører og et indre termometer. Løsningen ble avkjølt til +15°Cf og 11,4 ml (0,10 mol) N-methylmorfolin ble tilsatt, etterfulgt av 13,4 ml (0,10 mol) isobutylklorformiat i en slik hastighet at den indre reaksjonstemperatur ble opprettholdt ved -MO til -5-15°C. 5 min. etter at tilsetningen var fullført, ble en løsning av 25,2 g (0,10 mol) L-prolinbenzylester-hydroklorid og 11,4 ml (0,10 mol) N-methylmorfolin i 90 ml kloroform dråpevis tilsatt i en slik hastighet at den indre reaksjonstemperatur ble opprettholdt ved -rlO til -f-15°C. Etter at tilsetningen var fullført, ble reaksjonsblandingen langsomt oppvarmet til romtemperatur og ble deretter omrørt ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under anvendelse av en rotasjonsfordamper, residuet ble fortynnet med 500 ml ethylacetat/ 100 ml 0,2N saltsyre og ble helt over i en skilletrakt. Lagene ble separert, og den vandige fase ble ekstrahert med ytterligere 150 ml ethylacetat. De kombinerte organiske lag ble vasket med 0,2N saltsyre (2 x 100 ml), 100 ml vann, 2 x 100 ml mettet natriumbicarbonat og igjen med 100 ml vann, og til slutt 100 ml saltvann. Den organiske fase ble tørket over magnesiumsulfat, ble filtrert og konsentrert på en rotasjonsfordamper. Kromatografi under anvendelse av ethylacetat-hexan som elueringsmiddel gav Boc-L-alanyl-L-prolinbenzylester, Rf: 0,15 (EtOAc/hexan - 30:70). ;Eksempel 50 ;L- alanyl- L- prolinbenzylester- hydroklorid ;I en løsning av Boc-L-alanyl-L-prolinbenzylester (31,6 g, 83,94 mmol) i 400 ml ethylacetat, avkjølt på et isbad, ble boblet hydrogenkloridgass i 15 min. Tilsetningen av gass ble avsluttet, kjølebadet ble fjernet og løsningen omrørt ved romtemperatur i 1 1/2 time. Konsentrering under anvendelse av en rotasjonsfordamper etterfulgt av tørking av residuet (i en vakuumeksikkator over kaliumhydroxydpellets over natten) gav L-alanyl-L-prolinbenzylester-hydroklorid (25,5 g, 81,5 mmol). ;Eksempel 51 ;Boc- L- alanyl- L- alanyl- L- prolinbenzylester ;L-alanyl-L-prolinbenzylester-hydroklorid (13,0 g, 41,6 mmol) ble oppløst i 650 ml methylenklorid under en argonatmosfære i en kolbe utstyrt med rører. 4,8 ml ;(43,6 mmol) N-methylmorfolin ble sprøytet inn i løsningen, og etter 5 min. ble Boc-L-alanin (7,9 g, 41,6 mmol) tilsatt, etterfulgt av l-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrokinolin (11,8 g, 47,8 mmol). Den resulterende løsning ble omrørt ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble helt ;over i en skilletrakt inneholdende 300 ml vann, og lagene ble fraskilt. Det vandige lag ble ekstrahert med 200 ml kloroform, og de kombinerte organiske ekstrakter ble vasket med 3 x 200 ml 0,5N saltsyre, 2 x 200 ml vann, 2 x 200 ml mettet natriumbicarbonat og 200 ml saltvann. Det organiske lag ble deretter tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert på en rotasjonsfordamper. Tilsetning av ether-hexan gav urent Boc-L-alanyl-L-alanyl-L-prolinbenzylester som ble omkrystallisert fra ethyleacetat-hexan under dannelse av det rene produkt (15,1 g) med sm.p. 124-126°C. ;Eksempel 52 ;L- alanyl- L- alanyl- L- prolinbenzylester- hydroklorid ;I en løsning av Boc-L-alanyl-L-alanyl-L-prolinbenzylester (25,5 g, 57,0 mmol) i 650 ml ethylacetat, avkjølt på et isbad, ble boblet hydrogenkloridgass i 15 min., hvoretter boblingen ble stanset. Kjølebadet ble fjernet, og løsningen ble omrørt ved romtemperatur i 1 1/2 time. Reaksjonsblandingen ble konsentrert på en rotasjonsfordamper, og det resulterende gummiaktige faste materiale ble oppløst i methylenklorid-hexan. Fjerning av løsningsmidlene gav L-alanyl-L-alanyl-L-prolinbenzylester-hydroklorid som ble tørket over kaliumhydroxydpellets i en vakuumeksikkator over natten under dannelse av 21,09 g (54,7 mmol) av det ønskede produkt. ;Eksempel 53 ;Methoxysuccinyl- L- alanyl- L- alanyl- L- prolinbenzylester ;Til en løsning av L-alanyl-L-alanyl-L-prolinbenzylester-hydroklorid (19,2 g, 50,0 mmol), mono-methylsuccinat ;(6,6 g, 50,0 mmol) og 1-hydroxybenzotriazol-xH20 (16,9 g) i 125 ml N,N-dimethylformamid under en argonatmosfære, og av-kjølt på et isbad, ble tilsatt 5,5 ml (50,0 mmol) N-methylmorfolin. Etter 5 min. ble 11,9 g (57,5 mmol) N,N'-dicyclo-hexylcarbodiimid tilsatt, kjølebadet ble fjernet, og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble filtrert, og filtratet ble helt over i en skilletrakt inneholdende 750 ml kloroform/250 ml 0,5N ;saltsyre. Lagene ble separert, og den vandige fase ble ekstrahert med 200 ml kloroform. De kombinerte organiske ekstrakter ble vasket med 2 x 250 ml 0,5N saltsyre, 2 x 250 ml vann, 2 x 250 ml mettet natriumbicarbonat og 250 ml salt-vann. Det organiske lag ble tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert på en rotasjonsfordamper. De siste spor av løsningsmiddel ble fjernet under anvendelse av en vakuumpumpe, og residuet ble kromatografert under anvendelse av aceton-ethylacetat som elueringsmiddel. Det resulterende urene MeOSuc-L-alanyl-L-alanyl-L-prolinbenzylester ble omkrystallisert fra ethylacetat under dannelse av rent produkt med sm.p. 124-127°C. ;Eksempel 54 ;MeOSuc- L- alanyl- L- alanyl- L- prolin ;I en Parr-kolbe spylt med argon inneholdende 4,0 g 10 % palladium på carbon ble tilsatt 775 ml tert-butanol og deretter MeOSuc-L-alanyl-L-alanyl-L-prolinbenzylester (13,0 g, 28,2 mmol). Blandingen ble ristet under 2,1 kg/cm<2 >hydrogen ved 30-40°C over natten. Blandingen ble filtrert gjennom celitt, og filtratet ble konsentrert på en rota-sjons fordamper. Residuet ble destillert azeotropt med kloroform-hexan for å fjerne de siste spor av tert-butanol og ble deretter tørket under høyvakuum under dannelse av MeOSuc-L-alanyl-L-alanyl-L-prolin (10,4 g, 28,0 mmol). ;Eksempel 55 ;Acetyl- L- prolyl- L- alanyl- L- prolinbenzylester ;Ac-L-prolin (3,05 g, 19,41 mmol) ble oppløst i 100 ml tørr tetrahydrofuran under en argonatmosfære i en kolbe utstyrt med rører og indre termometer. Løsningen ble avkjølt til -i-15°C, og 2,13 ml (19,41 mmol) N-methylmorfolin ble tilsatt, etterfulgt av 2,51 ml (19,41 mmol) isobutylklorformiat i en slik hastighet at den indre reaksjonstemperatur ble opprettholdt ved -5-10 til -5-15°C. 5 min. etter at tilsetningen var fullført, ble en løsning av L-alanyl-L-prolinbenzylester-hydroklorid (6,08 g, 19,41 mmol) i 70 ml kloroform tilsatt, etterfulgt av en andre porsjon av 2,13 ml ;(19,41 mmol) N-methylmorfolin i en slik hastighet at den indre reaks jons temperatur ble opprettholdt ved -5-10 til -5-15°C. Reaks jonsblandingen ble deretter langsomt oppvarmet til romtemperatur og ble omrørt ved romtemperatur i 2 1/2 time. Reaksjonsblandingen ble konsentrert til et lite residuum på en rotasjonsfordamper, ble fortynnet med 500 ml kloroform og ble helt over i en skilletrakt hvor den ble vasket med 3 x 200 ml 0,2N saltsyre og 200 ml 5 % natriumbicarbonat. Det organiske lag ble tørket over magnesiumsulfat, ble filtrert, konsentrert på en rotasjonsfordamper og kromatografert under anvendelse av methylenklorid-methanol som elueringsmiddel under dannelse av Ac-L-prolyl-L-alanyl-L-prolinbenzylester; Rf 0,35 (CH3OH/CH2Cl2 - 7:93). ;Eksempel 56 ;Acetyl- L- prolyl- L- alanyl- L- prolin ;Til en Parr-kolbe spylt med argon inneholdende 450 mg 10 % palladium på carbonkatalysator ble tilsatt en løsning av 1,0 g (2,41 mmol) Ac-L-prolyl-L-alanyl-L-prolinbenzylester i 100 ml absolutt ethanol. Innoldet ble ristet under 2,8 kg/cm<2> hydrogen over natten ved romtemperatur. Blandingen ble filtrert gjennom celitt, og filtratet ble konsentrert på en rotasjonsfordamper under dannelse av urent Ac-L-prolyl-L-alanyl-L-prolin som ble krystallisert fra tetrahydrofuran-methanol-ether under dannelse av 0,57 g av det ønskede produkt i et utbytte på 73 %. ;Eksempel 57 ;1, 1, 1- trifluor- 3-[( N- acetylprolyl) alanylprolylamino3butan- 2-ol ;Ac-L-prolyl-L-alanyl-L-prolin (1,17 g, 3,61 mmol) ble suspendert i 55 ml tørr acetonitril under en argonatmosfære i en kolbe utstyrt med rører og indre termometer. Suspensjonen ble avkjølt til -5-15°C, og 0,40 ml (3,61 mmol) N-methylmorfolin ble tilsatt, etterfulgt av 0,47 ml (3,61 mmol) isobutylklorformiat i en slik hastighet at den indre reaksjonstemperatur ble opprettholdt ved -5-10 til -5-15°C. ;10 min. etter at tilsetningen var fullført, ble en blanding av 3-hydroxy-4,4,4-trifluor-2-butylamin-hydroklorid (0,65 g, 3,61 mmol) og N-methylmorfolin (0,40 ml, 3,61 mmol) i 25 ml kloroform tilsatt i en slik hastighet at den indre reak-sjons temperatur ble opprettholdt ved -MO til -M5°C. Reaksjonsblandingen fikk oppvarmes langsomt til romtemperatur og ble deretter omrørt ved romtemperatur i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble fordampet på en rotasjonsfordamper under dannelse av et oljeaktig residuum som ble oppløst i 65 ml vann og ble behandlet med en blandet sjiktharpiks (J.T. Baker - ANGMI-615, 17 g). Etter 15 min. ble blandingen filtrert, og filtratet ble fordampet på en rotasjonsfordamper. Kromatografi under anvendelse av methylenklorid-10 % methanol som elueringsmiddel gav det ovenfor angitte produkt (0,37 g) i 23 % utbytte. ;Eksempel 58 ;1, 1, 1- trifluor- 3-[( N- acetylprolyl) alanylprolylamino] butan-2, 2- diol ;Til en løsning av 72 ul (0,83 mmol) oxalylklorid i ;1 ml methylenklorid under argonatmosfære, og avkjølt på et tørris-acetonbad, ble tilsatt 0,12 ml (1,65 mmol) dimethylsulfoxyd under omrøring. Etter 5 min. ble en løsning av 0,25 g (0,55 mmol) av forbindelsen ifølge eksempel 57 i 1,5 ml methylenklorid tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 15 min., 0,50 ml (3,58 mmol) triethylamin ble deretter tilsatt, og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til romtemperatur i 30 min. Reaksjonsblandingen ble anbrakt direkte på en silicagelkolonne og eluert med methylenklorid-methanol. Triturering av det resulterende okjeaktige faste materiale med ether-hexan og filtrering gav 50 mg (0,11 mmol) av det ovenfor angitte produkt. ;Eksempel 59 ;3-[( N- acetylprolyl) alanylprolylamino]- 2- hydroxybutansyre, methylester ;Ac-L-prolyl-L-alanyl-L-prolin (0,65 g, 2,00 mmol) ble suspendert i 20 ml tørr acetonitril under argonatmosfære i en kolbe utstyrt med omrører og indre termometer. Suspensjonen ble avkjølt til M5°C, og 0,22 ml (2,00 mmol) N-methylmorfolin ble tilsatt, etterfulgt av 0,26 ml (2,00 mmol) isobutylklorformiat i en slik hastighet at den indre reaksjonstemperatur ble opprettholdt ved -MO til M5°C. Etter 10 min. ble tilsatt en løsning av methyl-(3S)-3-amino-2- hydroxybutanoat (0,53 g, 4,00 mmol) i 2,5 ml kloroform i en slik hastighet at den indre reaksjonstemperatur ble opprettholdt ved MO til M5°C. Reaks jonsblandingen ble langsomt oppvarmet til romtemperatur og ble deretter omrørt i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble fordampet på en rotasjonsfordamper, residuet ble oppløst i 20 ml vann og ble behandlet med en blandet sjiktharpiks (J.T. Baker - ANGMI-615, 11,0 g). Etter 15 min. ble blandingen filtrert, og filtratet ble fordampet på en rotasjonsfordamper. Kromatografi under anvendelse av methylenklorid-methanol som elueringsmiddel gav 0,32 g av det ovenfor angitte produkt i et utbytte på 36 %. ;Eksempel 60 ;3- [( N- acetylprolyl) alanylprolylamino]- 2, 2- dihydroxybutan-syre, methylester ;Til en omrørt løsning av 0,12 ml (1,43 mmol) oxalylklorid i 1,5 ml methylenklorid under en argonatmosfære, og avkjølt på et tørris-acetonbad, ble tilsatt en løsning av 0,20 ml (2,86 mmol) dimethylsulfoxyd i 1,5 ml methylenklorid. Etter 5 min. ble en løsning av 0,32 g (0,72 mmol) av produktet ifølge eksempel 59 i 1,5 ml methylenklorid tilsatt, og reaksjonsblandingen ble omrørt i 25 min. 0,50 ml (3,58 mmol) triethylamin ble tilsatt, og reaksjonsblandingen ble oppvarmet til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble anbrakt direkte på en silicagelkolonne og eluert med methylenklorid-methanol. Fordampning av de egnede fraksjoner på en rotasjonsfordamper, tilsetning av 3 ml vann til residuet og fordampning gav det ovenfor angitte produkt. ;Eksempel 61 ;( N- acetylprolyl) alanylprolylamino 3- 2, 2- hydroxybutansyre ;Til en løsning av 0,10 g (0,23 mmol) av produktet fra eksempel 60 i 4 ml vann, avkjølt på et isbad, ble tilsatt IN lithiumhydroxyd (0,50 ml av en vandig løsning, 0,50 mmol). ;Etter en time ble pH på reaksjonsblandingen justert til 4,5-5,0 med en IN saltsyre, og reaksjonsblandingen ble fordampet på en rotasjonsfordamper. Residuet ble kromatografert under anvendelse av methylenklorid-methanol som elueringsmiddel. Fordampning av de egnede fraksjoner, tilsetning av 2 ml vann til residuet og fordampning gav 65 mg av det ovenfor angitte produkt i et utbytte på 64 %. ;Eksempel 62 ;Boc- L- alanyl- L- alanyl- L- prolin ;En Parr-kolbe spylt med argon og fylt med 0,74 g 10 % palladium på carbon, etterfulgt av tilsetning av Boc-L-alanyl-L-alanyl-L-prolinbenzylester (1,8 g, 4,0 mmol) opp-løst i 300 ml tert-butanol. Reaksjonsblandingen ble ristet under 2,1 kg/cm<2> hydrogen ved 35°C i 5 timer. Etter avkjøl-ing til romtempeatur ble 50 ml ethanol tilsatt, og løsningen ble filtrert gjennom celitt, og filtratet ble konsentrert på en rotasjonsfordamper. Residuet ble destillert azeotropt med kloroform-hexan for å fjerne siste spor av tert-butanol og ble deretter tørket under høyvakuum under dannelse av Boc-L-alanyl-L-alanyl-L-prolin (1,40 g, 3,9 mmol) i 98 % utbytte. ;Eksempel 63 ;1, 1, 1- trifluor- 3-[( N- tert- butyloxycarbonylalanyl) alanylprolylamino]- 4- methylpentan- 2- ol ;Til en løsning av Boc-L-alanyl-L-alanyl-L-prolin (1,0 g, 2,80 mmol) i 25 ml tørr acetonitril ble tilsatt 0,34 ml (3,06 mmol) N-methylmorfolin. Løsningen ble avkjølt til -5-20°C, og 0,37 ml (2,88 mmol) isobutylklorformiat ble dråpevis tilsatt. Til denne løsning, på forhånd avkjølt til -5-20°C, ble tilsatt en blanding av 3-amino-l, 1,1-trifluor-4-methyl-2-pentanol-hydroklorid (0,61 g, 2,91 mmol), N,N-di-methylformamid (4 ml) og N-methylmorfolin (0,34 ml, 3,06 mmol). Reaks jonsblandingen ble omrørt ved -s-20°C i 4 timer, ble oppvarmet til romtemperatur og omrørt over natten. Fjerning av løsningsmidlene i vakuum gav et lyst gult residuum som ble renset ved flashkromatografi under anvendelse av etylacetat som elueringsmiddel under dannelse av 1,1,1-trifluor-3-[(N-tert-butyloxycarbonylalanyl)alanylprolylamino]-4-methylpentan-2-ol (1,09 mg, 2,1 mmol) i 76 % utbytte. ;Eksempel 64 ;1, 1, 1- trifluor- 3-[ N- tert- butyloxycarbonylalanyl) alanylprolylamino 3- 4- methylpentan- 2- on ;En løsning av 0,078 ml (0,9 mmol) oxalylklorid i 2 ml methylenklorid ble avkjølt til -s-55°C, og 0,125 ml (1,8 mmol) dimethylsulfoxyd ble dråpevis tilsatt. Løsningen ble omrørt i 5 min., etterfulgt av tilsetning av 1,1,1-trifluor-3-[N-tert-butyloxycarbonylalanyl)alanylprolylamino]-4-methyl-pentan-2-ol (260 mg, 0,53 mmol) i 1,5 ml methylenklorid. Blandingen ble omrørt i 15 min., og 0,45 ml (3,2 mmol) triethylamin ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til romtemperatur, løsningsmidlet ble fjernet i vakuum, og det urene produkt ble anbrakt direkte på en silicagelkolonne (230-400 mesh) for rensing. Eluering med ethylacetat gav 1,1,1-trifluor-3-[N-tert-butyloxycarbonylalanyl)alanylprolylamino] -4-methylpentan-2 -on (180 mg, 0,37 mmol) i 70 % utbytte. ;Eksempel 65 ;1, 1, 1- trifluor- 3-[ alanyl- alanylprolylamino]- 4- methylpentan-2- on ;En løsning av 1,1,1-trifluor-3-[(N-tert-butyloxycarbonylalanyl ) alanyl-prolylamino] -4-methylpentan-2 -on (180 mg, 0,35 mmol) i 50 ml ethylacetat ble avkjølt til 0°C og behandlet med hydrogenkloridgass i 5 min. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 1 1/2 time, etterfulgt av fjerning av løsningsmidlet i vakuum. 1,1,1-trifluor-3-[alanyl-alanylprolylamino] -4-methylpentan- 2 -on (151 mg, 0,34 mmol) ble erholdt i 96 % utbytte og ble anvendt for etterfølgende reaksjoner uten rensing. ;Eksempel 66 ;Dansylpeptid- 1, 1, 1- trif luor- 3- ( alanylalanylprolylami. no) - 4-methylpentan- 2- on ;Til en suspensjon av 1,1,1-trifluor-3-(alanylalanyl-prolylamino)-4-methylpentan-2-on (50 mg, 0,11 mmol) i 1 ml methylenklorid ble tilsatt 50 mg (0,5 mmol) N-methylmorfolin. Løsningen ble omrørt i 5 min., og 50 mg dansylklorid ble deretter tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 2 timer ved romtemperatur under utelukkelse av lys og ble deretter direkte overført til en silicagelkolonne (230-400 mesh) for rensing. Eluering med ethylacetat gav 48 mg (0,07 mmol) av det dansylerte peptid i 68 % utbytte. ;Eksempel 67 ;N ■*■-.( 2- methoxyethoxymethoxy- 3 , 3- difluor- l- isobutyl- 5- hexenyl-N2- isovalerylvalinamid
Til 0,211 g natriumhydrid (55 %, 4,83 mmol) i 3 ml DMF ved 0°C ble tilsatt 1,8 .g (4,6 mmol) N<1->(2-hydroxy-3,3-difluor-l-isobutyl-5-hexenyl-N<2->isovalerylvalinamid i 5 ml DMF. Etter omrøring ved 0°C i 10 min. ble 0,659 g (5,29 mmol) methoxyethoxymethylklorid i 3 ml DMF tilsatt, blandingen ble omrørt i 10 min. ved 0°C og over natten ved romtemperatur. Opparbeidelse med vann/Et20 gav etter rensing ved flashkromatografi (CHCl3-/Et20,. 2:1) 1,4 g av det ønskede produkt.
Eksempel 68
N^-- ( 2- methoxyethoxymethoxy- 3 , 3- dif luor- l- isobutyl- 4- carboxy-butyl)- N2- isovalerylvalinamid
Den ovenfor angitte forbindelse ble fremstilt fra N<1->2-methoxyethoxymethoxy-3,3-difluor-l-isobutyl-5-hexenyl-N<2->isovalerylvalinamid ved den prosedyre som er beskrevet i eksempel 8 under anvendelse av ekvivalente mengder betingelser .
Eksempel 69
N1-( 2- methoxyethoxymethoxy- 3, 3- difluor- 1- isobutyl- 4-[ 1-( isoamylaminocarbonyl) ethyljmethylaminocarbonylbutyl)- N2-isovalerylvalinamid
Den ovenfor angitte forbindelse ble fremstilt fra N^-(2-methoxyethoxymethoxy-3,3-difluor-l-isobutyl-4-carboxy-butyl-N<2->isovalerylvalinamid ved den prosedyre som er beskrevet i eksempel 49. Mengder: 1,50 g (3,02 mol) peptid-syre i 10 ml THF, 0,306 g (0,33 ml, 3,02 mmol) N-methyl-morf olin, 0,412 g (3,02 mmol) isobutylklorformiat, N-methyl-alaninisamylamid-hydroklorid (0,63 g, 3,02 mmol) og N-methylmorfolin (0,306 g, 3,02 mmol) i 5 ml THF. Flashkromatografi (EtOAc/pentan, 2:1) gav 0,3 g av den ovenfor angitte forbindelse. Fra 1,50 g av peptidsyren ble det under anvendelse av prosedyren beskrevet i eksempel 49, og etter rensing ved flashkromatografi, erholdt 0,39 g av det ønskede produkt.
Eksempel 70
N1-( 2- hydroxy- 3, 3- difluor- l- isobutyl- 4[[ 1-( isoamylamino-carbonyl ) ethyl]- methylamino 3 carbonylbutyl)- N2- isovalerylvalinamid
En blanding av 0,3 g (0,46 mmol) N<1->(2-methoxyethoxymethoxy-3,3-difluor-l-isobutyl-4-[[1-(isoamylaminocarbonyl)-ethyl]-methylamin]carbonylbutyl)-N<2->isovalerylvalinamid og 0,52 g (2,31 mmol) ZnBr2 i 3 ml CH2C12 ble omrørt i 24 timer ved romtemperatur. Flashkromatografi (EtOAc) gav 0,11 g av den ovenfor angitte alkohol.
Eksempel 71
N1-( 2- OXO- 3, 3- difluor- l- isobutyl- 4[[ 1-( isoamylamino) ethyl]-carbonyl) ethyl] methylaminocarbonylbutyl)- N2- isovalerylvalinamid
Den ovenfor angitte forbindelse ble fremstilt fra N^-(2-hydroxy-3,3-difluor-l-isobutyl-4[[1-(isoamylamino)ethyl]-methylamino]carbonylbutyl)-N<2->isovalerylvalinamid ved den prosedyre som er beskrevet i eksempel 7. Mengder: oxalylklorid (0,176 mmol, 0,0224 mg) i 0,5 ml CH2Cl2, 0,0275 mg
(0,352 mmol) DMSO, 90 mg alkohol i 1,5 ml CH2C12 (ved -s-55°C) 0,081 g Et3N (0,8 mmol).
Flashkromatogradi (EtOAc) gav 0,02 g av den ovenfor angitte forbindelse.
Eksempel 72
4- N- tert- butoxycarbonylamino- 2, 2- di fluor- 3- hydroxy- 5-methylhexansyre, ethylester
Tittelforbindelsen ble fremstilt i 35 % utbytte fra L-BOC-valinal under anvendelse av samme prosedyre som for esteren beskrevet i eksempel 32. Rf = 0,52 (EtOAc/CgH^ 1:1) .
Eksempel 73
4- amino- 2, 2- difluor- 3- hydroxy- 5- methylhexansyre, ethylester-hydroklorid
Den Boe-beskyttende gruppe av alkoholen ifølge eksempel 72 ble spaltet under anvendelse av samme prosedyre som for amidet beskrevet i eksempel 35, sm.p. 182°C.
Eksempel 74
4-[ methoxysuccinyl- L- alanyl- L- alanyl- L- prolyl] amino- 2,2-difluor- 3- hydroxy- 5- methylhexansyre, ethylester
Til en omrørt løsning av 0,371 g (1 mmol) MeOSuc-L-Ala-L-Ala-L-ProOH i 10 ml tørr acetonitril under nitrogen ble tilsatt 0,106 g (1,05 mmol) N-methylmorfolin. Den resulterende løsning ble avkjølt til ^-20°C. 0,136 g (1 mmol) isobutylklorformiat ble tilsatt til den avkjølte reaksjonsblanding. Etter 10 min. ble en løsning av 0,275 g (1,05 mmol) 4-amino-2,2-difluor-3-hydroxy-5-methylhexansyre, ethylester-hydroklorid og 0,106 g (1,05 mmol) N-methylmorfolin i 2 ml tørr DMF tilsatt til den avkjølte blanding. Reaks jonsblandingen ble omrørt ved -r20°C i 4 timer og ble deretter oppvarmet til romtemperatur. Etter omrøring i 15 timer ved romtemperatur ble blandingen konsentrert og anbrakt under høyvakuum ved 40°C for å fjerne alt DMF. Kromatografi (silicagel, ethylacetat/aceton 7:3) gav den forventede alkohol i 85 % utbytte. Rf: 0,38 (ethylacetat/
aceton 1:1).
Eksempel 75
4-[ methoxysuccinyl- L- alanyl- L- alanyl- L- prolyl] amino- 2, 2-difluor- 5- methyl- 3- oxo- hexansyre, ethylester
Tittelforbindelsen ble erholdt i 65 % utbytte fra alkoholen ifølge eksempel 74 under anvendelse av den prosedyre som er beskrevet i eksempel 37, sm.p.: 96-97°C.
Det foregående har i detalj beskrevet de generiske og spesifikke sider vedrørende oppfinnelsens ramme så vel som måter for fremstilling og anvendelse derav. Selv om slike prosedyrer er kjent innen faget, vil det i tillegg bli hen-vist til referanser vedrørende kjente prosedyrer, ved hvilke forbindelsene kan vurderes mht. til deres biokjemiske effekt.
Eksempelvis utprøves human elastase in vitro under anvendelse av kromofore peptider, succinylalanylalanyl-alanyl-p-nitro-anilid (Al), methoxysuccinylalanylalanyl-prolylvalyl-p-nitroanilid (A2) og andre, som alle er til-gjengelige kommersielt. Prøvebuffer, pH 8,9 og prøveteknik-ker er lik de som er beskrevet av Lottenberg et. al (A3, A4). Enzym renses fra humant spytt (A5), selv om det nylig er blitt kommersielt tilgjengelig. Kinetisk karakterisering av umiddelbare inhibitorer ble foretatt ved hjelp av Dixon-system (A6), mens karakterisering av langsomme og/eller tettbindende inhibitorer ble foretatt ved hjelp av data-analyseteknikker som beskrevet av Williams og Morrison (A7).
På liknende måte ble andre proteaser undersøkt, og effektene av inhibitorer ble fastslått in vitro ved liknende spektroskopiske teknikker: cathepsin G (A2); thrombin (A3); chymotrypsin (A8); trypsin (A9); plasmin (A3); Cl esterase (A10); urokinase (A3); plasminogenaktivator (All); acrosin (A12); beta-lactamase (A13); cathepsin B (A14); pepsin (A15); cethepsin D (A16) og leucin aminopeptidase (A17). Pseudomonas elastase ble målt i en koplet bestemmelsesprose-dyre under anvendelse av et humant elastasesubstrat og mikrosomal aminopeptidase.
Radiometriske bestemmelser av angiotensin I-omdannende enzym og enkefalinase og deres inhibitorer er basert på prosedyren ifølge Ryan (A18) og anvendelse av tritiert substrat levert fra Ventrex Laboratories, Inc. Radioimmuno-bestemmelse ble anvendt for studier med renin (A19). C3-konvertase ble bestemt som beskrevet av Tack et al. (A20).
De individuelle utprøvningshenvisninger er utarbeidet blant følgende: Al. Syntese og analytisk bruk av meget følsomt og hensiktsmessig substrat av elastase. J. Bieth, B. Spiess og C.G. Wermuth, Biochemical Medicine, 11 (1974) 350-375.
A2. Kartlegging av det utstrakte substratbindings-sete av cathepsin G og human leucocyttelastase. Studier med peptidsubstrater vedrørende alfa 1-proteaseinhibitorreaktivt sete. K. Nakajima, J.C. Powers, B.M. Ashe og M. Zimmerman, The Journal of Biological Chemistry, 254 (1979) 4027-4032.
A3. Bestemmelse av koagulasjonsproteaser under anvendelse av peptidkromogene og fluorogene substrater. R. Lottenberg, U. Christensen, CM. Jackson og P.L. Coleman, i: Methods in Enzymology (L. Lorand, utg.), Academic Press, New York, 1979, vol. 80, s. 341-361.
A4. Sammensetningsavhengig oppløsningsvariasjon i ekstinksjonskoeffisienter for p-nitroanilin. R. Lottenberg og CM. Jackson, Biochimica et Biophysica Acta, 742 (1983) 558-564.
A5. En hurtig metode for rensing av elastase og cathepsin G i stor målestokk fra humant spytt. R.R. Martodam, R.J. Baugh, D.Y. Twumasi og I.E. Liener, Prepara-tive Biochemistry, 9 (1979) 15-31.
A6. Bestemmelse av enzyminhibitorkonstanter. M. Dixon, The Biochemical Journal, 55 (1953) 170-171.
A7. Kinetikk ved reversibel tettbindende inhibering. J.W. Williams og J.F. Morrison, i: Methods in Enzymology (D.L. Purich, utg.), Academic Press, New York, 1979, vol. 63, s. 437-467.
A8. To hensiktsmessige spektrofotometriske enzym-bestemmelser. Et biokjemisk forsøk innen kinetikk. J.A. Hurlbut, T.N. Ball, H.C Pound og J.L. Graves, Journal of
Chemical Education, 50 (1973) 149-151.
A9. Fremstilling og egenskaper av to nye kromogene substrater av trypsin. B.F. Erlanger, N. Kokowsky og W. Cohen, Archives of Biochemistry and Biophysics, 95 (1961) 271-278.
A10. Det humane komplementsystem vedrørende serin-proteaser Clr og Cls og deres proenzymer. R.B. Sim, i: Methods in Enzymology (L. Lorand, utg.), Academic Press, New York, 1979, vol. 80, s. 26-42.
All. Ytre plasminogenaktivator og urokinase. J.H. Verheijen, C. Kluft, G.T.G. Chang og E. Mullaart, i: Methods of Enzymatic Analysis (H.U. Bergmeyer, J. Bergmeyer og M. Grassl, utg.), Verlag Chemie, Weinheim, 1984, tredje utg., vol. 5, s. 425-433.
A12. Spermaacrosin. W. Mueller-Esterl og H. Fritz, i: Methods in Enzymology (L. Lorand, utg.), Academic Press, New York, 1979, vol. 80, s. 621-632.
A13. Ny metode for påvisning av beta-lactamaser under anvendelse av et kromogent cefalosporinsubstrat. C.H. 0'Callaghan, A. Morris, S.M. Kirby og A.H. Shingler, Anti-microbial Agents and Chemotherapy, 1 (1972) 283-288.
Al4. Cathepsin B, cathepsin H og cathepsin L. A.J. Barret og H. Kirschke, i: Methods in Enzymology (L. Lorand, utg.), Academic Press, New York, 1979, vol. 80, s. 535-561.
A15. Pepsiner, gastricsiner og deres zymogener. A.P. Ryle, i: Methods of Enzymatic Analysis (H.U. Bergmeyer, J. Bergmeyer og M. Grassl, utg.), Verlag Chemie, Weinheim, 1984, tredje utg., vol. 5, s. 223-238.
A16. Cathepsin D, cathepsin E. V. Turk, T. Lah og I. Kregar, i: Methods of Enzymatic Analysis (H.U. Bergmeyer, J. Bergmeyer og M. Grassl, utg.), Verlag Chemie, Weinheim, 1984, tredje utg., vol. 5, s. 211-222.
A17. Aminosyrearylamidase. J.C.M. Hafkenscheid, i: Methods of Enzymatic Analysis (H.U. Bergmeyer, J. Bergmeyer og M. Grassl, utg.), Verlag Chemie, Weinheim, 1984, tredje utg., vol. 5, s. 11-15.
A18. Angiotensin I-omdannende enzym (kininase II). J.W. Ryan, i: Methods of Enzymatic Analysis (H.U. Bergmeyer, J. Bergmeyer og M. Grassl, utg.), Verlag Chemie, Weinheim, 1984, tredje utg., vol. 5, s. 20-34.
Al9. Renin. T. Inagami og M. Naruse, i: Methods of Enzymatic Analysis (H.U. Bergmeyer, J. Bergmeyer og M. Grassl, utg.), Verlag Chemie, Weinheim, 1984, tredje utg., vol. 5, s. 249-258.
A20. Tredje, fjerde og femte komponenter av humant komplement: isolering og biokjemiske egenskaper. B.F. Tack, J. Janatova, M.L. Thomas, R.A. Harrison og C.H. Hammer, i: Methods in Enzymology (L. Lorand, utg.), Academic Press, New York, 1979, vol. 80, s. 64-101.
Ved å følge de ovenfor angitte teknikker, så vel som å anvende andre kjente teknikker, så vel som å foreta en sammenlikning med forbindelser som er kjent for å være anvendbare for behandling av de ovenfor angitte sykdomstilstander, er det antatt at tilstrekkelig materiale er tilgjengelig for å gjøre det mulig at fagmannen kan utøve oppfinnelsen. For deres sluttelige anvendelse formuleres selvsagt forbindelsene ifølge oppfinnelsen i egnede farmasøyt-iske preparater slik som tabletter, kapsler eller eliksirer for oral administrering, eller i sterile løsninger eller suspensjoner for parenteral administrering. Forbindelsene kan administreres til pasienter (dyr og mennesker) med behov for slik behandling i et doseområde på 0,01-10 mg/kg kropps-vekt pr. dag. Som ovenfor angitt, vil dosen variere med strengheten av sykdommen, pasientens vekt og andre faktorer som er vel kjent for fagmannen.
Forsøksresultater
Elastaseinhibitorer
Forbindelse 27013 - MeO-Suc-Phe-Ala-Pro-Val-CF3,
17,5 ug av forbindelse 27013 injisert dermalt i rotter inhiberte med 75 % det ødem som ble fremkalt ved koadministrert human, neutrofil elastase.
Forbindelse 27021 - MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-C02Me,
17,5 ug av forbindelse 27021 injisert dermalt i rotter inhibert med 82 % av ødem fremkalt ved koadministrert human, neutrofil elastase.
Forbindelse 27324 - dansyl-Ala-Ala-Pro-Val-CF3,
10 mg/kg i.v. av forbindelse 27324 produ-serte 55 % inhibering av hemorrhage fremkalt i rottelunger med intratrakeal in-stillasjon av human, neutrofil elastase.
Calpaininhibitorer
Forbindelse 28920 - CBZ-Val-Phe-C02Me,
ved en konsentrasjon på 10 ug inhiberte forbindelse 28920 fullstendig Ca<++> og iono-forfremkalt lyse av erytrocytter.
Thrombininhibitorer
Forbindelse 73756 - D-Phe-Pro-Arg-CF3,
i en dose på 20 mg/kg i.v. i rotter produ-serte forbindelse 73756 en 100 % inhibering av ex vivo thrombinfremkalt fibrin-klumpdannelse.
Forbindelse 73866 - D-Phe-Pro-Lys-CF3,
i en dose på 20 mg/kg i.v. i rotter produ-serte forbindelse 73866 en 100 % inhibering av ex vivo thrombinfremkalt fibrin-klumpdannelse.
Typisk formuleres de ovenfor beskrevne forbindelser i farmasøytiske preparater som angitt i det etterfølgende. 10 til 500 mg av en forbindelse eller blanding av forbindelser av formel I eller et fysiologisk akseptabelt salt formuleres med en fysiologisk akseptabel bærer, eksi-pient, bindemiddel, konserveringsmiddel, stabiliserings-middel, smaksgivende middel etc. i en enhetsdoseringsform iht. akseptert farmasøytisk praksis. Mengden av aktiv bestanddel i disse preparater er slik at en egnet dose innenfor det angitte område erholdes.
Eksempler på hjelpestoffer som kan inkorporeres i
tabletter, kapsler o.l. er følgende: et bindemiddel slik som gummitragakant, akasie, maisstivelse eller gelatin; en eksi-pient slik som mikrokrystallinsk cellulose; et oppbrytende middel slik som maisstivelse, pregelatinert stivelse, algin-syre o.l.; et smøremiddel slik som magnesiumstearat; et søtningsmiddel slik som sucrose, lactose eller saccharin; et smaksgivende middel slik som peppermynte, vintergrønnolje eller kirsebær. Når enhetsdoseringsformen er en kapsel, kan den i tillegg til materialer av den ovenfor angitte type også inneholde en væskeformig bærer slik som fettolje. Forskjellige andre materialer kan være til stede som belegg eller for på annen måte å modifisere den fysikalske form av doseringsenheten. Eksempelvis kan tabletter være belagt med skjellakk, sukker eller begge deler. En sirup eller eliksir kan inneholde den aktive forbindelse, sucrose som søtnings-middel, methyl- og propylparabener som konserveringsmidler, et fargestoff og et smaksgivende stoff slik som kirsebær-ener appelsinsmak.
Sterile preparater for injeksjon kan formuleres iht. konvensjonell farmasøytisk praksis ved oppløsning eller suspendering av den aktive bestanddel i en bærer slik som vann for injeksjon, en naturlig forekommende vegetabilsk olje slik som sesamolje, kokonøttolje, peanøttolje, bomulls-frøolje etc, eller en syntetisk fettbærer slik som ethyl-oleat e.l. Buffere, konserveringsmidler, antioxydanter o.l. kan innarbeides om nødvendig.

Claims (1)

  1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive, aktiverte, elektrofile, keton-bærende peptidaseinhibitorer av formelen
    hydrater derav, og farmasøytisk akseptable salter derav, hvori Rx kan være hydrogen, en aminobeskyttende gruppe valgt fra gruppe K, en a-aminosyre, et dipeptid eller et tripeptid valgt fra Pro, Ala og Phe, hvori hver angitte a-aminosyre eller peptid eventuelt bærer en aminobeskyttende gruppe valgt fra gruppe K,
    R2 er sidekjeden av en a-aminosyre valgt fra Ala, Val, Phe,
    Lys, Arg eller er -CH2-0(p- )NHC(NH)NH2 hvor 0 betegner fenyl,
    X er -CF3, -CF2R4, C02R3 eller CF2COOR3,
    R3 er hydrogen, C1.4 rettkjedet eller forgrenet alkyl, R4 er hydrogen eller lavere alkenyl K: acetyl (Ac), succinyl (Suc), benzoyl (Bz),
    t-butyloxycarbonyl (Boe), carbobenzoyl (CBz),
    tosyl (Ts), dansyl (DNS), isovaleryl (Iva), methoxysuccinyl (MeOSuc), 1-adamantansulfonyl (AdS02), 1-adamantanacetyl (AcAc), 2-carboxy-benzoyl (2-CB) og slike andre terminale, aminobeskyttende grupper som er funksjonelt ekvivalente dertil,
    karakterisert ved at en forbindelse av formelen
    hvori Rlf R2 og X er som ovenfor angitt, underkastes en Swern-oxydasjon, og eventuelt at enhver beskyttende gruppe avbeskyt-tes.
NO860371A 1985-02-04 1986-02-03 Analogifremgangsmaate ved fremstilling av terapeutisk aktive peptidaseinhibitorer NO169543C (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US69798785A 1985-02-04 1985-02-04

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO860371L NO860371L (no) 1986-08-05
NO169543B true NO169543B (no) 1992-03-30
NO169543C NO169543C (no) 1992-07-08

Family

ID=24803437

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO860371A NO169543C (no) 1985-02-04 1986-02-03 Analogifremgangsmaate ved fremstilling av terapeutisk aktive peptidaseinhibitorer

Country Status (20)

Country Link
EP (1) EP0195212B1 (no)
JP (1) JP2529825B2 (no)
KR (1) KR900008004B1 (no)
CN (1) CN86101268A (no)
AR (1) AR246975A1 (no)
AT (1) ATE97652T1 (no)
AU (1) AU600226B2 (no)
CA (1) CA1341029C (no)
DE (1) DE3689314T2 (no)
DK (1) DK51586A (no)
ES (3) ES8800720A1 (no)
FI (1) FI94254C (no)
GR (1) GR860321B (no)
HU (1) HU207102B (no)
IE (1) IE60582B1 (no)
IL (1) IL77748A (no)
NO (1) NO169543C (no)
NZ (1) NZ215024A (no)
PT (1) PT81965B (no)
ZA (1) ZA86746B (no)

Families Citing this family (108)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0204775A4 (en) * 1984-12-14 1989-10-04 Univ Trobe AMINO ACID AND PEPTIDE INHIBITORS FOR HUMAN LEUKOCYTELASTASE.
GB8600263D0 (en) * 1985-01-22 1986-02-12 Ici America Inc Peptide derivatives
US5055450A (en) * 1985-01-22 1991-10-08 Ici Americas Inc. Peptide derivatives
US5194588A (en) * 1985-01-22 1993-03-16 Ici Americas Inc. Aminoalcohol intermediates for peptide derivatives
US5496927A (en) * 1985-02-04 1996-03-05 Merrell Pharmaceuticals Inc. Peptidase inhibitors
GB8613704D0 (en) * 1986-06-05 1986-07-09 Ici America Inc Difluoro keto compounds
GB8619182D0 (en) * 1986-08-06 1986-09-17 Sandoz Ltd Peptides & derivatives
US5055451A (en) * 1986-12-22 1991-10-08 Syntex Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
US5158936A (en) * 1986-12-22 1992-10-27 Syntex (U.S.A.) Inc. Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
NZ223148A (en) * 1987-01-16 1989-10-27 Merrell Dow Pharma Peptide derivatives having peptidase inhibition activity
EP0276101A3 (en) * 1987-01-19 1989-11-23 Ici Americas Inc. Substituted peptide derivatives
US4820691A (en) * 1987-06-24 1989-04-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. Amino acid 1,2-diketo derivatives as renin inhibitors
US5217958A (en) * 1988-03-03 1993-06-08 E. R. Squibb & Sons, Inc. 1,2-hydroxy phosphonates and derivatives thereof
US4981843A (en) * 1988-04-07 1991-01-01 E. R. Squibb & Sons, Inc. N-heterocyclic alcohol derivatives
US5151513A (en) * 1988-04-29 1992-09-29 E. R. Squibb & Sons, Inc. N-heterocyclic alcohol derivatives
EP0353732A3 (de) * 1988-08-05 1991-11-06 Ciba-Geigy Ag Neue Fluorolefine, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
ZA897515B (en) * 1988-10-07 1990-06-27 Merrell Dow Pharma Novel peptidase inhibitors
US5736520A (en) * 1988-10-07 1998-04-07 Merrell Pharmaceuticals Inc. Peptidase inhibitors
EP0371179A1 (en) * 1988-10-28 1990-06-06 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Novel analogs of peptidase substrates
EP0369391A3 (en) * 1988-11-15 1991-09-25 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. N-substituted amides
CA2021660A1 (en) * 1989-07-26 1991-01-27 Philippe Bey Peptidase inhibitors
NZ235155A (en) * 1989-09-11 1993-04-28 Merrell Dow Pharma Peptidase substrates in which the carboxy terminal group has been replaced by a tricarbonyl radical
CA2018801C (en) * 1990-06-12 2000-08-22 Pierre Louis Beaulieu Antiherpes peptide derivatives having a 1,4-dioxo c n-terminus
WO1992012140A1 (en) * 1990-12-28 1992-07-23 Georgia Tech Research Corporation Peptides ketoamides, ketoacids, and ketoesters
ES2124203T3 (es) * 1991-03-01 2004-04-16 Dyax Corp. Inhibidores de la elastasa neutrofila humana y la catepsina g humana.
US5391705A (en) * 1991-03-15 1995-02-21 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Polyfluorinated tripeptide thrombin inhibitors
DK0587799T3 (da) * 1991-05-23 1999-11-22 Merrell Pharma Inc Inhibitorer af cathepsin G og elastase til forebyggelse af bindevævsnedbrydning
WO1993008211A1 (en) * 1991-10-23 1993-04-29 The Procter & Gamble Company Tripeptide derivative anti-inflammatory agents
US6235929B1 (en) 1991-12-27 2001-05-22 Georgia Tech Research Corporation Tripeptide α-ketoamides
US5610297A (en) * 1991-12-27 1997-03-11 Georgia Tech Research Corp. Peptides ketoamides
US5441960A (en) * 1992-04-16 1995-08-15 Zeneca Limited 1-pyrimidinylacetamide human leukocyte elastate inhibitors
US5486529A (en) * 1992-04-16 1996-01-23 Zeneca Limited Certain pyridyl ketones for treating diseases involving leukocyte elastase
WO1994003480A1 (en) * 1992-07-31 1994-02-17 Pfizer Inc. Peptidyl 4-amino-2,2-difluoro-3-oxo-1,6-hexanedioic acid derivatives as antiinflammatory agents
US5514694A (en) * 1992-09-21 1996-05-07 Georgia Tech Research Corp Peptidyl ketoamides
US5371072A (en) * 1992-10-16 1994-12-06 Corvas International, Inc. Asp-Pro-Arg α-keto-amide enzyme inhibitors
IL108031A0 (en) * 1992-12-22 1994-04-12 Procter & Gamble Difluoro pentapeptide derivatives and pharmaceutical compositions containing them
US5563127A (en) * 1993-03-24 1996-10-08 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Boronic acid and ester inhibitors of thrombin
SE9301916D0 (sv) * 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra New peptides derivatives
US5783563A (en) * 1993-06-03 1998-07-21 Astra Aktiebolag Method for treatment or prophylaxis of venous thrombosis
US6984627B1 (en) 1993-06-03 2006-01-10 Astrazeneca Ab Peptide derivatives
US5541290A (en) * 1993-06-24 1996-07-30 Harbeson; Scott L. Optically pure calpain inhibitor compounds
US5977074A (en) * 1993-10-01 1999-11-02 Merrell Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of β-amyloid protein production
HU221629B1 (hu) * 1993-10-01 2002-12-28 Merrell Pharmaceuticals Inc. Béta-amiloid fehérje képződést gátló peptidek, eljárás előállításukra és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények
US6060462A (en) * 1993-10-20 2000-05-09 Dupont Pharmaceuticals Company Electrophilic peptide analogs as inhibitors of trypsin-like enzymes
DE69431359T2 (de) * 1993-12-02 2003-07-31 Merrell Pharmaceuticals Inc., Cincinnati Prolyl-endopeptidaseinhibitoren
DE69513167T2 (de) * 1994-06-02 2000-06-15 Merrell Pharmaceuticals Inc., Cincinnati Perfluoroalkyll ketone, inhibitoren von elastase und prozess zur deren herstellung
ATE206055T1 (de) * 1994-06-02 2001-10-15 Merrell Pharma Inc Acylierte enolderivate als vorläufdrogen von elastaseinhibitoren
DE4421052A1 (de) 1994-06-17 1995-12-21 Basf Ag Neue Thrombininhibitoren, ihre Herstellung und Verwendung
US5510369A (en) * 1994-07-22 1996-04-23 Merck & Co., Inc. Pyrrolidine thrombin inhibitors
SE9404196D0 (sv) * 1994-12-02 1994-12-02 Astra Ab New antithrombotic formulation
GB9502152D0 (en) * 1995-02-03 1995-03-29 Zeneca Ltd Proline derivatives
JPH11500120A (ja) * 1995-02-17 1999-01-06 ビーエーエスエフ アクチェンゲゼルシャフト 新規なトロンビンインヒビター
US5629324A (en) * 1995-04-10 1997-05-13 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
US5721214A (en) * 1995-06-07 1998-02-24 Cor Therapeutics, Inc. Inhibitors of factor Xa
US6046169A (en) * 1995-06-07 2000-04-04 Cor Therapeutics, Inc. Inhibitors of factor XA
US6211154B1 (en) 1995-06-07 2001-04-03 Cor Therapeutics, Inc. Ketoheterocyclic inhibitors of factor Xa
US6022861A (en) * 1995-06-07 2000-02-08 Cor Therapeutics, Inc. Ketoheterocyclic inhibitors of factor Xa
US6069130A (en) * 1995-06-07 2000-05-30 Cor Therapeutics, Inc. Ketoheterocyclic inhibitors of factor Xa
US5919765A (en) * 1995-06-07 1999-07-06 Cor Therapeutics, Inc. Inhibitors of factor XA
SA96170106A (ar) 1995-07-06 2005-12-03 أسترا أكتيبولاج مشتقات حامض أميني جديدة
US6069232A (en) * 1995-10-02 2000-05-30 Hoechst Marion Roussel, Inc. Polyfluoroalkyl tryptophan tripeptide thrombin inhibitors
GB9524267D0 (en) * 1995-11-28 1996-01-31 Isis Innovation Enzyme inhibitor and method
US6172044B1 (en) 1995-12-01 2001-01-09 Aventis Pharmaceuticals Inc. Acylated enol derivative of α-ketoesters and α-ketoamides
TWI238827B (en) 1995-12-21 2005-09-01 Astrazeneca Ab Prodrugs of thrombin inhibitors
US5739354A (en) * 1996-03-26 1998-04-14 Hoechst Marion Roussel, Inc. Process for the preparation of N-methyl-D-phenylalanyl-N- 1- 3- (aminoiminomethyl)amino!propyl!-3,3-difluoro-2-oxohexyl!-L-prolinamide
US6245743B1 (en) 1996-06-05 2001-06-12 Cor Therapeutics, Inc. Inhibitors of factor Xa
SE9602263D0 (sv) 1996-06-07 1996-06-07 Astra Ab New amino acid derivatives
SE9602646D0 (sv) 1996-07-04 1996-07-04 Astra Ab Pharmaceutically-useful compounds
US5792761A (en) * 1996-08-12 1998-08-11 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
CA2268391A1 (en) * 1996-10-18 1998-04-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease
SI0932617T1 (en) * 1996-10-18 2002-06-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease
US5798377A (en) * 1996-10-21 1998-08-25 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
US5854011A (en) * 1996-12-19 1998-12-29 Idexx Laboratories Incorporated Method and components for the detection of yeasts and/or molds in a sample
WO1998050420A1 (en) * 1997-05-02 1998-11-12 Akzo Nobel N.V. Serine protease inhibitors
AR013084A1 (es) 1997-06-19 2000-12-13 Astrazeneca Ab Derivados de amidino utiles como inhibidores de la trombina, composicion farmaceutica, utilizacion de dichos compuestos para la preparacion demedicamentos y proceso para la preparacion de los compuestos mencionados
SE9704543D0 (sv) 1997-12-05 1997-12-05 Astra Ab New compounds
WO1999037668A1 (de) 1998-01-26 1999-07-29 Basf Aktiengesellschaft Thrombininhibitoren
SE9804313D0 (sv) 1998-12-14 1998-12-14 Astra Ab New compounds
DE60037183T2 (de) 1999-01-13 2008-10-09 Astrazeneca Ab Neue amidinbenzylamin-derivate und ihre verwendung als thrombin-inhibitoren
AR023510A1 (es) 1999-04-21 2002-09-04 Astrazeneca Ab Un equipo de partes, formulacion farmaceutica y uso de un inhibidor de trombina.
SE0001803D0 (sv) 2000-05-16 2000-05-16 Astrazeneca Ab New compounds i
WO2001092234A1 (en) 2000-06-01 2001-12-06 Merck & Co., Inc. Pyrazinone thrombin inhibitors
US7244721B2 (en) 2000-07-21 2007-07-17 Schering Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
CN1446201A (zh) * 2000-07-21 2003-10-01 先灵公司 用作丙型肝炎病毒ns3－丝氨酸蛋白酶抑制剂的新型肽
IL153670A0 (en) 2000-07-21 2003-07-06 Schering Corp Novel peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus
US6433186B1 (en) 2000-08-16 2002-08-13 Astrazeneca Ab Amidino derivatives and their use as thormbin inhibitors
CA2396678C (en) 2000-11-06 2009-01-20 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Peptide derivatives and their pharmaceutically acceptable salts, processes for preparation of both, and use thereof
US7129233B2 (en) 2000-12-01 2006-10-31 Astrazeneca Ab Mandelic acid derivatives and their use as thrombin inhibitors
AR035216A1 (es) 2000-12-01 2004-05-05 Astrazeneca Ab Derivados de acido mandelico ,derivados farmaceuticamente aceptables, uso de estos derivados para la fabricacion de medicamentos, metodos de tratamiento ,procesos para la preparacion de estos derivados, y compuestos intermediarios
JP2004516286A (ja) 2000-12-18 2004-06-03 メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド ベンジルアミン誘導体およびそれのトロンビン阻害薬としての使用
US6528503B2 (en) 2000-12-18 2003-03-04 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
CA2436176A1 (en) 2001-02-09 2002-08-22 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
US6610701B2 (en) 2001-02-09 2003-08-26 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
AR034517A1 (es) 2001-06-21 2004-02-25 Astrazeneca Ab Formulacion farmaceutica
AU2003228793B2 (en) 2002-04-30 2008-01-03 Trustees Of Tufts College Smart Pro-Drugs of Serine Protease Inhibitors
US7084134B2 (en) 2002-05-02 2006-08-01 Merk & Co., Inc. Thrombin inhibitors
SE0201659D0 (sv) 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
SE0201661D0 (sv) 2002-05-31 2002-05-31 Astrazeneca Ab New salts
US6989369B2 (en) 2003-02-07 2006-01-24 Dyax Corp. Kunitz domain peptides
US7781424B2 (en) 2003-05-27 2010-08-24 Astrazeneca Ab Modified release pharmaceutical formulation
MY148123A (en) 2003-09-05 2013-02-28 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
US7795205B2 (en) 2004-04-12 2010-09-14 Canyon Pharmaceuticals, Inc. Methods for effecting regression of tumor mass and size in a metastasized pancreatic tumor
GB0507577D0 (en) 2005-04-14 2005-05-18 Novartis Ag Organic compounds
TW200827336A (en) 2006-12-06 2008-07-01 Astrazeneca Ab New crystalline forms
EP2753334B1 (en) 2011-08-30 2022-10-19 Trustees Of Tufts College Fap-activated proteasome inhibitors for treating solid tumors
RU2728785C2 (ru) 2014-10-06 2020-07-31 Кортексим, Инк. Ингибиторы лизинспецифичного гингипаина
JP6877424B2 (ja) 2015-11-09 2021-05-26 コーテクシーミー， インコーポレイテッド アルギニンジンジパインの阻害剤
TWI787202B (zh) 2016-09-16 2022-12-21 美商昆斯治療公司 離胺酸牙齦蛋白酶（gingipain）之酮抑制劑

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4277395A (en) * 1980-06-16 1981-07-07 Richardson-Merrell Inc. Novel enzyme inhibitors
US4518528A (en) * 1983-05-19 1985-05-21 Rasnick David W α Amino fluoro ketones
GB8600263D0 (en) * 1985-01-22 1986-02-12 Ici America Inc Peptide derivatives

Also Published As

Publication number Publication date
EP0195212B1 (en) 1993-11-24
EP0195212A3 (en) 1988-10-05
IE60582B1 (en) 1994-07-27
IL77748A (en) 1991-11-21
KR900008004B1 (ko) 1990-10-29
ES8800720A1 (es) 1987-11-16
AR246975A1 (es) 1994-10-31
DE3689314D1 (de) 1994-01-05
AU600226B2 (en) 1990-08-09
CN86101268A (zh) 1987-02-04
ES8800050A1 (es) 1987-10-16
NO169543C (no) 1992-07-08
IE860303L (en) 1986-08-04
ES553504A0 (es) 1987-10-16
PT81965B (pt) 1988-01-22
HU207102B (en) 1993-03-01
JPS61183253A (ja) 1986-08-15
FI94254B (fi) 1995-04-28
ES553505A0 (es) 1987-10-16
ES551597A0 (es) 1987-11-16
EP0195212A2 (en) 1986-09-24
GR860321B (en) 1986-06-04
AU5288186A (en) 1986-08-07
ZA86746B (en) 1986-09-24
FI94254C (fi) 1995-08-10
DK51586D0 (da) 1986-02-03
ATE97652T1 (de) 1993-12-15
HUT40142A (en) 1986-11-28
PT81965A (en) 1986-03-01
NO860371L (no) 1986-08-05
ES8800051A1 (es) 1987-10-16
DE3689314T2 (de) 1994-05-19
NZ215024A (en) 1989-08-29
FI860484A (fi) 1986-08-05
FI860484A0 (fi) 1986-02-03
CA1341029C (en) 2000-06-20
DK51586A (da) 1986-08-05
JP2529825B2 (ja) 1996-09-04
KR860006488A (ko) 1986-09-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO169543B (no) Analogifremgangsmaate ved fremstilling av terapeutisk aktive peptidaseinhibitorer
US6130315A (en) Peptidase inhibitors
EP0529568B1 (en) Novel orally-active elastase inhibitors
HU204847B (en) Process for producing new peptidase inhibitors
IE913120A1 (en) Enzyme inhibitors
WO1984003044A1 (en) Enzyme inhibitors
CA2024661A1 (en) Peptidase and isomerase inhibitors
EP0362002A1 (en) HIV protease inhibitors
US6096712A (en) Kininogen inhibitors
JPH03386B2 (no)
KR100341982B1 (ko) 프롤릴엔도펩티다제억제제
US5114927A (en) Analog of peptidase substrates
US5798377A (en) Thrombin inhibitors
Raddatz et al. Substrate analog renin inhibitors containing replacements of histidine in P2 or isosteres of the amide bond between P3 and P2 sites
Kempf et al. Renin inhibitors based on novel dipeptide analogs. Incorporation of the dehydrohydroxyethylene isostere at the scissile bond
Doherty et al. New inhibitors of human renin that contain novel replacements at the P2 site
KR0139535B1 (ko) 신규 펩티다제 억제제
US5888971A (en) Macrocyclic peptides useful in the treatment of thrombin related disorders
US5714470A (en) Orally-active elastase inhibitors
US5478811A (en) Orally-active elastase inhibitors
US5698523A (en) Acylated enol derivatives as prodrugs of elastase inhibitors
KR0144864B1 (ko) 신규한 펩티다제 기질 유사체
JPH0667903B2 (ja) ３―チオプロピオン酸誘導体の製造法
KR840002357B1 (ko) S-(아실아미도아실)메르캅토아실 프롤린류의 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees