HU221629B1 - Béta-amiloid fehérje képződést gátló peptidek, eljárás előállításukra és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények - Google Patents
Béta-amiloid fehérje képződést gátló peptidek, eljárás előállításukra és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények Download PDFInfo
- Publication number
- HU221629B1 HU221629B1 HU9600832A HU9600832A HU221629B1 HU 221629 B1 HU221629 B1 HU 221629B1 HU 9600832 A HU9600832 A HU 9600832A HU 9600832 A HU9600832 A HU 9600832A HU 221629 B1 HU221629 B1 HU 221629B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- formula
- group
- amino
- amyloid
- compound
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 19
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 5
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 title description 45
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 title description 45
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title description 36
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 11
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title description 6
- 230000014616 translation Effects 0.000 title description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 116
- -1 tert-butylmethyl Chemical group 0.000 claims description 51
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 claims description 33
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 24
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 13
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 13
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 claims description 7
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 claims description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 3
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- KWFLEBDYAVYEMW-UHFFFAOYSA-N 1-amino-4,4-difluoro-7-methyl-1-phenyloctane-3,5-dione Chemical compound NC(CC(C(C(CC(C)C)=O)(F)F)=O)C1=CC=CC=C1 KWFLEBDYAVYEMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 125000000882 C2-C6 alkenyl group Chemical group 0.000 claims 2
- NORYRTAREATSAU-UHFFFAOYSA-N CC(C(=O)N[Si](C)(C)C)CCC Chemical compound CC(C(=O)N[Si](C)(C)C)CCC NORYRTAREATSAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 claims 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 abstract description 25
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 abstract description 10
- 201000010374 Down Syndrome Diseases 0.000 abstract description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 6
- 102000009091 Amyloidogenic Proteins Human genes 0.000 abstract description 2
- 108010048112 Amyloidogenic Proteins Proteins 0.000 abstract description 2
- 206010044688 Trisomy 21 Diseases 0.000 abstract description 2
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 105
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 36
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 34
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 34
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 24
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 21
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 18
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 16
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 15
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 12
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 11
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 11
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 11
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 11
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 10
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 9
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 8
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 8
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 7
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 7
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 7
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 7
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 7
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 7
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 6
- 108010064397 amyloid beta-protein (1-40) Proteins 0.000 description 6
- FEWOUVRMGWFWIH-ILZZQXMPSA-N amyloid-beta polypeptide 40 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 FEWOUVRMGWFWIH-ILZZQXMPSA-N 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 6
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 6
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 6
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 6
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical class [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 5
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 5
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 5
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 5
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 5
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- JTNCEQNHURODLX-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanimidamide Chemical compound NC(=N)CC1=CC=CC=C1 JTNCEQNHURODLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000007590 Calpain Human genes 0.000 description 4
- 108010032088 Calpain Proteins 0.000 description 4
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 206010039966 Senile dementia Diseases 0.000 description 4
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 4
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 4
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 4
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 229910000343 potassium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 4
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanoic acid Chemical compound CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007351 Aβ plaque formation Effects 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000415 L-cysteinyl group Chemical group O=C([*])[C@@](N([H])[H])([H])C([H])([H])S[H] 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 3
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical class [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 3
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 3
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 3
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 3
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 3
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 3
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- CANZBRDGRHNSGZ-NSHDSACASA-N (2s)-3-methyl-2-(phenylmethoxycarbonylamino)butanoic acid Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 CANZBRDGRHNSGZ-NSHDSACASA-N 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SZMFMSBWDKHDTJ-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-1,1-difluoro-4-phenylbutan-2-one Chemical compound FC(F)(Cl)C(=O)CCC1=CC=CC=C1 SZMFMSBWDKHDTJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 102000003908 Cathepsin D Human genes 0.000 description 2
- 108090000258 Cathepsin D Proteins 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- 208000031124 Dementia Alzheimer type Diseases 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 2
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 2
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 2
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 2
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 208000033781 Thyroid carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- NGBKFLTYGSREKK-PMACEKPBSA-N Z-Val-Phe-H Chemical compound N([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C=O)C(=O)OCC1=CC=CC=C1 NGBKFLTYGSREKK-PMACEKPBSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 2
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 description 2
- WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N benzylamine Chemical compound NCC1=CC=CC=C1 WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical group 0.000 description 2
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 2
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- IRSJDVYTJUCXRV-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-bromo-2,2-difluoroacetate Chemical compound CCOC(=O)C(F)(F)Br IRSJDVYTJUCXRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IIEWJVIFRVWJOD-UHFFFAOYSA-N ethyl cyclohexane Natural products CCC1CCCCC1 IIEWJVIFRVWJOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PHUZOEOLWIHIKH-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]acetate Chemical compound COC(=O)CNC(=O)OC(C)(C)C PHUZOEOLWIHIKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002682 neurofibrillary tangle Anatomy 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 2
- CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N oxalyl chloride Chemical compound ClC(=O)C(Cl)=O CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000008807 pathological lesion Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 125000001557 phthalyl group Chemical group C(=O)(O)C1=C(C(=O)*)C=CC=C1 0.000 description 2
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N procalcitonin Chemical group C([C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(O)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CSSC1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000013077 thyroid gland carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 2
- TXUICONDJPYNPY-UHFFFAOYSA-N (1,10,13-trimethyl-3-oxo-4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl) heptanoate Chemical compound C1CC2CC(=O)C=C(C)C2(C)C2C1C1CCC(OC(=O)CCCCCC)C1(C)CC2 TXUICONDJPYNPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BAIDNIBSOZLYQU-GJZGRUSLSA-N (2s)-3-methyl-2-[[(2s)-3-methyl-2-(phenylmethoxycarbonylamino)butanoyl]amino]butanoic acid Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 BAIDNIBSOZLYQU-GJZGRUSLSA-N 0.000 description 1
- RRONHWAVOYADJL-HNNXBMFYSA-N (2s)-3-phenyl-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RRONHWAVOYADJL-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- OOKAZRDERJMRCJ-KOUAFAAESA-N (3r)-7-[(1s,2s,4ar,6s,8s)-2,6-dimethyl-8-[(2s)-2-methylbutanoyl]oxy-1,2,4a,5,6,7,8,8a-octahydronaphthalen-1-yl]-3-hydroxy-5-oxoheptanoic acid Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@H](CCC(=O)C[C@@H](O)CC(O)=O)C2[C@@H](OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H](C)C[C@@H]21 OOKAZRDERJMRCJ-KOUAFAAESA-N 0.000 description 1
- 230000006269 (delayed) early viral mRNA transcription Effects 0.000 description 1
- FUFUQQWIXMPZFU-VIFPVBQESA-N (s)-methyl 2-amino-3-(4-nitrophenyl)propanoate Chemical compound COC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 FUFUQQWIXMPZFU-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- DEVSOMFAQLZNKR-RJRFIUFISA-N (z)-3-[3-[3,5-bis(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,4-triazol-1-yl]-n'-pyrazin-2-ylprop-2-enehydrazide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC(C(F)(F)F)=CC(C2=NN(\C=C/C(=O)NNC=3N=CC=NC=3)C=N2)=C1 DEVSOMFAQLZNKR-RJRFIUFISA-N 0.000 description 1
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OLVBLANCUSDFIY-UHFFFAOYSA-N 1-amino-4,4-difluoro-1,7-diphenylheptane-3,5-dione Chemical compound NC(CC(C(C(CCC1=CC=CC=C1)=O)(F)F)=O)C1=CC=CC=C1 OLVBLANCUSDFIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PJUPKRYGDFTMTM-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole;hydrate Chemical compound O.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 PJUPKRYGDFTMTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VCUXVXLUOHDHKK-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminopyrimidin-4-yl)-4-(2-chloro-4-methoxyphenyl)-1,3-thiazole-5-carboxamide Chemical compound ClC1=CC(OC)=CC=C1C1=C(C(N)=O)SC(C=2N=C(N)N=CC=2)=N1 VCUXVXLUOHDHKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=CC=C1OCCO IDOQDZANRZQBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCUSTQZFLSBKBE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-methyl-3-trimethylsilylpropanoic acid Chemical compound CC(N)(C[Si](C)(C)C)C(O)=O ZCUSTQZFLSBKBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NUJKJRUPWGDRHG-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-[dimethyl(phenyl)silyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)C[Si](C)(C)C1=CC=CC=C1 NUJKJRUPWGDRHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl carbonochloridate Chemical compound CC(C)COC(Cl)=O YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AAJDKPSNGNMQGN-UHFFFAOYSA-N 3-amino-4-benzyl-2,2-difluoro-3-hydroxy-5-oxo-5-phenylmethoxypentanoic acid Chemical compound C=1C=CC=CC=1COC(=O)C(C(O)(N)C(F)(F)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 AAJDKPSNGNMQGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004080 3-carboxypropanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C(O[H])=O 0.000 description 1
- IFWRSKIKZRDGBE-UHFFFAOYSA-N 4-amino-2,2-difluoro-3-hydroxy-5-phenyl-n-(trimethylsilylmethyl)pentanamide Chemical compound C[Si](C)(C)CNC(=O)C(F)(F)C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 IFWRSKIKZRDGBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAVUVDIQQZVYDO-UHFFFAOYSA-N 4-amino-N-benzyl-2,2-difluoro-3-oxo-5-phenylpentanamide Chemical compound NC(C(C(C(=O)NCC1=CC=CC=C1)(F)F)=O)CC1=CC=CC=C1 FAVUVDIQQZVYDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023769 AA amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 208000023761 AL amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 108091005508 Acid proteases Proteins 0.000 description 1
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 description 1
- 230000007082 Aβ accumulation Effects 0.000 description 1
- 230000007546 Aβ plaque accumulation Effects 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004225 Cathepsin B Human genes 0.000 description 1
- 108090000712 Cathepsin B Proteins 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SBUKLPSBNFWJCU-UHFFFAOYSA-N ClIBr Chemical group ClIBr SBUKLPSBNFWJCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012192 Cystatin C Human genes 0.000 description 1
- 108010061642 Cystatin C Proteins 0.000 description 1
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 208000005531 Immunoglobulin Light-chain Amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026139 Memory disease Diseases 0.000 description 1
- 102000003843 Metalloendopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000131 Metalloendopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUAKHGWARZSWIH-UHFFFAOYSA-N N,N‐diethylformamide Chemical compound CCN(CC)C=O SUAKHGWARZSWIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CJUMAFVKTCBCJK-UHFFFAOYSA-N N-benzyloxycarbonylglycine Chemical compound OC(=O)CNC(=O)OCC1=CC=CC=C1 CJUMAFVKTCBCJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108010071690 Prealbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007584 Prealbumin Human genes 0.000 description 1
- 206010036673 Primary amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 102000056251 Prolyl Oligopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 101710178372 Prolyl endopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010039811 Secondary amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 102000054727 Serum Amyloid A Human genes 0.000 description 1
- 108700028909 Serum Amyloid A Proteins 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000473945 Theria <moth genus> Species 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 229910021626 Tin(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920004929 Triton X-114 Polymers 0.000 description 1
- 230000037374 absorbed through the skin Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000012445 acidic reagent Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 125000005076 adamantyloxycarbonyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)OC(=O)* 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012790 adhesive layer Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003806 alkyl carbonyl amino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000004202 aminomethyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000003941 amyloidogenesis Effects 0.000 description 1
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 150000007860 aryl ester derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000000211 autoradiogram Methods 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N benzoyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=CC=C1 PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- IODSIYZHOFNIAR-GJZGRUSLSA-N benzyl N-[(3S,6S)-6-amino-2,7-dimethyl-4,5-dioxooctan-3-yl]carbamate Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 IODSIYZHOFNIAR-GJZGRUSLSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 125000005997 bromomethyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 229960004424 carbon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000000114 cell free in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012230 colorless oil Substances 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- AVKNGPAMCBSNSO-UHFFFAOYSA-N cyclohexylmethanamine Chemical compound NCC1CCCCC1 AVKNGPAMCBSNSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001295 dansyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(N(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=C2C([H])=C([H])C([H])=C(C2=C1[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N di-tert-butyl ether Chemical group CC(C)(C)OC(C)(C)C AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004683 dihydrates Chemical class 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005594 diketone group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- UBHZUDXTHNMNLD-UHFFFAOYSA-N dimethylsilane Chemical compound C[SiH2]C UBHZUDXTHNMNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N diphenyl Chemical group C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 238000011833 dog model Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000008393 encapsulating agent Substances 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- SFUOZXABFSQINF-UHFFFAOYSA-N ethenyl-(iodomethyl)-dimethylsilane Chemical compound IC[Si](C)(C)C=C SFUOZXABFSQINF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 1
- VCYZVXRKYPKDQB-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-fluoroacetate Chemical compound CCOC(=O)CF VCYZVXRKYPKDQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWNFQAKCJYEJEW-UHFFFAOYSA-N ethyl 3-[8-[[4-methyl-5-[(3-methyl-4-oxophthalazin-1-yl)methyl]-1,2,4-triazol-3-yl]sulfanyl]octanoylamino]benzoate Chemical compound CCOC(=O)C1=CC(NC(=O)CCCCCCCSC2=NN=C(CC3=NN(C)C(=O)C4=CC=CC=C34)N2C)=CC=C1 GWNFQAKCJYEJEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- PQVSTLUFSYVLTO-UHFFFAOYSA-N ethyl n-ethoxycarbonylcarbamate Chemical compound CCOC(=O)NC(=O)OCC PQVSTLUFSYVLTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N hexamethylphosphoric triamide Chemical compound CN(C)P(=O)(N(C)C)N(C)C GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- VZNYXGQMDSRJAL-UHFFFAOYSA-N iodomethyl(trimethyl)silane Chemical compound C[Si](C)(C)CI VZNYXGQMDSRJAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIRJFFHPESCPIQ-UHFFFAOYSA-N iodomethyl-dimethyl-phenylsilane Chemical compound IC[Si](C)(C)C1=CC=CC=C1 UIRJFFHPESCPIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004491 isohexyl group Chemical group C(CCC(C)C)* 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229950003188 isovaleryl diethylamide Drugs 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012280 lithium aluminium hydride Substances 0.000 description 1
- 229940040692 lithium hydroxide monohydrate Drugs 0.000 description 1
- GLXDVVHUTZTUQK-UHFFFAOYSA-M lithium hydroxide monohydrate Substances [Li+].O.[OH-] GLXDVVHUTZTUQK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OVEHNNQXLPJPPL-UHFFFAOYSA-N lithium;n-propan-2-ylpropan-2-amine Chemical compound [Li].CC(C)NC(C)C OVEHNNQXLPJPPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 230000006984 memory degeneration Effects 0.000 description 1
- 208000023060 memory loss Diseases 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- KRKPYFLIYNGWTE-UHFFFAOYSA-N n,o-dimethylhydroxylamine Chemical compound CNOC KRKPYFLIYNGWTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000018791 negative regulation of catalytic activity Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 101150009274 nhr-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 230000033116 oxidation-reduction process Effects 0.000 description 1
- 125000005740 oxycarbonyl group Chemical group [*:1]OC([*:2])=O 0.000 description 1
- 208000021090 palsy Diseases 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 150000003053 piperidines Chemical class 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N pyrrolidin-2-one Chemical compound O=C1CCCN1 HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 229920000260 silastic Polymers 0.000 description 1
- 229920002379 silicone rubber Polymers 0.000 description 1
- 239000004945 silicone rubber Substances 0.000 description 1
- 125000003808 silyl group Chemical group [H][Si]([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007892 solid unit dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000001119 stannous chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011150 stannous chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- XJDNKRIXUMDJCW-UHFFFAOYSA-J titanium tetrachloride Chemical compound Cl[Ti](Cl)(Cl)Cl XJDNKRIXUMDJCW-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000037317 transdermal delivery Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012301 transgenic model Methods 0.000 description 1
- 238000011824 transgenic rat model Methods 0.000 description 1
- 125000006000 trichloroethyl group Chemical group 0.000 description 1
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 description 1
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 description 1
- PQDJYEQOELDLCP-UHFFFAOYSA-N trimethylsilane Chemical group C[SiH](C)C PQDJYEQOELDLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YVWPNDBYAAEZBF-UHFFFAOYSA-N trimethylsilylmethanamine Chemical compound C[Si](C)(C)CN YVWPNDBYAAEZBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 125000002114 valyl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
- C07D295/16—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms
- C07D295/20—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms by radicals derived from carbonic acid, or sulfur or nitrogen analogues thereof
- C07D295/215—Radicals derived from nitrogen analogues of carbonic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
- C07C237/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
- C07C237/22—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton having nitrogen atoms of amino groups bound to the carbon skeleton of the acid part, further acylated
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
- C07C271/06—Esters of carbamic acids
- C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
- C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
- C07C271/22—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C279/00—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
- C07C279/18—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F5/00—Compounds containing elements of Groups 3 or 13 of the Periodic Table
- C07F5/02—Boron compounds
- C07F5/025—Boronic and borinic acid compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic Table
- C07F7/02—Silicon compounds
- C07F7/08—Compounds having one or more C—Si linkages
- C07F7/0803—Compounds with Si-C or Si-Si linkages
- C07F7/081—Compounds with Si-C or Si-Si linkages comprising at least one atom selected from the elements N, O, halogen, S, Se or Te
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
- C07C2601/06—Systems containing only non-condensed rings with a five-membered ring
- C07C2601/08—Systems containing only non-condensed rings with a five-membered ring the ring being saturated
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
- C07C2601/12—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
- C07C2601/14—The ring being saturated
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
A találmány olyan Ka–P2a–NH–CH(Ra)–C(?O)–Xa (IB) általános képletűvegyületekre, azok hidrátjaira, sztereoizo- merjeire és gyógyászatilagelfogadható sóira vonatkozik, ahol ha Xa jelentése hidrogénatom, akkorRa jelentése CH2Si(1–6 szénatomos alkil)2-(2–6 szénatomos alkenil)-csoport, CH2Si(1–6 szénatomos alkil)2-fenil-csoport vagy NHC(?O)-fenil-csoporttal szubsztituált benzilcsoport; vagy ha Xa jelentéseCF2C(?O)-fenetil-csoport, akkor Ra jelentése 1–7 szénatomosalkilcsoport, de terc-butil-metil-cso- porttól eltérő; vagy ha Xajelentése CF2C(?O)NHCH2Si(1–6 szénatomos alkil)3-csoport, akkor Rajelentése benzilcsoport, P2a jelentése Leu, Ala, Ile, Val, Nva, Nlevagy terc-leucin aminosavmaradék; Ka jelentése benzil-oxi-karbonil-csoport. A találmány tárgya még az (IB) képletű vegyületekelőállítására szolgáló eljárás, gyógyszerként történő alkalmazása ésezeket a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények. A találmányszerinti vegyületek gátolják vagy megelőzik az amiloidfehérjelerakódásokat az agyban, ezáltal alkalmasak az Alzheimer-kór ésaz időskori Down-kór kezelésére. ŕ
Description
A találmány új (IB) általános képletű vegyületekre, ezek előállítási eljárására, valamint a vegyületeket hatóanyagként tartalmazó, az amiloid fehéije agybani lerakódásának gátlására vagy megelőzésére szolgáló gyógyszerkészítményekre vonatkozik. A találmány tárgya közelebbről az Alzheimer-kór kezelésére alkalmazható (IB) általános képletű peptidek.
Úgy becsülik, hogy az USA-ban a 65 éven felüli lakosság több mint 5%-át, a 85 éven felüli lakosság több mint 15%-át érinti az Alzheimer-kór. [Cross, A. J., Eur. J. Pharmacol., 82, 77-80 (1982); Terry, R. D. et al., Ann. Neurol., 14, 497-506 (1983)]. Feltételezik, hogy az idősek hosszú távú ápolásra történő elhelyezésének fő oka ebben a betegségben keresendő, és a szakszerű ellátást biztosító idősek otthonában elhaláloző embereknek körülbelül 65%-a szenved a betegségben.
Az Alzheimer-kórral együtt járó biokémiai és metabolikus jelenségekről ismerünk bizonyos tényeket Az Alzheimer-kóros agyban megfigyelt két morfológiai és hisztopatológiai elváltozás a neurofibrilláris csomósodások (elváltozások, neurofibrillary tangles, NFT) és az amiloid lerakódások. Intraneuronális neurofibrilláris elváltozások (csomósodások) jelen vannak más degeneratív betegségek esetén is, de úgy tűnik, hogy amiloid lerakódások jelenléte mind az intraneuronális terekben (neuritikus plakkok), mind az azokat körülvevő mikroérrendszerben (vaszkuláris plakkok), jellemző az Alzheimer-kórra. Úgy látszik, hogy ezek közül a neuritikus plakkok (neuritic plaques), vannak túlsúlyban [Price, D. L., et al., Drug Development Research, 5, 59-68 (1985)]. Plakkok találhatók azoknál a Down-kóros idős betegeknél is, akiknél fellép az Alzheimer-kór.
Alzheimer-kóros betegek plakkokban gazdag agyát használták fel forrásként egy körülbelül 4(2 kD „mag” („core”) polipeptid, az amiloid plakkmagfehéije [amyloid plaque core protein (APCP)] kivonására. Ezt a peptidet a β-proteinnek nevezték el a Glenner, G., et al., Biochem. Biophys. Commun., 120, 885-890 (1984) közlemény szerint. Meghatározták az aminoterminus aminosavszekvenciáját [Glenner, G., et al., Biochem Biophys. Rés. Commun., 122, 1131-1135 (1984); Masters, C. L., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 4245-4259 (1985)]. A két kutatócsoport azonos aminosavszekvenciát közölt azzal az eltéréssel, hogy Glenner és munkatársai az Alzheimer-kóros cerebrovaszkuláris amiloid 11. helyzetében glutamincsoportot ismertet, míg Master et al., glutaminsavról számol be a 11. helyzetben. Az előbbi szerzők tehát arról számolnak be, hogy a cerebrovaszkuláris amiloidnak homogén aminoterminusa van, míg az utóbbi szerzők heterogén aminoterminusokat ismertetnek. Mindkét kutatócsoport kimutatta, hogy ugyanaz a peptid található a Down-kóros felnőttek amiloid plakkmagjaiban és vaszkuláris amiloidjában, és leúják, hogy all. helyzetben glutaminsav található. Wong. C. W. és munkatársai [Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 82, 8729-8732 (1985)] kimutatták, hogy egy szintetikus peptid, amely homológ volt a Masters (lásd fent) által leirt β-amiloid magfehéije első tíz aminosavjával, képes volt antitesteket termeim egerekben, és ezeket az antitesteket fel lehetett használni nemcsak az amiloiddal borított agyi véredények, hanem a neuritikus plakkok megfestésére is. Ezeket az eredményeket megerősítették Allsop, D. és munkatársai is a Neuroscience Letters, 68, 252-256 (1986) közleményükben, akik a 8-17 aminosavaknak megfelelő szintetikus peptiddel szembeni antitesteket használták. Ezek szerint az Alzheimer-kórban szenvedő betegek agyának különféle helyein talált plakkfehéije általában hasonlónak tűnik az immunreaktivitás tekintetében. Nagymértékben oldhatatlan, amit az mutat, hogy nem tudták oldhatóvá tenni sok közönségesen használt denaturálószerben, úgy mint detergensekben és kaotrop szerekben [Masters, lásd fent, Allsop, D., et al., lásd fent].
A betegséggel együtt járó amiloid depozitumoknak hat olyan ismert példája van, amelyben az amiloid prekurzorfehérjéből termelődik: primer amiloidózis esetén a prekurzor egy immunglobulin könnyű lánc; szekunder amiloidózis esetén a prekurzor amiloid A fehéije; amiloidózis esetén prealbumin vagy annak egy variánsa; a pajzsmirigy velőkarcinómája esetén egy prokalcitonin fragmens; és öröklődő agyvérzés esetén gamma-nyom (gamma-trace)-fragmens [lásd például Glenner, G., New England Journal of Medicine, 302, 1283 (1980); Sletton, K., et al., Biochem. J., 195, 561 (1981); Benditt, et al., FEBS Lett., 19, 169 (1971); Sletton K., et al., Eur. J. Biochem., 41, 117 (1974); Sletton, K„ J. Exp. Med., 143, 993 (1976)]. Az előbbiekben részleges felsorolást; adtunk, és számos további referencia van arra nézve, hogy prokalcitonin fragmens prekurzor a pajzsmirigykarcinóma amiloidja tekintetében.
Betegségekkel együtt járó amiloid lerakódások (depozitumok) más ismert példáinak analógiájára feltételezik, hogy az Alzheimer-kórral együtt járó β-amiloid magfehéije prekurzorfehérjéből keletkezik. Kang, J. és munkatársai [Natúré, 325, 733-736 (1987)] ismertetnek egy olyan fehéijét, amely egy nagyobb fehérjeszerkezeten belül tartalmazza a β-amiloid magfehérjeszekvenciát. Ennek a fehéijének a szekvenciáját egy olyan cDNS-klón szekvenciájából vezették le, amely kiónt humán fetális agyszővet cDNS-könyvtárából izoláltak, és amely 695 aminosavcsoportból áll, ahol a βamiloid magfehéije aminoterminusa az 597 helyzetben kezdődik. Egy második olyan prekurzorfehérjét, amely a β-amiloid-szekvenciát tartalmazza, Ponté és munkatársai [Natúré, 331, 525-527 (1988)] által izolált cDNS-klónból jósoltak meg. A Ponté és munkatársai által izolált cDNS-klón olyan prekurzorfehéijét kódolt, amely azzal azonos, amelyet Kang és munkatársai azonosítottak, azzal a különbséggel, hogy tartalmaz egy további 57 aminosavból álló szekvenciát, amely a β-amiloid magfehéije-szekvenciától felfelé van inszertálva. Az 57 aminosavból álló inszertált szekvencia tartalmaz egy funkcionális domént, amely erősen homológ egy sor olyan proteázinhibitorral, amelyeket Kunitz-tipusú szerin proteáz inhibitorokként ismerünk. Mások olyan további amiloid prekurzorfehéijét jellemeztek [lásd Kitaguchi, et al., Natúré, 331, 530-532 (1988)], amely 770 aminosavat tartalmaz. A Kitaguchi által azonosított prekurzor azzal a különbséggel egyezik meg a Ponté és munkatársai által izolált prekurzorral, hogy to2
HU 221 629 Bl vábbi 19 aminosavat tartalmaz az 57 aminosavból álló proteázinhibitor doménnal szomszédosán. Nem ismeretes, hogy ez a további 19 aminosav kölcsönöz-e bármilyen funkcionalitást a molekulának. A különféle amiloid prekurzorfehéijék, amelyeket a cDNS-klónokból 5 azonosítottak, alternatív message splicing eredményeként keletkeznek egy egyedülálló amiloid prekurzorgén transzkripciója során.
Kimutatták, hogy az amiloid prekurzorfehéijék a normális sejtmetabolizmus révén keletkeznek a β-ami- 10 lóid magfehéije termelése érdekében [Haas, et al., Natúré, 359, 322-325 (1992); Shoji, et al., Science, 258, 126-129 (1992); Seubert, et al., Natúré, 359, 325-327 (1992)]. Nincs tisztázva azonban, hogy az Alzheimerkórban szenvedő betegekben nagyobb mennyiségű β- 15 amiloid magfehéije termelődik-e, bár kimutatták, hogy a Down-szindrómás betegek, akiknél invariábilisan kifejlődik az Alzheimer-kór, kétszeres mennyiségű βamiloid prekurzorfehéijét fejeznek ki [Neve, et al., Neuron, 1, 669-677 (1988)]. Úgy vélik, hogy az amiloid 20 plakkok kifejlődése az Alzheimer-kóros agyban a βamiloid fehérje túltermelődésének és/vagy csökkent mértékű eltávozásának, vagy komplexszé alakulásának az eredménye. Ennélfogva, ha megteremthetjük annak eszközét, hogy beavatkozzunk a plakk-képzódés folya- 25 matába azáltal, hogy megelőzzük vagy gátoljuk az amiloid plakk magfehérje termelődésében prekurzor anyag keletkezését, egy ilyen eszköz eljárást képezhet az Alzheimer-kór progressziójának kezelésére vagy javítására. Mindeddig azonban a β-amiloid magfehérje terme- 30 lődéséhez szükséges amiloid prekurzorfehéije képződése nem volt kielégítő mértékben ismert ahhoz, hogy hatékony terápiás beavatkozást tegyen lehetővé abba a folyamatba, amely amiloid lerakódásokra vezet.
Számos közlemény ismertet olyan vélelmezett pro- 35 teinázokat, amelyeket felelősnek tekintenek a β-amiloid fehérje és/vagy az Alzheimer-kór patológiája előidézéséért. Ezek a vélelmezett proteinázok az enzimek osztályainak széles spektrumát ölelik fel, például a szerin, a cisztein és a metalloproteinázokat. Számos β- 40 amiloid-termelő proteinázt izoláltak és jellemeztek már. Néhány ismertetett jelölt a következő: multikatalitikus proteináz [FEBS 304, 57-60 (1992) és FEBS Lett. 257, 388-392 (1989)], hízósejtkináz [J. Bioi. Chem. 265, 3836-3843 (1990)], metalloendopeptidáz 45 24.15, Biochem. Biophys. Rés. Commun., 185, 746-752 (1992)], kalciumaktivált semleges proteinázok (calpain) [J. Neurosci., 10, 2400-2411 (1990)], kalciumaktivált szerin proteináz [Biochem., Biophys. Rés. Commun. 174, 790-796 (1991)], és prolil-endopep- 50 tidáz [FEBS Lett. 160, 131-134 (1990)]. Nem mutatták még ki ezen β-amiloid-termelő proteinázjelöltek mindegyikének a fiziológiai jelentőségét, például azt, hogy az enzimaktivitás gátlása blokkolt β-amiloid fehéijetermeléssel jár együtt. 55
Számos proteináz esetén számoltak be arról, hogy az megváltozik az Alzheimer-kóros agyszövetben. így például kimutatták, hogy az α-1-tripszin-szerű immunoreaktivitás megnövekszik az Alzheimer-kóros agyban [Biochem. Biophys. Rés. Commun. 193(2), 579-594 60 (1993)], három különböző metalloproteinázról ismertették, hogy aktivitása megemelkedik az Alzheimer-kóros agyban [J. Neurochem. 58, 983 -992 (1992)], megfigyelték multikatalitikus proteinázok megváltozását [Neurosc. Rés. Comm. 8(3), 185-190 (1991)], beszámoltak abnormis katepszin D és B immunreaktivitásról [Neurosc. Lett. 130, 195-198 (1991) és Proc. Natl.
Acad. Sco. 87, 3861-3865 (1990)], továbbá különféleképpen mutatták ki kalciumaktivált neutrális proteináz (calpain) aktivitásának változását Alzheimer-kóros agyszövetben, kimutatták csökkenését [Neurobio. of
Aging, 11, 425-431 (1990)], növekedését [Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 90, 2628-2632 (1993)] vagy változatlanságát [J. Neurol. Sci, 102, 220-234 (1991).
Az előbbiek bemutatásul szolgálnak arra, hogy bár hatalmas mennyiségű munkáról számolnak be ezen a területen, nincs általános egyetértés a proteinázok azon osztálya tekintetében, amelyek hatékonyak az Alzheimer-kór kezelésében, vagy a tekintetben, hogy ezen proteinázok megváltoznak-e, ha Alzheimer-kóros agyszövettel lépnek kontaktusba.
A találmány tárgyát új (IB) képletű vegyületek és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények képezik, melyek a β-amiloid magfehéije-képződésének és az amiloid plakkok képződésének gátlására alkalmazha- l tők Alzheimer-típusú dementiában szenvedő betegek esetén. A találmány szerinti gyógyszerkészítmény tehát az Alzheimer-kór progressziójának kezelésére ; | vagy javítására, például az Alzheimer-típusú öregkori ? * elbutulás és az időskori Down-szindróma kezelésére í j . i használható. f
A találmány tárgya továbbá az (IB) képletű vegyüle- f tek előállítása és e vegyületek alkalmazása olyan állapo- | tok kezelésére, amelyek reagálnak a betegben végbeme- | nő β-amiloid magfehérje-termelődés gátlására vagy I megelőzésére. í
A találmány tárgyát képezik tehát az (IB) általános képletű vegyületek, azok hidrátjai, sztereoizomeijei és gyógyszerészetileg elfogadható sói, ahol az általános képletben ha Xa jelentése hidrogénatom, akkor Ra jelentése CH2Si(l-6 szénatomos alkíl)2-(2—6 szénatomos alkenil)-csoport, CH2Si(l-6 szénatomos alkil)2-fenil-csoport vagy NHC(=O)-fenil-csoporttal szubsztituált benzilcsoport; vagy ha Xa jelentése CF2C(=O)-fenetil-csoport, akkor Ra jelentése 1 -7 szénatomos alkilcsoport, de terc-butil-metil-csoporttól eltérő; vagy ha Xa jelentése CF2C(=O)NHCH2Si(l-6 szénatomos alkil)3-csoport, akkor Ra jelentése benzilcsoport,
P2 a jelentése Leu, Alá, Ile, Val, Nva, Nle vagy tercleucin aminosavmaradék;
Ka jelentése benzil-oxi-kaibonil-csoport.
A találmány tárgya továbbá eljárás az (IB) általános képletű vegyületek előállítására oly módon, hogy L valamely Ka-P2a általános képletű csoportot, melyben Ka és P2a jelentése a fentiekben megadott, valamely R
H2N-CH(Ra)-C(=O)Xa általános képletű vegyülettel
- melyben Ra és Xa jelentése a fentiekben megadott kapcsolunk, vagy
HU 221 629 BI valamely Ka-P2a általános képletű csoportot, melyben Ka és P2a jelentése a fentiekben megadott, valamely H2N-CH(Ra)-CH(OH)Xa általános képletű vegyülettel - melyben Ra és Xa jelentése a fentiekben megadott - kapcsolunk, és az így kapott vegyületet oxidáljuk.
A leírásban az 1-6 szénatomos alkil- vagy 1-7 szénatomos alkilcsoportok jelentése egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, így például metilcsoport, etilcsoport, propilcsoport, izopropilcsoport, butilcsoport, izobutilcsoport, terc-butil-csoport, pentilcsoport, izopentilcsoport, szek-pentil-csoport, hexilcsoport, izohexilcsoport. Hasonlóképpen a 2-6 szénatomos alkiléncsoportok jelentése 2-6 szénatomot tartalmazó kétértékű csoport, amely egyenes vagy elágazó láncú lehet. Valamennyi 1-7 szénatomos csoport előnyösen 1-6 szénatomos és előnyöseb- 15 ben 1-4 szénatomos csoport Minden 1-6 szénatomos csoport előnyösen 1-4 szénatomos és előnyösebben 1-2 szénatomos csoport.
Az (IB) általános képletű vegyületek lehetnek szabad formában vagy só formában, például savaddíciós só vagy anionos só formájában. Egy ilyen vegyületet átalakíthatunk sójává vagy bázissá, ismert módon, egyiket a másikba. Előnyös sók a trifluor-acetát, a hidrokloridsók, a nátrium-, kálium- vagy ammóniumsók, bár a találmány tárgyköre kiteljed minden olyan sóra, melyet 25 a peptidkémiában ismert módon felhasználunk.
A „sztereoizomer” definíció általános definíció az egyes molekulák mindazon izomerjeire vonatkozóan, amelyek csak atomjaik térbeli orientációjában különböznek. A leírás szerinti definíció magában foglalja a 30 tükörképi izomereket (enantiomereket), a geometriai (cisz/transz) izomereket, továbbá az egynél több királis centrumot tartalmazó molekulák azon izometjeit, amelyek egymásnak nem tükörképei (diasztereo-izomereket). Aminosavak esetén a D/L vagy R/S megjelölése- 35 két alkalmazhatjuk, amint azt a IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature, Eur. J. Biochem. 138,9-37 (1984) közlemény ismerteti. A természetes aminosavak a glicin kivételével tartalmaznak királis szénatomot. Eltérő specifikus jelölés hiányában az 40 előnyös vegyületek az L-konfigurációjú optikailag aktív aminosavak; az (IB) általános képletű vegyületeket felépítő aminosavak azonban akár D- akár L-konfigurációjúak lehetnek, vagy lehetnek a D- és L-izomerek elegyei, beleértve a racém elegyeket. A későbbiekben sze- 45 replő 1. táblázatban foglaljuk össze a vegyületekben előforduló α-aminosavak elfogadott rövidítését.
A leírásban az ,Alzheimer-kór” az Alzheimer-típusú senilis dementiát is jelenti.
A „hidrát” definíció azt jelenti, hogy a találmány 50 szerinti vegyületekben lévő ketocsoport dihidroxi-metilén-csoport formájában is lehet. A találmány szerinti vegyületek normális fiziológiai körülmények között várhatóan hidratált formában vannak.
A „dezaminocsoport” jelentése a-aminosavcsoport 55 az ahhoz csatlakozó aminocsoport nélkül. Előnyös dezaminocsoportot képeznek a Val, Ala alfa-aminosavak a megfelelő terminális aminocsoportjuk nélkül.
A „szubsztituált benzilcsoport” azt jelenti, hogy a benzilcsoport a fenilrészén hozzáférhető szénatomo- 60 kon, vagyis méta-, orto- és/vagy para-helyzetben szubsztituálva van, és előnyösen a szubsztituens para-helyzetben van.
Minden α-aminosavnak van egy jellegzetes „R-cso5 portja”, ahol az R-csoport az az oldallánc vagy maradék, amely az a-aminosav α-szénatomjához kapcsolódik. Például az R-csoport oldallánc glicin esetén hidrogénatom, alanin esetén metilcsoport, valin esetén izopropilcsoport. Az α-aminosavak specifikus R-csoport10 jait vagy oldalláncait ismerteti például A. L. Lehninger „Biochemistry” [Lehninger A. L., Biochemistry, 2nd Edition, Chapter 4, „The Aminoacid Building Blocks of Proteins”, pp. 71. (1978)], szakirodalmi hivatkozási helyen.
A természetes aminosavak a glicin kivételével tartalmaznak királis szénatomot. Eltérő specifikus jelölés hiányában az előnyös vegyületek az L-konfigurációjú optikailag aktív aminosavak; a találmány szerinti (Π3) általános képletű vegyületeket felépítő aminosavak azonban 20 akár D-, akár L-konfigurációjúak lehetnek, vagy lehetnek a D- és L-izomerek elegyei, beleértve a racém elegyeket. Az I. táblázatban foglaljuk össze a vegyületekben előforduló α-aminosavak elfogadott rövidítését:
I. táblázat
A találmány szerinti vegyületekben előforduló aminosavak nevének rövidítése
Aminosav | Jele |
alanin | Ala |
izoleucin | Ile |
leucin | Leu |
valin | Val |
norvalin | Nva |
norleucin | Nle |
Az A reakcióvázlat általános szintézisutat mutat be az (IB) általános képletű vegyületek előállítására.
A Ka-P2a csoportot az (1) általános képletű aminosavszármazék szabad aminocsoportjához kapcsolhatjuk. Az (1) általános képletben Ra és Xa jelentése a fentiekben megadott. A P2a csoportot - melynek jelentése szintén a fenti - a jól ismert peptidkapcsolási eljárásokkal kapcsolhatjuk a védőcsoportot nem tartalmazó szabad aminovegyülethez.
Általában úgy hosszabbítjuk meg a peptideket, hogy eltávolítjuk a C-terminális maradék a-aminocsoportjának a védőcsoportját, és peptidkötéssel hozzákapcsoljuk a következő, megfelelően védett aminosavakat az ismertetett eljárások alkalmazásával. Ezt a védócsoport-eltávolítási és -kapcsolási eljárást addig ismételjük meg, amíg megkapjuk a kívánt szekvenciát. Ezt a kapcsolást elvégezhetjük a peptidet alkotó aminosavakkal lépésenként, amint azt az A reakcióvázlattal bemutatjuk, vagy fragmensek (két vagy több aminosav) kondenzációjával, vagy e két eljárás kombinációjával, továbbá szilárd fázisú peptidszintézissel, amely eljárást eredetileg Merrifield a J. Am. Chem. Soc., 85, 2149-2154
HU 221 629 Bl (1963) közleményében ismertetett, és amely közlemény a leírás tekintetében referenciaként szerepel. Ha szilárd fázisú szintézismódszert alkalmazunk, a C-terminális karbonsavat (karboxilcsoportot) oldhatatlan hordozóhoz (rendszerint polisztirolhoz) kapcsoljuk. Ezek az oldhatatlan hordozók olyan csoportot tartalmaznak, amely reakcióba lép az aldehidcsoporttal, és olyan kötést hoz létre, amely stabil a lánchosszabbítás körülményei között, de később könnyen hasítható. E hordozókra példák a következők: klór- vagy bróm-metil-gyanta, hidroxi-metil-gyanta és amino-metil-gyanta. E gyanták közül sok kapható a kereskedelmi forgalomban úgy, hogy már tartalmazza a kívánt C-terminális aminosavat. Azon (IB) általános képletű vegyületek esetén, melyekben X* jelentése hidrogénatom, kapcsolóvegyületet is alkalmazhatunk az A reakcióvázlat szerinti reakciókban abból a célból, hogy hozzákössünk egy gyantát az olyan (1) általános képletű aminosavszármazékok aldehid funkciós csoportjához, amelyekben X* jelentése hidrogénatom. Alkalmas kapcsolószerek például az Ll, L2 vagy L3 képletű vegyületek.
Alternatív módon a találmány szerinti vegyületeket automata peptidszintetizátor alkalmazásával is előállíthatjuk. Az előbbieken felül további peptidszintézist ismertetnek a következő művekben: Stewart és Young, „Solid Phase Peptide Synthesis” 2. kiadás, Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984); Gross, Meienhofer, Udenfriend (szerkesztők), „The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology”, 1., 2., 3., 5. és 9. kötet, Academic Press, New York, 1980-1987; Bodanszky, „Peptide Chemistry: A Practical Textbook”, Springer Verlag, New York (1988); valamint Bodanszky és munkatársai „The Practice of Peptide Synthesis” Springer Verlag, New York (1984), amely műveket a leírásban referenciaként szerepeltetünk.
Két aminosav, egy aminosav és egy peptid, vagy két peptidfragmens közötti kapcsolást standard kapcsolási eljárásokkal végezhetünk, úgymint az azidmódszerrel, vegyes szénsavanhidrid (izobutil-klór-formiát)módszerrel, karbodiimid (diciklohexil-karbodiimid, diizopropil-karbodiimid vagy vízoldható karbodiimid)módszerrel, aktív észter (p-nitro-fenil-észter, N-hidroxi-szucinimid-észter)-módszerrel, Woodward K reagens módszerrel, karbonil-diimidazol-módszerrel, foszfortartalmú reagens, úgymint BOP-C1 alkalmazásával vagy oxidációs-redukciós módszerekkel. E módszerek közül néhánynak (különösen a karbodiimid-módszernek) növelhetjük a hatékonyságát 1-hidroxi-benzotriazol hozzáadásával. Ezeket a kapcsolási reakciókat elvégezhetjük akár oldatban (folyadékfázisban) akár szilárd fázisban.
A peptideket felépítő aminosavak funkciós csoportjait védeni kell a kapcsolási reakciók során annak érdekében, hogy elkerüljük nemkívánatos kötések kialakulását. Az alkalmazható védőcsoportokat ismertetik a kővetkező művek: Greene „Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley & Sons, New York (1981), valamint „The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology”, Vol. 3, Academic Press, New York (1981), amely közleményeket a leírásban referenciaként tekintünk.
A C-tenninális csoport α-karboxilcsoportját általában egy ilyen észterrel védjük, amelyet lehasíthatunk, hogy megkapjuk a karbonsavat. Alkalmazható védőcsoportok lehetnek: 1. alkil-észterek úgymint a metil- és a terc-butil-észter, 2. aril-észterek, úgymint a benzil- és a szubsztituált benzil-észterek vagy 3. olyan észterek, amelyeket kíméletes bázisos kezeléssel vagy enyhe reduktív kezeléssel hasíthatunk, úgymint triklór-etil- és fenacil-észterek.
Minden aminosav α-aminocsoportját védenünk kell. Erre bármely ismert védőcsoportot felhasználhatunk, A védőcsoportokra példák: 1. acil típusú védőcsoportok, úgymint formilcsoport, trifluor-acetil-csoport, ftalilcsoport és p-toluolszulfonilcsoport; 2. aromás karbarnát típusú védőcsoportok, úgymint a benzil-oxi-karbonil-csoport (Cbz vagy Z) és a szubsztituált benziloxi-karbonil-csoportok, 1 -(p-bifenil)-1 -(metil-etoxi)karbonil-csoport és a 9-fluorenil-metil-oxi-karbonilcsoport (Fmoc); 3. alifás karbamát típusú csoportok, úgymint a terc-butoxi-karbonil-csoport (Boc), etoxikarbonil-csoport, diizopropil-metoxi-karbonil-csoport, valamint az allil-oxi-karbonil-csoport; 4. ciklusos alkilkarbamát típusú csoportok, úgymint a ciklopentil-oxikarbonil-csoport és az adamantil-oxi-karbonil-csoport; 5. alkil típusú csoportok, úgymint a trifenil-metil-csoport és a benzilcsoport; 6. trialkil-szilán-csoportok, úgymint a trimetil-szilán-csoport; valamint 7. tiolcsoportot tartalmazó típusúak, úgymint a fenil-tio-karbonil-csoport és a ditia-szukcinoil-csoport. Előnyös a-aminovédő csoport a Boc vagy Fmoc csoport, előnyös közülük a Fmoc. A kereskedelmi forgalomban számos olyan aminosavszármazék kapható, amely peptidszintézis céljaira alkalmasan védve van.
Az α-aminovédő csoportot a következő aminosav kapcsolását megelőzően eltávolítjuk Ha Boc védőcsoportot alkalmazunk, választhatunk a trifluor-ecetsavval (tisztán vagy diklór-metános oldatban) vagy a dioxános sósavoldattal végzett hasítás között. A keletkezett ammóniumsót ezután semlegesítjük vagy a kapcsolást megelőzően, vagy in situ bázisos oldatokkal, úgymint vizes pufforokkal vagy pedig diklór-metánnal vagy dimetil-formamiddal készült tercier amin-oldatokkal. Ha Fmoc csoportot alkalmazunk, a választható reagensek közé tartozik a dietil-formamidban lévő piperidin vagy szubsztituált piperidin, de bármilyen szekunder aminoldatot vagy vizes bázisos oldatot használhatunk. A védőcsoport-eltávolítást 0 °C és szobahőmérséklet között végezzük.
Bármely olyan aminosavat, amelynek oldalláncbeli funkciós csoportja van, védenünk kell a peptidek előállítása során ha bármelyik felsorolt eljárást alkalmazzuk. A szakember számára ismert, hogy ezen oldalláncbeli megfelelő védőcsoportok megválasztása és alkalmazása függ az aminosavtól és a pepiidben jelen lévő más védőcsoportoktól. Az ilyen védőcsoportok megválasztásának szempontja az, hogy azokat nem szabad eltávolítani az α-aminocsoport védőcsoportjának eltávolítása és kapcsolása során.
Ha például Boc csoportot használunk a-aminovédő csoportként, a következő oldallánci védőcsoportok alkal5
HU 221 629 Bl masak: p-toluolszulfonilcsoportot (tozilcsoportot) használhatunk aminosavak amino-oldalláncának védelmére, így a Lys és az Arg esetén; p-metil-benzil-csoportot, acetamido-metil-csoportoL benzilcsoportot (Bzl) vagy tercbutil-szulfonil-csoportot használhatunk az aminosavak szulfidtartalmú oldalláncának védelmére, úgymint a risztéin esetói; továbbá benzil (Bzl)-éter-csoportot használhatunk az aminosavak hidroxicsoportot tartalmazó oldalláncainak védelmére, úgymint a Ser vagy a Thr esetén.
Ha Fmoc csoportot választunk az a-aminovédelemre, rendszerint elfogadhatók a terc-butil-alapú védőcsoportok. Például Boc csoportot használhatunk a lizin, terc-butil-éter-csoportot a szerin és a treonin, valamint terc-butil-észter-csoportot a glutaminsav esetén.
Ha a peptidlánc meghosszabbítását befejeztük, az összes védőcsoportot eltávolítjuk. Ha oldalfázisú szintézist alkalmazunk, a védőcsoportot bármely módon eltávolíthatjuk, amilyet a védőcsoport megválasztása megszab. Ezek az eljárások a szakember számára jól ismertek.
Ha szilárd fázisú szintézist alkalmazunk, a peptidet rendszerint a védőcsoportok eltávolításával egyidejűleg hasítjuk le a gyantáról. Ha a Boc-védelem sémáját alkalmazzuk a szintézis során, a pepiidnek a gyantáról való lehasítására előnyös eljárás olyan vízmentes HF-dal végzett kezelés, amely HF adalékanyagokat, úgymint dimetil-szulfoxidot, anizolt, tioanizolt vagy p-krezolt tartalmaz, és a kezelést 0 °C-on végezzük. A peptidet lehasíthatjuk más savas reagensekkel is, úgymint trifluor-metánszulfonsav/trifluor-ecetsav elegyével. Ha a Fmoc-védelem sémáját alkalmazzuk, az N-terminális Fmoc csoportot a korábban ismertetett reagensekkel hasítjuk le. A többi védőcsoportot és a peptidet a gyantáról trifluor-ecetsav és különféle adalékok, úgymint anizol, stb. oldatával hasítjuk le.
Azokat az (I) általános képletű peptideket, amelyekben X jelentése hidrogénatom, vizes sav/formaldehid rendszerrel hasíthatjuk le a kapcsolódó vegyületről és a gyantáról.
Az (I) általános képletű vegyületeket alternatív módon előállíthatjuk a szakember számára ismert standard kémiai reakciókkal analóg módon úgy is, amint azt a B reakcióvázlattal szemléltetjük.
A B reakcióvázlat alternatív általános szintézisvázlatot mutat be az (IB) általános képletű vegyületek előállítására.
A P2 a csoportot, melynek jelentése a fenti, az előbbiekben leirt A reakcióvázlatnak megfelelően kapcsolhatjuk a (2) általános képletű amino-alkohol-származékok - melyekben R1 és X» jelentése a fenti - szabad aminocsoportjához, így a (3) általános képletű peptidoalkoholokat kapjuk.
A (3) általános képletű peptido-alkoholok alkohol funkciós csoportját ezután a szakember számára ismert eljárásokkal és műveletekkel oxidáljuk, úgymint Swem-oxidációval oxalil-klorid és dimetil-szulfoxid alkalmazásával, és így kapjuk az (IB) általános képletű vegyületeket.
Az A és B reakcióvázlat szerinti kiindulási anyagok a szakember számára könnyen hozzáférhetőek. Például a P2® aminosav, a kereskedelemben kapható, továbbá az (Ll) képletű kapcsoló (linker)-vegyületet a J. Am. Chem. Soc. 114, 3157-3159 (1992) közlemény ismerteti. A 0363284 számú európai szabadalmi bejelentés (1990. április 11.) leírja továbbá azokat a Ka-P2a általános képletű szubsztituált aminosavakat, melyekben Ka jelentése acetilcsoport, szukcinilcsoport, benzoilcsoport, terc-butil-oxi-karbonil-csoport, karbobenzil-oxicsoport, tozilcsoport, danzilcsoport, izovalerilcsoport, metoxi-szukcinil-csoport, 1-adamantán-szulfonil-csoport, 1-adamantán-acetil-csoport, 2-karbox-benzoil-csoport, fenil-acetil-csoport, terc-butil-acetil-csoport, bisz[(l-naftil)-metil]-acetil-csoport vagy -A-Rz általános képletű csoport, ahol A jelentése (a), (b), (c) vagy (d) képletű csoport; és Rz jelentése olyan 6, 10 vagy 12 szénatomos arilcsoport, amely alkalmas módon szubsztituálva van 1-3 szubsztituenssel, amely szubsztituensek jelentése egymástól függetlenül fluor-, klór-, bróm-, jódatom, trifluor-metil-csoport, hidroxicsoport, 1-6 szénatomos alkilcsoport, 1-6 szénatomos alkoxicsoport, karboxicsoport, alkil-karbonil-amino-csoport, melyben az alkilcsoport 1-6 szénatomot tartalmaz, 5-tetrazolilcsoport, és 1-15 szénatomot tartalmazó acil-szulfonamido-csoport, azaz acil-amino-szulfonil-csoport és szulfonil-amino-karbonil-csoport, azzal a feltétellel, hogy ha az acil-szulfonamido-csoport arilcsoportot tartalmaz, ez az arilcsoport még egy szubsztituenssel szubsztituálva lehet, ahol ennek a szubsztituensnek a jelentése fluor-, klór-, bróm-, jódatom és nitrocsoport; továbbá K jelentése olyan más terminális aminovédő csoport, amely ezekkel funkcionálisan ekvivalens.
Az (1) általános képletű kiindulási aminovegyületek a szakember számára könnyen hozzáférhetőek. A következőkben példaképpen megadunk olyan közleményeket, amelyek bizonyos (I) általános képletű védett aminosavakat írnak le. Olyan (1) általános képletű vegyületeket ismertetnek tehát, ahol
X jelentése hidrogénatom és R jelentése benzilcsoport: a 0363284 számú európai és a WO 84/00365 számon nyilvánosságra hozott PCT szabadalmi bejelentések;
X jelentése hidrogénatom és R jelentése CH2Si(CH3)3 képletű csoport: a 0363284 számú európai szabadalmi bejelentés, és e bejelentés 12. példája. A 13. és 14. példákban leírt vegyűleteknél csak a szililcsoporton lévő szubsztituensek különbözőek;
X jelentése hidrogénatom és R jelentése szubsztituált benzilcsoport: a PCT/US91/09741 számú szabadalmi bejelentés;
X jelentése CF3 és CHF2 csoport, és R jelentése benzilcsoport vagy NHC(NH)NH2 csoporttal szubsztituált benzilcsoport: a 0195212 számú európai szabadalmi bejelentésben (nyilvánosságra hozatala 1986. szeptember 24., feltalálók: Michel Jung és társai);
X jelentése CF2CH2NHC(=O)R] általános képletű csoport és R jelentése benzilcsoport, intermedierként ismertetve az OPI0275101 számú európai szabadalmi bejelentésben (benyújtva 1988. január 14-én, feltalálók: Dániel Schirlin és társai); a CFHCH2NHC(=O)Rj általános képletű csoportot tartalmazó monofluorszármazék hasonló eljárásokkal állítható elő úgy, hogy bróm6
HU 221 629 Bl (fluor-ecetsav)-etil-észtert használnak bróm-(difluorecetsav)-etil-észter helyett;
X jelentése CF2C(O)W általános képletű csoport, melyben W jelentése NHCH2Si(alkil)3 általános képletű csoport, továbbá R jelentése benzilcsoport, CH2Si(CH3)3 vagy szubsztituált benzilcsoport: aPCT/US91/09741 számú szabadalmi bejelentés (feltalálók: Dániel Schirlin et al., benyújtva: 1991. december 20-án), és ha R jelentése (CH^-naftil-csoport, hasonló eljárásokat alkalmazhatnak ismert kiindulási vegyületek használatával;
X jelentése CF2C(O)W általános képletű csoport, ahol W jelentése NHRj vagy Rj csoport és R jelentése benzilcsoport, CH2Si(CH3)3 vagy szubsztituált benzilcsoport: a PCT/US91/09741 számú szabadalmi bejelentés (feltalálók: Dániel Schirlin és társai, benyújtva 1991. december 20-án), és ha R jelentése (CH2)m-naftil-csoport, hasonló eljárásokat alkalmazhatnak ismert kiindulási vegyületek használatával;
X jelentése C(O)Rt csoport és R jelentése benzilcsoport, CH2Si(CH3)3, (CH2)m-naftil- vagy szubsztituált benzilcsoport: a 4,820,691 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (benyújtva: 1989. április 11-én); és a transz-4-(amino-metil-ciklohexán)-karbonsavbenzil-észter kapcsolódó vegyületnek a megfelelő savból végzett előállítását az olyan (I) általános képletű vegyületek szintézise érdekében, melyekben X jelentése hidrogénatom a J. Am. Chem. Soc., 114, 3156-3157 (1992) közlemény.
A leírás szempontjából valamennyi előbbi közlemény referenciaként tekintendő.
A következő példák tipikus szintéziseket mutatnak be. A példák csak a találmány bemutatását szolgálják anélkül, hogy az oltalmi kört bármilyen módon korlátoznák. A példákban megadott jelölések jelentése a következő: gramm; „mmol” millimól; „ml” milliliter, „lp” fonáspont; „°C” Celsius-fok; „pl” mikroliter; „pg” mikrogramm; „pM” mikromól; ,JZ” vagy „Cbz” jelentése karbobenzil-oxi-csoport; „THF” tetrahidroíurán; „DCU” Ν,Ν-diklór-uretán; „Eq” ekvivalens; ,Atg” gramm atom.
1. példa (ref.)
2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-4,4-difluor-l,7-difenil-3,5-dioxo-heptán előállítása [(69) képletű vegyület]
A) lépés: N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil-L-fenilalanin, N, O-dimetil-hidroxamát
0,920 g (4,5 mmol) N,N’-diciklohexil-karbodiimidet adunk 0,220 g (0,55 mmol) CBz(L)-Val-PheOH és 0,93 g (0,61 mmol) hidroxi-(benzotriazol) 12 ml metilén-kloriddal készített oldatához. Az elegyet 0 °Con 1 órán át keverjük. A reakcióelegyhez 0,59 g (0,61 mmol) N,O-dimetil-hidroxil-amin.HCl-t és 0,61 g (0,61 mmol) N-metil-morfolint adunk és 12 órán keresztül keveijük 25 ’C-on. Az elegyet szüljük, metilén-kloriddal mossuk és a szűrletet vákuumban besűrítjük, így megkapjuk a nyersamidot olaj alakban. A nyersmaradékot flashkromatográfiával tisztítjuk [szilikagél, 2:8 (etil-acetát):ciklohexán], 0,250 g címbeli vegyületet kapunk.
B) lépés: N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil-L-fenilalaninal
Az előzőekben készített hidroxamátból 0,220 g-ot (5 mmol) adunk 10 ml dietil-éterben oldott 0,19 g (0,49 mmol) lítium-aluminium-hidridhez, 0 ’C-on inért atmoszférában. Az elegyet 30 percig keverjük, szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, és 1 órán át keverjük. A fázisokat elválasztjuk, és a szerves fázist mossuk 10 ml telített nátrium-karbonát-oldattal, majd telített nátrium-klorid-oldattal, magnézium-szulfáton szárítjuk, szüljük és vákuumban besűrítjük. így kapjuk a címbeli vegyületet: 0,179 g CBz(L)-Val-Phe-H-t, melyet további tisztítás nélkül használunk fel.
C) lépés: 2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-valil]-amino4,4-difluor-l,7-difenil-3-hidroxi-5-oxo-heptán
0,019 g (0,1 ekv.) titán-tetrakloridot adunk 0,196 g (3 mAtg) aktivált cinknek 3 ml vízmentes THF-nal készített szuszpenziójához, 0 ’C-on. Nitrogéngáz alatt 30 percig keveijük, és hozzáadunk 0,42 g (1,1 mmol) CBz(L)-Val-Phe-H-t, 0,218 g (1,0 mmol) l-klór-1,1difluor-2-oxo-4-fenil-butánt 4 ml vízmentes THF-ban. Hagyjuk felmelegedni a reakcióelegyet szobahőmérsékletre, és 12 órán át keveijük. 2 ml telített ammónium-klorid-oldatot adunk hozzá. Kétszer extraháljuk 4 ml dietil-éterrel, és a szerves tézist sóoldattal mossuk, majd vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. A szerves fázist vákuumban besűrítjük. A nyersmaradékot flashkromatográfiával tisztítjuk [szilikagél, 3:7(etil-acetát): ciklohexán], így 0,381 g címbeli alkoholt kapunk.
D) lépés: 2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-4,4-difluor-l,7-difenil-3,5-dioxo-heptán
0,331 g (4,26 mmol) dimetil-szulfoxidot adunk 0,269 g (2,13 mmol) oxalil-klorid-oldatboz, melyet 2 ml vízmentes metilén-kloriddal készítettünk -55 ’Con nitrogéngáz alatt. 10 percig keveijük az elegyet -55 °C-on, és hozzáadunk a fent készített alkoholból 0,3 g-ot (0,53 mmol) 2 ml vízmentes metilén-kloridban oldva. A reakcióelegyet 2 órán át keveijük ezen a hőmérsékleten, majd hagyjuk felmelegedni -20 ’C-ra. 0,321 g (1,68 mmol) trietil-amint adunk hozzá, és hagyjuk szobahőmérsékletre felmelegedni. Néhány percig még keveijük az elegyet. 10 ml etil-acetáttal felhígítjuk. A szerves fázist 3x3 ml 0,1 mol/1 sósavval és telített vizes ammónium-klorid-oldattal mossuk. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, szűrjük és besűrítjük vákuumban, így 0,22 g nyersterméket kapunk. A nyersanyagot kristályosítással tisztítjuk, és 0,102 g címbeli vegyületet kapunk.
Elemanalízis-adatok:
számított: C: 67,95%, H: 6,24%, N: 4,95%; talált: C: 66,99%, H: 6,15%, N: 5,30%.
2. példa (ref.)
4-[N-(Fenil-propionil)-L-valil]-amino-2,2-difluor3-oxo-5-fenil-N-benzil-pentánamid előállítása [(70) képletű vegyület]
A) lépés: N-(Benzil-oxi-karbonil)-fenil-alaninal
4,19 g CBz(L)-Phe-H aldehidet kapunk úgy, hogy 15,00 g (50 mmol) CBz(L)-Phe-OH-t redukálunk, utá7
HU 221 629 Bl na az az eljárás következik, melyet az 1. példában leírtunk [A) és B) lépés].
B) lépés: 4-(Benzil-oxi-karbonil)-amino-2,2-difluor-3-hidroxi-5-fenil-pentánsav-etil-észter
4,19 g (14,8 mmol) CBz-(L)-Phe-H-t és 6,30 g (31 mmol) etil-bróm-difluor-acetátot 40 ml száraz THF-ban hozzáadjuk egy olyan refluxáló szuszpenzióhoz, mely 2,0 g (31 mAtg) aktivált cinkforgácsot tartalmaz 10 ml száraz THF-ban, és az elegyet gyenge reflux alatt tartjuk. Az oldatot 12 órán keresztül keveijük szobahőmérsékleten. Az elegyhez 100 ml etil-acetátot, 20 ml sóoldatot, 20 ml kálium-hidrogén-szulfátot adunk. A vizes fázist 3x60 ml etil-acetáttal extraháljuk, az extraktumot magnézium-szulfáton szárítjuk és vákuumban besűrítjük. A nyersmaradékot flashkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 3:7 etil-acetát: ciklohexán) és 3,70 g címbeli vegyületet kapunk.
C) lépés: 4-(Benzil-oxi-karbonil)-amino-2,2-difluor-3-hidroxi-5-fenil-N-benzil-pentánamid
1,93 g (18 mmol) benzil-amint 10 ml THF-ban oldunk. Az oldatot hozzáadjuk egy olyan oldathoz, mely 1,42 g (3,5 mmol) etil-észtert tartalmaz 10 ml THFban. Az elegyet 12 órán át keveijük. 100 ml etil-acetátot adunk hozzá, 2x100 ml 0,1 mol/1 vizes sósavval, majd 100 ml vízzel és 100 ml sóoldattal mossuk. Vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. A nyersterméket flashkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 2:8 etil-acetát:ciklohexán), így 1,16 g címbeli vegyületet kapunk.
D) lépés: 4-Amino-2,2-difluor-3-hidroxi-5-fenil-Nbenzil-pentánamid
Az előző lépésben készített amid 0,81 g-ját (1,70 mmol) 0,28 g 10%-os palládium/aktív szén katalizátor 75 ml absz. etanolos szuszpenziójához adjuk. 12 órán át keveijük az elegyet hidrogéngáz atmoszférában atmoszferikus nyomáson. A katalizátort leszűijük, etanollal mossuk, és a szűrletet vákuumban besűrítjük, így 0,5 g címbeli amint kapunk, amely védőcsoportot nem tartalmaz.
E) lépés: 4-[N-(Fenil-propionil)-L-valil]-amino2.2- difluor-3-hidroxi-5-fenil-N-benzil-pentánamid
0,165 g (0,80 mmol) N,N’-diciklohexil-karbodiimidet adunk 0,199 g (0,80 mmol) hidrocinnamoilVal-OH [3-(fenil-propionil)-Val-OH] 15 ml vízmentes acetonitrillel készült oldatához. Az elegyet 1 órán át keveijük 0 °C-on. Az előbb készített aminból 0,210 got (0,80 mmol) adunk a reakcióelegyhez, és 12 órán át keveijük 25 °C-on. Az elegyet szüljük, etil-acetáttal mossuk és a szűrletet vákuumban besűrítjük, és megkapjuk a nyersamidot olaj alakban. A nyersmaradékot flashkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 2:8 etilacetát: ciklohexán), így 0,16 g címbeli vegyületet kapunk.
F) lépés: 4-[N-(Fenil-propionil)-L-valil]-amino2.2- difluor-3-oxo-5-fenil-N-benzil-pentánamid
A fentiekben készített alkoholból 0,145 g-ot (0,25 mmol) 10 ml metilén-kloriddal és 0,055 g (0,75 mmol) terc-butil-alkohollal elegyítünk, és ezt az elegyet hozzáadjuk 0,318 g (0,75 mmol) Dess-Martinreagens metilén-kloridos szuszpenziójához. 12 órán keresztül keveijük az elegyet szobahőmérsékleten, majd vákuumban besűrítjük. A nyersmaradékot flashkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 3:7 etil-acetát :ciklobexán), így 0,063 g címbeli vegyületet kapunk. Elemanalízis-adatok a képletre:
számított: C: 68,19%, H: 6,26%, N: 7,45%;
talált: C: 67,90%, H: 6,30%, N : 7,33%.
3. példa (ref.)
2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-3-(trimetil-szilil)-propanal előállítása [(75) képletű vegyület]
A) lépés: 2-[(Benzil-oxi-karbonil)-amino]-3-(trimetil-szilil)-propánsav-metil-észter
5,58 g (25 mmol) N-(benzil-oxi-karbonil)-glicin-metil-észtert feloldunk 70 ml száraz THF-ban. Ezt az oldatot cseppenként hozzáadjuk -78 °C-on 8,76 ml (62,5 mmol) lítium-diizopropil-amin és 9,43 ml (62,5 mmol) tetrametil-etilén-diamin 100 ml száraz THF-nal készített oldatához, nitrogénatmoszférában. Miután az adagolás befejeződött, az oldatot 2 órán át keveijük -78 °C-on, majd 15 percig -30 °C-on, és lehűtjük -78 °C-ra. 39 ml száraz hexametil-foszfor-amidban oldunk 5,36 g (25 mmol) jód-metil-trimetil-szilánt és cseppenként adagoljuk a kapott szirupos elegyhez. Miután az adagolást befejeztük, a reakcióelegyet felmelegítjük -50 °C-ra, 1 óráig ezen a hőmérsékleten tartjuk és lehűtjük -78 °C-ra, éppen a hidrolízis előtt. A reakcióelegyet kioltjuk víz és ammónium-klorid hozzáadásával és felhígítjuk éterrel. A szerves réteget 1 mol/1 káliumhidrogén-szulfát-oldattal, majd kétszer vízzel mossuk, és nátrium-szulfáton szárítjuk. Az oldószert elpároljuk és a nyert 8,03 g maradékot flashkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, etil-acetát/petroléter: 2/8). 4,30 g címbeli vegyületet kapunk (56%-os hozam, színtelen olaj). Rf=0,51 (etil-acetát/petroléter: 2/8).
B) lépés: 2-Amino-3-(trimetil-szilil)-propánsav-metil-észter-hidroklorid
Az előbbi A lépésből származó termék 0,309 g-ját (1 mmol) 30 ml etanolban oldjuk és az oldatot 1,5 ml sósavval telített száraz dietil-éteiben keveijük szobahőmérsékleten 24 órán át, hidrogénatmoszférában, 0,03 g 10%-os palládium/aktív szén katalizátor jelenlétében. A hidrogénatmoszférát nitrogénatmoszférára cseréljük, és a katalizátort kiszűijük. Az elegyet vákuumban besűrítjük, így megkapjuk a címbeli vegyületet szilárd alakban, ezt úgy ahogy van felhasználjuk a következő lépésben.
C) lépés: 2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-vatil]-amino-3-(trimetil-szilil)-propánsav-metil-észter 0,311 g (1,24 mmol)N-(benzil-oxi-karbonil)-L-valint, 1,167 g (1,24 mmol) 1-hidroxi-benzotriazolhidrátot és 0,255 g (1,24 mmol) N,N’-diciklohexil-karbodiimidet feloldunk 20 ml metilén-kloridban és 3 ml dimetil-formamidban. Keverés közben az oldathoz 0 °C-on egymás után hozzáadunk 0,262 g-ot (1,24 mmol) az előbbi B lépésben nyert aminból és 0,136 ml (1,24 mmol) N-metil-morfolint. A hűtőfurdót eltávolítjuk, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 17 órán át keverjük. Ezután szűrjük a reakcióele8
HU 221 629 Bl gyet, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A 0,476 g maradékot flashkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, petroléter/etil-acetát:8/2; Rf=0,14), így kapjuk a címbeli vegyületet (0,316 g-ot, 77%-os hozam a két lépésre).
D) lépés: 2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-3-(trimetil-szilil)-propanal
Hexánnal készitett 1 mol/1 diizobutil-alumíniumhidrid-oldat 1,55 ml-ét cseppenként hozzáadjuk az előbbi C) lépésben kapott észter oldatához [0,316 g (0,77 mmol) észtert 7,5 ml vízmentes éterben és 3,5 ml vízmentes toluolban oldottunk] -78 °C-on, nitrogénatmoszférában. Az oldatot -78 °C-on 45 percig keverjük, és lassan hidrolizáljuk telített, vizes ammóniumklorid-oldattal. A vizes réteget kétszer extraháljuk (2 χ 20 ml) éterrel, és a szerves fázist szukcesszíve mossuk 10 ml 1 mol/1 kálium-hidrogén-szulfáttal és 20 ml vízzel. Az egyesített szerves fázisokat nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. 0,260 g szilárd maradékot kapunk, melyet flashkromatográfiával tisztítunk (szilikagél, petroléter/etil-acetát :75/25, Rf=0,25), így megkapjuk a címbeli vegyületet 53%-os hozammal (0,15 g).
Az anyagot diklór-metán/pentánból kristályosítjuk, és 0,077 g fehér, gyapotszerű szilárd anyagot kapunk. Elemanalízis-eredmények a Cj^o^C^Si képletre: számított: C: 60,29%, H: 7,99%, N: 7,40%; talált: C: 60,23%, H: 8,10%, N: 7,42%.
4. példa
4-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-2,2-difluor-3-oxo-4-fenil-N-(trimetil-szilil-metil)-pentánamid előállítása [(71) képletű vegyület] 4-(Benzil-oxi-karbonil)-amino-2,2-difluor-3-hidroxi-5-fenil-pentánsav-etil-észtert állítunk elő a 2. példa B) lépésében leírtak szerint.
A) lépés: 4-(Benzil-oxi-karbonil)-amino-2,2-difltíor-3-hidroxi-5-fenil-N-(trimetil-szilii-metil)-pentánamid
A fent említett difluor-alkohol 0,25 g-ját (0,61 mmol) hozzáadjuk 2,5 ml THF-ban lévő 0,81 ml (6,10 mmol) trimetil-szilil-metil-aminhoz. Az elegyet 12 órán át keveijük és visszafolyató hűtő alatt melegítjük. Vákuumban besűrítjük, majd felhígítjuk 5 ml vizes kálium-hidrogén-szulfát-oldattal és 3 χ 5 ml dietil-éterrel extraháljuk. A szerves fázist 2x15 ml vízzel mossuk, majd nátrium-szulfáton szárítjuk. A nyersmaradékot flashkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 25:75 etil-acetát:ciklohexán), így 0,212 g címbeli vegyületet kapunk.
B) lépés: 4-Amino-2,2-difluor-3-hidroxi-5-fenil-N(trimetil-szilil-metil)-pentánamid
0,10 g (0,22 mmol) fentiekben készített amidot egy olyan szuszpenzióhoz adunk, mely 10 ml abszolút etanolban 0,1 g 10%-os palládium/aktív szén katalizátort tartalmaz. Az elegyet 12 órán át atmoszferikus hidrogénnyomás alatt keveijük. A katalizátort kiszűijük, etanollal mossuk és vákuumban besűrítjük, így 0,71 g címbeli amint kapunk, amely védőcsoportot nem tartalmaz.
C) lépés: 4-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-2,2-difluor-3-hidroxi-5-fenil-N-(trimetil-szililmetil)-pentánamid
0,055 g (0,22 mmol) CBz(L)-Val-OH és 0,03 g (0,22 mmol) hidroxi-benzotriazol 10 ml dimetil-formamiddal készült oldatához 0,045 g (0,22 mmol) N,N’-diciklohexil-karbodiimidet adunk. Az elegyet 30 percig keveijük 0 °C-on. A reakcióelegyhez a fent készített aminból 0,073 g-ot (0,22 mmol) adunk és 25 °C-on 12 órán át keveijük a reakcióelegyet. Vizet és sóoldatot adunk hozzá, majd etil-acetáttal extraháljuk, vízzel mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, és besűrítjük. 5 ml acetonitrillel hígítjuk, és leválasztjuk a DCU-t. Szüljük és a szűrletet vákuumban besűrítjük, és megkapjuk a nyersamidot. A nyersmaradékot flashkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, 35:65 etil-acetát:petroléter), így kapunk 0,40 g címbeli vegyületet.
D) lépés: 4-[N-(Benzü-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-2,2-difluor-3-oxo-5-fenil-N-(trimetil-szilil-metil)-pentánamid
0,031 g (0,44 mmol) dimetil-szulfoxidot 1 ml vízmentes metilén-kloridban hozzáadjuk 1 ml metilén-kloridban oldott 0,02 ml (0,22 mmol) oxalil-kloridhoz -60 °C-on. Az elegyet 5 percig -60 °C-on keveijük, és hozzáadjuk a fent készített alkohol 0,041 g-ját (0,07 mmol), melyet 2 ml metilén-kloriddal elegyítettünk. A reakcióelegyet 1 órán át keveijük ezen a hőmérsékleten. 0,09 ml (0,65 mmol) trietil-amint adunk hoz- f zá, és hagyjuk felmelegedni szobahőmérsékletre. Az * elegyet még néhány percig keveijük, majd 10 ml meri- J lén-kloriddal felhígítjuk. A szerves fázist 3x10 ml I mol/1 kálium-hidrogén-szulfáttal és 2 χ 10 ml vízzel j mossuk. A szerves fázist nátrium-szulfáton szárítjuk, fc szűqük és vákuumban besűrítjük, így megkapjuk a | nyersvegyületet. A nyersmaradékot flashkromatográfiá- j val tisztítjuk (etil-acetát: petroléter 25:75, Rf= 0,2), így i nyerünk 0,015 g címbeli vegyületet.
Elemanalízis-eredmények a C31H33N3O5F2.0,25 H2O képletre:
számított: C: 58,93%, H: 6,71%, N: 7,36%;
talált: C: 58,74%, H: 6,72%, N: 7,16%.
5. példa
2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-3-(fenildimetil-szilil)-propanal előállítása [(76) képletű vegyület]
A) lépés: 2-(Terc-butoxi-karbonil)-amino-3-(fenildimetil-szilil)-propánsav-metil-észter
A címbeli észtert 28%-os hozammal állítjuk elő N(terc-butoxi-karbonil)-glicin-metil-észterből és jód-metil-fenil-dimetil-szilánból (81%-os hozammal készítjük a kereskedelemben kapható klór-metil-fenil-dimetil-szilánból) ezt követi a 3. példa A) lépésében leírt eljárás.
Rf=0,23 (szilikagél, etil-acetát/petroléter: 1/9).
B) lépés: 2-Amino-3-(fenil-dimetil-szilán)-propán- ...
sav-metil-észter
Az előbbi A) lépésben kapott 0,92 g (2,73 mmol) ve- 8 gyületet 30 ml hangyasavban oldjuk, az oldatot 2 órán keresztül szobahőmérsékleten tartjuk. Miután a hangya- ' savat vákuumban eltávolítottuk, a maradékot feloldjuk
HU 221 629 BI ml etil-acetátban, 20 ml 1 mol/1 nátrium-karbonáttal extraháljuk és kétszer mossuk vízzel, a vizes fázist még egyszer extraháljuk 20 ml etil-acetáttal. Az egyesített szerves fázisokat nátrium-szulfáton szárítjuk, az oldószert bepároljuk és megkapjuk a címbeli vegyületet (0,64 g-ot) 98%-os hozammal.
C) lépés: 2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-3-(fenil-dimetil-szilil)-propánsav-metil-észter
A címbeli vegyületet az előbbi B) lépésben előállított aminból és N-(benzil-oxi-karbonil)-L-valinból kapjuk a 3. példa C) lépésében leírt kapcsolási módszert alkalmazva, de l-etil-3-(3-dimetil-amino-propil)-karbodiimid-hidrokloridot használunk N,N’-diciklohexil-karbodiimid helyett (74% hozam).
Rf=0,19 (szilikagél, etil-acetát/petroléter: 2/8).
D) lépés: 2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-3-ffeml-ditnetil-szilil)-propanal
A címbeli aldehidet 33%-os hozammal nyerjük az előbbi C lépésben kapott észtéiből, a 3. példa D) lépésében leírt redukciós eljárás szerint.
Rf=0,17 (szilikagél, etil-acetát/petroléter:2/8). Elemanalízis-eredmények a C24H32N2O4Si képletre: számított: C: 65,42%, H: 7,32%, N: 6,36%; talált: C: 65,33%, H: 7,10%, N: 6,26%.
6. példa
2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-3-(vimldimetil-szilil)-propanal [(77) képletű vegyület]
A) lépés: 2-(Terc-butoxi-karbonil)-amino-3-(vinildimetil-szilil)-propánsav-metil-észter
A címben lévő észtert 51%-os hozammal állítjuk elő N-(terc-butoxi-karbonil)-glicin-metil-észterből és jód-metil-vinil-dimetil-szilánból, a 3. példa A) lépésében megadott eljárást követve.
Rf=0,35 (szilikagél, etil-acetát/petroléter: 1/9).
B) lépés: 2-Amino-3-(vmil-dimetil-szilil)-propánsav-metil-észter
A címbeli amint az előbbi A) lépésben előállított származékból kapjuk az 5. példa B) lépésében megadott védőcsoport-eltávolítási eljárással (kvantitatív hozam).
C) lépés: 2-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-3-(vinil-dimetil-szilil)-propánsav-metil-észter
A címbeli vegyületet 68%-os kitermeléssel állítjuk elő az előbbi B) lépésben kapott aminból és N-(benziloxi-karbonil)-L-valinból az 5. példa C) lépésében ismertetett kapcsolási módszert alkalmazva.
Rf-0,22 (szilikagél, etil-acetát/petroléter: 2/8).
MS: MH+=421, MNH4+=438.
D) lépés: 3-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-3-(vinil-dimetil-szilil)-propanal
A címben adott aldehidet megkapjuk az előbbi C) lépésben előállított észterből a 3. példa D) lépésében ismertetett redukciós eljárás szerint.
7. példa
N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil-4-(fenil-karbonilamino)-L-fenil-alaninal előállítása [(83) képletű vegyület]
A) lépés: N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil-4-nitroL-fenil-alamn-metil-észter
4,80 g (10 mmol) Z-L-valin-anhidrid 50 ml vízmentes diklór-metános oldatához 2,24 g (10 mmol) 4-nitroL-fenil-alanin-metil-észtert adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten 1 éjjelen át keveijük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot flashkromatográfíával tisztítjuk (szilikagél, etil-acetát/ciklohexán 4:6) és 2,10 g (56%-os hozam) címbeli vegyületet kapunk. Rf=0,32 (etil-acetát/ciklohexán 1:1)
B) lépés: N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil-4-(fenilkarbonil-ammo)-L-fenil-alanin-metil-észter
0,91 g (2 mmol) N-(benzil-oxi-karbonil)-L-valil-4nitro-L-fenil-alanin-metil-észter, valamint 1,56 g (7 mmol) ón(ü)-klorid-dihidrát 50 ml abszolút etanolos oldatát és 5 ml Ν,Ν-dimetil-fonnamidot 4 órán át hevítünk reflux hőmérsékleten. Az elegyet lehűtjük, és vízzel hígítjuk, nátrium-hidrogén-kaibonáttal semlegesítjük, etil-acetáttal háromszor extraháljuk (3x50 ml). A szerves fázist magnézium-szulfáton szárítjuk. Szűrés és az oldószer bepárlása után a maradékot 20 ml vízmentes diklór-metánban felvesszük és 0 °C-ra hűtjük. 0,202 g (2 mmol) trietil-amint, utána 0,281 g (2 mmol) benzoil-kloridot adunk hozzá. Az elegyet szobahőmérsékleten 1 éjjelen át keveijük. Az oldószert eltávolítjuk vákuumban, és a maradékot flashkromatográfíával tisztítjuk (szilikagél, diklór-metán/metanol 98:2) és 0,500 g (50%-os hozam) címbeli vegyületet kapunk.
C) lépés: N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil-4-(femlkarbonil-amino)-L-fenil-alanin
0,500 g (0,94 mmol) N-(benzil-oxi-karbonil)-Lvalil-4-(fenil-karbonil-ammo)-L-fenil-alanin-metil-észtert 30 ml dioxánban oldunk. Az oldathoz 0,084 g (2 mmol) lítium-hidroxid-monohidrátot adunk 10 ml vízben oldva. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten keveijük 1 éjjelen át. Az elegyet 20 ml vízben felvesszük és kétszer mossuk etil-acetáttal (2 χ 20 ml). A szerves tézist pH«2 értékig 1 mol/1 sósavval megsavanyítjuk, és etil-acetáttal háromszor extraháljuk. A szerves tézist vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. Az elegyet szűrjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, így 0,400 g címbeli vegyületet kapunk fehér, szilárd anyagként (82%-os hozam).
MS:[MH]+=518 [MNH4]+=535
D) lépés: N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil-4-(fenilkarbonil-amino)-L-fenil-alanin-N,O-dimetil-hidroxamát
0,390 g (0,75 mmol) N-(benzil-oxi-karbonil)-Lvalil-4-(fenil-karbonil-amin)-L-fenil-alanint feloldunk 5 ml vízmentes Ν,Ν-dimetil-formamidban és 15 ml vízmentes diklór-metánban. Az oldathoz 0 °C-on 0,155 g (0,75 mmol) Ν,Ν’-diciklohexil-karbodiimidet és 0,115 g (0,75 mmol) hidroxi-benzotriazolt adunk. 10 percig tartó keverés után 0,073 g (0,75 mmol) N,Odimetil-hidroxamát-klórhidrátot és 0,076 g (0,75 mmol) N-metil-morfolint adunk hozzá. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 1 éjjelen át keveijük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot etil-acetátban felvesszük, majd szűqük. A szűrletet bepároljuk, és a maradékot flashkromatográfíával tisztítjuk (szilikagél, diklór-metán/metanol 98:2), így kapunk 0,230 g (53%-os hozam) címbeli vegyületet.
HU 221 629 Bl
Rf=0,59 (CH2Cl2/MeOH 9:1)
MS: [MH]+=561 [MNH]+=578
E) lépés: N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil-4-(fenilkarboml-amino)-L-fenil-alaninal
0,230 g (0,41 mmol) N-(benzil-oxi-karbonil)-Lvalil-4-(fenil-karbonil-amino)-L-fenil-alanin-N,Odimetil-hidroxamátot 10 ml vízmentes dietil-éterben és 5 ml vízmentes THF-ban oldunk. Az oldathoz 0 °C-on 0,017 g (0,45 mmol) lítium-alumínium-hidridet adunk. A reakcióelegyet 0 °C-on 1 órán át keverjük. 5 ml 1 mol/l-es kálium-hidrogénszulfát-oldatot adunk hozzá, és az elegyet háromszor extraháljuk etil-acetáttal (3 χ 15 ml). A szerves fázist 1 mol/1 sósavval, vízzel és sóoldattal mossuk és vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. Miután az oldószert vákuumban eltávolítottuk, a maradékot flashkromatográfíával tisztítjuk (szilikagél, diklór-metán/metanol 98:2), 0,050 g (25%-os hozam) címbeli vegyületet kapunk.
Rf=0,43 (CH2Cl2/MeOH 9:1)
MS: [MH]+=502 [MNH4]+=519
8. példa
4-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-terc-leucil]-amino2,2-difluor-3-oxo-5-fenil-N-(trimetil-szilil-metil)pentánamid előállítása [(88) képletű vegyület]
A) lépés: 4-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-terc-leucil]-amino-2,2-difluor-3-hidroxi-5-fenil-N-(trimetil-szilil-metil)-pentánamid
A 4. példa B) lépésében leírt amin 0,222 g-ját (0,5 mmol) (trifluor-ecetsavas sójaként állítottuk elő), 115 μΐ (1,05 mmol) N-metil-morfolin és 0,56 g (1,1 mmol) karbobenzoxi-L-terc-leucil-anhidrid (előzetesen in situ állítjuk elő a savból és Ν,Ν’-diciklohexilkarbodiimidből 3 ml dimetil-fonnamidban) elegyét 1 éjjelen át keveijük szobahőmérsékleten. Az elegyet etilacetáttal hígítjuk, kétszer mossuk vízzel és a vizes fázist vákuumban besűrítjük. A nyersmaradékot flashkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, etil-acetát/petroléter 3:7) így 0,15 g címbeli alkoholt kapunk (52% hozam). Rf=0,69 (etil-acetát/petroléter 4:6).
B) lépés: 4-[N-(Benzil-axi-karbonil)-L-terc-leucil]-amino-2,2-difluor-3-oxo-5-fenil-N-(trimetil-szilil-metil)-pentánamid
A címbeli ketont az előbbi A) lépésben kapott alkoholból készítjük 69%-os hozammal, a Swem-féle oxidációs eljárást alkalmazva, melyet a 4. példa D) lépésében leírtunk.
1^=0,30 (etil-acetát/petroléter 3:7)
Elemanalízis-adatok a C29H39F2N3O5Si.0,5H2O képletre: számított: C: 59,57%, H: 6,90%, N: 7,19%;
talált: C: 59,65%, H: 6,89%, N: 7,00%.
9. példa
6-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-4,4-difluor-l-fenil-7-metil-3,5-dioxo-oktán előállítása [(89) képletű vegyület]
A) lépés: Benzil-oxi-karbonil-L-valil-valinal
A címbeli aldehidet 43%-os hozammal állítjuk elő N-(benzil-oxi-karbonil)-L-valil-L-valin-etil-észterből, a 3. példa D) lépésében leírt redukciós módszenei.
Rf=0,25 (szilikagél, etil-acetát/petroléter 3:7)
MS: MH+=335, MNH4+=352.
B) lépés: 6-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-4,4-difluor-l-fenil-7-metil-8-hidroxi-3-oxo-oktán
A címbeli difluor-alkoholt 39%-os hozammal kapjuk az előbbi A lépésben előállított aldehidből és 1klór-l,l-difluor-2-oxo-4-fenil-butánból, az 1. példa C) lépésében leírt eljárást követve.
Rf=0,43 (szilikagél, etil-acetát:petroléter 3:7). MS:MH+=519, MNR,+=536.
Elemanalízis-adatok a C2gH36F2N2O5 képletre: számított: C: 64,85%, H: 7,00%, N: 5,40%; talált: C: 65,11%, H: 7,25%, N: 5,27%.
C) lépés: 6-[N-(Benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-4,4-difluor-l-fenil-7-metiI-3,5-dioxo-oktán
A címbeli diketont megkapjuk az előbbi B) lépésben előállított alkoholból, Swem-oxidációval, melyet a 4. példa D) pontjában írtunk le (34%-os hozam). Rf=0,31 (szilikagél, etil-acetát/petroléter 2:8) MS:MH+=517, MNH4 +=534.
Elemanalízis-adatok a C^H^^Os képletre: számított: C: 65,10%, H: 6,63%, N: 5,42%; talált: C: 65,22%, H: 6,90%, N: 5,05%.
10. példa
A találmány szerinti vegyületek azon aktivitását, hogy megelőzik vagy csökkentik a β-amiloid plakkok akkumulációját, és így a vegyületek alkalmazhatóságát az Alzheimer-típusú senilis dementia kezelésére, és más olyan állapotok kezelésére, amelyekről ismertek, hogy β-amiloid plakk-képződéssel járnak - ilyen a Down-szindróma - számos olyan in vitro és in vivő kísérlettel mutathatjuk be, amellyel a β-amiloid plakkok képződését modellezzük. így például a találmány szerinti vegyületeknek azt a képességét, hogy megelőzik vagy csökkentik a β-amiloid plakkok akkumulációját, számos celluláris és sejtmentes in vitro eljárással mutathatjuk ki, amelyeket az 1-3. meghatározásokként a következőkben ismertetünk. Ezek a mérések azon a tényen alapulnak, hogy a natív β-ΑΡΡ-t minden sejt kifejezi és processzálja 11-12 KDa C-terminális fragmensek és β-amiloid termelésére. A β-ΑΡΡ expresszió endogén szintjét kívánt esetben növelni lehet úgy, hogy βΑΡΡ cDNS-szekvenciákat, például β-ΑΡΡ(751)-ί transzfektálunk a sejtekbe standardmódszerek alkalmazásával.
Az alábbiakban ismertetésre kerülő in vitro vizsgálatok alkalmazásával meghatároztuk néhány, találmány szerinti vegyületnek a katepszin D enzim gátlására vonatkozó ICjo-értékétí és az eredményeket a következő táblázatban foglaltuk össze.
ic50
4. példa szerinti vegyület 2,1 χ 10~s
7. példa szerinti vegyület 5,0 χ 10-4
8. példa szerinti vegyület 3,8 χ 10~8
Az IC50-értékeket tehát in vitro körülmények között mértük, oly módon, hogy borjúlépből nyert, a kereskedelemben kapható enzimet és hemoglobinszubsztrátot használtunk.
HU 221 629 Bl
In vitro vizsgálatok
1. meghatározás: Immunlecsapás
Sejtek: CHO-K1 [kínaihörcsög-petefészek (Chinese Hamster Ovaiy); ATCC-eredetű] sejtvonalat stabilan transzfektálunk, hogy nagy mennyiségű β-ΑΡΡ-695-öt fejezzünk ki, és ez „CP-6-36” elnevezéssel szolgál inhibitorok szkrinelésére. Más emlős tenyésztett sejtvonalakat is használhatunk és használtunk már. Például az SKN-MC (ATCC eredetű) humánidegsejt-sejtvonal jó eredményeket ad azonos meghatározási körülmények között. A β-ΑΡΡ-695-tel végzett transzfekciő nem feltétele a βΑΦ-ίβπηβΙέβηβ^ csupán megnöveli a βΑ4 szignált. Kísérleti célra való előkészítés során a CP-6-36 sejteket kis sejtsűrűséggel 10 cm-es (Petri)-csészékbe oltjuk és 2-4 napon át tenyésztjük egybefüggő monolayerré (~1,5 χ 10~7 sejt/csésze) 37 °C (5% CO2 inkubátorban; a tápoldat összetétele DMEM 21/Coon’s F12 (1:1)+10% FBS fetális borjúsavó)+50 U/ml penicillin+50 pg/ml sztreptomicin.
Kezelés: Minden vegyületet kezdeti lépésként CP6-36 sejteken szűrünk 200 μΜ dózisban. A vizsgálatot megelőzően mindegyik vizsgálandó vegyületből 20 mM törzsoldatot készítünk oldószerként sejtkultúratisztaságú DMSO-t használva. Mindegyik 20 mM törzsoldatot ezután 100-szorosára hígítjuk olyan szérummentes EMEM-médiumban, amely nem tartalmaz tisztein és metionin aminosavakat („Cys-/Met-EMEM”), így a tápoldatban (médiumban) a vegyület végső koncentrációja 200 μΜ lesz. A kísérlet kezdetén a sejteket „kiéheztetjük” ciszteinre és metioninra úgy, hogy a sejtmonolayereket 3-szor mossuk 3 ml/Petri-csésze Cys-/MetEMEM-mel, majd inkubáljuk (37 °C/5% CO2) csészékként 3 ml azonos médiummal 15 percen át. Ezt a médiumot leszívatjuk a csészékről, majd az egyes vegyületeket 200 μΜ koncentrációban tartalmazó tápoldatokat adunk a tenyészethez csészékként 3 ml mennyiségben. Ezeket a lemezeket (Petri-csészéket) és egy „kontroll”csészét (3 ml/csésze Cys-/Met-EMEM, amely 1% DMSO-t tartalmaz, de vegyületet nem tartalmaz), a fentiek szerint 15 percig inkubáljuk. Ezt a tápoldatot (médiumot) leszívatjuk, majd mindegyik csészéhez további, az előző lépésben használt médiumot adunk, amely ezúttal ~150 pCi/ml 35S-transz jelzőt (35S-jelzett ciszteint és metionint) tartalmaz. A sejteket a fentiek szerint 4 órán át inkubáljuk.
A tenyészet összegyűjtése: A 4 órás jelzési periódus végén a sejteket megfigyeljük mikroszkóp alatt általános megjelenésük szempontjából, valamint a vegyületek összes (gross) toxikus hatásának ellenőrzése céljából, ami után a sejteket tartalmazó csészéket jégre helyezzük. A kondicionált közeget mindegyik csészéből 15 ml-es, kónuszos, csavarmentes kupakú csövekbe visszük át, 10 percen át centrifugáljuk 2000 rpm-en, és egy sorozat hasonló csőbe visszük át, így minden pelletált sejt visszamarad. A jelzett sejtmonolayereket ezután háromszor mossuk 2 ml/csésze foszfátpufferes sóoldattal (PBS), majd 1 ml olyan puffért adunk mindegyik csészéhez, amely elősegíti a sejtek roncsolását (lízisét) (5% Triton X-114; 20 mM trisz, pH=7,5; 300 mM NaCl; proteázinhibitorok), és ezt követően percig jégen inkubáljuk ezeket a mintákat. A sejtlizátumokat lekaparjuk a csészékről, és 1,5 ml-es mikrofügacsövekbe visszük át. A lizátumokat ezután 4 percig nagyfrekvenciás hanggal kezeljük jégen, nagy sebességgel centrifugáljuk 10 percen át egy mikrocentrifugában (mikrofügában) majd 15 ml-es kónuszos, csavaros fedelű csövekbe visszük át, így visszamarad a sejtmaradványok pelletje.
Immunlecsapás: Az immunlecsapásra való előkészítés során az előbbiek szerint összegyűjtött lizátumokat 5 ml 1 xRIPA-pufferban (10 mM trisz, pH=80; 150 mM NaCl; 0,125% NaN3; 1% Triton X-100; 1% dezoxikolát; 0,1 SDS) oldjuk; a kondicionált médium (tápoldat)-mintákkal hígítás nélkül végzünk immunlecsapást. Mind a kondicionált médiumokat, mind a lizátumokat először előderitjük úgy, hogy minden mintához 5 μΐ normál nyúlszérumot adunk, a mintákat szobahőmérsékleten rázzuk (himbáljuk), majd RIPA-pufferral készült, 100 μΐ 10%-ós protein A-Sepharose (PÁS) oldatot adunk hozzájuk, és szobahőmérsékleten 1,5 órán át rázzuk (himbáljuk) azokat. A mintákat ezután 3000 rpm-en centrifugáljuk, és a felülúszókat új 15 ml-es csövekbe visszük át. Az előderített lizátumokkal ezután immunlecsapást végzünk úgy, hogy mindegyik csőhöz 30 μΐ olyan antitestet adunk, amely felismeri a β-ΑΡΡ kaiboxiterminusát, a mintákat szobahőmérsékleten 10 percig rázzuk, ezután hozzáadunk 100 μΐ 10%-os PAS-t és szobahőmérsékleten 1,5 órán át rázzuk a mintákat. Az előderített médiummintákkal azonos módon végzünk immunlecsapást, azonban a karboxiterminusra irányuló antitest helyett 45 μΐ olyan antitestet használunk, amely a βΑ4-βί ismeri fel. Ezután minden mintát 1 percig centrifugálunk 3000 rpm-en, így pelletáljuk a PAS-antitest-komplexeket, és a kapott pelletet alaposan mossuk; négyszer nagy sótartalmú pufferral (50 mmol/1 trisz, pH=7,5; 500 mmol/1 NaCl; 5 mM EDTA; 0,5% Nonidet P-40), majd kétszer 10 mmol/l-es trisz pufferral (pH=7,5).
Gélelektroforézis: A kimosott pelleteket 5 percen át forraljuk 50 μΐ 2xLaemmli géltöltő (gél loading) pufféiban. Ezeket a mintákat, valamint a molekulatömegmarkereket rátöltjük egy 16,5%-os SDS-poliakrilamid gélre trisz/Tricine rezervoár pufferokkal. Elektroforézist végzünk 90V-on -18-20 órán át, 20% metanol/20% ecetsav elegyben rögzítjük, majd szűrőpapíron szárítjuk a mintákat 65 °C-on, 2 órán át. Autoradiográfiával tesszük láthatóvá az eredményt.
Analízis: Az eredményeket az autoradiogram analízisével kapjuk meg. Pozitív hatóanyag egy olyan vegyület, amely gátolja a 4 kDa βΑ4 fehérjesávot a kontrolimintához viszonyítva, ezen felül némelyik növelheti a 9-12 kDa C-terminális fehéijesávok szintjét a kontrolimintához viszonyítva. A pA4-gátlást vagy a C-terminális sávok növelését a sávok denzitometriás értékelésével határozhatjuk meg mennyiségileg úgy, hogy a mérést kontrollsávokra vonatkoztatva normalizáljuk. Negatív hatóanyag az olyan vegyület, amely nem okoz változást a 4kDa βΑ4 vagy 9-12 kDa C-terminális fehéijesávok hozamában a kontrollminta sávjához viszonyítva.
HU 221 629 Bl
További vizsgálat: Ha megállapítottuk, hogy egy vegyület aktív (vagyis a gélanalízissel kimutattuk a 4 kDa βΑ4 lényeges gátlását az azt kísérő C-terminális fragmensnövekedéssel), akkor dózis-válasz kísérletet végzünk, hogy meghatározzuk azt a legkisebb dózist, ami a fenti hatás megnyilvánulásához szükséges. Tipikusan 12,5-300 mol/1 dózistartományt vizsgálunk, és e dózisváltoztatástól eltekintve a kísérletet ugyanúgy folytatjuk le, amint azt az előbbiekben ismertettük. Ha egy vegyületnél csak gyenge hatást tapasztaltunk vagy egyáltalán nem találtunk hatást, a kísérletet nagyobb dózisokkal, tipikusan 400 pmol/l dózissal megismételjük. Ha egy vegyületet toxikusnak találtunk (vagyis a sejtek nem látszanak egészségesnek mikroszkópos megfigyeléssel, vagy úgy találjuk, hogy a lizátumok nem jelződtek jól a gélanalízis után), a vegyületet kisebb dózisokkal, például 25, 50 és 100 pmol/l dózisokkal újra teszteljük, hogy megállapítsuk a vegyület hatását nem toxikus dózisok esetén.
2. meghatározás: Radioimmunoassay
Médiumok készítése és Sepak-koncentrálása RIA céljára:
Tenyésztett emlőssejtek, úgymint kínaihörcsögpetefészek- (CHO) sejtek vagy humán neuron SK-N-MC sejtek β-amiloidot termelnek, és ezt a peptidet a tápközegbe választják ki. Ha a sejteket a β-amiloid-képződés potenciális inhibitoraival kezeljük, a kezelt sejtek tápközegében nem mutathatunk ki oldható β-amiloidot. Úgy mint az 1. meghatározásnál, az inhibitorvegyületek változó dózisait tesztelhetjük, 200 μΜ dózissal kezdve. A CHO-sejtek esetén mind a vad típusúak, mind a βΑΡΡ-695-tel transzfektáltak esetén 10 cm-es lemezeket inkubálunk 2 ml szérummentes EMEM-ben 4-6 órán át, 37 °C-on a vizsgálandó inhibitor vegyület jelenlétében vagy távollétében. A tápoldatot eltávolítjuk és 10 percen át centrifugáljuk 1500 rpm-en (Sorvall RT 6000 B), hogy eltávolítsunk minden sejtet/sejtmaradványt. A tápoldatot vagy azonnal felhasználjuk vagy -20 °C-on tároljuk.
A Sepak C18 lépést azért végezzük el, hogy eltóvolítsuk a sókat és más nemkívánatos szennyezőket, továbbá töményítsük a β-amiloid peptideket. 2 ml tópoldatmintát bocsátunk át egy Cl 8 Sepak tölteten, és a töltetet (cartridge) 2 ml 5%-os CH3CN-ben (0,1%-os TFA-ban) mossuk. Az átbocsátott anyagot és az 5%-os CH3CN mosófolyadékot eldobjuk. A töltetet 2 ml 25%os CH3CN-nel (0,1 %-os TFA-ban), majd 2 ml 50%-os CH3CN-nel (0,1%-os TFA-ban) eluáljuk. Mindkét eluátumot összegyűjtjük és gyorsbepárlóban (speedvac) szárítjuk, majd 125 μ1-250 μΐ 10% izopropanolt tartalmazó vízzel felvesszük RIA-meghatározás céljára. A 25%-os CH3CN frakció tartalmazza a tápoldatból származó fenolvörös legnagyobb részét, de nem tartalmaz β-anúloid peptidet. Az 50%-os CH3CN-nel kapott frakció tartalmazza a β-amiloid peptideket.
I25I-jelzett β-amiloid 1-40 előállítása és HPLC tisztítása:
pg szintetikus β-amiloid 1-40-et jelzünk 1 mCi 125I-dal klóramin T módszerrel. A reakciót szobahőmérsékleten végezzük. Eppendorf-csőben 10 pl 125I-ot (1 mCi NaOH-oldatban) adunk 10 pl β-amiloid 1-40hez (1 ml/ml 20%-os izopropanolban) és 80 pl Na-foszfátot pH=7,4 értéken, és a komponenseket összekeverjük. A reakciót 30 pl klóramin T (1 mg/ml, 0,1 mol/1 foszfátban, pH=7,4) hozzáadásával indítjuk meg, az elegyet összekeverjük, és 1 percig inkubáljuk. A reakciót 50 pl Na-metabiszulfit (2 mg/ml, 0,1 mol/1 foszfát, pH=7,4) adagolásával állítjuk le.
A reakcióelegyet (280 μΐ) azonos térfogatú vízzel felhígítjuk, és Sepak C18 tölteten engedjük át, hogy elválasszuk a jelzett peptidet. A Sepak töltetet kétszer mossuk 5%-os CH3CN-nel (1-1 ml), majd háromszor eluáljuk 50%-os CH3CN-nel (1-1 ml), és újból kétszer mossuk 95%-os CH3CN-ben (1-1 ml). Majdnem az összes jelzett peptid eluálódik az első 50%-os CH3CNnel végzett elúció során. Ezt az eluátumot -70 °C-on toroljuk, és HPLC-vel tisztítjuk a RIA-meghatározás követelményeinek megfelelően.
A jelzett peptidet fordított bázisú HPLC-vel tisztítjuk C8 oszlopon (cartridge-on) (4,6 mmx 3 cm, Brownlee). Az oszlopot 0,1%-os TFA-ban lévő 5%-45% CH3CN lineáris gradienselúcióval működtetjük 30 percig 0,5 ml/min áramlási sebességgel. 0,5 ml-es frakciókat gyűjtünk és számláljuk azokat. A jelzett peptidet tartalmazó csúcsfrakciót -20 °C-on tároljuk, és 3 napon belül felhasználjuk RIA-meghatározásra.
Radioimmunoassay: A RIA-mérésekben a következő pufferokat használjuk: 1. RIA-puffer, összetétele 0,lM Na-foszfát, pH=7,4, amely 0,1% BSA-t és 0,1% Triton-X-100-at tartalmaz; 2. mintapuffer: 10% izopropanol vízben; 3. tracer puffer: 0,2M Na-foszfát, pH=7,4, amely 0,1% BSA-t és 0,1% Triton-X-100-at tartalmaz. A β-amiloid-specifíkus antitesteket hígításokban használjuk, ahol a jelzett peptidnek körülbelül 30%-a van megkötve a versengő ligandum távollétében. Az antitesthígításokat RIA-pufferral készítjük. A RIA-ban felhasznált antitestek három különböző szérumot foglalnak magukban, amelyeket humán βamiloid 1-40 szintetikus peptiddel szemben termeltünk (BA#1, BA#2 és 6514). A BA#l-et 1/900, a BA#2-t 1/1600 és a 6514-et 1/2500 hígításban használjuk. A HPLC-vel tisztított jelzett peptidet tracer puffetban oldjuk úgy, hogy 50 μΐ-nek 7000 és 9000 cpm közötti legyen az aktivitása. Teljes kiszorítást végzünk nagy koncentrációjú (2,5 μτηοΐ/ΐ) β-amiloid 1-40 jelenlétében. A β-amiloid 1-40 standardokat mintapufferral készítjük. A meghatározási térfogat 200 μΐ. A komponenseket a következő sorrendben adagoljuk:
100 μΐ Ab (antitest) RIA-pufferban 50 μΐ ismeretlen minta vagy standard, vagy TD mintapufferban μΐ jelzett peptid (7000-9000 cpm tracer pufferban).
A mintákat összekeveijük és egy éjjelen át 4 °C-on inkubáljuk. A kötött aktivitásnak (count) a szabad aktivitástól való elválasztása céljából a meghatározást polietilénglikollal (PEG) állítjuk le. Mindegyik mérőcsőhöz 50 μΐ normál nyúlszérumot adunk, majd 800 μΐ PEG-et (Mw 6000-8000, 15,8% RIA pufferban). A mintákat 10 percig inkubáljuk 4°-on, majd 3200 rpm-en 20 percen
HU 221 629 Bl át inkubáljuk (Sorvall, RT600 B). A felülúszót leszívatjuk, és a pellet aktivitását gamma-számlálóval méljük.
Értékelés: Az antitestmegkötésből származó eredményeket a jelzett β-amiloid tracer kiszorítása alapján értelmezzük. Pozitív az az eredmény, amely esetén nem figyelhető meg a tracer kiszorítása, vagyis a médium nem tartalmaz kiválasztott (szekretált) β-amiloidot, ami azt jelzi, hogy a vizsgált vegyület hatékonyan gátolja a β-amiloid-termelést. Negatív az az eredmény, amelyben megfigyelhető a tracer kiszorítása antitestkötés miatt, és ekvivalens a kezeletlen kontrollsejtekkel.
Enzimimmunoassay-t (ELISA, enzimhez kötött immunoszendvics assay) ugyancsak alkalmazhatunk az aktív vegyületek azonosítására. β-Amiloid fehérjét termelő emlőssejteket (úgymint CHO CP-6 vagy SK.-NMC sejteket) tenyésztünk, majd az 1. meghatárosban leírt vegyületekkel kezelünk azzal a különbséggel, hogy a sejtfehérje radioaktív jelzését elhagyjuk. A kezelt sejtkultúrákból kondicionált médiumot gyűjtünk, és kis fordulatszámon végzett centrifügálással megtisztítjuk a sejtmaradványoktól. A kondicionált médiumot ezután 96 mérőhelyes ELISA mérőlapon vizsgáljuk βamiloid-specifíkus antitestek alkalmazásával. Egy βamiloid antitest befogóreagensként szolgál a médiummintában jelen lévő β-amiloid számára, egy második β-amiloid-specifikus antitest, amely egy eltérő epitópot ismer fel a β-amiloid fehéijék, a detektorkomplex egy komponenseként szolgál. A második β-amiloid antitestet biotinnal konjugáljuk, amit streptavidinnal lehet kimutatni. Egy harmadik antitestet - ami torma-peroxidázhoz van kapcsolva - használunk fel a β-amiloid: antitest :streptavidin komplex kimutatására. Orto-feniléndiamin-szubsztrát, valamint H2O2 és citrát-foszfát pH=5,0 hozzáadásával biztosítjuk a peroxidázaktivitást, amit mennyiségileg úgy határozunk meg, hogy méijük az elegy kolorimetriás változását OD 490 nm értéken. Tipikus esetben minden tápközeg (médium)mintából háromszoros hígitási sorozatot készítünk a 96 mérőhelyes lemezen, valamint egy standard, szintetikus β-amiloid 1-40 fehéijéét. Pozitív eredményt akkor kapunk, ha csekély reaktivitást figyelünk meg vagy nem tapasztalunk reaktivitást (vagyis abszorbanciát OD 490 nm-nél), tehát nincs jelen β-amiloid fehéije a tápközegmintában, a vizsgált vegyület gátló hatása következtében. Részlegesen aktív inhibitorok mutatnak némi abszorbanciát OD 490 nm-nél, de ez nem ekvivalens a kezeletlen sejtekből nyert kontroll médiummintákéval. Pontos mennyiségi meghatározást végezhetünk, ha a mintákkal nyert adatokat a standardéval összehasonlítjuk.
In vivő vizsgálatok
A találmány szerinti vegyületek azon aktivitását, hogy megelőzik vagy csökkentik a β-amiloid plakkok felhalmozódását, kimutathatjuk, a β-amiloid plakk akkumuláció transzgenikus modelljeiben (például transzgenikus egérben vagy transzgenikus patkányban), valamint kutyamodellben, amelyben természetes, a βamiloid plakk-képződésre genetikailag hajlamos kutyákat használunk fel. Olyan transzgenikus egereket, amelyek felülmúlják a humán β-ΑΡΡ (751) vagy β-ΑΡΡ (770) kifejezését a neuronsejtekben, és az Alzheimerkórral összefüggő hisztopatológiát mutatnak, például a PCT/US91/04447 számú szabadalmi bejelentés ismertet. Ilyen állatmodellekben a β-amiloid plakk-képződéssel együtt járó bisztopatológia és/vagy szimptómák, úgymint az emlékezetvesztés csökkenése használható fel annak bemutatására, hogy a vegyületek képesek kezelni az olyan terápiás állapotokat, amelyek a βamiloid plakkok képződéséből származnak, úgymint az Alzheimer-kórt és a Down-szindrómával együtt járó emlékezetgyengülést.
Minthogy a hisztopatológia a transzgenikus egérben gyakoribb az állat idősebb korában, két hónapos egereket kívánatos felhasználnunk. A két hónapos állatokban minimális a patológiás elváltozás, amely az idővel növekedik az inhibitorszer távollétében. Az egerek egy csoportja (n= 12) csak vehikulumot kap; egy második csoport (n=12) kis dózisú szert, egy harmadik csoport (n=12) mérsékelt dózist; és a negyedik csoport (n=12) nagy dózist. A dózist az előbbi meghatározások alapján határoztuk meg a testtömeg, a vegyület felezési ideje, stb. figyelembevételével. Ideális esetben az egereket több hónapon át kezeljük. A vegyületeket beadhatjuk injekcióban, orális úton, nyújtott hatású implantátumban, stb. amint azt a vegyületprofil megszabja. A kezelés értékelését immunhisztokémiai eljárások alkalmazásával végezzük: β-amiloid immunreaktív depozitumok gyakoriságát határozzuk meg az agy 4 coronalis középső (midline) szekciójában úgy, hogy a bemetszéseket olyan személy teszi meg, aki nem ismeri a kísérleti kezelést. A patológiás elváltozás egy másik megnyilvánulását, az Alz50 immunreaktivitást, ugyancsak meghatározzuk az előfordulás gyakoriságára nézve, azonos számú agyszövetdarabot használva fel minden egérből. A gyógyszerhatás pozitív eredménye, ha e két patológiás marker egyáltalán nem vagy kisebb gyakorisággal fordul elő. Pszichológiai és/vagy viselkedési megfelelés, ami egyedülálló a β-amiloid transzgenikus egérre nézve, szintén felhasználható a gyógyszerbatás kimutatására.
A szakirodalomban beszámoltak arról, hogy bizonyos kutyafajtáknál ugyancsak előfordultak β-amiloidfelhalmozódások [Giaccone et al., Neuroscience Letters, 114, 178-183 (1990)], továbbá idős, nem humán főemlősöknél szintén kimutattak β-amiloid patológiás jelenséget, valamint az emlékezet romlását [Cork et al., American Journal of Pathology, 137, 1383-1392 (1990); Podlisny et al., American Journal of Pathology, 138, 1423-1425 (1991)]. A kutyákkal és a nem humán főemlősökkel végzett vizsgálatok némileg eltérő kísérleti tervezés szerint folytak le úgy, hogy a gyógyszert hosszabb időn át adagolták.
Valamely (IB) általános képletű vegyület vagy egynél több (IB) általános képletű vegyület elegyének bármely hatékony mennyiségét beadhatjuk a páciensnek abból a célból, hogy megelőzzük β-amiloid plakkok abnormis lerakódását, és olyan betegséget vagy állapotot kezeljünk, amely velejárója a β-amiloid plakk abnormis lerakódásának, mint amilyen az Alzheimer-típusú
HU 221 629 Bl senilis dementia vagy a Down-szindróma. A β-amiloid plakk abnormis lerakódásának megelőzésére, és az Alzheimer-típusú senilis dementia vagy a Downszindróma kezelésére alkalmas specifikus dózisok olyan faktoroktól függenek, mint a páciens tömege, típusa és kora, valamint a betegség vagy állapot súlyossága, mindezen faktorok szokásosan ismertek a beteget kezelő orvos számára, aki figyelembe veszi azokat. A vegyületeket általában 0,2-20 mg/testtömeg-kg, előnyösen 0,5-5 mg/testtömeg-kg dózisban adjuk be. A vegyületeket beadhatjuk egyszeri vagy többszörös dózisegységekben, amelyek 25 mg-250 mg (I) általános képletű vegyületet tartalmaznak.
Orális adagolás céljára a vegyületeket szilárd vagy folyékony készítményekké formulálhatjuk, igy kapszulákká, pilulákká, tablettákká, pasztillákká, porokká, oldatokká, szuszpenziókká vagy emulziókká. A szilárd egységdózis lehet kapszula, amely szokásos zselatin típusú leheL és amely tartalmaz például lubrikánsokat és inért töltőanyagokat, úgymint laktózt, szacharózt vagy kukoricakeményítőt. Egy másik kivitelben az (I) általános képletű vegyületeket szokásos tabletta-alapanyagokkal, úgymint laktózzal, szacharózzal és kukoricakeményítőval, kötőanyagokkal, úgymint akácmézgával, kukoricakeményítővel vagy zselatinnal, szétesést elősegítő szerekkel, úgymint burgonyakeményítővel vagy alginsawal, továbbá lubrikánsokkal, úgymint sztearinsawal vagy magnézium-sztearáttal együtt tablettázhatjuk.
Parenterális adagolási módban a vegyületeket beadhatjuk oldataik vagy szuszpenzióik injektálható dózisaiként, amikor is a vegyületeket fiziológiailag elfogadható hígítószerben oldjuk vagy szuszpendáljuk gyógyszerészeti vivőanyaggal együtt, amely lehet steril folyadék, úgymint a víz, alkoholok, olajok és más elfogadható szerves oldószerek, felületaktív anyagok, más gyógyszerészetileg elfogadható adjuvánsokkal vagy azok nélkül. A találmány szerinti készítményekben felhasználható olajokra példák az ásványi, állati, növényi vagy szintetikus eredetű olajok, például a földimogyoró-olaj, szójaolaj, és ásványi olaj. Előnyös folyékony hordozóanyagok, különösen injektálható oldatok céljaira, általában a víz, sóoldat, vizes szacharóz és hasonló cukoroldatok, az etanol és glikolok, úgymint a propilénglikol vagy polietilénglikol vagy a 2-pirrolidon.
A vegyületeket beadhatjuk depó injekció vagy olyan cerebrális implantátum formájában, amely úgy van formuláivá, hogy lehetővé teszi a hatóanyag elnyújtott felszabadulását A hatóanyagot pelletekké vagy kicsiny hengerekké préselhetjük, és beültethetjük szubkután, intramuszkulárisan, intracerebrálisan depó injekciók vagy implantátumok formájában. Az implantátumokhoz inért anyagot, úgymint biológiailag lebontható polimereket vagy szintetikus szilikonokat, például Silastic®-t, a Dow Corning Corp. által gyártott szilikongumit alkalmazhatunk.
A találmány szerinti vegyületeket beadhatjuk topikálisan is. Ezt úgy végezhetjük, hogy egyszerűen oldatot készítünk a beadandó vegyületbŐl, előnyösen olyan oldószerrel, amelyről ismert, hogy elősegíti a transzdermális abszorpciót, úgymint etanollal vagy dimetil-szulfoxiddal (DMSO) excipienssel vagy anélkül. Topikális adagolást előnyösen tapasszal végzünk, amely lehet akár rezervoár és porózus membrán típusú, akár szilárd mátrixváltozat.
Alkalmas transzdermális eszközöket ismertetnek a 3 742 951, a 3 797 494, a 3 996 934 és a 4 031 894 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírások. Ezek az eszközök általában tartalmaznak egy tartó (támasztó)-elemet, amely az eszköz valamelyik felszínét képezi, egy hatóanyagot átengedő adheziv réteget, amely a másik felszínt képezi, továbbá legalább egy rezervoárt (tárolóelemet), amely a hatóanyagot tartalmazza a két felszíni felület között. Alternatív módon a hatóanyagot számos mikrokapszula is tartalmazhatja, amely a permeábilis adheziv rétegen szét van oszlatva. A hatóanyag mindkét esetben folyamatosan szállítódik a rezervoárból vagy a mikrokapszulákból egy membránon át a hatóanyagot átengedő tapadórétegbe, amely a befogadó szervezet bőrével vagy nyálkahártyájával kontaktusban van. Ha a hatóanyag a bőrön keresztül abszorbeálódik, a hatóanyag szabályozott és előre meghatározott áramát adagoljuk a szervezetbe. Mikrokapszulák esetén a kapszulázószer membránként is funkcionálhat.
Egy másik eszközben, amely szintén transzdermális adagolásra szolgál a találmány értelmében, a gyógyszerhatóanyagot egy mátrix tartalmazza, amelyből a kivánt mennyiség fokozatos, állandó és szabályozott sebességgel szállítódik. A mátrix diffúzió vagy mikropórusos áramlás révén permeábilis a vegyület felszabadulásával szemben. A felszabadulás sebességmeghatározó. Egy ilyen rendszert, amely nem igényel membránt, a 3 291 636 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ismertet Ezekben a rendszerekben legalább két típusú felszabadulás lehetséges. A felszabadulás akkor megy végbe diffúzió révén, ha a mátrix nem porózus. A gyógyszerészetileg hatékony vegyület feloldódik magában a mátrixban és azon keresztül diffundál. Mikropórusos áramlás útján akkor megy végbe a felszabadulás, ha a gyógyszerhatóanyag egy folyékony fázis révén szállítódik a mátrix pórusaiba.
Amint az számos olyan vegyületcsoportra igaz, amelyek általában alkalmasak bármely adott farmakológiai hatás elérésére és terápiás végfelhasználásuk van, az osztályok bizonyos alcsoportjai és bizonyos specifikus tagjai előnyösek átfogó terápiás indexük és biokémiai, valamint farmakológiai profiljuk folytán.
Előnyösek azok a vegyületek, amelyeknél az 1-6 szénatomos alkilcsoport jelentése előnyösen 1-3 szénatomos alkiléncsoport és előnyösebben metilén- vagy etiléncsoport, a legelőnyösebben elágazó láncú etiléncsoport és a KP2 molekularész előnyösen valint vagy alantot tartalmaz.
Claims (8)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. A Ka-P2 a-NH-CH(Ra)-C(=O)-Xa (IB) általános képletű vegyületek, azok hidrátjai, sztereoizomeijei és gyógyszerészetileg elfogadható sói, ahol az (IB) általános képletben:ha Xa jelentése hidrogénatom, akkor Ra jelentése CH2Si(l-6 szénatomos alkil)2-(2-6 szénatomos alkenil)-csoport, CH2Si(l-6 szénatomos alkil)2-fenil-cso15HU 221 629 Β1 port vagy NHC(=O)-fenil-csoporttal szubsztituált benzilcsoport; vagy ha Xa jelentése CF2C(=O)-fenetil-csoport, akkor Ra jelentése 1-7 szénatomos alkilcsoport, de terc-butil-metil-csoporttól eltérő; vagy 5 ha Xa jelentése CF2C(=O)NHCH2Si(l-6 szénatomos alkil)3-csoport, akkor Ra jelentése benzilcsoport,P2 a jelentése Leu, Alá, Ile, Val, Nva, Nle vagy tercleucin aminosavmaradék;Ka jelentése benzil-oxi-karbonil-csoport. 10
- 2. Az 1. igénypont szerinti olyan (IB) általános képletű vegyületek, azok hidrátjai, sztereoizomeijei vagy gyógyszerészetileg elfogadható sói, melyekben Xa jelentése CF2C(=O)NHCH2Si(l-6 szénatomos alkil)3csoport, a többi szubsztituens jelentése az 1. igénypont- 15 bán megadott.
- 3. A 2. igénypont szerinti olyan (IB) általános képletű vegyületek, azok hidrátjai, sztereoizomeijei és gyógyszerészetileg elfogadható sói, melyekben Xa jelentése CF2C(=O)NHCH2Si(CH3)3-csoport, a többi szubszti- 20 tuens jelentése az 1. igénypontban megadott.
- 4. Az 1. igénypont szerinti (IB) általános képletnek megfelelő 4-[N-(benzil-oxi-karbonil)-L-(terc-leucil)]amino-2,2-difluor-3-oxo-5-fenil-N-(trimetil-szilil-metil)-pentánamid. 25
- 5. Az 1. igénypont szerinti (IB) általános képletnek megfelelő 2-[(benzil-oxi-karbonil)-L-valil]-amino-4,4difluor-l-fenil-7-metil-3,5-dioxo-oktán.
- 6. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti vegyület gyógyszerként való alkalmazásra. 30
- 7. Gyógyszerkészítmény, amely hatóanyagként az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti vegyületet, valamint egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyagot, és kívánt esetben adalék anyagokat tartalmaz.
- 9. Eljárás az (IB) általános képletű vegyületek, hidrátjaik, sztereoizomeijeik és gyógyszerészetileg elfogadható sóik előállítására, ahol az (IB) általános képletben ha Xa jelentése hidrogénatom, akkor Ra jelentése CH2Si(l-6 szénatomos alkil)2-(2-6 szénatomos alkenil)-csoport, CH2Si(l-6 szénatomos alkil)2-fenil-csoport vagy NHC(=O)-fenil-csoporttal szubsztituált benzilcsoport, vagy ha Xa jelentése CF2(=O)-fenetil-csoport, akkor Ra jelentése 1-7 szénatomos alkilcsoport, vagy ha Xa jelentése CF2C(=O)NHCH2Si(l-6 szénatomos alkil)3-csoport, akkor Ra jelentése benzilcsoport,P2 a jelentése Leu, Alá, Ile, Val, Nva, Nle vagy tercleucin aminosavmaradék,Ka jelentése benzil-oxi-karbonil-csoport, azzal jellemezve, hogy valamely Ka-P2a általános képletű csoportot, melyben Ka, P2a jelentése a tárgyi körben megadott, valamely N2H-CH(Ra)-C(=O)Xa általános képletű vegyülettel, amelyben Ra, Xa jelentése a tárgyi körben megadott, kapcsolunk, és kívánt esetben a kapott (IB) képletű vegyületet gyógyszerészetileg elfogadható sóvá alakítjuk, vagy valamely Ka-P2a általános képletű csoportot, amelyben Ka, P2a jelentése a tárgyi körben megadott, valamely H2N-CH(Ra)-CH(OH)Xa általános képletű vegyülettel, melyben Ra, Xa jelentése a tárgyi kőiben megadott, kapcsolunk, majd az igy kapott vegyületet oxidáljuk, és kívánt esetben a kapott (IB) képletű vegyületet gyógyszerészetileg elfogadható sóvá alakítjuk.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP93402398 | 1993-10-01 | ||
PCT/US1994/010679 WO1995009838A1 (en) | 1993-10-01 | 1994-09-20 | INHIBITORS OF β-AMYLOID PROTEIN PRODUCTION |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU9600832D0 HU9600832D0 (en) | 1996-05-28 |
HUT74004A HUT74004A (en) | 1996-10-28 |
HU221629B1 true HU221629B1 (hu) | 2002-12-28 |
Family
ID=8214751
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9600832A HU221629B1 (hu) | 1993-10-01 | 1994-09-20 | Béta-amiloid fehérje képződést gátló peptidek, eljárás előállításukra és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0721449B1 (hu) |
JP (1) | JPH09505281A (hu) |
KR (1) | KR100316865B1 (hu) |
CN (1) | CN1078886C (hu) |
AT (1) | ATE211129T1 (hu) |
AU (1) | AU687449B2 (hu) |
CA (1) | CA2171882C (hu) |
DE (1) | DE69429527T2 (hu) |
DK (1) | DK0721449T3 (hu) |
ES (1) | ES2170104T3 (hu) |
FI (1) | FI961438A0 (hu) |
HU (1) | HU221629B1 (hu) |
IL (1) | IL111078A (hu) |
NO (1) | NO308029B1 (hu) |
NZ (1) | NZ274074A (hu) |
PT (1) | PT721449E (hu) |
TW (1) | TW264480B (hu) |
WO (1) | WO1995009838A1 (hu) |
ZA (1) | ZA947529B (hu) |
Families Citing this family (53)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0763055B1 (en) * | 1994-06-02 | 1999-11-03 | Merrell Pharmaceuticals Inc. | Perfluoroalkyl ketone inhibitors of elastase and processes for making the same |
NZ287604A (en) * | 1994-06-02 | 1998-12-23 | Merrell Pharma Inc | Acylated enol derivatives as prodrugs of elastase inhibitors |
US5804560A (en) * | 1995-01-06 | 1998-09-08 | Sibia Neurosciences, Inc. | Peptide and peptide analog protease inhibitors |
US5691368A (en) * | 1995-01-11 | 1997-11-25 | Hoechst Marion Roussel, Inc. | Substituted oxazolidine calpain and/or cathepsin B inhibitors |
US5849711A (en) * | 1995-06-06 | 1998-12-15 | Athena Neurosciences, Inc. | Cathepsin and methods and compositions for inhibition thereof |
US5783434A (en) * | 1995-06-06 | 1998-07-21 | Tung; Jay S. | Cathepsin and methods and compositions for inhibition thereof |
JPH11506923A (ja) * | 1995-06-06 | 1999-06-22 | アセナ ニューロサイエンシーズ,インコーポレイテッド | 新しいカテプシンならびにその阻害のための方法および組成物 |
US6172044B1 (en) | 1995-12-01 | 2001-01-09 | Aventis Pharmaceuticals Inc. | Acylated enol derivative of α-ketoesters and α-ketoamides |
CA2191924A1 (en) | 1995-12-05 | 1997-06-06 | Kevin Felsenstein | 5-amino-6-cyclohexyl-4-hydroxy-hexanamide derivatives as inhibitors of .beta.-amyloid protein production |
US5703129A (en) * | 1996-09-30 | 1997-12-30 | Bristol-Myers Squibb Company | 5-amino-6-cyclohexyl-4-hydroxy-hexanamide derivatives as inhibitors of β-amyloid protein production |
US6211235B1 (en) | 1996-11-22 | 2001-04-03 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Compounds for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis |
US6191166B1 (en) | 1997-11-21 | 2001-02-20 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compounds for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis |
US6153652A (en) | 1996-11-22 | 2000-11-28 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | N-(aryl/heteroaryl/alkylacetyl) amino acid amides, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds |
US6642261B2 (en) | 1997-11-21 | 2003-11-04 | Athena Neurosciences, Inc. | N-(aryl/heteroarylacety) amino acid esters, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds |
US6117901A (en) * | 1996-11-22 | 2000-09-12 | Athena Neurosciences, Inc. | N-(aryl/heteroarylacetyl) amino acid esters, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for use |
EP0942923A2 (en) * | 1996-11-22 | 1999-09-22 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | N-(ARYL/HETEROARYL) AMINO ACID DERIVATIVES, PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS COMPRISING SAME, AND METHODS FOR INHIBITING $g(b)-AMYLOID PEPTIDE RELEASE AND/OR ITS SYNTHESIS BY USE OF SUCH COMPOUNDS |
US6096782A (en) * | 1996-11-22 | 2000-08-01 | Athena Neurosciences, Inc. | N-(aryl/heteroaryl) amino acid derivatives pharmaceutical compositions comprising same and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds |
AR016751A1 (es) * | 1996-11-22 | 2001-08-01 | Athena Neurosciences Inc | Metodo para inhibir la liberacion del peptido beta-amiloide en una celula, composicion farmaceutica y compuestos utiles en dicho metodo |
US6207710B1 (en) | 1996-11-22 | 2001-03-27 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Compounds for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis |
DE19648793A1 (de) | 1996-11-26 | 1998-05-28 | Basf Ag | Neue Benzamide und deren Anwendung |
US6683075B1 (en) | 1996-12-23 | 2004-01-27 | Athena Neurosciences, Inc. | Cycloalkyl, lactam, lactone and related compounds, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use |
US6635632B1 (en) | 1996-12-23 | 2003-10-21 | Athena Neurosciences, Inc. | Cycloalkyl, lactam, lactone and related compounds, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds |
US6506782B1 (en) | 1998-02-27 | 2003-01-14 | Athena Neurosciences, Inc. | Heterocyclic compounds, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds |
US6958330B1 (en) | 1998-06-22 | 2005-10-25 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Polycyclic α-amino-ε-caprolactams and related compounds |
US6509331B1 (en) | 1998-06-22 | 2003-01-21 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Deoxyamino acid compounds, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds |
US6552013B1 (en) | 1998-06-22 | 2003-04-22 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Deoxyamino acid compounds, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds |
US6774125B2 (en) | 1998-06-22 | 2004-08-10 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Deoxyamino acid compounds, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds |
US6569851B1 (en) | 1998-06-22 | 2003-05-27 | Elan Pharmaceutials, Inc. | Cycloalkyl, lactam, lactone and related compounds, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds |
US6528505B1 (en) | 1998-06-22 | 2003-03-04 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Cyclic amino acid compounds pharmaceutical compositions comprising same and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds |
US6737038B1 (en) | 1998-11-12 | 2004-05-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Use of small molecule radioligands to discover inhibitors of amyloid-beta peptide production and for diagnostic imaging |
WO2000051998A1 (en) * | 1999-03-02 | 2000-09-08 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. | Compounds useful as reversible inhibitors of cathepsin s |
US6420364B1 (en) | 1999-09-13 | 2002-07-16 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. | Compound useful as reversible inhibitors of cysteine proteases |
AU2001261728A1 (en) | 2000-05-17 | 2001-11-26 | Bristol-Myers Squibb Pharma Company | Use of small molecule radioligands for diagnostic imaging |
US7423177B2 (en) | 2001-03-05 | 2008-09-09 | Transtech Pharma, Inc. | Carboxamide derivatives as therapeutic agents |
US6613801B2 (en) | 2000-05-30 | 2003-09-02 | Transtech Pharma, Inc. | Method for the synthesis of compounds of formula I and their uses thereof |
EP1268450A1 (en) | 2000-06-01 | 2003-01-02 | Bristol-Myers Squibb Pharma Company | Lactams substituted by cyclic succinates as inhibitors of a-beta protein production |
US6432944B1 (en) | 2000-07-06 | 2002-08-13 | Bristol-Myers Squibb Company | Benzodiazepinone β-amyloid inhibitors: arylacetamidoalanyl derivatives |
AU2002245590B2 (en) | 2001-03-05 | 2006-06-29 | Transtech Pharma, Inc. | Benzimidazole derivatives as therapeutic agents |
EP2324830A1 (en) | 2002-03-05 | 2011-05-25 | TransTech Pharma Inc. | Process for the preparation of a monocyclic azole derivative that inhibits the interaction of ligands with rage |
US7576206B2 (en) | 2003-08-14 | 2009-08-18 | Cephalon, Inc. | Proteasome inhibitors and methods of using the same |
US7223745B2 (en) | 2003-08-14 | 2007-05-29 | Cephalon, Inc. | Proteasome inhibitors and methods of using the same |
US7468383B2 (en) | 2005-02-11 | 2008-12-23 | Cephalon, Inc. | Proteasome inhibitors and methods of using the same |
KR100851035B1 (ko) | 2005-08-23 | 2008-08-11 | 대한민국 | GCP-Ⅱ를 유효성분으로 함유하는 β-아밀로이드의 뇌내축적 예방 및 치료용 약학적 조성물과 치료제 스크리닝용조성물 및 이를 이용한 스크리닝 방법 |
TWI517850B (zh) | 2009-09-30 | 2016-01-21 | Vtv治療有限責任公司 | 經取代之咪唑衍生物及其使用方法 |
WO2011087822A1 (en) | 2009-12-22 | 2011-07-21 | Cephalon, Inc. | Proteasome inhibitors and processes for their preparation, purification and use |
US9717710B2 (en) | 2012-10-05 | 2017-08-01 | Vtv Therapeutics Llc | Treatment of mild and moderate Alzheimer's disease |
CN108276435B (zh) * | 2015-12-30 | 2020-04-14 | 南京中硼联康医疗科技有限公司 | 用于制备和β淀粉样蛋白特异性结合的化合物的中间体的制备方法 |
UA124672C2 (uk) | 2016-06-21 | 2021-10-27 | Оріон Офтальмолоджі Ллс | Гетероциклічні похідні пролінаміду |
JP7164521B2 (ja) | 2016-06-21 | 2022-11-01 | オリオン・オフサルモロジー・エルエルシー | 炭素環式プロリンアミド誘導体 |
US11376200B2 (en) * | 2018-02-02 | 2022-07-05 | Agilent Technologies, Inc. | Methods and kits for using blocked 2-AA for glycan analysis |
WO2019190822A1 (en) | 2018-03-28 | 2019-10-03 | Vtv Therapeutics Llc | Crystalline forms of [3-(4- {2-butyl-1-[4-(4-chloro-phenoxy)-phenyl]-1h-imidazol-4-yl} -phenoxy)-propyl]-diethyl-amine |
WO2019190823A1 (en) | 2018-03-28 | 2019-10-03 | Vtv Therapeutics Llc | Pharmaceutically acceptable salts of [3-(4- {2-butyl-1-[4-(4-chlorophenoxy)-phenyl]-1h-imidazol-4-yl} -phenoxy)-propyl]-diethyl-amine |
CA3110582A1 (en) | 2018-10-10 | 2020-04-16 | Vtv Therapeutics Llc | Metabolites of [3-(4-{2-butyl-1-[4-(4-chloro-phenoxy)-phenyl]-1h-imidazol-4-yl}-phenoxy)-propyl]-diethyl-amine |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5142056A (en) * | 1989-05-23 | 1992-08-25 | Abbott Laboratories | Retroviral protease inhibiting compounds |
AU600226B2 (en) * | 1985-02-04 | 1990-08-09 | Merrell Pharmaceuticals Inc. | Novel peptidase inhibitors |
CA2021660A1 (en) * | 1989-07-26 | 1991-01-27 | Philippe Bey | Peptidase inhibitors |
EP0572547A1 (en) * | 1991-02-22 | 1993-12-08 | The Du Pont Merck Pharmaceutical Company | SUBSTITUTED $g(a)-AMINOALDEHYDES AND DERIVATIVES |
CA2071621C (en) * | 1991-06-19 | 1996-08-06 | Ahihiko Hosoda | Aldehyde derivatives |
-
1994
- 1994-09-20 ES ES94928637T patent/ES2170104T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-20 DK DK94928637T patent/DK0721449T3/da active
- 1994-09-20 PT PT94928637T patent/PT721449E/pt unknown
- 1994-09-20 KR KR1019960701686A patent/KR100316865B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-09-20 HU HU9600832A patent/HU221629B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-09-20 CN CN94193598A patent/CN1078886C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-20 DE DE69429527T patent/DE69429527T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-20 AU AU77998/94A patent/AU687449B2/en not_active Ceased
- 1994-09-20 WO PCT/US1994/010679 patent/WO1995009838A1/en active IP Right Grant
- 1994-09-20 CA CA002171882A patent/CA2171882C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-20 NZ NZ274074A patent/NZ274074A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-09-20 EP EP94928637A patent/EP0721449B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-20 JP JP7510830A patent/JPH09505281A/ja not_active Withdrawn
- 1994-09-20 AT AT94928637T patent/ATE211129T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-09-27 ZA ZA947529A patent/ZA947529B/xx unknown
- 1994-09-29 TW TW083108992A patent/TW264480B/zh active
- 1994-09-29 IL IL11107894A patent/IL111078A/en not_active IP Right Cessation
-
1996
- 1996-03-29 FI FI961438A patent/FI961438A0/fi not_active Application Discontinuation
- 1996-04-01 NO NO961326A patent/NO308029B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH09505281A (ja) | 1997-05-27 |
CA2171882A1 (en) | 1995-04-13 |
ES2170104T3 (es) | 2002-08-01 |
PT721449E (pt) | 2002-06-28 |
FI961438A (fi) | 1996-03-29 |
EP0721449B1 (en) | 2001-12-19 |
KR960704839A (ko) | 1996-10-09 |
NO308029B1 (no) | 2000-07-10 |
NO961326L (no) | 1996-04-01 |
IL111078A0 (en) | 1994-11-28 |
AU687449B2 (en) | 1998-02-26 |
DE69429527D1 (de) | 2002-01-31 |
ZA947529B (en) | 1995-05-29 |
HU9600832D0 (en) | 1996-05-28 |
CN1132504A (zh) | 1996-10-02 |
NO961326D0 (no) | 1996-04-01 |
CA2171882C (en) | 2001-12-04 |
DK0721449T3 (da) | 2002-04-22 |
ATE211129T1 (de) | 2002-01-15 |
FI961438A0 (fi) | 1996-03-29 |
KR100316865B1 (ko) | 2002-11-29 |
EP0721449A1 (en) | 1996-07-17 |
TW264480B (hu) | 1995-12-01 |
HUT74004A (en) | 1996-10-28 |
IL111078A (en) | 1999-03-12 |
NZ274074A (en) | 1997-11-24 |
AU7799894A (en) | 1995-05-01 |
DE69429527T2 (de) | 2002-07-18 |
CN1078886C (zh) | 2002-02-06 |
WO1995009838A1 (en) | 1995-04-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
HU221629B1 (hu) | Béta-amiloid fehérje képződést gátló peptidek, eljárás előállításukra és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények | |
JP4157601B2 (ja) | 置換オキサゾリジンカルパインおよび/またはカテプシンb阻害剤 | |
US20110144170A1 (en) | Fc RECEPTOR MODULATING COMPOUNDS AND COMPOSITIONS | |
JPH09500087A (ja) | カルパイン活性の増大に関連した健康障害の抑制及び処置におけるカルパイン阻害剤の使用法 | |
WO2004076478A1 (ja) | βセクレターゼ阻害活性を有するペプチド誘導体 | |
US6541453B2 (en) | Peptide derivatives | |
NZ264143A (en) | Use of an aspartyl protease inhibitor to inhibit beta-amyloid peptide production | |
US7238774B2 (en) | Statine derivatives for the treatment of Alzheimer's disease III | |
JP2001519769A (ja) | N―(アリール/ヘテロアリール)アミノ酸誘導体、その医薬組成物および該化合物を用いたβ―アミロイドペプチドの放出および/またはその合成を阻害する方法 | |
KR20000048577A (ko) | 인다논으로 26s 및 20s 프로테아좀을 억제하는 방법 | |
JPH04211095A (ja) | 新規ジペプチド、その製造方法及び薬剤におけるレニン阻害剤としてのその使用 | |
JPH11506923A (ja) | 新しいカテプシンならびにその阻害のための方法および組成物 | |
KR20000016700A (ko) | 뎁시 펩티드 및 이를 유효 성분으로 하는 의약 | |
CA2140931A1 (en) | Non-peptidic surrogates of the ldv sequence and their use in the treatment of inflammation, autoimmune disease and tumour progression | |
US6087336A (en) | Peptide derivatives useful in treating autoimmune diseases | |
WO1993005011A1 (en) | Novel immunosuppressants | |
JP2002505339A (ja) | システイン活性依存性酵素のインヒビターとして有用なチアジアゾール化合物類 | |
US5977074A (en) | Inhibitors of β-amyloid protein production | |
US5817757A (en) | Inhibitors of peptide binding to MHO class II proteins | |
US20020187934A1 (en) | Peptide derivatives | |
US20060281686A1 (en) | Aza-peptides | |
US20230279052A1 (en) | Prodrugs of mitochondria-targeting oligopeptides | |
JP6952320B2 (ja) | 新規nk3受容体アゴニスト | |
JP2934905B2 (ja) | 新規リポペプタイド及び抗腫瘍剤 | |
US20190127419A1 (en) | Neuropeptide s receptor (npsr) agonists |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
DGB9 | Succession in title of applicant |
Owner name: MERRELL PHARMACEUTICALS INC., US |
|
GB9A | Succession in title |
Owner name: AVENTIS INC., US Free format text: FORMER OWNER(S): SCOIS NOVA INC., US; MERRELL PHARMACEUTICALS INC., US; MERRELL DOW PHARMACEUTICALSINC., US; MERRELL PHARMACEUTICALS INC., US |
|
MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |