NO169490B - Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive pyrrolopyrimidinderivater - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører fremstilling av nye pyrrolopyrimidinderivater som er nyttige som anti-tumormid-ler.

Folinsyre er en bærer av en Cl-enhet i kroppen, avledet fra maursyre eller formaldehyd, virkende som et koenzym i forskjellige enzymatiske reaksjoner såsom ved biosyntese av nukleinsyrer, ved metabolismen av aminosyrer og peptider og ved dannelsen av metan. Spesielt ved biosyntese av nukleinsyrer er folinsyre essensiell for formulering i de to reaksjonsveiene, dvs. purinsyntetiske reaksjonsveien og tymidinsyntetiske reaksjonsveien. Vanligvis er folinsyre nødvendig for å bli overført til den aktiverte koenzymformen ved reduksjon i to trinn før den blir biologisk aktiv. Ametopterin (metotreksat: MTX) og de beslektede forbindelsene er kjent for å hemme reduksjonen fra dihydrofolinsyre til tetrahydrofolinsyre ved sterk kobling til det dominante enzymet i det andre trinnet (dihydrofolinsyrereduktase). Disse medikamentene er blitt utviklet som anti-tumormedika-menter på grunn av at de kan forstyrre DNA-syntesen og dermed forårsake celledød, og er for tiden ansett å være klinisk viktige. Derimot er et nytt tetrahydroaminopterin antitumor-middel (5,10-dideaza-5,6,7,8-tetrahydroaminopterin: DDATHF) blitt rapportert som, ulikt medikamentene beskrevet ovenfor, ikke inhiberer dihydrofolinsyrereduktase og hovedmekanismen består i hemming av glycinamidribonukleotidtransformylase som er nødvendig i den begynnende fasen av purinbiosyntesen (Journal of Medicinal Chemistry, 28, 914 (1985)).

Forskjellige studier på terapi av kreft er nå blitt utført, og en utvikling av medikamenter som er mere effektive og har toksisiteter med høy spesifisitet overfor kreftceller basert på en ny mekanisme er ventet. Anti-tumormiddelet MTX hvori virkningsmekanismen består i antagonisme overfor folinsyre, blir mye anvendt klinisk, til tross for at den terapeutiske effekten enda er utilfredsstillende, på grunn av den har relativt sterk toksisitet med liten effekt på fast kreft.

Som et resultat av oppfinnerenes forskning under betingelsene beskrevet ovenfor, har de oppdaget at nye pyrrolopyrimidinderivater har toksisiteter som er veldig spesifikke overfor tumorceller og med gode anti-tumoreffekter.

Foreliggende oppfinnelse vedrører analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive pyrrolopyrimidinderivater med formel

hvori ringen A er en pyrol eller pyrrolinring, X er en aminogruppe eller en hydroksylgruppe, Y er et hydrogenatom eller en hydroksylgruppe, B er en rettlinjet eller forgrenet alkylen med 2-4 C-atomer og - COOR<1> og -COOE<2> er karbonyl-grupper som kan bli forestret med en Cj^alkyl eller benzyl-gruppe eller et salt derav, kjennetegnet ved at man omsetter en forbindelse med formelen hvori ringen A, X, Y og B er som definert ovenfor eller et derivat derav, oppnådd ved reaksjon ved karboksylgruppen, med en forbindelse med formel

hvori -COOr<I> og -C00R<2> er karboksylgrupper som kan bli forestret med en konvensjonell gruppe, og om nødvendig dehydrogenere og/eller omdanne til et salt eller en fri form.

Når X eller Y i formlene beskrevet ovenfor er en hydroksylgruppe, kan hver av forbindelsene (I) og (II) eksistere som en likevektsblanding av de respektive tautomerene. Følgende partielle strukturelle formler viser stedene på strukturen som er utsatt for tautomerisme, og likevekten mellom tautomerene er illustrert nedenfor.

For å forenkle beskrivelsen, er bare hydroksylformene og de korresponderende navnene beskrevet i denne beskrivelsen, men de korresponderende oksoformene er alltid innbefattet.

Lineære eller forgrenede alkylengrupper representert ved B i formlene beskrevet ovenfor innbefatter alkylengrupper med 2 til 4 karbonatomer hver (f.eks. etylen-, propylen-, isoprop-ylen-, butylen- og isobutylengrupper). Karboksylgrupper som kan bli forestrert, representert ved -COOR<1> og -C00R<2 ><1>nnbefatter karboksylgrupper som kan bli forestrert med alkylgrupper med 1 til 4 karbonatomer hver eller benzyl-grupper, fortrinnsvis med nitro eller C^_3 alkoksy. Alkyl-gruppene innbefatter metyl, etyl, propyl, isopropyl, n-butyl, iso-butyl, sek-butyl og tert-butyl.

Nedenfor er fremgangsmåten for fremstilling av forbindelsene (I) forklart.

Forbindelsene (I) eller salter derav kan bli tilveiebragt ved acylering av glutaminsyrederivatene vist i formelen (III) eller salter derav med karboksylsyrer vist i formel (II), eller reaktive derivater eller salter derav. Acyleringen kan for eksempel bli utført ved acylering av forbindelsen (III) med forbindelsen (II) i nærvær av karbodiimid, defenylfos-forylazid eller dietylfosforcyanidat. Generelt blir omtrent 1 til 20 mol ekvivalent, fortrinnsvis 1 til 5 mol ekvivalent av forbindelsen (III) relativt til forbindelsen (II) anvendt. Generelt blir omtrent 1 til 25 mol ekvivalent, fortrinnsvis omtrent 1 til 5 mol ekvivalent av karbodiimid relativt til forbindelse (II) anvendt. Som karbodiimid er dicykloheksyl-karboddimid foretrukket for praktisk anvendelse, men andre karbodiimider såsom difenylkarbodiimid, di-o-tolylkarbodiimid, di-p-tolylkarbodiimid, di-tert-butylkarbodiimid, 1-cykloheksyl-3-(2-morfolinoetyl)karbodiimid, l-cykloheksyl-3-(4-dietylaminocykloheksyl)karbodiimid, l-etyl-3-(2-dietyl-aminopropyl)karbodiimid og l-etyl-3-(3-dietylaminopropyl)karbodiimid kan bli anvendt. Acyleringen blir fortrinnsvis utført i nærvær av et egnet oppløsningsmiddel, og slike oppløsningsmidler innbefatter vann, alkoholer (f.eks. metanol, etanol, osv.), eterforbindelser (f.eks. dimetyleter, dietyleter, tetrahydrofuran, dioksan, monoglym, diglym, osv.), nitriler (f.eks. acetonitril, osv.), estere (f.eks. etylacetat, osv.), halogenerte hydrokarboner (f.eks. diklormetan, kloroform, karbontetraklorid, osv.), aromatiske hydrokarboner (f.eks. benzen, toluen, xylen, osv.), aceton, nitrometan, pyridin, dimetylsulfoksyd, dimetylformamid, heksametylfosfolamid, sulfolan, og de egnede blandingene av to eller flere av disse oppløsningsmidlene. Reaksjonen foregår generelt ved en pH varierende fra 2 til 14, fortrinnsvis ved en pH varierende fra omtrent 6 til 9, ved en temperatur varierende fra omtrent —10°C til kokepunktet til det anvendte oppløsningsmiddelet (opp til omtrent 100°C),

fortrinnsvis ved en temperatur varierende fra omtrent 0 til 50°C, i omtrent 1 til 100 timer. pHen til reaksjonsblandingen blir justert, hvis nødvendig, ved tilsetting av en syre (f.eks. saltsyre, svovelsyre, fosforsyre, salpetersyre, eddiksyre, osv.), en base (f.eks. natriumalkoholat såsom natriummetylat og natriumetylat, hydroksider av alkalimetaller eller av alkaliske jordmetaller såsom natriumhydroksyd, kaliumhydroksyd, litiumhydroksyd, bariumhydroksyd, karbonater eller bikarbonater av alkalimetaller eller av alkaliske jordmetaller såsom natriumkarbonat, kaliumkarbonat, barium-karbonat, kalsiumkarbonat og natriumbikarbonat, aminer såsom trimetylamin, trietylamin, trietanolamin og pyridin), eller en buffer (f.eks. fosfatbuffer, boratbuffer, acetatbuffer, osv.). Reaksjonen kan forløpe mere fordelaktig i nærvær av en katalysator som fremmer acylering. Slike katalysatorer innbefatter basiske katalysatorer og sure katalysatorer. Basiske katalysatorer innbefatter tertiære aminer (f.eks. alifatiske tertiære aminer såsom trietylamin; aromatiske tertiære aminer såsom pyridin, a-, p- eller •y-pikolin, 2,6-lutidin, 4-dimetylaminopyridin, 4-(1-pyrrolidinyl)pyridin, dimetylanilin og dietylanilin), og sure katalysatorer innbefatter Lewis-syrer (f.eks. vannfri sinkklorid, vannfri aluminiumklorid (AICI3), vannfrie jernklorid, titantetra-klorid (TiCl4), tintetraklorid (SnCl4), antimonpentaklorid, koboltklorid, kupriklorid, bortrifluoridetyleterkompleks, osv.). Blant katalysatorene beskrevet ovenfor er 4-dimetylaminopyridin eller 4-(1-pyrrolidinyl)pyridin foretrukket i mange tilfeller. Egnet mengde av katalysatoren er den mengden som er tilstrekkelig for å fremme acylering, vanligvis på omtrent 0,01 til 10 mol ekvivalent, fortrinnsvis omtrent 0,1 til 1 mol ekvivalent relativt til forbindelse (II). De reaktive derivatene av karboksylsyrene ved karboksylgruppen anvendt for acyleringen innbefatter sure hal ider (f.eks. fluorid, klorid, bromid, jodid), sure anhydrider (f.eks. jodeddiksyreanhydrid, isobutyrsyreanhydrid), blandete syreanhydrider med monoalkylkarbonsyreestere (f.eks. mono-metylkarbonsyreester, monoetylkarbonsyreester, monopropyl-karbonester, mono-iso-propylkarbonsyreester, monobutyl-karbonsyreester, mono-iso-butylkarbonsyreester, mono-sec-butylkarbonsyreester, mono-tert-butylkarbonsyreester), aktive estere (f.eks. cyanometylester, karboetoksymetylester, metoksymetylester, fenylester, o-nitrofenylester, p-nitrofenylester, p-karbometoksyfenylester, p-cyanofenylester, tionfenylester), sure azider, blandede sure anhydrider med fosforsyrediestere (f.eks. dimetylfosfat, dietylfosfat, dibenzylfosfat, difenylfosfat), og blande sure anhydrider med fosforsyrediestere (f.eks. dimetylfosfitt, dietylfosfitt, dibenzylfosfitt, difenylfosfitt), av karboksylsyre (II). For acylering med et slikt reaktivt derivat er oppløsningsmid-delet, katalysatoren og reaksjonstemperaturen de samme som for acylering i nærvær av karbodiimidet beskrevet ovenfor.

I det følgende er fremgangsmåten for fremstilling av utgangs-forbindelse (II) forklart.

Forbindelse (II) hvori ring A er en pyrrolring, kan for eksempel bli fremstilt ved følgende fremgangsmåter. I reaksjonsformelen beskrevet ovenfor er X, Y og R<2> de samme som beskrevet før; Ra, R13 og R<c> er uavhengig et hydrogenatom, et fluoratom eller en alkylgruppe (samme som de som represen-terte R beskrevet ovenfor); R<4> er en cyanogruppe eller en forestret karboksylgruppe ; A er et hydrogenatom eller et halogenatom (f.eks. fluoratom, kloratom, bromatom, jodatom); B er et halogenatom (f.eks. kloratom, bromatom, jodatom) eller en eliminerbar gruppe som lett kan bli avledet fra hydroksygruppen (f.eks. metansulfonyloksygruppe, benzensulfo-nyloksygruppe, p-toluensulfonylgruppe, trifluormetansulfonyl-oksygruppe ); og m er 0, 1 eller 2. Den forestrede karboksylgruppen er eksemplifisert ved en alkylgruppe med 1 til 4 karbonatom(er) (f.eks. metyl, etyl, propyl, isopropyl, butyl, sec-butyl, tert-butyl, osv.), fenyl eller substituert fenylgruppe (p-nitrofenyl, p-metoksyfenyl, osv.), og benzyl eller substituert benzyl (f.eks. p-nitrobenzyl, p-metoksy-benzyl, osv. ).

Forbindelse (V) kan bli dehydrert på den mulige posisjonen mellom de to ved siden av liggende karboner og danne en umettet binding.

I det følgende blir reaksjonsmåtene beskrevet ovenfor forklart i detalj.

Fremgangsmåte 1

Forbindelse (V) og forbindelse (VI) blir utsatt for kondensa-sjon og det resulterende produktet blir utsatt for reduksjon som gir forbindelse (VII).

Mellomproduktene til forbindelsene fremstilles ifølge denne oppfinnelsen og forbindelsene (I) fremstilt ifølge denne oppfinnelsen kan bli isolert fra reaksjonsblandingene ved bruk av konvensjonelle fremgangsmåter for separasjon og rensing, såsom konsentrering, ekstrahering med oppløsnings-middel, kromatografi og omkrystallisering.

Forbindelsene (I), (II) og (III) kan danne salter. Slike salter blir fremstilt ved bruk av de kjente fremgangsmåtene, og blir eksemplifisert ved saltene til basene eller syrene og de kvarternære saltene. Salter til basene innbefatter salter av alkalimetaller, alkaliske jordmetaller, ikke-toksiske metaller, ammoniakk og ammoniakk fortrinnsvis substituert med Cl_3 alkyl eller etanol, såsom natrium, kalium, litium, kalsium, magnesium, aluminium, sink, ammonium, trimetylam-monium, trietylammonium, trietanolammonium, pyridinium og pyridinium fortrinnsvis med C^_3 alkyl eller etanol. Saltene til syrene innbefatter salter av mineralsyrer såsom saltsyre, svovelsyre, salpetersyre, fosforsyre og borsyre, og salter av organiske syrer såso oksalsyre, tartarsyre, eddiksyre, trifluoreddiksyre, metansulfonsyre og kamfersulfonsyre. Kvaternære salter innbefatter salter av metylbromid, metyljodid, metylmetansulfonat, metylbenzensulfonat og metyl p-toluensulfonat.

Virkninger

Forbindelsene (I) fremstilt ifølge denne oppfinnelsen viser fremragende antitumorvirkninger i musetumorcellestammer (P388, L1210, L5178Y, B16 melanoma, MethA, Lewis Lung Carcinoma, S180 sarcoma, Ehrlich Carcinoma, Colon38) og humane tumorcellestammer (HL60, KB, Lu65), reduserer tumorene som blir båret av varmblodige dyr [f.eks. Melanoma, sarcoma, mastocytoma, carcinoma, neoplasia, osv.] og forlenger livet til tumor-bærende varmblodige dyr.

I det følgende blir resultatene som indikerer de farmasøy-tiske effektene til forbindelsene (I) fremstilt ifølge denne oppfinnelsen beskrevet.

Celleveksthemmende virkning (IC50) til forbindelsene tilveiebragt i Arbeidseksemplene beskrevet nedenfor i KB-cellene ble bestemt ved følgende fremgangsmåte:

Humane nasofaryngeale kreft KB-celler (1 x IO<4> celler/ml) fremstilt ifølge en konvensjonell fremgangsmåte ble inokulert inn i hver brønn av en 96-mikrotiterplate (0,1 ml i en brønn) og utsatt for stående kultur ved 37° C under 5% C02 i 24 timer. En oppløsning av en forbindelsene tilveiebragt i arbeidseksemplene i 10# MEM (Nissui Pharmaceutical Co. Ltd.), og igjen utsatt for stående kultur ved 37°C under 556 CO2 i 72 timer. Kulturen ble deretter pipettert ut og 0,1 ml MTT-oppløsning (Dojindo Laboratories) i 10# MEM (1,0 mg/ml) ble på ny tilsatt og inkubert ved 37° C i 4 timer. Deretter ble 0,1 ml av 1056 SDS-oppløsningen (Wako Pure Chemicals) tilsatt og inkubert ved 37°C i ytterligere 24 timer. Absorbansen ved 590 nm ble målt og ICsø-verdien til forbindelsen ble definert som den konsentrasjonen av forbindelsen som er nødvendig for å redusere antall celler i den ubehandlede kontrollgruppen med 50$. Resultatene tilveiebragt er vist i tabell 1.

Nedenfor beskrives i tillegg resultatene som viser de farmasøytiske virkningene av forbindelsene (I) fremstilt ifølge denne oppfinnelsen.

Celleveksthemmende effekt (IC50) av forbindelsen tilveiebragt i arbeidseksempel 14 beskrevet nedenfor i HL-60 og HEL-cellene ble bestemt ved følgende fremgangsmåte.

(1) Humane leukemiceller HL-60 (2 x IO<5> celler/ml) ble suspendert i GIT-kulturmedium (Wako Pure Chemicals) inneholdende forbindelsen fremstilt ifølge denne oppfinnelsen og 0,2 ml av suspensjonen ble inokulert i hver brønn av en 96-mikrotiterplate. Etter at kulturen har stått ved 37°C under 5& C02 i 68 timer, ble 1 pCi ]<3>H]-tymidin (5 Ci/mmol) tilsatt

og blandingen ble inkubert i ytterligere 4 timer. For måling av inkorporeringen av tymidin inn i cellene, ble den sure-uoppløselige fraksjonen samlet opp på et glassfilter, og radioaktiviteten til fraksjonen ble målt med en flytende scintillasjonsteller. ICsø-verdien til forbindelsen ble definert som den konsentrasjonen av forbindelsen som er nødvendig for å redusere radioaktiviteten inkorporert inn i cellene i den ubehandlede kontrollgruppen ved 50%. (2) Humane føtale normale lungefibroblaster HEL (1 x IO<4 >celler/ml) ble suspendert i MEM kulturmedium (Nippon Flow Laboratories) og 0,1 ml av suspensjonen ble inokulert i hver brønn av en 96-mikrotiterplate. Etter at kulturen hadde stått ved 37 °C under 5% C02 i 24 timer, ble MEM-kul turmediet inneholdende forbindelsen for denne oppfinnelsen tilsatt og blandingen ble inkubert i ytterligere 72 timer. Mediumet ble erstattet med mediumet som inneholder 1 pg/ml MTT (Dojindo Laboratories), hvorpå 10% SDS (Wako Pure Chemicals), ble tilsatt og inkubert over natt. Absorbans ved 590 nm ble målt ved hjelp av Multiscan (Titertec Co.). ICsg-verdien ble bestemt ved sammenligning av absorbansen i den ubehandlede kontrollgruppen. De tilveiebragte resultatene er vist i tabell 1.

Som vist i de ovenfor nevnte resultatene hemmer forbindelsene (I) celleveksten av KB og HL-60 fremragende, mens de ikke utviser en toksisitet overfor HEL. Forbindelsene (I) fremstilt ifølge denne oppfinnelsen og saltene derav med lav toksisitet, har fremragende antitumorvirkning. Dermed kan preparatene inneholdende forbindelse (I) eller saltene derav bli anvendt som antitumormidler for behandling av tumorer i varmblodige dyr, spesielt pattedyr (f.eks. mus, rotte, katt, hund, kanin, osv.).

Forbindelsene (I) og saltene derav, når de blir anvendt som antitumormidler, kan bli administrert oralt og parenteralt som de er eller i form av pulver, granuler, tabletter, kapsler, stikkpiller og injeksjoner, og blir fremstilt ifølge konvensjonelle fremgangsmåter ved anvendelse av farmasøytisk akseptable tilsetningsstoffer, baerestof f er, og fortynnlngsmidler. Dosen varierer ifølge dyrene, sykdommene, symptomene, forbindelsene og administrasjonsmåtene; for eksempel den daglige dosen er omtrent 2,0 til 100 mg av en forbindelse fremstilt ifølge oppfinnelsen pr. kg kroppsvekt av et varmblodig dyr beskrevet ovenfor ved oral administrasjon, og omtrent 1,0 til 50 mg/kg ved parenteral administrasjon. Injeksjonene kan bli administrert intramusku-lært, intraperitonealt, subkutant eller intravenøst.

Preparatene blir fremstilt ved hjelp av i seg selv kjente fremgangsmåter. For de ovenfor nevnte orale preparatene blir for eksempel tablettene fremstilt ved egnet kombinasjon med et bindemiddel (f.eks. hydroksypropylcellulose, hydroksy-propylmetylcellulose, makrogol, osv.), et oppløsende middel (f.eks. stivelse, kalsiumkarboksylmetylcellulose, osv) og et smøremiddel (f.eks. magnesiumstearat, talk, osv.).

Som parenterale preparater blir for eksempel injeksjoner fremstilt ved egnet kombinasjon med et middel for å tilveiebringe isotoniskhet (f.eks. glukose, D-sorbitol, D-mannitol, natriumklorid, osv.), et antiseptisk middel (f.eks. benzyl-alkohol, klorbutanol, metyl p-hydroksybenzoat, propyl p-hydroksybenzoat, osv.) og en buffer (f.eks. fosfatbuffer, natriumacetatbuffer, osv.).

Et eksempel på en fremgangsmåte for fremstilling av tabletter innbefatter blanding av 1,0 til 25 mg av en forbindelse fremstilt ifølge oppfinnelsen, 100 til 500 mg laktose, omtrent 50 til 100 mg maisstivelse og omtrent 5 til 20 mg hydroksypropylcellulose for fremstilling av en tablett konvensjonelt, ved granulering, blanding med maisstivelse og magnesiumstearat og tablettdanning, slik at tablettene. hver har en vekt på omtrent 100 til 500 mg med en diameter på omtrent 3 til 10 mm. Tablettene kan bli belagt med en blanding av aceton og etanol, og blandingen inneholder hydroksypropylmetylcelluloseftalat (omtrent 10 til 20 mg pr. tablett) og lakserolje (0,5 til 2 mg) ved en konsentrasjon på omtrent 5 til 10%, for å gi belagte tabletter for tarmen.

Eksempel på fremgangsmåte for fremstilling av et injiserbart preparat innbefatter oppløsning av omtrent 2,0 til 50 mg av et natriumsalt av forbindelsen fremstilt ifølge denne oppfinnelsen i omtrent 2 ml fysiologisk saltvann for fremstilling av en ampulle, forsegling av den resulterende oppløsningen i en ampulle og sterilisering av ampullen ved 110"C i omtrent 30 minutter eller tilsetting av omtrent 2 ml sterilt destillert vann inneholdende omtrent 10 til 40 mg mannitol eller sorbitol inn i ampullen, frysetørring og forsegling av ampullen. For anvendelse av den frysetørrede forbindelsen for subkutan, intravenøs eller intramuskulær injeksjon, blir ampullen åpnet og inneholdet løst opp i, for eksempel, fysiologisk saltvann slik at konsentrasjonen av forbindelsen omtrent blir 1, 0 til 25 mg/ml.

Følgende referanseeksempler og arbeidseksempler vil forklare foreliggende oppfinnelse i mere detalj.

Referanseeksempel 1

Fremstilling av metyl-5-[4-(tert-butoksykarbonyl)-fenyl]pen-tanoat: Under argonatmosfære ble kalium (25 mg) satt til tørket tert-butylalkohol (820 ml), og som ble oppvarmet med tilbakeløp for å bli fullstendig oppløst. Oppløsningen ble avkjølt til 20°C, hvorpå eter (300 ml) ble tilsatt og deretter en oppløsning bestående av metylkrotonat (63,93 g) og tert- butyl 4-formylbenzoat (71,0 g) i tert-butyl alkohol-eter (2:1, 300 ml) sakte tilsatt mens den indre temperaturen ble holdt på 10°C. Etter omrøring ved den samme temperaturen i 2 timer ble 1 N kaliumhydrogensulfat i vann (750 ml) tilsatt med avkjøling slik at pHen ble justert til 4. Oppløsningen ble ekstrahert med eter, vasket med vann og deretter med mettet natriumkloridoppløsning og utsatt for fordamping av oppløsningsmiddelet under redusert trykk. Den resulterende resten ble løst opp i etylacetat (100 ml), og 5#Pd-C (15 g: Engelhard Co. Ltd.) ble tilsatt og omfattende omrørt under hydrogentrykk på 4 kg/cm<2> ved romtemperatur i 3 timer. Katalysatoren ble filtrert ut, oppløsningsmiddelet ble fordampet under redusert trykk, og tørket metanol (200 ml), 4-(N,N-dimetylamino)pyridin (30 mg) og diklormetan (250 ml), ble satt til resten og deretter ble en oppløsning bestående av 1,3-dicykloheksylkarbodiimid (132 g) i diklormetan (250 ml) sakte dråpevis tilsatt ved 0°C. Etter omrøring ved romtemperatur i 18 timer ble blandingen avkjølt til 0°C, og eddiksyre (30 ml) ble tilsatt og blandingen ble omrørt ved 0°C i 30 minutter og deretter ved romtemperatur i 30 minutter. Det resulterende presipitatet ble filtrert ut, filtratet ble konsentrert til tørrhet under redusert trykk, og til resten ble etylacetat (100 ml) tilsatt og etter henstand ved 0°C i 2 timer ble det resulterende presipitatet igjen filtrert ut. Filtratet ble konsentrert under redusert trykk og resten ble renset ved koionnekromatografi (bærer; silisiumoksydgel, 100 g, elueringsmiddel; eter: heksan = 1:15 1:5), for å gi sluttforbindelsen (59,7 g).

Smeltepunkt (Bp) 145-155°C/0,2-0,3 mmHg

IR (Neat): 2980, 2950, 1740, 1712, 1605 cm-<1>.

1-H-NMR (CDC13) S: 1,40-1,75 (4H,m), 1,55 (9H,s), 2,15-2,45 (2H,m), 2,50-2,75 (2H,m), 3,62 (3H,s),

7,16 (2H,d,J=8Hz), 7,85 (H,d,J=8Hz).

Referanseeksempel 2

Fremstilling av metyl 5-[4-(tert-butoksykarbonyl)-fenyl]-2-j odopentanoat:

Under argonatmosfære ble en oppløsning bestående av diisopropylamin (2,48 g) i tetrahydrofuran (100 ml) satt til en oppløsning bestående av butyllitium (24,5 mmol) i heksan (15,3 ml) ved 0°C og omrørt i 10 minutter, til denne ble en oppløsning av forbindelsen (6,53 g) tilveiebragt i referanseeksempel 1 I tetrahydrofuran (50 ml) dråpevis tilsatt ved -78°C i løpet av 30 minutter. Etter omrøring i 30 minutter ble en jodoppløsning (5,66 g) i tetrahydrofuran (30 ml) tilsatt og omrørt i ytterligere 20 minutter. Temperaturen til oppløsningen ble bragt opp til 0°C i løpet av 30 minutter, 1 N kaliumhydrogensulfat i vann (30 ml) ble dråpevis tilsatt, og oppløsningen ble ekstrahert med eter etter justering til pH 4. Det organiske laget ble vasket med 1 N kaliumkarbonat i vann og deretter med mettet natriumkloridoppløsning, og tørket med vannfritt magnesiumsulfat. Resten tilveiebragt ved fordamping av oppløsningsmiddelet under redusert trykk ble renset ved kolonnekromatografi (eter-heksan, 1:9), for å gi sluttforbindelsen (4,736 g).

IR (Neat): 2990, 2905, 1744, 1718, 1612 cm-<1>.

1-H-NMR (CDC13) S: 1,45-1,80 (2H,m), 1,58 (9H,s), 1,80-2,16 (2H,m), 2,69 (2H,t,J=7Hz), 3,72 (2H,s),

4,30 (lH,t,J=7Ez), 7,20 (2H,d,J=8Hz),

7,90 (2H,d,J=8Hz).

Referanseeksempel 3

Fremstilling av metyl 5-[4-(tert-butoksy-karbonyl)fenyl]-2-(dicyanometyl)pentanoat: Til en suspensjon bestående av natriumhydrid (1,356 g) i dimetylsulfoksid (8 ml) ble en oppløsning av malonitril (3,37 g) i dimetylsulfoksid (8 ml) under avkjøling med vann, og omrørt i 15 minutter. Til denne oppløsningen ble en oppløs-ning av forbindelsen (4,736 g) tilveiebragt i referanseeksempel 2 i dimetylsulfoksid (12 ml) dråpevis tilsatt og omrørt ved romtemperatur i 1 time, til denne oppløsningen ble 45 ml IN kaliumhydrogensulfat i vann tilsatt ved 0°C etterfulgt av distraksjon med eter. Eterlaget ble vasket med vann og tørket med vannfritt magnesiumsulfat, etterfulgt av fordamping av oppløsningsmiddelet under redusert trykk. Resten ble renset ved kolonnekromatografi (bærer; silisiumoksydgel, 200 g, elueringsmiddel; etylacetat; heksan = 1:5), for å gi sluttforbindelsen (3,33 g).

IR (Neat): 2970, 2930, 2252 1740, 1713, 1608 cm-<1>

1H-NMR (CDC13) S: 1,60-2,05 (4H,m), 1,48 (9H,s),

2,70 (2H,brt,J=7Hz), 2,90-3,15 (lH,m), 3,82 (3E,s),

4,04 (lH,d,J=7Hz), 7,20 (2H, d,J=8Hz),

7,-92 (2E,d,J=8Hz).

Referanseeksempel 4

Fremstilling av metyl 4-[3-(2-amino-7-benzyl-3-isopropyloksy-metyl-4(3H)-oksopyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)-l-okso-2-propenyl]benzoat: 2-Amino-7-benzyl-3-isopropyloksymetyl-4(3H)-okso-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-karbaldehyd (1,7 g) ble suspendert i en metanol-tetrahydrofuranblanding (10:1, 33 ml), hvorpå en oppløsning av natriummetylat i metanol (ekvivalent til 6,25 mM, 3,75 ml) ble tilsatt for å oppløse.

Deretter ble 4-metoksykarbonylacetofenon (2,23 g) tilsatt og omrørt ved romtemperatur i 15 timer. Presipitatet ble samlet ved filtrering, vasket med en liten mengde metanol og eter, og tørket, for å gi sluttforbindelsen (2,02 g) som gule nåler.

IR (KBr): 3480, 3350, 1710, 1680, 1620, 1550,

1375, 1280, 1210, 1110, 1060, 775. cm-<1>.

%-NMR (CDCI3) S: 1,23 (6H,d,J=6Ez), 3,93 (3H,s), 3,80-4,07 (lH,m), 5,15 (2H,s), 5,63 (2H,s),

6,92 (lH,s), 7,10-7,40 (5H, m), 7,73 (1H,d,J=15Hz),

8,13 (4H,s), 8,60 (1H,d,J=15Hz).

Referanseeksempel 5

Fremstilling av metyl 4-[3-(2-amino-3-isopropyloksymetyl-4(3H )-okso-5,6-dihydropyrrolo-[2,3-d]pyrimidin-5-yl)propyl]-benzoat: Forbindelsen (2,01 g) tilveiebragt i referanseeksempel 4 ble løst opp i en metanol-tetrahydrofuranblanding (3:4, 350 ml), hvorpå 1 N saltsyre (8 ml) og 10% Pd-C (4 g, fremstilt av Engelhard Co. Ltd.) ble tilsatt, og utsatt for katalytisk reduksjon under hydrogenatmosfære i 48 timer. Katalysatoren ble filtrert ut, filtratet ble nøytralisert, og oppløsnings-middelet ble fordampet under redusert trykk og resten ble isolert og renset ved kolonnekromatografi på silisiumoksydgel, (bærer; 100 g, elueringsmiddel; kloroform inneholdende 2- 4% etanol), for å gi sluttforbindelsen (0,68 g) som et fargeløst pulver.

IR (KBr): 3210, 2980, 1725, 1625, 1580, 1510,

1435, 1275, 1175, 1100, 1060 cm-<1>.

<i>H-NMR (CDC13) S: 1,17(3H,d,J=6Hz), 1,19

(3H,d,J=6Hz), 1,50-2,13 (4H,m), 2,70 (2H,t,J=7,5Ez ) , 3,07-3,77 (3H,m), 3,80-4,60 (lH,m), 3,87 (3H,s), 5,03 og 5,57 (2H,ABq), 7,21 (2H,d,J=7,5Hz), 7,91

(2H,d,J=7,5Hz).

Referanseeksempel 6

Fremstilling av metyl 4-[3-(2-amino-4-hydroksy-5,6-dihydro-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)propyl]benzoat: Forbindelsen (0,66 g) tilveiebragt i referanseeksempel 5 ble løst opp i tørket tetrahydrofuran (31,5 ml), hvorpå 0,21 N hydrogenbromid i diklormetan (78,3 ml) ble tilsatt og omrørt ved romtemperatur i 20 timer. Deretter ble 3 volumer n-heksan tilsatt og det resulterende presipitatet ble samlet ved filtrering, for å gi dihydrobromidet av sluttforbindelsen (0,59 g) som et fargeløst pulver.

IR (KBr): 3290, 3030, 2950, 1720, 1690, 1680

1620, 1480, 1350, 1275, 1100, 1035, 760 cm-<1>.

<1->H-NMR (DMS0-d6) S: 1,40-1,83 (4E,broad),

2,65 (2H,t,J=7,5Hz), 3,07-3,37 (2H,m), 3,50-3,77

(lH),m), 3,82 (3H,s), 7,33 (2H,d,J=7,5Hz),

7,86 (2H,d,J=7,5Hz).

Referanseeksempel 7

Fremstilling av dietyl N-[4-[3-(2-amino-4-hydroksy-5,6-dihydropyrrolo [2,3-d]pyrimidin-5-yl )propyl]benzoyl] -L-glutamat: Forbindelsen (1,47 g) tilveiebragt i referanseeksempel 6 ble suspendert i tetrahydrofuran (60 ml), hvorpå 0,1 N natriumhydroksyd i vann (120 ml) ble tilsatt og omrørt ved romtemperatur i 21 timer. Deretter ble oppløsningen nøytralisert med 0,1 N saltsyre (60 ml) og konsentrert til tørrhet under redusert trykk. Resten ble suspendert i tørket dimetylformamid (112,5 ml), hvorpå dietyl L-glutamathydroklorid (2,88 g), difenylfosforylazid (1,295 ml) og trietylamid (2,52 ml) ble tilsatt, bragt tilbake til romtemperatur og omrøringen ble fortsatt i 63 timer. Det resulterende presipitatet ble filtrert ut, og filtratet ble konsentrert til tørrhet under redusert trykk. Resten ble utsatt for separasjonsrensing med kolonnekromatografi på silisiumoksydgel (bærer; 100 g, elueringsmiddel; kloroform inneholdende 6,9$ ammoniakk-inneholdende etanol, 1:20 -» 1:10), for å gi sluttforbindelsen (1,12 g) som et fargeløst pulver.

IR (KBr): 3330, 2930, 1740, 1670, 1640, 1570,

1540, 1440, 1375, 1300, 1200, 1095, 1020 cm-<1>.

<i>H-NMR (CDCI3-CD3OD) 5: 1,20 (3H,t,J=7,5Hz),

1,27 (3H,t,J=7,5Hz), 1,47-1,83 (4H,m),

2,0-2,36 (2H,m), 2,37-2,50 (2H,m), 2,67

(2H,t,J=7,5Ez), 3,10-3,37 (2H,m), 3,53-3,80 (lH,m), 3,96-4,33 (4E,q x 2,J=7,5Hz), 4,60-4,87 (lH,m),

7,25 (2H,d,J=9Hz), 7,75 (2H,d,J=9Hz ).

Referanseeksempel 8

Fremstilling av metyl 4-[3-(2-amino-7-benzyl-3-isopropyloksy-metyl-4(3H)-oksopyrrolo[2,3-d]pyr imidin-5-yl)-l-okso-2-propenyl]benzoat: 2-Amino-7-benzyl-3-isopropyloksymetyl-4(3H)-okso-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-karbaldehyd (1,7 g) ble suspendert i en metanol-tetrahydrofuranblanding (10:1, 33 ml), hvorpå en oppløsning av natriummetylat i metanol (ekvivalent med 6,25 mM, 3,75 ml) ble tilsatt for å løse opp. Deretter ble 4-metoksykarbonylacetofenon (2,23 g) tilsatt og omrørt ved romtemperatur i 15 timer. Presipitatet ble samlet ved filtrering, vasket med en liten mengde metanol og eter, og tørket, for å gi sluttforbindelsen (2,02 g) som gule nåler.

IR (KBr): 3480, 3350, 1710, 1680, 1620, 1550, 1376,

1280, 1210, 1110, 1060, 775 cm-<1>

1-H-NMR (CDC13) S: 1,23 (6H,d, J=6Hz ), 3,93 (3H,s), 3,80-4,07 (lH.m), 5,15 (2H,s), 5,63 (2H,s), 6,92

(lH,s), 7,10-7,40 (5H,m), 7,73 (lH,d,J=15Hz), 8,13

(4E,s), 8,60 (lH,d,J=15Hz).

Referanseeksempel 9

Fremstilling av metyl 4-[3-(2-amino-3-isopropyloksy-metyl-4 ( 3H )-okso-5 , 6-dihydropyrrolo[2 ,3-d] pyr imi din-5-yl )propyl] - benzoat: Forbindelsen (2,01 g) tilveiebragt i referanseeksempel 8 ble løst opp i en metanol-tetrahydrofuranblanding (3:4, 350 ml), hvorpå 1 N saltsyre (8 ml) og 10% Pd-C (4 g, fremstilt av Engelhard Co. Ltd.) ble tilsatt, og utsatt for katalytisk reduksjon under en hydrogenatmosfære i 48 timer. Katalysatoren ble filtrert ut, filtratet ble nøytralisert, oppløs-ningsmiddelet ble fordampet under redusert trykk, og resten ble isolert og renset ved kolonnekromatografi på silisiumoksydgel (bærer; 100 g) (elueringsmiddel: kloroform inneholdende 2-4% etanol), for å gi sluttforbindelsen (0,68 g) som et fargeløst pulver.

IR (KBr): 3210, 2980, 1725, 1625, 1580, 1510, 1435,

1275, 1175, 1100, 1060 cm-<1>.

<1->H-NMR (CDCI3) S: 1,17 ( 3H, d , J=6Hz ),

1,19(3H,d,J=6Ez), 1,50-2,13 (4H,m), 2,70

(2E,t,J=7,5Hz), 3,07-3,77 (3H,m), 3,80-4,06 (lH,m),

3,87 (3H,s), 5,03 og 5,57 (2H,ABq), 7,21

(2H,d,J=7,5Hz), 7,91 (2H,d,J=7,5Hz ).

Referanseeksempel 10

Fremstilling av metyl 4-[3-(2-amino-4-hydroksy-5,6-dihydro-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)propyl]benzoat: Forbindelsen (0,66 g) tilveiebragt i referanseeksempel 9 ble oppløst i tørket tetrahydrofuran (31,5 ml), hvorpå 0,21 N hydrogenbromidsyre i diklormetan (78,3 ml) ble tilsatt, og omrørt ved romtemperatur i 20 timer. Deretter ble 3 volumer n-heksan tilsatt og det resulterende presipitatet ble samlet ved filtrering, for å gi dihydrobromidet av sluttforbindelsen (0,59 g) som et fargeløst pulver.

IR (KBr): 3290, 3030, 2950, 1720, 1690, 1680,

1620, 1480, 1350, 1275, 1100, 1035, 760 cm-<1>. 1-H-NMR (DMS0-d6) 5: 1,40-1,83 (4H, broad), 2,65 (2H,t,J=7,5Ez), 3,07-3,37 (2E,m), 3,50-3,77 (lH,m),

3,82 (3H,s), 7,33 (2H,d,J=7,5Hz), 7,86

(2H,d,J=7,5Hz).

Referanseeksempel 11

Fremstilling av metyl 4-[2-(2-amino-7-benzyl-3-isopropyloksy-metyl-4(3H )-oksopyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)-etenyl]benzoat: Til en suspensjon bestående av 2-amino-7-benzyl-3-isopropyl-oksy-metyl-4 (3H)-oksopyrrolo[2,3-d] pyrimidin-5-karbaldehyd (2,04 g) i tørket metanol (84 ml) ble p-metoksykarbonyl-benzyltrifenylfosfoniumbromid (3,24 g) tilsatt og omrørt. Deretter ble en oppløsning av natriummetylat i metanol (ekvivalent til 6,6 mM på basis av natrium) ble tilsatt og omrørt ved romtemperatur i 1,5 timer, for å gi gule nåler. Nålene ble samlet ved filtrering, vasket med metanol og deretter med eter, og tørket, for å gi sluttproduktet (cis-form, 1,49 g). Morvaesken ble renset ved kolonnekromatografi på silisiumoksydgel (bærer: 100 g) (elueringsmiddel: etylacetat-heksan, 1:4-»1:3), for å gi cis-transblandingen av sluttforbindelsen (0,9 g) som gult pulver, cis-form;

IR (KBr): 3340, 3220, 2980, 1715, 1690, 1625,

1600, 1530, 1430, 1280, 1175, 1105,

1060, 995 cm-<1>.

<i>H-NMR (CDC13) S: 1,20 (6H,d,J=6Hz), 3,87 (3E,s), 3,80-4,07 (lH,m), 5,14 (2H,s), 5,32 (2H,s), 5,60

(2H,s), 6,77 (lE.s), 7,10-7,37 (5H,m), 7,43 (2H,s),

7,50 (2H,d,J=9Hz), 7,95 (2H,d,J=9Hz).

Referanseeksempel 12

Fremstilling av metyl 4-[2-(2-amino-3-isopropyloksymetyl-4(3H)-okso-5,6-dihydropyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)etyl]benzoat: Forbindelsen (1,6 g) tilveiebragt i referanseeksempel 11 ble utsatt for samme reaksjon som den i referanseeksempel 9 for å gi sluttforbindelsen (0,62 g).

<i>H-NMR (CDC13) 5. 1,17 (3H,d,J=6Ez), 1,20

(3H,d,J=6Hz), 1,47-2,0 (lH,m), 2,10-2,43 (lH,m), 2,65 (2E,t,J=9Hz), 2,97-3,60 (3H,m), 3,73-4,07 (lH,m),

3,90 (3H,s), 4,47 (2E,s), 5,30 (1H,d,J=12Hz), 5,60 (lH,d,J=12Hz), 7,13-7,50 (7H,m), 7,92 (1H,d,J=9Ez).

Referanseeksempel 13

Fremstilling av metyl 4-[2-(2-amino-4-hydroksy-7H-5,6-dihydropyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)etyl]benzoat: Forbindelsen (1,25 g) tilveiebragt i referanseeksempel 12 ble utsatt for samme reaksjon i referanseeksempel 10, for å gi sluttforbindelsen (0,51 g).

IR (KBr): 3400, 3300, 2920, 1740, 1710, 1680, 1640,

1600, 1570, 1435, 1310, 1280, 1110, 1020

cm-*. ;1-H-NMR (DMS0-d6/D20) S: 1,53-2,27 (2H,m), 2,70 (2E,t,J=9Hz), 3,00-3,26 (2E,m), 3,47-3,63 (lH,m), 3,83 (3E,s), 7,35 (2H,d,J=9Hz), 7,85 (2H,d,J=9Hz). ;Referanseeksempel 14 ;Fremstilling av metyl 5-[4-tert-butoksykarbonyl)-fenyl]penta-noat: ;Under argonatmosfaere ble kalium (25 g) fullstendig løst opp i tørket tert-butylalkohol (820 ml) ved oppvarming med tilbake-løp i 3 timer. Oppløsningen ble avkjølt til 20° C, hvorpå eter (300 ml) ble tilsatt og deretter sakte en oppløsning av metylkrotonat (63,93 g) og tert-butyl 4-formylbenzoat (71,0 g) i tert-butyl alkohol-eterblanding (2:1, 300 ml) mens den indre temperaturen ble holdt på 10°C. ;Blandingen ble omrørt ved samme temperatur i 2 timer, og 1 N kaliumhydrogensulfat i vann (750 ml) ble tilsatt med avkjøl-ing for å justere pHen til 4. Etter ekstrahering med eter ble eterlaget vasket med mettet natriumkloridoppløsning og oppløsningsmiddelet ble fordampet under redusert trykk. Resten ble løst opp i etylacetat (100 ml), hvorpå 5% Pd-C (15 g: fremstilt av Engelhard Co. Ltd.), ble tilsatt, og omfattende omrørt ved romtemperatur under et hydrogentrykk på 4 kg/cm<2> i 3 timer. Katalysatoren ble filtrert ut, oppløsnings-middelet ble fordampet under redusert trykk, og tørket metanol (200 ml), 4-(N,N-dimetylamino)pyridin (30 mg) og diklormetan (250 ml) ble tilsatt, hvorpå en oppløsning av 1,3-dicykloheksylkarbodiimid (132 g) i diklormetan (250 ml) ble sakte dråpevis tilsatt ved 0°C. Etter omrøring ved romtemperatur I 18 timer, ble blandingen avkjølt til 0°C. Eddiksyre (30 ml) ble tilsatt, og blandingen ble omrørt ved 0°C i 30 minutter og deretter ved romtemperatur i 30 minutter. Det resulterende presipitatet ble filtrert ut, filtratet ble konsentrert til tørrhet under redusert trykk, og etylacetat (100 ml) ble tilsatt til resten, som ble latt stå ved 0°C i 2 timer, og det resulterende presipitatet ble igjen filtrert ut. Filtratet ble konsentrert under redusert trykk, og resten ble renset ved kolonnekromatografi (bærer: silisiumoksydgel, 500 g, eter-heksan,. 1:15-»1:5), for å gi sluttforbindelsen (59,7 g). ;Bp. 145-155°C/0,2-0,3 mmHg. ;IR (Neat): 2980, 2950, 1740, 1712, 1605 cm-<1>. ;<i>H-NMR (CDC13) S: 1,40-1,75 (4H,m), 1,55 (9H,s), ;2,15-2,45 (2H,m), 2,50-2,75 (2H,m), 3,62 (3E,s), 7,16 (2H,d,J=8Hz), 7,85 (H,d,J=8Hz). ;Referanseeksempel 15 ;Fremstilling av metyl 5-[4-(tert-butoksykarbonyl )-fenyl]-2-jodpentanoat: Under argonatmosfære ble en oppløsning av butyllitium (24,5 mmol) i heksan (15,3 ml) tilsatt til en oppløsning av diisopropylamin (2,48 g) i tetrahydrofuran (100 ml) ved 0°C og omrørt i 10 minutter. Til den resulterende oppløsningen ble en oppløsning av forbindelsen (6,53 g) tilveiebragt i referanseeksempel 14 i tetrahydrofuran (50 ml) dråpevis tilsatt ved -78°C i løpet av 30 minutter. Etter omrøring i 30 minutter ble en oppløsning av jod (5,66 g) i tetrahydrofuran (30 ml) tilsatt og omrørt i ytterligere 20 minutter. Temperaturen ble øket til 0°C i løpet av 30 minutter, og 30 ml IN kaliumhydrogensulfat i vann ble dråpevis tilsatt, og pHen ble justert til 4, etterfulgt av ekstraksjon med eter. Det organiske laget ble vasket med 1 N kaliumkarbonat i vann og deretter med mettet natriumkloridoppløsning, og tørket med vannfri magnesiumsulfat. Oppløsningsmiddelet ble fordampet under redusert trykk, og den resulterende resten ble renset ved kolonnekromatografi (bærer: silisiumoksydgel, 100 g, eter-heksan, 1:9), for å gi sluttforbindelsen (4,736 g). ;IR (Neat): 2990, 2905, 1744, 1718, 1612 cm-<1>. ;<1->H-NMR (CDC13) S: 1,45-1,80 (2H,m), 1,58 (9E, s), 1,80-2,16 (2H,m), 2,69 (2H,t,J=7Hz), 3,72 (2H,s), ;4,30 (lH,t,J=7Hz), 7,20 (2H,d,J=8Hz), ;7,90 (2H,d,J=8Hz). ;Referanseeksempel 16 ;Fremstilling av metyl 5-[4-(tert-butoksykarbonyl)-fenyl]-2-(dicyanometyl)pentanoat: Til en suspensjon av natriumhydrid (1,356 g) i dimetylsulfoksid (8 ml) ble en oppløsning av malonitril (3,37 g) i dimetylsulfoksid (8 ml) tilsatt med isavkjøling og omrørt i 15 minutter. Til oppløsningen ble en oppløsning av forbind-eisen (4,736 g) tilveiebragt i referanseeksempel 15 i dimetylsulfoksid (12 ml) dråpevis tilsatt, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time. Deretter ble 45 ml 1 N kaliumhydrogensulfat i vann tilsatt ved (PC, etterfulgt av ekstrahering med eter. Eterlaget ble vasket med vann og tørket med vannfritt magnesiumsulfat. Resten tilveiebragt ved fordamping av oppløsningsmiddelet under redusert trykk ble renset ved kolonnekromatografi (bærer: silisiumoksydgel, 200 g, etylacetat-heksan, 1:5), for å gi sluttforbindelsen (3,33 ;g)<.>;IR (Neat): 2970, 2930, 2252, 1740, 1713 (1608 cm-<1>. ;<1->H-NMR (CDC13) S: 1,60-2,05 (4E,m), 1,48 (9E,s), ;2,70 (2E,brt,J=7Ez), 2,90-3,15 (lH,m), 3,82(3E,s), 4,04(lE,d,J=7Ez), 7,20 (2E,d,J=8Ez ), 7,92 (2E,d,J=8Ez). ;Referanseeksempel 17 ;Fremstilling av etyl 5-[4-(tert-butoksykarbonyl)-fenyl]heksa-noat: I en oppløsning av tert-butyl 4-acetylbenzoat (19,90 g) i en benzen-eter-tetrahydrofuranblanding (3:3:2, 200 ml) ble sink (11,81 g) suspendert, hvorpå etyl 4-bromkrotonat (17,44 g) ble sakte tilsatt med oppvarming og omrøring, og deretter ble jod (omtrent 20 mg) tilsatt. Den resulterende blandingen ble varmet med tilbakeløp i et oljebad (60-70° C) i en 1 time, deretter ble etyl 4-bromkrotonat (3,00 g) tilsatt, og blandingen ble ytterligere varmet med tilbakeløp i 15 minutter. Etter avkjøling ved romtemperatur ble reaksjonsblandingen satt til vann (500 ml), justert til pE 4,9 ved tilsetting av eddiksyre og ekstrahert med eter. Ekstraktet ble vasket med 5% vandig ammoniakk og tørket med vannfritt magnesiumsulfat. ;Resten tilveiebragt ved fordamping av oppløsningsmiddelet under redusert trykk ble renset ved kolonnekromatografi (bærer; silisiumoksydgel, 300 g, elueringsmiddel; etylacetat-heksan=l:5), for å gi sluttforbindelsen. ;IR (Neat): 3480, 2975, 1720, 1650, 1605 cm-<1>. ;<1->H-NMR (CDC13) S: 1,20 ( 3H, t, J=7Hz ), 1,53 (12H,s), ;2,64 (2H,d,J=7Hz), 2,67 (lH.brs), 3,63 (3H,s), 4,08 (2E,q,J=7Ez), 5,80 (1H,d,J=15Hz), 6,80 ;(lH,dt,J=15Hz,7Hz), 7,45 (2H,d,J=7Hz), 7,90 ;(2H,d,J=8Hz). ;Hele etylheksenatderivatmengden (22,3 g) ble løst opp i en etanol-eddiksyreblanding (20:1, 200 ml), hvorpå 5% Pd-C (5,0 g) ble tilsatt, og deretter omfattende omrørt i 115 timer. Etter filtrering av Pd-C ved anvendelse av celitt og fordamping av oppløsningsmiddelet under redusert trykk, ble resten utsatt for fordamping under redusert trykk, for å gi sluttforbindelsen (15,66 g) som en fargeløs olje. ;K.pkt. 162-165°C/0,3mmEg ;IR (Neat): 2980, 2940, 1735, 1710, 1607, 848 cm-<1>. ;<1>H-NMR (CDCI3) S: 1,20 (3H,t,J=7Hz), 1,23 ;(3H,d,J=6Hz), 1,30-1,80 (4H,m), 1,58 (9H,s), 2,24 (2H,brt,J=6Ez ), 2,77 (lH.dq,J=6Hz, 6Ez ), 4,08 (2H,q,J=7Hz), 7,20 (2E,d,J=8Hz), 7,90 (2E,d,J=8Hz ). ;Referanseeksempel 18 ;Fremstilling av etyl 5-[4-(tert-butoksykarbonyl)fenyl]-2-jodheksanat: Forbindelsen (6,41 g) tilveiebragt i referanseeksempel 17 ble utsatt for samme reaksjon som i referanseeksempel 2 for å sluttforbindelsen (3,90 g). ;IR (Neat): 2980, 2940, 1738, 1715, 1610, 850 cm-<1>. ;<1>E-NMR (CDCI3) S: 1,23 (3E,t,J=7Ez), 1,23 ;(2E,d,J=7Hz), 1,40-1,95 (4E,m), 1,60 (9E,s ), 2,75 (lE.dq,J=6Ez,6Hz), 4,15 (2E,q,J=7Ez), 4,18 (lE,t,J=7Hz), 7,20 (2E,d,J=8Ez), 7,90 (2H,d,J=8Ez). ;Referanseeksempel 19 ;Fremstilling av etyl 5-[4-(tert-butoksykarbonyl)-fenyl]-2-(dicianometyl )-heksanoat: Forbindelsen (3,90 g) tilveiebragt i referanseeksempel 18 ble utsatt for samme reaksjon som den i referanseeksempel 3 for å gi sluttforbindelsen 83,19 g). ;IR (Neat): 2980, 2930, 2250, 1735, 1710, 1605, 857 cm-<1>. 1-H-NMR (CDC13) 5: 1,26 (1, 5H, t, J=7Hz ), 1,26 ;(3H,d,J=7Hz), 1,27 (1,5H,t,J=7Hz), 1,35-1,80 (4H,m), ;1,58 (9H,s), 2,50-3,08 (2H,m), 4,00 ;(lH,dd,J=8Hz,4Hz), 4,22 (1H,q,J=7Ez ), 4,23 ;(lH,q,J=7Hz), 7,18 (2H,d,J=8Hz), 7,92 (2H,d,J=8Ez). ;Arbeidseksempel I ;Fremstilling av tert-butyl 4-[3-(2,4-diamino-6-hydroksy-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)propyl]benzoat: Til en oppløsning av kaliumtert-butoksid (2,35 g) og guanidinhydroklorid (1,07 g) i tert-butylalkohol (10 ml) ble en oppløsning av forbindelsen (3,33 g) tilveiebragt i referanseeksempel 3 i tert-butylalkohol (30 ml) under argonatmosfære, og varmet med tilbakeløp i 20 timer. Til reaksjonsblandingen ble ytterligere kaliumtert-butoksid (434 mg) og guanidinhydroklorid (370 mg) tilsatt og blandingen ble varmet med tilbakeløp i ytterligere 8 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt, satt til 1 N kaliumhydrogensulfat i vann (omtrent 10 ml) og justert til pH 9. Etter ekstrahering med en tetrahydrofuran-kloroformblanding, ble oppløsningsmiddelet fordampet under redusert trykk og den resulterende resten ble renset ved kolonnekromatografi (bærer; silisiumoksydgel, 100 g, elueringsmiddel; diklormetan: etanol = 15:1 -» diklormetan etter blanding med konsentrert vandig ammoniakk i en skilletrakt: etanol = 15:1), for å gi sluttforbindelsen (1,90 g). ;IR (KBr): 3430, 3360, 1710, 1627, 1583, 1432 cm-<1>. ;<1->H-NMR (CDCl3-Me2S0-d6) S: 1,15-1,73 (2H,m), ;1,55 (9H,s), 1,73-2,10 (2H,m), 2,61 (2H,t,J=7Hz), ;3,35 (lH,t,J=6Hz), 5,40 (2H,brs), 5,51 (2H,brs), ;6,30 (lH.brs), 7,12 (2H,d,J=8Hz ), 7,29 (2H,d,J=8Hz). ;Arbeidseksempel II ;Fremstilling av tert-butyl 4-[3-(2,4-diamino-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)propyl]benzoat: Til en oppløsning av forbindelsen (575 mg) tilveiebragt i arbeidseksempel 1 I tetrahydrofuran (6 ml) ble en oppløsning av boran-tetrahydrofurankompleks (7,5 mmol) i tetrahydrofuran (7,5 ml) ved 0°C, og omrørt i 4,5 timer. Til reaksjonsblandingen ble eddiksyre-metanol (1:1, 6 ml) tilsatt og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 15 timer. Oppløsningsmiddelet ble fordampet under redusert trykk og resten ble renset ved kolonnekromatografi (bærer; silisiumoksydgel, 30 g, elueringsmiddel; diklormetan: etanol = 100:6 -+ 100:7 -► 100:8 10:1 8:1), for å gi sluttforbindelsen (263 mg). IR (KBr): 3335, 3180, 2975, 2935, 1710, 1607, 1207, 1163, 1110 cm-<1>. l-H-NMR (Me2S0-d6) 5: 1,54 (9H,s), 1,77-1,90 (2H,m), 2,68(2H,t,J=8Hz), 2,72 (2H,t,J=8Hz), 5,54 (2H,brs), ;6,11 (2H,brs), 6,45 (lH,s), 7,33 (2H,d,J=8Ez ) , ;7,82 (2H,d,J=8Hz), 10,51 (lH,s). ;Arbeidseksempel 1 ;Fremstilling av dietyl N-[4-[3-(2,4-diamino-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)propyl]benzoyl]-L-glutamat: Til forbindelsen (381 mg) tilveiebragt i arbeidseksempel II ble trifluoreddiksyre (3 ml) tilsatt og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 3 timer. Trifluoreddiksyre ble fordampet under redusert trykk, og til resten tilveiebragt ved tørking ved 70°C under redusert trykk ble en oppløsning av dietyl L-glutamathydroklorid (748 mg) i dimetylformamid (4 ml) ble en oppløsning av difenylfosforylazid (858 mg) i dimetylformamid (4 ml) tilsatt ved CC, og deretter ble en oppløsning av trietylamin (631 mg) i dimetylformamid (4 ml) dråpevis tilsatt ved samme temperatur. Etter omrøring ved 0°C i 30 minutter og deretter ved romtemperatur i 63 timer, ble presipitatet filtrert ut. Oppløsningsmiddelet ble fordampet under redusert trykk og den resulterende resten ble renset ved kolonnekromatografi (bærer; silisiumoksydgel, 20 g, elueringsmiddel; diklormetan etter blanding med konsentrert vandig ammoniakk I en skilletrakt -♦ diklormetan etter blanding med konsentrert vandig ammoniakk: etanol = 40:1 30:1), for å gi sluttforbindelsen (260 mg). ;IR (KBr): 3330, 3160, 1735, 1632, 1575, 1540, 1500, ;1200 cm-<1>. ;ifl-NMR (Me2S0-d6) S: 1,17 (3H,t,J=7Hz), 1,20 (3H,t,J=7Ez), 1,80-2,20 (4H,m), 2,44 (2H,t,J=7Hz), ;2,68 (2H,t,J=7Ez), 2,72 (2H,t,J=7Hz), 4,05 ;(2E,q,J=7Hz), 4,11 (2H,q,J=7Hz ), 4,35-4,50 (lH,m), ;5,34 (2H,s), 5,91 (2H,s), 6,42 (lH,s), 7,31 ;(2H,d,J=8Hz), 7,80 (2H,d,J=8Ez), 8,66 (1E,d,J=8Hz), ;10,51 (lH,s). ;Arbeidseksempel 2 ;Fremstilling av N-[4-[3-(2,4-diamino-7E-pyrrolo[2,3-d]pyrimi-din-5-yl)propyl]benzoyl]-L-glutaminsyre: Forbindelsen (250 mg) tilveiebragt i arbeidseksempel 1 ble løst opp i tetrahydrofuran-vannblanding (1:1, 7 ml), hvori 1 N natriumhydroksyd i vann (2,52 ml) ble tilsatt og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1,5 timer. Oppløsningen ble konsentrert til 3 ml under redusert trykk, og det resulterende uoppløselige stoffet ble filtrert ut gjennom et milli-porfilter. Til filtratet, avkjølt til 0°C, ble eddiksyre (0,5 ml) tilsatt og de resulterende krystallene ble samlet ved filtrering og grundig vasket med isvann. Krystallene ble tørket ved 70°C under redusert trykk, for å gi sluttforbindelsen (201 mg) som hvite krystaller. ;IR (KBr): 3340, 3200, 2940, 1660-1630, 1540, ;1500, 1397 cm-<1>. ;<i>H-NMR (Me2So-d6) S: 1,75-2,20 (4E,m), 2,35 ;(2E,t,J=7Ez), 2,68 (2E,t,J=7Ez), 2,71 (2H,t,J=7Ez ) , 4,30-4,47 (lH,m), 5,53 (2H,brs), 6,15 (2H,s), ;6,46 (lH,s), 7,31 (2H,d,J=8Hz ), 7,81 (2H,d,J=8Hz), ;8,48 (lH,d,J=8Hz), 10,51 (1H,s ). ;Arbeidseksempel 3 ;Fremstilling av dietyl N-[4-[3-(2,4-diamino-6-hydroksy-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)propyl]benzoyl]-L-glutamat: Forbindelsen (200 mg) tilveiebragt i arbeidseksempel I ble utsatt for samme reaksjon som den i arbeidseksempel 3, for å gi sluttforbindelsen (164 mg). ;IR (KBr): 3355, 3230, 2995, 2990, 1740, 1638, ;1595, 1590 cm-<1>. ;%-NMR (CDCl3/Me2S0-d6) S: 1,20 (3H,t,J=7Hz), ;1,25 (3H,t,J=7Hz), 1,25-2,70 (HH,m), 3,25-3,45 ;(lH,m), 4,05 (2H,q,J=7Hz ), 4,15 (2H,q,J=7Hz), ;4,38-4,68 (lH,m), 5,63 (2H,brs), 5,66 (2H,brs), ;7,16 (2E,d,J=8Hz), 7,76 (2H,d,J=8Hz), ;8,39 (lH,d,J=8Hz), 10,50 (lH,s). ;Arbeidseksempel 4 ;Fremstilling av N-[4-[3-(2,4-diamino-6-hydroksy-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)propyl]benzoyl]-L-glutaminsyre: Forbindelsen (112 mg) tilveiebragt i arbeidseksempel 3 ble utsatt for den samme reaksjonen som den i arbeidseksempel 4, for å gi sluttforbindelsen (60 mg). ;IR (KBr): 3350, 3210, 2950, 1730, 1660, ;1630 cm-1. ;<i>H-NMR (Me2S0-d6) S: 1,20-1,56 (2H,m), ;1,65-2,20 (4H,m), 2,35 (2H,t,J=7Hz ), 2,50-2,65 ;(2H,m), 3,25-3,35 (lH,m), 4,32-4,46 (lH,m), ;5,90 (2H,brs), 6,00 (2H,brs), 7,22 (2H,d,J=8Hz), ;7,78 (2H,d,J=8Ez), 8,52 (1H,d,J=8Hz), 10,45 ;(lH,s). ;Arbeidseksempel 5 ;Fremstilling av dietyl N-[4-[3-(2-amino-4-hydroksy-7H-pyrrolo[2,3-d]pyridin-5-yl)propyl]benzoyl]-L-glutamat: Forbindelsen (150 mg) tilveiebragt i referanseeksempel 7 ble løst opp i etanol (22,5 ml), og til denne ble 10% Pd-C (450 mg: fremstilt av Engelhand Co. Ltd.) og 2 dråper eddiksyre tilsatt og omfattende omrørt ved romtemperatur i 62,5 timer. Katalysatoren ble filtrert ut, filtratet ble konsentrert til tørrhet og resten ble renset ved kolonnekromatografi (bærer: silisiumoksydgel, 10 g, elueringsmiddel; kloroform inneholdende 5% etanol), for å gi sluttforbindelsen (33 mg). ;IR (KBr): 3340, 2940, 1740, 1680, 1670, 1630, ;1540, 1440, 1380, 1340, 1210, 1100, 1020, ;860 cm-1.;<1->H-NMR (CDCI3/CD3OD) S: 1,20 (3H,t,J=6Hz ), 1,28 (3H,t,J=6Hz), 1,87-2,36 (4H,m), 2,40-2,57 (2H,m), 2,60-2,87 (4H,m), 3,96-4,37 (4H,q x 2,J=6Hz), ;4,56-4,90 (lH,m), 6,37 (lH,s), 7,23 (2H,d,J=7,5Hz), ;7,71 (2H,d,J=7,5Hz). ;Arbeidseksempel 6 ;Fremstilling av N-[4-[3-(2-amino-4-hydroksy-7E-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)propyl]benzoyl]-L-glutaminsyre: Forbindelsen (27 mg) tilveiebragt i arbeidseksempel 5 ble løst opp i en tetrahydrofuran-vannblanding (1:1, 2,16 ml), hvorpå 1 N natriumhydroksyd i vann (0,189 ml) ble tilsatt og omrørt ved romtemperatur i 2,5 timer. En stor mengde tetrahydrofuran ble fordampet, og eddiksyre (0,189 ml) ble tilsatt ved isavkjøling og omrøring. Det resulterende presipitatet ble samlet ved filtrering og tørket, for å gi sluttforbindelsen (19 mg). ;IR (KBr): 3400, 3300, 2950, 1700, 1650, 1540, ;1510, 1400, 1340, 1240, 1080, 1020 cm-<1>. ;<1->H-NMR (Me2S0-d6) S: 1,80-2,17 (4H,m), 2,23-2,40 ;(2H,m), 2,53-2,83 (4H,m), 4,27-4,56 (lH,m), ;6,33 (lH,s), 7,27 (2H,d,J=7,5Ez), 7,78 ;(2E,d,J=7,5Hz). ;Arbeidseksempel III ;Fremstilling av tert-butyl 4[3-(2,4-diamino-6-okso-5,6-dihydropyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)propyl]benzoat: Til en oppløsning av kalium tert-butoksid (2,35 g) og guanidinhydroklorid (1,07 g) i tert-butylalkohol (10 ml) ble en oppløsning av forbindelsen (3,33 g) tilveiebragt i referanseeksempel 16 i tert-butylalkohol (30 ml) tilsatt under argonatmosfære, og varmet med tilbakeløp i 20 timer. Til reaksjonsblandingen ble ytterligere kaliumtert-butoksid (434 mg) og guanidinhydroklorid (370 mg), og varmet med tilbakeløp i ytterligere 8 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt, satt til 1 N kaliumhydrogensulfat i vann (omtrent 10 ml), justert til pH 9. Etter ekstrahering med en tetrahydrofuran-kloroformblanding, ble oppløsningsmiddelet fordampet under redusert trykk, og den resulterende resten ble renset ved kolonnekromatografi (bærer; silisiumoksydgel, 100 g, diklormetan-etanol; 15:1 diklormetan etter blanding med konsentrert vandig ammoniakk i en skilletrakt-etanol, 15:1), for å gi sluttforbindelsen (1,90 g). ;IR (KBr): 3430, 3360, 1710, 1627, 1583, 1432 cm-<1>. ;%-NMR (CDCl3/Me2S0-d6) S: 1,15-1,73 (2H,m), 1,55 ;(9H,s), 1,73-2,10 (2H,m), 2,61 (2H,t,J=7Hz ), 3,35 (lH,t,J=6Hz), 5,40 (2E,brs), 5,51 (2H,brs), 6,30 (lH,brs), 7,12 (2H,d,J=8Hz), 7,29 (2H,d,J=8Hz). ;Arbeidseksempel IV ;Fremstilling av tert-butyl 4-[3-(2,4-diamino-5,6-dihydropyr-rolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)propyl]benzoat: Til en oppløsning av forbindelsen (430 mg) tilveiebragt i arbeidseksempel III i tetrahydrofuran (10 ml) ble en oppløsning av boran-tetrahydrofurankomplekset (16,8 mmol) i tetrahydrofuran (10 ml) tilsatt og blandingen ble varmet med tilbakeløp i 4 timer. Etter avkjøling ble reaksjonsblandingen satt til isvann og grundig omrørt ved pH 2 (justert ved tilsetting av IN saltsyre) i 3 minutter ved pH 10,5 (justert ved tilsetting av 2 N kaliumkarbonat i vann) i 5 minutter. Reaksjonsblandingen ble ekstrahert med tetrahydrofuran-kloroformblanding. Oppløsningsmiddelet ble dampet av under redusert trykk, og resten ble renset ved kolonnekromatografi (bærer; silisiumoksydgel, 20 g, diklormetan-etanol, 30:1-»15:1 diklormetan etter blanding med konsentrert vandig ammoniakk i en skilletrakt-etanol, 20:1), for å gi sluttforbindelsen (114 mg). ;IR (KBr): 3375, 3325, 3190, 2970, 2930, 1712, ;1603 cm-<1>. ;%-NMR (CDCl3/Me2SO-d6) S: 1,45-2,15 (4H,m), 1,57 ;(9H,s), 2,65 (2H,t,J=7Hz), 3,00-3,28 (2H,m), ;3,44-3,70 (lH,m), 4,85 (2H,brs), 4,90 (2E,brs), 5,30 (lH,brs), 7,19 (2H,d,J=8Hz), 7,80 (2H,d,J=8Hz ). ;Arbeidseksempel 7 ;Fremstilling av dietyl N-[4-[3-(2-amino-4-hydroksy-5,6-dihydropyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl )propyl ] benzoyl ] -L-glutamat: Forbindelsen (1,47 g) tilveiebragt i referanseeksempel IV ble suspendert i tetrahydrofuran (60 ml), hvorpå 0,1 N natriumhydroksyd i vann (120 ml) ble tilsatt, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 21 timer. Deretter ble oppløs-ningen nøytralisert med 0,1 N saltsyre (60 ml) og konsentrert til tørrhet under redusert trykk. Resten ble suspendert i tørr dimetylformamid (112,5 ml), og dietyl L-glutamathydroklorid (2,88 g), difenylfosforylazid (1,295 ml) og trietylamin (2,52 ml) ble tilsatt. Blandingen ble bragt tilbake til romtemperatur og omrøringen ble fortsatt i 63 timer. Det resulterende presipitatet ble filtrert ut, og filtratet ble konsentrert til tørrhet under redusert trykk. Resten ble utsatt for separasjonsrensing med kolonnekromatografi på silisiumoksydgel (bærer; 100 g) (etanol inneholdende 6,9% ammoniakk-kloroform inneholdende 6,9% ammoniakk, 1:20-*1:10), for å gi sluttforbindelsen (1,12 g) som et farveløst pulver.

IR (KBr): 3330, 2930, 1740, 1670, 1640, 1570, 1540,

1440, 1375, 1300, 1200, 1095, 1020 cm-<1>.

1-H-NMR (CDCI3/CD3OD) S: 1,20 (3H,t, J=7,5Hz ), 1,27 (3H,t,J=7,5Hz), 1,47-1,83 (4H,m), 2,00-2,36 (2E,m), 2,37-2,50 (2H,m), 2,67 (2H,t,J=7,5Hz), 3,10-3,37

(2H,m), 3,53-3,80 (lH,m), 3,96-4,33 (4H,qx2,J=7,5Hz), 4,60-4,87 (lH,m), 7,25 (2H,d,J=9Hz), 7,75

(2H,d,J=9Hz).

Arbeidseksempel 8

Fremstilling av dietyl N-[4-[2-(2-amino-4-hydroksy-5,6-dihydropyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)etyl]benzoyl]-L-glutamat: Forbindelsen (0,315 g) tilveiebragt i referanseeksempel 13 ble utsatt for samme reaksjon som den i arbeidseksempel 7 for å gi sluttforbindelsen (0,247 g).

IR (KBr): 3310, 2990, 1740, 1730, 1690, 1640, 1570,

1530, 1440, 1375, 1330, 1240, 1200, 1090,

1010, 850 cm-<1>.

<1>H-NMR (CDCI3/CD3OD) S: 1,22 (3H,t,J=7,5Ez), 1,30 (3H,t,J=7,5Hz), 1,53-2,87 (8H,m), 3,13-3,90 (3H,m), 4,00-4,43 (4H,qx2,J=7,5Hz), 4,57-4,90 (lH,m), 7,25 (2H,d,J=9Hz ), 7,72 (2H,d,J=9Hz).

Arbeidseksempel 9

Fremstilling av dietyl N-[4-[3-(2,4-diamino-5,6-dihydropyr-rolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)propyl]benzoyl]-L-glutamat: Forbindelsen (94 mg) tilveiebragt i arbeidseksempel IV ble løst opp i 1 ml trifluoreddiksyre og omrørt ved romtemperatur i 3 timer. Oppløsningsmiddelet ble avdampet under redusert trykk, og til blandingen av resten tilveiebragt ved tørking ved 70°C under redusert trykk og dietyl L-glutamat (304 mg) i dimetylformamid (2 ml), ble en oppløsning bestående av difenylfosforylazid (350 mg) i dimetylformamid (1,5 ml) ved 0°C tilsatt, og deretter ble en oppløsning av trietylamin (180 mg) i dimetylformamid (1,5 ml) dråpevis tilsatt ved samme temperatur. Etter omrøring ved 0"C i 30 minutter og deretter ved romtemperatur i 78 timer, ble oppløsningsmid-delet avdampet under redusert trykk. Den resulterende resten ble renset ved kolonnekromatografi (bærer; silisiumoksydgel, 20 g, diklormetan etter blanding med konsentrert vandig ammoniakk i en skilletrakt->diklormetan etter blanding med konsentrert vandig ammoniakk -etanol 40:1->30:1), for å gi sluttforbindelsen (88 mg).

IR (KBr): 3350, 2990, 2945, 1740, 1610, 1540, 1508,

1438 cm-<1>.

1-H-NMR (CDC13) S: 1,23 (H,q,'J=7Hz), 1,43-1,80 (3H,m), 1,85-2,77 (7H,m), 2,95-3,30 (2H,m), 3,58

(lH,t,J=HEz) , 4,07 (2H,q,J=7Hz) , 4,20 (2E, q , J=7Hz ) ,

4,25 (lH.brs), 4,63-4,83 (lH,m), 4,68 (lH.brs),

7,00-7,23 (lH.m), 7,13 (2H,d,J=8Hz), 7,67

(2H,d,J=8Hz).

Arbeidseksempel 10

Fremstilling av N-[4-[3-(2-amino-4-hydroksy-5,6-dihydropyr-rolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)propyl]benzoyl]-L-glutaminsyre: Forbindelsen (1,05 g) tilveiebragt i arbeidseksempel 7 ble løst opp i tetrahydrofuran-vannblanding (2:1, 63 ml), og 1 N natriumhydroksid i vann (7,35 ml) ble tilsatt, og omrørt ved romtemperatur i 2,5 timer. Tetrahydrofuran ble avdampet, en liten mengde uoppløselig stoff ble filtrert ut, og eddiksyre (7,35 ml) ble satt til filtratet, og det resulterende presipitatet ble samlet ved filtrering. Presipitatet ble samlet ved filtrering. Presipitatet ble vasket med vann og tørket, for å gi sluttforbindelsen (0,85 g) som et fargeløst pulver.

IR (KBr): 3340, 2930, 1690, 1630, 1540, 1440, 1300,

1080, 850 cm-<1>.

1-H-N1V1R (DMS0-d6) S: 1,20-1,80 (4H,m), 1,87-2,17

(2E,m), 2,23-2,40 (2H,m), 2,50-2,77 (2H,m),

2,83-3,20 (2H,m), 3,30-3,63 (lH.m), 4,23-4,53

(lH,m), 7,26 (2H,d,J=9Hz), 7,77 (2H,d,J=9Hz ).

Arbeidseksempel 11

Forbindelsen N-[4-[2-(2-amino-4-hydroksy-5,6-dihydropyr-rolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)etyl]benzoyl]-L-glutaminsyre: Forbindelsen (0,195 g) tilveiebragt i arbeidseksempel 8 ble utsatt for samme reaksjon som den i arbeidseksempel 10, for å gi sluttforbindelsen (0,153 g).

IR (KBr): 3250, 2900, 1650, 1580, 1440, 1300,

1090 cm-<1>.

<i>H-NMR (DMS0-d6) S: 1,43-1,76 (lE,m), 1,98 (2H,t,J=7,5Ez), 1,80-2,10 (lH,m), 2,13-2,40

(2H,m), 2,67 (2H,t,J=9Hz), 2,90-3,23 (2H,m),

3,33-3,60 (lH,m), 4,10-4,43 (lE,m), 7,28

(2H,d,J=9Hz), 7,75 (2H,d,J=9Hz).

Arbeidseksempel 12

Fremstilling av N-[4-[3-(2,4-diamino-5,6-dihydropyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)propyl]benzoyl]-L-glutaminsyre: Forbindelsen (41 mg) tilveiebragt i arbeidseksempel 9 ble utsatt for samme reaksjon som den i arbeidseksempel 10, for å gi sluttforbindelsen (32 mg).

IR (KBr). 3700-2350, 3215, 1690-1620, 1540 cm-<1>.

^H-NMR (Me2S0-d6) 5: 1,02-1,85 (4H,m), 1,85-2,83

(6H,m), 2,90-3,30 (2H,m), 3,55 (1H,t,J=llHz ),

4,15-4,45 (lE,m), 6,38 (2H,brs), 6,77 (2H,brs),

6,90 (lH.brs), 7,22 (2H,d,J=8Hz), 7,74

(2H,d,J=8Hz), 8,22 (1H,d,J=7Hz).

Arbeidseksempel 13

Fremstilling av tert-butyl 4-[3-(2,4-diamino-6-hydroksy-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)-l-metylpropyl]benzoat: Forbindelsen (3,18 g) tilveiebragt i referanseeksempel 19 ble utsatt for samme reaksjon som den i arbeidseksempel I, for å gi sluttforbindelsen (2,61 g).

IR (KBr): 3360, 3235, 2975, 2700, 1715, 1625, 1584,

1438, 1290, 1163, 1118, 848 cm-<1>.

1-H-NMR (Me2S0-d6) S: 1,14 ( 3H, d , J=7Hz ), 1,20-1,50

(2H,m), 1,54 (9H,s), 1,55-1,80 (lH,m), 1,80-2,05

(lH.m), 2,60-2,78 (lH,m), 3,20-3,30 (lH,m), 5,86 (2H,brs), 5,96 (2H,brs), 7,25 (2H,d,J=8Hz), 7,81 (2H,d,J=8Hz), 10,42 (lH,s).

Arbeidseksempel 14

Fremstilling av tert-butyl 4-[3-(2,4-diamino-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)-l-metylpropyl]-benzoat (A) og tert-butyl-4-[3-(2, 4-diamino-7E-pyrrolo[2 ,3-d] pyr imi din-5-yl)-l-metyl-propyl]benzoat (B): Til en suspensjon av forbindelsen (2,00 g) tilveiebragt i arbeidseksempel 13 i tetrahydrofuran (25 ml) ble en oppløs-ning av bolan-tetrahydrofurankompleks (40,3 mmol) i tetrahydrofuran (40,3 ml). Etter omrøring i 10 minutter, ble blandingen avkjølt ved romtemperatur og ytterligere omrørt i 5 timer. Til reaksjonsblandingen ble en eddiksyre-metanol-blanding (1:1, 40 ml) tilsatt og blandingen ble omrørt i 18 timer ved romtemperatur. Etter avdamping av oppløsningsmid-delet under redusert trykk, ble den resulterende resten renset ved kolonnekromatografi (bærer: silisiumoksydgel, 100 g, elueringsmiddel; diklormetan-etanol=20: l->25 :2 , deretter diklormetan-etanol inneholdende ammoniakk (6%)), for å gi sluttforbindelsen (A) (579 mg) og (B) (1,214 g). (A) IR (KBr): 3350, 3200, 2980, 2940m, 1714, 1650, 1608, 1290, 1163, 1115, 848 cm-<1>.

<1->H-NMR (CDC13) S: 1,31 ( 3H, d , J=7Hz ), 1,60 (9H,s),

1,94 (2H,dt,J=8Hz), 2,40-2,60 (2H,m), 2,85 (lH,tq,J=7Hz,7Hz), 4,50-5,50 (4H,br), 6,46 (1H,s ),

7,27 (2H,d,J=8Hz), 7,96 (2H,d,J=8Hz), 9,20 (lH.brs). (B)IR (KBr): 3340, 3195, 2980, 2935, 1715, 1607, 1430,

1295, 1163, 1115, 847 cm-<1>.

1-H-NMR (Me2S0-d6) S: 1,18 (2,25H,d, J=7Hz), 1,19 (0,75H,d,J=7Hz), 1,23-1,42 (2H,m), 1,45-1,65 (2H,m),

1,54 (9H,s,), 2,64-2,70 (lH,m), 2,90-3,08 (2H,m), 3,30-3,50 (lH,m), 5,43 (4H,s), 5,95 (0,25H,s), 6,00 (0,75H,s), 7,32 (2H,d,J=8Hz), 7,82 (2H,d,J=8Hz).

Arbeidseksempel 15

Fremstilling av dietyl N-[4-[3-(2,4-diamino-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)-l-metylpropyl]-benzoyl]-L-glutamat: Forbindelsen (A) (581 mg) tilveiebragt i arbeidseksempel 14 ble utsatt for samme reaksjon som den i arbeidseksempel 1 for å gi sluttforbindelsen (640 mg).

IR (KBr): 3375, 3200, 2975, 2930, 1738, 1608, 1430,

1200, 1008, 853 cm-<1>.

<1>h-NMR (Me2S0-d6) S: 1,17 (3H,t,J=7Hz), 1,18 (3H,d,J=7Hz), 1,19 (3H,t,J=7Hz), 1,26-1,44 (2H,m), 1,44-1,63 (2H,m), 1,90-2,20 (2H,m), 2,44

(2H,t,J=7Hz), 2,63-2,80 (lH,m), 2,90-3,08 (2H,m), 3,30-3,50 (lH,m), 4,05 (2H,q,J=7Hz), 4,11

(2H,q,J=7Hz), 4,37-4,50 (lH,m), 5,36 (2E,s), 5,37

(2H,s), 5,87 (0,25H,s), 5,91 (0,75H,s), 7,30 (2H,d,J=8Hz), 7,80 (2H,d,J=8Hz), 8,66 (1H,d,J=8Hz).

Arbeidseksempel 16

Fremstilling av N-[4-[3-(2,4-diamino-6,7-dihydro-5H-pyr-rolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)-l-metylpropyl]benzoyl]-L-glutamin-syre : Forbindelsen (600 mg) tilveiebragt i arbeidseksempel 15 ble utsatt for samme reaksjon som den i arbeidseksempel 2, for å gi sluttforbindelsen (508 mg).

IR (KBr): 3350, 3200, 1690, 1680-1610, 1635, 1530,

1400, 1300, 853 cm-<1>.

l-H-NMR (Me2S0-d6) S: 1,20 ( 3H, d , J=7Hz ), 1,25-1,65

(4H,m), 1,87-2,20 (2H,m), 2,30 (2H,t,J=7Hz),

2,60-2,80 (lE,m), 3,00-3,20 (2E,m), 3,42-3,60 (lH,m), 4,22-4,40 (lH,m), 6,20-5,08 (5H,m), 7,28

(2H,d,J=8Hz), 7,78 (2H,d,J=8Hz), 8,28-8,36 (lH,m).

Arbeidseksempel 17

Fremstilling av dietyl N-[4-[3-(2,4-diamino-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)-l-metylpropyl]benzoyl]-L-glutaminsyre: Forbindelsen (B) (540 mg) tilveiebragt i arbeidseksempel 14 ble utsatt for samme reaksjon som den i arbeidseksempel 1, for å gi sluttforbindelsen (556 mg).

IR (KBr): 3340, 3180, 2935, 1735, 1640, 1610, 1580,

1200, 1095, 1018, 850 cm-<1>.

<1->H-NMR (CDC13) 5: 1,23 ( 3H, t, J=7Hz ), 1,30

(3H,d,J=7Hz), 1,31 (3H,t,J=7Hz), 1,80-2,05 (4H,m), 2,15-2,57 (4H,m), 2,83 (1H,tq,J=7Hz), 4,12

(2H,q,J=7Hz), 4,25 (2H,q,J=7Hz ), 4,68 (2H,brs),

4,75-4,87 (lH,m), 4,92 (2H,brs), 6,43 (lH.s), 7,26 (2H,d,J=8Hz), 7,37 (1H,dd,J=7Hz,3Hz), 7,77

(2H,d,J=8Hz), 8,81 (lH.brs).

Arbeidseksempel 18

Fremstilling N-[4-[3-(2,4-diamino-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)-l-metylpropyl]benzoyl]-L-glutaminsyre: Forbindelsen (533 mg) tilveiebragt i arbeidseksempel 17 ble utsatt for samme reaksjon som den i arbeidseksempel 2, for å gi sluttforbindelsen (436 mg).

IR (KBr): 3350, 3205, 1650, 1640, 1540, 1400, 850

cm-1.

<1->H-NMR (Me2S0-d6) 5: 1,25 (3H, d , J=7Hz ), 1,73-2,20

(4H,m), 2,35 (3H,t,J=8Hz), 2,40-2,68 (2H,m), 2,85 (lH,tq,J=7Hz,7Hz), 4,32-4,45 (lH,m), 5,54 (2H,brs),

6,06 (2H,brs), 6,38 (1H,s ), 7,33 (2H,d,J=8Hz), 7,83 (2H,d,J=8Hz), 8,49 (1H,d,J=8Hz), 10,45 (lH,s).

Arbeidseksempel 19

Forbindelsen (50 mg pr. tablett) tilveiebragt i arbeidseksempel 10, laktose (250 mg pr. tablett), kornstivelse (51 mg pr. tablett) og hydroksypropylcellulose L (9 mg pr. tablett) ble blandet Ifølge den konvensjonelle måten og granulert. Granulene, kornstivelse (8 mg pr. tablett) og magnesiumstearat (2 mg pr. tablett) ble blandet og tabletter ble dannet ifølge konvensjonell måte, for å tilveiebringe

tabletter (370 mg pr. tablett).

Arbeidseksempel 20

Ti gram av natriumsaltet av forbindelsen tilveiebragt i arbeidseksempel 10 ble løst opp i 11 fysiologisk saltvann. Oppløsningen ble filtrert gjennom et mikrofilter og fordelt i 2,2 ml aliquoter i ampuller, sterilisert ved 110"C i 30 minutter og ampullene kan bli anvendt for subkutane, intra-venøse eller intramuskulære injeksjoner.

Arbeidseksempel 21

Fem gram av hydrokloridet i forbindelsen tilveiebragt i arbeidseksempel 10 og 10 g mannitol ble løst opp i 11 destillert vann, og oppløsningen ble fordelt i 2 ml aliquoter i ampuller etter filtrering gjennom et bakterielt filter. Ampullene ble tørket i en frysetørrer og forseglet, og ampullene hvori innholdet blir løst opp før bruk ble dermed tilveiebragt. Før anvendelse for injeksjon blir ampullene åpnet og innholdet løst opp i, for eksempel, 2 ml fysiologisk saltvann.

Claims (1)

1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive pyrrolopyrimidinderivater med formel hvori ringen A er en pyrol eller pyrrolinring, X er en aminogruppe eller en hydroksylgruppe, Y er et hydrogenatom eller en hydroksylgruppe, B er en rettlinjet eller forgrenet alkylen med 2-4 C-atomer og - COOR<*> og -C00R<2> er karbonyl-grupper som kan bli forestret med en C^_4alkyl eller benzyl-gruppe eller et salt derav, karakterisertved at man omsetter en forbindelse med formelen hvori ringen A, X, Y og B er som definert ovenfor eller et derivat derav, oppnådd ved reaksjon ved karboksylgruppen, med en forbindelse med formel hvori -COOr<I> og -C00R<2> er karboksylgrupper som kan bli forestret med en konvensjonell gruppe, og om nødvendig dehydrogenere og/eller omdanne til et salt eller en fri form.