NO168043B - Analogifremgangsmaate for fremstilling av et terapeutisk aktivt syntetisk peptid - Google Patents
Analogifremgangsmaate for fremstilling av et terapeutisk aktivt syntetisk peptid Download PDFInfo
- Publication number
- NO168043B NO168043B NO851947A NO851947A NO168043B NO 168043 B NO168043 B NO 168043B NO 851947 A NO851947 A NO 851947A NO 851947 A NO851947 A NO 851947A NO 168043 B NO168043 B NO 168043B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- leu
- arg
- ser
- gln
- tyr
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 129
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 72
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 72
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 51
- XKCWNEVAXQCMGP-RXMQYKEDSA-N (2R)-2-amino-5-[carbamimidoyl(methyl)amino]pentanoic acid Chemical group CN(CCC[C@@H](N)C(O)=O)C(N)=N XKCWNEVAXQCMGP-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 35
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 15
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 claims description 11
- ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N D-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 11
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 11
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 10
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N D-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 claims description 7
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims description 7
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims description 7
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims description 4
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- 125000003301 D-leucyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CC(C)C 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 2
- LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims 1
- PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N dichlorodifluoromethane Chemical compound FC(F)(Cl)Cl PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010091798 leucylleucine Proteins 0.000 claims 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 63
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 59
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 36
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 29
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 29
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 29
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 28
- -1 p-chlorobenzyloxycarbonyl Chemical group 0.000 description 23
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 16
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 14
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 13
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 13
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 10
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 9
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical group C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 6
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 6
- 230000036515 potency Effects 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 5
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 description 5
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 5
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N methylsulfanylethane Chemical compound CCSC WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N D-histidine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical class OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 108010036509 somatotropin releasing factor 40 Proteins 0.000 description 3
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanoic acid Chemical compound CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N D-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical class OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical class OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GELXFVQAWNTGPQ-UHFFFAOYSA-N [N].C1=CNC=N1 Chemical compound [N].C1=CNC=N1 GELXFVQAWNTGPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 159000000021 acetate salts Chemical class 0.000 description 2
- 125000005076 adamantyloxycarbonyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)OC(=O)* 0.000 description 2
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical class OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 2
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 2
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical class NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Chemical class 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101100284231 Caenorhabditis elegans his-24 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N D-Asparagine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-Serine Chemical compound OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 1
- 125000003290 L-leucino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-asparagine Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Chemical class OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Chemical class OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005915 ammonolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical class O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- UNXNGGMLCSMSLH-UHFFFAOYSA-N dihydrogen phosphate;triethylazanium Chemical compound OP(O)(O)=O.CCN(CC)CC UNXNGGMLCSMSLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 1
- 125000000031 ethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N([H])[*] 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002260 hypophysiotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037189 immune system physiology Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000005928 isopropyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(OC(*)=O)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical class OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Chemical class 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Chemical class 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N methylazanide Chemical compound [NH-]C MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005897 peptide coupling reaction Methods 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000006257 total synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Chemical class OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N urethane group Chemical group NC(=O)OCC JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth-hormone releasing factors (GH-RF) (Somatoliberin)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
- A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/12—Growth hormone, growth factor other than t-cell or b-cell growth factor, and growth hormone releasing factor; related peptides
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt syntetisk peptid med sekvens: Rl-R2-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-R8-Ser-Rio~Ar9_R12_<R>13_<R>14-Gly-Gln-Leu-Ri3-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-R24-<R>25-<I>1e-N1e-R28-<R>29-Gln-Gln-Gly-NHR,
hvori
Ri er Tyr, D-Tyr, acetyl-Tyr, His eller NaMe-D-Tyr,
R2 er Ala eller D-NMA,
Rs er Ser eller Asn,
R^O er Tyr eller D-Tyr,
Ri2 er Arg eller Lys,
Rl3 er Ile eller Val,
R14 er Leu eller D-Leu,
Rl3 er Tyr eller Ser,
R24 er His eller Gin,
R25 er Glu eller Asp,
R28 er Asn eller Ser,
R29 er Arg eller D-Arg,
R er H eller -CH2CH3,
med den betingelse at en sekvens av rester som begynner ved C-enden og strekker seg gjennom R28 kan utelates og med den videre betingelse at R2 er D-NMA og/eller R14 er D-Leu og/eller R29 er D-Arg,
eller et ikke-giftig salt derav. Det karakteristiske ved oppfinnelsen er at
a) et utgangspeptid med minst en beskyttende gruppe og med formel (II) eller en passende avkortet versjon derav: X<1->R1(X eller X<2>)-R2-Asp(X<3>)-Ala-Ile-Phe-Thr(X<4>)-R8(X<4 >eller X<5>)-Ser(X<4>)-R10(X<2>)-Arg(X<6>)-R12(X<6> eller X<7>)-R13-R14-Gly-Gln(X<5>)-Leu-R18(X<2>)-Ala-Arg(X<6>)-Lys(X<7>)-Leu-Leu-<R>24(X eller X<5>)-R25(X<3>)-Ile-Nle-R28(X<4> eller X<5>)-R29 <x6)_Gln <x5)-Gln(x5)-Gly-x9,
hvori X, X<1>, X2, X3, X4, X5, X<6> og X<7> er hver enten hydrogen eller en beskyttende gruppe og X<9> er enten en beskyttende gruppe eller en forankringsbinding til harpiksbærer eller er des-X<9>, hvor da C-enden er NHR, fremstilles ved kobling av individuelle aminosyrer eller peptidfragmenter, b) den eller de beskyttende grupper eller forankringsbindingen avspaltes fra peptidet ved formel (II), og c) om ønsket omdannes det resulterende peptid med amino-syresekvensen (I) til et ikke-giftig salt derav.
Disse og andre trekk ved oppfinnelsen fremgår av patentkravene.
Oppfinnelsen vedrører fremstilling av peptider som har innvirkning på funksjonen av hypofysen i mennesker og dyr. Det ved oppfinnelsen fremstillbare peptid fremmer frigivelsen av veksthormon fra hypofysen.
Fysiologer har lenge vært kjent med at hypotalamus styrer de sekretoriske funksjoner av adenohypofysen ved at hypotalamus produserer spesielle substanser som stimulerer eller inhiberer sekresjonen av hvert hyposehormon. En hypotalamisk inhiberende faktor ble karakterisert i 1972 i form av somatostatin som inhiberer sekresjonen av veksthormon (GH).
I 1982 ble humane pankreatiske (tumor) frigivende faktorer (hpGRF) isolert fra ekstrakter av humane pankreatiske tumorer, renset, karakterisert, syntetisert og testet og ble funnet å fremme frigivelse av GH av hypofysen. Begge disse hypofysiotrope faktorer er blitt reprodusert ved total syntese og analoger av de native strukturer er blitt syntetisert. Det antas at human hypotalamisk GH frigivende faktor har nøyaktig den samme struktur og betegnelsen hGRF anvendes derfor i det følgende. En tilsvarende rotte-hypotalamisk GH frigivende faktor (rGRF), en tilsvarende svine-hypotalamisk GH frigivende faktor (pGRF) og en tilsvarende kveg-hypotalamisk GH frigivende faktor (bGRF) er også blitt karakterisert og syntetisert.
De ved oppfinnelsen fremstillbare peptider frigir GH fra dyrkede hypofyseceller og kan i det minste delvis motstå enzymatisk nedbrytning i kroppen og fremviser meget vesentlig økt potens.
De ved oppfinnelsen fremstillbare peptider kan anvendes
dispergert i en farmasøytisk eller veterinært tålbar flytende eller fast bærer. Slik farmasøytiske preparater kan anvendes innen klinisk medisin, både humanmedisin og veterinærmedisin, for tilførsel for terapeutiske formål.
Den nomenklatur som anvendes for å definere peptidene er
den som er angitt av Schroder & Lubke, "The Peptides", Academic Press (1965), hvor i samsvar med konvensjonell angivelse amino-gruppen ved N-enden vises til venstre og karboksyl-gruppen ved C-enden til høyre. Med naturlig aminosyre menes en av de vanlige, naturlig forekommende aminosyrer som finnes i proteiner omfattende Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gin, Cys,
Met, Phe, Tyr, Pro, Trp og His. Med Nie menes norleucin
og med Nva menes norvalin. Hvor aminosyre-resten har isomere former er det L-formen av aminosyren som er representert med mindre annet uttrykkelig er angitt.
D-NMA betegner D-isomeren av alanin hvori a-amino-gruppen
er substituert med metyl.
Oppfinnelsen tilveiebringer således syntetiske peptider
med den tidligere angitte sekvens.
Som anvendt ovenfor har fragmenter som strekker seg fra N-enden gjennom 27-resten biologisk potens ved å bevirke frigivelse av GH av hypofysen og fremstilling av slike biologisk aktive fragmenter er innenfor oppfinnelses-rammen.
Peptidene syntetiseres ved hjelp av en passende metode som kan være en utelukkende fastfase-teknikk eller delvis fastfase-teknikk, ved fragment-kondensering eller ved klassiske oppløsnings-koblinger. Anvendelse av i den
senere tid utviklede rekombinante DNA-metoder kan anvendes for å fremstille en del av en analog inneholdende bare naturlige aminosyre-rester som så kan knyttes til et kort
N-ende-peptid. F.eks. er metoder med utelukkende fastfase-syntese angitt i verket "Solid-Phase Peptide Synthesis", Stewart & Young, Freeman & Co., San Francisco, 1969, og er eksemplifisert ved læren i US patentskrift nr. 4.105.603 (Vale et al). Klassisk oppløsningssyntese er beskrevet detaljert i verket "Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl); Synthese von Peptiden", E. Wunsch (redaktør) (1974) Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Vest-Tyskland. Fragment-kondensasjonsmetoden for syntese er eksemplifisert i US patentskrift nr. 3.972.859. Andre tilgjengelige synteser er eksemplifisert i US patentskrift nr. 3.842.067 og 3.862.925.
Felles for slike synteser er beskyttelsen av de- labile sidekjede-grupper i de forskjellige aminosyre-deler med passende beskyttende grupper som vil forhindre at en kjemisk reaksjon foregår ved dette sted inntil gruppen endelig fjernes. Vanlig' er også beskyttelsen av en a-amino-gruppe på en aminosyre eller et fragment mens denne del reagerer ved karboksyl-gruppen, etterfulgt av den selektive fjernelse av den a-aminobeskyttende gruppe for å tillate at etterfølgende reaksjon foregår ved dette sted. Følgelig er det vanlig at det som et trinn i syntesen fremstilles en mellomprodukt-forbindelse som inkluderer hver av aminosyre-restene lokalisert i den ønskede sekvens i peptidkjeden med sidekjedebeskyttende grupper knyttet til de respektive rester.
Som utgangspeptid anvendes de tidligere angitte forbindelser med formel (II) med minst en beskyttende gruppe eller en passende avkortet versjon derav hvori: X, X<1->X<7> og X<9> har de tidligere angitte betydninger. De a-amino-beskyttende grupper som omfattes av XI er slike som er kjent å være nyttige ved trinnvis syntese av polypeptider. Blant de klasser av a-amino-beskyttende grupper som kan anvendes som X er (1) aromatiske uretantype-beskyttende grupper som f.eks. fluorenylmetyl-oksykarbonyl (FMOC), benzyloksykarbonyl (Z) og substituert Z, som f.eks. p-klorbenzyloksykarbonyl, p-nitrobenzyloksy-karbonyl, p-brombenzyloksykarbonyl og p-metoksybenzyloksy-karbonyl, videre (2) alifatiske uretan-beskyttende grupper som f.eks. t-butyloksykarbonyl (BOC), diisopropyl-metyloksykarbonyl, isopropyloksykarbony1, etoksykarbony1, allyloksykarbonyl og (3) cykloalkyl-uretan-type-beskyttende gruppe som f.eks. cyklopentyloksykarbony1, adamantyloksykarbonyl, og cykloheksyloksykarbonyl. Den foretrukne a-amino-beskyttende gruppe er BOC, selv når en NaMe-substituert rest anvendes i 1-stillingen.
X er hydrogen eller en beskyttende gruppe for imidazol-nitrogenet i His, som f.eks. Tos.
X 2kan være en passende beskyttende gruppe for den fenoliske hydroksyl-gruppe i Tyr, som f.eks. tetrahydropyranyl, tert-butyl, trityl, Bzl, CBZ, 4Br-CBZ og 2,6-diklorbenzyl(DCB). Den foretrukne beskyttende gruppe er 2,6-diklorbenzyl. X 2kan være hydrogen som betyr at der ikke er noen sidekjede-beskyttende gruppe på aminosyre-résten i denne stilling.
X^ er hydrogen eller en passende esterdannende beskyttende gruppe for karboksyl-gruppen i Asp eller Glu, som f.eks. benzyl (OBzl), 2,6-diklorbenzyl, metyl og etyl.
X 4kan være en passende beskyttende gruppe for hydroksyl-gruppen i Thr eller Ser, som acetyl, benzoyl, tert-butyl, trityl, tetrahydropyranyl, Bzl, 2,6-diklor-benzyl og CBZ. Den foretrukne beskyttende gruppe er Bzl. X 4kan være hydrogen som betyr at der ikke er noen beskyttende gruppe på hydroksyl-gruppen.
er hydrogen eller en passende beskyttende gruppe for sidekjede-amido-gruppen i Asn eller Gin. Den er foretrukket xantyl (Xan).
X6 er en passende beskyttende gruppe for guanidino-gruppen
i Arg, som nitro, Tos, CBZ, adamantyloksykarbonyl og BOC, eller er hydrogen.
X7 er hydrogen eller en passende beskyttende gruppe for sidekjede-amino-gruppen i Lys. Illustrerende for passende sidekjede-aminobeskyttende grupper er 2-klorbenzyloksykarbonyl(2-Cl-Z), Tos, t-amyloksykarbonyl og BOC.
Seleksjonen av en sidekjede-amino-beskyttende gruppe er
ikke kritisk med unntagelse av at generelt velges en som ikke fjernes under avbeskyttelsen av a-amino-gruppene under syntesen. For noen aminosyrer, f.eks. His, er imidlertid beskyttelse ikke generelt nødvendig etter at koblingen er fullført og de beskyttende grupper kan være de samme.
X ger en passende beskyttende gruppe for C-ende-karboksyl-gruppen som f.eks. den esterdannende gruppe X , eller er en forankringsbinding anvendt ved fastfase-syntese for tilknytning til en fast harpiksbærer, eller er des-X 9, hvor da resten ved C-enden har en karboksyldel angitt i det foregående som NHR.. Når en fast harpiksbærer anvendes kan den være av en hvilken som helst type som er kjent på området, f.eks. en med formel : -0-CH2~harpiksbærer, -NH-benzhydryl-amin (BHA) harpiksbærer eller -NH-parametylbenzhydrylamin (MBHA) harpiksbærer. Når det usubstituerte amid ønskes foretrekkes bruk av BHA eller MBHA, på grunn av at spaltning gir amidet direkte. Når N-metylamidet ønskes kan dette utvikles fra en N-metyl BHA-harpiks- Skulle andre substituerte amider være ønskelig eller skulle andre grupper enn den fri syre være ønskelig ved C-enden,
kan det være foretrukket å syntetisere peptidet under anvendelse av klassiske metoder som angitt i Houben-Weyl.
I formelen for mellomprodukt-forbindelsen er minst en av X-gruppene en beskyttende gruppe eller X 9inkluderer harpiksbærer. I oppfinnelsens sammenheng fremstilles altså et peptid av interesse ved (a) å tildanne et peptid med minst en beskyttende gruppe og formel (II): hvori
123456 7
X, X , X , X , X , X , X og X er enten hver hydrogen
eller en beskyttende gruppe og X^ er enten en beskyttende gruppe eller en forankringsbinding til harpiksbærer eller des-X g, hvor da resten ved C-enden har en karboksydel,
eller ved (b) å avspalte den eller de beskyttende grupper eller forankringsbindingen fra peptidet med formel (II) , og om ønsket (c) omdannes det resulterende peptid med sekvensen (I) til et ikke-giftig salt.
Ved seleksjon av en spesiell sidekjede-beskyttende gruppe som anvendes ved syntese av peptidene følges de følgende generelle regler: (a) den beskyttende gruppe bibeholder foretrukket sine beskyttende egenskaper og avspaltes ikke under koblingsbetingelsene, (b) den beskyttende gruppe bør være stabil overfor reagensen og er med unntagelse av Xan foretrukket stabil under reaksjonsbetingelsene valgt for å fjerne den a-aminobeskyttende gruppe ved hvert syntesetrinn, og (c) den sidekjedebeskyttende gruppe må kunne fjernes etter fullført syntese inneholdende den ønskede aminosyresekvens, under reaksjonsbetingelser som ikke uønsket vil endre peptidkjeden.
Når peptidene ikke fremstilles under anvendelse av rekombinant DNA-teknologi fremstilles de foretrukket under anvendelse av fastfase-syntese, f.eks. som generelt beskrevet av Merrifield,J. Am. Chem. Soc. 85, side 2149
(1963), selv om andre ekvivalente kjemiske synteser kjent på området også kan anvendes som tidligere nevnt. Fastfase-syntese begynnes fra den C-terminale ende av peptidet ved å koble en beskyttet a-aminosyre til en passende harpiks. Et slikt utgangsmaterial kan fremstilles ved å knytte en a-amino-beskyttet aminosyre ved hjelp av en ester-binding til en klormetylert harpiks eller en hydroksymetylharpiks, eller ved en amidbinding til en BHA-harpiks eller MBHA-harpiks. Fremstillingen av hydroksymetylharpiksen er beskrevet av Bodansky et al., Chem. Ind. (London) 38, 1597-98 (1966). Klormetylerte harpikser kan fåes i handelen fra Bio Rad Laboratories, Richmond, California, USA og fra Lab. Systems. Inc. Fremstillingen av en slik harpiks er beskrevet av Stewart et al "Solid Phase Peptide Synthesis" (Freeman & Co., San Francisco 1969), kapitel.
1, sidene 1-6. BHA og MBHA harpiksbærere kan fåes i handelen og anvendes generelt bare når det det ønskede polypeptid som syntetiseres har et usubstituert amid ved C-enden.
C-ende-aminosyren, beskyttet mot BOC og Xan, kan først kobles til den klormetylerte harpiks ved hjelp av metoden angitt i Chemistry Letters, K. Horiki et al., 165-158 (1978) under anvendelse av KF i DMF ved omtrent 60°C i 24, timer under omrøring. Etter koblingen av den BOC-beskyttede aminosyre til harpiksbæreren fjernes den a-aminobeskyttende gruppe, f.eks. under anvendelse av trifluoreddiksyre (TFA)
i metylenklorid eller TFA alene. Avbeskyttelsen gjennom-føres en temperatur mellom omtrent 0°C og romtemperatur. Andre standard spaltningsmidler som f. eks". HCl i dioksan,
og betingelser for å fjerne spesifikke a-aminobeskyttende grupper kan anvendes som beskrevet i Schroder & Lubke "The Peptides", 1 sidene 72-75 (Academic Press 1965).
Etter fjernelse av den a-aminobeskyttende gruppe kobles
de resterende a-amino- og sidekjede-beskyttede aminosyrer trinnvis i den ønskede rekkefølge for å oppnå mellomprodukt-forbindelsen som definert i det foregående, eller som et alternativ til å addere hver aminosyre separat ved syntesen, kan noen av dem kobles til hverandre før tilsetningen til fastfase-reaktoren. Seleksjonen av et passende koblingsreagens foretas lett av fagmannen.
Spesielt egnet som et koblingsreagens er N,N'-dicykloheksyl-karbodiimid (DCCI).
De aktiverende reagenser som anvendes ved fastfase-
syntesen av peptidene er vel kjent på peptidområdet. Eksempler på egenede aktiverende reagenser er karbodiimider
som f.eks. N,N'-diisopropylkarbodiimid og N-etyl-N'-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimid. Andre aktiverende reagenser og deres bruk ved peptid-kobling er beskrevet av Schroder & Lubke supra, i kapitel III og av Kåpor, J. Phar. Sei.,
59, sidene 1-27 (1970) .
Hver beskyttet aminosyre eller aminosyre-sekvens innføres
i fastfase-reaktoren i omtrent et fire gangers eller større overskudd og koblingen kan gjennomføres i et medium av dimetylformamid (DMF): CH2C12 (1:1) eller i DMF eller CH2C12 alene. I tilfeller hvor ufullstendig kobling forekommer gjentas koblingsprosedyren før fjernelse av den a- aminobeskyttende gruppe før koblingen av den neste aminosyre. Det heldige utfall av koblingsreaksjonen ved hvert trinn av syntesen, hvis denne gjennomføres manuelt, overvåkes foretrukket ved hjelp av ninhydrin-reaksjonen som beskrevet av E. Kaiser et al., Anal. Biochem., 34,
595 (1970). Koblingsreaksjonene kan gjennomføres automatisk f.eks. på et Beckman 990 automatisk synteseanlegg under anvendelse av program f.eks. som angitt i Rivier et al., Biopolymers, 1978, 17, sidene 1927-1938.
Etter at den ønskede aminosyre-sekvens er fullført kan mellomprodukt-peptidet fjernes fra harpiksbæreren ved behandling med et reagens som f.eks. flytende hydrogenfluorid som ikke bare spalter peptidet fra harpiksen, men også avspalter alle resterende sidekjede-beskyttende grupper X, X2, X<3>, X4, X5, X6 og X7 og forankringsbindingen X 9 og også den a-aminobeskyttende gruppe X 1 hvis en sådan anvendes, for å oppnå peptidet i form av den fri syre. Når hydrogenfluorid anvendes for spaltningen inkluderes anisol og metyletylsulfid som reaksjonskomponenter i reaksjonsbeholderen.
Det følgende angir en foretrukket og rent eksempelvis medtode for syntese av peptider ved hjelp av fastfase-teknikk. Det sees selvfølgelig at syntesen av et tilsvarende kortere peptidfragment gjennomføres på samme måte ved enkelt å eliminere det ønskede antall aminosyrer ved den ene eller den annen ende av kjen. Det antas imidlertid at biologisk aktive fragmenter bør inneholde den angitte sekvens ved N-enden.
llS5??}P?i_P^_É??^Éasef £em§tilling_a^_e^_peptid
Syntese av peptidet [N^eTyr<1>, D-NMA<2>, D-Leu<23>]-rGRF(1-43)-OH med formel: N MeTyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-His-Glu-Ile-Met-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-GjLu-Gln-Arg-Ser-Arg-Phe-Asn-OH
gjennomføres på trinnvis måte under anvendelse av et Beckman 990 Peptide Synthesizer på en klormetylert
harpiks med et substitusjonsområde på omtrent 0,1 til 0,5 mmol/g harpiks. Kobling av BOC-Asn(xan) til harpiksen gjennomføres ved hjelp av den generelle metode angitt i Chemistry Letters, supra, under anvendelse av KF i DMF
ved omtrent 60°C i 24 timer med omrøring og resulterer i substitusjon av omtrent 0,35 mmol Asn pr. g harpiks.
Etter avblokkering og nøytralisering oppbygges peptidkjeden trinnvis på harpiksen. Avblokkering, nøytraliering og addisjon av hver aminosyre gjennomføres i generelt samsvar med prosedyren angitt detaljert i Rivier, J., J. Amer.
Chem. Soc, 96, 2986-2992 (1974). Alle løsningsmidler som anvendes avgasses gjerne ved gjennombobling med en inert gass, f.eks. helium eller nitrogen
Avblokkering gjennomføres foretrukket i samsvar med
skjema A som følger:
SKJEMA A
Koblingene gjennomføres foretrukket som angitt i skjema B som følger:
SKJEMA B
Kort forklart anvendes 1 til 2 mol BOC-beskyttet aminosyre
i metylen-klorid pr. g harpiks, pluss en ekvivalent av 1,0 molar DCCI i metylen-klorid i 2 timer. Når BOC-Arg(TOS) kobles anvendes en blanding av 50% DMF og metylen-klorid. Bzl-eter anvendes som hydroksyl-sidekjede-beskyttende gruppe for Ser og Thr. Amido-gruppen i Asn eller Gin beskyttes med Xan når DCC-kobling anvendes som foretrukket. P-nitrofenylester(ONp) kan også anvendes for å aktivere
karboksyl-enden av Asn eller Gin og f.eks. kan BOC-Asn-(ONp) kobles over natten under anvendelse av en ekvivalent HOBt i en 50* blanding av DMF og metylen-klorid, og DCC tilsettes da ikke. 2-klor-benzyloksykarbonyl (2C1-Z) anvendes som den beskyttende gruppe for Lys-sidekjeden. Tos anvendes for å beskytte guanidino-gruppen i Arg og imidazol-nitrogenet i His, og Glu eller Asp sidekjede-karboksyl-gruppen beskyttes med OBzl. Den fenoliske hydroksyl-gruppe i Tyr beskyttes med 2,6-diklor-benzyl (DCB). Ved slutten av syntesen oppnås følgende sammensetning: BOC-N<*>MeTyr(X<2>)-D-NMA-Asp(X<3>)-Ala-Ile-Phe-Thr(X<4>)-Ser(X<4>)-Ser(X<4>)-Tyr(X<2>)-Arg(X<6>)-Arg(X<6>)-Ile-Leu-Gly-Gln(X<5>)-Leu-T<y>r(X<2>)-Ala-Arg(X<6>)-Lys(X<7>)-Leu-D-Leu-His(X)-Glu(X<3>)-Ile-Met-Asn VX5)-Arg(X6)-Gin(X5)-Gin(X5)-Gly-Glu(X3)-Arg (X6) -Asn (X5) -Gin (X5) -Glu (X3) -Gin (X5) -Arg (X6) - Ser(X<4>)-Arg(X<6>)-Phe-Asn(X<5>)-X<9>
hvori X<2> er DCB, X<3> er OBzl, X<4> er Bzl, X<5> er Xan, X<6> er
7 9
Tos, X er 2C1-Z og X er -0-CH2-harpiks-bærer.
Xan kan være blitt delvis eller fullstendig fjernet ved TFA-behandling anvendt for avblokkering av den a-amino-beskyttende gruppe.
For å spalte og avbeskytte den beskyttede peptidharpiks behandles den med 1,5 ml anisol, 0,5 ml metyletylsulfid og 15 ml hydrogenfluorid (HF) pr. g peptidharpiks ved -20°C i 1/2 time og ved 0°C i 1/2 time. Etter fjernelse av HF under høyvakuum blir harpikspeptid-resten vasket vekselvis med tørr dietyleter og kloroform og peptidet ekstraheres så med avgasset 2N vandig eddiksyre og separeres fra harpiksen ved filtrering.
Det spaltede og avbeskyttede peptid oppløses i 0 til 5% eddiksyre og underkastes rensing som kan inkludere "Sephadex G-50" fingel-filtrering.
Peptidet blir så ytterligere renset ved preparativ eller halvpreparativ høytrykks væskekromatografering HPLC
som beskrevet i Rivier et al., Peptides: Structure and Biological Function, (1979), sidene 125-128 og Marki et al. J.Am.Chem.Soc. 103, 3178 (1981). Patroner tilpasset Waters Associates preparat LC-500 fylles med 15-20 |u Clg silika fra Vydac (300A). En gradient av CH3CN i TEAP utvikles ved hjelp av en lavtrykks Eldex gradient-fremstiller som beskrevet i Rivier, J., J. Liq. Chromatography 1, 343-367 (1978). De kromatografiske fraksjoner overvåkes omhyggelig ved hjelp av HPLC og bare de fraksjoner som viser vesentlig renhet samles. Avsalting av de rensede fraksjoner, uavhengig kontrollert med hensyn til renhet, oppnås under anvendelse av en gradient av CH3CN i 0,1* TFA. Midtfraksjonen blir så frysetørket til
å gi det ønskede peptid med renhet som kan være over 98%.
Syntesen gjentas under anvendelse av en MBHA-harpiks for
å fremstille det samme peptid med en amidert C-ende under anvendelse av en initial prosedyre som generelt beskrevet i Vale et al US patentskrift nr. 4.292.313 for å knytte Asn til MBHA-harpiksen.
EKSEMPEL I
Syntese av [D-NMA<2>, Nie<27>]-rGRF(1-43)-OK med formel: H-His-D-DNMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ser-Arg-Phe-Asn-OH
gjennomføres på trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en klormetylert harpiks på den måte som er generelt beskrevet i det foregående. Peptidet ansees å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL II
Syntese av hGRF analog-fragment,
[D-NMA<2>, Nle27]-hGRF(l-32)-NH2 med formel: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-NH2
gjennomføres på trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I. Denne analoge ansees å være hovedsakelig ren under anvendelse av TLC og HPLC.
Syntesen gjentas for å fremstille [D-NMA , D-Leu , Nie ]-hGRF(1-32)-NH2-
EKSEMPEL III
Syntese av hGRF-analogfragmentet
fD-NMA , Nie J-hGRF(1-29)-NH2 med formel: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr - Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I.. Peptidet ansees å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
Syntesen gjentas for å fremstille [D-NMA 2 , Nie 2 7"]-hGRF-(l-27)-NH2.
EKS EMP EL IV
2 27
Syntese av [D-NMA , Nie ]-rGRF(1-29)-NH2 med formel H-His-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I. Peptidet betraktes som hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
Syntesen gjentas for å fremstille [D-NMA <2> -D-Leu 2 3, Nie<27>]-rGRF(1-29)-NH2.
EKSEMPEL V
Syntese av [D-NMA<2>, D-Glu<25>, Nie<27>]-hGRF(1-29)-NH2
med formel: m „ , ^. _, H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-D-Glu-Ile-Nle-Ser-Arg-NH2
gjennomføres på trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpisk som i eksempel I. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL VI
Syntese av [D-NMA 2 , D-Asp 3 ' 25]-hGRF(1-32)-NH med formel: H-Tyr-D-NMA-D-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-D-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-NH, gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I.. Denne analoge bedømmes å være hovedsakelig ren under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL VII
Syntese av [D-His<1>, D-NMA<2>, D-Ser8, D-Leu23, Nle27]-rGRF-(l-43i)-OH med formel: H-D-His-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-D-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ser-Arg-Phe-Asn-OH
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en klormetylert harpiks
på samme måte som generelt beskrevet i det foregående.. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL VIII
Syntese av rGRF analogfragment, dvs. [NaMeTyr1, D-NMA2, D-Glu25]-rGRF(1-29)-NH2 med formel
N<a>MeTyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-D-Glu-Ile-Met-Asn-Arg-NH2
gjennomføres på trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som
i eksempel I. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL IX
Syntese av [D-NMA2, Nie27]-pGRF(1-29)-NH2 med formel H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som generelt beskrevet i Vale et al. US patentskrift nr.
4.292.313. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent
under anvendelse av TLC og HPLC.
■ EKSEMPEL X'
1 2 2 3
Syntese av [D-Tyr , D-NMA , D-Leu ]-bGRF(1-44)-NH2
med formel: H-D-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Arg-Val-Arg-Leu-NH2
gjennomføres på trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som generelt beskrevet i Vale et al., US patentskrift nr. 4.292.313. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL XI
2 2 7
Syntese av [D-NMA , Nie ]-bGRF (1-29)-NH2 med formel: D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Asn-Arg-NH2 gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som generelt beskrevet i Vale et al., US patentskrift nr. 4.292.313. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL X. TI
Syntese av [N^eHis<1>, D-NMA2, Nie27 ]-pGRF (1-29)-NH2 med formel: H-N^MeHis-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som
generelt beskrevet i Vale et al., US patentskrift nr. 4.292.313. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av -,;TLC og HPLC.
EKSEMPEL X:iII
Syntese av hGRF analogfragmentet [D-NMA<2>, Leu<27>, Asn<28>]-hGRF(l-32)-NH2 med formel: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Leu-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I. Denne analoge bedømmes å være hovedsakelig ren under anvendelse av TLC og HPLC.
Syntesen gjentas for å fremstille [D-NMA<2>Ile<13>, Ile<27>]-hGRF-(l-32)-NH2.
EKSEMPEL XIV
2 12 27
Syntese av [D-NMA , Lys , Nie ]-rGRF(1-29)-NH2 med formel: H-His-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Lys-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel II. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
2 13 18 Syntesen gjentas for å fremstille [D-NMA , Val , Ser ]-rGRF(1-29)-NH2
EKSEMPEL X. V
Syntese av [D-NMA2, His24, D-Asp<25>]-hGRF(1-32)-NH2
med formel: H-Tyr-D-NMA-Asp<->Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-D-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I. Denne analoge bedømmes å være hovedsakelig ren under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL XVI
Syntese av [D-His <1> , D-NMA <2> , D-Asn <8> , Nie <27> , Ser <34> , Ala <40>]-rGRF(1-4 3)-OH med formel: H-D-His-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-D-Asn-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ala-Arg-Phe-Asn-OH
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en klormetylert harpiks på samme måte som generelt beskrevet i det foregående Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL XVII
Syntese av [D-Ala<2>, D-Asp<3>, D-Arg<29>]-hGRF(1-32)-NH2
med formel: H-Tyr-D-Ala-D-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-yal-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-D-Arg-Gln-Gln-Gly-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I . Denne analoge bedømmes å være hovedsakelig ren under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL XVIII
Syntese av [D-His<1>, D-NMA<2>, D-Ser<8>, D-Leu14, Nle27]-rGRF-(1-43) -NHCH2CH3 rned formel: H-D-His-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-D-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-D-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ser-Arg-Phe-Asn-NHCH2CH3
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en klormetylert harpiks på den måte som er generelt beskrevet i det foregående og fjernes fra harpiksen under anvendelse av etylamin til å danne det substituerte amidpeptid. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL XIX
r a i 14 Syntese av et rGRF analogfragment, dvs. LN MeTyr i , D-Leu <14>, D-Glu25]-rGRF(1-27)-NH2 med formel: N^SieTyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-D-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-D-Glu-Ile-Met-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL XX.
Syntese av [D-Tyr<1>, D-NMA<2>, D-Leu14, D-Arg29]-pGRF(1-44)-NH2 med formel: H-D-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-D-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-D-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Arg-Val-Arg-Leu-NH2 gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som generelt beskrevet i Vale et al., US patentskrift nr. 4.292.313. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL XXII
1 2 14 29 42 Syntese av [D-Tyr , D-NMA , D-Leu , D-Arg , Ala bGRF(1-44)-NH2 med formel: H-D-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-D-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Asn-D-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som generelt beskrevet i Vale et al., US patentskrift nr. 4.292.313. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL XX:
Syntese av [D-NMA2, Nie27, D-Arg29]-pGRF(1-29)-NH2
med formel: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-D-Arg-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som generelt beskrevet i Vale et al., US patentskrift nr. 4.292.313. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent
under anvendelse av TLC og HPLC. Acetatsaltet fremstilles så ved å oppløse peptidet i vann og tilsette IN eddiksyre. Den resulterende oppløsning frysetørkes og gir eddiksyre-saltet.
EKSEMPEL XXIII
Syntese av hGRF analog [D-NMA 2 , Nie 27 , D-Arg 29 ]-hGRF-(l-29)-NH2 med formel: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-D-Arg-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I . Dene analoge bedømmes å være hovedsakelig ren under anvendelse av TLC og HPLC.
Syntesen gjentas for å fremstille [D-NMA 2 , D-Leu 14 , Nie 2 7, D-Arg<29>]-hGRF(1-32)-NH2.
EKSEMPEL XXIV
14 27
Syntesen av [D-Leu , Nie ]-rGRF(1-29)-NH2 med formel: H-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-D-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg-NH2 gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I . Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC. 2 14 27 Syntesen gjentas for a fremstille [D-NMA , D-Leu , Nie ]-rGRF(1-29)-NH2.
EKSEMPEL XXV
Syntese av hGRF-analog [D-NMA2, Nie27, Asn28 ]-hGRF (1-29 )-NFL.
med formel: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Asn-Arg-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synchesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel r. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL XXVI
2 25 71 ?Q
Syntese- av [D-Ala , D-Glu , Nie , D-Arg ] -hGRF (1-29)-NH2 med formel: H-Tyr-D-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-D-Glu-Ile-Nle-Ser-D-Arg-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I. Etter fjernelse av peptidet fra harpiksen og avbeskyttelse behandles det med IN eddiksyre for å frembringe acetatsaltet før frysetørkingen. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL XXVII
27 29
Syntese av [Nie , D-Arg ]-rGRF(1-29)-NH2 med formel: H-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-D-Arg-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en. Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I . Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL XXVIII
Syntese av hGRF analogfragmentet [D-NMA2, D-Tyr10, Nle27]-hGRF(1-29)-NH2 med formel: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-D-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I . Peptidet bedømmes å være hovdsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
Syntesen gjentas for å frembringe [D-NMA 2 , D-Leu 17 , Nie 27]-hGRF(1-27)-NH2-
EKSEMPEL XXIX
2 27
Syntese av hGRF analogfragmentet [D-NMA , Nie ]-hGRF-(l-29)-NHEt med formel: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-1le-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr - Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-NHCH2CH3
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en klormetylert harpiks som i det foregående.Peptidet avspaltes fra harpiksen ved ammonalyse ved behandling med etylamin. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL XXX
Syntese av tD-Leu14, Nie27]-rGRF(1-29)-NH2 med formel: H-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-D-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I. Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL XXXI
1 2 2 7 Syntese av hGRF analog-fragmentet rD-Tyr , D-NMA , Nie , 29 i D-Arg J-hGRF(1-29)-NH2 med formel: H-D-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-D-Arg-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I . Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL XXXII
Syntese av hGRF analog-fragmentet [D-N<a>MeTyr, D-NMA <2>,
27
Nie <]>-hGRF(1-29)-NH2 med formel: H-D-N<*>MeTyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I . Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
EKSEMPEL XXXIII
1 2 27 Syntese av hGRF analogfragmentet [His , D-NMA , Nie ]-hGRF(1-29)-NH2 med formel: H-His-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-NH2
gjennomføres på en trinnvis måte under anvendelse av en Beckman 990 Peptide Synthesizer på en MBHA-harpiks som i eksempel I . Peptidet bedømmes å være hovedsakelig rent under anvendelse av TLC og HPLC.
o 127 Syntesen gjentas for å fremstille [His , Nie , D-Arg29]-hGRF(1-2 7)-NH2.
De syntetiske peptider fremstilt i eksemplene sammenlignes med syntetisk hpGRF(1-40)-OH ved in vitro assay-"testingog finnes å fremvise generelt større potenser for sekresjon av GH og lignende dermed forbundne aktiviteter. Alle disse syntetiske peptider ansees å være biologisk aktive og potensielt nyttige for simulering av frigivelse av GH av hypofysen.
For å bestemme den relative effektivitet av visse representative syntetiske peptider for å fremme frigivelse av vekst-hormon ble in vitro assay- tester gjénnomført under anvendelse av syntetisk hpGRF(1-40)-OH som en standard ved side-ved-side-sammenligning med ekvimolare konsentrasjoner av de representative analoger som er blitt syntetisert. Det anvendes kulturer som inkluderer celler av rotte-hypofyse-kjertel fjernet tre til fem døgn tidligere. Slike kulturer ansees som optimale for sekresjon av veksthormon og anvendes for den sammenlignende testing, på den generelle måte som er beskrevet i Vale et al. Endocrinology, 91, 562-572 (1972) og som mer detaljert beskrevet i Vale et al. Endocrinology, 112, 1553-1555 (1983). Inkubasjon med substansen som testes gjennomføres i tre til fire timer og prøver av dyrkings-mediet fjernes og behandles for å måle deres innhold av immuno-reaktivt GH(ir GH) ved hjelp av en vel-karakterisert radio-immunoassay.
Resultatene av denne sammenlignende testing for ekvimolare konsentrasjoner er vist i tabell I.
In vitro testing av disse syntetiske peptider viser at mange av dem har overraskende større biologisk potens enn den som fremvises av hpGRF(1-40)-OH, f.eks. er minimum effektiv konsentrasjon for [D-NMA<2>, Nie<27>]-hGRF(1-29)-NH2 omtrent 1 picomolar.
I tillegg til de nevnte in vitro tester for sekresjon av veksthormon ble in vivo forsøk gjennomført med injeksjon av de syntetiske peptider intravenøst i uretan-bedøvede hanrotter og det ble bestemt at de undertrykker spontan GH-sekresjon uten at responsen overfor eksogent GRF forsvinner. Blodprøver tas umiddelbart før og 10, 30 og 90 min. etter injeksjoner. GH-nivåer i blodet, målt ved radioimmunoassay, viser at syntetisk [D-NMA <2> Nie 2 7 hGRF(1-29)-NH2 er omtrent 6 ganger mer potent enn hGRF(1-40)-OH med hensyn til blodnivåer av hypofyse-GH ved måling både 10 og 30 min. etter IV-injeksjon.
Andre kjénte GRF in vivo tester som er kjent å være effektive for deteksjon av sekresjon av GH anvendes for å bekrefte disse resultater. Doseringer mellom omtrent 50 nanogram og omtrent 5 mikrogram av disse peptider pr. kg kroppsvekt ansees å være effektive for å bevirke GH-sekresjon. Noen peptider som fremviser in vitro biologisk potens omtrent lik eller endog noe mindre enn standarden fremviser meget større in vivo potens.
Slike syntetiske hGRF-analoger og eventuelt rGRF, bGRF og pGRF-analoger er nyttige for humane anvendelser hvor en lege ønsker å forhøye GH-produksjon. Simulering av GH-sekresjon ved hjelp av slike analoger er av interesse i pasienter med fullstendig eller relativ GH defisiens bevirket ved underproduksjon av endogent GRF. Videre er det mulig at øket GH-sekresjon og dens medfølgende økning i veksten kunne oppnås i mennesker eller dyr med normale GH-nivåer. Videre bør tilførsel endre kroppsfettinnhold og modifisere andre GH-avhengige metabolske, immunologiske og utviklingsprosesser. F.eks. kan disse analoger være nyttige som et middel for å stimulere anaboliske prosesser i mennesker under forhold som følger brannskader.
For tilførsel til mennesker bør disse syntetiske peptider ha en renhet på minst omtrent 9 3% og foretrukket minst 98%. Renhet, i oppfinnelsens sammenheng, refererer til det angjeldende peptid som utgjør en angitt vektprosent av alle peptider og peptidfragmenter som er tilstede.
Disse syntetiske peptider eller de ikke-giftige salter derav, kombinert med en farmasøytisk eller veterinært tålbar bærer for å blande et farmasøytisk preparat, kan tilføres dyr og mennesker, enten intravenøst, subkutant, intramuskulært, perkutant, f.eks. intranasalt eller endog oralt. Tilførselen kan anvendes av en lege for å stimulere frigivelse av GH hvor verten som behandles trenger slik terapeutisk behandling. Den nødvendige dosering vil variere med den spesielle tilstand som behandles, med tilstandens karakter og med varigheten av den ønskede behandling.
Slike peptider tilføres ofte i form av ikke-giftige salter, som f.eks. syreaddisjonssalter eller metallkomplekser, f.eks. med sink, jern eller lignende (som betraktes som salter i oppfinnelsens sammenheng. Eksempler på slike syreaddisjonssalter er syresaltene av saltsyre, brom-hydrogensyre, svovelsyre, fosforsyre, maleinsyre, eddiksyre, sitronsyre, benzosyre, ravsyre, eplesyre, askorbinsyre, vinsyre eller lignende. Hvis den aktive bestanddel som skal tilføres oralt er i tablettform kan tabletten inneholde et bindemiddel, som tragant, maisstivelse eller gelatin, et desintegrerende middel som alginsyre og et smøremiddel som f.eks. magnesiumstearat. Hvis tilførsel i væskeform er ønskelig kan søtnings- og/eller aroma-midler anvendes, og intravenøs tilførsel i isotonisk saltløsning, fosfatbuffer-oppløsninger eller lignende kan foretas.
Peptidene bør tilføres mennesker under overvåkning av
en lege og farmasøytiske preparater vil vanligvis inneholde peptider i forbindelse med en konvensjonell, fast eller flytende, farmasøytisk tålbar bærer. Vanligvis vil parenteral dosering være fra omtrent 0,01 til omtrent 1 mikrogram av peptidet pr. kg kroppsvekt av verten.
Claims (2)
1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt syntetisk peptid med sekvens: R1-R2-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-R8-Ser-Rio-<A>r9-Ri2_R13_R14_ Gly-Gln-Leu-Ri8-Ala-Ar9-Ijys~Leu_Leu~R24~<R>25~Ile_Nle_R28~ R29-Gln-Gln-Gly-NHR,
hvori Ri er Tyr, D-Tyr, acetyl-Tyr, His eller NaMe-D-Tyr, R2 er Ala eller D-NMA, Rq er Ser eller Asn, R^O er Tyr eller D-Tyr, Rl2 er Arg eller Lys, R^3 er Ile eller Val, Rl4 er Leu eller D-Leu, Rig er Tyr eller Ser, R24 er His eller Gin, R25 er Glu eller Asp, R28 er Asn eller Ser, R2g er Arg eller D-Arg, R er H eller -CH2CH3,
med den betingelse at en sekvens av rester som begynner ved C-enden og strekker seg gjennom R28 kan utelates og med den videre betingelse at R2 er D-NMA og/eller R14 er D-Leu og/eller R2g er D-Arg,
eller et ikke-giftig salt derav,
karakterisert ved at a) et utgangspeptid med minst en beskyttende gruppe og med formel (II) eller en passende avkortet versjon derav:X<1->R1(X eller X<2>)-R2-Asp(X<3>)-Ala-Ile-Phe-Thr(X<4>)-R8(X<4 >eller X<5>)-Ser(X<4>)-R10(X<2>)-Arg(X<6>)-R12(X<6> eller X<7>)-R13-R14-Gly-Gln(X<5>)-Leu-R18(X<2>)-Ala-Arg(X<6>)-Lys(X<7>)-Leu-Leu-<R>24(X eller X<5>)-R25(X<3>)-Ile-Nle-R28(X<4> eller X<5>)- R29(X6)-Gin(X<5>)-Gin(X<5>)-Gly-X<9>,
hvori X, X1, X2, X3, X4, X5, X<6> og X<7> er hver enten hydrogen eller en beskyttende gruppe og X<9> er enten en beskyttende gruppe eller en forankringsbinding til harpiksbærer eller er des-X<9>, hvor da C-enden er NHR, fremstilles ved kobling av individuelle aminosyrer eller peptidfragmenter, b) den eller de beskyttende grupper eller forankringsbindingen avspaltes fra peptidet ved formel (II), og c) om ønsket omdannes det resulterende peptid med amino-syresekvensen (I) til et ikke-giftig salt derav.
2. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, for fremstilling av det syntetiske peptid med formel H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-NH2, karakterisert ved at det fremstilles fra tilsvarende utgangsforbindelser.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/611,844 US4528190A (en) | 1983-10-25 | 1984-05-18 | GRF Analogs IV |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO851947L NO851947L (no) | 1985-11-19 |
| NO168043B true NO168043B (no) | 1991-09-30 |
| NO168043C NO168043C (no) | 1992-01-08 |
Family
ID=24450622
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO851947A NO168043C (no) | 1984-05-18 | 1985-05-15 | Analogifremgangsmaate for fremstilling av et terapeutisk aktivt syntetisk peptid |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4528190A (no) |
| EP (1) | EP0161852B1 (no) |
| JP (1) | JPH0689036B2 (no) |
| KR (1) | KR910000379B1 (no) |
| AT (1) | ATE73823T1 (no) |
| AU (1) | AU578467B2 (no) |
| CA (1) | CA1271299A (no) |
| DD (1) | DD236536A5 (no) |
| DE (1) | DE3585634D1 (no) |
| DK (1) | DK162103C (no) |
| EG (1) | EG17394A (no) |
| ES (1) | ES8606412A1 (no) |
| FI (1) | FI92210C (no) |
| GR (1) | GR851207B (no) |
| HU (1) | HU197759B (no) |
| IE (1) | IE57813B1 (no) |
| IL (1) | IL75088A (no) |
| MX (1) | MX157381A (no) |
| NO (1) | NO168043C (no) |
| NZ (1) | NZ212113A (no) |
| PH (1) | PH20976A (no) |
| PT (1) | PT80450B (no) |
| SU (1) | SU1530097A3 (no) |
| YU (1) | YU46153B (no) |
| ZA (1) | ZA852919B (no) |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4728726A (en) * | 1982-10-04 | 1988-03-01 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF analogs IIIb |
| US4732972A (en) * | 1983-03-07 | 1988-03-22 | Hoffmann-La Roche Inc. | Polypeptides having growth hormone releasing activity |
| US4649131A (en) * | 1984-09-24 | 1987-03-10 | Hoffmann-La Roche Inc. | Growth hormone releasing factor analogs |
| CA1271600A (en) * | 1985-01-07 | 1990-07-10 | David Howard Coy | Growth hormone-releasing peptides and method of treating mammals therewith |
| EP0193910A3 (en) * | 1985-03-06 | 1988-11-23 | Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited | Synthesis of a derivative of grf and intermediate peptides |
| US4734399A (en) * | 1985-08-06 | 1988-03-29 | Hoffmann-La Roche Inc. | Growth hormone releasing factor analogs |
| US4689318A (en) * | 1985-08-29 | 1987-08-25 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF analogs |
| US4880778A (en) * | 1986-05-12 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Combinations having synergistic growth hormone releasing activity and methods for use thereof |
| FR2599038B1 (fr) * | 1986-05-26 | 1990-06-29 | Sanofi Sa | Procede de preparation de nonacosapeptides et peptides intermediaires |
| DE3742633A1 (de) * | 1987-12-16 | 1989-06-29 | Hoechst Ag | Peptide mit beeinflussender wirkung auf die hypophyse von saeugern |
| US5565606A (en) * | 1986-10-21 | 1996-10-15 | Hoechst Aktiengesellschaft | Synthesis of peptide aminoalkylamides and peptide hydrazides by the solid-phase method |
| US4843064A (en) * | 1987-01-13 | 1989-06-27 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF analogs V |
| IL84758A (en) * | 1987-01-13 | 1992-03-29 | Salk Inst For Biological Studi | Peptides stimulating the release of pituitary growth hormone in fish and amphibians,and pharmaceutical compositions containing them |
| US4914189A (en) * | 1987-02-05 | 1990-04-03 | The Adminstrators Of The Tulane Educational Fund | Synthetic GHRH analogs |
| EP0289186A3 (en) * | 1987-04-23 | 1990-04-04 | International Minerals And Chemical Corporation | Process for increasing the growth rate and enhancing the feed efficiency of meat producing livestock |
| IL86102A (en) * | 1987-05-11 | 1994-04-12 | Univ Tulane | Alkylated peptides that release growth hormone and their use |
| US5112808A (en) * | 1987-05-11 | 1992-05-12 | American Cyanamid Company | Alkylated hormone-releasing peptides and method of treatig mammals therewith |
| US5002931A (en) * | 1987-05-22 | 1991-03-26 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF analogs VII |
| US4839344A (en) * | 1987-06-12 | 1989-06-13 | Eastman Kodak Company | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
| US4801456A (en) * | 1987-07-09 | 1989-01-31 | International Minerals & Chemical Corp. | Growth hormone-releasing factor analogs |
| USRE33699E (en) * | 1987-07-09 | 1991-09-24 | International Minerals & Chemical Corp. | Growth hormone-releasing factor analogs |
| US4880777A (en) * | 1987-09-01 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Synthetic peptides having growth hormone releasing activity |
| ES2054754T3 (es) * | 1987-09-18 | 1994-08-16 | Hoffmann La Roche | Analogos ciclicos del grf. |
| WO1989007110A1 (en) * | 1988-01-28 | 1989-08-10 | Eastman Kodak Company | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
| US5043322A (en) * | 1988-07-22 | 1991-08-27 | The Salk Institute For Biological Studies | Cyclic GRF analogs |
| US5023322A (en) * | 1988-08-31 | 1991-06-11 | Mta Kutatas-Es Szervezetelemzo Intezete | Analogs of growth hormone releasing factor (GRF) and a method for the preparation thereof |
| US5756458A (en) * | 1989-06-16 | 1998-05-26 | Pharmacia & Upjohn Company | Stabilized potent GRF analogs |
| US5716937A (en) * | 1989-12-13 | 1998-02-10 | The General Hospital Corporation | Method for treating cardiac malfunction |
| JPH06500311A (ja) * | 1990-06-29 | 1994-01-13 | エフ・ホフマン―ラ ロシュ アーゲー | ヒスチジン置換されたヒト成長ホルモン放出因子類縁体 |
| ATE119916T1 (de) * | 1990-12-10 | 1995-04-15 | Hoffmann La Roche | Verfahren zur enzymatischen herstellung von grf(1-44)nh2. |
| JPH05507939A (ja) * | 1991-04-09 | 1993-11-11 | エフ・ホフマン―ラ ロシユ アーゲー | 成長ホルモン放出因子の類似体 |
| ZA922746B (en) * | 1991-04-26 | 1992-12-30 | Lilly Co Eli | Superactive grf analogs |
| US5246920A (en) * | 1992-06-15 | 1993-09-21 | University Of South Florida | Treatment of hyperprolactinemia |
| US5811074A (en) * | 1992-06-29 | 1998-09-22 | University Of South Florida | Method of diagnosing pituitary dependent growth hormone deficiency |
| GB9324691D0 (en) * | 1993-12-01 | 1994-01-19 | Hafslund Nycomed As | Peptide compounds |
| US5550212A (en) * | 1993-12-17 | 1996-08-27 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Analogues of hGH-RH(1-29)NH2 having antagonistic activity |
| IT1285405B1 (it) * | 1995-06-06 | 1998-06-03 | Alza Corp | Modificazione di farmaci polipeptidici per accrescere il flusso per elettrotrasporto. |
| AU2002233082B2 (en) * | 2001-02-02 | 2005-11-10 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Long lasting growth hormone releasing factor derivatives |
| NZ539218A (en) * | 2002-09-18 | 2008-03-28 | Univ Montreal Ct Hospitalier Chum | Synthetic GHRH analogues of 29 amino acids or more |
| WO2009009727A2 (en) * | 2007-07-12 | 2009-01-15 | Akela Pharma Srl | Ghrh analogs and therapeutic uses thereof |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4563352A (en) * | 1982-10-04 | 1986-01-07 | The Salk Institute For Biological Studies | Human pancreatic GRF |
| US4518586A (en) * | 1983-01-13 | 1985-05-21 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF Analogs III |
| IL70530A (en) * | 1983-01-13 | 1986-09-30 | Salk Inst For Biological Studi | Synthetic peptides having growth hormone releasing factor activity and compositions containing them |
| AU575843B2 (en) * | 1983-08-10 | 1988-08-11 | The Administrators Of The Tulane Eductional Fund | Growth hormone releasing peptides |
-
1984
- 1984-05-18 US US06/611,844 patent/US4528190A/en not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-04-18 ZA ZA852919A patent/ZA852919B/xx unknown
- 1985-04-26 DE DE8585302975T patent/DE3585634D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-04-26 AT AT85302975T patent/ATE73823T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-04-26 EP EP85302975A patent/EP0161852B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-04-29 IE IE1087/85A patent/IE57813B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-05-02 CA CA000480584A patent/CA1271299A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-05-03 IL IL75088A patent/IL75088A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-05-08 PH PH32242A patent/PH20976A/en unknown
- 1985-05-09 FI FI851842A patent/FI92210C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-05-10 YU YU77185A patent/YU46153B/sh unknown
- 1985-05-13 PT PT80450A patent/PT80450B/pt not_active IP Right Cessation
- 1985-05-15 AU AU42488/85A patent/AU578467B2/en not_active Ceased
- 1985-05-15 NO NO851947A patent/NO168043C/no not_active IP Right Cessation
- 1985-05-16 EG EG306/85A patent/EG17394A/xx active
- 1985-05-17 DD DD85276457A patent/DD236536A5/de not_active IP Right Cessation
- 1985-05-17 MX MX105337A patent/MX157381A/es unknown
- 1985-05-17 NZ NZ212113A patent/NZ212113A/en unknown
- 1985-05-17 HU HU851870A patent/HU197759B/hu not_active IP Right Cessation
- 1985-05-17 GR GR851207A patent/GR851207B/el unknown
- 1985-05-17 SU SU853898058A patent/SU1530097A3/ru active
- 1985-05-17 DK DK220685A patent/DK162103C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-05-17 ES ES543235A patent/ES8606412A1/es not_active Expired
- 1985-05-17 JP JP60105746A patent/JPH0689036B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1985-05-17 KR KR1019850003400A patent/KR910000379B1/ko not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO168043B (no) | Analogifremgangsmaate for fremstilling av et terapeutisk aktivt syntetisk peptid | |
| FI88402C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara grf-analoger | |
| NO167866B (no) | Syntetisk peptid og preparat for tilfoersel i dyr for produksjonsfremmende formaal. | |
| US5262519A (en) | GRF analogs XI | |
| JP2739910B2 (ja) | 環状ｇｒｆ類似体 | |
| NO168362B (no) | Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive peptidforbindelser | |
| CA1247601A (en) | Rat grf and analogs | |
| US4728726A (en) | GRF analogs IIIb | |
| US4784987A (en) | GRF analogs VI | |
| US5002931A (en) | GRF analogs VII | |
| US5098995A (en) | GRF Analogs VIIA | |
| JP2685195B2 (ja) | Ｇｒｆ類縁体ｖ | |
| NO166486B (no) | Analogifremgangsmaate for fremstilling av et terapeutisk aktivt peptid. | |
| CA1304192C (en) | Grf analogs vi |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |
Free format text: LAPSED IN NOVEMBER 2001 |