JPH06500311A - ヒスチジン置換されたヒト成長ホルモン放出因子類縁体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ヒスチジン置換されたヒト成長ホルモン放出因子類縁体本発明はヒト成長ホルモ ン放出因子類縁体及びその断片に関する。本発明の薬学的組成物はヒトにおける 種々の成長ホルモンが関連する問題を処置するため、及び動物における成績（ｐ ｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ）増進のために用いることができる。

成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）はヒト小島細胞腫瘍（ｈｕｍａｎ　１ｓｌｅｔ ｃｅｌｌ　ｔｕＩＩｏｒ）から単離され、構造的にはＧｕｉｌｌｅｍｉｎら［５ ｃｉｅｎｃｅ、２１８．５８５−５８７　（１９８２）コ及びＲｉｖｉｅｒら［ Ｎａｔｕｒｅ、３００　。

２７６−２７８　（１９８２）］により特定された。数十年間探究されてはいた が、ＧＲＦの単離と特定化（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ）はそれが極く 微量しか存在しないためにそれ迄成功していなかった。ヒト視床下部（ｈｙｐｏ ｔｈａｌａ■ｉｃ）成長ホルモン放出因子（ｈＧＲＦ）は小島細胞腫瘍から単離 されたＧＲＦと同じ構造を有することが見出された［Ｂｏｈｌｅｎら。

Ｒｉｖｉｅｒら（ｓ、　ａ、　）はＧＲＦ　（１−４４）及びＧＲＦ　（１−４ ０）の構造をそれぞれ記載し、モしてＧＲＦは成長ホルモンの放出について特異 的であることを示した。ＧＲＦのこれら２個の形状はそれらのアミノ（ＮＨ２） 末端においては同一であるが、それらのカルボキシ（Ｃｏ。

Ｈ）末端の終点で異なっている。ＧＲＦ　（１−４４）はそのカルボキシ末端に アミド基を有する点において更に区別される。

Ｒｉｖｉｅｒら（ｓ、　ａ、　）はＧＲＦの生物学的活性が分子のＮＨ２末端部 に存在し、且つ完全な固有の活性と効力はｉｎ　ｖｉｔｒｏでＧＲＦ　（１−２ ９）−ＮＨ，で発現されることを明らかにした。

Ｌａｎｃｅら［Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍ、、 　１１９　（１）　、　２６５−２７２　（１９８４）］は、１．２及び３の位 置において、選ばれたアミノ酸で置換されたＧＲＦ　（１−２９）　ＮＨ２が豚 （ｐｉｇ）及びラットの双方においてｉｎ　ｖｉｖｏで成長ホルモン（ＧＨ）の 放出増進を引き起すことを明らかにした。

動物の成長はおそらく生理的規制分子（ｂｉｏ−ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｍｏｌ ｅｃｕｌｅ）のカスケードにより制御されている。視床下部は脳下垂体での成長 ホルモン放出を誘起するＧＲＦを産生ずる。少量のＧＲＦは脳下垂体で血中への 相当量の成長ホルモン放出を引き起すことが見出された。このようにＧＲＦは成 長ホルモンを必要とするこれらの例において大いなる治療的有用性を有する。例 えばＧＲＦは脳下垂体性小人症及び成長ホルモン産生異常による糖尿病の処置、 傷害治癒の増進、火傷の処置、老化過程又はオステオポローシス（ｏｓｔｅｏｐ ｏｒｏｓｉｓ）の遅延又は骨治癒において用い得る。同様にＧＲＦは農業分野に おける有用性を有する。農業的利用の具体例には、家禽や豚、牛その他の如き食 用に飼育された動物の肉生産を増進し、早期の市販を可能とし、或いは飼料を与 えて同じ時間でより大きい動物を作り出し、或いは赤身対脂身の比率を改善する ことが含まれる。ＧＲＦはまた乳牛のミルク生成及び鶏の弁製造を刺激する。

ＧＲＦの単離の成功は、部分的には末端肥大症を併う膵臓の腫瘍が異常に（ｅｃ ｔｏｐｉｃａｌｌｙ）大量のＧＲＦを生産するということの発見によるものであ った。アミノ末端から同じアミノ酸配列であるところの４４．４０及び３７アミ ノ酸の３種の状態のＧＲＦが単離された。

アミド化された状態の４４アミノ酸ＧＲＦが親分子（ｐａｒｅｎｔ　ｍｏｌｅｃ ｕｌｅ）であると考えられる。種々のアミノ酸置換を行った、原ポリペプチドの 生物学的に活性な断片を有する広範な合成類縁体が製造されてきた。これらの変 更は親分子よりもすぐれた生物学的特性をもつ合成類縁体をしばしば生み出すよ うに特別に設計されてきた。一般的に線状ペプチドは非常に柔軟な分子であり、 しつかり決った構造を欠いている。線状ペプチド中の個々のアミノ酸は周囲の環 境に曝されており、酵素的及び化学的劣化に対し非常に敏感になっている。従っ て、酵素的及び化学的劣化に対する抵抗を有しつつ、例えば効力、効果及び安定 性の如き項目において最大の生物学的活性を発現するＧＲＦ類縁体を設計するこ とが望まれている。

本発明は下記式： ％式％ 但し、式中Ｒ１はＨｉ　ｓ、　３−ＭｅＨｉ　ｓ、　ｄ　ｅ　５ＮＨ２Ｈｉ　ｓ 。

Ｔｙｒ又はｄｅｓＮＨｚＴｙｒであり、Ｒ２はＶａｔＳＬｅｕ又は１１ｅであり 、Ｒ１１はＡｌａであり、Ｒ４はＭｅ　ｔ、Ｌｅｕ、Ｉ　Ｉ　ｅ又はＮｌｅであ り、Ｒ５はＳｅｒ又はＡｓｎであり；Ｒ６はＡｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｉｎ−Ｇａｙ− Ｇｌｕ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｈａ−Ａｒｇ− Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ又はそのカルボキシ末端から１〜１５のアミノ酸残基が 除去された配列を有するその断片から選ばれたアミノ酸配列であり：ＸはＯＨ又 はＮＨ２である、 で表わされる化合物及びその薬学的に許容しつる酸又は塩基付加塩に関する。

本発明による薬学的組成物は、薬学的に又は獣医学的に許容される液体又は固体 担体中に分散された、長さが２９と４４残基の間であるかかる類縁体を包含する 。かかる薬学的組成物は治療及び／又は診断目的のために、ヒト及び獣の両方の 臨床薬において用いることができる。特にそれらは温及び冷血動物の成長を促進 するために用いることができる。

それらはまた温及び冷血動物において成長関連疾患の治療及び成長成績の改善の ために用いることもできる。

本発明のＧＲＦペプチドは、ヒトの成長ホルモン欠損症により特徴づけられる成 長関連疾患の処置のため、又は成長成績を改善するための動物の処置のために有 用である。

本明細書においては、“ＧＲＦ”という語は、下記アミノ酸配列［５ｃｉＨ−Ｔ ｙｒ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｉ　ｌ　ｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３ｅ　 ｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｖａ　Ｉ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−３ ｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−１１ｅ−Ｍ ｅｔ−３ｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｉｎ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ｇ ｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−ｃｔｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａ　ｒ　ｇ−Ｌ　ｅ 　ｕ−ＮＨ２ を有するポリペプチド、又は少くとも全配列の初めの２９アミノ酸を有し、且つ 成長ホルモン放出活性を発現する生物学的に活性な断片である、ヒト成長ホルモ ン放出因子を意味する。通常の定められた表現方法（ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ 　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎｓ）に従い、Ｎ末端のアミノ基は左に現れ、Ｃ 末端のカルボキシ基は右に現れる。アミノ酸とは天然のアミノ酸′　を意味し、 ０１７％Ａｌ　ａ、Ｖａ　１、Ｌｅｕ、Ｌｌｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ。

ＬｙｓＳＡｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、ＧｌｕＳＧｌｕ、Ｃｙｓ、Ｍｅ　ｔ。

ロイシン（ｎｏｒｌｅｕｃｉｎｅ）を意味する。アミノ酸残基が異性体の形を有 する場合、特に記さないかぎりし一型のアミノ酸を表わす。“ＧＲＦ”につづく サフィックス“−ＯＨ”及び“−ＮＨ，”はそれぞれポリペプチドの遊離の酸及 びアミド形を示す。いずれのサフィックスも用いられていない場合は、その表現 は両方の形を含んでいることを意図する。ＧＲＦの類縁体は“ＧＲＦ”の前のカ ギカッコ（［］）に置換アミノ酸を示すことにより表わされ、例えば“［Ｈｉｓ ”、Ａｌ　ａ”］　−ＧＲＦ”は１位のタイロシン残基がヒスチジン残基により 置換され、１５位のグリシン残基がアラニン残基で置換された、ＧＲＦに対応す るアミノ酸配列を有するポリペプチドを表わす。“ＧＲＦ“につづくカッコ（（ ））内の数はアミノ酸残基の位置数を付与することにより、完全ペプチドの断片 を示し、例えばＧＲＦ　（１−２９）は完全配列のはじめの２９アミノ酸を有す る断片を表わす。

本発明は、ＧＲＦ分子の１位のタイロシン残基及び／又は２位のアラニン残基及 び１５位のグリシン残基を、他の適切に選ばれたアミノ酸で置換し、脳下垂体か らの成長ホルモンの放出を刺激するための増進した生物学的効力を有するＧＲＦ 類縁体を製造することができることを見出したことに基づいている。更に２７位 のメチオニン残基及び／又は２８位のセリン残基も同様に置換することができ、 そして増進した生物学的効力を有するＧＲＦ類縁体を生成する。

当技術分野で周知の種々の基準が、特定の位置においてＧＲＦの置換のための特 定のアミノ酸を選択するために用いることが可能であり、例えば１つのこのよう な基準はらせん性（ｈｅｌｉｃｉｔｙ）及びハイドロパシシティ（ｈｙｄｒｏｐ ａｔｈｉｃｉ　ｔｙ）分析で示されるように、得られるポリペプチドの両親媒性 的特性（ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ　ｃｈａｒａｃｔｅｒ）及びらせん構造を増進 させるため特定のアミノ酸を選ぶことである。得られるポリペプチドはレセプタ ーにより効率的に結合しうるし、また蛋白分解に対しより安定であり得、それに より生物学的効力が増進する。らせん性及び親水性分析は当該技術分野で公知の 慣用手段により行なわれる。

本発明に従い、ＧＲＦ　（１−２９）の１及び／又は２及び１５位における適切 に選択されたアミノ酸残基の置換は、生物学的活性と対酵素抵抗性を増進した。

１及び／又は２及び１５位の置換と共に、更にＧＲＦ分子の２７及び／又は２８ 位における適切に選ばれたアミノ酸残基の置換は、多置換ＧＲＦ類縁体を生成し 、脳下垂体によるＧＲＦ放出を行なわせることにおいて増大した生物学的効力を 有するペプチドを生み出す。

このような置換のために選ばれるアミノ酸は、タイロシン、デスＮ　Ｈ２−タイ ロシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、バリン、アスパラギ ン、セリン、ノルロイシン、ヒスチジン、デスＮＨ２−ヒスチジン、及び３−メ チル−ヒスチジンを含むが、これに限定されない。

本発明の代表的化合物には、 ［Ｈｉ　ｓ’ＳＶａ　１２、Ａ　ｌ　ａ　”　］−Ｇ　ＲＦ　（１−２９）−Ｎ 　Ｈ２［Ｈｉｓ’、Ｌｅｕ２、Ａ　ｌ　ａ　”　］−Ｇ　ＲＦ　（１−２９）− Ｎ　Ｈ２［３−ＭｅＨｉ　ｓ’、Ｖａ　］”、Ａ　１　ａ　”　］−Ｇ　ＲＦ　 （１−２９）−Ｎ　Ｈ２［Ｈｉｓ’、Ｉｌｅ”、Ａ　Ｉ　ａ”］−ＧＲＦ（１− ２９）−ＮＨ２［ｄｅｓＮＨ，Ｈｉｓ’、Ｖａ　１”、Ａ　Ｉ　ａ”］−ＧＲＦ （１−２９）−ＮＨｚ［Ｌｅｕ”、Ａ　ｌ　ａ　”　］−Ｇ　ＲＦ　（１−２９ ）−Ｎ　Ｈ２［１１ｅ２、Ａ　Ｉ　ａ　”　］−Ｇ　ＲＦ　（１−２９）−Ｎ　 Ｈ２［Ｈｉ　ｓ　’、Ｖａ　Ｉ２、Ａｌａ”、Ｌ　ｅ　ｕ　”］−Ｇ　ＲＦ　（ １−３２）−０Ｈ［Ｈｉｓ’、Ｖａｌ２、Ａｌａ”、Ｌ　ｅ　ｕ　”、Ａ　ｓ　 ｎ　”］−Ｇ　ＲＦ　（１−３２）−０Ｈ［Ｖａｌ”、　Ａｌａ”、　Ｌｅｕ２ ）］−Ｇ　ＲＦ　（１−３２）−０Ｈ［Ｈｉｓ’、Ｉｌｅ”、Ａｌａ”、Ｌ　ｅ 　ｕ　”］−Ｇ　ＲＦ　（１−３２）−０Ｈ［Ｈｉｓ’　、　Ｖａｌ　２、　Ａ ｈａ”　、　Ｌ　ｅ　ｕ　”］−Ｇ　ＲＦ　（１−４０）−０Ｈ［Ｈ４ｓ’、Ｌ ｅｕ２、Ａｌａ”、Ｌ　ｅ　ｕ　２７］−Ｇ　ＲＦ　（１−３２）−０Ｈ［Ｈｉ ｓ’、Ｌｅｕ”、Ａｌａ＋５、Ｌ　ｅ　ｕ　２７］−Ｇ　ＲＦ　（１−４０）− ０８［Ｈｉ　ｓ　’、ｌ１ｅ２、Ａｌａ”、Ｌ　ｅ　ｕ　”］−Ｇ　ＲＦ　（１ −４０）−０８が含まれる。

記載された改変はヒト成長ホルモン放出因子（ｈＧＲＦ）を扱っているが、同様 の改変がブタ成長ホルモン放出因子（ｐＧＲＦ）　、中成長ホルモン放出因子（ ｂＧＲＦ）　、ヒツジ（ｏｖｉｎｅ）成長ホルモン放出因子（ｏＧＲＦ）　、及 びヤギ（ｃａｐｒｉｎｅ）成長ホルモン放出因子（ｃＧＲＦ）にも行うことがで きよう。

本発明のポリペプチドは、組換えＤＮＡ法、固相ペプチド合成技術、又は溶液相 ペプチド合成技術を含む（しかし、これに限定されない）多くの方法で製造する ことができる。

組換えＤＮＡ技術の公知手法を用いて、本発明の化合物をコードする配列を含有 するＤＮＡ配列を、適当な制御要素、例えばプロモーター／オペレーター配列及 びリポソーム結合部位をコードする配列の制御下に、複製可能な発現担体（ｖｅ ｈｉｃｌｅ）中に挿入することができるであろう。

該発現担体は次いでバクテリアの如き宿主微生物を形質転換するために用いるこ とができ、それを所望の蛋白を発現するための条件下で成長させることができる であろう。本発明のＧＲＦ類縁体の製造のために非天然型のアミノ酸が用いられ るような例においては、組換えＤＮＡ技術は天然型のアミノ酸残基からなるフラ グメントを製造するために用いることができ、そしてそれを当技術分野で公知の 方法により非天然型のアミノ酸を含有するフラグメントと合体させることができ るであろう。

当該技術者に既知の他の同等の化学的合成方法を用いることもできるが、ペプチ ドは例えばメリフィールド（ＭｅｒｒｉＨｅｌｄ）　［Ｊ、＾ｍ、　Ｃｈｅｗ。

Ｓａｃ、　、８５．２１４９．　（１９６３）］により記載された如き固相合成 法で製造することができる。固相台或は、クロルメチル化樹脂又はヒドロキシメ チル樹脂に結合したベンジルエステル架橋を介して、又はベンズヒドリルアミン （ＢＨＡ）樹脂又はメチルベンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）樹脂に結合したア ミド結合を介して、保護されたアミノ酸をカップリングさせることにより合成さ れるべきペプチドのＣ−末端から開始される。該樹脂は商業的に入手可能であり 、それらの製法は当該技術者に既知である。

本発明の化合物の酸形態は、固相担体としてベンジルエステル樹脂又はフェニル アセトアミドメチル樹脂を用いて固相ペプチド合成により製造することができる 。該ポリペプチドは製造用高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で精製され 、そして分析用ＨＰＬＣ，等電焦点化高圧（ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ　ｆｏｒｃ ｕｓｉｎｇ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｖｏｌｔａｇｅ）薄層電気泳動により均一（ｈ ｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ）であることを示すことができる。アミノ酸分析を予期し たアミノ酸組成であることを確認するために実施することができる。

対応するアミド形は固相担体としてベンズヒドリルアミン−又はメチルベンズヒ ドリルアミン−樹脂を用いる方法により製造できる。ＢＨＡ−又はＭＢＨＡ−樹 脂を用いる場合、固相担体から該ポリペプチドをとりはずすための無水ＨＦを用 いる処理は末端アミド基を有するポリペプチドをもたらすことを、当業者は認識 するであろう。

Ｃ末端アミノ酸、例えばＡｒｇはＮ　−アミノ及び側鎖グアニジノ位において、 それぞれｔ−ブチロキシカルボニル（Ｂｏｃ）及びｐ−トルエンスルホニル（Ｔ ｏｓ）のような適切に選択された保護基で保護される。該Ｂｏｃ−Ａｒｇ　（Ｔ ｏｓ）−ＯＨは、ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いて約２５℃ で２時間撹拌しながら該ベンズヒドリルアミン樹脂に初めに合体（ｃｏｕｐｌｅ ｄ）させることができる。Ｂｏｃ保護されたアミノ酸の樹脂担体へのカップリン グに次いで、メチレンクロライド中のトリフルオロ酢酸（Ｔ　Ｆ　Ａ）又はＴＦ Ａ単独を用いてアミノ保護基を除去する。該脱保護は約０℃と室温との間の温度 で実施する。

アミノ保護基を除去した後、残余のＢｏｃ保護されたアミノ酸を所望の順序で段 階的に合体させる。いくつかのアミノ酸は固相合成機において用いる前に活性化 することができる。適当なカップリング試剤の選定は当業者には公知である。特 に好ましいのはＤＣＣである。

それぞれの保護されたアミノ酸又はアミノ酸配列を過剰に固相合成器に仕込み、 そしてカップリングをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）又はメチレンクロライド （ＣＨｚＣＬ）又はそれらの混合物の媒地中で実施することができる。カップリ ングが不完全であった場合、次のアミノ酸のカップリングに先立つＮ−アミノ保 護基の除去の前に該カップリング操作を繰返す。合成の各々の段階でのカップリ ング反応の成功は当該技術分野で周知の方法で監視することができる。該合成を 監視する好ましい方法はニンヒドリン反応によるものである。該カップリング反 応は、例えばベガ（Ｖｅｇａ）　１０００．２５０又は２９６ペプチドシンセサ イザー　（Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）又はアプライドバイオシ ステムズ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅａ＋ｓ）モデル４３０Ａ又は４３１ Ａペプチドシンセサイザーを用いて自動的に達成することができる。

樹脂からのペプチドの開裂はペプチド化学において周知の手法を用いて達成する ことができる。ｐ−クレゾールの如き消却剤（ｓｃａｖｅｎｇｅｒ）及びジメチ ルスルフィドの存在下、０℃で１時間フッ化水素と反応させ、次いでｐ−クレゾ ールの存在下０℃で２時間フッ化水素と第二回目の反応を行うことができる。

従って、 （ａ）　溶液相ペプチド合成により合成された、対応するアミノ酸配列の適格に 保護されたポリペプチドの保護基を従来の方法を用いて切り離す、又は （ｂ）　固相ペプチド合成により合成された、対応するアミノ酸配列の適格に側 鎖保護された樹脂結合ポリペプチドを脱保護し、従来の方法を用いて樹脂から切 り離し、そして所望ならば薬学的に許容しうる酸又は塩基付加塩に転換する、 ことを特徴とする方法も本発明の対象である。

本発明のポリペプチドの精製は、ペプチド化学において周知の手順を用いて達成 することができる。先に示した如（、このようなポリペプチドは製造用ＨＰＬＣ を用いて精製することができる。しかし、ゲルパーミェーション−、イオン交換 −及び分配クロマトグラフィーの如き他の公知のクロマトグラフィー手法又は向 流分布（ｃｏｕｎｔｅｒｃｕｒｒｅｎｔ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）もまた用 いることができる。

本発明のポリペプチドは成長ホルモン放出活性を有する。本発明の薬学的組成物 は、薬学的又は獣医学的に許容される液体又は固体担体中に分散された、かかる 化合物又はその非毒性塩を含んでいる。かかる薬学的組成物はヒト及び獣両方の 臨床薬品中で治療的又は診断的目的の為に用いることができる。例えば脳下垂体 性小人症の如き成長関連疾患及び成長ホルモン産生異常による糖尿病の処置にお いて有用である。更にそれらは肉生産のために飼育された動物の成長を刺激し、 飼料効率を高め、ミルク生産を高め、及び非生産を刺激するためにも用いること ができる。

本発明の化合物は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏでＧＲＦ−（１−４４）　−ＮＨ２よりも 約３倍多く成長ホルモンの放出を誘起する。このように、成長ホルモン放出因子 が同一目的で与えられる場合これらの類縁体はそれより相当少い投与量で投与す ることができる。当業界で周知の如く、成長関連疾患の処置では成長ホルモン生 産の不充分さの程度によって個人個人で投与量を変化させる必要があるであろう 。一般的に患者の体重を基にして約０．０４ｇｇ／ｋｇ／日〜約２０．０μｇ／ ｋｇ／日（皮下）の投与量の範囲を成長ホルモンの放出を刺激するために用いる ことができる。家畜の成長活性を刺激するために用いられる投与量は、ヒトの脳 下垂体性小人症の如き成長ホルモン欠乏の場合に正常な成長を回復するために採 用される投与量よりも、相当高いであろう（患者体重ｋｇ当り）。家畜において は、約０．４μｇ／ｋｇ／日〜約３０μｇ／ｋｇ／日の範囲の皮下投与が、脳下 垂体成長ホルモンの放出を刺激するために用いることができる。しかし当業者は 、正常な成長を伴う成長ホルモンの公知循環レベル及び該ポリペプチドの成長ホ ルモン放出活性を基準にして適当な投与量を決定することができる。

かくして、本発明により、成長ホルモンの不十分な生産を特徴とする成長関連疾 患を処置する方法が提供され、それは正常な成長を伴う水準まで成長ホルモンの 生産を刺激するのに十分な量の本発明化合物を投与することを含んでなるもので ある。

成長ホルモンの正常なレベルは個人間で相当変化し、そしていかなる個人におい ても、成長ホルモンの循環レベルは１日の間中で相当変化する。ヒト成人では成 長ホルモンの正常な血清レベルは約０〜約１０ナノグラム／ｍｌで変化すると報 告されてきた。小供では成長ホルモンの正常血清レベルは約０〜約２０ナノグラ ム／ｍｌで変化すると報告されてきた。

前記した類縁体を用いた脳下垂体機能不全（ｈＹｐｏｐｉｔｕｉｔａｒｙ）小人 症を効果的に治療する目的で、正常な成長の期間の間装置を施す。女子の場合こ の期間は一般的に月経開始からはるかに延びることはない。このように女性の処 置は個人個人によって約１２〜１６年の年齢から開始せねばならない。男性の場 合成長の刺激は年頃（ｐｕｂｅｒｔｙ）を越えて相当長い期間可能である。この ように男性の有効な処置（治療）は通常約１８〜１９年齢まで、成る個人的のケ ースでは約２５年齢まで可能である。

ここに、正常な成長を伴うよりも大きなレベルで成長ホルモンの生産を刺激する のに十分な量の本発明のＧＲＦ類縁体を投与することにより、動物の成長速度を 増加させる方法も提供される。

本発明のポリペプチドは従来の薬学的調製剤技術により製造することができるヒ ト又は獣用薬学的組成物の形態で投与することができる。経口、経静脈、皮下、 筋肉内、腹膜内又は経鼻投与に適した組成物が用いられる。薬学的用途のための 適切な投与形態は、約０．０１〜約０．５ｍｇの本発明の化合物であり、それは 殺菌水又は生理食塩水を用いて再構成するように凍結乾燥することができる。該 組成物は該類縁体の安定性を維持するために、約８．０以下のｐＨに維持されな ければならない。

処置されるべき種の血清アルブミン（例えば、人の場合ヒト血清アルブミン、牛 の場合ウシ血清アルブミン、等）を他の公知の薬学的助剤と一緒に存在させるこ ともできる。

本発明のポリペプチドは酵素（ジペプチジルペプチダーゼ−■）劣化に対して高 められた安定性を持つＧＲＦ類縁体を述べている。

以下の実施例は本発明の実際的応用を説明するために提供されているのであり、 いかなる点でも本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきでない。特に述べ ない限り、全ての「部」及び「％」は重量基準であり、全ての温度は「℃」であ る。特に述べない限り（現在形の如く）、以下の実施例は実際に記載された如〈 実施されたものである。

実施例においては、特に注記しないかぎり、Ｌ−配置の光学活性な保護されたア ミノ酸を用いた。保護されたアミノ酸はシリカゲルＧプレートでの薄層クロマト グラフィーで試験し、塩素化−ＴＤＭで展開した。

アミノ酸分析はウォーター・アミノアシッド・アナライザー（Ｗａｔｅｒ　Ａｍ １ｎｏ　Ａｃ１ｄ　Ａｎａｌｙｚｅｒ）で実施した。

実施例においては種々の保護基や試剤を示すために、以下の略号を用いる。

ＢＯＣ＝ｔ−ブチロキシカルボニル Ｔｏｓ　＝ｐ−トルエンスルホニル ＤＣＣ＝ジシクロへキシルカルボジイミドＢＨＡ　＝ベンズヒドリルアミン 樹脂Ｆ　＝ジメチルホルムアミド ＴＦＡ　＝ｌ−リフルオロ酢酸 ＥｔＯＡｃ　−酢酸エチル ＣＨ，Ｃｌ２＝メチレンクロライド Ｂｚｌ　＝ベンジル ｃＨｅｘ　＝シクロへキシル ２Ｃｚ　＝２−クロロベンジロキシカルボニルＤｃｂ　＝２．６−ジクロロベン ジル ＢＯＰ　＝ベンゾトリアゾルー１−イロキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニ ウムへキサフルオロホスフェートＰＡＭ　＝フェニルアセトアミドメチル本発明 の類縁体は手作業（ｍａｎｕａｌ　ｍｏｄｅ）で、或いは商業的に入手しつる自 動化された固相ペプチド合成装置（例えば、ベガ１０００．２５０又は２９６ペ プチド・シンセサイザー又はアプライド・バイオシステムズ・モデル４３１Ａ又 は４３０Ａペプチドシンセサイザー）を用いて、アミノ酸の連続的カップリング により製造した。

３官能アミノ酸は、Ｎ　−Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＨ，Ｎ　−Ｂｏｃ−Ｈ ｉｓ（Ｔｏｓ）−０Ｈ，Ｎ　−Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（２Ｃｚ）−ＯＨ。

α Ｎ　−Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−０Ｈ，Ｎ　−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｏ Ｈ，Ｎ−Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ｃＨｅｘ）−ＯＨ及びＮ−Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｄｃｂ） −ＯＨとして保護された。

［実施例１］ ［Ｈｉ　ｓ’、　Ｖａ　Ｉ”、Ａ１　ａ”］　−ＧＲＦ（１２９）ＮＨｔの製造 米国特許第４，６２２．３１２において製造された如き、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏ ｓ）−ベンズヒドリルアミン樹脂（３５０，０ｇ、０．４３ｍｍｏｌ／ｇ）を、 ペプチド合成装置（Ｖｅｇａ　２９６　）の反応槽に仕込み、そして固相ペプチ ド合成をシーハン・ジェー・シー（Ｓｈｅｅｈａｎ、　Ｊ。

Ｃ，）及びヘス・ジー・ピー（Ｂｅｓｓ、　Ｇ、　Ｐ、）　［Ｊ、　Ａｌ１ｅｒ 、Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ。

７７．１０６７　（１９５５）］に従いジシクロへキシルカルボジイミド・カッ プリング手法により全体で２６サイクル実施し、保護された［ＡＩ　ａ”］　− ＧＲＦ　（３−２９）−ＢＨＡ−樹脂を得た。該ペプチド−樹脂の１ｇを取り、 反応槽に仕込み、そしてＢｏｃ−Ｖａ　１−ＯＨとＢｏｃ−Ｈｉ　５（Ｔｏｓ） −ＯＨをＢＯＰ試剤で活性化し、連続的に手動固相法で添加し、［Ｈｉｓ’、Ｖ ａｔ！、Ａｌａ＋５］　−ＧＲＦ　（１−２９）−ＢＨＡ−崩脂（１，０２ｇ） を得た。保護されたペプチド樹脂（１ｇ）を無水ＨＦ（１０％プロパンチオール を含有）で０℃で２時間処理し、０℃（高真空ＨＣａＯｔ−ラップ）で蒸発し、 ＥｔＯＡｅでくだき、ＴＦＡで抽出した。溶媒を蒸発し、残渣を無水エーテルで （だき、乾燥して４９０ｍｇの粗ペプチドを得た。

該粗材料（４９０ｍｇ）を２５ｍＡ’の０．０２５％ＴＦＡ／Ｈ！Ｏに溶かし、 濾過（０，４５ミクロンのＨＡミリポア・フィルター）し、シンクロパック（Ｓ ｙｎｃｈｒｏｐａｋ）　ＲＰ　−Ｐカラム（２，０ｃｍＸ　５０　ｃｍ）（Ａｌ ｔｅｃｈ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ、　Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、　ＩＬ、　ＵＳＡ） にかけた。該カラムを（Ａ）Ｈ２Ｏ（０，０２５％ＴＦＡ）−（Ｂ）ＣＨ３ＣＮ 　（０，０２５％ＴＦＡ）を用い、２０％（Ｂ）−４５％（Ｂ）の直線勾配で、 ９０分間流速１２ｍ１１分で溶出した。画分を集め（１分／画分）、各少量を分 析用ＨＰＬＣ系：　（Ａ）　Ｏ，ＩＭ　Ｎａ　Ｃｌ　０４　（ｐＨ２，５）　（ Ｂ）　ＣＨｓＣＮ；１ｍｉ’／分で２０分間に４０％（Ｂ）−５５％（Ｂ）、カ ラム：　ＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂＲＰ−８５ミクロンで分析した。画分３２−３５ 　（半純粋）及び画分３６−５１　（サイドカット）に出てきた生成物を一緒に し、蒸発し、凍結乾燥して半純粋の［Ｈｔ　ｓ　’、Ｖａｌ”、Ａｌ　ａ”］　 −ＧＲＦ　（１−２９）　−ＮＨ，を得た。収量：各々１９ｍｇと５５　ｍ　ｇ 　。

半純粋の材料（１９ｍｇ）を５ｍｌの０．　Ｏ２５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏに溶かし、 遠心し、濾過（０，３５ｍのＨＡミリボア・フィルター）シ、ｌＸ５０ｃｍのＮ ｕｃｌｅｏｓｉｌカラム（Ａｌｔｅｃｈ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ、　ｓ、　ａ、 ）にかけた。該カラムを３ｍ１１分の流速で１２０分間２０％（Ｂ）　−４０％ （Ｂ）の直線勾配で、（Ａ）　Ｉ２０　（０，Ｏ２５％ＴＦＡ）−（Ｂ）ＣＨ， ＣＮ　（０，Ｏ２５％ＴＦＡ）を用いて溶出した。両分を集め（１分／画分）、 各少量を分析用ＨＰＬＣ系で分析した。両分７４−８６に溶出した生成物を集め 、蒸発し、凍結乾燥して純粋な［Ｈｉ　ｓ’、Ｖａ　Ｉ”、ＡＩ　ａ”］　ＧＲ Ｆ　（１２９）　−ＮＨ２を得た。収量：　１０ｍｇ。

該生成物は分析用ＨＰＬＣにより均一であることが示され、酸加水分解の後予想 のアミノ酸組成を与えた（加水分解：６Ｎ　ＨＣＩ、１１０℃、７２時間）：Ａ ｓｐ　２．９６　（３）；Ｙｈｒ　Ｏ，８５（１）；Ｓｅｒ　２．９２　（３） ；Ｇｌｕ　２．３０　（２）；Ａｌａ　３．００　（３）；Ｖａｌ　１．８４　 （２）；Ｍｅｔ　１．０５　（１）：１１ｅ　１．９０　（２）；Ｌｅｕ　４． ４３　（４）；Ｔｙｒ　Ｏ，８３（１）：Ｐｈｅ　Ｏ，８８（１）；Ｌｙｓ　２ ．１９　（２）；Ｈｉ　ｓ　Ｏ，９２（１）；Ａｒｇ　３．１９　（３）。

構造の確認はＦＡＢマススペクトロスコピーで与えられた：　（Ｍ＋Ｈ）″３３ ７４、０゜実測：３３７３．７゜ ［実施例２］ ［Ｈｉｓ’、Ｌｅｕ”、Ａｌａ”］　ＧＲＦ（１２９）ＮＨ２の製造保護された ［Ａｌａ”］　−ＧＲＦ　（３−２９）−ＢＨＡ−樹脂の１ｇを実施例１の固相 ペプチド合成に２サイクルかけ、１．１２ｇの保護された［Ｈｉ　ｓ’、Ｌｅｕ ”、Ａｌａ”］　−ＧＲＦ　（１−２９）−ＢＨＡ−樹脂を得た。０．６ｇ部分 を無水ＨＦで切り取り、２４５ｍｇの粗ペプチドを得、それを（実施例１におけ る如く）精製し、２５．４ｍｇの純粋な［Ｈｉ　ｓ’５Ｌｅｕ”、ＡｌａＩ１１ ］　−ＧＲＦ　（１−２９）　ＮＨｔを得た。　該生成物は分析用ＨＰＬＣで均 一であることが示され、酸加水分解により予期したアミノ酸組成が得られた（加 水分解：６ＮＨＣＩ、１５０℃、ｌｈ）：Ｔｈｒ　Ｏ，９５（１）；Ｓｅｒ　２ ．９２　（３）；”ｌ”ｙｒ　１．１２　（１）、　（加水分解：６ＮＨＣＩ、 １１０℃、２４　ｈ）：Ａｓｐ　２．９１　（３）；Ｇｌｕ　２．１４　（２） ；Ａｌａ　３．００　（３）；Ｍｅｔ　０．９９　（１）：Ｌｅｕ　４．９７　 （５）：Ｈｉｓ　Ｏ，９２（１）；Ｌｙｓ　１．９９　（２）；Ａｒｇ　３．０ ４　（３）。（加水分解二６ＮＨＣＩ、１１０℃、７２ｈ）：Ｖａｌ　１．．０ ２　（１）：　Ｉ　Ｉｅ　２．０５（２）；Ｐｈｅ　Ｏ，９７（１）。構造の確 認はＦＡＢマス・スペクトロスコピーでなされた。計算値：　（Ｍ＋Ｈ）”３３ ８９．　Ｏ０実測値＝３３８８．８゜ ［実施例３］ ［３−ＭｅＨｉ　ｓ’、　Ｖａ　Ｉ２、Ａｌａ１５］　−ＧＲＦ　（１−２９） −ＮＨ２の製造 実施例１における如（製造された、保護された［Ａ　Ｉ　ａＩｓ］　−ＧＲＦ（ ３−２９）−ＢＨＡ−樹脂の１ｇを、実施例１に従い２サイクルの固相ペプチド 合成に賦し、１．０８ｇの保護された［３−ＭｅＨｉ　ｓ’、Ｖａｌ２、Ａｌａ ”］　−ＧＲＦ　（１−２９）−ＢＨＡ−樹脂を得た。０，５ｇ部分を切り取り 、実施例における如く抽出及び精製し、１１．５ｍｇの純粋な［３−ＭｅＨｉ　 ｓ’、Ｖａ　Ｉ”、Ａｌ　ａ”］　−ＧＲＦ　（１−２９）−ＮＨ，を得た。

該生成物は分析用ＨＰ　Ｌ　Ｃで均一であることが示され、酸加水分解により予 期されたアミノ酸組成が得られた（加水分解：６ＮＳＨＣＩ、１１０℃、２４ｈ ）：Ａｓｐ　２．９０　（３）：Ｔｈｒ　Ｏ，８５（１）：Ｓｅｒ　３．００　 （３）：Ｇｌｕ　２．３４　（２）＋Ａｌａ　３．００　（３）：Ｖａｌ　１． ６９　（２）：Ｍｅｔ　１．０３　（１）；　Ｉ　Ｉｅ　１．８４　（２）；Ｌ ｅｕ　４．４７　（４）：Ｔｙｒ　Ｏ，９１（１）：Ｐｈｅ　Ｏ，８２（１）： ３−ＭｅＨｉｓ　１．０９　（１）＋Ｌｙｓ　２．１３　（２）：Ａｒｇ　３． ２６（３）。構造の確認はＦ　Ａ　Ｂマス・スペクトロスコピーで行った。計算 値：　（Ｍ＋Ｈ）”３３８９．　Ｏ０実測値：３３８８．５゜［実施例４］ ［Ｈｉ　ｓ’、Ｖａ　１”、Ａｌａ”５Ｌｅｕ”］　−ＧＲＦ　（１−３２）− ＯＨの製造 Ｂｏ　ｃ　−Ｇ　Ｉ　Ｖ−ＰＡＭ−樹脂（Ｂａｃｈｅａ＋　Ｉｎｃ、、　Ｔｏｒ ｒａｎｃｅ、　ＣＡ、　ＵＳＡ）（０，７ｇ、０．５ｍｍｏＩ）をアプライド・ バイオシステムズ・モデル４３０Ａペプチド合成器の反応槽に仕込み、３１サイ クルの固相ペプチド合成に賦し、１．８ｇの保護された［Ｈｉｓ’、Ｖａｌ２、 Ａｌａ１５、Ｌｅｕ”］　−ＧＲＦ　（１−３２）　−ＰＡＭ−樹脂を得た。０ ．５ｇ部分をＨＦで処理し、得られた粗ペプチド（４２０ｍｇ）を実施例１にお ける如＜ＨＰＬＣで精製し、３４ｍｇの純粋な［Ｈｉ　ｓ’、Ｖａ　１２、Ａｌ ａ＋６、Ｌｅｕ”］　−ＧＲＦ　（１−３２）−ＯＨを得た。

該生成物は分析用ＨＰＬＣで均一であることが示され、酸加水分解により予期さ れたアミノ酸組成が得られた（加水分解：５ＮＨＣ１，１５０℃、ｌｈ）：Ａｓ ｐ　３．２３　（３）；Ｔｈｒ　Ｏ，９４（１）：Ｓｅｒ　２．８３　（３）； Ｇｌｕ　４．２３　（４）：Ｇｌｙ　１．０６　（１）：Ａｌａ　３．０６　（ ３）；Ｌｅｕ　４．９１　（５）；Ｔｙｒ　Ｏ，９８（１）；Ｈｉｓ　Ｏ，９３ （１）；Ｌｙｓ　１．９２　（２）：Ａｒｇ　３．２２　（３）。

（６ＮＨＣ］、１１０℃、７２ｈ）：Ｖａｌ　２．０１　（２）；　Ｉ　Ｉｅｌ 、９８　（２）：Ｐｈｅ　１．００　（１）、構造の確認はＦＡＢｙス・：Ｚ。

ペクトロスコピーで行った。計算値：　（Ｍ＋Ｈ）“３６７１．２゜実測値＝３ ６７１．２゜ ［実施例５］ ［Ｈｉｓ’、ｌ１ｅ２、Ａｌａ”］　ＧＲＦ（１２９）ＮＨｔの製造保護された ［ＡＩ　ａ１５］　−ＧＲＦ　（３−２９）−ＢＨＡ−樹脂のＩｇ部分を実施例 １における如く２サイクルの固相ペプチド合成に賦し、１１ｇの保護された［Ｈ ｉｓ’、Ｉ　ｌｅ”、Ａｌａ”］　−ＧＲＦ　（１−２９）−ＢＨＡ−樹脂を得 た。該保護されたペプチド樹脂を無水ＨＦで解裂し、５４０ｍｇの粗ペプチドを 得た。該粗材料（５４０ｍｇ）を２５ｍ／の０．１％ＴＦＡ／Ｈ２０に溶かし、 濾過し、そしてＰｒｅｐ−Ｐａｋ　ＹＭＣ−塩基性（Ｂａｓｉｃ）カラム（４， ８Ｃｍｘ　３０　ｃｍ）　（ＹＭＣ，Ｍｏｒｒｉｓ　Ｐｌａｉｎｓ、　ＮＪ。

ＵＳＡ）にかけた。該カラムを５０ｍ／／分の流速、２０％（Ｂ）−５０％（Ｂ ）の直線勾配、９０分で、（Ａ）Ｈ２０（０，１％ＴＦＡ）−（Ｂ）ＣＨｓＣＮ 　（０，１％ＴＦＡ）を用いて溶出した。０．５分毎に画分をとり、分析用ＨＰ 　Ｌ　Ｃ系で分析した。半純粋生成物を含有する両分を集め、蒸発し、凍結乾燥 した。

半純粋材料を０１％ＴＦＡ／Ｈ２０に溶かし、遠心し、濾過し、そして２．５　 Ｘ　５０　ｃ　ｍ　Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌカラムにかけた。該カラムを（Ａ）Ｈ２ ０（０，１％ＴＦＡ）　−（Ｂ）ＣＨ３ＣＮ　（０，１％ＴＦＡ）を用い、流速 １０ｒｒ＋ｌ／分、９０分、２５％（Ｂ）−４５％（Ｂ）の直接勾配で溶出した 。両分を集め（１ｍｌＺ画分）、小部分を分析用ＨＰＬＣで分析した。生成物は 画分５０−５４に溶出しており、それを合体して、蒸発及び凍結乾燥し、純粋な ［Ｈｉ　ｓ’、　Ｉ　Ｉ　ｅ”、Ａｌａ”］　−ＧＲＦ　（１−２９）−ＮＨ２ を得た。収量：３７ｍｇ０該生成物は分析用ＨＰ　Ｌ　Ｃで均一であることが示 され、酸加水分解により予期されたアミノ酸組成が得られた（６Ｎ　ＨＣＩ、１ ５０℃、１ｈ）：ＡＳＴ）２．８２　（３）；Ｔｈｒ　Ｏ，９５（１）；Ｓｅｒ 　３．０７（３）：Ｇｌｕ　２．０２　（２）＋Ａｌａ　３．００　（３）；Ｍ ｅｔ　Ｏ，９４（１）；Ｌｅｕ　３．７１　（４）：Ｔｙｒ　Ｏ，９７（１）； Ｈｉｓ　１．１０（１）；　（１１０°、２４ｈ）：Ｖａｌ　Ｏ，８６（１）； 　Ｉ　Ｉｅ　２．４６（３）；Ｐｈｅ　Ｏ，８２（１）；Ｌｙｓ　１．９２　（ ２）；Ａｒｇ　２．８７（３）。構造の確認はＦＡＢマス・スペクトロスコピー で行った。計算値：　（Ｍ十Ｈ）”３３８９．０゜実測値：３３８９．Ｏｏ［実 施例６コ ［１１ｅ”、Ａ１　ａ”］　−ＧＲＦ　（１２９）　ＮＨ２の製造保護された［ ＡＩ　ａｌＳ］　−ＧＲＦ　（３−２９）−ＢＨＡ−樹脂の１ｇ部分を実施例１ における如く２サイクルの固相ペプチド合成に賦し、０゜９２ｇの保護された［ １１ｅ２、Ａ　Ｉ　ａ′５］　−ＧＲＦ　（１−２９）　−ＢＨＡ樹脂を得た。

０．５ｇ部分を無水ＨＦで解裂し、０．２１５ｇの粗［１１ｅ”、ＡＩ　ａＩｓ ］　−ＧＲＦ　（１２９）　ＮＨ２を得た。粗生成物（０，２１５ｇ）を２５ｍ １の０．１％ＴＦＡ／Ｈ２０に溶かし、遠心し、濾過し、ｌｘ２５ｃｍ　Ｎｕｃ ｌｅｏｓｉｌ　Ｃ−１８カラム（Ａｌｔｅｃｈ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ。

ｓ、　ａ、　）にかけた。該カラムを（Ａ）Ｈ２０（０，１％ＴＦＡ）−（Ｂ） ＣＨ３ＣＮ　（０，１％ＴＦＡ）を用いて、流速１５ｍ１／分、９０分、２０％ （Ｂ）−４５％（Ｂ）の直線モードで溶出した。１分毎に両分を集め、小部分を 分析用ＨＰＬＣ系で分析した。画分４８−４９　（半純粋生成物を含有）を合体 し、蒸発し、凍結乾燥した。半組製凍結乾燥品を蒸留水に溶かし、Ｗａｔｅｒｓ 　Ｐｈｅｎｙｌ　Ｃｏ１ｕ＋ｓｎ　（０、７８Ｘ　３０　ｃ　ｍ）にかけた。

該カラムを、（Ａ）Ｈ，Ｏ（０，１％ＴＦＡ）−（Ｂ）ＣＨ８ＣＮ　（０，１％ ＴＦＡ）を用いて、流速３ｍ／／分、５０分、３０％（Ｂ）−５０％（Ｂ）の直 線モードで溶出した。

画分を分析用ＨＰＬＣで分析し、純生成物を含有する画分４１を蒸発し、凍結乾 燥して４ｍｇの生成物を得た。

該生成物は分析用ＨＰＬＣで均一であることが示され、酸加水分解により予期さ れたアミノ酸組成が得られた（６ＮＨＣＩ、１５０℃、１１１０℃、７２ｈ）＋ Ａｓｐ　２．８６　（３）；Ｇｌｕ　２．４０　（２）；Ａｌａ　３．００　（ ３）：Ｖａｌ　１．１１　（１）；Ｍｅｔ　１．０４　（１）：Ｉ　Ｉｅ　２． ６０　（３）：Ｌｅｕ　４．５７　（４）；Ｔｙｒ　１．６０　（２）；Ｐｈｅ 　Ｏ，８３（１）；Ｌｙｓ　２．３９　（２）　：Ａｒｇ　３．４５　（３）。

構造の確認はＦＡＢマス・スペクトロスコピーで行った。計算値：　（Ｍ＋Ｈ） ”３４１５．０３゜実測値＋３４１５．８゜［実施例７］ ［Ｌｅｕ”、Ａｌａ”コーＧＲＦ　（１−２９）　−ＮＨ２の製造保護された［ ＡＩ　ａ”］　−ＧＲＦ　（３−２９）−ＢＨＡ−樹脂の１ｇを実施例１におけ る如く２サイクルの固相ペプチド合成に賦し、１．１ｇの保護された［Ｌｅｕ２ 、Ａｌａ＋５コーＧＲＦ　（１−２９）−ＢＨＡ−樹脂を得た。保護されたペプ チド樹脂（１，１ｇ）を無水ＨＦで解裂し、５７１ｍｇの粗ペプチドを得、それ を実施例１における如く精製した。全体で３４ｍｇの純粋な［Ｌｅｕ２、Ａ　ｌ 　ａ１５］　−ＧＲＦ　（１−２９）ＮＨ，が得られた。

該生成物は分析用ＨＰＬＣで均一であることが示され、酸加水分解により予期さ れたアミノ酸組成が得られた（６ＮＨＣＩ、１５０℃、ｌｈ）：Ｔｈｒ　Ｏ，９ ４（１）；Ｓｅｒ　３．０１　（３）；Ｔｙｒ　２．０４（２）、（１１０℃、 ２４ｈ）：Ａｓｐ　２．７４　（３）：Ｇｌｕ　２．０３（２）；Ａｌａ　３． ００　（３）；Ｖａｌ　Ｏ，９０（１）＋Ｍｅｔ　０．９６（１）；　Ｉ　Ｉｅ 　１．８０　（２）：Ｌｅｕ　４．８４　（５）；　Ｐｈｅ　Ｏ，８６（１）： Ｌｙｓ　１．８３　（２）：Ａｒｇ　２．９６　（３）、構造の確認はＦＡＢマ ス・スペクトロスコピーで行った。計算値＋　（Ｍ十Ｈ）′″３４１５゜０゜実 測値：３４１５．５゜ ［実測値８］ ［ｄｅｓＮＨ，Ｈｉｓ’、Ｖａｌ”、Ａｌａ”］　−ＧＲＦ　（１−２９）−Ｎ Ｈ，の製造 （実施例１かラノ）保護された［Ａ１　ａ”］　−ＧＲＦ　（３−２９）−ＢＨ Ａ−樹脂の１ｇを２サイクルの固相ペプチド合成に賦し、１ｇの保護された［ｄ ｅｓＮＨ２Ｈｉｓ’、Ｖａ　１”、Ａｌ　ａ”］　−ＧＲＦ　（１−２９）−Ｂ ＨＡ−樹脂を得た。０．５ｇ部分を無水ＨＦで解裂し、２４０ｍｇの粗［ｄｅｓ ＮＨ，Ｈｉｓ’、Ｖａｌ”、Ａ　１　ａ”］　−ＧＲＦ　（１−２９）−ＮＨ， を得た。Ｐｒｅｐ−Ｐａｋ　ＹＭＣ塩基性（Ｂａｓｉｃ）　ＨＰ　Ｌ　Ｃカラム を用いて、（実施例７における如く）精製し、全体で１９ｍｇの純粋な［ｄｅｓ ＮＨ，Ｈｉｓ’１Ｖａ１２、Ａｌａ＋５３−ＧＲＦ　（１−２９）−ＮＨ２が得 られた。

分析用ＨＰＬＣにより該生成物は均一であることが示され、酸加水分解で予期し たアミノ酸組成が得られた（６Ｎ　ＨＣＩ、１５０℃、１ｈ）：Ａｓｐ　３．０ ６　（３）；Ｔｈｒ　Ｏ，９４（１）；Ｓｅｒ　３．０３（３）：Ｇｌｕ　２． ２２　（２）；Ａｌａ　３．２８　（３）：Ｖａｌ　１．８５（２）：Ｍｅｔ　 １．０５　（１）　：　Ｉ　Ｉｅ　１．９３　（２）　：Ｌｅｕ　４．３８（４ ）；Ｔｙｒ　１．０３　（１）；Ｐｈｅ　Ｏ，９０（１）：Ｌｙｓ　２．００（ ２）；Ａｒｇ　３．３０　（３）、構造の確認はＦＡＢマス・スペクトロスコピ ーで行った。計算値：　（Ｍ＋Ｈ）“３３５９．９゜実測値：３３５９゜９゜ ［実施例９］ ［Ｖａｌ”、Ａｌａ”、Ｌｅｕ”］　−ＧＲＦ（１−３２）−ＯＨの製造Ｂｏ　 ｃ−Ｇ　Ｉ　ｙ−ＰＡＭ−樹脂（１０ｇ；　０．６８ｍｍｏＩ／ｇ）を４００ｍ Ａの反応槽に配置し、１円形振動器（ｓｈａｋｅｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｏｕｎｄ ）″装置（Ｇｌａｓ−Ｃｏｌ＾ｐｐａｒａｔｕｓ　Ｃｏ、　；　Ｔｅｒｒｅ　Ｈ ａｕｔｅ、　ＩＮ）を用いて全体で２３サイクルの固相ペプチド合成を実行し、 保護された［Ａｌａ”、Ｌｅｕ”］　−ＧＲＦ　（９−２９）ＰＡＭ−樹脂（１ ９，８ｇ）を得た。保護されたペプチド樹脂の１部（１０ｇ）を更に６サイクル の固相ペプチド合成に賦し、９．６ｇの保護された［Ａ１　ａ”、Ｌｅｕ”］　 −ＧＲＦ（３−３２）ＰＡＭ−樹脂を得た。該保護された［Ａ　Ｉ　ａｌｓＳＬ 　ｅ　ｕ”］−ＧＲＦ　（３−３２）ＰＡＭ−樹脂の１ｇを最終的に更に２サイ クルの固相ペプチド合成に賦し、保護された［Ｖａｌ”、Ａｌａ１３、Ｌ　ｅ　 ｕ　”］−ＧＲＦ　（３−３２）ＰＡＭ−樹脂（１ｇ）を生成した。該保護され たペプチド樹脂を無水ＨＦを用いて解裂し、５４０ｍｇの粗［Ｖａｌ２、Ａｌａ ”１Ｌｅｕ”）］　−ＧＲＦ　（１−３２）−ＯＨを生成した。

該粗ペプチド混合物（５４０ｍｇ）をＹＭＣ−Ｐｒｅｐ　Ｐａｋカラムを用い（ 実施例５における如＜）ＨＰＬＣで精製し、１５ｍｇの純粋な［Ｖａｌ２、Ａｌ ａ”、Ｌｅｕ２７］　−ＧＲＦ　（１−３２）−ＯＨが得られた。

該生成物は分析用ＨＰ　Ｌ　Ｃで均一であることが示され、酸加水分解で予期さ れたアミノ酸組成が得られた（６Ｎ　ＨＣＩ　；　１５０℃、１ｈ）：Ａｓｐ　 ２．９８　（３）；Ｔｈｒ　１．０３　（１）；Ｓｅｒ　２．９６　（３）；Ｇ ｌｕ　４．１７　（４）；Ｇｌｙ　１．０９　（１）；Ａｌａ　３．００　（３ ）；Ｖａｌ　１．８２　（２）：　Ｉ　ｌｅ　１．８３　（２）；Ｌｅｕ　５． １４　（５）；Ｔｙｒ　２．００　（２）；Ｐｈｅ　Ｏ，７４（１）：Ｌｙｓ　 ２．００　（２）；Ａｒｇ　３．０９　（３）。構造の確認はＦＡＢマス・スペ クトロスコピーで行った。計算値：　（Ｍ＋Ｈ）”３６９６．３゜実測値：３６ ９６．２゜［実施例１０］ ［Ｈｉｓ’、ＶａｌζＡｌａ”、Ｌｅｕ”、Ａｓｎ”］　−ＧＲＦ　（１−３２ ）−ＯＨの合成 りｏｃ−Ｇ１　ｙ−ＰＡＭ−樹脂をペプチド合成器の反応槽に仕込み、３１サイ クルの固相ペプチド合成に賦し、保護された［Ｈｉｓ’、Ｖａｌ２、ＡｌａＩｓ ｓ　Ｌｅｕ”、Ａｓｎ”］　−ＧＲＦ　（１−３２）−ＰＡＭ−樹脂を得ること ができる。該ＰＡＭ−樹脂を実施例２における如くＨＦで処理し、粗［Ｈｉｓ’ 、Ｖａ　１”、Ａｌａ”ｓ　Ｌｅｕ”、Ａ　ｓ　ｎ　”］−ＧＲＦ　（１−３２ ）−ＯＨを生成することができる。そしてこの粗生成物の１部を実施例１におけ る如＜ＨＰＬＣ精製に賦することができる。

いくつかの両分に出て（る所望の生成物を合体し、蒸発し、凍結乾燥することが できる。生成物は分析用ＨＰＬＣで均一であることを示すことができ、またアミ ノ酸分析で確認できる。

［実施例１１］ ［Ｈｉｓ’、Ｌｅｕ”、Ａｌａ’ζＬｅｕ”］　−ＧＲＦ　（１−３２）−ＯＨ の合成 りｏ　ｃ　−Ｇ　ｌ　ｙ−ＰＡＭ−樹脂をペプチド合成器の反応槽に仕込み、３ １サイクルの固相ベビチド合成に賦し、保護された［Ｈｉｓ’、Ｌｅｕ２、Ａｌ ａＩ５、Ｌｅｕ”ｌ　−ＧＲＦ　（１−３２）−ＰＡＭ−樹脂を得ることができ る。該ＰＡＭ−樹脂を実施例２における如＜ＨＦで処理し、粗［Ｈｉｓ’、Ｌｅ ｕ”、Ａｌａ′５、Ｌｅｕ”］　−ＧＲＦ　（１−３２）　−ＯＨを生成するこ とができる。そしてこの粗生成物の１部を実施例１における如＜ＨＰＬＣ精製に 賦することができる。いくつかの両分に出てくる所望の生成物を合体し、蒸発し 、凍結乾燥することができる。生成物は分析用ＨＰ　Ｌ　Ｃで均一であることを 示すことができ、またアミノ酸分析で確認できる。

［実施例１２］ ［Ｈｉｓ’、Ｉｌｅ”、Ａｌａ１５、Ｌｅｕ”］　−ＧＲＦ　（１−３２）−Ｏ Ｈの合成 りｏ　ｃ−Ｇ　Ｉ　ｙ−ＰＡＭ−樹脂をペプチド合成器の反応槽に仕込み、３１ サイクルの固相ペプチド合成に賦し、保護された［Ｈｉｓ’、Ｉｌｅ２、Ａｌａ ”、Ｌｅｕ”］　−ＧＲＦ　（１−３２）−ＰＡＭ−樹脂を得ることができる。

該ＰＡＭ−樹脂を実施例２における如＜ＨＦで処理し、粗［Ｈｉｓ’、ｌ１ｅ２ 、Ａｌａ＋５、Ｌｅｕ”］　−ＧＲＦ　（１−３２）　−ＯＨを生成することが できる。そしてこの粗生成物の１部を実施例１における如＜ＨＰＬＣ精製に賦す ることができる。いくつかの画分に出て（る所望の生成物を合体し、蒸発し、凍 結乾燥することができる。生成物は分析用ＨＰＬＣで均一であることを示すこと ができ、またアミノ酸分析で確認できる。

［実施例１３コ ［Ｈｉ　ｓ’、　Ｖａ　１２、Ａｌａ”、Ｌｅｕ”］　−ＧＲＦ　（１−４０） −ＯＨの合成 りｏ　ｃ　−Ａ　Ｉ　ａ−ＰＡＭ−樹脂をペプチド合成器の反応槽に仕込み、３ ９サイクルの固相ペプチド合成に賦し、保護された［Ｈｉｓ’、Ｖａ１！、Ａｌ ａ＋５、Ｌｅｕ”］　−ＧＲＦ　（１−４０）−ＰＡＭ−樹脂を得ることができ る。該保護されたＰＡＭ−樹脂を実施例２における如くＨＦで処理し、粗［Ｈｉ 　ｓ’、　Ｖａ　Ｉ”、Ａｌａ”、Ｌｅｕ２７］　−ＧＲＦ（１−４０）−ＯＨ を生成することができる。そしてこの粗生成物の１部を実施例１における如＜Ｈ ＰＬＣ精製に賦することができる。い（つかの両分に出て（る所望の生成物を合 体し、蒸発し、凍結乾燥することができる。生成物は分析用ＨＰＬＣで均一であ ることを示すことができ、またアミノ酸分析で確認できる。

［実施例１４］ ［Ｈｉ　ｓ’、Ｌｅｕ”、Ａｌａ”、Ｌｅｕ２７］　−ＧＲＦ　（１−４０）− ＯＨの合成 りｏｃ−Ａ１　ａ−ＰＡＭ−樹脂をベピチド合成器の反応槽に仕込み、３９サイ クルの固相ペプチド合成に賦し、保護された［Ｈｉｓ’、Ｌｅｕ２、Ａｈａ＋５ 、Ｌｅｕ”）］　−ＧＲＦ　（１−４０）−ＰＡＭ−樹脂を得ることができる。

該保護されたＰＡＭ−樹脂を実施例２における如くＨＦで処理し、粗［Ｈｉｓ’ 、Ｌｅｕ２、Ａ　１　ａ”、Ｌｅｕ”］　−ＧＲＦ（１−４０）−ＯＨを生成す ることができる。そしてこの粗生成物の１部を実施例１における如＜ＨＰＬＣ精 製に賦することができる。いくつかの画分に出てくる所望の生成物を合体し、蒸 発し、凍結乾燥することができる。生成物は分析用ＨＰＬＣで均一であることを 示すことができ、またアミノ酸分析で確認できる。

［実施例１５］ ［Ｈｉｓ’、Ｉｌｅ　２、　Ａｌａ”、　Ｌｅｕ”コ　−ＧＲＦ　（１−４０） 　−ＯＨの製造 Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＰＡＭ−樹脂をペプチド合成器の反応槽に仕込み、３９サイク ルの固相ペプチド合成に賦し、保護された［Ｈｉｓ’、ＩＩｅ２、Ａｌａ”、Ｌ ｅｕ”フ］　−ＧＲＦ　（１−４０）−ＰＡＭ−樹脂を得ることができる。該保 護されたＰＡＭ−樹脂を実施例２における如くＨＦで処理し、粗［Ｈｉｓ’、ｌ ｉｅ”、Ａｌａ”、Ｌｅｕ”）］　−ＧＲＦ（１−４０）−ＯＨを生成すること ができる。そしてこの粗生成物の１部を実施例１における如（ＨＰＬＣ精製に賦 することができる。いくつかの画分に出て（る所望の生成物を合体し、蒸発し、 凍結乾燥することができる。生成物は分析用ＨＰＬＣで均一であることを示すこ とができ、またアミノ酸分析で確認できる。

し実施例１６］ 該新規ペプチドの生物学的活性を、先端肥大症にかかっている人のヒト膵臓腫瘍 から単離された天然配列のＧＲＦ　（１４４）　ＮＨｔの合成標準品の活性と比 較した（Ｓａｌｋ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ標準ｈｐ−ＧＲＦ　ＮＨｚ（ＮＬ−Ａ− １０））。組繊培養物中のラット脳下垂体細胞中での成長ホルモンの生成を刺激 する能力に基づく、生物学的活性についての分析は以下のように行った。

３０−４０のスブラージ・ダーク−・ラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ　 ｒａｔ）（１７５ｇ）からの脳下垂体を斬首後無菌的に（ａｓｅｐｔｉｃａｌｌ ｙ）取り出シタ。前葉（ａｎｔｅｒｉｏｒ　１ｏｂｅ）を集め、無菌のへバス・ バッファー（Ｂｅｐｅｓｂｕｆｆｅｒ）　（０，０２５Ｍ）　（ｐＨ７，３５） 中で３回洗い、コラゲナーゼ（４ｍｇ／ｍｌ）とジスパーゼ（Ｄｉｓｐａｓｅ） 　（プロテアーゼ級■、２ｍｇ／ｍｚ）を含有するへバス・バッファー２０２０ −３Ｏ中中子７で分散した。静かに８０分かき回し、パスツールピペットで砕い た後、分散した細胞を遠心（１５０Ｘｇ、４分）で分離し、再びノイラミニダー ゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ）　（４μｇ／ｍ／）　、及び２００ｇｇ／ｍ ／のエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）二ナトリウム塩を含有するヘペス・バ ッファーｐＨ７，３５中で１０分間分散させる。該細胞を以下に定義する媒地： ２ｇ　ＢＳＡ／１．．２．３８ｇヘペス／１．．５０ｍｇゲンタマイシン／　ｌ 　（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ　ｃｏ、　）を有するＦ−１２／ＤＭＥＭ／ＢＧＪ　（６ ：３：１）（ギブコニ　４３０−１７００／４３０−１６００／３２０−２５９ １）を用いて、該被覆用媒地（ｐｌａｔｉｎｇ　ｍｅｄｉｕｍ）で２回洗い、そ して多ウェルプレートに被覆した（ｐｌａｔｅｄ）　（１，５Ｘ１０’細胞／ｍ ／）　。各々のウェル中の媒体に、３．１〜２００　ｆ　ｍｏ／／ｍＪ媒地の濃 度範囲の該新規ペプチド又は天然ＧＲＦ　（１−４４）−ＮＨｚを補充した。対 照ウェルには補充しなかった。被覆（ｐｌａｔｉｎｇ）は細胞の迅速な固定を確 実にするため２％牛脂児血清（Ｆｅ２）を添加したこの媒地を用いて行った。４ 日目に該細胞を牛胎児血清を有さない上記定義の媒地で２回洗った。最終的に９ ００ｍ１の上記定義の媒地を各ウェルに加え、各々の個々の処置を含有する１０ ０ｍＡ’の同−媒地を３回加えた。

３時間のインキュベーションの後、該媒地を集め、ラット成長ホルモンについて 放射免疫分析（ＲＩ　Ａ）を実施するため必要に応じ希釈した。

ＲＩＡは、抗原抗体複合体を沈降させるためにプロティンＡを用いるナショナル ・ビチュイタリー・エージエンシー（ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｐｉｔｕｉｔ ａｒｙＡｇｅｎｃｙ）　（Ｕ　Ｓ　Ａ　）による手順、及び５ｉｎｈａの抗ネズ ミＧＨ免疫血清を用いて実施した。結果を表１にまとめる。

Ｇ　ＲＦ　（１−２９）−Ｎ　Ｈ２０，７１Ｇ　ＲＦ　（１−４４）−Ｎ　Ｈｚ 　１．００［Ｈｉ　ｓ’、Ｔ　Ｉ　ｅ２、Ａ　Ｉ　ａ　”］−Ｇ　ＲＦ　（１− ２９）−ＮＨｚ　１．２４［ｄｅｓＮＨ２Ｈｉｓ’、Ｖａｌ”、Ａｌａ”］−Ｇ ＲＦ（１−２９）−ＮＨｚ　１．２１［Ｈｉｓ’　、　Ｖａ　Ｉ　”、Ａ　ｌ　 ａ”］−ＧＲＦ（１−２９）−ＮＨｚ　２．５ｇ［Ｈｉｓ’、Ｖａｌ”、Ａｌａ ”、Ｌ　ｅ　ｕ　”］−Ｇ　ＲＦ　（１−３２）−０Ｈ２，４０ＧＲＦ類縁体の ｉｎ　ｖｉｔｒｏプラズマ安定性は、３７℃でのブタプラズマ・インキュベーシ ョンにより測定した。対照ブタから合体ブタプラズマを集め、−２０℃で保存し た。注目のＧＲＦ類縁体は上記のようにして製造した。該プラズマをまず解かし 、４℃で２０分間３０００ｒｐｍで遠心した。そして該プラズマを温度３７℃の 振盪バス中に置き、１０分間平衡になるに任せた。ＧＲＦ類縁体は０．１％ＴＦ Ａ含有水に２μｇ／ｍｌの濃度で溶かした。初期の平衡化が完結するとすぐに、 類縁体を該プラズマ試料に終濃度１００μｇ／ｍｌ迄添加した。ＧＲＦ類縁体の 添加後直ちに、プラズマ試料の１ｍ１分割を取り出し、０．２ｍｌの０．１Ｍ　 ＴＦＡ／ＨｚＯで酸性化し、後の固相抽出のために０℃に維持した。残りのプラ ズマ試料はウォーターバス中でインキュベートし、異なる時間で１ｍ１分割を取 り出し、上記と同じ方法で酸性化した。

プラズマ試料は５ＥＰ−ＰＡＫオクタデシル・カラム（Ｗａｔｅｒｓ　Ｍｉｌｌ ｉｐｏｒｅ　Ｇｍｂｌ’ｌ、　Ｅｓｃｈｂｏｒｎ、　ＢＲＤ）で抽出した。該カ ラム容器は、２ｍｌの８０％酢酸で、次いで４ｍｌの０．ＯＩＭＴＦＡで洗った 。プラズマ試料をかけた後、該カラムを３ｍｌの０．ＩＭＴＦＡで洗い、過剰の 非結合生物物質を除去した。容器に残っている溶媒をＩＱｍｌ注射器から空気を ２回流して押し出した。そして結合物質を８０％酢酸で溶出し、３ｍｌの溶出液 をクロマトグラフィー分析のために採取した。２つの高速液クロ系を用いた。系 Ａ：波装置Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅ１ｍｅｒ系４液体クロマトグラフィー・マイクロプ ロセッサ−制御溶媒分配システム、Ｗａｔｅｒｓインテリジェント・サンプル・ プロセッサー（ＷＩＳＰ）型７１Ｑ　（ＷａｔｅｒｓＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ）　 、及びＨｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ　１０４０Ｍ　Ｄｉｏｄｅ　Ａｓ５ａｙ 　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　５ｙｓｔｅｔｓ、カラム−Ｄｅｌｔａ　Ｐａｋ　Ｃ１８ ，３，５ｘ１５０ｍｍ、５μｍ球状（Ｎｉｈｏｎ　ｆａｔｅｒｓ　Ｌｔｄ、　） 　。移動相−（Ａ）０．１％ＴＦＡ／水、（Ｂ）０．１％ＴＦＡ／（９５％アセ トニトリル＋５％Ｈ２０）。勾配は３４−５０％（Ｂ）で、６０分、流速１ｍ１ １分、検出は２１５ｎｍ０系Ｂ：装置−ｗａｔｅｒｓ　６００　フルチ溶媒分配 システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ。

Ｍｉｌｆｏｒｄ、　ＭＡ、　ＵＳＡ）　、ＷＩ　Ｓ　Ｐ型７１２　（Ｍｉｌｌｉ ｐｏｒｅ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ。

Ｍｉｌｆｏｒｄ、　ＭＡ、　ＵＳＡ）及びＬＤＣスペクトロモニターｍ　（ＬＤ Ｃ，ＲｉｖｉｅｒａＢｅａｃｈ、　ＦＬ、　ＵＳＡ）。カラム−Ｖｙｄａｃ　２ ０１ＴＰ５４、Ｃ１８４，６ｘ２５０　ｍｍ、　１０　ａｍ　（Ｔｈｅ　５ｅｐ ａｒａｔｉｏｎｓ　Ｇｒｏｕｐ、　Ｈｅ５ｐｅｒｉａ、　ＣＡ、　ＵＳＡ）。

移動相−系Ａと同じ。勾配は１０分間で３０％（Ｂ）平坦（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ ）であり、次いで６０分間で３０−５０％（Ｂ）勾配であり、流速は１ｒｓｌ／ 分であり、検出は２１５ｎｍであった。アミノ酸分析は上記の如〈実施した。プ ラズマ半減期の結果を表２に示す。

Ｇ　ＲＦ　（１−２９）−Ｎ　Ｈ２１３［Ａ　ｌ　ａ　”］−ＧＲＦ　（１−２ ９）−ＮＨｚ　１？［Ｈｉｓ’、Ｖａ　Ｉ２、Ａ　１　ａ　”　］−Ｇ　ＲＦ　 （１−２９）−Ｎ　Ｈｔ　６０［Ｈｉｓ’、　Ｖａｌ　２、　Ａｌａ”、　Ｌｅ ｕ”コーＧＲＦ（１−３２）−０Ｈ６０［Ｖａｌ”、　Ａｌａ”、Ｌｅｕ”）］ −ＧＲＦ（１−３２）−０Ｈ７０−際調査報告 ｗ″″″′−にＴ／ＵＳ９１１０／１６０６

Claims (36)

【特許請求の範囲】
1. １．下記式 １　　　　　　　　　　　　　　５ Ｒ１−Ｒ２−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−　　　　１０ 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１５Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ −Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｒ３−Ｇｌｎ　　　　　　　　　　　　　　２０ −Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−　　　　２５ Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｒ４−Ｒ５−Ｒ６−Ｘ式中Ｒ１はＨｉｓ、３−ＭｅＨ ｉｓ、ｄｅｓＮＨ２Ｈｉｓ、Ｔｙｒ又はｄｅｓＮＨ２Ｔｙｒであり；Ｒ２はＶａ ｌ、Ｌｅｕ又はＩｌｅであり；Ｒ３はＡｌａであり；Ｒ４はＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉ ｌｅ又はＮｌｅであり；Ｒ５はＳｅｒ又はＡｓｎであり；Ｒ６はＡｒｇ−ＧＩｎ −Ｇｌｎ−ＧＩｙ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ −Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ又はカルボキシ末端から総数で１〜 １５のアミノ酸残基を減じた配列であるその断片から選ばれるアミノ酸配列であ り；ＸはＯＨ又はＮＨ２のいずれかである、 で示される化合物及びその薬学的に許容されうる酸又は塩基付加塩。
2. ２．Ｒ３がＡｌａであり、Ｒ８がＡｒｇである請求の範囲第１項記載の化合物。
3. ３．Ｒ２がＶａｌである請求の範囲第２項記載の化合物。
4. ４．［Ｈｉｓ１、Ｖａｌ２、Ａｌａ１５］−ＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ２である 請求の範囲第３項記載の化合物。
5. ５．［３−ＭｅＨｉｓ１、Ｖａｌ２、Ａｌａ１５］−ＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ ２である請求の範囲第３項記載の化合物。
6. ６．［ｄｅｓＮＨ２Ｈｉｓ１、Ｖａｌ２、Ａｌａ１５］−ＧＲＦ（１−２９）− ＮＨ２である請求の範囲第３項記載の化合物。
7. ７．Ｒ２がＬｅｕである請求の範囲第２項記載の化合物。
8. ８．［Ｈｉｓ１、Ｌｅｕ２、Ａｌａ１５］一ＧＲＦ（１−２９）一ＮＨ２である 請求の範囲第７項記載の化合物。
9. ９．［Ｌｅｕ２、Ａｌａ１５］−ＧＲＦ（１−２９）一ＮＨ２である請求の範囲 第７項記載の化合物。
10. １０．Ｒ２がＩｌｅである請求の範囲第２項記載の化合物。
11. １１．［Ｈｉｓ１、Ｉｌｅ２、Ａｌａ１５］−ＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ２であ る請求の範囲第１０項記載の化合物。
12. １２．［Ｉｌｅ２、Ａｌａ１５］−ＧＲＦ（１−２９）−ＮＨ２である請求の範 囲第１０項記載の化合物。
13. １３．Ｒ３がＡｌａであり、Ｒ６がＡｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙである請求 の範囲第１項記載の化合物。
14. １４．Ｒ２がＶａｌである請求の範囲第１３項記載の化合物。
15. １５．［Ｈｉｓ１、Ｖａ１２、Ａｌａ１５、Ｌｅｕ２７］−ＧＲＦ（１−３２） −ＯＨである請求の範囲第１４項記載の化合物。
16. １６．［Ｖａｌ２、Ａｌａ１５、Ｌｅｕ２７］−ＧＲＦ（１−３２）−ＯＨであ る請求の範囲第１４項記載の化合物。
17. １７．［Ｈｉｓ１、Ｖａｌ２、Ａｌａ１５、Ｌｅｕ２７、Ａｓｎ２６］−ＧＲＦ （１−３２）−ＯＨである請求の範囲第１４項記載の化合物。
18. １８．Ｒ２がＬｅｕである請求の範囲第１３項記載の化合物。
19. １９．［Ｈｉｓ１、Ｌｅｕ２、Ａｌａ１５、Ｌｅｕ２７］−ＧＲＦ（１−３２） −ＯＨである請求の範囲第１８項記載の化合物。
20. ２０．Ｒ２がＩｌｅである請求の範囲第１３項記載の化合物。
21. ２１．［Ｈｉｓ１、Ｉｌｅ２、Ａｌａ１５、Ｌｅｕ２７］−ＧＲＦ（１−３２） −ＯＨである請求の範囲第２０項記載の化合物。
22. ２２．Ｒ３がＡｌａであり、Ｒ６がＡｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ− Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｌａである請求の範囲第 １項記載の化合物。
23. ２３．Ｒ２がＶａｌである請求の範囲第２２項記載の化合物。
24. ２４．［Ｈｉｓ１、Ｖａｌ２、Ａｌａ１５、Ｌｅｕ２７］−ＧＲＦ（１−４０） −ＯＨである請求の範囲第２３項記載の化合物。
25. ２５．Ｒ２がＬｅｕである請求の範囲第２２項記載の化合物。
26. ２６．［Ｈｉｓ１、Ｌｅｕ２、Ａｌａ１５、Ｌｅｕ２７］−ＧＲＦ（１−４０） −ＯＨである請求の範囲第２５項記載の化合物。
27. ２７．Ｒ２がＩｌｅである請求の範囲第２２項記載の化合物。
28. ２８．［Ｈｉｓ１、Ｉｌｅ２、Ａｌａ１５、Ｌｅｕ２７］−ＧＲＦ（１−４０） −ＯＨである請求の範囲第２７項記載の化合物。
29. ２９．ヒトにおける成長ホルモン欠乏を特徴とする成長関連の病気の処置（治療 ）のための、請求の範囲第１−２８項のいずれかに記載された化合物。
30. ３０．成長成績（ｇｒｏｗｔｈｐｅｒｆｏｍａｎｃｅ）を促進するために動物を 処置（治療）するための、請求の範囲第１−２８項のいずれかに記載された化合 物。
31. ３１．（ａ）溶液相ペプチド合成により合成された対応するアミノ酸配列を有す る正しく保護されたポリペプチドの保護基を、通常の方法を用いて、切り離すこ と、又は （ｂ）固相ペプチド合成により合成された対応するアミノ酸配列を有する、正し く側鎖保護された樹脂結合ポリペプチドを、通常の方法を用いて脱保護し、そし て樹脂から切り離すこと、そして、もし所望ならば薬学的に許容される酸又は塩 基付加塩に転換することを特徴とする請求の範囲第１−２８項のいずれかに記載 された化合物の製造方法。
32. ３２．請求の範囲第１−２８項記載の少くとも１つの化合物の有効量、及びもし 所望なら非毒性の薬学的に許容しうる液体又は固体担体を含有する薬学的組成物 。
33. ３３．ヒトにおける成長ホルモン欠乏を特徴とする成長関連の病気の処置、又は 成長成績を促進するための動物の処置における請求の範囲第１−２８項のいずれ かに記載された化合物の利用。
34. ３４．請求の範囲第３１項に記載された方法に従って製造された、請求の範囲第 １−２８項のいずれかに記載の化合物。
35. ３５．以上に記載された発明。
36. ３６．請求の範囲第１−２８項のいずれかに記載された化合物を動物に投与する ことから成る、温及び冷血動物における成長ホルモン欠乏を特徴とする成長関連 の病気の処置又は成長成績の改善のための方法。