DK162103B - Syntetiske grf-analoge peptider og farmaceutisk acceptable salte heraf samt farmaceutisk middel indeholdende peptidet eller et ikke-toksisk salt deraf - Google Patents
Syntetiske grf-analoge peptider og farmaceutisk acceptable salte heraf samt farmaceutisk middel indeholdende peptidet eller et ikke-toksisk salt deraf Download PDFInfo
- Publication number
- DK162103B DK162103B DK220685A DK220685A DK162103B DK 162103 B DK162103 B DK 162103B DK 220685 A DK220685 A DK 220685A DK 220685 A DK220685 A DK 220685A DK 162103 B DK162103 B DK 162103B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- arg
- leu
- ser
- ala
- gln
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 106
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims abstract description 13
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 title claims abstract description 8
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title abstract description 34
- 239000005426 pharmaceutical component Substances 0.000 title 1
- XKCWNEVAXQCMGP-RXMQYKEDSA-N (2R)-2-amino-5-[carbamimidoyl(methyl)amino]pentanoic acid Chemical compound CN(CCC[C@@H](N)C(O)=O)C(N)=N XKCWNEVAXQCMGP-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims abstract description 25
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N D-leucine Chemical group CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims abstract description 12
- OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N D-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 9
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003196 D-leucino group Chemical group [H]OC(=O)[C@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims 1
- -1 Phe Chemical compound 0.000 abstract description 27
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 17
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract description 12
- 241000282412 Homo Species 0.000 abstract description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 abstract description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 abstract description 5
- 125000000773 L-serino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])*)C([H])([H])O[H] 0.000 abstract description 2
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 abstract description 2
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 abstract description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Chemical group OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 abstract 2
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical group OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 abstract 2
- 125000003290 L-leucino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 abstract 2
- 101000825768 Bos taurus Somatoliberin Proteins 0.000 abstract 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N D-Asparagine Chemical group OC(=O)[C@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N 0.000 abstract 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-Serine Chemical group OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 abstract 1
- WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N D-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N 0.000 abstract 1
- HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N D-histidine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N 0.000 abstract 1
- 125000003301 D-leucyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CC(C)C 0.000 abstract 1
- FFEARJCKVFRZRR-SCSAIBSYSA-N D-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-SCSAIBSYSA-N 0.000 abstract 1
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 abstract 1
- SGCGMORCWLEJNZ-UWVGGRQHSA-N His-His Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C([O-])=O)C1=CN=CN1 SGCGMORCWLEJNZ-UWVGGRQHSA-N 0.000 abstract 1
- 101000825742 Homo sapiens Somatoliberin Proteins 0.000 abstract 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 abstract 1
- 101000825738 Rattus norvegicus Somatoliberin Proteins 0.000 abstract 1
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 abstract 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 56
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 56
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 46
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 44
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 43
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 28
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 28
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 28
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 22
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 description 16
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 13
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical group C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 8
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 7
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 5
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000004744 butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000000031 ethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N([H])[*] 0.000 description 4
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 4
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ULEBESPCVWBNIF-BYPYZUCNSA-N L-arginine amide Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N ULEBESPCVWBNIF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-asparagine Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GELXFVQAWNTGPQ-UHFFFAOYSA-N [N].C1=CNC=N1 Chemical group [N].C1=CNC=N1 GELXFVQAWNTGPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000005076 adamantyloxycarbonyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)OC(=O)* 0.000 description 2
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N di-isopropyl sulphide Natural products CC(C)SC(C)C XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 2
- 239000003501 hydroponics Substances 0.000 description 2
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 2
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N methylsulfanylethane Chemical compound CCSC WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 description 2
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000252073 Anguilliformes Species 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 125000006847 BOC protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101100512078 Caenorhabditis elegans lys-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000270605 Chelonia Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 101000937129 Drosophila melanogaster Cadherin-related tumor suppressor Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 101100187187 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) NMA2 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- UMPVMAYCLYMYGA-ONGXEEELSA-N Val-Leu-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O UMPVMAYCLYMYGA-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940022663 acetate Drugs 0.000 description 1
- 159000000021 acetate salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000005915 ammonolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 229940050390 benzoate Drugs 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229940001468 citrate Drugs 0.000 description 1
- 239000012459 cleaning agent Substances 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- UNXNGGMLCSMSLH-UHFFFAOYSA-N dihydrogen phosphate;triethylazanium Chemical compound OP(O)(O)=O.CCN(CC)CC UNXNGGMLCSMSLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002260 hypophysiotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000960 hypophysis hormone Substances 0.000 description 1
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037189 immune system physiology Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000005928 isopropyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(OC(*)=O)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- 229910052751 metal Chemical class 0.000 description 1
- MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N methylazanide Chemical compound [NH-]C MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005897 peptide coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 108010036509 somatotropin releasing factor 40 Proteins 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 229940086735 succinate Drugs 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 238000006257 total synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- KMIOJWCYOHBUJS-HAKPAVFJSA-N vorolanib Chemical compound C1N(C(=O)N(C)C)CC[C@@H]1NC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C KMIOJWCYOHBUJS-HAKPAVFJSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
- A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/12—Growth hormone, growth factor other than t-cell or b-cell growth factor, and growth hormone releasing factor; related peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Luminescent Compositions (AREA)
- Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Dental Preparations (AREA)
- Superconductors And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
i
DK 162103 B
Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte GRF-analoge peptider, der fremmer frigørelsen af væksthormon fra hypofysekirtelen, farmaceutisk acceptable salte heraf samt farmaceutisk middel indeholdende disse.
S
Fysiologer har længe erkendt, at hypothalamus styrer adenohy-pofysens sekretionsfunktioner, idet hypothalamus producerer særlige stoffer, der stimulerer eller inhiberer sekretionen af hvert hypofysehormon. En hypothalamisk inhiberingsfaktor blev 10 i 1972 karakteriseret i form af somastatin, der inhiberer sekretionen af væksthormon (GH). I 1982 isoleredes humane pan-creas-(svulst) frigørelsesfaktorer (hpGRF) fra ekstrakter af humane pancreassvulster, hvilke faktorer blev renset, karakteriseret, syntetiseret og afprøvet og viste sig at fremme af-15 gøreisen af GH fra hypofysen. Begge disse hypofysiotrope faktorer er blevet genfremstillet ved hjælp af total syntese, og med de naturlige stoffer analoge forbindelser er blevet syntetiseret. Det antages, at human hypothalam GH-frigørelsesfaktor har nøjagtig den samme opbygning. Derfor anvendes udtrykket 20 hGRF i det følgende . En tilsvarende rotte-hypothalam GH-fri-gørelsesfaktor (rGRF), en tilsvarende svin-hypothalam GH-fri-gørelsesfaktor (pGRF) og en tilsvarende kvæg-hypothalam GH-frigørelsesfaktor (bGRF) er også blevet karakteriseret og syntetiseret.
25
Syntetiske polypeptider er nu blevet syntetiseret og afprøvet, hvilke polypeptider frigør GH fra dyrkede hypofyseceller og i det mindste delvis kan modstå enzymatisk nedbrydning i legemet samt udviser meget betydelig forøget virkningsstyrke. Disse 30 peptider har NaCH3-D-Ala(D-NMA) i 2-stillingen og/eller D-Leu i 14-sti 11 ingen og/eller D-Arg i 29-sti 11 i ngen og har Nle i 27-stillingen. Peptiderne kan også have en af følgende rester i 1-sti 11 i ngen: Tyr, D-Tyr eller His, hvilken rest eventuelt kan have en methylsubstitution i α-aminogruppen. De kan even-35 tuelt have D-Tyr i 10-sti 11 i ngen.
i j
DK 162103 B
2
Farmaceutiske midler ifølge opfindelsen er kendetegnet ved at indeholde et peptid ifølge krav 1 eller et ikke-toksisk salt af ethvert af disse, dispergeret. i en farmaceutisk eller veterinært acceptabelt flydende eller fast bærer. Sådanne farma-5 ceutiske midler kan anvendes inden for klinisk medicin, såvel human som veterinær, til administration med henblik på terapeutiske formål og også diagnostisk. Endvidere kan de anvendes til fremme af væksten af varmblodede dyr inklusive fjerkræ og inden for hydroponik til koldblodede dyr, f.eks. fisk, ål, 10 etc.
Den til definering af peptiderne benyttede nomenklatur er den af Schroder & Lubke anførte i "The Peptides", Academic Press (1965), hvori aminogruppen ved N-terminalen i overensstemmelse 15 med konventionel angivelse forekommer til venstre, og car- boxylgruppen ved C-terminalen forekommer til højre. Hed naturlig aminosyre menes en af de almindelige naturligt forekommende aminosyrer, der findes i proteiner og omfatter Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gin, Cys, 20 Met, Phe, Tyr, Pro, Trp og His. Med Nle menes norleucin. Når aminosyreresten har isomere former, er det L-formen af aminosyren, der angives, medmindre andet er udtrykkeligt anført. D-NMA betyder D-isomeren af alanin, hvori α-aminogruppen er substitueret med methyl.
25
De syntetiske peptider ifølge opfindelsen er kendetegnet ved følgende sekvens (I):
Rj-R2-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-R8-Ser-Rio“Arg-R2-Ri3-Ri4-Gly-Gln-30 Leu-R-ji8“Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-R24-R25"Ile"Mle“R28'“R29“ein-Gln-
Gly-NHR, hvori R er H eller lavere alkyl, Ri· er Tyr, D-Tyr eller His med NaMe-substitution eller i usubstitueret form, R2 er Ala eller D-NMA, Re er Ser eller Asn, Rio er Tyr eller D-Tyr, R12 er Arg eller Lys, R13 er Ile eller Val, R14 er Leu 35 eller D-Leu, Rie er Tyr eller Ser, R24 er His eller Gin, R25 er Glu eller Asp, R28 er Asn eller Ser, og R29 er Arg eller D-Arg, forudsat imidlertid, at enhver sekvens af rester begyn- [ 3
DK 162103 B
tiende ved C-terminalen og strækkende sig til og med R2g kan være udeladt, og forudsat endvidere, at R2 er D-NMA og/eller Rj4 er D-Leu og/eller R29 er D-Arg.
5 Peptiderne syntetiseres ved hjælp af en egnet metode, såsom udelukkende ved hjælp af fastfaseteknik, ved hjælp af delvis fastfaseteknik, ved fragmentkondensation eller ved hjælp af klassiske opløsningskoblinger. Anvendelse af for nylig udviklet rekombinant DNA-teknik kan benyttes til fremstilling af en 10 del af en analog indeholdende kun naturlige aminosyrerester, som derpå kunne knyttes til et kort N-terminal peptid. Metoder til udelukkende fastfasesyntese er eksempelvis angivet i lærebogen "Solid-Phase Peptide Synthesis", Stewart & Young, Freeman & Co., San Francisco, 1969, og er eksemplificeret i US-pa-15 tentskrift nr. 4.105.603. Klassisk opløsningssyntese er be skrevet detaljeret i afhandlingen "Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl): Synthese von Peptiden", E. Wunsch (udgiver) (1974) Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Vesttyskland. Fragment-kondensation-syntesemetoden er eksemplificeret i US-20 patentskrift nr. 3.972.859. Andre til rådighed stående synteser er eksemplificeret i US-patentskrifterne nr. 3.842.067 og nr. 3.862.925.
Fælles for sådanne synteser er beskyttelsen af de forskellige 25 aminosyremolekyldeles labile sidekædegrupper med passende beskyttelsesgrupper, der vil forhindre en kemisk reaktion i at finde sted på det pågældende sted, indtil gruppen til sidst fjernes. Fælles er sædvanligvis også beskyttelsen af en a-aminogruppe på en aminosyre eller et fragment, medens denne 30 del eller enhed reagerer ved carboxylgruppen, efterfulgt af selektiv fjernelse af α-aminobeskyttelsesgruppen for at gøre efterfølgende reaktion mulig på dette sted. Følgelig er det fælles, som et trin i syntesen, at en intermediær forbindelse dannes, hvilken forbindelse indeholder hver af aminosyreres-35 terne placeret i dens ønskede rækkefølge i peptidkæden med si-dekædebeskyttelsesgruppe knyttet til de pågældende rester.
4
DK 162103 B
Mellemprodukter ved syntesen kan have formlen (II): χΙ-R^X eller X2)-R2-Asp(X3)-Ala-Ile-Phe-Thr(X4)-R8(X4 eller X5)-Ser(X4)-R10(X2)-Arg(X6)-Ri2(X6 eller X7)-R13-R14-Gly-Gln-5 (X5)-Leu-R18(X2)-Ala-Arg(X6)-Lys(X7)-Leu-LeU"R24(X eller X5)- R25(X3)“Ile-N1e-R28(X4 eller X5)-R29(X6)-Gln(X5)-G1n(x5)61y-X9, hvori X1 er enten hydrogen eller en α-aminobeskyttelses-gruppe. α-aminobeskyttelsesgrupperne, der kommer i betragtning som χΐ, er de som vides at være anvendelige inden for trinvis 10 syntese af polypeptider. Til klasserne af α-aminobeskyttelsesgrupper, der kan anvendes som X*, hører (l) aromatiske beskyttelsesgrupper af urethantype, såsom fluorenylmethyloxycarbonyl (FMOC), benzyloxycarbonyl (Z) og substitueret Z, såsom p-chlorbenzyloxycarbonyl, p-nitrobenzyloxycarbonyl, p-bromben-15 zyloxycarbonyl og p-methoxybenzyloxycarbonyl, (2) alifatiske urethan-beskyttelsesgrupper, såsom t-butyloxycarbonyl (BOC), di isopropylmethyloxycarbonyl, isopropyloxycarbonyl, ethoxycar- bonyl og allyloxycarbonyl, og (3) cykloalkylbeskyttelsesgrup-per af urethantype, såsom cyklopentyloxycarbony1, adamantyl-20 oxycarbonyl og cyklohexyloxycarbonyl. Den foretrukne a-amino-beskyttelsesgruppe er BOC, endog når en Na-Me-substitueret rest benyttes i 1-sti11 ingen.
X er hydrogen eller en beskyttelsesgruppe for imidazolnitro-25 genatomet i His, såsom Tos.
X2 kan være en egnet beskyttelsesgruppe for den phenoliske hy-droxylgruppe i Tyr, såsom tetrahydropyranyl, tert.-butyl, tri-tyl, Bzl, CBZ, 4Br-CBZ og 2,6-dichlorbenzyl (DCB). Den fore-30 trukne beskyttelsesgruppe er 2,6-dichlorbenzyl. X2 kan være hydrogen, hvilket betyder, at der ikke findes nogen sidekæde-beskyttelsesgruppe på aminosyreresten i denne stilling.
35
DK 162103 B
5 3 X er hydrogen eller en egnet esterdannende beskyttelsesgruppe for carboxylgruppen i Asp eller Glu, såsom benzyl(OBzl), 2,6-dichlorbenzyl, methyl og ethyl.
4 X kan være en egnet beskyttelsesgruppe for hydroxylgruppen 5 i Thr eller Ser, såsom acetyl, benzoyl, tert.-butyl, trityl, tetrahydropyranyl, Bzl, 2,6-dichlorbenzyl og CBZ. Den fore- 4 trukne beskyttelsesgruppe er Bzl. X kan være hydrogen, hvilket betyder, at der ikke findes nogen beskyttelsesgruppe på hydroxylgruppen.
10 X^ er hydrogen eller en egnet beskyttelsesgruppe for sidekæde- 5 amidogruppen i Asn eller Gin. X er fortrinsvis xanthyl(Xan).
g X er en egnet beskyttelsesgruppe for quanidinogruppen i Arg, såsom nitro, Tos, CBZ, adamantyloxycarbonyl og BOC, eller g også er X hydrogen.
7 15 X er hydrogen eller en passende beskyttelsesgruppe for side-kædeaminogruppen i Lys. Eksempler på egnede sidekædeamino-beskyttelsesgrupper er 2-chlorbenzyloxycarbonyl(2-Cl-Z), Tos, t-amyloxycarbonyl og BOC.
Met kan eventuelt være beskyttet ved hjælp af oxygen, men 20 lades fortrinsvis være ubeskyttet.
Valget af en sidekædeaminobeskyttelsesgruppe er ikke afgørende, bortset fra at man generelt vælger en, der ikke fjernes under afbeskyttelse af α-aminogrupperne under syntesen. For nogle aminosyrer, f.eks. His, er beskyttelse imidlertid generelt 25 ikke nødvendig efter at kobling er gennemført, og beskyttelsesgrupperne kan være de samme.
g X er en egnet beskyttelsesgruppe for C-terminal-carboxylgrup- 3 . 9 pen, såsom den esterdannende gruppe X , eller også er X er forankringsbinding, der inden for fastfasesyntese anvendes 30 til at binde til en fast harpiksbærer, eller også er den des- 9 . . : X , i hvilket tilfælde resten ved C-terminalen har en carboxyl- del, som er Y, således som ovenfor anført. Når en fast har-
DK 162103 B
6 piksbærer anvendes, kan den være enhver af de hidtil kendte, såsom en med formlernei-O-CE^-harpiksbærer, -NH-benzhydryl-amin (BHA)-harpiksbærer eller -NH-paramethylbenzhydrylamin (MBHA)-harpiksbærer. Når det usubstituerede amid ønskes, fore-5 trækkes anvendelse af BHA- eller MBHA-harpiks, fordi spaltning direkte fører til amidet. I tilfælde af at N-methylamidet ønskes, kan det dannes fra en N-methyl-BHA-harpiks. Hvis andre substituerede amider ønskes, eller hvis andre grupper end den frie syre ønskes ved C-terminalen, kan det være at fore-10 trække at syntetisere peptidet under anvendelse af klassiske metoder som anført i Houben-Weyl-afhandlingen.
I formlen for mellemproduktet er mindst én af X-grupperne en beskyttelsesgruppe, eller også omfatter X^ en harpiksbærer.
Et peptid ifølge opfindelsen kan fremstilles ved (a) dannelse 15 af et peptid med mindst en beskyttelsesgruppe samt formlen (II), hvori X, X1, X2, X3, X4, X5, X6 og X7 er enten hy- q drogen eller en beskyttelsesgruppe, og X er enten en beskyttelsesgruppe eller en forankringsbinding til harpiksbærer g eller des-X , i hvilket tilfælde resten ved C-terminalen har 20 en carboxymolekylde1, der er Y, (b) fraspaltning af beskyttelsesgruppen eller beskyttelsesgrupperne eller forankringsbindingen fra peptidet med formlen (II), og (c) om ønsket omdannelse af det resulterende peptid med sekvensen (I) til et 'ikke-toksisk salt deraf. 1 2 3 4 5 6
Ved valg af en bestemt sidekædebeskyttelsesgruppe, der skal 2 anvendes ved syntesen af peptiderne, følges følgende generel 3 le regler: (a) beskyttelsesgruppen bevarer fortrinsvis sine 4 beskyttende egenskaber og fraspaltes ikke under koblingsbe 5 tingelser, (b) beskyttelsesgruppen bør være stabil over for 6 reagenset og er med undtagelse af Xan fortrinsvis stabil under de reaktionsbetingelser, der vælges til fjernelse af a-amino-beskyttelsesgruppen på hvert trin i syntesen, og (c) sidekædebeskyttel sesgruppen skal kunne fjernes efter afslutning af syntesen indeholdende den ønskede aminosyresekvens under
DK 162103 B
7
O
reaktionsbetingelser, der ikke på uønsket måde vil ændre peptidkæden.
Når peptider ikke fremstilles under anvendelse af rekombi-5 nant DNA-teknik, fremstilles de fortrinsvis under anvendelse af fastfasesyntese, såsom den der generelt er beskrevet af Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85, side 2149 (1963), selv om andre dermed ækvivalente i og for sig kendte kemiske synteser også kan anvendes som nævnt i det foregående. Fastfase-10 syntese påbegyndes fra peptidets C-terminale ende ved kobling af en beskyttet α-aminosyre til en passende harpiks. Et sådant udgangsmateriale kan fremstilles ved at knytte en cc-amino-beskyttet aminosyre til en chlormethyleret ester eller en hydroxymethylharpiks ved hjælp af en esterbinding eller til 15 en BHA-harpiks eller MBHA-harpiks ved hjælp af en amidbinding. Fremstilling af hydroxymethylharpiksen er beskrevet af Bodan-sky et al., Chem. Ind. (London) 38, 1597-1598 (1966). Chlor-methylerede harpikser fås kommercielt fra Bio Rad Laboratories, Richmond, California og fra Lab. Systems, Inc. Fremstilling 20 af en sådan harpiks er beskrevet af Stewart et al., "Solid
Phase Peptide Synthesis" (Freeman & Co., San Francisco 1969), kapitel 1, side 1-6. BHA- og MBHA-harpiksbærere fås kommercielt og anvendes generelt kun, når det ønskede polypeptid, som syntetiseres, har et usubstitueret amid ved C-terminalen.
25
Den C-terminale aminosyre kan til at begynde med kobles til den chlormethylerede harpiks i overensstemmelse med proceduren angivet i Chemistry Letters, K. Horiki et al., 165-168 (1978), under anvendelse af KF i DMF ved ca. 60°C 30 i 24 timer under omrøring, når peptider med 29-32 aminosyre-rester skal syntetiseres. Efter kobling af den BOC-beskytten-de aminosyre til harpiksbæreren, fjernes a-aminobeskyttelsesgruppen, såsom ved anvendelse af trifluoreddikesyre (TFA) i methylenchlorid eller TFA alene. Afbeskyttelsen udføres ved 35 o en temperatur mellem ca. 0 C og stuetemperatur. Andre stan- dardspaltningreagenser, såsom HCl i dioxan, og betingelser til fjernelse af specifikke α-aminobeskyttelsesgrupper kan
DK 162103 B
8
O
anvendes som beskrevet i Schroder & Lubke, "The Peptides", 1 side 72 - 75 (Academic Press 1965).
Efter fjernelse af a-aminobeskyttelsesgruppen kobles de tilbage-5 værende α-amino- og sidekædebeskyttede aminosyrer trinvis i den ønskede orden til opnåelse af den ovenfor definerede mellemproduktforbindelse, eller også kan som alternativ til tilføjelse af hver aminosyre separat i syntesen nogle af dem være koblet til hinanden forud for tilsætning til fastfase-10 reaktoren. Udvælgelsen af et passende koblingsmiddel ligger inden for fagmandens viden. Særlig egnet som koblingsreagens er N,N'-dicyklohexylcarbodiimid (DCCI).
De aktiverende reagenser, der anvendes ved fastfasesyntesen 15 af peptiderne, er velkendte på peptidområdet. Eksempler på egnede aktiverende reagenser er carbodiimider, såsom N,N'-diisopropylcarbodiimid og N-ethyl-N1-(3-dimethylaminopropyl)= carbodiimid. Andre aktiverende reagenser og deres anvendelse til peptidkobling er beskrevet af Schroder & Lubke supra, 20 ·.'··' i kapitel III og af Kapoor, J. Phar. Sci., 59, side 1-27 (1970).
Hver beskyttet aminosyre eller aminosyresekvens indføres i fastfasereaktoren i ca. et firdobbelt eller større overskud, 25 og koblingen kan udføres i et medium af dimethylformamid(DMP): CH2CI2 (1:1) eller i DMF eller alene. I et tilfælde, hvor ufuldstændig kobling finder sted, gentages koblingsproceduren før fjernelse af α-aminobeskyttelsesgruppen forud for koblingen af den næste aminosyre. Vellykketheden af koblings-30 reaktionen på hvert trin i syntesen, hvis den udføres manuelt, måles fortrinsvis ved hjælp af ninhydrinreaktionen, således som beskrevet af E. Kaiser et al., Anal. Biochem. 34, 595 (1970). Koblingsreaktionerne kan udføres automatisk, såsom på en Beckman 990 automatisk syntetisator, under anvendelse 35 af et program, såsom det af Rivier et al. omtalte i Biopolymers, 1978, 17, side 1927-1938.
Efter at den ønskede aminosyresekvens er blevet afsluttet, ί* DK 162103 Β 9 kan mellemproduktpeptidet fjernes fra harpiksbæreren ved behandling med et reagens, såsom flydende hydrogenfluorid, der ikke alene spalter peptidet fra harpiksen, men også fraspalter 2 3 alle tilbageværende sidekædebeskyttelsesgrupper X, X , X , 5 X^, X3, X^ og X7 og forankringsbindingen X^ og også oc-aminobeskyttelsesgruppen X^, hvis der anvendes en, til opnåelse af peptidet i form af den frie syre. Hvis Met findes i sekvensen, fjernes BOC-beskyttelsesgruppen fortrinsvis først under anvendelse af trifluoreddikesyre (TFA)/ethandithiol lo forud for fraspaltning af peptidet fra harpiksen med HF til fjernelse af potentiel S-alkylering. Ved anvendelse af hydrogenfluorid til spaltning medtages anisol og methylethylsulfid i reaktionsbeholderen som skylle- eller rensemidler.
Det efterfølgende eksempel angiver en foretrukken metode til |5 syntetisering af peptider ved hjælp af fastfaseteknikken.
Eksempel 1.
Syntesen af peptidet [N^eTyr1, D-NMA2, D-Leu23]-rGRF(1-43)-OH med formlen:
NQMeTyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-20 Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-His-Glu-Ile-Met-Asn-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Arg-Asn-Gln-Glu-Gln-Arg-Ser-Arg-Phe-Asn-OH
udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en chlormethyleret harpiks med et sub-*2.5 stitutionsområde på ca. 0,1 til 0,5 mmol/g harpiks. Kobling af BOC-Asn(Xan) til harpiksen gennemføres ved hjælp af den generelle procedure, der er angivet i Chemistry Letters, supra, under anvendelse af KF i DMF ved ca. 60°C i 24 timer under omrøring, og den resulterer i substitution af ca. 0,35 'bO mmol Asn pr. gram harpiks.
Efter afblokering og neutralisering opbygges peptidkæden trin for trin på harpiksen. Afblokering, neutralisering og til- i føjelse af hver aminosyre foretages generelt i overensstemmelse !
DK 162103 B
10 med proceduren angivet detaljeret af J. Rivier i J. Amer.
Chem. Soc., 96, 2986-2992 (1974). Alle benyttede opløsningsmidler afgasses ved gennembobling med en inert gas, f.eks. helium eller nitrogen, til sikring af fravær af oxygen, som 5 på uønsket måde kunne oxidere svovlet i Met-resten.
Afblokering udføres fortrinsvis i overensstemmelse med skema A som følger:
Skema A.
Reagens Blandetid (min.) 10 1. 60% TFA/2% ethandithiol 10 2. 60% TFA/2% ethandithiol 15 3. IPA/1% ethandithiol 0,5 4. Et3N (10%) i CH2C12 0,5 5. · MeOH 0,5 15 6. Et3N (10%) i CH2C12 0,5 7. MeOH (2 gange) 0,5 8. CH2C12 (2 gange) 0,5
Koblingerne udføres fortrinsvis som angivet i følgende skema B: 20 Skema B.
Reagens Blandetid (min.)
9. DCCI
10. Boc-aminosyre 50-90 11. MeOH (2 gange) 0,5 25 12. CH2C12 (2 9an9e> 0,5 13. Ac20 (3M) i CH2C12 15,0 14. ch2c12 0,5 15. MeOH 0,5 16. CH2C12 (2 gange) 0,5.
DK 162103B
11
Kort fortalt anvendes ét eller to mmol BOC-beskyttet aminosyrer i methylenchlorid pr. gram harpiks plus ét ækvivalent 1,0 molær DCCI i methylenchlorid i 2 timer. Når BOC-Arg(TOS) kobles, anvendes en blanding af 50% DMF og methylenchlorid.
5 Bzl-ether anvendes som hydroxyl-sidekædebeskyttelsesgruppe for Ser og Thr. Amidogruppen i Asn eller Gin beskyttes eller med Xan, når DCC-kobling anvendes, som det foretrækkes. P-nitrophenylester(ONp) kan også anvendes til aktivering af carboxylenden af Asn eller Gin, og BOC-Asn(ONp) kan f.eks.
10 kobles natten over under anvendelse af ét ækvivalent HOBt i en 50% blanding af DMF og methylenchlorid, i hvilket tilfælde intet DCC tilsættes. 2-chlor-benzyloxycarbonyl(2C1-Z) anvendes som beskyttelsesgruppe for Lys-sidekæden. Tos anvendes til beskyttelse af Arg's guanidinogruppe og His's imida-15 zolnitrogen, og Glu- eller Asp-sidekædecarboxylgruppen be skyttes med OBzl. Tyr's phenoliske hydroxylgruppe beskyttes med 2,6-dichlorbenzyl(DCB). Ved syntesens afslutning opnås følgende sammensætning: BOC-NaMeTyr(X2)-D-NMA-Asp(X3)-Ala-Ile-Phe-Thr(X4)-Ser (X4)- 20 ser(X4)-Tyr (X2)-Arg(X6)-Arg(X6)-Ile-Leu-Gly-Gln(X5)-Leu-Tyr= (X2)-Ala-Arg(X6)-Lys (X7)-Leu-D-Leu-His(X)-Glu(X3)-Ile-Met-
Asn(X5)-Arg(X6)-Gin(X5)-Gin(X5)-Giy-Glu(X3)-Arg(X6)-Asn(X5)-
Gin (X5)-Glu(X3)-Gin(X5)-Arg(X6)-Ser (X4)-Arg (X6)-Phe-Asn(X5)- X^, hvor X2 er DCB, X3 er OBzl, X4 er Bzl, X^ er Xan, X® er 7 9 25 Tos, X er 2C1-Z, og X er -O-OE^-harpiksbærer. Xan kan helt eller delvis være fjernet ved hjælp af TFA-behandling, der anvendes til afblokering af a-aminobeskyttelsesgruppen.
For at spalte og afbeskytte den beskyttede peptid-harpiks, behandles denne med 1,5 ml anisol, 0,5 ml methylethylsulfid 30 og 15 ml hydrogenfluorid(HF) pr. gram peptid-harpiks ved -20°C
i 1/2 time og ved 0°C i 1/2 time. Efter fjernelse af HF under højvakuum, vaskes det tilbageværende harpiks-peptid skiftevis med tør diethylether og chloroform, og peptidet ekstra-heres derpå med afgasset 2N vandig eddikesyre og skilles fra 35 harpiksen ved filtrering.
DK 162103B
12
Det fraspaltede og afbeskyttede peptid opløses derpå i 0 -5% eddikesyre og underkastes rensning, som kan omfatte filtrering med fin gel af "Sephadex" G-50.
Peptidet renses derpå yderligere ved hjælp af præparativ el-5 ler halvpræparativ HPLC som beskrevet af Rivier et al., Pep tides: Structure and Biological Function, (1979), side 125 -128, og Marki et al. J. Am. Chem. Soc. 103, 3178 (1981). Patroner, der passer til Waters Associates prep LC-500, pakkes med 15 - 20 l-^g-silica fra Vydac (300A). En gradient af CH^CN 10 i TEAP dannes ved hjælp af en Eldex lavtryksgradientdanner, således som beskrevet af J. Rivier i J. Liq. Chromatography 1, 343-367 (1978). De kromatografiske fraktioner måles omhyggeligt ved hjælp af HPLC, og kun de fraktioner, der udviser væsentlig renhed,samles. Afsaltning af de rensede fraktioner, 15 der er kontrolleret uafhængigt for renhed, opnås ved anvendelse af en gradient af CH^CN i 0,1% TFA. Midterfraktionen lyofiliseres derpå til opnåelse af det ønskede peptid, hvis renhed kan være' større end 98%.
Syntesen gentages under anvendelse af en MBHA-harpiks til 20 fremstilling af det samme peptid med en amideret C-terminal under anvendelse af en begyndelsesprocedure som generelt beskrevet af Vale et al. i US patentskrift nr. 4.292.313 til at knytte Asn til MBHA-harpiksen.
Eksempel 2.
25 Syntesen af et amideret 40-rest-peptid [CaMeHis·*·, D-NMA^, 2 3 D-Leu ]-hGRF(1-40)-NH2 med formlen: H-CaMeHis-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-
Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-D-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-
Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-N^
DK 162103 B
13 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som generelt beskrevet af Vale et al. i US patentskrift nr. 4.292.313. Peptidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af 5 TLC og HPLC.
Eksempel 3.
Syntesen af det analoge hGRF-fragment [D-NMA^, Nle^J-hGRF(1- 32)-NH2 med formlen: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-10 Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-
Gln-Gln-Gly-NH2 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som i eksempel 2. Denne analog bedømmes som værende i det væsentlige ren ved an-15 vendelse af TLC og HPLC.
Eksempel 4.
2 27
Syntesen af det analoge hGRF-fragment [D-NMA , Nle ]-hGRF(l-29)-NH2 med formlen: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-20 Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-
nh2 I
udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som i eksempel 2. Pep- ! tidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendel-25 se af TLC og HPLC. | 2 27 i
Syntesen gentages til fremstilling af [D-NMA , Nle ]-hGRF(l-27)-NH2.
14
DK 162103 B
Eksempel 5.
Syntesen af [D-NMA2, Nle27]-rGRF(1-29)-NH2 med formlen: H-His-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg-5 NH2 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som i eksempel 2. Pep-tidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TCL og HPLC.
10 Eksempel 6.
Syntesen af [D-NMA2, D-Glu25, Nle27]-hGRF(1-29)-NH2 med formlen: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-D-Glu-Ile-Nle-Ser-15 Arg-NH2 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som i eksempel 2. Pep-tidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
20 Eksempel 7.
Syntesen af [D-NMA2, D-Asp3'25]-hGRF(l-32)-NH2 med formlen: H-Tyr-D-NMA-D-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-
Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-D-Asp-Ile-Met- . Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-NH2
DK 162103 B
15 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som beskrevet i eksempel 2. Denne analog bedømmes som værende i det væsentlige xen ved anvendelse af TLC og HPLC.
5 Eksempel -8.
Syntesen af [D-NMA2, Nle27]-pGRF(1-29)-NH2 med formlen: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-
Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg-N^ udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 10 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som generelt beskrevet af Vale et al. i US patentskrift nr. 4.292.313.. Peptidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
Eksempel 9.
15 Syntesen af [D-NMA2, Nle27]-bGRF(1-29)-NH2 med formlen: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-
Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Asn-Arg-NH2 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som generelt beskrevet 20 af Vale et al. i US patentskrift nr. 4.292.313. Peptidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
Eksempel 10.
Syntesen af [N^eHis1, D-NMA2, Nle27]-pGRF(1-29)-NH2 med form-25 len: 16
DK 162103 B
H-NaMeHis-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-
Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-
Arg-NH2 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 5 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som generelt beskrevet af Vale et al. i US patentskrift nr. 4.292.313. Peptidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
Eksempel 11.
10 Syntesen af [D-NMA^, Lys1^, Nle^7]-rGRF(l-29)-NH2 med form len: H-His-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Lys-Ile-Leu-
Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg- nh2 15 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som i eksempel 2. Peptidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
2 13 18
Syntesen gentages til fremstilling af [D-NMA , Val , Ser ]-20 rGR'F(l-29)-NH2.
Eksempel 12.
? 27 9Q
Syntesen af [D-NMA , Nle , D-Arg ]-pGRF(1-29)-NH2 med formlen: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu- 25 Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-D-
Arg-NH2
DK 162103 B
17 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som generelt beskrevet af Vale et al. i US patentskrift nr. 4.292.313. Peptidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af 5 TLC og HPLC. Acetatsaltet fremstilles derpå ved opløsning af peptidet i vand og tilsætning af IN eddikesyre. Den resulterende opløsning lyofiliseres til opnåelse af eddikesyre-saltet..
Eksempel 13.
2 27 7Q
10 Syntesen af hGRF-analogen ID-NMA , Nle , D-Arg ]-hGRF(l- 29)-NH2 -med formlen: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-
Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-D-
Arg-NH2 15 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som i eksempel 2. Denne analog bedømmes som værende i det væsentlige ren ved anvendelse af TLC og HPLC.
2 14 27
Syntesen gentages til fremstilling af [D-NMA , D-Leu , Nle , 29 20 D-Arg ]-hGRF(1-32)-NH2.
Eksempel 14.
Syntesen af [D-Leu*4, Nle^]-rGRF(l-29)-NH2 med formlen: H-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-D-Leu-Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-Arg-25 NH2 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som i eksempel 2. Pep-
DK 162103 B
18 tidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
Syntesen gentages til fremstilling af [D-NMA2, D-Leu14, Nle2^]-rGR'F (1-29) ~NH2.
5 Eksempel 15.
9 9 7 9 q
Syntesen af hGRF-analogen [D-NMA , Nle , Asn J-hGRF(l-29)-NH2 med formlen: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-
Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Asn-Arg- 10 nh2 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som i eksempel 2. Pep-tidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
15 Eksempel .16.
27 79
Syntesen af [Nle , D-Arg ]-rGRF(l-29)-NH2 med formlen: H-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-Leu-
Gly'-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-Asn-D-
Arg-NH2 20 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som i eksempel 2. Pep-tidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
19
Eksempel 17.
2 10 27
Syntesen af det hGRF-analoge fragment [D-NMA , D-Tyr , Nle ]-hGR'F( 1-29 )-NH2 med formlen: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-D-Tyr-Arg-Lys-Val-5 Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-
Arg-NH2 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som i eksempel 2. Pep-tidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvend-10 else af TLC og HPLC.
2 17 27
Syntese gentages til fremstilling af [D-NMA , D-Leu , Nle ]-hGRF(l-27)-NH2.
Eksempel 18« 2 27
Syntesen af det hGRF-analoge fragment [D-NMA , Nle ]-hGRF(l-15 29)-NHEt med formlen: H-Tyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-
Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg- nhch2ch3 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 20 peptidsyntetisator til en chlormethyleret harpiks som i eksem pel 1. Peptidet spaltes fra harpiksen ved hjælp af ammonolyse ved behandling med ethylamin. Peptidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
Eksempel 19.
25 Syntesen af Syntesen af [D-Leu14, Nle27]-rGRF(l-29)-NH2 med formlen:
DK 162103 B
20 H-His-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Ser-Ser-Tyr-Arg-Arg-Ile-D-Leu-
Gly-Gln-Leu-Tyr-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-His-Glu-Ile-Nle-NH2 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som i eksempel 2. Pep-5 tidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
Eksempel 20.
1 2 27
Syntesen af det hGRF-analoge fragment [D-Tyr , D-NMA , Nle , oq D-Arg ]-hGRF(1-29)-NH2 10 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som i eksempel 2. Pep-tidét bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvendelse af TLC og HPLC.
1 2
Syntesen gentages to gange til fremstilling af [Met , D-NMA , 15 Nle27]-hGRF(1-27)-NH2.
Eksempel 21.
rri 2
Syntesen af det hGRF-analoge fragment [D-N MeTyr, D-NMA ,
Nle^7]-hGRF(1-29)-NH2 med formlen: H-D-NaMeTyr-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-20 Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile- Nle-
Ser-Arg-NH2 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som i eksempel 2. Pep-tidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvend-25 else af TLC og HPLC.
DK 162103 B
21
Eksempel 22.
Syntesen af det hGRF-analoge fragment [His^-, D-NMA^, Nle^]-hGRF(1-29)-NH2 med formlen: H-His-D-NMA-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-5 Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Nle-Ser-Arg- NH2 udføres på trinvis måde under anvendelse af en Beckman 990 peptidsyntetisator til en MBHA-harpiks som i eksempel 2. Pep-tidet bedømmes som værende i det væsentlige rent ved anvend-10 else af TLC og HPLC.
1 27
Syntesen gentages to gange til fremstilling af [His , Nle , 29 D-Arg ]-hGRF(l-27)-NH2.
De syntetiske peptider, som er fremstillet ifølge eksemplerne, sammenlignes med syntetisk hpGRF(1-40)-0H ved in vitro forsøg 15 og viser sig at udvise generelt større virkningsstyrker med hensyn til sekretion af GH og lignende egenvirkninger. Alle disse syntetiske peptider anses for biologisk aktive og potentielt anvendelige til stimulation af frigørelsen af GH fra hypofysen.
20 Til bestemmelse af den relative effektivitet af visse repræsentative syntetiske peptider med hensyn til fremme af frigørelsen af væksthormon udføres in vitro forsøg ved anvendelse af syntetisk hpGRF(1-40)-0H som standard ved sammenligning side om side med ækvimolære koncentrationer af de repræ-25 sentative analoge, som er blevet syntetiseret. Anvendte kulturer indbefatter celler af rottehypofysekirteler, der er fjernet ca. 3-5 dage forinden. Sådanne kulturer betragtes som optimale til sekretion af væksthormon og anvendes til den sammenlignende afprøvning på den generelle måde, der er 30 beskrevet af Vale et al. i Endocrinology, 91, 562-572 (1972) og som nærmere beskrevet af Vale et al. i Endocrinology, 112,
DK 162103 B
22 1553-155 (1983). Inkubation sammen med det stof, der skal undersøges, udføres i 3 - 4 timer, og aliquot mængder af kulturmediet fjernes og behandles til måling af deres indhold af im-munoreaktivt GH(ir GH) ved en godt karakteriseret radioimmuno-5 prøve.
Resultaterne af denne sammenlignende afprøvning ved ækvimolære koncentrationer er vist i tabel 1.
10 Tabel 1.
Optisk
Sammen- drejning, ligning, [a]*2 f c=l,
Peptid % i% hAc
hGRF(1-40)-OH
(standard til dette forsøg) 100% 15 [D-NMA2, Nle27]-hGRF(l-29)-NH2 1330% 57,9° [D-NMA2, Nle27]-hGRF(l-27)-NH2 150% 56,8° [D-NMA2, Nle27]-hGRF(l-29)-NHEt 1130% 57,0° [D-NMA2, Nle27, Asn28]-hGRF(1-29)-NH2 520% 57,6° [D-Leu14, Nle27]-rGRF(l-29)-NH2 120% 52,6° 20 [Nle27, D-Arg29]-rGRF(l-29)-NH2 386% 52,7° [D-NMA2, Nle27]-rGRH(129)-NH2 900% 51,9° [D-NMA2, D-Tyr10, N1e27]-hGRF(1-29)-NH2 270% 56,7° [D-NMA2, Nle27, D-Arg29]-hGRF(1-29)-NH2 580% 57,8° [D-Tyrl, D-NMA2, Nle27, D-Arg29]-25 hGRF(129)-NH2 60% 57,5° [D-NaMeTyr1, D-NMA2, Nle27]- hGRF(l-29)-NH2 30% 57,2° [Hisi, D-NMA2, Nle27]-hGRF(l-29)-NH2 260% 57,3° [Ac-Tyrl, D-NMA2, NIe27]-hGRF(1-29)-NH2 90% 56,8° 30 [D-NMA2, Serl®, Nle27]-rGRF(1-29)-NH2 260% 52,3° [D-NMA2, Nle27, Asn28]-hGRF(1-29)-NHEt 1510% 56,9° [D-NMA2, Nle27]-hGRF(l-28)-NHEt 140% 56,5° [D-NMA2, Nle27, Asn28]-hGRF(1-32)-NH 82% 57,9° 35
In vitro afprøvning af disse syntetiske peptider viser, at mange af dem har overraskende større biologisk virkningsstyrke end den, den udvises af hpGRF(1-40)-OH, og f.eks. er den
DK 162103 B
23
O
mindste effektive koncentration af [D-NMA2, Nle27]-hGRF(1-29)-NH2 ca. 1 picomolær.
Foruden in vitro forsøgene vedrørende sekretion af væksthor-5 mon blev de syntetiske peptider ved in vivo eksperimenter intravenøst injiceret i urethanbedøvede hanrotter, og det blev fastslået, at de undertrykker spontan GH-sekretion uden ophævelse af reaktionen på eksogent GRF. Blodprøver udtages umiddelbart før og 10, 30 og 90 minutter efter injektioner-10 ne. GH-mængder i blod, målt ved radioimmunprøve, viser, at syntetisk [D-NMA2, Nle27]-hGRF(1-29)-NH2 er ca. 6 gange mere virksomt end hGRF(1-40)-OH med hensyn til blodmængder af hy-pofysært GH ved måling både 10 og 30 minutter efter fjerde injektion. Andre kendte in vivo GRF-forsøg, som vides at 15 være effektive til påvisning af sekretion af GH, anvendes til bekræftelse af disse resultater. Doser mellem ca. 50 nano-gram og ca. 5 mikrogram af disse peptider pr. kg legemesvægt anses for effektive til at forårsage GH-sekretion. Nogle peptider, der in vitro udviser en biologisk virkningsstyrke, 20 som er ca. lig med eller endog en smule mindre end standarden, udviser meget større in vivo virkningsstyrke.
Sådanne syntetiske hGRF-analoge og eventuelt rGRF-, bGRF- og pGRF-analoge skulle være anvendelige til humane anvendelser, 25 ved hvilke en læge ønsker at forøge GH-produktionen. Stimulation af GH-sekretion ved hjælp af sådanne analoge har interesse for patienter med fuldstændig eller relativ GH-mangel forårsaget af underproduktion af endogent GRF. Det er endvidere sandsynligt, at forøget GH-sekretion og dennes led-30 sagende vækstforøgelse kunne opnas hos mennesker og dyr med normale GH-mængder. Administration skulle endvidere kunne ændre legemets fedtindhold og modificere andre GH-afhængige metaboliske, immunologe og udviklingsmæssige processer. For eksempel kan disse analoge være anvendelige som et middel 35 til stimulation af anabole processer i mennesker under sådanne omstændigheder, som følger efter pådragelse af forbrændinger. Som et andet eksempel kan disse analoge administreres til kommercielle varmblodede dyr, såsom høns, kalkuner, svin,
DK 162103 B
24
O
geder, kvæg og får, og de kan anvendes inden for hydroponik til opdræt af fisk og andre koldblodede havdyr, f.eks. hav-skilpadder og ål samt amfibier, til accelerering af vækst og forøgelse af forhold mellem protein og fedt, som opnås 5 ved fodring med effektive mængder af peptiderne.
Til administration til mennesker bør disse syntetiske peptider hnve en renhed på mindst ca. 93% og fortrinsvis mindst 98%. Renhed vil i denne forbindelse referere til det tilsigtede 10 peptid, der udgør den anførte vægt% af alle tilstedeværende peptider og peptidfragmenter. Til administration af sådanne syntetiske peptider til kommercielle og andre dyr med henblik på fremme af vækst og reduktion af fedtindhold kan en renhed så lav som ca. 5% eller endog så lav som 0,01% være accep-15 tabel.
Disse syntetiske peptider eller de ikke-toksiske salte deraf i kombination med en farmaceutisk eller veterinært acceptabel bærer til dannelse af et farmaceutisk middel kan admini-20 streres til dyr inklusive mennesker enten intravenøst, subkutant, intramuskulært eller perkutant, f.eks. intranasalt eller endog oral. Administrationen kan foretages af en læge med henblik på stimulation af frigørelsen af GH, når den behandlede vært kræver en sådan terapeutisk behandling. Den 25 krævede dosis vil variere med den pågældende tilstand, der behandles, med alvorligheden af tilstanden og med varigheden af den ønskede behandling.
Sådanne peptider adminstreres ofte i form af ikke-toksiske 30 salte, såsom syreadditionssalte eller metalkomplekser, f.eks. med zink, jern eller lignende (der betragtes som salte til det foreliggende formål). Eksempler på sådanne syreadditionssalte er hydrochloridet, hydrobromidet, sulfatet, phosphatet, maleatet, acetatet, citratet, benzoatet, succinatet, malatet, 35 ascorbatet, tartratet og lignende. Hvis den aktive bestanddel skal administreres oralt i tabletform, kan tabletten indeholde et bindemiddel, såsom tragacanth, majsstivelse eller
Claims (6)
1. Syntetisk GRF-analogt peptid eller et ikke-toksisk salt deraf, kendetegnet ved, at det har sekvensen: Rj-R2“Asp-Ala-ne-Phe-Thr-Rg-Ser-Rio-Ar9"^12"R13"R14“G1y_G1n"1-eu"
20 Rig-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-R24-R25-ne_Nle-R28-R29-Gln_Gln“G1y“ NHR, hvor R er H eller lavere alkyl/ Ri er Tyr, D-Tyr eller His med NaMe-substi tut i on eller usubstitueret, R2 er Ala eller D-NMA, Rg er Ser eller Asn, Riq er Tyr eller D-Tyr, R12 er Arg eller Lys, Rj3 er Ile eller Val, Rj4 er Leu eller D-Leu, R^g 25 er Tyr eller Ser, R24 er His eller Gin, R25 er Glu eller Asp, R2g er Asn eller Ser, og R2g er Arg eller D-Arg, forudsat imidlertid, at enhver sekvens af rester begyndende ved C-terminalen og strækkende sig til og med R28 kan være udeladt, og forudsat også, at R2 er D-NMA og/eller R^4 er D-Leu og/el-30 ler r29 er D-Arg.
2. Peptid ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R3 er D-NMA.
3. Peptid ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at R2g er D-Arg. DK 162103B
4. Peptid ifølge ethvert af kravene 1-3, kendetegnet ved, at Rj4 er D-Leu.
5. Peptid ifølge ethvert af kravene 1-4, kendeteg-5 net ved, at R er H.
6. Farmaceutisk middel til stimulation af frigørelsen af GH i et dyr, kendetegnet ved, at det omfatter peptidet ifølge krav 1 eller et ikke-toksisk salt deraf samt en farma- 10 ceutisk eller veterinært acceptabel flydende eller fast bærer derfor. 15 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US61184484 | 1984-05-18 | ||
| US06/611,844 US4528190A (en) | 1983-10-25 | 1984-05-18 | GRF Analogs IV |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK220685D0 DK220685D0 (da) | 1985-05-17 |
| DK220685A DK220685A (da) | 1985-11-19 |
| DK162103B true DK162103B (da) | 1991-09-16 |
| DK162103C DK162103C (da) | 1992-02-17 |
Family
ID=24450622
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK220685A DK162103C (da) | 1984-05-18 | 1985-05-17 | Syntetiske grf-analoge peptider og farmaceutisk acceptable salte heraf samt farmaceutisk middel indeholdende peptidet eller et ikke-toksisk salt deraf |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4528190A (da) |
| EP (1) | EP0161852B1 (da) |
| JP (1) | JPH0689036B2 (da) |
| KR (1) | KR910000379B1 (da) |
| AT (1) | ATE73823T1 (da) |
| AU (1) | AU578467B2 (da) |
| CA (1) | CA1271299A (da) |
| DD (1) | DD236536A5 (da) |
| DE (1) | DE3585634D1 (da) |
| DK (1) | DK162103C (da) |
| EG (1) | EG17394A (da) |
| ES (1) | ES8606412A1 (da) |
| FI (1) | FI92210C (da) |
| GR (1) | GR851207B (da) |
| HU (1) | HU197759B (da) |
| IE (1) | IE57813B1 (da) |
| IL (1) | IL75088A (da) |
| MX (1) | MX157381A (da) |
| NO (1) | NO168043C (da) |
| NZ (1) | NZ212113A (da) |
| PH (1) | PH20976A (da) |
| PT (1) | PT80450B (da) |
| SU (1) | SU1530097A3 (da) |
| YU (1) | YU46153B (da) |
| ZA (1) | ZA852919B (da) |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4728726A (en) * | 1982-10-04 | 1988-03-01 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF analogs IIIb |
| US4732972A (en) * | 1983-03-07 | 1988-03-22 | Hoffmann-La Roche Inc. | Polypeptides having growth hormone releasing activity |
| US4649131A (en) * | 1984-09-24 | 1987-03-10 | Hoffmann-La Roche Inc. | Growth hormone releasing factor analogs |
| CA1271600A (en) * | 1985-01-07 | 1990-07-10 | David Howard Coy | Growth hormone-releasing peptides and method of treating mammals therewith |
| EP0193910A3 (en) * | 1985-03-06 | 1988-11-23 | Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited | Synthesis of a derivative of grf and intermediate peptides |
| US4734399A (en) * | 1985-08-06 | 1988-03-29 | Hoffmann-La Roche Inc. | Growth hormone releasing factor analogs |
| US4689318A (en) * | 1985-08-29 | 1987-08-25 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF analogs |
| US4880778A (en) * | 1986-05-12 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Combinations having synergistic growth hormone releasing activity and methods for use thereof |
| FR2599038B1 (fr) * | 1986-05-26 | 1990-06-29 | Sanofi Sa | Procede de preparation de nonacosapeptides et peptides intermediaires |
| DE3742633A1 (de) * | 1987-12-16 | 1989-06-29 | Hoechst Ag | Peptide mit beeinflussender wirkung auf die hypophyse von saeugern |
| US5565606A (en) * | 1986-10-21 | 1996-10-15 | Hoechst Aktiengesellschaft | Synthesis of peptide aminoalkylamides and peptide hydrazides by the solid-phase method |
| IL84758A (en) * | 1987-01-13 | 1992-03-29 | Salk Inst For Biological Studi | Peptides stimulating the release of pituitary growth hormone in fish and amphibians,and pharmaceutical compositions containing them |
| US4843064A (en) * | 1987-01-13 | 1989-06-27 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF analogs V |
| US4914189A (en) * | 1987-02-05 | 1990-04-03 | The Adminstrators Of The Tulane Educational Fund | Synthetic GHRH analogs |
| EP0289186A3 (en) * | 1987-04-23 | 1990-04-04 | International Minerals And Chemical Corporation | Process for increasing the growth rate and enhancing the feed efficiency of meat producing livestock |
| US5112808A (en) * | 1987-05-11 | 1992-05-12 | American Cyanamid Company | Alkylated hormone-releasing peptides and method of treatig mammals therewith |
| IL86102A (en) * | 1987-05-11 | 1994-04-12 | Univ Tulane | Alkylated growth hormone-releasing peptides and use thereof |
| US5002931A (en) * | 1987-05-22 | 1991-03-26 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF analogs VII |
| US4839344A (en) * | 1987-06-12 | 1989-06-13 | Eastman Kodak Company | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
| USRE33699E (en) * | 1987-07-09 | 1991-09-24 | International Minerals & Chemical Corp. | Growth hormone-releasing factor analogs |
| US4801456A (en) * | 1987-07-09 | 1989-01-31 | International Minerals & Chemical Corp. | Growth hormone-releasing factor analogs |
| US4880777A (en) * | 1987-09-01 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Synthetic peptides having growth hormone releasing activity |
| EP0307860B1 (en) * | 1987-09-18 | 1994-06-08 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Cyclic GRF-analogs |
| DE68922602T2 (de) * | 1988-01-28 | 1995-12-07 | Polygen Holding Corp | Polypeptide mit hormonwachstumsbefreiender wirkung. |
| US5043322A (en) * | 1988-07-22 | 1991-08-27 | The Salk Institute For Biological Studies | Cyclic GRF analogs |
| US5023322A (en) * | 1988-08-31 | 1991-06-11 | Mta Kutatas-Es Szervezetelemzo Intezete | Analogs of growth hormone releasing factor (GRF) and a method for the preparation thereof |
| US5756458A (en) * | 1989-06-16 | 1998-05-26 | Pharmacia & Upjohn Company | Stabilized potent GRF analogs |
| US5716937A (en) * | 1989-12-13 | 1998-02-10 | The General Hospital Corporation | Method for treating cardiac malfunction |
| CA2085362A1 (en) * | 1990-06-29 | 1991-12-30 | Arthur M. Felix | Histidine substituted growth hormone releasing factor analogs |
| ATE119916T1 (de) * | 1990-12-10 | 1995-04-15 | Hoffmann La Roche | Verfahren zur enzymatischen herstellung von grf(1-44)nh2. |
| JPH05507939A (ja) * | 1991-04-09 | 1993-11-11 | エフ・ホフマン―ラ ロシユ アーゲー | 成長ホルモン放出因子の類似体 |
| ZA922746B (en) * | 1991-04-26 | 1992-12-30 | Lilly Co Eli | Superactive grf analogs |
| US5246920A (en) * | 1992-06-15 | 1993-09-21 | University Of South Florida | Treatment of hyperprolactinemia |
| US5811074A (en) * | 1992-06-29 | 1998-09-22 | University Of South Florida | Method of diagnosing pituitary dependent growth hormone deficiency |
| GB9324691D0 (en) * | 1993-12-01 | 1994-01-19 | Hafslund Nycomed As | Peptide compounds |
| US5550212A (en) * | 1993-12-17 | 1996-08-27 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Analogues of hGH-RH(1-29)NH2 having antagonistic activity |
| IT1285405B1 (it) * | 1995-06-06 | 1998-06-03 | Alza Corp | Modificazione di farmaci polipeptidici per accrescere il flusso per elettrotrasporto. |
| AU2002233082B2 (en) * | 2001-02-02 | 2005-11-10 | Conjuchem Biotechnologies Inc. | Long lasting growth hormone releasing factor derivatives |
| RU2005111253A (ru) * | 2002-09-18 | 2005-11-20 | Сантр Оспиталье Де Л` Юниверсите Де Монреаль (Схюм) (Ca) | Аналоги ghrh |
| WO2009009727A2 (en) * | 2007-07-12 | 2009-01-15 | Akela Pharma Srl | Ghrh analogs and therapeutic uses thereof |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4563352A (en) * | 1982-10-04 | 1986-01-07 | The Salk Institute For Biological Studies | Human pancreatic GRF |
| IL70530A (en) * | 1983-01-13 | 1986-09-30 | Salk Inst For Biological Studi | Synthetic peptides having growth hormone releasing factor activity and compositions containing them |
| US4518586A (en) * | 1983-01-13 | 1985-05-21 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF Analogs III |
| AU575843B2 (en) * | 1983-08-10 | 1988-08-11 | The Administrators Of The Tulane Eductional Fund | Growth hormone releasing peptides |
-
1984
- 1984-05-18 US US06/611,844 patent/US4528190A/en not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-04-18 ZA ZA852919A patent/ZA852919B/xx unknown
- 1985-04-26 AT AT85302975T patent/ATE73823T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-04-26 EP EP85302975A patent/EP0161852B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-04-26 DE DE8585302975T patent/DE3585634D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-04-29 IE IE1087/85A patent/IE57813B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-05-02 CA CA000480584A patent/CA1271299A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-05-03 IL IL75088A patent/IL75088A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-05-08 PH PH32242A patent/PH20976A/en unknown
- 1985-05-09 FI FI851842A patent/FI92210C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-05-10 YU YU77185A patent/YU46153B/sh unknown
- 1985-05-13 PT PT80450A patent/PT80450B/pt not_active IP Right Cessation
- 1985-05-15 AU AU42488/85A patent/AU578467B2/en not_active Ceased
- 1985-05-15 NO NO851947A patent/NO168043C/no not_active IP Right Cessation
- 1985-05-16 EG EG306/85A patent/EG17394A/xx active
- 1985-05-17 DD DD85276457A patent/DD236536A5/de not_active IP Right Cessation
- 1985-05-17 GR GR851207A patent/GR851207B/el unknown
- 1985-05-17 JP JP60105746A patent/JPH0689036B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1985-05-17 HU HU851870A patent/HU197759B/hu not_active IP Right Cessation
- 1985-05-17 SU SU853898058A patent/SU1530097A3/ru active
- 1985-05-17 KR KR1019850003400A patent/KR910000379B1/ko not_active Expired
- 1985-05-17 DK DK220685A patent/DK162103C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-05-17 NZ NZ212113A patent/NZ212113A/en unknown
- 1985-05-17 MX MX105337A patent/MX157381A/es unknown
- 1985-05-17 ES ES543235A patent/ES8606412A1/es not_active Expired
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI92210B (fi) | Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten GRF-analogien valmistamiseksi | |
| FI88402C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara grf-analoger | |
| US4626523A (en) | GRF analogs II | |
| JP2739910B2 (ja) | 環状ｇｒｆ類似体 | |
| NO167866B (no) | Syntetisk peptid og preparat for tilfoersel i dyr for produksjonsfremmende formaal. | |
| FI87080C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av grf-analoger | |
| US5262519A (en) | GRF analogs XI | |
| CA1247601A (en) | Rat grf and analogs | |
| US4784987A (en) | GRF analogs VI | |
| US4728726A (en) | GRF analogs IIIb | |
| US5002931A (en) | GRF analogs VII | |
| US5098995A (en) | GRF Analogs VIIA | |
| US4843064A (en) | GRF analogs V | |
| CA1304192C (en) | Grf analogs vi |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |