NO152220B - Fremgangsmaate for fremstilling av sesquiterpenderivat - Google Patents
Fremgangsmaate for fremstilling av sesquiterpenderivat Download PDFInfo
- Publication number
- NO152220B NO152220B NO781704A NO781704A NO152220B NO 152220 B NO152220 B NO 152220B NO 781704 A NO781704 A NO 781704A NO 781704 A NO781704 A NO 781704A NO 152220 B NO152220 B NO 152220B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- stachybotrys
- colony
- strain
- compound
- cultivation
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 12
- 241001574328 Stachybotrys sp. Species 0.000 claims description 31
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 26
- 241001279361 Stachybotrys Species 0.000 claims description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 14
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 14
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 241001279364 Stachybotrys chartarum Species 0.000 claims description 11
- 150000004354 sesquiterpene derivatives Chemical class 0.000 claims description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229930004725 sesquiterpene Natural products 0.000 claims description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 6
- 229940125890 compound Ia Drugs 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 claims description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 32
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 21
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 12
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 12
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 12
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 11
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 10
- 230000002391 anti-complement effect Effects 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- HBEDSQVIWPRPAY-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydrobenzofuran Chemical compound C1=CC=C2OCCC2=C1 HBEDSQVIWPRPAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 6
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 6
- 230000003171 anti-complementary effect Effects 0.000 description 6
- 108010008730 anticomplement Proteins 0.000 description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 241001598067 Memnoniella echinata Species 0.000 description 5
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 150000007514 bases Chemical class 0.000 description 5
- 229940099898 chlorophyllin Drugs 0.000 description 5
- 235000019805 chlorophyllin Nutrition 0.000 description 5
- 230000018842 conidium formation Effects 0.000 description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 5
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 4
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 4
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001598064 Memnoniella Species 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 3
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 3
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 3
- 239000012225 czapek media Substances 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000006877 oatmeal agar Substances 0.000 description 3
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 244000056139 Brassica cretica Species 0.000 description 2
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 2
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000027932 Collagen disease Diseases 0.000 description 2
- QPLDLSVMHZLSFG-UHFFFAOYSA-N Copper oxide Chemical compound [Cu]=O QPLDLSVMHZLSFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 241001558929 Sclerotium <basidiomycota> Species 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical group ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000015895 biscuits Nutrition 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 2
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 2
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNDWXJDUTDZBNV-UHFFFAOYSA-N 1-benzofuran-2,3-diol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=C(O)OC2=C1 DNDWXJDUTDZBNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ORIHZIZPTZTNCU-VMPITWQZSA-N 2-[(E)-hydroxyiminomethyl]phenol Chemical compound O\N=C\C1=CC=CC=C1O ORIHZIZPTZTNCU-VMPITWQZSA-N 0.000 description 1
- WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 2-[[6-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]-2-methylpyrimidin-4-yl]amino]-n-(2-methyl-6-sulfanylphenyl)-1,3-thiazole-5-carboxamide;hydrate Chemical compound O.C=1C(N2CCN(CCO)CC2)=NC(C)=NC=1NC(S1)=NC=C1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1S WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JUJWROOIHBZHMG-QYKNYGDISA-N 2-deuteriopyridine Chemical compound [2H]C1=CC=CC=N1 JUJWROOIHBZHMG-QYKNYGDISA-N 0.000 description 1
- AOPRXJXHLWYPQR-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyacetamide Chemical class NC(=O)COC1=CC=CC=C1 AOPRXJXHLWYPQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 3-(trimethylsilyl)propane-1-sulfonic acid Chemical compound C[Si](C)(C)CCCS(O)(=O)=O TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000940 FEMA 2235 Substances 0.000 description 1
- 210000000712 G cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 239000004378 Glycyrrhizin Substances 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 1
- 229940126902 Phlorizin Drugs 0.000 description 1
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical class OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N glycyrrhetinic acid glycoside Natural products C1CC(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004949 glycyrrhizic acid Drugs 0.000 description 1
- UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N glycyrrhizic acid Natural products CC1(C)C(CCC2(C)C1CCC3(C)C2C(=O)C=C4C5CC(C)(CCC5(C)CCC34C)C(=O)O)OC6OC(C(O)C(O)C6OC7OC(O)C(O)C(O)C7C(=O)O)C(=O)O UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 150000002357 guanidines Chemical class 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 150000005204 hydroxybenzenes Chemical class 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002134 immunopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000231 kidney cortex Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000010985 leather Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 231100000637 nephrotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOUVKUPGCMBWBT-UHFFFAOYSA-N phloridzosid Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 IOUVKUPGCMBWBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOUVKUPGCMBWBT-GHRYLNIYSA-N phlorizin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 IOUVKUPGCMBWBT-GHRYLNIYSA-N 0.000 description 1
- 235000019139 phlorizin Nutrition 0.000 description 1
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009751 slip forming Methods 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- HWEXKRHYVOGVDA-UHFFFAOYSA-M sodium;3-trimethylsilylpropane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].C[Si](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O HWEXKRHYVOGVDA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D307/94—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom spiro-condensed with carbocyclic rings or ring systems, e.g. griseofulvins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D493/10—Spiro-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/04—Oxygen as only ring hetero atoms containing a five-membered hetero ring, e.g. griseofulvin, vitamin C
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Furan Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for fremstilling av et sesquiterpenderivat med formel (Ia)
samt, farmasøytisk tålbare salter derav,
og det særegne ved fremgangsmåten i henhold til opp-
finnelsen er at man aerobt dyrker en mikroorganisme av slekten Stachybotrys valgt fra stammegruppen bestående av Stachybotrys sp. K-76 (FERM-P 3801) Stachybotrys sp.
T-789 (FERM-P 3802), Stachybotrys sp. T-791 (FERM-P 3803) og Stachybotrys chartarum IFO 5369 i et dyrkningsmedium inneholdende assimilerbare kilder for nitrogen, karbon,
uorganiske salter og spormineraler ved pH på 3,5 til 11,5
og ved en temperatur på 15°C til 35°C, og utvinner det resulterende produkt med formel (Ia) fra dyrkings-
væsken, og om ønsket omdanner forbindelsen Ia til et farmasøytisk tålbart salt derav.
Disse trekk ved oppfinnelsen fremgår av patentkravet.
Det nye sesquiterpenderivat (Ia) har inhiberende virkning mot komplementsystemet i dyr (en antikomplementær aktivi-tet) og antitumorvirkning og er nyttig som aktiv bestanddel i terapeutiske preparater effektive mot autoimmun-sykdommer, nephritis, reumatisme, kollagen-sykdommer, allergiske sykdommer, krefttilfeller, etc, eller som utgangsforbindelse for syntese av en rekke omdannede derivater med liknende terapeutisk virkning som derivatet (Ia) .
Betegnelsen "komplement" refererer til en kompleks gruppe av proteiner i legemsvæskene som ved at de arbeider sammen med antistoffer eller andre faktorer, spiller en viktig rolle som formidlere av immune, allergiske, immunokjemiske og/eller immunopatoloqiske reaksjoner. Reaksjoner hvori komplementer deltar foregår i blodserum eller andre legemsvæsker og betraktes følgelig som humo-rale reaksjoner.
Det er publisert at komplementsystemet er påvist å henge sammen med inflammasjon, koagulasjon, fibrinolyse, anti-stoff -antigenreaks joner og andre stoffskifteprosesser (se US patentskrift nr. 4.021.544, Bull. World Health Ord., 39 935-938 (1968), Scientific American, 929 (Nr. 5) 54-66
(1973) , Medical World News, oktober 11, 53-58, 64-66
(1974) , Harvey Lectures, 66 75-104 (1972), The New England Journal of Medicine, 287 489-495, 545-549, 592-596, 642-646 (1972), The Johns Hopkins Med. J., 128 57-74 (1971) og Federation Proceedings, 32 134-137
(1973)).
Forskjellige forbindelser er kjent som forbindelser med en antikomplementær virkning som f.eks. etylendiamin-tetraeddiksyre (EDTA), Saldox, florizin (som beskrevet i Borsos, J. Immunol, 94 (4), 629 (1964)), hydroksybenzen-derivater (som beskrevet i Shir Mayer, Biochemistry N.Y., 7, 3003 (1968), guanidiner og fenoksyacetamider (som omhandlet i B.R. Baker, J. Med. Chem., 12, 408 (1968)), fosfonat-estere (som omhandlet i E. L. Becker, B.B.A., 147, 289 (1967)), klorofyllin, glycyrrhizin, etc. Disse forbindelser er imidlertid ikke tilfredsstillende for praktiske formål på grunn av at de er sterkt giftige eller har en lav antikomplementær virkning. Så vidt vites har ingen antikomplementær forbindelse eller middel hittil blitt kommersielt tilbudt.
Det er derfor et formål for den foreliggende oppfinnelse å fremstille et nytt sesquiterpenderivat en høy antikomplementær virkning og lav giftighet. Det nye sesquiterpenderivat egner seg særlig for behandling av nephritis.
Farmasøytisk tålbare salter av det nye sesquiterpenderi-bat Ia kan oppnås ved å omsette sesquiterpenderivatene med passende basiske forbindelser.
For karakterisering av oppfinnelsen skal det også vises til de vedføyde figurer, hvori: Fig. 1 og 2 er mikrofotografier av Stachybotrys complementi nov sp. K-76 med evne til å fremstille forbindelsen med den nevnte formel (Ia); Fig. 3 er et mikrofotografi av Stachybotrys complementi nov sp. T-789 med samme evne. Fig. 4 er mikrofotografi av Stachybotrys echinata var. T-791 med samme evne. Fig. 5 er et kjernemagnetisk resonansspektrum av forbindelsen med den nevnte formel (Ia) oppnådd i henhold til det etterfølgende eksempel 1.
Sesquiterpenderivåtet (Ia)
fremstilles ved å anvende den følgende kjente mikroorganisme hørende til slekten Stachybotrys, eller mikro-organismer av slekten Stachybotrys nylig isolert for oppfinnelsens formål, nemlig den kjente stamme Stachybotrys chartarum IFO 5369, henholdsvis de nye stammer hørende til slekten Stachybotrys som beskrevet i det følgende og benevnt Stachybotrys complementi nov sp. K-76 (i det følgende benevnt som Stachybotrys sp. K-76), Stachybotrys complementi nov sp. T-789 (i det følgende benevnt Stachybotrys sp. T-789) og Stachybotrys (Memnoniella) echinata var. T-791 (i det følgende benevnt Stacy-botrys sp. T-791). Disse nye stammer er som nærmere angitt i det følgende deponert i FRI (Japan) under respektive deponeringsbetegnelser FERM-P 3801, 3802 og 3803.
( A) Finnested
(1) Stachybotrys sp. K-76
Stammen ble isolert fra jordbunnen i Ishigaki City, Okinawa, Japan.
(2) Stachybotrys sp. T-789
Denne stamme ble isolert fra jordbunnen i Naruto City, Tokushima, Japan.
(3) Stachybotrys sp. T-791
Denne stamme ble isolert fra jordbunnen i Tokushima City, Tokushima, Japan.
( B) Egenskaper av forskjellige dyrkingsmedier
(1) Stachybotrys sp. K-76
Dyrkingskarakteristikker for denne stamme på forskjellige dyrkingsmedier basert på visuelle og mikroskopiske observasjoner (fig. 1 og 2) er som folger:
(a) Visuell observasjon
Meget god vekst observeres på forskjellige dyrkingsmedia vanlig anvendt ved dyrking av muggsopp, men adhesjonen av phialosporene er ikke nodvendigvis god med unntagelse av havremel-agar-medium. Vekstbetingelsene på typiske media er vist i det fblgende.
(i) Maltekstrakt-agar-medium
Veksten er relativt langsom og ved dyrking ved 27°C i 30 dogn danner det seg en stor koloni med en storrelse på 30-35 mm. Kolonien vokser i en sirkulær form og koloniomkretsen har form av grove sagtakker. Overflaten av kolonien er glatt og lufthyfer strekker seg tykt lik en sirkulær matte ved kolonisenter og vokser tett. Kolonien går gradvis over fra hvitt ved det tidlige dyrkingstrinn til lys elfenben (Li Ivory, 2ca). To uker etter begynnende dyrking begynner det sakte å dannes phialosporer, men disse er knapt synlige for det blåtte bye. Sclerotium og andre seksuelle sporogene organer dannes ikke. Farven av baksiden av kolonien går fra farvelos til kobberbrun (Copper Tan, 5ie). Det fremstilles et kobberbrunt (Copper Tan, 5ie) opploselig pigment.
(ii) Potetglukose-agar-medium
Veksten er god og ved dyrking ved 27°C i 30 dogn når kolonistorrelsen 45-47 mm. Koloniveksten er konveks ved kolonisenter og koloniomkretsen har en grov sagtakket form. Kolonien frembyr konsentriske sirkler eller folder som går ut fra kolonisenter. Fra det forste dyrkingstrinn er kolonien tykt dekket med hvite til perlerosa (Pearl Pink, 4ca) hyfer. Ettersom dyrkingen går fremover blir farven av kolonien mork grå (Gray, i). En stor del phialospormasser dannes. Store mengder av væskedråper iakttas. Farven av baksiden går fra rustbrun(Rust Tan, 5ie) til lett brunrosa (Li Rose Brown,
6^ lg). Et opploselig pigment som dannes har en karamellfarve (Butter Scotch, 3ne), men farven er svak.
(iii) Czapek-agar-medium
Veksten er god og ved dyrking ved 27°C i 30 dogn når kolonistorrelsen 40-45 mm. Kolonien frembyr en konsentrisk folding og kolonien har et opphoyet felt ved kolonisenter. Omkretsen av kolonien er bolgeformet. Farven av baksiden av kolonien er lærbrun (Luggage Tan, 4ne). Ved kolonioverflaten kleber farvelose til hvite hyfer tynt i en konsentrisk form fra sentraldelen som ikke er dekket med lufthyfer, med en lysebrun (Toast Tan, 41g). Det iakttas ingen væskedråper, men den sentrale delen av kolonien er hygroskopisk. Phialosporer dannes knapt. Det opploselige pigment er svakt gullfarvet (Gold 2 le).
(iv) Havre-agar-medium
Veksten er meget hurtig og ved dyrking ved 27°C i 30 dogn når kolonistorrelsen 60 til 70 mm. Kolonien er tynn og plan og fra det forste trinn i dyrkingen dannes farvelose til hvite hyfer på hele overflaten av kolonien. Oppstående hyfer, 3-4 mm store, dannes bare ved den sentrale del av kolonien, men er ikke tette. To uker etter at dyrkingen begynte sprer adhesjonen av phialosporer seg over hele overflaten av kolonien, og farven av kolonien blir svakt oliven (Li Olive Drab, 1 li). Farven av baksiden av kolonien er brunbeige (Beige Brown, 3 ig) til brunaktig (Tan, 3 ie). Det opploselige pigment som fremstilles er svakt gulaktig (Colonial Yellow, 2 ca).
(2) Stachybotrys sp. T-789
Dyrkingskarakteristikkene for T-789-stammen, som er fungi imperfecti, på forskjellige dyrkingsmedia ble observert visuelt og mikroskopisk (som vist i fig. 3) og resultatene er vist i det folgende. De morfologiske karakteristikker for T-789-stammen ved mikroskopisk observasjon stemmer bra med observasjonene for Stachybotrys sp. K-76. Der er imidlertid forskjeller på dyrkingsmedia og på folgende to media er karakteristikkene mest markert forskjellige.
(a) Visuell observasjon
(i) Maltekstrakt-agar-medium
Veksten er meget sakte og ved .dyrking ved 27°C i 30 dogn når kolonistorrelsen 17-20 mm. Omkretsen av kolonien vokser på en bolgeaktig måte og er begrenset ved midten. Kolonien har et opphoyet midtparti og en radial fold ved omkretsen av kolonien. Lufthyfer kleber tynt til hele overflaten av kolonien. Ved
det begynnende dyrkingstrinn er hyfene hvite og conidier dannes gradvis. Midtpartiet av kolonien antar en brunfarve (Mole, 1) og conidiene vokser tett. Conidiedannelsen er ringlignende mot
omkretsen av kolonien. Farven av baksiden av kolonien er korkbrun (Cork Tan, 4ie). Det opploselige pigment dannes rikelig og er ravfarvet (Amber, 3 le).
(ii) Czapek-agar-medium
Veksten er god og ved dyrking ved 2 7°C i 30 dogn når veksten
45 mm. Senter av kolonien er konveks og kolonien danner en radial fold. Den perifere del av kolonien viser en bolgeformet vekst. Hvite lufthyf er kleber tynt i en konsentrisk sirkulær form utover fra den sentrale konvekse del av kolonien. Conidiene dannes konsentrisk bare ved omkretsdelen av kolonien. Hyfene er i opplost tilstand ved den konvekse del og er meget hygro-skopiske. Farven av baksiden av kolonien er sennepsbrun (Mustard Brown, 2 pi). Det frembringes ikke noe opploselig pigment.
(3) Stachybotrys sp. T-791
Dyrkingskarakteristikkene for T-791, som er fungi imperfecti,
på forskjellige dyrkingsmedia basert på visuelle og mikroskopiske observasjoner ( vist i fig. 4) er som folger:
(a) Visuell observasjon
(i) Maltekstrakt-agar-medium
Veksten er hurtig og irregulær. Farven av baksiden av
kolonien er brunaktig (Tan, 3 ie) til morkebrun (Dk Brown, 2 pn). Kolonien er plan og conidie -dannelsen er god. Farven av hyfene er kjeksfarve (Biscuit, 2 ec) til brun (Tan, 3 ie) og eksuderte væskedråper observeres. Det frembringes ikke noe opploselig pigment.
(ii) Potet-glukose-medium
Veksten er meget hurtig og ved dyrking ved 27°C i 30 dogn når kolonistorrelsen 70 mm. Den perifere del av kolonien sprer seg dendritisk og klebende hvite hyfer iakttas. Et stort antall væskedråper er tilstede. Det observeres knapt noen spore-dannelse. Farven av baksiden av kolonien er lys ravfarvet (Li Amber, 3 ie). Det dannes ikke noe opploselig pigment.
(iii) Czapek's Dox-agar-medium
Veksten er dårlig.
(iv) Syntetisk Mucor-agar-medium
Veksten er dårlig.
(v) Havremel-agar-medium
Veksten er meget god slik at Petri-skålen er dekket i lopet av
2 uker. Kolonien er tynn og flat. Dannelse av hyfer er rikelig fra det begynnende dyrkingstrinn og conidiedannelsen er også hurtig. Farven av kolonien endres fra hvit til morkebrun (Dk Brown, 3 pn) ettersom dyrkingen går fremover. Store mengder væskedråper forekommer på hyfene. Det frembringes ikke noe opploselig pigment.
( C) Fysiologiske egenskaper
Stachybotrys K-76, T-789 og T-791 er alle aerobe stammer og har folgende fysiologiske egenskaper:
( D) Morfologiske egenskaper
(1) Stachybotrys sp. K-76
De folgende trekk fremgår klart av fig. 1 og 2. Sclerotium
og andre seksuelle forplantningsorganer iakttas ikke på de forskjellige dyrkingsmedia, men aseksuelle sporer av phialospor-typen kan sees og dannes.
Hyfer dannes på forskjellige dyrkingsmedia, forgrenes fullstendig og strekker seg i lengderetningen og tverr-retningen med en hyfebredde på 2 til 4 p.'
Phialosporer forgrener seg enkelt fra hyfene (ingen forgrening fra en phialophor til en annen) og har 3 til 4 septa fra fot-cellene ved basisdelen og de strekker seg oppover eller svakt krummet. Hyfebredden for phialosporen er 4,3 til 4,7 pm ved bunndelen og 3,6 til 4,5 pm i midtdelen. Spissene av phialosporene er svakt utvidet og fra de ytre endene av phialophoren dannes 3 til 7 ellipsoide til klubbformet oppstående phialide med en storrelse på 7, 9 - 9,3 x 3,6 - 4,7 pm. Phialiden er glatt og har en farve fra farvelos til blek gulbrun. Phialosporene dannes forbundet basipetalt fra endene av phialiden. Phialosporene danner ikke rette kjeder, men blir slimaktige seige små halvsirkulære masser i antall 7 til 26. Phialophorene er sub-kulef ormede til ovale meden storrelse på
4,9 - 8,0 x 3,3 - 4,7 pm og overflatene av phialophorene er ru til vorteaktig og farvene av phialophoren er morkegronn (Dk ivy 24 po) til gråsort. Det sees ingen membran som skyldes mukose stoffer på phialospormassene.
Den taksonomiske status av denne stamme med de ovennevnte mikrobiologiske egenskaper er utforsket ved hjelp av G.L. Barron,
The Genera of Hyphomocetes from Soil, The Williams & Wilkins Company, Baltimore (1968), J.C. Gilman, A Manual of Soil.Fungi, The Iowa State University Press, Ames, Iowa (1971) og J.A.
von Arx, The Genera of Fungi Sporelating in Pure Culture,
Verag von J. Cremer 3301 Lehre (1970).
I henhold til det taksonomiske system til Saccardo horer de foreliggende stammer til klassen Hypomycetes,familien Dematiaceae, slekten Stachybotrys. Med andre ord stemmer egenskapene av den foreliggende stamme karakterisert ved fravær av ascocarper og andre seksuelle forplantningsorganer, dannelsen av morkebrune phialosporer fra phialider og samlingen av de resulterende phialosporer i en halvsirkulær form ved de ovre ender av phialiden godt med egenskapene til slekten Stachybotrys.
De forskjellige karakteristikker for de foreliggende stammer
er blitt identifisert med henvisning til de ovenfor nevnte håndboker og literaturhenvisninger som f.eks. G.R. Bisby Trans. Brit. Mycol. Soc, 26, 133-143 (1943), R.K. Zuck, Mycologia, 38, 69-76 (1946), G.L. Barron, Can.J. Bot., 39, 153-157 (1961) og i sammenligning med de typestammer som er oppbevart ved Institute for Fermentation, Osaka, Japan (IFO). Som et resultat er den foreliggende stamme K-76 bedomt å være mest lik Stachybotrys lobulata IFO 5369, på grunn av at phialosporene av den foreliggende stamme K-76 har ru til vorteaktig fremspring og er ovale til ellipsoidale. Forskjeller eksisterer imidlertid ved at Stachybotrys lobulata har en phialophor som kan nå 1 mm, og mens K-76-stammen viser enkel forgrening har Stachybotrys lobulata-stammen den egenskap at en ytterligere phialophor avgrenes og strekker seg fra en phialophor. Med hensyn til veksten på forskjellige dyrkingsmedia frembringer K-76-stammen en stor mengde opploselig pigment, og conidie-dannelsen er meget dårlig på agarmedia med unntagelse av potetglukose-agar-medium og havremel-agar-medium.
På den annen side vokser Stachybotrys lobulata meget hurtig på forskjellige dyrkingsmedia og en foldefri plan koloni dannes. Conidiedannelsen er god på nesten alle media med unntagelse av Czapek's Dox-agar-medium slik at farven på kolonien typifiseres. Det frembringes ikke noe loselig pigment eller slikt pigment frembringes bare i små mengder.
Fra de ovennevnte forskjeller er den foreliggende stamme
K-76 bedomt som en ny stamme forskjellig fra Stachybotrys lobulata og den foreliggende stamme er gitt navnet Stachybotrys sp. Kt76.
(2) Stachybotrys sp. T-789
Fra fig. 3 kan de folgende forhold sees og denne stamme har helt den samme morfologi som Stachybotrys sp. K-76, selv om der er noen forskjell i kolonistorrelsen.
På samme måte som i Stachybotrys sp. K-76, er de ovennevnte mikrobiologiske egenskaper sammenlignet med håndboker og litteraturhenvisninger nevnt ovenfor og med IFO-typestammene. Folgelig er denne stamme funnet å være mest lik Stachybotrys lobulata IFO 5369 og Stachybotrys sp. K-76. Den foreliggende stamme viser god dannelse av phialosporer på Czapek-agar-medium. Dannelsen av phialosporer på Czapek's Dox-agar-medium er imidlertid knapt observert for de forste to stammer. Dette er en dyrkingsforskjell.
Videre, som angitt med hensyn til Stachybotrys sp. K-76 ovenfor, er de morfologiske egenskaper for den foreliggende stamme opplagt forskjellig fra Stachybotrys lobulata. Videre er pH-området for optimal vekst ved den foreliggende stamme en pH fra 4,5 til 10,5. Også med hensyn til dette punkt er den foreliggende stamme forskjellig fra K-76-stammen.
Av den ovennevnte grunn er den foreliggende stamme derfor bedomt som en ny stamme og gitt navnet Stachybotrys sp. T-789.
(3) Stachybotrys sp. T-791
Det folgende kan sees fra fig. 4, idet phialophorene forgrenes enkelt og står oppreist. Phialophorspissene er forsiktig av-rundet i en stavform. Avrundingen er imidlertid ikke så stor som den som observeres i typestammene av Stachybotrys echinata IFO 7525 og 8856. Denne stamme viser en hyfebredde på 4,0 til 4,5 fim som er litt storre enn phialophoren. De phialophorer som avgrenes står opp fra fotceller fra vegetative hyfer eller lufthyfer, har to eller tre septa og har en storrelse på
40-80 x 3,0-3,5 jim. Celleveggen i phialophoren er ikke echinulat, men glatt.
Tre til seks phialider dannes fra den avrundede del ved spissen av philophorene. Videre dannes kontinuerlig sfæriske til sub-globose phialosporer av en celle med et echinulat fremspring og en storrelse på 4,3 - 5,2 x 3', 0 - 4,2 yim basipetalt ved spissene av phialiden og en kjede av 24 til 70 conidier dannes. Phialiden har en klubbeform og en storrelse på 6,9-10,7 x 3,5-4,7 pm. Phialophorene og phialiden er farvelos og phialiden har farve som kaffe (Coffee, 3pn) til sort.
Den taksonomiske status av den foreliggende stamme med de ovenfor beskrevne mikrobiologiske egenskaper ble undersokt i håndbokene angitt i den del som handler om K-76-stammen. Som et resultat ble den foreliggende stamme funnet å hore til slekten Stachybotrys (slekten Memnoniella). Spesifikt har den foreliggende stamme ikke noen ascocarper og andre seksuelle forplantningsorganer og morkebrune phialosporer dannes kontinuerlig fra phialiden. Lange kjeder av sporer dannes. Egenskapene av den foreliggende stamme T-791 stemmer med egenskapene av slekten Stachybotrys (slekten Memnoniella) .
De forskjellige egenskaper av den foreliggende stamme ble undersokt ved hjelp av ovennevnte håndboker og literaturhenvisninger som f.eks. R.K. Zuck Mycologia, 38, 69-76 (1964) og G. Smith, Trans. Brit. Mycol. Soc, 45, 387-394 (1962) og sammenlignet med typestammene oppbevart ved IFO. Som et resultat ble det bedomt at siden phialosporer dannes kontinuerlig og basipetalt fra phialiden horer stammen T-791 til Memnoniella echinata i henhold til Hohnel. Fra rapportene til R.K. Zuck og G. Smith ovenfor ble imidlertid den foreliggende stamme T-791 betraktet som en stamme analog med Stachybotrys echinata. Den ble folgelig sammenlignet med Stachybotrys echinata IFO 7525 og IFO 8856.
iMorfologisk iakttas ikke echinulate fremspring spesifikke for de to typestammer på celleveggene av phialophorene ved den foreliggende stamme T-791. Videre avrundes i typestammene spissene phialosporene til to til tre ganger hyfebredden av phialosporene mens ingen markert avrunding observeres ved den foreliggende stamme. Videre viser de to typestammer god vekst på forskjellige dyrkingsmedia, spesielt på potetglukose-agar-medium og danner sirkulære, noe opphoyde kolonier, og hyfer kleber rikelig. Videre observeres rikelig conidiedannelse. I motsetning hertil viser den foreliggende stamme en dendritisk irregulær vekst som angitt ovenfor og dårlig hyfedannelse og dårlig conidiedannelse observeres. Fra de ovennevnte mikrobiologiske forskjeller er den foreliggende stamme betraktet som en ny stamme og betegnet Stachybotrys sp. T-791.
Angivelsene av de ovennevnte farver og tilsvarende i det etterfølgende er i samsvar med metoden beskrevet i Color Harmony Manual, Container Corporation of America (1958).
Prover av de nye stammer, Stachybotrys sp. K-76, Stachybotrys sp. T-789 og Stachybotrys sp. T-791 er deponert ved Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Japan med respektive deponeringsbetegnelser FERM-P nr. 3801, FERM-P nr. 3802 og FERM-P nr. 3803.
Spesifikt oppnås fremstillina av forbindelsen med den generelle formel (Ia) ved hjelp av mikroorganismene av slekten Stachybotrys beskrevet ovenfor på folgende måte: Mikroorganismene dyrkes forst i et medium inneholdende vanlige næringskilder og tilsetningsmidler. Nitrogenkilder vanlig anvendt som et dyrkingssubtrat omfatter f.eks. soyabonnepulver, soyabonneolje, kornstopvæske, gjærekstrakt, torket gjær, havremel, kjottekstrakt, hydrolysert kasein, ammoniumsalter og nitratsalter. Eksempler på egnede karbonkilder er glukose, glyserol, maltose, stivelse, laktose, sucrose og melasse. Eksempler på tilsetningsmidler til dyrkingsmediet omfatter uorganiske salter som f.eks. kalsiumkarbonat, natriumklorid, magnesiumsulfat og fosforsyre. Om nodvendig kan dyrkingsmediet ytterligere inneholde små mengder av salter av metaller som f.eks. jern og kobber, mangan og zink. Dyrkingen kan gjennomfores i vanlig vandig medium, inneholdende det ovennevnte substrat under anvendelse av en overflatedyrkingsteknikk eller en neddykket dyrkingsteknikk under lufting og omroring. Neddykket dyrking med lufting og omroring foretrekkes.
Dyrkingen gjennomfores ved en temperatur fra 15 - 35°C, foretrukket 20 - 32°C i en periode på vanligvis omtrent 3 til omtrent 7 dogn under vanlige luftingsbetingelser mens pH i dyrkingsmediet holdes ved 3,5 til 11,5» fortrinnsvis 4,5 til 9,5.
Etter dyrkingen utvinnes den fremstilte substans fra dyrkingsvæsken. Utvinningsmetoden er ikke spesielt begrenset og forskjellige kjente metoder som anvender de fysikalskkjemiske egenskaper av de fremstilte substanser kan anvendes. Gjenvinning kan f.eks. oppnås ved hjelp av en metode som utnytter forskjellene i opploselighet mellom produktene og forurensningene, en metode som utnytter forskjellene i adsorbsjonsevne og affinitet for vanlige adsorberingsmidler som f.eks. aktivert karbon, silikagel, ionevekslerharpikser, eller "Sephadex"
(handelsbetegnelse for et produkt fra Pharmacia Fine Chemical), en metode som utnytter forskjellene i fordelingskoeffisient mellom to væskefaser, og en kombinasjon av slike metoder.
Mer spesifikt filtreres dyrkingsvæsken eller sentrifugeres på en konvensjonell måte for å fjerne cellene. Deretter tilsettes metanol til det overliggende væskelag og blandingen omrores og settes bort i 2 til 3 timer. Bunnfallet fjernes ved hjelp av en ytterligere sentrifugeringsseparasjon. Resten ekstraheres med det samme volum av etylacetat og losningsmidlet avdestilleres. Ekstrakten anbringes i metanol og metanol-losningen fores gjennom en kolonne av aktivert karbon, og losningsmidlet avdestilleres fra eluatet. Resten gelfiltreres under anvendelse av "Sephadex LH-20". De resulterende fraksjoner underkastes hver en anti-komplement-aktivitetstest beskrevet i det folgende. Aktive fraksjoner samles og losningsmidlet avdestilleres. Således kan rent 6,7-dihydroksy-2,5,5,8a-tetrametyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaftalen-1-spiro-2'-(6<1>,7'-diformyl-4'-hydroksy-2<1>,3<1->dihydroksybenzo-furan) med den tidligere angitte strukturformel (Ia) isoleres.
Det nye sesquiterpenderivat med formel Ia inneholder sure grupper i form av fenoliske hydroksylgrupper og kan lett omsettes med basiske forbindelser til å danne saltene derav. Eksempler på basiske forbindelser som kan anvendes ved fremstillingen av saltene av sesquiterpenderivatet med formel Ia inkluderer hydroksydene og karbonatene av alkali-metallene og jordalkalimetallene, som f.eks. natrium-hydroksyd, kaliumhydroksyd, kalsiumhydroksyd, natrium-karbonat, k.aliumkarbonat og natriumhydrogenkarbonat.
Saltdannelser under anvendelse av basiske forbindelser kan lett gjennomføres i. et passende løsningsmiddel under anvendelse av konvensjonell saltdannelsesteknikk. Eksempler på passende løsningsmidler som kan anvendes er vann,
lavere alkoholer som f .eks. metanol, etanol og propanol,
etere som f.eks. dioksan og tetrahydrofuran, aceton, benzen, etylacetat, dimetylsulfoksyd, dimetylformamid, metylen-klorid og kloroform. Saltdannelse kan gjennomføres ved romtemperatur til omtrent 100°c, foretrukket fra romtemperatur til 50oC; ± løpet av fra omtrent 5 min. til omtrent 6 timer, vanligvis under tilgang av atmosfærisk luft
eller under oksygenfri betingelser, foretrukket i en
atmosfære av en inert gass som f.eks. nitrogen eller argon. Mengden av basisk forbindelse som anvendes er ikke spesielt begrenset, men en passende mengde er vanligvis i det minste omtrent 1 ekvivalent, foretrukket 1 til 2 ekvivalenter, basert på sure grupper i utgangsforbindelsen Ia.
Det nye sesguiterpenderivat (Ia) kan anvendes som et middel for behandling av nephritis og når det anvendes som et nephritisbehandlingsmiddel sammensettes det til farmasøy-tiske preparater med vanlige farmasøytisk tålbare bærere, som f.eks. fortynningsmidler eller tilsetningsmidler som f.eks. fyllstoffer, drøyemidler, bindemidler, fuktemidler, desintegrasjonsmidler, overflateaktive midler og smøre-midler som vanlig anvendes for fremstilling av slike preparater i avhengighet av doseringsformen.
Forskjellige doseringsformer for terapeutiske preparater
i form av et nephritis-behandlingsmiddel kan velges i samsvar med terapiformålet og typiske doseringsformer som anvendes er tabletter, piller, pulvere, flytende preparater, suspensjoner, emulsjoner, granuler, kapsler, suppositorier og injeksjonspreparater (oppløsninger, suspensjoner, etc).
Mengden av forbindelsen (Ia) som en aktiv bestanddel som innblandes i et farmasøytisk preparat egnet som et nephritisbehandlingsmiddel er ikke spesielt begrenset og kan variere innen vide grenser. En passende terapeutisk effektiv mengde er vanligvis omtrent 1 til omtrent 70 vekt%, foretrukket 5 til 50 vekt% baser på hele prepa-ratet.
Doseringen av nephritis-behandlingsmidlet velges passende alt etter bruksformålet, symptomene, etc. Vanligvis er en foretrukket dosering av forbindelsen fra omtrent 0,5
til omtrent 20 mg/kg legemsvekt pr. døgn i form av enkle eller multiple doser.
Forbindelsen Ia har antikomplementær virkning og er nyttig som terapeutisk middel for autoimmune sykdommer, kollagen-sykdommer og reumatiske sykdommer, som hver innbefatter et komplementsystem.
Resultatene av forsøk vedrørende farmakologiske virkninger av forbindelsen med formel Ia er vist i det følgende.
(1) Anti-komplementvirkning
Anti-komplementvirkningen ble målt og bekreftet ved hjelp av testmetoden beskrevet i Meneki Kagaku (Immuno-Chemistry), Yuichi Yamamura et al, Ed. sidene 830-834, Asakura Shoten, Tokyo, Japan (1973). Spesifikt ble et reagensrør fylt med 0,5 ml av en vandig dispersjon av hver av testforbindelsene, 0,5 ml sensitivert erythrocytes (EA) inneholdende 1 x 10 g celler /ml, 1 ml av en 5-ganger fortynnet løsning av en Veronal-bufferløsning inneholdende gelatin, Ca<++> og Mg<++> (GBV<++>) og 0,5 ml komplementserum (marsvin-komplement) fortynnet til 150 ganger med GBV<++>. Blandingen ble holdt varm ved 37°C i 60 min. Deretter ble 5 ml av en iskold fysiologisk saltløsning tilsatt dertil, og blandingen ble sentrifugert. Absorberingen av utskilt overliggende væskelag ble målt ved OD4i3 oe3 inhibisjonsgraden for testforbindelsen med hensyn til hemolyse av de sensitiverte erythrocyter ble bestemt.
50% inhiberende hemolyse-aktivitetsverdi (v/ml) målt ved hjelp av den ovennevnte metode er vist i den etter-følgende tabell 2 for hver testforbindelse.
(2) Akutt giftighet
Verdier for (mg/kg) av testforbindelsene ved intra-venøs tilførsel i mus ble målt og de oppnådde resultater er også vist i den etterfølgende tabell 1.
( 3) Terapeutisk virkning på nephrotoksin-type Nephritis
Rotte-nephrotoksin ("NT" som forkortelse) ble oppnådd som beskrevet i det folgende. Rotte-nyrecortex ble homogenisert med en like stor mengde fysiologisk saltlosning. Den homogeniserte blanding ble blandet med Freund<1>s fullstendige tilsetningsmiddel (et produkt fra Difco Company) i volumforhold 1:1. To milliliter av den resulterende blanding ble injisert intramuskulært i en kanin (legemsvekt 3.100 g) for immunisering av kaninen. En og en halv måned senere ble blod tatt fra hjertet av kaninen og serum fremstilt. Det resulterende serum ble inaktivert ved 56°C i 30 min., deretter utsaltet med en 40% mettet vandig losning av ammoniumsulfat og fraksjonert. Fraksjonen med Y_<3lobulin dgG) ble samlet for å oppnå NT.
Bedommelsen ble gjennomfort ved å anvende Wistar-hanrotter med en kroppsvekt på 150 til 160 g med tre serier for hver testforbindelse. Testforbindelsen ble tilfort intraperitonealt hver 24 timer i 7 dogn. En time etter tilforsel av testforbindelsen på den tredje dag ble NT tilfort. NT ble injisert intravenost i en mengde på 1 ml i halevenen på hver rotte. Klorophyllin (CP) ble anvendt som en sammenligningsforbindelse, og fysiologisk saltlosning ble anvendt som blindprove.
Prbteinuria-nivået (total mengde utskilt i urinen i lbpet av
24 timer) ble målt ved hjelp av turbidometri, anvendelse av bovin-serum-albumin som en kontroll ved hjelp av sulfosalicyl-syre.
De oppnådde resultater er vist i den etterfølgende tabell II•
Proteinurea-nivået i en frisk rotte er 0,5 til 5 mg/dbgn. Når proteinurea-nivået overstiger disse grenser, spesielt når proteinurea-nivået er mer enn 10 mg/dbgn, kan det sikkert sies at nephritis opptrer. Som det kan sees fra resultatene i tabell 3 forekommer nephritis i blindprbve-serien og i tilfellet med forbindelsene med formel (I) og CP, eir mengden av proteinurea fra tilfbrselstiden for NT til 10 dogn etter tilfbrsel omtrent den samme som for en frisk rotte. Tilfbrsel av forbindelsene med formel (Ta) kan således sees å inhibere primære og sekundære immunreaksjoner.
(4) Terapeutiske virkninger på Heymann-type nephritis
Wistar-hanrotter med en kroppsvekt på 180 til 200 g ble anvendt ved dette forsok. Rottenyre-cortex ble ekstrahert og homogenisert med en like stor volummengde av en fysiologisk saltlosning. Homogenatet ble sentrifugert ved 1500 gil time. Den supernatante væske ble renset i samsvar med metoden til T.S. Edgington et al, Journal of Experimental Medicine, 127,
555 (1968), og blandet med Freund's fullstendige tilsetningsmiddel 37 Ra (et produkt fra Difco Company) i volumforholdet 0,4:1. Den resulterende blanding ble injisert intraperitonealt i isologe rotter i en mengde på 0,5 ml rotte. Deretter ble den samme mengde tilsetningsmiddel tilfort hver 2 uker inntil proteinurea-nivået oversteg 100 mg/dogn (denne periode var omtrent 6 til 8 uker).
Hver av testforbindelsene angitt i tabell ni i det folgende ble tilfort intraperitonealt i rotter som led av Heymann-type nephritis (med en kroppsvekt på 300 til 350 g) en gang daglig i 7 dogn, og deretter ble mengden av proteinurea (mg/dogn) målt på samme måte som beskrevet ovenfor. CP ble anvendt som en sammenligningsforbindelse og fysiologisk saltlosning ble anvendt som en kontroll. Tre serier ble gjennomført for hver testforbindelse. De oppnådde resultater er vist i den etterfolgende tabell ill.
To til tre uker etter begynnelsen av testen okte legemsvekten for rottene til 400 til 500 g, og normale proteinurea-nivåer var antatt å være 5 til 15 mg/dogn. Som det kan sees fra resultatene i tabellul kan forbindelsene med formel (Ia) helbrede Heymann-type-nephritis.
FR EMS TILLINGS EKS EMPLER 1- 4
For mer detaljert å illustrere oppfinnelsen er fremstillingen av forbindelsen med formel(Ta) beskrevet i de etterfølgende eksempler, og med mindre annet er angitt er alle deler, prosentangivelser, forhold og lignende på vektbasis og betegnelsen romtemperatur som anvendt heri betyr 15 - 2 5°C.
Eksempel 1
En 500 ml Sakaguchi-kolbe ble fylt med 100 ml av et dyrkingsmedium med folgende sammensetning, og Stachybotrys sp. K-76 ble dyrket ved 28°C og pH 6 i 4 dogn med omrysting.
Sammensetning av dyrkingsmedium
En 30-liters gjæringsbeholder ble fylt med 20 1 av et dyrkingsmedium av den ovennevnte sammensetning, og en kolbe av den resulterende podekultur ble dyrket i dyrkingsmediet ved 28°C i 5 dogn ved omroring 400 rpm ved en luftingstakt på 1 1 pr. liter av dyrkingsmediet pr. min. Den resulterende dyrkingsvæske ble sentrifugert med en hastighet på 800 rpm for å fjerne mikrobecellene. Til den supernatante væske ble tilsatt 5 1 metanol og blandingen ble omrort og fikk deretter stå i
3 timer. Blandingen ble sentrifugert og det faste material ble fjernet. Supernatanten ble ekstrahert med en like stor volummengde etylacetat. Losningmidlet i etylacetatlaget ble avdestillert under redusert trykk. Resten ble opplost i metanol og fort gjennom en kolonne med aktivert karbon. Eluatet ble konsentrert til tbrrhet under redusert trykk. Den torkede masse ble opplost i en blanding av kloroform og etylacetat (1:1 volum/volum) og gelfiltrert gjennom en kolonne av "Sephadex
LH-20". Filtratet ble underkastet en tynnskiktkromatografering (inder anvendelse av en blanding av etylacetat, kloroform og eddiksyre (volumforhold 50:50:2) som fremkallings-losningsmiddel) og en fraksjon med en antikomplementvirkning tilsvarende Rf=0,34 ble oppsamlet. Alternativt ble filtratet underkastet tynnskikstkromatografering (under anvendelse av en blanding av benzen, butanol og eddiksyre (volumforhold 60:15:5) som fremkallingslosningsmiddel) og en fraksjon med en anti-komplementvirkning tilsvarende Rf=0,58 ble oppsamlet.
Avdamping av losningsmidlet fra fraksjonen ga 2,0 g 6, 7-dihydr Dksy-2,5,5,8a-tetrametyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaftalen-1-spiro-2'-(6',7'-diformyl-4'-hydroksy-2',3<1->dihydrobenzofuran),
en svakt gul svakt sur substans med antikomplementvirkning. Fremstilling av denne forbindelse ble bekreftet ved hjelp av folgende fysikalskkjemiske karakteristikker.
(1) /a/J° = -48° (C=2,5 i metanol)
(2) Elementæranalyseverdier for C„-H<o>_<0>,
/.i JU d
Teoretisk (%) : C 68,64, H, 7,51
Funnet (%): C, 68,58, H, 755
(3) Ultrafiolett absorbsjonsspektralanalyse (UV)
etanol = 246 nm (f =16474)
<*>maks = 307 nm (f =6659)
(4) Kjernemagnetisk resonans-spektralanalyse (NMR)
NMR-analyse ble gjennomfort under anvendelse av pyridin-d,-/natrium 2,2-dimetyl-2-silapentan-5-sulfonat (DSS) som intern standard/ som et løsningsmiddel. Det oppnådde NMR-skjema er vist i fig. 5. NMR-målingsbetingelsene var som folger:
Eksempel 2
En 500 ml Sakaguchi-kolbé ble fylt med 100 ml av et dyrkingsmedium med folgende sammensetning, og Stachybotrys chartarum IFO 5369, en kjent stamme, ble dyrket i mediet ved 28°C i
4 dogn ved pH 6 med omrysting.
Sammensetning av dyrkingsmedium
En 30-liters gj æringsbeholder ble fylt med 20 1 av et dyrkingsmedium med den ovennevnte sammensetning og to kolber av den resulterende podekultur ble dyrket ved 28°C i 5 dogn med omroring med hastighet 30 rpm med en lufttilforselstakt på 1 1 pr. liter medium pr. min. Den resulterende dyrkingsvæske ble sentrifugert med en hastighet av 8.000 rpm for å fjerne mikrobeceller. Til supernatantvæsken ble tilsatt 5 1 metanol og blandingen ble omrort og fikk stå i 3 timer. Blandingen ble sentrifugert og det faste material fjernet. Supernatantvæsken ble ekstrahert med en like stor volummengde etylacetat. Losningsmidlet i etylacetatlaget ble fjernet under redusert trykk for konsentrering til torrhet. Resten ble opplost i metanol og fort gjennom en kolonne med aktivert karbon. Eluatet ble konsentrerttil torrhet under redusert trykk, opplost i en blanding av kloroform og etylacetat (1:1, v/v) og gelfiltrert gjennom en kolonne av "Sephadex LH-20". Fraksjoner med aktive topper tilsvarende Rf-verdiene for tynnskiktkromatografering beskrevet i eksempel 1 ble oppsamlet. Avdamping av losningsmidlet ga 2,2 g (6,7-dihydroksy-2,5,5,8a-tetrametyl-l,2,3,4,4a, 5,6,7,8,8a-decahydronaftalen-l-spiro-2'-(6',7'-diformyl-4'-hydroksy-2',3<1->dihydrobenzofuran), en lysegul svakt sur substans med antikomplementvirkning. Forbindelsen hadde de samme fysikalskjemiske karakteristikker som beskrevet i eksempel 1,
og fremstilling av denne forbindelse ble bekreftet fra disse egenskaper.
Eksempel 3
Stachybotrys sp. T-789 ble dyrket og renset på samme måte som i eksempel 1 med unntagelse at det ble anvendt et dyrkingsmedium med folgende sammensetning innstilt til pH 7,5 og at dyrkingstemperaturen ble holdt ved 32°C.
Sammensetning av dyrkingsmedium
På denne måte ble 6,7-dihydroksy-2,5,5,8a-tetrametyl-l,2,3,4,4a, 5,6,7,8,8a-decahydronaftalen-l-spiro-2'-(6<1>,7'-diformyl-4'-hydroksy-2<1>,3<1->dihydrobenzofuran) oppnådd, en lysegul svakt sur substans med antikomplementvirkning. De fysikalskkjemiske egenskaper av forbindelsen svarte til egenskapene av forbindelsen isolert og renset i eksempel 1. i i i
I
l Eksempel 4
Stachybotrys sp. T-791 ble dyrket og renset på samme måte som i eksempel 1 med unntagelse av at et dyrkingsmedium med den j
i folgende sammensetning, innstilt til pH 5,5 ble anvendt, og dyrkingstemperaturen ble holdt ved 2 5°C.
i i Sammensetning av dyrkingsmedium
På denne måte ble det oppnådd 6,7-dihydroksy-2,5,5,8a-tetra-metyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaftalen-l-spiro-2'-(6<1>,7'-diformyl-4'-hydroksy-2'3'-dihydrobenzofuran), en lysegul svakt sur substans med antikomplementvirkning. De fysikalskkjemiske egenskaper av denne forbindelse svarte til egenskapene av forbindelsen oppnådd i eksempel 1.
Claims (1)
- Fremgangsmåte for fremstilling av et sesquiterpenderivat med formel ( Ia samt larmasøytisk tålbare salter derav,karakterisert ved at man aerobt dyrker en mikroorganisme av slekten Stachybotrys valgt fra stammegruppen bestående av Stachybotrys sp. K-76 (FERM-P 3801), Stachybotrys sp. T-789 (FERM-P 3802), Stachybotrys sp. T-791 (FERM-P 3803) og Stachybotrys chartarum IFO 5369 i et dyrkningsmedium inneholdende assimilerbare kilder for nitrogen, karbon, uorganiske salter og spormineraler ved pH på 3,5 til 11,5 og ved en temperatur på 15°C til 35°C, og utvinner det resulterende produkt med formel (Ia) fra dyrkingsvæsken, og om ønsket omdanner forbindelsen Ia til et farmasøytisk tålbart salt derav.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP52078641A JPS589114B2 (ja) | 1977-06-30 | 1977-06-30 | セスキテルペン類縁体、その製造法及び腎炎治療剤 |
| JP15895977A JPS5492680A (en) | 1977-12-29 | 1977-12-29 | Novel microorganism |
| JP53014674A JPS5936913B2 (ja) | 1978-02-10 | 1978-02-10 | セスキテルペン誘導体 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO781704L NO781704L (no) | 1979-01-03 |
| NO152220B true NO152220B (no) | 1985-05-13 |
| NO152220C NO152220C (no) | 1985-08-21 |
Family
ID=27280728
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO781704A NO152220C (no) | 1977-06-30 | 1978-05-12 | Fremgangsmaate for fremstilling av sesquiterpenderivat |
| NO834363A NO154013C (no) | 1977-06-30 | 1983-11-28 | Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive sesquiterpenderivater. |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO834363A NO154013C (no) | 1977-06-30 | 1983-11-28 | Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive sesquiterpenderivater. |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4229466A (no) |
| AR (1) | AR228011A1 (no) |
| CA (1) | CA1142106A (no) |
| CH (1) | CH641452A5 (no) |
| DE (1) | DE2821403C2 (no) |
| DK (2) | DK154704C (no) |
| ES (2) | ES469821A1 (no) |
| FR (1) | FR2405941A1 (no) |
| GB (1) | GB1601479A (no) |
| IE (1) | IE46785B1 (no) |
| IT (1) | IT1103138B (no) |
| MX (1) | MX6053E (no) |
| NL (1) | NL181804C (no) |
| NO (2) | NO152220C (no) |
| NZ (1) | NZ187243A (no) |
| PT (1) | PT68035B (no) |
| SE (2) | SE439322B (no) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5630917A (en) * | 1979-08-22 | 1981-03-28 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | Preventive and remedy for hepatitis |
| US4423027A (en) * | 1982-12-22 | 1983-12-27 | Simon Lionel N | Pharmaceutical compositions of deglycyrrhizinated licorice (DGL) |
| JPS6193179A (ja) * | 1984-10-15 | 1986-05-12 | Takara Shuzo Co Ltd | グアニジルフンジン類の誘導体及びその製造方法 |
| JPS646214A (en) * | 1987-02-13 | 1989-01-10 | Otsuka Pharma Co Ltd | Remedy for ulcerative colonopathy |
| US5366986A (en) * | 1988-04-15 | 1994-11-22 | T Cell Sciences, Inc. | Compounds which inhibit complement and/or suppress immune activity |
| US5173499A (en) * | 1988-04-15 | 1992-12-22 | T Cell Sciences, Inc. | Compounds which inhibit complement and/or suppress immune activity |
| US5506247A (en) * | 1988-04-15 | 1996-04-09 | T Cell Sciences, Inc. | Compounds that inhibit complement and/or suppress immune activity |
| US4981980A (en) * | 1989-09-14 | 1991-01-01 | Merck & Co., Inc. | Drug for treating manic depression |
| EP0447813A1 (en) * | 1990-02-28 | 1991-09-25 | GRUPPO LEPETIT S.p.A. | Water soluble salts of purpuromycin and pharmaceutical formulations thereof |
| US5532416A (en) * | 1994-07-20 | 1996-07-02 | Monsanto Company | Benzoyl derivatives and synthesis thereof |
| US5854036A (en) * | 1994-03-25 | 1998-12-29 | Gruppo Lepetit S.P.A. | Sesquiteterpenic dervatives |
| US5869688A (en) * | 1994-07-20 | 1999-02-09 | Monsanto Company | Preparation of substituted 3-aryl-5-haloalkyl-pyrazoles having herbicidal activity |
| US5698708A (en) * | 1996-06-20 | 1997-12-16 | Monsanto Company | Preparation of substituted 3-aryl-5-haloalkyl-pyrazoles having herbicidal activity |
| JP4194196B2 (ja) | 1999-02-22 | 2008-12-10 | 花王株式会社 | 浴用剤組成物 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3985896A (en) * | 1975-07-15 | 1976-10-12 | Smithkline Corporation | Benzophenalenofurans |
| US4046805A (en) * | 1976-05-10 | 1977-09-06 | American Cyanamid Company | Substituted-hydroxy-naphthalenedisulfonic acid compounds |
-
1978
- 1978-05-10 FR FR7813932A patent/FR2405941A1/fr active Granted
- 1978-05-11 NZ NZ187243A patent/NZ187243A/en unknown
- 1978-05-12 NL NLAANVRAGE7805160,A patent/NL181804C/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-05-12 PT PT68035A patent/PT68035B/pt unknown
- 1978-05-12 AR AR272175A patent/AR228011A1/es active
- 1978-05-12 GB GB19140/78A patent/GB1601479A/en not_active Expired
- 1978-05-12 ES ES469821A patent/ES469821A1/es not_active Expired
- 1978-05-12 CH CH519378A patent/CH641452A5/de not_active IP Right Cessation
- 1978-05-12 NO NO781704A patent/NO152220C/no unknown
- 1978-05-12 DK DK212778A patent/DK154704C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-05-15 US US05/906,300 patent/US4229466A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-05-15 IT IT49342/78A patent/IT1103138B/it active
- 1978-05-15 IE IE975/78A patent/IE46785B1/en not_active IP Right Cessation
- 1978-05-15 CA CA000303381A patent/CA1142106A/en not_active Expired
- 1978-05-16 DE DE2821403A patent/DE2821403C2/de not_active Expired
- 1978-05-16 SE SE7805606A patent/SE439322B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-06-02 MX MX787121U patent/MX6053E/es unknown
-
1979
- 1979-02-15 ES ES477771A patent/ES477771A1/es not_active Expired
-
1983
- 1983-09-30 SE SE8305390A patent/SE452008B/sv not_active IP Right Cessation
- 1983-11-28 NO NO834363A patent/NO154013C/no unknown
-
1987
- 1987-02-04 DK DK058487A patent/DK155670C/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO152220B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av sesquiterpenderivat | |
| IE49743B1 (en) | Antihypercholesteraemic agent,monacolin k,and its preparation | |
| PT95876A (pt) | Processo para a preparacao de novos polipeptidos | |
| CA1335367C (en) | Ks-506 compounds and process for the production thereof | |
| KR0135600B1 (ko) | 항암 항생물질 mi43-37f11, 그 제조방법 및 그 용도 | |
| JPS5822120B2 (ja) | ３−０−（β−Ｄ−グルクロノピラノシル）−ソ−ヤサポゲノ−ルＢ | |
| JPH0334991A (ja) | 環状テトラペプチドおよびその製造法 | |
| US5306496A (en) | Antibiotics NK374186A, NK374186B, NK374186B3 and NK374186C3, process for producing the same, and use of the same | |
| EP0371762B1 (en) | New platelet activating factor antagonists, named "the phomactins", their preparation and use | |
| KR820001032B1 (ko) | 세스키테르펜 유도체의 제조방법 | |
| JPS6236008B2 (no) | ||
| US5308867A (en) | Platelet activating factor antagonists, named "the phomactins", their preparation and use | |
| JPS59161396A (ja) | 新規抗生物質スピカマイシン | |
| KR950004181B1 (ko) | 항생물질 버미스포린, 그의 제조방법 및 그것을 활성 항균제로서 포함하는 약제 조성물 | |
| JPH041179A (ja) | 抗腫瘍性物質ｂｅ―１４１０６ | |
| JP2990628B2 (ja) | 新規植物生長調節物質ａｊｉ−３０２及びその製造法 | |
| JPS5822194B2 (ja) | 新規な微生物 | |
| JPH05163289A (ja) | 新規な免疫抑制物質、ｍｉ７１０−５１ｆ６物質およびその製造法 | |
| KR830000619B1 (ko) | 3-0(β-D-글루쿠로노피라노실)-소야사포게놀 B의 제조방법 | |
| JPH0341089A (ja) | 生理活性物質３１２７ | |
| JPH0725878A (ja) | 血小板凝集阻害物質ｐｉ−３３４ | |
| JPS5822193B2 (ja) | 新規な微生物 | |
| WO1995018142A1 (en) | Wf15604 substances | |
| JPS58149683A (ja) | 抗生物質ｂ−１６２５ｆａ↓２およびｂ−１６２５ｆａ↓３，およびこれらの製造法 | |
| JPH06135979A (ja) | 新規物質ｎｋ３７４２００、その製造法及びその用途 |