KR950004181B1

KR950004181B1 - 항생물질 버미스포린, 그의 제조방법 및 그것을 활성 항균제로서 포함하는 약제 조성물

Info

Publication number: KR950004181B1
Application number: KR1019880009774A
Authority: KR
Inventors: 다까시 미까와; 노리꼬 다까하시; 하루유끼 오끼시; 요시까즈 사또; 신지 미야도; 마사지 세자끼
Original assignee: 미쓰비시 가가꾸 가부시끼가이샤; 미우라 아끼라; 메이지 세이까 가부시끼가이샤; 사사이 아끼라
Priority date: 1988-07-29
Filing date: 1988-07-29
Publication date: 1995-04-27
Also published as: KR900001713A

Abstract

내용 없음.

Description

항생물질 버미스포린, 그의 제조방법 및 그것을 활성 항균제로서 포함하는 약제 조성물

제1도는 메탄올 용액중에서 농도 20μg/ml인 버미스포린의 자외선 흡수 스펙트럼이고,

제2도는 클로로포름용액중에서 버미스포린의 적외선 흡수 스펙트럼이며,

제3도는 중클로로포름 용액중에서 버미스포린의 양성자 NMR 스펙트럼이고, 또

제 4도는 중클로로포름 용액중에서 버미스포린의^l3C NMR 스펙트럼이다.

본 발명은 항균활성, 특히 혐기성 세균에 대한 항균활성을 갖는 신규한 항생물질 버미스포린(Vermisporin), 그의 제조방법 및 그것을 활성제로서 포함하는 약제 조성물에 관한 것이다.

각종 항생물질이 제조되어 의학 및 수의학, 농업분야등에서 실제로 사용되고 있다. 그러나, 혐기성 세균에 대하여 유효한 항균활성을 나타내는 물질이 거의 알려져 있지 않았기 때문에, 혐기성 세균에 기인하는사람의 전염병, 돼지 이질 및 회저성 장염의 치료와 같은 치료학 분야에서 개선된 항생물질이 끊임없이 요망되고 있다.

정밀한 연구를 통하여, 본 발명자들은 필요로하는 항균활성, 특히 혐기성 세균에 대하여 강한 항균활성을갖는 물질이 오피오블루스(Ophiobolus)속(屬)에 속하는 어떤 균주를 배양하는 동안 생산되는 것을 발견하였다. 본 발명자들은 또한 상기 활성을 나타내는 신규 항생물질 버미스포린의 분리 및 그의 물리화학적 특성과 생물학적 특성 측정에 성공하였다.

그러므로, 본 발명의 한가지 측면은 항생물질 버미스포린을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 측면은 혐기성 세균에 기인하는 전염병의 치료 또는 예방에 유용한, 버미스포린을 활성제로 포함하는 약제 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명에 따른 버미스포린은 하기 특성을 갖는다:

(a) 원소 조성:

탄소 70.18%

수소 8.73%

질소 3 10%;

(b) 분자량:

415(HR-MS m/Z 415.2719, M+);

(c) 분자식:

C₂₅H₃₇NO₄;

(d) 고유 광회전도:

[α_D ²⁰]=+73.8°(C 1.0, 클로로포름)

(e) 제1도에 나타낸 메탄올 용액중에서 측정한 자외선 흡수 스펙트럼

_MeoH229nm(ε6180),

λ

^max291nm(ε12280);

(f) 제2도에 나타낸 클로로포름 용액중에서 측정한 적외선 흡수 스펙트럼,

(g) 제3도에 나타낸 중클로로포름 용액중에서 측정한 양성자 NMR(400MHz) 스펙트럼;

(h) 제4도에 나타낸 중클로로포름 용액중에서 측정한¹³C NMR(100MHz) 스펙트럼,

(i) 클로로포름, 디에틸에테르, 아세톤, 에틸 아세테이트, 메탄올 및 에탄올및 가용이고 또 n-헥산 및물에 불용;

(j) 발색 반응:

10% 황산 및 크로마토리브덴산 시약에 양성이고 또 그레이그-리바크 시약 및 닌히드린 시약에 음성;

(k) 머크사제 실리카겔(Art J5714)의 얇은 막 및 전개용매로서 클로로포름-메탄올(30 : 1)을 사옹하여 얇은 막 크로마토그래피한 경우 R_f값이 0.63이고 또 상기 앎은 막 및 전개용매로서 톨루엔-아세톤(2 : 1)을사용하여 얇은 막 크로마토그래피한 경우 R_f값이 0.52임;

(1) 외관:

무색이고 유(油)상임.

본 발명의 다른 측면은 오피오블루스속의 버미스포린 생산균을 배양한 다음 그 배양물로부터 버미스포린을 회수하는 것으로 구성되는 버미스포린의 생산 방법을 제공하는 것이다.

하기에 본 발명을 상세히 설명하겠다.

자외선 흡수 스펙트럼의 λ_max패턴으로부터 본 발명의 항생물질 버미스포린이 톄뉴아조산 골격을 갖는다는 것을 추정할 수 있다. 표 1 및 2에 나타낸 버미스포린의 물리화학적 특성 및 생물학적 특성을 테뉴아조산 골격을 갖는 공지된 항생물질의 특성과 비교함으로써 이 버미스포린이 신규한 항생물질이라는 것을 알수 있다.

본 발명 버미스포린을 생산하는데 사용될 수 있는 균은 오피오블루스(Ophiobolus)속(屬)에 속하고 또 그의 배양중에 회수되기에 충분한 양의 버미스포린을 생산할 수 있는 것이면 어떤것이어도 좋다. 이러한 균의 전형적인 예로서 본 발명자들에 의하여 초본성 식물체로부터 처음으로 분리된 소방자낭균류(Loculoascomycetes)강(綱)에 속하는 L-8 균주를 들 수 있다. L-8 균주의 균적 특성은 하기와 같다.

(1) 형태학적 특징 .

자낭과는 숙주 식물상에서 산제적으로 또는 군생적으로 성장한다. 이들은 처음에는 숙주 식물의 표피 아래에 파묻혀 성장하고 이어 표피를 깨고나와 유도와 같이 돌출한 목을 형성한다. 자낭과는 구형 또는 반구형이고 직경이 230 내지 450μm 범위이며 또 높이가 300 내지 420μm이다. 목은 직경이 110 대지 155μm이고 또 길이가 130 내지 180μm이다. 목 와(窩)의 내면에는 무색의 페리피제스(periphyses)가 있다. 외피70 두께가 25 내지 40μm이고 또 5 내지 10층의 다각형 또는 장방형 세포로 구성된다. 외피벽의 외부 및내부에는 암갈색의 두꺼운 막 및 담색의 얇은 막이 각각 형성된다. 원통형 또는 곤봉형, 100 내지 135×10내지 15μm 범위이고 또 기부 끝을 향해 가늘어지는 자낭이 많이 생성한다. 그의 정점은 둥글다. 자낭은 두꺼운 벽으로 되고, 이중벽과 8개의 포자를 가진다. 위측사(pseudoparaphyses)는 실모양이고 격벽을 갖는다. 자낭포자는 자낭속에 다발로 서로 평행하게 또는 나선형으로 배열되어 있다. 자낭포자는 형태상으로는 곤봉형이거나 또는 긴 원통형이고, 무색이며 실질적으로 직선 또는 약간 굽은 모양이고, 90 내지 110×5 내지 7μm 범위이고, 통상 7개의 격벽을 갖는다. 각 자낭포자는 충분히 팽창되지도 수축되지도 않은 것이고 또 1 내지 3개의 유상의 작은 방울을 함유한다. 자낭포자 양쪽극은 젤라틴과 같은 부수물을 갖는다.

(2) 각종 배지상에서의 배양 특징

(a) 감자 포도당 한천(PDA) 배지상에서 27℃로 10일간 배양

집락은 10일동안 직경 2 대지 3cm로 확대된다. 초기에는 이들은 연한 올리브색을 띤 회색을 나타내지만, 이후엔 짙은 올리브색을 띤 회색이 된다. 기저균사는 방사형으로 확대되고 또 분지된다. 이들은 폭이 4.0내지 7.0μm에 이르고 또 1개의 격벽을 갖는다. 많은 기생(氣生) 균사를 형성한다. 한천 배지상에서 완전세대 및 불완전 세대의 생식기관의 형성은 확인되지 않는다.

(b) 맥아한천(MA) 배지상에서 27℃로 10일간 배양

이 배지상에서의 배양 특징은 상기 PDA 배지에서의 특징과 동일하다.

(3) 생리학적 특성 :

(a) 최적 성장 조건

pH : 6-7(LCA 액체 배지중에서 14일간 배양) ;

온도 27-30℃(PDA 한천 배지상에서 14일간 배양) ;

(b) 성장 가능한 조건

pH : 4-10(LCA 액체 배지중에서 14일간 배양) ;

온도 : 20-30℃(PDA 한천 배지상에서 14일간 배양) ;

(4) L-8의 분류 :

(a) 고차의 분류학상의 위치

본 균주(L-8)는 초본성 식물에 착생하여 성장하고, 플라스크 모양 자낭과를 형성한다· 자낭은 영속성위측사 사이에서 형성된다. 자낭은 이중벽 구조를 갖는다. 자낭포자는 다중 격벽 구조이다. 상기 주 특징을 기준으로 하여, L-8은 L. Ho1m, Symb. Botan Upsal., 14(3), 1-88(1957) , Luttrel1, Loculoas-comycetes, The Fungi, Vo1 4A(ed. G. C. Ainsworth et al.), 135-219(1973) , J.A. von Arx and E.M01ler, Stud. Myco1., 9, 1-159(1975)등에 의하여 소방자낭균류(Loculoascomycetes)강(綱)의 플레오스 포랄레스(Pleosprales)목() 의 플레오스포라세아애(Pleospraceae)과(枓)로 분류할 수 있다.

(b) 속(屬)등급에서의 확인

J.A von Arx and E. M01leI, ibidem에 의한 플레오스포라세아애 과(料)에 관련된 분류학 문헌에 의하면, 이 과(枓)는 77개 속(屬)으로 세분된다. 이들 77개 속 중에서, 긴 원통형 또는 실모양의 자낭포자를 갖는 것으로서 오피오블루스(Ophibolus), 노두로스파애리아(Nodulosphaeria) 및 코클리오블루스(Coch-liobolus)를 포함한다. 이들 속(屬)은 (1) 자낭과의 외면에서의 강모의 존재여부, (2) 목와 내면에서의 강모의 존재여부, (3) 팽창 자낭포자의 존재여부 및 (4) 배양에 기초로한 분생자기 세대의 존재여부와 같은 기준에 의하여 각각 구별된다.

L-8은 (1) 자낭과의 외면에서의 강모의 부재, (2) 목와 내면에서의 강모의 부재, (3) 원통형 팽창 자낭포자의 부재 및 (4) 각종 배지상에서 분생자기 세대를 형성하지 않는 것을 특징으로 한다.

이들 특징으로부터 L-8은 오피오볼루스(Ophiobolus)속(屬)의 균주로 확인된다.

(c) 종(種)분류에서의 확인

R.A Shoemaker, Can. J. Bot., 54,2365-2404(1976)에 의한 오피오볼루스(OPhiobolus)속(屬)에 대한 분류학 문헌에 의하면, 31종이 이 속(屬)에 속하는 것으로 열거된다. 이들 종은 자낭포자의 성질, 예를들어 포자의 형상 및 크기, 격벽의 수, 팽창 세포의 존재여부, 분절의 존재여부, 부수물의 존재여부, 색조등에 의하여 구별된다.

L-8은 (1) 자낭포자는 긴 원통형 또는 곤봉형상으로 100-135×10-15μm 크기이고 ; (2) 7개 격벽을가지며 ; (3) 팽창되지 않고 ; (4) 각 자낭포자가 영속적으로 분절되지 않으며 ; (5) 자낭포자 및 양쪽 극에서 셀라틴상 부수물을 가지고 ; 또 (6) 자낭포자는 무색인 특징을 갖는다. 이들 특징들은 RA.Shoemaker, Can.J. Bot, 54,2393(1976)에 기재된 오피오볼루스 버미스포러스(Ophiobolusvermispor-us)의 특징과 일치한다. 따라서, L-8은 오피오볼루스 버미스포러스(Ophiobolus vennisporus)로 확인되었다.

L-8 균주는 the Ageney of Industrial Science and Technology of the Ministry of International Trade and Industry인 Fermentatlon Research Institute에 1987년 1월 16일 기탁번호 FERM P-9131로서 최초 기탁되어 있다.

1-8의 원 기탁은 특히 절차를 위한 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약에 의해 1987년12월 24일 기탁번호 FERM BP-1636으로 이전되었다.

다른 균류의 경우에서 처럼 오피오블루스(Ophiobo1us)속의 균의 특징은 일반적으로 변화하기 쉽다. 그러므로, L-8 균주 자체뿐 아니라 그의 돌연변이체 및 변종(자연발생 또는 유발성), 또는 형질전환체 또는 유전자 재조합체라하더라도 이들이 항생물질 버미스포린 생산능력이 있는 한 본 발명에 사용될 수 있다.

L-8을 성장시키기 위해 사용하는 배지는 통상의 균이 흡수할 수 있는 영양분을 함유하는 많은 배지중의 어느 하나일 수 있다. 영양원으로는 글루코스, 시럽, 덱스트린, 자당, 녹말, 당밀, 동식물유등을 사용할 수 있다. 질소원으로는 대두분, 소맥아, 옥수수 스팁 리커(corn-steep liquor), 면실 케이크, 육액기스, 펜톤, 효모액기스, 암모늄 술페이트, 나트륨 니트레이트, 요소등을 사용할 수 있다. 필요에 따라서, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 코발트, 염소, 인산, 황산등 및 그외 이온을 생성할 수 있는 무기염류를 첨가하는것이 유효할 수 있다. 또한 균의 성장 및/또한 항생물질 버미스포린 생산을 촉진시킬 수 있는 적당한 유기및 무기물질을 첨가할 수 있다.

버미스포린의 생산법으로는 호기성 발효법, 특히 심부 호기성 발효법이 바람직하다. 버미스포린 생산 균은 20 내지 30℃에서 적당하게 성장하지만, 많은 경우 배양은 약 26 내지 30℃ 온도에서 실시한다. 따라서 생성된 버미스포린의 양은 배지 및 배양 조건에 따라 다르다. 그러나, 진탕배양 및 탱크 배양 모두에서 통상 약 3 내지 10일동안 버미스포린 축적량이 최대로 된다. 배양물중에 버미스포린 축적량이 최대에 도달하면, 배양을 중지하고 이어 배양액을 정제시켜 버미스포린을 분리한다.

본 발명의 버이스포린이 지용성 물절이기 때문에 배양액으로부터 버미스포린의 블리 및 정제는 이 특성을 이용함으로써 실시할 수 있다. 따라서, 예를들어 앰버라이트 XAD-2(Rohm ＆ Haas 제품) 또는 다이아이온 HP-20(미쓰비시 케미칼 인더스트리스 리미티드 제품)과 같은 합성 흡착제, 세파덱스 HL-20(Pharmacia 제품) 또는 도요-퍼얼 HW-40(Toyo Soda 제품)과 같은 겔-여과제, 에틸아세테이트, 클로로포름등을 사용한 용매추출법 ; 실리카겔, 알루미나등을 사용한 컬럼 크로마토그래피 ; 또는 담체로서 실리카겔율 사용반 분취 얇은막 크로마토그레피하는 것이 유리하다.

상기 방법중의 하나를 단독으로 사용하거나 또는 기타 방법과 결합시켜 사용함으로써 상기 기술된 물리화학적 특성을 갖는 고순도의 버미스포린을 수득할 수 있다.

각 정제 단계중에서 버미스포린의 검정은 검정균으로서 박테로이데스 프라질리스(Bacteroides fragilis)2271을 사용한 페이퍼-디스크검정법으로써 실행할 수 있다. 페이퍼-디스크 검정법에서, 한천 배지상에서 성장억제 서클의 반경은 20 내지 700μg/ml에서 버미스포린 농도의 대수와 직접적으로 비례하며 15 내지 23mm을 나타낸다

표 2 및 3아래에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 버미스포린은 특히 산부인과와 부인과의학 및 구강외과 분야에서 임상문제인 혐기성 세균의 성장을 억제한다. 이들은 또한 소화기관 및 전염가능기관에서의 전염을 포함한 유해한 전염의 병원성 세균으로도 유명하다. 그러므로, 버미스포린은 이들 전염병을 치료하거나 예방하는데 유용하다. 다른 면에서, 버미스포린은 돼지 이질 및 회저성 장염과 같은 동물의 질명을 치료 및 예방하는데 유용하다.

사람에 사용되는 경우, 버미스포린은 단독으로 투여되거나 또는 약제학적으로 허용되는 담체와의 결합물로도 투여될 수 있다. 고체 담체로서, 폴리에닐렌글리콜, 고래왁스 및 목재왁스와 같은 왁스를 사용할 수있다. 액체 담체로서는, 에탄올, 글리콜 및 글리새롤과 같은 알코올 및 에틸렌 글리콜 모노메틸에데르, 디에틸렌 글리콜 및 모노메틸에테르와 같은 글리콜 에테르를 들 수 있다. 버미스포린은 희석제, 농조화제 또는 안정제와 같은 공지된 점가제와 결합될 수 있다. 투여형태로서는, 예를들어 분말, 정제, 캅슐, 유제 및 연고를 들 수 있다. 이들 투여형태는 통상 50mg 내지 500mg의 버미스포린을 포함한다. 버미스포린은 2 내지 300mg/환자/일 내지 약 2 대지 3g/환자/일, 바람직하게는 약 200mg/환자/일 내지 약 1000mg/환자/일의 비율로 경구적으로 또는 비경구적으로 사람에게 투여된다.

한편, 동물에 사용되는 경우, 버미스포린은 동물사료와 직접 혼합되거나 또는 탈지겨, 대두분, 쌀겨, 옥수수가루, 오일 케이크 및 유당과 같은 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합된 버미스포린을 포함하는 약제조성물을 동물에 투여할 수 있다. 버미스포린의 농도는 일반적으로 사료중에서 약 1 내지 약 100ppm 범위이고 또는 약제 조성물중에서는 약 1 내지 약 50% 범위이다. 약제 조성물에 사용되는 담체 및 투여형태는 사람에서 사용된 것과 유사하다.

본 발명의 신규한 항생물질 버미스포린은 탁월한 항균활성, 특히 그램 양성 세균과 혐기성 세균에 대한항균활성을 가지고 있으며, 또 항균제로서 사용될 수 있다.

하기 실시예들은 본 발명을 예시하지만 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

[실시예 1]

2.0% 시럽, 0.3% 대두유, 1.2% 대두분, 1.2% 소맥아, 0.02% Na₂SO₄, 0.0005% FeSO₄ㆍ7H₂O, 0.0005% CoCl₂ㆍ6H₂O 및 0.1% CaCO₃을 함유하는 배지(pH 6.0) 40ml를 피펫으로 취해서 200ml의 3가지 플라스크 20개에 각각 넣은 다음 121℃ 오트클레이브에서 20분간 멸균하였다.

각 플라스크 내에 있는 이 배지에 버미스포린 생산 균주인 오피오블루스 버미스포러스(Ophiobolusvermisporus) L-8 균주를 1개 백금 루우프로 식균하였다. 이 식균된 배지를 210rpm으로 회전하는 진탕기상에서 26℃로 4일간 배양하여 종배양액으로 하였다.

상기와 동일한 배지 80ml를 피펫으로 취해서 500ml의 3가지 플라스크 100개에 각각 넣고 121℃ 오토클레이브에서 20분간 멸균시켰다. 이들 주발효배지에 상기 종배양액을 4ml씩 접종하고 210rpm으로 회전하는 진탕기상에서 26℃로 5일간 배양하였다. 생성한 배양액을 원심분리하여 배양상층액과 균 덩어리를 수득하였다.

[실시예 2]

균 덩어리를 실온에서 1시간동안 70% 아세톤 수용액 1.5리터로 추출하였다. 추출액을 여과시켜 균을 제거하고 여과된 추출액을 0.3리터로 농축시킨 다음 실시예 1에서 수득된 4 7리터의 상층액과 혼합하였다. 이렇게 제조한 5리터의 용액을 동량의 에틸아세테이트로 추출하였다. 이 추출액을 물로 세척하고 무수 황산나트륨상에서 탈수시키고 또 감압하에서 농축시켜 7.12g의 유상물질을 수득하였다.

이 유상물질을 규조토 7.5g과 혼합하고, 감압하에서 하룻 밤동안 건조시켜 클로로포름중에서 제조된 300ml 실리카겔 C-200(Wako Pure Chemical Industries Ltd. 제품) 컬럼상에 장입하였다. 이 칼럼을 클로로포름으로 세척하고 클로로포름-메탄올(100 : 1) 혼합물, 이어 클로로포름-메탄올(50 : 1) 혼합물로 전개시켰다. 활성 분획을 모아서 감압하에서 농축시키고 건조될 때까지 증발시켜 유상물질 1.29g을 수득하였다.이 유상물질을 다시 실리카겔 C-200을 사용하는 크로마토그래피를 행하고, 클로로포름으로 세척한 후, 칼럼을 클로로포름-메탄올(100 : 1) 혼합액으로 전개시켜 다시 활성 분휙을 수득하였다. 수집된 활성분획을 감압하에서 농축시키고 건조될 때까지 증발시켜 유상물질 709mg을 수득하였다. 이 유상물질을 소량의 메탄올에 용해시켜 메탄올로 충전된 1리터들이 세파덱스 LH-20(Pharmacia 제품) 칼럼에 장입하고 메탄올로 전개시켰다. 활성 물질은 12ml 분획으로 분획번호 38 내지 44에서 용출되었다. 이들 활성분획을 수집하고,감압하에서 농축시키고 또 건조될 때까지 증발시켜 유상물질 481mg을 수득하였다. 이 유상물길 220mg을 실리카겔 플레이트(Merck Inc. 제품)를 사용한 분취 얇은 막 크로마토그래피(전개용매 : 클로로포름/메탄올=30/1)시켰다. 이 활성 분획을 메탄올로 추출시킨 다음 감압하에서 메탄올을 제거시켜 유상물질 66mg을수득하였다. 이 유상물질을 소량의 메탄올에 용해시켰다. 생성한 메탄올 용액을 메탄올로 총전된 300ml 세파덱스 LH-200 칼럼상에 장입하고 메탄올로 전개시켰다. 활성 물질은 5.5ml 분휙으로 분휙 번호 31 내지38에서 용출되었다. 이들 활성 분획을 수집하고, 감압하에서 농축시키며 또 건조될 때까지 증발시켜 조 버미스포린 31mg율 유상물질로서 수득하였다. 이 조 버미스포린을 클로로포름 10ml에 용해시키고, 동량의 pH 2 산성수로 세척하고 또 물로 더 세척한 다음 무수 황산나토륨상에서 탈수한 후 감압하에서 농축시키고 건조될 때까지 증발시켜 정제된 버미스포린 28mg을 무색의 유상물질로서 수득하있다. 이 유상물질의 물리화학적 특성은 전술한 바와 같다.

각 정제 단계중에서, 활성 분획은 전술한 박데로이데스 프라질리스(Bacteroides fragilis) 2271을 검정균으로서 사용한 페이퍼-디스크 검정법에 의해 측정되었다.

정제된 버미스포린을 통상적인 방법으로 쥐의 복강내에서 투여해서 측정한 급성독성(LD₅₀)은 100mg/kg을 초과하였다.

[실시예 3]

GAM 한천(Nissui Pharmacentical Co., Ltd.)를 사용해서 Japan Society of Chemo theraPy의 표준방법에 따라서 표 1에 나타낸 시험균 106 CPU/ml을 370에서 18시간동안 호기성 배양 처리하였다. 성장억제 서클의 반경을 측정해서 본 발명 버미스포린의 시험균에 대한 최소억제 농도를 구하였다. 이 결과를 표1에 나타낸다.

표 1

[실시예 4]

GAM 한천 배지를 사용하여 표 2에 나타낸 시험균 106 CPU/ml를 370에서 48시간동안 혐기 배양하였다. 성장억제 서클의 반경을 측정해서 본 발명 버미스포린의 시험균에 대한 최소억제농도를 구하였다. 이결과를 표 2에 나타내었다.

표 2

[실시예 5]

5% 말 혈액으로 보충한 TS 한천 배지(Difco Co. 제품)상에 있는 표 3에 나타낸 돼지 이질균을 혐기성조건의 37℃에서 5일간 배양하였다. 페트리 접시에 있는 5% 말 혈액을 함유하는 TS 배지 및 일련의 버머스포린 희석액을 TS 배지로부터 수집한 10⁶CPU/ml 농도의 상기 세균 5μ1로서 접종시켰다. 이들 접종물을 형기성 조건중의 37℃에서 5일간 배양하였다. 각 접시에서의 집락 형성 및 용혈 현상을 측정해서 버미스포린의 최소억제농도를 구하였다. 이 결과를 표 3에 나타낸다.

표 3

Claims

하기의 특징을 갓는 항생물질 버미스포린(Vennisporin).

(a) 원소 조성 :

탄소 70.18%

수소 8.73%

질소 3.10%,

(b) 분자량 :

415(HR-MS, m/Z 415.2719, M+) ;

(c) 분자식 :

C₂₅H₃₇NO₄;

(d) 고유 광회전도 :

[
]_D ²⁰= +73.8°(C 1.0, 클로로포름) ,

(e) 제1도에 나타낸 메탄올 용액중에서 측정한 자외선 흡수 스펙트럼

_MeoH229nn(ε6180),

λ

_max291nm(ε12280) ,

(f) 제2도에 나타낸 클로로포름 용액중에서 측정한 적외선 흡수 스펙트럼 ;

(g) 제3도에 나타낸 중클로로포름 용액중에서 측정한 양성자 NMR(400MHz) 스펙트럼 ;

(h) 제4도에 나타낸 중클로로포름 용액중에서 측정한 13C NMR(100MHz) 스펙트럼 ;

(i) 클로로포름, 디에틸에테로, 아세톤, 에틸 아세데이트, 메탄올 및 에탄올에 가용이고 또 n-헥산 및뭍에 불용 ;

(j) 발색 반응 :

10% 황산 및 몰리브덴산 시약에 양성이고 또 그레이그-리바크(Greig-L￡aback) 시약 및 닌히드린 시약에 음성 ;

(k) 머크사제 실리카겔(Art 5714)의 얇은 막 및 전개용매로서 클로로포름-메탄올(30 : 1)을 사용하여 얇은 막 크로마토그레피한 경우 R_f값이 0.63이고 또 상기 얇은 막 및 전개용매로서 톨루엔-아세톤(2 : 1)을 사용하여 얇은 막 크로마토그래피한 경우 R_f값이 0.52임 ;

(1) 외관 :

무색이고 유(油)상임.
유효량만큼의 제1항에 정의된 버미스포린과 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하며, 혐기성 세균에 기인하는 전염병을 치료하거나 또는 예방하는데 사용하기 위한 약제 조성물.
제2항에 있어서, 혐기성 세균이 사람의 전염병의 병원성 세균인 약제 조성물.
제2항에 있어서, 혐기성 세균이 동물의 전염병의 병원성 세균인 약제 조성물.
제2항에 있어서, 혐기성 세균이 돼지 이질 간균인 약제 조성물.
오피오볼루스(Ophiobolus)속(屬)의 버미스포린 생산균을 배양하고, 이어 배양액으로부터 버미스포린을 회수하는 것으로 구성되는 제1항에서 청구된 버미스포린의 제조방법.